ES2747839T3 - Derivados de pirazolopirimidona o de pirrolotriazona, método de preparación de los mismos, y aplicaciones farmacéuticas de los mismos - Google Patents

Derivados de pirazolopirimidona o de pirrolotriazona, método de preparación de los mismos, y aplicaciones farmacéuticas de los mismos Download PDF

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Abstract

Un compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: en la que: cuando G es N, D es C y E es -CH-; cuando G es C, D y E son N; R1 se selecciona entre el grupo que consiste en arilo de 6 miembros y heteroarilo de 6 miembros, en la que el arilo y heteroarilo están cada uno independientemente opcionalmente sustituidos adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y -OR6; R2 es alquilo C1-6, en el que el alquilo está adicionalmente sustituido con fenilo, en el que el fenilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo y haloalquilo; R3 es fenilo, en la que el fenilo está cada uno opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6; R4 es alquilo C1-6; R5 es hidrógeno; R6 se selecciona entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo; n es 1 o 2.

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de pirazolopirimidona o de pirrolotriazona, método de preparación de los mismos, y aplicaciones farmacéuticas de los mismos
Campo de la invención
La presente invención se refiere a un nuevo derivado de pirazolopirimidona o derivado de pirrolotriazona y una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, a un método de preparación de los mismos, y a la composición farmacéutica que los contiene, así como al uso de los mismos como antagonistas del receptor de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH), particularmente como un agente terapéutico para la enfermedad, tal como la endometriosis.
Antecedentes de la invención
La endometriosis es una enfermedad ginecológica común dependiente de estrógenos, que a menudo ocurre en mujeres en edad fértil, aunque el mecanismo no está claro. El diagnóstico difícil y la patogénesis poco clara de la endometriosis dificultan gravemente el descubrimiento de tratamientos eficaces. Actualmente, la endometriosis se diagnostica principalmente por laparoscopia y se trata mediante cirugía, o se controla con anticonceptivos, agonistas del receptor GnRH o progestágenos para reducir los niveles de estrógenos corporales.
Actualmente, la tasa de incidencia de endometriosis es alta. Los datos estadísticos de Datamonitor 2009 muestran que el número de pacientes femeninas que padecen endometriosis ha sido de más de 68 millones solo en dos países (India y China) (31.288.000 en India, 37.535.000 en China), mientras que los datos en los siete mercados principales han sido de más de 17 millones. Datamonitor espera que durante 2009-2018, el mercado de medicamentos para la endometriosis crecerá de 764 millones de dólares en 2009 (596 millones de dólares en EE. UU., 117 millones de dólares en la Unión Europea, 51 millones de dólares en Japón) a 1.156 mil millones de dólares en 2018 (844 millones de dólares en EE. UU., 206 millones de dólares en la Unión Europea, 106 millones de dólares en Japón), y el creciente espacio en el mercado chino será mayor.
La hormona liberadora de gonadotropina (gonadoliberina; GnRH), también conocida como hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH), es una hormona decapéptida (pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2) sintetizada por las células neuroendocrinas hipotalámicas, y es un factor de regulación central del sistema reproductor endocrino. La GnRH juega un papel importante en el sistema del eje hipotálamo-hipófisis-gonadal al ser transportada a la hipófisis a través del sistema de circulación portal hipotalámico-hipofisario y luego unirse a las células receptoras de GnRH en la hipófisis anterior, promoviendo la secreción y liberación de la hormona luteinizante de gonadotropina, como la hormona luteinizante (LH) y la hormona foliculoestimulante (FSH), y regulando el desarrollo normal del ovario y el cuerpo lúteo. El receptor de GnRH desempeña su función reguladora al acoplarse con la proteína G que es capaz de activar el sistema de segundo mensajero de fosfatidilinositol de calcio; l H regula la producción de esteroides sexuales; y FSH regula la espermatogénesis masculina y la maduración de los folículos ováricos femeninos.
LH y FSH se liberan en la circulación y se combinan con receptores en las células específicas de los ovarios o los testículos para estimular la producción de esteroides. Enfermedades como la endometriosis, el leiomioma uterino y el cáncer de próstata se han agravado en presencia de esteroides sexuales. Es necesario administrar péptidos de acción prolongada agonistas y antagonistas del receptor de GnRH para controlar las enfermedades.
Los péptidos antagonistas del receptor de GnRH incluyen péptidos lineales derivados de GnRH (documento US 5.171.835), derivados de hexapéptidos cíclicos (documento US 2002/0065309), derivados de péptidos bicíclicos (Journal of Medicinal Chemistry, 1993; 36: 3265-73), etc.; y los péptidos agonistas de los receptores de GnRH incluyen leuprorelina (pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-d-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt). Sin embargo, hay muchos problemas sin resolver para el compuesto de péptidos, incluida la absorción oral, la forma de dosificación, el volumen de la dosis, la estabilidad del fármaco, acción sostenida y estabilidad metabólica y similares. La razón principal por la que la terapia antagonista del receptor de GnRH de molécula pequeña es superior a la terapia basada en péptidos existente se debe en gran parte a la administración oral de antagonistas del receptor de GnRH de molécula pequeña, que es conveniente y eficiente. Los estudios han demostrado que los antagonistas de moléculas pequeñas tienen una eficacia significativa para las enfermedades dependientes de hormonas como la endometriosis, la pubertad precoz, el cáncer de próstata.
El mecanismo indirecto de inhibición tumoral mediado por los agonistas de GnRH es que los agonistas de GnRH disminuyen la secreción de hormona sexual y luego inhiben indirectamente el crecimiento de células tumorales por efecto a largo plazo sobre el eje hipotalámico-hipofisario-gonadal, lo que lleva a la reducción de las gonadotropinas hipofisarias (FSH, LH). Mientras que los antagonistas del receptor de GnRH inhiben directamente la liberación de gonadotropinas hipofisarias y luego inhiben el crecimiento de las células tumorales.
En vista de las limitaciones de los péptidos antagonistas del receptor de GnRH, se han propuesto ciertos antagonistas no peptídicos de los receptores de GnRH y se han puesto en desarrollo, ensayos clínicos y etapas de comercialización. Por ejemplo, Elagolix (también conocido como NBI-56418 o ABT-620), es un antagonista del receptor de GnRH de molécula pequeña desarrollado conjuntamente por Abbott y Neurocrine Biosciences Inc, que actualmente se encuentra en etapa de fase clínica III y se utiliza principalmente para el tratamiento de la endometriosis (fase III) y el leiomioma uterino (fase II). En junio de 2012, los datos del ensayo de fase II de endometriosis se presentaron por la 94a Reunión Anual de la Sociedad Endocrina en Houston: entre las 131 mujeres que padecen endometriosis que fueron tratadas con elagolix (150 o 250 mg qd), depósito de leuprorelina (3,75 mg sc, una vez al mes durante 12 semanas) o placebo, el nivel de estrógeno en suero en el paciente del grupo de tratamiento con elagolix es más bajo que el del grupo de tratamiento con leuprorelint y el grupo de placebo. Mientras tanto, la seguridad y tolerabilidad de elagolix ha sido bien verificada.
Relugolix, también conocido como TAK-385, es un antagonista oral del receptor de GnRH de molécula pequeña desarrollado por Takeda Pharmaceutical en Japón, que se usa para el tratamiento de la endometriosis, leiomioma uterino y cáncer de próstata. El estudio de endometriosis y leiomioma uterino ha estado en ensayo clínico de fase II en 2011, y el estudio del cáncer de próstata ha estado en ensayo clínico de fase I en el mismo año.
Actualmente, se han desvelado una serie de solicitudes de patente relativas a antagonistas de receptores de GnRH de molécula pequeña, incluyendo los documentos WO2006096785, WO2010026993, WO2011076687, WO2012175514, etc.
A pesar de que se han realizado numerosos estudios significativos en este campo, sigue siendo necesario desarrollar antagonistas del receptor de GnRH de molécula pequeña más eficaces. La presente descripción proporciona una nueva estructura de antagonistas del receptor de GnRH, y se ha descubierto que los compuestos que tienen tales estructuras tienen buena actividad y presentan un excelente efecto de tratamiento para enfermedades del sistema reproductivo endocrino.
Sumario de la invención
La presente invención está dirigida a proporcionar un compuesto de fórmula (I), un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000003_0001
donde:
cuando G es N, D es C y E es -CH-;
cuando G es C, D y E son N;
R1 se selecciona entre el grupo que consiste en arilo de 6 miembros y heteroarilo de 6 miembros, en el que el arilo y heteroarilo están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y -OR6;
R2 es alquilo C1-6, en el que el alquilo está adicionalmente sustituido con fenilo, en el que el fenilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo y haloalquilo;
R3 es fenilo, en el que el fenilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6;
R4 es alquilo C1-6;
R5 es hidrógeno;
R6 se selecciona entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo;
n es 1 o 2.
En una realización preferida de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, es un compuesto de fórmula (II) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000004_0001
en la que: n, R1~R5 son como se definen en la fórmula (I).
En otra realización preferida de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, es un compuesto de fórmula (III) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000004_0002
en la que: n, R1~R5 son como se definen en la fórmula (I).
En otra realización preferida de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R1 se selecciona entre el grupo que consiste en fenilo y piridazinilo, en el que el fenilo y piridazinilo están cada uno opcionalmente sustituidos adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y -OR6.
En otra realización preferida de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R2 es bencilo, en el que el bencilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo y haloalquilo.
En otra realización preferida de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R3 es fenilo, en el que el fenilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
En otra realización preferida de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R4 es metilo.
En otra realización preferida de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, es un compuesto de fórmula (IV) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000004_0003
en la que: n, D, E, G, R1, R2, R4 y R5 son como se definen en la fórmula (I).
Ra se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo y -OR6; y
R6 es alquilo.
Los compuestos típicos de la presente invención incluyen, peso sin limitación, los siguientes:
Figure imgf000005_0001
continuación
Figure imgf000006_0001
continuación
Figure imgf000007_0001
continuación
Figure imgf000008_0002
o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un proceso para preparar el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende una etapa de:
Figure imgf000008_0001
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IA) con la amina de NH(R4)(CH2)nR5 ; opcionalmente reducción o/y acilación del producto resultante para obtener el compuesto de fórmula (I); en la que: X es halógeno; n, D, E, G y R1 ~ R5 son como se definen en la fórmula (I).
Los agentes reductores incluyen, pero sin limitación, hidrógeno o polvo de hierro;
Los agentes de acilación incluyen, pero sin limitación, ácidos carboxílicos, cloruro de acilo, cloruro de sulfurilo, formiato de metilo halogenado, isocianato o trifosgeno y metoxiamina.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un proceso para preparar el compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende una etapa de:
Figure imgf000009_0001
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IB) con R2X en presencia de un reactivo alcalino; opcionalmente reducción o/y acilación del producto resultante para obtener el compuesto de fórmula (I);
en la que: X es halógeno, n, D, E, G y R1 ~ R5 son como se definen en la fórmula (I).
Los reactivos alcalinos incluyen, pero sin limitación, una base orgánica y una base inorgánica, en el que la base orgánica incluye, pero sin limitación, trietilamina, piridina, 2,6-lutidina, metóxido sódico, hexametildisilazida de litio, hexametildisilazida sódica, n-butillitio, ferc-butóxido y bromuro de tetrabutilamonio; la base inorgánica incluye, pero sin limitación, hidruro sódico, carbonato sódico, bicarbonato sódico, carbonato potásico, bicarbonato potásico, carbonato de cesio, hidróxido de litio, hidróxido sódico e hidróxido potásico, preferiblemente carbonato potásico y metóxido sódico;
Los agentes reductores incluyen, pero sin limitación, hidrógeno y polvo de hierro;
Los agentes de acilación incluyen, pero sin limitación, ácidos carboxílicos, cloruro de acilo, cloruro de sulfurilo, formiato de metilo halogenado, isocianato o trifosgeno y metoxiamina.
Un compuesto de fórmula (IA) o formula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que se usa como un intermedio en la preparación de un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000009_0002
en la que: X es halógeno, n, D, E, G y R1 ~ R5 son como se definen en la fórmula (I).
Un proceso para preparar el compuesto de fórmula (IA) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende una etapa de:
Figure imgf000009_0003
llevar a cabo la reacción de halogenación de un compuesto de fórmula (Ib) para obtener el compuesto de fórmula (IA); en la que: D, E, G y R1 ~ R3 son como se definen en la fórmula (I).
Un proceso para preparar el compuesto de fórmula (IB) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende una etapa de:
Figure imgf000010_0001
llevar a cabo una reacción de ciclación de un compuesto de fórmula (Ig) para obtener el compuesto de fórmula (IB); en la que: n, D, E, G y R1, R3 ~ R5 son como se definen en la fórmula (I);
Rb es alquilo.
Los compuestos típicos de fórmula (IA) incluyen, peso sin limitación, los siguientes:
Figure imgf000010_0002
continuación
Figure imgf000011_0002
o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Un compuesto de fórmula (IVA) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que se usa como un intermedio en la preparación de un compuesto de fórmula (IV):
Figure imgf000011_0001
Los compuestos típicos de fórmula (IVA) incluyen, peso sin limitación, los siguientes:
Figure imgf000011_0003
continuación
Figure imgf000012_0001
continuación
Figure imgf000013_0002
o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Un proceso para preparar el compuesto de fórmula (IV), que comprende una etapa de:
Figure imgf000013_0001
hacer reaccionar adicionalmente el compuesto de fórmula (IVA) con un agente de acilación para obtener un compuesto de fórmula (IV);
en la que: n, D, E, G, R1, R2, R4 y R5 son como se definen en la fórmula (I).
Los agentes de acilación incluyen, pero sin limitación, ácidos carboxílicos, cloruro de acilo, cloruro de sulfurilo, formiato de metilo halogenado, isocianato o trifosgeno y metoxiamina.
La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más de un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
La presente invención se refiere adicionalmente al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, o una mezcla de los mismos, y una de sus sales farmacéuticamente aceptables, o la composición farmacéutica que comprende a los mismos, para su uso como medicamentos para el tratamiento o la prevención de enfermedades de cáncer dependiente de hormonas sexuales (por ejemplo, cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de mama, cáncer de la hipófisis, etc.), metástasis óseas de cánceres dependientes de hormonas sexuales, hiperplasia prostática, leiomioma uterino, endometriosis, fibroides uterinos, pubertad precoz, amenorrea, síndrome premenstrual, dismenorrea, síndrome de ovario multilocular, síndrome de ovario poliquístico, acné, alopecia, enfermedad de Alzheimer, esterilidad, síndrome del intestino irritable, tumores benignos o malignos que son independientes de las hormonas y sensibles a la LH-RH, o rubor; o para su uso como regulador de la reproducción, anticonceptivo y un evocador de la ovulación; o para su uso como medicamentos para el tratamiento o la prevención de la recurrencia postoperatoria del cáncer dependiente de hormonas sexuales, preferentemente cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de mama, endometriosis o leiomioma uterino.
La presente divulgación se refiere además a un método para inhibir la actividad del receptor de GnRH, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I), o tautómero, mesómero, racemato, enantiómeros, diastereómeros, o mezclas de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o las composiciones farmacéuticas que los contienen.
La presente divulgación se refiere además a un método para tratar una enfermedad relacionada con la hormona gonadal, que comprende administrar al sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I), o tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, y una mezcla de los mismos, y una de sus sales farmacéuticamente aceptables, o la composición farmacéutica que los contiene.
La presente divulgación se refiere además a un método para la prevención o el tratamiento de cánceres dependientes de hormonas sexuales (cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de mama, cáncer de la hipófisis, etc.), metástasis ósea de cáncer dependiente de hormonas sexuales, hiperplasia prostática, leiomioma uterino, endometriosis, fibroides uterinos, pubertad precoz, amenorrea, síndrome premenstrual, dismenorrea, síndrome de ovario multilocular, síndrome de ovario poliquístico, acné, alopecia, enfermedad de Alzheimer, esterilidad, síndrome del intestino irritable, tumores benignos o malignos que son independientes de las hormonas y sensibles a la LH-RH, o rubor, preferentemente cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de mama, endometriosis o leiomioma uterino; o para regular la reproducción, anticoncepción o evocación de la ovulación; o para la prevención de la recurrencia postoperatoria del cáncer dependiente de hormonas sexuales.
La presente invención se refiere también al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, o una mezcla de los mismos, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, o la composición farmacéutica que los contiene, para su uso como medicamento para inhibir la actividad del receptor de GnRH.
La presente divulgación se refiere también al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, o una mezcla de los mismos, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, o la composición farmacéutica que los contiene, para su uso como medicamento para el tratamiento de enfermedades relacionadas con las hormonas sexuales.
La presente invención se refiere adicionalmente a un compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que los contiene, para su uso como agente preventivo o regulador de enfermedades dependientes de hormonas, particularmente; o para su uso como agente preventivo o terapéutico para los cánceres dependientes de hormonas sexuales (por ejemplo, cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de mama, cáncer de la hipófisis, etc.), hiperplasia prostática, leiomioma uterino, endometriosis, fibroides uterinos, pubertad precoz, síndrome de amenorrea, síndrome premenstrual, síndrome de ovario multilocular, acné, alopecia, enfermedad de Alzheimer, etc.; o para su uso como regulador del embarazo (anticonceptivos y similares), agente terapéutico de esterilidad o regulador de la menstruación; o para su uso como conservante o agente terapéutico para el síndrome del intestino irritable; o para su uso como agente preventivo para la recurrencia postoperatoria de cáncer dependiente de hormonas sexuales, y similares; preferentemente cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de mama, endometriosis o leiomioma uterino.
Las composiciones farmacéuticas que contienen el principio activo pueden estar en forma adecuada para administración oral, tales como comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires. Las composiciones orales se pueden preparar de acuerdo con cualquier método conocido para la preparación de composiciones farmacéuticas en la técnica. Dichas composiciones pueden contener uno o más aditivos seleccionados del grupo que consiste en edulcorante, agentes aromatizantes, colorantes y conservantes, para proporcionar una formulación farmacéutica satisfactoria y agradable al paladar. Los comprimidos contienen el principio activo y el excipiente no tóxico farmacéuticamente aceptable adecuado para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser excipientes inertes, tales como carbonato cálcico, carbonato de sodio, lactosa, fosfato cálcico o fosfato sódico; agentes de granulación y agentes disgregantes como la celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa sódica reticulada, almidón de maíz o ácido algínico; aglutinantes, tales como almidón, gelatina, polivinilpirrolidona o goma arábiga; y lubricante, como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden no estar recubiertas o recubiertas por medio de una técnica conocida que puede enmascarar el sabor del medicamento o retrasar la disgregación y absorción de un medicamento en el tracto gastrointestinal, proporcionando así una liberación sostenida durante un período prolongado. Por ejemplo, el material de enmascaramiento del sabor soluble en agua que se puede usar en la presente invención es tal como hidroxipropilmetilcelulosa o hidroxipropilcelulosa, o el material de período extendido que se puede usar en la presente invención como etilcelulosa, butirato acetato de celulosa.
Las formulaciones orales también se pueden proporcionar como cápsulas de gelatina dura en las que el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, tal como carbonato cálcico, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blandas en las que el principio activo se mezcla con vehículos hidrosolubles tales como polietilenglicol o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.
Las suspensiones acuosas contienen los principios activos en mezcla con excipientes adecuados para fabricar suspensiones acuosas. Tal excipiente es un agente de suspensión, tal como carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y goma arábiga; dispersante o humectante puede ser un fosfátido natural, tal como lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, tal como estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, tales como heptadecaetileneoxicetanol o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitoles, tales como monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como monooleato de polioxietilensorbitano. La suspensión acuosa puede contener también uno o más conservantes, tales como etilparabeno o n-propilparabeno, uno o más colorantes, uno o más agentes aromatizantes, y uno o más edulcorantes, tales como sacarosa, sacarina o aspartamo.
Las suspensiones oleosas pueden formularse suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal, tales como aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. La suspensión oleosa puede contener un espesante, tal como cera de abejas, parafina dura o alcohol de cetilo. Los agentes edulcorantes y aromatizantes mencionados anteriormente pueden añadirse para proporcionar una preparación agradable al paladar. Estas composiciones pueden preservarse mediante la adición de un antioxidante, tal como hidroxianisol o alfa-tocoferol butilado.
Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el principio activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión o uno o más conservantes. Los agentes dispersantes o humectantes adecuados y los agentes de suspensión se ejemplifican mediante los ya mencionados anteriormente. Los excipientes adicionales, tales como edulcorante, agente aromatizante y colorante, también se pueden añadir. Estas composiciones se pueden conservar mediante la adición de un antioxidante, tal como ácido ascórbico.
La presente composición farmacéutica también puede estar en la forma de una emulsión de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, tal como el aceite de oliva o el aceite de arachis, o un aceite mineral, tal como parafina líquida o mezcla de los mismos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser fosfátidos de origen natural, tales como lecitina de soja y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como monooleato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, tales como monooleato de polioxietilensorbitol. La emulsión también puede contener agentes edulcorantes, agente aromatizante, conservante y antioxidante. El jarabe y el elixir pueden formularse con edulcorante, tal como glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Dichas formulaciones también pueden contener un emoliente, un conservante, un colorante y un antioxidante.
La composición farmacéutica puede estar en forma de soluciones acuosas inyectables estériles. Los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse son agua, solución de Ringer y solución de cloruro sódico isotónica. El preparado inyectable estéril también puede ser una microemulsión de aceite en agua inyectable estéril en la que el principio activo se disuelve en la fase oleosa. Por ejemplo, el principio activo puede disolverse primero en una mezcla de aceite de soja y lecitina, la solución de aceite se introduce después en una mezcla de agua y glicerol y se procesa para formar una microemulsión. Las soluciones inyectables o microemulsiones pueden introducirse en el torrente sanguíneo de un individuo mediante inyección de bolo local. Como alternativa, puede ser ventajoso administrar la solución o microemulsión de manera que se mantenga una concentración en circulación constante del presente compuesto. Para mantener dicha concentración constante, se puede utilizar un dispositivo de suministro intravenoso continuo. Un ejemplo de dicho dispositivo es Deltec CADD-PLUs . TM. Bomba de inyección intravenosa 5400.
La composición farmacéutica puede estar en forma de una suspensión oleosa o acuosa inyectable estéril para la administración intramuscular y subcutánea. Dicha suspensión puede formularse con agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados como se describe anteriormente de acuerdo con técnicas conocidas. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril preparada en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, una solución preparada en 1,3-butanodiol. Además, un aceite fijo estéril se puede usar fácilmente como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, se puede emplear cualquier aceite fijo conciliable, incluyendo monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, en la preparación de la inyección se pueden usar ácidos grasos, tales como ácido oleico.
El presente compuesto puede administrarse en forma de supositorios para administración rectal. Estas composiciones farmacéuticas se pueden preparar mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que se solidifica a temperaturas normales pero líquido en el recto, derritiéndose así en el recto para liberar el fármaco. Dichos materiales incluyen manteca de cacao, gelatina glicerinada, aceites vegetales hidrogenados, mezcla de polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol con varios pesos moleculares.
Es bien sabido por los expertos en la materia que la dosis de un medicamento depende de una variedad de factores, incluidos, pero sin limitación, los siguientes factores: la actividad de un compuesto particular, la edad del paciente, el peso del paciente, la salud general del paciente, el comportamiento del paciente, la dieta del paciente, el tiempo de administración, la ruta de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos y similares. Además, el mejor tratamiento, tal como el tratamiento modelo, la dosis diaria del compuesto de fórmula (I) o el tipo de sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede verificarse mediante el régimen terapéutico tradicional.
Descripción detallada de la invención
A menos que se indique otra cosa, los términos usados en la memoria descriptiva y las reivindicaciones tienen los significados descritos más adelante.
"Alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático saturado que incluye grupos C1-C20 de cadena lineal o ramificada, preferiblemente alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, más preferiblemente un alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, incluso más preferiblemente un alquilo que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, y lo más preferiblemente metilo. Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, nbutilo, isobutilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, 1,1-dimetilpropilo, 1,2-dimetilpropilo, 2,2-dimetilpropilo, 1 -etilpropilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, n-hexilo, 1 -etil-2-metilpropilo, 1,1,2-trimetilpropilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2-etilbutilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 2,3-dimetilbutilo, n-heptilo, 2-metilhexilo, 3-metilhexilo, 4-metilhexilo, 5-metilhexilo, 2,3-dimetilpentilo, 2,4-dimetilpentilo, 2,2-dimetilpentilo, 3,3-dimetilpentilo, 2-etilpentilo, 3-etilpentilo, n-octilo, 2,3-dimetilhexilo, 2,4-dimetilhexilo, 2,5-dimetilhexilo, 2,2-dimetilhexilo, 3,3-dimetilhexilo, 4,4-dimetilhexilo, 2-etilhexilo, 3-etilhexilo, 4-etilhexilo, 2-metil-2-etilpentilo, 2-metil-3-etilpentilo, nnonilo, 2-metil-2-etilhexilo, 2-metil-3-etilhexilo, 2,2-dietilpentilo, n-decilo, 3,3-dietilhexilo, 2,2-dietilhexilo e isómeros ramificados de los mismos. Más preferiblemente, un grupo alquilo es un alquilo inferior que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, 1,1-dimetilpropilo, 1,2-dimetilpropilo, 2,2-dimetilpropilo, 1 -etilpropilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, n-hexilo, 1-etil-2-metilpropilo, 1,1,2-trimetilpropilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2-etilbutilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 2,3-dimetilbutilo, y similares. El grupo alquilo puede estar sustituido o no sustituido. Cuando están sustituidos, el grupo o grupos de sustituyentes pueden estar sustituidos en cualquier punto de conexión disponible, y el grupo o grupos sustituyentes son preferiblemente uno o más grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alquiloxilo, alquiltiol, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, alcoxi heterocíclico, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquilo, hidroxialquilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, -OR6 , -C(O)OR6 , -OC(O)R6 , -NHS(O)mR6 , -C(O)R6 , -NHC(O)R6 , -NHC(O)OR6 , -NR7R8 , -OC(O)NR7R8 , -C(O)NR7R8 , -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
"Alquenilo" se refiere a un alquilo definido de la manera anterior que tiene al menos dos átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono, por ejemplo, vinilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1-, 2- o 3-butenilo, etc., preferiblemente alquenilo C2-10, más preferiblemente alquenilo C2-6 y lo más preferiblemente alquenilo C2-4. El grupo alquenilo puede estar sustituido o sin sustituir. Cuando están sustituidos, el grupo o grupos de sustituyentes son preferiblemente uno 0 más grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltiol, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heterocicloalcoxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquilo, hidroxialquilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, -OR6 , -C(O)OR6 , -OC(O)R6 , -NHS(O)mR6 , -C(O)R6 , -NHC(O)R6 , -NHC(O)OR6 , -NR7 R8 , -OC(O)NR7 R8 , -C(O)NR7 R8 , -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
"Alquinilo" se refiere a un alquilo definido de la manera anterior que tiene al menos dos átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono, por ejemplo, etinilo, 1 -propinilo, 2-propinilo, 1-, 2- o 3-butinilo, etc., preferiblemente alquinilo C2-10, más preferiblemente alquinilo C2-6 y lo más preferiblemente alquinilo C2-4. El grupo alquinilo puede estar sustituido o sin sustituir. Cuando están sustituidos, el grupo o grupos de sustituyentes son preferiblemente uno o más grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltiol, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heterocicloalcoxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquilo, hidroxialquilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, -OR6 , -C(O)OR6 , -OC(O)R6 , -NHS(O)mR6 , -C(O)R6 , -NHC(O)R6 , -NHC(O)OR6 , -NR7 R8 , -OC(O)NR7 R8 , -C(O)NR7 R8 , -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
"Cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo monocíclico o policíclico, saturado o parcialmente insaturado que tiene de 3 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 3 a 12 átomos de carbono, más preferiblemente de 3 a 10 átomos de carbono, incluso más preferiblemente de 3 a 6 átomos de carbono, y lo más preferiblemente ciclopropilo. Los ejemplos representativos de cicloalquilo monocíclico incluyen, pero sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, ciclohexadienilo, cicloheptilo, cicloheptatrienilo, ciclooctilo, etc., preferiblemente ciclopropilo o ciclohexenilo. El cicloalquilo policíclico incluye un cicloalquilo que tiene un anillo espiro, un anillo condensado o un anillo puenteado. El grupo cicloalquilo puede estar sustituido o sin sustituir. Cuando están sustituidos, el grupo o grupos de sustituyentes son preferiblemente uno o más grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alquiloxilo, alquiltiol, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heterocicloalcoxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquilo, hidroxialquilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, -OR6 , -C(O)OR6 , -OC(O)R6 , -NHS(O)mR6 , -C(O)R6 , -NHC(O)R6 , -NHC(O)OR6 , -NR7 R8 , -OC(O)NR7 R8 , -C(O)NR7 R8 , -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
"Heterociclilo" se refiere a un grupo hidrocarburo monocíclico o policíclico, saturado o parcialmente insaturado de 3 a 20 miembros que tiene uno o más heteroátomos seleccionados entre el grupo que consiste en N, O y S(O)m (en el que m es un número entero entre 0 ~2) como átomos en el anillo, pero excluyendo -O-O-, -O-S- o -S-S- en el anillo, siendo C el resto de los átomos en el anillo. Un heterociclilo tiene preferiblemente de 3 a 12 átomos en el anillo, en el que de 1 a 4 átomos son heteroátomos; más preferiblemente de 3 a 10 átomos en el anillo; y lo más preferiblemente de 5 a 6 átomos en el anillo. Los ejemplos representativos de heterociclilo monocíclico incluyen, pero sin limitación, pirrolidinilo, piperidilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperazinilo, piranilo, tetrahidrofuranoílo y similares. El heterociclilo policíclico incluye el heterociclilo que tiene un anillo espiro, un anillo condensado o un anillo puenteado. El grupo heterociclilo puede estar sustituido o sin sustituir. Cuando están sustituidos, el grupo o grupos de sustituyentes son preferiblemente uno o más grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alquiloxilo, alquiltiol, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heterocicloalcoxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquilo, hidroxialquilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, -OR6 , -C(O)OR6 , -OC(O)R6 , -NHS(O)mR6 , -C(O)R6 , -NHC(O)R6 , -NHC(O)OR6 , -NR7 R8 , -OC(O)NR7 R8 , -C(O)NR7 R8 , -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
"Arilo" se refiere a un anillo monocíclico o anillo policíclico condensado de 6 a 14 miembros (un sistema de anillo "condensado" significa que cada uno de los anillos comparten un par adyacente de átomos de carbono con otro anillo en el sistema), que tiene un sistema de electrones n completamente conjugado. Un arilo tiene preferiblemente de 6 a 10 miembros, más preferiblemente fenilo y naftilo, y lo más preferiblemente fenilo. El arilo puede estar condensado al anillo de un heteroarilo, heterociciMo o cicloalquilo, en el que el enlace del anillo a la estructura precursora es un arilo. Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, los siguientes grupos:
Figure imgf000017_0001
El grupo arilo puede estar sustituido o no sustituido. Cuando están sustituidos, el grupo o grupos de sustituyentes son preferiblemente uno o más grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltiol, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heterocicloalcoxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, -OR6, -C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, -C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6
"Heteroarilo" se refiere a un anillo monocíclico completamente de carbono de 5 a 14 miembros o anillo policíclico condensado que tiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados entre el grupo que consiste en O, S y N, que tiene un sistema de electrones n completamente conjugado. Un heteroarilo tiene preferiblemente de 5 a 10 miembros, más preferiblemente 5 o 6 miembros, y lo más preferiblemente es furilo, tienilo, piridinilo, pirrolilo, W-alquil pirrolilo, pirimidinilo, pirazinilo, imidazolilo, tetrazolilo, y similares. El heteroarilo puede estar condensado con el anillo de un arilo, heterociclilo o cicloalquilo, en el que el enlace del anillo a la estructura precursora es un heteroarilo. Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, los siguientes grupos:
Figure imgf000017_0002
El grupo heteroarilo puede estar sustituido o sin sustituir. Cuando están sustituidos, el grupo o grupos de sustituyentes son preferiblemente uno o más grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltiol, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heterocicloalcoxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, -OR6 , -C(O)OR6, -Oc(O)R6 , -NHS(O)mR6 , -C(O)R6 , -NHC(O)R6 , -NHC(O)OR6 , -NR7 R8 , -OC(O)NR7 R8 , -C(O)NR7 R8 , -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
"Alcoxi" se refiere tanto a un -O-(alquilo) como a un grupo -O-(cicloalquilo sin sustituir), en el que el alquilo y cicloalquilo se definen como anteriormente. Los ejemplos representativos incluyen, pero sin limitación, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, ciclopropiloxi, ciclobutiloxi, ciclopentiloxi, ciclohexiloxi, y similares. El alcoxi puede estar sustituido o sin sustituir. Cuando están sustituidos, el sustituyente es preferiblemente uno o más grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltiol, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heterocicloalcoxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, amino, haloalquilo, hidroxialquilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, -OR6 , -C(O)OR6 , -OC(O)R6 , -NHS(O)mR6, -C(O)R6 , -NHC(O)R6 , -NHC(O)OR6 , -NR7 R8 , -OC(O)NR7 R8 , -C(O)NR7 R8 , -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
"Haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más halógenos, en el que el alquilo es como se ha definido anteriormente.
"Hidroxi" se refiere a un grupo -OH.
"Hidroxialquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo hidroxi, en el que el alquilo es como se ha definido anteriormente.
"Halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
"Amino" se refiere a un grupo -NH2.
"Ciano" se refiere a un grupo -CN.
"Nitro" se refiere a un grupo -NO2.
"Grupo oxo" se refiere a un grupo =O.
"Ácido carboxílico" se refiere a un (alquil) o (cicloalquil) -C(O)OH.
"Cloruro de sulfurilo" se refiere a un (alquil) o (cicloalquil) -S(O)m-X (halo).
"Isocianato" se refiere a un (alquil) o (cicloalquil) -N=C=O.
"Trifosgeno" se refiere a un bis(triclorometil)carbonato.
"Carboxilo" se refiere a un grupo -C(O)OH.
"Alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo -C(O)O(alquilo) o (cicloalquilo), en el que el alquilo y cicloalquilo se definen como anteriormente.
"Opcional" u "opcionalmente" significa que el suceso o circunstancia descrito posteriormente puede suceder, pero no necesariamente. Dicha expresión significa el caso en que el suceso o circunstancia sucede o no. Por ejemplo, "el grupo heterocíclico opcionalmente sustituido con un alquilo" significa que un grupo alquilo puede estar presente, pero no necesariamente, y dicha expresión incluye el caso en el que grupo heterocíclico está sustituido con un alquilo y el grupo heterocíclico no está sustituido con un alquilo.
"Sustituido" se refiere a uno o más átomos de hidrógeno en un grupo, preferiblemente hasta 5, más preferiblemente de 1 a 3 átomos de hidrógeno, cada uno reemplazado independientemente por el número correspondiente de sustituyentes. No hace falta decir que los sustituyentes existen en su única posible posición química. El experto en la técnica puede determinar si la sustitución es posible o imposible sin realizar esfuerzos excesivos por experimento o teoría. Por ejemplo, cuando un grupo amino o hidroxi que tiene hidrógeno libre se une con átomos de carbono que tienen enlaces insaturados (tales como olefínicos) puede ser inestable.
Una "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de uno o más de los compuestos descritos en la presente invención o sales o profármacos fisiológicamente/farmacéuticamente aceptables de los mismos, y otros componentes químicos tales como vehículos y excipientes fisiológicamente/farmacéuticamente aceptables. El fin de una composición farmacéutica es facilitar la administración de un compuesto a un organismo, lo que facilita la absorción del principio activo, y así presenta actividad biológica.
En la que R6~R8 son como se definen en la fórmula (I).
MÉTODO DE SÍNTESIS DEL PRESENTE COMPUESTO
Para alcanzar el objeto de la presente invención, la presente invención aplica la siguiente solución técnica:
Un proceso para preparar un compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende las etapas que se indican a continuación:
Figure imgf000018_0001
un compuesto de fórmula (Ia) se hace reaccionar con R2X en presencia de un reactivo alcalino para obtener un compuesto de fórmula (Ib); el compuesto de fórmula (Ib) se somete a una reacción de halogenación con un catalizador para obtener un compuesto de fórmula (IA), en el que el catalizador es preferiblemente azobisisobutironitrilo, y el agente de halogenación es preferiblemente W-bromosuccinimida; el compuesto de fórmula (IA) se hace reaccionar con la amina de NH(R4)(CH2)nR5 para obtener un compuesto de fórmula (I); en la que: X es halógeno; n, D, E, G y R1~R5 son como se definen en la fórmula (I);
R3 es preferiblemente un arilo, más preferiblemente un fenilo, en el que el arilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
Un proceso para preparar un compuesto de fórmula (I) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende las etapas que se indican a continuación:
Figure imgf000019_0001
hacer reaccionar el compuesto de fórmula (Ic) que se somete a una reacción de halogenación con un catalizador para obtener un compuesto de fórmula (Id), en el que el catalizador es preferiblemente azobisisobutironitrilo, y el agente de halogenación es preferiblemente W-bromosuccinimida; el compuesto de fórmula (Id) se hace reaccionar con la amina de NH(R4)(CH2)nR5 para obtener un compuesto de fórmula (Ie); el compuesto de fórmula (Ie) se calienta adicionalmente en ácido trifluoroacético para obtener un compuesto de fórmula (If); el compuesto de fórmula (If) se hace reaccionar con trifosgeno y una amina de R1NH2 sucesivamente para obtener un compuesto de fórmula (Ig); el compuesto de fórmula (Ig) se somete a una reacción de ciclación en un medio alcalino para obtener un compuesto de fórmula (IB); el compuesto de fórmula (IB) se hace reaccionar con R2X en presencia de un reactivo alcalino para obtener un compuesto de fórmula (I); en la que:
X es halógeno; Rb es alquilo;
n, D, E, G, R1~R5 son como se definen en la fórmula (I); y
R3 es preferiblemente un arilo, más preferiblemente un fenilo, en el que el arilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
Un proceso para preparar un compuesto de fórmula (II) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende las etapas que se indican a continuación:
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el compuesto de fórmula (IIa) se calienta en ácido trifluoroacético para obtener un compuesto de fórmula (IIb); el compuesto de fórmula (IIb) se hace reaccionar con trifosgeno y una amina de R1NH2 sucesivamente para obtener un compuesto de fórmula (IIc); el compuesto de fórmula (IIc) se somete a una reacción de ciclación en un medio alcalino para obtener un compuesto de fórmula (IId); el compuesto de fórmula (IId) se hace reaccionar con R2X en presencia de un reactivo alcalino para obtener un compuesto de fórmula (IIe); el compuesto de fórmula (IIe) se somete a una reacción de halogenación con catalización para obtener un compuesto de fórmula (IIA), en el que el catalizador es preferiblemente azobisisobutironitrilo, y el agente de halogenación es preferiblemente W-bromosuccinimida; el compuesto de fórmula (IIA) se hace reaccionar con una amina de NH(R4)(CH2)nR5 para obtener un compuesto de fórmula (II);
en la que: X es halógeno; Rb es alquilo;
n, R1~R5 son como se definen en la fórmula (I);
R3 es preferiblemente un arilo, más preferiblemente un fenilo, en el que el arilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
Un proceso para preparar un compuesto de fórmula (III) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende las etapas que se indican a continuación:
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el compuesto de fórmula (IIIa) se hace reaccionar con trifosgeno y una amina de R1NH2 sucesivamente para obtener un compuesto de fórmula (IIIb); el compuesto de fórmula (IIIb) se hace reaccionar en un medio alcalino para obtener un compuesto de fórmula (IIIc); el compuesto de fórmula (IIIc) es con R2X en presencia de un reactivo alcalino para obtener un compuesto de fórmula (IIId); el compuesto de fórmula (IIId) se somete a una reacción de halogenación con un catalizador para obtener un compuesto de fórmula (IIIA), en el que el catalizador es preferiblemente azobisisobutironitrilo, y el agente de halogenación es preferiblemente N-bromosuccinimida; el compuesto de fórmula (IIIA) se hace reaccionar con una amina de NH(R4)(CH2)nR5 para obtener un compuesto de fórmula (III);
en la que: X es halógeno; Rb es alquilo;
n, R1~R5 son como se definen en la fórmula (I);
R3 es preferiblemente un arilo, más preferiblemente un fenilo, en el que el arilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6.
Un proceso para preparar un compuesto de fórmula (IV), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende las etapas que se indican a continuación:
Figure imgf000020_0002
la fórmula (IVa) se prepara de acuerdo con los esquemas 1-4; el compuesto de fórmula (IVa) se hace reaccionar con R2X en presencia de un reactivo alcalino para obtener un compuesto de fórmula (IVb); el compuesto de fórmula (IVb) se somete a una reacción de halogenación con un catalizador para obtener un compuesto de fórmula (IVc), en el que el catalizador es preferiblemente azobisisobutironitrilo, y el agente de halogenación es preferiblemente N- bromosuccinimida; el compuesto de fórmula (IVc) se hace reaccionar con una amina de NH(R4)(CH2)nR5 para obtener un compuesto de fórmula (IVd); el compuesto de fórmula (IVd) se somete a una reacción de reducción con hierro en presencia de cloruro de amonio para reducir un grupo nitro a un grupo amino para obtener un compuesto de fórmula (IVA); el compuesto de fórmula (IVA) se hace reaccionar adicionalmente con un reactivo de acilación para obtener un compuesto de fórmula (IV);
en la que: X es halógeno,
n, D, E, G, Ra , R1~R5 son como se definen en la fórmula (I).
En las soluciones técnicas mencionadas, la condición alcalina se proporciona mediante una base orgánica o una base inorgánica, en el que la base orgánica incluye, pero sin limitación, trietilamina, piridina, 2,6-lutidina, metóxido sódico, hexametildisilazida de litio, hexametildisilazida potásica, n-butillitio, ferc-butóxido potásico o bromuro de tetrabutilamonio; y la base inorgánica incluye, pero sin limitación, hidruro sódico, carbonato sódico, bicarbonato sódico, carbonato potásico, bicarbonato potásico, carbonato de cesio, hidróxido de litio, hidróxido sódico o hidróxido potásico. En el método de la presente invención, la condición alcalina de ciclación es preferiblemente una base orgánica y más preferiblemente es metóxido sódico
El agente de reducción incluye, pero sin limitación, hidrógeno o polvo de hierro;
Los agentes de acilación incluyen, pero sin limitación, ácido carboxílico, cloruro de acilo, cloruro de sulfurilo, formiato de metilo halogenado, isocianato o trifosgeno y metoxiamina.
La invención se ilustrará adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos específicos. Debe entenderse que estos ejemplos están destinados únicamente a demostrar la invención sin limitar el ámbito de la invención.
Los métodos experimentales en los siguientes ejemplos para los que no se indican condiciones específicas se realizarán de acuerdo con condiciones convencionales o condiciones recomendadas de los materiales de partida y el fabricante del producto. Los reactivos experimentales para los que no se indican fuentes específicas serán reactivos convencionales que están disponibles en el mercado.
Ejemplos
Las estructuras de los compuestos se identifican por resonancia magnética nuclear (RMN) y/o espectrometría de masas (EM). El desplazamiento químico de RMN (8) se da en 10' 6 (ppm). RMN se determina mediante un Bruker AVANCE-4O0. Los disolventes para RMN son dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-cfó), cloroformo deuterado (CDCb) y metanol deuterado (CD3OD), con tetrametilsilano (TMS) como patrón interno.
La EM se determina mediante un espectrómetro de masas FINNIGAN LCQAd (IEN) (fabricante: Thermo, tipo: Finnigan LCQ advantage MAX).
La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) se determina mediante un espectrómetro de cromatografía líquida de alta presión Agilent 1200DAD (columna cromatográfica Sunfire C18, 150 x 4,6 mm) y un espectrómetro de cromatografía líquida de alta presión Waters 2695-2996 (columna cromatográfica Gimini C18, 150 x 4,6 mm).
La tasa de inhibición promedio de quinasa e CI50 se determinan mediante un NovoStar ELISA (BMG Co., Alemania).
Se utiliza gel de sílice Yantai Huanghai HSGF254 o Qingdao GF254 para cromatografía de capa fina sobre gel de sílice (TLC). La dimensión de las placas utilizadas en la TLC fue de 0,15 mm a 0,2 mm, y la dimensión de las placas utilizadas en la purificación del producto es de 0,4 mm a 0,5 mm.
Se utiliza gel de sílice malla 200 a 300 de Yantai Huanghai como un vehículo en cromatografía en columna.
Los materiales de partida conocidos de la presente invención pueden prepararse por métodos de síntesis convencionales en la técnica o pueden adquirirse de ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc., o Dari Chemical Company, etc.
A menos que se indique otra cosa, las reacciones pueden realizarse en una atmósfera de nitrógeno o una atmósfera de argón.
La expresión "atmósfera de argón" o "atmósfera de nitrógeno" significa que un matraz de reacción se equipa con un globo de argón o nitrógeno de 1 l.
A menos que se indique otra cosa, la solución en los ejemplos se refiere a una solución acuosa.
A menos que se indique otra cosa, la temperatura de reacción en los ejemplos es temperatura ambiente, y el intervalo de la temperatura ambiente fue de 20 °C a 30 °C.
El proceso de reacción se controló por cromatografía de capa fina (TLC) y el sistema de disolventes de desarrollo incluye: A: un sistema de diclorometano y metanol, B: un sistema de n-hexano y acetato de etilo, C: un sistema de éter de petróleo y acetato de etilo, D: acetona. La proporción del disolvente puede ajustarse de acuerdo con la polaridad de los compuestos.
El sistema de elusión para purificación de los compuestos por cromatografía en columna y cromatografía de capa fina incluye: A: un sistema de diclorometano y metanol, B: un sistema de n-hexano y acetato de etilo, C: un sistema de diclorometano y acetona, D: un sistema de acetato de etilo y diclorometano, E: un sistema de acetato de etilo y diclorometano y n-hexano, F: un sistema de acetato de etilo y diclorometano y acetona. La proporción en volumen del disolvente puede ajustarse de acuerdo con la polaridad de los compuestos, y algunas veces también puede añadirse un poco de reactivo alcalino, tal como trietilamina o reactivo ácido, tal como ácido acético.
Ejemplo 1
W-(4-(7-(2,6-difluorobencil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)acetamida
Etapa 1
3-Am¡no-5-metil-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
Se añadieron sucesivamente 3-(terc-but¡lamino)-5-met¡l-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo 1a (12,10 g, 34,93 mmol, preparado por un método bien conocido desvelado en "Synthesis, 1988, (3), 203-207") y 100 ml de ácido trifluoroacético a un matraz con forma de berenjena de 250 ml. La mezcla se agitó durante 2,5 horas a 85 °C y después la reacción se detuvo. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. Los residuos se añadieron gota a gota con una solución saturada de bicarbonato sódico para ajustar el pH> 7 y se filtraron. La torta de filtro se disolvió en diclorometano y la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se suspendieron con 50 ml de una mezcla de diclorometano y metanol (v/v = 20:1) y se filtró. El producto se secó para obtener 5,30 g de un sólido de color amarillo. La solución madre se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 3-amino-5-met¡l-1-(4-n¡trofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo 1b (producto total 6,07 g, sólido de color amarillo), rendimiento: 60,1 %.
EM m/z (IEN): 291,2 [M+1]
Etapa 2
3-(3-(2-Fluoro-3-metox¡fen¡l)ureido)-5-met¡l-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
Se disolvió 3-am¡no-5-metil-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo,1b (550 mg, 1,89 mmol) en 50 ml de diclorometano. La mezcla que no era suficientemente soluble a temperatura ambiente se añadió con trietilamina (0,66 ml, 4,75 mmol) y trifosgeno (225 mg, 0,76 mmol) y se agitó hasta que se disolvió por completo. Después de agitar durante 30 minutos, la solución de reacción se añadió con 2-fluoro-3-metoxianilina (283 mg, 2 mmol) y se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente, después la reacción se detuvo. La solución de reacción se concentró a presión reducida y los residuos se añadieron con 20 ml de agua, se extrajeron con diclorometano (50 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 3-(3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)ure¡do)-5-metil-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carboxilato de etilo, 1c (640 mg, sólido de color blanco), rendimiento: 73,9 %.
EM m/z (IEN): 458,1 [M+1]
Etapa 3
5-(2-Fluoro-3-metox¡fen¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-4,6 (5H,7H)-diona
Se disolvió 3-(3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)ure¡do)-5-metil-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo, 1c (640 mg, 1.40 mmol) en 30 ml de etanol y después se añadió metóxido sódico (190 mg, 3,52 mmol). Después de hacer reaccionar durante 3 horas a temperatura ambiente, la solución de reacción se calentó a 80 °C y se hizo reaccionar adicionalmente durante 1 hora. Después se detuvo la reacción. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se añadieron 3,5 ml de una solución 1 M de ácido clorhídrico y se filtró. La torta de filtro se lavó sucesivamente con agua (20 ml x 1), etanol (10 ml x 1) y metil terc-butil éter (5 ml x 1) y se secó para obtener el compuesto del título, 5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofenil)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6 (5H,7H)-diona, 1d (536 mg, sólido de color amarillo claro), rendimiento: 93,2 %. EM m/z (IEN): 412,2 [M+1]
Etapa 4
7-(2,6-D¡fluorobenc¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-pirazolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
Se disolvieron sucesivamente 5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-4,6 (5H,7H)-diona, 1d (530 mg, 1,29 mmol), 2-(clorometil)-1,3-difluorobenceno (230 mg, 1,41 mmol), yoduro potásico (235 mg, 1.41 mmol) y carbonato potásico (196 mg, 1,42 mmol) en 15 ml de W,W-dimetilformamida. Después de hacer reaccionar durante 24 horas a temperatura ambiente, la reacción se detuvo y la solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se añadieron con 30 ml de agua y 20 ml de metil terc-butil éter con agitación y después se filtraron. La torta de filtro se disolvió en 50 ml de diclorometano, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para obtener 570 mg de un sólido. La solución madre se extrajo, la fase orgánica se lavó sucesivamente con agua (20 ml x 3), una solución saturada de cloruro sódico (20 ml x 1), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se suspendieron con 15 ml de una mezcla de n-hexano y metil terc-butil éter (v/v = 1: 1) y se filtró. La torta de filtro se secó para obtener 110 mg de un sólido. Se obtuvo el compuesto del título, 7-(2,6-difluorobencil)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1e (producto total 680 mg, sólido de color castaño), rendimiento: 98,3 %.
EM m/z (IEN): 538,2 [M+1]
Etapa 5
3-(bromomet¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-diona
En una atmósfera de argón, se d¡solv¡eron suces¡vamente 7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1e (660 mg, 1,23 mmol), azob¡s¡sobut¡ron¡tr¡lo (24 mg, 0,15 mmol) y W-bromosucc¡n¡m¡da (262 mg, 1,47 mmol) en 20 ml de clorobenceno. Después de hace reacc¡onar durante 12 horas a 85 °C, la reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y después se lavó suces¡vamente con una soluc¡ón saturada de cloruro sód¡co (15 ml x 1) y una soluc¡ón saturada de t¡osulfato sód¡co (15 ml x 1). La fase acuosa se extrajo con d¡clorometano (40 ml x 2). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da para obtener el compuesto del título en bruto, 3-(bromomet¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H -p¡razolo[3,4-d] p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1f (900 mg, sól¡do de color amar¡llo claro), que se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente etapa.
EM m/z (IEN): 616,1 [M+1]
Etapa 6
7-(2,6-D¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
La 3-(bromomet¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H -p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona en bruto, 1f (900 mg, 1,46 mmol) se d¡solv¡ó en 3 ml de una soluc¡ón de d¡met¡lam¡na en tetrah¡drofurano. Después de hacer reacc¡onar durante 12 horas a temperatura amb¡ente, la reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce con el s¡stema de eluyentes D para obtener 627 mg de compuesto en bruto. El compuesto en bruto se pur¡f¡có por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de eluyentes E para obtener el compuesto del título, 7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1g (223 mg, sól¡do de color amar¡llo claro), rend¡m¡ento: 31,0 %. EM m/z (IEN): 581,3 [M+1]
Etapa 7
2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
Se d¡solv¡ó 7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1g (212 mg, 0,36 mmol) en 8 ml de ác¡do fórm¡co y después se añad¡eron 0,25 ml de una soluc¡ón de HCl 4 M en 1,4-d¡oxano y palad¡o al 10 % sobre carbono (40 mg). La mezcla se purgó tres veces con h¡drógeno y se h¡zo reacc¡onar durante 2 horas en una atmósfera de h¡drógeno y pres¡ón normal, después la reacc¡ón se detuvo y la mezcla de reacc¡ón se f¡ltró. La torta de f¡ltro se lavó con metanol (20 ml x 2). La fase orgán¡ca se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se añad¡eron con 50 ml de d¡clorometano y 15 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co, y se ag¡taron durante 10 m¡nutos. La soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co se añad¡ó gota a gota para ajustar el pH>7, y la fase acuosa se somet¡ó a extracc¡ón. La fase acuosa se extrajo con d¡clorometano (20 ml x 3). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de eluyentes A para obtener el compuesto del título, 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1h (180 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 89,5 %. EM m/z (IEN): 551,3 [M+1]
Etapa 8
W-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)acetam¡da
Se d¡solv¡ó 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1h (33 mg, 0,059 mmol) en 5 ml de d¡clorometano, se añad¡ó tr¡et¡lam¡na (13 pl, 0,094 mmol) y anhídr¡do acét¡co (7 pl, 0,072 mmol). Después de hacer reacc¡onar durante 12 horas a temperatura amb¡ente, la reacc¡ón estaba ¡ncompleta. Después, se añad¡eron 5 pl de anhídr¡do acét¡co y la mezcla se calentó a 35 °C y se h¡zo reacc¡onar ad¡c¡onalmente durante 2 horas. La reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 2 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co, se ag¡tó durante 10 m¡nutos y se extrajo. La fase acuosa se extrajo con d¡clorometano (15 ml x 3). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, W-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)acetam¡da, 1 (25 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 71,4 %.
EM m/z (IEN): 593,1 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 7,89 (d, 2H), 7,67 (d, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,25-7,30 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,08 (t, 1H), 7,89­ 7,94 (m, 3H), 5,45 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,69-3,70 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 2,25 (s, 3H).
Ejemplo 2
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea
Figure imgf000025_0001
Etapa 1
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea
Se d¡solv¡ó 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡ fen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1h (30 mg, 0,054 mmol) en 5 ml de d¡clorometano, se añad¡ó tr¡et¡lam¡na (0,045 ml, 0,32 mmol) y tr¡fosgeno (6,5 mg, 0,022 mmol). Después de hacer reacc¡onar durante 1 hora, la soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con metox¡am¡na (6,8 mg, 0,081 mmol) y se h¡zo reacc¡onar ad¡c¡onalmente durante 12 horas a temperatura amb¡ente, y después se complementó con tr¡fosgeno (18 mg, 0,061 mmol) y se h¡zo reacc¡onar ad¡c¡onalmente durante 1 hora a 35 °C, segu¡do de la ad¡c¡ón de metox¡am¡na (100 mg, 1,20 mmol) y la reacc¡ón se cont¡nuó durante 2 horas a 35 °C. La reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 10 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co y se extrajo. La fase acuosa se extrajo con d¡clorometano (15 ml x 3). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea, 2 (12 mg, sól¡do de color amar¡llo pálido), rend¡m¡ento: 35,3 %.
EM m/z (IEN): 624,5 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) = 07,90 (d, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,20-7,30 (m, 3H), 7,06-7,08 (m, 1H), 6,89-6,94 (m, 3H), 5,45 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,86 (s, 2H), 2,35 (s, 6H).
Ejemplo 3
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-et¡lurea
Figure imgf000026_0001
Etapa 1
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)-3-etilurea
Se d¡solv¡ó 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡ fen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1h (26 mg, 0,047 mmol) en 3 ml de tetrah¡drofurano y se añad¡ó ¡soc¡anato de etilo (55 pl, 0,69 mmol) y se h¡zo reacc¡onar durante 12 horas a 35 °C. La reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se añad¡eron con 10 ml de agua y 20 ml de d¡clorometano y se extrajeron. La fase acuosa se extrajo con d¡clorometano (15 ml x 3). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-et¡lurea, 3 (12 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 41,4 %.
EM m/z (IEN): 622,5 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) ^ 7 ,80 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,22-7,26 (m, 2H), 7,13-7,15 (m, 1H), 6,99-7,04 (m, 1H), 6,84­ 6,89 (m, 3H), 6,45 (s, 1H), 5,40 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,65 (s, 2H), 3,33-3,35 (m, 2H), 2,30 (s, 6H), 1,20 (t, 3H).
Ejemplo 4
(4-(7-(2,6-D¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)carbamato de met¡lo
Etapa 1
(4-(7-(2,6-D¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)carbamato de met¡lo
Se d¡solv¡ó 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡ fen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1h (35 mg, 0,064 mmol) en 5 ml de d¡clorometano y se añad¡ó tr¡et¡lam¡na (0,8 ml, 5,8 mmol) y cloroform¡ato de met¡lo (0,5 ml, 4,14 mmol). Después de hace reacc¡onar durante 12 horas a 35 °C, la reacc¡ón se detuvo y se enfr¡ó a temperatura amb¡ente. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 10 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co y se extrajo. La fase acuosa se extrajo con d¡clorometano (15 ml x 3). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de eluyentes A para obtener el compuesto del título, (4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)carbamato de met¡lo, 4 (24 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 61,5 %.
EM m/z (IEN): 609,5 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) ^ 7 ,88 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,25-7,27 (m, 1H), 7,18-7,20 (m, 1H), 7,06-7,08 (m, 1H), 6,88­ 6,94 (m, 3H), 6,78 (s, 1H), 5,45 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,65-3,73 (m, 2H), 2,35 (s, 6H).
Ejemplo 5
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea
Figure imgf000027_0001
Etapa 1
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea
Se d¡solv¡ó ác¡do acét¡co (46 mg, 0,77 mmol) en 1 ml de tolueno y se añad¡ó con W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,2 ml, 1,13 mmol) y d¡fen¡lfosfor¡l az¡da (0,16 ml, 0,73 mmol). La mezcla se ag¡tó durante 1 hora a 70 °C y después se enfr¡ó en un baño de h¡elo, segu¡do de la ad¡c¡ón de 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 1h (30 mg, 0,050 mmol) y 2 ml de d¡clorometano en un baño de h¡elo. La mezcla se h¡zo reacc¡onar durante 12 horas a temperatura amb¡ente. La reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 10 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co, y se extrajo con d¡clorometano (25 ml x 1). La fase orgán¡ca se lavó con agua (10 ml x 1) y una soluc¡ón saturada de cloruro sód¡co (10 ml x 1), se secó sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea, 5 (8 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 24,4 %.
EM m/z (IEN): 607,9 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 7,79 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,27-7,30 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,06 (t, 1H), 6,880-6,93 (m, 4H), 5,44 (s, 2H), 4,95 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,78 (s, 2H), 2,88 (d, 3H), 2,39 (s, 6H).
Ejemplo 6
1-(4-(3-((Dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)bencil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-et¡lurea
Figure imgf000028_0001
Etapa 1
5-(2-Fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
Se d¡solv¡eron suces¡vamente 5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6 (5H,7H)-d¡ona, 1d (1,90 g, 4,62 mmol), 2-(bromomet¡l)-1-fluoro-3-(tr¡fluoromet¡l)benceno (1,31 g, 5,10 mmol), yoduro potás¡co (844 mg, 5,08 mmol) y carbonato potás¡co (702 mg, 5,09 mmol) en 54 ml de W,W-d¡met¡lformam¡da. Después de ag¡tar durante 20 horas a temperatura amb¡ente, la reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se añad¡eron con agua y éter para suspender durante 1 hora y se f¡ltraron. La torta de f¡ltro se lavó con éter (10 ml x 3) y se secó para obtener el compuesto del título, 5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 6a (1,91 g, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento 70,7 %. EM m/z (IEN): 588,1 [M+1]
Etapa 2
3-(bromomet¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
Se d¡solv¡eron 5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4 d]pmmid¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 6a (1,81 g, 3,08 mmol), azobisisobutironitrilo (61 mg, 0,37 mmol) y W-bromosuccinimida (660 mg, 3,71 mmol) en 53 ml de clorobenceno. La solución resultante se purgó tres veces con argón y se hizo reaccionar durante 19 horas a 85 °C en una atmósfera de argón. La reacción se detuvo y la solución de reacción se lavó con una solución saturada de tiosulfato sódico (30 ml x 1) y una solución saturada de cloruro sódico (50 ml x 2), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título en bruto, 3-(bromomet¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p irazolo^^-dJpirim id in^^^H JH ^diona, 6b (2,18 g, sólido de color amarillo pálido), que se usó directamente en la siguiente etapa.
EM m/z (IEN): 666,0 [M+1]
Etapa 3
3-((D¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-dJpirim idin^^^H JH ^diona
La 3-(bromomet¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-dJpirim idin^^^H JH ^diona en bruto, 6b (2,18 g, 3,27 mmol) y dimetilamina (solución 2 M en THF) (6,8 ml 13,6 mmol) se añadieron al matraz de reacción y se agitaron durante 12 horas a temperatura ambiente. La reacción se detuvo y la solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron por un método de separación preparativa para obtener el compuesto del título, 3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tn fluorom eti^bencil^-^-n itrofem l^H -pirazolo^^-dJpinm idin^^^H JH^diona, 6c (455 mg, sólido de color blanco), rendimiento: 22,1 %.
EM m/z (IEN): 630,8 [M+1]
Etapa 4
2-(4-am¡nofen¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(t^fluoromet¡l)benc¡l)-2H-p¡razolo[3,4-dJp irim id in^^^H jH ^d iona
Se disolvió 3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p irazolo^^-dJpirim id in^^^H JH ^diona, 6c (200 mg, 0,32 mmol) en 8 ml de ácido fórmico y se añadieron 0,25 ml de una solución de HCl 4 M en 1,4-dioxano y 10 % de Pd/C (50 mg). La mezcla se purgó tres veces con hidrógeno y se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La reacción se detuvo y se filtró. La torta de filtro se lavó con una pequeña cantidad de metanol. El filtrado se concentró a presión reducida, se añadieron 50 ml de diclorometano y 20 ml de una solución de bicarbonato sódico y se agitaron durante 10 minutos. La fase acuosa se ajustó a pH 8 y se extrajo. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (25 ml x 2) y las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 2-(4-aminofenil)-3-((d im etilam ino^etil^-p-fluoro^-m etoxifem l)-/’- ^ -fluoro^tnfluoromeiiObencil^H-pirazolo^^-dJpmmidin-4,6(5H,7H)-diona, 6d (135 mg, sólido de color blanco), rendimiento: 71,1 %.
EM m/z (IEN): 600,9 [M+1]
Etapa 5
1-(4-(3-((D¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-et¡lurea
Se disolvió 2-(4-am¡nofen¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-( trifluorometil)bencN)-2H-p irazolo^^-dJpirim id in^^^H JH ^diona, 6d (30 mg, 0,050 mmol) en 1 ml de diclorometano y se añadió isocianato de etilo (0,06 ml, 0,76 mmol). Después de hace reaccionar durante 12 horas a 35 °C, la reacción se detuvo y la solución de reacción se añadió con 5 ml de una solución saturada de bicarbonato sódico y 20 ml de una solución de diclorometano y se sometió a extracción. La fase orgánica se lavó con agua (10 ml x 1) y una solución saturada de cloruro sódico (5 ml x 1), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró, El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrahidro^H-pirazolo^^-dJpm midin^-ilfem l^-etilurea, 6 (15 mg, sólido de color blanco), rendimiento: 44,1 %. EM m/z (IEN): 671,9 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 7,75 (d, 2H), 7,51 (d, 1H), 7,46 (d, 2H), 7,37-7,40 (m, 1H), 7,18-7,24 (m, 2H), 7,15 (t, 1H), 6,91 (t, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,60 (s, 2H), 4,92 (s, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,69-3,76 (m, 2H), 3,28-3,35 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 1,19 (t, 3H).
Ejemplo 7
1-(4-(3-((D¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea
Figure imgf000030_0001
Etapa 1
1-(4-(3-((Dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)bencil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea
Se disolvió 2-(4-am¡nofen¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-( tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 6d (30 mg, 0,050 mmol) en 3 ml de d¡clorometano y se añad¡eron tr¡et¡lam¡na (0,07 ml, 0,50 mmol) y tr¡fosgeno (15 mg, 0,051 mmol). Después de hacer reacc¡onar durante 1 hora a temperatura amb¡ente, la reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 10 ml de agua y después se extrajo con d¡clorometano (25 ml x 1). La fase orgán¡ca se lavó suces¡vamente con una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co (10 ml x 1), agua (10 ml x 1) y una soluc¡ón saturada de cloruro sód¡co (10 ml x 1), se secó sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea, 7 (12 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 33,6 %.
EM m/z (IEN): 673,8 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 7,85 (d, 2H), 7,64-7,70 (m, 3H), 7,53 (d, 1H), 7,39-7,42 (m, 1H), 7,23-7,28 (m, 3H), 7,06 (t, 1H), 6,92 (t, 1H), 5,57-5,65 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,72 (s, 2H), 2,36 (s, 6H).
Ejemplo 8
1-(4-(3-((D¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea
Figure imgf000031_0001
Etapa 1
1-(4-(3-((Dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)bencil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡mid¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea
Se disolvió ácido acético (62 mg, 1,03 mmol) en 1 ml de tolueno y se añadió W,W-di¡soprop¡let¡lam¡na (0,28 ml, 1,58 mmol) y difenilfosforil azida (0,20 ml, 0,98 mmol). Después de hace reaccionar durante 1,5 horas a 70 °C, la solución de reacción se añadió con 2-(4-am¡nofen¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-( tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 6d (30 mg, 0,050 mmol) y 1 ml de diclorometano y se hizo reaccionar adicionalmente durante 12 horas a temperatura ambiente. La reacción se detuvo. La solución de reacción se añadió con 5 ml de bicarbonato sódico saturado y después se extrajo con diclorometano (25 ml x 1). La fase orgánica se lavó con agua (10 ml x 1) y una solución saturada de cloruro sódico (10 ml x 1), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título en bruto, que se purificó adicionalmente por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-7-(2-fluoro-6-(trifluoromet¡l)benc¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea, 8 (13 mg, sólido de color blanco), rendimiento 39,4 %.
EM m/z (IEN): 658,2 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 7,76 (d, 2H), 7,51-7,53 (m, 1H), 7,47 (d, 2H), 7,39-7,40 (m, 1H), 7,24 (t, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,04 (t, 1H), 6,89 (t, 1H), 6,74 (m, 1H), 5,56-5,64 (m, 2H), 4,85 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,77 (s, 2H), 2,88 (d, 3H), 2,38 (s, 6H).
Ejemplo 9
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡ridaz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-pirazolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metilurea
Figure imgf000031_0002
Figure imgf000032_0001
Etapa 1
5-(Bromomet¡l)-3-(ferc-butilam¡no)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
Se añadió 3-(ferc-but¡lam¡no)-5-metil-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo, 1a (23 g, 66,40 mmol), azobisisobutironitrilo (2,18 g, 13,28 mmol), W-bromosuccinimida (14,18 g, 79,68 mmol) y 400 ml de clorobenceno a un recipiente de reacción de un solo puerto de 1 l. La solución de reacción se agitó uniformemente y se purgó tres veces con argón. Después de hace reaccionar durante 64 horas a 85 °C, se detuvo la reacción. La solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se añadieron con 300 ml de diclorometano y se lavaron sucesivamente con agua (100 ml x 2), una solución saturada de tiosulfato sódico (100 ml x 2) y una solución saturada de cloruro sódico (100 ml x 2). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título en bruto, 5-(bromometil)-3-(ferc-but¡lam¡no)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carboxilato de etilo, 9a (25 g, aceite de color pardo), que se usó directamente en la siguiente etapa.
EM m/z (IEN): 427,1 [M+2]
Etapa 2
3-(ferc-But¡lam¡no)-5-((d¡met¡lamino)met¡l)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
El 5-(bromomet¡l)-3-(ferc-butilam¡no)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo en bruto, 9a (25 g, 58,78 mmol), una solución de dimetilamina en THF (88 ml, 176,35 mmol) y 120 ml de THF se añadieron a un matraz de reacción de un solo puerto de 500 ml y se agitaron hasta disolución. Después de agitar durante 3 horas a temperatura ambiente, se detuvo la reacción. La solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el sistema de eluyentes C para obtener el compuesto del título, 3-(ferc-but¡lam¡no)-5-((d¡met¡lam¡no)metil)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo, 9b (6 g, aceite de color pardo), rendimiento 26,2 %.
EM m/z (IEN): 390,2 [M+1]
Etapa 3
3-Am¡no-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
Se añad¡eron 3-(terc-but¡lam¡no)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de et¡lo, 9b (6 g, 15,41 mmol) y 80 ml de ác¡do tr¡fluoroacét¡co a un matraz de reacdón de un solo puerto de 100 ml y se ag¡taron un¡formemente. La mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora y la reacc¡ón se detuvo. La soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se añad¡eron con 50 ml de d¡clorometano y después se añad¡ó gota a gota con una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co para ajustar el pH >7. La fase orgán¡ca se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro, se f¡ltró y se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se añad¡eron con 100 ml de metanol y 20 ml de d¡clorometano y se ag¡taron hasta d¡soluc¡ón. La soluc¡ón resultante se añad¡ó con carbonato potás¡co (6,37 g, 46,16 mmol) y se ag¡tó durante 17 horas a temperatura amb¡ente y después se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce con el s¡stema de eluyentes B para obtener el compuesto del título, 3-am¡no-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de met¡lo, 9c (3,30 g, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento 67,1 %.
EM m/z (IEN): 320,2 [M+1]
Etapa 4
5-((D¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ure¡do)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de met¡lo
Se añad¡eron 3-am¡no-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de met¡lo, 9c (3,30 g, 10,33 mmol) y 100 ml de d¡clorometano a un matraz de reacc¡ón de un solo puerto de 250 ml y se ag¡taron un¡formemente. La soluc¡ón resultante se añad¡ó con tr¡et¡lam¡na (5,8 ml, 41,32 mmol) y tr¡fosgeno (1,84 g, 6,20 mmol), y después se ag¡tó durante 1 hora a temperatura amb¡ente. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 3-am¡no-6-metox¡p¡r¡daz¡na (1,94 g, 15,50 mmol, preparada de una manera conoc¡da desvelada en "Journal of Med¡c¡nal Chem¡stry, 2006, 49(14), 4409-4424"), y se ag¡tó durante 2 horas a temperatura amb¡ente y después se detuvo la reacc¡ón. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 200 ml de agua y se extrajo con d¡clorometano (100 ml x 3). La fase orgán¡ca se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce con el s¡stema de eluyentes B para obtener el compuesto del título, 5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ure¡do)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de met¡lo, 9d (2,80 g, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento 57,6 %.
EM m/z (IEN): 470,9 [M+1]
Etapa 5
3-((D¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
Se añad¡eron 5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ure¡do)-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de met¡lo, 9d (2,80 g, 5,95 mmol) y 120 ml de metanol a un matraz de reacc¡ón de un solo puerto de 250 ml y se ag¡taron un¡formemente. La soluc¡ón resultante se añad¡ó con metóx¡do sód¡co (1,61 g, 29,76 mmol). La mezcla se calentó a 50 °C y se ag¡tó durante 4 horas y después se detuvo la reacc¡ón. La soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se añad¡eron con 100 ml de agua y después se añad¡eron gota a gota con ác¡do clorhídr¡co concentrado para ajustar el pH a 5-6. La soluc¡ón se extrajo con d¡clorometano (100 ml x 3). La fase orgán¡ca se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce con el s¡stema de elus¡ón B para obtener el compuesto del título, 3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 9e (1,80 g, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento 69,0 %. EM m/z (IEN): 438,9 [M+1]
Etapa 6
7-(2,6-D¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
Se añad¡eron 3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 9e (900 mg, 2,05 mmol) y 50 ml de W,W-d¡met¡lformam¡da se añad¡eron a un matraz de reacc¡ón de una sola boca de 100 ml y se ag¡taron un¡formemente. La soluc¡ón resultante se añad¡ó con cloruro de 2,6-d¡fluorobenc¡lo (367 mg, 2,26 mmol) y carbonato potás¡co (850 mg, 6,16 mmol). La mezcla se calentó a 40 °C y se ag¡tó durante 17 horas, después la reacc¡ón se detuvo. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 250 ml de agua y se ag¡tó durante 20 m¡nutos. La mezcla se f¡ltró y la torta de f¡ltro se secó al vacío para obtener el compuesto del título, 7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 9f (1,10 g, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento 94,9 %. e M m/z (IEN): 564,9 [M+1]
Etapa 7
2-(4-Am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metoxip¡r¡daz¡n-3-¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d] pirimidin-4,6(5H,7H)-diona
Se añad¡eron 7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-il)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]pir¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-diona, 9f (1 g, 1,77 mmol), palad¡o al 10 % sobre carbono (200 mg) y 80 ml de metanol a un matraz de reacción de un solo puerto de 250 ml y se agitaron uniformemente. La solución resultante se purgó 6 veces con hidrógeno y después se agitó durante 17 horas a temperatura ambiente. La reacción se detuvo. La solución de reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título
2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-4,6(5H,7H)-diona, 9g (785 mg, sólido de color amarillo), rendimiento 82,9 %.
EM m/z (IEN): 534,9 [M+1]
Etapa 8
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡ridaz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-pirazolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metilurea
Se agitaron ácido acético (483 mg, 8,04 mmol) y 15 ml de tolueno hasta disolución en un autoclave de 600 ml. La solución resultante se añadió sucesivamente con W,W-di¡soprop¡let¡lamina (2,1 ml, 12,07 mmol) y difenilfosforilaz i d a (2,22 g, 8,07 mmol). La mezcla se calentó a 75 °C y se agitó durante 1,5 horas. La solución de reacción se añadió con 10 ml de una solución de 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡ridaz¡n-3-¡l)-2H-pirazolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-diona, 9g (480 mg, 0,80 mmol) en THF en un baño de hielo a 0 °C. Después de completarse la adición, la solución de reacción se calentó a 55 °C y se agitó durante 16 horas, después la reacción se detuvo. La solución de reacción se añadió con 20 ml de diclorometano y 20 ml de agua y se sometió a extracción. La fase orgánica se lavó sucesivamente con una solución saturada de bicarbonato sódico (50 ml x 1), agua (50 ml x 1) y una solución saturada de cloruro sódico (50 ml x 1). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el sistema de eluyentes A para obtener el producto en bruto, que se purificó adicionalmente mediante cromatografía de capa fina con el sistema de eluyentes A para obtener el producto en bruto (387 mg, sólido de color pardo), rendimiento en bruto: 81,3 %. Los dos lotes en bruto se combinaron para obtener un producto total de 823 mg, que se purificó por cromatografía de capa fina con el sistema de eluyentes F. El producto resultante se disolvió en metanol y se concentró a presión reducida hasta que se separó un sólido, que se sometió a cristalización para obtener el compuesto del título, 1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metoxip¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡mid¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea, 9 (450 mg, sólido de color blanco), rendimiento total: 36,0 %.
EM m/z (IEN): 592,3 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 8,17 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,42-7,45 (m, 4H), 7,24-7,30 (m, 2H), 6,88 (t, 2H), 5,95 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,23 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 2,91 (s, 3H), 2,33 (s, 6H).
Ejemplo 10
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡ridaz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-pirazolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-etilurea
Etapa 1
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)-3-etilurea
Se d¡solv¡ó 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 9g (22 mg, 0,041 mmol) en 2 ml de d¡clorometano y se añad¡ó con ¡sodanato de etilo (0,1 ml, 1,26 mmol). Después de hace reacc¡onar durante 12 horas a 35 °C, se detuvo la reacc¡ón. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 5 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co y se extrajo con d¡clorometano (30 ml x 1). La fase orgán¡ca se lavó sucesivamente con agua (10 ml x 1), una soluc¡ón saturada de cloruro sód¡co (10 ml x 1), se secó sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-et¡lurea, 10 (10 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 40,0 %.
EM m/z (IEN): 606,2 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 8,07 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,38-7,43 (m, 4H), 7,25-7,28 (m, 2H), 6,858 (t, 2H), 5,87 (t, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,23 (s, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,37 (t, 2H), 2,25 (s, 6H), 1,23 (t, 3H).
Ejemplo 11
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea
Figure imgf000035_0001
Etapa 1
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea
Se d¡solv¡ó 2-(4-am¡nofen¡l)-7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 9g (100 mg, 0,18 mmol) en 5 ml de d¡clorometano y se añad¡ó con N,N- d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,5 ml, 2,90 mmol) y tr¡fosgeno (46 mg, 0,15 mmol). La mezcla se h¡zo reacc¡onar durante 45 m¡nutos a temperatura amb¡ente y después se añad¡ó con clorh¡drato de metox¡am¡na (92 mg, 1,12 mmol). La mezcla se h¡zo reacc¡onar ad¡c¡onalmente durante 12 horas a 40 °C y después la reacc¡ón se detuvo. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 5 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co y después se extrajo con d¡clorometano (25 ml x 1). La fase orgán¡ca se lavó sucesivamente con agua (10 ml x 1) y una soluc¡ón saturada de cloruro sód¡co (10 ml x 1), se secó sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener 62 mg de producto en bruto, que se pur¡f¡có ad¡c¡onalmente dos veces por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea, 11 (45 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 24,7 %. EM m/z (IEN): 608,3 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 7,90 (d, 2H), 7,73 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,41 (d, 1H), 7,26-7,30 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,92 (t, 2H), 5,44 (s, 2H), 4,21 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,70 (s, 2H), 2,35 (s, 6H).
Ejemplo 12
1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)bencil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡nm¡d¡n-2-¡l)feml)-3-metilurea
Figure imgf000036_0001
Etapa 1
3-(3-(6-Metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ure¡do)-5-metil-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
Se d¡solv¡ó 3-am¡no-5-metil-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de et¡lo, 1b (10,80 g, 37,20 mmol) en 500 ml de d¡clorometano y después se añadió con trietilamina (20 ml, 144 mmol) y trifosgeno (5,20 g, 17,5 mmol) sucesivamente. Después de hacer reaccionar durante 1 hora a temperatura ambiente, la solución de reacción se añadió con 3-amino-6- metoxipiridazina (6,60 g, 52,3 mmol) y se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente, después se detuvo la reacción. Los productos resultantes se combinaron y se añadieron con 100 ml de agua. La solución se sometió a extracción. La fase orgánica se lavó con agua (100 ml x 1) y una solución saturada de cloruro sódico (100 ml x 1), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el sistema de eluyentes C para obtener el compuesto del título, 3-(3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ure¡do)-5-metil-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo, 12a (8,72 g, sólido de color amarillo pálido), rendimiento: 53,0 %.
Etapa 2
5-(6-Metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-3-metil-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo [3,4-d]pir¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-diona
Se disolvió 3-(3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ureido)-5-met¡l-1-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo 12a (8,72 g, 19,70 mmol) en 150 ml de metanol y se añadió con metóxido sódico (2,70 g, 50 mmol). La mezcla se calentó a 55 °C y se agitó durante 12 horas, después la reacción se detuvo. La solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se añadieron gota a gota con una solución 1 M de ácido clorhídrico para ajustar el pH <7 y se filtró. La torta de filtro se lavó sucesivamente con agua (30 ml x 1), metanol (30 ml x 1) y éter (20 ml x 1), y se secó al vacío para obtener el compuesto del título en bruto, 5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-il)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo|3,4-d]pir¡mid¡n-4,6(5 H,7H)-diona, 12b (8,34 mg, sólido de color amarillo claro), que se usó directamente en la siguiente etapa. EM m/z (IEN): 396,0 [M+1]
Etapa 3
7- (2-Fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-4,6(5H,7H)-diona
Se disolvió 2-(bromometil)-1-fluoro-3-(trifluorometil)benceno (adquirido de Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., número de producto XW239870821) (308 mg, 1,20 mmol) en 20 ml de N,N-dimetil formamida y se añadió sucesivamente con la 5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-4,6(5 H,7H)-diona en bruto, 12b (395 mg, 1 mmol) y carbonato potásico (276 mg, 2 mmol). Después de hacer reaccionar durante 2 horas a temperatura ambiente, la solución de reacción se detuvo. La solución de reacción se vertió en 100 ml de agua y se filtró. La torta de filtro se secó para obtener el compuesto del título, 7-(2-fluoro-6-(trifluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-3-met¡l-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-pirazolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 12c (465 mg, sólido de color amarillo), rendimiento: 81,4 %. EM m/z (|En ): 570,0 [M-1]
Etapa 4
3-(bromomet¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡mid¡n-4,6(5H,7H)-diona
Se añadieron 7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-3-met¡l-2-(4-nitrofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]pir¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-diona, 12c (465 mg, 0,81 mmol), azobisisobutironitrilo (13 mg, 0,081 mmol), N- bromosuccinimida (174 mg, 0,97 mmol) y 20 ml de clorobenceno a un matraz de reacción de 100 ml. La mezcla se hizo reaccionar durante 17 horas a 80 °C en una atmósfera de argón, después la reacción se detuvo. La solución de reacción se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título en bruto, 3-(bromometil)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡din-4,6(5H,7H)-d¡ona, 12d (600 mg, aceite de color amarillo), que se usó directamente en la siguiente etapa.
EM m/z (IEN): 650,1 [M+1]
Etapa 5
3-((D¡met¡lam¡no)met¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡ridaz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]pir¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
La 3-(bromomet¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡dazin-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]pir¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-diona en bruto, 12d (15 mg, 0,033 mmol) se disolvió en 20 ml de THF y se añadió con una solución 2 M de dimetilamina en THF(1 ml, 2,03 mmol). La mezcla se hizo reaccionar durante 2 horas a temperatura ambiente y después la reacción se detuvo. La solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 3 ((d¡met¡lam¡no)met¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 12e (85 mg, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento: 17,0 %.
EM m/z (IEN): 615,2 [M+1]
Etapa 6
2-(4-Am¡nofen¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona
Se d¡solv¡ó 3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2-(4-n¡trofen¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 12e (100 mg, 0,14 mmol) en 5 ml de ác¡do fórm¡co y se añad¡ó con palad¡o al 10 % sobre carbono (48 mg). La mezcla se purgó tres veces con h¡drógeno a pres¡ón normal y después se h¡zo reacc¡onar durante 3 horas a temperatura amb¡ente en una atmósfera de h¡drógeno. La reacc¡ón se detuvo y se f¡ltró. El f¡ltrado se vert¡ó en 10 ml de agua y después se añad¡ó gota a gota con una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co para ajustar el pH> 7. La soluc¡ón se extrajo con d¡clorometano (25 ml x 3). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 2-(4-am¡nofen¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 12f (50 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 53,0 %.
EM m/z (IEN): 585,2 [M+1]
Etapa 7
1-(4-(3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea
Se d¡solv¡eron ác¡do acét¡co (51 mg, 085 mmol) y W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,22 ml, 1,28 mmol) en 2 ml de tolueno y se añad¡eron con d¡fen¡lfosfor¡l az¡da (236 mg, 0,86 mmol). Después de hace reacc¡onar durante 1,5 horas a 75 °C, la soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con una soluc¡ón 2 ml de 2-(4-am¡nofen¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4,6(5H,7H)-d¡ona, 12f (15 mg, 0,033 mmol) en THF. La soluc¡ón resultante se h¡zo reacc¡onar durante 12 horas a 50 °C y después la reacc¡ón se detuvo. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 10 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co y después se extrajo con d¡clorometano (20 ml x 1). La fase orgán¡ca se recog¡ó y se lavó sucesivamente con agua (10 ml x 1) y cloruro sód¡co saturado (10 ml x 1). La fase orgán¡ca se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-7-(2-fluoro-6-(tr¡fluoromet¡l)benc¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea, 12 (20 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 36,3 %.
EM m/z (IEN): 642,3 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) □ 8,19 (s, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,43-7,46 (m, 3H), 7,34-7,39 (m, 3H), 7,27 (d, 1H), 7,16 (t, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,48 (s, 2H), 4,22 (s, 3H), 3,48 (s, 2H), 2,93 (d, 3H), 2,21 (s, 6H).
Ejemplo 13
1-(4-(1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2,4-d¡oxo-1,2,3,4-tetrah¡drop¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-6-¡l)fen¡l)-3-et¡lurea
Figure imgf000039_0001
Etapa 1
(E)-4-(dimetilamino)-3-(4-nitrofenil)but-3-en-2-ona
Se añadieron 1-(4-nitrofenil)propan-2-ona, 13a (3,8 g, 21,21 mmol) y N,N-dimetilformamida dimetil acetal a un matraz de 50 ml. Después de hacer reaccionar durante 30 minutos a 100 °C, la reacción se detuvo y se añadió con 150 ml de diclorometano con agitación. El producto resultante se purificó mediante una cromatografía en columna sobre gel de sílice con el sistema de eluyentes A para obtener el compuesto del título, (E)-4-(dimetNamino)-3-(4-nitrofenN)but-3-en-2- ona, 13b (3 g, sólido de color amarillo), rendimiento: 60,5 %. EM m/z (IEN): 235,0 [M+1]
Etapa 2
3- Metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxNato de etilo
Se disolvieron (E)-4-(dimetilamino)-3-(4-nitrofenil) but-3-en-2-ona, 13b (1,50 g, 6,48 mmol) y clorhidrato de 2-aminoacetilacetato (1,40 g, 7,78 mmol) en 40 ml de ácido acético. La mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 16 horas y a 100 °C durante 5 horas, después la reacción se detuvo. La solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se añadieron con 120 ml de diclorometano y se lavaron con una solución saturada de bicarbonato sódico (50 ml x 1). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se suspendieron con 15 ml de acetato de etilo y después se filtraron. La torta de filtro se secó para obtener el compuesto del título, 3-metil-4-(4-nitrofenN)-1H-pirrol-2-carboxilato de etilo, 13c (412 mg, sólido de color amarillo), rendimiento: 24,5 %.
EM m/z (IEN): 273,1 [M-1]
Etapa 3
1-Amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxNato de etilo
Se disolvió 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato de etilo, 13c (412 mg, 1,50 mmol) en 6 ml de N,N- dimetilformamida y después se añadió hidruro sódico (72 mg, 1,80 mmol) en un baño de hielo. La mezcla se hizo reaccionar durante 30 minutos a temperatura ambiente y después se añadieron 20 ml de una solución de cloramina. La mezcla se hizo reaccionar adicionalmente durante 2 horas a temperatura ambiente y después la reacción se detuvo.
La solución de reacción se añadió con 50 ml de una solución saturada de tiosulfato sódico y se agitó durante 10 minutos para formar capas. La fase acuosa se extrajo con éter (30 ml x 3). La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml x 2), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título, 1-amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato de etilo, 13d (381 mg, sólido de color amarillo), rendimiento 87,7 %.
EM m/z (IEN): 290,2 [M+1]
Etapa 4
1-(3-(2-Fluoro-3-metoxifenil)ureido)-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato de etilo
Se añadió 1-amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato de etilo, 13d (381 mg, 1,30 mmol) a 30 ml de diclorometano y se agitó hasta disolución, después se añadió trietilamina (328 mg, 3,25 mmol) y trifosgeno (157 mg, 0,53 mmol). Después de hacer reaccionar durante 30 minutos a temperatura ambiente, la solución de reacción se añadió con 2-fluoro-3-metoxianilina (202 mg, 1,43 mmol). La mezcla se hizo reaccionar adicionalmente a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se detuvo. La solución de reacción se filtró. La torta de filtro se lavó sucesivamente con agua (10 ml x 2) y acetato de etilo (2 ml x 3) y después se secó para obtener el compuesto del título, 1 -(3-(2-fluoro-3-metoxifenil)ureido)-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato de etilo, 13e (296 mg, sólido de color amarillo), rendimiento 49,9 %.
EM m/z (IEN): 457,3 [M+1]
Etapa 5
3-(2-Fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona
Se disolvieron 1-(3-(2-fluoro-3-metoxifenil)ureido)-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato de etilo, 13e (290 mg, 0,64 mmol) e hidróxido sódico (128 mg, 3,20 mmol) en 10 ml de diclorometano. Después de hace reaccionar durante 2 horas a 80 °C, se detuvo la reacción. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se añadió gota a gota una solución 1 M de ácido clorhídrico para ajustar el pH a 3-4. Un sólido se separó y se filtró. La torta de filtro se lavó sucesivamente con agua (20 ml x 3) y etanol (10 ml x 1) para obtener el compuesto del título, 3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-t][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona, 13f (192 mg, sólido de color gris), rendimiento 73,3 %.
EM m/z (IEN): 411,0 [M+1]
Etapa 6
1-(2,6-Difluorobencil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona
Se añadieron 3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona, 13f (192 mg, 0,47 mmol), 2-(clorometil)-1,3-difluorobenceno (84 mg, 0,52 mmol) y carbonato potásico (162 mg, 1,75 mmol) a 10 ml de W,W-dimetilformamida. Después de hace reaccionar durante 16 horas a 50 °C, se detuvo la reacción. La solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se añadieron con 20 ml de agua, (20 ml x 1) y se extrajeron con diclorometano (20 ml x 1). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). Las fases orgánicas se recogieron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 1-(2,6-difluorobencil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona, 13g (160 mg, sólido de color amarillo), rendimiento 63,7 %.
EM m/z (IEN): 537,0 [M+1]
Etapa 7
5-(Bromometil)-1-(2,6-difluorobencil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona
Se disolvieron 1-(2,6-difluorobencil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2,4(1 H,3H)-diona, 13g (120 mg, 0,22 mmol), azobisisobutironitrilo (8 mg, 0,044 mmol) y W-bromosuccinimida (47 mg, 0,26 mmol) en 5 ml de clorobenceno. La mezcla se hizo reaccionar durante 16 horas a 85 °C en una atmósfera de argón y la reacción se detuvo. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. Los residuos se añadieron con 10 ml de agua y se extrajeron con diclorometano (10 ml x 1). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). La fase orgánica se combinó, se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (20 ml x 1), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título, 5-(bromometil)-1-(2,6-difluorobencil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona, 13h (130 mg, sólido de color amarillo), rendimiento: 96,2 %. EM m/z (IEN): 616,0 [M+1]
Etapa 8
1-(2,6-Difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f[1,2,4]triazin-2,4(1 H,3H)-d¡ona
La 5-(bromomet¡l)-1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-6-(4-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1H,3H)-diona en bruto, 13h (130 mg, 0,21 mmol) y W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (81 mg, 0,63 mmol) se disolvieron en 5 ml de THF y se añad¡eron 1,6 ml de una soluc¡ón de d¡met¡lam¡na en tetrah¡drofurano. La mezcla se h¡zo reacc¡onar durante 1 hora a 0~5 °C y después la reacc¡ón se detuvo. La soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-6-(4-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-/:][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1H,3H)-d¡ona, 13¡ (40 mg, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento: 33,1 %.
EM m/z (IEN): 580,2 [M+1]
Etapa 9
6-(4-Am¡nofen¡l)-1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4] tr¡az¡n-2,4(1 H,3H)-d¡ona
Se d¡solv¡eron 1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-6-(4-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-/] [1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1H,3H)-d¡ona, 13¡ (40 mg, 0,069 mmol), cloruro de amon¡o (30 mg, 0,55 mmol) y h¡erro (16 mg, 0,28 mmol) en 5 ml de una mezcla de etanol y agua (v/v = 4: 1). La mezcla se h¡zo reacc¡onar durante 1 hora a 80 °C y después la reacc¡ón se detuvo. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 20 ml de agua y después se extrajo con d¡clorometano (10 ml x 3). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se lavaron con una soluc¡ón saturada de cloruro sód¡co (20 ml x 1), se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 6-(4-am¡nofen¡l)-1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡ fen¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1 H,3H)-d¡ona, 13j (20 mg, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento: 52,6 %.
EM m/z (IEN): 550,2 [M+1]
Etapa 10
1-(4-(1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2,4-d¡oxo-1,2,3,4-tetrah¡drop¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-6-¡l)fen¡l)-3-et¡lurea
Se d¡solv¡eron 6-(4-am¡nofen¡l)-1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1H,3H)-d¡ona, 13j (20 mg, 0,036 mmol) e ¡soc¡anato de et¡lo (13 mg, 0,18 mmol) en 5 ml de tetrah¡drofurano en un tubo cerrado hermét¡camente de 30 ml. Después de hace reacc¡onar durante 16 horas a 50 °C, se detuvo la reacc¡ón. La soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2,4-d¡oxo-1,2,3,4-tetrah¡drop¡rrolo[2,-1f][1,2,4]tr¡az¡n-6-¡l)fen¡l)-3-et¡lurea, 13 (15 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 68,1 %.
EM m/z (IEN): 621,3 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) dd7,87-7,77 (m, 4H), 7,69 (s, 1H), 7,58-7325 (m, 4H), 7,12-7,08 (m, 1H), 6,80-6,71 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,45-3,50 (m, 2H), 3,20-3,31 (m, 2H), 2,16 (s, 6H), 1,12-1,03 (m, 3H)
Ejemplo 14
1-(4-(1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(2-fluoro-3-metox¡fen¡l)-2,4-d¡oxo-1,2,3,4-tetrah¡drop¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-6-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea
Figure imgf000042_0001
Etapa 1
1-(4-(1-(2,6-Difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metilurea
Se disolvieron ácido acético (70 mg, 1,12 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (0,32 ml, 1,80 mmol) en 1 ml de tolueno y después se añadió difenilfosforil azida (0,25 ml, 1,20 mmol). Después de hace reaccionar durante 1,5 horas a 70 °C, la solución de reacción se añadió con 1 ml de una solución de 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxi fenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona, 13j (30 mg, 0,054 mmol) en diclorometano. La solución de reacción se hizo reaccionar adicionalmente durante 12 horas a temperatura ambiente y después se añadieron 15 ml de agua y se extrajeron con diclorometano (30 ml x 1). La fase orgánica se lavó sucesivamente con bicarbonato sódico saturado (10 ml x 1), agua (10 ml x 1) y una solución saturada de cloruro sódico (10 ml x 1), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título
1-(4-(1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metilurea, 14 (9 mg, sólido de color blanco), rendimiento: 27,3 %.
EM m/z (IEN): 606,9 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8,86 (s, 1H), 7,55 (s, 2H), 7,24-7,35 (m, 3H), 7,68-7,14 (m, 6H), 6,21 (s, 1H), 5,60-5,74 (m, 2H), 4,54-4,59 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 2,77 (s, 3H), 2,55 (s, 6H).
Ejemplo 15
1-(4-(1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metoxiurea
Figure imgf000043_0001
Etapa 1
1-(4-(1-(2,6-Difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metoxiurea
Se disolvió 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxi fenil)pirrolo[ 2,1-f][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona, 13j (55 mg, 0,10 mmol) en 4 ml de tetrahidrofurano y después se añadieron cloroformiato de 4-nitrofenilo (30 mg, 0,15 mmol) y piridina (32 mg, 0,40 mmol). Después de hace reaccionar durante 3 horas a 30 °C, la solución de reacción se añadió después con clorhidrato de metoxilamina (25 mg, 0,30 mmol) y se hizo reaccionar durante 8 horas cerrado herméticamente. La reacción se detuvo y la solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron tres veces por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metoxiurea, 15 (5 mg, sólido de color amarillo), rendimiento: 8,1 %.
EM m/z (IEN): 623,4 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 7,90-7,87 (m, 2H), 7,85-7,80 (m, 2H), 7,60 (s, 1H), 7,55-7,25 (m, 4H), 7,09-7,02 (m, 1H), 6,71-6,65 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,54 (s, 2H), 2,15 (s, 6H)
Ejemplo 16
1-(4-(1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metilurea
Figure imgf000044_0001
Etapa 1
3-Met¡l-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡rrol-1-ferc-but¡lcarbox¡lato-2-carbox¡lato de etilo
Se d¡solv¡ó 3-met¡l-4-(4-n¡trofen¡l)-1 H-p¡rrol-2-carbox¡lato de etíio, 13c (4,30 g, 15,70 mmol) en 200 ml de d¡clorometano y se añad¡eron tr¡et¡lam¡na (21,7 ml, 157 mmol), 4-d¡met¡lam¡nop¡r¡d¡na (192 mg, 1,57 mmol) y d¡-ferc-but¡l d¡carbon¡lo (5,14 g, 23,50 mmol), sucesivamente. Después de hacer reacc¡onar durante 12 horas a temperatura amb¡ente, se detuvo la reacc¡ón. La soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se añad¡eron con 100 ml de agua y después se extrajeron con d¡clorometano (50 ml x 4). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se lavaron con una soluc¡ón saturada de cloruro sód¡co (150 ml x 1), se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se futraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce con el s¡stema de eluyentes B para obtener el compuesto del título, 3-met¡l-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡rrol-1-terc-but¡lcarbox¡lato-2-carbox¡lato de et¡lo, 16b (4 g, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento: 68,1 %.
EM m/z (IEN): 273,1 [M-100]
Etapa 2
3-Bromomet¡l-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡rrol-1-ferc-but¡lcarbox¡lato-2-carbox¡lato de etilo
Se d¡solv¡eron suces¡vamente 3-met¡l-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡rrol-1-ferc-but¡lcarbox¡lato-2-carbox¡lato de et¡lo, 16b (4 g, 10,70 mmol), azob¡s¡sobut¡ron¡tr¡lo (351 mg, 2,14 mmol) y W-bromosucc¡n¡m¡da (2,28 g, 12,80 mmol) en 40 ml de clorobenceno. La soluc¡ón de reacc¡ón se h¡zo reacc¡onar durante 16 horas a 80 °C en una atmósfera de argón. La reacc¡ón se detuvo y se enfr¡ó a temperatura amb¡ente. La soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da y se secó al vacío para obtener el compuesto del título, 3-bromomet¡l-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡rrol-1-ferc-but¡lcarbox¡lato-2-carbox¡lato de et¡lo, 16c (5,2 g, sólido de color amar¡llo), que se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente etapa.
EM m/z (IEN): 453,0 [M-100]
Etapa 3
3-(D¡met¡lam¡no)met¡l-4-(4-nitrofen¡l)-1H-p¡rrol-1-terc-but¡lcarbox¡lato-2-carbox¡lato de etilo
Se d¡solv¡ó 3-bromomet¡l-4-(4-n¡trofenil)-1H-p¡rrol-1-terc-but¡lcarbox¡lato-2-carbox¡lato de et¡lo, 16c (4,80 g, 10,70 mmol) en 50 ml de tetrahidrofurano y se añadió una solución de dimetilamina en tetrahidrofurano (26 ml, 53,50 mmol). Después de hacer reaccionar durante 3 horas a temperatura ambiente, se detuvo la reacción. La solución de reacción se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el sistema de eluyentes A para obtener el compuesto del título, 3-(d¡met¡lamino)met¡l-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-pirrol-1-terc-but¡lcarbox¡lato-2-carboxilato de etilo, 16d (3 g, sólido de color amarillo), rendimiento: 67,4 %.
EM m/z (IEN): 317,0 [M-100]
Etapa 4
3-((Dimet¡lam¡no)metil)-4-(4-n¡trofen¡l)-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo
Se disolvió 3-(d¡met¡lam¡no)met¡l-4-(4-n¡trofenil)-1H-p¡rrol-1-terc-but¡lcarbox¡lato-2-carbox¡lato de etilo, 16d (3 g, 7,18 mmol) en 30 ml de una solución de ácido clorhídrico 2 M en metanol. Después de hacer reaccionar durante 3 horas a temperatura ambiente, la reacción se detuvo y la solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se añadieron con 30 ml de una solución saturada de carbonato sódico y se extrajo con diclorometano (30 ml x 4). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución saturada de cloruro sódico (60 ml x 1), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título, 3-((d¡met¡lam¡no)metil)-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡rrol-2-carbox¡lato de etilo 16e (2 g, sólido de color amarillo), rendimiento: 90,9 %.
EM m/z (IEN): 318,1 [M+1]
Etapa 5
1-Am¡no-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-4-(4-nitrofen¡l)-1H-p¡rrol-2-carbox¡lato de etilo
Se disolvió 3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-4-(4-nitrofen¡l)-1H-p¡rrol-2-carbox¡lato de etilo, 16e (1,8 g, 5,68 mmol) en 20 ml de W,W-dimetilformamida y se añadió hidróxido sódico al 60 % (307 mg, 7,66 mmol). Después de hacer reaccionar durante 30 minutos a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se añadió con 50 ml de cloramina y se hizo reaccionar adicionalmente durante 2 horas a temperatura ambiente. La reacción se detuvo y la solución de reacción se añadió con 200 ml de agua y se extrajo con éter (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml x 1), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título, 1-am¡no-3-((d¡met¡lamino)met¡l)-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-pirrol-2-carboxilato de etilo, 16f (620 mg, sólido de color amarillo), rendimiento: 32,9 %.
EM m/z (IEN): 333,2 [M+1]
Etapa 6
3-((D¡met¡lam¡no)met¡l)-1-(3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ureido)-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡rrol-2-carbox¡lato de etilo
Se disolvió 1-am¡no-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-4-(4-nitrofen¡l)-1H-p¡rrol-2-carbox¡lato de etilo, 16f (420 mg, 1,26 mmol) en 15 ml de diclorometano y después se añadieron sucesivamente trietilamina (382 mg, 3,78 mmol), trifosgeno (131 mg, 0,44 mmol) y 3-amino-6-metoxip¡r¡daz¡na (236 mg, 1,89 mmol). Después de hacer reaccionar durante 2 horas a temperatura ambiente, la reacción se detuvo y la solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-1-(3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ure¡do)-4-(4-nitrofen¡l)-1H-p¡rrol-2-carbox¡lato de etilo, 16g (298 mg, sólido de color amarillo), rendimiento: 30,2 %.
Etapa 7
5-((D¡met¡lam¡no)metil)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-6-(4-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2, 4]triazin-2,4(1H,3H)-d¡ona
Se disolvió 3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-1-(3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)ureido)-4-(4-n¡trofen¡l)-1H-p¡rrol-2-carbox¡lato de etilo, 16g (260 mg, 0,54 mmol) en 10 ml de metanol y después se añadió metóxido sódico (151 mg, 2,69 mmol). Después de hace reaccionar durante 3 horas a 50 °C, la reacción se detuvo y la solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡dazin-3-¡l)-6-(4-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-f][1,2, 4]triazin-2,4(1 H,3H)-diona, 16h (76 mg, sólido de color amarillo), rendimiento: 32,3 %.
EM m/z (IEN): 438,3 [M+1]
Etapa 8
1-(2,6-Difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2,4(1 H,3H)-d¡ona
Se disolvieron 5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-6-(4-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1H,3H)-diona, 16h (78 mg, 0,18 mmol), 2-cloromet¡l-1,3-d¡fluorofen¡lo (35 mg, 0,21 mmol) y carbonato potás¡co (37 mg, 0,26 mmol) en 5 ml de W,W-d¡met¡lformam¡da. Después de hace reacc¡onar durante l6 horas a 50 °C, la reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-6-(4-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-/:][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1H,3H)-d¡ona, 16¡ (72 mg, sól¡do de color amar¡llo), rend¡m¡ento: 72,0 %. EM m/z (IEN): 564,1 [M+1]
Etapa 9
6-(4-Am¡nofen¡l)-1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1 H,3H)-d¡ona
Se d¡solv¡eron 1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-6-(4-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1H,3H)-d¡ona, 16¡ (72 mg, 0,13 mmol), h¡erro (29 mg, 0,51 mmol) y cloruro de amon¡o (55 mg, 1,02 mmol) en 20 ml de una mezcla de etanol y agua (v/v = 4: 1). Después de hacer reacc¡onar durante 1 hora a 80 °C, se detuvo la reacc¡ón. La soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y después se añad¡eron 20 ml de agua y se extrajo con d¡clorometano (10 ml x 4). Las fases orgán¡cas se comb¡naron, se lavaron con cloruro sód¡co saturado (10 ml x 1), se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 6-(4-am¡nofen¡l)-1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1 H,3H)-d¡ona, 16j (25 mg, sól¡do de color caqu¡), rend¡m¡ento: 42,8 %. EM m/z (IEN): 534,3 [M+1]
Etapa 10
1-(4-(1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2,4-d¡oxo-1,2,3,4-tetrah¡drop¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-6-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea
Se añad¡ó ác¡do acét¡co (51 kg, 0,84 mmol) a un tubo cerrado hermét¡camente de 25 ml y se añad¡eron 2 ml de tolueno, W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (163 mg, 1,26 mmol) y d¡fen¡lfosfor¡l az¡da (231 mg, 0,84 mmol), suces¡vamente. La mezcla se h¡zo reacc¡onar durante 1 hora en un tubo cerrado hermét¡camente. Después de enfr¡ar a 0 °C, la soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 2 ml de una soluc¡ón de 6-(4-am¡nofen¡l)-1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-2,4(1H,3H)-d¡ona, 16j (45 mg, 0,084 mmol) en d¡clorometano y se h¡zo reacc¡onar ad¡c¡onalmente durante 16 horas a 40 °C en un tubo cerrado hermét¡camente. La reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. Los res¡duos se pur¡f¡caron por cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2,4-d¡oxo-1,2,3,4-tetrah¡drop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-6-¡l)fen¡l)-3-met¡lurea, 16 (18 mg, sól¡do de color blanco), rend¡m¡ento: 36,0 %.
EM m/z (IEN): 591,3 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) ^7,92-7,87 (m, 2H), 7,77-7,70 (m, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,60-7,55 (m, 1H), 7,25-7,13 (m, 2H), 7,05-6,99 (m, 1H), 6,79-6,71 (m, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,06 (s, 3H), 3,54 (s, 2H), 2,75 (s, 3H), 2,16 (s, 6H)
Ejemplo 17
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-h¡drox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea
Figure imgf000047_0001
Etapa 1
1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-h¡drox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)feml)-3-metox¡urea
Se d¡solv¡ó 1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea, 11 (122 mg, 0,20 mmol) en 6 ml de tetrah¡drofurano y se agitó hasta que se d¡solv¡ó por completo. La soluc¡ón se añad¡ó con ác¡do bromhídr¡co al 40 % (103 mg, 0,51 mmol) y se ag¡tó durante 12 horas a temperatura amb¡ente. La reacc¡ón se detuvo y la soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó con 5 ml de una soluc¡ón saturada de b¡carbonato sód¡co y se ag¡tó ad¡c¡onalmente durante 5 m¡nutos. La mezcla resultante se extrajo. Las fases orgán¡cas se comb¡naron y se pur¡f¡caron por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce con el s¡stema de elus¡ón A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(7-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-5-(6-h¡drox¡p¡r¡dazm-3-¡l)-4,6-d¡oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea, 17 (16 mg, sólido de color blanco), rend¡m¡ento: 13,5 %.
EM m/z (IEN): 594,3 [M+1]
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) □□13,36-13,18 (m, 1H), 9,69 (s, 1H), 9,21-9,14 (m, 1H), 7,83-7,76 (m, 2H), 7,71-7,64 (m, 2H), 7,52-7,46 (m, 1H), 7,46-7,36 (m, 1H), 7,09 (s, 3H), 5,32-5,21 (m, 2H), 3,71-3,62 (m, 5H), 2,17 (s, 6H)
Ejemplo 18
1-(4-(1-(2,6-d¡fluorobenc¡l)-5-((d¡met¡lam¡no)met¡l)-3-(6-metox¡p¡r¡daz¡n-3-¡l)-2,4-d¡oxo-1,2,3,4-tetrah¡drop¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-6-¡l)fen¡l)-3-metox¡urea
Figure imgf000048_0001
Etapa 1
1-(4-(1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metoxiurea
Se disolvieron 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2,4(1H,3H)-diona, 16j (170 mg, 0,319 mmol), 4-nitrofenilmetoxiamino formiato de metilo (81 mg, 0. 382.mmol, preparado por un método conocido desvelado en el documento "WO 2011090935") y N,N- diisopropiletilamina (109 pl, 0,638 mmol) en 10 ml de tetrahidrofurano. Después de hacer reaccionar durante 4 horas a temperatura ambiente, la reacción se detuvo y la solución de reacción se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron por cromatografía de capa fina con el sistema de elusión A para obtener el compuesto del título, 1-(4-(1-(2,6-difluorobencil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metoxiurea, 18 (15 mg, sólido de color amarillo), rendimiento: 7,8 %.
EM m/z (IEN): 607,2 [M+1]
Ejemplo de ensayo
Evaluación biológica
Ejemplo de ensayo 1. Ensayo de actividad de GnRHr humano (receptor de GnRH) de los presentes compuestos
La actividad in vitro de la proteína GnRHr se prueba mediante los siguientes métodos.
Este ensayo se usa para determinar el efecto de inhibición del presente compuesto sobre la actividad de la proteína GnRHr humana expresada por líneas celulares GnRHr/CHO humanas transfectadas de manera estable.
1. Materiales y equipos experimentales
1) Kits de ensayo de calcio Fluo-4 NW (F36206, invitrogen)
2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
3) G418 (11811-031, invitrogen)
4) Lector de microplacas FlexStation3
2. Protocolo experimental
El vector de expresión de mamífero que contiene el gen GnRHr humano se transfirió a las células CHO añadiendo el reactivo Lipofectamine®LTX que contiene Plus™; se añadieron antibióticos al día siguiente para la detección, para seleccionar las líneas celulares monoclonales.
Las líneas celulares humanas GnRHr/CHO transfectadas de manera estable se inocularon en placas de 96 pocillos con una densidad de inoculación de 25.000/pocillo. El medio de cultivo se retiró al día siguiente y se añadió a la placa tampón de carga que contenía colorante Fluo-4 (100 pl/pocillo) y se incubó durante 30 minutos a 37 °C. La placa se movió a temperatura ambiente y se equilibró durante 10 minutos. Cada compuesto se diluyó con DMSO a siete gradientes de concentración de 100 pM, 10 pM, 1 pM, 0,1 pM, 0,01 pM, 0,001 pM, 0,0001 pM. Después, se añadió 1 |j| de cada gradiente a cada pocilio y se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de la adición automática de 50 j l de solución estimulante del polipéptido GnRH, el valor fue detectado a 494/516 nM por lector de microplacas (flexstation 3) inmediatamente. Los valores de CI50 de los compuestos se calcularon con el programa informático de diferentes señales de fluorescencia a varias concentraciones correspondientes.
La actividad de inhibición de los presentes compuestos sobre GnRHr humano se determinó mediante el ensayo anterior, y los valores de CI50 se muestran en la Tabla 1.
Tabla^ 1 I l f inhi i i n l r n m r l i i nRHr h mano
Figure imgf000049_0002
Conclusión: Los presentes compuestos tienen una actividad inhibidora de GnRHr humano significativa.
Ejemplo de ensayo 2. Ensayo de actividad inhibidora de GnRHr de mono de los presentes compuestos
Este ensayo se usa para determinar el efecto de inhibición de los presentes compuestos sobre la actividad de la proteína GnRHr de mono expresada por líneas celulares GnRHr/CHO de mono transfectadas de manera estable.
1. Materiales y equipos experimentales
1) Kits de ensayo de calcio Fluo-4 NW (F36206, invitrogen)
2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
3) G418 (11811-031, invitrogen)
4) Lector de microplacas FlexStation3
2. Protocolo experimental
El vector de expresión de mamífero que contiene el gen GnRHr de mono se transfirió a células CHO añadiendo el reactivo Lipofectamine®LTX que contiene Plus™; se añadieron antibióticos al día siguiente para la detección para seleccionar las líneas celulares monoclonales.
Las líneas celulares GnRHr/CHO de mono transfectadas de manera estable se inocularon en placas de 96 pocillos con una densidad de inoculación de 25.000/pocillo. El medio de cultivo se retiró al día siguiente y se añadió a la placa tampón de carga que contenía colorante Fluo-4 (100 jl/pocillo) y se incubó durante 30 minutos a 37 °C. La placa se movió a temperatura ambiente y se equilibró durante 10 minutos. Cada compuesto se diluyó con DMSO a siete gradientes de concentración de 100 jM , 10 jM , 1 jM , 0,1 jM , 0,01 jM , 0,001 jM , 0,0001 jM . Después, se añadió 1 j l de cada gradiente a cada pocillo y se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de la adición automática de 50 j l de solución estimulante del polipéptido GnRH, el valor fue detectado a 494/516 nM por lector de microplacas (flexstation 3) inmediatamente. Los valores de CI50 de los compuestos se calcularon con el programa informático de diferentes señales de fluorescencia a varias concentraciones correspondientes.
La actividad de inhibición de los presentes compuestos sobre GnRHR de mono se determinó mediante el ensayo anterior, y los valores de CI50 se muestran en la Tabla 1.
Tabla 2 I l f inhi i i n l r n m r l i i nRHr humano
Figure imgf000049_0001
Conclusión: Los presentes compuestos tienen actividad inhibidora de GnRHr de mono significativa.
Ejemplo de ensayo 3. Ensayo de actividad inhibidora de GnRHr de conejo de los presentes compuestos
Este ensayo se usa para determinar el efecto de inhibición del presente compuesto sobre la actividad de la proteína GnRHr de conejo expresada por líneas celulares GnRHr/CHO de conejo transfectadas de manera estable.
1. Materiales y equipos experimentales
1) Kits de ensayo de calcio Fluo-4 NW (F36206, invitrogen)
2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
3) G418 (11811-031, invitrogen)
4) Lector de microplacas FlexStation3
2. Protocolo experimental
El vector de expresión de mamífero que contiene el gen GnRHr de conejo se transfirió a células CHO mediante la adición de reactivo Lipofectamine®LTX que contiene Plus™; se añadieron antibióticos al día siguiente para la detección para seleccionar las líneas celulares monoclonales.
Las líneas celulares GnRHr/CHO de conejo se transfectadas de manera estable se inocularon en placas de 96 pocillos con una densidad de inoculación de 25.000/pocillo. El medio de cultivo se retiró al día siguiente y se añadió a la placa tampón de carga que contenía colorante Fluo-4 (100 pl/pocillo) y se incubó durante 30 minutos a 37 °C. La placa se movió a temperatura ambiente y se equilibró durante 10 minutos. Cada compuesto se diluyó con DMSO a siete gradientes de concentración de 100 pM, 10 pM, 1 pM, 0,1 pM, 0,01 pM, 0,001 pM, 0,0001 pM. Después, se añadió 1 pl de cada gradiente a cada pocillo y se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de la adición automática de 50 pl de solución estimulante del polipéptido GnRH, el valor fue detectado a 494/516 nM por lector de microplacas (flexstation 3) inmediatamente. Los valores de CI50 de los compuestos se calcularon con el programa informático de diferentes señales de fluorescencia a varias concentraciones correspondientes.
La actividad de inhibición de los presentes compuestos sobre GnRHr de conejo se determinó mediante el ensayo anterior, y los valores de CI50 se muestran en la Tabla 1.
Tabla 3 I l f inhi i i n l r n m r l i i nRHr de conejo
Figure imgf000050_0001
Conclusión: Los presentes compuestos tienen actividad inhibidora de GnRHr de conejo significativa.
Evaluación de la farmacocinética
Ejemplo de ensayo 4. Ensayo de farmacocinética de rata de los compuestos del Ejemplo 2, el Ejemplo 3, el Ejemplo 5, el Ejemplo 9, el Ejemplo 10, el Ejemplo 11 y el Ejemplo 13 de la presente invención
1. Sumario
Se utilizaron ratas Sprague-Dawley (SD) como animales de ensayo. Las concentraciones plasmáticas en diversos momentos se determinaron por LC/MS/MS después de la administración por vía intragástrica de los compuestos del Ejemplo 2, el Ejemplo 3, el Ejemplo 5, el Ejemplo 9, el Ejemplo 10, el Ejemplo 11 y el Ejemplo 13 y la administración intravenosa del compuesto del Ejemplo 11 a las ratas. Se estudió el comportamiento farmacocinético de los presentes compuestos en ratas y se evaluaron las características farmacocinéticas.
2. Protocolo de ensayo
2.1 Muestras
Compuestos del Ejemplo 2, el Ejemplo 3, el Ejemplo 5, el Ejemplo 9, el Ejemplo 10, el Ejemplo 11 y el Ejemplo 13 2.2 Animales de ensayo
32 ratas SD sanas adultas (la mitad hembras y la mitad machos) fueron designadas de manera uniforme en 8 grupos (4 para cada grupo). Los animales fueron comprados en Shanghai Super B&K Laboratory Animal Corp. Ltd (certificado de producción animal de laboratorio N.° SCx K (HU)2008-0016).
2.3 Formulación de fármacos
Se pesó la cantidad apropiada de muestra y se añadió CMC-Na al 0,5 % para formar una suspensión de 1 mg/ml después del tratamiento con ultrasonidos;
Se pesaron las cantidades apropiadas de fármacos y se disolvieron con 0,5 ml de DMSO y 0,5 ml de Tween 80; se añadió solución salina al volumen final.
2.4 Administración
32 ratas SD (la mitad hembras y la mitad machos) se designaron de manera uniforme en 8 grupos (4 para cada grupo) y se administraron mediante sonda oral o inyección intravenosa (iv) (sonda oral a una dosis de 10 mg/kg o 30 mg/kg, e iv a una dosis de 5,0 mg/kg) respectivamente a un volumen de 10 ml/kg después de ayunar durante la noche, 3. Operación
Se tomaron muestras de 0,1 ml de sangre antes y 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 11, 24 horas después de la administración, se recogieron en un tubo de ensayo heparinizado y centrifugado a 3500 rpm durante 10 minutos para separar el plasma, que se almacenó a -20 °C. Se permitió a los animales acceder al alimento 2 horas después de la administración. El contenido del compuesto de ensayo en el plasma de ratas después de la administración del compuesto por sonda oral se determinó por LC/MS/MS.
4. Resultados de los parámetros farmacocinéticos
Los parámetros farmacocinéticos de los presentes compuestos se muestran en la siguiente Tabla 4:
Figure imgf000052_0001
Conclusión: los presentes compuestos se absorben bien por vía oral en ratas y tienen una absorción farmacocinética evidente. El ejemplo 11 tiene una biodisponibilidad oral particularmente preferible.
Ejemplo de ensayo 5. Ensayo de farmacocinética en conejos del ejemplo 11 de la presente invención
1. Sumario
Los conejos se usaron como animales de ensayo. Las concentraciones plasmáticas en diversos momentos se determinaron por LC/MS/MS después de la administración intragástrica del compuesto del Ejemplo 11 y la administración intravenosa del compuesto del Ejemplo 11 a conejos. Se estudió el comportamiento farmacocinético del presente compuesto en conejos y se evaluaron las características farmacocinéticas.
2. Protocolo de ensayo
2.1 Muestra
Compuesto del Ejemplo 11
2.2 Animales de ensayo
6 conejos sanos de Nueva Zelanda (hembras) fueron designados de manera uniforme en 2 grupos. Los animales fueron comprados de Jie Sijie Corp. Ltd.
2.3 Formulación de fármacos
Se pesó la cantidad apropiada de muestra y se añadió CMC-Na al 0,5 % para formar una suspensión de 3 mg/ml después del tratamiento con ultrasonidos;
Se pesaron las cantidades apropiadas de fármacos y se disolvieron con 1 ml de DMSO y 1 ml de Tween 80; se añadió solución salina al volumen final.
2.4 Administración
6 conejos sanos de Nueva Zelanda (hembras) fueron designados de manera uniforme en 2 grupos, y administrados por sonda oral o inyección intravenosa (iv) (sonda oral a una dosis de 30 mg/kg con un volumen de administración de 5 ml/kg, e iv a una dosis de 5 mg/kg con un volumen de administración de 2 ml/kg) después de ayunar durante la noche.
3. Operación
Se tomaron muestras de 0,2 ml de sangre antes y 5 minutes, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 11, 24 horas después de la administración intravenosa, se recogieron en un tubo de ensayo heparinizado y centrifugado a 3500 rpm durante 10 minutos para separar el plasma, que se almacenó a -20 °C. Se tomaron muestras de sangre antes y 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 11,24 horas después de la administración oral, y se trataron de la misma manera que las del grupo de administración intravenosa. El contenido del compuesto de ensayo en el plasma de conejos después de la administración del compuesto por sonda oral e inyección intravenosa se determinó por LC/MS/MS.
4. Resultados de los parámetros farmacocinéticos
Los parámetros farmacocinéticos de los presentes compuestos se muestran en la siguiente Tabla 5:
Figure imgf000054_0001
Conclusión: El compuesto del Ejemplo 11 de la presente invención se absorbe bien en conejos y tiene una biodisponibilidad oral preferible.
Ejemplo de ensayo 6. Ensayo de farmacocinética en Beagle del ejemplo 11 de la presente invención
1. Sumario
Se usaron beagles como animales de ensayo. Las concentraciones plasmáticas en diversos momentos se determinaron por LC/MS/MS después de la administración intragástrica del compuesto del Ejemplo 11 y la administración intravenosa del compuesto del Ejemplo 11 a los beagles. Se estudió el comportamiento farmacocinético del presente compuesto en los beagles y se evaluaron las características farmacocinéticas.
2. Protocolo de ensayo
2.1 Muestra
Compuesto del Ejemplo 11
2.2 Animales de ensayo
8 beagles sanos (la mitad hembras y mitad machos) fueron designados de manera uniforme en 2 grupos. Los animales fueron adquiridos de SuzhouXishan Zhongke Laboratory Animal Corp. Ltd.
2.3 Formulación de fármacos
Se pesó la cantidad apropiada de muestra y se añadió CMC-Na al 0,5 % para formar una suspensión de 1,0 mg/ml después del tratamiento con ultrasonidos;
Se pesaron las cantidades apropiadas de fármacos y se disolvieron con 5 ml de DMSO y 5 ml de Tween 80; se añadió solución salina al volumen final.
2.4 Administración
8 beagles sanos (la mitad hembras y la mitad machos) fueron designados de manera uniforme en 2 grupos y administrados por sonda oral o inyección intravenosa (iv) (sonda oral a una dosis de 5 mg/kg con un volumen de administración de 5 ml/kg, e iv a una dosis de 2 mg/kg con un volumen de administración de 2 ml/kg) después de ayunar durante la noche.
3. Operación
Se tomaron muestras de 1,0 ml de sangre de la vena de la pata delantera antes y 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 horas después de la administración oral, se recogieron en un tubo de ensayo heparinizado y centrifugado a 3500 rpm durante 10 minutos para separar el plasma, que se almacenó a -20 °C. Se permitió a los animales acceder al alimento 2 horas después de la administración. Se tomaron muestras de sangre antes y 5 minutos, 0,25, 0,5, 1,2, 4, 6, 8, 12, 24 horas después de la administración intravenosa, y se trataron de la misma manera que antes. El contenido del compuesto de ensayo en el plasma de los beagles después de la administración del compuesto por sonda oral e inyección intravenosa se determinó por LC/MS/MS.
4. Resultados de los parámetros farmacocinéticos
Los parámetros farmacocinéticos de los presentes compuestos se muestran en la siguiente Tabla 6:
Figure imgf000055_0001
Conclusión: El compuesto del ejemplo 11 de la presente invención se absorbe bien en beagles y tiene una biodisponibilidad oral preferible.
Ejemplo de ensayo 7. Ensayo de farmacodinámica in vivo del ejemplo 11 de la presente invención en ratas
1. Sumario
El modelo de endometriosis se estableció con conejo, se implemento la prueba de detección farmacodinámica para la endometriosis de conejo tratada con el compuesto del Ejemplo 11.
2. Protocolo de ensayo
2.1 Muestra
Compuesto del Ejemplo 11
2.2 Animales de ensayo
15 conejos sanos de Nueva Zelanda (hembras) fueron designados de manera uniforme en 3 grupos. Los animales fueron comprados en la Granja de Animales de Laboratorio Songlian del Distrito de Songjiang de Shanghai (Certificado de producción animal de laboratorio N.° SCXK (HU) 2008-0016).
2.3 Operación
Los conejos se alimentaron de forma adaptativa y se pusieron en cuarentena durante siete días, y se inyectaron por vía subcutánea 30 pg/kg de benzoato de estradiol una vez al día durante dos días antes de la cirugía; cuando se estableció el modelo, los conejos fueron anestesiados con 3 % de pentobarbital sódico, y se laparotomizaron estérilmente. Después, un lado del útero se separó y se ligó el vaso mesorrecto uterino. Después, se cortó una sección del útero y se colocó en un plato de solución salina tibia, y luego se diseccionó longitudinalmente y se separó para el miometrio y el endometrio. Una sección de endometrio (aproximadamente 0,5 cm □ 0,5 cm) se unió a la pared abdominal rica en vasos sanguíneos con la superficie íntima mirando hacia la cavidad abdominal. Tres semanas después de la siembra de endometrio, los conejos se laparotomizaron para verificar el tamaño intimal del injerto. 15 animales de modelado exitoso se dividieron aleatoriamente en 3 grupos (5 para cada grupo) que eran el grupo de control del vehículo, el grupo de dosis baja (10 mg/kg del compuesto del ejemplo 11) y el grupo de dosis alta (30 mg/kg del compuesto del ejemplo 11) respectivamente. Cada grupo se administró por sonda oral una vez al día en un volumen de 5 ml/kg, durante 28 días continuos después de modelar con éxito. En última instancia, se pesó el conejo y se midió el volumen de endometrio ectópico para evaluar el efecto del presente compuesto sobre la actividad endometrial. 2.4 Resultados:
Después de la administración de 30 mg/kg del compuesto del Ejemplo 11 al modelo de endometriosis de conejo durante 4 semanas con administración oral de la misma cantidad de CMC-Na al 0,5 % como control, el crecimiento del endometrio ectópico se inhibió significativamente, mientras que la inhibición del compuesto del Ejemplo 11 para el volumen endometrial ectópico a 10 mg/kg no fue obvia. Por lo tanto, la dosis toxicológica de NOAEL (dosis bajo la cual no se observó una dosis de efecto nocivo) del compuesto del Ejemplo 11 en el modelo de endometriosis de conejo es de 30 mg/kg.
Ejemplo de ensayo 8 Evaluación toxicocinética de siete días del compuesto del Ejemplo 11 en rata
1. Sumario
Las ratas SD se usaron como animales de ensayo. Las concentraciones plasmáticas en diversos momentos se determinaron por LC/MS/MS después de la administración del compuesto del Ejemplo 11 por sonda oral durante 7 días. La toxicidad del compuesto en roedores se evaluó de manera preliminar de acuerdo con la reacción de toxicidad potencial y el nivel de gravedad del cuerpo.
2. Protocolo de ensayo
2.1 Muestra
Compuesto del Ejemplo 11
2.2 Animales de ensayo
24 ratas SD sanas adultas (la mitad hembras y la mitad machos) fueron designadas de manera uniforme en 4 grupos (6 para cada grupo). Los animales fueron adquiridos de Shanghai SLAC Laboratory Animal Corp. Ltd (certificado de producción animal de laboratorio N.° SCXK (HU) 2012-0002).
2.3 Formulación de fármacos
La cantidad apropiada de muestra se pesó con precisión y se añadió con CMC-Na al 0,5% menor para formar una suspensión uniforme tras el tratamiento de molienda o de ultrasonidos, y luego se diluyó hasta el volumen final. El resto de las soluciones de muestra el día 1 y el día 7 se mantuvieron para la determinación de la concentración de administración de toxicocinética.
2.4 Administración
Las dosis orales repetidas fueron 80, 240 y 720 mg/kg, y las concentraciones de administración fueron 8, 24 y 72 mg/ml respectivamente. El volumen de dosificación fue de 10 ml/kg, una vez al día durante 7 días.
3. Operación
Se tomaron muestras de sangre el día 1 y el día 7 después de la administración con tiempo de muestreo tanto antes como 1, 2, 4, 8 y 24 horas después de la administración oral el día 1, y antes y 1, 2, 4, 8, 24 y 48 horas después de la administración oral el día 7. La muestra de sangre se recogió en un tubo de ensayo heparinizado y se centrifugó para separar el plasma, que se almacenó a -20 °C. El contenido del compuesto de ensayo en el plasma de ratas después de la administración del compuesto por sonda oral se determinó por LC/MS/MS.
4. Resultados
4.1. Impacto en los síntomas clínicos
4.1.1 Muerte
La rata N.° 1 en el grupo de toxicidad de 720 mg/kg del compuesto del Ejemplo 11 murió el día 7 antes de la dosificación; la rata N.° 5 en el grupo toxicocinético de 720 mg/kg del compuesto del Ejemplo 11 murió el día 7 antes de la dosificación, y la rata N.° 6 murió el día 9.
4.1.2 Observación clínica
Durante la administración, en comparación con el grupo de control del vehículo, todas las ratas en el grupo de toxicidad de 720 mg/kg y el grupo toxicocinético presentaron pérdida de peso y mal estado mental después de la administración del compuesto del Ejemplo 11 el día 6; las ratas en el grupo de toxicidad de 720 mg/kg y el grupo toxicocinético después de la administración del compuesto del Ejemplo 11 en el día 7 presentaron una reducción de la ingesta de alimentos, pérdida de peso, actividad reducida, mal estado mental, piel opaca, vello erizado, joroba, hemorragia alrededor de la nariz y los ojos, diarrea y crissum sucio.
4.2. Impacto sobre el peso corporal
En comparación con el grupo de control del vehículo, el porcentaje de cambio de peso del grupo de dosis alta mostró una disminución significativa (P <0,05) después de la administración del compuesto del Ejemplo 11 el día 3 y el día 7.
4.3 Impacto en la ingesta de alimentos
En comparación con el grupo de control del vehículo, la ingesta de alimentos del grupo de dosis de 147280720 mg/kg se ha reducido significativamente el día 3 y el día 7.
4.4. Resultados de la prueba de hematología
En comparación con el grupo de control del vehículo, GB (glóbulos blancos), Neut (valor relativo de neutrófilos y recuento absoluto de neutrófilos), Linfa (recuento absoluto de linfocitos), EO (recuento absoluto de eosinófilos) y RET (valor relativo de reticulocitos y recuento absoluto de reticulocitos) de ratas en el grupo de dosis de 720 mg/kg del compuesto del Ejemplo 11 disminuyeron significativamente (P <0,05).
4.5. Resultados de pruebas bioquímicas de sangre
En comparación con el grupo de control del vehículo, BUN (nitrógeno ureico en sangre), COL (colesterol total), CREA (creatinina), TBIL (bilirrubina total), TP (proteína total), La AST (aspartato aminotransferasa) de ratas en el grupo de dosis de 720 mg/kg del compuesto del Ejemplo 11 aumentó significativamente (P <0,05). Aunque no hay diferencias estadísticas en ALT (alanina aminotransferasa), la ALT de dos animales aumentó significativamente. La ALB (albúmina), la ALP (fosfatasa alcalina) disminuyó significativamente (P <0,05). Mientras que el resultado de la detección de iones fue la falta de escasez de muestras de sangre del grupo de dosis SHR 147280 de 720 mg/kg. No se han detectado otras anormalidades toxicológicas obvias.
4.6. Parámetros de coagulación
En comparación con el grupo de control del vehículo, las ratas en el grupo de dosis de 80 mg/kg y el grupo de dosis de 240 mg/kg del compuesto del Ejemplo 11 no mostraron diferencias significativas. El resultado de los parámetros de coagulación fue la falta de escasez de muestras de sangre del grupo de dosis SHR 147280 de 720 mg/kg.
4.7. El examen de orina
En comparación con el grupo de control del vehículo, los grupos de tratamiento no mostraron cambios anormales regularmente en los índices de orina.
4.8. Resultados de patología general
La autopsia fue generalmente visible. En comparación con el grupo de control del vehículo, El grupo de dosis de 720 mg/kg del compuesto de Ejemplo 11 exhibió hemorragia y atrofia de timo; atrofia y congestión del bazo; grados variables de congestión en las hojas del hígado con lesiones necróticas de color gris escamoso; hiperemia y hemorragia pulmonar; hemorragia e hipertrofia de la glándula suprarrenal; hemorragia y congestión del ovario; adelgazamiento de la pared gastrointestinal; contenido blanco en el estómago; contenido amarillo en el intestino delgado, hemorragia intestinal, hemorragia rectal de colon y mucosa intestinal. Además, los animales muertos mostraron lesiones necróticas cardíacas. El resto de los grupos no presentaron anomalías visibles.
4.9. Resultados del coeficiente del órgano
En comparación con el grupo de control del vehículo, el peso húmedo absoluto del timo, del corazón, del pulmón y del bazo en ratas machos y hembras del grupo de 720 mg/kg del compuesto del Ejemplo 11 habían disminuido significativamente (p<0,05), por el contrario, el peso húmedo absoluto de la glándula suprarrenal había aumentado significativamente (p <0,05). El coeficiente relativo del órgano del timo, del bazo se había reducido significativamente (p <0,05), mientras que el coeficiente relativo del órgano del cerebro, del hígado, del pulmón, del riñón y de la glándula suprarrenal habían aumentado significativamente (p <0,05).
4.10. Resultados de los parámetros toxicocinéticos
Parámetros toxicocinéticos de ratas hembras después de la administración intragástrica
Figure imgf000058_0002
Por lo tanto, toxicología de la dosis de NOAEL del Ejemplo 11 es de 240 mg/kg, y la dosis letal es de 720 mg/kg. Los órganos diana tóxicos potenciales eran el sistema hematopoyético de la médula, el timo, el corazón, el hígado, el pulmón, el bazo, la glándula suprarrenal, el ovario y el sistema digestivo.
En conclusión: Comparando el ensayo farmacocinético del Ejemplo de ensayo 5, el ensayo farmacodinámico del ejemplo de ensayo 7 y el ensayo farmacocinético toxicológico del ejemplo de ensayo 8, la evaluación preliminar de la ventana de seguridad del compuesto en el Ejemplo 11 fue la siguiente:
Figure imgf000058_0001

Claims (18)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000059_0001
en la que:
cuando G es N, D es C y E es -CH-;
cuando G es C, D y E son N;
R1 se selecciona entre el grupo que consiste en arilo de 6 miembros y heteroarilo de 6 miembros, en la que el arilo y heteroarilo están cada uno independientemente opcionalmente sustituidos adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y -OR6;
R2 es alquilo C1-6, en el que el alquilo está adicionalmente sustituido con fenilo, en el que el fenilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo y haloalquilo;
R3 es fenilo, en la que el fenilo está cada uno opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NHC(O)NHR6 y -NHC(O)NHOR6; R4 es alquilo C1-6;
R5 es hidrógeno;
R6 se selecciona entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo;
n es 1 o 2.
2. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es un compuesto de fórmula (II) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000059_0002
en la que: n y R1 a R5 son como se definen en la reivindicación 1.
3. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es un compuesto de fórmula (III) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000059_0003
en la que: n y R1 a R5 son como se definen en la reivindicación 1.
4. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R1 se selecciona entre el grupo que consiste en fenilo y piridazinilo, en el que el fenilo y piridazinilo están cada uno opcionalmente sustituidos adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y -OR6.
5. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R2 es bencilo, en la que el bencilo está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo y haloalquilo.
6. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R3 es fenilo, en la que el fenilo está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más grupos seleccionados entre el grupo que consiste en -NHC(O)Nh R6 y -NHC(O)NHOR6.
7. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R4 es metilo.
8. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es un compuesto de fórmula (IV) o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000060_0001
en la que: n, D, E, G, R1, R2, R4 y R5 son como se definen en la reivindicación 1;
Ra se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo y -OR6; y
R6 es alquilo.
9. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000060_0002
Figure imgf000061_0001
10. Un proceso para preparar el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende una etapa de:
Figure imgf000061_0002
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IA) con la amina de NH(R4)(CH2)nR5; opcionalmente reducción o/y acilación del producto resultante para obtener el compuesto de fórmula (I); en la que: X es halógeno; n, D, E, G y R1 a R5 son como se definen en la reivindicación 1.
11. Un proceso para preparar el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende una etapa de:
Figure imgf000062_0001
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IB) con R2X en presencia de un reactivo alcalino; opcionalmente reducción o/y acilación del producto resultante para obtener el compuesto de fórmula (I); en la que: X es halógeno; n, D, E, G y R1 a R5 son como se definen en la reivindicación 1.
12. Un compuesto de fórmula (IA) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que se usa como un intermedio en la preparación de un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000062_0002
en la que:
X es halógeno;
D, E, G y R1 a R3 son como se definen en la fórmula (I).
13. Un compuesto de fórmula (IB) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que se usa como un intermedio en la preparación de un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000062_0003
en la que:
n, D, E, G, R1 y R3 a R5 son como se definen en la fórmula (I).
14. Un proceso para preparar el compuesto de fórmula (IA) de acuerdo con la reivindicación 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende una etapa de:
Figure imgf000062_0004
llevar a cabo una reacción de halogenación de un compuesto de fórmula (Ib) para obtener el compuesto de fórmula (IA);
en la que: D, E, G y R1 a R3 son como se definen en la reivindicación 1.
15. Un proceso para preparar el compuesto de fórmula (IB) de acuerdo con la reivindicación 13, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende una etapa de:
Figure imgf000063_0001
llevar a cabo una ciclación de un compuesto de fórmula (Ig) para obtener el compuesto de fórmula (IB);
en la que: n, D, E, G, R1 y R3~R5 son como se definen en la reivindicación 1;
Rb es alquilo.
16. Un compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:
Figure imgf000063_0002
17. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
18. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 17, para su uso como medicamentos para el tratamiento o prevención de enfermedades de cáncer dependiente de hormonas sexuales, metástasis óseas de cánceres dependientes de hormonas sexuales, hiperplasia prostática, leiomioma uterino, endometriosis, fibroides uterinos, pubertad precoz, amenorrea, síndrome premenstrual, dismenorrea, síndrome de ovario multilocular, síndrome de ovario poliquístico, acné, alopecia, enfermedad de Alzheimer, esterilidad, síndrome del intestino irritable, tumores benignos o malignos que son independientes de las hormonas y sensibles a la LH-RH, o rubor; para uso como regulador de la reproducción, píldora anticonceptiva, evocador de la ovulación; o para su uso como medicamentos para la prevención de la recurrencia postoperatoria del cáncer dependiente de hormonas sexuales seleccionado del grupo que consiste en cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de mama y cáncer de hipófisis; preferentemente cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de mama, endometriosis o leiomioma uterino.
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