BR112016008799B1

BR112016008799B1 - Derivados de pirazolopirimidona ou pirrolotriazona, seus intermediários, seus usos, seus processos de preparação, e composição farmacêutica

Info

Publication number: BR112016008799B1
Application number: BR112016008799-2A
Authority: BR
Inventors: Hejun Lü; Piaoyang Sun; Bin GUI; Qing Dong
Original assignee: Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd.; Jiangsu Hengrui Medicine Co.,Ltd
Priority date: 2013-10-30
Filing date: 2014-09-30
Publication date: 2023-02-23
Also published as: US20190270748A1; EP3064498B1; AU2014344504B2; TWI675838B; AU2014344504C1; ES2747839T3; US10344034B2; SI3064498T1; US10005781B2; CA2927641A1; AU2014344504A1; RU2674977C2; BR112016008799A8; RS59457B1; EP3064498A4; PL3064498T3; WO2015062391A1; CA2927641C; CN104884457A; PT3064498T

Abstract

DERIVADOS DE PIRAZOLOPIRIMIDONA OU PIRROLOTRIAZONA, MÉTODO DE PREPARAÇÃO DOS MESMOS, E APLICAÇÕES FARMACÊUTICAS DOS MESMOS. A presente invenção refere-se aos derivados de pirazolopirimidona ou pirrolotriazona, um método para preparar os mesmos, e aplicações farmacêuticas dos mesmos. Especificamente, a presente invenção oferece derivados de pirazolopirimidona ou pirrolotriazona representados pela fórmula geral (I) e sais farmacêuticos dos mesmos, um método para a preparação dos mesmos, e o uso dos mesmos como um antagonista do hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) e especialmente como agentes terapêuticos para endometriose, onde as definições dos substituintes na fórmula geral (I) são as mesmas que aquelas dadas no relatório descritivo.

Description

Campo da Invenção

[001] A presente invenção se refere a um novo derivado de pirazolopirimidona ou derivado de pirrolotriazona e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, a um método de preparação dos mesmos, e à composição farmacêutica contendo os mesmos, assim como ao uso dos mesmos como um antagonista do receptor do hormônio liberador de gonadotropina (GnRH), particularmente como um agente terapêutico para doenças tais como endometriose.

Antecedentes da Invenção

[002] Endometriose é uma doença ginecológica dependente de estrogênio comum, que frequentemente ocorre em mulheres em idade fértil, embora seu mecanismo ainda não esteja claro. O diagnóstico difícil e a patogênese incerta da endometriose obstrui severamente a constatação de tratamentos eficazes. Atualmente, a endometriose é diagnosticada principalmente por laparoscopia, e tratada com cirurgia, ou controlada com o uso de contraceptivos, agonistas do receptor de GnRH ou progestogena para reduzir os níveis de estrogênio no corpo.

[003] Atualmente a taxa de incidência de endometriose é alta. Os dados estatísticos do Datamonitor 2009 mostram que o número de mulheres que sofrem de endometriose já superou os 68 milhões em apenas dois países (Índia e China) (31.288.000 na Índia, 37.535.000 na China), embora os dados nos sete principais mercados tenham sido superiores a 17 milhões. O Datamonitor espera que durante 20092018, o mercado de fármacos para endometriose cresça de $764 milhões em 2009 ($596 milhões nos Estados Unidos, $117 milhões na União Europeia, $51 milhões no Japão) para $1.156 billhões em 2018 ($844 milhões nos Estados Unidos, $206 milhões na União Europeia, $106 milhões no Japão), e que o espaço crescente no mercado chinês seja maior.

[004] O hormônio liberador de gonadotropina (Gonadoliberina; GnRH), também conhecido como hormônio liberador do hormônio luteinizante (LHRH), é um hormônio decapeptídico (pGlu-His-Trp-Ser- Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2) sintetizado pelas células neuroendócrinas hipotalâmicas, e é um fator de regulação central do sistema reprodutivo endócrino. O GnRH desempenha um papel importante no sistema do eixo hipotálamo-hipófise-gonadal sendo transportado para a hipófise através do sistema de circulação portal hipotálamo-hipófise e então ligando-se a células do receptor de GnRH na pituitária anterior, promovendo a secreção e a liberação do hormônio luteinizante de gonadotropina tal como hormônio luteinizante (LH) e hormônio estimulante de folículos (FSH), e regulando o desenvolvimento normal do ovário e do corpo lúteo. O receptor de GnRH desempenha seu papel regulador acoplando-se à proteína G que é capaz de ativar o sistema do cálcio fosfatidilinositol como segundo mensageiro; o LH regula a produção de esteroides sexuais; e o FSH regula a espermatogênese masculina e a maturação dos folículos ovarianos femininos.

[005] LH e FSH são liberados na circulação, e combinados com receptores nas células específicas dos ovários ou testículos para estimular a produção de estereoides. Doenças, tais como endometriose, leiomioma uterino e câncer de próstata, agravam-se na presença de esteroides sexuais. É necessário administrar agonistas peptídicos e antagonistas do receptor de GnRH de ação prolongada para controlar as doenças.

[006] Antagonistas peptídicos do receptor de GnRH incluem peptídios lineares derivados de GnRH (US 5,171,835), derivados de hexapeptídios cíclicos (US 2002/0065309), derivados de peptídios bicíclicos (Journal of Medicinal Chemistry, 1993; 36: 3265-73), etc.; e agonistas peptídicos receptor do de GnRH incluem Leuprorelina (pGlu- His-Trp-Ser-Tyr-d-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt). No entanto, existem ainda muitos problemas não resolvidos para compostos peptídicos que incluem absorção oral, forma de dosagem, volume da dose, estabilidade do fármaco, ação sistemática, e estabilidade metabólica entre outros. O principal motivo para que a terapia com antagonista de moléculas pequenas do receptor de GnRH seja superior à terapia à base de peptídios existente deve-se grandemente à administração oral de antagonistas de moléculas pequenas do receptor de GnRH, que é conveniente e eficiente. Estudos já mostraram que antagonistas de moléculas pequenas têm uma eficiência significativa para doenças dependentes de hormônios tais como endometriose, puberdade precoce, câncer de próstata.

[007] O mecanismo de inibição indireta do tumor mediado por agonistas de GnRH é que os agonisas de GnRH diminuem a secreção de hormônios sexuais e então inibe indiretamente o crescimento de células tumorais por meio de efeito prolongado sobre o eixo hipotálamo-hipófise-gonadal o que leva à redução de gonadotropinas pituitárias (FSH, LH). Enquanto isso, antagonistas do receptor de GnRH inibem diretamente a liberação de gonadotropinas pituitárias, e inibem então o crescimento de células tumorais.

[008] Tendo em vista as limitações dos antagonistas peptídicos do receptor de GnRH, certos antagonistas não peptídicos do receptor de GnRH já foram propostos e colocados em desenvolvimento, ensaios clínicos e estágios de comercialização. Por exemplo, Elagolix (também conhecido como NBI-56418 ou ABT-620), é um antagonista de moléculas pequenas do receptor de GnRH codesenvolvido pela Abbott e Neurocrine Biosciences Inc, que atuamente se encontra no ensaio clínico de fase III, e é principalmente usado para o tratamento de endometriose (fase III) e leiomioma uterino (fase II). Em junho de 2012, os dados do ensaio clínico de fase II de endometriose foram apresentados pela 94th Annual Meeting of the Endocrine Society in Houston: entre as 131 mulheres sofrendo de endometriose que foram tratadas com elagolix (150 ou 250 mg qd), depósito de leuprorelina (3,75 mg sc, uma vez ao mês por 12 semanas) ou placebo, o nível de estrogênio sérico na paciente do grupo de tratamento com elagolix é mais baixo que aquele do grupo tratado com leuprorelina e que aqauele do grupo tratado com placebo. Entretanto, a segurança e a tolerabilidade do elagolix ainda não foi bem verificada.

[009] Relugolix, também conhecido como TAK-385, é um antagonista oral de moléculas pequenas do receptor de GnRH desenvolvido pela Takeda Pharmaceutical no Japão, que é usado para o tratamento de endometriose, leiomioma uterino e câncer de próstata. O estudo de endometriose e leiomioma uterino encontrava-se no ensaio clínico de fase II em 2011, e o estudo de câncer de próstata encontrava-se no ensaio clínico de fase I no mesmo ano.

[0010] No momento, uma série de pedidos de patente concernentes a antagonistas de moléculas pequenas do receptor de GnRH já foram descritos, incluindo os documentos WO2006096785, WO2010026993, WO2011076687, WO2012175514, etc.

[0011] Embora numerosos estudos significativos já tenham sido conduzidos neste campo, continua a necessidade de desenvolver antagonistas de moléculas pequenas do receptor de GnRH mais eficazes. A presente invenção oferece antagonistas do receptor de GnRH de estruturas novas, e foi constatado que compostos apresentando tais estruturas apresentam uma boa atividade, e exibem um efeito de tratamento excelente para doenças do sistema endócrino e reprodutor.

Sumário da Invenção

[0012] A presente invenção propõe-se oferecer um composto de Fórmula (I), um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, ou diastereômero do mesmo, ou uma mistura do mesmo, e um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

[0013] sendo que:

[0014] quando G é N, D é C e E é -CH-;

[0015] quando G é C, D e E são N;

[0016] R1 é selecionado do grupo que consiste em alquila, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila e -OR6, sendo que o alquila, cicloalquila, heterociclila, arila e heteroarila são cada um deles independentemente e opcionalmente ainda substituídos com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio, ciano, nitro, alquila, haloalquila, hidroxialquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, -OR6, -C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, - C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6, -NHC(O)OR6 e -NHC(O)NHOR6;

[0017] R2 é alquila, sendo que alquila é ainda substituída com um ou mais grupos selecionados dentre arila e heteroarila, sendo que arila e heteroarila são cada um deles opcionalmente ainda substituídos com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila, haloalquila, ciano, nitro, -C(O)OR6, -C(O)NR7R8, -OC(O)NR7R8, -OR6, -NHS(O)mR6, -NHC(O)R6 e -NR7R8, sendo que o haloalquila é preferivelmente trifluorometila;

[0018] R3 é selecionado do grupo que consiste em arila e heteroarila, sendo que arila e heteroarila são cada um deles opcionalmente ainda substituídos com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila, haloalquila, -OR6, -C(O)OR6, -OC(O)R6, -C(O)R6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, - C(O)NR7R8, -NHS(O)mR6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NHC(O)NHR6 e - NHC(O)NHOR6;

[0019] R4 é alquila;

[0020] R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, cicloalquila, heterocíclico, arila, heteroarila, -OR5, -NR7R8 e - NR7S(O)mR6, sendo que o alquila, cicloalquila, heterociclila, arila e heteroarila são cada um deles opcionalmente ainda substituídos com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio, oxo, alquila, haloalquila, hidroxialquila, -OR6, -C(O)OR6, -OC(O)R6, - NR7S(O)mR6, -S(O)mR6, -C(O)R6 e -NHC(O)R6;

[0021] R6 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, cicloalquila, heterocíclico, arila e heteroarila, sendo que o alquila, cicloalquila, heterociclila, arila e heteroarila são cada um deles independentemente e opcionalmente ainda substituídos com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em alquila, halogênio, hidroxila, alcóxi, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, ácido carboxílico e éster carboxílico;

[0022] R7 e R8 são cada um deles independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, cicloalquila, heterocíclico, arila e heteroarila, sendo que o alquila, cicloalquila, heterociclila, arila andheteroarila são cada um deles independentemente e opcionalmente ainda substituídos com um ou mais grupos selecionados dentre alquila, halogênio, hidróxi, alcóxi, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, ácido carboxílico e éster carboxílico;

[0023] ou, R7 e R8 são tomados junto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar uma heterociclila, sendo que a heterociclila contém um ou mais heteroátomos de N, O ou S(O)m, e o heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em alquila, halogênio, hidroxila, alcóxi, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, ácido carboxílico e éster carboxílico;

[0024] m é 0,1 ou 2;

[0025] n é 1, 2, 3 ou 4; e

[0026] p é 0,1 ou 2.

[0027] Em uma modalidade preferida da presente invenção, o composto de Fórmula (I) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de Fórmula (II) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

[0028] sendo que: n, R1~R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0029] Em uma outra modalidade preferida da presente invenção, o composto de Fórmula (I) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é um composto de Fórmula (III) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

[0030] sendo que: n, R1~R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0031] Em uma outra modalidade preferida da presente invenção, o composto de Fórmula (I) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, sendo que R1 é selecionado do grupo que consiste em arila e heteroarila, preferivelmente fenila e piridazinila, sendo que arila e heteroarila são cada um deles opcionalmente ainda substituídos com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio, ciano, nitro, alquila, haloalquila, hidroxialquila e -OR6.

[0032] Em uma outra modalidade preferida da presente invenção, o composto de Fórmula (I) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, sendo que R2 é benzila, sendo que benzila é opcionalmente ainda substituído com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila, haloalquila, ciano, nitro e -OR6.

[0033] Em uma outra modalidade preferida da presente invenção, o composto de Fórmula (I) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, sendo que R3 é selecionado dentre arila, preferivelmente fenila, sendo que arila é opcionalmente ainda substituído com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NHC(O)NHR6 e - NHC(O)NHOR6, preferivelmente -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[0034] Em uma outra modalidade preferida da presente invenção, o composto de Fórmula (I) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, sendo que R4 é metila.

[0035] Em uma outra modalidade preferida da presente invenção, o composto de Fórmula (I) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, sendo que R5 é hidrogênio, n é 1 ou 2.

[0036] Em uma outra modalidade preferida da presente invenção, o composto de Fórmula (I) ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável (IV) ou um tautômero, diastereômero, ou uma farmaceuticamente aceitável do mesmo:

[0037] sendo que: n, D, E, G, R1, R2, R4 e R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0038] Ra é selecionado do grupo que consiste em alquila e -OR6, sendo que alquila é opcionalmente ainda substituída com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em alquila, halogênio, hidróxi, alcóxi, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, ácido carboxílico e éster carboxílico; e

[0039] R6 é alquila, sendo que alquila é opcionalmente ainda substituída com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em alquila, halogênio, hidróxi, alcóxi, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, ácido carboxílico e éster carboxílico.

[0040] Compostos típicos da presente invenção incluem, porém sem limitação, os seguintes:

[0041] ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0042] Em um outro aspecto, a presente invenção oferece um processo para preparar um composto de Fórmula (I), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreendendo uma etapa de:

[0043] reagir um composto de Fórmula (IA) com a amina de Fórmula NH(R4)(CH2)nR5; opcionalmente reduzir e/ou acilar o produto resultante para obter o composto de Fórmula (I);

[0044] sendo que: X é halogênio; n, D, E, G e R1 ~ R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0045] Agentes redutores incluem, porém sem limitação, hidrogênio ou pó de ferro;

[0046] Agentes acilantes incluem, porém sem limitação, ácido carboxílicos, acil cloreto, sulfuril cloreto, metil formiato halogenado, isocianato ou trifosgênio e metoxiamina.

[0047] Em um outro aspecto, a presente invenção oferece um processo para preparar um composto de Fórmula (I), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreendendo uma etapa de:

[0048] reagir um composto de Fórmula (IB) com R2X na presença de um reagente alcalino; opcionalmente reduzir e/ou acilar o produto resultante para obter o composto de Fórmula (I);

[0049] sendo que: X é halogênio, n, D, E, G e R1 ~ R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0050] Reagentes alcalinos incluem, porém sem limitação, base orgânica e base inorgânica, sendo que a base orgânica inclui, porém sem limitação, trietilamina, piridina, 2,6-lutidina, metóxido de sódio, hexametildissilazida de lítio, hexametildissilazida de sódio, n-butil-lítio, terc-butóxido de potássio e brometo de tetrabutil amônio, a base inorgânica inclui, porém sem limitação, hidreto de sódio, carbonato de sódio, bicarbonato de sódio, carbonato de potássio, bicarbonato de potássio, carbonato de césio, hidróxido de lítio, hidróxido de sódio e hidróxido de potássio, preferivelmente carbonato de potássio e metóxido de sódio.

[0051] Agentes redutores incluem, porém sem limitação, hidrogênio e pó de ferro.

[0052] Agentes acilantes incluem, porém sem limitação, ácido carboxílicos, acil cloreto, sulfuril cloreto, metil formiato halogenado, isocianato ou trifosgênio e metoxiamina.

[0053] Um composto de Fórmula (IA) ou Fórmula (IB), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que é usado como um intermediário na preparação do composto de Fórmula (I):

[0054] sendo que: X é halogênio, n, D, E, G e R1 ~ R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0055] Um processo para preparar um composto de Fórmula (IA), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreendendo uma etapa de:

[0056] realizar uma reacão de halogenação de um composto de Fórmula (Ib) para obter o composto de Fórmula (IA);

[0057] sendo que: D, E, G e R1 ~ R3 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0058] Um processo para preparar um composto de Fórmula (IB), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreendendo uma etapa de:

[0059] realizar uma reação de ciclização de um composto de Fórmula (Ig) para obter o composto de Fórmula (IB);

[0060] sendo que: n, D, E, G e R1, R3 ~ R5 têm as definições dadas na Fórmula (I);

[0061] Rb é alquila.

[0062] Compostos de Fórmula (IA) típicos (IA) incluem, porém sem limitação, os seguintes:

[0063] ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0064] Um composto de Fórmula (IVA), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que é usado como um intermediário na preparação de um composto de Fórmula (IV):

[0065] sendo que: n, D, E, G, R1, R2, R4 e R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0066] Compostos de Fórmula (IVA) típicos incluem, porém sem limitação, os seguintes:

[0067] ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0068] Um processo para preparar um composto de Fórmula (IV), compreendendo uma etapa de:

[0069] reagir ainda o composto de Fórmula (IVA) com um agente acilante para obter um composto de Fórmula (IV);

[0070] sendo que: n, D, E, G, R1, R2, R4 e R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[0071] Agentes acilantes incluem, porém sem limitação, ácido carboxílicos, acil cloreto, sulfuril cloreto, metil formiato halogenado, isocianato ou trifosgênio e metoxiamina.

[0072] A presente invenção se refere ainda a uma composição farmacêutica, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais carreadores, diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0073] A presente invenção se refere ainda ao uso do composto de Fórmula (I), ou de um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo, na preparação de um medicamento como antagonista do receptor de GnRH.

[0074] A presente invenção se refere ainda ao uso do composto de Fórmula (I), ou de um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo, na preparação de um medicamento para o tratamento de doenças relacionadas com os hormônios gonadais.

[0075] A presente invenção se refere ainda ao uso do composto de Fórmula (I), ou de um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo, na preparação de medicamentos para o tratamento ou a prevenção de câncer dependente de hormônios de doenças sexuais (por exemplo, câncer de próstata, câncer de útero, câncer de mama, câncer da glândula pituitária, etc.), metástase óssea de cânceres dependentes de hormônios sexuais, hiperplasia da próstata, leiomioma uterino, endometriose, fibroide uterino, puberdade precoce, amenorreia, síndrome pré-menstrual, dismenorreia, síndrome do ovário multilocular, síndrome do ovário policístico, acne, alopecia, mal de Alzheimer, infertilidade, síndrome do intestino irritado, tumores benignos e malignos que são independentes de hormônios e sensíveis a LH-RH, ou rubor; ou na preparação de regulador da reprodução, contraceptivo, e um provocador de ovulação; ou na preparação de medicamentos para o tratamento ou a prevenção de recorrência pós- operatória de câncer dependente de hormônios sexuais, preferivelmente câncer de próstata, câncer de útero, câncer de mama, endometriose ou leiomioma uterino.

[0076] A presente invenção se refere ainda a um método para inibir a atividade do receptor de GnRH, compreendendo administrar a um indivíduo com necessidade da mesma uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto of formula (I), ou de um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou das composições contendo o mesmo.

[0077] A presente invenção se refere ainda a um método para tratar uma doença relacionada com os hormônios gonadais, compreendendo administrar a um indivíduo com necessidade da mesma uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto offormula (I), ou de um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou da composição farmacêutica contendo o mesmo.

[0078] A presente invenção se refere ainda a um método para a prevenção ou o tratamento de cânceres dependentes de hormônios sexuais (câncer de próstata, câncer de útero, câncer de mama, câncer da glândula pituitária, etc.), metástase óssea de câncer dependente de hormônios sexuais, hiperplasia da próstata, leiomioma uterino, endometriose, fibroide uterino, puberdade precoce, amenorreia, síndrome pré-menstrual, dismenorreia, síndrome do ovário multilocular, síndrome do ovário policístico, acne, alopecia, mal de Alzheimer, infertilidade, síndrome do intestino irritado, tumores benignos e malignos que são independentes de hormônios e sensíveis a LH-RH, ou rubor, preferivelmente câncer de próstata, câncer de útero, câncer de mama, endometriose, ou leiomioma uterino; ou para regular a reprodução, a contracepção ou evocar a ovulação; ou para a prevenção de recorrência pós-operatória de câncer dependente de hormônios sexuais.

[0079] A presente invenção também se refere a um composto de Fórmula (I), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou à composição farmacêutica contendo o mesmo, para uso como um medicamento para inibir a atividade do receptor de GnRH.

[0080] A presente invenção também se refere a um composto de Fórmula (I), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou à composição farmacêutica contendo o mesmo, para uso como um medicamento para o tratamento de doenças relacionadas com hormônios sexuais.

[0081] A presente invenção se refere ainda to a compound of the formula (I), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou à composição farmacêutica contendo o mesmo, para uso como um agente preventivo ou regulador para doenças dependentes de hormônio, em particular; ou para uso como um agente preventivo ou terapêutico para cânceres dependentes de hormônios sexuais (por exemplo, câncer de próstata, câncer de útero, câncer de mama, câncer da glândula pituitária, etc.), hiperplasia da próstata, leiomioma uterino, endometriose, fibroide uterino, puberdade precoce, amenorreia syndrome, síndrome pré- menstrual, síndrome do ovário multilocular, acne, alopecia, mal de Alzheimer, etc.; ou para uso como regulador de gravidez (contraceptivo e similares), agente terapêutico contra infertilidade ou regulador da menstruação; ou para uso como um agente preventivo ou terap6eutico para síndrome do intestino irritado; ou para uso como um agente preventivo para recorrência pós-operatória de câncer dependente de hormônios sexuais, entre outros; preferivelmente câncer de próstata, câncer de útero, câncer de mama, endometriose ou leiomioma uterino.

[0082] As composições farmacêuticas contendo o princípio ativo podem estar em uma forma adequada para administração oral, tal como comprimidos, trociscos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós dispersíveis ou grânulos, emulsões, cápsulas duras ou moles, ou xaropes ou elixires. As composições orais podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na literatura para a preparação de composições farmacêuticas. Tais composições podem conter um ou mais aditivos selecionados do grupo que consiste em adoçantes, agentes flavorizantes, corantes e preservativos, para proporcionar uma formulação farmacêutica agradável e palatável. Os comprimidos contêm o princípio ativo e excipientes atóxicos e farmaceuticamente aceitáveis para a produção de comprimidos. Esses excipientes devem ser excipientes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes granulantes e desintegrantes tais como celulose microcristalina, carboximetil celulose sódica reticulada, amido de milho ou ácido algínico; aglutinantes tais como amido, gelatina, polivinilpirrolidona ou acácia; e lubrificantes, tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou revestidos por meio de qualquer técnica conhecida que pode mascarar o sabor do fármaco ou retardar a desintegração e a absorção de um fármaco no trato gastrointestinal, proporcionando assim uma liberação sistemática por um período prolongado. Por exemplo, o material mascarador de sabor solúvel em água que pode ser usado na presente invenção é um material tal como hidroxipropil metilcelulose ou hidroxipropil celulose, ou material retardador da desintegração que pode ser usado na presente invenção é um material tal como etil celulose, butirato de acetato de celulose.

[0083] As formulações orais também podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras nas quais o princípio ativo é misturado com um diluente sólido inerte, tal como carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cáspulas de gelatina moles nas quais o princípio ativo é misturado com um carreador solúvel em água tal como polietileno glicol ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida, ou óleo de oliva.

[0084] A suspensão aquosa contém o princípio ativo em mistura com excipientes adequados para a produção de suspensões aquosas. Tal excipiente é um agente suspensor, tal como carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona e goma acácia; um dispersante ou umectante que pode ser um fosfatídeo de ocorrência natural, tal como lecitina, ou produtos de csendo quensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos, tais como estearato de polioxietileno, ou produtos de csendo quensação de óxido de etileno com um álcool alifático de cadeia longa, tal como heptadecaetileno-óxi cetanol, ou produtos de csendo quensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e hexitóis, tais como polioxietileno sorbitol mono-oleato, ou produtos de csendo quensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, tais como polioxietileno sorbitan mono-oleato. A suspensão aquosa também pode conter um ou mais preservativos, tais como etilparabeno ou n- propilparabeno, um ou mais corantes, um ou mais agentes flavorizantes, e um ou mais adoçantes, tais como sacarose, sacarina ou aspartame.

[0085] As suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão do princípio ativo em um óleo vegetal, tal como óleo de amendoim, óleo de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou em um óleo mineral tal como parafina líquida. A suspensão oleosa pode conter um espessante, tal como cerca de abelha, parafina dura ou cetil álcool. Os referidos agentes adoçantes e flavorizantes podem ser acrescentados para proporcionar uma preparação palatável. Estas composições podem ser preservadas pela adição de um antioxidante tal como hidroxianisol butilado ou a-tocoferol.

[0086] Pós dispersíveis e grânulos adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água oferecem o princípio ativo em mistura com um agente dispersante ou umectante, um agente suspensor ou um ou mais preservativos. Agentes dispersantes ou umectantes e agentes suspensores adequados são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Excipientes adicionais, tais como adoçante, agente flavorizante e corante, também podem ser acrescentados. Estas composições podem ser preservadas pela adição de um antioxidante tal como ácido ascórbico.

[0087] A presente composição farmacêutica também pode estar na forma de uma emulsão de óleo em água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, tal como óleo de oliva ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, tal como parafina líquida ou uma mistura dos mesmos. Agentes emulsificantes adequados podem ser fosfatídeos de ocorrência natural, tais como lecitina de soja, e ésteres ou ésters parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, tais como sorbitan mono-oleato, e produtos de csendo quensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, tais como polioxietileno sorbitol mono-oleato. A emulsão também pode conter adoçantes, agentes flavorizantes, preservativos e antioxidantes. Xaropes e elixires podem ser formulados com um adoçante, tal como glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações também podem conter um demulcente, um preservativo, um corante e um antioxidante.

[0088] A composição farmacêutica pode estar na forma de uma solução aquosa injetável estéril. Os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados são água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônica. A preparação injetável estéril também pode ser microemulsão de óleo em água injetável estéril na qual o princípio ativo é dissolvido na fase oleosa. Por exemplo, o princípio ativo pode ser primeiro dissolvido em uma mistura de óleo de soja e lecitina, a solução oleosa é então introduzida em uma mistura de água e glicerol e processada para formar uma microemulsão. As soluções ou microemulsões injetáveis podem ser introduzidas na corrente sanguínea de um indivíduo por injeção de bolo local. Alternativamente, pode ser vantajoso administrar a solução ou microemulsão de maneira a manter uma concentração circulante constante do presente composto. Para manter tal concentração constante, um dispositivo de distribuição intravenosa contínua pode ser utilizado. Um exemplo de tal dispositivo é a bomba de injeção intravenosa Deltec CADD-PLUS. TM. 5400.

[0089] A composição farmacêutica pode estar na forma de uma suspensão aquosa ou oleosa injetável estéril para administração intramuscular e subcutânea. Tal suspensão pode ser formulada com agentes dispersantes ou umectantes e agentes suspensores adequados como já descrito acima de acordo com técnicas conhecidas. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril preparada em um diluente ou solvente atóxico e parenteralmente aceitável, por exemplo, uma solução preparada em 1,3-butanodiol. Além disso, óleos fixos estéreis podem ser facilmente usados como um solvente ou meio de suspensão. Para tanto, quaisquer óleos fixos purificados ("reconcile fixed oils") incluindo monoglicerídeos e diglicerídeos sintéticos podem ser empregados. Além disso, ácidos graxos tais como ácido oleico podem ser empregados na preparação de injeção.

[0090] O presente composto pode ser administrado na forma de supositórios para administração retal. Estas composições farmacêuticas podem ser preparadas por misturação do fármaco com excipientes não irritantes adequados que são sólidos a temperaturas normais, porém líquidos no reto, dessa forma derretendo no reto para liberar o fármaco. Tais materiais incluem manteiga de cacau, gelatina glicerinada, óleos vegetais hidrogenados, misturas de polietileno glicóis e ésteres de ácidos graxos de polietileno glicol com vários pesos moleculares.

[0091] Os versados na técnica bem sabem que a dosagem de um fármaco depende de uma variedade de fatores, que incluem, porém sem limitação, os seguintes fatores: a atividade do composto particular, a idade do paciente, o peso do paciente, o estado geral de saúde do paciente, o comportamento do paciente, a dieta do paciente, o tempo de administração, a via de administração, a taxa de excreção, a combinação medicamentosa, entre outros. Além disso, o melhor tratamento, tal como o modelo de tratamento, a dose diária do composto de Fórmula (I) ou o tipo de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser verificado pelo regime terapêutico tradicional.

Descrição Detalhada da Invenção

[0092] A menos que especificado em contrário, os termos usados no relatório descritivo e nas reivindicações têm os significados descritos abaixo.

[0093] "Alquila" se refere a um grupo hidrocarboneto alifático saturado incluindo grupos C1-C20 de cadeia linear ou ramificada, preferivelmente alquila apresentando de 1 a 10 átomos de carbono, mais preferivelmente uma alquila apresentando de 1 a 6 átomos de carbono, ainda mais preferivelmente uma alquila apresentando de 1 a 4 átomos de carbono, e ainda mais preferivelmente metila. Exemplos representativos incluem, porém sem limitação, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, terc-butila, sec-butila, n-pentila, 1,1- dimetilpropila, 1,2-dimetilpropila, 2,2-dimetilpropila, 1-etilpropila, 2- metilbutila, 3-metilbutila, n-hexila, 1-etil-2-metilpropila, 1,1,2- trimetilpropila, 1,1-dimetilbutila, 1,2-dimetilbutila, 2,2-dimetilbutila, 1,3- dimetilbutila, 2-etilbutila, 2-metilpentila, 3-metilpentila, 4-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, n-heptila, 2-metil-hexila, 3-metil-hexila, 4-metil-hexila, 5-metil-hexila, 2,3-dimetilpentila, 2,4-dimetilpentila, 2,2-dimetilpentila, 3,3-dimetilpentila, 2-etilpentila, 3-etilpentila, n-octila, 2,3-dimetil-hexila, 2,4-dimetil-hexila, 2,5-dimetil-hexila, 2,2-dimetil-hexila, 3,3-dimetil- hexila, 4,4-dimetil-hexila, 2-etil-hexila, 3-etil-hexila, 4-etil-hexila, 2- metil-2-etilpentila, 2-metil-3-etilpentila, n-nonila, 2-metil-2-etil-hexila, 2- metil-3-etil-hexila, 2,2-dietilpentila, n-decila, 3,3-dietil-hexila, 2,2-dietil- hexila, e isômeros ramificados dos mesmos. Mais preferivelmente, um grupo alquila é uma alquila inferior apresentando de 1 a 6 átomos de carbono. Exemplos representativos incluem, porém sem limitação, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, terc-butila, sec- butila, n-pentila, 1,1-dimetilpropila, 1,2-dimetilpropila, 2,2-dimetilpropila, 1-etilpropila, 2-metilbutila, 3-metilbutila, n-hexila, 1-etil-2-metilpropila, 1,1,2-trimetilpropila, 1,1-dimetilbutila, 1,2-dimetilbutila, 2,2-dimetilbutila, 1,3-dimetilbutila, 2-etilbutila, 2-metilpentila, 3-metilpentila, 4- metilpentila, 2,3-dimetilbutila, entre outros. O grupo alquila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, os grupos substituintes podem ser substituídos em qualquer de ligação disponível, e os grupos substituintes são preferivelmente um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, alquiloxila, alquiltiol, alquilamino, halogênio, tiol, hidróxi, nitro, ciano, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, cicloalcóxi, heterocíclico alcóxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquila, hidroxialquila, carboxila, alcoxicarbonil, -OR6, - C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, -C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[0094] "Alquenila" se refere a uma alquila já definida acima que apresenta pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono, por exemplo, vinila, 1-propenila, 2- propenila, 1-, 2-, ou 3-butenila, etc., preferivelmente C2-10 alquenila, mais preferivelmente C2-6 alquenila, e ainda mais preferivelmente C2-4 alquenila. O grupo alquenila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, os grupos substituintes são preferivelmente um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, alquiltiol, alquilamino, halogênio, tiol, hidróxi, nitro, ciano, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, cicloalcóxi, heterocicloalcóxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquila, hidroxialquila, carboxila, alcoxicarbonila, -OR6, - C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, -C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[0095] "Alquinila" se refere a uma alquila já definida acima que apresenta pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono, por exemplo, etinila, 1-propinila, 2- propinila, 1-, 2-, ou 3-butinila, etc., preferivelmente C2-10 alquinila, mais preferivelmente C2-6 alquinila, e ainda mais preferivelmente C2-4 alquinila. O grupo alquinila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, os grupos substituintes são preferivelmente um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, alquiltiol, alquilamino, halogênio, tiol, hidróxi, nitro, ciano, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, cicloalcóxi, heterocicloalcóxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquila, hidroxialquila, carboxila, alcoxicarbonila, -OR6, - C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, -C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[0096] "Cicloalquila" se refere a um grupo hidrocarboneto monocíclico ou policíclico saturado ou parcialmente insaturado apresentando de 3 a 20 átomos de carbono, preferivelmente 3 a 12 átomos de carbono, mais preferivelmente 3 a 10 átomos de carbono, ainda mais preferivelmente 3 a 6 átomos de carbono, e ainda mais preferivelmente ciclopropila. Exemplos representativos de cicloalquila monocíclico incluem, porém sem limitação, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo- hexadienila, ciclo-heptila, ciclo-heptatrienila, ciclo-octila, etc., preferivelmente ciclopropila, ou ciclo-hexenila. Cicloalquila policíclico inclui uma cicloalquila apresentando um anel em espiral, um anel fundido ou um anel ligado por meio de ponte. O grupo cicloalquila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, os grupos substituintes são preferivelmente um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, alquiloxila, alquiltiol, alquilamino, halogênio, tiol, hidróxi, nitro, ciano, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, cicloalcóxi, heterocicloalcóxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquila, hidroxialquila, carboxila, alcoxicarbonila, -OR6, - C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, -C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[0097] "Heterociclila" se refere a um grupo hidrocarboneto monocíclico ou policíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 20 membros apresentando um ou mais heteroátomos selecionados do grupo que consiste em N, O, e S(O)m (sendo que m é um inteiro entre 0 ~2) como átomos anelares, porém excluindo -O-O-, -O-S- ou -S-S- no anel, com os outros átomos anelares sendo C. Uma heterociclila apresenta preferivelmente a 3 a 12 átomos anelares, sendo que 1 a 4 átomos são heteroátomos; mais preferivelmente 3 a 10 átomos anelares; e ainda mais preferivelmente 5 a 6 átomos anelares. Exemplos representativos de heterociclila monocíclico incluem, porém sem limitação, pirrolidinila, piperidila, piperazinila, morfolinila, tiomorfolinila, homopiperazinila, piranila, tetra-hidrofuranila, entre outros. Heterociclila policíclico inclui heterociclila apresentando um anel em espiral, um anel fundido ou um anel ligado por meio de ponte. O grupo heterociclila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, os grupos substituintes são preferivelmente um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, alquiloxila, alquiltiol, alquilamino, halogênio, tiol, hidróxi, nitro, ciano, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, cicloalcóxi, heterocicloalcóxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, oxo, amino, haloalquila, hidroxialquila, carboxila, alcoxicarbonila, -OR6, - C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, -C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[0098] "Arila" se refere a um anel monocíclico ou um anel fundido policíclico de 6 a 14 membros só carbonos (um sistema anelar "fundido" significa que cada anel compartilha um par adjacente de átomos de carbono com um outro anel no sistema), que apresenta um sistema de elétrons π completamente conjugado. Uma arila apresenta preferivelmente 6 a 10 membros, e é mais preferivelmente fenila e naftila, e ainda mais preferivelmente fenila. Arila pode ser fundida ao anel de uma heteroarila, heterociclila ou cicloalquila, sendo que o anel ligado à estrutura parental é arila. Exemplos representativos incluem, porém sem limitação, os seguintes grupos:

[0099] O gruparila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, os grupos substituintes são preferivelmente um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, alquiltiol, alquilamino, halogênio, tiol, hidróxi, nitro, ciano, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, cicloalcóxi, heterocicloalcóxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, -OR6, - C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, -C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[00100] "Heteroarila" se refere a um anel monocíclico ou um anel fundido policíclico de 5 a 14 membros só carbonos apresentando de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo que consiste em O, S e N, que apresenta um sistema de elétrons π completamente conjugado. Uma heteroarila apresenta preferivelmente 5 a 10 membros, mais preferivelmente 5 ou 6 membros, e é ainda mais preferivelmente furila, tienila, piridinila, pirrolila, N-alquila pirrolila, pirimidinila, pirazinila, imidazolila, tetrazolila, entre outros.O heteroarila pode ser fundido com o anel de uma arila, heterociclila ou cicloalquila, sendo que o anel ligado à estrutura parental é heteroarila. Exemplos representativos incluem, porém sem limitação, os seguintes grupos:

[00101] O grupo heteroarila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, os grupos substituintes são preferivelmente um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, alquiltiol, alquilamino, halogênio, tiol, hidróxi, nitro, ciano, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, cicloalcóxi, heterocicloalcóxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, -OR6, - C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, -C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, -C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[00102] "Alcóxi" se refere tanto a um grupo -O-(alquil) quanto a um grupo -O-( cicloalquila não substituído), sendo que alquila e cicloalquila têm as definições dadas acima. Exemplos representativos incluem, porém sem limitação, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, ciclopropilóxi, ciclobutilóxi, ciclopentylóxi, ciclo-hexilóxi, entre outros. O alcóxi pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, o substituinte é preferivelmente um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, alquiltiol, alquilamino, halogênio, tiol, hidróxi, nitro, ciano, cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, cicloalcóxi, heterocicloalcóxi, cicloalquiltio, heterocicloalquiltio, amino, haloalquila, hidroxialquila, carboxila, alcoxicarbonila, -OR6, -C(O)OR6, -OC(O)R6, -NHS(O)mR6, - C(O)R6, -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NR7R8, -OC(O)NR7R8, - C(O)NR7R8, -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[00103] "Haloalquila" se refere a um grupo alquila substituído com um ou mais halogênios, sendo que alquila tem a definição dada acima.

[00104] "Hidróxi" se refere a um grupo -OH.

[00105] "Hidróxi alquila" se refere a um grupo alquila substituído com um grupo hidróxi, sendo que alquila tem a definição dada acima.

[00106] "Halogênio" se refere a flúor, cloro, bromo ou bromo.

[00107] "Amino" se refere a um grupo -NH2.

[00108] "Ciano" se refere a um grupo -CN.

[00109] "Nitro" se refere a um grupo -NO2.

[00110] "Grupo oxo" se refere a um grupo =O.

[00111] "Ácido carboxílico" se refere a um (alquil) ou (cicloalquil) - C(O)OH.

[00112] "Sulfuril cloreto" se refere a um (alquil) ou (cicloalquil) - S(O)m-X (halo).

[00113] "Isocianato" se refere a um (alquil) ou (cicloalquil) -N=C=O.

[00114] "Trifosgênio" se refere a um bis(triclorometil)carbonato.

[00115] "Carboxila" se refere a um grupo -C(O)OH.

[00116] "Alcoxicarbonila" se refere a um grupo -C(O)O(alquil) ou (cicloalquil), sendo que alquila e cicloalquila têm as definições dadas acima.

[00117] "Opcional" ou "opcionalmente" significa que o evento ou circunstância descrita subsequentemente pode, mas não necessariamente ocorre. Tal expressão significa o caso em que o evento ou circunstância ocorre ou não ocorre. Por exemplo, "o grupo heterocíclico opcionalmente substituído com uma alquila" significa que um grupo alquila pode, mas não necessariamente está presente, e tal expressão inclui o caso em que o grupo heterocíclico é substituído com uma alquila e caso em que o grupo heterocíclico não é substituído com uma alquila.

[00118] "Substituído" se refere a um ou mais átomos de hidrogênio em um grupo, preferivelmente até 5, mais preferivelmente 1 a 3 átomos de hidrogênio, cada um deles independentemente substituído com um número correspsendo quente de substituintes. Não é preciso dizer que os substituintes existem em sua única posição química possível. O versado na técnica é capaz de determinar se a substituição é possível ou impossível sem esforços excessivos por meio de experiência ou teoria. Por exemplo, a ligação de um grupo amino ou hidróxi apresentando hidrogênio livre a átomos de carbono apresentando ligações insaturadas (tais como olefínicas) pode ser instável.

[00119] Uma "composição farmacêutica" se refere a uma mistura de um ou mais dos compostos descritos na presente invenção ou sais fisiologicamente/farmaceuticamente aceitáveis ou profármacos dos mesmos e outros componentes químicos tais como carreadores e excipientes fisiologicamente/farmaceuticamente aceitáveis. A finalidade de uma composição farmacêutica é facilitar a administração de um composto a um organismo, que leva à absorção do princípio ativo, exibindo assim atividade biológica.

[00120] Sendo que R6~R8 têm as definições dadas na Fórmula (I). MÉTODO DE SÍNTESE DO PRESENTE COMPOSTO

[00121] Para atingir o objetivo da presente invenção, a presente invenção aplica a seguinte solução técnica:

[00122] Um processo para preparar um composto de Fórmula (I), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreende as seguintes etapas:

Esquema 1

[00123] um composto de Fórmula (Ia) é reagido com R2X na presença de um reagente alcalino para obter um composto de Fórmula (Ib); o composto de Fórmula (Ib) é submetido a uma reação de halogenação na presença de um catalisador para obter um composto de Fórmula (IA), sendo que o catalisador é preferivelmente azobisisobutironitrila, e o agente halogenante é preferivelmente N- bromossuccinimida; o composto de Fórmula (IA) é reagido com a amina de Fórmula NH(R4)(CH2)nR5 para obter um composto de Fórmula (I);

[00124] sendo que: X é halogênio; n, D, E, G, e R1~R5 têm as definições dadas na Fórmula (I);

[00125] R3 é preferivelmente uma arila, mais preferivelmente um fenila, sendo que arila é opcionalmente ainda substituído com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[00126] Um processo para preparar um composto de Fórmula (I), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreende as seguintes etapas:

Esquema 2

[00127] reagir o composto de Fórmula (Ic) é submetido a uma reação de halogenação na presença de um catalisador para obter um composto de Fórmula (Id), sendo que o catalisador é preferivelmente azobisisobutironitrila, e o agente halogenante é preferivelmente N- bromossuccinimida; o composto de Fórmula (Id) é reagido com a amina de Fórmula NH(R4)(CH2)nR5 para obter um composto de Fórmula (Ie); o composto de Fórmula (Ie) é ainda aquecido na presença de ácido trifluoroacético para obter um composto de Fórmula (If); o composto de Fórmula (If) é reagido com trifosgênio e uma amina de Fórmula R1NH2 sucessivamente para obter um composto de Fórmula (Ig); o composto de Fórmula (Ig) é submetido a uma reação de ciclização na presença de um reagente alcalino para obter um composto de Fórmula (IB); o composto de Fórmula (IB) é reagido com R2X na presença de um reagente alcalino para obter um composto de Fórmula (I);

[00128] sendo que:

[00129] X é halogênio; Rb é alquila;

[00130] n, D, E, G, R1~R5 têm as definições dadas na Fórmula (I); e

[00131] R3 é preferivelmente uma arila, mais preferivelmente um fenila, sendo que arila é opcionalmente ainda substituído com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

[00132] Um processo para preparar um composto de Fórmula (II), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreende as seguintes etapas:

Esquema 3

[00133] o composto de Fórmula (IIa) é aquecido na presença de ácido trifluoroacético para obter um composto de Fórmula (IIb); o composto de Fórmula (IIb) é reagido com trifosgênio e uma amina de Fórmula R1NH2 sucessivamente para obter um composto de Fórmula (IIc); o composto de Fórmula (IIc) é submetido a uma reação de ciclização na presença de um reagente alcalino para obter um composto de Fórmula (IId); o composto de Fórmula (IId) é reagido com R2X na presença de um reagente alcalino para obter um composto de Fórmula (IIe); o composto de Fórmula (IIe) é submetido a uma reação de halogenação na presença de um catalisador para obter um composto de Fórmula (IIA), sendo que o catalisador é preferivelmente azobisisobutironitrila, e o agente halogenante é preferivelmente N- bromossuccinimida; o composto de Fórmula (IIA) é reagido com uma amina de Fórmula NH(R4)(CH2)nR5 para obter um composto de Fórmula (II);

[00134] sendo que: X é halogênio; Rb é alquila;

[00135] n, R1~R5 têm as definições dadas na Fórmula (I);

[00136] R3 é preferivelmente uma arila, mais preferivelmente um fenila, sendo que arila é opcionalmente ainda substituído com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em -NHC(O)NHR6 e - NHC(O)NHOR6.

[00137] Um processo para preparar um composto de Fórmula (III), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreende as seguintes etapas:

Esquema 4

[00138] o composto de Fórmula (IIIa) é reagido com trifosgênio e uma amina de Fórmula R1NH2 sucessivamente para obter um composto de Fórmula (IIIb); o composto de Fórmula (IIIb) é reagido na presença de um reagente alcalino para obter um composto de Fórmula (IIIc); o composto de Fórmula (IIIc) é com R2X na presença de um reagente alcalino para obter um composto de Fórmula (IIId); o composto de Fórmula (IIId) é submetido a uma reação de halogenação na presença de um catalisador para obter um composto de Fórmula (IIIA), sendo que o catalisador é preferivelmente azobisisobutironitrila, e o agente halogenante é preferivelmente N-bromossuccinimida; o composto de Fórmula (IIIA) é reagido com uma amina de Fórmula NH(R4)(CH2)nR5 para obter um composto de Fórmula (III);

[00139] sendo que: X é halogênio; Rb é alquila;

[00140] n, R1~R5 têm as definições dadas na Fórmula (I);

[00141] R3 é preferivelmente uma arila, mais preferivelmente um fenila, sendo que arila é opcionalmente ainda substituído com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em -NHC(O)NHR6 e - NHC(O)NHOR6.

[00142] Um processo para preparar um composto de Fórmula (IV), ou um tautômero, mesômero, racemato, enantiômero, diastereômero, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreende as seguintes etapas:

Esquema 5

[00143] um composto de Fórmula (IVa) é preparado de acordo com os esquemas 1-4; o composto de Fórmula (IVa) é reagido com R2X na presença de um reagente alcalino para obter um composto de Fórmula (IVb); o composto de Fórmula (IVb) é submetido a uma reação de halogenação na presença de um catalisador para obter um composto de Fórmula (IVc), sendo que o catalisador é preferivelmente azobisisobutironitrila, e o agente halogenante é preferivelmente N- bromossuccinimida; o composto de Fórmula (IVc) é reagido com uma amina de Fórmula NH(R4)(CH2)nR5 para obter um composto de Fórmula (IVd); o composto de Fórmula (IVd) é submetido a uma reação de redução com ferro na presença de cloreto de amônio para reduzir um grupo nitro a um grupo amino para obter um composto de Fórmula (IVA); o composto de Fórmula (IVA) é ainda reagido com um reagente acilante para obter um composto de Fórmula (IV);,

[00144] sendo que: X é halogênio, n, D, E, G, Ra, R1~R5 têm as definições dadas na Fórmula (I).

[00145] Nas soluções técnicas mencionadas acima, a condição alcalina é proporcionada por uma base orgânica ou por uma base inorgânica, sendo que a base orgânica inclui, porém sem limitação, trietilamina, piridina, 2,6-lutidina, metóxido de sódio, hexametildissilazida de lítio, hexametildissilazida de sódio, n-butil-lítio, terc-butóxido de potássio ou brometo tetrabutil amônio; e a base inorgânica inclui, porém sem limitação, hidreto de sódio, carbonato de sódio, bicarbonato de sódio, carbonato de potássio, bicarbonato de potássio, carbonato de césio, hidróxido de lítio, hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio. No método da presente invenção, a condição alcalina de ciclização é preferivelmente uma base orgânica, e mais preferivelmente é metóxido de sódio.

[00146] Agente redutor inclui, porém sem limitação, hidrogênio ou pó de ferro.

[00147] Agente acilante inclui, porém sem limitação, ácido carboxílico, acil cloreto, sulfuril cloreto, metil formiato halogenado, isocianato ou trifosgênio e metoxiamina.

[00148] A invenção será ainda ilustrada com referência aos exemplos específicos que se seguem. Deve ficar entendido que esses exemplos destinam-se meramente a demonstrar a invenção sem limitar o escopo da invenção.

[00149] Os métodos experimentais nos exemplos que se seguem para os quais nenhuma condição específica é indicada serão realizados de acordo com condições convencionais ou com as condições recomendadas para as matérias-primas e pelo fabricante do produto. Os reagentes experimentais para os quais nenhuma fonte específica é indicada serão reagentes convencionais que se encontram comercialmente disponíveis.

Exemplos

[00150] As estruturas dos compostos estão identificadas por ressonância magnética nuclear (RMNO e/ou por espectrometria de massas (MS). O desvio químico da RMN (δ) está dado em 10-6 (ppm). A RMN é determinada pelo Bruker AVANCE-400. Os solventes para RMN são dimetil sulfóxido deuterado (DMSO-d6), clorofórmio deuterado (CDCl3) e metanol deuterado (CD3OD), com tetrametilsilano (TMS) como um padrão interno.

[00151] A MS é determinada por um espectrômetro de massas FINNIGAN LCQAd (ESI) (fabricante: Thermo, tipo: Finnigan LCQ advantage MAX).

[00152] A cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é terminada em um espectrômetro de cromatografia líquida de alta pressão Agilent 1200DAD (coluna cromatográfica Sunfire C18 150x4,6 mm) e um espectrômetro de cromatografia líquida de alta pressão Waters 2695-2996 (coluna cromatográfica Gimini C18 150x4,6 mm).

[00153] A taxa de inibição média de quinase e a IC50 são determinadas por um NovoStar ELISA (BMG Co., Alemanha).

[00154] Uma placa de sílica-gel Yantai Huanghai HSGF254 ou Qingdao GF254 é usada para cromatografia sobre sílica-gel em camada fina (TLC). A dimensão das placas usadas na TLC variava de 0,15mm a 0,2 mm, e a dimensão das placas usadas na purificação do produto variava de 0,4 mm a 0,5 mm.

[00155] Sílica-gel Yantai Huanghai de malha 200 a 300 foi usada como carreador na cromatografia de coluna.

[00156] Os materiais de partida da presente invenção podem ser preparados por métodos de síntese convencionais conhecidos na literatura, ou podem adquiridos na ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc., ou Dari Chemical Company, etc.

[00157] A menos que indicado em contrário, as reações podem ser realizadas em uma atmosfera de nitrogênio ou em uma atmosfera de argônio.

[00158] O termo "atmosfera de argônio" ou "atmosfera de nitrogênio" significa que o balão de reação é equipado com um balão de argônio ou nitrogênio de 1 L.

[00159] A menos que indicado em contrário, a solução nos exemplos se refere a uma solução aquosa.

[00160] A menos que indicado em contrário, a temperatura de reação nos exemplos é a temperatura ambiente, e a faixa da temperatura ambiente variava de 20°C a 30°C.

[00161] O processo reacional é monitorado por cromatografia em camada fina (TLC), e o sistema de solvente de desenvolvimento inclui: A: sistema de diclorometano e metanol, B: sitema de n-hexano e etil acetato, C: sitema de éter de petróleo e etil acetato, D: acetona. A proporção do solvente pode ser ajustada de acordo com a polaridade dos compostos.

[00162] O sistema de eluição para purificação dos compostos por cromatografia de coluna e cromatografia em camada fina inclui: A: sistema de diclorometano e metanol, B: sistema de n-hexano e etil acetato, C: sistema de diclorometano e acetona, D: sistema de etil acetato e diclorometano, E: sistema de etil acetato e diclorometano e n-hexano, F: sistema de etil acetato e diclorometano e acetona. A proporção em volume do solvente pode ser ajustada de acordo com a polaridade dos compostos, e às vezes um pouco de reagente alcalino tal como trietilamina ou reagente ácido tal como ácido acético também pode ser acrescentado. Exemplo 1 N-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)acetamida

Etapa 1 Etil 3-amino-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato

[00163] Etil 3-(terc-butilamino)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4- carboxilato 1a (12,10 g, 34,93 mmol, preparado por um método bastante conhecido descrito em "Synthesis, 1988, (3), 203-207") e 100 mL de ácido trifluoroacético foram sucessivamente acrescentados a um balão de 250 mL em forma de beringela. A mistura foi agitada por 2,5 horas a 85°C, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, e concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos em gotas de uma solução saturada de bicarbonato de sódio para ajustar o pH em pH> 7, e filtrados. A torta de filtrado foi dissolvida em diclorometano e a fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram suspendidos com 50 mL de uma mistura de diclorometano e metanol (V/V = 20:1), e filtrados. O produto foi secado para obter 5,30 g de um sólido amarelo. A solução mãe foi concentrada à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição A para obter o composto do título etila 3-amino-5- metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 1b (total product 6,07 g, sólido amarelo), rendimento: 60,1%. MS m/z (ESI): 291,2 [M+1] Etapa 2 Etil 3-(3-(2-fluoro-3-metoxifenil)ureido)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4- carboxilato

[00164] Etil 3-amino-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 1b (550 mg, 1,89 mmol) foi dissolvido em 50 mL de diclorometano. A mistura que não era suficientemente solúvel à temperatura ambiente foi acrescida de trietilamina (0,66 mL, 4,75 mmol) e trifosgênio (225mg, 0,76 mmol), e agitada até dissolver completamente. Depois de agitar por 30 minutos, a solução reacional foi acrescida de 2-fluoro-3- metoxianilina (283 mg, 2 mmol) e agitada por 12 horas à temperatura ambiente, e então a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida e os resíduos foram acrescidos de 20mL de água, e extraídos com diclorometano (50 mL x 2). As fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição A para obter o composto do título etil 3-(3-(2- fluoro-3-metoxifenil)ureido)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4- carboxilato 1c (640 mg, sólido branco), rendimento: 73,9%. MS m/z (ESI): 458,1 [M+1] Etapa 3 5- (2-fluoro-3-metoxifenil) -3- metil -2- (4-nitrofenil) -2H- pirazolo [3,4- d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00165] Etil 3- (3- (2- fluoro -3- metoxifenil) ureido) -5- metil -1- (4- nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 1c (640 mg, 1,40 mmol) foi dissolvido em 30 mL de etanol, e em seguida acrescido de metóxido de sódio (190 mg, 3,52 mmol). Depois de reagir por 3 horas à temperatura ambiente, a solução reacional foi aquecida até 80°C e ainda reagida por 1 hora. Em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, e então acrescida de 3,5 mL de uma solução 1 M de ácido clorídrico, e filtrada. A torta de filtrado foi lavada sucessivamente com água (20 mL x 1), etanol (10 mL x 1) e metil terc-butil éter (5 mLxl), e secada para obter o composto do título 5- (2-fluoro -3- metoxifenil) -3- metil -2- (4- nitrofenil) -2H- pirazolo [3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona1d (536 mg, sólido amarelo claro), rendimento: 93,2%. MS m/z (ESI): 412,2 [M+1] Etapa 4 7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)- 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00166] 5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H- pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1d (530 mg, 1,29 mmol),2- (clorometil)-1,3-difluorobenzeno (230 mg, 1,41 mmol), iodeto de potássio (235 mg, 1,41 mmol) e carbonato de potássio (196 mg, 1,42 mmol) foram sucessivamente dissolvidos em 15 mL de N,N-dimetil formamida. Depois de reagir por 24 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida, e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 30 mL de água e 20 mL de metil terc-butil éter com agitação, e em seguida filtrados. A torta de filtrado foi dissolvida em 50 mL de diclorometano, secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter 570 mg de um sólido. A solução mãe foi extraída, a fase orgânica foi sucessivamente lavada com água (20 mL x 3), e uma solução saturada de cloreto de sódio (20 mL x 1), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram suspendidos com 15 mL de uma mistura de n-hexano e metil terc-butil éter (V/V = 1: 1), e filtrados. A torta de filtrado foi secada para obter 110 mg de um sólido. O composto do título 7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-3- metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1e (produto total 680 mg, sólido pardo) foi obtido, rendimento: 98,3%. MS m/z (ESI): 538,2 [M+1] Etapa 5 3-(bromometil)-7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2-(4- nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00167] Em uma atmosfera de argônio, 7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2- fluoro-3-metoxifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1e (660 mg, 1,23 mmol), azobisisobutironitrila (24 mg, 0,15 mmol) e N-bromossuccinimida (262 mg, 1,47 mmol) foram sucessivamente dissolvidas em 20 mL de clorobenzeno. Depois de reagir por 12 horas a 85°C, a reação foi interrompida e a solução reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, e em seguida foi sucessivamente lavada com uma solução saturada de cloreto de sódio (15 mL x 1) e uma solução saturada de tiossulfato de sódio (15 mL x 1). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (40 mL x 2). As fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter o composto do título bruto 3-(bromometil)-7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2-(4- nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1f (900 mg, sólido amarelo claro), que foi usado diretamente na etapa seguinte. MS m/z (ESI): 616,1 [M+1] Etapa 6 7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)- 2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00168] A 3- (bromometil) -7- (2,6- difluorobenzil) -5- (2- fluoro- 3- metoxifenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)- diona 1f bruta (900 mg, 1,46 mmol) foi dissolvida em 3 mL uma solução de dimetilamina em tetra-hidrofurano. Depois de reagir por 12 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados via cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição D para obter 627 mg de composto bruto. O composto bruto foi purificado por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição E para obter o composto do título 7-(2,6- difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2-(4- nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1g (223 mg, sólido amarelo claro), rendimento: 31,0%. MS m/z (ESI): 581,3 [M+1] Etapa 7 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2- fluoro-3-metoxifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00169] 7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1g (212 mg, 0,36 mmol) foi dissolvida em 8 mL de ácido fórmico, e em seguida acrescida de 0,25 mL de uma solução de HCl 4 M em 1, 4- dioxano e 10% paládio sobre carvão (40 mg). A mistura foi purgada com hidrogênio por três vezes e reagida por 2 horas em uma atmosfera de hidrogênio e pressão normal, e em seguida a reação foi interrompida e a mistura resultante foi filtrada. A torta de filtrado foi lavada com metanol (20 mL x 2). A fase orgânica foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 50 mL de diclorometano e 15 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, e agitados por 10 minutos. A solução saturada de bicarbonato de sódio foi adicionada em gotas para ajustar o pH em pH>7, e a fase aquosa foi submetida à extração. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (20 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3- ((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona 1h (180 mg, sólido branco), rendimento: 89,5%. MS m/z (ESI): 551,3 [M+1] Etapa 8 N-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)acetamida

[00170] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5- (2-fluoro-3-metoxifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1h (33 mg, 0,059 mmol) foi dissolvida em 5 mL de diclorometano, acrescida de trietilamina (13 μL, 0,094 mmol) e anidrido acético (7 μL, 0,072 mmol). Depois de reagir por 12 horas à temperatura ambiente, a reação estava incompleta. 5 μL de anidrido acético foram então suplementados e a mistura foi aquecida até 35°C e ainda reagida por 2 horas. A reação foi interrompida e a solução reacional foi acrescida de 2 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, agitada por 10 minutos, e extraída. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (15 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título N-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3- ((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro- 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)acetamida 1 (25 mg, sólido branco), rendimento: 71,4%. MS m/z (ESI): 593,1 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,89 (d, 2H), 7,67 (d, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,25-7,30 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,08 (t, 1H), 7,89-7,94 (m, 3H), 5,45 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,69-3,70 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 2,25 (s, 3H). Exemplo 2 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)-3-metoxiureia

Etapa 1 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)-3-metoxi ureia

[00171] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5- (2-fluoro-3-metoxifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1h (30 mg, 0,054 mmol) foi dissolvida em 5 mL de diclorometano, e acrescida de trietilamina (0,045 mL, 0,32 mmol) e trifosgênio (6,5 mg, 0,022 mmol). Depois de reagir por 1 hora, a solução reacional foi acrescida de metoxiamina (6,8 mg, 0,081 mmol), e ainda reagida por 12 horas à temperatura ambiente, e em seguida suplementada com trifosgênio (18 mg, 0,061 mmol), e ainda reagida por 1 hora a 35°C, seguido por adição de metoxiamina (100 mg, 1,20 mmol) e a reação continuou por 2 horas a 35°C. A reação foi interrompida e a solução reacional foi acrescida de 10 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, e extraída. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (15 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3- ((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro- 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metoxiureia 2 (12 mg, sólido amarelo pálido), rendimento: 35,3%. MS m/z (ESI): 624,5 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,90 (d, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,20-7,30 (m, 3H), 7,06-7,08 (m, 1H), 6,89-6,94 (m, 3H), 5,45 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,86 (s, 2H), 2,35 (s, 6H). Exemplo 3 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)-3-etilureia

Etapa 1 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)-3-etilureia

[00172] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5- (2-fluoro-3-metoxifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1h (26mg, 0,047 mmol) foi dissolvida em 3 mL de tetra-hidrofurano e acrescida de etil isocianato (55 μL, 0,69 mmol), e reagida por 12 horas a 35°C. A reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 10 mL de água e 20 mL de diclorometano, e extraídos. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (15 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2- fluoro-3-metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-etilureia3 (12 mg, sólido branco), rendimento: 41,4%. MS m/z (ESI): 622,5 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,80 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,22-7,26 (m, 2H), 7,13-7,15 (m, 1H), 6,99-7,04 (m, 1H), 6,84-6,89 (m, 3H), 6,45 (s, 1H), 5,40 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,65 (s, 2H), 3,33-3,35 (m, 2H), 2,30 (s, 6H), 1,20 (t, 3H). Exemplo 4 Metil (4-(7- (2,6-difluorobenzil)- 3- ((dimetilamino) metil) -5- (2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)carbamato

Etapa 1 Metil (4- (7- (2,6 -difluorobenzil) -3- ((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)carbamato

[00173] 2-(4- aminofenil)-7- (2,6- difluorobenzil) -3-((dimetilamino)metil)- 5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1h (35 mg, 0,064 mmol) foi dissolvida em 5 mL de diclorometano e added com trietilamina (0,8 mL, 5,8 mmol) e metila cloroformiato (0,5 mL, 4,14mmol). Depois de reagir por 12 horas a 35°C, a reação foi interrompida e resfriada para a temperatura ambiente. A solução reacional foi acrescida de 10 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, e extraída. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (15 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título metil (4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3- ((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro- 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)carbamato 4 (24 mg, sólido branco), rendimento: 61,5%. MS m/z (ESI): 609,5 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,88 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,25-7,27 (m, 1H), 7,18-7,20 (m, 1H), 7,06-7,08 (m, 1H), 6,88-6,94 (m, 3H), 6,78 (s, 1H), 5,45 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,65-3,73 (m, 2H), 2,35 (s, 6H). Exemplo 5 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)-3-metilureia

Etapa 1 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2- il)fenil)-3-metilureia

[00174] Ácido acético (46 mg, 0,77 mmol) foi dissolvido em 1 mL de tolueno e acrescido de N,N-di-isopropiletilamina (0,2 mL, 1,13 mmol) e difenilfosforil azida (0,16 mL, 0,73 mmol). A mistura foi agitada por 1 hora a 70°C, e em seguida resfriada em um banho de gelo, seguido pela adição de 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2- fluoro-3-metoxifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1h (30 mg, 0,050 mmol) e 2 mL de diclorometano em um banho de gelo. A mistura foi reagida por 12 horas à temperatura ambiente. A reação foi interrompida e a solução reacional foi acrescida de 10 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, e extraída com diclorometano (25 mL x 1). A fase orgânica foi lavada com água (10 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (10 mL x 1), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(7-(2,6- difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-4,6-dioxo- 4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metilureia 5 (8 mg, sólido branco), rendimento: 24,4%. MS m/z (ESI): 607,9 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,79 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,27-7,30 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,06 (t, 1H), 6,880-6,93 (m, 4H), 5,44 (s, 2H), 4,95 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,78 (s, 2H), 2,88 (d, 3H), 2,39 (s, 6H). Exemplo 6 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-etilureia

Etapa 1 5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-3-metil-2- (4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00175] 5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H- pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 1d (1,90 g, 4,62 mmol), 2- (bromometil)-1-fluoro-3-(trifluorometil)benzeno (1,31 g, 5,10 mmol), iodeto de potássio (844 mg, 5,08 mmol) e carbonato de potássio (702 mg, 5,09 mmol) foram sucessivamente dissolvidos em 54 mL de N,N- dimetilformamida. Depois de agitar por 20 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de água e éter por 1 hora para formar uma suspensão, e foram filtrados. A torta de filtrado foi lavada com éter (10 mL x 3) e dried para obter o composto do título 5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-3-metil-2- (4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 6a (1,91 g, sólido branco), rendimento: 70,7%. MS m/z (ESI): 588,1 [M+1] Etapa 2 3-(bromometil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona

[00176] 5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)- 3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 6a (1,81 g, 3,08 mmol), azobisisobutironitrila (61 mg, 0,37 mmol) e N- bromossuccinimida (660 mg, 3,71 mmol) foram dissolvidas em 53 mL de clorobenzeno. A solução resultante foi purgada com argônio três vezes, e reagida por 19 horas a 85°C em uma atmosfera de argônio. A reação foi interrompida e a solução reacional foi lavada com uma solução saturada de tiossulfato de sódio (30 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (50 mL x 2), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter o composto do título bruto 3-(bromometil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H- pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 6b (2,18 g, sólido amarelo pálido), que foi usado diretamente na etapa seguinte. MS m/z (ESI): 666,0 [M+1] Etapa 3 3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona

[00177] A 3-(bromometil)- 5 -(2 -fluoro- 3-metoxifenil)- 7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona 6b bruta (2,18 g, 3,27 mmol) e dimetilamina (solução 2 M em THF) (6,8 mL 13,6 mmol) foram adicionadas ao balão de reação e agitadas por 12 horas à temperatura ambiente. A reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados pelo método de separação preparativo para obter o composto do título 3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona 6c (455 mg, sólido branco), rendimento: 22,1%. MS m/z (ESI): 630,8 [M+1] Etapa 4 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2- fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)- diona

[00178] 3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro- 6-(trifluorometil)benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona 6c (200 mg, 0,32 mmol) foi dissolvida em 8 mL de ácido fórmico, e acrescida de 0,25 mL de uma solução de HCl 4 M em 1,4-dioxano e 10% de Pd / C (50 mg). A mistura foi purgada com hidrogênio três vezes e agitada por 2 horas à temperatura ambiente. A reação foi interrompida e filtrada. A torta de filtrado foi lavada com uma pequena quantidade de metanol. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida, acrescido de 50 mL de diclorometano e 20 mL de uma solução de bicarbonato de sódio, e agitado por 10 minutos. A fase aquosa teve o pH ajustado em pH 8, e foi extraída. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (25 mL x 2) e as fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 2-(4-aminofenil)-3- ((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 6d (135mg, sólido branco), rendimento: 71,1%. MS m/z (ESI): 600,9 [M+1] Etapa 5 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-etilureia

[00179] 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona 6d (30 mg, 0,050 mmol) foi dissolvida em 1 mL de diclorometano, e acrescida de etil isocianato (0,06 mL, 0,76 mmol). Depois de reagir por 12 horas a 35°C, a reação foi interrompida e a solução reacional foi acrescida de 5 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio e 20 mL de uma solução diclorometano solution e submetida à extração. A fase orgânica foi lavada com água (10 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (5 mL x 1), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada, O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(3- ((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-etilureia 6 (15 mg, sólido branco), rendimento: 44,1%. MS m/z (ESI): 671,9 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,75 (d, 2H), 7,51 (d, 1H), 7,46 (d, 2H), 7,37-7,40 (m, 1H), 7,18-7,24 (m, 2H), 7,15 (t, 1H), 6,91 (t, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,60 (s, 2H), 4,92 (s, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,69-3,76 (m, 2H), 3,283,35 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 1,19 (t, 3H). Exemplo 7 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metoxiureia

Etapa 1 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metoxiureia

[00180] 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3- metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona 6d (30 mg, 0,050 mmol) foi dissolvida em 3 mL de diclorometano, e acrescida de trietilamina (0,07 mL, 0,50 mmol) e trifosgênio (15 mg, 0,051 mmol). Depois de reagir por 1 hora à temperatura ambiente, a reação foi interrompida e a solução reacional foi acrescida de 10 mL de água, e em seguida extraída com diclorometano (25 mL x 1). A fase orgânica foi sucessivamente lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL x 1), água (10 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (10 mL x 1), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(3- ((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metoxiureia 7 (12 mg, sólido branco), rendimento: 33,6%. MS m/z (ESI): 673,8 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,85 (d, 2H), 7,64-7,70 (m, 3H), 7,53 (d, 1H), 7,39-7,42 (m, 1H), 7,23-7,28 (m, 3H), 7,06 (t, 1H), 6,92 (t, 1H), 5,57-5,65 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,72 (s, 2H), 2,36 (s, 6H). Exemplo 8 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metilureia

Etapa 1 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metilureia

[00181] Ácido acético (62 mg, 1,03 mmol) foi dissolvido em 1 mL de tolueno, e acrescido de N,N-di-isopropiletilamina (0,28 mL, 1,58 mmol) e difenilfosforil azida (0,20 mL, 0,98 mmol). Depois de reagir por 1,5 horas a 70°C, a solução reacional foi acrescita de 2-(4-aminofenil)-3- ((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 6d (30 mg, 0,050 mmol) e 1 mL de diclorometano, e ainda reagida por 12 horas à temperatura ambiente. A reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 5 mL de bicarbonato de sódio saturado, e em seguida extraída com diclorometano (25 mL x 1). A fase orgânica foi lavada com água (10 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (10 mL x 1), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título bruto, que foi ainda purificado por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)- 5-(2-fluoro-3-metoxifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-4,6-dioxo- 4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metilureia 8 (13 mg, sólido branco), rendimento: 39,4%. MS m/z (ESI): 658,2 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,76 (d, 2H), 7,51-7,53 (m, 1H), 7,47 (d, 2H), 7,39-7,40 (m, 1H), 7,24 (t, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,04 (t, 1H), 6,89 (t, 1H), 6,74 (m, 1H), 5,56-5,64 (m, 2H), 4,85 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,77 (s, 2H), 2,88 (d, 3H), 2,38 (s, 6H). Exemplo 9 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin- 3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)- 3-metilureia

Etapa 1 Etil 5- (bromometil) -3- (terc-butilamino) -1 -(4-nitrofenil)- 1H-pirazol-4- carboxilato

[00182] Etil 3-(terc-butilamino)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4- carboxilato 1a (23 g, 66,40 mmol), azobisisobutironitrila (2,18 g, 13,28mmol), N-bromossuccinimida (14,18 g, 79,68 mmol) e 400 mL de clorobenzeno foram introduzidos em um balão de reação de orifício único de 1 L. A solução reacional foi agitada uniformemente e purgada com argônio três vezes. Depois de reagir por 64 horas a 85°C, a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 300 mL de diclorometano, e lavados sucessivamente com água (100 mL x 2), uma solução saturada de tiossulfato de sódio (100 mL x 2) e uma solução saturada de cloreto de sódio (100 mL x 2). A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e o filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter o composto do título bruto etil 5-(bromometil)-3- (terc-butilamino)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 9a (25 g, óleo castanho), que foi usado diretamente na etapa seguinte. MS m/z (ESI): 427,1 [M+2] Etapa 2 Etil 3-(terc-butilamino)-5- ((dimetilamino) metil)-1- (4-nitrofenil) -1H- pirazol- 4-carboxilato

[00183] O etil 5-(bromometil)-3-(terc-butilamino)-1-(4-nitrofenil)-1H- pirazol-4-carboxilato 9a bruto (25 g, 58,78 mmol), uma solução de dimetil amina em THF (88 mL, 176,35 mmol) e 120 mL de THF foram introduzidos em um balão de reação de orifício único de 500 mL e agitados até dissolverem. Depois de agitar por 3 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição C para obter o composto do título etil 3-(terc-butilamino)-5- ((dimetilamino)metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 9b (6 g, óleo castanho), rendimento: 26,2%. MS m/z (ESI): 390,2 [M+1] Etapa 3 Metil 3-amino-5-((dimetilamino)metil)-1-(4-nitrofenil)-1 H-pirazol-4-carboxilato

[00184] Etil 3-(terc-butilamino)-5-((dimetilamino)metil)-1-(4-nitrofenil)- 1H-pirazol-4-carboxilato 9b (6 g, 15,41 mmol) e 80 mL de trifluoroácido acético foram introduzidos em um balão de reação de orifício único de 100mL e agitados uniformemente. A mistura foi aquecida até o refluxo por 1 hora e a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 50 mL de diclorometano, e em seguida acrescidos de uma solução saturada de bicarbonato de sódio em gotas para ajustar o pH em pH >7. A fase orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada, e concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 100 mL de metanol e 20 mL de diclorometano, e agitados até dissolverem. A solução resultante foi acrescida de carbonato de potássio (6,37 g, 46,16 mmol), e agitada por 17 horas à temperatura ambiente, e em seguida filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição B para obter o composto do título metil 3-amino-5- ((dimetilamino)metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 9c (3,30 g, sólido amarelo), rendimento: 67,1%. MS m/z (ESI): 320,2 [M+1] Etapa 4 Metil 5-((dimetilamino)metil)-3 -(3 -(6-metoxipiridazin- 3-il)ureido)- 1- (4- nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato

[00185] Metil 3-amino-5-((dimetilamino)metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol- 4-carboxilato 9c (3,30 g, 10,33 mmol) e 100 mL de diclorometano foram introduzidos em um balão de reação de orifício único de 250 mL e agitados uniformemente. A solução resultante foi acrescida de trietilamina (5,8mL, 41,32 mmol) e trifosgênio (1,84 g, 6,20 mmol), e em seguida agitada por 1 hora à temperatura ambiente. A solução reacional foi acrescida de 3-amino-6-metoxipiridazina (1,94 g, 15,50 mmol, preparada por método conhecido descrito no "Journal of Medicinal Chemistry, 2006, 49(14), 4409-4424"), e agitada por 2 horas à temperatura ambiente, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 200 mL de água, e extraída com diclorometano (100 mL x 3). A fase orgânica foi concentrada à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição B para obter o composto do título metil 5-((dimetilamino)metil)- 3-(3-(6-metoxipiridazin-3-il)ureido)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 9d (2,80 g, sólido amarelo), rendimento: 57,6%. MS m/z (ESI): 470,9 [M+1] Etapa 5 3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H- pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00186] Metil 5-((dimetilamino)metil)-3-(3-(6-metoxipiridazin-3-il)ureido)- 1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 9d (2,80 g, 5,95 mmol) e 120 mL de metanol foram introduzidos em um balão de reação de orifício único de 250 mL, e agitados uniformemente. A solução resultante foi acrescida de metóxido de sódio (1,61 g, 29,76 mmol). A mistura foi aquecida até 50°C e agitada por 4 horas, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 100 mL de água, e em seguida de ácido clorídrico concentrado em gotas para ajustar o pH em pH 5~6. A solução foi extraída com diclorometano (100 mL x 3). A fase orgânica foi concentrada à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição B para obter o composto do título 3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)-2-(4- nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 9e (1,80 g, sólido amarelo), rendimento: 69,0%. MS m/z (ESI): 438,9 [M+1] Etapa 6 7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)- 2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00187] 3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)-2-(4- nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 9e (900 mg, 2,05 mmol) e 50 mL de N,N-dimetilformamida foram introduzidos em um balão de reação de orifício único de 100 mL, e agitados uniformemente. A solução resultante foi acrescida de 2,6-difluorobenzil cloreto (367 mg, 2,26 mmol) e carbonato de potássio (850 mg, 6,16 mmol). A mistura foi aquecida até 40°C e agitada por 17 horas, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 250 mL de água, e agitada por 20 minutos. A mistura foi filtrada, e a torta de filtrado foi secada a vácuo para obter o composto do título 7- (2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)-2- (4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 9f (1,10 g, sólido amarelo), rendimento: 94,9%. MS m/z (ESI): 564,9 [M+1] Etapa 7 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00188] 7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)- diona 9f (1 g, 1,77 mmol), 10% de paládio sobre carvão (200 mg) e 80 mL de metanol foram introduzidos em um balão de reação de orifício único de 250 mL, e agitados uniformemente. A solução resultante foi purgada com hidrogênio 6 vezes e em seguida agitada por 17 horas à temperatura ambiente. A reação foi interrompida. A solução reacional foi filtrada e o filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter o composto do título 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 9g (785mg, sólido amarelo), rendimento: 82,9%. MS m/z (ESI): 534,9 [M+1] Etapa 8 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin- 3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)- 3-metilureia

[00189] Ácido acético (483 mg, 8,04 mmol) e 15 mL de tolueno foram agitados até dissolverem em uma autoclave de 600 mL. A solução resultante foi sucessivamente acrescida de N,N-di- isopropiletilamina (2,1 mL, 12,07 mmol) e difenilfosforil azida ( 2,22 g, 8,07 mmol). A mistura foi aquecida até 75°C e agitada por 1,5 horas. A solução reacional foi acrescida de 10 mL de uma solução de 2-(4- aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 9g (480 mg, 0,80 mmol) em THF em um banho de gelo a 0°C. Depois de terminada a adição, a solução reacional foi aquecida até 55oC e agitada por 16 horas, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 20 mL de diclorometano e 20 mL de água, e submetida à extração. A fase orgânica foi sucessivamente lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL x 1), água (50 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (50 mL x 1). A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição A para obter o produto bruto, que foi ainda purificado por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o produto bruto (387 mg, sólido castanho), rendimento bruto: 81,3%. Os dois lotes brutos foram combinados para obter um total de produto de 823 mg, que foi purificado por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição F. O produto resultante foi dissolvido em metanol, e concentrado à pressão reduzida até que se separou um sólido que foi submetido à cristalização para obter o composto do título 1-(4-(7-(2,6- difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)-4,6- dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)-3- metilureia 9 (450 mg, sólido branco), total rendimento: 36,0%. MS m/z (ESI): 592,3[M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 8,17 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,42-7,45 (m, 4H), 7,24-7,30 (m, 2H), 6,88 (t, 2H), 5,95 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,23 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 2,91 (s, 3H), 2,33 (s, 6H). Exemplo 10 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin- 3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)- 3-etilureia

Etapa 1 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin- 3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)- 3-etilureia

[00190] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5- (6-metoxipiridazin-3-il)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 9g (22 mg, 0,041 mmol) foi dissolvida em 2 mL de diclorometano, e acrescida de etil isocianato (0,1 mL, 1,26 mmol). Depois de reagir por 12 horas a 35°C, a reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 5 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, e extraída com diclorometano (30 mL x 1). A fase orgânica foi sucessivamente lavada com água (10 mL x 1), uma solução saturada de cloreto de sódio (10 mL x 1), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-etilureia 10 (10 mg, sólido branco), rendimento: 40,0%. MS m/z (ESI): 606,2 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 8,07 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,38-7,43 (m, 4H), 7,25-7,28 (m, 2H), 6,858 (t, 2H), 5,87 (t, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,23 (s, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,37 (t, 2H), 2,25 (s, 6H), 1,23 (t, 3H). Exemplo 11 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin- 3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)- 3-metoxiureia

Etapa 1 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoxipiridazin- 3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)- 3-metoxiureia

[00191] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5- (6-metoxipiridazin-3-il)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 9g (100 mg, 0,18 mmol) foi dissolvida em 5 mL de diclorometano, e acrescida de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 mL, 2,90 mmol) e trifosgênio (46 mg, 0,15mmol). A mistura foi reagida por 45 minutos à temperatura ambiente, e em seguida acrescida de cloridrato de metoxiamina (92 mg, 1,12 mmol). A mistura foi ainda reagida por 12 horas a 40°C, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 5 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, e em seguida extraída com diclorometano (25 mL x 1). A fase orgânica foi lavada com água (10 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (10 mL x 1) sucessivamente, secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter 62 mg de produto bruto que foi ainda purificado por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A duas vezes para obter o composto do título 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metoxiureia 11 (45 mg, sólido branco), rendimento: 24,7%. MS m/z (ESI): 608,3 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 7,90 (d, 2H), 7,73 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,41 (d, 1H), 7,26-7,30 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,92 (t, 2H), 5,44 (s, 2H), 4,21 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,70 (s, 2H), 2,35 (s, 6H). Exemplo 12 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metilureia

Etapa 1 Etil 3-(3- (6- metoxipiridazin-3-il) ureido) -5 -metil- 1- (4-nitrofenil) -1H- pirazol-4-carboxilato

[00192] Etil 3-amino-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 1b (10,80 g, 37,20 mmol) foi dissolvida em 500 mL de diclorometano, e em seguida sucessivamente acrescida de trietilamina (20 mL, 144mmol) e trifosgênio (5,20 g, 17,5 mmol). Depois de reagir por 1 hora à temperatura ambiente, a solução reacional foi acrescida de 3- amino-6-metoxipiridazina (6,60 g, 52,3 mmol), e agitada por 12 horas à temperatura ambiente, e em seguida a reação foi interrompida. Os produtos resultantes foram combinados, e acrescidos de 100 mL de água. A solução foi submetida à extração. A fase orgânica foi lavada com água (100 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (100 mL x 1), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição C para obter o composto do título etil 3-(3-(6-metoxipiridazin-3-il)ureido)- 5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 12a (8,72 g, sólido amarelo pálido), rendimento: 53,0%. Etapa 2 5-(6-metoxipiridazin-3-il) -3- metil -2- (4-nitrofenil) -2H- pirazolo [3,4- d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00193] Etil 3- (3- (6- metoxipiridazin -3-il) ureido) -5- metil -1- (4- nitrofenil)-1H-pirazol-4-carboxilato 12a (8,72 g, 19,70 mmol) foi dissolvido em 150 mL de metanol, e acrescido de metóxido de sódio (2,70 g, 50mmol). A mistura foi aquecida até 55°C e agitada por 12 horas, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de uma solução de ácido clorídrico 1 M em gotas para ajustar o pH em pH <7, e filtrados. A torta de filtrado foi sucessivamente lavada com água (30 mL x 1), metanol (30 mL x 1) e éter (20 mL x 1), e secada a vácuo para obter o composto do título bruto 5-(6-metoxipiridazin-3-il)-3-metil-2-(4- nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 12b (8,34 mg, sólido amarelo claro), que foi usado diretamente na etapa seguinte. MS m/z (ESI): 396,0 [M+1] Etapa 3 7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)-3-metil-2- (4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00194] 2-(bromometil)-1-fluoro-3-(trifluorometil)benzeno (adquirido na Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., produto número XW239870821) (308 mg, 1,20 mmol) foi dissolvida em 20 mL de N,N- dimetil formamida, e sucessivamente acrescida da 5-(6- metoxipiridazin-3-il)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona 12b bruta (395 mg, 1 mmol) e carbonato de potássio (276 mg, 2mmol). Depois de reagir por 2 horas à temperatura ambiente, a solução reacional foi interrompida. A solução reacional foi despejada em 100 mL de água, e filtrada. A torta de filtrado foi secada para obter o composto do título 7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona 12c (465 mg, sólido amarelo), rendimento: 81,4%. MS m/z (ESI): 570,0 [M-1] Etapa 4 3-(bromometil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6-metoxipiridazin- 3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00195] 7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)- 3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 12c (465 mg, 0,81 mmol), azobisisobutironitrila (13 mg, 0,081 mmol), N-bromossuccinimida (174 mg, 0,97 mmol) e 20 mL de clorobenzeno foram introduzidos em um balão de reação de 100 mL. A mistura foi reagida por 17 horas a 80°C em uma atmosfera de argônio, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida para obter o composto do título bruto 3- (bromometil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6-metoxipiridazin-3- il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 12d (600 mg, óleo amarelo), que foi usado diretamente na etapa seguinte. MS m/z (ESI): 650,1 [M+1] Etapa 5 3-((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona

[00196] A 3-(bromometil) -7 -(2- fluoro -6- (trifluorometil) benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)- diona 12d bruta (15 mg, 0,033 mmol) foi dissolvida em 20 mL de THF, e acrescida de uma solução 2M de dimetilamina em THF (1 mL, 2,03 mmol). A mistura foi reagida por 2 horas à temperatura ambiente, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 3- ((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)- diona 12e (85 mg, sólido amarelo), rendimento: 17,0%. MS m/z (ESI): 615,2 [M+1] Etapa 6 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)- 5-(6-metoxipiridazin-3-il)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[00197] 3-((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)- diona 12e (100 mg, 0,14 mmol) foi dissolvida em 5 mL de ácido fórmico, e acrescida de 10% de paládio sobre carvão (48 mg). A mistura foi purgada com hidrogênio à pressão normal três vezes e em seguida reagida por 3 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de hidrogênio. A reação foi interrompida e filtrada. O filtrado foi despejado em 10 mL de água, e em seguida acrescido em gotas de uma solução saturada de bicarbonato de sódio para ajustar o pH em pH> 7. A solução foi extraída com diclorometano (25 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil)-5-(6-metoxipiridazin-3-il)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6 (5H,7H)- diona 12f (50mg, sólido branco), rendimento: 53,0%. MS m/z (ESI): 585,2 [M+1] Etapa 7 1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metilureia

[00198] Ácido acético (51 mg, 085 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,22 mL, 1,28 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de tolueno, e acrescidos de difenilfosforil azida (236 mg, 0,86 mmol). Depois de reagir por 1,5 horas a 75°C, a solução reacional foi acrescida de 2 mL de uma solução de 2-(4- aminofenil)-3-((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona 12f (15mg, 0,033 mmol) em THF. A solução resultante foi reagida por 12 horas a 50oC, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 10 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, e em seguida extraída com diclorometano (20 mL x 1). A fase orgânica foi recolhida e sucessivamente lavada com água (10 mL x 1) e cloreto de sódio saturado (10 mL x 1). A fase orgânica foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(3- ((dimetilamino)metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6- metoxipiridazin-3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metilureia 12 (20 mg, sólido branco), rendimento: 36,3%. MS m/z (ESI): 642,3 [M+1] 1H RMN (400MHz, CDCl3) 8,19 (s, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,43-7,46 (m, 3H), 7,34-7,39 (m, 3H), 7,27 (d, 1H), 7,16 (t, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,48 (s, 2H), 4,22 (s, 3H), 3,48 (s, 2H), 2,93 (d, 3H), 2,21 (s, 6H). Exemplo 13 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)- 3-etilureia

Etapa 1 (E)-4-(dimetilamino)-3-(4-nitrofenil)but-3-en-2-ona

[00199] 1-(4-nitrofenil)propan-2-ona 13a (3,8 g, 21,21 mmol) e N,N- dimetil formamida dimetil acetal foram introduzidos em um balão de 50mL. Depois de reagir por 30 minutos a 100°C, a reação foi interrompida e acrescida de 150 mL de diclorometano com agitação. O produto resultante foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição A para obter o composto do título (E)-4-(dimetilamino)-3-(4-nitrofenil)but-3-en-2-ona 13b(3 g, sólido amarelo), rendimento: 60,5%. MS m/z (ESI): 235,0 [M+1] Etapa 2 Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato

[00200] (E)-4- (dimetilamino) -3- (4-nitrofenil) but-3-en-2-ona 13b (1,50 g, 6,48 mmol) e cloridrato de 2-aminoacetil acetato (1,40 g, 7,78mmol) foram dissolvidos em 40 mL de ácido acético. A mistura foi reagida à temperatura ambiente por 16 horas e a 100°C por 5 horas, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 120 mL de diclorometano, e lavados com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL x 1). A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram suspendidos com 15 mL de etil acetato, e em seguida filtrados. A torta de filtrado foi secada para obter o composto do títuloetil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato 13c (412 mg, sólido amarelo), rendimento: 24,5%. MS m/z (ESI): 273,1 [M-1] Etapa 3 Etil 1-amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato

[00201] Etil 3- metil-4- (4-nitrofenil)- 1H-pirrol- 2- carboxilato 13c (412mg, 1,50 mmol) foi dissolvido em 6 mL de N,N-dimetil formamida, e em seguida acrescido de hidreto de sódio (72 mg, 1,80 mmol) em um banho de gelo. A mistura foi reagida por 30 minutos à temperatura ambiente, e em seguida acrescida de 20 mL de uma solução de cloraminas. A mistura foi ainda reagida por 2 horas à temperatura ambiente e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 50 mL de uma solução saturada de tiossulfato de sódio, e agitada por 10 minutos para disposição em camadas ("to layering"). A fase aquosa foi extraída com éter (30 mL x 3). A fase orgânica foi lavada com uma solução saturada de cloreto de sódio (100 mL x 2), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter o composto do título etil 1-amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato 13d (381 mg, sólido amarelo), rendimento: 87,7%. MS m/z (ESI): 290,2 [M+1] Etapa 4 Etil 1-(3-(2-fluoro-3-metoxifenil) ureido)-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol- 2-carboxilato

[00202] Etil 1-amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato 13d (381 mg, 1,30 mmol) foi adicionado a 30 mL de diclorometano e agitado até dissolver, e em seguida acrescido de trietilamina (328 mg, 3,25 mmol) e trifosgênio (157 mg, 0,53 mmol). Depois de reagir por 30 minutosà temperatura ambiente, a solução reacional foi acrescida de 2-fluoro-3- metoxianilina (202 mg, 1,43 mmol). A mistura foi ainda reagida à temperatura ambiente por 2 horas. A reação foi interrompida. A solução reacional foi filtrada. A torta de filtrado foi sucessivamente lavada com água (10 mL x 2) e etil acetato (2 mL x 3), e em seguida secada para obter o composto do título etil 1-(3-(2-fluoro-3-metoxifenil)ureido)-3-metil-4- (4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato 13e (296 mg, sólido amarelo), rendimento: 49,9%. MS m/z (ESI): 457,3 [M+1] Etapa 5 3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina- 2,4(1H,3H)-diona

[00203] Etil 1-(3-(2-fluoro-3-metoxifenil)ureido)-3-metil-4-(4-nitrofenil)- 1H-pirrol-2-carboxilato 13e (290 mg, 0,64 mmol) e hidróxido de sódio (128mg, 3,20 mmol) foram dissolvidos em 10 mL de diclorometano. Depois de reagir por 2 horas a 80°C, a reação foi interrompida. A solução reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, e em seguida acrescida em gotas de uma solução de ácido clorídrico 1 M para ajustar o pH em 3~4. Um sólido separou-se e foi filtrado. A torta de filtrado foi sucessivamente lavada com água (20 mL x 3) e etanol (10 mL x 1) para obter o composto do título 3-(2-fluoro-3-metoxifenil) -5- metil- 6- (4- nitrofenil) pirrolo [2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13f (192 mg, sólido cinza), rendimento: 73,3%. MS m/z (ESI): 411,0 [M+1] Etapa 6 1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil) pirrolo [2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona

[00204] 3-(2-fluoro-3-metoxifenil) -5-metil-6- (4-nitrofenil) pirrolo [2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13f (192 mg, 0,47 mmol), 2- (clorometil)-1,3-difluorobenzeno (84 mg, 0,52 mmol) e carbonato de potássio (162 mg, 1,75 mmol) foram adicionados a 10 mL de N,N- dimetil formamida. Depois de reagir por 16 horas a 50°C, a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 20 mL de água, (20 mL x 1) e extracted com diclorometano (20 mLx1). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (10 mL x 3). As fases orgânicas foram recolhidas, secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina- 2,4(1H,3H)-diona 13g (160 mg, sólido amarelo), rendimento: 63,7%. MS m/z (ESI): 537,0 [M+1] Etapa 7 5-(bromometil)-1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-6-(4- nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona

[00205] 1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-5-metil-6-(4- nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13g (120 mg, 0,22 mmol), azobisisobutironitrila (8 mg, 0,044 mmol) e N-bromossuccinimida (47 mg, 0,26 mmol) foram dissolvidas em 5 mL de clorobenzeno. A mistura foi reagida por 16 horas a 85°C em uma atmosfera de argônio, e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 10 mL de água, e extraídos com diclorometano (10 mL x 1). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (10 mL x 3). A fase orgânica foi combinada, lavada com uma solução saturada de cloreto de sódio (20 mL x 1), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter o composto do título 5-(bromometil)-1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13h (130 mg, sólido amarelo), rendimento: 96,2%. MS m/z (ESI): 616,0 [M+1] Etapa 8 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)- 6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona

[00206] A 5- (bromometil)- 1- (2,6- difluorobenzil) -3- (2- fluoro-3- metoxifenil)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13h bruta (130 mg, 0,21 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (81 mg, 0,63 mmol) foram dissolvidas em 5 mL de THF, e acrescidas de 1,6 mL de uma solução de dimetilamina em tetra-hidrofurano. A mistura foi reagida por 1 hora a 0~5°C e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro- 3-metoxifenil)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13i (40 mg, sólido amarelo), rendimento: 33,1%. MS m/z (ESI): 580,2 [M+1] Etapa 9 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2- fluoro-3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona

[00207] 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13i (40 mg, 0,069 mmol), cloreto de amônio (30 mg, 0,55 mmol ) e ferro (16mg, 0,28 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de uma mistura de etanol e água (V / V = 4: 1). A mistura foi reagida por 1 hora a 80°C e em seguida a reação foi interrompida. A solução reacional foi acrescida de 20 mL de água, e em seguida extraída com diclorometano (10 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com uma solução saturada de cloreto de sódio (20 mL x 1), secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5- ((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina- 2,4(1H,3H)-diona 13j (20 mg, sólido amarelo), rendimento: 52,6%. MS m/z (ESI): 550,2 [M+1] Etapa 10 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)- 3-etilureia

[00208] 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3- (2-fluoro-3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13j (20 mg, 0,036 mmol) e etil isocianato (13 mg, 0,18 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de tetra-hidrofurano em um tubo de 30 mL vedado. Depois de reagir por 16 horas a 50°C, a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida, e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2- fluoro-3-metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin- 6-il)fenil)-3-etilureia 13 (15 mg, sólido branco), rendimento: 68,1%. MS m/z (ESI): 621,3 [M+1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 7,87-7,77 (m, 4H), 7,69 (s, 1H), 7,587325 (m, 4H), 7,12-7,08 (m, 1H), 6,80-6,71 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,45-3,50 (m, 2H), 3,20-3,31 (m, 2H), 2,16 (s, 6H), 1,12-1,03 (m, 3H) Exemplo 14 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)- 3-metilureia

Etapa 1 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6- il)fenil)-3-metilureia

[00209] Ácido acético (70 mg, 1,12 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,32 mL, 1,80 mmol) foram dissolvidos em 1 mL de tolueno, e em seguida acrescidos de difenilfosforil azida (0,25 mL, 1,20 mmol). Depois de reagir por 1,5 horas a 70°C, a solução reacional foi acrescida de 1 mL de uma solução de 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3- (2-fluoro-3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13j (30mg, 0,054 mmol) em diclorometano. A solução reacional foi ainda reagida por 12 horas à temperatura ambiente, e em seguida acrescida de 15mL de água, e extraída com diclorometano (30 mL x 1). A fase orgânica foi sucessivamente lavada com bicarbonato de sódio saturado (10 mL x 1), água (10 mL x 1) e uma solução saturada de cloreto de sódio (10 mL x 1 ), secada sobre sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(1- (2,6- difluorobenzil)-5- ((dimetilamino) metil)-3- (2-fluoro-3-metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metilureia 14 (9 mg, sólido branco), rendimento: 27,3%. MS m/z (ESI): 606,9 [M+1] 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 8,86 (s, 1H), 7,55 (s, 2H), 7,24-7,35 (m, 3H), 7,68-7,14 (m, 6H), 6,21 (s, 1H), 5,60-5,74 (m, 2H), 4,54-4,59 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 2,77 (s, 3H), 2,55 (s, 6H). Exemplo 15 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6- il)fenil)-3-metoxiureia

Etapa 1 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3- metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6- il)fenil)-3-metoxiureia

[00210] 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3- (2-fluoro-3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 13j (55mg, 0,10 mmol) foi dissolvida em 4 mL de tetra-hidrofurano, e em seguida acrescida de 4-nitrofenil cloroformiato (30 mg, 0,15 mmol) e piridina (32mg, 0,40 mmol). Depois de reagir por 3 horas a 30°C, a solução reacional foi então acrescida de cloridrato de metoxilamina (25 mg, 0,30 mmol), e reagida por 8 horas com vedação. A reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A três vezes para obter o composto do título 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5- ((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoxifenil)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra- hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metoxiureia 15 (5 mg, sólido amarelo), rendimento: 8,1%. MS m/z (ESI): 623,4 [M+1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 7,90-7,87 (m, 2H), 7,85-7,80 (m, 2H), 7,60 (s, 1H), 7,55-7,25 (m, 4H), 7,09-7,02 (m, 1H), 6,71-6,65 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 3,84(s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,54 (s, 2H), 2,15(s, 6H) Exemplo 16 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin- 3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3- metilureia

Etapa 1 Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-1-terc-butilcarboxilato-2-carboxilato

[00211] Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato 13c (4,30g, 15,70 mmol) foi dissolvido em 200 mL de diclorometano, e sucessivamente acrescido de trietilamina (21,7 mL, 157 mmol), 4- dimetilaminopiridina (192 mg, 1,57 mmol) e di-terc-butil dicarbonila (5,14 g, 23,50 mmol). Depois de reagir por 12 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 100 mL de água, e em seguida extraídos com diclorometano (50 mL x 4). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com uma solução saturada de cloreto de sódio (150 mL x 1), secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição B para obter o composto do título etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-1-terc-butilcarboxilato-2-carboxilato 16b (4 g, sólido amarelo), rendimento: 68,1%. MS m/z (ESI):273,1 [M-100] Etapa 2 Etil 3-bromometil -4- (4- nitrofenil) -1H- pirrol -1- terc -butilcarboxilato-2- carboxilato

[00212] Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-1-terc-butilcarboxilato-2- carboxilato 16b (4 g, 10,70 mmol), azobisisobutironitrila (351 mg, 2,14mmol) e N-bromossuccinimida (2,28 g, 12,80 mmol) foram sucessivamente dissolvidos em 40 mL de clorobenzeno. A solução reacional foi reagida por 16 horas a 80°C em uma atmosfera de argônio. A reação foi interrompida e resfriada para a temperatura ambiente. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida, e secada a vácuo para obter o composto do título etil 3-bromometil-4-(4- nitrofenil)-1H-pirrol-1-terc-butilcarboxilato-2-carboxilato 16c (5,2 g, sólido amarelo), que foi usado diretamente na etapa seguinte. MS m/z (ESI):453,0[M-100] Etapa 3 Etil 3-(dimetilamino)metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-1-terc-butilcarboxilato-2- carboxilato

[00213] Etil 3-bromometil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-1-terc-butilcarboxilato -2-carboxilato 16c (4,80 g, 10,70 mmol) foi dissolvido em 50 mL de tetra- hidrofurano, e acrescido de uma solução de dimetilamina em tetra- hidrofurano (26 mL, 53,50 mmol). Depois de reagir por 3 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida. A solução reacional foi concentrada à pressão reduzida e os resíduos foram purificados por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição A para obter o composto do título etil 3-(dimetilamino)metil-4-(4-nitrofenil)- 1H-pirrol-1-terc-butilcarboxilato-2-carboxilato 16d (3 g, sólido amarelo), rendimento: 67,4%. MS m/z (ESI): 317,0 [M-100] Etapa 4 Etil 3-((dimetilamino) metil)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato

[00214] Etil 3- (dimetilamino) metil -4- (4- nitrofenil) -1H-pirrol-1-terc- butilcarboxilato-2-carboxilato 16d (3 g, 7,18 mmol) foi dissolvido em 30mL em uma solução de ácido clorídrico 2 M em metanol. Depois de reagir por 3 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram acrescidos de 30 mL de uma solução saturada de carbonato de sódio, e extraídos com diclorometano (30 mL x 4). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com uma solução saturada de cloreto de sódio (60 mL x 1), secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter o composto do título etil 3-((dimetilamino)metil)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato 16e (2 g, sólido amarelo), rendimento: 90,9%. MS m/z (ESI): 318,1 [M+1] Etapa 5 Etil 1-amino-3-((dimetilamino)metil)-4-(4-nitrofenil)-1 H-pirrol-2-carboxilato

[00215] Etil 3- ((dimetilamino) metil)- 4- (4- nitrofenil) -1H-pirrol-2- carboxilato 16e (1,8 g, 5,68 mmol) foi dissolvido em 20 mL de N,N- dimetilformamida, e acrescido de hidróxido de sódio a 60% (307 mg, 7,66mmol). Depois de reagir por 30 minutos à temperatura ambiente, a mistura reacional foi acrescida de 50 mL de cloramina, e ainda reagida por 2 horas à temperatura ambiente. A reação foi interrompida e a solução reacional foi acrescida de 200 mL de água, e extraída com éter (50 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com uma solução saturada de cloreto de sódio (100 mL x 1), secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida para obter o composto do título etil 1-amino-3-((dimetilamino)metil)-4-(4-nitrofenil)-1H- pirrol-2-carboxilato 16f (620 mg, sólido amarelo), rendimento: 32,9 %. MS m/z (ESI): 333,2 [M+1] Etapa 6 Etil 3- ((dimetilamino) metil)- 1- (3- (6- metoxipiridazin 3-il) ureido)-4-(4- nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato

[00216] Etil 1-amino-3-((dimetilamino)metil)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol- 2-carboxilato 16f (420 mg, 1,26 mmol) foi dissolvido em 15 mL de diclorometano, e em seguida sucessivamente acrescido de trietilamina (382 mg, 3,78 mmol), trifosgênio (131 mg, 0,44 mmol) e 3-amino-6- metoxipiridazina (236 mg, 1,89 mmol). Depois de reagir por 2 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título etil 3-((dimetilamino) metil) -1- (3-(6- metoxipiridazin-3-il) ureido) -4- (4-nitrofenil) -1H-pirrol-2-carboxilato 16g (298 mg, sólido amarelo), rendimento: 30,2%. Etapa 7 5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1- f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona

[00217] Etil 3-((dimetilamino)metil)-1-(3-(6-metoxipiridazin-3-il)ureido)- 4-(4-nitrofenil)-1H-pirrol-2-carboxilato 16g (260 mg, 0,54 mmol) foi dissolvido em 10 mL de metanol, e em seguida acrescido de metóxido de sódio (151 mg, 2,69 mmol). Depois de reagir por 3 horas a 50°C, a reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 5- ((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1- f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 16h (76 mg, sólido amarelo) rendimento: 32,3%. MS m/z (ESI): 438,3 [M+1] Etapa 8 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)- 6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona

[00218] 5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin-3-il)-6-(4- nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 16h (78 mg, 0,18mmol), 2-clorometil-1,3-difluorofenil (35 mg, 0,21 mmol) e carbonato de potássio (37 mg, 0,26 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de N,N-dimetilformamida. Depois de reagir por 16 horas a 50°C, a reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin- 3-il)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 16i (72 mg, sólido amarelo), rendimento: 72,0%. MS m/z (ESI): 564,1 [M+1] Etapa 9 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6- metoxipiridazin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona

[00219] 1- (2,6- difluorobenzil) -5- ((dimetilamino) metil) -3- (6- metoxipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)- diona 16i (72 mg, 0,13 mmol), ferro (29 mg, 0,51 mmol) e cloreto de amônio (55 mg, 1,02 mmol) foram dissolvidos em 20 mL de uma mistura de etanol e água (V / V = 4: 1). Depois de reagir por 1 hora a 80°C, a reação foi interrompida. A solução reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, e em seguida acrescida de 20 mL de água, e extraída com diclorometano (10 mL x 4). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com cloreto de sódio saturado (10 mL x 1), secadas sobre sulfato de sódio anidro, e filtradas. O filtrado foi concentrado à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6- metoxipiridazin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 16j (25 mg, sólido cáqui), rendimento: 42,8%. MS m/z (ESI): 534,3[M+1] Etapa 10 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin- 3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3- metilureia

[00220] Ácido acético (51 kg, 0,84 mmol) foi introduzido em um tubo de 25 mL vedado, e sucessivamente acrescido de 2 mL de tolueno, N,N-di- isopropiletilamina (163 mg, 1,26 mmol) e difenilfosforil azida (231 mg, 0,84mmol). A mistura foi reagida por 1 hora no tubo vedado. Depois de esfriar para 0°C, a solução reacional foi acrescida de 2 mL de uma solução de 6- (4-aminofenil) -1- (2,6 -difluorobenzil) -5-((dimetilamino)metil)-3-(6- metoxipiridazin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 16j (45mg, 0,084 mmol) em diclorometano, e ainda reagida por 16 horas a 40°C no tubo vedado. A reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1- (4- (1- (2,6- difluorobenzil) -5- ((dimetilamino) metil) - 3- (6-metoxipiridazin-3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3-metilureia 16 (18 mg, sólido branco), rendimento: 36,0%. MS m/z (ESI): 591,3 [M+1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 7,92-7,87 (m, 2H), 7,77-7,70 (m, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,60-7,55 (m, 1H), 7,25-7,13 (m, 2H), 7,05-6,99 (m, 1H), 6,79-6,71 (m, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,06 (s, 3H), 3,54 (s, 2H), 2,75 (s, 3H), 2,16 (s, 6H) Exemplo 17 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-hidroxipiridazin- 3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)- 3-metoxiureia

Etapa 1 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-hidroxipiridazin- 3-il)-4,6-dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)- 3-metoxiureia

[00221] 1- (4 -(7-(2,6- difluorobenzil) -3- ((dimetilamino) metil)-5- (6- metoxipiridazin-3-il)-4,6- dioxo- 4,5,6,7- tetra- hidro- 2H- pirazolo [3,4- d]pirimidin-2-il)fenil)-3-metoxiureia 11 (122 mg, 0,20 mmol) foi dissolvida em 6 mL de tetra-hidrofurano e agitada até dissolver completamente. A solução foi acrescida de ácido bromídrico a 40% (103 mg, 0,51 mmol), e agitada por 12 horas à temperatura ambiente. A reação foi interrompida e a solução reacional foi acrescida de 5 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio e ainda agitada por 5 minutos. A mistura resultante foi extraída. As fases orgânicas foram combinadas e purificadas por cromatografia de coluna sobre sílica-gel com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1- (4- (7- (2,6- difluorobenzil) -3-((dimetilamino)metil)-5-(6-hidroxipiridazin-3-il)-4,6- dioxo-4,5,6,7-tetra-hidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)fenil)-3- metoxiureia 17 (16 mg, sólido branco), rendimento: 13,5%. MS m/z (ESI): 594,3 [M+1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 13,36-13,18 (m, 1H), 9,69 (s, 1H), 9,21- 9,14 (m, 1H), 7,83-7,76 (m, 2H), 7,71-7,64 (m, 2H), 7,52-7,46 (m, 1H), 7,46-7,36 (m, 1H), 7,09 (s, 3H), 5,32-5,21 (m, 2H), 3,71-3,62 (m, 5H), 2,17 (s, 6H) Exemplo 18 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin- 3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3- metoxiureia

Etapa 1 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoxipiridazin- 3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)fenil)-3- metoxiureia

[00222] 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3- (6-metoxipiridazin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-2,4(1H,3H)-diona 16j (170mg, 0,319 mmol), metil 4-nitrofenilmetoxiamino formiato (81 mg, 0,382mmol, preparado por um método conhecido descrito no documento "WO 2011090935") e N,N-di-isopropiletilamina (109 μL, 0,638 mmol) foram dissolvidos em 10 mL de tetra-hidrofurano. Depois de reagir por 4 horas à temperatura ambiente, a reação foi interrompida e a solução reacional foi concentrada à pressão reduzida. Os resíduos foram purificados por cromatografia em camada fina com os sistemas de eluição A para obter o composto do título 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6- metoxipiridazin-3-il)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6- il)fenil)-3-metoxiureia 18 (15 mg, sólido amarelo), rendimento: 7,8%. MS m/z (ESI): 607,2 [M+1]

Exemplo de Teste Avaliação Biológica Exemplo de Teste 1. Ensaio da atividade de GnRHr (receptor de GnRH) humana dos presentes compostos

[00223] A atividade in vitro da proteína GnRHr foi testada pelos seguintes métodos.

[00224] Este ensaio é usado para determinar o efeito inibitório do presente composto sobre a atividade da proteína GnRHr humana expressa por linhagens celulares GnRHr/CHO humanas estavelmente transfectadas.

1. Materiais Experimentais e Equipamentos

[00225] 1) Kits do Ensaio de Fluo-4 NW Cálcio (F36206, invitrogen)

[00226] 2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)

[00227] 3) G418 (11811-031, invitrogen)

[00228] 4) Leitora de Microplaca FlexStation3

2. Protocolo Experimental

[00229] O vetor de expressão mamífero contendo o gene de GnRHr humana foi transferido para células CHO por adição do reagente Lipofectamina®LTX contendo Plus™; antibióticos foram adicionados no dia seguinte para rastreamento, para selecionar as linhagens celulares monoclonais.

[00230] As linhagens celulares GnRHr/CHO humanas estavelmente transfectadas foram inoculadas em placas de 96 poços com uma densidade de inoculação de 25,000/poço. O meio de cultura foi removido no dia seguinte, e tampão de carga contendo o corante Fluo- 4 foi adicionado à placa (100 μL/poço) e incubado por 30 minutos a 37°C. A placa foi levada até a temperatura ambiente e equilibrada por 10 minutos. Cada composto foi diluído com DMSO até sete gradientes de concentração de 100 μM, 10 μM, 1 μM, 0,1 μM, 0,01 μM, 0,001 μM, 0,0001 μM. Em seguida, 1 μl de cada gradiente foi adicionado a cada poço e incubado por 10 minutos à temperatura ambiente. Depois da adição automática de 50μL de uma solução estimulante de polipeptídio GnRH, o valor foi detectado a 494/516nM pela leitora de microplaca (flexstation 3) imediatamente. Os valores de IC50 dos compostos foram calculados por software a partir de diferentes sinais de fluorescência a várias concentrações correspsendo quentes.

[00231] A atividade inibitória dos presentes compostos sobre a GnRHr humana foi determinada pelo ensaio acima, e os valores de IC50 estão mostrados na Tabela 1. Tabela 1 IC50 do efeito inibitório do presente composto sobre a atividade de GnRHr humana

[00232] Conclusão: Os presentes compostos têm significativa atividade inibitória de GnRHr humana. Exemplo de Teste 2. Ensaio da atividade inibitória de GnRHr de macaco dos presentes compostos

[00233] Este ensaio é usado para determinar o efeito inibitório dos presentes compostos sobre a atividade da proteína GnRHr de macaco por linhagens celulares GnRHr/CHO de macaco estavelmente transfectadas.

1. Materiais Experimentais e Equipamentos

[00234] 1) Kits do Ensaio de Fluo-4 NW Cálcio (F36206, invitrogen)

[00235] 2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)

[00236] 3) G418 (11811-031, invitrogen)

[00237] 4) Leitora de Microplaca FlexStation3

2. Protocolo Experimental

[00238] O vetor de expressão mamífero contendo o gene de GnRHr de macaco foi transferido para células CHO por adição do reagente Lipofectamina®LTX contendo Plus™; antibióticos foram adicionados no dia seguinte para rastreamento para selecionar as linhagens celulares monoclonais.

[00239] As linhagens celulares GnRHr/CHO de macaco estavelmente transfectadas foram inoculadas em placas de 96 poços com uma densidade de inoculação de 25.000/poço. O meio de cultura foi removido no dia seguinte, e tampão de carga contendo o corante Fluo-4 foi adicionado à placa (100 μL/poço) e incubado por 30 minutos a 37°C. A placa foi levada até a temperatura ambiente e equilibrada por 10 minutos. Cada composto foi diluído com DMSO até sete gradientes de concentração de 100 μM, 10 μM, 1 μM, 0,1 μM, 0,01 μM, 0,001 μM, 0,0001 μM. Em seguida, 1 μl de cada gradiente foi adicionado a cada poço e incubado por 10 minutos à temperatura ambiente. Depois da adição automática de 50μL de uma solução estimulante de polipeptídio GnRH, o valor foi detectado a 494/516 nM pela leitora de microplaca (flexstation 3) imediatamente. Os valores de IC50 dos compostos foram calculados por software a partir de diferentes sinais de fluorescência a várias concentrações correspsendo quentes.

[00240] A atividade inibitória dos presentes compostos sobre GnRHr de macaco foi determinada pelo ensaio acima, e os valores de IC50 estão mostrados na Tabela 1. Tabela 2 IC50 do efeito inibitório dos presentes compostos sobre a atividade de GnRHr humana

[00241] Conclusão: Os presentes compostos têm significativa atividade inibitória de GnRHr de macaco. Exemplo de Teste 3. Ensaio da atividade inibitória de GnRHr de coelho dos presentes compostos

[00242] Este ensaio é usado para determinar o efeito inibitório do presente composto sobre a atividade da proteína GnRHr de coelho expressa por linhagens celulares GnRHr/CHO de coelho estavelmente transfectadas. 1. Materiais Experimentais e Equipamentos

[00243] 1) Kits do Ensaio de Fluo-4 NW Cálcio (F36206, invitrogen)

[00244] 2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)

[00245] 3) G418 (11811-031, invitrogen)

[00246] 4) Leitora de Microplaca FlexStation3

[00247] 2. Protocolo Experimental

[00248] O vetor de expressão mamífero contendo o gene de GnRHr de coelho foi transferido para células CHO por adição do reagente Lipofectamina®LTX contendo Plus™; antibióticos foram adicionados no dia seguinte para rastreamento para selecionar as linhagens celulares monoclonais.

[00249] As linhagens celulares GnRHr/CHO de coelho estavelmente transfectadas foram inoculadas em placas de 96 poços com uma densidade de inoculação de 25.000/poço. O meio de cultura foi removido no dia seguinte, e tampão de carga contendo o corante Fluo-4 foi adicionado à placa (100 μL/poço) e incubado por 30 minutos a 37°C. A placa foi levada até a temperatura ambiente e equilibrada por 10 minutos. Cada composto foi diluído com DMSO até sete gradientes de concentração de 100 μM, 10 μM, 1 μM, 0,1 μM, 0,01 μM, 0,001 μM, 0,0001 μM. Em seguida, 1 μl de cada gradiente foi adicionado a cada poço e incubado por 10 minutos à temperatura ambiente. Depois da adição automática de 50μL de uma solução estimulante de polipeptídio GnRH, o valor foi detectado a 494/516 nM pela leitora de microplaca (flexstation 3) imediatamente. Os valores de IC50 dos compostos foram calculados por software a partir de diferentes sinais de fluorescência a várias concentrações correspsendo quentes.

[00250] A atividade inibitória dos presentes compostos sobre GnRHr de coelho foi determinada pelo ensaio acima, e os valores de IC50 estão mostrados na Tabela 1. Tabela 3 IC50 do efeito inibitório do presente composto sobre a atividade de GnRHr de coelho

[00251] Conclusão: Os presentes compostos têm significativa atividade inibitória de GnRHr de coelho.

Avaliação Farmacocinética

[00252] Exemplo de Teste 4. Ensaio farmacocinético em ratos dos compostos do Exemplo 2, Exemplo 3, Exemplo 5, Exemplo 9, Exemplo 10, Exemplo 11 e Exemplo 13 da presente invenção

1. Sumário

[00253] Ratos Sprague-Dawley (SD) foram usados como animais de teste. As concentrações plasmáticas em vários tempos foram determinadas por LC/MS/MS depois de depois de administração intragástrica dos compostos do Exemplo 2, Exemplo 3, Exemplo 5, Exemplo 9, Exemplo 10, Exemplo 11 e Exemplo 13 e administração intravenosa do composto do Exemplo 11 aos ratos. O comportamento farmacocinético dos presentes compostos nos ratos foi estudado, e os aspectos farmacocinéticos foram avaliados.

2. Protocolo de Teste 2.1 Amostras

[00254] Compostos do Exemplo 2, Exemplo 3, Exemplo 5, Exemplo 9, Exemplo 10, Exemplo 11 e Exemplo 13

2.2 Animais de teste

[00255] 32 ratos SD adultos saudáveis (metade fêmeas e metade machos) foram distribuídos uniformemente em 8 grupos (4 para cada grupo). Os animais foram adquiridos no Shanghai Super B&K Laboratory Animal Corp. Ltd. (Certificado de produção de animais de laboratório N° SCXK (HU)2008-0016).

2.3 Formulação medicamentosa

[00256] A quantidade apropriada de amostra foi pesada, e acrescida de CMC-Na a 0,5% para formar uma suspensão a 1 mg/mL mediante tratamento ultrassônico.

[00257] As quantidades apropriadas de fármacos foram pesadas, e dissolvidas com 0,5 mL de DMSO e 0,5 mL de Tween 80; solução salina foi adicionada ao volume final.

2.4 Administração

[00258] 32 ratos SD (metade fêmeas e metade machos) foram distribuídos uniformemente em 8 grupos (4 para cada grupo), e medicados por gavagem oral ou injeção intravenosa (i.v.) (oral gavage a uma dosagem de 10 mg/kg ou 30 mg/kg, e i.v. a uma dosagem de 5,0mg/kg) respectivamente a um volume de 10 mL/kg depois de jejuarem durante a noite.

3. Operação

[00259] 0,1 mL de sangue foi coletado antes e 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 11, 24 horas depois da administração, recolhido em um tubo de ensaio heparinizado, e centrifugado a 3500 rpm por 10 minutos para separar o plasma, que foi armazenado a -20°C. Foi permitido que os animais tivessem acesso à comida 2 horas depois da administração.

[00260] O teor do composto de teste no plasma dos ratos depois da administração do composto por gavagem oral foi determinado por LC/MS/MS.

4. Resultados dos Parâmetros farmacocinéticos

[00261] Os parâmetros farmacocinéticos dos presentes compostos estão mostrados na Tabela 4 que se segue:

[00262] Conclusão: os presentes compostos são bem absorvidos por via oral em ratos, e têm absorção farmacocinética óbvia. O Exemplo 11 tem biodisponibilidade oral particularmente preferível.

[00263] Exemplo de Teste 5. Ensaio farmacocinético em coelhos do Exemplo 11 da presente invenção 1. Sumário

[00264] Coelhos foram usados como animais de teste. As concentrações plasmáticas em vários tempos foram determinadas por LC/MS/MS depois de administração intragástrica do composto do Exemplo 11 e administração intravenosa do composto do Exemplo 11 aos coelhos. O comportamento farmacocinético do presente composto nos coelhos foi estudado, e os aspectos farmacocinéticos foram avaliados.

2. Protocolo de Teste 2.1 Amostra

[00265] Composto do Exemplo 11

2.2 Animais de teste

[00266] 6 coelhos Nova Zelândia saudáveis (fêmeas) foram distri buídos uniformemente em 2 grupos. Os animais foram adquiridos na Jie Sijie Corp. Ltd.

2.3 Formulação medicamentosa

[00267] A quantidade apropriada de amostra foi pesada, e acrescida de CMC-Na a 0,5% para formar uma suspensão a 3 mg/mL mediante tratamento ultrassônico.

[00268] As quantidades apropriadas de fármacos foram pesadas, e dissolvidas com 1 mL de DMSO e 1 mL de Tween 80; solução salina foi adicionada até o volume final.

2.4 Administração

[00269] 6 coelhos Nova Zelândia saudáveis (fêmeas) foram distri- buídos uniformemente em 2 grupos, e medicados por gavagem oral ou intravenous injection (i.v.) (gavagem oral a uma dosagem de 30 mg/kg com um volume de administração de 5 mL/kg, e i.v. a uma dosagem de 5 mg/kg com um volume de administração de 2 mL/kg) depois de jejuarem durante a noite.

3. Operação

[00270] 0,2 mL de sangue foi coletado antes e 5 minutos, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 11, 24 horas depois da administração intravenosa, recolhido em um tubo de ensaio heparinizado, e centrifugado a 3500 rpm por 10 minutos para separar o plasma, que foi armazenado a -20°C. Sangue foi coletado antes e 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 11, 24 horas depois da administração oral, e tratado da mesma maneira que o grupo com administração intravenosa. O teor do composto de teste no plasma dos coelhos depois da administração do composto por gavagem oral e injeção intravenosa foi determinado por LC/MS/MS. 4. Resultados dos Parâmetros Farmacocinéticos

[00271] Os parâmetros farmacocinéticos dos presentes compostos estão mostrados na Tabela 5 que se segue:

[00272] Conclusão: O composto do Exemplo 11 da presente invenção é bem absorvido em coelhos, e tem biodisponibilidade oral preferível.

[00273] Exemplo de Teste 6. Ensaio farmacocinético em Beagles do Exemplo 11 da presente invenção 1. Sumário

[00274] Cães Beagle foram usados como animais de teste. As concentrações plasmáticas em vários tempos foram determinadas por LC/MS/MS depois de administração intragástrica do composto do Exemplo 11 e administração intravenosa do composto do Exemplo 11 a cães beagles. O comportamento farmacocinético do presente composto nos beagles foi estudado, e os aspectos farmacocinéticos foram avaliados.

2. Protocolo de Teste 2.1 Amostra

[00275] Composto do Exemplo 11

2.2 Animais de teste

[00276] 8 cães beagles saudáveis (metade fêmeas e metade machos) foram distribuídos uniformemente em 2 grupos. Os animais foram adquiridos na SuzhouXishan Zhongke Laboratory Animal Corp. Ltd.

2.3 Formulação medicamentosa

[00277] A quantidade apropriada de amostra foi pesada, e acrescida de CMC-Na a 0,5% para formar uma suspensão a 1,0 mg/mL mediante tratamento ultrassônico.

[00278] As quantidades apropriadas de fármacos foram pesadas, e dissolvidas com 5 mL de DMSO e 5 mL de Tween 80; solução salina foi adicionada até o volume final.

2.4 Administração

[00279] 8 cães beagles saudáveis (metade fêmeas e metade machos) foram distribuídos uniformemente em 2 grupos, e medicados por gavagem oral ou injeção intravenosa (i.v.) (gavagem oral a uma dosagem de 5 mg/kg com um volume de administração de 5 mL/kg, e i.v. a uma dosagem de 2 mg/kg com um volume de administração de 2mL/kg) depois de jejuarem durante a noite.

3. Operação

[00280] 0,1 mL de sangue foi coletado da veia perna dianteira antes e 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 horas depois da administração oral, recolhido em um tubo de ensaio heparinizado, e centrifugado a 3500 rpm por 10 minutos para separar o plasma, que foi armazenado a - 20°C. Foi permitido que os animais tivessem acesso à comida 2 horas depois da administração. Sangue foi coletado antes e 5 minutos, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 horas depois da administração intravenosa, e tratada da maneira descrita acima. O teor do composto de teste no plasma dos beagles depois da administração do composto por gavagem oral e injeção intravenosa foi determinado por LC/MS/MS. 4. Resultados dos Parâmetros Farmacocinéticos

[00281] Os parâmetros farmacocinéticos dos presentes compostos estão mostrados na Tabela 6 que se segue:

[00282] Conclusão: O composto do Exemplo 11 da presente invenção é bem absorvido em beagles, e tem biodisponibilidade oral preferível.

[00283] Exemplo de Teste 7. Teste farmacodinâmico in vivo do Exemplo 11 da presente invenção em ratos

1. Sumário

[00284] O modelo de endometriose foi estabelecido com coelho, o teste de rastreamento farmacodinâmico para endometriose de coelho tratada com o composto do Exemplo 11 foi implementado.

2. Protocolo de Teste 2.1 Amostra

[00285] Composto do Exemplo 11

2.2 Animais de teste

[00286] 15 coelhos Nova Zelândia saudáveis (fêmeas) foram distribuídos uniformemente em 3 grupos. Os animais foram adquiridos na Shanghai Songjiang District Songlian Laboratory Animal Farm (Certificado de produção de animais de laboratório N° SCXK (HU) 2008-0016).

2.3 Operação

[00287] Os coelhos foram alimentados de forma adaptiva e colocados em quarantena por sete dias, e receberam uma injeção subcutânea de 30μg/kg de benzoato de estradiol uma vez ao dia por dois dias antes da cirurgia; quando o modelo foi estabelecido, os coelhos foram anestesiados com 3% de pentobarbital sódico, e laparotomizados de forma estéril. Em seguida, um lado do útero foi separado ligado ao vaso uterino do mesorreto. Em seguida, uma seção do útero foi removido e colocada em um prato com solução salina quente, e em seguida dissecada longitudinalmente e separada por miométrio e endométrio. Uma seção do endométrico (cerca de 0,5cm 0,5cm) foi costurada à parede abdominal rica em vasos sanguíneos na superfície interna voltada para a cavidade abdominal. Três semanas depois de plantado o endométrio, os coelhos foram laparotomizados para que fosse verificado o tamanho interno do enxerto. 15 animais da modelagem bem-sucedida foram aleatoriamente divididos em 3 grupos (5 para cada grupo) que foram o grupo de controle tratado com veículo, o grupo tratado com dose baixa (10mg/kg do composto do Exemplo 11) e o grupo tratado com dose alta (30mg/kg do composto do Exemplo 11), respectivamente. Cada grupo foi medicado por gavagem oral uma vez ao dia com um volume de 5mL/kg, por 28 dias consecutivos da modelagem bem-sucedida. Por fim, o coelho foi pesado e o volume do endométrio ectópico foi medido para avaliar o efeito do presente composto sobre a atividade endometrial.

2.4 Resultados:

[00288] Depois da administração de 30 mg/kg do composto do Exemplo 11 ao modelo de endometriose em coelho por 4 semanas por administração oral da mesma quantidade de CMC-Na a 0,5% como controle, o crescimento de endométrio ectópico foi significativamente inibido, enquanto que a inibição pelo composto do Exemplo 11 do volume de endométrio ectópico a 10 mg/kg não era óbvio. Por conseguinte, a dose NOAEL toxicológica (dose à qual nenhum efeito danoso foi observado) do composto do Exemplo 11 no modelo de endometriose em coelho é de 30 mg/kg.

[00289] Exemplo de Teste 8 Avaliação toxicocinética de sete dias do composto do Exemplo 11 em ratos

1. Sumário

[00290] Ratos SD foram usados como animais de teste. As concentrações plasmáticas em vários tempos foram determinadas por LC/MS/MS depois de administração do composto do Exemplo 11 por gavagem oral por 7 dias. A toxicidade do composto em roedores foi preliminarmente avaliada de acordo com a reação de toxicidade em potencial e o nível de severidade do corpo.

2. Protocolo de Teste 2.1 Amostra

[00291] Composto do Exemplo 11

2.2 Animais de teste

[00292] 24 ratos SD adultos saudáveis (metade fêmeas e metade machos) foram distribuídos uniformemente em 4 grupos (6 para cada grupo). Os animais foram adquiridos no Shanghai SLAC Laboratory Animal Corp. Ltd. (Certificado de produção de animais de laboratório N° SCXK (HU) 2012-0002).

2.3 Formulação medicamentosa

[00293] A quantidade apropriada de amostra foi pesada com precisão, e acrescida de um pouco de CMC-Na a 0,5% para formar uma suspensão uniforme mediante tratamento de trituração em ultrassonicador, e em seguida diluída até o volume final. O resto das soluções de amostra no dia 1 e no dia 7 foram mantidas para determinação da concentração de administração de toxicocinética.

2.4 Administração

[00294] As doses orais repetidas foram 80, 240 e 720 mg/kg, e as concentrações de administração foram 8, 24 e 72 mg/mL, respectivamente. O volume de dosagem foi 10 mL/kg, uma vez ao dia por 7 dias.

3. Operação

[00295] Sangue foi coletado no dia 1 e no dia 7 depois de administração com tempo de coleta antes e 1, 2, 4, 8 e 24 horas depois de administração oral no dia 1, e antes e 1, 2, 4, 8, 24 e 48 horas depois de administração oral no dia 7. A amostra de sangue foi recolhido em um tubo de ensaio heparinizado, e centrifugada para separar o plasma, que foi armazenado a -20°C. O teor do composto de teste no plasma dos ratos depois de administração do composto por gavagem oral foi determinado por LC/MS/MS.

4. Resultados 4.1 Impacto nos sinais clínicos 4.1.1 Morte

[00296] O rato n° 1 do grupo de toxicidade a 720 mg/kg do composto do Exemplo 11 morreu no dia 7 antes da dosagem; o rato n° 5 do grupo de toxicidade a 720 mg/kg do grupo toxicocinético do composto do Exemplo 11 morreu no dia 7 antes da dosagem, e o rato n° 6 morreu no dia 9. 4.1.2 Observação Clínica

[00297] Durante a administração, comparados com o grupo de controle tratado com veículo, todos os ratos no grupo de toxicidade a 720mg/kg e no grupo toxicocinético apresentaram perda de peso e estado mental pobre depois de administração do composto do Exemplo 11 no dia 6; todos os ratos no grupo de toxicidade a 720 mg/kg e no grupo toxicocinético depois de administração do composto do Exemplo 11 no dia 7 apresentaram redução de ingestão de comida, perda de peso, atividade reduzida, estado mental pobre, pele fosca na parte traseira, pelo eriçado, lombo encurvado, hemorragia em volta do nariz e dos olho, diarreia e crissum sujo 4.2 Impacto no peso corporal

[00298] Em comparação com o grupo de controle tratado com veículo, a percentagem de alteração no peso corporal do grupo tratado com dose alta apresentou redução significativa (P <0,05) depois de administração do composto do Exemplo 11 no dia 3 e no dia 7. 4.3 Impacto sobre a ingestão de alimentos

[00299] Em comparação com o grupo de controle tratado com veículo, a ingestão de alimentos do grupo tratado com 147280 a uma dose de 720 mg/kg foi significativamente reduzida no dia 3 e no dia 7. 4.4. Resultados do exame hematológico

[00300] Em comparação com o grupo de controle tratado com veículo, WBC (células sanguíneas brancas), Neut (valor relativo de neutrófilos e contagem absoluta de neutrófilos), Lymph (contagem absoluta de linfócitos), EO (contagem absoluta de eosinófilos) e RET (valor relativo de reticulócitos e contagem absoluta de reticulócitos) dos ratos no grupo tratado com dose de 720 mg/kg do composto do Exemplo 11 foram significativamente reduzidos (P <0,05). 4.5 Resultados do exame bioquímico do sangue

[00301] Em comparação com o grupo de controle tratado com veículo, BUN (ureia nitrogênio no sangue), CHOL (colesterol total), CREA (creatinina), TBIL (bilirubina total), TP (proteína total), AST (aspartato aminotransferase) dos ratos no grupo tratado com dose de 720 mg/kg do composto do Exemplo 11 foram significativamente aumentados (P <0,05). Embora sem diferenças estatíticas na ALT (alanina aminotransferase), a ALT de dois animais foi significativamente aumentada. ALB (albumina), ALP (fosfatase alcalina) foram significativamente reduzidas (P <0,05). Enquanto que o resultado da detecção de íons foi de ausência devido à escassez de amostras de sangue do grupo tratado com SHR 147280 a uma dose de 720 mg/kg. Nenhuma outra anormalidade toxicológica óbvia fora detectada. 4.6 Parâmetros de coagulação

[00302] Em comparação com o grupo de controle tratado com veículo, os ratos no grupo tratado com a dose de 80mg/kg e no grupo tratado com a dose de 240mg/kg do composto do Exemplo 11 não mostraram diferenças significativas. O resultado dos parâmetros de coagulação foi de ausência devido à escassez de amostras de sangue do grupo tratado com SHR 147280 a uma dose de 720 mg/kg. 4.7 O exame de urina

[00303] Em comparação com o grupo de controle tratado com veículo, os grupos de tratamento não apresentaram alterações regularmente anormais nos índices de urina. 4.8 Resultados da patologia geral

[00304] Autópsia foi em geral visível. Em comparação com o grupo de controle tratado com veículo, o grupo tratado com a dose de 720mg/kg do composto do Exemplo 11 exibiu hemorragia e atrofia do timo; atrofia e congestão do baço; graus variáveis de congestão nas camadas do fígado com lesões necróticas lesões necróticas escamosas cinza-avermelhado; hiperemia e hemorragia pulmonar; hemorragia e hipertrofia da glândula adrenal; hemorragia e congestão do ovário; adelgaçamento da parede gastrointestinal; conteúdo branco no estômago; conteúdo amarelo no intestino delgado, hemorragia intestinal, hemorragia colorretal, e mucoide no intestino. Além disso, os animais mortos apresentaram lesões necróticas no coração. O resto dos grupos não apresentou anormalidade visível. 4.9 Resultados do coeficiente orgânico

[00305] Em comparação com o grupo de controle tratado com veículo, o peso úmido absoluto do timo, coração, pulmão e baço nos ratos machos e fêmeas do grupo tratado com 720 mg/kg do composto do Exemplo 11 foi significativamente reduzido (p<0,05), ao contrário do peso úmido absoluto da glândula adrenal que foi significativamente aumentado (p<0,05). O coeficiente orgânico relativo do timo e do baço foi significativamente reduzido (p<0,05), ao passo que o coeficiente orgânico relativo do cérebro, fígado, pulmão, rim e glândula adrenal foi significativamente aumentado (p<0,05). 4.10 Resultados dos Parâmetros Toxicocinéticos Parâmetros toxicocinéticos de ratos fêmeas depois de administração intragástrica

Nota: — indica que os parâmetros não podem ser calculados por falta de dados.

[00306] Portanto, a dose NOAEL toxicológica do Exemplo 11 é 240mg/kg, e a dose letal é 720 mg/kg. Os potenciais órgãos alvo tóxicos foram sistema medulo-hematopoiético, timo, coração, fígado, pulmão, baço, glândula adrenal, ovário e sistema digestivo.

[00307] Conclusão: Comparando o teste farmacocinético do Exemplo de Teste 5, o teste farmacodinâmico do Exemplo de Teste 7 e o teste farmacocinético toxicológico do Exemplo de Teste 8, a avaliação preliminar da janela de segurança do composto do Exemplo 11 foi a seguinte:

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I):

ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; na qual: quando G for N, D é C e E é -CH-; quando G for C, D e E são N; R1 é selecionado do grupo que consiste em arila com 6 membros, heteroarila com 6 membros, sendo que arila com 6 membros e a heteroarila com 6 membros são cada um deles independentemente e opcionalmente ainda substituídos com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio e -OR6; sendo que a heteroarila com 6 membros apresenta de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo que consiste em O, S e N; R2 é C1-6 alquila, sendo que a C1-6 alquila é ainda substituída com fenila, sendo que a fenila é opcionalmente ainda substituída com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio, C1-6 alquila e C1-6 haloalquila; R3 é fenila, sendo que a fenila é opcionalmente ainda substituída com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em -NHC(O)R6, -NHC(O)OR6, -NHC(O)NHR6 e - NHC(O)NHOR6; R4 é C1-4 alquila; R5 é hidrogênio; R6 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e C16 alquila; n é 1 ou 2.

2. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 1, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é um composto de Fórmula (II), ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

na qual n e R1 a R5 são como definidos na reivindicação 1.

3. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 1, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é um composto de Fórmula (III) ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

na qual n e R1 a R5 são como definidos na reivindicação 1.

4. Composto de Fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é selecionado do grupo que consiste em fenila e piridazinila, sendo que fenila e piridazinila são cada um deles opcionalmente ainda substituídas com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio e -OR6.

5. Composto de Fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é benzila, sendo que benzila é opcionalmente substituída com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em halogênio, C1-6 alquila e C1-6 haloalquila.

6. Composto de Fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um tautômeroracemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R3 é fenila, sendo que a fenila é opcionalmente ainda substituída com um ou mais grupos selecionados do grupo que consiste em -NHC(O)NHR6 e -NHC(O)NHOR6.

7. Composto de Fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R4 é metila.

8. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 1, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é um composto de Fórmula (IV) ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

na qual n, D, E, G, R1, R2, R4 e R5 como definidos na reivindicação 1; Ra é selecionado do grupo que consiste em C1-6 alquila e - OR6; e R6 é C1-6 alquila.

9. Composto de Fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:

10. Processo para preparar um composto de Fórmula (I), como definido na reivindicação 1, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende uma etapa de: reagir um composto de Fórmula (IA)

com a amina de Fórmula NH(R4)(CH2)nR5; opcionalmente reduzir e/ou acilar o produto resultante para obter o composto de Fórmula (I); na qual X é halogênio; e n, D, E, G e R1 a R5 são como definidos na reivindicação 1.

11. Processo para preparar um composto de Fórmula (I), como definido na reivindicação 1, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende uma etapa de:

com R2X, na presença de um reagente alcalino; opcionalmente reduzir e/ou acilar o produto resultante para obter o composto de Fórmula (I); sendo que X é halogênio; e n, D, E, G e R1 a R5 são como definidos na reivindicação 1.

12. Composto de Fórmula (IA), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é usado como um intermediário na preparação do composto de Fórmula (I):

na qual: X é halogênio; e D, E, G e R1 a R3 são como definidos na Fórmula (I).

13. Composto de Fórmula (IB), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é usado como um intermediário na preparação do composto de Fórmula (I):

na qual n, D, E, G, R1 e R3 a R5são como definidos na Fórmula (I).

14. Processo para preparar um composto de Fórmula (IA), como definido na reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende uma etapa de: realizar uma reação de halogenação do composto de Fórmula (Ib)

na qual D, E, G e R1 a R3 são como definidos na reivindicação 1; para obter o composto de Fórmula (IA).

15. Processo para preparar um composto de Fórmula (IB), como definido na reivindicação 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende uma etapa de: realizar uma ciclização do composto de Fórmula (Ig)

na qual n, D, E, G, R1 e R3~R5 são como definidos na reivindicação 1, e Rb é C1-6 alquila; para obter o composto de Fórmula (IB).

16. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste

17. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais veículos, diluentes, ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

18. Uso do composto de Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um tautômero, racemato, ou uma mistura dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou da composição farmacêutica, como definida na reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento ou a prevenção de câncer dependente de hormônios de doenças sexuais, metástase óssea de cânceres dependentes de hormônios sexuais, hiperplasia da próstata, leiomioma uterino, endometriose, fibroide uterino, puberdade precoce, amenorreia, síndrome pré-menstrual, dismenorreia, síndrome do ovário multilocular, síndrome do ovário policístico, acne, alopecia, mal de Alzheimer, infertilidade, síndrome do intestino irritado, tumores benignos e malignos que são independentes de hormônios e sensíveis a LH-RH, ou rubor; na preparação de regulador reprodutivo, pílula anticoncepcional, evocador de ovulação; ou na preparação de medicamentos para a prevenção de recorrência pós-operatória de câncer dependente de hormônios sexuais selecionado do grupo que consiste em câncer de próstata, câncer de útero, câncer de mama e câncer da glândula pituitária; preferivelmente câncer de próstata, câncer de útero, câncer de mama, endometriose, ou leiomioma uterino.