CN104884457B - 吡唑并嘧啶酮类或吡咯并三嗪酮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents

吡唑并嘧啶酮类或吡咯并三嗪酮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了吡唑并嘧啶酮类或吡咯并三嗪酮类衍生物，其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的吡唑并嘧啶酮类或吡咯并三嗪酮类衍生物及其可药用盐，其制备方法以及它们作为促性腺素释放激素(GnRH)受体拮抗剂特别是作为子宫内膜异位症等治疗剂的用途，其中通式(I)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

吡唑并嘧啶酮类或吡咯并三嗪酮类衍生物、其制备方法及其 在医药上的应用
技术领域
本发明涉及一种新型吡唑并嘧啶酮类或吡咯并三嗪酮类衍生物及其可药用的盐，其制备方法及含有该衍生物的药物组合物，以及其作为促性腺素释放激素(GnRH)受体拈抗剂特别是作为子宫内膜异位症等治疗剂的用途。
背景技术
子宫内膜异位症是一种常见的雌激素依赖的妇科疾病，常发生于女性生育年龄期间，其作用机制尚不清楚。子宫内膜异位症的诊断困难及病因不明等复杂的症状，严重阻滞了其有效治疗方法的发现。目前，子宫内膜异位症主要通过腹腔镜手术诊断，并通过外科手术进行治疗，或者服用避孕药，GnRH受体激动剂或孕激素减少体内雌激素水平来进行控制。
目前子宫内膜异位症的发生率很高，Datamonitor 2009年数据显示，仅印度和中国两个国家，患有子宫内膜异位症的女性患者数已超过6800万(印度3128.8万，中国3753.5万)人次，而七大主要市场国家患病人数也超过1700万。Datamonitor预计，2009至2018年，子宫内膜异位症市场将从2009年的7.64亿美元(美国5.96亿美元，欧盟1.17亿美元，日本0.51亿美元)增长至2018年的11.56亿美元(美国8.44亿美元，欧盟2.06亿美元，日本1.06亿美元)，而中国市场将会有更大的增长空间。
促性腺激素释放激素(Gonadoliberin；gonadotropin releasing hormone；GnRH)也称黄体生成素释放激素(LHRH)，是由下丘脑神经内分泌细胞合成的十肽激素(pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)，是内分泌生殖系统中的中枢调节因素。其通过下丘脑垂体门脉循环系统将其输送到垂体，与垂体前叶的GnRH受体细胞结合，促性腺激素如黄体生成素(Luteinizing Hormone，LH)和卵泡刺激素(Follicle-StimulatingHormone，FSH)的分泌和释放，调节卵巢和黄体的正常发育，在下丘脑-垂体-性腺轴发挥重要作用。GnRH受体通过与能够激活磷脂酰肌醇钙第二信使体系的G蛋白偶联发挥其调节作用，而LH则调节性类固醇的产生，FSH调节男性精子发生及女性卵泡的发育。
LH和FSH被释放到循环中，并与卵巢或睾丸的特异性细胞上受体相结合，刺激类固醇的生成。性类固醇存在情况下，疾病例如子宫内膜异位症、子宫肌瘤和前列腺癌等病情加重，需给予长效肽类的GnRH受体激动剂和拈抗剂进行治疗控制。
肽类GnRH受体拈抗剂包括GnRH衍生的线性肽(US 5,171,835)，环状六肽衍生物(US 2002/0065309)，双环肽衍生物(Journal of Medicinal Chemistry，1993；36：3265-73)等；而肽类GnRH受体激动剂包括亮丙瑞林(Leuprorelin，pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-d-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt)。然而肽类化合物存在许多待解决的包括口服吸收性、剂型、剂量体积、药物稳定性、持续作用及代谢稳定性等问题。而小分子GnRH受体拈抗剂治疗优于现存的肽基治疗法的主要原因在于小分子GnRH受体拈抗剂可以直接进行口服给药，方便快捷。研究证明小分子拈抗剂对子宫内膜异位症、性早熟、前列腺癌等激素依赖性疾病具有显著的疗效。
GnRH受体激动剂介导的间接抑制肿瘤机制是通过长期作用于下丘脑-垂体-性腺轴，导致垂体促性腺激素(FSH，LH)降低，从而减少性激素的分泌而间接抑制肿瘤细胞的生长。而GnRH受体拈抗剂则直接抑制垂体促性腺激素的释放，进而抑制肿瘤细胞的生长。
鉴于肽类GnRH受体拈抗剂的局限性，一些非肽类的GnRH受体拈抗剂已被提出并进入开发、临床试验及上市阶段，例如Elagolix(也称NBI-56418或ABT-620)是由Abbott公司和Neurocrine Biosciences Inc公司合作开发的小分子GnRH受体拈抗剂，目前处于临床三期阶段，主要应用于治疗子宫内膜异位症(III期)和子宫肌瘤(II期)。2012年6月，休斯顿第94届内分泌协会年度会议上公布了一项子宫内膜异位症临床二期的数据结果：在131名接受elagolix(150或250mg qd)，leuprorelin depot(3.75mg sc，一月一次，共12周)或安慰剂治疗的女性子宫内膜异位症患者中，elagolix治疗组中患者血清雌激素相较于leuprorelin治疗组及安慰剂组显著降低。同时，elagolix的安全性及耐受性也得到了很好的验证。
Relugolix也称TAK-385，是由日本Takada Pharmaceutical公司开发研制的小分子GnRH受体的口服拈抗剂，用于治疗子宫内膜异位症，子宫肌瘤和前列腺癌。2011年进入子宫内膜异位症和子宫肌瘤临床二期研究阶段，同年开展前列腺癌的临床一期研究。
目前公开的一系列的小分子GnRH受体拈抗剂专利包括WO2006096785、WO2010026993、WO2011076687、WO2012175514等。
尽管大量有意义的研究已在该领域进行，目前仍需要继续研究开发更加有效的小分子GnRH受体拈抗剂，本发明提供了一种新型结构的GnRH受体拈抗剂，并发现具有此类结构的化合物具有良好的活性，能够有效治疗内分泌生殖系统疾病。
发明内容
本发明的目的在于提供通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐：
其中：
当G为N时，D为C，E为-CH-；
当G为C时，D和E为N；
R1选自烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基或-OR6，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选进一步被一个或多个选自卤素、氰基、硝基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6、-NHC(O)OR6、或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代；
R2选自烷基，其中所述的烷基进一步被一个或多个选自芳基或杂芳基的取代基所取代，其中所述的芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基、卤代烷基、氰基、硝基、-C(O)OR6、-C(O)NR7R8、-OC(O)NR7R8、-OR6、-NHS(O)mR6、-NHC(O)R6或-NR7R8的取代基所取代，其中所述的卤代烷基优选为三氟甲基；
R3选自芳基或杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基、卤代烷基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-C(O)R6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHS(O)mR6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代；
R4选自烷基；
R5选自氢原子、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-NR7R8或-NR7S(O)mR6，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、氧代基、烷基、卤代烷基、羟烷基、、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NR7S(O)mR6、-S(O)mR6、-C(O)R6或-NHC(O)R6的取代基所取代；
R6选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
R7或R8各自独立选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酯的取代基所取代；
或者，R7或R8与相连接的氮原子一起形成杂环基，其中所述的杂环基内含有一个或多个N、O或S(O)m杂原子，并且所述杂环基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
m为0、1或2；
n为1、2、3或4；且
p为0，1或2。
在本发明一个优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，其为通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐：
其中：n，R1～R5的定义如通式(I)中所述。
在本发明另一个优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，其为通式(III)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐：
其中：n，R1～R5的定义如通式(I)中所述。
在本发明另一个优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，其中R1选自芳基或杂芳基，优选为苯基或哒嗪基，其中所述的芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、氰基、硝基、烷基、卤代烷基、羟烷基或-OR6的取代基所取代。
在本发明另一个优选的实施方案中，一种通式(I)所述的的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，其中R2选自苄基，其中所述的苄基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基、卤代烷基、氰基、硝基或-OR6的取代基所取代。
在本发明另一个优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，其中R3选自芳基，优选为苯基，其中所述的芳基任选进一步被一个或多个选自-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代，优选为-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
在本发明另一个优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，其中R4选自甲基。
在本发明另一个优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，其中R5选自氢原子，n为1或2。
在本发明另一个优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，其为通式(IV)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐：
其中：n、D、E、G和R1、R2、R4和R5的定义如通式(I)中所述；
Ra选自烷基或-OR6，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；且
R6选自烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代。
本发明典型的化合物包括，但不限于：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐。
本发明提供一种制备通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(IA)化合物与NH(R4)(CH2)nR5所示的胺反应，任选进一步还原或/和酰化反应，得到通式(I)化合物；
其中：X选自卤素，n、D、E、G和R1～R5的定义如通式(I)中所述。
还原试剂包括但不限于氢气或铁粉；
酰化试剂包括但不限于羧酸、酰氯、磺酰氯、卤代的甲酸甲酯、异氰酸酯或三光气和甲氧胺。
本发明还提供一种制备通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(IB)化合物在碱性试剂存在下，与R2X反应，任选进一步还原或/和酰化反应，得到通式(I)化合物。
其中：X选自卤素，n、D、E、G和R1～R5的定义如通式(I)中所述。
碱性试剂包括但不限于有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、吡啶、2，6-二甲基吡啶、甲醇钠、六甲基二硅基胺基锂、六甲基二硅基胺基钠，正丁基锂、叔丁醇钾或四丁基溴化铵，所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸铯、氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾，优选为碳酸钾或甲醇钠；
还原试剂包括但不限于氢气或铁粉；
酰化试剂包括但不限于羧酸、酰氯、磺酰氯、卤代的甲酸甲酯、异氰酸酯或三光气和甲氧胺。
一种通式(IA)或(IB)所示的化合物或其可药用的盐，其作为制备通式(I)化合物的中间体，
其中：X选自卤素；n、D、E、G和R1～R5的定义如通式(I)中所述。
一种制备通式(IA)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(Ib)化合物进行卤化反应，得到通式(IA)化合物；
其中：D、E、G和R1～R3的定义如通式(I)中所述。
一种制备通式(IB)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(Ig)化合物成环反应，得到通式(IB)化合物；
其中：n、D、E、G和R1、R3～R5的定义如通式(I)中所述；
Rb选自烷基。
通式(IA)所示)的典型化合物包括，但不限于：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐。
一种通式(IVA)所示的化合物或其可药用的盐，其作为制备通式(IV)化合物的中间体，
其中：n、D、E、G和R1、R2、R4和R5的定义如通式(I)中所述。
通式(IVA)的典型化合物包括，但不限于：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐。
一种制备通式(IV)化合物的方法，该方法包括：
通式(IVA)化合物进一步与酰化试剂反应，得到通式(IV)化合物；
其中：
n、D、E、G和R1、R2、R4和R5的定义如通式(I)中所述；
酰化试剂包括但不限于羧酸、酰氯、磺酰氯、卤代的甲酸甲酯、异氰酸酯或三光气和甲氧胺。
本发明进一步涉及一种药物组合物，其含有治疗有效量的本发明通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐以及一种或多种可药用的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备GnRH受体拈抗剂的药物中的用途。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备治疗性腺激素相关的疾病的药物中的用途。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备治疗或预防性激素依赖性癌症(例如，前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、垂体癌等)、性激素依赖性癌症的骨质转移、前列腺肥大、子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫纤维瘤、性早熟、闭经、月经前期综合症、痛经、多房性卵巢综合症、多囊性卵巢综合症、痤疮、脱毛症、阿尔茨海默病、不育症、过敏性肠综合症、不依赖于激素且LH-RH敏感的良性或恶性肿瘤或潮红的疾病的药物中的用途；用作制备生殖调节物、避孕药、排卵诱发物中的用途；或用作制备治疗预防性激素依赖性癌症的手术后复发的药物中的用途，优选为前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、子宫内膜异位症或子宫肌瘤。
本发明还涉及一种抑制GnRH受体活性的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，或包含其的药物组合物。
本发明进一步涉及一种治疗性腺激素相关的疾病的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，或包含其的药物组合物。
本发明进一步涉及一种用于预防或治疗性激素依赖性癌症(前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、垂体癌等)、性激素依赖性癌症的骨质转移、前列腺肥大、子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫纤维瘤、性早熟、闭经、月经前期综合症、痛经、多房性卵巢综合症、多囊性卵巢综合症、痤疮、脱毛症、阿尔茨海默病、不育症、过敏性肠综合症、不依赖于激素且LH-RH敏感的良性或恶性肿瘤或潮红的疾病的方法，优选为前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、子宫内膜异位症或子宫肌瘤；；用作调节生殖、避孕或诱发排卵的方法；或用于预防性激素依赖性癌症的手术后复发的方法。
本发明还涉及作为抑制GnRH受体活性的药物的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，或包含其的药物组合物。
本发明还涉及作为治疗性腺激素相关的疾病的药物的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，或包含其的药物组合物。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐，或包含其的药物组合物，其作为激素依赖性疾病的预防剂或调节剂，具体的，可用作性激素依赖性癌症(例如，前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、垂体癌等)、前列腺肥大、子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫纤维瘤、性早熟、闭经综合症、月经前期综合症、多房性卵巢综合症、痤疮、脱毛症、阿尔茨海默病等的预防剂或治疗剂；用作妊娠调节剂(避孕药物等)、不育症药物的治疗剂或月经调节剂；用作过敏性肠癌综合症的预防剂或治疗剂；用作性激素依赖性癌症的手术后的复发的预防剂等；优选为前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、子宫内膜异位症或子宫肌瘤。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物质，例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素，或延长时间物质例如乙基纤维素、醋酸丁酸纤维素。
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合的硬明胶胶囊，或其中活性成分与水溶性载体例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂可以是天然产生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxy cetanol)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷脱水山梨醇单油酸酯。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或矿物油例如液体石蜡中配制而成。油悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂例如丁羟茴醚或α-生育酚保存这些组合物。
通过加入水可使适用于制备水混悬也的可分散粉末和颗粒提供活性成分和用于混合的分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂可说明上述的例子。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油，或矿物油例如液体石蜡或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，例如大豆卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯例如山梨坦单油酸酯，和所述偏酯和环氧乙烷的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制糖浆和酏剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可在使用的可接受的溶媒和溶剂中有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如1，3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年龄、病人的体重、病人的健康状况、病人的行被、病人的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
发明详述
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。优选含有1至10个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基，最优选含有1至4个碳原子的烷基，最佳为甲基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2，2-二乙基戊基、正癸基、3，3-二乙基己基、2，2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
术语“烯基”指由至少由两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。优选C2-10烯基，更优选C2-6烯基，最优选C2-4烯基。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
术语“炔基”指至少由两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。优选C2-10炔基，更优选C2-6炔基，最优选C2-4炔基。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至20个碳原子，优选包括3至12个碳原子，更优选环烷基环包含3至10个碳原子，最优选环烷基环包含3至6个碳原子，最佳为环丙基。单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环己烯基。多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。环烷基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至20个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包括3至12个环原子，其中1～4个是杂原子，更优选杂环基环包含3至10个环原子，更优选杂环基环包含5至6个环原子。单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基、四氢呋喃基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。杂环基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元的芳基，更优选苯基和萘基，最优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：
芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
“杂芳基”指具有共轭的π电子体系的5至14元全碳单环或稠合多环基团，进一步包含1至4个杂原子的，其中杂原子选自一个或多个氧、硫或氮。优选为5至10元的杂芳基，更优选为5元至6元的杂芳基，甚至更优选呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含：
杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(未取代的环烷基)，其中烷基、环烷基的定义如上所述。非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自为烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6。
“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基的定义如上所述。
“羟基”指-OH基团。
“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“氧代基”指＝O。
“羧酸”指(烷基)或(环烷基)-C(O)OH。
“磺酰氯”指(烷基)或(环烷基)-S(O)m-X(卤素)。
“异氰酸酯”指(烷基)或(环烷基)-N＝C＝O。
“三光气”指双(三氯甲基)碳酸酯。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
其中R6～R8的定义如通式(I)中所述。
本发明的合成方法
为了完成本发明的合成目的，本发明采用如下的合成技术方案：
一种制备通式(I)化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(Ia)在碱性试剂存在下与R2X反应，得到通式(Ib)化合物；通式(Ib)化合物在催化剂条件下进行卤化反应，得到通式(IA)化合物，催化剂优选为偶氮二异丁腈，卤化试剂优选为N-溴代琥珀酰亚胺；通式(IA)化合物与NH(R4)(CH2)nR5所示的胺反应，得到通式(I)化合物；
其中：X选自卤素，n、D、E、G和R1～R5的定义如通式(I)中所定义如通式(I)中所述；
R3优选为芳基，更优选为苯基，其中所述的芳基任选进一步被一个或多个选自-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代。
一种制备通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(Ic)在催化剂条件下进行卤化反应，得到通式(Id)化合物，催化剂优选为偶氮二异丁腈，卤化试剂优选为N-溴代琥珀酰亚胺；通式(Id)化合物与NH(R4)(CH2)nR5所示的胺反应，得到通式(Ie)化合物；通式(Ie)化合物进一步在三氟醋酸条件下，加热反应得到通式(If)化合物；通式(If)化合物先后与三光气和R1NH2所示的胺反应，得到通式(Ig)化合物；通式(Ig)化合物在碱性条件下进行成环反应，得到通式(IB)化合物；通式(IB)化合物在碱性试剂存在下，与R2X反应，得到通式(I)化合物；
其中：
X选自卤素；Rb选自烷基；
n、D、E、G和R1～R5的定义如通式(I)中所定义如通式(I)中所述；且
R3优选为芳基，更优选为苯基，其中所述的芳基任选进一步被一个或多个选自-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代。
一种制备通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(IIa)在三氟醋酸条件下，加热反应得到通式(IIb)化合物；通式(IIb)化合物先后与三光气和R1NH2所示的胺反应，得到通式(IIc)化合物；通式(IIc)化合物在碱性条件下进行成环反应，得到通式(IId)化合物；通式(IId)化合物在碱性试剂存在下，与R2X反应，得到通式(IIe)化合物；通式(IIe)化合物在催化剂条件下进行卤化反应，得到通式(IIA)化合物，催化剂优选为偶氮二异丁腈，卤化试剂优选为N-溴代琥珀酰亚胺；通式(IIA)化合物与NH(R4)(CH2)nR5所示的胺反应，得到通式(II)化合物；
其中：X选自卤素；Rb选自烷基；
n，R1～R5的定义如通式(I)中所定义如通式(I)中所述；
R3优选为芳基，更优选为苯基，其中所述的芳基任选进一步被一个或多个选自-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代。
一种制备通式(III)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(IIIa)先后与三光气和R1NH2所示的胺反应，得到通式(IIIb)化合物；通式(IIIb)化合物在碱性条件下反应，得到通式(IIIc)化合物；通式(IIIc)化合物在碱性试剂存在下，与R2X反应，得到通式(IIId)化合物；通式(IIId)化合物在催化剂条件下进行卤化反应，得到通式(IIIA)化合物，催化剂优选为偶氮二异丁腈，卤化试剂优选为N-溴代琥珀酰亚胺；通式(IIIA)化合物与NH(R4)(CH2)nR5所示的胺反应，得到通式(III)化合物；
其中：X选自卤素；Rb选自烷基；
n，R1～R5的定义如通式(I)中所定义如通式(I)中所述；
R3优选为芳基，更优选为苯基，其中所述的芳基任选进一步被一个或多个选自-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代。
一种制备通式(IV)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(IVa)可以通过合成路线1～4制备而得，通式(IVa)在碱性试剂存在下与R2X反应，得到通式(IVb)化合物；通式(IVb)化合物在催化剂条件下进行卤化反应，得到通式(IVc)化合物，催化剂优选为偶氮二异丁腈，卤化试剂优选为N-溴代琥珀酰亚胺；通式(IVc)化合物与NH(R4)(CH2)nR5所示的胺反应，得到通式(IVd)化合物；(IVd)化合物在氯化铵存在下，铁将硝基还原为氨基，得到通式(IVA)化合物；通式(IVA)化合物进一步与酰化试剂反应，得到通式(IV)化合物；
其中：X选自卤素，n、D、E、G、Ra、R1～R5的定义如通式(I)中所定义如通式(I)中所述。
上述技术方案中，提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、吡啶、2，6-二甲基吡啶、甲醇钠、六甲基二硅基胺基锂、六甲基二硅基胺基钠，正丁基锂、叔丁醇钾或四丁基溴化铵，所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸铯、氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾；本发明方法中成环优选碱性条件的试剂为有机碱类，更优选甲醇钠。
还原试剂包括但不限于氢气或铁粉；
酰化试剂包括但不限于羧酸、酰氯、磺酰氯、卤代的甲酸甲酯、异氰酸酯或三光气和甲氧胺。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。
本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR化学位移(6)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商：Thermo，型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C 18 150×4.6mm色谱柱)。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)，达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应均能够在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：石油醚和乙酸乙酯体系，D：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：二氯甲烷和丙酮体系，D：乙酸乙酯和二氯甲烷体系，E：乙酸乙酯和二氯甲烷和正己烷，F：乙酸乙酯和二氯甲烷和丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
实施例1
N-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)乙酰胺
第一步
3-氨基-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡吡唑-4-甲酸乙酯
依次将3-(叔丁基氨基)-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯1a(12.10g，34.93mmol，采用公知的方法“Synthesis，1988，(3)，203-207”制备而得)、100mL三氟乙酸加入250mL茄形瓶中，85℃下搅拌反应2.5小时，停止反应。冷却至室温，减压蒸馏，滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH＞7，过滤，滤饼用二氯甲烷溶解，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，残留物加入50mL二氯甲烷和甲醇(V/V＝20∶1)混合溶液打浆，过滤，干燥得到5.30g黄色固体；母液减压蒸馏，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物3-氨基-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯1b(合并共得到6.07g，黄色固体)，产率60.1％。MS m/z(ESI)：291.2[M+1]
第二步
3-(3-(2-氟-3-甲氧基苯基)脲基)-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将3-氨基-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯1b(550mg，1.89mmol)溶于50mL二氯甲烷溶液中，室温搅拌不能全溶，加入三乙胺(0.66mL，4.75mmol)和三光气(225mg，0.76mmol)，搅拌全溶。搅拌30分钟，加入2-氟-3-甲氧基苯胺(283mg，2mmol)，室温搅拌12小时，停止反应。减压蒸馏，残留物加入20mL水，二氯甲烷萃取(50mL×2)，合并有机相，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物3-(3-(2-氟-3-甲氧基苯基)脲基)-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯1c(640mg，白色固体)，产率73.9％。
MS m/z(ESI)：458.1[M+1]
第三步
5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将3-(3-(2-氟-3-甲氧基苯基)脲基)-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯1c(640mg，1.40mmol)加入30mL乙醇溶液中，加入甲醇钠(190mg，3.52mmol)，室温反应3小时，加热至80℃反应1小时，停止反应。冷却至室温，加入3.5mL 1M盐酸溶液，过滤，滤饼依次用水(20mL×1)、乙醇(10mL×1)、甲基叔丁基醚(5mL×1)洗涤，干燥得到标题产物5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1d(536mg，淡黄色固体)，产率93.2％。
MS m/z(ESI)：412.2[M+1]
第四步
7-(2，6-二氟苄基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
依次将5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1d(530mg，1.29mmol)、2-(氯甲基)-1，3-二氟苯(230mg，141mmol)、碘化钾(235mg，1.41mmol)和碳酸钾(196mg，1.42mmol)加入15mL N，N-二甲基甲酰胺中。室温反应24小时，停止反应。减压蒸馏，残留物加入30mL水和20mL甲基叔丁基醚搅拌，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，得到570mg固体；母液分液，有机相依次用水(20mL×3)、饱和氯化钠溶液(20mL×1)洗涤，有机层用用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，残留物用15mL正己烷和甲基叔丁基醚(V/V＝1∶1)洗涤打浆，过滤，滤饼干燥，得到110mg固体，共得到标题产物7-(2，6-二氟苄基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1e(680mg，黄褐色固体)，产率98.3％。
MS m/z(ESI)：538.2[M+1]
第五步
3-(溴甲基)-7-(2，6-二氟苄基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
氩气氛下，依次将7-(2，6-二氟苄基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1e(660mg，1.23mmol)、偶氮二异丁腈(24mg，0.15mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(262mg，1.47mmol)加入20mL氯苯中，85℃反应12小时，停止反应。冷却至室温，依次用饱和氯化钠溶液(15mL×1)、饱和硫代硫酸钠溶液(15mL×1)洗涤，水相用二氯甲烷萃取(40mL×2)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，得到粗品标题产物3-(溴甲基)-7-(2，6-二氟苄基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1f(900mg，淡黄色固体)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI)：616.1[M+1]
第六步
7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将粗品3-(溴甲基)-7-(2，6-二氟苄基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1f(900mg，1.46mmol)溶于3mL二甲胺的四氢呋喃溶液中，室温反应12小时，停止反应。减压蒸馏，得到的残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系D纯化，得到627mg粗品，经薄层色谱法以展开剂体系E纯化，得到标题产物7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲基氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1g(223mg，淡黄色固体)，产率：31.0％。
MS m/z(ESI)：581.3[M+1]
第七步
2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1g(212mg，0.36mmol)溶于8mL甲酸中，加入0.25mL 4M HCl的1，4-二氧六环溶液，加入含10％的钯碳(40mg)，氢气置换三次，常压氢气条件下反应2小时，停止反应。过滤，滤饼用甲醇(20mL×2)洗涤，有机相减压蒸馏，加入50mL二氯甲烷和15mL饱和碳酸氢钠溶液，搅拌10分钟，滴加饱和碳酸氢钠溶液，调节水相pH＞7，分液，水相用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1h(180mg，白色固体)，产率：89.5％。
MS m/z(ESI)：551.3[M+1]
第八步
N-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)乙酰胺
将2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1h(33mg，0.059mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(13μL，0.094mmol)和乙酸酐(7μL，0.072mmol)，室温反应12小时，未反应完全，补加5μL乙酸酐，升至35℃反应2小时，停止反应。加入2mL饱和碳酸氢钠溶液，搅拌10分钟，分液，水相用二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物N-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)乙酰胺1(25mg，白色固体)，产率：71.4％。
MS m/z(ESI)：593.1[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)7.89(d，2H)，7.67(d，2H)，7.36(s，1H)，7.25-7.30(m，1H)，7.19(t，1H)，7.08(t，1H)，7.89-7.94(m，3H)，5.45(s，2H)，3.93(s，3H)，3.69-3.70(m，2H)，2.35(s，6H)，2.25(s，3H).
实施例2
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲
第一步
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲
将2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1h(30mg，0.054mmol)加入5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(0.045mL，0.32mmol)和三光气(6.5mg，0.022mmol)，室温反应1小时，加入甲氧胺(6.8mg，0.081mmol)，室温反应12小时，补加三光气(18mg，0.061mmol)，35℃反应1小时，再加入甲氧胺(100mg，1.20mmol)，35℃反应2小时，停止反应。加入10mL饱和碳酸氢钠，分液，水相用二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲2(12mg，淡黄色固体)，产率：35.3％。
MS m/z(ESI)：624.5[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3).7.90(d，2H)，7.71(s，1H)，7.67(d，2H)，7.20-7.30(m，3H)，7.06-7.08(m，1H)，6.89-6.94(m，3H)，5.45(s，2H)，3.94(s，3H)，3.87(s，3H)，3.86(s，2H)，2.35(s，6H).
实施例3
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲
第一步
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲
将2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1h(26mg，0.047mmol)加入3mL四氢呋喃中，加入异氰酸乙酯(55μL，0.69mmol)，35℃反应12小时，停止反应。减压蒸馏，加入10mL水和20mL二氯甲烷，分液，水相用二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲3(12mg，白色固体)，产率：41.4％。
MS m/z(ESI)：622.5[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3).7.80(d，2H)，7.45(d，2H)，7.22-7.26(m，2H)，7.13-7.15(m，1H)，6.99-7.04(m，1H)，6.84-6.89(m，3H)，6.45(s，1H)，5.40(s，2H)，3.89(s，3H)，3.65(s，2H)，3.33-3.35(m，2H)，2.30(s，6H)，1.20(t，3H).
实施例4
(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)氨基甲酸甲酯
第一步
(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)氨基甲酸甲酯
将2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1h(35mg，0.064mmol)加入5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(0.8mL，5.8mmol)和氯甲酸甲酯(0.5mL，4.14mmol)，35℃反应12小时，停止反应。降至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠溶液，分液，水相用二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)氨基甲酸甲酯4(24mg，白色固体)，产率：61.5％。
MS m/z(ESI)：609.5[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3).7.88(d，2H)，7.55(d，2H)，7.25-7.27(m，1H)，7.18-7.20(m，1H)，7.06-7.08(m，1H)，6.88-6.94(m，3H)，6.78(s，1H)，5.45(s，2H)，3.93(s，3H)，3.85(s，3H)，3.65-3.73(m，2H)，2.35(s，6H).
实施例5
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲
第一步
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲
将乙酸(46mg，0.77mmol)加入1mL甲苯中，加入N，N-二异丙基乙胺(0.2mL，113mmol)和叠氮磷酸二苯酯(0.16mL，0.73mmol)，70℃反应1小时，冰浴冷却，冰浴条件下加入2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1h(30mg，0.050mmol)和2mL二氯甲烷，室温反应12小时，停止反应。加入10mL饱和碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷(25mL×1)萃取，有机相用水(10mL×1)和饱和氯化钠溶液(10mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲5(8mg，白色固体)，产率24.4％。
MS m/z(ESI)：607.9[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)7.79(d，2H)，7.50(d，2H)，7.27-7.30(m，1H)，7.19(t，1H)，7.06(t，1H)，6.880-6.93(m，4H)，5.44(s，2H)，4.95(s，1H)，3.92(s，3H)，3.78(s，2H)，2.88(d，3H)，2.39(s，6H).
实施例6
1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲
第一步
5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
依次将5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮1d(1.90g，4.62mmol)、2-(溴甲基)-1-氟-3-(三氟甲基)苯(1.31g，5.10mmol)、碘化钾(844mg，5.08mmol)和碳酸钾(702mg，5.09mmol)加入54mL N，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌20小时，停止反应。减压蒸馏，加入水和乙醚打浆1小时，过滤，滤饼用乙醚(10mL×3)洗涤，干燥，得到标题产物5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6a(1.91g，白色固体)，产率70.7％。
MS m/z(ESI)：588.1[M+1]
第二步
3-(溴甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6a(1.81g，3.08mmol)、偶氮二异丁腈(61mg，0.37mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(660mg，3.71mmol)溶于53mL氯苯中，氩气置换三次，氩气条件下85℃反应19小时，停止反应。加入饱和硫代硫酸钠溶液(30mL×1)和饱和氯化钠溶液(50mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题产物3-(溴甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6b(2.18g，浅黄色固体)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI)：666.0[M+1]
第三步
3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将粗品3-(溴甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6b(2.18g，3.27mmol)和二甲胺(2M四氢呋喃溶液)(6.8mL 13.6mmol)加入反应瓶中，室温搅拌12小时，停止反应。减压蒸馏，残留物送制备，得到标题产物3-((二甲基氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6c(455mg，白色固体)，产率：22.1％。
MS m/z(ESI)：630.8[M+1]
第四步
2-(4-氨基苯基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
依次将3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6c(200mg，0.32mmol)溶于8mL甲酸中，加入0.25mL 4M盐酸的1，4-二氧六环溶液，加入含10％的Pd/C(50mg)，氢气置换三次，室温条件下反应2小时，停止反应。过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，滤液减压浓缩，加入50mL二氯甲烷和20mL碳酸氢钠溶液，搅拌10分钟，调节水相pH至8，分液，水相用二氯甲烷(25mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物2-(4-氨基苯基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6d(135mg，白色固体)，产率：71.1％。
MS m/z(ESI)：600.9[M+1]
第五步
1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲
将2-(4-氨基苯基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6d(30mg，0.050mmol)溶于1mL二氯甲烷中，加入异氰酸乙酯(0.06mL，0.76mmol)，35℃反应12小时，停止反应。加入5mL饱和碳酸氢钠溶液和20mL二氯甲烷，分液，有机相用水(10mL×1)和饱和氯化钠溶液(5mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲6(15mg，白色固体)，产率：44.1％。
MS m/z(ESI)：671.9[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)7.75(d，2H)，7.51(d，1H)，7.46(d，2H)，7.37-7.40(m，1H)，7.18-7.24(m，2H)，7.15(t，1H)，6.91(t，1H)，6.85(s，1H)，5.60(s，2H)，4.92(s，1H)，3.90(s，3H)，3.69-3.76(m，2H)，3.28-3.35(m，2H)，2.35(s，6H)，1.19(t，3H).
实施例7
1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲
第一步
1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲
将2-(4-氨基苯基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6d(30mg，0.050mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入三乙胺(0.07mL，0.50mmol)和三光气(15mg，0.051mmol)，室温反应1小时，加入甲氧胺(25mg，0.30mmol)，室温反应1小时，停止反应。加入10mL水，用二氯甲烷(25mL×1)萃取，有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×1)、水(10mL×1)和饱和氯化钠溶液(10mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲7(12mg，白色固体)，产率：33.6％。
MS m/z(ESI)：673.8[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)7.85(d，2H)，7.64-7.70(m，3H)，7.53(d，1H)，7.39-7.42(m，1H)，7.23-7.28(m，3H)，7.06(t，1H)，6.92(t，1H)，5.57-5.65(m，2H)，3.93(s，3H)，3.87(s，3H)，3.72(s，2H)，2.36(s，6H).
实施例8
1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲
第一步
1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲
将乙酸(62mg，1.03mmol)加入1mL甲苯中，加入N，N-二异丙基乙胺(0.28mL，1.58mmol)，加入叠氮磷酸二苯酯(0.20mL，0.98mmol)，70℃反应1.5小时，加入2-(4-氨基苯基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮6d(30mg，0.050mmol)和1mL二氯甲烷，室温反应12小时，停止反应。加入5mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(25mL×1)萃取，有机相用水(10mL×1)和饱和氯化钠溶液(10mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到粗品标题产物，再用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲8(13mg，白色固体)，产率39.4％。。
MS m/z(ESI)：658.2[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)7.76(d，2H)，7.51-7.53(m，1H)，7.47(d，2H)，7.39-7.40(m，1H)，7.24(t，1H)，7.19(t，1H)，7.04(t，1H)，6.89(t，1H)，6.74(m，1H)，5.56-5.64(m，2H)，4.85(s，1H)，3.92(s，3H)，3.77(s，2H)，2.88(d，3H)，2.38(s，6H).
实施例9
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲
第一步
5-(溴甲基)-3-(叔丁氨基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将3-(叔丁氨基)-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯1a(23g，66.40mmol)、偶氮二异丁腈(2.18g，13.28mmol)、N-溴代丁二酰亚胺(14.18g，79.68mmol)和400mL氯苯加入1L单口反应瓶中，搅拌均匀。氩气置换三次，升温至85℃，反应64小时，停止反应。将反应液减压浓缩，加入300mL二氯甲烷，依次用水(100mL×2)、饱和硫代硫酸钠溶液(100mL×2)和饱和氯化钠溶液(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到标题产物粗产品5-(溴甲基)-3-(叔丁氨基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯9a(25g，棕黄色油状物)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：427.1[M+2]
第二步
3-(叔丁氨基)-5-((二甲氨基)甲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将粗品5-(溴甲基)-3-(叔丁氨基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯9a(25g，58.78mmol)、二甲胺四氢呋喃溶液(88mL，176.35mmol)和120mL四氢呋喃加入500mL单口反应瓶中，搅拌溶解。室温搅拌3小时，停止反应。将反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化，得到标题产物3-(叔丁氨基)-5-((二甲氨基)甲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯9b(6g，棕黄色油状物)，产率26.2％。
MS m/z(ESI)：390.2[M+1]
第三步
3-氨基-5-((二甲氨基)甲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯
将3-(叔丁氨基)-5-((二甲氨基)甲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯9b(6g，15.41mmol)和80mL三氟乙酸加入100mL单口反应瓶中，搅拌均匀。升温至回流反应1小时，停止反应。将反应液减压浓缩，加入50mL二氯甲烷，滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH大于7，有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残余物中加入100mL甲醇和20mL二氯甲烷，搅拌溶解，加入碳酸钾(6.37g，46.16mmol)，室温搅拌17小时。过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3-氨基-5-((二甲氨基)甲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯9c(3.30g，黄色固体)，产率67.1％。
MS m/z(ESI)：320.2[M+1]
第四步
5-((二甲氨基)甲基)-3-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯
将3-氨基-5-((二甲氨基)甲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯9c(3.30g，10.33mmol和100mL二氯甲烷加入250mL单口反应瓶中，搅拌均匀，加入三乙胺(5.8mL，41.32mmol)和三光气(1.84g，6.20mmol)，室温搅拌1小时。加入3-氨基-6-甲氧基哒嗪(1.94g，15.50mmol，采用公知的方法“Journal of Medicinal Chemistry，2006，49(14)，4409-4424”制备而得)，加完后室温搅拌反应2小时，停止反应。反应液中加入200mL水，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物5-((二甲氨基)甲基)-3-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯9d(2.80g，黄色固体)，产率57.6％。
MS m/z(ESI)：470.9[M+1]
第五步
3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将5-((二甲氨基)甲基)-3-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯9d(2.80g，5.95mmol)和120mL甲醇加入250mL单口反应瓶中，搅拌均匀，加入甲醇钠(1.61g，29.76mmol)。升温至50℃，搅拌反应4小时，停止反应。将反应液减压浓缩，加入100mL水，滴加浓盐酸调节pH至5～6，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮9e(1.80g，黄色固体)，产率69.0％。
MS m/z(ESI)：438.9[M+1]
第六步
7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮9e(900mg，2.05mmol)和50mL N，N-二甲基甲酰胺加入100mL单口反应瓶中，搅拌均匀，加入2，6-二氟氯苄(367mg，2.26mmol)和碳酸钾(850mg，6.16mmol)。升温至40℃搅拌反应17小时，停止反应。反应液中加入250mL水，搅拌20分钟，过滤，滤饼真空干燥，得到标题产物7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮9f(1.10g，黄色固体)，产率94.9％。
MS m/z(ESI)：564.9[M+1]
第七步
2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮9f(1g，1.77mmol)、10％钯碳(200mg)和80mL甲醇加入250mL单口反应瓶中，搅拌均匀。氢气置换6次，室温搅拌17小时，停止反应。将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮9g(785mg，黄色固体)，产率82.9％。
MS m/z(ESI)：534.9[M+1]
第八步
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲
将醋酸(483mg，8.04mmol)和15mL甲苯加入600mL高压釜中，搅拌溶解，依次加入N，N-二异丙基乙胺(2.1mL，12.07mmol)和叠氮磷酸二苯酯(2.22g，8.07mmol)。升温至75℃，反应1.5小时。冰水浴0℃下加入10mL 2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮9g(480mg，0.80mmol)的四氢呋喃溶液，加完后升温至55℃，反应16小时，停止反应。加入20mL二氯甲烷和20mL水，分液，有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液(50mL×1)、水(50mL×1)和饱和氯化钠溶液(50mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到粗产品，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到粗产物(387mg，褐色固体)，粗产率81.3％。将两个批次的粗产物合并，共823mg，用薄层色谱法以展开剂体系F纯化，所得产物用甲醇溶解，减压浓缩至有固体析出，静置析晶，得到标题产物1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲9(450mg，白色固体)，总产率36.0％。
MS m/z(ESI)：592.3[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.17(s，1H)，7.54(s，1H)，7.42-7.45(m，4H)，7.24-7.30(m，2H)，6.88(t，2H)，5.95(s，1H)，5.38(s，2H)，4.23(s，3H)，3.69(s，2H)，2.91(s，3H)，2.33(s，6H).
实施例10
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲
第一步
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲
将2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮9g(22mg，0.041mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入异氰酸乙酯(0.1mL，1.26mmol)，35℃反应12小时，停止反应。加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷(30mL×1)萃取，有机相依次用水(10mL×1)、饱和氯化钠溶液(10mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲10(10mg，白色固体)，产率：40.0％。
MS m/z(ESI)：606.2[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.07(s，1H)，7.55(d，1H)，7.38-7.43(m，4H)，7.25-7.28(m，2H)，6.858(t，2H)，5.87(t，1H)，5.38(s，2H)，4.23(s，3H)，3.50(s，2H)，3.37(t，2H)，2.25(s，6H)，1.23(t，3H).
实施例11
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲
第一步
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲
将2-(4-氨基苯基)-7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮9g(100mg，0.18mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入N，N-二异丙基乙胺(0.5mL，2.90mmol)和三光气(46mg，0.15mmol)室温反应45分钟，加入甲氧胺盐酸盐(92mg，112mmol)，40℃反应12小时，停止反应。加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷(25mL×1)萃取，有机相依次用水(10mL×1)、饱和氯化钠溶液(10mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到粗品合并批次共62mg粗品，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化2次，得到标题产物1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲11(45mg，白色固体)，产率：24.7％。
MS m/z(ESI)：608.3[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)7.90(d，2H)，7.73(s，1H)，7.68(d，2H)，7.41(d，1H)，7.26-7.30(m，1H)，7.22(s，1H)，7.13(s，1H)，6.92(t，2H)，5.44(s，2H)，4.21(s，3H)，3.88(s，3H)，3.70(s，2H)，2.35(s，6H).
实施例12
1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲
第一步
3-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将3-氨基-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯1b(10.80g，37.20mmol)溶于500mL二氯甲烷中，依次加入三乙胺(20mL，144mmol)和三光气(5.20g，17.5mmol)，室温反应1小时，加入3-氨基-6-甲氧基哒嗪(6.60g，52.3mmol)，室温反应12小时，停止反应。合并之前样品，加入100mL水，分液，有机相依次用水(100mL×1)和饱和氯化钠(100mL×1)溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化，得到标题产物3-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯12a(8.72g，淡黄色固体)，产率：53.0％。
第二步
5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将3-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯12a(8.72g，19.70mmol)溶于150mL甲醇中，加入甲醇钠(2.70g，50mmol)，加热至55℃反应12小时，停止反应。减压蒸馏，滴加1M盐酸溶液调节pH＜7，过滤，滤饼依次用水(30mL×1)、甲醇(30mL×1)和乙醚(20mL×1)洗涤，真空干燥，得到粗品标题产物5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12b(8.34mg，淡黄色固体)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI)：396.0[M+1]
第三步
7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将2-(溴甲基)-1-氟-3-(三氟甲基)苯(购买于国药集团化学试剂有限公司，产品编号XW239870821)(308mg，1.20mmol)溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，依次加入粗品5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12b(395mg，1mmol)和碳酸钾(276mg，2mmol)，室温反应2小时，停止反应。将反应液倒入100mL水中，过滤，滤饼干燥得到标题产物7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12c(465mg，黄色固体)，产率：81.4％。
MS m/z(ESI)：570.0[M-1]
第四步
3-(溴甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
依次将7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-3-甲基-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12c(465mg，0.81mmol)、偶氮二异丁腈(13mg，0.081mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(174mg，0.97mmol)和20mL氯苯加入100mL反应瓶中，氩气气氛下，恒温80℃反应17小时，停止反应。减压蒸馏，得到粗品标题产物3-(溴甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12d(600mg，黄色油状物)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：650.1[M+1]
第五步
3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将粗品3-(溴甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12d(15mg，0.033mmol)溶于20mL四氢呋喃中，加入2M二甲胺(1mL，2.03mmol)的四氢呋喃溶液，室温反应2小时，停止反应。减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12e(85mg，黄色固体)，产率：17.0％。
MS m/z(ESI)：615.2[M+1]
第六步
2-(4-氨基苯基)-3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
将3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2-(4-硝基苯基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12e(100mg，0.14mmol)溶于5mL甲酸中，加入10％钯碳(48mg)，常压下置换氢气三次，氢气氛下室温反应3小时，停止反应。反应液过滤，滤液倒入10mL水中，滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH＞7，用二氯甲烷(25mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物2-(4-氨基苯基)-3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12f(50mg，白色固体)，产率：53.0％。
MS m/z(ESI)：585.2[M+1]
第七步
1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲
将乙酸(51mg，085mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.22mL，1.28mmol)溶于2mL甲苯中，加入叠氮磷酸二苯酯(236mg，0.86mmol)，75℃反应1.5小时，加入2mL2-(4-氨基苯基)-3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮12f(15mg，0.033mmol)的四氢呋喃溶液，50℃反应12小时，停止反应。加入10mL饱和碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷(20mL×1)萃取，收集有机相，依次用水(10mL×1)和饱和氯化钠(10mL×1)洗涤，减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(3-((二甲氨基)甲基)-7-(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲12(20mg，白色固体)，产率：36.3％。MS m/z(ESI)：642.3[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.19(s，1H)，7.56(d，1H)，7.43-7.46(m，3H)，7.34-7.39(m，3H)，7.27(d，1H)，7.16(t，1H)，6.05(s，1H)，5.48(s，2H)，4.22(s，3H)，3.48(s，2H)，2.93(d，3H)，2.21(s，6H).
实施例13
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-乙基脲
第一步
(E)-4-(二甲氨基)-3-(4-硝基苯基)-3-丁烯-2-酮
将4-硝基苯丙酮13a(3.8g，21.21mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛加入50mL烧瓶中，100℃反应30分钟，停止反应。加入150mL二氯甲烷搅拌，得到的化合物经过用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(E)-4-(二甲氨基)-3-(4-硝基苯基)3-丁烯-2-酮13b(3g，黄色固体)，产率：60.5％。MS m/z(ESI)：235.0[M+1]
第二步
3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯
依次将(E)-4-(二甲氨基)-3-(4-硝基苯基)3-丁烯-2-酮13b(1.50g，6.48mmol)和2-氨基乙酰乙酸乙酯盐酸盐(1.40g，7.78mmol)溶于40mL乙酸中，室温反应16小时，100℃反应5小时，停止反应。减压蒸馏，加入120mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液(50mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用15mL乙酸乙酯打浆，过滤，滤饼干燥，得到标题产物3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯13c(412mg，黄色固体)，产率24.5％。
MS m/z(ESI)：273.1[M-1]
第三步
1-氨基-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯
将3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯13c(412mg，1.50mmol)溶于6mLN，N-二甲基甲酰胺中，冰浴条件下，加入氢化钠(72mg，1.80mmol)，室温反应30分钟，加入20mL过氯胺溶液，室温反应2小时，停止反应。加入50mL饱和硫代硫酸钠溶液，搅拌10分钟，分层，水相用乙醚(30mL×3)萃取，有机相用饱和氯化钠溶液(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物1-氨基-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯13d(381mg，黄色固体)，产率87.7％。
MS m/z(ESI)：290.2[M+1]
第四步
1-(3-(2-氟-3-甲氧基苯基)脲基)-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯
将1-氨基-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯13d(381mg，1.30mmol)加入30mL二氯甲烷中，搅拌溶解，加入三乙胺(328mg，3.25mmol)和三光气(157mg，0.53mmol)，室温反应30分钟，加入2-氟-3-甲氧基苯胺(202mg，1.43mmol)，室温反应2小时，停止反应。过滤，滤饼依次用水(10mL×2)和乙酸乙酯(2mL×3)洗涤，干燥，得到标题产物1-(3-(2-氟-3-甲氧基苯基)脲基)-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯13e(296mg，黄色固体)，产率49.9％。
MS m/z(ESI)：457.3[M+1]
第五步
3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲基-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮
将1-(3-(2-氟-3-甲氧基苯基)脲基)-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯13e(290mg，0.64mmol)和氢氧化钠(128mg，3.20mmol)溶液10ml二氯甲烷中，80℃反应2小时，停止反应。冷却至室温，滴加1M盐酸溶液调节pH至3～4，有固体析出，过滤，滤饼依次用水(20mL×3)和乙醇(10mL×1)洗涤，得到标题产物3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲基-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13f(192mg，灰色固体)，产率73.3％。
MS m/z(ESI)：411.0[M+1]
第六步
1-(2，6-二氟苄基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲基-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮
将3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲基-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13f(192mg，0.47mmol)和2-(氯甲基)-1，3-二氟苯(84mg，0.52mmol)和碳酸钾(162mg，1.75mmol)加入10mL N，N-二甲基甲酰胺中。50℃反应16小时，停止反应。减压蒸馏，残留物加入20mL水，用二氯甲烷(20mL×1)萃取，水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(2，6-二氟苄基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲基-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13g(160mg，黄色固体)，产率63.7％。
MS m/z(ESI)：537.0[M+1]
第七步
5-(溴甲基)-1-(2，6-二氟苄基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮
将1-(2，6-二氟苄基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲基-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13g(120mg，0.22mmol)、偶氮二异丁腈(8mg，0.044mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(47mg，0.26mmol)加入5mL氯苯中，氩气气氛下，85℃反应16小时，停止反应。冷却至室温，减压蒸馏，残留物加入10mL水，用二氯甲烷(10mL×1)萃取，水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取，收集有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，得到标题产物5-(溴甲基)-1-(2，6-二氟苄基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13h(130mg，黄色固体)，产率96.2％。
MS m/z(ESI)：616.0[M+1]
第八步
1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮
将粗品5-(溴甲基)-1-(2，6-二氟苄基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13h(130mg，0.21mmol)和N，N-二异丙基乙胺(81mg，0.63mmol)溶于5mL四氢呋喃中，加入1.6mL二甲胺的四氢呋喃溶液，0～5℃反应1小时，停止反应。减压蒸馏，得到的残留物用用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13i(40mg，黄色固体)，产率：33.1％。
MS m/z(ESI)：580.2[M+1]
第九步
6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮
将1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13i(40mg，0.069mmol)、氯化铵(30mg，0.55mmol)和铁(16mg，0.28mmol)溶于5mL乙醇和水(V/V＝4∶1)混合溶剂中，80℃反应1小时，停止反应。加入20mL水，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，收集有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13j(20mg，黄色固体)，产率：52.6％。
MS m/z(ESI)：550.2[M+1]
第十步
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-乙基脲
将6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13j(20mg，0.036mmol)和异氰酸乙酯(13mg，0.18mmol)加入5mL四氢呋喃的30mL封管中。50℃反应16小时，停止反应，减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-乙基脲13(15mg，白色固体)，产率：68.1％。
MS m/z(ESI)：621.3[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6).7.87-7.77(m，4H)，7.69(s，1H)，7.58-7325(m，4H)，7.12-7.08(m，1H)，6.80-6.71(m，1H)，4.42(s，2H)，3.83(s，3H)，3.45-3.50(m，2H)，3.20-3.31(m，2H)，2.16(s，6H)，1.12-1.03(m，3H)
实施例14
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲基脲
第一步
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲基脲
将乙酸(70mg，112mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.32mL，1.80mmol)加入1mL甲苯中，加入叠氮磷酸二苯酯(0.25mL，1.20mmol)，70℃反应1.5小时，冰浴条件下加入6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13j(30mg，0.054mmol)的1mL二氯甲烷溶液，室温反应12小时。加入15mL水，用二氯甲烷(30mL×1)萃取，有机相依次用饱和碳酸氢钠(10mL×1)、水(10mL×1)和饱和氯化钠溶液(10mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化二次，得到标题产物1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲基脲14(9mg，白色固体)，产率27.3％。
MS m/z(ESI)：606.9[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.86(s，1H)，7.55(s，2H)，7.24-7.35(m，3H)，7.68-7.14(m，6H)，6.21(s，1H)，5.60-5.74(m，2H)，4.54-4.59(m，2H)，3.97(s，3H)，2.77(s，3H)，2.55(s，6H).
实施例15
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲氧基脲
第一步
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲氧基脲
将6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮13j(55mg，0.10mmol)溶于4mL四氢呋喃中，加入对硝基苯基氯甲酸酯(30mg，0.15mmol)和吡啶(32mg，0.40mmol)，30℃反应3小时，加入甲氧基胺盐酸盐(25mg，0.30mmol)，封口反应8小时，停止反应。减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化三次，得到标题产物1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲氧基脲15(5mg，黄色固体)，产率：8.1％。
MS m/z(ESI)：623.4[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.90-7.87(m，2H)，7.85-7.80(m，2H)，7.60(s，1H)，7.55-7.25(m，4H)，7.09-7.02(m，1H)，6.71-6.65(m，1H)，4.50(s，2H)，3.84(s，3H)，3.67(s，3H)，3.54(s，2H)，2.15(s，6H)
实施例16
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲基脲
第一步
3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯
将3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯13c(4.30g，15.70mmol)溶于200mL二氯甲烷中，依次加入三乙胺(21.7mL，157mmol)、4-二甲氨基吡啶(192mg，1.57mmol)和二羰基二叔丁酯(5.14g，23.50mmol)，室温反应12小时，停止反应。减压蒸馏，加入100mL水，用二氯甲烷(50mL×4)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(150mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯16b(4g，黄色固体)，产率：68.1％。
MS m/z(ESI)：273.1[M-100]
第二步
3-(溴甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯
依次将3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯16b(4g，10.70mmol)、偶氮二异丁腈(351mg，2.14mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(2.28g，12.80mmol)溶于40mL氯苯中，氩气气氛下，80℃反应16小时，停止反应。冷却至室温，减压蒸馏，真空抽干，得到标题产物3-(溴甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯16c(5.2g，黄色固体)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI)：453.0[M-100]
第三步
3-((二甲氨基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯
将3-(溴甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯16c(4.80g，10.70mmol)溶于50mL四氢呋喃中，加入二甲胺的四氢呋喃溶液(26mL，53.50mmo1)，室温反应3小时，停止反应。减压蒸馏，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物3-((二甲氨基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯16d(3g，黄色固体)，产率：67.4％。
MS m/z(ESI)：317.0[M-100]
第四步
3-((二甲氨基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯
将3-((二甲氨基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯16d(3g，7.18mmol)溶于30mL 2M盐酸甲醇溶液中，室温反应3小时，停止反应。减压蒸馏，残余物加入30mL饱和碳酸钠溶液，二氯甲烷萃取(30mL×4)，收集有机相，用饱和氯化钠溶液(60mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，得到标题产物3-((二甲氨基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯16e(2g，黄色固体)，产率：90.9％。
MS m/z(ESI)：318.1[M+1]
第五步
1-氨基-3-((二甲胺基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯
将3-((二甲氨基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯16e(1.8g，5.68mmol)溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入含60％的钠氢(307mg，7.66mmol)，室温反应30分钟，加入50mL氯胺，室温反应2小时，停止反应。加入200mL水，用乙醚萃取(50mL×3)，收集有机相，用饱和氯化钠溶液(100mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，得到标题产物1-氨基-3-((二甲胺基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯16f(620mg，黄色固体)，产率：32.9％。
MS m/z(ESI)：333.2[M+1]
第六步
3-((二甲氨基)甲基)-1-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯
将1-氨基-3-((二甲胺基)甲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯16f(420mg，1.26mmol)溶于15mL二氯甲烷中，依次加入三乙胺(382mg，3.78mmol)、三光气(131mg，0.44mmol)和3-氨基-6-甲氧基哒嗪(236mg，1.89mmol)，室温反应2小时，停止反应。减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物3-((二甲氨基)甲基)-1-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯16g(298mg，黄色固体)，产率：30.2％。
第七步
5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮
将3-((二甲氨基)甲基)-1-(3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)脲基)-4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯16g(260mg，0.54mmol)溶于10mL甲醇中，加入甲醇钠(151mg，2.69mmol)，50℃反应3小时，停止反应。减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮16h(76mg，黄色固体)，产率：32.3％。
MS m/z(ESI)：438.3[M+1]
第八步
1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮
将5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮16h(78mg，0.18mmol)、2-氯甲基-1，3-二氟苯基(35mg，0.21mmol)和碳酸钾(37mg，0.26mmol)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，50℃反应16小时，停止反应。减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮16i(72mg，黄色固体)，产率：72.0％。
MS m/z(ESI)：564.1[M+1]
第九步
6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮
将1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-6-(4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮16i(72mg，0.13mmol)、铁(29mg，0.51mmol)和氯化铵(55mg，1.02mmol)溶于20mL乙醇和水(V/V＝4∶1)混合溶剂中，80℃反应1小时，停止反应。冷却至室温，加入20mL水，二氯甲烷萃取(10mL×4)，收集有机相，饱和氯化钠洗涤(10mL×1)，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮16j(25mg，土黄色固体)，产率：42.8％。
MS m/z(ESI)：534.3[M+1]
第十步
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲基脲
将乙酸(51mg，0.84mmol)加入25mL封管中，依次加入2mL甲苯、N，N-二异丙基乙胺(163mg，1.26mmol)和叠氮磷酸二苯酯(231mg，0.84mmol)，封管反应1小时，冷却至0℃，加入2mL 6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮16j(45mg，0.084mmol)的二氯甲烷溶液，封管40℃反应16小时，停止反应。减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲基脲16(18mg，白色固体)，产率：36.0％。
MS m/z(ESI)：591.3[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6).7.92-7.87(m，2H)，7.77-7.70(m，2H)，7.69(s，1H)，7.60-7.55(m，1H)，7.25-7.13(m，2H)，7.05-6.99(m，1H)，6.79-6.71(m，1H)，4.48(s，2H)，4.06(s，3H)，3.54(s，2H)，2.75(s，3H)，2.16(s，6H)
实施例17
1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-羟基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲
第一步
将1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲11(122mg，0.20mmol)溶于6mL四氢呋喃中，搅拌至全溶，加入40％氢溴酸(103mg，0.51mmol)，室温搅拌12小时，停止反应。反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，搅拌5分钟，萃取，收集有机相，用硅胶柱色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(7-(2，6-二氟苄基)-3-((二甲氨基)甲基)-5-(6-羟基哒嗪-3-基)-4，6-二氧代-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲氧基脲17(16mg，白色固体)，产率：13.5％。
MS m/z(ESI)：594.3[M+1]
1HNMR(400MHz，DMSO-d6).13.36-13.18(m，1H)，9.69(s，1H)，9.21-9.14(m，1H)，7.83-7.76(m，2H)，7.71-7.64(m，2H)，7.52-7.46(m，1H)，7.46-7.36(m，1H)，7.09(s，3H)，5.32-5.21(m，2H)，3.71-3.62(m，5H)，2.17(s，6H)
实施例18
1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲氧基脲
第一步
将6-(4-氨基苯基)-1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-2，4(1H，3H)-二酮16j(170mg，0.319mmol)、4-硝基苯基甲氧基氨基甲酸甲酯(81mg，0.382mmol，采用专利申请“WO 2011090935”公开的方法制备而得)、N，N-二异丙基乙胺(109μL，0.638mmol)溶于10mL四氢呋喃中，室温反应4小时，停止反应。减压蒸馏，残留物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1-(4-(1-(2，6-二氟苄基)-5-((二甲氨基)甲基)-3-(6-甲氧基哒嗪-3-基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基)苯基)-3-甲氧基脲18(15mg，黄色固体)，产率：7.8％。
MS m/z(ESI)：607.2[M+1]
测试例：
生物学评价
测试例1、本发明化合物对人源GnRHr(GnRH受体)活性的测定
体外GnRHr蛋白活性通过以下的方法进行测试。
该方法用来测定本发明中的化合物对人源GnRHr/CHO稳转株细胞中所表达的人源GnRHr蛋白活性的抑制作用。
一、实验材料及仪器
1、Fluo-4NW Calcium Assay Kits(F36206，invitrogen)
2，DMEM/F12(SH30023.01B，thermo)
3，G418(11811-031，invitrogen)
4、FlexStation3酶标仪
二、实验步骤
将含人源GnRHr基因的哺乳动物表达载体，用含有PlusTM的LTX试剂转入CHO细胞；隔天开始加抗生素筛选，挑选单克隆细胞系。
将人源GnRHr/CHO稳转株细胞以25000个/孔的密度种于96孔板中。隔天，去除培养基，每孔加入100μL含Fluo-4染料的上样缓冲液，37℃，孵育30分钟。到时间后，把板子移至室温环境平衡10分钟。将每个化合物用DMSO配成100μM，10μM，1μM，0.1μM，0.01μM，0.001μM，0.0001μM等7个浓度，每孔加入1μL，室温孵育10分钟。用flexstation 3酶标仪进行检测，由机器自动加入50μL的GnRH多肽刺激液，立刻在494/516nM处读值。化合物的IC50值可采用不同浓度对应的荧光值，经软件计算得到。
本发明中化合物对人源GnRHr抑制活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表1。
表1本发明中化合物对人源GnRHr活性抑制IC50
实施例编号 IC50(nM)
2 1.46
3 0.90
5 0.66
6 0.96
7 0.49
8 0.60
9 0.42
10 0.66
11 4.95
12 2.24
13 0.92
14 0.11
15 0.43
16 2.32
结论：本发明化合物对人源GnRHr活性具有明显的抑制作用。
测试例2、本发明中化合物对猴源(monkey)GnRHr抑制活性的测定
该方法用来测定本发明中的化合物对猴源GnRHr/CHO稳转株细胞中所表达猴源的GnRHr蛋白活性的抑制作用。
一、实验材料及仪器
1、Fluo-4NW Calcium Assay Kits(F36206，invitrogen)
2，DMEM/F12(SH30023.01B，thermo)
3，G418(11811-031，invitrogen)
4、FlexStation3酶标仪
二、实验步骤
将含猴源GnRHr基因的哺乳动物表达载体，用含有PlusTM的LTX试剂转入CHO细胞；隔天开始加抗生素筛选，挑选单克隆细胞系。
将猴源GnRHr/CHO稳转株细胞以25000个/孔的密度种于96孔板中。隔天，去除培养基，每孔加入100μL含Fluo-4染料的上样缓冲液，37℃，孵育30分钟。到时间后，把板子移至室温环境平衡10分钟。将每个化合物用DMSO配成100μM，10μM，1μM，0.1μM，0.01μM，0.001μM，0.0001μM等7个浓度，每孔加入1μL，室温孵育10分钟。用Flexstation 3酶标仪检测，由机器自动加入50μL的GnRH多肽刺激液，立刻在494/516nM处读值。化合物的IC50值可采用不同浓度对应的荧光值，经软件计算得到。
本发明中化合物对猴源GnRHr抑制活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表2。
表2本发明中化合物对猴源GnRHr活性抑制的IC50
实施例编号 IC50(nM)
9 23.22
11 78.57
结论：本发明化合物对猴源GnRHr活性具有明显的抑制作用。
测试例3、本发明中化合物对兔源(Rabbit)GnRHr抑制活性的测定
该方法用来测定本发明中的化合物对兔源GnRHr/CHO稳转株细胞中所表达兔源的GnRHr蛋白活性的抑制作用。
一、实验材料及仪器
1、Fluo-4NW Calcium Assay Kits(F36206，invitrogen)
2，DMEM/F12(SH30023.01B，thermo)
3，G418(11811-031，invitrogen)
4、FlexStation3酶标仪
二、实验步骤
将含兔源GnRHr基因的哺乳动物表达载体，用含有PlusTM的LTX试剂转入CHO细胞；隔天开始加抗生素筛选，挑选单克隆细胞系。
将兔源GnRHr/CHO稳转株细胞以25000个/孔的密度种于96孔板中。隔天，去除培养基，每孔加入100μL含Fluo-4染料的上样缓冲液，37℃，孵育30分钟。到时间后，把板子移至室温环境平衡10分钟。将每个化合物用DMSO配成100μM，10μM，1μM，0.1μM，0.01μM，0.001μM，0.0001μM等7个浓度，每孔加入1μL，室温孵育10分钟。用Flexstation 3酶标仪进行检测，由机器自动加入50μL的GnRH多肽刺激液，立刻在494/516nM处读值。化合物的IC50值可采用不同浓度对应的荧光值，经软件计算得到。
本发明中化合物对兔源GnRHr抑制活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表3。
表3本发明中化合物对兔源GnRHr活性抑制的IC50
实施例编号 IC50(nM)
8 0.27
9 0.24
11 0.57
结论：本发明化合物对兔源GnRHr活性具有明显的抑制作用。
药代动力学评价
测试例4、本发明实施例2、实施例3、实施例5、实施例9、实施例10、实施例11和实施例13化合物的大鼠药代动力学测试
1、摘要
以SD大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了大鼠灌胃给予实施例2、实施例3、实施例5、实施例9、实施例10、实施例11和实施例13化合物后，以及静脉注射实施例11化合物不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明的化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
2、试验方案
2.1试验药品
实施例2、实施例3、实施例5、实施例9、实施例10、实施例11和实施例13化合物
2.2试验动物
健康成年SD大鼠32只，分成8组，每组4只，雌雄各半，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016。
2.3药物配制
称取适量样品，加入0.5％CMC-Na，超声制成1mg/ml混悬液；
称取适量药物，加入0.5ml DMSO和0.5ml吐温80使溶解，后加生理盐水至终体积。
2.4给药
SD大鼠32只，分成8组，每组4只，雌雄各半，禁食一夜后分别灌胃给药和静脉注射，灌胃给药剂量为10mg/kg或30mg/kg，静脉注射给药剂量为5mg/kg，给药体积10ml/kg。
3、操作
于给药前及给药后0.5、1、2、4、6、8、11、24小时采血0.1ml，置于肝素化试管中，3500rpm离心10分钟，分离血浆，于-20℃保存。给药后2小时进食。
用LC/MS/MS法测定灌胃给药后大鼠血浆中的待测化合物含量。
4、药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如下表4：
结论：本发明化合物的大鼠灌胃药代吸收良好，具有明显的药代吸收效果，特别是实施例11具有较好的口服生物利用度。
测试例5、本发明实施例11的兔药代动力学测试
1、摘要
以兔为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了兔灌胃和静脉注射给予实施例11和实施例后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明的化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
2、试验方案
2.1试验药品
实施例11化合物
2.2试验动物
新西兰兔，6只，雌性，平均分成2组；购自捷思杰公司。
2.3药物配制
称取适量样品，加入0.5％CMC-Na，超声制成3mg/ml混悬液；
称取适量药物，加入1ml DMSO和1ml吐温80使溶解，后加生理盐水至终体积。
2.4给药
新西兰兔，6只，雌性，平均分成2组，禁食一夜后分别灌胃给药和静脉注射，灌胃给药剂量为30mg/kg，给药体积5ml/kg，静脉注射给药剂量为5mg/kg，给药体积2ml/kg。
3、操作
静脉注射给药组于给药前及给药后5分钟，0.25，0.5，1，2，4，8，11，24小时采血0.2ml，置于肝素抗凝试管中，3500rpm离心10分钟分离血浆，于-20℃保存；灌胃给药组于给药前及给药后0.5，1，2，4，6，8，11，24小时采血，处理方法同静脉注射给药组。用LC/MS/MS法测定灌胃和静脉注射给药后兔血浆中的待测化合物含量。
4、药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如下表5：
结论：本发明化合物11在兔体内吸收较好，具有较好的口服生物利用度。
测试例6、本发明实施例11的犬药代动力学测试
1、摘要
以比格犬为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了比格犬灌胃和静脉注射给予实施例11化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明的化合物在比格犬体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
2、试验方案
2.1试验药品
实施例11化合物
2.2试验动物
健康成年比格犬8只，分成2组，雌雄各半，购自苏州西山中科实验动物有限公司。
2.3药物配制
称取适量药物，加入0.5％CMC-Na，超声制成1.0mg/ml混悬液；
称取适量药物，加入5ml DMSO和5ml吐温80使溶解，后加90ml生理盐水至终体积。
2.4给药
健康成年比格犬8只，分成2组，雌雄各半，禁食一夜后分别灌胃给药和静脉注射，灌胃给药剂量为5mg/kg，给药体积5ml/kg，静脉注射给药剂量为2mg/kg，给药体积2ml/kg。
3、操作
灌胃给药组于给药前及给药后0.25，0.5，1，2，4，6，8，12，24h由前肢静脉采血1.0ml，置于肝素抗凝试管中，3500rpm离心10分钟分离血浆，于-20℃保存；给药后2小时进食。静脉给药组于给药前及给药后5分钟，0.25，0.5，1，2，4，6，8，12，24h采血，样品处理过程同前，用LC/MS/MS法测定灌胃和静脉注射给药后兔血浆中的待测化合物含量。
4、药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如下表6：
结论：本发明化合物11在比格犬体内吸收较好，具有较好的口服生物利用度。
测试例7本发明实施例11化合物大鼠体内药效测试
1、摘要
采用家兔建立子宫内膜异位症模型，进行实施例11化合物的治疗家兔子宫内膜异位药效学筛选试验。
2、试验方案
2.1试验药品
实施例11化合物
2.2试验动物
新西兰兔，15只，雌性，平均分成3组，购自上海市松江区松联实验动物场，动物生产许可证号：SYXK(沪)2013-0027。
2.3操作方法
新西兰兔适应性饲养、检疫7天，术前连续二天，每天一次皮下注射苯甲酸雌二醇注射液30μg/kg；模型建立时以3％戊巴比妥钠溶液麻醉，无菌剖腹，游离一侧子宫，结扎子宫系膜内的血管，切下一段子宫，在(温)生理盐水的平皿中，纵行剖开子宫，分离肌层与内膜，取一段约0.5cm×0.5cm内膜，缝于腹壁内富含血管处，内膜面朝向腹腔。植膜三周后，剖腹，检查移植内膜大小，将造模成功的15只动物随机分为3组，每组5只，分别为溶媒对照组、实施例11化合物低剂量组(10mg/kg)低和高剂量组(30mg/kg)，给药体积为5ml/kg，1次/天，造模成功后连续灌胃给药28天，测量体重和异位内膜的体积，评价本发明化合物的对于内膜的活性。
2.4结果：
兔子宫内膜异位模型给予30mg/kg剂量的实施例11化合物四周后，并灌胃给予等量的0.5％CMC-Na作对照，可以显著抑制异位内膜的增长，10mg/kg剂量的实施例11化合物对异位内膜体积抑制不明显，因此，实施例11的兔子宫内膜异位模型的毒理的NOAEL剂量(未观察到损害作用剂量)为30mg/kg。
测试例8本发明实施例11化合物大鼠7天毒代动力学评价
1、摘要
以SD大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定连续灌胃给予实施例11化合物7天，根据机体可能产生的毒性反应及其严重程度，对该化合物对啮齿类动物的毒性进行初步评估。
2、试验方案
2.1试验药品
实施例11化合物
2.2试验动物
健康成年SD大鼠24只，分成4组，每组6只，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物生产许可证号：SCXK(沪)2012-0002号。
2.3药物配制
准确称量实施例11化合物，加入少量0.5％CMC-Na超声或研磨至均匀混悬液后加至终体积并混匀。保留第1天及第7天剩余溶液样品用于毒代给药溶液浓度检测。
2.4给药
重复灌胃给药剂量为80、240和720mg/kg，给药浓度分别为8、24、72mg/ml。给药体积10ml/kg，每日1次，连续7天。
3、操作
于给药第1和7天给药后采集血样，采血时间：第1天为给药前及给药后1、2、4、8和24小时采集血样，第7天为给药前及给药后1、2、4、8、24和48小时采集血样，肝素抗凝分离血浆，于-20℃保存待测，用LC/MS/MS法测定灌胃和静脉注射给药后兔血浆中的待测化合物含量。
4、结果
4.1.对临床体征的影响
4.11死亡情况
实施例11化合物的720mg/kg毒性组1号动物第7天给药前死亡；实施例11化合物的720mg/kg毒代组5号第7天给药前死亡，6号第9天死亡。
4.1.2临床观察
给药期间，与溶媒对照组相比，给药第6天实施例11化合物的720mg/kg毒性组和毒代组均出现消瘦，精神状态不佳；给药第7天实施例11化合物的720mg/kg毒性组和毒代组动物均出现摄食量减少、消瘦、活动减少、精神状态不佳、被毛无光、耸毛、弓背、鼻和眼周围有血迹、稀便、肛周污秽现象。
4.2.对体重的影响
与溶媒对照组相比，给药第3天和第7天，实施例11化合物的高剂量组动物体重变化％均出现显著性降低(P＜0.05)。
4.3.对摄食量的影响
与溶媒对照组相比，147280720mg/kg剂量组动物第3和第7天摄食量有较明显降低。
4.4.血液学检测结果
与溶媒对照组相比，实施例11化合物的720mg/kg剂量组动物WBC(白细胞)、Neut(中性粒细胞相对值和绝对值)、Lymph(淋巴细胞绝对值)、EO(嗜酸性粒细胞绝对值)和RET(网织红细胞相对值和绝对值)均有显著性下降(P＜0.05)。
4.5.血液生化检测结果
与溶媒对照组相比，实施例11化合物的720mg/kg剂量组动物BUN(尿素氮)、CHOL(总胆固醇)、CREA(肌酐)、TBIL(总胆红素)、TP(总蛋白)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)显著性升高(P＜0.05)，ALT(丙氨酸氨基转移酶)虽然没有统计学差异但是有两只动物明显升高，ALB(白蛋白)、ALP(碱性磷酸酶)显著性降低(P＜0.05)，因SHR147280720mg/kg剂量组动物血量过少样本量不足，缺失离子检测结果，其余未见毒理学意义的明显异常。
4.6.凝血指标
与溶媒对照组相比，实施例11化合物的80mg/kg，240mg/kg剂量组动物均无显著性差异，因SHR147280720mg/kg剂量组动物血量过少样本量不足，缺失凝血功能指标结果。
4.7.尿液检测
与溶媒对照组相比，各给药组未见尿液指标规律性异常变化。
4.8.大体病理学结果
尸检大体肉眼观察可见，与溶媒对照组相比，实施例11化合物的720mg/kg剂量组胸腺出血、萎缩，脾脏萎缩、有淤血，肝脏各叶有不同程度地淤血、有片状灰红色坏死灶，肺脏充血、出血，肾上腺出血、肥大，卵巢出血淤血，胃肠道壁变薄，胃内白色内容物，小肠黄色内容物，出血，结肠直肠出血，腹腔粘液状；另外死亡的动物心脏有坏死灶，其余各组未见肉眼可见异常。
4.9.脏器系数结果
与溶媒对照组相比，实施例11化合物的720mg/kg给药组的两性别动物胸腺、心脏、肺脏和脾脏绝对湿重显著性降低(p＜0.05)，肾上腺绝对湿重显著性升高(p＜0.05)。胸腺、脾脏的相对脏器系数显著性降低(p＜0.05)，脑、肝脏、肺脏、肾脏、肾上腺的相对脏器系数显著性升高(p＜0.05)。
4.10.毒代动力学参数结果
雌性大鼠连续灌胃给药后的毒代动力学参数表
注：-表示数据少，参数无法计算
因此，实施例11的毒理的NOAEL剂量为240mg/kg，致死剂量为720mg/kg，可能的毒性靶器官为骨髓造血系统、胸腺、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾上腺、卵巢和消化系统。
综上所述：对比测试例5的药代测试、测试例7的药效测试、测试例8的毒理药代测试，对实施例11化合物的安全窗口初步评价如下：

Claims (21)

1.一种通式(I)所示的化合物及其可药用的盐：
其中：
当G为N时，D为C，E为-CH-；
当G为C时，D和E为N；
R1选自苯基或哒嗪基，其中所述的苯基或哒嗪基各自独立地任选进一步被一个或多个选自卤素、-OR6的取代基所取代；
R2为C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基进一步被苯基所取代，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基的取代基所取代；
R3为苯基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代；
R4为C1-6烷基；
R5为氢原子；
R6选自氢原子或C1-6烷基；
n为1、2、3或4。
2.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，其为通式(II)所示的化合物及其可药用的盐：
其中：n，R1～R5的定义如权利要求1中所述。
3.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，其为通式(III)所示的化合物及其可药用的盐：
其中：n，R1～R5的定义如权利要求1中所述。
4.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，其中R2选自苄基，其中所述的苄基任选进一步被一个或多个选自卤素、C1-6烷基或C1-6卤代烷基的取代基所取代。
5.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，其中R3为苯基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自-NHC(O)NHR6或-NHC(O)NHOR6的取代基所取代。
6.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，其中R4选自甲基。
7.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，其中R5选自氢原子，n为1或2。
8.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，其为通式(IV)所示的化合物及其可药用的盐：
其中：n、D、E、G、R1、R2、R4和R5的定义如权利要求1中所述；
Ra选自C1-6烷基或-OR6；且
R6选自C1-6烷基。
9.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，其中所述化合物选自：
10.一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(IA)化合物与NH(R4)(CH2)nR5所示的胺反应，任选进一步还原或/和酰化反应，得到通式(I)化合物；
其中：X选自卤素，n、D、E、G和R1～R5的定义如权利要求1中所述。
11.一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(IB)化合物在碱性试剂存在下，与R2X反应，任选进一步还原或/和酰化反应，得到通式(I)化合物；
其中：X选自卤素，n、D、E、G和R1～R5的定义如权利要求1中所述。
12.一种通式(IA)所示的化合物或其可药用的盐，其作为制备通式(I)所示的化合物的中间体，
其中：
X选自卤素；
D、E、G和R1～R3的定义如权利要求1中所述。
13.一种通式(IB)所示的化合物或其可药用的盐，其作为制备通式(I)所示的化合物的中间体，
其中：
n、D、E、G和R1、R3～R5的定义如权利要求1中所述。
14.一种制备根据权利要求12所述的通式(IA)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(Ib)化合物进行卤化反应，得到通式(IA)化合物；
其中：D、E、G和R1～R3的定义如权利要求1中所述。
15.一种制备根据权利要求13所述的通式(IB)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(Ig)化合物成环反应，得到通式(IB)化合物；
其中：n、D、E、G和R1、R3～R5的定义如权利要求1中所述；
Rb选自C1-6烷基。
16.根据权利要求12所述的通式(IA)或权利要求13所述的通式(IB)所示的化合物或其可药用的盐，其中该化合物选自：
17.一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的根据权利要求1～9任一项所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐，以及一种或多种可药用的载体、稀释剂或赋形剂。
18.根据权利要求1～9任一项所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐或根据权利要求17所述的药物组合物在制备GnRH受体拮抗剂的药物中的用途。
19.根据权利要求1～9任一项所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐或根据权利要求17所述的药物组合物在制备治疗性腺激素相关的疾病的药物中的用途。
20.根据权利要求1～9任一项所述的通式(I)所示的化合物及其可药用的盐或根据权利要求17所述的药物组合物，其在作为制备治疗或预防性激素依赖性癌症、性激素依赖性癌症的骨质转移、前列腺肥大、子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫纤维瘤、性早熟、闭经、月经前期综合症、痛经、多房性卵巢综合症、多囊性卵巢综合症、痤疮、脱毛症、阿尔茨海默病、不育症、过敏性肠综合症、不依赖于激素且LH-RH敏感的良性或恶性肿瘤或潮红的疾病的药物中的用途；其作为制备生殖调节物、避孕药、排卵诱发物中的用途；或其作为制备预防性激素依赖性癌症的手术后复发的药物中的用途，其中所述的性激素依赖性癌症选自前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、垂体癌。
21.根据权利要求20所述的用途，其中所述的癌症选自前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、子宫内膜异位症或子宫肌瘤。
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