ES2703716T3 - Polimorfos y sales de 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol como inhibidores de PI3k para uso por ejemplo en el tratamiento de trastornos respiratorios - Google Patents

Abstract

Hemi succinato de 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol.

Description

DESCRIPCIÓN

Polimorfos y sales de 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol como inhibidores de PI3k para uso por ejemplo en el tratamiento de trastornos respiratorios

Campo de la invención

La presente invención está dirigida a una sal de un compuesto y a su polimorfo, cuyo compuesto es un inhibidor de la actividad de quinasa, más específicamente un compuesto que es un inhibidor de la actividad o función de la isoforma delta de fosfoinosítido 3'OH-quinasa, (en adelante PI3K8), a composiciones farmacéuticas que los comprenden y a su uso en el tratamiento de varios trastornos.

Antecedentes de la invención

Las membranas celulares representan un gran almacén de segundos mensajeros que pueden ser reclutados en una serie de rutas de transducción de señales. Con respecto a la función y regulación de las enzimas efectoras en las rutas de señalización de fosfolípidos, las PI3 quinasas de clase I (por ejemplo PI3K8) generan segundos mensajeros a partir de los reservorios de fosfolípidos de la membrana. Las PI3Ks de clase I convierten el fosfolípido de membrana PI(4,5)P2 en PI(3,4,5)P3, que funciona como un segundo mensajero. El PI y PI(4)P también son sustratos de PI3K y pueden ser fosforilados y convertidos en PI3P y PI(3,4)P2, respectivamente. Además, estos fosfoinosítidos pueden ser convertidos en otros fosfoinosítidos por fosfatasas 5'-específicas y 3'-específicas. De esta manera, la actividad enzimática de PI3K da como resultado directa o indirectamente la formación de dos subtipos de 3'-fosfoinosítidos que funcionan como segundos mensajeros en rutas de transducción de señal intracelulares (Trends Biochem. Sci. 22(7), p. 267-72 (1997), de Vanhaesebroeck et al.; Chem. Rev. 101(8), p. 2365-80 (2001) de Leslie et al.; Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17, p. 615-75 (2001) de Katso et al.; y Cell. Mol. Life Sci. 59(5), p. 761-79 (2002) de Toker). Hasta la fecha se han identificado ocho PI3Ks de mamífero, divididas en tres clases principales (I, II y III) en función de la homología de secuencia, la estructura, los copartícipes de unión, el modo de activación y la preferencia de sustrato. In vitro, las PI3Ks de clase I pueden fosforilar fosfatidilinositol (PI), fosfatidilinositol-4-fosfato (PI4P) y fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2), para producir fosfatidilinositol-3-fosfato (PI3P), fosfatidilinositol-3,4-bifosfato (PI(3,4)P2), y fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (PI(3,4,5)P3), respectivamente. Las PI3Ks de clase II pueden fosforilar PI y PI4P. Las PI3Ks de clase III sólo pueden fosforilar PI (Vanhaesebroeck et al., susodicho; Vanhaesebroeck et al. Exp. Cell Res.

253(1), p. 239-54 (1999); y Leslie et al. (2001), susodicho).

La PI3K de clase I es un heterodímero que consiste en una subunidad catalítica p110 y una subunidad reguladora, y la familia se divide además en enzimas de clase Ia y clase Ib en función de los copartícipes reguladores y el mecanismo de regulación. Las enzimas de clase Ia consisten en tres subunidades catalíticas distintas (p110a, p110p y p1108) que se dimerizan en cinco subunidades reguladoras distintas (p85a, p55a, p50a, p85p y p55Y), y todas las subunidades catalíticas son capaces de interaccionar con todas las subunidades reguladoras para formar una serie de heterodímeros. Las PI3K de clase Ia son activadas generalmente en respuesta a la estimulación del factor de crecimiento de los receptores tirosina quinasa, mediante la interacción de los dominios SH2 de la subunidad reguladora con restos de fosfotirosina específicos de las proteínas receptoras o adaptadoras activadas, tales como IRS-1. Las GTPasas pequeñas (ras, por ejemplo) también están implicadas en la activación de PI3K en conjunto con la activación del receptor de tirosina quinasa. Tanto p110a como p110p son expresadas constitutivamente en todo tipo de célula, mientras que la expresión de p1105 está más restringida a poblaciones de leucocitos y algunas células epiteliales. En contraste, la única enzima de clase Ib consiste en una subunidad catalítica p110Y que interacciona con una subunidad reguladora p101. Además, la enzima de clase lb es activada en respuesta a sistemas de receptores acoplados a la proteína G (GPCR) y su expresión parece estar limitada a los leucocitos.

Esquema A: Conversión de PI(4,5)P2 a PI(3,4,5)P3

Como se ilustra en el esquema A anterior, las fosfoinosítido 3-quinasas (PI3Ks) fosforilan el hidroxilo del tercer carbono del anillo del inositol. La fosforilación de los fosfoinosítidos para dar lugar a PI(3,4,5)P3, PI(3,4)P2 y PI(3)P, produce segundos mensajeros para una serie de rutas de transducción de señal, incluyendo los esenciales para la proliferación celular, la diferenciación celular, el crecimiento celular, el tamaño celular, la supervivencia celular, la apoptosis, la adhesión, la motilidad celular, la migración celular, la quimiotaxis, la invasión, el reordenamiento del citoesqueleto, los cambios de forma de la célula, el tráfico de vesícula y la ruta metabólica (Katso et al. (2001), susodichos; y Mol. Med. Today 6(9), p. 347-57 (2000) de Stein et al.).

La actividad de las PI3 quinasas responsables de generar estos productos de señalización fosforilados fue identificada originalmente como asociada a oncoproteínas virales y al factor de crecimiento de los receptores tirosina quinasa que fosforilan el fosfatidilinositol (PI) y sus derivados fosforilados en el 3'-hidroxilo del anillo de inositol (Panayotou et al., Trends Cell Biol. 2, p. 358-60 (1992)). Sin embargo, estudios bioquímicos más recientes han revelado que las PI3 quinasas de clase I (por ejemplo la isoforma PI3K8 de clase IA) son enzimas quinasas doblemente específicas, lo que significa que muestran tanto actividad de lípido quinasa (fosforilación de fosfoinosítidos) como también actividad de proteína quinasa, que ha mostrado ser capaz de fosforilar otra proteína como sustrato, incluso de autofosforilación como mecanismo regulador intramolecular (EMBO J., 18(5), p. 1292-302 (1999), de Vanhaesebroeck et al.). Los procesos celulares en los cuales las PI3Ks desempeñan una función esencial incluyen la supresión de la apoptosis, la reorganización del esqueleto de actina, el crecimiento del miocito cardiaco, la estimulación de glicógeno sintasa por insulina, el cebado de neutrófilos mediado por TNFa y la generación de superóxido, y la migración de leucocitos y adhesión a células endoteliales.

Se cree que la activación de la PI3 quinasa está implicada en una amplia gama de respuestas celulares que incluyen el crecimiento, la diferenciación y la apoptosis celular (Parker, Current Biology 5(6), p. 577-79 (1995); y Yao et al., Science 267(5206), p. 2003-06 (1995)). La PI3 quinasa parece estar implicada en varios aspectos de la activación de leucocitos. Se ha mostrado que una PI3 quinasa asociada a p85 se asocia físicamente con el dominio citoplásmico de CD28, la cual es una molécula coestimuladora importante para la activación de células T en respuesta al antígeno (Pages et al., Nature 369, p. 327-29 (1994); y Rudd, Immunity 4, p. 527-34 (1996)). La activación de células T por medio de CD28 reduce el umbral de activación por antígeno y aumenta la magnitud y duración de la respuesta proliferativa. Estos efectos están asociados a aumentos en la transcripción de varios genes incluyendo interleucina 2 (IL2), un factor de crecimiento de células T importante (Fraser et al., Science 251(4991), p. 313-16 (1991)).

PI3Ky ha sido identificada como un mediador de la regulación de la actividad de JNK dependiente de G beta-gamma, y las G beta-gamma son subunidades de proteínas G heterotriméricas (López-llasaca et al., J. Biol. Chem. 273(5), p.

2505-8 (1998)). Recientemente se ha descrito (Laffargue et al., Immunity 16(3), p. 441 -51 (2002)) que PI3Ky retrasa las señales inflamatorias por medio de varios receptores acoplados a G(i), y es fundamental para la función de mastocitos, estímulos en el contexto de leucocitos, e inmunología que incluyen, por ejemplo, citocinas, quimocinas, adenosinas, anticuerpos, integrinas, factores de agregación, factores de crecimiento, virus u hormonas (J. Cell Sci.

114 (P. 16), p. 2903-10 (2001) de Lawlor et al.; Laffargue et al. (2002), susodicho; y Curr. Opinión Cell Biol. 14(2), p.

203-13 (2002) de Stephens et al.).

Los inhibidores específicos frente a miembros individuales de una familia de enzimas proporcionan herramientas de valor inestimable para descifrar las funciones de cada enzima. Dos compuestos, LY294002 y wortmanina (véase más adelante), han sido muy utilizados como inhibidores de PI3 quinasa. Estos compuestos son inhibidores inespecíficos de PI3K, ya que no distinguen entre los cuatro tipos de PI3 quinasas de clase I. Por ejemplo, los valores de IC50 de wortmanina frente a cada una de las PI3 quinasas de clase I están en la escala de 1-10 nM. Similarmente, los valores de IC50 para LY294002 frente a cada una de estas PI3 quinasas es de aproximadamente 15-20 pM (Fruman et al., Ann. Rev. Biochem. 67, p. 481-507 (1998)), también 5-10 pM sobre la proteína quinasa CK2 y alguna actividad inhibidora sobre fosfolipasas. La wortmanina es un metabolito fúngico que inhibe irreversiblemente la actividad de PI3K uniéndose covalentemente al dominio catalítico de esta enzima. La inhibición de la actividad de PI3K por wortmanina elimina la respuesta celular subsiguiente al factor extracelular. Por ejemplo, los neutrófilos responden a la quimocina fMet-Leu-Phe (fMLP) estimulando la PI3K y sintetizando PI(3,4,5)P3. Esta síntesis se correlaciona con la activación de la explosión respiratoria implicada en la destrucción de neutrófilos por microorganismos invasores . El tratamiento de los neutrófilos con wortmanina previene la respuesta de explosión respiratoria inducida por fMLP (Thelen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, p. 4960-64 (1994)). En realidad, estos experimentos con wortmanina, así como también otra evidencia experimental, muestran que la actividad de PI3K en células precursoras de glóbulos blancos (hemociblastos), particularmente neutrófilos, monocitos y otros tipos deleucocitos, está implicada en muchas de las respuestas inmunes que no son de memoria asociadas con la inflamación aguda y crónica.

Basándose en los estudios que utilizan wortmanina, existe evidencia de que la función de PI3 quinasa también se requiere para algunos aspectos de la señalización de leucocitos por medio de receptores acoplados a la proteína G (Thelen et al. (1994), susodichos). Además, se ha mostrado que la wortmanina y LY294002 bloquean la migración de neutrófilos y la liberación de superóxido.

Ahora se entiende bien que la disregulación de oncogenes y genes supresores de tumores contribuye a la formación de tumores malignos, por ejemplo por medio de un aumento del crecimiento y proliferación celular o un aumento de la supervivencia celular. También ahora se sabe que las rutas de señalización mediadas por la familia PI3K tienen un papel central en varios procesos celulares que incluyen proliferación y supervivencia, y la disregulación de estas rutas es un factor causante de un amplio espectro de cáncer humano y otras enfermedades (Katso et al. Annual Rev. Cell Dev. Biol. (2001) 17, p. 615-675, y Foster et al. J. Cell Science (2003), 116(15), p. 3037-3040). Las proteínas PI3K efectoras inician rutas y redes de señalización trasladándose a la membrana plasmática por medio de un dominio conservado de homología Pleckstrin (PH), que interacciona específicamente con PI(3,4,5)P3 (Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem. (2001) 70, p. 535-602). La señalización de proteínas efectoras por medio de PI(3,4,5)P3 y dominios PH incluye serina/treonina (Ser/Thr) quinasas, tirosina quinasas, Rac o Arf GEFs (factores de intercambio de nucléotido de guanina) y Arf GAPs (proteínas activadoras de GTPasa) .

En las células B y T, las PI3Ks desempeñan una función importante por medio de la activación de la familia Tec de proteína de tirosina quinasas que incluyen la tirosina quinasa de Bruton (BTK) en células B, y de interleucina 2 quinasa (ITK) inducible en células T. Tras la activación de PI3K, BTK o ITK migran a la membrana plasmática en donde son fosforiladas subsiguientemente por Src quinasas. Uno de los principales objetivos de la ITK activada es la fosfolipasa C-gamma (PLCy1), que hidroliza PI(4,5)P2 a PI(3,4,5)P3 e inicia un aumento intracelular de los niveles de calcio y diacilglicerol (DAG) que puede activar las proteínas quinasas C en células T activadas.

A diferencia de p110a y p110p de clase IA, p1105 se expresa de una forma limitada en el tejido. Su alto grado de expresión en linfocitos y tejidos linfoides sugiere una función en la señalización mediada por PI3K en el sistema inmune. La p1108 quinasa de ratones con una secuencia génica reemplazada (knock-in) muertos también son viables y su fenotipo está restringido a defectos en la señalización inmune (Okkenhaug et al., Science (2002) 297, p. 1031-4). Estos ratones transgénicos han ofrecido una nueva percepción en el papel de p1105 en la señalización de células B y células T. En particular, se requiere p1108 para la formación de PI(3,4,5)P3 posterior a CD28 y/o la señalización del receptor de células T (TCR). Un efecto clave de la señalización de PI3K posterior a TCR es la activación de Akt, que fosforila factores anti-apoptóticos y también varios factores de transcripción para la producción de citosina. Como consecuencia, las células T con p1108 inactiva tienen defectos en la proliferación y secreción de citocina Th1 y Th2. La activación de células T por medio de CD28 reduce el umbral de activación de TCR por antígeno y aumenta la magnitud y duración de la respuesta proliferativa. Estos efectos son mediados por el aumento de PIK38 dependiente de la transcripción de varios genes que incluyen IL2, un importante factor de crecimiento de células T.

Por lo tanto, se anticipa que los inhibidores de PI3K proporcionan un beneficio terapéutico mediante su función en la modulación de respuestas inflamatorias mediadas por células T, asociadas a enfermedades respiratorias tales como el asma, COPD y fibrosis quística. Además, hay una indicación de que las terapias dirigidas a las células T pueden proporcionar la preservación de propiedades de corticosteroide (Alexander et al., Lancet (1992) 339, p. 324-8), sugiriendo que dichos inhibidores pueden proporcionar una terapia útil, ya sea autónoma o en combinación con glucocorticosteroides inhalados u orales, en enfermedades respiratorias. Un inhibidor de PI3K también se podría usar junto con otras terapias convencionales tales como beta-agonistas de acción prolongada (LABA) en asma.

En el sistema vascular, PI3K8 es expresada por células endoteliales y participa en el tráfico de neutrófilos modulando el estado proadhesivo de estas células en respuesta a TNF-alfa (Puri et al., Blood (2004) 103(9), p. 3448-56). La inhibición farmacológica de la fosforilación de Akt y la actividad de PDK1 muestra una función de PI3K8 en la señalización de células endoteliales inducida por TNF-alfa. Además, la PI3K8 está implicada en la permeabilidad vascular y el edema de tejido de las vías respiratorias por medio de la ruta de VEGF (Lee et al. J. Allergy Clin. Immunol. (2006) 118(2), p. 403-9). Estas observaciones sugieren beneficios adicionales de la inhibición de PI3K8 en el asma mediante la reducción combinada de extravasación de leucocitos y permeabilidad vascular, asociadas con el asma. Además, se requiere la actividad de PI3K8 para la función de los mastocitos tanto in vitro como in vivo (Ali et al., Nature (2004) 431, p. 1007-11; y Ali et al., J. Immunol. (2008) 180(4), p. 2538-44), sugiriendo adicionalmente que la inhibición de PI3K sería de beneficio terapéutico para indicaciones alérgicas tales como el asma, rinitis alérgica y dermatitis atópica.

La función de PI3K8 en la proliferación de células B, la secreción de anticuerpos, la señalización de antígenos de células B y de receptores de IL-4, y la función presentadora de antígeno de las células B también se establece en Okkenhaug et al. (2002), susodicho; Al-Alwan et al., J. Immunol. (2007) 178(4), p. 2328-35; y Bilancio et al., Blood (2006) 107(2), p. 642-50), e indica una función en enfermedades autoinmunarias tales como la artritis reumatoide o lupus eritematoso sistémico. Por lo tanto, los inhibidores de PI3K también pueden ser de beneficio para estas indicaciones.

La inhibición farmacológica de PI3K8 inhibe la quimiotaxis de neutrófilos dependiente de fMLP sobre un sistema desviado recubierto con ICAM dependiente de integrina de matriz de agarosa (Sadhu et al., J. Immunol. (2003) 170(5), p. 2647-54.). La inhibición de PI3K8 regula la activación, adhesión y migración de los neutrófilos, sin afectar la fagocitosis mediada por neutrófilos y la actividad bactericida sobre Staphylococcus aureus (Sadhu et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. (2003) 308(4), p.764-9). En conjunto, los datos sugieren que la inhibición de PI3K8 no inhibiría globalmente las funciones de los neutrófilos requeridas para la defensa inmune innata. La función de las PI3K8s en los neutrófilos ofrece un alcance mayor para el tratamiento de enfermedades inflamatorias que implican remodelación de tejido, tales como COPD o artritis reumatoide.

Además, también hay una buena evidencia de que las enzimas PI3K de clase la también contribuyen a la tumorigénesis en una amplia serie de cánceres humanos, ya sea directa o indirectamente (Vivanco y Sawyers, Nature Reviews Cancer (2002) 2(7), p. 489-501). Por ejemplo, la inhibición de PI3K8 puede tener una función terapéutica en el tratamiento de trastornos hematológicos malignos como la leucemia mieloide aguda (Billottet et al., Oncogene (2006) 25(50), p. 6648-59). Además, tumores las mutaciones de activación dentro de p110a (gen PIK3CA) se han asociado con otros , tales como los del colon, la mama y el pulmón (Samuels et al., Science (2004) 304(5670), p. 554).

También se ha mostrado que la PI3K está implicada en el establecimiento de sensibilización central en afecciones inflamatorias dolorosas (Pezet et al., The J. of Neuroscience (2008) 28 (16), p. 4261-4270).

Una amplia serie de retrovirus y virus basados en ADN activan la ruta de PI3K como una manera de prevenir la muerte de la célula hospedadora durante la infección viral y finalmente aprovechando la maquinaria de síntesis de la célula hospedadora para su replicación (Virology 344(1), p. 131-8 (2006), de Vogt et al.; y Nat. Rev. Microbiol. 6(4), p. 265­ 75 (2008) de Buchkovich et al.). Por lo tanto, los inhibidores de PI3K pueden tener propiedades antivirales además de las indicaciones oncológicas y antiinflamatorias más establecidas. Estos efectos antivirales plantean prospectos interesantes en las exacerbaciones inflamatorias inducidas por virus. Por ejemplo, el rinovirus humano del resfriado común (HRV) es responsable de más del 50% de las infecciones del aparato respiratorio, pero las complicaciones de estas infecciones pueden ser significativas en algunas poblaciones. Este es particularmente el caso en enfermedades respiratorias tales como el asma o enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). La infección rinoviral de las células epiteliales produce una secreción de citocina y quimocina dependiente de PI3K (J. Biol. Chem. (2005) 280(44), p. 36952, de Newcomb et al.). Esta respuesta inflamatoria se correlaciona con el empeoramiento de los síntomas respiratorios durante la infección. Por lo tanto, los inhibidores de PI3K pueden impedir una respuesta inmunológica exagerada a un virus por lo demás benigno. La mayoría de las cepas de HRV infectan las células epiteliales bronquiales uniéndose inicialmente al receptor ICAM-1. Entonces el complejo HRV-ICAM-1 es internalizado por endocitosis, y se ha mostrado que este suceso requiere la actividad de PI3K (J. Immunol. (2008) 180(2), p. 870-880, de Lau et al.). Por lo tanto, los inhibidores de PI3k también pueden bloquear las infecciones virales inhibiendo la entrada viral a las células hospedadoras

Los inhibidores de PI3K pueden ser útiles para reducir otros tipos de infecciones respiratorias incluyendo la infección fúngica aspergilosis (Mucosal Immunol. (2010) 3(2), p. 193-205, de Bonifazi et al.). Además, los ratones deficientes en PI3K8 son más resistentes a las infecciones por el parásito protozoario Leishmania major (J. Immunol. (2009) 183(3), p. 1921-1933, de Liu et al.). Teniendo en cuenta los efectos sobre las infecciones virales, estos artículos sugieren que los inhibidores de PI3K pueden ser útiles para el tratamiento de una amplia serie de infecciones.

También se ha mostrado que la inhibición de PI3K promueve la diferenciación de células T reguladoras (Proc. Natl. Acad. Sci. U S A (2008) 105(22), p. 7797-7802, de Sauer et al.) sugiriendo que los inhibidores de PI3K pueden servir para fines terapéuticos en indicaciones autoinmunes o alérgicas, induciendo inmunotolerancia hacia autoantígenos o alérgenos. Recientemente la isoforma PI3K8 también se ha asociado con insensibilidad a glucocorticoide inducida por el humo (Am. J. Respir. Crit. Care Med. (2009) 179(7), p. 542-548 de Marwick et al.). Esta observación sugiere que los pacientes de COpD, que de otra manera responden escasamente a los corticosteroides, se pueden beneficiar de la combinación de un inhibidor de PI3K con un corticosteroide.

La PI3K también se ha relacionado con otras afecciones respiratorias tales como fibrosis pulmonar idiopática (IPF). La IPF es una enfermedad fibrótica con disminución progresiva de la función pulmonar e incremento de la mortalidad debido a un fallo respiratorio. En la IPF, los fibrocitos circulantes son dirigidos al pulmón a través del receptor de quimocina CXCR4. Se requiere PI3K tanto para la señalización como para la expresión de CXCR4 (Int. J. Biochem. and Cell Biol. (2009) 41, p.1708-1718, de Mehrad et al.). Por lo tanto, reduciendo la expresión de CXCR4 y bloqueando su función efectora, un inhibidor de PI3K inhibiría el reclutamiento de fibrocitos al pulmón y consecuentemente retardaría el proceso fibrótico subyacente a la IPF, una enfermedad con alta necesidad no cubierta.

Los compuestos que son inhibidores de PI3 quinasa, pueden ser por tanto útiles en el tratamiento de trastornos asociados con la actividad inapropiada de quinasa, en particular la actividad inapropiada de PI3 quinasa, por ejemplo en el tratamiento y prevención de trastornos mediados por mecanismos de PI3 quinasa. Estos trastornos incluyen enfermedades respiratorias que incluyen el asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y fibrosis pulmonar idiopática (IPF); infecciones virales que incluyen infecciones virales del aparato respiratorio y exacerbación viral de enfermedades respiratorias tales como asma y EPOC; infecciones respiratorias no virales que incluyen aspergilosis y leishmaniasis; enfermedades alérgicas que incluyen rinitis alérgica y dermatitis atópica; enfermedades autoinmunes que incluyen artritis reumatoide y esclerosis múltiple; trastornos inflamatorios que incluyen enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedades cardiovasculares que incluyen trombosis y aterosclerosis; malignidades hematológicas; enfermedades neurodegenerativas; pancreatitis; fallo multiorgánico; enfermedades renales; agregación plaquetaria; cáncer; movilidad espermática; rechazo de trasplante; rechazo de injerto; lesiones pulmonares; y dolor que incluye dolor asociado con artritis reumatoide u osteoartritis, lumbalgia, dolor inflamatorio general, neuralgia post hepática, neuropatía diabética, dolor neuropático inflamatorio (trauma), neuralgia trigeminal y dolor central.

Se ha intentado preparar compuestos que inhiben la actividad de PI3 quinasa, y varios de estos compuestos se han descrito..

El documento WO2010/102958 describe el 4-oxadiazol-2-il-indazol como inhibidores de PI3 quinasa.

El documento WO2012/032065 describe derivados de indazol que son inhibidores de PI3 quinasa para uso en el tratamiento de infección por virus influenza.

La solicitud de patente internacional PCT/EP2010/055666 (número de publicación WO2010/125082) describe compuestos que tienen la fórmula general (I):

y sales de ellos.

Los ejemplos de la solicitud de patente internacional PCT/EP2010/055666 (número de publicación WO2010/125082) describen la preparación de 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol, que se puede representar con la fórmula (II):

en adelante denominado “compuesto A”, y sus sales de hidrocloruro.

Los presentes inventores han encontrado ahora una sal del compuesto A y polimorfos de la misma.

En una realización, las sales del compuesto A pueden tener propiedades que los hacen particularmente adecuados para su administración como un medicamento, por ejemplo por inhalación. En una realización adicional, la sal de hemisuccinato del compuesto A puede tener estabilidad, por ejemplo en formulaciones que contienen excipientes como lactosa, y propiedades de solubilidad que la hacen particularmente adecuada para su administración por inhalación.

Sumario de la invención

La invención está dirigida a una sal del compuesto A y su polimorfo (en adelante “ polimorfos y sales de la invención”).

Breve descrpición de las figuras

La figura 1 muestra un patrón de difracción de rayos X en polvo (XRPD) de un polimorfo del compuesto A. La figura 2 muestra un patrón de XRPD de un polimorfo de la sal tosilato del compuesto A.

La figura 3 muestra un patrón de XRPD de un polimorfo de la sal de hemifumarato del compuesto A. La figura 4 muestra un patrón de XRPD de un polimorfo de la sal de hemisuccinato del compuesto A. Descripción detallada de la invención

En un aspecto, la invención está dirigida a una sal del compuesto A y un polimorfo del mismo.

En una realización, la invención proporciona una sal de hemisuccinato del compuesto A.

La sal de hemisuccinato del compuesto A es la sal formada entre 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol y ácido succínico, en una relación estequiométrica de aproximadamente 2:1.

También se incluye dentro del alcance de la invención cualquier solvato, por ejemplo hidratos, complejos y formas polimórficas de las sales de la invención.

Las sales de la invención pueden existir en forma cristalina o no cristalina, o como una mezcla de las mismas. Para las sales de la invención que son de forma cristalina, el experto en la materia apreciará que se pueden formar solvatos farmacéuticamente aceptables en donde las moléculas del disolvente se incorporan en la red cristalina durante la cristalización. Los solvatos pueden incluir disolventes no acuosos tales como etanol, isopropanol, DMSO, ácido acético, etanolamina y EtOAc, o pueden incluir agua como el disolvente que se incorpora en la red cristalina. Los solvatos en donde el agua es el disolvente que se incorpora en la red cristalina se denominan normalmente “hidratos”. Los hidratos incluyen hidratos estequiométricos y también composiciones que contienen cantidades variables de agua. Como apreciará el experto en la materia, la cantidad de agua puede depender de las condiciones, por ejemplo de la humedad. Por ejemplo, conforme disminuye la humedad, la cantidad de agua puede disminuir, y conforme aumenta la humedad, la cantidad de agua puede aumentar. Dichas variaciones en la cantidad de agua están incluidas dentro del alcance de la invención. En una realización, la invención proporciona un hidrato de la sal de hemisuccinato del compuesto A. En otra realización, el hidrato de la sal de hemisuccinato del compuesto A puede ser el monohidrato, en donde la relación estequiométrica de compuesto A ácido succínico:agua es de aproximadamente 2:1:1.

En otra realización, la invención proporciona un polimorfo de la sal de hemisuccinato del compuesto A caracterizado en el que comprende un patrón de XRPD usando Cu Ka como fuente de radiación que comprende picos (°20) a 7,2 ± 0,2, 13,2 ± 0,2 y/o 14,0 ± 0,2.

En otra realización, la invención proporciona un polimorfo de la sal de hemisuccinato del compuesto A que proporciona un patrón de XRPD para caracterizarlo que comprende los picos como se indican en la tabla 4.

Cuando se indica en la presente que hay un pico en un patrón de XRPD a un valor dado, normalmente se entiende que el pico está en un intervalo de ± 0.2 del valor citado, por ejemplo en un intervalo de ± 0.1 del valor citado.

La invención abarca la sal del compuesto A y su polimorfo, aislados en forma pura o cuando están mezclados con otros materiales, por ejemplo otros polimorfos, o sales o solvatos (inclusive de sus polimorfos) del compuesto A, o cualquier otro material.

De esta manera, en un aspecto se proporciona una sal del compuesto A o su polimorfo, en forma aislada o pura. La forma “aislada” o “pura” se refiere a una muestra en la cual la sal del compuesto A o su polimorfo está presente en una cantidad >75%, particularmente >90%, más particularmente >95%, y más particularmente >99% con respecto a otros materiales que pueden estar presentes en la muestra.

Términos y definiciones

Como se usan en la presente memoria, los símbolos y convenciones en estos procedimientos, esquemas y ejemplos son consistentes con los utilizados en la literatura científica contemporánea, por ejemplo el Journal of the American Chemical Society o el Journal of Biological Chemistry. Generalmente se utilizan abreviaturas estándares de una sola letra o de tres letras para designar residuos de aminoácido, que se supone están en la configuración L, a menos que se indique de otra manera. A menos que se indique de otra manera, todos los materiales iniciales se obtuvieron de proveedores comerciales y se usaron sin más purificación. Específicamente, se pueden usar las siguientes abreviaturas en los ejemplos y en toda la especificación:

DCM Diclorometano

DMPU 1,3-Dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2-(1H)-pirimidinona

DMSO Sulfóxido de dimetilo

EtOAc Acetato de etilo

g Gramos

h hora(s)

HPLC Cromatografía de líquidos de alto rendimiento

IMS Alcohol metilado industrial

IPA Alcohol isopropílico

LCMS Espectroscopía de masa con cromatografía de líquidos

L Litros

M Molar

MDAP HPLC preparativa automática de masa dirigida

Me Metilo

MeCN Acetonitrilo

MeOH Metanol

mg Miligramos

min Minutos

ml Mililitros

mmol Milimoles

tR Tiempo de retención

t.a Temperatura ambiente

TFA Acido trifluoroacético

THF Tetrahidrofurano

UPLC Cromatografía de líquidos de rendimiento ultraalto

UV Ultravioleta

XRPD Difracción de rayos X en polvo

Todas las referencias a la salmuera son de una disolución acuosa saturada de NaCl.

Preparación del polimorfo y la sal

La invención también está dirigida a procedimientos para preparar los polimorfos y sales de la invención.

En un aspecto, la invención proporciona un procedimiento para preparar una sal del compuesto A o un polimorfo del mismo, que comprende poner en contacto el compuesto A con un ácido adecuado, tal como ácido p-toluenosulfónico, ácido fumárico o ácido succínico, en presencia de un disolvente adecuado como alcohol metilado industrial (IMS), acetonitrilo o DMSO.

El compuesto A se puede preparar de acuerdo con los procedimientos conocidos, tales como los que se describen en la solicitud de patente internacional PCT/EP2010/055666 (número de publicación WO2010/125082) y la sección de ejemplos que se da más abajo.

Métodos de uso

Los polimorfos y sales de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos en donde la patología subyacente es atribuible (por lo menos parcialmente) a la actividad inapropiada de la PI3 quinasa, tales como asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). “La actividad inapropiada de PI3 quinasa” se refiere a cualquier actividad de PI3 quinasa que se desvía de la actividad normal de PI3 quinasa esperada en un paciente particular. La actividad inapropiada de PI3 quinasa puede tener la forma, por ejemplo, de un aumento anormal de la actividad, o una aberración en la programación y/o control de la actividad de PI3 quinasa. Dicha actividad inapropiada puede resultar entonces, por ejemplo, de la sobreexpresión o mutación de la quinasa de proteína, resultando en activación inapropiada o descontrolada.

Dichos trastornos incluyen enfermedades respiratorias incluyendo el asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y fibrosis pulmonar idiopática (IPF); infecciones virales que incluyen infecciones virales del aparato respiratorio y exacerbación viral de enfermedades respiratorias como asma y EPOC; infecciones respiratorios no virales que incluyen aspergilosis y leishmaniasis; enfermedades alérgicas que incluyen rinitis alérgica y dermatitis atópica; enfermedades autoinmunes que incluyen artritis reumatoide y esclerosis múltiple; enfermedades inflamatorias que incluyen enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedades cardiovasculares que incluyen trombosis y aterosclerosis; malignidades hematológicas; enfermedades neurodegenerativas; pancreatitis; fallo multiorgánico; enfermedades renales; agregación plaquetaria; cáncer; movilidad espermática; rechazo de trasplante; rechazo de injerto; lesiones pulmonares; y dolor que incluye dolor asociado con artritis reumatoide u osteoartritis, lumbalgia, dolor inflamatorio general, neuralgia post hepática, neuropatía diabética, dolor neuropático inflamatorio (trauma), neuralgia trigeminal y dolor central. En una realización, estos trastornos incluyen enfermedades respiratorias que incluyen el asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC); enfermedades alérgicas que incluyen rinitis alérgica y dermatitis atópica; enfermedades autoinmunes que incluyen artritis reumatoide y esclerosis múltiple; trastornos inflamatorios que incluyen enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedades cardiovasculares que incluyen trombosis y aterosclerosis; malignidades hematológicas; enfermedades neurodegenerativas; pancreatitis; fallo multiorgánico; enfermedades renales; agregación plaquetaria; cáncer; movilidad espermática; rechazo de trasplante; rechazo de injerto; lesiones pulmonares; y dolor que incluye dolor asociado con artritis reumatoide u osteoartritis, lumbalgia, dolor inflamatorio general, neuralgia post hepática, neuropatía diabética, dolor neuropático inflamatorio (trauma), neuralgia trigeminal y dolor central.

Los usos de la invención comprenden administrar una cantidad segura y eficaz de un polimorfo o sal de la invención a un paciente en necesidad del mismo. Las realizaciónes individuales de la invención incluyen métodos de tratamiento de cualquiera de los trastornos anteriormente mencionados, administrando una cantidad segura y eficaz de un polimorfo o sal de la invención a un paciente en necesidad del mismo.

Como se usa en la presente memoria, “tratar” con respecto a un trastorno significa: (1) aliviar o prevenir el trastorno o una o más de las manifestaciones biológicas del trastorno; (2) alterar (a) uno o más puntos de la cascada biológica que resulta en, o es responsable de, el trastorno, o (b) una o más de las manifestaciones biológicas del trastorno; (3) aliviar uno o más de los síntomas o efectos asociados con el trastorno; o (4) retardar el avance del trastorno o una o más de las manifestaciones biológicas del trastorno.

Como se indica arriba, el “tratamiento” de un trastorno incluye la prevención del trastorno. El experto en la materia apreciará que la “prevención” no es un término absoluto. En medicina se entiende que “prevención” se refiere a la administración profiláctica de un fármaco para disminuir sustancialmente la probabilidad o severidad de un trastorno o manifestación biológica del mismo, o retrasar el inicio de dicho trastorno o manifestación biológica del mismo.

Como se usa en la presente memoria, una “cantidad segura y eficaz” con respecto a un polimorfo o sal de la invención, u otro agente farmacéuticamente activo, significa una cantidad suficiente para tratar la afección del paciente pero suficientemente baja para evitar efectos secundarios serios (a una relación beneficio/riesgo razonable), dentro del alcance del buen criterio médico. Una cantidad segura y eficaz de un compuesto variará con el compuesto particular elegido (por ejemplo, se considera la potencia, eficacia y vida media del compuesto); la vía de administración elegida; el trastorno tratado; la severidad del trastorno tratado; la edad, talla, peso y condición física del paciente tratado; la historia médica del paciente tratado; la duración del tratamiento; la naturaleza de la terapia concurrente; el efecto terapéutico deseado; y factores similares; pero no obstante puede ser determinada rutinariamente por el experto en la materia.

Como se usa en la presente memoria, “paciente” se refiere a un humano (que incluye adultos y niños) u otro animal. Los polimorfos y sales de la invención se pueden administrar mediante cualquier vía de administración adecuada que incluye administración tanto sistémica como administración tópica. La administración sistémica incluye administración oral, administración parenteral, administración transdérmica y administración rectal. La administración parenteral se refiere a vías de administración diferentes de la vía enteral o transdérmica, y normalmente es por inyección o infusión. La administración parenteral incluye inyección o infusión intravenosa, intramuscular y subcutánea. La administración tópica incluye aplicación en la piel, así como también administración intraocular, ótica, intravaginal, por inhalación e intranasal. La inhalación se refiere a la administración en los pulmones del paciente, ya sea inhalando a través de la boca o a través de las fosas nasales. En una realización, los polimorfos y sales de la invención se pueden administrar por vía oral. En otra realización, los polimorfos y sales de la invención se pueden administrar por inhalación. En una realización adicional, los polimorfos y sales de la invención se pueden administrar por vía intranasal.

Los polimorfos y sales de la invención se pueden administrar una vez, o de acuerdo con un régimen de dosificación en donde se administran varias dosis a intervalos variables de tiempo durante un periodo. Por ejemplo, las dosis se pueden administrar una, dos, tres o cuatro veces al día. En una realización, se administra una dosis una vez al día. En una realización adicional se administra una dosis dos veces al día. Las dosis se pueden administrar hasta lograr el efecto terapéutico deseado, o indefinidamente para mantener el efecto terapéutico deseado. Los regímenes de dosificación adecuados para un polimorfo o sal de la invención dependen de las propiedades farmacocinéticas de ese polimorfo o sal, tales como la absorción, distribución y vida media, que pueden ser determinadas por el experto en la materia. Además, los regímenes de dosificación adecuados, que incluyen la duración en que se administran dichos regímenes para un polimorfo o sal de la invención, dependen del trastorno tratado, la severidad del trastorno tratado, la edad y condición física del paciente tratado, la historia médica del paciente tratado, la naturaleza de la terapia concurrente, el efecto terapéutico deseado y factores similares dentro del conocimiento y experiencia del experto en la materia. Además, será entendido por el experto en la materia que los regímenes de dosificación adecuados pueden requerir un ajuste según la respuesta individual del paciente al régimen de dosificación, o por el tiempo en que el paciente individual requiera el cambio.

Las dosis diarias típicas pueden variar dependiendo de la vía de administración particular elegida. Las dosis diarias típicas para administración oral varían de 0,001 mg a 50 mg por kg de peso corporal total, por ejemplo de 1 mg a 10 mg por kg de peso corporal total. Por ejemplo, las dosis diarias para administración oral pueden ser de 0,5 mg a 2 g por paciente, tal como por ejemplo de 10 mg a 1 g por paciente.

En un aspecto, la invención proporciona un polímero o sal de la invención para uso en terapia médica.

En otro aspecto, la invención proporciona un polímero o sal de la invención para uso en el tratamiento de trastornos mediado por la actividad inapropiada de PI3 quinasa en donde el trastorno se selecciona del grupo que consiste en enfermedades respiratorias (que incluyen asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y fibrosis pulmonar idiopática (IPF)); infecciones virales (que incluyen infecciones virales del aparato respiratorio y exacerbación viral de enfermedades respiratorias tales como asma y EPOC); infecciones respiratorias no virales (que incluyen aspergilosis y leishmaniasis); enfermedades alérgicas (que incluyen rinitis alérgica y dermatitis atópica); enfermedades autoinmunes (que incluyen artritis reumatoide y esclerosis múltiple); trastornos inflamatorios (que incluyen enfermedad inflamatoria del intestino); enfermedades cardiovasculares (que incluyen trombosis y aterosclerosis); malignidades hematológicas; enfermedades neurodegenerativas; pancreatitis; fallo multiorgánico; enfermedades renales; agregación plaquetaria; cáncer; movilidad espermática; rechazo de trasplante; rechazo de injerto; lesiones pulmonares; y dolor (que incluye dolor asociado con artritis reumatoide u osteoartritis, lumbalgia, dolor inflamatorio general, neuralgia post hepática, neuropatía diabética, dolor neuropático inflamatorio (trauma), neuralgia trigeminal y dolor central).

En una realización, el trastorno mediado por actividad inapropiada de PI3 quinasa es una enfermedad respiratoria. En otra realización, el trastorno mediado por actividad inapropiada de PI3 quinasa es el asma. En otra realización, el trastorno mediado por actividad inapropiada de PI3 quinasa es la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). En una realización adicional, el trastorno mediado por actividad inapropiada de PI3 quinasa es la fibrosis pulmonar idiopática (IPF).

En una realización, el trastorno mediado por actividad inapropiada de PI3 quinasa es el dolor.

En una realización, la presente invención proporciona un polimorfo o sal de la invención para uso en el tratamiento de una enfermedad respiratoria, que comprende administrar una cantidad segura y eficaz un paciente en necesidad del mismo.

En otra realización, la presente invención proporciona un polimorfo sal de la invención para el uso en el tratamiento del asma, que comprende administrar una cantidad segura y eficaz de un polimorfo o sal de la invención a un paciente en necesidad del mismo

Composiciones

Los polimorfos y sales de la invención normalmente, aunque no necesariamente, se formularán en composiciones farmacéuticas antes de su administración a un paciente.

Por consiguiente, en un aspecto, la invención está dirigida a composiciones farmacéuticas que comprenden un polimorfo o sal de la invención y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

En otro aspecto la invención está dirigida a composiciones farmacéuticas que comprenden de 0,05 a 1000 mg de un polimorfo o sal de la invención, y de 0,1 a 2 g de uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

En un aspecto adicional, la invención está dirigida a una composición farmacéutica para el tratamiento o profilaxis de un trastorno mediado por actividad inapropiada de PI3 quinasa, que comprende un polimorfo o sal de la invención.

En otro aspecto de la invención se dirige a una composición farmacéutica para el tratamiento o profilaxis de un trastorno mediada por la actividad inapropiada de la PI3 quinasa comprendiendo un polimorfo o sal de la invención en donde el trastorno se selecciona del grupo que consiste en enfermedades respiratorias (que incluyen asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y fibrosis pulmonar idiopática (IPF)); infecciones virales (que incluyen infecciones virales del aparato respiratorio y exacerbación viral de enfermedades respiratorias tales como asma y EPOC); infecciones respiratorias no virales (que incluyen aspergilosis y leishmaniasis); enfermedades alérgicas (que incluyen rinitis alérgica y dermatitis atópica); enfermedades autoinmunes (que incluyen artritis reumatoide y esclerosis múltiple); trastornos inflamatorios (que incluyen enfermedad inflamatoria del intestino); enfermedades cardiovasculares (que incluyen trombosis y aterosclerosis); malignidades hematológicas; enfermedades neurodegenerativas; pancreatitis; fallo multiorgánico; enfermedades renales; agregación plaquetaria; cáncer; movilidad espermática; rechazo de trasplante; rechazo de injerto; lesiones pulmonares; y dolor (que incluye dolor asociado con artritis reumatoide u osteoartritis, lumbalgia, dolor inflamatorio general, neuralgia post hepática, neuropatía diabética, dolor neuropático inflamatorio (trauma), neuralgia trigerminal y dolor central).

Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden preparar y envasar a granel, de donde puede ser extraída una cantidad segura y eficaz de un polimorfo o sal de la invención y después ser administrada al paciente, tal como por ejemplo con polvos o jarabes. Alternativamente, las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden preparar y envasar en forma de dosis unitarias, en donde cada unidad físicamente separada contiene un polimorfo o sal de la invención. Cuando se prepara en forma de dosis unitaria, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden contener normalmente, por ejemplo, de 0,5 mg a 1 g, o de 1 mg a 700 mg, o de 5 mg a 100 mg de un polimorfo o sal de la invención.

Las composiciones farmacéuticas de la invención normalmente contienen un polimorfo o sal de la invención.

Como se usa en la presente memoria, “excipiente farmacéuticamente aceptable” significa un material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable implicado en dar forma o consistencia a la composición farmacéutica. Cada excipiente debe ser compatible con los otros componentes principio de la composición farmacéutica cuando se mezclan, para evitar las interacciones que podrían reducir sustancialmente la eficacia del polimorfo o sal de la invención cuando se administra a un paciente, y las interacciones que resultarían en composiciones farmacéuticas que no son aceptables farmacéuticamente. Además, cada excipiente, desde luego, debe ser farmacéuticamente aceptable, por ejemplo de una pureza suficientemente alta.

El polimorfo o sal de la invención y el excipiente o excipientes farmacéuticamente aceptables normalmente se formularán en una forma de dosis adaptada para su administración al paciente mediante la vía de administración deseada. Por ejemplo, las formas de dosis incluyen las adaptadas para (1) administración oral, tales como tabletas, cápsulas, comprimido, píldoras, pastilla, polvos, jarabes, elíxires, suspensiones, disoluciones, emulsiones, sobres y obleas; (2) administración parenteral, tales como disoluciones, suspensiones y polvos para reconstitución estériles; (3) administración transdérmica, tales como parches transdérmicos; (4) administración rectal, tales como supositorios; (5) inhalación, tales como aerosoles, disoluciones y polvos secos; (6) administración tópica, tales como cremas, ungüentos, lociones, disoluciones, pastas, aerosoles, espumas y geles.

Los excipientes farmacéuticamente aceptables variarán dependiendo de la forma de dosis particular elegida. Además, se pueden elegir excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados para una función particular que pueda servir en la composición. Por ejemplo, algunos excipientes farmacéuticamente aceptables se pueden elegir por su capacidad para facilitar la producción de formas de dosis uniformes. Algunos excipientes farmacéuticamente aceptables se pueden elegir por su capacidad para facilitar la producción de formas de dosis estables. Algunos excipientes farmacéuticamente aceptables se pueden elegir por su capacidad para llevar o facilitar el transporte del polimorfo o sal de la invención una vez administrado al paciente, de un órgano o parte del cuerpo a otro órgano o parte del cuerpo. Algunos excipientes farmacéuticamente aceptables se pueden elegir por su capacidad para mejorar la conformidad del paciente.

Los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen los siguientes tipos de excipientes: diluyentes, rellenos, aglutinantes, desintegradores, lubricantes, deslizantes, agentes de granulación, agentes de recubrimiento, agentes de mojado, disolventes, codisolventes, agentes de suspensión, emulsionantes, edulcorantes, agentes saborizantes, agentes de enmascaramiento de sabor, agentes colorantes, agentes contra la formación de torta, humectantes, agentes quelantes, plastificantes, agentes incrementadores de viscosidad, antioxidantes, conservadores, estabilizadores, agentes tensoactivos y agentes amortiguadores. El experto en la materia apreciará que algunos excipientes farmacéuticamente aceptables pueden servir para más de una función, y pueden servir para funciones alternativas dependiendo de la cantidad de excipiente presente en la formulación y de qué otros excipientes están presentes en la formulación.

Los expertos en la materia tienen el conocimiento y habilidad que les permite seleccionar excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados en cantidades apropiadas para usarse en la invención. Además, hay varios medios de consulta disponibles para el experto en la materia que describen excipientes farmacéuticamente aceptables, y pueden ser útiles para seleccionar los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados. Los ejemplos incluyen “Remington's Pharmaceutical Sciences” (Mack Publishing Company), “The Handbook of Pharmaceutical Additives” (Gower Publishing Limited), y “The Handbook of Pharmaceutical Excipients” (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press).

Las composiciones farmacéuticas de la invención se preparan usando las técnicas y métodos conocidos para el experto en la materia. Algunos de los métodos usados comúnmente se describen en “Remington's Pharmaceutical Sciences” (Mack Publishing Company).

Por consiguiente, en otro aspecto, la invención está dirigida a un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica que comprende un polimorfo o sal de la invención y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, que comprende mezclar los componentes. Una composición farmacéutica que comprende un polimorfo o sal de la invención se puede preparar, por ejemplo, mediante mezclado a temperatura ambiente y presión atmosférica.

En una realización, el polimorfo o sal de la invención se formulará para administración oral. En otra realización, el polimorfo o sal de la invención se formulará para administración por inhalación. En una realización adicional, el polimorfo o sal de la invención se formulará para administración intranasal.

En un aspecto, la invención está dirigida a una forma de dosis oral sólida, tal como una tableta o cápsula, que comprende una cantidad segura y eficaz de un polimorfo o sal de la invención y un diluyente o relleno. Los diluyentes y rellenos adecuados incluyen lactosa, sacarosa, dextrosa, manitol, sorbitol, almidón (por ejemplo almidón de maíz, almidón de patata y almidón pregelatinizado), celulosa y sus derivados (por ejemplo celulosa microcristalina), sulfato de calcio y fosfato dibásico de calcio. La forma de dosis sólida oral puede comprender adicionalmente un aglutinante. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón (por ejemplo almidón de maíz, almidón de patata y almidón pregelatinizado), gelatina, acacia, alginato de sodio, ácido algínico, tragacanto, goma guar, povidona y celulosa y sus derivados (por ejemplo celulosa microcristalina). La forma de dosis sólida oral puede comprender adicionalmente un desintegrador. Los desintegradores adecuados incluyen crospovidona, almidón glicolato de sodio, croscarmelosa, ácido algínico y carboximetilcelulosa de sodio. La forma de dosis oral sólida puede comprender adicionalmente un lubricante. Los lubricantes adecuados incluyen ácido esteárico, estearato de magnesio, estearato de calcio y talco.

Cuando sea apropiado, las formulaciones de dosis unitarias para administración oral pueden ser microencapsuladas. La composición también se puede preparar para prolongar o sostener la liberación, por ejemplo recubriendo o incorporando material de partículas en polímeros, cera o similares.

Los polimorfos y sales de la invención también se pueden acoplar a polímeros solubles como vehículos de fármaco dirigibles. Dichos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidafenol, polihidroxietilaspartamidafenol, u óxido de polietileno-polilisina sustituido con residuos de palmitoil. Además, los polímeros y sales de la invención se pueden acoplar con una clase de polímeros biodegradables útiles para lograr la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, poli-épsilon-caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos, y copolímeros de bloque entrelazados o anfipáticos de hidrogeles.

En otro aspecto, la invención está dirigida a una forma de dosis oral líquida. Se pueden preparar líquidos orales, tales como una disolución, jarabes y elíxires, en forma de dosis unitarias, de tal manera que una cantidad dada contenga una cantidad predeterminada de un polimorfo o sal de la invención. Los jarabes se pueden preparar disolviendo el polimorfo o sal de la invención en una disolución acuosa con un saborizante adecuado, mientras que los elíxires se preparan usando un vehículo alcohólico inocuo. Las suspensiones se pueden formular dispersando el polimorfo o sal de la invención en un vehículo inocuo. También se pueden añadir solubilizantes y emulsionantes tales como alcoholes isoestearílicos etoxilados y éteres de polioxietilensorbitol, conservadores, aditivos de sabor como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina, u otros edulcorantes artificiales, y similares.

En otro aspecto, la invención está dirigida a una forma de dosis adaptada para su administración a un paciente mediante inhalación, por ejemplo como un polvo seco, un aerosol, una suspensión, o una composición en disolución. En una realización, la invención está dirigida a una forma de dosis adaptada para su administración a un paciente mediante inhalación como un polvo seco. En una realización adicional, la invención está dirigida a una forma de dosis adaptada para su administración a un paciente mediante inhalación por medio de un nebulizador.

Las composiciones de polvo seco para su distribución al pulmón por inhalación normalmente comprenden un polimorfo o sal de la invención como un polvo finamente dividido, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables como polvos finamente. Los excipientes farmacéuticamente aceptables particularmente adecuados para el uso en polvos secos son conocidos para los expertos en la materia, e incluyen lactosa, almidón, manitol y mono-, di- y polisacáridos. El polvo finamente dividido se puede preparar, por ejemplo, mediante micronización y molienda. Generalmente el compuesto de tamaño reducido (por ejemplo, micronizado) se puede definir por un valor de D50 de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 micras (por ejemplo, medido usando difracción de láser).

El polvo seco se le puede administrar al paciente mediante un inhalador de polvo seco de depósito (RDPI) que tiene un depósito adecuado para guardar múltiplos (dosis no medidas) del medicamento en forma de polvo seco. Los RDPIs normalmente incluyen medios para medir cada dosis de medicamento del depósito al sitio de distribución. Por ejemplo, los medios de medida pueden comprender una copa dosificadora que se mueve de una primera posición en donde la copa se llena con un medicamento del depósito, a una segunda posición en donde la dosis de medicamento medida queda disponible para su inhalación por el paciente.

Alternativamente, el polvo seco se puede presentar en cápsulas (por ejemplo de gelatina o plástico), cartuchos o paquetes de burbujas, para usarse en un inhalador de polvo seco de dosis múltiples (MDPI). Los MDPIs son inhaladores en donde el medicamento está comprendido dentro de un paquete de dosis múltiples que contiene (o que lleva de otra manera) dosis múltiples definidas de un medicamento (o partes de las mismas). Cuando el polvo seco se presenta como un paquete de burbujas, comprende múltiples burbujas para contener el medicamento en forma de polvo seco. Las burbujas se disponen normalmente de manera regular para facilitar la liberación del medicamento. Por ejemplo, las burbujas se pueden disponer en una forma generalmente circular en un paquete de burbujas en forma de disco, o las burbujas pueden ser de forma alargada, por ejemplo comprendiendo una tira o una cinta. Cada cápsula, cartucho o burbuja puede contener, por ejemplo, entre 20 |jg y 1o mg del polimorfo o sal de la invención.

Los aerosoles se pueden formar suspendiendo o disolviendo un polimorfo o sal de la invención en un propulsor licuado. Los propulsores adecuados incluyen halocarburos, hidrocarburos y otros gases licuados. Los propulsores representativos incluyen: triclorofluorometano (propulsor 11), diclorofluorometano (propulsor 12), diclorotetrafluoroetano (propulsor 114), tetrafluoroetano (HFA-134a), 1,1-difluoroetano (HFA-152a), difluorometano (HFA-32), pentafluoroetano (HFA-12), heptafluoropropano (HFA-227a), perfluoropropano, perfluorobutano, perfluoropentano, butano, isobutano y pentano. Los aerosoles que comprenden un polimorfo o sal de la invención normalmente se administrarán a un paciente mediante un inhalador dosificador (MDI). Dichos dispositivos son conocidos para los expertos en la materia.

El aerosol puede contener excipientes farmacéuticamente aceptables adicionales, usados normalmente con MDIs, tales como agentes tensoactivos, lubricantes, codisolventes y otros excipientes, para mejorar la estabilidad física de la formulación, para mejorar el rendimiento de la válvula, para mejorar la solubilidad, o para mejorar el sabor.

Así, como un aspecto adicional de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica en aerosol que comprende un polimorfo o sal de la invención y como propulsor un fluorocarburo o clorofluorocarburo que contiene hidrógeno, opcionalmente en combinación con un agente tensoactivo y/o un codisolvente.

De acuerdo con otro aspecto de la invención, se provee una formulación farmacéutica en aerosol en donde el propulsor se selecciona de 1,1,1,2-tetrafluoroetano, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano, y mezclas de ellos.

Las formulaciones de la invención se pueden hacer amortiguadoras agregando agentes amortiguadores adecuados.

Se pueden formular cápsulas y cartuchos para usarse en un inhalador o insuflador, por ejemplo de gelatina, conteniendo una mezcla de polvo para inhalación de un polimorfo o sal de la invención y una base de polvo adecuada, tal como lactosa o almidón. Cada cápsula o cartucho puede contener en general de 20 |jg a 10 mg del polimorfo o sal de la invención. Alternativamente, el polimorfo o sal de la invención se puede presentar sin excipientes tales como lactosa.

La proporción del polimorfo o sal activa en las composiciones locales de acuerdo con la invención depende del tipo preciso de formulación que se va a preparar, pero generalmente estará dentro de la escala de 0,001 a 10 % en peso. Generalmente, en la mayoría de tipos de preparaciones, la proporción usada estará en la escala de 0,005 a 1 %, por ejemplo de 0,01 a 0,5 %. Sin embargo, en polvos para inhalación o insuflación la proporción usada normalmente estará dentro de la escala de 0.1 a 5 %.

Las formulaciones de aerosol se disponen preferiblemente de tal manera que cada dosis medida o “golpe” de aerosol contiene de 20 jg a 10 mg, preferiblemente de 20 jg a 2000 jg , muy preferiblemente de 20 jg a 500 jg de un polimorfo o sal de la invención. La administración puede ser una vez al día o varias veces al día, por ejemplo 2, 3, 4 u 8 veces, dando por ejemplo 1,2 o 3 dosis cada vez. La dosis diaria total de un aerosol estará dentro de la escala de 100 jg a 10 mg, preferiblemente de 200 jg a 2000 jg . La dosis diaria total y la dosis medida suministrada por cápsulas y cartuchos en un inhalador o insuflador generalmente será el doble de la suministrada con formulaciones de aerosol.

En el caso de formulaciones de aerosol en suspensión, el tamaño de partícula de las partículas de fármaco (por ejemplo micronizado) debe ser tal que permita la inhalación de sustancialmente todo el fármaco hacia los pulmones después de la administración de la formulación de aerosol, y de este modo será menor de 100 micras, convenientemente menor de 20 micras, en particular en la escala de 1 a 10 micras, por ejemplo de 1 a 5 micras, muy preferiblemente de 2 a 3 micras.

Las formulaciones de la invención se pueden preparar por dispersión o disolución del medicamento y un polimorfo o sal de la invención en el propulsor seleccionado en un envase adecuado, por ejemplo con la ayuda de sonicación o un mezclador de alto cizallamiento. El procedimiento se efectúa convenientemente bajo condiciones de humedad controlada.

La estabilidad química y física y la aceptación farmacéutica de las formulaciones de aerosol de acuerdo con la invención pueden ser determinadas con técnicas muy conocidas para los expertos en la materia. De esta manera, por ejemplo, la estabilidad química de los componentes puede ser determinada por medio de una prueba de HPLC, por ejemplo después de almacenamiento prolongado del producto. Se pueden obtener datos de estabilidad física de otras técnicas analíticas convencionales, tales como por ejemplo pruebas de fuga, mediante la prueba de suministro de válvula (pesos promedio de disparo por accionamiento), mediante la prueba de reproducibilidad de dosis (principio activo por accionamiento), y análisis de distribución del aerosol.

La estabilidad de las formulaciones de aerosol en suspensión de acuerdo con la invención se puede medir mediante las técnicas convencionales, por ejemplo midiendo la distribución de tamaño de floculación usando un instrumento de retrodispersión de luz, o midiendo la distribución de tamaño de partícula por impacto de cascada o por medio del procedimiento analítico “impactador de dos etapas”. Como se en la presente memoria, la referencia a la prueba de “ impactador de dos etapas” significa la “Determinación del depósito de la dosis emitida en inhalaciones presurizadas usándose el aparato A”, como se define en la Farmacopea Británica de 1988, p. A204-207, apéndice XVll C. Estas técnicas permiten calcular la “fracción respirable” de las formulaciones de aerosol. Un método usado para calcular la “fracción respirable” es mediante la “fracción de partícula fina”, que es la cantidad de principio activo recolectado en la cámara de impacto inferior por accionamiento, expresada como el porcentaje de la cantidad total de principio activo suministrado por accionamiento, usando el método de impactador de dos etapas arriba descrito.

El término “ inhalador dosificador” o MDI significa una unidad que comprende un bote, una tapa asegurada que cubre el bote y una válvula dosificadora de formulación situada en la tapa. El sistema MDI incluye un dispositivo de canalización adecuado. Los dispositivos de canalización adecuados comprenden por ejemplo un accionador de válvula y un pasaje cilíndrico o cónico, a través del cual el medicamento puede ser suministrado del bote lleno a través de la válvula dosificadora a la nariz o boca de un paciente, por ejemplo un accionador de pieza bucal.

Generalmente los botes de MDI comprenden un envase capaz de resistir la presión de vapor del propulsor usado, tales como una botella de plástico o de vidrio revestido con plástico, o preferiblemente un bote de metal, por ejemplo aluminio o una aleación del mismo, que opcionalmente puede estar anodizado, revestido de laca y/o revestido de plástico (por ejemplo, el documento WO96/32099, en donde una parte o todas las superficies internas se revisten con uno o más polímeros de fluorocarbono, opcionalmente en combinación con uno o más polímeros que no son fluorocarbono), dicho envase se cierra con una válvula dosificadora. La tapa se puede asegurar sobre el bote por medio de soldadura ultrasónica, acoplamiento de rosca o doblado y comprimido. Los MDIs enseñados en la presente se pueden preparar mediante los métodos conocidos (por ejemplo, véase Byron, arriba citado, y el documento WO096/32099). Preferiblemente el bote se acopla con un ensamble de tapa, en donde una válvula dosificadora de fármaco se coloca en la tapa, y los bordes de dicha tapa se doblan y comprimen en su posición.

En una realización de la invención, la superficie interna metálica del bote se reviste con un fluoropolímero, muy preferiblemente mezclado con un compuesto no fluoropolímero. En otra realización de la invención, la superficie interna metálica del bote se reviste con una mezcla polimérica de politetrafluoroetileno (PTFE) y polietersulfona (PES). En una realización adicional de la invención, toda la superficie interna metálica del bote se reviste con una mezcla polimérica de politetrafluoroetileno (PTFE) y polietersulfona (PES).

Las válvulas dosificadoras se diseñan para suministrar una cantidad medida de la formulación por accionamiento, e incorporan un empaquetamiento para impedir la fuga del propulsor a través de la válvula. El empaquetamiento puede comprender cualquier material elastomérico adecuado, tal como por ejemplo polietileno de baja densidad, clorobutilo, bromobutilo, EPDM, caucho de butadieno-acrilonitrilo negros y blancos, caucho de butilo y neopreno. Las válvulas adecuadas están disponibles comercialmente de fabricantes muy conocidos en la industria del aerosol, por ejemplo de Valois, Francia (por ejemplo, DF10, DF30, DF60), Bespak PLC, Reino Unido (por ejemplo, BK300, b K357) y 3M-Neotechnic Ltd, Reino Unido (por ejemplo, SpraymiserTM).

En varias realizaciónes, los MDIs también se pueden usar en conjunto con otras estructuras tales como por ejemplo, sin limitación, paquetes de envoltura para guardar y contener los MDIs, que incluyen los que se describen en las patentes de EE. UU. Nos. 6,119,853; 6,179,118; 6,315,112; 6,352,152; 6,390,291; y 6,679,374, y también las unidades contadoras de dosis, tales como por ejemplo, sin limitación, las que se describen en las patentes de EE. UU. Nos.

6,360,739 y 6,431,168.

En la fabricación de aerosoles farmacéuticos se pueden utilizar los métodos de fabricación a granel y maquinaria convencionales, muy conocidos para los expertos en la materia, para preparar lotes a gran escala para la producción comercial de los botes llenos. De esta manera, por ejemplo, en un método de fabricación a granel para preparar formulaciones de aerosol en suspensión, los bordes de una válvula dosificadora se doblan y comprimen junto con los bordes de un bote de aluminio para formar un bote vacío. El medicamento en partículas se añade a un recipiente de carga, y un propulsor licuado junto con los excipientes opcionales se surten a presión a un recipiente de fabricación a través del recipiente de carga. La suspensión de fármaco se mezcla antes de reciclar hacia una máquina de llenado y entonces una alícuota de la suspensión de fármaco se surte al bote a través de la válvula dosificadora. En un ejemplo del método de fabricación a granel para preparar formulaciones de aerosol en disolución, los bordes de una válvula dosificadora se doblan y comprimen junto con los bordes de un bote de aluminio para formar un bote vacío. El propulsor licuado junto con los excipientes opcionales y el medicamento disuelto se surten a presión a un recipiente de fabricación a través del recipiente de carga.

En un procedimiento alternativo, una alícuota de la formulación licuada se añade a un bote abierto bajo condiciones que son suficientemente frías para asegurar que la formulación no se vaporice, y después los bordes de una válvula dosificadora se doblan y comprimen junto con los bordes del bote.

Normalmente, en los lotes preparados para uso farmacéutico se revisa el peso de cada bote lleno y el bote se codifica con un número de lote y se mete en una bandeja para su almacenamiento antes de las pruebas de liberación.

Las suspensiones y disoluciones que comprenden un polimorfo o sal de la invención también se pueden administrar a un paciente por medio de un nebulizador. El disolvente o agente de suspensión utilizado para la nebulización puede ser cualquier líquido farmacéuticamente aceptable tal como agua, disolución salina acuosa, alcoholes o glicoles, por ejemplo etanol, alcohol isopropílico, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol, etc., o mezclas de ellos. Las disoluciones salinas utilizan sales que presentan poca o ninguna actividad farmacológica después de su administración. Para este fin se pueden usar sales orgánicas, como las sales de amonio o halógeno de metal alcalino, por ejemplo cloruro de sodio, cloruro de potasio, o sales orgánicas como las sales de potasio, sodio y amonio de ácidos orgánicos, por ejemplo ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido acético, ácido tartárico, etc.

Se le pueden agregar otros excipientes farmacéuticamente aceptables a la suspensión o disolución. El polimorfo o sal de la invención se puede estabilizar agregando un ácido inorgánico, por ejemplo ácido clorhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico y/o ácido fosfórico; un ácido orgánico, por ejemplo ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido acético y ácido tartárico, etc.; un agente de formación de complejo como EDTA o ácido cítrico y sales de ellos; o un antioxidante como vitamina E o ácido ascórbico. Estos se pueden usar solos o juntos para estabilizar el polimorfo o sal de la invención. Se pueden añadir conservadores como cloruro de benzalconio o ácido benzoico y sales de ellos. Se puede añadir un agente tensoactivo particularmente para mejorar la estabilidad física de las suspensiones. Estos incluyen lecitina, dioctilsulfosuccinato de disodio, ácido oleico y ésteres de sorbitán.

En un aspecto adicional, la invención está dirigida a una forma de dosis adaptada para administración intranasal.

Las formulaciones para su administración intranasal pueden incluir formulaciones de aerosol presurizadas y formulaciones acuosas administrabas en la nariz mediante una bomba presurizada. Son de particular interés las formulaciones que no están presurizadas y están adaptadas para administrarse tópicamente en la cavidad nasal. Las formulaciones adecuadas contienen agua como diluyente o vehículo para este propósito. Se pueden proveer formulaciones acuosas para su administración en el pulmón o nariz provistas de excipientes convencionales tales como agentes amortiguadores, agentes modificadores de tonicidad y similares. Las formulaciones acuosas también se pueden administrar en la nariz por nebulización.

El polimorfo y sales de la invención se pueden formular como una formulación fluida para su suministro desde un dispensador de fluido, por ejemplo un dispensador de fluido que tiene una boquilla dispensadora u orificio dispensador, a través del cual se dispensa una dosis medida de la formulación fluida tras la aplicación de una fuerza aplicada por el usuario a un mecanismo de bomba del dispensador de fluido. Estos dispensadores de fluido generalmente están provistos de un depósito de múltiples dosis medidas de la formulación fluida, las dosis siendo dispensadoras tras accionamientos secuenciales de la bomba. La boquilla u orifico dispensador se puede configurar para su inserción en las fosas nasales del usuario para el despacho del aerosol de la formulación fluida en la cavidad nasal. Un dispensador de fluido del tipo anteriormente mencionado se describe e ilustra en WO05/044354, cuyo contenido completo se incorpora aquí como referencia. El dispensador tiene un alojamiento que aloja un dispositivo de descarga de fluido que tiene una bomba de compresión montada en un recipiente para contener una formulación de fluido. El alojamiento tiene por lo menos una palanca lateral operable con el dedo, que se mueve hacia dentro con respecto al alojamiento, para hacer de leva en el recipiente ascendentemente en el alojamiento, para hacer que la bomba comprima y bombee una dosis medida de la formulación fuera del vástago de bomba, a través de una boquilla nasal del alojamiento. En una realización, el dispensador de fluido es del tipo general ilustrado en las figuras 30-40 del documento WO05/044354.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración intranasal en donde el vehículo es un sólido, incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en la escala de 20 a 500 micras, que se administra mediante inhalación rápida a través del pasaje nasal desde el recipiente del polvo, sostenido cerca de la nariz. Las composiciones adecuadas en donde el vehículo es un líquido, para administración como un aerosol nasal o como gotas nasales, incluyen disoluciones acuosas u oleosas del polimorfo o sal de la invención.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración transdérmica se pueden presentar como parches separados destinados a permanecer en contacto directo con la epidermis del paciente durante un periodo prolongado. Por ejemplo, el principio activo se puede suministrar desde el parche mediante iontoforesis, como se describe en general en Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración tópica se pueden formular como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, disoluciones, pastas, geles, preparaciones para atomizar, aerosoles o aceites.

Los ungüentos, cremas y geles se pueden formular, por ejemplo, con una base acuosa u oleosa con la adición de un agente espesante y/o gelificante adecuado, y/o disolventes. Estas bases pueden incluir así, por ejemplo, agua y/o un aceite como parafina líquida o un aceite vegetal como el aceite de ajonjolí o aceite de ricino, o un disolvente como polietilenglicol. Los agentes espesantes y agentes gelificantes que se pueden usar de acuerdo con la naturaleza de la base incluyen parafina blanda, estearato de aluminio, alcohol cetoestearílico, polietilenglicoles, grasa de lana, cera de abejas, carboxipolimetileno y derivados de celulosa, y/o monoestearato de glicerilo, y/o agentes emulsionantes no iónicos.

Las lociones se pueden formular con una base acuosa u oleosa y en general también contendrán uno o más agentes emulsionantes, agentes estabilizadores, agentes dispersantes, agentes de suspensión o agentes espesantes.

Los polvos para aplicación externa se pueden formar con la ayuda de cualquier base de polvo adecuada, por ejemplo talco, lactosa o almidón. Las gotas se pueden formular con una base acuosa o no acuosa que también comprende uno o más agentes dispersantes, agentes solubilizantes, agentes de suspensión o conservadores.

Las preparaciones tópicas se pueden administrar por medio de una o más aplicaciones al día en el área afectada; sobre las áreas de la piel se pueden usar ventajosamente apósitos oclusivos. Se puede lograr un suministro continuo o prolongado por medio de un sistema de depósito adhesivo.

Para el tratamiento del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo la boca y la piel, las composiciones se pueden aplicar como un ungüento o crema tópica. Cuando se formulan en un ungüento, el polimorfo o sal de la invención se puede usar con una base de ungüento parafínica o miscible en agua. Alternativamente, el polimorfo o sal de la invención se puede formular en una crema o en una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen disoluciones inyectables estériles, acuosas y no acuosas, que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos, y solutos que hacen a la formulación isotónica con la sangre del receptor deseado; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las composiciones se pueden presentar en envases de dosis unitaria o dosis múltiples, por ejemplo ampollas y frascos sellados, y se pueden almacenar en una condición congelada-desecada (liofilizada), que solo requiere la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo agua inyectable, inmediatamente antes de usarse. Se pueden preparar disoluciones y suspensiones inyectables extemporáneas a partir de polvos, gránulos y tabletas estériles.

Los polimorfos, sales y composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención se pueden usar en combinación con, o incluyendo, uno o más de otros agentes terapéuticos, seleccionados por ejemplo de agentes antiinflamatorios, agentes anticolinérgicos (particularmente un antagonista del receptor M1/M2/M3), agonistas del adrenoreceptor p2, agentes antiinfecciosos como los antibióticos o antivirales, o antihistamínicos. Así, la invención proporciona en un aspecto adicional una combinación que comprende un polimorfo o sal de la invención junto con uno o más de otros agentes terapéuticamente activos, seleccionados por ejemplo de un agente antiinflamatorio tal como un corticosteroide o un AINE, un agente anticolinérgico, un agonista del adrenoreceptor p2, un agente antiinfeccioso como un antibiótico o un antiviral, o un antihistamínico. Una realización de la invención abarca combinaciones que comprenden un polimorfo o sal de la invención junto con un agonista del adrenoreceptor p2, y/o un anticolinérgico, y/o un inhibidor de PDE-4, y/o un antihistamínico.

En una realización, la invención proporciona una combinación que comprende un polimorfo o sal de la invención que es selectivo para PI3K8, junto con un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo que es selectivo para otra PI3 quinasa, por ejemplo PI3Ky.

Una realización de la invención abarca combinaciones que comprenden uno o dos de otros agentes terapéuticos.

Será evidente para el experto en la materia que, cuando sea apropiado, los otros principios terapéuticos se pueden usar en forma de sales, por ejemplo sales de metal alcalino o de amina, o como sales de adición de ácido, o profármacos, o como ésteres, por ejemplo ésteres de alquilo inferior, o como solvatos, por ejemplo hidratos, para optimizar la actividad y/o estabilidad y/o características físicas, tales como la solubilidad, del principio terapéutico. También será evidente que, cuando sea apropiado, los principios terapéuticos se pueden usar en forma ópticamente pura.

En una realización, la invención abarca una combinación que comprende un polimorfo o sal de la invención junto con un agonista del adrenoreceptor p2.

Los ejemplos de los agonistas del adrenoreceptor p2 incluyen salmeterol (que puede ser un racemato o un solo enantiómero, tal como el enantiómero R), salbutamol (que puede ser un racemato o un solo enantiómero, tal como el enantiómero R), formoterol (que puede ser un racemato o un solo diasterómero, tal como el diasterómero R,R), salmefamol, fenoterol, carmoterol, etanterol, naminterol, clenbuterol, pirbuterol, flerbuterol, reproterol, bambuterol, indacaterol, terbutalina y sus sales, por ejemplo la sal xinafoato (1-hidroxi-2-naftalenocarboxilato) de salmeterol, la sal sulfato o base libre de salbutamol, o la sal fumarato de formoterol. En una realización se prefieren los agonistas del adrenoreceptor p2 de acción prolongada, por ejemplo, los compuestos que propocionan broncodilatación eficaz durante aproximadamente 12 h o más.

Otros agonistas del adrenoreceptor p2 incluyen los que se describen en los documentos WO 02/066422, WO 02/070490, WO 02/076933, WO 03/024439, WO 03/072539, WO 03/091204, WO 04/016578, WO 2004/022547, WO 2004/037807, WO 2004/037773, WO 2004/037768, WO 2004/039762, WO 2004/039766, WO01/42193 y WO03/042160.

Los ejemplos de los agonistas del adrenoreceptor p2 incluyen:

3-(4-{[6-({(2R)-2-hidroxi-2-[4-hidroxi-3-(hidroximetil)fenil]etil}amino)-hexil]oxi}butil)bencenosulfonamida;

3- (3-{[7-({(2R)-2-hidroxi-2-[4-hidroxi-3-hidroximetil)fenil]etil}-amino)-heptil]oxi}propil)bencenosulfonamida;

4- {(1R)-2-[(6-{2-[(2,6-diclorobencil)oxi]etoxi}hexil)amino]-1-hidroxietil}-2-(hidroximetil)fenol;

4-{(1R)-2-[(6-{4-[3-(ciclopentilsulfonil)fenil]butoxi}hexil)amino]-1-hidroxietil}-2-(hidroximetil)fenol;

N-[2-hidroxil-5-[(1R)-1-hidroxi-2-[[2-4-[[(2R)-2-hidroxi-2-feniletil]amino]fenil]etil]amino]etil]fenil]formamida;

N-2-{2-[4-(3-fenil-4-metoxifenil)aminofenil]etil}-2-hidroxi-2-(8-hidroxi-2(1H)-quinolinon-5-il)etilamina; y

5- [(R)-2-(2-{4-[4-(2-amino-2-metil-propoxi)-fenilamino]-fenil}-etilamino)-1-hidroxi-etil]-8-hidroxi-1H-quinolin-2-ona.

El agonista del adrenoreceptor p2 puede estar en forma de una sal formada con un ácido farmacéuticamente aceptable, seleccionado de ácido sulfúrico, clorhídrico, fumárico, hidroxinaftoico (por ejemplo 1- o 3-hidroxi-2-naftoico), cinámico, cinámico sustituido, trifenilacético, sulfámico, sulfanílico, naftalenoacrílico, benzoico, 4-metoxibenzoico, 2- o 4-hidroxibenzoico, 4-clorobenzoico y 4-fenilbenzoico.

Los agentes antiinflamatorios adecuados incluyen los corticosteroides. Los corticosteroides adecuados que se pueden usar en combinación con los polimorfos o sales de la invención son los corticosteroides orales e inhalados, y sus profármacos que tienen actividad antiinflamatoria. Los ejemplos incluyen metilprednisolona, prednisolona, dexametasona, propionato de fluticasona, éster de S-fluorometilo del ácido 6a,9a-difluoro-11p-hidroxi-16a-metil-17a-[(4-metil-1,3-tiazol-5-carbonil)oxi]-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17p-carbotioico, éster de S-fluorometilo del ácido 6a,9adifluoro-17a-[(2-furanilcarbonil)oxi]-11p-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17p-carbotioico (furoato de fluticasona), éster de S-(2-oxo-tetrahidro-furan-3S-ilo) del ácido 6a,9a-difluoro-11p-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17apropioniloxi-androsta-1,4-dieno-17p-carbotioico, éster de S-cianometilo del ácido 6a,9a-difluoro-11p-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-(2,2,3,3-tetrametilcidopropilcarbonil)oxi-androsta-1,4-dieno-17p-carbotioico y éster de S-fluorometilo del ácido 6a,9a-difluoro-11p-hidroxi-16a-metil-17a-(1-metilciclopropilcarbonil)oxi-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17pcarbotioico, ésteres de beclometasona (por ejemplo, el éster 17-propionato o el éster 17,21-dipropionato), budesonida, flunisolida, ésteres de mometasona (por ejemplo, furoato de mometasona), triamcinolona acetonida, rofleponida, ciclesonida (16a,17-[[(R)-ciclohexilmetilen]bis(oxi)]-11p,21-dihidroxi-pregna-1,4-dien-3,20-diona), propionato de butixocort, RPR-106541, y ST-126. Los corticosteroides preferidos incluyen propionato de fluticasona, éster de S-fluorometilo del ácido 6a,9a-difluoro-11p-hidroxi-16a-metil-17a-[(4-metil-1,3-tiazol-5-carbonil)oxi]-3-oxoandrosta-1,4-dieno-17p-carbotioico, éster de S-fluorometilo del ácido 6a,9a-difluoro-17a-[(2-furanilcarbonil)oxi]-11phidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17p-carbotioico, éster de S-cianometilo del ácido 6a,9a-difluoro-11phidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-(2,2,3,3-tetrametilciclopropilcarbonil)oxi-androsta-1,4-dieno-17p-carbotioico, y éster de S-fluorometilo del ácido 6a,9a-difluoro-11p-hidroxi-16a-metil-17a-(1-metilciclopropilcarbonil)oxi-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17p-carbotioico. En una realización, el corticosteroide es el éster de S-fluorometilo del ácido 6a,9a-difluoro-17a-[(2-furanilcarbonil)oxi]-11p-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17p-carbotioico.

Los ejemplos de los corticosteroides pueden incluir los que se describen en los documentos WO2002/088167, WO2002/100879, WO2002/12265, WO2002/12266, WO2005/005451, WO2005/005452, WO2006/072599 y WO2006/072600.

Los compuestos no esteroideos que tienen agonismo glucocorticoide que pueden tener selectividad por transrepresión sobre la transactivación, y que pueden ser de utilidad en una terapia de combinación, incluyen los que están incluidos en las siguientes patentes: WO03/082827, W098/54159, WO04/005229, WO04/009017, WO04/018429, WO03/104195, WO03/082787, WO03/082280, WO03/059899, WO03/101932, WO02/02565, WO01/16128, WO00/66590, WO03/086294, WO04/026248, WO03/061651 y WO03/08277. Más compuestos no esteroideos están incluidos en los documentos: WO2006/000401, WO2006/000398 y WO2006/015870.

Los ejemplos de agentes antiinflamatorios incluyen los fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINEs).

Los ejemplos de AINEs incluyen cromoglicato de sodio, nedocromil sodio, inhibidores de fosfodiesterasa (PDE) (por ejemplo, teofilina, inhibidores de PDE4 o inhibidores mixtos PDE3/PDE4), antagonistas de leucotrieno, inhibidores de la síntesis de leucotrieno (por ejemplo, montelukast), inhibidores de ¡NOS, inhibidores de triptasa y elastasa, antagonistas de integrina beta-2 y agonistas o antagonistas del receptor de adenosina (por ejemplo, agonistas de adenosina 2a), antagonistas de citocina (por ejemplo, antagonistas de quimocina tales como un antagonista de CCR3) o inhibidores de la síntesis de citocina, o inhibidores de 5-lipooxigenasa. Un inhibidor de ¡NOS (óxido nítrico sintasa inducible) es preferiblemente para administración oral. Los ejemplos de inhibidores de ¡NOS incluyen los que se describen en los documentos WO93/13055, WO98/30537, WO02/50021, W095/34534 y W099/62875. Los ejemplos de inhibidores de CCR3 incluyen los que se describen en WO02/26722.

En una realización, la invención proporciona el uso de los polimorfos y sales de la invención en combinación con un inhibidor de fosfodiesterasa 4 (PDE4), especialmente en el caso de una formulación adaptada para inhalación. El inhibidor específico de PDE4 útil en este aspecto de la invención puede ser cualquier compuesto conocido que inhiba la enzima PDE4 o que se descubra que actúa como un inhibidor de PDE4, y que sea inhibidor solo de PDE4, no compuestos que inhiban otros miembros de la familia de PDE, tales como PDE3 y PDE5, y también PDE4.

Los compuestos incluyen el ácido c/s-4-ciano-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)ciclohexan-1-carboxílico, 2-carbometoxi-4-ciano-4-(3-ciclopropilmetoxi-4-difluorometoxifenil)ciclohexan-1-ona y c/s-[4-ciano-4-(3-ciclopropilmetoxi-4-difluorometoxifenil)ciclohexan-1-ol]. También el ácido c/s-4-ciano-4-[3-(ciclopentiloxi)-4-metoxifenil]ciclohexano-1-carboxílico (también conocido como cilomilast) y sus sales, ésteres, profármacos o formas físicas, que se describen en la patente de EE. UU. No. 5,552,438, expedida el 3 de septiembre de 1996; esta patente y los compuestos que describe se incorporan en la presente como referencia.

Otros compuestos incluyen AWD-12-281 de Elbion (Hofgen, N. et al. 15th EFMC Int Symp Med Chem (Sept 6 -10, Edinburgh), 1998, Abs, P. 98; CAS reference No. 247584020-9); un derivado de 9-benciladenina denominado NCS-613 (INSERM); D-4418 de Chiroscience y Schering-Plough; un inhibidor de PDE4 de benzodiazepina identificado como Cl-1018 (PD-168787) y atribuido a Pfizer; un derivado de benzodioxol descrito por Kyowa Hakko en W099/16766; K-34 de Kyowa Hakko; V-11294A de Napp (Landells, L.J. et al. Eur Resp J [Annu Cong Eur Resp Soc (Sept 19-23 , Geneva) 1998] 1998, 12 (Supl. 28): Abs, P. 2393); roflumilast (referencia CAS No 162401-32-3) y una ftalazinona (WO99/47505, cuya descripción se incorpora aquí como referencia) de Byk-Gulden; pumafentrina, (-)-p-[(4aR*,10bS*)-9-etoxi-1,2,3,4,4a,10b-hexahidro-8-metoxi-2-metilbenzo[c][1,6]naftiridin-6-il]-N,N-diisopropilbenzamida, que es un inhibidor mixto de PDE3/PDE4 que ha sido preparado y dado a conocer por Byk-Gulden, ahora Altana; arofilina bajo desarrollo por Almirall-Prodesfarma; VM554/UM565 de Vernalis; o T-440 (Tanabe Seiyaku; Fuji, K. et al. J Pharmacol Exp Ther, 1998, 284(1): 162), yT2585.

Se describen compuestos adicionales en la solicitud de patente internacional publicada WO04/024728 (Glaxo Group Ltd), WO04/056823 (Glaxo Group Ltd) y WO04/103998 (Glaxo Group Ltd) (p. ej., véase el ejemplo 399 o 544 ahí descritos). También se describen más compuestos en WO2005/058892, WO2005/090348, WO2005/090353 y WO2005/090354, todos a nombre de Glaxo Group Limited.

Los ejemplos de agentes anticolinérgicos son los compuestos que actúan como antagonistas en los receptores muscarínicos, en particular los compuestos que son antagonistas de los receptores M1 o M3, antagonistas dobles de los receptores M1/M3 o M2/M3, o panantagonistas de los receptores M1/M2/M3. Los compuestos ejemplares para administrarse por inhalación incluyen ipratropio (por ejemplo, como el bromuro, CAS 22254-24-6, vendido con el nombre Atrovent), oxitropio (por ejemplo, como el bromuro, CAS 30286-75-0) y tiotropio (por ejemplo, como el bromuro, CAS 136310-93-5, vendido con el nombre Spiriva). También son de interés el revatropato (por ejemplo, como el bromhidrato, CAS 262586-79-8) y LAS-34273 que se describe en WO01/04118. Los compuestos ejemplares para administración oral incluyen pirenzepina (CAS 28797-61-7), darifenacina (CAS 133099-04-4, o CAS 133099-07-7 para el bromhidrato, vendido con el nombre Enablex), oxibutinina (CAS 5633-20-5, vendido con el nombre Ditropan), terodilina (CAS 15793-40-5), tolterodina (CAS 124937-51-5, o CAS 124937-52-6 para el tartrato, vendido con el nombre Detrol), otilonio (por ejemplo, como el bromuro, CAS 26095-59-0, vendido con el nombre Spasmomen), cloruro de trospio ^{( c A s} 10405-02-4) y solifenacina (CAS 242478-37-1, o CAS 242478-38-2 para el succinato, también conocido como YM-905 y vendido con el nombre Vesicare).

Compuestos adicionales se describen en los documentos WO 2005/037280, WO 2005/046586 y WO 2005/104745, que se incorporan en la presente como referencia. Las presentes combinaciones incluyen, pero no se limitan a: yoduro de (3-endo)-3-(2,2-di-2-tieniletenil)-8,8-dimetil-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano;

bromuro de (3-endo)-3-(2-ciano-2,2-difeniletil)-8,8-dimetil-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano;

bromuro de 4-[hidroxi(difenil)metil]-1-{2-[(fenilmetil)oxi]etil}-1-azoniabiciclo[2.2.2]octano; y

bromuro de (1R,5S)-3-(2-ciano-2,2-difeniletil)-8-metil-8-{2-[(fenilmetil)oxi]etil}-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano.

Otros agentes anticolinérgicos incluyen los compuestos descritos en la solicitud de patente de EE. UU. No. 60/487981 que incluyen, por ejemplo:

bromuro de (3-endo)-3-(2,2-di-2-tieniletenil)-8,8-dimetil-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano;

bromuro de (3-endo)-3-(2,2-difeniletenil)-8,8-dimetil-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano;

4-metilbencenosulfonato de (3-endo)-3-(2,2-difeniletenil)-8,8-dimetil-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano;

bromuro de (3-endo)-8,8-dimetil-3-[2-fenil-2-(2-tienil)etenil]-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano; y/o

bromuro de (3-endo)-8,8-dimetil-3-[2-fenil-2-(2-piridinil)etenil]-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano.

Agentes anticolinérgicos adicionales incluyen los compuestos descritos en la solicitud de patente de EE. UU. No.

60/511009 que incluyen, por ejemplo:

yoduro de (endo )-3-(2-metoxi-2,2-di-tiofen-2-il-etil)-8,8-dimetil-8-azonia-biciclo[3.2.1]octano;

3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propionitrilo;

(endo)-8-metil-3-(2,2,2-trifenil-etil)-8-aza-biciclo[3.2.1]octano;

3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propionamida;

ácido 3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propiónico;

yoduro de (endo )-3-(2-ciano-2,2-difenil-etil)-8,8-dimetil-8-azonia-biciclo[3.2.1]octano;

bromuro de (endo )-3-(2-ciano-2,2-difenil-etil)-8,8-dimetil-8-azonia-biciclo[3.2.1]octano;

3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propan-1-ol;

W-bencil-3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propionamida;

yoduro de (endo )-3-(2-carbamoil-2,2-difenil-etil)-8,8-dimetil-8-azonia-biciclo[3.2.1]octano;

1-bencil-3-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]-urea;

1-etil-3-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]-urea;

W-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]-acetamida;

W-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]-benzamida;

3-((endo)-8-met¡l-8-aza-b¡c¡clo[3.2.1]oct-3-¡l)-2,2-d¡-t¡ofen-2-¡l-prop¡on¡tr¡lo;

yoduro de (endo )-3-(2-c¡ano-2,2-d¡-t¡ofen-2-¡l-et¡l)-8,8-d¡met¡l-8-azon¡a-b¡c¡clo[3.2.1]octano;

W-[3-((endo)-8-met¡l-8-aza-b¡c¡clo[3.2.1]oct-3-¡l)-2,2-d¡fen¡l-prop¡l]-bencenosulfonam¡da;

[3-((endo)-8-met¡l-8-aza-b¡c¡clo[3.2.1]oct-3-¡l)-2,2-d¡fen¡l-prop¡l]-urea;

W-[3-((endo)-8-met¡l-8-aza-b¡c¡clo[3.2.1]oct-3-¡l)-2,2-d¡fen¡l-prop¡l]-metanosulfonam¡da; y/o

bromuro de (endo )-3-{2,2-d¡fen¡l-3-[(1-fen¡l-metano¡l)-am¡no]-prop¡l}-8,8-d¡met¡l-8-azon¡a-b¡c¡clo[3.2.1]octano.

Compuestos ad¡c¡onales ¡ncluyen:

yoduro de (endo )-3-(2-metox¡-2,2-d¡-t¡ofen-2-¡l-et¡l)-8,8-d¡met¡l-8-azon¡a-b¡c¡clo[3.2.1]octano;

yoduro de (endo )-3-(2-c¡ano-2,2-d¡fen¡l-et¡l)-8,8-d¡met¡l-8-azon¡a-b¡c¡clo[3.2.1]octano;

bromuro de (endo )-3-(2-c¡ano-2,2-d¡fen¡l-et¡l)-8,8-d¡met¡l-8-azon¡a-b¡c¡clo[3.2.1]octano;

yoduro de (endo )-3-(2-carbamo¡l-2,2-d¡fen¡l-et¡l)-8,8-d¡met¡l-8-azon¡a-b¡c¡clo[3.2.1 ]octano;

yoduro de (endo)-3-(2-c¡ano-2,2-d¡-t¡ofen-2-¡l-et¡l)-8,8-d¡met¡l-8-azon¡a-b¡c¡clo[3.2.1]octano; y/o

bromuro de (endo )-3-{2,2-d¡fen¡l-3-[(1-fen¡l-metano¡l)-am¡no]-prop¡l}8,8-d¡met¡l-8-azon¡a-b¡c¡clo[3.2.1]octano.

En una real¡zac¡ón, la ¡nvenc¡ón proporc¡ona una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un antagon¡sta de H1. Los ejemplos de antagon¡stas de H1 ¡ncluyen, s¡n l¡m¡tac¡ón, amelexanox, astem¡zol, azatad¡na, azelast¡na, acr¡vast¡na, bromfen¡ram¡na, cet¡r¡z¡na, levocet¡r¡z¡na, eflet¡r¡z¡na, clorfen¡ram¡na, clemast¡na, c¡cl¡z¡na, carebast¡na, c¡proheptad¡na, carb¡noxam¡na, descarboetox¡loratad¡na, dox¡lam¡na, d¡met¡ndeno, ebast¡na, ep¡nast¡na, eflet¡r¡z¡na, fexofenad¡na, h¡drox¡z¡na, ketot¡feno, loratad¡na, levocabast¡na, m¡zolast¡na, mequ¡taz¡na, m¡anser¡na, noberast¡na, mecl¡z¡na, norastem¡zol, olopatad¡na, p¡cumast, p¡r¡lam¡na, prometaz¡na, terfenad¡na, tr¡pelenam¡na, temelast¡na, tr¡mepraz¡na y tr¡prol¡d¡na, part¡cularmente cet¡r¡z¡na, levocet¡r¡z¡na, eflet¡r¡z¡na y fexofenad¡na. En una real¡zac¡ón ad¡c¡onal, la ¡nvenc¡ón proporc¡ona una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un antagon¡sta (y/o agon¡sta ¡nverso) de H3. Los ejemplos de antagon¡stas de H3 ¡ncluyen, por ejemplo, los compuestos descr¡tos en los documentos WO2004/035556 y en WO2006/045416. Otros antagon¡stas del receptor de h¡stam¡na que se pueden usar en comb¡nac¡ón con los pol¡morfos y sales de la presente ¡nvenc¡ón ¡ncluyen los antagon¡stas (y/o agon¡stas ¡nversos) del receptor H4, por ejemplo, los compuestos descr¡tos en Jablonowsk¡ et al., J. Med. Chem. 46:3957-3960 (2003).

La ¡nvenc¡ón proporc¡ona así, en un aspecto ad¡c¡onal, una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un ¡nh¡b¡dor de PDE4.

La ¡nvenc¡ón proporc¡ona así, en un aspecto ad¡c¡onal, una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un agon¡sta del adrenoreceptor p2.

La ¡nvenc¡ón proporc¡ona así, en un aspecto ad¡c¡onal, una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un cort¡costero¡de.

La ¡nvenc¡ón proporc¡ona así, en un aspecto ad¡c¡onal, una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un agon¡sta de GR no estero¡deo.

La ¡nvenc¡ón proporc¡ona así, en un aspecto ad¡c¡onal, una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un ant¡col¡nérg¡co.

La ¡nvenc¡ón proporc¡ona así, en un aspecto ad¡c¡onal, una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un ant¡h¡stamín¡co.

La ¡nvenc¡ón proporc¡ona así, en un aspecto ad¡c¡onal, una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un ¡nh¡b¡dor de PDE4 y un agon¡sta del adrenoreceptor p2.

La ¡nvenc¡ón proporc¡ona así, en un aspecto ad¡c¡onal, una comb¡nac¡ón que comprende un pol¡morfo o sal de la ¡nvenc¡ón junto con un ant¡col¡nérg¡co y un ¡nh¡b¡dor de PDE-4.

Las comb¡nac¡ones menc¡onadas anter¡ormente se pueden presentar conven¡entemente en forma de una compos¡c¡ón farmacéut¡ca, y así las compos¡c¡ones farmacéut¡cas que comprenden una comb¡nac¡ón como la que se def¡ne arr¡ba, junto con un d¡luyente o vehículo farmacéut¡camente aceptable, representan un aspecto ad¡c¡onal de la ¡nvenc¡ón. Los componentes ¡nd¡v¡duales de estas comb¡nac¡ones se pueden adm¡n¡strar secuenc¡almente o s¡multáneamente en formulac¡ones farmacéut¡cas separadas o comb¡nadas. En una real¡zac¡ón, los componentes ¡nd¡v¡duales se administrarán simultáneamente en una formulación farmacéutica combinada. Las dosis apropiadas de los agentes terapéuticos conocidos serán apreciadas fácilmente por los expertos en la materia.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con otro agente terapéuticamente activo.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con un inhibidor de PDE4.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con un agonista del adrenoreceptor p2.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con un corticosteroide.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con un agonista de GR no esteroideo.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con un anticolinérgico.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con un antihistamínico.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con un inhibidor de PDE4 y un agonista del adrenoreceptor P2.

La invención proporciona así, en un aspecto adicional, una composición farmacéutica que comprende una combinación de un polimorfo o sal de la invención junto con un anticolinérgico y un inhibidor de PDE4.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos ilustran la invención. Los ejemplos corresponden a polimorfos y sales los cuales ya no se reivindican, se incluyen como ejemplos de referencia.

Cuando se da el nombre de un proveedor comercial después del nombre de un compuesto o un reactivo, por ejemplo “compuesto X (Aldrich)” o “compuesto X /Aldrich”, esto significa que el compuesto X se puede obtener de un proveedor comercial, como el proveedor comercial mencionado. Si no se hace referencia en la presente, el compuesto o reactivo se puede comprar de un proveedor estándar tal como Sigma Aldrich, Lancaster, Fluorochem, TCI, etc.

Los nombres de los compuestos se obtuvieron usando un programa de nomenclatura de compuestos que empareja la estructura con el nombre (por ejemplo, ACD/Name Batch v 9.0).

Detalles experimentales generales

Métodos de espectroscopia de masa con cromatografía de líquidos (LCMS)

El análisis de LCMS se llevó a cabo usando uno de los métodos mencionados más abajo.

Método A:

La instrumentación de LCMS consiste en lo siguiente:

Columna: Columna Acquity UPLC BEH C18 de 1,7 pm, 2,1 mm x 50 mm. Horno de la columna a 40 grados centígrados.

Disolvente A: Agua con ácido fórmico al 0,1% acetato de amonio 10 mM

Disolvente B: MeCN : Agua, 95:5, ácido fórmico al 0,05%

Volumen de inyección: 0.5 |jl

Técnica de inyección: sobrellenado parcial del circuito

Detección en UV: 220 a 330 nm

Velocidad de muestreo de UV: 40 puntos por segundo

Escala de escaneo de MS: 100 a 1000 amu

Velocidad de escaneo de MS: 0,2 segundos de escaneo con un retraso de 0,1 segundos entre los escaneos Función de escaneo de MS: Electroaspersión con conmutación positivo - negativo

Tiempo del ciclo: 2 minutos y 30 segundos

Gradiente:

Método B:

El análisis de HPLC se hizo en una columna Sunfire C18 (30 mm x 4,6 mm, diámetro de empaquetado d.i. 3,5 |jm) a 30 grados centígrados.

Disolvente A = disolución de ácido fórmico al 0,1% v/v en agua.

Disolvente B = disolución de ácido fórmico al 0,1% v/v en acetonitrilo.

El gradiente utilizado fue:

La detección de UV fue una señal promediada de la longitud de onda de 210 nm a 350 nm, y los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa usando ionización de electroaspersión en modo alternado de escaneo positivo y negativo.

Método C:

El análisis de HPLC se hizo sobre Phenomenex Luma C18(2) (50 mm x 2 mm, diámetro de empaquetado d.i. 3 jm , o equivalente validado) a 40 grados centígrados.

Disolvente A = Disolución de TFA al 0.05% v/v en agua.

Disolvente B = Disolución de TFA al 0.05% v/v en acetonitrilo.

El gradiente utilizado fue:

La longitud de onda de detección de UV fue dependiente del analito, y los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa usando electroaspersión de ion positivo.

Método D:

El análisis de HPLC se hizo sobre Phenomenex Luma C18(2) (50 mm x 2 mm, diámetro de empaquetado d.i. 3 |jm, o equivalente validado) a 60 grados centígrados.

Disolvente A = Disolución de TFA al 0,05% v/v en agua.

Disolvente B = Disolución de TFA al 0,05% v/v en acetonitrilo.

El gradiente utilizado fue:

La longitud de onda de detección de UV fue dependiente del analito, y los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa usando electroaspersión de ion positivo.

Métodos de HPLC preparativa automática de masa dirigida

A continuación se describen los métodos para la HPLC preparativa automática de masa dirigida usados para la purificación de los compuestos:

Método A- pH alto

Detalles de la columna: Columna Waters_XBRIDGE Prep C18, 5 jm OBD (30 x 150 mm).

Los disolventes usados fueron:

A = Bicarbonato de amonio 10 mM en agua, ajustado a pH 10 con disolución acuosa de amoniaco.

B = Acetonitrilo amoniaco acuoso al 0.1%.

La recolección fue activada por UV, MS o una combinación de las dos. La detección de UV fue una señal promediada de las longitudes de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa usando ionización de electroaspersión en modo alternado de escaneo positivo y negativo.

Preparación del compuesto A

Compuesto intermedios y ejemplos

Compuesto intermedio 1

6-Cloro-4-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol

Método A

Se disolvió 6-cloro-4-yodo-1H-indazol (30 g, 108 mmol, disponible de Sinova) en W,W-dimetilformamida (300 ml), y se enfrió en un baño de agua de hielo bajo nitrógeno. Se le añadió hidruro de sodio (5,17 g, 129 mmol) en porciones, manteniendo la temperatura por debajo de 10°C. Después de terminar la adición, la mezcla de reacción se agitó 20 min y luego se le añadió cloruro de bencenosulfonilo (16,5 ml, 129 mmol) en porciones durante 15 min. La reacción se dejó calentar a t.a. durante la noche y luego se vació sobre agua de hielo (2 L). El producto precipitado se recogió por filtración, se lavó con agua (~400 ml) y se secó en una estufa de vacío durante la noche, para dar el compuesto del título (43,3 g).

LCMS (Método A): tR 1,38 min, MH+ 419.

Método B

A una disolución agitada de 6-cloro-4-yodo-1H-indazol (633.6 g) en THF (5.7 l) se le añadió hidróxido de sodio (227,4 g), seguido por bisulfato de tetra-n-butilamonio (38,0 g) a 20 ± 3 °C, bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a 20 ± 3°C durante 1 h 3 min, y después se le agregó cloruro de bencenosulfonilo (319 ml) a una velocidad adecuada para mantener la temperatura interna a <25 °C. El cloruro de bencenosulfonilo residual se llevó hacia el recipiente con THF (630 ml), luego la mezcla se agitó durante 1 h 10 min. La mezcla se enfrió a <5 °C y se le añadió agua (12,7 L) a una velocidad adecuada para mantener la temperatura interna por abajo de 5 ± 3 °C, luego la mezcla se agitó a 0-5 °C durante 1 h 20 min. El sólido se recogió por filtración al vacío, se lavó con agua (2 x 1,9 L), se succionó para secar y después se secó más al vacío con una purga de nitrógeno a 40°C ± 3 °C durante la noche, para dar el compuesto del título (780,8 g).

LCMS (Método C): tR 6,28 min, MH+ 419.

Método C

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 6-cloro-4-yodo-1H-indazol.

El 6-cloro-4-yodo-1H-indazol (1,0 eq, 1 p, 50 g), hidróxido de sodio (2,25 eq, 0,324 p, 16,16 g) y hidrógeno sulfato de tetrabutilamonio (0,05 eq, 0,061 p, 3,05 g), se agitaron en THF (9,5 vol, 475 ml) a 20 ± 3 °C bajo una atmósfera de nitrógeno durante 1 h. La mezcla se enfrió a 15 ± 3 °C y se le agregó cloruro de bencenosulfonilo (1,10 eq, 0,51 vol, 25,5 ml), gota a gota durante 20 min, manteniendo la temperatura de reacción a <25 °C, y se lavó con THF (0,5 vol, 25 ml). Después, la mezcla resultante se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a 20± 3 °C durante por lo menos 1 h antes de determinar por HPLC. Después, la mezcla de reacción se agregó a una disolución de ácido clorhídrico 0,25 M (18 vol, 900 ml) enfriada a 0± 3 °C durante 15 minutos, manteniendo la temperatura de la suspensión acuosa a <20 °C. Esta se lavó con una disolución de ácido clorhídrico 0,25M (2 vol, 100 ml). Después, la suspensión anaranjada resultante se agitó a 2 ± 3 °C durante por lo menos 1 h. El sólido se filtró, se lavó con agua (2 x 3 vol, 2 x 150 ml) y se succionó para secar durante 20 min, luego se secó al alto vacío a 40 °C (± 3 °C) a una temperatura constante de la sonda para producir 6-cloro-4-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol como un sólido anaranjado.

Compuesto intermedio 2

6-Cloro-1-(fenilsulfonil)-4-(trimetilestananil)-1H-indazol

El 6-cloro-4-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol (30 g, 71,7 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) (8,1 g, 7,01 mmol), xileno (200 ml), trietilamina (19.98 ml, 143 mmol) y hexameti-diestaño (21,8 ml, 105 mmol), se calentaron a 150 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró en caliente a través de Celite, lavando con más xileno, y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se trituró con ciclohexano y el precipitado se recogió por filtración y se secó en una estufa de vacío para dar el compuesto del título (14,4 g).

LCMS (Método A): tR 1,51 min, MH+ 457.

Compuesto intermedio 3a

2-[6-Cloro-1-(fenilsulfon¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]-1,3-oxazol-5-carbox¡lato de etilo

En 4 lotes, se agregó tetrakis(trifen¡lfosf¡na)palad¡o (0) (3,37 g, 2,92 mmol), 2-cloro-1,3-oxazol-5-carboxilato de etilo (6,65 g, 37,9 mmol, disponible de Apollo Scientific) y yoduro de cobre (l) (1,11 g, 5,83 mmol) a una disolución de 6-cloro-1-(fen¡lsulfonil)-4-(tr¡met¡lestanan¡l)-1H-¡ndazol (13,28 g, 29,2 mmol) en W,W-dimet¡lformamida (52 ml). En 3 de los lotes, se agregó tetrakis(tr¡fen¡lfosf¡na)palad¡o(0) (1,03 g, 0,89 mmol), 2-cloro-1,3-oxazol-5-carboxilato de etilo (2,03 g, 11,59 mmol) y yoduro de cobre (l) (0,34 g, 1,78 mmol) a una disolución de 6-cloro-1-(fenilsulfon¡l)-4-(trimet¡lestanan¡l)-1H-¡ndazol (4,06 g, 8,91 mmol) en W,W-d¡metNformamida (16 ml). En el cuarto lote, se agregó tetrakis(tr¡fen¡lfosf¡na)palad¡o(0) (0,28 g, 0,24 mmol), 2-cloro-1,3-oxazol-5-carboxilato de etilo (0,55 g, 3,14 mmol) y yoduro de cobre (l) (0,09 g, 0,48 mmol) a una disolución de 6-cloro-1-(fen¡lsulfon¡l)-4-(trimet¡lestanan¡l)-1H-¡ndazol (1,10 g, 2,42 mmol) en W,W-dimet¡lformamida (4 ml). Cada lote se calentó y se agitó a 100 °C bajo irradiación de microondas durante 30 min. La mezcla se dejó enfriar a t.a. y el producto precipitado combinadose suspendió en éter dietílico y se recogió por filtración, lavando con más éter dietílico y luego secando en una estufa de vacío durante 72 h. Aproximadamente 5,2 g del sólido resultante se disolvieron en diclorometano y esto se pasó a través de Celite, eluyendo con más diclorometano. El disolvente se evaporó al vacío para dar el compuesto del título como un sólido anaranjado pálido (4.95 g).

LCMS (Método A): tR 1,38 min, MH+ 432.

Compuesto intermedio 3b

2-[6-Cloro-1-(fenilsulfon¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]-1,3-oxazol-5-carbox¡lato de metilo

A una disolución agitada de 6-cloro-4-yodo-1-(fenilsulfon¡lo)-1H-¡ndazol (549,8 g) en tolueno (1,43 L) se le agregó trietilamina (380 ml) a 20 ± 3 °C, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se le agregó hexameti-diestaño (385 ml) en tolueno (825 ml), seguido por tolueno (275 ml) y luego tetrakis(trifen¡lfosf¡na)palad¡o (0) (154,7 g). La mezcla de reacción se calentó a 120°C y se agitó a esta temperatura durante 3 h. La mezcla se dejó enfriar a 20 ± 3°C, se filtró, luego se lavó con tolueno (4,95 L). El filtrado se transfirió a un recipiente limpio a través de un filtro en línea Dominick hunter de 5 |jm, enjuagando con más tolueno (550 ml). Después, el lote se lavó con una disolución acuosa de KF al 50% (5,5 L), la suspensión acuosa se filtró y el filtrado se volvió a combinar con la fase orgánica. La fase acuosa se separó y la fase orgánica se lavó sucesivamente con una disolución acuosa de KF al 50% (5,5 L), seguida por agua (5,5 L). La capa orgánica se diluyó con DMPU (2,75 l) y luego se concentró por destilación al vacío hasta ~ 5,4 volúmenes. A la disolución resultante se le agregó yoduro de cobre (I) (25,5 g) seguido por 2-cloro-1,3-oxazol-5-carboxilato de metilo (279 g, disponible de Apollo Scientific) a 20 ± 3°C. La disolución se desgasificó por medio de vacío y purgas de nitrógeno (x3). Se le agregó tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) (78 g), la mezcla se desgasificó (x3) y luego se calentó a 85-90°C durante 10 h. La mezcla se diluyó con DMSO (13,75 L) y se enfrió a 20 ± 3 °C; luego se le agregó agua (2,75 L) en porciones de ~1 volumen durante ~15 min hasta que empezó la cristalización. La suspensión resultante se dejó reposar a 20°C ± 3°C durante 1,5 h. El sólido se recogió por filtración al vacío, se lavó con agua (2x 2,75Ll), se succionó para secar y se secó más al vacío con una purga de nitrógeno a 45°C ± 5 °C durante la noche, para dar el compuesto del título (341,1 g).

LCMS (Método C): tR 6,08 min, MH+ 418.

Compuesto intermedio 4

{2-[6-Cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il]-1,3-oxazol-5-il}metanol

Método A

Una disolución de 2-[6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il]-1,3-oxazol-5-carboxilato de etilo (5,11 g, 11,8 mmol) en diclorometano (80 ml) se enfrió a -25 °C en un matraz de fondo redondo secado en el horno. Se le agregó gota a gota hidruro de diisobutilaluminio (25 ml, 37,5 mmol, disolución 1,5 M en tolueno), y la reacción se agitó a -20°C durante 3 h. Se le agregó una disolución acuosa de tartrato de sodio y potasio al 10% (80 ml) y la mezcla de reacción se agitó 5 min. El sólido precipitado se separó por filtración y se dividió entre acetato de etilo (500 ml) y agua (500 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con más acetato de etilo (3 x 150 ml). La capa orgánica combinada se secó y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (1,1 g).

LCMS (Método A): tR 1,09 min, MH+ 390.

El filtrado remanente se concentró al vacío en su mayor parte y el residuo se dividió entre acetato de etilo (500 ml) y agua (500 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con más acetato de etilo (3 x 150 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua (2 x 150 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (1,9 g).

LCMS (Método A): tR 1,09 min, MH+ 390.

Método B

A una disolución de 2-[6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il]-1,3-oxazol-5-carboxilato de etilo (1,15 g) en THF (17,25 ml), agitada bajo nitrógeno en un baño de hielo, se le agregó una disolución de hidruro de diisobutilaluminio (5,08 ml, 5,64 mmol) en tolueno. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 h. Se le agregó sulfato de sodio decahidratado (2,5 g); la mezcla se agitó a t.a. durante 1 h, luego se filtró, se lavó con THF (2 x 5 vol) y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (0,98 g).

LCMS (Método D): tR 2,20 min, MH+ 390.

Método C

A una disolución de 2-[6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il]-1,3-oxazol-5-carboxilato de etilo (604,5 g) en THF (8,7 L), agitada bajo nitrógeno a 0 ± 3 °C, se le agregó una disolución de hidruro de diisobutilaluminio aproximadamente 1,3 M (1.8 kg) en tolueno. La mezcla de reacción se agitó a 0 ± 3 °C durante 30 min y luego se diluyó con THF (3 L). Se le agregó sulfato de sodio decahidratado (1,3 kg), manteniendo la temperatura por abajo de 5 °C. La mezcla se agitó a 0 ± 3 °C durante 10 min y luego se calentó a 20 ± 3 °C, y se mantuvo a esta temperatura durante 1 h. La suspensión se filtró, se lavó con THF (4 x 3 L) y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (529,6 g).

LCMS (Método C): tR 5,18 min, MH+ 390.

Método D

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 6-cloro-4-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol.

Se enfrió cloruro de zinc (3,6 eq, 1,17 p, 52,7 g) en tetrahidrofurano (5 vol, 225 ml) a 0-5 °C. Se le agregó al recipiente una disolución del oxazol-5-carboxilato de etilo (1,1 eq, 0,37 p, 18,1 g, corregido para el 92 % p de la prueba) en tetrahidrofurano (5 vol, 225 ml). La suspensión se enfrió a -10 °C (+/-5 °C) bajo una atmósfera de nitrógeno y se le agregó una disolución de bis-(trimetilsilil)-litio-amida 1M en tetrahidrofurano (1,80 eq, 4,30 vol, 193 ml) durante 15 minutos, manteniendo la temperatura a -10 °C (+/-5 °C). La disolución resultante se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a -10 °C (+/-5 °C) durante 1 hora. A la disolución se le agregó 6-cloro-4-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol (1,0 eq, 1,0 p, 45,0 g) y tetrakis-trifenilfosfina-paladio (0,03 eq, 0,083 p, 3,73 g) (la mezcla se desgasificó con vacío/nitrógeno 3 veces) y luego se calentó a 60°C (+/-3°C) durante por lo menos 6 horas. Después, la reacción se verificó por medio de HPLC hasta su terminación. La disolución de reacción se enfrió a 0 °C (+/-3 °C) y se le agregó una disolución de hidruro de diisobutilaluminio al 25% p/p en tolueno (4,0 eq, 6,4 vol, 288 ml), manteniendo la temperatura a <5°C. Después, la disolución de reacción resultante se agitó a 0°C (+/-3°C) durante por lo menos 1 hora. Después, la terminación de la reacción se verificó por medio de HPLC (genérica). La mezcla de reacción se le agregó en porciones a una disolución de ácido cítrico (4,0 eq, 2,0 p, 90 g) en agua (10 vol, 450 ml) a 0 °C (+/-5 °C) durante ~1 h. La disolución resultante se agitó a 20 °C durante 15 minutos, se extrajo con acetato de etilo (10 vol, 450 ml), la capa orgánica se lavó con agua (2 x 3 vol, 2 x 135 ml), y se filtró a través de un embudo sinterizado de porosidad 4. La capa orgánica se evaporó entonces bajo presión reducida (45 °C, 100 mbar) a 2 a 3 volúmenes, se le agregó sulfóxido de dimetilo (10 vol, 450 ml), y la disolución se evaporó bajo presión reducida (45 °C, 50 mbar) para quitar todo vestigio de los otros disolventes. A la disolución a 45 °C se le agregó agua (5 vol, 225 ml), gota a gota durante 30 minutos; la mezcla de reacción resultante se enfrió a 20 °C durante 3 h y se agitó a 20 °C durante por lo menos 15 h. El producto se filtró, se lavó con una disolución de sulfóxido de dimetilo : agua (1:2) (2 vol, 90 ml) y luego se lavó con agua (3 vol, 135 ml), se secó al alto vacío a 60 °C (± 3 °C) a temperatura constante de la sonda, para producir (2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)oxazol-5-il)metanol como un sólido beige.

Compuesto intermedio 5

4-[5-(Bromometil)-1,3-oxazol-2-il]-6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol

Método A

El {2-[6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il]-1,3-oxazol-5-il}metanol (1,626 g, 4,17 mmol) se disolvió en diclorometano anhidro (20 ml) y se le agregó tetrabromuro de carbono (2,77 g, 8,34 mmol). La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se le agregó gota a gota una disolución de trifenilfosfina (2,188 g, 8,34 mmol) en diclorometano (20 ml). Después de dejar calentar a t.a., agitando 3 h más, el disolvente se eliminó parcialmente al vacío y la disolución se purificó directamente por cromatografía en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo 0-100% en diclorometano. Las fracciones apropiadas se combinaron para dar el compuesto del título como un sólido de color crema (1,16 g).

LCMS (Método B): tR 3,70 min, MH+ 454.

Método B

A una suspensión de {2-[6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il]-1,3-oxazol-5-il}metanol (9,06 g, 23,2 mmol) en diclorometano (181 ml) a 0°C se le agregó dibromuro de trifenilfosfina (20,60 g, 48,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0°C hasta su terminación. Se le agregó agua (91 ml) y disolución saturada de bicarbonato de sodio (91 ml) y la mezcla se agitó y luego se separó. La capa acuosa se extrajo con más diclorometano (45 ml), las capas orgánicas se combinaron y el producto y se lavó con agua (91 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se concentró a sequedad y se volvió a disolver en metanol (136 ml). Después de agitar durante 30 min, la suspensión blanca resultante se filtró, y el sólido se secó al vacío para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (9,58 g).

LCMS (Método D): tR 2,57min, MH+ 452/454.

Método C

A una suspensión de {2-[6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il]-1,3-oxazol-5-il}metanol (544,7 g) en diclorometano (3,8 L), agitada bajo nitrógeno a 10 ± 3 °C, se le agregó dibromuro de trifenilfosfina (1,2 kg). La mezcla de reacción se agitó a 10 ± 3 °C durante 20 min. Se le agregó agua (2,7 L) y disolución saturada de bicarbonato de sodio (5.4 L), y la mezcla se agitó y luego se separó. La capa acuosa se extrajo con más diclorometano (2,7 L), las capas orgánicas se combinaron y el producto y se lavó con agua (2,7 L). Las capas se separaron y la capa orgánica se concentró a sequedad y luego se volvió a disolver en metanol (6,5 L). Después de agitar durante 5 horas, la suspensión blanca resultante se filtró, se lavó con metanol (2 x 1,1 L), y el sólido se secó al vacío a 40 ± 5 °C para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (514,0 g).

LCMS (Método C): tR 6,40 min, MH+ 453/455.

Método D

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto a (2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)oxazol-5-il)metanol.

El (2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)oxazol-5-il)metanol (1,0 eq, 1 p, 34,0 g) y dibromuro de trifenilfosfina (1,3 eq, 1,32 p, 45,0 g) se agitó en diclorometano (15 vol, 510 ml) a 20°C (± 3 °C) bajo una atmósfera de nitrógeno durante 1 h. Después, la terminación de la reacción se verificó por medio de HPLC. Una vez terminada la reacción, se le agregó metanol (0,8 vol, 27,2 ml), y con agitación vigorosa se le agregó una disolución de carbonato ácido de sodio al 8% p/p (10 vol, 340 ml), gota a gota durante 15 minutos (se verifica que el pH acuoso sea >7). La mezcla se calentó a 30°C (± 3°C) y se agitó por 10 minutos, luego se separó, la capa acuosa se volvió a extraer con diclorometano (5 vol, 170 ml) y la capa combinada de diclorometano se lavó con agua (5 vol, 170 ml). Después, la disolución de diclorometano se evaporó bajo presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 4 vol. A la disolución se le agregó metanol (15 vol, 510 ml) y la disolución se evaporó bajo presión reducida a 260 mbar, 20 °C, para eliminar el diclorometano remanente hasta -15 vol. La suspensión se agitó entonces a 20 °C durante por lo menos 6 h. El sólido se filtró, se lavó con metanol (2 x 1 vol, 2 x 34 ml), se succionó para secar por 20 minutos, luego se secó al alto vacío a 30 °C (± 3 °C) a temperatura constante de la sonda para producir 5-(bromometil)-2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)oxazol como un sólido beige.

Compuesto intermedio 6a

6-Cloro-4-(5-{[(2R,6S)-2,6-dimetil-4-morfolinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol

El 4-[5-(bromometil)-1,3-oxazol-2-il]-6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol (0,580 g, 1,28 mmol) se disolvió en diclorometano (5 ml) y se le agregó (2R,6S)-2,6-dimetilmorfolina (0,317 ml, 2,56 mmol). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 3 h y luego el disolvente se eliminó bajo una corriente de nitrógeno. El sólido amarillo resultante se disolvió en diclorometano (5 ml) y se lavó con agua (2 x 2,5 ml). Las capas se separaron (frita hidrofóbica) y la capa orgánica se evaporó al vacío para dar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (0,60 g).

LCMS (Método A): tR 0,86 min, MH+ 487.

1H RMN (400MHz, cloroformo-d) 8 (ppm) 8,93 (d, J = 1,0 Hz, 1 H), 8,33 (dd, J = 1,0, 1,5 Hz, 1 H), 8,04 - 8,00 (m, 2 H), 7,98 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,62 (tt, J = 1,5, 7,5 Hz, 1 H), 7,51 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,15 (s, 1 H), 3,67 (s, 2 H), 3,75 -3. 66 (m, 2 H), 2,79 -2 ,72 (m, 2 H), 1,86 (dd, J = 10,5, 11,0 Hz, 2 H), 1,16 (d, J = 6,5 Hz, 6 H).

Usando la amina apropiada se preparó similarmente:

Compuesto intermedio 6b

Método B

A una suspensión de 4-[5-(bromometil)-1,3-oxazol-2-il]-6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol (250,1 g) en diclorometano (2,5 L), agitada bajo nitrógeno a 22 ± 3 °C, se le agregó isopropilpiperazina (165 ml). La mezcla de reacción se agitó a 22 ± 3 °C durante 1,25 horas y luego se le agregó agua (2,5 L); la mezcla se agitó y luego se separó. La capa acuosa se extrajo con más diclorometano (0,5 L), las capas orgánicas se combinaron y el producto y se lavó con agua (2,5 L).

Las capas se separaron y la capa orgánica se concentró a sequedad al vacío, para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (274,6 g).

LCMS (Método B): tR 3,33 min, MH+ 500.

Método C

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 5-(bromometil)-2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)oxazol (corregido para la prueba).

En un recipiente limpio se cargó DMSO (7 vol, 70 ml) e isopropilpiperazina (1,5 eq, 0,387 p, 0,431 vol, 4,31 ml, 3,87 g). Se le agregó 5-(bromometil)-2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)oxazol (1,0 eq, 10 g (9,13 g ya corregidos para la prueba), 1 p) en 5 porciones, a 20 °C durante 1 h, y la mezcla se agitó 1 h. La mezcla se calentó a 50 °C y se dejó reposar durante 1 h, luego se verificó el consumo del material inicial por medio de HPLC. Se le agregó trietilamina (1,2 eq, 0,244 p, 0,336 vol, 2,44 g, 3,36 ml) durante 10 min y la mezcla se dejó reposar durante 30 min, luego se enfrió a 20 °C durante 1 h y se dejó reposar adicionalmente durante 2 h. La suspensión espesa se filtró y se lavó con DMSO (2 x 1.5 vol, 2 x 15 ml), seguido por acetona:agua 1:2 (3 x 2 vol, 3 x 20 ml). El sólido resultante se sopló para secar sobre el filtro y se secó a 60 °C al vacío a peso/temperatura constante, para producir 2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol como un sólido blanquecino.

Recristalización- Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol. En un recipiente limpio se cargó DMSO (7,7 p, 231 g) seguido por -(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol (1 p, 30 g). El lote se calentó a 75 °C hasta que se observó la disolución completa y la mezcla se filtró y se lavó en línea con DMSO (1,1 p, 33 g, previamente calentado a 75 °C). La mezcla se enfrió a 20 °C durante 2 h, se dejó reposar 2 h, y se filtró. La torta se lavó con DMSO (2,2 p, 66 g) seguido por agua:acetona 3:1 (3 x 2 vol, 3 x 60 ml). El producto se sopló para secar sobre el filtro y se secó a 60 °C al vacío a peso/temperatura constante, para producir 2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol como un sólido blanquecino.

Compuesto intermedio 7

6-(1H-lndol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol

A una suspensión de 6-cloro-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol (271,2 g) y 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol (263,2 g, disponible de Apollo Scientific Limited) en isopropanol (2,7 L), agitada bajo nitrógeno a temperatura ambiente, se le agregó una disolución de bicarbonato de sodio (228,0 g) en agua (2,7 L). Después de desgasificar, mediante evacuación y purga con nitrógeno, se le agregó complejo de cloruro de 2'-(dimetilamino)-2-bifenilil-paladio (ll) y dinorbornilfosfina (29,83 g). La mezcla se desgasificó de nuevo y luego se calentó a 90 ± 3 °C y se mantuvo a esta temperatura durante 2 horas. La mezcla se enfrió a 20 ± 5 °C durante 25 minutos y se dejó reposar a esta temperatura durante la noche. La suspensión resultante se filtró, se lavó con agua (1,35 L) y luego se suspendió con tolueno (4 x 1,35 L). El sólido se secó al vacío a 50 °C para dar el compuesto del título como un sólido gris (302,7 g).

LCMS (Método B): tR 3,20 min, MH+ 581.

Método B

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol.

Una mezcla de2-(6-cloro-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol (1,0 eq, 1 p, 10,0 g), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol (1,1 eq, 0,535 p, 5,35 g) y K3PO4 (1,2 eq, 0,509 p, 5,09 g), se cargó secuencialmente a un recipiente agitado que contenía IPA (5 vol, 50 ml) y agua (5 vol, 50 ml). Después se le agregó KHF2 (2,2 eq, 0,344 p, 3,44 g) y la mezcla se calentó a 75-80 °C bajo un flujo de N2 durante por lo menos 1 h para desgasificar. Mientras tanto, se cargó IPA (5 vol, 50 ml) a un recipiente separado y se calentó a reflujo durante 1 h bajo una corriente de N2 para desgasificar. El IPA se enfrió a 20 °C y se le agregó secuencialmente Pd(OAc)2 (0,02 eq, 0.0090 p, 90,0 mg) y triciclohexilfosfina (0,04 eq, 0,0224 p, 224 mg), y se dejó reposar durante 1 h hasta que se observó una disolución amarilla. Entonces se agregó la disolución amarilla al primer recipiente durante 10 min, manteniendo la temperatura a 75-80 °C, y se agitó durante por lo menos 4 horas. La mezcla se enfrió a 20 °C y se dejó reposar durante por lo menos 1 h. Después, la suspensión se filtró y se lavó con IPA:agua 1:1 (2 vol, 20 ml) seguido por agua (2 x 2 vol, 2 x 20 ml), y se secó al vacío a 60 ± 3 °C a temperatura constante, para producir 2-(6-(1H-indol-4-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol como un sólido amarillo.

Compuesto intermedio 8

Oxazol-5-carboxilato de etilo

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al isocianuro de toluenosulfonilmetilo.

El isocianuro de toluenosulfonilmetilo (TosMIc) (12,31 g, 1 p, 1 eq) se disolvió en DCM (61,6 ml, 5 vol) a 0 °C bajo N2. En un recipiente separado, se diluyó glioxalato de etilo (disolución al 50% en peso en tolueno, 20,6 g, 20,0 ml, 1,67 p) con DCM (61,6 ml, 5 vol) bajo N2 y se le agregó DBU (12,48 g, 12,35 ml, 1,3 eq, 1,01 p), dando como resultado una disolución púrpura. La segunda disolución se le agregó a la disolución de TosMIc durante 1 h, manteniendo la temperatura a 0 °C, luego de unos 20 min más se verificó la terminación por medio de HPLC. La reacción se apagó agregando lentamente HCl 2M (10 vol, 123 ml) y la capa de DCM se separó. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM (5 vol, 61,6 ml), y la capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, luego se evaporó en un Buchi, 25 °C, 100 mbar, para eliminar el DCM y tolueno. Se destiló a 12 mbar, temperatura de la camisa 105 °C, temperatura de vapor 60-80 °C, para producir el oxazol-5-carboxilato de etilo como un aceite incoloro.

Compuesto intermedio 9

4-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 4-bromoindol.

En un recipiente seco y limpio, que contenía tolueno (5 vol, 100 ml), y lavado con tolueno (2 vol, 40 ml), se cargó secuencialmente bis(pinacolato)diboro (1,555 p, 1,20 eq, 31,1 g), acetato de potasio (1,00 p, 2,0 eq, 20,0 g) y 4-bromoindol (1,00 p, 0,64 vol, 1,00 eq, 20,0 g), bajo N2. La mezcla se desgasificó con vacío/purga de N2 x3 y se calentó a 100 °C. En un recipiente seco y limpio separado, se combinó trisbencilidenacetona-dipaladio (0,0234 p, 0,005 eq, 0,467 g) y triciclohexilfosfina (0,0286 p, 0,02 eq, 0,572 g) bajo N2, y se le agregó tolueno (1 vol, 20 ml). La mezcla se desgasificó con vacío/purga de N2 x3 y se agitó durante 30 min. La disolución de catalizador se agregó al recipiente de reacción y la mezcla se calentó a 95-100 °C durante por lo menos 3 h, hasta que todo el 4-bromoindol se consumió, indicado por un análisis de HPLC. La mezcla se enfrió a 60 °C y se filtró para eliminar el material inorgánico. La torta se lavó con tolueno (2 x 2 vol, 2 x 40 ml). Después, la disolución oscura se destiló hasta 4 vol (80 ml) al vacío (50-60 °C, 100 mbar) y se dejó reposar a 60 °C durante 1 h. La suspensión resultante se enfrió a 20 °C durante 2 h y se le agregó heptano (12 vol, 240 ml) durante 1 h. La mezcla se dejó reposar durante por lo menos 1 h y se filtró. La torta se lavó con tolueno:heptano (1:4, 2 vol, 40 ml), seguido por heptano (2 vol, 40 ml), y se secó al vacío a 50-60 °C a temperatura constante de la sonda, para producir 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol como un sólido beige.

Recristalización - Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol. En un recipiente limpio se cargó isopropanol (6 vol, 4,72 p, 54,3 kg), seguido por 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol (1 p, 11,5 Kg), y la mezcla se agitó y se calentó a reflujo (82 °C) durante 40 min. El lote se enfrió a 70 ± 3 °C y se le agregó agua (6 vol, 6 p, 69 kg) mediante una bomba peristáltica durante 1 hora, manteniendo la temperatura a 70 ± 3 °C. El contenido se dejó reposar a 70 ± 3 °C durante 60 min y se enfrió a 20 °C durante 2 horas. La suspensión se dejó reposar a 20 °C durante por lo menos 6 h y se filtró. La torta se lavó con IPA:agua 1:1 (2 vol, 23L) e IPA:agua 1:3 (2 vol, 23 L), y se secó al vacío a 60 °C a temperatura constante para producir 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol como un sólido blanco.

Ejemplo 1

6-(1H-lndol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol

El 6-cloro-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol (97 mg, 0,194 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol (61,3 mg, 0,252 mmol, disponible de Frontier Scientific Europe), cloro[2'-(dimetilamino)-2-bifenilil]paladio-(1 R,4S)-biciclo[2,2,1]hept-2-il[(1 S,4R)-biciclo[2,2,1]hept-2-il]fosfano (10,87 mg, 0,019 mmol) y fosfato tribásico de potasio (124 mg, 0,582 mmol), se disolvieron en 1,4-dioxano (1 ml) y agua (0,1 ml), y esto se calentó en un aparato de microondas Biotage Initiator a 100°C durante 30 min. Se le agregó más 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxabotolan-2-il)-1H-indol (61,3 mg, 0,252 mmol) y cloro[2'-(dimetilamino)-2-bifenilil]paladio-(1R,4S)-biciclo[2,2,1]hept-2-il[(1S,4R)-biciclo[2,2,1]hept-2-il]fosfano (5 mg), y la reacción se calentó a 110 °C durante 30 min, y luego a 140 °C durante 30 min. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice, eluyendo con metanol 0-25% en diclorometano. Las fracciones apropiadas se combinaron y el producto se concentró para dar un sólido pardo que se disolvió en MeOH:DMSO (1 ml, 1:1, v/v) y se purificó por m Da P (Método A). Las fracciones apropiadas se concentraron al vacío para dar el compuesto del título como un sólido blanco (30 mg).

LCMS (Método A): tp 0,57 min, MH+ 441.

Método B

El 6-cloro-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol (75,17 g, 150 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indol (73,1 g, 301 mmol), bicarbonato de sodio (37,9 g, 451 mmol), y cloro[2'-(dimetilamino)-2-bifenilil]paladio-(1R,4S)-biciclo[2,2,1]hept-2-il[(1S,4R)-biciclo[2,2,1]hept-2-il]fosfano (8,43 g, 15,03 mmol) se suspendieron en 1,4-dioxano purgado con nitrógeno (1200 ml) y agua (300 ml). El recipiente de reacción se puso alternadamente bajo vacío y nitrógeno cinco veces con agitación con agitador de varilla, después finalmente se puso bajo una atmósfera de nitrógeno y se calentó a 120°C durante 2,5 h.

La mezcla de reacción se enfrió a 45°C y después se trató con hidróxido de sodio acuoso 2M (376 ml, 752 mmol). Después de agitar a 45°C durante la noche (~13h), la mezcla se enfrió a t.a. y se le agregó DCM (600 ml) y agua (400 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se volvió a extraer con DCM:1,4-dioxano (1:1). Se le agregó salmuera y la mezcla se filtró a través deCelite, lavando con DCM:1,4-dioxano (1:1). Las capas se separaron ya la capa orgánica se le agregó HCl 2M (1000 ml). La mezcla se filtró de nuevo a través de Celite lavando con 500 ml de HCl 2M, manteniendo los lavados separados. Las capas de filtrado se separaron entonces y la capa orgánica se lavó con los lavados ácidos del Celite. Las capas se separaron y las capas acuosas ácidas se combinaron. Después, esto se volvió a lavar con 2x500 ml de DCM, cada lavado requiriendo una filtración en Celite. Después, a la capa acuosa ácida se le dio una filtración final a través de Celite lavando la almohadilla de Celite con 150 ml de HCL 2M.

La capa acuosa ácida se transfirió a un matraz (5000 ml) y, con agitación vigorosa, se le agregó NaOH 2M para basificar la mezcla a pH 10-11. La mezcla se extrajo entonces usando 1,4-dioxano:DCM (1:1) (5 x 500 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó, para producir una espuma parda que se secó al vacío a 50°C durante la noche.

Este material se dividió en tres lotes y cada uno se purificó por cromatografía en columna de fase inversa (3x columna C18, 1,9 kg), cargando en DMF/TFA (1:1, 30 ml) y eluyendo entonces con MeCN 3-40% en agua 0,25% TFA (Nota: en las columnas 2 y 3 se usó un gradiente diferente empezando con MeCN al 10%).

Las fracciones apropiadas se combinaron, el acetonitrilo se eliminó al vacío y la capa acuosa ácida se basificó a pH 10 agregando a la disolución agitada una disolución acuosa saturada de carbonato de sodio. El sólido resultante se recogió por filtración, se lavó con agua y luego se secó al vacío a 65 °C durante la noche para dar el compuesto del título como una espuma parda pálida (28.82 g).

LCMS (Método A): tR 0,68 min, MH+ 441.

1H RMN (400MHz ,DMSO-da) d = 13,41 (br. s., 1 H), 11,35 (br. s., 1 H), 8,59 (br. s., 1 H), 8,07 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 7,90 (br. s., 1 H), 7,51 - 7,44 (m, 2 H), 7,32 (s, 1 H), 7,27 - 7,21 (m, 2 H), 6,61 - 6,58 (m, 1 H), 3,73 (br. s., 2 H), 2,64 - 2,36 (m, 9 H), 0,97 - 0,90 (m, 6 H).

Método C

A una suspensión de 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol (300,7 g) y bromuro de cetiltrimetilamonio (9,3 g) en tetrahidrofurano (6,0 L) y agua (30 ml), agitada bajo nitrógeno y a temperatura ambiente, se le agregó hidróxido de potasio (145,6 g). La mezcla se calentó a reflujo durante 17 horas y luego se enfrió a 20-25 °C. Se le agregó acetato de etilo (3,0L ) y agua (3,0 L), se agitó durante 10 minutos y luego se separó. La capa orgánica se extrajo con ácido clorhídrico (1 M, 1 x 3,0 L, 2 x 1,5 L), los extractos ácidos se combinaron y el producto se basificó a ~pH 8 agregando una disolución saturada de carbonato de sodio (2,1 L). Después de dejar reposar durante 30 minutos, la suspensión resultante se filtró, se lavó con agua (300 ml) y el sólido se secó al vacío a 65°C para dar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (127,9 g).

LCMS (Método B): tR 2,44 min, MH+ 441.

Método D

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 2-(6-(1H-indol-4-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)-oxazol.

A una suspensión de 2-(6-(1H-indol-4-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol (1 p, 1 eq, 501 g), y CTAB (bromuro de cetiltrimetilamonio) (0,031 p, 0,05 eq, 15,5 g) en 2-metiltetrahidrofurano (10 vol, 5,01 L), se le agregó hidróxido de potasio (0,483 p, 5 eq, 242 g) y luego se calentó a reflujo (79 °C) durante por lo menos 4 h hasta que terminó la reacción. La mezcla se enfrió a 50 °C y se lavó a 50 °C con agua (2 x 10 vol, 2 x 5 L). La disolución se diluyó con 2-metil-tetrahidrofurano (5 vol, 2,5 L) y se filtró mientras estaba a 50 °C, para eliminar los residuos de paladio precipitado. Después, la disolución orgánica se destiló (100 mbar, 20 °C) hasta 2 vol (1 L), se diluyó con 2-metil-tetrahidrofurano (1 vol, 0,5Ll) y 3-pentanona (3 vol, 1,5 L) y se destiló (100 mbar, 30 °C) hasta 2 vol (1 L). La disolución se diluyó de nuevo con 3-pentanona (3 vol, 1,5 L) y se destiló (80 mbar, 25 °C) hasta 2 vol (1 L). La disolución se diluyó otra vez con 3-pentanona (3 vol (1,5 L)) y se destiló (100 mbar, 30 °C) hasta 3 vol (1,5 L). La suspensión se enfrió a 20°C durante 1 h y se dejó reposar a 20 °C durante por lo menos 2 h. El producto se filtró al vacío, se lavó con 3-pentanona (1 vol, 0,5 L) y se secó al vacío a 60 °C para producir 2-(6-(1 H-indol-4-il)-1 H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol como un sólido de color canela.

Preparación del polimorfo del compuesto a

El 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol (25 g) se disolvió en dimetilformamida (DMF, 240 ml) y se filtró (filtro de porosidad 4). Se usó DMF (10 ml) como un enjuague de línea para lavar los materiales de vidrio y se filtró. El material se sometió a cromatografía en 14 inyecciones x 17-18 ml y una inyección final de ~10 ml. Las fracciones que contenían 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol se evaporaron a vacío a temperaturas de hasta 40°C. El sólido resultante se filtró, se lavó con agua (100 ml) y se secó a 60 °C al vacío durante la noche.

Condiciones de la cromatografía:

Sistema de HPLC Varian SD-1

Columna: Phenomenex Luna C18(ll), 50x243 mm

Eluyente A: acetato de amonio 0,1 M con pH ajustado a 8.0 con amoniaco 0,88

Eluyente B: Acetonitrilo

Detector: 350 nm, escala 12

Inyección: aprox. 17-18 ml de disolución en DMF (1 g por 10 ml de DMF)

RMN concordante con el espectro esperado:

RMN (400MHz, DMSO d6): 13,42 (br s, 1 H), 11,35 (br s, 1 H), 8,60 (s, 1 H), 8,08 (d J = 1.2Hz, 1 H), 7,91 (s, 1 H), 7,48 (m, 2H), 7,32 (s, 1 H), 7,24 (m, 2H), 6,61 (s, 1 H), 3,73 (s, 1 H), 2,58 (m, 1 H), 2,45 (br s, 4H), 0,94 (d J = 6.6Hz, 6H) El singlete amplio a 2,45 ppm probablemente contiene algo de los protones alifáticos remanentes; sin embargo, es poco probable que la integración sea exacta debido al solapamiento con el pico de DMSO (d5). Los protones alifáticos remanentes probablemente están por abajo del pico de DMSO (d5).

Preparación de las sales del compuesto a y polimorfos del mismo

Tosilato

El 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol (1,5013 g) se suspendió en acetonitrilo (10 ml) y se agitó. Por otro lado, se disolvió ácido p-toluenosulfónico monohidratado (679,5 mg, 1,05 eq) en acetonitrilo (5 ml) y se añadió. Inmediatamente se formó un precipitado gomoso que se sometió a sonicación y se trituró para movilizar la masa sólida. La suspensión se mezcló con sal de tosilato cristalina y se dejó agitando durante la noche. El sólido se aisló y se secó al vacío a 50 °C. RMN concordante con el espectro esperado:

RMN (400MHz, DMSO d6): 13,45 (br s, 1 H), 11,37 (br s, 1 H), 8,92 (br s, 1 H), 8,64 (s, 1 H), 8,11 (s, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 7,48 (m, 4H), 7,43 (s, 1 H), 7,24 (m, 2H), 7,12 (d J = 8,1 Hz, 2H), 6,61 (s, 1 H), 3,97 (s, 2H), 3,42 (m, 3H), 3,13 (m, 4H), 2,54 (m, 1 H), 2,28 (s, 3H), 1,23 (d J = 6,4Hz, 6H).

Los protones alifáticos no observados aquí probablemente residen bajo el pico de DMSO (d5).

La semilla de sal de tosilato cristalina se puede preparar mediante el siguiente método:

El 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol (0,1003 g) se suspendió en acetonitrilo (1,5 ml) y se agitó. Separadamente, se disolvió ácido toluenosulfónico monohidratado (45,6 mg, 1,05 eq) en acetonitrilo (0,5 ml) y se le agregó a la suspensión de 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol. Se formó un precipitado gomoso que se dejó agitando durante 10 min La muestra se calentó a aproximadamente 50 °C y se sometió a sonicación con poco efecto visual. El sólido se agitó manualmente con una espátula para movilizarlo y se agitó durante 4 días a temperatura ambiente. El sólido se filtró y se succionó para secar. Hemifumarato

El 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol (1,5014 g) y ácido fumárico (217,2 mg, 0,56 eq) se suspendieron en iMs (15 ml), y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La suspensión se filtró y se succionó para secar antes de secar al vacío a 50°C durante la noche.

RMN concordante con el espectro esperado:

RMN (400MHz, DMSO d6): 13,47 (br s, 1 H), 11,37 (br s, 1 H), 8,60 (s, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,92 (s. 1 H), 7,48 (m, 2H), 7,34 (s, 1 H), 7,24 (m, 2H), 6,61 (s, 1 H), 6,56 (s, 1 H), 3,76 (s, 2H), 2,74 (m, 1 H), 2,58 (br s, 7H), 1,00 (d, J = 6,6Hz, 6H).

El singlete amplio a 2,58 ppm probablemente contiene protones alifáticos remanentes; sin embargo, es poco probable que la integración sea exacta debido al solapamiento con el pico de DMSO (d5).

Hemisuccinato

Método A

Al 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol (0,1006 g) se le agregó alcohol metilado industrial (IMS, 1 ml) y se agitó. Por otro lado, se disolvió ácido succínico (28,3 mg, 1,05 eq) en IMS (1 ml) y después se le agregó a la suspensión de 6-(1H-indol-4-il)-4-(5-{[4-(1-metiletil)-1-piperazinil]metil}-1,3-oxazol-2-il)-1H-indazol y se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana (~72 h). El sólido se aisló por filtración y se lavó con IMS (~1 ml) antes de secar al vacío a 50 °C.

RMN concordante con el espectro esperado:

RMN (400MHz, DMSO d6): 13,42 (br s, 1 H), 11,36 (br s, 1 H), 8,61 (s, 1 H), 8,09 (d, J = 1,2Hz, 1 H), 7,92 (s, 1 H), 7,48 (m, 2H), 7,34 (s, 1 H), 7,25 (m, 2H), 6,62 (s, 1 H), 3,76 (s, 2H), 2,67 (m, 1 H), 2,40 (s, 2H), 0,98 (d, J = 6,6Hz, 6H). Los protones alifáticos no observados aquí probablemente residen bajo el pico de DMSO (d5).

Método B

Todos los pesos, volúmenes y equivalentes son con respecto al 2-(6-(1H-indol-4-il)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)-metil)oxazol.

Una mezcla de 2-(6-(1H-indol-4-il)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol (1 p, 440 g) y ácido succínico (0,14 p, 0,52 eq, 61,6 g) se agitó en DMSO (2,9 vol, 1,28 L) a 20-25 °C. La disolución transparente resultante se transfirió a un recipiente de cristalización por medio de un filtro en línea Domnick hunter de 5 |jm; luego la línea se lavó con más DMSO (0,1 vol, 44 ml). A la disolución se le agregó metanol (1 vol, 440 ml) durante 10 min por medio del filtro anterior, seguido por una suspensión de hemisuccinato de 2-(6-(1H-indol-4-il)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol (0,005 p, 2,2 g) en metanol (0,05 vol, 22 ml). La suspensión se dejó reposar a 20­ 25 °C durante 3 h, después se le agregó metanol (3 vol, 1,32 L) por medio del filtro anterior durante ~1 h y la suspensión se dejó reposar a esta temperatura durante por lo menos 16 h. El sólido resultante se filtró, se lavó con metanol previamente filtrado (2 x 10 vol, 2 x 4,4 L) antes de succionar para secar durante 0,5 h. El lote se secó al vacío a 50­ 55 °C a temperatura constante de la sonda, para producir la sal de ácido hemisuccínico de 2-(6-(1H-indol-4-il)-1H-indazol-4-il)-5-((4-isopropilpiperazin-1-il)metil)oxazol como un sólido blanquecino.

Contenido de agua

El contenido de agua de la sal de hemisuccinato se determinó mediante un método de titulación colorimétrica de Karl Fischer alineado con la Determinación de Agua (Método 1c) de USP <921>, Determinación de Agua BP (Método III), Agua: Microdeterminación, Ph. Eur. (Método 2.5.32), y Determinación de Agua JP (Método de Karl Fischer). Basándose en un promedio de 2 mediciones se observó un contenido de agua de 1,8% p/p usando la técnica de sólido colorimétrico (horno) con el reactivo Hydranal Coloumat AK y la temperatura del horno puesta en 110 °C.

Difracción de rayos x en polvo (xrpd) del polimorfo del compuesto a y los polimorfos de las sales del compuesto A Los datos se adquirieron en un difractómetro de polvo PANalytical X'Pert Pro, modelo PW3040/60, usando un detector X'Celerator. Las condiciones de adquisición fueron: radiación: Cu Ka, tensión del generador: 40 kV, corriente del generador: 45 mA, ángulo inicial: 2,0° 20, ángulo final: 40,0° 20, tamaño de paso: 0,0167° 20, tiempo por paso: 31,75 segundos. La muestra se preparó colocando unos pocos miligramos de muestra sobre una placa de oblea de silicio (fondo cero), dando como resultado una capa delgada de polvo.

Polimorfo del compuesto A

Los datos de XRPD se muestran en la figura 1.

En la tabla 1 se resumen los ángulos característicos de XRPD y separaciones d de la forma de estado sólido. Las posiciones de los picos se midieron usando el software Highscore.

Tabla 1

Polimorfo de la sal tosilato del compuesto A

Los datos de XRPD se muestran en la figura 2.

En la tabla 2 se resumen los ángulos característicos de XRPD y separaciones d de la forma de estado sólido. Las posiciones de los picos se midieron usando el software Highscore.

Tabla 2

Polimorfo de la sal de hemifumarato del compuesto A

Los datos de XRPD se muestran en la figura 3.

En la tabla 3 se resumen los ángulos característicos de XRPD y separaciones d de la forma de estado sólido. Las posiciones de los picos se midieron usando el software Highscore.

Tabla 3

Polimorfo de la sal de hemisuccinato del compuesto A

Los datos de XRPD se muestran en la figura 4.

En la tabla 4 se resumen los ángulos característicos de XRPD y separaciones d de la forma de estado sólido. Las posiciones de los picos se midieron usando el software Highscore.

Tabla 4

Claims (7)

REIVINDICACIONES

1. Hemi succinato de 6-(1H-¡ndol-4-¡l)-4-(5-{[4-(1-met¡let¡l)-1-p¡peraz¡n¡l]met¡l}-1,3-oxazol-2-¡l)-1H-¡ndazol.

2. Un pol¡morfo de la sal hem¡ succ¡nato de 6-(1H-¡ndol-4-¡l)-4-(5-{[4-(1-met¡let¡l)-1-p¡peraz¡n¡l]met¡l}-1,3-oxazol-2-¡l)-1H-¡ndazol caracter¡zado porque proporc¡ona un patrón de XRPD que ut¡l¡za Cu Ka como fuente de rad¡ac¡ón que comprende p¡cos (°20) a7,2 ± 0,2, 13,2 ± 0,2 y/o l4,0 ± 0,2.

3. El pol¡morfo de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 2, caracter¡zado porque proporc¡ona un patrón de XRPD que comprende los p¡cos sustanc¡almente como se ¡nd¡can en la tabla 4:.

4. La compos¡c¡ón farmacéut¡ca que comprende un pol¡morfo o sal como se def¡ne en cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 3 o exc¡p¡entes más farmacéut¡camente aceptables.

5. El pol¡morfo o sal como es def¡ne en cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 3 para uso en terap¡a méd¡ca.

6. El pol¡morfo o sal como se def¡ne en cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 3 para el uso en el tratam¡ento de un trastorno med¡ado por la act¡v¡dad ¡naprop¡ada de PI3 qu¡nasa en donde el trastorno se selecc¡ona del grupo que cons¡ste en enfermedades resp¡rator¡as; ¡nfecc¡ones v¡rales; ¡nfecc¡ones resp¡rator¡as no v¡rales; enfermedades alérg¡cas, enfermedades auto¡nmunes; trastornos ¡nflamator¡os; enfermedades card¡ovasculares; neoplas¡as hematológ¡cas; enfermedades neurodegenerat¡vas; pancreat¡t¡s; fallo mult¡orgán¡co; enfermedades hepát¡cas; agregac¡ón plaquetar¡a hematológ¡ca; cáncer; mot¡l¡dad espermát¡ca; rechazo de trasplante; rechazo de ¡njerto; les¡ones pulmonares; y dolor.

7. El uso de un pol¡morfo o sal como se def¡nes en cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 3 en la fabr¡cac¡ón de un med¡camento para el uso en el tratam¡ento de un trastorno med¡ado por la act¡v¡dad ¡naprop¡ada de la PI3 qu¡nasa en donde el trastorno se selecc¡ona del grupo que cons¡ste en enfermedades resp¡rator¡as; ¡nfecc¡ones v¡rales; ¡nfecc¡ones resp¡rator¡as no v¡rales; enfermedades alérg¡cas, enfermedades auto¡nmunes; trastornos ¡nflamator¡os; enfermedades card¡ovasculares; neoplas¡as hematológ¡cas; enfermedades neurodegenerat¡vas; pancreat¡t¡s; fallo mult¡orgán¡co; enfermedades hepát¡cas; agregac¡ón plaquetar¡a hematológ¡ca; cáncer; mot¡l¡dad espermát¡ca; rechazo de trasplante; rechazo de ¡njerto; les¡ones pulmonares; y dolor.