ES2694771T3 - Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-NGF - Google Patents

Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-NGF Download PDF

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Abstract

Una formulación formulaciones farmacéutica, que comprende: (i) de 50 a 100 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente al factor de crecimiento de nervios humano (hNGF); (ii) un 0,05 % de polisorbato 20; (iii) un 8 % de sacarosa; y (iv) acetato 10 mM, en la que: - el anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF consiste en dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, comprendiendo cada cadena pesada una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y una región constante de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 31, y comprendiendo cada cadena ligera una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22 y una región constante de cadena ligera; - la formulación almacenada, después de seis meses a 5 °C, mantiene la estabilidad de modo que un 97 % o más del anticuerpo se mantiene en su forma nativa según se detecta por cromatografía de líquidos de alto rendimiento por exclusión de tamaño; y - el pH de la formulación es 5,0.

Description

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DESCRIPCION
Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-NGF Campo de la invención
La presente invención se refiere al campo de formulaciones de anticuerpos terapéuticos. Más específicamente, la presente invención se refiere al campo de formulaciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo humano que se une específicamente al factor de crecimiento de nervios (NGF) humano.
Antecedentes
Las macromoléculas terapéuticas (por ejemplo, anticuerpos) deben formularse de una manera que no solamente haga que las moléculas sean adecuadas para su administración a pacientes, sino que también mantengan su estabilidad durante el almacenamiento. Por ejemplo, los anticuerpos terapéuticos en solución líquida son propensos a degradación, agregación y/o a modificaciones químicas indeseadas salvo que la solución se formule apropiadamente. La estabilidad de un anticuerpo en formulación líquida depende no solamente de los tipos de excipientes usados en la formulación, sino también de las cantidad y proporciones de los excipientes unos respecto a otros. Además, deben tenerse en cuenta otras consideraciones aparte de la estabilidad cuando se prepara una formulación líquida de anticuerpos. Los ejemplos de dichas consideraciones adicionales incluyen la viscosidad de la solución y la concentración de anticuerpo que puede acomodarse por una formulación dada. Por tanto, cuando se formula un anticuerpo terapéutico, debe tenerse gran cuidado en llegar a una formulación que permanezca estable, contenga una concentración adecuada de anticuerpo y posea una viscosidad adecuada, así como otras propiedades que posibiliten que la formulación se administre convenientemente a los pacientes.
Los anticuerpos contra el factor de crecimiento de nervios humano (hNGF) son un ejemplo de una macromolécula terapéuticamente relevante que requiere formulación apropiada. Los anticuerpos anti-NGF son clínicamente útiles para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades tales como osteoartritis, ciática y otras afecciones tales como dolor inflamatorio, dolor neuropático y dolor oncológico.
Aunque se conocen los anticuerpos anti-NGF, sigue existiendo una necesidad en la técnica de formulaciones farmacéuticas novedosas que comprendan anticuerpos anti-hNGF, que sean suficientemente estables y también adecuadas para su administración a pacientes.
El documento WO 2006/044908 describe formulaciones de anticuerpos, incluyendo anticuerpos monoclonales formulados en tampón histidina-acetato, así como una formulación que comprende un anticuerpo que se une al dominio II de HER2 (por ejemplo, Pertuzumab), y una formulación que comprende un anticuerpo que se une a DR5 (por ejemplo, Apomab). E documento WO 2006/138101 divulga formulaciones de proteína autotamponantes. Particularmente, las formulaciones farmacéuticas de proteína autotamponantes que son adecuadas para uso veterinario y médico humano. El documento WO 98/56418 divulga una formulación farmacéutica acuosa estable que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo no sometido a liofilización previa, un tampón que mantiene el pH en el intervalo de aproximadamente 4,5 a aproximadamente 6,0, un tensioactivo y un poliol, junto con usos de dicha formulación. El documento US 2003/0113316 divulga una formulación farmacéutica liofilizada estable preparada por liofilización de una formulación acuosa que comprende una alta concentración, por ejemplo, 50 mg/ml o más, o un anticuerpo IgG en tampón histidina aproximadamente 5-25 mM que tiene pH de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 6.5, aproximadamente un 0,005 %-0,03 % de polisorbato, sacarosa y opcionalmente serina, y/o manitol. El documento WO 2004/055164 divulga formulaciones de anticuerpo estabilizadas que contienen histidina. El documento WO 2009/023540 divulga un anticuerpo humano o fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente al factor de crecimiento de nervios (NGF) humano con KD de 5 pM o menos, que no reacciona de forma cruzada con neurotrofina-3 (NT-3), y se une a NGF humano con una Kd de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 veces mayor que con la que el anticuerpo o fragmento se une a NGF de rata o de ratón. El documento WO 2011/116090 divulga composiciones estables de anticuerpos anti-NGF y fragmento de unión a antígeno de los mismos y sus usos en la prevención y/o tratamiento de diversas enfermedades y trastornos en que la actividad NGF es perjudicial.
Breve sumario de la invención
La presente invención satisface la necesidad mencionada anteriormente proporcionando formulaciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo humano que se une específicamente al factor de crecimiento de nervios humano (hNGF). Específicamente, la invención proporciona una formulación farmacéutica, que comprende:
(i) de 50 a 100 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente al factor de crecimiento de nervios humano (hNGF);
(ii) un 0,05 % de polisorbato 20;
(iii) un 8 % de sacarosa; y
(iv) acetato 10 mM,
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en la que:
- el anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF consiste en dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, comprendiendo cada cadena pesada una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y una región constante de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 31, y comprendiendo cada cadena ligera una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22 y una región constante de cadena ligera;
- la formulación almacenada, después de seis meses a 5 °C, mantiene la estabilidad de modo que un 97 % o más del anticuerpo se mantiene en su forma nativa según se detecta por cromatografía de líquidos de alto rendimiento por exclusión de tamaño; y
- el pH de la formulación es 5,0.
Las formulaciones de la divulgación pueden comprender excipientes además del anticuerpo anti-hNGF. Por ejemplo, en determinados casos, la formulación puede comprender (i) un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF; (ii) un tensioactivo no iónico; y (iii) al menos un carbohidrato. El tensioactivo no iónico puede seleccionarse del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 80, monooleato de polioxietilen sorbitán y polietilenglicol. En la formulación de la invención, el tensioactivo no iónico es polisorbato 20. El carbohidrato puede ser un azúcar tal como, por ejemplo, sacarosa, glucosa, manitol, sorbitol, lactosa o trehalosa. En la formulación de la invención, el azúcar es sacarosa.
En un aspecto de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende (i) de aproximadamente 0,1 a 100 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF; (ii) de aproximadamente un 0,01 a un 1,0 % de polisorbato 20; y (iii) de aproximadamente un 1 a un 20 % de sacarosa.
En un aspecto de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende (i) de aproximadamente 0,2 a 75 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF; (ii) de aproximadamente un 0,02 a un 0,5 % de polisorbato 20; y (iii) de aproximadamente un 5 a un 10 % de sacarosa.
En un aspecto de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende (i) de aproximadamente 0,6 a 60 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF; (ii) aproximadamente un 0,05 % de polisorbato 20; y (iii) aproximadamente un 8 % de sacarosa.
En determinados aspectos de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende además acetato de aproximadamente 1,0 mM a aproximadamente 50 mM.
En un aspecto de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende (i) de aproximadamente 1 a 100 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF; (ii) de aproximadamente un 0,01 a un 1,0 % de polisorbato 20; y (iii) de aproximadamente un 1 a un 20 % de sacarosa. En determinados aspectos de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende además acetato de aproximadamente 1,0 mM a aproximadamente 50 mM.
En un aspecto de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende: (i) de aproximadamente 5 a 75 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF; (ii) de aproximadamente un 0,02 a un 0,5 % de polisorbato 20; (iii) de aproximadamente un 5 a un 10 % de sacarosa; y (iv) acetato de aproximadamente 5 a 20 mM.
En un aspecto de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende: (i) aproximadamente 6-60 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF; (ii) aproximadamente un 0,05 % de polisorbato 20; (iii) aproximadamente un 8 % de sacarosa; y (iv) acetato aproximadamente 10 mM.
En determinados aspectos, la formulación también puede contener al menos un aminoácido, por ejemplo, histidina o arginina. En determinados aspectos, la concentración de histidina o arginina puede variar de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 100 mM.
De acuerdo con determinados aspectos de la divulgación, la formulación se prepara en un tampón que puede mantener un pH que varía de aproximadamente pH 4,5 a aproximadamente pH 5,6, por ejemplo, un tampón acetato.
En determinados aspectos, la formulación farmacéutica muestra una viscosidad de menos de aproximadamente 15 cPoise o menos de aproximadamente 12 cPoise o menos de aproximadamente 9 cPoise.
El anticuerpo contenido dentro de las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación puede ser cualquier anticuerpo, o una proteína de fusión o agente de bloqueo, que se une específicamente a hNGF. Los anticuerpos ejemplares que pueden estar contenidos dentro de las formulaciones son anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada (HCVR) y una región variable de cadena ligera (LCVR), en el que la HCVR comprende una región determinante de complementariedad de cadena pesada (HCDR) 1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6, una HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SeQ ID NO: 8 y una HCDR3 que tiene
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la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10; y en el que la LCVR comprende una región determinante de complementariedad de cadena ligera (LCDR) 1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 14, una LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16 y una LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18.
El anticuerpo contenido dentro de las formulaciones de la presente invención es un anticuerpo que comprende una HCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y una LCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22.
En determinados aspectos de la divulgación, el anticuerpo contenido dentro de las formulaciones es un anticuerpo que comprende una HCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4 y una LCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de la sEq ID NO: 12.
En determinadas realizaciones, las formulaciones farmacéuticas pueden administrarse por vía intravenosa o por vía subcutánea a un paciente que lo necesita. En determinados aspectos de la divulgación, la formulación farmacéutica, como se describe en este documento, puede usarse en la preparación de un medicamento para el tratamiento, la prevención y/o la mejora de cualquier enfermedad o trastorno asociado con la actividad de NGF o la activación de NGF. Las enfermedades y trastornos no limitantes ejemplares que pueden tratarse y/o prevenirse por la administración de las formulaciones farmacéuticas de la presente invención incluyen, dolor resultante de cualquier afección asociada con dolor neurógeno, neuropático o nocisensible. En determinadas realizaciones de dolor neuropático, se tratan las mencionadas neuralgia del trigémino, neuralgia posherpética, dolor del miembro fantasma, fibromialgia, algodistrofia y afecciones de dolor neurógeno. En otras realizaciones, se trata dolor oncológico, particularmente, dolor oncológico óseo, dolor por osteoartritis o artritis reumatoide, dolor lumbar, dolor por incisión posoperatoria, dolor por fractura, dolor por fractura osteoporótica, osteoporosis, dolor articular por gota, neuropatía diabética, ciática, dolores asociados con crisis drepanocíticas, migraña y otros dolores neuropáticos y/o nocisensibles con las formulaciones de la invención.
Las formulaciones de anticuerpo de la presente invención pueden estar contenidas dentro de cualquier recipiente adecuado útil para almacenar formulaciones farmacéuticas. Los ejemplos de dichos recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, viales de vidrio o plástico, jeringas y cartuchos. El recipiente puede ser transparente u opaco (por ejemplo, de color ámbar). En ciertas realizaciones, los viales o jeringas se recubren con silicona, tal como dióxido de silicona. En determinadas realizaciones, el espacio vacío en los viales se llena con un gas inerte para desplazar cualquier cantidad de oxígeno presente que pueda tener un efecto adverso sobre la estabilidad del anticuerpo. Dicho gas inerte puede seleccionarse de nitrógeno o argón.
Las formulaciones farmacéuticas permanecen relativamente estables después de almacenamiento durante varios días, meses o años a una temperatura dada. Por ejemplo, en determinados aspectos ejemplares de la divulgación, se mantiene un alto porcentaje del anticuerpo (por ejemplo, un 90 %, 95 %, 96 % o más) en su forma nativa después de al menos 3, 6, 9 o más meses de almacenamiento. El porcentaje de la forma nativa del anticuerpo puede medirse, por ejemplo, por SE-HPLC o por cualquier otro método conocido en la técnica. La temperatura de almacenamiento a la que se mantiene la estabilidad del anticuerpo puede ser, por ejemplo, -80 °C, -40 °C, -30 °C, -20 °C, 0 °C, 5 °C, 25 °C, 37 °C, 45 °C o mayor.
Otras realizaciones de la presente invención llegarán a ser evidentes a partir de una revisión de la consiguiente descripción detallada.
Descripción detallada
Antes de describir la presente invención, debe entender que esta invención no está limitada a los métodos ni a las condiciones experimentales descritas en particular, ya que dichos métodos y condiciones pueden variar. También tiene que entenderse que la terminología usada en este documento con el fin de describir realizaciones particulares únicamente, y no pretende ser limitante, ya que el alcance de la presente invención se limitará únicamente por las reivindicaciones adjuntas.
Salvo que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en este documento tienen el mismo significado que el comprendido habitualmente por un experto en la materia a la que pertenece esta invención. Como se usa en este documento, el término "aproximadamente", cuando se usa en referencia a un valor numérico indicado particular, significa que el valor puede variar del valor indicado en no más de un 1 %. Por ejemplo, como se usa en este documento, la expresión "aproximadamente 100" incluye 99 y 101 y todos los valores intermedios (por ejemplo, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, etc.).
Aunque puede usarse cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en este documento en la práctica o ensayo de la presente invención, ahora se describen los métodos y materiales preferidos.
Antes de describir la presente invención, tiene que entenderse que esta invención no está limita a métodos y condiciones experimentales particulares descritos, ya que dichos métodos y condiciones pueden variar. También debe entenderse que la terminología usada en este documento es con el fin de describir realizaciones particulares
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únicamente, y no pretende ser limitante, ya que el alcance de la presente invención se limitará únicamente por las reivindicaciones adjuntas.
Salvo que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en este documento tienen el mismo significado que el comprendido habitualmente por un experto en la materia a la que pertenece esta invención. Como se usa en este documento, el término "aproximadamente", cuando se usa en referencia a un valor numérico indicado particular, significa que el valor puede variar del valor indicado en no más de un 1 %. Por ejemplo, como se usan en este documento, la expresión "aproximadamente 100" incluye 99 y 101 y todos los valores intermedios (por ejemplo, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, etc.).
Aunque puede usarse cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en este documento en la práctica o ensayo de la presente invención, ahora se describen los métodos y materiales preferidos.
Formulaciones farmacéuticas
Como se usa en este documento, la expresión "formulación farmacéutica" significa una combinación de al menos un ingrediente activo (por ejemplo, una molécula pequeña, macromolécula, compuesto, etc. que es capaz de ejercer un efecto biológico en un ser humano o animal no humano) y al menos un ingrediente inactivo que, cuando se combina con el ingrediente activo y/o uno o más ingredientes inactivos adicionales, es adecuado para la administración terapéutica a un ser humano o animal no humano. El término "formulación", como se usan en este documento, significa "formulación farmacéutica" salvo que se indique específicamente de otro modo. La presente divulgación proporciona formulaciones farmacéuticas que comprenden al menos un polipéptido terapéutico. Específicamente, en las formulaciones de la invención, el polipéptido terapéutico es un anticuerpo (como se define en las reivindicaciones) que se une específicamente al factor de crecimiento de nervios humano (hNGF). La presente divulgación incluye formulaciones farmacéuticas que comprenden: (i) un anticuerpo que se une específicamente a hNGF; (ii) un tensioactivo no iónico; y (iii) al menos un carbohidrato. Los componentes ejemplares específicos y formulaciones incluidos dentro de la presente invención se describen en detalle a continuación.
En determinados aspectos de la divulgación, el "tensioactivo" puede ser un tensioactivo no iónico que se selecciona del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 80, monooleato de polioxietilen sorbitán y polietilenglicol.
Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser, en determinadas realizaciones, formulaciones fluidas. Como se usa en este documento, la expresión "formulación fluida" significa una mezcla de al menos dos componentes que existen predominantemente en el estado fluido a aproximadamente 5 °C hasta aproximadamente 45 °C. Las formulaciones fluidas incluyen, entre otras cosas, formulaciones líquidas. Las formulaciones fluidas pueden ser de viscosidad baja, moderada o elevada dependiendo de sus constituyentes particulares.
Anticuerpos que se unen específicamente a hNGF
Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención comprenden un anticuerpo humano, como se define en las reivindicaciones, que se une específicamente a hNGF. Como se usa en este documento, el término "hNGF" significa un factor de crecimiento de nervios humano que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 2, que está codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 1.
El término "anticuerpo", como se usan en este documento, pretende hacer referencia en líneas generales a moléculas de inmunoglobulina que comprenden cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, así como multímeros de las mismas (por ejemplo, IgM); sin embargo, las moléculas de inmunoglobulina que consisten en únicamente cadenas pesadas (es decir, carecen de cadenas ligeras) también están incluidas dentro de la definición del término "anticuerpo". Cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (abreviada en este documento como HCVR o Vh) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada comprende tres dominios, Ch1, Ch2 y Ch3. Cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (abreviada en este documento como LCVR o VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera comprende un dominio (CL1). Las regiones Vh y Vl pueden subdividirse además en regiones de hipervariabilidad, llamadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que están más conservadas, llamadas regiones flanqueantes (FR). Cada VH y VL está compuesta de tres CDR y de cuatro FR, dispuestas del extremo amino al extremo carboxi en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Salvo que se indique específicamente de otro modo, el término "anticuerpo", como se usan en este documento, debe entenderse abarcando moléculas de anticuerpo completas, así como fragmentos de unión a antígeno de las mismas. Las expresiones "parte de unión a antígeno" de un anticuerpo, "fragmento de unión a antígeno" de un anticuerpo y similares, como se usan en este documento, incluyen cualquier polipéptido o glucoproteína de origen natural, obtenible enzimáticamente, sintético o modificado por ingeniería genética que se une específicamente a un antígeno para formar un complejo. Las expresiones "parte de unión a antígeno" de un anticuerpo o "fragmento de anticuerpo", como se usan en este documento, se refieren a uno o más fragmentos de un anticuerpo que conservan la capacidad de unirse específicamente a hNGF.
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Un "anticuerpo aislado", como se usa en este documento, pretende hacer referencia a un anticuerpo que está sustancialmente libre de otros anticuerpos que tienen diferentes especificidades antigénicas (por ejemplo, un anticuerpo aislado que se une específicamente a hNGF está sustancialmente libre de anticuerpos que se unen específicamente a antígenos diferentes de hNGF).
La expresión "se une específicamente", o similares, significa que un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo forma un complejo con un antígeno que es relativamente estable en condiciones fisiológicas. La unión específica puede caracterizarse por una constante de disociación de al menos aproximadamente 1x10-6 M o mayor. Los métodos para determinar si dos moléculas se unen específicamente son bien conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, diálisis en equilibrio, resonancia de plasmones superficiales y similares. Un anticuerpo aislado que se une específicamente a hNGF puede tener, sin embargo, reactividad cruzada con otros antígenos, tales como moléculas NGF de otras especies. En el contexto de la presente invención, los anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, biespecíficos) que se unen a hNGF, así como uno o más antígenos adicionales se considera que "se unen específicamente" a hNGF. Además, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otro material celular y/o agentes químicos.
Los anticuerpos anti-hNGF ejemplares que pueden incluirse en las formulaciones farmacéuticas se exponen en el documento US 20090041717.
De acuerdo con determinados aspectos de la divulgación, el anticuerpo anti-hNGF, o fragmento de unión a antígeno del mismo, comprende una región determinante de complementariedad de cadena pesada (HCDR) 1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6, una HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10.
De acuerdo con determinados aspectos de la divulgación, el anticuerpo anti-hNGF, o fragmento de unión a antígeno del mismo, comprende una región determinante de complementariedad de cadena ligera (LCDR) 1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 14, una LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16 y una LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18.
En determinados aspectos de la divulgación, el anticuerpo anti-hNGF, o fragmento de unión a antígeno del mismo, comprende los dominios HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3, respectivamente, seleccionados del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 6 - 8 - 10 / SEQ ID NO: 14 - 16-18.
En determinados aspectos de la divulgación, el anticuerpo anti-hNGF, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en SEQ ID NO: 4 y 20. En determinados aspectos de la divulgación, el anticuerpo anti- hNGF, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en SEQ ID NO: 12 y 22. En determinados aspectos de la divulgación, el anticuerpo anti-hNGF, o fragmento de unión a antígeno del mismo, comprende un par de secuencia de aminoácidos de HCVR/LCVR seleccionadas del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 4/12; y 20/22.
El anticuerpo ejemplar no limitante, usado en los ejemplos de este documento se mencionan como "mAb1". Este anticuerpo también se menciona en el documento US 20090041717 y como se describe en este documento, comprende un par de secuencia de aminoácidos de HCVR/LCVR que tienen las SEQ ID NO: 20/22, y los dominios HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3 representados por las SEQ ID NO: 6 - 8 - 10 / SEQ ID NO: 14 - 16 - 18.
La cantidad de anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, contenida dentro de las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación puede variar dependiendo de las propiedades específicas deseadas de las formulaciones, así como las circunstancias particulares y fines para los que se pretenden las formulaciones a usar. En determinados aspectos, las formulaciones farmacéuticas pueden comprender de aproximadamente 0,01 mg/ml a aproximadamente 500 mg/ml de anticuerpo; de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 500 mg/ml de anticuerpo; de 5 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml de anticuerpo; de 5 mg/ml a 200 mg/ml de anticuerpo; de 25 mg/ml a aproximadamente 180 mg/ml de anticuerpo; de 25 mg/ml a aproximadamente 150 mg/ml de anticuerpo; o de aproximadamente 50 mg/ml a aproximadamente 180 mg/ml de anticuerpo. En determinados aspectos, las formulaciones farmacéuticas pueden comprender de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 100 mg/ml de anticuerpo; de 0,2 mg/ml a aproximadamente 75 mg/ml de anticuerpo; de 0,6 mg/ml a aproximadamente 60 mg/ml de anticuerpo. Por ejemplo, las formulaciones pueden comprender aproximadamente 0,1 mg/ml; aproximadamente 0,2 mg/ml; aproximadamente 0,6 mg/ml; aproximadamente 1 mg/ml; aproximadamente 2 mg/ml; aproximadamente 5 mg/ml; aproximadamente 10 mg/ml; aproximadamente 15 mg/ml; aproximadamente 20 mg/ml; aproximadamente 25 mg/ml; aproximadamente 30 mg/ml; aproximadamente 35 mg/ml; aproximadamente 40 mg/ml; aproximadamente
45 mg/ml; aproximadamente 50 mg/ml; aproximadamente 55 mg/ml; aproximadamente 60 mg/ml; aproximadamente
65 mg/ml; aproximadamente 70 mg/ml; aproximadamente 75 mg/ml; aproximadamente 80 mg/ml; aproximadamente
85 mg/ml; aproximadamente 86 mg/ml; aproximadamente 87 mg/ml; aproximadamente 88 mg/ml; aproximadamente
89 mg/ml; aproximadamente 90 mg/ml; aproximadamente 95 mg/ml; aproximadamente 100 mg/ml; aproximadamente
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105 mg/ml; aproximadamente 110 mg/ml; aproximadamente 115 mg/ml; aproximadamente 120 mg/ml;
aproximadamente 125 mg/ml; aproximadamente 130 mg/ml; aproximadamente 131 mg/ml; aproximadamente
132 mg/ml; aproximadamente 133 mg/ml; aproximadamente 134 mg/ml; aproximadamente 135 mg/ml;
aproximadamente 140 mg/ml; aproximadamente 145 mg/ml; aproximadamente 150 mg/ml; aproximadamente
155 mg/ml; aproximadamente 160 mg/ml; aproximadamente 165 mg/ml; aproximadamente 170 mg/ml;
aproximadamente 175 mg/ml; aproximadamente 180 mg/ml; aproximadamente 185 mg/ml; aproximadamente
190 mg/ml; aproximadamente 195 mg/ml; o aproximadamente 200 mg/ml de un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente a hNGF.
Excipientes y pH
Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención comprenden uno o más excipientes. El término "excipiente", como se usa en este documento, significa cualquier agente no terapéutico añadido a la formulación para proporcionar una consistencia, viscosidad o efecto estabilizante deseado.
En determinados aspectos de la divulgación, la formulación farmacéutica comprende un tampón adecuado para mantener un pH que varía de aproximadamente 4,5 a aproximadamente 5,6. Un tampón ejemplar adecuado para su uso en las formulaciones incluye, por ejemplo, un tampón acetato. En las formulaciones de la invención, el tampón acetato se prepara a una concentración de 10 mM.
La cantidad de acetato contenida dentro de las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación puede variar de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 50 mM; de aproximadamente 2 mM a aproximadamente 20 mM; de aproximadamente 3 mM a aproximadamente 12 mM; o aproximadamente 10 mM.
Las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación también pueden comprender uno o más carbohidratos, por ejemplo, uno o más azúcares. El azúcar puede ser un azúcar reductor o un azúcar no reductor. Los "azúcares reductores" incluyen, por ejemplo, azúcares con un grupo cetona o aldehído y contienen un grupo hemiacetal reactivo, que permite que el azúcar actúe como agente reductor. Los ejemplos específicos de azúcares reductores incluyen fructosa, glucosa, gliceraldehído, lactosa, arabinosa, manosa, xilosa, ribosa, ramnosa, galactosa y maltosa. Los azúcares no reductores puede comprender un carbono anomérico que es un acetal y no es sustancialmente reactivo con aminoácidos o polipéptidos para iniciar una reacción de Maillard. Los ejemplos específicos de azúcares no reductores incluyen sacarosa, trehalosa, sorbosa, sucralosa, sorbitol, melezitosa y rafinosa. Los ácidos de azúcar incluyen, por ejemplo, ácidos sacáricos, gluconato y otros polihidroxi azúcares y sales de los mismos.
La cantidad de azúcar contenida dentro de las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación variará dependiendo de las circunstancias específicas y fines pretendidos para los que se usan las formulaciones. En determinados aspectos, las formulaciones pueden contener de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 20 % de azúcar; de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 20 % de azúcar; de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 20 % de azúcar; de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 15 % de azúcar; de aproximadamente un 3 % a aproximadamente un 10 % de azúcar; de aproximadamente un 4 % a aproximadamente un 10 % de azúcar; o de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 10 % de azúcar. Por ejemplo, las formulaciones farmacéuticas pueden comprender aproximadamente un 0,5 %; aproximadamente un 1,0 %; aproximadamente un 1,5 %; aproximadamente un 2,0 %; aproximadamente un 2,5 %; aproximadamente un 3,0 %;
aproximadamente un 3,5 %; aproximadamente un 4,0 %; aproximadamente un 4,5 %; aproximadamente un 5,0 %;
aproximadamente un 5,5 %; aproximadamente un 6,0 %; 6,5 %; aproximadamente un 7,0 %; aproximadamente un
7.5 %; aproximadamente un 8,0 %; aproximadamente un 8,5 %; aproximadamente un 9,0 %; aproximadamente un
9.5 %; aproximadamente un 10,0 %; aproximadamente un 10,5 %; aproximadamente un 11,0 %; aproximadamente un 11,5 %; aproximadamente un 12,0 %; aproximadamente un 12,5 %; aproximadamente un 13,0 %; aproximadamente un 13,5 %; aproximadamente un 14,0 %; aproximadamente un 14,5 %; aproximadamente un
15.0 %; aproximadamente un 15,5 %; aproximadamente un 16,0 %; 16,5 %; aproximadamente un 17,0 %; aproximadamente un 17,5 %; aproximadamente un 18,0 %; aproximadamente un 18,5 %; aproximadamente un
19.0 %; aproximadamente un 19,5 %; o aproximadamente un 20,0 % de azúcar (por ejemplo, sacarosa).
Las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación también pueden comprender uno o más tensioactivos. Como se usa en este documento, el término "tensioactivo" significa una sustancia que reduce la tensión superficial de un fluido en que se disuelve y/o reduce la tensión interfacial entre aceite y agua. Los tensioactivos pueden ser iónicos o no iónicos. Los tensioactivos no iónicos ejemplares que pueden incluirse en las formulaciones de la presente invención incluyen, por ejemplo, poli(óxido de etileno) de alquilo, poliglucósidos de alquilo (por ejemplo, glucósido de octilo y maltósido de decilo), alcoholes grasos tales como alcohol cetílico y alcohol oleílico, cocamida MEA, cocamide DEA y cocamide TEA. Los tensioactivos no iónicos específicos que pueden incluirse en las formulaciones de la presente invención incluyen, por ejemplo, polisorbatos tales como polisorbato 20, polisorbato 28, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 65, polisorbato 80, polisorbato 81 y polisorbato 85; poloxámeros tales como poloxámero 188, poloxámero 407; polietilen-polipropilenglicol; o polietilenglicol (PEG). El polisorbato 20 también es conocido como TWEEN 20, monolaurato de sorbitán y monolaurato de polioxietilensorbitán.
La cantidad de tensioactivo contenida dentro de las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación puede
variar dependiendo de las propiedades específicas deseadas de las formulaciones, así como las circunstancias particulares y fines para los que se pretenden las formulaciones a usar. En determinados aspectos, las formulaciones pueden contener de aproximadamente un 0,01 % a aproximadamente un 10 % de tensioactivo; de aproximadamente un 0,05 % a aproximadamente un 5 % de tensioactivo; o de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 1 % 5 de tensioactivo. Por ejemplo, las formulaciones pueden comprender aproximadamente un 0,01 %; aproximadamente un 0,02 %; aproximadamente un 0,03 %; aproximadamente un 0,04 %; aproximadamente un 0,05 %;
aproximadamente un 0,06 %; aproximadamente un 0,07 %; aproximadamente un 0,08 %; aproximadamente un 0,09 %; aproximadamente un 0,10 %; aproximadamente un 0,11 %; aproximadamente un 0,12 %; aproximadamente un 0,13 %; aproximadamente un 0,14 %; aproximadamente un 0,15 %; aproximadamente un 0,16 %;
10 aproximadamente un 0,17 %; aproximadamente un 0,18 %; aproximadamente un 0,19 %; aproximadamente un 0,20 %; aproximadamente un 0,21 %; aproximadamente un 0,22 %; aproximadamente un 0,23 %; aproximadamente un 0,24 %; aproximadamente un 0,25 %; aproximadamente un 0,26 %; aproximadamente un 0,27 %;
aproximadamente un 0,28 %; aproximadamente un 0,29 %; o aproximadamente un 0,30 % de tensioactivo (por ejemplo, polisorbato 20).
15
Las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación pueden tener un pH de aproximadamente 4,0 a aproximadamente 6,0. Por ejemplo, las formulaciones de la presente divulgación pueden tener un pH de aproximadamente 4,2; aproximadamente 4,4; aproximadamente 4,6; aproximadamente 4,8; aproximadamente 5,0; aproximadamente 5,2; aproximadamente 5,4; aproximadamente 5,6; aproximadamente 5,8; o aproximadamente 6,0.
20
Formulaciones ejemplares
De acuerdo con un aspecto de la presente divulgación, la formulación farmacéutica comprende: (i) un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF (por ejemplo, mAb1); (ii) acetato; y (iii) un azúcar (por ejemplo, sacarosa). 25 Aspectos ejemplares no limitantes específicos de la divulgación se exponen en la tabla 1.
_________________________________Tabla 1___________________________________
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que contienen mAbl, acetato y sacarosa
mAb1 (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
sacarosa (%)
2 2 2 2 4 4 4 4 6 6 6 6 8 8 8 8
De acuerdo con otro aspecto de la presente divulgación, la formulación farmacéutica comprende: (i) un anticuerpo 30 humano que se une específicamente a hNGF (por ejemplo, mAb1); (ii) acetato; (iii) un azúcar (por ejemplo, sacarosa); y (iv) un tensioactivo (por ejemplo, polisorbato 20). Aspectos ejemplares no limitantes específicos de la divulgación se exponen en las tablas 2A y 2B.
35
Tabla 2A
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que comprenden mAb1, acetato, sacarosa y polisorbato 20
mAb1 (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
sacarosa (%)
2 2 2 2 4 4 4 4 8 8 8 8
polisorbato 20 (%)
0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
Tabla 2B
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que comprenden mAb1, acetato, sacarosa y polisorbato 20
mAb1 (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
sacarosa (%)
2 2 2 2 4 4 4 4 8 8 8 8
polisorbato 20 (%)
0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
De acuerdo con otro aspecto de la presente divulgación, la formulación farmacéutica comprende: (i) un anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF (por ejemplo, mAb1); (ii) acetato; (iii) un azúcar (por ejemplo, sacarosa);
40 (iv) un tensioactivo (por ejemplo, polisorbato 20); (v) un primer aminoácido (por ejemplo, histidina) y (v) un segundo aminoácido (por ejemplo, arginina). Aspectos ejemplares no limitantes específicos de la divulgación se exponen en las tablas 3A, 3B, 3C, 3D, 3E y 3F.
Tabla 3A
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que comprenden mAbl, acetato, histidina, sacarosa, polisorbato 20 y arginina
mAbl (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
histidina (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
sacarosa (%)
2 2 2 2 4 4 4 4 8 8 8 8
polisorbato 20 (%)
0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
arginina (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
Tabla 3B
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que comprenden mAb1, acetato, histidina, sacarosa, polisorbato 20 y arginina
mAb1 (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
histidina (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
sacarosa (%)
2 2 2 2 4 4 4 4 8 8 8 8
polisorbato 20 (%)
0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
arginina (mM)
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
5 Tabla 3C
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que comprenden mAb1, acetato, histidina, sacarosa, polisorbato 20 y arginina
mAb1 (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
histidina (mM)
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
sacarosa (%)
2 2 2 2 4 4 4 4 8 8 8 8
polisorbato 20 (%)
0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
arginina (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
Tabla 3D
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que comprenden mAb1, acetato, histidina, sacarosa, polisorbato 20 y arginina
mAb1 (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
histidina (mM)
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
sacarosa (%)
2 2 2 2 4 4 4 4 8 8 8 8
polisorbato 20 (%)
0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
arginina (mM)
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
5
10
15
20
25
30
35
40
Tabla 3E
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que comprenden mAb1, acetato, histidina, sacarosa, polisorbato 20 y arginina
mAb1 (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
histidina (mM)
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
sacarosa (%)
2 2 2 2 5 5 5 5 10 10 10 10
polisorbato 20 (%)
0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
arginina (mM)
50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
Tabla 3F
Formulaciones farmacéuticas ejemplares que comprenden mAb1, acetato, histidina, sacarosa, polisorbato 20 y arginina
mAb1 (mg/ml)
5 50 100 150 5 50 100 150 5 50 100 150
acetato (mM)
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
histidina (mM)
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
sacarosa (%)
2 2 2 2 5 5 5 5 10 10 10 10
polisorbato 20 (%)
0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
arginina (mM)
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
De acuerdo con determinados aspectos de la divulgación, la formulación de anticuerpo puede comprender un anticuerpo anti-hNGF a una concentración de aproximadamente 20 mg/ml en acetato aproximadamente 10 mM, más aproximadamente un 1,0 % de polietilenglicol 3350 (PEG 3350) y aproximadamente un 20 % de sacarosa a un pH de aproximadamente 5,0. En una realización, la formulación de anticuerpo se administra por vía intravenosa. En una realización, la formulación de anticuerpo se administra por vía subcutánea.
Ejemplos no limitantes adicionales de formulaciones farmacéuticas se exponen en otra parte en este documento, incluyendo los ejemplos de trabajo presentados a continuación.
Estabilidad y viscosidad de las formulaciones farmacéuticas
Las formulaciones farmacéuticas de la presente divulgación típicamente muestran altos niveles de estabilidad. El término "estable", como se usa en este documento en referencia a las formulaciones farmacéuticas, significa que los anticuerpos dentro de las formulaciones farmacéuticas retienen un grado aceptable de estructura y/o función y/o actividad biológica después de almacenamiento durante una cantidad definida de tiempo. Una formulación puede ser estable aunque el anticuerpo contenido en la misma no mantenga un 100 % de su estructura y/o función y/o actividad biológica después de almacenamiento durante una cantidad definida de tiempo. En determinadas circunstancias, el mantenimiento de aproximadamente un 80 %, aproximadamente 85 %, aproximadamente 90 %, aproximadamente 95 %, aproximadamente 96 %, aproximadamente 97 %, aproximadamente un 98 % o aproximadamente un 99 % de la estructura y/o función y/o actividad biológica de un anticuerpo después de almacenamiento durante una cantidad definida de tiempo puede considerarse como "estable".
La estabilidad puede medirse, entre otras cosas, determinando el porcentaje de anticuerpo nativo que permanece en la formulación después de almacenamiento durante una cantidad definida de tiempo a una temperatura dada. El porcentaje de anticuerpo nativo puede determinarse por, entre otras cosas, cromatografía por exclusión de tamaño (por ejemplo, cromatografía de líquidos de alto rendimiento por exclusión de tamaño [SE-HPLC]). Un "grado aceptable de estabilidad", según se usa la expresión en este documento, significa que al menos un 90 % de la forma nativa del anticuerpo puede detectarse en la formulación después de almacenamiento durante una cantidad definida de tiempo a una temperatura dada. En determinados aspectos, al menos aproximadamente un 90 %, un 91 %, un 92 %, un 93 %, un 94 %, un 95 %, un 96 %, un 97 %, un 98 %, un 99 % o un 100 % de la forma nativa del anticuerpo puede detectarse en la formulación después de almacenamiento durante una cantidad definida de tiempo a una temperatura dada. La cantidad definida de tiempo después de la que se mide la estabilidad puede ser de al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses o más. La temperatura a la que la formulación farmacéutica puede almacenarse cuando se valúa la estabilidad puede ser cualquier temperatura de aproximadamente -80 °C a aproximadamente 45 °C, por ejemplo, almacenamiento
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a aproximadamente -30 °C, a aproximadamente -20 °C, a aproximadamente 0 °C, a aproximadamente 5 °C, a aproximadamente 25 °C, a aproximadamente 37 °C o a aproximadamente 45 °C. Por ejemplo, una formulación farmacéutica puede considerarse estable si después de 3 meses de almacenamiento a 5 °C, más de aproximadamente un 90 %, un 95 %, un 96 % o un 97 % del anticuerpo nativo se detecta por SE-HPLC. Una formulación farmacéutica también puede considerarse estable si después de 6 meses de almacenamiento a 5 °C, más de aproximadamente un 90 %, un 95 %, un 96 % o un 97 % del anticuerpo nativo se detecta por SE-HPLC. Una formulación farmacéutica también puede considerarse estable si después de 9 meses de almacenamiento a 5 °C, más de aproximadamente un 90 %, un 95 %, un 96 % o un 97 % del anticuerpo nativo se detecta por SE-HPLC. Una formulación farmacéutica también puede considerarse estable si después de 3 meses de almacenamiento a 25 °C, más de aproximadamente un 90 %, un 95 %, un 96 % o un 97 % del anticuerpo nativo se detecta por SE-HPLC. Una formulación farmacéutica también puede considerarse estable si después de 6 meses de almacenamiento a 25 °C, más de aproximadamente un 90 %, un 95 %, un 96 % o un 97 % del anticuerpo nativo se detecta por SE-HPLC. Una formulación farmacéutica también puede considerarse estable si después de 9 meses de almacenamiento a 25 °C, más de aproximadamente un 90 %, un 95 %, un 96 % o un 97 % del anticuerpo nativo se detecta por SE-HPLC.
Pueden usarse otros métodos para evaluar la estabilidad de las formulaciones de la presente invención tal como, por ejemplo, calorimetría diferencial de barrido (DSC) para determinar la estabilidad térmica, agitación controlada para determinar la estabilidad mecánica y absorbancia a aproximadamente 350 nm o a aproximadamente 405 nm para determinar la turbidez en solución. Por ejemplo, una formulación puede considerarse estable si, después de 6 o más meses de almacenamiento a aproximadamente 5 °C hasta aproximadamente 25 °C, el cambio en la DO405 de la formulación es de menos de aproximadamente 0,05 (por ejemplo, 0,04, 0,03, 0,02, 0,01 o menos) de la DO405 de la formulación a t=0.
También puede evaluarse la estabilidad midiendo la actividad biológica y/o afinidad de unión del anticuerpo a su diana. Por ejemplo, una formulación puede considerarse estable si, después de almacenamiento a, por ejemplo, 5 °C, 25 °C, 37 °C, 45 °C, etc., durante una cantidad de definida de tiempo (por ejemplo, de 1 a 12 o 18 meses), el anticuerpo anti- hNGF contenido dentro de la formulación se une a hNGF con una afinidad que es al menos de un 50 %, un 60 %, un 70 %, un 80 %, un 90 %, un 95 % o más de la afinidad de unión del anticuerpo antes de dicho almacenamiento. Métodos adicionales para evaluar la estabilidad de un anticuerpo en formulación se demuestran en los ejemplos presentados a continuación.
En la forma fluida, las formulaciones farmacéuticas pueden mostrar, en determinadas realizaciones, niveles de bajos a moderados de viscosidad. "Viscosidad" como se usa en este documento puede ser "viscosidad cinemática" o "viscosidad absoluta". La "viscosidad cinemática" es una medida del flujo de resistencia de un fluido bajo la influencia de la gravedad. Cuando dos fluidos e volumen igual se colocan en viscosímetros capilares idénticos y se deja que fluyan por gravedad, un fluido viscoso tarda más que un fluido menos viscoso en fluir a través del capilar. Por ejemplo, si un fluido tarda 200 segundos en completar su flujo y otro fluido tarda 400 segundos, el segundo fluido es dos veces más viscoso que el primero en una escala de viscosidad cinemática. "Viscosidad absoluta", a veces llamada viscosidad dinámica o simple, es el producto de la viscosidad cinemática y la densidad del fluido (viscosidad absoluta = viscosidad cinemática x densidad). La dimensión de la viscosidad cinemática es L2/T donde L es una longitud y T es un tiempo. Habitualmente, la viscosidad cinemática se expresa en centistokes (cSt). La unidad del SI de la viscosidad cinemática es mm2/s, que es 1 cSt. La viscosidad absoluta se expresa en unidades de centipoise (cP). La unidad del SI de la viscosidad absoluta es el miliPascal-segundo (mPa-s), donde 1 cP = 1 mPa-s.
Como se usa en este documento, un nivel bajo de viscosidad, en referencia a una formulación fluida de la presente divulgación, mostrará una viscosidad absoluta de menos de aproximadamente 20 cPoise (cP). Por ejemplo, una formulación fluida de la divulgación se considerará que tiene "baja viscosidad" si, cuando se mide usando técnicas de medición de viscosidad convencionales, la formulación muestra una viscosidad absoluta de aproximadamente 19 cP, de aproximadamente 18 cP, de aproximadamente 17 cP, de aproximadamente 16 cP, de aproximadamente 15 cP, de aproximadamente 14 cP, de aproximadamente 13 cP, de aproximadamente 12 cP, de aproximadamente 11 cP, de
aproximadamente 10 cP, de aproximadamente 9 cP, de aproximadamente 8 cP, de aproximadamente 7 cP, de
aproximadamente 6 cP, de aproximadamente 5 cP, de aproximadamente 4 cP o menos. Como se usa en este documento, un nivel moderado de viscosidad, en referencia a una formulación fluida de la presente divulgación, mostrará una viscosidad absoluta entre aproximadamente 30 cP y aproximadamente 20 cP. Por ejemplo, una formulación fluida de la divulgación se considerará que tiene "viscosidad moderada", si cuando se mide usando técnicas de medición de viscosidad convencionales, la formulación muestra una viscosidad absoluta de aproximadamente 30 cP, de aproximadamente 29 cP, de aproximadamente 28 cP, de aproximadamente 27 cP, de
aproximadamente 26 cP, de aproximadamente 25 cP, de aproximadamente 24 cP, de aproximadamente 23 cP, de
aproximadamente 22 cP, de aproximadamente 21 cP o de aproximadamente 20 cP.
Como se ilustra en el ejemplo 5 a continuación, los autores de la presente invención han hecho el sorprendente descubrimiento de que formulaciones fluidas de viscosidad baja a moderada que comprenden altas concentraciones de un anticuerpo anti-hNGF (por ejemplo, de hasta al menos 125 a 150 mg/ml) pueden obtenerse formulando el anticuerpo con histidina 25 mM y arginina de 25 mM a 100 mM. Además, se descubrió además que la viscosidad de la formulación podría disminuirse hasta un grado incluso mayor reduciendo el contenido de sacarosa.
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Recipientes para las formulaciones farmacéuticas y métodos de administración
Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención pueden estar contenidas dentro de un recipiente adecuado para almacenamiento de medicinas u otras composiciones terapéuticas. Por ejemplo, las formulaciones farmacéuticas pueden estar contenidas dentro de un recipiente de plástico o de vidrio precintado y esterilizado que tenga un volumen definido tal como un vial, ampolla, jeringa, cartucho o frasco. Pueden usarse diferentes tipos de viales para contener las formulaciones de la presente invención incluyendo, por ejemplo, viales de vidrio o plástico transparentes y opacos (por ejemplo, ámbar). Asimismo, puede usarse cualquier tipo de jeringa para contener y/o administrar las formulaciones farmacéuticas de la presente invención. La formulación farmacéutica dentro del recipiente puede tratarse usando cualquier método conocido en la técnica para eliminar el oxígeno para mejorar la estabilidad del anticuerpo si fuera necesario. El oxígeno en el espacio vacío (el espacio gaseoso por encima de un líquido en un recipiente cerrado) puede remplazarse por un gas inerte, tal como nitrógeno o argón.
Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención pueden estar contenidas dentro de jeringas "de tungsteno normal" o jeringas de "bajo contenido de tungsteno". Como apreciarán los expertos en la materia, el proceso de fabricación de jeringas de vidrio generalmente implica el uso de una varilla de tungsteno caliente que funciona perforando el vidrio creando de ese modo un orificio desde el que puede extraerse líquidos y expulsarse desde la jeringa. Este proceso provoca que se depositen cantidades mínimas de tungsteno sobre la superficie interior de la jeringa. El lavado posterior y otras etapas de procesamiento pueden usarse para reducir la cantidad de tungsteno en la jeringa. Como se usa en este documento, la expresión "tungsteno normal" significa que la jeringa contiene más de 500 partes por billón (ppmm) de tungsteno. La expresión "bajo contenido de tungsteno" significa que la jeringa contiene menos de 500 ppmm de tungsteno. Por ejemplo, una jeringa de bajo contenido de tungsteno, de acuerdo con la presente invención, puede contener menos de aproximadamente 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 o menos ppmm de tungsteno.
Los émbolos de caucho usados en las jeringas, y los tapones de caucho usados para cerrar las aberturas de los viales, pueden recubrirse para prevenir la contaminación de los contenidos medicinales de la jeringa o el vial y/o para conservar su estabilidad. Por tanto, las formulaciones farmacéuticas de la presente invención, de acuerdo con determinadas realizaciones, pueden estar contenidas dentro de una jeringa que comprende un émbolo recubierto o dentro de un vial que está precintado con un tapón de caucho recubierto. Por ejemplo, el émbolo o tapón puede recubrirse con una película de fluorocarbono. Los ejemplos de tapones y/o émbolos recubiertos adecuados para su uso con viales y jeringas que contienen las formulaciones farmacéuticas de la presente invención se mencionan en, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos n.° 4.997.423; 5.908.686; 6.286.699; 6.645.635; y 7.226.554. Los tapones y émbolos de caucho recubiertos ejemplares particulares que pueden usarse en el contexto de la presente invención están disponibles en el mercado con la marca registrada "FluroTec®", disponible en West Pharmaceutical Services, Inc. (Lionville, PA).
De acuerdo con determinadas realizaciones de la presente invención, las formulaciones farmacéuticas pueden estar contenidas dentro de una jeringa de bajo contenido de tungsteno que comprende un émbolo recubierto con fluorocarbono. Sin embargo, como se demuestra en la sección de ejemplos a continuación, el anticuerpo anti-NGF parece ser estable en cualquiera de las combinaciones de jeringa y émbolo ensayadas.
Las formulaciones farmacéuticas pueden administrarse a un paciente por vía parenteral tal como inyección (por ejemplo, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, etc.) o administración percutánea, a la mucosa, nasal, pulmonar y/u oral. Pueden usarse numerosos dispositivos de suministro de bolígrafo y/o autoinyector reutilizables para suministrar por vía subcutánea las formulaciones farmacéuticas de la presente invención. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Inc., bolígrafo DISETRONlC™ (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Suiza), bolígrafo HUMALOG MIX 75/25™, bolígrafo HUMALOG™, bolígrafo HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly y Co., Indianápolis, IN), NOVOPEN™ I, II y III (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), bolígrafo BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ y OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Alemania), por nombrar solo algunos. Los ejemplos de dispositivos de suministro por bolígrafo y/o autoinyector desechables que tienen aplicaciones en suministro subcutáneo de una composición farmacéutica de la presente invención incluyen, aunque sin limitación, el bolígrafo SOLOSTAR™ (Sanofi-Aventis), el FLEXPEN™ (Novo Nordisk) y el KWIKPEN™ (Eli Lilly), el autoinyector SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), el PUSHCLICK™ (Scandinavian Health, Ltd. (SHL) Group), el PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Alemania), el EPIPEN (Dey, L.P.) y el HUMIRA™ Pen (Abbott Labs, Abbott Park, IL), por nombrar solo algunos.
El uso de un microinfusor para suministrar las formulaciones farmacéuticas de la presente invención también se contempla en este documento. Como se usa en este documento, el término "microinfusor" significa un dispositivo de suministro subcutáneo diseñado para administrar lentamente volúmenes grandes (por ejemplo, hasta aproximadamente 2,5 ml o más) de una formulación terapéutica durante un periodo prolongado de tiempo (por ejemplo, aproximadamente 10, 15, 20, 25, 30 o más minutos). Véase, por ejemplo, el documento US 6.629.949; el documento US 6.659.982; y Meehan et al., J. Controlled Release 46:107-116 (1996). Los microinfusores son particularmente útiles para el suministro de grandes dosis de proteínas terapéuticas contenidas dentro de soluciones de alta concentración (por ejemplo, aproximadamente 100, 125, 150, 175, 200 o más mg/ml) y/o viscosas.
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Usos terapéuticos de las formulaciones farmacéuticas
Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención son útiles, entre otras cosas, para el tratamiento, la prevención y/o mejora de cualquier enfermedad o trastorno asociado con la actividad de NGF. Las enfermedades y trastornos no limitantes ejemplares que pueden tratarse y/o prevenirse por la administración de las formulaciones farmacéuticas de la presente invención incluyen, dolor resultante de cualquier afección asociada con dolor neurógeno, neuropático o nocisensible. En determinadas realizaciones de dolor neuropático, se tratan preferiblemente las mencionadas neuralgia del trigémino, neuralgia posherpética, dolor del miembro fantasma, fibromialgia, algodistrofia y afecciones de dolor neurógeno. En otras realizaciones, se trata preferiblemente dolor oncológico, particularmente, dolor oncológico óseo, dolor por osteoartritis o artritis reumatoide, dolor lumbar, dolor por incisión posoperatoria, dolor por fractura, dolor por fractura osteoporótica, osteoporosis, dolor articular por gota, neuropatía diabética, ciática, dolores asociados con crisis drepanocíticas, migraña y otros dolores neuropáticos y/o nocisensibles. Por tanto, la presente divulgación incluye métodos de tratamiento, prevención y/o mejora de cualquier enfermedad o trastorno asociado con la actividad NGF o la activación de NGF (incluyendo cualquiera de las enfermedades, trastornos y la afecciones ejemplares mencionados anteriormente) mediante el uso de las formulaciones farmacéuticas de la invención. Los métodos terapéuticos comprenden administrar a un sujeto cualquier formulación que comprenda un anticuerpo anti-hNGF como se divulga en este documento. El sujeto al que se administra la formulación farmacéutica puede ser, por ejemplo, cualquier ser humano o animal no humano que necesite dicho tratamiento, la prevención y/o mejora, o que se beneficiaría de otro modo de la inhibición o atenuación de la actividad de NGF y/o actividad mediada por NGF. Por ejemplo, el sujeto puede ser un individuo que está diagnosticado con, o que se considera que está en riesgo de verse afectado por cualquiera de las enfermedades o trastornos mencionados anteriormente. La presente divulgación incluye además el uso de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas divulgadas en este documento en la fabricación de un medicamento para el tratamiento, la prevención y/o la mejora de cualquier enfermedad o trastorno asociado con la actividad de NGF o la activación de NGF (incluyendo cualquiera de las enfermedades, trastornos y afecciones mencionados anteriormente).
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se exponen para proporcionar a los expertos en la materia una divulgación completa y descripción de la manera en que preparar y usar los métodos y composiciones de la invención, y no pretenden limitar el alcance de lo que los autores de la invención consideran su invención. Se han hecho esfuerzos por asegurar la precisión con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.) pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. Salvo que se indique de otro modo, las partes son partes en peso, la masa molecular es la masa molecular promedio, la temperatura es en grados Celsius y la presión es en o cerca de atmosférica.
Ejemplo 1. Estabilidad de un anticuerpo anti-factor de crecimiento de nervios (NGF) humano ("mAbl") completamente humano después de almacenamiento a bajas temperaturas
En este ejemplo, se crearon diversas formulaciones que contienen un anticuerpo anti-NGF humano sin excipientes. El anticuerpo ejemplar usado en este ejemplo y en todos los ejemplos posteriores expuestos a continuación es un anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y una región variable de cadena ligera (LCVR) con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22. Este anticuerpo se menciona en este documento como "mAbl".
Como experimento preliminar, se determinó la estabilidad del mAbl en solución líquida después de diversas cantidades de tiempo en almacenamiento congelado a -30 °C y a -80 °C. La concentración del mAbl usada en este ejemplo fue 130 mg/ml. En diversos puntos temporales, se determinó la estabilidad del mAbl por cromatografía de líquidos de alto rendimiento por exclusión de tamaño (SE-HPLC) y por cromatografía de líquidos de alto rendimiento por intercambio catiónico (CEX-HPLC). La estabilidad se evaluó basándose en el porcentaje de mAbl nativo que permanecía en la muestra (por SE-HPLC; table 4) y por el porcentaje de especies ácidas observadas en la muestra (por CEX-HPLC; tabla 5). Un aumento en el porcentaje de especies ácidas es coherente con la desaminación del anticuerpo y, por tanto, se considera un fenómeno indeseado con respecto las formulaciones farmacéuticas de la presente invención.
Tabla 4
% de mAb nativo recuperado (SE-HPLC)
Temperatura de almacenamiento
Tiempo (meses)
l 00 o o O 1 CJ o o O
0
96,6 96,6
1
96,6 95,2
3
96,6 94,6
6
96,6 94,2
9
96,5 93,1
% de mAb nativo recuperado (SE-HPLC)
Temperatura de almacenamiento
12
96,7 | 93,3
Tabla 5
% de especies ácidas (CEX-HPLC)
Temperatura de almacenamiento
Tiempo (meses)
do o o O 1 CJ o o O
0
14,3 14,3
1
14,7 14,6
3
14,9 14,5
6
14,1 12,8
9
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14,6 14,6
Estos resultados muestran que el mAbl puede permanecer estable a una concentración de 130 mg/ml durante al 5 menos 12 meses cuando se almacena a -80 °C.
Ejemplo 2. Estabilidad de formulaciones de mAbl que contienen excipientes mínimos
Se prepararon seis formulaciones diferentes que contienen mAb1 a una concentración de 40 mg/ml con excipientes 10 mínimos (como se muestra en la tabla 6, véase también el ejemplo 2) y se almacenaron a -20 °C o a -30 °C durante diversos periodos de tiempo. Todas las formulaciones contienen acetato 10 mM, pH 5,0. La tabla 7 (-30 °C) y la tabla 8 (-20 °C) muestran el porcentaje de mAb1 nativo restante en diversas formulaciones de excipientes mínimos, medido por SE-HPLC.
15 Tabla 6
Formulaciones de excipientes mínimos de mAb1
Formulación
Excipiente mAb1 (mg/ml)
1
polietilenglicol 3350 al 0,5 % 40
2
polietilenglicol 3350 al 1,0 % 40
3
sacarosa al 1 % 40
4
sacarosa al 2 % 40
5
sacarosa al 4 % 40
6
ninguno 40
20
Como se ha señalado anteriormente, las formulaciones se ensayaron para la estabilidad por SE-HPLC después de diversas cantidades de tiempo a -30 °C y a -20 °C. Los resultados, expresados en porcentaje de mAb1 nativo restante, se muestran en las tablas 7 (almacenamiento a -30 °C) y 8 (-20 °C).
Tabla 7
% de mAb1 nativo restante (SE-HPLC) después de almacenamiento a -30 °C
Formulación n.° (véase la tabla 6
Tiempo (meses)
1 2 3 4 5 6
0
98,3 98,1 98,0 97,9 98,1 98,0
1
98,0 98,1 98,0 98,0 98,0 97,0
3
97,8 97,9 98,0 98,0 97,9 96,0
6
98,2 98,4 98,5 98,4 98,4 95,9
9
98,2 98,3 98,5 98,5 98,8 95,1
12
98,2 98,4 98,4 98,4 98,5 95,7
18
97,7 98,2 98,1 98,1 98,4 94,5
24
97,9 98,1 98,3 98,5 98,5 94,5
Tabla 8
% de mAb1 nativo restante (SE-HPLC) después de almacenamiento a -20 °C
Formulación n.° véase la Tabla 6)
Tiempo (meses)
1 2 3 4 5 6
0
98,3 98,1 98,0 97,9 98,1 98,0
1
97,8 98,1 98,2 98,1 98,2 95,8
3
97,8 97,9 98,1 98,2 98,0 93,0
5
10
15
20
25
% de mAb1 nativo restante (SE-HPLC) después de almacenamiento a -20 °C
Formulación n.° véase la Tabla 6)
Tiempo (meses)
1 2 3 4 5 6
6
97,7 98,3 98,3 98,4 98,5 92,6
9
97,8 98,1 98,3 98,3 98,3 90,7
12
97,7 98,2 98,3 98,3 98,5 92,9
18
96,4 97,7 97,9 98,1 98,3 86,7
24
96,9 97,9 98,1 98,2 98,3 88,6
Como se muestra en este ejemplo, la estabilidad del mAbl se mantuvo hasta un grado significativo en las formulaciones 1,2, 3, 4 y 5 después de varios meses de almacenamiento a -20 °C y a -30 °C. Estos resultados indican que la estabilidad de mAb1 a -30 °C puede potenciarse por la adición de al menos un 1,0 % de sacarosa o al menos un 0,5 % de polietilenglicol 3350. Estos resultados indican además que la estabilidad de mAb1 a -20 °C puede potenciarse mediante la adición de al menos un 1,0 % de sacarosa o al menos un 1,0 % de polietilenglicol 3350.
Ejemplo 3. Formulación estabilizada de mAbl
Se preparó una formulación estabilizada que contenía diversas concentraciones de mAb1 para su uso en los ejemplos 4 y 5 a continuación. Esta formulación, denominada "Formulación A", se muestra en la tabla 9.
Tabla 9
Formulación "A" de mAbl estabilizada
Componente
Formulación A
mAb1
6 - 100 mg/ml
Acetato
10 mM
Polisorbato 20
0,05 %
Sacarosa
8 %
pH
5,0
Ejemplo 4. Estabilización de la formulación A después de almacenamiento a 5 °C
Se ensayó la formulación A (véase el ejemplo 3) que contiene 6, 20 o 100 mg/ml de mAb1 para la estabilidad después de varios meses de almacenamiento a 5 °C en viales de vidrio transparente. La estabilidad se evaluó por los siguientes parámetros: (a) aspecto visual; (b) turbidez (DO 405 nm); (c) pH; (d) porcentaje de mAb1 total recuperado medido por RP-HPLC; (e) porcentaje de mAb1 nativo recuperado (medido por SE-HPLC); (f) porcentaje de mAb1 del pico principal recuperado (medido por CEX-HPLC); y (g) porcentaje de mAb1 de especies ácidas recuperado (medido por cEX- HPLC). Los resultados de estabilidad para formulación A que contiene 6, 20 y 100 mg/ml de mAb1 se resumen en las tablas 10, 11 y 12, respectivamente.
Tabla 10
Estabilización de la formulación A que contiene 6 mg/ml de mAbl después de almacenamiento a 5 °C en viales de vidrio (0-12 meses)
Duración de almacenamiento a 5 °C (meses)
Parámetro
0 1 2 3 6 9 12
Aspecto visual
Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado
Turbidez (DO 405 nm)
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
ph
5,1 5,1 5,1 5,0 5,0 5,1 5,1
% de mAb1 total recuperado
100 96 101 99 102 107 107
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
98,8 98,6 98,7 98,9 98,5 98,8 98,7
% del pico principal de mAb1 recuperado (CEX- HPLC)
44,8 46,3 46,4 45,4 41,2 46,2 45,0
% de la especie ácida de mAb1 recuperada (CEX- HPLC)
16,6 16,5 17,4 17,7 15,2 15,9 16,5
Estabilización de la formulación A que contiene 20 mg/ml de mAbl después de almacenamiento a 5 °C en viales de vidrio (0-18 meses)
Duración de almacenamiento a 5 °C (meses)
Parámetro
0 1 2 3 6 9 12 18
Aspecto visual
Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado
Turbidez (DO 405 nm)
0,00 0,00 0,01 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
pH
5,1 5,2 5,0 5,1 5,0 5,1 5,2 5,1
% de mAb1 total recuperado
100 96 99 100 100 104 101 102
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
99,0 98,4 98,5 98,4 98,6 98,2 98,6 98,2
% del pico principal de mAb1 recuperado (CEX- HPLC)
44,0 44,0 44,1 43,8 44,3 43,8 44,9 43,6
% de la especie ácida de mAb1 recuperada (CEX- HPLC)
15,8 15,5 15,8 15,5 15,5 15,2 15,9 15,3
Tabla 12
Estabilización de la formulación A que contiene 100 mg/ml de mAb1 después de almacenamiento a 5 °C en viales de vidrio (0-18 meses)
Duración de almacenamiento a 5 °C (meses)
Parámetro
0 1 2 3 6 9 12 18
Aspecto visual
Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado Aprobado
Turbidez (DO 405 nm)
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
pH
5,0 5,1 5,0 5,1 5,0 5,1 5,0 5,2
% de mAb1 total recuperado
100 98 106 104 103 103 101 104
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
98,2 97,9 97,5 97,8 98,2 97,4 98,1 97,6
% del pico principal de mAb1 recuperado (CEX-HPLC)
41,3 40,9 39,2 39,0 39,5 39,7 42,0 40,4
% de la especie ácida de mAb1 recuperada (CEX-HPLC)
14,8 14,9 13,7 14,0 14,0 13,4 13,8 14,0
5 Los resultados de este ejemplo demuestran que la formulación A que contiene 6 mg/ml de mAbl permanecía estable
durante al menos 12 meses de almacenamiento, a 5 °C en viales de vidrio transparentes, con aproximadamente un 98,7 % o más de mAb1 nativo recuperado en las muestras después de 12 meses de almacenamiento en dichas condiciones. Los resultados de este ejemplo demuestran además que la formulación A que contiene 20 mg/ml de mAb1 permanecía estable durante al menos 18 meses de almacenamiento, a 5 °C en viales de vidrio transparentes, 10 con aproximadamente un 98,2 % de mAb1 nativo recuperado en las muestras después de 18 meses de
almacenamiento en dichas condiciones. Además, la formulación A que contiene 100 mg/ml de mAb1 permaneció estable durante al menos 18 meses de almacenamiento, a 5 °C en viales de vidrio transparentes, con aproximadamente un 97,6 % de mAb1 nativo recuperado en las muestras después de 18 meses de almacenamiento en dichas condiciones. Además, el porcentaje de especies ácidas no cambió significativamente desde tiempo 0 15 después de 12 o 18 meses de almacenamiento en las condiciones ensayadas, confirmando la estabilidad de las formulaciones.
5
10
15
20
25
Ejemplo 5. Efecto de concentraciones de arginina, histidina y sacarosa sobre la viscosidad y la estabilidad de formulaciones que contienen mAb1
Se prepararon varias formulaciones que contenían 100 mg/ml, 125 mg/ml y 150 mg/ml de mAbl y diversas cantidades de histidina, arginina y sacarosa. Se midió la viscosidad y la osmolalidad para cada formulación a 25 °C. Los resultados se resumen en la tabla 13.
Tabla 13
Efecto de concentraciones de arginina, histidina y sacarosa sobre la viscosidad de las formulaciones de mAb1 (todas las formulaciones contienen acetato 10 mM, pH 5,0, y un 0,2 % de polisorbato 20)
mAb1 (mg/ml)
[Histidina] (mM) [Arginina] (mM) [Sacarosa] (%) Viscosidad (cPoise) Osmolalidad (mOsm)
100
0 0 10 ~ 13,5 440
100
0 25 10 ~ 9 510
100
25 0 10 ~ 9 510
100
0 25 5 ~ 7 270
100
0 50 10 ~ 7 560
125
0 0 5 ~ 20 ~ 250
125
0 25 5 ~ 11 290
125
25 0 5 ~ 12 280
125
0 50 5 ~ 9 340
125
25 25 5 ~ 9 330
125
0 0 2 ~ 16 150
150
0 0 5 ~ 41 300
150
25 25 5 ~ 19 360
150
25 25 2 ~ 15 310
150
0 75 5 ~ 14 450
150
0 100 5 ~ 11 510
Los resultados presentados en la tabla 13 indican que añadir histidina o arginina a una concentración de 25 mM a mAb1 (a una concentración de 100 mg/ml), reducía significativamente la viscosidad de la formulación en comparación con una formulación de anticuerpo que no contiene histidina y no contiene arginina. Además, añadir arginina a 25 mM a mAb1 (a una concentración de 100 mg/ml), reduciendo al mismo tiempo la concentración de sacarosa de un 10 % a un 5 %, provocó una reducción adicional en la viscosidad. Cuando la concentración de anticuerpo mAb1 se elevó hasta 125 mg/ml, tanto la histidina como la arginina a 25 mM provocaron una reducción significativa en la viscosidad cuando se usaba en solitario o conjuntamente. Además, reducir la concentración de sacarosa de un 5 % a un 2 % con la histidina y arginina añadidas disminuyó la viscosidad de la formulación hasta un grado incluso mayor. Cuando la concentración de mAb1 se aumentó hasta 150 mg/ml, una combinación de histidina y arginina, cada una a 25 mM, provocó una reducción significativa en la viscosidad. Reducir la sacarosa de un 5 % a un 2 % provocó una disminución adicional en la viscosidad.
Basándose en al menos en parte en lo anterior, se preparó la siguiente "Formulación B" como se expone en la tabla 14.
Tabla 14
Componente
Formulación B
mAb1
20 - 100 mg/ml
Acetato
10 mM
Polisorbato 20
0,05 %
Sacarosa
8 %
Arginina
25 mM
_________pH_________
5,0
5
10
15
20
25
Ejemplo 6. Estabilidad de la formulación A que contiene 100 mg/ml de mAbl cuando se fabrica en un vial y jeringas
La formulación A (véase la Tabla 9) que contiene 100 mg/ml de mAbl se preparó en un vial de vidrio de 2 ml y en dos jeringas diferentes: normal y de bajo contenido en tungsteno. Las preparaciones se almacenaron a 5, 25 y 37 °C durante varios meses de tiempo. La estabilidad de mAb1 después de almacenamiento se midió por SE-HPLC y CEX- HPLC. Los resultados se muestran en la tabla 15. (Un aumento en el porcentaje de especies ácidas es coherente con la desaminación del anticuerpo y, por tanto, se considera un fenómeno indeseado con respecto las formulaciones farmacéuticas de la presente invención). Como se muestra en esta tabla, la formulación A que contiene 100 mg/ml de mAb1, almacenada a 5 °C en un vial o jeringa de vidrio, permanecía relativamente estable durante al menos 18 meses, y era ligeramente menos estable a 25 °C o 37 °C en los momentos posteriores ensayados.
Tabla 15
Estabilidad de la formulación A que contiene 100 mg/ml e mAb1 en vial y jeringa
Vial de vidrio de 2 ml Jeringa normal Jeringa de ba tune ¡o contenido en steno
Temp
Tiempo % nativo (SE- HPLC) % ácido (CEX- HPLC) % nativo (SE- HPLC) % ácido (CEX- HPLC) % nativo (SE- HPLC) % ácido (CEX- HPLC)
-
Inicio 98,2 14,4 98,2 14,1 98,2 14,3
37 °C
7 días 97,6 13,9 97,6 14,0 97,8 13,9
37 °C
14 días 97,2 14,7 97,3 14,6 97,3 14,7
37 °C
28 días 96,7 15,7 96,6 15,5 96,5 15,5
O o LO CM
1 mes 97,7 13,1 97,5 13,5 97,9 13,3
o o LO CM
3 meses 97,3 14,9 97,2 14,9 97,1 14,8
o o LO CM
6 meses 96,9 17,4 97,1 16,9 96,7 17,4
5 °C
1 mes 97,9 14,8 98,1 13,7 98,0 14,0
5 °C
3 meses 97,8 13,7 97,6 13,9 97,7 13,5
5 °C
6 meses 98,2 14,0 98,1 13,5 98,0 13,7
5 °C
9 meses 97,4 13,4 97,6 13,1 97,6 13,2
5 °C
12 meses 98,1 13,8 98,1 13,5 98,2 13,1
5 °C
18 meses 97,6 14,0 97,6 14,1 97,7 14,0
Ejemplo 7. Estabilidad de la formulación B que contiene 100 mg/ml de mAb1 cuando se fabrica en un vial y jeringas
La formulación B (véase la tabla 14) que contiene 100 mg/ml de mAb1 se preparó en un vial de vidrio de 2 ml y en dos jeringas diferentes: normal y de bajo contenido en tungsteno. Las preparaciones se almacenaron a 5, 25 y 37 °C durante varios meses de tiempo. La estabilidad de mAb1 después de almacenamiento se midió por SE-HPLC y CEX- HPLC. Los resultados se muestran en la tabla 16. (Como se indica previamente, un aumento en el porcentaje de especies ácidas es coherente con la desaminación del anticuerpo y, por tanto, se considera un fenómeno indeseado con respecto las formulaciones farmacéuticas de la presente invención). Como se muestra en esta tabla, la formulación B que contiene 100 mg/ml de mAb1, almacenada a 5 °C en un vial o jeringa de vidrio, permanecía relativamente estable durante al menos 12 meses, y era ligeramente menos estable a 25 °C o 37 °C en todos los puntos temporales
ensayados.
Estabilidad de la formulación B que contiene 100 mg/ml de mAb1 en vial y jeringa
Vial de vidrio de 2 ml Jeringa normal Jeringa de ba tune ¡o contenido en steno
Temp
Tiempo % nativo (SE- HPLC) % ácido (CEX- HPLC) % nativo (SE- HPLC) % ácido (CEX- HPLC) % nativo (SE- HPLC) % ácido (CEX- HPLC)
-
Inicio 98,2 14,2 98,1 14,4 98,2 14,3
37 °C
7 días 97,4 14,3 97,4 14,3 97,6 14,1
37 °C
14 días 97,0 14,9 96,9 14,8 96,9 14,8
37 °C
28 días 96,4 16,3 96,4 16,2 96,4 15,9
O o LO CM
1 mes 97,7 13,6 97,8 13,7 97,7 13,6
o o LO CM
3 meses 96,7 14,7 96,9 14,7 96,8 14,8
o o LO CM
6 meses 96,6 15,4 96,6 15,5 96,6 15,6
5 °C
1 mes 98,1 13,6 98,0 13,7 98,1 13,5
5 °C
2 meses 97,8 14,3 97,9 14,3 97,9 14,2
5 °C
3 meses 97,7 14,3 97,3 14,4 97,4 14,2
5 °C
6 meses 97,4 14,4 97,5 14,5 97,6 14,5
5 °C
9 meses 97,8 14,2 97,8 14,1 97,7 14,1
5 °C
12 meses 98,0 15,1 98,1 14,7 98,2 14,7
5 °C
18 meses 97,7 14,3 97,7 39,8 97,7 14,1
5 Ejemplo 8: Estabilidad de formulaciones de mAbl en jeringas prellenadas
Se realizó una serie de experimentos para evaluar la estabilidad de diferentes formulaciones de mAbl en jeringas prellenadas. Para estos experimentos, se usaron diversas jeringas normales de tungsteno y de bajo contenido en tungsteno, con agujas de conexión de Luer y fijas en combinación con diferentes tipos de émbolos (recubierto y no 10 recubierto) y capuchones. Las formulaciones se ensayaron para la estabilidad después de almacenamiento en jeringas prellenadas a 37 °C, 25 °C y 5 °C durante diversas cantidades de tiempo (que varían de 7 días a 6 meses, dependiendo de las condiciones ensayadas).
Se ensayaron para la estabilidad las siguientes formulaciones de mAb1 en jeringas prellenadas en este ejemplo: (1) 15 Formulación A (véase la tabla 9) que contiene 100 mg/ml de mAbl en la jeringa prellenada fija n.° 1 descrita en la tabla 17; (2) Formulación A que contiene 100 mg/ml de mAb1 en la jeringa prellenada fija n.° 2 descrita en la tabla 18; (3) Formulación A que contiene 20 mg/ml de mAb1 en la jeringa prellenada fija n.° 1 descrita en la tabla 19; (4) Formulación A que contiene 20 mg/ml de mAb1 en la jeringa prellenada fija n.° 2 descrita en la tabla 20; (5) Formulación A que contiene 100 mg/ml de mAb1 en la jeringa prellenada fija n.° 3 descrita en la tabla 21; y (6) Formulación A que 20 contiene 6 mg/ml de mAb1 en la jeringa prellenada fija n.° 3 descrita en la tabla 22.
La jeringa n.° 1 es una jeringa Physiolis de bajo contenido en tungsteno de BD de 1 ml de longitud de calibre 29 x A
pulgada; la jeringa n.° 2 es una jeringa Schott de 1 ml de longitud SN CF de calibre 29 x A pulgada; y la jeringa n.° 3 es una jeringa Daikyo Seiko CZ® (Crystal Zenith) de 1 ml conenvional de calibre 30 x A pulgada.
La estabilidad se evaluó por los siguientes parámetros: (a) análisis visual; (b) turbidez (DÜ405nm); (c) porcentaje e 5 recuperación por RP-HPLC; (d) porcentaje de mAbl nativo recuperado por SE-HPLC; (e) porcentaje de mAbl del pico principal por CEX-HPLC; y (f) porcentaje de especies ácidas por CEX-HPLC.
10
Los resultados de un experimento representativo que evalúa la estabilidad de la formulación A, que contiene 100 mg/ml de mAbl en la jeringa n.° 1 se muestran en la tabla 17 a continuación.
Tabla 17
Estabilidad de la formulación A que contiene 100 mg/ml de mAbl en la jeringa prellenada de aguja fija n.° 1
Descripción de la jeringa n.° 1:
Jeringa:
BD 1 ml de longitud, calibre 29 x 1/2" Physiolis, Bajo tungsteno
Émbolo:
Hypak FluroTec® 4023/50
Capuchón:
BD 260
Siliconización:
Pulverizada
Temp
Tiempo Análisis visual Turbidez (DO405 nm) % de recuperación % de mAb1 nativo (SE-HPLC) % del pico principal (CEX- HPLC) % de especies ácidas (CEX-HPLC)
--
Inicio Aprobado 0,00 100 98,2 40,2 14,2
37 °C
7 días Aprobado 0,00 101 97,8 37,6 13,9
37 °C
14 días Aprobado 0,00 100 97,3 37,0 14,7
37 °C
28 días Aprobado 0,00 96 96,5 34,9 15,5
O o LO CM
1 mes Aprobado 0,00 97 97,9 36,9 13,3
o o LO CM
2 meses Aprobado 0,00 103 97,0 38,6 14,9
o o LO CM
3 meses Aprobado 0,00 100 97,1 35,5 14,8
o o LO CM
6 meses Aprobado 0,00 104 96,7 36,8 17,4
5 °C
1 mes Aprobado 0,00 96 98,0 39,0 13,8
5 °C
2 meses Aprobado 0,00 103 97,8 39,3 13,6
5 °C
3 meses Aprobado 0,00 100 97,7 39,2 13,5
5 °C
6 meses Aprobado 0,00 100 98,0 39,2 13,7
5 °C
9 meses Aprobado 0,00 100 97,6 39,1 13,2
5 °C
12 meses Aprobado 0,00 102 98,2 40,9 13,1
5 °C
18 meses Aprobado 0,00 100 97,7 39,6 14,0
Los resultados de un experimento representativo que evalúa la estabilidad de la formulación A, que contiene 100 mg/ml de mAb1 en la jeringa n.° 2 se muestran en la tabla 18 a continuación.
Estabilidad de la formulación A que contiene 100 mg/ml de mAbl en la jeringa prellenada de aguja fija n.° 2
Descripción de la jeringa n.° 2:
Jeringa:
Schott 1 ml de longitud SN CF, calibre 29 x 1/2"
Émbolo:
West FluroTec® 4023/50
Capuchón:
Stelmi 4800 w/RNS
Siliconización:
Pulverizada
Temp
Tiempo Análisis visual Turbidez (DO405 nm) % recuperado % de mAb1 nativo (SE-HPLC) % del pico principal (CEX- HPLC) % de especies ácidas (CEX-HPLC)
--
Inicio Aprobado 0,00 100 98,3 40,3 14,2
37 °C
7 días Aprobado 0,00 102 97,5 37,8 14,0
37 °C
14 días Aprobado 0,00 102 97,3 37,4 14,7
37 °C
28 días Aprobado 0,00 97 96,6 34,6 15,4
25 °C
1 mes Aprobado 0,00 98 97,8 36,8 13,4
25 °C
2 meses Aprobado 0,00 103 97,1 38,8 14,9
25 °C
3 meses Aprobado 0,00 101 97,1 35,6 14,8
25 °C
6 meses Aprobado 0,00 103 96,8 37,4 17,5
5 °C
1 mes Aprobado 0,00 97 97,8 39,8 13,8
5 °C
2 meses Aprobado 0,00 103 97,8 39,4 13,9
5 °C
3 meses Aprobado 0,00 101 97,6 39,8 13,8
5 °C
6 meses Aprobado 0,00 101 98,1 40,0 13,9
5 °C
9 meses Aprobado 0,00 102 97,6 39,7 13,4
5 °C
12 meses Aprobado 0,00 100 98,2 41,1 13,0
5 °C
18 meses Aprobado 0,00 102 97,7 39,4 13,9
5
Los resultados de un experimento representativo que evalúa la estabilidad de la formulación A, que contiene 20 mg/ml de mAb1 en la jeringa n.° 1 se muestran en la tabla 19 a continuación.
Tabla 19
Estabilidad de la formulación A que contiene 20 mg/ml de mAbl en la jeringa prellenada de aguja fija n.° 1
Descripción de la jeringa n.° 1:
Jeringa:
BD 1 ml de longitud, calibre 29 x 1/2" Physiolis, Ba¡o tungsteno
Émbolo:
Hypak FluroTec® 4023/50
Capuchón:
BD 260
Siliconización:
Pulverizada
Temp
Tiempo Análisis visual Turbidez (DO4ü5 nm) % recuperado % de mAb1 nativo (SE-HPLC) % del pico principal (CEX- HPLC) % de especies ácidas (CEX-HPLC)
--
Inicio Aprobado 0,00 100 98,9 44,5 15,9
0 0 l's- CO
7 días Aprobado 0,00 100 98,4 42,1 15,7
0 0 l's- co
14 días Aprobado 0,00 99 98,3 41,8 16,2
0 0 l's- co
28 días Aprobado 0,00 98 97,6 39,2 17,5
25 °C
1 mes Aprobado 0,00 96 98,4 41,4 15,3
25 °C
2 meses Aprobado 0,00 100 98,1 41,8 16,0
Estabilidad de la formulación A que contiene 20 mg/ml de mAbl en la jeringa prellenada de aguja fija n.° 1
Descripción de la jeringa n.° 1:
Jeringa:
BD 1 ml de longitud, calibre 29 x 1/2" Physiolis, Ba¡o tungsteno
Émbolo:
Hypak FluroTec® 4023/50
Capuchón:
BD 260
Siliconización:
Pulverizada
Temp
Tiempo Análisis visual Turbidez (d0405 nm) % recuperado % de mAb1 nativo (SE-HPLC) % del pico principal (CEX- HPLC) % de especies ácidas (CEX-HPLC)
25 °C
3 meses Aprobado 0,00 99 98,0 42,7 17,0
25 °C
6 meses Aprobado 0,01 99 98,0 42,0 19,4
5 °C
1 mes Aprobado 0,00 97 98,2 44,0 15,7
5 °C
2 meses Aprobado 0,00 99 98,5 44,5 15,8
5 °C
3 meses Aprobado 0,00 100 98,4 44,4 15,8
5 °C
6 meses Aprobado 0,00 99 98,6 44,1 15,6
5 °C
9 meses Aprobado 0,00 101 98,2 44,0 15,1
5 °C
12 meses Aprobado 0,00 101 98,5 45,4 15,9
5 °C
18 meses Aprobado 0,00 101 98,2 43,5 15,3
Los resultados de un experimento representativo que evalúa la estabilidad de la formulación A, que contiene 20 mg/ml de mAb1 en la jeringa n.° 2 se muestran en la tabla 20 a continuación.
5 Tabla 20
Estabilidad de la formulación A que contiene 20 mg/ml de mAbl en la jeringa prellenada de aguja fija n.° 2
Descripción de la jeringa n.° 2:
Jeringa:
Schott 1 ml de longitud SN CF, calibre 29 x 1/2"
Émbolo:
West FluroTec® 4023/50
Capuchón:
Stelmi 4800 w/RNS
Siliconización:
Pulverizada
Temp
Tiempo Análisis visual Turbidez (DO405 nm) % recuperado % de mAb1 nativo (SE-HPLC) % del pico principal (CEX- HPLC) % de especies ácidas (CEX-HPLC)
--
Inicio Aprobado 0,00 100 98,9 44,5 15,9
37 °C
7 días Aprobado 0,00 101 98,4 42,1 15,6
37 °C
14 días Aprobado 0,00 100 98,2 41,8 16,2
37 °C
28 días Aprobado 0,00 98 97,6 39,3 17,4
O o LO CM
1 mes Aprobado 0,00 97 98,3 41,5 15,2
o o LO CM
2 meses Aprobado 0,00 99 98,2 41,9 16,0
o o LO CM
3 meses Aprobado 0,00 100 98,0 42,7 16,9
o o LO CM
6 meses Aprobado 0,00 99 97,9 42,1 19,5
5 °C
1 mes Aprobado 0,00 96 98,4 44,7 15,6
5 °C
2 meses Aprobado 0,00 99 98,5 44,3 15,9
5 °C
3 meses Aprobado 0,00 99 98,4 44,7 15,7
5 °C
6 meses Aprobado 0,00 100 98,7 44,2 15,5
5 °C
9 meses Aprobado 0,00 102 98,4 43,8 15,1
5 °C
12 meses Aprobado 0,00 102 98,6 45,2 15,9
5 °C
18 meses Aprobado 0,00 102 98,3 43,2 15,2
Los resultados de un experimento representativo que evalúa la estabilidad de la formulación A, que contiene 100 mg/ml de mAbl en la jeringa n.° 3 se muestran en la tabla 21 a continuación.
10
Estabilidad de la formulación A que contiene 100 mg/ml de mAbl en la jeringa prellenada de aguja fija n.° 3
Descripción de la jeringa n.° 3:
Jeringa:
Daikyo Seiko CZ 1 ml convencional, calibre 30 x 1/2"
Émbolo:
Daikyo D-21-6-1 FluroTec® recubierto
Capuchón:
7028
Siliconización:
NP
Temp
Tiempo Análisis visual Turbidez (DO405 nm) % de recuperación % de mAb1 nativo (SE-HPLC) % del pico principal (CEX- HPLC) % de especies ácidas (CEX-HPLC)
--
Inicio Aprobado 0,00 100 97,5 38,5 13,6
37 °C
7 días Aprobado 0,00 101 97,5 40,0 14,0
37 °C
14 días Aprobado 0,00 102 97,3 39,5 15,2
37 °C
28 días Aprobado 0,00 101 96,4 38,3 15,7
O o LO CM
1 mes Aprobado 0,00 105 97,8 38,3 13,6
o o LO CM
2 meses Aprobado 0,00 102 97,2 37,4 14,9
o o LO CM
3 meses Aprobado 0,00 102 97,2 37,2 14,6
5 °C
1 mes Aprobado 0,00 104 98,2 38,1 13,3
5 °C
2 meses Aprobado 0,00 101 97,9 38,1 13,4
5 °C
3 meses Aprobado 0,00 101 97,8 38,4 13,1
5 °C
6 meses Aprobado 0,00 106 97,8 39,6 13,4
5 °C
9 meses Aprobado 0,00 105 97,9 40,8 13,4
5 °C
12 meses Aprobado 0,00 112 97,6 38,3 13,5
5
Los resultados de un experimento representativo que evalúa la estabilidad de la formulación A, que contiene 6 mg/ml de mAb1 en la jeringa n.° 3 se muestran en la tabla 22 a continuación.
Tabla 22
Estabilidad de la formulación A que contiene 6 mg/ml de mAbl en la jeringa prellenada de aguja fija n.° 3
Descripción de la jeringa n.° 3:
Jeringa:
Daikyo Seiko CZ 1 ml convencional, calibre 30 x 1/2"
Émbolo:
Daikyo D-21-6-1 FluroTec® recubierto
Capuchón:
7028
Siliconización:
NP
Temp
Tiempo Análisis visual Turbidez (DO405 nm) % de recuperación % de mAb1 nativo (SE-HPLC) % del pico principal (CEX- HPLC) % de especies ácidas (CEX-HPLC)
--
Inicio Aprobado 0,00 100 98,8 45,6 16,8
37 °C
7 días Aprobado 0,00 101 98,7 46,2 17,2
37 °C
14 días Aprobado 0,00 101 98,5 45,8 18,2
37 °C
28 días Aprobado 0,00 101 98,3 44,5 19,8
O 0 LO CM
1 mes Aprobado 0,00 106 98,8 45,7 17,3
0 0 LO CM
2 meses Aprobado 0,00 103 98,8 44,3 18,1
0 0 LO CM
3 meses Aprobado 0,00 101 98,3 42,9 18,6
5 °C
1 mes Aprobado 0,00 105 99,0 46,0 16,6
5 °C
2 meses Aprobado 0,00 102 98,8 45,6 16,8
5 °C
3 meses Aprobado 0,00 101 98,8 45,7 16,3
5 °C
6 meses Aprobado 0,00 105 98,5 46,7 16,5
5 °C
9 meses Aprobado 0,00 106 98,8 47,8 17,2
5 °C
12 meses Aprobado 0,00 115 97,8 47,6 17,5
Los resultados de este conjunto de experimentos demuestran que las diferentes formulaciones permanecen relativamente estables en jeringas prellenadas, especialmente cuando se almacenan a temperaturas de 25 °C y por 10 debajo, durante un mes o más.
Ejemplo 9: Estabilidad de formulaciones que contienen bajas concentraciones de mAbl en viales de vidrio
Se está evaluando la estabilidad en tiempo real y acelerada de 0,2, 0,5, 1 y 2 mg/ml de mAb1 en viales de vidrio, cuyos 15 resultados hasta la fecha se muestran en las tablas 23 a 27. Para estos experimentos, se está examinando la estabilidad de mAb1 en viales de vidrio de borosilicato de tipo 1 fabricados por Schott. La formulación del mAb1 usada en los ejemplos 9 a 12 es similar a la descrita en la tabla 9, excepto que las concentraciones de anticuerpo usadas fueron inferiores que las ensayadas previamente y varían para todos los periodos de ensayo. Las concentraciones exactas de mAb1 usadas en cada experimento se indican en cada tabla a continuación. Las formulaciones se
ensayaron para la estabilidad después de almacenamiento en viales de vidrio a 45 °C, 25 °C y 5 °C durante diversas cantidades de tiempo (que varían de 7 días a 6 meses, dependiendo de las condiciones ensayadas).
10
Estabilidad de mAbl a baja concentración en viales de vidrio (incubación a 45 °C)
Tiempo (días)
% de mAb1 recuperado (RP-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml por vial)
0,2 0,5 1,0 2,0
0
100 100 100 100
7
91 97 103 109
14
67 94 101 108
28
40 82 100 106
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
Los resultados hasta la fecha demuestran una degradación aumentada (precipitación, agregación, escisión y variantes de carga) de las formulaciones de 0,2 y 0,5 mg/ml después de incubación a 45 °C durante 7 a 14 días. Además, hubo un aumento en la agregación para las formulaciones a todas las concentraciones < 2 mg/ml cuando se incubaban a 45 °C durante 28 días (> 15 % frente a -2 % para formulaciones > 6 mg/ml). Se observó precipitación cunado la formulación de 0,2 mg/ml se almacenaba a 5 °C durante 6 meses. No hubo degradación/precipitación significativa observada cuando formulaciones de 0,5, 1 y 2 mg/ml se almacenaban a 5 °C durante 6 meses.
Tabla 23
Tabla 24
Estabilidad de mAb1 a baja concentración en viales de vidrio (incubación a 25 °C)
Tiempo (días)
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml por vial)
0,2 0,5 1,0 2,0
0
98,1 98,4 98,6 98,5
7
98,3 98,6 98,6 98,7
14
98,1 98,7 98,6 98,7
28
97,6 98,5 98,6 98,7
56
92,2 96,6 98,1 98,5
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
15 Tabla 25
Estabilidad de mAb1 a baja concentración en viales de vidrio (incubación a 5 °C)
Tiempo (meses)
% de mAb1 recuperado (RP-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml por vial)
0,2 0,5 1,0 2,0
0
100 100 100 100
1
101 97 105 109
2
99 100 107 110
3
105 99 105 111
6
80 97 102 106
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
Tabla 26
Estabilidad de mAb1 de baja concentración en viales de vidrio (incubación a 5 °C)
Tiempo (meses)
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml por vial
0,2 0,5 1,0 2,0
0
98,1 98,4 98,6 98,5
1
97,7 98,6 98,7 98,8
2
97,8 98,3 98,3 98,7
3
98,2 98,7 98,7 98,3
6
97,6 98,4 98,6 98,5
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
5
10
15
20
25
30
Tabla 27: Estabilidad de mAbl a baja concentración en jeringas PFS o en viales de vidrio (incubación a ________________________________________45 °C)________________________________________
A. Viales de vidrio
Tiempo (días)
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml por vial)
0,2 0,5 1,0 2,0
0
98,1 98,4 98,6 98,5
7
90,4 97,2 98,3 98,2
14
76,1 92,0 96,1 97,8
28
42,9 51,0 83,7 81,7
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
B. Jeringa
Tiempo (días)
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml por vial)
0,2 0,5 1,0 2,0
0
98,1 98,6 98,5 98,4
7
97,6 98,1 98,2 98,1
14
97,9 97,9 97,8 97,8
28
96,9 96,8 96,7 96,6
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
Ejemplo 10: Estabilidad de formulación que contiene bajas concentraciones de mAb1 en jeringas BD y Ompi
Se está evaluando la estabilidad en tiempo real y acelerada de 0,2 y 0,6 mg/ml de mAbl en jeringas BD y Ompi. Ambas jeringas son de un tamaño de 1 ml de longitud, fabricadas con bajo contenido en tungsteno y tienen un calibre 27 X 1X pulgadas, de pared delgada, con aguja fija. La jeringa BD contiene 0,8 mg de silicona, aplicada por pulverización desde la parte superior del reborde. La jeringa Ompi contiene 0,5 mg de silicona y se aplica con tecnología de boquilla sumergida, que da un recubrimiento más uniforme a lo largo de la longitud del cilindro. Las formulaciones se ensayaron para la estabilidad después de almacenamiento tanto en jeringas prellenadas a 45 °C, 25 °C y 5 °C durante diversas cantidades de tiempo (que varían de 7 días a 6 meses, dependiendo de las condiciones ensayadas).
Los resultados, que se muestran en las tablas 28 a 30, demostraron que la estabilidad de mAbl a 45 °C en la jeringa BD está enormemente mejorada en comparación con un vial de vidrio de borosilicato de tipo 1, determinada por análisis RP-HPLC (precipitación) y SE-HPLC (especies de agregación y escisión).
La estabilidad de mAb1 a 45 °C en la jeringa Ompi mejoraba en comparación con viales de vidrio de borosilicato de tipo 1, pero era significativa menos estable en comparación con incubación en la jeringa BD. Estos datos sugieren que la silicona puede estar bloqueando la interacción de la formulación con la superficie de vidrio, mejorando por tanto la estabilidad. Como la jeringa BD contiene más silicona a lo largo del cilindro de la jeringa de vidrio que la jeringa Ompi, esto puede explicar la causa de que la formulación sea más estable en la jeringa BD en comparación con la jeringa Ompi.
No se observó degradación significativa cuando el mAb1 se almacenaba en las jeringas BD y Ompi a 5 °C o a 25 °C durante 6 meses determinada por análisis SE-HPLC y CEX-HPLC.
Tabla 28
Estabilidad de 0,6 mg/ml de mAb1 en jeringas BD, jeringa Ompi o viales de vidrio (incubación a 45 °C)
Tiempo (días)
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
Vial de vidrio de tipo 1
Jeringa BD Jeringa Ompi
0
98,6 98,6 98,9
7
98,2 98,4 98,5
28
66,1 97,1 84,5
54
- 95,6 24,5
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
5
10
15
20
25
Estabilidad de mAbl a baja concentración en jeringas BD y Ompi (incubación a 5 °C; SE-HPLC)
% de mAb1 nativo recuperado (SE-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml)
Tiempo (meses)
Vial BD Ompi
0,2
0,6 0,2 0,6 0,2 0,6
0
98,6 98,6 98,4 98,6 98,7 98,9
1
98,7 99,0 98,5 98,9 98,5 98,9
2
98,3 98,9 98,7 98,9 98,6 98,9
3
98,4 98,6 98,4 98,7 98,3 98,7
6
98,3 98,6 98,3 98,7 98,2 98,7
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
Tabla 30
Estabilidad de mAb1 a baja concentración en vial, jeringas BD y CZ (incubación a 45 °C; RP-HPLC)
% de mAb1 recuperado (RP-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml)
Tiempo (días)
Vial BD CZ
0,2
0,6 0,2 0,6 0,2 0,6
0
100 100 100 100 100 100
7
92 103 96 107 99 106
14
88 96 96 99 104 100
28
39 94 85 99 104 101
42
- - 61 - 94 -
56
- - 55 - 96 -
62
- - - 88 - 98
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
Ejemplo 11: Estabilidad de formulación que contiene bajas concentraciones de mAb1 en dispositivos de almacenamiento alternativos
Hay estudios en curso para examinar la estabilidad de mAbl en otros dispositivos de almacenamiento, incluyendo: jeringas West CZ (poliolefina cíclica), viales de vidrio Schott Type 1 plus® (100 - 200 nm de recubrimiento de SiO2 en la superficie interior de viales de vidrio de borosilicato de tipo 1) y viales de vidrio de borosilicato Schott Type 1 con espacio vacío de nitrógeno (aire eliminado del espacio vacío del vial y remplazado con gas N2).
Los resultados, como se muestran en las tablas 31 a 36, demuestran que la estabilidad a 45 °C se mejoraba enormemente para formulaciones de 0,2 y 0,6 mg/ml en jeringas CZ en comparación con jeringas BD determinada por RP-HPLC y SE-HPLC.
Además, la estabilidad de la formulación de mAb1 a 45 °C se mejoró enormemente a concentraciones de 0,2 y 0,6 mg/ml en viales de vidrio de Type 1 plus® en comparación con viales de tipo 1, determinada por RP-HPLC y SE- HPLC.
Se observó degradación significativa por SE-HPLC para la formulación de 0,2 mg/ml en viales de vidrio de tipo 1 cuando se incubaban a 25 °C o a 5 °C durante 3 meses. No se observó degradación significativa para la formulación de 0,2 mg/ml en viales de vidrio de Type 1 plus® cuando se incubaban a 25 °C o a 5 °C durante 3 meses.
La estabilidad a 45 °C se mejoró enormemente para las formulaciones de 0,2 mg/ml en viales de vidrio de tipo 1 con un revestimiento de nitrógeno, en comparación con viales de vidrio de tipo 1 con un espacio vacío de aire, determinada por SE-HPLC.
5 La eliminación de oxígeno del espacio vacío tuvo el máximo efecto estabilizante sobre mAb1 a 0,2 mg/ml formulado con un 0,05 % de polisorbato 20 (como en la formulación A) aunque aún se observaba una tasa aumentada de degradación en comparación con una formulación de 0,2 mg/ml sin polisorbato 20.
10
________________________________________Tabla 31__________________________________________
Estabilidad de mAbl a baja concentración en vial, jeringas BD y CZ (incubación a 45 °C; SE-HPLC)
% de mAb1 nativo (SE-HPLC)
Concentración de mAb1 (mg/ml)
Tiempo (días)
Vial BD CZ
0,2
0,6 0,2 0,6 0,2 0,6
0
98,8 98,7 98,5 98,5 98,7 98,6
7
96,5 98,3 97,6 98,3 97,0 98,3
14
82,0 97,2 95,8 97,2 97,1 97,0
28
58,2 64,5 70,6 95,8 96,1 96,2
42
- - 48,8 - 93,3 -
56
- - 36,4 - 89,6 -
62
- - - 93,4 - 90,3
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
______________________________________Tabla 32________________________________________
Estabilidad de mAb1 a baja concentración en vial Type 1 plus®, (incubación a 45 °C; RP-HPLC)
% de mAb1 recuperado (RP-HPLC)
Tiempo (días)
Concentración de mAb1 (mg/ml)
Vial de tipo 1 Vial Type 1 plus®
0,2 0,6 0,2 0,6
0
100 100 100 100
7
92 103 99 106
14
88 96 100 99
28
39 94 101 100
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
_______________________________________Tabla 33_______________________________________
Estabilidad de mAb1 a baja concentración en vial Type 1 plus® (incubación a 45 °C; SE-HPLC)
% de mAb1 nativo (SE-HPLC)
Tiempo (días)
Concentración de mAb1 (mg/ml)
Vial de tipo 1
Vial Type 1 plus®
0,2
0,6 0,2 0,6
0
98,8 98,7 98,7 98,6
7
96,5 98,3 97,3 98,3
14
82,0 97,2 97,4 97,2
28
58,2 64,5 70,6 95,2
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
______________________________________Tabla 34________________________________________
Estabilidad de mAbl a baja concentración en vial Type 1 plus® (incubación a 25 °C; SE-HPLC)
% de mAb1 nativo (SE-HPLC)
Tiempo (meses)
Concentración de mAb1 (mg/ml)
Vial de tipo 1 Vial Type 1 plus®
0,2 0,6 0,2 0,6
0
98,8 98,7 98,7 98,6
1
98,7 98,7 98,6 98,8
2
98,2 98,6 98,2 98,6
3
92,5 97,2 97,5 97,4
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
______________________________________Tabla 35_______________________________________
Estabilidad de mAb1 a baja concentración en vial Type 1 plus® (incubación a 5 °C; SE-HPLC)
% de mAb1 nativo (SE-HPLC)
Tiempo (meses)
Concentración de mAb1 (mg/ml)
Vial de tipo 1 Vial Type 1 plus®
0,2 0,6 0,2 0,6
0
98,8 98,7 98,7 98,7
1
98,9 98,9 98,5 98,7
2
98,7 98,9 98,6 98,6
3
96,5 97,7 97,9 97,7
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
5 Tabla 36
Estabilidad de 0,2 mg/ml de mAb1 en vial de tipo 1 con revestimiento de nitrógeno (incubación a 45 °C; SE- HPLC)
% de mAb1 nativo (SE-HPLC)
Tiempo (meses)
Espacio vacío de aire Espacio vacío de nitrógeno
0
97,5 97,1
7
95,2 95,7
14
84,6 96,6
21
60,9 96,7
28
53,9 96,7
56
- 92,4
Formulación: Sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
Ejemplo 12: Efecto del tungsteno sobre la estabilidad de mAb1 a baja concentración
Hay estudios para examinar la estabilidad de mAbl cuando se le añade un extracto de alambre de tungsteno sin filtrar. 10 Los alambres de tungsteno se usan en el proceso de fabricación de jeringas prellenadas para formar el orificio en la jeringa de conexión de Luer. Un extracto de un alambre de tungsteno usado en una línea de fabricación por BD se preparó usando placebo de mAb1 (similar a la formulación A sin mAb1). El extracto del alambre sin filtrar contiene todas las especies de tungsteno que pueden quedar en la jeringa como contaminantes (sales solubles de tungsteno y óxidos insolubles de tungsteno).
5
10
15
20
25
30
Los resultados de SE-HPLC, como se muestra en las tablas 37 a 38, demuestran que la estabilidad a 25 °C se redujo en comparación con un vial de control sin tungsteno para formulaciones de 0,6 mg/ml que contienen niveles de tungsteno > 500 ppmm. Las jeringas de bajo contenido en tungsteno típicamente contienen < 500 ppmm de tungsteno mientras que las jeringas normales pueden contener como mucho 2500 ppmm de tungsteno.
No se observó degradación para formulaciones de 0,6 mg/ml con tungsteno de hasta 2500 ppmm cuando se incubaban a 5 °C durante 6 meses.
Tabla 37
Estabilidad de 0,6 mg/ml de mAbl cuando se almacena a 25 °C en extractos de alambre de tungsteno sin filtrar (SE-HPLC)
% de mAb1 nativo (SE-HPLC)
Tiempo (semanas)
Vial de control 50 ppmm W 100 ppmm W 500 ppmm W 1000 ppmm W 2500 ppmm W
0
98,7 98,8 98,9 98,8 98,8 98,7
1
98,7 98,6 98,7 98,6 98,7 98,7
2
98,6 98,6 98,6 98,4 98,4 98,4
4
98,5 98,5 98,5 98,6 98,2 98,5
8
98,6 98,7 98,6 98,2 98,3 98,6
26
97,4 97,8 97,5 78,6 76,5 74,8
Formulación: 0,6 mg/ml de mAb1 en sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
Tabla 38
Estabilidad de 0,6 mg/ml de mAb1 cuando se almacena a 5 °C en extractos de alambre de tungsteno sin filtrar (SE-HPLC)
% de mAb1 nativo (SE-HPLC)
Tiempo (semanas)
Vial de control 50 ppmm W 100 ppmm W 500 ppmm W 1000 ppmm W 2500 ppmm W
0
98,7 98,8 98,9 98,8 98,8 98,7
1
98,5 98,5 98,6 98,7 98,6 98,4
3
97,7 98,0 98,2 98,2 98,2 98,2
6
98,8 98,6 98,7 98,7 98,8 98,4
Formulación: 0,6 mg/ml de mAb1 en sacarosa al 8 %, polisorbato 20 al 0,05 %, acetato 10 mM, pH 5,0
LISTADO DE SECUENCIAS
<110> Scott Walsh Terra Potocky Daniel Dix Renuka Sivendran
<120> Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-NGF <130> 6066PCT <140> Por asignar
<141> Presentado en este documento
<150> 61/364.112 <151> 14/07/2010
<160> 31
<170> FastSEQ para Windows Versión 4.0 <210> 1
5
10
15
20
25
<211> 847 <212> ADN <213> Homo sapiens
<400> 1
agcgtccgga ggtgcatagc acaggcggaa ctggactaaa agcggcgata gtttaaaaag agctgcagac tcacaggagc tgacagtgtc ggtgatggtg gaccaagt ge ctggaactca gcaggctgcc ggccgtgaga Ctqqqcc
cccaataaca gttttaccaa gggagcagct gtaatgtcca tgttgttcta cactctgatc ccacactcag agagcaatgt ccctgcagga cttcagcatt cccttgacac tgcccttcgc gctgcacgcg tggcggggca gacccgcaac cggcgactcc gttcaccccg tgtgctgttt actcaqqatc tggacttcga ggtcggtggt aagcggtcat catcccatcc catcttccac agcgtgtggg ttggggataa gaccaccgcc ttgggagagg tgagcattaa caacagtgta cgggacccaa atcccgttga cagcgggtgc tattgtacca cgactcacac ctttgtcaag tggcggttta tccggataga tacggcctgt agagcctgac ctgccgacac gctccctccc
<210> 2 <211> 115 <212> PRT <213> Homo sapiens
<400> 2
ttctatcctg acagcttttc cacaccatcc agagcccgca attactgtgg agcacccagc
gotgCCCCCt
aggggcgaat
ttcaaacagt
cqqqqcat.eq
qcqctqacca
atgtgtgtgc
cctgcccctt
gccacactga tgatcggcat cccaagccca gcgccccggc accccaggct ctccccgtga tcaacaggac tctcggtgtg agggcaagga acttttttga act.caaaqr.a tggaiqqcaa tcagcaggaa ctacactcte
Ser
Ser
Ser
His Pro I le Phe His Arg Gly Glu Phe Ser Val Val
Ser
1
5 10 15
Val
Trp Val Gly Asp Lys Thr Thr Ala Thr Asp I le Lys Gly Lys Glu
20 25 30
Val
Met Val Leu Gly Glu Val Asn lie Asn Asn Ser Val Phe Lys Gln
35 40 45
Tyr
Phe Phe Glu Thr Lys Cys Arg Asp Pro Asn Pro Val Asp Ser Gly
50 55 60
Cys
Arg Gly He Asp Ser Lys His Trp Asn Ser Tyr Cys Thr Thr Thr
65
70 75 80
His
Thr Phe Ala Leu Thr Met Asp Gly Lys Gln Ala Ala Trp Arg Phe
85 90 95
lie
Arg lie Asp Thr Ala Cys Val Cys Va 1 Leu Ser Arg Lys Ala Val
100 105 110
Arg Arg Ala 115
<210> 3 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintético <400> 3
60 1 20 180 240 300 360 400 480 540 60 0 660 7 2 0 780 $40 847
5
10
15
20
25
30
35

caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgcctc cgtgaaggtg 60

tcctgcaagg tgtccggctt caccctgacc gagctgtcca tgcactgggt gcggcaggcc 120

cccggcaagg gcctggagtg gatgggcggc ttcgaccccg aggacggcga gaccatctac 180

gcccagaagt tccagggccg ggtgaccatg accgaggaca cctccaccga caccgcctac 240

atggagctgt cctccctgcg gtccgaggac accgccgtgt actactgctc caccatcttc 300

ggcgtggtga ccaacttcga caactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtcctcc 357
<210>4 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 4

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Thr Leu Thr Glu Leu

20 2b ~ 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr lie Tyr Ala C_ri Lys Phe 50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 7C 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 00 05
Ser Thr lie Phe Gly Val Val Thr Asn Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly

100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 5 <211> 24 <212>ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 5
ggattcaccc tcactgaatt atcc 24
<210>6 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 6
Gly Phe Thr Leu Thr Glu leu Ser 1 5
<210>7 <211> 24
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
<212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400>7
tttgatcctg aagatggtga aaca 24
<210>8 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 8
Phe Asp Pro Glu Asp Gly Giu Thr 1 5
<210>9 <211> 36 <212>ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 9
tcaacgattt ttggagtggt taccaacttt gacaac 36
<210> 10 <211> 12 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 10
Ser Thr lie Phe Gly Val Val Thr Asn Phe Asp Asn 1 5 10
<210> 11 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 11

gacatccaga tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60

atcacctgcc gggcctccca ggccatccgg aacgacctgg gctggtacca gcagaagccc 120

ggcaaggccc ccaagcggct gatctacgcc gccttcaacc tgcagtccgg cgtgccctcc 180

cggttctccg gctccggctc cggcaccgag ttcaccctga ccatctcctc cctgcagccc 240

gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacaaccggt acccctggac cttcggccag 300

ggcaccaagg tggagatcaa gcgg 324
5
10
15
20
25
30
35
40
45
<210> 12 <211> 108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 12

Aap lie G_n Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser leu Ser Ala Ser Val G_y 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lis Thr C.’ys Arg Ala Ser Gln Ala He Arg Asn Asp 2C 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lya Ala Pro Lys Arg leu I_e 35 40 45

Tyr Ala Ala Phe Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 5C 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr GLu Phe Thr leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 HÜ
Gln Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Trp

81 30 35

Thr Phe G_y Gln G_y Thr Lys Val Glu I_e Lys Arg 100 105
<210> 13 <211> 18 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 13
caggccatta gaaatgat 18
<210> 14 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 14
Glr. Ala lie Arg Asn Aso 1 5
<210> 15 <211>9 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 15
gctgcattc 9
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
<211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 16
Ala Ala Phe 1
<210> 17 <211> 27 <212>ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 17
caacagtata atagataccc gtggacg 27
<210> 18 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintético <400> 18
Glr. Gln Tyr Asn Arg Gyr Pro Trp Thr
1 Ei
<210> 19 <211> 357 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético
<400> 19
caggtgcagc tcctgcaagg cctggaaaag gcacagaagt atggagctga ggagtggtta
Lgy tgcagLe tttccggatt ggcttgagtg tccagggcag ccagcctgag ccaactccga
tggggctgag caccctcact gatgggaggt ay rcacca-.g atcggaagac caactygqqc
gtgaagaagc gaattatcca tt tgar.ee tg accgaggaca acggccgtgt caqqgaaccc
ctggggcctc agtgaaggtc 60 ttcactgggt gcgacaggct 120 aagatggtga aacaatctac 180 catctacaga cacageetae 240 attactgtte aacgattttt 300 rqqtcaccqt ctccrca 337
<210> 20 <211> 119 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintético
5
10
15
20
25
Gln 1
Val Gln leu Val 3 Glr. Ser
Se r
Val Lys Val 20 Scr Cys Lys
Ser
lie Hiñ 35 Trp Val Arg Gln
G1 y
Gly LO Phe Asp Pro Glu Asp 55
Gln 65
Gly Arg Val Thr Mer 7C Thr
Met
Clu Leu Thr Ser 65 Leu Arq
Ser
Thr lie Phe 100 Gly Val Val
Thr
leu Val 115 Thr Val Ser Ser
<210> 21 <211> 324 <212> ADN
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético
Gly
Ala Glu Val Lys lys Pro —i n Ala
10 15
Val
Ser Gly Phe Th r leu Th r Glu Leu
25 30
Ala
Pro Gly Lys Gly leu Glu Trp Met
4Ü
45
G1 y
Glu Thr l le Ty r Ala Gln Lys Phe
60
Glu
Aap Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
7 5 80
Ser
Clu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
30 93
Thr
Aan Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly
105 110
<400> 21
gacatccaga atcacttgcc gggaaagccc agattcagcg gaagatcttg gqqaccaaqg
tgacccagtc tccatcctcc gggcaagtca ggccattaga o t aagcg cct gatct a tgct gcagtggatc tgggacagaa caag t La tta c tg t c a a cag tggaaatcaa acqa
ctgtctgcat ctgcaggaga aatgatttag gctggtatca g c a 11 c a a 11. t g c a a. a g - g g ttcactctca caatcagtag La La a tagat a cccgtggac
cagagtcacc LO gcagaaacca 120 ggtcccatca 180 cctgcagcct 240 gttcggccaa 300 30 4
<210> 22 <211> 108 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 22
Aap
lie G_ri Met Thr Gln Ser
: Asp
Arq Val Thr lie Thr Cys
Leu
Gly Trp 20 Tyr G_n Gln Lys
T y r
Ala 35 Ala Phe Arjn leu G1 n
Ser
30 Gly Ser Gly Thr Glu 55 Phe
65 Glu
Asp Leu Ala Ser 70 T y r Tyr
Thr
Phe Gly Gln 83 Gly Thr Lys
Pro
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ala Gly
1 0 1 5
Arq
Ala Ser Gln Ala ile Arq Asn Asp
2 3 30
Pro
Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu I_e
40
-15
Ser
31 y Va 1 hrc Ser Arq Phe 3er Gly
60
Thr
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro
75 80
Cys
Gln Gln Tyr Al-: ri Arg Tyr ?rc Trp
30 23
Val
Glu He Lys Arg
105
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
<210> 23 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <220>
<221> VARIANTE <222> (1)...(8)
<223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 23
Xa o Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
I 5
<210> 24 <211>8 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <220>
<221> VARIANTE <222> (1)...(8)
<223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 24
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
I 5
<210> 25 <211> 18 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <220>
<221> VARIANTE <222> (1)...(18)
<223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 25
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 15 10 15
Xaa Xaa
<210> 26 <211>6 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
<220>
<221> VARIANTE <222> (1)...(6)
<223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 26
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
I 5
<210> 27 <211>3 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <220>
<221> VARIANTE <222> (1)...(3)
<223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 27
Xaa Xaa Xaa 1
<210> 28 <211>9 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <220>
<221> VARIANTE <222> (1)...(9)
<223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 28
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
I 5
<210> 29 <211> 330 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Sintético <400> 29
Ala
Ser Thr Lys Gly Pro
1 Ser
Thr Ser Gly 5 Gly Thr
Phe
Pro Glu 20 Pro Va 1 Thr
Gly
Val 35 His Thr Phe Pro
Leu
50 Ser Ser Val Val Thr
65 Tyr
lie Cys Asn Val 70 Asn
85
Lys
Val Glu Pro 100 Lys Ser
Pro
Ala Pro 115 Glu Leu Leu
Lys
Pro 130 Lys Asp Thr Leu
Val 145
Val Val Asp Val Ser 150
Tyr
Val Asp Gly Val 165 Glu
Glu
Gln Tyr Asn 180 Ser Thr
His
Gln Asp 195 Trp Leu Asn
Lys
Ala 210 Leu Pro Ala Pro
Gln 225
Pro Arg Glu Pro Gln 230
Leu
Thr Lys Asn Gln 2 45 Val
Pro
Ser Asp lie 260 Ala Val
Asn
Tyr Lys 275 Thr Thr Pro
Leu
Tyr 290 Ser Lys Leu Thr
Val 305
Phe Ser Cys Ser Val 310
Gln
Lys Ser Leu Ser Leu
325
Ser
Val Phe Pro 10 Leu
Ala
Ala
Leu 25 Gly Cys
Va 1
Ser 40 Trp Asn Ser
Ala 55
Val Leu Gln Ser
Va 1
Pro Ser Ser Ser 75
Hi s
Lys Pro Ser Asn
90
Cys
Asp Lys Thr His
Gly
Gly
105 Pro Ser V a 1
Met
120 lie Ser Arg Thr
135 Hi s
Glu Asp Pro Glu
Val
His Asn Ala 155 Lys
Tyr
Arg Val 170 Val Ser
Gly
Lys 185 Glu Tyr Lys
lie
200 Glu Lys Thr
lie
215 Val
Tyr Thr Leu Pro
Ser
Leu Thr Cys 235 Leu
Glu
Trp Glu 250 Ser Asn
Pro
V a 1 265 Leu Asp Ser
Val
280 Asp Lys Ser Arg
295 Met
His Glu Ala Leu
Ser
Pro Gly Lys 315
330
Ala
Pro Ser Ser Lys
Leu
Val Lys 15 Asp Tyr
Gly
Ala 30 Leu Thr Ser
Ser
45 Gly Leu Tyr
Ser
60 Leu
Gly Thr Gln Thr
Thr
Lys Val Asp 80 Lys
95
Thr
Cys Pro 110 Pro Cys
Phe
Leu 125 Phe Pro Pro
Pro 140
Glu Val Thr Cys
Val
Lys Phe Asn Trp 160
Thr
Lys Pro Arg 175 Glu
Val
Leu Thr 190 Val Leu
Cys
Lys 205 Val Ser Asn
Ser 220
Lys Ala Lys Gly
Pro
Ser Arg Asp Glu 240
Val
Lys Gly Phe 255 Tyr
Gly
Gln Pro 270 Glu Asn
Asp
Gly 285 Ser Phe Phe
Trp 300
Gln Gln Gly Asn
His
Asn His Tyr Thr 320
<210> 30 <211> 327 5 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintético
10
<400> 30
Ala 1
Ser Thr Lys
Ser
Thr Ser Glu 2 0
Phc
2 re Glu 35 2 re
Gly
Va 1 50 Í1 3 Thr
Leu Si
Ser Ser Val
Tyr
Thr Cys A s n
Arg
Val Glu Ser 100
Glu
Phe Leu 115 Gly
Agp
Thr 130 Leu Met
Asp 14 5
Va 1 S e r G1 n
Gly
Val Glu Val
Asn
Ser Thr Tyr 180
Trp
leu Asn 135 Gly
Pro
Ser 210 Ser lie
Glu 22 r;
Pro Gln Va 1
Asn
G1 n val 3er
lie
Ala val Glu 260
Th r
Thr P ro 27 5 Pro
Arg
leu 290 Thr Val
Cys 305
Ser Val Met
Leu
Ser Leu Ser
<210> 31 <211> 327 5 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Sintético
10
<400> 31
Gly 5
?rc Ser- Val Phe Pro 10
Ser
Thr Ala Ala Leu 25 Gly
va 1
Thr Va 1 Ser 4 0 Trp Asn
Phe
Pro Ala 55 Val Leu Gln
Val
Thr 70 Val Pro Ser Ser
va i 85
A a p íl i o Lys P r 0 Ser 90
Lys
Tyr Gly Pro Pro 105 Cys
Gly
?rc Ser Val 120 Phe Leu
lie
Ser Arg 135 Thr Pro Glu
Glu
Aap 1 50 P ro G1 j Val G1 n
His : £5
Asn Ala Lys Thr Lys : 70
Arg
Va 1 va 1 Ser Va 1 Leu
185
Lys
Glu Tyr Lys 200 Cys
Lys
Glu
L y a Thr 215 lie Ser Lys
Tyr
Thr 230 Leu Pro Pro Ser
Leu 74 5
Thr Cys Leu Val Lys 25C
Crp
Glu Ser Asn Gly 261, Gln
Va 1
Leu Asp S o r- 2 30 A s p G1 y
Asp
Lys Ser 225 Arg Trp Gln
His Leu 32 5
Glu 310 Gly Ala Lys Leu His Asn
Leu
Ala Fro Cys Ser 15 Are
Cys
Lee Val Lys 30 Asp Tyr
3c r
G1 y Al a 4 5 Leu Thr Ser
Se r
Ser 60 G1 y Leu Ty r Ser
Ser 75
Leu. Gly Thr Lys Thr 30
As ri
Thr i ,ys Va l Asp 55 Lys
S'rc
Ser Cya Pro 11C AH Pro
Phe
Pío Pry 121 Lys Pr y Lys
Val
Thr 140 Cya
Val
Val
Val
Phe 1 55
Asn T i p Ty r Va'. Asp 160
Pro
Arg Glu Glu Gln 1 7.5 Phe
Thr
Val i ,eu ¡li 5 Gln Asp
190
Val
Ser Asn 205 Lys Gly Leu
Ala
Lys 220 Gly Glr. Pro Arg
Gln 235
G1 u Glu Met Thr Lys 240
G1 y
Phe Tyr Pro Se r 7 55 Asp
Pro
Glu Asn Asn 270 Tyr Lys
3c r
Phe Phc 285 Leu Tyr Ser
Glu
Gly 300 Asn Val Fhe Ser
His 315
Tyr Thr Glr. Lys Ser 320

Claims (9)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    REIVINDICACIONES
    1. Una formulación formulaciones farmacéutica, que comprende:
    (i) de 50 a 100 mg/ml de un anticuerpo humano que se une específicamente al factor de crecimiento de nervios humano (hNGF);
    (ii) un 0,05 % de polisorbato 20;
    (iii) un 8 % de sacarosa; y
    (iv) acetato 10 mM,
    en la que:
    - el anticuerpo humano que se une específicamente a hNGF consiste en dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, comprendiendo cada cadena pesada una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y una región constante de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 31, y comprendiendo cada cadena ligera una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22 y una región constante de cadena ligera;
    - la formulación almacenada, después de seis meses a 5 °C, mantiene la estabilidad de modo que un 97 % o más del anticuerpo se mantiene en su forma nativa según se detecta por cromatografía de líquidos de alto rendimiento por exclusión de tamaño; y
    - el pH de la formulación es 5,0.
  2. 2. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la formulación está contenida en un vial o en una jeringa de vidrio, o en un vial o jeringa de plástico.
  3. 3. La formulación farmacéutica de la reivindicación 2, en la que:
    (a) el vial de vidrio es un vial de vidrio recubierto con dióxido de silicio; opcionalmente en el que el espacio vacío en el vial de vidrio se llena con un gas inerte para eliminar el oxígeno, preferiblemente en el que el gas inerte es argón o nitrógeno; o
    (b) la jeringa comprende un émbolo recubierto con fluorocarbono; opcionalmente en la que la jeringa es una jeringa de bajo contenido en tungsteno, preferiblemente en la que la jeringa es una jeringa de bajo contenido en tungsteno y comprende un émbolo recubierto con fluorocarbono.
  4. 4. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1 o 2, contenida en un autoinyector o microinfusor.
  5. 5. La formulación farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que la formulación se administra por vía intravenosa o por vía subcutánea.
  6. 6. El uso de la formulación farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 en la preparación de un medicamento para el tratamiento, la prevención y/o mejora del dolor asociado con la actividad de NGF o con la activación de NGF.
  7. 7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el dolor es neurógeno, neuropático, nocisensible o está asociado con inflamación.
  8. 8. La formulación farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para su uso en un método de tratamiento, prevención y/o mejora del dolor asociado con la actividad de NGF o con la activación de NGF.
  9. 9. La formulación para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el dolor es neurógeno, neuropático, nocisensible o está asociado con inflamación.
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