ES2685972T3

ES2685972T3 - Composición antibacteriana para uso tópico

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Publication number: ES2685972T3
Application number: ES13777127.5T
Authority: ES
Inventors: Gianfranco De Paoli Ambrosi
Original assignee: Exalya Srl
Current assignee: Exalya Srl
Priority date: 2012-08-01
Filing date: 2013-07-29
Publication date: 2018-10-15
Anticipated expiration: 2033-07-29
Also published as: JP2015525778A; MA37869B1; EP2922537A1; SG11201500806RA; US9511112B2; MX347281B; AU2013298182B2; MY167610A; UA113015C2; EA201590309A1; KR20150040972A; IL237035A0; EP2922537B1; AU2013298182A1; CA2880778A1; MA37869A1; EA029484B1; PL2922537T3; IN2015MN00433A; US20150209405A1

Abstract

Composición antibacteriana que comprende citrato de trietilo y un péptido que consiste en 15 aminoácidos de secuencia FAKALKALLKALKAL-NH2, en la que F es fenilalanina, A es alanina, K es lisina, y L es leucina.

Description

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DESCRIPCION

Composición antibacteriana para uso tópico Campo de la invención

La presente invención se refiere a una composición antibacteriana para uso tópico, y de forma particular a una composición del tipo anterior que se pretende contrarreste la colonización bacteriana y sea apta para su uso tanto en piel dañada como no dañada, así como también en membranas de la mucosa, incluyendo mucosa oral.

Estado de la técnica

El uso de antibióticos bien bacteriostáticos o bien bactericidas es conocido por contrarrestar las infecciones bacterianas a las que están sometidos los seres humanos, que pueden ser de diferente naturaleza.

Si bien los antibióticos son ventajosos, estos no están libres de desventajas debido a que por lo general implican efectos secundarios que incluyen desequilibrio de la flora bacteriana de la piel, aparición de reacciones alérgicas, efectos tóxicos en diversas zonas del organismo, así como también intolerancia en caso de interacción con otras sustancias, especialmente otros fármacos.

Adicionalmente, el abuso de antibióticos puede dar lugar a la aparición de una resistencia al antibiótico que puede adquirirse por parte de un agente patógeno, haciendo así inefectiva la terapia con antibiótico que sin embargo debería continuar durante un periodo medio o largo para ser exitosa.

En cualquier caso, el abuso de antibióticos puede presentar serias consecuencias para el organismo humano que puede incluso conducir a la muerte.

Con el fin de superar las anteriores desventajas, se han investigado enfoques alternativos a los antibióticos, en particular para el tratamiento de piel y membranas de la mucosa que sufren de enfermedades tales como acné, tales enfoques mostraron la actividad antimicrobiana de un péptido como se describe en el documento US 2007/0207112.

De forma particular, el anterior documento describe que la colonización bacteriana en un paciente con acné se puede controlar con un péptido que consiste en una secuencia de 15 aminoácidos que comprenden fenilalanina (F), alanina (A), lisina (K) y leucina (L) en el orden FAKALKALLKALKAL-NH2.

Este péptido se deriva de una proteína biocida definida como una “proteína que aumenta la permeabilidad bacteriana’’, en general denominada como BPI, que forma parte del sistema inmune innato como se describe en el documento US 2005/0148495.

Aunque las BPI(s) muestren actividad biocida, sin embargo, son conocidas por ser activas principalmente contra bacterias gram-negativas.

El documento WO 02/079408 describe péptidos bioactivos cortos que contienen restos de fenilalanina, leucina, alanine y lisina que se pueden usar en aplicaciones antibacterianas, antifúngicas, anticancerosas y otras aplicaciones biológicas.

El documento EP 1 269 991 desvela una composición para uso tópico, en particular dirigido al cuidado de la piel y a la mejora de afecciones estéticas de la misma, que contiene como principio active al menos uno de los principios activos seleccionados entre el éster etílico de ácido linoleico y el éster trietílico de ácido cítrico.

El documento WO 2007/066371 desvela una composición para uso tópico para la protección de triglicéridos frente a la hidrólisis enzimática, que contiene citrato de trietilo como principio active, puro o en combinación con algunos agentes sinérgicos.

El documento CHARAKIDA A ET AL: "Double-blind, randomized placebo-controlled study of a lotion containing triethyl citrate and ethyl linoleate in the treatment of acne vulgaris.", THE BRITISH JOURnAl OF DERMATOLOGY SEP 2007, VOL.157, N.° 3, septiembre de 2007 (2007-09), páginas 569-574, ISSN: 0007-0963 desvela una loción para uso tópico que contiene citrato de trietilo y linoleato de etilo que es eficaz y bien tolerada en el tratamiento tanto de acne como de seborrea.

El documento DATABASE EMBASE [online], ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS, AMSTERDAM, NL; 2011, PLACEK W Y COL.: "Topical treatment of acne", n.° de acceso en la base de datos EMB-2011695323; y PLACEK W Y COL.: "Topical treatment of acne", PRZEGLAD DERMATOLOGICZNY 2011 WYDAWNICTWO CZELEJ SP Z.O.O. POL, vol. 98, n.° 5, 2011, páginas 442-448, ISSN: 0033-2526 desvela el uso de citrato de trietilo en el tratamiento del acné y la seborrea.

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Sumario de la invención

De acuerdo con lo anterior, el problema técnico que subyace en la presente invención es proporcionar una composición antibacteriana capaz de superar las desventajas citadas en relación a la técnica anterior, en particular una composición que presenta una alta efectividad y es adecuada para el tratamiento de una variedad de enfermedades de la piel mientras que no muestra efecto secundario alguno u otro efecto no deseado.

De acuerdo con la invención, el problema anteriormente citado se solventa con una composición antibacteriana preferiblemente enfocada a uso tópico, apta para ser usada tanto en piel dañada como en piel no dañada, membranas de mucosa incluyendo mucosa oral y apéndices de piel, y que comprenden citrato de trietilo y un péptido que consiste en 15 aminoácidos de secuencia FAKALKALLKALKAL-NH2, en la que F es fenilalanina, A es alanina, K es lisina y L es leucina.

De forma inesperada, la composición de acuerdo con la invención mostró una actividad sinérgica, y en particular, mostró una acción microbicida elevada y una alta capacidad de inhibir la colonización bacteriana tanto con bacterias gram-positivas y gram-negativas, bacterias aerobias y anaerobias incluyendo, a modo de ejemplo no limitante: Staphylococcus Aureus, Propionibacterium acne, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus epidermis, mientras que son capaces de inhibir simultáneamente la degradación de moléculas de triglicéridos de la piel inducidas por enzimas liberadas por gram-positivas y gram-negativas, bacterias aerobias y anaerobias, con lo que se controla la génesis del proceso inflamatorio determinado por los ácidos grasos libres que resultan de la hidrólisis de triglicérido.

Por tanto, de acuerdo con la invención, la presente invención es apta para contrarrestar infecciones bacterianas de la piel, membranas de la mucosa y apéndices de piel, y es apta para el tratamiento de patologías en las que una infección de la piel provoca, o contribuye a provocar, lesiones detectables en la piel, tales como por ejemplo en acné, hidradenitis supurativa o no supurativa, dermatitis atópica caracterizada por colonización por Staphylococcus Aureus, impétigo, infecciones interdigitales, foliculitis, forúnculos, infecciones post-traumáticas, e infecciones de la piel quemada.

Preferiblemente la composición de acuerdo con la invención comprende citrato de trietilo a una concentración en el intervalo de 0,05 % en p/p a 99,9 % en p/p, más preferiblemente de 0,5 % en p/p a 45 % en p/p, aún más preferiblemente de 2,5 % en p/p a 15 % en p/p.

Preferiblemente, la composición de acuerdo con la invención comprende el péptido citado anteriormente a una concentración en el intervalo de 0,002 % en p/p a 0,5 % en p/p, más preferiblemente de 0,010 % en p/p a 0,35 % en p/p, aún más preferiblemente de 0,010 % en p/p a 0,125 % en p/p.

De acuerdo con otras realizaciones de la invención, la presente composición puede comprender también uno o más agentes sinérgicos seleccionados de ácidos grasos esenciales incluyendo sales y ésteres de los mismos, ácido salicílico incluyendo sales y ésteres de los mismos, cinc y derivados del mismo, ácido azelaico, ácido octanodecenedioico, y antibióticos.

Preferiblemente, uno o más agentes sinérgicos que pertenecen al grupo que consiste en ácidos grasos esenciales y sales y ésteres de los mismos están incluidos en la presente composición a una concentración en el intervalo de 0,01 % a 50 % en p/p, más preferiblemente de 0,5 % en p/p a 15 % en p/p, y de forma ventajosa son más preferidos ácido linoleico, ácido linolénico y ácido oleico.

Preferiblemente, uno o más agentes sinérgicos pertenecientes al grupo que consiste en ácido salicílico y sales y ésteres del mismo están incluidos en la presente composición a una concentración en el intervalo de 0,2 % en p/p a 15 % en p/p, más preferiblemente de 0,5 % en p/p a 2 % en p/p.

Preferiblemente uno o más agentes sinérgicos pertenecientes al grupo que consiste en cinc y derivados del mismo están incluidos en la presente composición en una concentración de 0,2 % en p/p a 5 % en p/p, más preferiblemente de 0,5 % en p/p a 2 % en p/p, y de forma ventajosa son más preferidos óxido de cinc, sulfato de cinc, piritiona de cinc, mandelato de cinc, acetato de cinc, glicolato de cinc, salicilato de cinc, lactato de cinc, piruvato de cinc.

Preferiblemente uno o más agentes sinérgicos que pertenecen al grupo que consiste en ácido azelaico y ácido octanodecenedioico están incluidos en la presente composición a una concentración en el intervalo de 1 % en p/p a 65 % en p/p, más preferiblemente de 2 % en p/p a 15 % en p/p.

Preferiblemente, uno o más agentes sinérgicos pertenecientes al grupo que consiste en antibióticos están incluidos en la presente composición a una concentración en el intervalo de 0,1 % en p/p a 5 % en p/p, más preferiblemente de 0,5 % en p/p a 2 % en p/p, y de forma ventajosa son más preferidas isoxacilinas incluyendo oxacilina, cloxacicilina, dicloxacilina, nafcilina y flucloxacilina; aminopenicilinas incluyendo ampicilina y amoxicilina; carboxypenicilinas incluyendo carbenicilina y ticarcilina; ureidopenicilinas incluyendo mezlocilina, piperacilina, azlocilina y apalcilina; así como también bencilpenicilina, sulfadimidina, sulfamerazina, estreptomicina, sulfadiazina, clorotetraciclina, cloroamfenicol, neomicina, oxitetraciclina, penicilina G procaina, eritromicina, benzatinpenicilina, espiramicina, tetraciclina, tiamfenicol, vancomicina, fenoximetilpenicilina, colistina, demeclociclina, virginiamicina,

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meticilina, metronidazole, ampicilina, espectinomicina, sulfametoxazol, trimetoprim, cloxacilina, ácido fusídico, fusafungina, limeciclina, gentamicina, doxiciclina, carbenicilina, rifampicina, clindamicina, cefalexina, cefazolina, pivampicilina, tinidazol, amoxicilina, cefradina, minociclina, pristinamicina, fosfomicina, talampicilina, tobramicina, bacampicilina, ticarcilina, amicacina, azlocilina, cefadroxilo, cefamandol, cefoxitina, cefuroxima, mezlocilina, pivmecilinam, cefaclor, cefmetazol, cefotaxima, cefsulodina, piperacilina, amoxicilina/ácido clavulánico (co- amoxiclav), cefperazona, cefotiam, cefsulodina, latamoxef, netilmicina, apalcilina, ceftriaxona, micronomicina, cefmenoxima, ceftazidima, ceftizoxima, norfloxacina, cefonicida, cefotetán, temocilina, cefpiramida, imipenem/cilastatina, ofloxacina, mupirocina, aztreonam, cefoperazona/sulbactam, ticarcilina/ácido clavulánico, ampicilina/sulbactam, cefixima, roxitromicina, sultamicilina, ciprofloxacina, rifaximina, azitromicina, cefaclor, flomoxef, isepamicina, midecamicina, rifapentina, teicoplanina, cefpodoxima, enrofloxacina, lomefloxacina, arbecacina, cefozidim, claritromicina, cefdinir, cefetamet, cefpiroma, cefprozilo, ceftibufén, fleroxacina, loracarbef, piperacilina/ tazobactam, rufloxacina, brodimoprim, diritromicina, levofloxacina, nadifloxacina, panipenem/ betamiprón, esparfloxacina, cefepima, quinupristin-dalfopristina, linezolida, telitromicina, daptomicina, tigeciclina, doripenem, telavancina.

De acuerdo con un aspecto adicional, la presente invención proporciona una formulación cosmética y/o farmacéutica que comprende la composición anteriormente citada y un vehículo o portador fisiológicamente aceptable, en particular para tratamientos dermatológicos y preferiblemente para uso tópico.

De forma ventajosa la formulación anterior puede estar en la forma de una emulsión agua-en-aceite, una emulsión aceite-en-agua, un gel monofásico, un gel monofásico sub-micelar, una solución monofásica acuosa, una solución monofásica alcohólica, una crema, una leche, una pomada, un ungüento, que se puede administrar mediante un hisopo humedecido con él, un aerosol y similares.

De forma sustancial y sorprendente, la composición de acuerdo con la presente invención como se muestra en las realizaciones descritas anteriormente, y por tanto la formulación citada anteriormente también, mostraba una gran capacidad de controlar el crecimiento bacteriano así como también una alta actividad bacteriana y microbicida frente a una pluralidad tanto de bacterias gram-positivas como gram-negativas, aerobias y anaerobias, en virtud de la presencia combinada de los principios activos que la caracterizan, es decir, el citrato de trietilo y el péptido anterior de secuencia FAKALKALLKALKAL-NH2, mientas que al mismo tiempo muestra una gran capacidad de proteger los lípidos de la piel en particular contra alteraciones de tipo cualitativo y cuantitativo, cuya capacidad es probablemente esencialmente el resultado de su capacidad para inhibir la hidrólisis de las moléculas de triglicérido de la piel inducidas por lipasas bacterianas, es decir inducidas por enzimas liberados por las bacterias mismas, es decir, tanto gram-positivas como gram-negativas, aerobias y anaerobias.

Cuando la presente composición incluye uno o más agentes sinérgicos como se describió anteriormente, es extremadamente ventajoso, especialmente para tratamientos específicos de la piel.

A este respecto se debería enfatizar que una composición de acuerdo con la invención, que comprende uno o más agentes sinérgicos pertenecientes al grupo anteriormente citado de antibióticos, permite de forma ventajosa controla la ocurrencia de fenómenos de resistencia bacteriana, mientras que en ausencia de agentes sinérgicos que pertenecen a este grupo, la presente composición presenta la ventaja de que no da lugar a la ocurrencia de bacterias resistentes, es decir, una resistencia antibiótica adquirida.

Características y ventajas adicionales de la invención serán más evidentes a partir de un examen de la siguiente descripción detallada de algunas realizaciones preferidas pero no exclusivas ilustradas a modo de ejemplo no limitativo con la ayuda de los dibujos acompañantes, en los que:

Breve descripción de las figuras

La figura 1 es una imagen de una parte de la piel, en particular la zona dorsal, de un sujeto que sufre de un acné comedonal e inflamatorio de grado moderado antes de un tratamiento con una composición de acuerdo con la presente invención;

La figura 2 es una imagen de la parte de la piel de la figura 1 después de un tratamiento de 12 semanas con la composición de acuerdo con la presente invención;

Las figuras 3A y 3B son imágenes que muestran cada una cuatro muestras, tres que contienen una solución acuosa que comprende diferentes concentraciones de una composición de acuerdo con la presente invención incluyendo citrato de trietilo y el péptido FAKALKALLKALKAL-NH2, así como también un caldo de cultivo que comprende el microorganismo de ensayo Propionibacterium acnes ATCC 11827, siendo la cuarta muestra un control positivo constituido solo por el caldo de cultivo anteriormente citado;

La figura 4 es una imagen que muestra cuatro muestras, tres que contienen una solución acuosa que comprende diferentes concentraciones de una composición de acuerdo con la presente invención que incluye citrato de trietilo y el péptido FAKALKALLKALKAL-NH2, así como también un caldo de cultivo que comprende el microorganismo de ensayo Staphylococcus Aureus ATCC 6538, la cuarta muestra es un control positivo que comprende solo el caldo de cultivo citado anteriormente;

La figura 5 es una imagen que muestra la ausencia de crecimiento del microorganismo de ensayo en una placa sembrada con un injerto de la muestra de la figura 4 a la menor concentración de la composición de acuerdo con

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la invención;

La figura 6 es una imagen que muestra la proliferación del microorganismo de ensayo en una placa sembrada con un injerto de la muestra de control positivo de la figura 4;

La figura 7 ilustra un gráfico de acné inflamatorio y comedonal, respectivamente, que muestra el número de lesiones visibles en las muestras de piel como una función el tiempo, en particular antes de un tratamiento con una composición de acuerdo con la presente invención (estado basal) y a diferentes intervalos de tiempo en todo un tratamiento con una composición de acuerdo con la presente invención.

Descripción detallada de la invención

Una composición de acuerdo con la presente invención comprende citrato de trietilo y un péptido que consiste en 15 aminoácidos de secuencia FAKALKALLKALKAL-NH2, en la que F es fenilalanina, A es alanina, K es lisina, y L es leucina.

El citrato de trietilo es el éster etílico del ácido cítrico con nombre EINECS 2-hidroxipropan-1,2,3-tricarboxilato de trietilo, número CAS 201-070-7, fórmula molecular C12H20O7 y peso molecular 276,29, y es un compuesto oleoso que es tanto soluble en agua hasta una concentración de 4,5 % como soluble en lípidos.

El péptido FAKALKALLKALKAL-NH2, en lo sucesivo también denominado como el Péptido por simplicidad, es conocido por presentar actividad antimicrobiana y, en particular, por ser efectivo en el control de la colonización bacteriana en pacientes con acné, como se describe en el documento US 2007/0207112 que se incorpora a la presente memoria por referencia.

El Péptido se deriva de una proteína biocida definida como una “proteína que aumenta la permeabilidad bacteriana”, denominada en general como BPI, que forma parte del sistema inmune innato como se describe en el documento US 2005/0148495, que se incorpora a la presente memoria por referencia.

La composición de acuerdo con la invención, que comprende citrato de trietilo y el Péptido como los principios activos, mostró de forma sorprendente e inesperada una alta actividad sinérgica y, en particular mostró una acción microbicida pronunciada y una gran capacidad de inhibir la colonización bacteriana tanto de bacterias gram-positivas como de gram-negativas, aerobias y anaerobias, mientras que es capaz simultáneamente de inhibir la degradación de moléculas de triglicéridos de la piel inducidas por enzimas liberados por bacterias gram-positivas y gram- negativas, aerobias y anaerobias.

Entre las bacterias que se encuentra que son sensibles a la composición de acuerdo con la presente invención están Staphylococcus Aureus, Propionibacterium acne, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus epidermis.

Por tanto, de acuerdo con la invención, la presente composición es apta para contrarrestar las infecciones bacterianas de piel, membranas de la mucosa y apéndices de la piel, y es apta para el tratamiento de patologías en las que una infección de piel provoca, o contribuye a provocar, lesiones detectables en la piel, tal como por ejemplo en acné, hidradenitis supurativa o no supurativa, dermatitis atópica caracterizada por colonización por Staphylococcus Aureus, impétigo, infecciones interdigitales, foliculitis, forúnculos, infecciones post-traumáticas, e infecciones de la piel quemada.

De acuerdo con lo anterior la presente composición ha demostrado ser particularmente indicada para su uso en combinación con un vehículo o portador fisiológicamente aceptable, y de forma específica con un vehículo o portador cosmética y/o farmacéuticamente aceptable, con el fin de producir una formulación cosmética y/o farmacéutica que se pretende preferiblemente para uso tópico en tratamientos dermatológicos.

La composición de acuerdo con la invención comprende citrato de trietilo a una concentración en el intervalo de 0,05 % en p/p a 99,9 % en p/p, más preferiblemente de 0,5 % en p/p a 45 % en p/p, aún más preferiblemente de 2,5 % en p/p a 15 % en p/p.

La composición de acuerdo con la invención comprende el Péptido a una concentración en el intervalo de 0,002 % en p/p a 0,5 % en p/p, más preferiblemente de 0,010 % en p/p a 0,35 % en p/p, aún más preferiblemente de 0,010 % en p/p a 0,125 % en p/p.

La composición de acuerdo con la invención puede comprender adicionalmente uno o más agentes sinérgicos seleccionados de ácidos grasos esenciales incluyendo sales y ésteres de los mismos, ácido salicílico incluyendo sales y ésteres del mismo, cinc y derivados del mismo, ácido azelaico, ácido octanodecenedioico y antibióticos como se citan previamente.

Las propiedades antibacterianas de la composición de acuerdo con la presente invención se ilustran adicionalmente en los siguientes ejemplos y ensayos experimentales, los cuales se describen en referencia a los dibujos acompañantes.

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Ensayos experimentales

El fin de los ensayos experimentales fue determinar - y por tanto demostrar - la actividad antimicrobiana de una composición que comprende citrato de trietilo y el Péptido (una composición de acuerdo con la invención).

- Descripción del procedimiento

Se preparó una serie de tubos de muestra, en lo sucesivo también denominados como muestras, que contienen un caldo de cultivo inoculado con un microorganismo de ensayo y se añadió una solución acuosa de la composición de acuerdo con la invención que se va a ensayar a concentraciones decrecientes respectivas, y una muestra positiva que contiene solo el caldo de cultivo anteriormente citado.

- Evaluación de la actividad antibacteriana

Se inocularon cultivos de microorganismos de ensayo a una temperatura y en condiciones de cultivo óptimas para los microorganismos de ensayo específicos seleccionados, y durante un periodo de tiempo suficiente para permitir que los microorganismos se desarrollen.

Luego se identificaron las muestras que muestran un desarrollo efectivo de la población microbiana mediante observación visual de su turbidez como un indicador de crecimiento.

De forma detallada las muestras que contienen la composición de acuerdo con la invención a una concentración suficiente para inhibir el crecimiento bacteriano permanecían claras.

En los casos en los que bien la propia naturaleza de una muestra evitaba que la muestra fuese leída visualmente o que se desease determinar si la ausencia de crecimiento bacteriano era provocada por una acción microbiostática o microbicida, entonces se llevaban a cabo injertos en medio de agar apropiado para confirmación.

- Concentraciones de ensayo

Se prepararon muestras que comprenden un caldo de cultivo obtenido directamente del medio de cultivo y una solución acuosa de 4,5 % en p/p de citrato de trietilo, 0,0025 % en p/p de péptido y agua en una cantidad suficiente para llegar al 100 % en p/p a concentraciones decrecientes que incluyen de forma particular 50,00 gramos, 25,00 gramos y 12,50 gramos de la anterior solución por 100 mililitros de caldo de cultivo, respectivamente.

- Cepas microbianas de ensayo

Las cepas microbianas usadas para los ensayos fueron las siguientes:

Propionibacterium acnes ATCC 11827 a una concentración de 1,4 x 106 ufc/ml de medio.

Staphylococcus Aureus ATCC 6538 at the concentration of 3,5 x 103 ufc/ml de medio

- Condiciones de cultivo de ensayo

Para el cultivo Propionibacterium acnes, se usó el medio líquido tioglicolato fluido a una temperatura de 37° C ± 1° C en condiciones anaerobias.

Para los injertos usados como una confirmación del crecimiento en el medio líquido, se usó el medio tioglicolato fluido a una temperatura de 37° C ± 1° C en condiciones anaerobias.

Para el cultivo Staphylococcus Aureus, se usó el medio caldo de soja tríptico a 37° C ± 1° C con 24 horas de incubación en condiciones aerobias.

Para los injertos usados como una confirmación del crecimiento en el medio de agar, se usó el medio agar de soja tríptico y se inocularon discos Petri a 37° C ± 1° C en condiciones aerobias.

- Evaluación de la ausencia de bacterias anaerobias en un gramo de la solución que contiene los principios activos para ser diluida con el caldo de cultivo.

Se verificó la ausencia de bacterias anaerobias en un gramo de la solución anterior que contiene los principios activos sembrando en medio de tioglicolato fluido e incubación a 37° C +/-1° C en condiciones anaerobias durante 72 horas.

Adicionalmente se verificó como anteriormente la ausencia de microorganismos aerobios mesofílicos en 1 gramo de la misma solución que contiene los principios activos mediante siembra en caldo de soja tríptico e incubación a 37° C ± 1° C durante 48 horas.

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- Controles positivos

Fertilidad del medio y viabilidad de los microorganismos: para ambas cepas microbianas indicadas anteriormente, se llevaron a cabo ensayos tanto con el medio como con los microorganismos pero en ausencia de la solución acuosa que comprende la composición de acuerdo con la invención, en las mismas condiciones de cultivo usadas en los experimentos como se describió anteriormente.

- Esterilidad del medio y verificación de las condiciones asépticas

Se llevaron a cabo para ambos medios de cultivo usados para la incubación ensayos en ausencia tanto de la solución acuosa que comprende la composición de acuerdo con la invención como de los microorganismos, en las condiciones usadas en los experimentos como se describieron anteriormente.

- Resultados del ensayo para Propionibacterium acnes Resultados obtenidos de la observación visual por duplicado:

Los resultados se obtienen por lectura visual del crecimiento microbiano en las muestras anteriormente citadas (tubos de muestra) según se prepararon anteriormente, que se evaluaron en base a la turbidez del medio de cultivo tras aproximadamente 72 horas de incubación.

Los resultados, que se evaluaron por duplicado como se indica anteriormente, se ilustran en los ejemplos de las figuras 3A y 3B, en las que A, B y C y A1, B1 y C1, respectivamente, denotan las anteriores muestras a las concentraciones decrecientes respectivas como se describió anteriormente (50, 25, y 12,5 % en p/p).

A partir de las figuras anteriormente citadas, se puede observar que todas las muestras que comprenden la solución acuosa basada en la composición de acuerdo con la invención, si bien a diversas concentraciones, eran claras y transparentes, en contraste con el control positivo, representado por la cuarta muestra D y D1, respectivamente, en las que se observa un crecimiento positivo tanto en ambos tubos de muestra que contienen el medio de tioglicolato fluido con Propionibacterium acnes.

Los resultados obtenidos a partir de esta lectura se verificaron llevando a cabo injertos subsiguientes en el medio líquido después de aproximadamente 72 horas de incubación.

La tabla 1 muestra, para cada concentración de muestra redondeada a dos posiciones decimales, los resultados para los injertos a la misma concentración.

Tabla 1

: A B C

Concentración de muestra: 50,00 % 25,00 % 12,50 %

Crecimiento en medio agar: Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento

- Esterilidad del medio y verificación de las condiciones asépticas Ausencia de crecimiento.

- Resultados del ensayo para Staphylococcus Aureus Resultados de la observación visual:

Los resultados se refieren a la lectura visual del crecimiento microbiano en las muestras anteriormente citadas (tubos de muestra) según se prepararon anteriormente, que se evaluaron en base a la turbidez del medio de cultivo después de aproximadamente 24 horas de incubación.

Los resultados se ilustran en el ejemplo de la figura 4, en la que A2, B2 y C2 denotan las muestras citadas anteriormente a concentraciones decrecientes que son claras y transparentes, en contraste con la muestra de control positivo que contiene el medio de caldo de soja tríptico con Staphylococcus Aureus - designado como D2 - que mostró un crecimiento positivo.

Los resultados obtenidos a partir de esta lectura se verificaron llevando a cabo injertos subsiguientes en el medio sólido después de aproximadamente 24 horas de incubación.

Los ejemplos de las figuras 6 y 7 muestran y vislumbran la ausencia de crecimiento bacteriano en una placa de agar de soja tríptico sembrada con un injerto a la menor concentración ensayada (12,50 %) de la muestra, respectivamente, en comparación con un injerto con la muestra de control positivo en el que se observa un crecimiento bacteriano.

La tabla 2 muestra, para cada concentración de muestra redondeada a dos posiciones decimales como se indica anteriormente, los resultados finales para los injertos obtenidos a la misma concentración ensayada.

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Tabla 2

: A B C

Concentración de muestra: 50,00 % 25,00 % 12,50 %

Crecimiento en medio agar: Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento

A partir de lo anterior se puede establecer que la composición de acuerdo con la invención, de forma específica una composición constituida por citrato de trietilo (4,5 % en p/p) y el Péptido (0,025 % en p/p), mostró una actividad antimicrobiana excelente contra ambos organismos ensayados.

De hecho tiene que puntualizarse que ninguna de las muestras ensayadas, a la concentración respectiva, permitía a los microbios crecer.

Adicionalmente se tiene que resaltarse que, de acuerdo con los mismos procedimientos descritos anteriormente, una composición basada en citrato de trietilo, es decir citrato de trietilo solo a una concentración de 4,5 % en p/p en agua c.s. hasta 100 % en p/p sin el Péptido, mostraba una actividad microbicida muy suave (25 % de supervivencia de la población bacteriana) en contraste con una inhibición total de las bacterias vivas con la composición de acuerdo con la invención.

- Evaluación de la eficacia y tolerabilidad del tratamiento de un acné comedonal e inflamatorio localizado en las zonas del pecho y espalda con el uso de una emulsión aceite-en-agua que comprende una composición de acuerdo con la invención obtenida como sigue:

N.°: Descripción % en peso

Fase A)

01: Cetearilglucósido 4,2 %

02: Hidroxitolueno butilado 0,01 %

03: Linoleato de etilo 3,0 %

04: Ácido salicílico 0,5 %

05: Citrato de trietilo 9%

Fase B)

06: Péptido 0,0025%

07: Agua desmineralizada 5,0 %

Fase C)

08: Propilenglicol 1,5 %

09: Fenoxietanol 0,8 %

10: Sal sódica de metilparabeno 0,25 %

11: Lactato de cinc 1,25 %

12: Agua c.s. hasta 100 %

Procedimiento de preparación:

Etapa A): mezclar 01+02+03+04+05 y calentar hasta 75° C;

Etapa B): disolver 06 en 07;

Etapa C): disolver 10 + 11 en 12; mezclar 08+09 con la solución resultante y calentar hasta 75° C.

Al alcanzar la temperatura de 75° C, combinar fase A) con fase C). Dejar agitar mientras se desairea y, cuando se alcance la temperatura de 35° C, añadir la fase B).

Se estudiaron la eficacia y tolerabilidad de la emulsión que comprende la composición de acuerdo con la invención como se indicó anteriormente, en el tratamiento de un acné inflamatorio y comedonal localizado en la espalda y línea del cuello.

Reclutamiento de pacientes: 12 pacientes de edades entre 13 y 22 años y que sufren de un acné de grado leve- moderado en la espalda y/o el cuello.

Diseño del estudio: estudio de diseño abierto.

Aplicación de la emulsión (loción): dos veces al día durante 12 semanas.

Seguimiento: 4, 8 y 12 semanas.

Evaluación: recuento de lesiones en la zona de referencia.

Evaluación de la imagen.

5 Pacientes después de 12 semanas de tratamiento: 12

Resultado de acuerdo con el investigador: la emulsión era efectiva.

Resultado de acuerdo con los pacientes: la emulsión era efectiva:

Evaluación de acuerdo con los pacientes tras tratamiento: bueno, los pacientes estaban satisfechos Tolerabilidad: excelente

10 Efectos secundarios observados: ninguno

El ejemplo de la figura 7 ilustra gráficamente los datos del ensayo descrito anteriormente, mientras que los ejemplos de las figuras 1 y 2 ilustran una muestra de piel de uno de los 12 pacientes reclutados antes y después del tratamiento anteriormente descrito, respectivamente.

Se dan a continuación ejemplos adicionales de preparaciones o formulaciones cosméticas y/o farmacéuticas que 15 comprende una composición de acuerdo con la invención, junto con la preparación y uso de las mismas:

PREPARACIÓN 1 - solución monofásica hidroalcohólica para el tratamiento del acné

N.°: Descripción % en peso

01: Citrato de trietilo 10 %

02: Péptido 0,01 %

03: Alcohol etílico 45,0 %

04: Agua c.s. hasta 100 %

Procedimiento de preparación: disolver 02 en 03; añadir 01 a la solución resultante, llevar el volumen hasta 100 con 04 con agitación

PREPARACIÓN 2 - gel monofásico para el tratamiento de acné

N.°: Descripción % en peso

01: Citrato de trietilo 4,5 %

02: Péptido 0,0025 %

03: Carbómero 1,0 %

04: Hidróxido de sodio c.s. hasta pH 6

05: Agua desmineralizada c.s. hasta 100,00 %

20 Procedimiento de preparación: mezclar 01 con 05, disolver 02 en la solución resultante; dispersar 03 en la solución resultante; neutralizar con 04. Toda la operación se lleva a cabo con agitación.

PREPARACIÓN 3 - emulsión aceite-en-agua para el tratamiento de dermatitis atópica

N.°: Descripción % en peso

Fase A) 01: Steareth 2 3,0 %

02: Steareth 21 2,0 %

03: PPG-15 esteariléter 8,0 %

04: Hidroxitolueno butilado 0,01 %

05: Citrato de trietilo 10,0 %

06: Ceramida IV 0,005 %

Fase B) 07: Péptido 0,0025 %

08: Agua desmineralizada 5,0 %

Fase C) 09: Propilenglicol 1,5 %

10: Fenoxietanol 0,8 %

11: Sal sódica de metilparabeno 0,25 %

12: Agua c.s. hasta 100 %

5

10

15

20

25

Procedimiento de preparación: etapa A): mezclar 01+02+03+04+05+06 y calentar hasta +75° C;

Etapa B): disolver 07 en 08;

Etapa C): disolver 11 en 12; mezclar 10 + 09 con la solución resultante, y calentar hasta 75° C.

Al alcanzar la temperatura de 75° C, combinar la fase A) con fase C). Dejar agitar mientras de desairea y, cuando la temperatura llegue a 35° C, añadir la fase B).

PREPARACIÓN 4 - solución alcohólica para el tratamiento de hidradenitis supurativa

N.°: Descripción % en peso

01: Citrato de trietilo 40,0 %

02: Péptido 0,01 %

03: Alcohol etílico c.s. hasta 100,0 %

Procedimiento de preparación: disolver 02 en 03; mezclar 01 con la solución resultante.

PREPARACIÓN 5 - solución antibacteriana

N.°: Descripción % en peso

01: Citrato de trietilo 4,5 %

02: Péptido 0,0025 %

03: Agua desmineralizada c.s. hasta 100,0 %

PREPARACIÓN 6 - solución antibacteriana y anti-acné

N.°: Descripción % en peso

01: Citrato de trietilo 4,5 %

02: Péptido 0,0025 %

03: Clindamicina 1 %

04: Alcohol etílico c.s. hasta 100,0 %

Procedimiento de preparación: disolver 02 + 03 en 04; mezclar 01 con la solución resultante.

PREPARACIÓN 7 - solución antibacteriana y anti-acné

N.°: Descripción % en peso

01: Citrato de trietilo 4,5 %

02: Péptido 0,0025 %

03: Eritromicina 1,5 %

03: Alcohol etílico c.s. hasta 100,0 %

Las ventajas de la presente invención, que ya aparecen claras en toda la descripción anterior, se pueden resumir indicando que se proporciona una composición antibacteriana que comprende citrato de trietilo y el Péptido como los ingredientes activos que se describieron anteriormente, que presenta alta eficacia frente a bacterias tanto aerobias como anaerobias, gram-positivas y gram-negativas, mientras que al mismo tiempo es capaz de proteger los lípidos de la piel frente a alteraciones cualitativas y cuantitativas debido a su capacidad de inhibir la hidrólisis de moléculas de triglicérido de la piel inducidas por lipasas bacterianas.

Por lo tanto, de forma ventajosa, la presente composición combina una acción bactericida y microbicida efectivas con una acción protectora efectiva de la piel y membranas de la mucosa, con lo que se asegura el mantenimiento de sus características naturales.

De nuevo, se encontró que la presente composición está exenta de efectos secundarios u otros efectos no deseados, y mostró una excelente tolerabilidad.

De acuerdo con lo anterior, la presente composición está indicada de forma ventajosa para el tratamiento de lesiones bacterianas de la piel, membranas de la mucosa y apéndices de la piel, y para el tratamiento de patologías en las que una infección de la piel provoca, o contribuye a provocar, lesiones detectables en la piel, tal como por ejemplo

10

15

20

en acné, hidradenitis supurativa o no supurativa, dermatitis atópica caracterizada por colonización por Staphylococcus Aureus, impétigo, infecciones interdigitales, foliculitis, forúnculos, infecciones post-traumáticas, e infecciones de la piel quemada.

Un especialista en la técnica puede hacer diversos cambios en la presente invención, en sus realizaciones ilustradas y descritas, para satisfacer requerimientos de contingencia y específicos, por otro lado todo se encuentra contenido en el alcance de protección de la invención como se define en las siguientes reivindicaciones.

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> de Paoli Ambrosi, Gianfranco

<120> Composición antibacteriana para uso tópico

<140> ITBS2012A000126 <141>

<160> 1

<170> BiSSAP 1.2

<210> 1 <211> 15 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Composición antibacteriana para uso tópico <400> 1

Phe Ala. Lys Ala Leu Lys Ala Leu Leu Lys Ala Leu Lys Ala Leu 15 10 15

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

REIVINDICACIONES

1. Composición antibacteriana que comprende citrato de trietilo y un péptido que consiste en 15 aminoácidos de secuencia FAKALKALLKALKAL-NH2, en la que F es fenilalanina, A es alanina, K es lisina, y L es leucina.
2. Composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende citrato de trietilo en una concentración de 0,05 % a 99,9 % p/p, más preferiblemente de 0,5 % a 45 % p/p, aún más preferiblemente de 2,5 % a 15 % p/p.
3. Composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que comprende dicho péptido en una concentración de 0,002 % a 0,5 % p/p, más preferiblemente de 0,010 % a 0,35 % p/p, aún más preferiblemente de 0,010 % a 0,125 % p/p.
4. Composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además uno o más agentes sinérgicos seleccionados de ácidos grasos esenciales incluyendo sales y ésteres de los mismos, ácido salicílico incluyendo sales y ésteres del mismo, cinc y derivados del mismo, ácido azelaico, ácido octadecenedioico, antibióticos.
5. Composición de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende dicho uno o más agentes sinérgicos del grupo que consiste en ácidos grasos esenciales y sales y ésteres de los mismos en una concentración de 0,01 % a 50 % p/p, más preferiblemente de 0,5 % p/p a 15 % p/p, y aún más preferiblemente seleccionados de ácido linoleico, ácido linolénico y ácido oleico, o una combinación de los mismos.
6. Composición de acuerdo con la reivindicación 4 ó 5, que comprende dicho uno o más agentes sinérgicos del grupo que consiste en ácido salicílico y sales y ésteres del mismo en una concentración de 0,2 % p/p a 15 % p/p, más preferiblemente de 0,5 % p/p a 2 % p/p.
7. Composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4-6, que comprende dicho uno o más agentes sinérgicos del grupo que consiste en cinc y derivados del mismo en una concentración de 0,2 % p/p a 5 % p/p, más preferiblemente de 0,5 % p/p a 2 % p/p, y aún más preferiblemente seleccionado de óxido de cinc, sulfato de cinc, piritiona de cinc, mandelato de cinc, acetato de cinc, glicolato de cinc, salicilato de cinc, lactato de cinc, piruvato de cinc, o una combinación de los mismos.
8. Composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4-7, que comprende dicho uno o más agentes sinérgicos del grupo que consiste en ácido azelaico y ácido octanodecenedioico en una concentración de 1 % p/p a 65 % p/p, más preferiblemente de 2 % p/p a 15 % p/p.
9. Composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4-8, que comprende dicho uno o más agentes sinérgicos del grupo que consiste en antibióticos en una concentración de 0,1 % p/p a 5 % p/p, más preferiblemente de 0,5 % p/p a 2 % p/p, aún más preferiblemente seleccionado de isoxacilinas incluyendo oxacilina, cloxacicilina, dicloxacilina, nafcilina y flucloxacilina; aminopenicilinas incluyendo ampicilina y amoxicilina; carboxipenicilinas incluyendo carbenicilina y ticarcilina; ureidopenicilinas incluyendo mezlocilina, piperacilina, azlocilina y apalcilina; bencilpenicilina, sulfadimidina, sulfamerazina, estreptomicina, sulfadiazina, clorotetraciclina, cloroamfenicol, neomicina, oxitetraciclina, penicilina G procaina, eritromicina, benzatina penicilina, espiramicina, tetraciclina, tiamfenicol, vancomicina, fenoximetilpenicilina, colistina, demeclociclina, virginiamicina, meticilina, metronidazol, ampicilina, espectinomicina, sulfametoxazol, trimetoprim, cloxacilina, ácido fusídico, fusafungina, limeciclina, gentamicina, doxiciclina, carbenicilina, rifampicina, clindamicina, cefalexina, cefazolina, pivampicilina, tinidazol, amoxicilina, cefradina, minociclina, pristinamicina, fosfomicina, talampicilina, tobramicina, bacampicilina, ticarcilina, amicacina, azlocilina, cefadroxilo, cefamandol, cefoxitina, cefuroxima, mezlocilina, pivmecilinam, cefaclor, cefmetazol, cefotaxima, cefsulodina, piperacilina, amoxicilina/ ácido clavulánico (co-amoxiclav), cefperazona, cefotiam, cefsulodina, latamoxef, netilmicina, apalcilina, ceftriaxona, micronomicina, cefmenoxima, ceftazidima, ceftizoxima, norfloxacina, cefonicida, cefotetán, temocilina, cefpiramida, imipenem/cilastatina, ofloxacina, mupirocina, aztreonam, cefoperazona/sulbactam, ticarcilina/ácido clavulánico, ampicilina/sulbactam, cefixima, roxitromicina, sultamicilina, ciprofloxacina, rifaximina, azitromicina, cefaclor, flomoxef, isepamicina, midecamicina, rifapentina, teicoplanina, cefpodoxima, enrofloxacina, lomefloxacina, arbecacina, cefozidim, claritromicina, cefdinir, cefetamet, cefpirome, cefprozilo, ceftibufeno, fleroxacina, loracarbef, piperacilina/tazobactam, rufloxacina, brodimoprim, diritromicina, levofloxacina, nadifloxacina, panipenem/betamiprona, esparfloxacina, cefepima, quinupristina- dalfopristina, linezolid, telitromicina, daptomicina, tigeciclina, doripenem, telavancina, o una combinación de los mismos.
10. Composición antibacteriana de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para uso tópico en piel lesionada o sana y membranas de la mucosa, incluyendo mucosa oral y apéndices de la piel, para el tratamiento del acne, hidradenitis supurativa o no supurativa, dermatitis atópica acompañada de colonización por Staphylococcus Aureus, impétigo, infecciones interdigitales, foliculitis, forúnculos, infecciones post-traumáticas, e infecciones de la piel quemada.
11. Formulación cosmética y/o farmacéutica que comprende una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, y un vehículo fisiológicamente aceptable.