CN107383166B

CN107383166B - 对痤疮杆菌敏感的肽

Info

Publication number: CN107383166B
Application number: CN201710666244.7A
Authority: CN
Inventors: 罗海哨; 余作取
Original assignee: Wenzhou Qianrui Biotechnology Co ltd
Current assignee: Wenzhou Qianrui Biotechnology Co ltd
Priority date: 2017-08-07
Filing date: 2017-08-07
Publication date: 2020-10-23
Anticipated expiration: 2037-08-07
Also published as: CN107383166A

Abstract

本发明涉及本发明提供一种对痤疮杆菌敏感的肽，具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：Ser‑Glu‑Ala‑Gly‑Trp‑Leu‑Lys‑Lys‑Ile‑Lys(SEQ ID NO:1，肽1)；Ser‑Glu‑Ala‑Gly‑Trp‑Leu‑Lys‑Lys‑Leu‑Lys(SEQ ID NO:2，肽2)；和Ser‑Glu‑Ala‑Gly‑Trp‑Leu‑Lys‑Lys‑Gly‑Lys(SEQ ID NO:3，肽3)。本发明的肽能够抑制痤疮杆菌，但不会产生副作用或抗药性。

Description

对痤疮杆菌敏感的肽

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体的说，涉及一种对痤疮杆菌敏感的肽及其编码核酸、组合物和应用。

背景技术

痤疮的发生主要与皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管堵塞、细菌感染和炎症反应等因素密切相关。进入青春期后人体内雄激素特别是睾酮的水平迅速升高，促进皮脂腺发育并产生大量皮脂。同时毛囊皮脂腺导管的角化异常造成导管堵塞，皮脂排出障碍，形成角质栓即微粉刺。毛囊中多种微生物尤其是痤疮杆菌大量繁殖，痤疮杆菌产生的脂酶分解皮脂生成游离脂肪酸，同时趋化炎症细胞和介质，最终诱导并加重炎症反应，形成痤疮。

痤疮杆菌(Propionibacterium acnes)也称痤疮丙酸杆菌、疮疱丙酸杆菌，是一种革兰氏阳性厌氧菌，是造成青春痘的主要细菌，和皮肤疾病、粉刺息息相关，还会引起慢性睑炎以及眼内炎，特别是后者还需要眼科手术解决。抑制痤疮杆菌的生长或杀死痤疮杆菌，是目前治疗痤疮的一种重要手段。

对于痤疮杆菌，中国专利申请201410365868公开了一种杀灭痤疮杆菌的制剂，该制剂含有0.1％-10％页岩油磺酸酯钠和0.1％-10％蛋黄提取物。中国专利申请201410203435公开了一种杏仁酸在抑制痤疮杆菌中的用途，其是施予一重量百分浓度为10％-30％的杏仁酸在皮肤上。中国专利申请201510941897公开了一种抑制痤疮丙酸杆菌的中药组合物，由黄连、黄柏、牡荆叶、三色堇、僵蚕、荆芥组成。中国专利申请201310023814公开了丹参酮IIA在用于制备预防或治疗由痤疮丙酸杆菌繁殖引起的粉刺的药物或化妆品中的用途。

一般治疗痤疮杆菌造成的皮肤疾病，主要是通过抗生素例如红霉素、甲硝唑治疗，或通过采取两种以上的合并药物治疗，如抗生素合并过氧化苯甲酰(benzoyl peroxide，BPO)、BPO合并外用A酸、抗生素合并外用A酸等。但过度使用抗生素，可能引起抗生素抗药性或其它副作用。所以对于能够抑制痤疮杆菌，但不会产生副作用或抗药性的治疗手段，仍是非常需要和期望的。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种对痤疮杆菌敏感的肽及其编码核酸、组合物和应用。

本发明提供一种对痤疮杆菌敏感的肽(称为“Peptide.08肽”)，具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：

Ser-Glu-Ala-Gly-Trp-Leu-Lys-Lys-Ile-Lys(SEQ ID NO:1，肽1)；

Ser-Glu-Ala-Gly-Trp-Leu-Lys-Lys-Leu-Lys(SEQ ID NO:2，肽2)；和

Ser-Glu-Ala-Gly-Trp-Leu-Lys-Lys-Gly-Lys(SEQ ID NO:3，肽3)。

本发明还提供了一种编码所述对痤疮杆菌敏感的肽的核酸分子。本发明还提供了一种组合物，其含有所述对痤疮杆菌敏感的肽之一、之二或之三20-80wt％，和红霉素20-80wt％。

优选地，所述组合物含有所述对痤疮杆菌敏感的肽之一、之二或之三30-50wt％，和红霉素50-70wt％。

优选地，所述组合物含有所述对痤疮杆菌敏感的肽之一、之二或之三33.3wt％，和红霉素66.7wt％。

本发明还提供了所述肽或所述核酸分子或所述组合物在制备用于治疗痤疮杆菌引起的疾病的药物中的应用。

在一个具体实例中，在所述应用中，所述痤疮杆菌引起的疾病为痤疮。

本发明还提供了一种治疗痤疮的药物制剂，含有所述肽及药学上可接受的载体。

在一个具体实例中，所述药物制剂可通过口服、肠道外或局部给药。

优选地，所述药物制剂为局部给药制剂。

在一个具体实例中，所述药物制剂含有质量百分比为0.5％到5％的所述对痤疮杆菌敏感的肽或其组合物。

优选地，所述药物制剂含有质量百分比为1.5％的所述肽或其组合物。

在一个具体实例中，所述药物制剂含有质量百分比为0.5％的所述肽和1％的红霉素。

本发明还提供了一种祛痘化妆品，含有所述肽及化妆品学上可接受的载体。

本发明的肽经体外测试具有显著的抗痤疮杆菌效果，肽1、肽2、肽3对痤疮杆菌的最低抑菌浓度分别为25.1μg/ml、23.9μg/ml、25.8μg/ml。本发明的肽可采用现有化学方法合成，生产成本地，易放大，稳定性好，适合大规模工业化生产。本发明的肽与红霉素联合使用，对痤疮杆菌具有协同杀灭作用，与单方相比，效率提高50％以上，可减少药物的使用剂量，从而减少细菌耐药以及皮肤十燥、脱屑、瘙痒、红斑和烧灼感等副作用的发生，提高患者顺应性，并降低治疗成本。本发明的肽可进一步与药物可接受的载体制成外用药物制剂或者加入化妆品中，发挥治疗痤疮杆菌引起的疾病如痤疮的作用。

具体实施方式

在本发明中要求保护三个肽，亦即具有SEQ ID NO:1的肽(i)或具有SEQ ID NO:2的肽(ii)或具有SEQ ID NO:3的肽(iii)。当这些肽用于化妆品时，该肽提供治疗痤疮杆菌引起的疾病如痤疮的益处。这三个肽是从短肽库中鉴别出来的。从极多的可能肽中，首先鉴别出六个独特的肽作为潜在的抑制或杀灭痤疮杆菌的肽。从这六个肽中，发现有三个肽就抑制痤疮杆菌而言有极强的结合性，选择这三个肽用于功能益处研究。

短肽的制备方法采用化学合成的方法，即本领域熟知的已经非常成熟的固相多肽合成方法，既可以采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具体做法就是将被保护的氨基酸逐个偶联到惰性固相载体上去，然后利用强酸将肽链从载体上裂解下来，同时去除侧链保护。

核苷酸采用人工合成方法制备；该核苷酸基本由编码具有所述的氨基酸序列短肽的核苷酸组成，本发明的核苷酸序列，其形式为DNA形式包括cDNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的也可以是双链的。

实施例1

本发明肽的抗痤疮杆菌实验

1.制备痤疮杆菌菌液，37℃恒温培养18h，备用；

2.配制浓度为5-100μg/ml小分子多肽溶液，将直径为5-7mm的圆形定性滤片消毒烘干后浸入上述不同浓度的小分子多肽溶液中；

3.制备高柱肉汤琼脂培养基，灭菌，备用；

4.溶化高柱肉汤琼脂培养基，冷却至50℃，加入痤疮杆菌菌液1ml，轻摇均匀，倒入无菌平皿，轻晃使培养基均匀平铺在平皿上；

5.用消毒过的镊子将滤片整齐、有序的放入冷却的平皿内，盖上陶瓦盖，并做标记，置于37℃恒温培养箱内培养24h；

6.用卡尺测量抑菌圈大小，并比较不同浓度小分子多肽对痤疮杆菌的作用强度，结果如表1。

表1：肽的最低抑菌浓度

肽	最低抑菌浓度(μg/ml)
		肽1	25.1
肽2	23.9
		肽3	25.8

如表1所示：小分子多肽1到3对痤疮杆菌的最低抑菌浓度分别为25.1μg/ml、23.9μg/ml、25.8μg/ml。

实施例2

本发明肽与红霉素协同抗痤疮杆菌的实验

1.凝胶基质制备

按照卡波姆含量0.6％，甘油含量15％，丙二醇含量3％的比例配制卡波姆凝胶500g备用。

2.供试凝胶制备

将150mg肽1和150mg红霉素加入凝胶基质混匀制成复方一20g；将200mg肽1和100mg红霉素，加入凝胶基质混匀制成复方二20g；将100mg肽1和200mg红霉素加入凝胶基质混匀制成复方三20g；将150mg肽2和150mg红霉素加入凝胶基质混匀制成复方四20g；将200mg肽2和100mg红霉素加入凝胶基质混匀制成复方五20g；将100mg肽2和200mg红霉素加入凝胶基质混匀制成复方六20g；将150mg肽3和150mg红霉素加入凝胶基质混匀制成复方七20g；将200mg肽3和100mg红霉素加入凝胶基质混匀制成复方八20g；将100mg肽3和200mg红霉素加入凝胶基质混匀制成复方九20g；将300mg肽1加入凝胶基质混匀制成单方一20g；将300mg肽2加入凝胶基质混匀制成单方二20g；将300mg肽3加入凝胶基质混匀制成单方三20g；将300mg红霉素加入凝胶基质混匀制成单方四20g。

3.抑菌圈试验

用丙二醇稀释供试凝胶至其饱和浓度，设置3个用量梯度(4、6、8μL)，放入直径6mm的滤纸片浸泡2h取出自然风干，贴于涂布菌液的平板表面。丙二醇做阴性对照，未涂布菌液的平板作空白对照。每组设平行样三个，结果取其平均值。将培养皿置于培养箱中培养，痤疮丙酸杆菌37℃无氧培养。24h后测量抑菌圈直径。

表2不同浓度凝胶对痤疮丙酸杆菌的抑菌圈直径

实验结果表明，肽-红霉素复方凝胶对痤疮杆菌抑菌作用强于单方凝胶，且以1：2配比效果最佳，该复方凝胶减少了红霉素用量，避免了众多患者采取西药治疗引起的一系列副作用，细菌一般不产生抗药性。

实施例3

组合物，含有20wt％的肽1，和80wt％的红霉素。

实施例4

组合物，含有80wt％的肽2，和20wt％的红霉素。

实施例5

组合物，含有33.3wt％的肽1，和66.7wt％的红霉素。

实施例6

治疗痤疮的膏霜，每100g含有5g肽1及95g医用凡士林，将二者混匀即得。

实施例7

治疗痤疮的凝胶，每100g含有1.5g肽2及98.5g凝胶基质，将二者混匀即得。所述凝胶基质按照卡波姆含量0.6％，甘油含量15％，丙二醇含量3％的比例配制。

实施例8

治疗痤疮的凝胶，每100g含有0.5g肽3及99.5g凝胶基质，将二者混匀即得。所述凝胶基质按照卡波姆含量0.6％，甘油含量15％，丙二醇含量3％的比例配制。

实施例9

治疗痤疮的凝胶，每100g含有1.5g实施例5的组合物及98.5g凝胶基质，将三者混匀即得。所述凝胶基质按照卡波姆含量0.6％，甘油含量15％，丙二醇含量3％的比例配制。

实施例10

祛痘精华液的配方如下(wt％)：

SEQ ID NO：1、2或3的肽：0.05％

1,3丙二醇：3％

视黄醇：2％

参根提取物：1.5％

蒲公英提取物:1.5％

甘草根提取物:1.0％

忍冬花提取物:1.0％

大豆卵磷脂:5％

萄聚糖:3％

莪术提取物：1％

芦荟提取物：1％

月桂酰精氨酸乙酯:0.5％

去离子水:余量。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的范围之内。

序列表

<110> 温州千瑞生物科技有限公司

<120> 对痤疮杆菌敏感的肽

<130> SGYX1704

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗菌肽

<400> 1

Ser Glu Ala Gly Trp Leu Lys Lys Ile Lys

1 5 10

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗菌肽

<400> 2

Ser Glu Ala Gly Trp Leu Lys Lys Leu Lys

1 5 10

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗菌肽

<400> 3

Ser Glu Ala Gly Trp Leu Lys Lys Gly Lys

1 5 10

Claims

1.一种对痤疮杆菌敏感的肽，称为“Peptide.08肽”，其氨基酸序列为：Ser-Glu-Ala-Gly-Trp-Leu-Lys-Lys-I le-Lys(SEQ ID NO:1)；或者为Ser-Glu-Ala-Gly-Trp-Leu-Lys-Lys-Leu-Lys(SEQ ID NO:2)；或者为Ser-Glu-Ala-Gly-Trp-Leu-Lys-Lys-Gly-Lys(SEQ IDNO:3)。

2.编码如权利要求1所述对痤疮杆菌敏感的肽的核酸分子。

3.组合物，其含有如权利要求1所述的肽中之一或其之二组合或其之三组合。

4.如权利要求1所述的肽在制备用于治疗痤疮杆菌引起的疾病的药物中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其中所述痤疮杆菌引起的疾病为痤疮。

6.如权利要求1所述的肽在制备用于治疗痤疮杆菌引起的疾病的化妆品中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其中所述痤疮杆菌引起的疾病为痤疮。

8.一种治疗痤疮的药物制剂，其含有如权利要求1所述的肽，及药学上可接受的载体。

9.如权利要求8所述的治疗痤疮的药物制剂，其为局部给药制剂。

10.一种祛痘化妆品，其含有如权利要求1所述的肽、1,3丙二醇、视黄醇、苦参根提取物、蒲公英提取物、甘草根提取物、忍冬花提取物、大豆卵磷脂、萄聚糖、莪术提取物、芦荟提取物、月桂酰精氨酸乙酯和水。