CN107698662A - 治疗痤疮的肽组合 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种治疗痤疮的肽组合，其包含以下的两种肽：Trp Lys Ile Lys Ile Asp Ser Glu Ala Glu (SEQ ID NO:1)和Pro Asn Met Ile Tyr Ser Lys Asp Tyr (SEQ ID NO:2)。本发明的肽能够用于治疗痤疮，但不会产生副作用或抗药性。

Description

治疗痤疮的肽组合

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体的说，涉及一种治疗痤疮的肽组合及其编码核酸、组合物和应用。

背景技术

痤疮是引起丘疹或“面疱”的一种皮肤病状。这包括皮肤的白头粉刺、黑头粉刺和红色发炎斑点(如囊肿)。痤疮在皮肤表面上的微小毛孔被堵塞时发生。每个毛孔通向毛囊。毛囊包括 毛发和脂腺。由腺体释放的油脂帮助去除老化的皮肤细胞并且使皮肤保持柔软。当腺体产生太多油脂时，毛孔可能会变得被堵塞，进而导致污物、细菌和细胞累积。阻塞物被称为栓子或粉刺。如果栓子的顶部是白色，那么它被称为白头粉刺。如果栓子的顶部是黑色，那么它被 称为黑头粉刺。如果栓子裂开，那么发生肿胀和红色肿块。在皮肤深处的痤疮会导致硬的疼痛的囊肿。这被称为囊肿性痤疮。

存在有各种疗法用于治疗痤疮。一般来说，痤疮治疗通过减少油脂产生、加速皮肤细胞更新、抵抗细菌感染、减少炎症或进行前述所有四项来起作用。这些类型的痤疮治疗包括非处方局部治疗、抗生素、口服避孕药以及整容程序。痤疮洗剂可平衡油脂，杀死细菌并且促进死亡皮肤细胞的脱落。非处方(OTC)洗剂通常是温和的并且包含过氧化苯甲酰、硫、间苯二酚、水杨酸或硫作为其活性成分。

已有研究发现使用局部过氧化苯甲酰连同口服抗生素可降低显现抗生素抗性的风险。抗生素会导致副作用，如胃部不适、眩晕或皮肤变色。这些药 物还增加皮肤的阳光敏感性并且会降低口服避孕药的有效性。对于深度囊肿，抗生素可能不够。异维甲酸是可用于瘢痕囊肿性痤疮或对其它治疗无反应的痤疮的强效药剂。然而，异维甲酸具有许多副作用，如皮肤干燥、抑郁、剧烈胃疼、和肌 肉/关节/背部疼痛，并且可能引起母亲使用异维甲酸的婴儿中的出生缺陷。口服避孕药，包括诺孕酯(norgestimate)和乙炔基雌二醇的组合(OrthoTri-Cyclen、Previfem等)，可改善女性的痤疮。然而，口服避 孕药会引起其它副作用，如头痛、乳房触痛、恶心以及抑郁。化学脱 皮术和微晶磨皮术(microdermabrasion)可有助于控制痤疮。曾在传统 上用于减轻细纹的出现、阳光损伤和小面部疤痕的这些整容程序在与 其它痤疮治疗组合使用时是最有效的。它们会引起皮肤暂时性的严重 发红、脱皮和起泡以及长期变色。

一般治疗痤疮杆菌造成的皮肤疾病，主要是通过抗生素例如红霉素、甲硝唑治疗，或通过采取两种以上的合并药物治疗，如抗生素合并过氧化苯甲酰(BPO)、BPO合并外用A酸、抗生素合并外用A酸等。但过度使用抗生素，可能引起抗生素抗药性或其它副作用。所以对于能够抑制痤疮杆菌，但不会产生副作用或抗药性的治疗手段，仍是非常需要和期望的。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗痤疮的肽组合及其编码核酸、组合物和应用。

本发明提供一种治疗痤疮的肽组合，其包括由以下氨基酸序列组成的肽：Trp LysIle Lys Ile Asp Ser Glu Ala Glu (SEQ ID NO:1)和Pro Asn Met Ile Tyr Ser LysAsp Tyr (SEQ ID NO:2)。

本发明还提供了一种编码所述治疗痤疮的肽组合的核酸分子。

本发明还提供了一种组合物，其含有所述治疗痤疮的肽组合中SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的重量比为1:10-10:1。

优选地，所述组合物中SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的重量比为1:5-5:1。

优选地，所述组合物中SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的重量比为1:2-2:1。

优选地，所述组合物中SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的重量比为2:3。

本发明还提供了所述肽组合或所述核酸分子或所述组合物在制备用于治疗痤疮杆菌引起的疾病的药物或化妆品中的应用。

在一个具体实例中，在所述应用中，所述痤疮杆菌引起的疾病为痤疮。

本发明还提供了一种治疗痤疮的药物制剂，含有所述肽组合及药学上可接受的载体。

在一个具体实例中，所述药物制剂可通过口服、肠道外或局部给药。

优选地，所述药物制剂为局部给药制剂。

在一个具体实例中，所述药物制剂含有质量百分比为0.5%到5%的所述治疗痤疮的肽组合。

优选地，所述药物制剂含有质量百分比为1.5%的所述肽组合。

在一个具体实例中，所述药物制剂含有质量百分比为0.5%的所述肽组合。

本发明还提供了一种祛痘化妆品，含有所述肽组合及化妆品学上可接受的载体。

本发明的肽经体外测试具有显著的抗痤疮杆菌效果，SEQ ID NO：1的肽、SEQ IDNO：2的肽、重量比为2:3的SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的组合对痤疮杆菌的最低抑菌浓度分别为21.7μg/ml、22.8μg/ml、10.2μg/ml。本发明的肽可采用现有化学方法合成，生产成本低，易放大，稳定性好，适合大规模工业化生产。本发明的肽组合对痤疮杆菌具有协同杀灭作用，与单一肽相比，效率提高50%以上，可减少药物的使用剂量，从而减少细菌耐药以及皮肤十燥、脱屑、瘙痒、红斑和烧灼感等副作用的发生，提高患者顺应性，并降低治疗成本。本发明的肽或肽组合可进一步与药物可接受的载体制成外用药物制剂或者加入化妆品中，发挥治疗痤疮杆菌引起的疾病如痤疮的作用。

具体实施方式

在本发明中要求保护二个肽及其组合，即具有SEQ ID NO:1 的肽（i）或具有SEQID NO:2的肽（ii）或上述两种肽的组合。当这些肽或组合用于化妆品时，该肽或组合提供治疗痤疮杆菌引起的疾病如痤疮的益处。这两个肽及其组合是从短肽库中鉴别出来的。从极多的可能肽中，首先鉴别出少数几个个独特的肽作为潜在的抑制或杀灭痤疮杆菌的肽。从这少数几个独特肽中，发现有这两个肽就抑制痤疮杆菌而言有极强的协同性。

短肽的制备方法采用化学合成的方法，即本领域熟知的已经非常成熟的固相多肽合成方法，既可以采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具体做法就是将被保护的氨基酸逐个偶联到惰性固相载体上去，然后利用强酸将肽链从载体上裂解下来，同时去除侧链保护。

核苷酸采用人工合成方法制备；该核苷酸基本由编码具有所述的氨基酸序列短肽的核苷酸组成，本发明的核苷酸序列，其形式为DNA形式包括cDNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的也可以是双链的。

实施例1

本发明肽的抗痤疮杆菌实验

1.制备痤疮杆菌菌液，37℃恒温培养18h，备用；

2.配制浓度为5-100μg/ml小分子多肽溶液，将直径为5-7mm的圆形定性滤片消毒烘干后浸入上述不同浓度的小分子多肽溶液中；

3.制备高柱肉汤琼脂培养基，灭菌，备用；

4.溶化高柱肉汤琼脂培养基，冷却至50℃，加入痤疮杆菌菌液1ml，轻摇均匀，倒入无菌平皿，轻晃使培养基均匀平铺在平皿上；

5.用消毒过的镊子将滤片整齐、有序的放入冷却的平皿内，盖上陶瓦盖，并做标记，置于37℃恒温培养箱内培养24h；

6.用卡尺测量抑菌圈大小，并比较不同浓度小分子多肽对痤疮杆菌的作用强度，结果如表1。

表1：肽的最低抑菌浓度

肽	最低抑菌浓度(μg/ml)
		SEQ ID NO：1的肽	21.7
SEQ ID NO：2的肽	22.8
		重量比为2:3的SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的组合	10.2

如表1所示：短肽SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的组合对痤疮杆菌的最低抑菌浓度显著低于单个肽的情形。

实施例2

本发明肽的不同比例组合的抗痤疮杆菌实验

1.凝胶基质制备

按照卡波姆含量0.6%，甘油含量15%，丙二醇含量3%的比例配制卡波姆凝胶500g备用。

2.供试凝胶制备

将150mgSEQ ID NO：1的肽和150mgSEQ ID NO：2的肽加入凝胶基质混匀制成复方一20g；

将100mgSEQ ID NO：1的肽和200mgSEQ ID NO：2的肽加入凝胶基质混匀制成复方二20g；

将75mgSEQ ID NO：1的肽和225mgSEQ ID NO：2的肽加入凝胶基质混匀制成复方三20g；

将120mgSEQ ID NO：1的肽和180mgSEQ ID NO：2的肽加入凝胶基质混匀制成复方四20g；

将200mgSEQ ID NO：1的肽和100mgSEQ ID NO：2的肽加入凝胶基质混匀制成复方五20g；

将225mgSEQ ID NO：1的肽和75mgSEQ ID NO：2的肽加入凝胶基质混匀制成复方六20g；

3.抑菌圈试验

用丙二醇稀释供试凝胶至其饱和浓度，设置3个用量梯度（4、6、8μL），放入直径6mm的滤纸片浸泡2h取出自然风干，贴于涂布菌液的平板表面。丙二醇做阴性对照，未涂布菌液的平板作空白对照。每组设平行样三个，结果取其平均值。将培养皿置于培养箱中培养，痤疮丙酸杆菌37℃无氧培养。24h后测量抑菌圈直径。

表2 不同浓度凝胶对痤疮丙酸杆菌的抑菌圈直径

供试凝胶	4μL	6μL	8μL	阴性对照
					复方一	7.1	10.2	11.1	-
复方二	7.4	9.6	10.2	-
					复方三	10.6	12.6	16.8	-
复方四	8.3	9.9	12.6	-
					复方五	7.3	10.1	12.0	-
复方六	9.9	13.4	12.9	-

实验结果表明，肽组合凝胶对痤疮杆菌具有抑菌作用，且SEQ ID NO：1的肽和SEQ IDNO：2的肽以2：3配比效果最佳。

实施例3

组合物，含有40wt%的SEQ ID NO：1的肽，和60wt%的SEQ ID NO：2的肽。

实施例4

组合物，含有45wt%的SEQ ID NO：1的肽，和55wt%的SEQ ID NO：2的肽。

实施例5

组合物，含有35wt%的SEQ ID NO：1的肽，和65wt%的SEQ ID NO：2的肽。

实施例6

治疗痤疮的膏霜，每100g含有0.1gSEQ ID NO：1的肽和0.15gSEQ ID NO：2的肽及余量医用凡士林，将二者混匀即得。

实施例7

治疗痤疮的凝胶，每100g含有0.1gSEQ ID NO：1的肽和0.15gSEQ ID NO：2的肽及余量凝胶基质，将二者混匀即得。所述凝胶基质按照卡波姆含量0.6%，甘油含量15%，丙二醇含量3%的比例配制。

实施例8

治疗痤疮的凝胶，每100g含有0.2g重量比为2:3的SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的组合及99.8g凝胶基质，将二者混匀即得。所述凝胶基质按照卡波姆含量0.6%，甘油含量15%，丙二醇含量3%的比例配制。

实施例9

治疗痤疮的凝胶，每100g含有0.5g实施例5的组合物及98.5g凝胶基质，将三者混匀即得。所述凝胶基质按照卡波姆含量0.6%，甘油含量15%，丙二醇含量3%的比例配制。

实施例7

祛痘乳霜的配方如下(wt%)：

实施例3的组合物：1%

甘油硬脂酸酯：3%

鲸蜡硬脂醇：5%

甘油：20%

氢化聚癸烯：6%

椰油醇硫酸酯钠：0.5%

羟乙基纤维素：0.7%

防腐剂：适量

香精：适量

去离子水：余量。

实施例8

祛痘乳霜的配方如下(wt%)：

实施例4的组合物：1.5%

甘油硬脂酸酯：5%

鲸蜡硬脂醇：3%

甘油：20%

氢化聚癸烯：5%

椰油醇硫酸酯钠：0.8%

羟乙基纤维素：1%

防腐剂：适量

香精：适量

去离子水：余量。

实施例9

祛痘精华液的配方如下(wt%)：

实施例5的组合物：0.15%

1,3丙二醇：3%

视黄醇：2%

参根提取物：1.5%

蒲公英提取物:1.5%

甘草根提取物:1.0%

忍冬花提取物:1.0%

大豆卵磷脂:5%

葡聚糖:3%

莪术提取物：1%

芦荟提取物：1%

月桂酰精氨酸乙酯:0.5%

去离子水:余量。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的范围之内。

序列表

<110> 银川利智信知识产权咨询服务有限公司

<120> 治疗痤疮的肽组合

<141> 2017-10-24

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)

<400> 1

His Tyr Pro Ile Pro Arg Thr Thr Leu Ile Leu Ile Ala Ser Gly Ala

1 5 10 15

Gly Pro Arg Thr Pro Ala Met Ile Thr Ser Leu Ala Thr

20 25

Claims (9)

1.一种肽组合，其包括以下的肽：Trp Lys Ile Lys Ile Asp Ser Glu Ala Glu (SEQID NO:1)和Pro Asn Met Ile Tyr Ser Lys Asp Tyr (SEQ ID NO:2)。

2.编码如权利要求1所述肽组合的核酸分子。

3.组合物，其含有重量比为2:3的SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的组合0-50wt%。

4.如权利要求3所述的组合物，其含有重量比为2:3的SEQ ID NO：1的肽和SEQ ID NO：2的肽的组合0.1-10wt%。

5.如权利要求1所述的肽组合或如权利要求2所述的核酸分子或如权利要求3-4中任意一项所述的组合物在制备用于治疗痤疮杆菌引起的疾病的药物或化妆品中的用途。

6.如权利要求5所述的应用，其中所述痤疮杆菌引起的疾病为痤疮。

7.一种治疗痤疮的药物制剂，含有如权利要求1所述的肽组合或如权利要求3-4中任意一项所述的组合物，及药学上可接受的载体。

8.如权利要求8所述的治疗痤疮的药物制剂，为局部给药制剂。

9.一种祛痘化妆品，含有如权利要求1所述的肽组合或如权利要求3-4中任意一项所述的组合物，及化妆品上可接受的载体。