CN110227144A - 一种消除妇科炎症致病菌及hpv病毒的抗菌肽靶向制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种消除妇科炎症致病菌及HPV病毒的抗菌肽靶向制剂及其制备方法，包括如下重量份的组分：4~6份抗菌肽，2~4份靶向肽，30~60份温敏凝胶，制备方法包括如下步骤：（1）在装有水的容器中加入抗菌肽和靶向肽，超声使其形成混合溶液备用；（2）向步骤（1）制备的混合溶液中加入温敏凝胶材料，搅拌使得温敏凝胶材料溶解，形成的溶液即为抗菌肽靶向制剂。本发明提供的抗菌肽靶向制剂使用时在阴道以及宫颈内部表面形成一层凝胶，延长了药剂作用时间，凝胶中的抗菌肽除了消除阴道以及宫颈粘膜表面的炎症致病菌及HPV病毒，更在靶向肽的搭载下穿透粘膜进入粘膜以下部位靶向清除深度病毒感染，从而彻底、高效地消除妇科炎症致病菌及HPV病毒。

Description

一种消除妇科炎症致病菌及HPV病毒的抗菌肽靶向制剂及其 制备方法

技术领域

本申请涉及妇科疾病医药领域，具体而言，涉及一种消除妇科炎症致病菌及HPV病毒的抗菌肽靶向制剂及其制备方法。

背景技术

宫颈癌是我国仅次于乳腺癌居第2位的妇科恶性肿瘤，但同时宫颈癌也是目前世界上唯一病因明确的癌症，目前普遍认为人乳头瘤病毒（HPV）感染是引起宫颈癌变的重要因素,但HPV感染并非是宫颈癌发生的唯一因素,除了HPV感染外,生殖系统病原体引起的宫颈慢性炎症也是诱发宫颈癌的独立危险因素。因此，消除女性妇科炎症致病菌及HPV病毒是有效预防宫颈癌的最行之有效的举措。

目前，涉及消除女性妇科炎症致病菌或HPV病毒的方式主要有两种：接种HPV病毒疫苗和抗生素或药物治疗。

接种HPV病毒疫苗仅能针对部分种类的HPV病毒，不能对所有HPV病毒产生免疫，更不能消除女性妇科炎症致病菌，如淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、一些需氧菌、厌氧菌、巨细胞病毒、人型支原体和解脲支原体等等，故而接种HPV病毒疫苗不能全面消除女性妇科炎症致病菌或HPV病毒。

抗生素或药物治疗初期能达到消除女性妇科炎症致病菌或HPV病毒的效果，但随着抗生素失效日益严重，使用抗生素过度的直接后果就是使病原体产生耐药性，引发更严重的妇科炎症。还有部分女性倾向于采用中药成分的药物治疗妇科炎症，但中药成分的药物大部分是清热解毒作用，一般用做慢性妇科炎症的辅助治疗，不能作为对于HPV病毒的首选治疗。否则用“慢兵对强敌”让引起妇科炎症的病原体趁机扩散.发展，从而耽误了病情。且健康女性的阴道为酸性环境，有自洁功能有益菌，长时间滥用抗生素和中药成分的凝胶治疗妇科炎症的方法不当，会杀死阴道有益菌，破坏阴道的酸碱平衡。反而培养大量的抗药菌，往往使单一的炎症患者并发多重感染，反复感染妇科炎症往往会引起高危HPV感染，如果不采取有效措施，5年后癌变率1/5。

发明内容

本申请的主要目的在于综合现有缺乏消除妇科炎症致病菌或HPV病毒行之有效的手段的问题，提供一种全面消除妇科炎症致病菌或HPV病毒的新直击及其制备方法。

为了实现上述目的，提供了一种消除妇科炎症致病菌及HPV病毒的抗菌肽靶向制剂及其制备方法，具体方案如下：

一种消除妇科炎症致病菌及HPV病毒的抗菌肽靶向制剂，包括如下重量份的组分： 4~6份抗菌肽，2~4份靶向肽，30~60份温敏凝胶。

抗菌肽(AMPs)为小分子蛋白，具有广谱抗菌、病毒及真菌的能力。这类多肽一般带有正电荷且同时具有疏水及亲水基，使其能够溶于水溶液，亦能够进入病原微生物的脂多醣膜，进入胞膜后再经由不同机制杀灭微生物。抗菌肽依其结构可分很多类型，其中Cathelicidins及defensins为主要的类型。抗菌肽曾经应用于过敏性皮肤炎及柯士文症候群(Kostmanns)并发嗜中性白血球减少获得良好的效果。抗菌肽的治疗应用潜力在于它能裂解细胞膜。研究证明，抗菌肽确实具有快速地、广谱抗菌的能力，包括杀灭多重耐药菌、真菌和病毒。它还能对其他一些包括原虫的病原微生物有一定的杀灭作用。

本发明提供的抗菌肽靶向制剂为溶液状药剂，平时10~20℃储存，使用时直接对阴道给药，在药剂进入阴道后，在人体温度影响下，实现溶液向凝胶的转化过程，使得药剂在阴道以及宫颈内部表面形成一层凝胶，延长了药剂作用时间，凝胶中的抗菌肽除了消除阴道以及宫颈粘膜表面的炎症致病菌及HPV病毒，更在靶向肽的搭载下穿透粘膜进入粘膜以下部位靶向清除深度病毒感染，从而彻底、高效地消除妇科炎症致病菌及HPV病毒。

作为优选地，所述的抗菌肽靶向制剂包括如下重量份的组分：5份抗菌肽，3份靶向肽，50份温敏凝胶。

作为优选地，所述抗菌肽为cathelicidins类或defensins类。

作为优选地，所述靶向肽为小分子肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ IDNO.2或SEQ ID NO.3所示。

作为优选地，还包括重量份为3~5份的乙醇。

作为优选地，还包括重量份为0.5~2份的益母草提取液。

作为优选地，还包括重量份为0.5~2份的玫瑰花提取液。

作为优选地，还包括重量份为0.1~0.2份的薄荷提取液。

一种抗菌肽靶向制剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）在装有水的容器中加入抗菌肽和靶向肽，超声使其形成混合溶液备用；

（2）向步骤（1）制备的混合溶液中加入温敏凝胶材料，搅拌使得温敏凝胶材料溶解，形成的溶液即为抗菌肽靶向制剂。

相较于现有技术，本申请具有以下优点：

（1）与普通阴道凝胶相比，本发明提供的药剂在给药时为溶液状，便于将药剂置于阴道处，且克服了传统阴道制剂缺乏良好的铺展性和覆盖率低的缺点；

（2）药剂在阴道以及宫颈内部表面形成一层凝胶，延长了药剂作用时间，凝胶中的 抗菌肽除了消除阴道以及宫颈粘膜表面的炎症致病菌及HPV病毒，更在靶向肽的搭载下穿透粘膜进入粘膜以下部位靶向清除深度病毒感染，从而彻底、高效地消除妇科炎症致病菌及HPV病毒；

（3）经长期开发，采用特制的小分子靶向肽，提高了靶向肽与抗菌肽的结合力以及靶向肽结合抗菌肽后对肌肤的穿透力，提高了消除妇科炎症致病菌及HPV病毒的效价比，使得效价高达1：1040。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本申请。

实施例1

本发明提供的抗菌肽靶向制剂，各组分来源如下：

1、抗菌肽购自林州中农颖泰生物肽有限公司。

2、靶向肽自制或外购，购自南京莱昂生物科技，自制的制备过程如下：

一、制备SEQ ID NO.1所示的靶向肽

材料:带Fmoc(芴甲氧羰基)保护的Ala、Asp、Arg、Leu、Glu、Asp、Lys，TBTU(O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯)，HBTU(O-苯并三唑-1-基-N、N、N、N-四甲基尿六氟磷酸脂)和HOBT(1-羟基苯并三氮唑)，哌啶，六氢吡啶，醋酸酐，二氯甲烷；溶剂：DMF(N、N-二甲基甲酰胺)，TFA(三氟乙酸)，ACN(乙腈)，冰乙醚。

合成方法采用Fmoc(芴甲氧羰基)保护的固相合成法，具体步骤如下：

(1)Ala、Asp的偶联：称Ala 10g，用100ml 20％六氢吡啶溶液脱Fmoc 10min。抽滤后再用100ml DMF洗涤2次，每次时间2分钟，甲醇洗涤1次，二氯甲烷洗涤一次，再用100ml DMF洗涤2次，每次2分钟，洗完后取少量树脂做茚三酮检，结果呈阳性。

然后向反应器中加入以下原料：

Asp	12.8g
		TBTU	10.3g
HOBT	6.7g
		HBTU	3.9g
DMF	120ml

原料加完后，反应1h。时间结束后，用100ml DMF洗涤3次，每次时间2分钟，甲醇洗涤1次，100ml DMF洗涤1次，时间2分钟。茚检呈阴性

(2)变换原料，重复步骤（1）依次偶联Arg、Leu、Glu、Asp、Lys,最后用醋酸酐封闭。

(3)甲醇收缩5min+5min，抽干树脂。

(4)使用经典裂解液裂解2h，冰乙醚沉降获得氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO.1所述的粗肽。

(5)首先将上述得到的粗肽进行样品的10-100％分析，在确定出主峰的保留时间后，线性梯度分析样品；

(6)去离子水和乙腈(4:1)能够较充分的溶解试样品多肽；

(7)200mg多肽置于10ml的溶解瓶中，加入去离子水，经过超声溶解后，1用0.45μm的有机相滤头过滤，取上清液；

(8)收峰由线性梯度制备，并确定MS是否正确；

(9)为了符合纯度要求的液体量，要对所收的液体进行纯度的跟踪反馈；

(10)在40℃下，把所收集合格的溶液浓缩至40-50ml；

(11)浓缩好的溶液置于100ml烧杯中，放置于冰柜中冷冻；

(12)干燥；

(13)称量；

(14)反打；

(15)包装。

HPLC纯化后，冷冻干燥，即得本发明所述靶向肽小分子，其序列为序列表中SEQ IDNO.1所述。

二、制备SEQ ID NO.2和3所示的靶向肽

按照SEQ ID NO.1的制备步骤，更换原材料，合成本发明所述的其他两个靶向肽小分子,其序列为序列表中SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所述。

3、制备抗菌肽靶向制剂

将抗菌肽称取6份，每份5g，加入500ml水中，6组装有抗菌肽的容器分别标号为A、B、C、D、E、F，其中A、B、C、D、E中分别混入SEQ ID NO.1/ SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2/ SEQ IDNO.3/外购靶向肽（购自南京莱昂生物科技）混匀，F中不添加任意一种靶向肽，超声溶解后，B、C、D、E、F加入购自巴斯夫公司生产的温敏材料50g溶解即得抗菌肽靶向制剂，A制成普通凝胶剂。

最终6组抗菌肽靶向制剂的性状情况如下表：

产品	效价比
		A	1:237
B	1:1035
		C	1:1040
D	1:1037
		E	1:655
F	1:104
		纯抗菌肽	1:1

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

序列表

<110> 华懿思科（成都）生物科技有限公司

<120> 一种消除妇科炎症致病菌及HPV病毒的抗菌肽靶向制剂及其制备方法

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Ala Asp Arg Leu Glu Asp Lys

1 5

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Asp Asp Ala Glu Ala Leu Glu Asp

1 5

<210> 3

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Lys Leu Leu Lys Glu

1 5

Claims (9)

1.一种消除妇科炎症致病菌及HPV病毒的抗菌肽靶向制剂，其特征在于，包括如下重量份的组分： 4~6份抗菌肽，2~4份靶向肽，30~60份温敏凝胶。

2.如权利要求1所述的抗菌肽靶向制剂，其特征在于，包括如下重量份的组分：5份抗菌肽，3份靶向肽，50份温敏凝胶。

3.如权利要求1或2所述的抗菌肽靶向制剂，其特征在于，所述抗菌肽为cathelicidins类或defensins类。

4.如权利要求1或2所述的抗菌肽靶向制剂，其特征在于，所述靶向肽为小分子肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。

5.如权利要求1所述的抗菌肽靶向制剂，其特征在于，还包括重量份为3~5份的乙醇。

6.如权利要求1所述的抗菌肽靶向制剂，其特征在于，还包括重量份为0.5~2份的益母草提取液。

7.如权利要求1所述的抗菌肽靶向制剂，其特征在于，还包括重量份为0.5~2份的玫瑰花提取液。

8.如权利要求1所述的抗菌肽靶向制剂，其特征在于，还包括重量份为0.1~0.2份的薄荷提取液。

9.一种如权利要求1或2所述的抗菌肽靶向制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）在装有水的容器中加入抗菌肽和靶向肽，超声使其形成混合溶液备用；

（2）向步骤（1）制备的混合溶液中加入温敏凝胶材料，搅拌使得温敏凝胶材料溶解，形成的溶液即为抗菌肽靶向制剂。