KR101231158B1

KR101231158B1 - 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 조성물

Info

Publication number: KR101231158B1
Application number: KR1020100071978A
Authority: KR
Inventors: 노주원; 이샛별; 유지혜; 윤지호; 강경수; 배귀남; 정재희; 이병욱
Original assignee: 한국과학기술연구원
Priority date: 2010-07-26
Filing date: 2010-07-26
Publication date: 2013-02-07
Also published as: KR20120010439A

Abstract

본 발명은 일월비비추(Hosta capitata) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 피부표면 세균 및 진균, 식품의 부패와 식중독을 일으키는 원인균 및 필터에 서식하는 부유성 진균에 대해서 생육을 저지시키고, 상기의 세균 및 진균세포를 파괴하며, 진균의 균사체 형성을 저해하며, 또한 세포의 주기를 G2/M기에서 정지시키고 세포사멸을 유도함으로써 탁월한 항균 및 항진균 활성을 가지고 있으며, 또한 식용으로 사용되는 산채류에서 추출한 조성물을 원료로 하고 있어 인체에 안전하기 때문에 본 발명의 항균 및 항진균 활성을 갖는 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이를 포함하는 조성물은 각종 용도의 항균 및 항진균용 조성물뿐만 아니라 공기 청정용품 및 에어컨의 필터 등 천연 항균제로서 부작용없이 유용하게 사용할 수 있다.

Description

일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 조성물{An antibacterial and antifungal composition containing the extracts and fractions of Hosta capitata as active ingredient}

본 발명은 병원성 세균, 병원성 진균, 부유성 진균에 대한 항균 및 항진균 활성을 갖는 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 조성물에 관한 것이다.

항생물질은 미생물은 죽이면서 인체 또는 동물에게는 독성이 낮고 체내의 효소 등에 의해 비활성화되지 않는 선택적 독성작용(selective toxicity)을 갖는 물질로서, 이는 주로 DNA의 복제, 유전정보의 전사 및 해독, 전자 에너지의 수송, 세포벽의 생합성 등을 저해함으로써 미생물의 증식을 억제하는 기전을 통해 효과를 나타낸다.

항생물질은 플레밍(Sir Alexandor Fleming)이 1929년에 페니실린을 처음 발견하고, 플로리(Flory) 등이 1939년에 페니실리움 크리소제늄(Penicillium chrysogenum)의 배양액에서 페니실린을 최초로 분리, 정제하여 감염성 질환을 가진 수많은 환자의 생명을 구함으로써 기적의 약으로 알려져 왔다. 이후 1959년까지 본격적으로 연구가 이루어지면서 현재까지 항생 치료제로 유용하게 사용되고 있는 벤질페니실린(benzylpenicillin), 스트렙토마이신(streptomycin), 테트라사이클린 (tetracyclin) 및 마크로라이드계의 에리트로마이신(erythromycin) 등이 개발되었다. 이후 페니실린류(penicillin)가 1965년에 처음 합성방법에 의해 개발되어서 반합성 페니실린인 메티실린 등이 개발되었고, 1973년에는 세팔로스포린계인 세파졸린이 개발되었다.

그러나 대부분의 항생제는 여러 개의 키랄 중심을 갖고 있을 뿐만 아니라 마크로라이드 또는 펩타이드와 같이 복잡한 구조로 되어 있으므로, 그 합성이 어려울 뿐 아니라 이러한 합성방법 역시 발효방법과 비교하여 그 경제성이 매우 낮은 문제점이 있다. 또한 최근의 엄격한 안전성 검토 과정에서 이들이 인체에 대한 안전성을 100% 충족시킬 수 없다는 사실이 종종 발견되고 있어 미생물 살균약재에 대한 안전성이 시급한 문제로 떠오르고 있다. 미생물 살균제의 경우, 합성살균제의 사용을 지양하고 인체에 대한 오염이 없는 천연항균제를 사용하려는 움직임이 강하게 일고 있는 실정이며 이에 대한 연구 개발이 활발히 진행되고 있다. 천연항균제의 이용이 가장 활발한 분야는 섬유의 항균, 방취가공과 필터류의 항균 가공분야인데 섬유와 직물은 피부와 직접적으로 접촉되기 때문에 피부를 통하여 인체 내부로 유해한 가공제가 경피에 흡수될 수 있는 위험성이 있으며, 필터류에서는 공기를 순환시키는 과정에서 가공된 필터류에서 떨어져 나오거나 확산되어 나온 공기 중에 포함된 유해한 가공제가 호흡기를 통하여 인체 내부로 직접 유입될 수 있기 때문이다. 이러한 안전성이 강조되고 있는바 항균제에 대하여 경피독성, 급성 독성, 변이 원성 등 여러 종류의 안전성 평가가 의무화되고 있다. 공기청정용 필터 중에서도 가정용 공기청정용 필터와 자동차 에어컨(airconditioner)용 필터는 좁은 공간에서 공기가 순환되고 있다는 점과 특히 자동차용 에어컨 필터는 1년에 4~5개월만 사용되고 사용이 중단되었다가 다시 사용되기 때문에 분해하여 자주 필터를 교환할 수 없다는 점 때문에 완벽한 항균처리가 요구되고 있다. 또한, 자동차용 필터의 경우, 지극히 좁은 공간에서 탑승자가 호흡하고 있다는 점을 감안할 때 항균제의 안정성이 더욱 중요하다고 볼 수 있다.

일월비비추(Hosta capitata)는 방울 비비추, 비녀 비비추라고도 하며, 석회암지대에서 자라고 높이는 35 ~ 65 cm인 백합과 외떡잎 식물이다. 줄기는 곧게 자라고 잎은 뿌리에서 모여나며 넓은 달걀모양을 가지며 길이 10 ~ 16 cm, 나비 5 ~7.7 cm 이다. 한국(전남 백운산, 전북 덕유산, 경남 지리산, 경북 가야산) 및 일본에 분포하고 있으며, 비비추의 뿌리를 한방에서 자옥잠근(紫玉簪根)이라고 하여 이기보허(理氣補虛), 화혈지통(和血止痛)의 효능이 있어 인후종통(咽喉腫痛), 치통, 위통, 혈붕(血崩), 대하, 옹저(癰疽), 나력을 치료하는데 사용된다고 알려져 있다.

이에 본 발명자들은 우리가 일상생활에서 접하는 유해세균 및 진균들, 예를 들어, 구강질환의 원인균, 피부상재균, 에어컨필터 등에 서식하여 공기를 통해 감염이 되는 부유성 진균의 감염에 대한 치료 및 예방효과를 갖는 항균제를 개발하기 위해 계속 연구를 진행한 결과, 한국의 자생 식물인 일월비비추의 추출물 및 이의 분획물 중 일부가 항균 및 항진균 활성이 우수하며, 부작용이 없어 항생제의 유효성분으로 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 일월비비추(Hosta capitata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 일월비비추 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 피부외용제를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 구강용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 항균필터 코팅용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 공기청정용품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 일월비비추(Hosta capitata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 일월비비추 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 피부외용제를 제공한다.

또한, 본 발명은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 구강용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 항균필터 코팅용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 공기청정용품을 제공한다.

본 발명의 일월비비추(Hosta capitata) 추출물 또는 이의 분획물은 피부표면 세균 및 진균, 식품의 부패와 식중독을 일으키는 원인균 및 필터에 서식하는 부유성 진균에 대해서 생육을 저지시키고, 상기의 세균 및 진균세포를 파괴하며, 진균의 균사체 형성을 저해하며, 또한 세포의 주기를 G2/M기에서 정지시키고 세포사멸을 유도함으로써 탁월한 항균 및 항진균활성을 가지는 것을 확인하였으므로, 본 발명의 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물은 항균 및 항진균용 조성물에 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은 일월비비추(Hosta capitata) 추출물 또는 이의 분획물의 향진균활성 최소억제농도를 나타낸 그래프이다.
도 2는 일월비비추 추출물의 캔디다 알비칸스 동종 이형 억제효과를 나타낸 그림이다.
도 3은 진균세포주기에 대해 일월비비추 추출물이 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 일월비비추(Hosta capitata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 조성물을 제공한다.

상기 균은 칸디다 알비칸(C. albicans), 사카로마이세스 세레비지에(S. cerevisiae), 에쉐리키아 콜리(E. coli), 바실러스 서브틸리스(B. subtilis), 스트렙토코커스 뮤탄스(S. mutans), 스타필로코커스 아레우스(S. aureus), 엔테로코커스 히레(E. hirae), 마이크로코커스 루테우스(M. luteus) 및 메티실린 내성 스타필로코커스 아레우스(MRSA; methicillin resistant staphylococcus aureus ), 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes), 에피더모피톤 플록코섬(Epidermophyton floccosum), 마이크로스포럼 아우도워이니(Microsporum audouinii), 트리초피톤페러지니움(Trichophyton ferrugineum), 트리초피톤 멘타그로파이츠(Trichophyton mentagrophytes), 트리초피톤 루범(Trichophyton ruburm), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermis), 피티로스포룸 오발레(Pityrosporum ovale), 캔디다 알비칸스(candida albicans) 및 질 트리코모나스(Trichomonas Vaginalis)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 일월비비추 추출물 및 이의 분획물은 하기와 같은 단계로 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:

1) 건조한 일월비비추를 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축하여 추출물을 제조하는 단계; 및

4) 단계 3)의 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 분획물을 제조하는 단계.

상기 방법에 있어서, 일월비비추는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.

상기 추출 용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물, 바람직하게는 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 메탄올 또는 에탄올로 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 용매의 양은 일월비비추 건조 중량의 0.5 내지 100 배로 함이 바람직하고, 5 내지 10 배로 하는 것이 더 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 방법은 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출, 열수추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당업계의 통상적인 추출 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 초음파 추출방법으로 1회 내지 5회 추출될 수 있다. 추출시 온도는 10℃ 내지 100℃ 인 것이 바람직하며 상온인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 시간은 2시간 내지 24시간인 것이 바람직하고, 3시간인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조, 상온건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 4)의 유기용매는 헥산(n-hexane), 디클로로메탄((dichloromethane) 및 에틸아세테이트(ethyl acetate)인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 에틸아세테이트인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 4)의 분획물은 70% 에탄올 추출물을 증류수로 현탁하여 동량의 헥산(n-hexane)을 혼합한 다음 분액깔때기를 넣고 분획하여 헥산층을 분리 제거한 후, 남은 물 층에 동량에 디클로로메탄(dichloromethane)을 혼합한 다음 디클로로메탄층을 분리 제거한 다음, 남은 물 층에 다시 동량의 에틸아세테이트(ethyl acetate)를 혼합하여 분획한 다음 에틸아세테이트 층을 분리 농축한 후 동결 건조하여 에틸 아세테이트 분획을 제조하는 것이 바람직하다.

상기 분획물은 상기 일월비비추 추출물로부터 분획 과정을 1 내지 5회, 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고, 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 구체적인 실시예에 있어서, 일월비비추를 물로 세척한 후, 그늘 및 실온에서 건조시켰다. 건조된 일월비비추를 추출용기에 넣고, 추출용매로 50 ~ 60℃에서 2시간 동안 추출하고 여과지에 여과하였다. 상기 추출액을 50 ~ 55℃에서 감압농축하고 동결건조시켜 일월비비추 추출물을 제조하였다.

본 발명의 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명의 일월비비추 추출물의 항균 활성을 확인하기 위해 디스크확산법을 수행하였다. 그 결과 일월비비추 추출물은 넓은 투명존을 나타내거나 세균이 거의 성장하지 못하는 높은 항균 활성을 갖는 것을 알 수 있었다.

또한, 본 발명의 일월비비추 추출물 및 이의 분획물의 항진균 활성을 보이는 최소억제 농도를 확인하기 위해 MIC를 구하였다. 그 결과 본 발명의 일월비비추 추출물 및 이의 분획물은 유해세균에 대하여 낮은 MIC값을 나타내므로 항균 활성이 높다는 것을 확인할 수 있었다(도 1 참조). 또한 본 발명자들은 클라도스포리움 클라도스포리오이데스(C. cladosporioides)의 경우 MIC를 구하는 것이 용이하지 않아 디스크확산법을 이용하여 항진균 활성을 확인하였다. 그 결과 본 발명의 일월비비추 추출물 및 이의 분획물은 클라도스포리움 클라도스포리오이데스에 대하여 투명존을 형성하므로, 항진균 활성이 우수하다는 것을 확인하였다.

또한, 본 발명의 일월비비추 추출물 및 이의 분획물의 캔디다 알비칸스의 동종 이형 형성에 미치는 영향을 확인하였다. 그 결과 본 발명의 일월비비추 추출물 및 이의 분획물은 캔디다 알비칸스균이 동종 이형을 형성하지 못하게 하여 생체내에서 캔디다알비칸스에 의한 발명을 막을 수 있음을 확인할 수 있었다(도 2 참조).

또한, 본 발명의 일월비비추 추출물이 진균세포주기에 미치는 영향을 확인하기 위해, DNA를 염색한 후, flow cytometry를 이용하여 형광의 강도를 측정하였다. 그 결과 본 발명의 일월비비추 추출물은 G2/M에서 세포주기를 멈추게 하여 진균세포의 분열을 억제하고 세포사멸을 일으키는 것을 확인할 수 있었다(도 3 참조).

따라서, 일월비비추(Hosta capitata) 추출물 또는 이의 분획물은 피부표면 세균 및 진균, 식품의 부패와 식중독을 일으키는 원인균 및 필터에 서식하는 부유성 진균에 대해서 생육을 저지시키고, 상기의 세균 및 진균세포를 파괴하며, 진균의 균사체 형성을 저해하며, 또한 세포의 주기를 G2/M기에서 정지시키고 세포사멸을 유도함으로써 탁월한 항균 및 항진균활성을 가지는 것을 확인하였으므로, 본 발명의 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물은 항균 및 항진균용 조성물에 유용하게 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 피부외용제를 제공한다.

상기 균은 칸디다 알비칸, 사카로마이세스 세레비지에, 에쉐리키아 콜리, 바실러스 서브틸리스, 스트렙토코커스 뮤탄스, 스타필로코커스 아레우스, 엔테로코커스 히레, 마이크로코커스 루테우스 및 메티실린 내성 스타필로코커스 아레우스, 프로피오니박테리움 아크네스, 에피더모피톤 플록코섬, 마이크로스포럼 아우도워이니, 트리초피톤페러지니움, 트리초피톤 멘타그로파이츠, 트리초피톤 루범, 황색포도상구균, 표피포도상구균, 피티로스포룸 오발레, 캔디다 알비칸스 및 질 트리코모나스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

따라서, 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물은 피부표면 세균 및 진균, 식품의 부패와 식중독을 일으키는 원인균 및 필터에 서식하는 부유성 진균에 대해서 생육을 저지시키고, 상기의 세균 및 진균세포를 파괴하며, 진균의 균사체 형성을 저해하며, 또한 세포의 주기를 G2/M기에서 정지시키고 세포사멸을 유도함으로써 탁월한 항균 및 항진균활성을 가지는 것을 확인하였으므로, 본 발명의 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물은 항균 및 항진균용 피부외용제에 유용하게 사용할 수 있다.

상기 피부외용제는 용액제, 현탁제, 스프레이제, 패취제, 패드제, 크림제, 연고제 및 겔제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균용 피부외용제인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

또한, 본 발명은 상기 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 치자 분획물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

상기 구강용 조성물은 구강 내 세균 및 진균을 제거하여 구강질환 예방 또는 구강 청결을 목적으로 하는 구강용 조성물일 수 있으며, 치약, 구강세정제 또는 구강체정제로 이루어진 군에서 선택되는 어는 하나인 것을 특징으로 하는 항균용 구강용 조성물인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

또한, 상기 구강용 조성물은 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물에 연마제, 습윤제, 기포제, 결합제, 감미제, pH조절제, 방부제, 약효성분, 향료, 증백제, 색소, 용제 등이 구강용 조성물 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

상기 항균필터 코팅용 조성물은 부유성 세균 및 진균을 제거하여 실내공기 청결을 목적으로 하는 필터 코팅용 조성물일 수 있으며, 용액제, 현탁제, 스프레이제 및 겔제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 항균용 항균필터 코팅용 조성물인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

상기 공기청정용품은 공기청정기 또는 중앙공조장치용 필터를 포함하며, 방향제, 탈취제, 공기청정기 또는 앙공조장치용 필터로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균용 것을 특징으로 하는 항균용 공기청정용품인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

이하 본 발명을 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물의 제조

강원도 산채시험장에서 재배한 일월비비추를 구입하여, 적당한 크기로 분쇄하여 추출용기에 일월비비추 10 g과 95% 에탄올 수용액 총 500 ml를 가하여 환류 냉각하였고, 거름종이로 여과하여 추출물을 얻었다. 추출과정은 3회 반복하였고, 이후 용매를 감압 농축 및 건조하여 1 g의 에탄올 수용액 추출물을 수득하였다.

상기 에탄올 추출물을 계통분획을 실시하여 n-헥산(34.6 mg), 에틸아세테이트(56.7 mg) 및 부탄올(94.9 mg)의 분획물로 분리하였다.

< 실시예 2> 항균 및 항진균실험을 위한 균주의 준비

병원성 균주인 캔디다 알비칸스(Candida albicans), 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae), 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)와 부유성 균주인 클라도스포리움 클라도스포리오이데스 (Cladosporium cladosporioides)는 한국유전자원은행 (KCTC)으로부터 분양받아 실험에 이용하였다.

< 실험예 1> 디스크확산법에 의한 일월비비추 추출물의 항균 및 항진균시험

상기의 방법으로 제조한 실시예 1의 일월비비추 추출물 및 분획물의 항균 활성을 확인하기 위하여, 하기와 같이 디스크확산법을 수행하였다.

밤새 액체배지에서 키운 실시예 2의 칸디다 알비칸스(C. albicans), 사카로마이세스 세레비지에(S. cerevisiae), 스타필로코커스 에피더미디스(S. epidermidis), 클라도스포리움 클라도스포리오이데스(Cladosporium cladosporioides)를 각각 1/10로 희석하고, 그 중 100 ㎕씩을 한천배지에 잘 펴서 깔았다. 실시예 1에서 제조한 추출물 또는 분획물의 농도가 20 ㎎/㎖가 되도록 DMSO에 녹인 용액 2 ㎕로 직경 8 mm 정도의 둥근 여과지를 적신 후, 한천 배지 위에 올려 한천배지에 확산되게 하였다. 이를 37℃ 또는 25℃에서 24시간 또는 48시간 배양한 후 세균 성장이 억제된 부분(투명존; clear zone)을 측정함으로써 항균 및 항진균 활성을 측정하였다.

결과는 표 1에 나타내었다. 항생물질 혼합물

투명존의 크기에 따른 각 균에 대한 항균 및 항진균 활성

	균주명	항생물질 혼합물 ¹ ⁾	일월비비추 추출물
1	S. epidermidis	+++²⁾	+
2	S. aureus	+++	+
3	C. albicans	++	++
4	S. cerevisiae	+++	+++
5	C. cladosporioides	-	++

상기 1)로 나타낸 항생물질 혼합물은 임파실린(Ampicillin): 1 mg/ml, 페니실린 스트렙토마이신(Penicillin Streptomycin): 1 mg/ml 및 암포테리신(Amphotericin): 250 /ml 을 나타낸다.

상기 2)는 억제지역 지름을 비억제시: "-" , 7 ~ 9 mm : "+", 9 ~ 10 mm : "++" 및 10≤ : "+++"로 나타낸다.

표 1에 나타난 바와 같이, 일월비비추 추출물의 경우, 넓은 투명존을 나타내거나 세균이 거의 성장하지 못해 항균 활성이 매우 좋음을 확인하였다.

< 실험예 2> 항진균활성을 보이는 시료의 최소억제농도( MIC , Minimum Inhibitory Concentration) 측정

상기 실험예 1 및 2의 디스크확산법으로 항균 및 항진균 활성이 확인된 실시예를 대상으로 하기와 같이 균이 자라지 않는 최소농도(MIC)를 구하였다.

실시예 1에서 제조한 추출물 또는 이의 분획물의 농도를 200 ㎍/㎖에서 시작하여 2배 농도로 계속 희석하여 3.25 ㎍/㎖농도까지 낮추었고, 실험에 사용될 캔디다 알비칸스와 사카로마이세스 세레비지애는 미리 24시간 동안 배양하여 A₆₀₀가 0.1가 되도록 조정하였다. 상기 추출물 또는 이의 분획물과 균주는 동량으로 96-웰 마이크로플레이트에서 혼합한 혼합물을 첨가 한 후 24시간 배양하였다. 24시간 후 배양액을 1/10로 희석하여 새로운 96-웰 마이크로플레이트에 분주한 뒤 흡광도 600 nm에서 측정하여 MIC₅₀을 구하였다.

흡광도 측정 및 MIC₅₀ 결과는 도 1 및 표 2에 나타내었다.

MIC₅₀ 측정 결과 (단위: ㎍/㎖)

균주명	시료명	MIC ₅₀ (㎍/ ml )
S. cerevisiae	에탄올 추출물	<3.13
	핵산 분획물	85.19
	에틸아세테이트 분획물	>200
	부탄올 분획물	<3.13
	물 분획물	157.36
C. albicans	에탄올 추출물	24.18
	핵산 분획물	>200
	에틸아세테이트 분획물	>200
	부탄올 분획물	5.76
	물 분획물	>200

표 2에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 제조한 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물은 상기 실험에 사용된 유해세균에 대하여 모두 낮은 MIC 값을 갖으므로, 항균활성이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한, 분획물들 가운데 부탄올 분획물이 가장 높은 항균활성을 보였다.

따라서, 일월비비추 추출물 및 이의 분획물들은 항균용 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.

< 실험예 3> 디스크 확산법을 이용한 일월비비추 분획물의 항진균 활성

상기 클라도스포리움 클라도스포리오이데스(C. cladosporioides)의 경우 액체배지상에서 MIC를 구하는 것이 용이하지 않아서 분획물의 항진균 활성을 확인하기 위해 디스크 확산법을 이용하였다. 클라도스포리움 클라도스포리오이데스의 콜로니를 생리식염수로 희석하고, 그 중 100 ㎕씩을 한천배지에 잘 펴서 깔았다. 실시예 1에서 제조한 분획물의 농도를 20 ㎎/㎖로 맞춘 뒤 2 ㎕로 직경 8 mm 정도의 둥근 여과지를 적신 후, 한천 배지 위에 올려 한천배지에 확산되게 하였다. 이를 25℃에서 24시간 또는 48시간 배양한 후 세균 성장이 억제된 부분(투명존; clear zone)의 넓이를 측정하였다.

결과는 표 3에 나타내었다.

투명존의 크기에 따른 클라도스포리움 클라도스포리오이데스에 대한 일월비비추 분획물의 항진균 활성

	시료명	투명존의 크기
1	에탄올 추출물	++
2	핵산 분획물	-
3	에틸아세테이트 분획물	-
4	부탄올 분획물	++
5	물 분획물	-

상기 억제 지역 지름을 비억제시: "-", 7 ~ 9 mm: "+", 9 ~ 10 mm: "++", 10≤:"+++"로 나타내었다.

표 3에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 제조한 일월비비추 추출물 및 부탄올 분획물은 클라도스포리움 클라도스포리오이데스에 대하여 투명존을 형성하였으므로, 항진균활성이 우수함을 확인할 수 있었다.

< 실험예 4> 동종 이형에 대한 일월비비추 추출물 및 이의 분획물의 영향

캔디다 알비칸스는 병원성 인자를 유발하는데 동종 이형(Dimorphic transition)을 형성하는 것이 필수적이다. 따라서 일월비비추 추출물 및 이의 분획물이 캔디다 알비칸스의 동종 이형 형성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기의 실험을 수행하였다. 캔디다 알비칸스를 YM 배지에서 배양한 후, 세포수가 3.5 × 10⁶ CFU/가 되도록 희석하여 24-웰 플레이트에 그 희석액을 분주하였다. 20 % 송아지 혈청액 (Fetal bovine serum)을 넣어 생체 내와 유사한 환경을 갖추고 일월비비추 추출물을 200 ㎍/ml을 처리한 구에서 체온과 동일한 온도인 37 배양기에서 배양하면서 균의 형태 변화를 관찰하였다.

상기 실험 수행의 결과 도 2에서 보는 바와 같이 대조구인 송아지의 혈청액 만을 넣은 경우에는 대부분의 캔디다 알비칸스균이 동종 이형을 형성하여 뭉쳐있는 것을 볼 수 있는 반면에, 일월비비추 추출물을 처리한 구에서는 동종 이형 형성이 저해되는 것을 확인할 수 있었다. 이로써 일월비비추의 추출물이 생체 내에서 캔디다 알비칸스에 의한 발병을 막을 수 있음을 확인할 수 있었다.

< 실험예 5> 진균세포주기에 대해 일월비비추 추출물이 미치는 영향

캔디다 알비칸스와 사카로마이세스 세레비지에의 세포수가 1 × 10⁹ cells/ml 이 되도록 YM 배지에서 배양한 후 10, 50, 100 μg/ml의 일월비비추 추출물을 처리하여 24℃에서 6시간 동안 배양한 후, DNA 염색시약인 프로피디움 요오드화물(propidium iodide)을 사용하여 DNA를 염색한 후, flow cytometry를 이용하여 형광의 강도를 측정하였다.

상기 실험 수행의 결과, 도 3에서 보는 바와 같이 아무 물질도 처리하지 않은 대조군의 세포주기와 달리 일월비비추 추출물을 처리한 군에서 캔디다 알비칸스와 사카로마이세스 세레비지애의 세포주기가 G2/M기에서 멈추는 것을 확인할 수 있었다. 또한 sub G1 기가 증가하는 것으로 보아 일월비비추 추출물은 에폽토시스를 유발하는 것을 알 수 있었다.

따라서 본 발명의 일월비비추 추출물 및 분획물은 진균세포의 분열을 억제하고 세포사멸을 일으키는 것을 확인할 수 있었다.

< 제조예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 환의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물 1 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

<1-5> 과립의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물 150 ㎎

대두 추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

< 제조예 2> 화장료 조성물의 제조

<2-1> 크림의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 0.1 중량부

세토스테아릴알코올 2.8 중량부

밀난 2.6 중량부

스테아린산 1.4 중량부

친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부

피이지-100 스테아레이트 1 중량부

세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부

호호바오일 4 중량부

스쿠알란 3.8 중량부

폴리소르베이트 60 1.1 중량부

마카다이아오일 2 중량부

초산토코페롤 0.2 중량부

메칠폴리실록산 0.4 중량부

에칠파라벤 0.1 중량부

프로필파라벤 0.1 중량부

Euxyl K-400 0.1 중량부

1,3-부칠렌글리콜 7 중량부

메칠파라벤 0.05 중량부

글리세린 6 중량부

d-판데놀 0.2 중량부

트리에탄올아민 0.2 중량부

pt 41891 0.2 중량부

정제수 50.55 중량부

<2-2> 로션의 제조

세토스테아릴알코올 1.6 중량부

스테아린산 1.4 중량부

친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부

피이지-100 스테아레이트 2.6 중량부

세스퀴올레인산소르비탈 0.6 중량부

스쿠알렌 4.8 중량부

마카다이아오일 2 중량부

호호바오일 2 중량부

초산토코페롤 0.4 중량부

메칠폴리실록산 0.2 중량부

에칠파라벤 0.1 중량부

프로필파라벤 0.1 중량부

1,3-부칠렌글리콜 4 중량부

메칠파라벤 0.1 중량부

산탄검 0.1 중량부

글리세린 4 중량부

d-판데놀 0.15 중량부

알란토인 0.1 중량부

카르보내(2% aq. Sol) 4 중량부

트리에탄올아민 0.15 중량부

에탄올 3 중량부

pt 41891 0.1 중량부

정제수 51.7 중량부

< 제조예 3> 화장료 조성물 중 세정제의 제조

<3-1> 비누의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 4.0 중량부

비누베이스 94.25 중량부

토코페롤 아세테이트 0.3 중량부

글리세린 0.2 중량부

PEG 4000(폴리에틸렌글리콜 4000) 0.8 중량부

호호바유 0.3 중량부

세탄올 0.15 중량부

상기 성분들을 혼합기에서 잘 혼합한 후 비누제조 기계에서 압출하고 일정한 크기로 절단 및 성형하여 비누 조성물을 제조하였다. 상기 비누 베이스는 당 업계에서 통상적으로 사용되고 있는 천연 유지인 팜유(palm oil)의 나트륨염이 사용될 수 있다.

<3-2> 바디 클렌저의 제조

암모늄 라우릴 설페이트 42 중량부

코카미도프로필 베타인 12 중량부

글리콜 디스테어레이트 0.5 중량부

프로필렌 글리콜 1.0 중량부

색소 적당량

향료 적당량

구연산 적당량

드레인(50% 농축액) 1.0 중량부

정제수를 가하여 100 중량부로 한다.

암모늄 라우릴 설페이트, 코카미도프로필 베타인, 글리콜 디스테어레이트 및 프로필렌 글리콜를 70℃까지 가열하고 가열된 정제수를 넣어 유화시키면서 상기 나머지 성분들을 첨가하고 실온으로 냉각하여 바디 클렌저를 제조하였다.

< 제조예 4> 구강용 조성물의 제조

<4-1> 구강용 가글제의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 0.1 ~ 1.0 g

자이리톨 5 ~ 10 g

에틸알콜 5 ~ 15 g

솔비톨 5 ~ 15 g

사카린 나트륨 10 ~ 100 ㎎

소디움 모노플루오로포스페이트 500 ~ 1000 ㎎

소디움 라우릴설페이트 100 ~ 200 ㎎

폴리솔베이트 20 100 ~ 1000 ㎎

페파민트 플레이버 10 ~ 100 ㎎

소디움 벤조에이트 10 ~ 100 g

색소 적당량

정제수를 가하여 100 g으로 한다.

상기 성분에 따라 통상의 구강 가글제의 제조방법에 따라서 본 발명의 드라코세팔룸 포에티디움 정유성분, 일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 구강용 조성물인 가글제를 제조하였다.

< 제조예 5> 공기청정용 필터의 제조

본 발명의 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 건조물 5중량% 초산수용액에 함량비가 각각 5부: 95부가 되도록 용해하였다. 상기 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 건조물이 용해된 용액을 상온에서 백금-금 합금노즐(0.1 mm φ×300 홀)로 10 m/min 속도로 압출하였다. 상기 압출된 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 섬유를 5중량% 가성소다에서 중화반응에 의해 응고, 고화를 하였다.

이어서 상기 압출된 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 섬유를 물로 구성된 응고욕에서 응고 수세처리를 하고, 상기 수세 처리된 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 섬유를 98℃의 온도를 유지하는 물로 구성된 비등수 욕조에서 연신하여 습윤상태의 섬유를 얻었으며 이 습윤 상태의 섬유 실제 중량 500 g을 포화상태의 구리이온을 킬레이트시킨 착화합물을 얻었으며 상기의 킬레이트 형성 일월비비추 추출물, 이의 분획물 또는 이들의 혼합물 섬유를 절단하여 필터용 섬유를 제조하였다.

Claims

일월비비추(Hosta capitata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 상기 추출물은 물, C₁ ~ C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균용 약학적 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균용 조성물.
일월비비추 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 유기용매는 헥산, 에틸아세테이트 또는 부탄올인 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균용 조성물.
제 1항 또는 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 균은 칸디다 알비칸(C. albicans), 사카로마이세스 세레비지에(S. cerevisiae), 에쉐리키아 콜리(E. coli), 바실러스 서브틸리스(B. subtilis), 스트렙토코커스 뮤탄스(S. mutans), 스타필로코커스 아레우스(S. aureus), 엔테로코커스 히레(E. hirae), 마이크로코커스 루테우스(M. luteus) 및 메티실린 내성 스타필로코커스 아레우스(MRSA; methicillin resistant staphylococcus aureus ), 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes ), 에피더모피톤 플록코섬(Epidermophyton floccosum ), 마이크로스포럼 아우도워이니(Microsporum audouinii), 트리초피톤페러지니움(Trichophyton ferrugineum), 트리초피톤 멘타그로파이츠(Trichophyton mentagrophytes), 트리초피톤 루범(Trichophyton ruburm), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermis), 피티로스포룸 오발레(Pityrosporum ovale), 캔디다 알비칸스(candida albicans) 및 질 트리코모나스(Trichomonas Vaginalis)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균인 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균용 조성물.
일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 피부외용제.
제 7항 있어서, 상기 균은 칸디다 알비칸, 사카로마이세스 세레비지에, 에쉐리키아 콜리, 바실러스 서브틸리스, 스트렙토코커스 뮤탄스, 스타필로코커스 아레우스, 엔테로코커스 히레, 마이크로코커스 루테우스 및 메티실린 내성 스타필로코커스 아레우스, 프로피오니박테리움 아크네스, 에피더모피톤 플록코섬, 마이크로스포럼 아우도워이니, 트리초피톤페러지니움, 트리초피톤 멘타그로파이츠, 트리초피톤 루범, 황색포도상구균, 표피포도상구균, 피티로스포룸 오발레, 캔디다 알비칸스 및 질 트리코모나스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균인 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균용 피부외용제.
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일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 구강용 조성물.
제 11항에 있어서, 상기 균은 칸디다 알비칸, 사카로마이세스 세레비지에, 에쉐리키아 콜리, 바실러스 서브틸리스, 스트렙토코커스 뮤탄스, 스타필로코커스 아레우스, 엔테로코커스 히레, 마이크로코커스 루테우스 및 메티실린 내성 스타필로코커스 아레우스, 프로피오니박테리움 아크네스, 에피더모피톤 플록코섬, 마이크로스포럼 아우도워이니, 트리초피톤페러지니움, 트리초피톤 멘타그로파이츠, 트리초피톤 루범, 황색포도상구균, 표피포도상구균, 피티로스포룸 오발레, 캔디다 알비칸스 및 질 트리코모나스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균인 것을 특징으로 하는 항균용 구강용 조성물.
일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 항균필터 코팅용 조성물.
제 13항 있어서, 상기 균은 칸디다 알비칸, 사카로마이세스 세레비지에, 에쉐리키아 콜리, 바실러스 서브틸리스, 스트렙토코커스 뮤탄스, 스타필로코커스 아레우스, 엔테로코커스 히레, 마이크로코커스 루테우스 및 메티실린 내성 스타필로코커스 아레우스, 프로피오니박테리움 아크네스, 에피더모피톤 플록코섬, 마이크로스포럼 아우도워이니, 트리초피톤페러지니움, 트리초피톤 멘타그로파이츠, 트리초피톤 루범, 황색포도상구균, 표피포도상구균, 피티로스포룸 오발레, 캔디다 알비칸스 및 질 트리코모나스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균인 것을 특징으로 하는 항균용 항균필터 코팅용 조성물.
일월비비추 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 공기청정용품.
제 15항에 있어서, 상기 공기청정용품은 방향제, 탈취제, 공기청정기 또는 앙공조장치용 필터로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 항균용 공기청정용품.
제 15항에 있어서, 상기 균은 칸디다 알비칸, 사카로마이세스 세레비지에, 에쉐리키아 콜리, 바실러스 서브틸리스, 스트렙토코커스 뮤탄스, 스타필로코커스 아레우스, 엔테로코커스 히레, 마이크로코커스 루테우스 및 메티실린 내성 스타필로코커스 아레우스, 프로피오니박테리움 아크네스, 에피더모피톤 플록코섬, 마이크로스포럼 아우도워이니, 트리초피톤페러지니움, 트리초피톤 멘타그로파이츠, 트리초피톤 루범, 황색포도상구균, 표피포도상구균, 피티로스포룸 오발레, 캔디다 알비칸스 및 질 트리코모나스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균인 것을 특징으로 하는 항균용 공기청정용품.