ITBS20120126A1 - Composizione antibatterica per uso topico - Google Patents
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Description
DESCRIZIONE
Campo dell'invenzione
La presente invenzione si riferisce ad una composizione antibatterica per uso topico, ed in particolare ad una composizione del tipo suddetto, per contrastare la colonizzazione batterica, atta ad essere utilizzata sulla cute, sia lesa sia non lesa e sulle mucose, compresa la mucosa orale.
Stato dell'arte
Per contrastare le infezioni batteriche a cui à ̈ soggetto l'uomo, le quali possono essere di diversa natura, à ̈ noto l'impiego di antibiotici sia in forma di batteriostatici sia in forma di battericidi.
Gli antibiotici, benché vantaggiosi, non sono esenti da inconvenienti in quanto, generalmente, comportano effetti indesiderati tra cui lo scompenso della flora batterica cutanea, l'insorgere di reazioni allergiche, effetti tossici in vari distretti dell'organismo ed ancora intolleranza in caso di interazione con altre sostanze particolarmente altri farmaci.
L'uso eccessivo di antibiotici, inoltre, può determinare l'insorgere di una antibiotico-resistenza che può essere acquisita dall'agente patogeno, rendendo inefficace la terapia antibiotica che per altro, per avere efficacia, deve essere protratta per un periodo mediolungo.
In ogni caso, l'abuso di antibiotici può comportare gravi conseguenze sull'organismo umano che possono determinarne anche la morte.
Per ovviare ai suddetti inconvenienti sono state studiate soluzioni alternative agli antibiotici, in particolare per quanto riguarda il trattamento della cute e delle mucose affette da patologie quali acne, che hanno evidenziato l'attività antimicrobica di un peptide, come descritto nel documento US 2007/0207112.
In particolare, il suddetto documento descrive la capacità di controllare la colonizzazione batterica in un paziente acneico tramite un peptide costituito da una sequenza di 15 amminoacidi comprendenti fenilalanina (F), alanina (A), lisina (K) e leucina(L) nell'ordine FAKALKALLKALKAL-NH2 .
Tale peptide à ̈ derivato da una proteina biocida definita "bacterial/permeabili ty-inreasing protein" , generalmente individuata come BPI, facente parte del sistema immunitario innato, come descritto nel documento US 2005/0148495.
La o le BPI, per quanto mostrino attività biocida, sono conosciute però per essere attive essenzialmente su batteri gram negativi.
Sommario dell'invenzione
Il problema tecnico alla base della presente invenzione à ̈ pertanto quello di mettere a disposizione una composizione antibatterica in grado di superare gli inconvenienti citati con riferimento alla tecnica nota, particolarmente una composizione dalla marcata efficacia, idonea al trattamento di una molteplicità di patologie cutanee e che nel contempo non mostri effetti collaterali o comunque indesiderati.
Il suddetto problema à ̈ risolto secondo l'invenzione da una composizione antibatterica preferibilmente per uso topico, atta ad essere utilizzata sulla cute, sia lesa sia non lesa, sulle mucose inclusa la mucosa orale e gli annessi cutanei, comprendente trietilcitrato e un peptide costituito da 15 amminoacidi con sequenza FAKALKALLKALKAL-NH2, in cui F à ̈ fenilalanina, A à ̈ alanina, K à ̈ lisina e L à ̈ leucina.
La composizione secondo l'invenzione ha inaspettatamente evidenziato attività sinergica ed in particolare ha mostrato un'elevata azione microbicida e un'elevata capacità di inibire colonizzazioni batteriche di batteri sia gram positivi sia gram negativi, anaerobi ed aerobi, tra cui a titolo esemplificativo e non esaustivo si citano: stafilococco aureo,· propionibacterium acne , pseudomonas auroginosa , streptococco pyogenes , stafilococco epidermis , e contemporaneamente à ̈ risultata capace di inibire la degradazione dei trigliceridi cutanei indotta da enzimi rilasciati da batteri gram positivi e gram negativi, aerobi e anaerobi, controllando quindi la genesi del processo infiammatorio determinato dagli acidi grassi liberi derivati dall'idrolisi dei trigliceridi.
Pertanto, in accordo con l'invenzione, la presente composizione risulta atta a contrastare infezioni batteriche della cute, delle mucose e degli annessi cutanei, ed atta al trattamento di patologie in cui l'infezione cutanea risulta essere causa, o concausa, di lesioni rilevabili sulla cute, come ad esempio nell'acne, nella idrosadenite sia suppurativa sia non suppurativa, nella dermatite atopica caratterizzata da colonizzazione ad opera dello stafilococco aureo, nella impetigine, nelle infezioni interdigitali, nelle follicoliti, nei foruncoli, nelle infezioni post traumatiche e nelle infezioni su pelle ustionata .
Preferibilmente la composizione secondo l'invenzione comprende trietilcitrato in concentrazione compresa tra 0,05% p/p e 99,9% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 45% p/p, più preferibilmente ancora tra 2,5% p/p e 15% p/p.
Preferibilmente la composizione secondo l'invenzione comprende il suddetto peptide in concentrazione compresa tra 0,002% p/p e 0,5% p/p, più preferibilmente tra 0,010% p/p e 0,35% p/p, più preferibilmente ancora tra 0,010% p/p a 0,125% p/p.
In accordo a ulteriori forme di realizzazione dell'invenzione, la presente composizione può comprendere inoltre uno o più agenti sinergisti scelti tra acidi grassi essenziali compresi i relativi sali ed esteri, acido salicilico compresi i suoi sali ed esteri, zinco e suoi derivati, acido azelaico, acido octadecenedioico e antibiotici.
Preferibilmente, uno o più agenti sinergisti appartenenti al gruppo costituito dagli acidi grassi essenziali e dai relativi sali ed esteri sono contenuti nella presente composizione in concentrazione compresa tra 0,01% e 50% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 15% p/p, e vantaggiosamente sono maggiormente preferiti acido linoleico, acido linolenico e acido oleico.
Preferibilmente, uno o più agenti sinergisti appartenenti al gruppo costituito da acido salicilico e dai suoi sali ed esteri sono contenuti nella presente composizione in concentrazione compresa tra 0,2% p/p e 15% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 2% p/p.
Preferibilmente, uno o più agenti sinergisti appartenenti al gruppo costituito da zinco e dai suoi derivati sono contenuti nella presente composizione in concentrazione compresa tra 0,2% p/p e 5% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 2% p/p, e vantaggiosamente sono maggiormente preferiti zinco ossido, zinco solfato, zinco piritione, zinco mandelato, zinco acetato, zinco glicolato, zinco salicilato, zinco lattato, zinco piruvato.
Preferibilmente, uno o più agenti sinergisti appartenenti al gruppo costituito da acido azelaico e acido octadecenedioico sono contenuti nella presente composizione in concentrazione compresa tra 1% p/p e 65% p/p, più preferibilmente tra 2% p/p e 15% p/p.
Preferibilmente, uno o più agenti sinergisti appartenenti al gruppo costituito da antibiotici sono contenuti nella presente composizione in concentrazione compresa tra 0,1% p/p e 5% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 2% p/p, e vantaggiosamente sono maggiormente preferite le isoxacilline tra cui oxacillina, cloxacicillina, dicloxacicillina, nafcillina e flucloxacillina; le aminopenicilline tra cui ampicillina e amoxicillina; le carbossipenicilline tra cui carbenicillina e ticarcillina; le ureidopenicilline tra cui mezlocillina, piperacillina, azlocillina e apalcillina; ed ancora benzilpenicillina, sulfadimidina, sulfamerazina, streptomicina, sulfadiazina, clorotetraciclina, d oramienicolo, neomicina, ossitetraciclina, penicillina G procaina, eritromicina, benzatina penicillina, spiramicina, tetraciclina, tiamfenicolo, vancomicina, fenossimetilpenicillina, colistina, demeclociclina, virginiamicina, meticillina, metronidazolo, ampicillina, spectinomicina, sulfametossazolo, trimetoprim, cloxacillina, acido fusidico, fusafungina, limeciclina, gentamicina, doxaciclina, carbenicillina, rifampicina, clindamicina, cefalexina, cefazolina, pivampicillina, tinidazolo, amoxicillina, cefradina, minociclina, pristinamicina, fosfomicina, talampicillina, tobramicina, bacampicillina, ticarcillina, amikacina, azlocillina, cefadroxil, cefamandolo, cefossitina, cefuroxima, mezlocillina, pivmecillinam, cefaclor, cefmetazolo, cefotaxima, cefsulodina, piperacillina, amoxicillina/acido clavulanico (co-amoxiclav), cefperazone, cefotiam, cefsulodina, latamoxef, netelmicina, apalcillina, ceftriaxone, micronomicina, cefmenossima, ceftazidima, ceftirossima, norfloxacina, cefonicid, cefotetan, temocillina, cefpiramide, imipenem/cilastatina, ofloxacina, mupirocina, aztreonam, cefoperazone/sulbactam, ticarcillina/acido clavulanico, ampicillina/sulbactam, cefixima, roxitromicina, sultamicillina, ciprofloxacin, rifaximina, azithromicina, cefaclor, flomoxef, isepamicina, midecamicina, rifapentine, teicoplanina, cefpodoxima, enrofloxacina, Ioniefloxacina, arbekacina, cefozidima, claritromicina cefdinir, cefetamet, cefpirome cefprozil ceftibufene, fleroxacina, loracarbef, piperacillina/tazobactam, rufloxacina, brodimoprim, diritromicina, levofloxacina, nadifloxacina, panipenem/betamipron, spariloxacina, cefepime, quinupristina-dalfopristina, linezolid, telitromicina, daptomicina, tigeciclina, doripenem, telavancin.
In accordo ad un ulteriore aspetto la presente invenzione mette a disposizione una formulazione cosmetica e/o farmaceutica comprendente la suddetta composizione ed un veicolo o vettore fisiologicamente accettabile, particolarmente per trattamenti dermatologici e preferibilmente per uso topico.
Vantaggiosamente la suddetta formulazione può essere in forma di emulsione acqua in olio, emulsione olio in acqua, gel monofasico, gel monofasico sub-micellare, soluzione monofasica acquosa, soluzione monofasica alcolica, crema, latte, pomata, unguento, veicolabile tramite tampone imbevuto, spray e simili.
In sostanza, la composizione secondo la presente invenzione, nelle forme di realizzazione sopra indicate, quindi anche la suddetta formulazione, ha sorprendentemente evidenziato un'elevata capacità di controllo della crescita batterica con elevata attività battericida e microbicida su una pluralità di batteri sia gram positivi sia gram negativi, aerobi ed anaerobi, da attribuire alla presenza combinata dei principi attivi che la caratterizzano, vale a dire il trietilcitrato ed il suddetto peptide con sequenza FAKALKALLKALKAL-NH2, ed ha mostrato contestualmente un'elevata capacità di protezione dei lipidi cutanei, particolarmente una protezione da alterazioni di tipo qualitativo e quantitativo, verosimilmente essenzialmente dovuta alla capacità di inibire l'idrolisi dei triqliceridi cutanei indotta dalle lipasi batteriche, vale a dire indotta da enzimi rilasciati daqli stessi batteri, sia qram positivi sia qram neqativi, aerobi ed anaerobi.
Quando comprendente uno o più aqenti sinerqisti come sopra descritti, la presente composizione risulta oltremodo vantaqqiosa in particolare per specifici trattamenti della cute.
Al riquardo, vi à ̈ da evidenziare che una composizione in accordo con l'invenzione comprendente uno più aqenti sinerqisti appartenenti al suddetto qruppo deqli antibiotici consente vantaqqiosamente di controllare l'insorqenza di fenomeni di resistenza batterica, mentre in caso di assenza di aqenti sinerqisti di questo qruppo la presente composizione ha il vantaqqio di non determinare insorqenza di resistenza batterica, vale a dire una antibiotico-resistenza acquisita.
Ulteriori caratteristiche e vantaqqi dell'invenzione risulteranno meqlio evidenziati dall'esame della sequente descrizione dettagliata di alcune forme di realizzazione preferite, ma non esclusive, illustrate a titolo indicativo e non limitativo, col supporto dei disegni allegati in cui:
Breve descrizione delle figure
La figura 1 Ã ̈ una fotografia di una porzione di cute, particolarmente della zona dorsale, di un soggetto affetto da acne comedonica ed infiammatoria di grado moderato, prima di un trattamento con una composizione secondo la presente invenzione;
la figura 2 Ã ̈ una fotografia della porzione di cute di figura 1, successivamente ad un trattamento con la composizione secondo la presente invenzione, protratto per 12 settimane;
le figure 3A e 3B sono fotografie che mostrano ciascuna quattro campioni, di cui tre contenenti una soluzione acquosa comprendente una composizione secondo la presente invenzione includente trietilcitrato e il peptide FAKALKALLKALKAL-NH2, ed un brodo di coltura comprendente come microorganismo test il P ropionibacterium acnes ATCC 11827 , a differenti concentrazioni, il quarto campione essendo un controllo positivo costituito unicamente dal suddetto brodo di coltura;
la figura 4 Ã ̈ una fotografia che mostra quattro campioni, di cui tre contenenti una soluzione acquosa comprendente una composizione secondo la presente invenzione includente trietilcitrato e il peptide FAKALKALLKALKAL-NH2, ed un brodo di coltura comprendente come microorganismo test lo Staphylococcus aureus ATCC 6538 , a differenti concentrazioni, il quarto campione essendo un controllo positivo costituito unicamente dal suddetto brodo di coltura;
la figura 5 à ̈ una fotografia che mostra, in una piastra seminata con trapianto del campione di figura 4 a più bassa concentrazione di composizione secondo l'invenzione, l'assenza di crescita del microorganismo test;
la figura 6 Ã ̈ una fotografia che mostra, in una piastra seminata con trapianto del campione del controllo positivo di figura 4, la proliferazione del microorganismo test;
la figura 7 illustra un grafico per acne infiammatoria e rispettivamente comedonica riportante, in funzione del tempo, il numero di lesioni visibili su campioni di cute, particolarmente prima di un trattamento con una composizione secondo la presente invenzione (stato basale) e a differenti intervalli di tempo nel corso di un trattamento con una composizione secondo la presente invenzione.
Descrizione dettagliata dell'invenzione
Una composizione secondo la presente invenzione comprende trietilcitrato e un peptide costituito da 15 amminoacidi con sequenza FAKALKALLKALKAL-NH2, in cui F Ã ̈ fenilalanina, A Ã ̈ alanina, K Ã ̈ lisina e L Ã ̈ leucina.
Il trietilcitrato à ̈ l'estere etilico dell'acido citrico, la cui denominazione EINECS à ̈ Trietil-2-idrossipropan-1,2,3-tricarbossilato, il numero CAS à ̈ 201-070-7, la formula bruta à ̈ C12H20O7, il peso molecolare à ̈ 276,29 ed à ̈ un composto oleoso solubile in acqua sino ad una concentrazione del 4,5% e solubile nei lipidi.
II peptide FAKALKALLKALKAL-NH2, nel sequito individuato semplicemente anche come Peptide, à ̈ conosciuto per avere attività antimicrobica ed in particolare per essere efficace nel controllare la colonizzazione batterica in pazienti acneici, come descritto nel documento US 2007/0207112 qui incorporato come riferimento.
Il Peptide à ̈ derivato da una proteina biocida definita "bacterial/permeability-inreasinq protein", qeneralmente individuata come BPI, facente parte del sistema immunitario innato, come descritto nel documento US 2005/0148495 qui incorporato come riferimento.
La composizione secondo l'invenzione comprendente come principi attivi il trietilcitrato e il Peptide ha sorprendentemente ed inaspettatamente evidenziato elevata attività sinerqica ed in particolare ha mostrato una spiccata azione microbicida e un'elevata capacità di inibire colonizzazioni batteriche di batteri sia gram positivi sia gram negativi, anaerobi ed aerobi, e contemporaneamente à ̈ risultata in grado di inibire la degradazione dei trigliceridi cutanei indotta da enzimi rilasciati da batteri gram positivi e gram negativi, aerobi e anaerobi.
Tra i batteri risultati sensibili alla composizione secondo la presente invenzione vi sono stafilococco aureo, propionibacterium acne, pseudomonas auroginosa , streptococco pyogenes , stafilococco epidermis .
Pertanto, in accordo con l'invenzione, la presente composizione risulta atta a contrastare infezioni batteriche della cute, delle mucose e degli annessi cutanei, ed atta al trattamento di patologie in cui l'infezione cutanea risulta essere causa, o concausa, di lesioni rilevabili sulla cute, come ad esempio nell'acne, nella idrosadenite sia suppurativa sia non suppurativa, nella dermatite atopica caratterizzata da colonizzazione ad opera dello stafilococco aureo, nella impetigine, nelle infezioni interdigitali, nelle follicoliti, nei foruncoli, nelle infezioni post traumatiche e nelle infezioni su pelle ustionata .
In accordo a quanto sopra la presente composizione à ̈ risultata particolarmente indicata ad essere utilizzata, congiuntamente ad un veicolo o vettore fisiologicamente accettabile e specificatamente cosmeticamente e/o farmaceuticamente accettabile, per realizzare una formulazione cosmetica e/o farmaceutica preferibilmente per uso topico in trattamenti dermatologici.
La composizione secondo l'invenzione comprende trietilcitrato in concentrazione tra 0,05% p/p e 99,9% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 45% p/p, più preferibilmente ancora tra 2,5% p/p e 15% p/p.
La composizione secondo l'invenzione comprende il Peptide in concentrazione tra 0,002% p/p e 0,5% p/p, più preferibilmente tra 0,010% p/p e 0,35% p/p, più preferibilmente ancora tra 0,010% p/p e 0,125% p/p.
La composizione secondo l'invenzione può comprendere inoltre uno o più agenti sinergisti scelti tra acidi grassi essenziali compresi i relativi sali ed esteri, acido salicilico compresi i suoi sali ed esteri, zinco e suoi derivati, acido azelaico, acido octadecenedioico e antibiotici come in precedenza riportato.
Le proprietà antibatteriche della composizione secondo la presente invenzione sono ulteriormente illustrate nei seguenti esempi e prove sperimentali, descritti con riferimento ai disegni allegati.
Prove Sperimentali
Lo scopo delle prove sperimentali effettuate à ̈ stato quello di determinare, quindi dimostrare, l'attività antimicrobica di una composizione comprendente trietilcitrato ed il Peptide (composizione secondo 1'invenzione) .
- Descrizione del metodo
Sono state preparate una serie di provette, nel seguito individuate anche come campioni, contenenti un brodo di coltura inoculato con un microrganismo test nel quale à ̈ stata introdotta la composizione secondo l'invenzione, in soluzione acquosa e a rispettive concentrazioni scalari decrescenti, da sottoporre a saggio, ed un campione positivo contenente solo il suddetto brodo di coltura.
- Valutazione dell'attività antibatterica
Le colture dei microorganismi test sono state incubate a temperatura e condizioni ottimali di crescita per lo specifico microrganismo test prescelto, per un periodo di tempo sufficiente ad evidenziarne lo sviluppo.
Sono poi stati individuati i campioni in cui effettivamente si à ̈ avuto sviluppo di popolazione microbica osservandone, visualmente, la torbidità come indice di crescita.
In dettaglio, i campioni in cui la composizione secondo l'invenzione à ̈ presente in concentrazione tale da inibire la crescita batterica sono rimasti limpidi.
Nei casi in cui la natura stessa di un campione ne ha Gianfranco de Paoli Ambrosi
impedito una lettura visiva, o si à ̈ voluto determinare se il mancato sviluppo batterico à ̈ stato dovuto ad un'azione microbiostatica o microbicida, si à ̈ proceduto per conferma a trapianti in opportuni terreni agarizzati.
- Concentrazioni saggiate
Sono stati preparati campioni costituiti da una soluzione acquosa di trietilcitrato 4,5% p/p, peptide 0,0025% p/p e acqua quanto basta a 100% p/p, e da un brodo di coltura ottenuto direttamente da terreno di coltura, a concentrazioni scalari e particolarmente comprendenti, per 100 millilitri di brodo di coltura, rispettivamente 50,00 grammi, 25,00 grammi e 12,50 grammi della suddetta soluzione.
- Ceppi microbici utilizzati
Nelle prove effettuate sono stati utilizzati i ceppi microbici:
Propionibacterium acnes ATCC 11827 a concentrazione di 1.4 x IO<6>u.f.c./ml di terreno.
Staphylococcus aureus ATCC 6538 al concentrazione di 3.5 x IO<3>u.f.c./ml di terreno
- Condizioni colturali adottate
Per la coltivazione di Propionibacteri um acnes à ̈ stato utilizzato terreno liquido Fluid Thioglycollate Medium a temperatura di 37°C ± 1°C in condizioni di anaerobiosi.
Per i trapianti di conferma della crescita in terreno liquido à ̈ stato utilizzato Fluid Thioglycollate Medium alla temperatura di 37°C ± 1°C in condizioni di anaerobiosi.
Per la coltivazione di Staphylococcus aureus à ̈ stato utilizzato terreno Tryptic Soy Broth a temperatura di 37°C ± 1°C con incubazione di 24 ore in condizioni di aerobiosi.
Per i trapianti di conferma della crescita in terreno agarizzato à ̈ stato utilizzato terreno Tryptic Soy Agar e capsule Petri sono state incubate a temperatura di 37°C ± 1°C in condizioni di aerobiosi.
- Controllo dell'assenza di batteri anaerobi in un grammo della soluzione contenente i principi attivi, da diluire nel brodo di coltura.
L'assenza di batteri anaerobi à ̈ stata verificata in un grammo della suddetta soluzione contenente i principi attivi mediante semina in Fluid Thioglycollate Medium ed incubazione a temperatura di 37°C /-1°C in condizioni di anaerobiosi per 72 ore.
E' stata, inoltre, verificata l'assenza di microrganismi aerobi mesofili in 1 grammo della stessa suddetta soluzione contenente i principi attivi tramite semina in Tryptic Soy Broth ed incubazione a temperatura di 37°C ± 1°C per 48 ore.
- Controlli positivi
Fertilità del terreno e vitalità dei microrganismi: Sono state effettuate prove con terreno e microrganismi in Gianfranco de Paoli Ambrosi
assenza della soluzione acquosa comprendente la composizione secondo l'invenzione, per entrambi i ceppi microbici sopra indicati, nelle medesime condizioni colturali sopra descritte utilizzate nella sperimentazione.
- Sterilità del terreno e verifica delle condizioni di asepsi
Sono state effettuate prove in assenza della soluzione acquosa comprendente la composizione secondo l'invenzione ed in assenza di microrqanismi, per entrambi i terreni di coltura utilizzati per l'incubazione, alle condizioni sopra descritte utilizzate nella sperimentazione.
- Risultati per le prove con Propionibacterium acnes Risultati dell'osservazione visiva in duplicato:
I risultati sono forniti dalla lettura visiva della crescita microbica nei suddetti campioni (provette) come sopra preparati, valutati in base alla torbidità del terreno di coltura dopo circa 72 ore di incubazione.
I risultati, come detto verificati in doppio, sono illustrati neqli esempi delle fiqure 3A e 3B in cui con A, B, C e rispettivamente Al, B1 e Ci sono indicati i suddetti campioni, alle rispettive concentrazioni scalari sopra riportate (50%, 25% e 12,5% p/p).
Dalle suddette fiqure si nota come tutti i campioni comprendenti la soluzione acquosa a base della composizione secondo l'invenzione, sebbene a concentrazione diversa, si sono presentati limpidi e trasparenti, in contrasto con il controllo positivo rappresentato dal quarto campione D e rispettivamente DI, in cui si nota una crescita positiva in entrambe le provette contenenti terreno Fluid Thioglycollate Medium con Propionibacterium acnes .
I risultati di tale lettura sono stati verificati con successivi trapianti in terreno liquido effettuati dopo circa 72 ore di incubazione.
La tabella 1 riporta, per ogni concentrazione di campione, arrotondata alla seconda cifra decimale, i risultati dei trapianti per la stessa concentrazione.
Tabella 1
A B C
Concentrazione 50,00% 25,00% 12,50% campione
Crescita in Nessuna Nessuna Nessuna terreno crescita crescita crescita agarizzato
Sterilità del terreno e verifica delle condizioni di asepsi
Assenza di crescita.
- Risultati per la prova con Staphylococcus aureus Risultati dell'osservazione visiva:
I risultati si riferiscono alla lettura visiva della crescita microbica nei suddetti campioni (provette) come sopra preparati, valutati in base alla torbidità del terreno di coltura dopo circa 24 ore di incubazione.
I risultati sono illustrati nell'esempio della figura 4 in cui con A2, B2 e C2 sono indicati i suddetti campioni con concentrazioni scalari che si presentano limpidi e trasparenti in contrasto con il campione del controllo positivo, indicato con D2, contenente terreno Tryptic soy broth Staphylococcus aureus, che evidenzia una crescita positiva.
I risultati di tale lettura sono stati verificati da successivi trapianti in terreno solido dopo circa 24 ore di incubazione.
Gli esempi delle figure 6 e 7 mostrano ed evidenziano l'assenza di crescita batterica in una piastra di Tryptic Soy agar seminata con un trapianto della più bassa concentrazione saggiata di campione (12,50%) rispettivamente a confronto con un trapianto effettuato con campione del controllo positivo in cui si nota la crescita batterica.
La tabella 2 riporta, per ogni concentrazione di campione come sopra indicato, arrotondata alla seconda cifra decimale, i risultati finali dei trapianti ottenuti per la stessa concentrazione saggiata.
Sterilità del terreno e verifica delle condizioni di asepsi
Assenza di crescita.
Da quanto sopra si può affermare che la composizione secondo l'invenzione, nello specifico una composizione costituita da trietilcitrato (4,5% p/p) ed il Peptide (0,025% p/p) ha mostrato un'eccellente attività antimicrobica nei confronti di entrambi i microrganismi saggiati .
Vi à ̈ da evidenziare, infatti, che nessun campione saggiato, alla rispettiva concentrazione, ha permesso uno sviluppo microbico.
Vi à ̈ da evidenziare ancora che, secondo le stesse metodiche sopra descritte, una composizione a base di trietilcitrato, vale a dire trietilcitrato usato da solo senza il Peptide ad una concentrazione del 4,5% p/p in acqua qba 100% p/p, ha mostrato una attività microbicida molto blanda (sopravvivenza del 25% della popolazione batterica) contro una totale inibizione di batteri vivi secondo la composizione in accordo con l'invenzione.
- Valutazione dell'efficacia e della tollerabilità nel trattamento dell'acne comedonica ed infiammatoria localizzata a livello del petto e della schiena di un'emulsione olio in acqua, comprendente una composizione secondo l'invenzione, ottenuta come seque:
N° Descrizione % in peso
Fase A)
01 Cetearyl qlucoside 4,2%
02 Butilidrossitoluolo 0,01%
03 Etil linoleato 3,0%
04 Acido salicilico 0,5%
05 Trietilcitrato 9
Fase B)
06 Peptide 0,0025%
07 Acqua demineralizzata 5,0%
Fase C)
08 Glicole propilenico 1,5%
09 Fenossietanolo 0,8%
10 Metil parabene sale di sodio 0,25%
11 Zinco lattato 1,25%
12 Acqua qba 100
Metodo di preparazione:
Fase A): miscelare 01+02+03+04+05 e scaldare a 75°C;
Fase B): scioqliere 06 in 07;
Fase C) scioqliere 10 11 in 12; alla soluzione ottenuta miscelare 08+09 e scaldare sino a 75°C.
Alla temperatura di 75°C unire la Fase A) alla Fase C). Lasciare sotto aqitazione disareando ed alla temperatura di 35°C unire la Fase B).
È stata studiata l'efficacia e la tollerabilità dell'emulsione comprendente la composizione secondo l'invenzione, come sopra indicata, per il trattamento dell'acne infiammatoria e comedonica localizzata a schiena e decolleté.
Pazienti arruolati: 12 pazienti di età compresa tra 13 e 22 anni, affetti da acne del dorso e/o del decolleté di qrado lieve moderato.
Diseqno dello studio: Studio in aperto.
Applicazione dell'emulsione (lozione): due volte al qiorno per 12 settimane.
Controlli: a 4, 8 e 12 settimane.
Valutazione: Conteqqio delle lesioni su area di riferimento. Valutazione fotografica.
Pazienti dopo 12 settimane di trattamento: 12
Risultato secondo lo sperimentatore: l'emulsione à ̈ risultata efficace.
Risultato secondo i pazienti: l'emulsione à ̈ risultata efficace:
Giudizio dei pazienti dopo il trattamento: buono, pazienti soddisfatti
Tollerabilità : eccellente
Effetti collaterali osservati: nessuno
L'esempio di figura 7 illustra graficamente i dati della prova sopra descritta, mentre gli esempi delle figure 1 e 2 illustrano un campione di cute di uno dei 12 pazienti arruolati, prima e rispettivamente dopo il trattamento sopra descritto.
Ulteriori esempi di preparazioni o formulazioni cosmetiche e/o farmaceutiche comprendenti una composizione secondo l'invenzione, con relativa preparazione ed impiego, sono indicati di seguito:
PREPARAZIONE 1 - soluzione monofasica idroalcolica per il trattamento dell'acne
N Descrizione % m peso
GENT017BIT
Gianfranco de Paoli Ambrosi
01 Trietil citrato 10%
02 Peptide 0 , 01%
03 alcool etilico 45, 0%
04 acqua qba 100%
Metodo di preparazione: sciogliere 02 in 03; alla soluzione ottenuta aggiungere 01, sotto agitazione portare a volume di 100 con 04
PREPARAZIONE 2 - gel monofasico per il trattamento dell'acne
N° Descrizione % in peso
01 Trietilcitrato 4,5%
02 Peptide 0,0025%
03 Carbomer 1,0%
04 sodio idrato qba pH 6
05 Acqua deminerali zata qba 100,00%
Metodo di preparazione: miscelare 01 in 05, sciogliere 02 nella soluzione ottenuta; disperdere 03 nella soluzione ottenuta; neutralizzare con 04. Tutta l'operazione da effettuarsi sotto agitazione.
PREPARAZIONE 3 - emulsione olio in acqua per il trattamento della dermatite atopica
N° Descrizione % in peso
Fase A)
01 Steareth 2 3,0%
02 Stereth 21 2,0%
03 PPG-15 stearyl ether 8,0%
04 Butilidrossitoluolo 0,01%
05 trietilcitrato 10,0%
06 Ceramide IV 0,005%
Fase B)
07 Peptide 0,0025%
08 Acqua demineralizzata 5,0%
Fase C)
09 Glicole propilenico 1,5%
10 Fenossietanolo 0,8%
11 Metil parabene sale di sodio 0,25%
12 Acqua qba 100%
Metodo di preparazione: Fase A) miscelare 01+02+03+04+05+06 e scaldare a 75°C;
Fase B) scioqliere 07 in 08;
Fase C) scioqliere 11 in 12; alla soluzione ottenuta miscelare 10 09 e scaldare sino a 75°C.
Alla temperatura di 75°C unire la Fase A) alla Fase C). Lasciare sotto aqitazione disareando ed alla temperatura di 35°C unire la Fase B).
PREPARAZIONE 4 soluzione alcolica per il trattamento della idrosadenite suppurativa
N° Descrizione % in peso
01 Trietilcitrato 40,0%
02 Peptide 0,01%
03 Alcol etilico qba 100,0%
Metodo di preparazione: sciogliere 02 in 03; alla soluzione ottenuta miscelare 01.
PREPARAZIONE 5 soluzione antibatterica
N° Descrizione % in peso
01 Trietilcitrato 4,5%
02 Peptide 0,0025%
03 Acqua demineralizzata qba 100,0%
Metodo di preparazione: sciogliere 02 in 03; alla soluzione ottenuta miscelare 01.
PREPARAZIONE 6 - soluzione antibatterica e antiacne
N° Descrizione % in peso
01 Trietilcitrato 4,5%
02 Peptide 0,0025%
03 Clindamicina 1%
04 alcool etilico qba 100,0%
Metodo di preparazione: sciogliere 02 03 in 04; alla soluzione ottenuta miscelare 01.
PREPARAZIONE 7 - soluzione antibatterica e antiacne
N° Descrizione % in peso
01 Trietilcitrato 4,5%
02 Peptide 0,0025%
03 Eritromicina 1,5%
03 alcool etilico qba 100,0%
Metodo di preparazione: sciogliere 02 03 in 04; alla soluzione ottenuta miscelare 01.
I vantaggi della presente invenzione, già apparsi evidenti nel corso della descrizione sopra riportata, possono essere riassunti rimarcando che à ̈ messa a disposizione una composizione antibatterica, comprendente come principi attivi trietilcitrato ed il Peptide come sopra descritto, dalla marcata efficacia nei confronti di batteri gram positivi e gram negativi, sia aerobi sia anaerobi, e che nel contempo à ̈ in grado di proteggere i lipidi cutanei da alterazioni qualitative e quantitative grazie alla capacità di inibire l'idrolisi dei trigliceridi cutanei indotta dalle lipasi batteriche.
Pertanto, vantaggiosamente, la presente composizione associa ad un'efficace azione battericida e microbicida anche un'efficace azione protettiva della cute e delle mucose potendone garantire la conservazione delle caratteristiche naturali.
Ancora, la presente composizione à ̈ risultata priva di effetti collaterali o comunque indesiderati ed ha mostrato un'eccellente tollerabilità .
La presente composizione risulta quindi vantaggiosamente indicata per il trattamento di lesioni batteriche della cute, delle mucose e degli annessi cutanei, e per il trattamento di patologie in cui l'infezione cutanea à ̈ causa o concausa di lesioni rilevabili della cute, quali ad esempio acne, idrosadenite sia suppurativa sia non suppurativa, dermatite atopica caratterizzata da colonizzazione ad opera di Stafilococco aureo, impetigine, infezioni interdigitali, follicoliti, foruncoli, infezioni post traumatiche ed infezioni su pelle ustionata.
Alla presente invenzione, nelle sue forme di realizzazione illustrate e descritte, allo scopo di soddisfare esigenze contingenti e specifiche, un tecnico del ramo potrà apportare numerose modifiche, tutte peraltro contenute nell'ambito di protezione dell'invenzione, quale definito dalle rivendicazioni di seguito riportate.
Claims (11)
- RIVENDICAZIONI 1. Composizione antibatterica comprendente trietilcitrato e un peptide costituito da 15 amminoacidi con sequenza FAKALKALLKALKAL-NH2, in cui F Ã ̈ fenilalanina, A Ã ̈ alanina, K Ã ̈ lisina e L Ã ̈ leucina.
- 2. Composizione secondo la rivendicazione 1, comprendente trietilcitrato in concentrazione tra 0,05% p/p e 99,9% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 45% p/p, più preferibilmente ancora tra 2,5% p/p e 15% p/p.
- 3. Composizione secondo la rivendicazione 1 o 2, comprendente detto peptide in concentrazione tra 0,002% p/p e 0,5% p/p, più preferibilmente tra 0,010% p/p e 0,35% p/p, più preferibilmente ancora tra 0,010% p/p e 0,125% p/p.
- 4. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, comprendente inoltre uno o più aqenti sinerqisti scelti tra acidi prassi essenziali compresi i relativi sali ed esteri, acido salicilico compresi i suoi sali ed esteri, zinco e suoi derivati, acido azelaico, acido octadecenedioico, antibiotici.
- 5. Composizione secondo la rivendicazione 4, comprendente detti uno o più aqenti sinerqisti del qruppo costituito da acidi prassi essenziali e relativi sali ed esteri in concentrazione compresa tra 0,01% e 50% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 15% p/p, e più preferibilmente ancora scelti tra acido linoleico, acido linolenico e acido oleico o una loro combinazione.
- 6. Composizione secondo la rivendicazione 4 o 5, comprendente detti uno o più agenti sinergisti del gruppo costituito da acido salicilico e dai suoi sali ed esteri in concentrazione compresa tra 0,2% p/p e 15% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 2% p/p.
- 7. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 4-6, comprendente detti uno o più agenti sinergisti del gruppo costituito da zinco e suoi derivati in concentrazione compresa tra 0,2% p/p e 5% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 2% p/p, e più preferibilmente ancora scelti tra zinco ossido, zinco solfato, zinco piritione, zinco mandelato, zinco acetato, zinco glicolato, zinco salicilato, zinco lattato, zinco piruvato o una loro combinazione.
- 8. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 4-7, comprendente detti uno o più agenti sinergisti del gruppo costituito da acido azelaico e acido octadecenedioico in concentrazione compresa tra 1% p/p e 65% p/p, più preferibilmente tra 2% p/p e 15% p/p.
- 9. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 4-8, comprendente detti uno o più agenti sinergisti del gruppo costituito da antibiotici in concentrazione compresa tra 0,1% p/p e 5% p/p, più preferibilmente tra 0,5% p/p e 2% p/p, più preferibilmente ancora scelti tra isoxacilline tra cui oxacillina, cloxacicillina, dicloxacicillina, nafcillina e flucloxacillina; aminopenicilline tra cui ampicillina e amoxicillina; carbossipenicilline tra cui carbenicillina e ticarcillina; ureidopenicilline tra cui mezlocillina, piperacillina, azlocillina e apalcillina; benzilpenicillina, sulfadimidina, sulfamerazina, streptomicina, sulfadiazina, clorotetraciclina, d oramienicolo, neomicina, ossitetraciclina, penicillina G procaina, eritromicina, benzatina penicillina, spiramicina, tetraciclina, tiamfenicolo, vancomicina, fenossimetilpenicillina, colistina, demeclociclina, virginiamicina, meticillina, metronidazolo, ampicillina, spectinomicina, sulfametossazolo, trimetoprim, cloxacillina, acido fusidico, fusafungina, limeciclina, gentamicina, doxaciclina, carbenicillina, rifampicina, clindamicina, cefalexina, cefazolina, pivampicillina, tinidazolo, amoxicillina, cefradina, minociclina, pristinamicina, fosfomicina, talampicillina, tobramicina, bacampicillina, ticarcillina, amikacina, azlocillina, cefadroxil, cefamandolo, cefossitina, cefuroxima, mezlocillina, pivmecillinam, cefaclor, cefmetazolo, cefotaxima, cefsulodina, piperacillina, amoxicillina/acido clavulanico (co-amoxiclav), cefperazone, cefotiam, cefsulodina latamoxef netelmicina apalcillina ceftriaxone, micronomicina, cefmenossima, ceftazidima, ceftirossima, norfloxacina, cefonicid, cefotetan, temocillina, cefpiramide, imipenem/cilastatina, ofloxacina, mupirocina, aztreonam, cefoperazone/sulbactam, ticarcillina/acido clavulanico, ampicillina/sulbactam, cefixima, roxitromicina, sultamicillina, ciprofloxacin, rifaximina, azithromicina, cefaclor, flomoxef, isepamicina, midecamicina, rifapentine, teicoplanina, cefpodoxima, enrofloxacina, Ioniefloxacina, arbekacina, cefozidima, claritromicina, cefdinir, cefetamet, cefpirome, cefprozil, ceftibufene, fleroxacina, loracarbef, piperacillina/tazobactam, rufloxacina, brodimoprim, diritromicina, levofloxacina, nadifloxacina, panipenem/betamipron, spariloxacina, cefepime, quinupristina-dalfopristina, linezolid, telitromicina, daptomicina, tigeciclina, doripenem, telavancin o una loro combinazione .
- 10. Composizione antibatterica secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, per uso topico su cute lesa o non lesa, mucose compresa la mucosa orale ed annessi cutanei, nel trattamento di acne, idrosadenite suppurativa o non suppurativa, dermatite atopica con colonizzazione di stafilococco aureo, impetigine, infezioni interdigitali, follicoliti, foruncoli, infezioni post traumatiche e infezioni su pelle ustionata.
- 11. Formulazione cosmetica e/ii farmaceutica comprendente una composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti ed un veicolo fisiologicamente accettabile.
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