ES2675528T3 - Derivados de aminotriazina y composición farmacéutica que comprende los mismos - Google Patents

Derivados de aminotriazina y composición farmacéutica que comprende los mismos Download PDF

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Abstract

Un compuesto de fórmula:**Fórmula** o su sal farmacéuticamente aceptable.

Description

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DESCRIPCIÓN
Derivados de aminotriazina y composición farmacéutica que comprende los mismos
Campo de la Invención
La presente invención se refiere a un compuesto útil para el tratamiento de enfermedades o condiciones asociadas con el receptor P2X, específicamente el receptor P2X3 y/o P2X2/3, y una composición farmacéutica que comprende este compuesto.
Antecedentes de la Invención
Se conoce el trifosfato de adenosina (ATP, por sus siglas en inglés) porque sirve como una fuente de energía en las células y un sustrato de fosforilación, así como también un mensajero extracelular. Se conoce que el ATP es liberado de una célula por varias estimulaciones tal como lesión celular, inflamación, estímulos nociceptivos, niveles de oxígeno en sangre reducidos y también se conocer porque será liberado junto con otro mensajero a partir de una terminal nerviosa sensorial primaria. El ATP así liberado es mediador de varias traducciones de señal celular a través de un receptor ATP (Documento no de patente 4, Documento no de patente 5).
El receptor ATP es categorizado en la familia P2X ionotrópica y familia P2Y acoplado a la proteína G. Para la familia P2Y, se han reportado siete subtipos, y un miembro de esta familia forma una estructura homo-trimérica o una estructura hetero-trimérica junto con otro miembro de este subtipo y funciona como un canal de catión no específico (Documento no de patente 6)
El ATP se conoce por provocar dolor y estudios con metodologías agénicas y de interferencia génica de P2X3 se han mostrado por que la transmisión de dolor crónico es mediada por el receptor P2X3. Los receptores P2X3 son expresados de una manera específica o del nervio sensorial periférico para formar un complejo homo o complejo hetero con P2X2 (P2X2/3) (Documento no de patente 1).
Por último, el compuesto A-317491 se reportó como un antagonista específico a los receptores P2X3 y P2X2/3. El A- 317491 es un derivado tri-sustituido-N-[(1S)-1,2,3,4-tetrahidro-1-naftalenil]benzamida representado por la fórmula:
Fórmula Química 1
imagen1
(Documento de Patente 1). Se reportó por exhibir una actividad antagonista a receptores P2X3 y P2X2/3 y acción analgésica en modelo de dolor neuropático y modelo de dolor inflamatorio en ratas (Documento no de patente 7). Esto indica que la sensación de dolor es transmitida mediante los receptores P2X3 o P2X2/3 y que un compuesto que tiene una actividad antagonística del receptor P2X3 o P2X2/3 es útil como un analgésico. También, los compuestos que exhiben la actividad antagonística del receptor P2X3 o P2X2/3 se describen en los Documentos de Patente 2-7.
Adicionalmente, se reportó recientemente que el reflejo vesical es fuertemente inducido en ratones agénicos P2X3 (Documento no de patente 2), lo que sugiere que un compuesto que tiene actividad antagonística de P2X3 es útil en el tratamiento de enfermedades causadas por vejiga hiperactiva. También, los compuestos que exhiben actividad antagonística del receptor P2X3 o P2X2/3 se describen en los Documentos de Patente 2-7.
Además, el receptor P2X3 se expresa en cuerpos neuroepiteliales (NEB) del pulmón (Documentos no de patente 9), el
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ATP induce tos (Documento no de patente 10), y similares, por lo tanto se sugiere que el receptor P2X3 participa en la traducción de la señal en el sistema respiratorio (Documento no de patente 11). Estos reportes sugieren la posibilidad de que los compuestos que exhiben la actividad antagonística del receptor P2X3 son útiles en el tratamiento de enfermedades respiratorias.
Por último, el compuesto A-31749 conocido como un antagonista específico a los receptores P2X3 y P2X2/3 se reportan por inhibir una actividad de la fibra A vagal aferente en enfermedades pulmonares (Documento de Patente 16). Adicionalmente, los derivados de bifenil y fenil-piridina se reportan como un antagonista específico a los receptores P2X3 y P2X2/3, y sugiere que los derivados bifenil y fenil-piridina exhiben efecto mejorado en las enfermedades respiratorias en asma y modelo de pulmón (Documento de Patente 17). También, los compuestos que exhiben actividad agonística del receptor P2X3 o P2X2/3 se describen en los Documentos de Patente 2-7).
Los Documentos de Patente 8, 9, 10, 11 y 15 y el Documento no de patente 14 describen compuestos que tienen similar estructura a los compuestos de la presente invención pero no describen efecto analgésico y actividad antagonística del receptor P2X3 o P2X2/3. El Documento no de patente 8 describe compuestos que tienen similar estructura a los compuestos de la presente invención y tienen efecto analgésico, pero no describe la actividad antagonística del receptor P2X3 ni de P2X2/3. El documento de Patente 12 y los Documentos no de patente 12 y 13 describen un compuesto que tiene actividad antagonística del receptor P2X3, pero las estructuras son diferentes con aquellas de los compuestos de la presente invención. Los Documentos de Patente 13, 14 y 18 describen compuestos que tienen actividad antagonística del receptor P2X3 P2X2/3 con una estructura de triazina.
Técnica Anterior
Documentos de Patente
Documento de Patente 1 WO02/094767
Documento de Patente 2 WO2005/095359
Documento de Patente 3 US2007/0037974
Documento de Patente 4 US2007/0049758
Documento de Patente 5 US2007/0049610
Documento de Patente 6 US2007/0049609
Documento de Patente 7 US2007/0049534
Documento de Patente 8 JP12-072757A
Documento de Patente 9 WO2006/104713
Documento de Patente 10 WO2006/104715
Documento de Patente 11 WO2006/102112
Documento de Patente 12 WO2010/051188
Documento de Patente 13 WO2010/092966
Documento de Patente 14 WO2012/020749
Documento de Patente 15 WO2011/017347
Documento de Patente 16 WO2006/012639
Documento de Patente 17 WO2010/149578
Documento de Patente 18 WO2013/089212
Documentos no de patente
Documento no de patente 1 Neuroscientist (2005), 11, pp.345-356 Documento no de patente 2 J. Physiol. 567.2 (2005), pp.621-639
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Documento no de patente 3 Expert Opin. Ther. Patens (2006), 16(8), pp.113-1127
Documento no de patente 4 J. Physiology (2003), 554(2), pp.301-308
Documento no de patente 5 J. Physiology (2003), 553(3), pp.683-694
Documento no de patente 6 Pflungers Arch Eur J physiol (2006), p.452, 513-537
Documento no de patente 7 PNAS (2002), 99(26), pp.17179-17184
Documento no de patente 8 Journal of Medicinal Chemistry (2008), 51(23), pp.7635-7639
Documento no de patente 9 Brouns et al. Am J Respir Cell Mol Biol (2000), 23, pp.52-61
Documento no de patente 10 Basoglu et al. Chest. (2005), 128(4), pp.1905-9
Documento no de patente 11 Adriaensen et al. THE ANATOMICAL RECORD PART A (2003), 270A, pp.25-40 Documento no de patente 12 Cantin, L.-D. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. (2012), 22(7), pp.2565-2571 Documento no de patente 13 Jahangir, A. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. (2009), 19, pp.1632-1635 Documento no de patente 14 Chemistry--A European Journal (2012), 18(5), pp.1476-1486
Breve Descripción de la Invención Problemas a ser resueltos por la Invención
La presente invención proporciona un compuesto nuevo que tiene una actividad antagonística del receptor P2X3 y/o P2X2/3. También se proporciona una composición farmacéutica que tiene una actividad antagonística del receptor P2X3 y/o P2X2/3.
Medios para Resolver el Problema
A través de su búsqueda extensiva para resolver los problemas mencionados anteriormente, los inventores han encontrado nuevos compuestos que se unen específicamente a los receptores P2X3 y/o P2X2/3 y exhiben una actividad antagonística, y nuevos compuestos que se unen específicamente al receptor P2X2/3 y/o P2X2/3. Adicionalmente, han descubierto composiciones farmacéuticas que tienen actividad antagonística a P2X3 y/o P2X2/3.
Los compuestos y composiciones farmacéuticas abarcados por la presente invención producen excelentes resultados del efecto inhibitorio del receptor P2X3, efecto inhibitorio del receptor P2X3 en la presencia de albúmina en suero de rata (en lo sucesivo referido como RSA) y similares. Los compuestos abarcados por la presente invención también producen excelentes resultados en el ensayo de inhibición de la enzima CYP, ensayo FAT, ensayo de solubilidad, ensayo de estabilidad metabólica, ensayo de la actividad inhibitoria hERG, ensayo de farmacocinética (ensayo de biodisponibilidad, ensayo de separación del cuerpo total, etc.) y/o ensayo de unión a la proteína y similares.
Esta invención se refiere a lo siguiente (1) a (5)
(1) Un compuesto de Fórmula (I):
Fórmula Química 2
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imagen2
en donde,
Ra y Rb ambos son átomos de hidrógeno, o Ra y Rb son tomados juntos para formar oxo, tioxo o =N-Rx;
Rd y Re ambos son átomos de hidrógeno, o Rd y Re son tomados juntos para formar oxo, tioxo o =N-Ry;
Rx y Ry son cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, alquinilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilo sustituido o no sustituido, un grupo heterocíclico no aromático sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido;
R4a es cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido; R4b es cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido;
o R4a y R4b unidos al mismo átomo de carbono son tomados juntos para formar oxo o tioxo;
n es un número entero de 1 hasta 4;
R2 es cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilo sustituido o no sustituido, un grupo heterocíclico no aromático sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido;
R9 es cada uno independientemente halógeno, hidroxi, carboxi, ciano, nitro, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, alquinilo sustituido o no sustituido, alquiloxi sustituido o no sustituido, alqueniloxi sustituido o no sustituido, alquiniloxi sustituido o no sustituido, alquiltio sustituido o no sustituido, alqueniltio sustituido o no sustituido, alquiniltio sustituido o no sustituido, acilo sustituido o no sustituido, alquiloxicarbonilo sustituido o no sustituido, alqueniloxicarbonilo sustituido o no sustituido, alquiniloxicarbonilo sustituido o no sustituido, carbamoilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, sulfamoilo sustituido o no sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilo sustituido o no sustituido, un grupo heterocíclico no aromático sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, cicloalquiloxi sustituido o no sustituido, cicloalqueniloxi sustituido o no sustituido, heterocicliloxi no aromático sustituido o no sustituido, ariloxi sustituido o no sustituido o heteroariloxi sustituido o no sustituido;
R9 es cada uno independientemente halógeno, hidroxi, carboxi, ciano, nitro, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, alquinilo sustituido o no sustituido, alquiloxi sustituido o no sustituido, alqueniloxi sustituido o no sustituido, alquiniloxi sustituido o no sustituido, alquiltio sustituido o no sustituido, alqueniltio sustituido o no sustituido, alquiniltio sustituido o no sustituido, acilo sustituido o no sustituido, alquiloxicarbonilo sustituido o no sustituido, alqueniloxicarbonilo sustituido o no sustituido, alquiniloxicarbonilo sustituido o no sustituido, carbamoilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, sulfamoilo sustituido o no sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilo sustituido o no sustituido, un grupo heterocíclico no aromático sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, cicloalquiloxi sustituido o no sustituido, cicloalqueniloxi sustituido o no sustituido, heterocicliloxi no aromático sustituido o no sustituido, ariloxi sustituido o no sustituido o heteroariloxi sustituido o no sustituido;
s y s' son cada uno independientemente un numero entero de 0 hasta 3;
R20a es cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, hidroxi, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, alquinilo sustituido o no sustituido, o alquiloxi sustituido o no sustituido;
R20b es cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, hidroxi, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, alquinilo sustituido o no sustituido, o alquiloxi sustituido o no sustituido;
o R20a y R20b unidos al mismo átomo de carbono o los diferentes átomos de carbono son tomados juntos para formar cicloalcano sustituido o no sustituido, cicloalqueno sustituido o no sustituido, o un anillo heterocíclico no aromático 5 sustituido o no sustituido; siempre que todos los R20a y R20b no son átomos de hidrógeno al mismo tiempo;
u es un número entero de 1 hasta 4; y
R13 es un átomo de hidrógeno o alquilo sustituido o no sustituido, que es un compuesto de fórmula:
imagen3
imagen4
o su sal farmacéuticamente aceptable.
(2) Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de conformidad con el anterior (1), o su sal farmacéuticamente aceptable.
5 (3) La composición farmacéutica de conformidad con el anterior (2), en donde la composición tiene una actividad
antagonística del receptor p2x3 y/o p2x2/3.
(4) Un compuesto de conformidad con el anterior (1), o su sal farmacéuticamente aceptable, para usarse en un método para tratar y/o prevenir una enfermedad relacionada con el receptor P2X3 y/o P2X2/3.
(5) El compuesto para usarse de conformidad con el anterior (4), o su sal farmacéuticamente aceptable, para usarse en 10 un método para tratar y/o prevenir dolor crónico, trastorno de la orina, o enfermedad respiratoria.
Efecto de la Invención
El compuesto de la invención tiene una actividad antagonística del receptor p2x3 y/o p2x2/3 y es útil en el tratamiento de enfermedades o condiciones asociadas con un receptor P2X3 y/o P2X2/3.
Modo para llevar a cabo la invención
Lo siguiente es un método general para sintetizar los compuestos de esta invención. Los materiales de partida y 5 reactivos utilizados para sintetizar estos compuestos son comercialmente disponibles o pueden ser manufacturados de conformidad con un método ampliamente conocido en este campo usando compuestos comercialmente disponibles.
Por ejemplo, los compuestos de la fórmula (I) descritos en esta invención pueden ser manufacturados por la siguiente ruta de síntesis, o por referencia a lo que se describe en los documentos WO2010/092966 y WO2012/020749 si es necesario.
10 Método A
Esquema de reacción 47
NH li I NHfc
h pX R^-NCO 0 H) ° (II)’ 0 rA'' l/A H
Etapa 1
(¡)
(Si)
(CR<aR4b)n— Lg1
________W ,
Etapa 2
O
X
N N
(CR4aR4b)r
(V)
Rn-x-n
(vi)
--------»
Etapa 3
O
A ^
N N
(H)
15
en donde, Lg es un grupo colgante representado por la fórmula: Fórmula Química 48
imagen5
R3 es un grupo representado por la fórmula: Fórmula Química 49
imagen6
Rc es un grupo representado por la fórmula: 20 Fórmula Química 50
5
10
15
20
25
p20a p^20b
co2r13
10 27 2
R es alquilo, R es alquilo, Z es un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, X es NH, n' es un número entero de 0 hasta 3, Lg1 es un grupo colgante y otros símbolos son como se definen anteriormente.
(Etapa 1)
El compuesto (i) o su clorhidrato o bromato se hace reaccionar con isocianato (ii) o 1-carbamoil imidazol (ii)' en un solvente, tal como N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, N,N'-dimetiloimidazolidinona y dimetilsulfóxido, en la presencia de una base, tal como DBU, trietilamina y piridina (preferiblemente DBU) a una temperatura entre -20 y 50 °C, preferiblemente a una temperatura entre -10°C y por debajo de cero. Después de esto, el compuesto (iii) puede ser manufacturado haciendo reaccionar la mezcla reactiva con un agente de carbonilación o tiocarbonilación, tal como 1,1'- carbonildiimidazol, 1,1'-tiocarbonildiimidazol, fósgeno, tiofósgeno y trifósgeno, etc., y una base, tal como DBU, trietilamina o piridina (preferiblemente DBU) a una temperatura entre -20 y 50°C, preferiblemente a una temperatura entre -10°C y por debajo de cero.
(Etapa 2)
El compuesto (v) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (iii) con el compuesto (iv) en un solvente, tal como acetonitrilo, acetona, DMF y DMSO, en la presencia de una base, tal como carbonato de potasio y carbonato de sodio, a una temperatura entre 50 °C a reflujo, preferiblemente a reflujo.
Los ejemplos de un grupo colgante incluyen halógeno y -OSO2 (CtF2t+1) en donde t es un número entero de 1 hasta 4. Como halógeno, cloro, yodo y bromo son preferidos. Como grupo -OSO2 (CtF2t+1), el grupo -OTf (trifluorometansulfonato) es preferido.
(Etapa 3)
El compuesto indicado por la Fórmula (II') puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (v) con el compuesto (vii) en un solvente, tal como NMP, DMF y DMSO, o bajo condiciones libres de solvente bajo irradiación de microondas a una temperatura entre 150°C y 250°C, preferiblemente a una temperatura entre 200°C y 230°C, o en un solvente, tal como t-butanol, en la presencia de un ácido, tal como ácido acético, a una temperatura entre 60°C y 150°C, preferiblemente a una temperatura entre 80°C y 120°C.
Usando isocianato ópticamente activo (ii) se permite sintetizar el compuesto ópticamente activo (II').
Método B
Esquema de reacción 51
imagen7
imagen8
imagen9
R*
(x)
5
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2 3
en donde Hal y Hal son halógeno y otros símbolos son como se definen anteriormente.
(Etapa 1)
El compuesto (ix) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (vii) con un agente de alquilación (viii), tal como yoduro de metilo y yoduro de etilo, en un solvente, tal como metanol y etanol, a una temperatura entre - 40°C y 30°C, preferiblemente por debajo de cero.
(Etapa 2)
El compuesto (x) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (ix) con isocianato, tal como N- (clorocarbonil)isocianato, en un solvente, tal como diclorometano, cloroformo, 1,2-dicloroetano, en la presencia de una base, tal como trietilamina y N,N-diisopropiletilamina, a una temperatura entre - 20°C y 30°C, preferiblemente por debajo de cero.
(Etapa 3)
El compuesto (xi) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (x) con el compuesto (vi) en un solvente, tal como t-butanol, isopropanol, etanol y acetonitrilo, en la presencia de un ácido, tal como ácido acético, ácido fórmico y ácido metansulfónico, a reflujo.
(Etapa 4)
El compuesto representado por Formula (II") puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (xi) con el compuesto (xii) en un solvente, tal como DMF o NMP, etc, en la presencia de una base, tal como t-butóxido de potasio, o hidruro de sodio, a una temperatura entre 40°C y 100°C, preferiblemente a una temperatura entre 50°C y 70°C.
Usando el compuesto ópticamente activo (xii) permite sintetizar el compuesto ópticamente activo(N").
Método C
Esquema de reacción 52
imagen10
-i
en donde Pg es un grupo protector hidroxi apropiado, s es un número entero de 1 hasta 4 y otros símbolos son como se definen anteriormente.
(Etapa 1)
El compuesto (xiii) puede ser manufacturado haciendo reaccionar una mezcla del compuesto (x) obtenido por el método B, y el alcohol (xii) cuyo grupo hidroxilo es protegido, tal como 2-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)etanol en un solvente, tal como THF o dioxano, etc, con trifenilfosfina, y azodicarboxilato dietílico, etc.
(Etapa 2)
El compuesto (xiv) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (xiii) con el compuesto (vi) en la presencia de un ácido, tal como ácido fórmico o ácido acético, etc., a reflujo.
Método E
Esquema de reacción 54
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en donde R13 es alquilo sustituido o no sustituido, R20a y R20b son hidrógeno, halógeno, ciano, hidroxi, carboxi, sulfo, alquiloxi sustituido o no sustituido, alqueniloxi sustituido o no sustituido, alquiniloxi sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilo sustituido o no sustituido, un grupo heterocíclico no aromático sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, alquiloxicarbonilo sustituido o no sustituido, alqueniloxicarbonilo sustituido o no sustituido, alquiniloxicarbonilo sustituido o no sustituido, carbamoilo sustituido o no sustituido, sulfamoilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, imino sustituido o no sustituido, guanidilo sustituido o no sustituido o R20a y R20b son tomados juntos para formar oxo o tioxo, u es un número entero de 1 hasta 4, y otros símbolos son como se definen anteriormente.
(Etapa 1)
El compuesto (xx) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (x) obtenido por el método B con el compuesto (xix) en un solvente, tal como DMF, NMP o THF, etc., en la presencia de una base, tal como DBU, t-butóxido de potasio o hidruro de sodio, etc., a una temperatura entre 0°C y 80°C, preferiblemente a una temperatura entre 30°C y 50°C.
(Etapa 2)
El compuesto (xxi) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (xx) con el compuesto (vi) en un solvente, tal como t-butanol, isopropanol, etanol o acetonitrilo, etc., en la presencia de un ácido tal como ácido fórmico, ácido acético o ácido metansulfónico, etc., a reflujo.
(Etapa 3)
El compuesto (xxii) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (xxi) con una solución, tal como solución acuosa de hidróxido de litio, solución acuosa de hidróxido de sodio y solución acuosa de hidróxido de potasio, en un solvente, tal como metanol o etanol, etc., o en una mezcla de tal solvente y un solvente, tal como THF o dioxano, etc.
Método L
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O
O
O
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HO-Rc
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F^-X-H
(vi)
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(CR*iR4b)n Etapa i
(xxxviii)
Etapa 2
R3'X^'N'^íO
(CR4aR4b)n
(x)
R2
(ixl)
R2
(®
en donde los símbolos en la fórmula son como se definen anteriormente.
(Etapa 1)
El compuesto (ix1) puede ser manufacturado haciendo reaccionar una mezcla del compuesto (x) obtenido por el método B y el alcohol (xxxviii) en un solvente, tal como THF o dioxano, etc., con trifenilfosfina, etc., y azodicarboxilato dietílico, etc.
(Etapa 2)
El compuesto (II) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (ix1) con el compuesto (vi) en la presencia de un ácido, tal como ácido fórmico o ácido acético, etc., a reflujo.
Usar el alcohol ópticamente activo (xxxviii) permite sintetizar el compuesto ópticamente activo (II).
El alcohol usado como un intermediario (xxxviii) es comercialmente disponible o puede ser manufacturado de conformidad con un método especificado en los siguientes documentos:
Tetrahedron (1993), 49(11), 2325-44.
Chemical Communications (2008), (47), 6408-6410.
Tetrahedron (1990), 46(24), 8207-28.
Synlett (1994), (3), 199-200.
Bulletin of the Chemical Society of Japan (1994), 67(8), 2244-7 Canadian Journal of Chemistry (1996), 74, 1731-1737 Chemistry--A European Journal (2010), 16(2), 577-587 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2009), 19(21), 6196-6199.
Chemische Berichte (1985), 118(10), 3966-79.
Tetrahedron: Asymmetry (1992), 3(4), 515-16.
Organic Letters (1999), 1(6), 957-959.
Chimia (1986), 40(5), 172-3.
Método O
Esquema de reacción 59
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en donde R25 es alquilo sustituido o no sustituido o alcoxi sustituido o no sustituido, R26 es bromo o yodo, y otros símbolos son como se definen anteriormente.
(Etapa 1)
El compuesto (xlvi) se puede obtener a partir del compuesto (xliv) en la presencia de ácido Lewis o ácido trifluoroacético, etc., bajo condiciones libres de solvente o en un solvente apropiado a una temperatura entre 0°C y reflujo.
(Etapa 2)
El compuesto (xlviii) puede ser manufacturado haciendo reaccionar el compuesto (xlvi) con el compuesto (xlvii) en un solvente, tal como THF o dioxano, etc., en la presencia de un catalizador de paladio y una solución, tal como solución acuosa de carbonato de potasio, carbonato de cesio o carbonato de sodio, etc., a una temperatura entre 50°C y reflujo, preferiblemente a reflujo, o bajo irradiación de microondas a una temperatura de 120°C y 200°C, preferiblemente a una temperatura entre 130°C y 150°C.
Los compuestos de Formula (I) no están limitados a isómeros específicos, sino incluyen todos los isómeros posibles (por ejemplo, isómeros ceto-enol, isómeros de imina-enamina, diastereoisómeros, enantiómeros, rotámeros o similares), racematos o mezclas de los mimos. Por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) incluye el siguiente tautómero.
Fórmula Química 95
Ra Rb n
C
N NRd
N N Re
H (C(R4a)(R4b))n
R2
Ras Rb
Rc
H'N N
N N
Re
(C(R4a)(R4b))n
R2
d
Además, uno o más átomos de hidrógeno, átomos de carbono u otros átomos del compuesto de Fórmula (I) pueden ser reemplazados por un isótopo del átomo de hidrógeno, átomo de carbono u otros átomos. Los compuestos de Fórmula (I) incluyen todas las formas radioetiquetadas de compuestos de Fórmula (I). La “radioetiqueta”, “forma radioetiquetada” y similares del compuesto de Fórmula (I) están abarcados por la presente invención y son útiles como una herramienta de búsqueda y/o diagnóstico en los estudios de farmacocinética del metabolismo en ensayos de unión. También es útil para un medicamento.
Uno o más átomos de hidrógeno, carbón y/u otros en los compuestos de Formula (I) pueden ser reemplazados con isotopos de hidrógeno, carbono y/u otros átomos respectivamente. Ejemplos de isótopos incluyen hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, fluoro, yodo y cloro, tal como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, 123I
y 36Cl respectivamente. Los compuestos de Formula (I) incluyen los compuestos reemplazados con estos isótopos. Los compuestos reemplazados con los isótopos anteriores son útiles como medicinas e incluyen todos los compuestos radioetiquetados del compuesto de Fórmula (I). Un “método de radioetiquetado” en la manufactura de los “compuestos radioetiquetados” está abarcado por la presente invención, y los “compuestos radioetiquetados” son útiles para estudios en las farmacocinéticas de fármaco metabolizado, estudios en ensayos de unión y/o herramientas de diagnóstico.
Un compuesto radietiquetado de los compuestos de Fórmula (I) puede ser preparado usando métodos bien conocidos en este campo de la invención. Por ejemplo, un compuesto etiquetado con tritio de Fórmula (I) puede ser preparado introduciendo un tritio a un cierto compuesto de Fórmula (I), a través de una reacción de deshalogenación catalítica usando tritio. Este método comprende hacer reaccionar con un precursor apropiadamente halogenado del compuesto de
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Fórmula (I) con gas de tritio en la presencia de un catalizador apropiado, tal como Pd/C, y en la presencia o ausencia de una base. El otro método apropiado para preparar un compuesto etiquetado con tritio pueden ser referidos a “Isotopes in the Physical and Biomedical Sciences, Vol. 1, Labeled Compounds (Part A), Chapter 6 (1987)”. Un compuesto etiquetado con 14C puede ser preparado usando una materia prima que tiene 14C.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula (I) incluyen, por ejemplo, sales con metal alcalino (por ejemplo, litio, sodio, potasio o similares), metal alcalinotérreo (por ejemplo, calcio, bario o similares), magnesio, metales de transición (por ejemplo, zinc, fierro o similares), amoníaco, bases orgánicas (por ejemplo, trimetilamina, trietilamina, diciclohexilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, meglumina, etilendiamina, piridina, picolina, quinolina o similares) o aminoácidos, o sales con ácidos inorgánicos (por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido carbónico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido yodhídrico o similares) o ácidos orgánicos (por ejemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido trifluoroacético, ácido cítrico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido mandélico, ácido glutárico, ácido málico, ácido benzoico, ácido ftálico, ácido ascórbico, ácido bencensulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico o similares). Especialmente, salte con ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido tartárico, ácido metansulfónico y similares están incluidas. Estas sales pueden ser formadas por los métodos usuales.
Los compuestos de Fórmula (I) de la presente invención o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables pueden formar solvatos (por ejemplo, hidratos o similares) y/o polimorfos de cristal. La presente invención abarca estos varios solvatos y polimorfos de cristal. Los “solvatos” pueden ser aquellos en donde cualquiera de los números de moléculas de solvente (por ejemplo, moléculas de agua o similares) son coordinados con los compuestos de Fórmula (I). Cuando los compuestos de Fórmula (I) o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables se permiten permanecer en la atmósfera, los compuestos pueden absorber agua, resultando en la unión del agua adsorbida o formación de hidratos. La recristalización de los compuestos de Fórmula (I) o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables puede producir polimorfos de cristal.
Los compuestos de Fórmula (I) o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables pueden formar profármacos. Los profármacos son derivados de los compuestos de la presente invención que tienen grupos químicamente o metabólicamente degradables, y compuestos que son convertidos a los compuestos farmacéuticamente activos de la presente invención a través de solvólisis o bajo condiciones fisiológicas in vivo. Los profármacos incluyen compuestos que son convertidos a los compuestos de Fórmula (I) a través de oxidación enzimática, reducción, hidrólisis o similares bajo condiciones fisiológicas in vivo, los compuestos que son convertidos a los compuestos de Fórmula (I) a través de hidrólisis por ácido gástrico etc., y similares. Los métodos para la selección y preparación de derivados de profármaco adecuados se describen en, por ejemplo, “Design of Prodrugs, Elsevier, Amsrdam, 1985”. Los profármacos mismos pueden tener alguna actividad.
Cuando los compuestos de Fórmula (I) o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables tienen grupo(s) hidroxilo, los profármacos incluyen derivados aciloxi, y derivados sulfoniloxi que son preparados mediante, por ejemplo, hacer reaccionar compuestos que tienen grupo(s) hidroxilo con haluro de ácido adecuado, anhídrido de ácido adecuado, cloruro de sulfonilo adecuado, anhídrido de sulfonilo adecuado y anhídrido mezclado, o con un agente de condensación. Por ejemplo, incluyen CH3COO-, C2H5COO-, terc-BuCOO-, C15H31COO-, PhCOO-, (m-NaOOCPh)COO-,
NaOOCCH2CH2COO-, CH3CH(NH2)COO-, CH2N(CH3)2COO-, CH3SO3-, CH3CH2SO3-, CF3SO3-, CH2FSO3-,
CF3CH2SO3-, p-CH3O-PhSO3-, PhSO3- y p-CH3PhSO3.
El compuesto de la fórmula (I) tiene una actividad antagonística en el receptor P2X3 y/o P2X2/3 receptor, y por lo tanto, es útil como un agente terapéutico para enfermedades asociadas con un receptor P2X3 y/o P2X2/3. Puesto que el receptor P2X3 y/o P2X2/3 se cree está asociado con el dolor, enfermedades en el sistema urinario y enfermedad respiratoria (Nature 407, 26, 1011-1015 (2000), Nature, Vol.407, No.26, 1015-1017 (2000), Documento no de patente 1, Documento no de patente 2, Documento no de patentes 9-11 etc.), el compuesto de la invención es útil en el tratamiento, alivio de síntomas o prevención de las enfermedades, tal como por ejemplo, dolor asociado con artritis reumatoide, dolor asociado con osteoartritis, cefalea, migraña, dolor orofacial, dolor de dientes, glossagra, dolor asociado con artrosis temporomandibular, neuralgia trigeminal, dolor de hombros, dolor asociado con hernia del disco intervertebral, dolor asociado con espondilosis deformante cervical, dolor asociado con estenosis del canal espinal, dolor asociado con síndrome de salida torácica, dolor asociado con síndrome de lesión del plexo braquial traumático, dolor asociado con síndrome de pinzamiento del hombro, dolor asociado con latigazo cervical, dolor de pecho, dolor abdominal, dolor cólico, dolor asociado con colelitiasis, dolor asociado con pancreatitis, dolor asociado con cálculos urinarios, dolor asociado con síndrome del intestino irritable, dolor de espalda lumbar, ciática, dolor asociado con fractura ósea, dolor asociado con osteoporosis, dolor de articulación, dolor asociado con gota, dolor asociado con síndrome de la cauda equina, dolor asociado con espondilitis anquilosante, músculo inflamado, dolor asociado con espasmos dolorosos, dolor asociado con síndrome de dolor miofacial, dolor asociado con síndrome de fibromialgia, síndrome del dolor regional complejo, dolor asociado con arteriosclerosis obliterante, dolor asociado con enfermedad de Buerger, dolor asociado con fenómeno de Raynaud, dolor asociado con zoster, dolor cuasálgico, dolor asociado con neuropatía de atrapamiento, dolor asociado
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con síndrome del canal carpal, dolor asociado con diabetes, dolor asociado con síndrome Guillain-Barre, dolor asociado con enfermedad de Hansen, dolor asociado con terapia de fármaco, dolor asociado con terapia de radiación, dolor asociado con lesión espinal, dolor asociado con siringomielia, dolor asociado con apoplejía, dolor talámico, dolor asociado con desaferentación, dolor simpatéticamente mantenido, síndrome ABC, esclerosis múltiple, dolor asociado con enfermedad de la piel, dolor por cáncer, dolor postoperativo, dolor asociado con lesión, dolor asociado con gangrena, dolor asociado con trastorno somatomorfo, dolor asociado con trastorno de somatización, dolor asociado con depresión, dolor asociado con enfermedad de Parkinson, dolor de la articulación de la rodilla, dolor asociado con artritis, dolor neuropático tal como dolor menstrual, dolor intermenstrual, dolor de parto, etc., dolor inflamatorio, dolor nociceptivo, dolor psicogénico, dolores asociados con endometriosis, y similares; vejiga sobrerreactiva, incontinencia de urgencia, incontinencia urinaria por estrés, incontinencia de reflejo, urgencia urinaria, vejiga neurogénica, vejiga inestable, uretritis, infecciones del tracto urinario, cistitis intersticial, cistitis, cáncer de vejiga, trastorno del tracto urinario inducido por quimioterapia, trastornos del tracto urinario asociados con trastornos cerebrales tales como apoplejía etc., disfunción de evacuación, dolor, etc., asociado con hiperplasia prostática, prostatitis, etc., y similares; y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD, por sus siglas en inglés), asma, broncoespasmo, tos crónica, y similares.
“Una composición farmacéutica que tiene un efecto de mejoramiento del trastorno de la orina” incluye una composición farmacéutica para usarse para mejorar el tratamiento y/o prevención del trastorno de la orina.
El compuesto de la presente invención o la composición farmacéutica de la presente invención puede ser un fármaco con efecto secundario reducido tal como efecto en la función motora debido a que tiene una alta afinidad para el receptor ATP, especialmente el receptor P2X3, y también tiene alta selectividad del subtipo y alta selectividad para otros receptores. También, el compuesto abarcado por la presente invención o la composición farmacéutica abarcada por la presente invención es ventajoso debido a su alta actividad inhibidora del receptor P2X3 en la presencia de RSA, alta estabilidad metabólica, alta absorción oral, alta solubilidad, buena biodisponibilidad, baja separación corporal total, vida útil larga, duración de acción prolongada, baja actividad de la inhibición de la enzima hepática, alta fracción no unida en suero y/o alta seguridad, etc.
El compuesto de la presente invención o la composición farmacéutica de la presente invención puede ser un fármaco con alta persistencia después de la administración debido a su baja separación corporal total.
Cuando se administra la composición farmacéutica de la presente invención, puede ser administrada en cualquier método de métodos oralmente y parenteralmente. Los métodos para administración parenteral incluyen dermal, subcutánea, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intraperitoneal, transmucosal, inhalación, transnasal, oftálmica, oído interno o administración vaginal y similares.
En el caso de administración oral, cualquiera de las formas, las cuales son usualmente usadas, tales como formulaciones sólidas orales (por ejemplo, tabletas, polvos, gránulos, cápsulas, píldoras, películas o similares), las formulaciones líquidas orales (por ejemplo, suspensión, emulsión, elixir, jarabe, limonada, esencia, agua aromática, extracto, decocción, tintura o similares) y similares puedan ser preparados de conformidad con el método usual y administrado. Las tabletas pueden ser tabletas recubiertas de azúcar, tabletas recubiertas de película, tabletas recubiertas entéricas, tabletas de liberación sostenida, tabletas de trocisco, tabletas sublinguales, tabletas bucales, tabletas masticables o tabletas que se dispersan oralmente. Los polvos y gránulos pueden ser jarabes secos. Las cápsulas pueden ser cápsulas blandas, microcápsulas o cápsulas de liberación sostenida.
En el caso de administración parenteral, cualquiera de las formas, las cuales son usualmente empleadas, tales como inyecciones, gotas, preparaciones externas (por ejemplo, gotas oftálmicas, gotas nasales, gotas óticas, aerosoles, inhalaciones, lociones, infusión, pomadas, enjuagues bucales, enema, ungüento, yesos, jaleas, cremas, parches, cataplasmas, polvo externo, supositorios o similares) y similares, pueden ser preferiblemente administrados. Las inyecciones pueden ser emulsiones cuyo tipo es Ac/Ag, Ag/Ac, Ac/Ag/Ac, Ag/Ac/Ag o similares.
Los varios aditivos farmacéuticos tales como excipientes, aglutinantes, agentes desintegrantes y lubricantes adecuados para la forma de dosificación pueden ser mezclados como sea necesario en una cantidad efectiva del compuesto de la presente invención, para hacer el compuesto en una composición farmacéutica. Además, la composición farmacéutica puede ser para pacientes pediátricos, pacientes geriátricos, casos serios u operaciones cambiando apropiadamente la cantidad efectiva del compuesto de la presente invención, formulación y/o varios aditivos farmacéuticos. Las composiciones farmacéuticas pediátricas son preferiblemente administradas a pacientes por debajo de 12 o 15 años de edad. Además, las composiciones farmacéuticas pediátricas pueden ser administradas a pacientes quienes tienen por debajo de 27 días de edad después del nacimiento, 28 días hasta 23 meses de edad después del nacimiento, 2 hasta 11 años de edad, 12 hasta 16 años de edad, o 18 años de edad. Las composiciones farmacéuticas geriátricas son preferiblemente administradas a pacientes quienes tienen 65 años de edad o más.
Aunque la dosificación de una composición farmacéutica de la presente invención debe ser determinada en
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consideración de la edad del paciente y peso corporal, el tipo y grado de enfermedades, la ruta de administración y similares, una dosificación oral usual es 0.05 hasta 100 y preferiblemente 0.1 hasta 10 mg/kg/día. Para administración parenteral, aunque la dosificación varía altamente con rutas de administración, una dosificación usual es 0.005 hasta 10 y preferiblemente 0.01 hasta 1 mg/kg/día. La dosificación puede ser administrada en una a varias divisiones por día.
La cantidad de dosificación del fármaco concomitante puede ser apropiadamente seleccionada con base en la dosis clínicamente usada. En adición, la relación de mezclado del compuesto de la presente invención al fármaco concomitante puede ser apropiadamente seleccionada dependiendo del objetivo de administración, ruta de administración, enfermedad objetivo, síntomas, combinación y similares. Por ejemplo, cuando el objetivo de administración es un humano, 0.01 hasta 100 partes en peso del fármaco concomitante puede ser usado, con base en 1 parte en peso del compuesto de la presente invención.
Los siguientes ejemplos si no se reivindican son compuestos de referencia. El significado de cada abreviatura es como sigue:
Me: metilo
TMS: tetrametilsilano
DMSO: dimetilsulfóxido
DMA: dimetilacetamida
DMF: dimetilformamida
THF: tetrahidrofurano
DBU: 1,8-diazabiciclo [5.4.0]undeca-7-eno
NMP: N-metil-2-pirrolidona
HOAt:1-hidroxi-7-azabenzotriazol
HATU: hexafluorofosfato de 2-(7-azabenzotriazol-1 -il)-1,1,3,3-tetrametiluronio PyBOP: hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -il-oxitrispirrolidinofosfonio ta: temperatura ambiente M: mol/L Ejemplo 1
(1) Preparación de trans-3-(4-etoxicarbonilciclobutil)-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona Fórmula Química 96
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A una solución de clorhidrato de trans-3-aminociclobutancarboxilato de etilo (340 mg, 2.3 mmol) en DMA (3.4 mL) se agregaron 1,1-Carbonildiimidazol (496 g, 3.1 mmol) y DBU (0.46 mL, 3.1 mmol) bajo enfriamiento en hielo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 4.5 horas, después se agregaron clorhidrato de 1-amidinopirazol (340 mg, 2.3 mmol) y DBU (0.37 mL, 2.4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 7.5 horas. 1,1- Carbonildiimidazol (564 mg, 3.5 mmol) se agregó a la mezcla de reacción bajo enfriamiento en hielo, después se agregó DBU (0.52 mL, 3.5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50°C por 15 horas. 4 mol/L de ácido clorhídrico (7.5 mL) se agregó a la mezcla de reacción bajo enfriamiento en hielo. El polvo resultante se recolectó por filtración para dar trans-3- (4-etoxicarbonilciclobutil)-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (376 mg, rendimiento: 53%) como polvo blanco.
RMN-1H (6 ppm TMS / DMSO-d6): 1.21 (3H, t, J = 6.9 Hz), 2.40 (2H, t, J = 9.4 Hz), 3.03 (2H, dd, J = 19.4, 9.9 Hz), 3.093.17 (1H, m), 4.12 (2H, q, J = 6.8 Hz), 5.13-5.31 (1H, m), 6.72 (1H, s), 8.05 (1H, s), 8.56 (1H, s), 13.05 (1H, br s).
(2) Preparación de trans-3-(4-etoxicarbonilcidobutil)-1-(4-metilbencil)-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona Fórmula Química 97
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Diisopropiletilamina (0.19 mL, 1.1 mmol) se agregó a una mezcla de trans-3-(4-etoxicarbonilciclobutil)-6-(1-pirazolil)- 5 1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (279 mg, 0.9 mmol), bromuro de 4-metilbencilo (203 mg, 1.1 mmol), y DMA (2.8 mL), y la
mezcla de reacción se agitó a 60°C por 7 horas. La mezcla de reacción se acidificó por 5% de solución acuosa de ácido cítrico, y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró in vacuo para dar trans-3-(4-etoxicarbonilciclobutil)-1-(4-metilbencil)-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin- 2,4(1H,3H)-diona cruda (371 mg, rendimiento:99%) como un sólido amarillo.
10 (3) Preparación de 6-[4-(5-cloro-2-piridiloxi)fenilimino]-3-(4-etoxicarbonilciclobutil)-1 -(4-metilbencil)-1,3,5-triazinan-2,4-
diona (I-172)
Fórmula Química 98
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Una mezcla de trans-3-(4-etoxicarbonilciclobutil)-1-(4-metilbencil)-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (123 mg, 15 0.3 mmol), 4-(5-cloro-2-piridiloxi)anilina (73 mg, 0.33 mmol), y t-butanol (1.2 mL) se calentó bajo reflujo con agitación por
2 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo, y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para dar 6-[4-(5-cloro-2-piridiloxi)fenilimino]-3-(4-etoxicarbonilciclobutil)-1-(4-metilbencil)-1,3,5-triazinan- 2,4-diona (I-172, 140 mg, rendimiento:83%) como un pálido amarillo amorfo.
RMN-1H (CDCl3) 6: 1.28 (3H, t, J = 6.8 Hz), 2.35 (3H, s), 2.50-2.70 (2H, m), 3.03-3.15 (2H, m), 3.16-3.30 (1H, m), 4.17 20 (2H, q, J = 7.0 Hz), 5.20 (2H, s), 5.34-5.58 (1H, m), 6.59-7.08 (4H, m), 7.14 (3H, dd, J = 14.4, 7.8 Hz), 7.49 (2H, d, J = 7.4
Hz), 7.56-7.71 (2H, m), 8.10 (1H, s).
Ejemplo 2
Preparación de 6-[4-(5-cloro-2-p iridiloxi)fenilimino]-3-(4-h idroxicarbonilciclo butil)-1-(4-metilbencil)-1,3,5-triazinan-2,4- diona (I-178)
25 Fórmula Química 99
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4mol/L de hidróxido de litio (0.24 mL, 0.96 mmol) se agregó a una mezcla de 6-[4-(5-cloro-2-piridiloxi)fenilimino]-3-(4- etoxicarbonilcidobutil)-1-(4-metilbencil)-1,3,5-triazinan-2,4-diona (135 mg, 0.24 mmol), metanol (0.7 mL), y THF (0.7 mL), y se agitó a 50°C por 3 horas. 2mol/L de ácido clorhídrico (0.43 mL) se agregó a la mezcla de reacción, y la mezcla resultante se concentró in vacuo. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (cloroformo/metanol) y se pulverizó por acetato de etilo y hexano para dar 6-[4-(5-cloro-2-piridiloxi)fenilimino]-3-(4-hidroxicarbonilciclobutil)-1-(4- metilbencil)-1,3,5-triazinan-2,4-diona (I-178, 103 mg, rendimiento:80%) como polvo blanco.
RMN-1H (CDCl3) 6: 2.35 (3H, s), 2.52-2.72 (2H, m), 3.08-3.42 (3H, m), 5.20 (2H, s), 5.37-5.61 (1H, m), 6.82-6.95 (3H, m), 7.01-7.20 (4H, m), 7.48 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.61-7.81 (2H, m), 8.11 (1H, s).
Ejemplo de Referencia 1
(1) Preparación de 1-(4-clorobencil)-6-(etiltio)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona Fórmula Química 100
EtS
NH
'NH2
HBr
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imagen21
EtS^N^O
O
X
N NH EtS^N^O
Cl
Cl
t-Butilisocianato (1.2 mL, 10.5 mmol) y DBU (1.9 mL, 12.8 mmol) se agregaron a una mezcla de bromhidrato de S- etiltiourea (1.85 g, 10 mmol) y DMF (9.3 mL) bajo enfriamiento en hielo, y la mezcla resultante se agitó por6 horas. 1,1'- Carbonildiimidazol (1.95 g, 12 mmol) y DBU (1.9 mL, 12.8 mmol) se agregaron a la mezcla de reacción bajo enfriamiento en hielo y la mezcla se agitó por 2 horas. 2 mol/L de ácido clorhídrico (80 mL) se agregó a la mezcla de reacción bajo enfriamiento en hielo durante 50 minutos, y el polvo generado se recolectó por filtración. El polvo se disolvió en acetato de etilo, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se concentró in vacuo para dar 6-(etiltio)-3-t-butil-1,3,5-triazin- 2,4(1H,3H)-diona (1.15g, rendimiento:50%) como un polvo marrón pálido.
RMN-1H (6 ppm TMS / DMSO-d6): 1.27 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.55 (9H, s), 3.03 (2H, q, J=7.3), 12.30 (1H, brs)
Carbonato de potasio (17.97 g, 130 mmol) se agregó a una mezcla de 6-(etiltio)-3-t-butil-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (22.93 g, 100 mmol), bromuro de 4-clorobencilo (22.60 g, 110 mmol), y acetonitrilo (200 mL), y la mezcla resultante se calentó a reflujo y se agitó por 3 horas. La mezcla de reacción se filtró, y lo filtrado se concentró in vacuo para dar el producto crudo (39.9g) de 3-t-butil-1-(4-clorobencil)-6-(etiltio)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona como un aceite marrón pálido.
Se agregó ácido trifluoroacético (100 mL) al producto crudo resultante, la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 17 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para dar 1-(4-clorobencil)-6-(etiltio)-1,3,5-triazin- 2,4(1H,3H)-diona (29.03 g, rendimiento: 97%) como un polvo marrón pálido.
RMN-1H (6 ppm TMS / d6-DMSO): 1.25 (3H, t, J=7.3 Hz), 3.08 (2H, q, J=7.3 Hz), 5.02 (2H, s), 7.30-7.33 (2H, m), 7.397.42 (2H, m), 11.61 (1H, s).
(2) Preparación de 1-(4-clorobencil)-3-(metoxicarbonilmetil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-238)
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Fórmula Química 101
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o
x
N NH
Cl
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,OMe
Cl
Carbonato de potasio (1.80 g, 13 mmol) se agregó a una mezcla de 1-(4-dorobencil)-6-(etiltio)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)- diona (2.98 g, 10 mmol), bromoacetato de metilo (1.04 mL, 11 mmol), y DMF (30 mL), y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. Se agregó agua (250 mL) a la mezcla de reacción, y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (200 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (250 mL), y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de concentrado in vacuo, al residuo se agregaron acetato de etilo y hexano. El polvo generado se recolectó por filtración para dar 1-(4-clorobencil)-3-(metoxicarbonilmetil)-6-(etiltio)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (3.26 g, rendimiento: 88%) como un polvo incoloro.
RMN-1H (5 ppm TMS / CDCb): 1.37 (3H, t, J=7.2 Hz), 3.23 (2H, q, J=7.2 Hz), 3.78 (3H, s), 4.68 (2H, s), 5.11 (2H, s), 7.27-7.35 (4H, m).
Una mezcla de 1-(4-clorobencil)-3-(metoxicarbonilmetil)-6-(etiltio)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (1.0 g, 2.70 mmol), 4-(2- piridiloxi)anilina (1.0 g, 5.4 mmol), t-butanol (10.0 mL), y ácido acético (2.3 mL) se calentó bajo reflujo con agitación por 8 horas. Solución acuosa saturada de carbonato hidrógeno de sodio (30 mL) se agregó a la mezcla de reacción, y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3). La capa orgánica se lavó con agua (20 mL) y salmuera (20 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para dar 1-(4-dorobencil)-3-(metoxicarbonilmetil)-6-[4-(2- piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-238, 1.24 g, rendimiento:93%) como un pálido amarillo amorfo.
RMN-1H (CDCl3) 5: 3.78 (3H, s), 4.59 (2H, s), 5.23 (2H, s), 6.86 (2H, d, J=7.8 Hz), 6.96 (1H, d, J=8.1 Hz), 7.00 (1H, t, J=6.0 Hz), 7.15 (2H, d, J=8.1 Hz), 7.31 (2H, d, J=7.8 Hz), 7.49 (2H, d, J=7.8 Hz), 7.71 (1H, t, J=7.8 Hz), 7.86 (1H, s), 8.15 (1H, s).
(3) Preparación de 1-(4-clorobencil)-3-(hidroxilcarbonilmetil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-239) Fórmula Química 102
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4mol/L de hidróxido de litio (2.43 mL, 9.7 mmol) se agregó a una mezcla de 1-(4-clorobencil)-3-(metoxicarbonilmetil)-6-[4- (2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (1.2 g, 2.43 mmol), metanol (12 mL), THF (12 mL), y agua (12 mL), y la mezcla resultante se agitó bajo enfriamiento en hielo por 1 hora. La mezcla de reacción se vertió en agua helada, se acidificó por 1mol/L de ácido clorhídrico, y se extrajo con acetato de etilo (100 mL). La capa orgánica se lavó con agua (50 mL) y salmuera (50 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, al residuo se agregaron acetato de etilo y éter dietílico, y el polvo generado se recolectó por filtración para dar 1-(4-clorobencil)-3- (hidroxilcarbonilmetil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-239, 2.23 mg, rendimiento:92%) como un polvo marrón pálido.
RMN-1H (5 ppm TMS / d6-DMSO): 4.40 (2H, s), 5.30 (2H, s), 7.03 (2H, d, J=7.8 Hz), 7.12(2H, s), 7.13(1H, s), 7.37 (4H, d, J=7.5 Hz), 7.45 (4H, d, J=7.5 Hz), 7.84 (1H, t, J=7.8 Hz), 8.16 (1H, s), 9.48 (1H, brs).
(4) Preparación de 1-(4-clorobencil)-3-(carbamoilmetil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-240)
Fórmula Química 103
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1-(4-dorobencil)-3-(metoxicarbonilmetil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (150 mg, 0.31 mmol) se 5 disolvió en DMF (2 mL). Cloruro de amonio (16.7 mg, 0.31 mmol), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (57.4 mg, 0.38 mmol), 4-dimetilaminopiridina (3.8 mg, 0.03 mmol), clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (71.9 mg, 0.38 mmol), y trietilamina (0.05 mL, 0.38 mmol) se agregaron a la mezcla de reacción, y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 16 horas. A la mezcla de reacción se agregó solución acuosa saturada de carbonato hidrógeno de sodio (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (30 mL). La fase orgánica se lavó con agua (10 mL) y 10 salmuera (10 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, al residuo se agregó acetato de etilo, y el polvo generado se recolectó por filtración para dar 1-(4-dorobencil)-3-(carbamoilmetil)-6-[4-(2- piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-240, 79 mg, rendimiento:53%) como un polvo amarillo pálido.
RMN-1H (6 ppm TMS / DMSO-d6): 4.28 (2H, s), 5.29 (2H, s), 7.03 (2H, d, J=7.2 Hz), 7.12(4H, s), 7.35 (1H, s), 7.38 (1H, d, J=7.2 Hz), 7.42 (4H, d, J=9.3 Hz), 7.54 (1H, s), 7.85 (1H, t, J=7.2 Hz), 8.16 (1H, s), 9.37 (1H,s).
15 Ejemplo de Referencia 2
(1) Preparación de 3-etil-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona Fórmula Química 104
NH
//N^NH2
HCl
O
N-V"
/'N^N^O ' H
DBU (63.3 mL, 420 mmol) se agregó por goteo a una mezcla de clorhidrato de 1-amidinopirazol (58.6 g, 400 mmol), 20 isocianato de etilo (33.2 mL, 420 mmol), y DMA (240 mL) a -10°C durante 15 minutos, y la mezcla resultante se agitó bajo enfriamiento en hielo por 30 minutos. 1,1'-Carbonildiimidazol (97.2 g, 600 mmol) se agregó a la mezcla de reacción bajo enfriamiento en hielo, y después se agregó DBU (93 mL, 620 mmol) a -5°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se agitó bajo enfriamiento en hielo por 1 hora y después se agitó a temperatura ambiente por 1 hora. 2 mol/L de ácido clorhídrico (1.16 L) se agregó a la mezcla de reacción a 20°C durante 1 hora. El polvo resultante se recolectó por 25 filtración para dar 3-etil-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (73.0 g, rendimiento:88%) como un polvo marrón pálido.
RMN-1H (6 ppm TMS / CDCl3): 1.30 (6H, t, J=7.0 Hz), 4.02 (2H, q, J=7.0 Hz), 6.59 (1H, m), 7.34 (1H, m), 8.48 (1H, m), 9.79 (1H, brs).
(2) Preparación de 1-(4-clorobencil)-3-etil-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona 30 Fórmula Química 105
N
O
N^N
,A.A.
N ^O H
O
nV
AnAiAo
Cl
Diisopropiletilamina (92 mL, 528 mmol) se agregó por goteo a una mezcla de 3-etil-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin- 2,4(1H,3H)-diona (89 g, 480 mmol), bromuro de 4-clorobencilo (108 g, 528 mmol), y DMA (400 mL) a temperatura ambiente durante 10 minutos, y la mezcla resultante se agitó a 60°C por 2 horas. Se agregó agua (800 mL) por goteo a 5 la mezcla de reacción bajo enfriamiento en hielo durante 40 minutos, y después se agregó hexano (200 mL). El polvo resultante se recolectó por filtración para dar 1-(4-clorobencil)-3-etil-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (156 g, rendimiento:97.6%) como un polvo marrón pálido.
RMN-1H (6 ppm TMS / CDCla): 1.30 (3H, t, J=7.1 Hz), 4.04 (2H, q, J=7.1 Hz), 5.86 (2H, s), 6.48 (1H, m), 7.02 (2H, d, J=8.6 Hz), 7.20-7.25 (2H, m), 7.84 (1H, m), 8.33 (1H, m).
10 (3) Preparación de 1-(4-clorobencil)-6-[4-(3-cloro-5-etoxicarbonil-2-piridiloxi)fenilimino]-3-etil-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-
015)
Fórmula Química 106
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F
Una mezcla de 1-(4-clorobencil)-2-etil-6-(1-pirazolil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (200 mg, 0.6 mmol), 4-(3-cloro-5- 15 etoxicarbonil-2-piridiloxi)anilina (176 mg, 0.6 mmol), y t-butanol (4 mL) se agitó a 80°C por 1 hora. La mezcla de reacción se concentró in vacuo, y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para dar 1-(4- clorobencil)-6-[4-(3-cloro-5-etoxicarbonil-2-piridiloxi)fenilimino]-3-etil-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-015, 321 mg,
rendimiento:96%) como polvo blanco. RMN-1H (CDCl3) 6: 1.24 (3H, t, J = 7.2 Hz), 1.39 (3H, t, J = 7.2 Hz), 3.90 (2H, q, J = 7.1 Hz), 4.39 (2H, q, J = 7.1 Hz), 5.21 (2H, s), 6.88 (2H, dd, J = 6.5, 2.0 Hz), 7.16 (2H, dd, J = 6.7, 2.1 Hz), 7.30-7.33 20 (2H, m), 7.52 (2H, t, J = 4.1 Hz), 7.89 (1H, s), 8.35 (1H, d, J = 2.0 Hz), 8.63 (1H, d, J = 2.0 Hz).
(4) Preparación de 1-(4-clorobencil)-6-[4-(3-cloro-5-hidroxicarbonil-2-piridiloxi)fenilimino]-3-etil-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-016)
Fórmula Química 107
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1mol/L de Hidróxido de sodio (0.75 mL) se agregó a una mezcla de 1-(4-clorobencil)-6-[4-(3-cloro-5-etoxicarbonil-2- piridiloxi)fenilimino]-3-etil-1,3,5-triazinan-2,4-diona (209 mg, 0.38 mmol), THF (0.75 mL), y metanol (0.75 mL), y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua, se acidificó por 5% de solución acuosa de ácido cítrico, y después se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, al residuo se agregó éter dietílico, y el polvo generado se recolectó por filtración para dar 1-(4-clorobencil)-6-[4-(3-cloro-5-hidroxicarbonil-2-piridiloxi)fenilimino]-3-etil-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-016, 125 mg, rendimiento:63%) como polvo blanco.
RMN-1H (CDCl3) 6: 1.24 (3H, q, J = 8.3 Hz), 3.93 (2H, q, J = 7.0 Hz), 5.23 (2H, s), 6.91 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.14 (2H, dd, J = 6.8, 2.0 Hz), 7.32 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.53 (2H, d, J = 8.3 Hz), 8.36 (1H, d, J = 2.0 Hz), 8.74 (1H, d, J = 1.8 Hz), 9.78 (1H, s).
Ejemplo de Referencia 3
(1) Preparación de (S)-1-(4-clorobencil)-6-(4-hidroxifenilimino)-3-(2-hidroxicarbonilpropil)-1,3,5-triazinan-2,4-diona
Fórmula Química 108
imagen28
Dicarboxilato de di-2-metoxietilazo (56.2g, 240 mmol) se agregó gradualmente a una mezcla de 1-(4-clorobencil)-6- (etiltio)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (59.6 g, 200 mmol), (S)-(+)-3-hidroxiisolactato de metilo (28.4 g, 240 mmol), trifenilfosfina (62.9 g, 240 mmol) y dioxano (400 mL), y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 3 horas. La mezcla de reacción se agregó en agua helada (1000 mL) y se extrajo con tolueno (500 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (700 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para dar (S)-1-(4-cloro bencil)-6-(etiltio)- 3-(2-metoxicarbonilpropil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (64.44 g, rendimiento:81%) como sólido blanco. RMN-1H (6 ppm TMS / CDCla): 1.19 (3H, d, J=5.7 Hz), 1.37 (3H, t, J=7.1 Hz), 2.96 (1H, m), 3.12 (2H, q, J=7.1 Hz), 3.60 (3H, s), 3,98 (1H, m), 4.21 (1H, m), 5.08 (2H, s), 7.29-7.34 (4H, m).
Una mezcla de (S)-1-(4-clorobencil)-6-(etiltio)-3-(2-metoxicarbonilpropil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (5.0 g, 12.6 mmol), 4-aminofenol (2.06 g, 18.9 mmol), ácido acético (11.32g, 189 mmol), y t-butanol (100 mL) se agitó bajo calentamiento a reflujo por 3 horas. Después de la reacción, la mezcla de reacción se agregó a una solución acuosa saturada de carbonato hidrógeno de sodio (500 mL) y se extrajo con acetato de etilo (500 mL). La capa orgánica se lavó con 1mol/L de ácido clorhídrico (500 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, al residuo se agregaron tolueno y acetato de etilo, y se calentó, y el polvo generado se recolectó por filtración para dar (S)- 1-(4-clorobencil)-6-(4-hidroxifenilimino)-3-(2-metoxicarbonilpropil)-1,3,5-triazinan-2,4-diona (5.17 g, rendimiento:92%) como polvo blanco.
2mol/L de Hidróxido de sodio (25 mL) se agregó a una mezcla de (S)-1-(4-clorobencil)-6-(4-hidroxifenilimino)-3-(2- metoxicarbonilpropil)-1,3,5-triazinan-2,4-diona (5.13 g, 11.5 mmol) y DMSO (50 mL), la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 1 hora. A la mezcla de reacción se agregó 2mol/L de ácido clorhídrico (25 mL), después la mezcla se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera (700 mL) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, al residuo se agregó acetato de etilo, y el polvo generado se recolectó por filtración para dar (S)-1-(4-clorobencil)-6-(4-hidroxifenilimino)-3-(2-hidroxicarbonilpropil)-1,3,5- triazinan-2,4-diona (3.92 g, rendimiento:79%) como polvo blanco.
RMN-1H (6 ppm TMS / d6 DMSO): 0.99 (3H, d, J = 7.0 Hz), 2.50 (1H, t, J = 1.8 Hz), 2.74 (1H, td, J = 14.5, 7.2 Hz), 3.893.95 (1H, m), 5.21 (2H, s), 6.70-6.75 (2H, m), 7.01 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.29 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.41 (2H, d, J = 8.5 Hz), 9.16 (1H, br s), 9.66 (1H, br s).
(2) Preparación de (S)-1 -(4-clorobencil)-6-[4-(2-benzoxazoliloxi)fenilimino]-3-(2-metoxicarbonilpropil)-1,3,5-triazinan-2,4- diona (R-144)
Fórmula Química 109
imagen29
Se agregó carbonato de cesio (454 mg, 1.39 mmol) a una mezcla de (S)-1-(4-clorobencil)-6-(4-hidroxifenilimino)-3-(2- hidroxicarbonilpropil)-1,3,5-triazinan-2,4-diona (200 mg, 0.46 mmol), 2-clorobenzoxazol (78 mg, 0.51 mmol), y DMSO (1 mL), y la mezcla resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en agua, 5 se acidificó por 5% de solución acuosa de ácido cítrico, y después se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, el residuo se purificó por cromatografía líquida de alta resolución (acetonitrilo/agua que contiene 0.3% de ácido fórmico) para dar (S)-1-(4- clorobencil)-6-[4-(2-benzoxazoliloxi)fenilimino]-3-(2-metoxicarbonilpropil)-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-144, 55.3 mg,
rendimiento:22%) como polvo blanco.
10 RMN-1H (CDCb) 6: 1.13 (3H, d, J = 6.8 Hz), 2.74-2.79 (1H, m), 3.82 (1H, dd, J = 13.3, 5.4 Hz), 4.04 (1H, dd, J = 12.8, 9.2 Hz), 5.13 (1H, d, J = 14.4 Hz), 5.22 (1H, d, J = 14.3 Hz), 6.88 (2H, d, J = 7.5 Hz), 7.23-7.49 (10H, m), 8.96 (1H, s).
Ejemplo de Referencia 4
(1) Preparación de 1 -(4-clorobencil)-3-(2-hidroximetil-2-propenil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R- 254)
15 Fórmula Química 110
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1-(4-Clorobencil)-6-(etiltio)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (1090 mg, 3.65 mmol), 2-(tetrahidropiran-2-iloxi)metil-2- propenol (628 mg, 3.65 mmol), y trifenilfosfina (956 mg, 3.65 mmol) se disolvieron en 1,4-dioxano(5.0 mL). Se agregó dimetoxietilazadicarboxilato (854 mg, 3.65 mmol) a la mezcla de reacción, la mezcla resultante se agitó a temperatura 20 ambiente por 3 horas. Después, trifenilfosfina (478 mg, 1.82 mmol) y dimetoxietilazadicarboxilato (478 mg, 1.82 mmol) se agregaron a la mezcla de reacción, y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo, y al residuo resultante se agregó éter dietílico. El polvo generado se removió por filtración. Lo filtrado se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró in vacuo. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para dar 1-(4-clorobencil)-6- 25 (etiltio)-3-(2-tetrahidropiran-2-iloximetil-2-propenil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (1589 mg, rendimiento:96%) como un aceite incoloro.
t-Butanol (2.4 mL), 4-(2-piridiloxi)anilina (148 mg, 0.8 mmol) y ácido acético (0.58 mL, 10 mmol) se agregaron a 1-(4- clorobencil)-6-(etiltio)-3-(2-tetrahidropiran-2-iloximetil-2-propenil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (300 mg, 0.66 mmol), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo por 15 horas. A la mezcla de reacción se agregó 2mol/L de ácido clorhídrico 30 (0.33 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 8 horas. A la mezcla de reacción se agregó solución acuosa saturada
de carbonato hidrógeno de sodio y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera (30 mL) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para dar 1-(4-clorobencil)-3-(2-hidroximetil-2-propenil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-
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30
1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-254, 206 mg, rendimiento:63%) como un amorfo blanco.
RMN-1H (CDCI3) 5: .52-2.66 (1H, m), 4.08 (2H, d, J = 5.0 Hz), 4.50 (2H, s), 5.16 (2H, d, J = 21.1 Hz), 5.21 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.96-7.01 (2H, m), 7.13 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.31 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.51 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.697.73 (1H, m), 8.10 (1H, d, J = 3.5 Hz), 8.14-8.40 (1H, m).
(2) Preparación de 1-(4-clorobencil)-3-(2-hidroximetil-2,3-dihidroxipropil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4- diona (R-255)
Fórmula Química 111
imagen31
1-(4-clorobencil)-3-(2-hidroximetil-2-propenil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (192 mg, 0.39 mmol) se disolvió en 95% de solución acuosa de THF (2.2 mL). Deshidrato osmato de potasio (VI) (14.4 mg, 0.04 mmol) y N- metilmorfolina (92 mg, 0.78 mmol) se agregaron a la mezcla de reacción, la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 2 horas. A la mezcla de reacción se agregó 5% de solución acuosa de sulfito de sodio (1.0 mL) y agua (50 mL) y se extrajo con acetato de etilo (50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (50 mL) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (cloroformo/metanol) y en polvo con acetato de etilo y hexano para dar 1-(4-clorobencil)-3-(2-hidroximetil-2,3- dihidroxipropil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-255, 155 mg, rendimiento:75%) como polvo blanco.
RMN-1H (DMSO-d6) 5: 3.26-3.31 (4H, m), 3.94 (2H, s), 4.31 (1H, s), 4.42 (2H, t, J = 6.0 Hz), 5.29 (2H, s), 6.97-7.18 (4H, m), 7.30-7.52 (6H, m), 7.85 (1H, t, J = 7.3 Hz), 8.16 (1H, d, J = 3.3 Hz), 9.39 (1H, s).
Ejemplo de Referencia 5
Preparación de 1-(4-clorobencil)-3-(2-hidroxietil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-257)
Fórmula Química 112
imagen32
Hidruro de aluminio y litio (38 mg, 1 mmol) se agregaron a 1-(4-clorobencil)-3-(metoxicarbonilmetil)-6-[4-(2- piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (248 mg, 0.5 mmol) en THF (6 mL) bajo enfriamiento en hielo, y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 1.5 horas. A la mezcla de reacción se agregaron agua (0.04 ml) y 10% de solución acuosa de hidróxido de sodio (0.04 ml) y se agitó a temperatura ambiente por 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite, se lavó con acetato de etilo, y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para dar 1-(4- clorobencil)-3-(2-hidroxietil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona(R-257, 65.4 mg, rendimiento:28%) como sólido blanco.
5
10
15
20
25
30
RMN-1H (CDCI3) 6: 2.25 (1H, t, J=5.7 Hz), 3.80 (2H, q, J=5.4 Hz), 4.05 (2H, t, J=5.1 Hz), 5.20 (2H, s), 6.85 (2H, d, J=8.5 Hz), 6.97 (1H, d, J=8.3 Hz), 7.00 (1H, dd, J=6.8, 5.3 Hz), 7.13 (2H, d, J=8.5 Hz), 7.30 (2H, d, J=8.3 Hz), 7.51 (2H, d, J=8.3 Hz), 7.71 (1H, t, J=8.0 Hz), 8.07 (1H, brs), 8.16 (1H, dd, J=4.8, 1.2 Hz).
Ejemplo de Referencia 6
(1) Preparación de 1-(4-clorobencil)-3-(3-tetrahidropiran-2-iloxipropil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona Fórmula Química 113
imagen33
Una mezcla de 1-(4-clorobencil)-6-(etiltio)-3-(3-tetrahidropiran-2-iloxipropil)-1,3,5-triazin-2,4(1H,3H)-diona (230 mg, 0.52 mol), 4-(2-piridiloxi)anilina (146 mg, 0.78 mmol), ácido acético (0.45 mL), y t-butanol (4 ml) se agitó durante la noche bajo calentamiento a reflujo. A la mezcla de reacción se agregó solución acuosa saturada de carbonato hidrógeno de sodio (50 mL) y se extrajo con acetato de etilo (50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de concentrarse in vacuo, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (hexano/acetato de etilo) para dar 1-(4-clorobencil)-3-(3-tetrahidropiran-2-iloxipropil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5- triazinan-2,4-diona (188 mg, rendimiento:64%) como amorfo incoloro.
RMN-1H (CDCla) 6: 1.47-1.66 (6H, m), 1.95 (2H, td, J = 12.3, 6.6 Hz), 3.42-3.49 (2H, m), 3.80-3.84 (2H, m), 3.96-4.00 (2H, m), 4.52 (1H, br s), 5.20 (2H, s), 6.84 (2H, d, J = 8.6 Hz), 6.95-7.01 (2H, m), 7.13 (2H, d, J = 8.6 Hz), 7.30 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.52 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.68-7.73 (1H, m), 7.95 (1H, s), 8.13 (1H, t, J = 2.5 Hz).
(2) Preparación de 1-(4-clorobencil)-3-(3-hidroxipropil)-6-[4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-251)
Fórmula Química 114
imagen34
Se agregó hidrato de ácido p-toluensulfónico (12 mg, 0.064 mmol) a 1-(4-clorobencil)-3-(3-tetrahidropiran-2-iloxipropil)-6- [4-(2-piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (180 mg, 0.32 mol) en metanol (2 ml), y la mezcla resultante se agitó a 50°C por 2 horas. A la mezcla de reacción se agregó trietilamina y se concentró in vacuo. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (hexano/acetato de etilo) para dar 1-(4-clorobencil)-3-(3-hidroxipropil)-6-[4-(2- piridiloxi)fenilimino]-1,3,5-triazinan-2,4-diona (R-251, 150 mg, rendimiento:99%) como amorfo incoloro.
RMN-1H (CDCla) 6: 1.83-1.89 (2H, m), 2.63 (1H, t, J = 6.5 Hz), 3.59 (2H, q, J = 5.9 Hz), 4.00 (2H, t, J = 6.1 Hz), 5.22 (2H, s), 6.86 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.97-7.01 (2H, m), 7.13 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.31 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.52 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.69-7.74 (1H, m), 8.10 (1H, dd, J = 4.9, 1.4 Hz).
Los siguientes compuestos se sintetizaron en una manera similar a aquellos descritos en los procedimientos generales anteriores para la síntesis del compuesto de la invención y Ejemplos, con referencia a los contenidos descritos en los documentos WO2010/092966 y WO2012/020749 como sea necesario. La estructura química de los compuestos y las propiedades físicas de los mismos se describen abajo.
5
10
15
20
Método de identificación del compuesto
Los datos de LC/MS del compuesto de la presente invención se midieron bajo cualquiera de las siguientes 2 condiciones (Métodos 1 y 2), y se muestran un tiempo de retención (RT) (unidad: min) y [M+H]+.
Método 1
Columna: Shim-pack XR-ODS (2.2pm, i.d.50x3.0mm) (Shimadzu)
Velocidad de flujo: 1.6 mL/min Longitud de onda de detección UV: 254nm
Fase móvil: [A] es 0.1% de solución acuosa que contiene ácido fórmico, y [B] es 0.1% solución de acetonitrilo que contiene ácido fórmico.
Gradiente: se realizó gradiente lineal de 10% hasta 100% de solvente [B] por 3 minutos, y se mantuvo 100% de solvente [B] por 1 minuto.
Método 2
Columna: ACQUITY UPLC (marca registrada) BEH C18 (1.7pm, i.d.2. 1x50mm) (Waters)
Velocidad de flujo: 0.8 mL/min Longitud de onda de detección UV: 254nm
Fase móvil: [A] es 10 mM de solución acuosa que contiene carbonato de amonio, y [B] es acetonitrilo
Gradiente: se realizó gradiente lineal de 5% hasta 100% de solvente [B] por 3.5 minutos, y se mantuvo 100% de solvente [B] por 0.5 minutos.
Tabla 5
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-022
F O'-'^'F 6 O 0 574 2.15 1
5
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-042
VN o °V^il hn'^'tOOoh TX 540 2 1
Tabla 20
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-100
ó . . 1 "a 522 2.15 1
Tabla 22
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-108
A 0 0 "a 516 2.29 1
1-110
,x> p ZH rcyt iJ °y) /=° o \ 530 2.4 1
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-112
p V 0 0 0y^>l hn^n^y^°h "Ce 502 2.04 1
Tabla 25
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-122
(?’ . . y-^'N^N^0 ,xx 556 2.24 1
5 Tabla 26
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-127
■p 0 0 hn—-N^-yJi'oH Tx 508 2.02 1
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-135
F O^'F 0' . . "a 554 2.08 1
Tabla 35
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-172
ka 562 2.6 1
5 Tabla 36
Compuesto No.
Estructura [M+H]+ RT Método
1-178
Cl y, "XX 534 2.22 1
Los ejemplos de pruebas biológicas para compuestos de la presente divulgación se describen abajo.
Ejemplos de Prueba
Ejemplo de Prueba 1 Evaluación de la actividad inhibidora del receptor P2X3 humano
10 Se usó la línea que expresa establemente las células (células C6BU-1 transfectadas con el gen del receptor P2X3 humano (número de acceso a GenBank Y07683). Las células se sembraron en una placa microtituladora recubierta de PDL de 384 pocillos a una concentración de 3000 células/pocillo y se cultivaron en el medio (8.3% de suero bovino fetal, 8.3% de suero de caballo, y 1% de antibiótico y antifúngico en DMEM) por un día a 37 °C bajo atmósfera de dióxido de
5
10
15
20
25
carbono al 5%. El medio se reemplazó con 4 |jM de solución Fluo-3-AM (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCI, 2.7 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 5.0 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5 mM de probenécido, 0.5% de BSA, y 0.04% de Pluronic F-127, pH 7.5) y se incubó a 37°C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5% por una hora. La placa se lavó con amortiguador de lavado (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 2.7 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 5.0 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5mM de probenécido, pH7.5), y cada pocillo se agregó con 20 jL del amortiguador de lavado. La placa se colocó en Sistema FLIPR 384 de Selección de Alto Rendimiento (Molecular Device Co.). Se inició la medición de la intensidad de fluorescencia por FLIPR 384, y 20 jL de diluciones de DMSO que contienen diferentes concentraciones del compuesto de prueba como se prepara por dilución con amortiguador de dilución (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 2.7 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 5.0 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5 mM de probenécido, 0.1% de Pluronic F-127, pH7.5) se dispensaron a cada pocillo a través del dispensador automático incorporado. Cinco minutos después, 150 nM de solución ATP (25 jL) preparada por dilución con el amortiguador de dilución se dispensó a través del dispensador automático incorporado, y la medición de la intensidad de fluorescencia se continuó por 4 min. Para cada pocillo, la intensidad de fluorescencia máxima específica se calculó como la relación de la máxima intensidad de fluorescencia después de la adición de la solución ATP a la intensidad de fluorescencia al comienzo de la medición. El 50% de concentración inhibidora (IC50) se calculó bajo la presunción de que la intensidad de fluorescencia máxima específica sin el compuesto de prueba es 0% de inhibición y que la intensidad de fluorescencia máxima específica cuando el amortiguador de dilución se agrega en lugar de la solución de ATP es 100% de inhibición, para evaluar la actividad inhibidora del compuesto de prueba. La intensidad de fluorescencia máxima específica y IC50 se calcularon usando Spotfire (Science & Technology Systems, Inc.)
Los datos de los compuestos de la presente divulgación son como se muestran en las siguientes Tablas.
Tabla 124
Compuesto No.
P2X3 IC50 (pM)
I-022
0,004
I-042
0,004
I-100
0,004
I-108
0,004
I-110
0,004
I-112
0,004
I-122
0,004
I-127
0,004
I-135
0,004
Tabla 125
Compuesto No.
P2X3 IC50 (pM)
I-172
0,026
I-178
0,005
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Ejemplo de Prueba 2 Evaluación de la actividad inhibidora del receptor P2X3 humano en la presencia de albúmina de suero humano (HSA)
Se usó la línea que expresa establemente las células (células C6BU-1 transfectadas con el gen del receptor P2X3 humano (número de acceso a GenBank Y07683). Las células se sembraron en una placa microtituladora de 96 pocillos a una concentración de 8000 células/pocillo y se cultivaron en el medio (7.0% de suero bovino fetal, 7.0% de suero de caballo, 1 % de antibiótico y antifúngico, y 2.0% de glutamina en DMEM) por un día a 37 °C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5%. El medio se reemplazó con 4 |jM de solución Fluo-3-AM (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 5.37 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5 mM de probenécido, 0.5% de BSA, y 0.04% de Pluronic F-127, pH 7.5) y se incubó a 37°C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5% por una hora. La placa se lavó con amortiguador de lavado (20 mM de HEpEs, 137 mM de NaCl, 5.27 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5mM de probenécido, pH7.5), y cada pocillo se agregó con 40 jL de este amortiguador. La placa se colocó en Sistema FDSS 3000 de Selección de Alto Rendimiento (Hamamatsu Photonics K.K.). Se inició la medición de la intensidad de fluorescencia por FDSS 3000, y 40 jL de soluciones de DMSO que contienen 1% de HSA (concentraciones finales) de diferentes concentraciones del compuesto de prueba como se prepara por dilución con amortiguador de dilución (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 5.27 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5 mM de probenécido, 0.1% de Pluronic F-127, pH7.5) se dispensaron a cada pocillo a través del dispensador automático incorporado. Cinco minutos después, 50 nM de solución ATP (50 jL) preparada por dilución con el amortiguador de dilución se dispensó a través del dispensador automático incorporado, y la medición de la intensidad de fluorescencia se continuó por 4 min. Para cada pocillo, la intensidad de fluorescencia máxima específica se calculó como la relación de la máxima intensidad de fluorescencia después de la adición de la solución ATP a la intensidad de fluorescencia al comienzo de la medición. El 50% de concentración inhibidora (IC50) se calculó bajo la presunción de que la intensidad de fluorescencia máxima específica sin el compuesto de prueba es 0% de inhibición y que la intensidad de fluorescencia máxima específica cuando el amortiguador de dilución se agrega en lugar de la solución de ATP es 100% de inhibición, para evaluar la actividad inhibidora del compuesto de prueba. Se usó software FDSS (Hamamatsu Photonics K.K.) para el cálculo de la intensidad de fluorescencia máxima específica. La IC50 se calculó usando Microsoft Excel (Microsoft Corporation) y XLfit (idbs Ltd.)
Ejemplo de Prueba 3 Evaluación de la actividad inhibidora del receptor P2X3 de rata
El gen del receptor P2X3 de rata (número de acceso a GenBank NM_031075) se expresó en células C6BU-1. Las células C6BU-1 se sembraron en una placa microtituladora de 96 pocillos a una concentración de 2500 células/pocillo y se cultivaron en el medio (7.0% de suero bovino fetal, 7.0% de suero de caballo, y 1% de antibiótico y antifúngico en DMEM) por un día a 37 °C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5%. El plásmido se transfectó en las células usando reactivo de transfección FuGENE6 (Promega). Las células transfectadas se cultivaron en el medio por un día a 37 °C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5%. El medio se reemplazó con 4 jM de solución Fluo-3-AM (pH7.5) que contiene 20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 5.27 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D- glucosa, 2.5 mM de probenécido, 1% de BSA, y 0.08% de Pluronic F-127, y se incubó a 37°C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5% por una hora. La placa se lavó con amortiguador de lavado (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 5.27 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5mM de probenécido, pH7.5), y cada pocillo se agregó con 40 jL de este amortiguador. La placa se colocó en Sistema FDSS 3000 de Selección de Alto Rendimiento (Hamamatsu Photonics K.K.). Se inició la medición de la intensidad de fluorescencia por FDSS 3000, y 40 jL de diluciones de DMSO que contienen diferentes concentraciones del compuesto de prueba como se prepara por dilución con amortiguador de dilución (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 5.27 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5 mM de probenécido, 0.1% de Pluronic F-127, pH7.5) se dispensaron a cada pocillo a través del dispensador automático incorporado. Cinco minutos después, 50 nM de solución ATP (50 jL) preparada por dilución con el amortiguador de dilución se dispensó a través del dispensador automático incorporado, y la medición de la intensidad de fluorescencia se continuó por 4 min. Para cada pocillo, la intensidad de fluorescencia máxima específica se calculó como la relación de la máxima intensidad de fluorescencia después de la adición de la solución ATP a la intensidad de fluorescencia al comienzo de la medición. El 50% de concentración inhibidora (IC50) se calculó bajo la presunción de que la intensidad de fluorescencia máxima específica sin el compuesto de prueba es 0% de inhibición y que la intensidad de fluorescencia máxima específica cuando el amortiguador de dilución se agrega en lugar de la solución de ATP es 100% de inhibición, para evaluar la actividad inhibidora del compuesto de prueba. Se usó software FDSS (Hamamatsu Photonics K.K.) para el cálculo de la intensidad de fluorescencia máxima específica. La IC50 se calculó usando Microsoft Excel (Microsoft Corporation) y XLfit (idbs Ltd.).
Ejemplo de Prueba 4 Evaluación de la actividad inhibidora del receptor P2X3 de rata en la presencia de albúmina de suero de rata (RSA)
El gen del receptor P2X3 de rata (número de acceso a GenBank NM_031075) se expresó en células C6BU-1. Las células C6BU-1 se sembraron en una placa microtituladora de 96 pocillos a una concentración de 2500 células/pocillo y se cultivaron en el medio (7.0% de suero bovino fetal, 7.0% de suero de caballo, y 1% de antibiótico y antifúngico en
5
10
15
20
25
30
35
40
45
DMEM) por un día a 37 °C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5%. El plásmido se transfectó en las células usando reactivo de transfección FuGENE6 (Promega). Las células transfectadas se cultivaron en el medio por un día a 37 °C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5%. El medio se reemplazó con 4 |jM de solución Fluo-4-AM (pH7.5) que contiene 20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 5.27 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D- glucosa, 2.5 mM de probenécido, 10% de BSA, y 0.08% de Pluronic F-127, y se incubó a 37°C bajo atmósfera de dióxido de carbono al 5% por una hora. La placa se lavó con amortiguador de lavado (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 5.27 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5mM de probenécido, pH7.5), y cada pocillo se agregó con 40 jL de este amortiguador. La placa se colocó en Sistema FDSS 3000 de Selección de Alto Rendimiento (Hamamatsu Photonics K.K.). Se inició la medición de la intensidad de fluorescencia por FDSS 3000, y 40 jL de soluciones de DMSO que contienen 1% de RSA (concentraciones finales) y diferentes concentraciones del compuesto de prueba como se prepara por dilución con amortiguador de dilución (20 mM de HEPES, 137 mM de NaCl, 5.27 mM de KCl, 0.9 mM de MgCh, 1.26 mM de CaCl2, 5.6 mM de D-glucosa, 2.5 mM de probenécido, 0.1% de Pluronic F-127, pH7.5) se dispensaron a cada pocillo a través del dispensador automático incorporado. Cinco minutos después, 50 nM de solución ATP (50 jL) preparada por dilución con el amortiguador de dilución se dispensó a través del dispensador automático incorporado, y la medición de la intensidad de fluorescencia se continuó por 4 min. Para cada pocillo, la intensidad de fluorescencia máxima específica se calculó como la relación de la máxima intensidad de fluorescencia después de la adición de la solución ATP a la intensidad de fluorescencia al comienzo de la medición. El 50% de concentración inhibidora (IC50) se calculó bajo la presunción de que la intensidad de fluorescencia máxima específica sin el compuesto de prueba es 0% de inhibición y que la intensidad de fluorescencia máxima específica cuando el amortiguador de dilución se agrega en lugar de la solución de ATP es 100% de inhibición, para evaluar la actividad inhibidora del compuesto de prueba. Se usó software FDSS (Hamamatsu Photonics K.K.) para el cálculo de la intensidad de fluorescencia máxima específica. La IC50 se calculó usando Microsoft Excel (Microsoft Corporation) y XLfit (idbs Ltd.).
Los datos de los compuestos de la presente divulgación son como se muestran en la siguiente Tabla.
Tabla 130
Compuesto No.
P2X3 de rata+RSA IC50 (/¿ M)
1-022
0.011
1-100
0.009
Como se muestra, los compuestos descritos en la presente descripción muestran inhibición de la actividad en el receptor P2X3. Además, como los compuestos son efectivos en el subtipo P2X3, los compuestos también son considerados por tener actividad de inhibición en el receptor P2X2/3, el cual comprende el subtipo p2X2.
Ejemplo de Prueba 5 Evaluación de la función urinaria en modelo de rata de cistitis
Cirugía para cistometría
Se fijó una rata en la posición supina después de ser dada anestesia a través de la inhalación de 2% de isoflurano (antecedente anestésico; óxido nitroso: oxígeno = 7:3). Se hizo una incisión en la línea media en su abdomen para exponer la vejiga. Se insertó una cánula (elaborada por procesamiento de un tubo de polietileno) (PE-50: Becton Dickinson)) a través de una pequeña inserción en la parte superior de la vejiga y se fijó para crear una fístula de vejiga. El otro extremo de la cánula se condujo a través del tejido hipodérmico a la espalda, y la capa muscular y piel son suturadas. La cánula, la cual se conduce a la espalda, se protege en un resorte de acero inoxidable en la mitad y se conecta a la pieza giratoria de la cánula.
Infusión de ácido acético
Dos días después de la cirugía, se infusionó 0.3% de ácido acético en la vejiga a través de la cánula permanente a una velocidad de 4 mL/hr por 30 minutos para inducir cistitis. Los animales, donde no se infusionó ácido acético, se usaron como animales normales.
Medición de citometría
Dos o tres días después de la infusión del ácido acético, el otro extremo de la cánula insertada en la vejiga se conectó a una llave de paso en forma de T y después la presión intravesical se registró continuamente usando un amplificador de presión mientras se infunde solución salina normal caliente a una velocidad de 3.0 mL/hr de un lado y a través de un transductor de presión en el otro lado. El valor de referencia de la presión intravesical se midió (por aproximadamente 40
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minutos) después de una medición por duración estable (por aproximadamente 20 minutos). Después de esto, un vehículo, compuesto de control positivo o compuesto de prueba son administrados, y el valor después de la administración se mide por aproximadamente 120 minutos. Un compuesto de la presente invención es triturado con un mortero y maja por ser de 0.1-2 mg/mL/kg de solución o suspensión usando 0.5% de solución de metilcelulosa, y se administró a un animal oralmente con una sonda oral. Al mismo tiempo, la orina vacía se recibió en básculas bajo la jaula para medir la variación en el peso simultáneamente.
Criterio de adopción de datos
Con base en el intervalo de evacuación, los animales normales cuyo intervalo de evacuación es de 10 minutos o mas se adoptaron y aquellos cuyo intervalo de evacuación es más corto que este, se excluyeron. En el caso de los animales en los cuales el ácido acético es infundido, aquellos cuyo intervalo de evacuación es menos de la mitad del valor promedio de los animales normales, se adoptaron como animales con cistitis y aquellos cuyo intervalo de evacuación es más largo que este se excluyeron.
Recolección de orina residual
Después de la terminación de la medición, la infusión de la solución salina normal se detuvo inmediatamente después de la orina para recolectar la orina residual bajo anestesia de pentaorbital sódico. La orina residual recolectada se transfirió al receptor de orina evacuada y se registró en la gráfica.
Puntos de análisis
La presión intravesical una a dos horas después del inicio de la medición (presión durante el descanso y presión durante la orina), intervalo de evacuación, volumen de evacuación por orina, y volumen de orina residual.
El siguiente valor se usó como un indicador del efecto del intervalo de evacuación:
Mejoramiento de la velocidad de la función urinaria = (intervalo de evacuación de un animal con cistitis después del tratamiento con fármaco - intervalo de evacuación de un animal con cistitis antes del tratamiento de fármaco) / (intervalo de evacuación medio de animales normales antes del tratamiento de fármaco - intervalo de evacuación de un animal con cistitis antes del tratamiento de fármaco) x 100
Se usó el siguiente valor como un indicador del efecto en el volumen de evacuación por orina:
Mejoramiento de la velocidad del volumen evacuado por orina = (volumen evacuado por orina de una rata con cistitis después del tratamiento de fármaco - volumen evacuado por orina de un animal con cistitis antes del tratamiento de fármaco) / (volumen evacuado medio por orina de animales normales antes del tratamiento de fármaco - volumen evacuado por orina de un animal con cistitis antes del tratamiento de fármaco) x 100
Ejemplo de Prueba 6 Efecto analgésico en un modelo Seltzer
Preparación del Modelo de ligación de nervio ciático parcial en ratas
Las ratas se anestesiaron usando anestesia de inhalación de isoflurano/CO2 Después de la inducción de anestesia, se rasuró el muslo izquierdo. Se hizo una incisión en la piel justo por debajo del hueso de la cadera. El músculo fue disectado de forma directa para exponer el nervio ciático. Un tercio (1/3) a un medio (1/2) del grosor del nervio ciático fue apretadamente ligado y se cerró la herida. El muslo derecho se usó como un control falsamente operado. El muslo derecho sufre un procedimiento idéntico con la extremidad posterior izquierda, sin embargo, el nervio ciático no se manipuló o ligó.
Evaluación (1)
Dos semanas después de la ligación del nervio, se evaluó el efecto de la alodinia mecánica usando una serie de filamentos von Frey. Para habituación, las ratas se colocaron en una jaula de plástico en un fondo de malla de alambre. La sensibilidad mecánica (umbral mecánico) de las patas traseras se estimó con a series de filamentos von Frey (0.4 - 26 g). La medición de la sensibilidad mecánica de las patas traseras izquierda y derecha se realizó para obtener una sensibilidad mecánica de predosis. Las ratas que muestran el cambio de umbral desde 0.6 hasta 2 g (en el lado ligado del nervio) y 8 hasta 15 g (en el lado falsamente operado) se usaron en los experimentos. En el día antes del experimento, las ratas se evaluaron con una serie de filamentos von Frey para familiarizarlas con el procedimiento de prueba. El animal adoptado se administró con los compuestos de prueba. Los compuestos de prueba se homogenizaron con mortero y maja y se suspendieron o diluyeron en 0.5% de metilcelulosa para preparar 0.1 - 2.0 mg/mL/kg de suspensión y se administraron oralmente a ratas usando una jeringa unida a una sonda. Las sensibilidades mecánicas post-dosis de las patas traseras izquierda y derecha fueron medidas a aproximadamente 1 hasta 5 horas después de la
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administración del fármaco. El porcentaje de reversión de alodinia mecánica para cada rata se calculó usando la siguiente fórmula. Los efectos analgésicos de los compuestos se compararon.
Log10 (sensibilidad mecánica post-dosis en el lado ligado del nervio)
- Log10 (sensibilidad mecánica predosis en el lado ligado del nervio)
% de reversión = ________________________________________________________________________
Log10 (sensibilidad mecánica de predosis en el lado falsamente operado)
- Log10 (sensibilidad mecánica predosis en el lado ligado del nervio)
Evaluación (2)
Se evaluó la hieralgesia mecánica usando un medidor de analgesia. Dos semanas después de la ligación del nervio, la prueba de la presión de la pata se realizó usando un medidor de analgesia (la presión de estímulo se incrementa 16g por segundo) para obtener los umbrales de retiro de la pata (PWT, por sus siglas en inglés). Se hicieron mediciones en ambos lados de la pata trasera y para obtener PWT de pre-dosis. Las ratas que mostraron el umbral de cambio desde 60 hasta 90 g (en el lado del nervio ligado) y 100 hasta 175 g (en el lado falsamente operado) son usadas en los experimentos. En el día antes del experimento, las ratas tienen sus patas traseras colocadas en el aparato para familiarizarlas con el procedimiento de prueba. El animal adoptado es administrado con los compuestos de prueba. Los compuestos de prueba son homogenizados con mortero y maja y suspendidos o diluidos en 0.5% de metilcelulosa para preparar 0.03 - 100 mg/2mL/kg de suspensión y se administraron oralmente a la rata usando una jeringa unida con una sonda. El PWT post-dosis en las patas traseras derecha e izquierda se midió a aproximadamente 1 hasta 5 horas después de la administración del fármaco. El porcentaje de reversión de la hiperalgesia mecánica para cada rata se calcula usando la siguiente fórmula. Los efectos analgésicos de los compuestos son comparados.
PWT postdosis en el lado del nervio ligado - PWT predosis en el lado del nervio ligado
% de reversión = _______________________________________________________________________________
PWT predosis en el lado falsamente operado - PWT predosis en el lado del nervio ligado
Ejemplo de Prueba 7 Prueba de MBI fluorescente de CYP3A4
La prueba MBI fluorescente de CYP3A4 es una prueba para investigar el mejoramiento de la inhibición de CYP3A4 de un compuesto por una reacción del metabolismo, y la prueba se realizó usando, como enzima CYP3A4 expresada en Escherichia coli y empleando, como un índice, una reacción en la cual 7-benciloxitrifluorometilchmarin (BFC) es desbencilado por la enzima CYP3A4 para producir un metabolito, 7-hidroxitrifluorometilchmarin (HFC) que emite luz fluorescente.
Las condiciones de reacción fueron como sigue: sustrato, 5.6 ^mol/L de 7-BFC; tiempo de pre-reacción, 0 o 30 minutos; tiempo de reacción, 15 minutos; temperatura de reacción, 25°C (temperatura ambiente); contenido de CYP3A4 (expresado en Escherichia coli), a pre-reacción de 62.5 pmol/mL, a reacción de 6.25 pmol/mL (a dilución de 10 veces); concentración del fármaco de prueba, 1.56, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50 ^mol/L (seis puntos).
Una enzima en un amortiguador de K-Pi (pH 7.4) y una solución del fármaco de prueba como una solución de prereacción se agregaron a una placa de 96 pocillos a la composición de la pre-reacción, una parte de esta se transfirió a otra placa de 96 pocillos de manera que fue diluida 1/10 por un sustrato en un amortiguador de K-Pi, se agregó NADPH como un co-factor para iniciar una reacción como un índice (sin preincubación) y, después de un tiempo predeterminado de reacción, se agregó acetonitrilo:0.5 mol/L de Tris (trishidroxiaminometano) = 4:1 para detener la reacción. Además, se agregó NADPH a una solución de preincubación restante para iniciar una preincubación (con preincubación) y, después de un tiempo predeterminado de una preincubación, una parte se transfirió a otra placa de manera que fue diluida 1/10 con un sustrato y un amortiguador de K-Pi para iniciar la reacción como un índice. Después de un tiempo predeterminado de reacción, se agregó acetonitrilo:0.5 mol/L de Tris (trishidroxiaminometano) = 4:1 para detener la reacción. Para la placa en la cual cada reacción de índice se ha realizado, un valor fluorescente de 7-HFC el cual es un metabolito, se midió con un lector de placa fluorescente. (Ej. = 420 nm, Em = 535 nm).
La adición de solamente DMSO el cual es un solvente que disuelve un fármaco a un sistema de reacción se adoptó como un control (100%), la actividad restante (%) se calculó en cada concentración de un compuesto de prueba agregado como la solución, y la IC50 se calculó por presunción reversa por un modelo logístico usado una concentración y una velocidad de inhibición. Cuando una diferencia entre el valor 1C50 es 5 mM o más, esta se define como (+) y, cuando la diferencia es 3 mM o menos, esta se define como (-).
Ejemplo de Prueba 8 Prueba de inhibición de CYP
Usando microsoma hepático humano combinado comercialmente disponible, y empleando, como marcadores, O-
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desetilación de 7-etoxiresorufina (CYP1A2), metil-hidroxilación de tolbutamida (CYP2C9), 4'-hidroxilación de mefenitoína (CYP2C19), O-desmetilación de dextrometorfano (CYP2D6), e hidroxilación de terfenedina como reacciones de metabolismo de sustrato típicas de cinco formas de enzima CYP principales humanas (CYP1A2, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4), se evaluó un grado inhibidor de cada cantidad de producción de metabolito por un compuesto de prueba.
Las condiciones de reacción fueron como sigue: sustrato, 0.5 ^mol/L de etoxiresorufina (CYP1A2), 100 ^mol/L de tolbutamida (CYP2C9), 50 ^mol/L de S-mefenitoína (CYP2C19), 5 ^mol/L de dextrometorfano (CYP2D6), 1 ^mol/L de terfenedina (CYP3A4); tiempo de reacción, 15 minutos; temperatura de reacción, 37°C; enzima, 0.2 mg proteína/mL de microsoma hepática humana combinada; concentración de fármaco de prueba, 1.0, 5.0, 10, 20 ^mol/L (cuatro puntos).
Cada uno de los cinco tipos de sustratos, microsoma hepática humana, o un fármaco de prueba en 50 mmol/L de amortiguador Hepes se agregó como una solución de reacción a una placa de 96 pocillos a la composición como se describe anteriormente, NADPH, como un cofactor, se agregó para iniciar las reacciones de metabolismo como marcadores y, después de la incubación a 37°C por 15 minutos, se agregó una solución de metanol/acetonitrilo = 1/1 (v/v) para detener la reacción. Después de la centrifugación a 3000 rpm por 15 minutos, la resorfurina (metabolito de CYP1A2) en el sobrenadante se cuantificó por un contador de etiqueta múltiple fluorescente e hidróxido de tributamida (metabolito de CYP2CP), 4'-hidróxido de mefenitoína (metabolito de CYP2C19), dextrometorfano (metabolito de CYP2D6), y alcohol de terfenadina (metabolito de CYP3A4) se cuantificaron por LC/mS/MS.
La adición de DMSO solamente siendo un solvente que disuelve un fármaco en un sistema de reacción, se adoptó como un control (100%), la actividad restante (%) se calculó en cada concentración de un fármaco de prueba agregado como la solución y la IC50 se calculó por presunción reversa por un modelo logístico usando una concentración y una velocidad de inhibición.
Ejemplo de Prueba 9 Prueba Ames de Fluctuación
Se evaluó la mutagenicidad de los compuestos de la presente invención
20 |jL de bacillus tifoide de rata almacenado por congelamiento (Salmonella typhimurium cepa TA98, cepa TA100) se inoculó en 10 mL de un medio nutriente líquido (2.5% de caldo nutriente Oxoide No.2), y este se cultivó antes del sacudimiento a 37°C por 10 horas. 7.70 mL de una solución bacteriana de la cepa TA98 se centrifugó (2000 x g, 10 minutos) para remover una solución de cultivo. La bacteria se suspendió en 7.70 mL de un amortiguador Micro F (K2HPO4: 3.5 g/L, KH2PO4: 1 g/L, (NH4)2SO4: 1 g/L, deshidrato de citrato trisódico: 0.25 g/L, MgSO4 ^7^O: 0.1 g/L), la suspensión se agregó a 110 mL de un medio de Exposición (amortiguador Micro F que contiene Biotina: 8 ^g/mL, histidina: 0.2 ^g/mL, glucosa: 8 mg/mL). La cepaTA100 se agregó a 120 mL del medio de exposición con relación a 3.42 mL de la solución bacteriana para preparar una solución bacteriana de prueba. Cada 12 ^L de solución DMSO de un compuesto de la presente invención (varias diluciones de etapa de una dosis máxima de 50 mg/mL a una relación de plegado de 2 a 3), se mezclaron DMSO como un control negativo, y 50 jg/mL de solución de DMSO de 4-nitroquinolin-1- óxido para la cepa TA98, 0.25 ^g/mL de solución de DMSO de 2-(2-furil)-3-(5-nitro-2-furil)acrilamida para la cepa TA100 bajo la condición de activación sin metabolismo, 40 ^g/mL de solución de DMSO de 2-aminoantraceno para la cepa TA98, solución de DMSO de 20 ^g/mL de 2-aminoantraceno para la cepa TA100 bajo la condición de activación del metabolismo como un control positivo, y 588 ^L de la solución bacteriana de prueba (una solución mezclada de 498 p.l de la solución bacteriana de prueba y 90 ^L de mezcla S9 bajo la condición de activación de metabolismo), y estas se centrifugaron-se cultivaron a 37°C por 90 minutos. 460 ^L de la solución bacteriana expuesta a un compuesto de la presente invención se mezcló con 2300 ^L de un medio indicador (amortiguador Micro F que contiene biotina: 8 ^g/mL, histidina: 0.2 ^g/mL, glucosa: 8 mg/mL, Bromo Cresol Púrpura: 37.5 ^g/mL), cada 50 ^L se dispensaron en una microplaca de 48 pocillos/dosis, y esta se sometió a cultivo estacionario a 37°C por 3 días. Puesto que una cavidad que contiene una bacteria la cual ha obtenido la capacidad de proliferación por mutación de un aminoácido (histidina) que sintetiza la enzima que cambia de púrpura a amarillo debido a un cambio en pH, el pocillo de proliferación de la bacteria el cual ha cambiado a amarillo en 48 pocillos por dosis se contó, y se evaluó comparando con un grupo de control negativo. (-) significa que la mutagenicidad es negativa y (+) es positiva.
Ejemplo de Prueba 10 Prueba de solubilidad
La solubilidad de un compuesto se determinó bajo una condición en la cual se agregó 1% de DMSO. 10 mmol/L de solución de compuesto se preparó usando DMSO, y después 2 |jL de la solución del compuesto se agregó a 198 |jL de jugo intestinal artificial en pH 6.8 (a 250 mL de 0.2 mol/L se agregó solución de reactivo de fosfato dihidrógeno de potasio 118 mL de 0.2 mol/L de solución de reactivo NaOH y agua para proporcionar un volumen final de 1000 mL). Después de reposar a 25 grados Celsius por 16 horas, la solución mezclada se filtró con succión. Lo filtrado se diluyó dos veces con metanol/agua (1/1), y después se midió una concentración en la filtración con HPLC o LC/MS/MS por el método de calibración absoluto.
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Ejemplo de Prueba 11 Prueba de Estabilidad del Metabolismo
Usando microsomas hepáticas humana combinadas comercialmente disponibles, un compuesto de prueba se hizo reaccionar por un tiempo constante, se calculó una velocidad restante comparando una muestra que reacciona y una muestra que no reacciona, de este modo, se evaluó un grado de metabolismo en el hígado.
Se realizó una reacción (reacción oxidativa) a 37°C por 0 minuto o 30 minutos en la presencia de 1 mmol/L de NADPH en 0.2 mL de un amortiguador (50 mmol/L de tris-HCl pH 7.4, 150 mmol/L de cloruro de potasio, 10 mmol/L de cloruro de magnesio) que contiene 0.5 mg de proteína de microsomas de hígado humano. Después de la reacción, 50 |iL de la solución de reacción se agregó a 100 |iL de metanol/acetonitrilo = 1/1 (v/v), se mezcló y centrifugó a 3000 rpm por 15 minutos. El compuesto de prueba en el sobrenadante se cuantificó por LC/MS/MS, y una cantidad restante del compuesto de prueba después de la reacción se calculó, dejando una cantidad de compuesto a 0 minutos de tiempo de reacción por ser 100%.
Ejemplo de Prueba 12 Prueba de estabilidad de metabolismo
El compuesto de prueba se hace reaccionar por un periodo de tiempo dado usando hepatocitos de rata criopreservados que son preparados y la relación residual se calcula con base en la comparación entre las muestras que reaccionan y no reaccionan para evaluar el grado de metabolismo hepático.
El compuesto se hace reaccionar en el medio Williams E que contiene 1.0 x 106 de células/mL de hepatocitos de rata criopreservados a una temperatura de 37°C por 0, 1o 2 horas. Después de la reacción, 50 |jL de la solución de reacción se agregan y mezclan con 100 jL de una solución que contiene metanol y acetonitrilo en la porción de uno a uno (v/v) y la mezcla es centrifugada a 3000 rpm por 15 minutos. El compuesto de prueba contenido en el sobrenadante centrífugo es cuantificado usando un sistema LC/MS/MS y la relación residual del compuesto de prueba después de la reacción se calcula con respecto a la cantidad de compuesto después de la reacción por 0 minutos como 100%.
Ejemplo de Prueba 13 Prueba hERG
Con el propósito de evaluar el riesgo de una prolongación del intervalo QT del electrocardiograma del compuesto de la presente invención, los efectos del compuesto de la presente invención sobre la corriente rectificadora retardada (Ikt), la cual juega un papel importante en el proceso de repolarización ventricular, se estudió usando células CHO que expresan el canal del gen relacionado con éter-a-go-go humano (hERG).
Después una celda se retuvo en un potencial de membrana de -80 mV por un método de sujeción de parche de celda usando un sistema de sujeción de parche automatizado (QPatch; Sophion Bioscience A/S) y proporcionó una fuga potencial de -50 mV, Ik inducida por la estimulación de pulso de despolarización a +20 mV por 2 segundos y, además, se registró la estimulación del pulso de repolarización a -50 mV por 2 segundos. Después que la corriente generada se estabilizó, la solución extracelular (NaCl: 145 mmol/L, KCl: 4 mmol/L, CaCh: 2 mmol/L, MgC^: 1 mmol/L, glucosa: 10 mmol/L, HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinetansulfónico): 10 mmol/L, pH=7.4), en la cual el compuesto de la presente invención se ha disuelto a una concentración objetivo, se aplicó a la celda a una temperatura ambiente por 10 minutos. A partir del registro kr, un valor absoluto de la corriente pico de la cola se midió con base en el valor de la corriente en el potencial de la membrana de reposo usando software de análisis (Falster Patch;Sophion Bioscience A/S). Además, se calculó el % de inhibición con relación a la corriente pico de la cola antes de la aplicación del compuesto de la presente invención, y se comparó con el grupo aplicado con vehículo (0.1% de solución de dimetilsulfóxido) para evaluar la influencia del compuesto de la presente invención en kr.
Ejemplo de Prueba 14 Prueba de unión a la proteína
La fracción no unida del presente compuesto en suero se midió usando suero de varias especies.
Las condiciones reactivas son como sigue: método d evaluación, diálisis de equilibrio; Tiempo de reacción, 24 horas; Temperatura de reacción, 37°C; Concentración del presente compuesto, 2 jg/mL.
La solución de prueba se agregó a cada suero y la mezcla se agitó para preparar las muestras de suero a la concentración mencionada anteriormente. Cada muestra de suero se agregó en un lado de la celda y se agregó salina amortiguada de fosfato (PBS) en el otro lado para realizar diálisis de equilibrio a 37°C por 24 horas. Después, la concentración de los compuestos en las muestras que se obtienen de ambos lados se mide por LC/MS/MS.
Ejemplo de Prueba 15 Prueba farmacocinética
Materiales y Métodos
(1) Animales: se usaron ratas SD
(2) Condiciones de reproducción: las ratas SD se dejaron tomar libremente alimento sólido y agua de grifo esterilizada.
(3) Dosis y agrupamiento: administrados oralmente o intravenosamente a una dosis predeterminada: agrupamiento fue como sigue (Dependiente de la dosis en el compuesto).
Administración Oral: 1 mg/kg (n = 2)
5 Administración intravenosa: 0.5 mg/kg (n = 2)
(4) Preparación de solución de dosificación: para administración oral, en una solución o un estado de suspensión; para administración intravenosa, en un estado de solubilidad.
(5) Método de administración: en administración oral, administrar forzadamente en los ventrículos con sondas orales; en administración intravenosa, administrada a la vena caudal con una jeringa equipada con aguja.
10 (6) Puntos de evaluación: la sangre se recolectó durante un tiempo, y la concentración de plasma del fármaco se midió
por LC/MS/MS.
(7) Análisis estadístico: con respecto a la transición de la concentración de plasma del compuesto presente, el área bajo la curva concentración de plasma-tiempo (AUC) se calculó por el programa de cuadrado de mínimos cuadrados no lineales WinNonlin (nombre comercial registrado), y la biodisponibilidad (BA) se calculó de las AUCs del grupo de 15 administración oral y grupo de administración intravenosa. Se calculó la separación del cuerpo total (CLtot) dividiendo la dosis por la AUC del grupo de administración intravenosa.
Los datos de los compuestos de la presente divulgación, son como se muestra en la siguiente Tabla.
Tabla 139
Compuesto
No.
1-127
AUC (po) (ng-hr/mL)
2460
AUC (¡v) (ng-hr/mL)
2330
imagen35
20 Ejemplo de Prueba 16: Prueba de solubilidad en polvo
Una cantidad apropiada del compuesto de la presente invención se coloca en un contenedor adecuado y 200 pl de solución JP-1 (se agregó agua a 2.0 g de cloruro de sodio y 7.0 ml de ácido clorhídrico para alcanzar 1000 ml), solución JP-2 (se agregó 500 ml de agua a 500 ml de amortiguador de fosfato con un pH de 6.8) o 20 mmol/l de taurocolato de sodio (TCA)/solución JP-2 (se agregó solución JP-2 a 1.08 g de TCA para alcanzar 100 ml) se agregó 25 independientemente para alcanzar el contenedor. Cuando la cantidad total se disolvió después de agregar el reactivo de prueba, el compuesto de la presente invención se agregó apropiadamente. Después se selló y se agitó a 37°C por 1 hora, se filtró la solución y se agregó 100 pl de metanol a 100 pl de cada filtrado para diluirse dos veces. La velocidad de dilución se cambió como sea necesario. Después se verificó que no existen burbujas y depósito, el contenedor se selló y agitó. El compuesto de la presente invención se midió usando HPLC por el método de curva de calibración absoluta.
30 Ejemplo de Preparación
Los siguientes Ejemplos de Formulación son solamente ejemplificados y no pretenden limitar el alcance de la invención.
Ejemplo de Formulación 1: Tableta

Compuesto de la presente invención 15 mg

Lactosa 15 mg

35 Estearato de calcio 3 mg
Los ingredientes anteriores diferentes a Estearato de Calcio son uniformemente mezclados, picados, granulados, secador para preparar gránulos de tamaño adecuado. Después de la adición de Estearato de Calcio, la mezcla se comprimió para preparar tabletas.
Ejemplo de Formulación 2: Cápsulas
40 Compuesto de la presente invención 10 mg
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15
20
25
30

Estearato de Magnesio 10 mg

Lactosa 80 mg
Los ingredientes anteriores son uniformemente mezclados para preparar medicina en polvo como polvo o partículas finas, las cuales son colocadas en contenedores de cápsulas para preparar cápsulas.
Ejemplo de Formulación 3: Gránulos

Compuesto de la presente invención 30 mg
Lactosa 265 mg

Estearato de Magnesio 5 mg
Los ingredientes anteriores con completamente mezclados, picados, se selecciona el tamaño para preparar gránulos de tamaño adecuado.
Ejemplo de Formulación 4: Tabletas oralmente dispersadas
Los compuestos de la presente invención y celulosa cristalina se mezclan, granulan y se hacen las tabletas para proporcionar tabletas oralmente dispersadas.
Ejemplo de Formulación 5: Jarabes secos
Los compuestos de la presente invención y lactosa se mezclan, pican, granulan y tamizan para dar tamaños adecuados de jarabes secos.
Ejemplo de Formulación 6: Invecciones
Los compuestos de la presente invención y amortiguador de fosfato se mezclan para proporcionar la inyección.
Ejemplos de Formulación 7: Infusiones
Los compuestos de la presente invención y amortiguador de fosfato se mezclan para proporcionar inyecciones.
Ejemplo de Formulación 8: Inhalaciones
El compuesto de la presente invención y lactosa se mezclan y pican finamente para proporcionar inhalaciones.
Ejemplo de Formulación 9: Ungüentos
Los compuestos de la presente invención y petrolato se mezclan para dar ungüentos.
Ejemplos de Formulación 10: Parches
Los compuestos de la presente invención y base tal como yeso adhesivo o similares, se mezclan para proporcionar parches.
Aplicabilidad Industrial
Los compuestos representados por la Fórmula (I) tienen una actividad antagonística en el receptor P2X3 y/o P2X2/3 y son útiles en el tratamiento de enfermedades o condiciones asociadas con un receptor P2X3 y/o P2X2/3, tal como dolor crónico, trastorno de orina, enfermedad respiratoria y similares.

Claims (7)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de fórmula:
    imagen1
    o su sal farmacéuticamente aceptable.
    5 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, seleccionado de los compuestos de la fórmula siguiente:
    imagen2
    imagen3
    o
    o su sal farmacéuticamente aceptable.
  2. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que es:
    5
    o su sal farmacéuticamente aceptable.
    imagen4
    imagen5
    imagen6
  3. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que es:
    imagen7
    o su sal farmacéuticamente aceptable.
    10 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que es:
    imagen8
    o su sal farmacéuticamente aceptable.
  4. 6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que es:
    imagen9
    5 o su sal farmacéuticamente aceptable.
  5. 7. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o su sal farmacéuticamente aceptable.
  6. 8. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, en donde la composición tiene una actividad antagonística del receptor P2X3 y/o P2X2/3.
    10 9. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o su sal farmacéuticamente aceptable,
    para usarse en un método para tratar y/o prevenir una enfermedad relacionada con P2X3 y/o P2X2/3 receptor.
  7. 10. El compuesto o su sal farmacéuticamente aceptable para usarse de conformidad con la reivindicación 9, en donde la enfermedad relacionada con P2X3 y/o P2X2/3 receptor es dolor crónico, trastorno de la orina, o enfermedad respiratoria.
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