ES2637332T3

ES2637332T3 - Polimorfos anhidros de nitrato de (2R,3S,4R,5R)-5-(6-(ciclopentilamino)-9H-purin-9-il)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)}metilo y procedimientos de preparación del mismo

Info

Publication number: ES2637332T3
Application number: ES13741502.2T
Authority: ES
Inventors: William K. Mcvicar
Original assignee: Inotek Pharmaceuticals Corp
Current assignee: Rocket Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2012-01-26
Filing date: 2013-01-25
Publication date: 2017-10-11
Anticipated expiration: 2033-01-25
Also published as: CN104093731A; EP2807178A4; US20160137686A1; SI2807178T1; US9278991B2; BR112014018413A8; IN2014DN05987A; EP2807178B9; EP2807178A1; JP2018024636A; CN104093731B; MX2014009086A; WO2013112850A1; US9718853B2; SG11201403979TA; AU2017204674A1; IL233812A0; CY1119271T1; EP2807178B1; EP3235825A1

Abstract

Compuesto A que tiene la estructura: en forma de polimorfo anhidro cristalino A2 que tiene los siguientes datos de cristal, (i) C15H20N6O6; Mr >= 380,37; sistema cristalino ortorrómbico; grupo espacial P212121; a >= 5,51796(17) Å; b >= 7,14615(29) Å; c >= 42,9738(29) Å y V >= 1694,55(14) Å3; o (ii) que tiene picos sustancialmente equivalentes en la difracción de rayos X de polvo con radiación CuK 1 a un ángulo de reflexión 2-teta como se muestra en la tabla 5; o (iii) que tiene difracción de rayos X de polvo con espectros de radiación CuK 1 que tienen picos a aproximadamente 16,9, 18,1, 19,1, 20,8, 21,3, 22,0, 22,8, 23,8, 24,9, 25,0, 29,1, 29,8, 34,2 y 35,8 + 0,2 grados de 2 teta, caracterizado por que el compuesto A está libre al menos en un 75 % de otras formas sólidas del compuesto A.

Description

Polimorfos anhidros de nitrato de (2R,3S,4R,5R)-5-(6-(ciclopentilamino)-9H-purin-9-il)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2il)}metilo y procedimientos de preparación del mismo 5

Campo de la invención

La presente invención proporciona una forma polimórfica anhidra novedosa de nitrato de [(2R,3S,4R,5R)-5-(6(ciclopentilamino)-9H-purin-9-il)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)]metilo (compuesto A), composiciones farmacéuticas

10 que contienen la forma polimórfica anhidra novedosa y procedimientos de preparación de la forma polimórfica anhidra novedosa.

Antecedentes de la invención

15 El compuesto A está representado por la siguiente estructura

nitrato de [(2R,3S,4R,5R)-5-(6-(ciclopentilamino)-9H-purin-9-il)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)]metilo.

20 El compuesto A es un agonista selectivo del receptor A1 de adenosina y es de uso particular en el tratamiento de la presión intraocular elevada como se describe en el documento PCT/US2010/033112 (publicado como el documento WO2010/127210).

25 El compuesto A se puede preparar usando los procedimientos descritos en la patente US 7.423.144, el documento US 20090062314 y el documento WO2010/127210.

Muchos sólidos farmacéuticos pueden existir en diferentes formas físicas. El polimorfismo se puede caracterizar como la capacidad de una sustancia farmacéutica para existir en dos o más fases cristalinas que tienen diferentes 30 disposiciones y/o conformaciones de las moléculas en la red cristalina.

Los polimorfos de un sólido farmacéutico pueden tener diferentes propiedades físicas y químicas de estado sólido. La forma polimórfica más estable de una sustancia farmacéutica se usa a menudo porque tiene la posibilidad más baja de conversión de una forma polimórfica a otra.

35 Una forma cristalina particular de un compuesto puede tener propiedades físicas que difieren de las de otras formas polimórficas y dichas propiedades pueden influir en el procesamiento fisicoquímico y farmacéutico del compuesto, particularmente cuando el compuesto se prepara o se usa a escala comercial. Dichas diferencias pueden alterar las propiedades de manipulación mecánica del compuesto, tal como la dispersión en una mezcla de excipientes de

40 formulación sólida o dentro de una formulación en suspensión. Los polimorfos también se conocen en algunos casos por tener diferentes perfiles de estabilidad química y diferente solubilidad del material sólido. Como resultado de estas posibles diferencias fisicoquímicas específicas a los polimorfos, el descubrimiento de nuevas formas polimórficas proporciona una nueva oportunidad para mejorar la fabricación o características de un producto final farmacéutico.

45 Además, las nuevas formas polimórficas de una sustancia farmacéutica pueden presentar diferentes puntos de fusión, higroscopicidad, estabilidad, solubilidad y/o velocidad de disolución, cristalinidad, propiedades cristalinas y características de manejo de formulación, que están entre las numerosas propiedades que se deben considerar en la preparación de medicamentos que se pueden administrar eficazmente, estos pueden afectar materialmente la

50 calidad de un producto farmacéutico. Además, las entidades reguladoras requieren un conocimiento, caracterización

y control definitivos de la forma polimórfica del componente activo en formas de dosificación farmacéutica si está en estado sólido.

El compuesto A está en desarrollo por los solicitantes para reducir la presión intraocular. Los solicitantes han 5 encontrado una serie de polimorfos del compuesto A que son útiles para controlar ciertas propiedades de formulación deseables. En particular se han identificado, aislado y caracterizado dos formas anhidras.

Sumario de la invención

10 En el presente documento se proporciona el compuesto A en forma de polimorfo anhidro A2 como se define en la reivindicación 1, composiciones farmacéuticas que comprenden el polimorfo según se define en la reivindicación 7 y procedimientos de preparación del compuesto A de la invención como se define en la reivindicación 11. Los modos de realización preferentes de la invención se definen en las reivindicaciones dependientes.

15 El compuesto A puede existir como polimorfo anhidro alternativo A1 fuera del alcance de la presente invención que tiene los siguientes datos de cristal,

C15H20N6O6; Mr = 380,37;

20 sistema cristalino monoclínico; grupo espacial P21; a = 5,546(2) Å; b = 7,107(2) Å; c = 21,929(9) Å;

25 V = 858,8(5) Å3, y Z = 2.

La presente invención proporciona el compuesto A en forma de polimorfo anhidro A2 que tiene los siguientes datos de cristal,

30 C15H20N6O6; Mr = 380,37; sistema cristalino ortorrómbico; grupo espacial P212121;

35 a = 5,51796(17) Å; b = 7,14615(29) Å; c = 42,9738(29) Å y V = 1694,55(14) Å3.

40 Por tanto, como alternativa, la presente invención proporciona el compuesto A en forma de polimorfo anhidro A2 que tiene picos sustancialmente equivalentes a un ángulo de reflexión 2-teta como se muestra en la tabla 5.

El compuesto A de la presente invención está libre al menos en un 75 % de otras formas sólidas del compuesto A.

45 En un modo de realización se proporciona el compuesto A como se define anteriormente que está libre al menos en un 80 % de otras formas sólidas del compuesto A.

En un modo de realización se proporciona el compuesto A como se define anteriormente que está libre al menos en un 90 % de otras formas sólidas del compuesto A.

50 En un modo de realización se proporciona el compuesto A como se define anteriormente que está libre al menos en un 95 % de otras formas sólidas del compuesto A.

En un modo de realización se proporciona el compuesto A como se define anteriormente que está libre al menos en 55 un 99 % de otras formas sólidas del compuesto A.

En un modo de realización se proporciona el compuesto A como se define anteriormente que está libre en un 100 % de otras formas sólidas del compuesto A.

60 En otro aspecto se proporciona un procedimiento para obtener el polimorfo A2, comprendiendo el procedimiento las etapas de tomar el compuesto A en un vehículo líquido y calentar hasta aproximadamente 40 grados durante al menos 9 horas.

En un modo de realización, el compuesto A se microniza y luego se añade a un vehículo líquido acuoso. En un modo 65 de realización, el compuesto A se microniza en partículas con tamaños de menos de 50 micrómetros.

En un modo de realización, el procedimiento incluye la etapa de calentar hasta aproximadamente 40 grados C durante 15 horas.

En un modo de realización, el vehículo líquido está adaptado para proporcionar una suspensión acuosa del compuesto A. En otro modo de realización, el vehículo líquido incluye un tensioactivo y un conservante. En un modo de realización, el tensioactivo se selecciona de polisorbato 80, polisorbato 60, polisorbato 40, polisorbato 20, estearato de polioxilo 40, poloxámeros, tiloxapol, POE 35 y aceite de ricino. En un modo de realización, el conservante se selecciona de una sal de amonio cuaternario, cloruro de benzalconio, cetrimida, clorobutanol, ácido sórbico y ácido bórico.

En otro aspecto se proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto A en forma de polimorfo anhidro A2 como se define anteriormente y que comprende además uno o más ingredientes farmacéuticamente aceptables seleccionados del grupo que consiste en vehículos, excipientes, diluyentes, aditivos, cargas, tensioactivos, aglutinantes, conservantes antimicrobianos, agentes potenciadores de la viscosidad y tampones.

En un modo de realización, la composición farmacéutica que comprende el polimorfo A2 definido anteriormente se formula para administración oftálmica.

En otro aspecto, se proporciona también un procedimiento para tratar un sujeto que necesita un agonista selectivo de adenosina A1, comprendiendo el procedimiento administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto A en forma de polimorfo anhidro A2 definido anteriormente.

En otro aspecto, se proporciona también un procedimiento para reducir la presión intraocular en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar en forma tópica a un ojo de un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto A en forma de polimorfo anhidro A2 definido anteriormente.

El breve sumario previo describe ampliamente las características y ventajas técnicas de ciertos modos de realización de la presente invención. Otras ventajas técnicas se describirán en la descripción detallada de la invención que sigue. Las características novedosas que se considera que son características de la invención se comprenderán mejor a partir de la descripción detallada de la invención cuando se analicen en relación con cualquiera de las figuras y ejemplos adjuntos. Sin embargo, las figuras y ejemplos proporcionados en el presente documento pretenden ayudar a ilustrar la invención o ayudar a desarrollar una comprensión de la invención, y no pretenden ser definiciones del alcance de la invención.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1: muestra la estructura molecular y el esquema de numeración de átomos para el compuesto A -forma A1.

Figura 2: muestra la disposición de empaquetado y los enlaces de H para el compuesto A -cristales de la forma A1.

Figura 3: muestra la estructura molecular y el esquema de numeración de átomos para el compuesto A -forma A2.

Figura 4: muestra la disposición de empaquetado y los enlaces de H para el compuesto A -cristales de la forma A2.

Figura 5: muestra una superposición en los espectros de polvo de rayos X observados para las formas del

compuesto A descritas en el presente documento. La línea gris inferior representa la forma A1 y la

línea negra superior representa la forma A2.

Figura 6: muestra la superposición de moléculas de la forma A1 (negro) y la forma A2 (gris).

Figura 7: muestra el gráfico de datos de XRPD de la conversión de la forma polimórfica A1 a la forma polimórfica A2 en el tiempo a 40 grados C.

Descripción detallada de la invención

Los modos de realización de la presente invención proporcionan el compuesto A en forma de polimorfo anhidro A2.

Definiciones

Algunas estructuras químicas en el presente documento se representan usando líneas negritas y discontinuas para representar enlaces químicos. Estas líneas negritas y discontinuas representan la estereoquímica absoluta. Una

línea negrita indica que un sustituyente está por encima del plano del átomo de carbono al que está unido y una línea discontinua indica que un sustituyente está por debajo del plano del átomo de carbono al que está unido.

El término "cantidad eficaz" como se usa en el presente documento se refiere a una cantidad de un agonista selectivo de adenosina A1 que es eficaz para: (I) tratar o prevenir PIO elevada; o (ii) reducir PIO en un ser humano.

El término "sujeto" pretende incluir organismos, por ejemplo, procariotas y eucariotas, que son capaces de padecer o les aqueja una enfermedad, trastorno o afección asociada con PIO elevada. Ejemplos de sujetos incluyen mamíferos, por ejemplo, seres humanos, perros, vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras, gatos, ratones, conejos, ratas y animales transgénicos no humanos. En ciertos modos de realización, el sujeto es un ser humano, por ejemplo, un ser humano que padece de, a riesgo de padecer de o posiblemente capaz de padecer de un aumento en PIO. En otro modo de realización, el sujeto es una célula.

El término "tratar", "tratado", "tratando" o "tratamiento" incluye la disminución o alivio de al menos un síntoma asociado o provocado por la condición, trastorno o enfermedad que se está tratando. En ciertos modos de realización, el tratamiento comprende la inducción de PIO elevada, seguido por la activación del compuesto de la invención, que a su vez disminuirá o aliviará al menos un síntoma asociado o provocado por la PIO elevada. Por ejemplo, el tratamiento puede ser la disminución de uno o varios síntomas de un trastorno o la erradicación completa de un trastorno.

El término "aproximadamente" o "sustancialmente" normalmente significa dentro de un 20 %, más preferentemente dentro de un 10 %, y lo más preferentemente aún dentro de un 5 % de un valor o intervalo dado.

Procedimientos de preparación y estudios

Síntesis del compuesto A

El esquema 1 siguiente muestra el esquema de reacción en la preparación del compuesto A. La preparación del compuesto A se describe en detalle.

Las cantidades detalladas se calculan para un lote de producción de aproximadamente 40 g de compuesto A. La producción descrita se puede aumentar a escala.

Etapa 1: Se cargó 1 litro de etanol en un reactor y se agitó rápidamente. Se añadieron 0,3 kg de 6-cloroadenosina y 0,267 kg de ciclopentilamina al etanol en el reactor. Se calentó el reactor hasta reflujo durante 2 h, luego se enfrió a 8 grados C y se mantuvo a estas condiciones durante 12 horas. Se filtró el material cristalizado del líquido madre y se lavó la torta sólida con 0,33 L de etanol para producir una torta húmeda. Se secó la torta húmeda para obtener N6-ciclopentiladenosina (0,249 kg).

Etapa 2: Se usó dimetoxipropano para proteger los hidroxilos 2' y 3' de la unidad de azúcar. Se cargaron 3,7 litros de acetona en el reactor y se agitó rápidamente. Se añadieron 0,249 kg de N6-ciclopentiladenosina; 0,386 kg de dimetoxipropano y 0,148 kg de ácido p-toluenosulfónico a la acetona (3,7 L) en el reactor. Se calentó el reactor a 40 grados C durante 1,5 horas. Luego, se eliminaron los disolventes mediante destilación a vacío a 40 grados C para preparar un material bruto seco. Luego, se añadieron 3,1 L de acetato de etilo al material bruto seco obtenido. Luego, se enfrió la disolución a 6 grados C y se añadió disolución de NaOH 0,5 N mediante goteo hasta alcanzar un pH de 8. Esto equivale a aproximadamente 1,55 L de disolución de NaOH. Después de completar la separación de fases, se añadieron 0,78 L de disolución saturada de cloruro de sodio al 20 % a la fase orgánica. Se añadieron de nuevo 0,78 L de disolución saturada de cloruro de sodio al 20 %. Se agitaron las dos fases durante 30 minutos. La fase orgánica que estaba basada en acetato de etilo se separó y se secó con 0,157 kg de sulfato de sodio y se lavó con 1 L de acetato de etilo. La disolución se filtró y evaporó hasta obtener un aceite a vacío a 55 grados C. Al aceite restante se añadieron 1,2 L de hexano y 0,3 L de acetato de etilo. Se calentó la mezcla de reacción a 55 grados C durante 3 horas y luego se enfrió la disolución a 5 grados C y se mantuvo a esta temperatura durante 12 horas. Se filtraron los sólidos y se lavó la torta resultante con una disolución de 0,625 L de acetato de etilo:hexano (1:4). Después de secar el sólido se obtuvieron 140 g de 2',3'-isopropiliden-N6-ciclopentiladenosina.

Etapa 3: La nitración de la posición 5' de la 2',3'-isopropiliden-N6-ciclopentiladenosina obtenida en la etapa 2 se llevó a cabo con una mezcla de ácido nítrico-anhídrido acético. Se cargaron 0,127 L de diclorometano en el reactor y se agitó rápidamente. Se añadieron 140 g de 2',3'-isopropiliden-N6-ciclopentiladenosina y se enfrió la disolución de reacción a -20 grados C. Se añadieron 0,547 L de una disolución compuesta de 0,127 L de ácido nítrico al 65 % en 0,420 L de anhídrido acético a una velocidad que mantenía la mezcla de reacción por debajo de -15 grados C; se ha encontrado que el intervalo de temperaturas de entre -23 a -18 grados C es el intervalo objetivo preferente. Si la temperatura aumenta, entonces se encontró que se generan impurezas. La adición de la mezcla ácida tardó aproximadamente 0,5 h. Se agitó la mezcla durante 20 minutos y luego se desactivó en 0,35 L de disolución saturada de bicarbonato de sodio frío. Se corrigió el pH hasta 7 mediante la adición de bicarbonato de sodio sólido a la fase acuosa. Se separó la fase orgánica y se extrajo la capa acuosa con 0,4 L de diclorometano. Se combinaron

las fases orgánicas y se lavaron con 0,6 L de disolución saturada de cloruro de sodio. Luego, se separó la fase orgánica que contiene 2',3'-isopropiliden-N6-ciclopentiladenosina-5'-nitrato para su uso en la etapa 4 a continuación.

Etapa 4: Debido a su labilidad, el 2',3'-isopropiliden-N6-ciclopentiladenosina-5'-nitrato protegido se hidrolizó

5 directamente sin purificación. Se evaporó la disolución de la etapa 3 a 20 grados C a vacío hasta obtener un aceite. Se enfrió el aceite a menos de 2 grados C. Se añadieron 1,95 L de disolución de ácido trifluoroacético:agua (3:1). Se agitó la mezcla de reacción durante 0,5 horas y se dejó calentar a temperatura ambiente mientras se agitaba. Después de eso, se preparó la disolución de bicarbonato de sodio y se enfrió a menos de 10 grados C. Se añadió la disolución de bicarbonato de sodio a la mezcla de reacción para desactivar la reacción. Se añadió acetato de etilo al

10 recipiente de reacción y se ajustó el pH y la capa orgánica se trató y se secó con sulfato de sodio. La disolución de producto resultante se secó luego varias veces con sulfato de magnesio y el separador de materiales para formar el compuesto A bruto.

Luego, se recristalizó el compuesto A bruto en etanol. Se disolvió el material del compuesto A bruto en etanol, luego

15 se concentró hasta la mitad del volumen para cristalizar durante 36 horas. Después de eso, se aisló el producto resultante mediante filtración para proporcionar el compuesto A. RMN de 1H (DMSO-d6): δ 1,49-1,58 (m, 4H), 1,661,72 (m, 2H), 1,89-1,94 (m, 2H), 4,12-4,17 (m, 1H), 4,28-4,33 (m, 1H), 4,48 (sa, 1H), 4,65-4,87 (m, 3H), 5,5 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,63 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 5,91 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 8,17 (sa, 1H), 8,30 (s, 1H); EM (ES+): m/z 381,35 (M+1); anal. Calculado para C15H20N6O6: C, 47,37; H, 5,30; N, 22,10; encontrado: C, 47,49; H,

20 5,12, N, 21,96.

Esquema 1:

10 Preparación de los polimorfos A1 y A2 5

Durante la preparación de disoluciones oftálmicas del compuesto A, se observó variabilidad en el tamaño de crecimiento de partículas y la estabilidad. Debido a la variabilidad, se han hecho esfuerzos para establecer si uno o más polimorfos se podrían aislar y purificar con el fin de superar la variabilidad en el crecimiento del tamaño de partícula y la estabilidad.

Estudio de cristalización:

El material del compuesto A usado para experimentos de cristalización se tomó de un lote de CMC preparado sustancialmente como se describe en las etapas 1 a 4 anteriores, que posteriormente se encontró que comprendía una mezcla de aproximadamente un 67 por ciento de la forma A1 y aproximadamente un 33 por ciento de la forma A2.

Forma A1 (ejemplo de referencia)

Varias cristalizaciones por evaporación lenta como se detalla en la tabla 1 a continuación dieron cristales usando los disolventes acetato de etilo, isopropilo, acetato, MEK y 2-metoxietanol que se usaron para establecer la estructura cristalina y molecular de la forma A1 como se muestra en las figuras 1 y 2. También se ha encontrado que una segunda recristalización en etanol del compuesto A obtenido en la etapa 4 anterior también produce una forma sustancialmente pura del polimorfo A1. Es crítico en la recristalización adicional en etanol que no se permita que la humedad de la atmósfera se condense sobre la torta húmeda del compuesto A. Esto se debe a que se pueden formar impurezas en presencia de agua. En el proceso de recristalización preferente en etanol luego se seca el compuesto recristalizado en un secador de liofilización a temperatura ambiente.

Tabla 1. Resultados de los experimentos de cristalización por evaporación lenta.

Disolventes: µl de disolventes Temperatura Cristales

1,4-Dioxano: 400 Tamb Forma A1

MEK♦: 400 Tamb Demasiado pequeños

Trifluoroetanol: 400 Tamb Demasiado pequeños

Acetato de etilo♦: 400 Tamb Forma A1

Acetato de isopropilo♦: 400 Tamb Forma A1

1,2-Dimetoxietano: 400 Tamb Vidrio

2-Metoxietanol: 400 Tamb Forma A1

3-Metil-2-butanona♦: 400 Tamb Forma A1

DMF: 400 Tamb Vidrio

Iso-propanol♦: 400 Tamb Demasiado pequeños

Etanol/agua (80:20)♦: 400 Tamb Demasiado pequeños

8

Disolventes µl de disolventes Temperatura Cristales

Etanol/agua (90:10)♦ 400 Tamb Demasiado pequeños

♦ Para disolver el material, se calentó la mezcla hasta 60 ºC y se mantuvo a esta temperatura durante aproximadamente 30 min. A continuación, se dejó para cristalización a temperatura ambiente (Tamb). MEK: Metiletilcetona. DMF: Dimetilformamida

Se colocaron aproximadamente 3-8 mg de compuesto A en viales de 8 ml a los que se añadieron 400 µl de disolvente como se detalla en la tabla 1. Los experimentos se llevaron a cabo a temperatura ambiente. Cada vial de 8 ml se colocó en un vial de 20 ml que luego se cerró y se perforó un pequeño orificio en la tapa de los viales de 20

5 ml. Los viales se dejaron a temperatura ambiente. Se recogió directamente un único cristal incoloro (en forma de placa) de tamaño aproximado 0,35 x 0,25 x 0,05 mm de la disolución de acetato de etilo y se montó sobre un goniómetro. Las mediciones se realizaron a temperatura ambiente (296 K). Los datos cristalográficos finales son como se muestra en la tabla 2 a continuación:

10 Tabla 2: Datos de cristal y refinamiento de la estructura para el compuesto A -forma A1

Identificación: Forma A1

Fórmula empírica: C15H20N6O6;

Peso fórmula: Mr = 380,37;

Sistema cristalino: Sistema cristalino monoclínico;

Grupo espacial: Grupo espacial P21;

a = 5,546(2) Å;

Dimensiones de celda unitaria: b = 7,107(2) Å;

c = 21,929(9) Å;

V = 858,8(5) Å3

[Grados]: 96,501(8)

Z: 2.

T [K]: 296(2)

A: 0,71073

Dc [g/cm3]: 1,471

[mm-1]: 0,115

F(000): 400

Tamaño de cristal [mm3]: 0,35 x 0,25 x 0,05

Intervalo de recogida de datos [grados]: 3-27,4

Reflexiones recogidas: 5868

Reflexiones independientes: 3315 [Rint = 0,0268]

Completitud a = 27,4 [%]: 97,8

Transmisión máx. y mín.: 0,9942 y 0,9606

Datos/restricciones/parámetros: 3315/1/289

Bondad de ajuste en F2: 1,063

Índices R finales [1>2(1)]: R1 = 0,0418, wR2 = 0,0970

Índices R (todos los datos): R1 = 0,0556, wR2 = 0,1050

Parámetro de estructura absoluta: -0,1(12)

Coeficiente de extinción: 0,081(8)

Las mediciones de cristal único se realizaron con difractómetro Nonius Kappa-CCD equipado con refrigerador de nitrógeno líquido Cryostream de Oxford usando radiación MO K. Los datos para la forma A1 se recogieron hasta teta = 27,5°a 296 K produciendo 5868 reflexiones. La reducción de datos se realizó usando HKL Scalepack (Otwinowski & Minor 1997) y los parámetros de celda se obtuvieron usando Denzo y Scalepak (Otwinowski & Minor 1997) desde 2569 dentro del intervalo de teta de 1 a 27,5°. La estructura se resolvió usando procedimientos directos de SHELXZ97 (Sheldrick, G. M. 1997a).

Además de los datos de cristalografía de rayos X monocristal, se recogieron también datos de difracción de polvo en un difractómetro D8 Advance usando radiación CuKα1 (1,54016 A) con monocromador de germanio a temperatura ambiente. Los datos se recogieron desde teta 2,5 a 32,5° con etapas de teta de 0,016° en el detector de estado sólido LynxEye. La muestra se midió en un capilar de 8 mm de longitud con un diámetro de 0,5 mm.

La forma polimorfa anhidra cristalina A1 se caracteriza preferentemente mediante un espectro de PXRD que tiene picos a aproximadamente 17,5, 20,5, 21,2, 22,7, 24,8, 33,2 y 42,1 + 0,2 grados de 2 teta.

En la tabla 3 se enumeran la intensidad, 2 teta y el espaciamiento D junto con los índices HKL. Debido a que tanto la intensidad como los valores de 2 teta dependen de la radiación usada, por lo tanto se implementó el espaciamiento

D. La radiación usada fue CuKα1.2

Tabla 3. HKL, 2 teta, espaciamiento D e intensidad de la difracción de polvo de la forma A1 (P21)

h: k / Espaciamiento D 2θ Intensidad

0
0: 1 21,757 4,058 3,070(29)

0
0: 2 10,878 8,121 1,910(36)

0
0: 3 7,252 12,194 0,623(59)

0: 1 1 6,745 13,115 0,025(65)

0: 1 2 5,943 14,895 2,323(93)

-1: 0 1 5,498 16,109 3,19(30)

1: 0 0 5,480 16,162 6,84(33)

0
0: 4 5,439 16,283 0,91(15)

-1: 0 2 5,192 17,064 1,06(15)

1: 0 1 5,147 17,214 4,07(16)

0: 1 3 5,072 17,472 11,87(17)

-1: 0 3 4,697 18,878 0,92(18)

1: 0 2 4,642 19,104 16,40(23)

0
0: 5 4,351 20,393 0,5(17)

1: -1 -1 4,346 20,420 20,7(26)

1
1: 0 4,337 20,462 19,5(15)

0: 1 4 4,317 20,559 10,14(40)

1: -1 -2 4,190 21,187 42,01(46)

1
1
1: 4,166 21,309 7,14(92)

-1: 0 4 4,160 21,342 1,29(81)

1: 0 3 4,106 21,624 1,29(24)

1: -1 -3 3,916 22,686 77,44(52)

1
1: 2 3,884 22,876 12,02(34)

0: 1 5 3,709 23,971 2,41(28)

-1: 0 5 3,664 24,270 0,03(28)

0
0: 6 3,626 24,530 1,18(60)

1: 0 4 3,617 24,590 5,78(63)

1: -1 -4 3,589 24,791 22,15(38)

h: k / Espaciamiento D 2θ Intensidad

1
1: 3 3,554 25,035 5,20(97)

0: 2 0 3,547 25,082 14,93(93)

0: 2 1 3,501 25,419 9,96(33)

0: 2 2 3,373 26,405 0,01(32)

1: -1 -5 3,256 27,371 1,19(38)

-1: 0 6 3,238 27,525 0,76(70)

0: 1 6 3,229 27,604 2,8(13)

1
1: 4 3,223 27,658 12,60(99)

1: 0 5 3,198 27,873 0,26(46)

0: 2 3 3,187 27,977 0,30(44)

0
0: 7 3,108 28,699 0,65(36)

1: -2 -1 2,981 29,953 14,3(20)

1: 2 0 2,978 29,982 0,2(25)

0: 2 4 2,971 30,050 5,21(90)

1: -1 -6 2,946 30,318 7,63(44)

1: -2 -2 2,929 30,494 1,64(66)

1: 2 1 2,921 30,581 0,0(11)

1
1: 5 2,916 30,638 2,36(86)

-1: 0 7 2,881 31,021 5,24(41)

1: 0 6 2,848 31,390 2,6(62)

0: 1 7 2,847 31,397 0,1(62)

1: -2 -3 2,831 31,580 11,04(53)

1: 2 2 2,819 31,720 3,23(48)

-2: 0 1 2,766 32,335 1,54(44)

0: 2 5 2,750 32,539 4,6(62)

-2: 0 2 2,749 32,548 1,3(64)

2: 0 0 2,740 32,657 1,45(63)

0
0: 8 2,720 32,908 0,37(43)

1: -2 -4 2,699 33,163 18,54(59)

-2: 0 3 2,689 33,286 0,53(97)

1: 2 3 2,684 33,350 0,65(92)

2: 0 1 2,673 33,500 2,6(11)

1: -1 -7 2,669 33,550 0,12(97)

1
1: 6 2,643 33,894 0,46(44)

-2: 0 4 2,596 34,521 1,31(47)

-1: 0 8 2,583 34,701 0,04(83)

2: -1 -1 2,577 34,778 1,6(15)

2: 0 2 2,574 34,832 0,3(12)

2: -1 -2 2,563 34,978 1,06(92)

2: 1 0 2,556 35,081 0(15)

1: 0 7 2,556 35,086 3(15)

1: -2 -5 2,549 35,182 9,2(11)

0: 1 8 2,539 35,316 2,7(16)

0: 2 6 2,536 35,369 2,3(26)

1: 2 4 2,533 35,412 4,6(16)

2: -1 -3 2,515 35,673 7,10(49)

2: 1 1 2,501 35,874 0,56(48)

-2: 0 5 2,479 36,208 0,01(47)

2: 1 5 2,089 43,279 5,9(61)

1: -2 -8 2,088 43,295 0,3(65)

h k / Espaciamiento D 2θ Intensidad

2 2 2 2,083 43,403 2,0(33) 0 1 10 2,080 43,471 2(110) -2 0 8 2,080 43,474 1(120) 0 3 5 2,078 43,519 0,7(59) 1 2 7 2,074 43,615 9,8(13) 1 -3 -4 2,056 44,008 9,4(15) 2 0 6 2,053 44,070 0,0(17) 1 3 3 2,049 44,156 2,0(11) 1 -1 -10 2,036 44,452 5,63(92) 2 -2 -5 2,032 44,555 7,3(10) 1 1 9 2,019 44,850 2,3(18) 2 2 3 2,018 44,889 0,0(21) 0 2 9 1,998 45,362 0(670) 2 -1 -8 1,996 45,403 70(970)

Forma A2

5 Ninguno de los ensayos o técnicas de cristalización intentadas, incluyendo (i) evaporación lenta de disolvente, (ii) difusión de vapor de disolvente no polar en disolución líquida del compuesto A y (iii) disolvente polar y cristalización controlada por temperatura con velocidad de enfriamiento lenta; produjo cristales adecuados de la forma A2 para el análisis de cristal único. En algunos experimentos, tales como, por ejemplo, en las cristalizaciones controladas por temperatura usando diversas mezclas de etanol/agua, se obtuvieron agujas muy finas. En la mayoría de los casos

10 los cristales parecían ser cristales gemelos, sin embargo ninguno de estos cristales dio suficientes reflexiones para obtener los parámetros de celda apropiados. Sin embargo, estos cristales se usaron para intentar la difracción de rayos X de polvo. Por lo tanto, se obtuvo el patrón de difracción de rayos X de polvo (XRPD) y luego se hicieron intentos para resolver la estructura de la forma A2 a partir de los datos de polvo. La primera etapa fue obtener la celda unitaria apropiada. Después de varios ensayos, se obtuvieron dos posibles configuraciones de celda. Ambas

15 fueron ortorrómbicas aunque con diferente centrado en las caras de Bravais. Una de estas celdas era una celda C centrada en la cara, mientras que la otra era primitiva P. Basándose en el hecho de que la celda C se podría transformar en una más pequeña, a saber, P, esta última se refinó y se hicieron intentos para resolver la estructura con esta configuración. Además, con la celda P, se redujo la unidad asimétrica a 1 molécula, con C estaba relacionado con 2 moléculas independientes de simetría. Para el refinamiento de celda se usó el ajuste Pawley. Se

20 usó un ajuste Pawley basándose en el patrón de difracción de rayos X de alta resolución para comprobar la pureza de la muestra. El propósito principal del ajuste Pawley es refinar los parámetros de celda a partir del patrón completo. En el procedimiento de Pawley, los perfiles son analíticos, su anchura está restringida a seguir una ley de Caglioti con los tres parámetros refinables U, V, W como se definen en la mayoría de los softwares derivados de Rietveld. El software usado para el cálculo en este proyecto fue Topas con los siguientes criterios de ajuste:

25 Yo,m e Yc,m son los datos observados y calculados, respectivamente en el punto de datos m.

M, el número de puntos de datos,

30 P, el número de parámetros,

Wm, la ponderación dada al punto de datos m que para las estadísticas de recuento está dada por wm = 1/σ (Yo,m)2 donde σ (Yo,m) es el error en Yo,m

Tabla 4: Parámetros del ajuste Pawley para el compuesto A -forma A2

Identificación: Forma A2

T [K]: 293(2)

A: 1,54056

Sistema cristalino: Sistema cristalino ortorrómbico;

Grupo espacial: Grupo espacial P212121;

a = 5,51796(17) Å;

Dimensiones de celda unitaria: b = 7,14615(29) Å;

c = 42,9738(29) Å;

V = 1694,55(14) Å3

Tamaño capilar: 0,5 x 0,8

Intervalo de recogida de datos: 2-22,5

Rexp: 1,52

Rwp: 2,64

Rp: 1,91

RBragg: 7,8

GOF: 1,74

5 Para la resolución de estructura, se empleó el software Topas 3.0 (Bruker-AXS, 2005) usando el procedimiento de recocido simulado. Se construyó el modelo sobre la matriz Z y se establecieron varios ángulos de torsión como variables libres. El modelo obtenido no se refinó excepto para la celda unitaria. Los átomos de H se incluyeron basándose en la geometría y el esquema de enlaces de H. La figura 3 muestra la estructura molecular de la forma 2 del compuesto A y la figura 4 muestra el empaquetamiento de cristal y el esquema de enlaces de H.

10 Se obtuvieron patrones de XRPD usando una configuración de XRPD de alto rendimiento. Las placas se montaron sobre un difractómetro Bruker GADDS equipado con un detector de área Hi-Star. La plataforma de XRPD se calibró usando behenato de plata para los espaciamientos d largos y corindón para los espaciamientos d cortos.

15 La recogida de datos se llevó a cabo a temperatura ambiente usando radiación CuKα monocromática en la región 2teta entre 1,5 grados y 41,5 grados, que es la parte más distintiva del patrón de XRPD entre las formas polimórficas. El patrón de difracción de cada pocillo se recogió en intervalos de 2 teta (1,5 grados ≤ 2 teta ≤ 21,5 grados para el primer fotograma y 19,5 grados ≤ 2 teta ≤ 41,5 grados para el segundo) con un tiempo de exposición de 30 segundos para cada fotograma. No se aplicó sustracción de fondo ni suavizado de curva a los patrones de XRPD. El

20 material de vehículo usado durante el análisis de XRPD era transparente a los rayos X y contribuyó sólo ligeramente al fondo.

La forma polimórfica anhidra cristalina A2 se caracteriza preferentemente mediante espectros de PXRD que tienen picos a aproximadamente 16,9, 18,1, 19,1, 20,8, 21,3, 22,0, 22,8, 23,8, 24,9, 25,0, 29,1, 29,8, 34,2 y 35,8 + 0,2

25 grados de 2 teta.

En la tabla 5 se enumeran la intensidad, 2 teta y el espaciamiento D junto con los índices HKL. Debido a que tanto la intensidad como los valores de 2 teta dependen de la radiación usada, por lo tanto se implementó el espaciamiento

D. La radiación usada fue CuKα1.2

30 Tabla 5. HKL, 2 teta, espaciamiento D e intensidad de la difracción de polvo de la forma A2 (P212121)

h k l Espaciamiento D 2θ Intensidad

0 0 2 21,487 4,109 3,341(28) 0 0 4 10,743 8,223 2,277(38) 0 0 6 7,162 12,348 0,690(57) 0 1 1 7,049 12,547 0,802(58) 0 1 2 6,781 13,045 0,032(57) 0 1 3 6,395 13,837 1,088(68) 0 1 4 5,950 14,877 2,330(82)

0: 1 5 5,495 16,117 2,50(22)

1: 0 1 5,473 16,182 16,69(24)

h: k l Espaciamiento D 2θ Intensidad

0
0: 8 5,372 16,489 0,31(12)

1: 0 2 5,345 16,574 0,02(12)

1: 0 3 5,149 17,207 0,78(11)

0: 1 6 5,059 17,517 9,55(14)

1: 0 4 4,908 18,058 15,49(17)

0: 1 7 4,657 19,043 2,50(33)

1: 0 5 4,643 19,098 18,42(35)

1: 0 6 4,371 20,300 0,0(12)

1
1: 0 4,367 20,317 14,0(13)

1
1
1: 4,345 20,423 21,46(33)

0
0: 10 4,297 20,652 4,4(20)

0: 1 8 4,294 20,669 14,2(23)

1
1: 2 4,280 20,737 34,73(53)

1
1: 3 4,178 21,251 62,18(36)

1: 0 7 4,104 21,637 3,26(21)

1
1: 4 4,046 21,951 64,81(39)

0: 1 9 3,970 22,375 3,18(21)

1
1: 5 3,894 22,821 67,15(41)

1: 0 8 3,849 23,089 0,02(22)

1
1: 6 3,729 23,844 23,77(31)

0: 1 10 3,683 24,147 1,11(24)

1: 0 9 3,611 24,636 5,44(27)

0
0: 12 3,581 24,843 1,32(64)

0: 2 0 3,573 24,900 0,0(10)

0: 2 1 3,561 24,987 16,0(37)

1
1: 7 3,559 25,001 57,1(34)

0: 2 2 3,525 25,247 7,78(28)

0: 2 3 3,467 25,675 0,11(25)

0: 1 11 3,428 25,972 0,02(26)

0: 2 4 3,390 26,264 0(1200)

1: 0 10 3,390 26,264 0(1200)

1
1: 8 3,389 26,278 13(11)

0: 2 5 3,299 27,003 0,24(27)

1
1: 9 3,223 27,658 6,71(31)

0: 1 12 3,202 27,843 4,61(77)

0: 2 6 3,197 27,882 0,02(89)

1: 0 11 3,188 27,961 0,02(42)

0: 2 7 3,088 28,889 3,68(33)

0
0: 14 3,070 29,067 0,02(57)

1
1: 10 3,063 29,129 13,39(58)

1: 0 12 3,004 29,716 0,3(17)

0: 1 13 3,000 29,754 0,3(90)

1: 2 0 2,999 29,765 4,9(81)

1: 2 1 2,992 29,839 23,29(88)

0: 2 8 2,975 30,012 0,81(68)

1: 2 2 2,970 30,060 4,79(66)

1: 2 3 2,936 30,426 0,16(34)

1
1: 11 2,912 30,680 1,09(34)

1: 2 4 2,889 30,931 2,18(35)

0: 2 9 2,861 31,241 3,31(36)

h: k l Espaciamiento D 2θ Intensidad

1: 0 13 2,836 31,524 2,60(83)

1: 2 5 2,832 31,569 13,87(87)

0: 1 14 2,820 31,700 0,94(41)

1
1: 12 2,769 32,301 1,3(12)

1: 2 6 2,766 32,335 12,9(14)

2: 0 0 2,759 32,425 2,17(88)

2: 0 1 2,753 32,493 3,93(89)

0: 2 10 2,747 32,564 2,65(63)

2: 0 2 2,737 32,698 1,03(41)

2: 0 3 2,709 33,037 0,47(39)

1: 2 7 2,695 33,219 13,32(50)

0
0: 16 2,686 33,333 0,44(92)

1: 0 14 2,682 33,376 0,02(88)

2: 0 4 2,672 33,507 1,62(43)

0: 1 15 2,659 33,677 0,31(39)

0: 2 11 2,637 33,974 0,0(33)

1
1: 13 2,636 33,985 1,5(34)

2: 0 5 2,627 34,103 3,97(60)

1: 2 8 2,619 34,214 14,87(53)

2: 0 6 2,575 34,818 0,3(46)

2: 1 0 2,574 34,829 2,2(52)

2: 1 1 2,569 34,893 4,43(92)

2: 1 2 2,556 35,086 4,65(43)

1: 0 15 2,543 35,270 0,0(11)

1: 2 9 2,540 35,312 11,6(13)

2: 1 3 2,533 35,405 0,15(98)

0: 2 12 2,529 35,461 5,87(80)

2: 0 7 2,517 35,648 0,0(15)

0: 1 16 2,514 35,683 0,0(25)

1
1: 14 2,511 35,724 2,5(15)

2: 1 4 2,503 35,847 15,03(56)

2: 1 5 2,466 36,409 3,57(54)

1: 2 10 2,459 36,504 1,95(65)

2: 0 8 2,454 36,585 0,02(56)

0: 2 13 2,427 37,018 2,26(64)

2: 1 6 2,422 37,086 1,62(68)

1: 0 16 2,415 37,201 1,13(49)

1
1: 15 2,396 37,514 2,28(58)

2: 0 9 2,389 37,623 4,3(25)

0
0: 18 2,387 37,646 0,0(30)

0: 1 17 2,383 37,716 0,6(17)

1: 2 11 2,379 37,785 8,3(82)

0: 3 1 2,378 37,795 2,2(80)

2: 1 7 2,374 37,873 2,95(98)

0: 3 2 2,368 37,974 1,72(55)

0: 3 3 2,350 38,273 0,02(46)

0: 2 14 2,328 38,639 6,6(11)

0: 3 4 2,326 38,687 2,9(18)

2: 0 10 2,322 38,754 0,9(66)

2: 1 8 2,321 38,764 1,8(59)

h: k l Espaciamiento D 2θ Intensidad

1: 2 12 2,299 39,146 1,3(32)

1: 0 17 2,298 39,167 0,0(43)

0: 3 5 2,296 39,214 11,8(17)

1
1: 16 2,288 39,351 2,64(54)

2: 1 9 2,266 39,753 5,2(23)

0: 1 18 2,264 39,775 0,0(26)

0: 3 6 2,260 39,850 1,52(90)

2: 0 11 2,254 39,973 4,10(57)

0: 2 15 2,235 40,318 1,37(55)

1: 2 13 2,221 40,582 0,5(43)

0: 3 7 2,221 40,591 4,1(43)

2: 1 10 2,208 40,835 0,02(60)

1: 0 18 2,191 41,165 0,0(15)

1
1: 17 2,188 41,230 3(14)

1: 3 0 2,187 41,246 1(25)

2: 0 12 2,186 41,274 2(24)

1: 3 1 2,184 41,302 6(49)

2
2: 0 2,184 41,310 0(40)

2
2: 1 2,181 41,366 8,8(38)

0: 3 8 2,178 41,433 2,1(33)

1: 3 2 2,176 41,469 11,6(29)

2
2
2: 2,173 41,533 2,8(12)

1: 3 3 2,162 41,747 11,1(12)

2
2: 3 2,159 41,810 7,1(18)

0: 1 19 2,156 41,860 2,7(15)

2: 1 11 2,149 42,003 5,0(99)

0
0: 20 2,149 42,016 0(14)

0: 2 16 2,147 42,052 0,9(81)

1: 2 14 2,145 42,087 2,4(56)

1: 3 4 2,143 42,132 3,6(29)

2
2: 4 2,140 42,195 6,3(12)

0: 3 9 2,132 42,370 5,30(72)

1: 3 5 2,119 42,624 2,3(32)

2: 0 13 2,118 42,651 0,2(49)

2
2: 5 2,116 42,686 6,8(25)

1
1: 18 2,095 43,148 1,4(22)

1: 0 19 2,093 43,194 0,2(81)

1: 3 6 2,092 43,219 3(11)

2: 1 12 2,090 43,254 6,0(89)

2
2: 6 2,089 43,280 2,5(44)

0: 3 10 2,083 43,398 0,10(84)

1: 2 15 2,072 43,657 6,91(88)

0: 2 17 2,064 43,835 0,0(11)

1: 3 7 2,060 43,913 5,9(22)

0: 1 20 2,058 43,968 4(18)

2
2: 7 2,057 43,974 0(17)

2: 0 14 2,052 44,098 0,99(86)

0: 3 11 2,034 44,512 1,2(11)

2 1 13 2,031 44,581 6,0(12) 1 3 8 2,026 44,704 10,2(16)

h k l Espaciamiento D 2θ Intensidad

2
2: 8 2,023 44,764 8,8(23)

1
1: 19 2,008 45,105 0(38)

1: 0 20 2,002 45,252 0(2700)

1: 2 16 2,001 45,286 0(4300)

Control de la formación de la forma de polimorfo

Se ha encontrado que se puede controlar la formación de la forma polimórfica particular. Como se describe anteriormente, la forma A1 se puede obtener predominantemente por medio de recristalización en etanol o en condiciones de evaporación lenta. También se ha establecido que la maduración o curado de las partículas del compuesto A suspendidas en una suspensión acuosa formulada para la administración ocular a 40 grados C durante un período de tiempo relativamente corto formó la forma polimórfica A2 a partir de la forma polimórfica A1. Las muestras de suspensión acuosa se mantuvieron a 40 grados C durante hasta 108 horas y se monitorizaron mediante medición de tamaño de partícula, XRPD y microfotografía. Las mediciones de tamaño de partícula mostraron que los tamaños promedio aumentaron significativamente a lo largo de 15 horas. A partir de ahí, los tamaños permanecieron efectivamente constantes hasta 108 horas. Los análisis de XRPD indicaron un cambio en el contenido polimórfico desde aproximadamente un 74 % de A1 a un 26 % de A2 en el tiempo cero a un 0 % de A1 a un 100 % de A2 a las 108 horas a 40 grados C. La figura 7 muestra la conversión de la forma A1 a A2 en el tiempo. Además, los cambios de hábito asociados con el crecimiento de A2 se reflejaron en los patrones de XRPD y se pudieron monitorizar mediante una diferencia en las intensidades de pico seleccionadas de los planos dentro de la red cristalina perpendicular al eje c que cambian de intensidad a medida que cambia el hábito del cristal. Las diferencias de intensidad cambiaron hasta 9 horas y permanecieron constantes a partir de ahí, indicando que los cambios de hábito se completaron durante este tiempo. Las microfotografías mostraron hábitos cristalinos de tipo cuchilla o placa de las partículas en suspensión.

Cuando la formulación ocular en suspensión acuosa que contiene el compuesto A en el polimorfo A1 se almacena a 2-8 ºC, una temperatura requerida para limitar la descomposición del compuesto A en el almacenamiento a largo plazo, el hábito de las partículas suspendidas cambia lentamente a lo largo de un periodo de 6 a 12 meses. Durante este tiempo, las partículas irregulares pequeñas de fármaco suspendido cambian a hábitos de tipo varilla, con muchas partículas que tienen una longitud a lo largo de la dimensión más larga mayor que 100 micrómetros. Estos cambios hacen mucho más difícil resuspender las partículas de compuesto A mediante sonicación y agitación a fin de formar una suspensión homogénea para dosificación.

Se ha encontrado que la conversión de la forma A1 a la forma A2 limita cualquier cambio adicional en el hábito, tamaño o contenido polimórfico de las partículas cuando la suspensión acuosa, que es adecuada para la administración ocular del fármaco, se almacena a lo largo de un período de 6 meses ya sea a 5 ºC o 25 ºC. Además, la suspensión acuosa curada se resuspende más fácilmente mediante agitación, una característica favorable para las formulaciones en suspensión para administración ocular de fármacos.

Los análisis de tamaño de partícula se realizaron en un analizador de tamaño de partícula Cilas 1180. Los parámetros usados fueron modo líquido, índice de refracción de la muestra = 1,62 (determinado usando aceites de inmersión Cargille), índice de refracción del líquido = 1,333 (valor para el agua), medición de 30 segundos, agitación de 180 rpm, circulación de la bomba de 120 rpm, sin sonicación, 5 medidas repetidas.

Ejemplo de formulación

Se preparó un lote de material estéril del compuesto A como se describe anteriormente en "Síntesis del compuesto A". El material del compuesto A resultante se esterilizó luego con irradiación gamma a hasta 40 kGray y luego se formuló en las siguientes formulaciones acuosas:

Formulación acuosa

Ingrediente %, p/V Compuesto A 0,152 -0,76 CMC de sodio 0,7

Cloruro de benzalconio 0,01

Polisorbato 80 0,3

Ácido cítrico monohidrato 0,152 (7 mM) NaOH/HCl pH 5,1 ± 0,1 NaCl c.s.p. 270-330 mOsm Agua purificada c.s.p. 100,00

Se prepararon diversas concentraciones de series de formulación del compuesto A desde 0,152, 0,30, 0,61, 0,91, 2,42, 0,46, 0,76 %, p/V para proporcionar la capacidad de aportar diferentes niveles de compuesto A por gota de formulación. Por ejemplo, una gota del 0,152 %, p/V de compuesto A aportaría 50 mcg por gota, un 0,30 %, p/V

5 aportaría 100 mcg por gota, directamente hasta un 0,76 % p/V que aporta 250 mcg por gota. Luego se calentaron las series de formulación para someterse a la etapa de curado y convertir la forma polimórfica A1 del compuesto A en la forma polimórfica A2 del compuesto A. La etapa de curado se emprendió colocando las series de formulación a 40 grados C durante 48 horas y luego revirtiendo las series de formulaciones a las condiciones de almacenamiento a largo plazo deseadas para estudios de estabilidad.

10 Se estudiaron dos de las series de formulación, a saber un 0,46 % p/V de compuesto A y un 0,76 % p/V en cuanto a estabilidad a largo plazo y crecimiento de tamaño de partícula a 5 grados Celsius y 25 grados Celsius durante 6 meses. Se estudiaron dos de las series de formulación, a saber un 0,46 % p/V de compuesto A y un 0,76 % p/V en cuanto a estabilidad a largo plazo y crecimiento de tamaño de partícula a 5 grados Celsius durante 18 meses. Los

15 resultados se tabulan a continuación en la tabla 6.

Tabla 6

Formulación: Tiempo (meses) Impurezas pH Distribución de tamaño de partícula (micrómetros)

0,46 % a 5 ºC: 0 1 % 5,1 X10 = 1,746 X50 = 6,992 X90 = 14,087

0,46 % a 5 ºC: 1 1 % 5,0 X10 = 0,907 X50 = 6,285 X90 = 13,485

0,46 % a 5 ºC: 3 1 % 5,0 X10 = 1,792 X50 = 7,082 X90 = 14,356

0,46 % a 5 ºC: 6 1 % 5,1 X10 = 1,777 X50 = 6,939 X90 = 13,698

0,46 % a 5 ºC: 12 1 % 5,1 X10 = 1,398 X50 = 6,679 X90 = 13,396

0,46 % a 5 ºC: 18 1 % 5,1 X10 = 1,666 X50 = 6,882 X90 = 13,074

0,46 % a 25 ºC: 0 1 % 5,1 X10 = 1,746 X50 = 6,416 X90 = 13,698

0,46 % a 25 ºC/60 % HR: 1 1 % 5,0 X10 = 1,036 X50 = 6,416 X90 = 13,698

0,46 % a 25 ºC/60 % HR: 3 3 % 5,1 X10 = 1,656 X50 = 6,705 X90 = 12,805

0,46 % a 25 ºC/60 % HR: 6 4 % 5,0 X10 = 1,809 X50 = 6,741 X90 = 12,380

0,76 % a 5 ºC: 0 1 % 5,1 X10 = 1,524 X50 = 6,773 X90 = 12,778

0,76 % a 5 ºC: 1 1 % 5,1 X10 = 1,115 X50 = 6,456 X90 = 12,944

0,76 % a 5 ºC: 3 1 % 5,1 X10 = 1,455 X50 = 6,745 X90 = 13,104

0,76 % a 5 ºC: 6 1 % 5,1 X10 = 1,541 X50 = 6,638 X90 = 11,833

0,76 % a 5 ºC: 12 1 % 5,1 X10 = 1,407 X50 = 6,635 X90 = 12,314

0,76 % a 5 ºC: 18 1 % 5,1 X10 = 1,611 X50 = 6,840 X90 = 12,672

0,76 % a 25 ºC/60 % HR: 0 1 % 5,1 X10 = 1,524 X50 = 6,773 X90 = 12,778

0,76 % a 25 ºC/60 % HR: 1 1 % 5,1 X10 = 1,056 X50 = 6,107 X90 = 11,551

0,76 % a 25 ºC/60 % HR: 3 2 % 5,1 X10 = 1,446 X50 = 6,691 X90 = 12.724

0,76 % a 25 ºC/60 % HR: 6 3 % 5,1 X10 = 1,619 X50 = 6,292 X90 = 10,240

Se puede observar a partir de los resultados de la tabla 6 que las distribuciones de tamaño de partícula de las dos series de formulación son estables en el tiempo en las condiciones probadas. Los resultados también muestran que

5 los niveles de impurezas y pH permanecen estables para las formulaciones a 5 grados Celsius a lo largo de 18 meses, mientras que hay un lento aumento en las impurezas para las formulaciones mantenidas a 25 grados Celsius a lo largo de 6 meses.

La presente invención y sus modos de realización se han descrito en detalle. Sin embargo, el alcance de la presente

10 invención no pretende limitarse a los modos de realización particulares descritos en la memoria descriptiva. Se pueden hacer diversas modificaciones, sustituciones y variaciones al material divulgado sin apartarse del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims

REIVINDICACIONES

1.

Compuesto A que tiene la estructura:

5

en forma de polimorfo anhidro cristalino A2 que tiene los siguientes datos de cristal,

10 (i) C15H20N6O6;

Mr = 380,37;

sistema cristalino ortorrómbico;

grupo espacial P212121; 15 a = 5,51796(17) Å;

b = 7,14615(29) Å;

c = 42,9738(29) Å y

V = 1694,55(14) Å3; o

20 (ii) que tiene picos sustancialmente equivalentes en la difracción de rayos X de polvo con radiación CuKα1 a un ángulo de reflexión 2-teta como se muestra en la tabla 5; o

(iii) que tiene difracción de rayos X de polvo con espectros de radiación CuKα1 que tienen picos a

aproximadamente 16,9, 18,1, 19,1, 20,8, 21,3, 22,0, 22,8, 23,8, 24,9, 25,0, 29,1, 29,8, 34,2 y 35,8 + 0,2 grados 25 de 2 teta,

caracterizado por que el compuesto A está libre al menos en un 75 % de otras formas sólidas del compuesto A.
2. El compuesto A de la reivindicación 1 que está libre al menos en un 80 % de otras formas sólidas del compuesto 30 A.
3. El compuesto A de la reivindicación 1 que está libre al menos en un 90 % de otras formas sólidas del compuesto

A.

35 4. El compuesto A de la reivindicación 1 que está libre al menos en un 95 % de otras formas sólidas del compuesto

A.
5. El compuesto A de la reivindicación 1 que está libre al menos en un 99 % de otras formas sólidas del compuesto

A.

40
6.

El compuesto A de la reivindicación 1 que está libre en un 100 % de otras formas sólidas del compuesto A.
7.

Una composición farmacéutica que comprende el compuesto A de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y que además comprende uno o más ingredientes farmacéuticamente aceptables seleccionados del grupo que consiste en

45 vehículos, excipientes, diluyentes, aditivos, cargas, tensioactivos, aglutinantes, conservantes antimicrobianos, agentes potenciadores de viscosidad y tampones.
8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7 que se formula para administración oftálmica.
9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8 que se formula como sigue:

Ingrediente %, p/V Compuesto A 0,152 -0,76 CMC de sodio 0,7

Cloruro de benzalconio 0,01

Polisorbato 80 0,3 Ácido cítrico monohidrato 0,152 (7 mM) NaOH/HCl pH 5,1 ± 0,1 NaCl c.s.p. 270-330 mOsm; y Agua purificada c.s.p. 100,00.
10. Una composición que comprende el compuesto A como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6

5 para su uso en un procedimiento de reducción de la presión intraocular en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar en forma tópica a un ojo de un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto A como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
11. Un procedimiento de obtención del compuesto A de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6,

10 comprendiendo el procedimiento las etapas de suspender el compuesto A en un vehículo líquido acuoso y calentar hasta aproximadamente 40 grados durante al menos 9 horas; o preferentemente al menos 15 horas.
12. El procedimiento como se reivindica en la reivindicación 11, en el que el compuesto A se microniza, preferentemente en tamaños de partícula de menos de 50 micrómetros, y luego se añade al vehículo líquido,

15 estando el vehículo líquido adaptado preferentemente para proporcionar una suspensión acuosa del compuesto A.
13. El procedimiento como se reivindica en la reivindicación 12, en el que el vehículo líquido incluye un tensioactivo

y un conservante. 20
14. El procedimiento como se reivindica en la reivindicación 13, en el que el tensioactivo se selecciona de polisorbato 80, polisorbato 60, polisorbato 40, polisorbato 20, estearato de polioxilo 40, poloxámeros, tiloxapol, POE 35 y aceite de ricino y en el que el conservante se selecciona de una sal de amonio cuaternario, cloruro de benzalconio, cetrimida, clorobutanol, ácido sórbico y ácido bórico.

Figura 2