ES2631152T3 - Formulaciones de coenzima Q10 tópicas o intravenosas para su uso en el tratamiento del cáncer - Google Patents

Formulaciones de coenzima Q10 tópicas o intravenosas para su uso en el tratamiento del cáncer Download PDF

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Niven Rajin Narain
Jie Li
Kathryn J. Rusell
Karrune V. Woan
Indushekhar Persaud
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Abstract

Composición para su uso en el tratamiento de un cáncer en un paciente, comprendiendo la composición coenzima Q10, en la que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma y carcinoma de células escamosas.

Description

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DESCRIPCION
Formulaciones de coenzima Q10 topicas o intravenosas para su uso en el tratamiento del cancer Campo de la invencion
La invencion proporciona composiciones farmaceuticas que comprenden coenzima Q10 (CoQ10) para el tratamiento del cancer, la reduccion selectiva del crecimiento de celulas cancerosas, la induccion de apoptosis en celulas cancerosas y la inhibicion de angiogenesis mediada por tumor.
Antecedentes
Actualmente el cancer es una de las principales causas de muerte en naciones desarrolladas. Aunque la investigacion reciente ha aumentado considerablemente nuestra comprension de muchos de los mecanismos moleculares de la tumorigenesis y ha proporcionado numerosas posibilidades nuevas para el tratamiento del cancer, los tratamientos convencionales para la mayona de los tumores malignos siguen siendo reseccion total, quimioterapia y radioterapia. Aunque cada vez son mas satisfactorios, cada uno de estos tratamientos todavfa produce numerosos efectos secundarios no deseados. Por ejemplo, la cirugfa da como resultado dolor, lesion traumatica a tejido sano y cicatrizacion. La radioterapia y la quimioterapia producen nauseas, supresion inmunitaria, ulceracion gastrica y tumorigenesis secundaria.
El documento WO 98/35660 describe una formulacion espedfica de coenzima Q10 que comprende ademas tensioactivo pulmonar. Se indica que la formulacion es util para el tratamiento de una amplia variedad de indicaciones medicas, incluyendo el tratamiento del cancer de piel.
Sumario
La invencion se refiere al descubrimiento de que formulaciones topicas de CoQ10 pueden reducir la tasa de crecimiento tumoral en un sujeto animal. En los experimentos descritos en el presente documento, se demostro que la CoQ10 aumenta la tasa de apoptosis en un cultivo de celulas cancerosas cutaneas pero no de celulas normales. Ademas, se demostro que el tratamiento de animales portadores de tumor con una formulacion topica de CoQ10 reduce espectacularmente la tasa de crecimiento tumoral en los animales.
La CoQ10 formulada para administracion oral se ha usado previamente como complemento dietetico. Sin embargo, se ha demostrado que la CoQ10 administrada por via oral se acumula en el tngado, disminuyendo su disponibilidad sistemica. Las respuestas antitumorales observadas con la CoQ10 aplicada por via topica pueden estar relacionadas con su biodisponibilidad superior en comparacion con las formas de complemento dietetico de la CoQ10.
Por consiguiente, la invencion presenta una composicion para su uso en un metodo para reducir la tasa de crecimiento de celulas tumorales o aumentar la tasa de apoptosis en celulas tumorales en un sujeto tal como se especifica en las reivindicaciones adjuntas. El metodo incluye las etapas de proporcionar un sujeto que tiene una pluralidad de celulas tumorales y administrar al sujeto una composicion que comprende una cantidad eficaz de CoQ10 y un portador farmaceuticamente aceptable.
En una realizacion preferida, la composicion para su uso es una formulacion topica de CoQ10 que incluye al menos aproximadamente desde el 0,01% en peso de CoQ10 hasta el 30% en peso (p/p) de CoQ10 y un portador adecuado para administrar la CoQ10 por via topica. Preferiblemente, la composicion farmaceutica para su uso comprende como principio activo CoQ10 y un portador farmaceuticamente aceptable. La composicion comprende coenzima Q10, Phospholipon 90, glicerol, hidroxitolueno butilado (BHT), etanol, trigliceridos de cadena media (MCT) y lavanda. Preferiblemente, el Phospholipon 90 es Phospholipon 90G y/o Phospholipon 90H.
En una realizacion preferida, la composicion farmaceutica para su uso comprende al menos de aproximadamente el 0,01% a aproximadamente el 30% (p/p) de coenzima Q10. Preferiblemente, la composicion farmaceutica entre aproximadamente el 1% y aproximadamente el 25% (p/p) de coenzima Q10.
Tambien se divulga en el presente documento un metodo de tratamiento de un paciente con cancer, que comprende:
administrar a un paciente que lo necesita, una composicion que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de coenzima Q10;
poner en contacto una celula tumoral con la composicion dando como resultado la lisis de la celula tumoral;
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tratando de ese modo al paciente con cancer. Preferiblemente, la composicion farmaceutica comprende al menos aproximadamente desde el 0,01% hasta el 30% p/p de coenzima Q10, preferiblemente, la composicion farmaceutica comprende de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 25% p/p de coenzima Q10.
En otra realizacion preferida, la composicion farmaceutica para su uso se formula en una crema topica con potenciadores transdermicos opcionales.
En otras realizaciones preferidas, la composicion es para su uso en un metodo, en el que se administra una cantidad terapeuticamente eficaz de la composicion de coenzima Q10 con uno o mas agentes quimioterapicos. Estos agentes quimioterapicos pueden coadministrarse, precedidos, o administrados tras la coenzima Q10. Los ejemplos no limitativos de agentes quimioterapicos incluyen, pero no se limitan a: ciclofosfamida (CTX, 25 mg/kg/dfa, v.o.), taxanos (paclitaxel o docetaxel), busulfano, cisplatino, ciclofosfamida, metotrexato, daunorubicina, doxorubicina, melfalan, cladribina, vincristina, vinblastina y clorambucilo.
En otra realizacion preferida, la composicion farmaceutica es para su uso en el tratamiento de un cancer tal como se especifica en las reivindicaciones adjuntas, es decir, la composicion de coenzima Q10 inhibe el crecimiento de celulas tumorales en un sujeto, y el metodo comprende administrar al sujeto una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de CoQ10. Preferiblemente, la cantidad terapeuticamente eficaz de coenzima Q10 en la composicion farmaceutica comprende entre aproximadamente el 0,01% y el 30% p/p de coenzima Q10. La inhibicion del crecimiento de celulas tumorales se refiere a uno o mas de los siguientes efectos: (1) inhibicion, en cierta medida, del crecimiento tumoral, incluyendo, (i) ralentizacion y (ii) detencion completa del crecimiento; (2) reduccion en el numero de celulas tumorales; (3) mantenimiento del tamano tumoral; (4) reduccion en el tamano tumoral; (5) inhibicion, incluyendo (i) reduccion, (ii) ralentizacion o (iii) prevencion completa, de infiltracion de celulas tumorales en organos perifericos; (6) inhibicion, incluyendo (i) reduccion, (ii) ralentizacion o (iii) prevencion completa, de metastasis; (7) potenciacion de respuesta inmunitaria antitumoral, que puede dar como resultado (i) mantenimiento del tamano tumoral, (ii) reduccion del tamano tumoral, (iii) ralentizacion del crecimiento de un tumor, (iv) reduccion, ralentizacion o prevencion de invasion y/o (8) alivio, en cierta medida, de la gravedad o el numero de uno o mas smtomas asociados con el trastorno.
En otra realizacion preferida, la invencion proporciona una composicion para su uso en el tratamiento de un cancer tal como se especifica en las reivindicaciones adjuntas, que incluye un metodo de induccion de apoptosis selectivamente en una celula tumoral, comprendiendo el metodo administrar una composicion farmaceutica que comprende coenzima Q10 tal como se mide mediante ensayos convencionales. Preferiblemente, la composicion farmaceutica comprende al menos aproximadamente desde el 0,01% hasta el 30% p/p de coenzima Q10. Los metodos para medir apoptosis incluyen, pero no se limitan a, ensayos con colorante de membrana mitocondrial y/o ensayos con anexina-VPE. En una realizacion preferida, la composicion farmaceutica para su uso induce apoptosis en al menos aproximadamente el 30% de las celulas tumorales tal como se mide mediante el ensayo con colorante de membrana mitocondrial y/o en ensayo con anexina-VPE. Preferiblemente, la composicion farmaceutica para su uso induce apoptosis en aproximadamente el 60% de las celulas tumorales tal como se mide mediante el ensayo con colorante de membrana mitocondrial y/o el ensayo con anexina-VPE, mas preferiblemente, la composicion farmaceutica para su uso induce apoptosis en aproximadamente el 75% de las celulas tumorales tal como se mide mediante el ensayo con colorante de membrana mitocondrial y/o el ensayo con anexina-VPE, mas preferiblemente, la composicion farmaceutica para su uso induce apoptosis en aproximadamente el 90%, el 91%, el 92%, el 93%, el 94%, el 95%, el 96%, el 97%, el 98%, el 99% y el 100% de las celulas tumorales tal como se mide mediante el ensayo con colorante de membrana mitocondrial y/o el ensayo con anexina-VPE.
En otra realizacion preferida, la invencion proporciona una composicion para su uso en el tratamiento de un cancer tal como se especifica en las reivindicaciones adjuntas, que incluye un metodo de inhibicion de la angiogenesis en un tumor, comprendiendo el metodo poner en contacto un tumor con una composicion farmaceutica que comprende coenzima Q10. Preferiblemente, la composicion farmaceutica para su uso comprende al menos aproximadamente desde el 0,01% hasta el 30% p/p de coenzima Q10.
Los usos adicionales de los presentes compuestos, que no son segun la presente invencion, incluyen el uso en el tratamiento de aterosclerosis, inflamacion y como agente antiangiogenico, especialmente para tratar canceres, particularmente canceres solidos tales como canceres que se alojan en pulmon, mama, tugado, cerebro u otro tejido.
En resumen, la presente solicitud se refiere al contenido segun los siguientes puntos:
1 Una composicion para su uso en el tratamiento de un cancer en un paciente, comprendiendo la composicion coenzima Q10, en la que el cancer se selecciona del grupo que consiste en melanoma y carcinoma de celulas escamosas.
2 La composicion para su uso segun el punto 1, en la que la composicion comprende aproximadamente del 0,01% al 30% p/p de coenzima Q10.
3 La composicion para su uso segun el punto 1, en la que la composicion comprende aproximadamente desde el 1%
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hasta el 25% p/p de coenzima Q10.
4 La composicion para su uso segun el punto 1, en la que la composicion comprende de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 20% p/p de coenzima Q10.
5 La composicion para su uso segun el punto 1, en la que el tratamiento de un cancer en un paciente comprende la administracion de una cantidad terapeuticamente eficaz de la composicion de coenzima Q10 con uno o mas agentes quimioterapicos.
6 La composicion para su uso segun el punto 5, en la que el tratamiento de un cancer en un paciente comprende la coadministracion del agente quimioterapico y la cantidad terapeuticamente eficaz de la composicion de coenzima Q10.
7 La composicion para su uso segun el punto 5, en la que el agente quimioterapico se selecciona del grupo que consiste en taxanos (paclitaxel o docetaxel), busulfano, cisplatino, ciclofosfamida, metotrexato, daunorubicina, doxorubicina, melfalan, cladribina, vincristina, vinblastina y clorambucilo.
8 La composicion para su uso segun el punto 5, en la que el tratamiento de un cancer en un paciente comprende la administracion del agente quimioterapico antes o despues de la administracion de la cantidad terapeuticamente eficaz de la composicion de coenzima Q10.
A menos que se definan de otro modo, todos los terminos tecnicos usados en el presente documento tienen los mismos significados entendidos comunmente por un experto habitual en la tecnica a la que pertenece esta invencion. Las definiciones entendidas comunmente de terminos medicos pueden encontrarse en Thomas Lathrop Stedman, Stedman's Medical Dictionary, Lippincott, Williams & Wilkins: Filadelfia, Pa, 2000.
En caso de conflicto, la presente memoria descriptiva, controlara las definiciones incluidas. Las realizaciones particulares comentadas a continuacion son unicamente ilustrativas y no se pretende que sean limitativas.
Otros aspectos de la invencion se describen mas adelante.
Breve descripcion de los dibujos
La invencion se muestra con particularidad en las reivindicaciones adjuntas. Las ventajas anteriores y adicionales de esta invencion pueden entenderse mejor haciendo referencia a la siguiente descripcion tomada conjuntamente con los dibujos adjuntos, en los que:
La figura 1 es una serie de microfotograffas que muestran el efecto de la CoQ10 en celulas de melanoma humano (SKMEL28) en un cultivo in vitro.
La figura 2 es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de melanoma humano (SKMEL28) en un cultivo in vitro de 36 horas.
La figura 3 es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de melanoma humano (SKMEL28) en un cultivo in vitro de 48 horas.
La figura 4 es un grafico que muestra que el control con vehmulo no reduce la proliferacion de una lmea celular de melanoma humano (SKMEL28) en un cultivo in vitro de 48 horas.
La figura 5 es un grafico que compara el efecto de la CoQ10 en la apoptosis entre melanoma humano y fibroblastos neonatales en un cultivo in vitro.
La figura 6 es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de celulas de carcinoma escamoso en un cultivo in vitro de 48 horas.
La figura 7 es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de fibroblastos neonatales humanos en un cultivo in vitro de 48 horas.
La figura 8 es un grafico que muestra que la CoQ10 aumenta la proliferacion de queratinocitos neonatales humanos en un cultivo in vitro de 48 horas.
La figura 9 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma de mama (MCF-7) en un cultivo in vitro de 48 horas. La lmea celular MCF-7 expresa el oncogen WNT7B y contiene el oncogen Tx-4.
La figura 10 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de
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adenocarcinoma de mama (MCF-7) en un cultivo in vitro de 72 horas.
La figura 11 es una fotograffa que muestra tumores inducidos en ratones tratados con CoQ10 y control tras el tratamiento con formulacion topica de CoQ10 durante 30 dfas.
La figura 12 es una fotograffa que muestra tumores inducidos en ratones tratados con CoQ10 y control tras el tratamiento con formulacion topica de CoQ10 durante 30 dfas.
La figura 13 es una fotograffa que muestra tumores extirpados de ratones tratados con CoQ10 y control.
La figura 14 es un grafico que muestra el efecto de la administracion de CoQ10 en el tamano tumoral en ratones tratados con CoQ10 o control durante 30 dfas. La masa tumoral promedio para el grupo control frente al grupo de tratamiento disminuyo en un 52,3% y un 54,0%, respectivamente.
La figura 15 (comparativo) es una serie de microfotograffas que muestran el efecto de la CoQ10 en celulas de adenocarcinoma de mama humano (SK-BR-3) en un cultivo in vitro. La lmea celular SK-BR-3 sobreexpresa el producto genico de los genes Her2/c-erb-2 (ATCC).
La figura 16 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma de mama humano (SK-BR-3) en un cultivo in vitro de 48 horas. La lmea celular SK-BR-3 sobreexpresa el producto genico de los genes Her2/c-erb-2 (ATCC).
La figura 17 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma de mama humano (SK-BR-3) en un cultivo in vitro de 72 horas. La lmea celular SK-BR-3 sobreexpresa el producto genico de los genes Her2/c-erb-2 (ATCC).
La figura 18 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma de mama humano (MDA-MB-468) en un cultivo in vitro de 48 horas. La lmea celular MDA-MB-468 tiene una mutacion en el gen p53 (ATCC).
La figura 19 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma de mama humano (MDA-MB-468) en un cultivo in vitro de 72 horas. La lmea celular MDA-MB-468 tiene una mutacion en el gen p53 (ATCC).
La figura 20 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma de mama humano (BT-20) en un cultivo in vitro de 48 horas. La lmea celular BT-20 expresa los oncogenes WNT7B y WNT3 (ATCC).
La figura 21 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma de mama humano (13T-20) en un cultivo in vitro de 72 horas. La lmea celular BT-20 expresa los oncogenes WNT7B y WNT3 (ATCC).
La figura 22 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de carcinoma hepatocelular humano (Hep 3B) en un cultivo in vitro de 48 horas.
La figura 23 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de carcinoma hepatocelular humano (Hep 3B) en un cultivo in vitro de 72 horas.
La figura 24 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de osteosarcoma humano (143B) en un cultivo in vitro de 48 horas.
La figura 25 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de osteosarcoma humano (143B) en un cultivo in vitro de 72 horas.
La figura 26 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma prostatico humano (PC-3) en un cultivo in vitro de 48 horas.
La figura 27 (comparativo) es un grafico que muestra que la CoQ10 reduce la proliferacion de una lmea celular de adenocarcinoma prostatico humano (PC-3) en un cultivo in vitro de 72 horas.
La figura 28 (comparativo) es un grafico que muestra el efecto de CoQ10 en la polarizacion mitocondrial (un indicador de la apoptosis) de una lmea celular de adenocarcinoma prostatico humano (PC-3) en un cultivo in vitro de 24 horas. Se trataron cultivos de celulas PC-3 con Q10 a concentraciones de 0,05, 0,1 y 0,2 mM durante 24 h y luego se trataron con JC-1, a 10 microgramos/ml, durante 30 min. Se midieron la captacion y los niveles de fluorescencia verde en un citometro de flujo, FL1 (fluorescencia verde). Nota: Se observo un aumento significativo en la fluorescencia verde en las celulas tratadas con Q10 0,2 mM (grafico amarillo).
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Las figuras 29A y 29B son fotograffas que muestran inhibicion de angiogenesis mediada por tumor en tejidos mediante una composicion que comprende CoQ10 (figura 29B) en comparacion con un control en ausencia de una composicion que comprende CoQ10.
Descripcion detallada
La invencion proporciona composiciones para reducir la tasa de crecimiento de celulas tumorales o aumentar la tasa de apoptosis de celulas tumorales tal como se especifica en las reivindicaciones adjuntas. Las composiciones para su uso de la invencion incluyen como agente antitumoral una cantidad terapeuticamente eficaz de CoQ10 y un portador. Una composicion preferida para su uso de la invencion es una formulacion topica de CoQ10 que comprende al menos aproximadamente el 1% de CoQ10 y un portador que facilita la administracion topica de CoQ10. La composicion mas preferida para su uso de la invencion es una formulacion topica de CoQ10 que comprende entre aproximadamente el 1% y el 15% de CoQ10 y un portador que facilita la administracion topica de CoQ10. Los metodos descritos en el presente documento para eliminar una celula tumoral o reducir su tasa de crecimiento incluyen la etapa de poner en contacto la celula con una concentracion eficaz de CoQ10..
Las realizaciones preferidas descritas a continuacion ilustran adaptaciones de estas composiciones. No obstante, a partir de la descripcion de estas realizaciones, pueden obtenerse y/o ponerse en practica otros aspectos de la invencion basandose en la descripcion proporcionada a continuacion.
Antes de divulgar y describir la presente invencion, ha de entenderse que esta invencion no se limita a las estructuras, etapas de procedimiento o materiales particulares divulgados en el presente documento, sino que se amplfa a equivalentes de los mismos tal como reconocenan los expertos habituales en las tecnicas relevantes. Tambien debe entenderse que la terminologfa empleada en el presente documento se usa para el fin de describir unicamente realizaciones particulares y no se pretende que sea limitativa.
Definiciones
Segun la presente invencion y tal como se usan en el presente documento, los siguientes terminos se definen con los siguientes significados, a menos que se establezca explfcitamente de otro modo.
Tal como se usan en el presente documento, “un”, “una” y “el/la” incluyen las referencias en plural a menos que el contexto dicte otra cosa.
Tal como se usa en el presente documento, un componente “farmaceuticamente aceptable” es uno que es adecuado para su uso con seres humanos y/o animales sin efectos secundarios adversos excesivos (tales como toxicidad, irritacion y respuesta alergica) acorde con una razon beneficio/riesgo razonable.
Tal como se usa en el presente documento, el termino “cantidad segura y terapeutica eficaz” se refiere a la cantidad de un componente que es suficiente para proporcionar una respuesta terapeutica deseada sin efectos secundarios adversos excesivos (tales como toxicidad, irritacion y respuesta alergica) acorde con una razon beneficio/riesgo razonable cuando se usa de la manera de esta invencion. Mediante “cantidad terapeuticamente eficaz” se quiere decir una cantidad de un compuesto de la presente invencion eficaz para proporcionar la respuesta terapeutica deseada. Por ejemplo, una cantidad eficaz para retrasar el crecimiento de o la produccion de un cancer, ya sea un sarcoma o un linfoma, o para reducir el cancer o para prevenir metastasis. La cantidad segura y eficaz espedfica o cantidad terapeuticamente eficaz variara con factores tales como el estado particular que esta tratandose, el estado ffsico del paciente, el tipo de mairnfero o animal que esta tratandose, la duracion del tratamiento, la naturaleza de la terapia concurrente (si la hay) y las formulaciones espedficas empleadas y la estructura de los compuestos o de sus derivados.
Tal como se usa en el presente documento, una “sal farmaceutica” incluye, pero no se limita a, sales de acidos organicos o minerales de residuos basicos tales como aminas; sales alcalinas u organicas de residuos acidos tales como acidos carboxflicos. Preferiblemente, las sales se preparan usando un acido organico o inorganico. Estas sales de acido preferidas son cloruros, bromuros, sulfatos, nitratos, fosfatos, sulfonatos, formiatos, tartratos, maleatos, malatos, citratos, benzoatos, salicilatos, ascorbatos y similares. La sal mas preferida es la sal de clorhidrato.
Tal como se usa en el presente documento, “cancer” se refiere a todos los tipos de cancer o neoplasma o tumores malignos encontrados en mamfferos, incluyendo, pero sin limitarse a: leucemias, linfomas, melanomas, carcinomas y sarcomas. En realizaciones preferidas, se usan composiciones de CoQ10 para el tratamiento de diversos tipos de cancer de mama; cancer de prostata; cancer de hngado; cancer de huesos. Sin embargo, el tratamiento que usa las composiciones de CoQ10 no se limita a estos tipos de canceres.
Ejemplos de canceres son cancer de cerebro, mama, pancreas, cuello uterino, colon, cabeza y cuello, rinon, pulmon, pulmon de celulas no pequenas, melanoma, mesotelioma, ovario, sarcoma, estomago, utero y meduloblastoma. Tal
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como se usan en el presente documento, los terminos “cancer,” “neoplasma” y “tumor,” se usan de manera intercambiable y ya sea en forma singular o plural, se refieren a celulas que han experimentado una transformacion maligna que hace que sean patologicas para el organismo huesped. Las celulas cancerosas primarias (es dedr, celulas obtenidas de cerca del sitio de la transformacion maligna) pueden distinguirse facilmente de las celulas no cancerosas mediante tecnicas bien establecidas, particularmente examen histologico. La definicion de una celula cancerosa, tal como se usa en el presente documento, incluye no solo una celula cancerosa primaria, sino cualquier celula derivada de un antecesor de celula cancerosa. Esto incluye celulas cancerosas metastatizadas, y lmeas celulares y cultivos in vitro derivados de celulas cancerosas. Cuando se hace referencia a un tipo de cancer que normalmente se manifiesta como un tumor solido, un tumor “clmicamente detectable” es uno que es detectable basandose en la masa tumoral; por ejemplo, mediante procedimientos tales como TAC, obtencion de imagenes mediante RM, rayos X, ultrasonido o palpacion, y/o que es detectable debido a la expresion de uno o mas antfgenos espedficos de cancer en una muestra que puede obtenerse de un paciente.
El termino “sarcoma” se refiere en general a un tumor que esta constituido por una sustancia como el tejido conjuntivo embrionario y esta compuesto generalmente de celulas estrechamente empaquetadas integradas en una sustancia fibrilar u homogenea. Los ejemplos de sarcomas que pueden tratarse con las presentes composiciones y opcionalmente un potenciador y/o agente quimioterapico incluyen, pero no se limitan a condrosarcoma, fibrosarcoma, linfosarcoma, melanosarcoma, mixosarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Abemethy, sarcoma adiposo, liposarcoma, sarcoma alveolar de partes blandas, sarcoma ameloblastico, sarcoma botrioide, sarcoma cloromatoso, coriocarcinoma, sarcoma embrionario, sarcoma tumor de Wilms, sarcoma endometrial, sarcoma estromal, sarcoma de Ewing, sarcoma fascial, sarcoma fibroblastico, sarcoma de celulas gigantes, sarcoma granulodtico, sarcoma de Hodgkin, sarcoma hemorragico pigmentado idiopatico multiple, sarcoma inmunoblastico de celulas B, linfoma, sarcoma inmunoblastico de celulas T, sarcoma de Jensen, sarcoma de Kaposi, sarcoma de celulas de Kupffer, angiosarcoma, leucosarcoma, sarcoma mesenquimoma maligno, sarcoma parostal, sarcoma reticulocftico, sarcoma de Rous, sarcoma serodstico, sarcoma sinovial y sarcoma telangiectaltico.
El termino “melanoma” se refiere a un tumor que surge del sistema melanocftico de la piel y otros organos. Los melanomas que pueden tratarse con las composiciones de la invencion y opcionalmente con un potenciador y/u otro agente quimioterapico incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, melanoma acral-lentiginoso, melanoma amelanico, melanoma juvenil benigno, melanoma de Cloudman, melanoma S91, melanoma de Harding-Passey, melanoma juvenil, melanoma lentiginoso maligno, melanoma maligno, melanoma nodular, melanoma, subungueal y melanoma de extension superficial.
El termino “carcinoma” se refiere a un nuevo crecimiento maligno constituido por celulas epiteliales que tienden a infiltrarse en los tejidos circundantes y dan lugar a metastasis. Los carcinomas que pueden tratarse con las composiciones de la invencion y opcionalmente un potenciador y/u otro agente quimioterapico incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, carcinoma acinar, carcinoma acinoso, carcinoma adenodstico, carcinoma qrnstico adenoide, carcinoma adenomatoso, carcinoma de la corteza suprarrenal, carcinoma alveolar, carcinoma de celulas alveolares, carcinoma de celulas basales, carcinoma basocelular, carcinoma basaloide, carcinoma de celulas basoescamosas, carcinoma bronquioalveolar, carcinoma bronquiolar, carcinoma broncogenico, carcinoma cerebriforme, carcinoma colangiocelular, carcinoma corionico, carcinoma coloide, comedocarcinoma, carcinoma de cuerpo uterino, carcinoma cribriforme, carcinoma en coraza, carcinoma cutaneo, carcinoma cilmdrico, carcinoma de celulas cilmdricas, carcinoma canalicular, carcinoma duro, carcinoma embrionario, carcinoma encefaloide, carcinoma epidermoide, carcinoma qrnstico adenoide, carcinoma exoftico, carcinoma ulcerado, carcinoma fibroso, carcinoma gelatiniforme, carcinoma gelatinoso, carcinoma de celulas gigantes, carcinoma gigantocelular, carcinoma glandular, carcinoma de celulas granulosas, carcinoma de la matriz pilosa, carcinoma hematoide, carcinoma hepatocelular, carcinoma de celulas de Hurthle, carcinoma hialino, carcinoma hipernefroide, carcinoma embrionario infantil, carcinoma in situ, carcinoma intraepidermico, carcinoma intraepitelial, carcinoma de Krompecher, carcinoma de celulas de Kulchitzky, carcinoma de celulas grandes, carcinoma lenticular, carcinoma lenticulare, carcinoma lipomatoso, carcinoma linfoepitelial, carcinoma medullare, carcinoma medular , carcinoma melanotico, carcinoma molle, carcinoma mucinoso, carcinoma mudparo, carcinoma mucocelular, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma mucosum, carcinoma mucoso, carcinoma mixomatoide, carcinoma nasofarmgeo, carcinoma de celulas en grano de avena, carcinoma osificante, carcinoma osteoide, carcinoma papilar, carcinoma periportal, carcinoma preinvasivo, carcinoma de celulas espinosas, carcinoma pultaceo, carcinoma de celulas renales, carcinoma de rinon, carcinoma de celulas de reserva, carcinoma sarcomatoide, carcinoma schneideriano, carcinoma escirroso, carcinoma escrotal, carcinoma de celulas en anillo de sello, carcinoma simple, carcinoma de celulas pequenas, carcinoma solanoide, carcinoma de celulas esferoidales, carcinoma de celulas espinosas, carcinoma esponjoso, carcinoma escamoso, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma en collar, carcinoma telangiectasico, carcinoma telangiectodes, carcinoma de celulas transicionales, carcinoma tuberosum, carcinoma tuberoso, carcinoma verrugoso y carcinoma velloso.
Los canceres adicionales que pueden tratarse con las composiciones de la invencion incluyen, por ejemplo, enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, mieloma multiple, neuroblastoma, cancer de mama, cancer de ovario, cancer de pulmon, rabdomiosarcoma, trombocitosis primaria, macroglobulinemia primaria, tumores de pulmon de celulas pequenas, tumores de cerebro primarios, cancer de estomago, cancer de colon, insulanoma pancreatico maligno, carcinoide maligno, cancer de vejiga urinaria, lesiones cutaneas premalignas, cancer testicular, linfomas,
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cancer de tiroides, neuroblastoma, cancer esofagico, cancer del aparato genitourinario, hipercalciemia maligna, cancer de cuello uterino, cancer endometrial, cancer corticosuprarrenal y cancer de prostata.
“Diagnostico” o “diagnosticado” significa identificar la presencia o la naturaleza de un estado patologico. Los metodos diagnosticos difieren en su sensibilidad y especificidad. La “sensibilidad” de un ensayo diagnostico es el porcentaje de individuos enfermos que dan positivo (porcentaje de “verdaderos positivos”). Los individuos enfermos no detectados por el ensayo son “falsos negativos”. Los sujetos que no estan enfermos y que dan negativo en el ensayo se denominan “verdaderos negativos”. La “especificidad” de un ensayo diagnostico es 1 menos la tasa de falsos positivos, definiendose la tasa de “falsos positivos” como la proporcion de aquellos sin enfermedad que dan positivo. Aunque un metodo diagnostico particular puede no proporcionar un diagnostico definitivo de un estado, basta si el metodo proporciona una indicacion positiva que ayuda en el diagnostico.
Los terminos “paciente” o “individuo” se usan de manera intercambiable en el presente documento y se refieren a un sujeto mairnfero que va a tratarse, prefiriendose los pacientes humanos. En algunos casos, los metodos de la invencion encuentran uso en animales de experimentacion, en aplicacion veterinaria y en el desarrollo de modelos animales para una enfermedad, incluyendo, pero sin limitarse a, roedores incluyendo ratones, ratas y hamsteres; y primates.
“Muestra” se usa en el presente documento en su sentido mas amplio. Una muestra que comprende polinucleotidos, polipeptidos, peptidos, anticuerpos y similares puede comprender un fluido corporal; una fraccion soluble de una preparacion celular, o medios en los que se hicieron crecer las celulas; un cromosoma, un organulo o membrana aislados o extrafdos de una celula; ADN, ARN o ADNc genomicos, polipeptidos o peptidos en disolucion o unidos a un sustrato; una celula; un tejido; una impresion tisular; una huella dactilar, piel o cabello; y similares.
“Tratamiento” es una intervencion realizada con la intencion de prevenir el desarrollo o de alterar la patologfa o los smtomas de un trastorno. Por consiguiente, “tratamiento” se refiere tanto a tratamiento terapeutico como a medidas profilacticas o preventivas. Los que necesitan tratamiento incluyen los que ya tienen el trastorno, asf como aquellos en los que va a prevenirse el trastorno. En el tratamiento de un tumor (por ejemplo, de cancer), un agente terapeutico puede disminuir directamente la patologfa de las celulas tumorales, o hacer que las celulas tumorales sean mas susceptibles al tratamiento mediante otros agentes terapeuticos, por ejemplo, radiacion y/o quimioterapia. Tal como se usa en el presente documento, “mejorado” o “tratamiento” se refiere a un smtoma que se aproxima a un valor normalizado (por ejemplo un valor obtenido en un paciente o individuo sano), por ejemplo, es diferente en menos del 50% de un valor normalizado, preferiblemente es diferente en menos de aproximadamente el 25% de un valor normalizado, mas preferiblemente, es diferente en menos del 10% de un valor normalizado, y todavfa mas preferiblemente, no es significativamente diferente de un valor normalizado tal como se determina usando pruebas estadfsticas de rutina. Por ejemplo, el “tratamiento del cancer” o “celulas tumorales”, se refiere a uno o mas de los siguientes efectos: (1) inhibicion, en cierta medida, del crecimiento tumoral, incluyendo, (i) ralentizacion y (ii) detencion completa del crecimiento; (2) reduccion en el numero de celulas tumorales; (3) mantenimiento del tamano tumoral; (4) reduccion en el tamano tumoral; (5) inhibicion, incluyendo (i) reduccion, (ii) ralentizacion o (iii) prevencion completa, de infiltracion de celulas tumorales en organos perifericos; (6) inhibicion, incluyendo (i) reduccion, (ii) ralentizacion o (iii) prevencion completa, de metastasis; (7) potenciacion de respuesta inmunitaria antitumoral, que puede dar como resultado (i) mantenimiento del tamano tumoral, (ii) reduccion del tamano tumoral, (iii) ralentizacion del crecimiento de un tumor, (iv) reduccion, ralentizacion o prevencion de invasion y/o (8) alivio, en cierta medida, de la gravedad o el numero de uno o mas smtomas asociados con el trastorno.
Tal como se usa en el presente documento, “un smtoma mejorado” o “smtoma tratado” se refiere a un smtoma que se aproxima a un valor normalizado, por ejemplo, es diferente en menos del 50% diferente de un valor normalizado, preferiblemente es diferente en menos de aproximadamente el 25% diferente de un valor normalizado, mas preferiblemente, es diferente en menos del 10% de un valor normalizado, y todavfa mas preferiblemente, no es significativamente diferente de un valor normalizado tal como se determina usando pruebas estadfsticas de rutina.
Una “quimiocina” es una citocina pequena implicada en la migracion y activacion de celulas, incluyendo fagocitos y linfocitos, y desempena un papel en respuestas inflamatorias.
Una “citocina” es una protema producida por una celula que afecta al comportamiento de otras celulas a traves de un “receptor de citocina” en la superficie de las celulas a las que afecta la citocina. Las citocinas producidas por linfocitos se denominan en ocasiones “linfocinas”. Las citocinas tambien se caracterizan como tipo I (por ejemplo IL- 2 e IFN-gamma) y tipo II (por ejemplo IL-4 e IL-10).
Mediante el termino “modular,” se quiere decir que cualquiera de las actividades mencionadas, por ejemplo, se aumenta, potencia, termina (actua como agonista), promueve, disminuye, reduce, suprime, bloquea o antagoniza (actua como agonista). La modulacion puede aumentar la actividad en mas de 1 vez, 2 veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 100 veces, etc., con respecto a los valores iniciales. La modulacion tambien puede disminuir su actividad por debajo de los valores iniciales.
Tal como se usa en el presente documento, el termino “selectivo para celulas tumorales” se refiere a los efectos de
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las composiciones farmaceuticas de coenzima Q10, tales como inhibicion del crecimiento tumoral, apoptosis, efectos antiangiogenicos y que no son detectables cuando se aplican a celulas normales, tal como se describe en detalle en los ejemplos que siguen.
Composiciones de CoQ10
En una realizacion preferida, la invencion proporciona composiciones de CoQ10 para el tratamiento del cancer, tal como se especifica en las reivindicaciones adjuntas. Preferiblemente, las composiciones para su uso comprenden al menos de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 25% p/p de CoQ10, mas preferiblemente, entre aproximadamente el 1% y aproximadamente el 20% p/p de CoQ10. En la realizacion representativa descrita en la seccion de ejemplos mas adelante, se aplica una formulacion topica de CoQ10 a la piel de un animal portador de tumor para reducir la tasa de crecimiento del tumor. La CoQ10 puede obtenerse de Pure Prescriptions (San Diego, Calif.) en forma de polvo en cualquier cantidad adecuada (por ejemplo, 1 kilogramo). Para suministrar una composicion que contiene CoQ10, puede usarse cualquier portador adecuado. Se usan liposomas como portador. Una formulacion liposomica a modo de ejemplo esta compuesta de Phospholipon 90G (American Lechitin, Stanford, Conn.), Phospholipon 90H (American Lechitin, Stanford, Conn.), glicerol, hidroxitolueno butilado (BHT), etanol, trigliceridos de cadena media (MCT), lavanda (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y coenzima Q10 (Pure Prescriptions, San Diego, Calif.). Un ejemplo de un protocolo para preparar esta formulacion implica disolver en primer lugar 10 g de Phospholipon 90H, 5 g de Phospholipon 90g, con 1,5 g de MCT, 0,3 g de BHT y 9 ml de etanol a 75°C. A continuacion, se disuelven 12 g de coenzima Q 10 en la mezcla. Se anaden 65 ml de tampon fosfato 1 mM (pH 8,2) preparado con agua saturada con nitrogeno, 13,3 g de glicerol y 50 |il de lavanda. Se combina la mezcla anterior en una mezcladora de alta velocidad a 12.000 RPM para formar una crema. Se almacena la crema a 4°C hasta su uso.
Sujetos
Puesto que sujetos de muchas especies diferentes tienen tumores y son susceptibles de desarrollar un tumor, la invencion es compatible con muchos tipos de sujetos animales. Una lista a modo de ejemplo no exhaustiva de tales animales incluye mairnferos tales como ratones, ratas, conejos, cabras, ovejas, cerdos, caballos, ganado, perros, gatos y primates tales como monos, simios y seres humanos. Aquellos sujetos animales que se sabe que padecen un tumor de cancer de piel son adecuados para su uso en la invencion. En particular, los pacientes humanos que padecen un tumor de cancer de piel son sujetos animales adecuados para su uso en la invencion. Adaptando los metodos ensenados en el presente documento a otros metodos conocidos en la ciencia medica o veterinaria (por ejemplo, ajustando dosis de sustancias administradas segun el peso del animal sujeto), pueden optimizarse facilmente las composiciones utilizadas en la invencion para su uso en otros animales.
Composiciones farmaceuticas y administracion a un sujeto
En una realizacion preferida, las composiciones para su uso que comprenden CoQ10 se administran por via topica. Es preferible que el principio activo, es decir CoQ10, este presente como una formulacion farmaceutica. Las composiciones para su uso se describen en detalle en los ejemplos que siguen. El principio activo puede comprender, para administracion topica, desde el 0,001 % hasta aproximadamente el 20% p/p en peso de la formulacion en el producto final, aunque puede comprender hasta el 30% p/p, preferiblemente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 20% p/p de la formulacion. Las formulaciones topicas de la presente invencion, comprenden un principio activo junto con uno o mas portador(es) aceptable(s) para el mismo y opcionalmente cualquier otro componente(s) terapeutico(s). El/los portador(es) debe(n) ser “aceptable(s)” en el sentido de ser compatible(s) con los otros componentes de la formulacion y no perjudiciales para el receptor del/de los mismo(s).
La composicion para su uso de la invencion puede administrarse a un paciente o bien en sf misma, o bien en composiciones farmaceuticas en las que se mezcla con portadores o excipiente(s) adecuado(s). Al tratar a un paciente que muestra melanoma o carcinoma de celulas escamosas, se administra una cantidad terapeuticamente eficaz de un agente o agentes especificados en las reivindicaciones adjuntas. Una dosis terapeuticamente eficaz se refiere a la cantidad del compuesto que da como resultado la mejora de los smtomas o una prolongacion de la supervivencia en un paciente.
Puede determinarse la toxicidad y la eficacia terapeutica de tales compuestos mediante procedimientos farmaceuticos convencionales en cultivos celulares o animales de experimentacion, por ejemplo, para determinar la DL50 (la dosis letal para el 50% de la poblacion) y la DE50 (la dosis terapeuticamente eficaz en el 50% de la poblacion). La razon de dosis entre efectos toxicos y terapeuticos es el mdice terapeutico y puede expresarse como la razon DL50/DE50. Se prefieren los compuestos que muestran grandes indices terapeuticos. Los datos obtenidos a partir estos ensayos de cultivo celular y estudios con animales pueden usarse en la formulacion de un intervalo de dosificacion para su uso en seres humanos. La dosificacion de tales componentes radica preferiblemente en un intervalo de concentraciones circulantes que incluyen la DE50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificacion puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma farmaceutica empleada y de la via de administracion utilizada.
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Para cualquier compuesto usado en la composicion para su uso de la invencion, la dosis terapeuticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Por ejemplo, puede formularse una dosis en modelos animales para lograr un intervalo de concentracion plasmatica circulante que incluye la CI50 tal como se determina en cultivo celular. Tal informacion puede usarse para determinar con mas precision dosis utiles en seres humanos. Los niveles en plasma pueden medirse, por ejemplo, mediante HPLC.
La formulacion exacta, la via de administracion y la dosificacion pueden escogerse por el medico individual en vista del estado del paciente. (Vease por ejemplo Fingl et al., en The Pharmacological Basis of Therapeutics, 1975, capftulo 1, pag. 1). Debe observarse que el medico responsable sabra como y cuando terminar, interrumpir o ajustar la administracion debido a toxicidad o disfunciones organicas. A la inversa, el medico responsable sabra como ajustar el tratamiento a niveles superiores si la respuesta clmica no fuera adecuada (evitando la toxicidad). La magnitud de una dosis administrada en el tratamiento del trastorno oncogenico de interes variara con la gravedad del estado que va a tratarse y con la via de administracion. La gravedad del estado puede evaluarse, por ejemplo, en parte, mediante metodos de evaluacion de pronostico convencionales. Ademas, la dosis y quiza la frecuencia de dosis, tambien variaran segun la edad, el peso corporal y la respuesta del paciente individual. Puede usarse un programa comparable al comentado anteriormente en medicina veterinaria.
Dependiendo de los estados espedficos que esten tratandose, tales agentes pueden formularse y administrarse de manera sistemica o local. Pueden encontrarse tecnicas para formulacion y administracion en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa. (1990). Las vfas adecuadas pueden incluir, administracion oral, rectal, transdermica, vaginal, transmucosa o intestinal; administracion parenteral, incluyendo inyecciones intramusculares, subcutaneas, intramedulares, asf como inyecciones intratecales, intraventriculares directas, intravenosas, intraperitoneales, intranasales o intraoculares, por nombrar algunas.
Las composiciones descritas anteriormente pueden administrarse a un sujeto en cualquier formulacion adecuada. Ademas del tratamiento del cancer con formulaciones topicas de CoQ10, en otros aspectos de la invencion, CoQ10 podna administrarse mediante otros metodos. Por ejemplo, la CoQ10 podna formularse para administracion parenteral, por ejemplo, para inyeccion subcutanea, intravenosa, intramuscular o intratumoral. Podnan usarse otros metodos de administracion, por ejemplo, administracion liposomica o difusion desde un dispositivo impregnado con la composicion. La composicion puede administrarse en un unico bolo, en multiples inyecciones o mediante infusion continua (por ejemplo, por via intravenosa o mediante dialisis peritoneal). Para la administracion parenteral, las composiciones se formulan preferiblemente en forma esterilizada libre de pirogenos. Las composiciones de la invencion tambien pueden administrarse in vitro a una celula (por ejemplo, para inducir apoptosis en una celula cancerosa en un cultivo in vitro) anadiendo simplemente la composicion al lfquido en que esta contenida la celula.
Dependiendo de los estados espedficos que esten tratandose, tales agentes pueden formularse y administrarse de manera sistemica o local. Pueden encontrarse tecnicas para formulacion y administracion en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa. (1990). Las vfas adecuadas pueden incluir, administracion oral, rectal, transdermica, vaginal, transmucosa o intestinal; administracion parenteral, incluyendo inyecciones intramusculares, subcutaneas, intramedulares, asf como inyecciones intratecales, intraventriculares directas, intravenosas, intraperitoneales, intranasales o intraocurales, por nombrar algunas.
Para inyeccion, los agentes de la invencion pueden formularse en disoluciones acuosas, preferiblemente en tampones compatibles fisiologicamente tales como la solucion de Hank, la solucion de Ringer o tampon salino fisiologico. Para la administracion transmucosa de este tipo, se usan en la formulacion agentes de penetracion apropiados para la barrera que va a permearse. Tales agentes de penetracion se conocen en general en la tecnica.
El uso de portadores farmaceuticamente aceptables para formular los compuestos dados a conocer en el presente documento para la practica de la invencion en dosificaciones adecuadas para administracion sistemica esta dentro del alcance de la invencion. Con la eleccion apropiada del portador y la practica de fabricacion adecuada, las composiciones de la presente invencion, en particular las formuladas como disoluciones, pueden administrarse por via parenteral, tal como mediante inyeccion intravenosa. Los compuestos pueden formularse facilmente usando portadores farmaceuticamente aceptables bien conocidos en la tecnica en dosificaciones adecuadas para la administracion oral. Tales portadores permiten que los compuestos de la invencion se formulen como comprimidos, pfldoras, capsulas, lfquidos, geles, jarabes, suspensiones espesas, suspensiones y similares, para la ingestion oral por parte de un paciente que va a tratarse.
Los agentes destinados a administrarse por via intracelular pueden administrarse usando tecnicas bien conocidas por los expertos habituales en la tecnica. Por ejemplo, tales agentes pueden encapsularse en liposomas, luego administrarse tal como se describio anteriormente. Los liposomas son bicapas lipfdicas esfericas con interiores acuosos. Todas las moleculas presentes en una disolucion acuosa en el momento de la formacion del liposoma se incorporan en el interior acuoso. El contenido liposomico esta tanto protegido del microentorno externo como, debido a que los liposomas se funden con membranas celulares, se administra de manera eficaz al interior del citoplasma celular. Adicionalmente, debido a su hidrofobicidad, las moleculas organicas pequenas pueden administrarse directamente por via intracelular.
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Las composiciones farmaceuticas adecuadas para su uso en la presente invencion incluyen composiciones en las que los principios activos estan contenidos en una cantidad eficaz para lograr su fin deseado, Vease, por ejemplo, la figura 14. La determinacion de las cantidades eficaces esta completamente dentro de la capacidad de los expertos en la tecnica, especialmente a la luz de la descripcion detallada proporcionada en el presente documento. Ademas de los principios activos, estas composiciones farmaceuticas pueden contener portadores farmaceuticamente aceptables adecuados que comprenden excipientes y agentes auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos dando lugar a preparaciones que pueden usarse farmaceuticamente. Las preparaciones formuladas para administracion oral pueden estar en forma de comprimidos, comprimidos recubiertos de azucar, capsulas o disoluciones. Las composiciones farmaceuticas para su uso de la presente invencion pueden fabricarse de una manera que se conoce por sf misma, por ejemplo, por medio de procedimientos convencionales de mezclado, disolucion, granulacion, levitacion, emulsion, encapsulacion, atrapamiento o liofilizacion.
Las formulaciones adecuadas para administracion topica incluyen preparaciones lfquidas o semilfquidas adecuadas para la penetracion a traves de la piel hasta el sitio en el que se requiere el tratamiento, tal como linimentos, lociones, cremas, pomadas o pastas, y gotas adecuadas para la administracion a los ojos, ofdos o nariz. Las gotas segun la presente invencion pueden comprender disoluciones o suspensiones acuosas u oleosas esteriles y pueden prepararse disolviendo el principio activo en una disolucion acuosa adecuada de un agente bacteriano y/o fungicida y/o cualquier otro conservante adecuado, e incluyendo preferiblemente un agente tensioactivo. La disolucion resultante puede clarificarse y esterilizarse entonces mediante filtracion y transferirse al recipiente mediante una tecnica aseptica. Ejemplos de agentes bactericidas y fungicidas adecuados para su inclusion en las gotas son acetato o nitrato fenilmercurico (0,002%), cloruro de benzalconio (0,01%) y acetato de clorhexidina (0,01%). Los disolventes adecuados para la preparacion de una disolucion oleosa incluyen glicerol, alcohol diluido y propilenglicol.
Las lociones segun la presente invencion incluyen las adecuadas para su aplicacion a la piel o los ojos. Una locion ocular puede comprender una disolucion acuosa esteril que contiene opcionalmente un bactericida y que puede prepararse mediante metodos similares a los de la preparacion de gotas. Las lociones o linimentos para su aplicacion a la piel tambien pueden incluir un agente para acelerar el secado y enfriar la piel, tal como un alcohol o acetona, y/o un agente hidratante tal como glicerol o un aceite tal como aceite de ricino o aceite de cacahuete.
Las cremas, pomadas o pastas segun la presente invencion son formulaciones semisolidas del principio activo para aplicacion externa. Pueden prepararse mezclando el principio activo en forma de polvo o finalmente dividido, solo o en disolucion o suspension en un fluido acuoso o no acuoso, con la ayuda de una maquinaria adecuada, con una base grasa o no grasa. La base puede comprender hidrocarburos tales como parafina dura, blanda o lfquida, glicerol, cera de abejas, un jabon metalico; un mudlago; un aceite de origen natural tal como aceite de almendras, mafz, cacahuete, ricino u oliva; lanolina o sus derivados, o un acido grasotal como acido estearico u oleico junto con un alcohol tal como propilenglicol o macrogeles. La formulacion puede incorporar cualquier agente tensioactivo adecuado, tal como un agente tensioactivo anionico, cationico o no ionico, tal como esteres de sorbitano o derivados de polioxietileno de los mismos. Tambien pueden incluirse agentes de suspension tales como gomas naturales, derivados de celulosa o materiales inorganicos tales como sflices silfceas y otros componentes tales como lanolina.
Las formulaciones farmaceuticas para administracion parenteral incluyen disoluciones acuosas de compuestos activos en forma soluble en agua. Adicionalmente, pueden prepararse suspensiones de compuestos activos como suspensiones de inyeccion oleosas apropiadas. Los disolventes o vehuculos lipofilos adecuados incluyen aceites grasos tales como aceite de sesamo, o esteres de acidos grasos sinteticos, tales como oleato de etilo o trigliceridos o liposomas. Las suspensiones de inyeccion acuosas pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspension, tales como carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspension tambien puede contener estabilizadores o agentes adecuados que aumentan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparacion de disoluciones altamente concentradas.
Las preparaciones farmaceuticas para su uso oral pueden obtenerse combinando los compuestos activos con un excipiente solido, moliendo opcionalmente una mezcla resultante, y procesando la mezcla de granulos, anadiendo despues agentes auxiliares adecuados, si se desea, para obtener nucleos de comprimidos o comprimidos recubiertos de azucar. Tales excipientes son, en particular, cargas tales como azucares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidon de mafz, almidon de trigo, almidon de arroz, almidon de patata, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, pueden incluirse agentes disgregantes, tales como la polivinilpirrolidona reticulada, agar o acido algmico o una sal del mismo tal como alginato de sodio.
Los nucleos de los comprimidos recubiertos de azucar se proporcionan con un recubrimiento adecuado. Para este fin, pueden usarse disoluciones concentradas de azucares, que pueden contener opcionalmente goma arabiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dioxido de titanio, disoluciones de laca y cualquier disolvente organico o mezclas de disolventes. Pueden anadirse materias colorantes o pigmentos a los recubrimientos de comprimidos o comprimidos recubiertos de azucar para su identificacion o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis del compuesto activo.
Las preparaciones farmaceuticas que pueden usarse por via oral incluyen capsulas duras de dos piezas compuestas
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por gelatina, as^ como capsulas blandas, selladas compuestas por gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las capsulas duras de dos piezas pueden contener los principios activos en mezcla con una carga tal como lactosa, aglutinantes tales como almidones y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizadores. En las capsulas blandas, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en Kquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina lfquida o polietilenglicoles lfquidos. Ademas, pueden anadirse estabilizadores.
La composicion puede incluir un sistema tapon, si se desea. Se escogen sistemas tampon para mantener o tamponar el pH de las composiciones dentro de un intervalo deseado. El termino “sistema tampon” o “tampon” tal como se usa en el presente documento se refiere a un agente o agentes de soluto que, cuando esta(n) en una disolucion acuosa, estabiliza(n) tal disolucion frente a un cambio principal en el pH (o en la concentracion de iones hidrogeno o la actividad) cuando se anaden acidos o bases a la misma. Se conoce(n) bien el agente o agentes de soluto que es/son por tanto responsable(s) de una resistencia o cambio en el pH desde un valor de pH tamponado de partida en el intervalo indicado anteriormente. Aunque hay incontables tampones adecuados, el fosfato de potasio monohidratado es un tampon preferido.
El valor de pH final de la composicion farmaceutica puede variar dentro del intervalo fisiologico compatible. Necesariamente, el valor de pH final es uno que no irrite la piel humana y preferiblemente de manera que se facilite el transporte transdermico del compuesto activo, es decir CoQ10. Sin infringir esta restriccion, el pH puede seleccionarse para mejorar la estabilidad del compuesto CoQ10 y para ajustar la consistencia cuando se requiera. En una realizacion, el valor de pH preferido es de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 7,4, mas preferiblemente de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 6,5, lo mas preferiblemente desde aproximadamente 3,5 hasta aproximadamente 6,0.
Para los vehfculos de administracion topica preferidos, el componente restante de la composicion es agua, que esta necesariamente purificada, por ejemplo, agua desionizada. Tales composiciones de vehfculo de administracion contienen agua en el intervalo de mas de aproximadamente el 50 a aproximadamente el 95 por ciento, basado en el peso total de la composicion. La cantidad espedfica de agua presente no es cntica, sin embargo, puede ajustarse para obtener la viscosidad (habitualmente de aproximadamente 50 cps a aproximadamente 10.000 cps) y/o concentracion deseadas de los otros componentes. El vehfculo de administracion topica tiene preferiblemente una viscosidad de al menos aproximadamente 30 centipoises.
Tambien pueden usarse otros potenciadores de penetracion cutanea transdermica conocidos para facilitar la administracion de CoQ10. Son ilustrativos sulfoxidos tales como dimetilsulfoxido (DMSO) y similares; amidas dclicas tales como 1-dodecilazacicloheptan-2-ona (Azone™, una marca comercial registrada de Nelson Research, Inc.) y similares; amidas tales como N,N-dimetilacetamida (DMA), N,N-dietiltoluamida, N,N-dimetilformamida, N,N- dimetiloctamida, N,N-dimetildecamida y similares; derivados de pirrolidona tales como N-metil-2-pirrolidona, 2- pirrolidona, acido 2-pirrolidon-5-carboxflico, N-(2-hidroxietil)-2-pirrolidona o esteres de acidos grasos de los mismos, 1-lauril-4-metoxicarbonil-2-pirrolidona, N-sebo-alquilpirrolidonas y similares; polioles tales como propilenglicol, etilenglicol, polietilenglicol, dipropilenglicol, glicerol, hexanotriol y similares; acidos grasos lineales y ramificados tales como oleico, linoleico, laurico, valerico, heptanoico, caproico, minstico, isovalerico, neopentanoico, trimetilhexanoico, isoestearico y similares; alcoholes tales como etanol, propanol, butanol, octanol, oleflico, esteanlico, linoleflico y similares; tensioactivos anionicos tales como laurato de sodio, laurilsulfato de sodio y similares; tensioactivos cationicos tales como cloruro de benzalconio, cloruro de dodeciltrimetilamonio, bromuro de cetiltrimetilamonio y similares; tensioactivos no ionicos tales como los eteres de polioxietileno propoxilados, por ejemplo, Poloxamer 231, Poloxamer 182, Poloxamer 184 y similares, los acidos grasos etoxilados, por ejemplo, Tween 20, Myrj 45 y similares, los derivados de sorbitano, por ejemplo, Tween 40, Tween 60, Tween 80, Span 60 y similares, los alcoholes etoxilados, por ejemplo, lauril eter de polioxietileno (4) (Brij 30), oleil eter de polioxietileno (2) (Brij 93) y similares, lecitina y derivados de lecitina y similares; los terpenos tales como D-limoneno, alfa-pineno, beta-careno, alfa- terpineol, carvol, carvona, mentona, oxido de limoneno, oxido de alfa-pineno, aceite de eucalipto y similares.
Tambien son adecuados como potenciadores de penetracion cutanea acidos organicos y esteres tales como acido salidclico, salicilato de metilo, acido dtrico, acido sucdnico y similares.
Angiogenesis y enfermedades dependientes de angiogenesis
Tal como se usa en el presente documento, los terminos “inhibidor de angiogenesis”, “inhibicion de angiogenesis” o “antiangiogenico” incluyen vasculogenesis y pretenden significar efectuar una disminucion en el grado, la cantidad o la tasa de neovascularizacion. Efectuar una disminucion en el grado, la cantidad o la tasa de proliferacion o migracion de celulas endoteliales en el tejido es un ejemplo espedfico de inhibicion de angiogenesis.
El termino “composicion inhibidora de angiogenesis” se refiere a una composicion que comprende CoQ10 que inhibe procesos de angiogenesis mediada por tumores tales como la migracion y proliferacion de celulas tumorales, la formacion de tubos y que conduce posteriormente a la inhibicion de la generacion de nuevos vasos sangumeos a partir de los existentes y, en consecuencia, a la inhibicion de enfermedades dependientes de angiogenesis, por ejemplo, angiogenesis mediada por tumores. Veanse, por ejemplo las figuras 29A y 29B en las que una composicion
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que comprende CoQ10 inhibe la angiogenesis mediada por tumor en un tejido en comparacion con el tejido control en ausencia de cualquier CoQ10. La composicion que comprende CoQ10 se describe en detalle en los ejemplos que siguen.
Tal como se usa en el presente documento, el termino “enfermedad dependiente de angiogenesis” pretende significar una enfermedad en la que el proceso de angiogenesis o vasculogenesis mantiene o aumenta un estado patologico. En particular, enfermedad dependiente de angiogenesis se refiere a una angiogenesis mediada por tumor.
La angiogenesis es la formacion de nuevos vasos sangumeos a partir de capilares preexistentes o venulas poscapilares. La vasculogenesis resulta de la formacion de nuevos vasos sangumeos que surgen a partir de angioblastos que son precursores de celulas endoteliales. Ambos procesos dan como resultado la formacion de nuevos vasos sangumeos y se incluyen en el significado del termino enfermedades dependientes de angiogenesis. De manera similar, el termino “angiogenesis” tal como se usa en el presente documento pretende incluir la formacion de novo de vasos tales como los que surgen a partir de vasculogenesis asf como los que surgen a partir de ramificacion y proliferacion de vasos, capilares y venulas existentes.
La angiogenesis, incluyendo la vasculogenesis, es un importante proceso fisiologico, sin el cual no se producina el desarrollo embrionario ni la curacion de heridas. Sin embargo, la angiogenesis tambien se incorpora de manera inapropiada en numerosos estados patologicos como medio para proporcionar suministro adecuado de sangre y nutrientes a las celulas dentro del tejido afectado. Muchos de estos estados patologicos implican la proliferacion o regulacion de celulas aberrantes. Tales estados en los que se cree que la angiogenesis es importante se denominan en el presente documento enfermedades dependientes de angiogenesis. Sin embargo, los metodos de la invencion tambien pueden usarse de manera beneficiosa para inhibir la angiogenesis asociada con procesos fisiologicos normales. Por ejemplo, la inhibicion de angiogenesis asociada con el ciclo menstrual puede usarse de manera profilactica como un metodo eficaz de control de natalidad. Por tanto, la siguiente descripcion en referencia al tratamiento de enfermedades dependientes de angiogenesis tambien es aplicable a la inhibicion de respuestas angiogenicas normales cuando existe una necesidad o beneficio profilactico o terapeutico.
Las enfermedades dependientes de angiogenesis incluyen, por ejemplo, trastornos inflamatorios tales como inflamacion inmunitaria y no inmunitaria, artritis reumatoide, reumatismo articular cronico y psoriasis; trastornos asociados con invasion inapropiada o inoportuna de vasos tales como retinopatfa diabetica, glaucoma neovascular, retinopatfa de la prematuridad, degeneracion macular, rechazo de injerto corneal, fibroplasia retrolenticular, rubeosis, proliferacion capilar en placas ateroscleroticas y osteoporosis; y trastornos asociados con cancer, incluyendo por ejemplo, tumores solidos, metastasis tumorales, tumores por via sangumea tales como leucemias, angiofibromas, sarcoma de Kaposi, tumores benignos tales como hemangiomas, neuromas acusticos, neurofibromas, tracomas y granulomas piogenicos, asf como otros canceres que requieren neovascularizacion para soportar el crecimiento tumoral. Ejemplos adicionales de enfermedades dependientes de angiogenesis incluyen, por ejemplo, smdrome de Osler-Webber; angiogenesis miocardica; neovascularizacion de placas; telangiectasia; articulaciones hemofflicas y granulacion de heridas. Los expertos en la tecnica conocen otras enfermedades en las que la angiogenesis desempena un papel en el mantenimiento o la progresion del estado patologico y se pretende que se incluyan de manera similar dentro del significado del termino usado en el presente documento. Preferiblemente, enfermedades mediadas por angiogenesis se refiere a angiogenesis inducida por tumor.
Ensayo biologico in vitro de actividad de Inhibicion de angiogenesis
Los compuestos de CoQ10 empleados en la presente invencion pueden someterse a prueba para determinar su actividad de inhibicion de angiogenesis en varios sistemas de ensayo in vitro y estan completamente dentro del conocimiento de un experto habitual en la tecnica. Pueden prepararse u obtenerse comercialmente celulas endoteliales, por ejemplo, celulas endoteliales humanas de vena umbilical (HUVEC) o celulas endoteliales microvasculares humanas (HMVEC), se mezclan a una concentracion de 2x105 celulas/ml con fibrinogeno (5 mg/ml en solucion salina tamponada con fosfato (PBS) en una razon de 1:1 (v/v). Se anade trombina (concentracion final de 5 unidades/ml) y se transfiere inmediatamente la mezcla a una placa de 24 pocillos (0,5 ml por pocillo). Se permite que se forme el gel de fibrina y entonces se anaden factor de crecimiento endotelial vascular (VEGf) y factor de crecimiento de fibroblastos basico (FGF2) a los pocillos (cada uno a una concentracion final de 5 ng/ml) junto con el compuesto de prueba, tal como se describe en los ejemplos que siguen. Se incuban las celulas a 37°C en 5% de CO2 durante 4 dfas, tiempo en el cual se cuentan las celulas en cada pocillo y se clasifican o bien como redondeadas, alargadas sin ramificaciones, alargadas con una ramificacion o bien alargadas con 2 o mas ramificaciones. Los resultados se expresan como el promedio de 5 pocillos diferentes para cada concentracion de compuesto. Normalmente, en presencia de inhibidores angiogenicos, las celulas permanecen o bien redondeadas o bien forman tubos no diferenciados (por ejemplo, 0 o 1 ramificacion). Se reconoce en la tecnica que este ensayo es predictivo de la eficacia angiogenica (o de la inhibicion de la actividad de angiogenesis) in vivo (Grant et al., In Vitro Cell Dev. Biol. 27A:327-336 (1991); Min et al., Cancer Res. 56:2428-2433 (1996)).
En un ensayo alternativo, se observa formacion de tubos de celulas endoteliales cuando se cultivan celulas endoteliales en placas recubiertas con matriz Matrigel™, disponible comercialmente de Becton Dickinson de
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Bedford, Pa. (Schnaper et al., J. Cell. Physiol. 165:107-118 (1995)). Se transfieren las celulas endoteliales (1x104 celulas/pocillo) a placas de 24 pocillos recubiertas con matriz Matrigel™ y se cuantifica la formacion de tubos tras 48 horas. Se someten a prueba los inhibidores anadiendolos o bien al mismo tiempo que las celulas endoteliales o bien en diversos puntos de tiempo despues de eso.
Este ensayo modela la angiogenesis presentando a las celulas endoteliales un tipo particular de membrana basal, concretamente la capa de matriz en que podna esperarse encontrar primero migracion y diferenciacion de celulas endoteliales. Ademas de factores de crecimiento unidos, los componentes de matriz encontrados en la matriz Matrigel™ (y en las membranas basales in situ) o productos proteolfticos de los mismos tambien pueden ser estimuladores para la formacion de tubos de celulas endoteliales, lo que hace que este modelo sea complementario al modelo de angiogenesis en gel de fibrina.
Adicionalmente, pueden evaluarse las actividades angiogenicas de los compuestos empleados en la presente invencion mediante el ensayo de la membrana corioalantoica (CAM) de pollo (Oikawa et al., Cancer Lett. 59:57-66 (1991)).
Terapias de combinacion
Las composiciones terapeuticas de CoQ10 para su uso de la presente invencion pueden combinarse con cualquier otro metodo empleado generalmente en el tratamiento del tumor, enfermedad o trastorno particular que muestre el paciente. Siempre que no se sepa que un enfoque terapeutico particular es perjudicial para el estado del paciente en sf mismo y que no contrarresta significativamente el tratamiento con composicion de CoQ10, se contempla su combinacion con la presente invencion.
En relacion con el tratamiento de tumores solidos, la presente invencion puede usarse en combinacion con enfoques clasicos, tales como cirugfa, radioterapia, quimioterapia y similares. La invencion, por tanto, proporciona terapias combinadas en las que se usan las composiciones terapeuticas de CoQ10 simultaneamente con, antes de o despues de tratamiento de cirugfa o radiacion; o se administran a pacientes con, antes de o despues de agentes quimioterapicos, radioterapicos u otros agentes antiangiogenicos convencionales, o inmunotoxinas o ligandos de coagulacion dirigidos.
Tambien se describe la terapia de combinacion para otras enfermedades vasculares. Un ejemplo particular de esto es la hiperplasia prostatica benigna (BPH), que puede tratarse con composiciones de CoQ10 en combinacion con otros tratamientos puestos en practica actualmente en la tecnica. Por ejemplo, direccionamiento de inmunotoxinas a marcadores localizados dentro de BPH, tal como PSA.
Cuando se usa uno o mas agentes en combinacion con las composiciones de CoQ10, no se necesita que los resultados combinados sean aditivos a los efectos observados cuando se realiza cada tratamiento por separado. Aunque generalmente son deseables al menos efectos aditivos, sena beneficioso cualquier efecto antitumoral aumentado por encima de una de las terapias individuales. Ademas, no hay necesidad particular de que el tratamiento combinado muestre efectos sinergicos, aunque esto ciertamente es posible y ventajoso.
Para poner en practica la terapia antitumoral combinada, simplemente se administrana a un animal un constructo de composicion de CoQ10 en combinacion con otro agente anticancengeno de una manera eficaz para dar como resultado sus acciones antitumorales combinadas dentro del animal. Los agentes se proporcionanan por tanto en cantidades eficaces y durante periodos de tiempo eficaces para dar como resultado su presencia combinada dentro de la vasculatura tumoral y sus acciones combinadas en el entorno tumoral. Para lograr este objetivo, las composiciones de CoQ10 y otros agentes anticancengenos pueden administrarse al animal simultaneamente, o bien en una unica composicion o bien como dos composiciones distintas usando vfas de administracion diferentes.
Alternativamente, el tratamiento mediado por la composicion de CoQ10 puede preceder o seguir a un segundo tratamiento con agente anticancengeno, por ejemplo, en intervalos que oscilan desde minutos hasta semanas. En determinadas realizaciones en las que el agente anticancengeno y la composicion de CoQ10 se aplican por separado al animal, habna que asegurarse de que no transcurriera un periodo de tiempo significativo entre el tiempo de cada administracion, de manera que el agente anticancengeno y la composicion de CoQ10 pudieran ejercer todavfa un efecto combinado ventajosamente sobre el tumor. En tales casos, se contempla que el tumor entrana en contacto con ambos agentes en el plazo de aproximadamente 5 minutos a aproximadamente una semana uno de otro y, mas preferiblemente, en el plazo de aproximadamente 12-72 horas uno de otro, siendo lo mas preferido un tiempo de retardo de solo aproximadamente 12-48 horas.
Se conoce bien el uso general de combinaciones de sustancias en el tratamiento del cancer. Por ejemplo, la patente estadounidense n.° 5.710.134 da a conocer componentes que inducen necrosis en tumores en combinacion con sustancias o “profarmacos” no toxicos. Las enzimas liberadas por los procesos necroticos escinden el “profarmaco” no toxico en el “farmaco” toxico, lo que conduce a la muerte de las celulas tumorales. Ademas, la patente estadounidense n.° 5.747.469 da a conocer el uso combinado de vectores virales que codifican para p53 y agentes que producen dano en el ADN. Puede usarse cualquiera de tales enfoques similares con la presente invencion.
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En algunas situaciones, puede ser deseable incluso ampliar el periodo de tiempo para el tratamiento de manera significativa, transcurriendo varios d^as (2, 3, 4, 5, 6 o 7), varias semanas (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8) o incluso varios meses (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8) entre las administraciones respectivas. Esto sena ventajoso en circunstancias en las que se pretende que un tratamiento destruya sustancialmente el tumor, tal como el tratamiento con composicion de CoQ10 y se pretende que otro tratamiento evite la micrometastasis o nuevo crecimiento del tumor, tal como la administracion de un agente antiangiogenico.
Tambien se preve que se utilizara mas de una administracion de o bien la composicion de CoQ10 o bien otro agente anticancengeno. La composicion de CoQ10 y los agentes anticancengenos pueden administrarse de manera intercambiable en dfas o semanas alternos; o puede administrarse una secuencia del tratamiento con composicion de CoQ10, seguido por una secuencia de terapia con agente anticancengeno. En cualquier caso, para lograr la regresion del tumor usando una terapia combinada, todo lo que se requiere es administrar ambos agentes en una cantidad combinada eficaz para ejercer un efecto antitumoral, independientemente de los momentos de administracion.
En lo que se refiere a la cirugfa, puede practicarse cualquier intervencion quirurgica en combinacion con la presente invencion. En relacion con la radioterapia, se contempla cualquier mecanismo para inducir dano en el ADN localmente dentro de las celulas tumorales, tal como radiacion gamma, rayos X, radiacion UV, microondas e incluso emisiones electronicas y similares. Tambien se contempla la administracion dirigida de radioisotopos a celulas tumorales y esto puede usarse en relacion con un anticuerpo de direccionamiento u otro medio de direccionamiento.
Tambien se ha demostrado que la terapia con citocinas es un componente eficaz para los regfmenes terapeuticos combinados. Pueden emplearse diversas citocinas en tales enfoques combinados. Los ejemplos de citocinas incluyen IL-1-alfa, IL-10, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, TGF-beta, GM-CSF, M- CSF, G-CSF, TNF-alfa, TNF-beta, LAF, TCGF, BCGF, TRF, BAF, BDG, MP, LIF, OSM, TMF, PDGF, IFN-alfa, IFN- beta, IFN-gamma. Las citocinas se administran segun regfmenes convencionales, compatibles con indicaciones clmicas tales como el estado del paciente y la toxicidad relativa de la citocina. Tambien pueden usarse uteroglobinas para prevenir o inhibir metastasis (patente estadounidense n.° 5.696.092).
Composiciones de CoQ10 y agentes quimioterapicos de combinacion
En determinadas realizaciones, la composicion de CoQ10 para su uso de la presente invencion puede administrarse en combinacion con otro agente quimioterapico. Independientemente del/de los mecanismo(s) subyacente(s), puede usarse una variedad de agentes quimioterapicos en los metodos de tratamiento combinado dados a conocer en el presente documento. Los agentes terapeuticos pueden incluir, por ejemplo, agentes quimioterapicos tales como, ciclofosfamida (CTX, 25 mg/kg/dfa, v.o.), taxanos (paclitaxel o docetaxel), busulfano, cisplatino, metotrexato, daunorubicina, doxorubicina, melfalan, cladribina, vincristina, vinblastina, clorambucilo, tamoxifeno, taxol, etoposido (VP-16), adriamicina, 5-fluorouracilo (5FU), camptotecina, actinomicina D, mitomicina C, cisplatino (CDDP), combretastatina(s) y derivados y profarmacos de los mismos.
Tal como entenderan los expertos habituales en la tecnica, las dosis apropiadas de agentes quimioterapicos seran generalmente entorno a las ya empleadas en terapias clmicas en las que se administran los agentes quimioterapicos solos o en combinacion con otros agentes quimioterapicos. A modo de ejemplo unicamente, pueden usarse agentes tales como cisplatino y otros agentes alquilantes de ADN. El cisplatino se ha usado ampliamente para tratar el cancer, siendo la dosis eficaz usada en aplicaciones clmicas de 20 mg/m2 durante 5 dfas cada tres semanas durante un total de tres ciclos. El cisplatino no se absorbe por via oral y por tanto debe administrarse a traves de inyeccion por via intravenosa, subcutanea, intratumoral o intraperitoneal.
Agentes utiles adicionales incluyen compuestos que interfieren con la replicacion del ADN, la mitosis y la segregacion cromosomica. Tales compuestos quimioterapicos incluyen adriamicina tambien conocida como doxorubicina, etoposido, verapamilo, podofilotoxina y similares. Ampliamente usados en una practica clmica para el tratamiento de neoplasias, estos compuestos se administran a traves de inyecciones en bolo por via intravenosa a dosis que oscilan entre 25-75 mg/m2 a intervalos de 21 dfas para adriamicina y 35-50 mg/m2 para etoposido por via intravenosa o el doble de la dosis intravenosa por via oral.
Tambien pueden usarse agentes que interrumpen la smtesis y fidelidad de precursores de polinucleotidos. Particularmente utiles son los agentes que se han sometido a pruebas exhaustivas y estan facilmente disponibles. Como tales, se usan preferiblemente agentes tales como 5-fluorouracilo (5-FU) por tejido neoplasico, haciendo que este agente sea particularmente util para el direccionamiento a celulas neoplasicas. Aunque es bastante toxico, el 5- FU, puede aplicarse en un amplio intervalo de portadores, incluyendo los topicos, usandose sin embargo comunmente la administracion intravenosa con dosis que oscilan entre 3 y 15 mg/kg/dfa.
Se remite al experto en la tecnica a “Remington's Pharmaceutical Sciences” 15a edicion, capttulo 33, en particular a las paginas 624-652, para ejemplos no limitativos de otros agentes quimioterapicos que pueden usarse en terapias de combinacion con las composiciones de CoQ10. Se producira necesariamente alguna variacion en la dosificacion
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dependiendo del estado del sujeto que este tratandose. El medico responsable para la administracion podra determinar la dosis apropiada para el sujeto individual.
Agentes antiangiogenicos
El termino “angiogenesis” se refiere a la generacion de nuevos vasos sangumeos, generalmente en el interior de un tejido u organo. En condiciones fisiologicas normales, los seres humanos o animales experimentan angiogenesis solo en situaciones restringidas muy espedficas. Por ejemplo, normalmente se observa angiogenesis en curacion de heridas, desarrollo fetal y embrionario y formacion del cuerpo luteo, endometrio y placenta. La angiogenesis no controlada (persistente y/o no regulada) se refiere a diversos estados patologicos y se produce durante el crecimiento tumoral y la metastasis.
Se cree que tanto la angiogenesis controlada como la no controlada transcurren de manera similar. Las celulas endoteliales y los pericitos, rodeados por una membrana basal, forman los vasos sangumeos capilares. La angiogenesis comienza con la erosion de la membrana basal por enzimas liberadas por celulas endoteliales y leucocitos. Las celulas endoteliales, que recubren la luz de los vasos sangumeos, sobresalen entonces a traves de la membrana basal. Los estimulantes angiogenicos inducen a las celulas endoteliales a migrar a traves de la membrana basal erosionada. Las celulas que migran forman un “brote” del vaso sangumeo parental, donde las celulas endoteliales experimentan mitosis y proliferan. Los brotes endoteliales se fusionan entre sf para formar bucles capilares, creando el nuevo vaso sangumeo.
Puesto que se produce angiogenesis persistente, no regulada durante el desarrollo tumoral y la metastasis, los metodos de tratamiento de esta invencion pueden usarse en combinacion con una cualquiera o mas terapias “antiangiogenicas”. Agentes antiangiogenicos a modo de ejemplo que son utiles en relacion con la terapia combinada se enumeran en la tabla 1. Cada uno de los agentes enumerados en ella es a modo de ejemplo y en modo alguno limitativo.
TABLA 1
Inhibidores y reguladores negativos de angiogenesis
Sustancias
Angiostatina
Endostatina
Fragmento de prolactina de 16 kDa Peptidos de laminina Peptidos de fibronectina
Inhibidores tisulares de metaloproteinasa (TIMP 1, 2, 3, 4)
Inhibidores del activador de plasminogeno (PAI-1, -2)
Factor de necrosis tumoral alfa (dosis alta, in vitro)
TGF-beta-1 Interferones (IFN-alfa, beta, gamma)
Quimiocinas CXC-ELR: IL-12; SDF-1; MIG; factor plaquetario 4 (PF4-4); IP-10
Trombospondina (TSP)
SPARC
2-Metoxiestradiol
Protema relacionada con proliferina
Suramina
Talidomida
Cortisona
Fumagilina (AGM-1470; TNP-470)
Tamoxifeno
Extracto de muerdago coreano (Viscum album coloratum)
Retinoides
CM101
Dexametasona
Factor inhibidor de leucemia (LIF)______________________________
Un componente determinado preferido para su uso en la inhibicion de la angiogenesis es una protema denominada “angiostatina”. Este componente se da a conocer en las patentes estadounidenses 5.776.704; 5.639.725 y 5.733.876. La angiostatina es una protema que tiene un peso molecular de entre aproximadamente 38 kD y aproximadamente 45 kD, tal como se determina mediante electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones reductoras, que contiene aproximadamente las regiones Kringle 1 a 4 de una molecula de plasminogeno. La angiostatina generalmente tiene una secuencia de aminoacidos sustancialmente similar a la de un fragmento de plasminogeno murino que comienza en el aminoacido numero 98 de una molecula de plasminogeno murino intacto.
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La secuencia de aminoacidos de la angiostatina vana ligeramente entre especies. Por ejemplo, en la angiostatina humana, la secuencia de aminoacidos es sustancialmente similar a la secuencia del fragmento de plasminogeno murino descrito anteriormente, aunque una secuencia de angiostatina humana activa puede comenzar en el numero de aminoacido o bien 97 o bien 99 de una secuencia de aminoacidos de plasminogeno humano intacto. Ademas, puede usarse plasminogeno humano, ya que tiene actividad antiangiogenica similar, tal como se muestra en un modelo tumoral de raton.
Ya se ha demostrado que determinadas terapias antiangiogenicas producen regresiones tumorales, y la angiostatina es uno de tales agentes. La endostatina, un fragmento COOH-terminal de 20 kDa del colageno XVIII, el polisacarido bacteriano CM101 y el anticuerpo LM609 tambien tienen actividad angiostatica. Sin embargo, a la luz de sus otras propiedades, se denominan terapias antivasculares o toxinas de vasos tumorales, ya que no solo inhiben la angiogenesis sino que tambien inician la destruccion de los vasos tumores a traves de mecanismos en su mayor parte no definidos. Tambien se preve claramente su combinacion con la presente invencion.
La angiostatina y la endostatina se han convertido en el centro de un intenso estudio, ya que son los primeros inhibidores de la angiogenesis que han demostrado capacidad no solo para inhibir el crecimiento tumoral, sino tambien para producir regresiones tumorales en ratones. Hay multiples proteasas que se ha demostrado que producen angiostatina a partir de plasminogeno incluyendo elastasa, metaloelastasa de macrofago (MME), matrilisina (MMP-7) y gelatinasa B de 92 kDa/colagenasa de tipo IV (MMP-9).
La MME puede producir angiostatina a partir de plasminogeno en tumores y el factor estimulador de colonias de granulocitos-macrofagos (GMCSF) regula por incremento la expresion de MME por macrofagos induciendo la produccion de angiostatina. El papel de la MME en la generacion de angiostatina esta apoyado por el hallazgo de que la MME se expresa de hecho en muestras clmicas de carcinomas hepatocelulares de pacientes. Otra proteasa que se cree que puede producir angiostatina es la estromelisina-1 (MMP-3). Se ha demostrado que la MMP-3 produce fragmentos similares a angiostatina a partir de plasminogeno in vitro.
CM101 es un polisacarido bacteriano que se ha caracterizado bien en su capacidad para inducir inflamacion neovascular en tumores. CM101 se une a y reticula receptores expresados en endotelio desdiferenciado que estimula la activacion del sistema del complemento. Tambien inicia una respuesta inflamatoria conducida por citocina que se dirige selectivamente al tumor. Es un agente antipatoangiogenico que regula por disminucion la expresion de VEGF y sus receptores.
La trombospondina (TSP-1) y el factor plaquetario 4 (PF4) tambien pueden usarse en combinacion con la presente invencion. Ambos son inhibidores de la angiogenesis que se asocian con heparina y se encuentran en granulos alfa de plaquetas. TSP-1 es una glicoprotema grande de multiples dominios de 450 kDa que es constituyente de la matriz extracelular. TSP-1 se une a muchas de las moleculas de proteoglicano encontradas en la matriz extracelular incluyendo, HSPG, fibronectina laminina y diferentes tipos de colageno. TSP-1 inhibe la migracion y proliferacion de celulas endoteliales in vitro y la angiogenesis in vivo. TSP-1 tambien puede suprimir el fenotipo maligno y la tumorigenesis de celulas endoteliales transformadas. Se ha demostrado que el gen supresor de tumores p53 regula directamente la expresion de TSP-1 de manera que la perdida de actividad de p53 produce una reduccion espectacular en la produccion de TSP-1 y un aumento concomitante en la angiogenesis iniciada por tumor.
PF4 es una protema de 70 aa que es miembro de la familia CXC ELR de quimiocinas que puede inhibir potencialmente la proliferacion de celulas endoteliales in vitro y la angiogenesis in vivo. PF4 administrada por via intratumoral o administrada mediante un vector adenoviral puede producir una inhibicion del crecimiento tumoral.
Los interferones y los inhibidores de metaloproteinasa son otras dos clases se inhibidores angiogenicos que se producen de manera natural que pueden combinarse con la presente invencion. La actividad antiendotelial de los interferones se ha demostrado desde principios de los anos 1980, sin embargo, el mecanismo de inhibicion todavfa no esta claro. Se sabe que pueden inhibir la migracion de celulas endoteliales y que tienen alguna actividad antiangiogenica in vivo que esta mediada posiblemente por una capacidad para inhibir la produccion de promotores angiogenicos por celulas tumorales. Los tumores vasculares son sensibles en particular al interferon, por ejemplo, los hemangiomas en proliferacion pueden tratarse con IFN-alfa.
Los inhibidores tisulares de metaloproteinasas (TIMP) son una familia de inhibidores que se producen de manera natural de las metaloproteinasas de la matriz (MMP) que tambien pueden inhibir la angiogenesis y pueden usarse en protocolos de tratamiento combinados con la presente invencion. Los MMP desempenan un papel clave en el proceso angiogenico ya que degradan la matriz a traves de la cual las celulas endoteliales y los fibroblastos migran cuando se esta extendiendo o remodelando la red vascular. De hecho, se ha demostrado que un miembro de las MMP, MMP-2, se asocia con el endotelio activado a traves de la integrina alfavbeta3 presumiblemente para este fin. Si esta interaccion se interrumpe por un fragmento de MMP-2, entonces la angiogenesis se regula por disminucion y se inhibe el crecimiento de tumores.
Hay varios agentes farmacologicos que inhiben la angiogenesis, pudiendo usarse uno cualquiera o mas de ellos en
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combinacion con la presente invencion. Estos incluyen AGM-1470/TNP-470, talidomida y carboxiamidotriazol (CAI). En 1990 se encontro que fumagilina es un potente inhibidor de la angiogenesis y desde entonces se han desarrollado los analogos sinteticos de fumagilina, AGM-1470 y TNP-470. Ambos farmacos inhiben la proliferacion celular in vitro y la angiogenesis in vivo. TNP-470 se ha estudiado ampliamente en ensayos clmicos con seres humanos sugiriendo los datos que la administracion a largo plazo es optima.
Originalmente se uso talidomida como sedante, pero se encontro que era un potente agente teratogeno y se interrumpio su uso. En 1994 se encontro que la talidomida es un inhibidor de la angiogenesis. La talidomida se usa actualmente en ensayos clmicos como agente anticancengeno asf como tratamiento de enfermedades oculares vasculares.
CAI es un inhibidor sintetico de la angiogenesis de pequeno peso molecular que actua como bloqueante de los canales de calcio que impide la reorganizacion de actina, la migracion de celulas endoteliales y la diseminacion sobre el colageno IV. CAI inhibe la neovascularizacion a las concentraciones fisiologicas alcanzables y se tolera bien por via oral por pacientes con cancer. Los ensayos clmicos con CAI han proporcionado estabilizacion de la enfermedad en el 49% de los pacientes con cancer que tienen enfermedad progresiva antes del tratamiento.
Se demostro que la cortisona en presencia de heparina o fragmentos de heparina inhiben el crecimiento tumoral en ratones bloqueando la proliferacion de celulas endoteliales. El mecanismo implicado en el efecto inhibidor aditivo del esteroide y la heparina no esta claro, aunque se cree que la heparina puede aumentar la captacion del esteroide por las celulas endoteliales. Se ha demostrado que la mezcla aumenta la disolucion de la membrana basal por debajo de los capilares recien formados y esto es una posible explicacion para el efecto angiostatico aditivo. Los conjugados de heparina-cortisol tambien tienen potente actividad de efectos angiostaticos y antitumorales in vivo.
Tambien se contemplan inhibidores de la angiogenesis espedficos adicionales, incluyendo, pero sin limitarse a, factor antiinvasivo, acidos retinoicos y paclitaxel (patente estadounidense n.° 5.716.981); AGM-1470 (Ingber et al., Nature, 48:555-557 1990); extracto de cartflago de tiburon (patente estadounidense n.° 5.618.925); oligomeros de poliurea o poliamida anionica (patente estadounidense n.° 5.593.664); derivados de oxiindol (patente estadounidense n.° 5.576.330); derivados de estradiol (patente estadounidense n.° 5.504.074); y derivados de tiazolopirimidina (patente estadounidense n.° 5.599.813) para su uso como composiciones antiangiogenicas para los usos combinados de la presente invencion.
Tambien pueden usarse composiciones que comprenden un antagonista de una integrina alfavbeta3 para inhibir la angiogenesis en combinacion con la presente invencion. Tal como se da a conocer en la patente estadounidense n.° 5.766.591, los polipeptidos que contienen RGD y sales de los mismos, incluyendo polipeptidos dclicos, son ejemplos adecuados de antagonistas de integrina alfavbeta3.
El anticuerpo LM609 frente a la integrina alfavbeta3 tambien induce regresiones tumorales. Los antagonistas de la integrina alfavbeta3, tales como LM609, inducen apoptosis de celulas endoteliales angiogenicas dejando los vasos sangumeos quiescentes sin afectar. LM609 u otros antagonistas de alfavbeta3 tambien pueden funcionar inhibiendo la interaccion de alfavbeta3 y MMP-2, una enzima proteolftica que se cree que desempena un importante papel en la migracion de celulas endoteliales y fibroblastos.
La apoptosis del endotelio angiogenico en este caso puede tener un efecto en cascada sobre el resto de la red vascular. La inhibicion de la red vascular tumoral de su respuesta completa a la senal del tumor para expandirse puede iniciar, de hecho, el colapso parcial o completo de la red, dando como resultado la muerte de las celulas tumorales y la perdida de volumen tumoral. Es posible que la endostatina y la angiostatina funcionen de manera similar. El hecho de que LM609 no afecte a los vasos quiescentes pero pueda producir regresiones tumorales sugiere fuertemente que no sea necesaria dirigirse a todos los vasos sangumeos en un tumor para el tratamiento con el fin de obtener un efecto antitumoral.
Pueden usarse angiopoyetinas no dirigidas, tales como angiopoyetina-2, en combinacion con la presente invencion. Los efectos angiogenicos de diversos reguladores implican un bucle autocrino conectado con angiopoyetina-2. Por tanto, se contempla el uso de angiopoyetina-2, angiopoyetina-1, angiopoyetina-3 y angiopoyetina-4 conjuntamente con la presente invencion. Tambien pueden usarse otros metodos de intervencion terapeutica basados en alterar la senalizacion a traves del receptor de Tie2 en combinacion el mismo, tal como usando un receptor de Tie2 soluble que pueda bloquear la activacion de Tie2 (Lin et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 95(15):8829-34, 1998). La administracion de un constructo de este tipo usando terapia genica adenoviral recombinante ha demostrado ser eficaz en el tratamiento del cancer y en la reduccion de metastasis (Lin et al., 1998).
Composiciones de CoQ10 y terapia de combinacion agentes de induccion de apoptosis
El tratamiento con composicion de CoQ10 tambien puede combinarse con metodos de tratamiento que inducen apoptosis en cualquier celula dentro del tumor, incluyendo celulas tumorales y celulas endoteliales vasculares tumorales. Aunque muchos agentes anticancengenos pueden tener, como parte de su mecanismo de accion, un efecto de induccion de apoptosis, se han descubierto, disenado o seleccionado determinados agentes con este
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mecanismo como primario, tal como se describe a continuacion.
Se han descrito varios oncogenes que inhiben la apoptosis o muerte celular programada. Los oncogenes a modo de ejemplo en esta categona incluyen, pero no se limitan a, bcr-abl, bcl-2 (distinto de bcl-1, ciclina D1; numeros de registro de GenBank M14745, X06487; patentes estadounidenses n.os 5.650.491; y 5.539.094) y miembros de la familia incluyendo Bcl-xl, Mcl-1, Bak, Al, A20. La sobreexpresion de bcl-2 se descubrio por primera vez en linfomas de celulas T. bcl-2 funciona como un oncogen uniendose e inactivando Bax, una protema en la ruta apoptotica. La inhibicion de la funcion de bcl-2 previene la inactivacion de Bax y permite que se realice la ruta apoptotica. Por tanto, se contempla la inhibicion de esta clase de oncogenes, por ejemplo, usando secuencias de nucleotidos antisentido, para su uso en la presente invencion en aspectos en los que se desea la potenciacion de la apoptosis (patentes estadounidenses n.os 5.650.491; 5.539.094; y 5.583.034).
En muchas formas de cancer se han notificado mutaciones en genes supresores de tumores, tales como p53. La inactivacion de p53 da como resultado un fallo en promover la apoptosis. Con este fallo, las celulas cancerosas avanzan en la tumorigenesis, en lugar de quedar destinadas para muerte celular. Por tanto, tambien se contempla proporcionar supresores de tumores para su uso en la presente invencion para estimular la muerte celular. Los supresores de tumores a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, p53, gen de retinoblastoma (Rb), tumor de Wilm (WT1), bax alfa, enzima convertidora de interleucina-11B y su familia, gen MEN-1, neurofibromatosis tipo 1 (NF1), inhibidor cdk p16, gen del cancer colorrectal (DCC), gen de la poliposis adenomatosa familiar (FAP), gen supresor de tumores multiple (MTS-1), BRCA1 y BRCA2.
Se prefieren para su uso los genes p53 (patentes estadounidenses n.os 5.747.469; 5.677.178; y 5.756.455), retinoblastoma, BRCA1 (patentes estadounidenses n.os 5.750.400; 5.654.155; 5.710.001; 5.756.294; 5.709.999; 5.693.473; 5.753.441; 5.622.829; y 5.747.282), MEN-1 (numero de registro de GenBank U93236) y E1A de adenovirus (patente estadounidense n.° 5.776.743).
Otras composiciones que pueden usarse incluyen genes que codifican para el ligando inductor de apoptosis relacionado con el factor de necrosis tumoral denominado TRAIL y el polipeptido de TRAIL (patente estadounidense n.° 5.763.223); la proteasa asociada con apoptosis de 24 kD de la patente estadounidense n.° 5.605.826); el factor 1 asociado con Fas, FAF1 (patente estadounidense n.° 5.750.653). Tambien se contempla para su uso en estos aspectos de la presente invencion proporcionar la enzima convertidora de interleucina-1-beta y miembros de su familia, que tambien se notifica que estimulan la apoptosis.
Tambien pueden usarse compuestos tales como derivados de carbostirilo (patentes estadounidenses n.os 5.672.603; y 5.464.833); peptidos apogenicos ramificados (patente estadounidense n.° 5.591.717); inhibidores de fosfotirosina y analogos de fosfotirosina no hidrolizables (patentes estadounidenses n.os 5.565.491; y 5.693.627); agonistas de receptores retinoides RXR (patente estadounidense n.° 5.399.586); e incluso antioxidantes (patente estadounidense n.° 5.571.523). Tambien pueden unirse inhibidores de tirosina cinasa, tales como genistema, a ligandos que se seleccionan como diana un receptor de la superficie celular (patente estadounidense n.° 5.587.459).
Cantidades eficaces
Las composiciones descritas anteriormente se administran preferiblemente a un sujeto en una cantidad eficaz. Una cantidad eficaz es una cantidad que puede producir un resultado deseable en un animal o celula tratada (por ejemplo, inducir apoptosis o afectar a la mitosis en una celula en el animal o en un cultivo). Tal como se conoce bien en las tecnicas medica y veterinaria, la dosificacion para cualquier animal depende de muchos factores, incluyendo el tamano del animal particular, el area de superficie corporal, la edad, la composicion particular que va a administrarse, el tiempo y la via de administracion, la salud general y otros farmacos que se esten administrando de manera concurrente. Se espera que una dosificacion apropiada para la administracion topica de las composiciones de la invencion estana en el intervalo de aproximadamente 1,5 - 4,0 mg de CoQ10/kg de peso corporal (por ejemplo, 200 mg para sujetos que oscilan entre 110 y 300 lb). Una cantidad eficaz para su uso con una celula en cultivo tambien variara, pero puede determinarse facilmente de manera empmca (por ejemplo, anadiendo diversas concentraciones a la celula y seleccionando la concentracion que mejor produce el resultado deseado). Se espera que una concentracion apropiada estana en el intervalo de aproximadamente 5 - 200 |iM.
Metodo para inhibir el crecimiento de celulas cancerosas
La invencion proporciona una composicion para su uso tal como se especifica en las reivindicaciones adjuntas, que puede usarse en un metodo para inhibir el crecimiento de celulas tumorales o aumentar la tasa de apoptosis de celulas tumorales. El metodo incluye las etapas de poner en contacto una celula tumoral con una composicion que incluye una cantidad suficiente de CoQ10 o eliminar o al menos retardar la mitosis en la celula tumoral. El metodo puede usarse para inhibir el crecimiento de numerosos tipos de celulas tumorales cancerosas. La coenzima Q10 se ha sometido a prueba y se ha demostrado que es eficaz contra melanoma, celulas cancerosas escamosas y de mama. Se espera que la coenzima Q10 tambien sea eficaz contra otros canceres, en particular los derivados de ongenes epiteliales, mesenquimatosos y hematopoyeticos.
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En los metodos de la invencion puede usarse cualquier formulacion adecuada de CoQ10. Las formulaciones tfpicas son formulaciones liposomicas topicas de coenzima Q10 de concentraciones variables. Ademas de la administracion topica, las formulaciones que contienen CoQ10 pueden administrarse a un sujeto a traves de inyeccion (por ejemplo, i.p., i.v., i.m., s.c.).
En un metodo de reduccion de la tasa de crecimiento de celulas tumorales o de aumento de la tasa de apoptosis de celulas tumorales in vitro, la CoQ10 se disuelve en 2-propanol seguido por dilucion en un medio deseado (tal como se describe en el ejemplo 1 a continuacion). En un metodo in vivo de reduccion de la tasa de crecimiento de celulas tumorales o de aumento de la tasa de apoptosis de celulas tumorales, se aplica diariamente por via topica una crema que contiene CoQ10 a un sitio diana hasta que se produce la regresion del tumor (tal como se describe en los ejemplos 2 y 3). En otro metodo in vivo, se administra una formulacion que contiene CoQ10 a un sujeto a traves de inyeccion (por ejemplo, i.p., i.v., i.m., s.c.).
La inhibicion del crecimiento de celulas tumorales manifestada por la administracion de las composiciones de CoQ10 descritas en el presente documento, que son composiciones que comprenden de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 25% de coenzima Q10, se refiere a uno o mas de los siguientes efectos: (1) inhibicion, en cierta medida, del crecimiento tumoral, incluyendo, (i) ralentizacion y (ii) detencion completa del crecimiento; (2) reduccion en el numero de celulas tumorales; (3) mantenimiento del tamano tumoral; (4) reduccion en el tamano tumoral; (5) inhibicion, incluyendo (i) reduccion, (ii) ralentizacion o (iii) prevencion completa, de infiltracion de celulas tumorales en organos perifericos; (6) inhibicion, incluyendo (i) reduccion, (ii) ralentizacion o (iii) prevencion completa, de metastasis; (7) potenciacion de respuesta inmunitaria antitumoral, que puede dar como resultado (i) mantenimiento del tamano tumoral, (ii) reduccion del tamano tumoral, (iii) ralentizacion del crecimiento de un tumor, (iv) reduccion, ralentizacion o prevencion de invasion y/o (8) alivio, en cierta medida, de la gravedad o el numero de uno o mas smtomas asociados con el trastorno.
En realizaciones preferidas, la administracion de composiciones de coenzima Q10 da como resultado que se inhiba uno o mas fenotipos de una celula tumoral. Por ejemplo, inhibicion del crecimiento tumoral, reduccion del tamano tumoral, inhibicion de metastasis, reduccion en el numero de celulas tumorales, y similares. Cada uno de estos fenotipos de una celula tumoral pueden medirse usando ensayos convencionales, tales como por ejemplo, obtencion de imagenes, mediciones mecanicas, ensayos in vitro, y similares.
Kits y formulaciones
En el presente documento tambien se describe un kit para reducir la tasa de crecimiento tumoral en un sujeto. El kit de la invencion incluye una composicion que comprende CoQ10 y un portador farmaceuticamente aceptable asf como instrucciones impresas para usar la composicion para reducir la tasa de crecimiento tumoral en un sujeto.
Los componentes activos pueden estar presentes en forma solida, semisolida o lfquida. Las formas solidas incluyen, por ejemplo, polvos, granulos y copos. Las formas semisolidas incluyen, por ejemplo, geles, cremas, gelatinas y pomadas. Los expertos habituales en la tecnica conocen estos y otros agentes activos abarcados por la presente invencion y, en la mayona de los casos, estan disponibles comercialmente de proveedores tales como Compound Solutions, Inc., Escondido, Calif. Informacion sobre estos y otros agentes activos e inactivos abarcados por la invencion, y sus proveedores comerciales esta disponible de diversos manuales comerciales, mas particularmente, de Remington's Pharmaceutical Sciences, Farmacopea de los Estados Unidos (USP), Formulario Nacional (NF), Merck Index, Physician's Desk Reference (grna de referencia medica) (PDR) y Chemical Abstracts.
Los kits descritos tambien contendran generalmente al menos un agente inactivo. Tal como se usa en el presente documento, los agentes inactivos son agentes que no proporcionan ningun beneficio terapeutico al sujeto al que se administran. En cambio, los agentes inactivos pueden funcionar de muchas otras maneras tal como para proporcionar una base en la que el agente activo puede disolverse o suspenderse, para diluir el agente activo con el fin de proporcionar dosis apropiadas para su administracion, para facilitar la disolucion o suspension de agente activo o para impedir la oxidacion del agente activo eliminando las burbujas de aire de la suspension combinada final. En algunas realizaciones de la invencion, los kits carecen de agente inactivo, y en cambio contienen uno o mas agentes activos.
Agentes de base tales como cremas, aceites, geles o pomadas son adecuados para aplicaciones topicas o como supositorio. La eleccion de un agente de base inactivo adecuado para su uso en los kits de la invencion dependera del agente activo con el que va a combinarse. El experto habitual conocera los agentes de base adecuados. Alternativamente, puede consultarse Remington's Pharmaceutical Sciences, the Physician Desk Reference (PDR) u otros manuales enumerados anteriormente para obtener esta determinacion.
Los ejemplos de agentes de base inactivos o componentes incluyen, por ejemplo, lanolina, pomada hidrofila, pomada blanca, pomada amarilla, pomada de polietilenglicol, vaselina, vaselina hidrofila, vaselina blanca, vaselina acuosa rosa, escualeno, aceite vegetal hidrogenado (tipo II), gel de ultrasonidos, gel de lecitina pluronica (PLO), crema.
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El termino “vaselina” tal como se usa en el presente documento significa pomada de vaselina, gel de vaselina o crema de vaselina, estando todos ellos disponibles comercialmente. Esta completamente dentro del dominio del experto farmaceutico habitual determinar que forma de vaselina es la mas apropiada para un kit espedfico.
Una base de ultrasonidos disponible comercialmente es o bien la locion de ultrasonidos POLYSONIC™ (gel de ultrasonidos) o bien el gel de ultrasonidos Aquasonic 100 fabricado por Parker Laboratories, Inc. (Fairfield, N.J.) o bien EcoGel 100 o EcoGel 200 fabricado por Eco-Med (Mississauga, Ontario, Canada), cuyas composiciones pueden incluir alcohol cefflico, parafina ffquida, poffmero, tensioactivos, conservantes tales como propilparabeno y metil parabeno en concentracion bacteriostatica, fragancia y agua para osmosis inversa. Tal como se usa en el presente documento, un gel es una base con una viscosidad superior que la de una locion. Las caractensticas ffsicas de la locion de ultrasonidos POLYSONIC™ (gel de ultrasonidos) y EcoGel 100 incluyen un intervalo de pH de 6,5-7,0, densidad de 1,04 g/cm3, viscosidad de 35.000 a 70.000 cps e impedancia acustica de 1,60 (105 g/cm2 s). Las caractensticas ffsicas del gel de ultrasonidos Aquasonic 100 o EcoGel 200 son similares a las de la locion de ultrasonidos POLYSONIC™ (gel de ultrasonidos) y EcoGel 100, excepto en que su viscosidad es de 80.000 a 110.000 cps. Estas lociones y geles estan disponibles en forma transparente, incolora o en una forma de color azul.
Las bases ffquidas se recomiendan para productos farmaceuticos administrados por via oral. En algunas realizaciones de la invencion, se proporcionan composiciones que permiten que el al menos un agente activo, por ejemplo, la CoQ10, se suministre ya mezclado conjuntamente con un agente inactivo. Los ejemplos de esto incluyen la combinacion de hidroxido de magnesio e hidroxido de aluminio (disponible comercialmente como MAALOX™ (hidroxido de magnesio/hidroxido de aluminio) y HCl de difenhidramina (disponible comercialmente como BENADRYL™ (clorhidrato de difenhidramina)). Tanto MAALOX™ (hidroxido de magnesio/hidroxido de aluminio) como BENADRYL™ (clorhidrato de difenhidramina) se suministran por sus fabricantes respectivos como una combinacion de agentes activos e inactivos.
Se prefieren las disoluciones de base esteriles para las vfas de administracion parenterales (es decir, inyeccion), en aerosol (es decir, inhalacion) y oftalmicas. La administracion puede ser, por ejemplo, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intracavitaria, subcutanea o transdermica. Las preparaciones para administracion parenteral incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones esteriles, acuosas o no acuosas. Los productos farmaceuticos combinados, preferiblemente los deseados para vfas de administracion parenterales, por inhalacion u oftalmicas, pueden prepararse y administrarse en agentes inactivos que son farmaceuticamente aceptables. Tal como se usa en el presente documento, un portador farmaceuticamente aceptable significa un material no toxico que no interfiere con la eficacia de la actividad biologica de los agentes activos y que es compatible con los sistemas biologicos de un tejido u organismo. El portador fisiologicamente aceptable debe ser esteril para la administracion in vivo. Portadores farmaceuticamente aceptables incluyen diluyentes, cargas, sales, tampones, estabilizantes, solubilizantes y otros materiales que se conocen bien en la tecnica. Las caractensticas del portador dependeran de la via de administracion. En general, los expertos habituales en la tecnica conocen bien los portadores o agentes farmaceuticamente aceptables. En algunas realizaciones, las disoluciones esteriles adecuadas incluyen disoluciones de inhalacion de albuterol e ipratropio; disolucion de inyeccion de papaverina, fentolamina y prostaglandina; disolucion de inyeccion de citrato de fentanilo y gotas oftalmicas de ciclosporina.
Ejemplos de disolventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceite vegetal tal como aceite de oliva, esteres organicos inyectables tales como oliato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, disoluciones alcoholicas/acuosas, emulsiones o suspensiones, incluyendo solucion salina y medios tamponados. Los vehffculos parenterales incluyen disolucion de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, Ringer lactato o aceites fijos. Los vehffculos intravenosos incluyen reforzadores de ffquidos y nutrientes, reforzadores de electrolitos, (tales como los basados en dextrosa de Ringer), y similares Tambien pueden estar presentes conservantes y otros aditivos tales como, por ejemplo, agentes antimicrobianos, antioxidantes, quelantes y gases inertes y similares. Los expertos en la tecnica pueden determinar facilmente los diversos parametros para preparar estas composiciones farmaceuticas alternativas sin recurrir a experimentacion excesiva.
Los agentes inactivos tambien pueden incluir componentes que funcionan para conservar la integridad de la formulacion combinada. Esta ultima categona de agentes inactivos incluye, por ejemplo, agentes antiespumantes. Agentes antiespumantes son agentes que funcionan para eliminar el aire no deseado atrapado en una composicion, quiza durante el mezclado o la agitacion. El uso de componentes antiespumantes es particularmente util en la preparacion de productos farmaceuticos que van a usarse para la obtencion de imagenes por ultrasonidos debido a la impedancia de la transmision de senales por las burbujas de aire. Los ejemplos de otros agentes antiespumantes utiles en las composiciones de la invencion incluyen bisfenilhexameticona, dimeticona, dimeticonol, hexametildisiloxano, alcohol hexflico, alcohol isopropflico, destilados de petroleo, fenetil disiloxano, fenil trimeticona, polisilicona-7, alcohol propflico, dimetilsililato de sflice, sililato de sflice, tetrametildecindiol y trimetilsiloxilicato. Un agente antiespumante preferido es simeticona. La simeticona es una mezcla de aproximadamente el 90% de dimeticona y el 10% de dioxido de silicona (p/p). La simeticona se usa ampliamente como agente antigas en productos farmaceuticos tales como GAS-X™ (simeticona), MAALOX™ (hidroxido de magnesio/hidroxido de aluminio), MYLANTA™ (aluminio, magnesio-simeticona), PhAzYME™ (simeticona), GENAZYME™ (simeticona) y MYLICON™ (simeticona) en gotas. La simeticona puede usarse como agente antiespumante en cualquiera de las formulaciones abarcadas por la invencion.
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Otros agentes inactivos que pueden incluirse en las formulaciones de la invencion incluyen estabilizantes tales como acido cftrico, antioxidantes tales como metabisulfito de sodio y conservantes tales como metil o propilparabeno.
Otra clase de agentes de inactivos son los agentes de suspension. Los agentes de suspension son agentes que facilitan la suspension y en algunos casos la disolucion de un agente activo en una base. Generalmente, los agentes de suspension garantizan el mezclado mas uniforme de los componentes activos y de base. Con el fin de administrar una dosis mas uniforme de un producto farmaceutico combinado a un paciente, los componentes combinados deben combinarse de manera apropiada y homogenea. Si el agente activo esta presente como un polvo, a menudo es diffcil de lograr una dispersion uniforme usando la forma tradicional de combinacion.
Una subcategona de agentes de suspension son los solubilizantes. Los solubilizantes son agentes que facilitan la disolucion de un agente solido o, en algunos casos, de un agente semisolido en un agente inactivo de base. En algunas realizaciones de la invencion, un agente activo en forma solida puede disolverse en un agente de suspension, antes de mezclarlo con el agente de base. A la inversa, el agente de suspension y el agente de base pueden envasarse previamente juntos, particularmente si la preocupacion es garantizar la combinacion uniforme del agente activo dentro del componente de base mas que la perdida del agente activo solido (es decir, en polvo). Todavfa en otras variaciones, el agente de suspension puede mezclarse previamente con el agente inactivo de base.
Agentes de suspension adecuados utiles en las composiciones para su uso de la invencion incluyen, pero no se limitan a, glicerina, hexilenglicol, propilenglicol, sorbitol, goma arabiga, colesterol, dietanolamina (adyuvante), monoestearato de glicerilo, alcoholes de lanolina, lecitina, mono y digliceridos, monoetanolamina (adyuvante), acido oleico (adyuvante), alcohol oleflico (estabilizante), Poloxamer, estearato de polioxietileno 50, aceite de ricino de polioxilo 35, aceite de ricino hidrogenado de polioxilo 40, olefl eter de polioxilo 10, cetoestearil eter de polioxilo 20, estearato de polioxilo 40, polisorbato 20, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 80, diacetato de propilenglicol, monoestearato de propilenglicol, laurilsulfato de sodio, estearato de sodio, monolaurato de sorbitano, monooleato de sorbitano, monopalmitato de sorbitano, monoestearato de sorbitano, acido estearico, trolamina, cera emulsionante, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, cloruro de cetilpiridinio, docusato sodico, nonoxinol 9, nonoxinol 10, octoxinol 9, estearato de polioxilo 50 y tiloxapol.
Todavfa otros agentes de suspension incluyen agentes humectantes y de humectacion. Los agentes humectantes son agentes que retienen la humedad. Los ejemplos de agentes humectantes incluyen, pero no se limitan a, glicerina, hexilenglicol, propilenglicol y sorbitol. Las cantidades de agentes activos de base y no de base tambien dependeran del producto farmaceutico combinado particular que va a prepararse. Los agentes de base pueden proporcionarse en cantidades que corresponden a las preparaciones combinadas finales que contienen del 0,5% al 99,99% de agente de base, o bien en peso o bien en volumen. En realizaciones preferidas, la concentracion final del agente de base es del 20%-80%. En incluso realizaciones mas preferidas, la concentracion final del agente de base es del 460%-80%.
Generalmente, las cantidades de agentes no de base seran suficientes para proporcionar formulaciones finales en las que cada agente inactivo no de base representa el 0,01%-50% (p/p) de la composicion. Los agentes de suspension pueden representar el 1%-50% (p/p) de la formulacion final. Preferiblemente, los agentes de suspension representaran el 1%-40% e incluso mas preferiblemente, representaran el 5%-30% de la formulacion final. Los agentes antiespumantes pueden representar del 0,01% al 20% (p/p) de la formulacion final. Mas preferiblemente, los agentes antiespumantes representan del 0,05% al 10% de la formulacion final e incluso mas preferiblemente, representan del 0,1% al 5% de la formulacion final.
En algunas realizaciones preferidas, los kits de unidad de uso individual o multiple estan disenadas para producir, tras el mezclado ffsico de agentes activos e inactivos, formulaciones farmaceuticas combinadas que comprenden el 1%, el 5%, el 10% o el 20% p/p de CoQ10.
Los kits descritos en el presente documento proporcionaran todos y cada uno de los componentes requeridos para preparar un producto farmaceutico combinado dado en cantidades medidas previamente. La medicion de cada componente se realizara usando las Buenas Practicas de Fabricacion actuales (cGMP, tal como se legislan por el Code of Federal Regulations o CFR), al igual que el acondicionamiento y el etiquetado de cada componente y el acondicionamiento y el etiquetado finales del kit en su totalidad. De este modo, los kits estan normalizados y las variaciones de un lote a otro seran mmimas o inexistentes y se mejorara considerablemente la precision y la exactitud en la medicion de componentes individuales con respecto a metodos usados actualmente por farmaceuticos. La informacion puede proporcionarse por separado de cualquier envase, pero todavfa contenida en el kit. Alternativamente, las instrucciones puede ubicarse en un envase, por ejemplo, sobre una superficie exterior o sobre una superficie interior tal como una tapa.
Tanto los agentes activos como los inactivos del kit se proporcionan en envases. Puesto que el kit contendra al menos un agente activo y al menos un agente inactivo, o al menos dos agentes activos formulados previamente con agentes inactivos, el numero mmimo de envases en un kit dado sera de dos. En realizaciones preferidas, el numero
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maximo de envases en un kit sera menor de o igual a cuatro. Los envases pueden formarse en cualquier tamano o conformacion util para el mezclado o la transferencia de los componentes de un envase a otro. Por ejemplo, cada envase puede estar en forma de viales, botellas, botellas flexibles, frascos, manguitos sellados, sobres o bolsas, tubos o paquetes de blister o cualquier otra forma adecuada, siempre que el envase este sellado para impedir el mezclado prematuro de los componentes. Tal como se usa en el presente documento, un envase puede ser tambien un compartimento o una camara dentro de un vial, un tubo, un frasco, o un sobre, o un manguito, o un paquete de blister, o una botella, siempre que el contenido de un compartimento no pueda asociarse ffsicamente con el contenido de otro compartimento antes de mezclarse deliberadamente por un farmaceutico o un medico.
La invencion pretende proporcionar dentro de un unico kit todos los componentes, envases y medios de agitacion o mezclado necesarios para preparar un producto farmaceutico combinado de unidad de uso sin necesidad de otros accesorios. Los kits descritos en el presente documento tambien pueden contener arffculos tales como guantes o panos de limpieza. Los expertos en la tecnica pueden modificar facilmente la eleccion del envase para adecuarse a los componentes individuales alojados mezclaros en el mismo.
En algunas realizaciones, la formulacion combinada final se proporcionara al paciente en el envase que aloja originalmente el compuesto inactivo o de base. En otras realizaciones, la formulacion combinada final se proporcionara en el envase que aloja originalmente el agente activo. Todavfa en otras realizaciones, todos los componentes necesarios para preparar un producto farmaceutico combinado estan incluidos en un envase pero estan separados ffsicamente dentro de tal envase. Por ejemplo, puede incluirse un agente inactivo en la parte inferior de un envase, tal como un frasco, y puede cubrirse por una envoltura desprendible de plastico. El agente activo puede alojarse en este mismo frasco, pero sujeto a la tapa del frasco y proporcionarse en una bolsa o un manguito. La capacidad para proporcionar todos los componentes juntos en la misma disposicion de acondicionamiento mas pequena puede ser preferible en algunas circunstancias. Tambien pueden ubicarse elementos de mezclado requeridos en la preparacion del producto farmaceutico combinado dentro del mismo envase, por ejemplo sujetos a la superficie interior de la tapa del envase.
Todavfa en otra realizacion, los agentes activos e inactivos se proporcionan en compartimentos adyacentes de un envase con un unico alojamiento, y se retiran mecanicamente de estos compartimentos y hacia el interior de un tercer compartimento. Como ejemplo, todos los componentes qmmicos necesarios para preparar un producto farmaceutico combinado particular pueden estar presentes en un unico tubo, por ejemplo, un tubo similar a un tubo de pasta de dientes que tiene un interior que esta dividido en compartimentos separados. Cada uno de estos compartimentos aloja a su vez un agente de base o un agente activo. O bien el agente de base o bien el agente activo pueden mezclarse previamente con un agente antiespumante y/o un agente de suspension, tal como se describe en el presente documento. Mediante la aplicacion de presion en todo el tubo, se hace que los componentes salgan de sus compartimentos respectivos. Entonces pueden mezclarse o bien en un compartimento adyacente o bien en uno ffsicamente separado. Apretar o presionar la superficie exterior del tubo puede ser todo lo que se necesita para recuperar los componentes individuales alojados dentro del tubo. Aun en otra realizacion, el contenido de ambas camaras de un envase puede bombearse y dirigirse hacia el interior de un tercer recipiente. En una realizacion relacionada, tambien se preve que en lugar de requerir que el contenido de cada compartimento salga y fluya hacia el interior de un tercer compartimento, los componentes pueden estar separados por una lamina o peffcula que puede retirarse. Asf, tras retirarse una lamina o peffcula de este tipo, los contenidos de los dos compartimentos entran en contacto y pueden requerir solo agitacion o inversion para mezclarse completamente. Esta ultima realizacion eliminana la necesidad de un elemento de mezclado, y potencialmente de un envase exterior si las instrucciones se escriben en el propio envase.
Segun algunos aspectos, cada envase puede contener uno o mas agentes activos y uno o mas agentes inactivos. Por ejemplo, en algunas realizaciones de la invencion, ninguno de los envases puede contener ni un agente activo ni un agente inactivo antes de mezclarse por el farmaceutico o medico. Sin embargo, la presente divulgacion tambien proporciona kits en los que un envase puede contener un agente activo y al menos un agente inactivo, tal como un agente de base, un agente de suspension o un agente antiespumante.
En una realizacion preferida, el agente activo se proporciona mezclado previamente con un agente inactivo. Esto se aplica principalmente cuando la CoQ10 esta disponible comercialmente como un solido, por ejemplo un polvo, y el mezclado previo del polvo con un agente de suspension facilita la combinacion por el farmaceutico o el medico. Aun en otras realizaciones, al menos dos de los agentes inactivos pueden estar mezclados previamente cuando se proporcionan en los kits de la presente divulgacion.
En algunas realizaciones, cuando el agente activo se anade al componente de base, puede ser deseable proporcionar el componente de base en un recipiente que solo este parcialmente lleno. En realizaciones preferidas, el envase en el que se situa el componente de base esta lleno en menos del 100% en volumen. En otras realizaciones, los envases estan llenos en el 95%, el 90%, el 80%, el 75%, el 70%, el 60%, el 50%, el 40%, el 30%, el 25%, el 20% o menos del 20% en volumen. En otras realizaciones, los agentes activos o inactivos comprenden un volumen de sus envases respectivos que oscila entre el 100% o mas del 1%, y cada numero entero entre ellos. En realizaciones preferidas, el agente inactivo ocupa un volumen del segundo envase que es menor que o igual al volumen del segundo envase menos el volumen del agente activo.
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Los agentes activos e inactivos se combinan ffsicamente por un farmaceutico para producir un producto farmaceutico combinado. Los componentes del kit puede combinarse mediante agitacion suave, removido, zarandeo, plegado o inversion del envase primero o segundo. En algunos casos, el mezclado apropiado de los agentes activo e inactivo puede llevarse a cabo anadiendo simplemente uno al otro, seguido por sellado y agitacion del envase. Este es el caso especialmente si los componentes son ambos lfquidos o ambos semisolidos. En otros casos, puede ser necesario agitar los componentes entre sf con un elemento de mezclado. Los elementos de mezclado los conoce bien un experto habitual en las tecnicas farmaceuticas y pueden incluir por ejemplo, centnfugas, una varilla de mezclado tal como una varilla de vidrio, una cuchara, una espatula o una tira reactiva. Cuando se requiera, el elemento de mezclado se proporciona en el kit. La presencia de un elemento de mezclado variara dependiendo de la formulacion farmaceutica combinada que va a obtenerse con los componentes de un kit.
El producto farmaceutico combinado final puede formularse para dar preparaciones en formas solidas, semisolidas, lfquidas o gaseosas tales como comprimidos, capsulas, polvos, granulos, pomadas, disoluciones, supositorios, inhalantes e inyecciones, y formas habituales para administracion oral, parenteral o quirurgica. La invencion tambien abarca composiciones para administrar de manera local los productos farmaceuticos combinados de la invencion tal como, por ejemplo, como implantes. Estas formulaciones pueden desearse para administracion oral, topica, mucosa, parenteral (por ejemplo, inyectable), rectal o vaginal. En realizaciones preferidas, las formulaciones combinadas finales pueden administrarse por el propio paciente.
Los kits tambien pueden contener un paquete que puede estar compartimentalizado para alojar en confinamiento cerrado dos o mas envases. En algunas realizaciones, el paquete puede ser de tipo caja, estando compuesto por un material moderadamente ngido tal como carton o papel reforzado. En otras realizaciones, el paquete puede ser una bolsa. Todavfa en otras realizaciones, tal como se describe en el presente documento, no hay acondicionamiento externo y todos los envases pueden incorporarse en uno de los envases que alojan o bien un agente activo o bien un agente inactivo. Esta ultima realizacion puede llevarse a cabo sujetando envases tales como bolsas, manguitos o sacos, que contienen o bien agentes activos o bien inactivos, asf como cualquier elemento de mezclado requerido para el combinado, al interior de la tapa del envase principal. Un experto en la tecnica puede modificar facilmente el paquete para adecuarlo a las necesidades individuales de cada kit y cada uso. Los kits de la invencion contienen ademas instrucciones para el uso apropiado de los componentes encontrados en ellos.
Se desea el uso de kits en el tratamiento o la prevencion de varios trastornos en una variedad de sujetos incluyendo humanos, perros, gatos, caballos, peces, cerdos, vacas, ovejas, ciervos, animales de zoologico y animales de laboratorio (por ejemplo, ratones, ratas, conejos, monos, etc.).
Los siguientes ejemplos se ofrecen a modo de ilustracion, no a modo de limitacion. Aunque se han proporcionado algunos ejemplos espedficos, la descripcion anterior es ilustrativa y no restrictiva. Una cualquiera o mas de las caractensticas de las realizaciones descritas anteriormente pueden combinarse de cualquier manera con una o mas caractensticas de cualquier otra realizacion en la presente invencion. Ademas, muchas variaciones de la invencion pueden resultar evidentes para los expertos en la tecnica tras la revision de la memoria descriptiva.
Con la mencion de diversas referencias en este documento, los solicitantes no admiten que ninguna referencia particular es “tecnica anterior”.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar la invencion sin limitarla de ese modo. Se entendera que pueden realizarse variaciones y modificaciones sin apartarse del espmtu y el alcance de la invencion.
Ejemplo 1- Materiales y metodos para ensayo de apoptosis
Las lmeas usadas en el ensayo fueron SK-Mel28 y nFIB. Se sembraron las celulas (SK-Mel28 y nFIB) (5 X 104 celulas/pocillo) en pocillos que conteman o bien unicamente medio o bien medio con tratamiento y se colocaron en una incubadora a 37°C, 5% de CO2 y en condiciones humidificadas durante 48 horas. Cada condicion se realizo por duplicado y se sometio al siguiente protocolo:
Analisis de apoptosis segun protocolo del protocolo de anexina-VPE de BD Pharmingen
Los reactivos incluyen anexina V-PE (BD Pharmingen, San Diego, Calif.), 7-AAD (BD Pharmingen, San Diego, Calif.), tampon de union (10x: Hepes 0,1 M/NaOH, NaCl 1,4 M, CaCl2 25 mM) [diluido hasta 1x (9 ml de PBS y 1 ml de tampon de union) para su uso en el experimento] (BD Pharmingen, San Diego, Calif.), tripsina-EDTA (Gibco, Grand Island, N.Y.) y medios deseados.
Se anaden 0,5 ml de tripsina a cada pocillo, se retira la tripsina tras aproximadamente 10 segundos y se anaden
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0,5 ml de tripsina a cada pocillo. Se colocan los pocillos en una incubadora, se observa el nivel de separacion al microscopio tras 4 minutos y se golpean suavemente los lados y el fondo para ayudar a la separacion. Cuando las celulas se separan, se neutraliza con 5 ml de medio complementado con suero. Se transfiere la disolucion de celulas a tubos de centnfuga, se centrifugan las celulas 2000 RPM durante 5 minutos, se aspira el sobrenadante, se resuspenden en 6 ml de PBS y dividen 6 ml en tres tubos de centnfuga (2 ml en cada uno). Se centrifugan las celulas 2000 RPM durante 5 minutos, se aspira el sobrenadante, se resuspenden en 100 ml de mezcla de tampon de union, se anaden 50 |il de anexina V-PE y 50 |il de 7-AAD en cada tubo de centnfuga y se agitan con vortex y se colocan en la oscuridad durante 15 minutos. Se anaden 350 |il de tampon de union a cada tubo y se realiza el analisis usando el citometro de flujo.
Tambien se crea una referencia usando celulas recien cultivadas a partir de un matraz. Se subcultivaron las celulas y se lavaron dos veces con PBS fno. Posteriormente, se resuspendieron en tampon de union 1x a una concentracion de 1 X 106 celulas/ml. Se trasfirieron 100 |il de la suspension celular a tres tubos de ensayo para obtener un total de 1 X 105 por tubo. Un tubo sirvio como control negativo sin tincion introducida. Otro se tino solo con anexina V-PE mientras que el ultimo se tino solo con 7-AAD. Se colocaron 50 |il de disolucion de tincion en cada uno de los tubos. Se colocaron entonces estos tubos en la oscuridad durante 15 minutos, tiempo tras el cual se anadieron a cada uno 350 |il de tampon de union. Entonces se sometieron a analisis mediante citometna de flujo antes de las celulas tratadas y control.
Experimento 1: El efecto de la coenzima Q10 en el nivel de apoptosis en celulas de cancer de mama humano
MCF-7
MCF-7
MCF-7
Control
Control
Control
100 |iM
100 |iM
100 |iM
CoQ10
CoQ10
CoQ10
- Se sembraron 50.000 celulas/pocillo
-Se compara con la referencia de 100.000 celulas/muestra en el ensayo de apoptosis (anexina PI) tras 72 horas
Experimento 2: El efecto de vehculo de 2-propanol en el nivel de apoptosis en celulas de melanoma
SK-MEL 28
SK-MEL 28
SK-MEL 28
Control
Control
Control
Volumen equivalente si 50 |iM de
Volumen equivalente si 50 |iM de
Volumen equivalente si 50 |iM de
CoQ10
CoQ10
CoQ10
(1% de 2-propanol)
(1% de 2-propanol)
(1% de 2-propanol)
-Se sembraron 50.000 celulas/pocillo
-Se compara con la referencia de 100.000 celulas/muestra en el ensayo de apoptosis (anexina PI) tras 48 horas.
Experimento 3: El efecto de vehculo de 2-propanol en el nivel de apoptosis en fibroblastos neonatales
nFIB (P) 6
nFIB (P) 6
nFIB (P) 6
Control
Control
Control
Volumen equivalente si 50 |iM de
Volumen equivalente si 50 |iM de
Volumen equivalente si 50 |iM de
CoQ10
CoQ10
CoQ10
(1% de 2-propanol)
(1% de 2-propanol)
(1% de 2-propanol)
-Se sembraron 50.000 celulas/pocillo
-Se compara con la referencia de 100.000 celulas/muestra en el ensayo de apoptosis (anexina PI) tras 48 horas.
Preparacion de medio DMEM/F12
Materiales:
- Medio DMEM/F12 (n.° de catalogo 11330-032 Gibco-Invitrogen Corp, Grand Island, NY)
- Puntas de pipeta esteriles siliconadas - 1 ml y 25 ml para usarse con PipettMan
- Complemento de FBS (suero bovino fetal) (Gibco-Invitrogen Corp, Grand Island, N.Y.)
- PSA (penicilina-estreptomicina-anfotericina B) - complemento de agentes antimicrobianos (Cascade Biologics, Inc.,
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Portland, Oreg.)
Procedimientos:
Se transfiere una cantidad apropiada de FBS a medio DMEM/F12 (por ejemplo, 50 ml de FBS en 500 ml de medio para una concentracion serica del 10%). Se anade la cantidad apropiada de PSA para obtener una disolucion con una concentracion final de penicilina G 100 U/ml, sulfato de estreptomicina 100 |ig/ml y anfotericina B 0,25 |ig/ml (por ejemplo, 1 ml de PSA 500x en 500 ml de medio). Se mezcla pipeteando e invirtiendo la botella. Se almacena a 4°C hasta su uso.
Preparacion de medio EpiLife
Materiales:
- Puntas de pipeta esteriles siliconadas - 5 ml, 10 ml para usarse con PipettMan
- Medios EpiLife (M-EPI-500, Cascade Biologicals)
- PSA (500X de penicilina-estreptomicina-anfotericina B)- complemento de agentes antimicrobianos (R-004-10 Cascade Biologics)
- EDGS (complemento de crecimiento epidermico) (S-012-S Cascade Biologics)
Procedimientos:
Se transfiere un vial de EDGS (5 ml) y PSA (1 ml) a medio EpiLife dando como resultado penicilina G 100 U/ml, sulfato de esteptomicina 100 |ig/ml y anfotericina B 0,25 |ig/ml (por ejemplo 1 ml de PSA 500x en 500 ml de medio). Se mezcla pipeteando e invirtiendo. Se almacena a 4°C hasta su uso.
Protocolo de creacion de una disolucion homogenea de Q10 en medios
Materiales:
- Puntas de pipeta esteriles de poliestireno -200-1000 |iM para usarse con pipetas automaticas
- Puntas de pipeta esteriles siliconadas - 10 ml para usarse con PipettMan
- Tubos de centnfuga de 15 ml
- Medios
- Coenzima Q10 (Compound Solutions, Inc., Escondido, Calif.)
- 2-propanol (numero de catalogo 9083-3, J.T. Baker Chemical Co., Phillipsbury, NJ)
Procedimientos:
Se recupera la disolucion madre de Q10 del almacenamiento a 20°C y se pesan aproximadamente 4,4 mg. Se transfiere la Q10 a un tubo de centnfuga de 25 ml. Se anade 1 ml de 2-propanol al tubo de centnfuga. Se agita con vortex y se sumerge en un bano de agua caliente (55°C) para promover la disolucion. Se anaden 9 ml de medio al tubo de centnfuga. Se agita con vortex y se sumerge en un bano de agua caliente (55°C) si es necesario para crear una disolucion homogenea. Esto da como resultado una disolucion de Q10 500 |iM. Se realizan diluciones en serie para obtener concentraciones de tratamiento.
Protocolo de descongelacion de celulas
Materiales:
- Puntas de pipeta esteriles siliconadas - 1 ml, 10 ml para usarse con PipettMan
- Matraces de cultivo celular de 75 m2
- Tubos de centnfuga de 15 ml Procedimientos:
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Se aclimatan los reactivos a 37°C en un bano de agua. Se retiran las celulas del tanque de nitrogeno Kquido. Se mantiene el vial sujeto en la palma para iniciar la descongelacion. Se sumerge en un bano de agua a 37°C hasta que se funde completamente. Se transfieren las celulas a un tubo de centnfuga de 15 ml con 10 ml de medio de crecimiento. Se mezcla pipeteando. Se centrifuga a 2500 RPM durante 8 minutos. Se aspira el sobrenadante. Se resuspende el sedimento con medio apropiado. Se mezcla mediante agitacion con vortex y se pipetea para homogeneizar la suspension celular. Se transfiere a un matraz/matraces de cultivo celular de 75 cm2.
Protocolo de subcultivo de celulas
Materiales:
- Puntas de pipeta esteriles siliconadas - 5 ml, 10 ml para usarse con PipetteMan
- Matraces de cultivo celular de 75 cm2 (T75)
- Placas de cultivo tisular de 6 pocillos
- Tubos de centnfuga de 15 ml
- Medios
- Tripsina al 0,05% (numero de catalogo 25-052-C1-tripsina 1X-EDTA, Cellgro by Mediatech, Herndon, VA) Procedimientos:
Se aclimatan los reactivos a 37°C en un bano de agua. Se retira el medio de los matraces de cultivo celular (las celulas estan listas para el subcultivo cuando son confluentes en aproximadamente el 85%). Se ceban anadiendo 12 ml de tripsina al matraz durante 30 segundos. Se retira la tripsina del matraz. Se anaden 5 ml de tripsina al matraz. Se coloca el matraz en la incubadora a 37°C durante aproximadamente 4 minutos. Se retira y se observa el grado de separacion con el microscopio. Si es necesario, se golpea suavemente el matraz para ayudar en la separacion. Se anaden 5 ml de medio que contema suero. Se mezcla pipeteando y lavando el matraz con suspension celular. Se transfiere la suspension celular a un tubo de centnfuga de 15 m. Se agita con vortex el tubo de centnfuga. Se centrifuga a 2500 RPM durante 8 minutos. Se aspira el sobrenadante. Se resuspende el sedimento en medio apropiado. Se crea una suspension celular homogenea pipeteando y agitando con vortex. Se siembran las celulas en nuevos matraces T75 o en placas de pocillos para la experimentacion.
Protocolo de recuento de celulas
Materiales:
- Contador de celulas y partfculas Beckman Coulter® Z1 (Beckman Coulter, Inc., Fullerton, Calif.)
- Viales de contador Coulter (Beckman Coulter, Inc.)
- Diluyente Isoton II (n.° 8546719, Beckman Coulter)
- Agente de limpieza Coulter CLENZ (n.° 8546929, Beckman Coulter)
- Puntas de pipeta esteriles de poliestireno -20-200 |iM, 200-1000 |iM para usarse con pipetas automaticas Procedimientos:
Tras el subcultivo (segun el protocolo de subcultivo de celulas descrito anteriormente), se pipetea la suspension celular de volumen deseado para su recuento (0,25-1 ml) en un vial de contador Coulter (Beckman, Inc.) usando una pipeta automatica. Asegurarse que el contador de celulas y partfculas Beckman Coulter® Z1 esta limpio usando el agente de limpieza Coulter CLENZ (Beckman, Inc., Fullerton, Calif.) para lavar. Lavar el aparato una vez con el diluyente Isoton II. Anadir diluente Isoton II al vial que contiene las celulas para obtener un volumen total de 10 ml. Usar el modo de salida del aparato para contar las celulas dos veces para garantizar la exactitud. Realizar un promedio de los recuentos juntos y calcular el numero de celulas totales por volumen.
Protocolo de realizacion de experimentos in vitro
Materiales:
- Puntas de pipeta esteriles de poliestireno -20-200 |iM, 200-1000 |iM para usarse con pipetas automaticas
5
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50
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60
65
- Puntas de pipeta esteriles siliconadas - 5 ml, 10 ml para usarse con PipettMan
- Matraces de cultivo celular de 75 cm2
- Placas de cultivo tisular de 6 pocillos
- Tubos de centnfuga de 15 ml
- Viales de contador Coulter (Beckman Coulter, Inc.)
- Tripsina al 0,05% (numero de catalogo 25-052-C1-tripsina 1X-EDTA, Cellgro)
Procedimientos:
Se aclimatan los reactivos a 37°C en un bano de agua. Se prepara una disolucion madre de Q10 segun el protocolo descrito anteriormente para crear una disolucion homogenea de Q10 en medios. Se realizan diluciones en serie para obtener concentraciones deseadas. Se colocan 2 ml de medios en los pocillos respectivos. Se subcultivan los matraces segun el protocolo descrito anteriormente para el subcultivo de celulas. Se resuspenden las celulas solo con medio suficiente para crear una suspension celular homogenea (aproximadamente 5 ml). Se determina la concentracion de celulas segun el protocolo descrito anteriormente para el recuento de celulas. Se diluye la suspension celular de modo que la cantidad deseada de celulas que va a sembrarse esta contenida en 50-100 |iL. Se siembra la cantidad deseada de celulas en cada pocillo. Se incuban a 37°C, 5% de CO2 y en condiciones humidificadas durante la duracion deseada. Se aspiran los medios de los pocillos. Se colocan 0,5 ml de tripsina en cada pocillo. Se incuba durante aproximadamente 4 minutos. Se comprueba el grado de separacion con el microscopio. Se agita, se golpean suavemente los lados y se dan toques suaves en el fondo para ayudar a la separacion si es necesario. Se neutraliza la tripsina con 0,5 ml de medio. Se pipetea para ayudar en la separacion de celulas y la rotura de agrupaciones. Se retiran 0,5 ml de suspension celular y se colocan en viales de contador Coulter (Beckman Coulter, Inc.). Se cuentan las celulas segun el protocolo descrito anteriormente para contar celulas.
Protocolo de inoculacion de animales Materiales:
- Disolucion tampon fosfato (PBS) (Gibco-Invitrogen Corp, Grand Island, N.Y.)
- Puntas de pipeta esteriles de poliestireno -20-200 |iM, 200-1000 |iM para usarse con pipetas automaticas
- Puntas de pipeta esteriles siliconadas - 5 ml, 10 ml para usarse con PipettMan
- Matraces de cultivo celular de 75 cm2
- Tubos de centnfuga de 15 ml
- Viales de contador Coulter (Beckman Coulter Inc.)
- Tripsina al 0,05% (numero de catalogo 25-052-C1-tripsina 1X-EDTA, Cellgro)
- Tubos de centnfuga (2 ml)
- Anestesico (Aventin)
Procedimientos:
Se subcultivan matraces segun el protocolo de subcultivo de celulas descrito anteriormente. Tras aspirar el sobrenadante, se combinan los sedimentos de cada matraz diluidos ligeramente con PBS con una pipeta de 5 ml. Se diluye la suspension celular final para que contenga aproximadamente diez millones de celulas por 100 |il. Se transfiere la suspension celular a tubos de microcentnfuga (2 ml). Se coloca en hielo inmediatamente y se deja en hielo hasta que se inyecta. Se anestesia a ratones a traves de una inyeccion intraperitoneal con 0,3 cc de Aventin. Se inocula a cada animal por via subcutanea 0,1 cc de suspension celular por sitio. Se transfiere cualquier celula restante a un tubo de centnfuga de 15 ml. Se enrasa a 10 ml con medio. Se centrifuga a 2500 RPM durante 8 minutos. Se aspira el sobrenadante. Se anaden 10 ml de medios al tubo de centnfuga. Se crea una suspension celular homogenea pipeteando y agitando con vortex. Se siembran las celulas en un matraz T75 para garantizar la viabilidad celular experimental.
Ejemplo 2 - Efecto de una formulacion topica de coenzima Q10 en tumores SK-MEL28 en ratones
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Se indujeron tumores de melanoma en ratones mediante la inyeccion de SK-MEL28 en la capa subcutanea. El estudio con animales consistio tanto en un grupo control como en uno de tratamiento, conteniendo cada uno cuatro ratones. Se inocularon a los ratones dos tumores y el grafico de la figura 14 representa la masa media resultante para los tumores en cada raton. Se aplico una formulacion topica de coenzima Q10 (10%) a los tumores en el grupo de tratamiento diariamente durante un periodo de 30 dfas. Tras esto, se extirparon los tumores y se determino la masa. La diferencia en la masa media global en el grupo de tratamiento fue significativa en comparacion con el control (P<0,05).
Ejemplo 3-Preparacion de crema topica de CoQ10 Reactivos:
- Phospholipon 90G (American Lechitin, Stanford, Conn.)
- Glicerol
- BHT
- Etanol
- MCT
- Lavanda (Sigma-Aldrich)
- CoQ10 (Pure Prescriptions, San Diego, Calif.)
Procedimiento:
Se disolvieron 6 g de Phospholipon 90G (American Lechitin, Stanford, Conn.) en una mezcla de 5,8 g de glicerol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 0,2 g de bHt (Sigma-Aldrich), 4 ml de etanol (Sigma-Aldrich) y 18 g de MCT (Sigma- Aldrich) a 60°C. Se disolvieron 20 g de CoQ10 (Pure Prescriptions) en la mezcla resultante. Se prepararon 90 ml de tampon fosfato 1 mM (pH 8,2) con agua saturada con nitrogeno y se anadieron 0,2 ml de lavanda (Sigma-Aldrich) y se combino la mezcla en una mezcladora de alta velocidad a 12.000 RPM para formar una crema. Se almaceno la crema a 4°C hasta su uso.
Ejemplo 4: Analisis de apoptosis para tincion con JC-1
Se midio la apoptosis usando un colorante de membrana mitocondrial JC-1, cloruro de 5,5',6,6'-tetracloro-1,1',3,3'- tetraetil-bencimidazolcarbocianina (Molecular Probe, Eugene, Oreg.). Los tratamientos consistieron en medios DMEM-F12 complementados con PSA 1X, FBS al 5% y se prepararon concentraciones de 0, 50, 100 y 200 |iM de coenzima Q10 en placas de cultivo tisular de 60 x 15 mm (Costar-Cambride, MA). Se sembraron celulas PC-3 a 500.000 celulas por placa y se incubaron durante 24 horas. Se sometieron las celulas a tripsinizacion usando 2 ml de tripsina-EDTA y se sometieron a centrifugacion a 2.500 RPM durante 8 minutos. Se resuspendieron en 1 ml de medio F12 de Ham que careda de suero y rojo fenol (Cascade Biologics, Inc., Portland, Oreg.) y se colocaron inmediatamente en hielo. Se preparo una disolucion madre 1 mg/ml de JC-1 usando DMSO esteril y se anadieron 10 ml a cada suspension celular mientras se agitaba con vortex suavemente. Se incubaron las celulas a 37°C durante 15 min., se diluyeron con 4 ml de medio F12 de Ham y se centrifugaron a 600 RPM durante 7 min. Se resuspendieron en 5 ml de PBS fno (Gibco-Grand Island, N.Y.), se centrifugaron las celulas de nuevo en 600 RPM durante 7 min. Entonces se suspendio el sedimento celular en 1 ml de PBS fno y se transfirio a tubos de citometna de flujo con filtro de nailon en la parte superior cubiertos con papel de aluminio para evitar la penetracion de luz. Se analizaron las muestras mediante citometna de flujo para determinar los cambios en la captacion de colorante fluorescente. El monomero JC-1 muestra fluorescencia verde (Acm = 527 nm) mientras que los agregados J muestran fluorescencia roja (Acm = 590 nm). Las mitocondrias permeabilizadas acumulan el colorante monomerico JC-1 antes de y durante la apoptosis.

Claims (6)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Composicion para su uso en el tratamiento de un cancer en un paciente, comprendiendo la composicion coenzima Q10, en la que el cancer se selecciona del grupo que consiste en melanoma y carcinoma de 5 celulas escamosas.
  2. 2. Composicion para su uso segun la reivindicacion 1, en la que la composicion comprende aproximadamente del 0,01% al 30% p/p de coenzima Q10.
    10 3.
  3. 4. 15
  4. 5.
    20 6.
  5. 7.
    25
  6. 8.
    30
    Composicion para su uso segun la reivindicacion 1, en la que la composicion comprende aproximadamente desde el 1% hasta el 25% p/p de coenzima Q10.
    Composicion para su uso segun la reivindicacion 1, en la que la composicion comprende de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 20% p/p de coenzima Q10.
    Composicion para su uso segun la reivindicacion 1, en la que el tratamiento de un cancer en un paciente comprende la administracion de una cantidad terapeuticamente eficaz de la composicion de coenzima Q10 con uno o mas agentes quimioterapicos.
    Composicion para su uso segun la reivindicacion 5, en la que el tratamiento de un cancer en un paciente comprende la coadministracion del agente quimioterapico y la cantidad terapeuticamente eficaz de la composicion de coenzima Q10.
    Composicion para su uso segun la reivindicacion 5, en la que el agente quimioterapico se selecciona del grupo que consiste en taxanos (paclitaxel o docetaxel), busulfano, cisplatino, ciclofosfamida, metotrexato, daunorubicina, doxorubicina, melfalan, cladribina, vincristina, vinblastina y clorambucilo.
    Composicion para su uso segun la reivindicacion 5, en la que el tratamiento de un cancer en un paciente comprende la administracion del agente quimioterapico antes o despues de la administracion de la cantidad terapeuticamente eficaz de la composicion de coenzima Q10.
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