ES2629170T3 - Pirazolopirimidinas y heterociclos relacionados como inhibidores de CK2 - Google Patents

Pirazolopirimidinas y heterociclos relacionados como inhibidores de CK2 Download PDF

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Fabrice Pierre
Collin F. Regan
Nicholas B. Raffaele
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Abstract

Un compuesto que es un heterociclo de Fórmula (II), (II'), (IIa) o (IIa'): Fórmula** o un solvato y/o sal farmacéuticamente aceptable de éste; en donde en las fórmulas (II), (II'), (IIa) y (IIa') Z3 representa N o CR5, o CH; Z4 representa CH, N o CR5 cada R5 se selecciona independientemente a partir de halo, -CN, -R, -OR, -S(O)nR, -COOR, -CONR2, y -NR2, en donde cada R se selecciona independientemente a partir de H y el alquilo C1-C4 opcionalmente sustituído, o alternativamente, los dos grupos R, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituído que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S como un miembro del anillo; cada n es independientemente 0, 1 o 2; y cada m es independientemente 1, 2, 3 o 4; n las fórmulas (II) y (II'): R2, R3 y R4 se seleccionan independientemente de H y el alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído; representa NR2, O, o S; Y es O o S; onde R10 se selecciona de H, CN, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituído, alquenilo C2-C4 opcionalmente sustituído, alquinilo C2-C4 opcionalmente sustituído, alcoxi C1-C4 opcionalmente sustituído, y -NR7R8, Z es O; es -NR7-, un enlace, -CR7>=CR8-, -C>=C-, -O-, -S(O)n-, -(CR7R8)m-, -(CR7R8)m-NR7-, - (CR7R8)m-O-, o -(CR7R8)m- S(O)n-; es arilo opcionalmente sustituído, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo C1-C10 55 opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, -NR7R8, -OR7, -S(O)nR7,-CONR7R8, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, alquenilo C2-C10 opcionalmente sustituído, alquinilo C2-C10 opcionalmente sustituído, o -CR7R8R9; donde cada R7 y R8 y R9 se selecciona independientemente a partir de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído y heteroarilalquilo opcionalmente sustituído; o R8 y R9, que junto con con el átomo de carbono al que se unen, forman >=O (oxo) o >=N-OR7 o >=N-CN; o R7 y R8, que juntos en un solo átomo de carbono o en átomos de carbono conectados adyacentes de (CR7R8)m sea solo o como parte de otro grupo, forman un anillo carbocíclico o anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros; o R7 y R8, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico o heteroarílico de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituído que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales 5 seleccionados de N, O y S como miembro del anillo; con la condición de que no más de uno de o R7 y R8 en -NR7R8 se selecciona del grupo que consiste en alcoxi, alquilamino, dialquilamino y heterociclilo; y R1B se selecciona a partir del carbociclilo opcionalmente sustituído, H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído o heteroarilalquilo opcionalmente sustituído; R1A se selecciona de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, y en las fórmulas (IIa) y (IIa') R2 es H, CH3 o CF3; R4 es H, CH3 o CF3; X es O, S o NH; Y es O o S; R1B se selecciona de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, cicloalquilo opcionalmente sustituído, cicloalquilalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído o un heteroarilo opcionalmente sustituído; L es un enlace, -NR7-, -O-, -S(O)n-, (CR7R8)m, o -(CR7R8)m-NR7-; W se selecciona de arilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, y -NR7R8, donde cada R7 y R8 se selecciona independientemente a partir de H, alcoxi C1-C6 opcionalmente sustituído, alquilamino C1-C6 opcionalmente sustituído, dialquilamino C1-C6 opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituído, cicloalquilalquilo C4-C10 opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído y heteroarilalquilo opcionalmente sustituído; y R7 y R8, que juntos en un solo átomo de carbono o en átomos de carbono conectados adyacentes de (CR7R8)m sea solo o como parte de otro grupo, forman un anillo de 3 a 8 miembros que contiene uno o más heteroátomos como miembros del anillo; o R7 y R8, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico o heteroarílico de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituído que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como miembro del anillo; y con la condición de que no más de uno de o R7 y R8 en -NR7R8 se seleccione del grupo que consiste en alcoxi, alquilamino, dialquilamino y heterociclilo.

Description

Pirazolopirimidinas y heterociclos relacionados como inhibidores de CK2
Campo de la invención
La invención se refiere en parte a moléculas que tienen ciertas actividades biológicas que incluyen, pero no se limitan a, inhibir la proliferación celular y modular ciertas actividades de proteína quinasa. Las moléculas de la invención modulan, por ejemplo, la Proteína Quinasa CK2 (denominada en la presente descripción CK2) y son útiles para tratar afecciones asociadas directa o indirectamente con actividades CK2, por ejemplo, cánceres, afecciones inflamatorias, trastornos infecciosos, dolor, trastornos inmunológicos y trastornos neurodegenerativos (tales como enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson). La invención además se refiere en parte al uso de tales compuestos, y composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos.
Antecedentes
El documento de patente núm. WO2004/076458 describe pirazolo[1,5-a]pirimidinas que tienen actividad inhibidora de proteína quinasa. Estos compuestos son útiles en el tratamiento de trastornos donde se implica una quinasa, tales como enfermedad inflamatoria y cáncer.
El documento de patente núm. WO2004/028535 describe una serie de tiazolidinas que son moduladores de la proteína Pin1 y proteínas relacionadas con Pin1.
La proteína quinasa CK2 (anteriormente denominada Caseína quinasa II, denominada en la presente descripción como quot;CK2quot;) es una proteína serina/treonina quinasa omnipresente y altamente conservada. La holoenzima se encuentra típicamente en complejos tetraméricos que consisten en dos subunidades catalíticas (alfa y/o alfa') y dos subunidades reguladoras (beta). CK2 tiene una serie de objetivos fisiológicos y participa en un número complejo de funciones celulares que incluyen el mantenimiento de la viabilidad celular. El nivel de CK2 en las células normales se regula estrechamente, y se ha considerado durante mucho tiempo que juega un papel en el crecimiento celular y la proliferación. Los inhibidores de CK2 que son útiles para tratar ciertos tipos de cáncer se describen en los documentos de patentes núms. PCT/US2007/077464, PCT/US2008/074820, PCT/US2009/35609.
La prevalencia e importancia de CK2, así como un análisis evolutivo de su secuencia, sugiere que es una enzima antigua en la escala evolutiva; su longevidad puede explicar por qué se ha vuelto importante en tantos procesos bioquímicos, y por qué CK2 de huéspedes incluso ha sido coadoptada por los patógenos infecciosos (por ejemplo, virus, protozoos) como parte integral de sus sistemas bioquímicos de supervivencia y ciclo de vida. Estas mismas características explican por qué se cree que los inhibidores de CK2 son útiles en una variedad de tratamientos médicos como se discute en la presente descripción. Debido a que CK2 es fundamental para muchos procesos biológicos, tal como se resume por Guerra & Issinger, Curr. Med. Chem., 2008, 15:1870-1886, los inhibidores de CK2, que incluyen los compuestos descritos en la presente descripción, deberían ser útiles en el tratamiento de una variedad de enfermedades y trastornos.
Las células cancerosas muestran una elevación de CK2, y la evidencia reciente sugiere que CK2 ejerce potente supresión de la apoptosis en las células mediante la protección de las proteínas reguladoras de la degradación mediada por la caspasa. La función antiapoptótica de CK2 puede contribuir a su capacidad para participar en la transformación y la tumorigénesis. Particularmente, se ha demostrado que CK2 se asocia con leucemia mielógena aguda y crónica, linfoma y mieloma múltiple. Además, se ha observado mayor actividad de CK2 en tumores sólidos de colon, recto y mama, carcinomas de células escamosas de pulmón y de cabeza y cuello (SCCHN), adenocarcinomas de pulmón, colon, recto, riñón, mama y próstata. Se reporta que la inhibición de CK2 por una molécula pequeña induce apoptosis de células de cáncer pancreático y células de carcinoma hepatocelular (líneas celulares de cáncer HegG2, Hep3, HeLa); y los inhibidores de CK2 sensibilizaron dramáticamente a los tumores RMS (Rabdomiosarcoma) hacia la apoptosis inducida por TRAIL. Así, un inhibidor de CK2 solo, o en combinación con TRAIL o un ligando para el receptor TRAIL, sería útil para tratar RMS, el sarcoma de tejidos blandos más común en niños. Además, se ha encontrado que la CK2 elevada se correlaciona altamente con la agresividad de las neoplasias, y el tratamiento con un inhibidor de la CK2 de la invención debe reducir así la tendencia de las lesiones benignas a avanzar hacia las malignas o las malignas a la metástasis.
A diferencia de otras quinasas y vías de señalización, donde las mutaciones se asocian frecuentemente con cambios estructurales que causan pérdida del control regulador, el aumento del nivel de actividad CK2 parece que se causa generalmente por la regulación positiva o sobreexpresión de la proteína activa en lugar de cambios que afectan los niveles de activación. Guerra e Issinger postulan que esto puede deberse a la regulación por agregación, ya que los niveles de actividad no se correlacionan bien con los niveles de ARNm. La actividad excesiva de CK2 se ha demostrado en muchos cánceres, que incluyen los tumores de SCCHN, tumores de pulmón, tumores de mama, y otros. Id.
Se demostró que la actividad elevada de CK2 en los carcinomas colorrectales correlaciona con una mayor malignidad. Se ha reportado que la expresión y la actividad aberrante de CK2 promueven el aumento de los niveles nucleares de
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NF-kappaB en células de cáncer de mama. La actividad de CK2 se aumenta notablemente en pacientes con AML y CML durante la crisis blástica, lo que indica que un inhibidor de CK2 debe ser particularmente efectivo en estas afecciones. Se ha demostrado que la supervivencia de células de mieloma múltiple depende de la alta actividad de CK2, y los inhibidores de CK2 son citotóxicos para las células MM.
La literatura proporciona evidencias claras de que la inhibición de CK2 se correlaciona con la eficacia contra las células tumorales. Por ejemplo, un inhibidor de CK2 inhibió el crecimiento de células de linfoma p190 murino. Se ha reportado que su interacción con Bcr/Abl juega un papel importante en la proliferación de células que expresan Bcr/Abl, lo que indica que los inhibidores de CK2 pueden ser útiles en el tratamiento de leucemias positivas a Bcr/Abl. Se ha demostrado que los inhibidores de CK2 inhiben la progresión de los papilomas de la piel, los xenoinjertos de cáncer de próstata y de mama en ratones y prolongan la supervivencia de ratones transgénicos que expresan promotores de próstata. Id.
El papel de la CK2 en diversos procesos no cancerígenos recientemente se ha revisado. Ver Guerra & Issinger, Curr. Med. Chem., 2008, 15:1870-1886. La creciente evidencia indica que CK2 se implica en enfermedades críticas del sistema nervioso central, que incluyen, por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y trastornos neurodegenerativos raros tales como demencia de Guam-Parkinson, síndrome de deleción del cromosoma 18, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad de Kuf, o enfermedad de Pick. Se sugiere que la fosforilación selectiva mediada por CK2 de proteínas tau puede implicarse en la neurodegeneración progresiva de la enfermedad de Alzheimer. Además, estudios recientes sugieren que CK2 juega un papel en el deterioro de la memoria y la isquemia cerebral, este último efecto aparentemente siendo mediado por el efecto regulador de CK2 en las vías de supervivencia de PI3K.
Se ha demostrado además que CK2 se implica en la modulación de trastornos inflamatorios, por ejemplo, dolor inflamatorio agudo o crónico, glomerulonefritis y enfermedades autoinmunes, que incluyen, por ejemplo, esclerosis múltiple (MS), lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, y artritis juvenil. Regula positivamente la función del canal del receptor 5-HT3 de la serotonina, activa la hemooxigenasa tipo 2 y mejora la actividad del óxido nítrico sintasa neuronal. Se reportó que un inhibidor selectivo de la CK2 reduce fuertemente la respuesta al dolor de los ratones cuando se administró al tejido de la médula espinal antes de la prueba del dolor. Fosforila la fosfolipasa A2 secretora del tipo IIA del líquido sinovial de pacientes con RA y modula la secreción de DEK (una proteína nuclear de unión al ADN), que es una molécula proinflamatoria encontrada en el líquido sinovial de pacientes con artritis juvenil. Así, se espera que la inhibición de CK2 controle la progresión de patologías inflamatorias tales como las descritas aquí, y se ha demostrado que los inhibidores descritos en la presente descripción traten efectivamente el dolor en modelos animales.
Además se ha demostrado que la proteína quinasa CK2 juega un papel en los trastornos del sistema vascular, tales como, por ejemplo, aterosclerosis, tensión de cizallamiento laminar, e hipoxia. CK2 además ha demostrado jugar un papel en los trastornos del músculo esquelético y el tejido óseo, como la hipertrofia de cardiomiocitos, alteración de la señalización de la insulina y mineralización del tejido óseo. En un estudio, los inhibidores de CK2 fueron eficaces en la disminución de la angiogénesis inducida por el factor de crecimiento en células cultivadas. Además, en un modelo de retinopatía, un inhibidor de CK2 combinado con octreotida (un análogo de somatostatina) redujo los manojos neovasculares; así, los inhibidores de CK2 descritos en la presente descripción serían eficaces en combinación con un análogo de somatostatina para tratar la retinopatía.
Además se demostró que la CK2 fosforila la GSK, la troponina y la cadena ligera de la miosina; así, CK2 es importante en la fisiología del músculo esquelético y del tejido óseo, y se vincula a enfermedades que afectan el tejido muscular.
La evidencia sugiere que la CK2 además se implica en el desarrollo y regulación del ciclo de vida de los parásitos protozoarios, tales como, por ejemplo, Theileria parva, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Herpetomonas muscarum muscarum, Plasmodium falciparum, Trypanosoma brucei, Toxoplasma gondii y Schistosoma mansoni. Numerosos estudios han confirmado el papel de CK2 en la regulación de la motilidad celular de los parásitos protozoarios, esenciales para la invasión de las células huésped. Se ha demostrado que la activación de CK2 o actividad excesiva de CK2 ocurre en huéspedes infectados con Leishmania donavani, Herpetomonas muscarum muscarum, Plasmodium falciparum, Trypanosoma brucei, Toxoplasma gondii y Schistosoma mansoni. De hecho, se ha demostrado que la inhibición de CK2 bloquea la infección por T. cruzi.
Además se ha demostrado que CK2 interacciona con y/o fosforila las proteínas virales asociadas con el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (HIV-1), el virus del papiloma humano y el virus del herpes simple, además de otros tipos de virus (por ejemplo, citomegalovirus humano, virus de la hepatitis C y B, virus de la enfermedad de Borna, adenovirus, coxsackievirus, coronavirus, influenza y virus de la varicela zoster). CK2 fosforila y activa la transcriptasa inversa y las proteasas del HIV-1 in vitro e in vivo, y promueve la patogenicidad del virus de la inmunodeficiencia simiohumano (SHIV), un modelo para el HIV. Los inhibidores de CK2 pueden así reducir los efectos patogénicos de un modelo de infección por HIV. CK2 además fosforila numerosas proteínas en el virus del herpes simple y numerosos otros virus, y algunas evidencias sugieren que los virus han adoptado CK2 como una enzima fosforilante para sus proteínas esenciales del ciclo de vida. Así, se espera que la inhibición de CK2 impida la infección y la progresión de las infecciones virales, que dependen de la CK2 del huésped para sus propios ciclos de vida.
CK2 es inusual en la diversidad de procesos biológicos que afecta, y difiere de la mayoría de las quinasas de otras
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maneras también: es constitutivamente activa, puede utilizar ATP o GTP, y se eleva en la mayoría de los tumores y los tejidos que proliferan rápidamente. Además, aunque muchos inhibidores de la quinasa afectan a múltiples quinasas, aumentando la probabilidad de efectos fuera del objetivo o la variabilidad entre sujetos individuales, las características estructurales únicas de CK2 permiten el descubrimiento de inhibidores altamente específicos de CK2. Por todas estas razones, CK2 es un objetivo particularmente interesante para el desarrollo de fármacos, y la invención proporciona inhibidores altamente eficaces de CK2 que son útiles en el tratamiento de una variedad de diferentes enfermedades y trastornos mediados por o asociados con niveles excesivos, aberrantes o no deseados de actividad de CK2.
Se ha descubierto que los compuestos de Fórmula I son activos en CK2 así como en una o más proteínas Pim. Se ha encontrado ahora que los compuestos de Fórmula (II) y (II') son típicamente más activos sobre CK2, y además tienen menos actividad sobre las quinasas Pim. Sin estar limitado por la teoría, se cree que sus actividades fisiológicas derivan de su actividad sobre CK2.
La presente invención proporciona nuevos compuestos de Fórmula (II) y (II'), así como Fórmulas IIa, IIa', II-Th y II-Th', y composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos. Los nuevos compuestos de Fórmula II, que se relacionan con los compuestos de Fórmula I, muestran una actividad sorprendentemente mayor en CK2 y una actividad de Pim reducida, y así se usan ventajosamente para tratar afecciones sensibles a la inhibición de CK2 tales como las descritas en la presente descripción. Los compuestos de Fórmula II son por lo tanto útiles para tratar afecciones mediadas por o asociadas con actividad excesiva de CK2, con probabilidad reducida de efectos no deseados causados por la inhibición de otras quinasas.
Descripción de la invención
La presente invención proporciona en parte compuestos químicos que tienen ciertas actividades biológicas que incluyen, pero no se limitan a, inhibir la proliferación celular, inhibir la angiogénesis y modular las actividades de la proteína quinasa. Estas moléculas modulan la actividad de proteína quinasa CK2 (CK2) y/o PIM, y son típicamente más selectivas para la actividad de CK2 sobre otras quinasas que compuestos similares que carecen del grupo amina mostrado en la Fórmula (II) o (II'). Estos compuestos afectan funciones biológicas que incluyen pero no se limitan a, por ejemplo, inhibir la transferencia de fosfato gamma desde ATP a un sustrato de proteína o péptido, inhibir la angiogénesis, inhibir la proliferación celular e inducir la apoptosis celular. Se proporcionan además composiciones que comprenden estas moléculas en combinación con otros materiales, que incluyen otros agentes terapéuticos, y métodos para usar tales composiciones.
Se ha demostrado que los compuestos de la técnica anterior de la fórmula general (I) inhiben Pim y CK2 (documento de patente núm. PCT/US2010/035657):
en donde el sistema de anillo bicíclico que contiene Z1-Z4 es aromático; uno de Z1 y Z2es C,elotrodeZ1 y Z2 es N; Z3 y Z4 son independientemente CR5 o N, donde R5 puede ser H o R1; R1 es H, halo, CN, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, alquenilo C2-C4 opcionalmente sustituido, heteroarilo o arilo opcionalmente sustituido, alquinilo C2-C4 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-C4 opcionalmente sustituido, o -NR7R8, donde R 7 y R8 se seleccionan cada uno independientemente de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heteroarilalquilo opcionalmente sustituido;
o R7 y R8 junto con el N de NR7R8 pueden formar un anillo de 5-8 miembros opcionalmente sustituido que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como un miembro del anillo; R2 es H, halo, CN, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo C1-C4, alquenilo C2-C4, y alquinilo C2- C4;
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R3 y R4 se seleccionan independientemente de H y alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido; X es NR6, O, o S, donde R6 es H o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo C1-C4, alquenilo C2-C4, y alquinilo C2-C4; Yes O o S; W es arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, o -NR9R10,-OR9, S(O)nR9, heterociclilo enlazado con carbono opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido, o CR9R10R11 , en donden es 0,1 o 2, y
R10
R9
y se seleccionan cada uno independientemente de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido y heteroarilalquilo opcionalmente sustituido,
o R9 y R10 junto con el N de NR9R10 forman un anillo de 5-8 miembros opcionalmente sustituido que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como un miembro de anillo, y
R11
se selecciona de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido y heteroarilalquilo opcionalmente sustituido.
Los compuestos de Fórmula I inhiben Pim y CK2, y frecuentemente inhiben además otras quinasas. Para su uso como productos farmacéuticos, puede ser ventajoso seleccionar compuestos que inhiben una enzima objetivo primaria o receptor con un efecto mínimo en otras vías u objetivos, debido a que los efectos bioquímicos fuera del objetivo pueden causar efectos secundarios impredecibles. Se ha encontrado ahora que los nuevos compuestos de Fórmula (II) y (II'), que se relacionan con los compuestos de Fórmula I, mantienen altos niveles de actividad de CK2, y de hecho son frecuentemente más potentes sobre CK2 que otros compuestos como la Fórmula I, sin embargo, son típicamente selectivos para CK2 sobre quinasas Pim. Además, su selectividad para CK2 sobre otras quinasas en una amplia gama de quinasas también se mejora con respecto a los compuestos de Fórmula I en general. Por lo tanto, los compuestos de Fórmula (II) o (II') representan una clase particularmente útil de compuestos para los métodos de tratamiento descritos en la presente descripción, porque son selectivos para CK2 e inhiben menos quinasas, resultando en un riesgo reducido de efectos secundarios. Como consecuencia, la invención proporciona un compuesto que es un heterociclo de Fórmula (II), (II'), (IIa) o (IIa'):
o una sal farmacéuticamente aceptable y/o solvato de éste; en donde, en la fórmula (II), (II'), (IIa) y (IIa') Z3 representa N o CR5, o CH; Z4 representa CH, N o CR5
cada R5 se selecciona independientemente de halo, -CN, -R, -OR, -S(O)nR, -COOR, -CONR2, y -NR2, en donde cada R se selecciona independientemente de H y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, o alternativamente, los dos grupos R, junto con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S como un miembro de anillo; cada n es independientemente 0, 1 o 2; y cada m es independientemente 1, 2, 3 o 4; en la fórmula (II) y (II'): R2, R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido ; X representa NR2,O, o S; Yes O o S; donde R10 se selecciona de H, CN, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, alquenilo C2-C4 opcionalmente sustituido, alquinilo C2-C4 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-C4 opcionalmente sustituido y -NR7R8, Z es O; L es -NR7-, un enlace, -CR7=CR8-, -C≡C-, -O-, -S(O)n-, -(CR7R8)m-, -(CR7R8)m-NR7-,-(CR7R8)m-O-, o -(CR7R8)m-S(O)n-; W es arilo opcionalmente sustituido, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, heteroalquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, -NR7R8, -OR7, -S(O)nR7, -CONR7R8, heterociclilo opcionalmente
sustituido, carbociclilo opcionalmente sustituido , alquenilo C2-C10 opcionalmente sustituido, alquinilo C2-C10 opcionalmente sustituido, o -CR7R8R9;
R7 R8 R9
donde cada y y se seleccionan independientemente de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, carbociclilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, carbociclilalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido , heteroarilo opcionalmente sustituido y heteroarilalquilo opcionalmente sustituido;
o R8 y R9, junto con el átomo de carbono al que se unen, forma =O (oxo) o N-OR7 o N-CN;
o R7 y R8, juntos en un solo átomo de carbono o en átomos de carbono conectados adyacentes (CR7R8)m si solo o como parte de otro grupo, forman un anillo carbocíclico de 3 a 8 miembros o un anillo heterocíclico;
o R7 y R8, junto con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S como un miembro de anillo; con la condición de que no más de uno de o R7 y R8 en -NR7R8 se selecciona del grupo que consiste en alcoxi, alquilamino, dialquilamino y heterociclilo; y R1B se selecciona de carbociclilo opcionalmente sustituido, H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, carbociclilalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroarilalquilo opcionalmente sustituido; R1A se selecciona de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, y en la fórmula (IIa) y (IIa') R2 es H, CH3o CF3; R4 es H, CH3o CF3; Xes O, S o NH; Yes O o S; R1B se selecciona de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilalquilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente sustituido; L es un enlace, -NR7-, -O-, -S(O)n-, (CR7R8)m, o -(CR7R8)m-NR7-; W se selecciona de arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido y -NR7R8, donde cada R7 y R8 se selecciona independientemente de H, alcoxi C1-C6 opcionalmente sustituido, alquilamino C1-C6 opcionalmente sustituido, dialquilamino C1-C6 opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido, cicloalquilalquilo C4-C10 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido y heteroarilalquilo opcionalmente sustituido; y R7 y R8, juntos en un solo átomo de carbono o en átomos de carbono conectados adyacentes de (CR7R8)m si solo o como parte de otro grupo, forman un anillo de 3 a 8 miembros que contiene uno o más heteroátomos como miembros del anillo;
o R7 y R8, junto con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un sistema de anillo heterocíclico o heteroarílico de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como un miembro de anillo; y con la condición de que no más de uno de o R7 y R8 en -NR7R8 se seleccione del grupo que consiste en alcoxi, alquilamino, dialquilamino y heterociclilo.
Una clase preferida de compuestos de Fórmula II son los de Fórmula (IIa) o (IIa'):
dondeR2 es H, Me o CF3; R4es H, Me o CF3; Xes O, S oNH; Yes O o S; R1B es comosedescribe para laFórmula II;L es un enlace, -NR7-, -O-, o -S(O)n-, (CR7R8)m, o puede ser -(CR7R8)m-NR7-; m es 1-4 y n es 0-2; y W se selecciona de
20 arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido y -NR7R8, donde R7 y R8 son como se definen para la Fórmula II.
Modalidades particulares de los compuestos de la invención incluyen compuestos que contienen tiofeno de Fórmula (II-Th) y (II-Th'):
donde RTh se selecciona de H, halo, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, CN, S(O)0-2R, -SO2NR2, COOR, CONR2, y
45 C(O)R, donde cada R es independientemente H, halo, CN, o un miembro opcionalmente sustituido seleccionado del grupo que consiste en alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilamino C1-C6, dialquilamino C1-C6, cicloalquilo C3-C8, cicloalquilalquilo C4-C10, heterociclilo C5-C8, heterociclilalquilo C6-C10, arilo, arilalquilo, heteroalquilo C5-C6 y heteroalquilalquilo C6-C10;
50 y dos R en el mismo átomo o átomos adyacentes pueden formar un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido que puede contener un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S; y otras características estructurales son como se definieron para la Fórmula IIa anteriormente.
La invención incluye sales farmacéuticamente aceptables de compuestos de Fórmula II, II', IIa, IIa', II-Th y II-Th' así 55 como los compuestos neutros.
La invención proporciona, además, composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos más uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables, y el uso de estos compuestos y composiciones para el tratamiento de afecciones específicas como se describe además en la presente descripción.
60 Los productos intermedios de la siguiente Fórmula (III) son útiles para la preparación de los compuestos descritos anteriormente:
R1B
donde R1A , , R2, R4, Z3, Z4, L y W son como se definieron para la Fórmula (II) anteriormente, o en ciertas
modalidades, éstas son las mismas que las características correspondientes definidas para la Fórmula (IIa) 15 anteriormente;
uno de Z1 y Z2 representa N, y el otro de Z1 y Z2 representa C;
y los círculos dentro de los dos anillos indican que los anillos son ambos aromáticos.
El método para usar estos productos intermedios que produce compuestos de fórmula (II) comprende hacer reaccionar 20 un compuesto de Fórmula (III) con una hidantoína o un compuesto similar heterocíclico de 5 miembros de Fórmula (IV):
30 donde R3, X, Y y Z son como se define para la Fórmula (II) o (II'), bajo condiciones que favorecen la condensación de los dos compuestos.
Típicamente, las condiciones de reacción incluirán un disolvente adecuado y una base, opcionalmente una cantidad
35 catalítica de base, pero pueden usarse cantidades estequiométricas o mayores de base. Las bases adecuadas son aquellas capaces de desprotonar el compuesto de Fórmula (IV) para promover la condensación con el compuesto de Fórmula (III), y aminas secundarias que son capaces de reaccionar con aldehídos de Fórmula (III) para formar una especie de iminio. Las bases adecuadas incluyen alcóxidos C1-C4, hidruros metálicos, aminas terciarias tales como trietilamina o diisopropiletilamina, DABCO y DBU; y bases de aminas secundarias adecuadas incluyen piperidina,
40 morfolina, piperazina, N-metilpiperazina y pirrolidina. Los disolventes adecuados incluyen disolventes apróticos polares tales como NMP, DMF, DMSO, DMA y dioxano; así como disolventes próticos tales como alcoholes C1-C10 y dioles, por ejemplo etanol, propanol, isopropanol, etilenglicol, propilenglicol y metoxietanol. Además pueden usarse mezclas de tales disolventes, así como mezclas de uno o más de estos disolventes con un disolvente orgánico menos polar para promover la solubilidad de los reactivos. La selección de disolventes y bases adecuados para estas reacciones está
45 dentro del nivel de aquellos con experiencia en la técnica.
En algunas modalidades de los compuestos de Fórmula (III), -L-W representa un grupo de la fórmula-S(O)1-2R, donde R es un grupo alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo o similar y el producto es un compuesto de Fórmula (II) o (II') que tiene el mismo grupo L-W. Tales compuestos se usan convenientemente para la preparación de otros compuestos de fórmula
50 (II) o (II'), debido a que la entidad de la fórmula -S(O)1-2R es un buen grupo saliente y puede desplazarse fácilmente por nucleófilos tales como aminas primarias o secundarias, para introducir otros grupos -L-W. Así, otro método para sintetizar los compuestos de la invención es hacer reaccionar un compuesto de Fórmula (V),
donde -L-W representa un grupo de la fórmula-S(O)1-2R, donde R es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, cicloalquilalquilo C4-C10, arilo C6-C10, heteroarilo C5-C6, arilalquilo C7-C12, y heteroarilquilo C6-C12; y otras variables son como se definen para las fórmulas (III) y (IV) anteriormente;
5 con un compuesto nucleofílico de fórmula
W'-L'-H
en donde L' se selecciona de NR7, O y S; y
10 W' es arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido, C2-C10 opcionalmente sustituido (alquenilo, alquinilo C2-C10 opcionalmente sustituido, o CR7R8R9, donde R7, R8 y R9 son como se definió anteriormente para la Fórmula II bajo condiciones adecuadas como se describe en la presente descripción para proporcionar un compuesto de Fórmula
15 (V'):
30 La invención además proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (II). (II'), (IIa) o (IIa') como se describe en la presente descripción y al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, o dos o más vehículos y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. Las composiciones farmacéuticas que comprenden al menos uno de estos compuestos pueden utilizarse en los métodos de tratamiento tales como los
35 descritos en la presente descripción.
En común con los compuestos conocidos de Fórmula (I), los compuestos de las Fórmulas (II), (II'), (IIa) y (IIa') como se describen en la presente descripción se unen a e inhiben ciertas proteínas quinasas, que se cree que son la base de su actividad farmacéutica. En ciertas modalidades, la proteína es una proteína CK2, tal como una proteína CK2 que
40 comprende la secuencia de aminoácidos de sec. con núm. de ident.: 1, 2 o 3 o por ejemplo una variante sustancialmente idéntica de esta.
Sec. con núm. de ident.:1 (NP 001886; isoforma a de caseína quinasa II subunidad alfa 1 [Homo sapiens])
Sec. con núm. de ident.:2 (NP_808227: isoforma a de caseína quinasa II subunidad alfa 1 [Homo sapiens])
Sec. con núm. de ident.:3 (NP 808228, isoforma b de caseína quinasa II subunidad alfa 1 [Homo sapiens])
10 Las variantes esencialmente idénticas de estas incluyen proteínas con al menos 90% de homología de secuencia con una de estas, preferentemente al menos 90% de identidad de secuencia; y tiene al menos 50% del nivel de actividad de quinasa in vitro de la secuencia especificada bajo condiciones de ensayo típicas.
Los compuestos de la invención pueden modular la actividad de la proteína CK2, ya sea in vitro o ex vivo. Los métodos
15 adecuados de tal modulación comprenden poner en contacto un sistema que comprende la proteína con un compuesto descrito en la presente descripción en una cantidad eficaz para modular la actividad de la proteína. Como consecuencia, la invención proporciona además un método in vitro para modular la actividad de la caseína quinasa 2 y/o la actividad de Pim quinasa en una célula, que comprende la contracción de la célula con un compuesto de la invención como se definió anteriormente.
20 En ciertas modalidades, la actividad de la proteína se inhibe, y a veces la proteína es una proteína CK2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la sec. con núm. de ident.: 1, sec. con núm. de ident.: 2 o sec. con núm. de ident.: 3 o por ejemplo una variante esencialmente idéntica de estas. En ciertas modalidades la CK2 está en una célula o tejido; en otras modalidades, puede estar en un sistema libre de células.
25 Los compuestos de la invención además pueden usarse en métodos para inhibir la proliferación celular, que comprende poner en contacto células con un compuesto descrito en la presente descripción en una cantidad eficaz para inhibir la proliferación de las células. Las células a veces están en una línea celular, tal como una línea celular de cáncer (por ejemplo, línea celular de cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer
30 hemopoyético, cáncer colorrectal, cáncer de piel, cáncer de ovario). En algunas modalidades, la línea celular de cáncer es una línea celular de cáncer de mama, cáncer de próstata o cáncer de páncreas. Las células a veces están en un tejido, pueden estar en un sujeto, a veces están en un tumor, y a veces están en un tumor en un sujeto. En un aspecto, la invención proporciona además un método para inhibir la proliferación celular, que comprende poner en contacto células en una línea celular con un compuesto de la invención como se definió anteriormente.
35 En ciertas modalidades, el método comprende además la inducción de apoptosis celular. Las células son a veces de un sujeto que tiene degeneración macular.
Un compuesto descrito en la presente descripción puede usarse en métodos para tratar una afección relacionada con la
40 proliferación celular aberrante, que comprende administrar tal compuesto a un sujeto que lo necesite en una cantidad eficaz para tratar la afección proliferativa celular. En ciertas modalidades, la afección proliferativa celular es un cáncer asociado a tumor, por ejemplo, un tumor sólido o circulante. El cáncer a veces es cáncer de mama, próstata, páncreas, pulmón, colorrectal, piel u ovario. En algunas modalidades, la afección proliferativa celular es un cáncer no tumoral, tal como un cáncer hematopoyético, por ejemplo, que incluyen leucemias, por ejemplo, mieloma múltiple y linfomas. La
45 afección proliferativa celular es la degeneración macular en algunas modalidades.
Los compuestos de la invención descritos anteriormente pueden usarse en métodos para tratar el cáncer o un trastorno inflamatorio u otros trastornos descritos en la presente descripción mediados por la actividad excesiva de una o más de estas quinasas, en un sujeto que necesite tal tratamiento. Tales métodos comprenden administrar al sujeto una cantidad
50 terapéuticamente eficaz de un agente terapéutico útil para tratar tal trastorno; y administrar al sujeto una molécula descrita en la presente descripción, por ejemplo, un compuesto inhibe CK2 en una cantidad que es eficaz para potenciar un efecto deseado del agente terapéutico.
Como consecuencia, la invención proporciona además un compuesto de fórmula (II), (II'), (IIa) o (IIa') como se definió 55 anteriormente, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en el
(a) tratamiento de una afección o enfermedad asociada con la actividad de la caseína quinasa 2 y/o Pim quinasa en un paciente mediante la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto, en donde la afección o enfermedad se selecciona de cáncer, un trastorno vascular, una inflamación, una infección patogénica, un trastorno inmunológico, un trastorno neurodegenerativo, y una de sus combinaciones, y en donde
60 el cáncer se selecciona preferentemente de cáncer de colorrectal, mama, pulmón, hígado, páncreas, ganglio linfático, colon, próstata, cerebro, cabeza y cuello, piel, hígado, riñón, sangre y corazón, y en donde el compuesto se administra opcionalmente en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales, preferentemente un agente anticanceroso; o
(b) que inhibe la proliferación celular, que comprende poner en contacto las células con el compuesto en una 65 cantidad eficaz para inhibir la proliferación de las células, en donde las células están en un tumor en un sujeto; o
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(c) que inhibe la angiogénesis en un sujeto, que comprende administrar al sujeto el compuesto en una cantidad eficaz para inhibir la angiogénesis.
La molécula que inhibe CK2 es un compuesto de Fórmula II, o Fórmula II' o (IIa) o (IIa'), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este. En ciertas modalidades, el efecto deseado del agente terapéutico que se potencia por la molécula que inhibe CK2 es un aumento en la apoptosis en al menos un tipo de célula. En ciertas modalidades, la célula es una célula cancerosa y el compuesto es un compuesto de Fórmula (II) o (IIa) que es un potente inhibidor (por ejemplo, IC-50 menor que aproximadamente 100 nM) de CK2. Preferentemente, el compuesto tiene un IC-50 en Pim de menos de aproximadamente 30 nM, y es selectivo para CK2 sobre Pim quinasas. En ciertas modalidades, la IC-50 para la inhibición de CK2 es menor en al menos un factor de diez que la actividad en Pim; en modalidades preferidas, el compuesto tiene una IC-50 para CK2 que es inferior a su IC-50 para al menos uno de Pim-1, Pim-2 y Pim-3 en aproximadamente 100 veces o más.
En algunas modalidades, el agente terapéutico y la molécula que inhibe CK2 se administran sustancialmente al mismo tiempo. El agente terapéutico y la molécula que inhibe CK2 a veces se usan simultáneamente por el sujeto. El agente terapéutico y la molécula que inhibe CK2 pueden combinarse en una composición farmacéutica en ciertas modalidades; en otras modalidades se administran como composiciones separadas.
Además se proporcionan composiciones de la materia que comprenden un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción y una proteína aislada. La proteína a veces es una proteína CK2, tal como una proteína CK2 que comprende por ejemplo la secuencia de aminoácidos de sec. con núm. de ident.:1, sec. con núm. de ident.:2 o sec. con núm. de ident.:3 o una variante sustancialmente idéntica de estas. En algunas modalidades, la proteína es una proteína Pim. Ciertas composiciones comprenden un compuesto descrito en la presente descripción en combinación con una célula. La célula puede ser de una línea celular, tal como una línea celular de cáncer. En las últimas modalidades, la línea celular de cáncer es a veces una línea celular de cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer hematopoyético, cáncer colorrectal, cáncer de piel, cáncer de ovario.
La invención se describe adicionalmente en la descripción que sigue. Las modalidades que caen fuera del alcance de la reivindicación se incluyen para propósitos de referencia.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 representa un compuesto de Fórmula I como se describe en la presente descripción, y muestra su IC50 sobre CK2 (7 nM) y sobre PIM1 (351 nM), y además muestra un gráfico de inhibición de un panel de 108 quinasas que ilustra su selectividad para estas quinasas con relación a otras quinasas. La Figura 2 representa un compuesto de Fórmula II como se describe en la presente descripción, y muestra que es más potente sobre CK2 (3 nM), menos potente en PIM1 (1310 nM) y generalmente más selectivo hacia diversas quinasas que el compuesto de la Figura 1. La Figura 3 muestra un esquema de síntesis para preparar ciertos compuestos de la invención que contienen un anillo de tiofeno. La Figura 4 ilustra las síntesis de ciertas pirazolotriazinas de la invención. La Figura 5 ilustra métodos de síntesis para introducir varios grupos nucleófilos sobre un sistema de anillo de pirazolotriazina para preparar compuestos de la invención. La Figura 6 ilustra vías de síntesis generales para fabricar ciertos compuestos de pirazolo-triazina de la invención. La Figura 7 muestra un método sintético general para fabricar diversos sistemas de anillos de imidazo-pirazina y para fabricar ciertos compuestos de la invención. La Figura 8 representa una serie de variaciones de los compuestos de pirazolo-triazina dentro del alcance de la invención. La Figura 9 representa métodos para fabricar ciertos compuestos de imidazo-piridazina dentro del alcance de la invención. La Figura 10 ilustra un método general para modificar ciertos compuestos sustituidos de la invención para introducir características adicionales. La Figura 11 representa más métodos para modificar sustituyentes en los compuestos de la invención. La Figura 12 ilustra vías de síntesis alternativas para fabricar ciertos compuestos de la invención. La Figura 13 representa la formación de un compuesto de amida de la invención a partir de un compuesto de ácido carboxílico correspondiente. La Figura 14 representa un método de aminación reductora para introducir ciertos grupos en los compuestos de la invención.
Modos de llevar a cabo la invención
Los compuestos de la presente invención ejercen actividades biológicas que incluyen, pero no se limitan a, inhibir la proliferación celular, reducir la angiogénesis, prevenir o reducir las respuestas inflamatorias y el dolor, y modular ciertas respuestas inmunitarias. Tales compuestos modulan la actividad de CK2, como se demuestra por los datos de la presente descripción. Tales compuestos, por lo tanto, pueden utilizarse en múltiples aplicaciones por un experto en la técnica. Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente descripción pueden usarse, por ejemplo para (i)
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modulación de la actividad de la proteína quinasa (por ejemplo, actividad CK2), (ii) modulación de la proliferación celular, (iii) modulación de la apoptosis y/o (iv) tratamientos de trastornos relacionados con la proliferación celular (por ejemplo, administración sola o coadministración con otra molécula). Particularmente, los compuestos de Fórmula (II) y (IIa) pueden usarse para modular la actividad de CK2, in vitro o in vivo, y para tratar trastornos asociados con niveles excesivos o indeseables de actividad CK2, que incluyen cánceres, ciertos trastornos inflamatorios, trastornos vasculares, ciertos trastornos esqueléticos y musculares, e infecciones tales como infecciones por parásitos protozoarios y algunas infecciones virales.
Definiciones:
Los términos quot;unquot; y quot;unoquot; no indican una limitación de cantidad, sino más bien denotan la presencia de al menos uno de los elementos referenciados. Los términos quot;unquot; y quot;unoquot; se usan intercambiables con quot;uno o másquot; o quot;al menos unoquot;. El término quot;oquot; o quot;y/oquot; se usa como una palabra de función para indicar que dos palabras o expresiones deben tomarse juntas o individualmente. Los términos quot;que comprendequot;, quot;que tienequot;, quot;que incluyequot; y quot;que contienequot; deben interpretarse como términos abiertos (es decir, que significan quot;que incluyen, pero no se limitan aquot;). Los extremos de todos los intervalos dirigidos al mismo componente o propiedad son inclusivos e independientemente combinables.
Los términos quot;compuestos de la invenciónquot;, quot;estos compuestosquot;, quot;tales compuestosquot;, quot;los compuestosquot; y quot;los presentes compuestosquot; se refieren generalmente a compuestos de la Fórmula estructural (II), (II'), (IIa), (IIa'), (IIb), (IIb'), (IIc), (II-Th) y (II-Th') e incluyen cualquier compuesto específico dentro de estas fórmulas cuya estructura se describe en la presente descripción. Los compuestos pueden identificarse por su estructura química y/o nombre químico. Cuando la estructura química y el nombre químico entran en conflicto, la estructura química es determinante de la identidad del compuesto. Además, los presentes compuestos pueden modular, es decir, inhibir o potenciar la actividad biológica de una proteína CK2, una proteína Pim o ambas, y de ese modo además se denomina en la presente descripción quot;moduladoresquot; o quot;moduladores de CK2 y/o Pim)quot;. Los compuestos de Fórmulas (I), (II), (II'), (IIa), (IIa'), (IIb), (IIb'), (IIc), (II-Th) y (II-Th'), que incluyen cualquier compuesto específico, es decir, las especies, descritas en la presente descripción son quot;moduladoresquot; ilustrativos.
Los compuestos descritos en la presente descripción pueden contener uno o más centros quirales y/o enlaces dobles y, por tanto, pueden existir como estereoisómeros, tales como isómeros de doble enlace (es decir, isómeros geométricos tales como E y Z), enantiómeros o diastereómeros. La invención incluye cada una de las formas estereoisoméricas aisladas (tales como los isómeros enantioméricamente puros, los isómeros E y Z, etc.) así como mezclas de estereoisómeros en diversos grados de pureza quiral o percentil de E y Z, que incluyen mezclas racémicas, mezclas de diastereoisómeros y mezclas de isómeros E y Z. Como consecuencia, las estructuras químicas representadas en la presente descripción abarcan todos los enantiómeros y estereoisómeros posibles de los compuestos ilustrados que incluyen la forma estereoisoméricamente pura (por ejemplo, pura geométricamente, pura enantioméricamente o pura diastereoméricamente) y mezclas enantioméricas y estereoisoméricas. Las mezclas enantioméricas y estereoisoméricas pueden resolverse en sus enantiómeros o estereoisómeros componentes usando técnicas de separación o técnicas de síntesis quiral bien conocidas por los expertos en la técnica. La invención incluye cada una de las formas estereoisoméricas aisladas así como mezclas de estereoisómeros en grados variables de pureza quiral, que incluyen mezclas racémicas. Además abarca los diversos diastereómeros. Otras estructuras pueden aparecer para representar un isómero específico, pero eso es meramente por conveniencia, y no se pretende limitar la invención al isómero de olefina representado. Cuando el nombre químico no especifica la forma isomérica del compuesto, denota cualquiera de las formas isoméricas posibles o una mezcla de esas formas isoméricas del compuesto.
Los compuestos además pueden existir en varias formas tautoméricas, y la descripción de la presente descripción de un tautómero es sólo por conveniencia, y además se entiende que abarca otros tautómeros de la forma mostrada. Como consecuencia, las estructuras químicas representadas en la presente descripción abarcan todas las formas tautómeras posibles de los compuestos ilustrados. El término quot;tautómeroquot;, tal como se usa en la presente descripción, se refiere a isómeros que se cambian uno con el otro con gran facilidad para que puedan existir juntos en equilibrio. Por ejemplo, cetona y enol son dos formas tautoméricas de un compuesto. En otro ejemplo, puede existir un derivado de 1,2,4-triazol sustituido en al menos tres formas tautoméricas como se muestra más abajo:
Las descripciones de los compuestos de la presente invención se limitan por principios de unión química conocidos por los expertos en la técnica. Como consecuencia, cuando un grupo puede sustituirse por uno o más de un número de sustituyentes, tales sustituciones se seleccionan de manera que cumplan con los principios de unión química y para dar compuestos que no son intrínsecamente inestables y/o serían conocidos por un experto en la técnica como probable que sea inestable bajo condiciones ambientales, tales como condiciones fisiológicas acuosas, neutras y varias conocidas. Por ejemplo, un heterocicloalquilo o heteroarilo se une al resto de la molécula a través de un heteroátomo
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del anillo en conformidad con los principios de unión química conocidos por los expertos en la técnica, evitando de ese modo compuestos inherentemente inestables.
Los compuestos de la invención frecuentemente tienen grupos ionizables de manera que son capaces de la preparación como sales. En ese caso, siempre que se haga referencia al compuesto, se entiende en la técnica que además se puede usar una sal farmacéuticamente aceptable. Estas sales pueden ser sales de adición de ácidos que incluyen ácidos inorgánicos u orgánicos o las sales pueden prepararse, en el caso de formas ácidas de los compuestos de la invención, a partir de bases inorgánicas u orgánicas. Frecuentemente, los compuestos se preparan o usan como sales farmacéuticamente aceptables preparadas como productos de adición de ácidos o bases farmacéuticamente aceptables. Los ácidos y bases farmacéuticamente aceptables adecuadas son bien conocidos en la técnica, tales como ácidos clorhídrico, sulfúrico, bromhídrico, acético, láctico, cítrico o tartárico para formar sales de adición de ácido e hidróxido de potasio, hidróxido de sodio, hidróxido de amonio, cafeína y diversas aminas, para formar sales básicas. Los métodos para la preparación de las sales apropiadas están bien establecidos en la técnica. En algunos casos, los compuestos pueden contener tanto un grupo funcional ácido como un grupo funcional básico, en cuyo caso pueden tener dos grupos ionizados y sin embargo no tienen carga neta. Los métodos estándar para la preparación de sales farmacéuticamente aceptables y sus formulaciones son bien conocidos en la técnica y se describen en diversas referencias que incluyen por ejemplo, quot;Remington: The Science and Practice of Pharmacyquot;, A. Gennaro, ed., 20ma edición, Lippincott, Williams & Wilkins, Filadelfia, PA.
quot;Solvatoquot;, como se usa en la presente descripción, significa un compuesto formado por solvatación (la combinación de moléculas de disolvente con moléculas o iones del soluto), o un agregado que consiste en un ion o molécula de soluto, es decir, un compuesto de la invención, con una o más moléculas de disolvente. Cuando el agua es el disolvente, el solvato correspondiente es quot;hidratoquot;. Ejemplos de hidrato incluyen, pero no se limitan a, hemihidrato, monohidrato, dihidrato, trihidrato, hexahidrato, etc. Debe entenderse por un experto en la técnica que la sal y/o profármaco farmacéuticamente aceptable del presente compuesto puede además existir en forma solvatada. El solvato se forma típicamente a través de la hidratación que es o parte de la preparación del presente compuesto o a través de la absorción natural de humedad por el compuesto anhidro de la presente invención.
El término éster significa cualquier éster de un compuesto presente en el que cualquiera de las funciones -COOH de la molécula se sustituye por una función -COOR, en la que la entidad R del éster es cualquier grupo que contiene carbono que forma una entidad éster estable, que incluye pero no se limita a alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, arilalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo y derivados sustituidos de estos. Los ésteres hidrolizables de los presentes compuestos son los compuestos cuyos carboxilos están presentes en forma de grupos éster hidrolizables. Es decir, estos ésteres son farmacéuticamente aceptables y pueden hidrolizarse al correspondiente ácido carboxílico in vivo. Estos ésteres pueden ser ésteres convencionales, que incluyen ésteres de alcanoiloxialquilo inferiores, por ejemplo pivaloiloximetilo y 1-pivaloiloxietilo; éteres de alcoxicarbonilalquilo inferior, por ejemplo, ésteres de metoxicarboniloximetilo, 1-etoxicarboniloxietilo y 1-isopropilcarboniloxietilo; ésteres de alcoximetilo inferiores, por ejemplo, ésteres de metoximetilo, ésteres de lactonilo, ésteres de ceto de benzofurano, ésteres de ceto de tiobenzofurano; ésteres de alcanoilaminometilo inferiores, por ejemplo, ésteres de acetilaminometilo. Además pueden usarse otros ésteres, tales como ésteres de bencilo y ésteres de ciano metilo. Otros ejemplos de estos ésteres incluyen: ésteres de (2,2-dimetil-1-oxipropiloxi) metilo; ésteres de (1RS)-1-acetoxietilo, ésteres de 2-[(2-metilpropiloxi)carbonil]-2pentenilo, ésteres de 1-[[(1-metiletoxi)carbonil]-oxi]etílico; ésteres de isopropiloxicarboniloxietilo, ésteres de (5-metil-2oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo, ésteres de 1-[[(ciclohexiloxi)carbonil]oxi]etílico; 3,3-dimetil-2 -oxobutilo. Es obvio para los expertos en la técnica que los ésteres hidrolizables de los compuestos de la presente invención pueden formarse en carboxilos libres de dichos compuestos usando métodos convencionales. Los ésteres representativos incluyen ésteres de pivaloiloximetilo, ésteres de isopropiloxicarboniloxietilo y ésteres de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il) metilo.
quot;Grupo protectorquot; se refiere a un agrupamiento de átomos que cuando se une a un grupo funcional reactivo en una molécula enmascara, reduce o previene la reactividad del grupo funcional. Ejemplos de grupos protectores se pueden encontrar en Green y otros, quot;Protective Groups in Organic Chemistryquot;, (Wiley, 2da ed. 1991) y Harrison y otros, quot;Compendium of Synthetic Organic Methodsquot;, Vols. 1-8 (John Wiley y Sons, 1971-1996). Los grupos protectores de amino representativos incluyen, pero no se limitan a, formilo, acetilo, trifluoroacetilo, bencilo, benciloxicarbonilo (quot;CBZquot;), terc-butoxicarbonilo (quot;Bocquot;), trimetilsililo (quot;TMSquot;), 2 trimetilsilil etanosulfonilo (quot;SESquot;), tritilo y grupos tritilo sustituidos, aliloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo y (quot;FMOC'), nitro-veratriloxicarbonilo (quot;NVOCquot;). Los grupos protectores hidroxi representativos incluyen, pero no se limitan a aquellos donde el grupo hidroxi o se acila o alquila tales como bencilo, y éteres de tritilo, así como éteres de alquilo, éteres de tetrahidropiranilo, éteres de trialquilsililo y éteres alílicos.
Como se usa en la presente descripción, el término quot;farmacéuticamente aceptablequot; significa adecuado para usar en contacto con los tejidos de humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, reacciones alérgicas y similares, y son proporcionales a una relación beneficio/riesgo razonable y efectiva para su uso dentro del alcance del juicio médico acertado.
“Excipiente” se refiere a un diluyente, adyuvante, vehículo o portador con el que se administra un compuesto.
Una quot;cantidad eficazquot; o quot;cantidad terapéuticamente efectivaquot; es la cantidad del presente compuesto en la que se logra
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un resultado beneficioso cuando el compuesto se administra a un paciente o, alternativamente, la cantidad de compuesto que posee una actividad deseada in vivo o in vitro. En el caso de trastornos proliferativos, un resultado clínico beneficioso incluye la reducción de la extensión o gravedad de los síntomas asociados con la enfermedad o trastorno y/o un aumento en la longevidad y/o calidad de vida del paciente en comparación con la ausencia del tratamiento. Por ejemplo, para un sujeto con cáncer, un quot;resultado clínico beneficiosoquot; incluye una reducción en la masa tumoral, una reducción en la tasa de crecimiento tumoral, una reducción en la metástasis, una reducción en la gravedad de los síntomas asociados con el cáncer y/o un aumento en la longevidad del sujeto en comparación con la ausencia del tratamiento. La cantidad exacta de compuesto administrado a un sujeto dependerá del tipo y gravedad de la enfermedad
o afección y de las características del paciente, tales como la salud general, edad, sexo, peso corporal y tolerancia a los fármacos. Además dependerá del grado, gravedad y tipo de trastorno proliferativo. El experto en la técnica será capaz de determinar dosificaciones apropiadas dependiendo de estos y otros factores.
Como se usa en la presente descripción los términos quot;alquilo,quot; quot;alqueniloquot; y quot;alquiniloquot; incluyen radicales hidrocarbilo monovalentes de cadena lineal, de cadena ramificada y cíclica, y combinaciones de éstos, que contienen sólo C y H cuando no están sustituidos. Los ejemplos incluyen metilo, etilo, isobutilo, ciclohexilo, ciclopentiletilo, y 2-propenilo, 3butinilo. El número total de átomos de carbono en cada uno de tales grupos se describe a veces en la presente descripción, por ejemplo, cuando el grupo puede contener hasta diez átomos de carbono, puede representarse como 110C o como C1-C10 o C1-10. Cuando se permite que los heteroátomos (N, O y S típicamente) reemplacen a los átomos de carbono como en los grupos heteroalquilo, por ejemplo, los números que describen el grupo, aunque todavía se escriben como por ejemplo C1-C6, representan la suma del número de átomos de carbono en el grupo más el número de tales heteroátomos que se incluyen como reemplazos de átomos de carbono en la cadena principal del anillo o cadena que se describe. Cuando se incluye un anillo, se entiende que el grupo contiene al menos tres átomos de carbono como un anillo de 3 miembros es el tamaño más pequeño para un anillo.
Típicamente, los sustituyentes alquilo, alquenilo y alquinilo de la invención contienen 1-10C (alquilo) o 2-10C (alquenilo
o alquinilo), o 3-10C cuando se incluye un anillo. Preferentemente contienen 1-8C (alquilo) o 2-8C (alquenilo o alquinilo)
o 3-8C cuando se incluye un anillo. A veces contienen 1-4C (alquilo) o 2-4C (alquenilo o alquinilo). Un solo grupo puede incluir más de un tipo de enlace múltiple, o más de un enlace múltiple; tales grupos se incluyen en la definición del término quot;alqueniloquot; cuando contienen al menos un doble enlace carbono-carbono y se incluyen dentro del término quot;alquiniloquot; cuando contienen al menos un enlace triple carbono-carbono; siempre que, sin embargo, la presencia de enlaces múltiples no produzca un anillo aromático.
Los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo son frecuentemente opcionalmente sustituidos en la medida que tal sustitución tenga sentido químicamente.
quot;Opcionalmente sustituidoquot; como se usa en la presente descripción indica que el grupo o grupos particulares que se describen pueden no tener sustituyentes distintos del hidrógeno, o el grupo o grupos pueden tener uno o más sustituyentes distintos del hidrógeno. Si no se especifica de cualquier otra manera, el número total de tales sustituyentes que pueden estar presentes es igual al número de átomos de H presentes en la forma no sustituida del grupo que se describe. Cuando un sustituyente opcional se une a través de un doble enlace, tal como un oxígeno de carbonilo (=O), el grupo toma dos valencias disponibles, de modo que el número total de sustituyentes que pueden incluirse se reduce de conformidad con el número de valencias disponibles.
quot;Sustituidoquot;, cuando se usa para modificar un grupo o radical especificado, significa que uno o más átomos de hidrógeno del grupo o radical especificado se reemplazan cada uno, independientemente entre sí, con el mismo o diferentes sustituyentes.
Los sustituyentes quot;acetilenoquot; son grupos alquinilo 2-10C que contienen al menos un enlace triple carbono-carbono y son opcionalmente sustituidos con los grupos descritos en la presente descripción como adecuados para grupos alquilo; en algunas modalidades, los grupos alquinilo son de la fórmula -C≡C-Ra, en donde Raes H o alquilo C1-C8, heteroalquilo C2-C8, alquenilo C2-C8, heteroalquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, heteroalquinilo C2-C8, acilo C1-C8, heteroacilo C2-C8, arilo C6-C10, heteroarilo C5-C10, arilalquilo C7-C12, o heteroarilalquilo C6-C12.
Cada grupo Ra está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de halo, =O, =N-CN, =N-OR', NR', OR', NR'2, SR', SO2R', SO2NR'2, NR'SO2R', NR'CONR'2, NR'CSNR'2, NR'C(=NR')NR'2, NR'COOR', NR'COR', CN, COOR', CONR'2, OOCR', COR', y NO2, en donde cada R' es independientemente H, alquilo C1-C6, heteroalquilo C2-C6, acilo C1-C6, heteroacilo C2-C6, arilo C6-C10, heteroarilo C5-C10, arilalquilo C7-12, o heteroarilalquilo C6-12, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre halo, CN, alquilo C1-C4, heteroalquilo C2-C4, acilo C1-C6, heteroacilo C1-C6, alcoxi C1-C4, alquilamino C1-C4, di(alquil C1-C4)amino, hidroxi, amino, y =O; y en donde dos R' pueden enlazarse para formar un anillo de 3-7 miembros que contiene opcionalmente hasta tres heteroátomos seleccionados de N, O y S. En algunas modalidades, Ra de -C≡C-Ra es H oMe.
quot;Heteroalquiloquot;, quot;heteroalqueniloquot; y quot;heteroalquiniloquot; se definen de forma similar a los correspondientes grupos hidrocarbilo (alquilo, alquenilo y alquinilo), pero los términos quot;heteroquot; se refieren a grupos que contienen 1-3 heteroátomos o combinaciones O, S o N de estos dentro del residuo de esqueleto; así al menos un átomo de carbono de un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo correspondiente se sustituye por uno de los heteroátomos especificados para
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formar, respectivamente, un grupo heteroalquilo, heteroalquenilo o heteroalquinilo. Los tamaños típicos y preferidos para las heteroformas de grupos alquilo, alquenilo y alquinilo son generalmente los mismos que para los correspondientes grupos hidrocarbilo, y los sustituyentes que pueden estar presentes en las heteroformas son los mismos que los descritos anteriormente para los grupos hidrocarbilo. Por razones de estabilidad química, además se entiende que, a menos que se especifique lo contrario, dichos grupos no incluyen más de dos heteroátomos contiguos excepto cuando un grupo oxo está presente en N o S como en un grupo nitro o sulfonilo.
Aunque quot;alquiloquot; como se usa en la presente descripción incluye los grupos cicloalquilo y cicloalquilalquilo, el término quot;cicloalquiloquot; puede usarse en la presente descripción para describir un grupo no aromático carbocíclico que se conecta a través de un átomo de carbono del anillo, y quot;cicloalquilalquiloquot; puede usarse para describir un grupo no aromático carbocíclico que se conecta a la molécula a través de un enlazador alquilo.
Similarmente, puede usarse quot;heterocicliloquot; para describir un grupo cíclico no aromático que contiene al menos un heteroátomo (típicamente seleccionado de N, O y S) como un miembro de anillo y que la inclusión de un heteroátomo permite la aromaticidad en anillos de 5 miembros así como anillos de 6 miembros. Los sistemas heteroaromáticos típicos incluyen grupos aromático C5-C6 monocíclicos tales como piridilo, pirimidilo, pirazinilo, tienilo, furanilo, pirrolilo, pirazolilo, tiazolilo, oxazolilo, triazolilo, triazinilo, tetrazolilo, tetrazinilo e imidazolilo y las entidades bicíclicas condensadas formadas por fusión de uno de estos grupos monocíclicos con un anillo de fenilo o con cualquiera de los grupos monocíclicos heteroaromáticos para formar un grupo bicíclico de C8-C10 tal como indolilo, bencimidazolilo, indazolilo, benzotriazolilo, isoquinolilo, quinolilo, benzotiazolilo, benzofuranilo, pirazolopiridilo, quinazolinilo, quinoxalinilo y cinolinilo. Se incluye en esta definición cualquier sistema bicíclico de anillo monocíclico o condensado que tenga las características de aromaticidad en términos de distribución electrónica en todo el sistema de anillos. Además incluye grupos bicíclicos en los que al menos el anillo que se une directamente al resto de la molécula tiene las características de aromaticidad. Típicamente, los sistemas de anillo contienen 5-12 átomos de miembros de anillo y hasta cuatro heteroátomos seleccionados entre N, O y S. Frecuentemente, los heteroarilos monocíclicos contienen 5-6 miembros de anillo y hasta tres de tales heteroátomos, y los heteroarilos bicíclicos contienen 8-10 miembros de anillo y hasta cuatro de tales heteroátomos. El número y colocación de heteroátomos en tales anillos está de acuerdo con las limitaciones bien conocidas de la aromaticidad y la estabilidad, donde la estabilidad requiere que el grupo heteroaromático sea lo suficientemente estable como para ser expuesto al agua sin degradación rápida.
Las entidades arilo y heteroarilo pueden sutituirse una variedad de sustituyentes que incluyen alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo C5-C12, acilo C1-C8 y heteroformas de éstos, cada una de los cuales puede sustituirse a sí misma; otros sustituyentes para las entidades arilo y heteroarilo incluyen halógeno halo, OR, NR2, SR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCSNR2, NRC(=NR)NR2, NRCOOR, NRCOR, CN, C≡CR, COOR, CONR2, OOCR, COR, y NO2, en donde cada R es independientemente H, alquilo C1-C8, heteroalquilo C2-C8, alquenilo C2-C8, heteroalquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, heteroalquinilo C2-C8, heterociclilo C3-C8, heterocicliloalquilo C4-C10, arilo C6-C10, heteroarilo C5-C10, arilalquilo C7-C12, heteroarilalquilo C6-C12, y cada R está opcionalmente sustituido como se describió anteriormente para grupos alquilo. Los grupos sustituyentes en un grupo arilo o heteroarilo pueden, por supuesto, estar además sustituidos con los grupos descritos en la presente descripción como adecuados para cada tipo de tales sustituyentes o para cada componente del sustituyente. Así, por ejemplo, un sustituyente arilalquilo puede estar sustituido en la porción arilo con sustituyentes descritos en la presente descripción como típicos para grupos arilo y puede estar además sustituido en la porción alquilo con sustituyentes descritos en la presente descripción como típicos o adecuados para grupos alquilo. Cuando un grupo sustituyente contiene dos grupos R en los mismos átomos o adyacentes (por ejemplo, -NR2, o NR-C(O)R), los dos grupos R pueden tomarse opcionalmente junto con los átomos en el grupo sustituyente al que se unen para formar un anillo que tiene 5-8 miembros del anillo, que puede estar sustituido como se permite para el propio R, y puede contener un heteroátomo adicional (N, O o S) como un miembro del anillo.
Similarmente, quot;arilalquiloquot; y quot;heteroarilalquiloquot; se refieren a sistemas de anillos aromáticos y heteroaromáticos que se unen a su punto de unión a través de un grupo enlazante tal como un alquileno, que incluyen enlazadores, sustituidos o no sustituidos, saturados o no saturados, cíclicos o acíclicos. Típicamente, el enlazador es alquilo C1-C8 o una hetero forma de este. Estos enlazadores además pueden incluir un grupo carbonilo, haciéndolos así capaces de proporcionar sustituyentes como una entidad acilo o heteroacilo. Un anillo arilo o heteroarilo en un grupo arilalquilo o heteroarilalquilo puede sustituirse con los mismos sustituyentes descritos anteriormente de grupos arilo. Preferentemente, un grupo arilalquilo incluye un anillo fenilo opcionalmente sustituido con los grupos definidos anteriormente de grupos arilo y un alquileno C1-C4 que no se sustituye o se sustituye con uno o dos grupos alquilo C1-C4 o grupos heteroalquilo, donde los grupos alquilo o heteroalquilo pueden ciclarse opcionalmente para formar un anillo tal como ciclopropano, dioxolano u oxaciclopentano. Similarmente, un grupo heteroarilalquilo incluye preferentemente un grupo heteroarilo C5-C6 monocíclico que está opcionalmente sustituido con los grupos descritos anteriormente como sustituyentes típicos en grupos arilo y un alquileno C1-C4 que no se sustituye o se sustituye con uno o dos grupos alquilo C1-C4 o grupos heteroalquilo, o incluye un grupo heteroarilo C5-C6 monocíclico opcionalmente sustituido y un heteroalquileno C1-C4 que no se sustituye o se sustituye con uno o dos grupos alquilo C1-C4 o heteroalquilo, donde los grupos alquilo o heteroalquilo pueden ciclar opcionalmente para formar un anillo tal como ciclopropano, dioxolano u oxaciclopentano.
Cuando un grupo arilalquilo o heteroarilalquilo se describe como opcionalmente sustituido, los sustituyentes pueden estar en la porción alquilo o heteroalquilo o en la porción arilo o heteroarilo del grupo. Los sustituyentes opcionalmente presentes en la porción alquilo o heteroalquilo son los mismos que los descritos anteriormente para los grupos alquilo
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generalmente; los sustituyentes opcionalmente presentes en la porción arilo o heteroarilo son los mismos que los descritos anteriormente para los grupos arilo generalmente.
Los grupos “arilalquilo” como se usa en la presente descripción son grupos hidrocarbilo si ellos no son sustituidos, y se describen por el número total de átomos de carbono en el anillo y el alquileno o enlazador similar. Así, un grupo bencilo es un grupo arilalquilo C7 y feniletilo es un arilalquilo C8.
quot;Heteroarilalquiloquot; como se describió anteriormente se refiere a una entidad que comprende un grupo arilo que se une a través de un grupo enlazador, y difiere de quot;arilalquiloquot; en que al menos un átomo del anillo de la entidad arilo o un átomo en el grupo enlazador es un heteroátomo seleccionado a partir de N, O y S. Los grupos heteroarilalquilo se describen en la presente descripción de conformidad con el número total de átomos en el anillo y enlazador combinados, e incluyen grupos heteroarilo enlazados a través de un enlazador hidrocarbilo tal como un alquileno; y grupos heteroarilo enlazados a través de un enlazador heteroalquilo. Así, por ejemplo, heteroarilalquilo C7 incluiría piridilmetilo y Npirrolilmetoxi.
quot;Alquilenoquot; como se usa en la presente descripción se refiere a un grupo hidrocarbilo divalente; porque es divalente, puede unir a otros dos grupos juntos. Típicamente se refiere a (CH2)n-donde n es 1-8 y preferentemente n es 1-4, aunque donde se especifica, un alquileno además puede sustituirse por otros grupos, y puede ser de otras longitudes, y las valencias abiertas no necesitan estar en los extremos opuestos de una cadena. Así -CH(Me)-y -C(Me)2-2 además puede referirse como alquileno, como puede ser un grupo cíclico tal como ciclopropan-1,1-diilo. Cuando un grupo alquileno está sustituido, los sustituyentes incluyen aquellos típicamente presentes en grupos alquilo como se describe en la presente descripción.
Generalmente, cualquier grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, acilo o arilo o arilalquilo o cualquier heteroforma de uno de esos grupos que se contiene en un sustituyente puede estar opcionalmente el mismo sustituido por sustituyentes adicionales. La naturaleza de estos sustituyentes es similar a los mencionados con respecto a los propios sustituyentes primarios si los sustituyentes no se describen de cualquier otra manera. Así, cuando una modalidad de, por ejemplo, Rx es alquilo, este alquilo puede estar opcionalmente sustituido con los restantes sustituyentes enumerados como modalidades para Rx cuando esto tiene sentido químico y cuando esto no socava el límite de tamaño proporcionado por el alquilo per se; por ejemplo, alquilo sustituido por alquilo o por alquenilo simplemente se extendería el límite superior de átomos de carbono para estas modalidades, y no se incluye. Sin embargo, los alquilos sustituidos por arilo, amino, alcoxi, =O y similares estarían incluidos dentro del alcance de la invención, y los átomos de estos grupos sustituyentes no se cuentan en el número usado para describir el alquilo, alquenilo, etc. siendo el grupo que se describe. Cuando no se especifica ningún número de sustituyentes, cada uno de tales grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, acilo o arilo puede sustituirse con un número de sustituyentes de conformidad con sus valencias disponibles; particularmente, cualquiera de estos grupos puede sustituirse por ejemplo con átomos de flúor en cualquiera o todas sus valencias disponibles.
quot;Heteroformaquot;, como se usa en la presente descripción, se refiere a un derivado de un grupo tal como un alquilo, arilo o acilo, en donde al menos un átomo de carbono del grupo carbocíclico designado se ha reemplazado por un heteroátomo seleccionado de N, O y S. Así las heteroformas de alquilo, alquenilo, alquinilo, acilo, arilo y arilalquilo son heteroalquilo, heteroalquenilo, heteroalquinilo, heteroacilo, heteroarilo y heteroarilalquilo, respectivamente. Se entiende que no más de dos átomos de N, O o S son pirrolidina, pirrolidin-2-ona, pirrol, piridina, pirimidina, octahidropirrolo [3,4 b] piridina, piperazina, pirazina, morfolina, tiomorfolina, imidazol, imidazolidina 2,4-diona, 1,3-dihidrobenzimidazol-2-ona, indol, tiazol, benzotiazol, tiadiazol, tiofeno, 1,1-dióxido de tetrahidrotiofeno, diazepina, triazol, guanidina, diazabiciclo [2.2.1] heptano, 2,5-diazabiciclo [2.2.1] heptano, 2,3,4,4a, 9,9a-hexahidro-1H-β-carbolina, oxirano, oxetano, tetrahidropirano, dioxano, lactonas, aziridina, azetidina, piperidina, lactamas y pueden además abarcar heteroarilos. Otros ejemplos ilustrativos de heteroarilos incluyen, pero no se limitan a, furano, pirrol, piridina, pirimidina, imidazol, bencimidazol y triazol.
Modalidades de los compuestos:
Los compuestos de la invención tienen la Fórmula estructural (II) o (II') como se mostró anteriormente (que incluyen IIa, IIa', IIb, IIb', II-TH y II-TH'). Estos compuestos son típicamente más selectivos para CK2, y son altamente potentes en CK2.
En una modalidad de la Fórmula (II) o (II'), el carbociclilo opcionalmente sustituido es un cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido; el carbociclilalquilo opcionalmente sustituido es un cicloalquilalquilo C4-C10 opcionalmente sustituido; y el heteroalquilo opcionalmente sustituido es un alcoxi C1-C6 opcionalmente sustituido, alquilamino C1-C6 opcionalmente sustituido, o dialquilamino C1-C6 opcionalmente sustituido.
En una modalidad de la Fórmula (II) o (II'), -L-W es -NHR7, -OR7, o -S(O)nR7; n es 0,1, o 2; y R7 es alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilalquilo opcionalmente sustituido, carbociclilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, carbociclilalquilo opcionalmente sustituido o heterociclilalquilo opcionalmente sustituido.
En una modalidad de la Fórmula (II) o (II'), -L-W es -NR7R8; y R7 y R8, }, junto con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un heterociclilo opcionalmente sustituido que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos adicionales como miembros del anillo.
5 En una modalidad de la Fórmula (II) o (II'), -L-W es arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, carbociclilo opcionalmente sustituido o heterociclilo opcionalmente sustituido.
En una modalidad de la Fórmula (II) o (II'), R1A y R1B se seleccionan independientemente de H, alquilo C1-C10
10 opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilalquilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido o un anillo arilo de 5-6 miembros opcionalmente sustituido que contiene hasta dos heteroátomos como miembros de anillo. Preferentemente, el grupo amina -NR1AR1B en los compuestos de Fórmulas (II) o (IIa) y II' o Ha' no es -NH2, -NHMe, o NMe2.
15 Adecuadamente, R1A puede seleccionarse de H, alquilo C1-C4 y acilo C1-C6, donde el alquilo y el acilo están opcionalmente sustituidos. En muchas modalidades, R1A es H; en otras modalidades, es a veces Me, o un alquilo C1-C4
R1A
opcionalmente sustituido. En algunas modalidades, es un grupo acilo C1-C6 opcionalmente sustituido, particularmente uno que se puede escindir fácilmente en condiciones suaves, tales como metoxiacetilo, hidroxiacetilo o
20 un grupo alfa-amino acilo, que pueden actuar como profármacos para los compuestos donde R1A es H.
Frecuentemente, R1A en este grupo amina -NR1AR1B es H, y R1B es un grupo sustituido o no sustituido seleccionado entre alquilo C2-C8, cicloalquilo C3-C8, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo. Típicamente, este arilo es fenilo; heteroarilo se refiere a un anillo de 5-6 miembros que contiene hasta tres heteroátomos 25 seleccionados de N, O y S como miembros del anillo; y heterociclilo se refiere a un anillo de 3-8 miembros que contiene al menos un heteroátomo, y opcionalmente dos heteroátomos de los anillos de 6-8 miembros, como miembros de anillo, donde los heteroátomos se seleccionan de N, O y S; y las versiones alquílicas de éstos (arilalquilo, heteroarilalquilo y heterociclilalquilo) comprenden típicamente el grupo cíclico especificado enlazado a través de un enlazador de alquileno tal como (CH2)1-4 al átomo de nitrógeno de NR1AR1B. En ciertas modalidades, R1B comprende al menos un anillo que
30 tiene 3-8 miembros de anillo.
Ejemplos de grupos R1B adecuados incluyen etilo, isopropilo, t-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, tetrahidrofuranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, fenilo y similares, cada uno de los cuales puede no sustituirse o sustituirse con hasta tres sustituyentes. Algunas modalidades preferidas incluyen ciclopropilo,
35 isopropilo, t-butilo y ciclobutilo.
Ejemplos específicos de grupos R1B sustituidos incluyen 2,2,2 -trifluoroetilo, 2-metoxi-etilo, 2-etoxietilo, metoximetilo, 2aminoetilo, 2-(N-morfolino) etilo, 3-hidroxipropilo, 3-dimetilaminopropilo, 3-metoxipropilo, 2-hidroxietilo, 2-hidroxipropilo, acetilo, benzoilo, fenilo sustituido con -COOH, -COOMe, -COOEt, -CONH2, -CONMe2, y
Las Figuras 1 y 2 ilustran la selectividad mejorada encontrada para los compuestos de Fórmula II. La Figura 1 representa un compuesto de la Fórmula I de la técnica anterior que es un potente inhibidor de CK2. En los ensayos para la inhibición de un panel de 108 quinasas, este compuesto a una concentración de 1 micromolar es un potente inhibidor 45 de muchas de las diversas quinasas. En comparación, la Figura 2 muestra un compuesto similar de Fórmula II, que tiene un grupo amina sustituido como un sustituyente adicional en el anillo de seis miembros del núcleo bicíclico. Este compuesto es más potente como inhibidor de CK2 que el compuesto de apariencia similar en la Figura 1; es menos potente como inhibidor de PIM1; y como muestra el ensayo de panel de quinasa, es menos potente en muchas otras quinasas que el compuesto de la Figura 1. Relativamente pocas quinasas se inhiben en más del 80% con el compuesto
50 sustituido con amina de Fórmula II, cuando se compara con la proporción de inhibidores de quinasa que muestran niveles similares de inhibición por el compuesto no aminado de Fórmula I. Esta selectividad mejorada se observa para una amplia gama de grupos sustituyentes amina, como demuestran los datos de las Tablas 1 y 2 y datos adicionales a lo largo de la solicitud.
55 Las modalidades específicas de los compuestos de la invención incluyen compuestos de Fórmula IIa y/o IIa' :
R2 es H, CH3o CF3; Z3 y Z4 cada uno independientemente representa N o CR5, o CH; donde cada R5 se selecciona independientemente de halo, -CN, -R, -OR, -S(O)nR, -COOR, -CONR2, y -NR2, en donde cada R se selecciona independientemente de H y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, o los dos grupos R, junto con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un H independientemente o alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, y donde dos R en un grupo se pueden tomar juntos para formar un anillo de 5-8 miembros opcionalmente sustituido que contiene hasta dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo.
25 En algunas modalidades de los compuestos de Fórmula (II) y (II') y (IIa) o (IIa'), -L-W es un grupo de la fórmula NH-Ar, donde Ar representa un grupo aromático opcionalmente sustituido. Anillos aromáticos adecuados para este grupo incluyen fenilo, naftilo, piridinilo, pirimidinilo, tienilo (anillo de tiofeno), furanilo, indolilo, benzofuranilo, benzotienilo, benzopirazolilo, bencimidazolilo, benzoxazol y benzotiazol. Los sustituyentes adecuados para estos grupos arilo o heteroarilo incluyen los descritos en la presente descripción como adecuados para tales grupos aromáticos
En algunas modalidades, W es un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido, que contiene típicamente 3-8 átomos en el anillo en una estructura monocíclica, o 8-10 átomos en el anillo en una estructura bicíclica. Los ejemplos incluyen 1,2,3,4-tetrahidronaft-1-ilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y decalina. Estos grupos están opcionalmente sustituidos como se describe en la presente descripción; en algunas modalidades, el anillo de cicloalquilo será sustituido
35 con uno o más grupos (por ejemplo, hasta tres) seleccionados de halo, hidroxi, oxo (=O), COOR, CONR2, SR, -S(O)R, -SO2R, -NR2, hidroxialquilo, -OR, metoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), alquilo C1-C4, donde cada R es independientemente H o alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, y donde dos R en un grupo pueden tomarse juntos para formar un grupo anillo de 5-8 miembros que contiene hasta dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo.
Modalidades particulares de los compuestos de la invención incluyen compuestos que contienen tiofeno de Fórmula (II-Th) y (II-Th'):
donde RTh se selecciona de H, halo, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, CN, S(O)0-2R, -SO2NR2, COOR, CONR2, y C(O)R,
En una modalidad de la Fórmula (IIc), L3 es un enlace covalente; y Y es OR5ao NR5aR6a .
65 Los compuestos de la invención además incluyen los enriquecidos en isótopos de los átomos implicados en las estructuras descritas en la presente descripción. Por ejemplo, se pretende que los compuestos como se describen
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incluyan versiones en donde uno o más átomos de H se enriquecen preferentemente en un isótopo de hidrógeno más pesado (deuterio o tritio). Particularmente, cuando cualquiera de los compuestos anteriores contiene un grupo metilo (Me), puede usarse un grupo metilo enriquecido que contiene deuterio a niveles muy por encima de la abundancia natural. Por ejemplo, -CH3 puede reemplazarse por -CH2D o -CHD2 o -CD3, donde cada D representa deuterio presente en lugar de 1H, e indica que D está presente en lugar de 1H en al menos aproximadamente 50% de las moléculas de una muestra del compuesto. Son de interés particular los compuestos que comprenden -N(R)Me o NMe2, donde Me puede estar presente como CD3. Esta variación de los compuestos descritos en la presente descripción es particularmente interesante debido a que la presencia de CD3en lugar de CH3 puede tener un efecto significativo sobre las velocidades de metabolismo de un grupo N-metilo, así un compuesto que comprende CD3 puede tener propiedades farmacocinéticas mejoradas sobre un compuesto no enriquecido. Como consecuencia, los grupos alquilo descritos en la presente descripción están destinados a incluir en los enriquecidos en deuterio y los compuestos que contienen un grupo metilo en N se consideran específicamente que incluyen un grupo metilo enriquecido con deuterio en N.
Los compuestos de la invención frecuentemente tienen grupos ionizables para poder ser capaces de la preparación como sales. En ese caso, siempre que se haga referencia al compuesto, se entiende en la técnica que además se puede usar una sal farmacéuticamente aceptable. Estas sales pueden ser sales de adición de ácidos que implican ácidos inorgánicos u orgánicos o las sales pueden prepararse, en el caso de formas ácidas de los compuestos de la invención, a partir de bases inorgánicas u orgánicas. Frecuentemente, los compuestos se preparan o usan como sales farmacéuticamente aceptables preparadas como productos de adición de ácidos o bases farmacéuticamente aceptables. Los ácidos y bases farmacéuticamente aceptables adecuadas son bien conocidos en la técnica, tales como ácidos clorhídrico, sulfúrico, bromhídrico, acético, láctico, cítrico o tartárico para formar sales de adición de ácido e hidróxido de potasio, hidróxido de sodio, hidróxido de amonio, cafeína y diversas aminas para formar sales básicas. Los métodos para la preparación de las sales apropiadas están bien establecidos en la técnica. En algunos casos, los compuestos pueden contener tanto un grupo funcional ácido como uno básico, en cuyo caso pueden tener dos grupos ionizados y sin embargo no tienen carga neta.
Utilidad de los compuestos:
En otro aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los compuestos de la invención como los descritos anteriormente, mezclados con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de la invención son útiles como medicamentos, y son útiles para la fabricación de medicamentos, que incluyen medicamentos para tratar las afecciones descritas en la presente descripción, tales como cáncer, afecciones inflamatorias, infecciones, dolor y trastornos inmunológicos.
Los términos quot;trataquot; y quot;tratarquot; tal como se usan en la presente descripción se refieren a mejorar, aliviar, disminuir y eliminar los síntomas de una enfermedad o afección. Una molécula o compuesto candidato descrito en la presente descripción puede estar en una cantidad terapéuticamente eficaz en una formulación o medicamento, que es una cantidad que puede conducir a un efecto biológico, tal como apoptosis de ciertas células (por ejemplo, células cancerosas), reducción de la proliferación de ciertas células, o conducir a mejorar, aliviar, disminuir o por ejemplo eliminar los síntomas de una enfermedad o afección. Los términos además pueden referirse a reducir o detener una velocidad de la proliferación celular (por ejemplo, retardar o detener el crecimiento de tumores) o reducir el número de células cancerosas en proliferación (por ejemplo, retirar parte o todo el tumor).
Estos términos además son aplicables para reducir un título de un microorganismo en un sistema (es decir, célula, tejido, o sujeto) infectado con un microorganismo, reducir la velocidad de propagación microbiana, reducir el número de síntomas o un efecto de un síntoma asociado con la infección microbiana, y/o eliminar las cantidades detectables de los microbios del sistema. Ejemplos de microorganismos incluyen pero no se limitan a virus, bacterias y hongos.
Los compuestos de la invención tienen actividades para modular proteínas quinasas, particularmente actividad CK2 y/o actividad Pim. En algunas modalidades, los compuestos de la invención inhiben específicamente la actividad de CK2, pero no Pim, por ejemplo, más de 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 ó 10 veces la diferencia entre la inhibición de CK2 vs inhibición de Pim. En algunas modalidades, los compuestos de la invención inhiben específicamente la actividad de Pim, pero no de Ck2, por ejemplo, más de 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 ó 10 veces la diferencia entre la inhibición de Pim vs inhibición de CK2. En algunas modalidades, los compuestos de la invención inhiben la actividad de CK2 así como de Pim.
Los compuestos de la invención pueden usarse para modular la actividad de CK2 y/o Pim, por ejemplo, inhibir la actividad de CK2 y/o Pim en una célula, por ejemplo, in vivo o in vitro. En algunas modalidades, los compuestos de la invención pueden usarse para modular la actividad de CK2, por ejemplo, inhibir la actividad de CK2 sin interferir esencialmente o cambiar la actividad de Pim. En algunas modalidades, los compuestos de la invención pueden usarse para modular la actividad de Pim, por ejemplo, inhibir la actividad de Pim sin interferir esencialmente o cambiar la actividad de CK2. En algunas modalidades, los compuestos de la invención pueden usarse para modular la actividad de CK2 y Pim, por ejemplo, inhibir la actividad de CK2 y Pim.
Los compuestos de la invención son así útiles para tratar infecciones por ciertos patógenos, que incluyen protozoos y
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virus. Los compuestos pueden usarse así en procedimientos para tratar trastornos protozoarios tales como parasitosis de protozoos, que incluyen infección por protozoos parasitarios responsables de trastornos neurológicos tales como esquizofrenia, paranoia y encefalitis en pacientes inmunocomprometidos, así como la enfermedad de Chagas. Los compuestos pueden usarse además para tratar diversas enfermedades virales, que incluyen virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (HIV-1), virus del papiloma humano (HPV), virus del herpes simple (HSV), virus Epstein-Barr (EBV), citomegalovirus humano, hepatitis C y B, virus de la gripe, virus de la enfermedad de Borna, adenovirus, coxsackie virus, coronavirus y virus de la varicela zoster. Los métodos para tratar estos trastornos comprenden administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula II o Formula II'.
Como se usa en la presente descripción, el término quot;apoptosisquot; se refiere a un programa de autodestrucción o suicidio de células intrínsecas. En respuesta a un estímulo desencadenante, las células sufren una cascada de eventos que incluyen el encogimiento de las células, protuberancias de las membranas celulares y la condensación cromática y la fragmentación. Estos eventos culminan en la conversión celular a grupos de partículas unidas a membranas (cuerpos apoptóticos), que son posteriormente engullidos por macrófagos.
Los compuestos de la invención como se describió anteriormente pueden usarse en los métodos para identificar una molécula candidata que interactúa con una CK2. Tales métodos comprende poner en contacto una composición que contiene una proteína CK2 y un compuesto de la invención descrito en la presente descripción con una molécula candidata y determinar si la cantidad del compuesto de la invención descrito en la presente descripción que interactúa con la proteína se modula, mediante lo cual una molécula candidata que modula la cantidad de la molécula descrita en la presente descripción que interactúa con la proteína se identifica como una molécula candidata que interactúa con la proteína.
Los compuestos de la invención como se describió anteriormente son además útiles para modular ciertas actividades de proteína quinasa. Las proteínas quinasas catalizan la transferencia de un fosfato gamma de trifosfato de adenosina a un aminoácido serina o treonina (proteína quinasa serina/treonina), aminoácido tirosina (tirosina proteína quinasa), tirosina, serina o treonina (proteína quinasa de doble especificidad) o aminoácido histidina (proteína quinasa histidina) en un sustrato de péptido o proteína. Un sistema que comprende una proteína quinasa puede ponerse así en contacto con un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción en una cantidad eficaz para modular (por ejemplo, inhibir) la actividad de la proteína quinasa. En algunas modalidades, la actividad de la proteína quinasa es la actividad catalítica de la proteína (por ejemplo, catalizar la transferencia de un fosfato gamma de trifosfato de adenosina a un sustrato de péptido o proteína). En ciertas modalidades, los métodos para identificar una molécula candidata que interactúa con una proteína quinasa comprenden: poner en contacto una composición que contiene una proteína quinasa y un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción con una molécula candidata en condiciones en las que el compuesto y la proteína quinasa interactúan, y se describe en la presente descripción que interactúa con la proteína quinasa se modula con relación a una interacción de control entre el compuesto y la proteína quinasa sin la molécula candidata, por lo que una molécula candidata que modula la cantidad del compuesto que interactúa con la proteína quinasa con respecto a la interacción de control se identifica como una molécula candidata que interactúa con la proteína quinasa. Los sistemas en tales modalidades pueden ser un sistema libre de células o un sistema que comprende células (por ejemplo, in vitro). La proteína quinasa, el compuesto o la molécula en algunas modalidades se asocia con una fase sólida. En ciertas modalidades, la interacción entre el compuesto y la proteína quinasa se detecta a través de un marcador detectable, donde en algunas modalidades la proteína quinasa comprende un marcador detectable y en ciertas modalidades el compuesto comprende un marcador detectable. La interacción entre el compuesto y la proteína quinasa a veces se detecta sin un marcador detectable.
Se proporcionan además composiciones de la materia que comprenden una proteína quinasa y un compuesto de la invención tal como se describe en la presente descripción. En algunas modalidades, la proteína quinasa en la composición es una proteína quinasa serina-treonina. En algunas modalidades, la proteína quinasa en la composición es, o contiene una subunidad (por ejemplo, subunidad catalítica, dominio SH2, dominio SH3) de, CK2. En ciertas modalidades, la composición está libre de células y a veces la proteína quinasa es una proteína recombinante.
La proteína quinasa puede ser de cualquier fuente, tal como por ejemplo, células de un mamífero, mono o humano. Ejemplos de proteína quinasas serina-treonina que pueden inhibirse o potencialmente inhibirse por los compuestos descritos en la presente descripción incluyen sin limitación versiones humanas de CK2, o CK2α2. Una proteína quinasa serina treonina a veces es un miembro de una subfamilia que contiene uno o más de los siguientes aminoácidos en posiciones correspondientes a las enumeradas en CK2 humana: leucina en posición 45, metionina en posición 163 e isoleucina en posición 174. Las secuencias de nucleótido y aminoácido para proteínas quinasas y reactivos están públicamente disponibles (por ejemplo, World Wide Web URLs www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez/ y www.Invitrogen.com, visitadas cada una de ellas el 2 de diciembre de 2009).
Los compuestos de la invención pueden usarse además en los métodos para tratar una afección relacionada con la proliferación celular aberrante. Por ejemplo, los métodos para tratar una afección proliferativa celular en un sujeto comprenden administrar un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción a un sujeto que lo necesite en una cantidad eficaz para tratar la afección proliferativa celular. El sujeto puede ser un animal de investigación (por ejemplo, roedor, perro, gato, mono), que opcionalmente contiene un tumor tal como un tumor de xenoinjerto (por ejemplo, tumor humano), por ejemplo, o puede ser un ser humano. Una afección proliferativa celular a
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veces es un tumor, por ejemplo, tumor sólido o circulante o cáncer no tumoral, que incluyen pero sin limitarse a, cánceres colorrectal, mama, pulmón, hígado, páncreas, ganglio linfático, colon, próstata, cerebro, cabeza y cuello, piel, hígado, riñón, sangre y corazón (por ejemplo, (por ejemplo, leucemia, linfoma, carcinoma).
Los compuestos y composiciones de la invención pueden usarse solos o en combinación con agentes anticancerígenos
o de otro tipo, tales como agentes paliativos, que típicamente se administran a un paciente en tratamiento por cáncer, como se describe además en la presente descripción.
Los compuestos de la invención se usan además en los métodos para tratar una afección relacionada con la inflamación
o el dolor. Por ejemplo, un método para tratar el dolor en un sujeto comprende administrar un compuesto de la invención descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite en una cantidad eficaz para tratar el dolor. Un método para tratar la inflamación en un sujeto comprende administrar un compuesto de la invención descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite en una cantidad eficaz para tratar la inflamación. El sujeto puede ser un animal de investigación (por ejemplo, (por ejemplo, roedor, perro, gato, mono), por ejemplo, o puede ser un humano. Las afecciones asociadas con la inflamación y dolor incluyen sin limitación reflujo ácido, acidez del estómago, acné, alergias y sensibilidad a alergeno, enfermedad de Alzheimer, asma, aterosclerosis, bronquitis, carditis, enfermedad celíaca, dolor crónico, enfermedad de Crohn, cirrosis, colitis, demencia, dermatitis, diabetes, ojos secos, edema, enfisema, eczema, fibromialgia, gastroenteritis, gingivitis, enfermedad cardiaca, hepatitis, presión arterial alta, resistencia a la insulina, cistitis intersticial, artritis reumatoide, síndrome metabólico (síndrome X), miositis, nefritis, obesidad, osteopenia, glomerulonefritis (GN), enfermedad renal quística juvenil y nefronoftisis tipo I (NPHP), osteoporosis, enfermedad de Parkinson, demencia de Guam-Parkinson, parálisis supranuclear, enfermedad de Kuf y enfermedad de Pick, así como deterioro de la memoria, isquemia cerebral, y esquizofrenia, enfermedad periodontal, poliarteritis, policondritis, psoriasis, esclerodermia, sinusitis, síndrome de Sjögren, colon espástico, candidiasis sistémica, tendinitis, infecciones del tracto urinario, vaginitis y cáncer inflamatorio (por ejemplo, cáncer de mama inflamatorio).
Se conocen métodos para determinar y monitorear los efectos de los compuestos de la presente descripción sobre el dolor o la inflamación. Por ejemplo, los comportamientos de dolor estimulados con formalina en animales de investigación pueden monitorearse después de la administración de un compuesto descrito en la presente descripción para evaluar el tratamiento del dolor (por ejemplo, Li y otros, Pain 115(1-2): 182-90 (2005)). Además, la modulación de moléculas pro-inflamatorias (por ejemplo, IL-8, GRO-alfa, MCP-1, TNFalfa y iNOS) puede monitorearse después de la administración de un compuesto descrito en la presente descripción para evaluar el tratamiento de la inflamación (por ejemplo, Parhar y otros, Int J Colorectal Dis. 22(6): 601-9 (2006)), por ejemplo. Así, los métodos para determinar si un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción reduce la inflamación o el dolor comprende poner en contacto un sistema con dicho compuesto en una cantidad eficaz para modular (por ejemplo, inhibir) la actividad de una señal de dolor o señal de inflamación.
Los métodos para identificar un compuesto que reduce la inflamación o el dolor comprenden: poner en contacto un sistema con un compuesto de Fórmula II o Fórmula II'; y detectar una señal de dolor o señal de inflamación, por lo que un compuesto que modula la señal de dolor en relación con una molécula de control se identifica como un compuesto que reduce la inflamación del dolor. Ejemplos no limitativos de señales de dolor son comportamientos de dolor estimulados con formalina y ejemplos de señales de inflamación incluyen sin limitación un nivel de una molécula proinflamatoria. Los compuestos de la invención pueden usarse así en métodos para modular la angiogénesis en un sujeto, y métodos para tratar una afección asociada con angiogénesis aberrante en un sujeto.
Además se ha demostrado que CK2 juega un papel en la patogénesis de la aterosclerosis, y puede prevenir la aterogénesis mediante el mantenimiento de flujo de tensión de cizallamiento laminar. CK2 juega un papel en la vascularización, y se ha demostrado que media la activación inducida por hipoxia de histona deacetilasas (HDAC). CK2 además se implica en enfermedades relacionadas con el músculo esquelético y el tejido óseo, por ejemplo, hipertrofia de cardiomiocitos, insuficiencia cardíaca, señalización de insulina deteriorada y resistencia a la insulina, hipofosfatemia y mineralización inadecuada de la matriz ósea.
Así, en un aspecto, los compuestos de la invención pueden usarse para tratar cada una de estas afecciones. Dicho tratamiento comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz de un inhibidor de CK2, tal como un compuesto de Fórmula II o Fórmula II' como se describe en la presente descripción.
Los compuestos de la invención además pueden usarse en métodos para modular una respuesta inmune en un sujeto, y los métodos para tratar una afección asociada con una respuesta inmune aberrante en un sujeto. Así, un método para determinar si un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción modula una respuesta inmune comprende poner en contacto un sistema con un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción en una cantidad eficaz para modular (por ejemplo, inhibir) una respuesta inmune o una señal asociada con una respuesta inmune. Las señales asociadas con la actividad inmunomoduladora incluyen, por ejemplo, la estimulación de la proliferación de células, supresión o inducción de citoquinas, que incluyen, por ejemplo, interleucinas, interferón-γ y TNF. Los métodos para evaluar la actividad inmunomoduladora son conocidos en la técnica.
Los métodos para tratar una afección asociada con una respuesta inmune aberrante en un sujeto comprenden administrar un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción a un sujeto que lo necesite en
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una cantidad eficaz para tratar la afección. Las afecciones caracterizadas por una respuesta inmune aberrante incluyen, sin limitación, rechazo de trasplante de órganos, asma, trastornos autoinmunes, que incluyen artritis reumatoide, esclerosis múltiple, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico, esclerodermia, polimiositis, enfermedad mixta de tejido conectivo (MCTD), enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. En ciertas modalidades, puede modularse una respuesta inmune mediante la administración de un compuesto en la presente descripción en combinación con una molécula que modula (por ejemplo, inhibe) la actividad biológica de un miembro de la vía mTOR o miembro de una vía relacionada (por ejemplo, mTOR, PI3 quinasa, AKT). En ciertas modalidades, la molécula que modula la actividad biológica de un miembro de una vía de mTOR o miembro de una vía relacionada es la rapamicina. En ciertas modalidades, se puede proporcionar un compuesto de la invención descrito en la presente descripción en una composición en combinación con una molécula que modula la actividad biológica de un miembro de la vía mTOR o miembro de una vía relacionada, tal como rapamicina.
Composiciones y Vías de Administración
En otro aspecto, la invención proporciona composiciones farmacéuticas (es decir, formulaciones). Las composiciones farmacéuticas pueden comprender un compuesto de cualquiera de las Fórmulas (II), (II'), (IIa), (IIa'), (IIb), (IIb'), (II-Th) y (II-Th'), Tal como se describe en la presente descripción, que se mezcla con al menos un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. Frecuentemente, la composición comprende al menos dos excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables.
Aunque las composiciones de la presente invención se usarán típicamente en la terapia para pacientes humanos, además pueden usarse en medicina veterinaria para tratar enfermedades similares o idénticas. Las composiciones pueden, por ejemplo, usarse para tratar mamíferos, que incluyen, pero no se limitan a, primates y mamíferos domesticados. Las composiciones pueden, por ejemplo, usarse para tratar herbívoros. Las composiciones de la presente invención incluyen isómeros geométricos y ópticos de uno o más de los fármacos, en donde cada fármaco es una mezcla racémica de isómeros o uno o más isómeros purificados.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para su uso en la presente invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos se contienen en una cantidad eficaz para lograr el propósito pretendido. La determinación de las cantidades eficaces está dentro de la capacidad de los expertos en la técnica, especialmente a la luz de la descripción detallada proporcionada en la presente descripción.
Los compuestos de la presente invención pueden existir como sales farmacéuticamente aceptables. La presente invención incluye tales sales. El término quot;sales farmacéuticamente aceptablesquot; significa que incluye sales de compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, en dependencia de las entidades sustituyentes particulares encontradas en los compuestos descritos en la presente descripción. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, pueden obtenerse sales de adición de bases poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea pura
o en un disolvente inerte adecuado. Se incluyen sales de adición de bases tales como sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, o sal de magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, pueden obtenerse sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido aceptables incluyen los derivados de ácidos inorgánicos como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, hidriódico o fosforoso, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos por ejemplo, acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico y metanosulfónico. Se incluyen además sales de aminoácidos tales como arginato, y sales de ácidos orgánicos como glucurónico o galacturónico (ver, por ejemplo, Berge y otros, quot;Pharmaceutical Saltsquot;, Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 119). Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen funciones básicas y ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición de base o de ácido.
Ejemplos de formas de sal aplicables incluyen hidrocloruros, hidrobromuros, sulfatos, metanosulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartratos (por ejemplo (+)-tartratos, (-)-tartratos o sus mezclas, que incluyen mezclas racémicas), succinatos, benzoatos Y sales con aminoácidos tales como ácido glutámico. Estas sales pueden prepararse por métodos conocidos por los expertos en la técnica.
Las formas neutras de los compuestos se regeneran preferentemente poniendo en contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de la sal en ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolventes polares.
Los ésteres farmacéuticamente aceptables en la presente invención se refieren a ésteres no tóxicos, preferentemente los ésteres de alquilo tales como ésteres de metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo o pentilo, de los cuales se prefiere el éster metílico. Sin embargo, si se desea, pueden emplearse otros ésteres tales como fenil-alquilo C1-5. Los derivados éster de ciertos compuestos pueden actuar como profármacos que, cuando se absorben en el torrente
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sanguíneo de un animal de sangre caliente, pueden escindirse de tal manera que liberen la forma del fármaco y permitan que el fármaco proporcione una eficacia terapéutica mejorada.
Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como formas solvatadas, que incluyen formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a formas no solvatadas y se incluyen dentro del alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y pretenden estar dentro del alcance de la presente invención.
Cuando se usan como agentes terapéuticos, los compuestos descritos en la presente descripción se administran frecuentemente con un portador fisiológicamente aceptable. Un portador fisiológicamente aceptable es una formulación a la que puede añadirse el compuesto para disolverlo o de cualquier otra manera facilitar de otro modo su administración. Ejemplos de portadores fisiológicamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, agua, solución salina, solución salina fisiológicamente tamponada.
A menos que se indique de cualquier otra manera, las estructuras representadas en la presente descripción además se entiende que incluyen compuestos que difieren solamente en presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras excepto el reemplazo de un hidrógeno por un deuterio o tritio, o el reemplazo de un carbono por carbono enriquecido con 13C o 14C están dentro del alcance de esta invención. Los compuestos de la presente invención además pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen tales compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden radiomarcarse con isótopos radiactivos, tales como por ejemplo tritio (3H), yodo 125 (125I) o carbono 14 (14C). Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sean radiactivos o no, se incluyen dentro del alcance de la presente invención.
Un compuesto de la presente invención puede formularse como una composición farmacéutica. Una composición farmacéutica de ese tipo puede entonces administrarse por vía oral, parenteral, mediante pulverización por inhalación, por vía rectal o por vía tópica en formulaciones de unidades de dosificación que contienen portadores, adyuvantes y vehículos convencionales no tóxicos farmacéuticamente aceptables, según se desee. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales del portador que produce una forma de dosificación única varía dependiendo del huésped mamífero tratado y del modo particular de administración. La administración tópica además puede implicar el uso de administración transdérmica tales como parches transdérmicos o dispositivos de iontoforesis. El término parenteral, como se usa en la presente descripción, incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión. La formulación de fármacos se discute, por ejemplo, en , Hoover, John E., REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Mack Publishing Co., Easton, Pa.; 1975. Otros ejemplos de formulaciones de fármacos pueden encontrarse en Liberman, H. A. y Lachman, L., Eds., PHARMACEUTICAL DOSAGE Forms, Marcel Decker, Nueva York, N.Y., 1980.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas o las oleaginosas inyectables estériles pueden formularse de conformidad con la técnica conocida usando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril puede ser además una solución o suspensión estéril inyectable en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el agua, solución de Ringer y la solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites fijos estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este propósito puede emplearse cualquier aceite fijo blando que incluyen mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables. Pueden usarse dimetilacetamida, tensioactivos que incluyen detergentes iónicos y no iónicos, polietilenglicoles. Además son útiles mezclas de disolventes y agentes humectantes tales como los discutidos anteriormente.
Los supositorios para la administración rectal del fármaco pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado tal como manteca de cacao, mono o triglicéridos sintéticos, ácidos grasos y polietilenglicoles que se venden a temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura rectal y por lo tanto, se fundirá en el recto y liberará el fármaco.
Cualquier formulación adecuada de un compuesto descrito anteriormente puede prepararse para la administración por métodos conocidos en la técnica. La selección de excipientes o portadores útiles puede lograrse sin experimentación excesiva, basada en la vía de administración deseada y las propiedades físicas del compuesto que se administra.
Puede usarse cualquier vía de administración adecuada, según se determine por un médico que lo trata, que incluyen, pero no se limitan a, vías oral, parenteral, intravenosa, intramuscular, transdérmica, tópica y subcutánea. En dependencia del sujeto que se trata, del modo de administración, y del tipo de tratamiento deseado --por ejemplo, prevención, profilaxis, terapia; los compuestos se formulan de manera consonante con estos parámetros. La preparación de formulaciones adecuadas para cada vía de administración se conoce en la técnica. Un resumen de tales métodos y técnicas de formulación se encuentra en Remington's Pharmaceutical Sciences, última edición, Mack Publishing Co., Easton, PA. La formulación de cada sustancia o de la combinación de dos sustancias incluirá
frecuentemente un diluyente así como, en algunos casos, adyuvantes, tampones y conservantes. Las sustancias que se administran pueden administrarse además en composiciones liposomales o como microemulsiones.
Para la inyección, las formulaciones pueden prepararse en formas convencionales como soluciones o suspensiones
5 líquidas o como formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en líquido antes de la inyección o como emulsiones. Los excipientes adecuados incluyen, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa y glicerol. Tales composiciones además pueden contener cantidades de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsionantes, y agentes tamponadores de pH, tales como, por ejemplo, acetato de sodio y monolaurato de sorbitán, y así sucesivamente.
10 Diversos sistemas de liberación sostenida para fármacos además se han diseñado, y pueden aplicarse a los compuestos de la invención. Ver, por ejemplo, patente de los Estados Unidos núm. 5,624,677.
La administración sistémica además puede incluir métodos relativamente no invasivos tales como el uso de
15 supositorios, parches transdérmicos, suministro transmucoso y administración intranasal. La administración oral además es adecuada para los compuestos de la invención. Las formas adecuadas incluyen jarabes, cápsulas, tabletas, como se entiende en la técnica.
Para la administración a sujetos humanos o animales, la dosificación apropiada de un compuesto descrito anteriormente
20 frecuentemente es de 0,01-15 mg/kg y a veces de 0,1-10 mg/kg. Además de estos agentes anticancerígenos destinados a actuar contra las células cancerosas, además se prevén las terapias de combinación, que incluyen el uso de agentes de protección o adyuvantes, que incluyen: agentes citoprotectores tales como amifostina, dexrazoxano y mesna, fosfonatos tales como parmidronato y ácido zoledrónico, y factores de estimulación tales como la epoetina, darbepoetina, filgrastim, PEG filgrastim y el sargramostim.
EJEMPLOS
Los siguientes ejemplos ilustran la invención. Los compuestos fuera del alcance de las presentes reivindicaciones se incluyen como modalidades de referencia.
30 Ejemplo 1. Síntesis de 5-cloropirazolo[1,5-a] pirimidin-7-amina
40 Al frasco de reacción se añadió 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina (3 g, 16 mmol) junto con una solución de hidróxido de amonio (48 mL). La reacción heterogénea se calentó a reflujo a 85°C durante 12 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se filtró, se lavó con agua y se secó al vacío durante la noche. El producto, 5cloropirazolo[1,5-a] pirimidin-7-amina, se recogió como un sólido blanquecino con un rendimiento del 88%. LCMS
45 (M+1=169).
Ejemplo 2. Síntesis de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilcarbamato de terc-butilo
55 Al frasco de reacción se añadió 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (2,4 g, 14,1 mmol) al diclorometano (35 mL) junto con dicarbonato de di-terc-butilo (3,7 g, 17 mmol), trietilamina (2,4 ml, 17 mmol) y DMAP (100 mg, 0,8 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas, después se diluyó con DCM, se lavó con solución saturada de NaHCO3 (3x) seguido de lavado con salmuera. La capa orgánica se aisló, se secó sobre MgSO4, anhidro, se filtró y
60 se evaporó hasta sequedad. El producto, 5-cloropirazolo [1,5-a]pirimidin-7-ilcarbamato de terc-butilo, se recogió como un sólido blanquecino con un rendimiento del 98%. LCMS (M-t-Butilo =213)
Tabla A1. Datos de bioactividad para algunos compuestos de la Fórmula II y Formula II'.
Compuesto
AB: MV4-11 AB: MDAMB453 AB: K562 AB: BxPC3 AB: SUM149PT CK2: IC50 (uM) PIM1: IC50 (uM) PIM2: IC50 (uM)
P49
0,185 1,958 0,437 4,945 4,495 lt; 0,01 0,6565 gt; 2,5000
Q49
0,1647 2,0638 1,6438
R49
3,608 7,7 5,129 9,45 4,6 lt;0,01 2,0575 1,8456
S49
0,1367 0,9177 1,3934
T49
0,1739 gt; 2,5000 1,4327
U49
lt;0,01 1,4455 1,4379
V49
0,2072 gt; 2,5000 gt; 2,5000
W49
0,0513 1,2533 gt; 2,5000
X49
0,7502 gt; 2,5000 gt; 2,5000
Y49
1,759 1,069 1,723 7,592 1,693 lt;0,01 0,4414 0,5759
Z49
gt;10 14,3 gt;10 26,465 gt;30 lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 2,5000
A50
0,764 0,5235 1,0907
25 Tabla A2. Datos de bioactividad para algunos compuestos de Fórmula II y Fórmula II'
Compuesto
AB: MDAMB453 AB: BxPC3 AB: SUM149PT CK2: IC50 15um ATP) (Brij PIM2: IC50 (5um ATP)
B50
1,047 2,341 1,043 0,00072
C50
1,552 1,564 1,922 0,00216 gt; 2,5000
D50
lt; 0,12 lt; 0,12 0,154 0,00038
E50
0,842 3,96 1,595 0,00081 gt; 2,5000
F50
3,459 2,958 2,054 0,00663
G50
1,483 1,626 2,073 0,00359 1,3652
H50
3,507 3,876 4,996 0,00412 1,2984
Pueden hacerse modificaciones a lo anterior sin apartarse de los aspectos básicos de la invención. Aunque la invención se ha descrito con detalle sustancial con referencia a una o más modalidades específicas, los expertos en la técnica reconocerán que pueden hacerse cambios en las modalidades específicamente descritas en esta solicitud.
los carbonos serían CH), de modo que los sustituyentes opcionales sobre W en tales compuestos están frecuentemente, cuando están presentes, situados en las posiciones 3, 4 ó 5 de un anillo de fenilo (suponiendo que la posición 1 se une a L), o a las posiciones 4 o 5 de un anillo de tienilo cuando L se fija a la posición 2 y en la posición 5
50 del grupo tienilo cuando L se fija a la posición 3. Ejemplos de estos grupos W incluyen:
donde cada A representa la presencia de un sustituyente opcional (o más de uno donde la valencia del anillo permite 65 más) sobre un carbono que no tiene H explícito fijo.
25 5
Donde W es un grupo aromático, una amplia gama de sustituyentes se toleran bien y proporcionan altos niveles de actividad quinasa. Los sustituyentes adecuados incluyen los descritos en la presente descripción como adecuados para la colocación en grupos aromáticos en general. Algunos de los sustituyentes adecuados para estos grupos aromáticos W incluyen halo (especialmente F o Cl), alquilo (por ejemplo, alquilo C1-C4, tal como metilo, etilo, isopropilo o ciclopropilo); alcoxi (especialmente alquiloxi C1-C4); haloalquilo (por ejemplo, CF3, -CH2CF3); haloalcoxi (por ejemplo -OCF3, -OCF2H, OCH2CF3, y similares); CN, -OH, alquinilo (por ejemplo, -CCH, CCMe, y similares); heterociclilmetilo (por ejemplo, N-piperidinilmetilo, N-pirrolidinilmetilo, N-morfolinilmetilo, etc.); hidroximetilo, aminometilo, dimetilaminometilo, metilaminometilo; alcoxi C1-C4 sustituido tal como metoxietoxi, etoximetoxi, trifluoroetoxi, 2-(Nmorfolino)etoxi, 2-(N-pirrolidinil)etoxi, 2-(piperidinil)etoxi, y similares; grupos acilo de la fórmula -C(O)-X donde X representa -OR, -NR2, o -R, donde cada R se selecciona independientemente de H o un miembro opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo C1-C4, cicloalquilo o heterociclilo de 3-8 miembros, y arilo o heteroarilo de 5-6 miembros que contiene hasta 3 heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros de anillo, y donde dos R en un grupo (por ejemplo, dos R de NR2) pueden estar juntos para formar un anillo de 5-8 miembros opcionalmente sustituido que contiene hasta dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros dl anillo; grupos heterocíclicos tales como morfolina, tetrahidrofurano, piperidina, pirrolidina, 4-Me-N-piperazinilo, N-piperazinilo, 4-acetilN-piperazinilo y similares.
Comúnmente, un grupo aromático W tendrá 1-2 sustituyentes, o será no sustituido; y comúnmente los sustituyentes, cuando están presentes, se colocan como se describió anteriormente, de manera que los carbonos del anillo adyacentes a donde L se une no están sustituidos (CH). Cuando L es distinto de un enlace, los sustituyentes en W pueden estar en cualquier posición, y frecuentemente estarán en las posiciones orto y/o para hasta el punto de unión de W aL.
Alternativamente, W puede ser un grupo heterocíclico tal como piperidinilo, morfolinilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, tiomorfolinilo, piperazinilo, tiolanilo y similares, cada uno de los cuales puede estar no sustituido o sustituido con hasta cuatro sustituyentes. Los sustituyentes adecuados para estos grupos incluyen los descritos en la presente descripción como adecuados para los grupos heterocíclicos. Tenga en cuenta que incluso cuando L es NR o NH, W puede ser un grupo heterocíclico tal como 1-piperidinilo o 4-morfolinilo donde L se enlaza a un heteroátomo (N) del grupo heterocíclico así como a C del grupo heterocíclico.
Donde L es NH, W puede ser además arilalquilo o cicloalquilalquilo o heterociclilalquilo, y la porción alquilo de W puede ser por ejemplo C1-C4. Cuando L comprende una porción alquilo, puede ser una cadena lineal (por ejemplo, etileno, propileno, butileno), o puede ser una cadena alquileno sustituida, resultando en la formación de un enlazador de carbono quiral potencialmente. Donde L es un grupo quiral de este tipo, por ejemplo cuando L es -CH(R)-o -CH2-CH(R)donde R no es H (por ejemplo, R es Metilo o etilo, L puede estar o en una configuración R o una configuración S , donde se usan dichos términos en su sentido estereoquímico convencional, o puede estar presente como una mezcla de isómeros, que incluyen una mezcla racémica. En algunas modalidades, tal centro quiral presente en L estará en la configuración S . En otras modalidades, puede estar en la configuración R.
Alternativamente, W puede ser un grupo de la fórmula -NR7R8, -OR7, S(O)nR7, CONR7R8, o CR7R8R9, donde cada R7 y R8 R9
y se selecciona independientemente de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido y heteroarilalquilo opcionalmente sustituido; o R7y R8 juntos con el N de -NR7R8 pueden formar un sistema de anillo heterocíclico o heteroaromático de 510 miembros opcionalmente sustituido que opcionalmente contiene un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como un miembro de anillo.
En modalidades donde W es -NR7R8, L es frecuentemente un enlace, y R7 y R8 juntos con el N de -NR7R8 pueden formar un sistema de anillos heterocíclicos o heteroaromáticos de 5-10 miembros opcionalmente sustituidos que opcionalmente contiene un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como un miembro de anillo. Estos anillos adecuados incluyen, por ejemplo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, tiomorfolinilo, diazepinilo y morfolinilo, cada uno de los cuales puede sustituirse en la medida en que la sustitución forme estructuras relativamente estables en agua. Los sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo, oxo , oxo (=O), alquilo C1-C4, -OH, -CN, halo (especialmente F o Cl), COOR, CONR2, SR, -S(O)R, -SO2R, -NR2, hidroxialquilo, -OR, metoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), en donde cada R es independientemente H o alquilo C1-C4, y donde dos R en un grupo se pueden tomar juntos para formar un anillo de 5-8 miembros opcionalmente sustituido que contiene hasta dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros de anillo.
En algunas modalidades de los compuestos de Fórmula (II) y (II') y (IIa) o (IIa'), -L-W es un grupo de la fórmula -NH-Ar, donde Ar representa un grupo aromático opcionalmente sustituido. Los anillos aromáticos adecuados para este grupo incluyen fenilo, naftilo, piridinilo, pirimidinilo, tienilo (anillo de tiofeno), furanilo, indolilo, benzofuranilo, benzotienilo, benzopirazolilo, bencimidazolilo, benzoxazol, benzotiazol y similares. Los sustituyentes adecuados para estos grupos arilo o heteroarilo incluyen los descritos en la presente descripción como adecuados para tales grupos aromáticos.
En algunas modalidades, W es un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido, que contiene típicamente 3-8 átomos en el anillo en una estructura monocíclica, o 8-10 átomos en el anillo en una estructura bicíclica. Los ejemplos incluyen
1,2,3,4-tetrahidronaft-1-ilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, decalina y similares. Estos grupos están opcionalmente sustituidos como se describe en la presente descripción; en algunas modalidades, el anillo de cicloalquilo estará sustituido con uno o más grupos (por ejemplo, hasta tres) seleccionados de halo, hidroxi, oxo (=O), COOR, CONR2, SR, -S(O)R, -SO2R, -NR2, hidroxialquilo, -OR, metoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), alquilo C1-C4, donde
5 cada R es independientemente H o alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido y donde dos R en un grupo pueden tomarse juntos para formar un anillo de 5-8 miembros opcionalmente suistituido que contiene hasta dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo.
Modalidades particulares de los compuestos de la invención incluyen compuestos que contienen tiofeno de Fórmula (II10 Th) y (II-Th'):
25 donde Rth se selecciona de H, halo, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, CN, S(O)0-2R,-SO2NR2, COOR, CONR2, y C(O)R, Donde cada R es independientemente H, halo, CN, o un miembro opcionalmente sustituido seleccionado del grupo que consiste en alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilamino C1-C6, dialquilamino C1-C6, cicloalquilo C3-C8, Cicloalquilalquilo
30 C4-C10, heterociclilo C5-C8, heterociclilalquilo C6-C10, arilo, arilalquilo, heteroalquilo C5-C6 y heteroalquilalquilo C6-C10; y dos R en el mismo átomo o átomos conectados adyacentes pueden formar un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido que puede contener un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como miembro del anillo; y otras características estructurales son como se definieron para la Fórmula IIa anteriormente.
35 El anillo de tienilo (tiofeno) en las Fórmulas II-Th y II-Th' puede unirse al núcleo bicíclico en la posición o 2 o en la posición 3 del anillo de tiofeno, cuando la posición sustituida con Th se define como la posición 5, y el azufre del anillo es la posición 1. En algunas modalidades, la conexión está en la posición 2 del grupo tienilo, y en modalidades alternativas, la conexión está en la posición 3 del grupo tienilo.
40 En estos compuestos de Fórmulas II-Th y II-Th', R2 y R4 son frecuentemente ambos H.
En los compuestos anteriores de Fórmulas II-Th y II-Th', X es preferentemente NH.
45 En los compuestos anteriores de Fórmulas II-Th y II-Th', Y es frecuentemente O.
En los compuestos anteriores de Fórmulas II-Th y II-Th', Z3 es frecuentemente N.
En los compuestos anteriores de Fórmulas II-Th y II-Th', Z4 puede ser CH o N.
50 En los anteriores compuestos de Fórmulas II-Th y II-Th', R1B puede ser alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilalquilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido o un anillo de arilo de 5-6 miembros opcionalmente sustituido que contiene hasta dos heteroátomos como miembros del anillo. En algunas modalidades,
55 R1B es un cicloalquilo C3-C6 o un grupo heterocíclico de 3-6 miembros tal como piperidina o un grupo alquilo C1-C3 sustituido con uno de estos anillos, y está opcionalmente sustituido. Las modalidades específicas de R1Bincluyen ciclopropilo, ciclopropilmetilo, 4-piperidinilo y 4-piperidinilo sustituido, por ejemplo 4-piperidinilo sustituido con un grupo acilo, tal como acetilo, en N-1. Otras modalidades incluyen fenilo opcionalmente sustituido.
60 En estos compuestos, RTH puede ser halo (F, Cl, Br), CF3, CN, alquilo C1-C6, alquilo C1-C3 sustituido con heterociclilo o heterociclilamino, COOR, o COONR2.
En una modalidad de la presente invención, los compuestos de Fórmula (IIa) o (IIa') tienen la Fórmula estructural (IIb) o (IIb'):
20 en donde R2 y R4 son independientemente H, CH3 o CF3; Z4 es No CH; -L-M es -NR8AR7, -NHR7, -OR7, o -S(O)nR7; n es 0, 1,o 2;y
25 R7 es alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilalquilo opcionalmente sustituido, carbociclilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, carbociclilalquilo opcionalmente sustituido o heterociclilalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, carbociclilo opcionalmente sustituido, o heterociclilo opcionalmente sustituido;
30 R7 y R8A, junto con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un heterociclilo opcionalmente sustituido que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales como miembros de anillo.
En una modalidad de la presente invención, los compuestos de Fórmula (II) tienen la fórmula estructural (IIc):
en donde, X es O, S, o NR2; R3 es -(CH2)-XC;
50 XC es hidroxilo o un grupo que tiene la fórmula estructural (a), (b), (c), o (d):
65 L1 y L2 son cada uno independientemente un enlace covalente, -0-, o -NR3a-;
R1a y R2a son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, heteroalquilo, heteroarilo, heterociclilo, alquenilo, alquinilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, heterociclilalquilo, -alquileno-C(O)-O-R4a, o -alquileno-O-C(O)-O-R4a; y R3a y R4a son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alquenilo, alquinilo, arilalquilo, heterociclilalquilo o heteroarilalquilo;
5 L3 es un enlace covalente o alquileno; Y es OR5a, NR5aR6a, o C(O)OR7a, con la condición de que cuando Y sea C(O)OR7a, entonces L3 no es un enlace covalente; y R5a, R6a, y R7a son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, arilalquilo, arilo, heteroalquilo, alquilheteroarilo, heterociclilo o heteroarilo; o alternativamente R5a y R6a, junto con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo
10 heterocíclico que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados independientemente de N, O y S.
En una modalidad de la Fórmula (IIc), X es NR2; R3 es -(CH2)-XC; y XC es hidroxilo o un grupo que tiene la fórmula estructural (b): 15
En una modalidad de la Fórmula (IIc), R2 y R4 son hidrógeno. 20 En una modalidad de la Fórmula (IIc), R1B es un alquilo, cicloalquilo o cicloalquilalquilo C1-C10 opcionalmente sustituido.
En una modalidad de la Fórmula (IIc), -L-W es -OR7 o -NR7R8.
25 En una modalidad de la Fórmula (IIc), R7 es arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; y R8 es H.
En una modalidad de la Fórmula (IIc), R8 es fenilo opcionalmente sustituido.
30 En una modalidad de la Fórmula (IIc), L3 es un enlace covalente; y Y es OR5a o NR5aR6a .
Los compuestos de la invención además incluyen los enriquecidos en isótopos de los átomos implicados en las estructuras descritas en la presente descripción. Por ejemplo, se pretende que los compuestos como se describen incluyan versiones en donde uno o más átomos de H se enriquecen preferentemente en un isótopo de hidrógeno más 35 pesado (deuterio o tritio). Particularmente, cuando cualquiera de los compuestos anteriores contiene un grupo metilo (Me), puede usarse un grupo metilo enriquecido que contiene deuterio a niveles muy por encima de la abundancia natural. Por ejemplo, -CH3 podría reemplazarse por -CH2D o-CHD2 o -CD3, donde cada D representa deuterio presente en lugar de 1H, e indica que D está presente en lugar de 1H en al menos aproximadamente 50% de las moléculas de una muestra del compuesto. De particular interés son los compuestos que comprenden -N(R)Me o -NMe2, donde Me 40 puede estar presente como CD3. Esta variación de los compuestos descritos en la presente descripción es particularmente interesante debido a que la presencia de CD3 en lugar de CH3 puede tener un efecto significativo sobre las velocidades de metabolismo de un grupo N-metilo, así un compuesto que comprende CD3 puede tener propiedades farmacocinéticas mejoradas sobre un compuesto no enriquecido. Como consecuencia, se pretende que los grupos alquilo descritos en la presente invención incluyan a los enriquecidos en deuterio, y los compuestos que contienen un
45 grupo metilo en N se consideran específicamente que incluyen un grupo metilo enriquecido con deuterio en N.
Los compuestos de la invención frecuentemente tienen grupos ionizables para poder ser preparados como sales. En ese caso, siempre que se haga referencia al compuesto, se entiende en la técnica que además puede usarse una sal farmacéuticamente aceptable. Estas sales pueden ser sales de adición de ácidos que incluyen ácidos inorgánicos u 50 orgánicos o las sales pueden prepararse, en el caso de formas ácidas de los compuestos de la invención, a partir de bases inorgánicas u orgánicas. Frecuentemente, los compuestos se preparan o usan como sales farmacéuticamente aceptables preparadas como productos de adición de ácidos o bases farmacéuticamente aceptables. Los ácidos y bases farmacéuticamente aceptables adecuados son bien conocidos en la técnica, tales como ácidos clorhídrico, sulfúrico, bromhídrico, acético, láctico, cítrico o tartárico para formar sales de adición de ácido e hidróxido de potasio,
55 hidróxido de sodio, hidróxido de amonio, cafeína, diversas aminas y similares para formar sales básicas. Los métodos para la preparación de las sales apropiadas están bien establecidos en la técnica. En algunos casos, los compuestos pueden contener tanto un grupo funcional ácido como un grupo funcional básico, en cuyo caso pueden tener dos grupos ionizados y sin embargo no tienen carga neta.
60 Utilidad de los compuestos:
En otro aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los compuestos descritos anteriormente, mezclado con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
65 En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar el cáncer, un trastorno vascular, inflamación, infección,
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dolor, o un trastorno inmunológico que comprende administrar a un sujeto que necesita de dicho tratamiento, una cantidad eficaz de cualquiera de los compuestos descritos anteriormente.
Los compuestos de la invención son útiles como medicamentos, y son útiles para la fabricación de medicamentos, que incluyen medicamentos para tratar las afecciones descritas en la presente descripción, tales como cáncer, afecciones inflamatorias, infecciones, dolor y trastornos inmunológicos.
Los términos quot;trataquot; y quot;tratarquot; tal como se usan en la presente descripción se refieren a mejorar, aliviar, disminuir y eliminar los síntomas de una enfermedad o afección. Una molécula o compuesto candidato descrito en la presente descripción puede estar en una cantidad terapéuticamente eficaz en una formulación o medicamento, que es una cantidad que puede conducir a un efecto biológico, tal como apoptosis de ciertas células (por ejemplo, células cancerosas), reducción de la proliferación de ciertas células, o por ejemplo conducir a mejorar, aliviar, disminuir o eliminar los síntomas de una enfermedad o afección. Los términos además pueden referirse a reducir o detener una velocidad de proliferación celular (por ejemplo, retardar o detener el crecimiento de tumores) o reducir el número de células cancerosas en proliferación (por ejemplo, eliminar parte o todo el tumor).
Además, estos términos son aplicables para reducir un título de un microorganismo en un sistema (es decir, célula, tejido, o sujeto) infectado con un microorganismo, reducir la velocidad de propagación microbiana, reducir el número de síntomas o un efecto de un síntoma asociado con la infección microbiana, y/o eliminar cantidades detectables de los microbios del sistema. Ejemplos de microorganismos incluyen pero no se limitan a virus, bacterias y hongos.
Los compuestos de la invención tienen actividades para modular proteínas quinasas, particularmente actividad CK2 y/o actividad Pim. En algunas modalidades, los compuestos de la invención inhiben específicamente la actividad de CK2, pero no Pim, por ejemplo, más de 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 ó 10 veces la diferencia entre la inhibición de CK2 vs inhibición de Pim. En algunas modalidades, los compuestos de la invención inhiben específicamente la actividad de Pim, pero no de Ck2, por ejemplo, más de 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 ó 10 veces la diferencia entre la inhibición de Pim vs inhibición de CK2. En algunas modalidades, los compuestos de la invención inhiben la actividad de CK2 así como de Pim.
Los compuestos de la invención pueden usarse para modular la actividad de CK2 y/o Pim, por ejemplo, inhibir la actividad de CK2 y/o Pim en una célula, por ejemplo, in vivo o in vitro. En algunas modalidades, los compuestos de la invención pueden usarse para modular la actividad de CK2, por ejemplo, inhibir la actividad de CK2 sin interferir esencialmente o cambiar la actividad de Pim. En algunas modalidades, los compuestos de la invención pueden usarse para modular la actividad de Pim, por ejemplo, inhibir la actividad de Pim sin interferir o cambiar esencialmente la actividad de CK2. En algunas modalidades, los compuestos de la invención pueden usarse para modular la actividad de CK2 y Pim, por ejemplo, inhibir la actividad de CK2 y Pim.
Los compuestos de la invención son así útiles para tratar infecciones por ciertos patógenos, que incluyen protozoos y virus. La invención proporciona así métodos para tratar trastornos protozoarios tales como parasitosis de protozoos, que incluyen infección por protozoos parasitarios responsables de trastornos neurológicos tales como esquizofrenia, paranoia y encefalitis en pacientes inmunocomprometidos, así como enfermedad de Chagas. Se proporciona además métodos para tratar varias enfermedades virales, que incluyen virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (HIV-1), virus del papiloma humano (HPV), virus del herpes simple (HSV), virus de Epstein-Barr (EBV), citomegalovirus humano, Virus de la hepatitis C y B, virus de la influenza, virus de la enfermedad de Borna, adenovirus, coxsackievirus, coronavirus y virus de la varicela zoster. Los métodos para tratar estos trastornos comprenden administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula II o Fórmula II'.
Como se usa en la presente descripción, el término quot;apoptosisquot; se refiere a un programa de autodestrucción o suicidio de células intrínsecas. En respuesta a un estímulo desencadenante, las células sufren una cascada de eventos que incluyen el encogimiento de las células, protuberancias de las membranas celulares y la condensación cromática y la fragmentación. Estos eventos culminan en la conversión celular a grupos de partículas unidas a membranas (cuerpos apoptóticos), que son posteriormente engullidos por macrófagos.
La invención, en parte, proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto dentro del alcance de la invención como se describe en la presente descripción, y métodos para usar los compuestos descritos en la presente descripción.
Además, la invención, en parte, proporciona métodos para identificar una molécula candidata que interactúa con una CK2, que comprende poner en contacto una composición que contiene una proteína CK2 y una molécula descrita en la presente descripción con una molécula candidata y determinar si la cantidad de la molécula que se describe en la presente descripción que interactúa con la proteína se modula, mediante lo cual una molécula candidata que modula la cantidad de la molécula descrita en la presente descripción que interactúa con la proteína se identifica como una molécula candidata que interactúa con la proteína.
Además se proporcionan por la invención métodos para modular ciertas actividades de proteína quinasa. Las proteínas quinasas catalizan la transferencia de un fosfato gamma de trifosfato de adenosina a un aminoácido de serina o treonina
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(proteína quinasa serina/treonina), aminoácido tirosina (proteína quinasa tirosina), tirosina, serina o treonina (especificidad dual proteína quinasa) o aminoácido histidina (histidina proteína quinasa) en un sustrato de péptido o proteína. Así, se incluyen en la presente descripción métodos que comprenden poner en contacto un sistema que comprende una proteína quinasa proteínica con un compuesto descrito en la presente descripción en una cantidad eficaz para modular (por ejemplo, inhibir) la actividad de la proteína quinasa. En algunas modalidades, la actividad de la proteína quinasa es la actividad catalítica de la proteína (por ejemplo, la catalización de la transferencia de un fosfato gamma de trifosfato de adenosina a un sustrato de péptido o proteína). En ciertas modalidades, se proporcionan métodos para identificar una molécula candidata que interactúa con una proteína quinasa, que comprende: poner en contacto una composición que contiene una proteína quinasa y un compuesto descrito en la presente descripción con una molécula candidata en condiciones en las que el compuesto y la proteína quinasa interactúan, y determinar si la cantidad del compuesto que interactúa con la proteína quinasa se modula con respecto a una interacción de control entre el compuesto y la proteína quinasa sin la molécula candidata, por lo que una molécula candidata que modula la cantidad del compuesto que interactúa con la proteína quinasa relativa a la interacción de control se identifica como una molécula candidata que interactúa con la proteína quinasa. Los sistemas en tales modalidades pueden ser un sistema libre de células o un sistema que comprende (por ejemplo, in vitro). La proteína quinasa, el compuesto o la molécula en algunas modalidades está en asociación con una fase sólida. En ciertas modalidades, la interacción entre el compuesto y la proteína quinasa se detecta a través de un marcador detectable, donde en algunas modalidades la proteína quinasa comprende un marcador detectable y en ciertas modalidades el compuesto comprende un marcador detectable. La interacción entre el compuesto y la proteína quinasa a veces se detecta sin un marcador detectable.
Además se proporcionan composiciones de la materia que comprenden una proteína quinasa y un compuesto descrito en la presente descripción. En algunas modalidades, la proteína quinasa en la composición es una proteína quinasa serina-treonina. En algunas modalidades, la proteína quinasa en la composición es, o contiene una subunidad (por ejemplo, subunidad catalítica, dominio SH2, dominio SH3) de CK2. En ciertas modalidades, la composición es libre de células y, a veces, la proteína quinasa es una proteína recombinante.
La proteína quinasa puede ser de cualquier fuente, tal como por ejemplo células de un mamífero, mono o humano. Ejemplos de proteína quinasas serina-treonina que pueden inhibirse o potencialmente inhibirse por los compuestos descritos en la presente descripción incluyen, sin limitación, versiones humanas de CK2 o CK2α2. Una proteína quinasa serina-treonina a veces es un miembro de una subfamilia que contiene uno o más de los siguientes aminoácidos en posiciones correspondientes a las enumeradas en CK2 humana: leucina en posición 45, metionina en posición 163 y la isoleucina en posición 174. Las secuencias de nucleótido y aminoácido de las proteínas quinasas y reactivos están públicamente disponibles (por ejemplo, las URL de la World Wide Web www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez/ y www.Invitrogen.com, visitadas cada una el 2 de diciembre de 2009).
La invención además proporciona en parte métodos para tratar una afección relacionada con la proliferación celular aberrante. Por ejemplo, se proporcionan métodos para tratar una afección proliferativa celular en un sujeto, que comprende administrar un compuesto descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite en una cantidad eficaz para tratar la afección proliferativa celular. El sujeto puede ser un animal de investigación (por ejemplo, roedor, perro, gato, mono), que opcionalmente contiene un tumor tal como un tumor de xenoinjerto (por ejemplo, tumor humano), por ejemplo, o puede ser un humano. Una afección proliferativa celular a veces es un tumor, por ejemplo, tumor sólido o circulante o cáncer no tumoral, que incluyen pero no se limitan a, cánceres de colorecto, mama, pulmón, hígado, páncreas, ganglio linfático, colon, próstata, cerebro, cabeza y cuello, piel, hígado, riñón, sangre y corazón (por ejemplo, leucemia, linfoma, carcinoma).
Los compuestos y composiciones de la invención pueden usarse solos o en combinación con agentes anticancerígenos
o de otro tipo, tales como agentes paliativos, que típicamente se administran a un paciente en tratamiento por cáncer, como se describe además en la presente descripción.
Además se proporcionan métodos para tratar una afección relacionada con la inflamación o el dolor. Por ejemplo, se proporcionan métodos para tratar el dolor en un sujeto, que comprenden administrar un compuesto descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite en una cantidad para tratar el dolor. Además se proporcionan procedimientos para tratar la inflamación en un sujeto, que comprenden administrar un compuesto descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite en una cantidad eficaz para tratar la inflamación. El sujeto puede ser un animal de investigación (por ejemplo, roedor, perro, gato, mono), por ejemplo, o puede ser un ser humano. Las afecciones asociadas con la inflamación y el dolor incluyen sin limitación el reflujo ácido, acidez del estómago, acné, alergias y sensibilidad a alergeno, enfermedad de Alzheimer, asma, aterosclerosis, bronquitis, carditis, enfermedad celíaca, dolor crónico, enfermedad de Crohn, cirrosis, colitis, demencia, dermatitis, diabetes, ojos secos, edema, enfisema, eczema, fibromialgia, gastroenteritis, gingivitis, enfermedad cardiaca, hepatitis, presión arterial alta, resistencia a la insulina, cistitis intersticial, dolor en las articulaciones/artritis/artritis reumatoide, síndrome metabólico (síndrome X), miositis, nefritis, obesidad, osteopenia, glomerulonefritis (GN), enfermedad renal quística juvenil y nefronoftisis tipo I (NPHP), osteoporosis, enfermedad de Parkinson, demencia de Guam-Parkinson, parálisis supranuclear, enfermedad de Kuf y enfermedad de Pick, así como deterioro de la memoria, isquemia cerebral, y esquizofrenia, enfermedad periodontal, poliarteritis, policondritis, psoriasis, esclerodermia, sinusitis, síndrome de Sjögren, colon espástico, candidiasis sistémica, tendinitis, infecciones de vías urinarias, vaginitis, cáncer inflamatorio (por ejemplo, cáncer de mama inflamatorio) y similares.
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Se conocen métodos para determinar y monitorear los efectos de los compuestos de la presente descripción sobre el dolor o la inflamación. Por ejemplo, los comportamientos de dolor estimulados con formalina en animales de investigación pueden monitorearse después de la administración de un compuesto descrito en la presente descripción para evaluar el tratamiento del dolor (por ejemplo, Li y otros, Pain 115(1-2): 182-90 (2005)). Además, puede monitorearse la modulación de moléculas proinflamatorias (por ejemplo, IL-8, GRO-alfa, MCP-1, TNF alfa e iNOS) después de la administración de un compuesto descrito en la presente descripción para evaluar el tratamiento de la inflamación (por ejemplo, Parhar y otros, Int J Colorectal Dis. 22(6): 601-9 (2006)), por ejemplo. Así, se proporcionan métodos para determinar si un compuesto en la presente invención reduce la inflamación o el dolor, que comprende poner en contacto un sistema con un compuesto descrito en la presente descripción en una cantidad eficaz para modular (por ejemplo, inhibir) la actividad de una señal de dolor o señal de inflamación.
Se proporcionan además métodos para identificar un compuesto que reduce la inflamación o el dolor, que comprenden: poner en contacto un sistema con un compuesto de Fórmula II o Fórmula II'; y detectar una señal de dolor o señal de inflamación, por lo que un compuesto que modula la señal de dolor en relación con una molécula de control se identifica como un compuesto que reduce la inflamación del dolor. Ejemplos no limitativos de señales de dolor son comportamientos de dolor estimulados con formalina y ejemplos de señales de inflamación incluyen sin limitación un nivel de una molécula proinflamatoria. Así, la invención pertenece en parte a métodos para modular la angiogénesis en un sujeto, y a métodos para tratar una afección asociada con angiogénesis aberrante en un sujeto. La retinopatía diabética proliferativa.
Además, se demostró que CK2 desempeña un papel en la patogénesis de la aterosclerosis, y puede prevenir la aterogénesis mediante el mantenimiento de flujo de tensión de cizallamiento laminar. CK2 juega un papel en la vascularización, y se ha demostrado que media la activación inducida por la hipoxia de las histona deacetilasas (HDAC). CK2 además se implica en enfermedades relacionadas con el músculo esquelético y el tejido óseo, que incluyen, por ejemplo, hipertrofia de cardiomiocitos, insuficiencia cardíaca, señalización de insulina deteriorada y resistencia a la insulina, hipofosfatemia y mineralización inadecuada de la matriz ósea.
Así, en un aspecto, la invención proporciona métodos para tratar cada una de estas afecciones, que comprende administrar a un sujeto que necesita de tal tratamiento una cantidad eficaz de un inhibidor de CK2, tal como un compuesto de Fórmula II o de Fórmula II' como se describe en la presente descripción.
La invención además pertenece en parte a métodos para modular una respuesta inmune en un sujeto, y a métodos para tratar una afección asociada con una respuesta inmune aberrante en un sujeto. Así, se proporcionan métodos para determinar si un compuesto de la presente descripción modula una respuesta inmune, que comprende poner en contacto un sistema con un compuesto descrito en la presente descripción en una cantidad eficaz para modular (por ejemplo, inhibir) una respuesta inmune o una señal asociada con una respuesta inmune. Las señales asociadas con la actividad inmunomoduladora incluyen por ejemplo, la estimulación de la proliferación, supresión o inducción de citoquinas de células T, que incluyen por ejemplo, interleuquinas, interferón-γ y TNF. Los métodos para evaluar la actividad inmunomoduladora son conocidos en la técnica.
Además se proporcionan métodos para tratar una afección asociada con una respuesta inmune aberrante en un sujeto, que comprende administrar un compuesto descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite en una cantidad eficaz para tratar la afección. Las afecciones caracterizadas por una respuesta inmune aberrante incluyen, sin limitación, rechazo de trasplante de órganos, asma, trastornos autoinmunes, que incluyen artritis reumatoide, esclerosis múltiple, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico, esclerodermia, polimiositis, enfermedad mixta de tejido conectivo (MCTD), enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. En ciertas modalidades, puede modularse una respuesta inmune administrando un compuesto de la presente descripción en combinación con una molécula que modula (por ejemplo, inhibe) la actividad biológica de un miembro de la vía mTOR o miembro de una vía relacionada (por ejemplo, mTOR, quinasa PI3, AKT). En ciertas modalidades, la molécula que modula la actividad biológica de un miembro de la vía mTOR o miembro de una vía relacionada es la rapamicina. En ciertas modalidades, se proporciona en la presente descripción una composición que comprende un compuesto descrito en la presente descripción en combinación con una molécula que modula la actividad biológica de un miembro de la vía mTOR o miembro de una vía relacionada, tal como por ejemplo, rapamicina.
Composiciones y Vías de Administración
En otro aspecto, la invención proporciona composiciones farmacéuticas (es decir, formulaciones). Las composiciones farmacéuticas pueden comprender un compuesto de cualquiera de las Fórmulas (I), (II), (II'), (IIa), (IIa'), (IIb), (IIb'), (II-Th), y (II-Th'),como se describe en la presente descripción, que se mezcla con al menos un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. Frecuentemente, la composición comprende al menos dos excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables.
Aunque las composiciones de la presente invención se usarán típicamente en la terapia para pacientes humanos, además pueden usarse en medicina veterinaria para tratar enfermedades similares o idénticas. Las composiciones pueden, por ejemplo, usarse para tratar mamíferos, que incluyen, pero no se limitan a, primates y mamíferos
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domesticados. Las composiciones pueden, por ejemplo, usarse para tratar herbívoros. Las composiciones de la presente invención incluyen isómeros geométricos y ópticos de uno o más de los fármacos, en donde cada fármaco es una mezcla racémica de isómeros o uno o más isómeros purificados.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para su uso en la presente invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos se contienen en una cantidad eficaz para lograr el propósito pretendido. La determinación de las cantidades eficaces está dentro de la capacidad de los expertos en la técnica, especialmente a la luz de la descripción detallada proporcionada en la presente descripción.
Los compuestos de la presente invención pueden existir como sales farmacéuticamente aceptables. La presente invención incluye tales sales. El término quot;sales farmacéuticamente aceptablesquot; pretende incluir sales de compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de las entidades sustituyentes particulares encontrados en los compuestos descritos en la presente descripción. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, pueden obtenerse sales de adición de bases poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, o pura o en un disolvente inerte adecuado. Se incluyen sales de adición de bases tales como sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, o sal de magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, pueden obtenerse sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, o puro o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrógenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, hidriódico o fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos, por ejemplo, acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. Además se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónicos o galacturónicos y similares (ver, por ejemplo, Berge y otros, quot;Pharmaceutical Saltsquot;, Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen tanto funciones básicas como ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición ya sea de base o de ácido.
Ejemplos de formas de sal aplicables incluyen hidrocloruros, hidrobromuros, sulfatos, metanosulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartratos (por ejemplo (+)-tartratos, (-)-tartratos o sus mezclas, que incluyen mezclas racémicas), succinatos, benzoatos Y sales con aminoácidos tales como ácido glutámico. Estas sales pueden prepararse por métodos conocidos por los expertos en la técnica.
Las formas neutras de los compuestos se regeneran preferentemente poniendo en contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de la sal en ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolventes polares.
Los ésteres farmacéuticamente aceptables en la presente invención se refieren a ésteres no tóxicos, preferentemente los ésteres de alquilo tales como ésteres de metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo o pentilo, de los cuales se prefiere el éster metílico. Sin embargo, si se desea, pueden emplearse otros ésteres tales como fenil-alquilo C1-5. Los derivados éster de ciertos compuestos pueden actuar como profármacos que, cuando se absorben en el torrente sanguíneo de un animal de sangre caliente, pueden escindirse de tal manera que liberen la forma del fármaco y permiten que el fármaco proporcione una eficacia terapéutica mejorada.
Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como formas solvatadas, que incluyen formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a formas no solvatadas y se incluyen dentro del alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y pretenden estar dentro del alcance de la presente invención.
Cuando se usan como agentes terapéuticos, los compuestos descritos en la presente descripción se administran frecuentemente con un portador fisiológicamente aceptable. Un portador fisiológicamente aceptable es una formulación a la que puede añadirse el compuesto para disolverlo o de cualquier otra manera facilitar de otro modo su administración. Ejemplos de portadores fisiológicamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, agua, solución salina, solución salina fisiológicamente tamponada.
A menos que se indique de cualquier otra manera, las estructuras representadas en la presente descripción además se entiende que incluyen compuestos que difieren solamente en presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras excepto el reemplazo de un hidrógeno por un deuterio o tritio, o el reemplazo de un carbono por carbono enriquecido con 13C o 14C están dentro del alcance de esta invención. Los compuestos de la presente invención además pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen tales compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden radiomarcarse con isótopos radiactivos, tales como por ejemplo tritio (3H), yodo 125 (125I) o
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carbono 14 (14C). Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sean radiactivos o no, se incluyen dentro del alcance de la presente invención.
Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos que están en una forma de profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en la presente descripción son aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos bajo condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Además, los profármacos pueden convertirse en los compuestos de la presente invención mediante métodos químicos o bioquímicos en un ambiente ex vivo. Por ejemplo, los profármacos pueden convertirse lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se colocan en un depósito de parche transdérmico con una enzima o reactivo químico adecuado.
Un compuesto de la presente invención puede formularse como una composición farmacéutica. Una composición farmacéutica de ese tipo puede entonces administrarse por vía oral, parenteral, mediante pulverización por inhalación, por vía rectal o por vía tópica en formulaciones de unidades de dosificación que contienen portadores, adyuvantes y vehículos convencionales no tóxicos farmacéuticamente aceptables, según se desee. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales del portador que produce una forma de dosificación única varía dependiendo del huésped mamífero tratado y del modo particular de administración. La administración tópica además puede implicar el uso de administración transdérmica tales como parches transdérmicos o dispositivos de iontoforesis. El término parenteral, como se usa en la presente descripción, incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión. La formulación de fármacos se discute, por ejemplo en, Hoover, John E., REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Mack Publishing Co., Easton, Pa.; 1975. Otros ejemplos de formulaciones de fármacos pueden encontrarse en Liberman, H. A. y Lachman, L., Eds., PHARMACEUTICAL DOSAGE Forms, Marcel Decker, Nueva York, N.Y., 1980.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas o oleaginosas inyectables estériles pueden formularse de conformidad con la técnica conocida usando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril puede ser además una solución o suspensión estéril inyectable en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el agua, solución de Ringer y la solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites fijos estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este propósito puede emplearse cualquier aceite fijo blando que incluyen mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables. Pueden usarse dimetilacetamida, tensioactivos que incluyen detergentes iónicos y no iónicos, polietilenglicoles. Además son útiles mezclas de disolventes y agentes humectantes tales como los discutidos anteriormente.
Los supositorios para la administración rectal del fármaco pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado tal como manteca de cacao, mono o triglicéridos sintéticos, ácidos grasos y polietilenglicoles que se venden a temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura rectal y por lo tanto, se fundirá en el recto y liberará el fármaco.
Las formas de dosificación sólidas para administración oral pueden incluir cápsulas, tabletas, píldoras, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, los compuestos de esta invención se combinan normalmente con uno
o más adyuvantes apropiados para la vía de administración indicada. Si se administran per os, puede mezclarse un compuesto de la invención con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ésteres alquílicos de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácido fosfórico y sulfúrico, gelatina, goma de acacia, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, y/o alcohol polivinílico, y después se comprimen o encapsulan para una administración conveniente. Tales cápsulas o tabletas pueden contener una formulación de liberación controlada como puede proporcionarse en una dispersión de compuesto activo en hidroxipropilmetilcelulosa. En el caso de cápsulas, tabletas y píldoras, las formas de dosificación además pueden comprender agentes tamponantes tales como citrato de sodio, carbonato o bicarbonato de magnesio o de calcio. Las tabletas y las píldoras pueden prepararse adicionalmente con revestimientos entéricos.
Para propósitos terapéuticos, las formulaciones para administración parenteral pueden estar en forma de soluciones o suspensiones de inyección estéril isotónica acuosa o no acuosa. Estas soluciones y suspensiones pueden prepararse a partir de polvos o gránulos estériles que tienen uno o más de los portadores o diluyentes mencionados para su uso en las formulaciones para administración oral. Un compuesto de la invención puede disolverse en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, alcohol bencílico, cloruro sódico y/o diversos tampones. Otros adyuvantes y modos de administración son bien conocidos en la técnica farmacéutica.
Las formas de dosificación líquidas para administración oral pueden incluir emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables que contienen diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tales como agua. Tales composiciones pueden comprender además adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, y agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes.
El régimen de dosificación que usa los compuestos de la presente invención en combinación con un agente
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anticancerígeno se selecciona de acuerdo con una variedad de factores que incluyen tipo, especie, edad, peso, sexo y condición médica del paciente; la gravedad de la afección que se trata; la vía de administración; la función renal y hepática del paciente; y el compuesto particular o sal o éster de este empleado. Una consideración de estos factores está dentro del ámbito del médico clínico ordinario con el propósito de determinar las cantidades de dosificación terapéuticamente eficaces que se deben administrar a una persona que necesita de la terapia de combinación instantánea.
En ciertas modalidades de la presente invención, el compuesto es un compuesto de Fórmula (I)a, y en ciertas modalidades, es un compuesto de Fórmula (I)b.
Cualquier formulación adecuada de un compuesto descrito anteriormente puede prepararse para la administración por métodos conocidos en la técnica. La selección de excipientes o portadores útiles puede lograrse sin experimentación excesiva, basada en la vía de administración deseada y las propiedades físicas del compuesto que se administra.
Puede usarse cualquier vía de administración adecuada, según se determine por un médico que lo trata, que incluyen, pero no se limitan a, vías oral, parenteral, intravenosa, intramuscular, transdérmica, tópica y subcutánea. En dependencia del sujeto que se trata, del modo de administración, y del tipo de tratamiento deseado --por ejemplo, prevención, profilaxis, terapia; los compuestos se formulan de manera consonante con estos parámetros. La preparación de formulaciones adecuadas para cada vía de administración se conoce en la técnica. Un resumen de tales métodos y técnicas de formulación se encuentra en Remington's Pharmaceutical Sciences, última edición, Mack Publishing Co., Easton, PA. La formulación de cada sustancia o de la combinación de dos sustancias incluirá frecuentemente un diluyente así como, en algunos casos, adyuvantes, tampones, conservantes y similares. Las sustancias que se administran pueden administrarse además en composiciones liposomales o como microemulsiones.
Para la inyección, las formulaciones pueden prepararse en formas convencionales como soluciones o suspensiones líquidas o como formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en líquido antes de la inyección o como emulsiones. Los excipientes adecuados incluyen, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol y similares. Tales composiciones además pueden contener cantidades de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsionantes, y agentes tamponadores de pH, y similares tales como, por ejemplo, acetato de sodio y monolaurato de sorbitán, y así sucesivamente.
Diversos sistemas de liberación sostenida para fármacos además se han diseñado, y pueden aplicarse a los compuestos de la invención. Ver, por ejemplo, patente de los Estados Unidos núm. 5,624,677, cuyos métodos se incorporan en la presente descripción como referencia.
La administración sistémica además puede incluir métodos relativamente no invasivos tales como el uso de supositorios, parches transdérmicos, suministro transmucoso y administración intranasal. La administración oral además es adecuada para los compuestos de la invención. Las formas adecuadas incluyen jarabes, cápsulas, tabletas, como se entiende en la técnica.
Para la administración a sujetos humanos o animales, la dosificación apropiada de un compuesto descrito anteriormente frecuentemente es de 0,01-15 mg/kg y a veces de 0,1-10 mg/kg. En algunas modalidades, una dosificación adecuada del compuesto de la invención para un paciente adulto estará entre 1 y 1000 mg por dosis, frecuentemente entre 10 y 300 mg, y la dosificación puede administrase 1-4 veces al día. Los niveles de dosificación dependen de la naturaleza de la afección, la eficacia del fármaco, la condición del paciente, el juicio del médico, y la frecuencia y modo de administración; la optimización de tales parámetros está dentro del nivel ordinario de la experiencia en la técnica.
Combinaciones terapéuticas:
Los compuestos de la invención pueden usarse solos o en combinación con otro agente terapéutico. La invención proporciona métodos para tratar afecciones tales como cáncer, inflamación y trastornos inmunes mediante la administración a un sujeto con necesidad de tal tratamiento de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente terapéutico útil para tratar dicho trastorno y administrar al mismo sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de la presente invención, es decir, un compuesto de la invención. El agente terapéutico y el modulador pueden ser quot;coadministradosquot;, es decir administrados juntos, ya sea como composiciones farmacéuticas separadas o mezcladas en una sola composición farmacéutica. Por quot;administrados juntosquot;, el agente terapéutico y el modulador además pueden administrarse por separado, incluyendo en tiempos diferentes y con frecuencias diferentes. El modulador puede administrarse por cualquier vía conocida, tal como por vía oral, intravenosa, intramuscular, nasal y similares; y el agente terapéutico además puede administrarse por cualquier vía convencional. En muchas modalidades, puede administrarse oralmente al menos uno y opcionalmente tanto el modulador como el agente terapéutico. Preferentemente, el modulador es un inhibidor, y puede inhibir ya sea uno de CK2 y Pim, o ambos para proporcionar los efectos de tratamiento descritos en la presente descripción.
En ciertas modalidades, un quot;moduladorquot; como se describió anteriormente puede usarse en combinación con un agente terapéutico que puede actuar mediante la unión a regiones de ADN que pueden formar ciertas estructuras cuádruplex. En tales modalidades, los agentes terapéuticos tienen actividad anticancerígena por sí mismos, pero su actividad
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aumenta cuando se usan en combinación con un modulador. Este efecto sinérgico permite que el agente terapéutico se administre en una dosificación más baja mientras que se alcanzan niveles equivalentes o superiores de al menos un efecto deseado.
Un modulador puede activarse por separado para tratar un cáncer. Para las terapias de combinación descritas anteriormente, cuando se usan en combinación con un agente terapéutico, la dosificación de un modulador será frecuentemente de dos a diez veces menor que la dosis requerida cuando el modulador se usa solo para tratar la misma afección o sujeto. La determinación de una cantidad adecuada del modulador para su uso en combinación con un agente terapéutico se determina fácilmente por métodos conocidos en la técnica.
Los compuestos y composiciones de la invención pueden usarse en combinación con anticancerígenos u otros agentes, tales como agentes paliativos, que se administran típicamente a un paciente en tratamiento para cáncer. Tales quot;agentes anticancerígenosquot; incluyen, por ejemplo, agentes quimioterapéuticos clásicos, así como agentes terapéuticos dirigidos molecularmente, agentes de terapia biológica y agentes radioterapéuticos.
Cuando un compuesto o composición de la invención se usa en combinación con un agente anticancerígeno con otro agente, la presente invención proporciona, por ejemplo, tratamiento simultáneo, escalonado o alterno. Así, el compuesto de la invención puede administrarse al mismo tiempo que un agente anticancerígeno, en la misma composición farmacéutica, el compuesto de la invención puede administrarse al mismo tiempo que el agente anticancerígeno, en composiciones farmacéuticas separadas, el compuesto de la invención se puede administrar antes que el agente anticancerígeno, o el agente anticancerígeno puede administrarse antes que el compuesto de la invención, por ejemplo, con una diferencia de segundos, minutos, horas, días o semanas.
En los ejemplos de un tratamiento escalonado, puede administrarse un curso de terapia con el compuesto de la invención, seguido por un curso de terapia con el agente anticancerígeno, o el orden inverso del tratamiento puede usarse y más de una serie de tratamientos puede usarse además con cada componente. En ciertos ejemplos de la presente invención, se administra un componente, por ejemplo, el compuesto de la invención o el agente anticancerígeno a un mamífero mientras que el otro componente, o sus productos derivados, permanecen en el torrente sanguíneo del mamífero. Por ejemplo, el presente compuesto puede administrarse mientras el agente anticancerígeno o sus productos derivados permanecen en el torrente sanguíneo o el agente anticanceroso puede administrarse mientras el presente compuesto o sus derivados permanezcan en el torrente sanguíneo. En otros ejemplos, el segundo componente se administra después de todo, o la mayor parte del primer componente, o sus derivados, han dejado el torrente sanguíneo del mamífero.
El compuesto de la invención y el agente anticancerígeno pueden administrarse en la misma forma de dosificación, por ejemplo, ambos administrados por vía intravenosa en forma de soluciones, o pueden administrarse en diferentes formas de dosificación, por ejemplo, un compuesto puede administrarse por vía tópica y el otro por vía oral. Una persona con experiencia ordinaria en la técnica sería capaz de discernir qué combinaciones de agentes serían útiles basándose en las características particulares de los fármacos y el cáncer implicado.
Los agentes anticancerígenos útiles en combinación con los compuestos de la presente invención pueden incluir agentes seleccionados de cualquiera de las clases conocidas por aquellos con experiencia en la técnica, que incluyen, pero no se limitan a, los agentes antimicrotubulares tales como diterpenoides y alcaloides de la vinca; complejos de coordinación de platino, agentes alquilantes tales como mostazas nitrogenadas, oxazafosforinas, alquilsulfonatos, nitrosoureas, y triacenos, agentes antibióticos como las antraciclinas, actinomicinas y bleomicinas; inhibidores de la topoisomerasa II, tales como epipodofilotoxinas; antimetabolitos tales como análogos de la purina y pirimidina y compuestos antifolato; inhibidores de la topoisomerasa I tales como camptotecinas; hormonas y análogos hormonales; inhibidores de la vía de transducción de la señal; inhibidores de la angiogénesis que son tirosina quinasas no receptoras, agentes inmunoterapéuticos; agentes proapoptóticos; y los inhibidores de la señalización del ciclo celular; otros agentes descritos más abajo.
Los agentes antimicrotubulares o antimitóticos son agentes específicos de fase que típicamente son activos frente a los microtúbulos de las células tumorales durante la fase M o de mitosis del ciclo celular. Ejemplos de agentes antimicrotúbulos incluyen, pero no se limitan a, diterpenoides y alcaloides vinca.
Los alcaloides vegetales y los agentes derivados de los terpenoides incluyen inhibidores mitóticos tales como los alcaloides de la vinca, vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina; y estabilizadores de polímero de microtúbulos tales como los taxanos, que incluyen, pero no se limitan a, paclitaxel, docetaxel, larotaxel, ortataxel y tesetaxel.
Los diterpenoides, que se derivan de fuentes naturales, son agentes anticancerígenos específicos de fase que se cree que operan en las fases G2/M del ciclo celular. Se cree que los diterpenoides estabilizan la subunidad p-tubulina de los microtúbulos, por unión con esta proteína. El desmontaje de la proteína parece después inhibirse con la mitosis siendo arrestada y a continuación la muerte celular.
Ejemplos de diterpenoides incluyen, pero no se limitan a, taxanos tales como paclitaxel, docetaxel, larotaxel, ortataxel y tesetaxel. Paclitaxel es un producto diterpénico natural aislado del árbol de tejo del Pacífico Taxus brevifolia y está
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comercialmente disponible como una solución inyectable TAXOL®. Docetaxel es un derivado semisintético de paclitaxel
q. v., preparado usando un precursor natural, 10-desacetil-bacatina III, extraído de la aguja del árbol de Tejo europeo. Docetaxel está comercialmente disponible como una solución inyectable como TAXOTERE®.
Los alcaloides de Vinca son agentes antineoplásicos específicos de fase derivados de la planta del vincapervinca. Alcaloides de Vinca que se cree que actúan en la fase M (mitosis) del ciclo celular mediante la unión específicamente a la tubulina. Consecuentemente, la molécula de tubulina unida no es capaz de polimerizarse en los microtúbulos. Se cree que la mitosis se detiene en la metafase con la muerte celular a continuación. Ejemplos de alcaloides de vinca incluyen, pero no se limitan a, vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina. Vinblastina, sulfato de vincaleucoblastina, está disponible comercialmente como VELBAN® como una solución inyectable. La vincristina, 22-oxo-sulfato de vincaleucoblastina, está comercialmente disponible como ONCOVIN® como una solución inyectable. La vinorelbina, está disponible comercialmente como una solución inyectable de tartrato de vinorelbina (NAVELBINE®), y es un derivado semisintético del alcaloide de la vinca.
Los complejos de coordinación de platino son agentes anticancerígenos no específicos de fase, que son interactivos con el ADN. Se cree que los complejos de platino entran en las células tumorales, se someten, se acuatan y forman entrecruzamientos intra e intercadena con el ADN causando efectos biológicos adversos al tumor. Los complejos de coordinación a base de platino incluyen, pero no se limitan a, cisplatino, carboplatino, nedaplatino, oxaliplatino, satraplatino, y (SP-4-3)-(cis) aminodicloro-[2-metilpiridina] platino (II). Cisplatino, cis-diaminodicloroplatino, está comercialmente disponible como PLATINOL® como una solución inyectable. El carboplatino, platino, diamina [1,1ciclobutano-dicarboxilato (2-)-0,0'], está comercialmente disponible como PARAPLATIN® como una solución inyectable.
Los agentes alquilantes son generalmente agentes no específicos de fase y típicamente son electrófilos fuertes. Típicamente, los agentes alquilantes forman enlaces covalentes, mediante alquilación, al ADN a través de entidades nucleófilas de la molécula de ADN tales como grupos fosfato, amino, sulfidrilo, hidroxilo, carboxilo e imidazol. Tal alquilación altera la función del ácido nucleico que conduce a la muerte celular. Ejemplos de agentes alquilantes incluyen, pero no se limitan a, alquilsulfonatos tales como busulfán; etilenimina y derivados de metilmelamina tales como altretamina y tiotepa; mostazas nitrogenadas tales como clorambucil, ciclofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, melfalán y uramustina; nitrosoureas tales como carmustina, lomustina y estreptozocina; triazenos e imidazotetrazinas tales como dacarbazina, procarbazina, temozolamida y temozolomida. Ciclofosfamida, monohidrato de 2-óxido de 2-[bis(2-cloroetil)-amino]tetrahidro-2H-1,3,2-oxazafosforina, está disponible comercialmente como una solución inyectable o tabletas como CYTOXAN®. Melfalán, 4-[bis (2-cloroetil)amino]-L-fenilalanina, está disponible comercialmente como una solución inyectable o tabletas como ALKERAN®. Clorambucil, ácido 4-[bis(2-cloroetil) amino]-bencenbutanoico, está disponible comercialmente como tabletas de LEUKERAN®. Busulfán, dimetanosulfonato de 1,4-butanodiol, está comercialmente disponible como TABLETA MYLERAN®. Carmustina, 1,3-[bis(2-cloroetil)-1nitrosourea, está comercialmente disponible como frascos individuales de material liofilizado como BiCNU®, 5-(3,3dimetil-1-triazeno)-imidazol-4-carboxamida, está comercialmente disponible como frascos individuales de material como DTIC-Dome®. Además, los agentes alquilantes incluyen (a) agentes quimioterapéuticos a base de alquilante de tipo platino tales como cisplatino, carboplatino, nedaplatino, oxaliplatino, satraplatino, y platino (SP-4-3)-(cis)-aminadicloro[2-metilpiridina] platino II); (b) sulfonatos de alquilo tales como busulfán; (c) etilenimina y derivados de metilmelamina tales como altretamina y tiotepa; (d) mostazas de nitrógeno tales como clorambucilo, ciclofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, trofosamida, prednimustina, melfalán y uramustina; (e) nitrosoureas tales como carmustina, lomustina, fotemustina, nimustina, ranimustina y estreptozocina; (f) triazenos e imidazotetrazinas tales como dacarbazina, procarbazina, temozolamida y temozolomida.
Los antibióticos antitumorales son agentes no específicos de fase que se cree que se unen o intercalan con el ADN. Esto puede resultar en complejos de ADN estables o rotura de la cadena, que interrumpe la función normal de los ácidos nucleicos, conduciendo a la muerte celular. Ejemplos de agentes antibióticos antitumorales incluyen, pero no se limitan a, antraciclinas tales como daunorubicina (que incluyen daunorubicina liposómica), doxorubicina (que incluyen doxorubicina liposómica), epirubicina, idarubicina y valrubicina; agentes relacionados con estreptomicidas tales como bleomicina, actinomicina, mitramicina, mitomicina, porfiromicina; y mitoxantrona. La dactinomicina, además conocida como Actinomicina D, está comercialmente disponible en forma inyectable como COSMEGEN®. Daunorubicina, clorhidrato de (8S-cis-)-8-acetil-10-[(3-amino-2,3,6-trideoxi-a-L-lixohexopiranosil)oxi]-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi1-metoxi-5, 12-naftacenediona, está comercialmente disponible como una forma liposomal inyectable como DAUNOXOME® o como inyectable como CERUBIDINE®. Doxorubicina, clorhidrato de (8S,10S)-10-[(3-amino-2,3,6trideoxi-α-L-lixohexopiranosil)oxi]-8-glicoloil, 7,8,9,1 0-tetrahidro-6,8, 11-trihidroxi-1-metoxi-5,12-naftacenediona, está comercialmente disponible en forma inyectable como RUBEX® o ADRIAMYCIN RDF®. Bleomicina, una mezcla de antibióticos citotóxicos glucopéptidos aislados de una cepa de Streptomyces verticil/us, está comercialmente disponible como BLENOXANE®.
Los inhibidores de topoisomerasa incluyen inhibidores de la topoisomerasa I tales como camptotecina, topotecán, irinotecán, rubitecan y belotecán; y los inhibidores de topoisomerasa II tales como etopósido, tenipósido y amsacrina.
Los inhibidores de la topoisomerasa II incluyen, pero no se limitan a, epipodofilotoxinas, que son agentes antineoplásicos específicos de la fase derivados de la planta de mandrágora. Las epipodofilotoxinas afectan típicamente a las células en las fases S y G2 del ciclo celular formando un complejo ternario con topoisomerasa II y ADN causando
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roturas de la cadena de ADN. Las rupturas de la cadena se acumulan y sigue la muerte de la célula. Ejemplos de epipodofilotoxinas incluyen, pero no se limitan a, etopósido, tenipósido y amsacrina. Etopósido, 4'-demetilepipodofilotoxina 9[4,6-0-(R) -etilideno-β-D-glucopiranósido], está comercialmente disponible como una solución inyectable o cápsulas como VePESID® y es comúnmente conocida como VP-16. Tenipósido, 4'-demetilepipodofilotoxina 9 [4,6-0-(R)-tenilideno-β-D-glucopiranósido], está disponible comercialmente como una solución inyectable como VUMON® y es comúnmente conocido como VM-26.
Inhibidores de topoisomerasa I que incluyen derivados de camptotecina y camptotecina. Ejemplos de inhibidores de topoisomerasa I incluyen, pero no se limitan a camptotecina, topotecán, irinotecán, rubitecan, belotecán y las diversas formas ópticas (es decir, (R), (S) o (R,S)) de 7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,11-etilendioxi-camptotecina, tal como se describe en las patentes de los Estados Unidos núms. 6.063.923; 5.342.947; 5.559.235; 5.491.237 y solicitud de patente de los Estados Unidos núm. 08/977.217 pendiente presentada el 24 de Noviembre, 1997. Irinotecan HCl, clorhidrato de (4S) -4,11-dietil-4-hidroxi-9-[(4-piperidinopiperidino) -carboniloxi]-1H-irano[3',4',6,7]indolizino[1,2-b] quinolina-3, 14(4H, 12H)-diona, está comercialmente disponible como solución inyectable CAMPT0SAR®. Irinotecan es un derivado de camptotecina que se une, junto con su metabolito activo 8N-38, al complejo de topoisomerasa I-ADN. Topotecan HCl, monoclorhidrato de (S)-10-[(dimetilamino)metil]-4-etil-4,9-dihidroxi-1H-pirano[3',4',6,7]indolizino[1,2-b]quinolina-3,14-(4H,12H) -diona, está comercialmente disponible como la solución inyectable HYCAMTIN®.
Los antimetabolitos incluyen (a) análogos de purina tales como fludarabina, cladribina, clorodeoxiadenosina, clofarabina, mercaptopurina, pentostatina y tioguanina; (b) análogos de pirimidina tales como fluorouracilo, gemcitabina, capecitabina, citarabina, azacitidina, edatrexato, floxuridina y troxacitabina; (c) antifolatos, tales como metotrexato, pemetrexed, raltitrexed y trimetrexato. Los antimetabolitos además incluyen inhibidores de timidilato sintasa, tales como fluorouracilo, raltitrexed, capecitabina, floxuridina y pemetrexed; y inhibidores de la ribonucleótido reductasa tales como claribina, clofarabina y fludarabina.Los agentes neoplásicos antimetabolitos son agentes antineoplásicos específicos de fase que actúan típicamente en la fase S (síntesis de ADN) del ciclo celular inhibiendo la síntesis de ADN o inhibiendo la síntesis de bases de purina o pirimidina y limitando de este modo la síntesis de ADN. Consecuentemente, la fase S no procede y sigue la muerte celular. Los antimetabolitos incluyen análogos de purina, tales como fludarabina, cladribina, clorodeoxiadenosina, clofarabina, mercaptopurina, pentostatina, eritrohidroxinoniladenina, fosfato de fludarabina y tioguanina; análogos de pirimidina tales como fluorouracilo, gemcitabina, capecitabina, citarabina, azacitidina, edatrexato, floxuridina y troxacitabina; antifolatos, tales como metotrexato, pemetrexed, raltitrexed y trimetrexato. Citarabina, 4-amino-1-p-D-arabinofuranosil-2 (1H)-pirimidinona, está comercialmente disponible como CYTOSAR-U® y es comúnmente conocida como Ara-C. Mercaptopurina, monohidrato de 1,7-dihidro-6H-purina-6-tiona, está disponible comercialmente como PURINETHOL®. Tioguanina, 2-amino-1, 7-dihidro-6H-purina-6-tiona, está disponible comercialmente como TABLOID®. Gemcitabina, monohidrocloruro de 2'-desoxi-2', 2'-difluorocitidina (isómero p), está disponible comercialmente como GEMZAR®.
Las terapias hormonales incluyen (a) andrógenos tales como fluoximesterona y testolactona; (b) antiandrógenos tales como bicalutamida, ciproterona, flutamida y nilutamida; (c) inhibidores de aromatasa tales como aminoglutetimida, anastrozol, exemestano, formestano y letrozol; (d) corticosteroides tales como dexametasona y prednisona; (e) estrógenos tales como dietilestilbestrol; (f) antiestrógenos tales como fulvestrante, raloxifeno, tamoxifeno y toremifina;
(g) agonistas de LHRH y antagonistas tales como buserelina, goserelina, leuprolida y triptorelina; (h) progestinas tales como acetato de medroxiprogesterona y acetato de megestrol; y (i) hormonas tiroideas tales como levotiroxina y liotironina. Las hormonas y los análogos hormonales son compuestos útiles para tratar cánceres en los que existe una relación entre las hormonas y el crecimiento y/o falta de crecimiento del cáncer. Ejemplos de hormonas y análogos hormonales útiles en el tratamiento del cáncer incluyen, pero no se limitan a, andrógenos tales como fluoximesterona y testolactona; antiandrógenos tales como bicalutamida, ciproterona, flutamida y nilutamida; inhibidores de la aromatasa tales como aminoglutetimida, anastrozol, exemestano, formestano, vorazol y letrozol; corticosteroides tales como dexametasona, prednisona y prednisolona; estrógenos tales como dietilestilbestrol; antiestrógenos tales como fulvestrante, raloxifeno, tamoxifeno, toremifina, droloxifeno, y yodoxifeno, así como moduladores selectivos de receptores de estrógenos (SERMS) tales como los descritos en laspatentes e los Estados Unidos núms. 5,681,835, 5,877,219, y 6,207,716; 5α-reductasas tales como finasterida y dutasterida; hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) y análogos de estos que estimulan la liberación de hormona luteinizante (LH) y/o hormona folículo estimulante (FSH), por ejemplo agonistas y antagonistas de LHRH tales como buserelina, goserelina, leuprolida y triptorelina; progestinas tales como acetato de medroxiprogesterona y acetato de megestrol; y hormonas tiroideas tales como levotiroxina y liotironina.
Los inhibidores de la vía de transducción de señal son los inhibidores, que bloquean o inhiben un proceso químico que evoca un cambio intracelular, tal como proliferación o diferenciación celular. Los inhibidores de la transducción de señal útiles en la presente invención incluyen, por ejemplo, inhibidores de tirosina quinasas receptoras, tirosina quinasas no receptoras, bloqueadores de dominios SH2/SH3, quinasas serina/treonina, quinasas fosfotidil inositol-3, señalización de mioinositol y oncogenes Ras.
Los agentes dirigidos moleculares incluyen (a) inhibidores de tirosina quinasa receptora ('RTK'), tales como inhibidores de EGFR, que incluyen erlotinib, gefitinib y neratinib; inhibidores de VEGFR que incluyen vandetanib, semaxinib y cediranib; y los inhibidores de PDGFR; se incluyen además inhibidores de RTK que actúan en múltiples sitios receptores tales como lapatinib, que inhibe tanto EGFR como HER2, así como los inhibidores que actúan en cada uno de C-kit,
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PDGFR y VEGFR, que incluye pero no limitado a axitinib, sunitinib, sorafenib y toceranib; además se incluyen inhibidores de BCR-ABL, c-kit y PDGFR, tales como imatinib; (b) agentes aglutinantes de FKBP, tales como un antibiótico macrólido inmunosupresor, que incluyen bafilomicina, rapamicina (sirolimus) y everolimus; (c) agentes de terapia génica, agentes de terapia antisentido y moduladores de la expresión génica tales como los retinoides y rexinoides, por ejemplo adapaleno, bexaroteno, ácido trans-retinoico, ácido 9-cis-retinoico y N-(4-hidroxifenil retinamida;
(d) agentes terapéuticos dirigidos por fenotipo, que incluyen anticuerpos monoclonales tales como alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, ibritumomab tiuxetan, rituximab y trastuzumab; (e) inmunotoxinas tales como gemtuzumab ozogamicina; (f) radioinmunoconjugados tales como 131I-tositumomab; y (g) vacunas contra el cáncer.
Varias proteínas tirosina quinasas catalizan la fosforilación de residuos tirosilo específicos en diversas proteínas implicadas en la regulación del crecimiento celular. Tales proteínas tirosina quinasas pueden clasificarse ampliamente como quinasas receptoras o no receptoras. Las tirosina quinasas receptoras son proteínas transmembrana que tienen un dominio de unión al ligando extracelular, un dominio transmembrana y un dominio de tirosina quinasa. Las tirosina quinasas receptoras se implican en la regulación del crecimiento celular y se denominan a veces receptores del factor de crecimiento.
Se ha demostrado que la activación inapropiada o no controlada de muchas de estas quinasas, por ejemplo por sobreexpresión o mutación, resulta un crecimiento celular descontrolado. Como consecuencia, la actividad aberrante de tales quinasas se ha relacionado con el crecimiento de tejido maligno. Consecuentemente, los inhibidores de tales quinasas podrían proporcionar métodos de tratamiento del cáncer.
Los receptores del factor de crecimiento incluyen, por ejemplo, receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR), erbB2, erbB4, receptor de factor de crecimiento vascular endotelial (VEGFR), tirosina quinasa con dominios de tipo inmunoglobulina y dominios de homología con el factor de crecimiento epidérmico (TIE-2), receptor del factor de crecimiento tipo insulina -I (IGFI), receptores del factor estimulante de colonias de macrófagos (cfms), BTK, ckit, cmet, factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), receptores Trk (TrkA, TrkB, y TrkC), receptores efrina (eph), y el protooncogen RET.
Varios inhibidores de los receptores de crecimiento están en desarrollo e incluyen antagonistas de ligando, anticuerpos, inhibidores de tirosina quinasa y oligonucleótidos antisentido. Los receptores y agentes del factor de crecimiento que inhiben la función del receptor del factor de crecimiento se describen, por ejemplo, en Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818; Shawver y otros, Drug Discov. Today (1997), 2(2):50-63; and Lofts, F. J. y otros, quot;Growth factor receptors as targetsquot;, New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, ed. Workman, Paul y Kerr, David, CRC press 1994, London. en. Ejemplos específicos de inhibidores de tirosina quinasa receptor incluyen, pero no se limitan a, sunitinib, erlotinib, gefitinib e imatinib.
Tirosina quinasas que no son quinasas receptoras de factor de crecimiento se denominan tirosina quinasas no receptora. Las tirosina quinasas no receptora útiles en la presente invención, que son objetivos u objetivos potenciales de fármacos anticancerígenos, incluyen cSrc, Lck, Fyn, Yes, Jak, cAbl, FAK (quinasa de adhesión Focal), Brutons tirosina quinasa y Bcr-Abl. Tales quinasas y agentes no receptoras que inhiben la función de tirosina quinasa no receptora se describen en Sinh, S. and Corey, S.J., J. Hematotherapy & Stem Cell Res. (1999) 8(5): 465 -80; and Bolen, J.B., Brugge, J.S., Annual Review of Immunology. (1997) 15: 371-404.
Los bloqueadores del dominio SH2/SH3 son agentes que interrupen la unión del dominio SH2 o SH3 en una variedad de enzimas o proteínas adaptadoras que incluyen, la subunidad p85 de PI3-K, las quinasas de la familia Src, las moléculas adaptadoras (Shc, Crk, Nck, Grb2) y Ras-GAP. Los dominios SH2/SH3 como objetivos para fármacos anticancerígenos se discuten en Smithgall, T.E., J. Pharmacol. Toxicol. Methods. (1995), 34(3): 125-32. Inhibidores de serina/treonina quinasas que incluyen bloqueadores de cascada de MAP quinasa que incluyen bloqueadores de quinasas Raf (rafk), mitógeno o quinasa regulada extracelular (MEK) y quinasas reguladas extracelulares (ERK); y bloqueadores de miembros de la familia de la proteína quinasa C que incluyen bloqueadores de PKC (alfa, beta, gamma, épsilon, mu, lambda, iota, zeta). Familia de quinasa IkB (IKKa, IKKb), quinasas de familia de PKB, miembros de la familia de AKT quinasa y quinasas de receptor beta de TGF. Tales quinasas serina/treonina e inhibidores de estas se describen en Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., J. Biochemistry. (1999) 126 (5): 799-803; Brodt, P, Samani, A, & Navab, R, Biochem. Pharmacol. (2000) 60:1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F., Cancer Surv. (1996) 27:41-64; Philip, P.A, y Harris, AL, Cancer Treat. Res. (1995) 78: 3-27; Lackey, K. y otros Bioorg. Med. Chem. Letters, (2000) 10(3): 223226; patente de los Estados Unidos núm. 6.268.391; yMartinez-Lacaci, I., y otros, Int. J. Cancer (2000), 88(1): 44-52. Los inhibidores de los miembros de la familia de la fosfotidil-inositol-3-quinasa que incluyen bloqueantes de PI3-quinasa, ATM, ADN-PK y Ku además son útiles en la presente invención. Tales quinasas se discuten en Abraham, RT. Current Opin. Immunol. (1996), 8(3): 412-8; Canman, C.E., Lim, D.S., Oncogene (1998) 17(25): 3301-8; Jackson, S.P., Int. J. Biochem. Cell Biol. (1997) 29(7):935-8; y Zhong, H. y otros, Cancer Res. (2000) 60(6):1541-5. Además son útiles en la presente invención los inhibidores de señalización de Mioinositol tales como los bloqueadores de fosfolipasa C y los análogos de Mioinositol. Tales inhibidores de señal se describen en Powis, G., y Kozikowski A, (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, ed., Paul Workman y David Kerr, CRC Press 1994, London.
Otro grupo de inhibidores de la vía de transducción de señales son inhibidores del oncogén Ras. Tales inhibidores incluyen inhibidores de la farnesiltransferasa, geranil-geranil transferasa y proteasas CAAX, así como oligonucleótidos
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antisentido, ribozimas e inmunoterapia. Se ha demostrado que tales inhibidores bloquean la activación ras en células que contienen ras mutante silvestre, actuando de ese modo como agentes antiproliferación. La inhibición del oncogén ras se discute en Scharovsky, O.G., Rozados, V.R, Gervasoni, SI, Matar, P., J. Biomed. Sci. (2000) 7(4): 292-8; Ashby, M.N., Curr. Opin. Lipidol. (1998) 9(2): 99 -102; y Oliff, A., Biochim. Biophys. Acta, (1999) 1423(3):C19-30.
Como se mencionó anteriormente, los antagonistas de anticuerpo para la unión del ligando receptor quinasa además pueden servir como inhibidores de la transducción de señales. Este grupo de inhibidores de la vía de transducción de señales incluye el uso de anticuerpos humanizados para el dominio extracelular de unión al ligando de las tirosinas quinasas receptoras. Por ejemplo, el anticuerpo específico Imclone C225 EGFR (ver Green, M.C. y otros, Cancer Treat. Rev., (2000) 26(4): 269-286); anticuerpo Herceptin® erbB2 (ver Stem, DF, Breast Cancer Res. (2000) 2(3):176-183); y anticuerpo específico 2CB VEGFR2 (ver Brekken, R.A. y otros, Cancer Res. (2000) 60(18):5117-24).
Los inhibidores de la angiogénesis no receptores de quinasa pueden encontrar uso también en la presente invención. Los inhibidores de VEGFR y TIE2 relacionados con la angiogénesis se discuten anteriormente con respecto a los inhibidores de transducción de señales (ambos receptores son receptores tirosina quinasas). La angiogénesis en general se relaciona con la señalización de erbB2 y EGFR ya que los inhibidores de erbB2 y EGFR han demostrado inhibir la angiogénesis, principalmente la expresión de VEGF. Así, la combinación de un inhibidor de erbB2/EGFR con un inhibidor de la angiogénesis tiene sentido. Como consecuencia, pueden usarse inhibidores no receptores de tirosina quinasa en combinación con los inhibidores de EGFR/erbB2 de la presente invención. Por ejemplo, anticuerpos anti-VEGF, que no reconocen VEGFR (el receptor tirosina quinasa), sino que se unen al ligando; inhibidores de pequeñas moléculas de integrina (alfav beta3) que inhibirán la angiogénesis; endostatina y angiostatina (no RTK) además pueden resultar útiles en combinación con los inhibidores de la familia erb descritos. (Ver Bruns, CJ y otros, Cancer Res. (2000), 60(11): 2926-2935; Schreiber AB, Winkler ME, & Derynck R., Science (1986) 232(4755):1250-53; Yen L. y otros, Oncogene (2000) 19(31): 3460-9).
Los agentes usados en regímenes inmunoterapéuticos además pueden ser útiles en combinación con los compuestos de fórmula (I). Existe una serie de estrategias inmunológicas para generar una respuesta inmune contra erbB2 o EGFR. Estas estrategias están generalmente en el ámbito de las vacunaciones del tumor. La eficacia de los enfoques inmunológicos puede mejorarse en gran medida mediante la inhibición combinada de las vías de señalización de erbB2/EGFR usando un inhibidor de molécula pequeña. La discusión del enfoque la vacuna inmunológica/del tumor contra la erbB2/EGFR se encuentran en Reilly RT, y otros, Cancer Res. (2000) 60(13):3569-76; y Chen Y, y otros, Cancer Res. (1998) 58(9): 1965-71.
Los agentes usados en regímenes proapoptóticos (por ejemplo, oligonucleótidos antisentido bcl-2) además pueden usarse en la combinación de la presente invención. Los miembros de la familia de proteínas Bcl-2 bloquean la apoptosis. Por lo tanto, la regulación positiva de bcl-2 se ha relacionado con la quimiorresistencia. Los estudios han demostrado que el factor de crecimiento epidérmico (EGF) estimula los miembros antiapoptóticos de la familia bcl-2. Por lo tanto, las estrategias diseñadas para regular negativamente la expresión de bcl-2 en tumores han demostrado beneficio clínico y ahora se encuentran en ensayos de Fase II/III, a saber, el oligonucleótido antisentido G3139 bcl-2 de Genta. Tales estrategias proapoptóticas usando la estrategia de oligonucleótidos antisentido para bcl-2 se discuten en Waters JS, y otros, J. Clin. Oncol. (2000) 18(9): 1812-23; y Kitada S, y otros Antisense Res. Dev. (1994) 4(2): 71-9.
Los inhibidores de la señalización del ciclo celular inhiben las moléculas implicadas en el control del ciclo celular. Una familia de proteínas quinasas llamadas quinasas dependientes de ciclina (CDK) y su interacción con una familia de proteínas denominadas ciclinas controla la progresión a través del ciclo celular eucariota. La activación coordinada y la inactivación de diferentes complejos ciclina/CDK es necesaria para la progresión normal a través del ciclo celular. Varios inhibidores de la señalización se están desarrollando. Por ejemplo, se describen ejemplos de quinasas dependientes de ciclina, que incluyen CDK2, CDK4 y CDK6 e inhibidores para la misma, por ejemplo, RosaniaGR & Chang Y-T., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-30.
Otros agentes moleculares dirigidos incluyen los agentes aglutinantes FKBP, tales como el antibiótico macrólido inmunosupresor, rapamicina, agentes de terapia génica, agentes de terapia antisentido, y moduladores de la expresión génica tales como los retinoides y rexinoides, por ejemplo, adapaleno, bexaroteno, ácido trans-retinoico, ácido 9-cisretinoico, y N-(4-hidroxifenil) retinamida; agentes terapéuticos dirigidos al fenotipo, que incluyen: anticuerpos monoclonales como el alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, ibritumomab tiuxetan, rituximab y trastuzumab; inmunotoxinas tales como gemtuzumab ozogamicina, radioinmunoconjugados tales como 131-tositumomab, y vacunas contra cáncer.
Los antibióticos antitumorales incluyen (a) antraciclinas tales como daunorubicina (que incluyen daunorubicina liposómica), doxorubicina (que incluyen doxorubicina liposómica), epirubicina, idarubicina y valrubicina; (b) agentes relacionados con estreptomicidas tales como bleomicina, actinomicina, mitramicina, mitomicina, porfiromicina; y (c) antracendionas, tales como mitoxantrona y pixantrona. Las antraciclinas tienen tres mecanismos de acción: intercalando entre los pares de bases de la cadena de ADN/ARN; inhibiendo la enzima topoiosomerasa II; y creando radicales libres de oxígeno mediada por hierro que dañan el ADN y las membranas celulares. Las antraciclinas se caracterizan generalmente como inhibidores de la topoisomerasa II.
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Los anticuerpos monoclonales incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales murinos, quiméricos o parcial o totalmente humanizados. Tales anticuerpos terapéuticos además incluyen, pero no se limitan a anticuerpos dirigidos a objetivos o vías asociadas directa o indirectamente con CK2. Los anticuerpos terapéuticos pueden incluir además, pero no están limitados a, anticuerpos dirigidos a objetivos o vías que interactúan directamente con objetivos o vías asociadas con los compuestos de la presente invención. En una variación, los anticuerpos terapéuticos incluyen, pero no se limitan a agentes anticancerígenos tales como Abagovomab, Adecatumumab, Afutuzumab, Alacizumab pegol, Alemtuzumab, Altumomab pentetate, Anatumomab mafenatox, Apolizumab, Bavituximab, Belimumab, Bevacizumab, Bivatuzumab mertansine, Blinatumomab, Brentuximab vedotin, Cantuzumab mertansine, Catumaxomab, Cetuximab, Citatuzumab bogatox, Cixutumumab, Clivatuzumab tetraxetan, Conatumumab, Dacetuzumab, Detumomab, Ecromeximab, Edrecolomab, Elotuzumab, Epratuzumab, Ertumaxomab, Etaracizumab, Farletuzumab, Figitumumab, Fresolimumab, Galiximab, Glembatumumab vedotin, Ibritumomab tiuxetan, Intetumumab, Inotuzumab ozogamicin, Ipilimumab, Iratumumab, Labetuzumab, Lexatumumab, Lintuzumab, Lucatumumab, Lumiliximab, Mapatumumab, Matuzumab, Milatuzumab, Mitumomab, Nacolomab tafenatox, Naptumomab estafenatox, Necitumumab, Nimotuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Oportuzumab monatox, Oregovomab, Panitumumab, Pemtumomab, Pertuzumab, Pintumomab, Pritumumab, Ramucirumab, Rilotumumab, Rituximab, Robatumumab, Sibrotuzumab, Tacatuzumab tetraxetan, Taplitumomab paptox, Tenatumomab, Ticilimumab, Tigatuzumab, Tositumomab, Trastuzumab, Tremelimumab, Tucotuzumab celmoleukin, Veltuzumab, Volociximab, Votumumab, Zalutumumab, and Zanolimumab. En algunas modalidades, tales anticuerpos monoclonales incluyen, alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, daclizumab, gemtuzumab, ibritumomab tiuxetan, pantitumumab, rituximab, tositumomab, y trastuzumab; en otras modalidades, tales anticuerpos monoclonales incluyen alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, ibritumomab tiuxetan, rituximab, y trastuzumab; alternativamente, tales anticuerpos incluyen daclizumab, gemtuzumab, y pantitumumab. En otra modalidad, los anticuerpos terapéuticos útiles en el tratamiento de las infecciones incluyen pero no se limitan a Afelimomab, Efungumab, Exbivirumab, Felvizumab, Foravirumab, Ibalizumab, Libivirumab, Motavizumab, Nebacumab, Pagibaximab, Palivizumab, Panobacumab, Rafivirumab, Raxibacumab, Regavirumab, Sevirumab, Tefibazumab, Tuvirumab, y Urtoxazumab. En otra modalidad, los anticuerpos terapéuticos pueden ser útiles en el tratamiento de la inflamación y/o trastornos autoinmunes, que incluyen, pero no se limitan a, Adalimumab, Atlizumab, Atorolimumab, Aselizumab, Bapineuzumab, Basiliximab, Benralizumab, Bertilimumab, Besilesomab, Briakinumab, Canakinumab, Cedelizumab, Certolizumab pegol, Clenoliximab, Daclizumab, Denosumab, Eculizumab, Edobacomab, Efalizumab, Erlizumab, Fezakinumab, Fontolizumab, Fresolimumab, Gantenerumab, Gavilimomab, Golimumab, Gomiliximab, Infliximab, Inolimomab, Keliximab, Lebrikizumab, Lerdelimumab, Mepolizumab, Metelimumab, Muromonab-CD3, Natalizumab, Ocrelizumab, Odulimomab, Omalizumab, Otelixizumab, Pascolizumab, Priliximab, Reslizumab, Rituximab, Rontalizumab, Rovelizumab, Ruplizumab, Sifalimumab, Siplizumab, Solanezumab, Stamulumab, Talizumab, Tanezumab, Teplizumab, Tocilizumab, Toralizumab, Ustekinumab, Vedolizumab, Vepalimomab, Visilizumab, Zanolimumab, y Zolimomab aritox. Aun en otra modalidad, tales anticuerpos terapéuticos incluyen, pero no se limitan a adalimumab, basiliximab, certolizumab pegol, eculizumab, efalizumab, infliximab, muromonab-CD3, natalizumab, y omalizumab. Alternativamente, el anticuerpo terapéutico puede incluir abciximab o ranibizumab. Generalmente, un anticuerpo terapéutico no se conjuga, o se conjuga con un radionúclido, citoquina, toxina, enzima activadora de fármacos o un liposoma relleno de fármaco.
Los inhibidores de Akt incluyen 1L6-Hidroximetil-chiro-inositol-2-(R)-2-O-metil-3-O-octadecil-sn-glicerocarbonato, SH-5 (Calbiochem Cat. Núm. 124008), SH-6 (Calbiochem Cat. Núm. Cat. Núm. 124009), Calbiochem Cat. Núm. 124011, Triciribina (NSC 154020, Calbiochem Cat. Núm. 124012), 10-(4'-(N-dietilamino) butil)-2-clorofenoxazina, Cu(II)Cl2(3formilcromona tiosemicarbazona) 1,3 dihidro-1-(1-((4-(6-fenil-1H-imidazo[4,5-g]quinoxalin-7-il)fenil)metil)-4-piperidinil)2H-benzimidazol-2-ona, GSK690693 (4-(2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7-{[(3S)-3-piperidinilmetil]oxi}-1H-imidazol [4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol), SR13668 ((2,10-dicarbetoxi-6-metoxi-5,7-dihidro-indolo[2,3-b] carbazol), GSK2141795, Perifosina, GSK21110183, XL418, XL147, PF-04691502, BEZ-235 [2-Metil-2-[4-(3-metil-2-oxo-8-quinolin3-il-2,3-dihidro-imidazo[4,5-c]quinolin-1-il)-fenil]-propionitrilo], PX-866 ((ácido acético (1S,4E,10R,11R,13S,14R)-[4diallilaminometileno-6-hidroxi-1-metoximetil-10,13-dimetil-3,7,17-trioxo-1,3,4,7,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahidro-2oxa-ciclopenta[a]fenantreno-11-il éster)), D-106669, CAL-101, GDC0941 (2-(1H-indazol-4-il)-6-(4-metanesulfonilpiperazin-1-ilmetil)-4-morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidina), SF1126, SF1188, SF2523, TG100-115 [3-[2,4-diamino-6-(3hidroxifenil)pteridin-7-il]fenol]. Un número de estos inhibidores, tales como, por ejemplo, BEZ-235, PX-866, D 106669, CAL-101, GDC0941, SF1126, SF2523 además se identifican en la técnica como inhibidores PI3K/mTOR; son bien conocidos ejemplos adicionales, tales como el clorhidrato de PI-103 [3-[4-(4-morfolinilpirido [3',2':4,5] furo[3,2d]pirimidin-2-il]fenol] Los inhibidores de PI3K adicionales conocidos incluyen los inhibidores de LY294002 [2-(4morfolinil)-8-fenil-4H-1-benzopiran-4-ona] y wortmanina mTOR conocidos por los expertos en la técnica incluye temsirolimus, deforolimus, sirolimus, everolimus, zotarolimus y biolimus A 9. Un subgrupo representativo de tales inhibidores incluye temsirolimus, deforolimus, zotarolimus y biolimus A9.
Los inhibidores de HDAC incluyen (i) ácidos hidroxámicos tales como Tricostatina A, vorinostat (ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA)), panobinostat (LBH589) y belinostat (PXD101) (ii) péptidos cíclicos, tales como trapoxina B y depsipéptidos, tales como romidepsina NSC 630176), (iii) benzamidas, tales como MS-275 (3-piridilmetil-N-{4-[(2aminofenil) -carbamoil]-bencil}-carbamato), CI994 (4-acetilamino-N-(2aminofenilo)-benzamida) y MGCD0103 (N-(2aminofenil)-4-((4-(piridin-3-il) pirimidin-2-ilamino) metil) benzamida), (iv) cetonas electrofílicas, (v) compuestos ácidos alifáticos tales como fenilbutirato y ácido valproico.
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Los inhibidores de Hsp90 incluyen ansamicinas de benzoquinona tales como geldanamicina, 17-DMAG (17dimetilamino-etilamino-17-demetoxigeldanamicina), tanespimicina (17-AAG, 17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina), EC5, retaspimicina (IPI-504, 18,21 -didehidro-17-demetoxi-18,21-didesoxo-18,21-dihidroxi-17-(2-propenilamino)geldanamicina), y herbimicina; pirazoles tales como CCT 018159 (4-[4-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il)-5-metil-1Hpirazol-3-il]-6-etil-1,3-benzendiol); macrólidos, tales como radicocol; así como BIIB021 (CNF2024), SNX-5422, STA9090 y AUY922.
Varios agentes incluyen altretamina, trióxido de arsénico, nitrato de galio, hidroxiurea, levamisol, mitotano, octreotida, procarbazina, suramina, talidomida, lenalidomida, compuestos fotodinámicos tales como metoxsalen y porfímero de sodio, y los inhibidores de proteasoma tal como bortezomib.
Los agentes de terapia biológica son: interferones tales como interferon-α2a e interferon-α2b, y las interleucinas tales como aldesleucina, denileucina diftitox y oprelvecina.
Además de estos agentes anticancerígenos que pretenden actuar contra las células cancerosas, además se visualizan terapias de combinación que incluyen el uso de agentes de protección o adyuvantes, que incluyen: agentes citoprotectores tales como amifostina, dexrazoxana y mesna, fosfonatos tales como parmidronato y ácido zoledrónico, y factores de estimulación tales como la epoetina, darbepoetina, filgrastim, PEG filgrastim y el sargramostim.
Ejemplos:
Los siguientes ejemplos ilustran y no limitan la invención.
Ejemplo 1. Síntesis de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina
Al frasco de reacción se añadió 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina (3g, 16 mmol) junto con una solución de hidróxido de amonio (48 mL). La reacción heterogénea se calentó a reflujo a 85°C durante 12 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se filtró, se lavó con agua y se secó al vacío durante la noche. El producto, 5cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, se recogió como un sólido blanquecino con un rendimiento del 88%. LCMS (M+1=169
Ejemplo 2. Síntesis de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilcarbamato de terc-butilo
Al frasco de reacción se añadió 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (2,4 g, 14,1 mmol) al diclorometano (35 mL) junto con dicarbonato de di-terc-butilo (3,7 g, 17 mmol), trietilamina (2,4 mL, 17 mmol) y DMAP (100 mg, 0,8 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas, después se diluyó con DCM, se lavó con solución saturada de NaHCO3 (3x) seguido de lavado con salmuera. La capa orgánica se aisló, se secó sobre MgSO4, anhidro, se filtró y se evaporó hasta sequedad. El producto, 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilcarbamato de terc-butilo, se recogió como un sólido blanquecino con un rendimiento de 98%. LCMS (M-t-Butilo=213)
Ejemplo 3. Síntesis de 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilcarbamato de terc-butilo
A 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilcarbamato de terc-butilo (3,7 g, 13,8 mmol) en DMF (36 mL), se añadió gota a gota POCl3 (7,7 mL, 82,9 mmol) a 0°C. Después que se completó la adición, la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 8 horas. Después, la reacción se detuvo por adición lenta a 6N de NaOH enfriado con hielo. La mezcla se diluyó con agua, después el sólido se recogió por filtración. El sólido se lavó varias veces más con agua y se secó al vacío durante la noche. El producto, 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a] pirimidin-7-ilcarbamato de terc-butilo, se
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recogió como un sólido con un rendimiento de 27%. El producto no ionizó en LCMS a menos que primero se desprotegió usando TFA/DCM (1:1). LCMS (M+1=197)
Ejemplo 4. Síntesis de 7-amino-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Se añadió 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilcarbamato de terc-butilo (1,1 g, 3,8 mmol) a 1,4-dioxano (15 mL) junto con 3-cloroanilina (2,4 mL, 22,6 mmol) y monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (73 mg, 0,4 mmol). La reacción se calentó a 95°C durante 12 horas, después se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se filtró. El análisis del sólido recuperado por LCMS mostró la masa del producto (M+1 = 288), así como, producto con masa de cloro anilina imina (M+1= 397). Para convertir completamente esta mezcla en el producto deseado, el sólido se disolvió en 6 mL de MeOH/HCl conc. HCl (1:1) y se calentó a 60°C durante 1,5 horas. La reacción se detuvo por adición lenta a 6N de NaOH enfriado con hielo. La mezcla se diluyó con agua, después el sólido se recogió por filtración. El sólido se lavó varias veces más con agua y después se secó al vacío durante la noche. El producto, 7-amino-5-(3-clorofenilamino) pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído, se recogió en forma de sólido rojo anaranjado con un rendimiento de 38%. LCMS (M+1=288)
Ejemplo 5. Síntesis de 5-((7-amino-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
A un frasco de reacción, se añadió 7-amino-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (411 mg, 1,4 mmol) a etanol (5,2 mL) junto con hidantoína (143 mg, 1,4 mmol) y piperidina (141 µL, 1,4 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante 60 minutos en el microondas. La reacción se enfrió después a temperatura ambiente y se diluyó con agua. El sólido se recogió por filtración, se lavó con agua y etanol frío. El material se secó al vacío durante la noche. Se recuperó el producto 5-((7-amino-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona en forma de sólido rojo en 54 % rendimiento. LCMS (M+1 = 370)
Ejemplo 6. Síntesis de N-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidina-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7il)piperidina-4-carboxamida
Al frasco de reacción, se añadió lentamente 5-((7-amino-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (15 mg, 0,04 mmol) a DMF (0,2 mL) junto con HBTU (30 mg, 0,08 mmol), DIEA (28µL, 0,16 mmol) y ácido 1-(terc-butoxicarbonil)piperidina-4-carboxílico (18 mg, 0,08 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas y después se calentó a 95°C durante 4 horas. La reacción se enfrió después a temperatura ambiente y se diluyó con agua. El sólido se recogió por filtración, se lavó con agua, solución de HCl 1 N y más agua. El material se disolvió después en DCM/MeOH al 5% y se purificó mediante HPLC preparativa. Las fracciones aisladas se combinaron y se evaporaron hasta sequedad. El material se disolvió en 1 mL de TFA/DCM (1:1) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se eliminó por evaporación bajo una corriente de nitrógeno y el material crudo se lavó con NaOH 1N seguido de agua. El sólido se recogió por filtración y se secó al vacío durante la noche. El producto N-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7il) piperidina-4-carboxamida, se recuperó como un sólido con un rendimiento de 2%. LCMS (M+1 = 481).
La Tabla 1 más abajo muestra las actividades biológicas de los Ejemplos 5 y 6 enumerados como Compuestos A1 y B1. Tabla 1.
Compuesto
CK2: (µM) IC50 PIM2: IC50 (5 µM de ATP) AB: (µM) MDAMB453 AB: BxPC3 (µM)
A1
lt;0,1 1.1779 2.464 16.599
B1
lt;1,0 2.5000
Ejemplo 7. Síntesis de 5-cloro-N-ciclopropilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina
A 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina (200 mg, 1,06 mmol) en ACN se le añadió Et3N (148 µl, 1,06 mmol) y ciclopropilamina (75 µl, 1,06 mmol). La reacción se calentó a reflujo a 80°C durante la noche. La mezcla se concentró a presión reducida, se disolvió en DCM y se lavó con agua. La capa orgánica resultante se secó sobre Na2SO4y se
25 concentró a presión reducida para proporcionar 156 mg de 5-cloro-N-ciclopropilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (70% de rendimiento). LCMS (M+1=209)
Ejemplo 8. Síntesis de 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
A 5-cloro-N-ciclopropilpirazolo[1,5-a] pirimidin-7-amina (156 mg, 0,75 mmol) en DMF se añadió POCl3 (205 µl, 2,25
40 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadió hielo para detener el exceso de POCl3 después la mezcla se neutralizó con NaOH 1M. Se añadió DCM y el producto se extrajo tres veces. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida para producir 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído. No se pudo eliminar algún DMF residual. LCMS (M+1=237)
45 Ejemplo 9. Síntesis de 5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
55 A 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (177 mg, 0,75 mmol) en 1,4-dioxano se añadió 3cloroanilina (397 µl, 3,75 mmol). La mezcla se calentó en un microondas a 120°C durante 60 minutos. El precipitado se separó por filtración y el filtrado se purificó mediante TLC preparativa (MeOH/DCM al 1%) para proporcionar 26 mg (11% de rendimiento) de 5-(3-clorofenilamino)-7-ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído. LCMS
60 (M+1=328)
Ejemplo 10. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a] pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona
A 5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (26 mg, 0,08 mmol) se añadió hidantoína (8 mg, 0,08 mmol) y piperidina (8 µl, 0,08 mmol). La mezcla se agitó a 70°C durante el fin de semana. Las insolubilidades se separaron por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El filtrado se disolvió después en
15 MeOH y se aisló mediante HPLC preparativa para producir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=410)
Ejemplo 11. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3-fluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de Terc-butilo (0,2 g, 0,59 mmol) se suspendió en etanol (2 mL). 3-fluoroanilina (189 mg, 1,48 mmol) se añadió, seguido de 4M de HCl/dioxano (0,3 mL, 1,18 mmol). La 30 reacción se calentó a 80°C durante 6 h, y después los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se diluyó con agua (10 mL) y el pH se ajustó a 12 mediante la adición de 6M de NaOH. La solución se agitó durante 0,5 h, después el precipitado, que es una mezcla de ciclopropil(5-(3-fluorofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo y la correspondiente imina, se aislaron por filtración y se secaron al vacío. La imina se hidrolizó disolviendo en metanol (9 mL), 1,4-dioxano (3,6 mL) y 6 M de HCl (9 mL) y calentando a 60 °C durante 5 h. La solución se vertió sobre
35 hielo (50 mL) y el pH se ajustó a 12 mediante la adición de 6M de NaOH. El precipitado se aisló por filtración y se secó al vacío para proporcionar ciclopropil(5-(3-fluorofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo (172 mg, 93%). LCMS (M+1=312)
Ejemplo 12. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-fluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina40 2,4-diona
Se añadió hidantoína (69 mg, 0,69 mmol) y piperidina (69 µL, 0,69 mmoles) a 7-(ciclopropilamino)-5-(3fluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (72 mg, 0,23 mmol) disuelto en etanol (1,1 mL). La reacción se calentó a 80 °C. Después de 15 h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (5 mL), y el
55 precipitado se recogió y se lavó con etanol/agua 1:1 (5 mL). El sólido amarillo brillante se secó al vacío para proporcionar (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-fluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona (25 mg, 10% en 3 etapas). LCMS (M+1=507)
Los compuestos descritos en la Tabla 2A siguiente se prepararon usando procedimientos quımicos similares a los
60 ejemplificados en el Ejemplo 11 y Ejemplo 12. Todos los compuestos se caracterizaron por LCMS. La Tabla 2B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 2A.
Tabla 2A
Tabla 2B.
Compuesto
CK2: (µM) IC50 PIM2: (µM) IC50 PIM2: IC50 (5 µM de ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
C1
lt;0,01 1.3 gt;2,5000 1.038 15.029
D1
lt;0,01 2.2002 1.34 4.067
E1
lt;0,01 gt;2,5000 17.713 16.835
F1
lt;0,01 gt;2,5000 2.037 5.763
35 Ejemplo 13. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3,5-difluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
45 Se añadieron 3,5-difluoroanilina (29 mg, 0,22 mmol), Cs2CO3 (67 mg, 0,21 mmol) a 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5a]pirimidin-7-il(Ciclopropil) carbamato de Terc-butilo (50 mg, 0,15 mmol) disuelto en 1,4-dioxano (1 mL). Después se añadieron BINAP racémico (6 mg, 0,06 mmol) y acetato de paladio (II) (4 mg, 0,04 mmol). La mezcla se selló y se irradió a 110 °C durante 20 minutos en el microondas. Se añadió Et2O (3 mL) y la solución se filtró. El filtrado se concentró al vacío. El residuo crudo se disolvió en diclorometano (1,5 mL) y ácido trifluoroacético (1,5 mL). Después de 1 h, la
50 solución se concentró bajo una corriente de aire. El residuo se trituró con 20% de 2-propanol/hexanos. El producto se filtró para producir 7-(ciclopropilamino)-5-(3,5-difluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (39 mg, 80%). LCMS (M+1=330)
Los compuestos descritos en la Tabla 3 siguiente se prepararon usando procedimientos químicos similares a los 55 ejemplificados en el Ejemplo 13. Todos los compuestos se caracterizaron por LCMS.
Tabla 3.
Estructura
PM LCMS m/z [M+1]+ Estructura PM LCMS m/z [M+1]+
395.7 396 345.8 346
294.3 295 345.8 346
327.7 328 351.4 352
357.7 358 368.1 369
361.3 362 294.3 295
345.8 346 347.4 348
359.4 360 267.3 268
Ejemplo 14. Síntesis de (Z)5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3,5-fluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
15 Se añadió hidantoína (28 mg, 0,28 mmol) y piperidina (42 µL, 0,42 mmol) a 7-(ciclopropilamino)-5-(3,5difluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (52 mg, 0,16 mmol) disuelto en etanol (1 mL). La reacción se calentó a 80°C. Después de 12 h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (2 mL) y el precipitado se recogió y se lavó con etanol:agua 1:1 (5 mL). El sólido se secó al vacío para proporcionar (Z)-5-((7(ciclopropilamino)-5-(3,5-difluorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (18 mg, 28% en
20 3 etapas). LCMS (M+1=440)
Los compuestos descritos en las Tablas siguientes se prepararon usando procedimientos quımicos similares a los ejemplificados en el Ejemplo 14. Todos los compuestos se caracterizaron por LCMS. La Tabla 4B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 4A.
25 Tabla 4A
Tabla 4B.
Compuesto
CK2: (µM) IC50 PIM2: IC50 ATP) (5 µM de AB: (µM) MDAMB453 AB: BxPC3 (µM)
G1
lt;0,01 gt; 2,5000 10.006 gt; 30
H1
lt;0,01 gt; 2,5000 0.991 3.209
I1
lt;0,01 gt; 2,5000 11.121 15.148
J1
lt;0,01 2.4799 7.116 3.924
K1
lt;0,01 gt; 2,5000 7.711 5.66
L1
lt;0,01 gt; 2,5000 0.5 1.354
M1
lt;0,01 gt; 2,5000
N1
lt;0,01 1.9706
O1
lt;0,01 gt; 2,5000
P1
lt;0,01 gt; 2,5000
Q1
lt;0,01 gt; 2,5000
R1
lt;0,01 gt; 2,5000
S1
lt;0,01 2.041
Los compuestos descritos en la Tabla 5 siguiente se prepararon siguiendo el esquema general más abajo usando procedimientos químicos similares al Ejemplo 13 y Ejemplo 14.
Tabla 5.
Ejemplo 15. Síntesis de 5-(3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilmetilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
30 A 5-cloro-3-formilpirazolo [1,5-a] pirimidin-7-il (ciclopropilmetil) carbamato de terc-butilo (50 mg, 0,14 mmol) en 1 mL de 1,4-dioxano se añadió carbonato de cesio 65 mg, 0,2 mmol), Pd (OAc)2 (4 mg, 0,006 mmol), (±)-BINAP (5 mg, 0,009 mmol), 3-cloro-4-fluoroanilina (31 mg, 0,21 mmol). La mezcla de reacción se calentó en microondas a 110°C durante 20 minutos. Después, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua y el producto se extrajo con éter. La capa orgánica se concentró después a presión reducida y el producto crudo se disolvió en una mezcla 1:1 de
35 diclorometano y ácido trifluoroacético a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró con 10 mL de diclorometano. A la mezcla de reacción se añadió éter/hexanos (1:1) y el frasco se sonicó durante 10 minutos y después se filtró para obtener el precipitado amarillo. El precipitado se lavó con hexano para producir 5-(3-cloro-4fluorofenilamino)-7-(ciclopropilmetilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído. LCMS (M+1=460)
40 Ejemplo 16. Síntesis de 5-((5-(3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilmetilamino)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
A 5-(3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilmetilamino) pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (40 mg, 0,09 mmol) en
55 1,0 mL de etanol se añadió hidantoína (9 mg, 3 mmol) y piperdina (8 µl). La reacción se calentó a 80°C durante la noche, se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y se lavó con etanol para producir 20 mg (31% de rendimiento) de (Z)5-((5-(3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilmetilamino) pirazolo [1,5-a]pirimidin-3-il)metileno) imidazolidina-2,4-diona como un polvo amarillo. LCMS (M+1=442)
60 Los compuestos descritos en las tablas siguientes se prepararon usando procedimientos quımicos similares a los ejemplificados en el Ejemplo 15 y Ejemplo 16. Todos los compuestos se caracterizaron por LCMS. La Tabla 6B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 6A.
Tabla 6A
Tabla 6B.
Compuesto
CK2: (µM) IC50 PIM2: IC50 ATP) (5 µM de AB: (µM) MDAMB453 AB: BxPC3 (µM)
T1
lt;0,01 0.5087 2.196 12.315
U1
lt;0,1 gt; 2,5000
V1
lt;0,1 gt; 2,5000 5.086 6.188
W1
lt;0,1 gt; 2,5000 7.424 9.207
X1
lt;0,1 gt; 2,5000 6.935 7.986
Y1
lt;0,1 gt; 2,5000
Z1
lt;0,1
A2
lt;0,1
B2
lt;0,1
C2
lt;0,1
D2
lt;0,1
E2
lt;0,01
F2
lt;0,1
G2
lt;0,01
H2
lt;0,01
I2
lt;0,1
Ejemplo 17. Síntesis de 5-azido-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
A 5-cloro-3-formilpirazolo [1,5-a]pirimidin-7-il (ciclopropil) carbamato de terc-butilo (500 mg, 1,5 mmol) en dimetilformamida se añadió azida de sodio (150 mg, 2,3 mmol) después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se dividió después entre acetato de etilo/agua. La capa orgánica se recogió, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a alto vacío para producir 5-azido-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin7-il(ciclopropil) carbamato de terc-butilo. El producto crudo se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS (M+1=344)
Ejemplo 18. Síntesis de 5-amino-7-(clopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
horas. La mezcla se filtró a través de celite y se sonicó con una mezcla 1:1 de acetato de etilo y hexano. El sólido amarillo se filtró y se secó a presión reducida y se disolvió en DCM/TFA (1:1) a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se lavó con solución acuosa de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se concentró y se secó a alto vacío para producir 5-amino-7-(ciclopropilamino) pirazolo [1,5-a]pirimidina-3carbaldehído como producto 310 mg (95% de rendimiento en tres etapas). LCMS (M+1=218)
Ejemplo 19. Síntesis de (Z)-5-((5-amino-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il) metileno)imidazolidin-2,4-diona
20 A 5-amino-7-(ciclopropilamino) pirazolo [1,5-a] pirimidina-3-carbaldehído (75 mg, 0,34 mmol) en 1,0ml de etanol se añadió hidantoína (34 mg, 0,34 mmol) y piperdina (33 µl). La reacción se calentó a 80°C durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el precipitado amarillo se filtró, se lavó con etanol para producir 45 mg (44% de rendimiento) de Z)-5-((5-amino-7-(ciclopropilamino)pirazolo [1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidin-2,4-diona. LCMS (M+1=300)
25 Ejemplo 20. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo [1,5-a]pirimidin-5-ilcarbamato de metilo
A 5-amino-7-(ciclopropilamino) pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (50 mg, 0,23 mmol) en 1,0 mL de tetrahidrofurano se le añadió cloroformiato de metilo (35 µl, 0,46 mmol) y DIEA (39 ul). La mezcla de reacción se calentó
40 a 60°C durante una hora. La reacción se dividió entre acetato de etilo/agua. La capa orgánica se recogió, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a alto vacío para producir 7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5ilcarbamato de metilo. El producto crudo se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS (M+ 1 =276)
Ejemplo 21. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a] pirimidin-545 ilcarbamato de (Z)-metilo
A 7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo [1,5-a] pirimidin-5-ilcarbamato de metilo (33 mg, 0,12 mmol) se añadió hidantoína (12 mg, 0,12 mmol) y piperdina (11 ul). La reacción se calentó a 80°C durante dos horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró el precipitado amarillo y se lavó con etanol para producir 15 mg (40% de rendimiento) de
60 7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno) metil) pirazolo [1,5-a]pirimidin-5-ilcarbamato de (Z)-metilo. LCMS (M+1=358)
Ejemplo 22. Síntesis de N-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)ciclopropanocarboxamida
10 A 5-amino-7-(ciclopropilamino) pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (etapa b) (58 mg, 0,266 mmol) en 1,0 mL de tetrahidrofurano se añadió cloruro de ciclopropanocarbonilo (38 µl, 0,419 mmol) , y DIPEA (39,0 µl). La mezcla de reacción se calentó a 60°C durante una hora. La reacción se dividió entre acetato de etilo y agua, la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio concentrado a alto vacío para producir N-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo [1,5-a]
15 pirimidin-5-il) ciclopropanocarboxamida. El producto crudo se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS (M+1=286)
Ejemplo 23. Síntesis de (Z)-N-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)ciclopropanocarboxamida 20
30 A N-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)ciclopropanocarboxamida (74 mg, 0,26 mmol) en 1,0 mL de etanol se añadió hidantoína (26 mg, 0,26 mmol) y piperdina (24 µl). La reacción se calentó a 80°C durante dos horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró y se diluyó con MeOH. El producto se purificó por HPLC preparativa para producir 14 mg (20% de rendimiento) de (Z)-N-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a] pirimidin-5-il)ciclopropanocarboxamida. LCMS (M+1=368)
35 Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando procedimientos químicos similares a los ejemplificados en el Ejemplo 20 y Ejemplo 16. Todos los compuestos se caracterizaron por LCMS. La Tabla 7B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 7A.
40 Tabla 7A
15 Tabla 7B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM de ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
J2
lt;0,1 gt; 2,5000
K2
lt;0,01 gt; 2,5000 11.768 9.93
L2
lt;0,01 4.17 10.986
Ejemplo 24. Síntesis de 5-((5-(cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (0,5 g, 1,48 mmol) se disolvió en ácido
40 acético glacial (5 mL). Se añadieron NaOAc (1,21 g, 14,8 mmol) e hidantoína (356 mg, 3,56 mmol) y la reacción se colocó en un baño a 110 °C durante 4 días. La solución se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (15 mL). El precipitado se filtró y después se trituró con etanol (5 mL) y después CH2Cl2 (5 mL) para producir (Z)-5-((5-(cloro-7(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (202 mg, 43%). LCMS (ES): gt;85% puro, m/z 319 [M+1]+.
45 Ejemplo 25. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
60 (Z)-5-((5-(cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (25 mg, 0,08 mmol) se suspendió en NMP (0,2 mL). clorhidrato de 4,4-difluoropiperidina (60 mg, 0,38 mmol) y diisopropiletilamina (67 µl, 0,38 mmol) se añadieron y después la reacción se irradió en el microondas a 140 °C durante 20 min. El producto se purificó por HPLC preparativa para proporcionar (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin
65 3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (5.9 mg, 14%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 404 [M+1]+.
Ejemplo 26. Síntesis de 5-(ciclopentilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído.
5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (1.0 eq, 105 mg, 0,312 mmol) se disolvió en DMF (1 ml) en un frasco. Se añadieron K2CO3 (1,5 eq, 64 mg, 0,463 mmol) y ciclopentilamina (1,5 eq, 46 µl, 0,465 mmol) y la mezcla se agitó a 50°C durante una hora. Se añadió una cantidad adicional de ciclopentilamina (1,5 eq, 46 15 µl, 0,465 mmol) y la mezcla se agitó a 70°C durante 2 horas. Se añadió agua y el precipitado resultante se filtró y se secó para proporcionar 130 mg de sólido. Este sólido se agitó en 4 N de HCl en dioxano (4 mL) a temperatura ambiente durante 4 horas. Se añadieron metanol (1 mL) y 6N de HCl acuoso (2 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se agitó posteriormente durante la noche a 60 °C para completar la hidrólisis de la imina. La reacción se neutralizó con 6N de NaOH y el compuesto se extrajo con cloruro de metileno. Después de secar sobre
20 Na2SO4, y evaporación de los volátiles, el material se trituró en acetato de etilo para formar un sólido. Se aisló 5(ciclopentilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído como un sólido por filtración (21 mg). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 286 [M+H]+.
Ejemplo 27. Síntesis de 5-((5-(ciclopentilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina25 2,4-diona.
35 Se mezcló 5-(ciclopentilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a] pirimidina-3-carbaldehído (1,0 eq, 20 mg, 0,070 mmol) en un frasco con hidantoína (2,8 eq, 20 mg , 0,20 mmol) en Etanol (0,3 mL). Se añadió piperidina (2,9 eq, 20 µl, 0,202 mmol) y la mezcla se agitó a 90°C durante 3 horas. La mezcla se enfrió, el precipitado se filtró, se lavó con etanol y se secó. Se aisló (Z)-5 ((5-(ciclopentilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il) metileno)imidazolidin-2,4-diona
40 como un sólido (25 mg, 100%). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 368 [M+H]+.
Los compuestos enumerados en la siguiente Tabla 6 son el Ejemplo 25, Ejemplo 26 y Ejemplo 27.
Tabla 8. 45
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM de ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
M2
lt;0,01 0.359 6.676 4.872
N2
lt;0,01 0.8453 3.042 9.185
O2
lt;0,01 gt; 2,5000 4.514 10.417
55 Ejemplo 28. Síntesis de (R,Z)-5-((7-(ciclopropropilamino)-5-(3-fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
(R,Z)-5-((7-(Ciclopropilamino)-5-(3-fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona se preparó usando los procedimientos químicos similares a los usados para preparar (Z)-5-((5-(ciclopentilamino)-7(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. El compuesto se aisló como un sólido (84 mg, 75% de rendimiento). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 372 [M+H]+.
Ejemplo 29. Síntesis (Z)-5-((5-((1r,4r)-4-aminociclohexilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metilenolimidazolidina-2,4-diona 2,2,2-trifluoroacetato.
5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato(1,0 eq, 113 mg, 0,335 mmol) se mezcló en un frasco
20 con 4-aminociclohexilcarbamato de trans-terc-butilo (1,0 eq, 81 mg, 0,335 mmol) y K2CO3 (5,0 eq, 232 mg, 1,68 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se agitó a 70°C durante 2,5 horas. Se añadió agua, el sólido se filtró y se secó. El compuesto se trató con hidantoína (3,0 eq, 100 mg), piperidina (3,0 eq, 100 µl) en etanol (2 mL) a 85-90°C durante 4,5 horas. Se añadió agua y el sólido se filtró y se secó. El sólido crudo se suspendió en cloruro de metileno (5 mL) y ácido trifluoroacético (1 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Los volátiles se evaporaron. El
25 residuo se disolvió en metanol y agua y se sometió a purificación mediante HPLC preparativa. Después de la evaporación en genevac se aisló (Z)-5-((5-((1r,4r)-4-aminociclohexilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona 2,2,2-trifluoroacetato un sólido amarillo (96 mg, 56% de rendimiento). LCMS (ES):gt;99% puro, m/z 397 [M+H]+. Dos isómeros se detectaron (relación: 97,5% y 2,5%).
30 Los siguientes compuestos se prepararon usando procedimientos químicos similares a los usados en el Ejemplo 26, Ejemplo 27, Ejemplo 28 y Ejemplo 29. Los compuestos se caracterizaron por LCMS. La Tabla 9B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 9A.
Tabla 9A 35
Tabla 9B.
Compuestos
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM de ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
P2
lt;0,01 0.7076 0.66 2.12
Q2
lt;0,01 0.2841 0.154 5.371
R2
lt;0,1 0.8783
S2
lt;0,01 1.2984 3.507 3.876
T2
lt;0,01 0.9978 2.494 6.901
U2
lt;0,01 0.7659 12.773 gt; 30
V2
lt;0,01 1.3652 1.483 1.626
W2
lt;0,01 0.8771
X2
lt;0,01 1.952
Ejemplo 30. Esquema de Síntesis de N-((1r,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)acetamida
(Z)-5-((5-((1r,4r)-4-Aminociclohexilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4
15 diona 2,2,2-trifluoroacetato (1.0 eq, 10 mg, 0,0196 mmol) y DIEA (1,2 eq, 4 ul, 0,0229 mmol) se disolvieron en NMP (0,1 ml). Se añadió anhídrido acético (1,0 eq, 2 µl, 0,0211 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió agua y el precipitado resultante se filtró y se secó para proporcionar N-((1r,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)acetamida como un sólido (8 mg). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 439 [M+H]+.
20 Ejemplo 31. Síntesis de 3-((1r,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)-1,1-dimetilurea 2,2,2-trifluoroacetato
(Z)-5-((5-((1r,4r)-4-Aminociclohexilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4
35 diona 2,2,2-trifluoroacetato (10 mg) y DIEA (1,2 eq, 4,1 ul) se mezclaron en NMP seco (0,1 ml). Se añadió cloruro de dimetilcarbámico (1,0 eq, 1,8 µl) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se diluyó con NMP (1,5 mL) y unas gotas de agua. El compuesto se purificó por HPLC preparativa y se aisló después de la evaporación en el genevac. 3-((lr,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)-1,1-dimetilurea 2,2,2-trifluoroacetato. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 468 [M+H]+. Z:E
40 relación: 86:13
Las siguientes moléculas se prepararon usando procedimientos químicos similares a los descritos en el Ejemplo 30 y Ejemplo 31 usando las aminas y anhídridos apropiados o cloruros de acilo, cloruros de sulfamoilo, cloruros de sulfonilo o cloroformiatos. Los compuestos se purificaron por HPLC preparativa, se aislaron después de la evaporación en genevac
45 y se caracterizaron por LCMS. La Tabla 10B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 10A.
Tabla 10A
Tabla 10B.
Compuesto
CK2: (µM) IC50 PIM2: IC50 ATP) (5 µM de AB: (µM) MDAMB453 AB: BxPC3 (µM)
A3
lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 30 gt; 30
B3
lt;0,1 0.5385
C3
lt;0,01 0.6791
D3
lt;0,01 0.476
E3
lt;0,01 gt; 2,5000
Las siguientes moléculas de la Tabla 10 se prepararon usando procedimientos químicos similares a los del Ejemplo 26, Ejemplo 27, Ejemplo 28 y Ejemplo 29.
62 63
Diisopropiletilamina (256 µL, 1,48 mmol) se añadió a 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (250 mg, 0,74 mmol) suspendido en etanol (2,5 mL). Se añadió bencil mercaptano (191 µl, 1,48 mmol) y la reacción fue homogénea después de ∼2 min. Después de 10 min, la reacción se diluyó con etanol (3 mL) y el precipitado se filtró y se lavó con etanol (10 mL) para producir 5-(benziltio)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (148 mg, 47%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 425 [M+1]+.
64 Ejemplo 33. Síntesis de 5-((5-(penziltio)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Se añadió hidantoína (67 mg, 0,67 mmol) y piperidina (66 µl, 0,67 mmol) a 5-(benziltio)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (95 mg, 0,22 mmol) disuelto en etanol (1,1 mL). La reacción se calentó a 80°C. Después de 15 h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (5 mL), y el precipitado se recogió y se lavó con etanol: agua 1:1 (10 mL) y después etanol (3 mL). El sólido amarillo brillante se secó al vacío para proporcionar (Z)-5-((5-(benziltio)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (75 mg, 66%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 507 [M+1]+.
5-((5-(Benziltio)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (60 mg, 0,15 mmol) se disolvió en diclorometano (1 mL) y ácido trifluoroacético (1 mL). Después de 1 h, la solución se concentró bajo una corriente de aire. El residuo se trituró con Et2O (3 mL) y el precipitado se recogió para proporcionar (Z)-5-((5-(benziltio)7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (59 mg, 98%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 407 [M+1]+.
Tabla 11.
Estructura
LCMS [M+1]+ m/z CK2: IC50 (uM) PIM2: IC50 (5um ATP) AB: MDAMB453 (uM) AB: BxPC3 (uM)
407 lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 30 11.037
Ejemplo 34. Síntesis de 5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona
A 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído. (440 mg, 1,86 mmol) en EtOH se añadió tiazolidina-2,4-diona (458 mg, 3,91 mmol) y piperidina (208 µl, 2,05 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante la noche. A la mezcla de reacción, se añadió isopropanol (3 mL) junto con 218 mg de tiazolidina-2,4-diona y 94 µl de piperidina. La temperatura se aumentó a 90 °C y la reacción se agitó a esa temperatura durante la noche. El precipitado se filtró mientras estaba caliente y se disolvió en MeOH. A la mezcla de reacción, se añadió 1 M de HCl (1 mL) y la mezcla se sonicó. El precipitado se filtró y se lavó con MeOH para producir 340 mg (54% de rendimiento) de 5-((5-cloro7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona como un polvo amarillo. LGMS (M+1=336)
Ejemplo 35. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4diona
A 5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona (20 mg, 0.06 mmol) en NMP se añadió 3-cloroanilina (38 µL, 0,36 mmol) y unos pocos gránulos de ácido p-toluenosulfónico. La reacción se calentó en microondas a 180°C durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se filtró y se purificó por HPLC preparativa y después TLC preparativa (MeOH/DCM al 1%) para producir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona como un sólido amarillo. LGMS (M+1=427)
Ejemplo 36. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(isobutilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4diona
A 5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona (30 mg, 0,09 mmol) en NMP se añadió 2-metilpropan-1-amina (20 mg, 0,268 mmol). La reacción se calentó a 130°C durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se purificó por HPLC preparativa para producir 5-((7-(ciclopropilamino)-5(isobutilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=373)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando procedimientos químicos similares a los ejemplificados en el Ejemplo 36. Todos los compuestos se caracterizaron por LCMS. La Tabla 12B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 12A.
Tabla 12A
66 67
Tabla 12B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM1: IC50 (30 µM de ATP) PIM2: IC50 (5 µM de ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
F3
lt;1,0 2,0638 1,6438
G3
lt;0,1 2,0575 1,8456 7,7 9,45
H3
lt;1,0 2,3875 gt; 2,5000
I3
lt;0,1 gt; 2,5000 0,8759
J3
lt;1,0 gt; 2,5000 gt; 2,5000
K3
lt;1,0 0,9177 1,3934
L3
lt;1,0 gt; 2,5000 1,4327
M3
lt;0,1 1,4455 1,4379
N3
lt;1,0 gt; 2,5000 gt; 2,5000
03
lt;0,1 1,2533 gt; 2,5000
P3
lt;1,0 gt; 2,5000 gt; 2,5000
Q3
lt;0,1 2,0461
R3
lt;1,0 1,82
Ejemplo 37. Síntesis de 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
A 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (4,52 g, 19,15 mmol) en cloruro de metileno (80 mL) se añadió trietilamina (3,2 mL, 23 mmol), dimetilaminopiridina (350 mg, 2,87 mmol) y dicarbonato de di-t-butilo (12,53 g, 57,44 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 60 minutos. La mezcla de reacción se transfirió a un embudo de separación, se lavó 1X con H2O, 2X con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó hasta sequedad para proporcionar un residuo oleoso. El material crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo/hexano al 0%-20%) para producir 5,68 g (rendimiento de 88%) de 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5a]pirimidin-7-il (ciclopropil)carbamato de terc-butilo. LCMS (M+1=337)
Ejemplo 38. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
A 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il (ciclopropil)carbamato de 5 terc butilo (650 mg, 1,93 mmol) en 14 mL de una mezcla 2:1 de 1,2-dimetoxietano/ EtOH se añadió ácido 3-hidroxifenil borónico (399 mg, 2,89 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (112 mg, 0,096 mmol) y solución acuosa 2M de Na2CO3 (2,9 mL, 5,79 mmol). La mezcla se agitó a 85°C durante 1 h. Los volátiles se eliminaron por evaporación rotatoria y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc/Hexanos al 0%-30%) para proporcionar 400 mg de ciclopropil(3-formil-5-(3hydroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo. (52%). LCMS (M+1=395)
Ejemplo 39. Síntesis de 7-(cipropilamino)-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído.
A ciclopropil(3-formil-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato (400 mg, 1,01 mmol) en cloruro de metileno (20 mL) se añadió TFA (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron por evaporación rotatoria y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc/hexanos al 0%40%) para proporcionar 103 mg de 7-(ciclopropilamino)-5-(3hidroxifenil)pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído. (35%). LCMS (M+1=295)
Ejemplo 40. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
A 7-(ciclopropilamino)-5-(3hidroxifenil)pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (100 mg, 0,340 mmol) en EtOH (2 mL) se añadió piperdina (67 µl, 0,680 mmol) e hidantoína (34 mg, 0,34 mmol). La reacción se agitó a 50°C durante la noche. El sólido formado se aisló por filtración para proporcionar 70 mg de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. (55%). LCMS (M+1=377)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando procedimientos químicos similares a los ejemplificados en el Ejemplo 38, Ejemplo 39, y Ejemplo 40. Todos los compuestos se caracterizaron por LCMS. La Tabla 13B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 13A.
Tabla 13 A
69 70 71 72 73 Tabla 13B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM de ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
S3
lt;0,01 0,6135 0,33 10,627
T3
lt;0,01 0,8908 0,402 1,541
U3
lt;0,01 gt; 2,5000 3,743 3,68
V3
lt;0,01 0,6492 0,477 5,171
W3
lt;0,01 gt; 2,5000 1,709 2,054
X3
lt;0,01 gt; 2,5000 0,517 13,111
Y3
lt;0,01 gt; 2,5000
Z3
lt;0,01 2,2144 0,284 2,916
A4
lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 30 gt; 30
B4
lt;0,01 2,1685 7,866 7,907
C4
lt;0,1 2,4032 1,494 3,279
D4
lt;0,01 gt; 2,5000 1,054 23,617
E4
lt;0,01 gt; 2,5000 1,174 11,78
F4
lt;0,01 gt; 2,5000 1,298 6,592
G4
lt;0,01 gt; 2,5000 1,153 1,191
H4
lt;0,01 gt; 2,5000 1,964 14,486
I4
lt;0,1 gt; 2,5000 0,683 1,898
J4
lt;0,01 0,867 4,746 gt; 30
K4
lt;0,1 1,3082 1,938 2,578
L4
lt;0,01 1,4748 1,79 0,725
M4
lt;0,01 1,2497 gt; 30 14,437
N4
lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 30 12,535
O4
lt;0,01 gt; 2,5000 17,123 1,232
P4
lt;0,01 0,0754 5,276 0,549
Q4
lt;0,01 0,2562 1,068 0,745
R4
lt;0,01 0,0487 14,882 10,61
S4
lt;0,01 gt; 2,5000 20,012 4,608
T4
lt;0,1 gt; 2,5000 1,706 2,744
U4
lt;0,01 gt; 2,5000 1,263 8,129
V4
lt;0,1 gt; 2,5000 12,417 gt; 30
W4
lt;0,01 2,084 12,278 gt; 30
X4
lt;0,01 1,7271 gt; 30 gt; 30
Y4
lt;0,01 gt; 2,5000 1,979 2,253
Z4
lt;0,01 gt; 2,5000 15,69 29,035
A5
lt;0,01 0,948 1,742
B5
lt;0,01 gt; 2,5000 26,74 5,426
C5
lt;1,0 gt; 2,5000
74 Síntesis de ácido 5-(7-(terc-butoxiicarbonil(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-2-fluorobenzoico
Procedimiento idéntico que [Ejemplo 38]. LCMS (M+1= 441) Ejemplo 41. Síntesis de ácido 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-2-fluorobenzoico
Procedimiento idéntico que [Ejemplo 39]. LCMS (M+1=341)
Ejemplo 42. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(4-fluoro-3-(morfolina-4-carbonil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3carbaldehído.
Al ácido 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-2-fluorobenzoico (75 mg, 0,22 mmol 0 en DMF (3 mL) se añadió EDCI (46 mg, 0.24 mmol), HOBt (33 mg, 0,24 mmol), y morfolina (21 mg, 0,24 mmol) La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó 1 x con bicarbonato de sodio saturado, 2X con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó hasta sequedad para proporcionar 92 mg de 7-(ciclopropilamino)-5-(4-fluoro-3-(morfolina-4-carbonil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3carbaldehído. LCMS (M+1=410)
Ejemplo 43. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(4-fluoro-3-(morfolina-4-carbonil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento idéntico que [Ejemplo 40]. LCMS (M+1=492)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando procedimientos químicos similares a los ejemplificados en el Ejemplo 42 y Ejemplo 43. Todos los compuestos se caracterizaron por LCMS. La Tabla 14B muestra las actividades biológicas de los compuestos enumerados en la Tabla 14A.
Tabla 14A
Tabla 14B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM de ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
D5
lt;0,1 gt; 2,5000 2,443 1,208
E5
lt;0,1 gt; 2,5000
F5
lt;0,01 gt; 2,5000 0,948 1,808
G5
lt;0,01 gt; 2,5000 0,435 1,841
Ejemplo 44. Síntesis ciclopropil(5-(2-fluoropiridin-4-il)-3-formlpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
A 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (1 g, 3 mmol) en 29 mL de una mezcla
2:1 de 1,2-dimetoxietano/EtOH se añadió ácido-2-Fluoropiridina-4-borónico (500 mg, 3,55 mmol), tetraquis (trifenilfosfina) paladio (0) (173 mg, 0,15 mmol) y solución acuosa 2 M de Na2CO3 (4,4 mL, 8,9 mmol). La mezcla se agitó a 85°C durante 8 horas. Los volátiles se eliminaron por evaporación rotatoria y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc/hexanos al 35%) para proporcionar 324 mg de ciclopropil(5-(2-fluoropiridin-4-il)-3formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo (28% de rendimiento). LCMS (M+1=398)
Ejemplo 45. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído.
horas. Los volátiles se eliminaron por evaporación rotatoria y se añadió 1 N de NaOH al residuo para hacer básico. El precipitado se recogió por filtración, se lavó con agua y se secó al vacío para proporcionar 180 mg de 7(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído. (74%). LCMS (M+1=298)
Ejemplo 46. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4diona
Al 7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído 30 mg, 0,1 mmol) en EtOH (1 mL) se añadió piperdina (13 µL, 0,1 mmol), y tiazolidina-2,4-diona (12 mg, 0,1 mmol). La reacción se agitó a 80°C durante 2 horas. El sólido formado se aisló mediante filtración, lavó con agua, después con etanol. El sólido recuperado se purificó además, lavando con 20% metanol/diclorometano para proporcionar 9 mg de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona (23%). LCMS (M+1=397)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 44, Ejemplo 45, y Ejemplo 46. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. Tabla 15B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 15A.
Tabla 15A
Tabla 15B .
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
H5
lt;0,1 0,8152
I5
lt;1,0 0,2176
J5
lt;1,0 0,1978 gt; 30 18,951
Ejemplo 47. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)-2tioxotiazolidin-4-ona
Al 7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído 30 mg, 0,1 mmol) en EtOH (1 mL) se añadió piperdina (13 µL, 0,1 mmol), y rodamina (13 mg, 0,1 mmol). La reacción se agitó a 80°C durante 2 horas. El sólido formado se aisló mediante filtración, lavó con agua, después con etanol. El sólido recuperado se purificó además mediante lavado con 20% metanol/diclorometano para proporcionar 15 mg de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)-2-tiazolidina-4-diona (35%). LCMS (M+1=413)
Tabla 16.
Estructura
LCMS m/z [M+1]+ CK2: IC50 (uM) PIM2: IC50 (5um ATP) AB: MDAMB453 (uM) AB: BxPC3 (uM)
413 lt;1,0 1,5908 gt; 30 22,671
Ejemplo 48. Síntesis de 4-(5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato
En el frasco de reacción se añadió, 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina (896 mg, 4,8 mmol) junto con 4-aminopiperidina1-carboxilato (954 mg, 4,8 mmol), trietilamina (664 µL, 4,8 mmol), y acetonitrilo (16 mL). La reacción se calentó a 100°C durante 12 horas, se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, filtró y lavó con agua. El producto, 4-(5cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato, se recogió como un sólido de rendimiento cuantitativo y se secó al vacío toda la noche. LCMS (M+1= 352)
Ejemplo 49. Síntesis de 4-(5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato
Al 4-(5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato (1,7 g, 4,8 mmol) en DMF (36 mL), se añadió gota a gota POCl3 (7,7 mL, 82,9 mmol) a temperatura ambiente. Después que se completó la adición, la reacción se agitó durante 8 horas. Después, la reacción se inactivó mediante la adición lenta de NaOH 6N frío. La mezcla se diluyó con agua y el sólido se recogió por filtración. El sólido se lavó numerosas veces con agua, después se secó al vacío toda la noche. El producto, 4-(5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato, se colectó como un sólido con rendimiento 48%. LCMS (M+1= 380)
78 Ejemplo 50. Síntesis de 4-(5-(3-clorofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato
terc-butil 4-(5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato (876 mg, 2,3 mmol) se añadió a 1,4-dioxano (6 mL) junto con 3-cloroanilina (1,5 mL, 13,9 mmol) y ácido p-toluenesulfónico monohidratado (44 mg, 0,23 mmol). La reacción se calentó a 95°C durante 12 horas, se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, y filtró. El sólido se lavó con NaOH 1N seguido con agua, después se secó al vacío toda la noche. El producto, 4-(5-(3clorofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato de terc-butilo, se recogió después de la purificación adicional mediante la recristalización a partir de acetato de etilo/hexanos (74% de rendimiento). LCMS (M+1=471)
Ejemplo 51. Síntesis de 4-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)piperidina-1-carboxilato de terc-butilo
En el frasco de reacción, el 4-(5-(3-clorofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1-carboxilato (811 mg, 1,7 mmol) se añadió a etanol (6,3 mL) junto con hidantoína (172 mg, 1,7 mmol) y piperidina (170 µL, 1,7 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante 12 horas, se enfrió después a temperatura ambiente y se diluyó con agua. El sólido se recogió por filtración, se lavó con agua y etanol frío. El material se secó al vacío toda la noche. El producto, 4-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1carboxilato, se recuperó como un sólido rojo en 67% de rendimiento después de la purificación adicional mediante recristalización a partir de acetato de etilo/hexanos. LCMS (M+1 = 553)
Ejemplo 52. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
terc-Butil 4-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)piperidina-1carboxilato (640 mg, 1,2 mmol) se disolvió en 10 mL de TFA/DCM (1:1) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se inactivó después mediante la adición de NaOH 6N frío. La mezcla se diluyó con agua, después se decantó la capa acuosa. La capa orgánica se diluyó con hexanos y se filtró. El producto, 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piperidin-4ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona, se colectó como un sólido con rendimiento cuantitativo. LCMS (M+1 = 453)
Ejemplo 53. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-(ciclopropanecarbonil)piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno) imidazolidina-2,4-diona (30 mg, 0,066 mmol) en THF se añadió cloruro de ciclopropil carbonilo (5 µL, 0,04 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante diez minutos. La mezcla de reacción se concentró después, se diluyó con MeOH, y purificó con HPLC preparativo para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-(ciclopropanecarbonil)piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=521)
Ejemplo 54. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-pivaloilpiperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 53]. LCMS (M+1=537)
Ejemplo 55. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-(3,3-dimetilbutanoil)piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 53]. LCMS (M+1=551)
Ejemplo 56. Síntesis de 4-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)-N,N-dimetilpiperidina-1-carboxamida
Procedimiento similar al [Ejemplo 53]. LCMS (M+1=524)
Ejemplo 57. Síntesis de 4-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)piperidina-1-carboxilato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 53] excepto que el DMF se usa como solvente. LCMS (M+1=511)
Ejemplo 58. Síntesis de 2-(4-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)piperidin-1-il)acetato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 53] excepto que el DMF se usa como solvente. LCMS (M+1=525)
Ejemplo 59. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-(2-hidroxipropil)piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (30 mg, 0,066 mmol) en DMF se añadió 1-cloro2-propanol (7 µL, 0,13 mmol) e yoduro de potasio (11,0 mg, 0,066 mmol). La mezcla se calentó a 120°C y se agitó durante toda la noche. La mezcla de reacción se concentró, se diluyó con MeOH, y purificó con HPLC preparativo para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-(2-hidroxipropil)piperidin-4ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=511)
Ejemplo 60. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-(2-hidroxietil)piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 59]. LCMS (M+1=497)
Ejemplo 61. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-(piridin-2-ilmetil)piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (30 mg, 0,066 mmol) en DMF se añadió ácido 2-(bromometil)piridina bromhídrico (26,0 mg, 0,103 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas. La mezcla de reacción se concentró, se diluyó con MeOH, y purificó con HPLC preparativo para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-(piridin-2-ilmetil)piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=544)
Ejemplo 62. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-isopropilpiperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (20 mg, 0,04 mmol) en THF y AcOH (4,8 mg, 0,08 mmol) se añadió acetona (2,0 mL, 0,2 mmol) y el borohidruro triacetoxi de sodio se concentró (85,0 mg, 0,4 mmol). La mezcla se calentó a 60°C durante una hora. La solución de bicarbonato de sodio saturada se añadió a la mezcla de reacción. La mezcla se extrajo con etilacetato y se secó sobre sulfato de sodio. Después la mezcla, se diluyó con MeOH, y purificó con HPLC preparativo para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1isopropilpiperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno) imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=495)
Ejemplo 63. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-etilpiperidina-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (30 mg, 0,06 mmol) en THF y AcOH (4,8 g, 0,08 mmol) se añadió acetaldehído (2,0 mL, 0,2 mmol) y el borohidruro triacetoxi de sodio se concentró (85,0 mg, 0,4 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas. La mezcla de reacción se concentró, se diluyó con MeOH, y purificó con HPLC preparativo para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1(piridin-2-ilmetil)piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=481)
Ejemplo 64. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-isobutilpiperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piperidin-4-ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno) imidazolidina-2,4-diona (30 mg, 0,06 mmol) en THF y AcOH (4,8 mg, 0,08 mmol) se añadió isobutrildehído (2,2 mL, 0,2 mmol) y borohidruro triacetoxi de sodio (85,0 mg, 0,4 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas. La mezcla se concentró, se diluyó con MeOH, y purificó con HPLC preparativo para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(1-isobutilpiperidin-4ilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=509)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en los Ejemplos descritos anteriormente. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 17B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 17A.
Tabla 17A
83 84
Tabla 17B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
K5
lt;0,1 2,4491 1,078 10,984
L5
lt;0,01 gt; 2,5000 0,993 2,399
M5
lt;0,1 gt; 2,5000 0,874 10,023
N5
lt;0,1 gt; 2,5000 1,569 17,368
O5
lt;0,1 2,4076 1,115 4,263
P5
lt;0,1 gt; 2,5000 0,825 16,513
Q5
lt;0,1 gt; 2,5000
R5
lt;0,1 2,2046
S5
lt;0,1 gt; 2,5000
T5
lt;0,1 gt; 2,5000
U5
lt;1,0 gt; 2,5000
V5
lt;1,0 gt; 2,5000
W5
lt;1,0 gt; 2,5000
Ejemplo 65. Síntesis de 7-(benciltio)-5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina
En el frasco de reacción, se añadió 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina (4,1 g, 22 mmol) junto con bencil mercaptano (2,8 mL, 22 mmol), trietilamina (3,1 mL, 22 mmol), y acetonitrilo (71 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, después se diluyó con agua, filtró y lavó con agua. El producto, 7-(benciltio)-5-cloropirazolo[1,5a]pirimidina, se colectó como un sólido en 96% de rendimiento después de secar al vacío toda la noche. LCMS (M+1= 276)
Ejemplo 66. Síntesis de 7-(benciltio)-N-(3-clorofenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-amina
En el frasco de reacción, se añadió el 7-(benciltio)-5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina (3,45 g, 12,5 mmol) junto con 3cloroanilina (3,3 mL, 31,3 mmol), HCl 4N en dioxano (3,1 mL, 12,5 mmol), y etanol (42 mL). La reacción se agitó a reflujo durante 12 horas, después se enfrió a temperatura ambiente. Se eliminó el exceso de disolvente bajo el vacío y el residuo se diluyó con agua. La mezcla se hizo básica con NaOH 3N, se filtró y lavó con agua. El producto, 7-(benciltio)N-(3-clorofenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-amina, se colectó como un sólido en 90% de rendimiento después de secar al vacío toda la noche. LCMS (M+1= 376)
Ejemplo 67. Síntesis de 7-(benciltio)-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Al 7-(benciltio)-N-(3-clorofenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-amina (4,1 g, 11,3 mmol) en DMF (42 mL), se añadió gota a gota POCl3 (6,3 mL, 67,6 mmol) a temperatura ambiente. Después que se completó la adición, la reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. Después, la reacción se inactivó mediante la adición lenta de NaOH 6N frío. La mezcla se diluyó con agua y el sólido se recogió por filtración. El sólido se lavó numerosas veces con agua después, se secó al vacío toda la noche. El producto, 7-(benciltio)-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído, se colectó como un sólido con rendimiento de 83%. LCMS (M+1= 395)
Ejemplo 68. Síntesis de 5-((7-(benciltio)-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
En el frasco de reacción, se añadió el 7-(benciltio)-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (3,7 g, 9,3 mmol) a etanol (31 mL) junto con hidantoína (933 mg, 9,3 mmol) y piperidina (920 µL, 9,3 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante 3 días se enfrió después a temperatura ambiente y se diluyó con agua. El sólido se recolectó por filtración, lavó con agua, 50% etanol/agua, y después 100% de etanol. El material se secó al vacío toda la noche. El producto, 5-((7-(benciltio)-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona, se recuperó como un sólido amarillo con 92% de rendimiento. LCMS (M+1 = 477)
Ejemplo 69. Síntesis de 5-((7-(bencilsulfinil)-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
En el frasco de reacción, se añadió el 5-((7-(benciltio)-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (4,1 g, 8,6 mmol) a diclorometano (86 mL) junto con el ácido m-cloroperbenzoico (5,9g, 34,4 mmol). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 12 horas. El sólido se recolectó por filtración, lavó con diclorometano, después se secó al vacío toda la noche. El producto, 5-((7-(bencilsulfinil)-5-(3clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona, se recuperó como un sólido amarillo brillante con rendimiento cuantitativo. LCMS (M+1 = 493)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en los Ejemplos descritos anteriormente. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 18B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 18A.
Tabla 18A
Tabla 18B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
X5
lt;1,0 2,2449
Y5
lt;1,0 0,2913
Z5
lt;1,0 0,2968
A6
lt;0,1 0,209
Ejemplo 70. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(2-hidroxietil amino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al 5-((7-(bencilsulfinil)-5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (15 mg, 0,0304 mmol) en NMP se añadió 2-aminoetanol (14,6 µL, 0,242 mmol). La mezcla se calentó en el microondas a 120°C durante 20 minutos. El agua se añadió a la mezcla de reacción y el precipitado se recogió mediante filtración. El precipitado se lavó con metanol para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(2-hidroxietilamino) pirazolo [1,5-a]pirimidin-3
il)metileno)imidazolidina-2,4-diona LCMS (M+1=414). Productos similares (que se muestran más abajo) se obtuvieron además, como precipitados mediante adición de agua mientras otras reacciones se purificaron con HPLC preparativo para rendir los productos correspondientes.
Ejemplo 71. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piridin-3-ilmetilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=461)
Ejemplo 72. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piridin-4-ilmetilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=461)
Ejemplo 73. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(2-(dimetilamino)etilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=441)
Ejemplo 74. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(isopropil amino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=412)
Ejemplo 75. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(2-hidroxi propilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=428)
Ejemplo 76. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclobutil amino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=424)
Ejemplo 77. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(2-morfolinoetilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=483)
Ejemplo 78. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(piridin-2-ilmetil amino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=461)
Ejemplo 79. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(3-(dimetilamino)-2,2-dimetilpropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=483)
Ejemplo 80. Síntesis de 2-((5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)metil)pirrolidina-1-carboxilato
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=553)
Ejemplo 81. Síntesis de 4-((5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=568)
Ejemplo 82. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(2,2,2-trifluoroetil amino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=452)
Ejemplo 83. Síntesis de 5-((7-(1H-pirazol-3-ilamino)-5-(3-clorofenil amino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=436)
Ejemplo 84. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(pirrolidin-3-il amino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 70]. LCMS (M+1=439)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 70. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 19B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 19A.
Tabla 19A
94 Tabla 19B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
B6
lt;1,0 0,3426 10,519 gt; 30
C6
lt;1,0 0,469 1,144 3,803
D6
lt;1,0 0,4747 0,717 1,923
E6
lt;1,0 1,3345
F6
lt;0,1 gt; 2,5000
G6
lt;1,0 gt; 2,5000
H6
lt;1,0 0,4211
I6
lt;1,0 0,7041 0,708 2,559
J6
lt;1,0 gt; 2,5000
K6
lt;1,0 0,3165 0,936 3,159
L6
lt;2,0 2,1905
M6
lt;1,0 gt; 2,5000
N6
lt;0,1 gt; 2,5000
O6
lt;0,01 gt; 2,5000 1,145 gt; 30
P6
lt;1,0 0,7008 0,569 1,618
Q6
lt;1,0 1,2876
R6
lt;1,0 1,1213
S6
lt;0,1
95 Ejemplo 85. Síntesis de 3-(5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoato de terc-butilo
T6
lt;0,1
U6
lt;1,0 0,5149
V6
lt;0,1
W6
lt;1,0
X6
lt;1,0
Y6
lt;0,1
Z6
lt;0,1
A7
lt;0,1
En el frasco de reacción, se añadió el 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina(1,6 g, 8,2 mmol) junto con 3-aminobenzoato de terc-butilo (1,7 g, 8,7 mmol), trietilamina (1,2 mL, 8,6 mmol), y alcohol t-butilo (22 mL). La reacción se calentó a 100°C durante 6 horas después diluyó con agua, filtró y lavó con agua. El producto, 3-(5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)benzoato de terc-butilo, se colectó como un sólido con rendimiento cuantitativo, después se secó al vacío toda la noche. LCMS (M+1= 345)
Ejemplo 86. Síntesis de 3-(5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoato de terc-butilo
En el frasco de reacción, se añadió el 3-(5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoato de terc-butilo (2,9 g, 8,2 mmol) junto con 3-cloroanilina (2,2 mL, 20,6 mmol), 4N HCl en dioxano (2,6 mL, 10,4 mmol), y alcohol t-butilo (41 mL). La reacción se agitó a 100°C durante 2 días se enfrió después a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con agua, se hizo básica con NaOH 3N, filtró y lavó con agua. El producto, 3-(5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)benzoato de terc-butilo, se colectó como un sólido en 55% de rendimiento después se secó al vacío toda la noche. LCMS (M+1= 436)
Ejemplo 87. Síntesis de 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoato de terc-butilo
Al 3-(5-(3-clorofenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoato de terc-butilo (965 mg, 2,2 mmol) en DMF (8,2 mL), se añadió gota a gota POCl3 (1,2 mL, 13,3 mmol) a temperatura ambiente. Después que se completó la adición, la reacción se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. Después, la reacción se inactivó mediante la adición lenta de
NaOH 6N frío. La mezcla se diluyó con agua y el sólido se recogió por filtración. El sólido se lavó numerosas veces con agua, después se secó al vacío toda la noche. El producto, 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)benzoato de terc-butilo, se colectó como un sólido en 12% de rendimiento después de la purificación mediante columna cromatográfica en sílice usando acetona/diclorometano al 5% como eluyente. LCMS (M+1= 464)
Ejemplo 88. Síntesis de 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)benzoato de terc-butilo
En el frasco de reacción, se añadió el 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoato de terc-butilo (122 mg, 0,3 mmol) a etanol (1,3 mL) junto con hidantoína (26 mg, 0,3 mmol) y piperidina (26 µL, 0,3 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante 2 horas en el microondas se enfrió después a temperatura ambiente y diluyó con agua. El sólido se recolectó por filtración, lavó con agua, etanol/agua al 50%, y después etanol al 100%. El material se secó al vacío toda la noche. El producto, 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-7-ilamino)benzoato de terc-butilo, se recuperó como un sólido con 69% de rendimiento. LCMS (M+1 = 546)
Ejemplo 89. Síntesis del ácido 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)benzoico
El 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoato de tercbutilo (97 mg, 0,2 mmol) se disolvió en 2 mL de TFA/DCM (1:1) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El exceso de disolvente y TFA se eliminaron mediante evaporación bajo una corriente de nitrógeno. El residuo se diluyó con agua, después se filtró la mezcla. El producto, ácido 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoico, se colectó como un sólido con 85% de rendimiento. LCMS (M+1= 490)
Ejemplo 90. Síntesis de 4-(3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)benzoil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo
En el frasco de reacción, se añadió el ácido 3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamino)benzoico (30 mg, 0,06 mmol) a DMF (0,5 mL) junto con HOBt (9,2 mg, 0,06 mmol), trietilamina (8.4 µL, 0.06 mmol) y piperazina-1-carboxilato (11,2 mg, 0,06 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos, después se añadió EDC (11,5 mg, 0,06 mmol). La reacción se dejó agitar durante una hora más, después se diluyó con agua y se filtró. El sólido recuperado se lavó con más agua seguido de etanol. El producto, 4-(3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7
ilamino)benzoil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo, se colectó como un sólido con 73% de rendimiento. LCMS (M+1= 658)
Ejemplo 91. Síntesis de 5-(5-(3-clorofenilamino)-7-(3-(piperazina-1-carbonil)fenilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno-imidazolidina-2,4-diona
El 4-(3-(5-(3-clorofenilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7ilamino)benzoil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (27mg, 0,04 mmol) se disolvió en 2 mL de TFA/DCM (1:1) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El exceso de disolvente y TFA se eliminaron mediante evaporación bajo una corriente de nitrógeno. El residuo se diluyó con agua después se filtró la mezcla. El sólido recuperado se lavó con agua seguido de etanol al 50%. El producto, 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(3-(piperazina-1-carbonil)fenilamino)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona, se colectó como un sólido con 21% de rendimiento. LCMS (M+1= 558)
Ejemplo 92. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(3-(3-(dimetilamino)pirrolidina-1-carbonil)fenilamino)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 90]. LCMS (M+1=586)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en los Ejemplos descritos anteriormente. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 20B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 20A.
Tabla 20A.
Tabla 20B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
B7
lt;0,01 gt; 2,5000 7,773 10,204
C7
lt;0,01 1,4446 6,435 gt; 30
D7
lt;0,1 gt; 2,5000 14,229 gt; 30
E7
lt;0,01 2,0193 0,364 3,006
F7
lt;0,01 1,2348 1,587 13,969
Ejemplo 93. Síntesis de 3-((7-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-5-il)metil)benzonitrilo
En el frasco de reacción, se añadió el 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina (452 mg, 2,4 mmol) junto con bromuro de (3cianobencil)zinc(II) (6 mL, 3,75 mmol, 0,625M en DMF), Pd(PPh3)4 (110 mg, 0,1 mmol), y DMF (10 mL). La reacción se calentó a 60°C durante 4 horas se enfrió después a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en solución acuosa saturada de NH4Cl y hielo y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con agua, solución saturada de NaCl, y se secaron después sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante columna cromatográfica en silice usando acetato de etilo/hexanos al 35% como eluyente. El producto, 3-((7cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo, se recuperó con 64% de rendimiento. LCMS (M+1= 269)
Ejemplo 94. Síntesis de 3-((7-(ciclopropilamino )pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo
En el frasco de reacción, se añadió el 3-((7-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo (400 mg, 1,5 mmol) junto con ciclopropilamina (115 µL, 1,6 mmol), trietilamina (230 µL, 1,6 mmol), y acetonitrilo (3 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas a 80°C, se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, filtró y lavó con agua. El producto, 3-((7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo, se colectó como un sólido con 83% de rendimiento, después se secó al vacío toda la noche. LCMS (M+1= 290)
Ejemplo 95. Síntesis de 3-((7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo
A 3-((7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo (69 mg, 0,24 mmol) en DMF (0,6 mL), se añadió POCl3 (130 µL, 1,4 mmol) a temperatura ambiente. Después que se completó la adición, la reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Después, la reacción se inactivó mediante la adición de NaOH 6N frío. La mezcla se diluyó con agua y el sólido se recogió por filtración. El sólido se lavó numerosas veces con agua después, se secó al vacío toda la noche. El producto, 3-((7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo, se colectó como un sólido con 37% de rendimiento. LCMS (M+1= 318)
Ejemplo 96. Síntesis de 3-((7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)metil)benzonitrilo
En el frasco de reacción, se añadió el 3-((7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo (28 mg, 0,09 mmol) a etanol (0,5 mL) junto con hidantoína (9 mg, 0,09 mmol) y piperidina (9 µL, 0,09 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante 30 minutos en el microondas se enfrió después a temperatura ambiente y diluyó con agua. El sólido se recolectó por filtración, lavó con agua, etanol/agua al 50%, y después etanol al 100%. El material se secó al vacío toda la noche. El producto, 3-((7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-il)metil)benzonitrilo, se recuperó como un sólido con 34% de rendimiento. LCMS (M+1= 400)
Tabla 21.
Estructura
LCMS m/z [M+1]+ CK2: IC50 (uM) PIM2:IC50 (5um ATP) AB: MDAMB453 (uM) AB: BxPC3 (uM)
400 lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 30 19,66
Ejemplo 97. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Al 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (650 mg, 1,93 mmol) en 14 mL de una mezcla 2:1 de 1,2-dimetoxietano/ EtOH se añadió el ácido 3-hidroxifenil borónico (399 mg, 2,89 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (112 mg, 0,096 mmol), y solución acuosa 2M de Na2CO3 (2,9 mL, 5,79 mmol). La mezcla se agitó a 85°C durante 1h. Los gases volátiles se eliminaron mediante la evaporación rotatoria y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0%-30% EtOAc/Hexanos) para proporcionar 400 mg de ciclopropil(3formil-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo. (52%). LCMS (M+1=395)
100 Ejemplo 98. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3-hidroxifenil)piazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Al ciclopropil(3-formil-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo (400 mg, 1,01 mmol) en cloruro de metileno (20 mL) se añadió TFA (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2h. Los gases volátiles se eliminaron mediante la evaporación rotatoria y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0%-40% EtOAc/hexanos) para proporcionar 103 mg de 7-(ciclopropilamino)-5-(3hidroxifenil)pirazolo [1,5a]pirimidina-3-carbaldehído. (35%). LCMS (M+1=295)
Ejemplo 99. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
Al 7-(ciclopropilamino)-5-(3hidroxifenil)pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (100 mg, 0,34 mmol) en EtOH (2 mL) se añadió piperdina (67 µL, 0,68 mmol), e hidantoína (34 mg, 0,34 mmol). La reacción se agitó a 50°C toda la noche. El sólido formado se aisló mediante filtración para proporcionar 70 mg de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (55%). LCMS (M+1=377)
Ejemplo 100. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de tercbutilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=463) Ejemplo 101. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=363)
Ejemplo 102. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=445) Ejemplo 103. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-(hidroximetil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=409) Ejemplo 104. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3-(hidroximetil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=309)
Ejemplo 105. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-(hidroximetil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=391)
Ejemplo 106. Síntesis de 3-(7-(terc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)benzoato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=437) Ejemplo 107. Síntesis de 3-(7-(ciclopropilamino)3-formilpirazolo[1.5-a]pirimidin-5-il)benzoato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=337)
Ejemplo 108. Síntesis de 3-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)benzoato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=419) Ejemplo 109. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-(metilsulfonil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=457) Ejemplo 110. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3-(metilsulfonil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=357)
Ejemplo 111. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-(metilsulfonil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=439)
Ejemplo 112. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-(N-metilsulfamoil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de tercbutilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=472) Ejemplo 113. Síntesis de 3-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-N-metilbenzenosulfonamida
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=372)
Ejemplo 114. Síntesis de 3-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-Nmetilbenzenosulfonamida
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=454)
Ejemplo 115. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-(metilsulfonamido)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de tercbutilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=472) Ejemplo 116. Síntesis de N-(3-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)fenil)metanosulfonamida
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=372)
Ejemplo 117. Síntesis de N-(3-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)fenil)metanosulfonamida
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=454) Ejemplo 118. Síntesis de ciclopropil(5-(3-(dimetilamino)fenil)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=422) Ejemplo 119. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3-(dimetilamino)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=322)
Ejemplo 120. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-(dimetilamino)fenil)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=404) Ejemplo 121. Síntesis de 5-(3-cianofenil)-3-formipirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=404) Ejemplo 122. Síntesis de 3-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolor[1,5-a]pirimidin-5-il)benzonitrilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=304)
Ejemplo 123. Síntesis de 3-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)benzonitrilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=386) Ejemplo 124. Síntesis de ciclopropil(5-(3-fluorofenil)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=397) Ejemplo 125. Síntesis de 7-(ciclopropilaminol-5-(3-fluorofenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=297)
Ejemplo 126. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-fluorofenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=379) Ejemplo 127. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=380) Ejemplo 128. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=280)
Ejemplo 129. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=362) Ejemplo 130. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(piridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=380) Ejemplo 131. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(piridin-4-pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=280)
Ejemplo 132. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(piridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=362) Ejemplo 133. Síntesis de ciclopropil(5-(2-fluoropiridin-4-il)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=398) Ejemplo 134. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=298)
Ejemplo 135. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoropiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=380) Ejemplo 136. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(4-hidroxifeni)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=395) Ejemplo 137. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(4-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=295)
Ejemplo 138. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(4-hidroxifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=377)
Ejemplo 139. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-(morfolinometil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de tercbutilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=478) Ejemplo 140. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3-(morfolinometil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=378)
Ejemplo 141. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-(morfolinometil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=460)
Ejemplo 142. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=491)
Ejemplo 143. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(3-(4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3carbaldehído
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=391)
Ejemplo 144. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=473) Ejemplo 145. Síntesis de 5-(3-(acetamidometil)fenil)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=450) Ejemplo 146. Síntesis de N-(3-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)bencil)acetamida
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=350)
Ejemplo 147. Síntesis de N-(3-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)bencil)acetamida
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=432) Ejemplo 148. Síntesis de 5-(3-(aminometil)fenil)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Al 5-(3-(acetamidometil)fenil)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (50 mg, 0,111 mmol) se añadió 1 mL de HCl 4M en 1,4-dioxane y 1 mL de H2O. La mezcla de reacción se agitó a 80° C durante 16 horas, se enfrió después a temperatura ambiente y se diluyó con H2O. A la mezcla de reacción, se añadió NaOH 5M para ajustar el pH a gt;10, después la mezcla se extrajo con CH2Cl2. La capa orgánica se recogió, secó sobre MgSO4, filtró y evaporó hasta la sequedad para proporcionar 24 mg de 5-(3-(aminometil)fenil)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidina-3-carbaldehído (70%). LCMS (M+1=308)
Ejemplo 149. Síntesis de 5-((5-(3-(aminometil)fenil)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=390)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 98 y Ejemplo 99. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 22B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 22A.
112 Tabla 22A.
113 114 115 Tabla 22B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
G7
lt;0,01 0,6135 0,33 10,627
H7
lt;0,01 0,8908 0,402 1,541
I7
lt;0,01 gt; 2,5000 3,743 3,68
J7
lt;0,01 0,6492 0,477 5,171
K7
lt;0,01 gt; 2,5000 1,709 2,054
L7
lt;0,01 gt; 2,5000 0,517 13,111
M7
lt;0,1 gt; 2,5000
N7
lt;0,01 2,2144 0,284 2,916
07
lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 30 gt; 30
P7
lt;0,01 2,1685 7,866 7,907
Q7
lt;0,1 2,4032 1,494 3,279
R7
lt;0,01 gt; 2,5000 1,054 23,617
S7
lt;0,01 gt; 2,5000 1,174 11,78
T7
lt;0,01 gt; 2,5000 1,298 6,592
U7
lt;0,01 gt; 2,5000 1,153 1,191
V7
lt;0,01 gt; 2,5000 1,964 14,486
W7
lt;0,1 gt; 2,5000 0,683 1,898
X7
lt;0,01 0,867 4,746 gt; 30
Y7
lt;0,1 1,3082 1,938 2,578
Z7
lt;0,01 1,4748 1,79 0,725
A8
lt;0,01 1,2497 gt; 30 14,347
B8
lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 30 12,535
C8
lt;0,01 gt; 2,5000 17,123 1,232
D8
lt;0,01 0,0754 5,276 0,549
E8
lt;0,01 gt; 2,5000 11,733 gt; 30
F8
lt;0,01 0,2562 1,068 0,745
G8
lt;0,01 0,0487 14,882 10,61
H8
lt;0,01 gt; 2,5000 20,012 4,608
I8
lt;0,1 gt; 2,5000 1,706 2,744
J8
lt;0,01 gt; 2,5000 1,263 8,129
K8
lt;0,1 gt; 2,5000 12,417 gt; 30
L8
lt;0,01 2,084 12,278 gt; 30
M8
lt;0,01 1,7271 gt; 30 gt; 30
N8
lt;0,01 gt; 2,5000 1,979 2,253
08
lt;0,01 gt; 2,5000 15,69 29,035
P8
lt;0,01 0,948 1,742
Q8
lt;0,01 gt; 2,5000 26,74 5,426
R8
lt;1,0 gt; 2,5000
Ejemplo 150. Síntesis de 5-(7-(terc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2carboxilato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=443) Ejemplo 151. Síntesis de 5-(7-(ciclopropilamino)3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxilato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=343)
Ejemplo 152. Síntesis de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)tiofeno-2-carboxilato de metilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=425) Ejemplo 153. Síntesis de 5-(5-cianotiofen-2-il)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 97]. LCMS (M+1=410) Ejemplo 154. Síntesis de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carbonitrilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 98]. LCMS (M+1=310)
Ejemplo 155. Síntesis de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)tiofeno-2-carbonitrilo
Procedimiento similar al [Ejemplo 99]. LCMS (M+1=392)
Ejemplo 156. Síntesis del ácido 5-(7-(terc-butoxicarbonil)ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2carboxílico
Al 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il (ciclopropil)carbamato (1 g, 2,97 mmol) en 30 mL de una mezcla 2:1 de 1,2-dimetoxietano/ EtOH se añadió ácido 2-carboxitiofeno-5-borónico (766 mg, 4,45 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (171 mg, 0,148 mmol), y solución acuosa 2M de Na2CO3 (4,45 mL, 8,91 mmol). La mezcla se agitó a 95°C durante 3 horas, se enfrió después a temperatura ambiente y fraccionó entre NaOH 2N y acetato de etilo. Las capas se separaron y la capa acuosa alcanzó la ácidez a pHlt;3 con HCl concentrado. La capa acuosa se extrajo (3x) con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, secaron sobre MgSO4, filtraron y evaporaron hasta la sequedad para proporcionar 450 mg del ácido 5-(7-(terc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico. Algún material adicional que estuvo en la primera capa de acetato de etilo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0%-20% MeOH/CH2Cl2) para proporcionar otros 550 mg del ácido 5-(7-(terc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (79%). LCMS (M+1=429)
Ejemplo 157. Síntesis del ácido 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico
Al ácido 5-(7-(terc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (1 g, 2,33 mmol) se añadió 8 mL de HCl 4M en dioxano y otros 5 mL de dioxano. La mezcla de reacción se agitó a 80° C durante 2 horas, se enfrió a temperatura ambiente y fraccionó entre CH2Cl2 y H2O. La emulsión que se formó entre las capas se filtró y lavó con H2O. El sólido recuperado se secó al vacío para proporcionar 627 mg del ácido 5-(7-(ciclopropilamino)-3formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico como un sólido rojo (82%). LCMS (M+1=329)
Ejemplo 158. Síntesis de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-N-(3-metoxipropil)tiofeno-2carboxamida
Al ácido 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (30 mg, 0,091 mmol), EDCI (19 mg, 0,10 mmol), Et3N (14 µL, 0,10 mmol), y HOBt (14 mg, 0,10 mmol) en 2 mL de DMF agitado previamente durante 5 minutos se añadió el 3-metoxipropilamina (10 µL, 0,10 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se diluyó con acetato de etilo, lavó con H2O, salmuera, secó sobre MgSO4, filtró, y evaporó hasta la sequedad para proporcionar 30 mg de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-N-(3metoxipropil)tiofeno-2-carboxamida (83%). LCMS (M+1=400)
Ejemplo 159. Síntesis de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-N(3-metoxipropil)tiofeno-2-carboxamida
Al 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-N-(3-metoxipropil)tiofeno-2-carboxamida (30 mg, 0,075 mmol) en EtOH (1 mL) se añadió piperdina (20 µL, 0,150 mmol), e hidantoína (10 mg, 0,075 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 85°C durante 3 horas. El sólido formado se aisló mediante filtración para proporcionar 5-(7(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-N-(3-metoxipropil)tiofeno-2carboxamida. LCMS (M+1=82)
Ejemplo 160. Síntesis de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxamida
Al ácido 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (40 mg, 0,122 mmol), HATU (70 mg, 0,183 mmol), HOBt (4 mg, 0,024 mmol) y DIEA (85 µL, 0,488 mmol) en 2 mL de DMF se añadió cloruro de amonio (20 mg, 0,366 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, lavó con solución saturada de NaHCO3, salmuera, se secó sobre MgSO4, filtró, y evaporó hasta la sequedad para proporcionar 42 mg de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2carboxamida (100%). LCMS (M+1=328).
Ejemplo 161. Síntesis de 5-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)tiofeno-2-carboxamida
Procedimiento similar al [Ejemplo 159]. LCMS (M+1=410)
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 158 y Ejemplo 159. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 23B muestra las actividades biológicas indicadas en la Tabla 23A.
Tabla 23A.
120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 Tabla 23B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
S8
lt;0,01 1,1336 0,648 0,99
T8
lt;0,01 gt; 2,5000 0,141 0,837
U8
lt;0,01 1,0091 10,145 6,668
V8
lt;0,01 gt; 2,5000 0,416 gt; 30
W8
lt;0,01 gt; 2,5000 0,425 0,417
X8
lt;0,01 gt; 2,5000 0,689 gt; 30
Y8
lt;0,01 gt; 2,5000 0,358 0,642
Z8
lt;0,01 gt; 2,5000 0,162 1,15
A9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,542 1
B9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,49 3,925
C9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,171 0,822
D9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,869 1,983
E9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,397 0,496
F9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,312 0,643
G9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,31 0,657
H9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,251 10,512
I9
lt;0,01 0,7137 gt; 30 gt; 30
J9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,795 1,736
K9
lt;0,01 gt; 2,5000 9,378 11,666
131 132 133
L9
lt;0,01 gt; 2,5000 2,066 3,829
M9
lt;0,01 gt; 2,5000 1,266 1,469
N9
lt;0,01 1,134 5,413
09
lt;0,01 0,621 12,558
P9
lt;0,01 0,596 0,5
Q9
lt;0,01 1,044 2,134
R9
lt;0,01 1,554 1,555
S9
lt;0,01 5,882 5,532
T9
lt;0,01 0,444 0,956
U9
lt;0,01 1,479 4,863
V9
lt;0,01 1,567 2,905
W9
lt;0,01 1,145 0,885
X9
lt;0,01 gt; 2,5000 1,391 gt; 30
Y9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,389 0,438
Z9
lt;0,01 gt; 2,5000 0,762 1,337
A10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,408 2,115
B10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,895 1,167
C10
lt;0,01 0,7939 0,66 2,399
D10
lt;0,01 gt; 2,5000 1,529 6,508
E10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,557 0,624
F10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,251 0,323
G10
lt;0,01 gt; 2,5000 1,038 0,995
H10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,294 2,968
I10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,813 1,386
J10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,613 0,324
K10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,579 0,451
L10
lt;0,01 gt; 2,5000 2,275 0,792
M10
lt;0,01 1,7758 5,94 0,677
N10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,958 0,455
O10
lt;0,01 1,8944 0,537 0,297
P10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,394 0,451
Q10
lt;0,01 gt; 2,5000 1,782 16,637
R10
lt;0,01 gt; 2,5000 1,641 5,729
S10
lt;0,01 gt; 2,5000 10,053 18,645
T10
lt;0,1 gt; 2,5000 gt; 30 gt;30
U10
lt;0,01 gt; 2,5000 13,297 21,203
V10
lt;0,01 2,1321 gt; 30 gt;30
W10
lt;0,01 1,3653 0,236 0,63
X10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,937 0,917
Y10
lt;0,01 gt; 2,5000 0,79 gt; 30
Z10
lt;0,01 gt; 2,5000 2,336 22,798
A11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,458 0,724
B11
lt;0,01 gt; 2,5000 gt;30 1,262
C11
lt;0,01 gt; 2,5000 27,783 3,302
D11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,445 2,265
E11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,298 2,948
F11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,567 0,903
G11
lt;0,01 2,0441 0,231 0,494
H11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,11 2,705
I11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,232 0,591
J11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,833 1,234
K11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,546 1,257
L11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,004 0,816
M11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,016 0,745
N11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,266 2,261
O11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,887 4,986
P11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,487 0,517
Q11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,621 0,564
R11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,845 2,309
S11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,935 gt;30
T11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,193 gt;30
U11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,618 5,349
V11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,892 1,6
W11
lt;0,01 gt; 2,5000 0,156 3,435
X11
lt;0,01 1,7245 3,806 0,225
Y11
lt;0,01 gt; 2,5000 1,402 0,352
Z11
lt;0,01 1,2434 2,251 0,355
A12
lt;0,01 1,4396 1,151 0,445
B12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,399 2,764
C12
lt;0,01 gt; 2,5000 gt;30 gt;30
D12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,683 0,854
E12
lt;0,01 gt; 2,5000 29,518 2,348
F12
lt;0,01 gt; 2,5000 gt;30 gt; 30
G12
lt;0,01 0,8106 0,658 0,352
H12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,449 0,418
I12
lt;0,01 gt; 2,5000 1,282 1,516
J12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,52 0,94
K12
lt;0,01 1,872 1,338 0,379
L12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,498 gt; 30
M12
lt;0,01 1,2604 7,403 8,736
N12
lt;0,01 3,52 gt; 30
012
lt;0,01 gt; 2,5000 1,077 2,509
P12
lt;0,01 gt; 2,5000 1,014 3,421
Q12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,942 7,084
R12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,846 14,096
S12
lt;0,01 gt; 2,5000 1,034 4,897
T12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,767 2,662
U12
lt;0,01 gt; 2,5000 0,525 gt; 30
V12
lt;0,01 1,759 gt; 30
W12
lt;0,01 1,041 1,184
X12
lt;0,01 7,54 gt; 30
Y12
lt;0,01 0,692 1,706
Z12
lt;0,01 2,17 9,892
A13
lt;0,01 gt; 2,5000 0,534 0,996
B13
lt;0,01 gt; 2,5000 0,388 2,584
Ejemplo 162. Síntesis del ácido 4-(7-(terc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2carboxílico
El 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (0,5 g, 1,48 mmol) y el disponible en el comercio (Combi-Blocks) éster picanol del ácido 2-carboxitiofeno-4-borónico (754 mg, 2,97 mmol) se disolvieron en acetonitrilo. Se añadió Na2CO3 2M (1 mL) y la solución se degasificó con una corriente de N2 durante 10 min. PdCl2dppf·CH2Cl2 (60 mg, 0,07 mmol) se añadió y la reacción se calentó a 100 °C durante 1,5 horas. La solución se diluyó con NaOH 1,5N (80 mL) y se filtró sobre celita. El pH del filtrado se ajustó a pH=3 mediante la adición de HCl 6M. El precipitado resultante se filtró y secó al vacío para proporcionar el ácido 4-(7-(terc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)-3formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (473 mg, 74%)como un sólido marrón. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 429 [M+1]+.
Ejemplo 163. Síntesis del ácido 4-(7-(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico
El ácido 4-(7-(terc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (473 mg, 1,10 mmol) se disolvió en diclorometano (5 mL) y ácido trifluoroacético (3 mL). Después de 1 h, la solución roja oscura se concentró bajo una corriente de aire. El aceite rojo se trituró con Et2O (5 mL) y el precipitado se filtró para proporcionar el ácido 4-(7-(ciclopropil)amino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (321 mg, 88%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 329 [M+1]+.
Ejemplo 164. Síntesis del ácido (Z)-4-(7-(ciclopropil)amino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico
Hidantoína (292 mg, 2,92 mmol) y piperidina (285 µL, 2,89 mmol) se adicionaron al ácido 4-(7-(ciclopropil)amino)-3formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (315 mg, 0,96 mmol) disuelto en etanol (5 mL). La reacción se calentó a 80 °C. Después de 15 h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó después con agua (10 mL). El pH se ajustó a pH=3 mediante la adición de HCl 1N. El precipitado amarillo se recogió y se lavó con 1:1 etanol:agua (10 mL) y después etanol (10 mL). El sólido se secó al vacío para producir el ácido (Z)-4-(7-(ciclopropil)amino)-3-((2,5dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2-carboxílico (362 mg, 92%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 411 [M+1]+.
Ejemplo 165. Síntesis de (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(,5-(2,6-dimetilmorfolina-4-carbonil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
El ácido (Z)-4-(7-(ciclopropil)amino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)tiofeno-2carboxílico (1,0 eq, 34 mg, 0,0828 mmol) se mezcló en un frasco con HOBt.H2O (2,0 eq, 22 mg, 0,163 mmol), 2,6 dimetilmorfolina (mezcla de isómero, 4,0 eq, 41 ul, 0,333 mmol), DIEA (2,0 eq, 29 ul, 0.166 mmol) in NMP (0.5 ml). EDCI
(2.0 eq, 32 mg, 0,166 mmol) se añadió y la mezcla se agitó a 70°C durante 1 hora. El agua se añadió y el precipitado resultante se filtró y secó. El material se trituró en una mezcla de acetato de etilo y hexanos, se filtró y secó al vacío para producir (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(5-(2,6-dimetilmorfolina-4-carbonil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como un sólido amarillo (26 mg, 62% de rendimiento). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 508 [M+1]+.
Los siguientes compuestos se prepararon usando condiciones similares a la de los compuestos químicos descritos en el Ejemplo 165. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 24B muestra las actividades biológicas indicadas en la Tabla 24A.
135 136
Tabla 24B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
C13
lt;0,01 2,382 gt; 30 gt; 30
D13
lt;0,01 gt; 2,5000 0,605 0,591
E13
lt;0,01 0,982 1,469 3,466
F13
lt;0,01 0,6084 1,641 0,943
G13
lt;0,01 0,888 0,845 1,251
H13
lt;0,01 0,654 3,98 10,149
I13
lt;0,01 1,8781 15,19 gt; 30
J13
lt;0,01 0,548 0,266 1,348
K13
lt;0,01 gt; 2,5000 4,31 9,291
L13
lt;0,01 1,9547 1,548 0,767
M13
lt;0,01 gt; 2,5000 10,179 4,429
N13
lt;0,01 1,9848 3,335 4,142
O13
lt;0,01 gt; 2,5000 6,095 19,358
P13
lt;0,01 0,8133 2,772 8,499
Q13
lt;0,01 gt; 30 6,578
R13
lt;0,01 gt; 2,5000 1,657 2,293
Ejemplo 166. Síntesis del ácido 5-(hidroximetil)tiofen-2-borónico
El ácido 5-(hidroximetil)tiofen-2-borónico se preparó a partir del ácido 5-formiltiofen-2-borónico disponible en el comercio (Combi-Blocks) de conformidad con el procedimiento descrito en WO2007/118137.
Ejemplo 167. Síntesis de ciclopropil(3-formil-5-(5-(hidroximetil)tiofen-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)carbamato de tercbutilo
Nota: DME y Na2CO3 2M se degasificaron con una corriente de N2 en frascos separados antes de la adición. El 5-cloro3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (1,5 g, 4,45 mmol) se disolvió en DME (40 mL). El ácido 5-(hidroximetil)tiofen-3-borónico (1,4 g, 8,9 mmol) se añadió, seguido por Pd(PPh3)4 (510 mg, 0,45 mmol) y finalmente Na2CO3 2M (6,7 mL, 13,3 mmol). La reacción se calentó a 90 °C durante 2 h. La solución se fraccionó entre EtOAc (100 mL) y HCl 0.5N (100 mL). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 75 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (250 mL), secaron sobre MgSO4 filtraron y concentraron al vacío. El residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (30-45% EtOAc/hexanos) y se trituraron después con hexanos (3 x 10 mL) para rendir ciclopropil(3-formil-5-(5-(hidroximetil)tiofen-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)carbamato de terc-butilo (984 mg, 53%) como un sólido blanquecino. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 415 [M+1]+.
Ejemplo 168. Síntesis de 5-(5-(bromometiltiofen-2-il)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
El ácido bromhídrico (48% en agua, 5 mL) se añadió gota a gota a ciclopropil(3-formil-5-(5-(hidroximetil)tiofen-2il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)carbamato de terc-butilo (980 mg, 2,4 mmol) suspendido en diclorometano (5 mL). La solución se tornó inmediatamente carmelita oscuro y homogénea después de la adición. La reacción se calentó a 40°C durante 4 horas, después se diluyó con diclorometano (10 mL). El líquido se decantó y el residuo pegajoso se lavó con diclorometano (3 x 10 mL). Los líquidos combinados se lavaron sucesivamente con NaHCO3 saturada (20 mL) y salmuera (20 mL), y después, se secó sobre MgSO4, filtró y concentró al vacío. El residuo se trituró con hexanos y después, se purificó a través de cromatografía rápida en columna (10-20% EtOAc/hexanos) para proporcionar 5-(5(bromometil)tiofen-2-il)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (300 mg, 34%) como un sólido amarillo. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 378 [M+1]+.
Ejemplo 169. Síntesis de (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(5-pirrolidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
El carbonato de potasio (30 mg, 0.20 mmol) se añadió a 5-(5-(bromometil)tiofen-2-il)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidina-3-carbaldehído (25 mg, 0,07 mmol) disuelto en DMF (0,7 mL). La pirrolidina (6 µL, 0,07 mmol) se añadió y la reacción se calentó a 60 °C durante 4 horas. El agua (3 mL) se añadió y el precipitado naranja se filtró y secó al vacío para producir 7-(ciclopropilamino)-5-(5-(pirrolidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (13 mg, 54%) que se usó sin purificación adicional. LCMS (ES): gt;85% puro, m/z 368 [M+1]+.
La hidantoína (3 mg, 0,03 mmol) y piperidina (3 µL, 0,03 mmol) se añadieron a 7-(ciclopropilamino)-5-(5-(pirrolidin-1ilmetil)tiofen-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (12 mg, 0,03 mmol) disuelto en etanol (0,5 mL). La reacción se calentó a 80 °C. Después de 15 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se diluyó con agua (3 mL). El precipitado se recogió y se lavó con 1:1 etanol:agua (3 mL) y se secó al vacío para proporcionar (Z)-5-((7
(ciclopropilamino)-5-(5-pirrolidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (2,8 mg, 9% en dos etapas). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 450 [M+1]+.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 168 y Ejemplo 169. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 25B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 25A.
Tabla 25A
Tabla 25B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
S13
lt;0,01 gt; 2,5000 1,266 2,261
T13
lt;0,01 0,8106 0,658 0,352
U13
lt;0,01 gt; 2,5000 0,449 0,418
V13
lt;0,01 gt; 2,5000 1,282 1,516
W13
lt;0,01 gt; 2,5000 0,52 0,94
X13
lt;0,01 1,872 1,338 0,379
Ejemplo 170. Síntesis del ácido 5-(hidroximetil)tiofen-3-borónico
El ácido 5-(hidroximetil)tiofen-3-borónico se preparó a partir del ácido 5-formiltiofen-3-borónico disponible en el comercio (Combi-Blocks) de conformidad con el procedimiento descrito en la solicitud de patente núm. WO2007/118137.
Ejemplo 171. Síntesis del ciclopropil(3-formil-5-(5-(hidroximetil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)carbamato de terc-butilo
Nota: DME y Na2CO3 2M se degasificaron con una corriente de N2 en frascos separados antes de la adición. El 5-cloro3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (750 mg, 2,22 mmol) se disolvió en DME (22 mL). El ácido 5-(hidroximetil)tiofen-3-borónico crudo (880 mg, 5,57 mmol) se añadió, seguido por Pd(PPh3)4 (256 mg, 0,22 mmol) y finalmente Na2CO3 2M (3,3 mL, 6,60 mmol). La reacción se calentó a 90 °C durante 2 horas. La solución se fraccionó entre EtOAc (100 mL) y HCl 0,5N (100 mL). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 75 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (250 mL), secaron sobre MgSO4, filtraron y concentraron al vacío. El residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (30-45% EtOAc/hexanos) y se trituraron después con hexanos (3 x 10 mL) para rendir ciclopropil(3-formil-5-(5-(hidrometil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)carbamato de terc-butilo (638 mg, 69%) como un sólido blanquecino. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 10,34 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,11 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,76 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,18 (s, 1H), 4,93 (bs, 2H), 3,30 (dddd, 1H, J = 6,8, 6,8, 3,6, 3,6 Hz), 2,15 (bs, 1H), 1,42 (s, 9H), 0,85-0,92 (m, 2H), 0,63-0,70 (m, 2H). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 415 [M+1]+.3
Ejemplo 172. Síntesis de 2,2,2,-trifluoroacetato de 7-(ciclopropilamino)-5-(5-(hidroximetil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5α]pirimidina-3-carbaldehído
El ciclopropil(3-formil-5-(5-(hidroximetil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)carbamato de terc-butilo (20 mg, 0,05 mmol) se disolvió en diclorometano (0,5 mL) y ácido trifluoroacético (0,5 mL). Después de 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de aire. El residuo se purificó a través de HPLC preparativa para proporcionar 2,2,2trifluoroacetato de 7-(ciclopropilamino)-5-(5-(hidroximetil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (4,8 mg, 23%).
Ejemplo 173. Síntesis de 5-(5-(bromometil)tiofen-3-il)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
El ácido bromhídrico (48% en agua, 2,5 mL) se añadió gota a gota a ciclopropil(3-formil-5-(5-(hidroximetil)tiofen-3il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il)carbamato de terc-butilo (561 mg, 1,35 mmol) suspendido en diclorometano (3,5 mL). La solución se tornó inmediatamente carmelita oscuro y homogénea después de la adición. La reacción se calentó a 40 °C durante 3 horas, después se diluyó con diclorometano (10 mL). El líquido se decantó y el residuo pegajoso se lavó con diclorometano (3 x 10 mL). Los líquidos combinados se lavaron sucesivamente con NaHCO3 saturada (20 mL) y salmuera (20 mL), y después se secó sobre MgSO4, filtró y concentró al vacío. El residuo se trituró con hexanos y después se purificó a través de cromatografía rápida en columna (15-40% EtOAc/hexanos) para proporcionar 5-(5(bromometil)tiofen-3-il)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (105 mg, 20%) como un sólido
amarillo. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 10,26 (s, 1H), 8,44 (s, 1 H), 8,12 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,80 (s, 1 H), 6,73 (s, 1 H), 6,65 (bs, 1 H), 4,80 (s, 2H), 2,81 (m, 1H), 1,03-1,09 (m, 2H), 0,84-0,89 (m, 2H). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 378 [M+1]+.
Ejemplo 174. Síntesis de (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(5-pirrolidin-1-ilmetil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Carbonato de potasio (30 mg, 0.20 mmol) se añadió a 5-(5-(bromometil)tiofen-3-il)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidina-3-carbaldehído (25 mg, 0,07 mmol) disuelto en DMF (0,7 mL). La pirrolidina (6 µL, 0,07 mmol) se añadió y la reacción se calentó a 50 °C durante 1,25 horas. El agua (3 mL) se añadió y el precipitado naranja se filtró y secó al vacío para producir 7-(ciclopropilamino)-5-(5-(pirrolidin-1-ilmetil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (13 mg, 54%) que se usó sin purificación adicional. LCMS (ES): gt;85% puro, m/z 368 [M+1]+.
Hidantoína (3 mg, 0,03 mmol) y piperidina (3 µL, 0,03 mmol) se añadieron a 7-(ciclopropilamino)-5-(5-(pirrolidin-1ilmetil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (12 mg, 0,03 mmol) disuelto en etanol (0,5 mL). La reacción se calentó a 80 °C. Después de 15 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se diluyó con agua (3 mL). El precipitado se recogió y se lavó con 1:1 etanol:agua (3 mL) y se secó al vacío para proporcionar (Z)-5-((7(ciclopropilamino)-5-(5-pirrolidin-1-ilmetil)tiofen-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (2.8 mg, 9% en dos etapas). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 450 [M+1]+.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 174. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 26B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 26A.
Tabla 26A
Tabla 26B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
Y13
lt;0,01 gt; 2,5000 1.386 0.929
Z13
lt;0,01 gt; 2,5000 2.498 10.153
A14
lt;0,01 1.5722 1.614 1.758
B14
lt;0,01 1.4451 1.614 1.003
El compuesto químico descrito en la Figura 3 puede usarse para preparar análogos sustituídos 7 por un grupo metilo. El ácido borónico disponible en el comercio 1 puede ponerse a reaccionar con 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo 2 bajo las condiciones de la reacción Suzuki para la metilcetona 3. Este compuesto 3 puede ponerse a reaccionar con varias aminas sustituídas 4 bajo condiciones de aminación reductora tales como las condiciones descritas en el documento de patente núm. US2007/244094 o condiciones de reacción descritas en European Journal of Medicinal Chemistry, vol 32, 1997, 143-150 para preparar los compuestos 5. El compuesto 5 puede convertirse en el aldehído 6 bajo condiciones Vilsmeier. El compuesto 6 puede convertirse en el compuesto 7 al reaccionar con la hidantoína y piperidina en etanol.
Las moléculas en la siguiente Tabla 27 pueden prepararse usando compuestos químicos similares.
Tabla 27.
Ejemplo 175. Síntesis de 6-bromo-N-ciclopropilimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina
Diisopropiletilamina (2,4 mL, 13,62 mmol) y ciclopropilamina (943 µL, 13,62 mmol) se añadieron a 6,8dibromoimidazo[1,2-a]pirazina disponible en el comercio (Ark Pharm, Inc.) (2,51 g, 9,08 mmol) disuelto en 2-propanol (9 mL). La solución se colocó en un baño de acite a 80 °C. Después 4,5 horas, los gases volátiles se eliminaron al vacío. El residuo marrón se fraccionó entre diclorometano (50 mL) y agua (50 mL). La capa orgánica se lavó además con agua (50 mL) y después salmuera (50 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, filtró y concentró al vacío. El residuo se purificó a través de una filtración sobre un tampón de gel de sílice corto (40% EtOAc/hexanos) y el filtrado se concentró al vacío para proporcionar 6-bromo-N-ciclopropilimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (2,19 g, 95%) como un sólido marrón claro. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 7,61 (s, 1H), 7,46 (d, 1H, J = 1.2 Hz), 7,44 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 6,26 (bs, 1H), 3,02 (dddd, 1H, J = 7,2, 7,2, 7,2, 3,6 Hz), 0,89-0,95 (m, 2H), 0,64-0,69 (m, 2H). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 254 [M+1]+.
Ejemplo 176. Síntesis de 6-bromoimidazo[1,2-a]pirazin-8-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
6-Bromo-N-ciclopropilimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (0,5 g, 1,98 mmol) se disolvió en diclorometano (8 mL). Dicarbonato de terc-butilo (733 mg, 3,35 mmol), DMAP (5 mg, 0,02 mmol) y piridina (0,4 mL) se adicionaron secuencialmente. Después de 12 horas, la solución se diluyó con EtOAc (50 mL) y después se lavó secuencialmente con HCl 1N (50 mL),
NaOH 1N (50 mL), y salmuera (50 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, filtró y concentró al vacío. El residuo se trituró con hexanos (5 mL) para rendir 6-bromoimidazo[1,2-a]pirazin-8-il(ciclopropil) carbamato de terc-butilo (337 mg, 48%) como un sólido blaquecino. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 8,18 (s, 1H), 7,78 (d, 1H, J = 0,8 Hz), 7,67 (d, 1H, J = 0,8 Hz), 3,25 (dddd, 1H, J = 6,8, 6,8, 3,6, 3,6 Hz), 1,20 (s, 9H), 0,78-0,86 (m, 2H), 0,71-0,77 (m, 2H). LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 354 [M+1]+.
Ejemplo 177. Síntesis de 6-bromo-8-(ciclopropilamino)imidazo[1,2-a]pirazina-3-carbaldehído
El oxicloruro de fósforo (V) (3,9 mL, 42,68 mmol) se añadió gota a gota a DMF anhidro (16 mL) a 0 °C. 6-bromo-Nciclopropilimidazo[1,2-a]pirazin-8-amina (900 mg, 3,56 mmol) se disolvió en DMF anhidro (24 mL) y adicionó durante dos minutos. La solución se colocó en un baño de aceite a 85 °C durante 5 horas. La solución se enfrió a 0°C y se añadió HCl concentrado (30 mL). La mezcla alcanzó la alcalinidad a pH=10 c/ NaOH 3N (-175 mL). La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 250 mL), y los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (500 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, filtró y concentró al vacío. El residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (30% EtOAc/hexanos) para proporcionar 6-bromo-8-(ciclopropilamino)imidazo[1,2-a]pirazina-3-carbaldehído (490 mg, 49%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 282 [M+1]+.
Ejemplo 178. Síntesis de 6-bromo-3-formilimidazo[1,2-a]pirazina-8-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
Dicarbonato de di-terc-butilo (1,16 g, 5,30 mmol) y DMAP (21 mg, 0,18 mmol) se añadieron a una solución de 6-bromo8-(ciclopropilamino)imidazo[1,2-a]pirazina-3-carbaldehído (994 mg, 3,50 mmol) en diclorometano (15 mL). Después de 2,5 horas, la solución se fraccionó entre EtOAc (100 mL) y agua (100 mL). La capa acuosa se extrajo además con EtOAc (2 x 75 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (250 mL), secaron sobre MgSO4, filtraron y concentraron al vacío. El residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (30% EtOAc/hexanos) para proporcionar 6-bromo-3-formilimidazo[1,2-a]pirazina-8-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (1,17 g, 87%) como una espuma marrón. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 10,05 (s, 1H), 9,42 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 3,25 (dddd, 1H, J = 6,8, 6,8, 4,0, 4,0 Hz), 1,22 (s, 9H), 0,85-0,90 (m, 2H), 0,69-0,75 (m, 2H). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 382 [M+1]+.
Ejemplo 179. Síntesis de ciclopropil(3-formil-6-(3-trifluorometoxi)feninimidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato deterc-butilo
6-bromo-3-formilimidazo[1,2-a]pirazina-8-il(ciclopropil)carbamato de tercbutilo (130 mg, 0,34 mmol), ácido 3(trifluorometoxi)fenil borónico (105 mg, 0,51 mmol), Na2CO3 3M (1,1 µL, 3,4 mmol) y DME (4,5 mL) se combinaron. La solución se degasificó con una corriente de N2 durante 10 minutos. Pd(PPh3)4 se añadió y la solución se refluyó durante 2 horas. La solución se fraccionó entre diclorometano (25 mL) y agua (25 mL). La capa acuosa se extrajo además con diclorometano (2 x 25 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (50 mL), secaron sobre MgSO4, filtraron y concentraron al vacío. El residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (30-45% EtOAc/hexanos) para proporcionar ciclopropil(3-formil-6-(3-trifluorometoxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (96 mg, 61 %) como un sólido amarillo brillante. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 463 [M+1]+.
Ejemplo 180. Síntesis de ciclopropil(6-(3-trifluorometoxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo
El ciclopropil(6-(3-trifluorometoxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (77%) se sintetizó en forma análoga al Ejemplo 179. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 435 [M+1]+,
Ejemplo 181. Síntesis de cipropil(6-(3-fluorofenil)-3-formilimidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo
El ciclopropil(6-(3-fluorofenil)-3-formilimidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (28%) se sintetizó en forma análoga al Ejemplo 183. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 435 [M+1]+.
Ejemplo 182. Síntesis de ciclopropil(3-formil-6-(3-(morfolinometil)fenil)imidazol[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo
6-bromo-3-formilimidazo[1,2-a]pirazina-8-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (100 mg, 0,26 mmol), 4-[3-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil]morfolina (118 mg, 0,39 mmol), Na2CO3 3M (1,3 mL, 2,60 mmol) y DME (3.5 mL) se combinaron. La solución se degasificó con una corriente de N2 durante 10 minutos. Pd(PPh3)4 se añadió y la solución se refluyó durante 2 horas. La solución se fraccionó entre diclorometano (25 mL) y agua (25 mL). La capa acuosa se extrajo además con diclorometano (2 x 25 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (50 mL), secaron sobre MgSO4, filtraron y concentraron al vacío. El residuo se purificó a través de TLC preparartiva (5% MeOH/diclorometano) para proporcionar ciclopropil(3-formil-6-(3-(morfolinometil)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8il)carbamato de terc-butilo (60 mg, 48%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 478 [M+1]+.
Ejemplo 183. Síntesis de ciclopropil(3-formil-6-((trimetilsilil)etinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo
Trietilamina (912 µL, 6,56 mmol) se añadió a 6-bromo-3-formilimidazo[1,2-a]pirazina-8-il(ciclopropil)carbamato de tercbutilo (250 mg, 0,66 mmol) disuelto en DMF anhidro (2,2 mL) en un tubo de presión de 15 mL. La solución se degasificó con una corriente de N2 durante 10 minutos. Trimetilsililacetileno (927 µL, 6,56 mmol), Pd(PPh3)4 (76 mg, 0,07 mmol), y yoduro de cobre(I) (25 mg, 0,13 mmol) se adicionaron y la reacción se selló y se calentó a 65 °C durante 24 horas. La reacción se diluyó con EtOAc (50 mL) y se lavó después con salmuera al 10% (4 x 50 mL) y salmuera (50 mL). Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO4, filtraron y concentraron al vacío. El residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (30% EtOAc/hexanos) para producir ciclopropil(3-formil-6((trimetilsilil)etinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (186 mg, 71%) como un sólido espumoso marrón. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 400 [M+1]+.
144 Ejemplo 184. Síntesis de ciclopropil(3-formil-6-((feniletinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo
El ciclopropil(3-formil-6-((feniletinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (64%) se sintetizó en forma análoga al Ejemplo 183. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 403 [M+1]+.
Ejemplo 185. Síntesis de ciclopropil(6-etinil-3-formilimidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo
Carbonato de potasio (86 mg, 0,63 mmol) se añadió a ciclopropil(3-formil-6-((trimetilsilil)etinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8il)carbamato de terc-butilo (50 mg, 0,13 mmol) disuelto en metanol (2,5 mL). Después de 2 horas, los gases volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se fraccionó entre diclorometano (10 mL) y agua (10 mL). La capa acuosa se extrajo además con diclorometano (2 x 10 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (30 mL), secaron sobre MgSO4, filtraron y concentraron al vacío. El residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (30% EtOAc/hexanos) para proporcionar ciclopropil(6-etinil-3-formilimidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (20 mg, 50%) como un sólido espumoso amarillo. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 327 [M+1]+.
Ejemplo 186. Síntesis de ciclopropil(3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-(3-trifluorometoxi)fenil)imidazo[1,2a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo
Hidantoína (33 mg, 0,33 mmol) y piperidina (33 µL, 0,33 mmol) se añadieron a ciclopropil(3-formil-6-(3trifluorometoxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (50 mg, 0,11 mmol) suspended in etanol (0,5 mL). La reacción se selló e irradió en el microondas a 80 °C durante 12 horas. El precipitado se filtró y se lavó con etanol (3 mL) para producir ciclopropil(3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-(3-trifluorometoxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8il)carbamato de (Z)-terc-butilo (18 mg, 30%) como un sólido amarillo brillante. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 545 [M+1]+.
Ejemplo 187. Síntesis de 5-((8-ciclopropilamino)-6-(3-(trifluorometoxi)fenil) imidazo[1,2-a]pirazin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
El ciclopropil(3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-(3-trifluorometoxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (15 mg, 0,03 mmol) se disolvió en diclorometano (0,5 mL) y ácido trifluoroacético (0,5 mL). Después de 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de aire. El residuo se purificó a través de HPLC preparativa para proporcionar (Z)-5-((8-ciclopropilamino)-6-(3-(trifluorometoxi)fenil) imidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona (0,9 mg, 8%).
Ejemplo 188. Síntesis de ciclopropil(3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-(feniletinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8il)carbamato de terc-butilo
Hidantoína (24 mg, 0,24 mmol) y piperidina (24 µL, 0,24 mmol) se añadieron a ciclopropil(3-formil-6((feniletinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (24 mg, 0,06 mmol) disuelto en etanol (1 mL). La reacción se calentó a 80°C durante 12 horas, y se enfrió después a temperatura ambiente. El precipitado se filtró y se lavó con etanol (3 mL) para producir ciclopropil(3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-(feniletinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8il)carbamato de (Z)-terc-butilo (12 mg, 43%) como un sólido naranja/amarillo. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 485 [M+1]+.
Ejemplo 189. Síntesis de (Z)-5-((8-(ciclopropilamino)-6-(feniletinil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
El ciclopropil(3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-(feniletinil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de (Z)-terc-butilo (12 mg, 0,03 mmol) se disolvió en diclorometano (0,3 mL) y ácido trifluoroacético (0,3 mL). Después de 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de aire. El residuo se trituró con Et2O y filtró para rendir (Z)-5-((8(ciclopropilamino)-6-(feniletinil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (6 mg, 63%) como un sólido amarillo brillante.
Ejemplo 190. Síntesis de 2,2,2-trifluoroacetato de (Z)-5-((8-(ciclopropilamino)-6-(3-morfolinometil)fenil)imidazo[1,2a]pirazin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Hidantoína (152 mg, 1,50 mmol) y piperidina (150 µL, 1,50 mmol) se añadieron a ciclopropil(3-formil-6-(3(morfolinometil)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (60 mg, 0,13 mmol) disuelto en etanol (1 mL). La reacción se calentó a 80°C durante 4 días, y después se diluyó con agua (10 mL). El sobrenadante se decantó y se extrajo con diclorometano (2 x 15 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (30 mL), secaron sobre MgSO4, filtraron y concentraron al vacío para obtener un sólido amarillo. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 560 [M+1]+.
El sólido crudo se disolvió en diclorometano (0,5 mL) y ácido trifluoroacético (0,5 mL). Después de 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de aire. El residuo se purificó a través de HPLC preparativa para proporcionar 2,2,2
trifluoroacetato de (Z)-5-((8-(ciclopropilamino)-6-(3-morfolinometil)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona (5,5 mg, 8% en dos etapas).
Ejemplo 191. Síntesis de (Z)-5-((8-ciclopropilamino)-6-(3-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
Hidantoína (18 mg, 0,17 mmol) y piperidina (17 µL, 0,17 mmol) se añadieron a ciclopropil(6-(3-fluorofenil)-3formilimidazo[1,2-a]pirazin-8-il)carbamato de terc-butilo (23 mg, 0,06 mmol) disuelto en etanol (0,3 mL). La reacción se calentó a 80 °C durante 18 horas, y después se concentró al vacío para obtener un sólido amarillo. El sólido crudo se disolvió en diclorometano (0,5 mL) y ácido trifluoroacético (1,5 mL). Después de 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de aire. El residuo se trituró con etanol y se filtró para proporcionar (Z)-5-((8-ciclopropilamino)-6-(3fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como un sólido naranja/amarillo (2.4 mg, 10% en dos etapas).
Ejemplo 192. Síntesis de los compuestos relacionados.
Los compuestos en la siguiente tabla se prepararon por los método descritos anteriormente, seleccionando los materiales de partida adecuados como es evidente para la persona con experiencia en la técnica. La Tabla 28B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 28A.
Tabla 28A.
Tabla 28B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
C14
gt; 5,0000 gt; 2,5000
D14
lt;0,1 gt; 2,5000 4.531 3.69
E14
gt; 5,0000 gt; 2,5000
F14
gt; 5,0000 gt; 2,5000
G14
gt; 5,0000 gt; 2,5000
Las reacciones químicas descritas en la Figura 7 pueden usarse para preparar los análogos sustituídos con un grupo trifluorometilo. El 2-amino-3,5-dibromopirazina disponible en el comercio y el 3-bromo-1,1,1-trifluoroacetona disponible en el comercio se pueden poner a reaccionar conjuntamente a 50ºC en un disolvente tal como dioxina (condiciones previamente descritas en el documento de patente núm. WO2003/82817), para preparar el compuesto 3 Compuesto 3 puede ponerse a reaccionar con la amina R1NH2 para obtener 4. Este material puede protegerse mediante un grupo boc al reaccionar 4 con el reactivo similar a Boc2O para obtener 5. Este material puede transformarse además en 6 bajo condiciones de reacción de Vilsmeier en la presencia de POCl3. El compuesto 6 puede ponerse a reaccionar con varios reactivos tales como ácidos borónicos o ésteres W-B(OR3)2 bajo condiciones de Suzuki para formar la molécula 7.
Otros análogos de 7 pueden prepararse al calentar 6 con aminas o anilinas R5R6NH, alcoholes o fenoles R5OH, tioles o tiofenoles R5SH, en presencia de una base o un ácido. El compuesto 8 puede prepararse al calentar 7 con hidantoína en etanol en presencia de una base tal como piperidina.
Métodos Generales
A menos que se especifique de cualquier otra manera, Los sustituyentes diferentes de los compuestos se definen de la misma manera que el compuesto de fórmula II / II' de la invención.
El compuesto químico descrito en la Figura 4 y Figura 5 puede usarse para preparar varios compuestos sustituídos de fórmula II.
El aminopirazol sustituído 1 puede reaccionar con isotiocianato 2 para formar el producto intermedio 3. El compuesto 3 puede ciclidarse a 4 en presencia de una base tal como hidróxido de sodio. El compuesto 4 puede alquilarse con haloR7 en presencia de una base. El compuesto 5 puede convertirse en compuesto 6 usando oxicloruro de fósforo. La molécula 7 puede prepararse mediante la adición de amina R7R8NH a la molécula 6 en un disolvente similar a NMP o DMF. El compuesto 8 puede obternerse al reaccionar el compuesto 7 con DMF y oxicloruro de fósforo bajo condiciones de reacción de Vilsmeier. El aldehído 8 puede convertirse en dos etapas en cetona sustituída 8b al reaccionar con un reactivo de Grignard R4MgX, seguido por la reacción con un oxidante tales como DCC o usando condiciones de reacción de Swern.
El compuesto 8 y 8a, o 8b y 8a puede reaccionar después de calentar con un disolvente tal como etanol y en presencia de una base tal como piperidina para formar el compuesto 9. La oxidación de 9 con un oxidante tales como ácido metacloroperbenzoico o oxono puede proporcionar el compuesto 10, que puede contener cantidades variables de sulfuro (n = 0), sulfóxido (n = 1) o sulfona (n = 2).
El compuesto químico descrito en la Figura 5 puede usarse para preparar varios análogos sustituídos de los compuestos de fórmula II.
El compuesto 10 puede mezclarse a temperatura ambiente o calentarse con aminas R7R8NH para formar el compuesto 11. El compuesto 10 puede ponerse a reaccionar con hidrazinas R7R8N-NH2 para formar el compuesto 12. El compuesto 10 puede ponerse a reaccionar con alcoholes o fenoles R7OH en presencia de una base tales como NaH o K2CO3 para formar el compuesto 13. El compuesto 10 puede ponerse a reaccionar con tioles o tiofenoles R7SH con o sinuna base para formar el compuesto 14.
El compuesto químico descrito en la Figura 6 puede usarse para preparar los análogos sustituídos por grupos arilos o heteroarilos. El compuesto 7 puede ponerse a reaccionar con ésteres o ácidos borónicos W-B(OR7)2 o compuestos de organoestaño W-Sn(R7)3 en presencia de tri(2-furil)fosfina, cobre(I)tiofeno-2-carboxilato y Pd2dba3 o usando las condiciones previamente descritas en Organic Letters 2002, vol 4(6), págs. 979-981. El compuesto 15 puede convertirse en compuesto 18 usando los compuestos químicos similares a los descritos en la Figura 4.
148 Ejemplo 193. Síntesis de 2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona
El material se preparó de conformidad con un procedimiento publicado en la patente de los Estados Unidos núm. 3,846,423. Caracterizado por LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 183 [M+H]+.
Ejemplo 194. Síntesis de 4-cloro-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina
En un frasco de fondo redondo equipado con una barra de agitación magnética, 2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin4(3H)-ona (1,0 eq, 10,43 g, 57,24 mmol) se suspendió en acetonitrilo (100 ml). El oxicloruro de fósforo (4,0 eq, 21 ml, 229,4 mmol) y la trietilamina (1,05 eq, 8,4 ml, 60,27 mmol) se añadieron y la mezcla se agitó en reflujo durante 3,5 horas, en el momento que LCMS indicó la finalización de la reacción. La mezcla se enfrió y se vertió lentamente en hielo picado (volumen total final de aproximadamente 600 ml). El sólido se filtró, lavó con agua y secó en un horno de vacío para proporcionar 4-cloro-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina como un sólido marrón (8,15 g, 71% de rendimiento). LCMS (ES):gt;97% puro, m/z 201 [M+H]+.
Ejemplo 195. Síntesis de N-ciclopropil-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amina
4-cloro-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina (1,0 eq, 6,26 g, 31,19 mmol) se suspendió en NMP anhidro (50 ml). Ciclopropilamina (1,5 eq, 3,2 ml, 46,26 mmol) se añadió a través de una jeringa gota a gota. La temperatura interna subió a 47°C. La mezcla se agitó sin ningún enfriamiento externo durante una hora. Se añadió una cantidad adicional de cipropilamina (1 ml) y la mezcla se agitó durante otras 1,5 horas. La mezcla se vertió lentamente en agua (500 ml) bajo agitación. El sólido resultante se filtró, lavó con agua y secó en horno de vacío para producir N-ciclopropil-2(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amina como un sólido marrón (5,44 g, 79% de rendimiento). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 222 [M+H]+.
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares al Ejemplo 195. Los compuestos se caracterizaron por LCMS.
Tabla 29.
Estructura
PM LCMS m/z [M+1]+
253.32 254
271.34 272
149 Ejemplo 196. Síntesis de 4-(ciclopropilamino)-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8-carbaldehído
263.24 264
235.31 236
N-ciclopropil-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amina (1,0 eq, 3,10 g, 14,00 mmol) se disolvió en DMF anhidro (50 ml) bajo atmósfera de nitrógeno. El oxicloruro de fósforo (5.0 eq, 6,4 ml, 69,9 mmol) se añadió gota a gota durante 5 minutos. La temperatura interna subió a 45°C. La reacción se agitó en un baño de aceite a 70°C durante 4,5 horas. La mezcla se enfrió y añadió gota a gota en una solución de NaOH 6N (150 ml) enfríada con un baño de hielo. La velocidad de adición se ajustó para mantener la temperatura interna del NaOH acuoso por debajo de 16°C. Al final de la adición, la mezcla se neutralizó con la adición lenta de HCl 6N para alcanzar pH = 5-6. El sólido resultante se filtró, lavó con agua y secó en horno de vacío durante la noche. 4-(ciclopropilamino)-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8-carbaldehído se aisló como un sólido marrón (9,26 g, 93%). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 250 [M+H]+.
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares al Ejemplo 196. Los compuestos se caracterizaron mediante LCMS.
Tabla 30.
Estructura
PM LCMS m/z [M+1]+
281,3341 282
299,3509 300
291.26 292
263.32 264
Ejemplo 197. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina2,4-diona
El 4-(ciclopropilamino)-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8-carbaldehído (1,0 eq, 3,00 g, 12,03 mmol) se suspendió en etanol (40 ml). Hidantoína (1,5 eq, 1,81 g, 18,08 mmol) y piperidina (1,5 eq, 1,78 ml, 18,01 mmol) se añadieron. La mezcla se calentó a reflujo bajo agitación magnética vigorosa durante 3 horas. Después de enfríar la mezcla de reacción, el precipitado se filtró, lavó con etanol, después con una mezcla de etanol y agua (1:1). Después de secar al vacío, (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona se aisló como un sólido amarillo (3,80 g, 95%). LCMS (ES):gt;85% puro, m/z 332 [M+H]+.
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares al Ejemplo 197. Los compuestos se caracterizaron mediante LCMS.
Tabla 31.
Estructura
PM LCMS m/z [M+1]+
363,39 364
373,32 374
381.42 382
Ejemplo
198. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8
il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8
il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
(Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1,0 eq, 3,00 g, 9,05 mmol) se suspendió en diclorometano (150 ml). Se añadió m-cpba (77% grado de pureza, 5,0 eq, 10,1 g, 45,06 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La reacción se diluyó mediante la adición de diclorometano (500 ml). El sólido se filtró y se lavó con diclorometano. Después de secar una mezcla de (Z)-5-((4(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona y (Z)-5-((4(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1:1) se aisló como un sólido amarillo (2,67 g, 81%). LCMS (ES):gt;85% puro, m/z 364 [M+H]+ y m/z 398 [M+H]+. La mezcla se usó para una nueva etapa sin cualquier separación de moléculas.
Las mezclas siguientes de sulfonas y sulfóxidos se prepararon usando los compuestos químicos similares al Ejemplo 198. Los compuestos se caracterizaron mediante LCMS.
Tabla 32.
Estructura
PM LCMS m/z [M+1]+ Estructura PM LCMS m/z [M+1]+
405.32 406 389.32 390
395.4 396 379.4 380
Ejemplo
199. Síntesis de (Z)-5-((2-(3-clorofenilamino)-4-(ciclopropilamino)-pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8
il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
152
Una mezcla de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1:1)(15 mg) se mezcló con 3-cloroanilina (0,1 ml) en NMP (0,2 ml) y la mezcla se calentó en un horno de microondas a 120°C durante 15 minutos. El metanol se añadió y el sólido resultante se filtró y secó para proporcionar (Z)-5-((2-(3clorofenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como un sólido (7 mg). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 411 [M+H]+.
Ejemplo 200. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(ciclopropilmetilamino)-pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il) metileno)imidazolidina-2,4-diona
Una mezcla (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (36 mg) (1:1) se suspendió en NMP (0,2 ml). La ciclopropilmetilamina (88 uL) se añadió y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. El agua y el cloruro de metileno se añadieron y el precipitado resultante se filtró. Después de triturar en una mezcla de acetato de etilo y hexanos, (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(ciclopropilmetilamino)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-8-il) metileno)imidazolidina-2,4-diona se aisló como un sólido amarillo.). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 355 [M+H]+.
Ejemplo 201. Síntesis de (Z)-5-((2-(3-clorofenoxi)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
Una mezcla de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1:1) (1,0 eq, 25 mg, 0,0704 mmol) se combinó en un frasco con 3-clorofenol (5,0 eq, 45 mg, 0,35 mmol) y K2CO3 (5,0 eq, 48 mg, 0,347 mmol) en NMP (0,2 ml). La mezcla se agitó a 90°C durante 1 hora. El agua se añadió y el sólido resultante se filtró y secó. La trituración en una mezcla de acetato de etilo y hexanos seguido por la filtración proporcionó (Z)-5-((2-(3clorofenoxi)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]iriazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como un sólido marrón (20 mg, 69%). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 412 [M+H]+.
Ejemplo 202. Síntesis de (1r,4r)-4-(4-(ciclopropilamino)-8-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-2-ilamino)-N-metilciclohexanocarboxamida.
El ácido (1r,4r)-4-(4-(ciclopropilamino)-8-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-2ilamino)ciclohexanocarboxílico (1 eq, 12 mg, 0,028 mmol) se mezcló en NMP (0,4 ml) con clorhidrato de metilamina (8 eq, 15 mg, 0,225 mmol), HOBt.H2O (2 eq, 8 mg, 0,056 mmol), DIEA (4 eq, 14 uL, 0,113 mmol) y EDCI (4 eq, 22 mg, 0,113 mmol). La mezcla se agitó a 70°C durante 2,5 horas. El agua se añadió y el precipitado se filtró para proporcionar (1r,4r)-4-(4-(ciclopropilamino)-8-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-2-ilamino)-Nmetilciclohexanocarboxamida. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 440 [M+H]+.
Ejemplo 203. Síntesis de (1r,4r)-4-(4-(ciclopropilamino)-8-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-2-ilamino)ciclohexanocarboxamida
El ácido (1r,4r)-4-(4-(ciclopropilamino)-8-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-2ilamino)ciclohexanocarboxílico (1 eq, 12 mg, 0,028 mmol) se mezcló en NMP (0,4 ml) con cloruro de amonio (8 eq, 12 mg, 0,225 mmol), HOBt.H2O (2 eq, 8 mg, 0,056 mmol), DIEA (4 eq, 14 uL, 0,113 mmol) y EDCI (4 eq, 22 mg, 0,113 mmol). La mezcla se agitó at 70°C durante 2,5 horas. El agua se añadió y el precipitado se filtró para proporcionar (1r,4r)-4-(4-(ciclopropilamino)-8-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]tiazin-2ilamino)ciclohexanocarboxamida. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 426 [M+H]+.
Ejemplo 204. Síntesis de (Z)-5-((2-((1r,4r)-4-aminociclohexilamino)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Una mezcla (1:1) de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina2,4-diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1,0 eq, 16 mg, 0,0451 mmol) se puso a reaccionar con trans-1,4-diaminociclohexano (20.0 eq, 103 mg, 0,902 mmol) en NMP (0,4 ml) a temperatura ambiente durante 3 horas. El agua y metanol se añadió y el material se purificó mediante HPLC preparativa. La evaporación en el Genevac proporcionó el 2,2,2-trifluoroacetato de (Z)-5-((2-((1r,4r)-4aminociclohexilamino)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (15 mg). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 398 [M+H]+.
Ejemplo 205. Síntesis de ciclopropil(2-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)carbamato de terc-butilo
El dicarbonato de di-terc-butilo (327 mg, 1,50 mmol) y DMAP (6 mg, 0,05 mmol) se añadieron a N-ciclopropil2(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amina (221 mg, 1 mmol) disuelto en diclorometano (4 mL). Después de 15 horas, la solución se diluyó con EtOAc (100 mL) y se lavó sucesivamente con agua (3 x 100 mL) y salmuera (100 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, filtró y concentró al vacío para obtener un aceite naranja. El residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (10% EtOAc/hexanos) para proporcionar ciclopropil(2-(metiltio)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-4-il)carbamato de terc-butilo (368 mg, 79%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 322 [M+1]+.
Ejemplo 206. Síntesis de ciclopropil(2-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)carbamato de terc-butilo
Nota: THF se degasificó con una corriente de N2 durante 10 minutos en un frasco separado. El ciclopropil(2(metiltio)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)carbamato de terc-butilo (100 mg, 0,31 mmol), ácido 3-(trifluorometoxi)fenil borónico (154 mg, 0,74 mmol), tri(2-furil)fosfina (86 mg, 0,37 mmol), cobre(I) tiofeno-2-carboxilato (167 mg, 0,88 mmol), Pd2dba3 (24 mg, 0,03 mmol) se combinaron. El frasco se evacuó y se rellenó con N2. THF (3.7 mL) se añadió y la reacción se calentó a 50 °C durante 5 días. La solución se diluyó con Et2O (40 mL) y se lavó con NH4OH al 10% (3 x 30 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, filtró y concentró al vacío. El residuo sólido se trituró con Et2O y se filtró. El filtrado se concentró al vacío y se purificó a través de cromatografía rápida en columna (2.5-5% EtOAc/hexanos) para proporcionar ciclopropil(2-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)carbamato de terc-butilo (116 mg, 85%). LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 436 [M+1]+.
Ejemplo 207. Síntesis de 4-(ciclopropilamino)-2-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8-carbaldehído
El ciclopropil(2-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)carbamato de terc-butilo se disolvió en diclorometano (0,7 mL) y ácido trifluoroacético (0,7 mL). Después de 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de aire para producir 4-(ciclopropilamino)-2-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8-carbaldehído crudo que se usó sin purificación adicional. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 336 [M+1]+. El 4-(ciclopropilamino)-2-(3(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8-carbaldehído (87 mg, 0,26 mmol) se disolvió en DMF (0,8 mL). El oxicloruro de fosfóro(V) (318 µL, 3,47 mmol) se añadió gota a gota y la reacción se calentó a 70 °C. Después de 6 horas, la solución se añadió gota a gota a NaOH 6M (~10 mL) y enfrió a 0 °C. El pH se ajustó a 7 mediante la adición de HCl 12N. El precipitado se filtró y secó al vacío para proporcionar 4-(ciclopropilamino)-2-(3(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8-carbaldehído (71 mg, 75%) como un sólido marrón. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 364 [M+1]+.
Ejemplo 208. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
El (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(3-(trifluorometoxi)fenil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazina-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona se preparó usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 197. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 446 [M+1]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando los compuestos químicos descritos en el Ejemplo 199, Ejemplo 200, Ejemplo 201, Ejemplo 202, Ejemplo 203, Ejemplo 204, Ejemplo 205, Ejemplo 206, Ejemplo 207 y Ejemplo 208; usando los reactivos adecuados. Los métodos generales para la preparación de tales compuestos se incluyen en las Figuras 314 de la presente descripción. Los reactivos que portan dos grupos amino reactivos se usan generalmente como mono-Boc protegidos. El grupo protector se eliminó mediante la reacción con el ácido trifluoroacético en cloruro de metileno antes de la purificación. Los compuestos se aislaron mediante filtración después de la adición de agua o metanol. Algunos compuestos se purificaron mediante HPLC preparativa y aislaron como sales de TFA después de la evaporación en el Genevac. Los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 33B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 33A.
Tabla 33A.
156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 Tabla 33B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (5 µM ATP) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
H14
lt;1,0 1,3064 25,377 22,762
I14
lt;0,01 gt; 2,5000 gt;30 gt;30
J14
lt;0,01 gt; 2,5000 1,193 5,747
K14
lt;0,1 gt; 2,5000
L14
lt;0,01 gt; 2,5000 1,003 11,197
M14
lt;0,01 gt; 2,5000 0,77 2,905
N14
lt;0,01 2,3344 1,998 1,766
O14
lt;0,01 gt; 2,5000 0,753 2,178
P14
lt;0,01 gt; 2,5000 3,129 gt; 30
Q14
lt;0,01 gt; 2,5000 1,06 2,671
R14
lt;0,01 2,4058 1,602 15,41
S14
lt;0,1 gt; 2,5000 11,279 11,668
T14
lt;0,1 1,25
U14
lt;0,1 gt; 2,5000
V14
lt;1,0 gt; 2,5000
W14
lt;0,1 gt; 2,5000 6,386 23,384
X14
lt;0,01 1,1205 0,559 1,517
Y14
lt;0,01 gt; 2,5000 3,325 6,748
170 171 172 173
A15
gt;1 gt; 2,5000
B15
lt;0,01 gt; 2,5000 2,214 3,394
C15
lt;1,0 gt; 2,5000
D15
lt;0,1 1,5464
E15
lt;1,0 gt; 2,5000
F15
lt;1,0 gt; 2,5000
G15
lt;0,1 gt; 2,5000
H15
lt;0,1 gt; 2,5000
I15
lt;0,1 gt; 2,5000
J15
lt;0,01 gt; 2,5000 1,936 11,99
K15
lt;0,1 1,6558 5,319 23,688
L15
lt;0,1 gt; 2,5000
M15
gt;1 gt; 2,5000
N15
gt;1 gt; 2,5000
O15
gt;1 gt; 2,5000
P15
lt;1,0 gt; 2,5000
Q15
lt;1,0 gt; 2,5000
R15
lt;1,0 gt; 2,5000
S15
gt;1 gt; 2,5000
T15
lt;1,0 gt; 2,5000
U15
lt;1,0 gt; 2,5000
V15
lt;1,0 gt; 2,5000
W15
lt;1,0 gt; 2,5000
X15
lt;1,0 18,336 14,152
Y15
lt;0,1 gt; 2,5000 6,603 10,731
Z15
lt;0,01 gt; 2,5000 6,283 15,114
A16
lt;0,1 gt; 2,5000 17,82 gt; 30
B16
lt;0,01 gt; 2,5000 2,627 5,528
C16
lt;0,1 1,7695 1,859 1,841
D16
lt;0,1 gt; 2,5000 5,03 17,83
E16
lt;0,01 gt; 2,5000 7,856 11,797
F16
lt;0,01 gt; 2,5000 3,545 17,187
G16
lt;0,01 gt; 2,5000 5,177 19,446
H16
lt;0,1 gt; 2,5000 18,952 gt;30
I16
lt;0,1 gt; 2,5000 12,508 12,673
J16
lt;0,1 gt; 2,5000 11,685 18,88
K16
lt;1,0 gt; 2,5000 9,2 12,494
L16
lt;0,1 gt; 2,5000 9,964 11,216
M16
lt;0,01 5,059 9,052
N16
lt;1,0 25,644 gt; 30
O16
lt;0,1 7,829 gt; 30
P16
lt;0,1 10,353 gt; 30
Q16
lt;0,1 17,611 gt; 30
R16
lt;0,1 13,114 19,2
S16
lt;0,01 gt; 2,5000 4,697 8,049
T16
lt;0,01 1,9391 2,491 1,712
U16
lt;0,01 gt; 2,5000 4,313 8,232
V16
lt;0,01 2,438 5,738 5,492
W16
lt;0,1 gt; 2,5000 27,524 9,27
X16
lt;1,0 gt; 2,5000 17,619 9,053
Y16
lt;0,1 gt; 2,5000
Z16
lt;0,01 lt;1,0 14,666 2,909
A17
lt;0,1 1,8629 12,569 5,872
B17
lt;0,01 gt; 2,5000 12,517 6,862
C17
lt;0,1 gt; 2,5000 11,841 2,389
D17
lt;0,01 1,884 3,353 8,144
E17
lt;1,0 gt; 2,5000
F17
lt;0,01 gt; 2,5000 3,97 15,62
G17
lt;0,1 lt;1,0
H17
lt;0,1 lt;1,0 6,919 6,611
I17
lt;0,01 1,1903 0,442 7,667
J17
lt;0,01 gt; 2,5000 1,416 9,445
K17
lt;0,1 gt; 2,5000
L17
lt;0,1 2,0781 20,449 5,948
M17
lt;0,01 gt; 2,5000 27,014 gt; 30
N17
lt;0,1 gt; 2,5000 13,419 19,135
O17
lt;0,1 gt; 2,5000 12,459 17,049
P17
lt;0,1 gt; 2,5000
Q17
lt;0,1 1,6281 gt; 30 2,009
R17
lt;1,0 gt; 2,5000
S17
lt;0,1 gt; 2,5000 2,594 6,849
T17
lt;0,01 lt;1,0 2,751 4,95
U17
lt;0,1 gt; 2,5000 4,554 10,817
V17
lt;0,1 gt; 2,5000 13,033 1,55
W17
lt;0,1 gt; 2,5000
X17
lt;0,1 gt; 2,5000 2,477 5,229
Y17
lt;0,1 gt; 2,5000 8,283 3,409
Z17
lt;0,1 gt; 2,5000 4,486 9,071
A18
lt;0,01 gt; 2,5000 1,478 4,729
B18
lt;0,01 1,304 2,64 4,027
C18
lt;0,01 gt; 2,5000 1,245 1,388
D18
lt;0,01 gt; 2,5000 2,286 4,684
E18
lt;0,1 gt; 2,5000 10,575 9,784
F18
lt;0,01 gt; 2,5000 gt;30 gt;30
G18
lt;0,1 gt; 2,5000 13,472 14,435
H18
lt;0,01 gt; 2,5000 1,907 4,537
118
lt;0,1 gt; 2,5000 8,221 14,522
J18
lt;0,1 gt; 2,5000
K18
lt;0,1 gt; 2,5000
L18
lt;0,1 gt; 2,5000
M18
lt;0,1 gt; 2,5000
N18
lt;0,1 gt; 2,5000 26,829 25,022
O18
lt;0,01 gt; 2,5000 13,2 gt; 30
P18
lt;0,1 gt; 2,5000 21,799 gt; 30
Q18
lt;0,1 gt; 2,5000 1,368 8,975
R18
lt;0,1 gt; 2,5000 8,555 13,435
S18
lt;0,1 gt; 2,5000
T18
lt;0,01 gt; 2,5000 3,136 4,168
U18
lt;0,1 gt; 2,5000
V18
lt;0,1 gt; 2,5000
W18
lt;0,01 gt; 2,5000 11,668 gt; 30
X18
lt;0,01 gt; 2,5000 13,548 18,585
Y18
lt;0,1 gt; 2,5000 18,328 5,013
Z18
lt;0,01 gt; 2,5000 11,97 gt;30
A19
lt;0,1 gt; 2,5000
B19
lt;0,1 gt; 2,5000
C19
lt;0,01 gt; 2,5000
D19
lt;0,1 gt; 2,5000
E19
lt;0,1 gt; 2,5000
F19
lt;0,01 gt; 2,5000
G19
lt;0,01 gt; 2,5000
H19
lt;0,1 gt; 2,5000
I19
lt;0,1 gt; 2,5000
J19
lt;0,01 gt; 2,5000
K19
lt;0,1 gt; 2,5000
L19
lt;0,1 gt; 2,5000
M19
lt;0,01
N19
lt;0,1
O19
lt;0,1
P19
lt;0,01
Q19
lt;0,01
R19
lt;0,01
S19
lt;0,1
Esquema 1
Los compuestos descritos en la siguiente tabla pueden prepararse usando los compuestos químicos descritos en la Figura 7. Tabla 34.
Las moléculas siguientes pueden prepararse usando los compuestos químicos similares al Ejemplo 206, Ejemplo 207 y Ejemplo 208.
Tabla 35.
Las moléculas descritas en la Figura 8 se prepararon usando los compuestos químicos descritos en el Ejemplo 201, usando bases tales como K2CO3 o hidruro de sodio.
Otros
La reacción química descrita en la Figura 9 puede usarse para preparar los análogos de fórmula 11. La 4-bromo-6cloropiridazin-3-amina 1 puede ponerse a reaccionar con 2 usando condiciones análogas a la preparación descrita en la solicitud de patente núm. WO2009/100375 para formar el compuesto 3. El compuesto 3 puede ponerse a reaccionar con la amina R8R7NH para formar el compuesto 4. El compuesto 4 puede transformarse en el compuesto 5 mediante sustituciones nucleofílicas con aminas, anilinas, alcoholes, fenoles o tiofenoles, en presencia de una base, o mediante las conversiones catalizadas por metal de transición tal como acoplamiento Suzuki con ácido bórico o ésteres de fórmula WB(OR)2. El compuesto 5 puede transformarse en el compuesto 6 mediante la reducción con LiAlH4. El alcohol 6 puede convertirse en el aldehído 7 por oxidación con DCC o bajo condiciones de Swern. El compuesto 5 puede reaccionar con un reactivo organometálico ejemplificado con el reactivo de Grignard R4MgX para formar el alcohol secundario 8. Este compuesto puede convertirse en alquilcetona 9 bajo condiciones análogas a las condicones usadas para convertir 6 en 7. Los compuestos 7 y 9 pueden convertirse ambos en el compuesto 11 mediante la condensación con 10 en un disolvente tal como etanol y en presencia de una base tal como piperidina.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla pueden prepararse usando el compuesto químico descrito en la Figura 9.
Las Figuras 10-14 ilustran otros métodos de síntesis que pueden usarse para preparar los compuestos de la invención.
Tabla 36.
Ejemplo 209. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona
Etapa A. Al 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina (200 mg, 1,06 mmol) en acetonitrilo se añadió Et3N (148 µl, 1,06 mmol) y ciclopropilamina (75 µl, 1,06 mmol). La reacción se calentó a 80 °C durante la noche. La mezcla se concentró bajo presión reductora, disuelta en diclorometano, y se lavó con agua. La capa orgánica resultante se secó sobre Na2SO4 y concentró bajo presión reductora para proporcionar 156 mg de 5-cloro-N-ciclopropilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (70% de rendimiento). LCMS (M+1=209)
Etapa C. Al 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (177 mg, 0,75 mmol) en 1,4-dioxano se añadió 3-cloroanilina (397 µl, 3,75 mmol). La mezcla se calentó en microondas a 120°C durante 60 minutos. El precipitado se filtró, y el filtrado se preparaó por TLC (1% metanol/diclorometano) para rendir 26 mg (11% de rendimiento) de 5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído. LCMS (M+1=328)
Etapa D. Al 5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (26 mg, 0,08 mmol) en EtOH se añadió hidantoína (8 mg, 0,08 mmol) y piperidina (8 µl, 0,08 mmol). La mezcla se agitó a 70°C durante 3 días. Los insolubles se filtraron, y el filtrado se concentró bajo presión reductora. El filtrado se disolvió después en metanol y purificó por HPLC para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=410)
Ejemplo 210. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(isobutilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4diona
Etapa A. Al 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (440 mg, 1,86 mmol) en EtOH se añadió tiazolidina-2,4-diona (458 mg, 3,91 mmol) y piperidina (208 µl, 2,05 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante toda la noche. 3 mL de isopropanol se añadió en la mañana, junto con 218 mg de tiazolidina-2,4-diona, 94 µL piperidina. La temperatura se aumentó a 90°C y dejó durante toda la noche. El precipitado se filtró aún caliente y disolvió en metanol. 1 mL de HCl 1M se añadió y la mezcla se sonicó. El precipitado se filtró y se lavó con metanol para rendir 340 mg (54% de rendimiento) 5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona como un polvo amarillo. LCMS (M+1=336)
Etapa B. Al 5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona (30 mg, 0,09 mmol) en N-metilpirrolidinona (NMP) se añadió 2-metilpropan-1-amina (20 mg, 0,268 mmol). La reacción se calentó a 130°C durante toda la noche. La mezcla se diluyó con metanol y preparaó por HPLC para rendir 5-((7-(ciclopropilamino)-5(isobutilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=373)
Ejemplo 211. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(2-hidroxipropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina2,4-diona
El compuesto del título se preparaó usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 210. LCMS (M+1=375) Ejemplo 212. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(dietilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona
El compuesto del título se preparó usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 210. LCMS (M+1=373)
Ejemplo 213. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(dimetilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4diona
El compuesto del título se preparó usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 210. LCMS (M+1=345)
Ejemplo 214. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(metil(1-metilpirrolidin-3-il)amino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)tiazolidina-2,4-diona
El compuesto del título se preparó usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 210. LCMS (M+1=414)
Ejemplo 215. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(2-fluoroetilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina2,4-diona
El compuesto del título se preparó usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 210. LCMS (M+1=363)
Ejemplo 216. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)tiazolidina-2,4-diona
El compuesto del título se preparó usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 210. LCMS (M+1=414)
Ejemplo 217. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(2-(dietilamino)etilamino)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)tiazolidina-2,4-diona
El compuesto del título se preparó usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 210. LCMS (M+1=416)
Ejemplo 218. Síntesis de 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina2,4-diona
Al 5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona (20 mg, 0,06 mmol) en NMP se añadió 3-cloroanilina (38 µL, 0,36 mmol) y pocos gránulos de ácido p-toluenosulfónico. La reacción se calentó en microondas a 180°C durante 1,5 horas. La mezcla se filtró y preparó por HPLC, después TLC preparativa (1% metanol/diclorometano) para rendir 5-((5-(3-clorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)tiazolidina-2,4-diona como un sólido amarillo. LCMS (M+1=427)
Ejemplo 219. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-2,5-dimetilpirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona
Etapa A. 7-(ciclopropilamino)-2,5-dimetilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído se preparó a partir de N-ciclopropil-2,5dimetilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 209, Etapa B. LCMS (M+1=231)
Etapa B. Al 7-(ciclopropilamino)-2,5-dimetilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (0,25 mmol) en DMF se añadió tiazolidina-2,4-diona (88 mg, 0,75 mmol) y piperidina (25 µl, 0,25 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla se preparó en HPLC para rendir 5-((7-(ciclopropilamino)-2,5-dimetilpirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=330)
Ejemplo 220. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)tiazolidina-2,4-diona
Etapa B. El compuesto del título se preparó a partir de 7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído usando un método análogo al descrito en el Ejemplo 219, Etapa B, excepto el producto se aisló por filtración, se lavó con metanol, y secó con aire. LCMS (M+1=302)
Ejemplo 221. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(4-(piridin-2-il)piperazin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Etapa A. Al 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (400 mg, 1,70 mmol) en EtOH se añadió hidantoína (186mg, 1,86mmol) y pirrolidina (14µL, 0,17mmol). La reacción se agitó a 70°C durante el final de semana. El precipitado se filtró y secó al aire para rendir 180mg (33% de rendimiento) 5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo-[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=319)
Etapa B. Al 5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (30 mg, 0,09 mmol) en 1,4-dioxano se añadió 1-(piridin-2-il)piperazina (58 µL, 4,10 mmol) y Et3N (13µL, 0,09 mmol). La reacción se calentó después a 120°C durante 35 minutos en el microondas. El solvente se eliminó bajo presión reductora, y la mezcla se disolvió en metanol. El sólido se aisló mediante filtración, después se secó al aire para rendir 11 mg (26% de rendimiento) 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(4-(piridin-2-il)piperazin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona. LCMS (M+1=446)
Ejemplo 222. Síntesis de 5-((7-(ciclopropilamino)-5-(4-etilpiperazin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
El compuesto del título se preparó usando métodos análogos a los descritos en el Ejemplo 221, Etapa B, con la siguiente alteración. El solvente se eliminó bajo presión reductora, y la mezcla se disolvió en metanol. La mezcla se filtró, y el filtrado se concentró bajo presión reductora para proporcionar 18 mg (48% de rendimiento) del producto como un sólido amarillo. LCMS (M+1=397)
Ejemplo 223. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(3,4-dimetilbencilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
Una solución de (3,4-dimetilfenil)metanamina en NMP (106 µl, 0,4 M, 1,5 eq, 0,042 mmol) se transfirió a un frasco de reacción de cristal. Una solución de una mezcla (1:1) de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona en NMP (100µl, 0,282M, 1,0 eq, 0,0282 mmol) se añadió. La mezcla se calentó a 80 °C durante 5 horas. NMP se añadió (0,7 ml) y la solución se sometió a la purificación en HPLC preparativa. La evaporación en el Genevac proporcionó (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(3,4dimetilbencilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como un sólido (5,8 mg). LCMS (ES):gt;85% puro, m/z 419 [M+H]+.
Ejemplo 224. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(1-(piridin-2-il)etilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
Una mezcla (2:1) de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina2,4-diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1,0 eq, 3,6 g, 10,08 mmol) se suspendió en 2-propanol (40 ml). Rac-1-piridinil-2-il-etilamina (2,0 eq, 2,47 g, 20,22 mmol) se añadió y la mezcla se agitó a 90 °C durante 6,5 horas. La mezcla se enfrió y el sólido se aisló por filtración. Después de secar en un horno de vacío, (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(1-(piridin-2-il)etilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona se aisló como un sólido amarillo pálido (3.60 g, 88%). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 406 [M+H]+.
Los compuestos en la siguiente tabla se prepararon usando los procedimientos descritos en el Ejemplo 223, Ejemplo 224, Ejemplo 199 y Ejemplo 200. Cuando el reactivo de amina se usó como una sal, una cantida esteoquiométrica de DIEA se añadió a la mezcla de reacción. La Tabla 37B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 37A.
Tabla 37A.
186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 Tabla 37B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
A20
lt;0,01 gt;1,0 2,74 9,91
B20
lt;0,01 gt;1,0 2,94 9,72
C20
lt;0,01 gt;1,0 3,56 5,24
D20
lt;0,01 gt;1,0 gt;30 29,48
E20
lt;0,01 gt;1,0 3,76 8,70
F20
lt;0,01 gt;1,0 4,15 3,72
G20
lt;0,01 gt;1,0 6,13 6,67
H20
lt;0,01 gt;1,0 5,69 6,09
I20
lt;0,1 gt;1,0
J20
lt;0,01 gt;1,0 18,11 13,01
K20
lt;0,01 gt;1,0 3,72 10,60
L20
lt;0,1 gt;1,0 3,67 10,55
M20
lt;0,01 gt;1,0 13,83 2,26
N20
lt;0,1 gt;1,0
O20
lt;0,1 gt;1,0
P20
lt;0,1 gt;1,0
Q20
lt;0,1 gt;1,0
R20
lt;0,1 gt;1,0
S20
lt;0,1 gt;1,0
T20
lt;0,1 gt;1,0 3,74 1,25
U20
lt;0,01 gt;1,0 3,50 6,12
V20
lt;0,1 gt;1,0 19,92 gt;30
W20
lt;0,01 gt;1,0 1,93 7,97
X20
lt;0,1 gt;1,0 1,16 1,69
Y20
lt;0,01 gt;1,0 26,01 14,86
A21
lt;0,1 gt;1,0
B21
lt;0,01 gt;1,0 8,33 10,81
C21
lt;0,1 gt;1,0
D21
lt;0,01 gt;1,0 16,78 13,98
E21
lt;0,1 gt;1,0 1,85 1,29
F21
lt;0,1 gt;1,0
G21
lt;0,1 gt;1,0 2,82 2,01
H21
lt;0,1 gt;1,0 20,39 10,94
I21
lt;0,1 gt;1,0
J21
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K21
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L21
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M21
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N21
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O21
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P21
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Q21
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R21
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S21
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T21
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U21
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V21
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W21
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X21
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Y21
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Z21
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A22
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B22
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C22
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D22
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E22
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F22
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G22
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H22
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I22
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J22
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K22
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L22
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M22
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N22
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O22
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P22
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Q22
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R22
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S22
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T22
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U22
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V22
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W22
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X22
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Y22
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Z22
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A23
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B23
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B23
lt;0,1 gt;1,0 13,76 gt;30
C23
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D23
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E23
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F23
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G23
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H23
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I23
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J23
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K23
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L23
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M23
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N23
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O23
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P23
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Q23
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R23
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S23
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T23
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U23
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V23
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W23
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X23
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Y23
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Z23
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A24
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B24
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C24
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D24
lt;1 gt;1,0
E24
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F24
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G24
lt;1 gt;1,0
H24
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I24
lt;0,1 gt;1,0
J24
lt;1 gt;1,0
K24
lt;0,1 gt;1,0 10,24 14,11
L24
gt;1,0
M24
lt;1 gt;1,0
N24
lt;0,1 gt;1,0
O24
lt;0,1 gt;1,0
P24
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
Q24
lt;0,1 gt;1,0
R24
lt;0,1 gt;1,0 22,35 gt;30
S24
gt;1,0
T24
lt;0,1 gt;1,0
U24
gt;1,0
V24
lt;1 gt;1,0
W24
lt;0,1 gt;1,0
X24
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Y24
lt;0,1 gt;1,0
Z24
lt;1 gt;1,0
A25
lt;0,1 gt;1,0
B25
lt;0,1 gt;1,0
C25
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D25
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E25
lt;1 gt;1,0
F25
lt;0,1 gt;1,0
G25
lt;1 gt;1,0
H25
lt;0,1 gt;1,0
I25
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J25
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K25
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L25
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M25
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
N25
lt;0,1 gt;1,0
O25
lt;0,1 gt;1,0
P25
lt;0,1 gt;1,0
Q25
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R25
lt;0,1 gt;1,0
S25
lt;1 gt;1,0
T25
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U25
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V25
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W25
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X25
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Y25
lt;1 gt;1,0
Z25
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A26
lt;0,1 gt;1,0
B26
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C26
gt;1,0
D26
gt;1,0
E26
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F26
lt;0,1 gt;1,0
G26
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H26
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
I26
lt;0,1 gt;1,0
J26
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K26
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L26
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M26
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N26
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O26
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P26
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Q26
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R26
lt;0,1 gt;1,0
S26
lt;0,1 gt;1,0
T26
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U26
lt;0,1 gt;1,0 7,93 11,66
V26
lt;1 gt;1,0
W26
lt;0,1 gt;1,0 8,01 14,51
X26
lt;0,1 gt;1,0
Y26
lt;0,1 gt;1,0
Z26
lt;0,01 gt;1,0 7,42 12,88
A27
lt;0,1 gt;1,0
B27
lt;0,01 gt;1,0 2,29 3,16
C27
lt;0,01 gt;1,0 13,60 9,56
D27
lt;0,1 gt;1,0
E27
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
F27
lt;0,01 gt;1,0 3,49 6,00
G27
lt;0,01 gt;1,0 gt;30 gt;30
H27
lt;0,1 gt;1,0
I27
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J27
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K27
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L27
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M27
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N27
lt;1 gt;1,0
O27
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P27
lt;0,01 gt;1,0 24,48 gt;30
Q27
lt;0,1 gt;1,0 6,81 15,80
R27
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S27
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T27
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U27
lt;0,1 gt;1,0 8,49 11,07
V27
lt;0,01 gt;1,0 gt;30 gt;30
W27
lt;0,1 gt;1,0 8,88 10,03
X27
lt;0,1 gt;1,0 4,98 9,72
Y27
lt;0,01 gt;1,0 23,52 17,78
Z27
lt;0,1 gt;1,0 4,54 3,82
A28
lt;0,01 gt;1,0 8,86 5,77
B28
lt;0,01 gt;1,0 7,71 11,04
C28
lt;0,1 gt;1,0 5,34 10,75
D28
lt;0,01 gt;1,0 4,71 4,58
E28
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
F28
lt;0,01 gt;1,0 4,15 9,71
G28
lt;0,1 gt;1,0
H28
lt;0,01 gt;1,0 0,56 0,44
I28
lt;0,01 gt;1,0 14,01 16,36
J28
lt;0,01 gt;1,0 4,22 8,17
K28
lt;0,1 gt;1,0 3,95 5,59
L28
lt;0,01 gt;1,0 6,78 13,76
M28
lt;0,1 gt;1,0 19,32 18,05
N28
lt;0,1 gt;1,0
O28
lt;0,01 gt;1,0 9,84
P28
lt;0,1 gt;1,0 11,59 18,01
Q28
lt;0,1 gt;1,0
R28
lt;0,1 gt;1,0
S28
lt;0,1 gt;1,0
T28
lt;0,1 gt;1,0
U28
lt;0,1 gt;1,0
V28
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
W28
lt;1 gt;1,0
X28
lt;0,1 gt;1,0 7,47 10,71
Y28
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
Z28
lt;0,1 gt;1,0 29,43 gt;30
A29
lt;0,1 gt;1,0 3,45 4,14
B29
lt;0,01 gt;1,0 2,23 4,14
C29
lt;0,1 gt;1,0 17,86 24,12
D29
lt;0,01 gt;1,0 10,09 11,48
E29
lt;0,01 gt;1,0 4,76 5,38
F29
lt;0,1 gt;1,0 29,82 gt;30
G29
lt;0,1 gt;1,0 7,04 gt;30
H29
lt;0,1 gt;1,0 6,62 15,18
I29
lt;0,01 gt;1,0 16,94 20,64
J29
lt;0,01 gt;1,0 4,01 7,66
K29
lt;0,1 gt;1,0 10,85 15,18
L29
lt;1 gt;1,0
M29
lt;0,01 gt;1,0 4,10 4,29
N29
lt;0,1 gt;1,0 15,63 26,05
O29
lt;0,1 gt;1,0 5,78 gt;30
P29
lt;0,01 gt;1,0 4,00 6,71
Q29
lt;0,1 gt;1,0 7,70 22,86
R29
lt;0,01 gt;1,0 5,92 4,53
S29
lt;0,1 gt;1,0
T29
lt;0,1 gt;1,0 11,56 13,01
U29
lt;0,1 gt;1,0
V29
lt;0,1 gt;1,0 8,44 18,96
W29
lt;0,01 gt;1,0 26,85 gt;30
X29
gt;1,0 gt;1,0
Y29
lt;0,01 gt;1,0 8,00 2,95
Z29
lt;0,1 gt;1,0 8,38 5,67
A30
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B30
lt;0,01 gt;1,0 3,24 2,56
C30
lt;0,1 gt;1,0 18,56 26,35
D30
lt;0,1 gt;1,0
E30
lt;0,01 gt;1,0 2,19 9,74
F30
lt;0,1 gt;1,0 18,92 23,77
G30
lt;0,01 gt;1,0 4,79 10,58
H30
lt;0,1 gt;1,0 15,60 16,24
I30
lt;0,01 gt;1,0 6,83 5,09
J30
lt;0,01 gt;1,0 2,79 2,15
K30
lt;0,1 gt;1,0
L30
lt;0,1 gt;1,0 7,00 4,33
M30
lt;0,01 gt;1,0 27,24 6,01
N30
lt;0,1 gt;1,0 15,00 16,45
O30
lt;0,01 gt;1,0 24,87 gt;30
P30
lt;0,1 gt;1,0
Q30
lt;0,1 gt;1,0
R30
lt;0,1 gt;1,0 5,13 5,78
S30
lt;0,01 gt;1,0 6,08 10,90
T30
lt;0,1 gt;1,0
U30
lt;0,1 gt;1,0
V30
lt;0,1 gt;1,0
W30
lt;0,01 gt;1,0 5,22 4,57
X30
lt;0,1 gt;1,0 6,50 10,50
Y30
lt;0,01 gt;1,0 5,29 gt;30
Z30
lt;0,1 gt;1,0 4,58 9,62
A31
lt;0,1 gt;1,0 18,05 14,55
B31
lt;0,1 gt;1,0
C31
lt;0,1 gt;1,0
D31
lt;0,01 gt;1,0 9,70 7,68
E31
gt;1,0
F31
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G31
lt;1 gt;1,0
H31
lt;1 gt;1,0
I31
lt;0,1 gt;1,0 5,18 7,09
J31
lt;1 gt;1,0
K31
lt;0,1 gt;1,0
L31
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M31
lt;0,1 gt;1,0
N31
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 14,17
O31
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 21,98
P31
lt;1 gt;1,0
Q31
lt;0,1 gt;1,0 4,33 10,82
R31
lt;0,1 gt;1,0
S31
lt;0,01 gt;1,0 5,48 14,80
T31
lt;0,1 gt;1,0 6,49 11,98
U31
lt;0,01 gt;1,0 9,66 25,85
V31
lt;0,01 gt;1,0 2,79 10,92
W31
lt;0,1 gt;1,0 6,17 10,06
X31
lt;0,01 gt;1,0 4,39 15,46
Y31
lt;0,1 gt;1,0
Z31
lt;0,1 gt;1,0 10,86 gt;30
A32
lt;0,01 gt;1,0 21,98 gt;30
B32
lt;0,1 gt;1,0
C32
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
D32
lt;0,1 gt;1,0
E32
lt;0,1 gt;1,0
F32
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
G32
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 5,13
H32
lt;0,01 gt;1,0 gt;30 gt;30
I32
lt;0,01 gt;1,0 5,73 11,31
J32
lt;0,1 gt;1,0
K32
lt;0,1 gt;1,0 1,20 1,15
L32
lt;0,1 gt;1,0 6,70 10,66
M32
lt;0,1 gt;1,0 0,21 0,18
N32
lt;0,1 gt;1,0 2,80 3,96
O32
lt;0,1 gt;1,0
P32
lt;0,1 gt;1,0
Q32
lt;0,1 gt;1,0 gt;30 gt;30
R32
lt;0,01 gt;1,0 gt;30 gt;30
S32
lt;0,01 gt;1,0 3,45 11,90
T32
lt;0,01 gt;1,0 6,79 25,42
U32
lt;0,01 gt;1,0 4,35 9,97
V32
lt;0,1 gt;1,0 7,38 11,29
W32
lt;0,01 gt;1,0 2,55 8,92
X32
lt;0,1 gt;1,0 9,82 17,08
Y32
lt;0,1 gt;1,0 5,98 16,43
Z32
lt;0,01 gt;1,0 4,10 13,91
A33
gt;1 gt;1,0
B33
lt;0,01 gt;1,0 4,15 9,63
C33
lt;0,1 gt;1,0 6,35 11,94
D33
lt;0,1 gt;1,0
E33
lt;0,01 gt;1,0 4,19 2,41
F33
lt;0,01 gt;1,0 1,36 6,58
G33
lt;0,01 gt;1,0 1,65 13,48
H33
lt;0,01 gt;1,0 3,00 8,68
I33
lt;0,01 gt;1,0 1,09 2,18
J33
lt;0,01 gt;1,0 1,48 3,81
K33
lt;0,01 gt;1,0 3,27 12,36
L33
lt;0,01 gt;1,0 1,49 6,81
M33
lt;0,01 gt;1,0 1,60 11,02
N33
lt;0,01 gt;1,0 0,85 8,92
O33
lt;0,01 gt;1,0 2,56 3,75
P33
lt;0,01 gt;1,0
Q33
gt;1,0
Ejemplo 225. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(1H-imidazol-1-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
Una mezcla de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (10 mg, 0,028 mmol) se mezcló con imidazol (6 mg, 0,084 mmol) en isopropanol (1 mL). La mezcla se agitó a 80 °C durante 16h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el sólido resultante se filtró y se lavó con isopropanol. El sólido se secó al vacío para proporcionar (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(1H-imidazol-1-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como un sólido amarillo. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 352 [M+H]+.
Ejemplo 226. Síntesis del ácido (Z)-1-(4-(ciclopropilamino)-8-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico.
Una mezcla de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (10 mg, 0,028 mmol) se mezcló con el ácido 1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico (20 mg, 0,140 mmol) in isopropanol (1 mL). La mezcla se agitó bajo calentamiento en microondas a 150°C durante 20 minutos. El solvente se eliminó para proporcionar el ácido (Z)-1-(4-(ciclopropilamino)-8-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-2-il)1H-benzo[d]imidazol-5-caboxílico como una mezcla cruda que se tomó para la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 446 [M+H]+
Ejemplo 227. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(5-(4-etilpiperazina-1-carbonil)-1H-benzo[d]imidazol-1il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
Al ácido (Z)-1-(4-(ciclopropilamino)-8-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-2-il)-1Hbenzo[d]imidazol-5-carboxílico (15 mg, 0,034 mmol) en DMF (2 mL) se añadió EDCI (65 mg, 0,34 mmol), HOBt (46 mg, 0,34 mmol), y 1-etilpiperazina (44 µL, 0,34 mmol). La mezcla se agitó at 50°C durante 1h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró a través de filtro PTFE, y purificó mediante LC/MS dirigido a masa para proporcionar (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(5-(4-etilpiperazina-1-carbonil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como la sal de TFA. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 542 [M+H]+.
Ejemplo 228. Síntesis de (Z)-1-(4-(ciclopropilamino)-8-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin2-il)-1H-imidazol-4-carbaldehído.
Una mezcla de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (20 mg, 0,056 mmol) se mezcló con 1H-imidazol-4-carbaldehído (16 mg, 0,168 mmol) en isopropanol (2 mL). La mezcla se agitó bajo calentamiento en microondas a 150°C durante 20 minutos. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el solvente se eliminó por evaporación rotatoria para proporcionar (Z)-1-(4-(ciclopropilamino)-8-((2,5dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-2-il)-1H-imidazol-4-carbaldehído como una mezcla cruda que se tomó para la próxima etapa sin purificación adicional. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 380 [M+H]+
Ejemplo 229. Síntesis de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(4-(pirrolidin-1-ilmetil)-1H-imidazol-1-il)pirazolo[1,5a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
Al (Z)-1-(4-(ciclopropilamino)-8-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-2-il)-1H-imidazol-4carbaldehído (7 mg, 0,018 mmol) en DCE (1 mL) se añadió pirrolidina (10 mg, 0,144 mmol) y triacetoxiborohidruro de sodio (36 mg, 0,144 mmol). La mezcla de reacción se agitó bajo calentamiento en microondas a 120°C durante 10 minutos. Diluir con DMSO (1 mL) y filtrar a través de filtro PTFE. Se purificó por LC/MS dirigido a masa para proporcionar (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(4-(pirrolidin-1-ilmetil)-1H-imidazol-1-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como la sal de TFA. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 435 [M+H]+
Los compuestos en la siguiente tabla se prepararon usando los compuestos químicos descritos en los Ejemplos 225 a
229. La Tabla 38B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 38A.
Tabla 38A.
229 230
Tabla 38B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
R33
lt;0,01 gt;1,0 3.45 4.67
S33
lt;0,01 gt;1,0 6.40 5.20
T33
lt;0,01 gt;1,0 1.03 1.25
U33
lt;0,01 gt;1,0 12.21 23.77
V33
lt;0,1 gt;1,0
W33
lt;0,01 gt;1,0 0.74 0.78
X33
lt;0,01 gt;1,0 gt;30 gt;30
Y33
lt;0,1 gt;1,0
Z33
lt;0,1 gt;1,0 14.60 15.71
A34
lt;0,1 gt;1,0
B34
lt;1 gt;1,0
C34
lt;0,1 gt;1,0
D34
lt;1 gt;1,0
Ejemplo 230. Síntesis de (Z)-5-((2-(3-clorofenoxi)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
Una mezcla (1:1) de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina2,4-diona y (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1,0 eq, 25 mg, 0,0704 mmol) se combinó en un frasco con 3-clorofenol (5,0 eq, 45 mg, 0,35 mmol) y K2CO3 (5,0 eq, 48 mg, 0,347 mmol) en NMP (0,2 ml). La mezcla se agitó a 90°C durante 1 hora. El agua se añadió y el sólido resultante se filtró y secó. La trituración en una mezcla de acetato de etilo y hexanos seguido por la filtración proporcionó (Z)-5-((2-(3clorofenoxi)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como un sólido marrón (20 mg, 69%). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 412 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando el compuesto químico descrito en el Ejemplo 230. La Tabla 39B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 39A.
231 Tabla 39A.
232 233 234 235 236 Tabla 39B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
E34
lt;0,01 gt;2,5000 1,42 9,45
F34
lt;0,01 gt;1,0 3,27 9,60
G34
lt;0,01 gt; 1,0 2,91 13,64
H34
lt;0,01 gt;1,0 gt; 30 gt; 30
I34
lt;0,01 gt;1,0 gt; 30 8,45
J34
lt;0,01 gt;1,0 5,38 17,57
K34
lt;0,1 gt;1,0 20,53 gt; 30
L34
lt;0,1 gt;1,0 18,30 28,13
M34
lt;0,01 gt;1,0 26,25 15,88
N34
lt;1,0 gt; 1,0
O34
lt;0,01 gt;1,0 1,44 2,66
P34
lt;0,01 gt;1,0 17,30 gt; 30
Q34
lt;0,1 gt;1,0
R34
lt;0,1 gt;1,0
S34
lt;0,01 gt;1,0 20,16 17,92
T34
lt;0,1 gt;1,0 11,09 gt; 30
U34
lt;0,01 gt;1,0 10,32 gt; 30
V34
lt;0,01 gt;1,0 gt; 30 gt; 30
W34
lt;0,01 gt;1,0 gt; 30 24,51
X34
lt;0,01 gt;1,0 1,54 5,48
Y34
lt;0,01 gt;1,0 14,63 gt; 30
Z34
lt;0,01 gt; 1,0 gt; 30 gt; 30
A35
lt;0,01 gt;1,0 5,89 28,39
237 238
B35
lt;0,01 gt;1,0 gt; 30 gt; 30
C35
lt;0,01 gt;1,0 15,80 gt; 30
D35
lt;0,01 gt;0,5 8,81 5,82
E35
lt;0,1 gt;1,0
F35
lt;0,01 gt;1,0 19,89 gt; 30
G35
lt;0,1 gt; 1,0
H35
lt;0,1 gt;1,0
I35
lt;0,1 gt;1,0
J35
lt;0,01 gt;1,0 20,37 18,02
K35
lt;1,0 gt;1,0
L35
lt;0,01 gt;1,0 gt; 30 gt; 30
M35
lt;0,01 gt;1,0 gt; 30 gt; 30
N35
lt;0,01 gt;1,0 15,44 gt; 30
O35
lt;1,0 gt;1,0
P35
lt;0,01 gt;1,0 7,86 18,37
Q35
lt;0,01 gt;1,0 4,74 7,01
R35
lt;0,1 gt;1,0 gt; 30 gt; 30
S35
lt;0,01 gt;1,0 gt; 30 gt; 30
T35
lt;0,01 gt;1,0 15,61 16,98
U35
lt;0,1 gt; 1,0
V35
lt;0,01 gt;1,0 17,27 27,22
W35
lt;0,1 gt;1,0
X35
lt;0,01 gt;1,0 4,68 16,96
Y35
lt;0,1 gt;1,0
Z35
lt;1,0 gt;1,0
A36
lt;1,0 gt;1,0
B36
lt;0,1 gt;1,0
C36
lt;0,1 gt;1,0 8,37 22,28
D36
lt;0,1 gt;1,0 gt; 30 gt; 30
E36
lt;0,1 gt; 1,0 29,88 gt; 30
F36
lt;0,1 gt;1,0
G36
lt;0,01 gt;1,0 4,44 16,68
H36
lt;0,1 gt;1,0 7,55 gt; 30
I36
lt;0,1 gt;1,0
J36
gt;1,0
K36
gt;1,0
Ejemplo 231. Síntesis de (Z)-5-((2-(benciloxi)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3.5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina2,4-diona.
El alcohol bencílico (14,2 µL, 0,138 mmol) se disolvió en NMP (0,2 ml). El hidruro de sodio (60%, 5,5 mg, 0,138 mmol) se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Una mezcla (1:1) de (Z)-5-((4(ciclopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona y (Z)-5-((4(ciclopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (10 mg, 0,027 mmol) se añadió y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora. El agua se añadió y el material se extrajo con etilacetato. Después de la concentración en el evaporador rotatorio, la adición de metanol formó un precipitado que se filtró y secó. (Z)-5-((2-(benciloxi)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona se aisló como un sólido (5,6 mg). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 392 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando condiciones similares al Ejemplo 231. La Tabla 40B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 40A.
Tabla 40A.
Tabla 40B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
L36
lt;0,01 gt;1,0
M36
lt;0,01 gt;1,0
N36
gt;1,0
Ejemplo 232. Síntesis de 2,2,2-trifluoroacetato de 3-((1r,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)-1,1-dimetilurea
El 2,2,2-trifluoroacetato de (Z)-5-((5-((1r,4r)-4-aminociclohexilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (10 mg) y DIEA (1,2 eq, 4,1 ul) se mezclaron en NMP seco (0,1 ml). Se añadió el cloruro de dimetilcarbámico (1,0 eq, 1,8 ul) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La reacción se diluyó con NMP (1,5 ml) y unas pocas gotas de agua. El compuesto se purificó mediante HPLC preparativa
y después se aisló por evaporación en el genevac. 2,2,2-trifluoroacetato de 3-((lr,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)-1,1-dimetilurea. LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 468 [M+H]+. Z:E ratio: 86:13.
Ejemplo 233. Síntesis de N-((1r,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)acetamida
El 2,2,2-trifluoroacetato de (Z)-5-((5-((1r,4r)-4-aminociclohexilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1,0 eq, 10 mg, 0,0196 mmol) y DIEA (1,2 eq, 4 ul, 0,0229 mmol) se disolvieron en NMP (0,1 ml). El anhídrido acético (1,0 eq, 2 ul, 0,0211 mmol) se añadió y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El agua se añadió y el precipitado resultante se filtró y secó para proporcionar N-((1r,4r)-4-(7(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)acetamida con un sólido (8 mg). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 439 [M+H]+.
Ejemplo 234. Síntesis de 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1r,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)propionamida.
El 2,2,2-trifluoroacetato de Z)-5-((5-((1r,4r)-4-aminociclohexilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1,0 eq, 10 mg, 0,0195 mmol) se suspendió en NMP (0,05 ml). Una solución de NMP de ácido propiónico (1,2 eq, 60 uL de la solución 0,4 M, 0,0234 mmol), HOBt (1,5 eq, 4 mg, 0,030 mmol), DIEA (2,5 eq, 8 uL, 0,048 mmol) y EDCI (1,5 eq, 6 mg, 0,03 mmol) se añadieron y la mezcla se agitó a 70°C durante 1,5 horas. El agua y NMP se añadió y el producto se purificó mediante HPLC preparativa. La evaporación en el Genevac proporcionó 2,2,2-trifluoroacetato de N-((1r,4r)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((Z)-(2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)ciclohexil)propionamida (2,8 mg). LCMS (ES):gt;90% puro, m/z 453 [M+H]+.
Ejemplo 235. Síntesis de 2,2,2-trifluoroacetato de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2-((1r,4r)-4(isobutilamino)ciclohexilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona.
El 2,2,2-trifluoroacetato de (Z)-5-((2-((1r,4r)-4-aminociclohexilamino)-4-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (1,0 eq, 10 mg, 0,025 mmol) se suspendió en dicloroetano. El isobutiraldehído (4 eq, 9,2 uL, 0,101 mmol), DIEA (1,0 eq, 0,025 mmol) y NaBH(OAc)3 (4 eq, 21 mg, 0,101 mmol) se añadieron y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante dos horas. La mezcla se diluyó con agua y NMP y sometió a la purificación en HPLC preparativa. La evaporación en el Genevac proporcionó 2,2,2-trifluoroacetato de (Z)-5-((4-(ciclopropilamino)-2((1r,4r)-4-(isobutilamino)ciclohexilamino)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona como un sólido (4,6 mg). LCMS (ES):gt;90% puro, m/z 454 [M+H]+.
Los compuestos en la siguiente tabla se prepararon usando los procedimientos descritos en los Ejemplos 232 a 235 y
Ejemplos 30 y 31, usando las aminas de partida adecuadas y ácidos carboxílicos, cloruros de acilo, cloruros de sulfamoilo, cloruros de sulfonilo, isocianatos y cloroformatos. La Tabla 41 B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 41A.
Tabla 41A.
241 242 243 244 245 Tabla 41B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
O36
lt;0,01 0,2532 0,154 4,467
P36
lt;0,01 gt; 2,5000 8,254 gt; 30
Q36
lt;0,01 0,6791 2,093 19,089
R36
lt;0,01 0,476 2,505 25,76
S36
lt;0,01 gt; 2,5000 0,404 4,396
T36
lt;1 gt; 2,5
U36
lt;0,01 gt;1,0 1,47 10,84
V36
lt;0,01 gt; 2,5 1,929 10,172
W36
lt;0,01 gt; 1,0 2,95 14,11
X36
lt;0,01 gt; 2,5 1,646 13,758
Y36
lt;0,01 gt;1,0 0,85 10,28
Z36
lt;0,01 gt; 2,5 0,647 10,871
246 247
A37
lt;0,01 gt;1,0 8,10 gt; 30
B37
lt;0,01 gt; 2,5 2,031 gt; 30
C37
lt;0,01 gt;1,0 2,49 13,79
D37
lt;0,01 gt; 2,5 1,189 11,567
E37
lt;0,01 gt;1,0 2,85 11,65
F37
lt;0,1 gt; 2,5 1,306 13,099
G37
lt;0,01 gt;1,0 1,76 13,92
H37
lt;0,1 gt; 2,5 3,413 18,066
I37
lt;0,01 gt;1,0 3,23 19,35
J37
lt;0,01 gt; 2,5 1,48 15,81
K37
lt;0,01 gt; 1,0 4,48 12,63
L37
lt;0,01 gt;1,0 1,25 6,39
M37
lt;0,01 gt; 2,5 0,792 5,473
N37
lt;0,01 gt;1,0 2,16 4,37
O37
lt;0,01 gt; 2,5 1,91 7,035
P37
lt;0,01 gt;1,0 3,02 9,44
Q37
lt;0,01 gt; 2,5 1,92 9,776
R37
lt;0,01 gt;1,0 3,13 4,93
S37
lt;0,01 gt; 2,5 1,46 11,298
T37
lt;0,01 gt;1,0 0,94 3,23
U37
lt;0,01 gt; 2,5 1,014 4,694
V37
lt;0,01 gt;1,0 1,72 9,92
W37
lt;0,01 gt; 2,5 1,22 10,565
X37
lt;0,01 gt;1,0 2,91 18,34
Y37
lt;0,01 gt; 2,5 5,154 19,647
Z37
lt;0,01 gt;1,0 1,30 7,61
A38
lt;0,01 gt; 2,5 1,487 9,152
B38
lt;0,01 gt;1,0 1,90 9,73
C38
lt;0,01 gt; 2,5 1,228 10,5
D38
lt;0,01 gt;1,0 1,25 8,76
E38
lt;0,01 gt; 2,5 0,949 7,851
F38
lt;0,01 gt;1,0 1,91 10,83
G38
lt;0,01 gt; 2,5 1,166 9,948
H38
lt;0,01 gt;1,0 1,30 10,80
I38
lt;0,01 gt; 2,5 0,784 9,886
J38
lt;0,01 gt;1,0 3,46 gt; 30
K38
lt;0,01 gt; 2,5 5,929 gt; 30
L38
lt;0,01 gt;1,0 1,85 15,78
M38
lt;0,01 gt; 2,5 1,519 17,331
N38
lt;0,01 gt;1,0 3,41 gt; 30
038
lt;0,01 gt; 2,5 2,696 gt; 30
P38
lt;0,01 gt;1,0 1,78 11,19
Q38
lt;0,01 gt; 2,5 2,403 19,332
R38
lt;0,01 gt;1,0 5,50 gt; 30
S38
lt;0,01 gt; 2,5 3,695 gt; 30
T38
lt;0,01 gt;1,0
Ejemplo 236. Síntesis de (Z)-5-((5-(3-clorofenoxi)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona.
El 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (1,0 eq, 49 mg, 0,145 mmol) se mezcló en un frasco con NMP (0,2 ml), 3-clorofenol (5,0 eq, 93 mg, 0,274 mmol) y carbonato de potasio (5,0 eq, 100 mg, 0,723 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora. El agua se añadió y el material pegajoso resultante se extrajo con cloruro de metileno. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y los gases volátiles se eliminaron al vacío. La solución resultante de NMP se puso a reaccionar con una solución de HCl 4N en dioxano (5 ml) a temperatura ambiente durante una hora, momento en el que el monitoreo de LCMS indicó la finalización de la reacción. La reacción se trató con agua y NaOH 6N y se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. El sólido se filtró y secó para proporcionar 5-(3-clorofenoxi)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído crudo como un sólido (31 mg). El material se calentó con hidantoína (30 mg), piperidina (30 uL) en Etanol (1 ml) en un frasco a 90 °C durante siete horas. El agua se añadió y el material se filtró, lavó con etanol, etanol/agua y se secó. (Z)-5-((5-(3clorofenoxi)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona se aisló como sólido (43 mg, 38% en dos etapas).). LCMS (ES):gt;95% puro, m/z 411 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando el compuesto químico descrito en el Ejemplo 236. La Tabla 42B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 42A.
Tabla 42A.
Tabla 42B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB:BxPC3 (µM)
U38
lt;0,01 gt; 2,5 10,724 20,865
V38
lt;0,01 gt; 2,5 1,377 5,205
248 Ejemplo 237. Síntesis de 4-(2-(2-cloro-3-nitrofenoxi)etil)morfolina
El 2-cloro-3-nitrofenol (1 g, 5,8 mmol) se disolvió en DMF (6 mL). K2CO3 (1,6 g, 11,5 mmol) se añadió y la solución cambió de amarilla a roja. Se añadió hidrocloruro de 4-(2-cloroetil)morfolina (1,07 g, 5,8 mmol) y la solución se dejó agitar durante 15 horas. La reacción se vertió en H2O (30 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 30 mL). Los orgánicos se lavaron con NaOH 1N (100 mL) y salmuera (100 mL) y después se secó sobre MgSO4, filtró, y concentró al vacío para proporcionar 4-(2-(2-cloro-3-nitrofenoxi)etil)morfolina (1,4 g, 87%) como un aceite dorado.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 237. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS.
Compuesto
Rendimiento Compuesto Rendimiento
37 30
Ejemplo 238. Síntesis de 2-cloro-3-(2-morfolinoetoxi)anilina
El 4-(2-(2-cloro-3-nitrofenoxi)etil)morfolina (873 mg, 3,1 mmol) se disolvió en tolueno (12 mL). El formato de amonio (866 mg, 13,7 mmol) se disolvió en H2O (12 mL) y se añadió. El polvo de hierro (lt;10 micrón, 766 mg, 13,7 mmol) se añadió y la reacción tuvo lugar a 120 °C en baño de aceite. Después de 1,25 horas, la solución se enfrió a 23 °C y se filtró sobre una almohadilla de celita que eluye con MeOH/diclorometano al 10% (250 mL). El filtrado se concentró al vacío y el residuo se purificó a través de cromatografía rápida en columna para producir 2-cloro-3-(2-morfolinoetoxi)anilina (503 mg, 75%) como un acite dorado.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 238. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS.
Compuesto
Rendimiento Compuesto Rendimiento
90 76
Ejemplo 239. Síntesis de 2-cloro-4-(1H-pirazol-1-il)anilina
El 2-cloro-4-iodoanilina (760 mg, 3 mmol), N,N'-dimetiletilenodiamina (96 µL, 0,9 mmol), 1H-pirazol (430 mg, 6,3 mmol) se disolvieron en DMF (3,8 mL). Cs2CO3 (1,86 g, 5,7 mmol) y CuI (57 mg, 0,3 mmol) se añadieron y la reacción tuvo lugar en un baño de aceite a 140°C. Después 3 horas, los gases volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se diluyó con diclorometano y se purificó a través de cromatografía rápida en columna (MeOH/diclorometano al 1 %) para
proporcionar 2-cloro-4-(1H-pirazol-1-il)anilina (540 mg, 93%) como un aceite carmelita dorado que se cristalizó durante toda la noche a -20°C.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 239. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS.
Estructura
Rendimiento Rendimiento de la estructura
93 90
89 58
Ejemplo 240. Síntesis de 1-(3-cloro-4-nitrofenil)-4-metilpiperazina
El 2-cloro-4-fluoronitrobenzeno (1 g, 5,7 mmol) se disolvió en DMF (10 mL). El 1-metilpiperazina (760 µL, 6,8 mmol) y después K2CO3(1,57 g, 11,4 mmol) se añadieron y la reacción tuvo lugar en un baño de aceite a 100 °C. Después de 1 hora, la solución se enfrió a 23 °C, después se añadió H2O (75 mL). El precipitado se filtró, lavó con H2O (≈25 mL), después se secó toda la noche(50 °C, 25 mmHg) para proporcionar 1-3-cloro-4-nitrofenil)-4-metilpiperazina (1,28 g, 88%) como un sólido color maíz.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 240. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS.
Estructura
Rendimiento
97
Ejemplo 241. Síntesis de 2-cloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)anilina
1-3-cloro-4-nitrofenil)-4-metilpiperazina (414 mg, 1,62 mmol)se disolvió en tolueno (6,5 mL). El formato de amonio (461 mg, 7,3 mmol) se disolvió en H2O (6,5 mL) y se añadió. El polvo de hierro (lt;10 micrón, 408 mg, 7,3 mmol) se añadió y la reacción tuvo lugar en un baño de aceite a 120 °C. Después de 1,25 horas, la solución se enfrió a 23 °C y se filtró sobre
una almohadilla de celita que se eluye con MeOH/diclorometano al 10% (250 mL). El filtrado se concentró al vacío y el residuo se fraccionó entre H2O (25 mL) y EtOAc (25 mL). La capa acuosa se extrajo además con EtOAc (6 x 25 mL) y después con diclorometano (3 x 25 mL). Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO4, filtraron, y concentraron al vacío para proporcionar 2-cloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)anilina (157 mg, 43%) como un sólido marrón claro.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 241. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS.
Estructura
Rendimiento
89
Ejemplo 242. Síntesis de 5-cloro-3-((2,5dioxoimidazolidin-4-ilidina)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il(clopropil)carbamato de (Z)-terc-butilo
El 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (5,05 g, 15 mmol) se disolvió en THF anhidro (100 mL). El 2,5-dioxoimidazolidin-4-ilfosfonato de dietilo (5,33 g, 22,5 mmol) y NaOt-bu (1,87 g, 19,5 mmol) se añadieron después. Después de agitar durante 3 días a 23 °C, el 2,5-dioxoimidazolidin-4-ilfosfonato de dietilo adicional (3,5 g) y NaOt-bu (1,44 g) se añadieron. Después de agitar 24 horas adicionales, los gases volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se agitó durante 4 horas en i-PrOH (50 mL) y agua (250 mL) y después se filtró para proporcionar 5cloro-3-((2,5dioxoimidazolidin-4-ilidina)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo crudo (5,64 g, 90%) como una mezcla de isómeros Z:E (5.3:1). El sólido crudo se diluyó con i-PrOH (110 mL) y calentó a reflujo. La solución se filtró y se dejó enfríar después para proporcionar 5-cloro-3-((2,5dioxoimidazolidin-4-ilidina)metil)pirazolo[1,5a]pirimidina-7-il(ciclopropil)carbamato de (Z)-terc-butilo (3,58 g, 57%) como un sólido naranja brillante en dos cosechas. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 10,37 (bs, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,02 (bs, 1H), 6,81 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 3,26 (dddd, 1H, J = 6,8, 6,8, 3,2, 3,2 Hz), 1,43 (s, 9H), 0,87-0,94 (m, 2H), 0,62-0,68 (m, 2H). LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 419 [M+1]+.
El 2,5-dioxoimidazolidin-4-ilfosfonato de dietilo se preparó de conformidad con el procedimiento de Meanwell, y otros J. Org. Chem. 1991, 56, 6897.
Ejemplo 243. Síntesis de (Z)-5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
solución se tornó homogénea. Después de 1 hora, los gases volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se trituró en Et2O (100 mL) y el sólido amarillo brillante se filtró para proporcionar (Z)-5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (2.42 g, 99%). LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 319 [M+1]+.
Ejemplo 244. Síntesis de (Z)-N-(3-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin5-ilamino)fenil)acetamida
El (Z)-5-((5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (75 mg, 0,23 mmol) se suspendió en 1,4-dioxano (1,6 mL). N-(3-aminofenil)acetamida (52 mg, 0,35 mmol), Cs2CO3 (105 mg, 0,32 mmol), (±)-BINAP (9 mg, 0,06 mmol) y acetato de paladio(II) (7 mg, 0,04 mmol) se añadieron después. La mezcla se selló e irradió a 120°C durante 30 minutos en el microondas. H2O (8 mL) se añadió y el precipitado se filtró y se secó. El residuo crudo se purificó a través de cromatografía rápida en columna (2,5-3,5% MeOH/diclorometano) para rendir (Z)-N-(3-(7(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)fenil)acetamida (12 mg, 12%) como un sólido amarillo brillante. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 433 [M+1]+.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando los compuestos químicos similares a los ilustrados en los Ejemplos 242 a 244. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 43B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 43A.
Tabla 43A.
252 253 254 255 256 257 Tabla 43B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: %inh 2,5 µM AB: MDAMB453 IC50 (µM) AB: BxPC3 IC50 (µM)
W38
lt;0,01 12,679 0,503 3,401
X38
lt;0,01 -14,929 0,817 7,128
Y38
lt;0,01 6,404 gt; 30
Z38
lt;0,01 5,11 0,363 2,273
A39
lt;0,01 -5,524 1,483 3,348
B39
lt;0,01 42,988 2,309 2,183
C39
lt;0,01 4,463 27,171
D39
lt;0,01 2,776 6,141
E39
lt;0,01 12,058 1,745 2,347
F39
lt;0,01 29,369 24,684 gt; 30
G39
lt;0,01 38,351 9,58 13,05
H39
lt;0,01 32,314 1,187 5,5
I39
lt;0,01 -19,596 3,914 13,069
J39
lt;0,01 19,119 2,462 4,126
K39
lt;0,01 -2,822 1,179 14,376
L39
lt;0,01 53,751 1,132 4,028
M39
lt;0,01 -12,471 1,824 20,033
N39
lt;0,01 1,334 2,178
O39
lt;0,01 2,901 5,71
P39
lt;0,01 1,012 3,518
Q39
lt;0,01 50,224 0,568 2,448
R39
lt;0,01 7,228 15,996
258 259
S39
lt;0,1 3,118 5,462
T39
lt;0,01 5,657 13,157
U39
lt;0,01 16,983 13,301
V39
lt;0,01 15,34 0,503 3,722
W39
lt;0,01 20,319 lt; 0,12 lt;0,12
X39
lt;0,1 23,241 3,558 0,409
Y39
lt;0,01 45,658 1,685 5,123
Z39
lt;0,01 32,912 10,761 11,535
A40
lt;0,01 61,33 1,214 4,211
B40
lt;0,01 27,322 8,026 gt; 30
C40
lt;0,01 54,631 0,568 0,427
D40
lt;0,01 56,161 3,885 4,838
E40
lt;0,01 45,415 10,016 7,671
F40
lt;0,01 74,699 1,487 2,566
G40
lt;0,01 74,328 16,589 14,183
H40
lt;0,01 55,726 1,099 4,157
I40
lt;0,01 67,726 0,882 2,795
J40
lt;0,01 69,269 14,73 5,949
K40
lt;0,01 66,943 1,042 3,053
L40
lt;0,01 37,998 6,073 1,762
M40
lt;0,01 26,534 2,111 1,273
N40
lt;0,1 23,553 3,706 1,379
O40
lt;0,01 60,445 16,119 gt; 30
P40
lt;0,01 56,901 28,665 gt; 30
Q40
lt;0,01 41,399 2,892 5,65
R40
lt;0,01 30,569 3,021 4,466
S40
lt;0,01 33,343 3,273 13,798
T40
lt;0,01 64,565 0,656 1,485
U40
lt;0,01 39,619 2,736 3,191
V40
lt;0,01 63,083 1,997 3,383
W40
lt;0,01 12,679 0,503 3,401
X40
lt;0,01 -14,929 0,817 7,128
Y40
lt;0,01 55,807 0,248 9,761
Z40
lt;0,01 55,427 0,999 3,866
A41
lt;0,01 41,66 2,511 22,3
B41
lt;0,01 35,147 0,764 2,282
C41
lt;0,01 24,356 5,447 12,691
D41
lt;0,01 -6,887 3,168 3,25
E41
lt;0,01 -12,19 1,04 1,794
F41
lt;0,01 19,291 15,678 26,981
G41
lt;0,01 73,187 0,803 9,037
H41
lt;0,01 76,943 0,852 5,263
I41
lt;0,01 59,089 0,776 9,983
Ejemplo 245. Síntesis de 2,2,2,-trifluoroacetato de (Z)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)-N-(2-(dietilamino)etil)-3-fluorobenzamida
El ácido (Z)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)-3fluorobenzoico (25 mg, 0,06 mmol) se suspendió en DMF (0,2 mL). EDCI (13 mg, 0,7 mmol), HOBt (11 mg, 0,7 mmol), trietilamina (10 µL, 0,7 mmol), y N,N-dietiletilenodiamina (8 µL, 0,7 mmol) se adicionaron secuencialmente. La reacción se calentó a 65°C. Después de 1 hora, la solución se diluyó con DMSO (1 mL) y se purificó por HPLC en fase reversa para rendir 2,2,2-trifluoroacetato de (Z)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)-N-(2-(dietilamino)etil)-3-fluorobenzamida (29 mg, 76%). LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 536 [M+1]+.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 245. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 44B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 44A.
Tabla 44A.
Tabla 44B.
Compuesto
CK2: IC50 (um) PIM2: %inh 2,5 uM AB: MDAMB453 (uM) AB:BxPC3 (µM)
J41
lt;0,01 33,546 1,288 10,863
K41
lt;0,01 55,606 5,536 gt; 30
L41
lt;0,01 55,104 8,434 13,38
M41
lt;0,01 19,242 7,402 gt; 30
N41
lt;0,1 75,247 2,764 gt; 30
041
lt;0,01 57,4 3,155 gt; 30
P41
lt;0,1 45,679 3,578 22,618
Q41
lt;0,01 31,821 16,205 5,914
Ejemplo 246. Síntesis de hidrocloruro de 4-(7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo
El 5-cloro-N-ciclopropilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (208 mg, 1 mmol) se suspendió en EtOH (1 mL). 4aminobenzonitrilo (236 mg, 2 mmol) y después HCl concentrado (125 µL, 1,5 mmol) se añadieron y la reacción tuvo lugar en un baño de aceite a 95 °C. Después de 24 horas, se añadió HCl concentrado adicional (62 µL). Después de unas 24 horas adicionales, la reacción se enfrió a 23 °C y la torta del filtro se lavó con EtOH (2 mL) para proporcionar hidrocloruro de 4-(7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (205 mg, 63%) como un sólido marrón claro. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 291 [M+1]+.
Ejemplo 247. Síntesis de 4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo
El hidrocloruro de 4-(7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (205 mg, 0,62 mmol) se disolvió en DMF anhidro (1 mL) y la solución se enfrió a 0 °C con un baño externo de hielo. POCl3 (115 µL, 1,25 mmol) se añadió manteniendo la temperatura interna lt;5°C. Después de la adición, el baño de hielo se eliminó. Después de 5 horas, la solución se vertió en H2O (20 mL) y el pH se ajustó a 11 mediante la adición de NaOH 6N. La solución se dejó agitar durante 1 hora, y el precipitado se filtró. El producto crudo se trituró con EtOH (7 mL), filtró, y secó en alto vacío (1 mmHg) para proporcionar 4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (129 mg, 64%) como un sólido naranja. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 319 [M+1]+.
Ejemplo 248. Síntesis de (Z)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5ilamino)benzonitrilo
El 4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (75 mg, 0,24 mmol) se suspendió en EtOH (2,4 mL). Hidantoína (36 mg, 0,35 mmol) y piperidina (36 µL, 0,35 mmol) se añadieron y la reacción se calentó a 80°C. Después de 15 horas, la solución se filtró aún tibia y la torta del filtro se lavó con EtOH (3 mL) tibio para producir (Z)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (76 mg, 80%) como un sólido amarillo brillante. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 401 [M+1]+,
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando los compuestos químicos similares alos ilustrados en los Ejemplos 246 a 248. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 45B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 45A.
Tabla 45B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5 uM AB: MDAMB453 (uM) AB:BxPC3 (µM)
R41
lt;0,1 55,09 0,8 1,179
S41
lt;0,01 -33,889 1,525 gt; 30
T41
lt;0,01 43,69 1,96 1,901
U41
lt;0,01 57,088 1,019 1,56
V41
lt;0,01 16,198 0,352 3,08
Ejemplo 249. Síntesis de 5-(2-bromo-4-cianofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
El 5-cloro-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (225 mg, 0,67 mmol) y 4-amino-3bromobenzonitrilo (197 mg, 1 mmol) se disolvieron en THF anhidro (4,5 mL). El terc-butóxido de sodio (96 mg, 1 mmol) se añadió en una porción. Después de 1,5 horas, la reacción se vertió en H2O (25 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 30 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (1 x 100 mL), secaron sobre MgSO4, filtraron y concentraron al vacío. El sólido marrón se purificó a través de cromatografía rápida en columna (EtOAc/hexanos al 30%) para proporcionar 5-(2-bromo-4-cianofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (106 mg, 32%) como un sólido amarillo pálido. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 497 [M+1]+.
Ejemplo 250. Síntesis de 3-bromo-4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo
El 5-(2-bromo-4-cianofenilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (105 mg, 0,21 mmol) se disolvió en diclorometano (2 mL) y se añadió ácido trifluoroacético (2 mL). Después de 1 hora, la reacción se concentró hasta la sequedad y el residuo se trituró con Et2O. El sólido amarillo se recogió y secó para producir 2,2,2trifluoroacetato de 3-bromo-4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (72 mg, 67%).
Ejemplo 251. Síntesis de (Z)-3-bromo-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo
El 2,2,2-trifluroacetato de 4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (72 mg, 0,14 mmol) se suspendió in EtOH (2,4 mL). La hidantoína (17 mg, 0,17 mmol) y piperdina (33 µL, 0,34 mmol) se añadieron y la reacción se calentó a 80°C. Después de 15 horas, la solución se filtró aún tibio y la torta del filtro se lavó con EtOH (3 mL) tibio para producir (Z)-3-bromo-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (60 mg, 89%) como un sólido amarillo brillante. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 479 [M+1]+.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en los Ejemplos 249 a 251. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 46B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 46A.
Tabla 46A.
263 Tabla 46B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5 uM AB: MDAMB453 (uM) AB: BxPC3 (uM)
W41
lt;0,01 45,045 0,162 2,047
X41
lt;0,01 76,955 3,875 1,245
Y41
lt;0,01 60,279 0,617 2,272
Z41
lt;0,01 44,216 0,331 0,136
A42
lt;0,01 43,425 0,457 0,446
B42
lt;0,01 22,74 2,455 0,235
C42
lt;0,01 10,041 1,798 1,206
Ejemplo 252. Síntesis de (Z)-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((1-metil-2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo
La 3-metilimidazolidina-2,4-diona se preparó de conformidad con el procedimiento de la literatura expuesto en Eur. JOC 2002, 1763.
El 4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (51 mg, 0,16 mmol) se suspendió en EtOH (1,6 mL). Se añadieron 3-metilimidazolidina-2,4-diona (28 mg, 0,24 mmol) y piperdina (24 µL, 0,24 mmol) y la reacción se calentó a 80 °C. Después de 15 horas, la solución se diluyó con H2O (2 mL) y se filtró. La torta del filtro se lavó con 50% H2O/50% EtOH (3 mL) y después se secó al vacío (∼1mmHg) para proporcionar (Z)-4-(7(ciclopropilamino)-3-((1-metil-2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (45 mg, 68%) como un sólido amarillo brillante. LCMS (ES): gt;90% puro, m/z 415 [M+1]+.
Los compuestos descritos en la siguiente tabla se prepararon usando compuestos químicos similares a los ilustrados en el Ejemplo 252. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 47B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 47A.
Tabla 47A.
Tabla 47B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: %inh 2,5 µM AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
D42
lt;0,1 -39,275 0,693 2,805
E42
lt;0,1 -72,498 1,286 1,971
F42
lt;0,1 -17,549 29,071 gt;30
Ejemplo 253. Síntesis de (Z)-3-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-iloxi)benzonitrilo
El 5-cloro-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de (Z)-terc-butilo (75 mg, 0,18 mmol) se disolvió en DMF anhidro (0,6 mL). El 3-cloro-4-hidroxibenzonitrilo (41 mg, 0,27 mmol) y K2CO3 (75 mg, 0,54 mmol) se añadieron. Después de 24 horas, se añadió H2O (3,5 mL) a la reacción y el precipitado amarillo brillante se filtró y secó. El sólido crudo se disolvió en diclorometano (1 mL) y ácido tricloroacético (1 mL). Después de 1 hora, la reacción se concentró hasta la sequedad y el residuo se trituró con Et2O (3 mL) y se filtró para proporcionar (Z)-3-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5iloxi)benzonitrilo (45 mg, 57% en dos etapas) como un sólido amarillo brillante.
Ejemplo 254. Síntesis de (Z)-5-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)3-(hidroximetil)imidazolidina-2,4-diona
Al (Z)-5-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (500 mg, 1,17 mmol) en acetonitrilo (15 mL) y piridina (1,5 mL) se añadió formaldehído (37% ac) (5,0 mL). La mezcla de reacción se agitó a 65°C durante 5 minutos. Se enfrió a temperatura ambiente y el sólido resultante se filtró. Se lavó con agua y se secó al vacío para proporcionar 450 mg (84%) of (Z)-5-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)-3-(hidroximetil)imidazolidina-2,4-diona como un sólido amarillo. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 458 [M+1]+.
Ejemplo 255. Síntesis del ácido (Z)-5-((4-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(cipropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)-2,5-dioxoimidazolidin-1-il)metoxi)-5-oxopentanoico
Al (Z)-5-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)-3(hidroximetil)imidazolidina-2,4-diona (100 mg, 0,218 mmol) en piridina (4,5 mL) se añadió anhídrido glutárico (125 mg, 1,095 mmol), y DMAP (3 mg, 0,022 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 75°C durante toda la noche después que la reacción no se completó. Se añadió el anhídrido glutárico (125 mg, 1,095 mmol) y DMAP (3 mg, 0,022 mmol) y se agitó unas 16 horas adicionales a 75°C. Se enfrió a 0°C en baño de hielo y añadió HCl 6M hasta que el pH fue menor que 3
mediante papel de pH. Se filtró el sólido y se lavó con HCl 0,1M. Se secó al vacío para proporcionar 40 mg (32%) de ácido (Z)-5-((4-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)-2,5dioxoimidazolidin-1-il)metoxi)-5-oxopentanoico como un sólido amarillo. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 572 [M+1]+.
Ejemplo 256. Síntesis de (Z)-(4-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)2,5-dioxoimidazolidin-1-il)metil 3-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato
Al (Z)-5-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)-3(hidroximetil)imidazolidina-2,4-diona (100 mg, 0,218 mmol) en DMF (3 mL) se añadió el ácido 3-(4-metilpiperazin-1il)propanoico (75 mg, 0,436 mmol), diciclohexilcarbodiimida (90 mg, 0,436 mmol), y DMAP (4,0 mg, 0,33 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche y después se diluyó con acetato de etilo y lavó con agua 1X, salmuera 3X. La capa orgánica se secó con MgSO4, filtró y adsorbió sobre gel de sílice. El material crudo se purificó mediante columna cromatográfica que eluye con el gradiente de 0-10% deMeOH/CH2Cl2 . Las fracciones puras se combinaron y el solvente se eliminó. Este material se cristalizó del acetato de etilo y hexano para proporcionar 35 mg (26%) de (Z)-(4-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)-2,5-dioxoimidazolidin-1-il)metil 3-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato como un sólido amarillo. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 612 [M+1]+.
Ejemplo 257. Síntesis de (Z)-(4-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)2,5-dioxoimidazolidin-1-il)metil 2-aminoacetato
Al (Z)-5-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)-3(hidroximetil)imidazolidina-2,4-diona (100 mg, 0,218 mmol) en DMF (3 mL) se añadió Boc-Gly-OH (153 mg, 0,873 mmol), diciclohexilcarbodiimida (180 mg, 0,873 mmol), y DMAP (13 mg, 0,109 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, después se diluyó con acetato de etilo y lavó 1X con HCl 1M seguido por salmuera 3X. La capa orgánica se secó con MgSO4, filtró y adsorbió sobre gel de sílice. El material crudo se purificó mediante columna cromatográfica que eluye con el gradiente de 5-15% deEtOAc/CH2Cl2 . Las fracciones puras se combinaron y el solvente se eliminó. Se le añadió al residuo HCl/dioxano 4M (4 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2h. Se eliminó el exceso de HCl/dioxano. Al residuo se le añadió éter dietílico y la suspensión se sonicó. El sólido resultante se filtró y se lavó con éter dietílico. Se secó al vacío para proporcionar 23 mg (21%) de cloruro de hidrógeno (Z)-(4-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)-2,5dioxoimidazolidin-1-il)metil 2-aminoacetatocomo un sólido amarillo. (LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 515 [M+1]+.
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares a la síntesis en los ejemplos anteriores. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 48B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 48A.
Tabla 48A.
267 Tabla 48B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5 uM AB: MDAMB453 IC50 (uM) AB: BxPC3 IC50 (u M)
G42
lt;0,01 65,361 0,232 1,104
H42
lt;0,01 19,196 0,291 1,989
I42
lt;0,01 42,049 0,25 1,143
J42
lt;0,1 42,889
K42
lt;0,1 -6,849
L42
lt;0,01 79,506 0,898 0,946
M42
lt;0,1 60,348 0,172 0,43
N42
lt;0,01 23,501 0,222 0,539
O42
lt;0,1 3,674
P42
lt;0,1 13,383
Q42
lt;0,01 -20,619 0,28 0,207
R42
lt;0,1
Ejemplo 258. Síntesis de 5-((5-(4-(1H-pirazol-1-il)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metil)imidazolidina-2,4-diona
Al (Z)-5-((5-(4-(1H-pirazol-1-il)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona (40 mg, 0,091 mmol) con un recipiente de reacción a presión Parr se añadió ácido acético (6,0 mL) y Pd/C al 10% (20 mg). El recipiente de reacción se colocó sobre el agitador Parr a 55 psi durante 3 días. Se filtró a través de celita y purificó mediante LC/MS dirigida a masa para proporcionar 5-((5-(4-(1H-pirazol-1-il)fenilamino)-7(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metil)imidazolidina-2,4-diona como la sal de TFA. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 444 [M+1]+.
Ejemplo 259. Síntesis de 2-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)fenol
Al 5-cloro-N-ciclopropilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (500 mg, 2,396 mmol) en EtOH (10 mL) se añadió 4-amino-2clorofenol (516 mg, 3.59 mmol) seguido por HCl concentrado (0,218 mL, 2,64 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura de reflujo durante 4 días. Se eliminó 5 mL de EtOH en el rotoevaporador seguido de la adición de 5 mL de éter dietílico. El sólido resultante se filtró y enjuagó con éter dietílico. Se secó bajo nitrógeno para proporcionar 582 mg (77%) de 2-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)fenol como la sal de HCl. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 316 [M+1]+.
Ejemplo 260. Síntesis de 5-(3-cloro-4-hidroxifenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Al 2-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)fenol (582 mg, 1,84 mmol) en DMF (4,5 mL) enfríado a 0°C se añadió gota a gota oxicloruro de fósforo (0,514 mL, 5,52 mmol). La mezcla de reacción se agitó aún caliente a 45°C durante 3h. Esta se enfrió a 0°C y añadió lentamente a una solución helada de NaOH 2M mientras se agitaba. Después de completar, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1h. El sólido resultante se filtró y lavó con agua para proporcionar 412 mg (65%) de 5-(3-cloro-4-hidroxifenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3carbaldehído. LCMS (ES): gt;95% puro, m/z 344 [M+1]+.
Ejemplo 261. Síntesis de 5-(3-cloro-4-(3-(dimetilamino)propoxi)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina3-carbaldehído
Al 5-(3-cloro-4-hidroxifenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (100 mg, 0,291 mmol) en DMF (3 mL) se añadió K2CO3 (100 mg, 0,727 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 80°C durante 16h. Se diluyó con EtOAc y se extrajo en HCl 2M. La capa acuosa alcanzó la alcalinidad a pH de 14 con NaOH 2M y se extrajo 2X con EtOAc. La capa orgánica se lavó 3X con salmuera y secó con MgSO4. Se filtró y purificó mediante columna cromatográfica que eluye con gradiente de 10%-30% de MeOH/EtOAc. Las fracciones puras combinadas para proporcionar 45 mg (36%) de 5-(3-cloro-4-(3-(dimetilamino)propoxi)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidina-3-carbaldehído LCMS (ES): m/z 429 [M+1]+.
Ejemplo 262. Síntesis de (Z)-5-((5-(3-cloro-4-(3-(dimetilamino)propoxi)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al 5-(3-cloro-4-(3-(dimetilamino)propoxi)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (79 mg, 0,184 mmol) en EtOH (3 mL) se añadió piperidina (22uL 0,221 mmol) seguido hidantoína (21 mg, 0,202 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 85°C durante 6h. El solvente se eliminó por evaporación rotatoria y el residuo se diluyó con 3 mL de agua. La suspensión se sonicó y el sólido resultante se filtró y lavó con agua seguido por una mezcla 1:1 de EtOH/agua. El material se secó al vacío para proporcionar 62 mg de (Z)-5-((5-(3-cloro-4-(3(dimetilamino)propoxi)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona LCMS (ES): m/z 511 [M+1]+.
Los compuestos enumerados en la Tabla 49A se prepararon de conformidad con los procedimientos descritos anteriormente. La Tabla 49B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 49A.
Tabla 49A.
Tabla 49B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5uM AB: MDAMB453 IC50(uM) AB: BxPC3 IC50(uM)
S42
lt;0,01 44,49 2,739 5,005
T42
lt;0,01 44,33 2,094 5,332
U42
lt;0,01 48,912 1,087 2,463
Ejemplo 263. Síntesis de 7-(ciclopropilamino)-5-(metiltio)pirazolo[1.5-a]pirimidina-3-carbaldehído
Al 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (4,0g, 16,87 mmol) en dimetilformamida se añadió tiometóxido de sodio (3,54 g, 50,5 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió, añadió agua, agitó durante 15 minutos y se filtró el precipitado blanco, se secó para rendir 7(ciclopropilamino)-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (3.60 g, 86% de rendimiento). LCMS (M+1=249)
Ejemplo 264. Síntesis de (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4diona
El producto anterior 7-(ciclopropilamino)-5-(metiltio) pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído se disolvió en 20,0 mL de etanol, añadió hidantoína (2,82 g, 28,17 mmol) y piperidina (2,70 mL). La reacción se calentó a 80°C durante toda la noche. La mezcla de reacción se enfrió y se filtró el precipitado amarillo, lavó con etanol, secó para rendir (Z)-5-((7(ciclopropilamino)-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona 4,18 g (90% de rendimiento). LCMS (M+1=331)
Ejemplo 265. Síntesis de (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-metilsulfonil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona
Al (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a] pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (etapa b) (4,2 g, 12,68 mmol) en 40,0 mL diclorometano, se añadió ácido meta-cloroperoxibenzoico (8,75 g, 50,7 mmols) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. Se añadió otros 10,0 mL de diclorometano, sonicó durante 10 minutos y después se filtró el precipitado amarillo para rendir (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno) imidazolidina-2,4-diona (3,7 g, 73% de rendimiento). LCMS (M+1=363)
Ejemplo 266. Síntesis de (S,Z)-5-((5-(1-(3-clorofenil)etilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (etapa c) (10 mg, 0,0275 mmol) en 200 uL NMP, se añadió (S)-1-(3-clorofenil)etanamina (23,2 ul, 0,165 mmoles) y la mezcla de reacción se calentó en el microondas a 120°C durante 20 minutos. La mezcla se concentró y se diluyó con MeOH y se purificó mediante HPLC preparativa para rendir (S,Z)-5-((5-(1-(3-clorofenil)etilamino)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona LCMS (M+1=438)
Los análogos de bencilamina mostrados más abajo se prepararon usando los procedimientos ilustrados anteriormente o métodos descritos previamente en los Ejemplos 27, 28, y 29. La Tabla 50B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 50A.
Tabla 50A.
272 273 274 275 276 277 278 279 Tabla 50B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5 uM AB: MDAMB453 IC50 (u M) AB: BxPC3 IC50 (u M)
V42
lt;0,01 8,514 7,253 7,753
W42
lt;0,01 41,144 3,451 6,982
X42
lt;0,01 24,082 5,335 7,883
Y42
lt;0,1 7,179 12,507 5,798
Z42
lt;0,1 46,188 3,333 6,124
A43
lt;0,1 51,937 5,542 11,672
B43
lt;0,1 57,05
C43
lt;0,01 46,18 3,788 10,91
280 281 282 Ejemplo 267. Síntesis de 5,7-dicloro-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina
D43
lt;0,1 46,258 18,532 21,512
E43
lt;0,1 35,462 3,442 7,676
F43
lt;0,1 47,13 5,127 11,302
G43
lt;0,1 40,238 0,25 0,311
H43
lt;0,01 70,122 1,575 7,156
I43
lt;0,1 44,879
J43
lt;0,1 54,24
K43
lt;0,1 59,084
L43
lt;0,01 54,602 7,624 11,881
M43
lt;0,01 58,527 6,073 4,019
N43
lt;0,01 53,361 3,747 5,688
O43
lt;0,1 39,481 7,183 13,677
P43
lt;0,01 30,394 7,84 10,566
Q43
lt;0,01 20,98 7,9 11,155
R43
lt;0,1 13,354 6,761 13,999
S43
lt;0,1 37,578 14,925 25,375
T43
lt;0,1 8,871
U43
lt;0,01 37,958 14,447 23,012
V43
lt;0,01 31,461 5,943 8,756
W43
lt;0,01 45,881 4,407 21,36
X43
lt;0,1 18,114 4,988 24,742
Y43
lt;0,1 37,959 4,445 15,629
Z43
lt;0,01 36,842 4,787 22,226
A44
lt;0,01 22,798 20,301
B44
lt;0,1 24,036 22,599 gt; 30
C44
lt;0,01 43,464 4,882 6,246
D44
lt;0,1 48,152 16,668 14
E44
lt;0,1 46,863 10,367 10,084
F44
lt;0,1 20,409
G44
lt;0,01 24,063 1,604 7,202
H44
lt;0,1 28,124 4,276 8,203
I44
lt;0,1 31,932 6,52 14,085
J44
lt;0,1 35,323 6,219 17,199
K44
lt;0,01 84,937 3,914 3,632
L44
lt;0,1 40,527
M44
lt;0,01 31,316 5,907 10,674
N44
lt;0,1 24,588 4,282 5,226
O44
lt;0,1 18,817
P44
lt;0,1 14,088
Q44
lt;0,1 26,537
R44
lt;0,01 41,193 22,212 20,611
S44
lt;0,1 12,628 12,315 20,837
T44
lt;0,1 9,802
U44
lt;0,1 34,87
V44
lt;0,1 14,908 5,184 10,102
W44
lt;0,01 -10,252 0,172 0,242
X44
lt;0,01 20,632 6,096 10,292
Y44
lt;0,01 36,847 2,301 1,384
Z44
lt;0,01 42,536 1,528 4,51
A45
lt;0,01 28,395 1,067 4,558
B45
lt;0,01 12,045 1,004 1,612
C45
lt;0,1 -25,739 5,504 9,198
D45
lt;0,1 -9,176 lt;0,12 lt;0,12
E45
lt;0,01 11,678 3,938 11,216
F45
lt;0,1 -19,013 5,844 7,288
G45
lt;0,01 2,857 4,311
H45
lt;0,01 45,857 16,617 13,54
I45
lt;0,01 2,447 7,898
J45
lt;0,1 77,85 0,573 3,391
K45
lt;0,01 30,57 5,471 9,4
L45
lt;0,01 54,081 4,999 3,386
M45
lt;0,01 75,785 5,792 28,828
N45
lt;0,01 62,228 5,556 13,076
O45
lt;0,1 46,251
P45
lt;0,01 74,254 2,905 10,582
Q45
lt;0,1 74,048 14,792 gt; 30
R45
lt;0,01 28,85 3,477 5,733
S45
lt;0,01 32,937 2,98 7,511
T45
lt;0,1 -6,871 21,079 14,555
U45
lt;0,1 38,332 1,063 1,443
V45
lt;0,1 17,03 3,83 19,496
W45
lt;0,1 57,926 2,214 15,246
X45
lt;0,1 33,091
Y45
lt;0,1 20,409
Z45
lt;0,1 48,01
A46
lt;0,1 41,388 11,35 3,499
Bajo la atmósfera de gas de nitrógeno, se añadió sodio (3,5 g, 151 mmol) a etanol (125 mL) en pequeñas porciones y se agitó a temperatura ambiente hasta que todo el sodio se disolvió. Una solución de 3-aminopirazol (12,5 g, 150 mmol) en etanol (20 mL) y metilmalonato de dietilo (26 mL, 153 mmol) se gotearon, sucesivamente, a la solución anterior. La mezcla se refluyó a 90°C durante 10 horas, se enfrió a temperatura ambiente, y filtró al vacío. Al sólido, se añadió HCl 5N frío y el sólido resultante se recogió mediante filtración al vacío. El producto intermedio, 6-metilpirazolo[1,5a]pirimidina-5,7-diol, se recuperó como un sólido blanquecino con 72% de rendimiento (17,9g). Este material se usó para la próxima etapa sin purificación adicional. LCMS (M+1=166)
Bajo la atmósfera de gas de nitrógeno, el oxicloruro de fósforo (160 mL, 1,72 mol) y dimetilanilina (16 mL, 132 mmol) se añadió sucesivamente al producto intermedio preparado anteriormente (16 g, 97 mmol). La mezcla se calentó a 110°C durante 4 horas, después el exceso de POCl3 se eliminó al vacío. El residuo se hizo básico con solución de NaOH 3N (pH = 9-10) y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, filtraron, y concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (100% DCM) para proporcionar 15,8 gramos de producto sólido amarillo, 5,7-dicloro-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina (81% de rendimiento). LCMS (M+1=203)
Ejemplo 268. Síntesis de 5-cloro-7-(cipropilamino)-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
En el frasco de reacción, se añadió el 5,7-dicloro-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina (5 g, 25 mmol) junto con ciclopropilamina (1,8 mL, 25 mmol), trietilamina (3,5 mL, 25 mmol), y acetonitrilo (87 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas se calentó después a 85°C durante unas 6 horas adicionales. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, diluyó con agua, filtró y lavó con agua. El producto intermedio, 5-cloro-N-ciclopropil-6metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, se purificó además mediante cromatografía en gel de sílice (10% acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 4,8 gramos de un sólido blanco (86% de rendimiento). LCMS (M+1= 223)
Al producto intermedio (3,6 g, 16 mmol) aislado anteriormente en DMF (59 mL) se añadió lentamente el oxicloruro de fósforo (9 mL, 96 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción de dejó agitar a temperatura ambiente durante 10 horas, se inactivó después mediante la adición de la solución de NaOH 6N. El pH de la mezcla se ajustó con HCl 6N a pH = 7-9. El sólido se eliminó por filtración y lavó con agua. El producto, 5-cloro-7-(ciclopropilamino)-6metilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído, se purificó mediante recristalización a partir de acetato de etilo/hexanos para rendir un sólido blanco con 73% de rendimiento (2,9 g). LCMS (M+1= 251)
Ejemplo 269. Síntesis de 5-cloro-3-formil-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
Al 5-cloro-7-(ciclopropilamino)-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (2,9 g, 11,7 mmol) en cloruro de metileno (22 mL) se añadió trietilamina (2 mL, 14 mmol), dimetilaminopiridina (100 mg, 0,8 mmol), y di-t-butildicarbonato (3,1 g, 14 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas. La mezcla de reacción se transfirió a un embudo separardor, se lavó 1X con H2O, 2X con salmuera, secó sobre MgSO4, filtró y evaporó hasta la sequedad para proporcionar un residuo oleoso. El material crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (25% acetato de
etilo/hexanos) para rendir un sólido naranja claro (3,6 g, 88% de rendimiento), 5-cloro-3-formil-6-metilpirazolo[1,5a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo. LCMS (M+1= 351)
Ejemplo 270. Síntesis de 3-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)-3-formil-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo
4-amino-3-clorobenzonitrilo (52 mg, 0,34 mmol), Cs2CO3(130 mg, 0,4 mmol) se añadieron a 5-cloro-3-formil-6metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo (100 mg, 0,29 mmol) disuelto en 1,4-dioxano (1,1 mL). El BINAP racémico (11 mg, 0,017 mmol) y acetato de paladio(II) (8 mg, 0,011 mmol) se añadieron después. La mezcla se selló e irradió a 110 °C durante 60 minutos en el microondas. Et2O (3 mL) se añadió y la solución se filtró. El filtrado se concentró al vacío. El residuo crudo se disolvió en diclorometano (1,5 mL) y ácido trifluoroacético (1,5 mL). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de aire. El material crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (3% acetona/diclorometano) para rendir el producto, 3cloro-4-(7-(ciclopropilamino)-3-formil-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo (34 mg, 33% de rendimiento). LCMS (M+1=367)
Ejemplo 271. Síntesis de 3-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilidene)metil)-6-metilpirazolo[1,5a]pirimidin-5-ilamino)benzonitrilo
Hidantoína (2,7 mg, 0.027 mmol) y 3-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)-3-formil-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5ilamino)benzonitrilo (10 mg, 0,027 mmol) se disolvieron en etanol (0,4 mL) junto con piperidina (3 uL, 0,03 mmol). La reacción se calentó a 80°C. Después de 10 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, diluyó con agua, y el precipitado se recogió y lavó con agua, 1:1 etanol:agua, después etanol. El sólido amarillo brillante se secó al vacío para producir 3-cloro-4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5ilamino)benzonitrilo (7 mg, 58% de rendimiento). LCMS (M+1=449)
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares a la síntesis en los ejemplos anteriores. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 51B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 51A.
Tabla 51A.
Tabla 51B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5 uM AB: MDAMB453 IC50 (u M) AB: BxPC3 IC50 (u M)
B46
lt;0,01 47,606 24,21 gt; 30
C46
lt;0,01 59,266 6,288 15,231
D46
lt;0,01 53,934 6,244 29,919
E46
lt;0,1 49,545 16,63 20,921
Ejemplo 272. Síntesis de 5-cloro-7-(ciclopropilamino)-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
En el frasco de reacción, se añadió el 5,7-dicloro-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina (2 g, 10 mmol) junto con ciclopropilamina (0,7 mL, 10 mmol), trietilamina (1,4 mL, 10 mmol), y acetonitrilo (30 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, filtró y lavó con agua. El producto intermedio, 5-cloro-N-ciclopropil-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, se secó al vacío para proporcionar 1,85 gramos de un sólido blanco (83% de rendimiento). LCMS (M+1= 223)
Al producto intermedio (1,9 g, 8,3 mmol) aislado anteriormente en DMF (31 mL) se añadió lentamente oxicloruro de fósforo (4,6 mL, 49,7 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 10 horas, se inactivó después mediante la adición de la solución de NaOH 6N. El pH de la mezcla se ajustó con HCl 6N a pH = 7-9. El sólido se eliminó por filtración y lavó con agua. El producto, 5-cloro-7-(ciclopropilamino)-2metilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído, se obtuvo como un sólido blanco con 80% de rendimiento (1,7 g). LCMS (M+1= 251)
Ejemplo 273. Síntesis de 5-cloro-3-formil-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
Al 5-cloro-7-(ciclopropilamino)-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (1,7 g, 6,7 mmol) en cloruro de metileno (13 mL) se añadió trietilamina (1,1 mL, 8 mmol), dimetilaminopiridina (100 mg, 0,8 mmol), y di-t-butildicarbonato (1,8 g, 8 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas. La mezcla de reacción se transfirió a un embudo de separación, lavó 1X con H2O, 2X con salmuera, secó sobre MgSO4, filtró y evaporó hasta la sequedad para proporcionar un residuo aceitoso que se solidificó al reposar. El producto, 5-cloro-3-formil-2-metilpirazolo[1,5a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato, se recuperó como un sólido blanquecino con 82% de rendimiento (1,9g). LCMS (M+1= 351)
Ejemplo 274. Síntesis de 5-(4-(1H-pirazol-1-il)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)-2-metilpirazolo[1.5-a]pirimidina-3carbaldehído
4-(1H-pirazol-1-il)anilina (54 mg, 0,34 mmol), Cs2CO3 (130 mg, 0,4 mmol) se añadieron a 5-cloro-3-formil-2metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato deterc-butilo (100 mg, 0,29 mmol) disuelto en 1,4-dioxano (1,1 mL). El BINAP racémico (11 mg, 0,017 mmol) y acetato de paladio(II) (8 mg, 0,011 mmol) se añadieron después. La mezcla se selló e irradió a 110 °C durante 60 minutos en el microondas. Et2O (3 mL) se añadió y la solución se filtró. El filtrado se concentró al vacío. El residuo crudo se disolvió en diclorometano (1,5 mL) y ácido trifluoroacético (1,5 mL). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de aire. El material crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (15% acetona/diclorometano) para rendir el producto, 5-(4-(1H-pirazol-1-il)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (24 mg, 23% de rendimiento). LCMS (M+1=374)
Ejemplo 275. Síntesis de 5-((5-(4-(1H-pirazol-1-il)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Hidantoína (3 mg, 0,03 mmol) y 5-(4-(1H-pirazol-1-il)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3carbaldehído (12 mg, 0,03 mmol) se disolvieron en etanol (0.4 mL) junto con piperidina (3 uL, 0,03 mmol). La reacción se calentó a 80 °C en el microondas durante 2 horas. La reacción se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, y el precipitado se recogió y lavó con agua, 1:1 etanol:agua, después el etanol. El sólido amarillo se secó al vacío para producir 5-((5-(4-(1H-pirazol-1-il)fenilamino)-7-(ciclopropilamino)-2-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (9,5 mg, 65% de rendimiento). LCMS (M+1=456)
Tabla 52. Actividades biológicas del Ejemplo 275:
CK2: IC50 (µM)
PIM2: %inh 2,5 µM
gt;1
43,426
Ejemplo 276. Síntesis de 7-cloro-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo
Bajo la atmósfera de gas de nitrógeno, metil éster 2-ciano-3,3-bismetiltio-2-propenoico (6 g, 29,5 mmol) se añadió a etanol (40 mL) junto con 3-aminopirazol (2,6 g, 31 mmol) y la mezcla se refluyó durante 2,5 horas. La reacción se enfrió después a temperatura ambiente y el precipitado se recogió mediante filtración al vacío. El sólido se lavó con etanol y se secó al vacío para producir 7-hidroxi-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo con 67% de rendimiento (4,1 g). Este material se usó para la próxima etapa sin purificación adicional. LCMS (M+1=207)
Bajo la atmósfera de gas de nitrógeno, el oxicloruro de fósforo (9,4 mL, 101,3 mmol) y dimetilanilina (2,6 mL, 20,3 mmol) se añadió sucesivamente al producto intermedio, 7-hidroxi-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo, preparado anteriormente (4,1 g, 19,7 mmol). La mezcla se calentó a 110°C durante 4 horas, después se eliminó el exceso de
POCl3 al vacío. El residuo se hizo básico con la solución de NaOH 3N (pH = 9-10) y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, filtraron y concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante la recristalización a partir de acetato de etilo hexanos para proporcionar el producto, 7-cloro-5(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo (80% de rendimiento). LCMS (M+1=225)
En el frasco de reacción, se añadió el 7-cloro-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo (3,1 g, 13,7 mmol) junto con ciclopropilamina (0,96 mL, 13,7 mmol), trietilamina (1,9 mL, 13,7 mmol), y acetonitrilo (30 mL). La reacción se agitó a 85°C durante 10 horas, después la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, diluyó con agua, filtró y lavó con agua. El producto intermedio, 7-(ciclopropilamino)-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo, se purificó además mediante la recristalización a partir de acetato de etilo hexanos para proporcionar 3 gramos con 89% de rendimiento. LCMS (M+1= 246)
Al producto intermedio (3 g, 12,2 mmol) aislado anteriormente en DMF (45 mL) se añadió lentamente oxicloruro de fósforo (13,7 mL, 146 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se dejó agitar a 70°C durante 10 horas, enfrió a temperatura ambiente, e inactivó mediante la adición de la solución NaOH 6N. El pH de la mezcla se ajustó con HCl 6N a pH = 7-9. El sólido se eliminó por filtración y lavó con agua. El producto, 7-(ciclopropilamino)-3-formil-5(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo, se obtuvo como un sólido con 38% de rendimiento (1,28 g). LCMS (M+1= 274)
Ejemplo 278. Síntesis de 7-(cicloprolpilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-5-(metilsulfinil)pirazolo[1,5a]pirimidina-6-carbonitrilo y 7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-5-(metilsulfonil)pirazolo[1,5a]pirimidina-6-carbonitrilo
Hidantoína (366 mg, 3,7 mmol) y 7-(ciclopropilamino)-3-formil-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo (1 g, 3,7 mmol) se disolvieron en etanol (18,5 mL) junto con piperidina (3,7 mL, 3,7 mmol). La reacción se calentó a 80 °C. Después de 10 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, diluyó con agua, y el precipitado se recogió y lavó con agua, 1:1 etanol: agua, después etanol. El sólido amarillo se secó al vacío para producir el producto intermedio, 7(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-5-(metiltio)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo (1,1 g, 83% de rendimiento). LCMS (M+1=356)
El producto intermedio (1,1 g, 3,04 mmol) se mezcló con ácido m-cloroperbenzoico (1,9 g, 7,6 mmol) en diclorometano (12 mL). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 12 horas. El sólido se recolectó por filtración, lavó con diclorometano después, se secó al vacío toda la noche. Los productos, 7-(ciclopropilamino)-3-((2,5dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-5-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo y 7-(ciclopropilamino)-3-((2,5dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-5-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo, se recuperaron como un sólido amarillo con rendimiento cuantitativo. LCMS (M+1 = 372) y LCMS (M+1 = 388)
Ejemplo 279. Síntesis de 5-(1-(3-clorofenil)etilamino)-7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo
La mezcla de 7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-5-(metilsulfonil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6carbonitrilo y 7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-5-(metilsulfinil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6carbonitrilo (20 mg) se mezcló con (R)-1-(3-clorofenil)etanamina (33 mg) en i-propanol (0,5 mL). La mezcla de reacción se calentó a 90°C en el microondas durante 1 hora. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y concentró al vacío. El residuo se diluyó con agua, filtró y lavó con agua seguido por la mezcla etanol/agua al 20%. El sólido se secó en alto vacío para producir 2 mg del producto, 5-(1-(3-clorofenil)etilamino)-7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carbonitrilo. LCMS (M+1=463)
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares a los de la síntesis en los ejemplos anteriores. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 53B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 53A.
Tabla 53B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5 uM AB: MDAMB453 IC50 (uM) AB: BxPC3 IC50 (uM)
F46
lt;0,1 39,402
G46
lt;0,1 71,368 9,41 16,174
H46
lt;0,1 41,888 gt; 30 gt; 30
I46
lt;0,1 84,757 25,494 2,698
J46
lt;0,1 57,881 7,76 6,299
K46
lt;0,1 69,233 6,41 2,989
Ejemplo 280. Síntesis de 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo
En un frasco de reacción, 2-(piperazin-1-il)nicotinonitrilo (22 mg, 0,11 mmol) se mezcló con 5-cloro-7(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (27 mg, 0,11 mmol) en DMF (0,5 mL) junto con carbonato de potasio (32 mg, 0,23 mmol). La reacción se calentó a 95°C durante 12 horas y después se repartió entre agua y acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua, después con solución saturada de NaCl. La capa de acetato de etilo se aisló, secó de sulfato de sodio anhidro, filtró y evaporó hasta la sequedad. El producto, 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo, se recuperó en 35% de rendimiento (16 mg) después de la recristalización a partir del acetato de etilo/hexanos. LCMS (M+1=389)
Ejemplo 281. Síntesis de 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo
Hidantoína (4 mg, 0,04 mmol) y 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo (16 mg, 0,04 mmol) se disolvieron en etanol (0,5 mL) junto con piperidina (4 uL, 0,04 mmol). La reacción se calentó a 80 °C durante 12 horas. La reacción se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, y el precipitado se recogió y lavó con agua, 1:1 etanol:agua, después el etanol. El sólido amarillo se purificó además mediante recristalización a partir de acetato de etilo/hexanos y se secó al vacío para producir 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo (2 mg, 21% de rendimiento). LCMS (M+1=471)
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares a los de la síntesis de los ejemplos anteriores. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 54B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 54A.
Tabla 54A.
Tabla 54B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5 uM AB: MDAMB453 IC50 (µM) AB: BxPC3 IC50 (u M)
L46
lt;0,01 47.249 1.082 3.701
M4
lt;0,1 60.945
N46
lt;0,1 32.984 19.188 7.441
O46
lt;0,1 12.231
P46
lt;0,1 -39.422
Ejemplo 282. Síntesis de 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-formil-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo
microondas durante 1 hora. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y concentró al vacío. El residuo se disolvió en TFA/DCM (1:1) (4 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se evaporó hasta la sequedad, inactivó NaOH 3N, filtró, lavó con agua, y se secó al vacío El producto, 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-formil-6metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo, se purificó además mediante TLC preparativa usando acetona/diclorometano 5% como eluyente (40 mg, 58% de rendimiento). LCMS (M+1=403)
Ejemplo 283. Síntesis de 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-metilpirazolo[1,5a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo
Hidantoína (7,5 mg, 0,08 mmol) y 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-formil-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1il)nicotinonitrilo (15 mg, 0,04 mmol) se disolvieron en etanol (0,5 mL) junto con piperidina (8 uL, 0,08 mmol). La reacción se calentó a 80 °C durante 1 hora en el microondas. La reacción se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, y el precipitado se recogió y lavó con agua, 1:1 etanol:agua, después el etanol. El sólido amarillo se secó al vacío para producir 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo (3 mg, 17% de rendimiento). LCMS (M+1=485)
Ejemplo 284. Síntesis de 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,4-dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo
En un frasco de reacción, tiazolidina-2,4-diona (9 mg, 0,08 mmol) y 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-formil-6metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo (15 mg, 0,04 mmol) se disolvieron en etanol (0,5 mL) junto con piperidina (8 uL, 0,08 mmol). La reacción se calentó a 80 °C durante 1 hora en el microondas. La reacción se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, y el precipitado se recogió y lavó con agua, 1:1 etanol:agua, después el etanol. El sólido amarillo se secó al vacío para producir 2-(4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,4-dioxotiazolidin-5ilideno)metil)-6-metilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazin-1-il)nicotinonitrilo (10 mg, 54% de rendimiento). LCMS (M+1=502)
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares a los de la síntesis en los ejemplos anteriores. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 55B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 55A.
Tabla 55B.
Compuesto
CK2: IC50 (uM) PIM2: %inh 2,5uM AB: MDAMB453 IC50(uM) AB: BxPC3 IC50(uM)
Q46
lt;0,01 13,151 gt;30 gt;30
R46
lt;1 68,545
S46
lt;1 -19,761
T46
lt;1 50,998
Ejemplo 285. Síntesis de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(2-morfolinopropil)carbamato de terc-butilo
En el frasco de reacción, se añadió el 5,7-dicloropirazolo[1,5-a]pirimidina (3,2 g, 17 mmol) junto con 2-morfolinopropan1-amina (2,4 g, 17 mmol), trietilamina (2,3mL, 17 mmol), y acetonitrilo (56 mL). La reacción se agitó a 85°C durante 12 horas se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, filtró y lavó con agua. El producto intermedio, 5-cloroN-(2-morfolinopropil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, se secó al vacío para proporcionar 3,8 gramos de un sólido blanquecino (77% de rendimiento). LCMS (M+1= 296)
Al 5-cloro-N-(2-morfolinopropil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (3,8 g, 13 mmol) en cloruro de metileno (50 mL) se añadió trietilamina (2,1 mL, 15 mmol), dimetilaminopiridina (200 mg, 1,6 mmol), y di-t-butildicarbonato (3,3 g, 15 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas. La mezcla de reacción se transfirió a un embudo de separación, lavó 1X con H2O, 2X con salmuera, secó sobre MgSO4, filtró y evaporó hasta la sequedad para proporcionar un residuo aceitoso que se solidificó al reposar. El producto, 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(2morfolinopropil)carbamato, se recuperó como un sólido blanquecino con 39% de rendimiento (5,1 mmol). LCMS (M+1= 396)
292 Ejemplo 286. Síntesis de N5-(5-cloro-2-fluorofenil)-N7-(2-morfolinopropil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-5,7-diamina
Al 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(2-morfolinopropil)carbamato de terc-butilo (396 mg, 1 mmol), 5-cloro-2-fluoroanilina (145 uL, 1,2 mmol), y LiHMDS (2.2 mL, 2,2 mmol, 1M en THF) se añadió X-Phos (11 mg, 0,024 mmol) y tris(dibencilidenoacetona)dipaladio(0) (18 mg, 0,02 mmol). La mezcla se selló e irradió a 65 °C durante 60 minutos en el microondas. La reacción se inactivó con HCL 1N (2 mL) y después se neutralizó con solución saturada de bicarbonato de sodio. La mezcla se extrajo con etilacetato y se lavó con con solución saturada de cloruro de sodio. La capa orgánica se recogió, secó sobre sulfato de sodio anhidro, filtró y evaporó hasta la sequedad. El residuo crudo se disolvió en diclorometano (2 mL) y ácido trifluoroacético (2 mL). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la solución se concentró bajo una corriente de nitrógeno. El material crudo se neutralizó con solución saturada de bicarbonato de sodio, después se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (75% acetato de etilo/hexanos) para rendir el producto, N5-(5-cloro-2-fluorofenil)-N7-(2-morfolinopropil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-5,7-diamina (84 mg, 21% de rendimiento). LCMS (M+1=405)
Ejemplo 287. Síntesis de 5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(2-morfolinopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3carbaldehído
En un frasco de reacción, N5-(5-cloro-2-fluorofenil)-N7-(2-morfolinopropil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-5,7-diamina (84 mg, 0,21mmol) se disolvió en DMF (0,9 mL), después se añadió lentamente el oxicloruro de fósforo (58 uL, 0,62 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 2 días, se inactivó después mediante la adición de solución de NaOH 6N. El pH de la mezcla se ajustó con HCl 6N a pH = 7-9. El sólido se eliminó por filtración y lavó con agua. El producto, 5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(2-morfolinopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidina-3-carbaldehído, se purificó mediante TLC preparativa (5% acetona/diclorometano) para rendir 37 mg del producto deseado (41% de rendimiento). LCMS (M+1=433)
Ejemplo 288. Síntesis de 5-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(2-morfolinopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Hidantoína (7 mg, 0,07 mmol) y 5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(2-morfolinopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3carbaldehído (15 mg, 0,035 mmol) se disolvieron en etanol (0,5 mL) junto con piperidina (7 uL, 0,07 mmol). La reacción se calentó a 80 °C durante 1 hora en el microondas. La reacción se enfrió después a temperatura ambiente, diluyó con agua, y el precipitado se recogió y lavó con agua, 1:1 etanol:agua, después el etanol. El sólido amarillo se secó al
vacío para producir 5-((5-(5-cloro-2-fluorofenilamino)-7-(2-morfolinopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (5 mg, 28% de rendimiento). LCMS (M+1=515)
Las moléculas siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares a los de la síntesis en los ejemplos anteriores. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 56B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 56A.
Tabla 56A.
Tabla 56B.
LCMS m/z [M+1]+
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
515
lt;0,01
522
lt;0,01 1,522 10,361
Ejemplo 289. Síntesis de 4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazina-1-carboxilato de tercbutilo
Al 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo [1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (500 mg, 2,11 mmol) en dimetilformamida se añadió 1-Boc-piperazina (1,17g, 6,33 mmol), carbonato de potasio (583mg, 4,21mmol) y diisopropiletilamina (0,41mL, 2,5 mmol). La mezcla se calentó a 80°C durante toda la noche. La mezcla de reacción se enfrió, añadió agua y filtró el precipitado blanco para rendir 4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazina-1-carboxilato de tercbutilo (655 mg, 80% de rendimiento). LCMS (M+1=387)
Ejemplo 290. Síntesis de (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(piperazin-1-il)pirazolo[1,5-alpirimidin-3-il)metileno)imidazolidina2,4-diona
El producto anterior 4-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (250 mg, 0,645 mmol) se disolvió en 2,0 mL etanol, añadió hidantoína (129 mg, 1,288 mmol) y piperidina (127 ul). La reacción se calentó a 80°C durante tres horas. La mezcla de reacción se enfrió y el precipitado amarillo se filtró, lavó con etanol, secó para rendir 4-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)piperazina-1-carboxilato de (Z)-terc-butilo (264 mg, 87% de rendimiento). El producto anterior se disolvió además en la mezcla 1:1 de DCM: TFA y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se concentró y se secó para rendir el sólido amarillo de (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(piperazin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il) metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=369)
Ejemplo 291. Síntesis de (Z)-5-((5-(4-(2-ciclopropilacetil)piperazin-1-il)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3il)metileno)imidazolidina-2,4-diona
Al (Z)-5-((7-(ciclopropilamino)-5-(piperazin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona (etapa b) (10 mg, 0,027 mmol) en 50,0 uL NMP, se añadió HOBT (4,4 mg, 0,032 mmol), ácido ciclopropilacético (60 ul en solución de NMP 0,02M), DIPEA (9,5 ul, 0,067 mmol) y EDC (7,8 mg, 0,040 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora. La mezcla de reacción se diluyó con metanol y preparó por HPLC para rendir (Z)-5-((5-(4(2-ciclopropilacetil)piperazin-1-il)-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)metileno)imidazolidina-2,4-diona. LCMS (M+1=451)
Los compuestos enumerados en la siguiente Tabla 57A se prepararon de conformidad con los procedimientos como descritos anteriormente. La Tabla 57B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 57A.
Tabla 57A.
Tabla 57B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
U46
lt;0,1 42,842 5,375 10,85
V46
lt;0,01 38,513 8,682 gt;30
W46
lt;0,01 70,354 20,4 5,92
X46
lt;0,01 41,17 0,899 11,126
Y46
lt;0,01 52,82 0,773 16,427
Z46
lt;0,01 51,843 1,187 8,643
A47
lt;0,01 60,724 5,638 gt;30
B47
lt;0,01 41,017 2,584 6,843
C47
lt;0,01 3,668 8,715 gt;30
Ejemplo 292. Síntesis de 5-azido-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il(ciclopropil)carbamato de terc-butilo
Al 5-cloro-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (4,0g, 16,87 mmol) en dimetilformamida se añadió azida sódica (1,56 g, 23,9 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 8 horas. La mezcla de reacción se enfrió, añadió agua y el precipitado blanco se filtró y secó para rendir 5-azido-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5a]pirimidina-3-carbaldehído (2,95 g, 75% de rendimiento). LCMS (M+1=244)
Ejemplo 293. Síntesis de 5-amino-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído
El producto anterior 5-azido-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1, 5-a]pirimidina-3-carbaldehído (1,09 g, 4,46 mmol) se sometió a la hidrogenación usando 10% en peso de paladio sobre carbono en etanol. La reacción se agitó under hydrogen durante 6 horas. La mezcla se filtró a través de celita y sonicó con la mezcla 1:1 de acetato de etilo y hexano. El sólido amarillo claro se filtró y secó para rendir 5-amino-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído como producto de 750 mg (85% de rendimiento). LCMS (M+1=218)
Ejemplo 294. Síntesis de (Z)-N-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)-2-fluorobenzamida
Al 5-amino-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (etapa b) (30 mg, 0,138 mmol) en 1,0 mL de tetrahidrofurano, agitando bajo nitrógeno, se añadió cloruro de 2-fluorobenzoilo (33 ul, 0,275mmol) y DIPEA (28,8 ul). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora. La reacción se fraccionó después entre acetato de etilo y agua, la capa orgánica se secó bajo sulfato de amonio concentrado en alto vacío para rendir N-(7(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)-2-fluorobenzamida. El producto crudo se disolvió además en 1,0 mL etanol, se añadió hidantoína (41,2 mg, 0,411 mmol) y pipperdina (40,0 ul). La reacción se calentó a 80°C durante tres horas. La mezcla de reacción se enfrió y el precipitado amarillo se filtró, lavó con etanol para rendir 10 mg (40% de rendimiento, dos etapas) (Z)-N-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno) metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5il)-2-fluorobenzamida. LCMS (M+1=422)
Ejemplo 295. Síntesis de (Z)-4-ciano-N-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5a]pirimidin-5-il)benzamida
Al 5-amino-7-(ciclopropilamino)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldehído (etapa b) (30 mg, 0,138 mmol) en 1,0 mL de acetonitrilo se añadió HATU (104 mg, 0,273 mmol), ácido 3-ciano benzoico (30 mg, 0,203 mmol) y DIPEA (48,0 ul). La mezcla de reacción se calentó a 80°C durante cinco horas. La mezcla de reacción se enfrió y el precipitado amarillo claro se filtró, lavó con acetonitrilo para rendir 4-ciano-N-(7-(ciclopropilamino)-3-formilpirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il) benzamida. El producto crudo se disolvió además en 1,0 mL de etanol, se añadió hidantoína (10 mg, 0,01 mmol) y pipperdina (9,5 ul). La reacción se calentó a 80°C durante tres horas. La mezcla de reacción se enfrió y el precipitado se filtró, lavó con etanol para rendir 7 mg (40% de rendimiento, dos etapas) (Z)-4-ciano-N-(7-(ciclopropilamino)-3-((2,5dioxoimidazolidin-4-ilideno)metil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)benzamida. LCMS (M+1=429)
Los compuestos siguientes se prepararon usando los compuestos químicos similares a los de la síntesis en los ejemplos anteriores con los ácidos, cloroformatos, o isocianatos correspondientes. Todos los compuestos se caracterizaron mediante LCMS. La Tabla 58B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 58A.
Tabla 58A.
298 299 300 301 302 303 Tabla 58B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
D47
lt;0,01 gt; 30 9,159
E47
lt;0,01 gt; 30 13,301
F47
lt;0,01 8,426 6,12
G47
lt;0,01 3,966 1,261
H47
lt;0,01 10,968 5,493
I47
lt;0,01 45,534 2,681 2,072
J47
lt;0,01 6,214 8,323
K47
lt;0,01 24,91 2,632 3,408
L47
lt;0,01 34,04 1,358 0,462
M47
lt;0,1 8,709 4,483 13,992
N47
lt;1 -3,824
O47
lt;0,1
P47
lt;0,1 19,381
Q47
lt;0,01 -3,745 gt; 30 10,923
R47
lt;0,01 35,033 6,348 3,024
S47
lt;0,01 23,66 10,188 6,687
T47
lt;0,1 2,891
U47
lt;0,1 19,928 24,406 2,473
V47
lt;0,01 29,314 8,961 1,499
W47
lt;0,01 41,784 15,923 3,845
X47
lt;0,1 -19,744 6,48 2,609
Y47
lt;0,1 39,441 9,161 5,819
Z47
lt;0,1 28,144 7,944 6,871
A48
lt;0,01 11,381 3,624 3,507
B48
lt;0,01 65,249 2,288 9,991
C48
lt;0,01 80,785 1,571 14,323
D48
lt;0,01 47,119 2,875 9,111
E48
lt;0,01 21,326 1,478 0,817
F48
lt;0,01 26,323 9,984 0,479
G48
lt;0,01 -17,316 gt; 30 gt; 30
H48
lt;0,01 36,311 1,753 1,068
I48
lt;0,01 6,687 4,714 4,008
J48
lt;0,01 -4,732 1,276 1,915
K48
lt;0,1 25,886 25,328 gt; 30
L48
lt;0,01 12,626 4,558 6,99
M48
lt;0,01 10,818 2,091 1,194
N48
lt;0,01 6,252 9,495 1,3
O48
lt;0,01 28,649 5,485 4,79
P48
lt;0,01 -31,641 2,964 2,068
Los compuestos siguientes se prepararon usando los compuestos químicos descritos en la presente descripción. La Tabla 59B muestra las actividades biológicas de los compuestos indicados en la Tabla 59A.
Tabla 59A
305 306 307
Tabla 59B.
Compuesto
CK2: IC50 (µM) PIM2: IC50 (µM) AB: MDAMB453 (µM) AB: BxPC3 (µM)
Q48
lt;0,1
R48
lt;0,01
S48
lt;0,01
T48
lt;0,1
U48
lt;0,01
V48
lt;0,01
W48
lt;0,1
X48
lt;0,1
Y48
lt;0,1 2,026 11,928 12,73
Z48
lt;0,1
A49
lt;0,01 87,627 0,709 6,265
B49
lt;0,01 26,245 gt;30
C49
lt;0,01 0,529 1,688
D49
lt;0,01 0,988 1,191
E49
lt;0,01 2,855 6,613
F49
lt;0,01 49,17 2,401 14,078
G49
lt;0,01 -32,822 13,256 29,23
H49
lt;0,01
I49
lt;0,01
J49
lt;0,01
K49
lt;0,01
L49
lt;0,01
M49
lt;0,01
N49
lt;0,01
O49
lt;0,1
Los compuestos siguientes en la Tabla 60 pueden prepararse usando los compuestos químicos descritos en la presente descripción:
Tabla 60.
308 309
Compuesto 3 se preparó mediante la reacción del compuesto 1 con ácido borónico 2 usando las condiciones de la reacción de acoplamiento de Suzuki como se muestra más abajo (Esquema 2).
Los compuestos siguientes en la Tabla 61 puede prepararse usando el compuesto químico descrito en el Esquema 2. Tabla 61.
311 312 313
El Compuesto 5 (como se muestra en Esquema 3 más abajo) se preparó a partir del compuesto 4 usando los compuestos químicos descritos en la solicitud de patente núm. US2004/0019058. El compuesto 5 puede convertirse en la molécula 6 usando los productos intermedios y los compuestos químicos anteriormente descritos. La desprotección de 6 usando los reactivos tales como el ácido N,N-dimetilbarbitúrico y un catalizador de paladio puede conducir a 7.
El Compuesto 7 (como se muestra en el Esquema 4 más abajo) puede convertirse en las moléculas 8, 9,10, 11 y 12 usando los compuestos químicos conocidos por los expertos en la técnica.
Esquema 4
Los compuestos siguientes en la Tabla 62 pueden prepararse usando los compuestos químicos descritos en la presente descripción:
El Compuesto 3 se preparó mediante la reacción del compuesto 1 con el ácido borónico 2 usando las condiciones de la reacción de acoplamiento de Suzuki (como se muestra en el Esquema 5 más abajo).
Esquema 5
Los compuestos siguientes en la Tabla 63 pueden prepararse usando el compuesto químico descrito en el Esquema 5: Tabla 63.
Compuesto 2 se prepararon mediante la reacción del compuesto 1 usando las condiciones de aminación reductora (como se muestra en el Esquema 6 más abajo).
Esquema 6
Los compuestos siguientes en la Tabla 64 pueden prepararse usando el compuesto químico descrito en el Esquema 6:
Tabla 64.
Métodos de pruebas biológicas:
Ejemplo Biológico A
Método de ensayo de CK2
La actividad moduladora de los compuestos que se describen en la presente descripción, se evaluó in vitro en ensayos de CK2 libre de células mediante el siguiente método.
En un volumen de reacción final de 50 µl, CK2 ααββ (4 ng, 8,5 mU) se incubó con varias concentraciones de los compuestos de prueba en DMSO (1 ul, 2% por volumen), 20 mM de MOPS pH 7,2, 10 mM de EGTA, 0,15 M de NaCl, 10 mM de DTT, Brij-35 al 0,002%, 200 µM de RRRDDDSDDD, 10 mM de acetato de Mg, ATP 15 uM y 0.33% (por volumen) de ([γ-33P]ATP: reserva 1mCi/100µl; 3000Ci/mmol (Perkin Elmer)). Las reacciones se mantuvieron durante 40 minutos a 23 °C. Las reacciones se inactivaron con 100 ul de ácido fosfórico al 0,75%, después se transfirieron a y filtraron a través de un plato de filtro de fosfocelulosa (Millipore, MSPH-N6B-50). Después de lavar cada pocillo 4 veces con ácido fosfórico al 0,75%, se añadió fluído de centelleo (20 uL) a cada pocillo y la radioactividad residual se midió usando un contador de luminiscencia Wallac.
Ejemplo Biológico B
Método de ensayo de PIM-1
El siguiente procedimiento se usó para ensayar la actividad quinasa de PIM-1 de los compuestos de la invención. Otros métodos para ensayar PIM-1 y otras quinasas PIM, aasí como los métodos para ensayar la actividad contra varias quinasas del panel de quinasas mencionados en las Figuras 1 y 2, se conocen en la técnica.
En un volumen de reacción final de 50 ul, el PIM-1 recombinante (1 ng) se incubó con 12 mM de MOPS pH 7,0, 0,4 mM de EDTA, glicerol al 1%, brij 35 al 0,002 %, 2-mercaptoetanol al 0,02 %, BSA 0,2 mg/ml, 100 uM de KKRNRTLTK, 10 mM de acetato de Mg, 15 uM de ATP, [γ-33P-ATP] (actividad específica aproximada 500 cpm/pmol), DMSO al 4% y el
compuesto inhibidor de prueba en la concentración requerida. La reacción se inició mediante la adición de la mezcla de ATP magnesio. Después de 40 minutos de incubación a 23°C, las reacciones se inactivaron mediante la adición de 100 ul ácido fosfórico al 0,75%, y el péptido marcado se colectó por filtración a través de un plato de filtro de fosfocelulosa. El plato se lavó 4 veces con ácido fosfórico al 0,075% (100 ul por pocillo) y luego, después de la adición del fluído de centelleo (20 ul por pocillo), los conteos se midieron con un contador de centelleo.
Ejemplo Biológico C
Método de ensayo de PIM-2
Los compuestos de prueba disueltos y diluídos en DMSO (2 µl) se añadieron a una mezcla de reacción que comprende 10 µl de 5X regulador de reacción (40mM MOPS pH 7,0, 5mM de EDTA), 10 µl de solución PIM2 recombinante humano (4 ng de PIM-2 disuelto en regulador de disolución (20 mM de MOPS pH 7,0; EDTA 1 mM; Glicerol al 5%; Brij 35 al 0,01%; 0,1%; 2-mercaptoetanol al 0,1%; 1 mg/ml BSA)) y 8 ul de agua. Las reacciones se iniciaron mediante la adición de 10 ul de la solución de ATP (49% (15 mM de MgCl2; 75 uM de ATP) 1% de ([γ-33P]ATP: reserva 1mCi/100µl; 3000Ci/mmol (Perkin Elmer)) y 10 ul de solución de sustrato peptídico (RSRSSYPAGT, disuelto en agua a una concentración de 1 mM), Las reacciones se mantuvieron durante 10 minutos a 30°C. Las reacciones se inactivaron con 100 ul de ácido fosfórico al 0,75%, se transfirieron después a y filtraron a través de un plato de filtro de fosfocelulosa (Millipore, MSPH-N6B-50). Después de lavar cada pocillo 4 veces con ácido fosfórico al 0,75%, se añadió fluído de centelleo (20 uL) a cada pocillo y la radioactividad residual se midió usando un contador de luminiscencia Wallac.
Ejemplo Biológico D
Actividad moduladora de la proliferación celular
Un protocolo representativo del ensayo de proliferación celular que usa colorante Alamar azul (almacenado a 4°C, usa 20 ul por pocillo) se describe después de esto.
Configuración de la placa de 96 pocillos y tratamiento del compuesto
a.
Tratamiento de las células con tripsina y escisión.
b.
Recuento de células mediante un hemocitómetro.
c.
Placa con 4,000-5,000 células por pocillo en 100 µl de medio y se sembraron en una placa de 96 pocillos de
conformidad con el diseño de la placa siguiente.
Se añadió medio de cultivo celular, sólo a los pocillos B10 a B12. Los pocillos B1 a B9 tenían células pero no se añadió ningún compuesto.
1
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
VACÍO
B
SIN AÑADIR EL COMPUESTO Medio solamente
C
10nM 100nM 1uM 10uM Control
D
10nM 104nM 1uM 10uM Comp. 1
E
10nM 100nM 1uM 10uM Comp. 2
F
10nM 100nM 1uM 10uM Comp. 3
G
10nM 100nM 1uM 10uM Comp. 4
H
VACÍO
d.
Añadir 100 µl de dilución de fármaco 2X a cada pocillo en una concentración mostrada en la disposición de la
placa anterior. Al mismo tiempo, añadir 100 µl de medio en los pocillos de control (pocillos B10 a B12). El
volumen total es 200 µl /pocillo.
e.
Incubar cuatro (4) días a 37°C, 5% de CO2 en una incubadora humidificada.
f.
Añadir 20 µl del reactivo Alamar azul a cada pocillo.
g.
Incubar cuatro (4) días a 37°C, 5% de CO2 en una incubadora humidificada.
h.
Registrar la fluorescencia a una longitud de onda de excitación de 544 nm y longitud de onda de emisión de 590
nm mediante el uso de un lector de microplacas.
En las pruebas, las células se cultivan con un compuesto de prueba durante aproximadamente cuatro días, el colorante se añade después a las células y la fluorescencia del colorante no reducido se detecta después de aproximadamente cuatro horas. Pueden usarse diferentes tipos de células en los ensayos (por ejemplo, las células humanas de carcinoma
colorrectal HCT-116, las células humanas del cáncer de próstata PC-3, las células humanas de cáncer de mama MDA-MB231, las células humanas de leucemia mieloide crónica (LMC) K-562, las células de carcinoma de páncreas MiaPaCa, las células humanas de leucemia mieloide aguda MV-4, y las células humanas de adenocarcinoma de páncreas BxPC3).
La actividad de los compuestos de la presente invención probada en estos ensayos in vitro y celulares se resumen en las Tablas 1A y 2A más abajo. Los compuestos enumerados en las Tablas 1A y 2A son los Ejemplos y especies descritas anteriormente.
Tabla A1. Datos de la bioactividad para algunos de los compuestos de Fórmula II y Fórmula II'.
Compuesto
AB: MV4-11 AB: MDAMB453 AH: K562 AB: BxPC3 AB: SUM149PT CK2: IC50 (uM) PIM1: IC50 (uM) PIM2: IC50 (uM)
P49
0,185 1,958 0,437 4,945 4,495 lt;0,01 0,6565 gt; 2,5000
Q49
0,1647 2,0638 1,6438
R49
3,608 7,7 5,129 9,45 4,6 lt;0,01 2,0575 1,8456
S49
0,1367 0,9177 1,3934
T49
0,1739 gt; 2,5000 1,4327
U49
lt;0,01 1,4455 1,4379
V49
0,2072 gt; 2,5000 gt; 2,5000
W49
0,0513 1,2533 gt; 2,5000
X49
0,7502 gt; 2,5000 gt; 2,5000
Y49
1,759 1,069 1,723 7,592 1,693 lt;0,01 0,4414 0,5759
Z49
gt; 10 14,3 gt; 10 26,465 gt;30 lt;0,01 gt; 2,5000 gt; 2,5000
A50
0,764 0,5235 1,0907
Tabla A2. Datos de la bioactividad para algunos de los compuestos de Fórmula II y Fórmula II'
Compuesto
AB: MDAMB453 AB: BxPC3 AB: SUM149PT CK2: IC50 (Brij 15um ATP) PIM2: IC50 (5um ATP)
B50
1.047 2.341 1.043 0.00072
C50
1.552 1.564 1.922 0.00216 gt; 2,5000
D50
lt; 0,12 lt; 0,12 0.154 0.00038
E50
0.842 3.96 1.595 0.00081 gt; 2,5000
F50
3.459 2.958 2.054 0.00663
G50
1.483 1.626 2.073 0.00359 1.3652
H50
3.507 3.876 4.996 0.00412 1.2984
La citación anterior de las patentes, solicitudes de patentes, publicaciones y documentos no es una admisión de pertinencia en la técnica anterior, ni constituye una admisión de los contenidos o fechas de estas publicaciones o documentos. Además, para todos los propósitos, los contenidos de las patentes, solicitudes de patentes, publicaciones y documentos citados en la presente se incorporan en su totalidad como referencia en la medida en que cada uno de ellos se incorpore específicamente mediante referencias.
Pueden hacerse modificaciones de lo anterior sin apartarse de los aspectos básicos de la invención. Aunque la invención se describió detalladamente con respecto a una o más modalidades específicas, los expertos en la técnica reconocerán que pueden hacerse cambios a las modalidades específicamente descritas en esta solicitud, y estando aún estas modificaciones y mejoras dentro del alcance y espíritu de la invención. La invención descrita ilustrativamente en la presente descripción puede practicarse de manera adecuada en ausencia de cualquiera de los elementos no específicamente descritos en la presente. Así, por ejemplo, en cada caso de la presente descripción cualquiera de los términos quot;que comprendequot;, quot;que consiste esencialmente enquot; y quot;que consiste enquot; pueden reemplazarse con cualquiera de los otros dos términos. Así, los términos y expresiones que se han empleado se usan como términos de descripción
y no de limitación, equivalentes de las características mostradas y descritas, o porciones de estas, no se excluyen, y se reconoce que son posibles varias modificaciones dentro del alcance de la invención.
Listado de Secuencia
lt;110gt; HADDACH, Mustapha TRAN, Joe A. PIERRE, Fabrice REGAN, Collin F. RAFFAELE, Nicholas B. RAVULA, Suchitra RYCKMAN, David M.
lt;120gt; PIRAZOLOPIRIMIDINAS Y HETEROCICLOS RELACIONADOS COMO INHIBIDORES DE CK2
lt;130gt; CYLE-060/02WO
lt;140gt; PCT/US2010/056712
lt;141gt; 2010-11-15
lt;150gt; US 61/266,801
lt;151gt; 2009-12-04
lt;150gt; US 61/354,165
lt;151gt; 2010-06-11
lt;160gt; 6
lt;170gt;PatentIn versión 3.5
lt;210gt; 1
lt;211gt; 391
lt;212gt; PRT
lt;213gt; Homo sapiens
lt;400gt; 1
322 323
lt;210gt; 2
lt;211gt; 391
lt;212gt; PRT
lt;213gt; Homo sapiens
lt;400gt; 2
lt;210gt; 3
lt;211gt; 255
lt;212gt; PRT
lt;213gt; Homo sapiens
lt;400gt; 3
210gt; 4
lt;211gt; 10
lt;212gt; PRT
lt;213gt; Desconocido
lt;220gt;
lt;223gt; Ensayo de CK2 sustrato peptídico
lt;400gt; 4
lt;210gt; 5
lt;211gt; 9
lt;212gt; PRT
lt;213gt; Desconocido
lt;220gt;
lt;223gt; Ensayo de PIM-1 sustrato peptídico
lt;400gt; 5
lt;210gt; 6
lt;211gt; 10
lt;212gt; PRT
lt;213gt; Desconocido
lt;220gt;
lt;223gt; Ensayo de PIM-2 sustrato peptídico
lt;400gt; 6 Reivindicaciones

Claims (16)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto que es un heterociclo de Fórmula (II), (II'), (IIa) o (IIa'):
    o un solvato y/o sal farmacéuticamente aceptable de éste; en donde en las fórmulas (II), (II'), (IIa) y (IIa') Z3 representa N o CR5, o CH; Z4 representa CH, N o CR5 cada R5 se selecciona independientemente a partir de halo, -CN, -R, -OR, -S(O)nR, -COOR, -CONR2, y -NR2, en donde cada R se selecciona independientemente a partir de H y el alquilo C1-C4 opcionalmente sustituído, o alternativamente, los dos grupos R, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituído que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S como un miembro del anillo; cada n es independientemente 0, 1 o 2; y cada m es independientemente 1, 2, 3 o 4; en las fórmulas (II) y (II'): R2, R3 y R4 se seleccionan independientemente de H y el alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído; X representa NR2, O, o S; Yes O o S; donde R10 se selecciona de H, CN, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituído, alquenilo C2-C4 opcionalmente sustituído, alquinilo C2-C4 opcionalmente sustituído, alcoxi C1-C4 opcionalmente sustituído, y -NR7R8, Z es O; L es -NR7-, un enlace, -CR7=CR8-, -C=C-, -O-, -S(O)n-, -(CR7R8)m-, -(CR7R8)m-NR7-, -(CR7R8)m-O-, o -(CR7R8)mS(O)n-; W es arilo opcionalmente sustituído, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, -NR7R8, -OR7, -S(O)nR7,-CONR7R8, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, alquenilo C2-C10 opcionalmente sustituído, alquinilo C2-C10 opcionalmente sustituído, o -CR7R8R9; donde cada R7 y R8 y R9 se selecciona independientemente a partir de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído y heteroarilalquilo opcionalmente sustituído;
    o R8 y R9, que junto con con el átomo de carbono al que se unen, forman =O (oxo) o =N-OR7 o =N-CN;
    o R7 y R8, que juntos en un solo átomo de carbono o en átomos de carbono conectados adyacentes de (CR7R8)m sea solo o como parte de otro grupo, forman un anillo carbocíclico o anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros;
    o R7 y R8, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico o heteroarílico de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituído que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S como miembro del anillo; con la condición de que no más de uno de o R7 y R8 en -NR7R8 se selecciona del grupo que consiste en alcoxi, alquilamino, dialquilamino y heterociclilo; y R1B se selecciona a partir del carbociclilo opcionalmente sustituído, H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído o heteroarilalquilo opcionalmente sustituído; R1A se selecciona de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, y en las fórmulas (IIa) y (IIa') R2 es H, CH3o CF3; R4 es H, CH3o CF3; Xes O, S o NH; Yes O o S;
    R1B
    se selecciona de H, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, cicloalquilo opcionalmente sustituído, cicloalquilalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído o un heteroarilo opcionalmente sustituído; L es un enlace, -NR7-, -O-, -S(O)n-, (CR7R8)m, o -(CR7R8)m-NR7-; W se selecciona de arilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, y -NR7R8, donde cada R7 y R8 se selecciona independientemente a partir de H, alcoxi C1-C6 opcionalmente sustituído, alquilamino C1-C6 opcionalmente sustituído, dialquilamino C1-C6 opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituído, cicloalquilalquilo C4-C10 opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído y heteroarilalquilo opcionalmente sustituído; y R7 y R8, que juntos en un solo átomo de carbono o en átomos de carbono conectados adyacentes de (CR7R8)m sea solo o como parte de otro grupo, forman un anillo de 3 a 8 miembros que contiene uno o más heteroátomos como miembros del anillo;
    o R7 y R8, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico o heteroarílico de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituído que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como miembro del anillo; y con la condición de que no más de uno de o R7 y R8 en -NR7R8 se seleccione del grupo que consiste en alcoxi, alquilamino, dialquilamino y heterociclilo.
  2. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde en las fórmulas (II) y (II'):
    (i)
    Z3esNy/oZ4esCHoN;o
    (ii)
    Z3esCHy/oZ4esN.
  3. 3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o 2, en donde en las fórmulas (II) y (II'):
    (a)
    R3 y R4 son ambas H; y/o
    (b)
    R2 es H, -CH3P o CF3 y/o
    (c)
    YesOoS,oZesO;y/o
    (d)
    XesNH,oXesOoS;y/o
    (e)
    el carbociclilo opcionalmente sustituído es un cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituído; el carbociclilalquilo opcionalmente sustituído es un cicloalquilalquilo C4-C10 opcionalmente sustituído; y el heteroalquilo opcionalmente sustituído es un alcoxi C1-C6 opcionalmente sustituído, alquilamino C1-C6 opcionalmente sustituído, o dialquilamino C1-C6 opcionalmente sustituído.
  4. 4. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde en las fórmulas (II) y (II'):
    (a)
    L es un enlace o NH, y/o W es fenilo opcionalmente sustituído, fenilalquilo opcionalmente sustituído, cicloalquilalquilo opcionalmente sustituído, o heterociclilo opcionalmente sustituído; o
    (b)
    -L-W es -NHR7, -OR7, o -S(O)nR7;
    n es 0, 1,o 2;y R7
    es alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilalquilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilalquilo opcionalmente sustituído o heterociclilalquilo opcionalmente sustituído; o
    (c)
    -L-W es -NR7R8; y R7 y R8, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un heterociclilo opcionalmente sustituído que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos adicionales como miembros del anillo; o
    (d)
    -L-W es arilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído o heterociclilo opcionalmente sustituído.
  5. 5.
    Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde en las Fórmulas (II) y (II') R1A es H y R1B es alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, cicloalquilo opcionalmente sustituído, cicloalquilalquilo opcionalmente sustituído, heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, o un anillo arilo de 5-6 miembros opcionalmente sustituído que contiene hasta dos heteroátomos como miembros del anillo.
  6. 6.
    Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde en las Fórmulas (IIa) y (IIa'):
    (a)
    R2 y R4 son cada una H; y/o
    (b)
    XesNHyYesO;y/o
    (c)
    R1B es cicloalquilo C3-C8 o cicloalquilalquilo C4-C8, y/o
    (d)
    Z3esNoCH;y/o
    (e)
    Z4esNoCH;y/o
    (f)
    Z3yZ4sonambasNoZ3yZ4sonambasCH.
  7. 7.
    Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o 6 en donde en las fórmulas (IIa) y (IIa'):
    (a)
    L es NH, y/o W es es fenilo opcionalmente sustituído o tienilo opcionalmente sustituído, y/o W es fenilalquilo opcionalmente sustituído, cicloalquilalquilo opcionalmente sustituído, o heterociclilo opcionalmente sustituído; o
    (b)
    -L-W es -NHR7, -OR7, o -S(O)nR7;
    n es 0, 1,o 2;y R7
    es alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilalquilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilalquilo opcionalmente sustituído o heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, o
    (c)
    -L-W es -NR7R8; y R7 y R8, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un heterociclilo opcionalmente sustituído que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos adicionales como miembros del anillo; o
    (d)
    -L-W es arilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, o heterociclilo opcionalmente sustituído.
  8. 8. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde el compuesto de la Fórmula (IIa) o (IIa') tien la Fórmula estructural (II-Th) o (II-Th'):
    en donde RTh se selecciona de H, halo, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituído, CN, S(O)0-2R, -SO2NR2, COOR, CONR2, y C(O)R, donde cada R es independientemente H, halo, CN, o un miembro opcionalmente sustituído seleccionado del grupo que consiste en alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquilamino C1-C6, di(C1-C6)alquilamino, cicloalquilo C3-C8 , cicloalquilalquilo C4-C10, heterociclilo C5-C8, heterociclilalquilo C6-C10, arilo, arilalquilo, heteroalquilo C5-C6 y heteroalquilalquilo C6-C10; y dos R en el mismo átomo o átomos conectados adyacentes pueden formar un anillo heterocíclico opcionalmente sustituído que puede contener un heteroátomo adicional seleccionado de N, O y S como un miembro del anillo;
    o una sal farmacéuticamente aceptable de éste.
  9. 9. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 8, en donde:
    (a)
    YesO,yXesNHoS;y/o
    (b)
    R2 y R4 son cada una H; y/o
    (c)
    RTH es CONR2.
  10. 10. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 6 a 9 en donde en las Fórmulas (IIa) y (IIa') R1B es ciclopropilo o ciclopropilmetilo.
    en donde en las fórmulas (IIb) y (IIb') R2 y R4 son independientemente H, CH3 o CF3; Z4 es No CH; -L-W es -NR8AR7, -NHR7, -OR7, o -S(O)nR7; n es 0, 1,o 2;y
    R7
    es alquilo C1-C10 opcionalmente sustituído, heteroalquilo opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, arilalquilo opcionalmente sustituído, heteroarilalquilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, heterociclilo opcionalmente sustituído, carbociclilalquilo opcionalmente sustituído o heterociclilalquilo opcionalmente sustituído, arilo opcionalmente sustituído, heteroarilo opcionalmente sustituído, carbociclilo opcionalmente sustituído, o heterociclilo opcionalmente sustituído; o R7 y R8A, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un heterociclilo opcionalmente sustituído que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos adicionales como miembros del anillo; y en la Fórmula (IIc): X es O, S, o NR2; R3 es -(CH2)-XC; XC es es hidroxilo o un grupo que tiene la fórmula estructural (a), (b), (c), o (d):
    L1 y L2 son cada uno independientemente un enlace covalente, -O-, o -NR3a-; R1a y R2a son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, heteroalquilo, heteroarilo, heterociclilo, alquenilo, alquinilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, heterociclilalquilo, -alquileno-C(O)-O-R4a, o -alquileno-O-C(O)-O-R4a; y R3a y R4a son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alquenilo, alquinilo, arilalquilo, heterociclilalquilo o heteroarilalquilo; L3 es un enlace covalente o alquileno; Q es OR5a, NR5aR6a, o C(O)OR7a, con la condición de que cuando Q sea C(O)OR7a, entonces L3 no es un enlace covalente; y
    R5a R6a R7a
    , , y son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo, arilalquilo, arilo, heteroalquilo, alquilheteroarilo, heterociclilo o heteroarilo; Oo alternativamente, R5a y R6a, que juntos con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un anillo heterocíclico que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales independientemente seleccionados de N, O, y S.
  11. 12. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 11, en donde en la Fórmula (IIc):
    (i)
    X es NR2; R3 es -(CH2)-XC; XC es es hidroxilo o un grupo que tiene la fórmula estructural (b):
    (ii)
    R2 y R4 son hidrógeno; y/o
    (iii) R1B es un alquilo, cicloalquilo o cicloalquilalquilo C1-C10 opcionalmente sustituído; y/o
    (iv)
    -L-W es -OR7 o -NR7R8, en donde preferentemente R7 es arilo opcionalmente sustituído o heteroarilo opcionalmente sustituído; y R8 es H, en donde con mayor preferencia R7 es fenilo opcionalmente sustituído y R8 es H; y/o
    (v)
    L3 es un enlace covalente; y Q es OR5a o NR5aR6a .
  12. 13.
    Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12; y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable; y que comprende opcionalmente además uno o más agentes terapéuticos adicionales, en donde uno o más agentes terapéuticos adicionales es preferentemente un agente anticancerígeno.
  13. 14.
    Un método in vitro que es:
    (a)
    un método para modular la actividad de la caseína quinasa 2 y/o la actividad de Pim quinasa en una célula, que comprende poner en contacto la célula con un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o
    (b)
    un método para inhibir la proliferación celular, que comprende poner en contacto células de una línea celular con el compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en una cantidad eficaz para inhibir la proliferación de las células.
  14. 15.
    Un método de conformidad con la reivindicación 14, cuyo método es el método (a), y en donde las células son de una línea celular cancerígena que es una línea celular de cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer hematopoyético, cáncer colorrectal, cáncer de piel o cáncer de ovario.
  15. 16.
    Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para su uso en:
    (a)
    tratar una afección o enfermedad asociada con la actividad de la caseína quinasa 2 y/o la actividad Pim quinasa en un paciente mediante la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto, en donde la afección o enfermedad se selecciona de cáncer, un trastorno vascular, una inflamación, una infección patogénica, un trastorno inmunológico, un trastorno neurodegenerativo, y una combinación de estos, y en donde el cáncer se selecciona preferentemente de cáncer de colorecto, mama, pulmón, hígado, páncreas, ganglio linfático, colon, próstata, cerebro, cabeza y cuello, piel, hígado, riñón, sangre y corazón, y en donde el compuesto se administra opcionalmente en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales, preferentemente un agente anticancerígeno; o
    (b)
    inhibir la proliferación celular, que comprende poner en contacto las células con el compuesto en una cantidad eficaz para inhibir la proliferación celular, en donde las células son de un tumor en un sujeto; o
    (c)
    inhibir la angiogénesis en un sujeto, que comprende administrar al sujeto el compuesto en una cantidad eficaz para inhibir la angiogénesis.
  16. 17.
    Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 que se selecciona del grupo que consiste en
    332 333
    335 336 337 338 339 340 341 342 343 344 345 346 347 348 349 350 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 371 372 373 374 375 376 377 378 379 380 381 382 383 384 385 386 ,y
    387 388 389 390 391 392 393 394 395 396 397 398 399
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