ES2617957T3 - Combinaciones farmacológicas para el tratamiento de la distrofia muscular de Duchenne - Google Patents

Abstract

Una combinación que comprende (o que consiste esencialmente en) el compuesto 5-(etilsulfonil)-2- (naftalen-2-il)benzo[d]oxazol y un corticosteroide seleccionado entre prednisona, prednisolona y deflazacort.

Description

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Análisis de músculos

Inmunohistoquímica

Se diseccionaron los tejidos para el seccionado, se sumergieron en OCT (Bright Cryo-M-Bed) y se congelaron sobre isopentano enfriado con nitrógeno líquido. Se cortaron criosecciones de 8 M no fijadas en un criostato de Bright, y se almacenaron a -80 ºC.

Cuando estuvieron listas para la tinción, las secciones se bloquearon en suero de ternero fetal al 5 % en PBS durante 30 min. Los anticuerpos primarios se diluyeron en reactivo de bloqueo y se incubaron sobre las secciones durante 1,5 h en una cámara húmeda, y después se lavaron tres veces durante 5 min en PBS. También se diluyeron los anticuerpos secundarios en reactivo de bloqueo, se incubaron durante 1 h en la oscuridad en una cámara húmeda. Finalmente, las secciones se lavaron tres veces durante 5 min en PBS y el cubreobjetos se montó con Hydromount. Se analizaron los portaobjetos usando un microscopio fluorescente Leica.

Resultados

La actividad biológica se evalúa usando el ensayo de indicador luciferasa en células H2K murinas, y se clasifica como se indica a continuación:

+ Hasta un 200 % con respecto a control ++ Entre el 201 % y el 300 % con respecto a control +++ Entre el 301 % y el 400 % con respecto a control ++++ Por encima del 401 % con respecto a control

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Método 1B (Compuestos I)

2-Bencil-5-nitrobenzo[d]oxazol

A 2-amino-4-nitrofenol (300 mg, 1,95 mmol) en dioxano (2,5 ml) se le añadió cloruro de 2-fenilacetilo (290 µl, 2,15 mmol) a temperatura ambiente. El recipiente de reacción se calentó en el microondas a 210 ºC durante 15 min. Después de la refrigeración, la mezcla se vertió lentamente en hidróxido sódico acuoso 1 M (50 ml), y el precipitado resultante se filtró y se lavó con agua. El sólido resultante se purificó por cromatografía en columna eluyendo usando un gradiente (acetato de etilo/hexanos, 1:7 v/v a acetato de etilo/hexanos, 1:5 v/v) para proporcionar 165 mg (33 %) del compuesto del título (TR de LCMS = 6,47 min, MH+ 255,2) 1H NMR (DMSO): 8,60 (1 H, d, J 2,4 Hz), 8,30 (1 H, dd, J 9,0 2,4 Hz), 7,95 (1 H, d, J 9,0 Hz), 7,43-7,27 (5H, m), 4,44 (2H, s)

El compuesto que se indica a continuación se preparó siguiendo el mismo método general. El cloruro de ácido usado era un compuesto disponible en el mercado o se sintetizó a partir del ácido carboxílico correspondiente usando condiciones estándar.

5-(Etilsulfonil)-2-(naftalen-2-il)benzo[d]oxazol

TR de LCMS = 6,94 min, MH+ 338,1; 1H NMR (DMSO): 8,90 (1 H, a), 8,34 (1 H, d, J 1,4 Hz), 8,30 (1 H, dd, J 8,6 1,7 Hz), 8,24-8,05 (4H, m), 7,99 (1 H, dd, J 8,5 1,8 Hz), 7,73-7,64 (2H, m), 3,41 (2H, c, J 7,3 Hz), 1,15 (3H, t, J 7,3 Hz)

Efecto sinérgico de combinaciones con prednisona

El efecto de las combinaciones del compuesto 5-(etilsulfonil)-2-(naftalen-2-il)benzo[d]oxazol con un corticosteroide (prednisolona) se examinó midiendo la fatiga inducida por un régimen de ejercicio forzado en ratones mdx.

Se obligó a ratones mdx machos de cuatro a cinco semanas de edad a hacer ejercicio (30 min de carrera en cinta andadora horizontal a 12 m/min dos veces a la semana el mismo día y a la misma hora) durante un transcurso de tratamiento de cinco semanas. Cada grupo de tratamiento incluía 6 ratones.

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Claims (1)

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