KR101194995B1 - 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물 - Google Patents

신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101194995B1
KR101194995B1 KR1020090097622A KR20090097622A KR101194995B1 KR 101194995 B1 KR101194995 B1 KR 101194995B1 KR 1020090097622 A KR1020090097622 A KR 1020090097622A KR 20090097622 A KR20090097622 A KR 20090097622A KR 101194995 B1 KR101194995 B1 KR 101194995B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
phenyl
benzo
formula
imidazol
benzimidazole
Prior art date
Application number
KR1020090097622A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20110040384A (ko
Inventor
한철규
윤정혁
김남두
정윤성
김승용
전하아린
김종우
이상욱
박상진
신중철
양재원
Original Assignee
주식회사 이큐스앤자루
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 이큐스앤자루 filed Critical 주식회사 이큐스앤자루
Priority to KR1020090097622A priority Critical patent/KR101194995B1/ko
Publication of KR20110040384A publication Critical patent/KR20110040384A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101194995B1 publication Critical patent/KR101194995B1/ko

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/08Radicals containing only hydrogen and carbon atoms
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/52Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D263/54Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles
    • C07D263/56Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/10Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물에 관한 것으로, 상기 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체는 C형 간염 바이러스(HCV)의 증식을 억제하는 효과가 우수하고 독성도 적으므로, C형 간염의 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다.
[화학식 1]
Figure 112009062898848-pat00001
(상기 화학식 1에서, R1~R6, X 및 Y는 본 명세서에 정의한 바와 같다.)
항바이러스제, HCV, NS5B 중합효소

Description

신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물{Novel 4-phenyl-benzimidazole or 4-phenyl-benzoxazole derivates or pharmaceutically acceptable salts thereof, preparation method thereof and pharmaceutical compositions for antivirus containing the same as an active gredient}
본 발명은 C형 간염 바이러스의 증식억제 효과를 갖는 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물에 관한 것이다.
C형 간염 바이러스 (HCV)는 플라비바이러스(flavivirus)에 속하는 바이러스로서 1989년 그 유전자의 일부가 동정되기까지 비A형, 비B형 간염의 주요 병원균으로 알려졌다. HCV는 만성간염, 간경변과 간암을 일으킨다. 최근의 보고에 의하 면, 전 세계적으로 약 2억 명 이상이 HCV에 감염 되어 있는 것으로 알려져 있다.
HCV는 약 9.6 kb의 (+)-sense single strand RNA를 게놈으로 이루어져 있으며, 한 개의 다단백질(poly-protein)로부터 약 10종의 구조/비구조(structural/ non-structural) 단백질을 만든다.
HCV 게놈은 IRES(internal ribosome entry site)가 속해 있는 5'-말단의 비해독 부위(NCR, non-coding region), 구조 및 비구조 단백질을 암호화하는 ORF(Open Reading Frame), 그리고 3'-말단의 비해독 부위로 구성되어 있다. 바이러스 게놈의 아미노 말단은 바이러스 구조 단백질인 중심 항원 유전자(Core), E1 및 E2를 만들고, 나머지 부위는 비구조 단백질을 만들게 된다. 중심 항원 유전자는 바이러스의 캡시이드(Capsid) 단백질, E1과 E2는 바이러스의 외피 단백질로 되어 있고, 이들 단백질은 내형질쇄막(endoplasmic reticulum)에 있는 신호 펩티드 분해효소(signal peptidase)에 의해 분리된다. 비구조 단백질은 세린 단백질 분해효소(serine protease)인 NS3와 보조인자(cofactor)인 NS4A에 의해 분리된다. NS5B는 RNA-의존적인 RNA 중합효소(RNA-dependent RNA polymerase)의 기능을 갖고 있으며 바이러스 복제에 가장 중요한 효소이다.
HCV에 의한 감염은 수혈 및 지역 특이적 감염(community-acquired)에 의해 일어나고, 신장 투석에 의해 약 70% 정도가 감염된다는 보고가 있다. HCV에 감염이 되면 약 20% 정도가 5년 내에 간경화를 수반한 급성 간염을 일으키게 되고 간암으로 전이되는 것으로 알려져 있다(참고문헌: Davis et al, New. Engl. J. Med., 321, 1501, 1989; Alter et al, in Current Pespective in Hepatology, p83, 1989). 이러한 높은 만성 감염율은 RNA 바이러스에서 보기 드문 일로서 HCV가 높은 비율의 간암을 일으키는 매개체임을 보여주고 있다. 최근에는 모든 혈액에 대해서 HCV 검사가 잘 이루어지고 있어 수혈로 인한 감염은 현저히 줄어들었지만, 지역 특이적 감염은 아직 조절할 수가 없어 전 세계적으로 중요한 문제점으로 대두되고 있다.
역학적으로 볼 때 HCV는 B형 간염 바이러스(Hepatitis B virus; HBV)와 달리 전 세계에 골고루 분포되어 있고 전 세계 인구의 1.5~2%가 감염된 것으로 보고되고 있다. HCV에 감염되면 만성 간염으로 진행되는 것이 특징인데 간경화 및 간암으로 전이되는 확률이 B형보다 상당히 높다. C형은 분류학적으로도 B형과는 전혀 다른 바이러스과에 속하기 때문에 B형 백신으로는 예방이 불가능하며 알파-인터페론(α-IFN)으로 치료를 시도하고 있으나, 유전형에 따라 반응이 현저히 다르고 효과가 극히 미약하다. 특히 많은 수가 감염되어 있는 유전형 1b(genotype 1b)의 경우에는 알파-인터페론 치료 효과가 가장 미약하다.
HCV는 1989년 처음으로 클로닝에 의해 RNA 게놈(genome)이 분리된 이후 많은 연구가 수행되었지만, 아직까지 효과적인 치료제는 개발되지 못하고 있다. 현재 HCV 감염에 대한 치료제로서 인터페론과 항바이러스제인 리바비린(ribavirin) 병용요법이 사용되고 있지만, 치료율이 낮고 부작용이 나타나므로 그 효과가 미미한 실정이다. 따라서 HCV 감염의 치료 및 예방을 위한 추가 화합물들이 요구되고 있다.
이에 본 발명자들은 부작용 및 독성이 적고, HCV에 대해 우수한 항바이러스 활성을 나타내는 화합물을 개발하기 위하여 노력한 결과, 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체에서 HCV 증식 억제 효과가 우수함을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 C형 간염 바이러스(HCV)에 대하여 우수한 저해활성을 갖는 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체의 제조방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112009062898848-pat00002
(상기 화학식 1에서, R1~R6, X 및 Y는 본 명세서에 정의한 바와 같다.)
본 발명에 따른 신규 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체는 C형 간염 바이러스(HCV)의 증식을 억제하는 효과가 우수하고 독성도 적으므로, C형 간염의 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체를 제공한다.
Figure 112009062898848-pat00003
(상기 화학식 1에서,
X는 산소 또는 -NH이고,
Y는 카르보닐 또는 설포닐이고,
R1~R5는 각각 수소 또는 할로겐이고,
R6는 C5~C12 아릴, C5~C12 헤테로아릴, C5~C8 사이클로알킬 및 C5~C8 헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
이때, 상기 아릴은 비치환되거나, 1 이상의 할로겐, 나이트로, 메틸, 트리플루오로메틸, C1~C4 알콕시 카르보닐기로 치환되거나, 산소 또는 질소를 1~2개 포함하는 C5~C8 헤테로사이클로알킬 치환기를 가질 수 있으며,
헤테로아릴인 경우에는 1~2개의 산소 또는 질소를 포함하는 모노 또는 바이사이클릭 헤테로아릴고리를 가질 수 있고, 이 헤테로아릴고리는 비치환 또는 할로겐, 아릴, 나이트로, C1~C4의 직쇄 또는 측쇄상 알킬기, C3~C6 사이클로알킬 치환기를 가질 수 있으며,
헤테로사이클로알킬인 경우에는 1~2개의 산소 또는 질소를 포함하거나, 치환체로는 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C4 알콕시 카르보닐을 포함한다.)
바람직하게는
상기 X는 산소 또는 -NH이고,
상기 Y는 카르보닐 또는 설포닐이고,
상기 R1~R5는 각각 수소 또는 플루오린이고,
상기 R6는 비치환되거나, 플루오로, 클로로, 나이트로, 메틸, 트리플루오로 메틸, 메톡시 카르보닐, t-부톡시 카르보닐, 모폴리노 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 페닐, 피라졸, 이소옥사졸, 퓨란, 벤조퓨란, 피리딘, 피페리딘, 사이클로헥산 또는 퀴놀린이다.
본 발명의 신규 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 중 바람직한 화합물은 구체적으로 하기와 같다.
(1) 3-모폴리노-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-5-(트리플루오로메틸)벤즈아마이드;
(2) 5-메틸-2-페닐-퓨란-3-카르복실산(2-페닐-1H-벤조이미다졸-5-일)-아마이드;
(3) N-(2-페닐-1H-벤조이미다졸-5-일)-이소니코틴아마이드;
(4) 3,4-디플루오로-N-(2-페닐-1H-벤조이미다졸-5-일)벤즈아마이드;
(5) 5-사이클로프로필-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)이소옥사졸-3-카르복사아마이드;
(6) 1-메틸-4-니트로-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-1H-피라졸-5-카르복사아마이드;
(7) N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)이소옥사졸-5-카르복사아마이드;
(8) 1-메틸-4-니트로-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-1H-피라졸-3-카르복사아마이드;
(9) 2,7-디메틸-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)퀴놀린-3-카르복사아마 이드;
(10) 3-니트로-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)벤젠설폰아마이드;
(11) N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)벤조퓨란-2-설폰아마이드;
(12) N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-3,5-디메틸이속사졸-4-카르보사아마이드;
(13) t-부틸-4-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일카바모일)피페리딘-1-카복실레이트;
(14) 4,6-디클로로-N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-1H-인돌-2-카르복사마아이드;
(15) N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-1-메틸-4-니트로-1H-피라졸-5-카르복사아마이드;
(16) N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)퓨란-2-카르복사아마이드;
(17) N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)퓨란-2-설폰아마이드;
(18) N-(2-(2,3-디플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-1-메틸-4-니트로-1H-피라졸-5-카르복사아마이드;
(19) N-(2-페닐벤조[d]옥사졸-6-일)사이클로헥산카르복사아마이드; 및
(20) 4-(2-페닐벤조[d]옥사졸-6-일카바모일)페닐아세테이트.
하기 표에는 본 발명에 따른 화학식 1의 신규 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2- 페닐-벤즈옥사졸 유도체의 구조를 정리하여 나타내었다.
화합물 구조


1
Figure 112009062898848-pat00004


2
Figure 112009062898848-pat00005


3
Figure 112009062898848-pat00006


4
Figure 112009062898848-pat00007


5
Figure 112009062898848-pat00008


6
Figure 112009062898848-pat00009


7
Figure 112009062898848-pat00010


8
Figure 112009062898848-pat00011


9
Figure 112009062898848-pat00012


10
Figure 112009062898848-pat00013


11
Figure 112009062898848-pat00014


12
Figure 112009062898848-pat00015


13
Figure 112009062898848-pat00016


14
Figure 112009062898848-pat00017


15
Figure 112009062898848-pat00018


16
Figure 112009062898848-pat00019


17
Figure 112009062898848-pat00020


18
Figure 112009062898848-pat00021


19
Figure 112009062898848-pat00022


20
Figure 112009062898848-pat00023
상기 화학식 1로 표시되는 본 발명의 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 유리산으로는 무기산과 유기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 시트르산, 아세트산, 락트산, 말레산, 푸마린산, 글루콘산, 메탄설폰산, 글리콘산, 숙신산, 타타르산, 4-톨루엔술폰산, 갈룩투론산, 엠본산, 글루탐산 또는 아스파르트산 등을 사용할 수 있다. 바람직하게는 무기산으로는 염산, 유기산으로는 메탄설폰산을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체는 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 화합물을 수혼화성 유기용매, 예를 들면 아세톤, 메탄올, 에탄올, 또는 아세토니트릴 등에 녹이고 과량의 유기산을 가하거나 무기산의 산 수용액을 가한 후 침전시키거나 결정화시켜서 제조할 수 있다. 이어서 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시킨 후 건조시켜서 부가염을 얻거나 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 표시되는 바와 같이,
화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물을 용매 하에서 커플링 반응시켜 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체의 제조방법을 제공한다.
Figure 112009062898848-pat00024
(상기 반응식 1에서, R1~R6, X 및 Y는 화학식 1에서 정의한 바와 같고, Z는 할로겐 또는 OH이다.)
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 사용되는 화학식 2의 화합물은 X가 NH인 경우(2a), 하기 반응식 2에 표시되는 바와 같이,
화학식 4의 4-나이트로-1,2-디아민과 상기 화학식 5의 벤즈알데히드 유도체를 반응시켜 상기 화학식 6의 6-나이트로-2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸 유도체를 합성하는 단계(단계 a); 및
상기 단계 a에서 제조된 화학식 6의 6-나이트로-2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸 유도체를 환원하여 화학식 2a의 6-아미노-2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸 유도체를 제조하는 단계(단계 b)에 의하여 얻을 수 있다.
Figure 112009062898848-pat00025
(상기 반응식 2에서, R1~R5는 화학식 1에서 정의한 바와 같고, 화학식 2a는 화학식 2에 포함된다.)
구체적으로 상기 반응식 2의 단계 a에서, 상기 화학식 6의 화합물은 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란 및 다이옥산과 같은 일반적인 유기용매의 단독 또는 혼합 용매 내에서 상업적으로 시판되는 화학식 4의 4-나이트로-1,2-디아민과 화학식 5의 벤즈알데히드 유도체에 적당량의 과산화수소수 및 염산을 첨가함으로써 용이하게 제조할 수 있다. 이때, 반응 온도 및 반응 시간은 상기 화학식 5의 벤즈알데히드 유도체의 화학적 반응성과 용매의 종류에 따라 60~100 ℃의 온도 범위 내에서 1시간 내지 24시간 동안 수행하는 것이 바람직하다.
다음으로, 상기 단계 b에서 상기 화학식 2a의 화합물은 상기 단계 a에서 제조한 화학식 6의 6-나이트로-2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸 유도체를 메탄올 또는 에 탄올의 단독 또는 혼합 용매를 사용하고 팔라듐 촉매 수소 조건 하에서 반응시킴으로써 용이하게 제조할 수 있다. 이때, 반응 온도 및 반응 시간은 화학식 6의 유도체의 화학적 반응성과 용매의 종류에 따라서 25 ~ 50℃의 온도 범위 내에서 1시간 내지 24시간 동안 수행하는 것이 바람직하다.
만일, X가 산소인 경우의 화학식 2의 화합물(2b, 미도시) 및 화학식 3의 화합물은 상업적으로 시판되는 물질로서 용이하게 구입하여 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 반응식 1에서 사용되는 용매로는 디메틸포름아마이드, 메틸렌클로라이드 등을 사용할 수 있으며, 상기 반응식 1의 반응은 당해 기술 분야에 속하는 통상의 지식을 가진 자라면 용이하게 수행할 수 있다.
상기와 같이 본 발명에 따라 제조된 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체는 제조 후, 적외선 분광법, 핵자기 공명 스펙트럼, 질량 분광법, 액체 크로마토그래피법, X-선 구조결정법, 선광도 측정법 및 대표적인 화합물의 원소분석 계산치와 실측치의 비교에 의해 분자구조를 확인할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학 적 조성물을 제공한다.
구체적으로 본 발명은 상기 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 화학식 1의 유도체 및 이의 약학적으로 허용가능함 염은 생체외(in vitro) 실험에서 HCV RNA 중합효소에 대하여 우수한 저해활성을 나타내었다(표 2 참조).
또한, 본 발명에 따른 화학식 1의 유도체 및 이의 약학적으로 허용가능함 염은 생체외(in vitro) 실험에서 HCV RNA 레플리콘에 대하여 우수한 저해활성을 나타내었다(표 3 참조).
따라서, 본 발명에 따른 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체는 C형 간염을 유발시키는 HCV RNA 중합효소 및 HCV RNA 레플리콘에 대하여 우수한 저해활성을 나타내므로 C형 간염의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 또는 젤라틴 등 을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 ㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1 ~ 1,000 ㎎/일이고, 바람직하게는 1 ~ 500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
< 제조예 1> 5-나이트로-2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸의 제조
Figure 112009062898848-pat00026
4-나이트로벤젠-1,2-디아민(5 g, 32.65 mmol)과 벤즈알데하이드(3.46 g, 32.65 mmol)를 아세토나이트릴(150 ㎖)에 녹이고 aq. 30% 과산화수소(7.77 g, 228.55 mmol)와 aq. 37% 염산(4.17 g, 114.28 mmol)을 가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 이후 물(100 ㎖)을 넣어 반응을 완결시킨 후, 에틸아세테이트(4×100 ㎖)로 추출을 하고 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 얻은 물질을 에틸아세테이트와 헥산을 이용하여 재결정을 하여 표제 화합물(4.95 g, 수율: 63.4%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 8.41 (s, 1H), 8.21 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.13 (d, J = 8.8Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.59 (m, 4H).
< 제조예 2> 2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -6- 아민의 제조
Figure 112009062898848-pat00027
상기 제조예 1에서 합성한 5-나이트로-2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸(4.95 g, 20.69 mmol)과 10% 팔라듐 카본 0.5 g을 메탄올 50 ㎖에 녹인 후 수소 조건 하에서 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완결 후 셀라이트로 여과를 하여 얻은 물 질을 감압 증류하고, 에틸아세테이트와 헥산으로 재결정을 하여 표제 화합물(3.8 g. 수율 : 87.8 %)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 12.23 (s, 1H), 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 (t, 2H), 7.40 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.94 (s, 2H).
< 실시예 1> 3- 모폴리노 -N-(2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -6-일)-5-( 트리플루오로메틸 ) 벤즈아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00028
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(16.7 ㎎, 0.044 mmol)과 3-몰포린-4-일-5-트리플루오로메틸 벤조산(10 ㎎, 0.036 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(7.5 ㎎ 0.036 mmol), 트리에틸아민(7.7 ㎕, 0.044 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하고 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제 화합물(4.1 ㎎, 수율: 24.4%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 8.4 (brs, 1H), 8.19 (brs, 1H), 7.99 (m, 2H), 7.59(brs, 2H), 7.50 (brs, 1H), 7.39 (m, 3H), 7.21 (brs, 1H), 3.82 (brs, 4H), 3.19 (brs, 4H).
< 실시예 2> 5- 메틸 -2- 페닐 - 퓨란 -3- 카르복실산- (2- 페닐 -1H- 벤조이미다졸 -5-일)-아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00029
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 5-메틸-2-페닐-퓨란-3-카르보닐클로라이드(11 ㎎, 0.05 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(11 ㎎, 0.05 mmol), 트리에틸아민(8.3 ㎕, 0.06 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하고 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제 화합물(7.2 ㎎, 수율: 36.6%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 8.52 (s, 1H), 7.99 (m, 2H), 7.81 (m, 3H), 7.65 (m, 1H), 7.4 (m, 4H), 6.6 (m, 1H), 6.43 (brs, 1H), 2.35 (s, 3H).
< 실시예 3> N-(2- 페닐 -1H- 벤조이미다졸 -5-일)- 이소니코틴아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00030
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 이소니코티노일클로라이드(10 ㎎, 0.056 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(11.7 ㎎, 0.056 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 세척하고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(5.6 ㎎, 수율: 31.8%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 8.2 (brs, 1H), 8.1 (m, 1H), 8.0 (m, 1H), 7.67 (m, 1H), 7.48 (m, 1H), 6.95 (brs, 1H), 6.8 (m, 1H).
< 실시예 4> 3,4- 디플루오로 -N-(2- 페닐 -1H- 벤조이미다졸 -5-일) 벤즈아마이드
Figure 112009062898848-pat00031
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(22 ㎎, 0.058 mmol), 3,4-디플루오로 벤조산(10 ㎎, 0.063 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(13.2 ㎎, 0.063 mmol), 트리에틸아민(10.1 ㎕, 0.073 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산(10 ㎖), 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 세척하고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제 화합물(5.9 ㎎, 수율: 26.8%)을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3, 400 MHz): δ = 8.15 (m, 3H), 7.93 (m, 2H), 7.55 - 7.45 (m, 6H).
< 실시예 5> 5-사이클로 프로필 -N-(2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일) 이소옥사졸 -3-카 르복사아마이드 의 제조
Figure 112009062898848-pat00032
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(22 ㎎, 0.057 mmol), 5-사이클로프로필이소옥사졸-3-카르복실산(7.4 ㎎, 0.048 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.048 mmol), 트리에틸아민(8 ㎕, 0.057 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 목적물(6.1 ㎎, 수율: 36.9%)을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3, 400 MHz): δ = 8.19 (s, 1H), 8.10 (m, 1H), 7.61 (m, 5 H), 6.5 (s, 1H), 2.22 (m, 1H), 1.2 (m, 2H), 1.04 (m, 2H).
< 실시예 6> 1- 메틸 -4-나이트로-N-(2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일)-1H- 피라졸 -5- 카복사아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00033
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(21.8 ㎎, 0.057 mmol), 1-메틸-4-나이트로-5-피라졸카르복실산(8.2 ㎎, 0.048 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.048 mmol), 트리에틸아민(8 ㎕, 0.057 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산(10 ㎖), 포화탄화수소나트륨(10 ㎖)과 포화염화나트륨(10 ㎖)으로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(4.3 ㎎, 수율: 24.7%)을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3, 400 MHz): δ = 8.23 (brs, 1H), 8.19 (brs, 1H), 8.12 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.63 (m, 1H), 7.57 (d, J = 7.6Hz, 3H), 7.44 (m, 1H), 4.14 (s, 3H).
< 실시예 7> N-(2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일) 이소옥사졸 -5- 카복사아마이 드의 제조
Figure 112009062898848-pat00034
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(21.8 ㎎, 0.057 mmol), 이소옥사졸-5-카르복실산(5.4 ㎎, 0.048 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.048 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(10 ㎕, 0.057 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(4.8 ㎎, 수율: 32.9%)을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3,, 400 MHz): δ = 8.78 (s, 1H), 8.53 (m, 1H), 8.21 (s, 1 H), 8.10 (m, 2H), 7.59 - 7.45 (m, 4H), 6.59 (s, 1H).
< 실시예 8> 1- 메틸 -4-나이트로-N-(2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -6-일)-1H- 피라졸 -3- 카복사아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00035
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(21.8 ㎎, 0.057 mmol), 1-메틸-4-나이트로-3- 피라졸카르복실산(8.2 ㎎, 0.048 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.048 mmol), 트리에틸아민(8 ㎕, 0.057 mmol)을 넣고 8시간 교반하였다. 반응완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제 화합물을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3, 400 MHz): δ = 8.23 (brs, 1H), 8.19 (brs, 1H), 8.12 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.63 (m, 1H), 7.57 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 7.44 (m, 1H), 4.14 (s, 3H).
< 실시예 9> 2,7-디메틸-N-(2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일)퀴놀린-3- 카르복사아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00036
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(13.3 ㎎, 0.035 mmol), 2,7-디메틸퀴놀린-3-카르복실산(5.8 ㎎, 0.029 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(6 ㎎, 0.029 mmol), 트리에틸아민(5 ㎕, 0.035 mmol)을 넣고 10시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산(10 ㎖), 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(4.8 ㎎, 수율: 42.2%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 8.28 (brs, 1H), 8.05 (m, 2H), 7.86 (m, 2H), 7.75 (m, 2H), 7.53 (m, 4H), 7.42 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.60 (s, 3H).
< 실시예 10> 3-나이트로-N-(2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일) 벤젠설폰아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00037
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 3-나이트로벤젠-1-설포닐클로라이드(10.6 ㎎, 0.048 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.048 mmol), 트리에틸아민(8 ㎕, 0.057 mmole)을 넣고 6시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(10.1 ㎎, 수율: 53.4%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz): δ = 8.54 (m, 1H), 8.43 (m, 1H), 8.26 (m, 3 H), 7.98 (t, 1H), 7.51 (m, 4H), 6.92 (s, 1H), 6.35 (m, 1H).
< 실시예 11> N-(2- 페닐 -1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일) 벤조퓨란 -2- 설폰아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00038
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 벤조퓨란-2-설포닐클로라이드(10.4 ㎎, 0.048 mmol), 페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.048 mmol), 트리에틸아민(8 ㎕, 0.057 mmol)을 넣고 10시간 동안 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(9.3 ㎎, 수율: 49.8%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 8.15 (m, 2H), 7.89 (m, 1H), 7.76 (m, 1 H), 7.51 (m, 3H), 7.33 (m, 3H), 6.87 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.42 (m, 1H).
< 실시예 12> N-(2-(4- 플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일)-3,5- 디메틸이속사졸 -4- 카르보사아마이드의 제조
(1) 2-(4- 플루오로페닐 )-6-나이트로-1H- 벤조[d]이미다졸의 제조
Figure 112009062898848-pat00039
4-나이트로-O-페닐렌다이아민(1 g, 6.53 mmol)과 4-플루오로벤즈알데하이드(0.81 g, 6.53 mmol)를 아세토니트릴 75 ㎖에 녹이고 aq. 30% 과산화수소수(1.55 g, 45.71 mmol)와 aq. 37% 염산(0.83 g, 22.86 mmol)을 가하고 상온에서 3시간 동 안 교반하였다. 반응 완결 후 증류수 물 100 ㎖을 넣어 반응을 완결하였다. 에틸아세테이트(4×100 ㎖)로 추출을 하고 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하고 에틸아세테이트와 헥산 혼합용매를 사용하여 결정화하여 표제 화합물(0.99 g,수율: 59 %)을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3, 400 MHz): δ = 8.25 (m, 4H), 7.48 (m, 1H), 7.37 (m, 2 H).
(2) 2-(4- 플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -6- 아민의 제조
Figure 112009062898848-pat00040
5-나이트로-2-페닐-1H-벤질[d]이미다졸(991 ㎎, 3.88 mmol)과 10% 팔라듐 카본(0.1 g)을 메탄올 20 ㎖에 넣고 수소 조건하에서 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완결 후 셀라이트로 여과를 하여 얻은 물질을 감압 증류하고 에틸아세테이트와 헥산을 이용하여 재결정을 하여 표제 화합물(348 ㎎, 수율: 39.8%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 12.31 (s, 1H), 7.57 (m, 2H), 7.25 (m, 3 H), 6.62 (s, 1H), 6.51 (m, 1H), 4.95 (s, 2H).
(3) N-(2-(4- 플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일)-3,5- 디메틸이속사졸 - 4-카 르보사아마이드 의 제조
Figure 112009062898848-pat00041
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(20 ㎎, 0.053 mmol), 3,5-디메일이속사졸-4-카르복실산(6.6 ㎎, 0.044 mmol), 플루오로페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.044 mmol), 트리에틸아민(7.4 ㎕, 0.053 mmol)을 넣고 16시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖ 로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(5.3 ㎎, 수율: 34.4%)을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3, 400 MHz): δ = 8.13 (m, 3H), 7.58 (brs, 1H), 7.31 (m, 3 H), 2.60 (m, 3H), 2.41 (m, 3H).
< 실시예 13> t-부틸-4-(2-(4- 플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -5- 일카바모일 )피페리딘-1- 카복실레이트의 제조
Figure 112009062898848-pat00042
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메 틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(20.3 ㎎, 0.053 mmol), 이소옥사졸-5-카르복실산(10.2 ㎎, 0.044 mmol), 플루오로페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.044 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(9.3 ㎕, 0.053 mmol)을 넣고 14시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(8.5 ㎎, 수율: 44.1%)을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3, 400 MHz): δ = 8.11 (m, 3H), 7.54 (m, 1H), 7.29 (m, 2 H), 3.39 (m, 4H), 2.63 (m, 1H), 1.97 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.29 (s, 9H).
< 실시예 14> 4,6- 다이클로로 -N-(2-(4-플루오로 페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일)-1H-인돌-2- 카복사마아이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00043
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 4,6-다이클로로-1H-인돌-2-카보닐클로라이드(22.1 ㎎, 0.089 mmol), 플루오로페닐벤조이미다졸 아민(20 ㎎, 0.089 mmol)을 넣고 15시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무 수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(15.8 ㎎, 수율: 40.4%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 12.35 (s, 1H), 10.71 (s, 1H), 8.46 (s, 1 H), 8.31 (t, 2H), 7.81 (t, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.58 (t, 2H), 7.48 (s, 1H), 7.29 (s, 1H).
< 실시예 15> N-(2-(4-플루오로 페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일)-1- 메틸 -4-나이트로-1H- 피라졸 -5- 카복사아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00044
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 N-하이드록시벤조트리아졸(9.5 ㎎, 0.07 mmol), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드 하이드로클로라이드(13.4 ㎎, 0.07 mmol), 1-메틸-4-나이트로-5-피라졸카르복실산(10 ㎎, 0.058 mmol), 플루오로페닐벤조이미다졸 아민(13.2 ㎎, 0.058 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(12.2 ㎕, 0.07 mmol)을 넣고 13시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 (10 ㎖), 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(7.6 ㎎, 수율: 34.5%)을 얻었다.
1H NMR (MeOH-d3, 400 MHz): δ = 8.25 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.14 (m, 2H), 7.63 (m, 1H), 7.32 (m, 3H), 4.03 (s, 3H).
< 실시예 16> N-(2-(4- 플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일) 퓨란 -2- 카복사아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00045
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 퓨란-2-카보닐클로라이드(5.8 ㎎, 0.044 mmol), 플루오로페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.044 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(4.7 ㎎, 수율: 33.2%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 10.12 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.23 (m, 2H), 7.53 (m, 2H), 7.29 (m, 3 ), 6.70 (m, 1H).
< 실시예 17> N-(2-(4- 플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -5-일) 퓨란 -2- 설폰아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00046
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 퓨란-2-설포닐클로라이드(7.48 ㎎, 0.044 mmol), 플루오로페닐벤조이미다졸 아민(10 ㎎, 0.044 mmol), 트리에틸아민(8 ㎕, 0.053 mmol)을 넣고 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(6.8 ㎎, 수율: 43.2%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 8.21 (m, 3H), 7.42 (m, 3H), 6.98 (s, 1H), 6.83 (m, 2H), 5.74 (s, 1H).
< 실시예 18> N-(2-(2,3- 다이플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -6-일)-1- 메틸 -4-나이트로-1H- 피라졸 -5- 카복사아마이드의 제조
(1) 2-(2,3- 다이플루오로페닐 )-6-나이트로-1H- 벤조[d]이미다졸의 제조
Figure 112009062898848-pat00047
4-나이트로-O-페닐렌다이아민(0.3 g, 2.1 mmol)과 2,3-다이플루오로벤즈알데하이드(0.3 g, 2.1 mmol)를 아세토나이트릴 3 ㎖에 녹이고 30% 과산화수소수 26 ㎖와 aq. 37% 염산 16 ㎖을 가하고 환류하여 3시간 동안 교반하였다. 반응 완결 후 물 10 ㎖을 넣어 반응을 종료하였다. 에틸아세테이트(4×20 ㎖)로 추출을 하고 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 얻은 물질을 에틸에테르로 정제하여 표제화합물(580 ㎎, 수율: 100%)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ : 7.43 - 7.48 (m, 2H), 7.65 - 7.77 (m, 2 H), 7.83 - 7.86 (m, 2H), 8.03 - 8.07 (m, 2H), 8.17 - 8.21 (m, 2H), 8.26 (d, J = 2 Hz, 2H).
(2) 2-(2,3- 다이플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -6- 아민의 제조
Figure 112009062898848-pat00048
2-(2,3-다이플루오로페닐)-6-나이트로-1H-벤조[d]이미다졸(0.1 g, 0.42 mmol)과 팔라듐 카본 0.01 g을 메탄올에 녹이고 수소가스 분위기 및 상온에서 2시간 교반하였다. 반응 후 셀라이트로 여과를 하여 얻은 물질을 감압 증류하여 얻은 목적물을 정제 없이 다음 반응을 진행시켰다.
(3) N-(2-(2,3- 다이플루오로페닐 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -6-일)-1- 메틸 -4-나이트로-1H- 피라졸 -5- 카복사아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00049
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(45.6 ㎎, 0.12 mmol), 1-메틸-4-나이트로-5-피라졸카르복실산(10 ㎎, 0.07 mmol), 2-(2,3-다이플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-6-아민(30 ㎎, 0.1 mmol), 트리에틸아민(12.1 ㎕, 0.12 mmol)을 가한 후 상온에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 이후 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 표제화합물(8 ㎎, 수율: 21%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ : 4.27 (s, 3H), 7.03 - 7.71 (m, 5H), 8.03 - 8.26 (m, 3H), 10.52 (s, 1H).
< 실시예 19> N-(2- 페닐벤조[d]옥사졸 -6-일)사이클로 헥산카복사아마이드의 제조
Figure 112009062898848-pat00050
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 사이클로헥산 카르보닐클로라이드(15 ㎎, 0.1 mmol), 2-페닐벤조옥사졸-6-일 아민(21 ㎎, 0.1 mmol), 트리에틸아민(17 ㎕, 0.12 mmol)을 넣고 상온에서 9시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 이후 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 크로마토그래피로 분리하여 표제 화합물을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 7.97 (brs, 3H), 7.85 (brs, 1 H), 7.50 (brs, 1 H), 7.38 (brs, 3H), 6.98 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 1.98 - 1.25 (m, 9H).
< 실시예 20> 4-(2- 페닐벤조[d]옥사졸 -6- 일카바모일 ) 페닐 아세테이트의 제조
Figure 112009062898848-pat00051
디메틸포름아마이드 1.5 ㎖에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로니움 헥사플루오로포스페이트(45.6 ㎎, 0.12 mmol), 4-아세톡시벤조산(18 ㎎, 0.1 mmol), 2-페닐벤조옥사졸-6-일 아민(21 ㎎, 0.1 mmol), 트리에틸아민(17 ㎕, 0.12 mmol)을 넣고 15시간 교반하였다. 반응 완결 후 1N-염산 10 ㎖, 포화탄화수소나트륨 10 ㎖와 포화염화나트륨 10 ㎖로 씻어주고 에틸아세테이트(3×10 ㎖)로 추출하였다. 무수황산나트륨으로 건조한 후 감압 증류하여 크로마토그래피로 분리하여 목적물을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 7.97 (brs, 3H), 7.85 (brs, 1H), 7.50 (brs, 1H), 7.38 (brs, 3H), 6.98 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 1.98 - 1.25 (m, 9H).
< 실험예 1> HCV RNA 중합효소( RNA 의존형 RNA 중합효소, NS5B )에 대한 생체외( in vitro ) 저해활성 조사
본 발명의 화합물들의 HCV RNA 의존형 RNA 중합효소에 대한 활성 저해 효과를 알아보기 위하여 다음과 같은 생체외 실험을 실시하였다.
(1) 재조합 HCV RNA 중합효소 제조
HCV RNA 중합효소는 다음과 같은 방법으로 제조하였다. 먼저, HCV-1b 형 C 형 간염바이러스 환자의 혈액으로부터 HCV의 상보적 DNA(cDNA)를 얻어낸 다음 PCR(polymerase chain reaction)을 이용하여 NS5B(1773bps)부위를 증폭하여 배큘로바이러스 (baculovirus) 전이벡터 pVLHIS에 삽입한 재조합 전이벡터를 제조하였다. 제조된 전이벡터를 wild-type AcNPV 벡터와 함께 곤충세포(Sf 9cell line)에 감염 (co-transfection)시켜 히스티딘 표지(histidine tag)된 재조합 벡터 pVLHIS-NS5B를 가진 재조합 배큘로바이러스를 만들었다. 이와 같이 제조된 재조합 배큘로바이러스를 충분히 배양된 곤충세포에 감염(infection) 하고 10% FBS가 첨가된 Grace's medium에서 3-4일 간 배양한 다음 감염된 세포만을 원심분리 하여 얻어내었다. 얻어진 세포를 PBS로 3차례 세척한 다음 초음파 분해 처리(sonication)하고 Ni-NTA His bind resin(Novagen 사)을 이용한 친화성(affinity) 컬럼크로마토그래피 과정을 거쳐 순수한 NS5B 단백질을 제조하였다. 
 
(2) HCV 3'말단 (3'- UTR )을 포함하는 RNA 주형 ( RNA template ) 제조
HCV 3'-UTR을 포함하는 RNA 주형은 다음과 같은 방법으로 제조하였다. 먼저 C형 간염환자의 혈액으로부터 얻어진 HCV RNA로부터 PCR 방법을 통해 cDNA를 얻어낸 다음 제한효소 Eco RⅠ을 이용하여 3'-UTR의 부위를 포함하는 DNA 절편을 얻어내었다. 이 DNA로부터 시험관내 전사(in vitro transcription) 과정을 거쳐 3'-UTR을 포함하는 RNA를 제조하였다.
(3) 재조합 HCV RNA 중합효소에 대한 본 발명의 화합물들의 생체외 저해활성 측정
본 발명에 사용된 HCV RNA 중합효소에 대한 본 발명의 화합물들의 생체외 저해활성 측정 방법은 다음과 같다. 측정하고자 하는 시료에 맞게 스트렙타비딘(streptavidin)으로 코팅된 웰(well)을 준비하고, 먼저, 각 웰에 2x 반응 완충액 [50mM Tris-Cl (pH 7.5), 100mM NaCl, 10mM MgCl2, 20mM KCl, 1mM EDTA, 1mM DTT]을 25㎕ 씩 가하고, 분리정제 된 HCV RNA 중합효소 200ng을 10㎕ 씩 가한 후, 측정하고자 하는 시험 물질을 최종 농도가 각각 10, 1, 0.1, 0.01 ㎍/㎖ 이 되도록 하여 5㎕ 씩 첨가한 다음, 마지막으로 RNA 주형인 HCV 3'-UTR RNA와 반응을 위한 뉴클레오타이드로서 DIG-(digoxigenin)-UTP, biotin-UTP, ATP, CTP, GTP, UTP가 혼합된 반응 혼합액을 10㎕ 씩 가한 다음, 22 ℃에서 60분간 반응시켰다. HCV 중합효소의 활성에 의해 RNA가 만들어지고 여기에는 바이오틴이 붙어있는 UTP가 포함되어 있으므로 새로운 RNA는 웰에 코팅되어 있는 스트렙타비딘과 결합한다. 반응이 끝난 후 반응하지 않고 남아있는 불순물을 제거하기 위해 각 웰 당 200㎕의 세척 완충액(washing buffer, pH 7.0, Roche 사)을 가한 다음 3차례 반복하여 씻어주었다. 그 다음 2차 항체인 항-DIG-POD(peroxidase, Roche 사)를 100 ㎕씩 가하고 37 ℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 다시 세척 완충액으로 각 웰을 씻어 주었다. 마지막으로 POD의 기질인 ABTSR(Roche 사)를 각각 100 ㎕씩 가하여 15~30분간 반응시킨 다음 ELISA 판독기(Bio-Tek instrument 사)를 이용하여 405 nm에서 흡광도(OD 값)를 측정하였다. 이때 시료를 넣지 않은 대조군(positive control)과의 상대적인 흡광도 차이에 따라 HCV 중합효소에 대한 활성 억제효과를 계산하여 하기 표 2에 나타내었다.
HCV RNA 중합효소에 대한 생체외 ( in vitro ) 저해 활성
구분 IC50 (μM)
실시예 1 2.1
실시예 2 1.7
실시예 3 4
실시예 4 4.3
실시예 5 3.9
실시예 6 0.1
실시예 7 1.5
실시예 8 4.0
실시예 9 3.8
실시예 10 2
실시예 11 1.1
실시예 12 0.2
실시예 13 0.4
실시예 14 0.7
실시예 15 2
실시예 16 0.01
실시예 17 5
실시예 18 0.07
실시예 19 2.5
실시예 20 2.4
표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물들의 HCV RNA 중합효소에 대한 저해활성을 측정한 결과, IC50 값이 0.01 ~ 5 μM로 강력한 HCV 저해활성을 나타내었다. 특히 실시예 6, 12~14, 16 및 18의 화합물은 마이크로몰 농도 이하의 IC50 값을 나타내는 우수한 HCV 저해활성을 나타내었다.
따라서, 본 발명에 따른 화합물들은 C형 간염을 유발시키는 HCV RNA 중합효소에 대하여 우수한 저해활성을 나타내므로, C형 간염의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
< 실험예 2> HCV 레플리콘 ( subgenomic RNA replicon ) 세포주에서 화합물의 HCV RNA 복제 저해활성 조사
본 발명의 화합물들의 HCV 레플리콘에 대한 저해활성을 조사하기 위하여 다음과 같은 실험을 실시하였다.
(1) HCV 레플리콘 세포주 배양
HCV 바이러스 복제를 저해하는 화합물의 탐색은 HCV 레플리콘을 지니고 있는 세포주에 각 화합물을 가한 후 배양하고 이때 발현된 HCV RNA의 발현 정도를 정량적으로 측정하여 그 저해활성을 계산하였다. 본 발명에 사용된 HCV 레플리콘은 HCV-1b 형 C형 간염바이러스 유전자를 이용하였고, HCV IRES, 네오마이신(neomycin) 저항 유전자(resistant gene, neomycin transferase gene), EMCV (encephalomyocarditis virus)의 IRES를 가지는 바이시스트로닉 레플리콘 (bicistronic replicon)이며, HCV 비구조유전자(nonstructural proteins) NS3에서 NS5B, 그리고 HCV 3' 말단(untranslational region)을 포함하는 서열로 구성되어 있다. 이러한 HCV 레플리콘을 포함하는 발현벡터를 시험관내 전사(in vitro transcription) 하여 얻어진 HCV 레플리콘을 Huh-7 세포주 내로 일렉트로포레이션(electroporation) 방법으로 형질전환(transfection) 하였고, Huh-7 세포주 중에서 HCV 레플리콘을 가지는 세포주만을 선별하기 위하여 항생제 G418(500 ㎍/ml)이 첨가된 배지에서 배양하였다. 선별된 세포주는 10% FBS와 비필수 아미노산(nonessential amino acids), 500 ㎍/ml G418이 첨가된 DMEM(Dulbecco's modified Eagles's media) 배지에서 배양하였다.
(2) HCV 레플리콘에 대한 화합물의 저해활성 측정
HCV RNA 레플리콘을 포함하는 Huh-7을 6 웰 플레이트에 약 3 × 105 cells의 농도로 5% CO2 배양기에서 37 ℃로 24시간 동안 배양하여 플레이트 바닥에 세포를 고정하였다. 각각의 웰을 2% FBS와 비필수 아미노산, 500 ㎍/ml G418이 첨가된 DMEM 배지로 갈아준 다음 DMSO로 녹인 실험 화합물을 정해진 농도에 따라 각 웰에 첨가하여 5% CO2 배양기에서 37 ℃로 72시간 동안 배양하였고, 동시에 대조군으로서 동일한 농도의 DMSO(음성 대조군)와 인터페론-α(양성 대조군)를 첨가하여 비교하였다. 배양이 끝나면 각 웰의 배지를 제거하고 1 ㎖의 PBS로 세척한 다음 250 ㎕의 트립신/EDTA를 첨가하여 플레이트로부터 세포를 분리하고 다시 PBS로 세척하여 배지성분을 제거한 세포를 회수하였다. 여기서 얻어진 세포로부터 SV total RNA isolation system(Promega corporation)을 이용하여 total RNA를 분리하였고 GeneQuant pro(Amersham bioscience)를 이용하여 RNA를 정량하였다. 각 화합물들의 HCV 레플리콘에 대한 EC50은 RT-PCR 방법을 사용하여 대조군과의 비교를 통해 측정하였다. HCV 1b의 NS5B 부분을 타겟으로 하는 프라이머(primer)를 사용하였으며 AccessQuickTM RT-PCR system(Promega corporation)을 이용한 RT-PCR 방법으로 측정하였다. RT-PCR과 함께 보다 정확하고 정량적인 EC50의 계산을 위하여 정량적 실시간(quantitative real-time) PCR 방법을 사용하였다. 분리된 RNA로부터 Reverse transcriptation system(Promega corporation)을 이용하여 cDNA를 얻어낸 다음 iQ SYBR Green Supermix(Bio-rad)를 사용하여 정량적인 real-time PCR 반응을 실시하였다. 동시에 Taqman probe를 사용한 one-step rael time RT-PCR 반응을 실시하여 각 화합물의 저해활성을 결정하였다. HCV 5'-UTR 부분을 타겟으로 하는 프라이머를 사용하였고, 대조유전자(reference gene)로는 GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) gene을 이용하여 보정하였다. iCycler iQ5 system(Bio-rad)를 사용하였고 iCycler iQ5 optical system software(Bio-rad) 프로그램을 이용하여 각 화합물들의 EC50 값을 계산하여 하기 표 3에 나타내었다.
HCV 레플리콘에 대한 화합물의 생체외 ( in vitro ) 저해 활성
구분 EC50 (μM)
실시예 1 3.1
실시예 2 2.7
실시예 3 5.1
실시예 4 3.3
실시예 5 0.9
실시예 6 0.7
실시예 7 2.5
실시예 8 1.0
실시예 9 0.6
실시예 10 4.0
실시예 11 2.7
실시예 12 0.4
실시예 13 0.1
실시예 14 0.1
실시예 15 1.2
실시예 16 0.05
실시예 17 6
실시예 18 0.02
실시예 19 1.9
실시예 20 2.8
표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물들의 HCV RNA 레플리콘에 대한 저해활성을 측정한 결과, EC50 값이 0.02 ~ 5.1 μM로 강력한 HCV 바이러스 복제 저해활성을 나타내었다. 특히 실시예 5, 6, 9, 12~14, 16 및 18의 화합물은 마이크로몰 농도 이하의 EC50 값을 나타내는 우수한 HCV 바이러스 복제 저해활성을 나타내었다.
따라서, 본 발명에 따른 화합물들은 C형 간염을 유발시키는 HCV 바이러스 복제를 저해하므로, C형 간염의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
< 실험예 3> 세포독성 시험
화학식 1의 화합물들이 세포독성(Cytotoxicity)을 나타내는지 알아보기 위하여, Hep G2 세포를 이용하여 일반적으로 널리 알려진 MTT 분석방법으로 시험관내 (in vitro) 실험을 실시하였다. 그 결과, 실험에 사용된 화합물들은 모두 CC50 값이 100 ㎍/㎖ 이상으로서, 세포에 대한 독성이 매우 적은 물질인 것으로 판명되었다.
따라서, 본 발명에 따른 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체는 세포독성이 매우 적고, C형 간염을 일으키는 HCV RNA 중합효소에 대하여 우수한 저해활성을 보여주므로 C형 간염의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (7)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure 112012006054563-pat00052
    .
    (상기 화학식 1에서,
    X는 산소 또는 -NH이고,
    Y는 카르보닐 또는 설포닐이고,
    R1~R5는 각각 수소 또는 할로겐이고,
    R6는 비치환되거나, 플루오로, 클로로, 나이트로, 메틸, 트리플루오로메틸, 메톡시 카르보닐, t-부톡시 카르보닐, 모폴리노 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 페닐, 피라졸, 이소옥사졸, 퓨란, 벤조퓨란, 피리딘, 피페리딘, 사이클로헥산 또는 퀴놀린이되,
    단, 1) X가 NH, Y가 C=O, R1-R5가 모두 H, R6이 티오펜-2-일;
    2) X가 O, Y가 C=O, R1-R5가 모두 H, R6이 퓨란-2-일;
    3) X가 NH, Y가 C=O, R1-R5가 모두 H, R6이 퓨란-2-일;
    4) X가 NH, Y가 C=O, R1-R5가 모두 H, R6이 1-메틸-4-니트로-1H-피라졸-3-일;
    5) X가 O, Y가 C=O, R1,R2,R4 및 R5가 H, R3이 Cl, R6이 사이클로프로필;
    6) X가 NH, Y가 C=O, R1 및 R5가 Cl, R2-R4가 H, R6이 3-메틸페닐;
    7) X가 NH, Y가 SO2, R1 및 R5가 Cl, R2-R4가 H, R6이 2,4,6-트리메틸페닐;
    8) X가 NH, Y가 C=O, R1 및 R5가 Cl, R2-R4가 H, R6이 3,4-디메틸페닐;
    9) X가 NH, Y가 C=O, R1 및 R5가 Cl, R2-R4가 H, R6이 퀴놀린-2-일;
    10) X가 O, Y가 SO2, R1-R5가 모두 H, R6이 3-(메톡시카르보닐)-4-메틸-페닐; 및
    11) X가 O, Y가 C=O, R1-R5가 모두 H, R6이 페닐인 경우는 제외한다)
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 상기 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체는
    (1) 3-모폴리노-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-5-(트리플루오로메틸)벤즈아마이드;
    (2) 5-메틸-2-페닐-퓨란-3-카르복실산(2-페닐-1H-벤조이미다졸-5-일)-아마이드;
    (3) N-(2-페닐-1H-벤조이미다졸-5-일)-이소니코틴아마이드;
    (4) 3,4-디플루오로-N-(2-페닐-1H-벤조이미다졸-5-일)벤즈아마이드;
    (5) 5-사이클로프로필-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)이소옥사졸-3-카르복사아마이드;
    (6) 1-메틸-4-니트로-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-1H-피라졸-5-카르복사아마이드;
    (7) N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)이소옥사졸-5-카르복사아마이드;
    (9) 2,7-디메틸-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)퀴놀린-3-카르복사아마이드;
    (10) 3-니트로-N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)벤젠설폰아마이드;
    (11) N-(2-페닐-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)벤조퓨란-2-설폰아마이드;
    (12) N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-3,5-디메틸이속사졸-4-카르보사아마이드;
    (13) t-부틸-4-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일카바모일)피페리딘-1-카복실레이트;
    (14) 4,6-디클로로-N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-1H-인돌-2-카르복사마아이드;
    (15) N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-1-메틸-4-니트로-1H-피라졸-5-카르복사아마이드;
    (16) N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)퓨란-2-카르복사아마이드;
    (17) N-(2-(4-플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)퓨란-2-설폰아마이드;
    (18) N-(2-(2,3-디플루오로페닐)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-1-메틸-4-니트로-1H-피라졸-5-카르복사아마이드;
    (19) N-(2-페닐벤조[d]옥사졸-6-일)사이클로헥산카르복사아마이드; 및
    (20) 4-(2-페닐벤조[d]옥사졸-6-일카바모일)페닐아세테이트로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 하기 반응식 1에 표시되는 바와 같이,
    화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물을 용매 하에서 커플링 반응시켜 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 제1항의 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체의 제조방법:
    [반응식 1]
    Figure 112011057776929-pat00053
    .
    (상기 반응식 1에서, R1~R6, X 및 Y는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고, Z는 할로겐 또는 OH이다.)
  5. 제4항에 있어서, 상기 용매는 디메틸포름아마이드 또는 메틸렌클로라이드인 것을 특징으로 하는 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체의 제조방법.
  6. 하기 화학식 1로 표시되는 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure 112011057776929-pat00054
    .
    (상기 화학식 1에서,
    X는 산소 또는 -NH이고,
    Y는 카르보닐 또는 설포닐이고,
    R1~R5는 각각 수소 또는 할로겐이고,
    R6는 비치환되거나, 플루오로, 클로로, 나이트로, 메틸, 트리플루오로메틸, 메톡시 카르보닐, t-부톡시 카르보닐, 모폴리노 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 페닐, 피라졸, 이소옥사졸, 퓨란, 벤조퓨란, 피리딘, 피페리딘, 사이클로헥산 또는 퀴놀린이다.)
  7. 하기 화학식 1로 표시되는 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 C형 간염의 예방 및 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure 112011057776929-pat00055
    .
    (상기 화학식 1에서,
    X는 산소 또는 -NH이고,
    Y는 카르보닐 또는 설포닐이고,
    R1~R5는 각각 수소 또는 할로겐이고,
    R6는 비치환되거나, 플루오로, 클로로, 나이트로, 메틸, 트리플루오로메틸, 메톡시 카르보닐, t-부톡시 카르보닐, 모폴리노 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 페닐, 피라졸, 이소옥사졸, 퓨란, 벤조퓨란, 피리딘, 피페리딘, 사이클로헥산 또는 퀴놀린이다.)
KR1020090097622A 2009-10-14 2009-10-14 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물 KR101194995B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090097622A KR101194995B1 (ko) 2009-10-14 2009-10-14 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090097622A KR101194995B1 (ko) 2009-10-14 2009-10-14 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20110040384A KR20110040384A (ko) 2011-04-20
KR101194995B1 true KR101194995B1 (ko) 2012-10-29

Family

ID=44046760

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020090097622A KR101194995B1 (ko) 2009-10-14 2009-10-14 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101194995B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2794763C1 (ru) * 2022-08-15 2023-04-24 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский химико-технологический университет имени Д.И. Менделеева" Производные 1-гидрокси- и 1-метокси-2-(4-нитрофенил)имидазола, обладающие противовирусной активностью в отношении ортопоксвирусов

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020120576A1 (en) * 2018-12-11 2020-06-18 Fundació Institut De Recerca Biomèdica (Irb Barcelona) p38α AUTOPHOSPHORYLATION INHIBITORS
KR102085692B1 (ko) * 2019-08-13 2020-03-06 한양대학교 에리카산학협력단 Flt3 저해 활성을 갖는 신규한 이미다졸 유도체 및 이의 용도
WO2022123314A1 (en) * 2020-12-11 2022-06-16 Tmem16A Limited Benzimidazole derivatives for treating respiratory disease

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005092845A1 (en) * 2004-03-10 2005-10-06 Pfizer Products Inc. Substituted heteroaryl- and phenylsulfamoyl compounds
WO2008048991A2 (en) * 2006-10-18 2008-04-24 Novartis Ag Organic compounds
WO2009019504A1 (en) * 2007-08-03 2009-02-12 Summit Corporation Plc Drug combinations for the treatment of duchenne muscular dystrophy
US20090163545A1 (en) * 2007-12-21 2009-06-25 University Of Rochester Method For Altering The Lifespan Of Eukaryotic Organisms

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005092845A1 (en) * 2004-03-10 2005-10-06 Pfizer Products Inc. Substituted heteroaryl- and phenylsulfamoyl compounds
WO2008048991A2 (en) * 2006-10-18 2008-04-24 Novartis Ag Organic compounds
WO2009019504A1 (en) * 2007-08-03 2009-02-12 Summit Corporation Plc Drug combinations for the treatment of duchenne muscular dystrophy
US20090163545A1 (en) * 2007-12-21 2009-06-25 University Of Rochester Method For Altering The Lifespan Of Eukaryotic Organisms

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2794763C1 (ru) * 2022-08-15 2023-04-24 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский химико-технологический университет имени Д.И. Менделеева" Производные 1-гидрокси- и 1-метокси-2-(4-нитрофенил)имидазола, обладающие противовирусной активностью в отношении ортопоксвирусов

Also Published As

Publication number Publication date
KR20110040384A (ko) 2011-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2450033C (en) Viral polymerase inhibitors
KR100957709B1 (ko) 5,6-디메틸티에노[2,3-디]피리미딘 유도체, 그 제조방법 및이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
EP1440068A1 (en) Acyl dihydro pyrrole derivatives as hcv inhibitors
JP4767321B2 (ja) 5,6−ジメチルチエノ[2,3−d]ピリミジン誘導体、その製造方法及びそれを含む抗ウイルス用薬学的組成物
WO2007038425A2 (en) Anti-viral compouinds
KR101194995B1 (ko) 신규한 2-페닐-벤즈이미다졸 또는 2-페닐-벤즈옥사졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR100516434B1 (ko) 6-(4-치환된-아닐리노)피리미딘 유도체, 그 제조방법 및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
CA2871324A1 (en) Substituted acyloxyamidines as hcv ns3/4a inhibitors
KR100490893B1 (ko) 2-메톡시-1,3,5-트리아진 유도체, 그 제조방법 및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
WO2004096774A1 (en) Acyl isoindoline derivatives and acyl isoquinoline derivatives as anti-viral agents
Jiang et al. Synthesis and antiviral activity of a series of novel N-phenylbenzamide and N-phenylacetophenone compounds as anti-HCV and anti-EV71 agents
EP1506197A1 (en) Acyl bicyclic derivatives of pyrrol
KR100516432B1 (ko) 2-(4-치환된-아닐리노)피리딘 유도체, 그 제조방법 및이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR100502394B1 (ko) 2-[2-(4-모르포리노)에틸아미노]피리딘 유도체, 그제조방법 및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR100490892B1 (ko) 4-(4-치환된-아닐리노)피리미딘 유도체, 그 제조방법 및이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR100638709B1 (ko) N-치환된- 설파모일벤조산 유도체, 그 제조방법 및이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR100453946B1 (ko) 6-메틸피리딘 유도체, 그 제조방법 및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR100502395B1 (ko) 4-[4-(4-모르포리노)아닐리노]피리미딘 유도체, 그제조방법 및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물.
KR100798634B1 (ko) C형 간염 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR100575344B1 (ko) C형 간염 예방 및 치료용 약학적 조성물
WO2004009543A2 (en) 1-carbonyl-4-cyano-pyrrolidine-2-carboxylic acid derivatives as hepatitis c virus inhibitors
WO2004076415A1 (en) 1- (hetero)aroyl-pyrrolidine-2-carboxylic acid derivatives useful as anti.viral agents
KR100516433B1 (ko) 2-(2-치환된-아닐리노)피리딘 유도체, 그 제조방법 및이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR100457857B1 (ko) 2-[2-(3-인돌릴)에틸아미노]피리딘 유도체, 그 제조방법및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR20120048223A (ko) 2-페닐-4-[3-(치환된-설포닐)아닐리노]퀴나졸린 유도체, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 c형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E90F Notification of reason for final refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
N231 Notification of change of applicant
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150910

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160921

Year of fee payment: 5

LAPS Lapse due to unpaid annual fee