ES2614804T3 - Acilación mejorada mediada por LovD aciltransferasa - Google Patents

Abstract

Un método para fabricar un compuesto de estatina, que comprende poner en contacto un sustrato de LovD aciltransferasa con una LovD aciltransferasa en presencia de un donante de tioéster y un agente de precipitación, en condiciones que producen un compuesto de estatina, en el que el producto de reacción precipita cuando el agente de precipitación está presente.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

técnica y que en la presente divulgación se muestra que tienen esta actividad, cualquier potencial donante/transportador de acilo conocido en la técnica (o sintetizado de novo) que tenga la capacidad de acilar un sustrato diana a través de una aciltransferasa, tal como C8 de monacolina J (que produce de este modo simvastatina), puede identificarse fácilmente mediante experimentos comparativos con los donantes de acilo

5 divulgados.

Otros ejemplos de donantes de acilo incluyen, pero sin limitaciones, α-dimetilbutiril-SNAC, acil-tioésteres, acil-CoA, butiril-CoA, benzoil-CoA, acetoacetil-CoA, β-hidroxibutiril-CoA, malonil-CoA, palmitoial-CoA, butiril-tioésteres, Nacetilcisteamina tioésteres (SNAC), metil-tioglicolato (SMTG), benzoil-SNAC, benzoil-SMTG o α-S-metilbutiril-SNAC.

10 Estos compuestos se pueden producir de forma natural o sintética y, en algunos casos, pueden atravesar una membrana celular. Se puede añadir una serie de estos compuestos a un medio de reacción que comprende LovD y monacolina J para producir, por ejemplo, simvastatina.

“Acil-SNAC", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a α-dimetilbutiril-SNAC. Como se sabe en la

15 técnica, el acil-SNAC puede atravesar una membrana celular en condiciones in vivo. LovD puede usar acil-SNAC como sustrato para iniciar la reacción de monacolina J a simvastatina mediante acilación regioespecífica del grupo hidroxilo C8 de monacolina J. El acil-SNAC puede donar su grupo acilo a LovD.

"Alquilo" significa un grupo alquilo no sustituido o sustituido. Un grupo alquilo puede ser, por ejemplo, cíclico, 20 acíclico, ramificado o lineal.

"Arilo" significa un grupo arilo no sustituido o sustituido y puede comprender heterociclos.

“Un tioéster que comprende un resto acilo” significa un tioéster que tiene un resto acilo que sufre una transferencia

25 mediada a un sustrajo cuando se trata en las condiciones adecuadas con una aciltransferasa. Por ejemplo, un compuesto de fórmula general R-C(=O)-SR', en la que R es un alquilo o arilo y R' es variable comprende un grupo acilo como R-C(=O)-.

"Un medio de reacción adecuado" es un sistema disolvente, mono o bifásico, que permite que los componentes de la

30 mezcla de reacción se combinen y produzcan el producto. Ejemplos de medios de reacción incluyen éter, acetato de etilo, hexanos, tetrahidrofurano, metanol, isopropanol, acetona, dimetilformamida, diclorometano, cloroformo, éter metil terc-butílico (MTBE), agua, acetonitrilo y combinaciones de los mismos. Los medios de reacción pueden tamponarse para mantener un pH o intervalo de pH específicos, tal como mediante la adición de ácidos, bases o sales. Por ejemplo, un medio de reacción de ejemplo es una suspensión acuosa tamponada con trietanolamina de

35 reactivos. Otro medio de reacción de ejemplo es acetato de etilo con la adición de metanol. Preferentemente, los medios de reacción se mantienen a temperaturas controladas, en atmósferas inertes, tales como argón o nitrógeno, y con agitación mecánica o magnética.

Un "compuesto secuestrante" es un compuesto que se une, modifica químicamente, a una forma inerte (con relación

40 a la actividad enzimática) o elimina un subproducto formado durante una reacción de acilación mediada por aciltransferasa. El proceso de unión o modificación química de un compuesto en una forma inerte también se denomina secuestro.

“Carbón activado” es una forma de carbono que ha sido procesada para proporcionar una superficie muy grande.

45 Una forma adecuada de carbón activado está representada por Fluka® puriss.p.a. Carbón activado en polvo (n.º CAS 7440-44-0, adsorción de yodo (0,05 de I2/I) de > 70 ml/g).

"Acilación mediada por LovD aciltransferasa" significa que la acilación de un sustrato está mediada por la LovD aciltransferasa. Sin estar limitado por teoría de operación alguna, se cree que la LovD aciltransferasa es acilada por

50 un compuesto tioéster, aceptando el resto acilo del tioéster y produciendo un subproducto de tiol. Posteriormente, un hidroxilo libre puede aceptar el resto acilo unido a la LovD aciltransferasa, acilándose ella misma y regenerando la LovD aciltransferasa activa. Se ha descubierto que la producción de compuestos de tiol durante la reacción de la aciltransferasa da lugar a una disminución de la actividad de la enzima. En particular, se ha descubierto que los compuestos de tiol inhiben la velocidad de conversión enzimática del sustrato en la diana.

55 "Agente de precipitación" es un agente químico que induce la precipitación de un compuesto o que convierte un material de partida en un compuesto que se vuelve insoluble después de la posterior reacción. Por precipitación se entiende la deposición de materia insoluble en un medio de reacción, es decir la formación de un sólido en una solución durante una reacción química. Un agente de precipitación actúa convirtiendo un compuesto normalmente

60 soluble en un compuesto que experimenta precipitación en el medio de reacción o que experimenta precipitación en el medio de reacción tras la conversión adicional en una diana. Un agente de precipitación también puede funcionar manteniendo o ajustando el pH de la solución. Por ejemplo, se puede usar hidróxido de amonio como agente de precipitación, en cuanto que el hidroxiácido de monacolina J puede convertirse en su sal de amonio antes de la acilación.. La acilación en un medio de reacción adecuado da como resultado un producto insoluble. El hidróxido de

65 amonio también funciona ajustando el pH de la solución.

8

imagen7

imagen8

imagen9

imagen10

imagen11

Claims (1)

1. imagen1