ES2607648T3 - Prevención de la síntesis de ADN celular y poliopédido de inhibición de la proliferación celular y uso de esto - Google Patents
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Abstract
Un polipéptido fusionado PTD-P15 que se caracteriza por su secuencia de aminoácidos: ácido argininaasparaginico - leucina - tirosina - como ácido paragínico - ácido asparagínico - ácido asparagínico - lisina - ácido asparagínico - arginina - metionina - prolina - Tirosina - serina - treonina - ácido glutámico - leucina - isoleucina - fenilalanina - tirosina - isoleucina - ácido glutámico - metionina - ácido asparagínico - prolina.
Description
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DESCRIPCION
Prevencion de la smtesis de ADN celular y poliopedido de inhibicion de la proliferacion celular y uso de esto Campo de la invencion
La invencion pertenece al campo de la bioingeniena medica, y se refiere a un polipeptido que previene la smtesis de ADN y la inhibicion de la proliferacion celular, asf como su uso.
Antecedentes de la invencion
El tumor es un tipo de enfermedad estrictamente peligrosa para la salud humana, para la cual, la quimioterapia, la radioterapia y el tratamiento quirurgico se aplican en la clmica. Estos metodos han formado relativamente maduro sistema terapeutico, y obtuvo buenos efectos. Sin embargo, como hay baja selectividad en medicina para el tratamiento de tumores ahora de uso comun, es difmil evitar tales desventajas como efectos toxicos y secundarios fuertes y pequenas ventanas terapeuticas entre celulas normales y el tumor y el potencial de desarrollo para mejorar aun mas los efectos del tratamiento eincluso alcanzar el objetivo de curar es limitado, por lo que es urgente desarrollar nuevos metodos terapeuticos eficaces.
El rapido desarrollo de la biologfa de las celulas tumorales en los ultimos anos ofrece una posibilidad real de satisfacer esta necesidad social, entre los cuales, con la iluminacion de las vfas de transduccion de senalizacion, se encuentran cada vez mas objetivos de farmacos que pueden usarse para el tratamiento de tumores. Y algunos de ellos se han aplicado con exito en la clmica y se obtuvo muy buenos efectos. Por ejemplo, la protema BCR-ABL se expresa en muchas celulas de leucemia, que tiene una actividad de protema quinasa relativamente fuerte y juega un papel importante en la aparicion y desarrollo de leucemia. A traves del estudio de la estructura de la protema BCR- ABL, muchos compuestos que pueden inhibir espedficamente su actividad biologica son disenados y producidos, y los medicamentos, incluyendo Glivec se utilizan en el tratamiento de pacientes con leucamia. El Glivec es la primera opcion para el tratamiento de muchos tipos de leucemia y otros tumores en la actualidad.
Las senales de crecimiento celular se transmiten al nucleo celular mediante farmacos promotores del crecimiento dentro y fuera de las celulas a traves de una serie de protemas, provocando el cambio de estructura y funcion de muchas ciclinas reguladoras y conduciendo a la division celular. Entre estas protemas que regulan el ciclo celular, la proliferacion de celulas del antfgeno nuclear (PCNA) juega un papel importante.La horquilla de replicacion de ADN es el complejo de protemas clave de la smtesis de ADN en la replicacion del ADN y PCNA es una composicion de complejo de horquilla de replicacion de ADN. Puede unir ADN y muchos tipos de protemas, especialmente la ADN polimerasa necesaria para la replicacion del ADN, y hacer que la ADN polimerasa facilite la smtesis de nuevas cadenas de ADN que participan en la replicacion del ADN. PCNA existe en todas las celulas en division, debido a la funcion vital de PCNA en el ciclo celular, para bloquear su funcion biologica en el ciclo celular es una manera ascendente de desarrollar nuevos farmacos para el tratamiento de tumores y otras enfermedades resultantes de la proliferacion celular anormal. Hasta ahora, como el mecanismo que PCNA participa en la regulacion del ciclo celular se desconoce, en la actualidad no hay ningun metodo util o compuesto que puede bloquear directamente la funcion biologica de PCNA para inhibir el crecimiento celular.
El documento WO 2008/089645 A1 proporciona un polipeptido de fusion que comprende un polipeptido que inhibe el crecimiento celular, un dominio de transduccion de protemas y un marcador His, en el que el polipeptido que inhibe el crecimiento celular consiste en 25 aminoacidos del extremo amino de la protema p55PlK. Se dice que el polipeptido de fusion es capaz de inhibir el crecimiento celular y tratar enfermedades tumorales.
Los datos UniProt baso 8 de abril de 2008 "SubName: Completo = fosfatidilinositol 3-quinasa gamma subunidad reguladora.
{EC0:0000313I Ensembl: ENSMUSP00040118568}; Banderas: Framento; "describe la subunidad reguladora 82aa de fosfatidilinositol 3-quinasa de raton gamma que comprende MPYSTELIFYIEMDP.
Sumario de la invencion
La invencion proporciona tambien un polipeptido fusionado PTD-P15 que se caracteriza por su secuencia de aminoacidos: acido arginina-asparagmico -leucina-tirosina -acido asparagmico acido asparagmico acido asparagmico acido asparagmico lisina acido asparagmico arginina metionina - Prolina - tirosina - serina - treonina - acido glutamico - leucina - isoleucina - fenilalanina - tirosina - isoleucina - acido glutamico - metionina - acido asparagmico - prolina.
La invencion tambien proporciona el uso del polipeptido fusionado PTD-P15 en la preparacion de farmacos para el tratamiento de tumores y otras enfermedades asociadas con el crecimiento celular anormal.
En esta investigacion, se ha encontrado la interaccion entre un fragmento polipeptfdico y PCNA. La secuencia de aminoacidos del fragmento es: metionina - prolina - tirosina - serina - treonina - acido glutamico - leucina - isoleucina - fenilalanina - tirosina - isoleucina - acido glutamico - metionina - acido asparagmico - prolina (ver Lista de
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Secuencias de Aminoacidos y Nucleotidos); En lo sucesivo el polipeptido se denomina P15. Y tambien se observa que, despues de la union de P15 y PCNA, la union de PCNA y ADN polimerasa se bloquea, mientras que la ADN polimerasa unida a PCNA es necesaria para la replicacion del ADN, un proceso importante en ciclo celular. De acuerdo con este resultado, se supone que si P15 se expresa 5 en celulas, el polipeptido puede inhibir la union de PCNA y ADN polimerasa, inhibiendo adicionalmente la replicacion del ADN mediada por la ADN polimerasa y previniendo la division celular.
La clave para testificar el modelo anterior es introducir P15 en las celulas y observar el impacto de P 15 en la division celular. Para lograr este objetivo, en virtud de las tecnicas de biologfa molecular, se creo una construccion de ADN que codifica la protema fusionada que comprende P15 y la protema fluorescente verde (GFP), luego transfirio la construccion a celulas humanas cultivadas y luego observo el cambio de la protema fusible expresada P15-GFP en ciclo celular. Ademas, se produjo un polipeptido fusionado PTD-P15 que comprende un fragmento polipeptfdico con la capacidad de penetrar en la citomembrana y P15 por medio de smtesis artificial; La secuencia de aminoacidos de PTD es: arginina - acido asparaginico - leucina - tirosina - acido asparaginico - acido asparaginico - acido asparaginico - acido asparaginico - lisina - acido asparaginico - arginina. Se anadio PTD-P15 en celulas cultivadas y se observo el impacto de P15 en las celulas en el ciclo celular. Para observar el impacto de P15 sobre el crecimiento del tumor 15 en el modelo animal, se observo si PTD-P15 podna inhibir el crecimiento de tumor en el modelo animal mediante la inyeccion de PTD-P15 en la vena caudal de ratones pequenos.
Los resultados del experimento muestran que cuando P15 se expresa en varios tipos de lmeas celulares cultivadas con capacidades de crecimiento y division o se anade PTD-P15, P15 inhibira la capacidad de PCNA para unirse a ADN polimerasa, causando una reduccion significativa en el mdice observacional Con respecto a la smtesis del ADN y otros varios testificando el crecimiento celular, lo que demuestra que P15 tiene la capacidad de inhibir la proliferacion celular; Y la inyeccion de PTD-P15 puede inhibir la proliferacion celular y el crecimiento de tumor en modelo animal.
En comparacion con los metodos existentes utilizados para inhibir la proliferacion celular, la aplicacion de la invencion consiguio los siguientes efectos:
1) P15 tiene la capacidad de bloquear PCNA de ADN polimerasa de union, por lo tanto, la replicacion del ADN facilitada por la ADN polimerasa se inhibe, dando lugar a detencion del ciclo celular. Esto proporciona un nuevo metodo y enfoque para disenar y seleccionar nuevos farmacos para el tratamiento de tumores y otras enfermedades resultantes del crecimiento anormal de celulas. Simultaneamente, PTD-P15 puede inhibir eficazmente el crecimiento del tumor. Esto demuestra que P15 todavfa tiene el efecto biologico de inhibir el crecimiento celular incluso despues de penetrar en la citomembrana, y tambien muestra que polipeptidos o moleculas con la capacidad de penetrar la citomem-brana pueden usarse para ayudar a P15 con actividad biologica a penetrar en la citomembrana.
2) P15 tiene efectos toxicos y secundarios bajos y antigenicidad debil, y de acuerdo con los resultados experimentales, se encuentra que, sin impacto evidente en la apoptosis, P15 no tiene un efecto letal obvio sobre las celulas normales. Cuando se anade PTD-P15 a celulas cultivadas o se aplica a animales, no se observa toxicidad obvia.
3) Tanto P15 como PTD-P15 expresados en celulas pueden inhibir eficazmente el crecimiento de celulas tumorales de seres humanos y ratones in vivo y sistemas de cultivo in vitro. Esto demuestra que P15 tiene ventajas tales como alta eficiencia y amplio espectro en el tratamiento de tumores y otras enfermedades que resultan del crecimiento anormal de celulas.
4) Con un pequeno peso molecular, PTD-P15 puede ser sintetizado qmmicamente, y es conveniente para la aplicacion directa a gran escala en la clmica. Y tambien, podemos inyectar P15 en celulas usando otros metodos (por ejemplo, el uso de plasmido o vectores de virus) para tratar el tumor y otras enfermedades resultantes de la proliferacion celular anormal.
Breve descripcion de los dibujos
FIG. 1: PTD-P15 bloquea PCNA de ADN polimerasa de union. Se cultivaron celulas de cancer rectal HT29 de pacientes en placas de cultivo, en las que se anadieron el polipeptido de control o diferentes cantidades de PTD- P15. Despues de una noche de cultivo, se recogieron las celulas y se ensayo la cantidad de ADN polimerasa unida por PCNA en celulas con co-imunoprecipitacion. Los resultados muestran que la adicion de PTD-P15 puede reducir la ADN polimerasa unida por PCNA, porque la cantidad de ADN polimerasa unida por PCNA esta estrechamente relacionada con la replicacion del ADN. Por lo tanto, se muestra que, PTD-P15 puede disminuir la velocidad de replicacion del ADN. Mientras se bloquea la capacidad de PCNA para unirse a aDn polimerasa, se inhibe la funcion de la polimerasa para facilitar la replicacion del ADN y se bloquea la division celular.
Las Figuras, 2a, 2b, 2c and 2d: diferentes ciclos celulares inhibidos por PTD-P 15. HT29 celulas de cancer rectal de los pacientes por lo que se cultivaron en platos de cultivo, en el que el polipeptido de control o diferentes cantidades de PTD-P15 se anadieron. Despues de 24 horas de cultivo, se recogieron las celulas y se probo el porcentaje de celulas en diferentes ciclos celulares. Los resultados muestran que PTD-P15 puede aumentar las cantidades de celulas en la fase G0 / G, mientras que disminuye la cantidad de celulas en la fase S y G2 / M. Esto demuestra que PTD-P 15 puede inhibir el ciclo celular.
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Descripcion detallada de las realizaciones
La invencion se demostrara e ilustrara en virtud de experiments concretos y datos a continuacion, pero dejaremos en claro que estas realizaciones no son limitacion de la invencion. Esta demostrado que P 15 tiene eficacia en la inhibicion de la proliferacion celular y el crecimiento tumoral en los siguientes experiments, incluyendo, pero sin limitarse a lo siguiente.
Ejemplo 1 Ensayo de expresion de P15-GFP por construccion de ADN despues de codificacion de cADN P15 introducido en pEGFP.
El vector pEGFP - N 1 se adquirio de American Clontech (Cat No. 6085 - 1). El plasmido que incluye el cADN que puede codificar GFP se digirio con EcoRI-BamHI (adquirido de American Promega, Cat N° R6011, R6021), y luego el plasmido digerido se separo y se purifico en gel de agarosa para una futura reaccion acoplada. El kit de reactivos utilizado para la recuperacion del fragmento de ADN se adquirio de la alemana Qiagen (Cat No. 28704).
El cADN que codifica P15 era de ADN bicatenario por medio de smtesis artificial, cuya secuencia es:
Una sola hebra 1
5 'TTTTGAATTCATGCCCTATTCGACAGAACTGATATTTTATATTGAAATGGATCCTGGATCC;
Hebra individual 2
5 'TTTTGGATCCAGGATCCATTTCAATATAAAATATCTGTTCTGTCGAATAGGGCATGAATTC.
Despues de mezclar, los dos hilos simples se combinaron en ADN de doble hebra. Despues de la purificacion (el kit de reactivos usado para la purificacion comprado de la alemana Qiagen, Cat No. 28704), el resultado se digirio primero con EcoRI-BamHI; Y se purifico con gel de agarosa, despues se llevo a reaccion acoplada con el vehtulo pEGFP-N1 despues de digerir y purificar (el kit de reactivo utilizado para la reaccion acoplada adquirida de Promega Americano, Cat No. M1801). Tras la transformacion bacteriana (celula competente de Promega americana, Cat N ° L2001, se seleccionaron los clones positivos.) Despues de que se demostro la correccion de la secuencia de cADN mediante la prueba de la secuencia de nucleotidos, el plasmido preparado se purifico a gran escala, Utilizado para la purificacion a gran escala adquirida a la alemana Qiagen, Cat N ° A7270) para futuros experimentos.Este plasmido expreso una protema fusionada consistio en P15 y GFP respectivamente en celulas eucariotas.La P15 expresada se conecto al extremo N de GFP y el fusible Protema se denomino P15-GFP.
El kit de reactivos para transfeccion se adquirio de American Invitrogen (Cat No. 11668). El experimento de transfeccion se termino de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante. Las celulas COS7 se cultivaron en un DMEM 35 de suero bovino con una concentracion de masa del 10%. Despues de transfectadas durante 48 horas, las celulas COS7 se lavaron dos veces con PBS. Se anadio el lisado siguiente para lisis celular. Despues de que el ADN se dano con onda ultrasonica, se anadieron cantidades apropiadas de 2-mercaptoetanol y azul de bromofenol. Despues de que se dispuso en agua hirviendo durante 5 minutos y se almaceno en hielo, se extrajo la muestra y se anadio en gel SDS-poliacrilamida con una concentracion de masa del 12% para electroforesis. La protema separada se transfirio a una membrana de nylon a traves de la cual se ensayo la generacion de protema fusionada con anticuerpo anti-GFP (adquirido a American Invitrogen, Cat N° R970) y los resultados demostraron la expresion de P15-GFP en las celulas.
Ejemplo 2: Experimento de expresion de P15 que inhibe el crecimiento celular y el ciclo celular
El impacto de P15 sobre el crecimiento celular se ensaya con NIH / 3T3 (celulas de fibroblastos y epftiales, adquiridas de ATCC americana, Cat N° CRL-1658) y MCF-7 (lmea de celulas de cancer de mama, adquirida a ATCC americana, Cat No. HTB -22). Las celulas se cultivaron en un plato de cultivo celular de 10 cm que contema un DMEM de suero bovino fetal al 10% (SBF) con una concentracion de masa del 10% a 37°C bajo una condicion de 5% de CO2 (volumen) / 95% de aire).
Plasmido utilizado para el experimento: pEGFP - P15 (para expresar la protema fusionada P15 - GFP); Plasmido de control: pEGFP - N1.
Despues de mezclar el plasmido para transfeccion y el reactivo de lipofectamina (adquirido de American Invitrogen, Cat No. 11668), la mezcla permanecio durante 15 minutos a temperatura ambiente. A continuacion, la mezcla se introdujo primero en celulas (con una densidad celular de aproximadamente 50%) cultivadas en DMEM sin suero durante 5 horas de cultivo a 37°C y luego en SBF con una concentracion de masa de 10% durante 48 horas de cultivo. Bajo el microscopio de fluorescencia, fue facil distinguir las celulas que expresan GFP fusionado y las protemas fluorescentes unicas y las que no expresan estas 55 protemas. Ademas, mediante el uso de FCM, fue facil separar y purificar las celulas de protema fluorescente positiva. Los indicadores simbolicos para ensayar el crecimiento celular, tales como el ciclo celular, se usaron para estudiar y testificar el impacto de P15 sobre el crecimiento celular, mientras que en estos experimentos, solo las celulas que expresan protemas fluorescentes se usaron como grupo de control.
Primero, utilizamos el plasmido antes mencionado para transfectar 3T3 y MCF7, y usamos FCM para clasificar las celulas GFP positivas transfectadas con ADN y analizamos la distribucion del ciclo de estas celulas dos dfas despues.
Los resultados experimentales muestran que: la expresion de P15 no tiene efecto evidente en la apoptosis de las 5 celulas, mientras que P15 puede inhibir el ciclo celular de entrar en la fase S y la induccion de celulas en la fase G0 / G1. Sus funciones se muestran en la siguiente tabla (Tabla 1).
TABLA 1 Funciones de P15 en la inhibicion del ciclo celular y la induccion de celulas en Fase G0 / G1
- Celulas 3T3 Celulas MCF7
- G0/G1 S G2/M G0/G1 S G2/M
- GFP
- 32,4% 25,9% 41,7% 62,2% 22,6% 15,2%
- P15-GFP
- 52,1% 22,1% 25,7% 85,6% 11,1% 3,3%
La smtesis de ADN es el sfmbolo de la proliferacion celular. En el siguiente experimento, probamos el impacto de 10 P15 sobre la smtesis de ADN 15. Dentro de las 15 horas despues de 3T3 y MCF7 transfectando pEGFP-N1 y
expresando el plasmido P15-GFP durante dos dfas, las celulas marcadas con BrdU que pueden penetrar en la cadena de ADN recien sintetizada se a~nadieron en fluido de cultivo celular. Las celulas GFP positivas en plasmido se detectaron y transfectaron con tecnica de inmunofluorescencia, y se determino la tasa positiva de penetracion de BrdU en el ADN (esto refleja la velocidad de smtesis de ADN). Los resultados muestran que P15 tambien inhibio 15 fuertemente la smtesis de ADN (mostrada en la Tabla 2).
TABLA 2 Smtesis de ADN inhibidor de P15
- Celulas 3T3 CelulasMCF7
- BrdU Celulas positivas Proporcion de inhibicion BrdU Celulas positivas Proporcion de inhibicion
- GFP
- 53,8% 0% 31,2% 0%
- P15-GFP
- 12,5% 76,8% 5,2% 83,4%
Ejemplo 3 Smtesis artificial del polipeptido fusionado PTD-P15 que comprende polipeptido con la capacidad de penetrar en la membrana celular y P15
20 De hecho, P15 no puede penetrar libremente en la membrana celular. Para observar el impacto de P15 sobre el ciclo celular y el crecimiento tumoral, sintetizamos artificialmente el polipeptido fusionado con P15 que puede penetrar en la membrana celular. El fusido se denomino PTD-P15 cuya secuencia de aminoacidos es: acido arginina-asparagmico - leucina-tirosina-acido asparagmico-acido asparagmico - acido asparagmico - acido asparagmico - lisina - acido asparagmico - arginina - metionina - prolina - tirosina - serina - treonina - acido glutamico 25 - leucina - isoleucina - fenilalanina - tirosina - isoleucina - acido glutamico - metionina - acido asparagmico - prolina;
La secuencia de aminoacidos del fragmento P15 es metionina - prolina - tirosina - serina - treonina acido glutamico - leucina - isoleucina - fenilalanina - tirosina - isoleucina - acido glutamico - metionina - acido asparagmico prolina; Y la del fragmento de PTD con la funcion de penetrar en la membrana celular es: acido arginina - asparaginico - leucina - tirosina - acido asparaginico - acido asparaginico - acido asparaginico - acido asparaginico - lisina - acido 30 asparaginico - arginina.
Entretanto, disenamos y sintetizamos un polipeptido de control cuya secuencia de aminoacidos es: acido asparagmico - arginina - arginina - acido asparagmico - leucina - tirosina - acido asparagmico - acido asparagmico - acido asparagmico - acido asparagmico - lisina - acido asparagmico - Arginina - metionina - alanina - glicina - treonina - metionina.
35 Ejemplo 4 PTD - P15 bloquea ADN polimerasa de union de PCNA
PTD-N15 bloquea la ADN polimerasa de union a PCNA. Las celulas de cancer rectal humano HT29 se cultivaron en placas de cultivo, en las que se anadieron el polipeptido de control o diferentes cantidades de PTD-P15. Despues de una noche de cultivo, se recogieron las celulas y se ensayo la cantidad de ADN polimerasa unida por PCNA en celulas con co-inmunoprecipitacion. Los resultados muestran que la adicion de PTD-P15 CAN puede reducir la ADN 40 polimerasa unida por PCNA, porque la cantidad de ADN polimerasa unida por PCNA esta estrechamente relacionada con la replicacion del ADN. En este sentido podemos decir que PTD-P15 puede disminuir la velocidad
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de replicacion del ADN. Siempre que se bloquee la capacidad de PCNA para unirse a ADN polimerasa, se inhibe la funcion de la polimerasa para facilitar la replicacion del ADN y se bloquea la division celular (Figura 1).
Ejemplo 5 Experimento del impacto del polipeptido fusionado PTD-P15 sobre el crecimiento celular y el ciclo
El impacto de PTD-P15 sobre el crecimiento celular se ensayo con la lmea celular HeLa humana (celulas Hela adquiridas de ATCC americana, Cat No. HTB-22). Las celulas Hela se cultivaron en placas de cultivo celular de 10 cm que conteman DMEM de suero bovino fetal al 10% (SBF) con una concentracion de masa del 10% a 37°C bajo una condicion de cultivo de aire de 5% de CO2 (volumen) / 95% de aire). Cuando las celulas se cultivaron hasta la fase logantmica, se anadieron PTD-P15 en diferentes concentraciones (respectivamente 8, 30 y 50 mcg / mL), mientras que el polipeptido de control (grupo de control en blanco) se anadio en otras celulas cultivadas para el control. Despues de 24 horas de cultivo, se recogieron las celulas y se adopto FCM para el analisis del ciclo celular. Los resultados experimentales muestran que: PTD-P15 puede inhibir la proliferacion celular, aumentar las cantidades de celulas en la fase G0 / G1, mientras que no tiene un impacto evidente en la apoptosis celular, como se muestra en las Figs. 2a, 2b, 2c y 2d.
Ejemplo 6 Experimento de PTD-P15 que inhibe el crecimiento de tumores de cancer rectal humano en ratones
Despues de 5x106 celulas de cancer rectal humano HT29 inyectadas en el tejido subcutaneo de ratones, los ratones fueron 15 divididos al azar en dos grupos. Despues de un dfa desde la inyeccion de las celulas tumorales, se inyectaron varios 1 mg de PTD-P15 en los ratones en el grupo de tratamiento a traves de la vena caudal y la inyeccion de la misma cantidad se repitio cada dos dfas durante cinco veces. Los tiempos y el tiempo de inyeccion de 1 mg de polipeptido de control fueron iguales que los del grupo de tratamiento. Despues de diez dfas de la inyeccion de celulas tumorales, se mataron los ratones, de los cuales se extrajeron los tumores para medir el peso. Los resultados muestran que: en comparacion con el grupo de control, el peso de los tumores en los ratones 20 tratados con PTD-P 15 se redujo en un 57%.
Ejemplo 7 Experimento de PTD-P15 que inhibe el crecimiento del tumor de leucemia humana en ratones
Despues de 5X106celulas de leucemia granulodtica humana K562 inyectadas en el tejido subcutaneo de ratones, los ratones 25 se dividieron al azar en cinco grupos. A los ratones de cada grupo se les inyecto respectivamente 1 mg de solucion en blanco, 1 mg de polipeptido de control, 1 mg de PTD-P15, 10 mg de Glivec y la solucion que comprendfa 1 mg de PTD-P15 + 10 meg de Glivec y la inyeccion De las mismas cantidades se repitio cada dos dfas durante 7 veces. Despues de dos semanas, se mataron los ratones, de los cuales los tumores crecidos en el tejido subcutaneo de los ratones se sacaron y pesaron. Los resultados muestran que, en comparacion con el grupo de control, la inyeccion de PTD-P15 puede obviamente reducir el peso de los tumores producidos por K562 en un 34%. Glivec es un medicamento usado para la leucemia en la clmica en la actualidad, y en la actualidad, la inyeccion de Glivec tambien redujo el peso de los tumores en un 48%. En el caso de la combinacion de PTD-P 15 y Glivec, hubo una mayor reduccion en el peso de los tumores que la de los tumores producidos, siempre que solo uno de los dos farmacos fue inyectado individualmente y la reduccion podna ser del 69% El control del polipeptido de control. Esto demuestra que la combinacion de PTD-P15 y Glivec tiene mejor efecto de tratamiento tumoral que la inyeccion individual de los mismos, tal como se muestra en la Tabla 3.
TABLA 3 PTD-P15 que inhibe el crecimiento del tumor formado por celulas K562 en modelo animal
- Grupo de animales
- Peso promedio de los tumores (g) Proporcion de inhibicion
- Control en blanco
- 2,48 0%
- Polipeptido de control
- 2,53 -2%
- PTD-P15 (1mg)
- 1,63 34%
- Glivec (10mcg)
- 1,28 48%
- PTD-P15 (1 mg) + Glivec (10 meg)
- 0,76 69%
Claims (2)
- REIVINDICACIONES1. Un polipeptido fusionado PTD-P15 que se caracteriza por su secuencia de aminoacidos: acido arginina- asparaginico - leucina - tirosina - como acido paragmico - acido asparagmico - acido asparagmico - lisina - acido asparagmico - arginina - metionina - prolina - Tirosina - serina - treonina - acido glutamico - leucina - isoleucina -5 fenilalanina - tirosina - isoleucina - acido glutamico - metionina - acido asparagmico - prolina.
- 2. Uso del polipeptido fusionado PTD-P 15 de reivindicacion 1 en la preparacion de medicamentos para el tratamiento de tumor y otras enfermedades asociadas con el crecimiento celular anormal.
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