ES2581562T3 - Procedimiento para purificar compuestos lipopeptídicos cíclicos o sales de los mismos - Google Patents

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ES2581562T3
ES2581562T3 ES11828114.6T ES11828114T ES2581562T3 ES 2581562 T3 ES2581562 T3 ES 2581562T3 ES 11828114 T ES11828114 T ES 11828114T ES 2581562 T3 ES2581562 T3 ES 2581562T3
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Zhaoli Zhang
Shidong Liu
Zhonghao Zhuo
Xiaoming Ji
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Shanghai Techwell Biopharmaceutical Co Ltd
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Shanghai Techwell Biopharmaceutical Co Ltd
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    • C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid

Abstract

Un procedimiento para purificar el compuesto de Fórmula I o las sales del mismo, en donde dicho procedimiento comprende las siguientes etapas: (1) cargar el compuesto en bruto de Fórmula I en una resina de adsorción macroporosa; (2) lavar la resina de adsorción macroporosa usando agua, un disolvente orgánico o una solución mixta de un disolvente orgánico y agua como el líquido de lavado; y (3) eluir el compuesto de Fórmula I de la resina de adsorción macroporosa usando agua, un disolvente orgánico o una solución mixta de un disolvente orgánico y agua como eluyente;**Fórmula** en donde, la resina de adsorción de la etapa (1) comprende halógeno y está unida a una matriz de polímero de estireno a través de un enlace químico que es un enlace covalente; o en la etapa (1), la solución comprende el compuesto en bruto de Fórmula I que comprende sales ionizables; y la resina de adsorción macroporosa se selecciona de entre una resina de adsorción aromática no polar polimerizada a partir de estireno y divinilbenceno, o una resina de adsorción metacrílica de polaridad moderada con unidades de metacrilato en su estructura.

Description

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DESCRIPCION
Procedimiento para purificar compuestos lipopeptidicos ciclicos o sales de los mismos
Campo tecnico
La presente invencion se refiere al campo de la qulmica organica, en particular, al procedimiento para purificar el compuesto ciclolipopeptldico de Formula I o las sales del mismo
Antecedentes
Las infecciones por hongos se han convertido en la principal causa de la alta incidencia y mortalidad en pacientes con inmunodeficiencia. Durante los ultimos 20 anos, la incidencia de infeccion micotica ha aumentado significativamente. La poblacion de alto riesgo para la infeccion por hongos, incluye a los pacientes crlticos, pacientes quirurgicos y los pacientes con infeccion por VIH, leucemia, as! como con otros tumores. Ademas, los receptores de trasplantes de organos son tambien poblacion de alto riesgo para la infeccion por hongos.
Las equinocandinas son nuevos medicamentos anti-hongos, que son eficaces en el tratamiento de infecciones por Candida o Aspergillus, y los ejemplos de ellas son caspofungina y micafungina. Las equinocandinas inhiben a los hongos mediante la inhibicion de la formacion del enlace 1,3-p glucosldico, reduciendo as! la toxicidad y los efectos secundarios hacia los humanos, mientras se mantiene una alta eficiencia. Por lo tanto, en comparacion con los medicamentos antifungicos tradicionales, las equinocandinas son mas seguras cuando se utilizan.
FK463 (Micafungina) es el compuesto de Formula III, que se obtiene cortando la cadena lateral del compuesto FR901379 de Formula II (Mo), formando as! el compuesto FR179642 (Mi) de Formula I, y anadiendo la cadena lateral al compuesto de Formula I mediante slntesis. Por lo tanto, el compuesto de Formula I con alta pureza es muy importante para la obtencion de Micafungina con alta pureza.
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Se ha informado sobre las siguientes cepas para la transformacion del compuesto de Formula II en el compuesto de Formula I por desacilacion de la cadena lateral de acilo del compuesto anterior: Streptomyces, tales como Streptomyces anulatus No. 4811, Streptomyces anulatus No. 8703, Streptomyces sp. No. 6907, e IFO13244, IFO6798, IFO31963,, IFO9951, NRRL12052, etc. El documento US5376634 ha divulgado un metodo para purificar el compuesto de Formula I, en donde el metodo comprende las siguientes etapas: el compuesto de Formula II se transforma en el compuesto de Formula I por reaccion enzimatica, se filtra el llquido de transformacion, el compuesto de Formula I se purifica a traves de una columna de carbon activo y una columna de gel de sllice turnandose, y despues de la concentracion a presion reducida, se obtiene el compuesto de Formula I en forma de solido blanco. Para este metodo, la cantidad de disolvente organico utilizado es grande, y el carbon activo y el gel de sllice utilizados no pueden ser reciclados, por lo tanto, dicho metodo contaminara el medio ambiente, puede ser danino para la salud flsica de los operadores, y no es adecuado para la produccion a gran escala.
Por lo tanto, es urgente en la tecnica encontrar un metodo de purification sin necesidad de utilizar gran cantidad de disolvente o gel de sllice, y tal metodo no solo puede superar los defectos de la tecnica anterior, sino tambien mejorar la pureza del compuesto de Formula I.
Sumario de la invencion
El objeto de la presente invencion es proporcionar un procedimiento para purificar el compuesto de Formula I.
En la presente invencion, se proporciona un procedimiento para purificar el compuesto de Formula I o las sales del mismo, comprendiendo dicho procedimiento las siguientes etapas:
(1) cargar el compuesto en bruto de Formula I en una resina de adsorcion macroporosa;
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(2) lavar la resina de adsorcion macroporosa usando agua, un disolvente organico o una solucion mixta de un disolvente organico y agua como el liquido de lavado; y
(3) eluir el compuesto de Formula I de la resina de adsorcion macroporosa usando agua, un disolvente organico o una solucion mixta de un disolvente organico y agua como eluyente;
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en donde, la resina de adsorcion de la etapa (1) comprende halogeno y esta unida a una matriz de polimero de estireno a traves de un enlace quimico que es un enlace covalente; o
en la etapa (1), la solucion comprende el compuesto en bruto de Formula I que comprende sales ionizables; y la resina de adsorcion macroporosa se selecciona de entre una resina de adsorcion aromatica no polar polimerizada a partir de estireno y divinilbenceno, o una resina de adsorcion metacnlica de polaridad moderada con unidades de metacrilato en su estructura.
En otra realizacion preferida, la resina de adsorcion se selecciona de entre: XAD-1, XAD-2, XAD-3, XAD-4, XAD-5, XAD-16, XAD-16HP, HP-10, HP-20, HP- 20ss, HP-21, HP-30, HP-40, HP-50, SP-825, SP-850, SP-70, SP-700, SP- 207, SP-207ss, XAD-6, XAD-7, XAD-7HP, XAD-8, HP-2MG, o la mezcla de las mismas.
En otra realizacion preferida, la resina de adsorcion comprende bromo y esta unida a la matriz de polimero de estireno a traves de un enlace quimico que es un enlace covalente.
En otra realizacion preferida, la resina de adsorcion se selecciona de entre: SP-207, SP-207ss, o la mezcla de las mismas.
En otra realizacion preferida, en la etapa (1), a la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I se la deja fluir a traves de la columna cromatografica llena de la resina de adsorcion macroporosa o la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I se mezcla con la resina de adsorcion macroporosa, cargando con ello el compuesto en bruto de Formula I en la resina de adsorcion macroporosa; y el caudal es 0,1-10 volumenes de columna por hora.
En otra realizacion preferida, la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I comprende sales ionizables, la sal ionizable se selecciona de entre sulfatos, nitratos, sales que comprenden halogeno, fosfatos, acetatos, carbonatos, citratos, silicatos, persulfatos, cromatos, lactatos, oxalatos, etc., o la mezcla de los mismos.
En una realizacion del procedimiento de purificacion proporcionado por la invencion, en la etapa (2), el porcentaje en volumen del disolvente organico es de 0-3%, preferiblemente 0-2%, basado en el volumen total del liquido de lavado.
En una realizacion del procedimiento de purificacion proporcionado por la invencion, en la etapa (3), el porcentaje en volumen del disolvente organico es de 0-20%, preferiblemente 0-5%, basado en el volumen total de eluyente.
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En una realizacion del procedimiento de purificacion proporcionado por la invencion, en la etapa (1), la relacion en peso del compuesto en bruto de Formula I con respecto a la resina de adsorcion macroporosa es 0,1-15 (g/L); preferiblemente, 5-10 (g/ L)).
En una realizacion del procedimiento de purificacion proporcionado por la invencion, el disolvente organico se selecciona de entre: alcohol C1-4, cetona C1-4; preferiblemente, el disolvente organico se selecciona de entre: metanol, etanol, propanol, butanol, acetona, butanona, o la mezcla de los mismos; mas preferiblemente, se selecciona de entre: metanol, etanol o acetona.
De acuerdo con ello, en la invencion se proporciona un metodo de purificacion sin necesidad de utilizar gran cantidad de disolvente y gel de sllice, y tal metodo no solo puede superar los defectos de la tecnica anterior, sino tambien mejorar la pureza del compuesto de Formula I.
Breve descripcion de los dibujos
La Fig. 1 muestra el cromatograma de HPLC del compuesto en bruto 1 de Formula I de acuerdo con el Ejemplo 1.
La Fig. 2 muestra el cromatograma de HPLC del compuesto de Formula I purificado en el Ejemplo 6.
Descripcion detallada de la invencion
A traves de una gran cantidad de experimentos, los inventores han descubierto que la resina de adsorcion aromatica macroporosa, especialmente resinas de derivados aromaticos, tal como la resina aromatica con bromo unido a su esqueleto, tiene una adsorcion hidrofobica mejorada, y tal resina exhibira una fuerte adsorcion de la sustancia con una fuerte hidrofilicidad, tal como el compuesto de la Formula I. la resina es significativamente eficaz en la purificacion del compuesto de Formula I con las impurezas relevantes.
La resina de adsorcion aromatica no polar polimerizada a partir de estireno y divinilbenceno, o una resina de adsorcion metacrllica de polaridad moderada con unidades de metacrilato en su estructura tiene una adsorcion hidrofoba debil, por lo tanto, exhibira una adsorcion debil de la sustancia con fuerte hidrofilicidad, tal como el compuesto de Formula I. Sin embargo, los inventores han descubierto sorprendentemente que cuando el compuesto de Formula I se absorbe sobre la resina de adsorcion macroporosa, se pueden anadir sales ionizables para mejorar la hidrofobicidad del compuesto diana, por lo tanto, el compuesto de Formula I se puede absorber facilmente en la resina, purificando de este modo el compuesto de Formula I.
El procedimiento para purificar el compuesto de Formula I proporcionado por la presente invencion incluye las siguientes etapas:
en la primera etapa, cargar el compuesto en bruto de fFormula I en una resina de adsorcion macroporosa;
en la segunda etapa, lavar la resina de adsorcion macroporosa usando agua, un disolvente organico o una solucion mixta de disolvente organico y agua como llquido de lavado; y
en la tercera etapa, eluir el compuesto de Formula I de la resina de adsorcion macroporosa usando agua, un disolvente organico o una solucion mixta de un disolvente organico y agua como eluyente.
La primera etapa se puede realizar poniendo la solucion del compuesto en bruto de Formula I en contacto con la resina de adsorcion macroporosa. El contacto se puede realizar por: a. alimentando directamente la resina de adsorcion a la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I, y agitando la mezcla resultante durante 5-120 minutos; o b. llenando el dispositivo cromatografico, tal como una columna cromatografica con la resina de adsorcion, y dejando fluir la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I a traves de la columna cromatografica, en donde el caudal puede ser 0,1-10 volumenes de columna por hora.
En un ejemplo de la invencion, el procedimiento de purificacion incluye las siguientes etapas:
A. alimentar directamente la resina de adsorcion a la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I, y agitar la mezcla resultante durante 5-120 minutos;
B. separar la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I de la resina;
C. lavar la resina de adsorcion macroporosa en la etapa B usando agua, un disolvente organico o una solucion mixta de un disolvente organico y agua como llquido de lavado;
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D. eluir la resina de adsorcion lavada obtenida en la etapa C mediante el uso de agua, un disolvente organico o una solucion mixta de un disolvente organico y agua como eluyente, y luego recoger el eluato que comprende el compuesto de la Formula I, obteniendo de este modo el compuesto purificado de Formula I.
En la etapa B, la separacion incluye, por ejemplo, filtracion y centrifugacion, para separar la resina de la fase de filtrado.
En procedimientos de purificacion proporcionados por la invencion, el disolvente organico se selecciona de: alcohol Cm, cetona C1-4, o la mezcla de los mismos; preferiblemente, metanol, etanol, propanol, butanol, acetona, butanona, o la mezcla de los mismos.
En procedimientos de purificacion proporcionados por la invencion, la resina de adsorcion macroporosa se selecciona de entre una resina de adsorcion aromatica no polar polimerizado a partir de estireno y divinilbenceno, o una resina de adsorcion metacrllica de polaridad moderada con unidades de metacrilato en su estructura. Preferiblemente, la resina se selecciona de entre: resina de absorcion la serie XAD (RohmHaas, EE.UU.), resina de absorcion la serie Diaion HP (Mitsubishi Chemical Corporation, Japon), y la resina de adsorcion que comprende bromo y esta unido a la matriz de pollmero de estireno a traves de un enlace qulmico covalente. Mas preferiblemente, la resina se selecciona de entre: XAD-1, XAD-2, XAD-3, XAD-4, XAD-5, xAd-6, XAD-7, XAD-7HP, XAD-8, XAD-16, XAD -16HP, HP-10, HP-20, HP-20ss, HP-21, HP-30, HP-40, HP-50, HP-2MG, SP-825, SP-850, SP- 70, SP-700, SP207, SP207ss, o la mezcla de las mismas. Lo mas preferible, es que la resina se seleccione de entre: HP20, XAD-16, XAD-16P, SP207, o productos mini-granulados, tales como HP-20ss, SP207ss, el tamano de partlcula de la cual es 0,063 mm-0,150 mm, y la ejecucion de la separacion se ha mejorado mucho.
Ademas, los inventores han descubierto que la resina de adsorcion que comprende halogeno y esta unido a la matriz de pollmero de estireno a traves de un enlace qulmico covalente posee una mayor absorcion y eficiencia de separacion. Se prefiere la resina de adsorcion que comprende bromo y esta unido con la matriz de pollmero de estireno a traves de un enlace qulmico covalente, y la resina mas preferida es SP207, SP207ss, o de la mezcla de las mismas. Actualmente, las resinas de adsorcion disponibles comercialmente que comprenden halogeno y esta unido a la matriz de pollmero de estireno a traves de un enlace qulmico covalente son principalmente: SP207, SP207ss (Mitsubishi Chemical Corporation, Japon).
Con respecto a la resina de absorcion sin halogeno, el compuesto en bruto de Formula I se mezcla con sales ionizables antes de cargar el compuesto en bruto de Formula I, para incrementar la conductividad de la solucion de carga y la hidrofobicidad del compuesto diana de Formula I, mejorando de ese modo la absorcion de la resina del compuesto diana. La sal ionizable se selecciona entre sulfatos, nitratos, sales que comprenden halogeno, fosfatos, acetatos, carbonatos, citratos, silicatos, persulfatos, cromatos, lactatos, oxalatos, etc., o la mezcla de los mismos. Preferiblemente, la sal ionizable se selecciona de entre una o mas del grupo siguiente que consiste en sales comunes: sales que comprenden halogeno, sulfatos, fosfatos, acetatos, carbonatos y citratos. Lo mas preferible es que la resina se seleccione de entre: NaCl, KCl y (NH4)2SO4.
En la segunda etapa del procedimiento de purificacion proporcionado por la invencion, la concentracion del disolvente organico en el llquido de lavado es de 0-3%; preferiblemente, 0-2%. La sal ionizable puede ser anadida al llquido de lavado tambien. La sal ionizable incluye sulfatos, nitratos, sales que comprenden halogeno, fosfatos, acetatos, carbonatos, citratos, silicatos, persulfatos, cromatos, lactatos, oxalatos, etc., o la mezcla de las mismas. Preferiblemente, la sal ionizable se selecciona de entre una o mas del grupo siguiente que consiste en sales comunes: sales que comprenden halogenos, sulfatos, fosfatos, acetatos, carbonatos y citratos. Lo mas preferible es que la resina se seleccione de entre: NaCl, KCl y (NH4)2SO4.
En la tercera etapa del procedimiento de purificacion proporcionado por la invencion, la concentracion del disolvente organico en el eluyente es de 0-20%; preferiblemente, 0-5%.
En el procedimiento de purificacion proporcionado por la invencion, el lavado se puede realizar 1, 2, o 3 veces. El caudal de lavado puede ser 0,1-10 volumenes de columna por hora. El caudal para la elucion puede ser 0,1-10 volumenes de columna por hora.
Tal como se usa en el presente documento, "compuesto de Formula I" y "compuesto I" se pueden utilizar indistintamente, tanto en referencia al compuesto que tiene la siguiente estructura o las sales farmaceuticamente aceptables del mismo:
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Tal como se usa en la presente memoria, "sal farmaceuticamente aceptable" significa sales formadas a partir de las siguientes bases: base inorganica, tales como sodio, potasio, magnesio, calcio, aluminio, etc.; base organica, tal como metilamina, etilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, ciclohexanolamina, lisina, ornitina, etc., u otras bases relevantes para las sales farmaceuticamente aceptables.
Tal como se usa en la presente memoria, "pureza del compuesto de Formula I", "pureza del compuesto I" y "pureza de HPLC del compuesto I" se pueden utilizar indistintamente, todas ellas con referencia al porcentaje del area del pico del compuesto I con respecto a la suma de todas las areas de los picos medidos en las condiciones de deteccion de cromatografla llquida de alta resolucion (HPLC) proporcionadas por la invencion.
Tal como se usa en la presente memoria, "compuesto en bruto de Formula I" y "compuesto en bruto I" se pueden utilizar indistintamente, tanto refiriendose a una mezcla que contiene <80% del compuesto I, medido en las condiciones de deteccion de cromatografla llquida de alta resolucion (HPLC) proporcionadas por la invencion. El compuesto en bruto I se puede obtener utilizando cualquier procedimiento adecuado conocido en la tecnica, incluyendo por ejemplo los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 del documento EP0431350B1, en el que el compuesto en bruto I se obtuvo por fermentacion de Coleophoma sp. F-11899 (FERM BP2635) y, a continuacion, por la extraccion de los micelios utilizando un disolvente organico. Preferiblemente, la extraccion se lleva a cabo anadiendo directamente el cultivo de fermentacion en 2 veces el volumen del disolvente organico. El disolvente organico preferido se selecciona de entre metanol, etanol o acetona.
Tal como se usa en la presente memoria, "solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I" y "solucion que comprende el compuesto en bruto I" se pueden utilizar indistintamente, tanto refiriendose a una solucion que contiene el compuesto diana I y uno o mas compuestos no diana. La solucion se puede obtener disolviendo el compuesto en bruto I en agua o en una solucion tampon, o una solucion de reaccion que comprende el compuesto de Formula I obtenido a partir de cualquier procedimiento. Para preparar el compuesto I se puede utilizar la solucion de reaccion que comprende el compuesto I a partir de cualquier procedimiento conocido en la tecnica (vease el ejemplo 1 del documento CN1040541C). Por ejemplo, la solucion se obtiene mediante la adicion de una cantidad de agua o disolvente organico a la solucion de transformacion del compuesto I. La concentracion del disolvente organico en la solucion del compuesto en bruto I es 0% -2%.
Tal como se usa en la presente memoria, "carga" se refiere al procedimiento de poner la solucion que contiene el compuesto en bruto I en contacto con una resina de adsorcion macroporosa de forma que el compuesto en bruto I se adsorbe en la resina de adsorcion macroporosa. "Contacto" incluye alimentar directamente la resina de adsorcion macroporosa a la solucion y despues agitar para permitir que ocurra la adsorcion; o llenar con la resina de adsorcion macroporosa un dispositivo cromatografico y dejar que la solucion fluya a traves de la columna cromatografica.
"Lavar" la resina de adsorcion macroporosa significa que se deja pasar una solucion tampon adecuada a traves o sobre la resina de adsorcion macroporosa.
Tal como se usa en la presente memoria, una "solucion tampon de lavado" se refiere a una solucion tampon utilizada para lavar la resina de adsorcion macroporosa (principalmente para retirar la fase organica) antes de que el
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compuesto diana I se eluya. Convenientemente, la solucion tampon de lavado y la solucion de tampon de carga de la muestra pueden, aunque no necesariamente, ser de la misma polaridad.
“Eluir” moleculas de la resina de adsorcion macroporosa significa que las moleculas se retiran de la resina de adsorcion macroporosa cambiando la polaridad de la solucion tampon alrededor de la resina de adsorcion macroporosa. Debido a la polaridad, la solucion tampon puede competir con las moleculas por los sitios de adsorcion en la resina de adsorcion macroporosa.
Tal como se usa en la presente memoria, una "solucion tampon de elucion" se utiliza para eluir el compuesto diana I a partir de una fase estacionaria. El compuesto diana I se puede eluir de la resina de adsorcion macroporosa mediante la solucion tampon de elucion.
"Purificar" el compuesto I a partir de una composicion que comprende el compuesto diana I y uno o mas compuestos no diana quiere decir que la pureza del compuesto I en la composicion se aumenta retirando (total o parcialmente) al menos un compuesto no diana de la composicion.
Todas las caracterlsticas mencionadas anteriormente o en los ejemplos siguientes de la invencion se pueden combinar opcionalmente. Todas las caracterlsticas divulgadas en esta memoria se pueden utilizar en cualquier combinacion. Cualquier caracterlstica alternativa que tengan el mismo, equivalente, o similar proposito puede sustituir a cada caracterlstica divulgada en esta especificacion. Por lo tanto, a menos que se especifique lo contrario, las caracterlsticas como las divulgadas son solo ejemplos generales de caracterlsticas equivalentes o similares.
Las principales ventajas de la invencion incluyen:
1. Se proporciona un nuevo procedimiento de bajo costo para purificar un compuesto ciclolipopeptldico, en particular, compuestos de equinocandina;
2. Las ventajas de las etapas de purificacion en el procedimiento proporcionado por la invencion, tales como, una via simple, condiciones suaves, rendimientos elevados de purificacion, una pequena cantidad del disolvente organico utilizado, tratamientos simples, baja contaminacion del medio ambiente, en gran medida, reducen los requisitos de manipulacion y equipos de procesamiento, reduciendo as! el coste;
3. A traves del procedimiento proporcionado por la invencion se pueden obtener productos diana estables, facilitando de este modo el control de calidad en los productos finales y la produccion a gran escala.
La invencion se ilustrara adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos especlficos. Se ha de entender que estos ejemplos solamente estan destinados a ilustrar la invencion. Respecto a los metodos experimentales de los siguientes ejemplos sin condiciones particulares, se llevan a cabo en condiciones rutinarias o segun las instrucciones del fabricante. A menos que se especifique lo contrario, todos los porcentajes, relaciones, proporciones o partes son en peso.
La unidad de los porcentajes peso/ volumen en la invencion es bien conocida por los expertos en la tecnica, por ejemplo, el peso de un soluto en una solucion de 100 mL.
A menos que se defina lo contrario, todos los terminos cientlficos y tecnicos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado que se entiende comunmente por el experto en la tecnica. Ademas, cualquier procedimiento o material similar o equivalente a los descritos en la presente memoria se pueden utilizar en el procedimiento de la presente invencion. Las realizaciones y materiales preferidos descritos en la presente memoria se proporcionan meramente a tltulo ilustrativo.
En los siguientes ejemplos, el compuesto I es detectado por HPLC:
El analisis se realiza en el sistema de HPLC analltica Waters. El analisis de HPLC en fase inversa se utiliza para la determinacion de FR179642, la equinocandina B y otros analogos. El material y las condiciones utilizadas en el analisis de fase inversa se enumeran como sigue: columna cromatografica PLATISIL ODS (tamano de partlcula 5 pm, 4,6 mm d.i. x 250 mm); Temperatura: 30 ° C; fase movil: 3% acetonitrilo / 0,5% fosfato de dihidrogeno de sodio; caudal: 1 ml/min; detectado bajo UV de 210 nm.
Ejemplo 1
Preparacion del compuesto en bruto de Formula I
La solucion de reaccion que contenla el compuesto I se obtuvo de acuerdo con el Ejemplo 1 del documento US5376634. En la solucion, el contenido del compuesto I era 7,3 g / L, y la pureza de HPLC del compuesto fue 73,91% (vease la Fig. 1 y la Tabla 1 para el patron de HPLC).
Tabla 1
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Tiempo de retention Area Altura % Area
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5,257 52004 4607 1,15
2
5,815 202507 25208 4,49
3
6,432 87928 6165 1,95
4
6,895 8923 1043 0,20
5
7,291 121333 10471 2,69
6
7,710 44199 2234 0,98
7
8,353 11225 1099 0,25
8
9,578 3334358 165845 73,91
9
11,460 134324 9884 2,98
10
13,681 11436 779 0,25
11
14,848 9766 729 0,22
12
15,163 23807 1379 0,53
13
19,268 307011 6129 6,81
14
24,014 162338 6277 3,60
Ejemplo 2
Purification del compuesto I
En este Ejemplo se utilizaron 500 ml de solution que contenia el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que la solucion contenia 3,65 g de compuesto I.
Se anadio 25 g de NaCl a la solucion en bruto. Tras la disolucion, la solucion en bruto se cargo en una columna cromatografica llena con 370 ml de resina HP20ss, en la que el caudal para la carga fue de 1 volumen de columna por hora. Despues, se utilizo NaCl acuoso al 3% (2 x volumenes de columna) para lavar la columna siendo el caudal para el lavado 1 volumen de columna por hora. Y luego, se utilizaron 100 ml de agua pura como eluyente, en el que el caudal de elucion es 1 volumen de columna por hora. Las porciones que contenian el compuesto I se recogieron y se mezclaron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 3,4 g mediante HPLC (rendimiento 93,2%), y su pureza fue del 97,2%.
Ejemplo 3
Purificacion del compuesto I
En este Ejemplo se utilizo 1 L de solucion que contenia el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que la solucion contenia 7,3 g de compuesto I.
Se anadio 40 g de KCl a la solucion de bruto. Tras la disolucion, la solucion en bruto se cargo en una columna cromatografica llena de 0,8 L de resina XAD-16, en la que el caudal para la carga fue de 1 volumen de columna por hora. Despues, se utilizo agua pura (5 x volumenes de columna) para lavar la columna siendo el caudal para el lavado 1 volumen de columna por hora. Y luego, se utilizaron 2,5 L de metanol acuoso al 3% 1 como eluyente, en el que el caudal de elucion es 1 volumen de columna por hora. Las porciones que contenian el compuesto I se recogieron y se mezclaron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 6,6 g mediante HPLC (rendimiento 90,4%), y su pureza fue del 96,5%.
Ejemplo 4
Purificacion del compuesto I
En este Ejemplo se utilizo 1 L de solucion que contenia el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que la solucion contenia 7,3 g de compuesto I.
La solucion en bruto se anadio a un vaso de plastico de dosificacion (5 L). Se anadieron al vaso de dosificacion, 1,4 L de resina XAD-16HP y 50 g de (NH4)2SO4. La mezcla resultante se agito durante 120 minutos a la temperatura ambiente, y despues se filtro por un embudo Buchner en que se coloco un trozo de papel de filtro. El filtrado se descarto, y la resina se cargo en una columna cromatografica. Se usaron 3 L de agua pura para lavar la columna. Despues, se utilizaron 5 L de acetona acuosa al 4% como eluyente. Las porciones que contenian el compuesto I se recogieron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 6,7 g mediante HPLC (rendimiento 92,5%), y su pureza fue del 97,3%.
Ejemplo 5
Purificacion del compuesto I
En este Ejemplo se utilizaron 0,5 L de solucion que contenia el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que la solucion contenia 4,6 g de compuesto I.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
La solucion en bruto se cargo en una columna cromatografica llena con 300 ml de resina SP207ss, en la que el caudal para la carga fue de 5 volumenes de columna por hora. Despues, se utilizo etanol acuoso al 1% (2 x volumenes de columna) para lavar la columna siendo el caudal para el lavado 1 volumen de columna por hora, y se uso para lavar la columna etanol acuoso al 2% (2 x volumenes de columna) siendo el caudal para el lavado 1 volumen de columna por hora. Y luego, se utilizaron 3,6 L de etanol acuoso al 3% como eluyente, en el que el caudal de elucion es 1 volumen de columna por hora. Las porciones que contenlan el compuesto I se recogieron y se mezclaron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 4,33 g mediante HPLC (rendimiento 94,2%), y su pureza fue del 99,0% (vease la Fig. 2 y la Tabla 2 para el patron de HPLC).
Tabla 2
Tiempo de retention Area Altura % Area
1
6481 100952 8789 0,41
2
6,890 29266 406 0,12
3
7,509 34144 889 0,14
4
9,464 24141515 1222680 99,00
5
11,387 82921 1983 0,33
Ejemplo 6
Purification del compuesto I
En este Ejemplo se utilizaron 0,5 L de solucion que contenla el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que la solucion contenla 4,6 g de compuesto I.
La solucion en bruto se cargo en una columna cromatografica llena con 600 ml de resina SP207ss, en la que el caudal para la carga fue de 5 volumenes de columna por hora. Despues, se utilizo agua pura (2 x volumenes de columna) para lavar la columna siendo el caudal para el lavado 1 volumen de columna por hora. Y luego, se utilizaron 7,2 L de etanol acuoso al 2% como eluyente, en el que el caudal de elucion es de 2 volumenes de columna por hora. Las porciones que contenlan el compuesto I se recogieron y se mezclaron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 4,4 g mediante HPLC (rendimiento 95,6%), y su pureza fue del 99,0%.
Ejemplo 7
Purificacion del compuesto I
En este Ejemplo se utilizaron 0,5 L de solucion que contenla el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que la solucion contenla 4,6 g de compuesto I.
La solucion en bruto se cargo en una columna cromatografica llena de 46 L de resina SP207, en el que el caudal para la carga fue de 5 volumenes de columna por hora. Despues, se utilizo agua pura (2 x volumenes de columna) para lavar la columna siendo el caudal para el lavado 1 volumen de columna por hora. Y luego, se utilizaron 150 L de etanol acuoso al 20% como eluyente, en el que el caudal de elucion es de 2 volumenes de columna por hora. Las porciones que contenlan el compuesto I se recogieron y se mezclaron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 4,02 g por HPLC (rendimiento 87,4%), y su pureza fue del 98,1%.
Ejemplo 8
Purificacion del compuesto I
En este Ejemplo se utilizaron 0,5 L de solucion que contenlan el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que la solucion contenla 4,6 g de compuesto I.
La solucion en bruto se cargo en una columna cromatografica llena con 460 ml de resina SP207, en la que el caudal para la carga fue de 5 volumenes de columna por hora. Despues, se utilizo etanol acuoso al 1% (2 x volumenes de columna) para lavar la columna siendo el caudal para el lavado 1 volumen de columna por hora. Y luego, se utilizo 3,0 L de etanol acuoso al 5% como eluyente, en el que el caudal de elucion es de 1 volumenes de columna por hora. Las porciones que contenlan el compuesto I se recogieron y se mezclaron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 4,4 g mediante HPLC (rendimiento 95,6%), y su pureza fue del 97,9%.
Ejemplo Comparativo 1 (Ejemplo de Referencia)
Purificacion del compuesto I
En este Ejemplo se utilizaron 500 ml de solucion que contenla el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que la solucion contenla 3,65 g de compuesto I.
La solucion en bruto se cargo en una columna cromatografica llena con 370 ml de resina HP20ss, en la que el caudal para la carga fue de 1 volumenes de columna por hora. Despues, se utilizaron 1.000 ml de agua pura como eluyente, en el que el caudal de elucion es de 1 volumenes de columna por hora. Las porciones que contenlan el compuesto I se recogieron y se mezclaron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 3,4 g 5 mediante HPLC (rendimiento 93,2%), y su pureza fue del 75,2%.
Ejemplo Comparativo 2 (Ejemplo de Referencia)
En este Ejemplo se utilizo 1 L de solucion que contenla el compuesto en bruto I obtenido en el Ejemplo 1, en el que 10 la solucion contenla 7,3 g de compuesto I.
La solucion en bruto se cargo en una columna cromatografica llena de 0,8 L de resina XAD-16, en la que el caudal para la carga fue de 1 volumenes de columna por hora. Despues, se utilizo agua pura (5 * volumenes de columna) para lavar la columna siendo el caudal para el lavado 1 volumen de columna por hora. Y luego, se utilizaron 2,5 L de 15 metanol acuoso al 3% como eluyente, en el que el caudal de elucion es de 1 volumenes de columna por hora. Las porciones que contenlan el compuesto I se recogieron y se mezclaron. El contenido de compuesto I en el eluato se determino que era 6,6 g mediante HPLC (rendimiento 50,4%), y su pureza fue del 79,5%.
Los ejemplos anteriores 1-8 son meramente los ejemplos preferidos para la presente invencion. Los contenidos 20 tecnicos sustanciales de acuerdo con la presente invencion se definen ampliamente en las reivindicaciones.

Claims (11)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    REIVINDICACIONES
    1. Un procedimiento para purificar el compuesto de Formula I o las sales del mismo, en donde dicho procedimiento comprende las siguientes etapas:
    (1) cargar el compuesto en bruto de Formula I en una resina de adsorcion macroporosa;
    (2) lavar la resina de adsorcion macroporosa usando agua, un disolvente organico o una solucion mixta de un disolvente organico y agua como el llquido de lavado; y
    (3) eluir el compuesto de Formula I de la resina de adsorcion macroporosa usando agua, un disolvente organico o una solucion mixta de un disolvente organico y agua como eluyente;
    imagen1
    en donde, la resina de adsorcion de la etapa (1) comprende halogeno y esta unida a una matriz de pollmero de estireno a traves de un enlace qulmico que es un enlace covalente; o
    en la etapa (1), la solucion comprende el compuesto en bruto de Formula I que comprende sales ionizables; y la resina de adsorcion macroporosa se selecciona de entre una resina de adsorcion aromatica no polar polimerizada a partir de estireno y divinilbenceno, o una resina de adsorcion metacrllica de polaridad moderada con unidades de metacrilato en su estructura
  2. 2. El procedimiento de purificacion segun la reivindicacion 1, en el que en la etapa (1), a la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I se la deja fluir a traves de la columna cromatografica llena de la resina de adsorcion macroporosa o la solucion que comprende el compuesto en bruto de Formula I se mezcla con la resina de adsorcion macroporosa, cargando con ello el compuesto en bruto de Formula I en la resina de adsorcion macroporosa.
  3. 3. El procedimiento de purificacion segun la reivindicacion 2, en el que el caudal es 0,1-10 volumenes de columna por hora.
  4. 4. El procedimiento de purificacion segun la reivindicacion 1, en el que la resina de adsorcion macroporosa se selecciona de entre XAD-1, XAD-2, XAD-3, XAD-4, XAD-5, XAD-16, XAD-16HP, HP-10, HP-20, HP- 20ss, HP-21, HP-30, HP-40, HP-50, SP-825, SP-850, SP-70, SP-700, SP-207, SP-207ss, XAD-6, XAD-7, XAD-7HP, XAD-8, HP- 2MG, o la mezcla de las mismas.
  5. 5. El procedimiento de purificacion segun la reivindicacion 1, en el que la resina de adsorcion comprende bromo y esta unido a la matriz de pollmero de estireno a traves de un enlace qulmico que es un enlace covalente.
  6. 6. El procedimiento de purificacion segun la reivindicacion 5, en el que la resina de adsorcion se selecciona de entre: SP-207, SP-207ss, o la mezcla de las mismos.
  7. 7. El procedimiento de purificacion segun la reivindicacion 1, en el que la sal ionizable se selecciona de entre sulfatos, nitratos, sales que comprenden halogeno, fosfatos, acetatos, carbonatos, citratos, silicatos, persulfatos, cromatos, lactatos, oxalatos, etc., o la mezcla de las mismas.
  8. 8. El procedimiento de purificacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el disolvente organico se selecciona de entre: alcohol C1-4, cetona C1-4.
    5 9. El procedimiento de purificacion segun la reivindicacion 8, en el que el disolvente organico se selecciona de
    entre: metanol, etanol, propanol, butanol, acetona, butanona, o de la mezcla de los mismos.
  9. 10. El procedimiento de purificacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que en la etapa (2), el porcentaje en volumen del disolvente organico es de 0-3%, preferentemente 0-2%, basado en el volumen total del
    10 llquido de lavado.
  10. 11. El procedimiento de purificacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que en la etapa (3), el porcentaje en volumen del disolvente organico es de 0-20%, preferiblemente 0-5%, basado en el volumen total de eluyente.
    15
  11. 12. El procedimiento de purificacion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que en la etapa (1), la relacion en peso del compuesto en bruto de Formula I con respecto a la resina de adsorcion macroporosa es 0,115 (g/L).
    20
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