CN103965298B - 一种阿尼芬净的纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种采用大孔吸附树脂纯化阿尼芬净的方法，包括(a)取阿尼芬净粗品，上样于大孔吸附树脂；(b)用酸性或中性水溶液洗涤树脂柱，再用体积百分比为0％‑50％有机溶剂的酸性水溶液洗涤树脂柱；(c)用体积百分比为40％‑80％有机溶剂的酸性水溶液洗脱吸附于树脂上的阿尼芬净，收集洗脱液；(d)合并收集得到的洗脱液，分离得到阿尼芬净。本发明的方法实现了阿尼芬净和关键杂质的有效分离，最后得到符合制剂要求的阿尼芬净纯品，而且本发明的方法操作简单，非常适合商业化生产。
Description
技术领域
本发明属于制药领域，涉及一种棘白菌素类抗真菌化合物的纯化方法。具体来说，本发明涉及抗真菌化合物阿尼芬净通过大孔吸附树脂进行纯化的方法。
发明背景
近年来，随着肿瘤化疗、器官移植、艾滋病等发病率的增加，深部真菌感染的发生率及由此引起的死亡率持续上升，已经成为临床较为棘手的问题之一。棘白菌素类化合物具有较好的抗真菌活性，包括棘白菌素B、棘白菌素C、肺念菌素A0、肺念菌素B0和WF11899等。该类化合物可进一步修饰为半合成药物，依次上市的有米卡芬净、卡泊芬净和阿尼芬净。上述半合成药物的起始原料均由微生物发酵获得，含有大量的结构类似的副产物，给后续终产物的纯化带来了极大的困难。
阿尼芬净属于棘白菌素类抗真菌药物，CAS号为166663-25-8，分子量为1140.24，结构式如下式Ⅰ所示，2006年首次在美国上市，药用剂型为注射剂，主要应用于深部真菌感染，特别是念珠菌感染的治疗。
在CN93103587和CN00805697中公布了阿尼芬净的制备方法，以发酵产物为起始原料，通过脱酰化酶处理得母环，后与侧链戊氧三联苯甲酰基连接制得阿尼芬净粗品，再经液相制备柱纯化获得阿尼芬净纯品，这两个申请中未公开制备柱的填料和洗脱溶液，具体的纯化方案未知，并且液相制备柱的纯化方法在工业上放大，目前还存在一定的难度。
Timothy N,John V等(commercialization and late-stage development of semi-syntheticantifungal API:anidulafungin/D-Fructose(Eraxis)，organic process research and development12,447.2008)公布了制备阿尼芬净-果糖共晶复合物的方法，其中母环与侧链连接制得粗品后，直接与D-果糖形成共晶复合物，该文献中没有报道终产物的纯度和关键的纯化技术方案。
根据CN00805697中公开的方法可制得纯度为97％的阿尼芬净粗品，而作为药物其对纯度和杂质都有较高的要求，以保证药物的有效性和安全性。阿尼芬净作为半合成药物，起始原料中含有的结构类似的杂质以及自身分子结构的不稳定性，决定了其相关杂质的控制是纯化技术方案的关键点，在CN201310146413.6中公开了一种用硅胶柱层析纯化阿尼芬净粗品的方法，该方法可将阿尼芬净的纯度提高至98％以上，而在该公开文本中未提及纯化前后杂质含量信息，然而对于药物而言其API中杂质含量的控制是影响药物药效与安全性的重要影响因素之一。在现有技术中关于阿尼芬净中杂质含量的控制方法报道很少，因此一种新的阿尼芬净的纯化方法亟需开发以满足原料药的工业化生产。
发明内容
本发明提供了一种阿尼分净的纯化方法，通过使用大孔吸附树脂，实现阿尼芬净与关键杂质的有效分离，包括以下步骤：
(a)取阿尼芬净粗品，上样于大孔吸附树脂；
(b)用酸性或中性水溶液洗涤树脂柱，再用体积百分比为0％-50％有机溶剂的酸性水溶液洗涤树脂柱；
(c)用体积百分比为40％-80％有机溶剂的酸性水溶液洗脱吸附于树脂上的阿尼芬净，收集洗脱液；
(d)合并收集得到的洗脱液，分离得到阿尼芬净。
其中，步骤(a)包括将阿尼芬净粗品溶解于有机溶剂的水溶液中，所述有机溶剂的水溶液的体积百分比为50％-60％，有机溶剂可选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈或丙酮中一种或它们的任意混合。将上述溶液，上样于湿法或干法装柱的大孔吸附树脂柱内，进行动态吸附(动态吸附具体指上样的同时保持柱下端有液体缓慢的流出)，吸附过程中保持液体流速在2d/s(d/s表示滴/秒)。其中，所述大孔吸附树脂的类型为聚苯乙烯类树脂，优选非极性或弱极性的聚苯乙烯类树脂，具体优选为H-60、HP20、HP20ss、HZ20ss、XAD-1600、XAD-4，更优选H-60、HP20ss、HZ20ss，非限制性的优选孔径为75-300μm。
其中，洗涤步骤(b)包括吸附完毕后，先用酸性或中性水溶液洗涤树脂柱，再用体积百分比为0％-50％有机溶剂的酸性水溶液进行洗涤，优选用体积百分比为10％-45％有机溶剂的酸性水溶液进行洗涤，以除去大极性的杂质。所述酸性水溶液和有机溶剂的酸性水溶液的PH为2-6，优选2.5-4.5，更优选3.0-3.5；有机溶剂的酸性水溶液的使用量约2BV(BV代表柱体积的意思)，洗涤液的流速为1BV/h。
其中，洗脱步骤(c)包括待洗涤完毕后，使用体积百分比为40％-80％，优选46％-60％，更优选48％-52％有机溶剂的酸性水溶液洗脱吸附于树脂柱上的阿尼芬净，并收集洗脱液。所述有机溶剂的酸性水溶液的pH值为2-6，优选2.5-4.5，更优选3.0-3.5，有机溶剂的水溶液的使用量约5BV，洗脱液的流速1BV/h。
进一步的，步骤(b)和步骤(c)中使用的有机溶剂须与水能够混溶，可选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮或2-丁酮中的一种或它们的任意混合，优选甲醇、乙醇、乙腈或丙酮中的一种或它们的任意混合，更优选丙酮。
其中，步骤(d)包括合并洗脱液，并除去有机溶剂，然后用萃取剂萃取水层，获得含有阿尼芬净的有机相，除去有机溶剂得到阿尼芬净。在一个具体实施方案中，包括在洗脱完毕后，合并阿尼芬净纯度大于99％的洗脱液，蒸除有机溶剂，用萃取剂萃取水层，萃取至水相中阿尼芬净的含量小于0.1％，合并有机相，除去有机相中的溶剂得到阿尼芬净，其纯度大于99.3％。
步骤(d)中所述的萃取剂可选自二氯甲烷、石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚、2-甲基四氢呋喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、正丁醇、异丁醇、正己烷或环己烷，优选二氯甲烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、2-甲基四氢呋喃；更优选自正丁醇、异丁醇、2-甲基四氢呋喃。
可以根据实际需要将纯度低于99％的洗脱液合并，按上述方法套用处理，获得合格的阿尼芬净纯品；优选将纯度大于98％不纯的洗脱液合并，套用至下一批次的纯化，多次套用可显著提高收率。
进一步的，本发明针对现有技术中制备阿尼芬净的工艺(例如CN00805697，commercialization and late-stage development of semi-synthetic antifungal API:anidulafungin/D-Fructose(Eraxis)，organic process research and development12,447.2008)会产生相关杂质1A(分子量为1126)和/或1B(分子量为1106)而研发的一种阿尼芬净的纯化方法。
非限制性的，本发明方法可用于纯化含量为85％-97％的阿尼芬净粗品。
在一个具体实施方案中，参照CN00805697公开的方法制备得到阿尼芬净粗品，所得粗品含量可通过高效液相进行分析，其结果如下表1所示：
表1阿尼芬净粗品HPLC谱图中各成分含量及出峰时间
| 序号 | 保留时间(min) | 峰名称 | 相对峰面积(％) |
| 1 | 6.79 | na | 0.10 |
| 2 | 7.39 | na | 0.07 |
| 3 | 8.11 | 1A | 1.77 |
| 4 | 8.71 | 阿尼芬净 | 97.18 |
| 5 | 9.02 | 1B | 0.74 |
| 6 | 16.80 | na | 0.05 |
| 7 | 16.95 | na | 0.07 |
| 8 | 17.83 | na | 0.02 |
| 总和 | 100 |
由表1可知，阿尼芬净粗品经HPLC检测其纯度可达97.18％，其含有两个关键杂质分别定义为1A(保留时间为8.11min)含量为1.77％、1B(保留时间为9.02min)含量为0.74％。通过液相与质谱联用进行分析，得到1A的分子量为1126，1B的分子量为1106。
将上述表1中所述的阿尼芬净粗品按照本发明的方法进行纯化，其中步骤(d)包括合并阿尼芬净纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液，蒸除有机溶剂，用萃取剂萃取水层，萃取至水相中阿尼芬净的含量小于0.1％，合并有机相，除去有机相中的溶剂得到阿尼芬净，其纯度大于99.3％，杂质1A和1B小于0.3％。
本发明所述的有机溶剂水溶液的体积百分比含义是指有机溶剂的体积除以水和有机溶剂的总体积所得的百分含量，如体积百分比为50％有机溶剂的水溶液，假设有机溶剂的体积为50ml，那么水的体积为50ml，两者的体积之和为100ml。
本发明各步骤中使用的水为纯化水或去离子水，调pH所用的酸可选自无机酸或有机酸，无机酸可选自盐酸、硫酸、磷酸等，有机酸可选自甲磺酸、三氟甲磺酸、甲酸、乙酸、丙酸、草酸、苯磺酸等。
本发明所使用的溶剂没有特别的限制，可采用商购的常规溶剂。
应当强调的是，本发明技术方案中所涉及的数值或数值端点，其含义或意义的保护范围并不局限于该数字本身，本领域技术人员能够理解，它们包含了那些已被本领域广为接受的可允许误差范围，例如实验误差、测量误差、统计误差和随机误差等等，而这些误差范围均包含在本发明的范围之内。
本发明相对于现有技术，提供了一种纯化阿尼芬净的新的技术方案，通过使用大孔吸附树脂，在特定的洗脱条件下，实现了产物与关键杂质1A、1B的高效分离，所得阿尼芬净的纯度大于99.3％，关键杂质1A含量由1.77％以上降到0.3％以下，关键杂质1B含量由0.74％以上降到0.3％以下，保证原料药的质量，满足药品生产的质量要求，为工业化生产和使用提供了可靠的纯化方法，纯化前后阿尼芬净纯度与关键杂质的变化情况如下表2所示：
表2纯化前后阿尼芬净及杂质1A和1B含量对比
| 项目 | 1A含量 | 阿尼芬净含量 | 1B含量 |
| 纯化前 | ≥1.77％ | ≤97.18％ | ≥0.74 |
| 纯化后 | ≤0.3％ | ≥99.3％ | ≤0.3％ |
其次，大孔吸附树脂可通过简单处理活化，重复使用，降低生产成本；另外，不纯部分的回收与套用，显著提高了纯化收率，为原料药的工业化生产提供了较好基础。本发明的技术方案也解决了现有技术通过使用高效液相制备色谱和硅胶柱层析色谱分离纯化阿尼芬净存在的技术缺陷，扩大了生产规模。
附图说明
图1：实施例1制备得到的阿尼芬净粗品HPLC谱图：其中保留时间为8.71min的峰为阿尼芬净，保留时间为8.11min的峰为杂质1A，保留时间为9.02min的峰为杂质1B。
图2：实施例3纯化后得到的阿尼芬净HPLC谱图：其中保留时间为8.71min的峰为阿尼芬净，保留时间为8.16min的峰为杂质1A，保留时间为9.05min的峰为杂质1B。
图3a：实施例1制备得到的阿尼芬净粗品LC-MS—杂质1A质谱图，其分子量为1126；
图3b：实施例1制备得到的阿尼芬净粗品LC-MS—阿尼芬净质谱图，其分子量为1140.24；
图3c：实施例1制备得到的阿尼芬净粗品LC-MS—杂质1B质谱图，其分子量为1106。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对发明内容作进一步的解释和说明，但是，它们并不构成对本发明范围的限制或限定。
阿尼芬净的分离效果与纯度是通过HPLC检测获得的，色谱条件如下：
HPLC仪器型号为安捷伦ULTIMATE3000
色谱柱：Aglient XDB-C8250mm*4.6mm*5um
流动相：水相为0.1％磷酸溶液，有机相为乙腈
梯度洗脱：
| 时间(min) | 水相％ | 有机相％ |
| 0 | 59 | 41 |
| 12 | 45 | 55 |
| 15 | 5 | 95 |
| 22 | 5 | 95 |
| 23 | 59 | 41 |
| 30 | 59 | 41 |
检测波长：220nm
流速：1.5ml/min
柱温：30℃
杂质1A和1B的分子量可通过液质联用(LC-MS)测得，其操作条件如下：
HPLC仪器型号：Agilent1260，质谱型号：Agilent Technologies6120B；
液相条件：色谱柱：Aglient XDB-C8250mm*4.6mm*5um，柱温25℃，检测波长220nm，流速1.0ml/min，进样量3ul，流动相A0.1％三氟乙酸的水溶液，流动相B乙腈；
梯度洗脱：
| 时间 | A | B |
| 0min | 60％ | 40％ |
| 15min | 50％ | 50％ |
| 18min | 10％ | 90％ |
阿尼芬净的环肽母核购自上海德默医药科技有限公司；阿尼芬净的侧链购自南京奇可医药化工有限公司。大孔吸附树脂中型号为HP20、HP20ss、HZ20ss购自日本三菱化学株式会社，XAD-1600、XAD-4购自罗门哈斯公司，H-60购自郑州勤实科技有限公司。
大孔吸附树脂在使用前需要进行预处理活化，以保持较好的分离性能，具体步骤如下：量取大孔吸附树脂湿法装柱，乙醇浸泡24h以除去色素和杂质，乙醇洗涤至流出液由去离子水稀释至无白色浑浊，去离子水洗涤以除去乙醇。由4％盐酸水溶液浸泡3h后，用4倍树脂柱体积的同浓度盐酸溶液洗涤，然后去离子水洗至中性；再用4％的氢氧化钠水溶液浸泡3h后，用4倍柱体积的4％的氢氧化钠水溶液洗涤，最后由去离子水洗至中性。
本发明实施例中用于调节PH值的酸为乙酸。
实施例1阿尼芬净粗品的合成
采用CN00805697中的合成路线，以母环为起始原料，与戊氧三联苯甲酸的HOBt活性酯合成阿尼芬净的粗品，HPLC纯度为97.18％(见图1)。
实施例2阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为Hz20ss大孔吸附树脂进行动态吸附，吸附完毕后先用2L、pH为3的去离子水洗涤，再用2L、pH为3、40％的丙酮水溶液洗涤，最后用5L、pH为3、50％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出甲醇，使用正丁醇约2L，萃取水层4次，至水层中的阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出正丁醇，得阿尼芬净2.0g，纯度为99.34％(1A含量0.29.％，1B含量0.28％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净1.6g，可套用。
实施例3阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20ss大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用2L，pH为3，30％的丙酮水溶液洗涤，接着用5L，pH为3，48％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出丙酮，使用2-甲基四氢呋喃约3L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净2.4g，纯度为99.76％(1A含量0.10％，1B含量0.12％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净2.0g，可套用。
实施例4阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20ss大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用2L，pH为3.2，45％的丙酮水溶液洗涤，接着用5L，pH为3.2，50％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出丙酮，使用异丁醇约5L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出异丁醇，得阿尼芬净2.3g，纯度为99.78％(1A含量0.08％，1B含量0.11％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净2.4g，可套用。
实施例5阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20ss大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用2L，pH为3.5，40％的丙酮水溶液洗涤，接着用5L，pH为3.5，52％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出丙酮，使用2-甲基四氢呋喃约3L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净2.8g，纯度为99.77％(1A含量0.10％，1B含量0.11％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净1.6g，可套用。
实施例6回收的阿尼芬净的套用
取将实施例2-5中回收得到的阿尼芬净粗品5.0g(阿尼芬净含量98.02％，1A含量1.42％，1B含量0.54％)，溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20ss大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L去离子水洗涤，然后用2L，pH为3.0，45％的丙酮水溶液洗涤，接着用5L，pH为3.0，52％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出丙酮，使用2-甲基四氢呋喃约2L，萃取水层4次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净1.6g，纯度为99.72％(1A含量0.13％，1B含量0.13％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净2.4g，可套用。
实施例7阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20ss大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用1.5L，pH为3.0，30％的乙腈水溶液洗涤，接着用4L，pH为3.0，46％的乙腈水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于98％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出乙腈，使用2-甲基四氢呋喃约2L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净2.1g，纯度为99.38％(1A含量0.25％，1B含量0.21％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净1.7g，可套用。
实施例8阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20ss大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用1.5L，pH为3.0，30％的乙腈水溶液洗涤，接着用4L，pH为3.0，48％的乙腈水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于98％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出乙腈，使用2-甲基四氢呋喃约2L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净2.1g，纯度为99.31％(1A含量0.29％，1B含量0.27％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净1.7g，可套用。
实施例9阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为XAD-6大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用2L，pH为3.2，44％的丙酮水溶液洗涤，接着用5L，pH为3.2，50％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出丙酮，使用2-甲基四氢呋喃约3L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净2.1g，纯度为99.31％(1A含量0.30％，1B含量0.26％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净1.4g，可套用。
实施例10阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用2L，pH为3.3，45％的丙酮水溶液洗涤，接着用5L，pH为3.5，50％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于98％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出丙酮，使用2-甲基四氢呋喃约3L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净1.5g，纯度为99.30％(1A含量0.29％，1B含量0.29％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净2.6g，可套用。
实施例11阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20ss大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用2L，pH为3.5，40％的丙酮水溶液洗涤，接着用5L，pH为3.5，60％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出丙酮，使用2-甲基四氢呋喃约3L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净2.6g，纯度为99.41％(1A含量0.25％，1B含量0.29％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净1.8g，可套用。
实施例12阿尼芬净粗品的纯化
取5.0g阿尼芬净粗品(阿尼芬净含量97.18％，1A含量1.77％，1B含量0.74％)溶解于80mL50％丙酮的水溶液中，用1L型号为HP20ss大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用2L中性去离子水洗涤，然后用2L，pH为3.0，40％的丙酮水溶液洗涤，接着用5L，pH为3.0，46％的丙酮水溶液洗脱，分管收集洗脱液，将纯度大于99％，杂质1A小于0.4％，杂质1B小于0.4％的洗脱液合并，蒸出丙酮，使用2-甲基四氢呋喃约3L，萃取水层3次，至水层中阿尼芬净含量小于0.1％，蒸出2-甲基四氢呋喃，得阿尼芬净1.9g，纯度为99.38％(1A含量0.29％，1B含量0.24％)，将纯度大于98％的洗脱液合并，回收得阿尼芬净2.2g，可套用。
Claims (12)
1.一种如下式Ⅰ所示的阿尼芬净的纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
(a)取阿尼芬净粗品，上样于大孔吸附树脂，其中所述大孔吸附树脂选自H-60、HP20、HP20ss、HZ20ss、XAD-1600或XAD-4；
(b)用酸性或中性水溶液洗涤树脂柱，再用体积百分比为10％-45％有机溶剂的酸性水溶液洗涤树脂柱；
(c)用体积百分比为46％-60％有机溶剂的酸性水溶液洗脱吸附于树脂上的阿尼芬净，收集洗脱液；
(d)合并收集得到的洗脱液，分离得到阿尼芬净；
其中所述步骤(b)和步骤(c)中的酸性水溶液和有机溶剂的酸性水溶液的pH为2-6，所述有机溶剂可选自乙腈、C3-C4的酮。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂选自H-60、HP20ss或HZ20ss。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤(b)和步骤(c)中的酸性水溶液和有机溶剂的酸性水溶液的pH为2.5-4.5。
4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤(b)和步骤(c)中的酸性水溶液和有机溶剂的酸性水溶液的pH为3.0-3.5。
5.根据权利要求1-4任一所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤(c)中有机溶剂的酸性水溶液的体积百分比为48％-52％。
6.根据权利要求1-4任一所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤(b)或步骤(c)的有机溶剂可选自乙腈、丙酮或2-丁酮。
7.根据权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤(b)或步骤(c)的有机溶剂可选自乙腈或丙酮。
8.根据权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤(b)或步骤(c)的有机溶剂可选自丙酮。
9.根据权利要求1-4任一所述的纯化方法，其特征在于，所述的步骤(d)包括合并洗脱液并除去有机溶剂，然后用萃取剂萃取水层，获得含有阿尼芬净的有机相，除去有机溶剂得到阿尼芬净。
10.根据权利要求9所述的纯化方法，其特征在于，所述的步骤(d)中的萃取剂选自二氯甲烷、石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚、2-甲基四氢呋喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、正丁醇、异丁醇、正己烷或环己烷。
11.根据权利要求10所述的纯化方法，其特征在于，所述的步骤(d)中的萃取剂选自二氯甲烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、正丁醇、异丁醇、2-甲基四氢呋喃。
12.根据权利要求10所述的纯化方法，其特征在于，所述的步骤(d)中的萃取剂选自正丁醇、异丁醇、2-甲基四氢呋喃。
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