CN104892642A - 一种长春地辛的纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种长春地辛的纯化方法。（1）采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；（2）将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱；（3）采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物；（4）减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛。本发明所得产品纯度高，该方法可使长春地辛的纯度达到90%以上，收率为40～80%。固定相稳定，可重复使用。
Description
技术领域
本发明涉及长春地辛的纯化技术，特别是涉及一种长春地辛的纯化方法。
背景技术
长春碱类化合物是从夹竹桃科植物长春花(Catharanthus roseus)中提取的生物碱，具有抗肿瘤活性，主要用于治疗非小细胞肺癌，小细胞癌，乳腺癌，恶性淋巴瘤等恶性肿瘤。现已正式用于临床的有长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristhle)、长春地辛(vindesine)及长春瑞宾(vinorelbine)。其中长春地辛是对长春碱G环的3、4位修饰而得到的典型4-去乙酰-C-3酰胺衍生物，可与细胞内的循环糖蛋白—转铁蛋白形成共价键，从而破环其与铁的结合导致肿瘤细胞凋亡，结构式如下。
国内主要研究长春地辛化合物的剂型改造、药物组合，对其分离纯化方法的研究较少。中国专利CN101638413公开了一种长春碱类生物碱的分离纯化方法，在氧化铝柱上预处理样品后，再用高效液相色谱进行分离纯化，最后重结晶精制样品，覆盖长春碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨等生物碱。该工艺属小试工艺且步骤繁多，成本高，不适宜工业生产。
发明内容
针对长春地辛纯化效率低、工艺复杂等难题，本发明的目的是提供一种高纯度、操作性强、适合工业化生产的长春地辛的纯化方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
(1)采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；
(2)将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱；
(3)采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物；
(4)减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛90wt％以上，收率为40～80％。
在上述制备方法中：
步骤(1)中，所采用硅胶为100～400目，干硅胶用量为5.9～6.1kg；
步骤(1)中，所述有机溶剂A为二氯甲烷、正丁醇、甲基异丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氧六环中的一种；
步骤(2)中，长春地辛上样量为1～5wt％，进料量为制备色谱柱体积的1～10％；
步骤(3)中，所述有机溶剂B为丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亚砜中的一种；
步骤(3)中，采用恒压恒流泵进洗脱剂，洗脱剂依次为溶剂A：B＝99：1～80：1、溶剂A：B＝60：1～45：1、溶剂A：B＝40：1～20：1，洗脱剂用量为柱体积的200～500％，洗脱流速为每分钟洗脱柱体积的1～10％；制备色谱柱运行的压力为0.1～0.7MPa；
步骤(3)中，洗脱液分段收集，收集分两段，第一段收集溶剂A：B＝60：1～45：1馏分，为含量较低的长春地辛洗脱液；第二段收集溶剂A：B＝40：1～20：1馏分，主要为高浓度长春地辛洗脱液。
步骤(3)中，采用溶剂A：B＝20：1～5：1洗脱残留物。
本发明以长春地辛粗品为起始原料，通过硅胶制备色谱纯化分离，实现高纯度长春地辛的制备。本发明具有如下优点：
1、产品纯度高，该方法可使长春地辛的纯度达到90％以上，收率为40～80％。固定相稳定，可重复使用；
2、本发明使用的洗脱剂易回收，可反复使用，生产成本低；
3、工艺过程简单，设备一次性投入小，能耗低，可操作性强，适合工业化生产。
附图说明
图1是本发明实施例1采用的长春地辛粗品原料的液相色谱分析图谱。
图2是本发明实施例1得到的长春地辛产品的液相色谱分析图谱。
具体实施方式
实施例1
1)称取5.98kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将195g长春地辛粗品(纯度为76.73％)用氯仿溶解，进料，进料量为300ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇＝90：1溶剂洗脱2个床层，换用氯仿：甲醇＝40：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇＝30：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇＝15：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛107.7g，液相色谱检测纯度为99.05％，收率为71.3％。
长春地辛粗品原料的液相色谱分析图谱如图1所示，长春地辛产品的液相色谱分析图谱如图2所示。
实施例2
1)称取6.10kg 400目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将205g长春地辛粗品(纯度为72.19％)用氯仿溶解，进料，进料量为320ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇＝95：1溶剂洗脱2个床层，换用氯仿：甲醇＝45：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇＝35：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇＝15：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛94.5g，液相色谱检测纯度为97.86％，收率为62.3％。
实施例3
1)称取6.00kg 200目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将165g长春地辛粗品(纯度为58.97％)用氯仿溶解，进料，进料量为280ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇＝90：1溶剂洗脱3个床层，换用氯仿：甲醇＝40：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇＝30：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇＝10：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛90g，液相色谱检测纯度为91.73％，收率为84.8％。
实施例4
1)称取5.96kg 300目硅胶，添加二氯甲烷并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将184g长春地辛粗品(纯度为53.74％)用二氯甲烷溶解，进料，进料量为300ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用二氯甲烷：乙腈＝80：1溶剂洗脱2个床层，换用二氯甲烷：乙腈＝35：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用二氯甲烷：乙腈＝25：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用二氯甲烷：乙腈＝5：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛66g，液相色谱检测纯度为95.39％，收率为63.7％。
实施例5
1)称取5.97kg 400目硅胶，添加二氯甲烷并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将161g长春地辛粗品(纯度为64.26％)用二氯甲烷溶解，进料，进料量为280ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用二氯甲烷：乙腈＝85：1溶剂洗脱3个床层，换用二氯甲烷：乙腈＝45：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液a，再换用二氯甲烷：乙腈＝30：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用二氯甲烷：乙腈＝5：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛59.7g，液相色谱检测纯度为94.80％，收率为54.7％。
实施例6
1)称取6.20kg 300目硅胶，添加乙酸乙酯并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将159.2g长春地辛粗品(纯度为63.18％)用乙酸乙酯溶解，进料，进料量为290ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用乙酸乙酯：甲醇＝99：1溶剂洗脱2个床层，换用乙酸乙酯：甲醇＝50：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用乙酸乙酯：甲醇＝35：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液b，最后换用乙酸乙酯：甲醇＝10：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛52g，液相色谱检测纯度为93.74％，收率为48.5％。
实施例7
1)称取6.10kg 400目硅胶，添加乙酸乙酯并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，得到装好的制备色谱柱；
2)将169.7g长春地辛粗品(纯度为84.58％)用乙酸乙酯溶解，进料，进料量为300ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用乙酸乙酯：甲醇＝98：1溶剂洗脱2个床层，换用乙酸乙酯：甲醇＝48：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用乙酸乙酯：甲醇＝30：1溶剂洗脱2个床层并收集洗脱液b，最后换用乙酸乙酯：甲醇＝10：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛64.2g，液相色谱检测纯度为98.75％，收率为44.2％。
实施例8
1)称取5.90kg 400目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将191.3g长春地辛粗品(纯度为79.26％)用氯仿溶解，进料，进料量为310ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮＝75：1溶剂洗脱3个床层，换用氯仿：丙酮＝40：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮＝25：1溶剂洗脱2个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮＝5：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛112.3g，液相色谱检测纯度为98.66％，收率为73.1％。
实施例9
1)称取5.80kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将170.3g长春地辛粗品(纯度为67.82％)用氯仿溶解，进料，进料量为300ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮＝80：1溶剂洗脱3个床层，换用氯仿：丙酮＝45：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮＝30：1溶剂洗脱2个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮＝5：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛83.3g，液相色谱检测纯度为97.33％，收率为70.2％。
实施例10
1)称取6.20kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；
2)将150.1g长春地辛粗品(纯度为72.37％)用氯仿溶解，进料，进料量为280ml；
3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮＝75：1溶剂洗脱3个床层，换用氯仿：丙酮＝45：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮＝30：1溶剂洗脱2个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮＝5：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛77.3g，液相色谱检测纯度为96.56％，收率为68.7％。
Claims (8)
1.一种长春地辛的纯化方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；
（2）将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱；
（3）采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物；
（4）减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（1）中，所采用硅胶为100～400目，干硅胶用量为5.9～6.1 kg。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（1）中，所述有机溶剂A为二氯甲烷、正丁醇、甲基异丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氧六环中的一种。
4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（2）中，所述长春地辛上样量为1～5wt%，进料量为制备色谱柱体积的1～10%。
5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3）中，所述有机溶剂B为丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亚砜中的一种。
6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3）中，采用恒压恒流泵进洗脱剂，洗脱剂依次为溶剂A：B=99：1～80：1、溶剂A：B=60：1～45：1、溶剂A：B=40：1～20：1，洗脱剂用量为柱体积的200～500%，洗脱流速为每分钟洗脱柱体积的1～10%；制备色谱柱运行的压力为0.1～0.7 MPa。
7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3）中，洗脱液分段收集，收集分两段，第一段收集溶剂A：B=60：1～45：1馏分；第二段收集溶剂A：B=40：1～20：1馏分。
8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3）中，采用溶剂A：B=20：1～5：1洗脱残留物。
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