CN106831827A - 一种长春地辛的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种长春地辛的分离纯化方法，包括如下步骤：a.将长春地辛粗品进行浓缩，浓缩后用正相硅胶柱柱层析，并洗脱；b.装好硅胶柱，湿法装柱，湿法上样后，用纯氯仿作为流动相冲洗，再将流动相换成氯仿‑二乙胺冲洗，收集合并流分，浓缩后得到长春地辛柱层析粗品；c.对硅胶柱分离得到的长春地辛柱层析粗品进行重结晶纯化；加完后析晶；d.析晶，过滤，洗涤长春地辛晶体；过滤后放置于真空干燥箱，20℃干燥得长春地辛成品；工艺简单，操作方便；硅胶成本低廉，对设备需求简单。通过高效液相色谱法测定，长春地辛含量高达99%，完全符合药典要求，免去重复精制带来的环境污染和制造成本的浪费。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物化学领域，尤其涉及一种对长春地辛粗品分离纯化的方法。
背景技术
长春地辛的四个氮原子中有两个显碱性，可与适当的酸成盐。硫酸长春地辛易溶于水、醇，不溶于正己烷，为白色或近似白色粉末，需密封、避光、冷冻保存。长春地辛(Videsine)，是半合成的长春碱衍生物,为周期特异性药物,主要作用于细胞有丝分裂中期(M期)。主要通过抑制微管蛋白的聚合,妨碍纺锤体的生成，从而使细胞停止与有丝分裂中期。临床上长春地辛广泛应用于急性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢粒急变等血液系统。
长春地辛的合成一般由长春碱进行一系列结构修饰的化学反应而获得。反应后长春地辛粗品具有成分复杂，色泽差，杂质多的问题。一般正常的分离纯化手段难以去除长春地辛中杂质。而采用多步骤反复分离纯化又会使得长春地辛的收率大大降低，增加产品的成本，不利于产业化生产。
发明内容
为了克服上述长春地辛分离纯化的缺陷，本发明提供一种方法简单，操作方便，收率高，含量高的长春地辛分离纯化方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种长春地辛的分离纯化方法，包括如下步骤：
a.将长春地辛粗品进行浓缩，浓缩后用正相硅胶柱柱层析，并用氯仿-二乙胺体系梯度洗脱；
b. 按照20:1的载样量装好硅胶柱，湿法装柱，湿法上样后，用纯氯仿作为流动相冲洗4-5个硅胶柱体积，再将流动相换成氯仿-二乙胺=100:1冲洗6-8个硅胶柱体积，收集合并流分，浓缩后得到长春地辛柱层析粗品；
c.对硅胶柱分离得到的长春地辛柱层析粗品进行重结晶纯化：将长春地辛柱层析粗品用3倍体积乙醇溶解，待完全溶解后，向其中加入2倍体积量石油醚-乙醚（1：1）的混合溶液；加完后放置于4-6℃的环境下静置析晶6-8小时；
d. 析晶6-8小时后，过滤，用少量乙醚洗涤长春地辛晶体；过滤后放置于真空干燥箱，20℃干燥得长春地辛成品；
本发明以长春地辛反应粗品为起始物，通过一系列分离纯化手段得到含量很高的长春地辛成品，本发明具有如下优点：1.工艺简单，操作方便，生产关键点易于控制，适于工业化生产。2.硅胶成本低廉，对设备需求简单。3.以氯仿-二乙胺作为洗脱剂，打破常规洗脱剂的选择方法，并且分离和除色效果好，产品收率高。4.通过高效液相色谱法测定，长春地辛含量高达99%，完全符合药典要求，免去重复精制带来的环境污染和制造成本的浪费。
具体实施方式
实施例1：分离纯化长春地辛粗品的操作方法如下：
长春地辛柱层析粗品的制备：将50g合成后的长春地辛反应粗品按照20:1的载样量装好硅胶柱（100-200目）。湿法装柱，湿法上样后，用纯氯仿作为流动相冲洗3L，再将流动相换成氯仿-二乙胺=100:1冲洗4.5L，收集合并流分，浓缩后得到长春地辛柱层析粗品40.5g。用高效液相色谱法检测长春地辛柱层析粗品，检测结果长春地辛含量为98.11%，最大单一杂质为0.46%，长春地辛柱层析粗品的收率为81%。高效液相色谱检测条件为：柱长及型号：SinoChrom ODS AP ,4.6ⅹ250mm，5μm，柱温：30℃，HPLC检测方法：流动相A相为甲醇，B相为0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH为6.6）。其中A:B=65:35。流速：1ml/min，检测波长：270nm。
长春地辛成品制备：将长春地辛柱层析粗品用150ml乙醇溶解，待完全溶解后，向其中加入100ml石油醚-乙醚（1：1）的混合溶液。加完后放置于6℃的环境下静置析晶8小时。待析晶后过滤，用少量乙醚洗涤长春地辛晶体。过滤后放置于真空干燥箱，20℃干燥4小时得长春地辛成品38.5g。用高效液相色谱法检测长春地辛成品，检测结果长春地辛含量为99.14%，最大单一杂质为0.36%。长春地辛成品的收率为77%。高效液相色谱检测条件为：柱长及型号： SinoChrom ODS AP ,4.6ⅹ250mm，5μm，柱温：30℃，HPLC检测方法：流动相A相为甲醇，B相为0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH为6.6）。其中A:B=65:35。流速：1ml/min，检测波长：270nm。
实施例2
长春地辛柱层析粗品的制备：将50g合成后的长春地辛反应粗品按照20:1的载样量装好硅胶柱（100-200目）。湿法装柱，湿法上样后，用纯氯仿作为流动相冲洗3L，再将流动相换成氯仿-二乙胺=100:1冲洗4.5L，收集合并流分，浓缩后得到长春地辛柱层析粗品41.05 g。用高效液相色谱法检测长春地辛柱层析粗品，检测结果长春地辛含量为98.33%，最大单一杂质为0.49%，长春地辛柱层析粗品的收率为82.1%。高效液相色谱检测条件为：柱长及型号： SinoChrom ODS AP ,4.6ⅹ250mm，5μm，柱温：30℃，HPLC检测方法：流动相A相为甲醇，B相为0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH为6.6）。其中A:B=65:35。流速：1ml/min，检测波长：270nm。
长春地辛成品制备：将长春地辛柱层析粗品用150ml乙醇溶解，待完全溶解后，向其中加入100ml石油醚-乙醚（1：1）的混合溶液。加完后放置于5℃的环境下静置析晶8小时。待析晶后过滤，用少量乙醚洗涤长春地辛晶体。过滤后放置于真空干燥箱，20℃干燥4小时得长春地辛成品39.1g。用高效液相色谱法检测长春地辛成品，检测结果长春地辛含量为99.09%，最大单一杂质为0.37%。长春地辛成品的收率为78.2%。高效液相色谱检测条件为：柱长及型号： SinoChrom ODS AP ,4.6ⅹ250mm，5μm，柱温：30℃，HPLC检测方法：流动相A相为甲醇，B相为0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH为6.6）。其中A:B=65:35。流速：1ml/min，检测波长：270nm。
实施例3：
长春地辛柱层析粗品的制备：将50g合成后的长春地辛反应粗品按照20:1的载样量装好硅胶柱（100-200目）。湿法装柱，湿法上样后，用纯氯仿作为流动相冲洗3L，再将流动相换成氯仿-二乙胺=100:1冲洗4.5L，收集合并流分，浓缩后得到长春地辛柱层析粗品40.8 g。用高效液相色谱法检测长春地辛柱层析粗品，检测结果长春地辛含量为98.62%，最大单一杂质为0.55%，长春地辛柱层析粗品的收率为81.6%。高效液相色谱检测条件为：柱长及型号： SinoChrom ODS AP ,4.6ⅹ250mm，5μm，柱温：30℃，HPLC检测方法：流动相A相为甲醇，B相为0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH为6.6）。其中A:B=65:35。流速：1ml/min，检测波长：270nm。
长春地辛成品制备：将长春地辛柱层析粗品用150ml乙醇溶解，待完全溶解后，向其中加入100ml石油醚-乙醚（1：1）的混合溶液。加完后放置于6℃的环境下静置析晶8小时。待析晶后过滤，用少量乙醚洗涤长春地辛晶体。过滤后放置于真空干燥箱，20℃干燥4小时得长春地辛成品38.8g。用高效液相色谱法检测长春地辛成品，检测结果长春地辛含量为99.27%，最大单一杂质为0.35%。长春地辛成品的收率为77.6%。高效液相色谱检测条件为：柱长及型号： SinoChrom ODS AP ,4.6ⅹ250mm，5μm，柱温：30℃，HPLC检测方法：流动相A相为甲醇，B相为0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH为6.6）。其中A:B=65:35。流速：1ml/min，检测波长：270nm。
实施例4：
长春地辛柱层析粗品的制备：将100g合成后的长春地辛反应粗品按照20:1的载样量装好硅胶柱（100-200目）。湿法装柱，湿法上样后，用纯氯仿作为流动相冲洗6L，再将流动相换成氯仿-二乙胺=100:1冲洗9L，收集合并流分，浓缩后得到长春地辛柱层析粗品82.8 g。用高效液相色谱法检测长春地辛柱层析粗品，检测结果长春地辛含量为98.42%，最大单一杂质为0.58%，长春地辛柱层析粗品的收率为82.8%。高效液相色谱检测条件为：柱长及型号：SinoChrom ODS AP ,4.6ⅹ250mm，5μm，柱温：30℃，HPLC检测方法：流动相A相为甲醇，B相为0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH为6.6）。其中A:B=65:35。流速：1ml/min，检测波长：270nm。
长春地辛成品制备：将长春地辛柱层析粗品用300ml乙醇溶解，待完全溶解后，向其中加入200ml石油醚-乙醚（1：1）的混合溶液。加完后放置于4℃的环境下静置析晶8小时。待析晶后过滤，用少量乙醚洗涤长春地辛晶体。过滤后放置于真空干燥箱，20℃干燥4小时得长春地辛成品78.9g。用高效液相色谱法检测长春地辛成品，检测结果长春地辛含量为99.15%，最大单一杂质为0.41%。长春地辛成品的收率为78.9%。高效液相色谱检测条件为：柱长及型号： SinoChrom ODS AP ,4.6ⅹ250mm，5μm，柱温：30℃，HPLC检测方法：流动相A相为甲醇，B相为0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH为6.6）。其中A:B=65:35。流速：1ml/min，检测波长：270nm。
Claims (1)
1.一种长春地辛的分离纯化方法，其特征在于包括如下步骤：
a.将长春地辛粗品进行浓缩，浓缩后用正相硅胶柱柱层析，并用氯仿-二乙胺体系梯度洗脱；
b. 按照20:1的载样量装好硅胶柱，湿法装柱，湿法上样后，用纯氯仿作为流动相冲洗4-5个硅胶柱体积，再将流动相换成氯仿-二乙胺=100:1冲洗6-8个硅胶柱体积，收集合并流分，浓缩后得到长春地辛柱层析粗品；
c.对硅胶柱分离得到的长春地辛柱层析粗品进行重结晶纯化：将长春地辛柱层析粗品用3倍体积乙醇溶解，待完全溶解后，向其中加入2倍体积量石油醚-乙醚的混合溶液，体积比1：1；加完后放置于4-6℃的环境下静置析晶6-8小时；
d. 析晶6-8小时后，过滤，用少量乙醚洗涤长春地辛晶体；过滤后放置于真空干燥箱，20℃干燥得长春地辛成品。
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| CN112592357A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-04-02 | 海南长春花药业有限公司 | 一种硫酸长春地辛的制备方法 |
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