ES2355280T3 - Procedimientos de purificación de compuestos de tipo equinocandina. - Google Patents

Abstract

Procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina que comprende combinar compuesto de tipo equinocandina con por lo menos un antidisolvente que hace que dicho compuesto precipite, y un soporte sólido.

Description

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención comprende procedimientos para purificar compuestos de tipo equinocandina, incluyendo pneumocandina B0, WF 11899A y equinocandina B.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 5

La pneumocandina B0, WF 11899A y equinocandina B son todos miembros de la familia de equinocandinas, que presentan la estructura general:

R R1 R2 R3 R4 R5 R6 R7

Equinocandina B

Linoleoilo OH OH OH CH3 CH3 H H

Aculeacina A

Palmitoilo OH OH OH CH3 CH3 H CH3

Mulundocandina

12-Metil-miristoilo OH OH OH H H H CH3

Esporiofungina A

10,12-Dimetil-miristoilo OH OH OH CH2CONH2 H H CH3

Pneumocandina B0

10,12-Dimetill-miristoilo OH OH OH CH2CONH2 CH3 H H

WF11899A

Palmitoilo OH OH OH CH2CONH2 CH3 OSO3H CH3

Son productos de fermentación que se usan para preparar productos semisintéticos, tales como 10 caspofungina, micafungina y anidulafungina, respectivamente. Todos tienen actividad antifúngica.

La caspofungina es la primera de una nueva clase denominada las equinocandinas, y funciona inhibiendo la síntesis de la pared celular. La caspofungina tiene el nombre químico 1-[(4R,5S)-5-[(2-aminoetil)amino]-N2-(10,12-dimetil-1-oxotetradecil)-4-hidroxi-L-ornitina]-5-[(3R)-3-hidroxi-L-ornitina]pneumocandina B0, el Número de Registro CAS, 179463-17-3, y la siguiente estructura química (Fórmula I). 15

Fórmula I

La caspofungina se describe en la patente US nº 5.378.804. La caspofungina se comercializa en forma de su sal de diacetato en los Estados Unidos de América por Merck & Co. Inc. con el nombre comercial CANCIDAS®. CANCIDAS® se administra intravenosamente para el tratamiento de infecciones tales como Aspergillus y Candida, y para la prevención de infecciones encontradas en pacientes inmunodeficientes. 5

La anidulafungina es comercializada en los Estados Unidos de América por Pfizer con el nombre comercial Eraxis®, y se administra intravenosamente para el tratamiento de infecciones tales como Candida.

La micafungina es comercializada en forma de su sal sódica en los Estados Unidos de América por Astellas con el nombre comercial Mycamine®, y se administra intravenosamente para el tratamiento de infecciones tales como Candida. 10

Los procedimientos para la preparación de caspofungina implican el uso de pneumocandina. La pneumocandina se describe en la patente US nº 5.194.377, y presenta la siguiente estructura química:

La pneumocandina se prepara mediante reacciones de fermentación, en las que los caldos de fermentación y mixtos generalmente contienen un número de subproductos relacionados, que pueden ser difíciles de separar del 15 producto deseado. La patente US nº 6.610.822 describe la purificación de los compuestos de tipo equinocandina, tales como pneumocandina, WF 11899 y equinocandina B, llevando a cabo varios procedimientos de extracción, el primero para eliminar impurezas no polares, el segundo para eliminar impurezas polares, y después “reextrayendo” el producto, opcionalmente en combinación con purificación cromatográfica. Por tanto, la patente US nº 6.610.822 proporciona un procedimiento de purificación prolongado y que consume tiempo. 20

La patente US nº 5.021.403 describe un procedimiento de purificación de compuestos de tipo equinocandina, tales como pneumocandina, WF 1899 y equinocandina B, llevando a cabo varias cromatografías. De este modo, este procedimiento no es adecuado para la fabricación a gran escala, no es económico, y consume tiempo.

La patente US nº 6.506.726 y la patente US nº 6.590.073 describen la purificación de compuestos de tipo equinocandina, especialmente de equinocandina B desacetilada, mediante cromatografía. Las sustancias purificadas 25 son núcleos de equinocandina, que contienen por lo menos un grupo amino que se puede protonar en presencia de un ácido. De este modo, este procedimiento no es adecuado para sustancias que no tengan un grupo amina que se protona, tal como pneumocandina, WF 1899 y equinocandina B.

Existe en la técnica la necesidad de procedimientos adicionales para purificar compuestos de tipo equinocandina, usando técnicas que son factibles para uso en una escala industrial. 30

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención comprende un procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina, incluyendo pneumocandinas.

En una forma de realización, la invención comprende un procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina, que comprende combinar un compuesto de tipo equinocandina con por lo menos un antidisolvente y un 35 soporte sólido.

En otra forma de realización, la invención comprende un procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina, que comprende: (a) extraer el compuesto de tipo equinocandina de un caldo de fermentación o de un micelio filtrado obtenido a partir de un caldo de fermentación con un disolvente orgánico inmiscible con agua, para obtener un sistema bifásico que comprende una fase acuosa y una fase orgánica; (b) recuperar el compuesto de tipo 40

equinocandina; y (c) combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido para obtener un compuesto de tipo equinocandina purificado.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La invención comprende un procedimiento para purificar pneumocandina u otros compuestos de tipo equinocandina. Como se usa aquí, excepto que se defina de otro modo, la expresión “compuestos de tipo 5 equinocandina” se refiere a compuestos que tienen la siguiente estructura general:

en la que R es un hidrógeno o -C(O)R’; R’ es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo alquinilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo que tiene unido al mismo por lo menos un grupo amino que se puede protonar en presencia de un ácido; R1 es -H o -OH; R2 es -H o -CH3; R3 es -H, CH3, -CH2CONH2 o -CH2CH2NH2; R4 es -H o -OH; R5 es -OH, -10 OPO3H2, o -OSO3H; R6 es -H o -OSO3H, y R7 es -H o -CH3.

Preferentemente, R es linoleoilo, 10,12-dimetil-miristoilo, o palmitoilo. Preferentemente, R1, R4 y R5 son OH. Preferentemente, R3 es Me, o CH2CONH2.

Preferentemente, cuando R es linoleoilo, R1, R5 y R4 son OH, R3 y R7 son Me, y R6 es H, es decir, el compuesto es equinocandina B. 15

Preferentemente, cuando R es 10,12-dimetil-miristoilo, R1, y R4 son OH, R3 es CH2CONH2, R5 es OH, y R6 es H y R7 es CH3, es decir, el compuesto es pneumocandina B0.

Preferentemente, cuando R es palmitoilo, R1, y R4 son OH, R3 es CH2CONH2, R5 es OH, R6 es OSO3H, y R7 es CH3, es decir, el compuesto es WF11899A.

Preferentemente, los compuestos de tipo equinocandina son pneumocandina B0, WF-11899 y equinocandina. 20 Estos productos no son muy solubles en disolventes convencionales, tales como ésteres, alcoholes inferiores y agua. De este modo, son difíciles de purificar mediante extracciones convencionales. Por lo tanto, los procedimientos conocidos para su purificación son habitualmente complicados e ineficaces, especialmente cuando se manipulan grandes cantidades de estos compuestos.

La presente invención proporciona un procedimiento para purificar compuestos de tipo equinocandina, que es 25 adecuado para cualquier escala, incluyendo la escala industrial. El procedimiento de la presente invención es simple por cuanto las etapas del procedimiento no son complicadas, son fácilmente llevables a un procedimiento a escala industrial, y son económicos a la vez que proporcionan compuestos de tipo equinocandina de una pureza que es suficiente para un procesamiento posterior para obtener un ingrediente farmacéutico activo tal como, por ejemplo, los antifúngicos caspofungina, anidulafungina, y micafungina. 30

Como se usa aquí, excepto que se mencione de otro modo, la expresión “disolvente inmiscible con agua” se refiere a un disolvente o mezcla de disolventes que, cuando se mezcla con agua, no forma una única mezcla, sino forma por lo menos un sistema bifásico. Por el contrario, un “disolvente miscible con agua” se refiere a un disolvente o mezcla de disolventes que, cuando se mezcla con agua, forma una única fase en disolución.

Como se usa aquí, excepto que se mencione de otro modo, la expresión “soporte sólido” se refiere a un 35 material (compuesto) que es inerte y queda sin disolver en los disolventes del procedimiento, pero es capaz de formar una mezcla con el compuesto o compuestos.

Como se usa aquí, excepto que se mencione de otro modo, la expresión “no polar” se refiere a disolventes

orgánicos que tienen un índice de polaridad de aproximadamente 0 a aproximadamente 2,4. Los ejemplos de tales disolventes son tolueno, heptano, hexano, octano y ciclohexano.

Como se usa aquí, excepto que se mencione de otro modo, la expresión “débilmente polar” se refiere a disolventes orgánicos que tienen un índice de polaridad de aproximadamente 2,4 a aproximadamente 5,1, excluyendo disolventes orgánicos alcohólicos. Los ejemplos de tales disolventes son metiletilcetona, acetona, éter diisopropílico, 5 éter dibutílico, acetato de isobutilo, acetato de n-propilo, acetato de etilo, diclorometano, y acetato de isopropilo. El índice de polaridad se puede medir según Synder, J. Chromatographic science 16, 223-234 (1978).

Cuando el compuesto de tipo equinocandina es pneumocandina B0, la pneumocandina sin purificar de partida (tal como pneumocandina en un caldo de fermentación) se puede preparar, por ejemplo, mediante el procedimiento descrito en la patente US nº 6.610.822. 10

Preferentemente, el compuesto de tipo equinocandina está presente en el caldo completo en una concentración de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 15 g/l, más preferentemente de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 8 g/l. Esta concentración del compuesto de tipo equinocandina en el caldo de fermentación se puede determinar mediante análisis de HPLC.

Los disolventes orgánicos inmiscibles con agua no polares o débilmente polares incluyen disolventes en los 15 que el compuesto de tipo equinocandina tiene una baja solubilidad. Preferentemente, los disolventes orgánicos inmiscibles con agua no polares o débilmente polares incluyen, pero no se limitan a, alcanos alifáticos de C5-8, hidrocarburos aromáticos de C6-8, éteres de C4-8, y ésteres de C3-6. Preferentemente, el alcano alifático de C5-8 es heptano, hexano, octano o ciclohexano. Preferentemente, el hidrocarburo aromático de C6-8 es tolueno. Preferentemente, el éter de C4-8 es éter dietílico, éter diisopropílico o éter dibutílico. Preferentemente, el éster de C3-6 es 20 acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de n-propilo, acetato de isopropilo o acetato de etilo. Lo más preferible, el disolvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar es acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de n-propilo, acetato de isopropilo o acetato de etilo.

Como se usa aquí, el término antidisolvente se refiere a un líquido que se añade a una mezcla de un disolvente y un sólido para reducir la solubilidad del sólido en el disolvente. 25

Un antidisolvente adecuado provoca la precipitación del compuesto de tipo equinocandina. Por lo tanto, un antidisolvente adecuado es tal cuando el compuesto de tipo etinocandina tiene baja solubilidad. Preferentemente, los antidisolventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, acetato de etilo, acetato de isobutilo, acetato de isopropilo, acetona, acetonitrilo (ACN), mezclas de acetonitrilo con acetato de etilo y acetato de isobutilo, y mezclas de acetonitrilo con acetato de isobutilo. Los antidisolventes más preferidos son acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de terc-30 butilo, acetonitrilo, acetona o acetato de isopropilo, e incluso muy preferentemente, acetonitrilo. Preferentemente, la cantidad de antidisolvente se añade en una relación de por lo menos 2:1 de antidisolvente:éster, más preferentemente de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 2:1, incluso más preferentemente de aproximadamente 3:1 a aproximadamente 2:1 v/v, respectivamente.

En una forma de realización preferida, el antidisolvente es acetonitrilo, y está presente en una cantidad de 35 forma que la relación acetonitrilo:éster es por lo menos aproximadamente 2:1 v/v, respectivamente. En otra forma de realización preferida, el antidisolvente es acetona, y está presente en una cantidad de manera que la relación acetona:éster es por lo menos aproximadamente 2:1 v/v, respectivamente.

En algunas formas de realización, cuando el antidisolvente es acetato de etilo o acetato de isobutilo, la precipitación también incluye una etapa de enfriamiento o la adición de un segundo antidisolvente, tal como ACN o 40 acetona, para inducir la precipitación. Tal etapa de enfriamiento puede ser enfriar la mezcla del residuo concentrado y el antidisolvente hasta una temperatura de aproximadamente 5ºC a aproximadamente -20ºC, más preferentemente de aproximadamente 5ºC a aproximadamente 0ºC.

En otra forma de realización, por ejemplo cuando el antidisolvente es ACN o acetona, la precipitación comprende además enfriar hasta una temperatura de aproximadamente 5ºC a aproximadamente -20ºC, más 45 preferentemente de aproximadamente 5ºC a aproximadamente 0ºC, para incrementar el rendimiento del producto precipitado.

La precipitación proporciona una suspensión, la cual se puede mantener a tal temperatura durante un período de tiempo suficiente para incrementar el rendimiento del producto precipitado. Preferentemente, la suspensión se mantiene durante por lo menos aproximadamente 15 minutos, más preferentemente durante aproximadamente 10 horas 50 a aproximadamente 24 horas, lo más preferible durante aproximadamente 20 horas.

En el procedimiento de la invención se usa un soporte sólido en el procedimiento de purificación, eliminando de ese modo la primera etapa de extracción en la que se extraen las impurezas, como por ejemplo es necesario en el procedimiento descrito en los ejemplos de referencia. Además, en la etapa o etapas de extracción se requiere una cantidad más pequeña de disolventes, y también en la etapa de cristalización, haciendo al procedimiento muy atractivo, 55 especialmente para la fabricación a gran escala.

En una forma de realización, la invención comprende un procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina que comprende combinar un compuesto de tipo equinocandina con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido. Preferentemente, el antidisolvente y el soporte sólido se añaden al compuesto tipo equinocandina.

Los compuestos de tipo equinocandina de partida se obtienen, preferentemente, a partir de extracciones del caldo de fermentación. Las extracciones se pueden realizar, por ejemplo, mediante los procedimientos descritos aquí, o 5 mediante cualquier otro método conocido por un experto.

Los compuestos de tipo equinocandina de partida pueden estar en forma de un residuo concentrado, obtenido mediante los procedimientos descritos en los ejemplos de referencia.

En otra forma de realización, este procedimiento comprende las etapas de (a) extraer el compuesto de tipo equinocandina del caldo de fermentación o a partir de un micelio filtrado obtenido de un caldo de fermentación con un 10 disolvente orgánico inmiscible con agua para obtener un sistema bifásico que tiene una fase acuosa y una fase orgánica; (b) recuperar el compuesto de tipo equinocandina; y (c) combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido para obtener un compuesto de tipo equinocandina purificado.

Inicialmente, el caldo de fermentación se combina con un disolvente orgánico inmiscible con agua, para obtener un sistema bifásico. 15

Esta extracción proporciona un sistema bifásico que comprende el compuesto de tipo equinocandina en la fase orgánica inmiscible con agua, que es preferentemente una fase orgánica polar obtenida con extracción con un alcohol y denominada fase orgánica, y el micelio y sustancias que no son solubles en la fase orgánica permanecen en la fase acuosa. Los ejemplos para sustancias que no son solubles en una fase orgánica polar son varios aminoácidos y sales de aminoácidos, varios ácidos orgánicos y sales de ácidos orgánicos, enzimas, y proteínas. 20

Un disolvente orgánico inmiscible con agua adecuado es aquel que tiene una afinidad elevada por el compuesto de tipo equinocandina. Preferentemente, el disolvente orgánico inmiscible con agua es un alcohol, más preferentemente un alcohol de C4-6, incluso más preferentemente un alcohol de C4-5, muy preferentemente isobutanol o n-butanol. Preferentemente, el disolvente orgánico inmiscible con agua es un alcohol inmiscible con agua. En una forma de realización preferida, la extracción se lleva a cabo a un pH de aproximadamente 2 a aproximadamente 8, más 25 preferentemente a aproximadamente 5 a aproximadamente 7. Cuando se extrae a pH ácido, tal como pH 2 a aproximadamente 4, la extracción se lleva a cabo preferentemente mientras se enfría y después de enfriar primero el caldo de fermentación y el disolvente inmiscible con agua polar para evitar la descomposición del producto. Preferentemente, el enfriamiento se lleva a cabo hasta una temperatura de aproximadamente 0ºC a 10ºC, más preferentemente de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 5ºC. Típicamente, el pH se ajusta hasta un intervalo de 30 aproximadamente 2 a aproximadamente 8 mediante adición de una base o un ácido, dependiendo del pH del caldo de fermentación. Las bases adecuadas son, por ejemplo, bases de amonio, tales como hidróxido amónico, o disoluciones acuosas diluidas de una base alcalina, tal como hidróxido sódico. Los ácidos adecuados son, por ejemplo, ácido acético o disoluciones acuosas diluidas de ácido sulfúrico.

La etapa de extracción se puede repetir para incrementar el rendimiento del compuesto de tipo equinocandina 35 en la segunda fase orgánica inmiscible con agua. Preferentemente, la extracción se repite hasta aproximadamente 2-4 extracciones, más preferentemente se prefiere un total de 3 extracciones en esta etapa de extracción.

El compuesto de tipo equinocandina se recupera entonces de la fase orgánica mediante cualquier método conocido en la técnica, tal como evaporando el disolvente. La recuperación proporciona un concentrado de la fase orgánica que tiene el compuesto de tipo equinocandina. El concentrado puede ser una disolución concentrada o un 40 residuo oleoso del compuesto de tipo equinocandina, denominado aquí como residuo concentrado bruto.

Este residuo concentrado bruto del compuesto de tipo equinocandina se puede obtener eliminando el disolvente casi hasta sequedad para obtener un concentrado. La eliminación del disolvente orgánico inmiscible con agua se puede repetir varias veces añadiendo un disolvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar, tal como acetato de isobutilo, y evaporando los disolventes, en la que el disolvente orgánico inmiscible con agua no polar o 45 débilmente polar es diferente del disolvente inmiscible con agua en la etapa (a) del procedimiento anterior.

Opcionalmente, el procedimiento comprende una etapa adicional de lavado del concentrado obtenido, antes de cristalizar el compuesto de tipo equinocandina combinándolo con un antidisolvente y un soporte sólido como en la etapa (c). Esta etapa de lavado comprende combinar con agua el concentrado obtenido. En una forma de realización preferida, el lavado comprende dos etapas, una que usa agua que tiene un pH de aproximadamente 4 a 50 aproximadamente 6,5, preferentemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 4,5, y una segunda, que usa agua y que tiene un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 6,5, preferentemente de aproximadamente 6 a aproximadamente 6,5. Además, cuando se lleva a cabo el enfriamiento del concentrado obtenido, por ejemplo hasta aproximadamente 5ºC, se puede usar agua que tiene un pH menor que 4, por ejemplo agua que tiene un pH de aproximadamente 3. Los lavados pueden eliminar aproximadamente 20 a aproximadamente 50% en peso de los 55 residuos sólidos que se originan del caldo de fermentación y que pueden estar presentes en el concentrado.

Además, el concentrado se puede tratar con carbón activo antes de cristalizar el compuesto de tipo equinocandina combinándolo con un antidisolvente y un soporte sólido como en la etapa (c). Este tratamiento comprende mezclar carbón activo y el concentrado, y después filtrar el carbón activo.

Entonces, el concentrado obtenido se puede purificar adicionalmente combinándolo con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido para obtener un compuesto de tipo equinocandina purificado. 5

La precipitación del compuesto de tipo equinocandina se produce sobre el soporte sólido; de este modo, el compuesto de tipo equinocandina se absorbe sobre el soporte sólido y se separa consiguientemente de impurezas que todavía están presentes en el concentrado obtenido en las etapas previas del procedimiento. Al precipitar la sustancia de interés con un antidisolvente, cuando se usa un volumen más pequeño de antidisolvente se obtiene una pureza elevada de la sustancia precipitada, pero este volumen más pequeño de antidisolvente también complica su filtración. El 10 soporte sólido facilita la filtración de la sustancia precipitada de otro modo difícil de filtrar. Los soportes sólidos adecuados incluyen, pero no se limitan a, carbón activo, tierra de diatomeas, harina de trigo, almidón de maíz, almidón de patata, bentonita, perlita, avicel, perlita hidrófoba, harinas de lignita activa, carbonos, productos celulósicos y cualesquiera otros sólidos, que se pueden suspender en la disolución del disolvente del procedimiento de la presente invención. 15

En esta etapa del procedimiento, una mezcla se prepara combinando el soporte sólido y el concentrado obtenido en la etapa previa. La mezcla se combina entonces con un antidisolvente. Preferentemente, un antidisolvente adecuado es como se describe anteriormente, además de acetato de isopropilo y acetato de isobutilo. Típicamente, después de la adición del antidisolvente, se obtiene una suspensión.

La suspensión se filtra entonces para eliminar el soporte sólido y el producto absorbido. 20

El procedimiento comprende además suspender el soporte sólido filtrado y el producto absorbido para eliminar las trazas de licor madre. El disolvente usado para crear la suspensión puede ser un solo disolvente, tal como ACN o acetona, o una mezcla de dos disolventes, en los cuales el compuesto de tipo equinocandina posee una baja solubilidad. Cuando se usa una mezcla de dos disolventes, el primer disolvente es aquel en el que las impurezas son solubles, tal como acetato de isobutilo, acetato de isopropilo y acetato de etilo, octano, y el segundo es acetonitrilo o 25 acetona.

Además, el producto y el soporte sólido se pueden recuperar de la suspensión mediante cualquier método conocido por un experto, tal como, por ejemplo, mediante filtración y el secado subsiguiente del sólido filtrado. Preferentemente, el producto se puede separar del soporte sólido combinando el complejo del soporte sólido y el compuesto de tipo equinocandina con un disolvente en el que el producto es soluble, como por ejemplo en alcoholes, 30 por ejemplo metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, en DMF o DMSO. El soporte sólido se filtra entonces para obtener el producto purificado. El filtrado que contiene el producto purificado se puede purificar entonces adicionalmente mediante cualquier método de precipitación o cromatografía conocido.

El compuesto de tipo equinocandina purificado anterior se puede usar posteriormente para preparar productos sintéticos, tales como caspofungina, anidulafungina o micafungina. 35

Habiendo descrito la invención haciendo referencia a determinadas formas de realización preferidas, otras formas de realización se pondrán más claramente de manifiesto para un experto en la materia a partir de la consideración de la memoria descriptiva. La invención se define además mediante referencia a los siguientes ejemplos que describen con detalle los procedimientos de la invención. Aunque los ejemplos se centran en pneumocandina B0, WF 11899A y equinocandina B, un experto en la materia reconocería que los procedimientos se pueden adaptar con 40 poca o ninguna experimentación para purificar otros productos naturales en la familia de las equinocandinas. También se pondrá de manifiesto para los expertos en la materia que se pueden practicar muchas modificaciones, tanto materiales como métodos, sin apartarse por ello del alcance de la invención.

EJEMPLOS

Ejemplo 1 de referencia 45

Etapa a: purificación

Se combinó 1 kg de caldo de fermentación que contiene pneumocandina B0 con 0,5 litros de acetato de isobutilo para formar un sistema bifásico. Las dos fases se separaron con una centrifugadora. La fase de acetato de isobutilo se eliminó. Toda la pneumocandina B0 quedó en el caldo de fermentación purificado.

El caldo de fermentación purificado se extrajo entonces con 500 ml de isobutanol. La extracción se repitió 50 entonces con 500 ml adicionales de isobutanol. Las dos fases de isobutanol resultantes se combinaron para obtener una fase de isobutanol de 1090 ml. El rendimiento global de la purificación y las extracciones fue aproximadamente 100%.

Etapa b: cristalización

La fase de isobutanol se dividió en cinco porciones de 200 ml. La pneumocandina B0 bruta se cristalizó a partir de cada una de las porciones mediante los siguientes procedimientos.

i) Una porción de 200 ml se concentró hasta 3,5 g a presión reducida. Entonces se añadieron 17,5 ml de acetato de isobutilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar durante 5 aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue 37%.

ii) Otra porción de 200 ml se concentró hasta 3,5 g a presión reducida. Entonces se añadieron 17,5 ml de acetonitrilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar durante aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron 10 entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue 75%.

iii) Otra porción de 200 ml se concentró hasta 3,5 g a presión reducida. Entonces se añadieron 17,5 ml de acetato de etilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar durante aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue 84%. 15

iv) Otra porción de 200 ml se concentró hasta 3,5 g a presión reducida. Entonces se añadieron 3,5 ml de acetato de butilo y 10,5 ml de acetonitrilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar durante aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue 83%.

v) Una porción de 200 ml se concentró hasta 3,5 g a presión reducida. Entonces se añadieron 3,5 ml de acetato 20 de etilo y 10,5 ml de acetonitrilo. Después, se añadieron entonces y 17,5 ml de acetato de isobutilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar durante aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue 74%.

Ejemplo 2 de referencia 25

Etapa a: purificación

Se combinó 1 kg de caldo de fermentación que contiene pneumocandina B0 con 0,5 litros de acetato de n-butilo para formar un sistema bifásico. Las dos fases se separaron con una centrifugadora. La fase de acetato de n-butilo se eliminó de forma que la pneumocandina B0 quedó en el caldo de fermentación purificado.

El caldo de fermentación purificado se extrajo entonces con 500 ml de n-butanol. La extracción se repitió 30 entonces con 500 ml adicionales de n-butanol. Las dos fases de n-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de n-butanol de 1150 ml.

Etapa b: cristalización

La fase de n-butanol se concentró hasta 18 g a presión reducida. Entonces se añadieron 18 ml de acetato de isobutilo y 54 ml de acetonitrilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar 35 durante aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue 64%.

Ejemplo 3 de referencia

Etapa a: purificación

Se combinó 1 kg de caldo de fermentación que contiene pneumocandina B0 con 0,5 litros de acetato de n-40 propilo para formar un sistema bifásico. Las dos fases se separaron con una centrifugadora. La fase de acetato de n-propilo se eliminó de forma que la pneumocandina B0 quedó en el caldo de fermentación purificado.

El caldo de fermentación purificado se extrajo entonces con 500 ml de isobutanol. La extracción se repitió entonces con 500 ml adicionales de isobutanol. Las dos fases de n-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de isobutanol de 1140 ml. 45

Etapa b: cristalización

La fase de isobutanol se concentró hasta 9 g a presión reducida. Entonces se añadieron 9 ml de acetato de isobutilo y 27 ml de acetonitrilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar durante aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue mayor que 80%. 50

Ejemplo 4 de referencia

Etapa a: purificación

Se combinó 1 kg de caldo de fermentación que contiene pneumocandina B0 con 0,5 litros de tolueno para formar un sistema bifásico. Las dos fases se separaron con una centrifugadora. La fase de tolueno se eliminó de forma que la pneumocandina B0 quedó en el caldo de fermentación purificado. 5

El caldo de fermentación purificado se extrajo entonces con 500 ml de isobutanol. La extracción se repitió entonces con 500 ml adicionales de isobutanol. Las dos fases de n-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de isobutanol de 1120 ml.

Etapa b: cristalización

La fase de isobutanol se concentró hasta 12 g a presión reducida. Entonces se añadieron 12 ml de acetato de 10 isobutilo y 36 ml de acetonitrilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar durante aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue 52%.

Ejemplo 5 de referencia

Etapa a: purificación 15

Se combinó 1 kg de caldo de fermentación que contiene pneumocandina B0 con 0,5 litros de hexano para formar un sistema bifásico. Las dos fases se separaron con una centrifugadora. La fase de hexano se eliminó de forma que la pneumocandina B0 quedó en el caldo de fermentación purificado.

El caldo de fermentación purificado se extrajo entonces con 500 ml de isobutanol. La extracción se repitió entonces con 500 ml adicionales de isobutanol. Las dos fases de n-butanol resultantes se combinaron para obtener una 20 fase de isobutanol de 910 ml.

Etapa b: cristalización

La fase de isobutanol se concentró hasta 18 g a presión reducida. Entonces se añadieron 18 ml de acetato de isobutilo y 54 ml de acetonitrilo. La disolución resultante se enfrió entonces hasta 0-5ºC. La disolución se dejó reposar durante aproximadamente 20 horas, durante lo cual se produjo la cristalización. Los cristales resultantes se filtraron 25 entonces de la disolución y se secaron. El rendimiento del producto bruto fue 88%.

Ejemplo 6 de referencia

El caldo fermentado se filtró, y el micelio filtrado se dividió en varias partes. Cada parte de los micelios filtrados se suspendió en un disolvente en un volumen de 2 veces la masa de la parte del micelio filtrado. Después de agitar, los micelios se filtraron a partir del disolvente. Cada disolvente eliminó impurezas. Los disolventes tales como 30 acetato de etilo, hexano, éter de petróleo y diclorometano dieron como resultado la purificación con una pérdida insignificante. Los disolventes tales como acetona, metanol, etanol, n-propanol, isopropanol y acetonitrilo dieron como resultado la purificación con una pérdida significativa.

Ejemplo 1

Etapa a: 35

Se extrajeron 190 kg de caldo fermentado de pneumocandina – que contiene 414,8 g de pneumocandina B0 – con 95 l de isobutanol a pH 5,0-7,0. La etapa de extracción se repitió con 95 l adicionales de isobutanol. Las dos fases de isobutanol resultantes se combinaron para obtener una fase de isobutanol de 191 l.

La fase de isobutanol combinada se evaporó hasta un volumen de 25 l. Este concentrado se lavó dos veces con 12,5 l de agua a pH 4,0-4,5. Después del lavado ácido, el concentrado se lavó dos veces con 6 l de agua a pH 6,0-40 6,5.

El concentrado lavado se aclaró con carbón activo de 193 g. Después del tratamiento con carbón, el concentrado se evaporó hasta un volumen de 4,8 l. Al concentrado final se añadieron 3,6 l de acetato de isobutilo, y la disolución se evaporó nuevamente hasta 4,8 l. Esta etapa se repitió.

El concentrado final obtenido contenía 296,7 g de pneumocandina B0. El rendimiento fue 71,5%. 45

Etapa b: precipitación de pneumocandina B0 bruta en diferentes soportes:

1. Se añadieron 59,4 g de tierra de diatomeas (el tipo usado fue FW-14) al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La

mezcla se filtró, y la torta del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 87,2 g de producto bruto – que contiene 13,88 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 89,9%.

2. Se añadieron 59,4 g de harina de trigo al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta 5 del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 77,09 g de producto bruto – que contiene 8,728 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 56,5%.

3. Se añadieron 59,4 g de almidón de maíz al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta 10 del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 80,02 g de producto bruto – que contiene 12,63 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 81,8%.

4. Se añadieron 59,4 g de almidón de patata al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta 15 del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 78,31 g de producto bruto – que contiene 14,56 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 94,3%.

5. Se añadió bentonita (el tipo usado fue S-100) de 59,4 g al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, 20 y la torta del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 80,97 g de producto bruto – que contiene 11,14 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 72,2%.

6. Se añadió bentonita (el tipo usado fue T2-350) de 59,4 g al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, 25 y la torta del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 81,14 g de producto bruto – que contiene 10,70 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 69,3%.

7. Se añadió carbón activo de 59,4 g al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 800 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se 30 suspendió con 1000 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 109,02 g de producto bruto – que contiene 25,44 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 82,4%.

8. Se añadió perlita (el tipo usado fue CP-800) de 19,8 g al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, 35 y la torta del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 47,46 g de producto bruto – que contiene 13,54 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 87,7%.

9. Se añadió Avicel (el tipo usado fue 200) de 59,4 g al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la 40 torta del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 81,65 g de producto bruto – que contiene 9,62 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 62,3%.

10. Se añadió lignita activa de 29,7 g al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se 45 suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 53,56 g de producto bruto – que contiene 13,45 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 87,1%.

11. Se añadió perlita hidrófoba de 19,8 g al concentrado final de volumen 250 ml. Se añadieron 400 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta 50 del filtro se suspendió con 500 ml de una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 43,83 g de producto bruto – que contiene 13,43 g de pneumocandina B0 -. El rendimiento de la precipitación fue 86,9%.

Ejemplo 2:

Etapa a:

Se extrajeron 100,0 kg de caldo fermentado diluido de WF-11899A – que contiene aprox. 36,5 g de WF-11899A – con 100,0 l de isobutanol a pH 5,0-7,0. La etapa de extracción se repitió con 60,0 l adicionales de isobutanol. Las dos fases de isobutanol resultantes se combinaron para obtener una fase de isobutanol de 161 0. 5

La fase de isobutanol combinada se evaporó hasta un volumen de 12,3 l. Este concentrado se lavó con 6,0 l de agua a pH 4,0-4,5. Después del lavado ácido, el concentrado se lavó con 6,0 l de agua a pH 6,0-6,5.

El concentrado lavado se aclaró con carbón activo de 9,1 g. Después del tratamiento con carbón, el concentrado se dividió en dos partes. La primera parte (6,9 l) se evaporó hasta un volumen de 1,3 l. Se añadió un volumen igual (1,3 l) de acetato de isobutilo al concentrado, y la disolución se evaporó nuevamente hasta el volumen de 10 la etapa previa. Esta etapa se repitió dos veces. El peso del primer concentrado final fue 740,41 g.

La segunda parte (3,3 l) se evaporó hasta un peso de 337,3 g. Se añadió un volumen (300 ml) de acetato de isobutilo al concentrado, y la disolución se evaporó nuevamente hasta el volumen de la etapa previa. Esta etapa se repitió dos veces. El peso del segundo concentrado final fue 316,07 g.

El concentrado final obtenido contenía 20,25 g de WF-11899A. El rendimiento fue 55,5%. 15

Etapa b: precipitación de WF-11899A (FR-901379) bruta sobre diferentes soportes:

1. Se añadieron 6,0 g de tierra de diatomeas (el tipo usado fue FW-14) y 5,0 ml de acetato de isopropilo al concentrado final de peso 10 g. Se añadieron 35 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otras 5 horas a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se suspendió con 10 ml de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 10,0 g de producto bruto – que contiene 213,1 mg 20 de WF-11899A -. El rendimiento de la precipitación fue 98,6%.

2. Se añadieron 300,0 g de tierra de diatomeas (el tipo usado fue FW-14) y 178,0 ml de acetato de isopropilo al concentrado final de peso 336,0 g. Se añadieron 1176 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otras 5 horas a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se suspendió con 336 ml de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 451,6 g de producto bruto – que 25 contiene 6,6 g de WF-11899A -. El rendimiento de la precipitación fue 91,7%.

3. Se añadieron 6,0 g de perlita (el tipo usado fue CP-800) y 5,0 ml de acetato de isopropilo al concentrado final de peso 10 g. Se añadieron 35 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otras 5 horas a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se suspendió con 10 ml de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 9,61 g de producto bruto – que contiene 221,3 mg de WF-30 11899A -. El rendimiento de la precipitación fue 98,3%.

4. Se añadieron 6,0 g de Avicel (el tipo usado fue 200) y 5,0 ml de acetato de isopropilo al concentrado final de peso 10 g. Se añadieron 35 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otras 5 horas a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se suspendió con 10 ml de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 9,71 g de producto bruto – que contiene 202,4 mg de WF-11899A -. El 35 rendimiento de la precipitación fue 93,6%.

5. Se añadieron 400,0 g de Avicel (el tipo usado fue 200) y 200,0 ml de acetato de isopropilo al concentrado final de peso 404,0 g. Se añadieron 1414 ml de acetonitrilo a la suspensión, y la mezcla se agitó otras 5 horas a temperatura ambiente. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se suspendió con 404 ml de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40ºC durante 12 horas. Se prepararon 549,2 g de producto bruto – que contiene 8,31 mg de WF-40 11899A -. El rendimiento de la precipitación fue 96,5%.

Ejemplo 3

Etapa a:

El caldo fermentado de equinocandina se extrajo con la mitad de volumen de isobutanol a pH 5,0-7,0. La etapa de extracción se repitió con medio volumen adicional de isobutanol. Las dos fases de isobutanol resultantes se 45 combinaron.

La fase de isobutanol combinada se concentró y se lavó a pH ácido y neutro. El concentrado lavado se aclaró con carbón activo. Después del tratamiento con carbón, el concentrado se evapora hasta un residuo oleoso. Se añade acetato de isobutilo al concentrado final, y la disolución se evapora nuevamente hasta el volumen de partida. Esta etapa se repite. 50

Etapa b: precipitación de equinocandina bruta:

Se añade tierra de diatomeas (el tipo usado fue FW-14) al concentrado final. Se añade acetonitrilo a la suspensión, para precipitar el producto bruto. La mezcla se agita otra hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtra, y la torta del filtro se suspende con una mezcla 1:1 de acetonitrilo-acetato de isobutilo. La torta del filtro se seca a 40ºC durante 12 horas. 5

Ejemplo 4: separación de la sustancia activa – pneumocandina B0 – del soporte

10 kg de producto bruto de pneumocandina B0 (sobre tierra de diatomeas, ensayo: 13,07%, pureza mediante HPLC 35,7%) que contiene 1307 g de sustancia activa se agitaron con 100 l de propanol normal durante aproximadamente 1 hora. La tierra de diatomeas se filtró y se lavó con 10 l de propanol normal. La disolución propanólica combinada aprox. 110 l se evaporó a presión reducida hasta un volumen de 11,4 l. Se añadieron 46 l de 10 acetato de isopropilo al concentrado, y la mezcla se enfrió hasta (-)10ºC-(-)20ºC. La mezcla se agitó otras 16-18 horas a (-)10ºC-(-)20ºC. El material precipitado se filtró y se lavó con 10 l de acetato de isopropilo. La pneumocandina B0 se secó a 40ºC durante aprox. 12 horas. La masa del producto fue 4,89 kg. El ensayo fue 26,21%, y la pureza mediante HPLC fue 41,12. El rendimiento de la etapa fue 98%.

Claims (24)

1. REIVINDICACIONES

   1. Procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina que comprende combinar compuesto de tipo equinocandina con por lo menos un antidisolvente que hace que dicho compuesto precipite, y un soporte sólido.
2. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el compuesto de tipo equinocandina de partida se obtiene a partir de extracciones del caldo de fermentación.
3. 3. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para purificar un compuesto de tipo 5 equinocandina, que comprende:

   (a) extraer el compuesto de tipo equinocandina de un caldo de fermentación o de un micelio filtrado obtenido a partir de un caldo de fermentación con un disolvente orgánico inmiscible con agua, para obtener un sistema bifásico que comprende una fase acuosa y una fase orgánica, o para obtener una fase orgánica que contiene agua; 10

   (b) recuperar el compuesto de tipo equinocandina; y

   (c) combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido para obtener un compuesto de tipo equinocandina purificado.
4. 4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el que el disolvente orgánico inmiscible con agua en la etapa (a) es un alcohol inmiscible con agua, preferentemente el alcohol inmiscible con agua es un alcohol de C4-6, más 15 preferentemente isobutanol o n-butanol.
5. 5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 4, en el que la extracción en la etapa (a) se lleva a cabo a un pH de aproximadamente 2 a aproximadamente 8.
6. 6. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que el pH es de aproximadamente 5 a aproximadamente 7.
7. 7. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que el pH es de aproximadamente 2 a aproximadamente 4, 20 y la extracción se lleva a cabo mientras se enfría hasta una temperatura menor que aproximadamente 10ºC, preferentemente aproximadamente 0ºC a aproximadamente 10ºC.
8. 8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7, en el que se repite la etapa (a) de extracción.
9. 9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, que comprende además una etapa de 25 lavado del compuesto de tipo equinocandina recuperado, antes de combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con un antidisolvente y un soporte sólido en la etapa c).
10. 10. Procedimiento según la reivindicación 9, en el que la etapa de lavado comprende combinar con agua el compuesto de tipo equinocandina recuperado.
11. 11. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que la etapa de lavado comprende dos etapas, una que 30 usa agua que tiene un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 6,5, y una segunda, que usa agua que tiene un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 6,5.
12. 12. Procedimiento según la reivindicación 11, en el que el primer lavado se efectúa con agua que tiene un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 4,5, y el segundo lavado se efectúa con agua que tiene un pH de aproximadamente 6 a aproximadamente 6,5. 35
13. 13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en el que el lavado elimina aproximadamente 20 a aproximadamente 50% en peso de residuos sólidos que se originan del caldo de fermentación.
14. 14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 13, que comprende además una etapa de tratar con carbón activo el compuesto de tipo equinocandina recuperado antes de combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con un antidisolvente y un soporte sólido como en la etapa c). 40
15. 15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además la etapa de cristalizar el compuesto de tipo equinocandina, que comprende combinarlo con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido para obtener un compuesto de tipo equinocandina purificado.
16. 16. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el soporte sólido se selecciona de entre el grupo constituido por carbón activo, tierra de diatomeas, harina de trigo, almidón de maíz, almidón 45 de patata, bentonita, perlita, avicel, perlita hidrófoba, harinas de lignita activa, carbonos, y productos celulósicos.
17. 17. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el antidisolvente se selecciona de entre el grupo constituido por acetato de etilo, acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de terc-

    butilo, acetato de isopropilo, acetona, acetonitrilo (ACN), mezclas de acetonitrilo con acetato de etilo y mezclas de acetonitrilo (ACN) con acetato de isobutilo.
18. 18. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la recuperación del compuesto de tipo equinocandina comprende filtrar la mezcla del compuesto de tipo equinocandina, el soporte sólido y el antidisolvente y suspender el soporte sólido filtrado, al cual está absorbido el compuesto de tipo equinocandina, en un 5 disolvente seleccionado de entre el grupo constituido por acetonitrilo, acetona o una mezcla de dos disolventes orgánicos.
19. 19. Procedimiento según la reivindicación 18, en el que la mezcla de dos disolventes orgánicos comprende un primer disolvente seleccionado de entre el grupo constituido por acetato de isobutilo, acetato de isopropilo, acetato de etilo, octano, y un segundo disolvente seleccionado de entre el grupo constituido por acetonitrilo o acetona. 10
20. 20. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto de tipo equinocandina se separa del soporte sólido, que comprende la etapa de combinar el soporte sólido, al cual está absorbido el compuesto de equinocandina, con un disolvente en el que el compuesto de tipo equinocandina es soluble.
21. 21. Procedimiento según la reivindicación 20, en el que el disolvente en el que el compuesto de tipo equinocandina es soluble se selecciona de entre el grupo constituido por metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-15 butanol, isobutanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), una mezcla de los mismos, y una mezcla de los mismos en agua.
22. 22. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además la etapa de convertir el compuesto de tipo equinocandina purificado en caspofungina, anidulafungina o micafungina.
23. 23. Uso de un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la preparación de una 20 equinocandina antifúngica.
24. 24. Uso según la reivindicación 23, en el que la equinocandina antifúngica es caspofungina, micafungina y anidulafungina.