ES2568731T3 - Suspensión de células madre - Google Patents

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Abstract

Uso de al menos un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en trehalosa, hidroxietilalmidón y dextrano como un inhibidor de la agregación de células madre de mamífero en una suspensión de células madre de mamífero, en el que: - cuando el polisacárido es trehalosa, el inhibidor se usa de manera que la concentración de trehalosa en la suspensión de células madre de mamífero está en el intervalo de 4,53 a 362,4 mg/ml; - cuando el polisacárido es hidroxietilalmidón, el inhibidor se usa de manera que la concentración de hidroxietilalmidón en la suspensión de células madre de mamífero está en el intervalo de 1 a 500 mg/ml; - y cuando el polisacárido es dextrano, el inhibidor se usa de manera que la concentración de dextrano en la suspensión de células madre de mamífero está en el intervalo de 30 a 100 mg/ml.

Description

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preferentemente 7 × 104 - 60 × 104, más preferentemente de 7 × 104 - 20 × 104.
Para reforzar el efecto supresor sobre la agregación y/o una reducción de la tasa de supervivencia de las células madre de mamífero, preferentemente, se usa hidroxietilalmidón que tenga un peso molecular medio en peso relativamente bajo (PMp) (por ejemplo, 5 × 104 - 9 × 104, preferentemente de 6 × 104 - 8 × 104 (por ejemplo, 7 × 104)).
Además, aunque el grado de sustitución (número de grupos hidroxietilo por 1 unidad de glucosa) del hidroxietilalmidón que se puede usar para la suspensión de la presente invención no se limite a uno en particular siempre que pueda suprimir la agregación y/o una reducción de la tasa de supervivencia de las células madre de mamífero, en general, es de 0,4 a 0,8.
Los ejemplos preferidos de hidroxietilalmidón para su uso en la suspensión de la presente invención incluyen hidroxietilalmidón que tiene un peso molecular medio en peso (PMp) de 7 × 104 y un grado de sustitución de 0,50 a 0,55, e hidroxietilalmidón que tiene un peso molecular medio en peso (PMp) de 20 × 104 y un grado de sustitución de 0,50 a 0,55 y similares. Dicho hidroxietilalmidón se encuentra disponible en el mercado, por ejemplo, en Fresenius Kabi Japan K.K. como Hespander (marca registrada).
El dextrano que se puede usar para la suspensión de la presente invención es un polisacárido (C6H10O5)n que consiste en D-glucosa, que tiene un enlace α1→6 como cadena principal. El tipo de dextrano no se limita a uno en particular siempre que pueda suprimir la agregación y/o una reducción de la tasa de supervivencia de las células madre de mamífero. El peso molecular medio en peso (PMp) del dextrano no se limita a uno en particular siempre que pueda suprimir la agregación y/o una reducción de la tasa de supervivencia de las células madre de mamífero. Son ejemplos preferidos el dextrano 40 (PMp = 40.000) y el dextrano 70 (PMp = 70.000) y similares.
La concentración de los polisacáridos anteriormente mencionados en la suspensión de la presente invención no se limita a una en particular siempre que sea suficiente para suprimir la agregación y/o una reducción de la tasa de supervivencia de las células madre de mamífero. Cuanto mayor sea la concentración de los polisacáridos anteriormente mencionados, mayor será el efecto de supresión de la agregación y/o una reducción de la tasa de supervivencia. Sin embargo, cuando la concentración de polisacáridos es demasiado alta, la tasa de supervivencia de las células madre se puede ver influida negativamente.
Por ejemplo, cuando se usa la trehalosa como el polisacárido mencionado anteriormente, la concentración de trehalosa en la suspensión de la presente invención, en general, no es inferior a 4,53 mg/ml, preferentemente no es inferior a 15,1 mg/ml. Para evitar una influencia adversa sobre la tasa de supervivencia de las células madre, la concentración de trehalosa en la suspensión, en general, no es superior a 362,4 mg/ml, preferentemente no es superior a 181,2 mg/ml. Por lo tanto, la concentración de trehalosa de la suspensión, en general, es de 4,53 a 362,4 mg/ml, preferentemente de 15,1 a 181,2 mg/ml.
Incluso cuando se usan polisacáridos anteriormente mencionados distintos de la trehalosa, es posible determinar apropiadamente una concentración que presente un efecto de supresión de la agregación de las células madre y/o una reducción de la tasa de supervivencia, y suprima una influencia adversa sobre la tasa de supervivencia de las células madre, de acuerdo con la concentración de trehalosa.
Cuando se usa hidroxietilalmidón como el polisacárido anteriormente mencionado, la concentración de hidroxietilalmidón en la suspensión de la presente invención, por ejemplo, no es inferior a 1 mg/ml, preferentemente no es inferior a 10 mg/ml. Además, para evitar una influencia adversa sobre la tasa de supervivencia de las células madre, la concentración de hidroxietilalmidón en la suspensión, por ejemplo, no es superior a 500 mg/ml, preferentemente no es superior a 100 mg/ml. Por lo tanto, la concentración de hidroxietilalmidón en la suspensión, por ejemplo, es de 1 a 500 mg/ml, preferentemente de 10 a 100 mg/ml.
Cuando se usa dextrano como el polisacárido anteriormente mencionado, la concentración de dextrano en la suspensión de la presente invención, por ejemplo, no es inferior a 1 mg/ml, preferentemente no es inferior a 10 mg/ml, más preferentemente no es inferior a 30 mg/ml, incluso más preferentemente no es inferior a 65 mg/ml. Además, para evitar una influencia adversa sobre la tasa de supervivencia de las células madre, la concentración de dextrano en la suspensión, por ejemplo, no es superior a 500 mg/ml, preferentemente no es superior a 200 mg/ml, más preferentemente no es superior a 125 mg/ml, todavía más preferentemente no es superior a 100 mg/ml. Por lo tanto, la concentración de dextrano en la suspensión, por ejemplo, es de 1 a 500 mg/ml, preferentemente es de 10 a 200 mg/ml, más preferentemente es de 30 a 125 mg/ml, todavía más preferentemente es de 30 a 100 mg/ml, incluso más preferentemente es de 65 a 100 mg/ml.
La suspensión de la presente invención comprende preferentemente una combinación de trehalosa e hidroxietilalmidón, o de trehalosa y dextrano. Se espera que una combinación de trehalosa con hidroxietilalmidón o dextrano mejore el efecto de supresión de una reducción de la tasa de supervivencia de las células madre de mamífero. En particular, se espera que la combinación suprima de manera eficaz una reducción de la tasa de supervivencia de las células madre adhesivas que flotan en la suspensión (en especial, las células madre adhesivas
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