JP7079045B2 - トレハロースを含む血球系細胞保存用液 - Google Patents
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Description
〔1〕トレハロース若しくはその誘導体又はこれらの塩を含み、かつ、pHが4.5~7.2である血球系細胞保存用液。
〔2〕等張液である、上記〔1〕に記載の液。
〔3〕等張液が、乳酸リンゲル液である、上記〔2〕に記載の液。
〔4〕血球系細胞を0~40℃で保存するための、上記〔1〕~〔3〕のいずれかに記載の液。
〔5〕血球系細胞の生存率低下を抑制するために用いられる、上記〔1〕~〔4〕のいずれかに記載の液。
〔6〕血球系細胞の細胞凝集を抑制するために用いられる、上記〔1〕~〔5〕のいずれかに記載の液。
〔7〕血球系細胞の保存容器への接着を抑制するために用いられる、上記〔1〕~〔6〕のいずれかに記載の液。
〔8〕血球系細胞の移植に用いられる、上記〔1〕~〔7〕のいずれかに記載の液。
〔9〕血球系細胞がT細胞である、上記〔1〕~〔8〕のいずれかに記載の液。
〔10〕トレハロース若しくはその誘導体又はこれらの塩を含む、上記〔1〕~〔9〕のいずれかに記載の液を調製するための粉末製剤。
〔11〕トレハロース若しくはその誘導体又はこれらの塩を含み、かつ、pHが4.5~7.2である液中で、血球系細胞を保存する工程を含む、血球系細胞の保存方法。
〔12〕液が、等張液である、上記〔11〕に記載の保存方法。
〔13〕等張液が、乳酸リンゲル液である、上記〔12〕に記載の保存方法。
〔14〕血球系細胞を0~40℃で保存する、上記〔11〕~〔13〕のいずれかに記載の保存方法。
〔15〕血球系細胞がT細胞である、上記〔11〕~〔14〕のいずれか1項に記載の保存方法。
トレハロース類含有液に、血球系細胞を加えるか、或いは、血球系細胞を含む液に、トレハロース類を加えることにより、血球系細胞を含むトレハロース類含有液を調製する工程と、調製した当該液に、必要に応じて、pH調整剤を添加することにより、pHが4.5~7.2となるように調整し、血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液を得る工程と、本件トレハロース類含有液中で血球系細胞を保存する工程と、保存後の当該液を、血球系細胞の移植を必要とする対象(例えば、がん患者)へ投与する工程とを含む、血球系細胞の移植方法;や、
トレハロース類含有液に、必要に応じて、pH調整剤を添加することにより、pHが4.5~7.2となるように調整し、本件トレハロース類含有液を得る工程と、本件トレハロース類含有液に、血球系細胞を加えることにより、血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液を調製する工程と、本件トレハロース類含有液中で血球系細胞を保存する工程と、保存後の当該液を、血球系細胞の移植を必要とする対象(例えば、がん患者)へ投与する工程とを含む、血球系細胞の移植方法;や、
血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液の製造における、トレハロース類の使用や、液体中の血球系細胞の生存率低下を抑制するための、トレハロース類の使用;や、
液体中の血球系細胞の細胞凝集を抑制するための、トレハロース類の使用;や、
液体中の血球系細胞の保存容器への接着を抑制するための、トレハロース類の使用;や、
血球系細胞の移植を必要とする疾患(例えば、がん)の治療における使用のための、血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液;や、
トレハロース類含有液に、血球系細胞を加えるか、或いは、血球系細胞を含む液に、トレハロース類を加えることにより、血球系細胞を含むトレハロース類含有液を調製する工程と、調製した当該液に、必要に応じて、pH調整剤を添加することにより、pHが4.5~7.2となるように調整し、血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液を得る工程とを含む、血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液の調製方法;や、
トレハロース類含有液に、必要に応じて、pH調整剤を添加することにより、pHが4.5~7.2となるように調整し、本件トレハロース類含有液を得る工程と、本件トレハロース類含有液に、血球系細胞を加えることにより、血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液を調製する工程とを含む、血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液の調製方法;や、
血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液;や、
血球系細胞を含む本件血球系細胞保存用液;
を挙げることができる。なお、上記移植方法において、血球系細胞の保存は、通常、血球系細胞を含む本件トレハロース類含有液を、当該液が液体の状態で存在する温度条件下で保存するものであり、当該液が固体の状態で保存する工程(例えば、凍結保存する工程、凍結乾燥保存する工程等の血球系細胞を休眠状態で保存する工程)を含まない。
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また、本発明には、トレハロース類を含む、本件血球系細胞保存用液を調製するための粉末製剤が含まれる。当該粉末製剤には上記の任意成分を含んでいてもよい。
1-1.材料及び方法
[血球系細胞]
血球系細胞として、以下の表1に記載のヒト末梢血由来CD8+T細胞(以下、単に「T細胞」という)を用いた。
pHが6.574の乳酸リンゲル液であるラクテック注(大塚製薬工場社製、表2参照)(以下、「LR」ともいう)に、α,α-トレハロース二水和物(富士フイルム和光純薬社製)を、トレハロースの終濃度が3(w/v)%となるように添加し、LRT-5(表3参照)を得た。LRT-5に、0.1mol/Lの塩酸を、pHがそれぞれ4.468、5.021、5.997、及び6.482となるように添加し、LRT-1~4(表3参照)を得た。また、LRT-5に、0.5mol/Lの水酸化ナトリウム溶液を、pHがそれぞれ7.207、7.515、及び8.033となるように添加し、LRT-6~8(表3参照)を得た。なお、各被験液におけるpHは、室温(20.6~25.8℃)で測定した際の値である。
1×106個のT細胞を、TLY CULTURE(登録商標)キット25(GCリンフォテック社製)、すなわち、インターロイキン(IL)-2、固相化抗ヒトCD3抗体、及び10%FCSを含むRPMI-1640培養液の存在下の培養用フラスコに添加し、当該製品の添付文書に記載の方法に従い、37℃、5%CO2インキュベーター内で7日間培養した。
血球系細胞の被験液中での保存と、その後の細胞生存率及び細胞凝集塊数の測定については、以下の〔1〕~〔7〕の手順に従って行った。
〔1〕上記[血球系細胞の培養]の項目に記載の方法に従って培養したT細胞を含む培養用フラスコに、培養液と等量のLRを加え、50mLのコニカルチューブに移した後、細胞塊を懸濁した。
〔2〕細胞懸濁液の一部(20μL)を、予めトリパンブルー染色液(Gibco社製)20μLを添加した1.5mLマイクロチューブに分取した。トリパンブルー染色液と混和した細胞懸濁液を、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社製)を用いて全細胞数及びトリパンブルー陽性細胞(死細胞)数を計測することにより、保存前の細胞生存率を算出した。
〔3〕残りの細胞懸濁液は、T細胞が5×105個となるように、低接着性のコニカルチューブであるステムフル(住友ベークライト社製)に移し、遠心処理(300×g、10分間、室温)後、上清を除去し、表3に示す9種類の被験液(実施例1~6及び比較例1~3)1mLを加え、細胞ペレットを懸濁し、25℃にて24時間保存した。
〔4〕保存後、チップの先を、細胞を含む液が入ったチューブの底から目視で5mm程度の位置まで挿入し、緩やかに攪拌(1mLのピペットを用いて、500μLの液量でのピペッティングを5回)した。
〔5〕撹拌直後の10μLの液を、ワンセルカウンターに分取し、ワンセルカウンターの細胞計数部の9カ所のエリアの細胞凝集塊の数を計測した。なお、3つ以上の細胞が接着した状態のものを細胞凝集塊として判断した。
〔6〕再度、チップの先を、細胞を含む液が入ったチューブの底から目視で5mm程度の位置まで挿入し、緩やかに攪拌(1mLのピペットを用いて、250μLの液量でのピペッティングを2回)した。
〔7〕撹拌直後の20μLの液を、1.5mLマイクロチューブに採取し、トリパンブルー染色液(Gibco社製)20μLと混和後、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社製)を用いて全細胞数及びトリパンブルー陽性細胞(死細胞)数を計測することにより、各保存期間における細胞生存率を算出した。なお、細胞生存率は、式「(全生細胞数/全細胞数)×100=([全細胞数-死細胞数]/全細胞数)×100=細胞生存率(%)」を用いて算出した。
細胞保存後の生じる細胞凝集塊を測定したところ、T細胞を、LRT-7(比較例2)やLRT-8(比較例3)中に保存すると、細胞凝集塊が認められたのに対して、T細胞を、LRT-1~6(実施例1~6)中に保存した場合や、LR中に保存した場合は、細胞凝集塊はほとんど又は全く認められなかった(図1A及び表4参照)。
この結果は、血球系細胞(特にT細胞)を、トレハロースを含み、かつ、pHが約4.5~約7.2の範囲の液中に保存すると、トレハロースを含むが、pHが上記範囲外の液中に保存した場合と比べ、保存したときに生じる細胞凝集塊を効果的に抑制できることを示している。
この結果は、血球系細胞(特にT細胞)を、トレハロースを含み、かつ、pHが約4.5~約7.2の範囲の液中に保存すると、pHが上記範囲内であるが、トレハロース不含の液中に保存した場合と比べ、保存したときに生じる細胞死を効果的に抑制できることを示している。
[血球系細胞]
上記(1)で使用したT細胞を用いた。
3(w/v)%のトレハロースを含む細胞洗浄保存液であるセルストアW(大塚製薬工場社製、表6参照)(以下、「W」ともいう)を室温(25℃)又は冷蔵(5℃)でインキュベートし、W(25℃)(以下「比較例4」ともいう。)及びW(5℃)(以下「比較例5」ともいう。)(表7参照)を得た。なお、被験液におけるpHは、室温(23.5℃)で測定時が7.331、氷冷(4.3℃)で測定時が7.231である。
上記(1)に記載の方法に従ってT細胞を培養した。
上記(1)に記載の方法に従い、比較例4及び5の被験液に細胞ペレットを懸濁し、24時間25℃又は5℃で保存し、細胞凝集塊形成を評価した。
細胞保存後の生じる細胞凝集塊を測定したところ、T細胞を、25℃で保存すると、細胞凝集塊が認められたのに対して(比較例4)、T細胞を、5℃で保存した場合は(比較例5)、細胞凝集塊は全く認められなかった(図2及び表8参照)。
この結果は、血球系細胞(特にT細胞)を冷蔵(10℃前後)よりも高い温度で保存すると、細胞凝集塊が形成される傾向にあることを示している。
3-1.材料及び方法
[血球系細胞]
上記(1)で使用したT細胞を用いた。
生理食塩液である大塚生食注(大塚製薬工場社製)に、アルブミナー(登録商標)25%静注12.5g/50mL(CSLベーリング社製)を、アルブミンの終濃度が2.5(w/v)%となるように添加し、2.5%アルブミン含有生理食塩液(2.5%ALBS)(表9参照)を調製した。LRT-3とLRT-7(表9参照)は、上記(1)で調製した被験液を用いた。
上記(1)に記載の方法に従ってT細胞を培養した。
血球系細胞の被験液中での保存と、その後の細胞回収率及び細胞生存率の測定については、以下の〔1〕~〔7〕の手順に従って行った。
〔1〕上記[血球系細胞の培養]の項目に記載の方法に従って培養したT細胞を含む培養用フラスコに、培養液と等量のLRを加え、50mLのコニカルチューブに移した後、細胞塊を懸濁した。
〔2〕細胞懸濁液の一部(20μL)を、予めトリパンブルー染色液(Gibco社製)20μLを添加した1.5mLマイクロチューブに分取した。トリパンブルー染色液と混和した細胞懸濁液を、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社製)を用いて全細胞数及びトリパンブルー陽性細胞(死細胞)数を計測することにより、保存前の細胞生存率を算出した。
〔3〕残りの細胞懸濁液は、T細胞が4.5×105個となるように、Falcon(登録商標)15mL高透明度ポリプロピレンコニカルチューブ(コーニング社製)に移し、遠心処理(300×g、10分間、室温)後、上清を除去し、表9に示す3種類の被験液(実施例3並びに比較例6及び比較例2)0.9mLを加え、細胞ペレットを懸濁し、25℃にて保存した。
〔4〕保存6時間後及び24時間後に、チップの先を、細胞を含む液が入ったチューブの底から目視で5mm程度の位置まで挿入し、緩やかに攪拌(1mLのピペットを用いて、450μLの液量でのピペッティングを5回)して、手順〔5〕の細胞回収率及び細胞生存率の測定に供した。
〔5〕撹拌直後の20μLの液を、1.5mLマイクロチューブに採取し、トリパンブルー染色液(Gibco社製)20μLと混和後、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社製)を用いて全細胞数及びトリパンブルー陽性細胞(死細胞)数を計測することにより、各保存期間における細胞回収率及び細胞生存率を算出した。なお、細胞回収率は、式「(全細胞数/保存前の全細胞数)×100=細胞回収率(%)」を用いて算出した。細胞生存率は、式「(全生細胞数/全細胞数)×100=([全細胞数-死細胞数]/全細胞数)×100=細胞生存率(%)」を用いて算出した。
細胞保存後の細胞回収率を算出した結果、2.5%ALBS(比較例6)やLRT-3(実施例3)中にT細胞を保存すると、いずれの保存時間においてもほぼ全ての細胞が回収できているのに対して、LRT-7(比較例2)中に保存した場合には、いずれの保存時間においても10%程度の細胞が回収されていないことが示された(表10、図3A及び図4A参照)。
この結果は、血球系細胞(特にT細胞)を、トレハロースを含み、かつ、pHが約4.5~約7.2の範囲の液中に保存すると、トレハロースを含むが、pHが上記範囲外の液中に保存した場合と比べ、保存したときに生じる保存容器への接着を効果的に抑制できることを示している。
この結果は、血球系細胞(特にT細胞)を、トレハロースを含み、かつ、pHが約4.5~約7.2の範囲の液中に保存すると、pHが上記範囲内であるが、トレハロース不含の液中に保存した場合や、トレハロースを含むが、pHが上記範囲外の液中に保存した場合と比べ、保存したときに生じる細胞死を効果的に抑制できることを示している。
4-1.材料及び方法
[血球系細胞]
上記(1)で使用したT細胞を用いた。
2.5%ALBS(表12参照)は、上記(3)のとおり調製した。LRに、α,α-トレハロース二水和物(富士フイルム和光純薬社製)を、トレハロースの終濃度が3(w/v)%となるように添加し、pHが6.538のLRT-9を得た(表12参照)。LRT-9に、0.5mol/Lの水酸化ナトリウム溶液を、pHが7.968となるように添加し、LRT-10を得た(表12参照)。
上記(1)に記載の方法に従ってT細胞を培養した。
血球系細胞の被験液中での保存と、その後の生細胞回収率及び細胞回収率の測定については、以下の〔1〕~〔6〕の手順に従って行った。
〔1〕上記[血球系細胞の培養]の項目に記載の方法に従って培養したT細胞を含む培養用フラスコに、培養液と等量のLRを加え、50mLのコニカルチューブに移した後、細胞塊を懸濁した。
〔2〕細胞懸濁液の一部(20μL)を、予めトリパンブルー染色液(Gibco社製)20μLを添加した1.5mLマイクロチューブに分取した。トリパンブルー染色液と混和した細胞懸濁液を、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社 製)を用いて全細胞数及びトリパンブルー陽性細胞(死細胞)数を計測することにより、保存前の細胞生存率を算出した。細胞生存率は、式「(全生細胞数/全細胞数)×100=([全細胞数-死細胞数]/全細胞数)×100=細胞生存率(%)」を用いて算出した。
〔3〕残りの細胞懸濁液は、T細胞が5×105個となるように、Falcon(登録商標)15mL高透明度ポリプロピレンコニカルチューブ(コーニング社製)に移し、遠心処理(300×g、10分間、室温)後、上清を除去し、表12に示す3種類の被験液(実施例7並びに比較例7及び比較例8)1mLを加え、細胞ペレットを懸濁し、5℃にて保存した。
〔4〕保存24時間後に、チップの先を、細胞を含む液が入ったチューブの底から目視で5mm程度の位置まで挿入し、緩やかに攪拌(1mLのピペットを用いて、500μLの液量でのピペッティングを5回)して、手順〔5〕の細胞回収率及び手順〔6〕の生細胞回収率の測定に供した。
〔5〕撹拌直後の10μLの液を、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社製)を用いて全細胞数を計測することにより、各保存期間における細胞回収率を算出した。なお、細胞回収率は、式「(全細胞数/保存前の全細胞数)×100=細胞回収率(%)」を用いて算出した。
〔6〕再度、緩やかに攪拌(1mLのピペットを用いて、250μLの液量でのピペッティングを2回)し、撹拌直後の20μLの液を、1.5mLマイクロチューブに採取し、トリパンブルー染色液(Gibco社製)20μLと混和後、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社製)を用いて全細胞数及びトリパンブルー陽性細胞(死細胞)数を計測することにより、各保存期間における生細胞回収率を算出した。なお、生細胞回収率は、式「([全細胞数-死細胞数]/保存前の生細胞数)×100=生細胞回収率(%)」を用いて算出した。
細胞保存後の細胞回収率を算出した結果、2.5%ALBS(比較例7)やLRT-9(実施例7)中にT細胞を保存すると、いずれの保存時間においてもほぼ全ての細胞が回収できているのに対して、LRT-10(比較例8)中に保存した場合には、10%程度の細胞が回収されていないことが示された(表13、図5A参照)。
この結果は、血球系細胞(特にT細胞)を、トレハロースを含み、かつ、pHが約4.5~約7.2の範囲の液中に保存すると、トレハロースを含むが、pHが上記範囲外の液中に保存した場合と比べ、保存したときに生じる保存容器への接着を効果的に抑制できることを示している。
この結果は、血球系細胞(特にT細胞)を、トレハロースを含み、かつ、pHが約4.5~約7.2の範囲の液中に保存すると、トレハロース不含の液中に保存した場合や、トレハロースを含むが、pHが上記範囲外の液中に保存した場合と比べ、保存したときに生じる細胞死を効果的に抑制できることを示している。
5-1.材料及び方法
[非血球系細胞]
非血球系細胞として、以下の表14に記載のヒト骨髄由来間葉系幹細胞(hBM-MSC)を用いた。
表2のLR(以下、便宜上「LR-6.5」という)(表15参照)に、0.5mol/Lの水酸化ナトリウム溶液を、pHが7.164となるように添加し、LR-7.2を得た(表15参照)。表6のW(以下、便宜上「W-7.2」という)(表15参照)に、0.1mol/Lの塩酸を、pHが、6.526となるように添加し、W-6.5を得た(表15参照)。なお、各被験液におけるpHは、室温(21.6~21.7℃)で測定した際の値である。
hBM-MSCを含む乳酸リンゲル液は、以下の手順〔1〕~〔8〕に従って調製した。
〔1〕4×105個のhBM-MSCを、75cm2フラスコに加え、ヒト間葉系幹細胞専用培地キット(Lonza社製)(以下、「MSC培地」という)存在下で37℃、5%CO2インキュベーターにて培養を行った。顕微鏡下で細胞の状態を観察し、約80%程度コンフルエントになるまで培養した。
〔2〕MSC培地を除き、10mLのPBS(-)でhBM-MSCをリンスした。
〔3〕PBS(-)を除き、4mLのトリプシン-EDTA(CC-3232、Lonza社製)を加え、室温で約4分間静置した。
〔4〕hBMーMSCが90%程度剥離するまで顕微鏡下で観察しながら、ゆっくりと揺らした。
〔5〕5mLのMSC培地を加え、トリプシン反応を停止させ、ピペッティングによりhBMーMSCを回収し、50mL遠心チューブに移した。
〔6〕600×g、5分間、室温で遠心分離を行った。
〔7〕上清(MSC培地)を除き、12mLの乳酸リンゲル液を加え、沈殿(hBM-MSC)を懸濁した。
〔8〕細胞数を計測し、5×105cells/mLとなるように乳酸リンゲル液で調整し、hBM-MSCを含む乳酸リンゲル液を調製した。
hBM-MSCの被験液中での保存と、その後の細胞生存率及び細胞凝集塊数の測定については、以下の〔1〕~〔6〕の手順に従って行った。
〔1〕上記[hBM-MSCを含む乳酸リンゲル液の調製]の項目に記載の方法に従って培養し、調製したhBMーMSCを含む乳酸リンゲル液の一部(20μL)を、予めトリパンブルー染色液(Gibco社製)20μLを添加した1.5mLマイクロチューブに分取した。トリパンブルー染色液と混和した細胞懸濁液を、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社製)を用いて全細胞数及びトリパンブルー陽性細胞(死細胞)数を計測することにより、保存前の細胞生存率を算出した。
〔2〕残りの細胞懸濁液は、hBM-MSCが2.5×105個となるように、低接着性のコニカルチューブであるステムフル(住友ベークライト社製)に0.5mLずつ分注し、遠心処理(600×g、5分間、室温)後、上清を除去し、表15に示す4種類の被験液(LR-6.5、W-6.5、LR-7.2、及びW-7.2)を0.5mL加え、細胞ペレットを懸濁し、25℃にて24時間保存した。
〔3〕24時間保存後、チップの先を、細胞を含む液が入ったチューブの底から目視で5mm程度の位置まで挿入し、緩やかに攪拌(1mLのピペットを用いて、250μLの液量でのピペッティングを10回)した。
〔4〕撹拌直後の10μLの液を、ワンセルカウンターに分取し、ワンセルカウンターの細胞計数部の9カ所のエリアの細胞凝集塊の数を計測した。なお、3つ以上の細胞が接着した状態のものを細胞凝集塊として判断した。
〔5〕再度、チップの先を、細胞を含む液が入ったチューブの底から目視で5mm程度の位置まで挿入し、緩やかに攪拌(1mLのピペットを用いて、250μLの液量でのピペッティングを2回)した。
〔6〕撹拌直後の20μLの液を、1.5mLマイクロチューブに採取し、トリパンブルー染色液(Gibco社製)20μLと混和後、ワンセルカウンターに分取し、光学顕微鏡(ECLIPSE TS100、ニコン社製)を用いて全細胞数及びトリパンブルー陽性細胞(死細胞)数を計測することにより、細胞生存率を算出した。なお、細胞生存率は、式「(全生細胞数/全細胞数)×100=([全細胞数-死細胞数]/全細胞数)×100=細胞生存率(%)」を用いて算出した。
細胞保存後の生じる細胞凝集塊を測定したところ、hBM-MSCを、W-6.5やW-7.2中に保存すると、細胞凝集塊が認められたのに対して、hBM-MSCを、LR-6.5やLR-7.2に保存した場合は、細胞凝集塊はほとんど認められなかった(表16、図6A参照)。
この結果は、hBM-MSCにおいては、トレハロースを含み、かつ、pHが約6.5~約7.2の範囲の液中に保存しても、保存中に生じる細胞凝集塊を抑制できないことを示している。
この結果は、hBM-MSCを、トレハロースを含み、かつ、pHが約6.5~約7.2の範囲の液中に保存すると、同じpHのLR中に保存した場合と比べ、保存したときに生じる細胞死を効果的に抑制できることを示している。
Claims (12)
- トレハロース又はその塩を含み、かつ、pHが4.5~7.2であるT細胞保存用液であって、T細胞の細胞凝集を抑制するために用いられる、前記液。
- 等張液である、請求項1に記載の液。
- 等張液が、乳酸リンゲル液である、請求項2に記載の液。
- T細胞を0~40℃で保存するための、請求項1~3のいずれか1項に記載の液。
- T細胞の生存率低下を抑制するために用いられる、請求項1~4のいずれか1項に記載の液。
- T細胞の保存容器への接着を抑制するために用いられる、請求項1~5のいずれか1項に記載の液。
- T細胞の移植に用いられる、請求項1~6のいずれか1項に記載の液。
- トレハロース又はその塩と、pH調整剤とを含む、請求項1~7のいずれか1項に記載の液を調製するための粉末製剤。
- トレハロース又はその塩を含み、かつ、pHが4.5~7.2である液中で、T細胞を保存する工程を含む、T細胞の細胞凝集を抑制する方法。
- 液が、等張液である、請求項9に記載の方法。
- 等張液が、乳酸リンゲル液である、請求項10に記載の方法。
- T細胞を0~40℃で保存する、請求項9~11のいずれか1項に記載の方法。
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