ES2456671T3 - Inhibidores diméricos de IAP - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de la fórmula siguiente: **Fórmula** en donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo o haloalquilo; o R8a y R7a forman un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina y R8b y R7b forman un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina; R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo está opcionalmente sustituido con halógeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y R7a forman un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina y R8b y R7b forman un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina; R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo; cada uno opcionalmente sustituido con hidroxilo, mercapto, halógeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; u, opcionalmente, R5a y R5b están conectados por un grupo alquileno, alquenileno, alquinileno de 2 a 12 átomos de carbono o puente de 2 a 12 átomos de carbono de alquileno, alquenileno, alquinileno, opcionalmente sustituido, donde uno o más átomos de carbono pueden ser reemplazados por N, O, o S; R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, ciano o CO2H; y R3a y R3b son independientemente H, halógeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido o amidino, en donde alquilo significa un grupo ramificado o no ramificado, saturado o insaturado, tal como alquenilo o alquinilo, que tiene hasta 12 átomos de carbono a menos que se especifique lo contrario, en donde amino indica aminas primarias, secundarias y terciarias, en donde alquenil comprende un radical hidrocarburo ramificado, hidrocarburo cíclico o hidrocarburo no ramificado de 2 a 30 átomos de carbono que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono, y en donde alquinil se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene 2 a 12 átomos de carbono y al menos un triple enlace.

Description

Inhibidores dimericos de IAP
Referencias cruzadas y solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional de EE.UU. n° 60/656.201 titulada "PEPTIDOMIMETICOS", presentada el 25 de febrero de 2005, la solicitud provisional de EE.UU. n° 60/668.344 titulada "USOS INMUNOTERAPEUTICOS DE MIMETICOS DE SMAC" presentada el 5 de abril de 2005, solicitud provisional de EE.UU. n° 60/692.111 titulada "PEPTIDOMIMETICOS DE SMAC SOLOS O COMBINADOS CON INHIBIDORES DE TOPOISOMERASA", presentada el 20 de junio de 2005, solicitud provisional de EE.UU. n° 60/706.649 titulada "PEPTIDOMIMETICOS DE SMAC COMO INHIBIDORES DE CIAP", presentada el 9 de agosto de 2005 y la solicitud provisional de EE.UU. n° 60/729.853 titulada "PEPTIDOMIMETICOS DE SMAC SOLOS O COMBINADOS CON COMPUESTOS QUE CONTIENEN PLATINO Y TAXANOS", presentada el 25 de octubre 2005.
Antecedentes�
La apoptosis (muerte celular programada) desempena un papel principal en el desarrollo y la homeostasis de todos los organismos pluricelulares. La apoptosis puede iniciarse dentro de una celula a partir de un factor externo tal como una quimiocina (via extrinseca) o por medio de un fenomeno intracelular tal como alteracion del ADN (via intrinseca). Las alteraciones en las rutas apoptosicas han estado implicadas en muchos tipos de patologias humanas, entre ellas los trastornos del desarrollo, el cancer, las enfermedades autoinmunitarias, asi como los trastornos neurodegenerativos. Un modo de accion de los farmacos quimioterapeuticos es la muerte celular por apoptosis.
La apoptosis se conserva a traves de la especie y es ejecutada principalmente por caspasas activadas, una familia de cisteina proteasas con especificidad de aspartato en sus sustratos. Estas proteasas especificas de aspartato que contienen cisteina ("caspasas") se producen en celulas como zimogenos cataliticamente inactivos y se procesan proteoliticamente para convertirse en proteasas activas durante la apoptosis. Una vez activadas, las caspasas efectoras son responsable de la escision proteolitica de un amplio espectro de dianas celulares que conducen en ultima instancia a la muerte celular. En las celulas supervivientes normales que no han recibido un estimulo apoptosico, la mayoria de las caspasas permanecen inactivas. Si caspasas se activan anormalmente, su actividad proteolitica puede ser inhibida por una familia de proteinas conservadas por evolucion denominadas IAP (inhibidores de proteinas de apoptosis).
La familia de proteinas IAP suprime la apoptosis al evitar la activacion de procaspasas e inhibir la actividad enzimatica de caspasas maduras. Se han identificado varias IAP de mamifero distintas entre ellas XIAP, c-IAP1, c-IAP2, ML-IAP, NAIP (proteina inhibidora de la apoptosis neuronal), Bruce, y survivina, y todas presentan actividad antiapoptosica en cultivo celular. Las IAP se descubrieron originalmente en baculovirus por su capacidad funcional para sustituir a la proteina P35, un gen antiapoptosico. Las IAP se han descrito en organismos que van desde Drosophila al hombre, y se sabe que se sobrexpresan en muchos canceres humanos. En terminos generales, las IAP comprenden uno a tres dominios con la repeticion LAP IAP de Baculovirus (BIR), y la mayoria de ellos tambien poseen un motivo dedo ANULAR en el terminal carboxilo. El dominio BIR en si es un dominio de union al cinc de aproximadamente 70 restos que comprenden 4 helices alfa y 3 cadenas beta, con restos de cisteina e histidina que coordinan el ion zinc. Se cree que el dominio BIR produce el efecto antiapoptosico al inhibir las caspasas y por lo tanto inhibir la apoptosis. XIAP se expresa por doquier en la mayoria de tejidos adultos y fetales. La sobreexpresion de XIAP en las celulas tumorales se ha demostrado que confiere proteccion contra una variedad de estimulos proapoptosicos y favorece la resistencia a la quimioterapia. Consecuente con esto, se ha demostrado una fuerte correlacion entre las concentraciones de proteina XIAP y la supervivencia para los pacientes con leucemia mielogena aguda. El descenso de la expresion de XIAP por oligonucleotidos complementarios se ha demostrado que sensibiliza celulas tumorales a la muerte inducida por una amplia gama de agentes proapoptosicos, tanto in vitro como in vivo. Los peptidos derivados de Smac/DIABLO tambien se ha demostrado que sensibilizan a numerosas diferentes estirpes de celulas tumorales a la apoptosis inducida por una variedad de farmacos proapoptosicos.
En las celulas normales senaladas para sufrir apoptosis, sin embargo, debe eliminarse el efecto inhibidor en el que IAP actua como mediador, un proceso al menos en parte realizado por una proteina mitocondrial denominada Smac (segundo activador mitocondrial de las caspasas). Smac (o DIABLO), se sintetiza como una molecula precursora de 239 aminoacidos; los 55 restos del terminal N sirven como las mitocondrias que se dirigen a la secuencia que se retira despues de la importacion. La forma madura de Smac contiene 184 aminoacidos y se comporta como un oligomero en disolucion. Smac y varios de sus fragmentos se han propuesto para su uso como dianas para la identificacion de agentes terapeuticos.
Smac se sintetiza en el citoplasma con una secuencia de orientacion mitocondrial N-terminal que se elimina proteoliticamente durante la maduracion al polipeptido maduro y se dirige a continuacion al espacio intermembranario de las mitocondrias. En el momento de la induccion de apoptosis, se libera Smac de las mitocondrias al citosol, junto con citocromo c, donde se une a las IAP, y permite la activacion de caspasas, eliminando en estas el efecto inhibidor de las IAP sobre la apoptosis. Mientras que el citocromo c provoca la polimerizacion de Apaf-1 para activar la procaspasa-9 y -3, Smac elimina el efecto inhibidor de multiples IAP. Smac interacciona esencialmente con todos las IAP que se han examinado hasta la fecha, entre ellos XIAP, c-IAP1, c-IAP2, y ML-IAP. Por lo tanto, Smac parece ser un regulador patron de apoptosis en mamiferos.
Se ha demostrado que Smac actua como un antagonista de IAP estimulando no solo la activacion proteolitica de las procaspasas, sino tambien la actividad enzimatica de la caspasa madura, ambas de las cuales dependen de su capacidad para interactuar fisicamente con IAP. La cristalografia de rayos X ha demostrado que los primeros cuatro aminoacidos (AVPI) de Smac madura se unen a una parte de las PAI. Esta secuencia del terminal N es esencial para unir las IAP y bloquear sus efectos antiapoptosicos.
Los antagonistas de IAP de la biologia basica sugieren que pueden complementar o sinergizar otros agentes quimioterapeuticos/antineoplasicos y/o radiacion. Seria de esperar que los agentes quimioterapeuticos/antineoplasicos y la radiacion provoquen apoptosis como resultado de dano al ADN y/o la alteracion del metabolismo celular.
Las tendencias actuales en el diseno de farmacos contra el cancer se enfocan en la activacion selectiva de las vias de senalizacion apoptosica en los tumores mientras se salvan las celulas normales. Se han descrito las propiedades especificas del tumor de agentes antitumorales especificos, tales como por TRAIL. El ligando que provoca apoptosis relacionado con el factor de de necrosis tumoral (TRAIL) es uno de varios miembros de la superfamilia del factor de necrosis tumoral (FNT) que provocan apoptosis mediante la participacion de receptores de muerte. TRAIL interactua con un sistema receptor inusualmente complejo, que en el hombre comprende dos receptores de muerte y tres receptores senuelo. Se ha utilizado TRAIL como un agente anticanceroso solo y en combinacion con otros agentes, entre ellos farmacos quimioterapeuticos y radiacion ionizante. TRAIL puede iniciar la apoptosis en las celulas que sobrexpresan los factores de supervivencia Bcl-2 y Bcl-XL, y puede representar una estrategia de tratamiento para los tumores que han adquirido resistencia a farmacos quimioterapeuticos. TRAIL une sus receptores afines y activa la cascada de caspasas utilizando moleculas adaptadoras tal como FADD. En la actualidad, se han identificado cinco receptores TRAIL. Dos receptores TRAIL-R1 (DR4) y TRAIL-R2 (DR5) actuan como mediadores en la senalizacion apoptosica, y tres receptores no funcionales, DcR1, DcR2, y la osteoprotegerina (OPG) pueden actuar como receptores de senuelo. Los gentes que aumentan la expresion de DR4 y DR5 pueden presentar actividad antitumoral sinergica cuando se combina con TRAIL.
Se han demostrado efectos beneficiosos de la produccion de TRAIL en varios tipos de cancer. Por ejemplo, la instilacion intravesical de la vacuna BCG provoca una respuesta inmunitaria de Thi, dando como resultado la produccion de citocinas antitumorales, como TRAIL, y la infiltracion de la lesion con inmunocitos y es la primera linea de terapia para el tratamiento de cancer superficial de vejiga. En estudios in vitro indican que el interferon alfa (INFa), que en la actualidad se esta probando la eficacia en estudios clinicos en cancer de vejiga, provoca apoptosis en la que actua como mediador la produccion autocrina de TRAIL en las estirpes celulares de cancer de vejiga humano. La concentracion circulante de osteoprotogerina, un receptor senuelo para TRAIL, se incrementa tambien en pacientes con cancer de vejiga y se correlaciona negativamente con el estadio tumoral, el grado y el pronostico.
Por otra parte, se ha demostrado que la expresion de TRAIL por celulas NK (destructoras naturales) se mejora con tratamiento con IL-2 (interleucina 2), y se requiere la expresion de TRAIL para los efectos citotoxicos completos de celulas tumorales. IL-2, una citocina, esta aprobado actualmente para el tratamiento tanto de melanoma como de carcinoma de celulas renales.
La inhibicion de la replicacion de las celulas del cancer y/o la reparacion de danos en el ADN mejorara la fragmentacion del ADN nuclear, induciendo de este modo a la celula a entrar en la via apoptosica. Las topoisomerasas, una clase de enzimas que reducen el superenrollamiento en el ADN al romper y volver a unir una o ambas cadenas de la molecula de ADN, son vitales para los procesos celulares, tales como la replicacion y reparacion del ADN. La inhibicion de esta clase de enzimas deteriora la capacidad de las celulas para replicar, asi como para reparar el ADN danado y activa la via apoptosica intrinseca.
Las principales vias que conducen desde el dano al ADN en el que la topoisomerasa actua como mediador a la muerte celular implican la activacion de las caspasas en el citoplasma por moleculas proapoptosicas liberadas desde las mitocondrias, tales como Smac. El vinculo de estas vias efectoras apoptosicas esta estrechamente controlado por las vias reguladoras aguas arriba que responden a las lesiones inducidas en el ADN por inhibidores de la topoisomerasa de en las celulas sometidas a apoptosis. La iniciacion de las respuestas celulares a las lesiones inducidas en el ADN por inhibidores de la topoisomerasa esta asegurada por proteina cinasas que unen a cortes de ADN. Estas cinasas (ejemplos no restrictivos de los que se comprenden Akt, JNK y p38) comunmente denominados "sensores deADN" actuan como mediadores en la reparacion delADN, la detencion y/o la apoptosis del ciclo celular por fosforilacion de un gran numero de sustratos, entre ellos varias cinasas aguas abajo.
Los medicamentos para la quimioterapia de platino pertenecen a un grupo general de los agentes que modifican el ADN. Los agentes modificadores del ADN pueden ser cualquier compuesto quimico muy reactivo que se une con varios grupos nucleofilos en los acidos nucleicos y las proteinas y provoca efectos mutagenos, carcinogenos o citotoxicos. Los agentes modificadores de ADN actuan por diferentes mecanismos, la interrupcion de la funcion del ADN y la muerte celular; el dano en el ADN/la formacion de puentes cruzados o enlaces entre los atomos en el ADN, y la induccion de emparejamiento incorrecto de los nucleotidos que conduce a mutaciones, para conseguir el mismo resultado final. Tres ejemplos no restrictivos de agentes modificadores de ADN que contiene platino son cisplatino, carboplatino y oxaliplatino.
Se cree que el cisplatino destruye celulas cancerosas al unirse al ADN e interferir con su mecanismo de reparacion, lo que conduce finalmente a la muerte celular. El carboplatino y oxaliplatino derivados de cisplatino que comparten el mismo mecanismo de accion. Los complejos de platino muy reactivos se forman en el interior de las celulas e inhiben la sintesis de ADN mediante moleculas de ADN que se unen por enlaces covalentes para formar reticulaciones de ADN en las cadenas y entre las cadenas.
Los farmacos antiinflamatorios no esteroideos (FAINE) se ha demostrado que provocan apoptosis en celulas colorrectales. Los FAINE parecen provocar apoptosis mediante la liberacion de Smac procedente de las mitocondrias (PNAS, 30 de noviembre de 2004, vol. 101:16897-16902). Por lo tanto, es de esperar que el uso de los FAINE en combinacion con mimeticos de Smac aumente la actividad de cada farmaco sobre la actividad de cualquier farmaco independientemente.
La Patente de EE.UU.. n° 6.992.063 de Shi et al. titulada "Compositions and methods for Regulation Apoptosis", presentada el 28 de septiembre 2001 y publicada el 31 de enero de 2006, da a conocer que los mimeticos de la parte del terminal N de Smac proporcionan farmacos experimentales viables.
Ademas, se ha demostrado en la publicacion de EE.UU. n° US 2008/0199439 de McLendon et al. titulada "IAP-Binding Cargo Molecules and Peptidomimetics for Use In Diagnostic and Therapeutics Methods", presentada el 12 de febrero de 2004, que una molecula de carga se puede acoplar a un tetrapeptido peptidomimetico de Smac con terminal N.
Compendno�de��a �nn�encn6n
La presente invencion proporciona compuestos que imitan la estructura de union terciaria de Smac a los IAP o la actividad de la parte del terminal N de Smac. Los estereoisomeros de los compuestos mimeticos descritos en la presente memoria tambien estan comprendidos en la presente invencion. La invencion tambien proporciona metodos de utilizacion de estos mimeticos para modular la apoptosis y ademas con fines terapeuticos. La invencion tambien proporciona productos intermedios y metodos para utilizar estos productos intermedios para la preparacion de compuestos que modulan la apoptosis al imitar la estructura terciaria de enlace de Smac a IAP o la actividad de la parte del terminal N de Smac.
Un compuesto de la presente invencion que tiene la formula general tal como en la reivindicacion 1. Otros compuestos se reivindican en las reivindicaciones 19 a 27.
El documento WO 2005/084317 describe peptidomimeticos de Smac dimericos. El documento WO 2006/020060 describe compuestos que se unen a IAP utiles para el tratamiento del cancer.
Ademas se describe la combinacion terapeutica de compuestos de la presente invencion con TRAIL u otro agentes quimicos o biologicos que se unen a y activan el/los receptor(es) de TRAIL. TRAIL ha recibido considerable atencion recientemente debido a la constatacion de que muchos tipos de celulas de cancer son sensibles a la apoptosis provocada por TRAIL, mientras que la mayoria de las celulas normales parecen ser resistentes a esta accion de TRAIL. Las celulas resistentes a TRAIL pueden aparecer por una variedad de diferentes mecanismos, entre ellos la perdida del receptor, la presencia de receptores senuelo, o la sobreexpresion de FLIP que compite por la union cimogeno caspasa-8 durante la formacion de DISC. En la resistencia a TRAIL, los mimeticos de Smac aumentan la sensibilidad de las celulas tumorales a TRAIN lo que conduce a un aumento de la muerte celular, cuyas correlaciones clinicas es de esperar que aumenten la actividad apoptosica en tumores resistentes a TRAIL, mejoren la respuesta clinica, aumenten la duracion de la respuesta, y en ultima instancia, aumenten la tasa de supervivencia de los pacientes. En apoyo de esto, se ha demostrado que la reduccion en las concentraciones de XIAP por tratamiento complementario in vitro provoca sensibilizacion a TRAIL de las celulas de melanoma resistentes y de las celulas de carcinoma renal (Chawla-Sarkar, et al., 2004). Los mimeticos de Smac descritos en la presente memoria se unen a las IAP e inhiben su interaccion con las caspasas, potenciando en ellas la apoptosis provocada por TRAIL.
Los mimeticos de Smac pueden utilizarse en combinacion con tratamiento con la vacuna BCG del cancer de vejiga. XIAP, el objetivo nominal de mimeticos de Smac, se sobrexpresa en una alta proporcion de canceres de vejiga. En los estudios que utilizaron XIAP complementario, las celulas de cancer de vejiga se sensibilizaron a agentes quimioterapeuticos que provocan apoptosis de las celulas efectuadas por la via TRAIL. La presente invencion proporciona mimeticos de Smac para su uso en el tratamiento con BCG en el cancer superficial de vejiga/carcinoma in situ. Los mimeticos de Smac descritos en la presente memoria potenciaran los efectos de la vacuna BCG al potenciar los efectos si TRAIL se genero en respuesta a la vacuna.
Del mismo modo, los mimeticos de Smac aumentaran la apoptosis provocada por TRAIL observada en pacientes con melanoma y carcinoma de celulas renales que estan siendo tratados con IL-2. Dado que IL-2 provoca la actividad de las celulas NK potenciando la expresion de TRAIL, la adicion del tratamiento con un activador de la caspasa-9, tal como el mimetico de Smac, dara lugar a una respuesta clinica mas eficiente.
Se describen ademas mimeticos de Smac que actuan sinergicamente con inhibidores de topoisomerasa para potenciar su efecto provocador de apoptosis. Los inhibidores de la topoisomerasa inhiben la replicacion y reparacion del ADN, favoreciendo con ello la apoptosis y se han utilizado como agentes quimioterapeuticos. Los inhibidores de la topoisomerasa favorecen el dano al ADN al inhibir las enzimas que se requieren en el proceso de reparacion del ADN. Por lo tanto, la exportacion de citocromo c y Smac procedente de las mitocondrias en el citosol de las celulas esta provocada por el dano del ADN causado por los inhibidores de la topoisomerasa.
Los inhibidores de topoisomerasa tanto de la clase de tipo I (camptotecina, topotecan, SN-38, irinotecan, topotecan, BNP 1350, 9-amino-camptotecan, lurtotecan, grimatecan, exatecan, amsacrina, y diflomotecan) como de la clase de tipo II (etoposido, antraciclina, antraquinona, y podofilotoxina) presentan potente sinergia con los mimeticos de Smac de la invencion en una estirpe celular de glioblastoma multirresistente (T98G), estirpe de cancer de mama (MDAMB-231), y estirpe de cancer de ovario (OVCAR-3), entre otras. Otros inhibidores de la topoisomerasa comprenden, por ejemplo, aclacinomicinaA, camptotecina, daunorrubicina, doxorrubicina, elipticina, epirrubicina, y mitaxantrona.
El agente quimioterapeutico/antineoplasico puede ser un compuesto que contiene platino. En una realizacion, el compuesto que contiene platino es el cisplatino. El cisplatino puede sinergizar con un peptidomimetico de Smac y potenciar la inhibicion de un IAP, tal como, pero sin limitarse a XIAP, cIAP-1, c-IAP-2, ML-IAP, etc. En otra realizacion, un compuesto que contiene platino es el carboplatino. El carboplatino puede sinergizar con un peptidomimetico de Smac y potenciar la inhibicion de un IAP, entre ellos, pero sin limitarse a, XIAP, la cIAP-1, c-IAP2, ML-IAP, etc. En otra realizacion, un compuesto que contiene platino es el oxaliplatino. El oxaliplatino puede sinergizar con un peptidomimetico de Smac y potenciar la inhibicion de un IAP, entre ellos, pero sin limitarse a, XIAP, cIAP-1, c-IAP-2, ML-IAP, etc.
En otra realizacion el agente quimioterapeutico/antineoplasico que sinergiza con un compuesto segun la presente invencion es un taxano. Los taxanos son antimitoticos, inhibidores mitoticos o agentes de polimerizacion de microtubulos. Los taxanos comprenden, pero no se limitan a, docetaxel y paclitaxel.
Los taxanos se caracterizan como compuestos que favorecen el ensamblaje de microtubulos inhibiendo la despolimerizacion de tubulina, bloqueando de este modo la evolucion del ciclo celular por deterioro centrosomico, provocacion de husillos anormales y supresion de la dinamica de los microtubulos del husillo. El mecanismo unico de accion de taxano esta en contraste con otros venenos de microtubulos, tales como alcaloides de la vinca, colquicina y criptoficinas, que inhiben la polimerizacion de tubulina. Los microtubulos son polimeros celulares muy dinamicos hechos de a�-tubulina y proteinas asociadas que desempenan funciones clave durante la mitosis al participar en la organizacion y funcion del husillo, asegurando la integridad del ADN segregado. Por lo tanto, representan un blanco efectivo para la terapia del cancer.
En otra realizacion, cualquier agente que activa la via intrinseca apoptosica y/o produce la liberacion de Smac o citocromo c de las mitocondrias tiene el potencial de actuar de forma sinergica con un mimetico de Smac.
Una combinacion de un peptidomimetico de Smac y un agente quimioterapeutico/neoplasico y/o radioterapia de cualquier tipo que activa las vias intrinsecas o extrinsecas o la liberacion de Smac puede proporcionar un enfoque mas eficaz para destruir las celulas tumorales. Los peptidomimeticos de Smac interactuan con los IAP, tales como XIAP, cIAP-1, cIAP-2, ML-IAP, etc., y bloquean la inhibicion de apoptosis en la que actua como mediador IAP, mientras que los quimioterapeuticos/agentes antineoplasicos y/o la radioterapia destruye las celulas se dividen activamente activando la via apoptosica intrinseca que conduce a la apoptosis y la muerte celular. Como se describe con mas detalle a continuacion, las realizaciones de la invencion proporcionan combinaciones de un pepidomimetico de Smac y un agente quimioterapeutico/antineoplasico y/o radiacion que proporcionan una accion sinergica contra la proliferacion celular no deseada. Esta accion sinergica entre un peptidomimetico de Smac y un agente quimioterapeutico/antineoplasico y/o radioterapia puede mejorar la eficiencia del agente quimioterapeutico/antineoplasico y/o de la radioterapia. Esto permitira un aumento en la eficacia de los agentes antineoplasicos/quimioterapeuticos actuales o de la radioterapia permitiendo reducir la dosis de agente quimioterapeutico/antineoplasico, proporcionando en el mismo tanto una posologia mas eficaz, asi como una dosis mas tolerable de agente quimioterapeutico/antineoplasico y/o radioterapia.
Por simplicidad y a titulo ilustrativo, los principios de la invencion se describen haciendo referencia principalmente a una de sus realizaciones.Ademas, en la descripcion siguiente, se exponen numerosos detalles especificos para proporcionar una comprension completa de la invencion. En otros casos, no se han descrito con detalle metodos y estructuras bien conocidos para no oscurecer innecesariamente la invencion.
Descrnpcn6n�de �as��nguras
La Fig. 1 es un grafico que representa la afinidad de union relativa de un tetrapeptido de Smac (AVPI) y un mimetico de Smac potente a XIAP BIR-3 utilizando un ensayo de polarizacion de fluorescencia. Los resultados presentaban un aumento de 30.000 veces en la afinidad de union del mimetico de Smac con relacion al tetrapeptido de Smac.
La Fig. 2 es un grafico que muestra la vida media de tres mimeticos de Smac despues de una sola dosis de administracion intravenosa de 1 mg/kg en una rata. Los resultados muestran hasta una vida media de seis horas para los mimeticos probados.
La Fig. 3 es un grafico que muestra la capacidad de un mimetico de Smac para antagonizar selectivamente la proliferacion de una estirpe celular de cancer de ovario SK-OV-3. En este ensayo MTT, el mimetico de Smac presenta propiedades contra el cancer a concentraciones que no tienen ningun efecto sobre la estirpe normal de celulas diploides MRC-5.
La Fig. 4 muestra el efecto quimiopotenciador de un mimetico de Smac utilizando celulas de melanoma que han demostrado ser resistentes a los efectos apoptosicos de TRAIL. Los ensayos para la proliferacion celular pusieron de manifiesto que cuando se trataban celulas MDA-MB-231, una estirpe celular de cancer de mama, con un peptidomimetico de Smac (Entrada 1) solo, las celulas eran resistentes a los efectos antiproliferativos del mimetico de Smac. Por el contrario, cuando se utilizo la Entrada 1 en combinacion con TRAIL habia un aumento de 1000 veces en el efecto antiproliferativo dando como resultado un aumento de 100 veces en la destruccion de celulas como se detecta por la perdida correspondiente en la formacion de colonias.
Descrnpcn6n�deta��ada
Tambien debe tenerse en cuenta que, como se emplea en la presente memoria y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una", y "el" comprenden la referencia en plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Amenos que se defina lo contrario, todos los terminos tecnicos ycientificos empleados en la presente memoria tienen los mismos significados que los entendidos normalmente por cualquier experto en la tecnica. Aunquecualesquierametodos similareso equivalentesalos descritosenlapresente memoriase pueden utilizar en la practica o ensayo de formas de las realizaciones de la presente invencion, los metodos preferidos se describen ahora. Nada en la presente memoria debe interpretarse como una admision de que la invencion no esta facultada para poner una fecha anterior a dicha descripcion en virtud de una invencion anterior.
Como se emplea en la presente memoria, el termino "aproximadamente" significa mas o menos el 10% del valor numerico del numero que se esta empleando. Por lo tanto, aproximadamente 50% significa en el intervalo de 45% 55%.
"Alquilo" significa un grupo hidrocarburo alifatico ramificado o no ramificado, saturado o insaturado (es decir, alquenilo, alquinilo), que tiene hasta 12 atomos de carbono a menos que se especifique lo contrario. Cuando se emplea como parte de otro termino, por ejemplo, "alquilamino", el fragmento alquilo puede ser una cadena de hidrocarburo saturada, sin embargo, tambien comprende cadenas de carbono de hidrocarburos insaturados tales como "alquenilamino" y "alquinilamino". Ejemplos de grupos alquilo concretos comprenden metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, 2-metilbutilo, 2,2-dimetilpropilo, n-hexilo, 2-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, n-heptilo, 3-heptilo, 2-metilhexilo y similares. Las expresiones "alquilo inferior" "alquilo C1-C4" y "alquilo de 1 a 4 atomos de carbono" son sinonimos y se emplean indistintamente para significar metilo, etilo, 1propilo, isopropilo, ciclopropilo, 1-butilo, sec-butilo o t-butilo.A menos que se especifique, los grupos alquilo sustituidos pueden contener uno, dos, tres o cuatro sustituyentes que pueden ser iguales o diferentes. Ejemplos de grupos alquilo sustituidos anteriores comprenden, pero no se limitan a: cianometilo, nitrometilo, hidroximetilo, tritiloximetilo, propioniloximetilo, aminometilo, carboximetilo, carboxietilo, carboxipropilo, alquiloxicarbonilmetilo, aliloxicarbonilaminometilo, carbamoiloximetilo, metoximetilo, etoximetilo, t-butoximetilo, acetoximetilo, clorometilo, bromometilo, yodometilo, trifluorometilo, 6-hidroxihexilo, 2,4-dicloro (n-butilo), 2-amino (iso-propilo), 2carbamoiloxietilo y similares. El grupo alquilo tambien puede estar sustituido con un grupo carbociclo. Los ejemplos comprenden grupos ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo y ciclohexilmetilo, asi como los correspondientes grupos -etil, propil-, butil-, -pentil, -hexil, etc. Los alquilos sustituidos concretos son metilos sustituidos, p. ej., un grupo metilo sustituido por los mismos sustituyentes que el grupo "alquilo Cn-Cm sustituido". Ejemplos del grupo metilo sustituido comprenden grupos tales como hidroximetilo, hidroximetilo protegido
(p. ej., tetrahidropiraniloximetilo), acetoximetilo, carbamoiloximetilo, trifluorometilo, clorometilo, carboximetilo, bromometilo y yodometilo.
"Amino" indica aminas primarias (es decir, -NH2), secundarias (es decir, -NRH) y terciarias (es decir, -NRR). Aminas secundarias y terciarias concretas son alquilamina, dialquilamina, arilamina, diarilamina, arilalquilamina y diarilalquilamina. Aminas secundarias y terciarias particulares son metilamina, etilamina, propilamina, isopropilamina, fenilamina, bencilamina dimetilamina, dietilamina, dipropilamina y diisopropilamina.
"Arilo" cuando se utiliza solo o como parte de otro termino significa un grupo aromatico carbociclico si o no condensadoque tiene el numero de atomos de carbono designado, o si no se designa ningun numero, hasta 14 atomos de carbono. Grupos arilo concretos comprenden fenilo, naftilo, bifenilo, fenantrenilo, naftacenilo, y similares (vease p. ej. Lang's Handbook of Chemistry (Dean, J.A., ed.) 13a ed. Tabla 7-2 [1985]). En una realizacion concreta un grupo arilo es fenilo. Fenilo sustituido o arilo sustituido indica un grupo fenilo o un grupo arilo sustituido con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados, a menos que se especifique lo contrario, entre halogeno (F, Cl, Br, I), hidroxi, hidroxi protegido, ciano, nitro, alquilo (tal como alquilo C1-C6), alcoxi (tal como alcoxi C1-C6), benciloxi, carboxi, carboxi protegido, carboximetilo, carboximetilo protegido, hidroximetilo, hidroximetilo protegido, aminometilo, aminometilo protegido, trifluorometilo, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heterociclilsulfonilamino, heterociclilo, arilo u otros grupos especificados. Uno o mas grupos metino (CH) y/o metileno (CH2) en estos sustituyentes pueden a su vez estar sustituidos con un grupo similar a los indicados anteriormente. Ejemplos del termino "fenilo sustituido" comprenden pero no se limitan a un grupo mono-o di (halo) fenilo tales como 2-clorofenilo, 2-bromofenilo, 4-clorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 3-clorofenilo, 3-bromofenilo, 4bromofenilo, 3,4-dibromofenilo, 3-cloro-4-fluorofenilo, 2-fluorofenilo y similares; un grupo mono-o di (hidroxi) fenilo tales como 4-hidroxifenilo, 3-hidroxifenilo, 2,4-dihidroxifenilo, los derivados hidroxi-protegidos de los mismos y similares; un grupo nitrofenilo tal como 3-o 4-nitrofenilo; un grupo cianofenilo, por ejemplo, 4-cianofenilo; un grupo mono-o di (alquilo inferior) fenilo tal como 4-metilfenilo, 2,4-dimetilfenil, 2-metilfenilo, 4-(isopropil)fenilo, 4-etilfenilo, 3-(n-propil)fenilo y similares; un grupo mono-o di(alcoxi)fenilo, por ejemplo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-metoxi-4benciloxifenilo, 3-metoxi-4-(1-clorometil) benciloxi-fenilo, 3-etoxifenilo, 4-(isopropoxi)fenilo, 4-(t-butoxi)fenilo, 3-etoxi4-metoxifenilo y similares; 3-o 4-trifluorometilfenilo; un mono-o dicarboxifenilo o (carboxi protegido) fenilo tal 4carboxifenilo; un grupo mono- o di (hidroximetil)fenilo o (hidroximetil protegido)fenilo tal como 3-(hidroximetil protegido)fenilo o 3,4-di (hidroximetil)fenilo; un mono-o di (aminometil)fenilo o (aminometil protegido)fenilo tal como 2-(aminometil)fenilo o 2,4-(aminometil protegido)fenilo; o un mono-o di (N-(metilsulfonilamino))fenilo tal como 3-(Nmetilsulfonilamino))fenilo. Tambien, el termino "fenilo sustituido" representa grupos fenilo disustituidos, donde los sustituyentes son diferentes, por ejemplo, 3-metil-4-hidroxifenilo, 3-cloro-4-hidroxifenilo, 2-metoxi-4-bromofenilo, 4etil-2-hidroxifenilo, 3-hidroxi-4-nitrofenilo, 2-hidroxi-4-clorofenilo, y similares, asi como grupos fenilo trisustituidos donde los sustituyentes son diferentes, por ejemplo 3-metoxi-4-benciloxi-6-metil sulfonilamino, sulfonilamino 3metoxi-4-benciloxi-6-fenil sulfonilamino, y grupos fenilo tetrasustituidos donde los sustituyentes son diferentes, tales como 3-metoxi-4-benciloxi-5-metil-6-fenil sulfonilamino. Grupos fenil sustituidos concretos son los grupos 2clorofenilo, 2-aminofenilo, 2-bromofenilo, 3-metoxifenilo, 3-etoxifenilo, 4-benciloxifenilo, 4-metoxifenilo, 3-etoxi-4benciloxifenilo, 3,4-dietoxifenilo, 3-metoxi-4-benciloxifenilo, 3-metoxi-4-(1-clorometil)benciloxi-fenilo, 3-metoxi-4-(1clorometil)benciloxi-6-metilsulfonil aminofenilo. Anillos de arilo condensados tambien pueden estar sustituidos con los sustituyentes especificados en la presente memoria, por ejemplo con 1, 2 o 3 sustituyentes, de la misma manera como los grupos alquilo sustituidos.
El termino radical alquileno tal como se emplea en la presente memoria comprende la referencia a un radical de hidrocarburo saturado ramificado o no ramificado difuncional que contiene de 1 a 30 atomos de carbono, e comprende, por ejemplo, metileno (CH2), etileno (CH2CH2), propileno (CH2CH2CH2), 2-metilpropileno (CH2CH(CH3)CH2), hexileno ((CH2)6), y similares. Alquileno inferior comprende un grupo alquileno de 1 a 10, mas preferiblemente de 1 a 5, atomos de carbono.
Radicales alquileno sustituido comprende la referencia a un radical o grupo alquileno saturado di-funcional ramificado o no ramificado que tiene 1 a 30 atomos de carbono y que tiene de 1 a 5 sustituyentes. Los radicales alquileno inferior sustituido se refieren a un grupo radical alquileno sustituido, que tiene 1 a 10 atomos de carbono, preferiblemente que tiene 1 a 5 atomos de carbono, y que tiene de 1 a 5 sustituyentes. Los sustituyentes pueden incluir, pero no se limitan a aquellos para los grupos alquilo.
El termino radical alquenilo como se emplea en la presente memoria comprende la referencia a un hidrocarburo ramificado, ciclico, o a un radical de hidrocarburo no ramificado de 2 a 30 atomos de carbono que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono, tal como etenilo, n-propenilo, isopropenilo, n-butenilo, isobutenilo, t-butenilo, octenilo, decenilo, tetradecenilo, hexadecenilo, eicosenilo, tetracosenilo y similares. El termino alquenilo inferior comprende un grupo alquenilo de 2 a 10 atomos de carbono, preferiblemente de 2 a 5 atomos de carbono, que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono. Uno o mas dobles enlaces carbono-carbono pueden tener independientemente una configuracion cis o trans. Radical alquenilo sustituido se refiere a un radical alquenilo o a un grupo alquenilo inferior que tiene de 1 a 5 sustituyentes que pueden incluir pero no estan limitados a los de los grupos alquilo.
El termino radical alquenileno comprende la referencia a un radical o grupo hidrocarburo ramificado o no ramificado difuncional que contiene de 2 a 30 atomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. "Alquenileno inferior" comprende un grupo alquenileno de 2 a 10, mas preferiblemente de 2 a 5, atomos de carbono, que contiene un doble enlace carbono-carbono.Alquenileno radical sustituido se refiere a un radical alquenilo o a un grupo alquenileno inferior que tiene de 1 a 5 sustituyentes que pueden incluir pero no estan limitados a los de los grupos alquilo.
El termino radical o grupo alquinilo se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene 2 a 12 atomos de carbono y al menos un triple enlace, algunas realizaciones comprenden grupos alquinilo de 2 a 6 atomos de carbono que tienen un triple enlace. Un alquinilo sustituido contendra uno, dos o tres sustituyentes como se define para los grupos alquilo sustituidos. Alquinileno comprende la referencia a una cadena de hidrocarburo ramificada o no ramificada difuncional que contiene de 2 a 12 atomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono; algunas realizaciones comprenden un grupo alquinileno de 2 a 6 atomos de carbono con un triple enlace. Un alquinileno sustituido contendra uno, dos, o tres sustituyentes como se define para los grupos alquilo sustituidos.
"Grupo heterociclico", "heterociclico", "heterociclo", "heterociclilo", o "heterociclo" solo y cuando se emplea como un resto en un grupo complejo tal como un grupo heterocicloalquilo, se emplean indistintamente y se refieren a cualquier anillo mono-, bi- o triciclico, saturado o insaturado, aromatico (heteroarilo) o no aromatico que tiene el numero de atomos designados, en general, de 5 a aproximadamente 14 atomos en el anillo, en donde los atomos del anillo son carbono y al menos un heteroatomo (nitrogeno, azufre u oxigeno). En una realizacion concreta, el grupo incorpora 1 a 4 heteroatomos. Por lo general, un anillo de 5 eslabones tiene de 0 a 2 dobles enlaces y un anillo de 6 o 7 eslabones tiene de 0 a 3 dobles enlaces y los heteroatomos de nitrogeno o azufre pueden estar opcionalmente oxidados (p. ej., SO, SO2), y cualquier heteroatomo de nitrogeno puede estar opcionalmente cuaternizado. Determinados heterociclos no aromaticos comprenden morfolinil (morfolino), pirrolidinilo, oxiranilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, 2,3-dihidrofuranilo, 2H-piranilo, tetrahidropiranilo, tiiranilo, tietanilo, tetrahidrotietanilo, aziridinilo, azetidinilo, 1-metil-2-pirrolilo, piperazinilo y piperidinilo. Un grupo "heterocicloalquilo" es un grupo heterociclo como se definio anteriormente unido por enlace covalente a un grupo alquilo como se ha definido anteriormente.
Determinados heterociclos de 5 eslabones que contienen un atomo de azufre o de oxigeno y de uno a tres atomos de nitrogeno comprenden tiazolilo, tales como tiazol-2-ilo y tiazol-2-il N-oxido, tiadiazolilo tales como 1,3,4-tiadiazol5-ilo y 1,2,4-tiadiazol-5-ilo, oxazolilo, tales como oxazol-2-ilo, y oxadiazolilo tales como 1,3,4-oxadiazol-5-ilo, y 1,2,4oxadiazol-5-ilo. Determinados heterociclos de anillo de 5 eslabones que contienen de 2 a 4 atomos de nitrogeno comprenden imidazolilo, tal como imidazol-2-ilo; triazolilo tales como 1,3,4-triazol-5-ilo, 1,2,3-triazol-5-ilo, y 1,2,4triazol-5-ilo, y tetrazolilo, tal como 1H-tetrazol-5-ilo. Benzo-fusionados especial heterociclos de 5 eslabones son benzoxazol-2-ilo, benzotiazol-2-ilo y bencimidazol-2-il. Determinados heterociclos de 6 eslabones contienen uno a tres atomos de nitrogeno y opcionalmente un atomo de azufre o de oxigeno, por ejemplo, piridilo, tal como pirid-2-ilo, pirid-3-ilo, y pirid-4-ilo; pirimidilo tales como pirimid-2 -ilo y pirimid-4-ilo; triazinilo, tales como 1,3,4-triazin-2-ilo y 1,3,5-triazin-4-ilo; piridazinilo tales como piridazin-3-ilo y pirazinilo. Los sustituyentes para los heterociclos opcionalmente sustituidos, y ejemplos adicionales de los sistemas de anillo de 5 y 6 eslabones expuestos anteriormente se pueden encontrar en la patente de EE.UU. n° 4.278.793 de W. Druckheimer et al.
Radical arilalquilo se refiere a radicales alquilo que llevan un sustituyente arilo y tienen de aproximadamente 6 a aproximadamente 20 atomos de carbono (y todas las combinaciones y subcombinaciones de intervalos y numeros especificos de atomos de carbono en el mismo), prefiriendose con desde aproximadamente 6 a aproximadamente 12 atomos de carbono. Los grupos arilalquilo pueden estar opcionalmente sustituidos. Los ejemplos no restrictivos comprenden, por ejemplo, bencilo, naftilmetilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, feniletilo y difeniletilo. Un grupo arilalquilo sustituido contendra uno o mas sustituyentes en el grupo arilo o alquilo como se define para grupos alquilo sustituidos.
Radical o grupo cicloalquilarilo, se refiere a un radical cicloalquilo condensado con un grupo arilo, inclusive todas las combinaciones de alquil cicloalquilarilos independientemente sustituidos, teniendo los grupos cicloalquilo y arilo dos atomos en comun.
El radical o grupo cicloalquilo comprende mas especificamente la referencia a un radical alquilo carbociclico monovalente saturado que consiste en uno o mas anillos en sus estructuras y que tiene de aproximadamente 3 a aproximadamente 14 atomos de carbono (y todas las combinaciones y subcombinaciones de intervalos y numeros especificos de atomos de carbono en el mismo), prefiriendose con desde aproximadamente 3 a aproximadamente 7 atomos de carbono. Las estructuras de anillos multiples pueden ser estructuras de aillo formando puente o condensadas. Los anillos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o mas de los sustituyentes para los grupos alquilo. Ejemplos de grupos cicloalquilo comprenden, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclooctilo y adamantilo. Un grupo cicloalquilo sustituido contendra uno o mas sustituyentes como se define para grupos alquilo sustituidos.
Radical cicloalquilalquilo se refiere mas especificamente a radicales alquilo que llevan un sustituyente cicloalquilo y que tienen de aproximadamente 4 a aproximadamente 20 atomos de carbono (y todas las combinaciones y subcombinaciones de intervalos y numeros especificos de atomos de carbono en el mismo), prefiriendose con desde aproximadamente 6 a aproximadamente 12 atomos de carbono y puede incluir, pero no se limitan a los grupos metilciclopropilo, metilciclohexilo, isopropilciclohexilo y butilciclohexilo. El radical o grupo cicloalquilalquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes para los grupos alquilo, entre ellos pero sin limitarse a hidroxi, ciano, alquilo, alcoxi, tioalquilo, halo, haloalquilo, hidroxialquilo, nitro, amino, alquilamino y dialquilamino.
"Heteroarilo" solo y cuando se emplea como un resto en un grupo complejo tal como un grupo heteroarilalquilo, se refiere a cualquier sistema de anillo aromatico mono-, bi-o triciclico que tiene el numero de atomos designado, donde al menos un anillo es un anillo de 5, 6 o 7 eslabones que contiene de uno a cuatro heteroatomos seleccionados del grupo de nitrogeno, oxigeno, y azufre (Lang's Handbook of Chemistry, anteriormente). En la definicion se incluyen los grupos biciclicos en donde cualquiera de los anillos de heteroarilo anteriores estan fusionados a un anillo de benceno. Los siguientes sistemas de anillo son ejemplos de grupos heteroarilo (ya sea sustituido o no sustituido) indicados por el termino "heteroarilo": tienilo, furilo, imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, tiatriazolilo, oxatriazolilo, piridilo, pirimidilo, pirazinilo, piridazinilo, tiazinilo, oxazinilo, triazinilo, tiadiazinilo, oxadiazinilo, ditiazinilo, dioxazinilo, oxatiazinilo, tetrazinilo, tiatriazinilo, oxatriazinilo, ditiadiazinilo, imidazolinilo, dihidropirimidilo, tetrahidropirimidilo, tetrazolo[1,5-b]piridazinilo y purinilo, asi como los derivados benzo-condensados, por ejemplo, benzoxazolilo, benzofurilo, benzotiazolilo, benzotiadiazolilo, benzotriazolilo, benzoimidazolilo e indolilo. Concretamente los "heteroarilos" comprenden; 1,3-tiazol-2-ilo, 4-(carboximetil)-5-metil-1,3-tiazol-2-ilo, sal sodica de 4-(carboximetil)-5metil-1,3-tiazol-2-ilo, 1,2,4-tiadiazol-5-ilo, 3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-ilo, 1,3,4-triazol-5-ilo, 2-metil-1,3,4-triazol-5-ilo, 2hidroxi-1,3,4-triazol-5-ilo, sal sodica de 2-carboxi-4-metil-1,3,4-triazol-5-ilo, 2-carboxi-4-metil-1,3,4-triazol-5-ilo, 1,3oxazol-2-ilo, 1,3,4-oxadiazol-5-ilo, 2-metil-1,3,4-oxadiazol-5-ilo, 2-(hidroximetil)-1,3,4-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2-tiol-1,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2-(metiltio)-1,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2-amino-1,3,4-tiadiazol-5-ilo, 1Htetrazol-5-ilo, 1-metil-1H-tetrazol-5-ilo, 1-(1-(dimetilamino)et-2-il)-1H-tetrazol-5-ilo, 1-(carboximetil)-1H-tetrazol-5-ilo, sal sodica de 1-(carboximetil)-1H-tetrazol-5-ilo, 1-(acido metilsulfonico)-1H-tetrazol-5-ilo, sal sodica de 1-(acido metilsulfonico)-1H-tetrazol-5-ilo, 2-metil-1H-tetrazol-5-ilo, 1,2,3-triazol-5-ilo, 1-metil-1,2,3-triazol-5-ilo, 2-metil-1,2,3triazol-5-ilo, 4-metil-1,2,3-triazol-5-ilo, N-oxido de pirid-2-ilo, 6-metoxi-2-(N-oxido)-piridaz-3-ilo, 6-hidroxipiridaz-3-ilo, 1-metilpirid-2-ilo, 1-metilpirid-4-ilo, 2-hidroxipirimid-4-ilo, 1,4,5,6-tetrahidro-5,6-dioxo-4-metil-as-triazin-3-ilo, 1,4,5,6tetrahidro-4-(formilmetil)-5,6-dioxo-as-triazin-3-ilo, 2,5-dihidro-5-oxo-6-hidroxi-astriazin-3-ilo, sal sodica de 2,5dihidro-5-oxo-6-hidroxi-as-triazin-3-ilo, sal sodica de 2,5-dihidro-5-oxo-6-hidroxi-2-metil-astriazin-3-il, 2,5-dihidro-5oxo-6-hidroxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-dihidro-5-oxo-6-metoxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-dihidro-5-oxo-as-triazin-3ilo, 2,5-dihidro-5-oxo-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-dihidro-5-oxo-2,6-dimetil-as-triazin-3-ilo, tetrazolo[1,5-b] piridazin-6ilo y 8-aminotetrazolo[1,5-b]-piridazin-6-ilo. Un grupo alternativo de "heteroarilo" comprende: 4-(carboximetil)-5-metil1,3-tiazol-2-ilo, sal sodica de 4-(carboximetil)-5-metil-1-,3-tiazol-2-ilo, 1,3,4-triazol-5-ilo, 2-metil-1,3,4-triazol-5-ilo, 1Htetrazol-5-ilo, 1-metil-1H-tetrazol-5-ilo, 1-(1-(dimetilamino)et-2-il)-1H-tetrazol-5-ilo, 1-(carboximetil)-1H-tetrazol-5-ilo, sal sodica de 1-(carboximetil)-1H-tetrazol-5-ilo, 1-(acido metilsulfonico)-1H-tetrazol-5-ilo, sal sodica de 1-(acido metilsulfonico)-1H-tetrazol-5-ilo, 1,2,3-triazol-5-ilo, 1,4,5,6-tetrahidro-5,6-dioxo-4-metil-as-triazin-3-ilo, 1,4,5,6tetrahidro-4-(2-formilmetil)-5,6-dioxo-as-triazin-3-ilo, sal sodica de 2,5-dihidro-5-oxo-6-hidroxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-dihidro-5-oxo-6-hidroxi-2- metil-as-triazin-3-ilo, tetrazolo[1,5-b] piridazin-6-ilo, y 8-aminotetrazolo [1,5-b] piridazin6-ilo.
"Inhibidor" significa un compuesto que reduce o impide la union de proteinas IAP a las proteinas de caspasa o que reduce o impide la inhibicion de la apoptosis por una proteina IAP, o que se une a un dominio BIR de IAP de una manera similar al fragmento amino terminal de Smac, liberando de este modo Smac para inhibir la accion de una IAP.
Las "sales farmaceuticamente aceptables" comprenden sales de adicion tanto de acido como de base. "Sal farmaceuticamente aceptable de adicion de acido" se refiere a aquellas sales que conservan la eficacia y las propiedades biologicas de las bases libres y que no son biologicamente o de otro modo indeseables, formadas con acidos inorganicos tales como acido clorhidrico, acido bromhidrico, acido sulfurico, acido nitrico, acido carbonico, acido fosforico y similares, y los acidos organicos pueden seleccionarse entre las clases de acidos organicos alifaticos, cicloalifaticos, aromaticos, arilalifaticos, heterociclicos, carboxilicos y sulfonicos tales como acido formico, acido acetico, acido propionico, acido glicolico, acido gluconico, acido lactico, acido piruvico, acido oxalico, acido malico, acido maleico, acido malonico, acido succinico, acido fumarico, acido tartarico, acido citrico, acido aspartico, acido ascorbico, acido glutamico, acido antranilico, acido benzoico, acido cinamico, acido mandelico, acido embonico, acido fenilacetico, acido metansulfonico, acido etansulfonico, acido p-toluensulfonico, acido salicilico y similares.
Los terminos "mimetico", "peptido mimetico" y "peptidomimetico" se utilizan indistintamente en la presente memoria, y se refieren en general a un peptido, peptido parcial o molecula no peptidica que imita la estructura terciaria de enlace o actividad de un peptido natural o dominio funcional de proteinas seleccionados (p. ej., motivo o zona activa de union). Estos peptidomimeticos comprenden peptidos modificados de manera recombinante o quimicamente, asi como agentes no peptidicos, tales como pequenas moleculas farmacomimeticas, como se describe con mas detalle a continuacion.
Como se emplea en la presente memoria, las expresiones "farmaceuticamente aceptable", "fisiologicamente tolerable" y sus variaciones gramaticales, en cuanto se refieren a composiciones, vehiculos, diluyentes y reactivos, se emplean indistintamente y representan que los materiales se pueden administrar a un mamifero sin producir efectos fisiologicos indeseables, como nauseas, mareos, erupciones o molestias gastricas.
"Proporcionar" cuando se utiliza junto con un medio terapeutico para administrar un agente terapeutico directamente en o sobre un tejido diana o para administrar un agente terapeutico a un paciente con lo que el agente terapeutico impacta positivamente en el tejido al que se dirige.
Como se emplea en la presente memoria "sujeto" o "paciente" se refiere a un animal o mamifero, entre ellos, pero sin limitarse a, ser humano, perro, gato, caballo, vaca, cerdo, oveja, cabra, pollo, mono, conejo, rata, raton, etc.
Tal como se emplea en la presente memoria, el termino "terapeutico" significa un agente utilizado para tratar, combatir, mejorar, prevenir o mejorar una afeccion o enfermedad no deseada de un paciente. Las realizaciones de la presente invencion estan dirigidas a estimular la apoptosis, y por lo tanto la muerte celular.
Los terminos "cantidad terapeuticamente eficaz" o "cantidad eficaz", como se emplean en la presente memoria, se pueden emplear indistintamente y se refieren a una cantidad de un componente del compuesto terapeutico de la presente invencion. Por ejemplo, una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto terapeutico es una cantidad predeterminada calculada para alcanzar el efecto deseado, es decir, para estimular eficazmente la apoptosis, o para sensibilizar una celula a la apoptosis preferiblemente eliminando una inhibicion de la apoptosis de IAP, mas preferiblemente inhibiendo una union de IAP a una caspasa.
"Mimeticos" o "peptidomimeticos" son compuestos sinteticos que tienen una estructura tridimensional (es decir, un "motivo de peptido en el nucleo") basado en la estructura tridimensional de un peptido seleccionado. El motivo peptidico proporciona el compuesto mimetico con la actividad biologica deseada, es decir, la union a IAP, en donde la actividad de union del compuesto mimetico no se reduce sustancialmente, y es a menudo la misma o mayor que la afinidad de union del peptido natural en el que se modela el mimetico. Por ejemplo, en los mimeticos de la presente invencion, se ha encontrado que X3 y X4 pueden completamente similares a no peptidos. Los compuestos peptidomimeticos pueden tener caracteristicas adicionales que mejoran su aplicacion terapeutica, tales como aumento de la permeabilidad celular, mayor afinidad y/o avidez y vida media biologica prolongada.
Las estrategias de diseno mimeticas, especificamente, peptidomimeticas estan facilmente disponibles en la tecnica y se puede adaptar facilmente para su uso en la presente invencion (vease, por ejemplo, Ripka y Rich, Curr Op. Cher. Biol. 2, 441-452, 1998; Hruby et al., Curr. Op. Cher. Biol. 1, 114-119, 1997; Hruby y Balse, Curr. Med. Cher. 9, 945-970, 2000). Una clase de mimeticos imita un eje central que es parcial o completamente no peptidico, pero imita el eje central del peptido atomo por atomo y comprende grupos laterales que de igual manera imitan la funcionalidad de los grupos laterales de los restos de aminoacidos naturales. Varios tipos de enlaces quimicos, p. ej., enlaces ester, tioester, tioamida, cetoamida, carbonilo reducido, dimetileno y cetometileno, son conocidos en la tecnica por ser sustitutos generalmente utiles de enlaces peptidicos en la construccion de peptidomimeticos resistentes a la proteasa. Otra clase de peptidomimeticos comprende una molecula pequena no peptidica que se une a otro peptido o proteina, pero que no es necesariamente un mimetico estructural del peptido natural. No obstante, ha surgido otra clase de peptidomimeticos de la quimica combinatoria y la generacion de bibliotecas quimicas masivas. Estos comprenden generalmente nuevas plantillas que, aunque estructuralmente no relacionados con el peptido natural, poseen grupos funcionales necesarios situados en una matriz no peptidica para servir como mimeticos "topograficos" del peptido original de (Ripka y Rich, 1998, anteriormente). Tetrapeptidomimeticos de la invencion son del tipo descrito y reivindicado en la patente de EE.UU.. n° 6.992.063 de Shi et al.
Se ha demostrado segun la presente invencion que los peptidos de union a IAP o sus mimeticos pueden potenciar la apoptosis de las celulas.
Se prefieren los mimeticos de los fragmentos de union a IAP del nucleo. Los mimeticos descritos en la presente memoria son adecuadamente pequenos, y puesto que las caracteristicas estructurales en relacion con el surco de union de IAP estan bien caracterizadas, puede sintetizarse una amplia variedad de compuestos mimeticos. Ventajas adicionales de compuestos de este tamano comprenden una mejor solubilidad en solucion acuosa y la facilidad de entrega a objetivos seleccionados in vivo.
En una realizacion, los peptidos de union a IAP de la invencion se modifican para producir compuestos peptidomimeticos por sustitucion de una o mas cadenas laterales naturales de los 20 aminoacidos codificados geneticamente, o D-aminoacidos con otras cadenas laterales, por ejemplo con grupos tales como alquilo, alquilo inferior, alquilo ciclico de 4, 5, 6 a 7 eslabones, amida, alquilamida inferior, di (alquil inferior)amida, alcoxi inferior, hidroxi, carboxi y sus derivados de ester inferior y con heterociclicos de 4, 5, 6 a 7 eslabones. Por ejemplo, se pueden crear analogos de prolina en los que el tamano del anillo del resto de prolina se cambia desde 5 eslabones a 4, 6 o 7 eslabones. Los grupos ciclicos pueden ser saturados o insaturados, y si son insaturados, puede ser aromaticos o no aromaticos. Los grupos heterociclicos pueden contener uno o mas heteroatomos de nitrogeno, oxigeno y/o azufre. Ejemplos de dichos grupos comprenden el furazanil, imidazolidinil, imidazolil, imidazolinil, isotiazolil, isoxazolil, morfolinil (p. ej. morfolino), oxazolil, piperazinil (por ejemplo, 1-piperazinil), piperidil (p. ej., 1piperidil, piperidino), piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil, piridil, pirimidinil, pirrolidinil (p. ej., 1pirrolidinil), pirrolinil, pirrolil, tiadiazolil, tiazolil, tienil, tiomorfolinil (p. ej. tiomorfolino), y triazolilo. Estos grupos heterociclicos pueden estar sustituidos o no sustituidos. Cuando el grupo esta sustituido, el sustituyente puede ser alquilo, alcoxi, halogeno, oxigeno o fenilo sustituido o no sustituido. Los peptidomimeticos pueden tener tambien restos de aminoacidos que han sido modificados quimicamente por fosforilacion, sulfonacion, biotinilacion, o la adicion o eliminacion de otros restos.
La presente invencion proporciona compuestos que imitan la estructura terciaria de union de Smac a IAP o la actividad del fragmento N-terminal de Smac segun la reivindicacion. Los estereoisomeros de los compuestos mimeticos descritos en la presente memoria tambien estan incluidos en la presente invencion. La invencion tambien describe metodos de utilizacion de estos mimeticos para modular la apoptosis y ademas con fines terapeuticos. Tambien se describen productos intermedios y metodos para utilizar estos productos intermedios para la preparacion de compuestos que modulan la apoptosis imitando la estructura terciaria de union de Smac a IAP o la actividad del fragmento N-terminal de Smac.
En la presente memoria se expone un compuesto que tiene la formula general (I): en donde R1 y R2 son independientemente H, terc-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, acetilo, trifluoroacetilo, alquilo, alquilo opcionalmente sustituido, o
5 en donde R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo o cada uno opcionalmente sustituido con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; o R5a y R5b estan independientemente sustituidos opcionalmente con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; u opcionalmente, R5a y R5b estan conectados por un grupo alquileno, alquenileno, puente de alquinileno de 2 a 12
10 atomos de carbono o alquileno, alquenileno, puente de alquinileno opcionalmente sustituidos de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono estan reemplazados con N, O o S;
R6a y R6b son independientemente H, terc-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, acetilo, trifluoroacetilo, alquilo, alquilo inferior, alquilo opcionalmente sustituido, o
15 donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, haloalquilo; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independientemente o en conjunto un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, o heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y
20 R7a y R8b y R7b pueden formar independientemente o en conjunto un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido, o amidino;
m y n son independientemente 0, 1, 2, o 3;
X e Y son independientemente O, N, S, o C=C;
R9a, R9b, R10a, R10b son independientemente H, alquilo, alquilo opcionalmente sustituido, arilo, heteroarilo, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo, o R9a y R10a, independientemente o en paralelo con R9b y R10b, pueden estar unidos por 4 a 8 atomos, opcionalmente sustituidos, tales como C, N, O o S, para formar un anillo aromatico o no aromatico.
Cuando Wa y Wb estan unidos por enlace covalente, Wa y Wb son un enlace, alquileno, alquenileno, alquinileno, arilo, arilalquileno, arilalquilalquileno, heteroarilo, heteroarilalquileno, o una cadena de alquileno, alquenileno, alquinileno opcionalmente sustituidos de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados por N, O o S; R11a y R11b y estan independientemente ausentes, H, alquilo, alquilo opcionalmente sustituido, hidroxialquilo, alcoxialquilo; o R11a y R11b juntos forman una cadena de alquileno, alquenileno, alquinileno, o alquiloxialquileno de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono estan, opcionalmente, sustituidos con N, O, o S;
Cuando Wa y Wb no estan unidos por enlace covalente, Wa y Wb son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, CN, CO2H; y R11a y R11b forman juntos una cadena de alquileno, alquenileno, alquinileno o alquiloxialquileno de 2 a 12 atomos de carbono o una cadena de alquileno, alquenileno, alquinileno o alquiloxialquileno opcionalmente sustituidos de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados por N, O,
o S; o Wa puede ser H, Cl, Br, F, alquilo, CN, CO2H y W y R11a juntos son un enlace, alquileno, alquenileno, alquinileno, arilo, arilalquileno, arilalquilalquileno, heteroarilo, heteroarilalquileno, o una cadena de alquileno, alquenileno, alquinileno opcionalmente sustituidos de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados con N, O o S, y R11b falta o H, alquilo, alquilo opcionalmente sustituido, hidroxialquilo, alcoxialquilo.
Los compuestos incluidos en la presente invencion comprenden tanto mimeticos de Smac como intermedios para ellos. La presente invencion comprende estereoisomeros de cada compuesto descrito. Generalmente, los compuestos expuestos en la presente memoria comprenden tertrapeptidomimeticos de Smac, dimeros unidos por enlaces covalentes de tetrapeptidomimeticos de Smac y homodimeros unidos por enlaces covalentes de tetrapeptidosmimeticos de Smac. Los homodimeros son aquellos mimeticos en donde los tetrapeptidomimeticos sustancialmente identicos estan unidos por enlace covalente.
Los esquemas experimentales a continuacion estan relacionadas con los esquemas utilizados para producir los compuestos descritos en primer lugar en la publicacion PCT n° WO 2004/007529. Los peptidos y peptidomimeticos adecuados se describen tambien en la publicacion de EE.UU. n° US 2006/0025347.
La afinidad de union de compuestos a la XIAP se determino como describe Nikolovska-Coleska, Z. et al. (Analytical Biochemistry (2004), vol. 332:261-273) utilizando una variedad de sustratos fluorogenos y se presenta como un valor KD. En resumen, diversas concentraciones de peptidos de ensayo se mezclaron con de peptido 5 nM marcados con fluorescencia (AbuRPF-K (5-FAM)-NH2) y XIAP-BIR3 40 nMe durante 15 min a T.A. en 100 Il de tampon de fosfato de potasio 0,1 M, pH 7,5 que contenia 100 Ig/ml de y-globulina bovina. Despues de la incubacion, se midieron los valores de polarizacion (mP) en un Victor2V utilizando un filtro de excitacion a 485 nm y un filtro de emision a 520 nm. Se determinaron los valores de CI50 del grafico usando analisis no lineal de minimos cuadrados GraphPad Prism. Los compuestos descritos en la presente memoria proporcionan valores KD en los intervalos siguientes: KD <0,1 IM (A), KD = 0,1-1 IM (B), KD = 1-10 IM (C) y KD > 10 IM (D).
Esquema I
Ester terc-butilico del acido 2-(2-bromo-6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-carboxilico (2):
Se anadio NBS (3,2 g, 17,9 mmol) a una solucion que contenia 1 (5,4 g, 17,0 mmol) en CCl4 (50 ml). La mezcla de
5 reaccion heterogenea se calento a reflujo (80-85°C) durante 2 h en cuyo momento el analisis TLC dio a conocer el consumo completo de 1.[Analisis de TLC, hexano/EtOAc 4:1, Rf (8) = 0,4, Rf (2) = 0,5]. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y despues se vertio en una columna de gel de silice. El producto se eluyo con 10-15% de EtOAc/hexano para dar 4,4 g (65%) de 2 en forma de un solido blanco. 1H RMN (DMSO, 300 MHz) 511,74 (s, 1H), 7,56 (m, 1H), 7,02 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,88 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,22 (m, 2H), 2,97 (m, 1H), 2,58 (dd, J = 13,5,
10 9,3 Hz, 1H), 1,9 a 1,5 (4H), 1,40 (s, 9H) ppm.
1,4-bis-[ester terc-butilico del acido 2-(6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-carboxilico]benceno (4)
Una solucion que contenia 2 (3,3 g, 8,3 mmol) en tolueno (25 ml), EtOH (25 ml) y agua (1 ml) se desgasifico a alto vacio. Se anadieron K2CO3 (4,5 g, 32,5 mmoles), 3 (0,97 g, 5,8 mmoles) y (Ph3P)4Pd (0,29 g, 0,25 mmol) y la mezcla resultante se agito a 100°C durante 5 h. [Analisis de TLC, hexano/EtOAc 4:1, Rf (2) = 0,5; Rf (4) = 0,3]. La mezcla de
15 reaccion se filtro a traves de una pequena almohadilla de gel de silice y se lavo con 5% de EtOAc/hexano. El filtrado se concentro y el producto en bruto se purifico por cromatografia ultrarrapida en gel de silice (20% de EtOAc/hexano) para proporcionar 3,0 g (98%) de 4 en forma de un solido blanquecino, muy fluorescente. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,6-8,4 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 7,57 (s ancho, 4H), 7,05 (m, 2H), 7,90 (m, 2H), 4,22 (s ancho, 2H), 3,4-3,1 (m, 6H), 2,90 (m, 2H), 1,8-1,3 (m, 26H) ppm.
20 Esquema II
1,4-bis-{ester terc-butilico del acido 2-[1-(2-acetoxi-etil)-6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil]-pirrolidin-1-carboxilico}benceno (6)
A una suspension de 60% de NaH (0,67 g, 17,0 mmol) en DMF anhidro (10 ml) se anadio una solucion de 4 (3,0 g, 4,2 mmol) en DMF (10 ml) a 0°C. La mezcla de reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 1 h, 25 despues se volvio a enfriar a 0°C. Una solucion que contenia 5 (2,8 g, 16,8 mmoles) en DMF (5 ml) se anadio a la mezcla de reaccion y se retiro el bano de hielo despues de la adicion. Despues de 2 h a temperatura ambiente, los analisis LC/MS y TLC dieron a conocer el consumo completo de 4. [Analisis de TLC, hexano/EtOAc 2:1, Rf (4) = 0,4,
Rf (6) = 0,8]. La mezcla de reaccion se enfrio a 0°C y se anadio una solucion acuosa saturada de NH4Cl. El producto se extrajo con eter dietilico. Los extractos de eter se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron, y se concentraron. El producto en bruto se purifico por NP-HPLC (gel de silice, 10-100% de EtOAc/hexano durante 30 min) para proporcionar 1,4 g de 6 en forma de un solido de color blanquecino. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,68 (m, 2H), 7,54 (s, 4H), 7,12 (m, 2H), 6,94 (m, 2H), 4,25 (m, 4H), 4,14 (m, 6H), 3,4-3,1 (6H), 2,60 (dd, J = 9,6, 13,8 Hz, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,83 (m, 2H), 1,7-1,3 (m, 24H) ppm.
Esquema III
Ester de acido acetico de 2-(2-{4-[1-(2-acetoxi-etil)-6-fluoro-3-pirrolidin-2-ilmetil-1H-indol-2-il]-fenil}-6-fluoro-310 pirrolidin-2-ilmetil-indol-1-il)-etilo (7)
Una solucion que contenia 6 (1,4 g, 1,58 mmoles) en DCM (20 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio TFA (5 ml) con una pipeta y la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se controlo hasta que el analisis TLC dio a conocer el consumo completa de 6 (-2 h). El analisis por TLC, 10% de MeOH/DCM, Rf(6) = 0,7, Rf (7) = 0,2. El disolvente se elimino en un evaporador rotatorio y el residuo se disolvio en EtOAc. La solucion de EtOAc se lavo dos veces con 15 NaHCO3 acuoso saturado y una vez con salmuera. Los lavados acuosos combinados se volvieron a extraer con EtOAc y los extractos organicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron, y se concentraron para proporcionar 1,2 g (cuantitativo) de 7 en forma de un solido amarillo que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,05 (dd, J = 8,4, 5,4 Hz, 2H), 7,56 (s, 4H), 7,13 (dd, J = 9,9, 2,4 Hz, 2H), 6,99 (m, 2H), 4,60 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 4,51 (m, 2H), 4,26 (m, 4H), 4,15 (m, 4H), 3,63 (m, 2H), 3,54 (m, 2H), 3,5-3,3 (m, 4H), 2,41 (m, 2H), 1,89 (s, 6H),
20 1,8-1,5 (m, 6H), 1,43 (s, 18H), 1,09 (s, 18H) ppm.
1,4-bis-{acido acetico 2-{3-[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-pirrolidin-2-ilmetil]-6-fluoro-indol-1-il}ester etilico}benceno (8):
Una solucion que contenia Boc-L-terc-Leu-OH (0,82 g, 3,54 mmol) y HATU (1,41 g, 3,70 mmoles) en NMP anhidro (15 ml) se enfrio a 0°C. Despues de 15 min, se anadio N-metilmorfolina (0,46 g, 0,5 ml, 4,54 mmol) con una 25 jeringa. Despues de 15 min, se anadio una solucion que contenia 7 (1,10 g, 1,61 mmoles) en DCM (10 ml) y la mezcla de reaccion se dejo calentar hasta temperatura ambiente durante 16 h momento en el que el analisis por TLC dio a conocer el consumo completo de 7 [analisis TLC, hexano/EtOAc 2:1, Rf (7) = 0,01; Rf (8) = 0,8]. La mezcla de reaccion se diluyo con eter dietilico y se lavo una vez con HCl acuoso diluido, cinco veces con agua para eliminar el exceso de NMP, una vez con solucion acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro,
30 se filtro y se concentro. El producto en bruto se purifico por NP-HPLC (gel de silice, 10-100% de EtOAc/hexano durante 30 min) para proporcionar 1,3 g (73%) de 8 como un solido de color blanquecino. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,05 (dd, J = 5,4, 8,4 Hz, 2H), 7,56 (s, 4H), 7,11 (dd, J = 2,4, 9,9 Hz, 2H), 6,98 (m, 2H), 5,43 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 4,51 (m, 2H), 4,26 (m, 6H), 4,17 (m, 6H), 3,2-3,7 (m, 8H), 2,41 (dd, J = 12, 13 Hz, 2H), 1,88 (s, 6H), 1,7-1,5 (m, 4H), 1,43 (s, 18H), 1,04 (s, 18H) ppm.
Esquema IV
Ester de acido acetico de 2-{2-(4-{1-(2-acetoxi-etil)-3-[1-(2-amino-3,3-dimetil-butiril)-pirrolidin-2-ilmetil]-6-fluoro-1Hindol-2-il}-fenil)-3-[1-(2-amino-3,3-dimetil-butiril)-pirrolidin-2-ilmetil]-6-fluoro-indol-1-il}-etilo (9)
Una solucion que contenia 8 (1,3 g, 1,17 mmoles) en DCM (5 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio 20% de TFA en DCM (25 ml) con una pipeta y la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se controlo hasta que el analisis por TLC dio a conocer el consumo completo de 8 (-2 h). El analisis por TLC, 10% de MeOH/DCM, Rf (8) = 0,7; Rf (9) = 0,3. El disolvente se elimino en un evaporador rotatorio y el residuo se purifico por RP-HPLC (Metodo: Disolvente A:agua w/0,1% v/v de HOAc, Disolvente B: ACN w/0,1% v/v de HOAc. Dynamax Microsorb C18 60 A 8I, 41,4 mm x 25 cm; caudal: 40 ml/min, detector: 254 nm). Las fracciones que contienen el producto se mezclaron y se neutralizaron con NAHCO3 acuoso saturado. El producto se extrajo con EtOAc y el extracto organico se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro para proporcionar 0,80 g (75%) de 9 en forma de un solido de color blanquecino. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 8,09 (dd, J = 5,1, 8,7 Hz, 2H), 7,51 (s, 4H), 7,13 (m, 2H), 7,0 (m, 2H), 4,41 (m, 2H), 4,25 ( m, 4H), 4,16 (m, 4H), 3,6-3,0 (m, 6H), 2,86 (m, 2H), 2,39 (m, 2H), 1,91 (s, 6H), 1,8-1,4 (m, 12H), 1,04 (s, 18H) ppm.
{1,4-bis-{acido acetico 2-[3-(1-{2-[2-terc-butoxicarbonil-metil-amino)-propionilamino]-3,3-dimetil-butiril)-pirrolidin-2ilmetil)-6-fluoro-indol-1-il]-ester etilico}benceno (10):
Una solucion que contenia Boc-LN (Me) Ala-OH (0,27 g, 1,32 mmol) y HATU (0,54 g, 1,43 mmoles) en NMP anhidro (15 ml) se enfrio a 0°C. Despues de 15 min, se anadio N-metilmorfolina (0,17 g, 0,2 ml, 1,68 mmol) con una jeringa. Despues de 15 min, se anadio una solucion que contenia 9 (0,50 g, 0,55 mmoles) en DCM (10 ml) y la mezcla de reaccion se dejo calentar hasta temperatura ambiente durante 16 h momento en el que el analisis por TLC dio a conocer el consumo completo de 9 [analisis TLC, hexano/EtOAc 3:2, Rf (9) = 0,01; Rf (10) = 0,5]. La mezcla de reaccion se diluyo con eter dietilico y se lavo una vez con HCl acuoso diluido, cinco veces con agua para eliminar el exceso de NMP, una vez con solucion acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro. El producto en bruto se purifico por NP-HPLC (gel de silice, 10-100% de EtOAc/hexano durante 30 min) para proporcionar 0,64 g (91%) de 10 como un solido de color blanquecino. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,05 (m, 2H), 7,58 (s ancho, 4H), 7,13 (m, 2H), 6,97 (m, 2H), 4,75 (m, 2H), 4,60 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 4,50 (m, 2H), 4,25 (m, 4H), 4,16 (m, 4H), 3,70 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,5-3,2 (m, 4H), 2,85 (s ancho, 6H), 2,42 (m, 2H), 1,88 (s, 6H), 1,8-1,4 (m, 8H), 1,52 (s, 18H), 1,33 (m, 6H), 1,04 (s ancho, 18H) ppm.
Esquema V
1,4-bis-{acido acetico 2-(3-{1-[3,3-dimetil-2-(2-metilamino-propionilamino)-butiril]-pirrolidin-2-ilmetil}-6-fluoro-indol-1il)-ester etilico}benceno (11):
Una solucion que contenia 10 (0,64 g, 0,5 mmoles) en DCM (20 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio TFA (5 ml) con una pipeta y la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se controlo hasta que el analisis por TLC dio a conocer el consumo completo de 10 (-2 h). El disolvente se elimino en un evaporador rotativo y el residuo se purifico por RP-HPLC (Metodo: Disolvente A: agua w/0,1% v/v de HOAc, Disolvente B:. ACN w/0,1% v/v de HOAc Dynamax Microsorb C18 60 A 8I, 41,4 mm x 25 cm; caudal: 40 ml/min; detector: 254 nm). Las fracciones que contienen el producto se mezclaron y se neutralizaron con NaHCO3 acuoso saturado. El producto se extrajo con EtOAc y el extracto organico se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro para proporcionar 0,50 g (93%) de 11 en forma de un solido de color blanquecino. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 8,04 (m, 2H), 7,83 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 7,55 (m, 4H), 7,12 (m, 2H), 6,99 (m, 2H), 4,60 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 4,57 (m, 2H), 4,24 (m, 4H), 3,73 (m, 2H), 3,55 (m, 2H), 3,41 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 2,40 (s, 6H), 2,38 (m, 2H), 1,87 (s, 6H), 1,8-1,3 (m, 16H), 1,04 (s ancho, 18H) ppm.
1,4-bis-{N-(1-{2-[6-fluoro-1-(2-hidroxi-etil)-1H-indol-3-ilmetil]-pirrolidin-1-carbonil}-2,2-dimetil-propil)-2-metilaminopropionamida}benceno (12)
Se anadio NaOH acuoso (1 M, 5 ml, en exceso) a 0°C a una solucion que contenia 11 (0,48 g, 0,44 mmol) en MeOH (5 ml).Despues de la adicion, se retiro el bano de hielo y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reaccion se diluyo con agua/EtOAc y se separaron las capas. La fase organica se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro. El residuo se purifico por RP-HPLC (Metodo: Disolvente A: agua w/0,1% v/v de HOAc, Disolvente B: ACN w/0,1% v/v de HOAc Dynamax Microsorb C18 60 A 8I, 41,4 mm x 25 cm; caudal: 40 ml/min; detector: 254 nm). Las fracciones que contienen el producto se combinaron, congelaron y liofilizaron para proporcionar 0,19 g de 12 en forma de solido floculante, blanco. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,8-7,4 (m, 8H), 7,11 (m, 2H), 6,95 (m, 2H), 4,57 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 4,4-4,0 (m, 6H), 3,8-3,4 (m, 8H), 3,2-3,0 (m, 3H), 2,6-2,4 (m, 14H), 2,38 (m, 6H), 2,2-1,5 (m, 12H), 1,29 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1,00 (s, 18H) ppm.
Ejemplo 1
= comparativo Ejemplo 2
Comparativo
Ejemplo comparativo I
En donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, haloalquilo; o R8a y R7b y R7b y R7b se pueden formar de forma independiente o juntos formar un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, o heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y R8b y R7a y R7b pueden de forma independiente o juntos formar un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo; o cada uno opcionalmente sustituido con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; o, en algunos casos, los restos de R5a y R5b estan conectados por un grupo alquileno, alquenileno, alquinileno puente de 2 a 12 atomos de carbono o alquileno, alquenileno, puente de alquinileno de 2 a 12 atomos de carbono opcionalmente sustituidos, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados con N, O o S;
R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, ciano o CO2H;
R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido o amidino;
X es O, N, S o C=C;
R11a y R11b independientemente faltan, H, alquilo, alquilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo opcionalmente sustituidos; o R11a y R11b forman juntos una cadena de alquileno, alquenileno, alquenileno o de alquiloxialquileno o de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono pueden estar sustituidos con N, O o S;
Wa y Wb juntos son un enlace, alquileno, alquenileno, alquinileno, arilo, heteroarilo, o una cadena de alquileno alquenileno, alquinileno opcionalmente sustituidos de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados por N, O o S.
Esquema VI
Vease: Macor, J.E.; Blank, D.H.; Post, R.J.; Ryan, K. Tetrahedron Lett. 1992, 33(52), 8011-8014.
5 Ester terc-butilico del acido 2-(2-etoxicarbonil-vinil)-pirrolidin-1-carboxilico (14):
Un matraz de 2 l, de fondo redondo de 3 bocas, equipado con una sobrecarga agitada y una entrada de nitrogeno se cargo con una solucion de cloruro de oxalilo (130 ml g, 0,26 moles) en DCM (250 ml). La solucion se enfrio a -78°C. Se anadio gota a gota una solucion de DMSO (20 ml, 0,28 moles) en DCM (30 ml). Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de alcohol 13 (40 g, 0,20 moles) en DCM (200 ml). Despues de 30 min, se anadio TEA (140 10 ml, 1,00 moles) a la solucion. La solucion se transfirio a un bano de hielo/agua (0°C) y se continuo la agitacion durante 30 min [NB: la mezcla de reaccion era una suspension blanca y espesa]. El analisis por TLC dio a conocer que no quedaba material de partida [hexano/EtOAc 1:1, Rf(13) = 0,4; Rf (aldehido) = 0,6]. La mezcla de reaccion se diluyo con DCM (200 ml) y se lavo sucesivamente con H2O, HCl 1 M, NaHCO3 saturado y salmuera. La capa de
DCM se seco sobre Na2SO4, se filtro, y se concentro para proporcionar ester terc-butilico del acido 2-formil-pirrolidin1-carboxilico (40 g) en bruto en forma de un aceite que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 9,50 (d, J = 24 Hz, 1H), 4,20-4,03 (m, 1H), 3,60-3,40 (m, 2H), 2,20-1,87 (m, 4H), 1,43 (s, 9H) ppm.
Un matraz de 2 l, de fondo redondo de 3 bocas, equipado con una sobrecarga agitada y entrada de nitrogeno se cargo con NaH (60%, 10,0 g, 0,25 mol) y THF anhidro (200 ml). A la mezcla agitada se anadio lentamente fosfonoacetato de trietilo (53,8 g, 0,24 mol) durante 20 minutos. Se anadio gota a gota una solucion de ester tercbutilico de acido 2-formil-pirrolidin-1-carboxilico (40 g, 0,20 moles) en THF (75 ml). La solucion se volvio naranja y se continuo la agitacion durante 1 h hasta que no quedo aldehido por analisis de TLC [hexano/EtOAc 1:1, Rf (aldehido) = 0,6, Rf (14) = 0,8]. La solucion se diluyo con EtOAc y salmuera y se separaron las capas. La capa de EtOAc se lavo con HCl 1 M, salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro para proporcionar 14 (67 g) en forma de un aceite de color amarillo que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 6,92-6,76 (m, 1H), 5,82 (d, 1H), 4,56-4,32 (m, 1H), 4,25-4,12 (m, 2H), 3,48-3,27 (m, 2H), 2,20-1,98 (m, 1H), 1,91-1,72 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,25 (t, 3H) ppm.
Ester terc-butilico del acido 2-(3-hidroxi-propenil)-pirrolidin-1-carboxilico (15):
Un matraz de 2 l, de fondo redondo de 3 bocas, equipado con una sobrecarga agitada, se cargo con 14 (67 g, 0,20 mol) y DCM (400 ml). La solucion se enfrio a -78°C. Aesta solucion se anadio lentamente eterato trifluoruro de boro (30 ml, 0,20 moles).La mezcla de reaccion se agito durante 30 min. Se anadio DIBAL (1 M en DCM, 600 ml, 0,6 mol) a un ritmo moderado. La solucion se agito a -78°C durante 2 h y despues se trato con EtOAc (100 ml) durante 30 min para descargar el reactivo restante. La mezcla de reaccion se dejo calentar a -5°C. La mezcla de reaccion se enfrio cuidadosamente mediante la adicion gota a gota de HCl 1 M. La mezcla de reaccion se diluyo con DCM y H2O y se hizo acida para disolver las sales de aluminio. Se separaron las capas y se lavo la fase organica sucesivamente con HCl acuoso diluido, agua, y salmuera. La capa de DCM se seco sobre Na2SO4, se filtro, y se concentro. El residuo se purifico por cromatografia ultrarrapida (SiO2, 25% a 80% de EtOAc/hexano) para dar 15 en forma de un aceite amarillo (36 g, 79%). [Analisis de TLC, hexano/EtOAc 1:1, Rf (14) = 0,8; Rf (15) = 0,2]. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 5,73-5,52 (m, 2H), 4,39 -4,16 (m, 1H), 4,15-4,4 (m, 2H), 3,46-3,25 (m, 2H), 2,92 (s ancho, 1H), 2,08-1,93 (m, 1H), 1,92-1,79 (m, 2H ), 1,78-1,62 (m, 1H), 1,42 (s, 9H) ppm.
Ester terc-butilico del acido trans-2S-(3-metanosulfoniloxi-propenil)-pirrolidin-1-carboxilico (16):
A una solucion de 15 (19 g, 84 mmoles) en DCM (100 ml) se anadio trietilamina (10 g, 13,9 ml, 100 mmoles). La solucion se enfrio a 0°C y se anadio gota a gota cloruro de metansulfonilo (9,6 g, 6,5 ml, 84 mmoles) en DCM (20 ml). Despues de 1 h, el analisis por TLC dio a conocer el consumo completo de 15 [hexano/EtOAc 1:1, Rf (15) = 0,2; Rf (16) = 0,6]. Se anadio salmuera y el producto se extrajo con DCM (3 x 50 ml). Los extractos organicos se combinaron y se lavaron con HCl 1 N, agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron, y se concentraron para proporcionar 21,4 g de 16 que se uso sin purificacion. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 4,4-4,0 (m, 2H), 3,42-3,21 (m, 3H), 3,0 (s, 3H), 2,00-1,6 (m, 4H), 1,42 (s, 9H) ppm.
Esquema VII
Ester terc-butilico del acido 2-{3-[acetil-(2-bromo-5-fluoro-fenil)-amino]-propenil}-pirrolidin-1-carboxilico (18):
A una suspension de 60% de NaH (9,2 g, 0,23 moles) en DMF anhidro (150 ml) a 0°C se anadio 2-bromo-5fluoroacetanilida (17, 53,4 g, 0,23 mol) en pequenas porciones. Despues de 1 h, se anadio gota a gota una solucion de mesilato en bruto 16 (aprox. 0,19 mol) en DMF (20 ml) desde un embudo de adicion. La mezcla de reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se volvio a enfriar a 0°C y se inactivo cuidadosamente mediante la adicion de salmuera y se neutralizo mediante la adicion de HCl acuoso diluido hasta pH = 7. La mezcla se diluyo con eter dietilico y agua y se separaron las capas. La fase organica se lavo varias veces con agua para eliminar la DMF seguido de lavado con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se
concentro. El producto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice (0,5% a 2% de MeOH/DCM) para proporcionar 66 g de 18 en forma de un aceite. [Analisis de TLC, hexano/EtOAc 1:1, Rf (16) = 0,5, Rf (17) = 0,6; Rf (18) = 0,4]. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 7,64 ( m, 1H), 7,01 (m, 2H), 5,52 (m, 1H), 5,39 (app dd, J = 6,0, 15,3 Hz, 1H), 4,77 (app dd, J = 4,5, 13,8 Hz, 1H), 4,24 (m, 1H), 3,67 (app dd, J = 7,5, 13,8 Hz, 1H), 3,32 (m, 2H), 1,90 (m, 1H), 1,81 (m, 3H), 1,75 (m, 2H), 1,57 (m, 1H), 1,43 (m, 9H) ppm.
ester terc-butilco del acido 2-(1-Acetil-6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-carboxilico (19):
Bajo una atmosfera de nitrogeno, una solucion de 18 (66 g, 0,15 moles) en DMF anhidro (350 ml) se cargo con (n-Bu)4NCl (41,5 g, 0,15 moles), K2CO3 (20,6 g, 0,15 mol), NaHCO3 (10,2 g, 0,15 moles), y Pd(OAc)2 (3,35 g, 0,015 mol) a temperatura ambiente. La mezcla heterogenea se sumergio en un bano de aceite precalentado (85°C). Despues de 1 h, el analisis por TLC puso de manifiesto que quedaba algo de 18, por lo tanto se anadio mas catalizador (1 g). Despues de 1,5 h, se anadio otra carga de catalizador (0,6 g). Despues de una 1,5 h mas de calentamiento, se habia consumido completamente 18 segun el analisis de TLC [analisis de TLC, 2% de MeOH/DCM, Rf (18) = 0,7; Rf (19) = 0,8]. La mezcla de reaccion caliente se transfirio a un bano de agua con hielo para enfriar y despues se diluyo con eter dietilico y se filtro a traves de una almohadilla de celite. Los solidos se lavaron con eter dietilico y el filtrado se lavo varias veces con agua para eliminar la DMF, despues una vez con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro para proporcionar 52,5 g de 19 en bruto, que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 8,18 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,05 (dt, J = 2,4, 8,7 Hz, 1H), 4,13 ( m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,33 (m, 2H), 3,17 (app dd, J = 14,1, 38,1 Hz, 1H), 2,61 (s, 3H), 1,83 (m, 3H), 1,69 ( m, 1H), 1,49 (s, 9H) ppm.
Ester terc-butilico del acido 2-(6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-carboxilico (20):
Una solucion que contenia 19 en bruto (48 g) en MeOH calidad reactivo (480 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio en una porcion NaOH acuoso (1 M, 144 ml). Despues de 30 min, el analisis por TLC puso de manifiesto el consumo completo del material de partida [analisis de TLC, hexano/EtOAc 3:2, Rf (19) = 0,7; Rf (20) = 0,8]. La mezcla de reaccion se neutralizo con HCl 1 N y el producto se extrajo con DCM. Los extractos de DCM se lavaron con agua, salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se absorbio sobre 200 ml de gel de silice y se cromatografio (80% a 65% hexano/EtOAc) para proporcionar 31,7 g de 20 en forma de un aceite espeso. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 8,11 (s ancho, 1H), 7,65-7,57 (m, 1H), 7,04 (m, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,87 (t, J = 2,8 Hz, 1H), 4,16-4,9 (m, 1H), 3,45-3,14 (m, 3H), 2,76-2,63 (m, 1H), 1,75 (br s, 4H), 1,58 (s, 9H) ppm.
Esquema VIII
Ester terc-butilico del acido 2-{1-[2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil}-pirrolidin-1-carboxilico
(22)
Bajo una atmosfera de nitrogeno, se anadio una solucion de 20 (3,0 g, 9,42 mmol) en DMF anhidro (40 ml) con un embudo de adicion a una mezcla de 60% de NaH (0,45 g, 11,3 mmoles) en DMF (10 ml) a 0°C. Despues de 1 h, se anadio bromuro de 21 (2,47 g, 2,22 ml, 10,3 mmoles) en DMF (5 ml) con una jeringa. Despues de 30 min, la mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante 30 min. mas. La reaccion se inactivo por adicion de solucion acuosa saturada de NH4Cl y se diluyo con agua. El producto se extrajo con eter dietilico y los extractos de eter combinados se lavaron varias veces con agua para eliminar la DMF, salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro para proporcionar 4,49 g (cuantitativo) de 22 en forma de un aceite amarillo que se uso sin purificacion adicional. El analisis de TLC [hexano/EtOAc 3:1, Rf (20) = 0,4; Rf (22) = 0,7]. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 7,68 (m, 1H), 7,12 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,98 (t, J = 3,2 Hz, 1H), 4,26-4,23 (m, 3H), 4,05-3,99 (m, 2H), 3,55-3,27 (m, 3H), 2,75 (m, 1H), 1,88 (br s, 4H), 1,67 (s, 9H), 1,33 (m, 1H), 1,06-1,00 (m, 3H), 0,95 (s, 9H), 0,23-0,14 (m, 2H) ppm.
Ester terc-butilico del acido 2-[6-fluoro-1-(2-hidroxi-etil)-1H-indol-3-ilmetil]-pirrolidin-1-carboxilico (23)
Una solucion que contenia 22 (4,49 g, 9,42 mmol) en THF anhidro (50 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio fluoruro de
tetra-n-butilamonio (1 M en THF, 14 ml, 14 mmol) con una jeringa. Despues de 1 h, la reaccion completa por analisis de TLC [hexano/EtOAc 3:1, Rf (22) = 0,7; Rf (23) = 0,1], en consecuencia, se diluyo con EtOAc. La solucion de EtOAc se lavo dos veces con HCl 1 M, agua, salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro para proporcionar 3,9 g de 23 (> 100%; contaminado con algunas impurezas que contenian TBS) en forma de un aceite de color bronceado que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 7,59 (s ancho, 1H), 7,01-6,85 (m, 3H), 4,19-4,10 (m, 3H), 3,90 (s ancho, 2H), 3,38-3,31 (m, 2H), 3,15 (dd, J = 1,4, 4,6 Hz, 1H), 2,68 (m, 1H), 1,791,72 (m, 4H), 1,47 (d, J = 10,9 Hz, 9H) ppm.
Ester terc-butilico del acido 2-{6-fluoro-1-[2-(tolueno-4-sulfoniloxi)-etil]-1H-indol-3-ilmetil}-pirrolidin-1-carboxilico (12):
Se anadio trietilamina (1,13 g, 1,56 ml, 11,2 mmol) a una solucion de 23 (3,4 g, 9,38 mmol) en DCM anhidro (50 ml) a 0°C, seguido por la adicion de p-TsCl (1,79 g, 9,38 mmol) y DMAP (0,12 g, 0,94 mmoles). Despues de 30 min, la mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente. Tras el consumo completo de 23 (-30 min a temperatura ambiente), la mezcla de reaccion se diluyo con DCM y se lavo dos veces con HCl 1 M, salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y se concentro. El tosilato en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice (hexano/EtOAc 3:1) para proporcionar 3,67 g (76%) de 24 en forma de una espuma blanca que fue homogenea por analisis de TLC [hexano/EtOAc 3:1, Rf (23) = 0,1; Rf (24) =0,3]. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,64-7,45 (m, 3H), 7,11 (t, J = 2,5 Hz, 2H), 6,85 (dd, J = 0,8, 3,3 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,73 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 4,25 (s, 4H), 4,08 (s ancho, 1H), 3,34 (d ancho, J = 9,6 Hz, 2H), 3,20-3,9 (m, 1H), 2,64-2,57 (m, 1H), 2,36 (s, 1H), 1,75 (s ancho, 4H), 1,53 (s, 9H) ppm.
Esquema IX
1,2-bis[ester terc-butilico del acido 2-(6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-carboxilico]etano (25)
A una suspension de 60% de NaH (0,34 g, 8,50 mmol) en DMF anhidro (20 ml) a 0°C se anadio una solucion de 20 (2,47 g, 7,75 mmoles) en DMF (30 ml) mediante un embudo de adicion. Despues de 1 h, la mezcla de reaccion se transfirioa unbano a -40°C (ACN/nievecarbonica). A-40°C, una solucion de tosilato 24 (3,65 g, 7,06 mmoles) en DMF (20 ml) se anadio a la solucion anionica fria de un embudo de adicion. Despues de 30 min, solo se observaron por analisis TLC los materiales de partida, por lo tanto se calento lentamente a 0°C durante 2 h. Despues de 2-3 horas a 0°C, la reaccion se inactivo por adicion de solucion acuosa saturada de NH4Cl. La mezcla se diluyo con eter dietilico y agua y se separaron las capas. La capa de eter se lavo varias veces con agua para eliminar la DMF, despues una vez con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y se concentro. El producto en bruto se purifico por HPLC de fase normal (10-100% de EtOAc/hexano durante 30 min) para proporcionar 3,27 g (70%) de 25 en forma de una espuma blanca que era homogenea por analisis de TLC [hexano/EtOAc 3:1 (dos revelados), Rf (20) = 0,8; Rf (24) = 0,55, Rf (25) = 0,5]. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,61-7,52 (m, 1H), 6,82 (t, J = 9,6 Hz, 1H), 6,686,61 (m, 1H), 6,48-6,46 (m, 1H), 4,34 (s, 2H), 3,93 (m, 1H), 3,34-3,26 (m, 2H ), 3,17-3,01 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,701,58 (m, 4H), 1,50 (s, 9H) ppm.
1,2-bis[2-(6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidina]etano (26):
Se anadio acido trifluoroacetico (2 ml) a 0°C a una solucion que contenia 25 (3,27 g, 4,93 mmoles) en DCM (10 ml). Despues de 3 h, se anadio una porcion adicional de TFA (2 ml) y la reaccion se completo en 1 h. Se elimino el disolvente en un evaporador rotatorio y el residuo se disolvio en DCM y se lavo dos veces con solucion acuosa saturada de NaHCO3, una vez con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y se concentro para proporcionar 26 en forma de una espuma de color amarillo que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 7,31 (dd, J = 5,1, 8,7 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,77 (ddd, J = 2,4, 9,6, 11,1 Hz, 1H), 6,44 (dd, J = 2,4, 9,9 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H), 3,65-3,55 (m, 1H), 3,24-3,16 (m, 1H), 3,01-2,96 (m, 1H), 2,92 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 2,15-1,99 (m, 1H), 1,96-1,84 (m, 2H), 1,76-1,67 (m, 1H) ppm.
1,2-bis {2,2,2-trifluoro-1-[2-(6-fluoro-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-il]-etanona}etano (27)
A 0°C, se anadio TFAA (2,17 g, 1,44 ml, 10,3 mmol) a una solucion que contenia 26 (2,28 g, 4,93 mmoles; basado en el rendimiento teorico de la etapa anterior) y TEA(2,49 g, 3,43 ml, 24,6 mmoles ) en DCM (50 ml). Despues de 30 min, la mezcla de reaccion se diluye con DCM y se lava dos veces con NaHCO3 acuoso saturado, una vez con 5 salmuera, se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra, y se concentra. El producto bruto se purifico por cromatografia en gel de silice ultrarrapida (hexano/EtOAc 4:1-1:1) para proporcionar 2,66 g (82%, 2 etapas) de 27 que era homogeneo por analisis de TLC [hexano/EtOAc 2:1, Rf (26) = 0,01; Rf (27) = 0,5]. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) 5 7,70 (dd, J = 5,4, 9,0 Hz, 1H), 6,84 (ddd, J = 1,8, 9,3, 10,5 Hz, 1H), 6,62 (dd, J = 1,8, 10,2 Hz, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,36 (s, 2H), 4,29-4,28 (m, 1H), 3,60 (t ap, J = 7,2 Hz, 2H), 3,23 (dd, J = 2,4, 14,1 Hz, 1H), 2,51 (dd, J = 9,9, 14,1 Hz, 1H), 1,92-1,84 (m,
10 2H), 1,72-1,66 (m, 1H), 1,57-1,56 (m, 1H) ppm.
Esquema X
1-(2-(3,10-difluoro-14-[1-(2,2,2-trifluoro-acetil)-pirrolidin-2-ilmetil]-6,7-dihidro-pirazino[1,2-a;4,3-a']diindol-13-ilmetil}
pirrolidin-1-il)-2,2,2-trifluoro-etanona (28)
15 Se disolvio dimero aciclico 27 (2,66 g, 4,06 mmol) en TFA puro (25 ml) a temperatura ambiente. Despues de 3 h, el disolvente se elimino en un evaporador rotatorio y el residuo resultante se disolvio en EtOAc, se lavo dos veces con solucion acuosa saturada de NaHCO3, una vez con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro para proporcionar 2,65 g (cuant.) de las indolilindolinas diastereomericas en forma de una espuma de color amarillo. [Analisis de TLC: hexano/EtOAc 3:1, Rf (27) = 0,3; Rf (indolilindolinas) = 0,6-0,7].
20 A una mezcla de indolilindolinas en bruto (2,65 g, 4,05 mmol) en 1,4-dioxano (50 ml) se anadio DDQ (1,10 g, 4,84 mmol) en una porcion. Despues de 2-3 h, la mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc y se filtro a traves de una almohadilla de celite. Los solidos se lavaron con EtOAc y el filtrado se lavo cinco veces con NaHCO3 acuoso saturado, a continuacion una vez con salmuera. Los lavados acuosos combinados se volvieron a extraer dos veces con EtOAc y los extractos organicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. El
25 producto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice (hexano/EtOAc 4:1) para producir 1,94 g (73%, 2 etapas) de 28 en forma de un solido de color blanco que era homogeneo por analisis de TLC (hexano/EtOAc 2:1, Rf (indolilindolinas) = 0,6-0,7; Rf (28) = 0,55]. NB: El producto 2,2'-biindol (28) es bastante fluorescente y se purifica facilmente por trituracion con MeOH calidad reactivo para proporcionar un solido blanco. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,06 (dd, J = 5,1, 8,1 Hz, 1H), 7,03-6,93 (m, 2H), 4,49 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,12 (d, J = 9,0 Hz, 1H),
30 3,75-3,69 (m, 2H), 3,57-3,51 (m, 2H), 2,85 (dd, J = 10,5, 12,9 Hz, 1H), 1,78-1,74 (m, 2H), 1,51-1,45 (m, 1H) ppm.
Esquema XI
3,10-difluoro-13,14-bis-pirrolidin-2-ilmetil-6,7-dihidro-pirazino[1,2-a;4,3-a']diindol (29):
Una mezcla que contenia 28 (1,94 g, 2,97 mmol) y K2CO3 (2,05 g, 14,8 mmol) en MeOH (60 ml) se calento a 60°C durante 1,5 h. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con EtOAc y agua. Se separaron las capas y la fase acuosa se extrajo tres veces con EtOAc. Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro , se filtraron, y se concentraron para proporcionar 1,57 g (cuantitativo) de 29 en forma de un solido amarillo que se uso sin purificacion adicional. Analisis de TLC, hexano/EtOAc 1:1, Rf (28) = 0,9; Rf (29) = 0,01. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,65 (m, 1H), 6,98 (d ap, J = 8,2 Hz, 1H), 6,90 (t ap, J = 8,3 Hz, 1H), 4,31 (s, 2H), 3,97 (s ancho, 3H), 3,54 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 1,83 (m, 1H), 1,68 (m, 2H), 1,42 (m, 1H) ppm. 13C RMN (CDCl3 , 75 MHz) 5 160,6 (d, JC-F = 238,7 Hz), 136,2 (d, JC-F = 12,0 Hz), 127,1, 125,4, 120,8 (d, JC-F = 10,2 Hz), 109,8, 108,9 (d, JC-F = 24,6 Hz), 95,3 (d, JC-F = 26,3 Hz), 59,6, 45,6, 41,6, 31,0, 30,7, 24,5 ppm.
Ester terc-butilico del acido[1-(2-{14-[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butiril)-pirrolidin-2-ilmetil]-3,10-difluoro6,7-dihidro-pirazino[1,2-a;4,3-a'] diindol-13-ilmetil}-pirrolidin-1-carbonil)-2-metil-propil]-carbamico (30):
Una solucion que contenia Boc-L-Val-OH (0,69 g, 3,18 mmol) y HATU (1,27 g, 3,34 mmoles) en NMP anhidro (4 ml) se enfrio a 0°C. Despues de 15 min, se anadio DIPEA (0,45 g, 0,61 ml, 3,50 mmol) con una jeringa. Despues de 15 min, se anadio una solucion que contenia 29 (0,70 g, 1,52 mmoles) en NMP (4 ml) y la mezcla de reaccion se dejo calentar hasta temperatura ambiente durante 2 h en cuyo momento el analisis TLC puso de manifiesto el consumo completo de 29 [analisis TLC, hexano/EtOAc 02:01, Rf (29) = 0,01; Rf (30) = 0,5]. La mezcla de reaccion se diluyo con eter dietilico y se lavo una vez con HCl acuoso diluido, cinco veces con agua para eliminar el exceso de NMP, una vez con solucion acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y se concentro. El producto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice (hexano/EtOAc 3:1) para producir 1,09 g (83%) de 30 en forma de un solido de color amarillo palido. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,04 (dd, J = 5,1, 8,7 Hz, 1H), 6,98 (m, 2H), 5,33 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,49 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,24 ( dd, J = 7,2, 9,3 Hz, 1H), 4,11 (m, 2H), 3,67 (dd, J = 3,0, 13,5 Hz, 1H), 3,56 (m, 2H), 2,73 (t ap, J = 12,9 Hz, 1H), 1,99 (dd, J = 7,2, 13,5 Hz, 1H), 1,70-1,17 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,01 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 7,5 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (CDCl3, 75 MHz) 5 171,2, 160,4 (d, JC-F = 238 Hz), 155,7, 136,6 (d, JC-F = 12,0 Hz), 127,2, 124,8, 122,0 (d, JC-F = 9,7 Hz), 109,2, 108,5 (d, JC-F = 24,0 Hz), 95,0 (d, JC-F = 26,3 Hz), 79,4, 57,7, 56,9, 47,3, 41,7, 31,8, 29,7, 28,4, 28,3, 23,8, 19,7, 17,7 ppm.
Esquema XII
2-amino-1-(2-{14-[1-(2-amino-3-metil-butiril)-pirrolidin-2-ilmetil]-3,10-difluoro-6,7-dihidro-pirazino[1,2-a;4,3-a]diindol13-ilmetil}-pirrolidin-1-il)-3-metil-butan-1-ona (31) Una solucion que contenia 30 (1,09 g, 1,27 mmoles) en DCM (20 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio TFA (4 ml) con una pipeta y la reaccion se controlo hasta que el analisis TLC puso de manifiesto el consumo completo de 30 (-2 h). Analisis por TLC, 10% de MeOH/DCM, Rf (30) = 0,5; Rf (31) = 0,4. El disolvente se elimino en un evaporador rotatorio y el residuo se disolvio en EtOAc. La solucion de EtOAc se lavo dos veces con NaHCO3 acuoso saturado y una vez con salmuera. Los lavados acuosos combinados se volvieron a extraer con EtOAc y los extractos organicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron, y se concentraron para proporcionar 0,83 g (cuantitativo) de 31 en forma de un solido amarillo que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,09 (dd, J = 5,1, 8,7 Hz, 1H), 6,97 (m, 2H), 4,52 (m, 1H), 4,50 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,71 (d ancho, J = 11,1 Hz, 1H), 3,51-3,32 (m, 2H), 2,74 (t ap, J = 12,6 Hz, 1H), 2,30 (s ancho, 4H), 1,92 (m, 1H), 1,68 (m, 2H), 1,41 (m, 1H), 1,03 (m, 6H) ppm. 13C RMN (CDCl3, 75 MHz) 5 174,3, 171,4, 160,6 (d, JC-F = 232,5 Hz), 136,8 (d, JC-F = 7,5 Hz), 127,4 (d, JC-F = 3,7 Hz), 125,0, 122,4 (d, JC-F = 7,5 Hz), 109,6, 108,7 (d, JC-F = 22,5 Hz), 95,2 (d, JC-F = 22,5 Hz), 58,0, 47,3, 41,9, 30,0, 28,5, 28,5, 24,1, 19,9, 17,6 ppm.
Penultimo intermedio (32):
Una solucion que contenia Boc-LN (Me) Ala-OH (0,49 g, 2,45 mmol) y HATU (0,98 g, 2,56 mmoles) en NMP anhidro (4 ml) se enfrio a 0°C. Despues de 15 min, se anadio DIPEA (0,35 g, 0,47 ml, 2,69 mmol) con una jeringa. Despues de 15 min, se anadio una solucion que contenia 31 (0,77 g, 1,17 mmoles) en NMP (4 ml) y la mezcla de reaccion se dejo calentar hasta temperatura ambiente durante 2 h en cuyo momento el analisis TLC puso de manifiesto el consumo completo de 31 [analisis TLC, hexano/EtOAc 1:1, Rf (31) = 0,01; Rf (32) = 0,5]. La mezcla de reaccion se diluyo con eter dietilico y se lavo una vez con HCl acuoso diluido, cinco veces con agua para eliminar el exceso de NMP, una vez con solucion acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro. El producto en bruto se purifico por cromatografia en gel de silice ultrarrapida (hexano/EtOAc 1:1) para producir 0,92 g (76%) de 32 en forma de un solido de color amarillo palido. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,05 (m, 1H), 7,65-6,90 (m, 2H), 4,53 (m, 3H), 4,13 (m, 1H), 3,70-3,52 (m, 4H), 2,82 (m, 2H), 2,72 (t ap, J = 11,1 Hz, 1H), 1,70 (m, 1H), 1,64 (s, 3H), 1,53 (s, 9H), 1,45-1,25 (m, 2H), 1,34 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,05-0,88 (m, 6H) ppm. 13C RMN (CDCl3 , 75 MHz) 5 171,3, 170,4, 160,4 (d, JC-F = 232,5 Hz), 136,6 (d, JC-F = 7,5 Hz), 127,2, 124,7, 122,1, 109,2, 108,5 (d, JC-F = 22,5 Hz), 95,0 (d, JC-F = 22,5 Hz), 57,8, 55,5, 47,4, 41,7, 31,6, 29,9, 29,7, 28,4, 23,8, 19,3, 18,0 ppm.
Esquema XIII
N-{1-[2-(3,10-difluoro-14-{1-[3-metil-2-(2-metilamino-propionilamino)-butiril]-pirrolidin-2-ilmetil}-6,7-dihidro
pirazino[1,2-a;4,3-a']diindol-13-ilmetil)-pirrolidin-1-carbonil]-2-metil-propil}-2-metilamino-propionamida (33):
5 Una solucion que contenia 32 (0,92 g, 0,89 mmoles) en DCM (15 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio TFA (3 ml) con una pipeta y la reaccion se controlo hasta que el analisis TLC puso de manifiesto el consumo completo de 32 (-3 h ). Analisis por TLC, 10% de MeOH/DCM, Rf (32) = 0,4; Rf (33) = 0,3. El disolvente se elimino en un evaporador rotatorio y el residuo se disolvio en EtOAc. La solucion de EtOAc se lavo dos veces con NaHCO3 acuoso saturado y una vez con salmuera. Los lavados acuosos combinados se volvieron a extraer con EtOAc y los extractos organicos
10 se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron, y se concentraron para proporcionar 0,73 g de 33 en bruto. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC (Metodo: Disolvente A: agua w/0,1% v/v de HOAc, Disolvente B:. ACN w/0,1% v/v de HOAc Dynamax Microsorb C18 60 A 8I, 41,4 mm x 25 cm; caudal: 40 ml/min, detector: 272 nm). Las fracciones que contenian el producto se diluyeron con NaHCO3 acuoso saturado y se extrajeron con EtOAc. El extracto de EtOAc se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y se concentro. El residuo se
15 disolvio en una cantidad minima de ACN, se diluyo con agua hasta que se puso turbio, se congelo y se liofilizo para producir 33 en forma de un solido floculante, blanco. 1H RMN (DMSO, 300 MHz) 5 8,04-7,86 (m, 2H), 7,38 (dd ap, J = 2,3, 10,5 Hz, 1H), 6,90 (dt ap, J = 2,3, 9,9 Hz, 1H), 4,68 (d ap, J = 8,7 Hz, 1H), 4,34-4,23 (m, 2H), 3,98 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,46 (m, 2H), 2,94 (q ap, J = 6,4 Hz, 1H), 2,70 (t, J = 12,8 Hz, 1H), 2,12 (s, 3H), 1,94 (m, 1H), 1,58 (m, 2H), 1,35 (m, 1H), 1,16-1,07 (m, 2H), 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,85 (m, 6H) ppm. 13C RMN (CDCl3 , 75 MHz) 5 175,0,
20 170,8, 160,6 (d, JC-F = 232,5 Hz), 136,8 (d, JC-F = 7,5 Hz), 127,4 (d, JC-F = 3,7 Hz), 125,0, 122,3 (d, JC-F = 7,5 Hz), 109,5, 108,7 (d, JC-F = 22,5 Hz), 95,2 (d, JC-F = 22,5 Hz), 60,4, 57,9, 55,3, 47,6, 42,0, 35,2, 31,7, 30,0, 28,6, 24,0, 19,7, 19,6, 18,2 ppm. Espectro de masas, r/z = [415,6] (M + 2)+/2.
Ejemplo comparativo 2
En donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, haloalquilo; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden
formar de forma independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, o heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y
5 R7a y R8b y R7b pueden formar de forma independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo; o cada uno esta opcionalmente sustituido con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; u, opcionalmente, R5a y R5b estan conectados por un grupo
10 alquileno, alquenileno, alquinileno de 2 a 12 atomos de carbono o puente de alquileno, alquenileno, alquinileno opcionalmente sustituidos de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono pueden estar reemplazados por N, O o S;
R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, ciano, o CO2H; y
15 R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido o amidino.
Ejemplo comparativo 3
En donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, haloalquilo; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden 5 formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, o heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
10 R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo; o cada uno esta sustituido opcionalmente con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; u, opcionalmente, R5a y R5b estan conectados por un grupo alquileno, alquenileno, alquinileno de 2 a 12 atomos de carbono o puente de alquileno, alquenileno, alquinileno opcionalmente sustituido de 2 a 12 atomos de carbono, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser
15 reemplazados por N, O o S;
R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, ciano o CO2H; y
R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido o amidino.
Esquema XIV
Especies que contienen bis-(Boc-alilglicina) (34)
Se enfrio a 0°C una solucion que contenia Boc-L-alil-Gly-OH (0,115 g, 0,53 mmol) y HATU (0,20 g, 0,53 mmoles) en
5 NMP anhidro (3 ml). Despues de 10 min, se anadio diisopropiletilamina (0,1 ml, 0,58 mmoles) con una jeringa. Despues de 5 min, se anadio una solucion que contenia 29 (0,11 g, 0,23 mmoles) en NMP (3 ml) y la mezcla de reaccion se dejo calentar hasta temperatura ambiente durante 16 h, momento en el que el analisis por TLC puso de manifiesto el consumo completo de �29 [analisis de TLC, 5% de MeOH/DCM, Rf (29) = 0,4]. La mezcla de reaccion se diluyo con eter dietilico y se lavo una vez con NaHCO3 acuoso saturado , una vez con HCl acuoso diluido, y dos
10 veces con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC (Dynamax Microsorb C18 60 A 8I, 41,4 mm x 250 mm; caudal 40 ml/min, detector: 254 nm, gradiente 20100% de ACN/agua con 0,1% de AcOH durante 30 min ). Las fracciones que contienen el producto se diluyeron con EtOAc, se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado, se secaron sobre Na2SO4 anhidro , se filtraron, y se concentraron para producir 0,067 g (73%) de 34 en forma de un solido de color amarillo claro. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,06
15 (dd, J = 5,4, 8,7 Hz, 1H), 7,02-6,92 (m, 2H), 5,88-5,79 (m, 1H), 5,42 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,19-5,11 (m, 2H), 4,49 (dd, J = 6,9, 15,9 Hz, 2H), 4,16-4,08 (m, 1H), 3,65-3,41 (m, 3H), 2,75 (t ap, J = 12,9 Hz, 1H), 2,54-2,35 (m, 2H), 1,75-1,68 (m, 3H), 1,46-1,43 (m, 9H), 1,21-1,19 (m, 1H) ppm. Espectro de masas, r/z = 877,7 (M + Na)+.
Esquema XV
20 Producto de metatesis de cierre de anillo (MCA) (35):
A una solucion de 34 (0,067 g, 0,08 mmol) en DCM anhidro (30 ml) se anadio el catalizador de Grubbs de primera generacion (9,2 mg, 0,01 mmol, 12% en moles) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 6 h, en cuyo momento el analisis de TLC puso de manifiesto en su mayoria material de partida. Se anadio a
continuacion a la mezcla de reaccion mas catalizador de Grubbs (7 mg, 0,009 mmol, 11% en moles). Despues de 2 dias, se evaporo el disolvente y se purifico el residuo en bruto por NP-HPLC (SiO2, 20% de hexano/EtOAc a 100% EtOAc durante 20 min) para producir las olefinas deseadas 35 (isomeros olefinicos: 15 mg y 24 mg ) en forma de una mezcla separable de isomeros (geometria de olefinas sin asignar) en forma de solidos de color amarillo 5 claro. [Analisis de TLC, hexano/EtOAc 1:1, Rf (34) = 0,7; Rf (35) = 0,6]. Isomero 35 A: 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,80 (t ap, J = 9,0 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 1,5, 11,07 Hz, 1H), 6,92 (ddd, J = 2,1, 9,3, 11,2 Hz, 1H), 5,62 (d ap, J = 7,8 Hz, 1H), 5,56 (s ancho, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,56-4,47 (m, 2H), 4,12 (d ap, J = 6,9 Hz, 1H), 3,85 (dd, J = 3,6, 13,5 Hz, 1H), 3,52-3,49 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 2,45-2,40 (m, 2H), 1,70-1,64 (m, 4H), 1,44 (s, 9H), 1.7-1.5 (m, 1H) ppm. Espectro de masas, r/z = 849,7 (M+Na)+. Isomero 35 B: 1HRMN (CDCl3 , 300MHz) 5 7,85(s ancho,1H),
10 7,0 (dd, J = 1,5, 9,3 Hz, 1H), 6,92 (ddd, J = 2,4, 9,3, 11,1 Hz, 1H), 5,66 (s ancho, 1H), 5,56 (d ap, J = 7,5 Hz, 1H), 4,80 (s ancho, 1H), 4,62-4,51 (m, 2H), 4,17-4,09 (m, 1H), 3,75-3,52 (m, 3H), 2,69-2,60 (m, 2H), 2,47 (d ap, J = 15,3 Hz, 1H), 1,69 (m, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,18 (m, 1H) ppm. Espectro de masas, r/z = 849,7 (M + Na)+.
Esquema XVI
15 Producto unido a alquilo (36):
A una solucion de isomero A de olefina 35 (15 mg, 0,02 mmol) en EtOAc (5 ml) se anadio 5% de Pd/C (25 mg). La mezcla de reaccion se agito en una atmosfera de H2 utilizando un aparato de Parr (-45-50 PSI). Despues de 2,5 h, el analisis por TLC puso de manifiesto material de partida sin reaccionar. A continuacion se anadio 5% de Pd/C adicional (20 mg) y la mezcla se sometio de nuevo a hidrogenacion utilizando un aparato de Parr. Despues de 1,5 h,
20 la mezcla se filtro a traves de Celite®, y los solidos se aclararon con EtOAc. El filtrado se concentro al vacio para dar 36 en forma de un solido de color amarillo claro.
Isomero B de 35 (24 mg, 0,03 mmol) se sometio a las mismas condiciones de reaccion y a procedimientos de preparacion como los descritos para el isomero A. El producto (36) se combino con el procedente de la hidrogenacion del isomero A. El compuesto 36 se aislo en forma de un solido amarillo claro (35 mg, 85%). [Analisis
25 de TLC, hexano/EtOAc 1:1, Rf (36) = 0,3]. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,85 (dd, J = 5,4, 8,1 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 1,8, 9,9 Hz, 1H), 6,92 (ddd, J = 2,4, 9,2, 11,1, 1H), 5,70 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,79-4,78 (m, 1H), 4,57-4,51 (m, 2H), 4,13-4,09 (m, 1H), 3,75 (dd, J = 3,6, 12,9 Hz, 1H), 3,53-3,41 (m, 2H), 2,49 (t ap, J = 12,3 Hz, 1H), 1,68-1,62 (m, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,08-1,02 (m, 1H), 0,93-0,89 (m, 1H) ppm. Espectro de masas, r/z = 851,7 (M + Na)+.
Esquema XVII
Diamina unida a alquilo libre (37):
Una solucion que contenia 36 (0,035 g, 0,04 mmoles) en DCM (10 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio TFA(1 ml) con una
5 pipeta y la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se hizo el seguimiento hasta que el analisis TLC puso de manifiesto el consumo completo de 36 (- 1 h). Se elimino el disolvente en un evaporador rotatorio y el residuo se disolvio en EtOAc. La solucion de EtOAc se lavo dos veces con NaHCO3 acuoso saturado y una vez con salmuera. Los lavados acuosos combinados se volvieron a extraer con EtOAc y los extractos organicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro , se filtraron, y se concentraron para producir 0,025 g (cuantitativo) de 37 en forma de un
10 solido amarillo que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,92-7,87 (m, 1H), 7,00 (dd, J = 2,1, 9,9 Hz, 1H), 6,91 (ddd, J = 2,4, 9,3, 11,1 Hz, 1H), 4,81 (m, 1H), 4,52 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,13-4,09 (m, 1H), 3,793,76 (m, 2H), 3,42-3,39 (m, 2H), 2,50 (t ap, J = 12,9 Hz, 1H), 1,89 (m, 4H), 1,65-1,61 (m, 3H), 1,33-1,24 (m, 4H), 1,91,03 (m, 1H), 0,94-0,82 (m, 1H) ppm. Espectro de masas, r/z = 315,3 (M + H)+/2; m/z = 629,5 (M + H)+.
15 Esquema XVIII
Macrociclo que contiene bis-[Boc-N(Me)-alanina] (38):
Se enfrio a 0°C una solucion que contenia Boc-N-metil-L-Ala-OH (0,022 g, 0,11 mmol) y HATU (0,03 g, 0,09 mmoles) en NMP anhidro (4 ml). Despues de 10 min, se anadio diisopropiletilamina (0,05 ml, 0,29 mmol) con una 20 jeringa. Despues de 5 min, se anadio una solucion que contenia 37 (0,025 g, 0,04 mmoles) en NMP (3 ml) y la mezcla de reaccion se dejo calentar hasta temperatura ambiente durante 24 h momento en el que el analisis por TLC puso de manifiesto el consumo completo de 37 [analisis de TLC, 5% de MeOH/DCM, Rf (38) = 0,3]. La mezcla de reaccion se diluyo con eter dietilico y se lavo una vez con NaHCO3 acuoso saturado, una vez con HCl acuoso diluido, y dos veces con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y se concentro para dar 38 en forma de
25 un aceite amarillo (35 mg ) que se uso sin purificacion adicional.
Esquema XIX
Mimetico de Smac macrociclico(39):
5 Una solucion que contenia 38 (0,035 g, 0,04 mmoles) en DCM (10 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio TFA(1 ml) con una pipeta y la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se controlo hasta que el analisis TLC puso de manifiesto el consumo completo de 38 (-2 h). Se elimino el disolvente en un evaporador rotatorio y el residuo se disolvio en EtOAc. La solucion de EtOAc se lavo dos veces con NaHCO3 acuoso saturado y una vez con salmuera. Los lavados acuosos combinados se volvieron a extraer con EtOAc y los extractos organicos se secaron
10 sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar 39 en forma de un solido amarillo. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC (Dynamax Microsorb C18 60 A 8I, 41,4 mm x 250 mm; caudal 40 ml/min, detector 254 nm, gradiente de 20-100% de ACN/agua con 0,1% de AcOH durante 30 min) . Las fracciones que contenian el producto se diluyeron con EtOAc y se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado , se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. El material se disolvio en una cantidad minima de ACN, se
15 diluyo con agua, se congelo y se liofilizo para producir 39 en forma de un solido floculante blanco (0,002 g). 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,16 (d ap, J = 8,1 Hz, 1H), 7,90-7,86 (m, 1H), 7,00 (d ap, J = 8,7 Hz, 1H), 6,93 (ddd, J = 3,0, 7,5, 9,0 Hz, 1H), 4,80 (m, 2H ), 4,52 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 3,9, 12,9 Hz, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,11-3.09 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 1,35-1,25 (m, 8H), 1,06 (m, 1H), 0,89 hasta 0,85 (m, 1H) ppm. Espectro de masas, r/z = 400,5 (M)+/2; m/z = 799,7 (M)+: r/z = 821,7 (M + Na +.
20 Ejemplo comparativo 4
En donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, haloalquilo; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino y nitro; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
5 Z es un enlace; un grupo alquileno, alquenileno, alquinileno de 1 a 6 atomos; o, un grupo alquileno, alquenileno, o alquinileno de 1 a 6 atomos de carbono opcionalmente sustituido; un grupo sulfuro (-S-), sulfoxido (-SO-), sulfona (-SO2-) o disulfuro (-SS-); un grupo arilo, arilalquileno, heteroarilo, heteroarilalquileno o un grupo arilo, arilalquileno, heteroarilo, heteroarilalquileno opcionalmente sustituido; un grupo amino o amino sustituido; un atomo de oxigeno;
m y n son independientemente 0, 1, 2, o 3;
10 R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxilo, alcoxi, amino, alquilamino, ciano o CO2H; y
R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido, o amidino.
15 Ejemplo 3
En donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, haloalquilo, o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo o
20 heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo; o cada uno opcionalmente sustituido con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, 25 carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; u, opcionalmente, R5a y R5b estan conectados por un grupo
alquileno, alquenileno, alquinileno de 2 a 12 atomos de carbono o puente de 2 a 12 atomos de carbono de alquileno, alquenileno, alquinileno, opcionalmente sustituido, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados por N, O, o S;
R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, ciano o CO2H; y
R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido o amidino.
Esquema XX
Preparacion de 2-amino-N-[1-(2-{1-[6-(3-{1-[2-(2-amino-propionilamino)-3-metil-butiril]-pirrolidin-2-ilmetil}-indol-1-il)hexa-2,4-diinil]-1H-indol-3-ilmetil}-pirrolidin-1-carbonil)-2-metil-propil]-propionamida (43):
A. Ester terc-butilico del acido (1S-{2-metil-1S-[2S-(1-prop-2-inil-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-carbonil]propilcarbamoil}-etil)-carbamico (41):
A una solucion de 40 (0,150 g, 0,319 mmol) en THF (2 ml) se anadio bromuro de propargilo [0,06 ml, 0,410 mmol, (80% en peso/tolueno)] seguido de NaH [0,015 g, 0,410 mmol, (60% dispersion en aceite mineral)]. La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. Se anadio agua (2 ml) a la mezcla de reaccion y el producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Los extractos de acetato de etilo se lavaron con agua, salmuera y se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purifico por HPLC. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz): 5 8,0 (s, 1H), 7,9 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 9,9 Hz, 1H ), 7,3-7,1 (m, 3H), 6,8 (m, 1H), 4,8 (s, 2H), 4,62 (m 1H), 4,5-4,4 (m 1H), 4,4-4,0 (m, 2H), 3,7-3,5 (m, 2H), 3,4 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,4 (s, 1H), 2,21,8 (m, 4H), 1,48 (s, 9H), 1,35 (d, J = 9,9 Hz, 3H), 1,05 (d, J = 5,5 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 5,5 Hz, 3H) ppm.
B. Ester terc-butilico del acido {1-[1-(2-{1-[6-(3-{1-[2-(2-terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butiril]-pirrolidin-2-ilmetil}indol-1-il)-hexa-2,4-diinil]-1H-indol-3-ilmetil}-pirrolidin-1-carbonil)-2-metil-propilcarbamoil]-etil}-carbamico (42):
A una solucion de 41 (0,040 g, 0,077 mmol) en acetonitrilo (2 ml), se anadio acetato de cobre (II) (0,070 g, 0,385 mmol) y la mezcla de reaccion se sumergio en un bano de aceite precalentado (-100°C. ) y se calento a reflujo durante 5 min. Despues se anadio agua a la mezcla de reaccion (2 ml) y el producto se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml). Los extractos organicos se lavaron con solucion acuosa de NH4OH (5 ml), agua, salmuera y se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron, y se concentraron para proporcionar el producto en bruto. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz): 5 8,0 (s, 2H), 7,9 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 7,3-7,1 (m, 6H), 6,8 (m, 2H), 4,8 (s, 4H), 4,62 (m 2H), 4,5-4,4 (m 2H), 4,4-4,0 (m, 4H), 3,7-3,5 (m, 4H), 3,4 (m, 2H), 2,5 (m, 2H), 2,2-1,8 (m, 8H), 1,48 (s, 18H), 1,35 (d, J = 9,9 H, 6H), 1,05 (d, J = 5,5 Hz, 6H), 0,95 (d, J = 5,5 Hz, 6H ) ppm.
C. 2-amino-N-[1-(2-{1-[6-(3-{1-[2-(2-amino-propionilamino)-3-metil-butiril]-pirrolidin-2-ilmetil}-indol-1-il)-hexa-2,4-diinil]1H-indol-3-ilmetil}-pirrolidin-1-carbonil)-2-metil-propil]-propionamida (43):
A una solucion de 42 (0,030 g, 0,029 mmoles) en DCM (5 ml) se anadio TFA(1 ml) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 30 min. Se anadio a continuacion solucion acuosa de NaHCO3 (3 ml) a la mezcla de reaccion. La mezcla de reaccion se concentro, se diluyo con agua, y el producto se extrajo con DCM (3 x 30 ml). Los extractos organicos se lavaron con agua, salmuera y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. El disolvente se elimino en un evaporador rotatorio y el producto se purifico por HPLC de fase inversa. 1H RMN (DMSO, 300 MHz) 5 8,0 (s, 2H), 7,9 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 7,3-7,1 (m, 6H), 6,8 (m, 2H), 4,8 (s, 4H), 4,62 (m 2H), 4,5-4,4 (m 2H), 4,4-4,0 (m, 4H), 3,7-3,5 (m, 4H), 3,4 (m, 2H), 2,5 (m, 2H), 2,2-1,8 (m, 8H), 1,35 (d, J = 9,9 Hz, 6H), 1,05 (d, J = 5,5 Hz, 6H), 0,95 (d, J = 5,5 Hz, 6H) ppm.
Ejemplo 4
Comparativo Esquema XXI
Preparacion de N-{1-ciclohexil-2-[2-(1-{2-[2-(3-{1-[2-ciclohexil-2(2-metilamino-propionilamino)-acetil]-pirrolidin-2ilmetil}-indol-1-il)-etoxi]-etil}-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-il]-2-oxo-etil}-2-metilamino-propionamida (51):
5 Compuesto (46):
A 0°C, se anadio NaH (60%, 0,025 g, 0,62 mmol) a una solucion de indol 45 (0,17 g, 0,56 mmol) en DMF anhidro (5 ml).Despues de 1 h, se anadieron en rapida sucesion eter bromoetilico (0,16 g, 0,68 mmol) y n-Bu4NCl (0,021 g, 0,05 mmol). La mezcla de reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se continuo agitando lentamente durante 16 h. La reaccion se inactivo mediante la adicion de solucion acuosa saturada de NH4Cl y el producto se 10 extrajo con eter dietilico. Los extractos de eter combinados se lavaron repetidamente con agua para eliminar el exceso de DMF y despues con salmuera y se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se combino con material formado en condiciones similares de reaccion (0,11 g de 45, 0,36 mmol) y se purifico por HPLC en fase normal (10-100% de EtOAc/hexano) para proporcionar 0,18 g de 46 como un aceite incoloro y 0,18 g del indol mono-alquilado. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,75-7,66 (m, 2H), 7,25-7,07 (m, 6H), 6,85
15 6,80 (m, 2H), 4,13 (m, 8H), 3,62 (s ancho, 4H), 3,40-3,15 (m, 4H), 2,63 (m, 2H), 2,04 (s ancho, 4H), 1,53 (s, 18H) ppm.
Compuesto (47):
Se enfrio a 0°C una solucion que contenia 46 (0,18 g, 0,27 mmoles) en DCM (8 ml). Se anadio acido trifluoroacetico (2 ml) y la mezcla de reaccion se mantuvo a 0°C durante 1 h. La reaccion se inactivo mediante la adicion cuidadosa de solucion acuosa saturada de NaHCO3 y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos organicos combinados se lavaron con solucion acuosa de NaHCO3, salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro, y se concentro para proporcionar 0,075 g de 47 en forma de un aceite de color amarillo palido. El producto en bruto se uso directamente en la siguiente reaccion. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 8,49 (s ancho, 2H), 7,57 (d ap., J = 8,2 Hz, 2H), 7,26-7,052 ( m, 6H), 6,82 (s, 2H), 4,11 (m, 8H), 3,57 (m, 4H), 3,29-2,96 (m, 6H), 1,95-1,58 (m, 8H) ppm.
Ester terc-butilico del acido [2-(2-{1-[2-(2-{3-[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-2-ciclohexil-acetil)-pirrolidin-2-ilmetil]indol-1-il}-etoxi)-etil]-1H-indol-3-ilmetil}-pirrolidin-1-il)-1-ciclohexil-2-oxo-etil]-carbamico (48):
A una solucion que contenia N-Boc-ciclohexilglicina (0,09 g, 0,34 mmoles) en NMP anhidro (2 ml) se anadio HATU (0,15 g, 0,38 mmol) y N-metilmorfolina (0,042 g, 0,42 mmol). Despues de 15 min, se anadio 47 (0,075 g, 0,16 mmol) en NMP anhidro (2 ml) y la mezcla de reaccion se agito durante 16 h. La mezcla de reaccion se diluyo con agua y el producto se extrajo con eter dietilico. Los extractos de eter combinados se lavaron repetidamente con agua para eliminar el exceso de NMP, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purifico por HPLC de fase normal (50-100% de EtOAc/hexano) para proporcionar 0,085 mg de 48 en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,87 (d, J = 7,62 Hz, 2H), 7,27-7,10 (m, 6H), 6,84 (s, 2H), 5,36 (d, J = 9,37 Hz, 2H), 4,45 (m, 2H), 4,30 (t ap., J = 6,4 Hz, 2H ), 4,18-4,12 (m, 6H), 3,70-3,58 (m, 6H), 3,35 (dd, J = 14,0, 2,9 Hz, 2H), 2,41 (dt, J = 11,1, 2,3 Hz, 2H), 2,04-1,57 (m, 20H), 1,44 (s, 18H), 1,37-1,07 (m, 10H) ppm.
2-amino-1-(2-{1-[2-(2-{3-[1-(2-amino-2-ciclohexil-acetil)-pirrolidin-2-ilmetil]-indol-1-il}-etoxi)-etil]-1H-indol-3-ilmetil}pirrolidin-1-il)-2-ciclohexil-etanona (49):
Se enfrio a 0°C una solucion que contenia 48 (0,085 g, 0,08 mmoles) en DCM (8 ml). Se anadio acido trifluoroacetico (2 ml) y la mezcla de reaccion se mantuvo a 0°C durante 30 min. Se anadio una porcion adicional de TFA (1 ml) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 h a 0°C. La reaccion se inactivo por adicion cuidadosa de solucion acuosa saturada de NaHCO3 y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos organicos combinados se lavaron con solucion acuosa de NaHCO3, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar 0,068 g de 49 en forma de aceite de color amarillo palido. El producto en bruto se uso directamente en la siguiente reaccion. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,90 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,31-7,12 (m, 6H), 6,84 (t ap, J = 14 Hz, 2H), 4,47 (m, rotamero menor), 4,15 (m, 4H), 3,66-3,36 (m, 8H), 2,80 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,040,83 (m, 30H) ppm.
Amida (50):
A una solucion que contenia N-Boc-N-metilalanina (0,041 g, 0,19 mmol) en NMP anhidro (2 ml) se anadio HATU (0,083 g, 0,21 mmol) y N-metilmorfolina (0,024 g, 0,23 mmol). Despues de 15 min, se anadio 49 (0,068 g, 0,09 mmol) en NMP anhidro (2 ml) y la mezcla de reaccion se agito durante 16 h. La mezcla de reaccion se diluyo con agua y el producto se extrajo con eter dietilico. Los extractos de eter combinados se lavaron repetidamente con agua para eliminar el exceso de NMP, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se combino con material formado en condiciones similares de reaccion (0,05 g 49, 0,06 mmol) y se purifico por HPLC en fase normal (10-100% de EtOAc/hexano) para proporcionar 32 mg de 50 en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (CDCl3 , 300 MHz) 5 7,86 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,27-7,08 (m, 6H), 6,84 (s, 2H), 4,70 (m, 2H), 4,58 (t ap., J = 7,6 Hz, 2H), 4,19 (m, 2H), 4,15-4,04 (m, 6H), 3,76-3,60 (m, 6H), 3,37 (m, 2H), 2,83 (s, 6H), 2,42 (m, 2H), 1,98-1,55 (m, 20H), 1,51 (s, 18H), 1,33 (d, J = 7,0 Hz, 6H), 1,30-0,98 (m, 10H) ppm.
N-{1-ciclohexil-2-[2-(1-{2-[2-(3-{1-[2-ciclohexil-2-(2-metilamino-propionilamino)-acetil]-pirrolidin-2-ilmetil}-indol-1-il)etoxi]-etil}-1H-indol-3-ilmetil)-pirrolidin-1-il]-2-oxo-etil}-2-metilamino-propionamida (51)
Se enfrio a 0°C una solucion que contenia 50 (0,0062 g, 0,055 mmoles) en DCM (8 ml). Se anadio acido trifluoroacetico (2 ml) y la mezcla de reaccion se mantuvo a 0°C durante 1 h. La reaccion se inactivo por adicion cuidadosa de solucion acuosa saturada de NaHCO3 y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos organicos combinados se lavaron con solucion acuosa de NaHCO3, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. Se purifico el producto en bruto por HPLC de fase inversa (10-100% de ACN/agua w/0,1% HOAc) para proporcionar 0,047 g de 51·2HOAc en forma de un solido blanco despues de liofilizacion. 1H RMN (DMSO, 300 MHz) 5 7,91 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,05 (m, 2H), 6,99-6,92 (m, 4H), 4,39 (t ap., J = 6,6 Hz, 2H), 4,15 (m, 6H), 3,57 (m, 4H), 3,52-3,23 (m, 4H), 3,06-2,91 (m, 4H), 2,46 (s, 6H), 2,31 (m, 2H), 2,15 (s, 12H), 1,91-1,65 (m, 12H), 1,55-1,49 (m, 8H), 1,07 (d, J = 7,0 Hz, 6H), 1,16-0,93 (m, 10H) ppm.
Ejemplo 5
En donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, haloalquilo; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
5 R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo,
10 heteroarilo, heteroarilalquilo; o cada uno opcionalmente sustituido con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi o alquiltio; u, opcionalmente, R5a y R5b estan conectados por un grupo alquileno, alquenileno, alquinileno de 2 a 12 atomos de carbono o puente de 2 a 12 atomos de carbono alquileno, alquenileno, alquinileno, opcionalmente sustituido donde uno o mas atomos de carbono pueden reemplazarse por N, O, o S;
15 R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, ciano o CO2H;
R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido, o amidino; y
Wa yWb son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, CN, CO2H.
Comparativo Ejemplo 6
Comparativo
Ejemplo comparativo 5
En donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, haloalquilo; o R8a y R7a y R8b y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
5 R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y R8b y R7a y R7b pueden formar independiente o conjuntamente un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo,
10 heteroarilo, heteroarilalquilo; o sustituidos opcionalmente cada uno con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; o, en algunos casos, los restos de R5a y R5b estan conectados por un grupo alquileno, alquenileno, alquinileno de 2 a 12 atomos de carbono o puente de 2 a 12 atomos de carbono de alquileno, alquenileno, alquinileno, opcionalmente sustituido donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados con N, O, o S;
15 R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, ciano o CO2H;
R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido o amidino;
X es O, N, S, o C=C;
20 Wa es H, Cl, Br, F, alquilo, CN, CO2H;
R11b falta o H, alquilo, alquilo opcionalmente sustituido, hidroxialquilo, alcoxialquilo.
Wb y R11a juntos son un enlace, alquileno, alquenileno, alquinileno, arilo, arilalquileno, arilalquilalquileno, heteroarilo, heteroarilalquileno, o una cadena de 2 a 12 atomos de carbono de alquileno, alquenileno, alquinileno opcionalmente sustituidos, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados con N, O, o S.
En celulas de mamifero la activacion de las caspasas se consigue mediante al menos dos mecanismos independientes que son iniciados por distintas caspasas, pero dan como resultado la activacion de caspasas ejecutoras comunes (efectoras).Ademas del mecanismo activado por el citocromo c (denominado a veces 'ruta intrinseca de muerte'), la "via extrinseca de muerte 'es un mecanismo por el cual la cascada de caspasas se activa a traves de la activacion de un receptor de muerte situado en la membrana celular. Ejemplos de receptores de muerte comprenden DR4, DR5 y FNT-R1 (asi como otros miembros del grupo de FNT de receptores de citocina). Los ligandos correspondientes son de TRAIL y FNT-a, con respeto. La union de la procaspasa-8 al receptor de muerte provoca la activacion automatica en donde el prodominio inhibidor de la procaspasa-8 se escinde y elimina. La caspasa-8 se libera en el receptor y puede entonces activar las caspasas efectoras (caspasa-3, -6, -7), y como en la ruta iniciada por la caspasa-9, el resultado es la division proteolitica de dianas celulares por las caspasas efectoras y la induccion de la apoptosis.
La presente invencion se refiere en general a peptidomimeticos de Smac, a los metodos de preparacion de estos peptidomimeticos de Smac definidos en las reivindicaciones y a sus utilizaciones. En una realizacion de la presente invencion, peptidomimeticos de Smac (en adelante denominados mimeticos de Smac) actuar como agentes quimiopotenciadores. La expresion "agente quimiopotenciador" se refiere a un agente que actua para aumentar la sensibilidad de un organismo, tejido, o celula a un compuesto quimico, o tratamiento es decir, "agentes quimioterapeuticos" o "quimiofarmacos" o radioterapia. Una realizacion de la invencion es la composicion terapeutica de un mimetico de Smac como se define en las reivindicaciones. Una realizacion adicional de la invencion es la composicion terapeutica de dicho mimetico de Smac, que puede actuar como agente quimiopotenciador y un agente biologico o quimioterapeutico o radiacion. Se expone ademas un metodo para inhibir el crecimiento del tumor in vivo mediante la administracion de un peptidomimetico de Smac. Se expone ademas un metodo para inhibir el crecimiento del tumor in vivo mediante la administracion de un mimetico de Smac y un agente biologico o quimioterapeutico o quimiorradiacion. Se expone ademas un metodo de tratamiento de un paciente con un cancer mediante la administracion de mimeticos de Smac de la presente invencion solos o en combinacion con un agente biologico o quimioterapeutico o quimiorradiacion.
Los agentes biologicos y quimioterapeuticos adecuados que se pueden administrar simultaneamente con mimeticos de Smac comprenden agentes alquilantes, alcaloides vegetales, antibioticos antitumorales, antimetabolitos, inhibidores de topoisomerasa, agentes hormonales, FAINE, factores de crecimiento, citocinas, inhibidores mitoticos y combinaciones de estos.
Convenientemente, las celulas estan in situ o en un individuo, y la etapa de contacto se ve afectada por la administracion de una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz del mimetico de Smac en donde el individuo puede estar sometido a la radiacion o quimioterapia simultanea o previa para el tratamiento de una patologia neoproliferativa. Las celulas patogenas son de un tumor tales como, pero sin limitarse a, cancer de vejiga, cancer de mama, cancer de prostata, cancer de pulmon, cancer de pancreas, cancer gastrico, cancer de colon, cancer de ovario, cancer renal, hepatoma, melanoma, linfoma, sarcoma y sus combinaciones. Sin embargo, las celulas tambien pueden ser celulas tumorales inmortalizadas utilizadas en el cultivo de celulas tumorales.
Tambien pueden utilizarse mimeticos de Smac para tratar enfermedades autoinmunitarias. Ademas de los defectos de la apoptosis que se encuentran en los tumores, los defectos en la capacidad de eliminar celulas autorreactivas del sistema inmunitario debido a la resistencia a la apoptosis se considera que desempenan una funcion clave en la patogenia de enfermedades autoinmunitarias. Las enfermedades autoinmunitarias se caracterizan por que las celulas del sistema inmunitario producen anticuerpos contra sus propios organos y moleculas o atacan directamente los tejidos dando como resultado la destruccion de estos ultimos. Un fallo de estas celulas autorreactivas para experimentar apoptosis conduce a la manifestacion de la enfermedad. Defectos en la regulacion de la apoptosis se han identificado en enfermedades autoinmunitarias tales como lupus eritematoso diseminado o la artritis reumatoide.
En una realizacion, el patogeno comprende ademas celulas que proliferan anormalmente, tales como las de cualquier enfermedad o enfermedades autoinmunitarias que son resistentes a la apoptosis debido a la sobreexpresion de IAP o miembros de la familia Bcl-2 de proteinas. Ejemplos de dichas enfermedades autoinmunitarias comprenden pero no se limitan a las enfermedades del colageno, tales como la artritis reumatoide, el lupus eritematoso diseminado, el sindrome de Sharp, el sindrome de CREST (calcinosis, sindrome de Raynaud, dismotilidad esofagica, telangiectasia), dermatomiositis, vasculitis (sindrome de Wegener) y sindrome de Sj�gren, enfermedades renales tales como el sindrome de Goodpasture, la glomerulonefritis que evoluciona rapidamente y la glomerulonefritis membranoproliferativa tipo II, enfermedades endocrinas como la diabetes de tipo I, la poliendocrinopatia autoinmunitaria-candidiasis-distrofia ectodermica (APECED), paratiroidismo autoinmunitario, anemia perniciosa, insuficiencia gonadal, enfermedad idiopatica de Addison, hipertiroidismo, tiroiditis de Hashimoto y mixedema primario, enfermedades de la piel tales como el penfigo comun, penfigoide ampolloso, herpes gestacional, la epidermolisis ampollosa y eritema multiforme mayor, enfermedades del higado, tales como la cirrosis biliar primaria, colangitis autoinmunitaria, hepatitis autoinmunitaria tipo 1, hepatitis autoinmunitaria tipo 2, colangitis esclerosante primaria, enfermedades neuronales, como la esclerosis multiple, miastenia grave, sindrome miastenico de Lambert-Eaton, neuromiotonia adquirida, sindrome de Guillain-Barre (sindrome de M�ller-Fischer), sindrome del hombre rigido, degeneracion cerebelosa, ataxia, opsoclono, neuropatia sensorial y la acalasia, enfermedades de la sangre como la anemia hemolitica autoinmunitaria, purpura trombocitopenica idiopatica (sindrome de Werlhof), enfermedades infecciosas con reacciones autoinmunitarias asociadas, tales como el SIDA, la malaria y la enfermedad de Chagas.
Las composiciones farmaceuticas abarcadas por la presente invencion comprenden una cantidad terapeuticamente eficaz de un mimetico de Smac de la invencion en forma farmaceutica y un vehiculo farmaceuticamente aceptable, en donde el mimetico de Smac inhibe la actividad de un IAP, estimulando por lo tanto, la apoptosis. Otra realizacion de la presente invencion son composiciones que contienen una cantidad terapeuticamente eficaz del mimetico de Smac en la forma farmaceutica y un vehiculo farmaceuticamente aceptable, en combinacion con un agente biologico
o quimioterapeutico y/o radioterapia, en donde el mimetico de Smac inhibe la actividad de un IAP, estimulando asi la apoptosis y aumentando la eficacia de la quimioterapia y/o radioterapia.
Los metodos de preparacion de composiciones farmaceuticas que contienen mimeticos de Smac tambien estan abarcados en la presente invencion y comprenden, pero no se limitan a la combinacion de una cantidad terapeuticamente eficaz del mimetico de Smac con un excipiente farmaceuticamente aceptable.
En una realizacion de la invencion una composicion terapeutica para estimular la apoptosis tiene una cantidad terapeuticamente eficaz de un peptidomimetico de Smac que se une al menos a un IAP. En una realizacion, el IAP puede ser XIAP. En otra realizacion, el IAP puede ser ML-IAP. En otra realizacion, el IAP puede ser CIAP-1 o CIAP
2. En otra realizacion, el IAP puede ser multiples tipos de IAP.
Se describe ademas un metodo de tratamiento de un paciente con una afeccion en necesidad del mismo, en donde la administracion de una cantidad terapeuticamente eficaz de un peptidomimetico de Smac se suministra al paciente, y el peptidomimetico de Smac se une al menos a un IAP. En una realizacion, el IAP puede ser XIAP. Convenientemente, el IAP puede ser ML-IAP. Convenientemente, el IAP puede ser cIAP-1 o cIAP
2. Convenientemente, el IAP puede ser multiples tipos de IAP. El metodo puede comprender ademas la administracion simultanea del agente quimioterapeutico. El agente quimioterapeutico puede ser, pero no se limita a, agentes alquilantes, antimetabolitos, antibioticos antitumorales, taxanos, agentes hormonales, anticuerpos monoclonales, glucocorticoides, inhibidores de la mitosis, inhibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisomerasa II, agentes inmunomoduladores, factores de crecimiento celular, citocinas y compuestos antiinflamatorios no esteroideos.
Los mimeticos de Smac se administran preferiblemente en cantidades eficaces. Una cantidad eficaz es aquella cantidad de un preparado que solo, o junto con otras dosis, produce la respuesta deseada. Esto puede implicar solo retardar la evolucion de la enfermedad temporalmente, aunque preferiblemente, se trata de detener la evolucion de la enfermedad de forma permanente o retrasar la aparicion de la enfermedad o de prevenirla o de que se produzca la enfermedad. El seguimiento de esto se puede hacer por metodos rutinarios. Generalmente, las dosis de compuestos activos serian de aproximadamente 0,01 mg/kg al dia a 1000 mg/kg al dia. Es de esperar que las dosis que van desde 50 a 500 mg/kg sean adecuadas, preferiblemente por via intravenosa, intramuscular o intradermica, y en una o varias administraciones al dia. La administracion del peptidomimetico de Smac puede tener lugar a la vez, despues, o antes de la quimioterapia o la radiacion siempre que el agente quimioterapeutico o la radiacion sensibilice el sistema al peptidomimetico de Smac.
En general, la experimentacion de rutina en ensayos clinicos determinara rangos especificos para el efecto terapeutico optimo para cada agente terapeutico y cada protocolo de administracion, y la administracion a pacientes especificos se ajustara a dentro de margenes eficaces y seguros dependiendo de la afeccion del paciente y la capacidad de respuesta a las administraciones iniciales. Sin embargo, el protocolo de administracion final se regulara segun el criterio del medico considerando factores tales como edad, afeccion y estatura del paciente, las potencias de peptidomimeticos de Smac, la duracion del tratamiento y la gravedad de la enfermedad que se esta tratando. Por ejemplo, una posologia del peptidomimetico de Smac puede ser la administracion oral de 1 mg a 2000 mg/dia, preferiblemente de 1 a 1000 mg/dia, mas preferiblemente de 50 a 600 mg/dia, en dos a cuatro (preferiblemente dos) dosis divididas, para reducir el crecimiento del tumor. La terapia intermitente (p. ej., una de cada tres semanas o tres de cada cuatro semanas) puede utilizarse tambien.
En el caso de que una respuesta en un paciente sea insuficiente a las dosis iniciales aplicadas, las dosis mas altas (o dosis de eficacia mayor por una via de administracion diferente mas localizada) se pueden emplear en la medida en que las tolere el paciente. Se contemplan multiples dosis al dia para conseguir concentraciones generales apropiadas de los compuestos. Generalmente, se utiliza una dosis maxima, es decir, la dosis segura mas alta segun el criterio medico razonable. Cualquier experto en la tecnica entendera, sin embargo, que un paciente puede insistir en una dosis mas baja o una dosis tolerable por razones medicas, razones psicologicas o practicamente por cualquier otra razon.
Se encuentran a disposicion varias vias de administracion. El modo concreto seleccionado dependera, por supuesto, del farmaco quimioterapeutico concreto seleccionado, de la gravedad de la afeccion en tratamiento y de la dosis requerida para la eficacia terapeutica. Los metodos de la invencion, generalmente hablando, pueden ponerse en practica utilizando cualquier modo de administracion que sea medicamente aceptable, lo que significa cualquier modo que produzca concentraciones eficaces de los compuestos activos sin provocar efectos secundarios clinicamente inaceptables. Dichos modos de administracion comprenden, pero no se limitan a, las vias oral, rectal, topica, nasal, intradermica, por inhalacion, intraperitoneal, intravesical o parenteral. El termino "parenteral" comprende la subcutanea, intravenosa, intramuscular o infusion. Las vias intravenosa o intramuscular son particularmente adecuadas por lo que respecta a la presente invencion.
En un aspecto de la invencion, un peptidomimetico de Smac como se describe en la presente memoria, con o sin agentes biologicos o quimioterapeuticos adicionales o radioterapia, no afecta negativamente a los tejidos normales, si bien sensibiliza las celulas tumorales a los protocolos quimioterapeuticos/de radiacion adicionales. Si bien no se desea estar ligado por la teoria, parece que debido a esto la apoptosis inducida especifica del tumor, marcados y los efectos secundarios adversos tales como la vasodilatacion inapropiada o el choque se reducen al minimo. Preferiblemente, la composicion o el metodo se disena para permitir la sensibilizacion de la celula o tumor a la quimioterapia o la radioterapia mediante la administracion de al menos una porcion del peptidomimetico de Smac antes de la quimioterapia o radioterapia. La radioterapia, y/o la inclusion de agentes quimioterapeuticos, puede incluirse como parte del regimen terapeutico para potenciar aun mas la destruccion de celulas tumorales por el peptidomimetico de Smac.
En formas de realizacion alternativas, se administran mimeticos de Smac en combinacion con una segunda forma de terapia que comprende, pero no se limita a la segunda terapia seleccionada de entre radioterapia, inmunoterapia, terapia fotodinamica, quimioterapia y una de sus combinaciones.
Agentes quimioterapeuticos contra el cancer administrados en combinacion con mimeticos de Smac pueden ser cualquier agente terapeutico que se dirija especificamente a tejido tumorigeno o a celulas ycomprenden, pero no se limitan a agentes alquilantes, alcaloides vegetales, antibioticos antitumorales, antimetabolitos, inhibidores de topoisomerasa y como por ejemplo altretamina, busulfan, carboplatino, carmustina, clorambucilo, cisplatino, ciclofosfamida, dacarbazina, hexametilmelamina, ifosfamida, lomustina, melfalan, mecloretamina, oxaliplatino, procarbazina, estreptozocina, temozolomida, tiotepa, uramustine, docetaxel, etoposido, irinotecan, paclitaxel, tenisopida, vincristina, vinblastina, vindesina, vinorelbina, bleomicina, dactinomicina, daunorrubicina, epirrubicina, hidroxiurea, idarrubicina, mitomicina, mitoxantrona, plicamicina, azatioprina, capecitabina, cladribina, citarabina, fludarabina, fluorouracilo, floxuridina, gemcitabina, mercaptopurina, metotrexato, nelarabina, pemetrexed, pentostatina, tioguanina, camptotecina, topotecan, BNP 1350, SN 38, 9-amino-camptotecina, lurtotecan, gimatecan, diflomotecan, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, nemorrubicina, mitoxantrona,loxoxantrona, etoposido y combinaciones de los mismos.
Los mimeticos de Smac descritos en la presente memoria tambien se pueden administrar simultaneamente con agentes inmunoterapeuticos. La inmunoterapia comprende la administracion de un agente inmunologicamente activo seleccionado de entre el bacilo de Calmette-Guerin (BCG), interferon y otros agentes que activan especificamente el sistema inmunitario de los pacientes afectados y sus combinaciones.
Composiciones farmaceuticas.
Otro agente biologico, quimioterapeutico o antineoplasico (mas adelante) y/o radiacion se pueden anadir antes de, junto con, o tras la administracion de un mimetico de Smac. La expresion "vehiculo farmaceuticamente aceptable" como se emplea en la presente memoria significa una o mas cargas, diluyentes o sustancias encapsulantes solidas
o liquidas compatibles que son adecuadas para la administracion a un ser humano. El termino "vehiculo" indica un ingrediente organico o inorganico, natural o sintetico, con el que el ingrediente activo se combina para facilitar la aplicacion. Los componentes de las composiciones farmaceuticas pueden mezclarse con las moleculas de la presente invencion, y entre si, de tal manera que no hay interaccion que perjudique sustancialmente la eficacia farmaceutica deseada.
Los sistemas de administracion de la invencion estan disenados para incluir sistemas de administracion de liberacion prolongada, liberacion retardada o liberacion mantenida de tal manera que la liberacion del peptidomimetico de Smac se produce antes y con tiempo suficiente, para provocar sensibilizacion del sitio a tratar. Un peptidomimetico de Smac puede ser utilizado junto con radiacion y/o agentes quimicos contra el cancer adicionales (anteriormente). Dichos sistemas pueden evitar administraciones repetidas del compuesto peptidomimetico de Smac, aumentando la comodidad para el paciente y el medico, y pueden ser particularmente adecuados para determinadas composiciones de la presente invencion.
Muchos tipos de sistemas de suministro de liberacion estan disponibles y conocidos por cualquier experto en la tecnica y pueden ser utilizados en el contexto de la presente invencion como por ejemplo, pero sin limitarse a los sistemas de base de polimeros tales como poli(lactida-glicolida), copolioxalatos, policaprolactonas, poliesteramidas, poliortoesteres, acido polihidroxibutirico, y polianhidridos. Las microcapsulas de los polimeros anteriores que contienen farmacos se describen en, por ejemplo, la patente de EE.UU.. n° 5.075.109. Los sistemas de administracion tambien comprenden sistemas no polimericos que son: lipidos que comprenden esteroles tales como colesterol, esteres de colesterol y acidos grasos o grasas neutras tales como mono-, di- y tri-gliceridos; sistemas de liberacion de hidrogel; sistemas Sylastic; sistemas a base de peptidos; recubrimientos de cera; comprimido que utilizan aglutinantes y excipientes convencionales; implantes parcialmente fusionados; y similares. Los ejemplos especificos comprenden, pero no se limitan a: (a) sistemas de erosion en los que el compuesto activo esta contenido en una forma dentro de una matriz tales como los descritos en las patentes de EE.UU.. n° 4.452.775, n° 4.667.014,
n° 4.748.034 y n° 5.239.660 y (b) sistemas de difusion en los que un componente activo penetra a una velocidad controlada desde un polimero tal como se describe en las patentes de EE.UU.. n° 3.832.253 y n° 3.854.480.Ademas, los sistemas de suministro de hardware a base de bomba pueden utilizarse, algunos de los cuales estan adaptados para implantacion.
El uso de un implante de liberacion mantenida a largo plazo puede ser deseable. La liberacion a largo plazo, como se emplea en la presente memoria, significa que el implante esta construido y dispuesto para administrar concentraciones terapeuticas del ingrediente activo durante al menos 30 dias, y preferiblemente 60 dias. Los implantes de liberacion sostenida a largo plazo son bien conocidos por cualquier experto en la tecnica y comprenden algunos de los sistemas de liberacion descritos anteriormente.
Las composiciones farmaceuticas pueden presentarse convenientemente en forma de dosificacion unitaria y pueden prepararse por cualquiera de los metodos bien conocidos en la tecnica de la farmacia. Todos los metodos comprenden la etapa de poner el agente activo en asociacion con un vehiculo que constituye uno o mas ingredientes
o excipientes accesorios. En general, las composiciones se preparan asociando uniforme e intimamente el compuesto activo con un vehiculo liquido, un vehiculo solido finamente dividido, o ambos, y a continuacion, si es necesario, dando forma al producto.
En una realizacion de la invencion, los peptidomimeticos dimericos descritos anteriormente se combinan con un excipiente farmaceuticamente aceptable.
Las composiciones adecuadas para administracion parenteral comprenden convenientemente un preparado acuoso esteril de un agente quimiopotenciador (p. ej., peptidomimetico de Smac), que es preferiblemente isotonica con la sangre del receptor. Este preparado acuoso puede formularse segun metodos conocidos usando agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspension. El preparado inyectable esteril puede ser tambien una solucion o suspension inyectable esteril en un diluyente o disolvente atoxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solucion en 1,3-butanodiol. Entre los vehiculos y disolventes aceptables que se pueden emplear estan el agua, solucion de Ringer, y solucion isotonica de cloruro de sodio. Ademas, los aceites fijos esteriles se emplean convencionalmente como un medio disolvente o de suspension. Por lo que respecta a esto, puede emplearse cualquier aceite fijo suave entre ellos mono- o di-gliceridos sinteticos. Ademas, se pueden utilizar acidos grasos tales como acido oleico en la preparacion de inyectables. La formulacion de vehiculo adecuado para las administraciones oral, subcutanea, intravenosa, intramuscular, etc. se puede encontrar en de Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA.
Agentes quimioterapeuticos adicionales.
Los agentes quimioterapeuticos adecuados para su utilizacion en combinacion con la presente invencion, comprenden, pero no se limitan a los agentes quimioterapeuticos descritos en "Modern Pharmacology with Clinical Applications", sexta edicion, Craig y Stitzel, cap. 56, pags. 639-656 (2004). Esta referencia describe farmacos quimioterapeuticos para incluir agentes alquilantes, antimetabolitos, antibioticos antitumorales, productos procedentes de plantas tales como taxanos, enzimas, agentes hormonales tales como glucocorticoides, agentes heterogeneos tales como cisplatino, anticuerpos monoclonales, agentes inmunomoduladores, tales como interferones, y factores de crecimiento celular. Otras clasificaciones adecuadas para los agentes quimioterapeuticos comprenden inhibidores de la mitosis y analogos antiestrogenos no esteroideos. Otros agentes quimioterapeuticos adecuados comprenden inhibidores de toposiomerase I y II, inhibidores de cinasa y cualquier agente capaz de activar la ruta apoptosica extrinseca o intrinseca o la liberacion de Smac de las mitocondrias.
Los ejemplos especificos de agentes biologicos y quimioterapeuticos adecuados comprenden, pero no se limitan a, cisplatino, carmustina (BCNU), 5-fluorouracilo (5-FU), citarabina (Ara-C), gemcitabina, metotrexato, daunorrubicina, doxorrubicina, dexametasona, topotecan, etoposido, paclitaxel, vincristina, tamoxifeno, FNT-alfa, TRAIL, interferon (tanto en sus formas alfa como beta), talidomida y melfalan. Otros ejemplos especificos de agentes quimioterapeuticos adecuados comprenden mostazas de nitrogeno tales como ciclofosfamida, sulfonatos de alquilo, nitrosoureas, etileniminas, triazenos, antagonistas de folato, analogos de purina, analogos de pirimidina, antraciclinas, bleomicinas, mitomicinas, dactinomicinas, plicamicina, alcaloides de la vinca, epipodofilotoxinas, taxanos, glucocorticoides, L-asparaginasa, estrogenos, androgenos, progestinas, hormonas luteinizantes, actetato de octreotida, hidroxiurea, procarbazina, mitotano, hexametilmelamina, carboplatino, mitoxantrona, anticuerpos monoclonales levamisol, interferones, interleucinas, filgrastim y sargramostim. Las composiciones quimioterapeuticas tambien comprenden otros miembros, es decir, aparte de TRAIL, de la superfamilia del FNT de compuestos o agentes tales como BCG que provocan la sintesis de quimiocinas despues del tratamiento intravesical. Los FAINE tambien pueden usarse en combinacion con los mimeticos de Smac de la presente invencion y pueden incluir inhibidores de COX-2 selectivos y no selectivos, celecoxib y rofecoib.
Protocolos de radioterapia
Ademas, el presente peptidomimetico de Smac puede utilizarse en relacion con la quimiorradiacion u otros protocolos de tratamiento del cancer que se utilizan para inhibir el crecimiento de las celulas tumorales. Por ejemplo, pero sin limitarse a, terapia de radiacion (o radioterapia) es el uso medico de la radiacion ionizante como parte del tratamiento del cancer para controlar las celulas malignas es adecuado para su uso en realizaciones de la presente invencion.Aunque la radioterapia se utiliza a menudo como parte del tratamiento curativo, se utiliza en ocasiones como un tratamiento paliativo, cuando la curacion no es posible y el objetivo es para el alivio sintomatico. La radioterapia se utiliza frecuentemente para el tratamiento de tumores. Puede utilizarse como terapia primaria. Tambien es frecuente combinar la radioterapia con cirugia y/o quimioterapia. Los tumores mas frecuentes tratados con radioterapia son el cancer de mama, cancer de prostata, cancer de recto, canceres de cabeza y cuello, tumores ginecologicos, cancer de vejiga y el linfoma. La radioterapia se aplica normalmente solo al area localizada afectada por el tumor. Amenudo, los campos de radiacion tambien comprenden los ganglios linfaticos de drenaje. Es posible, aunque poco frecuente dar radioterapia a todo el cuerpo, o a toda la superficie de la piel. La radioterapia se administra generalmente todos los dias durante un maximo de 35 a 38 fracciones (una dosis diaria es una fraccion). Estas pequenas dosis frecuentes permiten que las celulas sanas vuelvan, a crecer, reparando el dano inflingido por la radiacion. Tres divisiones principales de la radioterapia son la radioterapia de haz externo o teleterapia, braquiterapia o radioterapia de fuente sellada y radioterapia fuente no sellada, que son todos los ejemplos adecuados de protocolo de tratamiento de la presente invencion. Las diferencias se refieren a la posicion de la fuente de radiacion; externa esta fuera del cuerpo, mientras que radioterapia de fuente sellada y no sellada tiene materiales radiactivos suministrados internamente. Las fuentes selladas de braquiterapia se suelen extraer despues, mientras que las fuentes no selladas se inyectan en el cuerpo. La administracion de peptidomimetico de Smac se puede producir antes de, simultaneamente con el protocolo de tratamiento.
La afinidad de union relativa de un tetrapeptido de Smac (AVPI) y un potente mimetico de Smac (Entrada 17) por XIAP BIR-3 se muestra en la La Fig. 1. Esta cifra pone de manifiesto el notable aumento de la afinidad de union, un aumento de 30.000 veces, de la entrada 17 del mimetico de Smac en relacion con el tetrapeptido de Smac.
La vida media de 3 mimeticos de Smac, entrada 1, entrada 122 y la entrada 123, se examino en una rata. La dosis IV para cada mimetico de Smac fue de 1 mg/kg. La Fig. 2 demuestra que la vida media de eliminacion terminal es de hasta aproximadamente 6 horas para los mimeticos de Smac, teniendo la entrada 1 la vida media mas larga.
Agentes biologicos y quimioterapeuticos/antineoplasicos y la radiacion provocan apoptosis al activar las rutas apoptosicas extrinseca o intrinsecas, y dado que los mimeticos de Smac alivian a los inhibidores de proteinas apoptosicas (los IAP) y, por lo tanto, eliminan el bloque en la apoptosis, la combinacion de agentes quimioterapeuticos/antineoplasicos y radiacion con mimeticos de Smac deben actuar sinergicamente para facilitar la apoptosis. Para mostrar los efectos sinergicos de los mimeticos de Smac con agentes quimioterapeuticos comunes, se selecciono un panel de diversas estirpes de celulas tumorales y se ensayaron compuestos representativos de varias clases mecanicistas de agentes quimioterapeuticos, asi como la radiacion gamma.
Un ensayo MTT de 72 horas, como el descrito previamente por Hansen, M. B., Nielsen, S. E., y Berg, K. ((1989) J.. Irrunol. Methods 119, 203-210), se utilizo para diferenciar entre un efecto especifico frente a uno no especifico en la destruccion de celulas por mimeticos de Smac. En resumen, se sembraron celulas SK-OV-3 en placas de 96 pocillos en medio de McCoy que contenia 10% de albumina de suero fetal bovino (20.000 por pocillo) y se incubaron durante la noche a 37°C. Al dia siguiente, se anadieron los compuestos de ensayo a diversas concentraciones (0,003 -10 IM) y las placas se incubaron a 37°C durante 72 horas mas. 50 microlitros de 5 mg/ml de reactivo MTT a continuacion, se anadieron a cada pocillo y las placas se incubaron a 37°C durante 3 horas. Al final del periodo de incubacion, se anadieron 50 microlitros de DMSO a cada pocillo para disolver las celulas y se midio la densidad optica (DO) de los pocillos utilizando un lector de microplacas (Victor2 1420, Wallac, Finlandia) a 535 nm. Se calculo la supervivencia celular (SC) mediante la siguiente ecuacion
SC = (DO de pocillos tratados/media de DO de pocillos de referencia) x 100%
Se probo la entrada 116 de mimetico de Smac usando una estirpe celular de cancer de ovario, SK-OV-3, y celulas MRC-5 se utilizaron como referencia de las celulas normales. La Fig. 3 de muestra que la entrada 116 es 100,000 veces mas eficaz en la destruccion de las celulas tumorales despues de las referencias negativas mientras que las celulas normales (no tumorigenas) permanecen inafectadas.
La CE50 , definida como la concentracion de farmaco que produce 50% de CS, se obtuvo calculando el punto donde la curva de respuesta a la dosis cruza el punto 50% de CS utilizando GraphPad Prism. Estos resultados sugieren que los mimeticos de Smac que se unen a XIAP pueden utilizarse en el tratamiento del cancer, ya sea como monoterapia o en combinacion con agentes quimioterapeuticos.
Tincion con anexina V/yoduro de propidio
Para mostrar la capacidad de los mimeticos de Smac para provocar apoptosis, se realizo la tincion con anexina Visotiocianato de fluoresceina. En resumen como para el protocolo del fabricante (Invitrogen, Carlsbad, CA), las celulas se expusieron a diversas concentraciones de mimeticos de Smac durante 18-24 horas. y a continuacion se retiraron de la placa de ensayo por tripsinizacion. Se sedimentaron las celulas a continuacion y se volvieron a poner en suspension en tampon de ensayo (suministrado por el fabricante). Se anadieron anexina V y yoduro de propidio a los preparados celulares y se incubaron durante 1 hora en la oscuridad a temperatura ambiente. Despues de la incubacion se anadio mas tampon (200 Il) a cada tubo, y las muestras se analizaron inmediatamente por citometria de flujo. En presencia de mimeticos de Smac, se favorecio fuertemente la apoptosis, segun lo evaluado por tincion con anexina/PI y se analizaron por citometria de flujo. La ampliacion en el numero de celulas apoptosicas (cuadrante derecho inferior anexina V positiva/yoduro de propidio negativo) por los antagonistas de IAP en comparacion con la referencia era en funcion de la dosis y debida a la induccion de apoptosis y no por aumento de la proporcion de celulas necrosicas.
Mimetico de Smac con efecto quimiopotenciador utilizando celulas de melanoma que se ha demostrado que son resistentes a los efectos apoptosicos de TRAIL, un farmaco quimioterapeutico (Chawla-Sarkar. Clin. Can�er �es. (2001). Los ensayos para la proliferacion celular (ensayo MTT, Fig. 4) pusieron de manifiesto que cuando celulas MDA-MB-231, estirpe celular de cancer de mama, se trataron con un peptidomimetico de Smac de la invencion, Entrada 1 sola, las celulas eran resistentes a los efectos antiproliferativos del mimetico de Smac de la invencion. Por el contrario, cuando se utilizo la Entrada 1 en combinacion con TRAIL hubo un aumento de 1.000 veces en el efecto antiproliferativo que produce un aumento de 100 veces en la destruccion de celulas detectado por la perdida correspondiente en la formacion de colonias. Un peptidomimetico de referencia (Entrada 62) no pudo sinergizar con TRAIL y los resultados (datos no mostrados) indican que no hay actividad antiproliferativa de la Entrada 62 sola o en combinacion con TRAIL. TRAIL solo provoca poca, si es que alguna, apoptosis de las celulas MDAMB-231 despues de 4 horas. El tratamiento con la Entrada 121 sola tampoco pudo provocar apoptosis significativa (aproximadamente del 10% del total de celulas). Por el contrario, una combinacion de TRAIL con la Entrada 121 dio como resultado un aumento de 4 veces en la actividad apoptosica despues de 4 horas.
La capacidad de las celulas para formar colonias viables se analizo mediante la adicion de diversas concentraciones del compuesto en la presencia y ausencia de 0,4 ng/ml de TRAIL. En resumen, se sembraron celulas a razon de 100 celulas por pocillo en un formato de 12 pocillos en 2 ml de medio de crecimiento. El medio se retira despues de veinticuatro horas y se reemplaza por mimeticos de Smac a diversas concentraciones en medio de crecimiento con DMSO al 1%. Despues de 72 horas de ensayo, las concentraciones se retiran y se reemplazan con 2 ml. de medio de crecimiento. Las placas se devuelven a la incubadora durante 7-10 dias en cuyo periodo las colonias se han multiplicado por al menos 10 celulas por colonia que pueden contarse a simple vista. Las placas se tinen con una solucion de cristal violeta al 0,01% (peso:vol. en H2O) durante treinta minutos. Las placas se lavan con agua del grifo para eliminar cualquier cristal violeta residual, se secan y se cuentan las colonias. Los datos de inhibicion se analizaron usando la ecuacion sigmoidea de dosis-respuesta (pendiente variable) en GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA). El 50% de la concentracion inhibidora (EC50) era la concentracion de farmaco que disminuyo la actividad enzimatica en un 50% con respecto a las muestras de referencia sin farmaco.
Se observo sinergia con topotecan y camptotecina, dos ejemplos de inhibidores de topoisomerasas en un estudio de citotoxicidad en celulas T98G. La mayor cantidad de sinergia es 50-60% mas muerte celular que la que seria de esperar anadir la citotoxicidad de cada compuesto solo. Los resultados demuestran que tanto topotecan como camptotecina puede actuar sinergicamente con un mimetico de Smac de la invencion, tal como la Entrada 1, para una potenciacion de la apoptosis. El volumen sinergico total fue de 457, siendo el sinergismo mayor aproximadamente el 30%-40% mas muerte celular que la que seria de esperar anadiendo juntas las citotoxicidades individuales de Smac y topotecan, entre la Entrada 1 y un inhibidor de topoismerasa, tal como topotecan.
Para evaluar ademas las posibles interacciones farmaco-farmaco una matriz de las permutaciones de diluciones en serie dos veces de cada farmaco y un mimetico de Snac se probaron, asi como la actividad de cada compuesto solo usando un programa llamado MacSynergy II (Prichard, M.N., K.R. Aseltine y C. Shipman, Jr. 1993. MacSynergy II. User's manual. Univ. de Michigan, Ann Arbor). Se probo la sinergia con paclitaxel y el peptidomimetico de Smac Entrada 122 en las celulas OVCAR3. La cantidad mas alta de sinergia detectada es del 10-20%, lo que indica una muerte celular mayor que la que seria de esperar al sumar de la citotoxicidad de cualquier compuesto solo.
Los taxanos son compuestos que inhiben la mitosis obstaculizando la despolimerizacion del husillo a base de microtubulos. Estos datos fueron generados ensayando varias concentraciones de un taxano comun, paclitaxel, y un mimetico de Smac. La dosis de paclitaxel oscilaba entre aproximadamente 0,0 y aproximadamente 500,0 nM. Para la entrada 122, el intervalo de dosis fue aproximadamente de 125,0 a aproximadamente 8.000,0 nM. El volumen sinergico total fue aproximadamente 170.
El mecanismo de accion de los compuestos que contienen platino Se cree que es al unirse al ADN e interferir con su mecanismo de reparacion, que finalmente llevan a la muerte celular. Se probo la sinergia con cisplatino y los peptidomimeticos de Smac en celulas OVCAR-3. La cantidad mas alta de sinergia es 40-50% mas muerte celular que la que seria de esperar al sumar la citotoxicidad de cada compuesto solo. Estos datos fueron generados al probar varias concentraciones de cisplatino y farmacos mimeticos de Smac. Para el cisplatino el intervalo de dosificacion fue de aproximadamente 0,0 a aproximadamente 166.500,0 nM. Para la entrada 122, el intervalo de dosis fue aproximadamente 500,0 a aproximadamente 32.000,0 nM. El volumen sinergico total fue aproximadamente
434. Pruebas similares se realizaron con la combinacion de carboplatino y mimeticos de Smac. La sinergia entre un peptidomimetico de Smac, Entrada 122, y carboplatino.
Esta potente sinergia hace posible la utilizacion de los peptidomimeticos de Smac, que son antagonistas de IAP, para mejorar la eficacia de los compuestos antitumorales comercializados (tales como, pero sin limitarse a paclitaxel, cisplatino y carboplatino). Esta efectuado permitira la reduccion de la dosis requerida de los compuestos antitumorales mal tolerados y/o mejorar la velocidad de respuestas a las dosis comercializadas.
La presente invencion no se limita a las realizaciones descritas y ejemplificadas anteriormente, sino que es capaz de variaciones y modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (17)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de la formula siguiente:
    en donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo o haloalquilo; o R8a y R7a forman un anillo tal 5 como un anillo de aziridina o azetidina y R8b y R7b forman un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina;
    R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, en donde cada alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo esta opcionalmente sustituido con halogeno, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino, y nitro; o R8a y R7a forman un anillo tal como un anillo de aziridina o azetidina y R8b y R7b forman un anillo tal como un anillo de
    10 aziridina o azetidina;
    R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo; cada uno opcionalmente sustituido con hidroxilo, mercapto, halogeno, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o alquiltio; u, opcionalmente, R5a y R5b estan conectados por un grupo alquileno, alquenileno, alquinileno de 2 a 12 atomos de carbono o puente de 2 a 12 atomos de carbono de alquileno,
    15 alquenileno, alquinileno, opcionalmente sustituido, donde uno o mas atomos de carbono pueden ser reemplazados por N, O, o S;
    R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son independientemente H, Cl, Br, F, alquilo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, ciano o CO2H;
    y
    20 R3a y R3b son independientemente H, halogeno, alquilo, arilo, arilalquilo, amino, arilamino, arilalquilamino, hidroxi, alquiloxi, ariloxi, arilalquilhidroxi, dialquilamino, amido, sulfonamido o amidino,
    en donde alquilo significa un grupo ramificado o no ramificado, saturado o insaturado, tal como alquenilo o alquinilo, que tiene hasta 12 atomos de carbono a menos que se especifique lo contrario,
    en donde amino indica aminas primarias, secundarias y terciarias,
    25 en donde alquenil comprende un radical hidrocarburo ramificado, hidrocarburo ciclico o hidrocarburo no ramificado de 2 a 30 atomos de carbono que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono, y
    en donde alquinil se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene 2 a 12 atomos de carbono y al menos un triple enlace.
  2. 2. El compuesto segun la reivindicacion 1, en donde R7a y R7b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo o 30 haloalquilo.
  3. 3.
    El compuesto segun la reivindicacion 1, en donde R8a y R8b son independientemente H, hidroxilo, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo o heteroalquilo.
  4. 4.
    El compuesto segun la reivindicacion 1, en donde R5a y R5b son independientemente H, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo.
    35 5. Un compuesto segun la reivindicacion 1 seleccionado del grupo consistente en:
  5. 6. Una composicion farmaceutica que comprende:
    un compuesto reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
  6. 7. Un compuesto reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para su utilizacion en la provocacion de 5 apoptosis en una celula.
  7. 8. Un compuesto segun la reivindicacion 7 para su utilizacion en el tratamiento de enfermedades seleccionadas de los trastornos del desarrollo, el cancer, las enfermedades autoinmunitarias, enfermedades que son resistentes a la apoptosis debido a la sobreexpresion de los IAP o a miembros de la familia de proteinas Bcl-2 y trastornos neurodegenerativos.
    10 9. Un compuesto segun la reivindicacion 8 para su utilizacion en el tratamiento de cancer de vejiga, cancer de mama, cancer de prostata, cancer de pulmon, cancer pancreatico, cancer gastrico, cancer de colon, cancer de ovario, cancer renal, hepatoma, melanoma, linfoma, sarcoma y sus combinaciones.
  8. 10. Un compuesto segun la reivindicacion 8 para su utilizacion en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias.
  9. 11.
    Un compuesto para su utilizacion en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias segun la reivindicacion 10 15 en donde la enfermedad autoinmunitaria se selecciona de entre enfermedades del colageno, enfermedades renales,
    enfermedades endocrinas, enfermedades de la piel, enfermedades del higado, enfermedades neuronales, enfermedades de la sangre y enfermedades infecciosas con reacciones autoinmunitarias asociadas.
  10. 12.
    Un compuesto para su utilizacion en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias segun la reivindicacion 11 en donde dicha enfermedad autoinmunitaria es la artritis reumatoide, el lupus eritematoso diseminado, el sindrome 5 de Sharp, el sindrome de CREST (calcinosis, sindrome de Raynaud, dismotilidad esofagica, telangiectasia), dermatomiositis, vasculitis (sindrome de Wegener), sindrome de Sj�gren, sindrome de Goodpasture, la glomerulonefritis que evoluciona rapidamente y la glomerulonefritis membranoproliferativa tipo II, la diabetes tipo I, la poliendocrinopatia autoinmunitaria-candidiasis-distrofia ectodermica (APECED), paratiroidismo autoinmunitario, anemia perniciosa, insuficiencia gonadal, enfermedad idiopatica de Addison, hipertiroidismo, tiroiditis de Hashimoto, 10 mixedema primario, penfigo comun, penfigoide ampolloso, herpes gestacional, epidermolisis ampollosa, eritema multiforme mayor, cirrosis biliar primaria, colangitis autoinmunitaria, hepatitis autoinmunitaria tipo 1, hepatitis autoinmunitaria tipo 2, colangitis esclerosante primaria, esclerosis multiple, miastenia grave, sindrome miastenico de Lambert-Eaton, neuromiotonia adquirida, sindrome de Guillain-Barre (sindrome de M�ller-Fischer), sindrome del hombre rigido, degeneracion cerebelosa, ataxia, opsoclono, neuropatia sensorial, acalasia, anemia hemolitica
    15 autoinmunitaria, purpura trombocitopenica idiopatica (sindrome de Werlhof), SIDA, malaria o la enfermedad de Chagas.
  11. 13. Un compuesto de formula
    en donde los grupos R, R1, R2, W, X, R3, R4 y R5 se definen de la forma siguiente:
  12. 14. Un compuesto de formula: 15. Un compuesto de formula:
    en donde X es 1,4-fenil; R2 es terc-butil, R1 es metil y R es hidrogeno o metil, o R2 es terc-butil, R1 es etil y R es hidrogeno; o R2 es isopropil, R y R1 son ambos metil, o R es hidrogeno y R1 es etil.
  13. 16. Un compuesto de formula
    en donde los grupos R, R1, R2, X, W, R6, R7 y R8 son de la forma siguiente: 17. Un compuesto de formula
    en donde R y R1 son cada uno metil y R2 es terc-butil o c-hexil.
  14. 18. Un compuesto de formula
    en donde los grupos R, R1, R2, Y, R3, R4, R5, R6 y R7 estan definidos de la forma siguiente: 19. El compuesto de formula
  15. 20. El compuesto de formula 21. El compuesto de formula
  16. 22.
    Una composicion farmaceutica que comprende: un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 21; y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
  17. 23.
    Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 21 para su utilizacion en la provocacion de apoptosis en una celula.
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