ES2298415T3 - Nuevo peptido sy. - Google Patents
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Abstract
Un péptido SY que posee las siguientes propiedades físico-químicas: (A) Peso molecular: 200 a 10.000 (medido mediante cromatografía líquida de alta resolución: ASAHIPAK GS- 320); (B) Punto de fusión: se colorea y descompone a 138 ñ 3 ¿ C; (C) Solubilidad en disolventes: fácilmente soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y hexano; (D) Aspecto: polvo blanco o de color amarillo pálido; (E) Condición del líquido (pH): 4,0 a 6,0; (F) Componentes: agua del 1 al 5% en peso (método de secado por calor a presión normal); proteínas de 84 a 94% en peso (método de Micro-Kjeldahl); lípidos 0,5% en peso o menos (método de extracción de Soxhlet); cenizas 4 ñ 2% en peso (método de incineración directo); Na del 1 al 3% en peso (espectrometría de absorción atómica); (G) Propiedades fisiológicas: contiene el dipéptido Val-Tyr y posee una actividad inhibidora de la ECA; (H) Espectro de absorción infrarrojo: Fig. 3; (I) Espectro de absorción ultravioleta: Fig. 4.
Description
Nuevo péptido SY.
La presente invención se refiere a un nuevo
péptido SY, y a agentes reductores de la presión sanguínea y
alimentos funcionales en la reducción de la presión sanguínea en
los que se emplea el péptido SY para la depresión de la presión
sanguínea. Además, se refiere al péptido SY-MD
contenido en el péptido SY y a un método para la separación del
mismo.
\vskip1.000000\baselineskip
Los inventores de la presente invención ya
consiguieron con anterioridad desarrollar un nuevo péptido
\alpha-1000 que poseía una ECA (enzima de
conversión de la angiotensina) - que inhibe su actividad mediante
carne de pescado desnaturalizada térmicamente, inactivando la
enzima autolítica, hidrolizándola con una proteasa, inactivando la
enzima y separando el péptido \alpha-1000 a
continuación, y ya tienen concedidos sus derechos de patente (núm.
de patente japonesa 3117779:
JP-A-5-271297).
El documento
EP-A-1 094 071 describe el péptido
Val-Tyr, y el péptido Y-2, que
poseen una actividad antihipertensiva, obtenido después de la
elución del péptido \alpha-1000 con el 10% de
solución de etanol acuoso.
\vskip1.000000\baselineskip
Con el incremento de las enfermedades
relacionadas con el estilo de vida, se está demandando el
desarrollo de nuevos componentes innovadores que resulten efectivos
en evitar el desencadenamiento de la hipertensión o en rebajar la
presión sanguínea entre los profesionales expertos en materia, y la
invención se ha desarrollado para satisfacer la demanda de los
profesionales expertos en materia.
\vskip1.000000\baselineskip
Los inventores de la presente invención han
llevado a cabo las investigaciones desde distintos aspectos para
alcanzar los objetivos que anteceden.
En consecuencia, los inventores de la presente
invención volvieron a centrarse en el péptido inhibidor de la ECA
\alpha-1000 desarrollado por ellos, y realizaron
estudios minuciosos en distintas fracciones. Como resultado de
ello, descubrieron por primera vez que una fracción con un mayor
contenido en dipéptidos Val-Tyr exhibía una mayor
actividad inhibidora de la ECA, e identificaron que este dipéptido
Val-Tyr es uno de los componentes principales de
los péptidos reductores de la presión sanguínea.
En base al nuevo e interesante descubrimiento
que antecede, decidieron desarrollar inmediatamente una nueva
mezcla de péptidos que no tuviera solamente un alto contenido en
Val-Tyr, sino que fuera también menos ácida y
tuviera también un excelente sabor y estabilidad, así que
dirigieron un proceso en el que se trata con una resina para la
adsorción de péptidos (resina ODS) una mezcla de péptidos (es
decir, del péptido \alpha-1000) obtenida
procesando la carne de pescado con una proteasa, y se somete a una
elución en tres pasos, es decir: elución en agua, elución con una
solución acuosa de etanol y otra elución en agua. Como consecuencia
de ello, consiguieron hallar un nuevo e interesante descubrimiento
en el que se recupera la mayor parte del Val-Tyr
contenido en los péptidos de la carne de pescado en la última
fracción de la primera elución en agua, la fracción que va del 11
al 18% en volumen de la elución de la solución acuosa de etanol y
de la fracción de la última elución en agua.
Con este fin, se proporciona un péptido
denominado SY que posee las siguientes propiedades
físico-químicas:
(A) Peso molecular: 200 a 10.000 (medido
mediante cromatografía líquida de alta resolución: ASAHIPA1C
GS-320);
GS-320);
(B) Punto de fusión: se colorea y descompone a
138 \pm 3°C;
(C) Solubilidad en disolventes: fácilmente
soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y
hexano;
(D) Aspecto: polvo blanco o de color amarillo
pálido;
(E) Condición del líquido (pH): 4,0 a 6,0;
(F) Componentes:
agua del 1 al 5% en peso (método de secado por
calor a presión normal);
proteínas de 84 a 94% en peso (método de
Micro-Kjeldahl);
lípidos 0,5% en peso o menos (método de
extracción de Soxhlet);
cenizas 4 \pm 2% en peso (método de
incineración directo);
Na del 1 al 3% en peso (espectrometría de
absorción atómica);
(G) Propiedades fisiológicas: contiene el
dipéptido Val-Tyr y posee una actividad inhibidora
de la ECA;
(H) Espectro de absorción infrarrojo: Fig.
3;
(I) Espectro de absorción ultravioleta: Fig.
4.
Preferiblemente, el péptido SY se produce
recogiendo y mezclando los componentes del péptido resultantes del
fraccionamiento de la elución de una solución de péptidos con una
resina para la adsorción de péptidos utilizando agua, una solución
acuosa de etanol y agua en este orden como eluyentes del
fraccionamiento de la elución, en el que los componentes del
péptido, en forma de patrón de la elución, se muestran en la Fig.
1, se obtiene una última fracción de la elución en agua (1), una
fracción que va del 11 al 18% en volumen de la elución en etanol y
una fracción de la elución en agua (2) mediante los eluyentes
respectivos según se define a continuación:
(1) última fracción de la elución en agua (1):
fracción que se obtiene utilizando agua como eluyente a partir de
un tiempo en que el contenido de sodio (Na) del conjunto de la
fracción del péptido en elución (el péptido SY) es de 1 a 3 g/100 g
hasta una determinada hora de recogida final de la última fracción
en la elución en agua (1) cuando el contenido de sodio es
sustancialmente de 0 g/100 g.
(2) fracción de la elución en etanol: fracción
que se obtiene después de utilizar la solución acuosa de etanol
que posee una concentración que va del 11 al 18% en volumen como
eluyente hasta que una cantidad de péptido eluido haya superado un
pico y es reducida hasta aproximadamente la mitad del pico.
(3) fracción de la elución en agua (2): fracción
que se obtiene tras haber utilizado agua como eluyente hasta que
se completa el fraccionamiento de la elución.
Más preferiblemente aún, el péptido SY se
produce utilizando una solución acuosa de péptido
\alpha-1000 procedente de la carne de pescado y
que posee las siguientes propiedades
físico-químicas como solución de péptido.
(a) Peso molecular: 200 a 10.000 (medido
mediante cromatografía en columna Sephadex
G-25);
(b) Punto de fusión: se colorea a 119°C (punto
de descomposición);
(C) Potencia de rotación específica:
[\alpha]_{D}^{20} = -22°
(D) Solubilidad en disolventes: fácilmente
soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y
hexano;
(E) Diferenciación en ácido, carácter básico o
neutro: neutro;
(F) Aspecto, componentes: polvo blanco: agua
5,14% (método de secado por calor a presión reducida); proteínas
87,5% (método de Kjeldahl con un coeficiente de conversión de
nitrógeno/proteína de 6,25); lípidos 0% (método de extracción de
Soxhlet); cenizas 5,0% (método de incineración directo);
(G) Característica: mezclas de péptidos
procedentes de la carne de pescado y obtenidos mediante el
calentamiento de la carne de pescado para inactivar su enzima
autolítica y la hidrolización de la carne resultante con una
proteasa.
proteasa.
Asimismo, la invención se refiere a un agente
reductor de la presión sanguínea que se caracteriza por contener,
como principio activo, el péptido SY tal y como se ha definido
anteriormente.
Además la invención se refiere a un alimento
funcional en la reducción de la presión sanguínea caracterizado por
el hecho de que el alimento es el péptido SY tal y como se ha
definido anteriormente, o bien contiene dicho péptido SY.
De forma adecuada, el alimento mencionado
anteriormente es en forma líquida o sólida.
De este modo, se confirmó que una mezcla de la
última fracción de la primera elución en agua, la fracción que va
del 11 al 18% en volumen de la elución de la solución acuosa de
etanol y la fracción de la última elución en agua es una mezcla de
péptidos completamente novedosa en la reducción de la presión
sanguínea, que no tiene solamente un alto contenido en
Val-Tyr, sino que también es menos ácida y tiene un
excelente sabor y también una excelente estabilidad. Esta se
identificó como una mezcla de péptidos novedosa, y en este caso se
designó como péptido
SY.
SY.
Además, en esta invención, se ha aislado y
analizado solo la fracción que va del 11 al 18% en volumen de la
elución de la solución acuosa de etanol. Posteriormente, se obtuvo
una nueva mezcla de péptidos que poseía un contenido en Na bastante
bajo, desde el 0,1 hasta el 0,2% (en el péptido SY, el contenido en
Na es del 1 al 3%), y esta fracción se designó como péptido
SY-MD.
\vskip1.000000\baselineskip
La Fig. 1 es un gráfico en el que se muestra un
patrón de elución del péptido SY según el Ejemplo 1.
En la Fig. 2 se muestra el peso molecular del
péptido SY.
En la Fig. 3 se muestra el espectro de absorción
infrarrojo del péptido SY.
En la Fig. 4 se muestra el espectro de absorción
ultravioleta del péptido SY.
En la Fig. 5 se muestra el espectro de absorción
ultravioleta del péptido \alpha-1000.
En la Fig. 6 se muestra el espectro de absorción
infrarrojo del péptido \alpha-1000.
En la Fig. 7 se muestra un espectro de absorción
ultravioleta del péptido SY-MD. (En la Fig. 1 se
hace referencia al péptido SY-MD como "péptido
SY" o "péptido Y-2").
En la Fig. 8 se muestra el espectro de absorción
infrarrojo del péptido SY-MD.
En la invención, los estudios se han realizado
para recuperar continuamente una mezcla de péptidos que posee un
contenido de Val-Tyr tan alto como sea posible
utilizando el péptido \alpha-1000 como material de
partida.
En consecuencia, tras haber tratado el péptido
\alpha-1000 con una resina ODS, se obtuvo una
parte de una fracción (última fracción) eluida con la adición de
agua, y posteriormente se obtuvo a continuación una fracción
eluida con la adición de una solución acuosa de etanol. En ese
momento, se descubrió que puesto que permanece una parte del agua
utilizada en la elución en agua (1), la concentración de etanol
debe ir del 11 al 18% en volumen, preferiblemente del 14 al 16% en
volumen.
Además, al obtenerse el péptido SY, se
especificaron o se tomaron en cuenta respectivamente un tiempo de
partida de recogida en la recogida de la pretendida última fracción
de la elución en agua (1), un tiempo de finalización de la misma
(es decir, un tiempo de partida de la elución de la solución acuosa
de etanol) y un tiempo de finalización de la elución de la solución
acuosa de etanol (tiempo de partida de la elución en agua (2)) y un
tiempo de finalización de la elución en agua (2) mediante la
medición o control del tiempo de fraccionamiento, del contenido en
sales, de la absorción de Bx y UV a una longitud de onda de 280 nm
para establecer un proceso para producir el péptido SY mediante un
determinado sistema continuo. En base a estos nuevos e interesantes
descubrimientos, se realizaron aún más estudios. Al final, se
completó la invención.
Las propiedades físico-químicas
del péptido SY de la invención se muestran a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
(A) Peso molecular: 200 a 10.000 (medido
mediante cromatografía líquida de alta resolución: ASAHIPAK
GS-320): Fig. 2.
(B) Punto de fusión: se colorea y descompone a
138 \pm 3°C.
(C) Solubilidad en disolventes: fácilmente
soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y
hexano.
(D) Aspecto: polvo blanco o de color amarillo
pálido.
(E) Condición del líquido (pH): 4,0 a 6,0
(F) Componentes: agua del 1 al 5% en peso
(método de secado por calor a presión normal);
proteínas de 84 a 94% en peso (método de
Micro-Kjeldahl);
lípidos 0,5% en peso o menos (método de
extracción de Soxhlet);
cenizas 4 \pm 2% en peso (método de
incineración directo).
(G) Propiedades fisiológicas: contiene el
dipéptido Val-Tyr y posee una actividad inhibidora
de la ECA.
(H) Espectro de absorción infrarrojo: Fig.
3.
(I) Espectro de absorción ultravioleta: Fig.
4.
(J) Potencia de rotación específica:
[\alpha]_{D}^{20} = -40° a -51°.
El péptido SY de la invención se produce del
siguiente modo.
Es decir, el péptido SY se produce recogiendo y
mezclando los componentes del péptido resultantes del
fraccionamiento de la elución de una solución de péptidos con una
resina para la adsorción de péptidos utilizando agua, una solución
acuosa de etanol y agua en este orden como eluyentes del
fraccionamiento de la elución, en el que los componentes del
péptido, en forma de patrón de la elución, se muestran en la Fig.
1, se obtiene mediante los respectivos eluyentes una última
fracción de la elución en agua (1), una fracción que va del 11 al
18% en volumen de la elución en etanol \alpha-(la elución con el
15% en volumen de la solución acuosa de etanol se muestra en la
Fig. 1) y una fracción de la elución en agua (2) tal y como se
define a continuación.
- (1)
- última fracción de la elución en agua (1): fracción que se obtiene utilizando agua como eluyente a partir de un tiempo en que el contenido de sodio (Na) del péptido (el péptido SY) en la elución en agua es de 1 a 3 g/100 g hasta una determinada hora de recogida final de la última fracción en la elución en agua (1) cuando el contenido de sodio es sustancialmente de 0 g/100 g.
- (2)
- fracción que va del 11 al 18% en volumen de la elución en etanol: fracción que se obtiene después de utilizar la solución acuosa de etanol que posee una concentración que va del 11 al 18% en volumen como eluyente hasta que una cantidad de péptidos eluidos haya superado un pico y es reducida hasta aproximadamente la mitad del pico. (Se aísla y designa solo esta fracción como péptido SY-MD.).
- (3)
- fracción de la elución en agua (2): fracción que se obtiene tras haber utilizado agua como eluyente hasta que se completa el fraccionamiento de la elución.
Se describe a continuación el péptido
\alpha-1000 que es el material de partida del
péptido SY de la invención.
El péptido \alpha-1000 se
produce utilizando pescado y marisco como materias primas. Por
ejemplo, este puede producirse de conformidad con la Patente núm.
3117779. En primer lugar, el pescado y marisco se procesa en
colectores de carne, deshuesadoras o aparatos similares para
separar su carne. Es preferible que las materias primas sean tan
frescas como sea posible. La carne de pescado separada, se pica y
se divide en una pluralidad de porciones de carne de pescado picada
que pesan aproximadamente 10 kg cada una, y estas porciones de
carne pueden someterse tal cual al siguiente tratamiento. También
es recomendable que estas se congelen rápidamente con un rociado de
aire frío comprendido entre -20 y -50°C, por ejemplo,
aproximadamente -30°C, y se almacenen a una temperatura comprendida
entre -20 y -25°C y que se utilizan según se requiera por las
circunstancias.
Al igual que el pescado y marisco, pueden
utilizarse de forma adecuada los peces con pulpa roja, tales como
la sardina, el saurel, el atún, el bonito, la paparda y el jurel,
los peces con pulpa blanca, tales como la platija, el besugo, el
abichón, el sábalo, el bacalao, el arenque y la limanda, los peces
cartilaginosos tales como el tiburón y la raya, los peces de agua
dulce tales como el eperlano de estanque, la carpa, el salvelino y
la "yamame" (una especie de trucha), y los peces de aguas
profundas tales como el pejesapo y el rape, la gamba, el cangrejo,
el pulpo, la cigala y otros similares.
La carne de pescado y marisco recogida se pica
con una picadora de carne o herramienta similar, y se añade agua
en una cantidad que va desde 1/2 a 20 veces, preferiblemente desde
1 a 10 veces la materia prima en peso. A continuación, esta se
trata con calor de modo que se inactiva la enzima autolítica, se
destruyen las bacterias y se desnaturaliza térmicamente la
proteína, por lo que se incrementa la eficiencia de la reacción
enzimática posterior. Como condiciones de calentamiento, puede
aplicarse cualesquiera otras condiciones mientras dichas funciones
se lleven a cabo. Por ejemplo, las condiciones son 65°C o más y
desde 2 hasta 60 minutos, preferiblemente 80°C o más y desde 5
hasta 30 minutos.
A continuación, se añade a la misma un agente
alcalino como puede ser el amoniaco acuoso o una solución acuosa de
sodio (potasio) hidróxido para regular el pH hasta un valor
adecuado de la proteasa que se va a utilizar (por ejemplo, pH de
7,5 o más, preferiblemente de 8 o más para una proteasa alcalina).
La carne se calienta a una temperatura adecuada dependiendo de la
enzima (esta varia según la enzima que se va a utilizar, pero
oscila de 20 a 65°C; de 35 a 60°C, preferiblemente de 40 a 55°C
para una proteasa alcalina), y se trata añadiendo la proteasa
durante un tiempo que oscila desde 30 minutos hasta 30 horas (desde
30 minutos hasta 25 horas, preferiblemente desde 1 hasta 17 horas
para una proteasa alcalina).
\newpage
Pueden utilizarse como proteasa todas las
enzimas que son capaces de degradar una proteína en condiciones
neutras o alcalinas tanto individualmente como en combinación entre
ellas. Las proteasas pueden proceder no solamente de los animales y
vegetales sino también de los microorganismos. Pueden utilizarse
ampliamente la pepsina, la renina, la tripsina, la quimotripsina,
la papaina y la bromelaina, así como las proteasas bacterianas, las
proteasas filamentosas, las proteasas actinomiceliales y otras
similares. En general, estas enzimas suelen estar disponible en el
mercado. Dependiendo de sus finalidades, también pueden utilizarse
las enzimas sin purificar y las enzima sólidas o líquidas que
contienen substancias tales como las enzimas que contienen cultivos
y koji. La cantidad de enzima que debe añadirse puede estar
comprendido entre el 0,1% y el 5,0%.
Según sea necesario, se neutraliza la carne, y
se conserva a continuación a una temperatura de 70°C
(preferiblemente 80°C) o más durante un tiempo que oscila de 2 a 60
minutos (preferiblemente de 5 a 30 minutos) para inactivar la
enzima y facilitar su separación posterior. Después de la
inactivación por calentamiento, se separan las impurezas gruesas
con un tamiz vibratorio o herramienta similar, y el producto
resultante se trata con un yector según sea necesario, y a
continuación se somete a ultracentrifugación para eliminar las
impurezas flotantes y las impurezas por precipitación.
Posteriormente, el producto se filtra utilizando
un ayudafiltro de tierra diatomácea u otros similares (por ejemplo,
celita), y el filtrado se procesa con carbón activo (en una
cantidad que va desde el 0,05 hasta el 20% en peso/volumen,
preferiblemente desde el 0,1 hasta el 10 en peso/volumen; desde 20
hasta 65°C, preferiblemente desde 25 hasta 60°C; desde 15 minutos
hasta 4 horas, preferiblemente desde 30 minutos hasta 2 horas) para
desodorizarlo, descolorarlo y purificarlo.
Este producto suele estar concentrado (a
aproximadamente 30 Bx) de forma habitual, por ejemplo, sometiéndolo
a presión reducida (de 0 a 50°C). Luego, según sea necesario, este
producto se vuelve a someter a (ultra)centrifugación o
filtración para obtener una solución de péptido. La solución de
péptido obtenida de este modo, se esteriliza [mediante UHTST
(Temperatura Ultra Alta y Corto Tiempo; un tipo de esterilizador) o
mediante cualquier otro modo habitual], y a continuación se llena
en envases para suministrar el producto
(\alpha-1000 (líquido)). Si fuera necesario, este
también puede concentrarse aún mas o bien diluirse, asimismo puede
pulverizarse de forma habitual dentro de un producto en polvo de 60
mallas aproximadamente, por ejemplo, mediante un secado por
pulverización o liofilización, y el polvo puede envasarse en
envases como bolsas o sobres para suministrar el producto
(\alpha-1000 (polvo)). De estos productos, el
producto líquido se enfría o congela y almacena, mientras que el
producto en polvo se almacena en un lugar fresco, seco y
oscuro.
El péptido líquido, en pasta o en polvo obtenido
de este modo es \alpha-1000.
Las propiedades físico-químicas
del péptido \alpha-1000 (polvo secado por
pulverización) son las que se muestra a continuación. Propiedades
físico-químicas del péptido
\alpha-1000 (polvo)
- (A)
- Peso molecular: 200 a 10.000 (medido mediante cromatografía en columna Sephadex G-25)
- (B)
- Punto de fusión: Se colorea a 119°C (punto de descomposición);
- (C)
- Potencia de rotación específica: [\alpha]_{D}^{20} = -22°
- (D)
- Solubilidad en disolventes: fácilmente soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y hexano.
- (E)
- Diferenciación en ácido, carácter básico o neutro: Neutro, pH desde 6,0 hasta 8,0 (10% de solución acuosa)
- (F)
- Espectro de absorción ultravioleta: Fig. 5
- (G)
- Espectro de absorción infrarrojo: Fig. 6
- (H)
- Aspecto, componentes; Polvo blanco; agua 5,14% (método de secado por calor a presión reducida); proteínas 87,5% (método de Kjeldahl con un coeficiente de conversión de nitrógeno/proteína de 6,25); lípidos 0% (método de extracción de Soxhlet); cenizas 5,0% (método de incineración directo).
- (I)
- Característica; mezclas de péptidos procedentes de la carne de pescado y obtenidos mediante el calentamiento de la carne de pescado para inactivar su enzima autolítica y la hidrolización de la carne resultante con una proteasa.
- (J)
- Composición de aminoácidos.
Tal y como se muestra a continuación.
Método analítico: Medido mediante un método
analítico automático para la identificación de aminoácidos (la
cistina que se suministra se midió mediante oxidación con ácido
perfórmico y se hidrolizó a continuación con ácido hidroclórico. El
troptofano se midió mediante cromatografía líquida de alta
resolución).
El péptido \alpha-1000
obtenido de este modo se aplica a una resina para la adsorción de
péptidos como por ejemplo una resina ODS u otra similar directamente
en su estado líquido, o después de añadir agua en su estado en
polvo para preparar la "carga de la solución" que se muestra
en la Fig. 1.
Por cierto, en relación con la resina, pueden
utilizarse todos los tipos de resinas mientras éstas sean resinas
para la adsorción de péptidos. Por ejemplo, se utilizan distintas
resinas ODS, YMC ODS-AQ 120-S50
(nombre comercial) y una resina de adsorción hidrofóbica SEPABEADS
SP207 (nombre comercial para un producto de Mitsubishi Chemical
Corporation), según sea necesario.
Como resultado de los estudios desde distintos
aspectos relativos a una mezcla de péptidos que posea un alto
contenido de Val-Tyr y menos acidez y excelente
sabor y estabilidad, entre las mezclas de péptidos para la
reducción de presión (por ejemplo, el \alpha-1000)
que se formaron procesando la carne de pescado con una proteasa,
la invención consiguió por primera vez recoger las pretendidas
fracciones desde las distintas fracciones precedentes y mezclarlas.
La novedosa mezcla de péptidos para la reducción de presión que se
formaron de este modo, es decir recogiendo y mezclando las
fracciones que se designaron como péptido SY.
El péptido SY puede ser producido recogiendo las
fracciones desde las fracciones eluidas anteriormente. Un ejemplo
de patrón de elución de los eluatos se muestra en la Fig. 1.
El péptido SY, según la invención, puede ser
producido, tal y como se muestra en la Fig. 1, añadiendo, por
ejemplo, el \alpha-1000 a la resina para la
adsorción de péptidos (carga de la solución), después llevar a cabo
la elución con agua (elución en agua (1)), y mezclar una última
fracción de la elución en agua (1), una fracción que va del 11 al
18% en volumen de la elución en etanol la cual se eluye con el 11
al 18% en volumen de la solución acuosa de etanol y una fracción de
la elución en agua (2) la cual se eluye con agua. Puede
establecerse un tiempo de partida de la recogida de fracciones de
péptidos SY y tiempos de cambio de los eluyentes sobre la base de
al menos uno de los valores medidos de Bx, contenido en sales, UV
(absorción a 280 nm) y Na o bien sobre la base del tiempo de
fraccionamiento. También es posible
\hbox{controlar
adecuadamente estos elementos en tiempos reales y realizar las
determinaciones con un ordenador.}
Por ejemplo, en el patrón de elución de la Fig.
1, puede determinarse del siguiente modo un tiempo del
fraccionamiento de partida para la última fracción de la elución en
agua (1) del péptido SY midiendo el valor del contenido en
sales.
- i)
- Al recogerse la fracción desde 0 minutos después de iniciar la elución en agua, el contenido en Na es mayor de 4 g/100 g. De este modo, se sabe que no se desea un material que tenga un alto contenido en Na de cara a un agente reductor de la presión sanguínea.
- ii)
- Al realizar la recogida tras haber transcurrido 20 minutos desde el inicio de la elución en agua, el intervalo permitido del contenido en Na oscila desde 1 a 3 g/100 g.
- iii)
- Al iniciarse la recogida después de este tiempo, el contenido en Na se redujo aún más, pero así el contenido en sales es demasiado bajo. En consecuencia, la guanina contenida en el péptido SY tiende precipitarse en la concentración, y a veces suelen formarse impurezas que no son deseables.
- iv)
- En consecuencia, la recogida se inició tras haber transcurrido 20 minutos desde el inicio de la elución en agua, y el contenido en Na fue de aproximadamente 1 a 3 g/100 g.
El tiempo final de recogida de la fracción de la
elución en agua (1) fue el momento en que el contenido en Na llegó
a ser sustancialmente de 0 g/100 g.
Posteriormente, desde este tiempo, se añadió la
solución acuosa de etanol que va del 11 al 18% en volumen en lugar
del agua. En cuanto la cantidad de péptidos eluidos superó un pico
y se redujo hasta aproximadamente la mitad del pico, se dejó de
añadir la solución acuosa de etanol, y la fracción que se obtuvo en
este caso se designó como una fracción que va del 11 al 18% en
volumen de la elución en etanol. (Se aisló solo la fracción que va
del 11 al 18% en volumen de la elución en etanol y se convirtió en
péptido SY-MD casi libre de Na).
Es aconsejable que el momento en que se deja de
añadir la solución acuosa de etanol que va del 11 al 18% en volumen
y se cambia para añadir agua en su lugar es cuando se inicia la
elución en agua (2) pero el valor de absorción de UV a una longitud
de onda de 280 nm que muestra la cantidad total de péptidos empieza
a disminuir bruscamente y alcanza aproximadamente la mitad del
pico, y que el tiempo de finalización es el momento en que el
valor de absorción de UV alcanza el cero para mantenerse en un
estado constante. La fracción que se obtuvo en este caso se designó
como la fracción de la elución en agua (2).
El producto que se obtuvo en este caso mediante
la recogida (1) de la última fracción de la elución en agua (1),
(2) la fracción que va del 11 al 18% en volumen de la elución en
etanol y (3) la fracción de la elución en agua (2) bien de forma
separada, bien de forma continua y tras haberlas mezclado es el
péptido SY de la invención.
De este modo, según la invención, puede
obtenerse como péptido SY la fracción en la que se incluye la
última fracción que se ha formado durante el fraccionamiento de la
fracción de la elución en agua (1), la fracción que va del 11 al
18% en volumen de la elución en etanol y de la fracción de la
elución en agua (2) en este orden (expresado como péptido SY de
sardinas en la Fig. 1).
Asimismo, "elución en etanol del 15%" que
se muestra en la Fig. 1 corresponde al péptido
SY-MD.
El péptido SY contiene un dipéptido
(Valyl-Tirosina; en adelante denominado en alguna
ocasión como Val-Tyr o VY) que los inventores de la
presente invención han confirmado por primera vez que en altas
concentraciones es uno de los componentes principales de los
péptidos reductores de la presión sanguínea (tasa de recuperación
de VY: En caso de que se asigna un valor nominal de 100% en el
\alpha-1000, éste es del 90 al 95% en el SY,
mientras que es del 65 al 75% en el SY-MD), y no
solo manifiesta una actividad inhibidora de la ECA bastante elevada
sino también un sabor mejorado de forma notable. Sin embargo,
puesto que el péptido SY-MD no contiene la última
fracción de la elución en agua (1), la acidez permanece. Puesto que
casi no contiene sodio, se proporciona un agente beneficioso
reductor de la presión sanguínea para aquellos que no pueden tomar
sodio.
Es decir, la porción de "carga de la
solución" posee un sabor intenso, pero tiene un olor ligeramente
a pescado procedente de la materia prima y un alto contenido en Na.
Mientras que, en la última fracción de la elución en agua (1) se
reduce el olor a pescado procedente de la materia prima, y posee
bastante buen sabor.
En consecuencia, con la incorporación de la
última fracción de la elución en agua (1), puede obtenerse una
materia de péptido, el "péptido SY", del cual puede
recuperarse el VY en grandes cantidades que además tiene un
excelente sabor y estabilidad en comparación con el péptido
SY-MD.
Además, en el péptido SY o en el péptido
SY-MD se confirman tanto la actividad que reduce la
presión sanguínea como las funciones tales como la función que
acelera la absorción de calcio o hierro, la función que elimina el
colesterol y la función que reduce el nivel de azúcar en la
sangre.
Las propiedades físico-químicas
del péptido SY son las siguientes.
- (A)
- Peso molecular: 200 a 10.000 (Fig. 2)
- (B)
- Punto de fusión: se colorea y descompone a 138 \pm 3°C;
- (C)
- Solubilidad en disolventes: fácilmente soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y hexano.
- (D)
- Aspecto: polvo blanco o de color amarillo pálido.
- (E)
- Condición del líquido (pH): 4,0 a 6,0
- (F)
- Componentes:
- agua del 1 al 5% en peso (método de secado por calor a presión normal); proteínas de 84 a 94% en peso (método de Micro-Kjeldahl);
- lípidos 0,5% en peso o menos (método de extracción de Soxhlet);
- cenizas 4 \pm 2% en peso (método de incineración directo).
- Na del 1 al 3% en peso (espectrometría de absorción atómica);
- (G)
- Propiedades fisiológicas:
- contiene el dipéptido Val-Tyr y posee una actividad inhibidora de la ECA.
- (H)
- Espectro de absorción infrarrojo: Fig. 3
- (I)
- Espectro de absorción ultravioleta: Fig. 4
- (J)
- Potencia de rotación específica: [\alpha]_{D}^{20} = -40° a - 51°
- (K)
- Valor de la actividad inhibidora de la ECA (IC_{50}):
- 200 \mug/ml o menos (medido mediante el método de modificación de Cushman).
(Método analítico: medido mediante un método
analítico automático para la identificación de aminoácidos)
Asimismo, las propiedades
físico-químicas del péptido SY-MD
son las siguientes.
- (A)
- Peso molecular: 200 a 10.000
- (B)
- Punto de fusión; se colorea y descompone a 138 \pm 3°C;
- (C)
- Solubilidad en disolventes:
- fácilmente soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y hexano.
- (D)
- Aspecto:
- polvo blanco o de color amarillo pálido.
- (E)
- Condición del líquido (pH): 4,0 a 6,0
- (F)
- Componentes:
- agua del 2 al 6% en peso (método de secado por calor a presión normal); proteínas de 90 a 98% en peso (método de Micro-Kjeldahl);
- lípidos 0,5% en peso o menos (método de extracción de Soxhlet);
- cenizas 3,0% en peso o menos (método de incineración directo).
- Na del 0,1 al 0,2% en peso (espectrometría de absorción atómica);
- (G)
- Espectro de absorción ultravioleta: Fig. 7
- (H)
- Espectro de absorción infrarrojo: Fig. 8.
Según la invención, el péptido SY y el péptido
SY-MD son nuevas mezclas de péptidos que se
desconocían hasta la fecha.
Éstas muestran tener una excelente actividad
para la reducción de la presión sanguínea, y no son problemáticas
para la seguridad. En consecuencia, éstas también pueden utilizarse
como mezclas de péptidos para un agente o alimentos reductores de la
presión sanguínea en una utilización sanitaria específica para
reducir la presión sanguínea. Por lo que, tanto el péptido SY como
el péptido SY-MD pueden utilizarse como aditivos en
alimentos o piensos para animales tales como complementos
sazonadores y nutritivos, pudiéndose utilizar ampliamente, debido a
las actividades fisiológicas especiales mencionadas anteriormente,
como medicamentos o como infusiones, alimentos saludables y
complementos nutritivos para uso clínico para impedir o tratar los
trastornos hipertensivos.
Se pueden añadir tanto el péptido SY como el
péptido SY-MD, en caso de utilizarse como
alimentos, bien como tales, bien en combinación con otros alimentos
o ingredientes de alimentos como se suele hacer de forma habitual,
según el caso. Además, tanto el péptido SY como el péptido
SY-MD pueden administrarse bien de forma oral, bien
parenteral en caso de utilizarse como medicamentos. Para su
administración oral, tanto el péptido SY como el péptido
SY-MD pueden formularse en forma de, por ejemplo,
comprimidos, gránulos, partículas, cápsulas, polvos o bebidas tal y
como se suele hacer de forma habitual.
Para su administración parenteral, tanto el
péptido SY como el péptido SY-MD pueden utilizarse
en forma de inyecciones, gotas, supositorios u otras formas
similares.
La invención se ilustra a continuación más
específicamente mediante y en relación con el Ejemplo referencial y
los Ejemplos. Ejemplo referencial.
Se procesaron sardinas frescas en un colector
para recoger su carne. Se pico y dividió la carne recogida en una
pluralidad de porciones de carne de pescado picada que pesaban 10 kg
cada una, y a continuación se congelaron rápidamente estas
porciones de carne a -30°C o menos.
Posteriormente, se molió cada porción de carne
en un molino, y se añadió a ésta la misma cantidad de agua. Se
introdujo esta mezcla en un depósito, y se calentó a 100°C durante
10 minutos para inactivar la enzima autolítica y desnaturalizar la
carne térmicamente. A continuación, se añadió el amoniaco acuoso
para regular el pH a 9,5.
Se añadió a la misma un 0,1% de una solución de
un producto de proteasa alcalina disponible comercialmente, y se
mantuvo la carne a 50°C durante 17,5 horas para producir su
descomposición con la enzima. A continuación, esta se hirvió
durante 15 minutos para inactivar la enzima.
Después se hizo pasar a través de un tamiz
vibratorio (150 mallas), se trató mediante un yector a 5,000 rpm, y
posteriormente se procesó en una separadora centrífuga Sharpless
(15.000 rpm). Este producto se filtró utilizando un ayudafiltro de
tierra diatomácea de modo que se obtiene una solución de
péptido.
Se añadió carbón activo a la solución de péptido
obtenida anteriormente en una cantidad de un 1% en peso/volumen,
se agitó a 30°C durante 60 minutos, y a continuación se filtró para
obtener un filtrado. Se concentró este filtrado sometiéndolo a
presión reducida (20°C) tal y como se suele hacer de una forma
habitual, y a continuación se esterilizó por UHTST según se suele
hacer habitualmente para obtener un producto
\alpha-1000 (líquido). Este producto se secó aún
más por pulverización tal y como se suele hacer de forma habitual
para obtener un producto \alpha-1000 (polvo) que
poseía un tamaño de partículas de 60 mallas.
Finalmente, estos productos se congelaron y
almacenaron respectivamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
Se formó una solución disolviendo 5 g de
péptidos \alpha-1000 (polvo) obtenido en el
Ejemplo referencial en 500 ml de agua desionizada, y se hizo pasar
a través de una resina de adsorción hidrofóbica SEPABEADS SP207
(fabricada por Mitsubishi Chemical Corporation) en columna (3,5 x
13 cm) de modo que se llenó la columna con la solución de
\alpha-1000 (carga de la solución). A
continuación, siguiendo el patrón de elución de la Fig. 1, se
añadieron agua, una solución acuosa de etanol del 15% y agua en
este orden en cantidades de 500 ml cada una, y se recogieron y
mezclaron todas las fracciones del péptido de sardinas SY de la
Fig. 1, es decir, la última fracción de la elución en agua (1), la
fracción de la elución en etanol del 15% y la fracción de la
elución en agua (2). Se liofilizó la mezcla para obtener 2,1 g de
péptidos SY (polvo). El contenido en Na del péptido SY fue de 1,45%
en peso (medido mediante espectrometría de absorción atómica).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
Se formó una solución disolviendo 5 g de
péptidos \alpha-1000 (polvo) obtenido en el
Ejemplo referencial en 500 ml de agua desionizada, y se hizo pasar
a través de una resina de adsorción hidrofóbica SEPABEADS SP207
(fabricada por Mitsubishi Chemical Corporation) en columna (3,5 x
13 cm) de modo que se llenó la columna con la solución de
\alpha-1000 (carga de la solución). Entre todas
las fracciones de péptidos de sardinas SY que se muestran en el
patrón de elución de la Fig. 1, fue aislada y recogida solo la
fracción de la elución en etanol del 15%.
Ésta se liofilizó para obtener 1,7 g de péptidos
SY-MD (polvo). El contenido en Na del péptido
SY-MD fue de 0,124% en peso (medido mediante
espectrometría de absorción atómica).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
(obtenido en el Ejemplo 1)
para ajustar el volumen total a 100 ml de agua
purificada.
(obtenido en el Ejemplo 1)
para ajustar el volumen total a 50 ml de agua
purificada.
(obtenido en el Ejemplo 1)
para ajustar el volumen total a 30 ml de agua
purificada.
Se mezclaron y disolvieron los componentes que
anteceden a 60°C, y a continuación se sometieron a esterilización
mediante plancha a 128°C durante 10 segundos. Después, las mezclas
resultantes se llenaron a 90°C en botellas marrones lavadas a fondo
de 100 ml, 50 ml y 30 ml. Se hicieron enfriar las botellas a
temperatura ambiente, y a continuación se enfriaron rápidamente con
un baño de agua corriente para preparar las bebidas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Los comprimidos se prepararon según la siguiente
formulación.
Se mezclaron 500 g de péptidos SY (polvo)
obtenidos en el Ejemplo 1, 356 g de un jarabe espeso de maltosa
hidrogenada, 100 g de celulosa cristalina, 40 g de éster de ácido
graso de sucrosa y 4 g de un edulcorante (stevia), y a continuación
esta mezcla se comprimió con una máquina para comprimidos por
compresión para formar los comprimidos brutos (piezas de 250 mg x
4.000). Se recubrieron los comprimidos brutos con una solución de
shellac en una cantidad de 7,5 mg por comprimido para preparar
4.000 comprimidos que contenían los péptidos SY (polvo) en una
cantidad de 500 mg por 4 comprimidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Se describen a continuación los ejemplos de
administración de las bebidas preparadas en el Ejemplo 3.
Se utilizaron los péptidos SY en una cantidad de
0,5 g/bebida. Las personas que padecían hipertensión ligera fueron
divididas en un grupo para la administración de péptidos y un grupo
de placebo de acuerdo con un ensayo de doble ciego aleatorio para
realizar un examen clínico. Cada una de ellas tomó una dosis de
bebida cada día. Después de 4 semanas, se redujo de forma
significativa la presión sanguínea máxima de solo el grupo para la
administración de péptidos en 10,6 mmHg, y la presión sanguínea
mínima del mismo se redujo en 5,6 mmHg respectivamente en lo que
respecta al valor promedio.
De modo similar, las personas que padecían
hipertensión ligera fueron divididas en un grupo para la
administración de péptidos y un grupo de placebo de acuerdo con un
ensayo de doble ciego aleatorio para realizar un examen clínico.
Cada una de ellas tomó una dosis de bebida cada día. Después de 4
semanas, se redujo de forma significativa la presión sanguínea
máxima de solo el grupo para la administración de péptidos en 10,2
mmHg, y la presión sanguínea mínima del mismo se redujo en 3,8 mmHg
respectivamente en lo que respecta al valor promedio.
De modo similar, se realizó un examen clínico.
Después de 4 semanas, se redujo de forma significativa la presión
sanguínea máxima de solo el grupo para la administración de
péptidos en 8,2 mmHg, y la presión sanguínea mínima del mismo se
redujo en 3,0 mmHg respectivamente en lo que respecta al valor
promedio.
En consecuencia, en todos los casos, tomando la
bebida que contenía 0,5 g/bebida de péptidos SY una vez al día,
disminuyó de forma significativa la presión sanguínea de las
personas que padecían hipertensión ligera a un nivel de
significancia de un 1% o menos sin afectar a los síntomas
subjetivos y objetivos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Se describe a continuación un ejemplo de
administración de los comprimidos preparados en el Ejemplo 4.
Se llevó a cabo un ensayo para la administración
en doble ciego de control de placebo para 88 personas que eran
personas que tenían la presión sanguínea máxima normal y personas
que padecían hipertensión ligera.
Éstas tomaron los comprimidos en dosis de 4
comprimidos cada día (0,5 g/día de péptidos SY). En consecuencia,
en el grupo de administración de los péptidos SY (44 personas), la
presión sanguínea máxima (presión sanguínea sistólica) era de 148
\pm 11 mmHg y la presión sanguínea mínima (presión sanguínea
diastólica) era de 92 \pm 14 mmHg antes de iniciarse el ensayo,
mientras que la presión sanguínea máxima disminuyó de forma
significativa a 138 \pm 12 mmHg después de 4 semanas y a 134
\pm 9 mmHg después de 8 semanas, y la presión sanguínea mínima
disminuyó de forma significativa a 84 \pm 11 mmHg después de 4
semanas y a 83 \pm 10 mmHg después de 8 semanas. En el grupo de
placebo (44 personas), no se apreciaron cambios de importancia.
Además, no se observaron efectos secundarios tales como tos seca en
ninguno de estos grupos en su conjunto. De este modo, se
confirmaron los efectos de reducción de la presión sanguínea de los
comprimidos que contenían los péptidos SY entre las personas que
tenían la presión sanguínea máxima normal y las personas que
padecían hipertensión ligera.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(obtenido en el Ejemplo 2)
para ajustar el volumen total a 100 mi de agua
purificada.
Esta bebida de 100 ml contenía los péptidos
SY-MD en dosis de 500 mg/bebida, y sus componentes
eran: agua 96,7 g, proteínas 0, 5 g, azúcar 4,5 g, valor calórico 19
Kcal, sodio 7,4 mg y sorbitol 0,66 g.
Se llevó a cabo un ensayo de comparación por
doble ciego utilizando una bebida que contenía 0,5 g/bebida de
estos péptidos SY-MD cada día en voluntarios, es
decir, personas que tenían la presión sanguínea máxima normal con
una presión sanguínea sistólica que iba de 130 a 140 mmHg y una
presión sanguínea diastólica que iba de 80 a 90 mmHg, y en personas
que padecían de hipertensión ligera con una presión sanguínea
sistólica que iba de 140 a 160 mmHg y una presión sanguínea
diastólica que iba de 90 a 100 mmHg.
Como resultado de ello, en el grupo para la
administración de la bebida de placebo, no se apreció una
diferencia significativa en el cambio de la presión sanguínea,
mientras que en el grupo para la administración de la bebida de
péptidos, después de 4 semanas, disminuyó de forma significativa la
presión sanguínea sistólica en 14,7 mmHg y la presión sanguínea
diastólica en 7,6 mmHg en comparación con los valores anteriores a
la administración. De este modo, se confirmó la efectividad de los
péptidos SY-MD.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
Los comprimidos se prepararon según la siguiente
formulación.
Se mezclaron 500 g de péptidos
SY-MD (polvo) obtenidos en el Ejemplo 2, 356 g de
un jarabe espeso de maltosa hidrogenada, 100 g de celulosa
cristalina, 40 g de éster de ácido graso de sucrosa y 4 g de un
edulcorante (stevia), y a continuación esta mezcla se comprimió con
una máquina para comprimidos por compresión para formar los
comprimidos brutos (piezas de 250 mg x 4.000). Se recubrieron los
comprimidos brutos con una solución de shellac en una cantidad de
7,5 mg por comprimido para preparar 4.000 comprimidos que contenían
los péptidos SY-MD (polvo) en una cantidad de 500
mg por 4 comprimidos.
Los componentes de los mismos eran: agua 3,3 g,
proteínas 44,2 g, azúcar 3,5 g, cenizas 1,6 g, carbohidratos 47,4 g
y sodio 566 mg, por 100 g, y el valor calórico era de 398 Kcal.
Se llevó a cabo un ensayo de comparación por
doble ciego durante 12 semanas utilizando los comprimidos en dosis
de 4 comprimidos/día (administrando 0,5 g/día de péptidos
SY-MD) y un placebo que no contenía estos péptidos
SY-MD como control. Entre los 40 voluntarios que
eran personas que tenían una presión sanguínea máxima normal y
personas que padecían hipertensión ligera, el grupo para la
administración de los péptidos SY-MD contenidos en
los comprimidos experimentó una reducción significativa de la
presión sanguínea tanto en la presión sanguínea sistólica (PSS)
como en la presión sanguínea diastólica (PSD) en comparación con
los valores anteriores a la administración. Es decir, antes de la
administración, la PSS era de 145,4 mmHg y la PSD de 86,8 mmHg,
mientras que después del ensayo, la PSS era de 134,7 mmHg y la PSD
de 83,0 mmHg. En el grupo de placebo, no se observaron cambios de
importancia en la presión sanguínea. Durante las 12 semanas, no se
produjeron síntomas subjetivos tales como los efectos
secundarios.
\vskip1.000000\baselineskip
Según la invención, el péptido SY y el péptido
SY-MD son excelentes elementos en la función para
reducir la presión sanguínea puesto que cada uno de ellos contiene
el hallazgo Val-Tyr considerado como un componente
para la reducción de la presión sanguínea, es decir, el componente
principal de un péptido en altas concentraciones para la reducción
de la presión sanguínea _______. Además, incorporando una parte de
una fracción de elución en agua, el péptido SY posee la
característica de que no contiene acidez y posee excelente sabor y
estabilidad. Puesto que el novedoso y extremadamente efectivo
péptido SY según la invención, posee las características que
anteceden, éste puede utilizarse no solo como alimento y bebida en
sí mismo o bien como aditivo, sino también como alimento saludable
para inhibir o evitar el aumento de la presión sanguínea debido a
la excelente actividad inhibidora de la ECA. Más aún, estos pueden
utilizarse de forma ventajosa como agentes tales como un agente
inhibidor de la ECA y un agente reductor de la presión sanguínea
pudiéndose formular en varias formas de
administración.
administración.
Los novedosos péptidos SY y péptidos
SY-MD muestran, tal y como queda claro de la
descripción que antecede, la excelente actividad de reducción de la
presión sanguínea. Además, éstos proceden de la carne de pescado y
por lo tanto no suponen un problema de seguridad (de hecho, se
administraron cada uno de ellos por vía oral a ratas de forma
forzosa en dosis de 500 mg/día, no observándose ninguna toxicidad
aguda incluso después de 10 días de administración).
En consecuencia, cada uno de ellos puede
utilizarse en forma de mezcla de péptidos en un agente reductor de
la presión sanguínea o en alimentos para su utilización sanitaria
específica en la reducción de la presión sanguínea.
\newpage
Esta lista bibliográfica mencionada por el
solicitante se ha incorporado exclusivamente para información del
lector. Pero no forma parte integrante de la documentación de la
patente europea. Aún habiéndose recopilado esta bibliografía con
sumo cuidado, no pueden excluirse errores u omisiones, por lo que la
EPO declina toda responsabilidad a este respecto.
\bullet JP 3117779 B
\bullet JP 5271297 A
\bullet EP 1094071 A
\bullet WO 3117779 A
Claims (6)
1. Un péptido SY que posee las siguientes
propiedades físico-químicas:
(A) Peso molecular: 200 a 10.000 (medido
mediante cromatografía líquida de alta resolución: ASAHIPAK
GS-320);
(B) Punto de fusión: se colorea y descompone a
138 \pm 3°C;
(C) Solubilidad en disolventes: fácilmente
soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y
hexano;
(D) Aspecto: polvo blanco o de color amarillo
pálido;
(E) Condición del líquido (pH): 4,0 a 6,0;
(F) Componentes:
agua del 1 al 5% en peso (método de secado por
calor a presión normal);
proteínas de 84 a 94% en peso (método de
Micro-Kjeldahl);
lípidos 0,5% en peso o menos (método de
extracción de Soxhlet);
cenizas 4 \pm 2% en peso (método de
incineración directo);
Na del 1 al 3% en peso (espectrometría de
absorción atómica);
(G) Propiedades fisiológicas: contiene el
dipéptido Val-Tyr y posee una actividad inhibidora
de la ECA;
(H) Espectro de absorción infrarrojo: Fig.
3;
(I) Espectro de absorción ultravioleta: Fig.
4.
2. El péptido SY según se reivindica en la
Reivindicación 1, que se produce recogiendo y mezclando los
componentes del péptido resultantes del fraccionamiento de la
elución de una solución de péptidos con una resina para la
adsorción de péptidos utilizando agua, una solución acuosa de
etanol y agua en este orden como eluyentes del fraccionamiento de
la elución, en el que los componentes del péptido, en forma de
patrón de la elución, se muestran en la Fig. 1, se obtiene mediante
los respectivos eluyentes una última fracción de la elución en agua
(1), una fracción que va del 11 al 18% en volumen de la elución en
etanol y una fracción de la elución en agua (2) tal y como se
define a continuación:
(1) última fracción de la elución en agua (1):
fracción que se obtiene utilizando agua como eluyente a partir de
un tiempo en que el contenido de sodio (Na) del conjunto de la
fracción del péptido en elución (el péptido SY) es de 1 a 3 g/100 g
hasta una determinada hora de recogida final de la última fracción
en la elución en agua (1) cuando el contenido de sodio es
sustancialmente de 0 g/100 g.
(2) fracción de la elución en etanol: fracción
que se obtiene después de utilizar la solución acuosa de etanol
que posee una concentración que va del 11 al 18% en volumen como
eluyente hasta que una cantidad de péptido eluido haya superado un
pico y reducida hasta aproximadamente la mitad del pico.
(3) fracción de la elución en agua (2): fracción
que se obtiene tras haber utilizado agua como eluyente hasta que
se completa el fraccionamiento de la elución.
3. El péptido SY según se reivindica en la
Reivindicación 1 o 2, que se produce utilizando una solución acuosa
de péptido \alpha-1000 procedente de la carne de
pescado y que posee las siguientes propiedades
físico-químicas como solución de péptido.
(A) Peso molecular: 200 a 10.000 (medido
mediante cromatografía en columna Sephadex
G-25);
(B) Punto de fusión: se colorea a 119°C (punto
de descomposición);
(C) Potencia de rotación específica:
[\alpha]_{D}^{20}= -22°
(D) Solubilidad en disolventes: fácilmente
soluble en agua, pero casi insoluble en etanol, acetona y
hexano;
(E) Diferenciación en ácido, carácter básico o
neutro: neutro;
(F) Aspecto, componentes: polvo blanco: agua
5,14% (método de secado por calor a presión reducida); proteínas
87,5% (método de Kjeldahl con un coeficiente de conversión de
nitrógeno/proteína de 6,25); lípidos 0% (método de extracción de
Soxhlet); cenizas 5,0% (método de incineración directo);
(G) Característica: mezclas de péptidos
procedentes de la carne de pescado y obtenidos mediante el
calentamiento de la carne de pescado para inactivar su enzima
autolítica y la hidrolización de la carne resultante con una
proteasa.
4. Un agente reductor de la presión sanguínea
que se caracteriza por el hecho de que contiene, como
principio activo, el péptido SY según se reivindica en cualquiera
de las Reivindicaciones 1 a 3.
5. Un alimento funcional en la reducción de la
presión sanguínea caracterizado por el hecho de que el
alimento es el péptido SY según se reivindica en cualquiera de las
Reivindicaciones 1 a 3 o bien contiene el péptido SY según se
reivindica en cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 3.
6. El alimento según se reivindica en la
Reivindicación 5 caracterizado por el hecho de que el
alimento es en forma líquida o sólida.
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