KR100960843B1 - 신규 펩타이드 ｓｙ - Google Patents

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센미 에키스 가부시키가이샤
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Abstract

펩타이드 SY 는, 어육을 프로테아제로 처리함으로써 수득된 펩타이드를 펩타이드-흡착 수지 (ODS 수지 등) 에 적용한 후, 물 및 11 내지 18 % v/v 에탄올 수용액으로 연속 용출시키고, 수 용출 후 수득된 분획 (1)과 11 내지 18 % v/v 에탄올 및 물로 용출시켜 수득된 또 다른 분획 (2)를 혼합하여 제조된다. 또한, 펩타이드 SY-MD 는 11 내지 18 % v/v 에탄올 용출의 분획만을 단리함으로써 제조된다.
펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는 모두 신규한 펩타이드 혼합물이다. 이들은 새롭게 발견된 혈압 강하 펩타이드 Val-Tyr 을 대량 함유할 뿐 아니라, 쓴맛이 덜하고 맛과 안정성이 우수하며, 혈압 강하제, 또는 혈압 상승 저해 또는 혈압 상승 예방용 기능성 식품으로서 이용될 수 있다.

Description

신규 펩타이드 ＳＹ{NOVEL PEPTIDE SY}
본 발명은 신규한 펩타이드 SY, 펩타이드 SY 가 혈압 강하를 위해 사용되는 혈압 강하제 및 혈압 강하 기능성 식품에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 펩타이드 SY 에 포함되는 펩타이드 SY-MD 및 이의 분리 방법에 관한 것이다.
앞서, 본 발명자들은 어육을 열변성 처리하고, 자가용해 효소(autolytic enzyme)를 불활성화시키고, 이를 프로테아제(protease)로 가수분해하고, 효소를 불활성화시킨 후, 펩타이드 α-1000 을 분리함으로써 ACE (Angiotensin I-converting enzyme: 안지오텐신 I-변환 효소) 저해 활성을 갖는 신규한 펩타이드 α-1000 을 개발하는데 성공하였으며, 이미 이의 특허권을 획득했다 (특허 번호 제 3117779 호: JP-A-271297).
본 발명이 해결하려는 문제점
생활 습관과 관련된 질병이 증가함에 따라, 고혈압 발증을 예방 또는 혈압 강하에 효과적인 신규한 성분의 새로운 개발이 당업자에서 요구되어 왔으며, 본 발명은 이러한 당업자의 요구에 부합하여 만들어졌다.
문제점 해결 방법
본 발명자들은 상기 목적을 달성하기 위해 다방면으로 연구를 수행했다. 그 결과, 본 발명자들은 자신들이 개발한 ACE 저해 펩타이드 α-1000 에 재착안하여, 다양한 분획에 대해 예의 연구를 수행하였다. 그 결과, 본 발명자들은 보다 고도의 디펩타이드 Val-Tyr 함량을 갖는 분획이 보다 고도의 ACE-저해 활성을 나타낸다는 것을 최초로 발견하였고, 상기 Val-Tyr 이 혈압 강하 펩타이드의 주성분 중 하나라는 것을 동정하였다.
상기의 새로운 유용한 발견을 기초로 하여, 본 발명자들은 Val-Tyr 함량이 높을 뿐 아니라 쓴맛이 덜하고, 또한 맛과 안정성이 탁월한 펩타이드의 신규 혼합물을 새롭게 개발하기로 결정하고, 어육을 프로테아제로 처리함으로써 수득된 펩타이드의 혼합물 (즉, 펩타이드 α-1000) 을 펩타이드-흡착 수지 (ODS 수지) 로 처리하고, 3단계 용출 처리, 즉, 수 용출, 에탄올 수용액을 사용한 용출 및 수 용출 처리하는 방법을 수행했다. 그리고, 본 발명자들은 최초 수 용출의 후분획, 11 내지 18 % v/v 에탄올 수용액 용출의 분획 및 최종 수 용출의 분획에서, 어육 펩타이드의 Val-Tyr 대부분이 회수된다는 유용한 새로운 발견을 하였다.
따라서, 최초 수 용출의 후분획, 11 내지 18 % v/v 에탄올 수용액 용출의 분획 및 최종 수 용출의 분획의 혼합물은 Val-Tyr 함량이 높을 뿐 아니라 쓴맛이 덜하고, 맛과 안정성도 탁월한 펩타이드의 완전히 신규한 혈압 강하 혼합물이라는 것이 확인되었다. 이는 펩타이드의 신규한 혼합물로서 인정되어, 본원에서 펩타이드 SY 로 명명했다.
또한, 본 발명에서는 11 내지 18 % v/v 에탄올 수용액 용출의 분획만을 단리 하여 시험하였다. 그리고, 0.1 내지 0.2% 의 매우 낮은 Na 함량 (펩타이드 SY 에서, Na 함량은 1 내지 3% 임) 을 갖는 펩타이드의 새로운 혼합물이 수득되었으며, 이 분획을 펩타이드 SY-MD 로 명명했다.
도 1 은 실시예 1 에서 펩타이드 SY 용출 패턴을 나타내는 도면이다.
도 2 는 펩타이드 SY 의 분자량을 나타낸다.
도 3 은 펩타이드 SY 의 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
도 4 는 펩타이드 SY 의 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
도 5 는 펩타이드 α-1000 의 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
도 6 는 펩타이드 α-1000 의 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
도 7 은 펩타이드 SY-MD (펩타이드 SY-MD 는 도 1 에서의 펩타이드 SY-펩타이드 Y-2 로서 참조됨) 의 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
도 8 은 펩타이드 SY-MD 의 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
본 발명에서는, 원료로서 펩타이드 α-1000 을 사용하여 가능한 높은 Val-Tyr 함량을 갖는 펩타이드의 혼합물을 연속적으로 회수하기 위한 연구를 수행했다.
그 결과, 펩타이드 α-1000 을 ODS 수지로 처리한 후, 물을 첨가하여 용출된 분획의 일부 (후분획) 를 수득하고, 이어서, 에탄올 수용액을 첨가하여 용출된 분획을 연속적으로 수득한다. 이 때, 수 용출 (1) 에서 사용된 물의 일부가 잔류하기 때문에, 에탄올 농도는 11 내지 18 % v/v, 바람직하게는 14 내지 16 % v/v 라는 것이 발견되었다.
또한, 펩타이드 SY 를 수득하는 경우, 수 용출 (1) 의 목적되는 후분획을 분취하는 분취 시작 시점, 이를 종결하는 시점 (즉, 에탄올 수용액 용출을 시작하는 시점) 및 에탄올 수용액 용출을 종결하는 시점 (수 용출 (2) 의 시작 시점) 및 수 용출 (2) 의 종결 시점은 분획처리 시간, 염 함량, Bx 및 파장 280 nm 에서의 UV 흡광도를 측정 또는 모니터링함으로써 각각 특정되거나 판단되어, 특정한 연속 시스템에 의해 펩타이드 SY 를 제조하는 방법이 확립된다. 이들 유용한 새로운 발견을 기초로, 추가의 연구를 수행하여, 마침내 본 발명이 완성되었다.
본 발명의 펩타이드 SY 의 물리화학적 성질을 하기에 나타낸다.
펩타이드 SY 의 물리화학적 성질
(A) 분자량:
200 내지 10,000 (ASAHIPAK GS-320 고성능 액체 크로마토그래피로 측정됨): 도2
(B) 융점: 138 ±3 ℃ 에서 착색 및 분해.
(C) 용매에 대한 용해성:
물에 쉽게 용해되지만, 에탄올, 아세톤 및 헥산에서는 거의 불용성임.
(D) 외관:
백색 또는 담황색 분말
(E) 액성 (pH): 4.0 내지 6.0
(F) 성분:
물 1 내지 5 % w/w (상압, 열건조법)
단백질 84 내지 94 % w/w (Micro-Kjeldahl 법)
지질 0.5 % w/w 이하 (Soxhlet 추출법)
회분 4 ±2 % w/w (직접 회화법; direct ashing method)
(G) 생리적 성질:
디펩타이드 Val-Tyr 을 함유하고 ACE 저해 활성을 가짐.
(H) 적외선 흡수 스펙트럼: 도 3
(I) 자외선 흡수 스펙트럼: 도 4
(J) 고유 광회전도:
[α]D 20 = -40°내지 -51°
본 발명의 펩타이드 SY 는 하기와 같이 제조된다.
즉, 펩타이드 SY 는 용출 분획처리의 용리제로서 물, 에탄올 수용액 및 물을 순서대로 사용하여 펩타이드 흡착 수지로 펩타이드 용액을 용출 분획처리하는 것으로부터 생성된 펩타이드 성분을 분취 및 혼합함으로써 제조되며, 여기서 펩타이드 성분은, 도 1 에 나타낸 용출 패턴에서, 각각의 용리제에 의해 수득된 하기 정의된, 수 용출 (1) 의 후분획, 11 내지 18 % v/v 에탄올 용출의 분획 (15% v/v 에탄올 수용액을 사용한 용출을 도 1 에 나타냄) 및 수 용출 (2) 의 분획이다:
(1) 수 용출 (1) 의 후분획: 용리제로서 물을 사용하여, 수 용출 (1) 에서 펩타이드 (펩타이드 SY) 의 나트륨 (Na) 함량이 1 내지 3 g/100 g 일 때의 시점으로부터, 나트륨 함량이 실질적으로 0 g/100 g 이 되는 수 용출 (1) 의 후분획의 최 종 분취 시점까지, 수득된 분획.
(2) 11 내지 18 % v/v 에탄올 용출의 분획: 그 다음, 11 내지 18 % v/v 의 농도를 갖는 에탄올 수용액을 용리제로서 사용하여, 용출된 펩타이드의 양이 피크를 지나 피크의 대략 절반으로 감소될 때까지 수득된 분획. (이 분획만을 단리하여, 펩타이드 SY-MD 로 명명함).
(3) 수 용출 (2) 의 분획: 그 후, 용리제로서 물을 사용하여 용출 분획처리가 완료될 때까지 수득된 분획.
본 발명의 펩타이드 SY 의 원료인 펩타이드 α-1000 은 하기에 기재되어 있다.
펩타이드 α-1000 은 원료로서 어패류를 사용하여 제조된다. 예를 들어, 특허 제 3117779 호에 따라 제조될 수 있다. 우선, 어패류를 채육기, 뼈발림기(deboner) 등에서 처리하여, 어육질을 분리한다. 원료는 가능한 한 신선한 것이 바람직하다. 분리된 어육을 분쇄하고 각각 중량이 대략 10 kg 정도인 여러개의 분쇄 어육 덩어리로 나누고, 이 어육 덩어리를 그대로 후속 처리할 수 있다. 또한, 상기 어육 덩어리들을 -20 내지 -50 ℃, 예를 들어, 대략 -30 ℃ 정도의 냉풍 분사로 급속 냉동시키고, -20 내지 -25 ℃ 에서 보존하고, 필요에 따라 사용하는 것이 권고된다.
어패류로서는, 예컨대 정어리, 전갱이, 참치, 가다랭이, 꽁치 및 고등어와 같은 적색 육질을 가진 어류, 가자미, 도미, 보리멸, 전어, 대구, 청어 및 방어와 같은 백색 육질을 가진 어류, 상어 및 가오리와 같은 연골성 어류, 빙어, 잉어, 곤 들매기 및 야마메(yamame; 송어의 일종)와 같은 민물 어류, 및 심해 상어(아이자메, granulose) 및 아귀와 같은 심해 어류, 새우, 게, 왜문어, 젓새우(opossum shrimp) 등이 적합하게 사용될 수 있다.
수집된 어패류 육질을 육질 분쇄기 등으로 분쇄하고, 중량으로 원료의 1/2 내지 20 배, 바람직하게는 1 내지 10 배의 양으로 첨가한다. 이어서, 이를 열처리함으로써 자가용해 효소를 불활성화시키고, 멸균하고, 단백질을 열변성시킴으로써, 후속 효소 반응의 효능을 증가시킨다. 가열 조건으로서는, 상기와 같은 작용이 유효하다면 임의의 조건이 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 조건은 65℃ 이상 및 2 내지 60 분, 바람직하게는 80 ℃ 이상 및 5 내지 30 분이다.
이어서, 거기에, 암모니아수 또는 수산화나트륨(칼륨) 수용액과 같은 알칼리제를 첨가하여 사용되는 프로테아제의 적당값 (예를 들어, 알칼리 프로테아제의 경우, 7.5 이상, 더욱 바람직하게는 8 이상의 pH) 으로 pH 를 조정한다. 육질을 효소에 대해 적합한 온도에서 가열하고 (온도는 사용되는 효소에 따라 가변적이지만, 알칼리 프로테아제의 경우, 20 내지 65℃; 35 내지 60℃, 바람직하게는 40 내지 55℃ 임), 프로테아제를 첨가하여 30 분 내지 30 시간 (알칼리 프로테아제의 경우, 30 분 내지 25 시간, 바람직하게는 1 내지 17 시간) 동안 처리한다.
중성 또는 알칼리 조건에서 단백질을 분해할 수 있는 효소는 전부 단독으로 또는 병용되어 프로테아제로서 사용될 수 있다. 프로테아제는 동식물 뿐 아니라 미생물에서 유래할 수 있다. 펩신, 레닌, 트립신, 키모트립신, 파파인 및 브로멜라인, 또한 세균성 프로테아제, 사상균 프로테아제, 방선균 프로테아제 등이 널리 사용될 수 있다. 이들 효소는 일반적으로 시판된다. 이들의 용도에 따라, 미정제 효소 및 효소 함유 배양액 및 고지(koji) 와 같은 고체 또는 액체 효소 함유물을 사용할 수 있다. 효소 첨가량은 0.1 % 내지 5.0% 일 수 있다.
필요하다면, 육질을 중성화시킨 후, 70 ℃ (바람직하게는 80 ℃) 이상의 온도에서 2 내지 60 분 (바람직하게는 5 내지 30 분 동안) 유지시켜, 효소를 불활성화시키고, 후속되는 분리를 용이하게 한다. 가열에 의한 불활성화 후, 바이브로 스크린 (vibro-screen) 등을 사용하여 미정제 불순물을 분리하고, 필요하다면 Jector (일종의 원심분리기; Jector (상세히는 Self Jector) 는 Mitsubishi Kakoki Kaisha, Ltd. 제품의 상표명이다) 로 생성물을 처리한 후, 초원심분리 처리하여 부유 불순물 및 침전 불순물을 제거한다.
이어서, 상기 생성물을 규조토 등 (예를 들어, 셀라이트) 을 필터 보조제로서 사용하여 여과하고, 여과액을 활성탄 (0.05 내지 20 % w/v, 바람직하게는 0.1 내지 10 % w/v 의 양; 20 내지 65 ℃, 바람직하게는 25 내지 60 ℃; 15 분 내지 4 시간, 바람직하게는 30 분 내지 2 시간) 으로 처리하여, 이를 탈취, 탈색 및 정제한다.
상기 생성물을 예를 들어, (0 내지 50 ℃ 에서) 감압 하에 상법으로 농축한다 (대략 30 Bx 정도까지). 이어서, 필요하다면, 다시 (초)원심분리 또는 여과하여 펩타이드 용액을 수득한다. 이렇게 수득된 펩타이드 용액을 살균 처리하고 (UHTST (Ultra High Temperature Short Time; 일종의 멸균기) 또는 기타 상법에 의해), 이어서, 용기에 충전하여 제품을 제공한다 (α-1000 (액체)). 또한, 필요하다면 이를 추가 농축 또는 역으로 희석할 수 있거나, 예를 들어, 분사 건조 또는 동결 건조에 의해 상법으로 60 메쉬 정도의 분말로 분말화할 수 있고, 상기 분말을 자루와 같은 용기에 충전시켜 제품을 제공할 수 있다 (α-1000 (분말)). 상기 제품 중, 액체 제품은 냉장 또는 냉동하여 보존하고, 분말 제품은 건조한 냉 암실에서 보존한다.
이렇게 수득된 액체, 페이스트 또는 분말 펩타이드가 α-1000 이다.
펩타이드 α-1000 (분사 건조된 분말) 의 물리화학적 물성을 하기에 나타낸다.
펩타이드 α-1000 (분말) 의 물리화학적 물성
(A) 분자량:
200 내지 10,000 (Sephadex G-25 컬럼 크로마토그래피로 측정됨)
(B) 융점;
119 ℃ 에서 착색 (분해점).
(C) 고유 광회전도;
[α]D 20 = -22°
(D) 용매에 대한 용해성;
물에 쉽게 용해되지만, 에탄올, 아세톤 및 헥산에서는 거의 불용성임.
(E) 산성, 중성 또는 염기성의 구별;
중성, 6.0 내지 8.0 의 pH (10% 수용액)
(F) 자외선 흡수 스펙트럼: 도 5
(G) 적외선 흡수 스펙트럼: 도 6
(H) 외관, 성분;
백색 분말: 물 5.14 % (감압, 열건조법); 단백질 87.5 % (Kjeldahl 법, 질소/단백질 환산 계수 6.25); 지질 0 % (Soxhlet 추출법); 회분 5.0 % (직접 회화법).
(I) 특징;
어육으로부터 유래하며, 어육을 가열하여 자가용해 효소를 불활성화시키고, 생성된 어육을 프로테아제로 가수분해함으로써 수득된 혼합물.
(J) 아미노산의 조성;
하기에 나타냄.
분석 시험 항목 결과 (%)
전체 아미노산
알기닌 3.34
리신 6.86
히스티딘 3.34
페닐알라닌 2.33
티로신 2.01
류신 6.35
이소류신 3.27
메티오닌 2.26
발린 4.16
알라닌 5.17
글리신 3.59
프롤린 2.15
글루탐산 12.35
세린 3.30
트레오닌 3.70
아스파르트산 8.36
트립토판 0.32
시스틴 0.47
총량 73.33
분석 방법: 아미노산 자동 분석법에 의해 측정됨 (단, 시스틴은 퍼포름산으로 산화된 후, 염산으로 가수분해되어 측정됨. 트립토판은 고성능 액체 크로마토그래피로 측정됨).
상기 수득된 펩타이드 α-1000 을, 액체인 경우에는 직접 또는 분말인 경우에는 물을 첨가한 후, ODS 수지 등과 같은 펩타이드 흡착 수지에 적용하여, 도 1 에 나타낸 "용액 부하" 를 수행한다. 또한, 수지에 관해서는, 펩타이드 흡착 수지라면 모든 유형의 수지가 이용가능하다. 필요하다면, 예를 들어, 각종 ODS 수지, YMC ODS-AQ 120-S50 (상표명) 및 소수성 흡착 수지 SEPABEADS SP207 (Mitsubishi Chemical Corporation 제품의 상표명) 이 사용된다.
어육을 프로테아제로 처리함으로써 형성된 펩타이드의 압력 강하 혼합물 (예 를 들어, α-1000) 중에서, Val-Tyr 함량이 높고 쓴맛이 덜하며, 맛과 안정성이 탁월한 펩타이드의 혼합물에 관해 다방면의 연구를 수행한 결과, 본 발명은 상기 다양한 분획으로부터 목적 분획을 분취하고, 이들을 혼합하는데 최초로 성공했다. 상기 분획을 분취 및 혼합함으로써 형성된 펩타이드의 신규한 압력 강하 혼합물을 펩타이드 SY 로 명명했다.
펩타이드 SY 는 상기 용출 분획으로부터 분획을 분취함으로써 제조될 수 있다. 용출물의 용출 패턴의 예를 도 1 에 나타낸다.
본 발명에 따른 펩타이드 SY 는, 도 1 에 나타낸 바와 같이 펩타이드 흡착 수지에 예를 들어 α-1000 을 첨가하고 (용액 부하), 이어서, 물을 사용하여 용출을 수행하고 (수 용출 (1)), 수 용출 (1) 의 후분획, 11 내지 18 % v/v 에탄올 수용액을 사용하여 용출된 11 내지 18 % v/v 에탄올 용출 분획 및 물을 사용하여 용출된 수 용출 (2) 의 분획을 혼합함으로써 제조될 수 있다. 펩타이드 SY 분획의 분취 시작 시점 및 용리제 변경 시점은, Bx, 염 함량, 280 nm 에서의 UV 흡광도, 및 Na 를 기준으로 하여, 또는 분획처리 시간을 기준으로 하여 판단될 수 있다. 또한, 상기 항목들을 실시간으로 적절하게 모니터링하고 컴퓨터를 사용하여 판단하는 것이 가능하다.
예를 들어, 도 1 의 용출 패턴에서, 펩타이드 SY 의 수 용출 (1) 의 후분획에 대한 분획처리 시작 시점은, 염 함량의 값을 측정함으로써 하기와 같이 판단될 수 있다.
i) 수 용출 시작 0 분 후부터 분획을 분취하는 경우, Na 함량은 4 g/100 g 을 초과하게 된다. 따라서, 고도의 Na 함량을 갖는 재료는 혈압 강하제의 관점에서 바람직하지 않다.
ii) 수 용출 시작 20 분 후부터 분취를 수행하는 경우, Na 함량의 허용가능한 범위는 1 내지 3 g/100 g 이다.
iii) 상기 시점 후 분취를 시작하는 경우, Na 함량은 더욱 감소하지만, 염 함량이 너무 낮다. 따라서, 펩타이드 SY 에 함유된 구아닌이 상기 농도에서 침전되는 경향이 있으며, 바람직하지 못한 불순물이 형성되기도 한다.
iv) 따라서, 수 용출 개시 20 분 후 분취를 시작하고, Na 함량은 대략 1 내지 3 g/100 g 정도이다.
수 용출 (1) 분획의 최종 분취 시점은 Na 함량이 실질적으로 0 g/100 g 이 되는 시점이다.
그 다음, 이 시점으로부터, 11 내지 18 % v/v 에탄올 수용액을 물 대신 첨가한다. 용출된 펩타이드의 양이 피크를 지나 피크의 대략 절반으로 감소될 때, 에탈올 수용액의 첨가를 중단하고, 여기서 수득된 분획을 11 내지 18% v/v 에탄올 용출 분획으로 명명한다. (11 내지 18% v/v 에탄올 용출 분획만을 단리하여 Na 가 거의 없는 펩타이드 SY-MD 가 된다.).
11 내지 18% v/v 에탄올 수용액의 첨가를 중단하고 물을 첨가하는 것으로 변경하는 시점은 수 용출 (2) 가 시작되나 총 펩타이드 양을 나타내는 파장 280 nm 에서의 UV 흡광도 값이 급격히 감소하고, 피크의 절반 정도에 도달하는 시점이며, 종료 시점은 UV 흡광도 값이 0 에 도달하여 불변 상태에 도달하는 시점인 것이 권 고된다. 여기서 수득된 분획은 수 용출 (2) 의 분획이라 명명한다.
여기서, (1) 수 용출 (1) 의 후분획, (2) 11 내지 18% v/v 에탄올 용출의 분획 및 (3) 수 용출 (2) 의 분획을 개별적으로 또는 연속적으로 분취하고, 이들을 혼합함으로써 수득된 생성물이 본 발명의 펩타이드 SY 이다.
따라서, 수 용출 (1) 의 분획에 대해 분취처리하는 동안 형성된 후분획을 포함하는 분획, 11 내지 18% v/v 에탄올 용출 분획 및 수 용출 (2) 의 분획이 순서대로 본 발명에 따른 펩타이드 SY 로서 수득될 수 있다 (도 1 에서 정어리 펩타이드 SY 로 표시됨).
또한, 도 1 에 나타낸 "15% 에탄올 용출" 은 펩타이드 SY-MD 에 해당한다.
펩타이드 SY 는 본 발명자들에 의해 최초로 혈압 강하 펩타이드의 주성분 중 하나로서 확인된 디펩티드 (발릴-티로신; 이후, Val-Tyr 또는 VY 로 언급되곤 함) 를 고 농도로 함유하고 (VY 회수율: α-1000 에서 100% 로 간주하는 경우, SY 에서는 90 내지 95% 인 반면, SY-MD 에서는 65 내지 75% 임), ACE 저해 활성이 매우 높을 뿐 아니라 상당히 개선된 맛을 나타낸다. 하지만, 펩타이드 SY-MD 는 수 용출 (1) 의 후분획이 없기 때문에, 쓴 맛이 남아있지만, 나트륨이 거의 없기 때문에, 나트륨을 섭취할 수 없는 사람에게 유용한 혈압 강하제가 제공된다.
즉, "용액 부하" 의 부분은 강한 맛을 나타내지만, 원료 유래의 생선 냄새를 약간 가지며, Na 함량이 높다. 한 편, 수 용출 (1) 의 후분획은 원료 유래의 생선 냄새는 감소되고 매우 우수한 맛을 갖는다.
따라서, 수 용출 (1) 의 후분획을 혼입함으로써, VY 가 대량으로 회수될 수 있고, 펩타이드 SY-MD 와 비교하여 맛과 안정성이 탁월한 펩타이드 재료 "펩타이드 SY" 가 수득될 수 있다.
또한, 펩타이드 SY 또는 펩타이드 SY-MD 에서는, 혈압 강하 작용, 또한 칼슘 또는 철분 흡수 촉진 기능과 같은 기능, 콜레스테롤 강하 기능 및 혈당 수준 감소 기능이 확인된다.
펩타이드 SY 의 물리화학적 성질은 하기와 같다.
펩타이드 SY 의 물리화학적 성질.
(A) 분자량:
200 내지 10,000 (도 2)
(B) 융점: 138 ±3 ℃ 에서 착색 및 분해.
(C) 용매에 대한 용해성:
물에 쉽게 용해되지만, 에탄올, 아세톤 및 헥산에서는 거의 불용성임.
(D) 외관:
백색 또는 담황색 분말
(E) 액성 (pH): 4.0 내지 6.0
(F) 성분:
물 1 내지 5 % w/w (상압, 열건조법)
단백질 84 내지 94 % w/w (Micro-Kjeldahl 법)
지질 0.5 % w/w 이하 (Soxhlet 추출법)
회분 4 ±2 % w/w (직접 회화법)
Na 1 내지 3 % w/w (원자 흡수 분광법)
(G) 생리적 성질:
디펩타이드 Val-Tyr 을 함유하고 ACE 저해 활성을 가짐.
(H) 적외선 흡수 스펙트럼: 도 3
(I) 자외선 흡수 스펙트럼: 도 4
(H) 고유 광회전도:
[α]D 20 = -40°내지 -51°
(K) ACE 저해 활성값 (IC50):
200 ㎍/㎖ 이하 (Cushman 의 변형법에 의해 측정됨).
(J) 주 아미노산 조성
아미노산 분석값 (%)
아스파르트산 8.0 내지 9.2
글루탐산 9.5 내지 12.0
발린 4.5 내지 5.5
메티오닌 2.5 내지 3.8
이소류신 4.5 내지 5.2
류신 7.3 내지 8.5
티로신 3.4 내지 4.8
페닐알라닌 4.5 내지 5.5
히스티딘 3.0 내지 3.8
리신 6.5 내지 7.8
아르기닌 5.0 내지 6.0
(분석 방법: 아미노산 자동 분석법에 의해 측정됨)
또한, 펩타이드 SY-MD 의 물리화학적 성질은 하기와 같다.
펩타이드 SY-MD 의 물리화학적 성질
(A) 분자량; 200 내지 10,000
(B) 융점; 138 ±3 ℃ 에서 착색 및 분해.
(C) 용매에 대한 용해성:
물에 쉽게 용해되지만, 에탄올, 아세톤 및 헥산에서는 거의 불용성임.
(D) 외관:
백색 또는 담황색 분말
(E) 액성 (pH): 4.0 내지 6.0
(F) 성분:
물 2 내지 6 % w/w (상압, 열건조법)
단백질 90 내지 98 % w/w (Micro-Kjeldahl 법)
지질 0.5 % w/w 이하 (Soxhlet 추출법)
회분 3 % w/w 이하 (직접 회화법)
Na 0.1 내지 0.2 % w/w (원자 흡수 분광법)
(G) 자외선 흡수 스펙트럼: 도 7
(H) 적외선 흡수 스펙트럼: 도 8
본 발명에 따른 펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는 지금까지 알려지지 않았던 새로운 펩타이드 혼합물이다. 이는 탁월한 혈압 강하 작용을 나타내고, 안전성에 있어서 문제가 없다. 따라서, 이는 혈압강하제 또는 혈압을 강하시키기 위해 특정한 건강 용도로 사용되는 식품을 위한 펩타이드 혼합물로서 사용될 수 있다. 따라서, 펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는 양념 및 영양 보충제와 같은 식품 또는 동물 사료 첨가제로서 사용될 수 있고, 상기된 특수한 생리 작용 때문에, 의약으로서, 또는 고혈압 질환을 예방 또는 치료하기 위해 임상적으로 사용되는, 수액, 건강 식품 및 영양 보충제로서 사용될 수 있다.
식품으로서 사용되는 경우, 펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는 그 자체로, 또는 필요하다면 상법으로 기타 식품 또는 식품 성분과 병용하여 첨가될 수 있다. 또한, 상기 펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는 의약으로서 사용되는 경우, 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 경구 투여 시, 펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는, 예를 들어, 상법으로 정제, 과립, 입자, 캡슐, 분말 또는 드링크제로 제형될 수 있다. 비경구 투여 시, 펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는 주사액, 점적액, 좌약제 등으로 사용될 수 있다.
본 발명은 하기 참고예 및 실시예를 참조하여 더욱 구체적으로 설명된다.
참고예
신선한 정어리를 뼈발림기에서 처리하여 채육한다. 채집된 어육을 분쇄하 고, 각각 중량이 10 kg 인 여러개의 분쇄 어육 덩어리로 나누고, 이 어육 덩어리를 -30 ℃ 이하에서 급속 냉동시켰다. 이어서, 각 어육 덩어리를 분쇄기에서 분쇄하고, 거기에 동일한 양의 물을 첨가했다. 혼합물을 탱크에 공급하고, 100 ℃ 에서 10 분 동안 가열하여 자가용해 효소를 불활성화시키고, 어육을 열변성시켰다. 후속적으로, 암모니아수를 첨가하여 pH 를 9.5 로 조정했다.
거기에, 시판 알칼리 프로테아제 제품의 0.1% 용액을 첨가하고, 상기 어육을 50 ℃ 에서 17.5 시간 동안 유지시켜, 효소로 분해를 수행했다. 이어서, 이를 15 분 동안 끓여 효소를 불활성화시켰다.
이를 바이브로-스크린 (150 메쉬) 에 통과시키고, 5,000 rpm 에서 Jector 로 처리한 후, 샤프리스(sharpless) 원심분리기 (15,000 rpm) 에서 처리했다. 규조토를 필터 보조제로서 사용하여 상기를 여과하여, 펩타이드 용액을 제공한다.
상기 수득된 펩타이드 용액에 활성탄을 1 % w/v 의 양으로 첨가하고, 30 ℃ 에서 60 분 동안 교반한 후, 여과하여 여액을 수득했다. 상기 여액을 상법으로 감압 (20 ℃) 농축하고, 이어서 UHTST 를 통해 상법으로 멸균하여, α-1000 (액체) 제품을 수득했다. 이를 상법으로 추가 분사 건조하여, 60 메쉬의 입자 크기를 갖는 α-1000 (분말) 제품을 수득했다. 이 제품들을 각각 냉동 보존했다.
실시예 1
참고예에서 수득된 펩타이드 α-1000 (분말) 5 g 을 탈이온수 500 ㎖ 에 용해시킴으로써 용액을 형성시키고, 소수성 흡착 수지 SEPABEADS SP 207 (Mitsubishi Chemical Corporation) 컬럼 (3.5 ×13 ㎝) 에 통과시켜, 컬럼을 α-1000 용액으로 충전했다 (용액 부하). 이어서, 도 1 의 용출 패턴에 따라, 각각 500 ㎖ 의 양으로 물, 15% 에탄올 수용액 및 물을 순서대로 첨가하고, 도 1 의 정어리 펩타이드 SY 의 모든 분획, 즉, 수 용출 (1) 의 후분획, 15% 에탄올 용출의 분획 및 수 용출 (2) 의 분획을 분취 및 혼합했다. 상기 혼합물을 동결 건조하여 2.1 g 의 펩타이드 SY (분말) 을 수득했다. 펩타이드 SY 의 Na 함량은 1.45 % w/w 였다 (원자 흡수 분광법으로 측정됨).
실시예 2
참고예에서 수득된 펩타이드 α-1000 (분말) 5 g 을 탈이온수 500 ㎖ 에 용해시킴으로써 용액을 형성시키고, 소수성 흡착 수지 SEPABEADS SP 207 (Mitsubishi Chemical Corporation) 컬럼 (3.5 ×13 ㎝) 에 통과시켜, 컬럼을 α-1000 용액으로 충전했다 (용액 부하). 도 1 의 용출 패턴에 나타난 정어리 펩타이드 SY 의 모든 분획 중에서, 15% 에탄올 용출의 분획만을 단리 및 분취했다. 이를 동결 건조하여 1.7 g 의 펩타이드 SY-MD (분말) 을 수득했다. 펩타이드 SY-MD 의 Na 함량은 0.124 % w/w 였다 (원자 흡수 분광법으로 측정됨).
실시예 3
(드링크의 제조)
100 ㎖ 드링크 제형의 표
액체 프룩토스-글루코스 4.5 g
당 알콜 1 g
산미료 0.2 g
향료 0.13 g
감미료 (스테비아) 0.03 g
캬라멜 염료 0.02 g
펩타이드 SY (분말) 0.5 g
(실시예 1 에서 수득됨)
정제수 총부피를 100 ㎖ 로 조정
50 ㎖ 드링크 제형의 표
액체 프룩토스-글루코스 10 g
향료 0.3 g
산미료 0.16 g
감미료 (스테비아) 0.015 g
펩타이드 SY (분말) 0.5 g
(실시예 1 에서 수득됨)
정제수 총부피를 50 ㎖ 로 조정
30 ㎖ 드링크 제형의 표
액체 프룩토스-글루코스 5 g
향료 0.25 g
산미료 0.1 g
감미료 (스테비아) 0.015 g
펩타이드 SY (분말) 0.5 g
(실시예 1 에서 수득됨)
정제수 총부피를 30 ㎖ 로 조정
상기 성분들을 혼합하고 60 ℃ 에서 용해시킨 후, 128 ℃ 에서 10 초 동안 플레이트 살균 처리했다. 이어서, 생성된 혼합물을 90 ℃ 에서 100 ㎖, 50 ㎖ 및 30 ㎖ 의 잘 세척된 갈색 병에 충전했다. 병을 실온에서 냉각시킨 후, 조 내에서 흐르는 물로 급속 냉각시켜 드링크를 제조했다.
실시예 4
(정제의 제조)
하기 제형에 따라 정제를 제조했다.
실시예 1 에서 수득된 500 g 의 펩타이드 SY (분말), 356 g 의 환원 말토스 증점 시럽, 100 g 의 결정 셀룰로스, 40 g 의 수크로스 지방산 에스테르 및 4 g 의 감미료 (스테비아) 를 혼합하고, 이 혼합물을 압착 타정기로 압착하여 미가공 정제 (250 mg ×4,000 조각) 를 형성시켰다. 상기 미가공 정제를 1정 당 7.5 mg 의 양의 쉘락 (shellac) 용액으로 코팅하여, 4정 당 500 mg 의 양으로 펩타이드 SY (분말) 을 함유하는 4,000 개의 정제를 제조했다.
실시예 5
실시예 3 에서 제조된 드링크의 투여 실시예가 기재된다.
(1) 30 ㎖ 드링크의 경우
펩타이드 SY 를 0.5 g/드링크의 양으로 사용했다. 무작위 이중맹검 시험에 따라, 경증 고혈압 환자를 펩타이드 투여군과 플라시보 군으로 나누어, 임상 시험을 실시했다. 이들 각각은 매일 1병의 드링크제를 복용했다. 4주 후, 오직 펩타이드 투여군만 평균값으로 상부 혈압이 10.6 mmHg, 하부 혈압이 5.6 mmHg 만큼 각각 상당히 감소했다.
(2) 50 ㎖ 드링크의 경우
마찬가지로, 무작위 이중맹검 시험에 따라, 경증 고혈압 환자를 펩타이드 투여군과 플라시보 군으로 나누어, 임상 시험을 실시했다. 이들 각각은 매일 1병의 드링크제를 복용했다. 4주 후, 오직 펩타이드 투여군만 평균값으로 상부 혈압이 10.2 mmHg, 하부 혈압이 3.8 mmHg 만큼 각각 상당히 감소했다.
(3) 100 ㎖ 드링크의 경우
마찬가지로, 임상 시험을 실시했다. 4주 후, 오직 펩타이드 투여군만 평균값으로 상부 혈압이 8.2 mmHg, 하부 혈압이 3.0 mmHg 만큼 각각 상당히 감소했다.
결과적으로, 모든 경우에 있어서, 펩타이드 SY 를 0.5 g/드링크로 함유하는 드링크제를 1일 1회 복용함으로써, 경증 고혈압 환자의 혈압은 자각 및 타각 증상에 영향을 미치지 않으면서, 1% 이하에서 유의미한 수준으로 상당히 감소했다.
실시예 6
실시예 4 에서 제조된 정제의 투여 실시예를 기재한다.
정상인 높은 혈압을 가진 사람들과 경증 고혈압 환자인 88 명에 대해 플라시보 대조 이중맹검 투여 시험을 실시했다.
이들은 1일 4정의 용량으로 정제를 복용했다 (펩타이드 SY 로 0.5 g/1 일). 그 결과, 펩타이드 SY 투여군 (44 명) 에서는, 시험 개시 시 상부 혈압 (수축기 혈 압) 이 148 ±11 mmHg 이고 하부 혈압 (확장기 혈압) 이 92 ±14 mmHg 인 반면, 4주 후 상부 혈압은 138 ±12 mmHg 로, 그리고 8주 후 134 ±9 mmHg 로 상당히 감소했고, 하부 혈압은 4주 후 84 ±11 mmHg 로, 그리고 8주 후 83 ±10 mmHg 로 상당히 감소했다. 플라시보 군 (44 명) 에서는, 유의미한 변화가 발견되지 않았다. 또한, 마른 기침과 같은 부작용이 어떠한 군에서도 전혀 관찰되지 않았다. 따라서, 펩타이드 SY 를 함유하는 정제의 혈압 강하 효과는 정상인 높은 혈압을 가진 사람들 및 경증 고혈압 환자에게서 확인되었다.
실시예 7
(드링크 제제)
100 ㎖ 드링크 제형의 표
액체 프룩토스-글루코스 4.5 g
당 알콜 1 g
산미료 0.2 g
향료 0.13 g
감미료 (스테비아) 0.03 g
캬라멜 염료 0.02 g
펩타이드 SY-MD (분말) 0.5 g
(실시예 2 에서 수득됨)
정제수 총부피를 100 ㎖ 로 조정
상기 100 ㎖ 드링크는 펩타이드 SY-MD 를 500 mg/드링크의 용량으로 함유하 였으며, 성분은 물 96.7 g, 단백질 0.5 g, 당 4.5 g, 열량 값 19 Kcal, 나트륨 7.4 mg 및 소르비톨 0.66 g 였다.
지원자, 즉, 130 내지 140 mmHg 의 수축기 혈압 및 80 내지 90 mmHg 의 확장기 혈압을 가지는 정상인 높은 혈압을 가지는 사람, 그리고 140 내지 160 mmHg 의 수축기 혈압 및 90 내지 100 mmHg 의 확장기 혈압을 가지는 경증 고혈압 환자에게, 상기 펩타이드 SY-MD 를 0.5 g/드링크로 함유하는 드링크제를 1일 1병 사용하여 이중맹검 비교 시험을 수행했다.
그 결과, 플라시보 드링크 투여군에서는 혈압의 변화에 있어서 유의미한 차이가 관찰되지 않았던 반면, 펩타이드 드링크 투여군에서는, 투여 전과 비교하여, 수축기 혈압이 14.7 mmHg, 확장기 혈압이 7.6 mmHg 만큼 상당히 감소했다. 따라서, 펩타이드 SY-MD 의 효과가 확인되었다.
실시예 8
(정제의 제조)
하기 제형에 따라 정제를 제조했다.
실시예 2 에서 수득된 500 g 의 펩타이드 SY-MD (분말), 356 g 의 환원 말토스 증점 시럽, 100 g 의 결정 셀룰로스, 40 g 의 수크로스 지방산 에스테르 및 4 g 의 감미료 (스테비아) 를 혼합하고, 이 혼합물을 압착 타정기로 압착하여 미가공 정제 (250 mg ×4,000 조각) 를 형성시켰다. 상기 미가공 정제를 1정 당 7.5 mg 의 양의 쉘락 (shellac) 용액으로 코팅하여, 4정 당 500 mg 의 양으로 펩타이드 SY-MD (분말) 을 함유하는 4,000 개의 정제를 제조했다.
상기 정제의 성분은 100 g 당, 물 3.3 g, 단백질 44.2 g, 당 3.5 g, 회분 1.6 g, 탄수화물 47.4 g 및 나트륨 566 mg 이었고, 열량 값은 398 Kcal 였다.
4정/1일의 용량으로 상기 정제 (펩타이드 SY-MD 로서 0.5 g/일 투여함) 그리고 대조군으로서 펩타이드 SY-MD 가 없는 플라시보를 사용하여, 이중맹검 비교 시험을 12주 동안 수행했다. 정상인 높은 혈압을 가진 사람과 경증 고혈압 환자인 40 명의 지원자 중에서, 펩타이드 SY-MD 함유 정제 투여군은, 투여 전과 비교하여, 수축기 혈압 (SBP) 및 확장기 혈압 (DBP) 모두에서 유의미한 혈압강하를 나타내었다. 즉, 투여 전에는, SBP 가 145.4 mmHg 이고 DBP 가 86.8 mmHg 였던 반면, 시험 말기에는 SBP 가 134.7 mmHg 이고 DBP 가 83.0 mmHg 였다. 플라시보 군에서는 혈압의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. 12 주 내내, 부작용과 같은 자각 증상이 발생하지 않았다.
본 발명에 따른 펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는, 혈압 강하 성분으로서, 즉, 혈압 강하 펩타이드의 주성분으로서 발견된 Val-Tyr 을 고 농도로 각각 함유하고 있기 때문에, 혈압 강하 작용이 탁월하다. 또한, 수 용출 분획의 일부를 도입함으로써, 펩타이드 SY 는 쓴 맛이 없고 맛과 안정성이 탁월하다는 특징을 갖는다. 본 발명에 따른 신규하고 매우 효과적인 펩타이드 SY 는 상기 특징을 갖기 때문에, 그 자체로 또는 첨가제로서 식음품으로서 사용될 수 있을 뿐 아니라, 우수한 ACE 저해 활성 때문에 혈압 상승의 저해 또는 예방을 위한 건강 식품으로서 사용될 수 있다. 또한, 이는 각종 투약 형태로 제형화됨으로써, ACE-저해제 및 혈압 강하제와 같은 제제로서 유리하게 사용될 수 있다.
신규한 펩타이드 SY 및 펩타이드 SY-MD 는 상기 상세한 설명에서 명시된 바와 같이, 탁월한 혈압 강하 작용을 나타낸다. 또한, 이들은 어육에서 유래하므로, 안전성 문제를 유발하지 않는다 (실제, 각각을 래트에게 500 mg/일의 용량으로 강제적 경구 투여하는 경우, 10일 후 조차도 급성 독성이 관찰되지 않았다). 따라서서, 각각은 혈압 강하제 또는 혈압 강하에 특정 건강 용도로 사용되는 식품에 대한 펩타이드의 혼합물로서 사용될 수 있다.

Claims (8)

  1. 하기의 물리화학적 성질을 갖는 펩타이드 혼합물:
    (A) 분자량:
    200 내지 10,000 (ASAHIPAK GS-320 고성능 액체 크로마토그래피로 측정됨)
    (B) 융점: 138 ±3 ℃ 에서 착색 및 분해.
    (C) 용매에 대한 용해성:
    물에 용해되지만, 에탄올, 아세톤 및 헥산에서는 불용성임.
    (D) 외관:
    백색 또는 담황색 분말
    (E) 액성 (pH): 4.0 내지 6.0
    (F) 성분:
    물 1 내지 5 % w/w (상압, 열건조법)
    단백질 84 내지 94 % w/w (Micro-Kjeldahl 법)
    지질 0.5 % w/w 이하 (Soxhlet 추출법)
    회분 4 ±2 % w/w (직접 회화법; direct ashing method)
    Na 1 내지 3 % w/w (원자 흡수 분광법)
    (G) 생리적 성질:
    디펩타이드 Val-Tyr 을 함유하고 ACE 저해 활성을 가짐.
    (H) 적외선 흡수 스펙트럼:
    도 3
    Figure 112009070817983-pct00012
    (I) 자외선 흡수 스펙트럼:
    도 4
    Figure 112009070817983-pct00013
  2. 제 1 항에 있어서, 용출 분획처리의 용리제로서 물, 에탄올 수용액 및 물을 순서대로 사용하여 펩타이드 흡착 수지에 의해 펩타이드 용액을 용출 분획처리하는 것으로부터 생성된 펩타이드 성분을 분취 및 혼합함으로써 제조되며, 여기서 펩타이드 성분은, 하기 도 1 에 나타낸 용출 패턴에서, 각각의 용리제에 의해 수득된 하기 정의된, 수 용출 (1) 의 후분획, 11 내지 18 % v/v 에탄올 용출의 분획 및 수 용출 (2) 의 분획인, 펩타이드 혼합물:
    (1) 수 용출 (1) 의 후분획: 용리제로서 물을 사용하여, 용출 펩타이드 분획 전체 (펩타이드 SY) 의 나트륨 (Na) 함량이 1 내지 3 g/100 g 일 때의 시점으로부터, 나트륨 함량이 0 g/100 g 이 되는 수 용출 (1) 의 후분획의 최종 분취 시점까지, 수득된 분획.
    (2) 에탄올 용출의 분획: 그 다음, 11 내지 18 % v/v 의 농도를 갖는 에탄올 수용액을 용리제로서 사용하여, 용출된 펩타이드의 양이 피크를 지나 피크의 절반으로 감소될 때까지 수득된 분획.
    (3) 수 용출 (2) 의 분획: 그 후, 용리제로서 물을 사용하여 용출 분획처리가 완료될 때까지 수득된 분획.
    도 1
    Figure 112009070817983-pct00014
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 어육으로부터 유래한 하기의 물리화학적 성질을 갖는 펩타이드 α-1000 의 수용액을 펩타이드 용액으로서 사용하여 제조된 펩타이드 혼합물:
    (a) 분자량;
    200 내지 10,000 (Sephadex G-25 컬럼 크로마토그래피로 측정됨)
    (b) 융점;
    119 ℃ 에서 착색 (분해점)
    (c) 고유 광회전도
    [α]D 20 = -22°
    (d) 용매에 대한 용해성;
    물에 용해되지만, 에탄올, 아세톤 및 헥산에서는 불용성임.
    (e) 산성, 중성 또는 염기성의 구별;
    중성
    (f) 외관, 성분;
    백색 분말: 물 5.14 % (감압, 열건조법); 단백질 87.5 % (Kjeldahl 법, 질소/단백질 환산 계수 6.25); 지질 0 % (Soxhlet 추출법); 회분 5.0 % (직접 회화법).
    (g) 특징;
    어육으로부터 유래하며, 어육을 가열하여 자가용해 효소(autolytic enzyme)를 불활성화시키고, 생성된 어육을 프로테아제로 가수분해함으로써 수득된 펩타이드 혼합물.
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제 1 항에 기재된 펩타이드 혼합물을 활성 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 혈압 강하제.
  7. 제 1 항에 기재된 펩타이드 혼합물 자체이거나, 펩타이드 혼합물을 함유하는 것을 특징으로 하는 혈압 강하 기능성 식품.
  8. 제 7 항에 있어서, 액체 또는 고체 형태인 것을 특징으로 하는 식품.
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006056805A (ja) * 2004-08-18 2006-03-02 Senmi Ekisu Co Ltd カルシウムチャンネル阻害剤
WO2006084383A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-17 Ocean Nutrition Canada Limited Anti-diabetic or anti-hypertensive dietary supplement
US7179793B2 (en) 2005-02-14 2007-02-20 Ocean Nutrition Canada Limited Anti-hypertensive dietary supplement
JP5554719B2 (ja) * 2007-12-14 2014-07-23 ホフセス バイオケア エイエス 鉄分の吸収を促進するための方法及び組成物
US20120077747A1 (en) * 2008-10-23 2012-03-29 Innovactiv Inc. Fish-derived protein lysate, and uses thereof as immunomodulatory and/or anti-inflammatory agent
ES2791448T3 (es) 2013-01-23 2020-11-04 Bottled Science Ltd Composición de bebida para mejorar la piel
BR112016024911A2 (pt) * 2014-04-28 2017-08-15 Int Dehydrated Foods Inc composições de proteínas solúveis e métodos de sua produçâo
US11388910B2 (en) 2014-04-28 2022-07-19 International Dehydrated Foods, Inc. Process for preparing a collagen-rich composition
US10694768B2 (en) 2014-04-28 2020-06-30 International Dehydrated Foods, Inc. Process for preparing a soluble protein composition
US10694767B2 (en) 2014-04-28 2020-06-30 International Dehydrated Foods, Inc. Process for preparing a pumpable broth composition

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62257360A (ja) 1986-04-29 1987-11-09 Kazuharu Osajima 低分子量ペプチドを主成分とする呈味物質の製法
ES2053724T3 (es) 1987-03-20 1994-08-01 Sumitomo Seika Chemicals Un metodo para la produccion de una composicion comestible y composicion comestible obtenida por dicho metodo.
DE69124274T2 (de) * 1990-02-27 1997-08-14 Agency Ind Science Techn Oligopeptide, sie enthaltende pharmazeutische und Futterzusammensetzung und Benützung von Oligopeptiden
JP3117779B2 (ja) 1992-02-24 2000-12-18 仙味エキス株式会社 新規ペプチドα−１０００
JP3388602B2 (ja) 1993-02-12 2003-03-24 仙味エキス株式会社 新規親水性ペプチド
JP3406341B2 (ja) 1993-02-19 2003-05-12 仙味エキス株式会社 新規ペプチド、その製法及び用途
JP3403794B2 (ja) * 1994-01-27 2003-05-06 仙味エキス株式会社 血圧降下剤及び血圧降下性機能食品
JPH11228599A (ja) 1998-02-10 1999-08-24 Senmi Extract Kk 新規ペプチドｙ−２
JP4053686B2 (ja) * 1999-04-28 2008-02-27 仙味エキス株式会社 生理活性健康食品

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