JP2006056803A - サーデンペプチドによるカルシウムチャンネル阻害剤 - Google Patents
サーデンペプチドによるカルシウムチャンネル阻害剤 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】 サーデンペプチドを有効成分とすることにより課題を解決する。サーデンペプチドとしては、例えば具体的には、魚肉を熱変性した後、プロテアーゼ処理して加水分解し、酵素を失活せしめた後、分離処理してペプチドを得、このペプチドの水溶液をペプチド吸着樹脂に供してペプチドを吸着せしめた後、エタノール水溶液で溶出した画分(Y−2)が使用される。なお、市販品(サーデンペプチドY−2)も使用可能である。
【選択図】 なし
Description
ペプチドα−1000は、魚肉を熱変性した後、中性ないしアルカリプロテアーゼ処理して加水分解し、次いで加熱等常法にしたがって酵素を失活せしめた後、分離処理して製造することができる。その詳細を以下に述べる。
(A)分子量;
200〜10,000(セファデックスG−25カラムクロマトグラフィーによる)
(B)融点;119℃で着色(分解点)
(C)比旋光度
〔α〕D 20=−22°
(D)溶剤に対する溶解性;
水に易溶;エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない。
(E)酸性、中性、塩基性の区別;
中性 pH6.0〜8.0(10%溶液)
(F)外観、成分;
白色粉末;水分5.14%(減圧加熱乾燥法);蛋白質87.5%(ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数6.25);脂質0%(ソックスレー抽出法);灰分5.0%(直接灰化法)。
(G)特 性;
魚肉由来であり、加熱によって自己消化酵素を失活させ、蛋白分解酵素で加水分解して得たペプチドである。
カルシウムチャンネル阻害(ないし抑制)作用を有する。
(H)赤外線吸収スペクトル:図1
(I)紫外線吸収スペクトル:図2
(J)アミノ酸組成;
下記に示すとおり。
ペプチドα−1000(粉末)のアミノ酸組成
―――――――――――――――――
分析試験項目 結果(%)
―――――――――――――――――
全アミノ酸
アルギニン 3.34
リジン 6.86
ヒスチジン 3.34
フェニルアラニン 2.33
チロシン 2.01
ロイシン 6.35
イソロイシン 3.27
メチオニン 2.26
バリン 4.16
アラニン 5.17
グリシン 3.59
プロリン 2.15
グルタミン酸 12.35
セリン 3.30
スレオニン 3.70
アスパラギン酸 8.36
トリプトファン 0.32
シスチン 0.47
全量 73.33
―――――――――――――――――
分析方法:アミノ酸自動分析法による(但し、シスチンは、過ギ酸酸化処理後、塩酸加水分解し測定した。トリプトファンは、高速液体クロマトグラフ法を用いた。)
(ペプチドY−2の理化学的性質)
(A)分子量:200〜10,000(ASAHIPAK GS−320高速液体クロマトグラフィーによる)(図3)
(B)融点:138℃で着色、分解する。
(C)比旋光度〔α〕D 20=−40°
(D)溶剤に対する溶解性:水に易溶であるが、エタノール、アセトン、ヘキサンにほとんど溶解しない。
(E)酸性、中性、塩基性の区別:中性 pH5.0〜8.0(10%溶液)
(F)物質の外観:白色〜淡黄色粉末。
(G)成分:水分2.72%(常圧加熱乾燥法);蛋白質87.25%(ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数6.25);脂質0%(ソックスレー抽出法);灰分0.20%(直接灰化法)
(H)生理的性質:カルシウムチャンネル阻害ないし抑制作用を有する。
(I)赤外線吸収スペクトル:図4
(J)紫外線吸収スペクトル:図5
(K)アミノ酸組成:下記の表2に示すとおり。分析方法はアミノ酸自動分析法(島津LC−6Aシステム)による。
ペプチドY−2のアミノ酸組成
―――――――――――――――――
アミノ酸 分析値(%)
―――――――――――――――――
アスパラギン酸 10.97
スレオニン 4.10
セリン 2.90
グルタミン酸 12.52
グリシン 4.91
アラニン 5.06
バリン 6.20
メチオニン 2.55
イソロイシン 5.55
ロイシン 9.47
チロシン 2.96
フェニルアラニン 4.75
ヒスチジン 2.83
リジン 10.07
アルギニン 7.50
―――――――――――――――――
新鮮イワシをデボーナーで処理して採肉した。採肉した魚肉質を10kgのすり身に分割し、これを−30℃以下で急速凍結した後、粉砕機で粉砕した後等量の水を加え、これをタンクに送り、100℃で10分間加熱して自己消化酵素を失活させ、熱変性させた。次いでアンモニア水を加えてpHを9.5に調整した。
これに市販のアルカリプロテアーゼ製品の0.1%液を加え、50℃に17.5時間保持して酵素分解を行った。次いで15分間煮沸して酵素を失活せしめた。
これをバイブスクリーン(150メッシュ)に通し5000rpmでジェクター処理した後、シャープレス遠心分離機で処理し(15000rpm)、ケイソウ土を濾過助剤として用い、濾過処理したものをペプチド原液とした。
イワシ肉を0.7%アルカラーゼで17.5時間分解処理し、得られた水解物をODSカラムに供し、水溶出画分の後半部分と次に行った15%エタノール溶出画分とを合し、この画分をペプチドY−2とした。ペプチドY−2は高いカルシウムチャンネル阻害活性を有していた。
実施例1で製造したイワシペプチドα−1000(液体)800ml(Brix45、たんぱく質含量29.6%)に26.2Lの脱イオン水を加え、これをODS樹脂(YMC ODS−AQ120−S50)カラム(1.5×50cm)に流してペプチドを吸着させ、脱イオン水で洗滌し、次に、0%、10%、25%、50%、99.5%のエタノール水溶液27Lを用いて順次溶出してそれぞれY−1、Y−2、Y−3、Y−4、Y−5の画分を得た。このうちY−2画分を、40℃で濃縮してエタノールを除去し、凍結乾燥してイワシ精製ペプチド(Y−2)を得た。このY−2画分にはカルシウムチャンネル阻害成分がα−1000より多量に含有されていた。
実施例1で製造したイワシペプチドα−1000(粉末)5gを500mlの脱イオン水で溶解して原液とし、疎水性吸着樹脂SEPABEADS SP207(三菱化学(株)製)カラム(3.5×13cm)に流してカラムをα−1000溶液で満たし(原液負荷)、次に、図3の溶出パターンにしたがい、水、15%エタノール水溶液、次いで水、各500mlを加えて、図3におけるサーデンペプチドY−2の全画分、即ち、15%エタノール溶出画分、水溶出(2)画分を分取混合し、凍結乾燥し、ペプチドY−2(粉末)を得た。
―――――――――――――――――――――――
100mlドリンク配合表
―――――――――――――――――――――――
果糖ブドウ糖液糖 4.5g
糖アルコール 1g
酸味料 0.2g
香料 0.13g
甘味料(ステビア) 0.03g
カラメル色素 0.02g
ペプチドY−2(粉末) 0.5g
(実施例3で得た)
精製水 全量を100mlに定容
―――――――――――――――――――――――
50mlドリンク配合表
―――――――――――――――――――――――
果糖ブドウ糖液糖 10g
香料 0.3g
酸味料 0.16g
甘味料(ステビア) 0.015g
ペプチドY−2(粉末) 0.5g
(実施例3で得た)
精製水 全量を50mlに定容
―――――――――――――――――――――――
30mlドリンク配合表
―――――――――――――――――――――――
果糖ブドウ糖液糖 5g
香料 0.25g
酸味料 0.1g
甘味料(ステビア) 0.015g
ペプチドY−2(粉末) 0.5g
(実施例3で得た)
精製水 全量を30mlに定容
―――――――――――――――――――――――
次の配合により錠剤を製造した。
実施例3で得たペプチドY−2(粉末)500g、還元麦芽糖水飴356g、結晶セルロース100g、ショ糖脂肪酸エステル40g、甘味料(ステビア)4gを混合し、この混合物を圧縮錠剤機により圧縮して素錠(250mg×4000個)を作製した。この素錠に、1錠当たり7.5mgのセラック溶液をコーティングし、4錠当たりペプチドY−2(粉末)を500mg含有する錠剤4000個を製造した。
実験動物としては、7〜8週齢のSprague−Dawleyラット(オス)を用い、その胸部大動脈を摘出して試験に供した。栄養バッファーとしては、Krebs−Henseleit(KH)溶液を用い、張力は1.0gとした。
(1)サーデンペプチド:サーデンペプチドY−2(仙味エキス株式会社)
(2)フェニレフリン(PE):10-7M
(3)N−ニトロ−L−アルギニン(L−NNA):10-4M
(4)KCl:50mM
Claims (4)
- サーデンペプチドを有効成分としてなり、且つサーデンペプチドが、魚肉を熱変性した後、中性ないしアルカリ性プロテアーゼ処理して加水分解し、酵素を失活せしめた後、分離処理してペプチドを得、このペプチドの水溶液をペプチド吸着樹脂に供してペプチドを該樹脂に吸着せしめた後、エタノール水溶液で溶出した画分であって、カルシウムチャンネル阻害作用を有するペプチドY−2であること、を特徴とするカルシウムチャンネル阻害剤。
- サーデンペプチドを有効成分としてなり、且つサーデンペプチドが、下記の理化学的性質を有するペプチドY−2であること、を特徴とするカルシウムチャンネル阻害剤。
(ペプチドY−2の理化学的性質)
(A)分子量:200〜10,000(ASAHIPAK GS−320高速液体クロマトグラフィーによる)
(B)融点:138℃で着色、分解する。
(C)比旋光度〔α〕D 20=−40°
(D)溶剤に対する溶解性:水に易溶であるが、エタノール、アセトン、ヘキサンにほとんど溶解しない。
(E)酸性、中性、塩基性の区別:中性 pH5.0〜8.0(10%溶液)
(F)物質の外観:白色〜淡黄色粉末。
(G)成分:水分2.72%(常圧加熱乾燥法);蛋白質87.25%(ケルダール法、窒素、蛋白質換算係数6.25);脂質0%(ソックスレー抽出法);灰分0.20%(直接灰化法)
(H)生理的性質:カルシウムチャンネル阻害ないし抑制作用を有する。
(I)赤外線吸収スペクトル:図4
(J)紫外線吸収スペクトル:図5 - サーデンペプチドがイワシ魚肉由来であること、を特徴とする請求項1又は2に記載のカルシウムチャンネル阻害剤。
- 請求項1又は2に記載のペプチドY−2自体からなること、あるいはペプチドY−2を含有してなること、を特徴とするカルシウムチャンネル阻害ないし抑制用飲食品。
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2004
- 2004-08-18 JP JP2004238429A patent/JP2006056803A/ja active Pending
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