ES2288019T3 - Agentes paliativos y de prevencion para la periodontosis. - Google Patents
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Abstract
Uso de una fracción proteica básica derivada de la leche para la preparación de una composición farmacéutica para prevenir o mejorar la enfermedad periodontal, en el que a) dicha fracción proteica tiene una distribución de peso molecular de 3.000-8.000 daltons y un punto isoeléctrico en el intervalo de 7, 5-11, b) dichos componentes principales de la fracción proteica son lactoferrina y lactoperoxidasa, c) dicha fracción proteica contiene como su constituyente de aminoácidos en la proteína, aminoácidos básicos en más del 15 por ciento en peso, y d) dicha fracción proteica es obtenible haciendo pasar un ingrediente de la leche o derivado de la leche a través de una resina de intercambio catiónico y realizando una elución en gradiente usando tampón fosfato de pH 7 que contiene cloruro de sodio 0, 1 M y tampón fosfato de pH 7 que contiene cloruro de sodio 1, 0 M.
Description
Agentes paliativos y de prevención para la
periodontosis.
Esta invención se refiere a un agente paliativo
y de prevención de la enfermedad periodontal con una fracción
proteica básica derivada de la leche como un ingrediente eficaz.
Esta invención también se refiere a la utilización del agente
paliativo y de prevención de la enfermedad periodontal con una
fracción proteica básica derivada de la leche como un ingrediente
eficaz para un alimento/bebida y medicamento.
En los últimos años, la enfermedad periodontal
se ha convertido en un objeto de preocupación pública. A diferencia
de la caries dental, la enfermedad periodontal es una enfermedad en
la que la base de los dientes se debilita y se pierde finalmente el
uso de los dientes distintos a un diente con caries. Además, se dice
que existe un gran número de personas que muestran síntomas de
enfermedad periodontal. En este sentido, la enfermedad periodontal
es una enfermedad más grave que la caries dental.
De manera convencional, la prevención de la
enfermedad periodontal se realiza desde el punto de vista de evitar
que se propaguen las bacterias, la causa de la enfermedad,
eliminando la placa dental, o haciendo gárgaras con un enjuague
bucal que contiene un agente antibacteriano. Pero se considera que
la eficacia de estos métodos es baja para los casos avanzados de
enfermedad periodontal. En otras palabras, en el estadio terminal de
la enfermedad periodontal, se observa una disminución en el hueso
alveolar y una vez que se pierde hueso alveolar, es difícil hacer
que se reproduzca. Por tanto, si se pierde un diente debido a la
enfermedad periodontal, interfiere con la vida diaria de la gente,
porque, de más está decirlo, es difícil comer y provoca dolor, etc.
Por tanto, se requiere un medio paliativo/de prevención inmediato y
eficaz. Sin embargo, en este momento, no está disponible ningún
agente paliativo y de prevención de la enfermedad periodontal, que
sea eficaz para frenar la disminución en el hueso alveolar.
El documento FR2651433 se refiere a
composiciones para el tratamiento de la enfermedad periodontal
obtenidas mezclando lactoperoxidasa, lactoferrina y algunas otras
enzimas.
El documento US5149647 proporciona un método
para obtener lactoperoxidasa y lactoferrina a partir de la leche
mediante cromatografía de intercambio catiónico, pero solo
proporciona fracciones purificadas que contienen cada uno de los
polipéptidos en su forma aislada y no describe el uso de ninguna de
estas fracciones para el tratamiento o prevención de la enfermedad
periodontal.
Un problema que esta invención pretende
solucionar es proporcionar un agente paliativo y de prevención de
la enfermedad periodontal con una fracción proteica básica derivada
de la leche como un ingrediente eficaz. Otro problema que pretende
solucionar esta invención es proporcionar un medicamento y
comida/bebida en las que está contenido este agente paliativo y de
prevención de la enfermedad periodontal con una fracción proteica
básica derivada de la leche como un ingrediente eficaz.
Los inventores de esta invención descubrieron
que la fracción proteica básica que está contenida en la leche en
una cantidad muy pequeña, tiene un efecto notable sobre la
prevención y mejora de la enfermedad periodontal y llegaron a
completar esta invención.
Como ingredientes, puede usarse leche tal como
leche de vaca, leche de cabra y leche de oveja. Los diferentes
tipos de leches mencionados anteriormente pueden usarse tal como
están, en forma de leche fresca, o en forma de productos preparados
tales como leche en polvo, leche desnatada, leche reducida, suero de
leche, etc.
La fracción proteica básica usada en esta
invención se obtiene por contacto de la leche mencionada
anteriormente con una resina de intercambio catiónico, y eluyendo
después una fracción adsorbida por la resina usando una disolución
de elución con una concentración de sal de 0,1 M \sim 1,0 M.
Además, la proteína básica obtenida puede usarse tras desalarla o
condensarla, si es necesario.
La fracción proteica básica obtenida de este
modo es una fracción proteica básica derivada de la leche que tiene
una distribución de peso molecular de 3.000\sim80.000 Daltons
mediante electroforesis (SDS-PAGE) con
dodecilsulfato de sodio en gel de poliacrilamida y tiene un punto
isoeléctrico de 7,5\sim11. Sus componentes principales son
lactoferrina y lactoperoxidasa y, como su constituyente de
aminoácidos en la proteína, contiene aminoácidos básicos en más del
15 por ciento en peso.
Además, el agente paliativo y de prevención de
la enfermedad periodontal de esta invención tiene la fracción
proteica básica mencionada anteriormente como su ingrediente
principal, y puede mezclarse en un alimento/bebida y medicamento,
por ejemplo, en forma de pasta de dientes, agentes de gargarismos,
golosinas, chicles, pastillas para chupar, etc. Como método de
dosificación como medicamento, es deseable aplicar aproximadamente
1\sim50 mg/día para un adulto a la superficie de los dientes,
dividido en varias aplicaciones.
Además, la fracción proteica básica de esta
invención es esencialmente el ingrediente de la leche y se considera
que es seguro. De hecho, como resultado de pruebas de toxicidad
usando ratas, no se encontró toxicidad aguda.
Tras aclarar completamente una columna en la que
se colocaron 100 g de resina de intercambio catiónico (Chitopearl
sulfonado fabricado por Fujibouseki) usando agua desionizada, se
hicieron pasar 101 de leche desnatada sin esterilizar a través de
la columna a un flujo de 10 ml/min. Tras aclarar completamente la
columna con agua desionizada, se hicieron pasar a través 21 de
tampón fosfato 0,05 M (pH 7) que contenía cloruro de sodio 0,1 M.
Posteriormente, se realizó una elución en gradiente desde 0,5 M
hasta 1,0 M usando tampón fosfato 0,05 M (pH 7) que contenía
cloruro de sodio 0,1 M y tampón fosfato 0,05 M (pH 7) que contenía
cloruro de sodio 1,0 M para eluir la proteína básica adsorbida por
la resina y recuperarla. Se desaló este eluato usando una membrana
de ósmosis inversa. Tras concentrarlo, se liofilizó, y se obtuvo una
fracción proteica básica en polvo. Repitiendo esta operación ocho
veces, se obtuvieron 821 g de la fracción proteica básica.
Se criaron 54 hámsteres golden de seis semanas
de edad de manera preliminar durante una semana. Bajo tratamiento
con éter, se colocó sutura de seda esterilizada número 4 para uso
quirúrgico 5 veces alrededor de la parte del cuello del diente de
M1 de los hámsteres golden. Se criaron suministrándoles alimento (D
nº 2000: Keyes, P.H. y Jordan: Archs. Oral. Biol. 9:
377-400, 1964) para provocar que tuvieran una
enfermedad periodontal. Se dividieron entonces los hámsteres en
tres grupos iguales de 18 cada uno, el grupo control, el grupo de
fracción proteica básica 0,5 mg/ml y el grupo de fracción proteica
básica 5 mg/ml. Se realizó un tratamiento para empapar
continuamente el interior de la cavidad oral de los hámsteres con
proteína básica de la concentración respectiva durante
aproximadamente 10 minutos dos veces al día. A los tres días, siete
días y catorce días tras el inicio de este tratamiento,
seleccionando seis hámsteres de cada grupo, tras realizar la
perfusión fija usando una disolución de glutaraldehído al 2,5% (pH
7,4) durante aproximadamente 20 minutos, se extrajeron ambos lados
del hueso de la mandíbula inferior y se evaluó la cantidad de
disminución de hueso alveolar. Después de que se fijaran los huesos
de la mandíbula extraídos con disolución de glutaraldehído al 2,5%,
se tomó una fotografía de rayos x blandos. Se analizaron las
fotografías usando un analizador de imágenes (PIAS
LA-555). Midiendo un área entre un borde del
cemento del esmalte y la parte superior del hueso alveolar cerca de
M1, se evaluó la cantidad de disminución de hueso alveolar.
Los resultados se muestran en la tabla 1. La
cantidad de disminución de hueso alveolar de los hámsteres en los
grupos a los que se administró fracción proteica básica 0,5 mg/ml y
5 mg/ml es significativamente baja y este efecto era dependiente de
la concentración. Estos resultados demuestran que la fracción
proteica básica derivada de la leche inhibe la disminución de hueso
alveolar y es eficaz para la prevención y la mejora de la enfermedad
periodontal.
Se fabricó pasta de dientes para fines
paliativos y de prevención de la enfermedad periodontal mezclando
cada ingrediente con el porcentaje mostrado en la tabla 2 a
continuación y colocando el producto en un recipiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Se fabricó un gargarismo para fines paliativos y
de prevención de la enfermedad periodontal mezclando cada
ingrediente en el porcentaje mostrado en la tabla 3.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Según el porcentaje en peso mostrado en la tabla
4, tras que se disolviese la base de goma y se mezclase cada
ingrediente en la misma, se dio forma al producto, dando como
resultado un chicle para fines paliativos y de prevención de la
enfermedad periodontal.
Se combinaron azúcar y jarabe de almidón
glutinoso a los porcentajes en peso mostrados en la tabla 5. Se
hirvió la mezcla a 150ºC (302ºF) hasta que se condensó. Después de
que se enfriara hasta 115ºC (239ºF), se agitó en la misma la
fracción proteica básica de la leche en la cantidad del 0,1 por
ciento en peso. Después de que se enfriase en un disco de
refrigeración, se le dio forma, dando como resultado golosinas para
fines paliativos y de prevención de la enfermedad periodontal.
\vskip1.000000\baselineskip
El agente paliativo y de prevención de la
enfermedad periodontal de esta invención con una fracción proteica
básica derivada de la leche como su ingrediente eficaz puede
inhibir la disminución de hueso alveolar que se produce en el
estadio terminal de la enfermedad periodontal. Por tanto, contribuye
en gran medida a la prevención y mejora de esta enfermedad.
También, dado que el agente paliativo y de
prevención de la enfermedad periodontal de esta invención puede
mezclarse en un alimento/bebida y medicamento, por ejemplo, en forma
de pasta de dientes, agentes de gargarismos, golosinas, chicles,
pastillas para chupar, etc., de modo que se aplican eficazmente a la
superficie de los dientes, pueden obtenerse efectos paliativos y de
prevención sustanciales.
Claims (3)
1. Uso de una fracción proteica básica derivada
de la leche para la preparación de una composición farmacéutica
para prevenir o mejorar la enfermedad periodontal, en el que
a) dicha fracción proteica tiene una
distribución de peso molecular de 3.000-8.000
daltons y un punto isoeléctrico en el intervalo de
7,5-11,
b) dichos componentes principales de la fracción
proteica son lactoferrina y lactoperoxidasa,
c) dicha fracción proteica contiene como su
constituyente de aminoácidos en la proteína, aminoácidos básicos en
más del 15 por ciento en peso, y
d) dicha fracción proteica es obtenible haciendo
pasar un ingrediente de la leche o derivado de la leche a través
de una resina de intercambio catiónico y realizando una elución en
gradiente usando tampón fosfato de pH 7 que contiene cloruro de
sodio 0,1 M y tampón fosfato de pH 7 que contiene cloruro de sodio
1,0 M.
2. Uso según la reivindicación 1, en el que la
composición está en forma de un alimento o bebida.
3. Uso según la reivindicación 1, en el que la
composición está en forma de una pasta de dientes o gargarismo.
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