KR101441728B1 - 골흡수 억제용 식품 소재 - Google Patents

골흡수 억제용 식품 소재 Download PDF

Info

Publication number
KR101441728B1
KR101441728B1 KR1020107012033A KR20107012033A KR101441728B1 KR 101441728 B1 KR101441728 B1 KR 101441728B1 KR 1020107012033 A KR1020107012033 A KR 1020107012033A KR 20107012033 A KR20107012033 A KR 20107012033A KR 101441728 B1 KR101441728 B1 KR 101441728B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
milk
protein
bone resorption
fraction
degradation product
Prior art date
Application number
KR1020107012033A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20100105561A (ko
Inventor
아츠시 세리자와
요시카즈 모리타
다이스케 우에츠지
아이코 오노
히로아키 마츠야마
사토시 히구라시
Original Assignee
유키지루시 메그밀크 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 유키지루시 메그밀크 가부시키가이샤 filed Critical 유키지루시 메그밀크 가부시키가이샤
Publication of KR20100105561A publication Critical patent/KR20100105561A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101441728B1 publication Critical patent/KR101441728B1/ko

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23KFODDER
    • A23K50/00Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/40Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A21BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21DTREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/24Organic nitrogen compounds
    • A21D2/26Proteins
    • A21D2/261Animal proteins
    • A21D2/263Animal proteins from dairy products
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/06Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
    • A23C19/068Particular types of cheese
    • A23C19/08Process cheese preparations; Making thereof, e.g. melting, emulsifying, sterilizing
    • A23C19/082Adding substances to the curd before or during melting; Melting salts
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23JPROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/20Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23JPROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/30Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
    • A23J3/32Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
    • A23J3/34Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
    • A23J3/341Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins
    • A23J3/343Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins of dairy proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23KFODDER
    • A23K20/00Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10Organic substances
    • A23K20/142Amino acids; Derivatives thereof
    • A23K20/147Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/385Concentrates of non-alcoholic beverages
    • A23L2/39Dry compositions
    • A23L2/395Dry compositions in a particular shape or form
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52Adding ingredients
    • A23L2/66Proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/19Dairy proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/20Milk; Whey; Colostrum
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703Inhibitors; Suppressors
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Abstract

다음 (1) 내지 (4)의 특성을 갖는 유단백질 분획은 골흡수 억제 작용이 우수하고, 골질환의 예방 또는 치료에 유용하다:
(1) 젖 유래인 것
(2) 분자량 12,000∼16,000 달톤 범위의 단백질을 함유하는 분획인 것
(3) 구성 아미노산 조성 내에 염기성 아미노산을 18∼20 중량% 함유하고, 또한, 염기성 아미노산/산성 아미노산 비가 0.7∼0.9의 범위인 것
(4) 골흡수 억제 작용을 갖는 것.

Description

골흡수 억제용 식품 소재{FOOD MATERIAL FOR INHIBITING BONE RESORPTION}
본 발명은, 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물에 관한 것이다.
본 발명의 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물은, 골흡수 억제 작용을 갖기 때문에, 골질환의 예방 또는 치료, 골강화 등을 목적으로 한 골흡수 억제제로서, 또한, 골질환의 예방 또는 치료용 혹은 골흡수 억제용 의약품, 음식품 및 사료의 유효 성분으로서 유용하다.
최근, 고령화에 따라, 골다공증, 골절, 요통 등의 각종 골질환이 증가하는 경향이 있다. 골조직에 있어서는, 끊임없이 골형성과 골흡수가 행해지고 있고, 젊었을 때에는 골형성과 골흡수의 밸런스가 유지되고 있지만, 나이가 듦에 따라 여러 가지 원인으로 그 밸런스가 골흡수로 치우친다(언커플링). 그리고, 이 상태가 장기간 계속되면 골조직이 약해져서 골다공증, 골절, 요통 등의 각종 골질환을 일으키게 된다. 이 언커플링을 방지할 수 있으면, 골다공증, 골절, 요통 등의 각종 골질환을 예방할 수 있는 것으로 생각되고 있다.
종래, 언커플링을 방지하고, 각종 골질환을 예방 또는 치료하는 방법으로서, (1) 식이(食餌)에 의한 칼슘 보급, (2) 가벼운 운동, (3) 일광욕, (4) 약물 치료 등이 행해지고 있다. 식이에 의한 칼슘 보급에는, 탄산칼슘, 인산칼슘 등의 칼슘염이나 난각(卵殼), 어골분 등의 천연 칼슘제가 사용되고 있다. 그러나, 이들은 반드시 경구 섭취에 적합한 소재라고는 할 수 없다. 가벼운 운동은 조깅이나 산책 등이 좋다고 생각되지만, 몸이 약한 경우는 가벼운 운동도 성가신 것이며, 더구나 누워만 있는 노인은 거의 운동할 수 없다. 일광욕은 활성화 비타민 D3의 보급이라는 점에서는 좋다고 여겨지지만, 이것만으로는 불충분하다. 약물 투여에는 1α-히드록시 비타민 D3나 칼시토닌 제제 등이 사용되고 있고, 골다공증의 치료에는 유효하다는 것이 알려져 있다. 그러나, 이들 물질은 의약 그 자체이며, 식품 소재로서 사용 가능한 것은 아니다.
본 발명자들은, 식품 소재로서 사용 가능한 골강화 작용을 갖는 물질을 얻기 위해서, 젖(乳) 속에 존재하는 골강화 인자를 계속해서 탐색해 왔다. 그 결과, 유청 단백질의 수용성 분획으로부터 유청 유래의 염을 제거한 단백질 및 펩티드 혼합물에 골강화 작용이 있는 것을 발견하였다(예컨대, 특허문헌 1 참조). 그리고, 이 단백질 및 펩티드 혼합물의 수용액을 에탄올 처리, 가열 처리, 가염 처리, 한외여과막 처리를 행하여 얻어지는 분획에 골아세포 증식 촉진 작용 및 골강화 작용이 있는 것을 발견하였다(예컨대, 특허문헌 2, 특허문헌 3 참조). 또한, 젖 속에 존재하는 염기성 단백질에 골아세포 증식 촉진 작용, 골강화 작용 및 골흡수 방지 작용이 있는 것을 발견하였다(예컨대, 특허문헌 4 참조).
특허문헌 1 : 일본 특허 제3160862호 공보
특허문헌 2 : 일본 특허 제3092874호 공보
특허문헌 3 : 일본 특허 공개 평성 제5-320066호 공보
특허문헌 4 : 일본 특허 제3112637호 공보
본 발명은, 식품 소재로서도 사용 가능한, 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 발견하여, 이 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 함유하는 골흡수 억제제 및 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 의약품, 음식품 및 사료를 제공하는 것을 과제로 한다.
본 발명자들은, 새로운 골흡수 억제 소재의 탐색을 시도한 결과, 종래의 식품 소재보다도 강한 골흡수 억제 작용을 나타내는 분획을 얻을 수 있는 것을 발견하였다. 그리고, 이들 지견에 기초하여 이 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 함유하는 골흡수 억제제 및 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 의약품, 음식품 및 사료를 얻는 것에 이른 것이다.
본 발명은, 하기의 구성으로 이루어진 발명이다.
(A) 다음 특성을 갖는 유단백질 분획에 관한 것이다:
(1) 젖 유래인 것
(2) 소듐도데실술페이트-폴리아크릴아미드겔(SDS-PAGE) 전기영동으로 분자량 12,000∼16,000 달톤 범위의 단백질을 함유하는 분획인 것
(3) 구성 아미노산 조성 내에 염기성 아미노산을 18∼20 중량% 함유하고, 또한, 염기성 아미노산/산성 아미노산 비가 0.7∼0.9의 범위인 것
(4) 골흡수 억제 작용을 갖는 것.
(B) 상기 유단백질 분획을 단백질 분해 효소로 분해하여 얻어지는 유단백질 분획 분해물.
(C) (A) 또는 (B)에 기재한 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 함유하는 골흡수 억제제.
(D) (A) 또는 (B)에 기재한 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 의약품.
(E) (A) 또는 (B)에 기재한 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 음식품.
(F) (A) 또는 (B)에 기재한 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 사료.
본 발명의 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 유효 성분으로 하는 골흡수 억제제 및 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 의약품, 음식품 및 사료는, 경구적으로 섭취함으로써, 체 내에서 골흡수를 억제한다. 따라서, 본 발명의 유단백질 분획을 유효 성분으로 하는 골흡수 억제제 및 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획을 배합한 의약품, 음식품 및 사료는, 인간이나 동물의 생체 내에서 골흡수를 억제하기 때문에, 골강화 작용을 가지며, 또한 골다공증 등의 골량 감소의 억제에 유효하다.
도 1은 뇨중 골흡수 마커인 디옥시피리디놀린(DPD)량의 뇨중 총량 및 크레아티닌당 DPD 농도를 측정한 결과를 나타낸 도면이다(시험예 2).
본 발명은, 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 유효 성분으로 하는 골흡수 억제제 및 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 의약품, 음식품 및 사료에 관한 것이다.
본 발명의 이러한 유단백질 분획은, 예컨대, 탈지유나 유청 등의 젖 원료를 양이온 교환수지와 접촉시켜 0.3 M의 식염 용액으로 세정한 후, 이 수지에 흡착된 유단백질을 0.6 M의 식염 용출액으로 용출할 수 있다. 또한, 염류로서는, 식염 이외에 칼륨염, 암모니아염, 인산염, 아세트산염, 탄산염 등도 사용할 수 있고, 세정액의 이온 강도를 0.3∼0.4, 용출 용액의 이온 강도를 0.55∼0.65로 적절하게 조정하여 본 발명의 유단백질 분획을 얻을 수 있다. 또한, 이 용출 분획을 회수하여 역침투(RO)막이나 전기투석(ED)법 등에 의해 탈염 및 농축시키고, 필요에 따라 건조시킴으로써 얻을 수 있다. 역침투(RO)막으로서는, Desal-3(Desalination사 제조), HR-95(Dow Danmark사 제조), NTR-729HF(니토덴코사 제조) 등을 예시할 수 있다. 또한, 전기투석(ED)장치는 유아사 아이오닉스사나 일본 렌스이사에서 제조한 전기 투석 장치를 예시할 수 있다.
또한, 젖 유래의 미량 단백질 분획을 얻는 방법으로서는, 젖 또는 젖 유래의 원료를 양이온 교환체에 접촉시킨 후, 이 양이온 교환체에 흡착된 염기성 단백질 분획을, pH 5를 초과하고, 이온 강도 0.5를 초과하는 용출액으로 용출하여 얻는 방법[일본 특허 공개 평성 제5-202098호 공보], 알긴산겔을 이용하여 얻는 방법[일본 특허 공개 소화 제61-246198호 공보], 무기의 다공성 입자를 이용하여 유청으로부터 얻는 방법[일본 특허 공개 평성 제1-86839호 공보], 황산화에스테르 화합물을 이용하여 젖으로부터 얻는 방법[일본 특허 공개 소화 제63-255300호 공보] 등이 알려져 있고, 본 발명에서는, 이러한 방법으로 젖 유래의 단백질 분획을 얻을 수 있다.
이와 같이 하여 회수된 유단백질 분획은, 통상, 동결 건조 등에 의해 분말화하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 이용하는 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획은, 그 구성 아미노산 조성 내에 염기성 아미노산을 18∼20 중량% 함유하고, 또한, 염기성 아미노산/산성 아미노산 비가 0.7∼0.9의 범위인 것이 바람직하다. 이 범위를 벗어나면 본원 발명의 효과를 발휘할 수 없다. 또한, 본 발명품은, 분자량 12,000∼16,000 달톤, 등전점(等電點)이 10 이상을 나타내는 단백질이 주성분인 단백질 혼합물이다.
유단백질 분획 분해물은, 유단백질 분획과 동일한 아미노산 조성을 갖고 있고, 예컨대, 상기한 방법에 의해 얻어진 유단백질 분획에 펩신, 트립신, 키모트립신 등의 단백질 분해 효소를 작용시키며, 또한, 필요에 따라, 판크레아틴 등의 단백질 분해 효소를 작용시킴으로써, 평균 분자량 4,000 이하의 분해물로서 얻을 수 있다. 또한, 유단백질 분획 분해물은, 통상, 동결 건조 등에 의해 분말화하여 사용할 수 있다.
골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획의 공급원이 되는 젖 또는 젖 유래 원료로서는, 우유, 인유, 산양유, 양유 등의 젖을 이용할 수 있고, 이들 젖을 그대로, 혹은, 이들 젖의 환원유, 탈지유, 훼이(whey) 등을 이용할 수 있다.
본 발명의 골흡수 억제제를 투여하는 데 있어서는, 유효 성분인 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 그대로의 상태로 이용할 수도 있지만, 통상적인 방법에 따라, 분말제, 과립제, 정제, 캡슐제, 드링크제 등으로 제제화하여 이용할 수도 있다. 나아가서는, 이들 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 그대로 혹은 제제화한 후, 이것을 영양제나 음식품 등에 배합하여 골흡수 억제를 도모하는 것도 가능하다. 또한, 본 발명의 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물은, 비교적 열에 대하여 안정적이기 때문에, 통상 행해지는 조건으로 가열 살균하는 것도 가능하다.
본 발명에 있어서, 골흡수 억제 작용을 발휘시키기 위해서는, 체중, 성별이나 연령 등을 고려하여 적절하게 결정하면 되지만, 통상 성인의 경우, 본 발명품인 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 1일당, 1 ㎎∼50 ㎎ 섭취할 수 있도록 배합량 등을 조정하면 된다. 이와 같이 본 발명품은 저용량으로 효과가 있다. 본 발명의 골흡수 억제 작용을 갖는 성분은, 골흡수 억제제로서, 혹은 이들을 배합한 의약품, 음식품 및 사료를 경구 섭취함으로써, 골흡수 억제 작용을 발휘한다.
이하에, 참고예, 실시예 및 시험예를 나타내어 본 발명을 상세히 설명하지만, 이들은 단순히 본 발명의 실시양태를 예시하는 것으로서, 본 발명은 이들에 의해 전혀 한정되지 않는다.
[참고예 1]
하기의 방법(일본 특허 제3112637호 참조)에 의해 골강화가 확인되는 시판품인 유단백질 분획을 조제하였다.
양이온 교환수지의 술폰화 키토펄(후지보세키 제조) 0.5 ℓ를 충전한 직경 10 ㎝의 칼럼을 탈이온수로 충분히 세정하였다. 이 칼럼에 미살균 탈지유 50 ℓ를 유속 100 ㎖/분으로 통액시킨 후, 이 칼럼을 탈이온수로 충분히 세정하고, 0.95 M 염화나트륨을 함유하는 0.05 M 인산 완충액(pH 7.0) 2.5 ℓ를 통액시켜 수지에 흡착된 단백질을 용출시켰다. 그리고, 이 용출액을 역침투(RO)막 처리에 의해 탈염하여 농축시킨 후, 동결 건조시켜 분말 형상의 유단백질 분획을 얻었다. 이 조작을 2회 반복하여 104 g의 단백질 분획을 얻었다. 이 단백질 분획의 등전점은 7.0∼8.5이며, 이 단백질 분획에 함유되는 염기성 아미노산은 17.8%였다.
실시예 1
양이온 교환수지의 술폰화 키토펄(후지보세키 제조) 0.5 ℓ를 충전한 직경 10 ㎝의 칼럼을 탈이온수로 충분히 세정하였다. 이 칼럼에 미살균 탈지유 50 ℓ를 유속 100 ㎖/분으로 통액시킨 후, 이 칼럼을 0.3 M 염화나트륨을 함유하는 0.05 M 인산 완충액(pH 7.0)으로 충분히 세정하고, 계속해서, 0.55 M 염화나트륨을 함유하는 0.05 M 인산 완충액(pH 7.0) 2.5 ℓ를 통액시켜 수지에 흡착된 단백질을 용출시켰다. 그리고, 이 용출액을 역침투(RO)막 처리에 의해 탈염하여 농축시킨 후, 동결 건조시켜 분말 형상의 유단백질 분획을 얻었다. 이 조작을 5회 행하여 유단백질 분획 37.4 g을 얻었다. 이 분획은 분자량 12,000∼16,000 달톤, 등전점은 10 이상이며, 이 유단백질 분획에 함유되는 구성 아미노산 중, 염기성 아미노산은 18%∼20%였다. 또한, 염기성 아미노산/산성 아미노산 비는 0.7∼0.9였다.
실시예 2
양이온 교환수지의 술폰화 키토펄(후지보세키 제조) 0.5 ℓ를 충전한 직경 10 ㎝의 칼럼을 탈이온수로 충분히 세정하였다. 이 칼럼에 미살균 탈지유 50 ℓ를 유속 100 ㎖/분으로 통액시킨 후, 이 칼럼을 0.4 M 염화나트륨을 함유하는 0.05 M 인산 완충액(pH 7.0)으로 충분히 세정하고, 0.65 M 염화나트륨을 함유하는 0.05 M 인산 완충액(pH 7.0) 2.5 ℓ를 통액시켜 수지에 흡착된 단백질을 용출시켰다. 그리고, 이 용출액을 역침투(RO)막 처리에 의해 탈염하여 농축시킨 후, 동결 건조시켜 분말 형상의 유단백질 분획을 얻었다. 이 조작을 3회 행하여 유단백질 분획 22.8 g을 얻었다. 이 분획은 분자량 12,000∼16,000 달톤, 등전점은 10이상이며, 이 유단백질 분획에 함유되는 구성 아미노산 중, 염기성 아미노산은 18%∼20%였다. 또한, 염기성 아미노산/산성 아미노산 비는 0.7∼0.9였다.
실시예 3
실시예 1에서 얻어진 유단백질 분획 37.4 g을 증류수 10 ℓ에 용해시킨 후, 펩신(간토카가꾸 제조)을 2% 농도가 되도록 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 교반하면서 가수분해하였다. 계속해서, 수산화나트륨 용액으로 pH 6.8로 중화한 후, 1% 판크레아틴(시그마사 제조)을 첨가하여 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응시킨 후, 80℃에서 10분간 가열 처리하여 효소를 실활(失活)시킨 후, 유단백질 분획 분해물 36.2 g을 얻었다.
실시예 4
실시예 2에서 얻어진 유단백질 분획 22.8 g을 증류수 8 ℓ에 용해시킨 후, 트립신(간토카가꾸 제조)을 2% 농도가 되도록 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 교반하면서 가수분해하였다. 계속해서, 수산화나트륨 용액으로 pH 6.6으로 중화한 후, 1% 판크레아틴(시그마사 제조)을 첨가하여 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응시킨 후, 80℃에서 10분간 가열 처리하여 효소를 실활시킨 후, 유단백질 분획 분해물 21.1 g을 얻었다.
[시험예 1]
참고예 1 및 실시예 1에서 얻어진 각 유단백질 분획에 대해서, 골흡수 억제 작용을 다카다 연구진의 방법[Takada, Y. et al., Bone and Mineral, vol.17, pp.347-359, 1992]에 따라 조사하였다. 생후 10∼20일령의 ICR계 마우스의 장관골을 적출하여 연조직을 제거한 후, 5% 소 태아 혈청을 함유하는 α-MEM 용액 속에서 골을 기계적으로 잘게 잘라 파골 세포를 포함하는 전체 골수 세포를 얻었다. 이 세포를 상아편 위에 약 2×106 세포를 5% 소 태아 혈청을 함유하는 α-MEM 용액으로 스폿하였다. 수시간 후, 시험 시료를 첨가한 5% 소 태아 혈청을 함유하는 α-MEM 용액을 첨가하여 5일간 배양하고, 기존의 파골 세포의 골흡수 활성을 조사하였다. 또한, 골흡수의 평가는, 배양 후, 상아편 위의 세포를 박리하여 헤마톡실린 염색하여 화상 해석에 의해 골흡수와(骨吸收窩)의 면적을 측정함으로써 행하였다. 시료 블랭크를 대조로 하고, 그 골흡수와의 면적을 100%로 했을 때의 각 시료의 면적을 %로 나타내어 골흡수 활성으로 하였다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.
시료 최종 농도 골흡수 활성
대조 ---- 100
유단백질 분획(참고예 1) 0.01 mg/ml 75.2±3.7(%, ±SD)
유단백질 분획(실시예 1) 0.01 mg/ml 10.9±4.7
유단백질 분획(실시예 1) 0.001 mg/ml 22.3±5.6
대조군 및 참고예 1에서 얻어진 유단백질 분획에 비하여 본 발명의 유단백질 분획(실시예 1)은, 유의적인 골흡수 억제 작용이 확인되었다.
[시험예 2]
참고예 1 및 실시예 1에서 얻어진 각 유단백질 분획에 대해서, 동물 실험에 의해 골흡수 억제 작용을 조사하였다. 동물 실험에는 6주령의 Wistar계 암컷 래트를 이용하였다. 1주일간의 예비 사육 후, 난소 적출 수술을 행하고, 그 후, 저칼슘식(칼슘 함량 0.3%)으로 5주일간 사육하여 회복 기간을 두며, 그 후, 동물 실험에 제공하였다. 또한, 난소를 적출하여 저칼슘식(AIN-76 베이스)으로 5주일간 사육한 래트는, 분명히 골다공증 상태에 있었다. 이 골다공증 상태를 야기한 래트를 1군 8마리씩, 유단백질 분획 무첨가의 대조군(A군), 참고예 1에서 얻어진 유단백질 분획 0.1 중량% 투여군(B군), 실시예 1에서 얻어진 유단백질 분획 0.1 중량% 투여군(C군)의 3시험군으로 나누어 각각 표 2에 나타내는 시험 사료로 4개월간 사육하였다. 또한, 각 시험 사료의 질소 함량(17.06%)이 동일해지도록 카세인으로 조정하였다.
A군 B군 C군
카세인 20.0 19.9 19.9
콘스타치 15.0 15.0 15.0
셀룰로오스 5.0 5.0 5.0
옥수수유 5.0 5.0 5.0
비타민 혼합 1.0 1.0 1.0
미네랄 혼합(칼슘 비함유) 3.5 3.5 3.5
CaHPO4·2H2O 1.29 1.29 1.29
자당 48.91 48.91 48.91
DL-메티오닌 0.3 0.3 0.3
참고예 1에서 얻어진 유단백질 분획 - 0.1 -
실시예 1에서 얻어진 유단백질 분획 - - 0.1
(중량%)
4개월간 사육한 래트에 대해서, 마지막 1주일간, 대사 게이지로써 뇨(尿)를 회수하여 뇨 속에 존재하는 골흡수 마커인 디옥시피리디놀린(DPD)량(뇨중 총량)을, 오스테오링크스 「DPD」(스미토모세이야꾸 바이오메디칼사 제조)를 이용하여 측정하였다. 또한, 1일당 배설량이 뇨량에 의존되지 않는 크레아티닌량으로 상기 DPD 농도를 보정하면, 뇨량에 의존되지 않는 골흡수 마커로서 보다 정확한 DPD량을 산출할 수 있다. 그래서, 뇨중의 크레아티닌 농도를, 크레아티닌 테스트 와코(와코쥰야쿠고교사 제조)를 이용하여 측정하고, 크레아티닌당의 DPD 농도를 산출함으로써 보정을 하였다. 투여 4개월 후의 뇨중 골흡수 마커인 디옥시피리디놀린(DPD)의 뇨중 총량 및 크레아티닌당의 DPD 농도를 측정한 결과를 도 1에 나타내었다. 이것에 따르면, 1주일간의 DPD 총량 및 크레아티닌 보정 후의 DPD 농도 모두 대조군(A군: 유단백질 분획 무첨가)에 비하여 참고예 1에서 얻어진 유단백질 분획 투여군(B군), 실시예 1에서 얻어진 유단백질 분획 투여군(C군)에서 낮은 값을 나타내었다. 참고예 1에서 얻어진 유단백질에도 골흡수 억제 효과가 확인되지만, 본 발명품 쪽이 그 작용은 강한 것이 분명해졌다.
또한, 실험 결과는 나타내지 않았지만, 실시예 3 및 실시예 4에서 얻어진 유단백질 분획 분해물을 이용한 경우도 동일한 효과가 확인되었다.
실시예 5
실시예 1에서 얻어진 유단백질 분획 100 ㎎에, 함수 결정 포도당 93.4 g, 탄산칼슘 5 g, 슈가에스테르 1 g, 향료 0.5 g을 첨가하여 혼화한 후, 타블릿 형상으로 타정하여 본 발명의 골흡수 억제제를 제조하였다.
실시예 6
표 3에 나타낸 조성으로 각 성분을 혼합하여 도우(dough)를 작성하고, 성형한 후, 하소하여 골흡수 억제용 비스킷을 제조하였다.
소맥분 50.0(중량%)
설탕 20.0
식염 0.5
마가린 12.5
계란 12.1
4.0
탄산수소나트륨 0.1
중탄산암모늄 0.2
탄산칼슘 0.5
유단백질 분획 분말(실시예 1) 0.1
실시예 7
표 4에 나타내는 조성의 골흡수 억제용 과즙 음료를 제조하였다.
혼합 이성화당 15.0(중량%)
과즙 10.0
구연산 0.5
유단백질 분획 분말(실시예 1) 0.5
향료 0.1
칼슘 0.1
73.8
실시예 8
표 5에 나타낸 배합에 의해 원료를 혼합하여 골흡수 억제용 개 사육 사료를 제조하였다.
유단백질 분획 분말(실시예 1) 2.5(중량%)
탈지 분유 13.5
대두박 12.0
대두유 4.0
옥수수유 2.0
팜유 27.0
옥수수 전분 14.0
소맥분 9.0
밀기울 2.0
비타민 혼합물 9.0
미네랄 혼합물 2.0
셀룰로오스 3.0
실시예 9
표 6에 나타낸 조성으로 각 성분을 혼합하고, 가압 성형하여 실시예 3에서 얻어진 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 정제를 조제하였다.
함수 결정 포도당 59.4(중량%)
유단백질 분획 분해물(실시예 3) 16.0
콘스타치 12.0
셀룰로오스 4.0
옥수수유 4.0
비타민 혼합물(콜린 함유) 1.0
미네랄 혼합물 3.6
실시예 10
표 7에 나타낸 조성으로 각 성분을 혼합하고, 유화 온도 85℃에서 유화하여 실시예 4에서 얻어진 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 가공 치즈를 조제하였다.
고다 치즈 43.0(중량%)
체다 치드 43.0
구연산나트륨 2.0
유단백질 분획 분해물(실시예 4) 0.5
젖 유래 칼슘 1.0
10.5
본 발명의 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물은, 골흡수 억제 작용을 가지며, 또한 골다공증 등의 골량 감소의 억제에 유효하기 때문에, 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 유효 성분으로 하는 골흡수 억제제 및 골흡수 억제 작용을 갖는 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 의약품, 음식품 및 사료로서 이용할 수 있다.

Claims (6)

  1. 다음 (1) 내지 (6)의 특성을 갖는 유단백질 분획:
    (1) 젖 유래인 것
    (2) 소듐도데실술페이트-폴리아크릴아미드겔(SDS-PAGE) 전기영동으로 분자량 12,000∼16,000 달톤 범위의 단백질을 함유하는 분획인 것
    (3) 구성 아미노산 조성 내에 염기성 아미노산을 18∼20 중량% 함유하고, 또한, 염기성 아미노산/산성 아미노산 비가 0.7∼0.9의 범위인 것
    (4) 골흡수 억제 작용을 갖는 것
    (5) 등전점이 10 이상인 것
    (6) 젖 원료를 양이온 교환수지에 접촉시키는 단계, 식염 용액으로 세정하는 단계, 식염 용출액으로 용출시키는 단계, 회수된 용출 분획을 탈염, 농축 및 건조하는 단계를 포함하는 제조 방법에 의해 제조되는 것.
  2. 제1항에 기재한 유단백질 분획을 단백질 분해 효소로 분해하여 얻어지는 유단백질 분획 분해물.
  3. 제1항 또는 제2항에 기재한 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 함유하는 골흡수 억제제.
  4. 제1항 또는 제2항에 기재한 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 의약품.
  5. 제1항 또는 제2항에 기재한 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 음식품.
  6. 제1항 또는 제2항에 기재한 유단백질 분획 또는 유단백질 분획 분해물을 배합한 골흡수 억제용 사료.
KR1020107012033A 2007-11-01 2008-10-28 골흡수 억제용 식품 소재 KR101441728B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2007285408 2007-11-01
JPJP-P-2007-285408 2007-11-01
PCT/JP2008/003066 WO2009057282A1 (ja) 2007-11-01 2008-10-28 骨吸収抑制用食品素材

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20100105561A KR20100105561A (ko) 2010-09-29
KR101441728B1 true KR101441728B1 (ko) 2014-09-17

Family

ID=40590689

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020107012033A KR101441728B1 (ko) 2007-11-01 2008-10-28 골흡수 억제용 식품 소재

Country Status (9)

Country Link
US (1) US8580740B2 (ko)
EP (1) EP2208733A4 (ko)
JP (1) JPWO2009057282A1 (ko)
KR (1) KR101441728B1 (ko)
CN (1) CN101868475A (ko)
AU (1) AU2008320272B2 (ko)
CA (1) CA2704042C (ko)
NZ (1) NZ585093A (ko)
WO (1) WO2009057282A1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY160058A (en) 2007-11-01 2017-02-15 Megmilk Snow Brand Co Ltd Bone-reinforcing food material
JP5783484B2 (ja) * 2010-09-30 2015-09-24 雪印メグミルク株式会社 皮膚コラーゲン産生促進剤
JP5969225B2 (ja) * 2012-03-09 2016-08-17 雪印メグミルク株式会社 骨強化剤

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH107585A (ja) * 1996-06-20 1998-01-13 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 骨形成促進及び骨吸収防止剤
JP2000281587A (ja) 1999-03-30 2000-10-10 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 骨吸収抑制剤

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE901672A (fr) 1985-02-07 1985-08-07 Oleofina Sa Procede de purification de proteines du lait et de ses derives.
JPH0725800B2 (ja) 1987-04-10 1995-03-22 雪印乳業株式会社 硫酸エステル化物を用いて乳からラクトフエリンを分離、精製する方法
FR2616628B1 (fr) 1987-06-19 1989-09-29 Entremont Sa Procede pour extraire des proteines du lactoserum par adsorption et elution
JP3089636B2 (ja) 1989-09-05 2000-09-18 ミノルタ株式会社 画像形成装置
JPH03112637A (ja) 1989-09-27 1991-05-14 Hitachi Chem Co Ltd 接着剤付き化粧板及びその製造方法
JPH03160862A (ja) 1989-11-17 1991-07-10 Fujitsu Ltd 予約情報確認方式
JP3160862B2 (ja) 1990-11-15 2001-04-25 雪印乳業株式会社 骨強化食品、飼料及び医薬
JP3604159B2 (ja) 1992-05-07 2004-12-22 雪印乳業株式会社 乳清由来の骨芽細胞増殖促進及び骨強化因子ならびに該因子を含有せしめた骨強化食品、医薬および飼料
ATE163858T1 (de) * 1991-12-26 1998-03-15 Snow Brand Milk Products Co Ltd Die knochen stärkender faktor und lebensmittel und getränke die diesen faktor enthalten
JP3092874B2 (ja) 1991-12-26 2000-09-25 雪印乳業株式会社 乳清由来の骨芽細胞増殖・骨強化画分及び該画分を含有する骨強化食品、飼料、薬品類
JPH05202098A (ja) 1992-01-29 1993-08-10 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 乳質原料から生理活性物質の製造法
JP3460851B2 (ja) * 1993-04-28 2003-10-27 雪印乳業株式会社 新規システインプロテアーゼインヒビター
JP3112637B2 (ja) * 1994-09-30 2000-11-27 雪印乳業株式会社 骨強化剤
JP2974604B2 (ja) * 1996-01-23 1999-11-10 雪印乳業株式会社 塩基性タンパク質組成物、塩基性ペプチド組成物及びその利用
JP3018313B2 (ja) * 1996-02-23 2000-03-13 雪印乳業株式会社 骨形成促進及び骨吸収防止剤
JP4082782B2 (ja) * 1998-04-30 2008-04-30 雪印乳業株式会社 歯周病予防及び改善剤
US6649590B2 (en) 2000-06-09 2003-11-18 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Method of producing fractions containing a high concentration of milk basic cystatin and decomposition products thereof
JP2001346519A (ja) 2000-06-09 2001-12-18 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 乳塩基性シスタチン高含有画分及びその分解物の製造方法
EP1602284A1 (en) * 2000-06-09 2005-12-07 Snow Brand Milk Products, Co., Ltd. Method of producing fractions containing a high concentration of milk basic cystatin and decomposition products thereof
JP2004115509A (ja) 2002-09-05 2004-04-15 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 破骨細胞分化抑制因子産生促進剤
EP1623718B1 (en) * 2003-05-07 2011-01-05 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Skin collagen production promoter
JP2004331556A (ja) * 2003-05-07 2004-11-25 Japan Science & Technology Agency 2”−ヒドロキシニコチアナミン、その製造方法、並びにアンジオテンシン変換酵素阻害剤、血圧降下剤及び健康食品
JP4698935B2 (ja) * 2003-05-07 2011-06-08 雪印乳業株式会社 皮膚コラーゲン産生促進剤
JP4536341B2 (ja) 2003-08-15 2010-09-01 雪印乳業株式会社 骨形成促進剤
US7889353B2 (en) 2005-08-30 2011-02-15 Koninklijke Philips Electronics N.V. Method of measuring relative movement of an object and an optical input device over a range of speeds
KR101220603B1 (ko) 2007-05-21 2013-01-10 캐논 가부시끼가이샤 중합 토너의 제조 방법, 중합 토너, 토너용 결착 수지의 제조 방법 및 토너용 결착 수지
US20100234296A1 (en) 2007-11-01 2010-09-16 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Food material for inhibiting osteoclastogenesis
JP5783484B2 (ja) * 2010-09-30 2015-09-24 雪印メグミルク株式会社 皮膚コラーゲン産生促進剤

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH107585A (ja) * 1996-06-20 1998-01-13 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 骨形成促進及び骨吸収防止剤
JP2000281587A (ja) 1999-03-30 2000-10-10 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 骨吸収抑制剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bone Vol. 42, pp. 380-387(2007.10.04) *
Bone Vol. 42, pp. 380-387(2007.10.04)*

Also Published As

Publication number Publication date
CA2704042A1 (en) 2009-05-07
NZ585093A (en) 2013-03-28
US8580740B2 (en) 2013-11-12
JPWO2009057282A1 (ja) 2011-03-10
US20100261883A1 (en) 2010-10-14
KR20100105561A (ko) 2010-09-29
WO2009057282A1 (ja) 2009-05-07
EP2208733A1 (en) 2010-07-21
CA2704042C (en) 2017-06-20
AU2008320272A1 (en) 2009-05-07
AU2008320272B2 (en) 2014-01-23
CN101868475A (zh) 2010-10-20
EP2208733A4 (en) 2014-08-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2974604B2 (ja) 塩基性タンパク質組成物、塩基性ペプチド組成物及びその利用
EP0704218B1 (en) Bone reinforcing agent and foods and drinks product containing the same
US20120040908A1 (en) Fracture repair promoter
JPH04183371A (ja) 骨強化食品、飼料及び医薬
CA2349980C (en) Method of producing fractions containing a high concentration of milk basic cystatin and decomposition products thereof
EP2208734B1 (en) Food material for inhibiting the formation of osteoclast
AU2008320271B2 (en) Food material for promoting the differentiation of osteoblast and inhibiting the differentiation of osteoclast
KR101441728B1 (ko) 골흡수 억제용 식품 소재
KR101705905B1 (ko) 골 강화용 식품 소재

Legal Events

Date Code Title Description
N231 Notification of change of applicant
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170822

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180824

Year of fee payment: 5