ES2286398T3 - Utilizacion de al menos un peptido de la caseina "alpha s2" con actividad inhibidora de i'ace para la preparacion de medicamentos y alimentos. - Google Patents
Utilizacion de al menos un peptido de la caseina "alpha s2" con actividad inhibidora de i'ace para la preparacion de medicamentos y alimentos. Download PDFInfo
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Abstract
Uso para la preparación de medicamentos con actividad de tipo antihipertensivo, útiles para el tratamiento o la prevención de la hipertensión, de uno o varios péptidos, con una actividad inhibidora sobre la ECA con valores IC50 del orden de o inferiores a 60 mM seleccionados mediante el grupo de péptidos que tengan las siguientes secuencias de aminoácidos: Thr-Val-Tyr (ID SEC Nº: 1) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys (ID SEC Nº: 2) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr (ID SEC Nº: 3) Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr (ID SEC Nº: 4) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys (ID SEC Nº: 5) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro (ID SEC Nº: 6) Phe-Ala-Leu-Pro (ID SEC Nº: 7)
Description
Utilización de al menos un péptido de la caseína
"\alpha_{S2}" con actividad inhibidora de la ECA para la
preparación de medicamentos y alimentos.
La presente invención concierne al uso de uno o
varios péptidos de la
\alpha-_{S2}-caseína bovina que
tiene una actividad inhibidora de la enzima de conversión de la
angiotensina I para la preparación de medicamentos, alimentos y
complementos alimenticios, con actividad de tipo
antihipertensivo.
La caseína entera es un compuesto de proteínas
de la leche que ha sido estudiado durante mucho tiempo, por ejemplo
por GROSCLAUDE (1), SWAISGOOD (2) y GRAPPIN y RIBADEAUDUMAS (3).
La cromatografía sobre DEAE-celulosa permite
fraccionar las \gamma, \kappa, \beta, \alpha_{S1}, y
\alpha_{S2} caseínas, a partir de la caseína entera. Las
secuencias en aminoácidos de estas caseínas son bien conocidas.
[EIGEL et al. (4), HOLT y SAWYER (5)]: especialmente la de
la \alpha-_{S2}-caseína ha sido
determinada por BRIGNON et al. (6) y STEWART et al.
(7).
Ya se sabe que determinados fragmentos
peptídicos de las diferentes caseínas tienen actividades biológicas
diversas [CLARE y SWAISGOOD (8), MEISEL (9)]. En lo que concierne a
la \alpha-_{S2}-caseína, los
péptidos CN\alpha_{S2}-(f165-203) [ZUCHT et
al. (10)], CN\alpha_{S2}-(f183-207) y
CN\alpha_{S2}-(f164-179) [RECIO y VISSER (11)]
presentan una actividad antibacteriana y los péptidos
CN\alpha_{S2}-(f189-193),
CN\alpha_{S2}-(f190-197) y
CN\alpha_{S2}-(f198-202) inhiben la encima de
conversión de la angiotensina I [CORVOL et al. (12)] con
valores de IC_{50} que representan la cantidad de péptidos
necesarios para inhibir el 50% de la actividad enzimática
equivalentes a 580, 300 y 400 \muM respectivamente [MAENO et
al. (13)]. Sin embargo, estos péptidos no presentan un efecto
antihipertensivo significante in vivo en las líneas de ratas
hipertensadas espontáneamente 6 horas antes de la administración
oral de una dosis de 1 mg de péptido de síntesis/kg de rata [MAENO
et al. (13)].
La encima de conversión de la angiotensina I,
denominada de aquí en adelante ECA, juega in vivo un papel
clave en la regulación de la presión arterial [WEBER (14)]. Los
inhibidores de la ECA (captopril, benazepril, enalapril,
lisinopril...) [PIEPHO (15)] son una de las principales clases de
moléculas utilizadas para luchar contra la hipertensión. Están
especialmente indicadas para los pacientes diabéticos y para
aquellos que sufren insuficiencias cardiacas o renales [O.M.S.
(16), J.N.C. (17)].
Lo importante, según el solicitante, es proponer
los inhibidores de la ECA que presentan los valores IC_{50} que
sean netamente inferiores a aquellos de los tres péptidos de la
\alpha-_{S2}-caseína arriba
mencionados. Por valores netamente inferiores podemos aceptar
valores del orden o inferiores a 60 \muM teniendo en cuenta, sin
embargo, que subsiste una cierta imprecisión en cuanto al valor
obtenido en función de las condiciones operatorias y que por lo
tanto, conviene remitirse a las condiciones descritas anteriormente
para la determinación de dicho valor.
Ahora bien, el solicitante ha hallado mediante
los ensayos in vitro, que determinados péptidos de la
\alpha-_{S2}-caseína presentan
una actividad inhibidora sobre la ECA no mencionada hasta ahora,
con valores del orden de o inferiores a 60 \muM. Se trata de
cinco péptidos que se pueden obtener mediante hidrólisis trípsica
de la \alpha-_{S2}-caseína, que
son: CN\alpha_{S2}-(f25-32),
CN\alpha_{S2}-(f92-98),
CN\alpha_{S2}-(fl74-179),
CN\alpha_{S2}-(f174-181),
CN\alpha_{S2}-(f182-184) y de otros dos péptidos
obtenidos mediante síntesis química, que son:
CN\alpha_{S2}-(f25-30) y
CN\alpha_{S2}-(f174-177).
El objeto de la presente invención es, por lo
tanto, el de reivindicar el uso en la preparación de medicamentos
con actividad de tipo antihipertensivo, útiles para el tratamiento
o la prevención de la hipertensión, de uno o varios péptidos que
contengan una actividad inhibidora con respecto a la ECA con unos
valores de IC_{50} del orden de o inferiores a 60 \muM,
seleccionados mediante el grupo de péptidos que tengan las
siguientes secuencias en aminoácidos:
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención concierne igualmente a las
composiciones farmacéuticas que contienen como ingrediente activo
una cantidad eficaz de al menos uno de los susodichos péptidos en
combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La invención concierne también a los productos
alimenticios que contienen como principio activo al menos uno de
los susodichos péptidos o bien el hidrolizado trípsico total que
contenga al menos uno de los susodichos péptidos o bien una
fracción de dicho hidrolizado que contenga al menos uno de
susodichos péptidos en combinación con los soportes alimenticios,
particularmente de naturaleza proteica, lipídica o glucídica. Estos
complementos alimenticios se pueden utilizar como suplemento en la
alimentación de personas con tendencia a sufrir en especial
hipertensión o con el fin de prevenir su aparición.
En el grupo de péptidos de la presente
invención,
el péptido
Thr-Val-Tyr, [TVY (ID SEC Nº: 1)],
de peso molecular 381,4 corresponde al péptido
182-184 de la
\alpha-_{S2}-caseína,
\alpha-_{S2}-caseína,
el péptido
Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys,
[NMAINPSK (ID SEC Nº: 2)], de peso molecular 874,0 corresponde al
péptido 25-32 de la
\alpha-_{S2}-caseína,
el péptido
Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr,
[FALPQY (ID SEC Nº: 3)], de peso molecular 737,9 corresponde al
péptido 174-179 de la
\alpha-_{S2}-caseína,
el péptido
Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr,
[FPQYLQY (ID SEC Nº: 4)], de peso molecular 958,1 corresponde al
péptido 92-98 de la
\alpha-_{S2}-caseína,
el péptido
Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys,
[FALPQYLK (ID SEC Nº: 5)], de peso molecular 979,2 corresponde al
péptido 174- 181 de la
\alpha-_{S2}-caseína,
el péptido
Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro,
[NMAINP (ID SEC Nº: 6)], de peso molecular 658,8 corresponde al
péptido 25-30 de la
\alpha-_{S2}-caseína,
el péptido
Phe-Ala-Leu-Pro
[FALP (ID SEC Nº: 7)], de peso molecular 446,6 corresponde al
péptido 174-177 de la
\alpha-_{S2}-caseína.
Algunos de estos péptidos se pueden obtener a
partir de la
\alpha-_{S2}-caseína mediante
hidrólisis enzimática, preferentemente con la ayuda de la tripsina.
A continuación, se pueden concentrar o aislar mediante
cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) en fase inversa así
como mediante otras técnicas de cromatografía (de penetrabilidad,
de intercambio iónico, etc...), por centrifugación (por membrana) y
mediante otras técnicas de separación por membrana
(microfiltración, ultrafiltración, etc...).
Estos péptidos también se pueden obtener a
través de síntesis química mediante procedimientos ya conocidos por
los científicos, como por ejemplo, los descritos por MERRIFIELD
(18).
La caseína entera se obtiene a partir de la
leche, mediante deposición ácida y neutralización con la ayuda de un
alcalino, según procedimientos ya conocidos. Por ejemplo, se puede
utilizar el método de NITSCHMANN y
LEHMANN (19).
LEHMANN (19).
La
\alpha-_{S2}-caseína utilizada
como producto de salida para la obtención de péptidos del grupo
seleccionado en el ámbito de la presente invención se puede obtener
mediante los procedimientos clásicos ya conocidos por los
científicos, a partir de la leche, de caseínas enteras, de
caseinatos y de concentrados de proteínas totales de la leche,
obtenidos, por ejemplo, según los procedimientos descritos por
THOMSON (20) y MAUBOIS (21).
Por ejemplo, la
\alpha-_{S2}-caseína se puede
preparar adaptando el método descrito por SANOGO et al.
(22). Este método es un método de fraccionamiento en
DEAE-celulosa que utiliza como eluyente un
gradiente discontinuo de cloruro de calcio. El método permite
fraccionar rápidamente el conjunto de caseínas. También se puede
emplear ventajosamente como soporte cambiador de aniones, con la
DEAE-celulosa DE 23 [comercializada por Whatman,
Maidstone, Gran Bretaña] que es una resina seca. Después de esta
etapa y con el fin de eliminar todo rastro de otras proteínas, se
puede realizar una etapa suplementaria de cromatografía de
interacción hidrófoba, aplicando un gradiente descendente de
fosfato de sodio sobre una columna TSKgel phenyl 5PW [TosoHaas,
Stuttgart, Alemania].
El hidrolizado trípsico total de la
\alpha-_{S2}-caseína se obtiene
mediante la acción de la tripsina sobre la
\alpha-_{S2}-caseína, por
ejemplo en las condiciones arriba descritas.
Los péptidos primero, segundo, tercero, cuarto y
quinto [ID SEC Nº: 1, 2, 3, 4, 5] del grupo seleccionado en el
ámbito de la presente invención, se purifican directamente a partir
del hidrolizado trípsico total, mediante fraccionamiento por CLAR
en fase inversa por medio de un gradiente de acetonitrilo. Los
picos peptídicos obtenidos, correspondientes a cada uno de los
cinco péptidos, se liofilizan.
Cada uno de los cinco péptidos, sólo o mezclado,
o bien una fracción de hidrolizado trípsico total que contenga al
menos uno de los cinco péptidos, o bien el hidrolizado trípsico
total que contenga los cinco péptidos, se puede utilizar como
principio activo, bien en los complementos alimenticios en
combinación con los soportes alimenticios (por ejemplo, las
proteínas, los lípidos o los glúcidos), o bien en los productos
alimenticios destinados a una alimentación particular.
Los medicamentos utilizados para el tratamiento
de la hipertensión, preparados con al menos uno de los siete
péptidos del grupo seleccionado en el ámbito de la presente
invención, se pueden administrar por vía oral.
Para la administración por vía oral, la
composición farmacéutica puede tener forma de comprimidos,
cápsulas, polvos, granulados o cualquier otra forma administrable
por vía oral.
A continuación, mediante el ejemplo siguiente,
se describe la invención detalladamente de manera no
limitativa:
Se disuelven cinco gramos de caseinato de amonio
en 200 mL de tampón acetato de 20 mM, pH 6,6 que contenga 3,3 M de
urea, 35 mM de EDTA y 0,1% de 2-mercaptoetanol,
después se añaden 20 g de DEAE-celulosa DE 23
equilibrada en 150 mL del mismo tampón. La mezcla resultante se
agita durante 15 minutos a 25ºC, después se filtra sobre un filtro
nº 41 [Whatman]. El concentrado se eluye con 2 veces 250 mL de
tampón acetato-urea-EDTA sin
2-mercaptoetanol. Se reagrupan los tres filtrados.
Este primer ciclo de agitación-filtración permite
eliminar una fracción F0. Las fracciones caseinicas siguientes (F1
y F2) se eluyen según el mismo procedimiento, volviendo a añadir al
tampón 30 y 70 mM de CaCl_{2} respectivamente. El EDTA se añade a
las fracciones a razón de 15 mM en la fracción F0, de 45 mM en la
fracción F1 y de 85 mM en la fracción F2. Los filtrados F0, F1, F2
dializados con agua ultra pura y posteriormente liofilizados, se
someten a una electroforesis en gel de
poliacrilamida-urea con el fin de visualizar el
fraccionamiento. La fracción F1 contiene la
\alpha-_{S2}-caseína.
La purificación de la
\alpha-_{S2}-caseína se finaliza
mediante cromatografía de interacciones hidrófobas sobre una
columna TSKgel phenyl 5PW [TosoHaas, Stuttgart, Alemania] de 150 x
21,5 mm. La fracción F1 (1 mg.mL^{-1}) se introduce en una
solución en un tampón fosfato sódico de 0,48 M, pH 6,4, que
contiene 2,5 M de urea y en presencia de 0,1% de
2-mercaptoetanol, después se filtra a través de un
filtro de 0,45 mm PVDF [Pall Corporation, Ann Arbor, Michigan,
Estados Unidos]. Se inyectan veinte miligramos de solución
proteica. Se aplica un gradiente no lineal de 0,48 M a 0,037 M en
fosfato sódico pH 6,4 que contenga 2,5 M de urea con un cauce de
6,0 mL.minutos^{-1} de la siguiente manera: de 480 mM a 126 mM
(18 minutos), 126 mM (3 minutos), de 126 mM a 103 mM (3 minutos),
103 mM (3 minutos), de 103 mM a 72 mM (5 minutos), 72 mM (5
minutos), de 72 mM a 37 mM (4 minutos), 37 mM (17 minutos). La
\alpha-_{S2}-caseína bovina
obtenida se dializa, liofiliza y almacena al vacío a +4ºC.
La
\alpha-_{S2}-caseína se
introduce en una solución con una concentración de 0,05% (p/v) en
100 mL de tampón fosfato sódico de 67 mM, pH 8,1 que contenga un
0,02% de azida de sodio. La tripsina (E.C.3.4.21.4) pancreática
bovina inmovilizada en bolas de agarosa y tratada por la TPCK
(N-tosil-L-fenilalanina
clorometilcetona) [Sigma, San Luis, Missouri, Estados Unidos] se
añade, después de varios lavados en el tampón precedente y
filtrado, a la solución de
\alpha-_{S2}-caseína para
obtener una concentración de 0,2 unidades
N\alpha-benzoil-L-arginina
etil éster (BAEE) por ml. La hidrólisis se efectúa a 37ºC durante
24 horas. La reacción se detiene diluyendo dos veces la mezcla con
la ayuda de acetonitrilo 4% que contenga 0,2% de ácido
trifluoroacético (TFA) y a continuación filtrándola en un filtro de
0,45 mm PVDF. El hidrolizado se conserva a -30ºC.
El hidrolizado se fracciona en la columna C18
XTerra^{TM} [Waters, Milford, Massachussets, Estados Unidos] de
250 x 4,6 mm termostatado a 37ºC. Se inyecta 500 \muL de muestra
(0,25 mg.mL^{-1}). El perfil de elusión comporta una fase
isocrática de 3 minutos con un 1,6% de acetonitrilo en el agua (en
presencia de 0,1% de TFA) seguido de un gradiente lineal que permita
alcanzar un 40% de acetonitrilo en 87 minutos con un caudal de 1
mL.minutos^{-1}.
El perfil peptídico está representado por la
figura 1 donde la absorción a 215 nm se representa en la ordenada y
el tiempo de elusión en la abscisa.
Cinco de los siete péptidos del grupo
seleccionado en el ámbito de la presente invención corresponden a
los picos peptídicos a los que se hace referencia del 1 al 4 en la
figura 1. Estos péptidos se recolectan y se liofilizan dos veces.
Su identificación se realiza determinando su composición en
aminoácidos mediante el método de la ninhidrina de HAMILTON (23)
así como por espectrometría de la masa acoplada a la CLAR,
ESI-LC/MS ("electrospray source ionization" o
ionización por electrospray), véase por MS/MS, espectrometría de
masa en tándem.
El pico 1, captado a los 25 minutos, contiene el
péptido TVY (ID SEC Nº: 1).
El pico 2, captado a los 29 minutos, contiene el
péptido NMAINPSK (ID SEC Nº: 2).
El pico 3, captado a los 57 minutos, contiene el
péptido FALPQY (ID SEC Nº: 3).
El pico 4, captado a los 60 minutos, contiene el
péptido FPQYLQY (ID SEC Nº: 4) y FALPQYLK (ID SEC
Nº: 5).
Nº: 5).
Los otros dos péptidos, a saber NMAINP (ID SEC
Nº: 6) y FALP (ID SEC Nº: 7), se pueden obtener mediante síntesis
química según los procedimientos convencionales. Lo mismo se aplica
a los cinco péptidos obtenidos preferentemente mediante
fraccionamiento de hidrolizado trípsico total de
\alpha-_{S2}-caseína.
El principio del ensayo se basa en la medida de
la actividad residual de la ECA sobre un substrato de síntesis,
Hippuryl-His-Leu-OH,
en presencia de un péptido potencialmente inhibidor [CUSHMAN y
CHEUNG (24)]. El ácido hipúrico liberado se dosifica mediante CLAR
y su cantidad se compara con un testigo sin inhibidor.
La incubación se realiza en un tampón CHES de 50
mM, pH 8,3 que contenga 5 mM de
Hippuryl-His-Leu-OH,
350 mM de NaCl, 3,33 U.L^{-1} de ECA y 5% de etanol. La mezcla
(volumen final: 150 \muL), después de 10 minutos de preincubación
sin la enzima, se incuba durante 60 minutos a 37ºC. La reacción se
detiene mediante el captopril (5 \muM), el EDTA (1 mM) y la TFA
(0,067%). El ácido hipúrico liberado es cuantificado por la CLAR
utilizando una columna C18 Symmetry® [Waters, Milford,
Massachussets, Estados Unidos] de 150 x 2,1 mm termostatados a
37ºC. Las muestras se filtran en un filtro de 0,45 \mum PVDF y se
inyectan 40 \muL. Se aplica un gradiente de acetonitrilo en el
agua (en presencia de 0,1% de TFA) con un caudal de 0,25
mL.minutos^{-1}. Este gradiente de elusión pasa de 13 a 50% de
acetonitrilo en 7 minutos, después alcanza el 99% en 0,5 minutos y
se mantiene en este valor durante 1,5 minutos.
El método de determinación de los IC_{50} se
valida comparando el valor encontrado en el captopril (0,022
\muM), un inhibidor del ECA conocido, con los valores
bibliográficos (0,023 \muM, [CUSHMAN et al. (25)], 0,018
\muM [DUNCAN et al. (26)], 0,007 \muM
[PIHLANTO-LEPPÄLÄ et al. (27)]).
Los cuatro picos cromatográficos (1 al 4)
recolectados a partir del hidrolizado trípsico de
\alpha-_{S2}-caseína y
correspondientes a los cinco péptidos del grupo seleccionado en el
ámbito de la presente invención se ensayan dos veces en una
concentración de 50 \muM de aminas primarias. Los picos
cromatográficos numerados del 5 al 7 se ensayan en las mismas
condiciones.
Los resultados obtenidos se presentan en la
figura 2, en la cual el porcentaje de inhibición se ha representado
en la ordenada y el número de pico cromatográfico en la abscisa. Se
ha constatado que I os picos del 1 al 4 que contienen los péptidos
del grupo seleccionado en el caso de la presente invención, inhiben
la ECA en más del 40%, entre los cuales, el pico 4 que contiene los
péptidos FPQYLQY (ID SEC Nº: 4) y FALPQYLK (ID SEC Nº: 5), el pico
3 que contiene el péptido FALPQY (ID SEC Nº: 3) y el pico 1 que
contiene el péptido TVY (ID SEC Nº: 1) inhiben la ECA en más de un
70%.
Los péptidos de síntesis se utilizan para
determinar precisamente los IC_{50} de estos 5 péptidos. Los
péptidos se ensayan dos veces en un primer tiempo en
concentraciones comprendidas entre 0,1 y 250 a 500 \muM para
obtener una estimación de su IC_{50}, después se ensayan en
triple sobre la misma gama apropiada de concentraciones.
Los resultados obtenidos se presentan en los
gráficos de la figura 3 en la cual el logaritmo de la relación
actividad/inhibición se representa en la ordenada y el logaritmo de
la concentración en el péptido en la abscisa. Esto permite
linealizar la curva de inhibición y a partir de ésta, deducir los
valores del IC_{50} según la ecuación de las rectas. Los valores
del IC_{50} se recapitulan en la tabla 1.
Todos son del orden de o inferiores a 60 \muM
remarcando que los péptidos FALPQY (ID SEC Nº: 3) y FALPQYLK (ID
SEC Nº: 5) son los que muestran un mayor rendimiento con un valor
de IC_{50} de 4,3 \muM.
Los siete péptidos del grupo seleccionado en el
ámbito de la presente invención tienen secuencias en aminoácidos
diferentes de las de los péptidos inhibidores de la ECA, descritos
en su día [FITZGERALD y MEISEL (28), YAMAMOTO y TAKANO (29),
PIHLANTO-LEPPÄLÄ (30), NURMINEN (31), TAKANO (32)],
incluyendo aquéllas de las que informa MAENO et al. (13),
obtenidas a partir de la
\alpha-_{S2}-caseína:
CN\alpha_{S2}-(f198-202),
CN\alpha_{S2}-(f190-197) y
CN\alpha_{S2}-(f189-193). Tal y como se precisa
aquí abajo, dos péptidos del grupo seleccionado en el ámbito de la
presente invención, obtenidos mediante fraccionamiento del
hidrolizado trípsico de la
\alpha-_{S2}-caseína tienen un
IC_{50} inferior a 5 \muM y otros dos un IC_{50} inferior a 20
\muM, lo que los clasifica entre los inhibidores más activos de la
ECA, de entre los péptidos naturales obtenidos mediante un proceso
monoenzimático en las proteínas de la leche.
En lo que concierne a los dos péptidos NMAINP
(ID SEC Nº: 6) y FALP (ID SEC Nº: 7) que no se obtienen directamente
mediante fraccionamiento del hidrolizado trípsico de la
\alpha-_{S2}-caseína, se puede
decir que destacan por un lado, por poseer un residuo prolil en su
extremidad C-terminal, lo que es común con algunos
otros péptidos inhibidores de la ECA [MARUYAMA et al. (33),
KOHMURA et al. (34, 35, 36), NAKAMURA et al. (37)], y
por otro lado, porque su secuencia de aminoácidos, está incluida
por completo en otros dos péptidos NMAINPSK (ID SEC Nº: 2) y FALPQY
(ID SEC Nº: 3), los cuales se obtienen directamente mediante el
mismo fraccionamiento. Por esto, es factible que el uso como
medicamento o complemento alimenticio de estos dos últimos péptidos
(ID SEC Nº 2 y 3) pueda llevar, por ruptura del enlace peptídico
adecuado, a la formación in vivo de dos de los primeros
péptidos (ID SEC Nº 6 y 7).
Mencionemos que el uso de al menos uno de los
siete péptidos del grupo seleccionado en el ámbito de la presente
invención para la preparación de medicamentos, alimentos o
complementos alimenticios se puede realizar en combinación con uno
o varios de los otros péptidos que tengan una actividad inhibidora
de la ECA pero que tengan un valor de IC_{50} superior a 60
\muM. Este sería el caso durante la puesta en marcha del
hidrolizado trípsico total de la
\alpha-_{S2}-caseína o de una
fracción de éste que contenga al menos un péptido del grupo. Esta
combinación puede revelarse provechosa para la actividad inhibidora
in vivo con respecto a la ECA.
Preferentemente esta combinación hará intervenir
los siguientes péptidos:
(ID SEC Nº: 8),
CN\alpha_{S2}-(f81-91), ALNEINQFYQK,
Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gln-Phe-Tyr-Gln-Lys,
pico 5 eluído durante 52 minutos,
(ID SEC Nº: 9),
CN\alpha_{S2}-(f81-89), ALNEINQFY,
Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gln-Phe-Tyr,
pico 6 eluído durante 59 minutos,
(ID SEC Nº: 10),
CN\alpha_{S2}-(f206-207), YL,
Tyr-Leu, pico 7 eluído durante 31 minutos,
que también se pueden obtener
mediante el fraccionamiento del hidrolizado trípsico de la
\alpha-_{S2}-caseína y que
inhiben la ECA entre un 25% y 35% en una concentración de 50 \muM
de aminas primarias (figura
2).
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\vskip1.000000\baselineskip
<110> INGREDIA
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Uso de al menos un péptido de la
\alpha-_{S2}-caseína en la
actividad inhibidora de la enzima de conversión de la angiotensina
I para la preparación de medicamentos, alimentos y complementos
alimenticios.
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 1H9O487O/OOO4FRO
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<170> Patentln Ver. 2.1
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<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213>
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\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
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\alpha-_{S2}-caseína
\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
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<213>
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<400> 4
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\alpha-_{S2}-caseína
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
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\vskip0.400000\baselineskip
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\alpha-_{S2}-caseína
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Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
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\vskip0.400000\baselineskip
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\alpha-_{S2}-caseína
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\sa{Tyr Leu}
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<110> INGREDIA
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<120> Uso de al menos un péptido de la
\alpha-_{S2}-caseína en la
actividad inhibidora de la enzima de conversión de la angiotensina
I para la preparación de medicamentos, alimentos y complementos
alimenticios.
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<130> 1 H9O487O/OOO4FRO
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<160> 10
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<170> PatentIn Ver. 2.1
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<210> 1
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<211> 3
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\alpha-_{S2}-caseína
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Lys}
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\alpha-_{S2}-caseína
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<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Leu}
Claims (6)
1. Uso para la preparación de medicamentos con
actividad de tipo antihipertensivo, útiles para el tratamiento o la
prevención de la hipertensión, de uno o varios péptidos, con una
actividad inhibidora sobre la ECA con valores IC_{50} del orden
de o inferiores a 60 mM seleccionados mediante el grupo de péptidos
que tengan las siguientes secuencias de aminoácidos:
2. Composición farmacéutica que contiene como
principio activo una cantidad eficaz de uno o varios péptidos que
tienen una actividad inhibidora sobre la ECA con valores IC50 del
orden de o inferiores a 60 mM, seleccionados mediante el grupo de
péptidos que tengan las siguientes secuencias de aminoácidos:
en combinación con un vehículo
farmacéuticamente
aceptable.
3. Producto alimenticio principalmente útil como
suplemento en la alimentación de personas propensas a sufrir
hipertensión o que deseen prevenir su aparición, que contiene una
cantidad eficaz de uno o varios péptidos que tengan una actividad
inhibidora sobre la ECA con valores IC_{50} del orden de o
inferiores a 60 mM, seleccionados mediante el grupo de péptidos que
tengan las siguientes secuencias de aminoácidos:
en combinación con los suplementos
alimenticios, especialmente de naturaleza proteica, lipídica o
glucídica.
4. Producto alimenticio según la reivindicación
tercera, caracterizado por incluir una fracción de
hidrolizado trípsico de la
\alpha-_{S2}-caseína que
contiene al menos uno de los péptidos que tienen las siguientes
secuencias de aminoácidos:
5. Producto alimenticio según la reivindicación
tercera, caracterizado por incluir el hidrolizado trípsico
total de la \alpha-_{S2}-caseína
que contiene los cinco péptidos que tienen las siguientes
secuencias de aminoácidos:
6. Producto alimenticio según cualquiera de las
reivindicaciones de la 3 a la 5, caracterizado por incluir en
combinación al menos uno de los péptidos que tienen las siguientes
secuencias de aminoácidos:
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