KR20050026413A - 고혈압 치료를 위한 카제인 펩티드의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 고혈압을 치료하거나 예방하는데 효과적인 항-고혈압 약물의 제조에서, 60 μM 이하의 IC50 수치로 ACE에 저해 활성을 나타내고 아래의 아미노산 서열을 보유하는 펩티드에서 선택되는 한가지이상 펩티드의 용도에 관한다:
Thr-Val-Tyr(SEQ ID NO: 1)
Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys(SEQ ID NO: 2)
Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 3)
Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 4)
Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys(SEQ ID NO: 5)
Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro(SEQ ID NO: 6)
Phe-Ala-Leu-Pro(SEQ ID NO: 7).
또한, 본 발명은 제약학적으로 수용가능한 운반제와 함께 상기한 한가지이상 펩티드의 효과량을 활성 성분으로 함유하는 제약학적 조성물에 관한다. 또한, 본 발명은 특히 고혈압을 앓고 있거나 이의 발병을 예방하고자 하는 사람의 식이를 보충하는데 적합하고 식품 보조제, 바람직하게는 단백질과 함께 상기한 한가지이상 펩티드의 효과량을 함유하는 식품 산물에 관한다. 이런 식품 산물은 아래의 아미노산 서열을 보유하는 펩티드중 적어도 한가지를 추가로 함유한다:
Ala-Leu-Asn-Glu-lle-Asn-Gln-Phe-Tyr-Gln-Lys(SEQ ID NO: 8)
Ala-Leu-Asn-Glu-lle-Asn-Gln-Phe-Tyr(SEQ ID NO: 9)
Tyr-Leu(SEQ ID NO: 10).

Description

고혈압 치료를 위한 카제인 펩티드의 용도{THE USE OF CASEIN PEPTIDES FOR TREATING HYPERTENSION}
본 발명은 항고혈압 활성을 갖는 약물, 식품, 식품 보충물질의 제조에서 앤지오텐신 I 전환 효소에 저해 활성을 보이는 소 αs2 카제인(casein)의 한가지이상 펩티드의 용도에 관한다.
전체 카제인은 Grosclaude(1), Swaisgood(2), Grappin과 Ribadeau-Dumas(3)에 의해 심도있게 연구된 일단의 우유 단백질이다. 디에틸아미노에틸-셀룰로오스(DEAE-셀룰로오스)에서 크로마토그래피로 전체 카제인으로부터 아래의 카제인을 분리할 수 있다: γ, κ, β, αs1, αs2. 카제인의 아미노산 서열은 널리 공지되어 있다[Eigel et al.(4); Holt and Sawyer(5)]; 특히, αs2 카제인의 서열은 Brignon et al.(6) 및 Stewart et al.(7)에 의해 확인되었다.
이들 카제인의 특정 펩티드 단편은 다양한 생물학적 활성을 갖는 것으로 알려져 있다[Clare and Swaisgood(8); Meisel(9)]. αs2 카제인과 관련하여, 펩티드 CNαs2-(f165-203)[Zucht et al.(10)], CNαs2-(f183-207), CNαs2-(f164-179)[Recio and Visser(11)]는 항바이러스 활성을 나타내고, 펩티드 CNαs2-(f189-193), CNαs2-(f190-197), CNαs2-(f198-202)는 각각 580 μM, 300 μM, 400 μM에 상당하는 IC50 수치[Maneo et al.(13)], 다시 말하면, 효소 활성의 50%를 저해하는데 요구되는 펩티드 양으로 앤지오텐신 I 전환 효소를 저해한다[Corvol et al.(12)]. 그럼에도 불구하고, 이들 펩티드는 체중 ㎏당 1 ㎎ 용량의 합성 펩티드를 경구 투여하고 6시간이후 고혈압이 자발적으로 발생된 쥐에서 현저한 항고혈압 효과를 나타내지 않는다[Maneo et al.(13)].
앤지오텐신 I 전환 효소(이후, ACE)는 생체내에서 동맥압을 조절하는데 핵심적인 역할을 수행한다[Weber(14)]. ACE 저해물질(캡토프릴, 베나제프릴, 엔알라프릴, 리시노프릴 등)[Pipeho(15)]은 고혈압을 치료하는데 사용되는 주류 분자중 한가지이다. 이들은 당뇨병 환자 및 심장이나 신장 부전에 특히 적합하다[WHO(16); J.N.C.(17)].
도 1. 소 αs2 카제인의 트립신 가수분해물의 크로마토그래피 프로필(C18 칼럼에서 역상 HPLC).
도 2. 소 αs2 카제인으로부터 트립신 펩티드의 ACE 저해 활성(번호는 도 1에 제시된 크로마토그래프 피크를 인용한다).
도 3. 도 2에서 선별된 펩티드에 대한 IC50 수치 측정
본 출원인에 따르면, αs2 카제인의 상기한 3가지 펩티드에서보다 훨씬 낮은 IC50 수치를 나타내는 ACE 저해물질을 달성하는 것이 중요하다. 수치는 60 μM 이하일 때 "훨씬 낮은"것으로 간주되긴 하지만, 활동 조건의 함수로써 수득되는 수치에서 어느 정도의 부정확이 여전히 존재하기 때문에 상기 수치를 측정할 때 후술한 조건을 참고하는 것이 바람직하다.
본 출원인은 시험관내 검사에서 60 μM 이하의 수치로 ACE에 대한 저해 활성을 나타내는 기존 문헌에서 보고된 바 없는 αs2 카제인의 특정 펩티드를 확인하였다. 이들 펩티드는 αs2 카제인의 트립신 가수분해에 의해 수득될 수 있는 아래의 5가지 펩티드: CNαs2-(f25-32), CNαs2-(f92-98), CNαs2-(f174-179), CNα s2-(f174-181), CNαs2-(f182-184) 및 화학 합성으로 수득되는 다른 2가지 펩티드: CNαs2-(f25-30)와 CNαs2-(f174-177)이다.
따라서, 본 발명은 고혈압을 치료하거나 예방하는데 효과적인 항-고혈압 약물의 제조에서, 60 μM 이하의 IC50 수치로 ACE에 저해 활성을 나타내고 아래의 아미노산 서열을 보유하는 펩티드에서 선택되는 한가지이상 펩티드의 용도를 제시한다:
Thr-Val-Tyr
Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys
Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr
Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr
Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys
Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro
Phe-Ala-Leu-Pro.
또한, 본 발명은 제약학적으로 수용가능한 운반제와 함께 상기한 한가지이상 펩티드의 효과량을 활성 성분으로 함유하는 제약학적 조성물에 관한다.
또한, 본 발명은 식품 보조제, 바람직하게는 단백질, 지질 또는 탄수화물과 함께 상기한 한가지이상 펩티드, 또는 상기한 한가지이상 펩티드를 포함하는 전체 트립신 가수분해물, 또는 상기한 한가지이상 펩티드를 포함하는 상기 가수분해물의 분획물을 활성 성분으로 함유하는 식품 산물에 관한다. 이런 식품 보충물질은 특히 고혈압을 앓고 있거나 이의 발병을 예방하고자 하는 사람의 식이를 보충하는데 적합하다.
본 발명의 펩티드 군에서, 분자량 381.4의 펩티드 Thr-Val-Tyr[TVY(SEQ ID NO: 1)]은 αs2 카제인의 182-184 펩티드에 상응한다;
분자량 847.0의 펩티드 Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys[NMAINPSK(SEQ ID NO: 2)]는 αs2 카제인의 25-32 펩티드에 상응한다;
분자량 737.9의 펩티드 Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr[FALPQY(SEQ ID NO: 3)]은 αs2 카제인의 174-179 펩티드에 상응한다;
분자량 958.1의 펩티드 Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr[FPQYLQY(SEQ ID NO: 4)]은 αs2 카제인의 92-98 펩티드에 상응한다;
분자량 979.2의 펩티드 Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys[FALPQYLK(SEQ ID NO: 5)]는 αs2 카제인의 174-181 펩티드에 상응한다;
분자량 658.8의 펩티드 Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro[NMAINP(SEQ ID NO: 6)]는 αs2 카제인의 25-30 펩티드에 상응한다;
분자량 446.6의 펩티드 Phe-Ala-Leu-Pro[FALP(SEQ ID NO: 7)]는 αs2 카제인의 174-177 펩티드에 상응한다.
이들 펩티드중 일부는 효소적 가수분해, 바람직하게는 트립신에 의해 보조된 효소적 가수분해로 αs2 카제인으로부터 수득할 수 있다. 이후, 이들은 역상에서 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 또는 다른 크로마토그래피 기술(겔 여과, 이온 교환 등), 또는 다른 막 분리 기술(마이크로 여과, 한외여과 등)에 의해 농축되거나 분리될 수 있다.
이들 펩티드는 당업자에게 널리 공지된 방법, 예를 들면, Merrifield(18)에 의해 기술된 방법을 이용한 화학적 합성으로 수득할 수도 있다.
전체 카제인은 널리 공지된 방법에서 산 침전 및 알칼리를 이용한 중화에 의해 우유로부터 수득된다. 가령, Nitschmann과 Lehmann 방법(19)을 이용하는 것이 바람직하다.
본 발명에서 선별된 펩티드 군을 수득하기 위한 출발 물질로 사용되는 αs2 카제인은 우유, 전체 카제인, 카제인산염 및 우유의 전체 단백질 농축물로부터 출발하여 당업자에게 널리 공지된 통상적인 방법으로 수득할 수 있다, 예를 들면, Thomson(20)과 Maubois(21)에 의해 기술된 방법을 이용하여 수득할 수 있다.
가령, Sanogo et al.(22)에 의해 기술된 방법을 채택하여 αs2 카제인을 제조할 수 있다. 상기 방법은 불연속 구배의 염화칼슘을 용리액으로 하여 DEAE-셀룰로오스에서 분별화 방법이다. 이는 모든 카제인을 신속하게 분별할 수 있다. 적절하게는, 이는 건조 수지인 DEAE-셀룰로오스 DE 23[Wheatman, Maidstone, UK]를 음이온 교환 서포트로 이용하여 실행할 수 있다. 상기 단계이후, 남아있는 모든 다른 단백질을 제거하기 위하여, 감소하는 구배의 인산나트륨을 TSKgel 페닐 5PW 칼럼[TosoHaas, Stuttgart, Germany]에서 소수성 상호작용 크로마토그래피 단계를 실행한다.
본 발명에서 선별된 제 1, 제 2, 제 3, 제 4, 제 5 펩티드[SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5]는 아세토니트릴 구배를 이용한 역상 HPLC로 전체 트립신 가수분해물로부터 직접 정제된다. 이들 5가지 펩티드에 상응하는 각 수집된 펩티드 피크는 냉동 건조한다.
단독으로 또는 혼합물로 이들 5가지 펩티드 각각, 이들 5가지 펩티드중 적어도 한가지를 포함하는 전체 트립신 가수분해물의 분획물, 또는 5가지 펩티드 모두를 포함하는 전체 트립신 가수분해물은 식품 보조제와 함께 식품 보충물질에, 또는 특정 식이를 위한 식품 산물에 활성 성분으로써 사용될 수 있다.
본 발명에서 선별된 7가지 펩티드중 적어도 한가지를 이용하여 제조되고, 고혈압을 치료하는데 효과적인 약물은 경구 투여될 수 있다.
경구 투여를 위하여, 제약학적 조성물은 알약, 캡슐, 분말, 과립, 또는 경구 투여에 적합한 임의의 다른 형태를 취한다.
본 발명은 아래의 무-제한적 실시예로 더욱 상세하게 기술한다.
A - α s2 카제인의 제조
5g 카제인산암모늄은 3.5 M 요소, 35 mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 0.1% 2-멀캡토에탄올을 함유하는 200 ㎖의 20 mM 아세테이트 완충액, pH 6.6에 용해시키고, 이후 150 ㎖의 동일 완충액에서 균형된 20g DEAE-셀룰로오스 DE 23을 첨가하였다. 생성 혼합물은 25℃에서 15분동안 교반하고, 이후 No. 41 필터[Wheatman]에서 여과하였다. 농축액은 2-멀캡토에탄올에 녹인 250 ㎖ 아세테이트-요소-EDTA 완충액으로 2회 용리하였다. 3가지 여과액은 한데 모았다. 이런 첫 번째 교반-여과 사이클로 분획물 F0을 배출하였다. 후속의 카제인 분획물(F1과 F2)은 동일한 절차를 이용하여 용리하고, 각각 30 mM과 70 mM CaCl2를 완충액에 첨가하였다. EDTA는 분획물 F0에 15 mM, 분획물 F1에 45 mM, 분획물 F2에 85 mM의 함량으로 이들 분획물에 첨가하였다. 여과액 F0, F1, F2는 초순수(ultrapure water)에 투석하고 냉동 건조시키며, 이후 분별화를 확인하기 위하여 폴리아크릴아마이드-요소 겔에서 전기영동을 실행하였다. 분획물 F1이 αs2 카제인을 포함하였다.
αs2 카제인의 정제는 150 ㎜ x 32.5 ㎜ 치수의 TSKgel 페닐 5PW 칼럼[TosoHaas, Stuttgart, Germany]에서 소수성 상호작용 크로마토그래피로 완결하였다. 분획물 F1(1 ㎎/㎖)은 0.1% 2-멀캡토에탄올의 존재하에 2.5 M 요소를 함유하는 0.48 M 인산나트륨 완충액, pH 6.4에 용해시키고, 이후 0.45 ㎛ PVDF 필터[Pall Corporation, Ann Arbor, Michigan, United states]에서 여과하였다. 20 ㎎ 단백질 용액을 주입하였다. 2.5 M 요소를 함유하는 0.48 M 내지 0.037M 비-선형 구배의 인산나트륨, pH 6.4는 아래와 같이 분당 6.0 ㎖(㎖/min)의 유속으로 첨가하였다: 480 mM 내지 126 mM(18 min), 126 mM(3 min), 126 mM 내지 103 mM(3 min), 103 mM(3 min), 103 mM 내지 72 mM(5 min), 72 mM(5 min), 72 mM 내지 37 mM(4 min), 37 mM(17 min). 수집된 소 αs2 카제인은 투석하고 냉동 건조시키며 진공하에 +4℃에서 보관하였다.
B - α s2 카제인의 트립신 가수분해물 준비
αs2 카제인은 0.02% 질산나트륨을 함유하는 100 ㎖의 67 mM 인산나트륨 완충액, pH 8.1에서 0.05%(w/v) 농도로 용해시켰다. 아가로즈 비드에 고정되고 TPCK(N-토실-L-페닐알라닌 클로로메틸케톤)[Sigman, Saint Louis, Missouri, United States]로 처리된 소 췌장 트립신(E.C. 3.4.21.4)을 첨가하고, 이후 상기 완충액에서 세척하고 αs2 카제인 용액에 수회 여과하여 0.2 단위 농도의 Nα-벤조일-L-아르기닌 에틸 에스테르(BAEE)/㎖를 수득하였다. 가수분해는 37℃에서 24시간동안 진행하였다. 반응은 0.2% 트리플루오르아세트산(TFA)을 함유하는 4% 아세토니트릴로 혼합물을 2회 희석하고, 이후 0.45 ㎛ 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF) 필터에서 여과하여 중단시켰다. 가수분해물은 -30℃에서 보관하였다.
C - 아세토니트릴 구배에서 역상 HPLC에 의한 가수분해물의 분별화
가수분해물은 37℃로 정온된 250 ㎜ x 4.6 ㎜ 치수의 C18 XterraTM 칼럼[Waters, Milford, Massachusetts, United States]에서 분별하였다. 500 ㎕ 시료(0.25 ㎎/㎖)를 주입하였다. 용리 프로필은 물에 녹인 1.6% 아세토니트릴에서 3 min의 등용매 단계(isocratic phase), 이후 87분 내에 1 ㎖/min의 속도로 40% 아세토니트릴에 도달하는 선형 구배를 보였다.
도 1에서 이런 펩티드 프로필을 도시하는데, 215 nm에서 흡수도는 세로좌표에 표시되고 용리 시간은 가로좌표에 표시된다.
본 발명에서 선별된 7가지 펩티드 중에서 5가지는 도 1에서 1 내지 4로 표시된 펩티드 피크에 상응한다. 이들 펩티드는 선별하고 2회 냉동 건조시켰다. 이들은 Hamilton(23) 닌하이드린 방법, HPLC, ESI-LC/MS("electrospray source ionization")에 연계된 질량 분광법, 또는 MS/MS와 질량 분광법의 병행으로 아미노산 조성을 결정하여 확인하였다.
25 min에 수집된 피크 1은 펩티드 TVY(SEQ ID NO: 1)를 보유한다.
29 min에 수집된 피크 2는 펩티드 NMAINPSK(SEQ ID NO: 2)를 보유한다.
57 min에 수집된 피크 3은 펩티드 FALPQY(SEQ ID NO: 3)를 보유한다.
60 min에 수집된 피크 4는 펩티드 FPQYLQY(SEQ ID NO: 4)와 FALPQYLK(SEQ ID NO: 5)를 보유한다.
다른 2가지 펩티드, NMAINP(SEQ ID NO: 6)와 FALP(SEQ ID NO: 7)은 통상적인 방법을 이용한 화학적 합성으로 수득할 수 있다. 이는 Cαs2 카세인의 전체 트립신 가수분해물을 분별함으로써 수득되는 5가지 펩티드에도 적용된다.
D - 앤지오텐신 I 전환 효소(ACE)에 대한 상기 펩티드의 시험관내 검사
주요 실험은 잠재적 저해 펩티드의 존재하에 Hippuryl-His-Leu-OH의 합성 기질에서 ACE의 잔류 활성을 측정하는 것이다[Cushman and Cheung(24)]. 방출된 마뇨산(hippuric acid)은 HPLC로 분석하고, 이의 양은 저해물질이 없는 참고 물질과 비교하였다.
배양은 5 mM Hippuryl-His-Leu-OH, 350 mM NaCl, 3.33 U/ℓ ACE, 5% 에탄올을 함유하는 50 mM CHES 완충액, pH 8.3에서 실행하였다. 혼합물(최종 부피: 150 ㎕)은 효소 없이 10분동안 사전 배양한 이후, 37℃에서 60분동안 배양하였다. 반응은 캡토프릴(5 μM), EDTA(1 mM), TFA(0.067%)로 중단시켰다. 방출된 마뇨산은 37℃로 정온된 150 ㎜ x 2.1 ㎜ 치수의 C18 Symmetryㄾ 칼럼[Waters, Milford, Massachusetts, United States]에서 HPLC로 정량하였다. 시료는 0.45 ㎛ PVDF 필터에서 여과하고 40 ㎕을 주입하였다. 물(0.1% TFA의 존재하에)에서 아세토니트릴 구배는 0.25 ㎖/min의 속도로 이용되었다. 용리 구배는 7분 내에 13%에서 50% 아세토니트릴로 상승하고, 이후 0.5분 이내에 99%에 도달하며 1.5 분동안 상기 수치에 유지되었다.
IC50을 결정하는 방법은 공지된 ACE 저해물질인 캡토프릴(0.022 μM)에서 확인된 수치를 생물학적 수치(0.023 μM[Cushman et al.(25)], 0.018 μM[Duncan et al.(26)], 0.007 μM[Pihlanto-Leppala et al.(27)])를 비교하여 확인하였다.
αs2 카제인의 트립신 가수분해물로부터 수집되고 본 발명에서 선별된 5가지 펩티드에 상응하는 4가지 크로마토그래피 피크(1 내지 4)는 50 μM 농도의 일차 아민에서 2회 검사하였다. 5 내지 7로 표시된 크로마토그래피 피크는 동일한 조건하에 검사하였다.
도 2에서 이의 결과를 도시하는데, 저해 비율은 세로좌표에 표시되고 크로마토그래피 피크 번호는 가로좌표에 표시된다. 본 발명에서 선별된 펩티드를 보유하는 피크 1 내지 4는 ACE를 40% 초과 저해하는데, 이들 피크 중에서 펩티드 FPQYLQY(SEQ ID NO: 4)와 FALPQYLK(SEQ ID NO: 5)를 보유하는 피크 4; 펩티드 FALPQY(SEQ ID NO: 3)을 보유하는 피크 3; 펩티드 TVY(SEQ ID NO: 1)을 보유하는 피크 1은 ACE를 70% 초과 저해한다.
합성 펩티드를 이용하여 이들 5가지 펩티드의 IC50 수치를 정확하게 측정하였다. 이들 펩티드는 먼저 IC50 수치를 어림하기 위하여 0.1 μM과 250 μM 내지 500 μM 범위의 농도에서 2회 검사하고, 이후 적절한 범위의 농도에서 삼중으로 검사하였다.
도 3에서 이의 결과를 도시하는데, 활성/저해 비율의 대수는 세로좌표에 표시되고 펩티드 농도의 대수는 가로좌표에 표시된다. 이는 저해 곡선을 자유롭게 하고, 이들로부터 직선 방정식을 이용한 IC50 수치의 추론을 가능하게 한다. IC50 수치는 표 1에 요약한다.
이들 모두 60 μM 이하인데, 펩티드 FALPQY(SEQ ID NO: 3)와 FALPQYLK(SEQ ID NO: 5)가 4.3 μM의 IC50 수치로 최고 성적을 보인다.
본 발명에서 선별된 7가지 펩티드는 αs2 카제인을 이용하여 수득된 아미노산 서열: CNαs2-(f198-202), CNαs2-(f190-197), CNαs2-(f189-193)[Maeno et al. (13)]을 비롯하여, 기존 문헌[Fitzgerald and Meisel(28); Yamamoto and Takano(29); Pihlanto-Leppala(30); Nurminen(31); TAKANO(32)]에서 보고된 8가지 저해물질 펩티드의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 보유한다. 상기한 바와 같이, αs2 카제인의 트립신 가수분해물을 분별함으로써 본 발명에서 선별된 2가지 펩티드는 5 μM 미만의 IC50 수치를 보이고, 다른 2가지는 20 μM 미만의 IC50 수치를 보이는데, 이들은 우유 단백질에서 단일-효소 과정에 의해 수득되는 천연 펩티드 중에서 ACE의 최대 활성 저해물질로 분류된다.
αs2 카제인의 트립신 가수분해물을 분별함으로써 직접 수득되지 않는 2가지 펩티드 NMAINP(SEQ ID NO: 6)와 FALP(SEQ ID NO: 7)는 첫째 다른 특정 ACE 저해 펩티드에서 공통하는 C-말단에서 프롤릴 잔기를 보유하고[Maruyama et al.(33); Kohmura et al.(34, 35, 36); Nakamura et al.(37)], 둘째 이들의 아미노산 서열이 분별화에 의해 직접 수득되는 다른 2가지 펩티드 NMAINPSK(SEQ ID NO: 2)와 FALPQY(SEQ ID NO: 3)에 완전히 포함된다는 점에서 주목된다. 결과적으로, 약물 또는 식품 보충물질로써 2가지 2차 펩티드(SEQ ID NO: 2와 3)의 활용은 적절한 펩티드 결합을 파괴함으로써 2가지 1차 펩티드(SEQ ID NO: 6과 7)의 생체내 형성을 결과할 수 있다.
약물, 식품 산물 또는 식품 보충물질을 제조하는데 사용되는 본 발명에서 선별된 7가지 펩티드중 적어도 한가지 펩티드는 ACE 저해 활성을 보유하지만 60 μM 초과의 IC50 수치를 갖는 한가지이상의 다른 펩티드와 병용될 수 있다. 이는 αs2 카제인의 전체 트립신 가수분해물, 또는 상기한 펩티드중 적어도 한가지를 함유하는 이의 분획물을 이용하는 경우에 발생한다. 이런 조합은 ACE에 대한 생체내 저해 활성에 유리할 수 있다.
적절하게는, 상기 조합은 아래의 펩티드를 이용한다:
(SEQ ID NO: 8), CNαs2-(f81-91), ALNEINQFYQK, Ala-Leu-Asn-Glu- lle-Asn-Gln-Phe-Tyr-Gln-Lys, 52분에 용리된 피크 5;
(SEQ ID NO: 9), CNαs2-(f81-89), ALNEINQFY, Ala-Leu-Asn-Glu-lle-Asn- Gln-Phe-Tyr, 59분에 용리된 피크 6;
(SEQ ID NO: 10), CNαs2-(f206-207), YL, Tyr-Leu, 31분에 용리된 피크 7;
이들은 αs2 카제인의 트립신 가수분해물을 분별함으로써 수득될 수도 있고, 50 μM 농도의 일차 아민에서 ACE를 25% 내지 35% 범위로 저해한다(도 2).
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저해물질 No.a 서열 ID No.b 저해(%)c IC50(μM)
캡토프릴 > 99.5 0.022
Nαs2-(f 182-184) 1 TVY 1 70.2 15
CNαs2-(f25-32) 2 NMAINPSK 2 42.5 60
CNαs2-(f 174-179) 3 FALPQY 3 82.7 4.3
CNαs2-(f 92-98) 4 FPQYLQY 4 86.0d 14
CNαs2-(f 174-181) 4 FALPQYLK 5 86.0d 4.3
CNαs2-(f 81-91) 5 ALNEINQFYQK 8 27.2 26.4
CNαs2-(f 81-89) 6 ALNEINQFY 9 32.2 219
CNαs2-(f 206-207) 7 YL 10 34.8 nd
a) 도 1의 HPLC에서 피크 번호.
b) 펩티드 서열 ID 번호.
c) 50 μM에 상응하는 일차 아민이나 캡토프릴 농도로 측정됨.
d) 피크 No. 4에서 서로 혼합된 CNαs2-(f92-98)와 CNαs2-(f174-181).
nd) 측정되지 않음.

Claims (6)

  1. 고혈압을 치료하거나 예방하는데 효과적인 항-고혈압 약물의 제조에서, 60 μM 이하의 IC50 수치로 ACE에 저해 활성을 나타내고 아래의 아미노산 서열을 보유하는 펩티드에서 선택되는 한가지이상 펩티드의 용도:
    Thr-Val-Tyr(SEQ ID NO: 1)
    Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys(SEQ ID NO: 2)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 3)
    Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 4)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys(SEQ ID NO: 5)
    Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro(SEQ ID NO: 6)
    Phe-Ala-Leu-Pro(SEQ ID NO: 7).
  2. 제약학적으로 수용가능한 운반제와 함께, 60 μM 이하의 IC50 수치로 ACE에 저해 활성을 나타내고 아래의 아미노산 서열을 보유하는 펩티드에서 선택되는 한가지이상 펩티드의 효과량을 함유하는 제약학적 조성물:
    Thr-Val-Tyr(SEQ ID NO: 1)
    Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys(SEQ ID NO: 2)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 3)
    Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 4)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys(SEQ ID NO: 5)
    Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro(SEQ ID NO: 6)
    Phe-Ala-Leu-Pro(SEQ ID NO: 7).
  3. 고혈압을 앓고 있거나 이의 발병을 예방하고자 하는 사람의 식이를 보충하는데 적합한 식품 산물에 있어서, 식품 보조제, 특히 단백질, 지질 또는 탄수화물과 함께, 60 μM 이하의 IC50 수치로 ACE에 저해 활성을 나타내고 아래의 아미노산 서열을 보유하는 펩티드에서 선택되는 한가지이상 펩티드의 효과량을 함유하는 식품 산물:
    Thr-Val-Tyr(SEQ ID NO: 1)
    Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys(SEQ ID NO: 2)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 3)
    Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 4)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys(SEQ ID NO: 5)
    Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro(SEQ ID NO: 6)
    Phe-Ala-Leu-Pro(SEQ ID NO: 7).
  4. 제 3 항에 있어서, 아래의 아미노산 서열을 보유하는 펩티드에서 선택되는 한가지이상 펩티드를 포함하는 αs2 카제인의 트립신 가수분해물의 분획물을 함유하는 것을 특징으로 하는 식품 산물:
    Thr-Val-Tyr(SEQ ID NO: 1)
    Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys(SEQ ID NO: 2)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 3)
    Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 4)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys(SEQ ID NO: 5).
  5. 제 3 항에 있어서, 아래의 아미노산 서열을 보유하는 5가지 펩티드를 포함하는 αs2 카제인의 전체 트립신 가수분해물을 함유하는 것을 특징으로 하는 식품 산물:
    Thr-Val-Tyr(SEQ ID NO: 1)
    Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys(SEQ ID NO: 2)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 3)
    Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr(SEQ ID NO: 4)
    Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys(SEQ ID NO: 5).
  6. 제 3 항 내지 5 항중 어느 한 항에 있어서, 아래의 아미노산 서열을 보유하는 펩티드중 적어도 한가지를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 식품 산물:
    Ala-Leu-Asn-Glu-lle-Asn-Gln-Phe-Tyr-Gln-Lys(SEQ ID NO: 8)
    Ala-Leu-Asn-Glu-lle-Asn-Gln-Phe-Tyr(SEQ ID NO: 9)
    Tyr-Leu(SEQ ID NO: 10).
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