MXPA04012716A

MXPA04012716A - Utilizacion de peptidos de la caseina para tratar la hipertension.

Info

Publication number: MXPA04012716A
Application number: MXPA04012716A
Authority: MX
Inventors: Gaillard Jean-Luc
Original assignee: Ingredia
Priority date: 2002-06-27
Filing date: 2003-06-24
Publication date: 2005-03-23
Also published as: FR2841473B1; US20060234942A1; BR0312214A; ATE362372T1; DE60313827T2; KR20050026413A; AU2003255691A1; EP1374885B1; ES2286398T3; CA2490282A1; EP1374885A1; JP2005530851A; FR2841473A1; WO2004002509A2; DE60313827D1; WO2004002509A3

Abstract

La invencion concierne a la utilizacion para la preparacion de medicamentos de actividad de tipo anti-hipertensiva, utiles para el tratamiento o la prevencion de la hipertension, de uno o varios peptidos, que tengan una actividad inhibidora con respecto a la ECA con valores de IC50 del orden de o inferiores a 60 ??M, seleccionados entre los grupos de peptidos que tengan las secuencias de aminoacidos siguientes: Thr-Val-Thr (SEC ID NO: I) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro- Ser-Lya (SEC ID NO: 2) Phe-Ala-Leu-Pro-Gin-Tyr (SEC ID NO: 3) Phe-Pro-Gin-Tyr-Leu-Gin-Tyr (SEC ID NO. 4) Phe-Ala-Leu-Pro-Gin- Tyr-Leu-Lys (SEC ID NO. 5) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro (SEC ID NO: 6) Phe-Ala-Leu-Pro (SEC ID NO: 7). Concierne tambien a una composicion farmaceutica que tenga, a titulo de principio activo, una cantidad eficiente de uno o varios peptidos, previamente citados, en combinacion con un vehiculo aceptable farmaceuticamente. Concierne tambien a un producto alimentario, particularmente util para suplementar la alimentacion de personas suelas a la hipertension o deseosas de prevenir su aparicion, que contenga una cantidad eficiente de uno o varios de los peptidos previamente citados, en comparacion con soportes alimentarios, particularmente de naturaleza proteinica, lipidos o glucidica. Un producto alimentario tal puede comprender igualmente al menos uno de los peptidos que tengan las secuencias de aminoacidos siguientes: Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gin-Phe-Tyr-Gin-Lys (SEC ID NO: 8) Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gin-Tyr (SEC ID NO. 9) Tyr-Leu (SEC ID NO. 10).

Description

(88) Date de publication du rapport de recherche Internationale: 15 avril 2004 En ce qui concerne les codes a deux lettres et autres abréviations, se référer aux "Notes explicatives relatives aux codes et abréviations" figurant au début de chaqué numero ordinaire de la Gazette du PCT.

UTILIZACION DE PEPTIDOS DE LA CASEINA PARA TRATAR LA HIPERTENSION CAMPO DE LA INVENCION La presente invención concierne a la utilización de uno o varios péptidos de la caseína* S2 bovina, que tenga actividad inhibidora de la enzima de conversión de la angiotensina I para la preparación de medicamentos, de alimentos y de complementos alimentarios con actividad de tipo anti-hipertensivo .

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La caseína entera es un conjunto de proteínas de la leche que ha sido ampliamente estudiado, por ejemplo por GROSCLAÜDE (1), SWAISGOOD (2) y GRATIN y RIBADEAU-DUMAS (3) . La cromatografía sobre DEAE-celulosa permite fraccionar a partir de la caseína entera, las caseínas ?, K, ß, 5? y oíS2. Las secuencias de aminoácidos de estas caseínas son bien conocidas [EIGEL y colaboradores (4) , HOLT y SAWYER (5)]; en particular, la de la caseína 32 ha sido determinada por BRIGNON y colaboradores (6) y STEWART y colaboradores (7) . Se sabe ya que ciertos fragmentos peptídicos de estas diferentes caseínas tienen actividades biológicas diversas [CLARE y SWAISGOOD (8), MEISEL (9)]. En lo que concierne a la caseinaa s2, los péptidos oCN s2- (f165-203) [ZUCHT y colaboradores (10)], CNOÍs2- (F-183-207) y CNas2- (F-164-179) [RECIO y VISSER (11)] presentan una actividad antibacteriana y los péptidosx CN s2- (F189-193) , CN<¾2- (Í190-197) y CNas2- (f198-202) inhiben la enzima de conversión de la angiotensina I [CORVOL y colaboradores (12)] con valores de IC50, que es la cantidad de péptido necesario para inhibir el 50 % de la actividad enzimática, iguales a 580,, 300 y 400 µ? respectivamente [MAENO y colaboradores (13)]. Sin embargo estos péptidos no presentan efecto antihipertensivo significativo in vivo sobre lineas de ratas espontáneamente hipertensas 6 horas después de la administración oral de una dosis de 1 mg de péptido de sintesis/kg de rata [MAENO y colaboradores (13)]. La enzima de conversión de la angiotensina I, denominada a continuación la ECA desempeña in vivo un papel clave en la regulación de la presión arterial [WEBER (14)]. Los inhibidores de la ECA (captopril, benazepril, enalapril, lisinopril .. ) [PIEPHO (15)] son una de las principales clases de moléculas utilizadas para luchar contra la hipertensión. Son particularmente indicados para los pacientes diabéticos y los de insuficiencia cardiaca o renal [O.M.S. (16), J.N.C. (17)]. Es importante, según el solicitante, proponer inhibidores de la ECA que presenten valores de IC50 que sean netamente inferiores a los de los tres péptidos de la caseína as2, citados anteriormente. Por valores netamente inferiores, se puede retener valores del orden de o inferiores a 60 pM, a sabiendas sin embargo que subsiste una cierta imprecisión en cuanto al valor obtenido en función de las condiciones operatorias y que convienen entonces reportarse a las condiciones descritas a continuación para la determinación del dicho valor. O bien, el solicitante ha encontrado por medio de pruebas in vitro que ciertos péptidos de la caseína aS2 presentan una actividad inhibidora sobre la ECA, no mencionada hasta entonces, con valores del orden d eo inferiores a 60 uM. Se trata de cinco péptidos que pueden ser obtenidos por hidrólisis trípsica de la caseíaa s2, a saber CNas2- (f25-32) , CNaS2- (f92-98) , CNas2- (f174-179) , CNaS2- (f174-181) , CNaS2- (f182-184) y otros péptidos obtenidos por síntesis química, a saber, S S2_(f25-30) y CNas2(f174-177) .

DESCRIPCION DE LA INVENCION Es entonces el objeto de la presente invención reclamar la utilización para la preparación de medicamentos con actividad de tipo anti-hipertensivo, útiles para el tratamiento o la prevención de la hipertensión, de uno o varios péptidos, que tengan una actividad inhibidora con respecto a la ECA con valores de IC50 del orden de o inferiores a 60 uM, seleccionados entre el grupo de péptidos que tengan las secuencias de aminoácidos siguiente: Thr-Val-Tyr, 1 Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys, 1 5 Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr, 1 5 Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr, 1 5 Phe-ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys, 1 5 Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro, 1 5 Phe-Ala-Leu-Pro . 1 La presente invención concierne igualmente a las composiciones farmacéuticas que contengan a titulo de ingrediente activo una cantidad eficiente de al menos uno de los péptidos mencionados en combinación con un vehículo aceptable farmacéuticamente . La invención concierne igualmente a los productos alimentarios que contienen a titulo de principio activo al menos uno de los péptidos mencionados, o bien el hidrolizado tripsico total que contenga al menos uno de dichos péptidos o bien una fracción de este hidrolizado que contenga al menos uno de dichos péptidos en combinación con soportes alimentarios, particularmente de naturaleza proteínica, lipidica o glucidica. Estos complementos alimentarios pueden convenir para suplementar la alimentación de personas sujetas particularmente a la hipertensión o a fin de prevenir su aparición. En el grupo de péptidos de la presente invención, el péptido Thr-Val-Tyr, [TVY (SEC ID NO: 1)], de peso molecular de 381.4, corresponde al péptido 182-184 de la caseína a-s2, el péptido Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys, [NMAINPSK (SEC ID NO: 2)], de peso molecular de 874.0, corresponde al péptido 25-32 de la caseína as2, el péptido Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr, [FALPQY (SEC ID NO: 3)], de peso molecular de 737.9, corresponde al péptido 174-179 de la caseína OÍS2, el péptido Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr, [FPQYLQY (SEC ID NO: 4)], de peso molecular 958.1, corresponde al péptido 92-98 de la caseína aS2, el péptido Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys, [FALPQYLK (SEC ID NO: 5)], de peso molecular de 979.2, corresponde al péptido 174-181 de la caseína aS2 r el péptido Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro, [NMAINP (SEC ID NO: 6)] de peso molecular de 658.8, corresponde al péptido 25-30 de la caseína ct-szr el péptido Phe-Ala-Leu-Pro, [FALP (SEC ID NO: 7)], de masa molecular de 446.6, corresponde al péptido 174-177 de la caseína aS2- Algunos de estos péptidos pueden obtenerse a partir de la caseína c¾2 por hidrólisis enzimática, de preferencia con la ayuda de la tripsina. Puede ser a continuación concentrados o aislados por cromatografía líquida de alta resolución (CLHP) en fase inversa y otras técnicas de cromatografía (filtración sobre gel, intercambio de iones, etc.), por centrifugación (sobre membrana) y otras técnicas de separación sobre membrana (microfiltración, ultrafiltración, etc..) . Estos péptidos pueden también ser obtenidos por síntesis química según los procedimientos bien conocidos del experto en la materia, tales como los descritos por ejemplo, por MERRIFIELD (18) . La caseína entera es obtenida a partir de la leche por precipitación ácida y neutralización con la ayuda de un álcali según procedimientos bien conocidos. Por ejemplo, se puede utilizar el método de NITSCHMANN y 1EHMANN (19) .

La caseína a Sz r utilizada como producto de partida para la obtención de péptidos del grupo seleccionado en el marco de la presente invención, puede ser obtenida por los procedimientos clásicos bien conocidos por el experto en la materia a partir de la leche, de caseínas enteras, de caseínatos y de concentrados de proteínas totales de la leche, obtenidos por ejemplo, según los procedimientos descritos por THOMSON (20) y MMJBOIS (21) . Por ejemplo, se puede preparar la caseóma S2 adaptando el método descrito por SANOGO y colaboradores (22) . Este método es un método de fraccionamiento sobre DEAE-celulosa utilizando un gradiente discontinuo de cloruro de calcio como eluyente. Permite fraccionar rápidamente el conjunto de caseínas. Puede ser venta osamente aplicada con, como soporte intercambiador de aniones, la DEAE-celulosa DE 23 [comercializado por hatman, Maidstone, Grande-Bretagne] que es una resina seca. Después de esta etapa, a fin de eliminar cualquier huella de otras proteínas, una etapa suplementaria de cromatografía de interacción hidrófoba al aplicar un gradiente decreciente en fosfato de sodio sobre una columna TSKgel fenil 5PW [TosoHaas, Stuttgart, Alemania], puede realizarse. El hidrolizado tripsico total de la caseína S2 es obtenido por acción de la tripsina sobre la caseína c¿S2 por ejemplo en las condiciones descritas a continuación. Los primer, segundo, tercer, cuarto y quinto péptidos [SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 5] del grupo seleccionado en el marco de la presente invención son purificados, directamente a partir del liidrolizado tripsico total, por fraccionamiento por CLHP en fase inversa con la ayuda de un gradiente de acetonitrilo . Los picos peptídicos colectados, que corresponden a cada uno de estos cinco péptidos, son liofilizados . Cada uno de estos cinco péptidos, solos o en mezcla, o bien una fracción del hidrolizado tripsico total que contiene al menos alguno de estos cinco péptidos o bien el hidrolizado tripsico total que contiene los cinco péptidos puede ser utilizado como principio activo ya sea en complementos alimentarios en combinación con soportes alimentarios (por ejemplo proteínas, lípidos o glúcidos) , o bien en productos alimentarios destinados a una alimentación particular. Los medicamentos útiles para el tratamiento de la hipertensión preparados con al menos alguno de los siete péptidos del grupo seleccionado en el marco de la presente invención pueden ser administrados por vía oral. Para una administración por vía oral, las composiciones farmacéuticas pueden estar bajo la forma de comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos o cualquier otra forma administrable por vía oral . La invención será ahora descrita más en detalle por medio del ejemplo no limitativo siguiente: EJEMPLO A - Preparación de la Caseína OÍS2 Se disuelven 5 gramos de caseínato de amonio en 200 mi de acetato tampón 20 mM, pH 6.6 que contenía 3.3 M de urea, 35 mM de EDTA y 0.1 % de 2- mercaptoetanol, luego se añaden 20 g de DEAE-celulosa DE 23, equilibrada en 150 mi del mismo tampón. La mezcla resultante es agitada durante 15 minutos a 25 °C, luego se filtra sobre un filtro No. 41 [Whatmanj. El retenido es eluido con 2 veces 250 mi de tampón de acetato-urea-EDTA sin 2- mercaptoetanol . Los tres filtrados son reagrupados. Este primer ciclo de agitación-filtración permite eliminar una fracción F0. Las fracciones caseínicas siguientes (Fl y F2) son eluidas según el mismos procedimiento añadiendo al tampón 30 y 70 mM de CaCl2 respectivamente. El EDTA es añadido a las fracciones a razón de 15 mM en la fracción F0, 45 mM en la fracción Fl y 85 mM en la fracción F2. Los filtrados F0, Fl, F2, dializados contra agua ultrapura, luego se liofilizados, se sometieron a una electroforesis en gel de poliacrilamida- urea a fin de visualizar el fraccionamiento. La fracción Fl contiene la caseína aS2- La purificación de la caseána s2 se logró por cromatografía de interacciones hidrófobas sobre una columna TS ge fenilo 5PW [TosoHaas, Stuttgart, Alemania] 150 x 21.5 mm. la fracción Fl (1 mg/ml) es puesta en solución en un fosfato de sodio 0.48 M tampón, pH de 6.4, que contenía 2.5 M de urea y en presencia de 0.1 % de 2-mercaptoetanol, luego se filtra sobre un filtro de 0.45 um de PVDF [Pall Corporation, Ann Arbor, Michigan, Estados Unidos]. Se inyectan veinte miligramos de solución proteínica. Un gradiente no lineal de 0.48 M a 0.037 M de fosfato de sodio, pH 6.4 que contenía 2.5 M de urea es aplicado con un gasto de 6.0 ml/min como sigue: de 480 mM a 126 mM (18 min) , 126 mM (3 min) , de 126 mM (3 min), 103 mM (3 min), de 103 mM a 72 mM (5 min), de 72 mM a 37 mM (4 min) , 37 mM (17 min) . La caseína S2 bovina colectada es dializada, liofilizada y almacenada bajo vacío a + 4 °C. B - Preparación del hidrolizado trípsico de la caseína o¿S2 La caseína* S2 es puesta en solución a la concentración de 0.05 % (p/v) en 100 mi de fosfato de sodio de 67 mM tampón, pH 8.1, que contiene 0.02 % de azoturo de sodio. La tripsina (E.C. 3.4.21.4) pancreática bovina inmovilizada sobre perlas de agarosa y tratada por la TPC (N- tosil- L- fenilalanina clorometil acetona) [Sigma, Saínt-Louis, Misouri, Estados Unidos] es añadida, después de varios lavados en el tampón precedente y filtración, a la solución de caseína aS2 para obtener una concentración de 0.2 unidades del éster etílico (fe N -benzoil-L-arginina (BAEE) por mi. La hidrólisis se desarrolla a 37 °C durante 24 horas. La reacción es detenida diluyendo dos veces la mezcla con la ayuda de al 4 % que contenía 0.2 % de ácido trifluoroacético (TFA) , luego filtrando sobre un filtro de 0.45 um de PVDF. El hidrolizado es conservado a - 30 °C. C - Fraccionamientoo del hidrolizado por CLHP en fase inversa en gradiente de acetonitrilo . El hidrolizado es fraccionado sobre columna C18 Xterra™ [Waters, Milford, Massachussets, estados Unidos] 250 x 4.6 mm termostateado a 37 °C. Se inyectaron 500 µ? de muestra (0.25 mg/ml) . El perfil de elución contiene una fase isocrática de 3 min al 1.6 % de acetonitrilo en agua (en presencia de 0.1 % de TFA) seguido por un gradiente lineal que permita alcanzar 40 % de acetonitrilo en 87 minutos al gasto de 1 ml/min. El perfil peptídico está representado sobre la figura lr en donde la absorbancia a 215 nm está en ordenada y el tiempo de elución en abcisa. Cinco de los siete péptidos del grupo seleccionado en el marco de la presente invención corresponden a los picos peptídicos referencxados de 1 a 4 sobre la figura 1. Estos péptidos son colectados y liofilizados dos veces . Su identificación se realizó determinando su composición en aminoácidos por el método de la nihidrina de HAMILTON (23) asi como por espectrometría de masa acoplada a la CLHP, ESI-LC/MS "electronebulización con fuente de ionización" o electronebulización por ionización) , hasta por MS/MS, espectrometría de masa en tándem. El pico 1, colectado a 25 minutos contiene el péptido TVY (SEC ID NO: 1) . El pico 2 colectado a 29 minutos contiene el péptido NMAINPSK (SEC ID NO: 2) . El pico 3, colectado a 57 minutos contiene el péptido FALPQY (SEC ID NO: 3) . El pico 4 colectado a 60 minutos contiene los péptidos FPQYLQY (SEC ID NO: 4) y FALPQYLK (SEC ID NO: 5) . Los otros dos péptidos, a saber NMAINP (SEC ID NO: 6) y EALP (SEC ID NO: 7), pueden ser obtenidos por síntesis química según los procedimientos convencionales. Por otra parte, es igual para los cinco péptidos obtenidos preferentemente por fraccionamiento del hidrolizado trípsico total de la caseína OÍS2. D - Prueba in vitro de los péptidos sobre la enzima de conversión de la angiotensina I (ECA) El principio de la experiencia reposa sobre la medida de la actividad residual de la ECA sobre un substrato de síntesis, el Hippuryl-His-Leu-OH, en presencia de un péptido potencialmente inhibidor [CUSHMAN y CHEUNG (24]. El ácido hipúrico liberado es dosificado por CHLP y su cantidad es comparada con un testigo sin inhibidor. Se realiza la incubación en un tampón CHES de 50 mM, pH 8.3, que contiene 5 mM de Hippuryl-His-Leu-OH, 350 mM de NaCl, 3.33 U/L de ECA y 5 % de etanol. La mezcla (volumen final: 150 ul) , después de 10 min de preincubación sin la enzima, se incuba 60 min a 37 °C. La reacción se detiene con la ayuda de captopril (5 uM) , de EDTA (1 mM) y de TFA (0.067 %) . El ácido hipúrico liberado es cuantificado por CHLP utilizando una columna C18 Symmetry® [Waters, Milford, Massachussets, Estados Unidos] 150 x 2.1 mm , es termostateado a 37 °C. Las muestras son filtradas sobre filtro de 0.45 um PVDF y se inyectan 40 µ? . Un gradiente de acetonitrilo en agua (en presencia de 0.1 % de TFA) es aplicado a un gasto de 0.25 ml/min. Este gradiente de elución pasa de 13 a 50 % de acetonitrilo en 7 min, luego alcanza 99 % en 0.5 min y se mantiene en este valor durante 1.5 minutos . El método de determinación de IC50 es validado comparando el valor encontrado para el captopril (0.022 uM) , un inhibidor de la ECA conocido, a los valores bibliográficos (0.023 pM [CUSHMAN y colaboradores (25)], 0.018 uM [DUNCA y colaboradores (26)], 0.007 [PIHLANTO-LEPALA y colaboradores (27)].

Los cuatro picos cromatográficos (1 a 4) colectados a partir del hidrolizado tripsico de caseína aS2 y correspondientes a los cinco picos peptidicos del grupo seleccionado en el marco de la presente invención son probados dos veces a una concentración de 50 uM en aminas primarias. Los picos cromatográficos numerados de 5 a 7 son probados en las mismas condiciones. Los resultados obtenidos se presentan sobre la Figura 2 en donde el porcentaje de inhibición está sobre la ordenada y el número del pico cromatográfico en abcisa. En contraste con lo picos 1 a 4 que contienen los péptidos del grupo seleccionado en el caso de la presente invención inhiben la ECA en más de 40 %, entre los cuales el pico 4 que contiene los péptidos FPQYLQY (SEC ID NO: 4) y FALPQYLK (SEC ID NO: 5), el pico 3 que contiene el péptido FALPQY (SEC ID NO: 3) y el pico 1 que contiene el péptido TVY (SEC ID NO: 1) inhiben la ECA en más de 70 %. Se utilizaron péptidos de síntesis para determinar precisamente las IC50 de estos cinco péptidos. Los péptidos son probados dos veces en un primer tiempo a concentraciones comprendidas entre 0.1 y 250 a 500 uM para obtener una estimación de su IC50, luego se probaron por triplicado sobre una gama de concentraciones apropiada. Los resultados obtenidos se presentan sobre las gráficas de la figura 3 en donde el logaritmo d ela relación actividad /inhibición está sobre ordenada y el logaritmo de la concentración del péptido en abcisa. Esto permite linealizar la curva de inhibición y deducir valores de IC50 de acuerdo con la ecuación de las rectas. Los valores de IC50 se recapitulan en la Tabla 1. Todas son del orden o inferiores a 60 uM, habiéndose notado que los péptidos FALPQY (SEC ID NO: 3) y FALPQYL (SEC ID NO: 5) son los que se comportaron mejor con un valor de IC50 de 4.3 uM. Los siete péptidos del grupo seleccionado en el marco de la presente invención tienen secuencias de aminoácidos diferentes de las de los péptidos inhibidores de la ECA descritos actualmente [FITZGERALD y MEISEL (28) , YAMAMOTO y TAKANO (29), PIHLANTO-LEPPALA (30, NURMINEN (31), TAKANO (32)] que comprenden los reportados por MAENO y colaboradores (13) obtenidos a partir de la caseína S ' CNaS2©fl98-202) , CNas2- (£190-197) y CNaS2- (f189-193) . Como se precisó anteriormente, dos péptidos del grupo seleccionado en el marco de la · presente invención, obtenidos por fraccionamiento del hidrolizado trípsico de la caseína S2 tienen una IC50 inferior a 5 uM y otros dos tienen una IC50 inferior a 20 uM, lo que los clasifica entre los inhibidores más activos de la ECA entre los péptidos naturales obtenidos por un proceso mono-enzimático sobre proteína de la leche.

En lo que concierne a los dos péptidos NMAINP (SEC ID NO: 6) y FALP (SEC ID NO: 7), que no se obtienen directamente por fraccionamiento del hidrolizado tripsico de la caseína aS2, notables porque por una parte poseen un residuo prolilo en su extremo C-terminal, lo que es común en algunos otros péptidos inhibidores de la ECA [MARUYAMA y colaboradores (33), OHMÜRA y colaboradores (34, 35, 36), NAAMURA y colaboradores (37)], y por otra parte porque su secuencia de aminoácidos está completamente comprendida en otros dos péptidos NMAINPSK (SEC ID NO: 2) y FALPQY /SEC ID NO: 3) que son obtenidos directamente por medio de dicho fraccionamiento. De este hecho, es contempable que la utilización como medicamento o complemento alimentario de estos dos últimos péptidos (SEC ID NO: 2 y 3) pueda conducir, por ruptura de la unión peptídica adecuada, para la formacin in vivo de los dos primeros péptidos (SEC ID NO: 6 y 7) . Se hace notar que la utilización de al menos uno d e los siete péptidos del grupo seleccionado en el marco de la presente invención para la preparación de medicamentos, de alimentos o de complementos alimentarios puede hacerse en combinación con uno u otros varios péptidos, que tengan una actividad inhibidora de la ECA pero que tengan un valor de IC50 superior a 60 uM. este sería el caso en el momento de la aplicación del hidrolizado tripsico total de la caseína <¾2 o de una fracción de ésta, que contenga al menos un péptido del grupo. Esta combinación puede manifestarse ventajoso para la actividad inhibidora in vivo con respecto a la ECA. De preferencia, esta combinación haría intervenir los péptidos siguientes: (SEC ID NO: 8), CNaS2- [f81-91) , ALNEINQFYQK, Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gln-Phe-Tyr-Gln-Lys, pico 5, eluido a S2 minutos, (SEC ID NO: 9), CNo¾2- (f81-89) , ALNEINQFY, Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gln-Phe-Tyr, pico 6 eluido a 59 minutos. (SEC ID NO: 10), CNas2- (f206-207) , YL, Tyr-Leu-, pico eluido a 31. minutos, que pueden también obtenerse por fraccionamiento del hidrolizado trípsico de la casína a s2 y que inhiben la ECA entre 25 y 35 % a una concentración de 50 uM en aminas primarias (Figura 2) .

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Tabla 1 anúmero del pico en CLHP sobre la Figura 1; bnúmero de identificación de la secuencia del péptido; cdeterminado con una concentración de aminoácidos primarios o de captopril igual a 50uM; dCNoís2) -f92-98) y CN<¾2- (f174-181) que están mezclados en el pico No. 4; nd, no determinado.

LISTADO DE SECUENCIAS <110>INGREDIA <120> UTILIZACION DE PEPTIDOS DE LA CASEINA PARA TRATAR LA HIPERTENSION <130>lH9O487O/OOO4FRO <160>10 <170>PatentIn Ver. 2.1 <210>1 <211>3 <212>PRT <213>caseína lafa(s2) <400>1 Thr Val Tyr 1 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> caseína alfa <400>2 Asn Met Ala lie Asn Pro Ser Lys 1 5 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> caseína alfa (s2) <400> 3 Phe Ala Leu Pro Gln Tyr 1 5 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> caseína alfa (s2) <400>4 Phe Pro Gln Tyr Leu Gln 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> caseína alfa (s2) <400> 5 Phe Ala Leu Pro Gln Tyr Leu Lys 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> caseína alfa <400> 6 Asn Met Ala lie Asn Pro <210> 7 <211> 4 <212> PRT <213> caseína alfa (s2) <400> 7 Phe Ala Leu Pro 1 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> caseína alfa (s2) i * <400> 8 Ala Leu Asn Glu lie Asn Gln Phe Tyr Gln Lys 1 5 10 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> caseína alfa (s2) 10 <400> 9 Ala "Leu Asn Glu lie Asn Gln Phe Tyr 1 5 15 <210> 10 <211> 2 <212> PRT <213> caseína alfa (s2) <400> 10 Tyr Leu 25

Claims

29 NOVEDAD DE IA INVENCION Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Utilización para la preparación de medicamentos con actividad de tipo hipertensivo, útiles para el tratamiento o la prevención de la hipertensión de uno o varios péptidos, que tengan una actividad inhibidora con respecto a la ECA con valores de IC50 del orden de o inferiores a 60 uM, seleccionados entre el grupo de péptidos que tengan las secuencias de aminoácidos siguientes : Thr-Val-Tyr (SEC ID NO: 1) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys (SEC ID NO: 2) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr (SEC ID NO: 3) Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr (SEC ID NO: 4) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys (SEC ID NO: 5) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro- (SEC ID NO: 6) Phe-Ala-Leu-Pro (SEC ID NO: 7) .

2. Composición farmacéutica caracterizada porque contiene a titulo de principio activo una cantidad eficiente de uno o varios péptidos, que tengan una 30 actividad inhibidora con respecto a la ECA con valores de IC50 del orden de o inferiores a 60 uM, seleccionados entre el grupo de péptidos que tengan las secuencias de aminoácidos siguientes: Thr-Val-Tyr (SEC ID NO: 1) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys (SEC ID NO: 2) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr (SEC ID NO: 3) Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr (SEC ID NO: 4) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys (SEC ID NO: 5) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro- (SEC ID NO: 6) Phe-Ala-Leu-Pro (SEC ID NO: 7) en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable .

3. Producto alimentario, particularmente útil para suplementar la alimentación de personas sujetas a hipertensión o deseosas de prevenir su aparición, caracterizado porgue contiene una cantidad eficiente de uno o varios péptidos, que tengan una actividad inhibidora con respecto a la ECA con valores de IC50 del orden de o inferiores a 60 uM, seleccionados entre el grupo de péptidos que tengan las secuencias de aminoácidos siguientes : Thr-Val-Tyr (SEC ID NO: 1) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys (SEC ID NO: 2) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr (SEC ID NO: 3) 31 Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr (SEC ID NO: 4) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys (SEC ID NO: 5) Asn-Met-Ala-Ue-Asn-Pro- (SEC ID NO: 6) Phe-Ala-Leu-Pro (SEC ID NO: 7) . en combinación con soportes alimentarios, particularmente de naturaleza proteinica, lipidica o glucidica.

4. Producto alimentario de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque comprende una fracción de hidrolizado tripsico de la caseína cxSz r que contenga al menos alguno de los péptidos que tengan las secuencias de aminoácidos siguientes: Thr-Val-Tyr (SEC ID NO: 1) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys (SEC ID NO: 2) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr (SEC ID NO: 3) Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr (SEC ID NO: 4) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys (SEC ID NO: 5)

5. Producto alimentario de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque comprende el hidrolizado tripsico total de la caseínax 32 que contenga los cinco péptidos que tengan las secuencias de amino.ácidos siguientes : Thr-Val-Tyr (SEC ID NO: 1) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro-Ser-Lys (SEC ID NO: 2) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr (SEC ID NO: 3) m 32 Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr (SEC ID MO: 4) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr-Leu-Lys (SEC ID NO: 5)

6. Producto alimentario de conformidad con alguna de las reivindicaciones 3 a 5, caracterizado porque 5 comprende al menos alguno de los péptidos que tengan las secuencias de aminoácidos siguientes: Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gln-Phe-Tyr-Gln-Lys (SEC ID NO: 8) Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gln- Phe- Tyr (SEC ID NO: 9) 10 Tyr-Leu (SEC ID NO: 10) . 15 20 25 RESUMEN DE LA INVENCION La invención concierne a la utilización para la preparación de medicamentos de actividad de tipo anti-hipertensiva, útiles para el tratamiento o la prevención de la hipertensión, de uno o varios péptidos, que tengan una actividad inhibidora con respecto a la ECA con valores de IC50 del orden de o inferiores a 60 M, seleccionados entre los grupos de péptidos que tengan las secuencias de aminoácidos siguientes: Thr-Val-Tyr (SEC ID NO: 1) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro- Ser-Lys CSEC ID NO: 2) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln-Tyr (SEC ID NO: 3) Phe-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr (SEC ID NO: 4) Phe-Ala-Leu-Pro-Gln- Tyr-Leu-Lys (SEC ID NO: 5) Asn-Met-Ala-Ile-Asn-Pro (SEC ID NO: 6) Phe-Ala-Leu-Pro (SEC ID NO: 7) . Concierne también a una composición farmacéutica que tenga, a titulo de principio activo, una cantidad eficiente de uno o varios péptidos, previamente citados, en combinación con un vehículo aceptable farmacéuticamente. Concierne también a un producto alimentario, particularmente útil para suplementar la alimentación de personas sujetas a la hipertensión o deseosas de prevenir su aparición, que contenga una cantidad eficiente de uno o varios de los péptidos previamente citados, en comparación con soportes alimentarios, particularmente de naturaleza proteínica, 34 lipidica o glucídica. Un producto alimentario tal puede comprender igualmente al menos uno de los péptidos que tengan las secuencias de aminoácidos siguientes: Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gln-Phe-Tyr-Gln-Lys (SEC ID NO: 8) Ala-Leu-Asn-Glu-Ile-Asn-Gln-Tyr (SEC ID NO: 9) Tyr-Leu (SEC ID NO: 10) .