ES2284980T3

ES2284980T3 - Microesferulas que contienen un derivado pleuromutilina.

Info

Publication number: ES2284980T3
Application number: ES02803802T
Authority: ES
Inventors: Susanne Christine Wieland-Berghausen; Ferenc Jozsef Rakoczi; Brigitte Monika Cron-Eckhardt
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2001-11-28
Filing date: 2002-11-27
Publication date: 2007-11-16
Anticipated expiration: 2022-11-27
Also published as: AU2002356740A1; EP1450767B1; EP1450767A1; KR20040058334A; AR038367A1; US8236851B2; JP4537708B2; MXPA04005186A; JP2005523243A; CA2466671A1; CN100348185C; BR0214521B1; DE60220436D1; RU2004119815A; CN1592608A; CO5390081A1; CY1106745T1; WO2003045354A8; CA2466671C; PT1450767E

Abstract

Un derivado estabilizado de pleuromutilina de fórmula I, en donde R1 es etilo o vinilo, existe ya sea un doble enlace o un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, Ra y Rb son independientemente cada uno del otro hidrógeno o halógeno, y T es un radical orgánico de cadena larga o corta; en donde el compuesto de fórmula I está incluido en microesférulas en donde las microesférulas son partículas esféricas de una matriz polimérica que tienen un tamaño promedio entre 1 µm y 5000 µm en la cual el derivado de pleuromutilina, en forma sólida o líquida, está altamente dispersado.

Description

Microesférulas que contienen un derivado pleuromutilina.

La presente invención se relaciona con el suministro de granulados de pienso que contienen, como antibiótico, un derivado de pleuromutilina en forma estabilizada. La invención se relaciona también con la preparación de derivados estabilizados de pleuromutilina, para la preparación de dichos granulados de pienso y para el uso de las mismas en un método para controlar enfermedades infecciosas en animales.

Se entiende de aquí en adelante que los derivados de pleuromutilina son compuestos que contienen, como rasgo característico, al fragmento macrocíclico de fórmula I a continuación

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en donde R_{1} es etilo o vinilo, existe ya sea un doble enlace o un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, Ra y Rb son independientemente cada uno del otro hidrógeno o halógeno, y T es un radical orgánico de cadena larga o corta que preferiblemente es como se define aquí más adelante.

En algunas publicaciones, los términos pleuromutilinas, valnemulinas, tiamulinas, y mutilinas son utilizados como sinónimos. El término pleuromutilinas será el que se utilice aquí.

Las pleuromutilinas están entre los antibióticos más modernos y efectivos actualmente disponibles para medicina veterinaria. Sus representantes más conocidos incluyen Tiamutina® (sustancia activa: tiamulina), que se describe aquí más adelante, y el más reciente Econor® (sustancia activa: valnemulina). Ambas sustancias pueden ser utilizadas muy exitosamente con un rango total de enfermedades bacterianas infecciosas para los órganos respiratorios y para el tracto digestivo en animales y exhiben su acción total aún en aquellos casos de problemas en los cuales pueden ser utilizados antibióticos convencionales, en el mejor de los casos, únicamente en la forma de cócteles de dosis alta de una cantidad de sustancias activas, debido a la resistencia que se está presentando ahora.

El espectro de actividad de las pleuromutilinas incluye, por ejemplo, patógenos tales como Streptococcus aronson, Staphylococcus aureus, Mycoplasma arthritidis, Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma bovimastitidis, Micoplasma bovirhinis, Mycoplasma sp., Mycoplasma canis, Mycoplasma felis, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma gallinarum, Mycoplasma gallisepticum, A. granularum, Mycoplasma hominis, Mycoplasma hyorhinis, Actinobacillus laidlawii, Micoplasma meleagridis, Mycoplasma neurolyticum, Mycoplasma pneumonia and Mycoplasma hyopneumoniae.

Además, WO 98/01127 describe, para valnemulina, actividad sobresaliente contra un complejo de la enfermedad que puede ocurrir donde quiera que los animales sean mantenidos, por ejemplo para el propósito de transporte, en un espacio muy confinado (mayor densidad media) y, como resultado, son sometidos a un alto grado de estrés. Los patógenos más comunes que juegan un papel decisivo en esto son Mycoplasma hyopneumoniae, Serpulina (anteriormente Treponema) hyodysenteriae, Serpulina pilosicoli, Lawsonia intracellularis, Mycoplasma gallisepticum, Pasteurella multocida, Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae y Haemophilus parasuis, con enfermedades del tracto respiratorio y otras infecciones que a menudo se presentan uno al lado del otro y que resultan en un cuadro clínico complejo. Todos los animales de rebaño tales como, por ejemplo, ganado, ovejas y cerdos, y también aves de corral se ven afectados.

En una granja actual para ganado a gran escala, por ejemplo de cerdos, vacas, caballos, ovejas y aves de corral, no es posible, en el caso de las enfermedades animales mencionadas, renunciar a la administración de antibióticos porque de lo contrario las enfermedades se esparcirán rápidamente a través de todo el lote de animales, y a menos que sean tratados, dará como resultado pérdidas insostenibles. Existe por lo tanto una gran demanda por antibióticos efectivos por medio de los cuales sea posible ganarle el control a las enfermedades infecciosas en los animales rápidamente antes de que gran número de ejemplares del rebaño se vea afectado.

Aunque, como antibióticos, las pleuromutilinas cumplan con todas las expectativas en términos de eficacia, ellas tienen en común una desventaja que no puede ser desestimada, principalmente su inestabilidad relativa en las formas de administración las cuales, en virtud de su facilidad de manejo, son de particular importancia en medicina veterinaria. Como se discute en WO 01/41758, las pleuromutilinas, especialmente en la forma de la base libre, no son especialmente estables, lo que ha resultado obviamente en que hayan tenido que ser utilizadas como sales de adición ácida, preferiblemente como clorhidratos, usualmente en la forma soluciones inyectables. Las sales de adición ácida tienen estabilidad en almacenamiento a temperatura ambiente hasta por cinco años. La administración oral en el caso de animales ha sido por el contrario la excepción hasta ahora y puede ser utilizada únicamente hasta un cierto grado, aún en la forma de un aditivo para alimentos.

Mientras que en el caso de antibióticos humanos estos pueden ser administrados en una variedad muy grande de formas de administración, tales como tabletas, tabletas recubiertas con azúcar, emulsiones, soluciones inyectables y similares, ya que es posible contar con la disciplina del paciente humano y su deseo de recuperación, en el caso de los animales uno se ve enfrentado con problemas prácticos considerables.

En animales, debe existir una preparación natural para tomar una preparación medicinal en forma oral. Desde luego, es posible tratar a un solo animal o a un número pequeño de animales de manera forzada y administrarles un antibiótico de forma tal que el animal tenga que tragarlo, o éste sea inyectado. Tales métodos forzados son, sin embargo, no aceptables para una gran cantidad de animales debido a que es una labor muy intensa, se requiere que el veterinario esté presente en cada caso individual y, finalmente, resulta en costos altos que no pueden ser traspasados al consumidor de carne o de productos lácteos debido a la situación de competencia existente. En el cultivo a gran escala del ganado, por lo tanto, se buscan formas simples y confiables de administración que el encargado de los animales pueda, en la medida de lo posible, poner en práctica en forma independiente o aún completamente automatizada y que mantenga los costos dentro de límites razonables.

Un método para tratar estos factores es la administración de dosis precisas de antibióticos incorporados en pienso seco, esto es, en los así llamados granulados de pienso.

Hoy en día, los animales domésticos y el ganado productivo tal como, por ejemplo, cerdos, pero también vacas, ovejas y aves de corral son permanentemente mantenidos en establos que están equipados con los más modernos sistemas de alimentación automatizada. En tales casos, se reparte la alimentación en forma completamente automatizada de acuerdo con la edad y el peso del animal, y es transportada hasta cada animal y colocada en su sitio de alimentación a horas del día precisamente determinadas y en cantidades diarias también establecidas con precisión. Dichos granulados de pienso son utilizados frecuentemente en tales sistemas completamente automatizados. Los granulados son un pienso concentrado seco altamente comprimido y compactado con base en vegetales y/o en animales, que pueden ser enriquecidas con aditivos tales como proteínas, vitaminas y minerales. Tales granulados de pienso son simplemente gránulos redondos o alargados sintéticos que pueden ser vertidos, glóbulos o, dependiendo del método de producción, piezas con forma de pastilla de un tamaño uniforme dependiendo de la raza y de la edad de los animales y que están en el rango que va desde unos pocos milímetros para las aves de corral hasta aproximadamente un centímetro para cerdos y vacas completamente desarrollados. Los molinos comerciales de pienso producen el pienso moliendo el material orgánico de partida, mezclando los componentes en la composición deseada y finalmente comprimiéndolos en granulados; los granulados se colocan en sacos que son enviados al encargado de los animales, quien llena con ellos el sistema de distribución. Una ventaja significativa de tales granulados es su facilidad de manejo, como resultado de su uniformidad, facilidad de vertimiento y estabilidad en almacenamiento. Ellas pueden ser fácilmente vaciadas de los contenedores en forma completamente automática, medidas en porciones, transportadas a través de correas transportadoras o tuberías y entregadas a cada animal en una porción precisa con la cantidad correcta. Además los granulados ocupan mucho menos espacio que el alimento fresco y, sobre todo, son injeridas por los animales de buena gana y sin ningún problema.

Por lo tanto resulta ventajoso añadirle a esos granulados no solamente proteínas y otros nutrientes tales como vitaminas y minerales sino también, cuando se lo requiera, antibióticos. Esto ya está siendo realizado en la práctica pero, en el caso de la clase de ingredientes activos de la pleuromutilina que se encuentran bajo discusión aquí, uno se enfrenta con las dificultades particulares descritas, que son específicas para esa clase de sustancia y que serán explicadas con más detalle aquí, más adelante.

Se ha encontrado que las pleuromutilinas son algo inestables, sobre todo cuando están en contacto con material alimenticio, especialmente vegetales y fibras animales, durante la preparación de granulados de pienso, lo que resulta en perdidas considerables desde el proceso mismo de preparación. En la preparación de granulados de pienso, el material orgánico seco de partida de origen vegetal o animal se muele, se mezcla completamente con los aditivos, vitaminas, elementos traza, antibióticos -en el caso de derivados de pleuromutilina- etc., es decir que se homogeniza sustancialmente, y luego se humecta aproximadamente con entre 5 y 10% en peso de agua o vapor y se comprime en granulados a elevadas temperaturas aproximadamente entre 60 y 80ºC, preferiblemente entre 65 y 75ºC, bajo presiones aproximadamente de 10^{8} a 10^{10} N/m^{2} (1 a 100 kbar) usualmente desde 25 x 10^{8} hasta 10^{10} N/m^{2} (25 a 100 kbar). Temperaturas permanentes mayores, por ejemplo 100ºC, tienden a ser desventajosas y reducen dramáticamente la viscosidad de los granulados. Los picos locales de temperatura de corta duración dentro de la prensa, llamados destellos, de hasta 200ºC son, en contraste, no problemáticos. El tiempo de residencia de la masa en la prensa es aproximadamente de 5 a 180 segundos, preferiblemente de 10 a 90 segundos, y depende, entre otros, del tamaño de los granulados.

Mientras que las pleuromutilinas en forma pura soportan por si mismas tales temperaturas muy bien y pueden ser almacenadas a temperatura ambiente inclusive por unos pocos meses sin ninguna perdida medible de ingrediente activo, ellas se descomponen relativamente rápidamente bajo presión y en contacto íntimo con fibras animales o vegetales en alimentos para el ganado y bajo las elevadas temperaturas prevalecientes. Parece que el contacto con las fibras realmente cataliza el proceso de descomposición. Aún cuando se mantenga una fase de temperatura y presión elevadas tan corta como sea técnicamente posible y los granulados terminados sean inmediatamente enfriados hasta temperatura ambiente justamente después del proceso de compresión, entre un cuarto y un tercio del ingrediente activo se pierde a pesar de eso. Aún cuando los productos de degradación no tengan efectos adversos sobre los animales tratados, la perdida inevitable de ingrediente activo lleva ineludiblemente a un incremento considerable en el costo del producto final.

Además, se ha encontrado también que la pleuromutilina aún intacta en los granulados es mucho menos estable durante el almacenamiento, por ejemplo, que el ingrediente activo puro. Aún a temperatura ambiente, la degradación del ingrediente activo continúa en los granulados terminados. Después de tres meses el contenido de ingrediente activo ya ha caído a menos del 60%. Esa inestabilidad relativa también ha significado que, hasta ahora, la administración de una dosis exacta de ingrediente activo en la forma de granulados de pienso podría ser llevada a cabo únicamente durante un período aproximadamente de 4 a 6 semanas después de que los granulados han sido preparados. Por lo tanto, los encargados de los animales se habían visto obligados hasta ahora a utilizar únicamente granulados preparados en forma relativamente fresca. Ellos no han podido almacenar existencias razonables de granulados por largos períodos y han tenido que salir a los molinos de pienso con una nueva orden de producción aproximadamente cada cuatro a seis semanas con el propósito de que se les suministre pienso fresco que tenga un contenido garantizado de antibiótico. Aunque esto es técnicamente posible, implica un alto grado de planeamiento logístico y ha dado como resultado que los molinos para pienso tengan que cumplir repetidamente con pequeñas ordenes que no necesariamente se acomoden a sus cronogramas de producción, dando como resultado tiempos de espera inconvenientes y, especialmente, en incrementos adicionales en el costo de los granulados.

Por las razones mencionadas, en consecuencia, se han hecho muchos esfuerzos para estabilizar las pleuromutilinas de tal forma que ellas soporten las elevadas temperaturas y presiones durante la preparación de los granulados sin perdida de la sustancia activa y también, cuando se encuentran en forma de granulados terminados, tengan una estabilidad duradera durante el almacenamiento, adecuada para propósitos prácticos.

Los intentos no exitosos para tal estabilización incluyen, por ejemplo, (1) la reducción del área superficial del ingrediente activo por medio de la compresión en gránulos, habiéndose ensayado una variedad muy grande de tamaños de gránulo; (2) el sellamiento de dichos gránulos con el ingrediente activo en una variedad muy grande de capas protectoras, por ejemplo gelatina o diferentes azúcares y recubrimientos; (3) introducir el ingrediente activo dentro de materiales porosos tales como, por ejemplo, diferentes celulosas, almidones, ácidos salicílicos o zeolitas, con o sin capas protectoras adicionales; y (4) la modificación química de la estructura macrocíclica básica del ingrediente activo. Aunque en unos pocos casos la modificación ha dado como resultado una mayor estabilidad del compuesto en si mismo, simultáneamente ha dado como resultado una perdida de actividad.

Sin embargo, ninguno de esos intentos ha dado como resultado una perdida apreciablemente menor de ingrediente activo por compresión dentro de granulados de pienso o en una estabilidad mesurablemente mejorada en almacenamiento. Sin embargo, se ha logrado éxito ahora, sorprendentemente, en suministrarle al usuario un método amigable de administrar granulados de pienso en una forma que ya no exhiba los inconvenientes mencionados para el ingrediente activo. Ahora es posible, asombrosamente, estabilizar así a la pleuromutilina que no solamente soporte indemne la preparación del granulado sino que también sobreviva durante un período de almacenamiento suficientemente largo.

Aunque la presente invención se ilustra de aquí en adelante con referencia al ejemplo específico de la valnemulina, también es aplicable en forma demostrable a la Tiamutina®/tiamulina y a otros derivados de pleuromutilina que tienen la estructura macrocíclica básica de fórmula I mostrada al comienzo.

Dentro del contexto de la presente invención, se da preferencia a las pleuromutilinas de fórmula I mencionadas más abajo

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en donde R_{1} es etilo o vinilo;

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(A): existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, y Ra y Rb son H, y T es uno de los siguientes grupos a hasta i:

a): -CH_{2}-OH;

b)

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c): -(CH_{2}-X)_{m}-(CH_{2})_{n}-N(R_{2})(R_{3}) en donde X es -O-, -S-, -NH- o

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: m es = ó 1, n es un entero de 2 a 5; R_{2} y R_{3} son cada uno independientemente del otro alquilo C_{1-6} o, junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos están enlazados, forman un heterociclo de 5 ó 6 miembros que contiene como fracción hétero, -S-, -O-, o -N(R_{4})-; en donde R_{4} es alquilo C_{1-6} o hidroxialquilo C_{1-6}, y Y y Z son cada uno independientemente del otro -O- o -S-;

d): -CH_{2}-S-(CH_{2})_{k}-N(R_{5})(R_{6}), donde k es un entero de 2 a 5, y R_{5} y R_{6} son cada uno independientemente del otro alquilo C_{1-6};

e): -CH_{2}-S-C(CH_{3})_{2}-CH_{2}-NHC(O)-R_{7}, en donde R_{7} es alquilo C_{1-6}, sustituido por -NH_{2} o es un heterociclo saturado de 5 miembros, que contiene 1 ó 2 heteroátomos seleccionados de -S- y -NH-;

f): -CH_{2}S-C(CH_{2})_{l}-R_{8}, en donde l es 0 ó 1 y R_{8} es el grupo

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: donde K es H, alquilsulfonilo C_{1-6}, -NH_{2}-, CHO, -N(R_{9})(R_{10}), -S-(CH_{2})_{q}N(R_{9})(R_{10}) o -C(G)-NHR_{11} siendo G oxígeno o azufre, siendo R_{9} y R_{10} cada uno independientemente del otro H, alquilo C_{1-6}, alquilsulfonilo C_{1-6}, hidroxialquilo C_{1-6}, dihidroxialquilo C_{1-6} o alcanoílo C_{1-6} sustituido o no sustituido con alquilsulfonilo C_{1-6}; o R_{9} y R_{10} junto con el átomo de N al que están enlazados, formando piperazinilo sustituido o no sustituido, en donde el segundo átomo de nitrógeno está sustituido por un sustituyente del grupo alquilo C_{1-6}, hidroxialquilo C_{1-6} y dihidroxialquilo C_{1-6}; siendo R_{11} alquilo C_{1-6} o alquilcarbonilo C_{1-6}; Q es H, -NH_{2}, -CF_{3}, alquilo C_{1-6}, piridilo o -N(R_{9})(R_{10}); siendo R_{9} y R_{10} como se los definió más arriba;

g): -CH3, -CH_{2}Cl, CH_{2}Br, -CH_{2}SCN, -CH_{2}-NH_{2}, -CH_{2}-N_{3}, -COOH, -CH_{2}-OCOCH_{3} o

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h): -N(R_{15})(R_{16}), en donde R_{15} y R_{16} son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, un radical de hidrocarburo C_{1-6} saturado o insaturado, sustituido o no sustituido, de cadena recta o ramificada, un radical cicloalquilo C_{3-8} saturado o insaturado, sustituido o no sustituido; un heterociclo sustituido o no sustituido; y un radical arilo sustituido o no sustituido; o R_{15} y R_{16}, junto con el átomo de nitrógeno al cual están enlazados, forman un anillo de 3 a 8 miembros que no contiene un heteroátomo adicional, o que contiene un heteroátomo adicional de la serie -N-, -O- y -S-; o R_{15} es uno de los grupos mencionados y R_{16} es -SO_{2}R_{17}, -C(O)R_{18}, -O-R_{19} o N(R_{19}) (R_{20}); siendo R_{17} seleccionado del grupo que consiste de un radical hidrocarburo C_{1-6} saturado o insaturado, de cadena recta o ramificada, sustituido o no sustituido; un radical cicloalquilo C_{3-8}, saturado o insaturado, sustituido o no sustituido, un heterociclo sustituido o no sustituido, un radical arilo sustituido o no sustituido; un radical alquilamino C_{1-6} sustituido o no sustituido, y un radical arilamino sustituido o no sustituido; siendo R_{18} seleccionado del grupo que consiste de H, un radical hidrocarburo C_{1-6} saturado o insaturado, de cadena recta o ramificada, sustituido o no sustituido; un radical cicloalquilo C_{3-8}, saturado o insaturado, sustituido o no sustituido; un heterociclo sustituido o no sustituido y un radical arilo sustituido o no sustituido; siendo R_{19} y R_{20} iguales o diferentes y siendo seleccionados del grupo que consiste de un radical hidrocarburo C_{1-6}, saturado o insaturado, de cadena recta o ramificada, sustituido o no sustituido; un radical cicloalquilo C_{3-8}, saturado o insaturado, sustituido o no sustituido; un heterociclo sustituido o no sustituido y un radical arilo sustituido o no sustituido o, junto con el átomo de nitrógeno al cual están enlazados, forman un grupo cíclico de 3 a 8 miembros, que puede contener opcionalmente otro heteroátomo, seleccionado del grupo que consiste de -N-, -O- y -S-.

(B): existe un doble enlace entre los átomos de carbono 1 y 2, y Ra y Rb son H y T es el siguiente grupo i):

i): -CH_{2}-CO-R_{12}, en donde R_{12} es un heterociclo de 5 ó 6 miembros, que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido, un radical arilo sustituido o no sustituido, o el grupo -CH_{2}-R_{13}; R_{13} es halógeno o -SR_{14} y R_{14} es alquilamino C_{1-6}, o un heterociclo de 5 ó 6 miembros que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido, o un radical arilo sustituido o no sustituido, siendo los sustituyentes para dicho heterociclo o el radical arilo de uno a tres radicales seleccionados del grupo que consiste de OH, CN, NO_{2}, N_{3}, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}-alquilo C_{1-6}, di-N-alquilamino C_{1-6}, acilamino C_{1-6}, acilcarbonilamino C_{1-6}, aciloxi C_{1-6}, carbamoilo C_{1-6}, mono y di-N-alquilcarbamoilo C_{1-6}, aciloxicarbonilo C_{1-6}, alquilsulfonilo C_{1-6}, alquilsulfinilo C_{1-6} y bencilo;

(C): existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, y Ra es H, OH, o F, y Rb es H; o Ra es H y Rb es F; y T es el siguiente grupo k:

k): -CH_{2}-CO-R_{12}, en donde R_{12} es como se definió para el grupo i), incluyendo las sales de adición ácida fisiológicamente tolerables y las sales de amonio cuaternario de las mismas.

Los tres compuestos de fórmula I pueden ser convertidos en sus sales de adición ácida, y viceversa, por medio de métodos conocidos. De las sales de adición ácida se da la mayor preferencia al clorhidrato de la sal. Las sales de amonio cuaternario pueden prepararse igualmente por medio de métodos conocidos por si mismos.

A menos que se defina otra cosa, las definiciones del sustituyente se basan generalmente en lo que generalmente será comprendido por un químico promedio. Dentro del contexto de la fórmula I anterior, el alquilo por si mismo o como parte de un sustituyente es, dependiendo del número de átomos de carbono, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, ter-butilo, isobutilo, etc. "Halógeno" es fluor, cloro, bromo o yodo; preferiblemente fluor, cloro o bromo y especialmente cloro.

Los anillos heterocíclicos, de 5 ó 6 miembros, saturados o insaturados, incluyen a aquellos que contienen uno o más heteroátomos, siendo los heteroátomos adecuados, especialmente, azufre y nitrógeno. Un subgrupo especialmente preferido de tales heterociclos contiene 1, 2 ó 3 átomos de nitrógeno y ningún otro heterocomponente. De ellos, se hace énfasis especial en aquellos anillos heterocíclicos insaturados, de 5 ó 6 miembros que contienen un único átomo de nitrógeno como el heterocomponente, por ejemplo piridina, pirrol y 5,6-dihidro-3H-pirrol. Los anillos heterocíclicos adecuados de 5 ó 6 miembros, insaturados que contienen dos átomos de nitrógeno, son, por ejemplo, imidazol, piridazina y pirimidina. Tales anillos pueden tener también uno o más anillos fenilo fusionados. Ejemplos típicos son benzimidazol, quinolina, isoquinolina y ftalazina. Los anillos heterocíclicos adecuados de 5 ó 6 miembros que contienen tres átomos de nitrógeno son, por ejemplo, 1,2,4-triazoles. Otro grupo de heterociclos preferido contiene un átomo de nitrógeno y un átomo de azufre. El grupo incluye, por ejemplo, a los diferentes tiazoles, 4,5-dihidrotiazol y benzotiazol. Un ejemplo típico de un heterociclo que contiene dos átomos de nitrógeno y un átomo de azufre es 1,3,4-tiadizol. Arilo o un radical arilo es, especialmente, fenilo o naftilo, los cuales, a menos que se defina específicamente, pueden ser no sustituidos o pueden ajustarse a cuatro sustituyentes idénticos o diferentes seleccionados del grupo que consiste de OH, nitro, amino, ciano, halógeno, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, alquilo C_{1-6}-alcoxi C_{1-6}, haloalquilo C_{1-6}, mono-N-alquilamino C_{1-6}, di-N-alquilamino C_{1-6}, aciloxi C_{1-6}, acilamino C_{1-6}, acilcarbonilamino C_{1-6}, carbamoilo C_{1-6}, mono y di-N-alquilcarbamoilo C_{1-6}, aciloxicarbonilo C_{1-6}, alquilsulfonilo C_{1-6}, alquilsulfinilo C_{1-6} y bencilo. A menos que se defina específicamente, los sustituyentes adecuados son los mismos que para los anillos heterocíclicos, estando así mismo los heterociclos sustituidos una o más veces por radicales idénticos o diferentes. Los heterociclos a los cuales se da énfasis especial son: 3-piridilo, 4-piridilo, pirimidin-2-ilo, 1,3,4-tiazol-2-ilo, benzotiazol-2-ilo, 2H-1,2,4-triazol-3-ilo, azabicicloheptilo, azabiciclooctilo y piperidilo.

La presente invención se relaciona específicamente con compuestos de fórmula I en donde R_{1} es vinilo, existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, y Ra y Rb son hidrógeno o halógeno, preferiblemente hidrógeno, y T es como lo definido por la fórmula I, incluyendo las sales de adición ácida fisiológicamente tolerables y las sales de amonio cuaternario de las mismas.

Se da preferencia especial a los derivados de pleuromutilina de fórmula I en donde:

R_{1}: es vinilo; existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2;

Ra: y Rb son H, y

T: es -CH_{2}-S-(CH_{2})_{k}-N(R_{5})(R_{6}) en donde k es un entero de 2 a 5; y R_{5} y R_{6} son cada uno independientemente del otro alquilo C_{1-6}; incluyendo las sales de adición ácida fisiológicamente tolerables y las sales de amonio cuaternario de las mismas. Dentro de ese grupo, se da preferencia muy especial al derivado de pleuromutilina en donde T es -CH_{2}-S-(CH_{2})_{2}-N(C_{2}H_{5})(C_{2}H_{5}).

Igualmente se da preferencia a los derivados de pleuromutilina de fórmula I en donde

Ra: y Rb son H, y T es -CH_{2}-S-C(CH_{3})_{2}-CH_{2}-NH-C(O)-R_{7} en donde R_{7} es alquilo C_{1-6} sustituido por -NH_{2} o un heterociclo saturado de cinco miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de -S- y -NH-; incluyendo las sales de adición ácida fisiológicamente tolerables y las sales de amonio cuaternario de las mismas. Dentro de ese grupo, se da preferencia muy especial a los derivados de pleuromutilina de fórmula I en donde T es -CH_{2}-S-C(CH_{3})_{2}-CH_{2}-NH-C(O)-R_{7} en donde R_{7} es alquilo C_{1-6} sustituido por -NH_{2} y especialmente al derivado de pleuromutilina en donde T es -CH_{2}-S-C(CH_{3})_{2}-CH_{2}-NH-C(O)-CH(NH_{2})-CH(CH_{3})_{2}.

Dentro del contexto de la presente invención, se da por lo tanto preferencia muy especial a los compuestos tiamulina y valnemulina, especialmente valnemulina en virtud de su actividad de amplio espectro. Como ya se mencionó, ambas sustancias se encuentran comercialmente disponibles. La estructura química de esas dos sustancias preferidas es la siguiente.

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Los compuestos de fórmula I se describen en detalle en la literatura, por ejemplo en las referencias dadas más abajo:

El compuesto de fórmula I en donde R_{1} y A son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo a, ha sido aislado por Kavanagh y colaboradores, y descrito en Proc. Natl. Acad. Soc. 37, 570-574 (1951). Ese compuesto es el representante básico de la clase de sustancias discutidas aquí, principalmente pleuromutilina. En US-4.247.542, se indica que la estructura de la pleuromutilina se encontró luego que se caracterizaba porque Y en la fórmula I anterior es -CH_{2}-OH. La misma patente estadounidense también describe un compuesto de fórmula I en donde R_{1} es a su vez vinilo, existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, y Ra y Rb son H, y T es -CH_{2}-\beta,D-xilopiranosilo.

El compuesto de fórmula I en donde R_{1} y A son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo b es descrito en la US-4.129.721.

Los compuestos de fórmula I en donde R_{1} y A son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo c son descritos en la US-4.148.890.

Los compuestos de fórmula I en donde R_{1} y A son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo d son descritos en la US-3.919.290, incluyendo la sustancia ya específicamente mencionada varias veces, tiamulina, que está disponible bajo el nombre comercial Tiamutina®.

Los compuestos de fórmula I en donde R_{1} y A son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo e son descritos en la EP-0 153 277, incluyendo valnemulina, la cual ya ha sido mencionada varias veces y que también es conocida desde WO 98/01127.

Los compuestos de fórmula I en donde R_{1} y A son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo f son descritos en la US-4.428.953.

Los compuestos de fórmula I en donde R_{1} y A son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo g son descritos en la US-3.979.423.

Los compuestos de fórmula I en donde R_{1} y A son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo h son descritos en la WO 97/25309.

Los compuestos de fórmula I en donde R_{1} y B son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo i son descritos en la WO 01/14310.

Los compuestos de fórmula I en donde R_{1} y C son como se define para la fórmula I y T es como se define para el grupo k son descritos en la WO 01/14310.

La literatura divulga una serie de análisis que involucran la adición de medicamentos, incluida la tiamulina, al pienso pero esos análisis son incapaces de resolver el problema técnico fundamental de la presente invención. Algunas de esas referencias serán discutidas brevemente a continuación:

EP 0 l65 577 se relaciona con el aprovisionamiento de un aditivo al alimento para el ganado que contiene bacitracina de zinc la cual, después de mezclada con el alimento o cuando se forma el granulado, tiene una mejor estabilidad y hace posible un almacenamiento prolongado. Esta mejor estabilidad se logra con el aprovisionamiento del aditivo al alimento para el ganado que contiene bacitracina de zinc con un recubrimiento polimérico, con polímeros tales como polisacáridos, poliacrilatos, grasas, compuestos tipo grasa o ceras que son utilizadas como recubrimiento.

La Publicación Derwent XP002197610 [JP 03 101619 A SDS BIOTECH CORP] del 26.04.1991 se relaciona con un medicamento veterinario no amargo en forma granulada que consta de un material transportador de zeolita y de tiamulina.

La Publicación Derwent XP002198060 [JP 63 033330 A NIPPON KAYAKU KK] del 13.02.1988 se relaciona con una forma oral de administración antibacterial, entre otros, de tiamulina con base en poliacrilato de sodio, que da como resultado una mejor absorción del ingrediente activo. La forma de administración consiste de un polvo, que puede ser comprimido también en gránulos o tabletas y mezclado con el pienso.

EP-0 707 798 describe un método de preparación de alimentos que contengan sustancias farmacológicamente activas. El método se caracteriza especialmente porque las sustancias farmacológicamente activas se aplican individualmente o en una mezcla en una preparación adecuada en forma de gel galénico, en la forma de un gel que puede esparcirse, a un alimento para el ganado físicamente preparado.

La Solicitud de Patente Europea EP-0 658 313 describe gránulos que constan de un núcleo y de un recubrimiento. El núcleo consta de un material orgánico, especialmente vegetal, o inorgánico y que tiene un diámetro entre 100 y 800 \mu. El recubrimiento consta de polímeros solubles en agua que contienen al ingrediente activo, cuyos polímeros se disuelven en un medio acuoso y, especialmente, en jugo gástrico. El ingrediente activo se incorpora en ese recubrimiento o se adhiere al mismo. Durante la producción, se prepara primero el núcleo. Se trata la superficie del núcleo con un ácido y luego se la rocía con una solución acuosa del ingrediente activo. El propósito es preparar gránulos finos que se puedan mezclar con el pienso sin ninguna dificultad. En contraste con la presente invención, los gránulos descritos en esa referencia no dan como resultado ninguna estabilización significativa del ingrediente activo y por lo tanto no son adecuados para la provisión de granulados de pienso que contengan un derivado de pleuromutilina. El ingrediente activo es, también en contraste con la presente invención, liberado en el estómago.

Se ha encontrado ahora, sorprendentemente, que el derivado de pleuromutilina puede ser encapsulado en microesférulas por medio de métodos ya conocidos; esas microesférulas pueden ser introducidas en el pienso seco y comprimidas en granulados de pienso a presión elevada y a elevada temperatura y posteriormente secadas, sin la pérdida inevitable hasta ahora de sustancia activa. Esta nueva estabilidad obtenida de la sustancia activa en los granulados, resulta además en una estabilidad durante el almacenamiento extremadamente alta para el alimento terminado. A temperatura ambiente, tales granulados de pienso pueden ser almacenados ahora en forma estable durante muchos meses, lo cual quiere decir que el contenido de ingrediente activo permanece virtualmente constante.

La sustancia activa incluida en las microesférulas no solamente da como resultado dicha mejora inesperada en estabilidad sino también, muy independientemente, tiene la ventaja adicional de que, en contraste con la sustancia activa pura, las microesférulas no son sometidas a la formación de polvo, no forman masas, se pueden verter en forma muy apropiada y protegiendo a la sustancia activa de influencias no deseadas del exterior. Por ejemplo, como resultado de esto, se evita la inhalación no intencional o el contacto con la piel y los ojos durante su manipulación. Habiendo sido embebida en las microesférulas, la sustancia activa, que en ningún caso ha sido aprobada para el uso en humanos, puede ser manejada en forma simple y segura sin la necesidad de tener que tomar medidas protectoras especiales. Debido a que las microesférulas virtualmente no exhiben adhesión a las superficies de los aparatos ni tampoco forman bultos o incrustaciones ni se pegan entre si en ninguna otra forma, el aparato utilizado, por ejemplo en los molinos para el pienso, pueden ser limpiados con muy poca dificultad técnica; la simple remoción al vacío es a menudo más que suficiente.

El uso de estas microesférulas resulta además en una ventaja adicional en el uso. Cuando se administran antibióticos en forma oral, se observa una pérdida en el apetito que se incrementa con el transcurso de la terapia en pacientes humanos sensibles. Dependiendo de la severidad del caso, el médico cambiará entonces a otra forma de administración, por ejemplo por medio de inyección o de supositorios, puede propósito de evadir al estómago. En animales, se observa el mismo efecto en casos individuales. La pérdida de apetito se refleja en el rechazo a comer una cantidad suficiente de pienso. El alimento tampoco se metaboliza muy bien y no se presenta el incremento deseado en peso. Debido a que tales animales comen menos pienso, se pone en riesgo también la terapia oral. El cambio a supositorios no es una opción en el caso de los animales, y las inyecciones tienen las desventajas ya descritas, la eliminación de las cuales es un propósito de la presente invención. Cuando se utilizan en forma oral las microesférulas de la invención, no se observan dicho exceso de sensibilidad ni el rechazo asociado del alimento, lo cual se presume que está relacionado con el hecho de que la matriz de las microesférulas es resistente al ácido.

Los estudios de biodisponibilidad indican que las microesférulas pasan a través del estómago en forma intacta y liberan al ingrediente activo únicamente en el medio alcalino del intestino. Cuando se llevan a cabo ensayos comparativos de alimentación en cochinillos utilizando a) a granulados de pienso que contienen clorhidrato de valnemulina libre o ECONOR® disponible en el comercio y b) granulados de pienso preparados de acuerdo con el Ejemplo 2 que contienen al clorhidrato de valnemulina encapsulado en microesférulas, con muestras de sangre que son tomadas de los animales en prueba cada hora y midiendo la concentración de valnemulina presente en el plasma sanguíneo, se encontró que en el caso a) la concentración del ingrediente activo se eleva rápidamente antes de alcanzar su valor máximo después de 2-3 horas. Después de 8-10 horas, la curva cae entonces nuevamente y se aproxima a cero. En el caso b), con las microesférulas, el incremento en la concentración del ingrediente activo comienza después de un retraso aproximadamente de 1-2 horas, alcanza su valor máximo aproximadamente después de 3-4 horas y, aproximadamente después de 10-12 horas, cae hacia cero. Consecuentemente, aunque en el caso b) existe un ligero retraso en el establecimiento de los valores efectivos del nivel en sangre, esto no tiene un efecto adverso sobre la terapia. Este nuevo método pone a disposición una forma de administración que es suave con el estómago y que hace que la terapia oral sea aún más eficiente.

Si se desea, por medio de aditivos tales como, por ejemplo, carbonato ácido de sodio, se puede hacer que las microesférulas de acuerdo con la invención se disuelvan, y liberen al ingrediente activo, tan pronto como entren en contacto con el medio ácido del estómago. En muchos casos, sin embargo, esto no es deseable.

En el contexto de la presente invención, se entiende que las microesférulas (o "microesferas") son microscópicamente pequeñas, en su mayoría partículas esféricas de matriz polimérica que tienen un tamaño promedio aproximadamente desde 1 \mum hasta aproximadamente 5000 \mum, usualmente desde 50 \mum hasta 3000 \mum. El derivado de pleuromutilina se embebe allí dentro. Ellas son por lo tanto esferas extremadamente pequeñas que comprenden una matriz polimérica compacta en la cual el ingrediente activo, en forma liquidada o sólida, se dispersa altamente, no simplemente recubriéndola. Podría ser descrito como un caso especial de encapsulación.

El método utilizado en la presente invención para la preparación de las microesférulas es ya conocido, al igual que los materiales utilizados para la encapsulación y los derivados de pleuromutilina empleados. Sin embargo, las microesférulas preparadas por primera vez de esa manera y los granulados de pienso que contienen a esas microesférulas y el uso oral de esto para combatir enfermedades infecciosas en animales, son nuevos.

Las microesférulas se pueden preparar en forma análoga a los métodos descritos en las referencias mencionadas a continuación:

: Shigeru Goto y colaboradores, Journal of Microencapsulation, 1986, Vol. 3, No. 4, 293-305;

: Shigeru Goto y colaboradores, Journal of Microencapsulation, 1986, Vol. 3, No. 4, 305-316 o US-3 714 065 (correspondiente a DE-2 105 039).

El enfoque principal de la presente invención es menos sobre los aspectos de la preparación de microesférulas o el uso oral de pleuromutilinas que sobre el suministro de nuevos granulados de pienso que contienen derivados de pleuromutilina estabilizados en la forma de microesférulas y que, como resultado, no ser sometidos a una pérdida significativa de ingrediente activo ya sea durante la preparación o durante el almacenamiento. La invención consiste en implementar la estabilización de la sustancia activa en los granulados de pienso. Éste invención se propone ayudar a la persona que ejerce el oficio a resolver los problemas técnicos existentes y a proveerlo con medios por medio de los cuales pueda almacenar granulados de pienso que contienen pleuromutilinas durante períodos de tiempo relativamente largos y administrarlos a los animales domésticos y al ganado productivo sin un gran desembolso en términos de personal, tiempo y logística. En el análisis final, no solamente se ahorra tiempo y dinero sino que también se incrementa bastante significativamente la seguridad y la confiabilidad en el uso práctico.

Las microesférulas se preparan convenientemente en un sistema de dos fases que consiste de una primera fase orgánica u orgánica-acuosa, y una segunda fase aceitosa. La fase orgánica u orgánica-acuosa consiste de una solución o dispersión de los componentes poliméricos adecuados para la formación de microesférulas, solvente y el derivado de pleuromutilina que va a ser envuelto. La fase aceitosa es una dispersión de mono, di o triestearato de aluminio, estearato de sodio, estearato de calcio o estearato de magnesio en parafina líquida o aceite de silicona. Sin embargo, se pueden utilizar también otros, como por ejemplo emulgentes o dispersantes no iónicos tales como monooleato de sorbitán (Span-80®). El volumen de la fase aceitosa excede convenientemente varias veces al volumen de la fase orgánica. Se mezclan completamente las dos fases junto con agitación vigorosa o inclusiva se homogenizan bajo alta presión o con la ayuda de un mezclador estático. Se forman partículas poliméricas microscópicamente pequeñas en el proceso. Las microesférulas contienen al ingrediente activo en forma altamente dispersada y no son solubles en la mezcla de reacción de tal manera que se pueden separar por decantación o ser filtradas, lavadas y secadas.

La agitación de las dos fases es también importante para la formación de las microesférulas. En general, se utiliza un aparato de agitación que tiene un agitador en forma de propelente con velocidades de rotación relativas de al menos 100 rpm hasta aproximadamente 1500 rpm, garantizando un entremezclado vigoroso de las dos fases y la rápida formación de microesférulas. Se puede utilizar también, desde luego, un mezclado estático.

En detalle, la preparación de las microesférulas se lleva acabo en las siguientes etapas:

(a): preparación de una solución de un polímero adecuado para la formación de la matriz para las microesférulas, cuyo polímero se selecciona del grupo que consiste de shellac y un polímero con base en celulosa, ácido acrílico o ácido metacrílico, anhídrido maléico, polivinilpirrolidona o polivinil alcohol, por medio de la disolución de la shellac o del polímero en un solvente orgánico que tiene baja afinidad por el aceite de parafina o el aceite de silicona y una constante dieléctrica aproximadamente desde 10 hasta aproximadamente 40, según sea apropiado con la adición de agua;

(b): introducción del derivado de pleuromutilina dentro de esa shellac o solución polimérica, con agitación, para que se forme una primera fase orgánica, que no es miscible con aceita de parafina o aceite de silicona;

(c): introducción de esa primera fase, con agitación vigorosa entre 100 rpm y 1500 rpm, por ejemplo utilizando un mezclador estático o un homogenizador a alta presión, dentro de la segunda fase aceitosa, en donde el aceite consiste de aceite de parafina o de aceite de silicona, y se continúa la agitación de la mezcla resultante hasta que las microesférulas que contienen al derivado de pleuromutilina se forman por evaporación o remoción del solvente;

(d): aislamiento, y cuando sea apropiado, lavado y secado, de las microesférulas.

Shellac es suficientemente conocida en la industria farmacéutica, para la preparación de recubrimientos para tableta recubierta con azúcar de sabor neutro.

Los materiales de partida adecuados para los polímeros con base en celulosa son, por ejemplo, ftalato acetato de celulosa o el N,N-di-n-butilhidroxipropil éter de acetato de celulosa.

Los materiales de partida que pueden ser utilizados para los polímeros con base en ácido acrílico o ácido metacrílico son, por ejemplo, el copolímero metacrilato/ácido metacrílico, el copolímero 2-metil-5-vinil-piridina/metacrilato/ácido metacrílico, el copolímero metil metacrilato/ácido metacrílico, el copolímero metil metacrilato/anhídrido maléico o el copolímero metil metacrilato/anhídrido maléico.

Los materiales de partida adecuados para los polímeros con base en anhídrido maléico son, por ejemplo, el copolímero vinil metil éter/anhídrido maléico o el copolímero estireno/anhídrido maléico. Dentro del contexto de la presente invención, se da preferencia especial a los polímeros con base en ácido acrílico o en ácido metacrílico como envoltura para las microesférulas. Más convenientemente, los productos comercialmente disponibles se utilizan por su preparación. Tales productos son productos de polimerización de ácido acrílico y ésteres de ácido acrílico que tienen un bajo contenido de grupos amonio cuaternario. Productos comerciales tales como Eudragit® E, L o S de Röhm, Darmstadt, Alemania son muy adecuados. Eudragit® E es un polímero catiónico de dimetil-aminoetil metacrilato y un éster neutro de ácido metacrílico. Eudragit® L y S son copolímeros aniónicos de ácido metacrílico y del éster metílico de ácido metacrílico

Los materiales de partida adecuados para los polímeros con base en polivinilpirrolidona son, por ejemplo, polivinilpirrolidona.

Los materiales de partida adecuados para los polímeros con base en alcohol polivinílico son, por ejemplo, el propio alcohol polivinílico.

La fase aceitosa se utiliza en cantidades relativamente grandes para que la proporción del volumen de fase orgánica a fase aceitosa esté aproximadamente en el rango entre 1:20 a 5:10.

Normalmente, el procedimiento se lleva a cabo a temperatura ambiente o a una temperatura ligeramente elevada, esto es, en el rango de temperatura aproximadamente desde 20º hasta 45ºC. Sin embargo, temperatura ambiente es completamente suficiente.

Los solventes orgánicos adecuados para la primera fase orgánica son, por ejemplo, solventes que se mezclen con la fase aceitosa tan poco como sea posible y que sean fácilmente volátiles. Aquellos que tengan una constante dieléctrica desde 10 hasta 40 son muy adecuados. Una cierta cantidad de tales solventes se muestra a manera de ejemplo en la siguiente Tabla.

9

Los solventes puros o las mezclas de tales solventes pueden ser utilizados, por ejemplo una mezcla acetona-etanol (1:1). Se logran muy buenos resultados por medio de la adición de una pequeña cantidad de agua, esto es aproximadamente desde 1 a 5 partes de agua en volumen hasta desde 10 hasta 50 partes de solvente orgánico en volumen. Se da preferencia a mezclas de acetona-agua (alrededor de 30:1).

Se ha demostrado convenientemente que añadir a la segunda, la fase aceitosa, antes de utilizarla, mono, di o preferiblemente triestearato de aluminio, estearato de sodio, estearato de calcio, estearato de magnesio u otro, por ejemplo emulgente o dispersante no iónico, tal como monooleato de sorbitán (Span-80®), con agitación vigorosa para que se forme una dispersión homogénea. Tal adición promueve la formación especialmente rápida de microesférulas de un tamaño muy uniforme. Como resultado, se evita que las microesférulas que se forman sufran coalescencia entre ellas durante la preparación. Cuando la primera fase que contiene al polímero y el derivado de pleuromutilina consiste de una mezcla acetona-agua y las dos fases se combinan con agitación desde 800 hasta 1000 rpm, se obtienen entonces microesférulas que tienen un tamaño uniforme entre 50 y 1000 \mum. La pleuromutilina y el estearato son utilizados convenientemente en una proporción en peso entre 0,5:1 y 10:1, preferiblemente aproximadamente 1:1.

Las microesférulas pueden ser lavadas cuando sea apropiado, por ejemplo con dietil éter, petróleo liviano o n-hexano, metilciclopentano o, preferiblemente, ciclohexano. El solvente es removido más suavemente a temperatura ambiente al vacío. Es evidente en si mismo que el solvente es removido de tal forma que los residuos son tan bajos como sea posible.

Las microesférulas obtenidas por medio del método anterior tienen una envoltura polimérica relativamente dura. Con el propósito de lograr una mayor ductilidad, se puede añadir a la fase orgánica aproximadamente de 3 a 10% en peso de un plastificante, con base en el polímero. Los plastificantes adecuados son triacetina; monoglicéridos acetilados; glicerol; polietilén glicol, por ejemplo PEG 400 o PEG 600; ftalatos, tales como ftalato de dietilo o ftalato de dibutilo; citratos, tales como citrato de trietilo, citrato de acetil trietilo, citrato de tributilo o citrato de acetil tributilo; y aceites vegetales, tales como aceite de ricino, aceite de colza o aceite de girasol. Es factible una adición aproximadamente de 4 a 10% de citrato de trietilo. En general, sin embargo, la adición de plastificantes no es necesariamente deseable ya que se ha encontrado que entre más alta la proporción de plastificante más baja la estabilidad durante el almacenamiento de los granulados terminados de pienso. La adición de plastificantes por lo tanto tiende a actuar al contrario de la mejora deseada en estabilidad, loa cual no significa, sin embargo, que no sea posible añadir plastificante, especialmente en cantidades relativamente pequeñas. Los plastificantes disminuyen la temperatura de transición del vidrio. El ingrediente activo es, en nuestra experiencia, no es protegido más durante la preparación de los granulados de pienso cuando la temperatura de transición del vidrio es aproximadamente menor a 100-150ºC.

Los granulados de pienso se producen usualmente por medio de molinos para pienso. Se utiliza generalmente cereal molido como base. Para esa base se añaden constituyentes adicionales tales como aceite y vegetales y proteínas animales. Se mezclan completamente todos los constituyentes juntos en un molino o aparato de mezcla, se los esparce con agua o se los trata con vapor y, a elevada temperatura, se los estira por presión, esto es, se los presiona, a través de una boquilla redonda que tiene un diámetro aproximadamente de 2 a 15 mm. Durante ese proceso de presión, se compacta el material humedecido y deja la boquilla en la forma de una pastilla relativamente dura, la cual es cortada a la salida de la boquilla en piezas de longitud deseada, por ejemplo aproximadamente de 5 a 25 mm de longitud, utilizando un aparato de corte. Los granulados resultantes, que aún están calientes, se secan al aire en la medida en que son transportados fuera o son llevados sobre una correa transportadora a través de una cámara de calentamiento y secados aproximadamente entre 80 y 120ºC. Los granulados terminados toman forma de pastilla o de cilindro; ellos tienen una superficie relativamente lisa y pueden ser vertidos fácilmente sin desmoronarse o formar polvo. Ellos tienen generalmente una densidad aproximadamente de 1,2 g/cm^{3}.

En general, el procedimiento para la preparación de los granulados de pienso estabilizados de acuerdo con la invención es exactamente como para la preparación de los granulados de pienso normales sin medicamento añadido. Sin embargo, antes del proceso de prensado, se mezclan completamente entre sí las microesférulas y los constituyentes orgánicos, molidos y homogenizados de pienso, se humedecen aproximadamente con entre 5 y 10% en peso de agua o vapor y se comprimen en granulados de pienso a elevada temperatura aproximadamente entre 60 y 80ºC, preferiblemente entre 65 y 75ºC. Una buena homogenización se logra más convenientemente cuando las microesférulas son primero mezcladas completamente entre sí con una porción relativamente pequeña del resto de los componentes de pienso, como resultado de lo cual se obtiene una así llamada premezcla que tiene una proporción relativamente alta de microesférulas. Se mezcla luego una porción de esa premezcla con material de pienso adicional para formar una mezcla parcial adicional y esa mezcla parcial es diluida, en una etapa final, hasta la concentración final con material de pienso adicional. Esa dilución resulta en una distribución especialmente uniforme del ingrediente activo encapsulado en los granulados.

Se les permite a los granulados enfriarse hasta temperatura ambiente y se empacan en bolsas de papel o en otros contenedores adecuados para el almacenamiento o transporte hasta el consumidor final. No son necesarias medidas preventivas especiales ya que los granulados son extremadamente estables durante el almacenamiento y contienen al ingrediente activo en una espuma recubierta que protege al ingrediente activo de influencias del medio ambiente. Nada del ingrediente activo escapa hacia el exterior de estos granulados que son almacenados.

La medición de la cantidad de ingrediente activo antes y después de la compresión en granulados muestra, sorprendentemente, que el proceso de aglomeración utilizando microesférulas no resulta en una perdida medible del ingrediente activo.

Ejemplos de implementación

Ejemplo 1

Preparación de microesférulas de clorhidrato de valnemulina recubiertas con resina metacrílica

100

Etapa 1

El Eudragit se dispersa en 100 ml de acetona a temperatura ambiente en un vaso de precipitados de vidrio con agitación (800 rpm/5 min/agitador magnético). Se continúa la agitación de la dispersión bajo las mismas condiciones y se añade agua. Después de 10 min, el polímero se ha disuelto completamente. Mientras se continúa con la agitación, la sustancia activa, en este caso valnemulina, se añade en porciones. Después de 10 minutos adicionales, se obtiene una solución clara.

\newpage

Etapa 2

En un reactor de 2 litros provisto con un agitador propelente de 3 aspas (1000 rpm), se dispersa monoestearato de aluminio en parafina líquida liviana a temperatura ambiente. Después de 10 minutos, la dispersión es homogé-
nea.

Etapa 3

Se añade la solución obtenida en la Etapa 1 a la dispersión obtenida de acuerdo a la Etapa 2 a temperatura ambiente, mientras continúa la agitación (1000 rpm). Se forma una emulsión, que se agita adicionalmente a 800 rpm durante 24 horas a temperatura ambiente. (Alternativamente, la emulsión también puede ser calentada primero a 40ºC en el transcurso de 1 hora bajo una presión de 2 x 10^{2} N/m^{2} (200 mbar) y se mantienen la presión y la temperatura durante 2 horas más). En ambos casos, las microesférulas (microesferas), esto es, se forman las microcápsulas que consisten de resina metacrílica, en las cuales está encerrada la sustancia activa.

Etapa 4

Después de apagar el agitador, las microesférulas se hunden hasta el fondo del reactor, y la parafina sobrenadante y el monoestearato de aluminio se decantan lo más completamente posible. Se lavan varias veces las microesférulas con ciclohexano (tres veces/embudo Buchner/filtro de tela) y se remueve el exceso de ciclohexano al vacío.

Ejemplo 2

Preparación de granulados de pienso para la crianza de cerdos: (pienso para cochinillos)

Se añaden 80 g de la sustancia activa (valnemulina) a 3920 g de pienso seco convencional para cochinillos, molido y homogenizado, y se los mezcla completamente utilizando un agitador en espiral. Por este medio, se obtienen 4000 g de premezcla. Se añaden los 4000 g de la premezcla a 36 kg más de pienso seco convencional para cochinillos, molido y homogenizado, en un mezclador en espiral de 100 litros, e igualmente se los mezcla completamente. Los 40 kg resultantes de la mezcla parcial se mezclan luego con 360 kg adicionales de pienso seco convencional para cochinillos, molido y homogenizado, se los transfiere a un extrusor y se los comprime en granulados de pienso con forma de pastilla, aproximadamente de 10 mm de longitud y aproximadamente 6 mm de ancho a 68-72ºC y con una presión de 10^{9}-10^{10} N/m^{2} (10-100 kbar). Durante el proceso de compresión, se utiliza vapor a 2 x 10^{5} N/m^{2} (2 bar, 136ºC). El tiempo de permanencia en la porción calentada del extrusor se programa aproximadamente en 75 segundos. Los granulados terminados se colocan en sacos de 25 kg cada uno.

Ejemplo 3

Análisis de estabilidad de las mezclas de pienso que contienen ya sea al ingrediente activo libre, al ingrediente activo recubierto comercialmente disponible o al ingrediente activo embebido en microesférulas

De acuerdo con la Preparación del Ejemplo 2, se preparan tres tipos de granulados A, B y C de pienso para cochinillos utilizando un ingrediente activo pretratado en forma diferente, pero con cantidades idénticas del mismo. Los granulados de Tipo A contienen 50% de ECONOR® comercialmente disponible (ingrediente activo valnemulina), en los cuales el ingrediente activo está recubierto con hidroxipropil metilcelulosa (HPMC). Los granulados de Tipo B contienen al ingrediente activo puro valnemulina en la forma del clorhidrato y los granulados de Tipo C contienen las microesférulas preparadas de acuerdo con la Preparación del Ejemplo 1 que contiene embebido al clorhidrato de valnemulina.

Para las mediciones de la estabilidad, se preparan tres tipos de granulados de pienso de acuerdo con la Preparación del Ejemplo 2 y se toman cada una de las primeras muestras de 50 g inmediatamente después de la preparación. Se toman 9 muestras del Tipo A, 9 muestras del Tipo B y, para el Tipo C, se preparan tres lotes diferentes de granulados de pienso, que difieren entre sí ligeramente en la composición del material del pienso. Se toman igualmente 9 muestras de cada uno de estos lotes. Se analizan inmediatamente todas las muestras y se determina analíticamente en cada muestra el contenido de valnemulina intacta. El resto de los granulados de pienso se dividen en dos porciones iguales y se transfieren a dos cámaras climáticas para los estudios reales a largo plazo. La cámara (I) está a 25ºC y una humedad relativa del 60%, simulando el almacenamiento normal a temperatura ambiente. La cámara (II) está a una temperatura elevada de 40ºC y una humedad relativa alta del 75%, simulando un período de almacenamiento
largo.

Con intervalos de un mes, se toman 3 muestras cada una de 50 g de cada cámara y de cada tipo y lote de granulados de pienso y se determina el contenido intacto de valnemulina.

\newpage

Los valores promedio y la desviación estándar asociada se enlistan en las Tablas 1 y 2 a continuación, para las diferentes condiciones climáticas.

TABLA 1 25ºC/humedad relativa del 60%

10

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 2 40ºC/humedad relativa del 75%

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Las Tablas muestran muy claramente que la valnemulina presente en los gránulos de pienso de los Tipos A, B y C es de estabilidad variable. La valnemulina pura (Tipo B) es obviamente la que más rápido se degrada y ya sufre una perdida aproximadamente del 21% durante la granulación. Después de dos meses a temperatura ambiente normal, el contenido de valnemulina en los gránulos Tipo B cae a menos del 50% y, en el caso de temperatura elevada a 40ºC, cae aún más a menos del 20%. En el caso de la valnemulina recubierta con HPMC en el Tipo A, la degradación de la valnemulina en realidad es algo menor, pero es aún considerable. La pérdida de ingrediente activo aproximadamente del 1% durante la granulación puede ser despreciada pero, después de dos meses, el almacenamiento a 25ºC resulta en una perdida significativa aproximadamente del 30% y, a 40ºC, inclusive aproximadamente del 76%. En contraste, los gránulos de pienso de Tipo C, en los cuales el ingrediente activo está embebido en microesférulas, exhiben una pérdida de ingrediente activo significativamente menor. Después de 2 meses a 25ºC, la pérdida es únicamente aproximadamente del 1% y, a temperatura elevada de 40ºC, aproximadamente únicamente del 11%. Aún después de 6 meses, casi el 80% del ingrediente activo está presente aún en el caso del Tipo C, mientras que en los otros dos casos el contenido de ingrediente activo cae por debajo del 10%.

Esa estabilización significativa del ingrediente activo en los gránulos de pienso no podría haber sido predicha de ninguna manera, especialmente ya que la incorporación de microesférulas en pienso no comprimido no da como resultado ninguna estabilización. En el pienso no comprimido, la valnemulina no protegida y la valnemulina en microesférulas se comportan completamente en la misma forma y resultan en las mismas pérdidas.

Claims

1. Un derivado estabilizado de pleuromutilina de fórmula I,

12

en donde R_{1} es etilo o vinilo, existe ya sea un doble enlace o un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, Ra y Rb son independientemente cada uno del otro hidrógeno o halógeno, y T es un radical orgánico de cadena larga o corta; en donde el compuesto de fórmula I está incluido en microesférulas en donde las microesférulas son partículas esféricas de una matriz polimérica que tienen un tamaño promedio entre 1 \mum y 5000 \mum en la cual el derivado de pleuromutilina, en forma sólida o líquida, está altamente dispersado.

2. El derivado estabilizado de pleuromutilina, de acuerdo con la reivindicación 1,

donde en la fórmula

R_{1} es etilo o vinilo; y

a): -CH_{2}-OH;

b)

\vskip1.000000\baselineskip

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\vskip1.000000\baselineskip

14

\vskip1.000000\baselineskip

f): -CH_{2}S-C(CH_{2})_{l}-R_{8}, en donde l es 0 ó 1 y R_{8} es el grupo

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(B): si existe un enlace doble entre los átomos de carbono 1 y 2, y Ra y Rb son H, entonces T es el grupo i:

(C): si existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, y Ra es H, OH o F, y Rb es H; o Ra es H, y Rb es F;

: entonces T es el siguiente grupo k:

\newpage

3. Un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con la reivindicación 2, en donde R_{1} es vinilo, existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2, y Ra y Rb son hidrógeno o halógeno, y T es como se definió para la fórmula I; incluida una sal de adición ácida fisiológicamente tolerable y una sal de amonio cuaternario de la misma.

4. Un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con la reivindicación 3,

en donde

R_{1} es vinilo; existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2;

Ra y Rb son H, y

T es -CH_{2}-S-(CH_{2})_{k}-N(R_{5})(R_{6}) en donde k es un entero de 2 a 5; y R_{5} y R_{6} son cada uno independientemente del otro alquilo C_{1-6};

incluyendo las sales de adición ácida fisiológicamente tolerables y las sales de amonio cuaternario de las mismas.

5. Un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con la reivindicación 4,

en donde T es -CH_{2}-S-(CH_{2})_{2}-N(C_{2}H_{5})(C_{2}H_{5}).

6. Un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con la reivindicación 3,

en donde

R_{1} es vinilo; existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2;

Ra y Rb son H, y

T es -CH_{2}-S-C(CH_{3})_{2}-CH_{2}-NH-C(O)-R_{7} en donde R_{7} es alquilo C_{1-6} sustituido por -NH_{2} o un heterociclo saturado de cinco miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de -S- y -NH-; incluyendo las sales de adición ácida fisiológicamente tolerables y las sales de amonio cuaternario de las mismas.

7. Un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con la reivindicación 6,

en donde

R_{1} es vinilo; existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2;

Ra y Rb son H, y

T es -CH_{2}-S-C(CH_{3})_{2}-CH_{2}-NH-C(O)-R_{7} en donde R_{7} es alquilo C_{1-6} sustituido por -NH_{2}; incluida una sal de adición ácida fisiológicamente tolerable y una sal de amonio cuaternario de la misma.

8. Un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con la reivindicación 7,

en donde

R_{1} es vinilo; existe un enlace sencillo entre los átomos de carbono 1 y 2;

Ra y Rb son H, y

T es -CH_{2}-S-C(CH_{3})_{2}-CH_{2}-NH-C(O)-CH(NH_{2})-CH(CH_{3})_{2}; incluida una sal de adición ácida fisiológicamente tolerable y una sal de amonio cuaternario de la misma.

9. Un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde las microesférulas incluyen un polímero adecuado para la formación de microesférulas, cuyo polímero se selecciona del grupo que consiste de shellac y un polímero con base en celulosa, ácido acrílico o ácido metacrílico, anhídrido maléico, polivinilpirrolidona o alcohol polivinílico.

10. Un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con la reivindicación 9, en donde las microesférulas contienen de 3 a 10% en peso de un plastificante, con base en el polímero.

11. Un método para preparar microesférulas que comprende un derivado de pleuromutilina de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, cuyo método comprende:

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(a): la preparación de una solución de un polímero adecuado para la formación de la matriz para las microesférulas, cuyo polímero se selecciona del grupo que consiste de shellac y un polímero con base en celulosa, ácido acrílico o ácido metacrílico, anhídrido maléico, polivinilpirrolidona o polivinil alcohol, por medio de la disolución de la shellac o del polímero en un solvente orgánico que tiene baja afinidad por el aceite de parafina o el aceite de silicona y una constante dieléctrica aproximadamente desde 10 hasta aproximadamente 40, según sea apropiado con la adición de agua;

(b): la introducción del derivado de pleuromutilina dentro de esa shellac o solución polimérica, con agitación, para que se forme una primera fase orgánica, que no es miscible con aceita de parafina o aceite de silicona;

(d): el aislamiento, y, cuando sea apropiado, el lavado y el secado, de las microesférulas.

12. Un pienso seco que contiene un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, comprimido en gránulos de pienso que contienen, además de vegetales secos molidos - y/o pienso con base animal, con o sin aditivos tales como proteínas, vitaminas y minerales.

13. El pienso seco de acuerdo con la reivindicación 12 para ser usado en un método para tratar enfermedades infecciosas en animales domésticos y ganado productivo.

14. El uso de un derivado estabilizado de pleuromutilina encerrado en microesférulas, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la preparación de gránulos de pienso para tratar enfermedades infecciosas en animales domésticos y en ganado productivo.

15. Un método para preparar gránulos de pienso que comprende a un derivado estabilizado de pleuromutilina de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, cuyo método comprende mezclar completamente un derivado estabilizado de pleuromutilina de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la forma de microesférulas con los constituyentes orgánico, molido y homogenizado del pienso, humedecer aproximadamente con entre 5 y 10% en peso de agua o de vapor y comprimir en pastillas a temperaturas elevadas entre 60 y 80ºC, y dividir aquellas pastillas en los gránulos de pienso.