ES2278329T3 - Procedimiento e inoculo para fermentacion lactica acidificante. - Google Patents

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ES2278329T3 ES04742686T ES04742686T ES2278329T3 ES 2278329 T3 ES2278329 T3 ES 2278329T3 ES 04742686 T ES04742686 T ES 04742686T ES 04742686 T ES04742686 T ES 04742686T ES 2278329 T3 ES2278329 T3 ES 2278329T3
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Abstract

Inóculo especialmente adaptado a la siembra directa en un sustrato lácteo para la transformación de dicho sustrato lácteo en alimento fermentado, caracterizado porque dicho inóculo incluye, en mezcla o en forma de kit ("kit of parts"): - por lo menos un microorganismo en una forma tal que es capaz de ejercer una actividad de fermento sobre un sustrato lácteo, y - por lo menos una levadura en forma lisada, estando constituido dicho microorganismo con capacidad de fermento contenido en dicho inóculo o, si existen varios, el conjunto de microorganismos con capacidad de fermento contenidos en dicho inóculo, por bacterias lácticas capaces de producir un alimento lácteo fermentado mediante fermentación láctica acidificante de un sustrato lácteo, y

Description

Procedimiento e inóculo para fermentación láctica acidificante.
La presente solicitud de patente afecta al ámbito de la industria láctea. Se refiere a un nuevo procedimiento de fermentación láctica acidificante, una nueva composición inóculo de fermentos lácticos, medios para su preparación, y sus aplicaciones para la producción de productos lácteos fermentados.
En el ámbito de los productos lácteos, los gustos del consumidor se centran generalmente en la actualidad en texturas cremosas y sabores suaves. Esto conduce a los industriales lecheros a privilegiar cualquier medio y condición operativa que permita conseguir una acidificación suave del substrato lácteo durante la fermentación láctica, de manera a obtener un producto lácteo fermentado que presente cierto pH, así como cierta textura y cualidades organolépticas con relación a dichos gustos.
Típicamente, durante la fabricación de yogur mediante fermentación láctica con siembra directa, los industriales lecheros intentan conseguir una ralentización de la cinética de acidificación a partir de un pH incluido entre 5 y 4,5, por ejemplo a partir de 4,6, de manera a conseguir una meseta de acidificación que se estabiliza en un pH incluido entre 4,5 y 4, por ejemplo para un pH a 1.000 minutos a 4,25 (el pH a 1.000 minutos representa el pH medido 1.000 minutos después del comienzo de la fermentación). Este deseo de llevar a cabo una cinética de acidificación que sea suave se equilibra con el hecho de que también es deseable alcanzar un pH de 5,5 tan rápidamente como sea posible, de manera a limitar los distintos riesgos de contaminación. En efecto, cuanto más rápidamente se alcanza el pH de 5,5, menor es el riesgo de desarrollo de contaminantes resistentes al tratamiento térmico, tales como esporas, especialmente esporas de Bacillus; además, las fermentaciones cortas limitan los incidentes fágicos. Además, también es útil mantener tiempos de fermentación bastante cortos para que la producción industrial sea lo más rentable
posible.
En el marco de la preparación de quesos blancos y "petits-suisses", es importante, después de una fase de acidificación rápida, obtener una meseta de acidificación que se estabiliza entre 4,6 y 4,3, de manera a permitir un escurrido centrífugo óptimo.
Los problemas técnicos a los que se enfrentan actualmente los industriales lecheros pueden resumirse, por lo tanto, en la necesidad de encontrar fermentos y condiciones operativas que, durante la fermentación láctica mediante siembra directa de un sustrato lácteo, permiten por una parte llevar a cabo una acidificación rápida y, por otra parte, estabilizar dicha acidificación en pH elevados (típicamente, para alimentos lácteos del tipo yogur, leche fermentada, quesos blancos y petits-suisses, debe existir generalmente estabilización entre 4,8 y 4,2).
Frente a dichos problemas, que parecen a priori conflictivos, los industriales lecheros han optado por una solución de compromiso en la que se aplican cepas de fermentos lácticos elegidas por su escasa velocidad de crecimiento y/o metabolismo, para conseguir una cinética suave de acidificación, seleccionando al mismo tiempo entre dichas cepas, las que quedan a pesar de todo suficientemente rápidas para satisfacer las exigencias sanitarias y económicas.
De hecho, dicha selección se ha convertido en una profesión en sí, a la que se dedican sociedades especializadas. De este modo, están disponibles preparados de fermentos destinados a la siembra directa o semi-directa, listos para su uso, en el comercio, por lo que se pueden adquirir por ejemplo fermentos lácticos en forma de gránulos, (tales como gránulos congelados), que están destinados a la siembra directa del sustrato lácteo. Dichas formulaciones de gránulos evitan al industrial lechero la etapa delicada y larga de la preparación del fermento, al mismo tiempo que se asegura la constancia cualitativa requerida para la producción de productos industriales de uso alimenticio. Sin embargo, cabe subrayar que la formulación en gránulos de los fermentos añade asimismo una fase de latencia en el arranque del proceso de fermentación, lo que puede ser redhibitorio para algunas aplicaciones.
En respuesta a dichas necesidades de medios y/o condiciones operativas que permitan llevar a cabo una acidificación rápida pero suave durante la fermentación láctica acidificante, la presente invención propone medios que permiten controlar la cinética de acidificación durante la fermentación láctica, y que presentan además otras numerosas ventajas. Especialmente, permiten llevar a cabo una acidificación que, a la vez que más rápida, se estabiliza sola en pH elevados adecuados para la fabricación de alimentos lácteos fermentados, mejorando al mismo tiempo la textura de los productos fabricados y sin perjudicar las cualidades organolépticas.
Los nuevos medios de la invención incluyen el uso de levadura lisada, como aporte nutricional a por lo menos un fermento láctico con actividad acidificante. Por lo tanto, dicha levadura no es capaz de multiplicarse significativamente en un sustrato lácteo, y no asegura por sí sola metabolismo de fermentación alguno en el sustrato lácteo. Sin embargo, coopera de manera sinérgica en el metabolismo de fermentación del o de los fermentos lácticos.
De conformidad con la presente invención, se aporta la levadura lisada directamente al substrato lácteo que debe fermentar o que lo está siendo, en una forma que favorece la disponibilidad de los distintos elementos que la constituyen o que contiene, y de manera que dicha levadura pueda estar en presencia del o de los fermentos lácticos en funcionamiento. Preferiblemente, se aporta la levadura lisada antes de que empiece la fermentación láctica acidificante, o al inicio de la misma.
Los inventores comprobaron que, de manera ventajosa, se puede eficazmente optar por aportar el o los fermentos lácticos y la levadura lisada de manera secuencial, o de manera simultánea: basta con que se coloque la levadura lisada en presencia del o de los fermentos lácticos durante su actividad de fermentación láctica acidificante.
En medio industrial, suele ser más fácil y seguro aportar los dos tipos de ingredientes de manera simultánea. Pero, de manera ventajosa, los inventores demuestran que la levadura lisada puede aportarse mezclada con el o los fermentos.
En la técnica anterior se conocen algunos procedimientos de fermentación que utilizan cultivos iniciales que contienen un fermento láctico y una levadura lisada (por ejemplo, Chumchuere et al., Food Microbiology, 1999, 16, 129-137; GB 1085699A; EP 0 154 614A). Sin embargo, las relaciones levadura lisada con relación a los fermentos lácticos difieren de las descritas en la presente. Este compuesto inóculo que incluye en mezcla levadura lisada y fermento(s) láctico(s) está destinado a aportarse tras pasteurización. Este modo de realización está más especialmente adaptado a las situaciones en las que se aporta levadura lisada en pequeñas dosis.
Los inventores demuestran asimismo que, de manera ventajosa, la levadura lisada y el(los) fermento(s) láctico(s) pueden aportarse alternativamente de manera separada en el tiempo, aportando por ejemplo en primer lugar la levadura lisada y, a continuación, el(los) fermento(s) láctico(s). Levadura lisada y fermento(s) láctico(s) forman entonces conjuntamente un compuesto en forma de kit (compuesto en forma de "kit o parts"). Este modo permite especialmente aportar la levadura antes de la pasteurización, lo que es preferible desde el punto de vista sanitario, cuando se trabaja con fuertes dosis de levadura lisada.
Por lo tanto, el nuevo inóculo de la invención está especialmente adaptado al sembrado directo en un sustrato lácteo y a la transformación de dicho sustrato lácteo en un alimento lácteo fermentado. Incluye, bien en mezcla, bien en forma de kit ("kit of parts"):
-
por lo menos un microorganismo en una forma tal que sea capaz de ejercer una actividad de fermento en un sustrato lácteo, y
-
por lo menos una levadura en forma lisada
habiéndose elegido dicho microorganismo con capacidad de fermento contenido en dicho inóculo o, si existen varios, el conjunto de microorganismos con capacidad de fermento contenidos en dicho inóculo, entre el grupo de las bacterias lácticas capaces de producir un alimento lácteo fermentado mediante fermentación láctica acidificante de un sustrato lácteo. Se otorga a la expresión "capacidad para ejercer una actividad de fermento en un sustrato" su significado usual en el ámbito, es decir la capacidad de ejercer sobre dicho sustrato una actividad metabólica que conduce a la transformación de uno o varios compuestos de dicho sustrato. Dicho por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento presenta por lo tanto una membrana celular sustancialmente intacta.
Según un modo de realización preferido de la invención, más especialmente destinado a pequeñas dosis de levadura lisada, el (o el conjunto de) microorganismo(s) con capacidad de fermento y la por lo menos una levadura lisada están presentes en mezcla en dicho inóculo, ventajosamente en mezcla homogénea, como una mezcla de gránulos de levadura lisada y gránulos de fermento(s) láctico(s) acidificante(s).
Según otro modo de realización de la invención, más especialmente destinado a fuertes dosis de levadura lisada, el(los) microorganismo(s) con capacidad de fermento y la por lo menos una levadura lisada están presentes en dicho inóculo en forma de una colección ("kit of parts"), tal como una colección sin mezcla íntima de levadura lisada, por ejemplo en forma de polvo o líquido, y de fermento(s) láctico(s).
A objeto de la presente invención, dicha levadura lisada está presente en dicho inóculo en cantidades definidas, y en una proporción definida con relación al(a los) fermento(s), de manera a conseguir el efecto combinado de aceleración de la cinética de acidificación y obtención de una estabilización de la acidificación en un pH meseta. Este efecto combinado de aceleración y estabilización es el que permite fabricar alimentos fermentados del tipo yogur, leche fermentada, queso y petit-suisse de manera más rápida y por lo tanto sanitariamente más segura, mejorando al mismo tiempo las cualidades de textura y sin perjudicar las cualidades gustativas del alimento.
De conformidad con la presente invención, para la fabricación de alimentos lácteos fermentados tales como yogur, leche fermentada, queso blanco y petit-suisse, es obligatorio aportar la levadura lisada en una proporción, con relación al(a los) fermento(s) láctico(s), incluida entre 1 g de levadura lisada pura por 2.10^{13} bacterias lácticas, y 1 g de levadura lisada pura por 2.10^{8} bacterias lácticas, preferiblemente entre 1 g de levadura lisada pura por 1.10^{12} bacterias lácticas y 1 g de levadura lisada pura por 3.10^{8} bacterias lácticas.
En la presente solicitud, las masas de levadura lisada se entienden en peso seco.
Dicha levadura lisada puede haberse lisado mediante cualquier medio de rotura de membrana adecuado que conduzca a la liberación de los elementos constituyentes de la levadura, especialmente mediante lisis mecánica, osmótica, química. En el comercio están disponibles levaduras lisadas (por ejemplo, BioSpringer comercializa un extracto de levadura "sin sal líquida" al 50% de extracto seco, con el código 153).
El nuevo inóculo, según la invención, está especialmente adaptado para el sembrado directo en un sustrato lácteo y para la transformación de dicho sustrato lácteo en yogur, leche fermentada, queso blanco, o petit-suisse.
De forma sorprendente, el nuevo inóculo de la invención proporciona a dicha fermentación láctica sobre sustrato lácteo una cinética de acidificación que es más rápida de un inóculo testigo sin levadura lisada, pero que sigue siendo igual de suave en los que se refiere al pH final.
Los inventores han puesto en evidencia que la adición de levadura lisada directamente al sustrato lácteo es capaz de estimular los fermentos lácticos acidificantes, de manera que mejoran la eficacia y la calidad de la fermentación láctica acidificante del sustrato lácteo, sin que por ello se sobrepase un estadio considerado óptimo para productos lácteos fermentados destinados al consumo humano, especialmente para yogur, leche fermentada, queso blanco y petit-suisse. De este modo, los inventores demostraron que se podía ejercer entre levadura(s) lisada(s) y fermento(s) láctico(s) acidificante(s) una estimulación tal que se aceleraba la cinética de acidificación de la fermentación, sin que por ello se perturbara la meseta final de dicha cinética de acidificación. Este resultado es tanto más inesperado cuanto que antes de la presente invención, el especialista en la materia no se había inclinado a añadir, en sembrado directo, un material del tipo levadura al sistema de reacción ya complejo y delicado necesario para la producción de alimentos lácteos fermentados destinados al consumo humano.
El uso de levadura lisada, de conformidad con la invención, permite resolver por lo tanto los problemas de la obtención de una cinética de acidificación rápida y sin embargo suave, considerados hasta entonces como conflictivos. Gracias al empleo de levadura lisada de conformidad con la invención, se reducen fuertemente el tiempo necesario para alcanzar el pH de 5,5 y la acidificación final deseada. Por ejemplo, se ha podido conseguir un ahorro de entre una y varias horas en condiciones operativas de tipo industrial durante la fabricación de yogur.
De manera relevante, dicha cinética más rápida presenta una meseta final de acidificación no alterada con relación a un inóculo testigo sin levadura (véanse los ejemplos más adelante, y más concretamente las figuras 2 y 3). El empleo de levadura lisada, de conformidad con la invención, permite por lo tanto estimular la cinética de acidificación de la fermentación láctica, sin que el pH en el que se inicia la meseta de final de acidificación, y sin que el pH final de dicha acidificación (el pH a 1.000 minutos puede servir de referencia a tal efecto) sean sustancialmente distintos de cómo serían en la ausencia de levadura lisada. En el peor de los casos, el pH de final de acidificación tiene un valor tal que el producto de fermentación no ha perdido su capacidad de ser utilizado como alimento lácteo fermentado. De manera relevante, la composición, la textura y las cualidades organolépticas del producto de fermentación son tales que siempre es capaz de constituir o servir de base para un alimento lácteo fermentado del tipo yogur o leche fermentada. Además, se ha podido comprobar, gracias a la invención, una reducción del 5 al 30%, más generalmente del 10 al 20%, de los tiempos de fermentación industriales.
El uso de levadura lisada, de conformidad con la invención, constituye por lo tanto mucho más que la yuxtaposición de fermento(s) láctico(s) y un activador de crecimiento cualquiera: constituye una combinación de medios que permite no sólo estimular la cinética de acidificación, sino sobretodo de ajustar y controlar su efecto, lo que resulta esencial para la obtención de productos que puedan considerarse productos lácteos fermentados destinados al consumo humano, y lo que aporta una solución inesperada a problemas técnicos que se consideraban conflictivos hasta entonces.
Se entiende por "productos lácteos fermentados" más especialmente productos lácteos fermentados listos para el consumo humano, es decir alimentos lácteos fermentados. La presente solicitud afecta más concretamente a la leche fermentada y al yogur. Dichos alimentos fermentados pueden ser alternativamente queso blanco o petit-suisse.
Se otorga a los términos "leche fermentada" y "yogur" su significado usual en el ámbito de la industria lechera, es decir productos que están destinados al consumo humano y que proceden de la fermentación láctica acidificante de un sustrato lácteo. Dichos productos pueden contener ingredientes secundarios, tales como fruta, verduras, azúcar,
etc.
Por ejemplo, se puede acudir al Decreto francés nº 88-1203 de 30 de diciembre de 1988 relativo a la leche fermentada y al yogur o yogur, publicado en el Boletín Oficial de la República Francesa de 31 de diciembre de 1988.
Se puede acudir asimismo al "Codex Alimentarius" (elaborado por la Comisión del Codex Alimentarius con el amparo de la FAO y la OMS, y publicado por la División de Información de la FAO, disponible en línea en http://www.codexalimentarius.net; véase más concretamente el volumen 12 del Codex Alimentarius "Normas Codex para la leche y los productos lácteos", y la norma "CODEX STAN A -11(a)-1975").
Por lo tanto, el término "leche fermentada" queda reservado en la presente solicitud al producto lácteo preparado mediante un substrato lácteo al que se ha aplicado un tratamiento por lo menos equivalente a la pasterización, sembrado por medio de microorganismos pertenecientes a la especie o especies características de cada producto. Una "leche fermentada" no ha sufrido tratamiento alguno que permita sustraer un elemento constitutivo del sustrato lácteo empleado, especialmente no ha sufrido el escurrido del coágulo. La coagulación de la "leche fermentada" no debe obtenerse mediante medios distintos de aquellos que resultan de la actividad de los microorganismos empleados.
El término "yogur" está reservado a la leche fermentada obtenida, según los usos leales y constantes, mediante el desarrollo de las bacterias lácticas termófilas específicas, denominadas Lactobacillus bulgaricus y Streptococcus thermophilus, que deben encontrarse vivas en el producto terminado, a razón de por lo menos 10 millones de bacterias por gramo añadidas a la parte láctea.
En algunos países, la legislación autoriza la adición de otras bacterias lácticas en la producción de yogur, especialmente el uso adicional de cepas de Bifidobacterium y/o Lactobacillus acidophilus y/o Lactobacillus casei.
Dichas cepas lácticas adicionales están destinadas a proporcionar diversas propiedades al producto terminado, tales como la propiedad de favorecer el equilibrio de la flora intestinal o modular el sistema inmunitario.
Por lo tanto, en la práctica, el término "leche fermentada" se utiliza generalmente para designar leches fermentadas distintas del yogur, pudiendo adoptar según los países las denominaciones "Kefir", "Kumiss", "Lassi", "Dahi", "Leben", "Filmjölk", "Villi", "Acidophilus milk", por ejemplo.
La cantidad de ácido láctico libre contenida en el sustrato lácteo fermentado no debe ser inferior a 0,6 g por 100 g en el momento de la venta al consumidor, y el contenido de materia protéica aportada a la parte láctea no debe ser inferior a la de una leche normal.
La cantidad de ácido láctico libre contenida en el yogur no debe ser inferior a 0,7 g por 100 g en el momento de la venta al consumidor.
En la presente solicitud, la denominación "queso blanco" o "petit-suisse" está reservada a un queso no curado y no salado, que ha experimentado una fermentación únicamente mediante bacterias lácticas (sin otra fermentación que la fermentación láctica).
El contenido de materia seca de los quesos blancos puede rebajarse hasta 15 g o 10 g por 100 g de queso blanco, según que el contenido de materia grasa sea superior a 20 g o, como máximo, igual a 20 g por 100 g de queso blanco, tras su completa desecación: el contenido de materia seca de un queso blanco está incluido entre el 13 y el 20%. El contenido de materia seca de un petit-suisse no es inferior a 23 g por 100 g de petit-suisse. Generalmente está incluido entre el 25 y el 30%.
El término "leche" cubre, en el ámbito de la industria lechera, la leche de origen animal en todas sus formas y en todas las variaciones de su composición: leche desnatada o no, leche concentrada o no, leche ultrafiltrada o no, leche en polvo o no, leche a la que se ha aplicado un tratamiento térmico o no, leche enriquecida en constituyentes de la leche o no, leche con adición o no de agentes útiles para la fabricación o para la calidad del producto terminado, tales como potenciadores de sabor, aromas, azúcar, etc.
El término "sustrato lácteo" cubre tanto la leche como un compuesto que incluya leche a partir de la que puede producirse un producto lácteo fermentado.
Para la fabricación de yogur y leche fermentada, se emplea generalmente leche fermentada o no, leche concentrada o leche en polvo desnatada o no, eventualmente enriquecida con constituyentes de la leche. Para la fabricación de quesos blancos y petit-suisse, se pueden emplear asimismo otras materias, siempre de origen exclusivamente lácteo, tales como nata, materia grasa, suero de leche, solas o en mezcla.
En el ámbito de la industria lechera, se entiende por "fermento láctico" un microorganismo o una cepa de microorganismos, tal como una bacteria o una cepa de bacterias, que es capaz de llevar a cabo sobre un sustrato lácteo una fermentación mediante la que se degrada lactosa u otro azúcar presente en el sustrato lácteo en metabolito(s), especialmente en ácido láctico, lo que conduce a una acidificación del sustrato lácteo hasta cierto pH, de manera que se produce una gelificación del sustrato lácteo, de lo que resulta un producto lácteo fermentado del tipo yogur o leche fermentada. El pH inicial del sustrato lácteo se sitúa generalmente entre 8 y 6, descendiendo de dos a cuatro unidades pH y alcanzando, al término de la fermentación láctica, un pH final incluido generalmente entre 5 y 4 (generalmente pH de 4,7-4,6 para el yogur; 4,6-4,3 para el queso blanco y el petit-suisse). Pero, a un pH incluido entre 4 y 5, el micelio de caseína se desestabiliza mediante solubilización del calcio fosfato, y se precipita, lo que causa la coagulación de las proteínas de la leche y la formación de un gel.
En la presente solicitud, se otorga a todos los términos el alcance y el significado que adoptan usualmente en el ámbito de la industria lechera. De este modo, cuando se hace referencia a una "fermentación láctica", se trata en realidad de una fermentación láctica acidificante, que se traduce por una acidificación tras la producción de ácido láctico que puede acompañarse de la producción de otros ácidos, de CO_{2} o de etanol y sustancias diversas tales como exopolisacáridos o sustancias aromáticas, por ejemplo diacetil y acetaldehído.
Asimismo, se entiende por "fermento láctico" un microorganismo o una cepa de microorganismos que es capaz de llevar a cabo dicha fermentación láctica acidificante en un sustrato lácteo.
De conformidad con la presente invención, se elegirá de manera ventajosa como microorganismo(s) con capacidad de fermento(s) láctico(s), bacterias lácticas utilizadas en la fabricación de yogur y/o utilizadas en la fabricación de leche fermentada, más concretamente bacterias lácticas elegidas entre el siguiente grupo:
-
las cepas de Streptococcus thermophilus (por ejemplo, la cepa de Streptococcus thermophilus disponible con el número I-1630 en la C.N.C.M.),
-
las cepas de Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus (por ejemplo, la cepa de Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus disponible en la C.N.C.M. con el número I-1529),
-
las cepas de Bifidobacterium, tales como B. lactis (por ejemplo, C.N.C.M. I-2494), B. breve, B. bifidum, las B. longum, las B. infantis,
-
las cepas de Lactobacillus acidophilus (C.N.C.M. I-0967, por ejemplo),
-
las cepas de Lactobacillus casei (C.N.C.M. I-518, por ejemplo),
-
las cepas de Lactobacillus helveticus,
-
las cepas de Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis (C.N.C.M. I-2843, por ejemplo),
-
las cepas de Lactococcus cremoris,
-
las cepas de Lactococcus lactis ssp. lactis (C.N.C.M. I-1631, por ejemplo),
-
las cepas de Lactococcus lactis ssp. lactis biovar diacetylactis (C.N.C.M. I-2806, por ejemplo).
-
Las cepas de Pediococcus acidilactici,
-
Las cepas de Leuconostoc cremoris,
-
Las cepas de Leuconostoc dextranicum,
-
Las cepas de Leuconostoc lactis,
La C.N.C.M. es la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos (C.N.C.M. - Institut Pasteur - 28, rue Docteur Roux - 75725 Paris Cedex 15 - Francia).
De manera preferente, dicho por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento contenido en el inóculo según la invención, la invención es una bacteria de la especie Streptococcus thermophilus, o una bacteria de la especie Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus.
De manera aún más preferente, las dos especies Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus y Streptococcus thermophilus están representadas en el conjunto de microorganismos con capacidad de fermentos contenidos en dicho inóculo. Estas dos especies pueden ser las únicas dos especies de dicho conjunto de microorganismos con capacidad de fermentos. Por lo tanto, el inóculo de la invención está especialmente adaptado a la fabricación de yogur. En algunos países, pueden acompañarse de bacterias de las especies Bifidobacterium y/o Lactobacillus acidofilus y/o Lactobacillus.
Cualquier levadura está a priori adaptada para llevar a cabo la presente invención. Una levadura de la especie Saccharomyces cerevisiae es un ejemplo especialmente adecuado.
Dicha por lo menos una levadura lisada puede aportarse al sustrato lácteo y/o estar presente en dicho inóculo, en cualquier forma adaptada a su función de aporte nutricional.
Por ejemplo, puede aportarse en forma líquida (por ejemplo, el extracto de levadura de panadero comercializado por Lievitech con el código 30701 - "Special Light Type ``F''": "Backer's Yeast extract; Super Protex, without Salt, Liquid"), o bien en forma de polvo (por ejemplo, el extracto de levadura (autolisado puro) sin sal, tipo D comercializado por Bio Springer con los códigos 107 - polvo tradicional - o 180 - polvo microgranulado - o bien estracto de levadura sin sal líquido 153 de SPRINGER BIOTECH). Cuando se encuentra en forma líquida, dicha levadura lisada puede aportarse mediante inyección en la línea de producción. Cuando se encuentra en forma de polvo, se puede aportar dicha levadura lisada en el momento de la etapa del espolvoreo de la leche (mezcla - "mix" - de leche y polvo de leche desnatada). Este modo de aportación de levadura en forma de polvo o líquido está especialmente bien adaptado a un aporte de levadura lisada antes de la pasteurización, ya que permite un aporte fácil de levadura lisada a elevadas dosis.
Según otro modo de realización de la invención, se aporta la levadura lisada al sustrato lácteo a fermentar o en fermentación en forma de gránulos y, de manera ventajosa, en forma de gránulos congelados (véase el ejemplo 1 más adelante). La forma "gránulo" facilita la manipulación de levadura lisada en medio industrial, y la conservación de los stocks de levadura. Además, la forma "gránulo congelado" facilita y acelera la disolución y homogeneización en el sustrato lácteo. La forma "gránulo" está especialmente bien adaptada cuando la levadura lisada está destinada a ser aportada al sustrato lácteo después de la pasteurización, ya que se trata generalmente de un aporte de levadura lisada a escasa dosis.
Antes de la pasteurización, se podrá trabajar con elevadas dosis de levadura lisada, especialmente con dosis de levadura lisada pura de entre 1 gramo de levadura lisada por 4.10^{11} bacterias lácticas y 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{8} bacterias lácticas, preferiblemente entre 1 gramo de levadura lisada pura por 4.10^{11} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 3.10^{8} bacterias lácticas. Con estas dosis, se observa generalmente que es más fácil aportar la levadura lisada en forma de polvo o líquido.
El(los) fermento(s) láctico(s) se aporta(n) por supuesto siempre después de la pasteurización.
Tras la pasteurización, se trabaja de manera ventajosa a una dosis de levadura lisada de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{13} bacterias lácticas y 1 gramo de levadura lisada pura por 1.10^{9} bacterias lácticas, preferiblemente a una dosis de levadura lisada de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 8.10^{11} bacterias lácticas y 1 gramo de levadura lisada pura por 1.10^{10} bacterias lácticas, más preferiblemente a una dosis de levadura lisada de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{11} bacterias lácticas y 1 gramo de levadura lisada pura por 3.10^{10} bacterias lácticas. De manera ventajosa se podrá utilizar entonces un inóculo en el que fermento(s) láctico(s) y levadura lisada están mezclados en dichas proporciones dentro de un mismo compuesto, de manera que puedan ser aportados conjuntamente en una única operación en el sustrato lácteo. Especialmente, se podrá utilizar eficazmente una mezcla de gránulos de levadura lisada y gránulos de fermento(s) láctico(s).
Dicho por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento puede aportarse y/o estar presente en dicho inóculo en cualquier forma adecuada a su función de fermento.
Preferiblemente, cuando se aporta dicha levadura lisada en forma de gránulos tales como gránulos congelados,
el(los) fermento(s) láctico(s) se aporta asimismo en forma de gránulos, tales como gránulos congelados. El conjunto del inóculo incluye entonces al mismo tiempo gránulos de fermentos y gránulos de levadura, lo que proporciona una homogeneidad de forma, y facilita la mezcla homogénea de los dos tipos de gránulos. Dicha mezcla puede realizarse entonces mediante simple vía mecánica.
Cuando se formula en forma de gránulos, más concretamente en forma de gránulos congelados, el compuesto inóculo de la invención está especialmente bien adaptado a la siembra directa del sustrato lácteo.
Típicamente, los gránulos presentan una forma esférica, con un diámetro generalmente incluido entre 2 y 10 mm.
La fabricación de fermentos lácticos es una operación bien conocida por el especialista en la materia. Para la fabricación de gránulos de fermentos lácticos, se podrá acudir por ejemplo a "Bacterias lácticas: Aspectos fundamentales y tecnológicos", Volumen 1, UriageL Lorica, 1994, véase especialmente el Capítulo III-4, páginas 539-553, Lejard et al. "Producción de fermentos concentrados para siembra directa"), donde se encontrarán ejemplos de producción de fermentos concentrados para la siembra directa. En el ejemplo 2, más adelante, se encuentra un ejemplo de fabricación de gránulos de L. bulgaricus, y gránulos de S. Thermophilus.
Por el contrario, al conocimiento de la Solicitante, la fabricación de gránulos de levaduras lisadas en nueva: aún no se habían producido gránulos de levaduras lisadas, especialmente gránulos congelados de levaduras lisadas. Para ello, se puede proceder de la manera siguiente: se someten a esterilización levaduras lisadas, por ejemplo en forma de un extracto de levadura tal como está disponible en el comercio, y formadas en gránulos (por ejemplo, mediante goteo en nitrógeno líquido, y congeladas en condiciones estériles). El ejemplo 1 posterior proporciona una ilustración de dicho protocolo. Las características físicas de los gránulos de levaduras lisadas (extracto seco, presión osmótica, hidroscopicidad) difieren de forma muy sustancial de las de los gránulos de fermentos.
De conformidad con la presente invención, la levadura lisada no se aporta en exceso, sino de manera controlada y limitada.
Para estimular la cinética de acidificación de una fermentación láctica realizada sobre un sustrato lácteo sin perturbar significativamente el final de la acidificación, y obtener así un alimento lácteo fermentado del tipo yogur, leche fermentada, queso blanco o petit-suisse, cuyas cualidades organolépticas y textura estén de acuerdo con los gustos del consumidor, se limitará por lo tanto, de conformidad con la presente invención, el aporte de levadura lisada a dosis estrictamente necesarias para la obtención de una curva de acidificación idónea (acidificación rápida, pero elevada estabilización). En cualquier caso, la dosis máxima de levadura lisada, cualquiera que sea su modo de introducción y cualesquiera que sean las cepas y las concentraciones de bacterias lácticas utilizadas, nunca deberá ser superior a 0,6 g de levadura pura por litro de sustrato a fermentar, y preferiblemente no superior a 0,5 g de levadura pura por litro de sustrato a fermentar.
El o los fermentos se aportan en las dosis adecuadas para la fabricación del producto lácteo fermentado afectado; típicamente, se aportan generalmente en una dosis incluida entre 0,01 y 0,5 g/L, preferiblemente entre 0,05 y 0,2 g/L.
Las respectivas proporciones de levadura lisada y de fermento(s) láctico(s) en el inóculo de la invención pueden ajustarse de manera a obtener la cantidad deseada de levadura lisada a aportar. Se fabrican fácilmente gránulos de levadura lisada que contienen del 10 al 80% en peso de levadura, preferiblemente entre el 25 y el 65% en peso de levadura, por ejemplo fabricando gránulos congelados de levadura (véase el ejemplo 1). Una proporción de gránulos de levadura lisada en un inóculo según la invención, que contiene los fermentos lácticos también en forma de gránulos estará habitualmente incluida entre el 5% y el 60% en peso de gránulos de levadura lisada, preferiblemente el 20% y el 40% en peso de gránulos de levadura, con relación al peso total del conjunto de gránulos (peso de los gránulos de fermentos + peso de los gránulos de levadura lisada). Los gránulos de fermento(s) incluyen generalmente entre 10^{9} y 10^{11} bacterias lácticas por gramo (véase el ejemplo 2 dado a continuación).
De forma inesperada, se ha comprobado asimismo que los nuevos medios conformes a la invención aportan una mejora en términos de textura para el alimento lácteo fermentado obtenido, especialmente durante la fabricación de yogur en presencia de L. bulgaricus y S. thermophilus. Los inventores observaron que, durante su conservación, los yogures fabricados de conformidad con la presente invención (es decir mediante siembra directa de un inóculo constituido por gránulos congelados de levadura lisada, por ejemplo S. cerevisiae lisada, y gránulos congelados de fermentos L. bulgaricus y S. thermophilus), adquirían una consistencia y una viscosidad incrementada con relación a yogures testigos obtenidos a partir de un inóculo equivalente pero que no incluye levadura lisada (incremento de la consistencia del orden del 5% al 15% medida mediante penetrometría con un aparato TAXT-2, e incremento de la viscosidad del orden del 5% al 25% medida en un Rhéomat 180). Por lo tanto, la presente invención afecta, como productos, a los alimentos lácteos fermentados del tipo yogur, leche fermentada, queso blanco y petit-suisse, que pueden conseguirse de conformidad con la presente invención. En efecto, presentan distintas características, especialmente características de consistencia y viscosidad mejoradas, con relación a los alimentos testigos correspondientes.
Los inventores no han aclarado completamente hasta la fecha los mecanismos situados en la base de la estimulación controlada de la cinética de acidificación. Sin embargo, se puede observar ya que estos nuevos medios actúan por lo menos sobre la velocidad de crecimiento de los fermentos. Esto permite limitar la etapa previa usual de propagación de los fermentos durante una siembra indirecta o semi-directa y, por lo tanto, una mejora en términos de tiempo y coste, dado que los medios de cultivo necesarios para dicha etapa son netamente más costosos que los nuevos medios objeto de la presente solicitud.
De manera preferente, la presente solicitud afecta al uso de levaduras lisadas como aporte nutricional a por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento elegido entre las bacterias lácticas termófilas. Más preferiblemente, se elegirá una o varias bacterias lácticas termófilas homofermentarias. De manera ventajosa, se elegirá más concretamente un microorganismo con capacidad de fermento elegido entre las cepas de las especies Streptococcus thermophilus y Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, es decir entre las cepas utilizables para la producción de yogur. Por lo tanto, la presente solicitud afecta de manera particular a cualquier compuesto que incluya por lo menos una bacteria de la especie S. thermophilus y/o de la especie L. bulgaricus, y por lo menos una levadura lisada; dicho compuesto está especialmente adaptado para la fabricación de yogur.
Más preferiblemente, la presente solicitud afecta al empleo de levadura lisada como aporte nutricional a por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento elegido entre las cepas de la especie Streptococcus thermophilus, y con por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento elegido entre las cepas de la especie Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus. En efecto, existe una relación simbiótica entre S. thermophilus y L. bulgaricus, estimulando las bacterias de una especie el crecimiento de las de la otra especie. L. bulgaricus estimula el crecimiento de S. thermophilus liberando aminoácidos y péptidos a partir de las proteínas de la leche, lo que permite a S. thermophilus tener un crecimiento más rápido al comienzo de la incubación. Por su parte, S. thermophilus produce ácido fórmico que estimula el crecimiento de L. bulgaricus. Se conoce esta simbiosis con el nombre de "proto-cooperación", y conduce a tiempos de fermentación más cortos, así como a un producto que presenta características distintas de las que presenta un producto conseguido por medio de sólo una de ambas especies
\hbox{(aroma
específico  yogur , textura mejorada).}
Los inventores comprobaron que la utilización de levadura lisada como aporte nutricional a por lo menos una cepa de cada una de dichas dos especies conducía a una estimulación de la sinergia inicial entre ambas cepas, respetando al mismo tiempo las condiciones de no alteración de la meseta de acidificación exigidas para la producción de un alimento lácteo destinado al consumo humano, como un yogur (véase el ejemplo 4). La presente solicitud afecta en particular a cualquier compuesto de inóculo que incluye por lo menos una levadura lisada y cuyos fermentos son de las especies S. thermophilus y L. bulgaricus.
Según otro aspecto de la invención, la presente solicitud afecta asimismo a un procedimiento para la producción de un inóculo de siembra directa, de conformidad con la invención, caracterizado porque se mezcla o se coloca conjuntamente en colección:
-
por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento láctico capaz de producir un alimento lácteo fermentado mediante fermentación láctica de un sustrato lácteo, como un fermento lácteo capaz de producir una leche fermentada, un yogur, un queso blanco o un petit-suisse,
-
por lo menos una levadura lisada.
La presente solicitud afecta asimismo a las aplicaciones de la invención en el ámbito de la producción de productos lácteos fermentados, más concretamente alimentos lácteos fermentados. Por lo tanto, la presente solicitud afecta a un nuevo procedimiento de fermentación láctica de un sustrato lácteo. Este nuevo procedimiento de fermentación se caracteriza porque se aporta a dicho sustrato lácteo uno o varios microorganismos con capacidad de fermento(s) láctico(s)
y por lo menos una levadura lisada, y porque se mantiene dicho sustrato en condiciones favorables para la actividad de fermentación del o de los microorganismos con capacidad de fermento(s) láctico(s) aportados.
La presente solicitud afecta más concretamente a un procedimiento de fermentación láctica de un sustrato lácteo, según el cual dicho o dichos microorganismos con capacidad de fermento(s) láctico(s) y dicha levadura lisada se aportan a dicho sustrato lácteo en forma de un inóculo, de conformidad con la presente invención. Tras la pasteurización y eventual homogeneización del sustrato lácteo, se aporta a dicho sustrato dicho por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento, y dicha por lo menos una levadura lisada, se coloca el sustrato lácteo en incubación, de manera a permitir la fermentación deseada, y se enfría el sustrato en un pH fijado (definido por el tipo de alimento que se produce; por ejemplo, para un yogur, se detiene la fermentación cuando el pH se encuentra entre 4,5 y 4).
Por naturaleza, el sustrato lácteo contiene una fuente de lactosa. El especialista en la materia sabe adaptar las condiciones operativas de fermentación, especialmente las condiciones de temperatura, agitación y cantidad de oxígeno presente, al(a los) fermento(s) láctico(s) presente(s) en el sustrato lácteo, de manera que dicho(s) fermento(s) láctico(s)
puedan desarrollar en dicho sustrato su capacidad de transformar la lactosa en ácido láctico. Por ejemplo, para la fabricación de yogur, se opera en general a una temperatura de 40ºC. Para la fabricación de leche fermentada, se opera en general a una temperatura de 37ºC. Para la fabricación de queso blanco y petit-suisse, se opera generalmente a una temperatura de entre 17ºC y 30ºC.
El procedimiento de fermentación láctica de la invención permite producir directamente productos lácteos fermentados, y la presente solicitud afecta asimismo a cualquier procedimiento de fabricación de productos lácteos fermentados, más concretamente alimentos lácteos fermentados tales como yogur, leche fermentada, queso blanco y petit-suisse, mediante fermentación láctica acidificante de un sustrato lácteo pasterizado,
caracterizado porque la fermentación láctica acidificante llevada a cabo para la fabricación de dichos productos es una fermentación láctica según la invención, es decir que:
-
se aporta por lo menos una levadura lisada al sustrato lácteo, de manera que durante dicha fermentación láctica acidificante, el(los) fermento(s) láctico(s) acidificante(s) estén en presencia de dicha por lo menos una levadura lisada, aportándose dicha por lo menos una levadura lisada en una cantidad incluida entre 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{13} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{8} bacterial lácticas, velando porque la cantidad total de levadura lisada aportada al sustrato lácteo no sobrepase los 0,6 gramos de levadura lisada pura por litro de sustrato a fermentar, preferible los 0,5 gramos de levadura lisada pura por litro de sustrato a fermentar,
y que
-
se mantiene dicho sustrato lácteo inoculado en condiciones favorables para la actividad de fermentación del(de los) fermento(s) láctico(s) acidificante(s), de manera a producir el alimento lácteo fermentado deseado.
El conjunto de la fabricación de alimentos lácteos fermentados del tipo yogur, leche fermentada, queso blanco y petit-suisse incluye las etapas de pasterización de un sustrato lácteo y de fermentación láctica acidificante del sustrato lácteo pasterizado. De conformidad con la presente invención, se puede aportar la levadura lisada antes o después de la pasterización, en las proporciones indicadas anteriormente. Este procedimiento de la presente invención permite aportar los fermentos lácticos directamente sin pre-cultivo.
La presente solicitud se ilustra mediante los siguientes ejemplos, en los que se hace referencia a las figuras 1, 2 y 3.
La figura 1 presenta una curva que ilustra la estimulación ejercida mediante gránulos de levadura lisada sobre la cinética de acidificación de un fermento de L. bulgaricus sobre sustrato lácteo.
La figura 2 presenta una curva que ilustra la estimulación ejercida por gránulos de levadura lisada sobre la cinética de acidificación de la simbiosis que desarrollan un fermento de L. bulgaricus y un fermento de S. thermophilus sobre sustrato lácteo.
La figura 3 presenta una curva que ilustra la estimulación ejercida por un extracto de levadura seco aportado antes de la pasteurización, sobre la fermentación ejercida por S. thermophilus.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1
Preparación de gránulos congelados de levadura lisada
Se utiliza un extracto de levadura BIOSPRINGER "sin sal líquida" al 50% de extracto seco (código 153), a título de levadura lisada. Se preparan gránulos de levadura lisada según el siguiente protocolo:
1
\;
-
Esterilización de un litro de extracto de levadura (EL) en autoclave (121ºC 15'), en una botella de vidrio cuyo tapón permite la extracción estéril del líquido tras el tratamiento térmico,
2
\;
-
Enfriamiento del EL a entre 20ºC y 30ºC, procediendo a continuación bajo una campana con flujo laminar con material estéril,
3
\;
-
Conexión de la botella a una bomba peristáltica por medio de un tubo flexible de pequeña sección, cuyo otro extremo se une a un sistema que permite la conexión con varias agujas de jeringuilla,
4
\;
-
Disponer una cuba isotérmica llena de nitrógeno líquido bajo las agujas,
5
\;
-
Arrancar la bomba peristáltica y ajustar el caudal para conseguir un goteo regular de EL en el nitrógeno líquido,
6
\;
-
Recoger y acondicionar los gránulos estérilmente y conservarlos a -80ºC.
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Ejemplo 2
Fabricación de gránulos congelados de bacterias lácticas 1 - Preparación del inóculo a partir de la cepa I-1519 de L. bulgaricus y de la cepa I-1630 de S. thermophilus
Revivir la cepa mediante tres trasplantes sucesivos sobre la leche más extracto de levadura (polvo de leche desnatada de 90 a 140 g más extracto de levadura en polvo de 0,5 a 3 g QSP 1 kg con agua destilada, esterilización a 121ºC durante 15 minutos):
-
Siembra al 1%, incubación a 40ºC (S. thermophilus = ST); 44ºC (L. bulgaricus = LB)
-
Detención de los trasplantes mediante enfriamiento (4ºC) tras la coagulación (gelificación de la leche)
-
Sembrar por medio del último trasplante (1%), 200 ml de M17 a 40ºC (ST), 200 ml de MRS a 44ºC (LB)
-
Realizar un seguimiento de densidad óptico mediante un espectrofotómetro a 660 nanómetros
-
Detención del crecimiento bacteriano del inóculo mediante frío (4ºC). Tras la obtención del final de fase exponencial de crecimiento (entre 4 h y 4:30 h en buenas condiciones).
\vskip1.000000\baselineskip
2 - Preparación del fermentador (ejemplo: tipo BIOSTAT ED)
Elección de la normalidad de la base de regulación
-
ST solución de NaOH 6 N
-
LB solución de NaOH 2 N
Esterilización en autoclave, 121ºC, 15 minutos
-
Sistema de admisión de base y de inoculación,
-
Solución de base,
-
Rotor y bol de la centrifugadora,
-
Conexiones del fermentador hacia la centrifugadora,
-
Conexiones para recoger la parte flotante estéril hacia un frasco,
-
Conexión de la botella de concentrado estéril hacia el nitrógeno (tubos+aguja).
Calibración de la sonda pH
Esterilización del fermentador
-
Llenarlo de agua pura
-
Programar un ciclo de esterilización in situ (121ºC 20')
3 - Preparación del medio de cultivo
-
Utilización de agua destilada
-
Pesar los distintos compuestos del medio (ver recetas a continuación)
-
Hidratación 30' en agitación
-
Esterilización en autoclave (121ºC 15 minutos)
-
Enfriamiento hasta 4ºC: 40ºC (ST), 44ºC (LB)
-
Traslado del medio de cultivo al fermentador, de forma aséptica.
Medio de propagación ST Medio de propagación LB
- Agua destilada - Agua destilada
- Permeato de ultrafiltración 50g/l - Permeato de ultrafiltración 50 g/l
- Extracto de levadura 10 g/l - Extracto de levadura 15 g/l
- Sulfato de manganeso 0,1 g/l - Sulfato de manganeso 0,1 g/l
- Polvo de leche desnatada 10g/l - Tween 80
\hskip0,15cm pH inicial 6,5 \hskip0,15cm pH inicial 6,5
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4 - Comienzo de la propagación
-
Siembra del fermentador con el inóculo, a razón de 100 ml por 6 litros
-
Inicio del programa fermentador que permite regular la temperatura, regular el pH mediante soluciones de sosa, agitar el medio de cultivo, registrar el pH, la temperatura y el volumen de sosa añadido.
\vskip1.000000\baselineskip
5 - Detención de la propagación
Los datos sobre el volumen de sosa añadido durante la fermentación para regular el pH son tratados para obtener una curva del cúmulo del volumen de sosa consumido en función del tiempo, y para obtener una curva de velocidad de consumo de sosa en función del tiempo. El punto máximo de esta última curva corresponde al momento en que se debe detener la propagación mediante enfriamiento del fermentado.
\vskip1.000000\baselineskip
6 - Centrifugado en frío (ejemplo: rotor de flujo continuo 8575)
-
Extracción del fermentado mediante bomba peristáltica, y alimentación del bol de la centrifugadora
-
Velocidad: 13.000 rpm (ST), 10.000 rpm (LB)
-
Recogida del flotante en un frasco estéril
-
Tras la centrifugación, diluir el fondo obtenido con flotante, hasta que se pueda pipetar; trasladarlo a una botella estéril previamente enfriada (trabajar bajo campana con flujo laminar, mantener el concentrado a temperaturas inferiores a 10ºC)
\vskip1.000000\baselineskip
7 - Congelación (trabajar bajo campana con flujo laminar, manipulación aséptica, mantener el concentrado a temperaturas inferiores a 10ºC)
-
Conexión de la botella de fondo diluido a una bomba peristáltica por medio de un tubo flexible de escasa sección, cuyo otro extremo está unido a un sistema que permita la conexión con varias agujas de jeringuilla
-
Disponer una cuba llena de nitrógeno líquido bajo las agujas
-
Arrancar la bomba peristáltica y ajustar el caudal para obtener un goteo regular de concentrado en el nitrógeno líquido
-
Recoger y acondicionar los gránulos estérilmente, y conservarlos a -80ºC.
8 - Control de los gránulos concentrados congelados
Tras haber derretido rápidamente gránulos, se efectúa un recuento (ST o LB: Método FIL117A:1988)
Los gránulos de S. thermophilus presentan una población superior a 10^{10} cfu/g
Los gránulos de L. bulgaricus presentan una población superior a 5.10^{9} cfu/g.
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Ejemplo 3
Los gránulos de levadura lisada estimulan la cinética de acidificación de bacterias de la especie Lactobacillus bulgaricus
A partir de la cepa de Lactobacillus bulgaricus, que está disponible con el número I-1519 en la C.N.C.M. (Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos - Institut Pasteur - 28, rue du Docteur Roux - 75724 Paris Cedex 15 - Francia), se preparan gránulos de fermento siguiendo el método descrito en el ejemplo 2.
Se prepara asimismo un compuesto conforme a la invención, constituido por una mezcla de gránulos de fermento I-1519, gránulos de levadura lisada que se han preparado como se indica en el ejemplo 1 anterior. Los gránulos de fermento I-1519 se aportan en una cantidad correspondiente a 0,1 g de gránulos de fermento por litro de mezcla láctea a fermentar, y los gránulos de levadura en una cantidad correspondiente a 0,05 g de gránulos de levadura por litro de mezcla láctea a fermentar. Ambos tipos de gránulos se mezclan mecánicamente, de manera a obtener una distribución globalmente homogénea de los dos tipos de gránulos en la composición.
Se prepara, a título de sustrato lácteo, una mezcla láctea a partir de 120 g de polvo de leche desnatada, 70 g de sacarosa, 930 ml de agua permutada, y se pasteriza dicha mezcla manteniéndola al baño maría a 95ºC durante 10 min.
Se siembra la mezcla láctea pasterizada mediante:
a)
gránulos de fermento hasta 0,1 g de gránulos por litro de mezcla láctea a fermentar, o bien mediante
b)
la composición de la invención indicada anteriormente, constituida por una mezcla de gránulos de fermento hasta 0,1 g/l, y gránulos de levadura lisada hasta 0,05 g/l (es decir 1 gramo de levadura lisada pura por 4.10^{10} bacterias lácticas).
Se eleva la fermentación láctica del sustrato lácteo sembrado hasta una temperatura de 38ºC durante 18 h, y se mide el pH del sustrato en el transcurso de la fermentación. Las mediciones de pH se realizaron por medio de un aparato de análisis de la marca CINAC (fabricado y distribuido por la sociedad YSEBAERT - 10, avenue Charles de Gaulle - 95740 Frépillon - Francia), midiendo el pH cada minuto durante 18 h.
Los resultados relativos a la cinética de acidificación se ilustran en la Figura 1 (eje de las ordenadas: valores de pH; eje de abscisas: tiempo en min a partir del inicio de la acidificación). La curva de arriba corresponde a la siembra a) (gránulos de fermento L. bulgaricus, sin gránulos de levadura lisada), la curva de abajo corresponde a la siembra b) (compuesto conforme a la invención constituido por gránulos de fermento L. bulgaricus y gránulos de levadura lisada).
Se observa que, en presencia de gránulos de levadura lisada, se estimula netamente la cinética de acidificación de la cepa de L. bulgaricus.
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Ejemplo 4
Los gránulos de levadura estimulan la cinética de acidificación de la simbiosis de fermentación Lactobacillus bulgaricus - Streptococcus thermophilus, sin alterar por ello la meseta de final de acidificación y el valor del pH a 1.000 min
A partir de la cepa de Lactobacillus bulgaricus disponible con el número I-1519 en la C.N.C.M. (Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos - Institut Pasteur - 28, rue du Docteur Roux - 75724 Paris Cedex 15 - Francia), se preparan gránulos de fermento I-1519, como se indica en el ejemplo 3 anterior.
A partir de la cepa de Streptococcus thermophilus disponible con el número I-1630 en la C.N.C.M. (Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos - Institut Pasteur - 28, rue du Docteur Roux - 75724 Paris Cedex 15 - Francia), se preparan gránulos de fermento I-1630, como se indica en el ejemplo 3 anterior para la cepa de Lactobacillus bulgaricus.
Se prepara un compuesto constituido por un 95% en peso de gránulos de fermento I-1519 y por un 5% en peso de gránulos de fermento I-1630, mediante mezcla mecánica homogénea.
Se prepara asimismo un compuesto conforme a la invención, constituido por un 76% en peso de gránulos de fermento I-1519, un 4% en peso de gránulos de fermento I-1630, y un 20% en peso de gránulos de levadura lisada que se han preparado como se indica en el ejemplo 1 anterior (es decir 1 gramo de levadura lisada para 8.10^{10} bacterias lácticas).
Se prepara, a título de sustrato lácteo, una mezcla láctea constituida por 120 g de polvo de leche desnatada, 70 g de sacarosa, y 930 ml de agua permutada, y se pasteriza dicha mezcla manteniéndola al baño maría a 95ºC durante 10 min.
Se siembra la mezcla láctea pasterizada con:
a)
el compuesto constituido por gránulos de fermentos I-1519 e I-1630 en la proporción de 95%-5%, hasta 0,19 g de gránulos de fermento I-1519 y 0,01 g de gránulos de fermento I-1630 por litro de mezcla láctea a fermentar.
b)
el compuesto conforme a la invención constituido por gránulos de fermentos I-1519 e I-1630 y gránulos de levadura lisada en la proporción 76%-4%-20%, hasta 0,19 de gránulos de fermento I-1519, 0,01 g de gránulos de fermento I-1630 y 0,05 g de gránulos de levadura lisada por litro de mezcla láctea a fermentar.
Se eleva la fermentación láctica del sustrato lácteo sembrado hasta una temperatura de 38ºC durante 18h, y se mide el pH del sustrato en el transcurso de la fermentación. Las mediciones de pH se realizaron por medio de un aparato de análisis de la marca CINAC (fabricado y distribuido por la sociedad YSEBAERT - 10, avenue Charles de Gaulle - 95740 Frépillon - Francia), midiendo el pH cada 4 minutos durante 18 h.
Los resultados relativos a la cinética de acidificación se ilustran en la Figura 2 (eje de las ordenadas: valores de pH; eje de abscisas: tiempo en min a partir del inicio de la acidificación hasta el tiempo 1.000 min). La curva de arriba corresponde a la siembra a) (gránulos de fermento, sin gránulos de levadura lisada), la curva de abajo corresponde a la siembra b) (compuesto conforme a la invención constituido por gránulos de fermento y gránulos de levadura lisada).
Se observa que la adición de gránulos de levadura conduce a una neta estimulación de la actividad acidificante de la simbiosis de fermentación (I-1519+I-1630), conservando al mismo tiempo las características intrínsecas del fermento (meseta de acidificación a partir de pH 4,6, pH a 1.000 min idéntico).
Ejemplo 5 Adición de levadura lisada antes de la pasterización
Se añaden extractos de levaduras secos (autolisado puro, sin sal, código 107 de BIOSPRINGER) con un contenido del 100% de levadura lisada pura, directamente a los demás ingredientes que constituyen la fórmula del producto terminado (salvo las bacterias lácticas), a razón de 0,3 g de extracto de levadura seco por litro. Se pasteriza el conjunto. A continuación, se añaden gránulos de la cepa de Streptococcus thermophilus CNCM I-2774, a razón de 0,2 gramo de gránulos por litro de producto terminado. Se han preparado dichos gránulos de la misma manera que los gránulos de la cepa CNCM I-1630 en el ejemplo 3. Contienen 3,1x10^{10} bacterias por gramo de gránulos. Por lo tanto, se aporta 0,3 g de levadura lisada a 6,2x10^{9} bacterias lácticas, es decir 1 g de levadura lisada pura por 2,07 x 10^{10} bacterias lácticas.
Mediante comparación con la fórmula sin levaduras lisadas, se observa una acidificación más rápida durante las tres primeras horas, y una acidificación menos rápida que con la fórmula sin levaduras lisadas, como se ilustra en la Figura 3.

Claims (27)

1. Inóculo especialmente adaptado a la siembra directa en un sustrato lácteo para la transformación de dicho sustrato lácteo en alimento fermentado, caracterizado porque dicho inóculo incluye, en mezcla o en forma de kit ("kit of parts"):
-
por lo menos un microorganismo en una forma tal que es capaz de ejercer una actividad de fermento sobre un sustrato lácteo, y
-
por lo menos una levadura en forma lisada,
estando constituido dicho microorganismo con capacidad de fermento contenido en dicho inóculo o, si existen varios, el conjunto de microorganismos con capacidad de fermento contenidos en dicho inóculo, por bacterias lácticas capaces de producir un alimento lácteo fermentado mediante fermentación láctica acidificante de un sustrato lácteo, y
estando presente dicha levadura lisada en dicho inóculo en una cantidad de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{13} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{8} bacterias lácticas.
2. Inóculo, según la reivindicación 1, caracterizado porque dicha levadura lisada está presente en dicho inóculo en una cantidad de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 1.10^{12} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 3.10^{8} bacterias lácticas.
3. Inóculo, según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque dicha levadura lisada está presente en dicho inóculo en una cantidad de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 4.10^{11} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{8} bacterias lácticas.
4. Inóculo, según la reivindicación 3, caracterizado porque incluye dicha por lo menos una levadura lisada y dicho por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento en forma de kit, sin mezcla ("kit of parts" inoculum).
5. Inóculo, según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque dicha levadura lisada está presente en dicho inóculo en una cantidad de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{13} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 1.10^{9} bacterias lácticas.
6. Inóculo, según la reivindicación 5, caracterizado porque dicha levadura lisada está presente en dicho inóculo en una cantidad de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 8.10^{11} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 3.10^{10} bacterias lácticas.
7. Inóculo, según la reivindicación 5 o 6, caracterizado porque dicha levadura lisada está presente en dicho inóculo en una cantidad de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{11} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 3.10^{10} bacterias lácticas.
8. Inóculo, según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, caracterizado porque dicha levadura lisada se encuentra mezclada con dicho microorganismo con capacidad de fermento.
9. Inóculo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque dicha levadura lisada está presente en forma de polvo o líquido.
10. Inóculo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque dicha levadura lisada está presente en forma de gránulos.
11. Inóculo, según la reivindicación 10, caracterizado porque dichos gránulos de levadura lisada están en forma congelada.
12. Inóculo, según la reivindicación 10 u 11, caracterizado porque dichos gránulos de levadura contienen entre el 10 y el 80% en peso de levadura lisada, preferiblemente entre el 25 y el 65% en peso.
13. Inóculo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque dicha levadura es de la especie Saccharomyces cerevisiae.
14. Inóculo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque dicho por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento está presente en forma de gránulos.
15. Inóculo, según la reivindicación 14, caracterizado porque dichos gránulos de fermento están en forma congelada.
16. Inóculo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque se elige dicho alimento lácteo en el grupo constituido por el yogur, la leche fermentada, el queso blanco y el petit-suisse.
17. Inóculo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado porque dicho por lo menos un microorganismo con capacidad de fermento contenido en dicho inóculo pertenece a la especie Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus o a la especie Streptococcus thermophilus.
18. Inóculo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque las dos especies Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus y Streptococcus thermophilus están representadas en el conjunto de microorganismos con capacidad de fermentos contenidos en dicho inóculo.
19. Procedimiento de producción de alimentos lácteos fermentados, más concretamente yogur, leche fermentada, queso blanco y petit-suisse, mediante fermentación láctica acidificante de un sustrato lácteo pasterizado, caracterizado porque se aporta por lo menos una levadura lisada al sustrato lácteo, de manera que, durante dicha fermentación láctica acidificante, el(los) fermento(s) láctico(s) acidificantes están en presencia de dicha por lo menos una levadura lisada,
aportándose dicha por lo menos una levadura lisada en una cantidad de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{13} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{8} bacterias lácticas,
velando por que la cantidad total de levadura lisada aportada al sustrato lácteo no sobrepase 0,6 gramo de levadura lisada pura por litro de sustrato a fermentar, y porque
se mantiene dicho sustrato lácteo inoculado en condiciones favorables para la actividad de fermentación
del(de los) fermento(s) láctico(s) acidificante(s), para producir el alimento lácteo fermentado deseado.
20. Procedimiento de producción de alimentos lácteos fermentados, según la reivindicación 19, caracterizado porque la cantidad total de levadura lisada aportada al sustrato lácteo no sobrepasa 0,5 gramo de levadura lisada pura por litro de sustrato lácteo a fermentar.
21. Procedimiento de producción de alimentos lácteos fermentados, según la reivindicación 19 o 20, caracterizado porque se aporta dicha por lo menos una levadura lisada en una cantidad de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 1.10^{12} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 3.10^{8} bacterias lácticas.
22. Procedimiento de producción de alimentos lácteos fermentados, según una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque se aporta dicha por lo menos una levadura lisada antes de la pasterización del sustrato lácteo, en una dosis de entre 1 gramo de levadura lisada pura por 4.10^{11} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada pura por 2.10^{8} bacterias lácticas.
23. Procedimiento de producción de alimentos lácteos fermentados, según una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque se aporta dicha por lo menos una levadura lisada en una dosis de entre 1 gramo por 2.10^{3} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada por 10^{9} bacterias lácticas.
24. Procedimiento de producción de alimentos lácteos fermentados, según la reivindicación 23, caracterizado porque dicha por lo menos una levadura lisada, que se aporta después de la pasterización, se aporta en una dosis de entre 1 gramo por 8.10^{11} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada por 3.10^{10} bacterias lácticas.
25. Procedimiento de producción de alimentos lácteos fermentados, según la reivindicación 23 o 24, caracterizado porque dicha por lo menos una levadura lisada, que se aporta después de la pasterización, se aporta en una dosis de entre 1 gramo por 2.10^{11} bacterias lácticas, y 1 gramo de levadura lisada por 3.10^{10} bacterias lácticas.
26. Procedimiento de producción de alimentos lácteos fermentados, según una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 25, caracterizado porque se aporta(n) el(los) fermento(s) láctico(s) acidificante(s) al sustrato lácteo directamente, sin cultivo.
27. Cepa I-2774 tal como la depositada en la CNCM (Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos, Institut Pasteur, 28 rue du Docteur Roux, F-75724 Paris Cedex 15, Francia).
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