ES2271951T5

ES2271951T5 - Antagonistas de interleuquina 15.

Info

Publication number: ES2271951T5
Application number: ES96907112T
Authority: ES
Inventors: Kenneth H. Grabstein; Raymond J. Paxton; Dean K. Pettit
Original assignee: Immunex Corp
Current assignee: Immunex Corp
Priority date: 1995-02-22
Filing date: 1996-02-21
Publication date: 2010-11-29
Anticipated expiration: 2016-02-21
Also published as: FI973361A0; NO321990B1; EP1770163A2; CA2210491C; FI973361A; JPH11500908A; DK0811065T3; ES2271951T3; EP1770163A3; JP2008133276A; AU5027596A; PT811065E; NZ303843A; KR19980702238A; FI20060080A; EP0811065B2; EP0811065A1; EP0811065B1; CA2637795A1; DK0811065T4

Abstract

SE DESCUBREN ANTAGONISTAS DE LA INTERLEUCINA ") DE MAMIFERO QUE INCLUYEN MUTEINAS DE IL IL LA SUBUNIDAD {BE} O {GA} DEL COMPLEJO DEL RECEPTOR IL EVITAN QUE IL VES BIEN DE LA SUBUNIDAD {BE} O {GA} DEL COMPLEJO DEL RECEPTOR IL ENFERMEDAD, INCLUYENDO EL TRATAMIENTO DEL RECHAZO DEL ALOINJERTO Y DE LA ENFERMEDAD DE INJERTO CONTRA HOSPEDADOR.

Description

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se relaciona con anticuerpos monoclonales surgidos contra un polipéptido factor de célula T derivado del epitelio de mamífero denominado aquí como interleuquina-15 (“IL-15”) que reduce significativamente la capacidad del IL-15 a estimular la proliferación de linfocito T en un ensayo CTLL in Vitro. También incluido en la invención están los usos de tales anticuerpos para tratar varios estados de enfermedad en mamíferos donde se desea la reducción de la actividad de IL-15. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La interleuquina-15 es un factor de crecimiento de célula T conocido que puede soportar la proliferación de una línea celular dependiente de IL-2, CTLL-2. El IL-15 se reportó primero por Grabstein et al., in Science, 264: 965 (1994) como una citoquina secretada que comprende un polipéptido precursor de 162 aminoácidos que contiene una secuencia líder de 48 aminoácidos que resulta en un proteína madura de 114 aminoácidos. Grabstein et al. también describe la clonación del cADN humano de longitud completa que codifica un precursor de 162 aminoácidos, que contiene una región no codificante 5’ de 316 bp y una estructura de lectura abierta de 486 bp (o una estructura de lectura abierta de 489 bp cuando se incluyen los 3 bp para el codón de parada) y una región no codificante 3’ de 400 bp.

El IL-15 comparte muchas propiedades con el IL-2. Estas propiedades incluyen la proliferación y activación de células T humanas y de murino, la inducción de la actividad de célula asesina activada por linfoquina (LAK) actividad de una célula asesina natural (NK), y actividad de linfocitos T citotóxicos (CTL), y coestimulación de proliferación y diferenciación de célula B.

Adicionalmente, el IL-15 y el IL-2 son moléculas estructuralmente homólogas que son capaces de unirse a al menos tres subunidades receptoras distintas sobre la superficie de membrana de célula T. Los receptores IL-2 contienen al menos tres subunidades α, B y γ (Toshikazu et al., Science,

257: 379 (1992)). Tanto el IL-15 como el IL-2 comparten la unión al complejo de subunidad β-γ, mientras que cada uno del IL-15 y el IL-2 se unen a una subunidad receptora α específica (IL-15Rα e IL-2Rα, respectivamente). Recientemente, se descubrió el IL-15Rα y es el objeto de la solicitud copendiente Serie No. 08/300,903. Los anticuerpos dirigidos contra la cadena α del receptor IL-2 (anti-IL-2Rα) no tienen efecto sobre la unión del IL-15 (Grabstein et al., Id.). Los anticuerpos dirigidos contra la subunidad β del receptor IL-2, es decir, TU27, TU11, o Mikβ1, sin embargo, son capaces de bloquear la actividad del IL-15, sugiriendo que el IL-15 utiliza la subunidad β para señalización. Similarmente la cadena γ del receptor IL-2 se requiere para transducción de señal (Giri et al., EMBO J., 13: 2822 (1994)). La combinación de las subunidades β y γ del complejo receptor IL15, pero ninguna subunidad sola, unida al IL-15 sobre las células COS transfectadas.

Ciertos estados de enfermedad y condiciones fisiológicas son mediadas por las células T. Tales enfermedades incluyen rechazo por trasplante de órgano, síndrome del injerto contra el hospedador, enfermedad autoinmune, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, trastornos dermatológicos, diabetes mellitus dependiente de insulina, trastornos oculares y síndrome nefrótico idiopático/nefropatía membranosa idiopática. De hecho, el rechazo de injerto y el síndrome del injerto contra el hospedador (GVHD) se han asociado con una expresión creciente del receptor IL

2. Las células T activadas en respuesta a antígenos de histocompatibilidad extraña parecen expresar el

complejo receptor IL-2. Se han propuesto y estudiado varias terapias. Por ejemplo, Tinubu et al. (J. Immunol., 153: 4330 (1994 )), reportó que el anticuerpo monoclonal anti-IL-2Rβ, Mikβ1, prolonga la supervivencia del aloinjerto cardiaco en primates. Existe un incremento en la expresión de la subunidad IL-2Rβ sobre las células que expresan CD4 y CD8 en asocio con rechazo de aloinjerto agudo, que indica que la expresión de la subunidad IL-2Rβ parece incrementar las células T aloreactivas. Ver, por ejemplo, Niguma et al., Transplantation, 52: 296 (1991).

Sin embargo, antes de la presente invención, no había terapias que se enfocaran en la interacción del ligando-receptor IL-15 como medios para tratar el GVHD o para promover la supervivencia del aloinjerto. RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La invención está dirigida a anticuerpos monoclonales como se definieron aquí surgidos contra IL-15 y utiliza tales anticuerpos para tratamiento de enfermedad en humano. En particular, tal tratamiento incluye promover la supervivencia de aloinjerto en mamíferos y tratar GVHD.-los antagonistas IL-15 son efectivos para prevenir el IL-15 de transducir una señal a una célula a través de las subunidades β o γ del complejo receptor IL-15, antagonizando de esta manera la actividad biológica del IL-15. Ciertos de los anticuerpos monoclonales de acuerdo con la invención pueden interferir con la unión del IL-15 a la subunidades β o γ del complejo receptor IL-15, aunque no interfiriendo sustancialmente con la unión del IL-15 al IL-15Rα.

Además, la invención comprende anticuerpos monoclonales como se definieron aquí que inmunorreaccionan con IL-15 maduro y evita la transducción de señal al complejo receptor IL-15.

La invención también está dirigida al uso de anticuerpos monoclonales como se definieron aquí para tratar una enfermedad o condición en la cual se desea una reducción en la actividad del IL15 sobre las células T. Tales enfermedades incluyen rechazo por transplante de órgano, el síndrome del injerto contra el hospedador, enfermedad autoinmune, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, trastornos dermatológicos, diabetes mellitus dependiente de insulina, trastornos oculares y síndrome nefrótico idiopático/nefropatía membranosa idiopática. En particular, el rechazo por aloinjerto, la actividad IL-15 puede conducir a una respuesta inmune del huésped contra el injerto y eventualmente rechazo. De manera similar, el GVHD, el injerto, típicamente un trasplante de médula ósea, imparte una respuesta inmune contra el huésped. La supresión de tales actividades por los anticuerpos monoclonales IL-15 de acuerdo con la invención puede ser ventajosa para promover y prolongar la supervivencia del injerto y, para tratar GVHD.

Diversos investigadores han reportado la prolongación de la supervivencia de injerto al utilizar anticuerpos, tal como anti-TAC, un anticuerpo monoclonal del receptor IL-2α anti-humano. Ver Reed et al., Transplantation, 47: 55-59 (1989), en donde el anti-TAC muestra tener transplante de aloinjerto renal de primate mejorado. También, Brown et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 88: 2663 (1991) describe el uso del anti-TAC humanizado en prolongación de la supervivencia de aloinjerto cardiaco en primate. Kirkman et al., Transplantation, 51: 107 (1991), también describe el ensayo clínico que involucra anti-TAC para prevenir rechazo temprano de aloinjerto. En razón a que el IL-15 posee muchas actividades biológicas similares a IL-2, y de hecho, comparte ciertas subunidades del receptor con el IL-2, interfiriendo con la actividad deletérea del IL-15 en condiciones de enfermedad tiene distintos potenciales terapéuticos. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

3 La invención está dirigida a un anticuerpo monoclonal surgido contra interleuquina-15 (IL15) de la SEQ. ID. NO: 1 o 2 que evita específicamente que el IL-15 haga transducción de una señal a

través de las subunidades β o γ del complejo receptor IL-15.

Como se utiliza aquí, “tecnología de ADN recombinante” o “recombinante” se refiere a técnicas y procesos para producir polipéptidos específicos de células microbianas (por ejemplo bacterias, insectos o levaduras) la de mamífero u organismos (por ejemplo transgénicos) que han sido transformados o transfectados con secuencias de ADN clonadas o sintéticas para posibilitar la biosíntesis de péptidos heterólogos. Los patrones de glicosilación nativos se lograrán solamente con sistemas de expresión de células de mamífero. Las levaduras suministran un patrón de glicosilación distintivo. La expresión de célula procariótica (por ejemplo E. coli) producirá generalmente polipéptidos sin glicosilación.

Una “secuencia de nucleótidos” se refiere a un polinucleótido de la forma de un fragmento separado o como un componente de una construcción de ADN mayor, que se ha derivado de ADN o ARN aislado al menos una vez en forma sustancialmente pura (es decir libre de materiales endógenos contaminantes) y en una cantidad o concentración que posibilita la identificación, manipulación, y recuperación de sus secuencias de nucleótido componente mediante métodos bioquímicos estándar (tales como aquellos destacados en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed.. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)). Tales secuencias se suministran preferiblemente en la forma de una estructura de lectura abierta ininterrumpida por secuencias no traducidas internas, o intrones que están típicamente presentes en los genes eucarióticos. Las secuencias del ADN no traducido pueden estar presentes 5’ o 3’ desde una estructura de lectura abierta, donde la misma no interfiere con la manipulación o expresión de las regiones codificantes.

“Vector de expresión recombinante” se refiere a un plásmido que comprende una unidad transcripcional que comprende un montaje de (1) un elemento genético o elementos que tienen un papel regulador en la expresión del gen, por ejemplo, promotores o mejoradores, (2) una secuencia estructural o codificante que codifica IL-15 o una muteína IL-15, y (3) las secuencias de iniciación de trascripción y traducción apropiadas y, si se desea, las secuencias de terminación. Los ejemplos representativos de varios elementos reguladores que se pueden utilizar como se discute adelante (ver Técnicas de ADN Recombinante). Los elementos estructurales destinados para uso en sistemas de expresión de levadura incluyen preferiblemente una secuencia líder que posibilita la secreción extracelular del polipéptido traducido por una célula huésped de levadura. Alternativamente, en un sistema de expresión bacteriano, el polipéptido recombinante puede incluir un residuo de metionina N-terminal. El residuo de metionina n-terminal puede ser subsecuentemente clivado del polipéptido recombinante expresado para suministrar un producto adecuado para purificación adicional.

“Sistema de expresión microbiano recombinante” se refiere a un monocultivo sustancialmente homogéneo de microorganismos huéspedes adecuados, por ejemplo, bacterias, tales como E. coli, o levaduras tales como S. cerevisiae, que tienen establemente integrada una unidad transcripcional recombinante en un ADN de cromosoma o llevan la unidad transcripcional recombinante como un componente de un plásmido residente. De manera general, las células huésped que constituyen un sistema de expresión microbiano recombinante son la progenie de las células transformada ancestral simple. Los sistemas de expresión microbianos recombinantes expresarán polipéptidos heterólogos luego de la inducción de los elementos reguladores ligados a una secuencia de nucleótido estructural para ser expresada.

4 Las moléculas IL-15 de simio maduras, o nativas tienen la secuencia de aminoácidos 49-162 de la SEQ. ID. NO: 1 o las moléculas IL-15 tienen la secuencia de los aminoácidos 49-162 de la SEQ. ID. NO: 2. Preparación del IL-15 El IL-15 humano de simio se puede obtener de acuerdo a los procedimientos descritos por Grabstein et al., Science, 264: 965 (1994), que se han incorporado aquí como referencia, o por medio de procedimientos convencionales tales como la reacción de cadena de polimerasa (PCR). Un depósito de cADN IL-15 humano fue hecho con el American Type Culture Collection, Rockville, MD, USA (ATCC) en Febrero 19,1993 y se le asignó el número de acceso 69245. El depósito fue denominado “141-hETF”. El depósito fue hecho de acuerdo a los términos del Tratado de Budapest.

Se cree la Asp56 afecta la unión con la subunidad β y que el Gln156 afecta la unión con la

subunidad γ del complejo receptor IL-15.

La producción recombinante del IL-15 requiere primero aislamiento del clon de ADN (es decir, cADN) que codifica un IL-15. Los clones de cADN se derivan de células primarias o de líneas celulares que expresan los polipéptidos IL-15 de mamífero. Primero el ARN de la célula total se aísla, luego la librería de cADN se hace del mARN mediante transcripción inversa. Un clon de cADN se puede aislar e identificar utilizando la información de la secuencia de ADN suministrada aquí para diseñar una sonda de hibridización de especies cruzadas o un iniciador PCR como de describió anteriormente. Tales clones cADN tienen la secuencia de los ácidos nucleicos 1-486 de la SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

El cADN aislado está preferiblemente en la forma de una estructura de lectura abierta no interrumpida por secuencias no traducidas internas, o intrones. El ADN genómico que contiene las secuencias de nucleótido relevantes que codifican los polipéptidos IL-15 de mamífero también se pueden utilizar como una fuente de información genética útil en construir secuencias codificantes.

Los vectores de expresión recombinante incluyen fragmentos de ADN sintéticos o derivados de cADN que codifican un IL-15. El ADN que codifica un IL-15 está operablemente ligado a una secuencia de nucleótido reguladora o estructural transcripcional o transduccional adecuada, tal como aquella derivada de genes de mamífero, microbios, virus o insectos. Ejemplos de secuencias reguladoras incluyen, por ejemplo, una secuencia genética que tiene un papel regulador en la expresión del gen (por ejemplo promotores transcripcionales o mejoradores), una secuencia de operador opcional para controlar la trascripción, una secuencia que codifica los sitios de unión ribosomal de mARN adecuados, y las secuencias apropiadas que controlan la iniciación y terminación de la trascripción y la transducción. Las secuencias de nucleótido están operablemente ligadas cuando la funcionalidad de la secuencia reguladora se relaciona con el gen estructural. Por ejemplo, una secuencia de ADN para un péptido de señal (líder secretor) puede estar operablemente ligado a una secuencia de ADN de gen estructural para un IL-15 si el péptido de señal se expresa como parte de una secuencia de aminoácido precursora y participa en la secreción de un IL-15. Además, la secuencia de nucleótido promotora está operablemente ligada a una secuencia codificante (por ejemplo, ADN de gen estructural) si la secuencia de nucleótido promotora controla la transcripción de la secuencia de nucleótido del gen estructural. Aún más, el sitio de unión del ribosoma puede estar operablemente ligado a una secuencia codificante de nucleótido de gen estructural para el IL-15 si el sitio de unión de ribosoma se ubica dentro del vector para promover la traducción.

Las células huésped adecuadas para la expresión de un IL-15 incluyen células procariotas, levaduras o células eucarióticas superiores bajo el control de los promotores apropiados. Las procariotas incluyen organismos gram negativos o gram positivos, por ejemplo E. coli o bacilos. Las células huéspedes procarióticas adecuadas para la transformación incluyen, por ejemplo, E. coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, y varias otras especies dentro del género Pseudomonas, Streptomyces, y Staphylococcus. Como se discute con mayor detalle adelante, ejemplos de células huéspedes adecuadas también incluyen levaduras tales como S. cerevisiae, una línea celular de mamífero tal como células de ovario de hámster chino (CHO), o células de insecto. Los sistemas de traducción libres de célula también se pueden emplear para producir un IL-15 utilizando los ARN derivados de las construcciones de ADN descritas aquí. Los vectores de clonación y expresión apropiados para uso con huéspedes celulares bacteriano, de insecto, levadura y de mamífero se describen, por ejemplo en Pouwels et al. Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, New York, 1985.

Cuando un IL-15 se expresa en una célula huésped de levadura, la secuencia de nucleótido (por ejemplo el gen estructural que codifica un IL-15 puede incluir una secuencia líder. La secuencia líder puede posibilitar la secreción extracelular mejorada del polipéptido traducido por medio de una célula huésped de levadura.

El IL-15 se puede expresar en las células huésped de levadura, preferiblemente del género Saccharomyces (por ejemplo, S. cerevisiae). Otros géneros de levadura tales como Pichia o Kluyveromyces, también se pueden emplear. Los vectores de levadura contendrán a menudo un origen de la secuencia de replicación de un plásmido de levadura 2 μ, una secuencia autónomamente replicante (ARS), una región promotora, secuencias para poliadenilación, y secuencias para terminación de transcripción. Preferiblemente los vectores de levadura incluyen un origen de secuencia de replicación y un marcador seleccionable. Las secuencias promotoras adecuadas para vectores de levadura inciten promotores para metalotioneína, fosfoglicerato quinasa (Hitzeman et al.,

J. Biol. Chem. 255: 2073, 1980) u otras enzimas glicolíticas (Hess et al., J. Adv. Enzyme Reg. 7: 149, 1968; y Holland et al., Biochem. 17: 4900, 1978), tal como enolasa, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, hexoquinasa, piruvato descarboxilasa, fosfofructoquinasa, glucosa-6-fosfato isomerasa, 3-fosfoglicerato mutasa, piruvato quinasa, triosefosfato isomerasa, fosfoglucosa isomerasa, y glucoquinasa. Otros vectores y promotores adecuados para uso en expresión de levadura de describen adicionalmente en Hitzeman, EP-A-73,657.

Los vectores de levadura se pueden ensamblar, por ejemplo, utilizando secuencias de ADN del pBR322 para la selección y replicación de E, coli (gen Ampr y origen de replicación) otras secuencias de ADN de levadura que se puede incluir en una construcción de expresión de levadura incluyen un promotor ADH2 que reprime glucosa y un líder de secreción de factor α. El promotor ADH2 ha sido descrito por Russell et al. (J. Biol. Chem. 258: 2674,1982) y Beier et al. (Nature 300: 724,1982). La secuencia líder del factor α de levadura dirige la secreción del polipéptido heterólogo. La secuencia líder del factor α es a menudo insertada entre la secuencia promotora y la secuencia de gen estructural. Ver, por ejemplo, Kurjan et al., CeIl 30: 933, 1982; y Bitter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 5330, 1984. Una secuencia líder se puede modificar cerca al extremo 3’ por contener uno o más sitios de restricción. Esto facilitará la fusión de una secuencia líder al gen estructural.

Los protocolos de transformación de levadura son conocidos por aquellos expertos en la técnica. Uno de tales protocolos se describe por Hinnen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 1929, 1978. El protocolo de Hinnen et al. selecciona para transformantes Trp+ en un medio selectivo, en donde el medio selectivo consiste de 0.67% de base de nitrógeno de levadura, 0.5% de casamino ácidos, 2% de glucosa, 10 mg/ml de adenina y 20 mg/ml de uracilo.

6 Las células huésped de levadura transformada por los vectores que contienen la secuencia promotora ADH2 pueden crecer para inducir la expresión en un medio “rico”. Un ejemplo de un medio rico es aquel que consiste de 1% de extracto de levadura, 25 de peptona, y 1% de glucosa suplementado con 80 mg/ml de adenina y 80 mg/ml de uracilo. La represión del promotor ADH2 se pierde cuando la glucosa se agota del medio. Alternativamente, en una célula huésped procariótica, tal como E. coli, el IL-15 puede incluir un residuo de metionina N-Terminal para facilitar la expresión del polipéptido recombinante en una célula huésped procariótica. El Met N-Terminal puede ser escindido del IL-15 recombinante expresado. Los vectores de expresión recombinante que llevan la secuencia de nucleótido del gen estructural IL-15 recombinante son transferidos o transformados en un microorganismo huésped adecuado o en una línea celular de mamífero. Los vectores de expresión transfectados en células huéspedes procarióticas comprenden generalmente uno o más marcadores fenotipitos seleccionables. Un marcador fenotipito seleccionable es, por ejemplo, un gen que codifica proteínas que confieren resistencia antibiótica o que suministran un requerimiento autotrófico, y un origen de replicación reconocido por el huésped para asegurar la amplificación dentro del huésped. Otros vectores de expresión útiles para células huéspedes procarióticas incluyen un marcador seleccionable de origen bacteriano derivado de plásmidos comercialmente disponibles. Este marcador seleccionable puede comprender elementos genéticos del vector de clonación pBR322 (ATCC 37017). El pBR322 contiene genes para resistencia a ampicilina y tetraciclina y así suministra medios simples para identificar células transformadas. Las secciones de “estructuras” pBR322 se combinan con un promotor apropiado y una secuencia del gen estructural IL

15. Otros vectores comercialmente disponibles incluyen, por ejemplo, pKK223-3 (Farmacia Fine

Chemicals, Uppsala, Suecia) y pGEM1 (Promega Biotec, Madison, WI, USA). Las secuencias promotoras son utilizadas comúnmente para vectores de expresión de célula

huésped procariótica recombinante. Las secuencias promotoras comunes incluyen β-lactamasa (penicilinasa), sistema de promotor de lactosa (Chang et al., Nature 275:615, 1978; y Goeddel et al., Nature 281:544, 1979), sistema promotor de tritofano (trp) (Goeddel et al., Nud. Acids Res. 8:4057, 20 1980; y EPA 36,776) y el promotor (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1989)). Un sistema de expresión de célula huésped procariótica particularmente útil emplea un promotor λ PL de fago y una secuencia represora termolábil cl857ts. Los vectores de plásmido disponibles del American Type Culture Collection que incorporan derivados

del promotor λ PL incluyen el plásmido pHUB2 (residente en la cepa de E. coli JMB9 (ATCC 37092)) y pPLc28 (residente en E. coli RR1 (ATCC 53082)).

Los sistemas de cultivo de célula huésped de mamífero o insecto también se pueden emplear para expresar ejemplos recombinantes de IL-15 de líneas de célula huésped de mamífero adecuadas incluyen las líneas COS-7 de células de riñón de mono (Gluzman et al., Cell 23:175, (1981); ATCC CRL 1651), células L, células C 127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células CHO, células HeLa (ATCC CCL 2), y líneas celulares BHK (ATCC CRL 10). Los vectores de expresión de mamíferos adecuados incluyen elementos no transcriptos tales como un origen de replicación, una secuencia promotora, un mejorador ligado al gen estructural, otras secuencias no transcriptas de flanqueo 5' o 3', tales como los sitios de unión de ribosoma, un sitio de poliadenilación, un donador de empalme y sitios aceptadores, y secuencias de terminación transcripcional.

-Las secuencias de control transcripcional y traduccional en vectores de expresión de célula huésped de mamífero pueden ser suministrado por fuentes virales. Por ejemplo, las secuencias promotoras de célula de mamífero comúnmente utilizadas y las secuencias mejoradoras son derivadas de polioma. El adenovirus 2, virus de simio 40 (SV40), y citomegalovirus humano. Las secuencias de ADN derivadas del genoma viral SV40, por ejemplo, origen SV40, promotor temprano y tardío, mejorador, empalme, y sitios de poliadenilación se pueden usar para utilizar los otros elementos genéticos requeridos para la expresión de una secuencia de gen estructural en una célula huésped de mamífero. Los promotores virales tempranos y tardíos son particularmente útiles en razón a que ambos son fácilmente obtenidos de un genoma viral como un fragmento que también puede contener un origen viral de replicación (Fiers et al., Nature 273: 113, 1978). Los fragmentos SV40 más pequeños o más grandes también se pueden utilizar, siempre y cuando la secuencia de aproximadamente de 250 bp que se extiende desde el sitio Hind III hacia el Bgl localizado en el origen viral SV40 del sitio de replicación esté incluido.

Los vectores de expresión de mamíferos de ejemplo se pueden construir como se describió por Okayama y Berg (Mol. Cell. Biol. 3:280, 1983). Los vectores adicionales de expresión de mamífero útiles se describe en la solicitud de Patente U.S. Serie No. 07/480,694 presentada en febrero 14, 1990 y la Patente U.S. 5,350,683.

Purificación de IL-15 recombinante

En general, los polipéptidos IL-15 se pueden preparar al cultivar células huésped transformadas bajo condiciones de cultivo necesarias para expresar los polipéptidos IL-15. El IL-15 expresado resultante puede ser entonces purificado del medio de cultivo o de extractos de célula. Un IL-15 se puede concentrar utilizando un filtro de concentración de proteína comercialmente disponible, por ejemplo, una unidad de ultrafiltración Amicon o Millipore Pellicon. Con o son sin la etapa de concentración, los medios de cultivo se pueden aplicar a una matriz de purificación tal como un medio de cromatografía hidrófobo. La fenil sefarosa ® CL-4B (Pharmacia) es el medio preferido. Alternativamente, la resina de intercambio de anión no se puede emplear, por ejemplo, una matriz o sustrato que tiene grupos dietilaminoetil pendientes (DEAE). Las matrices pueden ser acrilamida, agarosa, dextrano, celulosa y otros tipos de comúnmente empleados en purificación de proteína. Alternativamente, se puede utilizar medio de filtración de gel.

Finalmente, una o más etapas de cromatografía líquida de alto desempeño de fase inversa (RP-HPLC) que emplean medios RP-HPLC hidrófobos, por ejemplo, gel de sílice que tiene butil pendiente u otros grupos alifáticos, se pueden emplear para purificar adicionalmente IL-15. Una columna de intercambio de catión de sefarosa S (Pharmacia) también se puede emplear como una etapa de intercambio de amortiguador final. Algunas o todas las etapas de purificación convencional anteriores, en varias combinaciones, también se puede emplear para suministrar una proteína recombinante sustancialmente homogénea.

La proteína recombinante producida en cultivo bacterial usualmente se aísla mediante la disrupción inicial de las células huésped, la centrifugación, extracción de los glóbulos de célula si es un polipéptido disoluble, o del sobrenadante si es un polipéptido soluble, seguido por una o más concentraciones, salteadas, intercambio de ión o etapas de cromatografía de exclusión de tamaño. Finalmente, RP-HPLC si se puede emplear para las etapas de purificación final. Las células microbianas pueden ser irrumpida por cualquier método conveniente, incluyendo el ciclo congelamiento – descongelamiento, sonicación, disrupción mecánica, o el uso de agentes lisantes de célula.

Las células huésped transformadas de levadura son empleadas preferiblemente para expresar un IL-15 como un polipéptido secretado. El polipéptido recombinante secretado de la fermentación de una célula huésped de levadura se puede purificar mediante métodos análogos a aquellos descritos por secuenciales para la purificaron del IL-2 humano recombinante sobre una columna HPLC preparativa.

Anticuerpos monoclonales contra IL-15

De acuerdo con la invención, se suministra un anticuerpo monoclonal contra IL-15 de SEQ. ID. NO: 1 o 2 como se definió aquí que interfiere con la unión del IL-15 a cualquiera de las subunidades α-, β-, o γ-del complejo receptor.

Dentro del contexto de la invención, el término "anticuerpo" se debe entender por incluir anticuerpos monoclonales, fragmentos de estos tales como los fragmentos F(ab')2 y Fab, así como también compañeros de unión recombinantemente producidos. La afinidad de un anticuerpo monoclonal o un compañero de unión se puede fácilmente determinar por un experto en la técnica (ver Scatchard, Ann. N. Y. Acad. Sci., 51: 660-672 (1949)). Los ejemplos específicos de tales anticuerpos monoclonales se suministran en el ejemplo 1 aquí.

En general, los anticuerpos monoclonales contra IL-15 se pueden generar utilizando el siguiente procedimiento. El IL-15 purificado, un fragmento de este, los péptidos sintéticos o las células que expresan IL-15 se pueden utilizar para generar anticuerpos monoclonales contra IL-15 utilizando técnicas conocidas per se, por ejemplo, aquellas técnicas descritas en la Patente U.S. 4,411,993. en resumen, los ratones son inmunizados con IL-15 como un inmunógeno emulsificado en un adyuvante de Freund completo o un adyuvante RIBI (RIBI Corp., 25 Hamilton, Montana), e inyectado en cantidades que varían desde 10-100 μg subcutánea o intraperitonealmente. Diez a doce días más tarde, los animales inmunizados son reforzados con IL-15 adicional emulsificado en un adyuvante de Freund incompleto. Los ratones son periódicamente reforzados posteriormente en un programa de inmunización semanal o bisemanal. Las muestras de suero son tomadas periódicamente mediante sangrado retro-orbital o escisión de punta de la cola para ensayar los anticuerpos IL-15 mediante ensayo dot blot, ELlSA (Ensayo Inmunosorbente Ligado a Enzima) o inhibición de la actividad IL-15 sobre células CTLL-2.

Luego de la detección de un tipo de anticuerpo apropiado a los animales positivos se les suministra una inyección intravenosa adicional de IL-15 en solución salina. Tres a cuatro días más tarde los animales son sacrificados, se cosechan las células del bazo, y las células del bazo son fusionadas en una línea celular de mieloma de murino, por ejemplo, NS1 preferiblemente P3x63Ag8.653 (ATCC CRL 1580). Las fusiones generan células de hibridoma, que son puestas en placas de microtítulo múltiples en un medio de cultivo HAT (hipoxantina, aminopterina y timidina) para inhibir la proliferación de células de mieloma no fusionadas e híbridos de mieloma.

Las células de hibridoma son seleccionadas mediante ELlSA por reactividad contra el IL-15 purificado o mediante las adaptaciones de las técnicas descritas en Engvall et al., Immunochem. 8: 871, 1971 y en la Patente U.S. 4,703,004. una técnica de selección preferida es la técnica ce captura de anticuerpo descrita en Beckmann et al., (J. Immunol. 144:4212, 1990). Las células de hibridoma positivas se pueden inyectar intraperitonealmente a los ratones Balb/c singénicos para producir ascitis que contienen altas concentraciones de anticuerpos monoclonales anti-IL-15. Alternativamente, las células de hibridoma, pueden ser cultivadas in vitro en recipientes o botellas de rodillo mediante varias técnicas. Los anticuerpos monoclonales producidos en ascitis de ratón se pueden purificar mediante precipitación de sulfato de amonio, seguido por cromatografía de exclusión de gel. Alternativamente, la cromatografía de afinidad basada en la unión del anticuerpo a la proteína A o proteína G también se puede utilizar, como lo puede la cromatografía de afinidad basada en unión IL

15.

9 Otros "anticuerpos" se puede preparar utilizando la descripción suministrada aquí, y así caen dentro del alcance de la invención. Los procedimientos utilizados para generar anticuerpos humanizados se pueden encontrar en la Patente U.S. No. 4,816,567 y WO 45 94/10332; los procedimientos para generar microcuerpos se pueden encontrar en la WO 94/09817; y los procedimientos para generar anticuerpos transgénicos se pueden encontrar en a GB 2 272 440, todos los cuales se incorporan aquí como referencia. Para determinar qué anticuerpos monoclonales son antagonistas, se prefiere el uso de un ensayo de selección. Un ensayo de proliferación CTLL-2 se prefiere para este propósito. Ver, Gillis y Smith, Nature 268:154 (1977), que se incorpora aquí como referencia. Los anticuerpos monoclonales de acuerdo con la invención encuentran uso, como se describió anteriormente y con más detalle adelante, para promover la supervivencia de aloinjerto y para el uso en el tratamiento de pacientes y en síndrome del injerto contra el hospedador. Otro uso creíble para los antagonistas incluyen el tratamiento de linfoma de leucemia de célula T adulta I-inducida por HTLV de fase tardía (virus linfotrópico de célula T humana), ver Burton et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 91: 4935 (1994). Otros usos creíbles incluyen la capacidad de prevenir la estimulación de célula B o célula T in vitro, estudio de la interacción del receptor-ligando, en kits de diagnóstico para enfermedades infecciosas y trastornos del tracto gastrointestinal. En virtud de la actividad los antagonistas de acuerdo con la invención, el nuevo uso de tales anticuerpos monoclonales para tratar ciertas enfermedades está dentro del alcance de la invención. Por ejemplo, se describe el uso de tales anticuerpos monoclonales para prevenir el rechazo de aloinjerto en un paciente necesitado de ello, y un uso para tratar GVHD en un paciente necesitado de ello, en el cual la composición farmacéutica comprende una cantidad de un anticuerpo monoclonal IL-15 como se definió aquí efectivo para inhibir la actividad de IL-15, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Los usos similares para tratar otras enfermedades se definen en las reivindicaciones anexas e incluyen, por ejemplo, linfomas, carcinomas, leucemias, rabdosarcomas, y ciertos trastornos autoinmunes tales como la artritis reumatoide. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo monoclonal generado contra IL-15 como se definió también están comprendidas por esta invención. Administración de anticuerpos monoclonales surgidos contra IL-15 La presente invención suministra composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo monoclonal como se definió aquí en un diluyente o vehículo adecuado. Un anticuerpo monoclonal IL-15 de la invención se puede formular de acuerdo con métodos conocidos utilizados para preparar composiciones farmacéuticamente útiles. Un anticuerpo monoclonal IL-15 se puede combinar en mezcla, bien sea como un material activo solo o con otros materiales activos conocidos, con diluyentes farmacéuticamente adecuados (por ejemplo, Tris-HCI, acetato, fosfato), preservativos, (por ejemplo, Timerosal, bencil alcohol, parabenos), emulsificadores, solubilizadores, adyuvantes y/o vehículos. Los vehículos adecuados y sus formulaciones se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16 ed. 1980, Mack Publishing Co. Además, tales composiciones pueden contener un anticuerpo monoclonal IL-15 complejado con iones metálicos de polietilenglicol (PEG) o incorporados en compuestos poliméricos tal como ácido poliacético, ácido poliglicólico, hidrogeles, etc., o incorporados en liposomas, microemulsiones, micelas, vesículas unilamelares o multilamelares, fantasmas de eritrocito o esferoblastos. Tales composiciones influenciarán el estado físico, la solubilidad estabilidad, proporción de liberación in vivo, y proporción de limpieza en vivo de un anticuerpo monoclonal IL-15. Un anticuerpo monoclonal IL-15 también se puede conjugar a los

anticuerpos contra los receptores específicos de tejido, los ligandos o los antígenos, o acoplado a los ligandos o a los receptores específicos de tejido.

Los anticuerpos monoclonales IL-15 de la invención se pueden administrar tópicamente, parenterálmente, rectálmente o mediante inhalación. El término "parenteral" incluye inyecciones subcutáneas, intravenosas, intramusculares, inyección intracisternal, o técnicas de infusión. Estas composiciones contendrán típicamente una cantidad efectiva de un anticuerpo monoclonal IL-15 solo

o en combinación con una cantidad efectiva de cualquier otro material activo. Tales dosis y concentraciones de droga deseadas contenidas en las composiciones pueden variar dependiendo de muchos factores, incluyendo el uso pretendido, el peso del cuerpo del paciente, la edad y la ruta de administración. Las dosis preliminares se pueden determinar de acuerdo a ensayos con animales, y el escalamiento de las dosis para administración en humanos se puede desarrollar de acuerdo a las prácticas aceptadas en la técnica.

Además de lo anterior, se suministran los siguientes ejemplos para ilustrar las modalidades particulares y no para limitar el alcance de la invención. EJEMPLO 1

Anticuerpos monoclonales contra IL-15

Este ejemplo describe el método utilizado para obtener tres anticuerpos monoclonales antiIL-15 que funcionan como antagonistas del IL-15. Todos los métodos son técnicas convencionales, excepto donde se anote.

Los ratones Balb/c fueron inyectados intraperitonealmente en dos ocasiones con intervalos de 3 semanas con 10 ug de IL-15 humano derivado de levadura en la presencia de adyuvante RIBI (RIBI Corp., Hamilton, Montana). El suero de ratón fue entonces ensayado mediante técnica de dot blot convencional, captura de anticuerpo (ABC) y ensayo de neutralización (ensayo CTLL-2) para determinar que animal fue mejor para fusionar. Tres semanas más tarde, a los ratones les fue dado un refuerzo intravenoso de 3 μg de IL-15 humano suspendido en PBS estéril. Tres días más tarde los ratones fueron sacrificados y las células de bazo fueron fusionadas con células de mieloma Ag8.653 (ATCC) seguido por los protocolos establecidos. En resumen, las células Ag8.653 fueron lavadas varias veces en medio libre de suero, y fusionadas a células de bazo de ratón a una proporción de tres células de bazo por una célula de mieloma. El agente fusionante fue 50% PEG: 10% DMSO 45 (Sigma). La fusión fue puesta en veinte placas de fondo plano de 96 pozos (Corning) que contienen medio de DMEM suplementado con HAT y a las que se les permitió crecer durante ocho días. Los sobrenadantes de los hibridomas resultantes fueron recolectados y agregados a una placa de 96 pozos durante 60 minutos que había sido primero recubierta con Ig de anti-ratón de cabra. Luego de los lavados, se agregó 125IL-15 a cada pozo, incubados durante 60 minutos a temperatura ambiente, y lavados cuatro veces. Los pozos positivos fueron autoradiografiados a -70.C utilizando una película Kodak X-Omat S los clones positivos fueron crecidos en cultivos de masa y los sobrenadantes fueron subsecuentemente purificados sobre una columna de proteína A (Pharmacia). Los clones designados como M110, M111 y M112 fueron cada uno subsecuentemente isotipiados como anticuerpos monoclonales IgG1. Los hibridomas que producen los anticuerpos monoclonales M110, M111 y M112 han sido depositados en el American Type Culture Collection, Rockville, MD, USA (A TCC). Todos los depósitos fueron hechos de acuerdo con los términos del Tratado de Budapest.

Los anticuerpos monoclonales generados se pueden ensayar para actividad antagonista IL-15 utilizando el ensayo CTLL-como se describió esencialmente por GiIIis, el al., Id. 7. EJEMPLO 2

Inhibición de la Actividad IL-15 en Ensayos CTLL-2

11 Este ejemplo ilustra adicionalmente un método para determinar la prevención mediante los antagonistas de acuerdo con la invención de la transducción de señal del IL-15 a través de las

subunidades receptoras β y γ del complejo receptor IL-15. La actividad antagonista de los anticuerpos monoclonales se puede evaluar utilizando un

5 ensayo de incorporación de 3H-timidina de célula CTLL-2 modificada (Gillis, et al., Id.). Las diluciones en serie de los antagonistas se pueden hacer en placas de cultivo de tejido de fondo plano de 96 pozos (Costar, Cambridge, MA) en medio de DMEM (suplementadas con 5% de FCS, NEAA, NaPiruvato, HEPES pH 7.4, 2-me, PSG) a un volumen final de 50 μl. una cantidad sub-óptima de IL15 (concentración final de 20-40 pg/ml) se agrega luego a todos los pozos de ensayo (5 μl/pozo) 10 después de la dilución en serie de las muestras y antes de la adición de las células. Las células CTLL-2 lavadas se agregan (aproximadamente 2000 por pozo en 50 μl) y las placas se incuban durante 24 horas a 37º C en un atmósfera humidificada de 10% de CO2 en aire. Esta fue seguida por una incubación de 5 horas con 0.5 μCi de 3H-timidina (25 Ci/mmol, Amersham, Arlington Heights, IL). Los cultivos son entonces cosechados sobre filtros de fibra de vidrio y contados mediante ionización 15 de gas de avalancha sobre un contador β directo multidetector (Matrix 96, Packard Instrument Company, Meridien, CT) o sobre un contador de centelleo β. Los conteos por minuto (CPM)

generados por el ensayo son convertidos a inhibición porcentual y los valores de inhibición porcentual de cada muestra de antagonista titulados se utilizan para calcular la actividad de antagonista en unidades/ml.

20 Los datos que muestran la concentración necesaria para neutralizar 40 pg/ml del IL-15 en un ensayo de inhibición de CTLL se suministra en la Tabla I de adelante. En la Tabla II de adelante se muestra la actividad IL-15 (actividad agonista) en CTLL y en ensayos de inhibición CTLL.

25 Tabla 1

Actividad Específica de los Antagonistas IL-15 La concentración del antagonista requerido para neutralizar 40 pg/ml de IL-15 en ensayo de inhibición CTLL:

Antagonista Concentración Método de determinación de proteína M110, M111 5 ng/ml OD M112 40 ng/ml OD

OD = absorbancia de densidad óptica a 280 mm; coeficiente de extinción de 1.35

Tabla 2 Actividad de IL-15 en CTLL y Ensayos de Inhibición CTLL

Muestra IL-15: Unidades de ensayo CTLL/ml (Actividad Agonista) 7.09 X 105 Unidades de ensayo de inhibición CTLL/ml (Actividad Antagonista) 279

IL-15: 3.7 X 108 NA

IL-15: 5.6 X 108 NA

NA: no ensayado

LISTA DE SECUENCIA 5

(1) INFORMACIÓN GENERAL

(i): SOLICITANTE: Grabstein, Kenneth Paxton, Raymond Pettit, Dean

(ii): TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Antagonistas de IL-15

(iii) NÚMERO DE SECUENCIAS: 10 10 (iv) DIRECCIÓN DE CORRESPONDENCIA:

(A): DESTINATARIO: Immunex Corporation

(B): CALLE: 51 University Street

(C): CIUDAD: Seattle

(D): ESTADO: Washington 15 (E) PAÍS: USA

(F) ZIP: 98101

(v) FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:

(A) TIPO DE MEDIO: Floppy disk

(B): COMPUTADORA: Apple Macintosh 20 (C) SISTEMA OPERATIVO System 7, Word 5.1a

(D) SOFTWARE: Patentin Release #1.0, Versión #1.25

(vi) DATOS DE APLICACIÓN HABITUAL:

(A) NÚMERO DE SOLICITUD: -por ser asignada’

(B): FECHA DE PRESENTACIÓN: 21-FEB-1996 25 (C) CLASIFICACIÓN:

(viii) INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE:

(A): NOMBRE: Malaska, Stephen L.

(B): NÚMERO DE REGISTRO: 32,655

(C): REFERENCIA/NÚMERO DE REFERENCIA: 2831-WO 30 (ix) INFORMACIÓN PARA TELECOMUNICACIÓN:

(A) TELÉFONO: 206-587-0430

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 1:

(i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

(A): LONGITUD: 486 pares base 35 (B) TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple

(D): TOPOLOGÍA: lineal

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(iii) HIPOTÉTICA: NO 40 (iv) ANTISENTIDO: NO

(ix) CARACTERÍSTICAS:

(A): NOMBRE/CLAVE: CDS

(B): LOCALIZACIÓN: 1..342

(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:

imagen1

5 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 2:

(i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

(A): LONGITUD: 489 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple 10 (D) TOPOLOGÍA: lineal

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(ix): CARACTERÍSTICAS:

(A): NOMBRE/CLAVE: CDS (B) LOCALIZACIÓN: 1..489 15 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 3:

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: 5 (A) LONGITUD: 27 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple

(D): TOPOLOGÍA: lineal

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: cADN 10 (iii) HIPOTÉTICA: NO

(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3: AATGTAATAA GTTGTTTGAA AAAAATT 27

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 4:

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: 15 (A) LONGITUD: 27 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple

(D): TOPOLOGÍA: lineal

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4: AATGTAATAA GTTCTTTGAA AAAAATT 27

(2): INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 5:

(i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

(A): LONGITUD: 24 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple

(D): TOPOLOGÍA: lineal

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(iii) HIPOTÉTICA: NO

(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5: GTTGATGAAC ATGCAGACAA TATG 24

(2): INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 6:

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

(A): LONGITUD: 24 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple

(D): TOPOLOGÍA: lineal

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(iii) HIPOTÉTICA: NO

(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6: GTTGATGAAC ATAGAGACAA TATG 24

(2): INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 7:

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

(A): LONGITUD: 39 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple

(D): TOPOLOGÍA: lineal

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(iii) HIPOTÉTICA: NO

(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7: GTCCTCGCAA CTAAGTCGAC TAACTGGGTG AATGTAATA 39

(2): INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 8:

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

(A): LONGITUD: 45 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple

(D): TOPOLOGÍA: lineal

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(iii) HIPOTÉTICA: NO

(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 8: GAGTCATTCT CGACTTGCGG CCGCACCAGA AGTGTTGATG AACAT 45

(2): INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 9:

(i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

(A): LONGITUD: 69 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico

(C): ENCADENAMIENTO: simple 5 (D) TOPOLOGÍA: lineal

imagen1

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(iii) HIPOTÉTICA: NO

(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 9:

AATATGGTAC CTTTGGATAA AAGAGACTAC AAGGACGACG 10 ATGACAAGAA CTGGGTGAAT GTAATAAGT 69

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 10:

(i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

(A) LONGITUD: 69 pares base

(B): TIPO: ácido nucleico 15 (C) ENCADENAMIENTO: simple

(D) TOPOLOGÍA: lineal

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: cADN

(iii) HIPOTÉTICA: NO

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 10: 20 GCGATATATC CATGGTCAAG AAGTGTTGAT GAACAT 36

Claims

1.: Un anticuerpo monoclonal surgido contra interleuquina-15 (IL-15) de las ID de SEC No.: ID NO: 1 o 2 que evita específicamente que el IL-15 haga transducción de una señal a través de las subunidades β o γ del complejo receptor IL-15.

2.: Un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en la reivindicación 1, en el cual el anticuerpo es humanizado.

3.: Un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en la reivindicación 1, en el cual el anticuerpo es transgénico.

4.: Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal como se definió en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

5.: Un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en el tratamiento de rechazo de trasplante de órgano, síndrome del injerto contra el hospedador, enfermedad autoinmune, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, linfoma, carcinoma, leucemia, rabdosarcoma, un trastorno dermatológico, un trastorno del tracto gastrointestinal, diabetes mellitus dependiente de insulina, un trastorno ocular, síndrome nefrótico idiopático/nefropatía membranosa idiopática, un linfoma de leucemia inducido por HT-LV-1.

6.: Un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en el tratamiento de artritis reumatoide.

7.: Un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en el tratamiento de un trastorno dermatológico.

8.: El uso de un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de rechazo de trasplante de órgano, síndrome del injerto contra el hospedador, enfermedad autoinmune, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, linfoma, carcinoma, leucemia, rabdosarcoma, un trastorno dermatológico, un trastorno del tracto gastrointestinal, diabetes mellitus dependiente de insulina, un trastorno ocular, síndrome nefrótico idiopático/nefropatía membranosa idiopática, un linfoma de leucemia inducido por HT-LV-1.

9.: El uso de un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de artritis reumatoide.

10.: El uso de un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno dermatológico.

11.: El uso de un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de síndrome del injerto contra el hospedador.

12.: El uso de un anticuerpo monoclonal como se reivindicó en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la elaboración de un medicamento para prolongar la supervivencia de un aloinjerto en un paciente.