EP0413700A1 - Neue alkylphosphono- und phosphoserine, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische mittel - Google Patents

Neue alkylphosphono- und phosphoserine, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische mittel

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EP0413700A1
EP0413700A1 EP89904069A EP89904069A EP0413700A1 EP 0413700 A1 EP0413700 A1 EP 0413700A1 EP 89904069 A EP89904069 A EP 89904069A EP 89904069 A EP89904069 A EP 89904069A EP 0413700 A1 EP0413700 A1 EP 0413700A1
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EP
European Patent Office
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general formula
serine
radical
compounds
chloroform
Prior art date
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Pending
Application number
EP89904069A
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English (en)
French (fr)
Inventor
Hans Brachwitz
Reinhild Schönfeld
Peter Langen
Friedrich Paltauf
Albin Hermetter
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hafslund Nycomed Pharma AG
Original Assignee
Hafslund Nycomed Pharma AG
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Publication date
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Priority claimed from DD31835988A external-priority patent/DD289892A7/de
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Pending legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/091—Esters of phosphoric acids with hydroxyalkyl compounds with further substituents on alkyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/113—Esters of phosphoric acids with unsaturated acyclic alcohols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/38—Phosphonic acids [RP(=O)(OH)2]; Thiophosphonic acids ; [RP(=X1)(X2H)2(X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/40—Esters thereof
    • C07F9/4071—Esters thereof the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/4075—Esters with hydroxyalkyl compounds
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • New alkylphosphono- and phosphoserines processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
  • the invention relates to new alkyl phosphono- and phosphoserines, processes for their preparation and their use.
  • the invention relates to compounds of the general formula I of the formula sheet in which R is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 carbon atoms, which is optionally substituted by halogen, the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 can be, where R 1 and R 2 each represent a hydrogen atom or an alkyl or acyl radical having 1-6 C atoms, or a radical OR ', where R' is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6-30 C atoms, which may optionally be substituted by the radicals OR 1 , SR 1 or NR 1 R 2 , where R 1 and R 2 have the meaning given above.
  • R denotes a straight-chain or branched, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 carbon atoms, preferably having 10 to 25 carbon atoms.
  • examples of such radicals are decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octadexyl, arachyl, 17-methyl-n-octadecyl radicals or the cis-9-n-octadecenyl radical.
  • These radicals can also be substituted by halogen, for example by Cl, Br, F or by the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 .
  • R 1 and R 2 mean independently of one another hydrogen or an alkyl or acyl radical having 1 to 6 carbon atoms, for example a methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, pentyl, Hexyl radical or for example a formyl, acetyl, propionyl, butyryl, i-butyryl radical.
  • R can furthermore denote the radical OR ', where R' represents a straight-chain or branched, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 C atoms, for example a decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octacedyl, 1, 7-methyl-n-octadecyl radicals or the cis-9-n-octadecenyl radical.
  • R' represents a straight-chain or branched, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 C atoms, for example a decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octacedyl, 1, 7-methyl-n-octadecyl radicals or the cis-9-n-octadecenyl radical.
  • radicals can optionally be substituted by the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 , where R 1 and R 2 independently of one another are hydrogen or an alkyl or acyl radical having 1-6 C atoms.
  • the alkylphosphono- and -phosphoserines have certain structural relationships with physiologically active naturally occurring phospholipids, e.g. B. phosphatidylserines. However, they differ from these in that they contain no glycerol component. Compared to the naturally occurring phosphatidylserines, the alkylphospho-and -phospho ⁇ oserines according to the invention have higher biostability. They represent potential cytostatics and virustatics.
  • the new alkylphosphono- or -phosphoserines can be prepared by a) a compound of the general formula II of the formula sheet in which R has the meaning given above and A and B is a hydroxyl group or if R is OR 'A is also halogen , preferably Cl and Br, and B may also be halogen, preferably Cl and Br, an alkoxy or aryloxy radical or, if appropriate, the salts of these compounds with a serine derivative of the general formula III of the formula sheet in which X is benzyl, t-butyl, phthalimidomethyl, isopropyl , Benzhydryl or another protective group which can be removed in the usual way,
  • Y is N-benzoyloxycarbonyl, Nt-butoxycarbonyl, N-phthaloyl or another protective group which can be split off in the usual way, optionally in the presence of a condensing agent to give compounds of the general Formula IV of the formula sheet is implemented, the protective groups are split off and the product is optionally converted into a salt or
  • C and D independently of one another are H or methyl and E is methyl and n is 2-6, in the presence of phospholipase D is reacted with L-serine.
  • the compounds of the general formula II of the formula sheet used as starting compounds can be prepared in a manner known per se by first synthesizing the dimethyl alkylphosphonate from the corresponding alkyl bromide R-Br and trimethyl phosphite, this by reaction with a mixture of trimethylsilyl chloride and sodium iodide in the trimethylsilyl ester transferred and hydrolyzed by exposure to water.
  • R is the radical OR '
  • phosphoric acid esters, phosphoric acid dihalides or phosphoric acid ester halides are used as starting compounds.
  • the corresponding phosphoric acid dichlorides can be obtained in a manner known per se by reacting alkyl alcohols with phosphorus oxychloride.
  • the compounds of the general formula II are generally reacted by converting the compounds into the salt of a base, for example pyridine, and then reacting this salt with the serine derivative.
  • the reaction is preferably carried out in the presence of a condensing agent, for example in the presence of 2,4,6-triisopropylbenzenesulfochloride under anhydrous conditions and preferably in the presence of an inert organic solvent.
  • a condensing agent for example in the presence of 2,4,6-triisopropylbenzenesulfochloride under anhydrous conditions and preferably in the presence of an inert organic solvent.
  • Pyridine is an example of a solvent.
  • the reactants are usually used in an equimolar amount, but it is also possible to use an up to four molar excess of serine derivative.
  • the reaction takes place at temperatures of about 5-60 ° C., preferably at room temperature.
  • the acid chloride still present is destroyed in the customary manner, for example by adding water in the reaction solution, and the product is isolated in the customary manner, for example by extraction with diethyl ether.
  • the compounds of the general formula IV of the formula sheet obtained in this way can be further purified before the protective groups are split off, for example by column chromatography on silica gel.
  • the protective groups are split off in a customary manner, for example by catalytic hydrogenolysis, hydrazinolysis, treatment with HCl or formic acid, preferably in an inert solvent.
  • the compounds of the general formula I of the formula sheet can then be isolated in a known manner and optionally further purified, for example by chromatography.
  • alkylphosphono- and -phosphoserines according to the invention can also be prepared enzymatically.
  • compounds of the general formula V of the formula sheet are reacted with LSerin in the presence of phospholipase D.
  • a solution or suspension of the compounds of the general formula V of the formula sheet with an excess of L-serine in an aqueous buffer system for example in an acetate or tris buffer solution at pH values of about 4-8.5, preferably 5-6, particularly preferably 5.6, in the presence of about 0.01-0.1 M and in the presence of phospholipase D with the addition of diethyl ether or a mixture of diethyl ether with another organic solvent, for example chloroform.
  • the reaction takes place at temperatures of about 5-60 ° C, preferably 35-45 ° C. During the reaction, the reaction mixture is stirred vigorously or shaken.
  • the reaction time is about 0.5-48 hours.
  • the enzyme phospholipase D is, for example, by adding a 0.1 M EDTA Solution deactivated and the compounds of general formula I of the formula sheet isolated in the usual way.
  • the new alkylphosphono- or -phosphoserines have a strong cytostatic and virustatic effect. To determine the cytostatic effect, the antiproliferative effect on Ehrlich ascites tumor cells was examined. It was found that the compounds according to the invention have excellent cytostatic activity.
  • the compounds of the general formula I of the formula sheet are intended for use in humans and can be administered in a customary manner, for example orally or parenterally. They are preferably administered orally, the daily dose being about 0.05 to 20 mg / kg of body weight, preferably 0.05 to 5 mg / kg of body weight.
  • the attending doctor can prescribe lower or higher doses outside this range.
  • the compounds of the formula I of the formula sheet can be administered alone or in conjunction with other pharmaceutically active substances, the content of the compounds of the general formula I of the formula sheet being between 0.1 and 99%.
  • the pharmaceutically active compounds are in a mixture with suitable inert auxiliaries and / or carriers or diluents, for.
  • suitable inert auxiliaries and / or carriers or diluents for.
  • the pharmaceutical preparations can be in solid form, for example as tablets, coated tablets, suppositories, capsules and the like.
  • semisolid form for example as ointments or in liquid form, for example as suspensions or emulsions. Otherwise they are sterilized and contain auxiliaries such as preservatives, stabilizers and emulsifiers, salt for changing the osmotic Druck u.
  • auxiliaries such as preservatives, stabilizers and emulsifiers, salt for changing the osmotic Druck u.
  • pharmaceutical preparations can contain the compounds according to the invention in combination with other therapeutically valuable substances.
  • the compounds according to the invention can be formulated, for example, together with the abovementioned auxiliaries and / or carriers or diluents to give combination preparations.
  • the residue obtained is extracted with 20 ml of diethyl ether and washed 3 ⁇ with 4 ml of diethyl ether.
  • the ethereal solutions are combined and concentrated in vacuo.
  • the residue is dissolved in chloroform and purified by column chromatography on 36 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck).
  • the chloroform used for column chromatography is saturated with 25% aqueous ammonia.
  • Elution is carried out with 300 ml chloroform, 250 ml chloroform / methanol, 98: 2, v / v, 200 ml chloroform / methanol, 95: 5, v / v, 500 ml chloroform / methanol, 90: 10, v / v, 400 ml chloroform / methanol, 80:20, v / v.
  • the fraction size is 22 ml.
  • n-hexadecylphospho-L-serine (diammonium salt) obtained is uniform by thin layer chromatography.
  • the visualization takes place with molybdate reagent as well as with ninhydrin spray.
  • the substance (30.8 mg) is chromatographed on 2 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The column is equilibrated with chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80: 20: 0.5, v / v / v. The substance is dissolved in the same mixture and added to the column.
  • Elution is carried out with 20 ml of chloroform / methanol 25% aqueous ammonia, 80: 20: 0.5 v / v / v, 20 ml of chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 75: 25: 0.5, v / v / V, 20 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 70: 30: 0.5, V / V / V, 20 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 65: 35: 0.5, V / V / V, 260 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 60: 40: 0.5, V / V / V.
  • the compound is obtained from fraction 7-13 (fraction size 20 ml) by concentration.
  • the two solutions are mixed and 581 mg (1.92 mmol) of triisopropylbenzenesulfochloride are added to the mixture, the reaction mixture is stirred under anhydrous conditions at room temperature for 24 hours, after which the mixture is concentrated in vacuo, redistilled with toluene and the residue is dried over phosphorus pentoxide in vacuo is then extracted with 15 ml of diethyl ether and washed three times with 4 ml of diethyl ether, the ether solutions are combined and concentrated in vacuo, and 118 mg of the n-hexadecylphosphonoserine derivative IV are obtained from the residue obtained by recrystallization from acetonitrile Column chromatography on 8 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck) ended chloroform and the solvent mixtures for the eluent contain 0.5% aqueous 25% ammonia.
  • the reaction mixture is then concentrated in vacuo and the residue is mixed with a mixture of 10 ml of chloroform / methanol, 2: 1, v / v, 1 ml of water and 0.02 ml of 25% aqueous ammonia, shaken and, after phase separation, the resulting organic Phase separated.
  • the aqueous phase is extracted three times with 5 ml of chloroform / methanol / water, 2: 1: 0.18, v / v / v, the organic solutions are combined and concentrated in vacuo.
  • To remove residual water repeated distillation with 1 ml of benzene / ethanol, 2: 3, V / V.
  • the product obtained, hexadecylphosphono-L-serine I is dried over phosphorus pentoxide in vacuo and then washed with acetone.
  • the substance is chromatographed on 2.2 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The column is washed with chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80:20. 0.5, V / V / V equilibrated.
  • Elution is carried out with 20 ml of chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80: 20: 0.5, v / v / v, 20 ml of chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 75: 25: 0.5, v / V / V, 20 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 70: 30: 0.5, V / V / V, 20 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 65: 35: 0.5 , V / V / V, 200 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 60: 40: 0.5, V / V / V.
  • the visualization takes place with molybdate reagent and with ninhydrin reagent.

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Description

Neue Alkylphosphono- und phosphoserine, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Mittel
Beschreibung
Die Erfindung betrifft neue Alkylphosphono- und -phosphoserine, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung.
In R. Hirt, R. Berchthold Pharmaceutica Acta Helvetica, 33 (1958), 349 - 356 ist ein Herstellungsverfahren von Alkylphosphocholinen beschrieben. Die cytostatische Wirksamkeit bzw. die Toxizität von Hexadecylphosphocholin wird in H.R. Scherf et al, Lipids 22, (1987), 927 - 929, in C . Muschol et al, Lipids 22, (1987) 930 - 934 beschrieben.
Es konnten nun neue Alkylphosphono- und -phosphoserine gefunden werden, die eine ausgezeichnete cytostatische und virustatische Wirkung aufweisen.
Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes, in der R einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, der gegebenenfalls durch Halogen, die Reste OR 1, SR 1, NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 jeweils ein Wasserstoffatom oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeuten, oder einen Rest OR' bedeutet, wobei R' einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, der gegebenenfalls durch die Reste OR1, SR1oder NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 die oben genannte Bedeutung haben.
In der Formel I bedeutet R einen geradkettigen oder verzweigten, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, vorzugsweise mit 10 - 25 C-Atomen. Beispiele für solche Reste sind Decyl-, Dodecyl-, Tetradecyl-, Hexadecyl-, Octadexyl-, Arachyl-, 17-Methyl-n-octadecylreste oder der cis-9-n-Octadecenylrest. Diese Reste können auch durch Halogen, beispielsweise durch Cl, Br, F oder durch die Reste OR1 , SR1,NR1R2 substituiert sein. Ri und R2 bedeuten dabei unabhängig voneinander Wasserstoff oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen, beispielsweise einen Methyl-, Ethyl-, n-Propyl-, i-Propyl, n-Butyl-, iButyl-, Pentyl-, Hexylrest oder beispielsweise einen Formyl-, Acetyl-, Propionyl, Butyryl-, i-Butyrylrest. R kann weiters den Rest OR' bedeuten, wobei R' einen geradkettigen oder verzweigten, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 bis 30 C-Atomen bedeutet, beispielsweise einen Decyl-, Dodecyl-, Tetradecyl-, Hexadecyl-, Octacedyl-, 1,7-Methyl-n-octadecylreste oder den cis-9-n-Octadecenylrest.
Diese Reste können gegebenenfalls durch die Reste OR1, SR1, NR1R2 substituiert sein, wobei R1 und R2 unabhängig voneinander Wasserstoff oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeuten.
Die Alkylphosphono- und -phosphoserine weisen gewisse strukturelle Beziehungen zu physiologisch aktiven natürlich vorkommenden Phospholipiden, z. B. Phosphatidylserinen auf. Sie unterscheiden sich von diesen jedoch dadurch, daß sie keine Glycerolkomponente enthalten. Im Vergleich zu den natürlich vorkommenden Phosphatidylserinen weisen die erfindungsgemäßen Alkylphospho-und -phosphoπoserine höhere Biostabilität auf. Sie stellen potentielle Cytostatika und Virustatika dar.
Die neuen Alkylphosphono- bzw. -phosphoserine können hergestellt werden, indem man a) eine Verbindung der allgemeinen Formel II des Formelblattes, in der R die oben genannte Bedeutung hat und A und B eine Hydroxygruppe oder falls R den Rest OR' bedeutet A außerdem Halogen, vorzugsweise Cl und Br, und B außerdem Halogen, vorzugsweise Cl und Br, ein Alkoxy oder Aryloxyrest bedeuten kann oder gegebenenfalls die Salze dieser Verbindungen mit einem Serinderivat der allgemeinen Formel III des Formelblattes, in der X Benzyl, t- Butyl, Phthalimidomethyl, Isopropyl, Benzhydryl oder eine andere auf übliche Weise abspaltbare Schutzgruppe,
Y N-Benzoyloxycarbonyl, N-t-Butoxycarbonyl, N-Phthaloyl oder eine weitere auf übliche Weise abspaltbare Schutzgruppe bedeutet, gegebenenfalls in Anwesenheit eines Kondensationsmittels zu Verbindungen der allgemeinen Formel IV des Formelblattes umsetzt, die Schutzgruppen abspaltet und das Produkt gegebenenfalls in ein Salz überführt oder
b) eine Verbindung der allgemeinen Formel V des Formelblattes in der R die oben angegebene Bedeutung hat und Z, einen Alkylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeutet, der gegebenenfalls durch Cl, Br oder F substituiert sein kann oder die Reste
bedeuten, in der C und D unabhängig voneinander H, oder Methyl bedeuten und E Methyl bedeutet und n 2 - 6 bedeutet, in Gegenwart von Phospholipase D mit L-Serin umsetzt.
Die als Ausgangsverbindungen verwendeten Verbindungen der allgemeinen Formel II des Formelblattes, können in an sich bekannter Weise hergestellt werden, indem man aus den entsprechenden Alkylbromid R-Br und Trimethylphosphit zunächst die Alkylphosphonsäuredimethylester synthetisiert, diese durch Umsetzung mit einem Gemisch von Trimethylsilylchlorid und Natriumjodid in die Trimethylsilylester überführt und diese durch Wassereinwirkung hydrolysiert. Bedeutet R den Rest OR' werden Phosphorsäureester, Phosphorsäuredihalogenide oder Phosphorsäureesterhalogenide als Ausgangsverbindungen verwendet. Die entsprechenden Phosphorsäuredichloride können in an sich bekannter Weise durch Umsetzung von Alkylalkoholen mit Phosphoroxychlorid erhalten werden.
Die Umsetzung der Verbindungen der allgemeinen Formel II erfolgt im allgemeinen in der Weise, daß man die Verbindungen in das Salz einer Base, beispielsweise Pyridin überführt und dieses Salz anschließend mit dem Serin-Derivat umsetzt. Die Umsetzung erfolgt vorzugsweise in Gegenwart eines Kondensationsmittels, beispielsweise in Gegenwart von 2,4,6-Triisopropylbenzolsulfochlorid unter wasserfreien Bedingungen und vorzugsweise in Gegenwart eines inerten organischen Lösungsmittels. Als Lösungsmittel kommt beispielsweise Pyridin in Frage.
Die Reaktionspartner werden üblicherweise in äquimolarer Menge eingesetzt, es ist aber auch möglich einen bis zu viermolaren Überschuß an Serinderivat einzusetzen. Die Umsetzung erfolgt bei Temperaturen von etwa 5 - 60°C, vorzugsweise bei Raumtemperatur.
Nach Beendigung der Reaktion wird das noch vorhandene Säurechlorid auf übliche Weise, beispielsweise durch Zugabe von Wasser in der Reaktionslösung zerstört und das Produkt auf übliche Weise, beispielsweise durch Extraktion mit Diethylether, isoliert. Gegebenenfalls können die so erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel IV des Formelblattes vor der Abspaltung der Schutzgruppen, beispielsweise durch Säulenchromatographie an Kieselgel weiter gereinigt werden. Es ist aber auch möglich sie ohne weitere Reinigung in die Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes überzuführen.
Dazu werden die Schutzgruppen auf übliche Weise, beispielsweise durch katalytische Hydrogenolyse, Hydrazinolyse, Behandlung mit HC1 oder Ameisensäure, vorzugsweise in einem inerten Lösungsmittel abgespalten. Die Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes können anschließend in bekannter Weise isoliert und gegebenfalls weiter, beispielsweise chromatographisch gereinigt werden.
Die erfindungsgemäßen Alkylphosphono- und -phosphoserine können auch auf enzymatischem Weg hergestellt werden.
Hierbei werden Verbindungen der allgemeinen Formel V des Formelblattes mit LSerin in Gegenwart von Phospholipase D umgesetzt. Dazu wird eine Lösung oder Suspension der Verbindungen der allgemeinen Formel V des Formelblattes mit einem Überschuß von L-Serin in einem wässrigen Puffersystem, beispielsweise in einer Acetat- oder Trispufferlösung bei pH-Werten von etwa 4 -8,5, vorzugsweise 5 - 6, besonders bevorzugt 5,6, in Gegenwart von etwa 0,01 -0,1 M und in Gegenwart von Phospholipase D unter Zusatz von Diethylether oder einem Gemisch von Diethylether mit einem weiteren organischen Lösungsmittel, beispielsweise Chloroform umgesetzt.
Die Umsetzung erfolgt bei Temperaturen von etwa 5 - 60°C, vorzugsweise 35 - 45°C. Während der Reaktion wird das Reaktionsgemisch intensiv gerührt oder geschüttelt.
Die Reaktionsdauer beträgt etwa 0,5 - 48 Stunden. Nach beendeter Reaktion wird das Enzym Phospholipase D beispielsweise durch Zugabe einer 0,1 M EDTA- Lösung desaktiviert und die Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes auf übliche Weise isoliert.
Die neuen Alkylphosphono- bzw. -phosphoserine weisen eine starke cytostatische und virustatische Wirkung auf. Zur Bestimmung der cytostatischen Wirkung wurde die antiproliferative Wirkung bei Ehrlich-Ascites Tumorzellen untersucht. Dabei zeigte sich, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen ausgezeichnete cytostatische Wirkung aufweisen.
Sie können daher allein oder in Mischung mit anderen Wirksubstanzen in Form üblicher galenischer Zubereitungen als Cytostatika oder Virustatika eingesetzt werden.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes sind zur Verwendung an Menschen bestimmt und können auf übliche Weise, beispielsweise oral oder parenteral verabreicht werden. Vorzugsweise werden sie oral verabreicht, wobei die Tagesdosis etwa 0,05 bis 20 mg/kg Körpergewicht beträgt, vorzugsweise 0,05 - 5 mg/kg Körpergewicht. Der behandelnde Arzt kann jedoch abhängig vom Allgemeinzustand und dem Alter des Patienten, der entsprechenden Verbindung der allgemeinen Formel I des Formelblattes, der Art der Krankheit und der Art der Formulierung auch niedrigere oder höhere Dosen außerhalb dieses Bereiches verschreiben.
Die Verbindungen der Formel I des Formelblattes können allein oder in Verbindung mit anderen pharmazeutisch aktiven Substanzen verabreicht werden, wobei der Gehalt der Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes zwischen 0,1 und 99 % liegt. Im allgemeinen liegen die pharmazeutisch aktiven Verbindungen in einer Mischung mit geeigneten inerten Hilfs- und/oder Trägerstoffen oder Verdünnungsmitteln, z. B. pharmazeutisch unbedenklichen Lösungsmitteln, Gelatine, Gummi arabicum, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliche Öle, Polyalkylenglykol, Vaseline oder dgl. vor. Die pharmazeutischen Präparate können in fester Form, beispielsweise als Tabletten, Dragees, Suppositorien, Kapseln u. dgl., in halbfester Form beispielsweise als Salben oder in flüssiger Form, beispielsweise als Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Gegenenfalls sind sie sterilisiert und enthalten Hilfsstoffe wie Konservierungs-, Stabilisierungs-und Emulgiermittel, Salz zur Veränderung des osmotischen Drucks u. dgl. Insbesondere können pharmazeutische Präparate die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit anderen therapeutisch wertvollen Stoff enthalten. Mit diesen können die erfindungsgemäOen Verbindungen beispielsweise zusammen mit den oben genannten Hilfs-und/oder Trägerstoffe oder Verdünnungsmitteln zu Kombinationspräparaten formuliert werden.
Beispiel 1:
n-Hexadecylphospho-L-serin
0,8 g L-Serin (7,6 mmol) werden in 1,66 ml 0,1 M Acetatpuffer (pH 5,6), der 0,09 M an CaCl2 ist, bei 45°C gelöst.
Zu dieser Lösung werden 32 mg (0,075 mmol) n-Hexadecylphosphocholin 1,6 ml Diethylether/Chloroform (9 : 1, v/v, ethanolfrei) und 200 mg eines Phospholipase-D-Enzympräparates, das aus Weißkohl hergestellt wird, eine Aktivität von 0,9 U/ml (1 Unit (U) setzt bei 27°C 1 μmol Substrat pro Min. um) im Reaktionsgemisch aufweist. Das Gemisch wird 3 Stunden bei 45°C gerührt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur werden 3,31 ml 0,1 M EDTA-Lösung zugesetzt und durch Einleiten von Stickstoff die organischen Lösungsmittel entfernt. Die zurückbleibende wäßrige Phase wird mit dem 4,3fachen Volumen Chloroform/Methanol (5 : 8, v/v) 30 Minuten gerührt und vom Ungelösten (L-Serin) abgesaugt. Das Filtrat wird mit 1 Volumen Wasser und 3,7 Volumen Chloroform versetzt, die Mischung 10 Minuten geschüttelt, die organische Phase abgetrennt, im Vakuum eingeengt und der erhaltene Rückstand an Carboxymethylcellulose (CM 52 Whatman, Na+-Form) säulenchromatographisch getrennt. Die Elution erfolgt nacheinander mit 75 ml Chloroform, je 300 ml Chloroform/Methanol, 9 : 1, 8 : 2, 7 : 3, anschließend 1750 1 Chloroform/Methanol 1 : 1 (jeweils V/V). Fraktionsgröße beträgt 50 ml. Aus den Fraktionen 18 -40 werden 16 mg reines nHexadecylphospho-L-serin (Na-Salz) erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatte, CHCl3/CH3θH/Aceton/Essigsäure/H2θ, 50 : 10 : 20 : 10 : 5, V/V/V/V/V): Rf = 0,1
Beispiel 2:
n-Hexadecylphospho-L-serin
Eine Lösung von 0,219 g (0,679 mmol) n-Hexadecylphosphat (III, A = B = OH, R =
CI6H33) in 1,2 ml Pyridin wird im Vakuum eingeengt und das so erhaltene
Pyridiniumsalz über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Danach wird es in
11 ml wasserfreiem Pyridin gelöst.
0,806 g (2,17 mmol) geschütztes Serin (IV, X = CH(C6H5)2> Y = CO-OC(CH3)3), über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet, werden in 9 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. Die beiden Lösungen werden vermischt und zum Gemisch 1,32 g (4,35 mmol) Triisopropylbenzolsulfochlorid zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird unter wasserfreien Bedingungen bei Raumtemperatur 24 Stunden gerührt. Nach Zugabe von einigen Tropfen Wasser wird noch weitere 30 Minuten gerührt. Danach wird das Gemisch im Vakuum eingeengt und der Rückstand über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Der erhaltene Rückstand wird mit 20 ml Diethylether extrahiert und 3 × mit je 4 ml Diethylether nachgewaschen. Die Etheriösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in Chloroform gelöst und durch Säulenchromatographie an 36 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04 - 0,063 mm, 230 - 400 mesh, Merck) gereinigt. Das für die Säulenchromatographie verwendete Chloroform ist mit 25 %igem wäßrigem Ammoniak gesättigt. Eluiert wird mit 300 ml Chloroform, 250 ml Chloroform/Methanol, 98 : 2, V/V, 200 ml Chloroform/Methanol, 95 : 5, V/V, 500 ml Chloroform/Methanol, 90 : 10, V/V, 400 ml Chloroform/Methanol, 80 : 20, V/V. Die Fraktionsgröße beträgt 22 ml. Die Fraktionen 41 - 47 enthalten 152 mg nHexadecylphospho-N-t-butoxycarbonyl-L-serinbenzhydrylester (R = C16H33, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3), (Ammoniumsalz), Ausbeute 32 %. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/25 % wäßriges NH3, 65 : 5, V/V) : Rf = 0,7
61 mg (0,09 mmol) der beschriebenen Verbindung V werden im Vakuum über Phosphorpentoxid getrocknet und anschließend in 12 ml wasserfreiem Chloroform gelöst. Durch diese Lösung wird für 10 Minuten getrockneter Stickstoff und anschließend unter wasserfreien Bedingungen bei 0°C für 20 Minuten HCl-Gas geleitet. Danach wird das Reaktionsgefäß fest verschlossen und das Reaktionsgemisch 1 5tunde bei 0°C weitergerührt.
Zur Entfernung des HCl-Gases wird anschließend 1 Stunde lang bei Raumtemperatur Stickstoff durch das Reaktionsgemisch geleitet. Danach wird das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mit einer Mischung von 10 ml Chloroform/Methanol, 2 : 1, V/V 1 ml Wasser und 0,02 ml 25%igem wäßrigen Ammoniak vesetzt und nach Phasentrennung die anfallende organische Phase abgetrennt. Die wäßrige Phase wird 3x mit Chloroform/Methanol, 2 : 1, V/V extrahiert, die organischen Lösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Zur Entfernung des restlichen Wassers wird mehrmals mit 1 ml Benzen/Ethanol, 2 : 3, V/V, nachdestilliert. Das erhaltene Produkt wird über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet und danach mit Aceton gewaschen. Ausbeute: 30,8 mg (83 %).
Das erhaltene n-Hexadecylphospho-L-serin (Diammoniumsalz) ist dünnschichtchromatographisch einheitlich.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser, 10 : 2 : 4 : 2 : 1, V/V/V/V/V): Rf = 0,1.
Die Sichtbarmachung erfolgt mit Molybdatreagenz sowie mit Ninhydrinspray. Zur Entfernung von Spuren an NH4CI wird die Substanz (30,8 mg) an 2 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04 - 0,063 mm, 230 - 400 mesh, Merck) chromatographiert. Die Säule wird mit Chloroform/Methanol/ wäßrigem 25%igen Ammoniak, 80 : 20 : 0,5, V/V/V äquilibriert. In der gleichen Mischung wird auch die Substanz gelöst und auf die Säule gegeben. Eluiert wird mit 20 ml Chloroform/Methanol 25 %igem wäßrigen Ammoniak, 80 : 20 : 0,5 V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/25 %igem wäßrigen Ammoniak, 75 : 25 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/25 %igem wäßrigen Ammoniak, 70 : 30 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/25 %igem wäßrigen Ammoniak, 65 : 35 : 0,5, V/V/V, 260 ml Chloroform/Methanol/25 %igem wäßrigen Ammoniak, 60 : 40 : 0,5, V/V/V. Die Verbindung wird aus Fraktion 7 - 13 (Fraktionsgröße 20 ml) durch Einengen erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser, 10 : 2 : 4 : 2 : 1, V/V/V/V/V) : Rf = 0,1.
Beispiel 3:
n-Hexadecylphosphono-L-serin n-Hexadecylphosphonsäure
Eine Mischung aus n-Hexadecylbromid (4,89 g, 16 mmol) und frisch destilliertem Trimethylphosphit (2,48 g, 20 mmol) wird für 24 Stunden bei 116°C gerührt. Anschließend wird das überschüssige Trimethylphosphit im Vakuum abdestilliert und der Rückstand 24 Stunden über Phosphorpentoxid im Vakuum aufbewahrt. Der entsprechende n-Hexadexylphosphonsäuredimethylester wird aus dem Rückstand durch zweimalige Extraktion mit je 10 ml Methanol isoliert. Die beiden Methanolextrakte werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Der so erhaltene ölige, farblose Rückstand, der neben dem n-Hexadecylphosphonsäuremethylester noch n-Hexadecylbromid enthält, wird weiter umgesetzt in 4,7 ml wasserfreiem Acetonitril mit Trimethylsilylchlorid (1,02 g, 9,4 mmol) und Natriumjodid (1,4 g, 9,4. mmol). Die Umsetzung erfolgt unter Rühren bei Raumtemperatur und dauert
15 Minuten.
Das bei der Reaktion entstandene Natriumchlorid wird abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und der resultierende Rückstand wird mit 4 ml Wasser versetzt, wobei durch Hydrolyse n-Hexadecylphosphonsäure entsteht. Um das gleichzeitig gebildete Me3SiOSiMe3 zu entfernen, wird mehrmals mit Ethanol/Wasser (1 : 1, V/V) im Vakuum nachdestilliert. Nach Behandlung des Rückstandes mit 7 ml getrocknetem Aceton werden 346 mg n-Hexadexylphosphonsäure II erhalten. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Wasser, 65 : 25 : 4, V/V/V) : Rf = 0,15.
Elementaranalyse berechnet für C16H35PO3 (306,42): C 62,71, H 11,51; gefunden C 62,81, H 11,89 (%).
n-Hexadecylphosphono-N-t-butoxycarbonyl-L-serinbenzhydrylester Eine Lösung von 92 mg (0,3 mmol) n-Hexadecylphosphonsäure in 1 ml Pyridin wird im Vakuum eingeengt und das so erhaltene Pyridiniumsalz anschließend über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Danach wird es in 5 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. 356 mg (0,96 mmol) geschütztes Serin (X = CH(C6H5)2, Y = CO-O-C(CH3)3, über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet, werden in 4 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. Die beiden Lösungen werden vermischt und zum Gemisch 581 mg (1,92 mmol) Triisopropylbenzolsulfochlorid zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird unter wasserfreien Bedingungen bei Raumtemperatur 24 Stunden gerührt. Danach wird das Gemisch im Vakuum eingeengt, mehrfach mit Toluen nachdestilliert und der Rückstand über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Dieser wird anschließend mit 15 ml Diethylether extrahiert und dreimal mit 4 ml Diethylether nachgewaschen. Die Etherlösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Aus dem so erhaltenen Rückstand werden durch Umkristallisieren aus Acetonitril 118 mg des n-Hexadecylphosphonoserin-Derivat IV erhalten. Eine weitere Reinigung erfolgt durch Säulenchromatographie an 8 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04 - 0,063 mm, 230 -400 mesh, Merck). Das für die Chromatographie verwendete Chloroform und die Lösungsmittelgemische für die Eluϊeruπg enthalten 0,5 % wäßrigen 25%igen Ammoniak. Eluiert wird mit 50 ml Chloroform, 50 ml Chloroform/Methanol, 98 : 2, V/V, 200 ml Chloroform/Methanol, 95 : 5, V/V, 200 ml Chloroform/Methanol, 90 : 10, V/V. Die Fraktionsgröße beträgt 15 ml. Die Fraktionen 15 - 20 enthalten 72 mg reinen Hexadecylphosphono-N-t-butoxycarbonyl-L-serinbenzhydrylester. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol, 80 : 20, V/V): Rf =
0,2.
Elementaranalyse berechnet für C37H61N2PO7 (NH4-Salz, 676,87):
C 65,65 H 9,08, N 4,14; gefunden C 65,44, H 9,15 N 3,73 (%).
n-Hexadecylphosphono-L-serin
69 mg (0,1 mmol) der beschriebenen Verbindung werden im Vakuum über Phosphorpentoxid getrocknet und anschließend in 13 ml wasserfreiem Chloroform gelöst. Durch diese Lösung wird für 10 Minuten trockener Stickstoff und anschließend unter wasserfreien Bedingungen bei 0°C für 20 Minuten Chlorwasserstoffgas geleitet. Danach wird das Reaktionsgefäß fest verschlossen und 1 Stunde bei 0°C weitergerührt. Zur Entfernung des Chlorwasserstoffgases wird anschließend 1 Stunde lang bei Raumtemperatur Stickstoff durch das Reaktionsgemisch geleitet. Danach wird das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt und der Rückstand mit einer Mischung von 10 ml Chloroform/Methanol, 2 : 1, V/V, 1 ml Wasser und 0,02 ml 25 %igem wäßrigen Ammoniak versetzt, geschüttelt und nach Phasentrennung die anfallende organische Phase abgetrennt. Die wäßrige Phase wird dreimal mit je 5 ml Chloroform/Methanol/Wasser, 2 : 1 : 0,18, V/V/V, extrahiert, die organischen Lösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Zur Entfernung von restlichem Wasser wird mehrmals mit 1 ml Benzen/Ethanol, 2 : 3, V/V nachdestilliert. Das erhaltene Produkt, Hexadecylphosphono-L-serin I, wird über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet und danach mit Aceton gewaschen.
Ausbeute: 43 mg (95 %).
Zur Entfernung von Spuren an Ammoniumchlorid wird die Substanz an 2,2 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04 - 0,063 mm, 230 - 400 mesh, Merck) chromatographiert. Die Säule wird mit Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igen Ammoniak, 80 : 20 . 0,5, V/V/V äquilibriert. Eluiert wird mit 20 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igen Ammoniak, 80 : 20 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25%igen Ammoniak, 75 : 25 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igen Ammoniak, 70 : 30 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igem Ammoniak, 65 : 35 : 0,5, V/V/V, 200 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igen Ammoniak, 60 : 40 : 0,5, V/V/V. Die Verbindung wird aus den Fraktionen 7 - 19 durch Einengen erhalten. (Fraktionsgröße 20 ml). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser, 10 : 2 : 4 : 2 : 1, V/V/V/V/)V: Rf = 0,1.
Die Sichtbarmachung erfolgt mit Molybdatreagenz und mit Ninhydrinreagenz.
Elementaranalyse berechnet für C19H45N2PO6 (NH4-Salz, Monohydrat, 428,55) :
C 53,24, H 10,58, N 6,54; gefunden C 53,80, H 10,55, N 5,73 (%).
FAB-Massenspektrometrie:
Anϊonenspektrum: m/z 414, (M-2H+Na)-; m/z 392, (M-H)-; m/z 305 (M- CH2CH(NH2)COOH)-;
Kationsspektrum: m/z 416, (M+Na)+; m/z 438, (M+2Na)+.
Beispiel 4:
n-Hexadecylphosphono-L-serin
0,8 g L-Serin /7,6 mmol) werden in 1,52 ml 0,1 M Acetatpuffer (pH 5,6), der 0,09 M an CaCl2 ist, bei 45°C gelöst. Zu dieser Lösung werden 31 mg (0,075 mmol) n-Hexadecylphosphonocholin, 1,6 ml Diethylether/Chloroform (9 : 1, V/V, ethanolfrei) und 200 mg eines Phospholipase-D-Enzympräparates, das aus Weißkohl hergestellt, eine Aktivität von 0,9 U/ml (1 Unit (U) setzt bei 27°C 1 uMol Substrat pro Minute um) im Reaktionsgemisch aufweist. Das Gemisch wird 2,2 Stunden bei 45°C gerührt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur werden 3,31 ml 0,1 M EDTA-Lösung zugesetzt und druch Einleiten von Stickstoff die organischen Lösungsmittel entfernt. Die zurückbleibende wäßrige Phase wird mit dem 4,3fachen Volumen Chloroform/Methanol (5 : 8, V/V) 30 Minuten gerührt und vom Ungelösten (L-Serin) abgesaugt. Das Filtrat wird mit 1 Volumen Wasser und 3,7 Volumen Chloroform versetzt, die Mischung 10 Minuten geschüttelt, die organische Phase abgetrennt, im Vakuum eingeengt und der erhaltene Rückstand an Carboxymethylcellulose (CM 52 Whatman, Na+-Form) säulenchromatographisch getrennt. Die Elution erfolgt nacheinanden mit 75 ml Chloroform, je 300 ml Chloroform/Methanol, 9 : 1, 8 : 2, 7 : 3, anschließend 1750 ml Chloroform/Methanol, 1 : 1 (jeweils V/V). Die Fraktionsgröße beträgt 50 ml. Aus Fraktionen 20 - 39 werden 5 mg reines n-Hexadecylphosphono-L-serin (I, R = C16H33) erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatte, CHCI3/CH3OH/ Aceton/Essigsäure/H2O, 50 : 10 : 20 : 10 : 5, V/V/V/V//V: Rf = 0,1. Auf analoge Weise wurden weitere Verbindungen hergestellt.
Analog Beispiel 2 wurden folgende Verbindungen hergestellt.
Beispiel 5:
n-Decylphospho-L-serin
Aus n-Decylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y =
CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1.
Beispiel 6:
n-Dodecylphospho-L-serin
Aus n-Dodecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y =
CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1.
Beispiel 7:
n-Tetradecylphospho-L-serin
Aus n-Tetradecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y
= CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1.
Beispiel 8:
17-Methyl-n-octadecylphospho-L-serin
Aus 17-Methyl-n-octadecylphospho-L-serin und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1. Beispiel 9:
cis-9-n-Octadecenylphosρho-L-serin
Aus cis-9-n-Octadecenylphospho-L-serin und geschütztem Serin (Formel IV, X =
CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chlorof orm/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1.
Beispiel 10
Arachylphospho-L-serin
Aus Arachylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CHtCgHs^» Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/ Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1.
Beispiel 11
2-Chlor-n-hexadecylphospho-L-serin
Aus 2-Chlor-n-hexadecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OcCH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/ Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1.
Beispiel 12
2-Methoxy-n-tetradecyIphospho-L-serin
Aus 2-Methoxy-n-tetradecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/ Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1. Beispiel 13
2-Methylmercapto-n-tetradecylphospho-L-serin
Aus 2-Methylmercapto-n-tetradecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1.
Beispiel 14
2-Dimethylamino-n-tetradecylphospho-L-serin
Aus 2-Dimethylamino-n-tetradecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1.
Analog Beispiel 3 wurden folgende Verbindungen hergestellt:
Beispiel 15
n-Decylphosphono-L-serin
Aus n-Decylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y
= CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1.
Beispiel 16
n-Dodecylphosphono-L-serin
Aus n-Dodecylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2,
Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1. Beispiel 17
n-Tetradecylphosphono-L-serin
Aus n-Tetradedylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X =
CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essϊgsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1.
Beispiel 18
n-Octadecylphosphono-L-serin
Aus n-Octadecylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X =
CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1.
Beispiel 19
Arachylphosphono-L-serin
Aus Arachylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y
= CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):
Rf = 0,1.
Beispiel A
Konzentrationsabhängige Wachstumshemmung von Ehrlich-Ascites-Tumorzellen
Konzentration (M) 1 × 10-4 3 × 10-5 1 × 10-5 3 × 10-6
Hemmung (%) n-Hexadecylphosphor-L-serin 95,5 75,4 60,1 37,9 n-Hexadecylphospono-L-serin 89 45 13 9

Claims

Patentansprüche
1. Verbindungen der allgemeinen Formel I
in der R einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, der gegebenenfalls durch Halogen, die Reste OR 1, SR 1 NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 jeweils ein Wasserstoffatom oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeuten, oder einen Rest OR' bedeutet, wobei R' einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, der gegebenenfalls durch die Reste OR1, SR1oder NR1 R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 die oben genannte Bedeutung haben.
2. Verbindungen der allgemeinen Formel I
nach Anspruch 1, in der R einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlen wassersto ff rest mit 10 - 25 C- Atomen, der gegebenenfalls durch Halogen, die Reste OR1, SR1 NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 jeweils ein Wasserstoffatom oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeuten, oder den Rest OR', wobei R' einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 10 - 25 C-Atomen, der gegebenenfalls durch die Reste OR1 , SR1 oder NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 die oben genannte Bedeutung haben.
3. n-Hexadecylphospho-L-serin.
4. n-Hexadecylphospono-L-serin.
5. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I
dadurch gekennzeichnet, daß man a) eine Verbindung der allgemeinen Formel II
in der R die oben genannte Bedeutung hat und A und B eine Hydroxygruppe oder falls R den Rest OR' bedeutet A außerdem Halogen, vorzugsweise Cl und Br, und B außerdem Halogen vorzugsweise Cl und Br, ein Alkoxy oder Aryloxyrest bedeuten kann oder gegebenenfalls die Salze dieser Verbindungen mit einem Serinderivat der allgemeinen Formel III
in der X Benzyl, t-Butyl, Phthalimidomethyl, Isopropyl, Benzhydryl oder eine andere auf übliche Weise abspaltbare Schutzgruppe, Y N-Benzoyloxycarbonyl, N-t-Butoxycarbonyl N-Phthaloyl oder eine weitere auf übliche Weise abspaltbare Schutzgruppe bedeutet, gegebenenfalls in Anwesenheit eines Kondensationsmittels zu Verbindungen der allgemeinen Formel IV
umsetzt, die Schutzgruppen abspaltet und das Produkt gegebenenfalls in ein Salz überführt oder
b) eine Verbindung der allgemeinen Formel V
in der R die oben angegebene Bedeutung hat und Z, einen Alkylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeutet, der gegebenenfalls durch Cl, Br oder F substituiert sein kann oder die Reste
bedeuten, in der C und D unabhängig voneinander H, oder Methyl bedeuten und E Methyl bedeutet und n 2 - 6 bedeutet, in Gegenwart von Phospholipase D mit L-Serin umsetzt.
6. Pharmazeutische Mittel, enthaltend Verbindungen der allgemeinen Formel I nach Anspruch 1 in Kombination mit üblichen galenischen Hilfs-Träger und/oder Verdünnungsmitteln.
7. Pharmazeutische Mittel, enthaltend Verbindungen der allgemeinen Formel I nach Anspruch 1 in Kombination mit anderen therapeutischen Wirkstoffen sowie üblichen galenischen Hilfs-Träger und/oder Verdünnungsmitteln.
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5117034A (en) * 1989-10-24 1992-05-26 Fuji Photo Film Co., Ltd. Phosphatidylserine derivatives
EP0581793A1 (de) * 1991-04-25 1994-02-09 University Of British Columbia Phosphonate und phosphinate als wirkstoffe gegen krebs, entzündungen, allergien und myokarditis
US5369097A (en) * 1991-04-25 1994-11-29 The University Of British Columbia Phosphonates as anti-cancer agents
US5506217A (en) * 1991-04-25 1996-04-09 The University Of British Columbia Phosphonates as anti-cancer agents
DE4132344A1 (de) * 1991-09-27 1993-04-01 Max Planck Gesellschaft Verfahren zur herstellung eines arzneimittels zur oralen oder topischen verabreichung bei der behandlung von leishmaniasis
US6254879B1 (en) * 1991-09-27 2001-07-03 Max-Planck-Gessellschaft zun Förderung der Wissenschaften e.V. Methods of treating protozoal diseases
DE4229877C2 (de) * 1992-09-04 1994-09-15 Max Delbrueck Centrum Phospho- bzw. Phosphono-(N-acyl)-serine und ihre Herstellung
WO2003024423A1 (en) * 2001-09-18 2003-03-27 Vasogen Ireland Limited Apoptosis-mimicking synthetic entities and use thereof in medical treatment
US6878532B1 (en) 2003-04-28 2005-04-12 Sioux Biochemical, Inc. Method of producing phosphatidylserine
EP1963343A1 (de) * 2005-12-14 2008-09-03 Novo Nordisk A/S Die halbwertszeit verlängernde tags für polypeptide

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD238979A1 (de) * 1985-07-03 1986-09-10 Akad Wissenschaften Ddr Verfahren zur herstellung von o-alkylglycerophosphoserin-analogen
DD238978A1 (de) * 1985-07-03 1986-09-10 Akad Wissenschaften Ddr Verfahren zur herstellung von 2-o-alkyl-i-des oxy-1-halogenglycero-3-phospho-l-serinen
US4916249A (en) * 1985-07-03 1990-04-10 Hans Brachwitz Glycero-3(2)-phospho-L-serine derivatives and salts thereof
DD239405A1 (de) * 1985-07-15 1986-09-24 Akad Wissenschaften Ddr Verfahren zur herstellung von trifluoralkyl-glycerophospho-l-serinen
US4751320A (en) * 1985-11-27 1988-06-14 Kao Corporation Phosphoric ester and process for producing same
JPH064651B2 (ja) * 1985-11-27 1994-01-19 花王株式会社 リン酸エステルおよびその製造方法
DE3606633A1 (de) * 1986-02-28 1987-09-03 Max Planck Gesellschaft Neue phosphoverbindungen und diese enthaltende arzneimittel
JPH0761276B2 (ja) * 1986-11-14 1995-07-05 名糖産業株式会社 酵素法リン脂質−ｄ−セリン誘導体の製造法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO8910370A1 *

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Publication number Publication date
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