EP0413700A1 - New alkylphosphono- and phosphoserines, method for preparing them, and pharmaceutical substances containing them - Google Patents

New alkylphosphono- and phosphoserines, method for preparing them, and pharmaceutical substances containing them

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EP0413700A1
EP0413700A1 EP89904069A EP89904069A EP0413700A1 EP 0413700 A1 EP0413700 A1 EP 0413700A1 EP 89904069 A EP89904069 A EP 89904069A EP 89904069 A EP89904069 A EP 89904069A EP 0413700 A1 EP0413700 A1 EP 0413700A1
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EP
European Patent Office
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general formula
serine
radical
compounds
chloroform
Prior art date
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Pending
Application number
EP89904069A
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German (de)
French (fr)
Inventor
Hans Brachwitz
Reinhild Schönfeld
Peter Langen
Friedrich Paltauf
Albin Hermetter
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Hafslund Nycomed Pharma AG
Original Assignee
Hafslund Nycomed Pharma AG
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/091—Esters of phosphoric acids with hydroxyalkyl compounds with further substituents on alkyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/113—Esters of phosphoric acids with unsaturated acyclic alcohols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/38—Phosphonic acids [RP(=O)(OH)2]; Thiophosphonic acids ; [RP(=X1)(X2H)2(X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/40—Esters thereof
    • C07F9/4071—Esters thereof the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/4075—Esters with hydroxyalkyl compounds
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • New alkylphosphono- and phosphoserines processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
  • the invention relates to new alkyl phosphono- and phosphoserines, processes for their preparation and their use.
  • the invention relates to compounds of the general formula I of the formula sheet in which R is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 carbon atoms, which is optionally substituted by halogen, the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 can be, where R 1 and R 2 each represent a hydrogen atom or an alkyl or acyl radical having 1-6 C atoms, or a radical OR ', where R' is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6-30 C atoms, which may optionally be substituted by the radicals OR 1 , SR 1 or NR 1 R 2 , where R 1 and R 2 have the meaning given above.
  • R denotes a straight-chain or branched, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 carbon atoms, preferably having 10 to 25 carbon atoms.
  • examples of such radicals are decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octadexyl, arachyl, 17-methyl-n-octadecyl radicals or the cis-9-n-octadecenyl radical.
  • These radicals can also be substituted by halogen, for example by Cl, Br, F or by the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 .
  • R 1 and R 2 mean independently of one another hydrogen or an alkyl or acyl radical having 1 to 6 carbon atoms, for example a methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, pentyl, Hexyl radical or for example a formyl, acetyl, propionyl, butyryl, i-butyryl radical.
  • R can furthermore denote the radical OR ', where R' represents a straight-chain or branched, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 C atoms, for example a decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octacedyl, 1, 7-methyl-n-octadecyl radicals or the cis-9-n-octadecenyl radical.
  • R' represents a straight-chain or branched, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 C atoms, for example a decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octacedyl, 1, 7-methyl-n-octadecyl radicals or the cis-9-n-octadecenyl radical.
  • radicals can optionally be substituted by the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 , where R 1 and R 2 independently of one another are hydrogen or an alkyl or acyl radical having 1-6 C atoms.
  • the alkylphosphono- and -phosphoserines have certain structural relationships with physiologically active naturally occurring phospholipids, e.g. B. phosphatidylserines. However, they differ from these in that they contain no glycerol component. Compared to the naturally occurring phosphatidylserines, the alkylphospho-and -phospho ⁇ oserines according to the invention have higher biostability. They represent potential cytostatics and virustatics.
  • the new alkylphosphono- or -phosphoserines can be prepared by a) a compound of the general formula II of the formula sheet in which R has the meaning given above and A and B is a hydroxyl group or if R is OR 'A is also halogen , preferably Cl and Br, and B may also be halogen, preferably Cl and Br, an alkoxy or aryloxy radical or, if appropriate, the salts of these compounds with a serine derivative of the general formula III of the formula sheet in which X is benzyl, t-butyl, phthalimidomethyl, isopropyl , Benzhydryl or another protective group which can be removed in the usual way,
  • Y is N-benzoyloxycarbonyl, Nt-butoxycarbonyl, N-phthaloyl or another protective group which can be split off in the usual way, optionally in the presence of a condensing agent to give compounds of the general Formula IV of the formula sheet is implemented, the protective groups are split off and the product is optionally converted into a salt or
  • C and D independently of one another are H or methyl and E is methyl and n is 2-6, in the presence of phospholipase D is reacted with L-serine.
  • the compounds of the general formula II of the formula sheet used as starting compounds can be prepared in a manner known per se by first synthesizing the dimethyl alkylphosphonate from the corresponding alkyl bromide R-Br and trimethyl phosphite, this by reaction with a mixture of trimethylsilyl chloride and sodium iodide in the trimethylsilyl ester transferred and hydrolyzed by exposure to water.
  • R is the radical OR '
  • phosphoric acid esters, phosphoric acid dihalides or phosphoric acid ester halides are used as starting compounds.
  • the corresponding phosphoric acid dichlorides can be obtained in a manner known per se by reacting alkyl alcohols with phosphorus oxychloride.
  • the compounds of the general formula II are generally reacted by converting the compounds into the salt of a base, for example pyridine, and then reacting this salt with the serine derivative.
  • the reaction is preferably carried out in the presence of a condensing agent, for example in the presence of 2,4,6-triisopropylbenzenesulfochloride under anhydrous conditions and preferably in the presence of an inert organic solvent.
  • a condensing agent for example in the presence of 2,4,6-triisopropylbenzenesulfochloride under anhydrous conditions and preferably in the presence of an inert organic solvent.
  • Pyridine is an example of a solvent.
  • the reactants are usually used in an equimolar amount, but it is also possible to use an up to four molar excess of serine derivative.
  • the reaction takes place at temperatures of about 5-60 ° C., preferably at room temperature.
  • the acid chloride still present is destroyed in the customary manner, for example by adding water in the reaction solution, and the product is isolated in the customary manner, for example by extraction with diethyl ether.
  • the compounds of the general formula IV of the formula sheet obtained in this way can be further purified before the protective groups are split off, for example by column chromatography on silica gel.
  • the protective groups are split off in a customary manner, for example by catalytic hydrogenolysis, hydrazinolysis, treatment with HCl or formic acid, preferably in an inert solvent.
  • the compounds of the general formula I of the formula sheet can then be isolated in a known manner and optionally further purified, for example by chromatography.
  • alkylphosphono- and -phosphoserines according to the invention can also be prepared enzymatically.
  • compounds of the general formula V of the formula sheet are reacted with LSerin in the presence of phospholipase D.
  • a solution or suspension of the compounds of the general formula V of the formula sheet with an excess of L-serine in an aqueous buffer system for example in an acetate or tris buffer solution at pH values of about 4-8.5, preferably 5-6, particularly preferably 5.6, in the presence of about 0.01-0.1 M and in the presence of phospholipase D with the addition of diethyl ether or a mixture of diethyl ether with another organic solvent, for example chloroform.
  • the reaction takes place at temperatures of about 5-60 ° C, preferably 35-45 ° C. During the reaction, the reaction mixture is stirred vigorously or shaken.
  • the reaction time is about 0.5-48 hours.
  • the enzyme phospholipase D is, for example, by adding a 0.1 M EDTA Solution deactivated and the compounds of general formula I of the formula sheet isolated in the usual way.
  • the new alkylphosphono- or -phosphoserines have a strong cytostatic and virustatic effect. To determine the cytostatic effect, the antiproliferative effect on Ehrlich ascites tumor cells was examined. It was found that the compounds according to the invention have excellent cytostatic activity.
  • the compounds of the general formula I of the formula sheet are intended for use in humans and can be administered in a customary manner, for example orally or parenterally. They are preferably administered orally, the daily dose being about 0.05 to 20 mg / kg of body weight, preferably 0.05 to 5 mg / kg of body weight.
  • the attending doctor can prescribe lower or higher doses outside this range.
  • the compounds of the formula I of the formula sheet can be administered alone or in conjunction with other pharmaceutically active substances, the content of the compounds of the general formula I of the formula sheet being between 0.1 and 99%.
  • the pharmaceutically active compounds are in a mixture with suitable inert auxiliaries and / or carriers or diluents, for.
  • suitable inert auxiliaries and / or carriers or diluents for.
  • the pharmaceutical preparations can be in solid form, for example as tablets, coated tablets, suppositories, capsules and the like.
  • semisolid form for example as ointments or in liquid form, for example as suspensions or emulsions. Otherwise they are sterilized and contain auxiliaries such as preservatives, stabilizers and emulsifiers, salt for changing the osmotic Druck u.
  • auxiliaries such as preservatives, stabilizers and emulsifiers, salt for changing the osmotic Druck u.
  • pharmaceutical preparations can contain the compounds according to the invention in combination with other therapeutically valuable substances.
  • the compounds according to the invention can be formulated, for example, together with the abovementioned auxiliaries and / or carriers or diluents to give combination preparations.
  • the residue obtained is extracted with 20 ml of diethyl ether and washed 3 ⁇ with 4 ml of diethyl ether.
  • the ethereal solutions are combined and concentrated in vacuo.
  • the residue is dissolved in chloroform and purified by column chromatography on 36 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck).
  • the chloroform used for column chromatography is saturated with 25% aqueous ammonia.
  • Elution is carried out with 300 ml chloroform, 250 ml chloroform / methanol, 98: 2, v / v, 200 ml chloroform / methanol, 95: 5, v / v, 500 ml chloroform / methanol, 90: 10, v / v, 400 ml chloroform / methanol, 80:20, v / v.
  • the fraction size is 22 ml.
  • n-hexadecylphospho-L-serine (diammonium salt) obtained is uniform by thin layer chromatography.
  • the visualization takes place with molybdate reagent as well as with ninhydrin spray.
  • the substance (30.8 mg) is chromatographed on 2 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The column is equilibrated with chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80: 20: 0.5, v / v / v. The substance is dissolved in the same mixture and added to the column.
  • Elution is carried out with 20 ml of chloroform / methanol 25% aqueous ammonia, 80: 20: 0.5 v / v / v, 20 ml of chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 75: 25: 0.5, v / v / V, 20 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 70: 30: 0.5, V / V / V, 20 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 65: 35: 0.5, V / V / V, 260 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 60: 40: 0.5, V / V / V.
  • the compound is obtained from fraction 7-13 (fraction size 20 ml) by concentration.
  • the two solutions are mixed and 581 mg (1.92 mmol) of triisopropylbenzenesulfochloride are added to the mixture, the reaction mixture is stirred under anhydrous conditions at room temperature for 24 hours, after which the mixture is concentrated in vacuo, redistilled with toluene and the residue is dried over phosphorus pentoxide in vacuo is then extracted with 15 ml of diethyl ether and washed three times with 4 ml of diethyl ether, the ether solutions are combined and concentrated in vacuo, and 118 mg of the n-hexadecylphosphonoserine derivative IV are obtained from the residue obtained by recrystallization from acetonitrile Column chromatography on 8 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck) ended chloroform and the solvent mixtures for the eluent contain 0.5% aqueous 25% ammonia.
  • the reaction mixture is then concentrated in vacuo and the residue is mixed with a mixture of 10 ml of chloroform / methanol, 2: 1, v / v, 1 ml of water and 0.02 ml of 25% aqueous ammonia, shaken and, after phase separation, the resulting organic Phase separated.
  • the aqueous phase is extracted three times with 5 ml of chloroform / methanol / water, 2: 1: 0.18, v / v / v, the organic solutions are combined and concentrated in vacuo.
  • To remove residual water repeated distillation with 1 ml of benzene / ethanol, 2: 3, V / V.
  • the product obtained, hexadecylphosphono-L-serine I is dried over phosphorus pentoxide in vacuo and then washed with acetone.
  • the substance is chromatographed on 2.2 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The column is washed with chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80:20. 0.5, V / V / V equilibrated.
  • Elution is carried out with 20 ml of chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80: 20: 0.5, v / v / v, 20 ml of chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 75: 25: 0.5, v / V / V, 20 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 70: 30: 0.5, V / V / V, 20 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 65: 35: 0.5 , V / V / V, 200 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 60: 40: 0.5, V / V / V.
  • the visualization takes place with molybdate reagent and with ninhydrin reagent.

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Abstract

Des composés de formule générale (I) où R est un résidu hydrocarbure aliphatique à chaîne droite ou ramifiée, saturé ou insaturé avec 6 à 30 atomes de C, éventuellement substitué par de l'halogène, les résidus OR1 ou SR1NR1R2, R1 et R2 représentant chacun un atome d'hydrogène ou un résidu alkyle ou acyle avec 1 à 6 atomes de C, ou bien R est un résidu OR', R' étant un résidu hydrocarbure aliphatique à chaîne droite ou ramifiée, saturé ou insaturé avec 6 à 30 atomes de C, éventuellement substitué par les résidus OR1, SR1 ou NR1R2, R1 et R2 ayant la notation précitée, possèdent une excellente activité virustatique et cytostatique.Compounds of general formula (I) where R is an aliphatic hydrocarbon residue with straight or branched chain, saturated or unsaturated with 6 to 30 atoms of C, optionally substituted by halogen, the residues OR1 or SR1NR1R2, R1 and R2 representing each a hydrogen atom or an alkyl or acyl residue with 1 to 6 C atoms, or else R is an OR 'residue, R' being a saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon residue with straight or branched chain with 6 to 30 atoms of C, optionally substituted by the residues OR1, SR1 or NR1R2, R1 and R2 having the abovementioned notation, have an excellent virustatic and cytostatic activity.

Description

Neue Alkylphosphono- und phosphoserine, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Mittel New alkylphosphono- and phosphoserines, processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
Beschreibungdescription
Die Erfindung betrifft neue Alkylphosphono- und -phosphoserine, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung.The invention relates to new alkyl phosphono- and phosphoserines, processes for their preparation and their use.
In R. Hirt, R. Berchthold Pharmaceutica Acta Helvetica, 33 (1958), 349 - 356 ist ein Herstellungsverfahren von Alkylphosphocholinen beschrieben. Die cytostatische Wirksamkeit bzw. die Toxizität von Hexadecylphosphocholin wird in H.R. Scherf et al, Lipids 22, (1987), 927 - 929, in C . Muschol et al, Lipids 22, (1987) 930 - 934 beschrieben.R. Hirt, R. Berchthold Pharmaceutica Acta Helvetica, 33 (1958), 349-356 describes a production process for alkylphosphocholines. The cytostatic activity or toxicity of hexadecylphosphocholine is described in H.R. Scherf et al, Lipids 22, (1987), 927-929, in C. Muschol et al, Lipids 22, (1987) 930-934.
Es konnten nun neue Alkylphosphono- und -phosphoserine gefunden werden, die eine ausgezeichnete cytostatische und virustatische Wirkung aufweisen.New alkylphosphono- and -phosphoserines have now been found which have an excellent cytostatic and virustatic effect.
Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes, in der R einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, der gegebenenfalls durch Halogen, die Reste OR 1, SR 1, NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 jeweils ein Wasserstoffatom oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeuten, oder einen Rest OR' bedeutet, wobei R' einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, der gegebenenfalls durch die Reste OR1, SR1oder NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 die oben genannte Bedeutung haben.The invention relates to compounds of the general formula I of the formula sheet in which R is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 carbon atoms, which is optionally substituted by halogen, the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 can be, where R 1 and R 2 each represent a hydrogen atom or an alkyl or acyl radical having 1-6 C atoms, or a radical OR ', where R' is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6-30 C atoms, which may optionally be substituted by the radicals OR 1 , SR 1 or NR 1 R 2 , where R 1 and R 2 have the meaning given above.
In der Formel I bedeutet R einen geradkettigen oder verzweigten, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, vorzugsweise mit 10 - 25 C-Atomen. Beispiele für solche Reste sind Decyl-, Dodecyl-, Tetradecyl-, Hexadecyl-, Octadexyl-, Arachyl-, 17-Methyl-n-octadecylreste oder der cis-9-n-Octadecenylrest. Diese Reste können auch durch Halogen, beispielsweise durch Cl, Br, F oder durch die Reste OR1 , SR1,NR1R2 substituiert sein. Ri und R2 bedeuten dabei unabhängig voneinander Wasserstoff oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen, beispielsweise einen Methyl-, Ethyl-, n-Propyl-, i-Propyl, n-Butyl-, iButyl-, Pentyl-, Hexylrest oder beispielsweise einen Formyl-, Acetyl-, Propionyl, Butyryl-, i-Butyrylrest. R kann weiters den Rest OR' bedeuten, wobei R' einen geradkettigen oder verzweigten, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 bis 30 C-Atomen bedeutet, beispielsweise einen Decyl-, Dodecyl-, Tetradecyl-, Hexadecyl-, Octacedyl-, 1,7-Methyl-n-octadecylreste oder den cis-9-n-Octadecenylrest.In the formula I, R denotes a straight-chain or branched, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 carbon atoms, preferably having 10 to 25 carbon atoms. Examples of such radicals are decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octadexyl, arachyl, 17-methyl-n-octadecyl radicals or the cis-9-n-octadecenyl radical. These radicals can also be substituted by halogen, for example by Cl, Br, F or by the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 . R 1 and R 2 mean independently of one another hydrogen or an alkyl or acyl radical having 1 to 6 carbon atoms, for example a methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, pentyl, Hexyl radical or for example a formyl, acetyl, propionyl, butyryl, i-butyryl radical. R can furthermore denote the radical OR ', where R' represents a straight-chain or branched, saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 C atoms, for example a decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octacedyl, 1, 7-methyl-n-octadecyl radicals or the cis-9-n-octadecenyl radical.
Diese Reste können gegebenenfalls durch die Reste OR1, SR1, NR1R2 substituiert sein, wobei R1 und R2 unabhängig voneinander Wasserstoff oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeuten.These radicals can optionally be substituted by the radicals OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 , where R 1 and R 2 independently of one another are hydrogen or an alkyl or acyl radical having 1-6 C atoms.
Die Alkylphosphono- und -phosphoserine weisen gewisse strukturelle Beziehungen zu physiologisch aktiven natürlich vorkommenden Phospholipiden, z. B. Phosphatidylserinen auf. Sie unterscheiden sich von diesen jedoch dadurch, daß sie keine Glycerolkomponente enthalten. Im Vergleich zu den natürlich vorkommenden Phosphatidylserinen weisen die erfindungsgemäßen Alkylphospho-und -phosphoπoserine höhere Biostabilität auf. Sie stellen potentielle Cytostatika und Virustatika dar.The alkylphosphono- and -phosphoserines have certain structural relationships with physiologically active naturally occurring phospholipids, e.g. B. phosphatidylserines. However, they differ from these in that they contain no glycerol component. Compared to the naturally occurring phosphatidylserines, the alkylphospho-and -phosphoπoserines according to the invention have higher biostability. They represent potential cytostatics and virustatics.
Die neuen Alkylphosphono- bzw. -phosphoserine können hergestellt werden, indem man a) eine Verbindung der allgemeinen Formel II des Formelblattes, in der R die oben genannte Bedeutung hat und A und B eine Hydroxygruppe oder falls R den Rest OR' bedeutet A außerdem Halogen, vorzugsweise Cl und Br, und B außerdem Halogen, vorzugsweise Cl und Br, ein Alkoxy oder Aryloxyrest bedeuten kann oder gegebenenfalls die Salze dieser Verbindungen mit einem Serinderivat der allgemeinen Formel III des Formelblattes, in der X Benzyl, t- Butyl, Phthalimidomethyl, Isopropyl, Benzhydryl oder eine andere auf übliche Weise abspaltbare Schutzgruppe,The new alkylphosphono- or -phosphoserines can be prepared by a) a compound of the general formula II of the formula sheet in which R has the meaning given above and A and B is a hydroxyl group or if R is OR 'A is also halogen , preferably Cl and Br, and B may also be halogen, preferably Cl and Br, an alkoxy or aryloxy radical or, if appropriate, the salts of these compounds with a serine derivative of the general formula III of the formula sheet in which X is benzyl, t-butyl, phthalimidomethyl, isopropyl , Benzhydryl or another protective group which can be removed in the usual way,
Y N-Benzoyloxycarbonyl, N-t-Butoxycarbonyl, N-Phthaloyl oder eine weitere auf übliche Weise abspaltbare Schutzgruppe bedeutet, gegebenenfalls in Anwesenheit eines Kondensationsmittels zu Verbindungen der allgemeinen Formel IV des Formelblattes umsetzt, die Schutzgruppen abspaltet und das Produkt gegebenenfalls in ein Salz überführt oderY is N-benzoyloxycarbonyl, Nt-butoxycarbonyl, N-phthaloyl or another protective group which can be split off in the usual way, optionally in the presence of a condensing agent to give compounds of the general Formula IV of the formula sheet is implemented, the protective groups are split off and the product is optionally converted into a salt or
b) eine Verbindung der allgemeinen Formel V des Formelblattes in der R die oben angegebene Bedeutung hat und Z, einen Alkylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeutet, der gegebenenfalls durch Cl, Br oder F substituiert sein kann oder die Resteb) a compound of the general formula V of the formula sheet in which R has the meaning given above and Z is an alkyl radical having 1-6 C atoms, which can optionally be substituted by Cl, Br or F or the radicals
bedeuten, in der C und D unabhängig voneinander H, oder Methyl bedeuten und E Methyl bedeutet und n 2 - 6 bedeutet, in Gegenwart von Phospholipase D mit L-Serin umsetzt. mean in which C and D independently of one another are H or methyl and E is methyl and n is 2-6, in the presence of phospholipase D is reacted with L-serine.
Die als Ausgangsverbindungen verwendeten Verbindungen der allgemeinen Formel II des Formelblattes, können in an sich bekannter Weise hergestellt werden, indem man aus den entsprechenden Alkylbromid R-Br und Trimethylphosphit zunächst die Alkylphosphonsäuredimethylester synthetisiert, diese durch Umsetzung mit einem Gemisch von Trimethylsilylchlorid und Natriumjodid in die Trimethylsilylester überführt und diese durch Wassereinwirkung hydrolysiert. Bedeutet R den Rest OR' werden Phosphorsäureester, Phosphorsäuredihalogenide oder Phosphorsäureesterhalogenide als Ausgangsverbindungen verwendet. Die entsprechenden Phosphorsäuredichloride können in an sich bekannter Weise durch Umsetzung von Alkylalkoholen mit Phosphoroxychlorid erhalten werden.The compounds of the general formula II of the formula sheet used as starting compounds can be prepared in a manner known per se by first synthesizing the dimethyl alkylphosphonate from the corresponding alkyl bromide R-Br and trimethyl phosphite, this by reaction with a mixture of trimethylsilyl chloride and sodium iodide in the trimethylsilyl ester transferred and hydrolyzed by exposure to water. If R is the radical OR ', phosphoric acid esters, phosphoric acid dihalides or phosphoric acid ester halides are used as starting compounds. The corresponding phosphoric acid dichlorides can be obtained in a manner known per se by reacting alkyl alcohols with phosphorus oxychloride.
Die Umsetzung der Verbindungen der allgemeinen Formel II erfolgt im allgemeinen in der Weise, daß man die Verbindungen in das Salz einer Base, beispielsweise Pyridin überführt und dieses Salz anschließend mit dem Serin-Derivat umsetzt. Die Umsetzung erfolgt vorzugsweise in Gegenwart eines Kondensationsmittels, beispielsweise in Gegenwart von 2,4,6-Triisopropylbenzolsulfochlorid unter wasserfreien Bedingungen und vorzugsweise in Gegenwart eines inerten organischen Lösungsmittels. Als Lösungsmittel kommt beispielsweise Pyridin in Frage.The compounds of the general formula II are generally reacted by converting the compounds into the salt of a base, for example pyridine, and then reacting this salt with the serine derivative. The reaction is preferably carried out in the presence of a condensing agent, for example in the presence of 2,4,6-triisopropylbenzenesulfochloride under anhydrous conditions and preferably in the presence of an inert organic solvent. Pyridine is an example of a solvent.
Die Reaktionspartner werden üblicherweise in äquimolarer Menge eingesetzt, es ist aber auch möglich einen bis zu viermolaren Überschuß an Serinderivat einzusetzen. Die Umsetzung erfolgt bei Temperaturen von etwa 5 - 60°C, vorzugsweise bei Raumtemperatur.The reactants are usually used in an equimolar amount, but it is also possible to use an up to four molar excess of serine derivative. The reaction takes place at temperatures of about 5-60 ° C., preferably at room temperature.
Nach Beendigung der Reaktion wird das noch vorhandene Säurechlorid auf übliche Weise, beispielsweise durch Zugabe von Wasser in der Reaktionslösung zerstört und das Produkt auf übliche Weise, beispielsweise durch Extraktion mit Diethylether, isoliert. Gegebenenfalls können die so erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel IV des Formelblattes vor der Abspaltung der Schutzgruppen, beispielsweise durch Säulenchromatographie an Kieselgel weiter gereinigt werden. Es ist aber auch möglich sie ohne weitere Reinigung in die Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes überzuführen.After the reaction has ended, the acid chloride still present is destroyed in the customary manner, for example by adding water in the reaction solution, and the product is isolated in the customary manner, for example by extraction with diethyl ether. If necessary, the compounds of the general formula IV of the formula sheet obtained in this way can be further purified before the protective groups are split off, for example by column chromatography on silica gel. However, it is also possible to convert them into the compounds of the general formula I of the formula sheet without further purification.
Dazu werden die Schutzgruppen auf übliche Weise, beispielsweise durch katalytische Hydrogenolyse, Hydrazinolyse, Behandlung mit HC1 oder Ameisensäure, vorzugsweise in einem inerten Lösungsmittel abgespalten. Die Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes können anschließend in bekannter Weise isoliert und gegebenfalls weiter, beispielsweise chromatographisch gereinigt werden.For this purpose, the protective groups are split off in a customary manner, for example by catalytic hydrogenolysis, hydrazinolysis, treatment with HCl or formic acid, preferably in an inert solvent. The compounds of the general formula I of the formula sheet can then be isolated in a known manner and optionally further purified, for example by chromatography.
Die erfindungsgemäßen Alkylphosphono- und -phosphoserine können auch auf enzymatischem Weg hergestellt werden.The alkylphosphono- and -phosphoserines according to the invention can also be prepared enzymatically.
Hierbei werden Verbindungen der allgemeinen Formel V des Formelblattes mit LSerin in Gegenwart von Phospholipase D umgesetzt. Dazu wird eine Lösung oder Suspension der Verbindungen der allgemeinen Formel V des Formelblattes mit einem Überschuß von L-Serin in einem wässrigen Puffersystem, beispielsweise in einer Acetat- oder Trispufferlösung bei pH-Werten von etwa 4 -8,5, vorzugsweise 5 - 6, besonders bevorzugt 5,6, in Gegenwart von etwa 0,01 -0,1 M und in Gegenwart von Phospholipase D unter Zusatz von Diethylether oder einem Gemisch von Diethylether mit einem weiteren organischen Lösungsmittel, beispielsweise Chloroform umgesetzt.Here compounds of the general formula V of the formula sheet are reacted with LSerin in the presence of phospholipase D. For this purpose, a solution or suspension of the compounds of the general formula V of the formula sheet with an excess of L-serine in an aqueous buffer system, for example in an acetate or tris buffer solution at pH values of about 4-8.5, preferably 5-6, particularly preferably 5.6, in the presence of about 0.01-0.1 M and in the presence of phospholipase D with the addition of diethyl ether or a mixture of diethyl ether with another organic solvent, for example chloroform.
Die Umsetzung erfolgt bei Temperaturen von etwa 5 - 60°C, vorzugsweise 35 - 45°C. Während der Reaktion wird das Reaktionsgemisch intensiv gerührt oder geschüttelt.The reaction takes place at temperatures of about 5-60 ° C, preferably 35-45 ° C. During the reaction, the reaction mixture is stirred vigorously or shaken.
Die Reaktionsdauer beträgt etwa 0,5 - 48 Stunden. Nach beendeter Reaktion wird das Enzym Phospholipase D beispielsweise durch Zugabe einer 0,1 M EDTA- Lösung desaktiviert und die Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes auf übliche Weise isoliert.The reaction time is about 0.5-48 hours. After the reaction has ended, the enzyme phospholipase D is, for example, by adding a 0.1 M EDTA Solution deactivated and the compounds of general formula I of the formula sheet isolated in the usual way.
Die neuen Alkylphosphono- bzw. -phosphoserine weisen eine starke cytostatische und virustatische Wirkung auf. Zur Bestimmung der cytostatischen Wirkung wurde die antiproliferative Wirkung bei Ehrlich-Ascites Tumorzellen untersucht. Dabei zeigte sich, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen ausgezeichnete cytostatische Wirkung aufweisen.The new alkylphosphono- or -phosphoserines have a strong cytostatic and virustatic effect. To determine the cytostatic effect, the antiproliferative effect on Ehrlich ascites tumor cells was examined. It was found that the compounds according to the invention have excellent cytostatic activity.
Sie können daher allein oder in Mischung mit anderen Wirksubstanzen in Form üblicher galenischer Zubereitungen als Cytostatika oder Virustatika eingesetzt werden.They can therefore be used alone or in a mixture with other active substances in the form of conventional pharmaceutical preparations as cytostatics or virustatics.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes sind zur Verwendung an Menschen bestimmt und können auf übliche Weise, beispielsweise oral oder parenteral verabreicht werden. Vorzugsweise werden sie oral verabreicht, wobei die Tagesdosis etwa 0,05 bis 20 mg/kg Körpergewicht beträgt, vorzugsweise 0,05 - 5 mg/kg Körpergewicht. Der behandelnde Arzt kann jedoch abhängig vom Allgemeinzustand und dem Alter des Patienten, der entsprechenden Verbindung der allgemeinen Formel I des Formelblattes, der Art der Krankheit und der Art der Formulierung auch niedrigere oder höhere Dosen außerhalb dieses Bereiches verschreiben.The compounds of the general formula I of the formula sheet are intended for use in humans and can be administered in a customary manner, for example orally or parenterally. They are preferably administered orally, the daily dose being about 0.05 to 20 mg / kg of body weight, preferably 0.05 to 5 mg / kg of body weight. However, depending on the general condition and age of the patient, the corresponding compound of the general formula I on the formula sheet, the type of disease and the type of formulation, the attending doctor can prescribe lower or higher doses outside this range.
Die Verbindungen der Formel I des Formelblattes können allein oder in Verbindung mit anderen pharmazeutisch aktiven Substanzen verabreicht werden, wobei der Gehalt der Verbindungen der allgemeinen Formel I des Formelblattes zwischen 0,1 und 99 % liegt. Im allgemeinen liegen die pharmazeutisch aktiven Verbindungen in einer Mischung mit geeigneten inerten Hilfs- und/oder Trägerstoffen oder Verdünnungsmitteln, z. B. pharmazeutisch unbedenklichen Lösungsmitteln, Gelatine, Gummi arabicum, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliche Öle, Polyalkylenglykol, Vaseline oder dgl. vor. Die pharmazeutischen Präparate können in fester Form, beispielsweise als Tabletten, Dragees, Suppositorien, Kapseln u. dgl., in halbfester Form beispielsweise als Salben oder in flüssiger Form, beispielsweise als Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Gegenenfalls sind sie sterilisiert und enthalten Hilfsstoffe wie Konservierungs-, Stabilisierungs-und Emulgiermittel, Salz zur Veränderung des osmotischen Drucks u. dgl. Insbesondere können pharmazeutische Präparate die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit anderen therapeutisch wertvollen Stoff enthalten. Mit diesen können die erfindungsgemäOen Verbindungen beispielsweise zusammen mit den oben genannten Hilfs-und/oder Trägerstoffe oder Verdünnungsmitteln zu Kombinationspräparaten formuliert werden. The compounds of the formula I of the formula sheet can be administered alone or in conjunction with other pharmaceutically active substances, the content of the compounds of the general formula I of the formula sheet being between 0.1 and 99%. In general, the pharmaceutically active compounds are in a mixture with suitable inert auxiliaries and / or carriers or diluents, for. B. pharmaceutically acceptable solvents, gelatin, gum arabic, milk sugar, starch, magnesium stearate, talc, vegetable oils, polyalkylene glycol, petroleum jelly or the like. The pharmaceutical preparations can be in solid form, for example as tablets, coated tablets, suppositories, capsules and the like. Like., In semisolid form, for example as ointments or in liquid form, for example as suspensions or emulsions. Otherwise they are sterilized and contain auxiliaries such as preservatives, stabilizers and emulsifiers, salt for changing the osmotic Druck u. In particular, pharmaceutical preparations can contain the compounds according to the invention in combination with other therapeutically valuable substances. With these, the compounds according to the invention can be formulated, for example, together with the abovementioned auxiliaries and / or carriers or diluents to give combination preparations.
Beispiel 1:Example 1:
n-Hexadecylphospho-L-serinn-hexadecylphospho-L-serine
0,8 g L-Serin (7,6 mmol) werden in 1,66 ml 0,1 M Acetatpuffer (pH 5,6), der 0,09 M an CaCl2 ist, bei 45°C gelöst.0.8 g L-serine (7.6 mmol) are dissolved in 1.66 ml 0.1 M acetate buffer (pH 5.6), which is 0.09 M CaCl2, at 45 ° C.
Zu dieser Lösung werden 32 mg (0,075 mmol) n-Hexadecylphosphocholin 1,6 ml Diethylether/Chloroform (9 : 1, v/v, ethanolfrei) und 200 mg eines Phospholipase-D-Enzympräparates, das aus Weißkohl hergestellt wird, eine Aktivität von 0,9 U/ml (1 Unit (U) setzt bei 27°C 1 μmol Substrat pro Min. um) im Reaktionsgemisch aufweist. Das Gemisch wird 3 Stunden bei 45°C gerührt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur werden 3,31 ml 0,1 M EDTA-Lösung zugesetzt und durch Einleiten von Stickstoff die organischen Lösungsmittel entfernt. Die zurückbleibende wäßrige Phase wird mit dem 4,3fachen Volumen Chloroform/Methanol (5 : 8, v/v) 30 Minuten gerührt und vom Ungelösten (L-Serin) abgesaugt. Das Filtrat wird mit 1 Volumen Wasser und 3,7 Volumen Chloroform versetzt, die Mischung 10 Minuten geschüttelt, die organische Phase abgetrennt, im Vakuum eingeengt und der erhaltene Rückstand an Carboxymethylcellulose (CM 52 Whatman, Na+-Form) säulenchromatographisch getrennt. Die Elution erfolgt nacheinander mit 75 ml Chloroform, je 300 ml Chloroform/Methanol, 9 : 1, 8 : 2, 7 : 3, anschließend 1750 1 Chloroform/Methanol 1 : 1 (jeweils V/V). Fraktionsgröße beträgt 50 ml. Aus den Fraktionen 18 -40 werden 16 mg reines nHexadecylphospho-L-serin (Na-Salz) erhalten.To this solution, 32 mg (0.075 mmol) of n-hexadecylphosphocholine 1.6 ml of diethyl ether / chloroform (9: 1, v / v, ethanol-free) and 200 mg of a phospholipase D enzyme preparation which is prepared from white cabbage have an activity of 0.9 U / ml (1 unit (U) converts 1 μmol substrate per minute at 27 ° C) in the reaction mixture. The mixture is stirred at 45 ° C for 3 hours. After cooling to room temperature, 3.31 ml of 0.1 M EDTA solution are added and the organic solvents are removed by introducing nitrogen. The remaining aqueous phase is stirred with 4.3 times the volume of chloroform / methanol (5: 8, v / v) for 30 minutes and suctioned off from the undissolved (L-serine). 1 volume of water and 3.7 volumes of chloroform are added to the filtrate, the mixture is shaken for 10 minutes, the organic phase is separated off, concentrated in vacuo and the residue obtained is separated by column chromatography on carboxymethyl cellulose (CM 52 Whatman, Na + form). The elution is carried out successively with 75 ml of chloroform, 300 ml of chloroform / methanol, 9: 1, 8: 2, 7: 3, then 1750 1 of chloroform / methanol 1: 1 (each V / V). Fraction size is 50 ml. 16 mg of pure n-hexadecylphospho-L-serine (Na salt) are obtained from fractions 18-40.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatte, CHCl3/CH3θH/Aceton/Essigsäure/H2θ, 50 : 10 : 20 : 10 : 5, V/V/V/V/V): Rf = 0,1TLC (silica gel 60, Merck finished plate, CHCl3 / CH3θH / acetone / acetic acid / H2θ, 50: 10: 20: 10: 5, V / V / V / V / V): Rf = 0.1
Beispiel 2:Example 2:
n-Hexadecylphospho-L-serinn-hexadecylphospho-L-serine
Eine Lösung von 0,219 g (0,679 mmol) n-Hexadecylphosphat (III, A = B = OH, R =A solution of 0.219 g (0.679 mmol) n-hexadecyl phosphate (III, A = B = OH, R =
CI6H33) in 1,2 ml Pyridin wird im Vakuum eingeengt und das so erhalteneCI6H33) in 1.2 ml of pyridine is concentrated in vacuo and the resultant
Pyridiniumsalz über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Danach wird es inPyridinium salt dried over phosphorus pentoxide in vacuo. After that it gets in
11 ml wasserfreiem Pyridin gelöst.11 ml of anhydrous pyridine dissolved.
0,806 g (2,17 mmol) geschütztes Serin (IV, X = CH(C6H5)2> Y = CO-OC(CH3)3), über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet, werden in 9 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. Die beiden Lösungen werden vermischt und zum Gemisch 1,32 g (4,35 mmol) Triisopropylbenzolsulfochlorid zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird unter wasserfreien Bedingungen bei Raumtemperatur 24 Stunden gerührt. Nach Zugabe von einigen Tropfen Wasser wird noch weitere 30 Minuten gerührt. Danach wird das Gemisch im Vakuum eingeengt und der Rückstand über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Der erhaltene Rückstand wird mit 20 ml Diethylether extrahiert und 3 × mit je 4 ml Diethylether nachgewaschen. Die Etheriösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in Chloroform gelöst und durch Säulenchromatographie an 36 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04 - 0,063 mm, 230 - 400 mesh, Merck) gereinigt. Das für die Säulenchromatographie verwendete Chloroform ist mit 25 %igem wäßrigem Ammoniak gesättigt. Eluiert wird mit 300 ml Chloroform, 250 ml Chloroform/Methanol, 98 : 2, V/V, 200 ml Chloroform/Methanol, 95 : 5, V/V, 500 ml Chloroform/Methanol, 90 : 10, V/V, 400 ml Chloroform/Methanol, 80 : 20, V/V. Die Fraktionsgröße beträgt 22 ml. Die Fraktionen 41 - 47 enthalten 152 mg nHexadecylphospho-N-t-butoxycarbonyl-L-serinbenzhydrylester (R = C16H33, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3), (Ammoniumsalz), Ausbeute 32 %. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/25 % wäßriges NH3, 65 : 5, V/V) : Rf = 0,70.806 g (2.17 mmol) of protected serine (IV, X = CH (C 6 H5) 2> Y = CO-OC (CH3) 3 ), dried over phosphorus pentoxide in vacuo, are dried in 9 ml of anhydrous Pyridine dissolved. The two solutions are mixed and 1.32 g (4.35 mmol) of triisopropylbenzenesulfochloride are added to the mixture. The reaction mixture is stirred under anhydrous conditions at room temperature for 24 hours. After adding a few drops of water, stirring is continued for a further 30 minutes. The mixture is then concentrated in vacuo and the residue is dried over phosphorus pentoxide in vacuo. The residue obtained is extracted with 20 ml of diethyl ether and washed 3 × with 4 ml of diethyl ether. The ethereal solutions are combined and concentrated in vacuo. The residue is dissolved in chloroform and purified by column chromatography on 36 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The chloroform used for column chromatography is saturated with 25% aqueous ammonia. Elution is carried out with 300 ml chloroform, 250 ml chloroform / methanol, 98: 2, v / v, 200 ml chloroform / methanol, 95: 5, v / v, 500 ml chloroform / methanol, 90: 10, v / v, 400 ml chloroform / methanol, 80:20, v / v. The fraction size is 22 ml. Fractions 41 - 47 contain 152 mg nHexadecylphospho-Nt-butoxycarbonyl-L-serine benzhydryl ester (R = C 16 H 33 , X = CH (C 6 H 5 ) 2 , Y = CO-OC (CH 3 ) 3 ), (ammonium salt), yield 32%. TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / 25% aqueous NH 3 , 65: 5, v / v): Rf = 0.7
61 mg (0,09 mmol) der beschriebenen Verbindung V werden im Vakuum über Phosphorpentoxid getrocknet und anschließend in 12 ml wasserfreiem Chloroform gelöst. Durch diese Lösung wird für 10 Minuten getrockneter Stickstoff und anschließend unter wasserfreien Bedingungen bei 0°C für 20 Minuten HCl-Gas geleitet. Danach wird das Reaktionsgefäß fest verschlossen und das Reaktionsgemisch 1 5tunde bei 0°C weitergerührt.61 mg (0.09 mmol) of the compound V described are dried in vacuo over phosphorus pentoxide and then dissolved in 12 ml of anhydrous chloroform. HCl gas is passed through this solution for 10 minutes and then under anhydrous conditions at 0 ° C. for 20 minutes. The reaction vessel is then tightly closed and the reaction mixture is stirred at 0 ° C. for a further 5 hours.
Zur Entfernung des HCl-Gases wird anschließend 1 Stunde lang bei Raumtemperatur Stickstoff durch das Reaktionsgemisch geleitet. Danach wird das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mit einer Mischung von 10 ml Chloroform/Methanol, 2 : 1, V/V 1 ml Wasser und 0,02 ml 25%igem wäßrigen Ammoniak vesetzt und nach Phasentrennung die anfallende organische Phase abgetrennt. Die wäßrige Phase wird 3x mit Chloroform/Methanol, 2 : 1, V/V extrahiert, die organischen Lösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Zur Entfernung des restlichen Wassers wird mehrmals mit 1 ml Benzen/Ethanol, 2 : 3, V/V, nachdestilliert. Das erhaltene Produkt wird über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet und danach mit Aceton gewaschen. Ausbeute: 30,8 mg (83 %).To remove the HCl gas, nitrogen is then passed through the reaction mixture at room temperature for 1 hour. The reaction mixture is then concentrated in vacuo. The residue is mixed with a mixture of 10 ml of chloroform / methanol, 2: 1, v / v 1 ml of water and 0.02 ml of 25% strength aqueous ammonia and, after phase separation, the resulting organic phase is separated off. The aqueous phase is extracted 3 times with chloroform / methanol, 2: 1, v / v, the organic solutions are combined and concentrated in vacuo. To remove the remaining water, repeated distillation with 1 ml of benzene / ethanol, 2: 3, V / V. The product obtained is dried over phosphorus pentoxide in vacuo and then washed with acetone. Yield: 30.8 mg (83%).
Das erhaltene n-Hexadecylphospho-L-serin (Diammoniumsalz) ist dünnschichtchromatographisch einheitlich.The n-hexadecylphospho-L-serine (diammonium salt) obtained is uniform by thin layer chromatography.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser, 10 : 2 : 4 : 2 : 1, V/V/V/V/V): Rf = 0,1.TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water, 10: 2: 4: 2: 1, V / V / V / V / V): Rf = 0.1.
Die Sichtbarmachung erfolgt mit Molybdatreagenz sowie mit Ninhydrinspray. Zur Entfernung von Spuren an NH4CI wird die Substanz (30,8 mg) an 2 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04 - 0,063 mm, 230 - 400 mesh, Merck) chromatographiert. Die Säule wird mit Chloroform/Methanol/ wäßrigem 25%igen Ammoniak, 80 : 20 : 0,5, V/V/V äquilibriert. In der gleichen Mischung wird auch die Substanz gelöst und auf die Säule gegeben. Eluiert wird mit 20 ml Chloroform/Methanol 25 %igem wäßrigen Ammoniak, 80 : 20 : 0,5 V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/25 %igem wäßrigen Ammoniak, 75 : 25 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/25 %igem wäßrigen Ammoniak, 70 : 30 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/25 %igem wäßrigen Ammoniak, 65 : 35 : 0,5, V/V/V, 260 ml Chloroform/Methanol/25 %igem wäßrigen Ammoniak, 60 : 40 : 0,5, V/V/V. Die Verbindung wird aus Fraktion 7 - 13 (Fraktionsgröße 20 ml) durch Einengen erhalten.The visualization takes place with molybdate reagent as well as with ninhydrin spray. To remove traces of NH 4 CI, the substance (30.8 mg) is chromatographed on 2 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The column is equilibrated with chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80: 20: 0.5, v / v / v. The substance is dissolved in the same mixture and added to the column. Elution is carried out with 20 ml of chloroform / methanol 25% aqueous ammonia, 80: 20: 0.5 v / v / v, 20 ml of chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 75: 25: 0.5, v / v / V, 20 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 70: 30: 0.5, V / V / V, 20 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 65: 35: 0.5, V / V / V, 260 ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 60: 40: 0.5, V / V / V. The compound is obtained from fraction 7-13 (fraction size 20 ml) by concentration.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser, 10 : 2 : 4 : 2 : 1, V/V/V/V/V) : Rf = 0,1.TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water, 10: 2: 4: 2: 1, V / V / V / V / V): Rf = 0.1.
Beispiel 3:Example 3:
n-Hexadecylphosphono-L-serin n-Hexadecylphosphonsäuren-hexadecylphosphono-L-serine n-hexadecylphosphonic acid
Eine Mischung aus n-Hexadecylbromid (4,89 g, 16 mmol) und frisch destilliertem Trimethylphosphit (2,48 g, 20 mmol) wird für 24 Stunden bei 116°C gerührt. Anschließend wird das überschüssige Trimethylphosphit im Vakuum abdestilliert und der Rückstand 24 Stunden über Phosphorpentoxid im Vakuum aufbewahrt. Der entsprechende n-Hexadexylphosphonsäuredimethylester wird aus dem Rückstand durch zweimalige Extraktion mit je 10 ml Methanol isoliert. Die beiden Methanolextrakte werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Der so erhaltene ölige, farblose Rückstand, der neben dem n-Hexadecylphosphonsäuremethylester noch n-Hexadecylbromid enthält, wird weiter umgesetzt in 4,7 ml wasserfreiem Acetonitril mit Trimethylsilylchlorid (1,02 g, 9,4 mmol) und Natriumjodid (1,4 g, 9,4. mmol). Die Umsetzung erfolgt unter Rühren bei Raumtemperatur und dauertA mixture of n-hexadecyl bromide (4.89 g, 16 mmol) and freshly distilled trimethyl phosphite (2.48 g, 20 mmol) is stirred at 116 ° C. for 24 hours. The excess trimethyl phosphite is then distilled off in vacuo and the residue is kept in vacuo over phosphorus pentoxide for 24 hours. The corresponding dimethyl n-hexadexylphosphonate is isolated from the residue by extraction twice with 10 ml of methanol. The two methanol extracts are combined and concentrated in vacuo. The oily, colorless residue thus obtained, which in addition to the n-hexadecylphosphonic acid methyl ester also contains n-hexadecyl bromide, is further reacted in 4.7 ml of anhydrous acetonitrile with trimethylsilyl chloride (1.02 g, 9.4 mmol) and sodium iodide (1.4 g , 9.4. mmol). The reaction takes place with stirring at room temperature and lasts
15 Minuten.15 minutes.
Das bei der Reaktion entstandene Natriumchlorid wird abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und der resultierende Rückstand wird mit 4 ml Wasser versetzt, wobei durch Hydrolyse n-Hexadecylphosphonsäure entsteht. Um das gleichzeitig gebildete Me3SiOSiMe3 zu entfernen, wird mehrmals mit Ethanol/Wasser (1 : 1, V/V) im Vakuum nachdestilliert. Nach Behandlung des Rückstandes mit 7 ml getrocknetem Aceton werden 346 mg n-Hexadexylphosphonsäure II erhalten. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Wasser, 65 : 25 : 4, V/V/V) : Rf = 0,15.The sodium chloride formed in the reaction is filtered off. The filtrate is concentrated in vacuo and the resulting residue is mixed with 4 ml of water, n-hexadecylphosphonic acid being formed by hydrolysis. In order to remove the simultaneously formed Me 3 SiOSiMe 3 , it is repeatedly distilled with ethanol / water (1: 1, V / V) in vacuo. After treatment of the residue with 7 ml of dried acetone, 346 mg of n-hexadexylphosphonic acid II are obtained. TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / water, 65: 25: 4, V / V / V): Rf = 0.15.
Elementaranalyse berechnet für C16H35PO3 (306,42): C 62,71, H 11,51; gefunden C 62,81, H 11,89 (%).Elemental analysis calculated for C 16 H 35 PO 3 (306.42): C 62.71, H 11.51; found C 62.81, H 11.89 (%).
n-Hexadecylphosphono-N-t-butoxycarbonyl-L-serinbenzhydrylester Eine Lösung von 92 mg (0,3 mmol) n-Hexadecylphosphonsäure in 1 ml Pyridin wird im Vakuum eingeengt und das so erhaltene Pyridiniumsalz anschließend über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Danach wird es in 5 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. 356 mg (0,96 mmol) geschütztes Serin (X = CH(C6H5)2, Y = CO-O-C(CH3)3, über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet, werden in 4 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. Die beiden Lösungen werden vermischt und zum Gemisch 581 mg (1,92 mmol) Triisopropylbenzolsulfochlorid zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird unter wasserfreien Bedingungen bei Raumtemperatur 24 Stunden gerührt. Danach wird das Gemisch im Vakuum eingeengt, mehrfach mit Toluen nachdestilliert und der Rückstand über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Dieser wird anschließend mit 15 ml Diethylether extrahiert und dreimal mit 4 ml Diethylether nachgewaschen. Die Etherlösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Aus dem so erhaltenen Rückstand werden durch Umkristallisieren aus Acetonitril 118 mg des n-Hexadecylphosphonoserin-Derivat IV erhalten. Eine weitere Reinigung erfolgt durch Säulenchromatographie an 8 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04 - 0,063 mm, 230 -400 mesh, Merck). Das für die Chromatographie verwendete Chloroform und die Lösungsmittelgemische für die Eluϊeruπg enthalten 0,5 % wäßrigen 25%igen Ammoniak. Eluiert wird mit 50 ml Chloroform, 50 ml Chloroform/Methanol, 98 : 2, V/V, 200 ml Chloroform/Methanol, 95 : 5, V/V, 200 ml Chloroform/Methanol, 90 : 10, V/V. Die Fraktionsgröße beträgt 15 ml. Die Fraktionen 15 - 20 enthalten 72 mg reinen Hexadecylphosphono-N-t-butoxycarbonyl-L-serinbenzhydrylester. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol, 80 : 20, V/V): Rf =n-Hexadecylphosphono-Nt-butoxycarbonyl-L-serine benzhydryl ester A solution of 92 mg (0.3 mmol) of n-hexadecylphosphonic acid in 1 ml of pyridine is concentrated in vacuo and the pyridinium salt thus obtained is then dried in vacuo over phosphorus pentoxide. Then it is dissolved in 5 ml of anhydrous pyridine. 356 mg (0.96 mmol) of protected serine (X = CH (C 6 H 5 ) 2, Y = CO-OC (CH 3 ) 3 , dried over phosphorus pentoxide in vacuo, are dissolved in 4 ml of anhydrous pyridine. The two solutions are mixed and 581 mg (1.92 mmol) of triisopropylbenzenesulfochloride are added to the mixture, the reaction mixture is stirred under anhydrous conditions at room temperature for 24 hours, after which the mixture is concentrated in vacuo, redistilled with toluene and the residue is dried over phosphorus pentoxide in vacuo is then extracted with 15 ml of diethyl ether and washed three times with 4 ml of diethyl ether, the ether solutions are combined and concentrated in vacuo, and 118 mg of the n-hexadecylphosphonoserine derivative IV are obtained from the residue obtained by recrystallization from acetonitrile Column chromatography on 8 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck) ended chloroform and the solvent mixtures for the eluent contain 0.5% aqueous 25% ammonia. Elution is carried out with 50 ml of chloroform, 50 ml of chloroform / methanol, 98: 2, v / v, 200 ml of chloroform / methanol, 95: 5, v / v, 200 ml of chloroform / methanol, 90: 10, v / v. The fraction size is 15 ml. Fractions 15-20 contain 72 mg of pure hexadecylphosphono-Nt-butoxycarbonyl-L-serine benzhydryl ester. TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol, 80:20, v / v): Rf =
0,2.0.2.
Elementaranalyse berechnet für C37H61N2PO7 (NH4-Salz, 676,87):Elemental analysis calculated for C 37 H 61 N 2 PO 7 (NH 4 salt, 676.87):
C 65,65 H 9,08, N 4,14; gefunden C 65,44, H 9,15 N 3,73 (%).C 65.65 H 9.08, N 4.14; found C 65.44, H 9.15 N 3.73 (%).
n-Hexadecylphosphono-L-serinn-hexadecylphosphono-L-serine
69 mg (0,1 mmol) der beschriebenen Verbindung werden im Vakuum über Phosphorpentoxid getrocknet und anschließend in 13 ml wasserfreiem Chloroform gelöst. Durch diese Lösung wird für 10 Minuten trockener Stickstoff und anschließend unter wasserfreien Bedingungen bei 0°C für 20 Minuten Chlorwasserstoffgas geleitet. Danach wird das Reaktionsgefäß fest verschlossen und 1 Stunde bei 0°C weitergerührt. Zur Entfernung des Chlorwasserstoffgases wird anschließend 1 Stunde lang bei Raumtemperatur Stickstoff durch das Reaktionsgemisch geleitet. Danach wird das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt und der Rückstand mit einer Mischung von 10 ml Chloroform/Methanol, 2 : 1, V/V, 1 ml Wasser und 0,02 ml 25 %igem wäßrigen Ammoniak versetzt, geschüttelt und nach Phasentrennung die anfallende organische Phase abgetrennt. Die wäßrige Phase wird dreimal mit je 5 ml Chloroform/Methanol/Wasser, 2 : 1 : 0,18, V/V/V, extrahiert, die organischen Lösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Zur Entfernung von restlichem Wasser wird mehrmals mit 1 ml Benzen/Ethanol, 2 : 3, V/V nachdestilliert. Das erhaltene Produkt, Hexadecylphosphono-L-serin I, wird über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet und danach mit Aceton gewaschen.69 mg (0.1 mmol) of the compound described are dried in vacuo over phosphorus pentoxide and then dissolved in 13 ml of anhydrous chloroform. Dry nitrogen is passed through this solution for 10 minutes and then under anhydrous conditions at 0 ° C. for 20 minutes. The reaction vessel is then tightly closed and stirring is continued at 0 ° C. for 1 hour. To remove the hydrogen chloride gas, nitrogen is then passed through the reaction mixture at room temperature for 1 hour. The reaction mixture is then concentrated in vacuo and the residue is mixed with a mixture of 10 ml of chloroform / methanol, 2: 1, v / v, 1 ml of water and 0.02 ml of 25% aqueous ammonia, shaken and, after phase separation, the resulting organic Phase separated. The aqueous phase is extracted three times with 5 ml of chloroform / methanol / water, 2: 1: 0.18, v / v / v, the organic solutions are combined and concentrated in vacuo. To remove residual water, repeated distillation with 1 ml of benzene / ethanol, 2: 3, V / V. The product obtained, hexadecylphosphono-L-serine I, is dried over phosphorus pentoxide in vacuo and then washed with acetone.
Ausbeute: 43 mg (95 %).Yield: 43 mg (95%).
Zur Entfernung von Spuren an Ammoniumchlorid wird die Substanz an 2,2 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04 - 0,063 mm, 230 - 400 mesh, Merck) chromatographiert. Die Säule wird mit Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igen Ammoniak, 80 : 20 . 0,5, V/V/V äquilibriert. Eluiert wird mit 20 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igen Ammoniak, 80 : 20 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25%igen Ammoniak, 75 : 25 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igen Ammoniak, 70 : 30 : 0,5, V/V/V, 20 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igem Ammoniak, 65 : 35 : 0,5, V/V/V, 200 ml Chloroform/Methanol/wäßrigem 25 %igen Ammoniak, 60 : 40 : 0,5, V/V/V. Die Verbindung wird aus den Fraktionen 7 - 19 durch Einengen erhalten. (Fraktionsgröße 20 ml). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser, 10 : 2 : 4 : 2 : 1, V/V/V/V/)V: Rf = 0,1.To remove traces of ammonium chloride, the substance is chromatographed on 2.2 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The column is washed with chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80:20. 0.5, V / V / V equilibrated. Elution is carried out with 20 ml of chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80: 20: 0.5, v / v / v, 20 ml of chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 75: 25: 0.5, v / V / V, 20 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 70: 30: 0.5, V / V / V, 20 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 65: 35: 0.5 , V / V / V, 200 ml chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 60: 40: 0.5, V / V / V. The compound is obtained from fractions 7-19 by concentration. (Fraction size 20 ml). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water, 10: 2: 4: 2: 1, V / V / V / V /) V: Rf = 0.1.
Die Sichtbarmachung erfolgt mit Molybdatreagenz und mit Ninhydrinreagenz.The visualization takes place with molybdate reagent and with ninhydrin reagent.
Elementaranalyse berechnet für C19H45N2PO6 (NH4-Salz, Monohydrat, 428,55) :Elemental analysis calculated for C19H45N2PO6 (NH4 salt, monohydrate, 428.55):
C 53,24, H 10,58, N 6,54; gefunden C 53,80, H 10,55, N 5,73 (%).C 53.24, H 10.58, N 6.54; found C 53.80, H 10.55, N 5.73 (%).
FAB-Massenspektrometrie:FAB mass spectrometry:
Anϊonenspektrum: m/z 414, (M-2H+Na)-; m/z 392, (M-H)-; m/z 305 (M- CH2CH(NH2)COOH)-;Anϊon spectrum: m / z 414, (M-2H + Na) -; m / z 392, (MH) -; m / z 305 (M-CH 2 CH (NH 2 ) COOH) -;
Kationsspektrum: m/z 416, (M+Na)+; m/z 438, (M+2Na)+.Cation spectrum: m / z 416, (M + Na) +; m / z 438, (M + 2Na) +.
Beispiel 4:Example 4:
n-Hexadecylphosphono-L-serinn-hexadecylphosphono-L-serine
0,8 g L-Serin /7,6 mmol) werden in 1,52 ml 0,1 M Acetatpuffer (pH 5,6), der 0,09 M an CaCl2 ist, bei 45°C gelöst. Zu dieser Lösung werden 31 mg (0,075 mmol) n-Hexadecylphosphonocholin, 1,6 ml Diethylether/Chloroform (9 : 1, V/V, ethanolfrei) und 200 mg eines Phospholipase-D-Enzympräparates, das aus Weißkohl hergestellt, eine Aktivität von 0,9 U/ml (1 Unit (U) setzt bei 27°C 1 uMol Substrat pro Minute um) im Reaktionsgemisch aufweist. Das Gemisch wird 2,2 Stunden bei 45°C gerührt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur werden 3,31 ml 0,1 M EDTA-Lösung zugesetzt und druch Einleiten von Stickstoff die organischen Lösungsmittel entfernt. Die zurückbleibende wäßrige Phase wird mit dem 4,3fachen Volumen Chloroform/Methanol (5 : 8, V/V) 30 Minuten gerührt und vom Ungelösten (L-Serin) abgesaugt. Das Filtrat wird mit 1 Volumen Wasser und 3,7 Volumen Chloroform versetzt, die Mischung 10 Minuten geschüttelt, die organische Phase abgetrennt, im Vakuum eingeengt und der erhaltene Rückstand an Carboxymethylcellulose (CM 52 Whatman, Na+-Form) säulenchromatographisch getrennt. Die Elution erfolgt nacheinanden mit 75 ml Chloroform, je 300 ml Chloroform/Methanol, 9 : 1, 8 : 2, 7 : 3, anschließend 1750 ml Chloroform/Methanol, 1 : 1 (jeweils V/V). Die Fraktionsgröße beträgt 50 ml. Aus Fraktionen 20 - 39 werden 5 mg reines n-Hexadecylphosphono-L-serin (I, R = C16H33) erhalten.0.8 g L-serine / 7.6 mmol) are dissolved in 1.52 ml 0.1 M acetate buffer (pH 5.6), which is 0.09 M CaCl 2 , at 45 ° C. To this solution, 31 mg (0.075 mmol) of n-hexadecylphosphonocholine, 1.6 ml of diethyl ether / chloroform (9: 1, v / v, ethanol-free) and 200 mg of a phospholipase D enzyme preparation, which is prepared from white cabbage, have an activity of 0.9 U / ml (1 unit (U) converts 1 µmol substrate per minute at 27 ° C) in the reaction mixture. The mixture is stirred at 45 ° C for 2.2 hours. After cooling to room temperature, 3.31 ml of 0.1 M EDTA solution are added and the organic solvents are removed by introducing nitrogen. The remaining aqueous phase is stirred with 4.3 times the volume of chloroform / methanol (5: 8, v / v) for 30 minutes and the undissolved (L-serine) is suctioned off. 1 volume of water and 3.7 volumes of chloroform are added to the filtrate, the mixture is shaken for 10 minutes, the organic phase is separated off, concentrated in vacuo and the residue obtained is separated by column chromatography on carboxymethyl cellulose (CM 52 Whatman, Na + form). Elution is carried out in succession with 75 ml of chloroform, 300 ml of chloroform / methanol each, 9: 1, 8: 2, 7: 3, then 1750 ml of chloroform / methanol, 1: 1 (in each case V / V). The fraction size is 50 ml. Fractions 20-39 give 5 mg of pure n-hexadecylphosphono-L-serine (I, R = C 16 H 33 ).
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatte, CHCI3/CH3OH/ Aceton/Essigsäure/H2O, 50 : 10 : 20 : 10 : 5, V/V/V/V//V: Rf = 0,1. Auf analoge Weise wurden weitere Verbindungen hergestellt.TLC (silica gel 60, Merck finished plate, CHCI 3 / CH 3 OH / acetone / acetic acid / H 2 O, 50: 10: 20: 10: 5, V / V / V / V // V: Rf = 0.1 . Further connections were made in an analogous manner.
Analog Beispiel 2 wurden folgende Verbindungen hergestellt.The following compounds were prepared analogously to Example 2.
Beispiel 5:Example 5:
n-Decylphospho-L-serinn-decylphospho-L-serine
Aus n-Decylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y =From n-decyl phosphate and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2 , Y =
CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1.Rf = 0.1.
Beispiel 6:Example 6:
n-Dodecylphospho-L-serinn-dodecylphospho-L-serine
Aus n-Dodecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y =From n-dodecyl phosphate and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2 , Y =
CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1.Rf = 0.1.
Beispiel 7:Example 7:
n-Tetradecylphospho-L-serinn-tetradecylphospho-L-serine
Aus n-Tetradecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, YFrom n-tetradecyl phosphate and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2 , Y
= CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):= CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1.Rf = 0.1.
Beispiel 8:Example 8:
17-Methyl-n-octadecylphospho-L-serin17-methyl-n-octadecylphospho-L-serine
Aus 17-Methyl-n-octadecylphospho-L-serin und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1. Beispiel 9:From 17-methyl-n-octadecylphospho-L-serine and protected serine (formula IV, X = CH (C6H5) 2, Y = CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V): Rf = 0.1. Example 9:
cis-9-n-Octadecenylphosρho-L-serincis-9-n-octadecenylphosρho-L-serine
Aus cis-9-n-Octadecenylphospho-L-serin und geschütztem Serin (Formel IV, X =From cis-9-n-octadecenylphospho-L-serine and protected serine (formula IV, X =
CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chlorof orm/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):CH (C 6 H 5 ) 2 , Y = CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck prefabricated plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1.Rf = 0.1.
Beispiel 10Example 10
Arachylphospho-L-serinArachylphospho-L-serine
Aus Arachylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CHtCgHs^» Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/ Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1.From arachyl phosphate and protected serine (formula IV, X = CHtCgHs ^ »Y = CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V): Rf = 0.1.
Beispiel 11Example 11
2-Chlor-n-hexadecylphospho-L-serin2-chloro-n-hexadecylphospho-L-serine
Aus 2-Chlor-n-hexadecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OcCH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/ Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1.From 2-chloro-n-hexadecyl phosphate and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2 , Y = CO-OcCH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V): Rf = 0.1.
Beispiel 12Example 12
2-Methoxy-n-tetradecyIphospho-L-serin2-methoxy-n-tetradecyphospho-L-serine
Aus 2-Methoxy-n-tetradecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/ Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1. Beispiel 13From 2-methoxy-n-tetradecyl phosphate and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2 , Y = CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V): Rf = 0.1. Example 13
2-Methylmercapto-n-tetradecylphospho-L-serin2-methylmercapto-n-tetradecylphospho-L-serine
Aus 2-Methylmercapto-n-tetradecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1.From 2-methylmercapto-n-tetradecyl phosphate and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H5) 2, Y = CO-OC (CH3) 3). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V): Rf = 0.1.
Beispiel 14Example 14
2-Dimethylamino-n-tetradecylphospho-L-serin2-dimethylamino-n-tetradecylphospho-L-serine
Aus 2-Dimethylamino-n-tetradecylphosphat und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V): Rf = 0,1.From 2-dimethylamino-n-tetradecyl phosphate and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2 , Y = CO-OC (CH3) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V): Rf = 0.1.
Analog Beispiel 3 wurden folgende Verbindungen hergestellt:The following compounds were prepared analogously to Example 3:
Beispiel 15Example 15
n-Decylphosphono-L-serinn-decylphosphono-L-serine
Aus n-Decylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, YFrom n-decylphosphonic acid and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2 , Y
= CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):= CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1.Rf = 0.1.
Beispiel 16Example 16
n-Dodecylphosphono-L-serinn-dodecylphosphono-L-serine
Aus n-Dodecylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2,From n-dodecylphosphonic acid and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2,
Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):Y = CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1. Beispiel 17Rf = 0.1. Example 17
n-Tetradecylphosphono-L-serinn-tetradecylphosphono-L-serine
Aus n-Tetradedylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X =From n-tetradedylphosphonic acid and protected serine (formula IV, X =
CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essϊgsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):CH (C 6 H 5 ) 2 , Y = CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, ready-made Merck plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1.Rf = 0.1.
Beispiel 18Example 18
n-Octadecylphosphono-L-serinn-octadecylphosphono-L-serine
Aus n-Octadecylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X =From n-octadecylphosphonic acid and protected serine (formula IV, X =
CH(C6H5)2, Y = CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):CH (C 6 H 5 ) 2 , Y = CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1.Rf = 0.1.
Beispiel 19Example 19
Arachylphosphono-L-serinArachylphosphono-L-serine
Aus Arachylphosphonsäure und geschütztem Serin (Formel IV, X = CH(C6H5)2, YFrom arachylphosphonic acid and protected serine (formula IV, X = CH (C 6 H 5 ) 2, Y
= CO-OC(CH3)3). DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10 : 2 : 4 : 2 : 1; V/V/V/V/V):= CO-OC (CH 3 ) 3 ). TLC (silica gel 60, Merck finished plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1; V / V / V / V / V):
Rf = 0,1. Rf = 0.1.
Beispiel AExample A
Konzentrationsabhängige Wachstumshemmung von Ehrlich-Ascites-TumorzellenConcentration-dependent growth inhibition of Ehrlich ascites tumor cells
Konzentration (M) 1 × 10-4 3 × 10-5 1 × 10-5 3 × 10-6 Concentration (M) 1 × 10 -4 3 × 10 -5 1 × 10 -5 3 × 10 -6
Hemmung (%) n-Hexadecylphosphor-L-serin 95,5 75,4 60,1 37,9 n-Hexadecylphospono-L-serin 89 45 13 9 Inhibition (%) n-hexadecylphosphor-L-serine 95.5 75.4 60.1 37.9 n-Hexadecylphosphono-L-serine 89 45 13 9

Claims

Patentansprüche Claims
1. Verbindungen der allgemeinen Formel I1. Compounds of the general formula I
in der R einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, der gegebenenfalls durch Halogen, die Reste OR 1, SR 1 NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 jeweils ein Wasserstoffatom oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeuten, oder einen Rest OR' bedeutet, wobei R' einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 6 - 30 C-Atomen, der gegebenenfalls durch die Reste OR1, SR1oder NR1 R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 die oben genannte Bedeutung haben.in which R is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6 to 30 carbon atoms, which may optionally be substituted by halogen, the radicals OR 1 , SR 1 NR 1 R 2 , where R 1 and R2 each represent a hydrogen atom or a Alkyl or acyl radical having 1-6 C atoms, or a radical OR ', where R' is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 6-30 C atoms, which is optionally replaced by the radicals OR 1 , SR 1 or NR 1 R 2 may be substituted, where R 1 and R 2 have the meaning given above.
2. Verbindungen der allgemeinen Formel I2. Compounds of the general formula I
nach Anspruch 1, in der R einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlen wassersto ff rest mit 10 - 25 C- Atomen, der gegebenenfalls durch Halogen, die Reste OR1, SR1 NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 jeweils ein Wasserstoffatom oder einen Alkyl- oder Acylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeuten, oder den Rest OR', wobei R' einen geradkettigen oder verzweigten gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 10 - 25 C-Atomen, der gegebenenfalls durch die Reste OR1 , SR1 oder NR1R2 substituiert sein kann, wobei R1 und R2 die oben genannte Bedeutung haben. according to claim 1, in which R is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon residue with 10-25 carbon atoms, which may optionally be substituted by halogen, the residues OR 1 , SR 1 NR 1 R 2 , where R 1 and R 2 each represent a hydrogen atom or an alkyl or acyl radical having 1-6 carbon atoms, or the radical OR ', where R' is a straight-chain or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon radical having 10-25 carbon atoms, which may be replaced by the radicals OR 1 , SR 1 or NR 1 R 2 can be substituted, where R 1 and R 2 have the meaning given above.
3. n-Hexadecylphospho-L-serin.3. n-Hexadecylphospho-L-serine.
4. n-Hexadecylphospono-L-serin.4. n-Hexadecylphosphono-L-serine.
5. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I5. Process for the preparation of compounds of general formula I.
dadurch gekennzeichnet, daß man a) eine Verbindung der allgemeinen Formel II characterized in that a) a compound of the general formula II
in der R die oben genannte Bedeutung hat und A und B eine Hydroxygruppe oder falls R den Rest OR' bedeutet A außerdem Halogen, vorzugsweise Cl und Br, und B außerdem Halogen vorzugsweise Cl und Br, ein Alkoxy oder Aryloxyrest bedeuten kann oder gegebenenfalls die Salze dieser Verbindungen mit einem Serinderivat der allgemeinen Formel III in which R has the meaning given above and A and B is a hydroxyl group or if R is the radical OR ', A is also halogen, preferably Cl and Br, and B is also halogen, preferably Cl and Br, an alkoxy or aryloxy radical or optionally the salts these compounds with a serine derivative of the general formula III
in der X Benzyl, t-Butyl, Phthalimidomethyl, Isopropyl, Benzhydryl oder eine andere auf übliche Weise abspaltbare Schutzgruppe, Y N-Benzoyloxycarbonyl, N-t-Butoxycarbonyl N-Phthaloyl oder eine weitere auf übliche Weise abspaltbare Schutzgruppe bedeutet, gegebenenfalls in Anwesenheit eines Kondensationsmittels zu Verbindungen der allgemeinen Formel IVin which X denotes benzyl, t-butyl, phthalimidomethyl, isopropyl, benzhydryl or another protective group which can be removed in the customary manner, Y denotes N-benzoyloxycarbonyl, Nt-butoxycarbonyl N-phthaloyl or another protective group which can be removed in the customary manner, optionally in the presence of a condensing agent Compounds of the general formula IV
umsetzt, die Schutzgruppen abspaltet und das Produkt gegebenenfalls in ein Salz überführt oder is implemented, the protective groups are split off and the product is optionally converted into a salt or
b) eine Verbindung der allgemeinen Formel Vb) a compound of the general formula V
in der R die oben angegebene Bedeutung hat und Z, einen Alkylrest mit 1 - 6 C-Atomen bedeutet, der gegebenenfalls durch Cl, Br oder F substituiert sein kann oder die Restein which R has the meaning given above and Z is an alkyl radical having 1-6 C atoms, which can optionally be substituted by Cl, Br or F or the radicals
bedeuten, in der C und D unabhängig voneinander H, oder Methyl bedeuten und E Methyl bedeutet und n 2 - 6 bedeutet, in Gegenwart von Phospholipase D mit L-Serin umsetzt. mean in which C and D independently of one another are H or methyl and E is methyl and n is 2-6, in the presence of phospholipase D is reacted with L-serine.
6. Pharmazeutische Mittel, enthaltend Verbindungen der allgemeinen Formel I nach Anspruch 1 in Kombination mit üblichen galenischen Hilfs-Träger und/oder Verdünnungsmitteln.6. Pharmaceutical compositions containing compounds of general formula I according to claim 1 in combination with conventional pharmaceutical auxiliary carriers and / or diluents.
7. Pharmazeutische Mittel, enthaltend Verbindungen der allgemeinen Formel I nach Anspruch 1 in Kombination mit anderen therapeutischen Wirkstoffen sowie üblichen galenischen Hilfs-Träger und/oder Verdünnungsmitteln. 7. Pharmaceutical compositions containing compounds of general formula I according to claim 1 in combination with other therapeutic agents and conventional pharmaceutical auxiliary carriers and / or diluents.
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