DD299727A7 - ALKYL AND ALKENYL PHOSPHO-L-SERINES, METHOD FOR THEIR PREPARATION AND USE - Google Patents
ALKYL AND ALKENYL PHOSPHO-L-SERINES, METHOD FOR THEIR PREPARATION AND USE Download PDFInfo
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- DD299727A7 DD299727A7 DD31486888A DD31486888A DD299727A7 DD 299727 A7 DD299727 A7 DD 299727A7 DD 31486888 A DD31486888 A DD 31486888A DD 31486888 A DD31486888 A DD 31486888A DD 299727 A7 DD299727 A7 DD 299727A7
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Abstract
Die Erfindung betrifft neue Alkyl- und Alkenyl-phospho-L-serine, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung. Die Verbindungen der allgemeinen Formel I,ROOThe invention relates to novel alkyl and alkenyl phospho-L-serines, processes for their preparation and use. The compounds of general formula I, ROO
Description
R-O-P-O-CH2-CH-COOH « IROPO-CH 2 -CH-COOH «I
OH NH2 OH NH 2
in derin the
R = einen gesättigten Kohlenwasserstoffrest mit 14 bis 18C-Atomen, der durch OR1, SR1, NR1R2 substituiert ist, wobei R1 und R2 = CH3 ist oder einen ungesättigten Kohlenwasserstoffrest mit 18 bis 20C-Atomen bedeutet, und von deren Salzen. Die Verbindungen I haben gewisse strukturelle Beziehung zu natürlich vorkommenden Phospholipiden, z. B. den Phosphatidylserinen, die im biologischen Geschehen eine sehr wesentliche Rolle spielen. Sie unterscheiden sich von letzteren jedoch dadurch, daß sie keine Glycerolkomponente sowie hydrolysierbare Fettsäurereste im Molekül enthalten. Sie lassen sich als Phosphatidylserin-Analoge auffassen, die im Vergleich zu den natürlich vorkommenden Phosphatidylserinen eine erhöhte Biostabilität besitzen, und 3tellen interessante Versuchsobjekte in Prozessen der Wechselwirkung von Phospholipiden mit der Zelle oder der Zellbestandteile dar.R = a saturated hydrocarbon radical having 14 to 18C atoms, which is substituted by OR 1 , SR 1 , NR 1 R 2 , wherein R 1 and R 2 = CH 3 or an unsaturated hydrocarbon radical having 18 to 20C atoms, and of their salts. The compounds I have some structural relationship with naturally occurring phospholipids, e.g. As the phosphatidylserines, which play a very important role in biological processes. However, they differ from the latter in that they contain no glycerol component and hydrolyzable fatty acid residues in the molecule. They can be regarded as phosphatidylserine analogues, which have an increased biostability compared to the naturally occurring phosphatidylserines, and 3tellen interesting experimental objects in processes of interaction of phospholipids with the cell or the cell components.
Anwendungsgebiet der Erfindung sind die chemische sowie die pharmazeutische Industrie.Field of application of the invention are the chemical as well as the pharmaceutical industry.
Es ist bekannt, daß sich Glycerophosphoserine durch Kondensation von Glycerophosphorsäurealkylestern mit Serin-Derivaten, deren funktionell Gruppen zur Vermeidung von Nebehreaktionen teilweise durch Schutzgruppen substituiert sind, herstellen lassen, wobei nach erfolgter Umsetzung eine Wiederabspaltung der Schutzgruppen erfolgt. Beispielsweise sind auf diese Weis* Diacyl-, Dialkyl- sowie auch Acylalkylglycerophosphoserine hergestellt worden (A. J.Slotboom et al., Chem. Phys. Lipids, S [1970] 301-379; H.Eibl, Chem. Phys. Lipids, 26 (1980) 405-429; A.Hermetter et al., Chem. Phys. Lipids, 30 (1982) 35-45). Diacylglycerophospho-L-serine sind ferner durch Reaktion von Diacylglycerophosphocholinen mit ungeschütztem L-Serin in Gegenwart von Phospholipase D hergestellt worden (P. Comfurius et al., Biochim. Biophys. Acta, 488 [1977] 36-42), wobei allerdings die Ausbeuten sehr niedrig liegen und vorzugsweise eine Umwandlung zu den entsprechenden Diacylglycerophosphorsäuren erfolgt. Bei den Alkylphosphoserinen der allgemeinen Formel I handelt es sich um neue Verbindungen, für die bisher keine Darstellungsmethoden beschrieben wurden. Außerdem sind aus DE-OS 3639084 u.a. Alkylphospho-L-serine beschrieben, die jedoch als Emulgatoren und Feuchthaltemittol eingesetzt werden.It is known that Glycerophosphoserine can be produced by condensation of Glycerophosphorsäurealkylestern with serine derivatives whose functional groups are partially substituted by protective groups to avoid Nebehreaktionen, wherein after the reaction, a deprotection of the protecting groups takes place. For example, diacyl, dialkyl and also acylalkylglycerophosphoserines have been prepared in this manner (AJ Slotboom et al., Chem. Phys. Lipids, S [1970] 301-379; H. Elb, Chem. Phys. Lipids, 26 (1980) 405-429; A. Hermetter et al., Chem. Phys. Lipids, 30 (1982) 35-45). Diacylglycerophospho-L-serines have also been prepared by reaction of diacylglycerophosphocholines with unprotected L-serine in the presence of phospholipase D (Comfurius, P., et al., Biochim., Biophys, Acta, 488 [1977], 36-42), but with yields are very low and preferably a conversion to the corresponding Diacylglycerophosphorsäuren. The alkylphosphoserines of the general formula I are novel compounds for which no methods of preparation have hitherto been described. In addition, from DE-OS 3639084 u.a. Alkylphospho-L-serines described, however, which are used as emulsifiers and humectants.
Ziel der ErfindungObject of the invention
Es ist das Ziel der Erfindung, ein ökonomisches Verfahren zu entwickeln, nach dem die Alkylphospho-L-serine der Formel I syn^hetisierbar sind, sowie pharmazeutisch einsetzbare Verbindungen aufzufinden und bereitzustellen.It is the object of the invention to develop an economical process according to which the alkylphospho-L-serines of the formula I can be synthesized, and to find and to provide pharmaceutically usable compounds.
Erfindungsgemäß werden die Alkyl- und Alkenylphosphoserine der allgemeinen Formel I und deren Salze hergestellt, indemAccording to the invention, the alkyl and alkenylphosphoserines of general formula I and their salts are prepared by
a) Phosphorsäureester der allgemeinen Formel II,a) phosphoric acid esters of the general formula II,
R-O-P-iR-O-P-i
, 0-(CH2In-X, 0- (CH 2 I n -X
o'>o '>
in der R die o.g. Bedeutung hat undin the R the o.g. Has meaning and
X = H, NH2, NH-CH3, N(CH3I2, N(CH3J3, OH, Cl, Br und η = 1 bis 6 ist,X is H, NH 2 , NH-CH 3 , N (CH 3 I 2 , N (CH 3 J 3 , OH, Cl, Br and η = 1 to 6,
mit L-Serin in Anwesenheit von Phospholipase D umsetzt oderreacted with L-serine in the presence of phospholipase D or
b) indem man einen Phosphorsäureester der allgemeinen Formel III,b) by adding a phosphoric acid ester of the general formula III,
R-O-P-A IIIR-O-P-A III
in der R die o.g. Bedeutung hat,in the R the o.g. Meaning,
oder die Salze dieser Verbindungen mit einem Serinderivat der allgemeinen Formel IV,or the salts of these compounds with a serine derivative of the general formula IV,
NH-ZNH-Z
in derin the
.katalytische Hydrogenolyse, Hydrazinolyse, Behandlung mit HCI oder Ameisensäure entfernbare Schutzgruppebedeuten,catalytic hydrogenolysis, hydrazinolysis, treatment with HCl or formic acid removable protecting group,
gegebenenfalls in Anwesenheit eines Kondonsationsmittels umsetzt.optionally in the presence of a Kondonsationmittels.
Das entstandene Reaktionsprodukt wird gegebenenfalls zur Hydrolyse mit Wasser behandelt. Anschließend werden die Schutzgruppen der entstandenen substituierten Alkylphosphoserin-Derivate der allgemeinen Formel V,The resulting reaction product is optionally treated with water for hydrolysis. Subsequently, the protecting groups of the resulting substituted alkylphosphoserine derivatives of general formula V,
R-O-P-R-O-P
.'-CH2-CH-COOY V.'- CH 2 -CH-COOY V
OH NH-ZOH NH-Z
in der R, Y und Z die o.g. Bedeutung haben, abgespalten und gegebenenfalls die entsprechenden Salze gebildet. Erfindungswesentlich sind neben den Phosphorsäureestern vom Typ III (A = B = OH) auch die entsprechenden Phosphorsäuredichloride (III, A = B-CI) als Ausgangsprodukte, die man z. B. nach an sich bekannten Verfahre ι, durch Umsetzung von Alkylalkoholen mit Phosphoroxychloiid erhält. Durch Kondensation von Alkylphosphodichloriclen mit einem geschützten Serin vom Typ IV erhält man Phosphorsäurechloride der Verbindungen vom Typ V, die durch Hydrolyse und Abspaltung der Schutzgruppen Y und Z in die Alkylphosphoserine I oder deren Salze übergeführt werden. Eine weitere erfindungswesentliche Variante des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht darin, daß man Verbindungen V durch Kondensation der Alkylphosphorsäureesterhalogenide der all; emeinen Formel III (A = Halogen, vorzugsweise Chlor, B = Alkoxy, Aryloxy) mit den doppelt geschützten Serinen IV umsetzt und die entstandenen Alkyl- bzw. Arylester der Kondensationsprodukte IV in die Alkylphosphoserine !umwandelt.in the R, Y and Z the o.g. Meaning have cleaved and optionally formed the corresponding salts. Essential to the invention are in addition to the phosphoric acid esters of type III (A = B = OH) and the corresponding phosphoric acid dichlorides (III, A = B-CI) as starting materials which are z. B. according to known method, by reaction of alkyl alcohols with Phosphoroxychloiid receives. Condensation of alkylphosphodichloriclene with a protected serine of type IV gives phosphoric acid chlorides of the compounds of type V, which are converted into the alkylphosphoserines I or their salts by hydrolysis and removal of the protective groups Y and Z. A further variant of the method according to the invention which is essential to the invention consists in using compounds V by condensation of the alkylphosphoric acid halides of all; reacting a formula III (A = halogen, preferably chlorine, B = alkoxy, aryloxy) with the doubly protected serines IV and converting the resulting alkyl or aryl esters of the condensation products IV into the alkylphosphoserines !.
Die unter a) genannte enzymatisch^ Methode zur Herstellung der Verbindungen der Formel I erfolgt irr allgemeinen, indem man einen Phosphorsäureester der allgemeinen Formel Il mit überschüssigem L-Serin in einer wäßrigen Acetat- oder Tris-Puffer-Lösung oder Suspension bei pH4,8 bis 8,5 in Anwesenheit von 0,01 bis 0,1 M Calciumchlorid unter Zusatz von Diethylether oder eines Gemisches von Diethylether mit weiteren organischen Lösungsmitteln, z. B. Chloroform, sowie Phospholipase D bei Temperaturen zwischen 5 und 60°C, vorzugsweise 4O0C, umsetzt. Während der Reaktionszeit, die zwischen 0,5 und 48 Stunden liegt, wird das Reaktionsgemisch intensiv gerührt. Danach wird zur Desaktivierung des Enzyms eine 0,1-M-EDTA-Lösung zugegeben und das entstandene Alkylphospho-L-serin chromatographisch gereinigt. Es ist bemerkenswert und keineswegs voraussehbar, daß sich die in der Natur nicht vorkommenden Verbindungen vom Typ II, die keine Glycerokomponente im Molekül besitzen, d. h. keine eigentlichen Phospholipide darstellen, Substrate für die natürlich vorkommende Phos,. ,olipase D darstellen und sich von dieser in die ebenfalls in der Natur nicht vorkommenden Verbindungen vom Typ I überführen lassen. Die unter b) genannte Synthesevariante für die neuen Verbindungen vom Typ I, die über die Zwischenverbindungen vom Typ V abläuft, wird zweckmäßigerweise durchgeführt, indem die getrockneten Pyridiniumsalze der Verbindungen IH(A = B = OH) mit dem doppelt geschützten Serin IV(Y = Benzhydryl, Z = N-t-Butoxycarbonyl) im Molverhältnis 1:1 bis 1:1,8 in Gegenwart einer organischen Base, z. B. Pyridin, wobei weitere inerte organische Lösungsmittel anwesend sein können, in Gegenwart eines Kondensationsmittels, z.B. 2,4,6-Triisopropylbenzolsulfochlorid, bei Temperaturen zwischen 5 und 50°C, vorzugsweise bei Raumtemperatur, umsetzt. Die entstandenen substituierten Alkylphosphoserine V werden in üblicherweise aus dem Reaktionsgemisch isoliert und, falls erforderlich, chromatographisch an Kieselgel gereinigt. Ihre Umwandlung in die Verbindungen I erfolgt, indem man in die Lösung der Verbindungen V in einem inerten organischen Lösungsmittel, vorzugsweise Chloroform, bei -5 bis 50C getrocknetes HCI-Gas einleitet. Nach der erfolgten Abspaltung der Schutzgruppen wird überschüssiges HCI durch Einleiten von Stickstoff entfernt.The enzymatic method mentioned under a) for preparing the compounds of the formula I is carried out in general by reacting a phosphoric acid ester of the general formula II with excess L-serine in an aqueous acetate or Tris buffer solution or suspension at pH 4.8 to 8.5 in the presence of 0.01 to 0.1 M calcium chloride with addition of diethyl ether or a mixture of diethyl ether with other organic solvents, eg. B. chloroform, and phospholipase D at temperatures between 5 and 60 ° C, preferably 4O 0 C, is reacted. During the reaction time, which is between 0.5 and 48 hours, the reaction mixture is stirred vigorously. Thereafter, to deactivate the enzyme, a 0.1 M EDTA solution is added and the resulting alkylphospho-L-serine purified by chromatography. It is remarkable and by no means foreseeable that the naturally occurring compounds of type II, which have no glycerol component in the molecule, ie do not represent actual phospholipids, are substrates for the naturally occurring phos. represent olipase D and can be converted by this into the also not occurring in nature type I compounds. The synthesis variant for the new compounds of type I, which proceeds via the intermediate compounds of type V, mentioned under b), is conveniently carried out by reacting the dried pyridinium salts of the compounds IH (A = B = OH) with the double-protected serine IV (Y = Benzhydryl, Z = Nt-butoxycarbonyl) in a molar ratio of 1: 1 to 1: 1.8 in the presence of an organic base, e.g. As pyridine, wherein further inert organic solvents may be present, in the presence of a condensing agent, for example 2,4,6-Triisopropylbenzolsulfochlorid, at temperatures between 5 and 50 ° C, preferably at room temperature, is reacted. The resulting substituted alkylphosphoserines V are usually isolated from the reaction mixture and, if necessary, purified by chromatography on silica gel. Their conversion into the compounds I takes place by introducing into the solution of the compounds V in an inert organic solvent, preferably chloroform, at -5 to 5 0 C dried HCl gas. After the deprotection has occurred, excess HCl is removed by introducing nitrogen.
Anschließend werden die entstandenen Verbindungen I durch Behandlung mit ammoniakhaltigen Lösungen in die Diammoniumsalze übergeführt und diese bei Bedarf chromatographisch gereinigt.Subsequently, the resulting compounds I are converted by treatment with ammonia-containing solutions in the diammonium salts and these are purified by chromatography if necessary.
Die erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen sind neu und biologisch aktiv. Sie wirken stark cytostatisch und hemmen z. B. die Zeilproliferation von Ehrlich-Ascites-Tumorzellen bereits in sehr niedrigen Konzentrationen. Als besonders wirksam erwiesen sich 17-Methoxyoctadecylphospho-L-serin; cis-9-n-octadecenylphospho-L-serin, Arachylphospho-L-serin, 2-Methoxy-tetradecylphospho-L-serin: 2-Methylmercapto-tetradecylphospho-L-serin, 2-Dimethyiamino-tetradecylphospho-L-serin.The compounds according to the invention are new and biologically active. They have a strong cytostatic and inhibit z. B. the cell proliferation of Ehrlich ascites tumor cells already in very low concentrations. 17-Methoxyoctadecylphospho-L-serine proved to be particularly effective; cis-9-n-octadecenylphospho-L-serine, arachylphospho-L-serine, 2-methoxy-tetradecylphospho-L-serine: 2-methylmercapto-tetradecylphospho-L-serine, 2-dimethylthio-tetradecylphospho-L-serine.
R-O-P-O-CH2-CH-COOH OH NH2 ROPO-CH 2 -CH-COOH OH NH 2
VlVl
worin R = einen Alkylrest mit 10 bis 16C-Atomen bedeutet, sind für die Verwendung zur Herstellung cytostatisch wirksamerpharmazeutischer Mittel geeignet.wherein R = an alkyl radical of 10 to 16C atoms are suitable for use in the preparation of cytostatic pharmaceutical agents.
seri" Oodecylphospho-L-serin, Tetradecylphospho-L-serin, Hexadecylphospho-L-serin.seri "Oodecylphospho-L-serine, Tetradecylphospho-L-serine, Hexadecylphospho-L-serine.
morzellen bereits in sehr niedrigen Konzentrationen. In Tabelle 1 ist die konzentrationsabhängige Wachstumshemmung vonalready in very low concentrations. Table 1 shows the concentration-dependent growth inhibition of
Das Dodecylphospho-L-serin zeigte an HL-60-Leukämiezellen sowie KB-Tumorzellen beträchtliche cytostatische Aktivität, die ICM-Werte (Konzentration, die eine 50% Hemmung des Zellwachstums bewirkt) betrugen 15 bzw. 39 · 10'8M. Die Erfindung wird an nachstehenden Beispielen näher erläutert.The dodecylphospho-L-serine exhibited considerable cytostatic activity on HL-60 leukemia cells as well as KB tumor cells, the IC M values (concentration causing 50% inhibition of cell growth) were 15 and 39 x 10 -8 M., respectively The invention will be explained in more detail by the following examples.
0,8g L-Serin (7,6mmol) werden in 1,66ml 0,1-M-Acetatpuffer (pH5,6), der 0,09M an CaCI2 ist, bei 450C gelöst.0.8 g of L-serine (7,6mmol) are in 1,66ml 0.1 M acetate buffer (pH5,6) of 0.09M to CaCl 2 is dissolved at 45 0 C.
3 Stunden bei 45°C gerührt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur werden 3,31 ml 0,1-M-EDTA-Lösung zugesetzt und durchStirred for 3 hours at 45 ° C. After cooling to room temperature, 3.31 ml of 0.1 M EDTA solution are added and passed through
1 Volumen Wasser und 3,7 Volumen Chloroform versetzt, die Mischung 10 Minuten geschüttelt, die organische Phaseabgetrennt, im Vakuum eingeengt und der erhaltone Rückstand an Carboxymethylcellulose (CM 52 Whatman, Na+-Form)säulenchromatographisch getrennt. Dio Elution erfolgt nacheinander mit 75ml Chloroform, je 300 ml Chloroform/Methanol, 9:1,8:2,7:3, anschließend 1750ml Chloroform/Methanol 1:1 (jeweils v/v). Die Fraktionsgröße beträgt 50ml. Aus den Fraktionen18-40 worden 16mg reines Hexadecylphospho-L-Serin (Na-SaIz) erhalten.1 volume of water and 3.7 volumes of chloroform, the mixture was shaken for 10 minutes, the organic phase separated, concentrated in vacuo and the resulting residue on carboxymethylcellulose (CM 52 Whatman, Na + form) separated by column chromatography. Dio elution is carried out successively with 75 ml of chloroform, 300 ml each of chloroform / methanol, 9: 1.8: 2.7: 3, then 1750 ml of chloroform / methanol 1: 1 (v / v in each case). The fraction size is 50ml. 16 mg of pure hexadecylphospho-L-serine (Na salt) were obtained from fractions 18-40.
eingeengt und das so erhaltene Pyridiniumsalz über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Danach wird es in 11 mlwasserfreiem Pyridin gelöst.concentrated and dried the pyridinium salt thus obtained over phosphorus pentoxide in vacuo. It is then dissolved in 11 ml of anhydrous pyridine.
0,806g (2,17 mmol) geschütztes Serin (IV, Y = CH(CjH5J2, Z- CO-O(CH3I3), über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet,werden in 9ml wasserfreiem Pyridin gelöst. Die beiden Lösungen werden vermischt und zum Gemisch 1,32g (4,35mmol)0.806 g (2.17 mmol) of protected serine (IV, Y = CH (CjH 5 J 2 , Z-CO-O (CH 3 I 3 ), dried over phosphorus pentoxide in vacuo, are dissolved in 9 ml of anhydrous pyridine are mixed and added to the mixture 1.32g (4.35mmol)
24 Stunden gerührt. Nach Zugabe von einigen Tropfen Wasser wird noch weitere 30 Minuten gerührt. Danach wird das Gemischim Vakuum eingeengt und der Rückstand über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet. Der erhaltene Rückstand wird mit 20mlStirred for 24 hours. After adding a few drops of water, stirring is continued for a further 30 minutes. Thereafter, the mixture is concentrated in vacuo and the residue is dried over phosphorus pentoxide in vacuo. The residue obtained is mixed with 20 ml
eingeengt. Der Rückstand wird in Chloroform gelöst und durch Säulenchromatographie an 36g Kieselgel 60 (Korngröße0,04-0,063mm, 230-400mesh, Merck) gereinigt. Das für die Säulenchromatographie verwendete Chloroform ist mit 25%igemwäßrigem Ammoniakgesättigt. Eluiertwird mit 300m! Chloroform, 250ml Chloroform/Methanol,98:2, v/v, 200ml Chloroform/concentrated. The residue is dissolved in chloroform and purified by column chromatography on 36 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The chloroform used for the column chromatography is saturated with 25% aqueous ammonia. Eluiertwird with 300m! Chloroform, 250ml chloroform / methanol, 98: 2, v / v, 200ml chloroform /
beträgt Σ .ml. Die Fraktionen 41-47'enthalten 152mg Hexadecylphospho-N-f-butoxycarbonyl-L-serinbenziiydrylester V(R = C16U33, Y = CH(C6H5I2, Z = CO-OC(CH3I3), (Ammoniumsalz), Ausbeute 32%.is Σ .ml. The fractions 41-47 'contain 152 mg hexadecylphospho-Nf-butoxycarbonyl-L-serinbenziihydryl ester V (R = C 16 U 33 , Y = CH (C 6 H 5 I 2 , Z = CO-OC (CH 3 I 3 ), ( Ammonium salt), yield 32%.
61 mg (0,09mmol) der beschriebenen Verbindung V werden im Vakuum über Phosphorpentoxid getrocknet und anschließend in 12 ml wasserfreiem Chloroform gelöst. Durch diese Lö ng wird für 10 Minuten trockener Stickstoff und anschließend unter wasserfreien Bedingungen bei O0C für 20 Minuten HCIuas geleitet. Danach wird das Reaktionsgefäß fest verschlossen und das Reaktionsgemisch 1 Stunde bei O0C weitergerührt.61 mg (0.09 mmol) of the described compound V are dried in vacuo over phosphorus pentoxide and then dissolved in 12 ml of anhydrous chloroform. Dry nitrogen is passed through this solution for 10 minutes followed by HCIu for 20 minutes under anhydrous conditions at 0 ° C. Thereafter, the reaction vessel is tightly closed and the reaction mixture is stirred for 1 hour at 0 0 C.
Zur Entfernung des HCI-Gases wird anschließend 1 Stunde lang bei Raumtemperatur Stickstoff durch das Reaktionsgemisch geleitet. Danach wird das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mit einer Mischung von 10ml Chloroform/Methanol, 2:1, v/v, 1 ml Wasser und 0,02 ml 25%igem wäßrigen Ammoniak versetzt und nach Phasentrennung die anfallende organische Phase abgetrennt. Die wäßrige Phase wird 3x mit Chloroform/Methanol, 2:1, v/v extrahiert, dio organischen Lösungen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Zur Entfernung des restlichen Wassers wird mehrmals mit 1 ml Benzen/Ethanol, 2:3, v/v, nachdestilliert. Das erhaltene Produkt wird über Phosphorponioxid irn Vakuum getrocknet jnd danach mit Aceton gewaschen. Ausbeute: 30,8mg (83%).Nitrogen is then passed through the reaction mixture for 1 hour at room temperature to remove the HCl gas. Thereafter, the reaction mixture is concentrated in vacuo. The residue is treated with a mixture of 10 ml of chloroform / methanol, 2: 1, v / v, 1 ml of water and 0.02 ml of 25% aqueous ammonia and separated after phase separation, the resulting organic phase. The aqueous phase is extracted 3x with chloroform / methanol, 2: 1, v / v, the organic solutions are combined and concentrated in vacuo. To remove the remaining water is distilled several times with 1 ml of benzene / ethanol, 2: 3, v / v. The product obtained is dried over phosphorus trioxide in vacuo and then washed with acetone. Yield: 30.8 mg (83%).
Das erhaltene Hexadecylphospho-L-serin (Diammoniumsalz) I (R = Ci6H33) ist dünnschichtchromatographisch einheitlich. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser, 10:2:4:2:1, v/v/v/v/v): Rf = 0,1. Die Sichtbarmachung erfolgt mit Molybdatreaganz sowie mit Ninhydrinspray.The obtained Hexadecylphospho-L-serine (diammonium salt) I (R = Ci 6 H 33 ) is thin-layer chromatographic unitary. TLC (Kieselgel 60, Merck precast plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water, 10: 2: 4: 2: 1, v / v / v / v / v): Rf = 0.1. The visualization is carried out with molybdate reactant as well as with ninhydrin spray.
Zur Entfernung von Spuren an NH4CI wird die Substanz (30,8 mg) an 2 g Kieselgel 60 (Korngröße 0,04-0,063 mm, 230-400 mesh, Merck) chromatographiort. Die Säule wird mit Chloroform/Methanol/wäßrigem 25%igen Ammoniak, 80:20:0,5, v/v/v äquilibriert. In der gleichen Mischung wird auch die Substanz gelöst und auf die Säule gegeben. Eluiert wird mit 20ml Chloroform/Methanol/25%igem wäßrigen Ammoniak, 80:20:0,5, v/v/v, 20ml Chloroform/Methanol/25%igem wäßrigen Ammoniak, 75:25:0,5, v/v/v, 20ml Ch!oroform/Methanol/25%igem wäßrigen Ammoniak, 70:30:0,5, v/v/v, 20ml Chloroform/ Methanol/25%igem wäßrigen Ammoniak, 65:35:0,5, v/v/v, 260ml Chloroform/Methanol/25%igem wäßrigen Ammoniak, 60:40:0,5, v/v/v. Die Verbindung wird aus Fraktion 7-13 (Fraktionsgröße 20ml) durch Einengen erhalten. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser, 10:2:4:2:1, v/v/v/v/v): Rf = 0,1. Analog Beispiel 2 werden folgende Verbindungen hergestellt:To remove traces of NH 4 Cl, the substance (30.8 mg) is chromatographed on 2 g of silica gel 60 (particle size 0.04-0.063 mm, 230-400 mesh, Merck). The column is equilibrated with chloroform / methanol / aqueous 25% ammonia, 80: 20: 0.5, v / v / v. In the same mixture, the substance is dissolved and added to the column. Elution is with 20 ml of chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 80: 20: 0.5, v / v / v, 20 ml of chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 75: 25: 0.5, v / v / v, 20ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 70: 30: 0.5, v / v / v, 20ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 65: 35: 0.5, v / v / v / v, 260ml chloroform / methanol / 25% aqueous ammonia, 60: 40: 0.5, v / v / v. The compound is obtained from fraction 7-13 (fraction size 20 ml) by concentration. TLC (Kieselgel 60, Merck precast plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water, 10: 2: 4: 2: 1, v / v / v / v / v): Rf = 0.1. The following compounds are prepared analogously to Example 2:
n-Decylphospho-L-serln (Vl, R = C10H2i)n-decylphospho-L-serln (VI, R = C 10 H 2 i)
n-Dodecylphospho-L-serln (Vl, R = C12H25)n-dodecylphospho-L-serine (VI, R = C 12 H 25 )
n-Tetradecylphospho-L-serln (Vl, R = CMH29)n-tetradecylphospho-L-serln (VI, R = C M H 29 )
Beispiel β17-Methoxy-n-octadecylphospho-L-seiln (I, R = C„H3,OCH})Example β17-Methoxy-n-octadecylphospho-L-Seiln (I, R = C "H 3 , OCH } )
cls-9-n-octadecenylphospho-L-serln (I, R = CuH38)Aus cis-g-n-Octadecenylphosphat und geschütztem Serin (IV, Y = CH(C6H6J2^Z = CO-OC(CH3J3), DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10:2:4:2:1; v/v/v/v/v): Rf =0,1.Cls-9-n-octadecenylphospho-L-serine (I, R = CuH 38 ) From cis-gn-octadecenyl phosphate and protected serine (IV, Y = CH (C 6 H 6 J 2) Z = CO-OC (CH 3 J 3 ), TLC (Kieselgel 60, Merck precast plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1, v / v / v / v / v): Rf = 0.1.
2-Methoxy-n-tetradecylphospho-L-serin (1,R = CmH28OCH3)Aus 2-Methoxy-n-tetradecylphosphst und geschütztem Serin (IV, Y = CH(C6H5I2, Z = CO-OC(CH3J3), DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Essigsäure/Wasser 10:2:4:2:1; v/v/v/v/v): Rf= 0,1.2-methoxy-n-tetradecylphospho-L-serine (1, R = CmH 28 OCH 3 ) From 2-methoxy-n-tetradecylphosphate and protected serine (IV, Y = CH (C 6 H 5 I 2 , Z = CO-) OC (CH 3 J 3 ), TLC (silica gel 60, Merck precast plates, chloroform / methanol / acetone / acetic acid / water 10: 2: 4: 2: 1, v / v / v / v / v): R f = 0 ,1.
2-Methylmercapto-n-tetradecylphoepho-L-eerln (I, R « Ci4HnSCHj) Aus 2-Methylmercapto-n-tetradecylphosphat und geschütztem Serin (IV, Y = CH(CeH6)2, Z - CO-OC(CHj)3), DC (Kieselgel 60, Merck-Fertlgplatten, Chloroform/Methanol/Aceton/Eeslgsäure/Wasser 10:2:4:2:1; v/v/v/v/v):2-Methylmercapto-n-tetradecylphoepho-L-enel (I, R "Ci 4 HnSCHj) From 2-methylmercapto-n-tetradecyl phosphate and protected serine (IV, Y = CH (C e H 6 ) 2 , Z-CO-OC (CHj) 3 ), TLC (Kieselgel 60, Merck-Grundlgplatten, chloroform / methanol / acetone / Eeslgsäure / water 10: 2: 4: 2: 1, v / v / v / v / v):
Rf = O1LRf = O 1 L
2-Dlmethylamlno-tetradecylphospho-L-serln (I, R = C14H2)N(CH1)]) Aus 2-Dimethylamino-tetradecylphosphat und geschüutem Serin (IV1Y ° CH(C8Hs)2, Z = CO-OC(CH3)J), OC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten.Chloroform/Methanol/Aceton/Esslgsäure/Wasser 10:2:4:2:1; v/v/v/v/v):2-Dimethylamino-tetradecylphospho-L-serine (I, R = C 14 H 2 ) N (CH 1 )]) From 2-dimethylamino-tetradecyl phosphate and washed serine (IV 1 Y ° CH (C 8 Hs) 2 , Z = CO-OC (CH 3 ) J), OC (Kieselgel 60, Merck precoated plates, chloroform / methanol / acetone / ethyl acetate / water 10: 2: 4: 2: 1, v / v / v / v / v):
In Betracht gezogene Druckschriften:Documents considered:
DE-OS 3639084: (folgende Verb, sind neuheitsschädlich vorbeschrieben, ebenso deren Herstellungsverfahren [Chem.Wegl:DE-OS 3639084: (following verb, are novelty damaging described above, as well as their preparation method [Chem.Wegl:
R-O-P-O-CH2-CH-COOH OH NH2 ROPO-CH 2 -CH-COOH OH NH 2
R = Alkyl Ce-38 [bzw. am C2-AtOm OH-subst.] EP 122152: enzym. Analogieverfahren für neiiheitsschädlich vorbeschriebene Verb, nicht schutzfähig)R = alkyl Ce-38 [or on the C 2 atom OH subst.] EP 122152: enzyme. Analogy method for nity-damaging prescribed verb, not protectable)
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