EA038124B1 - Жидкая композиция нейротоксина, стабилизированная триптофаном или тирозином - Google Patents

Жидкая композиция нейротоксина, стабилизированная триптофаном или тирозином Download PDF

Info

Publication number
EA038124B1
EA038124B1 EA201892493A EA201892493A EA038124B1 EA 038124 B1 EA038124 B1 EA 038124B1 EA 201892493 A EA201892493 A EA 201892493A EA 201892493 A EA201892493 A EA 201892493A EA 038124 B1 EA038124 B1 EA 038124B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
liquid composition
botulinum neurotoxin
tryptophan
composition according
amino acid
Prior art date
Application number
EA201892493A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201892493A1 (ru
Inventor
Андерс Ярстад
Анна Фриис
Ульф Шталь
Анн Гурелль
Барбро Агрен
Эмилия Эдстром
Эндрю Пикетт
Original Assignee
Ипсен Биофарм Лимитед
Гальдерма Холдинг Са
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ипсен Биофарм Лимитед, Гальдерма Холдинг Са filed Critical Ипсен Биофарм Лимитед
Publication of EA201892493A1 publication Critical patent/EA201892493A1/ru
Publication of EA038124B1 publication Critical patent/EA038124B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A61K8/20—Halogens; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A61K8/24—Phosphorous; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/39—Derivatives containing from 2 to 10 oxyalkylene groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
    • A61K8/44—Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4906—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom
    • A61K8/4913—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom having five membered rings, e.g. pyrrolidone carboxylic acid
    • A61K8/492—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom having five membered rings, e.g. pyrrolidone carboxylic acid having condensed rings, e.g. indol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/66—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/06—Preparations for care of the skin for countering cellulitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/20—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of the composition as a whole
    • A61K2800/30—Characterized by the absence of a particular group of ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к стабильным жидким композициям нейротоксинов, не содержащим животных белков, но содержащим поверхностно-активное вещество, аминокислоту, выбранную из триптофана и тирозина, буфер, включающий ионы натрия, хлорид-ионы и фосфат-ионы, при этом композиции имеют величину pH от 5,5 до 8 и стабильны в течение 2 месяцев. Такие композиции подходят для применения в терапии и, в частности, для введения пациенту для достижения требуемого терапевтического или эстетического эффекта. Изобретение также относится к применению аминокислоты, выбранной из триптофана и тирозина, для защиты белкового нейротоксина от разрушения в жидкой композиции, не содержащей белков животного происхождения.

Description

Область техники
Настоящее изобретение относится к жидким композициям нейротоксинов, не содержащим животных белков. В частности, настоящее изобретение относится к жидким композициям ботулинического нейротоксина, не содержащим животных белков, стабилизированным небелковыми вспомогательными веществами.
Композиции нейротоксинов, описанные в данном контексте, могут применяться в терапии и, в частности, могут вводиться пациенту для достижения требуемого терапевтического или эстетического эффекта.
Предшествующий уровень техники
Клостридиальные нейротоксины, продуцируемые в природе штаммами клостридий, являются одними из самых токсичных биологических агентов, известных на сегодняшний день, и в то же время представляют собой мощное средство для лечения целого ряда нервно-мышечных расстройств и эндокринных нарушений, включая дистонию мышц шеи, мышечную спастичность, блефароспазм, гипергидроз или сиалорею. Они также находят применение в эстетической медицине для разглаживания морщин.
Для применения в качестве фармацевтического продукта композиция нейротоксина должна быть такой, чтобы ее можно было хранить без существенной потери активности нейротоксина.
Во всех разрешенных в настоящее время к применению композициях ботулинических нейротоксинов в качестве стабилизатора используют животный (в том числе, человеческий) белок, как правило, человеческий сывороточный альбумин (англ. HSA - human serum albumin).
Однако присутствие в фармацевтических композициях животных белков, таких как HSA, является нежелательным из-за риска, пусть даже минимального, случайной передачи пациенту переносимых животными инфекционных агентов, таких как прионы.
В данной области техники раскрыты не содержащие животных белков композиции ботулинического токсина. Например, в патентном документе WO 0158472 описаны лиофилизированные композиции, в которых для стабилизации ботулинического токсина используют полисахарид, такой как 2гидроксиметилкрахмал. В патентном документе WO 2005007185 описаны композиции, в которых для стабилизации ботулинического токсина используют поверхностно-активное вещество и смесь по меньшей мере двух аминокислот, выбранных из Glu и Gln или Asp и Asn.
Однако большинство композиций предшествующего уровня техники нестабильны в жидкой форме и поэтому хранятся в лиофилизированной или сублимированной форме. Такие композиции перед введением пациенту необходимо восстанавливать стерильным физиологическим раствором. Подобная стадия восстановления сопряжена с потерей времени врача, риском ошибки при разведении, а также с риском загрязнения во время процесса восстановления. Кроме того, поставщик ботулинического токсина должен обучить врачей, чтобы гарантировать, что стадия восстановления выполнена надлежащим образом.
Вследствие этого жидкие композиции являются предпочтительными, поскольку они избавляют врача от потери времени, позволяют исключить риск ошибки при разведении, риск загрязнения и необходимость в обеспечении обучения поставщиком.
Жидкие композиции, не содержащие HSA, описаны, например, в патентном документе WO 2006005910, раскрывающем жидкие композиции ботулинического токсина, содержащие поверхностно-активное вещество, хлорид натрия и дисахарид. В патентном документе WO 2009008595 раскрыты жидкие композиции ботулинического токсина, содержащие полисорбат 20 и метионин.
Целью настоящего изобретения является обеспечение предпочтительных жидких композиций ботулинического нейротоксина, не содержащих животных белков, пригодных для хранения и для применения в терапии. В частности, стабилизирующая композиция должна поддерживать стабильность продукта, не должна содержать животных белков, а также должна быть пригодной для стабилизации нейротоксина, не содержащего комплексообразующих белков.
Краткое описание сущности изобретения
Первым аспектом настоящего изобретения является жидкая композиция, содержащая или, по существу, состоящая из белкового нейротоксина, поверхностно-активного вещества, аминокислоты, выбранной из триптофана и тирозина, буфера, включающего ионы натрия, хлорид-ионы и фосфат-ионы, имеющая величину pH в диапазоне от 5,5 до 8, стабильная в течение продолжительного времени и не содержащая белков животного происхождения.
Другим аспектом является применение жидких композиций в соответствии с изобретением в терапии и/или в косметических средствах.
Еще одним аспектом настоящего изобретения является использование аминокислоты, выбранной из триптофана и тирозина, для защиты белкового нейротоксина от разрушения в жидкой композиции, не содержащей белков животного происхождения.
Подробное описание изобретения
Первым аспектом настоящего изобретения является жидкая композиция, содержащая или, по существу, состоящая из белкового нейротоксина, поверхностно-активного вещества, аминокислоты, выбранной из триптофана и тирозина, буфера, включающего ионы натрия, хлорид-ионы и фосфат-ионы, имеющая величину pH в диапазоне от 5,5 до 8, стабильная в течение продолжительного времени и не содер- 1 038124 жащая белков животного происхождения.
Выражение не содержащая животных белков следует понимать как не содержащая белка животного, в том числе человеческого, происхождения.
Нейротоксин представляет собой вещество, воздействующее на нервную клетку и поражающее неврологическую функцию. К белковым нейротоксинам относятся ботулинические токсины (BoNT) и столбнячный токсин (TeNT). Предпочтительно белковый нейротоксин является ботулиническим нейротоксином.
Ботулинические нейротоксины представляют собой металлопротеазы с молекулярной массой 150 кДа, состоящие в их активной форме из легкой цепи (L) с молекулярной массой 50 кДа и тяжелой цепи (Н) с молекулярной массой 100 кДа, связанных дисульфидным мостиком. L-цепь представляет собой цинк-протеазу, которая внутриклеточно расщепляет один из белков SNARE (англ. soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor - растворимый, чувствительный к Nэтилмалеиду рецептор стыковочных белков), участвующих в опосредованном везикулами выделении нейротрансмиттеров, тем самым нарушая опосредуемые нейротрансмиттерами механизмы. Тяжелая цепь объединяет в себе два домена: N-концевой домен транслокации (HN) с молекулярной массой 50 кДа и Сконцевой рецептор-связывающий домен (HC) с молекулярной массой 50 кДа. HC домен ботулинического нейротоксина содержит две различимые структурные единицы, называемые HCC и HCN доменами. Считается, что аминокислотные остатки, занятые в связывании с рецептором, расположены главным образом в HCC домене.
Ботулинические нейротоксины классифицируют по 7 антигенно различимым серотипам (от A до G). Примеры аминокислотных последовательностей для каждого серотипа обозначены в данном контексте как SEQ ID NO: с 1 по 7.
Различные домены для каждой из последовательностей могут быть, например, следующими.
Серотип L цепь HN домен HCn домен Hec домен
BoNT/А (SEQ ID NO 1) 1-448 449-871 872-1110 1111-1296
BoNT/B (SEQ ID NO 2) 1-440 441-858 859-1097 1098-1291
BoNT/С (SEQ ID NO 3) 1-441 442-866 867-1111 1112-1291
BoNT/D (SEQ ID NO 4) 1-445 446-862 863-1098 1099-1276
BoNT/Е (SEQ ID NO 5) 1-422 423-845 846-1085 1086-1252
BoNT/F (SEQ ID NO 6) 1-439 440-864 865-1105 1106-1274
BoNT/G (SEQ ID NO 7) 1-441 442-863 864-1105 1106-1297
Специалистам будет понятно, что могут быть некоторые изменения в каждом из доменов ботулинического нейротоксина.
BoNT воздействуют, например, на нервно-мышечный синапс, подавляя высвобождение ацетилхолина и, тем самым, препятствуя мышечному сокращению. Интоксикация нервных окончаний является обратимой и ее продолжительность варьируется для различных серотипов BoNT.
В природе BoNT продуцируется бактериями Clostridium botulinum и другими видами клостридий, такими как С. butyricum, С. baratii и С. argentinense, в составе мультибелковых комплексов, защищающих нейротоксин от протеолитического расщепления. Под ботулиническим нейротоксином в форме комплекса подразумевается ботулинический нейротоксин и один или более из белков, по своей природе являющихся частью таких мультибелковых комплексов (нейротоксин-ассоциированные белки или NAP). NAP состоят из нетоксических негемагглютинина (NTNH) и гемагглютининов (НА-17, НА-33 и НА-70). Под ботулиническим нейротоксином высокой степени чистоты подразумевается ботулинический нейротоксин, по существу, не содержащий NAP.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения ботулинический нейротоксин является ботулиническим нейротоксином в форме комплекса. Согласно другому варианту осуществления ботулинический нейротоксин представляет собой ботулинический нейротоксин высокой степени чистоты.
Способ получения BoNT посредством культивирования природных клостридиальных штаммов и очистки их в форме комплекса либо в особо чистой форме описаны, например, в работе Pickett, Andy Botulinum toxin as a clinical product: manufacture and pharmacology (Ботулинический токсин как клинический продукт: получение и фармакологические характеристики), Clinical Applications of Botulinum Neurotoxin (Клинические применения ботулинического нейротоксина). Springer New York, 2014, 7-49.
Особо чистый или, по существу, чистый ботулинический нейротоксин может быть получен из бел- 2 038124 кового комплекса, содержащего ботулинический токсин, например, с помощью способа, описанного в работе Current topics in Microbiology and Immunology (Актуальные темы в микробиологии и иммунологии) (1995), 195, р. 151-154.
В качестве альтернативы ботулинический нейротоксин высокой степени чистоты может быть получен путем рекомбинантной экспрессии гена BoNT на гетерологичном хозяине, таком как Е. coli, с последующей очисткой от него.
Предпочтительно белковый нейротоксин является ботулиническим нейротоксином. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения ботулинический нейротоксин является ботулиническим нейротоксином в форме комплекса. Согласно другому варианту осуществления ботулинический нейротоксин представляет собой ботулинический нейротоксин высокой степени чистоты.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения ботулинический нейротоксин является ботулиническим нейротоксином, очищенным из его природного клостридиального штамма. Согласно другому варианту осуществления ботулинический нейротоксин является ботулиническим нейротоксином, получаемым рекомбинантно на гетерологичном хозяине, таком как Е. coli.
Согласно настоящему изобретению ботулинический нейротоксин может быть BoNT серотипов A, B, C, D, E, F или G.
Согласно настоящему изобретению ботулинический нейротоксин может быть модифицированным ботулиническим нейротоксином. Согласно настоящему изобретению модифицироанный BoNT означает BoNT, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 50% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7. Предпочтительно модифицироанный BoNT имеет аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7. Предпочтительно модифицироанный BoNT представляет собой BoNT, чья аминокислотная последовательность отличается от SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 менее чем на 600, 400, 200, 150, 100, 50 или 20 аминокислотных замен, делеций или вставок, например на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотные замены, делеции или вставки.
Согласно настоящему изобретению рекомбинантный ботулинический нейротоксин может быть химерным ботулиническим нейротоксином. Согласно настоящему изобретению химерный BoNT состоит из L, HN, HCN и HCC доменов, не принадлежащих к одному и тому же серотипу. Например, химерный BoNT может состоять из L цепи одного серотипа и полной H цепи (HN, HCN и HCC домены) другого серотипа. Химерный BoNT может также состоять из L цепи и HN домена (LHN) одного серотипа и HC домена (HCN и HCC) другого серотипа. Химерный BoNT может также состоять из L цепи и HN и HCN доменов (расширенный LHN) одного серотипа и HCC домена другого серотипа.
В соответствии с изобретением домен легкой цепи (L) может иметь аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 90% или 95% идентичность последовательности с одной из следующих аминокислотных последовательностей и сохраняющую способность расщеплять один из белков SNARE, участвующих в выделении опосредованного везикулой нейротрансмиттера:
аминокислота 1-448 последовательности SEQ ID NO: 1, аминокислота 1-440 последовательности SEQ ID NO: 2, аминокислота 1-441 последовательности SEQ ID NO: 3, аминокислота 1-445 последовательности SEQ ID NO: 4, аминокислота 1-422 последовательности SEQ ID NO: 5, аминокислота 1-439 последовательности SEQ ID NO: 6, аминокислота 1-441 последовательности SEQ ID NO: 7.
В соответствии с изобретением HN домен может иметь аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 90% или 95% идентичность последовательности с одной из следующих аминокислотных последовательностей и сохраняющую способность транслокации:
аминокислота 449-871 последовательности SEQ ID NO: 1, аминокислота 441-858 последовательности SEQ ID NO: 2, аминокислота 442-866 последовательности SEQ ID NO: 3, аминокислота 446-862 последовательности SEQ ID NO: 4, аминокислота 423-845 последовательности SEQ ID NO: 5, аминокислота 440-864 последовательности SEQ ID NO: 6, аминокислота 442-863 последовательности SEQ ID NO: 7.
В соответствии с изобретением HC домен может иметь аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 90% или 95% идентичность последовательности с одной из следующих аминокислотных последовательностей и сохраняющую способность связываться с нервно-мышечной клеткой:
аминокислота 872-1296 последовательности SEQ ID NO: 1, аминокислота 859-1291 последовательности SEQ ID NO: 2, аминокислота 867-1291 последовательности SEQ ID NO: 3,
- 3 038124 аминокислота 863-1276 последовательности SEQ ID NO: 4, аминокислота 846-1252 последовательности SEQ ID NO: 5, аминокислота 865-1274 последовательности SEQ ID NO: 6, аминокислота 864-1297 последовательности SEQ ID NO: 7.
В соответствии с изобретением HCC домен может иметь аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 90% или 95% идентичность последовательности с одной из следующих аминокислотных последовательностей и сохраняющую способность связываться с нервно-мышечной клеткой:
аминокислота 1111-1296 последовательности SEQ ID NO: 1, аминокислота 1098-1291 последовательности SEQ ID NO: 2, аминокислота 1112-1291 последовательности SEQ ID NO: 3, аминокислота 1099-1276 последовательности SEQ ID NO: 4, аминокислота 1086-1252 последовательности SEQ ID NO: 5, аминокислота 1106-1274 последовательности SEQ ID NO: 6, аминокислота 1106-1297 последовательности SEQ ID NO: 7.
Указанные выше эталонные последовательности следует рассматривать как направляющие, поскольку в зависимости от подсеротипов могут иметь место незначительные изменения.
Процент идентичности последовательностей между двумя или более последовательностями нуклеиновых кислот или аминокислотными последовательностями является функцией числа идентичных нуклеотидов/аминокислот в идентичных положениях для выравненных последовательностей. Таким образом, % идентичности можно рассчитать как число идентичных нуклеотидов/аминокислот в каждом положении при выравнивании, поделенное на общее число нуклеотидов/аминокислот в выравненной последовательности, и умноженное на 100. При вычислении % идентичности последовательностей могут также учитываться число гэпов и длина каждого гэпа, вводимого для оптимизации выравнивания двух или более последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности между двумя или более последовательностями может быть выполнено с использованием конкретных математических алгоритмов, таких как BLAST, хорошо знакомых специалистам.
Поверхностно-активные вещества (или поверхностно-активные агенты) представляют собой соединения, способные снижать поверхностное натяжение между жидкостью и твердым веществом или между двумя жидкостями.
Поверхностно-активные вещества могут быть неионными, анионными, катионными или амфотерными. В композициях в соответствии с изобретением поверхностно-активное вещество предпочтительно является неионным поверхностно-активным веществом. Неионные поверхностно-активные вещества включают простые алкиловые эфиры полиоксиэтилена, такие как простой монододециловый эфир октаэтиленгликоля или простой монододециловый эфир пентаэтиленгликоля; простые алкиловые эфиры полиоксипропиленгликоля; простые алкиловые эфиры глюкозидов, такие как децилглюкозид, лаурилглюкозид или октилглюкозид; простые октилфеноловые эфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как Triton X-100; простые алкилфеноловые эфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как Nonoxynol-9; сложные алкиловые эфиры глицерина, такие как глицериллаурат; сложные алкиловые эфиры полиоксиэтиленгликольсорбитана, такие как полисорбаты; сложные алкиловые эфиры сорбитана, такие как Spans; кокамид МЭА, кокамид ДЭА; додецилдиметиламиноксид; блок-сополимеры полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля, такие как полоксамеры; полиэтоксилированный таловый амин (англ. РОЕА).
Согласно предпочтительному варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит неионное поверхностно-активное вещество, представляющее собой полисорбат, предпочтительно полисорбат 20 (PS20), полисорбат 60 (PS60) или полисорбат 80 (PS80). Наиболее предпочтительно неионное поверхностно-активное вещество представляет собой PS80. В случае, если поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат, его концентрация предпочтительно составляет от 0,001 до 15 об.%, более предпочтительно от 0,005 до 2 об.%, более предпочтительно от 0,01 до 1% например 0,01, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 или 1 об.%. Согласно одному из вариантов осуществления поверхностно-активное вещество представляет собой PS80 в концентрации от 0,05 до 0,2 об.%, например приблизительно 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,10, 0,11, 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,18, 0,19 или 0,20 об.%.
PS20 имеет плотность приблизительно 1,1 г/мл. PS60 имеет плотность приблизительно 1,044 г/мл. PS80 имеет плотность приблизительно от 1,06 до 1,09 г/мл.
Считается, что полисорбаты образуют мицеллы и предотвращают адсорбцию белков поверхностями и агрегацию белков. Не желая быть связанными теорией, можно предположить, что при разложении/окислении полисорбаты могут образовывать перекиси и кислоты, способные влиять на стабильность белков. Поэтому считается предпочтительным, чтобы концентрация полисорбата в композиции продукта была как можно ниже. Таким образом, считается предпочтительным, чтобы концентрация полисорбата не более чем в 200 раз превышала его критическую мицеллярную концентрацию (англ. CMC), более предпочтительно она не должна превышать более чем в 100, 50, 20, 10 или 5 раз свою CMC.
Для PS20 (Mw 1227,5 г/моль) величина CMC составляет приблизительно 8х10-5 М при температуре
- 4 038124
21°С, т.е. приблизительно 0,01 (мас./об.)%.
Для PS60 (Mw 1309 г/моль) величина CMC составляет приблизительно 21х10-6 М при температуре 21°С, т.е. приблизительно 0,003 (мас./об.)%.
Для PS80 (Mw 1310 г/моль) величина CMC составляет приблизительно 12х10-6 М при температуре 21°С, т.е. приблизительно 0,002 (мас./об.)%.
Согласно предпочтительному варианту осуществления концентрация полисорбата в 1-200 раз превышает его CMC при данной температуре, например при температуре приблизительно 21°С предпочтительно в 2-100 раз превышает его CMC, например, приблизительно в 20 или 50 раз превышает его CMC.
Жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит аминокислоту, являющуюся триптофаном или тирозином. Не желая быть связанными теорией, можно предположить, что триптофан или тирозин могут предотвращать окисление активного белка, делающее его нефункциональным. В действительности, считается, что аминокислота, добавленная в молярном избытке по отношению к нейротоксину, будет окисляться в первую очередь, сохраняя нейротоксин. Можно также предположить, что триптофан или тирозин могут нейтрализовать реакционноспособные продукты разложения поверхностноактивных веществ, таких как полисорбаты.
Предпочтительно аминокислота является триптофаном. Более предпочтительно аминокислота является L-триптофаном.
Концентрация аминокислоты предпочтительно составляет приблизительно от 0,1 до 5 мг/мл, более предпочтительно от 0,1 до 5 мг/мл, от 0,25 до 3 мг/мл, например приблизительно 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2 или 3 мг/мл.
Композиция в соответствии с изобретением содержит буфер, включающий ионы натрия, хлорид- и фосфат-ионы. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что буферы, не содержащие ионов натрия, хлорид- и фосфат-ионов, снижали стабильность токсина. Предпочтительно буфер также содержит ионы калия.
Буфер может быть получен, например, объединением солей хлорида натрия, хлорида калия и фосфата натрия. Концентрация хлорида натрия предпочтительно составляет от 10 до 500 мМ, предпочтительно приблизительно от 25 до 300 мМ, например приблизительно 25, 50, 75, 100, 140, 150, 200, 250 или 300 мМ.
Концентрация фосфата натрия предпочтительно составляет от 1 до 100 мМ, предпочтительно от 2 до 50 мМ, например приблизительно 2, 5, 10, 20, 30, 40 или 50 мМ.
Концентрация хлорида калия предпочтительно составляет от 1 до 50 мМ, предпочтительно от 1 до 10 мМ, например приблизительно 1, 2, 3, 4, 5 или 10 мМ.
Композиция в соответствии с изобретением имеет величину pH в диапазоне от 5,5 до 8. Согласно предпочтительному варианту осуществления величина pH лежит в диапазоне от 6,0 до 7,5, например составляет приблизительно 6,3, 6,35, 6,4, 6,45, 6,5, 6,55, 6,6, 6,65, 6,7, 6,75, 6,8, 6,85, 6,9, 6,95, 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35, 7,4, 7,45 или 7,5. Предпочтительно величина pH отличается не более чем на одну единицу от физиологического значения pH (которое составляет приблизительно 7,4).
Композиция в соответствии с изобретением является жидкой. Композиция предпочтительно содержит водный разбавитель, более предпочтительно воду, например стерильную воду, воду для инъекций, очищенную воду, стерильную воду для инъекций.
Предпочтительно композиция является изотонической и подходит для инъекции пациенту, в частности пациенту человеку.
Количество ботулинического нейротоксина обычно выражают в мышиных единицах LD50 (летальная доза для 50% животных), определяемых как средняя летальная доза при внутрибрюшинном введении мышам.
Мышиная единица LD50 (MLD50) для ботулинических токсинов не является стандартизированной единицей. В действительности анализы, используемые разными производителями зарегистрированных для продажи токсинов, различаются, в частности, выбором буфера для разведения. Например, в тесте, применяемом для Dysport®, используется желатин-фосфатный буфер, тогда как в анализе, применяемом для ВОТОХ®, в качестве разбавителя используется солевой раствор. Можно предположить, что желатиновые буферы защищают токсин при высоких разведениях, используемых при анализах LD50. Напротив, использование в качестве разбавителя солевого раствора, как полагают, приводит к некоторой потере эффективности. Этим можно объяснить, почему при тестировании с помощью анализа, применяемого для Dysport®, одна единица ВОТОХ® была эквивалентна приблизительно трем единицам Dysport (Straughan, D.W., 2006, ATLA 34(3), 305-313; Hambleton и Pickett, Hambleton, P. и A.M. Pickett., 1994, Journal of the Royal Society of Medicine 87, 11: 719).
Предпочтительно буфер для разведения, используемый для определения мышиной LD50, является желатин-фосфатным буфером. Например, мышиная LD50 может быть определена, как описано в работе Hambleton, P. et al., Production, purification and toxoiding of Clostridium botulinum type A toxin (Образование, очистка и токсоидирование токсина Clostridium botulinum типа А). Eds. G. E. Jr Lewis, P.S. Angel. Academic Press, Inc., New York, USA, 1981, p. 248. Вкратце, образцы ботулинического токсина серийно
- 5 038124 разводят в буфере, содержащем 0,2% (мас./об.) желатина и 0,07М Na2HPO4 при pH 6,5. Группам мышей (например, от 4 до 8 мышей в группе) весом приблизительно по 20 г вводят внутрибрюшинно образец разбавленного токсина (например, по 0,5 мл каждому животному). Группы разведения, например 5 групп разведения, выбирают таким образом, чтобы они включали дозу 50% летального исхода. За мышами наблюдают в течение 96 ч и оценивают 50% мышиную летальную дозу (MLD50).
Композиция в соответствии с изобретением предпочтительно содержит от 4 до 10000 единиц LD50 ботулинического нейротоксина на 1 мл, более предпочтительно от 10 до 2000 единиц LD50 ботулинического нейротоксина на 1 мл, например 20, 30, 40, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 или 1500 единиц LD50 ботулинического нейротоксина на 1 мл.
Количество ботулинического нейротоксина также может быть выражено в нг. Композиция в соответствии с изобретением предпочтительно содержит приблизительно от 0,01 до 75 нг ботулинического нейротоксина на 1 мл, более предпочтительно приблизительно от 0,03 до 20 нг ботулинического нейротоксина на 1 мл, более предпочтительно приблизительно от 0,1 до 15 нг ботулинического нейротоксина на 1 мл, например приблизительно 0,15, 0,3, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нг ботулинического нейротоксина на 1 мл.
Композиция в соответствии с изобретением не содержит животных белков. В частности, композиции в соответствии с изобретением не содержат альбумин и, в частности, не содержат человеческий сывороточный альбумин. Предпочтительно композиция в соответствии с изобретением не содержит животных продуктов, что означает, что она не содержит компонентов животного (в том числе человеческого) происхождения. Предпочтительно композиция в соответствии с изобретением не содержит белок, отличный от белкового нейротоксина. Согласно другому варианту осуществления композиция в соответствии с изобретением не содержит белок, отличный от белкового нейротоксина и одного или более NAP (нейротоксин-ассоциированных белков). Во избежание недоразумений следует отметить, что аминокислоты не являются белками.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения композиция не содержит сахариды, в том числе моносахариды, дисахариды и полисахариды.
Жидкая композиция в соответствии с изобретением стабильна в течение продолжительного времени. Например, она стабильна в течение 2 месяцев при температуре от 2 до 8°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 3 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно предпочтительному варианту осуществления она стабильна в течение 6 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 12 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 18 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 24 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 36 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 3 месяцев при комнатной температуре, например при температуре 25°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 6 месяцев при комнатной температуре, например при температуре 25°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 2 месяцев при температуре 37°С.
Жидкую композицию в соответствии с изобретением предпочтительно хранят при температуре от 0 до 30°С. Согласно предпочтительному варианту осуществления ее хранят при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно другому варианту осуществления ее хранят при комнатной температуре. Предпочтительно композицию не замораживают.
Стабильность можно оценить посредством сравнения активности ботулинического нейротоксина в течение некоторого времени. Активность ботулинического нейротоксина может относиться к способности активности ботулинического нейротоксина связываться с его рецептором-мишенью на клетке, транслоцировать легкую цепь в клетку и/или расщеплять его мишени-белки SNARE.
Способы измерения активности ботулинического нейротоксина хорошо известны в данной области техники. Активность ботулинического нейротоксина может быть оценена, например, при помощи теста летальности мышей (LD50), как описано выше, с помощью анализа на основе мышечной ткани, такого как мышиный гемидиафрагмальный тест (например, как описано в работе Bigalke, H. and Rummel A., Toxins 7, 12 (2015):4895-4905), с использованием клеточного анализа (например, как описано в работах WO 201349508 или WO 2012166943) или анализа внеклеточной протеолитической активности, такого как BoTest® (набор для обнаружения ботулинического нейротоксина, доступный из компании BioSentinel Inc.).
Предпочтительно композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более определенного процента активности в течение данного периода времени и при данной температуре.
Согласно одному из вариантов осуществления композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 30% внеклеточной протеолитической активности в течение 3, 6, 12, 18, 24 или 36 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например потеря не более 30% внекле- 6 038124 точной протеолитической активности в течение 6 месяцев при температуре 5°С. Предпочтительно композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 20% внеклеточной протеолитической активности в течение 3 месяцев при температуре 5°С, более предпочтительно в течение 6, 12, 18, 24 или 36 месяцев при температуре 5°С. Согласно другому варианту осуществления композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 40% внеклеточной протеолитической активности в течение 3 месяцев при комнатной температуре, например при температуре 25°С. Предпочтительно композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 30% внеклеточной протеолитической активности в течение 3 месяцев при температуре 25°С, более предпочтительно в течение 6 месяцев при температуре 25°С. Согласно другому варианту осуществления композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 50% внеклеточной протеолитической активности в течение 2 месяцев при температуре 37°С. Внеклеточная протеолитическая активность может быть измерена с помощью анализа BoTest®.
Согласно одному из вариантов осуществления композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 30% в единицах MLD50 в течение 2, 3, 6, 12, 18, 24 или 36 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например потеря не более 30% в единицах MLD50 в течение 6 месяцев при температуре 5°С. Предпочтительно композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 20% в единицах MLD50 в течение 2 месяцев при температуре 5°С, более предпочтительно в течение 3, 6, 12, 18, 24 или 36 месяцев при температуре 5°С. Согласно другому варианту осуществления композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 40% в единицах MLD50 в течение 2 или 3 месяцев при комнатной температуре, например при температуре 25°С. Предпочтительно композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 30% в единицах MLD50 в течение 3 месяцев при температуре 25°С, более предпочтительно в течение 6 месяцев при температуре 25°С. Согласно другому варианту осуществления композиция в соответствии с изобретением считается стабильной, если имеет место потеря не более 50% в единицах MLD50 в течение 2 месяцев при температуре 37°С. Единицы MLD50 могут быть измерены, как указано выше.
Жидкие композиции в соответствии с изобретением могут храниться в герметичных флаконах или шприцах, например в стеклянных флаконах или шприцах, предпочтительно в стеклянных флаконах или шприцах типа 1 (или нейтральных для организма (body neutral)). Предпочтительно кислород во флаконе или шприце отсутствует либо присутствует в очень небольшом количестве. Флаконы или шприцы могут заполняться, например, в атмосфере с содержанием кислорода менее 100 м.д. (миллионные доли), предпочтительно менее 50 м.д., при этом в качестве защитной среды во флаконах может применяться газообразный азот. При использовании стеклянных флаконов они могут быть закрыты, например, пробками из хлорбутилового или бромбутилового каучука, в качестве которых могут применяться пробки с покрытием FluroTec®. Предпочтительно жидкие композиции в соответствии с изобретением хранят в стеклянных флаконах, закрытых пробками с покрытием FluroTec®.
Согласно одному из вариантов осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из от 4 до 10000 единиц LD50 ботулинического нейротоксина на 1 мл, от 0,001 до 15 об.% полисорбата, от 0,1 до 5 мг/мл триптофана, от 10 до 500 мМ NaCl, от 1 до 50 мМ KCl, от 1 до 100 мМ фосфата натрия, имеет величину pH от 5,5 до 8 и стабильна в течение 6 месяцев при температуре 5°С.
Согласно одному из вариантов осуществления, жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или по существу состоит из:
от 10 до 2000 единиц LD50 ботулинического нейротоксина на 1 мл, от 0,005 до 2 об.% полисорбата, от 0,1 до 5 мг/мл триптофана, от 25 до 300 мМ NaCl, от 1 до 10 мМ KCl, от 2 до 50 мМ фосфата натрия, имеет величину pH от 6,0 до 7,5 и стабильна в течение 12 месяцев при температуре 5°С.
Согласно одному из вариантов осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из от 10 до 2000 единиц LD50 ботулинического нейротоксина на 1 мл, от 0,05 до 0,2 об.% полисорбата 80, от 0,1 до 5 мг/мл триптофана, от 25 до 300 мМ NaCl,
- 7 038124 от 1 до 10 мМ KCl, от 2 до 50 мМ фосфата натрия, имеет величину pH от 6,0 до 7,5 и стабильна в течение 12 месяцев при температуре 5°С.
Согласно одному из вариантов осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина А,
0,2 об.% полисорбата 80, мг/мл триптофана,
140 мМ NaCl, мМ KCl, мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 6,6.
Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением со-
держит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксинп А, 0,04 об.% полисорбата 80, 1 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 6,9. Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением со-
держит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина В, 0,25 об.% полисорбата 20, 4 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 7,4. Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением со-
держит или, по существу. состоит из ботулинического нейротоксина А, 0,01 об.% полисорбата 80, 0,25 мг/мл триптофана, 255 мМ NaCl, 2 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 7,2. Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением со-
держит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина А, 0,01 об.% полисорбата 80, 0,25 мг/мл триптофана, 255 мМ NaCl, 10 мМ KCl, 50 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 6,3. Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением со-
держит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина А, 1 об.% полисорбата 80, 0,25 мг/мл триптофана, 255 мМ NaCl, 50 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 6,3. Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением со-
держит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина А, 1 об.% полисорбата 80, 3 мг/мл триптофана, 255 мМ NaCl, 10 мМ KCl,
- 8 038124 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 7,2.
Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина А, 0,1 об.% полисорбата 80, 1,625 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 6,75.
Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина А, 0,01 об.% полисорбата 80, 1 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 6,75.
Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина А, 0,1 об.% полисорбата 80, 1 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 6,75.
Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина А, 1 об.% полисорбата 80, 1 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 6,75.
Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина В, 15 об.% полисорбата 20, 1 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 7,4.
Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина В, 15 об.% полисорбата 20, 4 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 7,4.
Согласно другому варианту осуществления жидкая композиция в соответствии с изобретением содержит или, по существу, состоит из ботулинического нейротоксина В, 0,25 об.% полисорбата 20, 4 мг/мл триптофана, 140 мМ NaCl,
- 9 038124 мМ KCl, мМ фосфата натрия, где величина pH указанной композиции составляет приблизительно 7,4.
Еще одним аспектом является применение жидких композиций в соответствии с изобретением в терапии.
Жидкие композиции в соответствии с изобретением могут применяться в терапии для лечения или профилактики мышечных заболеваний, нейромышечных заболеваний, неврологических заболеваний, офтальмологических нарушений, болевых состояний, психологических расстройств, заболеваний суставов, воспалительных заболеваний, эндокринных нарушений или урологических заболеваний.
Например, жидкие композиции в соответствии с изобретением могут применяться для лечения или профилактики заболевания, состояния или синдрома, выбранных из следующего перечня:
офтальмологические нарушения, выбранные из группы, состоящей из блефароспазма, косоглазия (в том числе рестриктивного косоглазия или миогенного косоглазия), амблиопии, осциллопсии, защитного птоза, терапевтического птоза для защиты роговицы, нистагма, эзотропии, диплопии, энтропиона, ретракции века, орбитальной миопатии, гетерофории, сопутствующего смещения осей, несопутствующего смещения осей, первичной или вторичной эзотропии или экзотропии, межъядерной офтальмоплегии, косой девиации, синдрома Дуэйна и ретракции верхнего века;
двигательные расстройства, включая гемифациальный спазм, кривошею, мышечную спастичность у детей или взрослых (например, при церебральном параличе, после инсульта, рассеянном склерозе, у пациентов с черепно-мозговой травмой или травмой спинного мозга), идиопатические фокальные дистонии, ригидность мышц, писчий спазм, дистонию рук, паралич VI нерва, оромандибулярную дистонию, тремор головы, позднюю дискинезию, позднюю дистонию, профессиональные судороги (в том числе судорогу у музыкантов), паралич лицевого нерва, спазм сведения челюстей, лицевой спазм, синкинезию, тремор, первичный писчий тремор, миоклонию, синдром скованного человека, дистонию ступней, паралич лицевого нерва, синдром болезненности рук и движения пальцев, тиковые расстройства, дистонические тики, синдром Туретта, нейромиотонию, дрожь подбородка, паралич латеральной прямой мышцы, дистонический выворот ступни, дистонию челюсти, синдром кролика, мозжечковое дрожание, паралич III нерва, нистагм мягкого нёба, акатизию, мышечные судороги, паралич IV нерва, симптом застывания при ходьбе, дистонию мышц-разгибателей туловища, синкинезию после паралича лицевого нерва, вторичную дистонию, болезнь Паркинсона, хорею Хантингтона, эпилепсию, застойный период дистонии, лицевой столбняк, миокимию и доброкачественный синдром крампи-фасцикуляции;
оториноларингологические заболевания, включая спастическую дисфонию, ушные заболевания, нарушение слуха, треск в ушах, шум в ушах, головокружение, синдром Меньера, дисфункцию улиткового нерва, заикание, перстнеглоточную дисфагию, бруксизм, закрытие гортани при хронической аспирации, гранулему голосовой складки, вентрикулярную дистонию, вентрикулярную дисфонию, мутационную дисфонию, тризм, храп, тремор голоса, аспирацию, дистонию с протрузией языка, небный тремор, глубокий прикус и дистонию мышц гортани; синдром первого кусания (First Bite Syndrome);
нарушения со стороны желудочно-кишечного тракта, включая ахалазию, анальную трещину, запор, дисфункцию височно-нижнечелюстного сустава, дисфункцию сфинктера Одди, стойкую гипертензию сфинктера Одди, нарушения кишечной мускулатуры, пуборектальный синдром, анизмус, спазм привратника желудка, дисфункцию жёлчного пузыря, дисфункцию двигательной активности желудочнокишечного тракта или пищевода, диффузный спазм пищевода и парез желудка;
заболевания мочеполовой системы, включая детрузорно-сфинктерную диссинергию, гиперрефлексию детрузора, нейрогенную дисфункцию мочевого пузыря (например, у пациентов с болезнью Паркинсона, спинномозговой травмой, инсультом или рассеянным склерозом), гиперактивный мочевой пузырь, нейрогенную сверхактивность детрузора, спазмы мочевого пузыря, недержание мочи, задержку мочеиспускания, гипертрофированную шейку пузыря, дисфункцию опорожнения, интерстициальный цистит, вагинизм, эндометриоз, тазовую боль, увеличение предстательной железы (доброкачественную гиперплазию предстательной железы), простатодинию, рак предстательной железы и приапизм;
дерматологические заболевания, включая нарушения пролиферации клеток кожи, раневые дефекты кожного покрова, псориаз, розацеа, акне; редкие наследуемые кожные заболевания, такие как синдром Фокса-Фордайса или болезнь Хейли-Хейли; уменьшение келоидных и гипертрофических рубцов; уменьшение размера пор; воспалительные состояния кожи; болезненные воспалительные состояния кожи;
болевые состояния, включая боль в спине (боль в верхней части спины, боль в пояснице), миофасциальный болевой синдром, головную боль напряжения, фибромиалгию, болевые синдромы, миалгию, мигрень, хлыстовую травму, боль в суставах, послеоперационную боль, боль, не связанную с мышечным спазмом, и боль, связанную с заболеваниями гладкой мускулатуры;
воспалительные заболевания, включая панкреатит, нейрогенные воспалительные заболевания (в том числе подагра, тендинит, бурсит, дерматомиозит и анкилозирующий спондилит);
секреторные заболевания, такие как избыточные секреции желёз, гипергидроз (в том числе гипергидроз подмышечной области, гипергидроз ладоней и синдром Фрея), гиперсаливация, сиалорея, бро- 10 038124 мидроз, повышенная секреция слизи, повышенное слезотечение, дисфункция голокринной железы; избыточное салоотделение;
респираторные заболевания, включая риниты (в том числе аллергические риниты), ХОЗЛ (англ.
COPD, Chronic Obstructive Pulmonary Disease - хроническое обструктивное заболевание легких), астму и туберкулез;
гипертрофические заболевания, включая мышечную гипертрофию, гипертрофию жевательной мышцы, акромегалию и нейрогенную гипертрофию передней большеберцовой мышцы с миалгией;
заболевания суставов, включая бурсит локтевого сустава (теннисный локоть) (или эпикондилит локтевого сустава), воспаление суставов, коксартроз, остеоартрит, патологию головки мышцы-вращателя плеча, ревматоидный артрит и синдром канала запястья;
эндокринные нарушения, такие как диабет 2-го типа, гиперглюкагонемия, гиперинсулинизм, гипоинсулинизм, гиперкальциемия, гипокальциемия, заболевания щитовидной железы (в том числе болезнь Грейвса, тиреоидит, тиреоидит Хашимото, гипертиреоз и гипотиреоз), заболевания паращитовидной железы (в том числе гиперпаратиреоз и гипопаратиреоз), синдром Кушинга и ожирение;
аутоиммунные заболевания, такие как системная красная волчанка;
пролиферативные заболевания, включая опухоли параганглиомы, рак предстательной железы и накостные опухоли;
травматические повреждения, включая спортивные травмы, травмы мышц, повреждения сухожилий и переломы костей; и применение в ветеринарии (например, иммобилизация млекопитающих, колики у лошадей, ахалазия животных или мышечные спазмы животных).
Жидкие композиции в соответствии с изобретением также могут применяться в эстетической медицине (т.е. для улучшения косметического внешнего вида), в частности, для лечения или профилактики появления морщин кожи, в частности морщин лица, таких как межбровные морщины, морщины контура глаз, глабеллярные морщин, опущение уголков рта, морщины шеи (платизмальные тяжи), морщины подбородка (подбородочная мышца, апельсиновая корка, подбородок с ямочкой), морщины лба, морщины типа поцарапанной кожи, лифтинг носа или складки после сна. Согласно данному аспекту изобретения субъект, подлежащий лечению или профилактике с целью улучшения косметического внешнего вида, предпочтительно не страдает каким-либо из заболеваний, состояний или синдромов, описанных выше. Более предпочтительно указанный субъект является здоровым субъектом (т.е. не страдающим какимлибо заболеванием, состоянием или синдромом).
Жидкие композиции в соответствии с изобретением могут применяться в сочетании с другим терапевтическим соединением. Согласно одному из вариантов осуществления жидкие композиции в соответствии с изобретением вводят в сочетании с обезболивающим соединением для устранения боли, в частности, в сочетании с опиоидным производным, таким как морфин, как описано в патентном документе WO 2007/144493, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Согласно другому варианту осуществления жидкие композиции в соответствии с изобретением вводят в сочетании с гиалуроновой кислотой, например, для лечения рака предстательной железы, как описано в патентном документе WO 2015/0444416, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки.
Еще одним аспектом настоящего изобретения является использование аминокислоты, выбранной из триптофана и тирозина, для защиты белкового нейротоксина от разрушения в жидкой композиции, не содержащей белков животного происхождения.
Согласно предпочтительному варианту осуществления аминокислота является триптофаном, более предпочтительно L-триптофаном.
Предпочтительно белковый нейротоксин является ботулиническим нейротоксином. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения ботулинический нейротоксин является ботулиническим нейротоксином в форме комплекса. Согласно другому варианту осуществления ботулинический нейротоксин представляет собой ботулинический нейротоксин высокой степени чистоты. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения ботулинический нейротоксин является ботулиническим нейротоксином, очищенным из его природного клостридиального штамма. Согласно другому варианту осуществления ботулинический нейротоксин является ботулиническим нейротоксином, получаемым рекомбинантно на гетерологичном хозяине, таком как Е. coli. Согласно настоящему изобретению ботулинический нейротоксин может быть BoNT серотипов A, B, C, D, E, F или G. Согласно настоящему изобретению ботулинический нейротоксин может быть модифицированным ботулиническим нейротоксином, как описано выше. Согласно настоящему изобретению рекомбинантный ботулинический нейротоксин может быть химерным ботулиническим нейротоксином, как описано выше.
Согласно предпочтительному варианту осуществления аминокислоту используют в сочетании с поверхностно-активным веществом и буфером, включающим ионы натрия, хлорид-ионы и фосфат-ионы, при этом жидкая композиция имеет величину pH от 5,5 до 8. Предпочтительно поверхностно-активное вещество является неионным поверхностно-активным веществом, более предпочтительно полисорбатом, например PS20, PS60 или PS80. Наиболее предпочтительно неионное поверхностно-активное вещество является PS80. Предпочтительно буфер также содержит ионы калия. Буфер может быть получен, напри- 11 038124 мер, объединением солей хлорида натрия, хлорида калия и фосфата натрия. Согласно предпочтительному варианту осуществления величина pH лежит в диапазоне от 6,0 до 7,5, например составляет 6,3, 6,35,
6,4, 6,45, 6,5, 6,55, 6,6, 6,65, 6,7, 6,75, 6,8, 6,85, 6,9, 6,95, 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35, 7,4, 7,45 или
7,5. Предпочтительно величина pH отличается не более чем на одну единицу от физиологической pH (составляющей приблизительно 7,4).
Согласно предпочтительному варианту применения в соответствии с изобретением жидкая композиция стабильна в течение 2 месяцев. Например, она стабильна в течение 2 месяцев при температуре от 2 до 8°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 3 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно предпочтительному варианту осуществления она стабильна в течение 6 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 12 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 18 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 24 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 36 месяцев при температуре от 2 до 8°С, например при температуре 5°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 3 месяцев при комнатной температуре, например при температуре 25°С. Согласно одному из вариантов осуществления она стабильна в течение 6 месяцев при комнатной температуре, например при температуре 25°С.
Описание примеров осуществления изобретения
1. Приготовление стабильных жидких композиций ботулинического токсина типа A.
Готовили жидкие препараты ботулинического токсина, содержащие 15 нг/мл высокоочищенного BoNT/A, 15 об.% полисорбата 20, аминокислоту, выбранную из тирозина (Tyr), триптофана (Trp) и цистеина (Cys) или смеси метионина (Met), тирозина (Tyr), триптофана (Trp) и цистеина (Cys) (Sigma Aldrich), и фосфатно-солевой буфер (PBS из компании Calbiochem) (140 мМ NaCl, 10 мМ фосфата натрия и 3 мМ KCl с рН 7,4 при температуре 25°С), фильтровали при помощи фильтров из ПВДФ (поливинилиденфторида) с размером пор 0,22 мкм и хранили в силиконизированных стеклянных шприцах емкостью 2 мл в течение 6 дней при температуре 40°С, после чего для каждого препарата проводили тест для оценки эффективности.
При выполнении теста для оценки эффективности содержимое шприцов с препаратами переносили в стеклянные флаконы емкостью 2 мл (Chromacol, Gold) с крышками, содержащими мембрану из каучука, обработанного ПТФЭ (Chromacol), или в пластиковые микроцентрифужные пробирки емкостью 1,7 мкм (Axygen, Maximum Recovery), те и другие имеют низкую адсорбцию белка. После этого препараты разводили 0,9% раствором NaCl, содержащим 3% человеческого сывороточного альбумина (HSA). В тот же день, когда выполняли разведение, по 50 мкл образца каждого препарата вводили в икроножную мышцу мышей. За мышами наблюдали в течение 3 дней и регистрировали степень паралича.
Результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1 Испытание влияния добавок аминокислот на стабильность BoNT/A в условиях ускоренного старения (6 дней при температуре 40 °С)
Результаты паралича у мышей: - не анализировали, WN - без замечаний, РА - паралич и Т - смерть
Композиция Тест для оценки эффективности Оценка активности
Буфер Конц. BoNT/A Аминокислот а Разведение в 0,9 NaCl с 3% HSA (кратность) Инъеци руемая доза (нг) День 1 День 2 День 3
PBS pH 7,4 15% полисо рбат 20 15 нг/мл Тгр 0,25 мг/мл + Cys 0,25 мг/мл + Met 0,25 мг/мл + Туг 0,25 мг/мл 2 х 0,25 - - WN
20 х 0,025 - - WN
Cys 1 мг/мл 2 х 0,25 - - WN
20 х 0,025 - - WN
Туг 0,74 2 х 0,25 - - Резки
- 12 038124
мг/мл й парал ич всей брюш ной полос ти
20 χ 0,025 - - WN
Тгр 1 мг/мл 2 χ 0,25 - t
20 χ 0,025 - - WN
- 2 χ 0,25 - - WN
20 χ 0,025 - - WN
Было установлено, что тирозин и триптофан оказывают защитное действие против разложения BoNT/A. Было обнаружено, что триптофан обладает самым сильным защитным действием. Цистеин, а также смесь, содержащая все четыре аминокислоты, не оказывали защитного действия.
1. Приготовление стабильной жидкой композиции ботулинического токсина типа В.
Готовили жидкие препараты ботулинического токсина, содержащие 350 нг/мл высокоочищенного BoNT/B, 15 об.% полисорбата 20, аминокислоту, выбранную из тирозина (Tyr), триптофана (Trp) и цистеина (Cys) или смеси метионина (Met), тирозина (Tyr), триптофана (Trp) и цистеина (Cys), и фосфатносолевой буфер (PBS), при pH 7,4, фильтровали при помощи фильтров с размером пор 0,22 мкм и хранили в силиконизированных стеклянных шприцах емкостью 2 мл в течение двух недель при температуре 40°С, после чего для каждого препарата проводили тест для оценки эффективности, как описано выше.
Результаты представлены в табл. 2.
Таблица 2
Испытание влияния добавок аминокислот на стабильность BoNT/B в условиях ускоренного старения (две недели при температуре 40°С)
Результаты паралича у мышей: - - не анализировали, WN - без замечаний, РА - паралич и - смерть
Композиция Тест для оценки эффективности Оценка активности
Буфер Конц. BoNT/ В Аминокислот а Разведение в 0,9 NaCl с 3% HSA (кратность) Инъецируе мая доза (нг) Ден ь 1 Ден ь2 Де нь 3
PBS pH 7,4 15% полисор бат 20 350 нг/мл Тгр 0,25 мг/мл + Cys 0,25 мг/мл + Met 0,25 мг/мл + Туг 0,25 мг/мл 10 х 1,75 - - РА
Cys 1 мг/мл 10 х 1,75 - - РА
Туг 0,575 мг/мл 10 х 1,75 - t
Тгр 1 мг/мл 10 х 1,75 - t
35 х 0,5 - - РА
Было установлено, что тирозин и триптофан оказывают защитное действие против разложения BoNT/B. Цистеин, а также смесь, содержащая все четыре аминокислоты, также обладали защитным действием, но в меньшей степени.
2. Оценка различных концентраций триптофана и полисорбата 20.
Готовили жидкие препараты ботулинического токсина, содержащие BoNT/A или BoNT/B высокой степени чистоты и различные концентрации полисорбата 20 (PS20) и триптофана, и фосфатно-солевой буфер (PBS) при pH 7,4, фильтровали при помощи фильтров с размером пор 0,22 мкм и хранили в силиконизированных стеклянных шприцах емкостью 2 мл. Испытания эффективности в отношении паралича задней конечности проводили для каждого препарата, как описано выше.
Результаты представлены в табл. 3.
- 13 038124
Таблица 3
Оценка влияния концентраций Trp и полисорбата 20 (PS20) на стабильность BoNT/A или BoNT/B
Результаты паралича у мышей: - - не анализировали, WN - без замечаний, РА - паралич и - смерть
Композиция ИСПЫТАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ
BoN Т Конц. BoNT (нг/мл) Тгр (мг/м л) PS20 (%) Разводе ние в 0,9 NaCl с 3% HSA (кратное ть) Инъе циру емая доза (нг) Оценка эффективности (1 -Зд) для образцов, хранившихся при разных температурах и продолжительности
5°С 25°C
6 месяцев 5 недель 4 месяцев
1Д 2д зд 1Д 2д Зд 1д 2д зд
BoN Т/А 15 8 15 1 X 0,75 - t - - t - - PA
5 х 0,15 - - t - - t - - WN
15 8 0,25 1 X 0,75 - t - - Г - - t
5 х 0,15 - - t - Г - - WN2
15 1 15 1 X 0,75 - t - t t
5 х 0,15 - - t - - t - t PA3
BoN Т/В 100 8 15 1 X 5 - - t - - t - - PA
10 X 0,5 - - PA1 - - PA - - PA
100 8 0,25 1 X 5 - - t - - t t
10 X 0,5 - - PA4 - - WN1 - - PA
100 1 15 1 X 5 - - t - - t t
10 X 0,5 - - PA4 - PA - - PA
Степень паралича (РА): 1. Затронуты пальцы ног; 2. Легкое онемение задней конечности; 3. Парализованы обе задние конечности; 4. Парализована задняя конечность; элюирующий буфер от очистки (5): 50 мМ ацетата натрия, pH 4,5, с 0,2% (об./об.) полисорбата 20 и 400 мМ хлорида натрия; * возможно, произошло смешивание двух разведений BoNT/A при 25°С 8 мг/мл Trp, 0,25% полисорбата 20.
3. Оценка различных концентраций солей в препаратах BoNT/B.
Готовили жидкие препараты ботулинического токсина, содержащие 100 нг/мл высокоочищенного BoNT/B, полисорбат 20, триптофан от различных поставщиков аминокислот и буфер, выбранный из PBS с pH 7,4 (Calbiochem), 12 нМ фосфатного буфера с pH 7 (Apoteket) и 20 мМ ацетата натрия (NaAc) с pH 5,5 (NaAc фирмы Fluka и уксусная кислота фирмы Merck), фильтровали при помощи фильтров с размером пор 0,22 мкм и хранили в силиконизированных стеклянных шприцах емкостью 2 мл. Испытания эффективности в отношении паралича задней конечности проводили для каждого препарата, как описано выше.
Результаты представлены в табл. 4.
- 14 038124
Таблица 4
Оценка влияния различных концентраций солей на стабильность BoNT/B
Результаты паралича у мышей: - - не анализировали, WN - без замечаний, РА - паралич и ΐ - смерть
Конц. BoNT/ В (нг/мл) Буфер Поставщи к И КОНЦ. Тгр PS20 (%) Испытание эффективности Оценка эффективности (1-Зд) для образцов, хранившихся с разной продолжительностью
Разведение в 0,9 NaCl с 3% HSA (кратность) Инъе циру емая доза (нг) 40°С
2 недели 5 недель
1д 2д Зд 1Д 2д Зд
100 PBS pH 7,4 Ajinomoto 4 мг/мл 15 1 х 5 - t
10 х 0,5 - - PA
100 PBS pH 7,4 Sigma Aldrich 4 мг/мл 15 1 х 5 - t
10 х 0,5 - - PA
100 PBS pH 7,4 Sigma Aldrich 1 мг/мл 15 1 X 5 - t
10 х 0,5 - - PA
100 PBS pH 7,4 Sigma Aldrich 4 мг/мл 0,25 1 х 5 - t - t
10 х 0,5 - - PA - - PA2
100 12 мМ Phosphate pH 7 Sigma Aldrich 4 мг/мл 15 1 X 5 - - WN
10 х 0,5 - - WN1
100 20 мМ Na Ас pH 5,5 Sigma Aldrich 4 мг/мл 15 1 х 5 - - PA
10 X 0,5 - - PA
1. Некоторая потеря функции; 2. Слабый паралич.
Результаты показывают, что препараты, содержащие PBS буфер (включающий ионы натрия, хлорид-ионы, фосфат-ионы и ионы калия), по-видимому, играют определенную роль в стабильности ботулинического токсина.
4. Оценка различных стабилизаторов.
Готовили жидкие препараты ботулинического токсина, содержащие 15 нг/мл высокоочищенного BoNT/A, полисорбат 20 (PS20) или полисорбат 80 (PS80) или HSA, триптофан и PBS, фильтровали при помощи фильтров с размером пор 0,22 мкм и хранили в силиконизированных стеклянных шприцах емкостью 2 мл. Испытания эффективности в отношении паралича задней конечности проводили для каждо го препарата, как описано выше.
Результаты представлены в табл. 5.
Таблица 5
Оценка воздействия различных поверхностно-активных веществ на стабильность BoNT/A Результаты паралича у мышей: - - не анализировали, WN - без замечаний, РА - паралич и ΐ - смерть
Конц BoN T/A (нг/м л) Буф ер Trp Стабили затор Испытание эффективности Оценка эффективности (1-Зд) для образцов, хранившихся с разной продолжительностью
Разведение в 0,9 NaCl с 3% HSA (кратность) Инъец ируема я доза (нг) 40°С
6 дней 4 недель 3 месяца
1д 2д Зд 1д 2д Зд 1д 2д Зд
15 PBS pH 7,4 1 мг/мл PS 80 0,25% 1,7 х 0,45 t t - - РА3
15 х 0,05 t t - - WA
15 PBS рн 7,4 1 мг/мл PS 20 0,25% 1,7 х 0,45 t t - - РА2
15 х 0,05 t - - PA - - WN
15 PBS pH 7,4 - HSA 1 мг/мл 1,7 х 0,45 t t - t
15 х 0,05 t t - - РА1
1. Сильный паралич обеих задних конечностей; 2. Лапы расположены под углом; 3. Сильный паралич.
- 15 038124
5. Оценка различных композиций.
Готовили жидкие препараты ботулинического токсина, содержащие 10 нг/мл высокоочищенного
BoNT/A, 0,25% PS80, 1 мг/мл триптофана и PBS, как описано выше. Величину pH доводили до 6,6 и 7,0 с помощью добавления HCl. Каждый из препаратов хранили в течение 5 недель при температуре 40°С.
Каждый из препаратов разбавляли 10-кратно и проводили испытания эффективности в отношении паралича задней конечности, как описано выше (0,05 нг на инъекцию). В обоих случаях паралич задней конечности наблюдался на 3 день. Паралич был более сильным при использовании препарата с величиной pH 6,6.
6. Оценка различных композиций.
Готовили жидкие препараты ботулинического токсина, содержащие 0,3 нг/мл высокоочищенного BoNT/A, полисорбат, выбранный из PS20 и PS80, 1 мг/мл триптофана и 12 мМ PBS, при pH 7,4, как описано выше. Величину pH каждого препарата доводили до pH 6,6 или 6,9 с помощью добавления 1,2М HCl.
Полисорбат 20 испытывали при одной концентрации, 0,2 (мас./об.)%, что соответствует примерно его 20-кратной CMC (критической мицеллярной концентрации, составляющей приблизительно 0,01 (мас./об.)% при температуре 21°С). Полисорбат 80 испытывали при концентрациях 0,04 и 0,2 (мас./об.)%, что соответствует приблизительно его 20- и 100-кратной CMC (составляющей приблизительно 0,002 (мас./об.)% при температуре 21°С).
Таблица 6
Выбор полисорбата и величины pH
Композиция PS20 (мас./об.)% PS20 (мас./об.)% pH
PS20-1 0,2 - 6,6
PS20-2 0,2 - 6,9
PS80-1 - 0,04 6,6
PS80-2 - 0,04 6,9
PS80-3 - 0,2 6,6
По 0,5 мл каждого препарата заполняли в длинные стеклянные шприцы емкостью 1 мл (BD) и закрывали плунжером с фторуглеродным покрытием.
Эффективность определяли при помощи испытания в отношении паралича задней конечности у мышей, как описано выше.
Ни для одной из композиций не наблюдалось никакого снижения эффективности по истечении 6 месяцев хранения при температуре 5°С и после 25°С.
7. Оценка различных композиций.
Готовили девятнадцать различных композиций, содержащих ботулинический нейротоксин типа А высокой степени очистки с различными концентрациями полисорбата 80, триптофана, фосфата натрия, хлорида натрия, хлорида калия и различными pH. Каждая композиция имела целевую номинальную эффективность 500 Ед/мл. Каждую композицию дегазировали, фильтровали через фильтр с размером пор 0,2 мкм и заполняли во флаконы. В качестве защитной атмосферы внутри флаконов использовали газообразный азот. Заполнение осуществляли в анаэробной камере. Каждую композицию в виде аликвот по 1 мкл в атмосфере азота заполняли в стеклянные флаконы емкостью 2 мл, закрывали пробками FluroTec®, запечатывали при помощи алюминиевых колпачков с отрывной накладкой и хранили в вертикальном положении.
Стабильность 19 композиций оценивали при температурах 5°С, 25°С и 37°С, используя для измерения эффективности набор BoTest®.
Таблица 7
Композиции вспомогательных веществ
Назва ние приме ра pH Фосфат натрия (мМ) Триптофан (мг/мл) Полисорб ат 80 (об.%) NaCl (мМ) KCI (мМ)
N1 6,3 2 0,25 0,01 25 0
N2 7,2 2 0,25 0,01 255 0
N3 6,3 50 0,25 0,01 255 10
N4 7,2 50 0,25 0,01 25 10
N5 6,3 2 3 0,01 255 10
- 16 038124
N6 7,2 2 3 0,01 25 10
N7 6,3 50 3 0,01 25 0
N8 7,2 50 3 0,01 255 0
N9 6,3 2 0,25 1 25 10
N10 7,2 2 0,25 1 255 10
N11 6,3 50 0,25 1 255 0
N12 7,2 50 0,25 1 25 0
N13 6,3 2 3 1 255 0
N14 7,2 2 3 1 25 0
N15 6,3 50 3 1 25 10
N16 7,2 50 3 1 255 10
N17 6,75 10 1,625 0,1 140 3
Таблица 8
Компоненты упаковки
Изделие Номер изделия, поставщик
Флакон из боросиликатного прозрачного стекла, тип I плюс, 2 мл 1097221, Schott
Пробка Westar RS из бромбутилового каучука, покрытая Flurotec, серого цвета, 13 мм 1356 4023/50, West
Алюминиевый колпачек с отрывной накладкой, 13 мм 5920-6623, West
Для всех композиций раствор оставался прозрачным и по большей части бесцветным.
Концентрации вспомогательных веществ, тестируемые в данном исследовании, по-видимому, не влияют на величину pH композиций в тестируемом промежутке времени. Результаты эффективности представлены в табл. 9.
Таблица 9
Результаты определения эффективности с использованием BoTest
pH Исходная эффективность (Ед/мл) (ВоТ est) 0 месяцев Остаточная эффективность по сравнению с исходной (BoTest)
2 месяца 37°С 6 месяцев 25°С 6 месяцев 5°С
Ед/мл % Ед/мл % Ед/мл %
N1 6,3 86 0 0 0 0 39 45
N2 7,2 474 210 44 389 82 485 102
N3 6,3 449 288 64 406 90 512 114
N4 7,2 299 62 21 368 123 406 136
N5 6,3 378 263 70 385 102 422 112
N6 7,2 93 0 0 0 0 52 56
N7 6,3 238 0 0 0 0 239 100
N8 7,2 375 305 81 402 107 450 120
N9 6,3 196 0 0 100 51 294 150
N10 7,2 354 201 57 408 115 411 116
N11 6,3 438 197 45 372 85 492 112
N12 7,2 411 96 23 295 72 417 101
N13 6,3 304 185 61 403 133 416 137
N14 7,2 206 0 0 0 0 183 89
N15 6,3 197 155 79 231 117 214 109
N16 7,2 476 227 48 390 82 685 144
N17 6,75 402 250 62 286 71 488 121
Для нескольких композиций имела место потеря не более 30% эффективности в течение 6 месяцев при температуре 5°С, и/или не более приблизительно 40% эффективности в течение 3 месяцев при температуре 25°С. и/или не более приблизительно 50% активности в течение 2 месяцев при температуре 37°С.
8. Оценка PS60.
Г отовили композицию, содержащую ботулинический нейротоксин типа А высокой степени очистки
- 17 038124 с 0,1% (об./об.) PS60, 1 мг/мл L-триптофана, 10 мМ фосфата натрия, 140 мМ хлорида натрия, 3 мМ хлорида калия и воду для инъекций. Величину pH с помощью HCl доводили до 6,75. Композиция имела целевую номинальную эффективность 100 Ед/мл. Композицию дегазировали, фильтровали через фильтры с размером пор 0,2 мкм и заполняли во флаконы емкостью 2 мл в асептических условиях в анаэробной камере с атмосферой азота при объеме наполнения 1 мл. Во флаконах в качестве защитной атмосферы использовали газообразный азот. Флаконы закрывали пробками с покрытием FluroTec®, запечатывали при помощи алюминиевых колпачков с отрывной накладкой.
Таблица 10
Компоненты упаковки
Изделие Номер изделия, поставщик
Флакон из боросиликатного прозрачного стекла, тип 1 плюс, 2 мл 1097221, Schott
Пробка Inj из бромбутила с покрытием, 4023-50, серая, 13 мм INJ13TB3WRS, Nordic Pack
Синий алюминиевый колпачек с отрывной накладкой, 13 мм 5920-1164, Nordic Pack
Эффективность с течением времени при температурах 37 и 25°С определяли с помощью теста MLD50, как описано в данном контексте.
При температуре 37°С остаточная эффективность по истечении 9 недель составляла приблизительно от 50 до 55% от начальной эффективности.
При температуре 25°С остаточная эффективность по истечении 3 месяцев составляла приблизительно 80% от начальной эффективности.

Claims (19)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Жидкая композиция с эффектом защиты ботулинического нейротоксина от разрушения, содержащая ботулинический нейротоксин, поверхностно-активное вещество, аминокислоту, выбранную из триптофана и тирозина, буфер, включающий ионы натрия, хлорид-ионы и фосфат-ионы, где указанная жидкая композиция имеет величину pH от 5,5 до 8, и где указанная композиция не содержит белков животного происхождения.
  2. 2. Жидкая композиция по п.1, где указанная жидкая композиция стабильна в течение 2 месяцев при температуре от 2 до 8°С.
  3. 3. Жидкая композиция по п.1 или 2, где поверхностно-активное вещество является неионным поверхностно-активным веществом.
  4. 4. Жидкая композиция по п.3, где неионное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат, предпочтительно полисорбат 20, полисорбат 60 или полисорбат 80.
  5. 5. Жидкая композиция по любому из пп.1-4, где аминокислота представляет собой триптофан, предпочтительно L-триптофан.
  6. 6. Жидкая композиция по любому из пп. 1-5, где буфер дополнительно включает ионы калия.
  7. 7. Жидкая композиция по любому из пп.1-6, где указанная композиция имеет величину pH от 6,0 до 7,5.
  8. 8. Жидкая композиция по любому из пп.1-7, где не более 30% внеклеточной протеолитической активности теряется в течение 2, 3, 6, 12, 18, 24 или 36 месяцев при температуре 5°С.
  9. 9. Жидкая композиция по любому из пп.1-8, где ботулинический нейротоксин выбран из природного ботулинического нейротоксина в форме комплекса, природного ботулинического нейротоксина высокой чистоты и рекомбинантного ботулинического нейротоксина.
  10. 10. Жидкая композиция по п.9, где ботулинический нейротоксин представляет собой рекомбинантный ботулинический нейротоксин, выбранный из ботулинического нейротоксина типов A, B, C, D, E, F или G, модифицированного ботулинического нейротоксина и химерного ботулинического нейротоксина.
  11. 11. Жидкая композиция по любому из пп.1-10, где указанная жидкая композиция содержит от 0,01 до 75 нг ботулинического нейротоксина на 1 мл, от 0,001 до 15 об.% полисорбата, от 0,1 до 5 мг/мл триптофана, от 10 до 500 мМ NaCl, от 1 до 50 мМ KCl, от 1 до 100 мМ фосфата натрия, имеет величину pH в диапазоне от 5,5 до 8 и стабильна в течение 6 месяцев при температуре 5°С.
  12. 12. Жидкая композиция по п.11, где указанная жидкая композиция содержит от 0,03 до 20 нг ботулинического нейротоксина на 1 мл, от 0,05 до 0,2 об.% полисорбата 80, от 0,1 до 5 мг/мл триптофана,
    - 18 038124 от 25 до 300 мМ NaCl, от 1 до 10 мМ KCl, от 2 до 50 мМ фосфата натрия, имеет величину pH в диапазоне от 6,0 до 7,5 и стабильна в течение 12 месяцев при температуре 5°С.
  13. 13. Применение жидкой композиции по любому из пп.1-12 в терапии.
  14. 14. Применение жидкой композиции по п.13 для лечения или профилактики мышечных заболеваний, нейромышечных заболеваний, неврологических заболеваний, офтальмологических заболеваний, болевых состояний, психологических расстройств, заболеваний суставов, воспалительных заболеваний, эндокринных нарушений или урологических заболеваний.
  15. 15. Применение жидкой композиции по любому из пп.1-12 в эстетической медицине для лечения или профилактики появления морщин кожи.
  16. 16. Применение жидкой композиции по п.15 для лечения или профилактики появления морщин лица, таких как лицевые межбровные складки, морщины контура глаз, глабеллярные морщины, опущение уголков рта, морщины шеи (платизмальные тяжи), морщины подбородка (подбородочная мышца, апельсиновая корка, подбородок с ямочкой), морщины лба, морщины типа поцарапанной кожи, лифтинг носа или складки после сна.
  17. 17. Применение аминокислоты, выбранной из триптофана и тирозина, для защиты ботулинического нейротоксина от разрушения в жидкой композиции, не содержащей белков животного происхождения и содержащей поверхностно-активное вещество и буфер, включающий ионы натрия, хлорид-ионы и фосфат-ионы.
  18. 18. Применение по п.17, где аминокислота является триптофаном.
  19. 19. Применение по п.17, где аминокислоту используют в сочетании с поверхностно-активным веществом и буфером, включающим ионы натрия, хлорид-ионы и фосфат-ионы, при этом указанная жидкая композиция имеет величину pH от 5,5 до 8.
EA201892493A 2016-05-27 2017-05-26 Жидкая композиция нейротоксина, стабилизированная триптофаном или тирозином EA038124B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP2016062085 2016-05-27
PCT/EP2017/062785 WO2017203038A1 (en) 2016-05-27 2017-05-26 Liquid neurotoxin formulation stabilized with tryptophan or tyrosine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201892493A1 EA201892493A1 (ru) 2019-04-30
EA038124B1 true EA038124B1 (ru) 2021-07-09

Family

ID=56289455

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201892493A EA038124B1 (ru) 2016-05-27 2017-05-26 Жидкая композиция нейротоксина, стабилизированная триптофаном или тирозином

Country Status (30)

Country Link
US (4) US20190183988A1 (ru)
EP (3) EP4026532A1 (ru)
JP (1) JP7053498B2 (ru)
KR (2) KR102399451B1 (ru)
CN (2) CN111701010B (ru)
AR (1) AR108631A1 (ru)
AU (1) AU2017270359B2 (ru)
BR (1) BR112018074311A2 (ru)
CA (1) CA3025437A1 (ru)
CY (2) CY1124237T1 (ru)
DK (2) DK3679946T3 (ru)
EA (1) EA038124B1 (ru)
ES (2) ES2911124T3 (ru)
GE (1) GEP20207139B (ru)
HR (2) HRP20220024T1 (ru)
HU (2) HUE057640T2 (ru)
IL (2) IL285190B (ru)
LT (2) LT3679946T (ru)
MX (1) MX2018014631A (ru)
PL (2) PL3463432T3 (ru)
PT (2) PT3463432T (ru)
RS (2) RS61340B1 (ru)
RU (1) RU2741497C9 (ru)
SA (1) SA518400513B1 (ru)
SG (1) SG11201810561YA (ru)
SI (2) SI3463432T1 (ru)
TW (1) TWI777955B (ru)
UA (1) UA123679C2 (ru)
WO (1) WO2017203038A1 (ru)
ZA (1) ZA201807904B (ru)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8168206B1 (en) 2005-10-06 2012-05-01 Allergan, Inc. Animal protein-free pharmaceutical compositions
SG10202100698QA (en) 2008-12-31 2021-02-25 Revance Therapeutics Inc Injectable Botulinum Toxin Formulations
IL268980B (en) 2009-06-25 2022-09-01 Revance Therapeutics Inc Botulinum toxin formulations without albumin
US9480731B2 (en) 2013-12-12 2016-11-01 Medy-Tox, Inc. Long lasting effect of new botulinum toxin formulations
EP3436054B2 (en) 2016-09-13 2022-07-27 Allergan, Inc. Stabilized non-protein clostridial toxin compositions
JP2021508453A (ja) * 2017-12-20 2021-03-11 アラーガン、インコーポレイテッドＡｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ ボツリヌス毒素細胞結合ドメインポリペプチドおよび皮膚の若返りのための使用方法
TW202112348A (zh) * 2019-06-07 2021-04-01 英商益普生生物製藥有限公司 中度至極重度眉間紋及眼角外紋之治療
AU2023207838A1 (en) 2022-01-14 2024-07-04 Galderma Holding SA Treatment of moderate to very severe glabellar lines and lateral canthal lines
WO2023156389A1 (en) * 2022-02-15 2023-08-24 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Liquid botulinum toxin formulation and use thereof

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0909564A1 (en) * 1996-04-26 1999-04-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Erythropoietin solution preparation
US20030092622A1 (en) * 2000-02-29 2003-05-15 Yasushi Sato Preparation stabilized over long time
WO2006005910A2 (en) * 2004-07-12 2006-01-19 Ipsen Limited Pharmaceutical composition comprising botulinum, a non ionic surfactant, sodium chloride and sucrose
WO2006013370A1 (en) * 2004-08-04 2006-02-09 Ipsen Limited Pharmaceutical composition containing botulinum neurotoxin a2
US20060269575A1 (en) * 2000-02-08 2006-11-30 Allergan, Inc. Botulinum toxin pharmaceutical compositions formulated with recombinant albumin
WO2009008595A1 (en) * 2007-07-10 2009-01-15 Medy-Tox, Inc. Pharmaceutical liquid composition of botulinum toxin with improved stability
WO2015166242A1 (en) * 2014-04-29 2015-11-05 Ipsen Bioinnovation Limited Manufacture of recombinant clostridium botulinum neurotoxins

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW574036B (en) * 1998-09-11 2004-02-01 Elan Pharm Inc Stable liquid compositions of botulinum toxin
DE60125986T3 (de) * 2000-02-08 2011-07-28 Allergan, Inc., 92612, Calif. Pharmazeutische Zusammensetzungen mit Botulinum Toxin
US20030118598A1 (en) * 2000-02-08 2003-06-26 Allergan, Inc. Clostridial toxin pharmaceutical compositions
US6627602B2 (en) * 2001-11-13 2003-09-30 Duke University Preventing desensitization of receptors
DE10333317A1 (de) 2003-07-22 2005-02-17 Biotecon Therapeutics Gmbh Formulierung für Proteinarzneimittel ohne Zusatz von humanem Serumalbumin (HSA)
EP2266600B1 (en) * 2004-07-26 2014-09-10 Merz Pharma GmbH & Co. KGaA Therapeutic composition with a botulinum neurotoxin
US20080220021A1 (en) 2005-02-14 2008-09-11 Pankaj Modi Topical Botulinum Toxin Compositions for the Treatment of Hyperhidrosis
FR2902341B1 (fr) 2006-06-16 2011-02-25 Scras Utilisation therapeutique simultanee, separee ou etalee dans le temps d'au moins une neurotoxine botulique, et d'au moins un derive opiace
US9107815B2 (en) * 2008-02-22 2015-08-18 Allergan, Inc. Sustained release poloxamer containing pharmaceutical compositions
KR101910490B1 (ko) 2011-06-01 2018-10-22 바이오메디슨, 인코퍼레이티드 비-ｆｒｅｔ 보툴리눔 검정법
KR101640694B1 (ko) 2011-09-29 2016-07-18 셀스냅, 엘엘씨 독소생산능 시험용 조성물 및 방법
KR101357999B1 (ko) * 2012-03-20 2014-02-03 함종욱 보툴리눔 에이형 독소의 액상제품
EP3052120A1 (en) 2013-09-30 2016-08-10 Galderma S.A. Prostate cancer treatment

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0909564A1 (en) * 1996-04-26 1999-04-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Erythropoietin solution preparation
US20060269575A1 (en) * 2000-02-08 2006-11-30 Allergan, Inc. Botulinum toxin pharmaceutical compositions formulated with recombinant albumin
US20030092622A1 (en) * 2000-02-29 2003-05-15 Yasushi Sato Preparation stabilized over long time
WO2006005910A2 (en) * 2004-07-12 2006-01-19 Ipsen Limited Pharmaceutical composition comprising botulinum, a non ionic surfactant, sodium chloride and sucrose
WO2006013370A1 (en) * 2004-08-04 2006-02-09 Ipsen Limited Pharmaceutical composition containing botulinum neurotoxin a2
WO2009008595A1 (en) * 2007-07-10 2009-01-15 Medy-Tox, Inc. Pharmaceutical liquid composition of botulinum toxin with improved stability
WO2015166242A1 (en) * 2014-04-29 2015-11-05 Ipsen Bioinnovation Limited Manufacture of recombinant clostridium botulinum neurotoxins

Also Published As

Publication number Publication date
HRP20202070T1 (hr) 2021-02-19
HUE052023T2 (hu) 2021-04-28
HRP20220024T1 (hr) 2022-04-01
JP7053498B2 (ja) 2022-04-12
US20210330765A1 (en) 2021-10-28
GEP20207139B (en) 2020-07-27
DK3679946T3 (da) 2022-02-07
US20190183988A1 (en) 2019-06-20
IL263173B (en) 2021-08-31
PT3679946T (pt) 2022-01-14
CN111701010B (zh) 2023-09-26
IL285190B (en) 2022-07-01
EP3463432A1 (en) 2019-04-10
KR20190022548A (ko) 2019-03-06
EP4026532A1 (en) 2022-07-13
IL285190A (en) 2021-08-31
SA518400513B1 (ar) 2022-11-03
BR112018074311A2 (pt) 2019-10-01
KR20220054887A (ko) 2022-05-03
PT3463432T (pt) 2021-01-12
CY1124916T1 (el) 2023-01-05
SI3463432T1 (sl) 2021-02-26
PL3679946T3 (pl) 2022-05-30
LT3679946T (lt) 2022-02-10
HUE057640T2 (hu) 2022-05-28
SG11201810561YA (en) 2018-12-28
CN109562148A (zh) 2019-04-02
KR102399451B1 (ko) 2022-05-23
AU2017270359B2 (en) 2023-09-21
CN111701010A (zh) 2020-09-25
SI3679946T1 (sl) 2022-04-29
WO2017203038A1 (en) 2017-11-30
AR108631A1 (es) 2018-09-12
CY1124237T1 (el) 2022-07-22
RU2018142149A (ru) 2020-06-29
IL263173A (en) 2018-12-31
US20240050539A1 (en) 2024-02-15
TWI777955B (zh) 2022-09-21
CA3025437A1 (en) 2017-11-30
JP2019517481A (ja) 2019-06-24
EP3463432B1 (en) 2020-10-07
MX2018014631A (es) 2019-06-12
EA201892493A1 (ru) 2019-04-30
RU2741497C9 (ru) 2021-04-30
RU2741497C2 (ru) 2021-01-26
RU2018142149A3 (ru) 2020-07-23
EP3679946B1 (en) 2022-01-05
ZA201807904B (en) 2020-05-27
ES2846350T3 (es) 2021-07-28
US20230181702A1 (en) 2023-06-15
EP3679946A1 (en) 2020-07-15
LT3463432T (lt) 2021-01-25
AU2017270359A1 (en) 2018-12-13
RS61340B1 (sr) 2021-02-26
RS62832B1 (sr) 2022-02-28
US20230190892A9 (en) 2023-06-22
UA123679C2 (uk) 2021-05-12
ES2911124T3 (es) 2022-05-17
TW201742632A (zh) 2017-12-16
KR102423739B1 (ko) 2022-07-21
PL3463432T3 (pl) 2021-04-19
DK3463432T3 (da) 2021-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2741497C9 (ru) Жидкая композиция нейротоксина, стабилизированная триптофаном или тирозином
US20200164050A1 (en) Pharmaceutical composition containing botulinum neurotoxin
US20220160844A1 (en) Liquid neurotoxin formulation stabilized with tryptophan or tyrosine
NZ788585A (en) Liquid neurotoxin formulation stabilized with tryptophan or tyrosine
GB2418358A (en) Pharmaceutical composition comprising botulinum neurotoxin
GB2418359A (en) Pharmaceutical composition comprising botulinum neurotoxin