EA035624B1 - Вирулентный и ослабленный штаммы вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (prrsv) европейского типа - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к вирулентному и ослабленному штаммам вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV) европейского типа, к соответствующему способу получения заявленного ослабленного штамма PRRSV из вирулентного штамма, к вакцинам, содержащим ослабленный штамм PRRSV, а также к способу получения и применению заявленной вакцины.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к вирулентному, а также живому ослабленному штамму вируса европейского репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV), способам получения таких штаммов, вакцинам на их основе и способам получения указанных вакцин и их применению для лечения свиней.

Предпосылки создания изобретения

Репродуктивно-респираторный синдром свиней (PRRS) рассматривается многими специалистами как наиболее важное заболевание, которое в настоящее время наносит вред свиноводству во всем мире. Синдром был описан впервые в 1987 г. в Соединенных Штатах как загадочная болезнь свиней и он быстро распространился по всему миру. Этот синдром вызывает значительные репродуктивные потери, он ассоциирован с повышенным уровнем смертности от вторичных инфекций и связан со снижением конверсии корма и среднего суточного прироста массы. К сожалению, оказалось, что осуществление контроля вируса, вызывающего PRRS, является затруднительным.

Вирус PRRS (PRRSV) представляет собой покрытый оболочкой одноцепочечный РНК-овый вирус, который согласно классификации относится к семейству Arteriviridae (Cavanaugh, 1997). Он вызывает широко распространенное заболевание свиней, которое было впервые описано в США в 1987 г. как загадочная болезнь свиней (Hill, 1990). Болезнь проявляется в форме респираторного заболевания во всех возрастных группах свиней, приводя к гибели некоторых более молодых свиней и к серьезным проблемам, связанным с репродуктивной способностью у самок случного возраста.

Передача PRRSV может происходить и часто происходит путем непосредственного контакта между инфицированными и восприимчивыми свиньями. Перенос вируса может происходить также по воздуху на очень короткие расстояния или вместе со спермой. После заражения вирус может сохраняться в крови взрослых животных в течение примерно двух недель, а в организме зараженных молодых свиней в течение одного-двух месяцев или более. Зараженные хряки могут передавать вирус со спермой в течение более чем 100 дней. Такой длительный период виремии значительно повышает возможность трансмиссии заболевания. Кроме того, вирус PRRS может проникать через плаценту в течение последней трети периода беременности, заражая поросят в матке и приводя к рождению мертвых или ослабленных поросят.

Вирус PRRS может заражать стада всех типов и размеров, включая стада, характеризующиеся высоким или обычным статусом здоровья, а также содержащиеся в закрытых помещениях или на открытом воздухе. В зараженных стадах могут иметь место значительные потери репродуктивности, а также повышенные уровни постотъемной пневмонии, сопровождающейся слабым ростом. Репродуктивная фаза, как правило, продолжается в течение двух-трех месяцев; однако проблемы в постотъемный период часто приобретают эндемичный характер. Репродуктивное заболевание характеризуется вспышкой выкидышей, поражающей как свиноматок, так и подсвинок на последнем триместре беременности. Имеют место преждевременные опоросы в период примерно с 109 по 112 день беременности. Возрастает количество мертворожденных плодов и случаев рождения ослабленных поросят, что приводит к значительному увеличению смертности в предотъемный период.

Традиционно респираторная фаза наблюдалась в питомниках, прежде всего в питомниках с непрерывно-потоковой системой производства. Однако респираторные проблемы, вызываемые вирусом PRRS, могут проявляться также у свиней на завершающем периоде откорма в форме компонента респираторного симптомо-комплекса свиней (PRDC). Может иметь место снижение скорости роста, увеличение процента нетоварных свиней и повышение постотъемной смертности. Результаты диагностических исследований свидетельствуют о высоких уровнях пневмонии, ассоциированной с вирусом PRRS, а также с широким разнообразием других микроорганизмов, которые обычно выступают в роли вторичных возбудителей инфекции. Бактериальные изоляты могут включать среди прочего Streptococcus suis, Haemophilus suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus suis, Mycoplasma hyopneumoniae и Pasteurella multocida. Обычно встречающимися в этом случае вирусными агентами являются вирус свиного гриппа и респираторный коронавирус свиней. Пораженные свиньи редко дают ответ на применяемые в высоких дозах лекарственные средства, и заболевание не удается контролировать с помощью систем одновременного заполнения помещения животными и одновременного их удаления.

Вирус PRRSV существует в виде двух генотипов, обозначенных как US-тип- и EU-тип, характеризующихся примерно 50%-ной гомологией последовательностей (Dea S. и др., Arch Virol 145, 2000, сс. 659-688). Эти два генотипа можно различать также по их иммунологическим свойствам. Наибольший объем информации при секвенировании различных изолятов получают на основе структурных белков, а именно, оболочечного белка GP5, на долю которого приходится лишь примерно 4% вирусного генома, в то время как о неструктурных белках (nsp) имеется очень мало сведений. Выделение PRRSV и получение вакцин описано в многочисленных публикациях (WO 92/21375, WO 93/06211, WO93/03760, WO 93/07898, WO 96/36356, EP 0676467, EP 0732340, EP 0835930).

Вакцинация представляет собой имеющий решающее значение метод снижения связанной с PRRS нагрузки, поскольку у свиней, которые выздоровели после PRRS-инфекции, должен развиться иммунный ответ, который в обычных условиях должен защищать их от повторного заражения тем же штаммом ви- 1 035624 руса. Однако вирус PRRS обладает способностью изменяться (посредством мутации или рекомбинации);

и, следовательно, могут возникать новые вирусные штаммы. В таких случаях может не иметь место перекрестная защита от различных штаммов и на фермах, которые были инфицированы ранее, могут происходить новые вспышки заболевания. Таким образом, все еще существует необходимость в разработке дополнительных вакцин.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к вирулентному вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV) европейского типа, который представляет собой штамм ECACC 11012501.

Кроме того, еще одним из объектов изобретения является живой ослабленный вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV) европейского типа, который представляет собой штамм ECACC 11012502, полученный из родительского штамма ECACC 11012501.

В предпочтительном варианте PRRSV ослаблен путем осуществления по меньшей мере 36 пассажей указанного родительского штамма в клеточной культуре и который при введении свинье, восприимчивой к PRRSV, не вызывает клинических признаков репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRS), но индуцирует иммунный ответ, приводящий к иммунизации указанной свиньи против патогенных форм PRRSV.

Изобретение также относится к способу получения живого ослабленного PRRSV в результате адаптации PRRSV штамма ECACC 11012501 европейского типа путем непрерывных пассажей на клетках линии MA 104, к клеткам млекопитающих, которые не относятся к линии MA 104.

Наконец изобретение относится к вакцине, предназначенной для защиты свиней от инфекции PRRSV, которая содержит живой ослабленный штамм ECACC 11012502 и фармацевтически приемлемый носитель.

Она может дополнительно содержать один или несколько не представляющих собой PRRSV ослабленных или инактивированных патогенов или их антигенный материал.

Причем указанные не представляющие собой PRRSV патогены выбреются из вируса псевдобешенства, вируса свиного гриппа, парвовируса свиней, трансмиссивного вируса гастроэнтерита, Escherichia coli, Erysipelo rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella cholerasuis, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Mycoplasma hyopneumoniae и Actinobacillus pleuropneumoniae.

Предпочтительно вакцина дополнительно может содержать один или несколько штаммов европейского PRRSV, выбранных из штамма вируса Лелистад (CDI-NL-2.91) или штаммов ECACC 04102703, ECACC 04102702, ECACC 04102704, CNCM I-1140, CNCM I-1387, CNCM I-1388, CNCM I-1102, CNCM I-1387, или ECACC V93070108, pT7P129A; ATCC VR-2332, ATCC VR-2368; ATCC VR-2495; ATCC VR 2385, ATCC VR 2386, ATCC VR 2429, ATCC VR 2474 и ATCC VR 2402.

Кроме того, в предпочтительном варианте осуществления изобретения она содержит носитель, который пригоден для внутрикожного или внутримышечного введения. При этом такая вакцина может находиться в высушенной вымораживанием форме.

Предпочтительно такая вакцина может содержать по меньшей мере примерно 10⁷ вирусных частиц.

Еще одним из вариантов данного изобретения является способ получения вакцины для защиты свиней от инфекции PRRSV, включающий смешивание живого ослабленного PRRSV с фармацевтически приемлемым носителем.

В предпочтительном варианте к живому ослабленному PRRSV дополнительно добавляют адъювант.

Еще одним объектом изобретения является применение предложенной вакцины для иммунизации свиней от репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRS). Причем это применение не приводит к повреждению легких у указанных свиней после вакцинации.

Изобретение также относится и к вирусу PRRS, имеющему нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 95% гомологична последовательности PRRSV, представленной в SEQ ID NO: 1, или последовательности PRRSV, представленной в SEQ ID NO: 10. В предпочтительном варианте вирус PRRS имеет нуклеотидную последовательность, которая представлена либо в SEQ ID NO: 1, либо в SEQ ID NO: 10.

Кроме того, в заявке описана вакцина для защиты свиней от вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV), содержащая PRRS вирус и фармацевтически приемлемый носитель, где указанный PRRS вирус имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или ослабленный PRRS вирус, который имеет нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 95% гомологична последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1.

В предпочтительном варианте эта вакцина дополнительно включает один или более не представляющих собой PRRSV ослабленных или инактивированных патогенов или их антигенный материал.

Причем не представляющие собой PRRSV патогены выбираются из вируса псевдобешенства, вируса свиного гриппа, парвовируса свиней, трансмиссивного вируса гастроэнтерита, Escherichia coli, Erysipelo rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella cholerasuis, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Mycoplasma hyopneumoniae и Actinobacillus pleuropneumoniae.

- 2 035624

Краткое описание нескольких аспектов чертежей

На чертежах показано:

на фиг. 1А - балльная оценка кашля, установленная по результатам клинических обследований, при использовании модели респираторного контрольного заражения с применением европейского штамма для контрольного заражения;

на фиг. 1Б - общий клинический балл, установленный по результатам клинических обследований, при использовании модели респираторного контрольного заражения с применением европейского штамма для контрольного заражения;

на фиг. 2 - результаты измерений ректальной температуры при использовании модели респираторного контрольного заражения с применением европейского штамма для контрольного заражения;

на фиг. 3 - результаты измерений среднего суточного прироста массы при использовании модели респираторного контрольного заражения с применением европейского штамма для контрольного заражения;

на фиг. 4 - уровень PRRS-виремии по данным анализа методом количественной ПЦР при использовании модели респираторного контрольного заражения с применением европейского штамма для контрольного заражения;

на фиг. 5 - результаты серологического анализа на PRRS методом ELISA при использовании модели респираторного контрольного заражения с применением европейского штамма для контрольного заражения;

на фиг. 6 - результаты макроскопического исследования повреждений легких при использовании модели респираторного контрольного заражения с применением европейского штамма для контрольного заражения;

на фиг. 7А-7В - результаты гистопатологических анализов. На фиг. 7А представлены результаты оценки средних макроскопических повреждений; на фиг. 7Б представлены результаты гистопатологического исследования контрольного животного; на фиг. 7В представлены результаты гистопатологического исследования животного, зараженного PRRS.

на фиг. 8 - результаты ОТ-ПЦР в реальном времени, демонстрирующие % виремии у животных, вакцинированных EU PRRS 94881.

на фиг. 9 - параллельный процесс крупномасштабного получения EU PRRS 94881.

Подробное описание изобретения

Понятие лечение или снижение серьезности или встречаемости относится к снижению серьезности клинических признаков, симптомов и/или патологических признаков, которые, как правило, ассоциированы с инфекцией, вплоть до их прекращения и включая предупреждение возникновения любых таких признаков или симптомов. Понятие патологические признаки относится к проявлению инфекции, которое обнаруживают путем микроскопического обследования или при аутопсии (например, повреждения легких).

Антиген PRRSV можно вводить в одном терапевтическом количестве поросенку возрастом примерно три недели или менее, а свинье возрастом от примерно 3 недель до 4 недель можно вводить антиген в других терапевтических количествах. Аналогично этому его можно вводить в совершенно других терапевтических количествах свинье возрастом от примерно четырех недель до шестнадцати недель (или в любом возрасте, находящемся в указанном диапазоне, например, в возрасте от пяти недель до шести недель, в возрасте от девяти недель до пятнадцати недель, в возрасте от семи недель до десяти недель и т.д.), или свинье старше шестнадцати недель, такой, как взрослая свиноматка.

Ослабленный атипичный штамм PRRSV и соответствующие улучшенные модифицированные живые вакцины обеспечивают эффективный иммунитет к указанному новому открытому типичному штамму PRRSV. Понятие эффективный иммунитет относится к способности вакцины предупреждать инфекции, вызываемые PRRSV у свиней, включая инфекции, вызываемые атипичным PRRSV, которые приводят к выраженным клиническим признакам заболевания. Следует понимать, что иммунизированная свинья может иметь, но может и не иметь PRRSV-позитивный серологический статус, но при этом у свиньи не проявляются никакие выраженные клинические симптомы.

Предпочтительные формы вакцины включают живой вирус PRRS европейского типа, у которого ослаблена вирулентность. В опытах на животных-хозяевах с использованием контрольного заражения было продемонстрировано, что полученный таким путем ослабленный вирус является авирулентным и обеспечивает эффективный иммунитет. Указанный конкретный штамм EU PRRS не обладает такой вирулентностью, как другие, и, следовательно, является предпочтительным в качестве кандидата для получения вакцины. Родительский штамм PRRSV 94881 не вызывает ни серьезного атипического заболевания PRRS у беременных самок, ни серьезных повреждений легких у молодых свиней. Этот штамм первоначально был выделен в области Северный Рейн-Вестфалия, Германия, из организма поросенка 3недельного возраста с серьезным респираторным нарушением. Затем штамм последовательно ослабляли посредством осуществления непрерывных пассажей на клетках линии MA 104. Ослабленный штамм был депонирован фирмой Bioscreen GmbH, Mendelstrasse 11, 48149, Мюнстер, Германия в Европейской коллекции клеточный культур (ECACC), Портон Даун, Солсбери, графство Уилтшир, SP4 0JG, Великобри- 3 035624 тания, 25 января 2011 г. и ему был присвоен регистрационный номер 11012502. Указанный ослабленный вирус представляет собой предпочтительный исходный вакцинный вирус (MSV), который был подвергнут последовательным пассажам и превращен в эффективную вакцину на основе PRRSV. Вирулентный родительский штамм, обозначенный как 94881, также был депонирован в соответствии с Будапештским договором фирмой Bioscreen GmbH, Mendelstrasse 11, 48149, Мюнстер, Германия, в Европейской коллекции клеточный культур (ECACC), Портон Даун, Солсбери, графство Уилтшир, SP4 0JG, Великобритания, 25 января 2011 г. и ему был присвоен регистрационный номер 11012501.

Модифицированную живую вирусную вакцину тестировали, вводя ее путем внутримышечной инъекции в дозе 1 мл молодым свиньям и в дозе 2 мл свиноматкам, и была продемонстрирована ее эффективность в отношении создания защитного иммунитета.

Пассажи вируса с целью его ослабления осуществляли согласно классическим вирусологическим методам. Конкретно, родительский изолят PRRS 94881 ослабляли in vitro посредством осуществления непрерывных пассажей на клетках линии MA 104, осуществляя максимум 108 пассажей после первоначального выделения. В целом, материал пересевали примерно 1-2 раза в неделю, осуществляя в общей сложности 108 пассажей в Т-колбах (25 см2) или Т-колбах (75 см2). Конфлюэнтные культуры клеток линии MA 104 в примерно 12-30 мл минимальной поддерживающей среды (MEM), дополненной 6% фетальной бычьей сыворотки (FBS) инокулировали 100-300 мкл вируса. Культуры инкубировали в течение 3-7 дней во влажной камере при 37°С в атмосфере, содержащей 4-6% CO₂. После того, как цитопатическое действие (ЦПД) культур достигало >25%, осуществляли сбор из колб путем экстракции супернатанта. Часть супернатанта переносили в новую колбу, а 2 мл собранного продукта помещали в виде аликвот на хранение при температуре от -60 до -80°С.

Специалист в данной области может с помощью стандартных методов определять нуклеотидную последовательность, которую имеет ослабленный вирус, депонированный в ECACC под регистрационным номером 11012502.

Последовательность, представленная в SEQ ID NO: 1, является полноразмерной последов ательностью ослабленного MSV PRRS 94881 и полная длина последовательности составляет 14843 пар оснований. Ниже приведены данные об OPC с 1 по 7 для указанной последовательности:

Номер ОРС	CDS в SEQ ID NO: 1	Кодируемый белок
OPCla	с	178 по 7227	SEQ ID NO:	2
OPClb	с	7209 по 11600	SEQ ID NO:	3
ОРС 2	с	11611 по 12360	SEQ ID NO:	4
ОРСЗ	с	12219 по 13016	SEQ ID NO:	5
ОРС4	с	12761 по 13312	SEQ ID NO:	6
ОРС5	с	13309 по 13914	SEQ ID NO:	7
ОРС6	с	13902 по 14423	SEQ ID NO:	8
ОРС7	с	14413 по 14799	SEQ ID NO:	9

Последовательность, представленная в SEQ ID NO: 10, является полноразмерной последовательностью родительского штамма PRRSV 94881, полученного после пассажа 5, и полная длина последовательности составляет 14843 пар оснований. Ниже приведены данные об OPC с 1 по 7 для указанной последовательности:

Номер OPC	CDS в SEQ ID NO: 10	Кодируемый белок
OPCla	c	178 no 7227	SEQ ID NO:	11
OPClb	c	7209 no 11600	SEQ ID NO:	12
OPC2	c	11611 no 12360	SEQ ID NO:	13
OPC3	c	12219 no 13016	SEQ ID NO:	14
OPC4	c	12761 no 13312	SEQ ID NO:	15
OPC5	c	13309 no 13914	SEQ ID NO:	16
OPC6	c	13902 no 14423	SEQ ID NO:	17
OPC7	c	14413 no 14799	SEQ ID NO:	18

После выделения указанного нового ослабленного штамма европейского вируса PRRS можно получать улучшенные вакцины против PRRS, содержащие самый современный штамм вируса PRRS, который соответствует вирулентным штаммам PRRS, обнаруженным в настоящее время в полевых условиях. В частности, новый ослабленный европейский вирус PRRS можно применять для получения модифицированных живых вакцин (MLV). Модифицированная живая вакцина характеризуется тем, что она содержит живой вирус, который может размножаться в организме свиней, но который не вызывает клинического заболевания PRRS. Кроме того, после введения он индуцирует иммунологический ответ у свиней, кото

- 4 035624 рый, как правило, обеспечивает значительный уровень защиты от повторной инфекции, вызываемой патогенным вирусом PRRS. Вирус, обладающий такими характеристиками, обычно называют ослабленным вирусом. В заявке представлено подробное описание последовательностей OPC как родительского, так и ослабленного штаммов PRRSV 94881. Таким образом, предполагается, что специалист в данной области может применять последовательности одной или нескольких OPC, представленных в настоящем описании, в субъединичной вакцине.

Как указано выше, в целом, ослабленный вирус можно создавать из патогенных изолятов вируса посредством осуществления повторных пассажей с использованием пригодных клеток-хозяев, которые являются пермиссивными (т.е. восприимчивыми к вирусу клетками, способными обеспечивать его репродукцию) для вируса, до тех пор, пока вирус не приобретет требуемые свойства (WO 92/21375, WO 93/06211, WO93/03760, WO 93/07898, WO 96/36356, EP 0676467, EP 0732340, EP 0835930). Его также можно создавать путем генетической инженерии с использованием инфекционного клона, как правило, полноразмерного транскрипта комплементарной ДНК вирусного генома (WO 98/18933, EP 1018557, WO 03/062407, Nielsen и др., J Virol, 77, 2003, cc. 3702-3711). MLV содержит ослабленный вирус PRRS европейского генотипа 94481, который получен путем ослабления родительского вируса, депонированного в ECACC под регистрационным номером 11012501. MLV может содержать ослабленный вирус, пре который депонирован в ECACC под регистрационным номером 11012502.

Для специалиста не составит труда получить и выделить потомство или поколения вируса PPRS, депонированного 25 января 2011 г. в Европейской коллекции клеточных культур (ECACC), Портон Даун, Солсбери, графство Уилтшир, SP4 0JG, Великобритания, под регистрационными номерами ECACC 11012502 (ослабленный штамм для MLV) и 11012501 (родительский штамм). Таким образом, можно вывести штаммы вируса PRRS из депонированных штаммов посредством размножения или мультипликации в идентичной или дивергентной форме, прежде всего из потомков, которые обладают необходимыми характеристиками депонированных штаммов. При продолжении размножения штаммы могут приобретать мутации, большинство из которых не должно существенно изменять свойства указанных штаммов.

Штаммы можно подвергать также дополнительной модификации с целью придания им дополнительных желательных свойств. Это можно осуществлять с помощью классических методов размножения и отбора, таких как непрерывное размножение в пригодных клетках-хозяевах до получения ослабленного фенотипа. Штаммы можно генетически модифицировать путем осуществления направленной мутации нуклеотидной последовательности из генома этих штаммов с помощью пригодных методов генетической инженерии. Геном PRRSV был полностью или частично секвенирован (Conzelmann и др., 1993; Meulenberg и др., 1993а, Murtaugh и др., 1995), он кодирует помимо РНК-зависимой РНК-полимеразы (OPC1a и OPC1b), шесть структурных белков, которые представляют собой четыре оболочечных гликопротеина, обозначенные как GP2 (OPC2), GP3 (OPC3), GP4 (OPC4) и GP5 (OPC5), негликозилированный мембранный белок M (OPC6) и нуклеокапсидный белок N (OPC7) (Meulenberg и др., 1995, 1996; van Nieuwstadt и др., 1996). Путем иммунологической характеризации и нуклеотидного секвенирования европейских штаммов и US-штаммов PRRSV были выявлены небольшие антигенные различия в штаммах PRRSV, локализованные в структурных вирусных белках (Nelson и др., 1993; Wensvoort и др., 1992; Murtaugh и др., 1995). Сравнение MSV PRRS 94881 со штаммом европейского референс-вируса, а именно, вирусом Лелистад (LV), выявило гомологии нуклеотидных последовательностей на уровне от 85,40 до 95,09 процентов у 8 различных вирусных генов и идентичности аминокислот на уровне от 86,39 до 97,27 процентов между обоими вирусными штаммами. При сравнении с LV можно идентифицировать две делеции в OPC1a MSV 94881. Например, OPC1a MSV 94881 обладает 85,40%-ной гомологией нуклеотидов с вирусом Лелистад, что обусловливает идентичность аминокислот на уровне 86,39%; OPC1b MSV 94881 обладает 92,12%-ной гомологией нуклеотидной последовательности с вирусом Лелистад, что обусловливает идентичность аминокислот на уровне 97,27%; OPC2 MSV 94881 обладает 91,07%-ной гомологией нуклеотидной последовательности с вирусом Лелистад, что обусловливает идентичность аминокислот на уровне 90,76%; OPC3 MSV 94881 обладает 90,98%-ной гомологией нуклеотидной последовательности с вирусом Лелистад, что обусловливает идентичность аминокислот на уровне 89,43%; OPC4 MSV 94881 обладает 90,58%-ной гомологией нуклеотидной последовательности с вирусом Лелистад, что обусловливает идентичность аминокислот на уровне 87,43%; OPC5 MSV 94881 обладает 90,43%-ной гомологией нуклеотидной последовательности с вирусом Лелистад, что обусловливает идентичность аминокислот на уровне 88,56%; OPC6 MSV 94881 обладает 95,02%-ной гомологией нуклеотидной последовательности с вирусом Лелистад, что обусловливает идентичность аминокислот на уровне 97,11%; OPC7 MSV 94881 обладает 95,09%-ной гомологией нуклеотидной последовательности с вирусом Лелистад, что обусловливает идентичность аминокислот на уровне 92,97%.

Фактически вирус PRRS 94881 может быть создан в виде химерного вируса с каркасом вируса PRRS, имеющего регистрационный номер ECACC 11012502, или фактически родительский штамм, депонированный под регистрационным номером ECACC 11012501, модифицируют путем замены эндогенной последовательности одной или нескольких из OPC 1а, OPC 1b, OpC 2, OpC 3, OPC 4, OPC 5, OPC 6 или OPC 7 на соответствующую OPC из другого штамма вируса PRRS. Например, другой штамм вируса PRRS может представлять собой другой европейский штамм, такой как штамм вируса Лелистад (агент

- 5 035624

Лелистад (CDI-NL-2.91)), или другие штаммы, такие как штаммы, депонированные под регистрационными номерами ECACC 04102703, ECACC 04102702, ECACC 04102704, регистрационным номером CNCM I-1140, регистрационным номером CNCM I-1387, регистрационным номером CNCM I-1388, ATCC VR 2332, VR 2385, VR 2386, VR 2429, VR 2474 и VR 2402; CNCM I-1102, CNCM I-1140, CNCM I1387, CNCM I-1388 или ECACC V93070108, или в действительности он может представлять собой USштамм, такой как североамериканский вирус PRRS, pT7P129A; депозит ATCC VR-2332, депозит ATCC VR-2368; ATCC VR-2495; ATCC VR 2385, ATCC VR 2386, ATCC VR 2429, ATCC VR 2474 и ATCC VR 2402.

Методы рекомбинации, применяемые для получения модифицированных последовательностей, хорошо известны специалистам в данной области, и, как правило, в них применяют конструирование полноразмерных копий комплементарной ДНК (инфекционные клоны) вирусного генома, которые затем можно модифицировать с помощью методов рекомбинации и манипулирования ДНК (типа сайтнаправленного мутагенеза и т.д.). Таким путем можно, например, модифицировать антигенные сайты или ферментативные свойства вирусных белков. В литературе описаны инфекционные клоны штаммов вируса PRRS европейского и североамериканского генотипа.

Штаммы вируса PRRS, которые пригодны для вакцин, можно выращивать и собирать методами, известными в данной области, например, путем размножения в пригодных клетках-хозяевах, таких как обезьянья клеточная линия МА-104, клетки линии Vero или свиные альвеолярные макрофаги. PRRSV предпочтительно выращивают в альвеолярных легочных макрофагах (Wensvoort и др., 1991). Несколько клеточных линий, таких как CL2621 и другие клеточные линии, клонированные из линии клеток почки обезьяны МА-104 (Benfield и др., 1992; Collins и др., 1992; Kim и др., 1993), также восприимчивы к вирусу.

Таким образом, вакцины могут содержать любой из штаммов PRRSV с регистрационным номером ECACC 11012501, 11012501 регистрационными номерами ECACC 04102703, ECACC 04102702, ECACC 04102704, регистрационным номером CNCM I-1140, регистрационным номером CNCM I-1387 и регистрационным номером CNCM I-1388, а также любые комбинации указанных штаммов или их потомков. Вирус PRRS 94881 выращивают с помощью способа, в котором производят параллельное высевание вируса и клеток-хозяев в один и тот же день в биореактор, что продемонстрировано на фиг. 9. Дополнительные отличительные признаки способа получения вируса PRRS 94881 могут быть такими же, что и описанные в одновременно зарегистрированной предварительной заявке на патент США, озаглавленной Способ получения PRRSV в коммерческом масштабе, которая зарегистрирована одновременно с настоящей заявкой под номером 61/444071. Хотя представлен один способ выращивания PRRSV 94881, следует понимать, что вирус можно размножать с помощью любого общепринятого метода, известного специалистам в данной области.

Предпочтительно вакцины представляют собой модифицированные живые вакцины, содержащие один или несколько указанных живых штаммов в пригодном носителе, но можно применять также инактивированный вирус для получения убитой вакцины (KV). Как правило, MLV включают в препаративную форму таким образом, чтобы обеспечивать введение от 10¹ до 10⁷ вирусных частиц на дозу, предпочтительно от 10³ до 10⁵ частиц на дозу, более предпочтительно от 10⁴ до 10⁵ частиц на дозу (4,0-5,0 log₁₀ TCID₅₀) KV можно включать в препаративную форму, исходя из титра до активации, составляющего от 10³ до 10¹⁰ вирусных частиц на дозу. Вакцина может содержать фармацевтически приемлемый носитель, например, физиологический солевой раствор.

Инфицирование свиней PRRSV может осуществляться ороназальным путем. В легких вирус поглощается легочными альвеолярными макрофагами и в этих клетках репликация PRRSV завершается в течение 9 ч. В течение 12 ч PRRSV перемещается из легких в легочные лимфатические узлы и в течение 3 дней в периферические лимфатические узлы, костный мозг и селезенку. В этих областях лишь небольшое количество клеток дают положительную в отношении вирусного антигена окраску. Вирус присутствует в крови по меньшей мере в течение 21 дня и часто намного дольше. Через 7 дней в крови обнаруживают антитела к PRRSV. Одновременное присутствие вируса и антитела в организме инфицированных PRRS свиней свидетельствует о том, что вирусная инфекция может сохраняться в течение продолжительного периода времени, хотя и на низком уровне, несмотря на присутствие антитела. На протяжении по меньшей мере 7 недель популяция альвеолярных клеток в легких отличается от популяции в здоровых свободных от патогенов (SPF) легких.

Вакцина может находиться в форме высушенного вымораживанием препарата живого вируса, предназначенного для восстановления с помощью растворителя для получения раствора для инъекции. Растворитель может представлять собой, например, воду, физиологический раствор или буфер, или вспомогательный (адъювантный) растворитель. Растворитель может содержать адъюванты. Восстановленную вакцину можно затем инъецировать свинье, например, путем внутримышечной или внутрикожной инъекции в шею. Для внутримышечной инъекции можно использовать объем 2 мл, для внутрикожной инъекции, как правило, объем составляет 0,2 мл. Таким образом, продукт, представляющий собой вакцину, может содержать в отдельных контейнерах высушенную вымораживанием композицию вируса и растворитель для восстановления, и необязательно дополнительно листовку или этикетку с инструк

- 6 035624 циями по применению.

Вакцина может содержать не только один или несколько из вышеуказанных штаммов, но может включать другие компоненты, обладающие активностью в отношении PRRS или других вирусных или бактериальных заболеваний свиней, таких как свиной цирковирус или классический вирус лихорадки свиней. Таким образом, вакцина она может содержать по меньшей мере один дополнительный антиген, обладающий активностью в отношении заболевания свиней, отличного от PRRS. Например, такие дополнительные антигены могут включать Mycoplasma hyopneumoniae, PCV2, SIV, H. parasuis, E. rhusiopathiae, S. suis, A. suis, Leptospira sp. Parvovirus и т.п. Кроме того, вакцина может содержать определенные фармацевтически приемлемые или приемлемые для ветеринарии адъюванты. Вакцины против вируса PRRS могут содержать PRRSV 94881, а также адъюванты, повышающие эффективность вакцины, в результате чего при введении комбинации адъюванта и вакцины наблюдается лучший клинический ответ/исход по сравнению с введением только одной вакцины. Например, композиции вакцины могут содержать вакцину на основе вируса PRRSV 94881 и адъювант, выбранный из группы, состоящей из МСР-1, α-токоферол (например, α-токоферола ацетат, примером которого служит вариант, поступающий в продажу под товарным знаком Diluvac Forte®), фракции Haemophilus sonmus, карбопол и их комбинации. Вирусная вакцина может представлять собой рекомбинантную субъединичную вакцину или живую ослабленную вирусную вакцину. Примером существующей в настоящее время живой вакцины является MLV PRRS Ingelvac®, и на основе PRRS 94881 можно приготавливать препаративную форму методом, сходным с методом получения MLV PRRS Ingelvac®.

Иммуногенные композиции могут содержать помимо указанных выше и другие ингредиенты, если другие ингредиенты не взаимодействуют с адъювантами или лежащей в основе композиции вирусной вакциной. К таким другим ингредиентам относятся, например, связующие вещества, красители, десиканты, антисептики, смачивающие вещества, стабилизаторы, эксципиенты, адгезивы, пластификаторы, вещества для повышения клейкости, разрыхлители, материалы для пластырей, мазевые основы, вещества для удаления кератина, основные субстанции, вещества, усиливающие абсорбцию, жирные кислоты, эфиры жирных кислот, высшие спирты, поверхностно-активные вещества, вода и забуферивающие вещества. К предпочтительным другим ингредиентам относятся забуферивающие вещества, мазевые основы, жирные кислоты, антисептики, основные субстанции и поверхностно-активные вещества.

Содержание или количество адъювантов можно варьировать и его можно определять, принимая во внимание, например, свойства применяемой вакцины на основе PRRSV и форму лекарственного средства. Компонент, представляющий собой адъювант, может содержать, например, от 1 до 100 мас.%. Композиции на основе PRRSV 94881 получают путем смешения компонента, представляющего собой адъювант, и компонента, представляющего собой вирусную вакцину, либо индивидуально, либо в сочетании с различными другими ингредиентами. Композиции могут представлять собой такие композиции, в которых вирусная вакцина и адъювант присутствуют в составе одной препаративной формы, или в альтернативном варианте адъювант и вакцина присутствуют в составе отдельных препаративных форм, которые можно вводить одновременно или последовательно.

Так, при введении в организм животных компонент, представляющий собой адъювант можно вводить отдельно от вирусной вакцины. В альтернативном варианте адъювант можно вводить совместно с вирусной вакциной в форме единой композиции вакцины. Вирусная вакцина может представлять собой любую вирусную вакцину. Предлагается применять вакцину на основе вируса PRRS, содержащую PRRSV 94881. Кроме того, такую вакцину можно объединять с другими вакцинами, такими как MLV PRRS Ingelvac® и/или Porcilis®. Это является лишь одним из примеров комбинированной вакцины на основе вируса PRRS, можно легко приготавливать и другие подобные комбинации вакцин.

Иммуногенные композиции являются наиболее предпочтительными с точки зрения индукции гуморального иммунного ответа на вирус PRRS. Введение вакцин предпочтительно должно приводить к снижению серьезности одного или нескольких клинических симптомов, таких как повреждения легких, анорексия, обесцвечивание кожи, заторможенность, респираторные признаки, появление мумифицированных поросят, кашель, диарея и их комбинации, которые ассоциированы с заражением PRRSV.

Так, композиции предпочтительно улучшают клинический исход для заболевшего животного по сравнению с исходом после введения только одной вирусной вакцины против PRRS. Улучшенный клинический исход заключается в снижении процента повреждений легких по меньшей мере на 50% по сравнению с животными, которым не вводили иммуногенную композицию в комбинации с указанным адъювантом. Улучшение клинического исхода заключается также в снижении уровня виремии у животных по меньшей мере на 45% по сравнению с животными, которым не вводили иммуногенную композицию в комбинации с указанным адъювантом.

Таким образом, улучшенная вирусная вакцина против PRRS предполагает смешение вирусной вакцины с адъювантом, выбранным из группы, состоящей из МСР-1, фракций Haemophilus sonmus, карбопола и их комбинаций. Кроме того, композиция вакцины может содержать фармацевтически приемлемый носитель.

Композиции вакцины можно включать в препаративные формы любым методом, известным в об

- 7 035624 ласти приготовления препаративных форм, например, включать в состав жидких препаратов, суспензий, мазей, порошков, лосьонов, эмульсий типа вода-в масле, эмульсий типа масло-в воде, эмульсий, кремов, катаплазм, пластырей и гелей, и предпочтительно их применяют в качестве лекарственных средств. Композиция вакцины при ее введении в кожу может приводить к значительной индукции производства антител. Таким образом композиция вакцины может быть приготовлена в виде препарата для чрезкожного введения.

Кроме того, как описано выше, вирус и адъювант можно вводить в организм совместно в форме единой композиции вакцины или можно вводить адъювантный препарат отдельно и другим путем по отношению к антигенному вирусному компоненту вакцины против PRRS, при этом адъювант действует таким образом, что количество антитела, продуцируемого в организме в ответ на вирусную вакцину против PRRS, может существенно возрастать по сравнению с введением только одной вирусной вакцины против PRRS.

Когда в организм вводят адъювант и вирусную вакцину против PRRS, то это приводит к улучшению клинического исхода у животного. Обычный специалист в данной области может легко определять эффективное количество адъюванта и иммунологически эффективное количество вирусной вакцины против PRRS, принимая во внимание, например, тип и свойства антигенной субстанции, вид организмов, возраст, вес тела, серьезность заболеваний, тип заболеваний, время введения и метод введения, а также используя в качестве показателя количество антитела, вырабатываемого в организме против антигенной субстанции.

Вирусную вакцину против PRRS, адъювант или их комбинации можно вводить в организмы любым пригодным методом, выбранным в зависимости, например, от состояния животных и характеристик заболевания. Примеры таких методов включают внутрибрюшинное введение, дермальное введение, например, путем подкожной инъекции, внутримышечной инъекции, внутрикожной инъекции и с помощью пластыря, назальное введение, оральное введение, введение через слизистую оболочку (например, ректальное введение, вагинальное введение и введение через роговицу). Среди них предпочтительным является внутримышечное введение.

Примером терапевтической дозы MLV PRRSV является доза объемом примерно два миллилитра (2 мл). Специалисту в данной области должно быть очевидно, что уровень дозы можно варьировать в зависимости от породы, размера и других физических факторов индивидуального животного, а также от конкретной препаративной формы MLV PRRSV и пути введения. Предпочтительно MLV PRRSV вводят в виде однократной дозы; однако можно применять дополнительные дозы. И в этом случае также специалисту в данной области должно быть очевидно, что доза и количество доз зависят от возраста и физического состояния конкретной свиньи, а также от других факторов, которые обычно учитывают в промышленности, и от конкретных условий, в которых осуществляют введение MLV PRRSV.

Вакцина может представлять собой мультивалентную вакцину, которая содержит два или большее количество вирусов PRRS, где по меньшей мере один из вирусов PRRS представляет собой ослабленный вирус 94881, депонированный под регистрационным номером ECACC 11012502. Другие вирусы PRRS могут представлять собой один или несколько вирусов, выбранных из группы, состоящей из вирусного штамма PRRSV, представляющего собой вирус Лелистад (агент Лелистад (CDI-NL-2.91)), или других штаммов, таких как штаммы, депонированные под регистрационными номерами ECACC 04102703, ECACC 04102702, ECACC 04102704, регистрационным номером CNCM I-1140, регистрационным номером CNCM I-1387, регистрационным номером CNCM I-1388, ATCC VR 2332, VR 2385, VR 2386, VR 2429, VR 2474 и VR 2402; CNCM I-1102, CNCM I-1140, CNCM I-1387, CNCM I-1388 или ECACC V93070108, или может представлять собой US-штамм, такой как североамериканский вирус PRRS, pT7P129A; депозит ATCC VR-2332, депозит ATCC VR-2368; ATCC VR-2495; ATCC VR 2385, ATCC VR 2386, ATCC VR 2429, ATCC VR 2474 и ATCC VR 2402.

Вакцины на основе вирусов PRRS можно применять для вакцинирования, как поросят, так и свиноматок. Конкретную схему введения доз выбирают в зависимости от возраста свиньи и антигена, выбранного для введения. Это позволяет вводить свиньям любого возраста наиболее эффективную дозу. MLV PRRSV 94881 вводят в терапевтическом количестве свинье или поросенку возрастом примерно две недели ± 5 дней. Выбранное количество должно варьироваться в зависимости от возраста свиньи. MLV вводят в другом терапевтическом количестве свинье или поросенку, возраст которого превышает примерно 3 недели, и это количество также должно изменяться, когда свинья, которой осуществляют указанное введение, взрослеет или становится старше. Таким образом, свиньям возрастом примерно четыре недели, шесть недель, восемь недель, десять недель, двенадцать недель, четырнадцать недель, шестнадцать недель, подсвинке или свиноматке, всем нужно вводить вакцину в различных количествах. Предназначенную для применения терапевтическую дозу следует оптимизировать в полевых условиях и, как правило, ее определяют в клинических опытах, в которых определяют минимальную иммунизирующую дозу, обеспечивающую защиту восприимчивой свиньи от контрольного заражения вирулентным гетерологичным PRRSV. Предпочтительно, MLV PRRSV вводят внутримышечно; однако можно использовать и другие методы введения, такие как внутрикожное, интраназальное, интраретинальное, оральное, подкожное введение и т.п., которые широко известны и применяются в данной области.

- 8 035624

Специалисту в данной области должно быть очевидно, что методы вакцинации могут предусматривать определение соответствующего графика введения и доз для осуществления вакцинации свиньи от PRRSV. Такие методы, как правило, включают стадии определения по меньшей мере одной переменной, выбранной из группы, включающей возраст, состояние здоровья, уровень врожденного иммунитета и уровень активного иммунитета свиньи, и регулирования стандартного уровня доз с учетом этих переменных. Как правило, уровень врожденного иммунитета и уровень активного иммунитета следует определять путем сопоставления со стандартом, представляющим собой средние уровни для популяции свиней сходного возраста и состояния здоровья. Все переменные рассматривают до определения оптимального уровня доз и графика введения.

Полная нуклеотидная последовательность ослабленного вируса 94881, депонированного под регистрационным номером ECACC 11012502, имеет последовательность SEQ ID NO: 1, которая кодирует представленные в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9 белковые последовательности OPC1a, OPC1b, OPC2, OPC3, OPC4, OPC5, OPC6, OPC7 соответственно. Полная нуклеотидная последовательность вирулентного родительского вируса 94881, депонированного под регистрационным номером ECACC 11012501, имеет последовательность SEQ ID NO: 10, которая кодирует представленные в SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18 белковые последовательности OPC1a, OPC1b, OPC2, OPC3, OPC4, OPC5, OPC6, OPC7 соответственно.

Вакцину на основе PRRSV 94881 можно вводить любым общепринятым путем, в некоторых предпочтительных способах введение осуществляют внутримышечно. Предпочтительно, когда вводимая вакцина против PRRSV оказывает свое благоприятное действие в отношении лечения или уменьшения серьезности или встречаемости инфекции PRRSV после введения однократной дозы, как это имеет место в случае Ingelvac®, однако, если выбирают другие антигены или комбинации, или мультивалентные вакцины, то следует иметь в виду, что их можно вводить общепринятым для их применения образом, что может включать введение одной или нескольких бустерных доз после введения первой дозы. Специалисты в данной области могут определять соответствующие уровни доз с учетом выбранной вакцины против PRRSV и возрастного диапазона животного, которому требуется вводить антиген.

В конкретных представленных ниже примерах осуществляли контрольное заражение свиней и свиноматок новым выведенным штаммом европейского PRRSV, который обладает способностью воспроизводимым образом вызывать респираторное заболевание у поросят. Выводимые до настоящего времени европейские штаммы PRRSV не позволяли воспроизводить респираторное заболевание при его моделировании на поросятах и поэтому исторически модели, основанные на контрольном заражении респираторным путем, базировались на использовании не-европейских штаммов для заражения. В Европе вследствие высокого генетического разнообразия существует необходимость в создании новой вакцины на основе европейского штамма. В дополнительных примерах осуществляли контрольное заражение животных штаммом, который вызывал потерю репродуктивной способности на моделях с использованием контрольного заражения подсвинок/свиноматок. Было установлено, что эффективность MLV-вакцин на основе ослабленного вируса 94881, депонированного под регистрационным номером ECACC 11012502, или любого вируса, полученного из этого штамма или из родительского штамма, депонированного под регистрационным номером ECACC 11012501, можно демонстрировать на разнообразных моделях с использованием контрольного заражения, поскольку указанный штамм также обладает эффективностью на других моделях индуцированного вирусом PRRS респираторного заболевания или потери репродуктивной способности.

Примеры

Пример 1. Описание модели контрольного заражения PRRSV респираторным путем.

Как указано выше, исторически было установлено, что штаммы, выведенные из EU-PRRSV, не позволяют воспроизводить респираторное заболевание на модели, созданной на поросятах. В Европе вследствие высокого генетического разнообразия существует необходимость в создании новой вакцины на основе европейского штамма, и для проведения исследований необходима надежная воспроизводимая модель контрольного заражения респираторным путем, созданная с использованием вирулентного штамма, выведенного из Европейского PRRSV. В приведенном ниже примере представлены полученные при создании изобретения данные о том, что контрольное заражение свиней европейским применяемым для контрольного заражения штаммом, полученным в результате небольшого количества пассажей (после 4-го пассажа), позволяет надежно вызывать респираторные симптомы.

В этом опыте использовали 3 группы по 12 животных, имевших возраст 3 недели на момент их распределения по группам и возраст примерно 10 недель на момент контрольного заражения:

группа 1 - контрольная группа (на чертежах обозначена как контроль);

группа 2 - группа животных, которых подвергали контрольному заражению (SD 35) (на чертежах обозначена как контр. зараж.);

группа 3 - группа животных, которых вакцинировали PRRSV Porcilis® (SD 0) и затем подвергали контрольному заражению (SD 35) (на чертежах обозначена как Porcilis).

- 9 035624

Опыт проводили в течение 56-дневного периода; через 10 дней после контрольного заражения проводили аутопсию 6 животных из каждой группы; аутопсию всех остальных животных осуществляли через 21 день после контрольного заражения. Ежедневно оценивали следующие параметры: ректальную температуру, респираторные и другие клинические признаки. Другие исследуемые параметры включали: вес тела, смертность, виремию, сероконверсию, данные патологического и гистологического обследования легких.

В день -7 свиней распределяли по группам. В день опыта 0, группу 3 вакцинировали PRRSV Porcilis®. В день опыта 35 группу 2 и группу 3 подвергали контрольному заражению европейским штаммом, применяемым для контрольного заражения. В день 45 по 6 животных из каждой группы подвергали аутопсии. Аутопсию остальных животных осуществляли в день 56.

На фиг. 1А представлены результаты оценки кашля в виде среднего балла на животное для каждой недели. Видно, что после контрольного заражения имело место усиление кашля как в группе, подвергнутой контрольному заражению (группа 2), так и в группе, обработанной Porcilis (группа 3). На фиг. 1Б представлен общий клинический балл, который учитывает одышку, кашель, выделения из носа и глаз, а также поведение. Эти данные свидетельствуют о том, что в целом после контрольного заражения имело место повышение общего клинического балла в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе, обработанной Porcilis. Мониторинг ректальной температуры животных осуществляли до и после контрольного заражения, при этом было установлено, что после контрольного заражения имело место повышение ректальной температуры в группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе, обработанной Porcilis (SD (день опыта) > 35, при сравнении групп 1 и 2 p< 0,001; при сравнении групп 1 и 3 p< 0,001) (фиг. 2).

Измерения среднего суточного прироста массы (фиг. 3) позволили установить, что после контрольного заражения до осуществления первой аутопсии и до осуществления второй аутопсии величина ADWG была статистически значимо меньше в группе, подвергнутой контрольному заражению (SD35-44 p< 0,001 и SD35-56 p< 0,01), и в группе, вакцинированной Porcilis (SD35-44 p<0,05 и SD35-56 p< 0,05).

Мониторинг виремии осуществляли с помощью ПЦР (фиг. 4) и ELISA (фиг. 5). Результаты ПЦР показали, что в группе 1 (контрольная группа) все животные сохраняли негативный статус. В группе 2 все животные после контрольного заражения имели PRRSV-позитивный статус; в группе 3 все животные после вакцинации имели PRRSV-позитивный статус. Результаты, полученные с помощью ELISA, позволили установить, что в группе 1 все животные сохраняли негативный статус; в группе 2 все животные после контрольного заражения имели позитивный статус в отношении антител (Ат) к PRRSV; в группе 3 все животные после вакцинации имели позитивный статус в отношении Ат к PRRSV.

Проводили также макроскопическое обследование легких (фиг. 6), при этом в легких оценивали испещренные желтовато-коричневыми крапинками области и области консолидации. Оказалось возможным выявить статистически значимые макроскопические изменения в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе, обработанной Porcilis (при сравнении групп 1 и 2 p<0,001; при сравнении групп 1 и 3 p< 0,05), по сравнению с контрольной группой. Результаты гистопатологического обследования также продемонстрировали эффективность вакцинации (фиг. 7А-7В). Средний бал повреждений легких был статистически значимо выше в группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе, обработанной Porcilis, по сравнению с контрольной группой (при сравнении групп 1 и 2 p< 0,001; при сравнении групп 1 и 3 p< 0,001). Микроскопические повреждения были более сильными через 10 дней после заражения.

В целом, после контрольного заражения в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе, обработанной Porcilis, имело место увеличение баллов кашля, общих клинических баллов и повышение ректальной температуры. Вес тела в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе, обработанной Porcilis, был статистически значимо (p<0,05) меньше, чем в группе отрицательного контроля. Все животные в группе, обработанной Porcilis, после вакцинации имели позитивный статус в отношении вируса PRRS и антител к вирусу PRRS. Все животные в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, после вакцинации имели позитивный статус в отношении вируса PRRS и антител к вирусу PRRS. Макроскопический и гистологический анализ легких позволил выявить серьезные макроскопические и микроскопические повреждения легких в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе, обработанной Porcilis, по сравнению с группой отрицательного контроля.

Таким образом, результаты данного исследования подтвердили, что рассматриваемый применяемый для контрольного заражения европейский штамм позволяет статистически значимо (p<0,05 при сравнении с группой отрицательного контроля) индуцировать заболевание, характеризующееся следующими признаками: повышенная температура, кашель, сниженный вес и серьезные макроскопические и микроскопические повреждения.

Кроме того, было успешно продемонстрировано, что применяемый для контрольного заражения европейский штамм вызывал соответствующее и воспроизводимое респираторное заболевание со специфическими для PRRSV признаками на модели, основанной на контрольном заражении свиней, и, следо- 10 035624 вательно, его можно применять в качестве вируса для контрольного заражения в последующих исследованиях эффективности. В рамках проведенного исследования было установлено, что вакцина Porcilis против PRRS не обладала эффективностью в отношении европейского штамма, применяемого для контрольного заражения.

Пример 2. Определение минимальной иммунизирующей дозы ослабленного вируса PRRS 94881 на восприимчивых поросятах 2-недельного возраста после контрольного заражения гетерологичным изолятом европейского вируса PRRS.

Опыт по вакцинации-контрольному заражению осуществляли для определения минимальной иммунизирующей дозы (MID) вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней на основе изолята 94881, выведенного из европейского вируса, а именно, модифицированного живого вируса (MLV PRRS 94881), при трех различных уровнях титров, которую вводили восприимчивым к репродуктивно-респираторному синдрому свиней (PRRS) поросятам примерно 14-дневного возраста для обеспечения соответствующего уменьшения повреждений легких после контрольного заражения гетерологичным изолятом европейского вируса PRRS. В каждую предназначенную для вакцинации группу (группы 1-3), а также в контрольную группу, предназначенную для контрольного заражения (группа 4), включали по пятнадцать поросят. Десять поросят включали в группу отрицательного контроля (группа 5).

В группах, подвергнутых вакцинации, и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, осуществляли мониторинг ряда параметров, включая: уровень виремии после контрольного заражения, клинические оценки после вакцинации, серологию PRRS, уровень виремии после вакцинации, клинические обследования после контрольного заражения, средний суточный прирост массы (ADWG), ректальную температуру и выявление вируса PRRS в легких. В опыт была включена также группа отрицательного контроля (группа 5), которую не подвергали контрольному заражению, для целей валидации опыта путем демонстрации того, что в процессе опыта не нарушалась биологическая безопасность.

Контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению, и группа отрицательного контроля сохраняли PRRS-негативный статус вплоть до дня, в который осуществляли контрольное заражение (день D28), а группа отрицательного контроля оставалась PRRS-негативной и в течение всего оставшегося периода опыта (до дня D38), что служило валидацией опыта.

Контрольное заражение осуществляли на 4-й неделе после вакцинации. В это время только у 2 животных в группе, обработанной вакциной с низким титром, и у 3 животных в группе, обработанной вакциной с высоким титром, сыворотка была PRRS-позитивной по данным ПЦР.

В контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были выявлены значительные повреждения легких, типичные для PRRS после контрольного заражения. После контрольного заражения в группах, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром медианные величины общих баллов повреждений легких составляли 0,3, 0,5 и 0,40% соответственно, в то время как в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, медианная величина общего балла повреждений легких составляла 33,40%. Медианные величины общих баллов повреждений легких для трех обработанных вакциной с различными титрами групп, были статистически значимо меньшее, чем для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0001). Не было выявлено статистически значимых различий между общими баллами повреждений в группах, обработанных вакциной с различными титрами (p>0,1484). Для группы отрицательного контроля медианная величина общего балла повреждений легких составляла 0,00%.

В дни опыта 31, 5 и 38 в период после контрольного заражения в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, был выявлен статистически значимо меньший уровень виремии по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0093). После контрольного заражения не было обнаружено статистически значимых различий между уровнями виремии в группах, обработанных вакциной с различными титрами, за исключением дня D35, когда в группе, обработанной вакциной с высоким титром, имел место статистически значимо более низкий уровень виремии, чем в группе, обработанной вакциной со средним титром (p=0,0442). Поросята в группе отрицательного контроля в дни D31, D35 и D38 имели негативный статус в отношении виремии.

Такие клинические параметры, как серьезность (p<0,0082) и частота встречаемости кашля (p<0,0268), были менее выраженными в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в течение периода после контрольного заражения, т.е. со дня 29 по день 38. Гипертермия в течение периода после контрольного заражения была более значительной в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, чем в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами. Величина ADWG была статистически значимо выше в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0027).

Величина MID MLV PRRS 94881 по данным настоящего исследования соответствовала низкому титру вакцины, уровень которого составлял 1 х 10^2,77 ТСШ₅₀/мл, что было установлено на основе соответствующего уменьшения макроскопических повреждений легких, выявленного при использовании всех трех уровней титров, по сравнению с повреждениями у животных в контрольной группе, подвергнутой

- 11 035624 контрольному заражению, после осуществления контрольного заражения вирулентным гетерологичным штаммом, выведенным из европейского вируса PRRS. При анализе вторичных параметров было установлено, что все три уровня титра вакцины были эффективными, при этом не было обнаружено выраженных различий между группами, обработанными различными титрами.

Общий план опыта: опыт проводили согласно плану слепого рандомизированного исследования на 70 восприимчивых к PRRS поросятах-отъемышах возрастом 14-16 дней на день начала опыта (день 0, D0). Описание групп обработки приведено ниже в табл. 2.1:

Таблица 2.1 Группы обработки

Группа	Количество животных в день D0	Обработка в день D0
1	15	IVP № 1 (средний титр MLV PRRS 94881 1 х 102’77)
2	15	IVP № 2 (средний титр MLV PRRS 94881 1 х
		104·«)
3	15	IVP № 3 (средний титр MLV PRRS 94881 1 х 105’84)
4	15	СР (продукт-плацебо, который не содержал MLV PRRS 94881)
5	10	СР (продукт-плацебо, который не содержал MLV PRRS 94881)

Критериям включения в опыт удовлетворяли восемьдесят три поросенка, из которых специалист в области биостатистики в день D-3 произвольно распределял первые (по номерам) 70 животных по пяти группам. Поросят распределяли по 15 особей на группу в группы 1-4, десять поросят включали в группу 5. Все 83 поросенка имели PRRS-серонегативный статус.

Поросят обследовали в период со дня D-1 по день D26 для получения клинических оценок после вакцинации и данные обследований регистрировали в регистрационной форме для клинических оценок.

Серология: в дни D0, D7, D14, D21, D28 собирали образцы венозной цельной крови поросят. Регистрировали собранные образцы. Образцы крови центрифугировали и из каждой пробирки собирали сыворотку, разделяли и переносили в соответствующим образом маркированные пробирки. Один набор образцов сыворотки хранили при 2-8°С, другой набор образцов сыворотки хранили при -70±10°С. Набор образцов сыворотки, которые собирали в дни 0, 7, 14, 21, 28 и 38 и хранили при 2-8°С, анализировали в отношении антител к вирусу PRRS. Результаты классифицировали как негативные (соотношение S/P < 0,4 по данным ELISA) или позитивные (соотношение S/P > 0,4 по данным ELISA).

PRRS-виремия: набор образцов сыворотки, которые собирали в дни 0, 7, 14, 21, 28, 31, 35 и 38 и выдерживали при -70±10°С, анализировали в отношении РНК PRRSV с помощью qПЦР (Дополнение 1, Приложение 7). Результаты классифицировали как n.d. (не обнаружено), позитивные (EU PRRSV обнаружен, но не поддается количественной оценке, GE/мл (геномный эквивалент) = < 3,3 log) или указывали измеренную величину (log GE/мл). Для статистических целей результату не обнаружено приписывали величину 0 log GE/мл, а результату позитивный приписывали величину 3,0 log GE/мл.

Средний суточный прирост массы (ADWG): каждую свинью взвешивали на калиброванных градуированных весах и регистрировали вес индивидуального животного. Определяли среднесуточный прирост в период со дня D0 по день D28 и со дня D28 по день D38.

Клинические обследования после контрольного заражения: исследователь или уполномоченные лица проводили обследование поросят в отношении клинических признаков заболевания в период с D27 по D38 и результаты регистрировали в регистрационной форме для клинических оценок. Обследования заключались в оценке дыхания, поведения и кашля на основе балльной системы клинического обследования, представленной ниже в табл. 2.2.

Таблица 2.2 Балльная система клинического обследования

Балльная оценка дыхания	Балльная оценка поведения	Балльная оценка кашля
0 = нормальное дыхание 1 = затрудненное/учащенное дыхание 2 = одышка 3 = смерть	0 = нормальное 1 = заторможенность от слабой до средней степени 2 = серьезная заторможенность или лежачее положение 3 = смерть	0 = кашель отсутствует 1 = мягкий или интермиттирующий кашель 2 = грубый или серьезный, рецидивирующий кашель 3 = смерть

Общий суточный балл клинического обследования для каждого поросенка определяли путем суммирования его ежедневных балльных оценок дыхания, поведения и кашля.

Ректальные температуры измеряли в период с D27 по D38.

Общий балл повреждений легких: всех поросят, которые погибли до дня D38, и остальных поросят, которых умерщвляли в день D38, подвергали аутопсии. Каждый набор легких обследовали для выявле- 12 035624 ния любой макроскопической патологии легких и для каждой доли легких определяли % патологии. Если выявляли патологию других органов, то ее также описывали и регистрировали.

Анализ легких с помощью с.|ПЦР для выявления PRRSV: из каждого набора легких сохраняли по два образца левой и правой передних долей, левой и правой сердечных долей, левой и правой диафрагмальных долей и промежуточной доли. Для одного набора образцов легкого объединяли все три образца, взятые с левой стороны, и помещали в один контейнер; в то время как все три образца, взятые с правой стороны, и образец, взятый из промежуточной доли, объединяли и помещали в другой контейнер. Каждый контейнер заполняли 10%-ным раствором формалина, взятым в достаточном количестве. Для другого набора образцов легких, все три образца, взятых с левой стороны легких, объединяли и помещали в один Whirlpak® (стерильный пакет); в то время как все три образца, взятые с правой стороны, и образец промежуточной доли легких объединяли и помещали в другой Whirlpak®.

Замороженные образцы ткани легких хранили при -70±10°С до проведения дальнейшего анализа. Для каждого поросенка все образцы, взятые с левой стороны легких, гомогенизировали и анализировали в виде одного объединенного образца; и все образцы ткани, взятые с правой стороны легких, и образец промежуточной доли легких гомогенизировали и анализировали в виде одного объединенного образца. Результаты для образцов, взятых с левой и правой сторон легких, выражали в следующем виде: n.d. (не обнаружено), позитивный (EU PRRSV обнаружен, но не поддается количественной оценке, GE/мл (геномный эквивалент) = < 3,3 log) или указывали измеренную величину (log GE/мл). Для целей анализа для каждого поросенка записывали полученные с помощью qПЦР средние значения для образцов, взятых с левой и правой сторон легких. Для статистических целей результату не обнаружено приписывали величину 0 log GE/мл, а результату позитивный приписывали величину 3,0 log GE/мл.

Результаты

Общая балльная оценка повреждения легких после контрольного заражения: взятая в совокупности группа данных, включающих минимальные, максимальные, медианные величины, 95%-ный доверительный интервал, Q-диапазон и средние значения общих баллов повреждений легких, свидетельствует о том, что медианные величины общих баллов повреждений легких в группах, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром, составляли 0,13, 0,55 и 0,40% соответственно; в то время как медианная величина общих баллов повреждений легких в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, составляла 33,40%. Медианные величины общих баллов повреждений легких в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, были статистически значимо меньше, чем для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражениюф<0,0001). Не было выявлено статистически значимых различий между общими баллами повреждений легких в группах, обработанных вакциной с различными титрами (p>0,1484). Медианная величина общих баллов повреждений легких в группе отрицательного контроля составляла 0,00%.

У одного из животных (в группе, обработанной вакциной с высоким титром) путем гистологического анализа была выявлена слабая гнойная интерстициальная пневмония, сопровождавшаяся обширным фибринозно-гнойным плевритом. Дыхательные пути и альвеолы не имели существенных отличий за исключением рассеянных нейтрофилов. Ткань легких по данным ИГХ-анализа имела негативный статус в отношении антигенов M. hyo, PCV2, PRRSV и SIV. Повреждения легких соответствовали наличию серозита, который, как правило, ассоциирован с присутствием бактериальных агентов (Дополнение 12; приложение 2009030254). Из ткани легкого были выделены несколько чистых бактериальных культур, которые были идентифицированы как Bordetella bronchiseptica и коагулаза-отрицательный Staphylococcus. Хотя из ткани легких были выделены два типа бактерий, данного поросенка не исключали из группы 3 при осуществлении анализа общих баллов повреждений легких.

У двух из 10 поросят из группы отрицательного контроля были выявлены очень небольшие повреждения легких (№ 1767, 0,55%; № 1789, 0,61%). Указанные повреждения рассматривались как незначительные и не свидетельствующие о наличии PRRS.

PRRS-виремия после контрольного заражения: индивидуальные результаты анализа на виремию PRRS после контрольного заражения (дни D31-D38) сводили в таблицу, и было установлено, что после контрольного заражения виремия имелась у всех поросят в трех обработанных вакциной с различными титрами группах и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению. Во все три момента времени после контрольного заражения уровень виремии в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, был статистически значимо меньше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0093). Не было обнаружено различий в уровнях виремии между группами, обработанными вакциной с различными титрами, после контрольного заражения за исключением дня D35, когда в группе, обработанной вакциной с высоким титром, был выявлен меньший средний уровень виремии, чем в группе, обработанной вакциной со средним титром (p=0,0442). Поросята в группе отрицательного контроля сохраняли негативный статус в отношении виремии в дни D31, D35 и D38. Площадь под кривой (AUC) характеризует как величину, так и продолжительность вирусной нагрузки и является хорошим параметром для оценки виремии при проведении опыта. Статистически значимые различия были выявлены также между величинами AUC для трех групп, обработанных вакциной с различ- 13 035624 ными титрами, и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, как в период с D28 по

D38 (p<0,0162), так и в период с D31 по D38 (p<0,0001). Не было выявлено различий между величинами

AUC (p>0,3669) для групп, обработанных вакциной с различными титрами, в течение обоих интервалов времени.

Были обобщены также данные о частоте встречаемости поросят с позитивными результатами анализа на виремию, в группах в период со дня D31 по день D28, эти данные представлены в табл. 2.3. Поскольку для всех поросят в группах, обработанных вакциной, и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были получены позитивные результаты анализа на виремию после контрольного заражения, то частота встречаемости поросят с позитивными результатами анализа на виремию в каждой группе в каждый момент времени была равна 100%. Поэтому не проводили анализ частоты встречаемости виремии после контрольного заражения.

Таблица 2.3 Обобщение данных о частоте встречаемости поросят с позитивными результатами анализа на виремию в группах в период со дня D31 по день D38

День опыта	Группа*	Количество позитивных животных	% позитивных животных	95%-ный CI	Общее количество животных
31	1	14	100	76,8	100,0	14
2	15	100	78,2	100,0	15
3	15	100	78,2	100,0	15
4	14	100	76,8	100,0	14
5	0	0	0,0	30,8	10
35	1	14	100	76,8	100,0	14
2	15	100	78,2	100,0	15
3	15	100	78,2	100,0	15
4	14	100	76,8	100,0	14
5	0	0	0,0	30,8	10
38	1	14	100	76,8	100,0	14
2	15	100	78,2	100,0	15
3	15	100	78.2	100,0	15
4	14	100	76,8	100,0	14
5	0	0	0,0	30,8	10

* Группа 1 - низкий титр MLV PRRS 94881; группа 2 - средний титр MLV PRRS 94881; группа 3 высокий титр MLV PRRS; группа 4 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 5 - группа отрицательного контроля

Результаты анализа легких с помощью qПЦР: индивидуальные результаты выделения вируса из легких после контрольного заражения обобщали для получения частоты встречаемости позитивных результатов qПЦР-анализа образцов легких с целью оценки различий между группами (p-значения). Ткани легких, взятые у поросят из всех трех групп, обработанных вакциной с различными титрами, и из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, по данным qПЦР имели PRRSV-позитивный статус после контрольного заражения. Не было выявлено статистически значимых различий между группами, обработанными вакциной с различными титрами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p=1,0000). Поскольку все поросята, обработанные вакциной с различными титрами, имели по данным qПЦР PRRSV-позитивный статус, то не проводили статистических сравнительных анализов между группами, обработанными вакциной с различными титрами.

Хотя не было обнаружено различий между частотой встречаемости имевших позитивный по данным qПЦР статус тканей легких в группах, обработанных вакциной с различными титрами, и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были выявлены выраженные различия вирусной нагрузки в тканях легких. Действительно, для групп, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром, медианные величины вирусной нагрузки по данным qПЦР составляли 6,88, 6,80 и 6,81 log₁₀ GE/мл соответственно, в то время как для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, медианная величина вирусной нагрузки по данным дПЦР составляла 8,13 log₁₀ GE/мл. Различие между группами, обработанными вакциной с различными титрами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, было статистически значимым (p<0,0001). В противоположность этому, не было выявлено различий между медианными величинами вирусной нагрузки в легких по данным дПЦР в группах, обработанных вакциной с различными титрами (p>0,7379).

Балльная оценка результатов клинического обследования после контрольного заражения: после контрольного заражения не было выявлено серьезных аномалий в дыхании и поведении, о чем свидетельствовали медианные величины максимальных клинических баллов, равные 0 (балл, равный 0, соответствует нормальному дыханию или нормальному поведению) для всех пяти групп. Кроме того, не было обнаружено статистически значимых различий в аномалиях дыхания или поведения между группами, обработанными вакциной с различными титрами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному

- 14 035624 заражению (p>0,0996).

Кашель был зафиксирован во всех трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, но он был более серьезным в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению. Для каждой группы из трех групп, обработанных вакциной с различными титрами, максимальный балл кашля был равен 1, что соответствовало мягкому или интермиттирующему кашлю, а медианная величина максимального балла кашля была равна 0. В отличие от этого, для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, максимальный балл кашля был равен 2, что соответствовало грубому рецидивирующему кашлю, а медианная величина максимального балла кашля была равна 1. Во всех трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, кашель был статистически значимо менее серьезным, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0082). В группе отрицательного контроля кашель не был зафиксирован.

Для всех трех групп, обработанных вакциной с различными титрами, максимальные баллы были равны 1, а медианные величины максимальных баллов были равны нулю. В отличие от этого, для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, максимальный общий балл был равен 4, а медианная величина максимального балла была равен 1. Для всех трех групп, обработанных вакциной с различными титрами, максимальные общие клинические баллы были статистически значимо более низкими, чем для группы контрольного заражения (p<0,0047). И в этом случае также для группы отрицательного контроля максимальный общий клинический балл был равен нулю и медианная величина максимального общего клинического балла была равна нулю.

Во всех группах частота встречаемости аномального дыхания или поведения, выявленного в течение по меньшей мере одного дня в период со дня D29 по день D38, была низкой. Так, в группах, обработанных вакциной с низким и средним титром, не было зафиксировано аномального дыхания в период со дня D29 по день D38. В группе, обработанной вакциной с высоким титром, был выявлен один из 15 (7%) поросят, а в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, было выявлено 3 из 14 (21%) поросят с аномальным дыханием. Аномальное поведение не было зафиксировано ни в одной из групп, обработанных вакциной с различными титрами; в то время как в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, 2 из 14 (14%) поросят характеризовались аномальным поведением по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения. Не было обнаружено статистически значимых различий между группами, обработанными вакциной с различными титрами, и группой контрольного заражения в частоте встречаемости аномального дыхания или поведения, выявленного по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения (p>0,0996). В группе отрицательного контроля не было зафиксировано аномального дыхания или поведения.

Частота встречаемости кашля была намного больше в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, чем в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами. Так, частота встречаемости кашля, выявленного по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения, составляла 14, 13 и 27% в группах, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром соответственно. В противоположность этому, в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, частота встречаемости кашля, выявленного по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения, составляла 71%. Частота встречаемости кашля в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, была статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0268).

Частота встречаемости любого клинического признака, характеризующегося общим клиническим баллом > 0, после контрольного заражения в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, была выше, чем в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами. Аналогично частоте встречаемости кашля частота встречаемости любого клинического признака, выявленного по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения, составляла 14, 13 и 33% в группах, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром соответственно; в то время как в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, у 79% поросят был выявлен по меньшей мере один клинический признак после заражения. Частота встречаемости любого клинического признака после контрольного заражения в трех группах, обработанных вакциной, была статистически значимо меньше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, (p<0,0253). В группе отрицательного контроля в течение того же периода времени клинические признаки не были выявлены.

Средние баллы аномального дыхания или поведения в период со дня D29 по день D38 были низкими для всех групп. Так, средние баллы дыхания для групп, обработанных вакциной с низким и средним титром, были равны 0,00 (нормальное дыхание), для группы, обработанной вакциной с высоким титром, средний балл дыхания был равен 0,01, а для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, средний балл дыхания был равен 0,03. Для всех трех групп, обработанных вакциной с различными титрами, средний балл поведения был равен 0,00; в то время как для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, средний балл поведения был равен 0,01. Не было выявлено статистически значимых различий в средних баллах дыхания и поведения между группами, обработанных вакциной с различными титрами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p>0,0996). Сред

- 15 035624 ние баллы дыхания и поведения для группы отрицательного контроля были равны 0,00.

Для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, средний балл кашля был больше, чем для трех групп, обработанных вакциной с различными титрами. Так, средние баллы кашля составляли 0,01, 0,01 и 0,04 для групп, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром соответственно. В отличие от этого средний балл кашля для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, был равен 0,28. Средние баллы кашля для трех групп, обработанных вакциной с различными титрами, были статистически значимо ниже, чем для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0077).

Средний общий балл для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, был выше, чем для трех групп, обработанных вакциной с различными титрами. Аналогично средним баллам кашля средние общие баллы после контрольного заражения составляли 0,01, 0,01 и 0.04 для групп, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром соответственно, в то время как средний общий балл для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, был равен 0,32. Средние общие баллы для трех групп, обработанных вакциной с различными титрами, были статистически значимо меньше, чем для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0025).

Ректальные температуры после контрольного заражения: Максимальные для групп средние ректальные температуры в группах, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром, в период со дня D29 по день D38 составляли 40,20°С (D33), 40,33°С (D35) и 40,20°С (D37) соответственно. Максимальные для групп величины средней ректальной температуры в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе отрицательного контроля в период со дня D29 по D38 составляли 40,51°С (D33) и 39,95°С (D33) соответственно.

Ректальные температуры в группе, обработанной вакциной с низким титром, были статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в дни D29 (39,47 по сравнению с 39,90°С), D31 (39,85 по сравнению с 40,20°С), D35 (39,80 по сравнению с 40,22°С) и D38 (39,86 по сравнению с 40,32°С) (p<0,0317), при этом ректальная температура в день D30 в группе, обработанной вакциной с низким титром, была статистически значимо выше, чем в группе контрольного заражения (40,08 по сравнению с 39,58°С; p=0,0003). Не было выявлено статистически значимых различий между группой, обработанной вакциной с низким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в период со дня D32 по день D34 и в период со дня D36 по день D37 (p>0,0545).

Ректальная температура в группе, обработанной вакциной со средним титром, была статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в дни D31 (39,62 по сравнению с 40,20°С), D33 (40,15 по сравнению с 40,51°С) и D38 (39,58 по сравнению с 40,32°С) (p<0,0227). Не было выявлено статистически значимых различий между группой, обработанной вакциной со средним титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в дни D29-D30, D32 и D34-D37 (p>0,0580).

Ректальная температура в группе, обработанной вакциной с высоким титром, была статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в дни D33 (40,12 по сравнению с 40,51°С), D35 (39,79 по сравнению с 40,22°С) и D38 (39,55 по сравнению с 40,32°С) (p<0,0147), в то время как в день D32 ректальная температура в группе, обработанной вакциной с высоким титром, была статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, (40,31°С по сравнению с 39,90°С; p=0,0063). Не было выявлено статистически значимых различий между группой, обработанной вакциной с высоким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в дни D29-D31, D34 и D36-37 (p>0,0708).

Частота встречаемости гипертермии в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, после контрольного заражения была меньше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению. В целом в группах, обработанных вакциной с различными титрами, частота встречаемости гипертермии была низкой и находилась примерно на одинаковом уровне.

Средний суточный прирост массы (ADWG): среднеквадратичные величины ADWG в период со дня D0 по день D28 в группах, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром, составляли 0,4, 0,3 и 0,4 кг/день соответственно. Среднеквадратичная величина ADWG в течение этого же периода времени в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, составляла 0,3 кг/день. В группе, обработанной вакциной с низким титром, в период со дня D0 по день D28 среднеквадратичная величина ADWG была статистически значимо больше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0292), при этом не было выявлено других статистически значимых различий в среднеквадратичной величине ADWG между группами, обработанными вакциной с различными титрами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p>0,1262), или между группами, обработанными вакциной с различными титрами (p>0,1293). В течение этого же периода времени средняя величина ADWG в группе отрицательного контроля была равна 0,5 кг/день.

В течение периода времени со дня D28 по D38 среднеквадратичные величины ADWG в группах, обработанных вакциной с низким, средним и высоким титром, составляли 0,5, 0,5 и 0,4 кг/день соответственно. В течение этого же периода времени среднеквадратичная величина ADWG в контрольной груп- 16 035624 пе, подвергнутой контрольному заражению, была равно 0,3 кг/день. Прирост массы в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, после контрольного заражения статистически значимо превышал прирост массы в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0027). В течение этого же периода времени средняя величина ADWG в группе отрицательного контроля составляла 0,6 кг/день.

Клинические оценки после вакцинации: было установлено, что в группе, обработанной вакциной с низким титром, один поросенок (1735) оставался худосочным в период времени со дня D0 по день D10. Кроме того, было установлено, что один поросенок оставался худосочным в течение 16 дней, начиная со дня D6, у него наблюдался кашель в течение 2 дней и депрессия в течение 9 дней, вследствие плохого состояния здоровья он был подвергнут аутопсии в день D21 в соответствии с инструкциями о содержании подопытных животных. Для поросенка 1727 общий балл повреждений легких составлял 10,8%. Поскольку эта величина была определена до осуществления контрольного заражения, то ее не включали в анализ общих повреждений легкого после контрольного заражения. Кроме того, было зафиксировано присутствие областей красной/фиолетовой консолидации в краниовентральных областях легких, печень была бледной, а в почках в почечной лоханке присутствовали многочисленные области, имеющие красную/фиолетовую окраску. Патологом была выявлена жировая инфильтрация в центральных долях печени, которая, как правило, проявляется в тех случаях, когда имеет место отрицательный энергетический баланс и последующий липолиз. Никаких других повреждений не было выявлено в срезах печени, почки и легкого. Легочная ткань имела EU PRRS-позитивный статус по данным ПЦР. Не было выявлено роста стандартной бактериальной культуры.

В группе, обработанной вакциной со средним титром, один поросенок был исключен из опыта в день D0 до обработки вследствие плохого состояния здоровья и заменен другим поросенком. У двух поросят, начиная со дня D12, наблюдался кашель в течение одного и трех дней соответственно. Было установлено, что четыре поросенка были худосочными в день D2, день D3 или и в день D2 и день D3.

В группе, обработанной вакциной с высоким титром, у одного поросенка (1728) проявлялась хромота или хромота и опухание одной ноги в период со дня D7 по день D26. Было установлено, что, в течение 6 дней, начиная с 18-го дня после вакцинации, один поросенок был худосочным и у него проявлялся кашель в течение одного дня и в течение 4 дней он имел грубый волосяной покров. Было установлено, что другой поросенок был худосочным в день D2. У двух поросят, начиная со дня D9, имел место кашель в течение двух дней и одного дня соответственно. У одного поросенка имела место диарея в течение одного дня (D14).

В контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, у шести поросят периодически проявлялся кашель, продолжавшийся в общей сложности от одного до шести дней, у первого поросенка он начался в день D7 и у трех поросят он закончился в день D21. Было установлено, что два поросенка были худосочными в течение двух и 11 дней соответственно, при этом один их указанных поросят был худосочным, начиная со дня D1. У второго из этих двух поросят была выявлена также депрессия, и он имел грубый волосяной покров в течение 4 дней, слабость ног и он был обнаружен мертвым в день D15. При проведении аутопсии у этого поросенка не было выявлено повреждений легких (балл повреждений легких был равен 0%), не было обнаружено корма в желудке и абдоминального (брюшного) жира, был вынесен диагноз, что он умер по причине истощения. Поскольку указанный балл повреждений легких был определен до контрольного заражения, то он не был включен в анализ повреждений легких после контрольного заражения.

Результаты группового сравнительного анализа (p-значения) обобщали при оценке любого аномального клинического проявления, имевшего место по меньшей мере в один из дней в период со дня D1 по день D26. Не было выявлено статистически значимых различий ни между группами, обработанными вакциной с различными титрами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p>0,0502); ни между группами, обработанными вакциной с различными титрами (p>0,3898). В группе отрицательного контроля в период со дня D-1 по день D26 не было выявлено поросят с аномальными клиническими проявлениями.

Серологический анализ на PRRS: были обобщены результаты проведенного методом ELISA серологического анализа на PRRS, полученные для индивидуальных поросят. Поросята в группе отрицательного контроля сохраняли PRRS-серонегативный статус на протяжении всего опыта. Сероконверсию оказалось возможным обнаружить в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, на 14-й день после вакцинации, в то время как животные в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, сохраняли PRRS-серонегативный статус вплоть до периода после контрольного заражения. Через десять дней после контрольного заражения (D38) все поросята в группах, обработанных вакциной с низким и высоким титром, и поросята в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, имели PRRS-серопозитивный статус, в то время как в группе, обработанной вакциной со средним титром, PRRS-серопозитивный статус имели 14 из 15 поросят.

Позитивные результаты серологического анализа на PRRS методом ELISA (p-значения) использовали для оценки различий между группами. В трех группах, обработанных вакциной с различными тит- 17 035624 рами, частоты встречаемости поросят, имевших PRRS-позитивный статус по данным ELISA, были статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в дни D14, D21 и D28 (p<0,0001). Не было обнаружено статистически значимых различий ни между группами, обработанными вакциной с различными титрами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в день D38 (p=1,0000 или анализ не проводили), ни между группами, обработанными вакциной с различными титрами, в любой момент времени (p=1,0000 или анализ не проводили).

PRRS-виремия после вакцинации: получали результаты оценки уровня PRRS-виремии для индивидуального животного после вакцинации. Для целей статистического анализа результату не обнаружено приписывали значение О log GE/мл, а результату позитивный приписывали значение 3,0 log GE/мл. В день D0 для всех групп были получены негативные результаты анализа на PRRS-виремию. Оценивали виремию в группах (с.|ПЦР). определяя титр (log GE/мл) в период со дня D7 по день D28 после вакцинации. Средние уровни виремии у поросят во всех трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, достигали пиковых значений в день D7, после чего уровни титров во всех трех группах медленно снижались до тех пор, пока не осуществляли контрольное заражение (SD28). В отличие от этого, контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению, и группа отрицательного контроля сохраняли негативный статус в отношении виремии в течение фазы опыта, предшествующей контрольному заражению. Результаты сравнительного группового анализа (p-значения) данных, полученных с помощью с.|ПЦР в дни D7, D14, D21 и D28, свидетельствовали о том, что медианные величины, полученные с помощью с.|ПЦР, во всех трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, были статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в период со дня D7 по день D28 (p<0,0159). Медианная величина, полученная с помощью с.|ПЦР, в группе, обработанной вакциной со средним титром, была статистически значимо выше, чем в группе, обработанной вакциной с низким титром (p=0,0193), в противоположность этому, не было выявлено статистически значимых различий между медианными величинами, полученными с помощью с.|ПЦР до осуществления контрольного заражения, в группах, обработанных вакциной (p>0,0594).

В течение четырех недель после вакцинации частота встречаемости виремии в трех группах, обработанных вакциной с различными титрами, была низкой.

На основе результатов данного опыта можно сделать следующие заключения:

отсутствие каких-либо нарушений биобезопасности в процессе опыта и подтверждение восприимчивости поросят к PRRS свидетельствует о валидации опыта и пригодности его результатов для интерпретации;

в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были выявлены выраженные признаки клинического заболевания PRRS, что свидетельствует о валидации рассматриваемой модели контрольного заражения в качестве адекватного лабораторного средства для оценки эффективности вакцины против PRRS и, более конкретно, для определения MID MLV PRRS 94881;

при использовании всех трех уровней доз MLV PRRS 94881 были обнаружены статистически значимо меньшие повреждения легких, а также статистически значимо более низкие уровень виремии после контрольного заражения, вирусная нагрузка в тканях легких, кашель, общие баллы клинического обследования, гипертермия и ADWG;

в настоящем опыте на основе данных о соответствующем уменьшении макроскопических повреждений легких после осуществления контрольного заражения вирулентным гетерологичным вирусом, выведенным из европейского вируса PRRS, в случае применения всех трех уровней титров по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, было установлено, что величина MID MLV PRRS 94881 составляла 1х10^2,77ТСШ₅₀/мл, что соответствовало низкому титру вакцины.

Дополнительное обсуждение результатов

Клинические обследования проводили каждый день. Осуществляли с использованием праймеров, специфических в отношении PRRSV европейского типа, количественную ОТ-ПЦР для образцов крови, мазка из полости рта, пробы фекалий и мазка из полости носа, а также смывов из легких.

Данные, полученные в этих исследованиях, показали, что поросята имели нормальное состояние здоровья за исключением небольшого количества поросят, которые имели хромоту. При аутопсии после смерти не было выявлено никаких аномалий за исключением того, что у 1-2 животных были обнаружены признаки слабо увеличенных паховых лимфатических узлов. Важным является то, что в вакцинированной группе не было обнаружено повреждений легких.

На фиг. 8 представлено сравнение процента имеющих виремию животных в группе сентинелживотных и в группе, вакцинированной композицией, содержащей ослабленный штамм вируса PRRS, депонированный в ECACC под регистрационным номером 11012502. На этом чертеже продемонстрировано распространение входящего в вакцину штамма от вакцинированных животных к сентинелживотным. Как установлено с помощью количественной ОТ-ПЦР, в период пика виремии PRRS (SD21) вирусная нагрузка у зараженных сентинел-свиней (средняя вирусная нагрузка 3,347 GE/мл) была на 78,47% ниже, чем у вакцинированных животных (средняя вирусная нагрузка 4,014 GE/мл). В помещении, в котором не имеющие PRRS свиноматки были смешаны с их вакцинированным потомством, толь

- 18 035624 ко у 3 свиноматок из 8 результаты теста на присутствие PRRSV в крови, который осуществляли с помощью ОТ-ПЦР, оказались положительными, это подтверждает, что воздействие вакцины MLV PRRS на здоровых взрослых животных является ограниченным и неэффективным. В данном опыте выделение вакцинного вируса в основном происходило с фекалиями. Фактически, в фекалиях вирус можно было обнаружить в течение периода времени от одного до 21 дня после вакцинации. На пятый день после вакцинации почти 30% вакцинированных животных экскретировали вирус с фекалиями. Вирус PRRS не был обнаружен в выделениях из носовой полости и был выявлен только у небольшого количества животных в выделениях из ротовой полости (у 2 из 56 животных, у которых брали образцы на 5-й день после вакцинации).

Пример 3. Примеры материалов и методов, применяемых при тестировании эффективности вакцины, с использованием Porcilis® PRRS в качестве примера.

В данном опыте использовали определенное количество, например, четырнадцать, здоровых беременных свиноматок из стада, в котором подтверждено отсутствие PRRSV (на основе вирусологических и серологических анализов). Свиноматкам предстояли первые или вторые роды и у них подтверждали беременность в момент вакцинации/контрольного заражения в день 94 беременности. Свиноматок разделяли на три группы обработки. Первую группу обрабатывали поступающей в продажу дозой Porcilis™ PRRS, равной 2 мл, которая содержала по меньшей мере 10^4,0 TCID5o, посредством внутримышечного введения в день 94 периода беременности. Контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (группа 2), вводили интраназально дозу, содержащую 10^4,72 TCID50 патогенного европейского полевого изолята (пассаж 4), в объеме 2 мл. Группу 3 вакцинировали i.m. дозой 2 мл, содержащей 10^7,6 TCID50 MLV PRRS на основе ослабленного штамма вируса PRRS, депонированного в ECACC под регистрационным номером 11012502 25 января 2011 г., за семь дней до осеменения и осуществляли контрольное заражение европейским полевым изолятом (пассаж 4) (10^4,72 TCID50 в 2 мл среды для клеточной культуры, i.n.) в день 94 беременности.

Мониторинг животных в группе 1 осуществляли вплоть до дня 5 после опороса. Мониторинг животных в группах 2 и 3 осуществляли вплоть до дня 28 после опороса.

Животные: всем свиноматкам давали адаптироваться к помещениям для содержания животных в течение 1 недели перед осуществлением вакцинации. Исследователь ежедневно проводил обследование общего состояния здоровья свиноматок и поросят. Каждое животное, которое умирало или которое умерщвляли, подвергали посмертному обследованию и последующему лабораторному анализу.

Беременность подтверждали с помощью ультразвукового обследования. Образцы сыворотки брали у свиноматок в дни опыта 0, 7, 14 и при опоросе для исследований с помощью ПЦР и ELISA. Любой материал, связанный с выкидышем, подвергали лабораторным исследованиям.

Для всех мертворожденных поросят проводили стандартное изучение макроскопической патологии. У мертворожденных поросят и у мумифицированных плодов брали образцы тканей легких из всех долей легких. Образцы, предназначенные для ПЦР-анализа, хранили при -70°С. В день рождения у каждого поросенка брали по 2 мл преколостральной крови. Получали сыворотку и аликвоты хранили при -70°С. Сыворотку использовали для проведения теста на виремию с целью оценки трансплацентарного заражения. Всех поросят в группе 1, выживших до дня 5, умерщвляли в возрасте 5 дней.

Клинические параметры и параметры репродуктивной способности: ниже приведены (в порядке приоритета) критерии, являющиеся примером критериев, которые можно исследовать: количество живорожденных поросят на помет, количество мертворожденных поросят на помет, количество мумифицированных плодов на помет и количество поросят, выживших до 5- или 28-дневного возраста соответственно. Количество поросят, имевших виремию при рождении, определяли путем анализа преколостральной сыворотки. Проводили изучение частоты встречаемости позитивных по данным ПЦР образцов крови и ткани, взятых у свиноматок и/или поросят, с целью оценки эпидемиологии и протекания инфекции.

Полевые образцы: полевые образцы, которые изучали в данном опыте, получали из различных европейских стран при осуществлении стандартной диагностики PRRSV, и они представляли собой образцы крови, сыворотки и материалы, взятые из различных органов, в основном из легких и лимфатических узлов. Образцы хранили при -20°С в течение максимум 3 дней до приготовления препаратов РНК, а оставшийся материал после этого хранили при -70°С в течение продолжительного периода времени. РНК и ОТ-ПЦР-продукты хранили при -20°С.

Культивирование клеток: клетки линии MA104 (клон CL2621) выращивали в среде MEM (фирма Dulbecco, Германия), дополненной 10% FCS и антибиотиками.

Свиные альвеолярные макрофаги (PAM) собирали с помощью метода, описанного у Wensvoort с соавторами (Wensvoort G. и др., Vet. Quat., 13, 1991, cc. 121-130), и модифицировали следующим образом: в каждую долю легкого вводили путем инфузии 50-100 мл ЗФР и затем осуществляли массаж в течение 3-5 мин. Затем жидкость удаляли из доли и пропускали через газовый фильтр. Указанную процедуру повторяли до тех пор, пока промывная жидкость не становилась прозрачной. Объединенную промывную жидкость центрифугировали при 500g в течение 15 мин при комнатной температуре. Дебрис промывали в ЗФР и аликвоты, содержащие 1 х 10⁷ клеток в 50% RPMI 1640 (фирма Biochrom), 40% FCS и

- 19 035624

10% DMSO, замораживали при -196°С. Для дальнейшего применения РАМ культивировали в среде

RPMI 1640, дополненной 10% FCS и антибиотиками.

Получение материала из органов для выделения вируса в клеточной культуре: образец ткани объемом примерно 0,5 см³ переносили в пробирку, содержащую один стальной шарик для гомогенизации в

1,8 мл стерильного ЗФР.

Пробирки встряхивали в течение 10 мин до гомогенизации взятого из органа материала. Клеточный дебрис пеллетировали путем центрифугирования при комнатной температуре в течение 2 мин при 450g. Супернатант пропускали через стерильный фильтр с размерами пор 0,45 мкм и помещали на хранение при -70°С. Аликвоты объемом по 30 мкл использовали для инокуляции одного полуконфлюэнтного монослоя клеточной культуры, используя 24-луночные титрационные микропланшеты.

Выделение РНК: РНК экстрагировали из взятого из органа материала с использованием мининабора RNeasy Mini Kit, а из сыворотки, плазмы, супернатанта клеточной культуры и раствора вакцины с использованием мининабора для выделения вирусной РНК QTAamp Viral RNA Mini Kit (оба от фирмы Qiagen) согласно рекомендациям производителя, используя для каждого препарата примерно по 100 мг взятого из органа материала и 140 мкл жидкого материала соответственно. И, в завершение, РНК элюировали в 65 мкл буфера согласно рекомендациям производителя.

Очистка вируса из бляшек: конфлюэнтные монослои клеток линии Ma104, находящиеся в чашках для клеточных культур размером 10 см, высеянные за 48 ч до осуществления процедуры, инфицировали соответствующим вирусом с использованием десятикратных разведений в диапазоне от 10^-1 до 10^-4. Клетки инкубировали в течение 1 ч с разведениями вируса, которые затем удаляли, и на клетки наслаивали 30 мл среды для Ma104, содержащей 5% метилцеллюлозы (фирма Sigma). Через пять-семь дней бляшки отбирали и переносили на монослои Ma104 в 24-луночные планшеты. Вирус из этих планшетов собирали при достижении примерно 50% ЦПД и подвергали последующему анализу.

Иммунофлуоресцентный анализ: клетки фиксировали при -20°С в течение 15 мин с использованием охлажденной на льду смеси ацетон:метанол (1:1) и после этого сушили на воздухе. После регидратации в ЗФР клетки инкубировали в течение 1 ч со специфическим в отношении PRRSV моноклональным антителом SDOW17 (фирма Rural Technologies Inc., США), разведенным в соотношении 1:1000 в ЗФР. После 3-кратной отмывки с помощью ЗФР клетки инкубировали с козьим антимышиным конъюгированным с ФИТЦ вторичным антителом (фирма Dianova, Гамбург, Германия) (1:150 в ЗФР) в течение еще одного часа. После конечной 3-кратной отмывки с помощью ЗФР на клетки наслаивали раствор глицерин:ЗФР (1:1) и проводили иммунофлуоресцентный микроскопический анализ.

Диагностическая ОТ-иПЦР: диагностическую гнездовую ОТ-пПЦР можно осуществлять для проверки образцов на присутствие вируса PRRSV-EU.

Диагностическую ОТ-иПЦР можно осуществлять, например, с использованием набора Titan One Tube Kit (фирма Roche Molecular Biochemicals) следующим образом: [5 мкл препарата общей РНК, 1кратный буфер для ОТ-ПЦР, 0,4мМ дНТФ, 20 пмолей праймеров PLS и PLR, 5мМ дитиотреитол, 1мМ MgCl₂, 2,5-5 ед. RNAsin (фирма Promega Ltd), 1-2,5 ед. смеси ферментов, доведено до конечного объема 25 мкл с помощью обработанной DEPC дистиллированной воды]. Можно применять стандартные условия циклизации: 45°С в течение 1 ч, 94°С в течение 2 мин и 30 циклов при 94°С в течение 30 с, 58°С в течение 45 с и 68°С в течение 45 с, конечная стадия удлинения при 68°С в течение 5 мин. Гнездовую PCR осуществляли с использованием метки Qiagen Taq (фирма Qiagen AG) следующим образом: [1 мкл продукта ОТ-ПЦР, 1-кратный буфер для ПЦР, 10 мкл Q-раствора, 3,5мМ MgCl₂, 0,3мМ дНТФ, 20 пмолей каждого из праймеров EU-7-n-s и EU-7-n-as, 2,5 ед. Taq-полимеразы, доведено до конечного объема 50 мкл с помощью дистиллированной воды]. Условия циклизации были следующими: 7 циклов при 94°С в течение 1 мин, 58°С в течение 1 мин и 72°С в течение 1 мин, затем 30 циклов при 94°С в течение 1 мин и при 70°С в течение 1,5 мин (без стадии отжига), конечная стадия удлинения при 70°С в течение 5 мин.

Секвенирование нуклеотидных последовательностей: Проводили секвенирование нуклеотидных последовательностей продуктов гнездовой ПЦР, созданных с использованием праймеров, которые содержали метку M13, либо полученных непосредственно после ПЦР, либо ПЦР-продуктов, которые были вырезаны из агарозных гелей и очищены с использованием набора для экстракции из геля JETsorb (фирма Genomed). Секвенирование проводили с использованием автоматического секвенатора LI-COR DNA Analyzer GENE READIR 4200® (фирма LI-COR Inc., Линкольн, шт. Небраска, США). Нуклеотидные и выведенные аминокислотные последовательности можно анализировать с помощью программного обеспечения AlignIR®, версия 1.1 (фирма LI-COR Inc., Линкольн, шт. Небраска, США) и DNASIS.RTM. 2.6 (фирма Hitachi Software Genetic Systems Inc., Сан-Франциско. США).

Пример 4. Определение полноразмерной геномной последовательности PRRSV 94881.

В данном примере проиллюстрировано определение полноразмерных геномных нуклеотидных последовательностей ослабленного штамма 94881 и его родительского штамма 94881, пассаж 5. В этих последовательностях не выявлено никаких неизвестных нуклеотидных положений, что свидетельствует о наличии гомогенного вирусного продукта. Сравнение исходного вакцинного вируса 94881 с европейским штаммом референс-вируса Лелистад (LV) позволило выявить гомологию нуклеотидов, составляющую от

- 20 035624

85,40 до 95,09 процентов, для 8 различных вирусных генов и идентичность аминокислот, составляющую от 86,39 до 97,27 процентов обоих штаммов вируса. Оказалось возможным идентифицировать две делеции в OPC1a MSV 94881 по сравнению с LV. При сравнении исходного вакцинного вируса 94881 с его родительским штаммом (пассаж 5) между ними были выявлены 26 нуклеотидных замен, приводящих в общей сложности к 14 аминокислотным заменам.

Для определения полноразмерной геномной последовательности исходного вакцинного вируса 94881 были проведены в общей сложности 1 обратная транскрипция, 17 внешних ПЦР (амплификация внешних участков ампликона) и 58 внутренних ПЦР (амплификация внутренних участков ампликона, в результате чего получали 40 ПЦР-продуктов, которые использовали для секвенирования. В случае штамма 94881 (пассаж 5), были проведены 1 обратная транскрипция, 17 внешних ПЦР и 67 внутренних ПЦР, в результате чего получали 40 ПЦР-продуктов, которые также использовали для секвенирования.

Путем сравнительного анализа первичной структуры перекрывающихся последовательностей была получена полноразмерная последовательность, состоящая из 14843 нуклеотидов, для обоих вирусных изолятов, каждая из которых содержала полные открытые рамки считывания (OPC) 1a - 7. Кроме того, в каждой из них оказалось возможным определить 177 нуклеотидов в 5-нетранслируемой области (5'NTR) и 43 нуклеотида в 3'-нетранслируемой области (3'NTR). По сравнению с европейским изолятом референс-вируса PRRSV Лелистад (LV) (регистрационный номер GenBank M96262) оказалось невозможным определить 44 нуклеотида в 5'NTR и 83 нуклеотида в 3'NTR, поскольку эти области использовались в качестве областей гибридизации с праймерами.

С помощью реакций секвенирования для обоих вирусных штаммов были определены четкие нуклеотидные последовательности без каких-либо качаний (областей нестрогого соответствия) или других свидетельств наличия смешанной последовательности. После трансляции в аминокислоты были получены четкие аминокислотные последовательности, не содержащие каких-либо сомнительных аминокислот, которые можно было применять для сравнения последовательностей MSV 94881 с LV и с родительским штаммом 94881 (пассаж 5). Осуществляли выравнивание и сравнение нуклеотидных последовательностей MSV 94881 и вируса Лелистад, в результате чего было установлено, что имеются существенные различия на нуклеотидном и аминокислотном уровнях. Осуществляли также сравнительный анализ первичной структуры последовательностей MSV 94881 и его родительского штамма (пассаж 5).

Сравнение последовательностей с LV позволило выявить для обоих вирусных штаммов гомологию нуклеотидов, составляющую от 85,40 до 95,09 процентов для 8 различных вирусных генов, и идентичность аминокислот, составляющую от 86,39 до 97,27 процентов. При сравнении с LV оказалось возможным выявить две делеции в OPC 1a MSV 94881. Одна делеция 138 нуклеотидов локализована в положениях с 2154 по 2292 LV и приводит к утрате 46 аминокислот. Кроме того, в положениях с 2686 по 2688 имеется делеция триплета, что приводит к утрате аминокислоты фенилаланина. Расположение всех областей гомологии нуклеотидов и идентичности аминокислот LV и обоих штаммов 94881 представлено в табл. 4.1.

Таблица 4.1. Расположение сравниваемых областей нуклеотидных и аминокислотных последовательностей исходного вакцинного вируса 94881 с европейским референс-вирусом, т.е. вирусом Лелистад

ОРС	Длина вирусного гена/белка, кол-во нуклеотидов/аминокислот	Количество нуклеотидов, отличных от вируса Лелистад	Генетическая гомология с вирусом Лелистад (в процентах)	Количество аминокислот, отличных от вируса Лелистад	Идентичность аминокислот с вирусом Лелистад (в процентах)
5'NTR	177*/ —	9	94,92	___	___
la	7050** / 2349	1050	85,40	326	86,39
lb	4392 / 1463	346	92,12	40	97,27
2	750 / 249	67	91,07	23	90,76
3	798 / 265	72	90,98	28	89,43
4	552 / 183	52	90,58	23	87,43
5	606 / 201	58	90,43	23	88,56
6	522 / 173	26	95,02	5	97,11
7	387 / 128	19	95,09	9	92,97
3'NTR	44***/ ___	2	95,45	___	___

NTR: нетранслируемая область.

* - Сравнивали только 177 нуклеотидов в последовательностях вируса Лелистад и MSV94881. Остальные 44 нуклеотида, расположенные против хода транскрипции, не определяли.

* * - Изолят MSV 94881 имеет две делеции в OPC 1a, одну длиной 138 нуклеотидов и одну длиной 3 нуклеотида соответственно.

Для расчетов гомологии и идентичности использовали полные нуклеотидную и аминокислотную последовательности референс-вируса LV, при этом делеции рассматривали как отклонения. Длина соответствующего вирусного гена LV составляет 7191 нуклеотида, а длина соответствующего полипротеина составляет 2396 аминокислот, расчеты генетической гомологии и аминокислотной идентичности были

- 21 035624 основаны на количестве нуклеотидов 7191 и количестве аминокислот 2396 соответственно.

***- Для вируса Лелистад и MSV 94881 сравнивали только 44 нуклеотида. Остальные 83 нуклеотида, локализованные против хода транскрипции, не были определены.

В результате сравнения полноразмерных последовательностей исходного вакцинного вируса 94881 и родительского штамма 94881 (пассаж 5) у них было выявлено в общей сложности 26 нуклеотидных замен. Нуклеотидные замены распределялись следующим образом: 15 в OPC 1a, 4 в OPC 1b, 2 в OPC 2, ни одной в OPC 3, 1 в OPC 4, 3 в OPC 5, 1 в OPC 6 и ни одной в OPC 7. Указанные нуклеотидные замены приводили в общей сложности к 14 аминокислотным заменам, которые распределялись следующим образом: 8 в полипротеине 1a, 1 в полипротеине 1b, 1 в гликопротеине 2, ни одной в гликопротеине 3, 1 в гликопротеине 4, 2 в гликопротеине 5 и 1 в матриксном белке. В обоих штаммах имелись одни и те же делеции в OPC 1a по сравнению с вирусом Лелистад. Расположение всех нуклеотидных замен и обусловленных ими аминокислотных замен, включая положения в вирусных генах и соответствующих белках, подробно представлены в табл. 4.2.

Пример 5. Культуры депонированного вируса и MSV.

Как указано выше, родительский штамм PARENT (малое количество пассажей) 94881 депонирован в Европейской коллекции клеточных культур (ECACC) под регистрационным номером ECACC 11012501, исходный вакцинный вирус 94881 (MSV) депонирован в Европейской коллекции клеточных культур (ECACC) под регистрационным номером ECACC 11012502. В данном примере описаны условия для роста и культивирования родительского вируса и MSV.

Родительский штамм 94881: он представляет собой вирус, имеющий генотип PRRSV типа 1, т.е. он является PRRSV европейского генотипа. Хозяином для вируса является свинья. Родительский вирус, депонированный под регистрационным номером 11012501, был депонирован с титром 5,81 Log10 ТСШ₅₀/мл. Клетки-хозяева для размножения вируса представляют собой клетки линии MA 104. Эти клетки культивировали в Минимальной поддерживающей среде (MEM), дополненной 3,7 г/л бикарбоната натрия, которая содержала 6% обработанной излучением фетальной бычьей сыворотки, при 37±1°С. Клетки высевали в Т-колбы (75 см²) с плотностью посева от 2х10⁴ до 2х10⁵ клеток/см² и культивировали в течение 3-7 дней до достижения 100%-ной конфлюэнтности перед осуществлением пересева. Для выращивания вируса вирус добавляли в Т-колбы к клеткам с величиной MOI, составляющей 0,001-0,01. Инфицированные клетки достигали уровня конфлюэнтности, составляющего примерно 80-100%, как правило, через 1-3 дня после посева клеток. После осуществления заражения инфицированные клетки культивировали при 37±1°С в течение 3-10 дней и затем собирали. Сбор осуществляли, когда цитопатическое действие (ЦПД) на монослойные клетки составляло примерно 80-100%, что имело место через 310 дней после заражения. Собирали супернатант инфицированных тканевых культур МА104 (использованная среда + PRRSV из культуры при ЦПД, составляющем 80-100%), который содержал размножившийся вирус. Этот супернатант можно хранить при -70°С/-80°С в течение нескольких месяцев до использования. Для вируса оценивали величину TCID₅₀ согласно методу расчета, разработанному Spearman и Kaerber, определяя log₁₀ ТСШ₅₀/мл образца.

Исходный вакцинный вирус (MSV) 94881 для вакцины (после большого количества пассажей): Он представляет собой вирус, имеющий генотип PRRSV типа 1, т.е. он является PRRSV европейского генотипа. Хозяином для вируса является свинья. MSV, депонированный под регистрационным номером 11012502, был депонирован с титром 6,43 Logi₀ ТСШ₅₀/мл. Клетки-хозяева для размножения MSV представляют собой клетки линии MA104. Эти клетки культивировали в Минимальной поддерживающей среде (MEM), дополненной 1,4 г/л бикарбоната натрия, которая содержала 10% обработанной излучением фетальной бычьей сыворотки, при 36±2°С. Клетки высевали в Т-колбы (75-150 см²) или в роллерфлаконы площадью 850 см² с плотностью посева от 1х10⁴ до 1х 10 клеток/см² и культивировали в течение 3-7 дней до достижения 100%-ной конфлюэнтности перед осуществлением пересева. Для выращивания вируса вирус добавляли в Т-колбы или роллер-флаконы к клеткам с величиной MOI, составляющей 0,001-0,01. Инфицированные клетки достигали конфлюэнтности примерно 80-100%, как правило, через 1-3 дня после посева клеток. После заражения инфицированные клетки культивировали при 36±2°С в течение 3-14 дней и затем собирали вирус. Сбор осуществляли, когда цитопатическое действие (ЦПД) на монослойные клетки составляло примерно 80-100%, что имело место через 3-10 дней после заражения. Собирали супернатант инфицированных тканевых культур МА104 (использованная среда + PRRSV из культуры при ЦПД, составляющем 80-100%), который содержал размножившийся вирус. Этот супернатант можно хранить при 2-8°С в течение 5-10 дней, при -70°С в течение нескольких месяцев до использования. Для MSV оценивали величину TCID50 согласно методу расчета, разработанному Reed и Muench, определяя log₁₀ ТСГО₅₀/мл образца.

- 22 035624

Таблица 4.2. Расположение сравниваемых нуклеотидных и аминокислотных последовательностей исход________________ного вакцинного вируса 94881 и родительского штамма 94881________________

ОРС	Количество отличающихся нуклеотидов	Положение в вирусном гене	Замена (нуклеотидов) в MSV по сравнению с родительским штаммом	Синонимичная /несинонимичная	Количество отличающихся аминокислот	Положение в вирусном белке	Замена (аминокислот) в MSV по сравнению с родительским штаммом
1а	15	309	С на Т	синонимичная	8	...	...
		753	G на Т	несинонимичная		251	Е на D
		1474	G на А	несинонимичная		492	V на I
		1789	G на А	несинонимичная		597	V на I
		2094	С на Т	синонимичная		...	...
		2987	ТнаС	несинонимичная		996	L на S
		3034	А на G	несинонимичная		1012	Т на А
		3065	А на G	несинонимичная		1022	Е на G
		3736	А на G	несинонимичная		1246	Т на А
		3966	С на Т	синонимичная		...	...
		4101	Т на С	синонимичная		...	...
		5803	С на Т	несинонимичная		1935	L на F
		6354	Т на G	синонимичная		...	...
		6519	С наТ	синонимичная		...	...
		6588	ТнаС	синонимичная		...	...
1b	4	591	ТнаС	синонимичная	1	...	...
		1833	СнаТ	синонимичная		...	...
		1932	С на Т	синонимичная		...	...
		3682	G на А	несинонимичная		1228	V на I
2	2	13	С наТ	несинонимичная	1	5	Н1наУ
		195	С наТ	синонимичная		...	...
3	0	...	...	...	0	...	...
4	1	529	Т на С	несинонимичная	1	177	F на L
5	3	109	А на G	несинонимичная	2	37	N на D
		364	С наТ	несинонимичная		122	L на F
		570	С наТ	синонимичная		...	...
6	1	214	С наТ	несинонимичная	1	72	L на F
7	0	...	...	...	0	...	...

Пример 6. Определение MID MLV PRRS 94881 для подсвинок.

Краткое изложение

Задачей данного исследования с использованием вакцинации/контрольного заражения была оценка минимальной иммунизирующей дозы (MID) вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней на основе выведенного из европейского вируса изолята 94881, представляющего собой модифицированный живой вирус, код 19T1.U_ (MLV PRRS 94881) для подсвинок. Подсвинкам с PRRSсеронегативным статусом примерно за 28 дней до спаривания (день 0; D0) вводили вакцину с двумя различными уровнями титров, контрольное заражение подсвинок осуществляли с использованием гетерологичного европейского изолята PRRSV примерно на 90-й день периода беременности (D118) и у подсвинок оценивали общее количество живорожденных поросят или процент живорожденных поросят и поросят-отъемышей 20-дневного возраста для определения MID. В момент контрольного заражения в день 118 (D118) контрольная группа, подвергавшаяся контрольному заражению, состояла из 8 беременных подсвинок (группа 1, плацебо), группа, обработанная вакциной с низким титром состояла из 8 беременных подсвинок (группа 2, 1x10 ^2,43 ТСГО50/дозу), группа, обработанная вакциной с высоким титром состояла из 8 беременных подсвинок (группа 3,1 x 10^3,90 ТСГО50/дозу), и группа отрицательного контроля состояла из 5 беременных подсвинок (группа 4, плацебо, не подвергавшаяся контрольному заражению).

Как в группе, обработанной вакциной с низким титром, так и в группе, обработанной вакциной с высоким титром, в обеих был обнаружен более высокий процент живых поросят на помет (P<0,0455) при опоросе и более высокий процент, и количество живых поросят на помет (P<0,0203) при отъеме по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению.

Касательно вспомогательных параметров эффективности в группе, обработанной высокой дозой, были обнаружены более высокие процент и количество живых поросят на одну подсвинку в момент опороса (P<0,0211), меньшие процент и количество слабых и мумифицированных плодов (P<0,0090), более низкий процент позитивных по данным цПЦР подсвинок и меньшая вирусная нагрузка у подсвинок после контрольного заражения в дни D125, DOF 0 и DOF+13 (P<0,0155), более низкий процент позитивных по данным цПЦР поросят на одну подсвинку и меньшая вирусная нагрузка у поросят в день DOF 0 (P<0,0030), более низкий процент поросят с клиническими признаками заболевания на подсвинку

- 23 035624 (P<0,0001) и больший вес тела поросят в день DOF+20 и более высокая величина ADWG (P<0,0013) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению.

В группе, обработанной низкой дозой, были обнаружены более высокий процент здоровых поросят на подсвинку в момент опороса (P=0,0138), более низкие процент и количество мумифицированных плодов (P<0,0190), более низкий процент позитивных по данным qПЦР подсвинок и меньшая вирусная нагрузка у подсвинок после контрольного заражения в дни D125, D132, DOF 0 и DOF+13 (P<0,0290), более низкий процент позитивных по данным qПЦР поросят на одну подсвинку в день DOF 0 (P=0,0381), более низкий процент поросят с клиническими признаками заболевания на одну подсвинку (P<0,0001) и больший вес тела в день DOF+20 и большая величина ADWG (P<0,0028) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению.

Таким образом, можно сделать заключение о том, что задача исследования была выполнена и на основе данных, полученных в этом исследовании, установлена величина MID MLV PRRS 94881 для подсвинок, составляющая 1 х 10^2,43 TCID₅₀/2 мл. Кроме того, в данном исследовании было установлено, что продолжительность действия иммунитета (DOI) у подсвинок составляет примерно 4 месяца.

Задача(и)/цель исследования

Задача данного исследования с использованием вакцинации/контрольного заражения была оценка минимальной иммунизирующей дозы (MID) вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней на основе выведенного из европейского вируса изолята 94881, представляющего собой модифицированный живой вирус, код 19T1.U_ (PRRS 94881 MLV), на основе результатов ее введения при двух различных уровнях титров (группа 2, низкий титр; группа 3, высокий титр) имеющим серонегативный PRRS-статус подсвинкам, до спаривания, позволяющей обеспечивать более высокий процент живорожденных поросят и живых поросят-отъемышей к моменту достижения ими возраста 21 день после контрольного заражения подсвинок гетерологичным европейским изолятом вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней (PRRSv) примерно в день 90 периода беременности. Основным критерием, свидетельствующим о решении этой задачи, должна была явиться демонстрация того, что в одной или обеих группах, обработанных вакциной, имел место более высокий процент или количество живорожденных поросят и поросят-отъемышей к моменту достижения ими возраста 21 день (DOF +20) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (группа 1).

Другие параметры, которые анализировали при сравнении групп, обработанных вакциной, и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, включали результаты клинической оценки подсвинок после вакцинации, результаты серологического анализа подсвинок на PRRS, виремию у подсвинок, результаты клинических обследований подсвинок, виремию у поросят, общее количество поросят на помет, количество живых поросят на помет, количество ослабленных живых поросят на помет, количество мумифицированных плодов на помет, количество задавленных/погибших поросят на помет, количество поросят с клиническими показателями и средний суточный прирост массы (ADWG). Эти параметры анализировали в качестве вспомогательных параметров, и они не служили в качестве основных параметров, позволяющих делать вывод о выполнении задачи исследования.

График проведения опыта

Таблица 6.1. График проведения опыта на подсвинках

День (дни) опыта	Даты	Основные события опыта
-2 или -1	с 20 июля 2010 г. по 21 июля 2010 г.	обследование состояния здоровья
с -1 по 21	с 21 июля 2010 г. по 12 августа 2010 г.	группы 1-4: ежедневные клинические оценки
0	22 июля 2010 г.	группы 1-4: взятие образцов крови; вакцинирование групп 1 и 4 контрольным продуктом (СР); вакцинирование группы 2 исследуемым ветеринарным продуктом (IVP) № 1 (группа обработки вакциной с низким титром); и вакцинирование группы 3 IVP № 2 (группа обработки вакциной с высоким титром)
с 8 по 21	с 30 2010 г. июля по 12 августа 2010 г.	группы 1-4: обработка подсвинок один раз в день Matrix™ для синхронизации циклов течки
7, 14, 21, 56 и 84	29 июля 2010 г., 05 августа 2010 г., 12 августа 2010 г., 16 сентября 2010 г., 14 октября 2010 г.	группы 1-4: взятие образцов крови
с 22 по 113	с 13 августа 2010 г. по 12 ноября 2010 г.	группы 1-4: клинические оценки по меньшей мере три раза в неделю

- 24 035624

с 26 по 32	с 17 августа 2010 г. по 23 августа 2010 г.	группы 1-4: обследование для выявления повышенной температуры и оплодотворение подсвинков путем искусственного осеменения (AI)
84	14 октября 2010 г.	группы 1-4: проверка беременности путем ультразвукового обследования
с 116 дня по 20-й день после опороса	с 15 ноября 2010 г. по 05 января 2011 г.	группы 1-4: клинические обследования, регистрация выкидышей, мертворожденных, мумифицированных, живых поросят, поросят, имеющих слабое здоровье при рождении
118 (примерно 90-й день беременности)	17 ноября 2010 г.	группы 1-4: взятие образцов крови группы 1-3: контрольное заражение изолятом PRRSV 190136
125, 132, опорос/выкидыш (DOF*), DOF +7, DOF +13	24 ноября 2010 г., 01 декабря 2010 г., с 03 декабря 2010 г. по 16 декабря 2010 г., с 10 декабря 2010 г. по 23 декабря 2010 г., с 16 декабря 2010 г. по 29 декабря 2010 г.	группы 1-4: взятие образцов крови
DOF+20	с 23 декабря 2010 г. по 05 января 2011 г.	группы 1-4: взятие образцов крови у оставшихся в живых подсвинок; умерщвление оставшихся в живых подсвинок; ликвидация останков
DOF+20 или позже	с 25 декабря 2010 г. по 05 января 2011 г.	группы 1-4: умерщвление оставшихся в живых подсвинок; ликвидация останков

*DOF = день опороса

Таблица 6.2. График проведения эксперимента на поросятах

День(дни) опыта	Даты	Основные события опыта
DOF	с 03 декабря 2010 г. по 16 декабря 2010 г.	Для всех погибших поросят: взвешивание; аутопсия; взятие образцов крови/общей воды организма, если это возможно; взятие образцов из легких Для всех живых поросят: взвешивание; взятие образцов крови (преколостральной или перинатальной (в течение 12 ч после рождения))
DOF +1 DOF +20	с 04 декабря 2010 г. по 05 января 2011 г.	Для всех живых поросят: клинические обследования Для погибших поросят: взвешивание; аутопсия; взятие образцов крови/общей воды организма, если это возможно; взятие образцов из легких
DOF +7	с 10 декабря 2010 г. по 23 декабря 2010 г.	Для всех живых поросят: взятие образцов крови
DOF +13	с 16 декабря 2010 г. по 29 декабря 2010 г.	Для всех живых поросят: взятие образцов крови
DOF +20	с 23 декабря 2010 г. по 05 января 2011 г.	Для всех живых поросят: взвешивание; взятие образцов крови;
DOF+20 или позже	с 25 декабря 2010 г. по 05 января 2011 г.	Группы поросят 1-3: умерщвление оставшихся в живых поросят, ликвидация останков; Группа поросят 4: передача для другого проекта BIVI

План опыта

Таблица 6.3. План опыта

Группа	Количество подсвинок в день D0	Обработка в день D0 (примерно за 28 дней до оплодотворения)	Количество подсвинок в день D118	Контрольное заражение в день D118 с использованием 6,0 мл (2 мл/ноздрю; 2 мл IM) 1 х 106’30 TCID50 PRRSV 190136
1 (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению)	28	2,0 мл IM контрольного продукта(продуктплацебо, не содержащий MLV PRRS 94881)	16	да
2 (группа обработки вакциной с низким титром)	28	2,0 мл IM IVP № 1 (1 х 2 43 10 ’ TCID50 MLV PRRS 94881)	16	Да
3 (группа обработки вакциной с высоким титром)	28	2,0 мл IM IVP № 2 (1 x 3 90 10 ’ TCID50 MLV PRRS 94881)	16	да
4 (группа отрицательного контроля)	10	2,0 мл IM контрольного продукта	5	нет

- 25 035624

Критерии для проведения слепого исследования Исследователь и уполномоченные лица не имели информации о распределенных по группам 1 -4 подсвинках. Для гарантии того, что исследование является слепым, Исследователь и уполномоченные лица не участвовали в сборе данных о введении IVP и CP соответствующим подсвинкам в день D0. Лабораторный персонал при выполнении поставленных перед ним задач не имел информации о том, каким продуктом производится обработка каждой подсвинки.

Материалы

Исследуемые ветеринарные продукты (IVP) и контрольный продукт (CP) Таблица 6.4. Исследуемые ветеринарные продукты (IVP)

Непатентованное название:	Модифицированный живой вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
Изолят:	Изолят 94881
Препарат:	Протокол для партии препарата (МБР) MLV-вакцины PRRS 94881, лот 390-005 (лиофилизат) от фирмы-производителя представлен в Приложении 1. МБР для стерильного разбавителя, дополненного карбополом, лот 808-002 (разбавитель) представлен в разделе 15.1, Приложение 1. В день D0 непосредственно перед осуществлением вакцинации, на фирме BIVI-Ames (Boehringer Ingelheim Vetmedica, Эймс) MLV-вакцину PRRS 94881, лот 390-005, восстанавливали/разводили с помощью стерильного разбавителя, дополненного карбополом, лот 808-002, приготавливая два IVP. IVP № 1 приготавливали таким образом, чтобы обеспечить заданный уровень титра примерно 1x10’ TCID50/2 мл, a IVP № 2 приготавливали таким образом, чтобы обеспечить 4 5 заданный уровень титра примерно 1x10’ TCIDjo/2 мл. Для вакцинации и тестирования использовали одинаковые объемы каждого из IVP.
Лоты/серийные номера IVP:	IVP № 1: N270-142 IVP № 2: N270-143
Производитель:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. 2621 North Belt Highway Сент-Джозеф, шт. Миссури, 64506
Срок годности:	Для каждого IVP был установлен (только для целей исследования) срок годности до 22 июля 2010 г.
Требования к условиям хранения:	Регидратированный/разведенный IVP хранили при 2-8°С или на льду
Тестирование:	MLV PRRS 94881, серийный номер 390-005 и стерильный разбавитель, дополненный карбополом, лот 808-002, тестировали в подразделении клинического контроля фирмы Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. (BIVI-QC). Начало и завершение процедуры вакцинации осуществляли в контакте с BIVIAmes. В BIVI-Ames осуществляли тестирование аликвот каждого IVP до и после вакцинации в отношении титра вируса согласно процедуре титрования для PRRSV (раздел 15.1).
Результаты тестирования:	Результаты тестирования MLV PRRS 94881, серийный номер 390-005 и стерильного разбавителя, дополненного карбополом, лот 808-002, оказались удовлетворительными: средний титр вируса IVP № 1 составлял 1x10’ TCID50/2 мл, средний титр вируса IVP № 2 составлял 1x10’ TCID50/2 мл.
Передача IVP:	Два флакона, содержавших по 35 мл каждого из IVP, передавали в место проведения исследования в день D0 перед осуществлением вакцинации.
Хранение IVP:	Предназначенный для хранения образец каждого из IVP в настоящее время хранится при -70 ± 10°С в BIVI-Ames до подписания конечного отчета.

Таблица 6.6 Контрольный продукт (CP)

Непатентованное название:	Плацебо
Препарат:	Произведенный производственным подразделением BIVI (BIVIProduction) лиофилизированный продукт, представляющий собой плацебо, содержащий инертный продукт, который присутствует в вакцине, не содержащей MLV PRRS 94881 (ποτΝ240-191-062409). В день D0 на фирме BIVI-Ames восстанавливали продукт из лота N240191-062409 с помощью стерильного разбавителя, дополненного карбополом, лот 808-002 с получением СР, лот № 270-141.
Производитель:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. 2621 North Belt Highway Сент-Джозеф, шт. Миссури, 64506, США
Номер лота:	N270-141
Срок годности:	Для СР был установлен (только для целей исследования) срок годности до 22 июля 2010 г.
Условия хранения:	Лиофилизированная вакцина: при 2-8°С Ре гидратированный СР: при 2-8°С или на льду
Тестирование:	СР тестировали на фирме BIVI-QC в отношении соблюдения стерильности, удовлетворяющей требованиям ЕР (Европейская фармакопея) согласно специальному протоколу № 96
Результаты тестирования:	Было установлено, что СР являлся стерильным
Передача СР:	Два флакона, содержащие каждый по 50 мл СР, передавали в место проведения исследования в день D0 перед осуществлением вакцинации.
Хранение СР:	СР приготавливали только для целей данного исследования и не сохраняли.

- 26 035624

Материал, применявшийся для контрольного заражения

Таблица 6.7. Название/номер изолята Место и дата выделения, включая клинические симптомы Препарат: Номер лота: Производитель: Условия хранения Тестирование:	Материал, применявшийся для контрольного заражения Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней Изолят 190136, пассаж 2. Изолят № 190136 был получен из ткани легкого новорожденного поросенка на ферме, где были выявлены типичные касающиеся репродуктивной способности признаки PRRS (выкидыши у подсвинок и слабость новорожденных поросят) во время вспышки заболевания, имевшей место в Нижней Саксонии, Германия, в апреле 2004 г. Штатные ветеринарные врачи передали образцы в лабораторию bioScreen (образец был получен 21 апреля 2004 г.). Изолят № 190136 может размножаться непосредственно на клетках линии АКМА104. В день D118 вирус для контрольного заражения подвергали оттаиванию и разводили с помощью среды МЕМ (минимальная поддерживающая среда) до достижения заданного титра, составлявшего примерно 1 * 10 ТСШ50/З мл. Приготавливали достаточный объем материала для контрольного заражения. Из материала для контрольного заражения брали две аликвоты. N289-034 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. - США Нерасфасованный материал для контрольного заражения хранили при -70 ± 10°С. После приготовления разведенный материал для контрольного заражения хранили на льду до его введения. Начало и завершение процедуры вакцинации осуществляли в контакте с BIVIAmes. Персонал лаборатории BIVI-Ames тестировал аликвоты до и после контрольного заражения в отношении титра вируса согласно процедуре титрования PRRSV.
Результаты тестирования:	Средний титр материала для контрольного заражения составлял 1x10’ TCID50 на дозу объемом 6 мл.
Передача материала для контрольного заражения:	Три флакона, содержащие каждый по 101 мл материала для контрольного заражения, передавали в место проведения исследования в день D118 непосредственно перед осуществлением введения.
Путь введения	По 2,0 мл/ноздрю и по 2,0 мл IM в левую сторону шеи (введение осуществляли всем подсвинкам в группах 1, 2 и 3 в день D118).
Хранение материала для контрольного заражения:	Материал для контрольного заражения приготавливали только для проведения настоящего исследования и не сохраняли.

Дополнительные обработки

Каждая подсвинка получала вместе с кормом Matrix™ (6,8 мл; альтерногест; фирма Intervet/Schering Plough Animal Health) в период со дня D8 по день D21 для синхронизации циклов течки.

При родах вводили окситоцин (фирма VetTek) для облегчения опороса подсвинок, но не для инициации опороса. При опоросе всем живым поросятам вводили путем инъекции в правое бедро по 1,0 мл железа (фирма Phoenix или фирма Durvet), IM, для предупреждения обусловленной дефицитом железа анемии после рождения. Кроме того, всем живым поросятам вводили гентамицин (фирма SparHawk Laboratories, Inc.) в качестве средства для предупреждения поноса после рождения. Все обработки записывали в регистрационной форме для биологической и фармацевтической обработки.

Обработки

Подтверждение вводимых доз.

Каждый IVP вводили в виде дозы объемом 2,0 мл отобранным для этой цели подсвинкам для оценки MID MLV PRRS 94881. CP вводили в виде дозы объемом 2,0 мл подсвинкам из групп 1 и 4.

Схема введения доз.

В день D0 специалист, не участвующий в сборе экспериментальных данных, вводил каждой подсвинке из соответствующей группы IVP или CP в правую область шеи IM с использованием стерильного 3,0 мл шприца с разъемом типа Луер-Лок и стерильной иглы 18g х 1 дюйм (2,54 см). Схема введения доз представлена ниже в табл. 6.8.

Таблица 6.8 Схема введения доз

Группа	Количество	Обработка	Доза/путь введения	День опыта
1	28	СР	2,0 мл IM	D0
2	28	IVP № 1 (доза с низким титром)	2,0 мл IM	DO
3	28	IVP № 2 (доза с высоким титром)	2,0 мл IM	DO
4	10	СР	2,0 мл IM	DO

Методы и меры предосторожности для персонала, принимавшего участие в исследовании

Персонал, осуществлявший введение IVP, CP и материала для контрольного заражения, строго придерживался мер предосторожности и был одет в защитные комбинезоны, как предписано для конкретного места проведения исследования.

- 27 035624

Информация о животных Подробные сведения о подопытных животных.

________________Таблица 6.9. Информация о животных

Источник:	Фермы Wilson Prairie View N5627 Highway DD Берлингтон, WI 53105
Количество подсвинок:	94
Дата поступления:	Подсвинки поступили в исследовательский центр фирмы Veterinary Resources, Inc. двумя партиями, а именно, 15 июля 2010 г. (D-7) и 20 июля 2011 г. (D-2).
Идентификация:	У каждого животного имелась ушная бирка с указанием индивидуального номера
Вид:	Свиньи
Порода:	Товарная порода
Пол:	Самки
Возрастной диапазон:	Возраст примерно 8 месяцев в день D0
Собственник подопытных животных:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc.
Физиологический статус:	Все подсвинки имели в день DO PRRS-серонегативный статус по данным ELISA. Исследователь производил в день D-2 или день D1 обследование подсвинок при их отборе для участия в исследовании и подтверждал, что они имели хорошее состояние здоровья и упитанность.
Результаты оценки состояния беременности:	Подсвинок проверяли на наличие беременности в день D84.
Распределение подсвинок на группы в день D0	Группа 1 (п=28): 1, 3, 5, 6, 8, 11, 15, 18, 19, 34, 35, 39, 40, 52, 54, 68, 79, 82, 88, 90, 95, 96, 98, 101, 102, 107, 109 и ПО	Группа 2 (п=28): 12, 26, 31, 32, 41, 47, 49, 56, 58, 59, 60, 64, 67, 69, 70, 72, 73, 75, 76, 77, 78, 85, 89, 93, 94, 100, 103 и 104
	Группа 3 (п=28): 2, 7, 14, 22, 23, 25, 27, 28, 30, 33, 36, 42, 46, 48, 51, 53, 57, 61, 62, 65, 66, 80, 84, 86, 91,92, 105 и 106	Группа 4 (п=10): 4, 10, 13, 16, 17, 20, 21, 24,29 и 108
Номера подсвинок, оставшихся в группах в день опыта D118	Группа 1 (п=16): 1, 6, 11, 18, 19, 40, 54, 68, 79, 82, 88, 95, 96, 98,102 и 107	Группа 2 (п=16): 12, 26, 31, 32, 41, 47, 49, 58, 64, 67, 72, 85, 89, 93, 100 и 104
Группа 3 (п=16): 7, 14, 23, 27, 33, 36, 46, 48, 57, 61, 62, 65, 66, 84, 92 и 106	Группа 4 (п=5): 4, 13, 16, 17 и 108

Критерии включения/исключения

Все подсвинки, участвовавшие в настоящем исследовании имели негативный по данным ELISA PRRS-статус, обследование показало, что они были неосемененными и здоровыми на момент проведения вакцинации.

Исключение подсвинок после включения в опыт

У пяти (5) подсвинок в группе 1 (№№ 5, 15, 34, 35 и 52), двух (2) подсвинок в группе 2 (№ 77 и № 94), трех (3) подсвинок в группе 3 (№№ 2, 25 и 30) и у одной (1) подсвинки в группе 4 (№ 20) не наступила течка и они не были впоследствии осеменены. Эти подсвинки были исключены из опыта в день D47.

Две (2) подсвинки в группе 1 (№ 109 и № 110), девять (9) подсвинок в группе 2 (№№ 56, 59, 60, 69, 73, 75, 76, 78 и 103), четыре (4) подсвинки в группе 3 (№№ 22, 28, 51 и 53) и одна (1) подсвинка в группе 4 (№ 21) были исключены из опыта в день D89 вследствие наличия хромоты, отсутствия беременности или позднего осеменения.

Согласно протоколу исследования в том случае, если в группах 1-3 перед осуществлением контрольного заражения оставалось >16 беременных подсвинок на группу, то лишних подсвинок требовалось случайным образом исключить из опыта; в результате чего в группах 1-3 оставалось по 16 беременных подсвинок на группу. Пять (5) подсвинок из группы 1 (№№ 3, 8, 39, 90 и 101), одна (1) подсвинка из группы 2 (№ 70) и пять (5) подсвинок из группы 3 (№№ 42, 80, 86, 91 и 105) были удалены в день D104 случайным образом специалистом-статистиком или путем отбора лицом, не участвующим в исследовании, в результате чего количество подсвинок в каждой из групп 1 -3 стало равным 16.

Вследствие пространственных ограничений Исследователь потребовал уменьшить размер группы 4 с восьми (8) до пяти (5) животных. Специалист-статистик случайным образом отобрал трех (3) подсвинок (№№ 10, 24 и 29) для исключения из опыта, и их исключили в день D109.

Уход за животными и их содержание

Содержание животных

Подсвинки, обработанные IVP с низким титром, содержались в помещениях 1 и 2, а подсвинки, обработанные IVP с высоким титром, содержались в помещениях 3 и 4 в здании CB фирмы VRI-Кембридж в период со дня D-1 до завершения исследования. Подсвинки, включенные в контрольную группу, подвергнутую контрольному заражению, и группу отрицательного контроля, содержались в одном помещении VRI-Risdal в период со дня D-1 до дня D85. В день D85 подсвинок, оставшихся в контрольной груп

- 28 035624 пе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе отрицательного контроля, перевозили в VRIКембридж. Шестнадцать (16) подсвинок из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, содержали в здании CB, помещения 5-8, а восемь (8) подсвинок из группы отрицательного контроля содержали в здании CA, помещение 12, в течение оставшегося периода исследования. Начиная со дня D85, каждое помещение было оборудовано одинаковым образом, в каждом из них находилось два ряда станков для супоросных маток по четыре станка в ряду. В каждом станке содержали одну подсвинку и ее потомство. Каждый станок имел размеры примерно 5 футов х 7 футов, он был приподнят над полом, имел боковые панели из металлических прутьев и на полу настил из пластиковой сетки. Между соседними станками не имелось возможности для контакта типа нос-к носу. Пол в каждом станке мыли по меньшей мере один раз в день для удаления экскрементов и отбросов. Каждое помещение имело отдельный подогрев и вентиляцию, что предупреждало перекрестное загрязнение воздуха между помещениями. Каждое помещение чистили и дезинфицировали перед его использованием для настоящего исследования. Персонал, обслуживающий животных мылся под душем и переодевался в чистую одежду перед входом в каждое помещение.

При проведении настоящего исследования было необходимо изолировать группу обработки, поскольку в научном сообществе хорошо известно, что PRRSV легко распространяется от свиньи к свинье посредством различных механизмов, включая перенос в аэрозольной форме. Это относится и к авирулентным живым вакцинам против PRRS, поскольку указанные биологические продукты включают ослабленные вирусные частицы, которые имитируют характеристики вирулентного вируса PRRS дикого типа, не обладая способностью вызывать заболевание. Применяли соответствующие методы для гарантии поддержания биобезопасности и для того, чтобы вакцинированные животные не могли случайным образом заразиться PRRSV от невакцинированных животных из группы отрицательного контроля.

В каждом помещении в исследовательском центре имелись вентиляторы и нагреватели для того, чтобы обеспечивать необходимую циркуляцию воздуха и подогрев. Каждое помещение имело отдельную, но идентичную систему вентиляции, так что не происходило обмена воздухом между помещениями. Твердый корм хранили в мешках в условиях, обеспечивающих отсутствие паразитов. Животные имели свободный доступ к воде, которая поступала из скважины, расположенной на территории фирмы. Подсвинок кормили поступающим в продажу не содержащим лекарственных препаратов кормом, предназначенным для периода беременности и лактации (фирма Heart of Iowa Cooperative, Роланд, шт. Айова), соответствующим их размеру, возрасту и состоянию.

По мнению Исследователя перед началом исследования подсвинки имели хорошее состояние здоровья и упитанность. В период исследования у двух подсвинок была обнаружена слабо выраженная хромота, а у одной подсвинки было выявлено опухание в левой области шеи. По мнению Исследователя все эти проявления представляли собой неспецифические состояния, которые обычно встречаются в группах подсвинок при стойловом содержании. По решению Исследователя при проведении настоящего исследования ни для одного из животных не требовалось проводить сопутствующие обработки.

Всех подсвинок из групп 1-3 и рожденных ими поросят после умерщвления ликвидировали посредством промышленной кремации. Подсвинок из группы 4 после умерщвления утилизировали, передавая их для переработки непищевого животного сырья. Поросят из группы 4 не умерщвляли и не утилизировали, но передавали для участия в другом проекте BIVI. Никакие пищевые продукты от животных, участвовавших в настоящем исследовании, не попадали в цепь питания человека.

Оценка эффективности

Для оценки MID MLV PRRS 94881 осуществляли в день D118 контрольное заражение животных в группе, обработанной вакциной с низким титром (группа 2), и в группе, обработанной вакциной с высоким титром (группа 3), проводили оценку репродуктивной способности и количества поросятотъемышей после контрольного заражения. Основным критерием выполнения поставленной задачи должно было явиться то, что в одной или обеих группах, обработанных вакциной, имел место статистически значимо более высокий процент или количество живорожденных поросят и поросят-отъемышей к 20-дневному возрасту (DOF +20) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (группа 1).

Другие параметры, которые анализировали для подтверждения эффективности при сравнении обработанных вакциной групп и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, включали результаты клинической оценки подсвинок после вакцинации, результаты серологического анализа подсвинок на PRRS, виремию у подсвинок, результаты клинических обследований подсвинок после контрольного заражения, виремию у поросят на момент опороса, общее количество поросят на помет, количество живых поросят на помет, количество ослабленных живых поросят на помет, количество мумифицированных плодов на помет, количество мертворожденных поросят на помет, количество задавленных/погибших поросят на помет, результаты клинических обследований поросят и ADWG у поросят.

Критерии валидности теста

Группу отрицательного контроля (группа 4) не включали ни в один из анализов. Группу отрицательного контроля включали в исследование для демонстрации того, что исходные подсвинки имели PRRS-негативный статус в тот момент времени, когда осуществляли контрольное заражение животных в

- 29 035624 других трех группах. Кроме того, животные в группе отрицательного контроля должны были сохранять

PRRS-негативный статус вплоть до завершения исследования для исключения возможности внесения полевого PRRSV или случайного перекрестного заражения от животных из контрольных групп, подвергнутых контрольному заражению.

Требовалось, чтобы образцы сыворотки, взятые до поставки животных и в день D0, были негативными в отношении антител к вирусу PRRS. Для того, чтобы исследование было признано валидным, образцы сыворотки, собранные у животных из групп 1 и 4 в течение периода вплоть до дня контрольного заражения и у животных из группы 4 в течение периода вплоть до завершения исследования должны были не содержать антител к вирусу PRRS.

Основные выходные параметры

Основными переменными при статистической оценке эффективности были количество живых поросят на подсвинку при рождении (среднее количество или процент) и количество живых поросят на помет в день DOF +20 (среднее количество или процент).

9.2.1. Процент живых поросят при рождении на подсвинку.

В процессе исследования для каждой подсвинки регистрировали результаты опороса. За день опороса (DOF) для каждой подсвинки принимали день, в который рождался первый поросенок. В момент опороса каждого поросенка относили к одной из пяти категорий, перечисленных ниже в таблице 6.10. Живым при рождении поросенком считали любого поросенка, которого при обследовании признавали как здорового живого поросенка, ослабленного живого поросенка или задавленного/убитого поросенка (смерть в результате задавливания подтверждали путем аутопсии как описано ниже). Обследования проводил Исследователь или уполномоченное лицо, и результаты регистрировались в регистрационной форме для процесса опороса/получения помета.

Таблица 6.10. Категории результатов опороса

Название	Определение
мумия	Мумифицированный плод, не полностью резвившийся и имеющий серьезные признаки автолиза, или полностью развывшийся плод, имеющий блестящую зеленую окраску типа оружейного металла с отсутствием или очень слабым волосяным покровом
мертворожденный поросенок	Полностью резвившийся мертвый поросенок с волосяным покровом
ослабленный живой поросенок	Поросенок с плохим здоровьем, который не в состоянии питаться или ходить
здоровый живой поросенок	Здоровый способный питаться поросенок, который может ходить
задав ленный/у битый	Полностью развывшийся поросенок, который, по-видимому, умер сразу после опороса вследствие того, что был задавлен подсвинкой

Количество живых поросят на помет в день DOF +20

Поросят обследовали в отношении клинических признаков заболевания с использованием системы, представленной ниже в табл. 6.11, начиная со дня DOF+1 по день DOF+20. Обследования проводились Исследователем или уполномоченным лицом, и результаты регистрировали в регистрационной форме для клинических обследований.

Таблица 6.11. Система балльной оценки результатов клинических обследований

Дыхание	Поведение	Кашель
0 - нормальное дыхание 1 - затрудненное дыхание/учащенное дыхание 2 - одышка 3 - смерть	0 - нормальное 1 - заторможенность от слабой до умеренной 2 - серьезная заторможенность или лежащее положение 3 - смерть	0 - отсутствует 1 - мягкий или интермиттирующий кашель 2 - грубый или серьезный, рецидивирующий кашель 3 - смерть

Специалист-статистик рассчитывал суточный общий балл клинического обследования в виде суммы баллов дыхания, поведения и кашля с использованием программы SAS. Любой поросенок, получивший в день DOF+20 клинический балл от нуля до восьми, считался живым ко дню DOF+20.

Вспомогательные параметры

Другие параметры, которые анализировали при сравнении групп, обработанных вакциной, и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, включали результаты клинической оценки подсвинок после вакцинации, результаты серологического анализа подсвинок на PRRS, виремию у подсвинков, результаты клинических обследований подсвинок, виремию у поросят, общее количество поросят на помет, количество живых поросят на помет, количество ослабленных живых поросят на помет, количество мумий на помет, количество мертворожденных поросят на помет, количество задавленных/убитых поросят на помет, результат клинических обследований поросят и средний суточный прирост массы (ADWG) у поросят.

Ежедневные оценки подсвинок

Для получения ежедневных оценок после вакцинации Исследователь или уполномоченное лицо

- 30 035624 проводили обследование всех подсвинок один раз в день в период со дня D-1 по день D21 и в период со дня D22 по день 115 по меньшей мере три раза в неделю. Результаты регистрировали в регистрационной форме для ежедневных оценок.

Серологический анализ подсвинок на PRRS

Образцы венозной цельной крови собирали у подсвинок перед их поставкой и в дни D0, D7, D14, D21, D56, D84, D118, D125, D132, DOF 0, DOF+7, DOF+13 и DOF+20. Сбор образцов крови у подсвинок в день опороса/выкидышей (DOF 0) осуществляли сразу после завершения опороса/выкидышей или в период до 8 ч после опороса/выкидыша.

В целом, процедура состояла в следующем: у каждой подсвинки брали примерно по 10 мл крови в пробирку(и) для разделения крови (SST) соответствующего размера. Собранные образцы регистрировали в регистрационной форме для собранных образцов. Находящейся в SST крови давали свернуться при комнатной температуре. Образцы крови, собранные в рабочие дни недели, передавали в BIVI-Ames в день сбора. Образцы крови, собранные в выходные дни, обрабатывал персонал VRI в день сбора. Образцы сыворотки хранили в VRI при 2-8°С. Образцы крови, находящиеся либо в BIVI-Ames, либо в VRI, центрифугировали и сыворотку собирали, разделяли и переносили в соответствующие пробирки. На каждую пробирку наносили метку с указанием идентификационного (ID) номера подсвинки, номера исследования, даты сбора, дня исследования и типа образца. Образцы сыворотки, полученные в VRI, передавали в BIVI-Ames при первом удобном случае. К каждому поставляемому продукту прилагалась заполненная регистрационная форма для поставляемых образцов. В BIVI-Ames один набор образцов сыворотки помещали на хранение при 2-8°С, а другой набор образцов сыворотки помещали на хранение при -70 ± 10 °С.

Набор образцов сыворотки, хранившийся при 2-8°С, анализировали в BIVI-Ames на наличие антител к PRRSV. Результаты классифицировали как негативные (по данным ELISA отношение S/P < 0,4) или позитивные (по данным ELISA отношение S/P > 0,4).

Клинические обследования подсвинок после контрольного заражения

Обследование подсвинок в отношении клинических признаков заболевания проводили в период со дня D116 до дня DOF+20. Обследования выполнялись Исследователем или уполномоченными лицами. Подсвинок обследовали каждый день в отношении дыхания, поведения и кашля с использованием балльной системы оценки результатов клинических обследований, представленной выше в табл. 6.11.

PRRS-виремия у поросят

Образцы венозной крови собирали у поросят в дни DOF 0, DOF+7, DOF+13 и DOF+20, или в том случае, когда обнаруживали, что поросенок мертв. Предпочтительно брали образцы преколостральной крови у новорожденных поросят, но это не являлось обязательным. Если не имелось возможности взять образец преколостральной крови, то допускалось взятие образцов перинатальной крови в период до 12 ч после опороса. Образцы, которые не были собраны до первого сосания, помечали как перинатальные и хранили отдельно от преколостральных образцов.

В целом процедура заключалась в следующем: у каждого живого поросенка брали примерно по 2,02,5 мл крови в пробирку(и) для разделения сыворотки (SST) соответствующего размера. В день DOF +20 непосредственно перед умерщвлением у каждого поросенка брали как минимум по 5,0 мл крови. Образцы крови брали из каждой мумии или мертворожденного поросенка или, если не имелось возможности взять кровь из мертвого плода, то собирали торакальную или абдоминальную жидкость. Собранные образцы регистрировали в регистрационной форме для сбора образцов.

Средний суточный прирост массы поросят

Поросят взвешивали индивидуально в дни DOF 0 и DOF+20 или в тот день, когда поросенок был обнаружен мертвым Исследователем или уполномоченными лицами. Индивидуальные величины веса тела в день DOF 0 регистрировали в регистрационной форме для процесса опороса/получения помета, а величины веса тела, измеренные после дня DOF 0, регистрировали в регистрационной форме для веса тела.

Количественная оценка вируса PRRS в ткани легкого

Исследователь производил аутопсию всех поросят, родившихся мертвыми или умерших до дня DOF+20. Результаты аутопсии и диагноз регистрировали в форме для отчета о посмертном вскрытии. У каждого подвергнутого аутопсии поросенка брали по два образца из легких. Один образец помещали отдельный контейнер Whirlpak®, а другой образец помещали в соответствующий контейнер, заполненный достаточным объемом 10%-ного формалина. Собранные образцы регистрировали в форме для отчета об аутопсии.

Контейнеры Whirlpaks® и содержащие формалин контейнеры снабжали соответствующей меткой с указанием номера животного, номера исследования, дня исследования, типа образца и информации о том, с какой стороны взят образец: с левой стороны, с правой стороны или с обеих сторон. Образцы в контейнерах Whirlpaks® помещали на хранение при -70 ± 10°С, а образцы в 10%-ном формалине хранили при комнатной температуре до передачи их в BIVI-Ames. К каждой доставляемой партией образцов прилагалась заполненная регистрационная форма о доставке образцов. В BIVI-Ames образцы, находив- 31 035624 шиеся в контейнерах Whirlpaks®, хранили при -70 ± 10°С до переправки из BIVI-Ames в Германию, а зафиксированные формалином образцы хранили в BIVI-Ames при комнатной температуре.

После завершения исследования замороженные образцы, находившиеся в контейнерах Whirlpaks®, переправляли к месту назначения и анализировали как описано выше.

Зафиксированные формалином образцы ткани передавали в ISU VDL в течение одной недели после сбора для заливки в парафиновые блоки. Образцы ткани в парафиновых блоках возвращали в BIVI, и в настоящее время они хранятся в BIVI-Ames при комнатной температуре для возможных будущих анализов. Решение о том, сохранять ли эти образцы или уничтожить их, должно быть принято Спонсором и Наблюдателем исследования после завершения отчета об исследовании.

Нежелательные явления

При проведении настоящего исследования не было зарегистрировано никаких нежелательных явлений, обусловленных IVP. Более подробная информация о нежелательных явлениях представлена в разделе 12.6, озаглавленном Оценка подсвинок после вакцинации.

Статистические методы Экспериментальная единица

В процессе настоящего исследования группы обработки содержали в отдельных помещениях для того, чтобы избежать переноса живой вакцины на основе PRRSV животным в не подвергавшихся вакцинации группах. Таким образом, помещение представляло собой экспериментальную единицу. Однако, для целей рассматриваемого анализа, возможную нестрогость вследствие смешения (объединения) эффектов, обусловленных помещением и обработкой не учитывали, и подсвинку и соответствующий ее помет анализировали как экспериментальную единицу.

Рандомизация

Девяносто четыре (94) подсвинки с серонегативным статусом PRRS, взятые из группы, включающей 107 пригодных для исследования подсвинок, произвольно распределяли по 4 группам до дня D0. Каждая из групп 1-3 состояла из 28 подсвинок. Группа 4 состояла из 10 подсвинок. В группе 1, животные с номерами 45 и 55 были исключены менеджером фермы до поставки по причинам, связанным со здоровьем, и заменены на две другие подсвинки с номерами 15 и 18 соответственно. В группе 3, подсвинка № 44 была исключена менеджером фермы до поставки по причинам, связанным со здоровьем, и заменена на другую подсвинку № 25.

Вследствие пространственных ограничений в период осуществления контрольного заражения количество животных в группах 1 -3 было ограничено до 16 подсвинок на группу, а количество животных в группе 5 было ограничено до 5-8 подсвинок. В день D85 в группах 1-3 были произвольным образом отобраны по 16 подсвинок для продолжения исследования. Поскольку группа 4 состояла из 8 подсвинок в день D85, то эту группу не подвергали дополнительному рандомизированному сокращению. Впоследствии Исследователь потребовал, чтобы количество животных в группе 4 было уменьшено с 8 подсвинок до 5 подсвинок. В день D109 было отобрано произвольным образом 5 подсвинок в группе 4 для продолжения участия в исследовании.

Все процедуры рандомизации осуществлялись специалистом в области биостатистики.

Анализ

Статистический анализ и обобщение данных проводил д-р сельскохозяйственных наук Martin Vanselow, Biometrie & Statistik, Zum Siemenshop 21, 30539, Ганновер, Германия, +49(0) 511 606 777 650, m.vanselowat-online.de.

Основной целью статистического анализа было сравнение двух обработанных вакциной MLV PRRS 94881 групп (группы 2 и 3) с невакцинированной контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (группа 1). Все данные были переданы в SAS для обработки и оценки. Данные получали от Спонсора исследования в форме проверенных SAS наборов данных. Случаи, которые были исключены из исследования, учитывали при анализе соответствующих параметров вплоть до даты исключения. Все данные обобщали с помощью описательных категорий (n, минимум, максимум, среднее, медиана, стандартное отклонение, межквартильный диапазон или распределения частот встречаемости, доверительный интервал) на основе типа переменной. Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения SAS, выпуск 8.2 (SAS, 2001, Кэри, шт. Северная Каролина, США: SAS Institute Inc.).

Переменные для статистической оценки результатов исследования.

Основные переменные:

относительные количества живых поросят при опоросе/выкидыше (DOF+0);

относительные количества живых поросят в возрасте 20 дней (DOF+20).

Вспомогательные переменные:

клинические оценки подсвинок после вакцинации;

данные серологического анализа подсвинок на PRRS;

виремия у подсвинок;

Данные клинических обследований подсвинок:

- 32 035624 виремия у поросят;

репродуктивная способность.

Данные клинических обследований поросят:

средний суточный прирост массы поросят (ADWG).

Гипотеза, подлежащая проверке и сделанные допущения.

Группа отрицательного контроля, не подвергавшаяся контрольному заражению (группа 4), была исключена из статистического анализа. Группы, обработанные вакциной с низким титром и вакциной с высоким титром (группы 2 и 3 соответственно) сравнивали с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (группа 1). Все сравнительные групповые анализы проводили на основе двусторонних критериев различий. При использовании всех критериев различия считали статистически значимыми только в том случае, если P < 0,05. Считали, что вакцина обладает эффективностью, если процент или количество живорожденных поросят и процент или количество поросят-отъемышей ко дню DOF+20 в одной или обеих группах, обработанных вакциной, были статистически значимо больше чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению.

Подробное описание обработки и оценки данных

Клинические оценки подсвинок после вакцинации.

Создавали таблицы частот встречаемости животных, у которых был получен по меньшей мере один позитивный экспериментальный результат в период между днями исследования 1 и 21 и между днями исследования 1 и 113. Различия между контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, и группами, обработанными вакциной, анализировали с использованием точного критерия Фишера.

Клинические обследования подсвинок после контрольного заражения.

Создавали таблицы частот встречаемости животных, для которых был получен по меньшей мере один позитивный экспериментальный результат в период между днями исследования 116 и DOF+20. Различия между контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, и группами, обработанными вакциной, анализировали с использованием точного критерия Фишера.

Серологический анализ подсвинок.

Создавали таблицы частот встречаемости позитивных результатов, полученных методом ELISA в дни исследования 7, 14, 21, 56, 84, 118, 125, 132 (до опороса) и DOF+0, DOF+7, DOF+13 и DOF+20. Различия между контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, и группами, обработанными вакциной, анализировали с использованием точного критерия Фишера.

Виремия у подсвинок.

Результаты измерений уровня виремии оценивали по отдельности в каждый день исследования (в дни исследования 7, 14, 21, 56, 84, 118, 125, 132, предшествующие опоросу, и в дни DOF+0, DOF+7, DOF+13 и DOF+20). Для качественной оценки данных, полученных с помощью с.|ПЦР. результаты анализа, обозначенные как не обнаружено (n.d.) и негативные, классифицировали как негативные, а результаты анализа, обозначенные как позитивные, и измеренное значение классифицировали как позитивные. Для количественной оценки результат не обнаружено (n.d.) и негативный заменяли на величину log₁₀ GE/мл, равную 0,0, а результат позитивный заменяли на величину 3,0. Данные, полученные с помощью количественной ПЦР (PRRS-вирусная нагрузка [log₁₀ GE/мл]), использовали для сравнения контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (группа 1), с группами обработки 2 и 3 с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Создавали таблицы частот положительных результатов с.|ПЦР. Различия между контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, и группами, обработанными вакциной, анализировали с использованием точного критерия Фишера.

Репродуктивная способность.

Определяли абсолютные частоты встречаемости общего количества, живых, здоровых, ослабленных, мертворожденных, умерших и живых поросят ко дню DOF+20 на одну подсвинку и использовали в качестве единичных величин при сравнениях групп. Относительные частоты встречаемости живых, здоровых, ослабленных, мертворожденных и умерших поросят на одну подсвинку рассчитывали относительно общего количества поросят при опоросе и использовали в качестве единичных величин при сравнении групп. Процент живых поросят на помет в день DOF+20 рассчитывали относительно количества живых поросят при опоросе за вычетом количества умерших и задавленных поросят. Различия между контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, и группами, обработанными вакциной, анализировали с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Виремия у поросят.

Результаты измерений уровня виремии оценивали по отдельности в каждый день исследования (DOF+0, DOF+7, DOF+13 и DOF+20). Для качественной оценки данных, полученных с помощью qПЦР, результаты анализа, обозначенные как не обнаружено (n.d.) и негативные, классифицировали как негативные, а результаты анализа, обозначенные как позитивные, и измеренное значение классифицировали как позитивные. Рассчитывали процент позитивных поросят на помет и использовали в качестве единичных величин при сравнении групп, которое осуществляли на основе критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Для количественной оценки результат не обнаружено (n.d.) и негативный заменяли на величину log₁₀ GE/мл, равную 0,0, а результат позитивный заменяли на величину 3,0. Рассчи- 33 035624 тывали медианные величины для результатов qFUJP и использовали их в качестве единичных величин при сравнении групп, которое осуществляли на основе критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Для суммарной статистики использовали индивидуальные результаты с.|ПЦР. Вирусную нагрузку в образцах, взятых из легких, оценивали только в понятиях описательной статистики.

Вес тела и средний суточный прирост массы поросят.

Рассчитывали индивидуальные величины среднего суточного прироста массы (ADWG) в периоды времени между днями DOF+0 и DOF+20. Различия между группами обработки анализировали с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) и последующего использования t-критериев. С помощью ANOVA получали среднеквадратичные значения для групп и величины разницы между среднеквадратичными значениями с 95%-ными доверительными интервалами. Анализ ADWG для дня DOF+20 повторяли, используя вес, измеренный в день DOF+0, в качестве ковариаты. Данные о весе поросят от одной подсвинки суммировали с использованием понятий описательной статистики.

Клинические обследования поросят.

Рассчитывали процент поросят, для которых был получен по меньшей мере один позитивный экспериментальный результат в период между днями исследования DOF+1 и DOF+20, на один помет и использовали их в качестве единичных величин при сравнении групп, которое осуществляли на основе критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Данные анализировали в предположении полностью случайной структуры плана эксперимента.

Результаты

Репродуктивная способность подсвинок.

Средние величины процента живых поросят на помет при опоросе (здоровые + ослабленные + задавленные/погибшие) составляли 54,4, 75,1, 72,3 и 93,0% для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, групп, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группы отрицательного контроля соответственно. В группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром, процент живых поросят на помет при опоросе был статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0455). Средние количества живых поросят на помет при опоросе составляли 6,5, 8,3, 8,6 и 10,8 в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром и высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. Между группами не было выявлено статистически значимых различий в количестве живых поросят на помет при опоросе (P>0,1039).

Средние величины процента здоровых живых поросят на помет составляли 41,4, 65,8, 67,9 и 93,0% в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. В группах, обработанных вакциной с низким титром и высоким титром, процент здоровых живых поросят на помет при опоросе был статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0138). Средние количества здоровых живых поросят на помет при опоросе составляли 4,9, 7,2, 8,1 и 10,8 в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. Количество здоровых живых поросят на помет при опоросе в группе, обработанной вакциной с высоким титром, было статистически значимо (P=0,0211) более высоким, в то время как между группой, обработанной вакциной с низким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, различий не было выявлено (P=0,0640).

Средние величины процента ослабленных живых поросят на помет составляли 7,4, 7,1, 0,4 и 0,0% в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. Средние количества ослабленных живых поросят на помет при опоросе составляли 0,9, 0,8, 0,1 и 0,0 в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. В группе, обработанной вакциной с высоким титром, процент и количество ослабленных живых поросят на помет при опоросе были статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0090). В отличие от этого, не было выявлено различий в проценте и количестве ослабленных живых поросят на помет при опоросе между группой, обработанной вакциной с низким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P>0,8569).

Средние величины процента мумифицированных поросят на помет при опоросе в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля составляли 28,1, 14,1, 8,7 и 0,0% соответственно. Средние количества мумифицированных поросят на помет при опоросе составляли 3,1, 1,6, 0,9 и 0,0 в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. В обеих группах, обработанных вакциной, как с низким титром, так и с высоким титром, проценты и количества мумифицированных поросят на помет при опоросе были статистически значимо ниже, чем в контрольной группе,

- 34 035624 подвергнутой контрольному заражению (P<0,0190).

Не было выявлено статистически значимых различий в проценте или количестве мертворожденных или погибших/задавленных поросят на помет между обеими группами, обработанными вакцинами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P>0,1681).

Обобщение результатов оценки репродуктивной способности в группах (% поросят на помет и количество поросят на помет) в день DOF представлено ниже в табл. 6.12 и 6.13.

Таблица 6.12. Обобщение результатов оценки репродуктивной способности в группах ___________________(% поросят на помет) на день DOF___________________

Поросята	Группа*	N	Мин	. Макс.	Медианная величина	Среднее	95% С	л	SD	Р
живые	1	16	0	92	57,3	54,4	41,1	67,7	24,91
	2	16	33	100	81,9	75,1	64,5	85,7	19,88	0,0184
	3	16	17	100	75,6	72,3	59,5	85,1	24,01	0,0455
	4	5	83	100	91,7	93,0	84,2	101,8	7,11
здоровые	1	16	0	92	48,1	41,4	27,5	55,3	26,13
	2	16	8	92	71,4	65,8	52,2	79,5	25,57	0,0138
	3	16	17	100	71,8	67,9	54,4	81,3	25,25	0,0082
	4	5	83	100	91,7	93,0	84,2	101,8	7,11
ослабленные	1	16	0	25	3,6	7,4	2,6	12,2	9,04
	2	16	0	25	0,0	7,1	2,1	12,2	9,43	0,9441
	3	16	0	7	0,0	0,4	-0,5	1,3	1,67	0,0024
	4	5	0	0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,00
мертворожденные	1	16	0	50	9,5	17,5	8,5	26,4	16,83
	2	16	0	42	3.8	10,7	3.3	18,2	13,94	0,1965
	3	16	0	83	10,6	19,0	7,0	31.0	22,54	0,9033
	4	5	0	17	8,3	7,0	-1,8	15,8	7,11
мумифициро	1	16	0	63	25,8	28,1	18,8	37,4	17,50
ванные
	2	16	0	55	9,1	14.1	6,0	22,3	15,25	0,0190
	3	16	0	50	3,3	8,7	1,2	16,3	14,14	0,0006
	4	5	0	0	0.0	0,0	0,0	0,0	0,00
погибшие/	1	16	0	27	0,0	5,6	1,1	10,2	8,55
задавленные
	2	16	0	18	0.0	2,1	-0,6	4,8	5,07	0,2276
	3	16	0	25	0,0	4,0	0,1	7,8	7,25	0,6108
	4	5	0	0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,00
живые в день	1	15	0	100	33,3	43,6	23,0	64,3	37,28
DOF+20	2	16	13	100	84,5	73,8	58,5	89,2	28,80	0,0203
	3	16	44	100	86,6	83,8	75,1	92,5	16,37	0,0022
	4	5	100	100	100,0	100,0	100,0	100,0	0,00

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

Таблица 6.13. Обобщение результатов оценки репродуктивной способности в группах (количество поросят на помет) на день DOF

Поросята	Группа*	N	Ми1	г Макс.	Медианная величина	Среднее	95% CI	SD	Р
Всего	1	16	6	15	12,0	11,6	10,4	12,9	2,31
	2	16	9	13	11,0	П,1	10,4	П,7	1,24	0,1857
	3	16	7	15	12,0	11,6	10,3	12,9	2,42	0,9623
	4	5	10	14	12,0	11,6	9,5	13,7	1,67
живые	1	16	0	11	6,0	6,5	4.7	8,3	3,35
	2	16	4	12	8,0	8,3	7,0	9,5	2,27	0,1543
	3	16	2	13	9,0	8,6	6,6	10,6	3,77	0,1039
	4	5	9	14	10,0	10,8	8,4	13,2	1,92
здоровые	1	16	0	11	5,5	4,9	3,1	6,7	3,36
	2	16	1	12	7,0	7,2	5,7	8,7	2,83	0,0640
	3	16	2	13	8,5	8,1	6,1	10,1	3,76	0,0211
	4	5	9	14	10,0	10,8	8,4	13,2	1,92
ослабленные 1	16	0	3	0,5	0,9	0,3	1,5	1,09
	2	16	0		0,0	0,8	0,2	1,4	1,И	0,8569
	3	16	0	1	0,0	0,1	-од	0,2	0,25	0,0090

- 35 035624

	4	5	0	0	0,0	0.0	0,0	0,0	0,00
мертворожденные	1	16	0	6	1,0	2,0	0,9	3,1	2,03
	2	16	0	5	0,5	1,3	0,4	2,1	1,65	0,1681
	3	16	0	10	1,0	2,1	0.8	3,5	2,58	0,9478
	4	5	0	2	1,0	0,8	-0,2	1,8	0,84
мумифициро	1	16	0	7	3,0	3,1	2,1	4,1	1,89
ванные
	2	16	0	6	1,0	1,6	0,7	2,5	1,67	0,0125
	3	16	0	4	0,5	0,9	0,2	1,5	1,20	0,0003
	4	5	0	0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,00
погибшие/
1	16	0		0,0	0,7	0,1	1,2	1,01
задавленные
	2	16	0	2	0,0	0,3	-0,1	0,6	0,58	0,2200
	3	16	0	2	0,0	0,4	0,0	0,8	0,73	0,6115
	4	5	0	0	0,0	0,0	0.0	0,0	0,00
живые на	1	16	0	10	2,0	2,9	1,2	4,7	3,21
день
DOF+20	2	16	1	10	6,5	6,2	4,5	7,9	3,19	0,0063
	3	16	2	12	7,5	6.9	5,0	8,9	3,71	0,0026
	4	5	9	14	10,0	10,8	8,4	13,2	1,92

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

Живые поросята в день DOF+20.

Представленные в данном разделе данные иллюстрируют количество живых поросят на момент отъема (в возрасте 20 дней). Обобщение процентов и количества живых поросят на помет в группах в день DOF+20 представлено выше в табл. 6.12 и 6.13.

Средние величины процента живых поросят на помет в момент отъема (DOF+20) составляли 43,6, 73,8, 83,8 и 100,0% в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. Средние количества живых поросят на помет на момент отъема составляли 2,9, 6,2, 6,9 и 10,8 в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. В обеих группах, обработанных вакциной, как с низким титром, так и с высоким титром, проценты и количества живых поросят на помет на момент отъема (DOF+20) были статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0203).

Результаты анализа методом цПЦР виремии у подсвинок.

Все подсвинки по данным цПЦР имели РНК PRRSV-негативный статус в день D0. Все подсвинки в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и группе отрицательного контроля сохраняли по данным с]1111Р РНК PRRSV-негативный статус вплоть до дня контрольного заражения (D118) включительно. Группа отрицательного контроля сохраняла негативный статус по данным ql IIЦР на протяжении всего оставшегося периода исследования за исключением подсвинки № 108, для которой были получены позитивные результаты в день DOF+7. Во все другие моменты времени для подсвинки № 108 были получены негативные в отношении присутствия РНК PRRSV результаты дПЦР.

После вакцинации у 50 и 36% подсвинок в группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром соответственно, в день D7 были получены позитивные в отношении присутствия РНК PRRSV результаты дПЦР (P<0,0007). В период со дня D14 по день D56 только для 4% подсвинок из группы, обработанной вакциной с низким титром, результаты ql II IP оставались позитивными, в то время как в группе, обработанной вакциной с высоким титром, в течение указанного периода обследования у вплоть до 4% подсвинок периодически получали позитивные результаты ql II IP. В период со дня D14 по день D56 не было выявлено различий в проценте подсвинок с позитивными в отношении присутствия РНК PRRSV результатами ql IIЦР между группами, обработанными вакциной и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P=1,0000 или тестирование не осуществляли). У всех вакцинированных подсвинок результаты ql IIЦР в день D84 и день D118 (день контрольного заражения) были негативными в отношении присутствия РНК PRRSV.

После контрольного заражения в дни 125, DOF 0 и DOF+13 процент подсвинок с позитивными в отношении присутствия РНК PRRSV результатами ql IIЦР в группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром, был статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0155). В день D132 процент подсвинок с позитивными в отношении присутствия РНК PRRSV результатами ql IIЦР в группе, обработанной вакциной с низким титром, был статистически значимо ниже (P=0,0290); в то время как между группой, обработанной вакциной с высоким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено статистически значимого различия (P=0,1556). В день DOF+7 и день DOF+20 не было обнаружено статистически значимых различий в проценте подсвинок с позитивными в отношении присутствия РНК PRRSV

- 36 035624 результатами ql II IP между группами, обработанными вакциной, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P>0,1719).

Обобщение результатов определения процента подсвинок с позитивными в отношении присутствия РНК PRRSV результатами цПЦР в группах в период со дня D7 по день DOF +20 представлено ниже в табл. 6.14 и 6.15.

Таблица 6.14 Обобщение результатов определения процента подсвинок с позитивными в отношении присутствия РНК PRRSV результатами ql IIЦР в группах в период со дня D7 по день D132

День исследования	Группа*	N	%	95% CI	Всего	Р
7	1	0	0	0,0	12,3	28
	2	14	50	30,6	69,4	28	<0,0001
		10	36	18,6	55,9	28	0,0007
	4	0	0	0,0	30,8	10
14	1	0	0	0,0	12,3	28
	2	1	4	0,1	18,3	28	1,0000
		0	0	0,0	12,3	28	п.а.
	4	0	0	0,0	30,8	10
21	1	0	0	0,0	12,3	28
	2	1	4	0,1	18,3	28	1,0000
	3	1	4	од	18,3	28	1,0000
	4	0	0	0,0	30,8	10
56	1	0	0	0,0	14,8	23
	2	1	4	0,1	19,6	26	1,0000
	3	1	4	0,1	20,4	25	1,0000
	4	0	0	0,0	33,6	9
84	1	0	0	0,0	14,8	23
	2	0	0	0,0	13,2	26	п.а.
		0	0	0,0	13,7	25	п.а.
	4	0	0	0,0	33,6	9
118(день	1	0	0	0,0	20,6	16
контрольного	2	0	0	0,0	20,6	16	п.а.
заражения)	3	0	0	0,0	20,6	16	п.а.
	4	0	0	0,0	52,2	5
125	1	16	100	79,4	100,0	16
	2	5	31	11,0	58,7	16	0,0001
	3	4	25	7,3	52,4	16	<0,0001
	4	0	0	0,0	52,2	5
132	1	10	63	35,4	84,8	16
	2	3	19	4,0	45,6	16	0,0290
	3	5	31	11,0	58,7	16	0,1556
	4	0	0	0,0	52,2	5

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля; n.a. - не применимо, анализ не проводили.

Таблица 6.15. Обобщение результатов определения процента подсвинок с позитивными в отношении присутствия РНК PRRSV результатами ql IIЦР в группах в период со дня DOF 0 по день DOF+20

День исследования	Группа*	N	%	95% CI	Всего	Р
DOF+0	1	15	94	69,8	99,8	16
	2	4	25	7,3	52,4	16	0,0002
	3	1	6	0,2	30,2	16	<0,0001
	4	0	0	0,0	52,2	5
DOF+7	1	5	31	11,0	58,7	16
	2	2	13	1,6	38,3	16	0,3944
	3	1	6	0,2	30,2	16	0,1719
	4	1	20	0,5	71,6	5
DOF+13	1	7	47	21,3	73,4	15
	2	0	0	0,0	20,6	16	0,0024
	3	1	6	0,2	30,2	16	0,0155
	4	0	0	0,0	52,2	5
DOF+20	1	3	19	4,0	45,6	16
	2	3	19	4,0	45,6	16	1,0000
	3	0	0	0,0	20,6	16	0,2258
	4	0	0	0,0	52,2	5

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

- 37 035624

В обеих вакцинированных группах в день D7 медианная величина вирусной нагрузки была статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0007).

В период со дня D14 по день D56 не было обнаружено различий в вирусной нагрузке в вакцинированных группах и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P=1,0000). В день D84 и день

D118 (день контрольного заражения) вирусная нагрузка у всех вакцинированных подсвинок была равна нулю.

После контрольного заражения в дни D125, DOF 0 и DOF+13 медианные величины вирусной нагрузки в группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром, была статистически зна чимо меньше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0155). В день D132 медианная величина вирусной нагрузки в группе, обработанной вакциной с низким титром, была статистически значимо более низкой (P=0,0230); в то время как между группой, обработанной вакциной с высоким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено статистически значимого различия (0,94 и 1,97 log₁₀ GE/мл соответственно; P=0,1144). В день DOF+7 и DOF+20 не было обнаружено статистически значимых различий между обработанными вакциной груп пами и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P>0,1719).

Обобщение средних величин вирусной нагрузки в группах подсвинок (в GE/мл), полученных с помощью qllllj⁵, в период со дня D7 по день DOF +20 представлено ниже в табл. 6.16 и 6.17.

Таблица 6.16. Обобщение полученных с помощью qllllj⁵ результатов (log₁₀ GE/мл) для групп подсвинок в период со дня D7 по день D132

День исследования	Группа*	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Среднее значение	Р
7	1	28	0,00	0,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,000
	2	28	0,00	3,00	1,500	0,000 3,000	3,000	1,500	<0,0001
	3	28	0,00	3,00	0,000	0,000 3,000	3,000	1,071	0,0007
	4	10	0,00	0,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,000
14	1	28	0,00	0,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,000
	2	28	0,00	3,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,107	1,0000
	3	28	0,00	0,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,000	1,0000
	4	10	0,00	0,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,000
21	1	28	0,00	0,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,000
	2	28	0,00	3,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,107	1,0000
	3	28	0,00	3,00	0,000	0,000 0,000	0,000	0,107	1,0000

	4	10	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
56	1	23	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
	2	26	0,00	3,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,115	1,0000
	3	25	0,00	3,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,120	1,0000
	4	9	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
84	1	23	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
	2	26	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000	1,0000
	3	25	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000	1,0000
	4	9	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
	1	16	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
118(день	2	16	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000	1,0000
контрольного	3	16	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000	1,0000
	4	5	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
125	1	16	3,00	5,38	4,495	4,130	4,880	0,765	4,419
	2	16	0,00	6,46	0,000	0,000	3,000	3,000	1,293	0,0001
	3	16	0,00	3,00	0,000	0,000	3,000	1,500	0,750	0,0001
	4	5	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
132	1	16	0,00	4,47	3,000	0,000	3,000	3,000	1,967
	2	16	0,00	3,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,563	0,0230
	3	16	0,00	3,00	0,000	0,000	3,000	3,000	0,938	0,1144
	4	5	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV

PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

- 38 035624

Таблица 6.17. Обобщение полученных с помощью дПЦР результатов (log₁₀ GE/мл) для групп подсвинок в период со дня DOF 0 по день DOF+20

День „ . .у лт Медианная „_т Q- Среднее _

Группа* Ν Мин Макс. 95% CI Р исследования величина диапазон значение

DOF+0	1	16	0,00	3,00	3,000	3,000	3,000	0,000	2,813
	2	16	0,00	3,00	0,000	0,000	3,000	1,500	0,750	0,0002
	3	16	0,00	3,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,188	<0,0001
	4	5	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
DOF+7	1	16	0,00	3,00	0,000	0,000	3,000	3,000	0,938
	2	16	0,00	5,55	0,000	0,000	0,000	0,000	0,534	0,3944
	3	16	0,00	3,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,188	0,1719
	4	5	0,00	3,00	0,000	0,000	3,000	0,000	0,600
DOF+13	1	15	0,00	3,00	0,000	0,000	3,000	3,000	1,400
	2	16	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000	0,0024
	3	16	0,00	3,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,188	0,0155
	4	5	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
DOF+20	1	16	0,00	3,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0.563
	2	16	0,00	6,45	0,000	0,000	0,000	0,000	0,903	0,7924
	3	16	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000	0,2258
	4	5	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

Балльная оценка результатов клинических обследований подсвинок после контрольного заражения.

В период со дня D116 по день DOF+20 в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и в группе отрицательного контроля у 25%, 25%, 38% и 60% подсвинок соответственно были выявлены клинические признаки заболевания по меньшей мере в один из дней с D116 по DOF+20. Не было выявлено статистически значимых различий в частоте встречаемости подсвинок с позитивным статусом клинического заболевания между группами, обработанными вакциной, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в период со дня D116 по день DOF+20 (P>0,7043).

Обобщение данных о проценте подсвинок в группах, для которых был получен позитивный признак заболевания при клиническом обследовании (балл клинического обследования > 0), по меньшей мере в один из дней с D116 по DOF +20, представлено ниже в табл. 6.18.

Таблица 6.18. Обобщение данных о проценте подсвинок в группах, для которых был получен позитивный признак заболевания при клиническом обследовании (балл клинического обследования > 0) по меньшей мере в один из дней с D116 по DOF +20, представлено ниже в табл. 6.18

Дни исследования	Группа*	N	%	95% CI	Всего	Р
116 - DOF+20	1	4	25	7,3	52,4	16
	2	4	25	7,3	52,4	16	1,0000
	3	6	38	15,2	64,6	16	0,7043
	4	3	60	14,7	94,7	5

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля

Серологический анализ подсвинок на PRRS методом ELISA.

Все подсвинки имели PRRS-серонегативный статус в дни D0 и D7. В контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группе отрицательного контроля все подсвинки сохраняли PRRSсеронегативный статус вплоть до и, включая день контрольного заражения (D118); при этом животные в группе отрицательного контроля сохраняли PRRS-серонегативный статус в течение всего оставшегося периода исследования (DOF+20).

В день D14, 18 и 21% подсвинок в группах, обработанных вакциной с низким и высоким титром соответственно, имели PRRS-серопозитивный статус. В группе, обработанной вакциной с высоким титром, в день D14 процент подсвинок с PRRS-серопозитивным статусом был статистически значимо более высоким (P=0,0232), в то время как между группой, обработанной вакциной с низким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено статистически значимого различия (p=0,0515). Указанные проценты достигали для каждой группы пиковых значений, которые составляли в день D56 65 и 60% для групп, обработанных вакциной с низким и высоким титром соответственно (P<0,0001). В день контрольного заражения (D118), 56 и 50% подсвинок в группах, обработанных вакциной с низким и высоким титром, имели PRRS-серопозитивный статус (P<0,0024). В день D125, 6, 88 и 100% подсвинок в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группах, обработанных вакциной с низким и с высоким титром, имели PRRS-серопозитивный статус; и при этом раз- 39 035624 личие между вакцинированными группами и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, было статистически значимым (P<0,0001).

После дня D125 все оставшиеся подсвинки в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и в группах, обработанных вакциной с низким и с высоким титром, сохраняли PRRSсеропозитивный статус на протяжении всего оставшегося периода исследования (тестирование не проводили).

Обобщение результатов серологического анализа на PRRS в группах, проведенного методом ELISA в период со дня D14 по день DOF+20, представлено ниже в табл. 6.19 и 6.20.

Таблица 6.19. Обобщение результатов серологического анализа на PRRS в группах подсвинок, проведенного методом ELISA в период со дня D14 по день DOF+20

День исследования	Группа*	N	%	95% CI	Всего	Р
7	1	0	0	0,0	12,3	28
	2	0	0	0,0	12,3	28	п.а.
	3	0	0	0,0	12,3	28	и.а.
	4	0	0	0,0	30,8	10
14	1	0	0	0,0	12,3	28
	2	5	18	6,1	36,9	28	0,0515
	3	6	21	8,3	41,0	28	0,0232
	4	0	0	0,0	30,8	10
21	1	0	0	0,0	12,3	28
	2	13	46	27,5	66,1	28	<0,0001
	3	11	39	21,5	59,4	28	0,0003
	4	0	0	0,0	30,8	10
56	1	0	0	0,0	14,8	23
	2	17	65	44,3	82,8	26	<0,0001
	3	15	60	38,7	78,9	25	<0,0001
	4	0	0	0,0	33,6	9
84	1	0	0	0,0	14,8	23
	2	15	58	36,9	76,6	26	<0,0001
	3	14	56	34,9	75,6	25	<0,0001
	4	0	0	0,0	33,6	9
118	1	0	0	0,0	20,6	16
	2	9	56	29,9	80,2	16	0,0008
	3	8	50	24,7	75,3	16	0,0024
	4	0	0	0,0	52,2	5
125	1	1	6	0,2	30,2	16
	2	14	88	61,7	98,4	16	<0,0001
	3	16	100	79,4	10,.0	16	<0,0001
	4	0	0	0,0	52,2	5
132	1	16	100	79,4	100,0	16
	2	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	3	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	4	0	0	0,0	52,2	5

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля; n.a. - не применимо, тест не проводили.

Таблица 6.20. Обобщение результатов серологического анализа на PRRS в группах подсвинок, проведенного методом ELISA в период со дня DOF 0 по день DOF+20

День исследования	Группа*	N	%	95% CI	Всего	Р
DOF+0	1	16	100	79,4	100,0	16
	2	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	3	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	4	0	0	0,0	52,2	5
DOF+7	1	15	100	78,2	100,0	15
	2	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	3	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	4	0	0	0,0	52,2	5
DOF+13	1	16	100	79,4	100,0	16
	2	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	3	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	4	0	0	0,0	52,2	5
DOF+20	1	16	100	79,4	100,0	16
	2	16	100	79,4	100,0	16	п.а.
	3	15	100	78,2	100,0	15	п.а.
	4	0	0	0,0	52,2	5

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV

- 40 035624

PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля; **для образца, полученного от подсвинки № 106, тест не проводили; n.a. - не применимо, тест не проводили.

Оценки подсвинок после вакцинации.

В период со дня D1 по день 21 ни в одной из групп не было обнаружено никаких аномальных проявлений и тест не проводили. В период со дня D1 по день D113 у 4, 4, 0 и 10% подсвинок в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром и в группе отрицательного контроля были выявлены аномальные проявления по меньшей мере в один из дней с D1 по D113. В период со дня D1 по день D113 не было выявлено статистически значимых различий касательно аномальных проявлений между вакцинированными группами и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P=1,0000).

Конкретно, у животного № 109 (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению) была выявлена в день D85 хромота на правую заднюю ногу, у животного № 12 (группа, обработанная вакциной с низким титром) было выявлено опухание левой области шеи в период со дня D78 по день D89, и у животного № 21 (группа отрицательного контроля) была выявлена хромота в период со дня D81 по день D83.

Обобщение данных о проценте подсвинок, у которых были выявлены аномальные проявления по меньшей мере в один день в период со дня D1 по день D21 и со дня D1 по день D113, представлены ниже в табл. 6.21.

Таблица 6.21. Обобщение данных об аномальных проявлениях в группах, выявленных по меньшей мере в один день в период со дня D1 по день D21 и со дня D1 по день D113

Дни исследования	Группа*	Количество %	95% CI	Всего	Р
1 - 21	1 - 4	не получено «позитивных» результатов
1 - 113	1	1	4	ОД	18,3	28
	2	1	4	0,1	18,3	28	1,0000
	3	0	0	0,0	12,3	28	1,0000
	4	1	10	0,3	44,5	10

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

Балльная оценка результатов клинического обследования поросят.

Средние величины процента поросят на помет, позитивных в отношении клинических признаков заболевания (балл клинического обследования > 0), выявленных по меньшей мере в один день в период со дня DOF+1 по день DOF+20, составляли 91,6, 32,5, 33,4 и 3,2% в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и в группе отрицательного контроля соответственно. В группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром, процент поросят на помет, позитивных в отношении клинических признаков заболевания, выявленных по меньшей мере в один день в период со дня DOF+1 по день DOF+20, был статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0001).

Обобщение данных о проценте поросят на помет, позитивных в отношении клинических признаков заболевания (балл клинического обследования > 0), выявленных в группах по меньшей мере в один день в период со дня DOF+1 по день DOF+20, представлены ниже в табл. 6.22.

Таблица 6.22. Обобщение данных о проценте поросят на помет, позитивных в отношении клинических признаков заболевания (балл клинического обследования > 0), выявленных в группах по меньшей мере в один день в период со дня DOF+1 по день DOF+20

Дни исследования	Группа* N	Мин.	. . Медианная Макс, величина	Среднее значение	95% CI	SD	Р
с DOF+1	1	15	56	100	100,0	91,6	82,9	100,4	15,78
по	2	16	0	100	25,0	32,5	15,6	49,4	31,64	<0,0001
DOF+20	3	16	0	100	25,0	33,4	19,0	47,9	27,16	<0,0001
	4	5	0	9	0,0	3,2	-2,3	8,8	4,50

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

Результаты анализа с помощью ql II IP сыворотки/общей воды организма поросят.

В день DOF 0 средние величины процента поросят на помет, позитивных по данным ql IIЦР в отношении присутствия РНК PRRSV, составляли 86,3, 58,1, 55,0 и 0% в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группе отрицательного контроля соответственно. В день DOF 0 в группах, обработанных вакциной с высоким титром и с низким титром, величины процента поросят на помет, позитивных по данным ql II IP в отно- 41 035624 шении присутствия РНК PRRSV, были статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0381). В день DOF+7 в группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром, величины процента поросят на помет, позитивных по данным qПЦР в отношении присутствия РНК PRRSV, также были статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0293). В день DOF+13 процент позитивных по данным qПЦР поросят на помет был статистически значимо ниже только в группе, обработанной вакциной с низким титром (P=0,0216); в то время как между группой, обработанной вакциной с высоким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено статистически значимого различия в проценте позитивных по данным qПЦР поросят на помет (P=0,0860). В день DOF+20 не было выявлено статистически значимых различий между группами (P>0,0614).

Обобщение данных о проценте поросят на подсвинку в группах, для которых получены позитивные результаты анализа на PRRSV методом qПЦР сыворотки/общей воды организма, представлены ниже в табл. 6.23.

Таблица 6.23. Обобщение данных о проценте поросят на подсвинку в группах, для которых получены позитивные результаты анализа на PRRSV методом qПЦР сыворотки/общей воды организма

День исследования	Группа*	N	Мин Макс.	Медианная Среднее	95% CI	SD	Р
величина	значение
DOF+0	1	16	50	100	96,4	86,3	76,8	95,8	17,87
	2	16	0	100	68,3	58,1	37,3	78,9	39,07	0,0381
	3	16	0	100	60,0	55,0	37,0	73,0	33,77	0,0018
	4	5	0	0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,00
DOF+7	1	12	100	100	100,0	100,0	100,0	100,0	0,00
	2	16	10	100	100,0	76,6	57,1	96,0	36,51	0,0293
	3	16	0	100	100,0	78,6	60,6	96,6	33,83	0,0175
	4	5	0	0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,00
DOF+13	1	11	100	100	100,0	100,0	100,0	100,0	0,00
	2	16	0	100	100,0	75,4	55,0	95,8	38,31	0,0216
	3	16	0	100	100,0	84,0	68,2	99,9	29,75	0,0860
	4	5	0	0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,00
DOF+20	1	11	0	100	100,0	90,9	70,7	111,2	30,15
	2	16	0	100	93,8	75,3	55,6	95,0	36,97	0,0614
	3	16	0	100	100,0	81,6	65,0	98,1	31,06	0,1832
	4	5	0	0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,00

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

В день DOF 0 в группе, обработанной вакциной с высоким титром, медианные величины результатов, полученных с помощью qПЦР, были статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P=0,0030); в то время как между группой, обработанной вакциной с низким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено статистически значимого различия (P=0,0620). В дни DOF+7, DOF+13 и DOF+20 в обеих группах, обработанных вакциной, медианные величины результатов, полученных с помощью qПЦР, были статистически значимо ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0122).

Обобщение результатов измерений методом qПЦР величин GE/мл в сыворотке/общей воде организма поросят в пересчете на подсвинку для различных групп представлено ниже в табл. 6.24.

Таблица 6.24. Обобщение результатов анализа методом qПЦР (log₁₀ GE/мл) сыворотки/общей воды организма поросят в пересчете на подсвинку (P-значения для различий между группами получены на основе медианных значений результатов qПЦР)

День исследования	Группа* N Мин. Макс.	Медианная 95% величина	Q- диапазон	Среднее значение	Р
DOF+0	1	180 0,00	8,69	6,400	6,080	6,790	3,195	5,556
	2	176 0,00	8,47	3,000	3,000	4,420	6,945	3,560	0,0620
	3	183 0,00	8,76	3,000	0,000	3,000	6,580	3,049	0,0030
	4	58 0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
DOF+7	1	58 4,47	8,76	6,950	6,610	7,370	1,300	6,914
	2	103 0,00	8,12	3,000	3,000	4,930	5,640	3,337	<0,0001
	3	115 0,00	6,91	4,280	3,000	4,630	2,120	3,642	<0,0001
	4	54 0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000
DOF+13	1	52 4,19	8,62	6,835	6,430	6,970	0,995	6,549
	2	100 0,00	8,22	3,000	3,000	3,000	4,530	2,678	<0,0001
	3	113 0,00	6,54	3,000	3,000	3,000	1,580	3,413	<0,0001
	4	54 0,00	0,00	0,000	0.000	0,000	0,000	0,000
DOF+20	1	46 0,00	6,94	5,595	5,270	6,520	1,770	5,554
	2	98 0,00	6,59	3,000	3,000	3,000	4,000	2,502	0,0122
	3	111 0,00	6,28	3,000	3,000	3,000	1,160	3,218	0,0005
	4	54 0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000

- 42 035624 *группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV

PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

Величины ADWG у поросят.

В день DOF 0 не было выявлено статистически значимых различий между группами в среднеквадратичных величинах веса тела (P>0,2972). В день DOF+20 в обеих вакцинированных группах среднеквадратичные величины веса тела были статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0028), независимо от того, учитывали ли при анализе вес тела животных в день DOF 0, в качестве ковариаты, или нет.

Средние величины ADWG в период со дня DOF 0 по день DOF+20 составляли 0,1 кг/день, 0,2 кг/день, 0,2 кг/день и 0,2 кг/день для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, групп, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группы отрицательного контроля соответственно. В обеих вакцинированных группах величина ADWG была статистически значимо выше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0028), независимо оттого, учитывали ли при анализе вес тела животных в день DOF 0, в качестве ковариаты, или нет.

Обобщение данных о весах тела поросят в группах в дни DOF 0 и DOF+20 и величинах ADWG (кг/день) в период со дня DOF 0 по день DOF+20 представлено ниже в табл. 6.25 и 6.26.

Таблица 6.25. Обобщение данных о весах тела поросят в группах в дни DOF 0 и DOF+20 и величинах ADWG (кг/день) в период со дня DOF 0 по день DOF+20

День (дни) исследования	Группа*	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	Среднее значение	95% CI	SD
	1	47	0,9	2,0	1,40	1,34	1,274	1,411	0,234
вес тела в день	2	99	0,9	2,1	1,40	1,43	1,388	1,479	0,227
DOF+0	3	111	0,9	2,0	1,40	1,40	1,360	1,448	0,234
	4	54	0,9	1,9	1,40	1,39	1,335	1,454	0,218
	1	47	1,5	6,1	3,70	3,80	3,462	4,146	1,164
вес тела в день	2	99	2,4	8,3	5,50	5,42	5,168	5,673	1,266
DOF+20	3	111	2,1	8,2	5,30	5,19	5,000	5,388	1,032
	4	54	2,4	6,9	5,20	5,26	5,008	5,511	0,922
ADWG (в	1	47	0,015	0,235	0,1150	0,1231	0,10649	0,13968	0,05653
период со дня	2	99	0,065	0,340	0,2000	0,1993	0,18770	0,21099	0,05837
DOF+0 по день 3	111	0,055	0,330	0,1950	0,1895	0,18078	0.19823	0,04638
DOF+20)	4	54	0,060	0,260	0,1925	0,1932	0,18305	0,20343	0,03733

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

Таблица 6.26. Обобщение данных о среднеквадратичных величинах веса тела и ADWG (кг/день) в группах - результаты анализа (P-значения) различий между группами

День(дни) * Среднеквадрат. 95%-ный доверительный исследования ' величина интервал

вес тела в день	1		1,32	1,169	1,477
DOF+0	2		1,42	1,318	1,522
	3		1,41	1,317	1,497
	различие 1	-2	-0,10	-0,281	0,088	0,2972
	различие 1	-3	-0,08	-0,262	0,094	0,3467
	1		3,82	3,072	4,567
вес тела в день	2		5,32	4,827	5,819
DOF+20	3		5,35	4,910	5,785
	различие 1	-2	-1,50	-2,401	-0,606	0,0016
	различие 1	-3	-1,53	-2.394	-0,662	0,0010
	1		4,01	3,341	4,685
	2		5,28	4,843	5,727
вес тела в день DOF+20**	3		5,34	4.950	5,728
различие 1	-2	-1,27	-2,078	-0,466	0,0028
	различие 1	-3	-1,33	-2.103	-0,550	0,0013
	1		0,125	0,0903	0,1594
ADWG	2		0,195	0,1722	0,2181
(в период со дня DOF+0 по	3		0,197	0,1768	0,2172
день DOF+20)	различие 1	-2	-0,070	-0,1118	-0,0289	0,0014
	различие 1	-3	-0,072	-0,1122	-0,0322	0,0008
ADWG (в период со дня	1		0,130	0,0969	0,1640
DOF+0 по день DOF+20**)	2		0,194
0,1720	0,2161
	3		0,197	0,1773	0,2162
	различие 1	-2	-0,064	-0,1039	-0,0233	0,0028
	различие 1	-3	-0,066	-0,1052	-0,0275	0,0013

- 43 035624 *группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV

PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

** вес в день DOF+0 использовали в качестве ковариаты.

Результаты аутопсии поросят и диагнозы.

Правильность классификации всех плодов как мертворожденных, мумифицированных или задавленных при опоросе, была подтверждена при осуществлении аутопсии за исключением 8 плодов. Два плода в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были зарегистрированы как мертворожденные (40-S1, 66-S1), однако при проведении аутопсии были выявлены заполненные воздухом легкие, свидетельствующие о том, что животные были живыми в момент рождения. Два плода в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были зарегистрированы как задавленные (1С1, 79-С2), однако при проведении аутопсии у обоих плодов были обнаружены не заполненные воздухом легкие, свидетельствующие о том, что они не дышали. Один плод, родившийся в группе, обработанной вакциной с низким титром, был зарегистрирован как мертворожденный (85-S2), однако при проведении аутопсии были выявлены заполненные воздухом легкие, свидетельствующие о том, что поросенок был жив в момент рождения. Три поросенка, родившиеся в группе, обработанной вакциной с высоким титром, были зарегистрированы как задавленные (36-С1, 36-С2, 65-С1), однако при проведении аутопсии у них были обнаружены не заполненные воздухом легкие, свидетельствующие о том, что они не дышали. Вследствие небольшого количества плодов, неправильно зарегистрированных в момент опороса, в анализ продуктивности подсвинок изменения не вносили.

Один поросенок, родившийся в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, а именно 102-428, умер после взятия образца крови, что было подтверждено при проведении аутопсии.

Результаты анализа легких у поросят с помощью qПЦР.

У подвергнутых аутопсии плодов и мертвых поросят средние величины вирусной нагрузки в легких по данным qПЦР составляли 4,68, 4,09, 3,55 и 0,0 log₁₀ GE/мл для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, групп, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром и группы отрицательного контроля соответственно. Статистических анализов этих данных не проводили.

Обобщение результатов определения методом дПЦР PRRSV-вирусной нагрузки в легких (log₁₀ GE/мл) в различных группах представлено ниже в табл. 6.27.

Таблица 6.27. Обобщение результатов определения методом дПЦР PRRSV-вирусной нагрузки в легких (log₁₀ GE/мл) у поросят в различных группах

Группа	N	Мин.	Макс.	Медианная уЭ /о С1 величина	_ Среднее О-диапазон значение
1	141	0,00	7,95	5,140	4,810	5,390	2,990	4,676
2	79	0,00	7,45	4,780	3,000	5,260	2,620	4,092
3	75	0,00	6,84	4,220	3,000	5,100	5,620	3,547
4	4	0,00	0,00	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000

*группа 1 - контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с низким титром; группа 3 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 с высоким титром; группа 4 - группа отрицательного контроля.

Обсуждение/выводы

Для достижения цели исследования в план исследования были включены в день D0 четыре группы восприимчивых к PRRS подсвинок: контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению, которой вводили контрольный продукт (группа 1); группа, которую обрабатывали вакциной с низким титром, а именно 1 х 10^2,43 TCID50 MLV PRRS 94881 (IVP № 1, группа 2); группа, которую обрабатывали вакциной с высоким титром, а именно 1х10^3,90 TCID50 MLV PRRS 94881 (IVP № 2, группа 3); и группа отрицательного контроля (группа 4), которой также вводили контрольный продукт. Каждую обработку проводили с использованием дозы 2,0 мл, которую вводили IM примерно за 28 дней до осеменения (день D0).

Для определения минимальной иммунизирующей дозы MLV PRRS 94881 две группы, обработанные вакциной с различными титрами, и контрольную группу, предназначенную для контрольного заражения, подвергали контрольному заражению в день D118 (примерно на 90-й день периода беременности) гетерологичным европейским изолятом PRRSV (изолят 190136) и оценивали после осуществления контрольного заражения процент и количество живых поросят на помет в момент рождения (день опороса, DOF) и процент и количество живых поросят на помет, достигших возраста 21 дня (DOF +21). Валидация исследования (группа отрицательного контроля 4) Для того чтобы иметь возможность удостовериться в том, что исходные подсвинки не были заражены PRRSV и что в процессе исследования не имели место контакт с попавшим извне PRRSV или перекрестное заражение между группами обработки и контрольными группами, в план исследования была включена группа отрицательного контроля (группа 4). Подсвинки, входящие в группу отрицательного контроля, на протяжении всего исследования имели негативный статус в отношении антител к вирусу PRRS. Кроме того, подсвинки из этой группы и их потомство имели также негативный статус в отношении виремии PRRSV (по данным qПЦР) во все моменты времени, в которые проводили анализ, за исключением животного № 108 в день DOF+7. Для под- 44 035624 свинки № 108 результат анализа оказался позитивным в день DOF+7, хотя во все другие моменты времени результаты с.|ПЦР были негативными и результаты анализа рожденных ее поросят на присутствие РНК PRRSV также были негативными. Было принято решение рассматривать этот результат как ошибку, обусловленную загрязнением образца, а не заражением PRRSV. Данные результаты свидетельствуют о том, что группа отрицательного контроля оставалась незараженной PRRS в течение периода исследовании, и тем самым валидируют результаты настоящего исследования.

Валидация воспроизводимой модели контрольного заражения PRRSV (контрольная группа 1, подвергнутая контрольному заражению).

Модель контрольного заражения, основанная на использовании вирулентного штамма, выведенного из европейского PRRSV, который позволяет индуцировать адекватное и воспроизводимое клиническое заболевание PRRS, необходима для адекватной оценки эффективности вакцины против PRRS в лабораторных условиях. После инокуляции изолята 190136 европейского вируса PRRS (1х 10^6,30 TCID₅₀/6 мл) в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, было только 54,4% живых поросят на помет при рождении (в группе отрицательного контроля их было 93,0%), 17,5% и 28,1% на помет мертворожденных и мумифицированных поросят соответственно (в группе отрицательного контроля их было 7,0% и 0,0% соответственно), у 91,6% поросят на помет были выявлены клинические признаки заболевания по меньшей мере в один из дней в период со дня DOF+1 по DOF+20 (в группе отрицательного контроля они были выявлены у 3,2% поросят на помет), в возрасте 20 дней среднее количество живых поросят на помет составляло 2,9 (в группе отрицательного контроля среднее количество составляло 10,8) и у 86,3% поросят на помет при рождении была выявлена виремия (0% в группе отрицательного контроля). Эти результаты свидетельствуют о том, что у подсвинок из невакцинированной контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, и у их потомства индуцировалось серьезное клиническое заболевание со специфическими для PRRS признаками, что валидирует указанную модель контрольного заражения в качестве адекватного инструмента для клинического лабораторного исследования эффективности вакцины против PRRS и, более конкретно, для определения MID MLV PRRS 94881 для подсвинок.

Определение минимальной иммунизирующей дозы MLV PRRS 94881 для подсвинок (обработка дозами вакцины с низким и с высоким титром; группы 2-3)

Определение MID MLV PRRS 94881 для подсвинок базировалось на том, что в вакцинированной группе, которую обрабатывали вакциной с наименьшим титром, был получен более высокий процент или количество живых поросят на помет при рождении и более высокий процент или количество живых поросят на помет, достигших возраста 20 дней после контрольного заражения, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению.

В качестве одного из двух основных критериев для определения MID MLV PRRS 94881 был выбран процент (или количество) живых поросят на помет при опоросе. Выбор указанного первого основного критерия был основан на том факте, что заражение PRRSV беременных подсвинок и свиноматок, как правило, приводит к появлению мертворожденных и мумифицированных поросят, что обусловливает низкое количество живых поросят при опоросе. Количество живых поросят на опорос при рождении определяли путем суммирования количества здоровых живых, ослабленных живых и задавленных/убитых поросят на момент опороса. Поросят, зарегистрированных как задавленные или убитые, включали в категорию живые, поскольку результаты аутопсии подтверждали, что эти поросята были живыми в момент рождения и умерли вскоре после этого в результате травмы. Как в группе, обработанной вакциной с низким титром, так и в группе, обработанной вакциной с высоким титром, был выявлен статистически значимо более высокий процент живых поросят на помет при опоросе по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0455), следовательно, эффективность вакцины удовлетворяла этому критерию. Хотя не было выявлено статистически значимого различия в среднем количестве живых поросят на помет при опоросе между группами, обработанными вакциной с низким и с высоким титром (P>0,1857), как в группе, обработанной вакциной с низким титром, так и в группе, обработанной вакциной с высоким титром, было выявлено существенно большее среднее количество живых поросят на помет при опоросе (средние количества составляли 8,3 и 8,6 поросят на помет соответственно), чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, (среднее количество составляло 6,5 поросят на помет), это является дополнительным доказательством и подтверждением того, что у указанных животных после контрольного заражения было выявлено благоприятное лечебное действие вакцины.

В качестве второго критерия для определения MID MLV PRRS 94881 был выбран процент (или количество) живых поросят на помет, достигших возраста 20 дней, поскольку иммунитет к PRRS у подсвинок должен влиять на заражение поросят в утробе и передачу вируса от подсвинки к живым поросятам. Поросята, инфицированные вирусом PRRS в утробе, и родившиеся живыми, или инфицированные вирулентным вирусом PRRS после опороса в результате его переноса от подсвинки, как правило, умирают в доотъемный период в результате осложнения, связанного с PRRS. В настоящем исследовании было установлено, что в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и в группе отрицательного контроля достигли 20-дневного

- 45 035624 возраста 43,6, 73,8, 83,8 и 100% живых поросят на помет соответственно (P<0,0203). Средние количества поросят на помет в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и в группе отрицательного контроля, достигших 20дневного возраста, составляли 2,9, 6,2, 6,9 и 10,8 соответственно (P<0,0063). В обеих вакцинированных группах процент и количество живых поросят на момент отъема были статистически значимо (P<0,0203) более высокими, таким образом, указанный критерий решения поставленной в исследовании задачи был выполнен.

Дальнейший анализ данных, полученных при опоросе, дал дополнительную информацию, подтверждающую эффективность вакцины после контрольного заражения PRRSV, прежде всего в группе, обработанной вакциной с высоким титром. В группе, обработанной вакциной с высоким титром, были выявлены статистически значимо более высокий процент и большее среднее количество здоровых поросят при рождении (P<0,0211); и при этом были выявлены статистически значимо более низкий процент и среднее количество ослабленных поросят и мумифицированных плодов (P<0,0090) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению. Эти данные подтверждают то, что высокая доза вакцины индуцирует защитный иммунитет против вирулентного и гетерологичного штамма PRRSV, который использовали для контрольного заражения. В группе, обработанной вакциной с низким титром, также была выявлена эффективность вакцины при опоросе, о чем свидетельствовал более высокий процент здоровых живых поросят на помет (P=0,0138) и статистически значимо более низкий процент и среднее количество мумифицированных плодов (P<0,0190). В отличие от этого, между группами не было выявлено различий в проценте или количестве мертворожденных плодов или задавленных/убитых поросят при опоросе (P>0,1681).

Через семь дней после контрольного заражения (день D125) в группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром, были выявлены статистически значимо более низкие проценты подсвинок с позитивными по данным с.|ПЦР результатами анализа на присутствие РНК PRRSV, а также статистически значимо более низкая вирусная нагрузка в обеих группах по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P<0,0001). Эти данные служат дополнительным подтверждением того, что оба уровня доз вакцины индуцировали адекватный иммунитет у подсвинок, обусловливающий статистически значимо более низкий уровень вирусной репликации после контрольного заражения. Аналогично этому в группах, обработанных вакциной с низким и с высоким титром, был выявлены более низкие проценты подсвинок с позитивными результатами qПЦР в дни DOF 0 и DOF+13, а также более низкая вирусная нагрузка в обеих группах в указанные дни исследования (P<0,0155). В группе, обработанной вакциной с низким титром, в день D132 имел место статистически значимо более низкий процент подсвинок с позитивными результатами qПЦР и более низкая вирусная нагрузка (P<0,0290); при этом не было выявлено статистически значимых различий в отношении этого же набора параметров между группой, обработанной вакциной с высоким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P>0,1144). В дни DOF+7 и DOF+20 между вакцинированными группами и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено статистически значимых различий в проценте подсвинок с позитивными результатами qПЦР или в величине вирусной нагрузки (P>0,1719).

Как правило, PRRSV не индуцирует клинических симптомов заболевания у подсвинок и свиноматок, отличных от выкидышей. В настоящем исследовании было установлено, что у 25%, 25%, 38% и 60% подсвинок в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и в группе отрицательного контроля соответственно, были выявлены клинические симптомы заболевания (т.е. для которых балл клинического обследования был > 0) по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения. Не было выявлено статистически значимых различий между вакцинированными группами и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в проценте подсвинок, у которых имелись клинические симптомы заболевания по меньшей мере в один из дней в период со дня D116 по день DOF +20 (P>0,7043). У подсвинок, у которых в определенной форме проявлялись клинические признаки заболевания, они имели место в околородовой период, а не сразу после контрольного заражения. Высокий процент подсвинок в группе отрицательного контроля (60%), у которых проявлялись клинические признаки заболевания, и тот факт, что клинические признаки заболевания во всех группах отмечались в основном в околоопоросный период, подтверждает, что клинические признаки заболевания были обусловлены не заболеванием PRRS, а скорее физиологическими изменениями, ассоциированными с родами.

В день D0 все подсвинки по данным ELISA имели PRRS-серонегативный статус, что подтверждает соблюдение критериев включения подопытных животных в исследование. Аналогично этому, все подсвинки по данным ELISA имели серонегативный статус в день D7. У вакцинированных подсвинок первые PRRS-серопозитивные результаты по данным ELISA были получены в день D14, а наиболее высокие уровни сероконверсии, составлявшие 65 и 60%, были выявлены в группах, обработанных вакциной в низкой и высокой дозе соответственно, в день D56 (P<0,0001). В отличие от этого, животные в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, сохраняли PRRS-серонегативный статус по данным

- 46 035624

ELISA в течение периода вплоть до 7 дней после контрольного заражения (день D125). Со дня D132 и до завершения исследования подсвинки во всех группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, имели PRRSсеропозитивный статус по данным ELISA. Процент позитивных в отношении виремии подсвинок в обеих вакцинированных группах достигал пика после вакцинации в день D7, составлявшего 50% и 36% в группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром соответственно (P<0,0007). Уровень виремии быстро снижался до 4% (1 животное из 28, № 64) и 0% (0 животных из 28) в группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром соответственно, в день D14 (P=1,0000 или тест не проводили). В день D21 виремия оставалась на уровне 4% в группах, обработанных вакциной с низким титром (1 животное из 28, № 56) и с высоким титром (1 животное из 28, № 91). В день D56 одно животное из 26 (4%, № 89) в группе подсвинок, обработанных вакциной с низким титром, и одно животное из 25 (4%, № 66) в группе подсвинок, обработанных вакциной с высоким титром, имели позитивный в отношении виремии статус. Все подсвинки имели негативный в отношении виремии статус в дни D84 и D118.

Не было выявлено статистически значимых различий между обеими группами, обработанными вакциной с различными титрами, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в проценте подсвинок на группу, у которых была выявлена аномалия при клиническом обследовании по меньшей мере в один из дней после вакцинации в период со дня D1 по день D113 (P=1,0000). Конкретно, только у трех подсвинок имелись какие-либо аномалии, полученные при клиническом обследовании в указанный период времени. У двух подсвинок была выявлена хромота (у одной подсвинки в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и у одной подсвинки в группе отрицательного контроля) и у одной подсвинки в группе, обработанной вакциной с низким титром, было выявлено опухание левой области шеи. Поскольку вакцину вводили в правую область шеи, то не было зафиксировано нежелательных явлений, ассоциированных с указанной вакциной.

Результаты оценки PRRS-виремии у поросят в день DOF позволили лучше оценить уровень защиты в организме подсвинок, препятствующей заражению поросят через плаценту. В день DOF средний процент поросят на подсвинку, имеющих позитивный по данным с.|ПЦР статус, составлял 58,1 и 55,0% в группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром соответственно. В отличие от этого, в группе контрольного заражения средний процент поросят на подсвинку, для которых были получены позитивные результаты анализа методом с.|ПЦР сыворотки/общей воды организма, составлял 86,3%, что было статистически значимо выше, чем в обеих вакцинированных группах (P<0,0381). При исследовании вирусной нагрузки у поросят в день DOF 0 было установлено, что у поросят, родившихся у подсвинок из группы, обработанной вакциной с высоким титром, вирусная нагрузка была статистически значимо ниже, чем у поросят, рожденных подсвинками из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (P=0,0030); при этом не было выявлено различия в вирусной нагрузке между поросятами, рожденными подсвинками из группы, обработанной вакциной с низким титром, рожденными подсвинками из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (P=0,0620). Статистически значимые снижения (P<0,05) процента поросят на подсвинку, имеющих позитивный в отношении виремии статус, свидетельствует о снижении вертикальной передачи вирулентного PRRSV от вакцинированной подсвинки ее потомству при использовании для иммунизации любой из рассмотренных доз MLV EU PRRS 94881. Кроме того, в группе, обработанной вакциной с высоким титром, медианная величина вирусной нагрузки в сыворотке/общей воде организма на подсвинку по данным qПЦР составляла 3,00 log₁₀ GE/мл в день DOF; в то время как в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, медианная величина вирусной нагрузки на подсвинку по данным с.|ПЦР составляла 6,40 log₁₀ GE/мл (P=0,0030). В день DOF не было выявлено статистически значимого различия в вирусной нагрузке на подсвинку между группой, обработанной вакциной с низким титром, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (P=0,0620). Эти данные служат дополнительным подтверждением эффективности высокой дозы MLV PRRS 94881 при ее введении подсвинкам и свиноматкам.

В группах, обработанных вакциной с низким титром и с высоким титром, средние количества поросят на помет, у которых были выявлены клинические признаки заболевания (балл клинического обследования > 0) по меньшей мере в один из дней в период со дня DOF+1 по день DOF +20, составляли 32,5% и 33,4% соответственно. Эти результаты были существенно ниже, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в которой указанные признаки были выявлены в среднем у 91,6% поросят на помет (P<0,0001), что служит дополнительным подтверждением эффективности обоих уровней доз вакцины.

В день DOF 0 между группами не было выявлено статистически значимых различий в среднем весе тела (P>0,2972); при этом в обеих вакцинированных группах средние веса тела в день DOF+20 и величины ADWG в период со дня DOF 0 по день DOF+20 были статистически значимо выше (P<0,0028). И в этом случае также полученные результаты подтверждают эффективность обеих доз MLV PRRS 94881.

Результаты аутопсии подтвердили правильность классификации почти всех плодов на момент опороса. Вследствие очень небольшого количества плодов, которые были зарегистрированы как раздавлен

- 47 035624 ные, в то время как они в действительности были мертворожденными, и как мертворожденные, в то время как в действительности они были раздавлены при опоросе, по сравнению с общим количеством плодов, правильно классифицированных в момент опороса, не вносили изменений в данные о продуктивности подсвинок до осуществления их анализа. Один поросенок, родившийся в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, умер после взятия образцов крови. Поскольку эта ситуация касалась только одного поросенка по сравнению с большим общим количеством поросят в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, то указанного поросенка не исключали из анализа.

Образцы из легких были взяты из 141, 79, 75 и 4 мертвых плодов/поросят из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, групп, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, и группы отрицательного контроля соответственно. По данным с.|ПЦР средние величины вирусной нагрузки в легких составляли 4,68, 4,10, 3,55 и 0,00 log₁₀ GE/мл в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, группах, обработанных вакциной с низким титром, с высоким титром, в группе отрицательного контроля соответственно. Анализа этих данных не проводили, поскольку поросят, доживших до 20-дневного возраста, не подвергали аутопсии, однако эти результаты свидетельствуют о том, что, когда осуществляли контрольное заражение вирулентным PRRSV, то у поросят, рожденных подсвинками, вакцинированными с помощью MLV PRRS 94881, имела место меньшая вирусная нагрузка в легких.

В заключение, следует отметить, что в настоящем исследовании выявлены статистически значимо более высокие проценты живых поросят на помет при опоросе (P<0,0455) и более высокие проценты и количества поросят на помет при отъеме (P<0,0203) в обеих вакцинированных группах по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению. Таким образом, цель исследования была достигнута и результаты настоящего исследования позволили определить величину MID MLV PRRS 94881 для подсвинок, составляющую 1х10^2,43 TCID₅₀/2 мл. Эти результаты были получены через 118 дней после вакцинации, которая, кроме того, обеспечивала продолжительность действия иммунитета (DOI) у подсвинок, составлявшую примерно 4 месяца. На основе анализа вспомогательных данных было установлено, что при использовании высокой дозы MLV PRRS 94881 (1х 10^3,90 TCID50/2 мл) были выявлены более высоким процент и количество здоровых поросят на подсвинку при опоросе (P<0,0211), более низкий процент и количество ослабленных поросят и мумифицированных плодов (P<0,0090), более низкий процент подсвинок с позитивным по данным с.|ПЦР статусом и более низкая вирусная нагрузка у подсвинок после контрольного заражения в дни D125, DOF 0 и DOF+13 (P<0,0155), более низкий процент поросят на подсвинку с позитивным по данным с.|ПЦР статусом и более низкая вирусная нагрузка у поросят в день DOF 0 (P<0,0030), меньший процент поросят на подсвинку, имеющих клинические признаки заболевания (P<0,0001), и более высокий вес тела поросят в день DOF+20 и большая величина ADWG (P<0,0013).

В группе, обработанной вакциной в низкой дозе, были выявлены более высокий процент здоровых поросят на подсвинку при опоросе (P=0,0138), более низкий процент и количество мумифицированных плодов (P<0,0190), более низкий процент подсвинок с позитивным по данным с.|ПЦР статусом и более низкая вирусная нагрузка у подсвинок после контрольного заражения в дни D125, D132, DOF 0 и DOF+13 (P<0,0290), более низкий процент поросят на подсвинку, имеющих позитивный по данным с.|ПЦР статус в день DOF 0 (P=0,0381), более низкий процент поросят на подсвинку, имеющих клинические признаки заболевания (P<0,0001), и больший вес тела поросят в день DOF+20 и большая величина ADWG (P<0,0028).

Пример 7. Оценка начала развития вызываемого MLV PRRS 94881 иммунитета у восприимчивых поросят, которую проводили после контрольного заражения гетерологичным европейским изолятом вируса PRRS через две недели после вакцинации.

Задача настоящего исследования на основе вакцинации-контрольного заражения заключалась в оценке того, имеет ли место начало развития иммунитета (OOI) через две недели после введения вакцины-кандидата на основе изолята 94881, выведенного из европейского вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней, а именно, модифицированного живого вируса (MLV PRRS 94881), восприимчивым поросятам возрастом 14 ± 3 дней. Основной критерий эффективности, выполнение которого должно свидетельствовать о том, что имеет место OOI через 2 недели после вакцинации, заключался в демонстрации того, что имело место статистически значимое различие (p<0,05) между повреждениями легких после контрольного заражения в вакцинированной группе (группа 1) и невакцинированной контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (группа 2). Вспомогательные параметры включали клинические оценки после вакцинации, результаты клинических обследований после контрольного заражения, ректальные температуры, средний суточный прирост массы, оценки антител к вирусу PRRS и уровень виремии в образцах сыворотки и количественные оценки вируса PRRS в образцах, взятых из легких при проведении аутопсии.

Поросят случайным образом включали либо в группу 1 (которую обрабатывали вакциной на основе MLV PRRS 94881, содержащей 1х10^3,82ТСШ₅₀/мл, и подвергали контрольному заражению; n=20), группу 2 (которую обрабатывали плацебо-вакциной и подвергали контрольному заражения; n=20) или группу 3

- 48 035624 (которую обрабатывали плацебо-вакциной и не подвергали контрольному заражению; n=10). Поросят содержали в пластиковых боксах с приподнятыми полами (n=5 животных/бокс). Каждую группу обработки содержали в отдельном помещении для того, чтобы избежать переноса PRRSV механическими путями, включая перенос в аэрозольной форме.

Все животные, включенные в настоящее исследование, участвовали в нем до его завершения. В процессе настоящего исследования не было выявлено никаких нежелательных явлений. В день D24 средние баллы повреждений легких составляли 27,4 и 54,8% в группе вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Средний балл повреждений легких в группе вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней был статистически значимо меньше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0002), поэтому полученные результаты удовлетворяли основному критерию эффективности, т.е. было установлено, что OOI имело место через 2 недели после однократной вакцинации. Было установлено, что в дни D14, D17 и D21 в группе вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней статистически значимо большая пропорция животных имела позитивные титры антител к вирусу PRRS по сравнению с пропорцией животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0012). Средняя величина AUC, характеризующая виремию, в период со дня D17 по день D24 после контрольного заражения была статистически значимо меньше в группе вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (50,72 и 54,61 log₁₀ GE/мл соответственно; p=0,0039). У вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней не было выявлено признаков заторможенности (0%) после осуществления контрольного заражения, в то время как в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, она была выявлена у 45% свиней (p=0,0012). На протяжении фазы исследования после контрольного заражения (дни с SD14 по SD24) приросты массы у вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней были больше, чем у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (0,3 и 0,1 кг соответственно; p=0,0003).

Статистически значимо меньшие повреждения легких, клинические признаки, уровень репликации вируса в крови и легких после контрольного заражения, а также более высокие показатели роста у вакцинированных животных свидетельствуют об эффективности вакцины против вирулентного PRRSV в том случае, когда контрольное заражение осуществляли через 2 недели после вакцинации. Таким образом, эти данные подтверждают, что начало развития иммунитета имело место не позже чем через 2 недели после вакцинации с использованием MLV PRRS 94881.

Задачи/цели исследования

Задача настоящего исследования на основе вакцинации-контрольного заражения заключалась в оценке того, имеет ли место начало развития иммунитета (OOI) через две недели после введения вакцины-кандидата на основе изолята 94881, выведенного из европейского вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней, а именно, модифицированного живого вируса (MLV PRRS 94881), восприимчивым поросятам возрастом 14 ± 3 дней. Основной критерий эффективности, выполнение которого должно свидетельствовать о том, что имеет место OOI через 2 недели после вакцинации, заключался в демонстрации того, что имело место статистически значимое различие (p<0,05) между повреждениями легких после контрольного заражения в вакцинированной группе (группа 1) и невакцинированной контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (группа 2).

Вторичные параметры эффективности, которые анализировали при сравнении вакцинированной группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, включали клинические оценки после вакцинации, результаты серологического анализа на PRRS, оценку уровня PRRS-виремии после контрольного заражения, результаты клинических обследований после контрольного заражения, средний суточный прирост массы (ADWG), ректальные температуры и количественную оценку PRRSV в легких.

Группа отрицательного контроля (группа 3), которую не подвергали ни вакцинации, ни контрольному заражению, была включена в исследование для демонстрации того, что исходное стадо не было заражено PRRSV на протяжении периода испытания и что в течение настоящего опыта биобезопасность не нарушалась.

График событий Таблица 7.1. График событий

День исследования	Даты	Основные события исследования
-8	14 декабря 2009	Отбор животных на основе PRRS-негативного статуса по данным ELISA
-1	21 декабря 2009	Прибытие в VRI; обследование состояния здоровья
с -1 по 12	с 21 декабря 2009 по 03 января 2010 г.	Клинические оценки
0	22 декабря 2009 г.	Измерение веса тела; вакцинирование группы 1 с использованием IVP, вакцинирование групп 2 и 3 с использованием СР
7	29 декабря 2009 г.	Взятие образцов крови
с 13 по 24	с 04 января 2010 г. по 15 января	Клинические обследования и измерение ректальной температуры

- 49 035624

	2010 г.
14	05 января 2010 г.	Измерение веса тела и взятие образцов крови; контрольное заражение групп 1 и 2 гетерологичным изолятом европейского вируса PRRS
с 17 по 21	с 08 января 2010 г. по 12 января 2010 г.	Взятие образцов крови
24	15 января 2010 г.	Умерщвление и осуществление аутопсии свиней после сбора данных и образцов; Балльная оценка патологии легких; взятие образцов ткани легких

План исследования

Таблица 7.2. План исследования

Группа	Количество поросят в день D0	Обработка в день D0 (возраст 14 ± 3 дней)	Контрольное заражение в день D14 дозой 1 мл/ноздрю и введение 1 мл IM PRRSV 205817	Умерщвление и аутопсия в день D24
1	20	1,0 мл IM IVP (1 х 3 82 10 ’ ТСЮ50/мл)	Да	Да
2	20	1,0 мл IM контрольного продукта (СР; продуктплацебо, не содержащий MLV PRRS 94881)	Да	Да
3	10	1,0 мл IM СР	Нет	Да

Критерии для проведения слепого исследования

Исследователь и уполномоченные лица не имели информации о распределенных по группам обработки животных в течение прижизненной фазы исследований. Для гарантии того, что исследование является слепым, рандомизацию и осуществление предписанных обработок с использованием IVP и CP в день D0 осуществлял специалист, который не принимал участие в проведении оценок свиней (т.е. при осуществлении клинических оценок, клинических обследований или проведении аутопсии). Персонал лаборатории BIVI при выполнении поставленных перед ним задач не имел информации о том, каким продуктом производилась обработка каждой свиньи.

Материалы

Исследуемый ветеринарный продукт (IVP) и контрольный продукт (CP)

Таблица 7.3. IVP

Непатентованное название продукта:	Модифицированный живой вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
штамм:	94881
Получение и препаративная форма:	Производственное подразделение BIVI производило MLV PRRS 94881, лот 390-005 (приложение 4) в соответствии с планом производства, код 19S1.U_ и досье EU, часть 2Ь. 3 день 0 на фирме BIVI-Ames осуществляли восстановление/разведение вакцины MLV PRRS 94881, лот 390-005 (приложение 4) с использованием забуференного фосфатом физиологического раствора (ЗФР; лот 809-003, приложение 5) для приготовления IVP, лот № 257-086. Расшифрованные составы препарата IVP представлены в приложении 7 (исходные составы могут быть получены по требованию).
Производитель:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc., 2621 North Belt Highway, Сент-Джозеф, шт. Миссури, 64506, США
Лот №:	N257-086
Срок годности:	Срок годности до 22 декабря 2009 г. для IVP был установлен только для целей настоящего исследования
Условия хранения:	Лиофилизированная вакцина: при 2-8°С Регидратированная/разведенная IVP: при 2-8°С или на льду
Тестирование:	1артию 390-005 тестировали в BIVI-QC согласно проекту плана производства и досье EU, часть 2F. Начало и завершение процедуры вакцинации осуществляли в контакте с персоналом BIVI-Ames. Персонал лаборатории BIVIAmes осуществлял тестирование аликвот IVP до и после вакцинации для определения вирусного титра в соответствии с процедурой титрования PRRSV (приложение 1, дополнение 6).
Результаты тестирования:	Продукт с серийным номером 390-005: получены удовлетворительные результаты (приложение 4). 3 82 IVP, лот N257-086: средний титр 1 χ 10 ’ ТСП)5о/мл (приложение 7).
СохранениеIVP:	1репарат IVP приготавливали для целей настоящего исследования и не сохраняли.

- 50 035624

Таблица 7.4. CP

Непатентованное название продукта:	Плацебо
Препаративная форма:	Производственное подразделение BIVI производило лиофилизированный продукт, представляющий собой плацебо, который содержал инертный материал, включенный в состав серийной вакцины, не содержащей MLV PRRS 94881 (лот N240-191062409, приложение 6). В день D0 на фирме BIVI-Ames осуществляли восстановление/разведение продукта, лот N240-191-062409, с использованием забуференного фосфатом физиологического раствора (ЗФР; лот 809-003, приложение 5) для приготовления СР, лот № 257-085. Расшифрованные составы препарата IVP представлены в приложении 7 (исходные составы могут быть получены по требованию).
Производитель:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc., 621 North Belt Highway Сент-Джозеф, шт. Миссури, 64506, США
Номер лота:	N257-085
Срок годности:	Срок годности до 22 декабря 2009 г. был установлен для СР только для целей исследования.
Условия хранения:	Лиофилизированная вакцина: при 2-8°С регидратированный СР: при 2-8°С или на льду
Тестирование:	СР тестировали в BIVI-QC в отношении соответствия стерильности требованиям ЕФ согласно специальному плану 96 (приложение 1, дополнение 5).
Результаты тестирования:	Установлено, что СР был стерильным (приложение 7).
Сохранение СР:	СР приготавливали только для целей настоящего исследования и не сохраняли.

Материал, применяемый для контрольного заражения Таблица 7.5. Материал, применяемый для контрольного заражения

Название/номер изолята

Изолят 205817 вируса PRRS

Место и дата выделения, включая клинические симптомы

4золят 205817 европейского вируса PRRS был выведен из изолята 190136, первоначально полученного из ткани легкого новорожденного поросенка на ферме, где были выявлены типичные касающиеся )епродуктивной способности признаки PRRS (выкидыши у свиноматок и слабость новорожденных поросят) во время вспышки заболевания, имевшей место в Нижней Саксонии, Германия, в апреле 2004 г. Штатные ветеринарные врачи передали образцы в лабораторию bio Screen (образец был получен 21 апреля 2004 г.) для диагностического тестирования. Ззолят № 190136 размножали непосредственно на клетках линии АКМА104 и получали чистую маточную культуру штамма для контрольного заражения с целью применения для будущих клинических исследований в BIVI. Чистую культуру изолята 190136 использовали для инокуляции свиней с целью оценки ее способности воспроизводить респираторное заболевание со специфическими для PRRS признаками в условиях контролируемого лабораторного эксперимента. У подвергнутых контрольному заражению животных проявлялся респираторный дистресссиндром, и при гистопатологическом исследовании было выявлено наличие интерстициальной пневмонии. Вирус PRRS был успешно повторно выделен из областей повреждения легкого и изолят получил обозначение 205817. Изолят 205817 размножали непосредственно на

	клетках линии МА104 и получали чистую маточную культуру штамма для контрольного заражения с целью применения для будущих клинических исследований в BIVI.
Препаративная форма:	Вирус для контрольного заражения подвергали оттаиванию и разводили средой МЕМ (минимальная поддерживающая среда) до получения заданного титра, составляющего примерно 1 *х 10 TCID50/3 мл в день D14. Приготавливали материал для контрольного заражения в достаточном объеме. Из материала для контрольного заражения отбирали две аликвоты.
Номер лота:	Ν257-093
Производитель:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. - США
Условия хранения	Нерасфасованный материал для контрольного заражения хранили при -70 £ 10°С. После приготовления разведенный материал для контрольного заражения хранили на льду до его введения животным.
Тестирование:	Начало и завершение процедуры контрольного заражения осуществляли в контакте с персоналом BIVI-Ames. Персонал лаборатории BIVI-Ames осуществлял тестирование аликвот до и после контрольного заражения для определения титра вируса согласно процедуре титрования PRRSV
Результаты тестирования:	Средняя величина титра в материале для контрольного заражения 4 71 составляла 1 * 10 ’ TCID50 на дозу 3 мл
Путь введения	1,0 мл/ноздрю и 1,0 мл IM в левую область шеи (введение осуществляли всем свиньям в группах 1 и 2 в день D14).
Сохранение материала для контрольного заражения:	Материал для контрольного заражения приготавливали только для целей настоящего исследования и его не сохраняли.

- 51 035624

Обработки

Подтверждение дозирования.

IVP вводили в дозе объемом 1,0 мл отобранным для этой цели свиньям для оценки OOI MLV PRRS 94881 через 2 недели после вакцинации. CP вводили в дозе 1,0 мл животным в группах 2 и 3 в качестве вакцины-плацебо.

Схема введения доз.

Специалист, не участвовавший в сборе результатов исследования, вводил IVP или CP отобранной для этого свинье в правую область шеи IM в день D0 с использованием стерильного 3,0 мл шприца с разъемом типа Луер-Лок и стерильной иглы 20g х 1 дюйм (2,54 см) или 18g х 3/4 дюйма (1,91 см). Схема введения доз представлена ниже в табл. 7.6.

Таблица 7.6. Схема введения доз

Группа	Количество животных	Обработка	Доза/путь введения	День исследования
1	20	IVP	1,0 мл, IM	D0
2	20	СР	1,0 мл, IM	DO
3	10	СР	1,0 мл, IM	DO

Информация о животных Подробное описание животных, участвовавших в исследовании Таблица 7.7 Информация о животных

Источник:	Ферма Wilson Prairie View N5627 Highway DD Берлингтон, шт. Висконсин, 53105 США
Количество поросят:	50
Дата прибытия:	Свиньи прибыли в производственное помещение фирмы Veterinary Resources, Inc. (VRI), Кембридж, 21 декабря 2009 г. (день D-1).
Обработка в момент прибытия:	После прибытия 50 свиньям, отобранным для исследования, вводили IM в правое бедро EXCEDE® в указанной на этикетке дозе.
Идентификация:	У каждого животного на ухе имелась бирка с указанием индивидуального номера
Вид	Свинья
Порода:	Товарная порода
Пол:	Смесь животных (самки и кастрированные самцы)
Возрастной диапазон:	Возраст от 11 до 17 дней в день D0
Диапазон веса тела:	От 3,2 до 5,5 кг в день D0
Владелец подопытных животных:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc.
Физиологическое состояние:	В день D-1 Исследователь проводил обследование свиней, отобранных для участия в исследовании, было установлено, что они имели хорошее состояние здоровья и упитанность. Результаты обследования были зарегистрированы в регистрационной форме для результатов обследования состояния здоровья животных.
Распределение свиней по группам	Группа 1 (п=20): 55, 56, 60, 72, 75, 76, 77, 83, 87, 91, 99, 102, 116, 117, 124, 141, 142, 144, 156 и 162	Группа 2 (п=20): 57, 61, 62, 68, 78, 81, 86, 89, 97, ПО, 129, 132, 135, 150, 152, 154, 160, 165, 167 и 168	Группа 3 (п=10): 51, 69, 80, 85, 104, 105, 128, 131, 133 и 155

Критерии включения/исключения

Все поросята, участвующие в настоящем исследовании, имели негативный PRRS-статус по данным ELISA, и обследование показало, что они были здоровы в момент вакцинации.

Критерии исключения после включения в исследование.

В период проведения исследования ни одна свинья не была исключена из опыта.

Уход за животными и их содержание Содержание животных

В течение всего периода исследования поросят содержали на фирме Veterinary Resources, Inc. (VRI), Кембридж, шт. Айова. Группы 1, 2 и 3 содержались в одинаковых, но отдельных помещениях для обеспечения биобезопасности. Поросят содержали в каждом помещении в боксах, рассчитанных на несколько животных (по 5 поросят/бокс). Группу 1 содержали в 4 боксах в помещении 5, группу 2 содержали в 4 боксах в помещении 6, а группу 3 содержали в 2 боксах в помещении 4. Боксы представляли собой пластиковые поддоны, приподнятые на стойках, с пластиковым щелевым полом. В каждом боксе имелись кормушка с 6 отверстиями и ниппельная поилка. Все изолированные помещения имели одинаковую конструкцию, и они все удовлетворяли требованиям уровня 2 опасности для живых организмов (BL2), имели систему очистки воздуха с помощью HEPA-фильтров, механическую вентиляцию и регулируемую термостатом систему контроля температуры.

При проведении настоящего исследования было необходимо изолировать группу обработки, по

- 52 035624 скольку в научном сообществе хорошо известно, что PRRSV легко распространяется от свиньи к свинье посредством различных механизмов, включая перенос в аэрозольной форме. Это относится и к авирулентным живым вакцинам против PRRS, поскольку указанные биологические продукты включают ослабленные вирусные частицы, которые имитируют характеристики вирулентного вируса PRRS дикого типа, не обладая способностью вызывать заболевание. Применяли соответствующие методы для гарантии поддержания биобезопасности и для того, чтобы вакцинированные животные не могли случайным образом заразиться PRRSV от невакцинированных животных из группы отрицательного контроля. Персоналом исследовательского центра были приняты соответствующие меры для обеспечения требуемой чистоты и уровня дезинфекции каждого помещения перед его использованием в настоящем исследовании.

В каждом помещении в здании имелись вентиляторы и нагреватели для того, чтобы обеспечивать необходимую циркуляцию воздуха и подогрев. Каждое помещение имело отдельную, но идентичную систему вентиляции, так что не происходило обмена воздухом между помещениями.

Твердый корм хранили в мешках в условиях, обеспечивающих отсутствие паразитов. Животные имели свободный доступ к воде. Поросята имели свободный доступ к поступающему в продажу корму (Lean Metrics Infant, фирма Purina Mills, Сент-Луис, шт. Миссури), дополненному лекарственными средствами тиамулином (35 г/тонну) и хлортетрациклином (400 г/тонну), соответствующему их размеру, возрасту и состоянию, согласно принятой в регионе животноводческой практике.

По мнению Исследователя перед началом опыта подсвинки имели хорошее состояние здоровья и упитанность.

В процессе исследования у некоторых животных были выявлены небольшое ухудшение состояния тела, появление грубого волосяного покрова, опухшие суставы и хромота различной степени. По мнению Исследователя все эти явления представляли собой неспецифические состояния (состояния неясной этиологии), которые обычно встречаются в группах свиней при их стойловом содержании. У некоторых свиней после контрольного заражения были выявлены кашель, чихание, учащенное дыхание, одышка и заторможенность от слабой до средней степени, и их рассматривали как типичные клинические признаки, ассоциированные с пневмонией, хотя и неясной этиологии. По решению Исследователя при проведении настоящего опыта ни для одного из животных не требовалось проводить сопутствующие обработки.

Всех свиней, отобранных для настоящего исследования, после умерщвления и осуществления аутопсии ликвидировали посредством промышленной кремации в день D24. Никаких пищевых продуктов от животных, участвовавших в настоящем исследовании, не поступало в цепь питания человека.

Оценка эффективности

Для оценки того, имеет ли место OOI, вызываемое MLV PRRS 94881, через 2 недели после вакцинации, животных в группах 1 и 2 подвергали в день D14 контрольному заражению и оценивали повреждения легких после контрольного заражения. Считалось, что имело место OOI через 2 недели после вакцинации, если в группе 1 (обработанной минимальной иммунизирующей дозой MLV PRRS 94881) после контрольного заражения был выявлен статистически значимо (p<0,05) более низкий уровень патологии легких по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (группа 2).

Вспомогательные параметры эффективности, которые анализировали при сравнении вакцинированной группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, включали клинические оценки после вакцинации, результаты клинических обследований после контрольного заражения, ректальные температуры, вес тела и средний суточный прирост массы (ADWG), оценки уровней антител к вирусу PRRS и виремии в образцах сыворотки и количественную оценку вируса PRRS в образцах, взятых из легких при проведении аутопсии.

Группа отрицательного контроля (группа 3), которую не подвергали контрольному заражению, была включена в исследование для демонстрации того, что исходное стадо не было заражено вирусом PRRS и что на протяжении исследования поддерживалась биобезопасность.

Критерии валидности исследования

Необходимо, чтобы все образцы сыворотки, взятые до поставки животных и в день D0, имели негативный статус в отношении антител к вирусу PRRS.

Для того чтобы исследование считалось валидным, необходимо, чтобы образцы сыворотки, взятые у животных из групп 2 и 3 в период вплоть до дня контрольного заражения и у животных из группы 3 в период вплоть до завершения исследования, не содержали антител к вирусу PRRS.

Основной выходной параметр.

Основной переменной для статистической оценки эффективности являлись общие баллы повреждений легких, полученные в день D24 исследования.

Общие баллы повреждений легких.

В день 24 после осуществления сбора и регистрации данных и образцов всех участвовавших в исследовании свиней умерщвляли в соответствии с VRI SOP PRC 1027 (приложение 1, дополнение 8). Аутопсию каждой свиньи проводили согласно VRI SOP PRC 1028. Уполномоченное лицо проводило вскрытие грудной полости и изъятие сердца и легких. Исследователь проводил обследование каждого набора легких, описывал любую выявленную макроскопическую патологию и определял % патологии

- 53 035624 для каждой доли легких. Результаты обследований и полученные данные регистрировали в регистрационной форме отчета об аутопсии. Для каждой свиньи определяли общий балл повреждений легких с использованием ЕФ-формулы.

Вспомогательные параметры.

Другие параметры, которые анализировали при сравнении группы 1 и группы 2, включали клинические оценки после вакцинации, результаты серологического анализа на PRRS, оценку уровня виремии после вакцинации, результаты клинических обследований после контрольного заражения, величины ADWG, ректальные температуры и количественную оценку вируса в легких после контрольного заражения. Эти параметры анализировали в качестве вспомогательных параметров и их не рассматривали в качестве основных параметров, позволяющих судить о достижении цели исследования.

Клинические оценки.

Исследователь или уполномоченное лицо обследовали всех свиней в дни, указанные в табл. 7,1, для получения клинических оценок после вакцинации. Результаты обследования регистрировались в регистрационной форме для клинических обследований.

Серологический анализ на PRRS.

Осуществляли сбор образцов венозной цельной крови в дни, указанные в табл. 3. В целом, процедура заключалась в следующем: у каждого поросенка брали примерно по 2-5 мл крови в пробирку соответствующего размера для разделения сыворотки (SST). Собранные образцы регистрировали в регистрационной форме для сбора образцов. Находящейся в SST крови давали свернуться при комнатной температуре. Образцы крови передавали в BIVI-Ames в день сбора и заполняли регистрационную форму для поставки образцов. Образцы крови центрифугировали в BIVI-Ames, сыворотку собирали, разделяли и переносили в соответствующие пробирки. Каждую пробирку снабжали меткой с указанием ID-номера поросенка, номера исследования, даты сбора, для исследования и типа образца. В BIVI-Ames один набор образцов сыворотки хранили при 2-8°С, а другой набор образцов сыворотки помещали на хранение при 70 ± 10°С.

Образцы сыворотки, собранные в дни 0, 7, 14, 17, 21 и 24, которые хранили при 2-8°С, анализировали в BIVI-Ames на антитела к вирусу PRRS. Результаты классифицировали как негативные (по данным ELISA отношение S/P < 0,4) или позитивные (по данным ELISA отношение S/P > 0,4).

PRRS-виремия

Другой набор о.бразцов сыворотки, собранных в дни 0, 7, 14, 17, 21 и 24, хранили при -70 ± 10°С в BIVI-Ames до завершения прижизненной фазы исследования.

Заполненную регистрационную форму для поставки образцов прилагали к передаваемым образцам. На фирме bioScreen проводили анализ образцов сыворотки методом qПЦР на присутствие РНК PRRSV. Результаты выражали в виде количества геномных эквивалентов/мл (log GE/мл).

Клинические обследования после контрольного заражения

Поросят обследовали в отношении клинических признаков заболевания в дни, указанные в табл. 7.1. Обследование проводил Исследователь или уполномоченное лицо, результаты регистрировали в регистрационной форме для клинических обследований. Поросят обследовали каждый день в отношении дыхания, поведения и кашля с использованием балльной системы клинических оценок, представленной ниже в табл. 7.8.

Таблица 7.8. Балльная система оценки результатов клинических обследований

Дыхание	Поведение	Кашель
0 - нормальное дыхание 1 - затрудненное дыхание/учащенное дыхание 2 - одышка 3 - смерть	0 - нормальное 1 - заторможенность от слабой до умеренной 2 - серьезная заторможенность или лежачее положение 3 - смерть	0 - отсутствует 1 - мягкий или интермиттирующий кашель 2 - грубый или серьезный, рецидивирующий кашель 3 - смерть

Средний суточный прирост массы (ADWG).

Измерения веса тела каждого животного проводили в дни, указанные в табл. 3. Исследователь или уполномоченное лицо взвешивали каждую свинью на калиброванных весах. Результаты измерений в кг регистрировали в регистрационной форме для веса тела. Определяли средний суточный прирост массы в периоды со дня D0 по день D14 и со дня D14 по день D24.

Ректальные температуры.

Измерение ректальных температур проводил Исследователь или уполномоченное лицо в дни, указанные в табл. 6.1. Ректальные температуры регистрировали в °С в регистрационной форме для клинических обследований.

Количественная оценка вируса PRRS в ткани легких.

Из каждого набора легких сохраняли по два образца из левой и правой передних долей, левой и правой сердечных долей, левой и правой диафрагмальных долей и промежуточной доли. Каждый образец, взятый из легкого, имел размер примерно 1 дюйм (2,54 см) х 1 дюйм (2,54 см). Для одного набора образцов легкого объединяли все три образца, взятые с левой стороны, и помещали в один контейнер; в то время как все три образца, взятые с правой стороны, и образец, взятый из промежуточной доли, объе- 54 035624 диняли и помещали в другой контейнер. Каждый контейнер заполняли 10%-ным раствором формалина, взятым в достаточном количестве. Для другого набора образцов легких, все три образца, взятых с левой стороны легких, объединяли и помещали в один Whirlpak®; в то время как все три образца, взятые с правой стороны, и образец промежуточной доли легких объединяли и помещали в другой Whirlpak®. Все контейнеры и пакеты Whirlpak® снабжали соответствующей меткой, на которой были указаны номер животного, номер исследования, дата взятия образца, день исследования, тип образца и то, с какой стороны, с левой или с правой, был взят образец. Образцы легких, которые находились в пакетах Whirlpaks®, хранили на сухом льду до транспортировки в BIVI-Ames, в то время как образцы, находящиеся в формалине, хранили при комнатной температуре. Собранные образцы регистрировали в регистрационной форме для отчета об аутопсии. Образцы ткани легкого, зафиксированные в формалине, и образцы ткани легкого, находящиеся в пакетах Whirlpak®, передавали в BIVI-Ames. К каждой поставляемой партии прилагали заполненную регистрационную форму для поставки образцов.

Заполненная регистрационная форма для поставки образцов прилагалась к каждой поставляемой партии. На фирме bioScreen образцы, взятые из легкого, анализировали на присутствие РНК PRRSV методом qПЦР (приложение 1, дополнение 7). Ткани, взятые из левого легкого, гомогенизировали и анализировали. Ткани, взятые из правого легкого и промежуточной доли легкого, гомогенизировали и анализировали. Результаты регистрировали в виде количества геномных эквивалентов (log GE/мл) для образцов, взятых из левого и правого легкого.

Нежелательные явления.

При проведении настоящего исследования не было выявлено никаких нежелательных явлений. Статистические методы

Экспериментальная единица.

В процессе настоящего исследования группы обработки содержали в отдельных помещениях для того, чтобы избежать переноса PRRSV животным в не подвергавшимся вакцинации группах. Таким образом, помещение представляло собой экспериментальную единицу. Однако для целей рассматриваемого анализа, возможную нестрогость вследствие смешения (объединения) эффектов, обусловленных помещением и обработкой не учитывали, и поросенка рассматривали как экспериментальную единицу.

Рандомизация.

Пятьдесят (50) поросят распределяли по блокам на основе их веса (n=5 поросят/блок). Каждой свинье присваивали случайный номер с использованием функции генерирования случайных номеров программы Excel. В каждом блоке с определенным весом свиней ранжировали в порядке возрастания численных величин приписанных им случайных номеров. Затем свиней распределяли по группам обработки в соответствии с указанным порядком расположения номеров: 2 животных с наименьшими случайным образом выбранными номерами включали в группу 1, 2 животных со следующими номерами включали в группу 2, а животное с наибольшим номером включали в группу 3. Каждая из групп 1 и 2 состояла из 20 свиней, а группа 3 состояла из 10 свиней.

Анализ.

Статистический анализ и обобщение данных проводил д-р сельскохозяйственных наук Martin Vanselow, Biometrie & Statistik, Zum Siemenshop 21, 30539, Ганновер, Германия, +49(0) 511 606 777 650, m.vanselowat-online.de.

Данные анализировали в предположении полностью случайной структуры плана эксперимента. Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения SAS, выпуск 8.2 (SAS, 2001, Кэри, шт. Северная Каролина, США: SAS Institute Inc.). Все анализы различий проводили на основе двусторонних критериев при α = 5%.

Общие баллы повреждений легких.

Общий балл повреждений легких в день осуществления аутопсии (D24) оценивали в виде процента пораженной части легкого, который рассчитывали согласно весовой формуле, рекомендованной в проекте монографии о вакцине (инактивированной) против энзоотической пневмонии свиней. В этой формуле учитывается относительный весовой коэффициент для каждой из семи долей легкого. Установленный в результате обследования процент площади доли легких, имеющей типичные повреждения, умножали на соответствующий коэффициент для доли легкого, получая общий взвешенный балл повреждений легкого. Коэффициенты для соответствующих долей легкого представлены в табл. 7.9.

Таблица 7.9. Коэффициенты для расчета баллов повреждений легких

Доля легких	Коэффициент
Левая передняя	0,05
Левая сердечная	0,06
Левая диафрагмальная	0,29
Правая передняя	0,11
Сердечная	0,10
Правая диафрагмальная	0,34
Правая добавочная/промежуточная	0,05

- 55 035624

Сравнение групп обработки для выявления различий осуществляли с использованием критерия

Уилкоксона-Манна-Уитни.

Клинические оценки после вакцинации.

Создавали таблицы частот встречаемости животных, для которых был получен по меньшей мере один позитивный результат в период между днем D1 и днем D12. Различия между группами обработки анализировали на основе точного критерия Фишера.

Серологический анализ на PRRS.

Создавали таблицы частот встречаемости позитивных результатов ELISA. Различия между группами обработки анализировали на основе точного критерия Фишера.

PRRS-виремия.

Данные о виремии оценивали по отдельности в каждый день исследования. Кроме того, анализировали для каждого индивидуального случая площади под кривыми вирусной нагрузки за период со дня D14 по день D24 (AUC D14-D24) и за период со дня D17 по день D24 (AUC D17-D24).

Для сравнений групп обработки, которые проводили на основе критерия Уилкоксона-Манна-Уитни, использовали данные, полученные с помощью количественной ПЦР (PRRS-вирусная нагрузка [log₁₀ GE/мл]). Перед осуществлением расчета аналитический результат не обнаружено заменяли величиной log10 GE/мл, равной 0,0, а результат позитивный заменяли величиной 3,0. Различия между группами обработки анализировали с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Клинические обследования после контрольного заражения.

Создавали таблицы частот встречаемости животных, для которых в период со дня D15 по день D24 был получен по меньшей мере один позитивный результат. Различия между группами обработки анализировали на основе точного критерия Фишера.

Для статистической оценки использовали максимальные величины баллов и средние величины баллов оценки дыхания, поведения, кашля и всех трех параметров вместе (суммарные) в пересчете на одно животное, полученные в период со дня D15 по день D24. Различия между группами обработки анализировали с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Вес тела и средний суточный прирост массы.

Средние суточные приросты массы для индивидуального животного рассчитывали для периодов времени со дня D0 по день D14 и со дня D14 по день D24. Для каждого дня исследования и для каждого периода времени рассчитывали характеристики описательной статистики. Различия между группами анализировали с использованием дисперсионного анализа и последующего применения t-критериев. С помощью дисперсионного анализа рассчитывали среднеквадратичные значения для групп и различия между среднеквадратичными значениями с 95%-ными доверительными интервалами.

Ректальные температуры.

Различия в исходных величинах температуры между группами обработки анализировали с использованием дисперсионного анализа и последующего применения t-критериев. С помощью дисперсионного анализа рассчитывали среднеквадратичные значения для групп и различия между среднеквадратичными значениями с 95%-ными доверительными интервалами.

Количественная оценка вируса PRRS в тканях легких.

Результаты, полученные с помощью количественной ПЦР (PRRS-вирусная нагрузка [log₁₀ GE/мл]) для образцов ткани легкого, собранных в день D24, использовали для сравнений групп обработки с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Для оценки использовали средние значения (log₁₀ GE/мл) результатов, полученных с помощью ql IIЦР, для левого и правого легкого. Перед осуществлением расчета аналитический результат не обнаружено заменяли величиной log₁₀ GE/мл, равной 0,0, а результат позитивный заменяли величиной 3,0.

Создавали таблицы частот встречаемости позитивных результатов ql П ЦР. Различия между группами обработки анализировали на основе точного критерия Фишера.

Результаты

Общие баллы повреждений легких.

Обобщение общих баллов повреждений легких в группах и ассоциированное p-значение представлены ниже в табл. 7.10.

Таблица 7.10. Общие баллы повреждений легких (%)

1 Группа	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Среднее значение	р-значение
1	20	0,06	59,30	27,550	12,270	40,600	29,515	27,368	0,0002
2	20	13,86	91,60	55,200	47,300	66,500	21,850	54,841
3	10	0,00	0,06	0,000	0,000	0,000	0,000	0,006	NI

1группа 1 -группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению. NI - не включали в статистический анализ.

- 56 035624

Средние величины общих баллов повреждений легких у поросят в день D24 составляли 27,368% и

54,841% в группе, вакцинированной MLV PRRS 94881, и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно.

Балл повреждений у обработанных вакциной против PRRS свиней был статистически значимо ниже, чем средний балл повреждений у животных из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0002).

PRRS-виремия.

Обобщение результатов измерений с помощью qПЦР уровней РНК PRRSV в сыворотке представлены ниже в табл. 7.11.

Таблица 7.11. Уровни РНК PRRSV, обнаруженные в сыворотке с помощью дПЦР (log₁₀ GE/мл) в указанные дни

День	Группа 1	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Среднее значение	р- значение
7	1	20	0,00	5,34	3,00	3,00	3,79	0,82	3,17	<0,0001
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	10	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
14	1	20	0,00	4,29	3,32	3,00	3,77	0,84	3,30	<0,0001
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	10	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
17	1	20	5,54	8,07	6,72	6,47	7,08	0,80	6,78	<0,0001
2	20	6,44	9,02	8,18	7,47	8,47	1,09	8,00
3	10	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
21	1	20	6,18	8,73	7,38	7,13	8,08	0,98	7,51	0,0565
2	20	7,22	8,86	7,87	7,62	8,11	0,57	7,88
3	10	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
24	1	20	5,82	8,54	7,15	6,73	7,84	1,16	7,26	0,6251
2	20	6,53	8,29	7,27	6,97	7,60	0,67	7,34
3	10	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
AUC 14-24	1	20	56,95	78,02	65,10	60,39	70,05	9,76	65,84	0,4945
2	20	58,74	74,30	67,02	64,38	68,24	4,83	66,61
3	10	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
AUC 17-24	1	20	42,98	59,51	49,52	47,46	54,30	7,14	50,72	0,0039
2	20	49,08	60,99	54,35	52,93	55,38	3,63	54,61
3	10	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению. NI - не включали в статистический анализ. AUC - площадь под кривой; GE/мл в день.

В день D0 РНК PRRSV не была выявлена в сыворотке ни у одного поросенка. Средние значения у вакцинированных с помощью MLV PRRS 94881 свиней составляли 3,17 и 3,30 log₁₀ GE/мл в день D7 и день D14 соответственно. Указанные величины были статистически значимо выше, чем у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в оба указанных дня (p<0,0001), поскольку в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено присутствия РНК PRRSV вплоть до дня D17. В этот день средние величины составляли 6,78 и 8,00 log₁₀ GE/мл у поросят, вакцинированных MLV PRRS 94881, и у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. В день D17 указанная величина у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, была статистически значимо выше, чем у поросят, вакцинированных MLV PRRS 94881 (p<0,0001). Средние величины у поросят, вакцинированных MLV PRRS 94881, в день D21 и день D24 составляли 7,51 и 7,26 log₁₀ GE/мл соответственно, по сравнению с величинами 7,88 и 7,34 log₁₀ GE/мл у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, измеренными в эти же дни. Ни в день D21, ни в день 24 не было выявлено статистически значимых различий между вакцинированными MLV PRRS 94881 свиньями (p>0,0565). В течение периода исследования ни у одной свиньи в группе отрицательного контроля не было выявлено присутствия РНК PRRSV в сыворотке.

Не было выявлено различий между величинами AUC 14-24 для вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней и для свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (65,84 и 66,61 соответственно; p=0,4945). Величина AUC в период со дня D17 по день D24 для свиней, вакцинированных MLV PRRS 94881, была статистически значимо меньше, чем для свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (50,72 и 54,61 соответственно; p=0,0039).

Количественная оценка вируса PRRS в тканях легкого.

- 57 035624

Результаты оценки PRRSV с помощью ql IIЦР в индивидуальных образцах тканей легкого, собранных при осуществлении аутопсии в день D24, представлены в дополнении 1, табл. 30. Обобщение данных об уровнях РНК PRRSV, выявленных в тканях легкого с помощью цПЦР, представлено ниже в табл. 7.12, а обобщение данных о частоте встречаемости животных, для которых были получены позитивные результаты анализа методом цПЦР образцов, взятых при осуществлении аутопсии, представлено ниже в табл. 7.13.

Таблица 7.12. Результаты выделения вируса в легких методом цПЦР (средние значения log₁₀ GE/мл) при осуществлении аутопсии (D24)

1 Группа	N	Мин.	Макс.	Медиана	95% CI	Qдиапазон	Среднее значение	р-значение
1	20	6,63	8,26	7,46	7,07	7,86	0,84	7,47	0,0101
2	20	6,55	8,67	7,99	7,69	8,14	0,54	7,88
3	10	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению. NA - не применимо вследствие отсутствия вариабельности. NI - не включали в статистический анализ.

Таблица 7.13. Частота встречаемости животных, для которых получены позитивные результаты в отношении присутствия РНК PRRSV при анализе методом цПЦР образцов ткани легкого, взятых при осуществлении аутопсии (в день D24)

День	Группа	N	%	95 % CI	Всего	Р
24	1	20	100	83,2	100,0	20	NA
2	20	100	83,2	100,0	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению. NA - не применимо вследствие отсутствия вариабельности. NI - не включали в статистический анализ.

РНК PRRSV была выявлена в тканях легкого у всех поросят как в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе, так и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению. Между этими группами не было выявлено различий. РНК PRRSV не была выявлена в тканях легкого ни у одного поросенка из группы отрицательного контроля.

Клинические обследования после контрольного заражения

Частота встречаемости поросят, для которых в период после осуществления контрольного заражения (D15-D24) при клиническом обследовании была получена по меньшей мере одна позитивная оценка, представлена ниже в табл. 7.14.

Таблица 7.14. Частота встречаемости поросят, для которых после осуществления контрольного заражения (D15-D24) был получен позитивный балл клинического обследования

Параметр	1 Группа	Количество животных с позитивной оценкой	% животных с позитивной оценкой	95% CI	Всего	р-значение
Дыхание	1	2	10	1,2	31,7	20	0,2351
2	6	30	П,9	54,3	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI
Поведение	1	0	0	0,0	16,8	20	0,0012
2	9	45	23,1	68,5	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI
Кашель	1	6	30	П,9	54,3	20	0,2003
2	11	55	31,5	76,9	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI
Суммарный показатель	1	6	30	П,9	54,3	20	0,0562
2	13	65	40,8	84,6	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению. NI - не включали в статистический анализ.

Аномальное дыхание было выявлено у животных как в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе

- 58 035624 (10%), так и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (30%), однако различие между этими результатами не было статистически значимым (p=0,2351).

Аномальное поведение было выявлено только у животных из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражения (45%), но не у животных из вакцинированной MLV PRRS 94881 группы (0%). Количество случаев аномального поведения в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе было статистически значимо меньше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0012).

Кашель был выявлен у животных как в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе (30%), так и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (55%). Различие между этими результатами не было статистически значимым (p=0,2003).

Проценты поросят с общими клиническими баллами > 0 составляли 30 и 65% в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Различие между этими результатами не было статистически значимым (p=0,0562).

В группе отрицательного контроля в течение всего периода времени после осуществления контрольного заражения не было выявлено клинических признаков.

Обобщение максимальных баллов клинического обследования в группах в течение периода времени после контрольного заражения (со дня D15 по день D24) представлено ниже в табл. 7.15.

Таблица 7.15. Максимальные клинические баллы после контрольного заражения в период со дня D15 по день D24

Параметр	1 Группа	N	Мин	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Среднее значение	р- значение
Дыхание	1	20	0	1	0	0	0	0	0,1	0,1872
2	20	0	2	0	0	1	1	0,4
3	10	0	0	0	0	0	0	0,0	NI
Поведение	1	20	0	0	0	0	0	0	0,0	0,0012
2	20	0	1	0	0	1	1	0.5
3	10	0	0	0	0	0	0	0,0	NI
Кашель	1	20	0	1	0	0	1	1	0,3	0,1129
2	20	0	2	1	0	1	1	0,7
3	10	0	0	0	0	0	0	0,0	NI
Всего	1	20	0	1	0	0	1	1	0,3	0,0072
2	20	0	4	1	0	2	2	1,2
3	10	0	0	0	0	0	0	0,0	NI

¹группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению. NI - не включали в статистический анализ.

После осуществления контрольного заражения аномальное дыхание было выявлено как в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе, так и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, при этом максимальные баллы в этих группах составляли 1 (затрудненное дыхание/учащенное дыхание) и 2 (одышка) соответственно. Между этими баллами, характеризующими аномальное дыхание, не имелось статистически значимого различия (p=0,1872). Медианная величина максимального балла дыхания была равна 0 для обеих групп.

В период после осуществления контрольного заражения в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе не было выявлено случаев аномального поведения (максимальный балл = 0). В отличие от этого, для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, максимальный балл поведения был равен 1 (заторможенность от слабой до умеренной; p=0,0012), хотя медианный балл для этой группы был равен 0. Максимальный балл для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы был статистически значимо ниже, чем балл для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0012). Медианные величины максимальных баллов поведения для обеих групп были равны 0.

Кашель был выявлен после осуществления контрольного заражения как в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе, так и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению. Максимальные баллы были равны 1 (мягкий или интермиттирующий кашель) и 2 (грубый или серьезный, рецидивирующий кашель), а медианные баллы были равны 0 и 1 для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Между этими группами не имелось статистически значимых различий (p=0,1129). Медианные величины максимальных баллов кашля были равны 0 и 1 для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно.

Максимальные общие баллы были равны 1 и 4, а медианные величины общих баллов были равны 0 и 1 для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному

- 59 035624 заражению, соответственно. Максимальный балл для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы был статистически значимо ниже, чем балл для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0072). Медианные величины общих баллов были равны 0 и 1 для вакцинированной MLV PRRS

94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно.

В группе отрицательного контроля, которую не подвергали контрольному заражению, не было выявлено клинических признаков в период со дня D15 по день D24. Для этой группы максимальный балл для каждого из рассматриваемых параметров был равен 0.

Обобщение средних баллов клинического обследования для групп животных в период после контрольного заражения (со дня D15 по день D24) представлено ниже в табл. 7.16.

Таблица 7.16. Средние баллы клинического обследования после осуществления контрольного заражения в период со дня D15 по день D24

Параметр	Группа	N	Мин.	Макс.	Медиана	95% CI	Q- диапазон	Среднее значение	р-значение
Дыхание	1	20	0,0	0,2	0,00	0,00	0,00	0,00	0,02	0,1394
2	20	0,0	0,6	0,00	0,00	0,10	0,10	0,07
3	10	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
Поведение	1	20	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,0012
2	20	0,0	0,8	0,00	0,00	0,10	0,10	0,12
3	10	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
Кашель	1	20	0,0	0,4	0,00	0,00	0,10	0,10	0,07	0,0835
2	20	0,0	0,7	0,10	0,00	0,30	0,35	0,17
3	10	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	N1
Суммарный показатель	1	20	0,0	0,4	0,00	0,00	0,10	0,15	0,08	0,0103
2	20	0,0	1,4	0,25	0,00	0,40	0,50	0,35
3	10	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению. NI - не включали в статистический анализ.

Общие картины средних баллов клинических обследований и максимальных клинических баллов были сходными, при этом статистически значимые различия между вакцинированной MLV PRRS 94881 группой и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, были выявлены только в среднем балле поведения (p=0,0012) и среднем общем балле (p=0,0103).

Средние баллы дыхания были равны 0,02 и 0,07 для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Средние баллы поведения были равны 0,00 и 0,12 для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и группы контрольного заражения соответственно. Средние баллы кашля были равны 0,07 и 0,17 вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Средние общие баллы были равны 0,08 и 0,35 для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно.

В группе отрицательного контроля, которую не подвергали контрольному заражению, не было выявлено клинических признаков в период исследования со дня D15 по день D24. Для этой группы максимальный балл для каждого из рассматриваемых параметров был равен 0.

Вес тела и средний суточный прирост массы.

Обобщение данных о весе тела животных, полученных в дни D0, D14 и D24, и величинах ADWG в течение периодов со дня D0 по день D14 и со дня D14 по день D24 представлены ниже в табл. 7.17.

Таблица 7.17. Вес тела и средний суточный прирост массы (кг и кг/день)

День(дни)	1 Группа	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	Среднее значение	SD
0	1	20	3,3	5,5	3,95	4,14	0,589
2	20	3,2	5,2	4,05	4,17	0,603
3	10	3,4	5,1	4,00	4,07	0,556
14	1	20	5,6	9,4	7,60	7,64	1,029
2	20	6,0	8,9	7,30	7,39	0,909
3	10	5,5	9,3	6,95	7,22	1,187
24	1	20	7,0	13,9	10,40	10,26	1,693
2	20	6,4	10,9	8,80	8,87	1,328
3	10	6,8	12,9	10,90	10,64	1,807
ADWG 0-14	1	20	0,164	0,343	0,2571	0,2500	0,05254
2	20	0,179	0,307	0,2357	0,2304	0,03939
3	10	0,150	0,307	0,2071	0,2250	0,04906
ADWG	1	20	0,090	0,460	0,2600	0,2620	0,08907
14 - 24	2	20	-0,060	0,290	0,1600	0,1475	0,09060
3	10	0,130	0,440	0,3700	0,3420	0,10130

- 60 035624

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению.

Средний вес тела животных в день D0 составлял 4,1 и 4,2 кг в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. В день D14 средний вес тела животных составлял 7,6 и 7,4 кг в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. В день D24 средний вес тела животных составлял 10,3 и 8,9 кг в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Средние суточные приросты массы (ADWG) в период после вакцинации (со дня D0 по день D14) составляли 0,25 и 0,23 кг/день в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Величины ADWG в период после контрольного заражения (со дня D14 по день D24) составляли 0,26 и 0,15 кг/день в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Величины ADWG в группе отрицательного контроля составляли 0,23 и 0,34 кг/день в течение периодов со дня D0 по день D14 и со дня D14 по день D24 соответственно.

В группе отрицательного контроля средний вес тела поросят составлял 4,1, 7,2 и 10,6 кг в дни D0, D14 и D28 соответственно.

Обобщение данных о среднеквадратичных величинах и результатов статистического анализа веса тела животных и ADWG для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, представлено ниже в табл. 7.18.

Таблица 7.18. Среднеквадратичные величины веса тела и средних суточных приростов массы (кг)

День(дни)	1 Группа	Среднеквадратичная величина	95%-ный доверительный интервал	р-значение
0	1	4,14	3,865	4,405	0,8743
2	4,17	3,895	4,435
Разница между группами 1 и 2	-0,03	-0,411	0,351
14	1	7,64	7,196	8,074	0,4297
2	7,39	6,951	7,829
Разница между группами 1 и 2	0,25	-0,376	0,866
24	1	10,26	9,566	10,944	0,0063
2	8,87	8,176	9,554
Разница между группами 1 и 2	1,39	0,416	2,364
ADWG 0-14	1	0,2500	0,22898	0,27102	0,1889
2	0,2304	0,20934	0,25138
Разница между группами 1 и 2	0,0196	-0,01008	0,04937
ADWG 14-24	1	0,2620	0,22133	0,30267	0,0003
2	0,1475	0,10683	0,18817
Разница между группами 1 и 2	0,1145	0,05699	0,17201

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению.

В день 0 среднеквадратичные величины веса тела поросят составляли 4,14 и 4,17 кг в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Разница составляла -0,03 кг, это различие не было статистически значимым (p=0,8743). В день D14 среднеквадратичные величины веса тела составляли 7,64 и 7,39 кг в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Разница составляла 0,25 кг, это различие не было статистически значимым (p=0,4297). В день D24 среднеквадратичные величины веса тела составляли 10,26 и 8,87 в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. В этот день разница составляла 1,39 кг и вес в вакцинированной группе был статистически значимо больше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0063).

Среднеквадратичные величины ADWG в период после вакцинации (D0-D14) составляли 0,25 и 0,23 кг/день в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Различие между этими величинами не было статистически значимым (p=0,1889). Среднеквадратичные величины ADWG в период после контрольного заражения (D14-D24) составляли 0,26 и 0,15 в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Величина ADWG в вакцинированной MLV PRRS 94881

- 61 035624 группе была статистически значимо больше, чем величина ADWG в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0003).

Ректальные температуры.

Обобщение данных о ректальных температурах представлено ниже в табл. 7.19 и 7.20. Обобщение среднеквадратичных величин и результатов статистического анализа ректальных температур для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, представлено ниже в табл. 7.21 и 7.22.

Таблица 7.19. Ректальная температура (°С) в период со дня 13 по день 22

День	1 Группа	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	Среднее значение	SD
13	1	20	39,3	40,3	39,80	39,77	0,247
2	20	38.9	40,0	39,35	39,39	0,292
3	10	39,0	39,7	39,15	39,26	0,267
14	1	20	39,4	40,2	39,75	39,76	0,226
2	20	39,0	39,8	39,40	39,37	0,220
3	10	39,1	40,3	39,40	39,51	0,375
15	1	20	39,3	40,4	39,65	39,69	0,258
2	20	39,4	41,1	39,70	39,90	0,538
3	10	39,1	40,3	39,40	39,52	0,371
16	1	20	39,9	41,3	40,80	40,68	0,417
2	20	39,3	40,3	39,75	39,77	0,279
3	10	39,1	39,9	39,45	39,46	0,263
17	1	20	39,2	40,6	39,80	39,89	0,363
2	20	39,4	40,6	39,85	39,90	0,285
3	10	39,2	40,0	39,50	39,53	0,226
18	1	20	39,3	41,0	39,95	39,99	0,492
2	20	39,5	41,2	40,20	40,29	0,472
	3	10	38,9	39,7	39,30	39,30	0,211
19	1	20	39,7	41,6	40,35	40,40	0,464
2	20	39,5	41,1	40,65	40,55	0,451
3	10	39,0	39,6	39,20	39,22	0,199
20	1	20	39,7	41,5	40,50	40,52	0,449
2	20	39,5	41,5	40,65	40,61	0,531
3	10	39,1	40,1	39,40	39,49	0,281
21	1	20	39,6	41,1	40,30	40,22	0,413
2	20	39,4	41,0	40,10	40,12	0,371
3	10	39,2	40,2	39,45	39,59	0,351
22	1	20	39,8	41,0	40,20	40,34	0,391
2	20	39,6	41,2	40,30	40,41	0,437
3	10	39,0	40,0	39,40	39,45	0,276

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению.

Таблица 7.20. Ректальная температура (°С) в период со дня 23 по день 24

День	1 Группа	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	Среднее значение	SD
23	1	20	39,6	41,2	40,25	40,36	0,454
2	20	39,5	41,6	40,60	40,60	0,482
3	10	39,3	40,1	39,70	39,68	0,290
24	1	20	39,8	41,3	40,30	40,39	0,421
2	20	39,7	41,6	40,30	40,50	0,531
3	10	39,1	40,2	39,60	39,66	0,389

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению.

- 62 035624

Таблица 7.21. Среднеквадратичные величины ректальной температуры (°С) в период со дня 13 по день 20

День	1 Группа	Среднеквадратичная величина	95%-ный доверительный интервал	р-значение
13	1	39,77	39,648	39,892	<0,0001
2	39,39	39,268	39,512
Разница между группами 1 и 2	0,38	0,207	0,553
14	1	39,76	39,654	39,856	<0,0001
2	39,37	39,269	39,471
Разница между группами 1 и 2	0,39	0,242	0,528
15	1	39,69	39,494	39,876	0,1241
2	39,90	39,704	40,086
Разница между группами 1 и 2	-0,21	-0,480	0,060
16	1	40,68	40,514	40,836	<0,0001
2	39,77	39,609	39,931
Разница между группами 1 и 2	0,91	0,678	1,132
17	1	39,89	39,737	40,033	0,8852
2	39,90	39,752	40,048
Разница между группами 1 и 2	-0,02	-0,224	0,194
18	1	39,99	39,767	40,203	0,0528
2	40,29	40,072	40,508
Разница между группами 1 и 2	-0,31	-0,614	0,004
19	1	40,40	40,188	40,602	0,3065
2	40,55	40,338	40,752
Разница между группами 1 и 2	-0,15	-0,443	0,143
20	1	40,52	40,293	40,737	0,5659
2	40,61	40,383	40,827
Разница между группами 1 и 2	-0,09	-0,405	0,225

¹группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению.

Таблица 7.22. Среднеквадратичные величины ректальной температуры (°С) в период со дня 21 по день 24

День	1 Группа	Среднеквадратичная величина	95%-ный доверительный интервал	р-значение
21	1	40,22	40,037	40,393	0,4489
2	40,12	39,942	40,298
Разница между группами 1 и 2	0,10	-0,156	0,346
22	1	40,34	40,152	40,528	0,6231
2	40,41	40,217	40,593
Разница между группами 1 и 2	-0,07	-0,331	0,201
23	1	40,36	40,143	40,567	0,1062
2	40,60	40,388	40,812
Разница между группами 1 и 2	-0,25	-0,545	0,055
24	1	40,39	40,168	40,602	0,4526
2	40,50	40,283	40,717
Разница между группами 1 и 2	-0,12	-0,422	0,192

¹группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному зара- 63 035624 жению.

Средние величины и среднеквадратичные величины ректальной температуры у поросят, вакцинированных MLV PRRS 94881, были равны 39,77°С в день, предшествующий дню контрольного заражения, и находились в пределах от 39,69°С (D15) до 40,68°С (D16) после контрольного заражения. Средние величины и среднеквадратичные величины ректальной температуры у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были равны 39,39°С в день, предшествующий дню контрольного заражения, и находились в пределах от 39,77°С (D16) до 40,61°С (D20) после контрольного заражения. Среднеквадратичные величины ректальной температуры у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были статистически значимо ниже, чем у поросят, вакцинированных MLV PRRS 94881, в период до контрольного заражения (дни D13 и D14) и в день D16 после контрольного заражения (p<0,0001). В настоящем исследовании не было выявлено других статистически значимых различий в ректальной температуре у свиней, вакцинированных MLV PRRS 94881, и у животных из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p>0,0528). У животных в группе отрицательного контроля на протяжении исследования средние величины и среднеквадратичные величины ректальной температуры оставались на уровне <39,68°С.

Клиническая оценка после вакцинации

Обобщение данных о проценте поросят, для которых был получен по меньшей мере один позитивный результат при оценке в период со дня D1 по день D12, представлено ниже в табл. 7.23.

Таблица 7.23. Процент поросят, для которых был получен по меньшей мере один позитивный результат при клинической оценке в период со дня D1 по день D12

1 Группа	Количество животных с позитивной оценкой	% животных с позитивной оценкой	95% CI	Всего	р-значение
1	0	0	0,0	16,8	20	1,0000
2	1	5	0,1	24,9	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению; NI - не включали в статистический анализ.

Ни у одного поросенка в группе животных, вакцинированных MLV PRRS 94881, и в группе отрицательного контроля не было выявлено никаких клинических признаков период вакцинации со дня D-1 по день D12. У поросенка 110 в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, было обнаружено воспаление за правой передней ногой, начавшееся в день D9. Между группой поросят, вакцинированных MLV PRRS 94881, и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено статистически значимых различий касательно указанного параметра (p=1,0000).

Серологический анализ на PRRS

Обобщение данных о частоте встречаемости поросят с позитивными титрами антител к вирусу PRRS представлено ниже в табл. 7.24.

Таблица 7.24. Частота встречаемости поросят с позитивными титрами антител к вирусу PRRS в указанные дни

День	Группа1	Количество поросят с позитивным и титрами	% поросят с позитивным и титрами	95% CI	Всего	р-значение
7	1	0	0	0,0	16,8	20	NA
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI
14	1	17	85	62,1	96,8	20	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI
17	1	19	95	75,1	99,9	20	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI
21	1	20	100	83,2	100,0	20	0,0012
2	11	55	31,5	76,9	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI
24	1	20	100	83,2	100,0	20	1,0000
2	19	95	75,1	99,9	20
3	0	0	0,0	30,8	10	NI

1группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881 в дозе MID, подвергнутая контрольному заражению; группа 2 - контрольная группа, обработанная плацебо, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 -контрольная группа, обработанная плацебо, не подвергнутая контрольному заражению. NA - не применимо вследствие отсутствия вариабельности. NI - не включали в статистический

- 64 035624 анализ.

Все поросята во всех группах обработки имели негативный статус в отношении антител к вирусу PRRS в дни D0 и D7. В день D14 у 85% свиней, вакцинированных MLV PRRS 94881, были выявлены позитивные титры антител к вирусу PRRS. Это количество возросло до 95% в день D17, и оно составляло 100% в оба дня D21 и D24. Ни у одной свиньи в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, не были выявлены позитивные титры антител к вирусу PRRS вплоть до дня D21 (через 7 дней после осуществления контрольного заражения), когда у 55% свиней были обнаружены позитивные титры. Это количество возросло до 95% в день D24. В дни D14, D17 и D21 в группе свиней, вакцинированных MLV PRRS 94881, пропорция свиней с позитивными титрами антител к вирусу PRRS была статистически значимо больше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0012). Ни у одной свиньи в группе отрицательного контроля на протяжении всего исследования не были выявлены титры антител к вирусу PRRS.

Обсуждение/выводы

Для достижения цели исследования в план исследования в день D0 были включены три группы: группа, обработанная вакциной с 1 х 10^3,82 TCID₅₀ MLV PRRS 94881 (группа 1); контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению, которой вводили контрольный продукт (группа 2) и группа отрицательного контроля (группа 3), которой также вводили контрольный продукт.

Двадцати (20) здоровым восприимчивым к PRRS и имеющим серонегативный статус поросятам возрастом примерно 14 дней вводили IM 1 мл MLV PRRS 94881. Тридцати (20 поросятам в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и 10 поросятам в группе отрицательного контроля) восприимчивым к PRRS и имеющим серонегативный статус поросятам возрастом примерно 14 дней вводили IM 1 мл контрольного продукта.

Для определения того, имеет ли место начало развития иммунитета через 2 недели после введения MLV PRRS 94881, животных в вакцинированной группе и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, через 14 дней после осуществления вакцинации подвергали контрольному заражению гетерологичным изолятом европейского PRRSV (изолят 205817) и оценивали соответствующее снижение повреждения легких после контрольного заражения.

Валидация исследования (группа отрицательного контроля 3).

Для того чтобы иметь возможность удостовериться в том, что исходные подсвинки не были заражены PRRSV и что в процессе исследования не имел место контакт с попавшим извне PRRSV или перекрестное заражение между группами обработки и контрольными группами, в план исследования была включена группа отрицательного контроля (группа 3). Поросята, входящие в группу отрицательного контроля, на протяжении всего исследования имели негативный PRRSV-статус (по результатам оценки уровня виремии с помощью с.|ПЦР). а также в отношении антител к вирусу PRRS, что являлось валидацией настоящего исследования.

Валидация модели контрольного заражения (контрольная группа 2, подвергнутая контрольному заражению).

Модель контрольного заражения, позволяющая индуцировать требуемое клиническое заболевание PRRS, необходима для адекватной оценки начала развития иммунитета в лабораторных условиях. После заражения изолятом 205817 европейского вируса PRRS согласно ранее описанному методу у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, была выявлена ректальная температура > 40,50°С в дни D19, D20 D23 и D24 (в те же самые дни в группе отрицательного контроля температура была < 39,68°С), средняя величина ADWG в период со дня D14 по день D24 составляла 0,15 кг/день по сравнению со средней величиной ADWG, составлявшей 0,34 кг/день в группе отрицательного контроля, аномальное поведение, кашель и медианная величина балла повреждений легких, составлявшая 55,2% (в группе отрицательного контроля она составляла 0,00%). Эти результаты свидетельствуют о том, что у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, индуцировалось серьезное заболевание со специфическими для PRRS клиническими признаками даже несмотря на то, что титр вируса при осуществлении контрольного заражения был немного ниже заданной дозы, это является валидацией рассматриваемой модели контрольного заражения в качестве адекватного клинического лабораторного инструмента для оценки эффективности вакцины против PRRS и более конкретно для оценки OOI при использовании MLV PRRS 94881.

Определение начала развития иммунитета через две недели после введения MLV PRRS 94881 (группа 1).

Доказательство того, что начало развития иммунитета имеет место через две недели после вакцинации с использованием MLV PRRS 94881, было основано на данных том, что после осуществления контрольного заражения у животных в вакцинированной группе выло выявлено статистически значимо (р < 0,05) меньшие повреждения легких по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению.

Повреждения легких были выбраны в качестве основного параметра для определения OOI через 2 недели, поскольку этот параметр обеспечивает с клинической точки зрения наиболее адекватное и убе- 65 035624 дительное доказательство эффективности при оценке новой вакцины с использованием модели контрольного заражения PRRS свиней респираторным путем. Развитие повреждений легких является одним из характерных признаков респираторного заболевания PRRS у свиней. Повреждения легких часто сопровождаются проявляющимися позднее вторичными признаками заболевания, вызываемого PRRSV, такими как клинические признаки, гипертермия, снижение ADWG и т.д.

У животных в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе после контрольного заражения была выявлена статистически значимо меньшая макроскопическая патология в легких, о чем свидетельствовала медианная величина общего балла повреждений легких, составлявшая 27,6%, по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в которой медианная величина общего балла повреждений легких, составляла 55,2% (p=0,0002). Таким образом, с использованием основного параметра, свидетельствующего о статистически значимо меньших повреждениях легких после контрольного заражения, было установлено, что имеет место OOI через 2 недели после введения MLV PRRS 94881 в дозе 1 х 10^3,82 TCID50 Этот результат был достигнут при использовании вакцины в дозе, немного более низкой, чем минимальная иммунизирующая доза, составляющая 1 х 10^4,5 ТСШ50/дозу.

Уровень виремии после контрольного заражения был выбран в качестве наиболее важного вторичного параметра, поскольку он характеризует уровень репликации и персистентность вируса после его попадания в организм животного-хозяина. Статистически значимое (p<0,05) снижение уровня виремии должно свидетельствовать о том, что вакцина против PRRS индуцирует адекватный иммунитет для ограничения патогенеза PRRSV в организме хозяина. Через 3 дня после контрольного заражения (день D17) в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе было выявлено статистически значимое снижение медианного уровня виремии (по данным с.|ПЦР) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (6,72 GE/мл по сравнению с 8,18 GE/мл; p<0,0001). С целью дополнительной оценки уровня виремии после контрольного заражения рассчитывали величину вирусной нагрузки в течение определенного периода времени после контрольного заражения, который обозначают как площадь под кривой или AUC. Для группы животных, вакцинированных MLV PRRS 94881, медианная величина AUC за период со дня D17 по день D24 составляла 49,52 GE/мл/день; в то время как для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, медианная величина AUC составляла 54,35 GE/мл/день. Медианная величина AUC за период со дня D17 по день D24 для вакцинированной группы была статистически значимо меньше, чем для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0039). Вне зависимости от того, оценивали уровень виремии через 3 дня после контрольного заражения или в течение определенного периода времени после контрольного заражения, вакцина MLV PRRS 94881, введенная за две недели до контрольного заражения вирулентным гетерологичным европейским штаммом вируса PRRS статистически значимо (p<0,05) снижала уровень виремии после осуществления контрольного заражения.

С точки зрения иммунитета, вызываемого вакциной против PRRS, наряду со снижением уровня виремии после контрольного заражения вирусом PRRS большую важность может представлять собой также статистически значимое (p<0,05) уменьшение вирусной нагрузки в ткани легкого. Уменьшение вирусной нагрузки в ткани легкого может быть ассоциировано с уменьшением стабильности, репликации и персистентности вируса в организме хозяина и оно может в свою очередь приводить к снижению передачи PRRSV другим свиньям. В настоящем исследовании было установлено, что по результатам с.|ПЦР медианная величина вирусной нагрузки в тканях легкого у животных в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе через 10 дней после контрольного заражения (D24) составляла 7,46 log₁₀ GE/мл, в то время как в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, указанная медианная величина по данным с.|ПЦР составляла 7,88 log₁₀ GE/мл. Различие между вакцинированной группой и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, было статистически значимым (p=0,0101), что служит дополнительным подтверждением того, что OOI имеет место через 2 недели.

Выраженное снижение серьезности и частоты клинических признаков у поросят после контрольного заражения также подтверждает эффективность вакцины против PRRS и свидетельствует о том, что OOI имело место через 2 недели после вакцинации с использованием MLV PRRS 94881. Ни в одной из групп после контрольного заражения не было выявлено достаточно серьезного и встречающегося с достаточной частотой аномального дыхания, при этом не было выявлено статистически значимых различий между группами в отношении указанных параметров (p>0,1394). В отличие от этого, серьезность и частота встречаемости кашля были примерно одинаковыми в группах, при этом не было выявлено различий между группами в отношении указанных параметров (p>0,0835). Были выявлены различия между группами в серьезности и частоте встречаемости аномального поведения (заторможенность) после контрольного заражения. Аномальное поведение было выявлено по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения у 0 из 20 (0%) и 9 из 20 (45%) поросят в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно (p=0,0012). Аналогично этому, для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы были получены более низкие максимальные аномальные клинические баллы и средние аномальные клинические баллы после контрольного заражения по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0012). При анализе

- 66 035624 максимальных баллов и средних баллов в период со дня D15 по D24 были выявлены статистически значимые различия между группами в общих клинических баллах (сумма баллов дыхания, поведения и кашля). Вследствие того, что на общие баллы влияют баллы аномального поведения, то для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы был получен статистически значимо более низкий максимальный общий балл и более низкий средний общий балл по сравнению с группой контрольного заражения (p<0,0103). Выявленные различия между группами в серьезности и частоте встречаемости аномального поведения служат дополнительным подтверждением того, что OOI имеет место через 2 недели после вакцинации.

Перед осуществлением контрольного заражения в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе имели место немного более высокие средние ректальные температуры по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, в день D13 (39,77°С по сравнению с 39,39°С соответственно; p<0,0001) и в день D14 (39,76°С по сравнению с 39,37°С соответственно; p<0,0001). Хотя перед осуществлением контрольного заражения между группами были выявлены статистически значимые различия (p<0,05), указанные различия не были важны с биологической точки зрения. После контрольного заражения статистически значимое различие (p<0,05) между группами в средних ректальных температурах было выявлено только в один день, а именно, в день D16 (через 2 дня после осуществления контрольного заражения). В день D16 средние ректальные температуры в вакцинированной группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, составляли 40,68°С и 39,77°С соответственно, при этом различие между группами было статистически значимым (p<0,0001). Средняя ректальная температура через 4-5 дней после осуществления контрольного заражения повысилась до уровня, превышающего 40°С, и оставалась на уровне выше 40°С в обеих группах до конца исследования.

Наличие в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, выраженного аномального поведения, виремии, патологии легких и вирусной нагрузки в тканях легких вследствие PRRS обусловило наличие статистически значимых (p<0,05) различий между группами в величинах ADWG после контрольного заражения. В настоящем исследовании для вакцинированной группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, были получены средние величины ADWG в период со дня D14 по день D24, составлявшие 0,3 кг/день и 0,1 кг/день соответственно, при этом различия между группами были статистически значимыми (p=0,0003). Наличие статистически значимого (p<0,05) различия между группами в величинах ADWG после контрольного заражения служит дополнительным подтверждением того, что OOI имеет место через 2 недели после вакцинации.

Проанализированные в настоящем исследовании параметры, полученные после вакцинации.

У поросят после вакцинации в день D0 при проведении клинических оценок не было получено никаких аномальных признаков, связанных с вакцинацией с использованием MLV PRRS 94881, или с контрольным продуктом. У одного поросенка из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, было выявлено воспаление за правой передней ногой, начавшееся в день D9, которое, по-видимому, не было ассоциировано с введением контрольного продукта.

Все поросята в день D0 имели PRRS-негативный статус по данным серологического анализа методом ELISA, это подтверждает то, что все поросята удовлетворяли критерию включения, заключающемуся в том, что они должны иметь PRRS-негативный статус при включении в исследование. У большинства поросят, обработанных MLV PRRS 94881, ко дню D14 произошла PRRS-сероконверсия и все поросята, обработанные вакциной против PRRSV, имели серопозитивный статус через 7 дней после контрольного заражения (D21). В отличие от этого, контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению, сохраняла серонегативный статус в течение 7 дней после контрольного заражения, после чего в этой группе начала происходить сероконверсия. Группа отрицательного контроля сохраняла серонегативный статус в отношении вируса PRRS на протяжении всего периода исследования.

В дни 7 и 14 после вакцинации по данным с.|ПЦР средние величины вирусной нагрузки в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе составляли 3,17 и 3,30 log₁₀ GE/мл соответственно. Эти результаты свидетельствуют о том, что доза MLV PRRS 94881 с титром 1 х 10^3,82 TCID₅₀ в течение 2 недельного периода времени после вакцинации обеспечивала достаточный уровень репликации MLV, который, как правило, требуется для выработки защитного иммунитета уже через две недели после вакцинации. В отличие от этой группы, в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, и группе отрицательного контроля в период со дня D0 по день D14 PRRSV-виремия не была выявлена.

Выводы

Статистически значимо (p<0,05) меньшие повреждения легких, клинические признаки, уровень репликации вируса в крови и легких после контрольного заражения, а также более высокие показатели роста, являются доказательством того, что имело место OOI через 2 недели после вакцинации поросят возрастом примерно 14 дней однократной дозой MLV PRRS 94881 с титром 1 х 10^3,82 ТСГО₅₀/мл.

Пример 8. Оценка продолжительности действия вызываемого MLV PRRS 94881 иммунитета у восприимчивых свиней двухнедельного возраста после контрольного заражения гетерологичным изолятом европейского вируса PRRS через 26 недель после вакцинации.

Цель данного исследования с использованием вакцинации-контрольного заражения заключалась в

- 67 035624 оценке продолжительности действия иммунитета (DOI) через 26 недель после введения вакциныкандидата на основе модифицированного живого вируса, представляющего собой изолят 94881, выведенный из европейского вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (MLV PRRS 94881), серонегативным в отношении вируса PRRS свиньям возрастом 14±3 дней. Основным критерием эффективности, свидетельствующим о том, что имела место DOI, составлявшая 26 недель после вакцинации, являлись статистически значимо (р<0,05) меньшие баллы повреждений легких (макроскопические или выявленные путем гистологического анализа) после контрольного заражения у животных в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе (группа 1) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (группа 2).

В день 0 (D0) 22 свиньям, включенным в группу, предназначенную для обработки вакциной, вводили IM по 1,0 мл MLV PRRS 94881 (1 х 10^4,27 TCID₅₀) IM (группа 1), 22 свиньям, включенным в контрольную группу, подвергнутую контрольному заражению, вводили IM по 1,0 мл контрольного продукта (продукт-плацебо, не содержащий MLV PRRS 94881, группа 2) и 12 свиньям, включенным в группу отрицательного контроля, вводили также по 1,0 мл контрольного продукта IM (группа 3). Животных в группах 1 и 2 подвергали контрольному заражению в день D179 (день после контрольного заражения {DPC} 0) вирулентным штаммом европейского PRRSV и осуществляли мониторинг свиней в течение 10 дней после контрольного заражения, оценивая клинические признаки, средний суточный прирост массы и виремию. В день D189 (DPC 10) свиней подвергали аутопсии и оценивали макроскопические и выявляемые гистологическим путем повреждения легких и вирусную нагрузку в легких.

Медианные величины баллов макроскопических повреждений легких в день D189 (DPC 10) составляли 0,1% и 13,8% у свиней в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно (p<0,0001). Медианные величины баллов повреждений легких, выявляемых гистологическим путем, в день DPC 10 составляли 6,0 и 19,5 у свиней в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно (p<0,0001). У вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней вирусная нагрузка в сыворотке в дни 3, 7 и 10 после контрольного заражения была статистически значимо меньше, чем у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, (p<0,0001). Используемые для анализа виремии после контрольного заражения величины площади под кривой (AUC) в течение периодов времени со дня DPC 0 по день DPC 10 и со дня DPC 3 по день DPC 10 для вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней (15,54 и 8,88 log₁₀ GE/мл в день, соответственно) также были статистически значимо меньше, чем для животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (44,77 и 36,43 log₁₀ GE/мл в день соответственно, p<0,0001). Медианные величины вирусной нагрузки в тканях легких, собранных при осуществлении аутопсии, по данным с.|ПЦР составляли 3,69 и 6,25 log₁₀ GE/мл для вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней и животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно (p<0,0001). Не было выявлено статистически значимых различий в клинических признаках после контрольного заражения (p>0,4878).

Выявленные статистически значимо (p<0,05) меньшие макроскопические и выявляемые гистологическим путем повреждения легких, меньшая вирусная нагрузка в тканях легких, собранных при осуществлении аутопсии, и меньший уровень виремии после контрольного заражения у вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней по сравнению с животными в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, подтверждают эффективность вакцины против вирулентного PRRSV в случае контрольного заражения через 26 недель после вакцинации. Результаты данного исследования свидетельствуют о том, что иммунитет сохранялся в течение 26 недель после вакцинации у свиней, вакцинированных MLV PRRS 94881 в возрасте 2 недель. Указанные результаты были получены при использовании вакцины в дозе 1х10^4,27 ТСШ50/мл, которая была немного ниже минимальной иммунизирующей дозы (1х10^4,5 ТСГО50/мл), установленной для данного исследуемого ветеринарного продукта.

Задача(и)/цель исследования

Задача настоящего исследования с использованием вакцинации-контрольного заражения заключалась в оценке продолжительности действия иммунитета (DOI), обеспечиваемого введением модифицированного живого вируса, Code 19S1.U, (MLV PRRS 94881), представляющего собой изолят 94881, выведенный из европейского вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, имеющим PRRSсеронегативный статус свиньям возрастом 14 ± 3 дня против вирулентного гетерологичного изолята европейского вируса PRRS, заражение которым осуществляли через 26 недель после вакцинации. Основным критерием эффективности, свидетельствующим о том, что имела место DOI, составлявшая 26 недель после вакцинации, являлись статистически значимо (р <0,05) меньшие баллы повреждений легких (макроскопические или выявленные путем гистологического анализа) после контрольного заражения у животных в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе (группа 1) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (группа 2).

Вспомогательные параметры эффективности включали уровни виремии после вакцинации и после контрольного заражения, клинические оценки после вакцинации, результаты серологического анализа на PRRS, данные клинических обследований после контрольного заражения, средний суточный прирост

- 68 035624 массы (ADWG), ректальные температуры и количественную оценку PRRSV в легких. Уровень виремии после контрольного заражения рассматривали в качестве наиболее важного вспомогательного параметра, поскольку он является объективным и поддающимся количественной оценке параметром. Следующим по важности вспомогательным параметром, используемым в процессе определения DOI, были ректальные температуры и результаты клинических обследований. И, наконец, в качестве вспомогательных параметров в дополнение к основным параметрам при решении поставленной задачи использовали показатели роста, результаты серологического анализа и результаты обнаружения вируса в легких.

График событий Таблица 8.1. График событий

День исследования	Даты	Основные события в процессе исследования
-7	04 февраля 2010 г.	Сбор образцов крови для скрининга в отношении PRRSнегативного статуса методом ELISA
-2	09 февраля 2010 г.	Осуществление обследования состояния здоровья
с -1 по 21	с 10	Ежедневные клинические обследования
	февраля 2010 г. По 04 марта 2010 г.
0	11 февраля 2010 г.	Регистрация веса тела животных; сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии; вакцинация группы 1 IVP, вакцинация групп 2 и 3 СР
7	18 февраля 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
13	24 февраля 2010 г.	. ® Вакцинация свиней 1,0 мл вакцины CircoFlex Вживление каждой участвующей в исследовании свинье микрочипа SC в левую область шеи
14	25 февраля 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
21	04 марта 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
с 22 по 177	с 05 марта 2010 г. по 07 августа 2010 г.	Проведение клинических обследований по меньшей мере 3 раза в неделю
28	11 марта 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
56	08 апреля 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
84	06 мая 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
112	03 июня 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
140	01 июля 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
168	29 июля 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
с D178 (DPC-1) по D189 (DPC 10)	с 08 августа 2010 по 19 августа 2010 г.	Ежедневные клинические обследования и измерение ректальных температур
D179 (DPC 0)	09 августа 2010 г.	Измерения веса тела; сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии; контрольное заражение групп 1 и 2 гетерологичным изолятом европейского вируса PRRS
D182 (DPC 3)	12 августа 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
D186 (DPC 7)	16 августа 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии
D188 (DPC 9)	18 августа 2010 г.	Измерения веса тела
D189 (DPC 10)	19 августа 2010 г.	Сбор образцов крови для серологического анализа и анализа виремии Умерщвление свиней и осуществление аутопсии Балльная оценка патологических повреждений легких Сбор образцов ткани легких для выделения вируса и гистопатологического анализа

План исследования

Настоящее исследование представляло собой слепое исследование с использованием вакцинацииконтрольного заражения, которое проводили на 56 PRRS-серонегативных вируса поросятах-отъемышах, имевших возраст 14 ± 3 дня в день 0 (D0). Обобщение данных о настоящем исследовании представлено в табл. 8.2.

- 69 035624

Таблица 8.2. План исследования

Группа	Количество свиней в день D0	Обработка в день D0 (возраст 14 ± 3 дня)	Контрольное заражение в день D179 (DPC 0) с использованием 1,0 мл/ноздрю и 1,0 мл IM изолята PRRSV 205817 (средний титр 1x10’ TCID50/3 мл)	Умерщвление и проведение аутопсии в день D189 (DPC 10)
1	22	1,0 мл IVP (MLV PRRS 94881), IM	да	да
2	22	1,0 мл контрольного продукта (СР; плацебопродукт, не содержащий MLV PRRS 94881), IM	да	да
3	12	1,0 мл СР, IM	нет	да

Критерии для проведения слепого исследования.

Исследователь и уполномоченные лица не имели информации о животных, распределенных по группам обработки, в течение прижизненной фазы исследований. Для выдерживания условий слепого исследования представители BIVI осуществляли мониторинг рандомизации, а проведение назначенных обработок с использованием IVP и CP в день D0 осуществлял специалист, который не участвовал в обследованиях свиней (а именно, в клинических оценках, клинических обследованиях или проведении аутопсий). Персонал лаборатории BIVI при выполнении соответствующих поставленных перед ним задач не имел информации о том, каким продуктом обрабатывали каждую свинью.

Материалы

Исследуемый ветеринарный продукт (IVP) и контрольный продукт

Таблица 8.3. IVP

Непатентованное название продукта:	Модифицированный живой вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
Штамм:	94881
Производство и приготовление препарата:	Вакцина MLV PRRS 94881, лот 390-005 (см. раздел 15.4) была изготовлена на фирме BIVI-St. Joseph Production в соответствии со схемой производства, код 19S1.U_ и досье EU, часть 2Ь. В день D0, на фирме BIVI-Ames осуществляли восстановление/разведение вакцины MLV PRRS 94881, лот 390-005, забуференным фосфатом физиологическим раствором (ЗФР; лот 809-002, см. раздел 15.5) с получением IVP, лот № N257-137 в 4 5 заданной дозе, составляющей примерно 1x10’ ТСЮдо/мл.
Производитель:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. 2621 North Belt Highway Сент-Джозеф, шт. Миссури, 64506, США
Номер лота:	390-005, после восстановления лот № 257-137
Срок годности:	Срок годности до 11 февраля 2010 г. был установлен для IVP только для целей исследования.
Условия хранения:	Лиофилизированная вакцина: при 2-8°С Регидратированная/разведенная IVP: на льду
Тестирование:	MLV PRRS 94881, лот 390-005, и ЗФР, лот 809-002, тестировали в BIVI-QC в соответствии с проектом схемы производства (раздел 15.1) и более подробными указаниями, изложенными в досье EU, часть 2.F. Персонал лаборатории BIVI-Ames осуществлял тестирование аликвот IVP до и после вакцинации для определения титра вируса в соответствии с процедурой титрования PRRSV (раздел 15.1).
Результаты тестирования:	лот 390-005: получены удовлетворительные результаты (раздел 15.4). лот 809-002: получены удовлетворительные результаты (раздел 15.5). IVP, лот N257-137: Средняя величина титра 1 х 10 ’ ТСЮ50/МЛ (раздел 15.7).
Сохранение IVP:	IVP восстанавливали/разводили только для того, чтобы сразу использовать в настоящем исследовании и не сохраняли после осуществления вакцинации.

- 70 035624

Таблица 8.4. СР

Непатентованное название продукта:	Плацебо
Препарат:	Лиофилизированный продукт, представляющий собой плацебо, который содержал инертный материал, присутствующий в серийной вакцине, без MLV PRRS 94881 (лот N240-191-062409, раздел 15.6), был изготовлен на фирме ВIVI-Production. В день D0, на фирме BIVI-Ames лот N240-191-062409 восстанавливали с помощью забуференного фосфатом физиологического раствора (ЗФР, лот 809-002, раздел 15.5) с получением СР, лот № N257-134
Производитель:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. 2621 North Belt Highway Сент-Джозеф, шт. Миссури 64506, США
Номер лота:	лот N240-191-062409, после восстановления лот N257-134
Срок годности:	Срок годности до 11 февраля 2010 г. был установлен для СР только для целей исследования.
Условия хранения:	Лиофилизированная вакцина: при 2-8°С Регидратированный СР: при 2-8°С или на льду
Тестирование:	лот N240-191-062409 и лот N257-134 тестировали на фирме BIVIQC в отношении ЕР-стерильности
Результаты тестирования:	лот N240-191-062409: результаты оценки стерильности были удовлетворительными (раздел 15.6). лот 809-002: результаты оценки стерильности были удовлетворительными; было установлено, что СР являлся стерильным (раздел 15.7).
Сохранение СР:	СР восстанавливали/разводили только для того, чтобы использовать в настоящем исследовании и не сохраняли после осуществления вакцинации.

Материал для контрольного заражения Таблица 8.5. Материал для контрольного заражения

Название/количество изолятов	Изолят 205817 вируса PRRS
Место и дата выделения, включая клинические симптомы	Изолят 205817 европейского вируса PRRS был выведен из изолята № 190136, впервые полученного из ткани легкого новорожденного поросенка на ферме, где были выявлены типичные касающиеся репродуктивной способности признаки PRRS (выкидыши у подсвинок и ослабленные новорожденные поросята) во время вспышки заболевания, имевшей место в Нижней Саксонии, Германия, в апреле 2004 г. Штатные ветеринарные врачи передали образцы в лабораторию bio Screen (образец был получен 21 апреля 2004 г.). Изолят № 190136 размножали непосредственно на клетках линии АК-МА104 и получали чистую культуру штамма для контрольного заражения. Чистую культуру изолята 190136 использовали для инокуляции свиней с целью оценки ее способности воспроизводить респираторное заболевание со специфическими для PRRS признаками в условиях контролируемого лабораторного эксперимента. У подвергнутых контрольному заражению животных проявлялся респираторный дистресс-синдром, и при гистопатологическом исследовании было выявлено наличие интерстициальной пневмонии. Вирус PRRS был успешно повторно выделен из областей повреждения легкого и изолят получил обозначение 205817. Изолят 205817 размножали непосредственно на клетках линии МА 104 и получали чистую маточную культуру штамма для контрольного заражения с целью применения для будущих клинических исследований в BIVI.
Препарат:	Вирус для контрольного заражения размножали в клетках линии АКМА104 и в день D179 приготавливали препарат с заданным титром, составляющим примерно 1 * 10 TCIDjq на дозу 3 мл. Приготавливали материал для контрольного заражения в необходимом количестве. Из материала для контрольного заражения отбирали две аликвоты по 5 мл для целей анализа перед транспортировкой материала для контрольного заражения в VRI.
Номер лота:	N270-179
Производитель:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc., США
Условия хранения	Нерасфасованный материал хранили при -70 ± 10°С. После приготовления разведенный материал для контрольного заражения хранили на льду до его введения.
Тестирование:	Персонал лаборатории BIVI-Ames осуществлял тестирование аликвот до и после осуществления контрольного заражения для определения титра вируса в соответствии с процедурой титрования PRRSV
Результаты тестирования:	Материал для контрольного заражения имел среднюю величину титра 1 * 106’27 TCID50 на дозу 3 м
Путь введения:	1,0 мл/ноздрю и 1,0 мл IM в правую область шеи
Сохранение материала для контрольного заражения:	Материал для контрольного заражения подвергали оттаиванию/разведению только для целей настоящего исследования и не сохраняли после осуществления контрольного заражения.

- 71 035624

Обработки.

Подтверждение доз.

IVP вводили в дозе 1,0 мл свиньям из соответствующей группы обработки для оценки DOI MLV

PRRS 94881 через 26 недель после вакцинации. CP вводили в дозе 1,0 мл животным в группах 2 и 3 в качестве вакцины-плацебо.

Схема введения доз.

Специалист, не принимавший участия в сборе экспериментальных данных, вводил IVP или CP свинье из соответствующей группы обработки в правую область шеи IM в день D0 с использованием стерильного 3,0 мл шприца с разъемом типа Луер-Лок и стерильной иглы 20g х 1 дюйм (2,54 см). Схема введения доз представлена ниже в табл. 8.6

Таблица 8.6. Схема введения доз

Группа	Количество животных	Обработка	Доза/путь введения	День исследования
1	22	IVP	1,0 мл, IM	D0
2	22	СР	1,0 мл, IM	DO
3	12	СР	1,0 мл, IM	DO

Сопутствующие обработки.

Поскольку вскоре после начала исследования было обнаружено, что несколько свиней умерло вследствие бактериальных инфекций, то Исследователь и Наблюдатель приняли согласованное решение о проведении следующих сопутствующих обработок всех участвующих в исследовании животных (раздел 15.10):

день 20: Mu-Se® (витамин Е/селен, фирма Intervet/фирма Schering Plough Animal Health, США), 0,1 мл, IM в правое бедро;

день 21: EXCEDE® (цефтиофур, фирма Pfizer Animal Health, США), 0,5 мл в левое бедро;

день 35: EXCEDE® (цефтиофур, фирма Pfizer Animal Health, США), 1,0 мл в правое бедро;

день 42: EXCEDE® (цефтиофур, фирма Pfizer Animal Health, США), 1,0 мл в левое бедро;

день 47: BAYTRIL 100® (энрофлоксацин, фирма Bayer Animal Health, США), 1,5 мл, SC в левую область шеи.

Витамин Е/селен вводили для предупреждения сердечного заболевания, обусловленного дефицитом витамина Е и селена (mulberry heart disease), a обработку антибиотиками осуществляли для лечения/предупреждения бактериальных инфекций.

Информация о животных Подробное описание исследований на животных Таблица 8.7. Информация о животных

Источник:	Фермы Prairie View, N5627 Hwy DD, Берлингтон, шт. Висконсин, 53105
Количество свиней:	56
День прибытия:	Свиньи прибыли на фирму Veterinary Resources, Inc. (VRI) Cambridge facility в день D-2 (09 февраля 2010 г.).
Идентификация:	Для идентификации каждое животное в день прибытия D-2 снабжали двумя ушными бирками. Кроме того, каждому животному в день D13 вживляли SC в левую область шеи электронный микрочип.
Вид:	Свинья
Порода:	Промышленная порода
Пол:	Самки или кастрированные самцы.
Возрастной диапазон:	Возраст от 13 до 17 дней в день D0
Диапазон веса тела:	От 2,4 до 5,4 кг в день D0
Владелец подопытных животных:	Фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc.
Физиологическое состояние:	В день D-2 свиньи, отобранные для участия в исследовании, были обследованы Исследователем и было признано, что они имели хорошее состояние здоровья и упитанность. Результаты обследования были зарегистрированы в регистрационной форме для обследования состояния здоровья.
Распределение свиней по	Группа 1 (п=22): 117, 118, 119, 121, 127, 128,	Группа 2 (п=22): 123, 124, 125, 130, 134, 137,	Группа 3 (п=12): 116, 120, 126, 132, 135, 145,
группам	129, 131, 133, 136, 139, 141, 142, 144, 146, 147, 153, 154, 162, 163, 164 и 179	138, 148, 149, 150, 156, 157, 158, 160, 161, 165, 167, 169, 170, 172, 177 и 178	151, 152, 155, 159, 166 и 171

Критерии включения/исключения.

Все свиньи, участвовавшие в настоящем исследовании, имели PRRS-негативный статус по данным ELISA (по данным ELISA отношение S/P <0,4) и на основании результатов обследования были признаны здоровыми на момент вакцинации (день D0).

Критерии исключения после включения в исследование.

- 72 035624

Ни одна свинья не была исключена из исследования. Три свиньи были обнаружены мертвыми до осуществления контрольного заражения. Более подробная информация об этих трех свиньях представлена в разделе 12.8.

Уход за животными и их содержание.

На протяжении исследования свиней содержали на фирме Veterinary Resources, Inc. (VRI), Кембридж, шт. Айова. В каждом помещении свиней содержали в рассчитанных на несколько животных боксах (по 11 или 12 свиней/бокс), при этом вакцинированных (группа 1) и контрольных животных (группы 2 и 3) содержали в одинаковых, но раздельных помещениях для гарантии биобезопасности. Свиней, обработанных MLV PRRS 94881, содержали в помещении CB8 вплоть до дня D78, затем в помещении CC1 до дня D105 и после этого в помещении CC3 в течение оставшегося периода исследования. Свиней из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, содержали в помещении CC2 на протяжении всего исследования. Свиней из группы отрицательного контроля содержали в помещении CB6 до дня D73, а затем в помещении CB7 в течение оставшегося периода исследования. Боксы были приподняты над полом помещения и имели пластиковые щелевые полы, они были оборудованы кормушками, соответствующими их возрасту, и ниппельными чашечными поилками. Каждое изолированное помещение имело одинаковую с другими конструкцию и все они соответствовали уровню 2 опасности для живых организмов (BL2), имели систему очистки воздуха с помощью HEPA-фильтров, механическую вентиляцию и регулируемую термостатом систему контроля температуры.

При проведении настоящего исследования было необходимо изолировать группу обработки, поскольку в научном сообществе хорошо известно, что PRRSV легко распространяется от свиньи к свинье посредством различных механизмов, включая перенос в аэрозольной форме. Это относится и к авирулентным живым вакцинам против PRRS, поскольку указанные биологические продукты включают ослабленные вирусные частицы, которые имитируют характеристики вирулентного вируса PRRS дикого типа, не обладая способностью вызывать заболевание. Применяли соответствующие методы для гарантии поддержания биобезопасности и для того, чтобы вакцинированные животные не могли случайным образом заразиться PRRSV от невакцинированных животных из группы отрицательного контроля.

Персоналом исследовательского центра были приняты соответствующие меры для обеспечения требуемой чистоты и уровня дезинфекции каждого помещения перед его использованием в настоящем исследовании.

В каждом помещении в здании имелись вентиляторы и нагреватели для того, чтобы обеспечивать необходимую циркуляцию воздуха и подогрев. Каждое помещение имело отдельную, но идентичную систему вентиляции, так что не происходило обмена воздухом между помещениями.

Корм хранили в мешках в условиях, обеспечивающих отсутствие паразитов. Животные имели свободный доступ к корму и воде. Начиная со дня прибытия, и до дня D5 свиньям давали корм с добавлением медицинских препаратов Lean Metrics Infant Medicated feed (фирма Purina Mills LLC, Сент-Луис, шт. Миссури), после чего их переводили на корм с добавлением медицинских препаратов Lean Metrics Senior Medicated feed (фирма Purina Mills LLC, Сент-Луис, шт. Миссури). В день D64 свиней переводили на корм Lean Metrics Complete 85 feed (фирма Purina Mills LLC, Сент-Луис, шт. Миссури), а в день D82 их переводили на корм Lean Metrics Complete CE85, Т40 (фирма Purina Mills LLC, Сент-Луис, шт. Миссури), которым их кормили в течение всего оставшегося периода исследования. На протяжении исследования животные были обеспечены кормом, соответствующим размеру, возрасту и состоянию здоровья свиней согласно принятой в данном регионе животноводческой практике.

Исследователем было установлено, что свиньи имели хорошее состояние здоровья и упитанность перед началом исследования. В процессе исследования у некоторых животных были обнаружении и другие состояния, включая худосочность, кашель, опухание, появление грубого волосяного покрова, депрессию, абсцессы и плохую кондицию тела. По мнению Исследователя все эти состояния являлись типичными для свиней на стадии откорма/созревания при их групповом содержании. Указанные состояния рассматривались как кратковременные или не имеющие системный характер и их не лечили.

Оценка эффективности

Для оценки DOI, обеспечиваемого MLV PRRS 94881, через 26 недели после вакцинации свиней, вакцинированных MLV PRRS 94881, и животных из контрольной группы, предназначенной для контрольного заражения, подвергали контрольному заражению в день D179 (DPC 0) и через 10 дней оценивали повреждения легких после контрольного заражения (в день DPC 10). Считалось, что обеспечивалась DOI, составляющая 26 недель после вакцинации, если в группе, вакцинированной MLV PRRS 94881, после контрольного заражения выявлена статистически значимо (p<0,05) меньшая патология в легких (путем макроскопического обследования или гистологического анализа), чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению.

Вспомогательные параметры эффективности, которые анализировали при сравнении вакцинированной группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, включали уровень виремии после вакцинации и после контрольного заражения, данные клинических обследований после контрольного заражения, ректальные температуры после контрольного заражения, клинические оценки после вакцинации, средний суточный прирост массы (ADWG) и данные серологического анализа на PRRS.

- 73 035624

Уровень виремии после контрольного заражения рассматривали в качестве наиболее важного вспомогательного параметра, поскольку он является объективным и поддающимся количественной оценке параметром. Следующим по важности вспомогательным параметром, используемым в процессе определения DOI, были ректальные температуры и результаты клинических оценок. И, наконец, в качестве вспомогательных параметров в дополнение к основным параметрам при решении поставленной задачи использовали показатели роста, результаты серологического анализа и результаты обнаружения вируса в легких.

Критерии валидности исследования.

Необходимо, чтобы все свиньи при отборе до поставки и в день D0, имели по данным ELISA PRRSнегативный статус. Необходимо, чтобы свиньи в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, имели негативный статус в отношении антител к вирусу PRRS (по данным ELISA отношение S/P < 0,4) вплоть до дня контрольного заражения, а животные в группе отрицательного контроля имели негативный статус в отношении антител к вирусу PRRS в течение всего исследования.

Основной выходной параметр.

Основной выходной переменной при оценке эффективности являлась патология легких (макроскопические и выявляемые при гистологическом анализе повреждения) в день D189 (DPC 10) исследования.

Баллы макроскопических повреждений легких.

В день D189 после сбора и регистрации образцов и данных всех оставшихся в живых подопытных свиней умерщвляли в соответствии с VRI SOP PRC1027 (раздел 15.1). Каждую свинью подвергали аутопсии в соответствии с VRI SOP PRC 1028 (раздел 15.1). Уполномоченное лицо осуществляло вскрытие грудной полости и удаление сердца и легких. Исследователь осуществлял обследование каждого набора легких, описывал любую выявленную макроскопическую патологию и определял процент патологического поражения каждой доли легкого. Результаты обследования и полученные данные регистрировались в регистрационной форме отчета об аутопсии.

Баллы повреждений, выявленных при гистологическом анализе.

Из каждого набора легких сохраняли по два образца из левой и правой передних долей, левой и правой сердечных долей, левой и правой диафрагмальных долей и промежуточной доли. Каждый образец ткани легкого имел размер примерно 1 дюйм (2,54 см) х 1 дюйм (2,54 см). Для одного набора образцов ткани легкого все три образца, взятые с левой стороны, объединяли и помещали в один контейнер; в то время как все три образца, взятые с правой стороны, и образец, взятый из промежуточной доли легкого, объединяли и помещали в другой контейнер. Каждый контейнер заполняли 10%-ным раствором формалина, взятым в достаточном количестве. Для другого набора образцов ткани легких все три образца, взятых из левой области легких, объединяли и помещали в один Whirlpak®; в то время как все три образца ткани легких, взятые с правой стороны, и образец, взятый из промежуточной доли легких, объединяли и помещали в другой Whirlpak®. Все контейнеры и пакеты Whirlpak® снабжали соответствующей меткой, на которой были указаны номер животного, номер исследования, дата взятия образца, день исследования, тип образца и то, с какой стороны, с левой или с правой, был взят образец. Образцы, взятые из легких, находящиеся в формалине, хранили при комнатной температуре, в то время как образцы, которые находились в пакетах Whirlpaks®, хранили на сухом льду до транспортировки в BIVI-Ames. Собранные образцы регистрировали регистрационной форме отчета об аутопсии. Образцы ткани легких, зафиксированные в формалине, и образцы ткани легкого, находящиеся в пакетах Whirlpak®, передавали в BIVI-Ames. К каждой поставляемой партии прилагали заполненную регистрационную форму для поставки образцов.

Зафиксированные в формалине образцы ткани легких хранили в BIVI-Ames при комнатной температуре до передачи из BIVI-Ames в ветеринарную диагностическую лабораторию Государственного университета штата Айова (ISU VDL). Персонал ISU VDL осуществлял обработку и анализ образцов ткани легких в соответствии с процедурами, принятыми в ISU VDL, в течение одной недели после осуществления аутопсии. Для каждой свиньи подготавливали одно предметное стекло, на котором размещали семь срезов (по одному, взятому с каждой из всех семи долей легких). Каждое предметное стекло, обработанное гематоксилином-эозином (H & E) обозначали с помощью уникального идентифицирующего кода. ISU VDL проводила компьютерную регистрацию данных, включая номер исследования, идентифицирующие коды и информацию о тканях, соответствующих конкретной свинье.

Ежедневно в те дни, когда проводили гистопатологический анализ исследуемых предметных стекол, патолог ISU VDL (K. Schwartz) сначала осуществлял анализ предметных стекол с образцами, взятыми у животных с позитивным EU PRRSV-статусом, и животных из группы отрицательного контроля. После этого патолог анализировал окрашенные H & E предметные стекла с образцами легкого, анализируя пневмоцитарную гипертрофию и гиперплазию, септальную инфильтрацию мононуклеарных клеток, некротический дебрис, внутриальвеолярное накопление воспалительных клеток и периваскулярное накопление воспалительных клеток. Результаты регистрировали в широкоформатной Excel-таблице. Система балльной оценки результатов гистопатологического анализа легких представлена ниже в табл. 8.8.

- 74 035624

Таблица 8.8. Система балльной оценки результатов гистопатологического анализа легких

Пневмоцитарная гипертрофия и гиперплазия	Внутриальвеолярное накопление воспалительных клеток
0 - отсутствует 1 - слабая 2 - средняя 3 - серьезная	0 - отсутствует 1 - слабое 2 - среднее 3 - серьезное
Септальная инфильтрация мононуклеарных клеток	Периваскулярное накопление воспалительных клеток
0 - отсутствует 1 - слабая 2 - средняя 3 - серьезная	0 - отсутствует 1 - слабое 2 - среднее 3 - серьезное
Некротический дебрис	Описание балльной системы применительно к гистологическим параметрам (за исключением некротического дебриса):
0 - отсутствует 3 - да, присутствует	0 - отсутствует: в поле зрения отсутствуют обнаруживаемые повреждения 1 - средние повреждения: в поле зрения присутствуют позитивные клетки в малом количестве (1-5 клеток/поле) 2 - средние повреждения: в поле зрения имеется много (>5 клеток/поле) позитивных клеток в одном месте или во многих местах имеется по небольшому количеству клеток (1-5 клеток/поле) 3 - серьезные повреждения: в поле зрения во многих местах имеется много (>5 клеток/поле) позитивных клеток

После завершения анализа всех предметных стекол предметные стекла возвращали Представителю Спонсора, и они должны храниться на фирме Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc., Сент-Джозеф, шт. Миссури до завершения финального отчета.

Вспомогательные параметры.

Вспомогательные параметры включали уровни виремии после вакцинации и после контрольного заражения, результаты клинических обследований после контрольного заражения, температуры после контрольного заражения, средний суточный прирост массы (ADWG), количественную оценку PRRSV в легких, результаты клинических оценок после вакцинации и результаты серологического анализа на PRRS.

Оценка PRRS в сыворотке с помощью цПЦР.

Собирали образцы венозной цельной крови перед поставкой животных и в дни 0, 7, 14, 21, 28, 56, 84, 112, 140, 168, 179 (DPC 0), 182 (DPC 3), 186 (DPC 7) и 189 (DPC 10). В целом процедура состояла в следующем: у каждой свиньи брали примерно по 2-5 мл крови в пробирку для разделения сыворотки (SST) соответствующего размера. Собранные образцы регистрировали в регистрационной форме для сбора образцов. Находящейся в SST крови давали свернуться при комнатной температуре. Образцы крови передавали в BIVI-Ames в день сбора и заполняли регистрационную форму для поставки образцов. Образцы крови центрифугировали в BIVI-Ames, сыворотку собирали, разделяли и переносили в соответствующие пробирки. Каждую пробирку снабжали меткой с указанием ID-номера свиньи, номера исследования, даты сбора, дня исследования и типа образца. В BIVI-Ames один набор образцов сыворотки хранили при 2-8°С, а другой набор образцов сыворотки помещали на хранение при -70±10°С.

Клинические обследования после контрольного заражения.

Свиней обследовали в отношении клинических признаков заболевания в период со дня D178 (DPC 1) по день D189 (DPC 10). Обследования проводил Исследователь или уполномоченные лица, и результаты регистрировали в регистрационной форме для клинических обследований. Свиней обследовали каждый день, оценивая дыхание, поведение и кашель на основе балльной системы оценки результатов клинических обследований, описанной ниже в табл. 8.9.

Таблица 8.9 Балльная система оценки результатов клинических обследований

Дыхание	Поведение	Кашель
0 - нормальное дыхание 1 - затрудненное дыхание/учащенное дыхание 2 - одышка 3 - смерть	0 - нормальное 1 - заторможенность от слабой до средней 2 - серьезная заторможенность или лежачее положение 3 - смерть	0 - кашель отсутствует 1 - мягкий или интермиттирующий кашель 2 - грубый или серьезный, рецидивирующий кашель 3 - смерть

Ректальные температуры.

Измерение ректальных температур осуществлял Исследователь или уполномоченные лица в период со дня D178 (DPC -1) по день D189 (DPC 10). Ректальные температуры регистрировали в °С в регистрационной форме для клинических обследований.

Вес тела и средний суточный прирост массы.

- 75 035624

Вес тела каждого животного измеряли в дни D0, D179 (DPC 0) и D188 (DPC 9). Исследователь или уполномоченные лица взвешивали каждую свинью на калиброванных весах. Результаты регистрировали в кг в регистрационной форме для веса тела. Средний суточный прирост массы определяли в период со дня D179 (DPC 0) по день D188 (DPC 9).

Оценка PRRSV в легких с помощью qПЦР.

Образцы ткани легких, находившиеся в Whirlpaks®, хранили при -70 ± 10°С в BIVI-Ames до пересылки по адресу, указанному в разделе 9.3.1. К пересылаемой партии прилагалась заполненная форма для пересылки образцов. На фирме bioScreen осуществляли анализ образцов ткани легких на присутствие РНК PRRSV методом с.|ПЦР (раздел 15.1). Гомогенизировали и анализировали ткани, взятые из левого легкого. Гомогенизировали и анализировали ткани, взятые из правого легкого и промежуточной доли легкого. Результаты выражали в геномных эквивалентах (log₁₀ GE/мл) для образцов, взятых из левого и правого легкого. Статистик рассчитывал с использованием программы SAS средние геометрические величины титра в виде GE/мл для образцов, взятых из левого и правого легкого.

Клинические оценки после вакцинации.

Исследователь или уполномоченные лица проводили обследования для получения клинических оценок после вакцинации. Обследования осуществляли ежедневно в период со дня D-1 по день D21, а затем по меньшей мере три раза в неделю в период со дня D22 по день D177. Результаты обследований регистрировали в регистрационной форме для клинических оценок.

Серологический анализ на PRRS.

Образцы сыворотки, собранные перед поставкой животных и в дни 0, 7, 14, 21, 28, 56, 84, 112, 140, 168, 179 (DPC 0), 182 (DPC 3), 186 (DPC 7) и 189 (DPC 10) и хранившиеся при 2-8°С, анализировали на фирме BIVI-Ames в отношении присутствия антител к PRRSV (раздел 15.1). Результаты классифицировали как негативные (по данным ELISA отношение S/P < 0,4) или позитивные (по данным ELISA отношение S/P > 0,4).

Нежелательные явления.

При проведении настоящего исследования не было выявлено никаких нежелательных явлений, обусловленных MLV PRRS 94881.

Статистические методы

Экспериментальная единица.

В процессе настоящего исследования группы обработки содержали в отдельных помещениях для того, чтобы избежать переноса PRRSV животным в не подвергавшихся вакцинации группах. Таким образом, помещение представляло собой экспериментальную единицу. Однако для целей рассматриваемого анализа, возможную нестрогость вследствие смешения (объединения) эффектов, обусловленных помещением и обработкой не учитывали, и свинью рассматривали как единицу статистического учета.

Рандомизация.

Пятьдесят шесть (56) свиней распределяли произвольным образом на три группы. Рандомизацию осуществляли на фирме BIVI. Сразу после поставки были отбракованы животные с номерами 140 и 143 (в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения), а также животное № 168 (группа, предназначенная для обработки MLV PRRS 94881). Для замены животного № 140 произвольным образом было выбрано животное № 178, для замены животного № 143 произвольным образом было выбрано животное № 177, а для замены животного № 168 произвольным образом было выбрано животное № 179 из группы, включающей пять дополнительных животных, удовлетворяющих критериям включения.

Анализ.

Статистические анализы и обобщение данных проводил д-р сельскохозяйственных наук Martin Vanselow, Biometrie & Statistik, Zum Siemenshop 21, 30539, Ганновер, Германия, +49(0) 511 606 777 650, m.vanselowat-online.de. Данные анализировали в предположении полностью случайной структуры плана эксперимента. Статистические анализы проводили с использованием программного обеспечения SAS, выпуск 8.2 (SAS, 2001, Кэри, шт. Северная Каролина, США: SAS Institute Inc.). Свинья № 179 из вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и свиньи с номерами 124 и 161 из контрольной группы, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и были исключены из анализов после контрольного заражения. Все анализы различий проводили на основе двусторонних критериев при α = 5%. Статистический отчет представлен в разделе 15.9.

Балльная оценка макроскопических повреждений легких Балл макроскопических повреждений легких для каждой свиньи рассчитывали с использованием коэффициентов, представленных ниже в табл. 8.10, путем их умножения на процент (%) патологии для конкретной доли легких. Расчеты проводили с использованием программы SAS.

- 76 035624

Таблица 7.9. Коэффициенты для расчета баллов повреждений легких

Доля легких	Коэффициент
Левая передняя	0,05
Левая сердечная	0,06
Левая диафрагмальная	0,29
Правая передняя	0,11
Сердечная	0,10
Правая диафрагмальная	0,34
Правая добавочная/промежуточная	0,05

Сравнение групп обработки для выявления различий осуществляли с использованием критерия У илкоксона-Манна-У итни.

Балльная оценка повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа.

Индивидуальные баллы, полученные при гистологической оценке образцов ткани, взятых из легких, суммировали для каждой доли и каждого животного. Этот суммарный балл делили на количество долей, проанализированных для животного. Полученные результаты использовали в качестве индивидуальных величин при осуществлении сравнения между группами обработки. Различия между группами обработки анализировали с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Анализ легких на PRRS методом ql IIЦР.

Результаты, полученные методом количественной ПЦР (PRRSV-вирусная нагрузка [log₁₀ GE/мл]) для образцов, взятых из легких в день D189, использовали для сравнений между группами обработки на основе критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Для оценки использовали средние величины (log₁₀ GE/мл) результатов анализа методом ql II [Р образцов ткани левого и правого легкого. Перед осуществлением расчетов аналитический результат не обнаружено заменяли на величину log₁₀ GE/мл, равную 0,0, а результат позитивный заменяли на 3,0.

Создавали таблицы частот встречаемости позитивных результатов ql IIЦР Различия между группами обработки анализировали с использованием точного критерия Фишера.

Оценка PRRSV в сыворотке методом ql IIЦР

Данные об уровнях виремии анализировали по отдельности для каждого дня исследования. Кроме того, для оценки вирусной нагрузки анализировали площади под индивидуальными кривыми ответа в периоды со дня D179 по день D189 (AUC 0-10) и со дня D182 по день D189 (AUC 3-10).

Результаты, полученные методом количественной ПЦР (PRRS-вирусная нагрузка [log₁₀ GE/мл]), использовали для сравнений между группами обработки на основе критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Перед осуществлением расчетов аналитический результат не обнаружено заменяли на величину log₁₀ GE/мл, равную 0,0, а результат позитивный заменяли на 3,0. Различия между группами обработки анализировали с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Создавали таблицы частот встречаемости позитивных результатов ql IIЦР Различия между группами обработки анализировали с использованием точного критерия Фишера.

Клинические обследования после контрольного заражения.

Создавали таблицы частот встречаемости животных, для которых был получен по меньшей мере один позитивный результат в период со дня D180 по D189. Общие баллы получали путем суммирования: балл дыхания + балл поведения + балл кашля. Расчеты проводили с использованием программы SAS. Различия между группами обработки анализировали с использованием точного критерия Фишера.

Для статистической оценки использовали максимальные баллы и средние баллы дыхания, поведения и кашля на одно животное, полученные в период со дня D180 по день D189, и сумму всех трех баллов (общий балл). Различия между группами обработки анализировали с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Вес тела и средний суточный прирост массы тела.

Рассчитывали средний суточный прирост массы тела для каждого животного в период со дня D179 по день D188. Для каждого дня исследования и для указанного периода исследования рассчитывали показатели описательной статистики. Различия между группами обработки анализировали с использованием дисперсионного анализа и последующего применения t-критериев. С помощью дисперсионного анализа рассчитывали среднеквадратичные величины для групп и различия между среднеквадратичными значениями с 95%-ным доверительным интервалом.

Ректальные температуры.

Различия между группами обработки касательно исходных измеренных температур анализировали с использованием дисперсионного анализа и последующего применения t-критериев. С помощью дисперсионного анализа рассчитывали среднеквадратичные величины для групп и различия между среднеквадратичными значениями с 95%-ным доверительным интервалом.

Клинические оценки после вакцинации.

Создавали таблицы частот встречаемости животных, для которых был получен по меньшей мере один позитивный результат в период со дня D1 по день D21. Различия между группами обработки ана- 77 035624 лизировали с использованием точного критерия Фишера.

Серологический анализ на PRRS.

Для каждого момента времени создавали таблицы частот встречаемости позитивных результатов, полученных методом ELISA. Различия между группами обработки анализировали с использованием точного критерия Фишера.

Результаты

Баллы макроскопических повреждений легких.

Медианные величины баллов макроскопических повреждений легких в день D189 (DPC 10) составляли 0,1% и 13,8% для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Медианная величина балла макроскопических повреждений легких для свиней из вакцинированной MLV PRRS 94881 группы была статистически значимо меньше, чем медианная величина балла макроскопических повреждений легких для свиней из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0001). Медианная величина балла макроскопических повреждений легких для свиней из группы отрицательного контроля была равна 0,0%.

У животного № 123 (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению) оказалось невозможным оценить повреждения легких в день D189 вследствие наличия диффузного плеврита и спаек. После аутопсии из тканей легких этой свиньи были выделены виды Moraxella osloensis, Staphylococcus warneri, Staphyloccous hyicus и Pseudomonas.

Обобщение баллов макроскопических повреждений легких для групп животных и соответствующее им р-значение представлены ниже в табл. 8.11.

Таблица 8.11. Обобщение баллов макроскопических повреждений легких (%) для групп животных, полученных в день D189

1 Группа	N3	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Средняя величина	р-значение
1	21	0,00	12,40	0,060	0,050	0,550	0,400	1,099	<0,0001
2	192	0,06	69,20	13,800	2,690	22,650	20,850	15,842
3	12	0,00	0,59	0,000	0,000	0,110	0,085	0,093	NI

¹Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ²Животное № 123 не оценивали вследствии наличия диффузного плеврита и спаек, обусловленных бактериальными инфекциями. ³Одна свинья в группе, обработанная вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ. NI - не включали в статистический анализ.

Баллы повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа Медианные величины баллов повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, составляли 6,0 и 19,5 для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Медианная величина баллов повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы была статистически значимо меньше, чем медианная величина баллов повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0001). Медианная величина баллов повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, для группы отрицательного контроля составляла 9.0.

Обобщение медианных величин баллов повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, для групп животных и соответствующее им p-значение представлены ниже в табл. 8.12.

Таблица 8.12. Обобщение медианных величин баллов повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, для групп животных

1 Группа	N2	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Средняя величина	р-значение
1	21	2	20	6,0	3,0	8,0	5,0	6,6	<0,0001
2	20	8	47	19,5	15,0	23,0	10,0	20,2
3	12	0	15	9,0	7,0	14,0	6,5	9,1	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ²Одна свинья в группе, обработанная вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ. NI - не включали в статистический анализ. Результаты анализа методом дПЦР легких на PRRS Медианные величины вирусной нагрузки в тканях легких, полученные методом дПЦР, составляли 3,69 и 6,25 log₁₀ GE/мл для свиней в группе, вакцинированной MLV PRRS 94881, и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Медианные величины результатов, полученных методом дПЦР для свиней в группе, вакцинированной MLV PRRS 94881, были статистически значимо меньше, чем для свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0001). РНК

- 78 035624

PRRSV не была выявлена ни в одном из образцов ткани легких, взятых у свиней из группы отрицательного контроля.

Обобщение результатов анализа легких методом qПЦР для групп животных и результат сравнительного анализа (р-значение) представлено ниже в табл. 8.13.

Таблица 8.13. Обобщение результатов анализа легких методом qПЦР для групп животных (средние величины log₁₀ GE/мл)

Группа1	N2	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Средняя величина	р-значение
1	21	0,00	6,83	3,69	1,50	5,21	3,18	3,36	<0,0001
2	20	4,80	7,40	6,25	5,62	6,68	1,26	6,22
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ²Одна свинья в группе, обработанная вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ. NI - не включали в статистический анализ.

РНК PRRSV была выявлена в тканях легких у 90 и 100% свиней, вакцинированных MLV PRRS 94881, и свиней из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Между вакцинированной группой и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, не было выявлено статистически значимого различия (p=0,4878).

Обобщение частот встречаемости тканей легких, взятых у свиней при осуществлении аутопсии, для которых получены позитивные результаты по данным анализа методом qПЦР на PRRS, в группах животных представлено ниже в табл. 8.14.

Таблица 8.14. Частоты встречаемости тканей легких, взятых у свиней при осуществлении аутопсии, для которых получены позитивные результаты по данным анализа методом qПЦР на PRRS, в группах животных

1 Группа	Количество позитивных	% позитивных	95% CI	Общее 2 количество	р-значение
1	19	90	69,6	98,8	21	0,4878
2	20	100	83,2	100,0	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ² Одна свинья в группе, обработанная вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ. NI - не включали в статистический анализ.

Результаты анализа сыворотки на PRRS методом qПЦР.

В день D0 РНК PRRSV не была выявлена в сыворотке ни у одной свиньи. После вакцинации у вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней медианные величины составляли 3,00, 0, 0, 3,00, 0, 0, 0, 0 и 0 log₁₀ GE/мл в дни D7, D14, D21, D28, D56, D84, D112, D140 и D168 соответственно. Полученные величины были статистически значимо больше, чем у животных из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, в дни D7, D14, D21 и D28 (p<0,0013), поскольку у животных в группе контрольного заражения не было выявлено РНК PRRSV вплоть до дня D182 (DPC 3).

РНК PRRSV не была выявлена в сыворотке ни у одной свиньи в день D179 (DPC 0). После контрольного заражения у вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней медианные величины составляли 4,44, 0 0 log₁₀ GE/мл в дни D182 (DPC 3), D186 (DPC 7) и D189 (DPC 10) соответственно, по сравнению с 5,88, 5,30 и 4,24 log₁₀ GE/мл у свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в те же самые дни. Медианные величины, полученные для животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были больше, чем в группе, обработанной MLV PRRS 94881 во все дни после контрольного заражения (p<0,0001).

На протяжении настоящего исследования РНК PRRSV не была выявлена в сыворотке ни у одной свиньи в группе отрицательного контроля.

Медианные величины AUC для группы вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней составляли 15,54 и 8,88 log₁₀ GE/мл в день в период со дня DPC 0 по день DPC 10 и со дня DPC 3 по день DPC 10 соответственно. В отличие от этого, медианные величины AUC для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, составляли 44,77 и 36,43 log10 GE/мл в день в период со дня DPC 0 по день DPC 10 и со дня DPC 3 по день DPC 10 соответственно.

Медианные величины AUC для группы вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней были статистически значимо меньше, чем для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, в течение обоих периодов времени (p<0,0001).

Обобщение результатов оценки PRRSV в сыворотке методом qПЦР представлены ниже в табл. 8.15

- 79 035624 и 8.16.

Таблица 8.15. Обобщение результатов анализа сыворотки на PRRS, полученных методом qПЦР (log₁₀ GE/мл), в период со дня D0 по день D168

День	Группа 1	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Q- диапазон	Средняя величина	р- значение
0	1	22	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	1,0000
2	22	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
7	1	21	3,00	4,63	3,00	3,00	3,00	0,00	3,23	<0,0001
2	22	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
14	1	21	0,00	3,00	0,00	0,00	3,00	3,00	1,43	0,0005
2	21	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
21	1	21	0,00	3,00	0,00	0,00	3,00	3,00	1,29	0,0013
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
28	1	21	0,00	3,88	3,00	0,00	3,00	3,00	1,93	<0,0001
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
56	1	21	0,00	3,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,57	0,1069
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
84	1	21	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	1,0000
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
112	1	21	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	1,0000
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
140	1	21	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	1,0000
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
168	1	21	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	1,0000
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI

¹Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. NI - не включали в статистический анализ.

Таблица 8.16. Обобщение результатов анализа сыворотки на PRRS, полученных методом qПЦР (log₁₀ GE/мл), в период со дня D179 по день D189

День	Группа 1	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Средняя величина	р- значение
179 (DPC 0)	1	21	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	1,0000
2	20	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
182 (DPC 3)	1	21	3,00	5,58	4,44	3,93	5,28	1,51	4,42	<0,0001
2	20	5,09	6,33	5,88	5,75	6,00	0,32	5,81
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
186 (DPC 7)	1	21	0,00	3,74	0,00	0,00	0,00	0,00	0,61	<0,0001
2	20	3,66	6,57	5,30	4,86	5,69	1,08	5,30
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
189 (DPC 10)	1	21	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	<0,0001
2	20	0,00	5,88	4,24	3,71	4,42	1,18	3,97
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
AUC DPC 010	1	21	10,50	31,22	15,54	13,76	19,53	5,95	1,61	<0,0001
2	20	36,86	52,16	44,77	43,23	48,03	6,24	44,84
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
AUC DPC 3- DPC 10	1	21	6,00	23,45	8,88	7,86	11,16	3,40	10,97	<0,0001
2	20	27,77	43,02	36,43	34,60	38,53	5,23	36,12
3	12	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. NI - не включали в статистический анализ. AUC - площадь под кривой; log₁₀ GE/мл в день.

- 80 035624

После вакцинации в группе, обработанной MLV PRRS 94881, относительное количество свиней, для которых были получены позитивные результаты методом qПЦР в дни D7, D14, D21 и D28, было статистически значимо больше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0013). В день D56 не было выявлено статистически значимых различий между группами в относительном количестве свиней, для которых были получены позитивные результаты qПЦР (p=0,1069).

В день D182 (DPC 3) у 100% свиней в группе, обработанной MLV PRRS 94881, и в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, были получены позитивные результаты qПЦР (теста не проводили). В дни D186 (DPC 7) и D189 (DPC 10) в группе, обработанной MLV PRRS 94881, относительное количество свиней, для которых были получены позитивные результаты qПЦР, было статистически значимо меньше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (<0,0001).

Обобщение данных об относительных количествах животных в группах, для которых были получены позитивные результаты анализа методом qПЦР, представлены ниже в табл. 8.17 и 8.18.

Таблица 8.17. Обобщение данных об относительных количествах животных в группах, для которых были получены позитивные результаты анализа сыворотки методом qПЦР после вакцинации

День	Группа1	Количество позитивных животных	% позитивных животных	95% CI	Общее количество	р- значение
0	1	0	0	0,0	15,4	22	и.а.
2	0	0	0,0	15,4	22
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
7	1	21	100	83,9	100,0	21	<0,0001
2	0	0	0,0	15,4	22
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
14	1	10	48	25,7	70,2	21	0,0005
2	0	0	0,0	16,1	21
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
21	1	9	43	21,8	66,0	21	0,0013
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
28	1	13	62	38,4	81,9	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
56	1	4	19	5,4	41,9	21	0,1069
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
84	1	0	0	0,0	16,1	21	и.а.
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
112	1	0	0	0,0	16,1	21	и.а.
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
140	1	0	0	0,0	16,1	21	и.а.
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
168	1	0	0	0,0	16,1	21	и.а.
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI

¹Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. NI - не включали в статистический анализ.

Таблица 8.18. Обобщение данных об относительных количествах животных в группах, для которых были получены позитивные результаты анализа сыворотки методом дПЦР после контрольного заражения

День	1 Группа	Количество позитивных животных	% позитивных животных	95% CI	Общее количество	р- значение
179 (DPC 0)	1	0	0	0,0	16,1	21	н.а.
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
182 (DPC3)	1	21	100	83,9	100,0	21	н.а.
2	20	100	83,2	100,0	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
186 (DPC7)	1	4	19	5,4	41,9	21	<0,0001
2	20	100	83,2	100,0	20
3	0	0	0,0	26.5	12	NI
189 (DPC Ю)	1	0	0	0,0	16,1	21	<0,0001
2	19	95	75,1	99,9	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. NI - не включали в статистический анализ.

Клинические обследования после контрольного заражения.

- 81 035624

Аномальное дыхание не было выявлено ни у одной из вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней после контрольного заражения, в отличие от контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, в которой была выявлена одна свинья (№ 149), состояние которой в день D185 (DPC 6) было оценено баллом 1. Не было выявлено статистически значимых различий между группами в проценте свиней, у которых было выявлено аномальное дыхание по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения (p=0,4878).

Аномальное поведение и кашель не были выявлены после контрольного заражения ни у одной из вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней или свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению.

Проценты свиней с общими клиническими баллами > 0 по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения составляли 0% и 5% для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению соответственно. Различие между этими величинами не было статистически значимым (p=0,4878).

В группе отрицательного контроля в период со дня D179 по день D189 клинических признаков не было выявлено.

Обобщение частот встречаемости свиней в группах, для которых был получен по меньшей мере один позитивный балл клинического обследования после контрольного заражения, представлено ниже в табл. 8.19.

Таблица 8.19. Обобщение частот встречаемости свиней в группах, для которых был получен по меньшей мере один позитивный балл клинического обследования после контрольного заражения

Параметр	Группа1	Количество позитивных животных	% позитивных животных	95% CI	Общее 2 количество	р-значение
Дыхание	1	0	0	0,0	16,1	21	0,4878
2	1	5	0,1	24,9	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
Поведение	1	0	0	0,0	16,1	21	NA
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
Кашель	1	0	0	0,0	16,1	21	NA
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
Суммарный параметр	1	0	0	0,0	16,1	21	0,4878
2	1	5	0,1	24,9	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ²Одна свинья в группе, обработанной вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ. NI - не включали в статистический анализ; NA -критерий не применим вследствие отсутствия вариабельности.

Между группами не было выявлено различий в максимальных баллах дыхания или максимальных общих баллах в период после контрольного заражения (p=0,4878).

Обобщение максимальных баллов клинических обследований для групп животных, полученных в течение периода после контрольного заражения (со дня DPC 1 по день DPC 10) представлено ниже в табл. 8.20.

Таблица 8.20 Обобщение максимальных баллов клинических обследований для групп животных, полученных после контрольного заражения

Параметр	Группа1	N2	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Средня величи на	рзначени е
Дыхание	1	21	0	0	0	0	0	0	0,0	0,4878
2	20	0	1	0	0	0	0	0,1
3	12	0	0	0	0	0	0	0,0	NI
Поведение	1	21	0	0	0	0	0	0	0,0	1,0000
2	20	0	0	0	0	0	0	0,0
3	12	0	0	0	0	0	0	0,0	NI
Кашель	1	21	0	0	0	0	0	0	0,0	1,0000
2	20	0	0	0	0	0	0	0,0
3	12	0	0	0	0	0	0	0,0	NI
Суммарный параметр	1	21	0	0	0	0	0	0	0,0	0,4878
2	20	0	1	0	0	0	0	0,1
3	12	0	0	0	0	0	0	0,0	NI

- 82 035624

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ²Одна свинья в группе, обработанной вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ. NI - не включали в статистический анализ.

Картина распределения средних баллов клинических обследований была сходна с картиной распределения процента свиней с позитивными клиническими баллами. Не было выявлено статистически значимых различий между вакцинированной MLV PRRS 94881 группой и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p>0,4878).

Обобщение средних баллов клинических обследований в группах в период после контрольного заражения (со дня DPC 1 по день DPC 10) представлено ниже в табл. 8.21.

Таблица 8.21 Обобщение средних баллов клинических обследований в группах в период после контрольного заражения

Параметр	Группа 1	№	Мин.	Макс.	Медианная величина	95% CI	Qдиапазон	Средняя величина	рзначени е
Дыхание	1	21	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,4878
2	20	0,0	ОД	0,00	0,00	0,00	0,00	0,01
3	12	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
Поведение	1	21	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	1,0000
2	20	0,0	0,0	0.00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
Кашель	1	21	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	1,0000
2	20	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	12	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI
Суммарный параметр	1	21	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,4878
2	20	0,0	0,1	0,00	0,00	0,00	0,00	0,01
3	12	0,0	0,0	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ²Одна свинья в группе, обработанной вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ. NI - не включали в статистический анализ

Вес тела и средний суточный прирост массы тела.

Различие между группами не было статистически значимым (p=0,2389). В день D179 (DPC 0) средние величины и среднеквадратичные величины веса тела составляли 134,6 и 128,2 кг в группе, обработанной MLV PRRS 94881, и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Различие не было статистически значимым (p=0,1090). В день D188 (DPC 9) средние величины и среднеквадратичные величины веса тела составляли 138,3 и 130,3 кг в группе, обработанной MLV PRRS 94881, и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. В день D188 вес тела в вакцинированной группе был статистически значимо больше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p=0,0455).

Среднеквадратичные величины ADWG в период после контрольного заражения (со дня DPC 0 по день DPC 9) составляли 0,4 и 0,2 кг/день в группе, обработанной MLV PRRS 94881, и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Различие между этими результатами не было статистически значимым (p=0,1041).

Средние величины веса тела у свиней в группе отрицательного контроля составляли 2,7, 117,2 and 120,0 кг в дни D0, D179 и D188 соответственно. Величина ADWG для группы отрицательного контроля в период со дня D179 по день D188 составляла 0,5 кг/день.

Обобщение средних величин веса тела в дни D0, D179 (DPC 0) и D188 (DPC 9) и величин ADWG для групп животных в период со дня DPC 0 по день DPC 9 представлено ниже в табл. 8.22. Обобщение среднеквадратичных величин и результатов статистического анализа веса тела и ADWG для группы, обработанной MLV PRRS 94881, и контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, представлено ниже в табл. 8.23.

- 83 035624

Таблица 8.22. Обобщение средних величин веса тела и величин среднего суточного прироста массы для групп животных (в кг и кг/день соответственно)

День(дни)	1 Группа	N	Мин.	Макс.	Медианная величина	Средняя величина	SD
0 Вес тела	1	22	2,8	5,4	4,00	3,96	0,730
2	22	2,4	4,8	3,75	3,72	0,547
3	12	2,7	4,5	3,60	3,71	0,552
D179 вес тела (DPC 0)	1	21	108,5	155,0	136,60	134,57	12,737
2	20	103,3	152,6	130,10	128,15	12,288
3	12	117,2	156,5	133,05	134,61	10,900
D188 Вес тела (DPC 9)	1	21	112,2	157,8	141,50	138,28	12,879
2	20	109,4	150,9	131,90	130,27	11,896
3	12	120,0	162,5	136,60	139,11	11,922
ADWG со дня DPC 0 по день DPC 9	1	21	-0,422	0,956	0,4111	0,4124	0,31653
2	20	-0,589	0,844	0,2889	0,2350	0,36530
3	12	-1,600	2,656	0,5111	0,5000	0,92391

'Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля.

Таблица 8.23. Обобщение среднеквадратичных величин и результатов статистического анализа веса тела и величин среднего суточного прироста массы для групп животных (в кг и кг/день соответственно)

День(дни)	1 Группа	Среднеквадратичная величина	95%-ный доверительный интервал	р-значение
0 Вес тела	1	3,6	3,674	4,241	0,2389
2	3,72	3,446	4,000
Разница между 1-2	0,23	-0,162	0,631
D179 Вес тела (DPC 0)	1	134,57	129,040	140,093	0,1090
2	128,15	122,487	133,813
Разница между 1-2	6,42	-1,496	14,329
D188 Вес тела (DPC 9)	1	138,28	132,800	143,756	0,0455
2	130,27	124,652	135,878
Разница между 1-2	8,01	0,170	15,856
ADWG со дня DPC 0 по день DPC 9	1	0,4124	0,26180	0,56297	0,1041
2	0,2350	0,08070	0,38930
Разница между 1-2	0,1774	-0,03822	0,39299

'Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля.

Ректальные температуры.

Средняя ректальная температура в обработанной MLV PRRS 94881 группе составляла 39,3°С в день контрольного заражения (D179) и после контрольного заражения средние величины находились в пределах от 39,1°С (D189, DPC 10) до 39,8°С (D181, DPC 2). Средняя ректальная температура в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, составляла 39,1°С в день контрольного заражения и после контрольного заражения средние величины находились в пределах от 39,1°С (D183, DPC 4) до 39,9°С (D182, DPC 3). Средние ректальные температуры в группе отрицательного контроля оставались на уровне < 39,3°С на протяжении того же самого периода времени.

Обобщение данных о ректальных температурах в группах животных представлено ниже в табл. 8.24.

- 84 035624

Таблица 8.24. Обобщение данных о ректальных температурах (°С) в группах животных в период со дня __________________D179 (DPC 0) по день D189 (DPC 10)__________________

День	1 Группа	№	Мин.	Макс.	Медианная величина	Средняя величина	SD
D179 (DPC 0)	1	21	38,5	40,0	39,40	39,33	0,360
2	20	38,6	40,0	39,00	39,07	0,380
3	12	38,8	39,7	39,30	39,27	0,257
D180 (DPC 1)	1	21	38,7	40,4	39,40	39,46	0,370
2	20	38,9	40,9	39,60	39,61	0,527
3	12	38,8	39,5	39,00	39,09	0,227
D181 (DPC 2)	1	21	39,0	41,0	39,80	39,82	0,473
2	20	38,6	40,5	39,35	39,42	0,487
3	12	38,8	39,2	38,80	38,90	0,141
D182 (DPC 3)	1	21	38,5	40,6	39,50	39,52	0,542
2	20	39,0	41,1	40,05	39,86	0,588
3	12	38,7	39,4	39,00	39,05	0,254
D183 (DPC 4)	1	21	38,9	40,8	39,50	39,52	0,411
2	20	38,4	40,3	39,00	39,08	0,508
3	11	38,8	39,4	39,10	39,08	0,209
D184 (DPC 5)	1	21	39,0	40,3	39,70	39,72	0,360
2	20	38,7	39,7	39,10	39,15	0,302
3	12	38,8	39,5	39,10	39,10	0,191
D185 (DPC 6)	1	21	39,1	40,5	39,60	39,66	0,376
2	20	38,9	40,9	39,25	39,48	0,546
3	12	38,4	39,4	38,85	38,88	0,313
D186 (DPC 7)	1	21	38,1	40,4	39,20	39,22	0,413
2	20	38,6	40,4	39,35	39,39	0,479
3	12	38,5	39,6	38,90	38,98	0,328
D187 (DPC 8)	1	21	38,8	39,9	39,20	39,23	0,290
2	20	38,8	40,8	39,45	39,58	0,573
3	12	38,5	39,5	38,85	38,93	0,296
D188 (DPC 9)	1	21	38,8	39,9	39,10	39,17	0,288
2	20	38,3	40,5	39,00	39,20	0,598
3	12	38,4	39,1	38,85	38,85	0,173
D189 (DPC Ю)	1	21	38,7	39,7	39,00	39,06	0,256
2	20	39,0	40,8	39,50	39,51	0,408
3	12	38,6	39,3	39,05	39,00	0,226

¹ Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ²Одна свинья в группе, обработанной вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ.

Среднеквадратичные величины ректальной температуры у вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней были статистически значимо больше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в дни DPC 0 (p=0,0281), DPC 2 (p=0,0095), DPC 4 (p=0,0034) и DPC 5 (p<0,0001). Среднеквадратичные величины ректальной температуры у вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней были статистически значимо меньше, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в дни DPC 8 (p=0,0183) и DPC 10 (p=0,0001). В остальные дни в период после контрольного заражения не было выявлено статистически значимых различий между группами (p>0,0642). Обобщение данных о среднеквадратичных величинах ректальной температуры для групп животных и результатов статистического анализа представлены ниже в табл. 8.25.

- 85 035624

Таблица 8.25. Обобщение данных о среднеквадратичных величинах ректальной температуры (°С) для групп животных в период со дня D179 (DPC 0) по день D189 (DPC 10)

День	1 Группа	Средне кв адр атичная величина	95%-ный доверительный интервал	р-значение
D179 (DPC 0)	1	39,33	39,170	39,496	0,0281
2	39,07	38,903	39,237
Разница между 1-2	0,26	0,030	0,497
D180 (DPC 1)	1	39,46	39,257	39,657	0,3025
2	39,61	39,400	39,810
Разница между 1-2	-0,15	-0,434	0,138
D181 (DPC 2)	1	39,82	39,612	40,036	0,0095
2	39,42	39,198	39,632
Разница между 1-2	0,41	0,105	0,712
D182 (DPC 3)	1	39,52	39,274	39,773	0,0642
2	39,86	39,604	40,116
Diff. 1-2	-0,34	-0,693	0,021
D183 (DPC 4)	1	39,52	39,320	39,727	0,0034
2	39,08	38,867	39,283
Разница между 1-2	0,45	0,158	0,740
D184 (DPC 5)	1	39,72	39,572	39,866	<0,0001
2	39,15	38,999	39,301
Разница между 1-2	0,57	0,359	0,779
D185 (DPC 6)	1	39,66	39,457	39,869	0,2164
2	39,48	39,269	39,691

	Разница между 1-2	0,18	-0,112	0,478
D186 (DPC 7)	1	39,22	39,027	39,421	0,2408
2	39,39	39,188	39,592
Разница между 1-2	-0,17	-0,448	0,116
D187 (DPC 8)	1	39,23	39,034	39,432	0,0183
2	39,58	39,376	39,784
Разница между 1-2	-0,35	-0,631	-0,062
D188 (DPC 9)	1	39,17	38,966	39,377	0,8454
2	39,20	38,989	39,411
Разница между 1-2	-0,03	-0,323	0,266
D189 (DPC 10)	1	39,06	38,908	39,207	0,0001
2	39,51	39,352	39,658
Разница между 1-2	-0,45	-0,662	-0,234

¹Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля.

У трех из 21 (14%) вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней и у 5 из 20 (25%) свиней в кон трольной группе, подвергнутой контрольному заражению, была выявлена ректальная температура > 40,5°С по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения. Не было выявлено различий между группами в относительном количестве свиней, у которых была обнаружена ректальная температура >40,5°С по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения. (p=0,4537). Обобщение данных об относительном количестве свиней в группах, у которых была выявлена гипертермия (>40,5°С) по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения, представлено ниже в табл. 8.26.

Таблица 8.26. Обобщение данных об относительном количестве свиней в группах, у которых была выявлена гипертермия (>40,5°С) по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения

День	1 Группа	Количество позитивных животных	% позитивных животных	95% CI	Общее количество	р- значение
со дня D180 (DPC	1	3	14	3,0	36,3	21	0,4537
2	5	25	8,7	49,1	20
1) по день D189 (DPC Ю)	3	0	0	0,0	26,5	12	NI

¹Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. ^{1 2}Одна свинья в группе, обработанной вакциной MLV PRRS 94881, и две свиньи в контрольной группе, предназначенной для контрольного заражения, умерли до осуществления контрольного заражения и не были включены в анализ. NI -не включали в статистический анализ.

Клинические оценки после вакцинации.

- 86 035624

Для четырех из 22 (18%) обработанных MLV PRRS 94881 свиней, 8 из 22 (36%) свиней из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, и у 2 из 12 (17%) свиней из группы отрицательного контроля были выявлены аномалии при клинических оценках по меньшей мере в один из дней в период со дня D1 по день D21. Не было выявлено статистически значимых различий между группами в этом параметре (p=0,3102).

Обобщение данных о проценте свиней в группах, у которых была выявлена по меньшей мере одна аномалия при клинической оценке в период со дня D1 по день D21, представлено ниже в табл. 8.27.

Таблица 8.27. Обобщение данных о проценте свиней в группах, у которых была выявлена по меньшей мере одна аномалия при клинической оценке в период со дня D1 по день D21

1 Группа	Количество позитивных животных	% позитивных животных	95% CI	Общее количество	р-значение
1	4	18	5,2	40,3	22	0,3102
2	8	36	17,2	59,3	22
3	2	17	2,1	48,4	12	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. NI - не включали в статистический анализ.

В общей сложности у 7 свиней, обработанных MLV PRRS 94881, была выявлена аномалия при клинической оценке по меньшей мере в один из дней в период со дня D1 по день D177.

У свиньи 121 было выявлено вздутие живота в период со дня D61 по день D146, опухание влагалища в период со дня D147 по день D167, вздутие живота в день D168, опухание влагалища в период со дня D169 по день 172 и вздутие живота в период со дня 173 по день 177. У свиньи 141 была выявлена худосочность в период со дня D4 по день D10, депрессия в период со дня D4 по день D6 и грубый волосяной покров в день D5. У свиньи 144 был выявлен кашель в день D26. У свиньи 146 было выявлено опухание грудины в день D82. У свиньи 147 была выявлена слабость ног в период со дня D84 по день D86 и она нетвердо стояла на ногах (покачивалась) в день D84. У свиньи 154 была выявлена худосочность в период со дня D4 по день D6. У свиньи 179 была выявлена худосочность в период со дня D2 по день D5, грубый волосяной покров в день D5 и она была обнаружена мертвой в день D6. У тринадцати свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, была выявлена аномалия при клинической оценке по меньшей мере в один из дней в период со дня D1 по день D177: У свиньи 124 были выявлены покачивания и тремор в день D20 и она была обнаружена мертвой в день D21. У свиньи 134 было выявлено опухание влагалища в период со дня D46 по день D68, вздутие живота в период со дня D69 по день D143, пупочная грыжа в день D144 и вздутие живота в период со дня D145 по день D177. У свиньи 137 было выявлено опухание влагалища в период со дня D108 по день D143. У свиньи 138 вздутие живота в период со дня D115 по день D143. У свиньи 148 была выявлена хромота или опухание ноги в период со дня D16 по день 20 и кашель в день D35. У свиньи 149 была выявлена худосочность в период со дня D5 по день D9 и в день D12, а также грубый волосяной покров в период со дня D12 по день D15. У свиньи 150 была выявлена худосочность в период со дня D4 по день D9 и в день D13, плохая кондиция тела в период со дня D10 по день D12, а также депрессия в день D11. У свиньи 161 была выявлена худосочность в период со дня D4 по день D9, грубый волосяной покров и признаки нарушения центральной нервной системы в день D9, и она была обнаружена мертвой в день D10. У свиньи 167 было выявлено опухание влагалища в период со дня D117 по день D143. У свиньи 170 была выявлена худосочность в период со дня D4 по день D7 и депрессия в день D7. У свиньи 172 был выявлен нарыв или опухание копытца в период со дня D120 по день D143. У свиньи 177 была выявлена депрессия в день D19 и опухание шеи в период со дня D156 по день D159. У свиньи 178 была выявлена депрессия в день D5, в период со дня D17 по день 20 и со дня D28 по день D36, хромота и/или опухание ноги в период со дня D15 по день D47, худосочность в период со дня D16 по день D18, и ригидность ног в период со дня D39 по день D47. У шести свиней в группе отрицательного контроля была выявлена аномалия при клинической оценке по меньшей мере в один из дней в период со дня D1 по день D177. У свиньи 120 был выявлен кашель в период со дня D5 по день D7 и в день D12. У свиньи 126 была выявлена худосочность в период со дня D2 по день 18, депрессия в период со дня D4 по день D5, в день D10 и в период со дня D17 по день D19, грубый волосяной покров в день D5 и затрудненное дыхание в период со дня D18 по день D22. У свиньи 132 был выявлен абсцесс в период со дня D49 по день D56. У свиньи 145 было выявлено опухание влагалища в период со дня D37 по день D43 и со дня D46 по день D74, а также нарыв во влагалище в период со дня D75 по день D83 и со дня D85 по день D87. У свиньи 151 была выявлена хромота и/или опухание ноги в период со дня D78 по день D83 и в день D85. У свиньи 155 был выявлен абсцесс в период со дня D69 по день D77.

В период до осуществления контрольного заражения произошли три смерти. Свинья 179 (группа, вакцинированная MLV PRRS 94881, день D6): При осуществлении аутопсии были выявлены минимальные повреждения (худосочность, плохая кондиция тела). Лабораторный анализ выявил слабую макрофагальную интерстициальную пневмонию. Результаты иммуногистохимического анализа на PRRS были отрицательными. В образцах, взятых из кишечника, выявлено наличие автолиза, но не было обнаружено

- 87 035624 серьезного некроза или серьезного воспаления. Были выделены гладкие колонии Escherichia coli и Enterococcus spp. (раздел 15.9). Свинья 124 (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению, день D21): При осуществлении аутопсии не было выявлено макроскопических повреждений. При проведении лабораторных анализов был обнаружен менингоэнцефалит от серьезного суппуративного до пиогрануломатозного с суппуративным периваскулитом. Был обнаружен также выраженный застой в легких и печени. Был вынесен диагноз: менингоэнцефалит, ассоциированный с инфекцией Streptococcus suis. Свинья 161 (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению, D10): При осуществлении аутопсии были выявлены минимальные повреждения (худосочность, плохая кондиция тела). Из тканей легких были выделены Bordetella bronchiseptica, альфа-гемолитический стрептококк и Staphylococcus auricularis.

Серологический анализ на PRRS.

Все свиньи имели по данным ELISA PRRS-негативный статус в дни D0 и D7. В день D14 у 90% вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней были выявлены PRRS-позитивные по данным ELISA титры. Этот уровень возрос до 95% в день D21 и составлял 100%, 100%, 100%, 90%, 100% и 95% в дни D28, D56, D84, D112, D140 и D168 соответственно. Ни у одной из свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, не были обнаружены титры антител к вирусу PRRS на протяжении фазы вакцинации данного исследования и в период со дня D14 по день D168, в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе статистически значимо более высокий процент свиней имел позитивные титры антител к вирусу PRRS, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0001).

На протяжении фазы контрольного заражения данного исследования проценты свиней с позитивным по данным ELISA статусом в отношении титров антител к вирусу PRRS в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе составляли 95%, 95%, 100% и 100% в дни DPC 0, DPC 3, DPC 7 и DPC10 соответственно. В отличие от этого, в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, у свиней не были выявлены титры антител к вирусу PRRS вплоть до дня DPC 7, когда титры антител были выявлены у 30% животных. Этот уровень возрос до 80% в день DPC 10. На протяжении фазы контрольного заражения данного исследования в группе вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней был более высокий процент животных с позитивными титрами антител к вирусу PRRS (p<0,0478).

Свиньи в группе отрицательного контроля сохраняли PRRS-негативный по данным ELISA статус на протяжении всего исследования за исключением двух свиней, у которых был выявлен позитивный результат в день D112. Свиньи 116 и 120 по данным ELISA имели PRRS-серонегативный статус в день D112.

Обобщение данных о процентах свиней с позитивным статусом в отношении титров антител к вирусу PRRS до осуществления контрольного заражения представлены ниже в табл. 8.28. Данные для фазы контрольного заражения настоящего исследования представлены ниже в табл. 8.29.

Таблица 8.28. Обобщение данных о частотах свиней с позитивным статусом в отношении титров антител к вирусу PRRS в группах животных в указанные дни в период со дня 0 по день 168

День	Группа1	Количество позитивных животных	% позитивных животных	95% CI	Общее количество	р-значение
0	1	0	0	0,0	15,4	22	NA
2	0	0	0,0	15,4	22
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
7	1	0	0	0,0	16,1	21	NA
2	0	0	0,0	15,4	22
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
14	1	19	90	69,6	98,8	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,1	21
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
21	1	20	95	76,2	99,9	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
28	1	21	100	83,9	100,0	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
56	1	21	100	83,9	100,0	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
84	1	21	100	83,9	100,0	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
112	1	19	90	69,6	98,8	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	2	17	2,1	48,4	12	NI
140	1	21	100	83,9	100,0	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
168	1	20	95	76,2	99,9	21	<0,0001
2	0	0	0,0	16,8	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI

- 88 035624

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. NI - не включали в статистический анализ. NA - не применимо, анализ не проводили.

Таблица 8.29. Обобщение данных о частотах свиней с позитивным статусом в отношении титров антител

к вирусу]	4RRS в I День D179 (DPC 0) D182 (DPC 3)	руппах Группа1 1 2 3 1 2	животнь Количество позитивных животных 20 0 0 20 0	[х в указа! % позитивных животных 95 0 0 95 0	тые дни 95% CI 76,2 0,0 0,0 76,2 0,0	в период 99,9 16,8 26,5 99,9 16,8	/о дня DP Общее количество 21 20 12 21 20	C 0 по ден р-значение <0,0001 NI <0,0001	1ь DPC 10
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
D186 (DPC 7)	1	21	100	83,9	100,0	21	<0,0001
2	6	30	П,9	54,3	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI
D189 (DPC 10)	1	21	100	83,9	100,0	21	0,0478
2	16	80	56,3	94,3	20
3	0	0	0,0	26,5	12	NI

1Группа 1 - группа, обработанная вакциной MLV PRRS 94881; группа 2 -контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению; группа 3 - группа отрицательного контроля. NI - не включали в статистический анализ.

Обсуждение/выводы

Для решения задачи исследования двадцати двум (22) здоровым восприимчивым к PRRS и имеющим серонегативный статус свиньям возрастом примерно 14 дней вводили IM по 1 мл MLV PRRS 94881. Тридцати четырем (22 свиньи - контрольная группа, предназначенная для контрольного заражения, и 12 свиней - группа отрицательного контроля) восприимчивым к PRRS и имеющим серонегативный статус свиньям возрастом примерно 14 дней вводили IM по 1 мл контрольного продукта.

Валидация исследования и модель контрольного заражения.

Свиньи в группе отрицательного контроля сохраняли негативный в отношении PRRSV статус (виремия; qПЦР) на протяжении всего исследования. У двух свиней (№ 116 и № 120) в группе отрицательного контроля были получены позитивные по данным ELISA результаты при оценке титров в день D112, в то время как все остальные результаты анализа методом ELISA для этой группы были негативными. Принимая во внимание, что виремия не была обнаружена ни у этих свиней, ни в указанной группе в целом; а также что для всех остальных образцов сыворотки были получены негативные по данным ELISA результаты, результаты, полученные для указанных двух свиней в день D112, были признаны позитивными ошибочно, и они, по-видимому, были обусловлены невыясненной лабораторной ошибкой. Таким образом, настоящее исследование являлось валидным. Безотносительно к вопросу о доказательстве валидности исследования следует отметить, что в группе отрицательного контроля медианный балл выявленных путем гистологического анализа повреждений легких составил 9,0 в день D189, в отличие от того, что медианный балл макроскопических повреждений был равен 0,0%. Эти данные свидетельствуют о том, что у свиней, которых содержали в течение продолжительного периода времени в нормальных принятых в животноводстве условиях содержания свиней, возникли небольшие повреждения легких, которые не имели системного характера и не были связаны с конкретными патогенами. После инокуляции с использованием изолята 205817 европейского вируса PRRS описанным выше методом было установлено, что в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, средняя величина ADWG в период со дня DPC 0 по день DPC 9 составляла 0,2 кг/день (средняя величина ADWG в группе отрицательного контроля составляла 0,5 кг/день), медианная величина балла макроскопических повреждений легких составляла 13,8% (в группе отрицательного контроля она составляла 0,0%), медианная величина балла повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, составляла 19,5 (в группе отрицательного контроля она составляла 9,0), а медианная величина уровня РНК PRRSV в ткани легкого составляла 6,25 log₁₀ GE/мл (в группе отрицательного контроля медианная величина составляла 0,0 log₁₀ GE/мл). Эти результаты свидетельствуют о том, что у животных в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, индуцировалась заболевание со специфическими для PRRS клиническими признаками, что валидирует данную модель контрольного заражения в качестве адекватного инструмента для клинических лабораторных исследований эффективности вакцины против PRRS, и более конкретно, для оценки 26-недельной продолжительности действия иммунитета, вызываемого MLV PRRS 94881.

Определение 26-недельной продолжительности действия иммунитета, вызываемого MLV PRRS 94881.

Определение того, что DOI MLV PRRS 94881 составляет 26 недель после вакцинации, было основано на том, что в вакцинированной группе имели место статистически значимо (p<0,05) меньшие повреждения (макроскопические или выявляемые путем гистологического анализа) легких после контрольного заражения, чем в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению.

- 89 035624

Макроскопические или выявляемые путем гистологического анализа повреждения легких были выбраны в качестве основного параметра для определения 26-недельной DOI, поскольку этот параметр обеспечивает наиболее адекватное с клинической точки зрения и убедительное доказательство эффективности при оценке новой вакцины с использованием модели контрольного заражения свиней вирусом PRRS респираторным путем. Развитие повреждения легких является одним из характерных признаков респираторного заболевания PRRS свиней и его можно рассматривать как источник всех последующих проявлений вторичных особенностей заболевания, вызываемого PRRSV, таких как клинические признаки, гипертермия, пониженная величина ADWG и т.д.

В обработанной MLV PRRS 94881 группе была выявлена статистически значимо меньшая макроскопическая патология легких после контрольного заражения, о чем свидетельствовала медианная величина балла макроскопического повреждения легких, составлявшая 0,1%, по сравнению с медианной величиной балла макроскопического повреждения легких в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, составлявшей 13,8% (p<0,0001). Кроме того, в группе, обработанной MLV PRRS 94881, баллы повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, были статистически значимо меньше, о чем свидетельствовала медианная величина балла повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, составлявшая 6,0 для обработанной MLV PRRS 94881 группы по сравнению с медианной величиной балла повреждений легких, выявленных путем гистологического анализа, составлявшей 19,5 для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0001). Таким образом, на основе основного параметра, а именно, статистически значимо меньших повреждений легких после контрольного заражения, было установлено, что имеет место 26-недельная DOI для MLV PRRS 94881 при ее применении в дозе 1 х 10^4,27 TCID50. Этот результат был получен при применении вакцины в дозе, немного более низкой, чем заданная минимальная иммунизирующая доза, равная 1х 10^4,5 ТСГО50/мл. Для одной свиньи из контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению (№ 123), оказалось невозможным провести балльную оценку макроскопических повреждений легких вследствие наличия плеврита и спаек, обусловленных бактериальной инфекцией, но была проведена балльная оценка повреждений легких, выявляемых путем гистологического анализа. Исключение указанной свиньи из анализа макроскопических повреждений легких в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, не повлияло на выходные результаты настоящего исследования.

Уровень виремии после контрольного заражения был выбран в качестве наиболее важного вспомогательного параметра, поскольку он характеризует уровень репликации и персистентности вируса в организме хозяина после заражения. Статистически значимое (p<0,05) снижение уровня виремии должно соответствовать вакцине против вируса PRRS, которая индуцирует адекватный иммунитет, ограничивающий патогенез PRRS в организме хозяина. На 3, 7 и 10 день после контрольного заражения в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе имел место статистически значимо меньший уровень виремии (по данным с.|ПЦР) по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p<0,0001). Для дополнительной оценки уровня виремии после контрольного заражения осуществляли расчет величины вирусной нагрузки в течение определенного периода времени, которое характеризуется величиной площади под кривой или AUC. Для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы медианная величина AUC в период со дня DPC 0 по день DPC 10 составляла 15,54 log₁₀ GE/мл/день; в то время как для группы контрольного заражения медианная величина AUC составляла 44,77 log₁₀ GE/мл/день (p<0,0001). Кроме того, для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы медианная величина AUC в период со дня DPC 3 по день DPC 10 составляла 8,88 log₁₀ GE/мл/день; в то время как для контрольной группы, подвергнутой контрольному заражению, медианная величина AUC в этот период времени составляла 36,43 log₁₀ GE/мл/день (p<0,0001). Как при анализе уровня виремии в конкретные моменты времени, так и при анализе в течение периода времени после контрольного заражения, было установлено, что введение вакцины MLV PRRS 94881 за 26 недель до осуществления контрольного заражения вирулентным гетерологическим штаммом европейского вируса PRRS приводило к статистически значимо (p<0,05) более низким уровням виремии после контрольной инокуляции.

Аналогично снижению уровня PRRS-виремии после контрольного заражения, статистически значимо (p<0,05) более низкий уровень вирусной нагрузки в тканях легких также может иметь важное значение с точки зрения иммунитета, индуцируемого вакциной против PRRS. Более низкий уровень вирусной нагрузки в ткани легких может быть ассоциирован с более низкой стабильностью, репликацией и персистентностью вируса в организме хозяина и, как следствие, может приводить к снижению передачи PRRSV другим свиньям. В настоящем исследовании было установлено, что для вакцинированной MLV PRRS 94881 группы медианная величина вирусной нагрузки в тканях легких по данным qПЦР составляла 3,69 log₁₀ GE/мл через 10 дней после контрольного заражения (DPC 10), в то время как в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, медианная величина вирусной нагрузки в тканях легких по данным qПЦР составляла 6,25 log₁₀ GE/мл. Различие между вакцинированной группой и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, было статистически значимым (p<0,0001), это является дополнительным подтверждением того, что длительность действия иммунитета составляет 26 недель.

Выраженное снижение серьезности и частоты встречаемости клинических признаков после кон

- 90 035624 трольного заражения у свиней также должно являться дополнительным свидетельством эффективности вакцины против PRRS и подтверждением того, что имеет место 26-недельная DOI MLV PRRS 94881. Только у одной свиньи были выявлены клинические признаки после контрольного заражения: для свиньи 149 (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению) был дан респираторный балл 1 (затрудненное дыхание/учащенное дыхание) в день D185. Ни у одной свиньи в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе не было выявлено клинических признаков на протяжении фазы после контрольного заражения в настоящем исследовании и не было выявлено статистически значимых различий между вакцинированной группой и контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению (p=0,4878 или анализ не осуществляли). В настоящем исследовании клинические признаки после контрольного заражения были недостаточно выраженными для оценки DOI.

Гипертермия варьировалась между группами после контрольного заражения. У вакцинированных MLV PRRS 94881 свиней была выявлена статистически значимо более низкая среднеквадратичная величина ректальной температуры в два дня (дни DPC 8 и DPC 10; (p<0,0183)) и более высокая среднеквадратичная величина ректальной температуры в четыре дня (дни DPC 0, DPC 2, DPC 4 и DPC 5; p<0,0281) по сравнению со свиньями в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению. Помимо этого не было выявлено статистически значимых различий между группами после контрольного заражения (p>0,0642). Хотя между группами были выявлены статистически значимые различия после контрольного заражения, эти различия не были важными с биологической точки зрения, учитывая, что средние величины ректальной температуры оставались на уровне < 39,9°С (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению, день D182) для всех групп. Не было выявлено различия между группами в относительном количестве свиней, у которых была обнаружена гипертермия по меньшей мере в один из дней после контрольного заражения (p=0,4537).

Наличие значительного уровня виремии, патологии легких и вирусной нагрузки в тканях легких вследствие PRRS, в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, обусловило наличие статистически значимого различия между группами в величинах веса тела в день DPC 9. В настоящем исследовании среднеквадратичные величины веса тела в вакцинированной группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в день DPC 9 составляли 138,3 кг и 130,3 кг соответственно (p=0,0455). Среднеквадратичные величины ADWG в период со дня DPC 0 по день DPC 9 составляли 0,4 кг/день и 0,2 кг/день в вакцинированной группе и контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, соответственно. Это различие не было статистически значимым (p=0,1041).

Проанализированные в настоящем исследовании параметры в период после вакцинации.

В течение фазы вакцинации настоящего исследования три свиньи были обнаружены мертвыми. Свинья 179 (группа, вакцинированная MLV PRRS 94881) была обнаружена мертвой в день D6, у нее была выявлена инфекция, вызванная smooth Escherichia coli и Enterococcus spp. Свинья 161 (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению) была обнаружена мертвой в день D10, у нее была выявлена инфекция, вызванная Bordetella bronchiseptica, альфа-гемолитическим стрептококком и Staphylococcus auricularis. Свинья 124 (контрольная группа, подвергнутая контрольному заражению) была обнаружена мертвой в день D21, у нее была выявлена инфекция, вызванная Streptococcus suis, которая привела менингоэнцефалиту. Для контроля и предупреждения других случаев гибели свиней подвергли массовой обработке витаминами и антибиотиками, которые вводили путем инъекции. После обработок случаев гибели животных больше не было. Поскольку случаи смерти имели место в обеих группах обработки, то можно предположить, что IVP сама по себе не была ассоциирована с инфекциями. Более вероятным является то, что свиньи прибыли в исследовательский центр, уже будучи инфицированными. Результаты, полученные для этих свиней, учитывали при анализе в тех случаях, когда это было возможно. Баллы макроскопических повреждений легких и баллы повреждений легких, выявляемых путем гистологического анализа, были исключены из анализов повреждений легких, поскольку эти свиньи умерли до осуществления контрольного заражения. Потеря одной свиньи в группе, обработанной MLV PRRS 94881, и двух свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в течение продолжительного периода времени с момента вакцинации до осуществления контрольного заражения не повлияла на конечные результаты исследования.

У свиней при осуществлении клинических оценок не было выявлено никаких аномалий, связанных с вакцинацией с использованием MLV PRRS 94881 или с контрольным продуктом, после инокуляции в день D0. Аномалии при оценке в период после вакцинации были выявлены у семи свиней в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе; в то время как в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, аномалии были выявлены у тринадцати свиней. Если исключить из рассмотрения трех свиней, которые умерли вследствие бактериальной инфекции, то указанные аномалии включали худосочность, кашель, опухание, грубый волосяной покров, депрессию, абсцессы и плохую кондицию тела, выявленные в различные моменты времени, при этом ни один из указанных признаков не наблюдался в течение длительного периода времени. По мнению авторов изобретения эти результаты не связаны с введением экспериментального продукта, но скорее представляют собой типичные явления, встречающиеся у свиней на стадии откорма/созревания в условиях группового содержания в течение продолжительного пе

- 91 035624 риода времени.

Все свиньи имели PRRS-серонегативный по данным ELISA статус в день D0, это подтверждает, что все свиньи удовлетворяли критерию включения, согласно которому все свиньи должны были иметь PRRS-серонегативный статус при включении в исследование. У большинства свиней (90%), обработанных MLV PRRS 94881, имела место сероконверсия, в результате чего они приобрели PRRS-позитивный статус ко дню D14, а ко дню D28 все обработанные вакциной против PRRSV свиньи имели серопозитивный статус. В отличие от этого, свиньи в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, сохраняли серонегативный статус вплоть до 7 дней после осуществления контрольного заражения, после чего в этой группе начала происходить PRRS-сероконверсия. Как указано выше, у двух свиней в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, в день D112 был выявлен PRRSсеропозитивный статус по данным ELISA, что было решено считать случайным результатом, обусловленным неизвестной лабораторной ошибкой.

В дни 7, 14, 21 и 28 после вакцинации медианные результаты, полученные методом qПЦР, в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе составляли 3,00, 0, 0 и 3,00 log₁₀ GE/мл соответствcенно. Эти результаты свидетельствуют о том, что в течение 4 недель после вакцинации доза MLV PRRS 94881, составляющая 1 х 10⁴’²⁷ TCID50, индуцировала достаточный уровень репликации MLV, который часто является достаточным для создания защитного иммунитета уже через 4 недели после вакцинации. В отличие от этого, животные в контрольной группе, подвергнутой контрольному заражению, сохраняли негативный в отношении виремии PRRSV статус вплоть до трех дней после осуществления контрольного заражения.

Выводы

Статистически значимо меньшие (p<0,05) макроскопические и выявленные путем гистологического анализа повреждения легких, обнаруженные при осуществлении аутопсии, вирусная нагрузка в тканях легких, обнаруженная при осуществлении аутопсии, и уровень виремии после контрольного заражения в вакцинированной MLV PRRS 94881 группе по сравнению с контрольной группой, подвергнутой контрольному заражению, демонстрируют эффективность вакцины против вирулентного PRRSV в том случае, когда вакцинацию животных проводили в возрасте 2 недель и осуществляли контрольное заражение через 26 недель после вакцинации. Таким образом, результаты настоящего исследования подтверждают наличие 25-недельной продолжительности иммунитета после вакцинации с использованием MLV PRRS 94881. Эти результаты были получены при использовании дозы вакцины 1 х 10⁴’²⁷ ТСГО50/мл, которая была немного ниже минимальной иммунизирующей дозы (1 х 10⁴’⁵ ТСГО50/мл).

Ниже представлены последовательности ослабленного штамма PRRSV 94881 и родительского штамма:

SEQ ID NO: 1: полноразмерная нуклеотидная последовательность исходного вакцинного вируса PRRS 94881

TTTGTGTACC TTGGAGGCGT GGGTACAGCC CTGCCCCACC CTTTGGTCCC TGTTCTAGCC

CGACAAGTAC ССТТСТСТСТ CGGGGCGAGC GCGCCGCCTG CTGCTCCCTT GCGGCGGGAA

121 GGACCTCCCG AGTATTTCCG GAGAGCACCT GCTTTACGGG ATCTCCGCCC TTTAACCATG 181 TCTGGGATGT TCTCCCGGTG CATGTGCACC CCGGCTGCCC GGGTATTTTG GAACGCCGGC 241 CAAGTCTATT GCACACGGTG TCTCAGTGCA CGGTCTCTTC TCTCTCCAGA ACTTCAGGAC 301 ACGGACCTCG GTGCAGTTGG CTTGTTTCAC AAGCCTAAAG ACAAGCTCCA TTGGAAAGTT 361 CCCATTGGTA TCCCCCAGGT GGAATGTTCT CCATCTGGGT GTTGCTGGCT GTCAACCATT 421 TTTCCTTTAG CGCGCATGAC CTCCGGCAAT САСААСТТСС TTCAACGACT CGTGAAGGTT 481 GCTGATGTAT TGTACCGTGA CGGTTGCTTA ACCCCTAGAC ACCTCCGTGA ACTCCAAGTT 541 TACGAGCGTG GTTGCAATTG GTATCCGATT ACGGGGCCTG TGCCTGGGAT GGCTGTGTAC 601 GCGAACTCCA TGCACGTGTC CGACCAACCG TTCCCTGGTG CCACTCATGT GTTAACAAAT 661 TCCCCTTTGC CTCAACGGGC TTGTCGGCAG CCGTTCTGTC CGTTCGAAGA GGCCCATTCT 721 AGCATATACA GGTGGGAAAA ATTTGTAATT TTTATGGATT CCTCCTCCGA CGGTCGATCT 781 CGCATGATGT GGACTCCGGA ATCCGATGAC TCCACGGCTT TGGAAGTTCT GCCGCCCGAG 841 CTAGAACACC AGGTCAAGGT CCTTGTTCGG AGCTTTCCCG СССАТСАССТ TGTCGACCTT 901 GCCGATTGGG AGCTCACTGA GTCCCCTGAT AACGGTTTTT CCTTCAGCAC GTCACATCCT 961 TGCGGCTACC TTGTTCGGGA CCCGGCTGTA TCCGAAGGCA AGTGTTGGCT TTCCTGCTTT

1021 TTGAGCCAGT CAGCCGAAGT GCTCAGTCGC GAGGCGCATC TGGCTACCGC CTATGGTTAC 1081 CAAACCAAGT GGGGTGTGCC TGGCAAGTAC ATCCAGCGCA GACTTCAAGT TCACGGTCTC 1141 CGTGCTGTGG TCGACCCTGA TGGTCCCATT CACGTTGAAG CATTGTCTTG CCCCCAGTCT 1201 TGGATCAGGC ACTTGACCCT GAATGATGAT GTCACCCCGG GATTCGTTCG CCTAATGTCT

- 92 035624

1261 CTTCGCATTG TGCCGAACAC AGAGCCTACC ACACACCGGA TCTTTCGTTT TGGAGTGCAC 1321 AAGTGGTATG GTGCCGCCGG CAAACGGGCC CGTGGCAAGC GTGCCGCCAA AAGTGAGAAA 1381 GACTCGGCTT CCACCCTCAA GGTTGCCCGA CCGACTTCCA CCAGTGGAAT CGTCACCTAC 1441 TCCCCACCTG CGGACGGGTC TTGTGGTTGG CATGCCCTTG CCGCCATACT GAACCGGATG 1501 ATTAATAATG ACTTCACGTC CCCTCTGCCT CGGTACAACA GGCCGGAGGA CGATTGGGCT 1561 TCTGATGGTG ACCTTGCTCA GGCCATTCAA TGTTTGCAAC TACCTGCCGC CATAGCTCGG 1621 AACCGCGCCT GCCCTAACGC CAAATACCTC ATAAAACTCA ACGGAGTTCA TTGGGAGGTA 1681 GAGGTGAGGC CTGGAATGGC TCCTCGCTCC CTCTCTCGTG AGTGCGTTGT TGGCGTCTGC 1741 TCTGAAGGCT GTGTCGCGTC GCCTTACCCG GAGGACGGGT TGCCTAAACG TGCACTTGAG 1801 GCCCTGGCGT CTGCTTATAG ACTGCCTTCA GACTGTGTTT GTGATGGTAT TATTGACTTC 1861 CTTGCCAATC CACCTCCCCA GGAGTTCTGG ACTCTTGACA AAATGTTGAC TTCCCCGTCA 1921 CCGGAGCAGT CCGGCTTCTC TAGTCTGTAT AAATTGTTGT TAGAGATCTT GCCGCAGAAA 1981 TGCGGATCCA CAGAAGGGGA ATTCATCTAT ACTGTTGAGA GGATGTTGAA GGATTGTCCG 2041 AGCTCCAAAC AGGCCATGGC CCTCCTTGCA AAAATTAAGG TCCCATCCTC AAAGGCCCCA 2101 TCCGTGACTC TGAACGAGTG CTTCCCCACG GATGTTCCAG TCAACTCTGA GTTAATATCT 2161 TGGGAAGAGC CCAAAGACCC TGGCGCTGCT GTTGTCCTAT GTCCATCGGA TGCAAAAGAA 2221 TCTAAGGAAA CAGCCCCTGA AGAAGCTCAA GCGAGAAACC GTAAGGTCCT TCACCCTGTG 2281 GTCCTTACCG AGGAACTTAG CGAGCAACAG GTGCAGGTGG TTGAGGGTGA TCAGGATATG 2341 CCACTGGATT TGACTTGGCC AACCTTAACC GCTACGGCGA CCCCTGTTAG AGGGCCGGTA 2401 CCGGACAATT TGAGCTCTGG CATTGGTGCC CAGCCCGCTA CCGTTCAAGA ACTCATTCTG 2461 GCGAGGCCTG CACCCCGTCT TGTTGAGCGC TGTGGCACGG AGTCGAACGG CAGCAGTTCA 2521 TTTCTGGATT TGCCTGACGT GCAGACCTCG GACCAGCCTT TAGACCTGTC CCTGGCCGCG 2581 TGGCCTGTAA GGGCTACCGC GTCTGACCCC GGTTGGATCC ACGGTAGGCG TGAGCCTGTC 2641 TTTGTGAAGC CTCGAGGTGT TTTCTCTGAT GGCGAGTCGG CCCTTCAGTT CGGAGAGCTT 2701 TCCGAAGCCA GTTCTGTCGT CGATGACCGG ACAAAAGAAG CTCCGGTGGT TGACGCCCCC 2761 ATCGATTTGA CAACTTCGAA CGAGACGCTC TCTGGGTCTG ACCCCTTTGA ATTCGCCAAA 2821 TTCAGGCGCC CGCGTTTCTC CGCGCAAGCT TTAATCGACC GAGGTGGTCC GCTTGCCGAT 2881 GTTCATGCAA AGATAAAGAG TCGGGTATAT GAACAATGCC TTCAAGCTTG TGAACCTGGT 2941 AGTCGTGCGA CCCCAGCCAC CAAGAAGTGG CTCGACAAAA TGTGGGACAG GGTGGACATG 3001 AAAACTTGGC GCTGCACCTC GCAGTTCCAA GCTGGTCACA TTCTTGAGTC CCTCAAATTC 3061 CTCCCTGACA TGATTCAAGA CACACCGCCT CCTGTTCCCA GGAAGAACCG AGCTGGTGAC 3121 AGTGCCGGCC TGAAGCAACT GGTGGCGCAG TGGGATAGGA AATCGAGTGT GACACCCCCC 3181 ACAAAACCGG TTGGACCGGT GCTTGACCAG GCCGTCCCTC TGCCTATGGA CATCCAGCAA 3241 GGAGATGCCA TCTCCGCTGA CAAGCCACCC CATTCGCAAA ACCCTTCTAG TCAAGTAGAT 3301 GTGGGTGGAG GTTGGAAAAG TTTTATGCTC TCCGGCACCC GTTTCGCGGG GTCCGTTAGT 3361 CAGCGCCTTA CGACATGGGT TTTTGAGGTT CTCTCCCATC TCCCAGCTTT TATGCTCACA 3421 CTTTTCTCGC CACGGGGCTC TATGGCTCCA GGTGATTGGC TGTTTGCAGG TGCTGTTCTA 3481 CTTGCTCTCC TGCTCTGCCG TTCTTACCCA ATACTCGGAT GCCTTCCCTT ATTGGGTGTC 3541 TTTTCTGGTT CTGTGCGGTG TGTTCGTTTG GGTGTTTTTG GTTCTTGGAT GGCTTTTGCT 3601 GTATTTTTAT TCTCGACTCC AGCCGACCCA GTCGGTTCTT CTTGTGACCA CGATTCGCCG 3661 GAGTGTCATG CTGAGCTTTT GGCTCTTGAG CAGCGCCAAC TTTGGGAACC TGTGCGCAGC 3721 CTTGTGGTCG GGCCATCGGG CCTCTTATGC GTCATTCTTG GCAAGTTACT CGGTGGGTCA 3781 CGTTGTCTCT GGTTTGTTCT CCTACGTATA TGCATGCTCG CAGATTTGGC AATTTCTCTT 3841 ATTTATGTGG TGTCCCAAGG GCGTTGTCAC AAGTGTTGGG GAAAGTGTAT AAGGACGGCT 3901 CCTGCAGAAG TGGCCCTTAA TGTGTTTCCT TTTTCGCGCG CCACCCGCTC ATCTCTTGTG 3961 TCCTTGTGTG ATCGGTTCCA AGCGCCAAAA GGAGTTGACC CCGTGCACTT GGCGACAGGC 4021 TGGCGCGGGT GCTGGTGTGG TGAGAGCCCT ATTCATCAAT CACACCAAAA ACCGATAGCT 4081 TATGCCAACT TGGATGAAAA GAAGATATCC GCCCAGACGG TGATTGCTGT CCCGTATGAT 4141 CCTAGTCAGG CCATTAAATG CCTGAAAGTT TTGCAGGCAG GAGGGGCTAT TGTGGACCAG 4201 CCTACGCCCG AGGTCGTCCG TGTGTCTGAG ATTCCCTTCT CGGCCCCATT TTTTCCGAAG 4261 GTCCCAGTCA ACCCAGACTG CAGGGTTGTG GTAGATTCGG ACACTTTTGT GGCTGCGGTC 4321 CGCTGCGGTT ATTCGACAGC ACAACTGGTC CTTGGTCGGG GCAACTTTGC CAAGCTAAAT 4381 CAGACCCCCC TCAGGAACTC TGTCCCCACC AAAACAACTG GTGGGGCCTC ATACACCCTT 4441 GCCGTGGCCC AGGTATCTGT GTGGACTCTT GTTCATTTCA TCCTCGGCCT TTGGTTAACG 4501 TCACCTCAAG TGTGTGGTCG AGGGACCTCT GACCCGTGGT GTTCGAACCC TTTTTCGTAT 4561 CCTACTTATG GCCCCGGAGT TGTGTGTTCC TCTCGACTCT GCGTGTCTGC CGACGGAGTT 4621 ACCCTGCCAT TGTTCTCAGC CGTTGCCCAT CTTTCCGGTA GAGAGGTGGG GATTTTTATT 4681 TTGGTGCTTG CCTCCTTGGG CGCTTTAGCC CACCGCTTGG CTCTTAAGGC AGACATGTCA 4741 ATGGTCTTTT TGGCGTTTTG TGCTTACGCC TGGCCCATGA GCTCCTGGTT AATTTGCTTC 4801 TTTCCTATGC TCTTGAGGTG GGTAACCCTT CATCCTCTCA CTATGCTTTG GGTGCACTCA 4861 TTTTTGGTGT TTTGCCTACC AGCTGCCGGC GTTCTCTCGC TGGGAATAAC CGGTCTTCTT 4921 TGGGCAGTTG GCCGTTTCAC CCAGGTTGCC GGAATTATCA CACCTTATGA CATCCACCAG 4 981 TATACCTCCG GACCACGTGG TGCAGCTGCT GTAGCAACGG CTCCAGAAGG TACTTACATG 5041 GCGGCCGTTC GGAGAGCCGC TTTGACTGGA CGGACTTTGA TCTTCACACC ATCTGCAGTC 5101 GGATCCCTTC TTGAAGGTGC TTTCAGAACT CAAAAGCCCT GCCTTAACAC CGTGAATGTC 5161 GTAGGCTCTT CCCTTGGTTC TGGAGGAGTT TTCACCATTG ATGGCAGAAG AGTCATCGTC 5221 ACTGCCACCC ATGTGTTGAA TGGTAACACA GCCAGGGTCA CTGGTGATTC CTACAACCGC 5281 ATGCACACGT TCAATACTAA TGGTGATTAT GCCTGGTCCC ATGCTGATGA CTGGCAAGGC 5341 GTTGCCCCTA TGGTTAAGAT CGCTAAGGGG TATCGCGGTC GTGCCTACTG GCAAACGTCA 5401 ACCGGAGTCG AACCTGGCAT CATGGGGGAA GGATTCGCCT TCTGTTTCAC TAACTGTGGC

- 93 035624

5461 GACTCAGGGT CACCTGTCAT TTCAGAAGCT GGTGACCTTA TTGGAGTCCA TACCGGTTCA 5521 AACAAACTCG GTTCTGGTCT TGTGACAACC CCTGAAGGGG AGACCTGCTC CATCAAGGAA 5581 ACTAGGCTCT CTGACCTTTC TAGACATTTT GCAGGTCCAA GCGTCCCTCT TGGGGACATT 5641 AAGTTGAGCC CAGCCATCAT CCCTGATGTG ACAACTATTC CGAGTGACTT GGCATCGCTC 5701 CTTGCTTCTG TCCCCGTGAT GGAAGGTGGC CTCTCAACTG TCCAGCTTTT GTGCGTCTTT 5761 TTCCTTCTCT GGCGCATGAT GGGCCATGCC TGGACACCCA TTGTTGCCGT AGGCTTCTTT 5821 TTGCTGAATG AAATTCTCCC AGCAGTCTTG GTCCGAGCTG TGTTCTCTTT TGCACTCTTT 5881 GTACTTGCAT GGGCCACCCC CTGGTCGGCA CAAGTGTTGA TGATTAGACT CCTCACGGCG 5941 GCTCTCAACC GCAACAGGTT GTCCCTGGCG TTCTACGCAT TCGGAGGTGT CGTTGGCCTG 6001 GCCACAGAAA TCGGGACTTT TGCTGGTGGA TGGCCTGAAC TGTCCCAAGC CCTCTCGACA 6061 TACTGCTTCC TGCCCAGGTT CCTTGCTGTG ACTAGTTATG TCCCCACCAT CATCATCGGT 6121 GGGCTCCATG CCCTCGGCGT AATTTTGTGG TTATTCAAAT ACCGATGCCT CCACAACATG 6181 CTGGTTGGTG ATGGGAGTTT CTCAAGCGCT TTCTTCCTAC GGTATTTTGC TGAGGGTAAT 6241 CTTAGGAAAG GCGTGTCGCA GTCCTGTGGC ATGAATAACG AATCCCTGAC AGCTGCTTTG 6301 GCTTGCAAGT TGTCGCAAGC TGACCTTGAT TTTTTGTCCA GTTTAACGAA CTTCAAGTGC 6361 TTTGTGTCCG CTTCAAACAT GAAAAATGCA GCTGGCCAAT ACATCGAGGC GGCGTATGCT 6421 AGAGCTCTGC GTCAGGAGCT GGCCTCCTTG GTTCAGGTTG ACAAGATGAA AGGAGTATTG 6481 GCCAAGCTCG AGGCTTTCGC TGAGACGGCC ACTCCGTCAC TTGACACAGG GGACGTGATT 6541 GTTCTGCTTG GGCAACACCC CCATGGATCC ATCCTCGACA TTAATGTGGG GGGTGAAAGG 6601 AAAACTGTGT CTGTGCAAGA AACACGATGC CTGGGTGGTT CCAAATTCAG TGTCTGCACT 6661 GTCGTGTCCA ACACGCCCGT GGATACCTTG ACCGGTATCC CACTTCAGAC GCCAACCCCA 6721 CTTTTTGAAA ATGGCCCGCG CCATCGCAGC GAGGACGACG ACCTCAAAGT TGAGAGAATG 6781 AAAAAACACT GTGTATCCCT CGGCTTCCAC AAAATCAATG GTAAAGTTTA CTGCAAAATT 6841 TGGGACAAGT CTAACGGCGA CACCTTTTAC ACGGATGATT CCCGATACAC TCAAGACCAT 6901 GCTTTTCAGG ACAGGTCAAC CGACTATAGA GACAGGGATT ATGAAGGTGT ACAGACCGCC 6961 CCCCAACAGG GATTCGATCC AAAGTCCGAA GCCCCTGTTG GCACTGTTGT AATCGGTGGC 7021 ATTACGTATA ACAGGCATCT GGTCAAAGGT AAGGAGGTCC TAGTTCCCAA ACCTGACAAC 7081 TGCCTTGAAG CTGCCAGACT GTCCCTTGAG CAAGCTCTTG CTGGGATGGG CCAAACTTGT 7141 GACCTTACAG CTACCGAAGT GGAGAAACTA AAGCGCATCA TTAGTCAACT CCAAGGTCTG 7201 ACCACTGAAC AGGCTTTAAA CTGCTAGCCG CCAGCGGCTT GACCCGCTGT GGCCGCGGCG 7261 GCCTAGTTGT AACTGAAACG GCGGTAAAAA TCGTAAAATA CCACAGCAGA ACTTTCACCT 7321 TAGGCTCTTT AGACCTAAAA GTCACCTCCG AGGTGGAGGT GAAGAAATCA ACTGAGCAGG 7381 GGCACGCTGT CGTGGCGAAC TTATGTTCCG GTGTCGTCTT GATGAGGCCT CACCCACCGT 7441 CCCTTGTTGA CGTTCTCCTC AAACCCGGAC TTGACACAAC ACCCGGCATT CAACCAGGGC 7501 ATGGGGCCGG GAATATGGGC GTGAACGGTT CTATTTGGGA TTTTGAAACT GCACCCACAA 75 61 AGGTAGAACT AGAGTTGTCC AAGCAAATAA TCCAAGCATG TGAAGTCAGG CGCGGGGACG 7621 CCCCTAACCT CCAACTCCCC TACAAGCTTT ATCCTGTCAG GGGGGACCCC GAGCGGCGTA 7681 AAGGTCGCCT TGTCAACACT AGGTTTGGAG ATTTACCTTA CAAAACTCCC CAAGACACCA 7741 AGTCCGCAAT TCATGCGGCT TGTTGCCTGC ATCCCAATGG GGTCCTCGTG TCTGATGGCA 7801 AATCCACGCT GGGTACCACT CTTCAACATG GTTTCGAGCT TTATGTCCCC ACTGTACCTT 7861 ATAGTGTCAT GGAATACCTT GATTCACGCC CTGACACCCC TTTTATGTGT ACTAAACATG 7921 GCACTTCCAA GGCTGCTGCA GAGGACCTCC AAAAATATGA CCTATCCACT CAAGGGTTTG 7981 TCTTGCCTGG GGTCCTACGC CTAGTGCGCA GGTTCATCTT TAGCCATGTT GGTAAGGCGC 8041 CACCACTGTT CCTTCCATCA ACCTACCCTG CCAAGAACTC CATGGCAGGG GTCAATGGCC 8101 AGAGGTTCCC AACAAAGGAT GTCCAGAGCA TACCTGAAAT TGATGAAATG TGCGCCCGTG 8161 CCGTCAAGGA AAATTGGCAG ACTGTGACAC CTTGCACCCT CAAAAAACAG TACTGTTCCA 8221 AACCTAAAAC TAGAACCATC CTAGGTACCA ACAACTTCAT AGCCTTGGCT CACAGGTCAG 8281 CACTCAGTGG TGTCACCCAG GCGTTCATGA AGAAGGCCTG GAAGTCCCCA ATTGCCTTGG 8341 GGAAAAACAA GTTTAAGGAA TTGCATTGCA CTGTCGCCGG CAGATGCCTT GAGGCTGACC 8401 TGGCTTCCTG CGATCGCAGC ACCCCCGCCA TTGTGAGGTG GTTTGTTGCC AACCTCCTGT 8461 ATGAACTTGC AGGATGTGAA GAGTACTTGC CTAGCTACGT GCTCAACTGT TGCCATGACC 8521 TTGTGGCAAC GCAGGATGGC GCTTTCACAA AACGCGGTGG CCTGTCGTCC GGGGACCCCG 85 81 TCACCAGTGT GTCCAACACC GTCTACTCAC TGATAATTTA CGCCCAGCAC ATGGTGCTTT 8641 CGGCCTTGAA GATGGGTCAT GAAATTGGTC TCAAGTTCCT TGAGGAACAG CTCAAATTTG 8701 AGGACCTTCT TGAAATCCAG CCCATGTTAG TGTATTCTGA TGACCTCGTC TTGTATGCGG 8761 AAAGACCCAC TTTTCCCAAC TACCATTGGT GGGTCGAGCA TCTTGACCTG ATGTTGGGCT 8821 TTAAAACGGA CCCAAAGAAA ACTGTCATAA CTGATAAACC CAGTTTTCTC GGCTGCAGAA 8881 TTGAAGCAGG ACGGCAGTTA GTCCCCAATC GCGACCGTAT TCTGGCTGCT CTTGCATATC 8941 ATATGAAGGC GCAGAACGCC TCAGAGTATT ATGCGTCCGC TGCCGCAATT CTGATGGATT 9001 CGTGTGCTTG CATTGACCAT GACCCCGAGT GGTATGAGGA TCTTATCTGC GGCATCGCCC 9061 GGTGTGCTCG CCAGGACGGT TACCGTTTTC CAGGCCCGGC ATTTTTCATG TCCATGTGGG 9121 AGAAGCTGAA AAGTCATAAT GAAGGGAAGA AATGCCGTCA CTGCGGCATC TGCGACGCCA 9181 AAGCCGACTA TGCGTCCGCC TGTGGACTTG ATTTGTGTTT GTTCCATTCA CACTTTCATC 9241 AACACTGCCC AGTCACTCTG AGCTGTGGCC ACCATGCCGG TTCAAAGGAA TGTTCGCAGT 9301 GTCAGTCACC TGTCGGGGCT GGCAAATCCC CCCTTGACGC TGTGCTGAAA CAAATCCCGT 9361 ACAAACCTCC TCGTACCATT ATCATGAAGG TGGACAACAA AACAACGACC CTTGACCCGG 9421 GAAGATATCA GTCCCGTCGA GGTCTTGTTG CAGTCAAAAG AGGTATTGCA GGTAATGAGG 9481 TTGATCTTTC TGATGGAGAC TACCAAGTGG TGCCTCTTTT GCCGACTTGC AAAGACATAA 9541 ACATGGTGAA GGTGGCTTGC AACGTACTAC TCAGCAAGTT TATAGTAGGG CCGCCAGGTT 9601 CCGGAAAAAC CACCTGGCTA CTGAACCAAG TCCAGGACGA TGATGTCATT TACACACCTA

- 94 035624

9661

9721

9781

9841

9901

9961

10021

10081

10141

10201

10261

10321

10381

10441

10501

10561

10621

10681

10741

10801

10861

10921

10981

11041

11101

11161

11221

11281

11341

11401

11461

11521

11581

11641

11701

11761

11821

11881

11941

12001

12061

12121

12181

12241

12301

12361

12421

12481

12541

12601

12661

12721

12781

12841

12901

12961

13021

13081

13141

13201

13261

13321

13381

13441

13501

13561

13621

13681

13741

13801

CTCATCAGAC AATGTTTGAC ATAGTCAGTG CTCTTAAAGT TTGCAGGTAT TCCATCCCAG GAGCCTCAGG ACTCCCTTTT CCACCACCTG CCAGGTCCGG GCCGTGGGTT AGGCTCATCG CCAGCGGACA TGTCCCTGGC CGAGTGTCAT ATCTCGATGA GGCAGGATAT TGCAATCATC TAGACATTCT AAGGCTGCTT TCCAAAACAC CCCTTGTGTG TTTGGGTGAC CTTCAGCAAC TTCACCCGGT CGGCTTTGAT TCCTATTGTT ATGTGTTCGA TCAGATGCCT CAGAAGCAGC TGACCACCAT TTATAGATTT GGCCCTAACA TCTGTGCAGC CATCCAGCCT TGTTACAGGG AGAAACTTGA ATCCAAGGCC AGGAACACCA GAGTGGTTTT CACCACCCGG CCTGTGGCCT TTGGTCAGGT CCTGACACCG TACCACAAAG ATCGTACCGG CTCTGCAATA ACTATAGATT CATCCCAGGG GGCGACCTTC GACATTGTGA CATTGCATCT ACCATCGCCA AAGTCCCTAA ACAAATCCCG AGCACTTGTA GCCATCACTC GGGCAAGACA TGGGTTGTTC ATTTATGACC CTCATGACCA ACTCCAGGAG TTTTTCAACT TAACCCCCGA GCGCACTGAT TGTAACCTTG CGTTCAGCCG TGGGGATGAG CTGGTTGTTT TGAATGTGGA TAATGCGGTC ACAACTGTAG CGAAGGCCCT AGAGACAGGT TCACCCCGAT TTCGAGTATC GGACCCGAGG TGCAAGTCTC TCTTAGCCGC TTGTTCGGCC AGTCTAGAAG GGAGCTGCAT GCCACTACCA CAAGTAGCAC ATAACCTGGG GTTTTACTTT TCCCCGGACA GCCCAGCTTT TGCACCCCTG CCAAAAGAGC TGGCGCCACA TTGGCCAGTG GTCACCCACC AGAATAATCG AGCGTGGCCT GATCGACTTG TCGCTAGTAT GCGCCCAATT GATGCCCGCT ACAGCAAGCC AATGGTCGGT GCAGGGTATG TGGTCGGGCC ATCCATTTTT CTTGGCACTC CTGGTGTGGT GTCATACTAT CTCACATTAT ACATCGGGGG CGAGCCTCAG GCCCTGCCAG AAACACTCGT TTCAACAGGA CGTATAGCCA CAGATTGTCG GGAATATCTC GACGCGGCTG AGGAAGAGGC AGCGAGAGAA CTTCCCCACG CATTTATTGG CGATGTCAAA GGCACTACGA TCGGGGGGTG TCACCACATT ACATCGAAAT ACCTACCTAG GTCCCTGCCT AAAGACTCTG TTGCTGTGGT TGGGGTGAGT TCGCCCGGTA GGGCTGCTAA AGCCGTGTGC ACTCTCACCG ATGTGTACCT CCCCGAACTC CGACCATATT TGCAACCGGA GACGGCATCA AAATGCTGGA AACTTAAACT GGATTTCAGG GATGTTCGAC TGATGGTCTG GAAAGGCGCC ACAGCCTATT TCCAGTTGGA AGGGCTGACA TGGTCAGCGC TGCCCGATTA TGCTAGGTTC ATTCAGCTAC CCAAGGATGC CGTTGTGTAC ATCGATCCGT GTATAGGGCC GGCAACAGCC AATCGCAAGG TTGTGCGAAC CACAGACTGG CGGGCCGACC TGGCAGTGAC ACCGTATGAT TACGGTGCTC AGGTCATTTT GACAACAGCC TGGTTCGAGG ACCTTGGGCC GCAGTGGAAG ATTTTGGGGT TGCAGCCTTT CAGACGAACA TTTGGCTTTG AGAACACTGA AGATTGGGCA ATTCTCGCAC GCCGTATGAA TGACGGCAAA GATTACACTG ACTATAATTG GCATTGTGTA CGAGAACGCC CACACGCAAT TTACGGGCGC GCCCGTGACC ATACGTATCA TTTTGCCCTT GGCACTGAAC TGCAAGTAGA GCTGGGCAGA CCCCGGCTGC CTCCTGAGCA AGTGCCGTGA ACGCGGAGTG ATGCAATGGG TTTACTGTGG AGTAAAATCA GTCAGTTGTT CGTGGATGCC TTCACTGAGT TCCTTGTTAG TGTGGTTGAC ATTGTCATCT TTCTCGCCAT ATTGTTTGGG TTCACTGTTG CAGGCTGGTT ATTGGTCTTC CTTCTCAGAG TGGTTTGCTC CGCGTTTCTC CGTTCGCGCT CTGCCATTCA CTCTTCCGAA CTATCGAAGG TCCTATGAGG GCTTGCTACC CAACTGCAGA CCGGATGTCC CACAATTCGC AGTTAAGCAC CCGTTGGGTA TACTTTGGCA TATGCGAGTC TCCCACCTAA TTGACGAAAT GGTCTCTCGC CGCATTTACC GGACCATGGA ACATTCGGGT CAAGCGGCCT GGAAGCAGGT TGTTAGTGAA GCCACTCTCA CAAAACTGTC AAGGCTTGAC GTAGTCACTC ATTTCCAACA CCTGGCCGCA GTGGAGGCTG ATTCTTGCCG CTTCCTTAGC TCACGACTCG CGATGCTGAA AAACCTTGCC GTTGGCAATG TGAGCCTGGA GTACAACACT ACTTTGGACC GCGTTGAGCT CATCTTTCCC ACACCAGGTA CGAGGCCCAA GTTGACCGAT TTTAGGCAAT GGCTTATCAG CGTGCACGCT TCCATCTTCT CCTCTGTGGC TTCGTCTGTT ACCTTGTTCA CAGTGCTTTG GCTTCGAATT CCAGCTCTAC GCTATGTTTT TGGTTTCCAT TGGCCCACGG CAACACATCA TTCGAACTAA CTATCAATTA CACTATATGT AAGCCATGCC CTACCAGTCA AGCTGCCCAA CAAAGACTCG AGCCTGGCCG TAACGTGTGG TGCAAAATAG GGCACGACAG GTGTGAGGAA CGTGACCATG ATGAGTTGTC AATGTCCATT CCGTCCGGGT ACGACAACCT CAAACTTGAG GGTTATTATG CTTGGCTGGC TTTTTTGTCC TTTTCCTACG CGGCCCAATT CCATCCGGAG CTGTTCGGAA TAGGAAACGT GTCGCGCGTC TTTGTGGATA AGCGACACCA GTTCATTTGC GCCGAGCATG ATGGACAAAA TTCAACCATA TCTGCCAGAC ACAACATCTC CGCGTCGTAT GCGGTGTATT ACCATCATCA AATAGACGGG GGCAATTGGT TTCATTTGGA ATGGCTGCGA CCATTCTTTT CCTCCTGGCT GGTGCTCAAC ATCTCATGGT TTCTGAGGCG TTCGCCTGCA AGCCCTGCTT CTCGACGCAT CTATCAGATA TTAAGACCAA CACGACCGCG GCTGCCGGTT TCATGGTCCT TCAGAACATC AATTGTTTCC AATCTCACAG GGCCTCAACA GCGCAAGGTA CCACTCCCCT CAGGAGGTCG TCCCAATGTC GTGAAGCCGT CGGCATTCCC CAGTACATCA CGATAACGGC TAATGTGACC GATGAATCGT ATTTGTACAA CGCGGACTTG CTGATGCTTT CCGCGTGCCT TTTCTACGCC TCGGAAATGA GCGAGAAAGG CTTCAAAGTC ATCTTTGGGA ATATTTCTGG CGTTGTTTCC GCTTGTGTTA ATTTCACAGA TTATGTGGCC CATGTGACCC AACACACTCA GCAGCACCAT TTGGTAATTG ATCACATTCG GTTACTACAC TTCTTGACAC CGTCTACGAT GAGGTGGGCT ACAACCATTG CTTGTTTGCT TGCCATTCTT TTGGCGGTAT GAAATGTTCT TGCAAGTTGG GGCATTTCTT GACTCCTCAC TCTTGCTTCT GGTGGCTTTT TTTGCTGTGT ACCGGCTTGT CTTGGTCCTT TGTCGATGGC AACGACGACA GCTCGACATC CCAATACATA TATAATTTGA CGATATGCGA GCTGAATGGG ACCGAATGGT TGTCCGGTCA TTTTGATTGG GCAGTCGAAA CCTTTGTGCT TTACCCAGTT GCCACTCATA TCATTTCACT GGGTTTTCTC ACAACAAGCC ATTTCCTTGA TGCGCTCGGT CTCGGCGCTG TGTCCGCCAC AGGATTCATT GGCGAGCGGT ATGTACTTAG CAGCATGTAC GGCGTTTGCG CCTTCGCGGC GTTCGTATGT TTTGTCATCC GTGCTGCTAA AAATTGCATG GCTTGCCGCT ATGCCCGCAC CCGGTTTACC AACTTCATCG TGGACGACCG GGGAAGAATC CATCGATGGA AGTCTTCAAT AGTGGTGGAG AAATTGGGCA AAGCTGAAGT CGGTGGTGAC CTTGTCAACA TTAAGCATGT TGTCCTCGAA

- 95 035624

13861 GGGGTTAAAG CTCAACCTTT GACGAGGACT TCGGCTGAGC AATGGGAAGC CTAGACGACT 13921 TTTGCAACGA TCCCACCGCC GCACAAAAAC TCGTGCTGGC CTTTAGCATC ACATATACAC 13981 CCATAATGAT ATACGCCCTT AAGGTGTCAC GCGGCCGACT CCTGGGGCTG TTGCACATCT 14041 TGATATTTCT GAATTGTTCC TTTACTTTTG GGTACATGAC ATATGTGCAT TTTCAATCCA 14101 CCAACCGTGT CGCATTCACT CTGGGGGCTG TAGTCGCCCT TTTGTGGGGT GTTTACAGCC 14161 TCACAGAGTC ATGGAAGTTC ATCACTTCCA GATGCAGATT GTGTTGCCTA GGCCGGCGAT 14221 ACATTCTGGC CCCTGCCCAT CACGTAGAAA GTGCTGCAGG CCTCCATTCA ATCCCAGCGT 14281 CTGGTAACCG AGCATACGCT GTGAGAAAGC CCGGACTAAC ATCAGTGAAC GGCACTCTAG 14341 TACCTGGGCT TCGGAGCCTC GTGCTGGGCG GCAAACGAGC TGTTAAACGA GGAGTGGTTA

144 01 ACCTCGTCAA GTATGGCCGG TAAGAACCAG AGCCAGAAGA AAAGAAGAAA TGCAGCTCCG 144 61 ATGGGGAAAG GCCAGCCAGT CAATCAACTG TGCCAGTTGC TGGGTACAAT GATAAAGTCC 14521 CAGCGCCAGC AATCTAGGGG AGGACAGGCC AAAAAGAAGA AGCCTGAGAA GCCACATTTT 14581 CCCCTAGCTG CTGAAGATGA CATTCGGCAC CATCTCACCC AGGCCGAACG TTCCCTCTGC 14641 TTGCAATCGA TCCAGACGGC TTTCAATCAA GGCGCAGGAA CTGCGTCGCT TTCATCCAGC 14701 GGGAAGGTCA GTTTCCAGGT TGAGTTCATG CTGCCGGTTG CTCATACAGT GCGCCTGATT 14761 CGCGTGACTT CTACATCCGC CAGTCAGGGT GCAAATTAAT TTGACAGTCA GGTGAATGGC 14821 CGCGATTGAC GTGTGGCCTC TAA

SEQ ID NO: 2: OPC 1a MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 1, расположенным между нуклеотидами 178..7227

MSGMFSRCMCTPAARVFWNAGQVYCTRCLSARSLLSPELQDTDLGAVGLFHKP KDKLHWKVPIGIPQVECSPSGCCWLSTIFPLARMTSGNHNFLQRLVKVADVLYR DGCLTPRHLRELQVYERGCNWYPITGPVPGMAVYANSMHVSDQPFPGATHVLT NSPLPQRACRQPFCPFEEAHSSIYRWEKFVIFMDSSSDGRSRMMWTPESDDSTA LEVLPPELEHQVKVLVRSFPAHHLVDLADWELTESPDNGFSFSTSHPCGYLVRD PAVSEGKCWLSCFLSQSAEVLSREAHLATAYGYQTKWGVPGKYIQRRLQVHGL RAVVDPDGPIHVEALSCPQSWIRHLTLNDDVTPGFVRLMSLRIVPNTEPTTHRIF RFGVHKWYGAAGKRARGKRAAKSEKDSASTLKVARPTSTSGIVTYSPPADGSC GWHALAAILNRMINNDFTSPLPRYNRPEDDWASDGDLAQAIQCLQLPAAIARN RACPNAKYLIKLNGVHWEVEVRPGMAPRSLSRECVVGVCSEGCVASPYPEDGL PKRALEALASAYRLPSDCVCDGIIDFLANPPPQEFWTLDKMLTSPSPEQSGFSSL YKLLLEILPQKCGSTEGEFIYTVERMLKDCPSSKQAMALLAKIKVPSSKAPSVTL NECFPTDVPVNSELISWEEPKDPGAAVVLCPSDAKESKETAPEEAQARNRKVLH PVVLTEELSEQQVQVVEGDQDMPLDLTWPTLTATATPVRGPVPDNLSSGIGAQP ATVQELILARPAPRLVERCGTESNGSSSFLDLPDVQTSDQPLDLSLAAWPVRATA SDPGWIHGRREPVFVKPRGVFSDGESALQFGELSEASSVVDDRTKEAPVVDAPI DLTTSNETLSGSDPFEFAKFRRPRFSAQALIDRGGPLADVHAKIKSRVYEQCLQA CEPGSRATPATKKWLDKMWDRVDMKTWRCTSQFQAGHILESLKFLPDMIQDTP PPVPRKNRAGDSAGLKQLVAQWDRKSSVTPPTKPVGPVLDQAVPLPMDIQQGD AISADKPPHSQNPSSQVDVGGGWKSFMLSGTRFAGSVSQRLTTWVFEVLSHLPA FMLTLFSPRGSMAPGDWLFAGAVLLALLLCRSYPILGCLPLLGVFSGSVRCVRL

- 96 035624

GVFGSWMAFAVFLFSTPPDPVGSSCDHDSPECHAELLALEQRQLWEPVRSLVV GPSGLLCVILGKLLGGSRCLWFVLLRICMLADLAISLIYVVSQGRCHKCWGKCIR TAPAEVALNVFPFSRATRSSLVSLCDRFQAPKGVDPVHLATGWRGCWCGESPIH QSHQKPIAYANLDEKKISAQTVIAVPYDPSQAIKCLKVLQAGGAIVDQPTPEVVR VSEIPFSAPFFPKVPVNPDCRVVVDSDTFVAAVRCGYSTAQLVLGRGNFAKLNQ TPLRNSVPTKTTGGASYTLAVAQVSVWTLVHFILGLWLTSPQVCGRGTSDPWC SNPFSYPTYGPGVVCSSRLCVSADGVTLPLFSAVAHLSGREVGIFILVLASLGAL AHRLALKADMSMVFLAFCAYAWPMSSWLICFFPMLLRWVTLHPLTMLWVHSF LVFCLPAAGVLSLGITGLLWAVGRFTQVAGIITPYDIHQYTSGPRGAAAVATAPE GTYMAAVRRAALTGRTLIFTPSAVGSLLEGAFRTQKPCLNTVNVVGSSLGSGGV FTIDGRRVIVTATHVLNGNTARVTGDSYNRMHTFNTNGDYAWSHADDWQGVA PMVKIAKGYRGRAYWQTSTGVEPGIMGEGFAFCFTNCGDSGSPVISEAGDLIGV HTGSNKLGSGLVTTPEGETCSIKETRLSDLSRHFAGPSVPLGDIKLSPAIIPDVTTI PSDLASLLASVPVMEGGLSTVQLLCVFFLLWRMMGHAWTPIVAVGFFLLNEILP AVLVRAVFSFALFVLAWATPWSAQVLMIRLLTAALNRNRLSLAFYAFGGVVGL ATEIGTFAGGWPELSQALSTYCFLPRFLAVTSYVPTIIIGGLHALGVILWLFKYRC LHNMLVGDGSFSSAFFLRYFAEGNLRKGVSQSCGMNNESLTAALACKLSQADL DFLSSLTNFKCFVSASNMKNAAGQYIEAAYARALRQELASLVQVDKMKGVLA KLEAFAETATPSLDTGDVIVLLGQHPHGSILDINVGGERKTVSVQETRCLGGSKF SVCTVVSNTPVDTLTGIPLQTPTPLFENGPRHRSEDDDLKVERMKKHCVSLGFH KINGKVYCKIWDKSNGDTFYTDDSRYTQDHAFQDRSTDYRDRDYEGVQTAPQ QGFDPKSEAPVGTVVIGGITYNRHLVKGKEVLVPKPDNCLEAARLSLEQALAG MGQTCDLTATEVEKLKRIISQLQGLTTEQALNC

SEQ ID NO: 3 OPC 1B MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 1, расположенным между нуклеотидами 7209...11600

TGFKLLAASGLTRCGRGGLVVTETAVKIVKYHSRTFTLGSLDLKVTSEVEVKKS

TEQGHAVVANLCSGVVLMRPHPPSLVDVLLKPGLDTTPGIQPGHGAGNMGVNG SIWDFETAPTKVELELSKQIIQACEVRRGDAPNLQLPYKLYPVRGDPERRKGRLV NTRFGDLPYKTPQDTKSAIHAACCLHPNGVLVSDGKSTLGTTLQHGFELYVPTV PYSVMEYLDSRPDTPFMCTKHGTSKAAAEDLQKYDLSTQGFVLPGVLRLVRRFI FSHVGKAPPLFLPSTYPAKNSMAGVNGQRFPTKDVQSIPEIDEMCARAVKENW

- 97 035624

QTVTPCTLKKQYCSKPKTRTILGTNNFIALAHRSALSGVTQAFMKKAWKSPIAL GKNKFKELHCTVAGRCLEADLASCDRSTPAIVRWFVANLLYELAGCEEYLPSY VLNC CHDL VATQDGAFTKRGGL S S GDP VT S VSNT V YSLIIY AQHM VLS ALKMG HEIGLKFLEEQLKFEDLLEIQPMLVYSDDLVLYAERPTFPNYHWWVEHLDLML GFKTDPKKTVITDKPSFLGCRIEAGRQLVPNRDRILAALAYHMKAQNASEYYAS AAAILMDSCACIDHDPEWYEDLICGIARCARQDGYRFPGPAFFMSMWEKLKSH NEGKKCRHCGICDAKADYASACGLDLCLFHSHFHQHCPVTLSCGHHAGSKECS QCQSPVGAGKSPLDAVLKQIPYKPPRTIIMKVDNKTTTLDPGRYQSRRGLVAVK RGIAGNEVDLSDGDYQVVPLLPTCKDINMVKVACNVLLSKFIVGPPGSGKTTWL LNQVQDDDVIYTPTHQTMFDIVSALKVCRYSIPGASGLPFPPPARSGPWVRLIAS GHVPGRVSYLDEAGYCNHLDILRLLSKTPLVCLGDLQQLHPVGFDSYCYVFDQ MPQKQLTTIYRFGPNICAAIQPCYREKLESKARNTRVVFTTRPVAFGQVLTPYHK DRTGSAITIDSSQGATFDIVTLHLPSPKSLNKSRALVAITRARHGLFIYDPHDQLQ EFFNLTPERTDCNLAFSRGDELVVLNVDNAVTTVAKALETGSPRFRVSDPRCKS LLAACSASLEGSCMPLPQVAHNLGFYFSPDSPAFAPLPKELAPHWPVVTHQNNR AWPDRLVASMRPIDARYSKPMVGAGYVVGPSIFLGTPGVVSYYLTLYIGGEPQA LPETLVSTGRIATDCREYLDAAEEEAARELPHAFIGDVKGTTIGGCHHITSKYLP RSLPKDSVAVVGVSSPGRAAKAVCTLTDVYLPELRPYLQPETASKCWKLKLDF RDVRLMVWKGATAYFQLEGLTWSALPDYARFIQLPKDAVVYIDPCIGPATANR KVVRTTDWRADLAVTPYDYGAQVILTTAWFEDLGPQWKILGLQPFRRTFGFEN TEDWAILARRMNDGKDYTDYNWHCVRERPHAIYGRARDHTYHFALGTELQVE LGRPRLPPEQVP

SEQ ID NO: 4 OPC 2 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 1, расположенным между нуклеотидами 11611..12360

MQWVYCGVKSVSCSWMPSLSSLLVWLTLSSFSPYCLGSLLQAGYWSSFSEWFA PRFSVRALPFTLPNYRRSYEGLLPNCRPDVPQFAVKHPLGILWHMRVSHLIDEM VSRRIYRTMEHSGQAAWKQVVSEATLTKLSRLDVVTHFQHLAAVEADSCRFLS SRLAMLKNL A VGN VSLEYNTTLDRVELIFPTPGTRPKLTDFRQWLIS VHASIF S S VASSVTLFTVLWLRIPALRYVFGFHWPTATHHSN

SEQ ID NO: 5 OPC 3 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 1, расположенным между нуклеотидами 12219..13016

MAYQRARFHLLLCGFVCYLVHSALASNSSSTLCFWFPLAHGNTSFELTINYTICK PCPTSQAAQQRLEPGRNVWCKIGHDRCEERDHDELSMSIPSGYDNLKLEGYYA WLAFLSFSYAAQFHPELFGIGNVSRVFVDKRHQFICAEHDGQNSTISARHNISAS YAVYYHHQIDGGNWFHLEWLRPFFSSWLVLNISWFLRRSPASPASRRIYQILRPT RPRLPVSWSFRTSIVSNLTGPQQRKVPLPSGGRPNVVKPSAFPSTSR

SEQ ID NO: 6 OPC 4 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 1, расположенным между нуклеотидами 12761..13312

MAATILFLLAGAQHLMVSEAFACKPCFSTHLSDIKTNTTAAAGFMVLQNINCFQ SHRASTAQGTTPLRRSSQCREAVGIPQYITITANVTDESYLYNADLLMLSACLFY ASEMSEKGFKVIFGNISGVVSACVNFTDYVAHVTQHTQQHHLVIDHIRLLHFLTP STMRWATTIACLLAILLAV

- 98 035624

SEQ ID NO: 7 OPC 5 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 1, расположенным между нуклеотидами 13309..13914

MKCSCKLGHFLTPHSCFWWLFLLCTGLSWSFVDGNDDSSTSQYIYNLTICELNG TEWLSGHFDWAVETFVLYPVATHIISLGFLTTSHFLDALGLGAVSATGFIGERYV LSSMYGVCAFAAFVCFVIRAAKNCMACRYARTRFTNFIVDDRGRIHRWKSSIVV EKLGKAEVGGDLVNIKHVVLEGVKAQPLTRTSAEQWEA

SEQ ID NO: 8 OPC 6 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 1, расположенным между нуклеотидами 13902..14423

MGSLDDFCNDPTAAQKLVLAFSITYTPIMIYALKVSRGRLLGLLHILIFLNCSFTF GYMTYVHFQSTNRVAFTLGAVVALLWGVYSLTESWKFITSRCRLCCLGRRYIL APAHHVESAAGLHSIPASGNRAYAVRKPGLTSVNGTLVPGLRSLVLGGKRAVK RGVVNLVKYGR

SEQ ID NO: 9 OPC 7 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 1, расположенным между нуклеотидами 14413..14799

MAGKNQSQKKRRNAAPMGKGQPVNQLCQLLGTMIKSQRQQSRGGQAKKKKP EKPHFPLAAEDDIRHHLTQAERSLCLQSIQTAFNQGAGTASLSSSGKVSFQVEFM LPVAHTVRLIRVTSTSASQGAN

- 99 035624

SEQ ID NO: 10 полноразмерная нуклеотидная последовательность родительского штамма вируса

PRRS 94881

TTTGTGTACC TTGGAGGCGT GGGTACAGCC CTGCCCCACC CCTTGGCCCC TGTTCTAGCC

CGACAGGTAC ССТТСТСТСТ CGGGGCGAGC GCGCCGCCTG CTGCTCCCTT GCGGCGGGAA

121 GGACCTCCCG AGTATTTCCG GAGAGCACCT GCTTTACGGG ATCTCCGCCC TTTAACCATG 181 TCTGGGATGT TCTCCCGGTG CATGTGCACC CCGGCTGCCC GGGTATTTTG GAACGCCGGC 241 CAAGTCTATT GCACACGGTG TCTCAGTGCA CGGTCTCTTC TCTCTCCAGA ACTTCAGGAC 301 ACGGACCTCG GTGCAGTTGG CTTGTTTCAC AAGCCTAAAG ACAAGCTCCA TTGGAAAGTT 361 CCCATTGGTA TCCCCCAGGT GGAATGTTCT CCATCTGGGT GTTGCTGGCT GTCAACCATT 421 TTTCCTTTAG CGCGCATGAC CTCCGGCAAT САСААСТТСС TTCAACGACT CGTGAAGGTT 4 81 GCTGACGTAT TGTACCGTGA CGGTTGCTTA ACCCCTAGAC ACCTCCGTGA ACTCCAAGTT 541 TACGAGCGTG GTTGCAATTG GTATCCGATT ACGGGGCCTG TGCCTGGGAT GGCTGTGTAC 601 GCGAACTCCA TGCACGTGTC CGACCAACCG TTCCCTGGTG CCACTCATGT GTTAACAAAT 661 TCCCCTTTGC CTCAACGGGC TTGTCGGCAG CCGTTCTGTC CGTTCGAAGA GGCCCATTCT 721 AGCATATACA GGTGGGAAAA ATTTGTAATT TTTATGGATT CCTCCTCCGA CGGTCGATCT 781 CGCATGATGT GGACTCCGGA ATCCGATGAC TCCACGGCTT TGGAAGTTCT GCCGCCCGAG 841 CTAGAACACC AGGTCAAGGT CCTTGTTCGG AGCTTTCCCG СССАТСАССТ TGTCGACCTT 901 GCCGATTGGG AGCTCACTGA GTCCCCTGAG AACGGTTTTT CCTTCAGCAC GTCACATCCT 961 TGCGGCTACC TTGTTCGGGA CCCGGCTGTA TCCGAAGGCA AGTGTTGGCT TTCCTGCTTT

1021 TTGAGCCAGT CAGCCGAAGT GCTCAGTCGC GAGGCGCATC TGGCTACCGC CTATGGTTAC 1081 CAAACCAAGT GGGGTGTGCC TGGCAAGTAC ATCCAGCGCA GACTTCAAGT TCACGGTCTC 1141 CGTGCTGTGG TCGACCCTGA TGGTCCCATT CACGTTGAAG CATTGTCTTG CCCCCAGTCT 1201 TGGATCAGGC ACTTGACCCT GAATGATGAT GTCACCCCGG GATTCGTTCG CCTAATGTCT 1261 CTTCGCATTG TGCCGAACAC AGAGCCTACC ACACACCGGA TCTTTCGTTT TGGAGTGCAC 1321 AAGTGGTATG GTGCCGCCGG CAAACGGGCC CGTGGCAAGC GTGCCGCCAA AAGTGAGAAA 1381 GACTCGGCTT ССАСССТСАА GGTTGCCCGA CCGACTTCCA CCAGTGGAAT CGTCACCTAC 1441 TCCCCACCTG CGGACGGGTC TTGTGGTTGG CATGCCCTTG CCGCCATACT GAACCGGATG 1501 ATTAATAATG ACTTCACGTC CCCTCTGCCT CGGTACAACA GGCCGGAGGA CGATTGGGCT 1561 TCTGATGGTG ACCTTGCTCA GGCCATTCAA TGTTTGCAAC TACCTGCCGC CATAGCTCGG 1621 AACCGCGCCT GCCCTAACGC САААТАССТС GTAAAACTCA ACGGAGTTCA TTGGGAGGTA 1681 GAGGTGAGGC CTGGAATGGC TCCTCGCTCC CTCTCTCGTG AGTGCGTTGT TGGCGTCTGC 1741 TCTGAAGGCT GTGTCGCGTC GCCTTACCCG GAGGACGGGT TGCCTAAACG TGCACTTGAG 1801 GCCCTGGCGT CTGCTTATAG ACTGCCTTCA GACTGTGTTT GTGATGGTAT TATTGACTTC 1861 CTTGCCAATC САССТССССА GGAGTTCTGG ACTCTTGACA AAATGTTGAC TTCCCCGTCA 1921 CCGGAGCAGT CCGGCTTCTC TAGTCTGTAT AAATTGTTGT TAGAGGTCTT GCCGCAGAAA 1981 TGCGGATCCA CAGAAGGGGA АТТСАТСТАТ ACTGTTGAGA GGATGTTGAA GGATTGTCCG 2041 AGCTCCAAAC AGGCCATGGC CCTCCTTGCA AAAATTAAGG ТСССАТССТС AAAGGCCCCA 2101 TCCGTGACTC TGAACGAGTG CTTCCCCACG GATGTTCCAG TCAACTCTGA GTTAATATCT 2161 TGGGAAGAGC CCAAAGACCC TGGCGCTGCT GTTGTCCTAT GTCCATCGGA TGCAAAAGAA 2221 TCTAAGGAAA CAGCCCCTGA AGAAGCTCAA GCGAGAAACC GTAAGGTCCT CCACCCTGTG 2281 GTCCTTACCG AGGAACTTAG CGAGCAACAG GTGCAGGTGG TTGAGGGTGA TCAGGATATG 2341 CCACTGGATT TGACTTGGCC ААССТТААСС GCTACGGCGA CCCCTGTTAG AGGGCCGGTA 2401 CCGGACAATT TGAGCTCTGG CATTGGTGCC CAGCCCGCTA CCGTTCAAGA ACTCATTCTG 2461 GCGAGGCCTG CACCCCGTCT TGTTGAGCGC TGTGGCACGG AGTCGAACGG CAGCAGTTCA 2521 TTTCTGGATT TGCCTGACGT GCAGACCTCG GACCAGCCTT TAGACCTGTC CCTGGCCGCG 2581 TGGCCTGTAA GGGCTACCGC GTCTGACCCC GGTTGGATCC ACGGTAGGCG TGAGCCTGTC 2641 TTTGTGAAGC CTCGAGGTGT TTTCTCTGAT GGCGAGTCGG CCCTTCAGTT CGGAGAGCTT 2701 TCCGAAGGCA GTTCTGTCGT CGATGACCGG ACAAAAGAAG CTCCGGTGGT TGACGCCCCC 2761 ATCGATTTGA CAACTTCGAA CGAGACGCTC TCTGGGTCTG ACCCCTTTGA ATTCGCCAAA 2821 TTCAGGCGCC CGCGTTTCTC CGCGCAAGCT TTAATCGACC GAGGTGGTCC GCTTGCCGAT 2881 GTTCATGCAA AGATAAAGAG TCGGGTATAT GAACAATGCC TTCAAGCTTG TGAACCTGGT

- 100 035624

2941 AGTCGTGCGA CCCCAGCCAC CAAGAAGTGG CTCGACAAAA TGTGGGACAG GGTGGACATG 3001 AAAACTTGGC GCTGCACCTC GCAGTTCCAA GCTGGTCACA TTCTTGAGTC CCTCAAATTC 3061 CTCCCTGACA TGATTCAAGA CACACCGCCT CCTGTTCCCA GGAAGAACCG AGCTGGTGAC 3121 AGTGCCGGCC TGAAGCAACT GGTGGCGCAG TGGGATAGGA AATTGAGTGT GACACCCCCC 3181 ACAAAACCGG TTGGACCGGT GCTTGACCAG ACCGTCCCTC TGCCTATGGA CATCCAGCAA 3241 GAAGATGCCA TCTCCGCTGA CAAGCCACCC CATTCGCAAA ACCCTTCTAG TCAAGTAGAT 3301 GTGGGTGGAG GTTGGAAAAG TTTTATGCTC TCCGGCACCC GTTTCGCGGG GTCCGTTAGT 3361 CAGCGCCTTA CGACATGGGT TTTTGAGGTT CTCTCCCATC TCCCAGCTTT TATGCTCACA 3421 CTTTTCTCGC CACGGGGCTC TATGGCTCCA GGTGATTGGC TGTTTGCAGG TGCTGTTCTA 3481 CTTGCTCTCC TGCTCTGCCG TTCTTACCCA ATACTCGGAT GCCTTCCCTT ATTGGGTGTC 3541 TTTTCTGGTT CTGTGCGGTG TGTTCGTTTG GGTGTTTTTG GTTCTTGGAT GGCTTTTGCT 3601 GTATTTTTAT TCTCGACTCC ACCCGACCCA GTCGGTTCTT CTTGTGACCA CGATTCGCCG 3661 GAGTGTCATG CTGAGCTTTT GGCTCTTGAG CAGCGCCAAC TTTGGGAACC TGTGCGCAGC 3721 CTTGTGGTCG GGCCATCGGG CCTCTTATGC GTCATTCTTG GCAAGTTACT CGGTGGGTCA 3781 CGTTGTCTCT GGTTTGTTCT CCTACGTATA TGCATGCTCG CAGATTTGGC AATTTCTCTT 3841 ATTTATGTGG TGTCCCAAGG GCGTTGTCAC AAGTGTTGGG GAAAGTGTAT AAGGACGGCT 3901 CCTGCAGAAG TGACCCTTAA TGTGTTTCCT TTTTCGCGCG CCACCCGCTC ATCTCTTGTG 3961 TCCTTGTGTG ATCGGTTCCA AGCGCCAAAA GGAGTTGACC CCGTGCACTT GGCGACAGGC 4021 TGGCGCGGGT GCTGGTGTGG TGAGAGCCCT ATTCATCAAT CACACCAAAA ACCGATAGCT 4081 TATGCCAACT TGGATGAAAA GAAGATATCC GCCCAGACGG TGATTGCTGT CCCGTATGAT 4141 CCCAGTCAGG CCATTAAATG CCTGAAAGTT TTGCAGGCAG GAGGGGCTAT TGTGGACCAG 4201 CCTACGCCCG AGGTCGTCCG TGTGTCTGAG ATTCCCTTCT CGGCCCCATT TTTTCCGAAG 4261 GTCCCAGTCA ACCCAGATTG CAGGGTTGTG GTAGATTCGG ACACTTTTGT GGCTGCGGTC 4321 CGCTGCGGTT ATTCGACAGC ACAACTGGTC CTTGGTCGGG GCAACTTTGC CAAGCTAAAT 4381 CAGACCCCCC TCAGGAACTC TGTCCCCACC AAAACAACTG GTGGGGCCTC ATACACCCTT 4441 GCCGTGGCCC AGGTATCTGT GTGGACTCTT GTTCATTTCA TCCTCGGCCT TTGGTTAACG 4501 TCACCTCAAG TGTGTGGTCG AGGGACCTCT GACCCGTGGT GTTCGAACCC TTTTTCGTAT 4561 CCTACTTATG GCCCCGGAGT TGTGTGTTCC TCTCGACTCT GCGTGTCTGC CGACGGAGTT 4621 ACCCTGCCAT TGTTCTCAGC CGTTGCCCAT CTTTCCGGTA GAGAGGTGGG GATTTTTATT 4681 TTGGTGCTTG CCTCCTTGGG CGCTTTAGCC CACCGCTTGG CTCTTAAGGC AGACATGTCA 4741 ATGGTCTTTT TGGCGTTTTG TGCTTACGCC TGGCCCATGA GCTCCTGGTT AATTTGCTTC 4801 TTTCCTATGC TCTTGAGGTG GGTAACCCTT CATCCTCTCA CTATGCTTTG GGTGCACTCA 4861 TTTTTGGTGT TTTGCCTACC AGCTGCCGGC GTTCTCTCGC TGGGAATAAC CGGTCTTCTT 4921 TGGGCAGTTG GCCGTTTCAC CCAGGTTGCC GGAATTATCA CACCTTATGA CATCCACCAG 4 981 TATACCTCCG GACCACGTGG TGCAGCTGCT GTAGCAACGG CTCCAGAAGG TACTTACATG 5041 GCGGCCGTTC GGAGAGCCGC TTTGACTGGA CGGACTTTGA TCTTCACACC ATCTGCAGTC 5101 GGATCCCTTC TTGAAGGTGC TTTCAGAACT CAAAAGCCCT GCCTTAACAC CGTGAATGTC 5161 GTAGGCTCTT CCCTTGGTTC TGGAGGAGTT TTCACCATTG ATGGCAGAAG AGTCATCGTC 5221 ACTGCCACCC ATGTGTTGAA TGGTAACACA GCCAGGGTCA CTGGTGATTC CTACAACCGC 5281 ATGCACACGT TCAATACTAA TGGTGATTAT GCCTGGTCCC ATGCTGATGA CTGGCAAGGC 5341 GTTGCCCCTA TGGTTAAGAT CGCTAAGGGG TATCGCGGTC GTGCCTACTG GCAAACGTCA 5401 ACCGGAGTCG AACCTGGCAT CATGGGGGAA GGATTCGCCT TCTGTTTCAC TAACTGTGGC 5461 GACTCAGGGT CACCTGTCAT TTCAGAAGCT GGTGACCTTA TTGGAGTCCA TACCGGTTCA 5521 AACAAACTCG GTTCTGGTCT TGTGACAACC CCTGAAGGGG AGACCTGCTC CATCAAGGAA 5581 ACTAGGCTCT CTGACCTTTC TAGACATTTT GCAGGTCCAA GCGTCCCTCT TGGGGACATT 5641 AAGTTGAGCC CAGCCATCAT CCCTGATGTG ACAACTATTC CGAGTGACTT GGCATCGCTC 5701 CTTGCTTCTG TCCCCGTGAT GGAAGGTGGC CTCTCAACTG TCCAGCTTTT GTGCGTCTTT 5761 TTCCTTCTCT GGCGCATGAT GGGCCATGCC TGGACACCCA TTGTTGCCGT AGGCTTCTTT 5821 TTGCTGAATG AAATTCTCCC AGCAGTCTTG GTCCGAGCTG TGTTCTCTTT TGCACTCTTT 5881 GTACTTGCAT GGGCCACCCC CTGGTCGGCA CAAGTGTTGA TGATTAGACT CCTCACGGCG 5941 GCTCTCAACC GCAACAGGTT GTCCCTGGCG TTCTACGCAC TCGGAGGTGT CGTTGGCCTG 6001 GCCACAGAAA TCGGGACTTT TGCTGGTGGA TGGCCTGAAC TGTCCCAAGG CCTCTCGACA 6061 TACTGCTTCC TGCCCAGGTT CCTTGCTGTG ACTAGTTATG TCCCCACCAT CATCATCGGT 6121 GGGCTCCATG CCCTCGGCGT AATTTTGTGG TTATTCAAAT ACCGATGCCT CCACAACATG 6181 CTGGTTGGTG ATGGGAGTTT CTCAAGCGCT TTCTTCCTAC GGTATTTTGC TGAGGGTAAT 6241 CTTAGGAAAG GCGTGTCGCA GTCCTGTGGC ATGAATAACG AATCCCTGAC AGCTGCTTTG 6301 GCTTGCAAGT TGTCGCAAGC TGACCTTGAT TTTTTGTCCA GTTTAACGAA CTTCAAGTGC 6361 TTTGTGTCCG CTTCAAACAT GAAAAATGCA GCTGGCCAAT ACATCGAGGC GGCGTATGCT 6421 AGAGCTCTGC GTCAGGAGCT GGCCTCCTTG GTTCAGGTTG ACAAGATGAA AGGAGTATTG 6481 GCCAAGCTCG AGGCTTTCGC TGAGACGGCC ACTCCGTCAC TTGACACAGG TGACGTGATT 6541 GTTCTGCTTG GGCAACACCC CCATGGATCC ATCCTCGACA TTAATGTGGG GGGTGAAAGG 6601 AAAACTGTGT CTGTGCAAGA AACACGATGC CTGGGTGGTT CCAAATTCAG TGTCTGCACT 6661 GTCGTGTCCA ACACGCCCGT GGATACCTTG ACCGGCATCC CACTTCAGAC GCCAACCCCA 6721 CTTTTTGAAA ATGGCCCGCG CCATCGCAGC GAGGACGACG ACCTTAAAGT TGAGAGAATG 6781 AAAAAACACT GTGTATCCCT CGGCTTCCAC AAAATCAATG GTAAAGTTTA CTGCAAAATT 6841 TGGGACAAGT CTAACGGCGA CACCTTTTAC ACGGATGATT CCCGATACAC TCAAGACCAT 6901 GCTTTTCAGG ACAGGTCAAC CGACTATAGA GACAGGGATT ATGAAGGTGT ACAGACCGCC 6961 CCCCAACAGG GATTCGATCC AAAGTCCGAA GCCCCTGTTG GCACTGTTGT AATCGGTGGC 7021 ATTACGTATA ACAGGCATCT GGTCAAAGGT AAGGAGGTCC TAGTTCCCAA ACCTGACAAC 7081 TGCCTTGAAG CTGCCAGACT GTCCCTTGAG CAAGCTCTTG CTGGGATGGG CCAAACTTGT

- 101 035624

7141

7201

7261

7321

7381

7441

7501

7561

7621

7681

7741

7801

7861

7921

7981

8041

8101

8161

8221

8281

8341

8401

8461

8521

8581

8641

8701

8761

8821

8881

8941

9001

9061

9121

9181

9241

9301

9361

9421

9481

9541

9601

9661

9721

9781

9841

9901

9961

10021

10081

10141

10201

10261

10321

10381

10441

10501

10561

10621

10681

10741

10801

10861

10921

10981

11041

11101

11161

11221

11281

GACCTTACAG CTACCGAAGT GGAGAAACTA AAGCGCATCA TTAGTCAACT CCAAGGTCTG ACCACTGAAC AGGCTTTAAA CTGCTAGCCG CCAGCGGCTT GACCCGCTGT GGCCGCGGCG GCCTAGTTGT AACTGAAACG GCGGTAAAAA TCGTAAAATA CCACAGCAGA ACTTTCACCT TAGGCTCTTT AGACCTAAAA GTCACCTCCG AGGTGGAGGT GAAGAAATCA ACTGAGCAGG GGCACGCTGT CGTGGCGAAC TTATGTTCCG GTGTCGTCTT GATGAGGCCT CACCCACCGT CCCTTGTTGA CGTTCTCCTC AAACCCGGAC TTGACACAAC ACCCGGCATT CAACCAGGGC ATGGGGCCGG GAATATGGGC GTGAACGGTT CTATTTGGGA TTTTGAAACT GCACCCACAA AGGTAGAACT AGAGTTGTCC AAGCAAATAA TCCAAGCATG TGAAGTCAGG CGCGGGGACG CCCCTAACCT CCAACTCCCC TACAAGCTTT ATCCTGTCAG GGGGGACCCC GAGCGGCGTA AAGGTCGCCT TGTCAACACT AGGTTTGGAG ATTTACCTTA CAAAACTCCC CAAGACACCA AGTCCGCAAT TCATGCGGCT TGTTGCCTGC ATCCCAATGG GGTCCTCGTG TCTGATGGTA AATCCACGCT GGGTACCACT CTTCAACATG GTTTCGAGCT TTATGTCCCC ACTGTACCTT ATAGTGTCAT GGAATACCTT GATTCACGCC CTGACACCCC TTTTATGTGT ACTAAACATG GCACTTCCAA GGCTGCTGCA GAGGACCTCC AAAAATATGA CCTATCCACT CAAGGGTTTG TCTTGCCTGG GGTCCTACGC CTAGTGCGCA GGTTCATCTT TAGCCATGTT GGTAAGGCGC CACCACTGTT CCTTCCATCA ACCTACCCTG CCAAGAACTC CATGGCAGGG GTCAATGGCC AGAGGTTCCC AACAAAGGAT GTCCAGAGCA TACCTGAAAT TGATGAAATG TGCGCCCGTG CCGTCAAGGA AAATTGGCAG ACTGTGACAC CTTGCACCCT CAAAAAACAG TACTGTTCCA AACCTAAAAC TAGAACCATC CTAGGTACCA ACAACTTCAT AGCCTTGGCT CACAGGTCAG CACTCAGTGG TGTCACCCAG GCGTTCATGA AGAAGGCCTG GAAGTCCCCA ATTGCCTTGG GGAAAAACAA GTTTAAGGAA TTGCATTGCA CTGTCGCCGG CAGATGCCTT GAGGCTGACC TGGCTTCCTG CGATCGCAGC ACCCCCGCCA TTGTGAGGTG GTTTGTTGCC AACCTCCTGT ATGAACTTGC AGGATGTGAA GAGTACTTGC CTAGCTACGT GCTCAACTGT TGCCATGACC TTGTGGCAAC GCAGGATGGC GCTTTCACAA AACGCGGTGG CCTGTCGTCC GGGGACCCCG TCACCAGTGT GTCCAACACC GTCTACTCAC TGATAATTTA CGCCCAGCAC ATGGTGCTTT CGGCCTTGAA GATGGGTCAT GAAATTGGTC TCAAGTTCCT TGAGGAACAG CTCAAATTTG AGGACCTTCT TGAAATCCAG CCCATGTTAG TGTATTCTGA TGACCTCGTC TTGTATGCGG AAAGACCCAC TTTTCCCAAC TACCATTGGT GGGTCGAGCA TCTTGACCTG ATGTTGGGCT TTAAAACGGA CCCAAAGAAA ACTGTCATAA CTGATAAACC CAGTTTTCTC GGCTGCAGAA TTGAAGCAGG ACGGCAGTTA GTCCCCAATC GCGACCGTAT TCTGGCTGCT CTTGCATATC ATATGAAGGC GCAGAACGCC TCAGAGTATT ATGCGTCCGC TGCCGCAATT CTGATGGATT CGTGTGCTTG CATTGACCAT GACCCCGAGT GGTATGAGGA CCTTATCTGC GGCATCGCCC GGTGTGCTCG CCAGGACGGT TACCGTTTTC CAGGCCCGGC ATTTTTCATG TCCATGTGGG AGAAGCTGAA AAGTCATAAC GAAGGGAAGA AATGCCGTCA CTGCGGCATC TGCGACGCCA AAGCCGACTA TGCGTCCGCC TGTGGACTTG ATTTGTGTTT GTTCCATTCA CACTTTCATC AACACTGCCC AGTCACTCTG AGCTGTGGCC ACCATGCCGG TTCAAAGGAA TGTTCGCAGT GTCAGTCACC TGTCGGGGCT GGCAAATCCC CCCTTGACGC TGTGCTGAAA CAAATCCCGT ACAAACCTCC TCGTACCATT ATCATGAAGG TGGACAACAA AACAACGACC CTTGACCCGG GAAGATATCA GTCCCGTCGA GGTCTTGTTG CAGTCAAAAG AGGTATTGCA GGTAATGAGG TTGATCTTTC TGATGGAGAC TACCAAGTGG TGCCTCTTTT GCCGACTTGC AAAGACATAA ACATGGTGAA GGTGGCTTGC AACGTACTAC TCAGCAAGTT TATAGTAGGG CCGCCAGGTT CCGGAAAAAC CACCTGGCTA CTGAACCAAG TCCAGGACGA TGATGTCATT TACACACCTA CTCATCAGAC AATGTTTGAC ATAGTCAGTG CTCTTAAAGT TTGCAGGTAT TCCATCCCAG GAGCCTCAGG ACTCCCTTTT CCACCACCTG CCAGGTCCGG GCCGTGGGTT AGGCTCATCG CCAGCGGACA TGTCCCTGGC CGAGTGTCAT ATCTCGATGA GGCAGGATAT TGCAATCATC TAGACATTCT AAGGCTGCTT TCCAAAACAC CCCTTGTGTG TTTGGGTGAC CTTCAGCAAC TTCACCCGGT CGGCTTTGAT TCCTATTGTT ATGTGTTCGA TCAGATGCCT CAGAAGCAGC TGACCACCAT TTATAGATTT GGCCCTAACA TCTGTGCAGC CATCCAGCCT TGTTACAGGG AGAAACTTGA ATCCAAGGCC AGGAACACCA GAGTGGTTTT CACCACCCGG CCTGTGGCCT TTGGTCAGGT CCTGACACCG TACCACAAAG ATCGTACCGG CTCTGCAATA ACTATAGATT CATCCCAGGG GGCGACCTTC GACATTGTGA CATTGCATCT ACCATCGCCA AAGTCCCTAA ACAAATCCCG AGCACTTGTA GCCATCACTC GGGCAAGACA TGGGTTGTTC ATTTATGACC CTCATGACCA ACTCCAGGAG TTTTTCAACT TAACCCCCGA GCGCACTGAT TGTAACCTTG CGTTCAGCCG TGGGGATGAG CTGGTTGTTT TGAATGTGGA TAATGCGGTC ACAACTGTAG CGAAGGCCCT AGAGACAGGT TCACCCCGAT TTCGAGTATC GGACCCGAGG TGCAAGTCTC TCTTAGCCGC TTGTTCGGCC AGTCTAGAAG GGAGCTGCAT GCCACTACCA CAAGTAGCAC ATAACCTGGG GTTTTACTTT TCCCCGGACA GCCCAGCTTT TGCACCCCTG CCAAAAGAGC TGGCGCCACA TTGGCCAGTG GTCACCCACC AGAATAATCG AGCGTGGCCT GATCGACTTG TCGCTAGTAT GCGCCCAATT GATGCCCGCT ACAGCAAGCC AATGGTCGGT GCAGGGTATG TGGTCGGGCC ATCCATTTTT CTTGGCACTC CTGGTGTGGT GTCATACTAT CTCACATTAT ACATCGGGGG CGAGCCTCAG GCCCTGCCAG AAACACTCGT TTCAACAGGA CGTATAGCCA CAGATTGTCG GGAATATCTC GACGCGGCTG AGGAAGAGGC AGCGAGAGAA CTTCCCCACG CATTTATTGG CGATGTCAAA GGCACTACGG TCGGGGGGTG TCACCACATT ACATCGAAAT ACCTACCTAG GTCCCTGCCT AAAGACTCTG TTGCTGTGGT TGGGGTGAGT TCGCCCGGTA GGGCTGCTAA AGCCGTGTGC ACTCTCACCG ATGTGTACCT CCCCGAACTC CGACCATATT TGCAACCGGA GACGGCATCA AAATGCTGGA AACTTAAACT GGATTTCAGG GATGTTCGAC TGATGGTCTG GAAAGGCGCC ACAGCCTATT TCCAGTTGGA AGGGCTGACA TGGTCAGCGC TGCCCGATTA TGCTAGGTTC ATTCAGCTAC CCAAGGATGC CGTTGTGTAC ATCGATCCGT GTATAGGGCC GGCAACAGCC AATCGCAAGG TTGTGCGAAC CACAGACTGG CGGGCCGACC TGGCAGTGAC ACCGTATGAT TACGGTGCTC AGGTCATTTT GACAACAGCC TGGTTCGAGG

- 102 035624

11341 ACCTTGGGCC GCAGTGGAAG ATTTTGGGGT TGCAGCCTTT CAGACGAACA TTTGGCTTTG 114 01 AGAACACTGA AGATTGGGCA ATTCTCGCAC GCCGTATGAA TGACGGCAAA GATTACACTG 11461 ACTATAATTG GCATTGTGTA CGAGAACGCC CACACGCAAT TTACGGGCGC GCCCGTGACC 11521 ATACGTATCA TTTTGCCCTT GGCACTGAAC TGCAAGTAGA GCTGGGCAGA CCCCGGCTGC 11581 CTCCTGAGCA AGTGCCGTGA ACGCGGAGTG ATGCAATGGG TTCACTGTGG AGTAAAATCA 11641 GTCAGTTGTT CGTGGATGCC TTCACTGAGT TCCTTGTTAG TGTGGTTGAC ATTGTCATCT 11701 TTCTCGCCAT ATTGTTTGGG TTCACTGTTG CAGGCTGGTT ATTGGTCTTC CTTCTCAGAG 11761 TGGTTTGCTC CGCGTTTCTC CGTTCGCGCT CTGCCATTCA CTCTCCCGAA CTATCGAAGG 11821 TCCTATGAGG GCTTGCTACC CAACTGCAGA CCGGATGTCC CACAATTCGC AGTTAAGCAC 11881 CCGTTGGGTA TACTTTGGCA TATGCGAGTC TCCCACCTAA TTGACGAAAT GGTCTCTCGC 11941 CGCATTTACC GGACCATGGA ACATTCGGGT CAAGCGGCCT GGAAGCAGGT TGTTAGTGAA 12001 GCCACTCTCA CAAAACTGTC AAGGCTTGAC GTAGTCACTC ATTTCCAACA CCTGGCCGCA 12061 GTGGAGGCTG ATTCTTGCCG CTTCCTTAGC TCACGACTCG CGATGCTGAA AAACCTTGCC 12121 GTTGGCAATG TGAGCCTGGA GTACAACACT ACTTTGGACC GCGTTGAGCT CATCTTTCCC 12181 ACACCAGGTA CGAGGCCCAA GTTGACCGAT TTTAGGCAAT GGCTTATCAG CGTGCACGCT 12241 TCCATCTTCT CCTCTGTGGC TTCGTCTGTT ACCTTGTTCA CAGTGCTTTG GCTTCGAATT 12301 CCAGCTCTAC GCTATGTTTT TGGTTTCCAT TGGCCCACGG CAACACATCA TTCGAACTAA 12361 CTATCAATTA CACTATATGT AAGCCATGCC CTACCAGTCA AGCTGCCCAA CAAAGACTCG 12421 AGCCTGGCCG TAACGTGTGG TGCAAAATAG GGCACGACAG GTGTGAGGAA CGTGACCATG 12481 ATGAGTTGTC AATGTCCATT CCGTCCGGGT ACGACAACCT CAAACTTGAG GGTTATTATG 12541 CTTGGCTGGC TTTTTTGTCC TTTTCCTACG CGGCCCAATT CCATCCGGAG CTGTTCGGAA 12601 TAGGAAACGT GTCGCGCGTC TTTGTGGATA AGCGACACCA GTTCATTTGC GCCGAGCATG 12661 ATGGACAAAA TTCAACCATA TCTGCCAGAC ACAACATCTC CGCGTCGTAT GCGGTGTATT 12721 ACCATCATCA AATAGACGGG GGCAATTGGT TTCATTTGGA ATGGCTGCGA CCATTCTTTT 12781 CCTCCTGGCT GGTGCTCAAC ATCTCATGGT TTCTGAGGCG TTCGCCTGCA AGCCCTGCTT 12841 CTCGACGCAT CTATCAGATA TTAAGACCAA CACGACCGCG GCTGCCGGTT TCATGGTCCT 12901 TCAGAACATC AATTGTTTCC AATCTCACAG GGCCTCAACA GCGCAAGGTA CCACTCCCCT 12961 CAGGAGGTCG TCCCAATGTC GTGAAGCCGT CGGCATTCCC CAGTACATCA CGATAACGGC 13021 TAATGTGACC GATGAATCGT ATTTGTACAA CGCGGACTTG CTGATGCTTT CCGCGTGCCT 13081 TTTCTACGCC TCGGAAATGA GCGAGAAAGG CTTCAAAGTC ATCTTTGGGA ATATTTCTGG 13141 CGTTGTTTCC GCTTGTGTTA ATTTCACAGA TTATGTGGCC CATGTGACCC AACACACTCA 13201 GCAGCACCAT TTGGTAATTG ATCACATTCG GTTACTACAC TTCTTGACAC CGTCTACGAT 13261 GAGGTGGGCT ACAACCATTG CTTGTTTGTT TGCCATTCTT TTGGCGGTAT GAAATGTTCT 13321 TGCAAGTTGG GGCATTTCTT GACTCCTCAC TCTTGCTTCT GGTGGCTTTT TTTGCTGTGT 13381 ACCGGCTTGT CTTGGTCCTT TGTCGATGGC AACGACAACA GCTCGACATC CCAATACATA 13441 TATAATTTGA CGATATGCGA GCTGAATGGG ACCGAATGGT TGTCCGGTCA TTTTGATTGG 13501 GCAGTCGAAA CCTTTGTGCT TTACCCAGTT GCCACTCATA TCATTTCACT GGGTTTTCTC 13561 ACAACAAGCC ATTTCCTTGA TGCGCTCGGT CTCGGCGCTG TGTCCGCCAC AGGATTCATT 13621 GGCGAGCGGT ATGTACTTAG CAGCATGTAC GGCGTTTGCG CCTTCGCGGC GCTCGTATGT 13681 TTTGTCATCC GTGCTGCTAA AAATTGCATG GCTTGCCGCT ATGCCCGCAC CCGGTTTACC 13741 AACTTCATCG TGGACGACCG GGGAAGAATC CATCGATGGA AGTCTTCAAT AGTGGTGGAG 13801 AAATTGGGCA AAGCTGAAGT CGGTGGTGAC CTTGTCAACA TTAAGCATGT TGTCCTCGAA 13861 GGGGTTAAAG CTCAACCCTT GACGAGGACT TCGGCTGAGC AATGGGAAGC CTAGACGACT 13921 TTTGCAACGA TCCCACCGCC GCACAAAAAC TCGTGCTGGC CTTTAGCATC ACATATACAC 13981 CCATAATGAT ATACGCCCTT AAGGTGTCAC GCGGCCGACT CCTGGGGCTG TTGCACATCT 14041 TGATATTTCT GAATTGTTCC TTTACTTTTG GGTACATGAC ATATGTGCAT TTTCAATCCA 14101 CCAACCGTGT CGCACTCACT CTGGGGGCTG TAGTCGCCCT TTTGTGGGGT GTTTACAGCC 14161 TCACAGAGTC ATGGAAGTTC ATCACTTCCA GATGCAGATT GTGTTGCCTA GGCCGGCGAT 14221 ACATTCTGGC CCCTGCCCAT CACGTAGAAA GTGCTGCAGG CCTCCATTCA ATCCCAGCGT 14281 CTGGTAACCG AGCATACGCT GTGAGAAAGC CCGGACTAAC ATCAGTGAAC GGCACTCTAG 14341 TACCTGGGCT TCGGAGCCTC GTGCTGGGCG GCAAACGAGC TGTTAAACGA GGAGTGGTTA 14 4 01 ACCTCGTCAA GTATGGCCGG TAAGAACCAG AGCCAGAAGA AAAGAAGAAA TGCAGCTCCG 14461 ATGGGGAAAG GCCAGCCAGT CAATCAACTG TGCCAGTTGC TGGGTACAAT GATAAAGTCC 14 521 CAGCGCCAGC AATCTAGGGG AGGACAGGCC AAAAAGAAGA AGCCTGAGAA GCCACATTTT 14581 CCCCTAGCTG CTGAAGATGA CATTCGGCAC CATCTCACCC AGGCCGAACG TTCCCTCTGC 14641 TTGCAATCGA TCCAGACGGC TTTCAATCAA GGCGCAGGAA CTGCGTCGCT TTCATCCAGC 14701 GGGAAGGTCA GTTTCCAGGT TGAGTTCATG CTGCCGGTTG CTCATACAGT GCGCCTGATT 14761 CGCGTGACTT CTACATCCGC CAGTCAGGGT GCAAATTAAT TTGACAGTCA GGTGAATGGC 14821 CGCGATTGAC GTGTGGCCTC TAA

SEQ ID NO: 11 OPC 1a родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 10, расположенным между нуклеотидами 178..7227

- 103 035624

MSGMFSRCMCTPAARVFWNAGQVYCTRCLSARSLLSPELQDTDLGAVGLFHKPKDKLHWKVPIGIPQVECSPSGC CWLSTIFPLARMTSGNHNFLQRLVKVADVLYRDGCLTPRHLRELQVYERGCNWYPITGPVPGMAVYANSMHVSDQ PFPGATHVLTNSPLPQRACRQPFCPFEEAHSSIYRWEKFVIFMDSSSDGRSRMMWTPESDDSTALEVLPPELEHQ VKVLVRSFPAHHLVDLADWELTESPENGFSFSTSHPCGYLVRDPAVSEGKCWLSCFLSQSAEVLSREAHLATAYG YQTKWGVPGKYIQRRLQVHGLRAWDPDGPIHVEALSCPQSWIRHLTLNDDVTPGFVRLMSLRIVPNTEPTTHRI FRFGVHKWYGAAGKRARGKRAAKSEKDSASTLKVARPTSTSGIVTYSPPADGSCGWHAIAAILNRMINNDFTSPL PRYNRPEDDWASDGDLAQAIQCLQLPAAIARNRACPNAKYLVKLNGVHWEVEVRPGMAPRSLSRECWGVCSEGC VASPYPEDGLPKRALEAIASAYRLPSDCVCDGIIDFLANPPPQEFWTLDKMLTSPSPEQSGFSSLYKLLLEVLPQ KCGSTEGEFIYTVERMLKDCPSSKQAMALLAKIKVPSSKAPSVTLNECFPTDVPVNSELISWEEPKDPGAAWLC PSDAKESKETAPEEAQARNRKVLHPWLTEELSEQQVQWEGDQDMPLDLTWPTLTATATPVRGPVPDNLSSGIG AQPATVQELILARPAPRLVERCGTESNGSSSFLDLPDVQTSDQPLDLSLAAWPVRATASDPGWIHGRREPVFVKP RGVFSDGESALQFGELSEASSWDDRTKEAPWDAPIDLTTSNETLSGSDPFEFAKFRRPRFSAQALIDRGGPLA DVHAKIKSRVYEQCLQACEPGSRATPATKKWLDKMWDRVDMKTWRCTSQFQAGHILESLKFLPDMIQDTPPPVPR KNRAGDSAGLKQLVAQWDRKLSVTPPTKPVGPVLDQTVPLPMDIQQEDAISADKPPHSQNPSSQVDVGGGWKSFM LSGTRFAGSVSQRLTTWVFEVLSHLPAFMLTLFSPRGSMAPGDWLFAGAVLLALLLCRSYPILGCLPLLGVFSGS VRCVRLGVFGSWMAFAVFLFSTPPDPVGSSCDHDSPECHAELLALEQRQLWEPVRSLWGPSGLLCVILGKLLGG SRCLWFVLLRICMLADLAISLIYWSQGRCHKCWGKCIRTAPAEVTLNVFPFSRATRSSLVSLCDRFQAPKGVDP VHLATGWRGCWCGESPIHQSHQKPIAYANLDEKKISAQTVIAVPYDPSQAIKCLKVLQAGGAIVDQPTPEWRVS EIPFSAPFFPKVPVNPDCRVWDSDTFVAAVRCGYSTAQLVLGRGNFAKLNQTPLRNSVPTKTTGGASYTLAVAQ VSVWTLVHFILGLWLTSPQVCGRGTSDPWCSNPFSYPTYGPGWCSSRLCVSADGVTLPLFSAVAHLSGREVGIF ILVLASLGAIAHRIALKADMSMVFLAFCAYAWPMSSWLICFFPMLLRWVTLHPLTMLWVHSFLVFCLPAAGVLSL GITGLLWAVGRFTQVAGIITPYDIHQYTSGPRGAAAVATAPEGTYMAAVRRAALTGRTLIFTPSAVGSLLEGAFR TQKPCLNTVNWGSSLGSGGVFTIDGRRVIVTATHVLNGNTARVTGDSYNRMHTFNTNGDYAWSHADDWQGVAPM VKIAKGYRGRAYWQTSTGVEPGIMGEGFAFCFTNCGDSGSPVISEAGDLIGVHTGSNKLGSGLVTTPEGETCSIK ETRLSDLSRHFAGPSVPLGDIKLSPAIIPDVTTIPSDLASLLASVPVMEGGLSTVQLLCVFFLLWRMMGHAWTPI VAVGFFLLNEILPAVLVRAVFSFALFVLAWATPWSAQVLMIRLLTAALNRNRLSLAFYALGGWGIATEIGTFAG GWPELSQALSTYCFLPRFLAVTSYVPTIIIGGLHALGVILWLFKYRCLHNMLVGDGSFSSAFFLRYFAEGNLRKG VSQSCGMNNESLTAAIACKLSQADLDFLSSLTNFKCFVSASNMKNAAGQYIEAAYARALRQELASLVQVDKMKGV LAKLEAFAETATPSLDTGDVIVLLGQHPHGSILDINVGGERKTVSVQETRCLGGSKFSVCTWSNTPVDTLTGIP LQTPTPLFENGPRHRSEDDDLKVERMKKHCVSLGFHKINGKVYCKIWDKSNGDTFYTDDSRYTQDHAFQDRSTDY RDRDYEGVQTAPQQGFDPKSEAPVGTWIGGITYNRHLVKGKEVLVPKPDNCLEAARLSLEQALAGMGQTCDLTA TEVEKLKRIISQLQGLTTEQALNC

SEQ ID NO: 12 OPC 1B родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 10, расположенным между нуклеотидами 7209..11600

TGFKLLAASGLTRCGRGGLWTETAVKIVKYHSRTFTLGSLDLKVTSEVEVKKSTEQGHAWANLCSGWLMRPH PPSLVDVLLKPGLDTTPGIQPGHGAGNMGVNGSIWDFETAPTKVELELSKQIIQACEVRRGDAPNLQLPYKLYPV RGDPERRKGRLVNTRFGDLPYKTPQDTKSAIHAACCLHPNGVLVSDGKSTLGTTLQHGFELYVPTVPYSVMEYLD SRPDTPFMCTKHGTSKAAAEDLQKYDLSTQGFVLPGVLRLVRRFIFSHVGKAPPLFLPSTYPAKNSMAGVNGQRF PTKDVQSIPEIDEMCARAVKENWQTVTPCTLKKQYCSKPKTRTILGTNNFIAIAHRSALSGVTQAFMKKAWKSPI ALGKNKFKELHCTVAGRCLEADLASCDRSTPAIVRWFVANLLYELAGCEEYLPSYVLNCCHDLVATQDGAFTKRG GLSSGDPVTSVSNTVYSLIIYAQHMVLSALKMGHEIGLKFLEEQLKFEDLLEIQPMLVYSDDLVLYAERPTFPNY HWWVEHLDLMLGFKTDPKKTVITDKPSFLGCRIEAGRQLVPNRDRILAAIAYHMKAQNASEYYASAAAILMDSCA CIDHDPEWYEDLICGIARCARQDGYRFPGPAFFMSMWEKLKSHNEGKKCRHCGICDAKADYASACGLDLCLFHSH FHQHCPVTLSCGHHAGSKECSQCQSPVGAGKSPLDAVLKQIPYKPPRTIIMKVDNKTTTLDPGRYQSRRGLVAVK RGIAGNEVDLSDGDYQWPLLPTCKDINMVKVACNVLLSKFIVGPPGSGKTTWLLNQVQDDDVIYTPTHQTMFDI VSALKVCRYSIPGASGLPFPPPARSGPWVRLIASGHVPGRVSYLDEAGYCNHLDILRLLSKTPLVCLGDLQQLHP VGFDSYCYVFDQMPQKQLTTIYRFGPNICAAIQPCYREKLESKARNTRWFTTRPVAFGQVLTPYHKDRTGSAIT IDSSQGATFDIVTLHLPSPKSLNKSRALVAITRARHGLFIYDPHDQLQEFFNLTPERTDCNLAFSRGDELWLNV DNAVTTVAKALETGSPRFRVSDPRCKSLLAACSASLEGSCMPLPQVAHNLGFYFSPDSPAFAPLPKELAPHWPW THQNNRAWPDRLVASMRPIDARYSKPMVGAGYWGPSIFLGTPGWSYYLTLYIGGEPQALPETLVSTGRIATDC REYLDAAEEEAARELPHAFIGDVKGTTVGGCHHITSKYLPRSLPKDSVAWGVSSPGRAAKAVCTLTDVYLPELR PYLQPETASKCWKLKLDFRDVRIJWWKGATAYFQLEGLTWSALPDYARFIQLPKDAVVYIDPCIGPATANRKWR TTDWRADLAVTPYDYGAQVILTTAWFEDLGPQWKILGLQPFRRTFGFENTEDWAILARRMNDGKDYTDYNWHCVR ERPHAIYGRARDHTYHFALGTELQVELGRPRLPPEQVP

SEQ ID NO: 13 OPC 2 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 10, расположенным между нуклеотидами 11611..12360

MQWVHCGVKSVSCSWMPSLSSLLVWLTLSSFSPYCLGSLLQAGYWSSFSEWFAPRFSVRALPFTLPNYRRSYEGL LPNCRPDVPQFAVKHPLGILWHMRVSHLIDEMVSRRIYRTMEHSGQAAWKQWSEATLTKLSRLDWTHFQHLAA VEADSCRFLSSRLAMLKNLAVGNVSLEYNTTLDRVELIFPTPGTRPKLTDFRQWLISVHASIFSSVASSVTLFTV LWLRIPALRYVFGFHWPTATHHSN

SEQ ID NO: 14 OCP 3 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 10, расположенным между нуклеотидами 12219..13016

MAYQRARFHLLLCGFVCYLVHSALASNSSSTLCFWFPLAHGNTSFELTINYTICKPCPTSQAAQQRLEPGRNVWC KIGHDRCEERDHDELSMSIPSGYDNLKLEGYYAWLAFLSFSYAAQFHPELFGIGNVSRVFVDKRHQFICAEHDGQ NSTISARHNISASYAVYYHHQIDGGNWFHLEWLRPFFSSWLVLNISWFLRRSPASPASRRIYQILRPTRPRLPVS WSFRTSIVSNLTGPQQRKVPLPSGGRPNWKPSAFPSTSR

SEQ ID NO: 15 OPC 4 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 10, расположенным между нуклеотидами 12761..13312

MAATILFLLAGAQHLMVSEAFACKPCFSTHLSDIKTNTTAAAGFMVLQNINCFQSHRASTAQGTTPLRRSSQCRE AVGIPQYITITANVTDESYLYNADLLMLSACLFYASEMSEKGFKVIFGNISGWSACVNFTDYVAHVTQHTQQHH LVIDHIRLLHFLTPSTMRWATTIACLFAILLAV

- 104 035624

SEQ ID NO: 16 OPC 5 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 10, расположенным между нуклеотидами 13309..13914

MKCSCKLGHFLTPHSCFWWLFLLCTGLSWSFVDGNDNSSTSQYIYNLTICELNGTEWLSGHFDWAVETFVLYPVA

THIISLGFLTTSHFLDALGLGAVSATGFIGERYVLSSMYGVCAFAALVCFVIRAAKNCMACRYARTRFTNFIVDD

RGRIHRWKSSIWEKLGKAEVGGDLVNIKHWLEGVKAQPLTRTSAEQWEA

SEQ ID NO: 17 OPC 6 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 10, расположенным между нуклеотидами 13902..14423

MGSLDDFCNDPTAAQKLVLAFSITYTPIMIYALKVSRGRLLGLLHILIFLNCSFTFGYMTYVHFQSTNRVALTLG AWALLWGVYSLTESWKFITSRCRLCCLGRRYILAPAHHVESAAGLHSIPASGNRAYAVRKPGLTSVNGTLVPGL RSLVLGGKRAVKRGWNLVKYGR

SEQ ID NO: 18 OPC 7 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO: 10, расположенным между нуклеотидами 14413..14799

MAGKNQSQKKRRNAAPMGKGQPVNQLCQLLGTMIKSQRQQSRGGQAKKKKPEKPHFPLAAEDDIRHHLTQAERSL CLQ SIQ TAFNQ GAGTAS LS S S GKVS FQVE FMLPVAHTVRLI RVT S T SASQ GAN

SEQ ID NO: 19 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 1A ослабленного PRRSV 94881 178 ATG 181 TCTGGGATGT TCTCCCGGTG CATGTGCACC CCGGCTGCCC GGGTATTTTG GAACGCCGGC 241 CAAGTCTATT GCACACGGTG TCTCAGTGCA CGGTCTCTTC TCTCTCCAGA ACTTCAGGAC 301 ACGGACCTCG GTGCAGTTGG CTTGTTTCAC AAGCCTAAAG ACAAGCTCCA TTGGAAAGTT 361 CCCATTGGTA TCCCCCAGGT GGAATGTTCT CCATCTGGGT GTTGCTGGCT GTCAACCATT 421 TTTCCTTTAG CGCGCATGAC CTCCGGCAAT CACAACTTCC TTCAACGACT CGTGAAGGTT 4 81 GCTGATGTAT TGTACCGTGA CGGTTGCTTA ACCCCTAGAC ACCTCCGTGA ACTCCAAGTT 541 TACGAGCGTG GTTGCAATTG GTATCCGATT ACGGGGCCTG TGCCTGGGAT GGCTGTGTAC 601 GCGAACTCCA TGCACGTGTC CGACCAACCG TTCCCTGGTG CCACTCATGT GTTAACAAAT 661 TCCCCTTTGC CTCAACGGGC TTGTCGGCAG CCGTTCTGTC CGTTCGAAGA GGCCCATTCT 721 AGCATATACA GGTGGGAAAA ATTTGTAATT TTTATGGATT CCTCCTCCGA CGGTCGATCT 781 CGCATGATGT GGACTCCGGA ATCCGATGAC TCCACGGCTT TGGAAGTTCT GCCGCCCGAG 841 CTAGAACACC AGGTCAAGGT CCTTGTTCGG AGCTTTCCCG CCCATCACCT TGTCGACCTT 901 GCCGATTGGG AGCTCACTGA GTCCCCTGAT AACGGTTTTT CCTTCAGCAC GTCACATCCT 961 TGCGGCTACC TTGTTCGGGA CCCGGCTGTA TCCGAAGGCA AGTGTTGGCT TTCCTGCTTT 1021 TTGAGCCAGT CAGCCGAAGT GCTCAGTCGC GAGGCGCATC TGGCTACCGC CTATGGTTAC 1081 CAAACCAAGT GGGGTGTGCC TGGCAAGTAC ATCCAGCGCA GACTTCAAGT TCACGGTCTC 1141 CGTGCTGTGG TCGACCCTGA TGGTCCCATT CACGTTGAAG CATTGTCTTG CCCCCAGTCT 1201 TGGATCAGGC ACTTGACCCT GAATGATGAT GTCACCCCGG GATTCGTTCG CCTAATGTCT 1261 CTTCGCATTG TGCCGAACAC AGAGCCTACC ACACACCGGA TCTTTCGTTT TGGAGTGCAC 1321 AAGTGGTATG GTGCCGCCGG CAAACGGGCC CGTGGCAAGC GTGCCGCCAA AAGTGAGAAA 1381 GACTCGGCTT CCACCCTCAA GGTTGCCCGA CCGACTTCCA CCAGTGGAAT CGTCACCTAC 1441 TCCCCACCTG CGGACGGGTC TTGTGGTTGG CATGCCCTTG CCGCCATACT GAACCGGATG 1501 ATTAATAATG ACTTCACGTC CCCTCTGCCT CGGTACAACA GGCCGGAGGA CGATTGGGCT 1561 TCTGATGGTG ACCTTGCTCA GGCCATTCAA TGTTTGCAAC TACCTGCCGC CATAGCTCGG 1621 AACCGCGCCT GCCCTAACGC CAAATACCTC ATAAAACTCA ACGGAGTTCA TTGGGAGGTA 1681 GAGGTGAGGC CTGGAATGGC TCCTCGCTCC CTCTCTCGTG AGTGCGTTGT TGGCGTCTGC 1741 TCTGAAGGCT GTGTCGCGTC GCCTTACCCG GAGGACGGGT TGCCTAAACG TGCACTTGAG 1801 GCCCTGGCGT CTGCTTATAG ACTGCCTTCA GACTGTGTTT GTGATGGTAT TATTGACTTC 1861 CTTGCCAATC CACCTCCCCA GGAGTTCTGG ACTCTTGACA AAATGTTGAC TTCCCCGTCA 1921 CCGGAGCAGT CCGGCTTCTC TAGTCTGTAT AAATTGTTGT TAGAGATCTT GCCGCAGAAA 1981 TGCGGATCCA CAGAAGGGGA ATTCATCTAT ACTGTTGAGA GGATGTTGAA GGATTGTCCG 2041 AGCTCCAAAC AGGCCATGGC CCTCCTTGCA AAAATTAAGG TCCCATCCTC AAAGGCCCCA 2101 TCCGTGACTC TGAACGAGTG CTTCCCCACG GATGTTCCAG TCAACTCTGA GTTAATATCT 2161 TGGGAAGAGC CCAAAGACCC TGGCGCTGCT GTTGTCCTAT GTCCATCGGA TGCAAAAGAA 2221 TCTAAGGAAA CAGCCCCTGA AGAAGCTCAA GCGAGAAACC GTAAGGTCCT TCACCCTGTG 2281 GTCCTTACCG AGGAACTTAG CGAGCAACAG GTGCAGGTGG TTGAGGGTGA TCAGGATATG 2341 CCACTGGATT TGACTTGGCC AACCTTAACC GCTACGGCGA CCCCTGTTAG AGGGCCGGTA 2401 CCGGACAATT TGAGCTCTGG CATTGGTGCC CAGCCCGCTA CCGTTCAAGA ACTCATTCTG 2461 GCGAGGCCTG CACCCCGTCT TGTTGAGCGC TGTGGCACGG AGTCGAACGG CAGCAGTTCA 2521 TTTCTGGATT TGCCTGACGT GCAGACCTCG GACCAGCCTT TAGACCTGTC CCTGGCCGCG 2581 TGGCCTGTAA GGGCTACCGC GTCTGACCCC GGTTGGATCC ACGGTAGGCG TGAGCCTGTC 2641 TTTGTGAAGC CTCGAGGTGT TTTCTCTGAT GGCGAGTCGG CCCTTCAGTT CGGAGAGCTT 2701 TCCGAAGGCA GTTCTGTCGT CGATGACCGG ACAAAAGAAG CTCCGGTGGT TGACGCCCCC 2761 ATCGATTTGA CAACTTCGAA CGAGACGCTC TCTGGGTCTG ACCCCTTTGA ATTCGCCAAA 2821 TTCAGGCGCC CGCGTTTCTC CGCGCAAGCT TTAATCGACC GAGGTGGTCC GCTTGCCGAT 2881 GTTCATGCAA AGATAAAGAG TCGGGTATAT GAACAATGCC TTCAAGCTTG TGAACCTGGT 2941 AGTCGTGCGA CCCCAGCCAC CAAGAAGTGG CTCGACAAAA TGTGGGACAG GGTGGACATG 3001 AAAACTTGGC GCTGCACCTC GCAGTTCCAA GCTGGTCACA TTCTTGAGTC CCTCAAATTC 3061 CTCCCTGACA TGATTCAAGA CACACCGCCT CCTGTTCCCA GGAAGAACCG AGCTGGTGAC 3121 AGTGCCGGCC TGAAGCAACT GGTGGCGCAG TGGGATAGGA AATCGAGTGT GACACCCCCC 3181 ACAAAACCGG TTGGACCGGT GCTTGACCAG GCCGTCCCTC TGCCTATGGA CATCCAGCAA 3241 GGAGATGCCA TCTCCGCTGA CAAGCCACCC CATTCGCAAA ACCCTTCTAG TCAAGTAGAT 3301 GTGGGTGGAG GTTGGAAAAG TTTTATGCTC TCCGGCACCC GTTTCGCGGG GTCCGTTAGT 3361 CAGCGCCTTA CGACATGGGT TTTTGAGGTT CTCTCCCATC TCCCAGCTTT TATGCTCACA 3421 CTTTTCTCGC CACGGGGCTC TATGGCTCCA GGTGATTGGC TGTTTGCAGG TGCTGTTCTA 3481 CTTGCTCTCC TGCTCTGCCG TTCTTACCCA ATACTCGGAT GCCTTCCCTT ATTGGGTGTC 3541 TTTTCTGGTT CTGTGCGGTG TGTTCGTTTG GGTGTTTTTG GTTCTTGGAT GGCTTTTGCT 3601 GTATTTTTAT TCTCGACTCC ACCCGACCCA GTCGGTTCTT CTTGTGACCA CGATTCGCCG 3661 GAGTGTCATG CTGAGCTTTT GGCTCTTGAG CAGCGCCAAC TTTGGGAACC TGTGCGCAGC 3721 CTTGTGGTCG GGCCATCGGG CCTCTTATGC GTCATTCTTG GCAAGTTACT CGGTGGGTCA 3781 CGTTGTCTCT GGTTTGTTCT CCTACGTATA TGCATGCTCG CAGATTTGGC AATTTCTCTT 3841 ATTTATGTGG TGTCCCAAGG GCGTTGTCAC AAGTGTTGGG GAAAGTGTAT AAGGACGGCT 3901 CCTGCAGAAG TGGCCCTTAA TGTGTTTCCT TTTTCGCGCG CCACCCGCTC ATCTCTTGTG 3961 TCCTTGTGTG ATCGGTTCCA AGCGCCAAAA GGAGTTGACC CCGTGCACTT GGCGACAGGC

- 105 035624

4021 TGGCGCGGGT GCTGGTGTGG TGAGAGCCCT ATTCATCAAT CACACCAAAA ACCGATAGCT 4081 TATGCCAACT TGGATGAAAA GAAGATATCC GCCCAGACGG TGATTGCTGT CCCGTATGAT 4141 CCTAGTCAGG CCATTAAATG CCTGAAAGTT TTGCAGGCAG GAGGGGCTAT TGTGGACCAG 4201 CCTACGCCCG AGGTCGTCCG TGTGTCTGAG ATTCCCTTCT CGGCCCCATT TTTTCCGAAG 4261 GTCCCAGTCA ACCCAGACTG CAGGGTTGTG GTAGATTCGG ACACTTTTGT GGCTGCGGTC 4321 CGCTGCGGTT ATTCGACAGC ACAACTGGTC CTTGGTCGGG GCAACTTTGC CAAGCTAAAT 4381 CAGACCCCCC TCAGGAACTC TGTCCCCACC AAAACAACTG GTGGGGCCTC ATACACCCTT 4441 GCCGTGGCCC AGGTATCTGT GTGGACTCTT GTTCATTTCA TCCTCGGCCT TTGGTTAACG 4501 TCACCTCAAG TGTGTGGTCG AGGGACCTCT GACCCGTGGT GTTCGAACCC TTTTTCGTAT 4561 CCTACTTATG GCCCCGGAGT TGTGTGTTCC TCTCGACTCT GCGTGTCTGC CGACGGAGTT 4621 ACCCTGCCAT TGTTCTCAGC CGTTGCCCAT CTTTCCGGTA GAGAGGTGGG GATTTTTATT 4681 TTGGTGCTTG CCTCCTTGGG CGCTTTAGCC CACCGCTTGG CTCTTAAGGC AGACATGTCA 4741 ATGGTCTTTT TGGCGTTTTG TGCTTACGCC TGGCCCATGA GCTCCTGGTT AATTTGCTTC 4801 TTTCCTATGC TCTTGAGGTG GGTAACCCTT CATCCTCTCA CTATGCTTTG GGTGCACTCA 4861 TTTTTGGTGT TTTGCCTACC AGCTGCCGGC GTTCTCTCGC TGGGAATAAC CGGTCTTCTT 4921 TGGGCAGTTG GCCGTTTCAC CCAGGTTGCC GGAATTATCA CACCTTATGA CATCCACCAG 4 981 TATACCTCCG GACCACGTGG TGCAGCTGCT GTAGCAACGG CTCCAGAAGG TACTTACATG 5041 GCGGCCGTTC GGAGAGCCGC TTTGACTGGA CGGACTTTGA TCTTCACACC ATCTGCAGTC 5101 GGATCCCTTC TTGAAGGTGC TTTCAGAACT CAAAAGCCCT GCCTTAACAC CGTGAATGTC 5161 GTAGGCTCTT CCCTTGGTTC TGGAGGAGTT TTCACCATTG ATGGCAGAAG AGTCATCGTC 5221 ACTGCCACCC ATGTGTTGAA TGGTAACACA GCCAGGGTCA CTGGTGATTC CTACAACCGC 5281 ATGCACACGT TCAATACTAA TGGTGATTAT GCCTGGTCCC ATGCTGATGA CTGGCAAGGC 5341 GTTGCCCCTA TGGTTAAGAT CGCTAAGGGG TATCGCGGTC GTGCCTACTG GCAAACGTCA 5401 ACCGGAGTCG AACCTGGCAT CATGGGGGAA GGATTCGCCT TCTGTTTCAC TAACTGTGGC 5461 GACTCAGGGT CACCTGTCAT TTCAGAAGCT GGTGACCTTA TTGGAGTCCA TACCGGTTCA 5521 AACAAACTCG GTTCTGGTCT TGTGACAACC CCTGAAGGGG AGACCTGCTC CATCAAGGAA 5581 ACTAGGCTCT CTGACCTTTC TAGACATTTT GCAGGTCCAA GCGTCCCTCT TGGGGACATT 5641 AAGTTGAGCC CAGCCATCAT CCCTGATGTG ACAACTATTC CGAGTGACTT GGCATCGCTC 5701 CTTGCTTCTG TCCCCGTGAT GGAAGGTGGC CTCTCAACTG TCCAGCTTTT GTGCGTCTTT 5761 TTCCTTCTCT GGCGCATGAT GGGCCATGCC TGGACACCCA TTGTTGCCGT AGGCTTCTTT 5821 TTGCTGAATG AAATTCTCCC AGCAGTCTTG GTCCGAGCTG TGTTCTCTTT TGCACTCTTT 5881 GTACTTGCAT GGGCCACCCC CTGGTCGGCA CAAGTGTTGA TGATTAGACT CCTCACGGCG 5941 GCTCTCAACC GCAACAGGTT GTCCCTGGCG TTCTACGCAT TCGGAGGTGT CGTTGGCCTG 6001 GCCACAGAAA TCGGGACTTT TGCTGGTGGA TGGCCTGAAC TGTCCCAAGC CCTCTCGACA 6061 TACTGCTTCC TGCCCAGGTT CCTTGCTGTG ACTAGTTATG TCCCCACCAT CATCATCGGT 6121 GGGCTCCATG CCCTCGGCGT AATTTTGTGG TTATTCAAAT ACCGATGCCT CCACAACATG 6181 CTGGTTGGTG ATGGGAGTTT CTCAAGCGCT TTCTTCCTAC GGTATTTTGC TGAGGGTAAT 6241 CTTAGGAAAG GCGTGTCGCA GTCCTGTGGC ATGAATAACG AATCCCTGAC AGCTGCTTTG 6301 GCTTGCAAGT TGTCGCAAGC TGACCTTGAT TTTTTGTCCA GTTTAACGAA CTTCAAGTGC 6361 TTTGTGTCCG CTTCAAACAT GAAAAATGCA GCTGGCCAAT ACATCGAGGC GGCGTATGCT 6421 AGAGCTCTGC GTCAGGAGCT GGCCTCCTTG GTTCAGGTTG ACAAGATGAA AGGAGTATTG 6481 GCCAAGCTCG AGGCTTTCGC TGAGACGGCC ACTCCGTCAC TTGACACAGG GGACGTGATT 6541 GTTCTGCTTG GGCAACACCC CCATGGATCC ATCCTCGACA TTAATGTGGG GGGTGAAAGG 6601 AAAACTGTGT CTGTGCAAGA AACACGATGC CTGGGTGGTT CCAAATTCAG TGTCTGCACT 6661 GTCGTGTCCA ACACGCCCGT GGATACCTTG ACCGGTATCC CACTTCAGAC GCCAACCCCA 6721 CTTTTTGAAA ATGGCCCGCG CCATCGCAGC GAGGACGACG ACCTCAAAGT TGAGAGAATG 6781 AAAAAACACT GTGTATCCCT CGGCTTCCAC AAAATCAATG GTAAAGTTTA CTGCAAAATT 6841 TGGGACAAGT CTAACGGCGA CACCTTTTAC ACGGATGATT CCCGATACAC TCAAGACCAT 6901 GCTTTTCAGG ACAGGTCAAC CGACTATAGA GACAGGGATT ATGAAGGTGT ACAGACCGCC 6961 CCCCAACAGG GATTCGATCC AAAGTCCGAA GCCCCTGTTG GCACTGTTGT AATCGGTGGC 7021 ATTACGTATA ACAGGCATCT GGTCAAAGGT AAGGAGGTCC TAGTTCCCAA ACCTGACAAC 7081 TGCCTTGAAG CTGCCAGACT GTCCCTTGAG CAAGCTCTTG CTGGGATGGG CCAAACTTGT 7141 GACCTTACAG CTACCGAAGT GGAGAAACTA AAGCGCATCA TTAGTCAACT CCAAGGTCTG 7201 ACCACTGAAC AGGCTTTAAA CTGCTAG

SEQ ID NO: 20 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 1B ослабленного PRRSV 94881

7209 AC AGGCTTTAAA CTGCTAGCCG CCAGCGGCTT GACCCGCTGT GGCCGCGGCG

7261 GCCTAGTTGT AACTGAAACG GCGGTAAAAA TCGTAAAATA CCACAGCAGA ACTTTCACCT 7321 TAGGCTCTTT AGACCTAAAA GTCACCTCCG AGGTGGAGGT GAAGAAATCA ACTGAGCAGG 7381 GGCACGCTGT CGTGGCGAAC TTATGTTCCG GTGTCGTCTT GATGAGGCCT CACCCACCGT 7441 CCCTTGTTGA CGTTCTCCTC AAACCCGGAC TTGACACAAC ACCCGGCATT CAACCAGGGC 7501 ATGGGGCCGG GAATATGGGC GTGAACGGTT CTATTTGGGA TTTTGAAACT GCACCCACAA 75 61 AGGTAGAACT AGAGTTGTCC AAGCAAATAA TCCAAGCATG TGAAGTCAGG CGCGGGGACG 7621 CCCCTAACCT CCAACTCCCC TACAAGCTTT ATCCTGTCAG GGGGGACCCC GAGCGGCGTA

- 106 035624

7681 AAGGTCGCCT TGTCAACACT AGGTTTGGAG ATTTACCTTA CAAAACTCCC CAAGACACCA

7741 AGTCCGCAAT TCATGCGGCT TGTTGCCTGC ATCCCAATGG GGTCCTCGTG TCTGATGGCA

7801 AATCCACGCT GGGTACCACT CTTCAACATG GTTTCGAGCT TTATGTCCCC ACTGTACCTT

7861 ATAGTGTCAT GGAATACCTT GATTCACGCC CTGACACCCC TTTTATGTGT ACTAAACATG

7921 GCACTTCCAA GGCTGCTGCA GAGGACCTCC AAAAATATGA CCTATCCACT CAAGGGTTTG

7981 TCTTGCCTGG GGTCCTACGC CTAGTGCGCA GGTTCATCTT TAGCCATGTT GGTAAGGCGC

8041 CACCACTGTT CCTTCCATCA ACCTACCCTG CCAAGAACTC CATGGCAGGG GTCAATGGCC

8101 AGAGGTTCCC AACAAAGGAT GTCCAGAGCA TACCTGAAAT TGATGAAATG TGCGCCCGTG

8161 CCGTCAAGGA AAATTGGCAG ACTGTGACAC CTTGCACCCT CAAAAAACAG TACTGTTCCA

8221 AACCTAAAAC TAGAACCATC CTAGGTACCA ACAACTTCAT AGCCTTGGCT CACAGGTCAG

8281 CACTCAGTGG TGTCACCCAG GCGTTCATGA AGAAGGCCTG GAAGTCCCCA ATTGCCTTGG

8341 GGAAAAACAA GTTTAAGGAA TTGCATTGCA CTGTCGCCGG CAGATGCCTT GAGGCTGACC

8401 TGGCTTCCTG CGATCGCAGC ACCCCCGCCA TTGTGAGGTG GTTTGTTGCC AACCTCCTGT

8461 ATGAACTTGC AGGATGTGAA GAGTACTTGC CTAGCTACGT GCTCAACTGT TGCCATGACC

8521 TTGTGGCAAC GCAGGATGGC GCTTTCACAA AACGCGGTGG CCTGTCGTCC GGGGACCCCG

8581 TCACCAGTGT GTCCAACACC GTCTACTCAC TGATAATTTA CGCCCAGCAC ATGGTGCTTT

8641 CGGCCTTGAA GATGGGTCAT GAAATTGGTC TCAAGTTCCT TGAGGAACAG CTCAAATTTG

8701 AGGACCTTCT TGAAATCCAG CCCATGTTAG TGTATTCTGA TGACCTCGTC TTGTATGCGG

8761 AAAGACCCAC TTTTCCCAAC TACCATTGGT GGGTCGAGCA TCTTGACCTG ATGTTGGGCT

8821 TTAAAACGGA CCCAAAGAAA ACTGTCATAA CTGATAAACC CAGTTTTCTC GGCTGCAGAA

8881 TTGAAGCAGG ACGGCAGTTA GTCCCCAATC GCGACCGTAT TCTGGCTGCT CTTGCATATC

8941 ATATGAAGGC GCAGAACGCC TCAGAGTATT ATGCGTCCGC TGCCGCAATT CTGATGGATT

9001 CGTGTGCTTG CATTGACCAT GACCCCGAGT GGTATGAGGA TCTTATCTGC GGCATCGCCC

9061 GGTGTGCTCG CCAGGACGGT TACCGTTTTC CAGGCCCGGC ATTTTTCATG TCCATGTGGG

9121 AGAAGCTGAA AAGTCATAAT GAAGGGAAGA AATGCCGTCA CTGCGGCATC TGCGACGCCA

9181 AAGCCGACTA TGCGTCCGCC TGTGGACTTG ATTTGTGTTT GTTCCATTCA CACTTTCATC

9241 AACACTGCCC AGTCACTCTG AGCTGTGGCC ACCATGCCGG TTCAAAGGAA TGTTCGCAGT

9301 GTCAGTCACC TGTCGGGGCT GGCAAATCCC CCCTTGACGC TGTGCTGAAA CAAATCCCGT

9361 ACAAACCTCC TCGTACCATT ATCATGAAGG TGGACAACAA AACAACGACC CTTGACCCGG

9421 GAAGATATCA GTCCCGTCGA GGTCTTGTTG CAGTCAAAAG AGGTATTGCA GGTAATGAGG

9481 TTGATCTTTC TGATGGAGAC TACCAAGTGG TGCCTCTTTT GCCGACTTGC AAAGACATAA

9541 ACATGGTGAA GGTGGCTTGC AACGTACTAC TCAGCAAGTT TATAGTAGGG CCGCCAGGTT

9601 CCGGAAAAAC CACCTGGCTA CTGAACCAAG TCCAGGACGA TGATGTCATT TACACACCTA

9661 CTCATCAGAC AATGTTTGAC ATAGTCAGTG CTCTTAAAGT TTGCAGGTAT TCCATCCCAG

9721 GAGCCTCAGG ACTCCCTTTT CCACCACCTG CCAGGTCCGG GCCGTGGGTT AGGCTCATCG

9781 CCAGCGGACA TGTCCCTGGC CGAGTGTCAT ATCTCGATGA GGCAGGATAT TGCAATCATC

9841 TAGACATTCT AAGGCTGCTT TCCAAAACAC CCCTTGTGTG TTTGGGTGAC CTTCAGCAAC

9901 TTCACCCGGT CGGCTTTGAT TCCTATTGTT ATGTGTTCGA TCAGATGCCT CAGAAGCAGC

9961 TGACCACCAT TTATAGATTT GGCCCTAACA TCTGTGCAGC CATCCAGCCT TGTTACAGGG

10021 AGAAACTTGA ATCCAAGGCC AGGAACACCA GAGTGGTTTT CACCACCCGG CCTGTGGCCT

10081 TTGGTCAGGT CCTGACACCG TACCACAAAG ATCGTACCGG CTCTGCAATA ACTATAGATT

10141 CATCCCAGGG GGCGACCTTC GACATTGTGA CATTGCATCT ACCATCGCCA AAGTCCCTAA

10201 ACAAATCCCG AGCACTTGTA GCCATCACTC GGGCAAGACA TGGGTTGTTC ATTTATGACC

10261 CTCATGACCA ACTCCAGGAG TTTTTCAACT TAACCCCCGA GCGCACTGAT TGTAACCTTG

10321 CGTTCAGCCG TGGGGATGAG CTGGTTGTTT TGAATGTGGA TAATGCGGTC ACAACTGTAG

10381 CGAAGGCCCT AGAGACAGGT TCACCCCGAT TTCGAGTATC GGACCCGAGG TGCAAGTCTC

10441 TCTTAGCCGC TTGTTCGGCC AGTCTAGAAG GGAGCTGCAT GCCACTACCA CAAGTAGCAC

10501 ATAACCTGGG GTTTTACTTT TCCCCGGACA GCCCAGCTTT TGCACCCCTG CCAAAAGAGC

10561 TGGCGCCACA TTGGCCAGTG GTCACCCACC AGAATAATCG AGCGTGGCCT GATCGACTTG

10621 TCGCTAGTAT GCGCCCAATT GATGCCCGCT ACAGCAAGCC AATGGTCGGT GCAGGGTATG

10681 TGGTCGGGCC ATCCATTTTT CTTGGCACTC CTGGTGTGGT GTCATACTAT CTCACATTAT

10741 ACATCGGGGG CGAGCCTCAG GCCCTGCCAG AAACACTCGT TTCAACAGGA CGTATAGCCA

10801 CAGATTGTCG GGAATATCTC GACGCGGCTG AGGAAGAGGC AGCGAGAGAA CTTCCCCACG

10861 CATTTATTGG CGATGTCAAA GGCACTACGA TCGGGGGGTG TCACCACATT ACATCGAAAT

10921 ACCTACCTAG GTCCCTGCCT AAAGACTCTG TTGCTGTGGT TGGGGTGAGT TCGCCCGGTA

10981 GGGCTGCTAA AGCCGTGTGC ACTCTCACCG ATGTGTACCT CCCCGAACTC CGACCATATT

11041 TGCAACCGGA GACGGCATCA AAATGCTGGA AACTTAAACT GGATTTCAGG GATGTTCGAC

11101 TGATGGTCTG GAAAGGCGCC ACAGCCTATT TCCAGTTGGA AGGGCTGACA TGGTCAGCGC

11161 TGCCCGATTA TGCTAGGTTC ATTCAGCTAC CCAAGGATGC CGTTGTGTAC ATCGATCCGT

11221 GTATAGGGCC GGCAACAGCC AATCGCAAGG TTGTGCGAAC CACAGACTGG CGGGCCGACC

11281 TGGCAGTGAC ACCGTATGAT TACGGTGCTC AGGTCATTTT GACAACAGCC TGGTTCGAGG

11341 ACCTTGGGCC GCAGTGGAAG ATTTTGGGGT TGCAGCCTTT CAGACGAACA TTTGGCTTTG

114 01 AGAACACTGA AGATTGGGCA ATTCTCGCAC GCCGTATGAA TGACGGCAAA GATTACACTG

11461 ACTATAATTG GCATTGTGTA CGAGAACGCC CACACGCAAT TTACGGGCGC GCCCGTGACC

11521 ATACGTATCA TTTTGCCCTT GGCACTGAAC TGCAAGTAGA GCTGGGCAGA CCCCGGCTGC

11581 CTCCTGAGCA AGTGCCGTGA

SEQ ID NO: 21 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 2 ослабленного PRRSV 94881

- 107 035624

11611 ATGCAATGGG TTTACTGTGG AGTAAAATCA

11641 GTCAGTTGTT CGTGGATGCC TTCACTGAGT TCCTTGTTAG TGTGGTTGAC ATTGTCATCT

11701 TTCTCGCCAT ATTGTTTGGG TTCACTGTTG CAGGCTGGTT ATTGGTCTTC CTTCTCAGAG

11761 TGGTTTGCTC CGCGTTTCTC CGTTCGCGCT CTGCCATTCA CTCTTCCGAA CTATCGAAGG

11821 TCCTATGAGG GCTTGCTACC CAACTGCAGA CCGGATGTCC CACAATTCGC AGTTAAGCAC

11881 CCGTTGGGTA TACTTTGGCA TATGCGAGTC TCCCACCTAA TTGACGAAAT GGTCTCTCGC

11941 CGCATTTACC GGACCATGGA ACATTCGGGT CAAGCGGCCT GGAAGCAGGT TGTTAGTGAA

12001 GCCACTCTCA CAAAACTGTC AAGGCTTGAC GTAGTCACTC ATTTCCAACA CCTGGCCGCA

12061 GTGGAGGCTG ATTCTTGCCG CTTCCTTAGC TCACGACTCG CGATGCTGAA AAACCTTGCC

12121 GTTGGCAATG TGAGCCTGGA GTACAACACT ACTTTGGACC GCGTTGAGCT CATCTTTCCC

12181 ACACCAGGTA CGAGGCCCAA GTTGACCGAT TTTAGGCAAT GGCTTATCAG CGTGCACGCT 12241 TCCATCTTCT CCTCTGTGGC TTCGTCTGTT ACCTTGTTCA CAGTGCTTTG GCTTCGAATT 12301 CCAGCTCTAC GCTATGTTTT TGGTTTCCAT TGGCCCACGG CAACACATCA TTCGAACTAA

SEQ ID NO: 22 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 3 ослабленного PRRSV 94881 12219 AT GGCTTATCAG CGTGCACGCT 12241 TCCATCTTCT CCTCTGTGGC TTCGTCTGTT ACCTTGTTCA CAGTGCTTTG GCTTCGAATT 12301 CCAGCTCTAC GCTATGTTTT TGGTTTCCAT TGGCCCACGG CAACACATCA TTCGAACTAA 12361 CTATCAATTA CACTATATGT AAGCCATGCC CTACCAGTCA AGCTGCCCAA CAAAGACTCG 12421 AGCCTGGCCG TAACGTGTGG TGCAAAATAG GGCACGACAG GTGTGAGGAA CGTGACCATG 12481 ATGAGTTGTC AATGTCCATT CCGTCCGGGT ACGACAACCT CAAACTTGAG GGTTATTATG 12541 CTTGGCTGGC TTTTTTGTCC TTTTCCTACG CGGCCCAATT CCATCCGGAG CTGTTCGGAA 12601 TAGGAAACGT GTCGCGCGTC TTTGTGGATA AGCGACACCA GTTCATTTGC GCCGAGCATG 12661 ATGGACAAAA TTCAACCATA TCTGCCAGAC ACAACATCTC CGCGTCGTAT GCGGTGTATT 12721 ACCATCATCA AATAGACGGG GGCAATTGGT TTCATTTGGA ATGGCTGCGA CCATTCTTTT 12781 CCTCCTGGCT GGTGCTCAAC ATCTCATGGT TTCTGAGGCG TTCGCCTGCA AGCCCTGCTT 12841 CTCGACGCAT CTATCAGATA TTAAGACCAA CACGACCGCG GCTGCCGGTT TCATGGTCCT 12901 TCAGAACATC AATTGTTTCC AATCTCACAG GGCCTCAACA GCGCAAGGTA CCACTCCCCT 12961 CAGGAGGTCG TCCCAATGTC GTGAAGCCGT CGGCATTCCC CAGTACATCA CGATAA

SEQ ID NO: 23 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 4 ослабленного PRRSV 94881 12761 ATGGCTGCGA CCATTCTTTT 12781 CCTCCTGGCT GGTGCTCAAC ATCTCATGGT TTCTGAGGCG TTCGCCTGCA AGCCCTGCTT 12841 CTCGACGCAT CTATCAGATA TTAAGACCAA CACGACCGCG GCTGCCGGTT TCATGGTCCT 12901 TCAGAACATC AATTGTTTCC AATCTCACAG GGCCTCAACA GCGCAAGGTA CCACTCCCCT 12961 CAGGAGGTCG TCCCAATGTC GTGAAGCCGT CGGCATTCCC CAGTACATCA CGATAACGGC 13021 TAATGTGACC GATGAATCGT ATTTGTACAA CGCGGACTTG CTGATGCTTT CCGCGTGCCT 13081 TTTCTACGCC TCGGAAATGA GCGAGAAAGG CTTCAAAGTC ATCTTTGGGA ATATTTCTGG 13141 CGTTGTTTCC GCTTGTGTTA ATTTCACAGA TTATGTGGCC CATGTGACCC AACACACTCA 13201 GCAGCACCAT TTGGTAATTG ATCACATTCG GTTACTACAC TTCTTGACAC CGTCTACGAT 13261 GAGGTGGGCT ACAACCATTG CTTGTTTGCT TGCCATTCTT TTGGCGGTAT GA

SEQ ID NO: 24 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 5 ослабленного PRRSV 94881 13309 AT GAAATGTTCT 13321 TGCAAGTTGG GGCATTTCTT GACTCCTCAC TCTTGCTTCT GGTGGCTTTT TTTGCTGTGT 13381 ACCGGCTTGT CTTGGTCCTT TGTCGATGGC AACGACGACA GCTCGACATC CCAATACATA 13441 TATAATTTGA CGATATGCGA GCTGAATGGG ACCGAATGGT TGTCCGGTCA TTTTGATTGG 13501 GCAGTCGAAA CCTTTGTGCT TTACCCAGTT GCCACTCATA TCATTTCACT GGGTTTTCTC 13561 ACAACAAGCC ATTTCCTTGA TGCGCTCGGT CTCGGCGCTG TGTCCGCCAC AGGATTCATT 13621 GGCGAGCGGT ATGTACTTAG CAGCATGTAC GGCGTTTGCG CCTTCGCGGC GTTCGTATGT 13681 TTTGTCATCC GTGCTGCTAA AAATTGCATG GCTTGCCGCT ATGCCCGCAC CCGGTTTACC 13741 AACTTCATCG TGGACGACCG GGGAAGAATC CATCGATGGA AGTCTTCAAT AGTGGTGGAG 13801 AAATTGGGCA AAGCTGAAGT CGGTGGTGAC CTTGTCAACA TTAAGCATGT TGTCCTCGAA 13861 GGGGTTAAAG CTCAACCTTT GACGAGGACT TCGGCTGAGC AATGGGAAGC CTAG

SEQ ID NO: 25 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 6 ослабленного PRRSV 94881 13902 ATGGGAAGC CTAGACGACT

13921 TTTGCAACGA TCCCACCGCC GCACAAAAAC TCGTGCTGGC CTTTAGCATC ACATATACAC 13981 CCATAATGAT ATACGCCCTT AAGGTGTCAC GCGGCCGACT CCTGGGGCTG TTGCACATCT 14041 TGATATTTCT GAATTGTTCC TTTACTTTTG GGTACATGAC ATATGTGCAT TTTCAATCCA 14101 CCAACCGTGT CGCATTCACT CTGGGGGCTG TAGTCGCCCT TTTGTGGGGT GTTTACAGCC 14161 TCACAGAGTC ATGGAAGTTC ATCACTTCCA GATGCAGATT GTGTTGCCTA GGCCGGCGAT 14221 ACATTCTGGC CCCTGCCCAT CACGTAGAAA GTGCTGCAGG CCTCCATTCA ATCCCAGCGT 14281 CTGGTAACCG AGCATACGCT GTGAGAAAGC CCGGACTAAC ATCAGTGAAC GGCACTCTAG 14341 TACCTGGGCT TCGGAGCCTC GTGCTGGGCG GCAAACGAGC TGTTAAACGA GGAGTGGTTA 14401 ACCTCGTCAA GTATGGCCGG TAA

SEQ ID NO: 26 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 7 ослабленного PRRSV 94881 14413 ATGGCCGG TAAGAACCAG AGCCAGAAGA AAAGAAGAAA TGCAGCTCCG

144 61 ATGGGGAAAG GCCAGCCAGT CAATCAACTG TGCCAGTTGC TGGGTACAAT GATAAAGTCC 14521 CAGCGCCAGC AATCTAGGGG AGGACAGGCC AAAAAGAAGA AGCCTGAGAA GCCACATTTT 14581 CCCCTAGCTG CTGAAGATGA CATTCGGCAC CATCTCACCC AGGCCGAACG TTCCCTCTGC 14641 TTGCAATCGA TCCAGACGGC TTTCAATCAA GGCGCAGGAA CTGCGTCGCT TTCATCCAGC 14701 GGGAAGGTCA GTTTCCAGGT TGAGTTCATG CTGCCGGTTG CTCATACAGT GCGCCTGATT 14761 CGCGTGACTT CTACATCCGC CAGTCAGGGT GCAAATTAAT TTGACAGTCA GGTGAATGGC 14821 CGCGATTGAC GTGTGGCCTC TAA

- 108 035624

SEQ ID NO: 27 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 1a родительского PRRSV

94881

178 ATG

181 TCTGGGATGT TCTCCCGGTG CATGTGCACC CCGGCTGCCC GGGTATTTTG GAACGCCGGC

241 CAAGTCTATT GCACACGGTG TCTCAGTGCA CGGTCTCTTC TCTCTCCAGA ACTTCAGGAC

301 ACGGACCTCG GTGCAGTTGG CTTGTTTCAC AAGCCTAAAG ACAAGCTCCA TTGGAAAGTT

361 CCCATTGGTA TCCCCCAGGT GGAATGTTCT CCATCTGGGT GTTGCTGGCT GTCAACCATT

421 TTTCCTTTAG CGCGCATGAC CTCCGGCAAT CACAACTTCC TTCAACGACT CGTGAAGGTT

481 GCTGACGTAT TGTACCGTGA CGGTTGCTTA ACCCCTAGAC ACCTCCGTGA ACTCCAAGTT

541 TACGAGCGTG GTTGCAATTG GTATCCGATT ACGGGGCCTG TGCCTGGGAT GGCTGTGTAC

601 GCGAACTCCA TGCACGTGTC CGACCAACCG TTCCCTGGTG CCACTCATGT GTTAACAAAT

661 TCCCCTTTGC CTCAACGGGC TTGTCGGCAG CCGTTCTGTC CGTTCGAAGA GGCCCATTCT

721 AGCATATACA GGTGGGAAAA ATTTGTAATT TTTATGGATT CCTCCTCCGA CGGTCGATCT

781 CGCATGATGT GGACTCCGGA ATCCGATGAC TCCACGGCTT TGGAAGTTCT GCCGCCCGAG

841 CTAGAACACC AGGTCAAGGT CCTTGTTCGG AGCTTTCCCG CCCATCACCT TGTCGACCTT

901 GCCGATTGGG AGCTCACTGA GTCCCCTGAG AACGGTTTTT CCTTCAGCAC GTCACATCCT

961 TGCGGCTACC TTGTTCGGGA CCCGGCTGTA TCCGAAGGCA AGTGTTGGCT TTCCTGCTTT

1021 TTGAGCCAGT CAGCCGAAGT GCTCAGTCGC GAGGCGCATC TGGCTACCGC CTATGGTTAC

1081 CAAACCAAGT GGGGTGTGCC TGGCAAGTAC ATCCAGCGCA GACTTCAAGT TCACGGTCTC

1141 CGTGCTGTGG TCGACCCTGA TGGTCCCATT CACGTTGAAG CATTGTCTTG CCCCCAGTCT

1201 TGGATCAGGC ACTTGACCCT GAATGATGAT GTCACCCCGG GATTCGTTCG CCTAATGTCT

1261 CTTCGCATTG TGCCGAACAC AGAGCCTACC ACACACCGGA TCTTTCGTTT TGGAGTGCAC

1321 AAGTGGTATG GTGCCGCCGG CAAACGGGCC CGTGGCAAGC GTGCCGCCAA AAGTGAGAAA

1381 GACTCGGCTT CCACCCTCAA GGTTGCCCGA CCGACTTCCA CCAGTGGAAT CGTCACCTAC

1441 TCCCCACCTG CGGACGGGTC TTGTGGTTGG CATGCCCTTG CCGCCATACT GAACCGGATG

1501 ATTAATAATG ACTTCACGTC CCCTCTGCCT CGGTACAACA GGCCGGAGGA CGATTGGGCT

1561 TCTGATGGTG ACCTTGCTCA GGCCATTCAA TGTTTGCAAC TACCTGCCGC CATAGCTCGG

1621 AACCGCGCCT GCCCTAACGC CAAATACCTC GTAAAACTCA ACGGAGTTCA TTGGGAGGTA

1681 GAGGTGAGGC CTGGAATGGC TCCTCGCTCC CTCTCTCGTG AGTGCGTTGT TGGCGTCTGC

1741 TCTGAAGGCT GTGTCGCGTC GCCTTACCCG GAGGACGGGT TGCCTAAACG TGCACTTGAG

- 109 035624

1801 GCCCTGGCGT CTGCTTATAG ACTGCCTTCA GACTGTGTTT GTGATGGTAT TATTGACTTC 1861 CTTGCCAATC CACCTCCCCA GGAGTTCTGG ACTCTTGACA AAATGTTGAC TTCCCCGTCA 1921 CCGGAGCAGT CCGGCTTCTC TAGTCTGTAT AAATTGTTGT TAGAGGTCTT GCCGCAGAAA 1981 TGCGGATCCA CAGAAGGGGA ATTCATCTAT ACTGTTGAGA GGATGTTGAA GGATTGTCCG 2041 AGCTCCAAAC AGGCCATGGC CCTCCTTGCA AAAATTAAGG TCCCATCCTC AAAGGCCCCA 2101 TCCGTGACTC TGAACGAGTG CTTCCCCACG GATGTTCCAG TCAACTCTGA GTTAATATCT 2161 TGGGAAGAGC CCAAAGACCC TGGCGCTGCT GTTGTCCTAT GTCCATCGGA TGCAAAAGAA 2221 TCTAAGGAAA CAGCCCCTGA AGAAGCTCAA GCGAGAAACC GTAAGGTCCT CCACCCTGTG 2281 GTCCTTACCG AGGAACTTAG CGAGCAACAG GTGCAGGTGG TTGAGGGTGA TCAGGATATG 2341 CCACTGGATT TGACTTGGCC AACCTTAACC GCTACGGCGA CCCCTGTTAG AGGGCCGGTA 2401 CCGGACAATT TGAGCTCTGG CATTGGTGCC CAGCCCGCTA CCGTTCAAGA ACTCATTCTG 2461 GCGAGGCCTG CACCCCGTCT TGTTGAGCGC TGTGGCACGG AGTCGAACGG CAGCAGTTCA 2521 TTTCTGGATT TGCCTGACGT GCAGACCTCG GACCAGCCTT TAGACCTGTC CCTGGCCGCG 2581 TGGCCTGTAA GGGCTACCGC GTCTGACCCC GGTTGGATCC ACGGTAGGCG TGAGCCTGTC 2641 TTTGTGAAGC CTCGAGGTGT TTTCTCTGAT GGCGAGTCGG CCCTTCAGTT CGGAGAGCTT 2701 TCCGAAGCCA GTTCTGTCGT CGATGACCGG ACAAAAGAAG CTCCGGTGGT TGACGCCCCC 2761 ATCGATTTGA CAACTTCGAA CGAGACGCTC TCTGGGTCTG ACCCCTTTGA ATTCGCCAAA 2821 TTCAGGCGCC CGCGTTTCTC CGCGCAAGCT TTAATCGACC GAGGTGGTCC GCTTGCCGAT 2881 GTTCATGCAA AGATAAAGAG TCGGGTATAT GAACAATGCC TTCAAGCTTG TGAACCTGGT 2941 AGTCGTGCGA CCCCAGCCAC CAAGAAGTGG CTCGACAAAA TGTGGGACAG GGTGGACATG 3001 AAAACTTGGC GCTGCACCTC GCAGTTCCAA GCTGGTCACA TTCTTGAGTC CCTCAAATTC 3061 CTCCCTGACA TGATTCAAGA CACACCGCCT CCTGTTCCCA GGAAGAACCG AGCTGGTGAC 3121 AGTGCCGGCC TGAAGCAACT GGTGGCGCAG TGGGATAGGA AATTGAGTGT GACACCCCCC 3181 ACAAAACCGG TTGGACCGGT GCTTGACCAG ACCGTCCCTC TGCCTATGGA CATCCAGCAA 3241 GAAGATGCCA TCTCCGCTGA CAAGCCACCC CATTCGCAAA ACCCTTCTAG TCAAGTAGAT 3301 GTGGGTGGAG GTTGGAAAAG TTTTATGCTC TCCGGCACCC GTTTCGCGGG GTCCGTTAGT 3361 CAGCGCCTTA CGACATGGGT TTTTGAGGTT CTCTCCCATC TCCCAGCTTT TATGCTCACA 3421 CTTTTCTCGC CACGGGGCTC TATGGCTCCA GGTGATTGGC TGTTTGCAGG TGCTGTTCTA 3481 CTTGCTCTCC TGCTCTGCCG TTCTTACCCA ATACTCGGAT GCCTTCCCTT ATTGGGTGTC 3541 TTTTCTGGTT CTGTGCGGTG TGTTCGTTTG GGTGTTTTTG GTTCTTGGAT GGCTTTTGCT 3601 GTATTTTTAT TCTCGACTCC ACCCGACCCA GTCGGTTCTT CTTGTGACCA CGATTCGCCG 3661 GAGTGTCATG CTGAGCTTTT GGCTCTTGAG CAGCGCCAAC TTTGGGAACC TGTGCGCAGC 3721 CTTGTGGTCG GGCCATCGGG CCTCTTATGC GTCATTCTTG GCAAGTTACT CGGTGGGTCA 3781 CGTTGTCTCT GGTTTGTTCT CCTACGTATA TGCATGCTCG CAGATTTGGC AATTTCTCTT 3841 ATTTATGTGG TGTCCCAAGG GCGTTGTCAC AAGTGTTGGG GAAAGTGTAT AAGGACGGCT 3901 CCTGCAGAAG TGACCCTTAA TGTGTTTCCT TTTTCGCGCG CCACCCGCTC ATCTCTTGTG 3961 TCCTTGTGTG ATCGGTTCCA AGCGCCAAAA GGAGTTGACC CCGTGCACTT GGCGACAGGC 4021 TGGCGCGGGT GCTGGTGTGG TGAGAGCCCT ATTCATCAAT CACACCAAAA ACCGATAGCT 4081 TATGCCAACT TGGATGAAAA GAAGATATCC GCCCAGACGG TGATTGCTGT CCCGTATGAT 4141 CCCAGTCAGG CCATTAAATG CCTGAAAGTT TTGCAGGCAG GAGGGGCTAT TGTGGACCAG 4201 CCTACGCCCG AGGTCGTCCG TGTGTCTGAG ATTCCCTTCT CGGCCCCATT TTTTCCGAAG 4261 GTCCCAGTCA ACCCAGATTG CAGGGTTGTG GTAGATTCGG ACACTTTTGT GGCTGCGGTC 4321 CGCTGCGGTT ATTCGACAGC ACAACTGGTC CTTGGTCGGG GCAACTTTGC CAAGCTAAAT 4381 CAGACCCCCC TCAGGAACTC TGTCCCCACC AAAACAACTG GTGGGGCCTC ATACACCCTT 4441 GCCGTGGCCC AGGTATCTGT GTGGACTCTT GTTCATTTCA TCCTCGGCCT TTGGTTAACG 4501 TCACCTCAAG TGTGTGGTCG AGGGACCTCT GACCCGTGGT GTTCGAACCC TTTTTCGTAT 4561 CCTACTTATG GCCCCGGAGT TGTGTGTTCC TCTCGACTCT GCGTGTCTGC CGACGGAGTT 4621 ACCCTGCCAT TGTTCTCAGC CGTTGCCCAT CTTTCCGGTA GAGAGGTGGG GATTTTTATT 4681 TTGGTGCTTG CCTCCTTGGG CGCTTTAGCC CACCGCTTGG CTCTTAAGGC AGACATGTCA 4741 ATGGTCTTTT TGGCGTTTTG TGCTTACGCC TGGCCCATGA GCTCCTGGTT AATTTGCTTC 4801 TTTCCTATGC TCTTGAGGTG GGTAACCCTT CATCCTCTCA CTATGCTTTG GGTGCACTCA 4861 TTTTTGGTGT TTTGCCTACC AGCTGCCGGC GTTCTCTCGC TGGGAATAAC CGGTCTTCTT 4921 TGGGCAGTTG GCCGTTTCAC CCAGGTTGCC GGAATTATCA CACCTTATGA CATCCACCAG 4 981 TATACCTCCG GACCACGTGG TGCAGCTGCT GTAGCAACGG CTCCAGAAGG TACTTACATG 5041 GCGGCCGTTC GGAGAGCCGC TTTGACTGGA CGGACTTTGA TCTTCACACC ATCTGCAGTC 5101 GGATCCCTTC TTGAAGGTGC TTTCAGAACT CAAAAGCCCT GCCTTAACAC CGTGAATGTC 5161 GTAGGCTCTT CCCTTGGTTC TGGAGGAGTT TTCACCATTG ATGGCAGAAG AGTCATCGTC 5221 ACTGCCACCC ATGTGTTGAA TGGTAACACA GCCAGGGTCA CTGGTGATTC CTACAACCGC 5281 ATGCACACGT TCAATACTAA TGGTGATTAT GCCTGGTCCC ATGCTGATGA CTGGCAAGGC 5341 GTTGCCCCTA TGGTTAAGAT CGCTAAGGGG TATCGCGGTC GTGCCTACTG GCAAACGTCA 5401 ACCGGAGTCG AACCTGGCAT CATGGGGGAA GGATTCGCCT TCTGTTTCAC TAACTGTGGC 5461 GACTCAGGGT CACCTGTCAT TTCAGAAGCT GGTGACCTTA TTGGAGTCCA TACCGGTTCA 5521 AACAAACTCG GTTCTGGTCT TGTGACAACC CCTGAAGGGG AGACCTGCTC CATCAAGGAA 5581 ACTAGGCTCT CTGACCTTTC TAGACATTTT GCAGGTCCAA GCGTCCCTCT TGGGGACATT 5641 AAGTTGAGCC CAGCCATCAT CCCTGATGTG ACAACTATTC CGAGTGACTT GGCATCGCTC 5701 CTTGCTTCTG TCCCCGTGAT GGAAGGTGGC CTCTCAACTG TCCAGCTTTT GTGCGTCTTT 5761 TTCCTTCTCT GGCGCATGAT GGGCCATGCC TGGACACCCA TTGTTGCCGT AGGCTTCTTT 5821 TTGCTGAATG AAATTCTCCC AGCAGTCTTG GTCCGAGCTG TGTTCTCTTT TGCACTCTTT 5881 GTACTTGCAT GGGCCACCCC CTGGTCGGCA CAAGTGTTGA TGATTAGACT CCTCACGGCG 5941 GCTCTCAACC GCAACAGGTT GTCCCTGGCG TTCTACGCAC TCGGAGGTGT CGTTGGCCTG

- 110 035624

6001 GCCACAGAAA TCGGGACTTT TGCTGGTGGA TGGCCTGAAC TGTCCCAAGG CCTCTCGACA 6061 TACTGCTTCC TGCCCAGGTT CCTTGCTGTG ACTAGTTATG TCCCCACCAT CATCATCGGT 6121 GGGCTCCATG CCCTCGGCGT AATTTTGTGG TTATTCAAAT ACCGATGCCT CCACAACATG 6181 CTGGTTGGTG ATGGGAGTTT CTCAAGCGCT TTCTTCCTAC GGTATTTTGC TGAGGGTAAT 6241 CTTAGGAAAG GCGTGTCGCA GTCCTGTGGC ATGAATAACG AATCCCTGAC AGCTGCTTTG 6301 GCTTGCAAGT TGTCGCAAGC TGACCTTGAT TTTTTGTCCA GTTTAACGAA CTTCAAGTGC 6361 TTTGTGTCCG CTTCAAACAT GAAAAATGCA GCTGGCCAAT ACATCGAGGC GGCGTATGCT 6421 AGAGCTCTGC GTCAGGAGCT GGCCTCCTTG GTTCAGGTTG ACAAGATGAA AGGAGTATTG 6481 GCCAAGCTCG AGGCTTTCGC TGAGACGGCC ACTCCGTCAC TTGACACAGG TGACGTGATT 6541 GTTCTGCTTG GGCAACACCC CCATGGATCC ATCCTCGACA TTAATGTGGG GGGTGAAAGG 6601 AAAACTGTGT CTGTGCAAGA AACACGATGC CTGGGTGGTT CCAAATTCAG TGTCTGCACT 6661 GTCGTGTCCA ACACGCCCGT GGATACCTTG ACCGGCATCC CACTTCAGAC GCCAACCCCA 6721 CTTTTTGAAA ATGGCCCGCG CCATCGCAGC GAGGACGACG ACCTTAAAGT TGAGAGAATG 6781 AAAAAACACT GTGTATCCCT CGGCTTCCAC AAAATCAATG GTAAAGTTTA CTGCAAAATT 6841 TGGGACAAGT CTAACGGCGA CACCTTTTAC ACGGATGATT CCCGATACAC TCAAGACCAT 6901 GCTTTTCAGG ACAGGTCAAC CGACTATAGA GACAGGGATT ATGAAGGTGT ACAGACCGCC 6961 CCCCAACAGG GATTCGATCC AAAGTCCGAA GCCCCTGTTG GCACTGTTGT AATCGGTGGC 7021 ATTACGTATA ACAGGCATCT GGTCAAAGGT AAGGAGGTCC TAGTTCCCAA ACCTGACAAC 7081 TGCCTTGAAG CTGCCAGACT GTCCCTTGAG CAAGCTCTTG CTGGGATGGG CCAAACTTGT 7141 GACCTTACAG CTACCGAAGT GGAGAAACTA AAGCGCATCA TTAGTCAACT CCAAGGTCTG 7201 ACCACTGAAC AGGCTTTAAA CTGCTAGCCG CCAGCGGCTT GACCCGCTGT GGCCGCGGCG SEQ ID NO: 28 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 1b родительского PRRSV 94881

7209 AC AGGCTTTAAA CTGCTAGCCG CCAGCGGCTT GACCCGCTGT GGCCGCGGCG

7261 GCCTAGTTGT AACTGAAACG GCGGTAAAAA TCGTAAAATA CCACAGCAGA ACTTTCACCT 7321 TAGGCTCTTT AGACCTAAAA GTCACCTCCG AGGTGGAGGT GAAGAAATCA ACTGAGCAGG 7381 GGCACGCTGT CGTGGCGAAC TTATGTTCCG GTGTCGTCTT GATGAGGCCT CACCCACCGT 7441 CCCTTGTTGA CGTTCTCCTC AAACCCGGAC TTGACACAAC ACCCGGCATT CAACCAGGGC 7501 ATGGGGCCGG GAATATGGGC GTGAACGGTT CTATTTGGGA TTTTGAAACT GCACCCACAA 75 61 AGGTAGAACT AGAGTTGTCC AAGCAAATAA TCCAAGCATG TGAAGTCAGG CGCGGGGACG 7621 CCCCTAACCT CCAACTCCCC TACAAGCTTT ATCCTGTCAG GGGGGACCCC GAGCGGCGTA 7681 AAGGTCGCCT TGTCAACACT AGGTTTGGAG ATTTACCTTA CAAAACTCCC CAAGACACCA 7741 AGTCCGCAAT TCATGCGGCT TGTTGCCTGC ATCCCAATGG GGTCCTCGTG TCTGATGGTA 7801 AATCCACGCT GGGTACCACT CTTCAACATG GTTTCGAGCT TTATGTCCCC ACTGTACCTT 7861 ATAGTGTCAT GGAATACCTT GATTCACGCC CTGACACCCC TTTTATGTGT ACTAAACATG 7921 GCACTTCCAA GGCTGCTGCA GAGGACCTCC AAAAATATGA CCTATCCACT CAAGGGTTTG 7981 TCTTGCCTGG GGTCCTACGC CTAGTGCGCA GGTTCATCTT TAGCCATGTT GGTAAGGCGC 8041 CACCACTGTT CCTTCCATCA ACCTACCCTG CCAAGAACTC CATGGCAGGG GTCAATGGCC 8101 AGAGGTTCCC AACAAAGGAT GTCCAGAGCA TACCTGAAAT TGATGAAATG TGCGCCCGTG 8161 CCGTCAAGGA AAATTGGCAG ACTGTGACAC CTTGCACCCT CAAAAAACAG TACTGTTCCA 8221 AACCTAAAAC TAGAACCATC CTAGGTACCA ACAACTTCAT AGCCTTGGCT CACAGGTCAG 8281 CACTCAGTGG TGTCACCCAG GCGTTCATGA AGAAGGCCTG GAAGTCCCCA ATTGCCTTGG 8341 GGAAAAACAA GTTTAAGGAA TTGCATTGCA CTGTCGCCGG CAGATGCCTT GAGGCTGACC 8401 TGGCTTCCTG CGATCGCAGC ACCCCCGCCA TTGTGAGGTG GTTTGTTGCC AACCTCCTGT 84 61 ATGAACTTGC AGGATGTGAA GAGTACTTGC CTAGCTACGT GCTCAACTGT TGCCATGACC 8521 TTGTGGCAAC GCAGGATGGC GCTTTCACAA AACGCGGTGG CCTGTCGTCC GGGGACCCCG 8581 TCACCAGTGT GTCCAACACC GTCTACTCAC TGATAATTTA CGCCCAGCAC ATGGTGCTTT 8641 CGGCCTTGAA GATGGGTCAT GAAATTGGTC TCAAGTTCCT TGAGGAACAG CTCAAATTTG 8701 AGGACCTTCT TGAAATCCAG CCCATGTTAG TGTATTCTGA TGACCTCGTC TTGTATGCGG 8761 AAAGACCCAC TTTTCCCAAC TACCATTGGT GGGTCGAGCA TCTTGACCTG ATGTTGGGCT 8821 TTAAAACGGA CCCAAAGAAA ACTGTCATAA CTGATAAACC CAGTTTTCTC GGCTGCAGAA 8881 TTGAAGCAGG ACGGCAGTTA GTCCCCAATC GCGACCGTAT TCTGGCTGCT CTTGCATATC 8941 ATATGAAGGC GCAGAACGCC TCAGAGTATT ATGCGTCCGC TGCCGCAATT CTGATGGATT 9001 CGTGTGCTTG CATTGACCAT GACCCCGAGT GGTATGAGGA CCTTATCTGC GGCATCGCCC 9061 GGTGTGCTCG CCAGGACGGT TACCGTTTTC CAGGCCCGGC ATTTTTCATG TCCATGTGGG 9121 AGAAGCTGAA AAGTCATAAC GAAGGGAAGA AATGCCGTCA CTGCGGCATC TGCGACGCCA 9181 AAGCCGACTA TGCGTCCGCC TGTGGACTTG ATTTGTGTTT GTTCCATTCA CACTTTCATC 9241 AACACTGCCC AGTCACTCTG AGCTGTGGCC ACCATGCCGG TTCAAAGGAA TGTTCGCAGT 9301 GTCAGTCACC TGTCGGGGCT GGCAAATCCC CCCTTGACGC TGTGCTGAAA CAAATCCCGT 9361 ACAAACCTCC TCGTACCATT ATCATGAAGG TGGACAACAA AACAACGACC CTTGACCCGG 9421 GAAGATATCA GTCCCGTCGA GGTCTTGTTG CAGTCAAAAG AGGTATTGCA GGTAATGAGG 9481 TTGATCTTTC TGATGGAGAC TACCAAGTGG TGCCTCTTTT GCCGACTTGC AAAGACATAA 9541 ACATGGTGAA GGTGGCTTGC AACGTACTAC TCAGCAAGTT TATAGTAGGG CCGCCAGGTT 9601 CCGGAAAAAC CACCTGGCTA CTGAACCAAG TCCAGGACGA TGATGTCATT TACACACCTA

- 111 035624

9661 CTCATCAGAC AATGTTTGAC ATAGTCAGTG CTCTTAAAGT TTGCAGGTAT TCCATCCCAG 9721 GAGCCTCAGG ACTCCCTTTT CCACCACCTG CCAGGTCCGG GCCGTGGGTT AGGCTCATCG 9781 CCAGCGGACA TGTCCCTGGC CGAGTGTCAT ATCTCGATGA GGCAGGATAT TGCAATCATC 9841 TAGACATTCT AAGGCTGCTT TCCAAAACAC CCCTTGTGTG TTTGGGTGAC CTTCAGCAAC 9901 TTCACCCGGT CGGCTTTGAT TCCTATTGTT ATGTGTTCGA TCAGATGCCT CAGAAGCAGC 9961 TGACCACCAT TTATAGATTT GGCCCTAACA TCTGTGCAGC CATCCAGCCT TGTTACAGGG

10021 AGAAACTTGA ATCCAAGGCC AGGAACACCA GAGTGGTTTT CACCACCCGG CCTGTGGCCT 10081 TTGGTCAGGT CCTGACACCG TACCACAAAG ATCGTACCGG CTCTGCAATA ACTATAGATT 10141 CATCCCAGGG GGCGACCTTC GACATTGTGA CATTGCATCT ACCATCGCCA AAGTCCCTAA 10201 ACAAATCCCG AGCACTTGTA GCCATCACTC GGGCAAGACA TGGGTTGTTC ATTTATGACC 10261 CTCATGACCA ACTCCAGGAG TTTTTCAACT TAACCCCCGA GCGCACTGAT TGTAACCTTG 10321 CGTTCAGCCG TGGGGATGAG CTGGTTGTTT TGAATGTGGA TAATGCGGTC ACAACTGTAG 10381 CGAAGGCCCT AGAGACAGGT TCACCCCGAT TTCGAGTATC GGACCCGAGG TGCAAGTCTC 10441 TCTTAGCCGC TTGTTCGGCC AGTCTAGAAG GGAGCTGCAT GCCACTACCA CAAGTAGCAC 10501 ATAACCTGGG GTTTTACTTT TCCCCGGACA GCCCAGCTTT TGCACCCCTG CCAAAAGAGC 10561 TGGCGCCACA TTGGCCAGTG GTCACCCACC AGAATAATCG AGCGTGGCCT GATCGACTTG 10621 TCGCTAGTAT GCGCCCAATT GATGCCCGCT ACAGCAAGCC AATGGTCGGT GCAGGGTATG 10681 TGGTCGGGCC ATCCATTTTT CTTGGCACTC CTGGTGTGGT GTCATACTAT CTCACATTAT 10741 ACATCGGGGG CGAGCCTCAG GCCCTGCCAG AAACACTCGT TTCAACAGGA CGTATAGCCA 10801 CAGATTGTCG GGAATATCTC GACGCGGCTG AGGAAGAGGC AGCGAGAGAA CTTCCCCACG 10861 CATTTATTGG CGATGTCAAA GGCACTACGG TCGGGGGGTG TCACCACATT ACATCGAAAT 10921 ACCTACCTAG GTCCCTGCCT AAAGACTCTG TTGCTGTGGT TGGGGTGAGT TCGCCCGGTA 10981 GGGCTGCTAA AGCCGTGTGC ACTCTCACCG ATGTGTACCT CCCCGAACTC CGACCATATT 11041 TGCAACCGGA GACGGCATCA AAATGCTGGA AACTTAAACT GGATTTCAGG GATGTTCGAC 11101 TGATGGTCTG GAAAGGCGCC ACAGCCTATT TCCAGTTGGA AGGGCTGACA TGGTCAGCGC 11161 TGCCCGATTA TGCTAGGTTC ATTCAGCTAC CCAAGGATGC CGTTGTGTAC ATCGATCCGT 11221 GTATAGGGCC GGCAACAGCC AATCGCAAGG TTGTGCGAAC CACAGACTGG CGGGCCGACC 11281 TGGCAGTGAC ACCGTATGAT TACGGTGCTC AGGTCATTTT GACAACAGCC TGGTTCGAGG 11341 ACCTTGGGCC GCAGTGGAAG ATTTTGGGGT TGCAGCCTTT CAGACGAACA TTTGGCTTTG 114 01 AGAACACTGA AGATTGGGCA ATTCTCGCAC GCCGTATGAA TGACGGCAAA GATTACACTG 114 61 ACTATAATTG GCATTGTGTA CGAGAACGCC CACACGCAAT TTACGGGCGC GCCCGTGACC 11521 ATACGTATCA TTTTGCCCTT GGCACTGAAC TGCAAGTAGA GCTGGGCAGA CCCCGGCTGC 11581 CTCCTGAGCA AGTGCCGTGA

SEQ ID NO: 29 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 2 родительского PRRSV 94881 11611 ATGCAATGGG TTCACTGTGG AGTAAAATCA

11641 GTCAGTTGTT CGTGGATGCC TTCACTGAGT TCCTTGTTAG TGTGGTTGAC ATTGTCATCT 11701 TTCTCGCCAT ATTGTTTGGG TTCACTGTTG CAGGCTGGTT ATTGGTCTTC CTTCTCAGAG 11761 TGGTTTGCTC CGCGTTTCTC CGTTCGCGCT CTGCCATTCA CTCTCCCGAA CTATCGAAGG 11821 TCCTATGAGG GCTTGCTACC CAACTGCAGA CCGGATGTCC CACAATTCGC AGTTAAGCAC 11881 CCGTTGGGTA TACTTTGGCA TATGCGAGTC TCCCACCTAA TTGACGAAAT GGTCTCTCGC 11941 CGCATTTACC GGACCATGGA ACATTCGGGT CAAGCGGCCT GGAAGCAGGT TGTTAGTGAA 12001 GCCACTCTCA CAAAACTGTC AAGGCTTGAC GTAGTCACTC ATTTCCAACA CCTGGCCGCA 12061 GTGGAGGCTG ATTCTTGCCG CTTCCTTAGC TCACGACTCG CGATGCTGAA AAACCTTGCC 12121 GTTGGCAATG TGAGCCTGGA GTACAACACT ACTTTGGACC GCGTTGAGCT CATCTTTCCC 12181 ACACCAGGTA CGAGGCCCAA GTTGACCGAT TTTAGGCAAT GGCTTATCAG CGTGCACGCT 12241 TCCATCTTCT CCTCTGTGGC TTCGTCTGTT ACCTTGTTCA CAGTGCTTTG GCTTCGAATT 12301 CCAGCTCTAC GCTATGTTTT TGGTTTCCAT TGGCCCACGG CAACACATCA TTCGAACTAA SEQ ID NO: 30 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 3 родительского PRRSV 94881 12219 AT GGCTTATCAG CGTGCACGCT

12241 TCCATCTTCT CCTCTGTGGC TTCGTCTGTT ACCTTGTTCA CAGTGCTTTG GCTTCGAATT

12301 CCAGCTCTAC GCTATGTTTT TGGTTTCCAT TGGCCCACGG CAACACATCA TTCGAACTAA

12361 CTATCAATTA CACTATATGT AAGCCATGCC CTACCAGTCA AGCTGCCCAA CAAAGACTCG

12421 AGCCTGGCCG TAACGTGTGG TGCAAAATAG GGCACGACAG GTGTGAGGAA CGTGACCATG

12481 ATGAGTTGTC AATGTCCATT CCGTCCGGGT ACGACAACCT CAAACTTGAG GGTTATTATG

12541 CTTGGCTGGC TTTTTTGTCC TTTTCCTACG CGGCCCAATT CCATCCGGAG CTGTTCGGAA

12601 TAGGAAACGT GTCGCGCGTC TTTGTGGATA AGCGACACCA GTTCATTTGC GCCGAGCATG

12661 ATGGACAAAA TTCAACCATA TCTGCCAGAC ACAACATCTC CGCGTCGTAT GCGGTGTATT

12721 ACCATCATCA AATAGACGGG GGCAATTGGT TTCATTTGGA ATGGCTGCGA CCATTCTTTT 12781 CCTCCTGGCT GGTGCTCAAC ATCTCATGGT TTCTGAGGCG TTCGCCTGCA AGCCCTGCTT 12841 CTCGACGCAT CTATCAGATA TTAAGACCAA CACGACCGCG GCTGCCGGTT TCATGGTCCT 12901 TCAGAACATC AATTGTTTCC AATCTCACAG GGCCTCAACA GCGCAAGGTA CCACTCCCCT 12961 CAGGAGGTCG TCCCAATGTC GTGAAGCCGT CGGCATTCCC CAGTACATCA CGATAA

SEQ ID NO: 31 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 4 родительского PRRSV 94881 12761 ATGGCTGCGA CCATTCTTTT

12781 CCTCCTGGCT GGTGCTCAAC ATCTCATGGT TTCTGAGGCG TTCGCCTGCA AGCCCTGCTT 12841 CTCGACGCAT CTATCAGATA TTAAGACCAA CACGACCGCG GCTGCCGGTT TCATGGTCCT 12901 TCAGAACATC AATTGTTTCC AATCTCACAG GGCCTCAACA GCGCAAGGTA CCACTCCCCT 12961 CAGGAGGTCG TCCCAATGTC GTGAAGCCGT CGGCATTCCC CAGTACATCA CGATAACGGC 13021 TAATGTGACC GATGAATCGT ATTTGTACAA CGCGGACTTG CTGATGCTTT CCGCGTGCCT 13081 TTTCTACGCC TCGGAAATGA GCGAGAAAGG CTTCAAAGTC ATCTTTGGGA ATATTTCTGG 13141 CGTTGTTTCC GCTTGTGTTA ATTTCACAGA TTATGTGGCC CATGTGACCC AACACACTCA 13201 GCAGCACCAT TTGGTAATTG ATCACATTCG GTTACTACAC TTCTTGACAC CGTCTACGAT 13261 GAGGTGGGCT ACAACCATTG CTTGTTTGTT TGCCATTCTT TTGGCGGTAT GA

- 112 035624

SEQ ID NO: 32 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 5 родительского PRRSV 94881 13309 AT GAAATGTTCT

13321 TGCAAGTTGG GGCATTTCTT GACTCCTCAC TCTTGCTTCT GGTGGCTTTT TTTGCTGTGT 13381 ACCGGCTTGT CTTGGTCCTT TGTCGATGGC AACGACAACA GCTCGACATC CCAATACATA 13441 TATAATTTGA CGATATGCGA GCTGAATGGG ACCGAATGGT TGTCCGGTCA TTTTGATTGG 13501 GCAGTCGAAA CCTTTGTGCT TTACCCAGTT GCCACTCATA TCATTTCACT GGGTTTTCTC 13561 ACAACAAGCC ATTTCCTTGA TGCGCTCGGT CTCGGCGCTG TGTCCGCCAC AGGATTCATT 13621 GGCGAGCGGT ATGTACTTAG CAGCATGTAC GGCGTTTGCG CCTTCGCGGC GCTCGTATGT 13681 TTTGTCATCC GTGCTGCTAA AAATTGCATG GCTTGCCGCT ATGCCCGCAC CCGGTTTACC 13741 AACTTCATCG TGGACGACCG GGGAAGAATC CATCGATGGA AGTCTTCAAT AGTGGTGGAG

13801 AAATTGGGCA AAGCTGAAGT CGGTGGTGAC CTTGTCAACA TTAAGCATGT TGTCCTCGAA 13861 GGGGTTAAAG CTCAACCCTT GACGAGGACT TCGGCTGAGC AATGGGAAGC CTAG

SEQ ID NO: 33 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 6 родительского PRRSV 94881 13902 ATGGGAAGC CTAGACGACT

13921 TTTGCAACGA TCCCACCGCC GCACAAAAAC TCGTGCTGGC CTTTAGCATC ACATATACAC 13981 CCATAATGAT ATACGCCCTT AAGGTGTCAC GCGGCCGACT CCTGGGGCTG TTGCACATCT 14041 TGATATTTCT GAATTGTTCC TTTACTTTTG GGTACATGAC ATATGTGCAT TTTCAATCCA 14101 CCAACCGTGT CGCACTCACT CTGGGGGCTG TAGTCGCCCT TTTGTGGGGT GTTTACAGCC 14161 TCACAGAGTC ATGGAAGTTC ATCACTTCCA GATGCAGATT GTGTTGCCTA GGCCGGCGAT 14221 ACATTCTGGC CCCTGCCCAT CACGTAGAAA GTGCTGCAGG CCTCCATTCA ATCCCAGCGT 14281 CTGGTAACCG AGCATACGCT GTGAGAAAGC CCGGACTAAC ATCAGTGAAC GGCACTCTAG 14341 TACCTGGGCT TCGGAGCCTC GTGCTGGGCG GCAAACGAGC TGTTAAACGA GGAGTGGTTA 14401 ACCTCGTCAA GTATGGCCGG TAA

SEQ ID NO: 34 Нуклеотидная последовательность, кодирующая OPC 7 родительского PRRSV 94881 14 413 ATGGCCGG TAAGAACCAG AGCCAGAAGA AAAGAAGAAA TGCAGCTCCG

14461 ATGGGGAAAG GCCAGCCAGT CAATCAACTG TGCCAGTTGC TGGGTACAAT GATAAAGTCC 14521 CAGCGCCAGC AATCTAGGGG AGGACAGGCC AAAAAGAAGA AGCCTGAGAA GCCACATTTT 14581 CCCCTAGCTG CTGAAGATGA CATTCGGCAC CATCTCACCC AGGCCGAACG TTCCCTCTGC 14641 TTGCAATCGA TCCAGACGGC TTTCAATCAA GGCGCAGGAA CTGCGTCGCT TTCATCCAGC 14701 GGGAAGGTCA GTTTCCAGGT TGAGTTCATG CTGCCGGTTG CTCATACAGT GCGCCTGATT 14761 CGCGTGACTT CTACATCCGC CAGTCAGGGT GCAAATTAA

- 113 035624

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Бёрингер Ингельхайм Ветмедика ГмбХ <120> Вирулентный и ослабленный штаммы вируса репродуктивно респираторного синдрома свиней (PRRSV) европейского типа <130> 10-0137 <140> US 13/396,298 <141> 2012-02-14 <160>34 <170> Patentin, версия 3.5 <210>1 <211>14843 <212> ДНК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней <400>1

tttgtgtacc	ttggaggcgt	gggtacagcc	ctgccccacc	ctttggtccc	tgttctagcc	60
cgacaagtac	ccttctctct	cggggcgagc	gcgccgcctg	ctgct ccctt	gcggcgggaa	120
ggacctcccg	agtatttccg	gagagcacct	gctttacggg	atctccgccc	tttaaccatg	180
tctgggatgt	tctcccggtg	catgtgcacc	ccggctgccc	gggtattttg	gaacgccggc	240
caagtctatt	gcacacggtg	tctcagtgca	cggtctcttc	tctctccaga	acttcaggac	300
acggacctcg	gtgcagttgg	cttgtttcac	aagcctaaag	acaagctcca	ttggaaagtt	360
cccattggta	tcccccaggt	ggaatgttct	ccatctgggt	gttgctggct	gtcaaccatt	420
tttcctttag	cgcgcatgac	ctccggcaat	cacaactt cc	ttcaacgact	cgtgaaggtt	480
gctgatgtat	tgtaccgtga	cggttgctta	acccctagac	acctccgtga	actccaagtt	540
tacgagcgtg	gttgcaattg	gtatccgatt	acggggcctg	tgcctgggat	ggctgtgtac	600
gcgaact cca	tgcacgtgtc	cgaccaaccg	ttccctggtg	ccactcatgt	gttaacaaat	660
tcccctttgc	ctcaacgggc	ttgtcggcag	ccgttctgtc	cgttcgaaga	ggcccattct	720
agcatataca	ggtgggaaaa	atttgtaatt	tttatggatt	cctcctccga	cggtcgatct	780
cgcatgatgt	ggactccgga	atccgatgac	tccacggctt	tggaagtt ct	gccgcccgag	840
ctagaacacc	aggtcaaggt	ccttgttcgg	agctttcccg	cccat cacct	tgtcgacctt	900

- 114 035624

gccgattggg	agctcactga	gtcccctgat	aacggttttt	ccttcagcac	gtcacatcct	960
tgcggctacc	ttgttcggga	cccggctgta	tccgaaggca	agtgttggct	ttcctgcttt	1020
ttgagccagt	cagccgaagt	gctcagtcgc	gaggcgcatc	tggctaccgc	ctatggttac	1080
caaaccaagt	ggggtgtgcc	tggcaagtac	atccagcgca	gactt caagt	tcacggtctc	1140
cgtgctgtgg	tcgaccctga	tggtcccatt	cacgttgaag	cattgtcttg	cccccagtct	1200
tggatcaggc	acttgaccct	gaatgatgat	gtcaccccgg	gattcgttcg	cctaatgtct	1260
cttcgcattg	tgccgaacac	agagcctacc	acacaccgga	tctttcgttt	tggagtgcac	1320
aagtggtatg	gtgccgccgg	caaacgggcc	cgtggcaagc	gtgccgccaa	aagtgagaaa	1380
gactcggctt	ccaccctcaa	ggttgcccga	ccgacttcca	ccagtggaat	cgtcacctac	1440
tccccacctg	cggacgggtc	ttgtggttgg	catgcccttg	ccgccatact	gaaccggatg	1500
attaataatg	acttcacgtc	ccctctgcct	cggtacaaca	ggccggagga	cgattgggct	1560
tctgatggtg	accttgct ca	ggccatt caa	tgtttgcaac	tacctgccgc	catagctcgg	1620
aaccgcgcct	gccctaacgc	caaatacctc	ataaaactca	acggagtt ca	ttgggaggta	1680
gaggtgaggc	ctggaatggc	tcctcgctcc	ctctctcgtg	agtgcgttgt	tggcgtctgc	1740
tctgaaggct	gtgtcgcgtc	gccttacccg	gaggacgggt	tgcctaaacg	tgcacttgag	1800
gccctggcgt	ctgcttatag	actgccttca	gactgtgttt	gtgatggtat	tattgacttc	1860
cttgccaat c	cacctcccca	ggagttctgg	actcttgaca	aaatgttgac	ttccccgtca	1920
ccggagcagt	ccggcttctc	tagtctgtat	aaattgttgt	tagagatctt	gccgcagaaa	1980
tgcggat cca	cagaagggga	attcatctat	actgttgaga	ggatgttgaa	ggattgtccg	2040
agctccaaac	aggccatggc	cctccttgca	aaaattaagg	tcccatcctc	aaaggcccca	2100
tccgtgactc	tgaacgagtg	cttccccacg	gatgtt ccag	tcaactctga	gttaatatct	2160
tgggaagagc	ccaaagaccc	tggcgctgct	gttgtcctat	gtccatcgga	tgcaaaagaa	2220
tctaaggaaa	cagcccctga	agaagct caa	gcgagaaacc	gtaaggtcct	tcaccctgtg	2280
gtccttaccg	aggaacttag	cgagcaacag	gtgcaggtgg	ttgagggtga	tcaggatatg	2340
ccactggatt	tgacttggcc	aaccttaacc	gctacggcga	cccctgttag	agggccggta	2400
ccggacaatt	tgagctctgg	cattggtgcc	cagcccgcta	ccgtt caaga	actcattctg	2460

- 115 035624

gcgaggcct g	caccccgt ct	tgttgagcgc	tgtggcacgg	agt egaaegg	cagcagttca	2520
tttctggatt	tgcctgacgt	gcagacctcg	gaccagcctt	tagacctgtc	cctggccgcg	2580
tggcctgtaa	gggctaccgc	gtctgacccc	ggttggatcc	aeggtaggeg	tgagcctgt c	2640
tttgtgaagc	ctcgaggtgt	tttctctgat	ggcgagtcgg	ccctt cagtt	eggagagett	2700
tccgaagcca	gttctgtcgt	cgatgaccgg	acaaaagaag	ctccggtggt	tgacgccccc	2760
atcgatttga	caacttcgaa	cgagacgctc	tctgggtctg	acccctttga	att cgccaaa	2820
ttcaggcgcc	cgcgtttctc	cgcgcaagct	ttaatcgacc	gaggtggtcc	gettgeegat	2880
gttcatgcaa	agataaagag	t cgggtatat	gaacaatgcc	ttcaagcttg	tgaacctggt	2940
agtcgtgcga	ccccagccac	caagaagtgg	ctcgacaaaa	tgtgggacag	ggtggacatg	3000
aaaacttggc	gctgcacctc	gcagttccaa	gctggtcaca	ttettgagte	cct caaatt c	3060
ctccctgaca	tgattcaaga	cacaccgcct	cctgttcoca	ggaagaaeeg	agctggtgac	3120
agtgccggcc	tgaagcaact	ggtggcgcag	tgggatagga	aatcgagtgt	gacacccccc	3180
acaaaaccgg	ttggaccggt	gcttgaccag	gccgtccctc	tgcctatgga	cat ccagcaa	3240
ggagatgcca	tctccgctga	caagccaccc	catt cgcaaa	acccttctag	tcaagtagat	3300
gtgggtggag	gttggaaaag	ttttatgctc	tccggcaccc	gtttcgcggg	gtccgttagt	3360
cagcgcctt a	cgacatgggt	ttttgaggtt	ctctcccatc	tcccagcttt	tatgctcaca	3420
cttttctcgc	cacggggctc	tatggctcca	ggtgattggc	tgtttgcagg	tgctgttcta	3480
cttgctctcc	tgctctgccg	ttcttaccca	atactcggat	geett ccctt	attgggtgtc	3540
tttt ctggt t	ctgtgcggtg	tgttcgtttg	ggtgtttttg	gttcttggat	ggcttttgct	3600
gtatttttat	tctcgactcc	acccgaccca	gtcggttctt	cttgtgacca	egatt egeeg	3660
gagtgtcatg	ctgagctttt	ggctcttgag	cagcgccaac	tttgggaacc	tgtgcgcagc	3720
cttgtggtcg	ggccat cggg	cctcttatgc	gtcattcttg	gcaagttact	cggtgggtca	3780
cgttgtctct	ggtttgttct	cctacgtata	tgcatgct eg	cagatttggc	aatttctctt	3840
atttatgtgg	tgt cccaagg	gcgttgtcac	aagtgttggg	gaaagtgtat	aaggaegget	3900
cctgcagaag	tggcccttaa	tgtgtttcct	tttt egegeg	ccacccgctc	atctcttgtg	3960
tccttgtgtg	atcggttcca	agcgccaaaa	ggagttgacc	ccgtgcactt	ggcgacaggc	4020

- 116 035624

tggcgcgggt	gctggtgtgg	tgagagccct	attcatcaat	cacaccaaaa	accgatagct	4080
tatgccaact	tggatgaaaa	gaagatatcc	gcccagacgg	tgattgctgt	cccgtatgat	4140
cctagtcagg	ccattaaatg	cctgaaagtt	ttgcaggcag	gaggggctat	tgtggaccag	4200
cctacgcccg	aggtcgtccg	tgtgtctgag	attcccttct	cggccccatt	ttttccgaag	4260
gtcccagtca	acccagactg	cagggttgtg	gtagattcgg	acacttttgt	ggctgcggt c	4320
cgctgcggtt	attcgacagc	acaactggtc	cttggt cggg	gcaactttgc	caagctaaat	4380
cagacccccc	tcaggaactc	tgtccccacc	aaaacaactg	gtggggcctc	atacaccctt	4440
gccgtggccc	aggtatctgt	gtggactctt	gttcatttca	tcctcggcct	ttggttaacg	4500
tcacctcaag	tgtgtggtcg	agggacctct	gacccgtggt	gtt cgaaccc	tttttcgtat	4560
cctacttatg	gccccggagt	tgtgtgttcc	tctcgactct	gcgtgtctgc	egaeggagtt	4620
accctgccat	tgttctcagc	cgttgcccat	cttt ccggta	gagaggtggg	gatttttatt	4680
ttggtgcttg	cctccttggg	cgctttagcc	caccgcttgg	ctcttaaggc	agacatgtca	4740
atggtctttt	tggcgttttg	tgcttacgcc	tggcccatga	get cctggtt	aatttgcttc	4800
tttcctatgc	tcttgaggtg	ggtaaccctt	catcctctca	ctatgctttg	ggtgcactca	4860
tttttggtgt	tttgcctacc	agctgccggc	gttctctcgc	tgggaataac	eggtettett	4920
tgggcagttg	gccgtttcac	ccaggttgcc	ggaattatca	caccttatga	cat ccaccag	4980
tatacctccg	gaccacgtgg	tgcagctgct	gtagcaacgg	ctccagaagg	tacttacatg	5040
gcggccgtt c	ggagagccgc	tttgactgga	cggactttga	tcttcacacc	atetgeagte	5100
ggat ccctt c	ttgaaggtgc	tttcagaact	caaaagccct	gccttaacac	cgtgaatgtc	5160
gtaggctctt	cccttggttc	tggaggagtt	ttcaccattg	atggcagaag	agteategte	5220
actgccaccc	atgtgttgaa	tggtaacaca	gccagggt ca	etggtgatte	ctacaaccgc	5280
atgcacacgt	tcaatactaa	tggtgattat	gcctggtccc	atgetgatga	ctggcaaggc	5340
gttgccccta	tggttaagat	cgctaagggg	tatcgcggtc	gtgcctactg	gcaaacgtca	5400
accggagtcg	aacctggcat	catgggggaa	ggattcgcct	tctgtttcac	taactgtggc	5460
gact cagggt	cacctgtcat	ttcagaagct	ggtgacctta	ttggagtcca	taccggttca	5520
aacaaactcg	gtt ctggt ct	tgtgacaacc	cctgaagggg	agacctgctc	cat caaggaa	5580

- 117 035624

actaggctct	ctgacctttc	tagacatttt	gcaggt ccaa	gcgtccctct	tggggacatt	5640
aagttgagcc	cagccatcat	ccctgatgtg	acaactattc	cgagtgactt	ggcat cgct c	5700
cttgcttctg	tccccgtgat	ggaaggtggc	ctctcaactg	tccagctttt	gtgcgtcttt	5760
ttccttctct	ggcgcatgat	gggccatgcc	tggacaccca	ttgttgccgt	aggcttcttt	5820
ttgctgaatg	aaattctccc	agcagtcttg	gtccgagctg	tgttctcttt	tgcactcttt	5880
gtacttgcat	gggccacccc	ctggtcggca	caagtgttga	tgattagact	cct cacggcg	5940
gctctcaacc	gcaacaggtt	gtccctggcg	ttctacgcat	tcggaggtgt	cgttggcctg	6000
gccacagaaa	tcgggacttt	tgctggtgga	tggcctgaac	tgt cccaagc	cct ct cgaca	6060
tactgcttcc	tgcccaggtt	ccttgctgtg	actagttatg	tccccaccat	catcatcggt	6120
gggctccatg	ccctcggcgt	aattttgtgg	ttattcaaat	accgatgcct	ccacaacatg	6180
ctggttggtg	atgggagttt	ctcaagcgct	ttcttcctac	ggtattttgc	tgagggtaat	6240
cttaggaaag	gcgtgt cgca	gtcctgtggc	atgaataacg	aat ccctgac	agctgctttg	6300
gcttgcaagt	tgt cgcaagc	tgaccttgat	tttttgtcca	gtttaacgaa	ctt caagtgc	6360
tttgtgt cog	ctt caaacat	gaaaaatgca	gctggccaat	acatcgaggc	ggcgtatgct	6420
agagctctgc	gtcaggagct	ggcct ccttg	gttcaggttg	acaagatgaa	aggagtattg	6480
gccaagctcg	aggctttcgc	tgagacggcc	actccgtcac	ttgacacagg	ggacgtgatt	6540
gttctgcttg	ggcaacaccc	ccatggatcc	atcctcgaca	ttaatgtggg	gggtgaaagg	6600
aaaactgtgt	ctgtgcaaga	aacacgatgc	ctgggtggtt	ccaaattcag	tgtctgcact	6660
gtcgtgtcca	acacgcccgt	ggataccttg	accggtatcc	cactt cagac	gccaacccca	6720
ctttttgaaa	atggcccgcg	ccatcgcagc	gaggacgacg	acctcaaagt	tgagagaatg	6780
aaaaaacact	gtgtat ccct	cggcttccac	aaaatcaatg	gtaaagttta	ctgcaaaatt	6840
tgggacaagt	ctaacggcga	caccttttac	acggatgatt	cccgatacac	tcaagaccat	6900
gcttttcagg	acaggt caac	cgactataga	gacagggatt	atgaaggtgt	acagaccgcc	6960
ccccaacagg	gattcgatcc	aaagt ccgaa	gcccctgttg	gcactgttgt	aat cggtggc	7020
attacgtata	acaggcat ct	ggtcaaaggt	aaggaggt cc	tagttcccaa	acctgacaac	7080
tgccttgaag	ctgccagact	gtcccttgag	caagct cttg	ctgggatggg	ccaaacttgt	7140

- 118 035624

gaccttacag	ctaccgaagt	ggagaaacta	aagcgcat ca	ttagtcaact	ccaaggtctg	7200
accactgaac	aggctttaaa	ctgctagccg	ccagcggctt	gacccgctgt	ggccgcggcg	7260
gcctagttgt	aactgaaacg	gcggtaaaaa	tcgtaaaata	ccacagcaga	actttcacct	7320
taggctcttt	agacctaaaa	gtcacctccg	aggtggaggt	gaagaaat ca	actgagcagg	7380
ggcacgctgt	cgtggcgaac	ttatgttccg	gtgtcgtctt	gatgaggcct	cacccaccgt	7440
cccttgttga	cgttctcctc	aaacccggac	ttgacacaac	acccggcatt	caaccagggc	7500
atggggccgg	gaatatgggc	gtgaacggtt	ctatttggga	ttttgaaact	gcacccacaa	7560
aggtagaact	agagttgtcc	aagcaaataa	tccaagcatg	tgaagtcagg	cgcggggacg	7620
cccctaacct	ccaact cccc	tacaagcttt	atcctgtcag	gggggacccc	gagcggcgta	7680
aaggtcgcct	tgtcaacact	aggtttggag	atttacctta	caaaactccc	caagacacca	7740
agtccgcaat	tcatgcggct	tgttgcctgc	atcccaatgg	ggtcctcgtg	tctgatggca	7800
aatccacgct	gggtaccact	ctt caacatg	gtttcgagct	ttatgtcccc	actgtacctt	7860
atagtgtcat	ggaatacctt	gattcacgcc	ctgacacccc	ttttatgtgt	actaaacatg	7920
gcacttccaa	ggctgctgca	gaggacctcc	aaaaatatga	cctatccact	caagggtttg	7980
tcttgcctgg	ggtcctacgc	ctagtgcgca	ggttcatctt	tagccatgtt	ggtaaggcgc	8040
caccactgtt	ccttccatca	acctaccctg	ccaagaactc	catggcaggg	gtcaatggcc	8100
agaggttccc	aacaaaggat	gtccagagca	tacctgaaat	tgatgaaatg	tgcgcccgtg	8160
ccgt caagga	aaattggcag	actgtgacac	cttgcaccct	caaaaaacag	tactgttcca	8220
aacctaaaa c	tagaaccatc	ctaggtacca	acaacttcat	agccttggct	cacaggtcag	8280
cact cagtgg	tgt cacccag	gcgtt catga	agaaggcctg	gaagt cccca	attgccttgg	8340
ggaaaaacaa	gtttaaggaa	ttgcattgca	ctgt cgccgg	cagatgcctt	gaggctgacc	8400
tggcttcctg	cgatcgcagc	acccccgcca	ttgtgaggtg	gtttgttgcc	aacct cctgt	8460
atgaacttgc	aggatgtgaa	gagtacttgc	ctagctacgt	gctcaactgt	tgccatgacc	8520
ttgtggcaac	gcaggatggc	gctttcacaa	aacgcggtgg	cctgtcgtcc	ggggaccccg	8580
tcaccagtgt	gtccaacacc	gtctactcac	tgataattta	cgcccagcac	atggtgcttt	8640
cggccttgaa	gatgggtcat	gaaattggtc	tcaagttcct	tgaggaacag	ctcaaatttg	8700

- 119 035624

aggaccttct	tgaaat ccag	cccatgttag	tgtattctga	tgacctcgtc	ttgtatgcgg	8760
aaagacccac	ttttcccaac	taccattggt	gggt cgagca	tcttgacctg	atgttgggct	8820
ttaaaacgga	cccaaagaaa	actgtcataa	ctgataaacc	cagttttctc	ggctgcagaa	8880
ttgaagcagg	acggcagtta	gtccccaatc	gcgaccgtat	tctggctgct	cttgcatatc	8940
atatgaaggc	gcagaacgcc	tcagagtatt	atgcgt ccgc	tgccgcaatt	ctgatggatt	9000
cgtgtgcttg	cattgaccat	gaccccgagt	ggtatgagga	tcttatctgc	ggcat cgccc	9060
ggtgtgctcg	ccaggacggt	taccgttttc	caggcccggc	atttttcatg	tccatgtggg	9120
agaagctgaa	aagtcataat	gaagggaaga	aatgccgt ca	ctgcggcatc	tgcgacgcca	9180
aagccgacta	tgcgtccgcc	tgtggacttg	atttgtgttt	gtt ccatt ca	cactttcatc	9240
aacactgccc	agtcactctg	agctgtggcc	accatgccgg	ttcaaaggaa	tgttcgcagt	9300
gtcagtcacc	tgt cggggct	ggcaaat ccc	cccttgacgc	tgtgctgaaa	caaat cccgt	9360
acaaacctcc	tcgtaccatt	atcatgaagg	tggacaacaa	aacaacgacc	cttgacccgg	9420
gaagatatca	gtcccgtcga	ggtcttgttg	cagt caaaag	aggtattgca	ggtaatgagg	9480
ttgatctttc	tgatggagac	taccaagtgg	tgcctctttt	gccgacttgc	aaagacataa	9540
acatggtgaa	ggtggcttgc	aacgtactac	tcagcaagtt	tatagtaggg	ccgccaggtt	9600
ccggaaaaac	cacctggcta	ctgaaccaag	tccaggacga	tgatgtcatt	tacacaccta	9660
ctcatcagac	aatgtttgac	atagt cagtg	ctcttaaagt	ttgcaggtat	tccatcccag	9720
gagcctcagg	actccctttt	ccaccacctg	ccaggt ccgg	gccgtgggtt	aggctcatcg	9780
ccagcggaca	tgt ccctggc	cgagtgtcat	atctcgatga	ggcaggatat	tgcaatcatc	9840
tagacattct	aaggctgctt	tccaaaacac	cccttgtgtg	tttgggtgac	cttcagcaac	9900
ttcacccggt	cggctttgat	tcctattgtt	atgtgttcga	t cagatgcct	cagaagcagc	9960
tgaccaccat	ttatagattt	ggccctaaca	tctgtgcagc	cat ccagcct	tgttacaggg	10020
agaaacttga	atccaaggcc	aggaacacca	gagtggtttt	caccacccgg	cctgtggcct	10080
ttggtcaggt	cctgacaccg	taccacaaag	atcgtaccgg	ctctgcaata	actatagatt	10140
catcccaggg	ggcgaccttc	gacattgtga	cattgcatct	accatcgcca	aagtccctaa	10200
acaaatcccg	agcacttgta	gccatcactc	gggcaagaca	tgggttgttc	atttatgacc	10260

- 120 035624

ctcatgacca	act ccaggag	tttttcaact	taacccccga	gcgcactgat	tgtaaccttg	10320
cgtt cagccg	tggggatgag	ctggttgttt	tgaatgtgga	taatgeggte	acaactgtag	10380
cgaaggccct	agagacaggt	t caccccgat	ttcgagtatc	ggacccgagg	tgcaagtctc	10440
tcttagccgc	ttgttcggcc	agtctagaag	ggagctgcat	gccactacca	caagtagcac	10500
ataacctggg	gttttacttt	t ccccggaca	gcccagcttt	tgcacccctg	ccaaaagagc	10560
tggcgccaca	ttggccagtg	gtcacccacc	agaataat eg	agcgtggcct	gategaettg	10620
tcgctagtat	gcgcccaatt	gatgcccgct	acagcaagcc	aatggtcggt	gcagggtatg	10680
tggt cgggcc	atccattttt	cttggcactc	ctggtgtggt	gtcatactat	ctcacattat	10740
acat cggggg	cgagcctcag	gccctgccag	aaacactcgt	ttcaacagga	cgtatagcca	10800
cagattgtcg	ggaatatctc	gacgcggctg	aggaagaggc	agegagagaa	ett ccccacg	10860
catttattgg	cgatgt caaa	ggcactacga	tcggggggtg	tcaccacatt	acatcgaaat	10920
acctacctag	gtccctgcct	aaagactctg	ttgctgtggt	tggggtgagt	tcgcccggta	10980
gggctgctaa	agccgtgtgc	actctcaccg	atgtgtacct	ccccgaactc	cgaccatatt	11040
tgcaaccgga	gacggcat ca	aaatgctgga	aacttaaact	ggatttcagg	gatgttcgac	11100
tgatggtctg	gaaaggcgcc	acagcctatt	tccagttgga	agggctgaca	tggteagege	11160
tgcccgatta	tgctaggttc	attcagctac	ccaaggatgc	cgttgtgtac	atcgatccgt	11220
gtatagggcc	ggcaacagcc	aatcgcaagg	ttgtgcgaac	cacagactgg	cgggccgacc	11280
tggcagtgac	accgtatgat	tacggtgctc	aggtcatttt	gacaacagcc	tggtt egagg	11340
accttgggcc	gcagtggaag	attttggggt	tgcagccttt	cagacgaaca	tttggctttg	11400
agaacactga	agattgggca	attctcgcac	geegtatgaa	tgacggcaaa	gattacactg	11460
actataattg	gcattgtgta	cgagaacgcc	cacacgcaat	ttacgggcgc	gcccgtgacc	11520
atacgtatca	ttttgccctt	ggcactgaac	tgcaagtaga	gctgggcaga	ccccggctgc	11580
ctcctgagca	agtgccgtga	acgcggagtg	atgcaatggg	tttactgtgg	agtaaaatca	11640
gtcagttgtt	cgtggatgcc	ttcactgagt	tccttgttag	tgtggttgac	attgteatet	11700
ttctcgccat	attgtttggg	ttcactgttg	caggctggtt	attggtette	ett et cagag	11760
tggtttgctc	cgcgtttctc	cgttcgcgct	ctgccatt ca	ctctt ccgaa	etategaagg	11820

- 121 035624

tcctatgagg	gcttgctacc	caactgcaga	ccggatgtcc	cacaattcgc	agttaagcac	11880
ccgttgggta	tactttggca	tatgcgagtc	tcccacctaa	ttgacgaaat	ggtctctcgc	11940
cgcatttacc	ggaccatgga	acattcgggt	caagcggcct	ggaagcaggt	tgttagtgaa	12000
gccactctca	caaaactgtc	aaggcttgac	gtagtcactc	atttccaaca	cctggccgca	12060
gtggaggctg	attcttgccg	cttccttagc	tcacgactcg	cgatgctgaa	aaaccttgcc	12120
gttggcaatg	tgagcctgga	gtacaacact	actttggacc	gcgttgagct	catctttccc	12180
acaccaggta	cgaggcccaa	gttgaccgat	tttaggcaat	ggcttatcag	cgtgcacgct	12240
tccatcttct	cct ctgtggc	ttcgtctgtt	accttgttca	cagtgctttg	gcttcgaatt	12300
ccagctctac	gctatgtttt	tggtttccat	tggcccacgg	caacacatca	ttcgaactaa	12360
ctatcaatta	cactatatgt	aagccatgcc	ctaccagtca	agctgcccaa	caaagactcg	12420
agcctggccg	taacgtgtgg	tgcaaaatag	ggcacgacag	gtgtgaggaa	cgtgaccatg	12480
atgagttgtc	aatgtccatt	ccgtccgggt	acgacaacct	caaacttgag	ggttattatg	12540
cttggctggc	ttttttgtcc	ttttcctacg	cggcccaatt	ccatccggag	ctgttcggaa	12600
taggaaacgt	gtcgcgcgtc	tttgtggata	agcgacacca	gttcatttgc	gccgagcatg	12660
atggacaaaa	ttcaaccata	t ctgccagac	acaacatctc	cgcgtcgtat	gcggtgtatt	12720
accatcatca	aatagacggg	ggcaattggt	ttcatttgga	atggctgcga	ccattctttt	12780
cctcctggct	ggtgctcaac	atctcatggt	ttctgaggcg	ttcgcctgca	agccctgctt	12840
ctcgacgcat	ctatcagata	ttaagaccaa	cacgaccgcg	gctgccggtt	tcatggtcct	12900
tcagaacatc	aattgtttcc	aatctcacag	ggcctcaaca	gcgcaaggta	ccactcccct	12960
caggaggtcg	tcccaatgtc	gtgaagccgt	cggcattccc	cagtacatca	cgataacggc	13020
taatgtgacc	gatgaatcgt	atttgtacaa	cgcggacttg	ctgatgcttt	ccgcgtgcct	13080
tttctacgcc	tcggaaatga	gcgagaaagg	cttcaaagtc	atctttggga	atatttctgg	13140
cgttgtttcc	gcttgtgtta	atttcacaga	ttatgtggcc	catgtgaccc	aacacactca	13200
gcagcaccat	ttggtaattg	atcacattcg	gttactacac	ttcttgacac	cgtctacgat	13260
gaggtgggct	acaaccattg	cttgtttgct	tgccattctt	ttggcggtat	gaaatgttct	13320
tgcaagttgg	ggcatttctt	gactcctcac	tcttgcttct	ggtggctttt	tttgctgtgt	13380

- 122 035624

accggcttgt	cttggtcctt	tgtcgatggc	aacgacgaca	gctcgacatc	ccaatacata	13440
tataatttga	cgatatgcga	gctgaatggg	accgaatggt	tgt ccggt ca	ttttgattgg	13500
gcagtcgaaa	cctttgtgct	ttacccagtt	gccactcata	tcatttcact	gggttttctc	13560
acaacaagcc	atttccttga	tgcgctcggt	ct cggcgctg	tgtccgccac	aggattcatt	13620
ggcgagcggt	atgtacttag	cagcatgtac	ggcgtttgcg	ccttcgcggc	gtt cgtatgt	13680
tttgtcatcc	gtgctgctaa	aaattgcatg	gcttgccgct	atgcccgcac	ccggtttacc	13740
aacttcatcg	tggacgaccg	gggaagaatc	catcgatgga	agtcttcaat	agtggtggag	13800
aaattgggca	aagctgaagt	cggtggtgac	cttgtcaaca	ttaagcatgt	tgtcctcgaa	13860
ggggttaaag	ctcaaccttt	gacgaggact	tcggctgagc	aatgggaagc	ctagacgact	13920
tttgcaacga	tcccaccgcc	gcacaaaaac	tcgtgctggc	ctttagcatc	acatatacac	13980
ccataatgat	atacgccctt	aaggtgtcac	gcggccgact	cctggggctg	ttgcacatct	14040
tgatatttct	gaattgtt cc	tttacttttg	ggtacatgac	atatgtgcat	tttcaatcca	14100
ccaaccgtgt	cgcattcact	ctgggggctg	tagt cgccct	tttgtggggt	gtttacagcc	14160
tcacagagtc	atggaagttc	atcacttcca	gatgcagatt	gtgttgccta	ggccggcgat	14220
acattctggc	ccctgcccat	cacgtagaaa	gtgctgcagg	cct ccatt ca	atcccagcgt	14280
ctggtaaccg	agcatacgct	gtgagaaagc	ccggactaac	atcagtgaac	ggcactctag	14340
tacctgggct	tcggagcctc	gtgctgggcg	gcaaacgagc	tgttaaacga	ggagtggtta	14400
acct cgt caa	gtatggccgg	taagaaccag	agccagaaga	aaagaagaaa	tgcagctccg	14460
atggggaaag	gccagccagt	caatcaactg	tgccagttgc	tgggtacaat	gataaagtcc	14520
cagcgccagc	aat ctagggg	aggacaggcc	aaaaagaaga	agcctgagaa	gccacatttt	14580
cccctagctg	ctgaagatga	cattcggcac	catctcaccc	aggccgaacg	ttccctctgc	14640
ttgcaat cga	tccagacggc	tttcaatcaa	ggcgcaggaa	ctgcgtcgct	ttcatccagc	14700
gggaaggtca	gtttccaggt	tgagttcatg	ctgccggttg	ctcatacagt	gcgcctgatt	14760
cgcgtgactt	ctacatccgc	cagtcagggt	gcaaattaat	ttgacagtca	ggtgaatggc	14820
cgcgattgac	gtgtggcctc	taa				14843

- 123 035624 <210> 2 <211> 2349 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC la MSV 94881 <400>2

Met Ser Gly Met Phe Ser Arg Cys Met Cys Thr Pro Ala Ala Arg Vai 1

1015

Phe Trp Asn Ala Gly Gin Vai Tyr Cys Thr Arg Cys Leu Ser Ala Arg

2530

Ser Leu Leu Ser Pro Glu Leu Gin Asp Thr Asp Leu Gly Ala Vai Gly35

4045

Leu Phe His Lys Pro Lys Asp Lys Leu His Trp Lys Vai Pro He Gly 50 5560

He Pro Gin Vai Glu Cys Ser Pro Ser Gly Cys Cys Trp Leu Ser Thr 65

7580 lie Phe Pro Leu Ala Arg Met Thr Ser Gly Asn His Asn Phe Leu Gin

9095

Arg Leu Vai Lys Vai Ala Asp Vai Leu Tyr Arg Asp Gly Cys Leu Thr

100 105110

Pro Arg His Leu Arg Glu Leu Gin Vai Tyr Glu Arg Gly Cys Asn Trp115

120125

Tyr Pro lie Thr Gly Pro Vai Pro Gly Met Ala Vai Tyr Ala Asn Ser 130 135140

- 124 035624

Met His Val Ser Asp Gin Pro Phe Pro Gly Ala Thr His Val Leu Thr 145

150 155160

Asn Ser Pro Leu Pro Gin Arg Ala Cys Arg Gin Pro Phe Cys Pro Phe

165 170175

Glu Glu Ala His Ser Ser He Tyr Arg Trp Glu Lys Phe Val He Phe

180 185190

Met Asp Ser Ser Ser Asp Gly Arg Ser Arg Met Met Trp Thr Pro Glu195

200205

Ser Asp Asp Ser Thr Ala Leu Glu Val Leu Pro Pro Glu Leu Glu His 210 215220

Gin Val Lys Val Leu Val Arg Ser Phe Pro Ala His His Leu Val Asp 225

230 235240

Leu Ala Asp Trp Glu Leu Thr Glu Ser Pro Asp Asn Gly Phe Ser Phe

245 250255

Ser Thr Ser His Pro Cys Gly Tyr Leu Val Arg Asp Pro Ala Val Ser

260 265270

Glu Gly Lys Cys Trp Leu Ser Cys Phe Leu Ser Gin Ser Ala Glu Val275

280285

Leu Ser Arg Glu Ala His Leu Ala Thr Ala Tyr Gly Tyr Gin Thr Lys 290 295300

125 035624

Trp 310

Gly

Vai

Pro

Gly

Lys 315

Tyr

He

Gin

Arg

Arg 320

Leu

Gin

Vai

Hi s

Gly

305

Leu

Arg

Ala

Vai

Vai

Asp

Pro

Asp

Gly

Pro

He

Hi s

Vai

Glu

Al a

Leu

325

330

335

Ser

Cys

Pro

Gin

Ser

Trp

He

Arg

His

Leu

Thr

Leu

Asn

Asp

Asp

Vai

340

345

350

Thr

Pro

Gly

Phe

Vai

Arg

Leu

Met

Ser

Leu

Arg

He

Vai

Pro

Asn

Thr

355

360

365

Glu

Pro

Thr

Thr

Hi s

Arg

He

Phe

Arg

Phe

Gly

Vai

His

Lys

Trp

Tyr

370

375

380

Gly

Ala

Ala

Gly

Lys

Arg

Ala

Arg

Gly

Lys

Arg

Ala

Ala

Lys

Ser

Glu

385

390

395

400

Lys

Asp

Ser

Ala

Ser

Thr

Leu

Lys

Vai

Al a

Arg

Pro

Thr

Ser

Thr

Ser

405

410

415

Gly

He

Vai

Thr

Tyr

Ser

Pro

Pro

Ala

Asp

Gly

Ser

Cys

Gly

Trp

Hi s

420

425

430

Ala

Leu

Ala

Ala

He

Leu

Asn

Arg

Met

He

Asn

Asn

Asp

Phe

Thr

Ser

435

440

445

Pro

Leu

Pro

Arg

Tyr

Asn

Arg

Pro

Glu

Asp

Asp

Trp

Ala

Ser

Asp

Gly

450

455

460

- 126 035624

Asp Leu Ala Gin Ala He Gin Cys Leu Gin Leu Pro Ala Ala He Ala 465

470 475480

Arg Asn Arg Ala Cys Pro Asn Ala Lys Tyr Leu lie Lys Leu Asn Gly

485 490495

Vai His Trp Glu Vai Glu Vai Arg Pro Gly Met Ala Pro Arg Ser Leu

500 505510

Ser Arg Glu Cys Vai Vai Gly Vai Cys Ser Glu Gly Cys Vai Ala Ser515

520525

Pro Tyr Pro Glu Asp Gly Leu Pro Lys Arg Ala Leu Glu Ala Leu Ala 530

535540

Ser Ala Tyr Arg Leu Pro Ser Asp Cys Vai Cys Asp Gly lie lie Asp 545

550 555560

Phe Leu Ala Asn Pro Pro Pro Gin Glu Phe Trp Thr Leu Asp Lys Met

565 570575

Leu Thr Ser Pro Ser Pro Glu Gin Ser Gly Phe Ser Ser Leu Tyr Lys

580 585590

Leu Leu Leu Glu lie Leu Pro Gin Lys Cys Gly Ser Thr Glu Gly Glu595

600605

Phe lie Tyr Thr Vai Glu Arg Met Leu Lys Asp Cys Pro Ser Ser Lys 610 615620

Gin Ala Met Ala Leu Leu Ala Lys He Lys Vai Pro Ser Ser Lys Ala 625

630 635640

- 127 035624

Pro Ser Vai Thr Leu Asn Glu Cys Phe Pro Thr Asp Vai Pro Vai Asn

645 650655

Ser Glu Leu He Ser Trp Glu Glu Pro Lys Asp Pro Gly Ala Ala Vai

660 665670

Vai Leu Cys Pro Ser Asp Ala Lys Glu Ser Lys Glu Thr Ala Pro Glu675

680685

Glu Ala Gin Ala Arg Asn Arg Lys Vai Leu His Pro Vai Vai Leu Thr 690 695700

Glu Glu Leu Ser Glu Gin Gin Vai Gin Vai Vai Glu Gly Asp Gin Asp 705

710 715720

Met Pro Leu Asp Leu Thr Trp Pro Thr Leu Thr Ala Thr Ala Thr Pro

725 730735

Vai Arg Gly Pro Vai Pro Asp Asn Leu Ser Ser Gly He Gly Ala Gin

740 745750

Pro Ala Thr Vai Gin Glu Leu lie Leu Ala Arg Pro Ala Pro Arg Leu755

760765

Vai Glu Arg Cys Gly Thr Glu Ser Asn Gly Ser Ser Ser Phe Leu Asp 770

775780

Leu Pro Asp Vai Gin Thr Ser Asp Gin Pro Leu Asp Leu Ser Leu Ala 785

790 795800

- 128 035624

Ala Trp Pro Val Arg Ala Thr Ala Ser Asp Pro Gly Trp He His Gly

805 810815

Arg Arg Glu Pro Val Phe Val Lys Pro Arg Gly Val Phe Ser Asp Gly

820 825830

Glu Ser Ala Leu Gin Phe Gly Glu Leu Ser Glu Ala Ser Ser Val Val835

840845

Asp Asp Arg Thr Lys Glu Ala Pro Val Val Asp Ala Pro lie Asp Leu 850 855860

Thr Thr Ser Asn Glu Thr Leu Ser Gly Ser Asp Pro Phe Glu Phe Ala 865

870 875880

Lys Phe Arg Arg Pro Arg Phe Ser Ala Gin Ala Leu lie Asp Arg Gly

885 890895

Gly Pro Leu Ala Asp Val His Ala Lys lie Lys Ser Arg Val Tyr Glu

900 905910

Gin Cys Leu Gin Ala Cys Glu Pro Gly Ser Arg Ala Thr Pro Ala Thr915

920925

Lys Lys Trp Leu Asp Lys Met Trp Asp Arg Val Asp Met Lys Thr Trp 930 935940

Arg Cys Thr Ser Gin Phe Gin Ala Gly His lie Leu Glu Ser Leu Lys 945

950 955960

- 129 035624

Phe Leu Pro Asp Met He Gin Asp Thr Pro Pro Pro Vai Pro Arg Lys

965 970975

Asn Arg Ala Gly Asp Ser Ala Gly Leu Lys Gin Leu Vai Ala Gin Trp

980 985990

Asp Arg Lys Ser Ser Vai Thr Pro Pro Thr Lys Pro Vai Gly Pro Vai995

10001005

Leu Asp Gin Ala Vai Pro Leu Pro Met Asp He Gin Gin Gly Asp 1010 10151020

Ala lie Ser Ala Asp Lys Pro Pro His Ser Gin Asn Pro Ser Ser 1025 10301035

Gin Vai Asp Vai Gly Gly Gly Trp Lys Ser Phe Met Leu Ser Gly 1040 10451050

Thr Arg Phe Ala Gly Ser Vai Ser Gin Arg Leu Thr Thr Trp Vai 1055 10601065

Phe Glu Vai Leu Ser His Leu Pro Ala Phe Met Leu Thr Leu Phe 1070

10751080

Ser Pro Arg Gly Ser Met Ala Pro Gly Asp Trp Leu Phe Ala Gly 1085 10901095

Ala Vai Leu Leu Ala Leu Leu Leu Cys Arg Ser Tyr Pro He Leu 1100

11051110

Gly Cys Leu Pro Leu Leu Gly Vai Phe Ser Gly Ser Vai Arg Cys 1115

11201125

- 130 035624

Val Arg Leu Gly Vai Phe Gly Ser Trp Met Ala Phe Ala Vai Phe 1130

11351140

Leu Phe Ser Thr Pro Pro Asp Pro Val Gly Ser Ser Cys Asp His 1145 11501155

Asp Ser Pro Glu Cys His Ala Glu Leu Leu Ala Leu Glu Gin Arg 1160

11651170

Gin Leu Trp Glu Pro Val Arg Ser Leu Val Val Gly Pro Ser Gly 1175 11801185

Leu Leu Cys Val He Leu Gly Lys Leu Leu Gly Gly Ser Arg Cys 1190 11951200

Leu Trp Phe Val Leu Leu Arg lie Cys Met Leu Ala Asp Leu Ala 1205 12101215 lie Ser Leu lie Tyr Val Val Ser Gin Gly Arg Cys His Lys Cys 1220

12251230

Trp Gly Lys Cys lie Arg Thr Ala Pro Ala Glu Val Ala Leu Asn 1235 12401245

Val Phe Pro Phe Ser Arg Ala Thr Arg Ser Ser Leu Val Ser Leu 1250

12551260

Cys Asp Arg Phe Gin Ala Pro Lys Gly Val Asp Pro Val His Leu 1265 12701275

- 131 035624

Ala Thr

Gly

Trp

Arg

1285

Gly Cys 1290

Trp

Cys

Gly

Glu

He

1280

Hi s

Gin

Lys

Pro lie

Ala

Tyr

Al a

Asn

Leu

Asp

Glu

Lys

1295

1300

1305

Lys lie 1315

Al a

Gin

Thr Vai

1320

He

Ala

Vai

Tyr

Asp

1310

Gin Ala

He

Lys

Cys

1330

Leu Lys 1335

Vai

Leu

Gin

Al a

Gly

Gly

Ala

He

1325

Vai Asp 1345

Gin

Thr

Pro Glu

1350

Vai

Vai

Arg

Vai

Glu

He

1340

Ala

Phe

Phe Pro

Lys

Vai

Vai

Asn

Asp

Cys

1355

1360

1365

Arg Vai 1375

Vai

Vai

Asp

Ser Asp 1380

Thr

Phe

Vai

Al a

Ala

Vai

Arg

Cys

1370

Gly Tyr 1390

Thr

Ala

Gin Leu

1395

Vai

Leu

Gly

Arg

Gly

Asn

Phe

Ala

1385

Lys Leu 1405

Asn

Gin

Thr

Pro Leu

1410

Arg

Asn

Vai

Thr

Lys

Thr

1400

Thr Gly 1420

Gly

Al a

Tyr Thr 1425

Leu

Ala

Vai

Al a

Gin

Vai

Vai

1415

- 132 035624

Trp Thr 1435

Leu

Val

His

Phe He 1440

Leu

Gly

Leu

Trp

Leu

Thr

Ser

Pro

1430

Gin Val 1450

Cys

Gly

Arg

Gly Thr 1455

Ser

Asp

Pro

Trp

Cys

Ser

Asn

Pro

1445

Phe Ser 1465

Tyr

Pro

Thr

Tyr Gly 1470

Pro

Gly

Val

Val

Cys

Ser

Ser

Arg

1460

Leu Cys 1480

Val

Ser

Ala

Asp Gly 1485

Val

Thr

Leu

Pro

Leu

Phe

Ser

Ala

1475

Val Al a 1495

Hi s

Leu

Ser

Gly Arg 1500

Glu

Val

Gly

He

Phe

lie

Leu

Val

1490

Leu Ala 1510

Ser

Leu

Gly

Ala Leu 1515

Ala

His

Arg

Leu

Ala

Leu

Lys

Ala

1505

Asp Met 1525

Ser

Met

Val

Phe Leu 1530

Ala

Phe

Cys

Al a

Tyr

Ala

Trp

Pro

1520

Met Ser 1540

Ser

Trp

Leu

lie Cys 1545

Phe

Phe

Pro

Met

Leu

Leu

Arg

Trp

1535

Val Thr 1555

Leu

Hi s

Pro

Leu Thr 1560

Met

Leu

Trp

Val

His

Ser

Phe

Leu

1550

Val Phe 1570

Cys

Leu

Pro

Al a Al a 1575

Gly

Val

Leu

Ser

Leu

Gly

He

Thr

1565

Gly Leu 1585

Leu

Trp

Ala

Val Gly 1590

Arg

Phe

Thr

Gin

Val

Ala

Gly

lie

1580

- 133 035624

He Thr Pro Tyr Asp He His Gin Tyr Thr Ser Gly Pro Arg Gly 1595

1600 1605

Ala Ala Ala Vai Ala Thr Ala Pro Glu Gly Thr Tyr Met Ala Ala 1610 16151620

Vai Arg Arg Ala Ala Leu Thr Gly Arg Thr Leu He Phe Thr Pro 1625

16301635

Ser Ala Vai Gly Ser Leu Leu Glu Gly Ala Phe Arg Thr Gin Lys 1640 16451650

Pro Cys Leu Asn Thr Vai Asn Vai Vai Gly Ser Ser Leu Gly Ser 1655 16601665

Gly Gly Vai Phe Thr lie Asp Gly Arg Arg Vai lie Vai Thr Ala 1670 16751680

Thr His Vai Leu Asn Gly Asn Thr Ala Arg Vai Thr Gly Asp Ser 1685 16901695

Tyr Asn Arg Met His Thr Phe Asn Thr Asn Gly Asp Tyr Ala Trp 1700 17051710

Ser His Ala Asp Asp Trp Gin Gly Vai Ala Pro Met Vai Lys lie 1715 17201725

Ala Lys Gly Tyr Arg Gly Arg Ala Tyr Trp Gin Thr Ser Thr Gly 1730 17351740

- 134 035624

Val Glu Pro Gly He Met Gly Glu Gly Phe Ala Phe Cys Phe Thr 1745

17501755

Asn Cys Gly Asp Ser Gly Ser Pro Val lie Ser Glu Ala Gly Asp 1760 17651770

Leu lie Gly Val His Thr Gly Ser Asn Lys Leu Gly Ser Gly Leu 1775 17801785

Val Thr Thr Pro Glu Gly Glu Thr Cys Ser He Lys Glu Thr Arg 1790 17951800

Leu Ser Asp Leu Ser Arg His Phe Ala Gly Pro Ser Val Pro Leu 1805 18101815

Gly Asp lie Lys Leu Ser Pro Ala lie lie Pro Asp Val Thr Thr 1820 18251830 lie Pro Ser Asp Leu Ala Ser Leu Leu Ala Ser Val Pro Val Met 1835

18401845

Glu Gly Gly Leu Ser Thr Val Gin Leu Leu Cys Val Phe Phe Leu 1850 18551860

Leu Trp Arg Met Met Gly His Ala Trp Thr Pro He Val Ala Val 1865

18701875

Gly Phe Phe Leu Leu Asn Glu lie Leu Pro Ala Val Leu Val Arg 1880 18851890

- 135 035624

Ala Vai Phe Ser Phe Ala Leu Phe Vai Leu Ala Trp Ala Thr Pro 1895

1900 1905

Trp Ser Ala Gin Vai Leu Met He Arg Leu Leu Thr Ala Ala Leu 1910 19151920

Asn Arg Asn Arg Leu Ser Leu Ala Phe Tyr Ala Phe Gly Gly Vai 1925 19301935

Vai Gly Leu Ala Thr Glu He Gly Thr Phe Ala Gly Gly Trp Pro 1940

19451950

Glu Leu Ser Gin Ala Leu Ser Thr Tyr Cys Phe Leu Pro Arg Phe 1955 19601965

Leu Ala Vai Thr Ser Tyr Vai Pro Thr lie lie lie Gly Gly Leu 1970 19751980

His Ala Leu Gly Vai lie Leu Trp Leu Phe Lys Tyr Arg Cys Leu 1985 19901995

His Asn Met Leu Vai Gly Asp Gly Ser Phe Ser Ser Ala Phe Phe 2000 20052010

Leu Arg Tyr Phe Ala Glu Gly Asn Leu Arg Lys Gly Vai Ser Gin 2015 20202025

Ser Cys Gly Met Asn Asn Glu Ser Leu Thr Ala Ala Leu Ala Cys 2030 20352040

Lys Leu Ser Gin Ala Asp Leu Asp Phe Leu Ser Ser Leu Thr Asn 2045 20502055

- 136

Phe Lys Cys Phe Vai Ser Ala Ser Asn Met Lys Asn Ala Ala Gly 2060

2065 2070

Gin Tyr 2080

He

Glu

Ala

Ala Tyr 2085

Ala

Arg

Al a

Leu

Arg

Gin

Glu

2075

Ala Ser

Leu

Vai

Gin

2095

Vai Asp 2100

Lys

Met

Lys

Gly

Vai

Leu

Al a

Lys

2090

Leu Glu

Ala

Phe

Ala

Glu Thr

Ala

Thr

Asp

Thr

Gly

2105

2110

2115

Asp Vai 2125

He

Vai

Leu

Leu Gly 2130

Gin

Hi s

Gly

He

Leu

2120

Asp lie 2140

Asn

Vai

Gly

Gly Glu 2145

Arg

Lys

Thr

Vai

Vai

Gin

Glu

2135

Thr Arg 2155

Cys

Gly

Lys

Phe

Vai

Cys

Thr

Vai

Vai

2150

Thr

Vai

2170

Leu

Phe

2185

Asp Asp 2200

Leu

Lys

Vai

2160

Asp Thr 2175

Glu Asn

2190

Glu Arg

2205

Leu

Thr

Gly

He

Gin

Thr

2165

Gly

Met

Lys

Arg

Hi s

Arg

Glu

Asp

2180

Lys

Hi s

Cys

Vai

2195

- 137 035624

Gly Phe His Lys He Asn Gly Lys Vai Tyr Cys Lys lie Trp Asp 2210

2215 2220

Lys Ser Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Thr Asp Asp Ser Arg Tyr Thr 2225 22302235

Gin Asp His Ala Phe Gin Asp Arg Ser Thr Asp Tyr Arg Asp Arg 2240 22452250

Asp Tyr Glu Gly Vai Gin Thr Ala Pro Gin Gin Gly Phe Asp Pro 2255 22602265

Lys Ser Glu Ala Pro Vai Gly Thr Vai Vai lie Gly Gly lie Thr 2270

22752280

Tyr Asn Arg His Leu Vai Lys Gly Lys Glu Vai Leu Vai Pro Lys 2285 22902295

Pro Asp Asn Cys Leu Glu Ala Ala Arg Leu Ser Leu Glu Gin Ala 2300 23052310

Leu Ala Gly Met Gly Gin Thr Cys Asp Leu Thr Ala Thr Glu Vai 2315 23202325

Glu Lys Leu Lys Arg lie lie Ser Gin Leu Gin Gly Leu Thr Thr 2330 23352340

Glu Gin Ala Leu Asn Cys 2345 <210>3 <211>1463

- 138 035624 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> ОРС IB MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:1 расположенным между нуклеотидами 7209...11600 <400>3

Thr Gly Phe Lys Leu Leu Ala Ala Ser Gly Leu Thr Arg Cys Gly Arg 1

1015

Gly Gly Leu Vai Vai Thr Glu Thr Ala Vai Lys He Vai Lys Tyr His

2530

Ser Arg Thr Phe Thr Leu Gly Ser Leu Asp Leu Lys Vai Thr Ser Glu35

4045

Vai Glu Vai Lys Lys Ser Thr Glu Gin Gly His Ala Vai Vai Ala Asn 50

5560

Leu Cys Ser Gly Vai Vai Leu Met Arg Pro His Pro Pro Ser Leu Vai 65

7580

Asp Vai Leu Leu Lys Pro Gly Leu Asp Thr Thr Pro Gly He Gin Pro 85 9095

Gly His Gly Ala Gly Asn Met Gly Vai Asn Gly Ser lie Trp Asp Phe

100 105HO

Glu Thr Ala Pro Thr Lys Vai Glu Leu Glu Leu Ser Lys Gin lie lie115

120125

Gin Ala Cys Glu Vai Arg Arg Gly Asp Ala Pro Asn Leu Gin Leu Pro130

135140

- 139 035624

Tyr Lys Leu Tyr Pro Vai Arg Gly Asp Pro Glu Arg Arg Lys Gly Arg 145

150 155160

Leu Vai Asn Thr Arg Phe Gly Asp Leu Pro Tyr Lys Thr Pro Gin Asp

165 170175

Thr Lys Ser Ala He His Ala Ala Cys Cys Leu His Pro Asn Gly Vai

180 185190

Leu Vai Ser Asp Gly Lys Ser Thr Leu Gly Thr Thr Leu Gin His Gly195

200205

Phe Glu Leu Tyr Vai Pro Thr Vai Pro Tyr Ser Vai Met Glu Tyr Leu 210 215220

Asp Ser Arg Pro Asp Thr Pro Phe Met Cys Thr Lys His Gly Thr Ser 225

230 235240

Lys Ala Ala Ala Glu Asp Leu Gin Lys Tyr Asp Leu Ser Thr Gin Gly

245 250255

Phe Vai Leu Pro Gly Vai Leu Arg Leu Vai Arg Arg Phe He Phe Ser

260 265270

His Vai Gly Lys Ala Pro Pro Leu Phe Leu Pro Ser Thr Tyr Pro Ala275

280285

Lys Asn Ser Met Ala Gly Vai Asn Gly Gin Arg Phe Pro Thr Lys Asp 290

295300

- 140 035624

Val Gin Ser He Pro Glu lie Asp Glu Met Cys Ala Arg Ala Vai Lys 305

310 315320

Glu Asn Trp Gin Thr Val Thr Pro Cys Thr Leu Lys Lys Gin Tyr Cys

325 330335

Ser Lys Pro Lys Thr Arg Thr lie Leu Gly Thr Asn Asn Phe lie Ala

340 345350

Leu Ala His Arg Ser Ala Leu Ser Gly Val Thr Gin Ala Phe Met Lys355

360365

Lys Ala Trp Lys Ser Pro lie Ala Leu Gly Lys Asn Lys Phe Lys Glu 370 375380

Leu His Cys Thr Val Ala Gly Arg Cys Leu Glu Ala Asp Leu Ala Ser 385

390 395400

Cys Asp Arg Ser Thr Pro Ala lie Val Arg Trp Phe Val Ala Asn Leu

405 410415

Leu Tyr Glu Leu Ala Gly Cys Glu Glu Tyr Leu Pro Ser Tyr Val Leu

420 425430

Asn Cys Cys His Asp Leu Val Ala Thr Gin Asp Gly Ala Phe Thr Lys435

440445

Arg Gly Gly Leu Ser Ser Gly Asp Pro Val Thr Ser Val Ser Asn Thr 450 455460

Val Tyr Ser Leu lie lie Tyr Ala Gin His Met Val Leu Ser Ala Leu 465

470 475480

- 141 035624

Lys Met Gly His Glu He Gly Leu Lys Phe Leu Glu Glu Gin Leu Lys

485 490495

Phe Glu Asp Leu Leu Glu lie Gin Pro Met Leu Val Tyr Ser Asp Asp

500 505510

Leu Val Leu Tyr Ala Glu Arg Pro Thr Phe Pro Asn Tyr His Trp Trp515

520525

Val Glu His Leu Asp Leu Met Leu Gly Phe Lys Thr Asp Pro Lys Lys 530 535540

Thr Val lie Thr Asp Lys Pro Ser Phe Leu Gly Cys Arg lie Glu Ala 545

550 555560

Gly Arg Gin Leu Val Pro Asn Arg Asp Arg lie Leu Ala Ala Leu Ala

565 570575

Tyr His Met Lys Ala Gin Asn Ala Ser Glu Tyr Tyr Ala Ser Ala Ala

580 585590

Ala lie Leu Met Asp Ser Cys Ala Cys lie Asp His Asp Pro Glu Trp595

600605

Tyr Glu Asp Leu lie Cys Gly lie Ala Arg Cys Ala Arg Gin Asp Gly 610 615620

Tyr Arg Phe Pro Gly Pro Ala Phe Phe Met Ser Met Trp Glu Lys Leu 625

630 635640

142 035624

Lys Ser His Asn Glu Gly Lys Lys Cys Arg His Cys Gly He Cys Asp

645 650655

Ala Lys Ala Asp Tyr Ala Ser Ala Cys Gly Leu Asp Leu Cys Leu Phe

660 665670

His Ser His Phe His Gin His Cys Pro Vai Thr Leu Ser Cys Gly His675

680685

His Ala Gly Ser Lys Glu Cys Ser Gin Cys Gin Ser Pro Vai Gly Ala 690

695700

Gly Lys Ser Pro Leu Asp Ala Vai Leu Lys Gin lie Pro Tyr Lys Pro 705

710 715720

Pro Arg Thr He He Met Lys Vai Asp Asn Lys Thr Thr Thr Leu Asp

725 730735

Pro Gly Arg Tyr Gin Ser Arg Arg Gly Leu Vai Ala Vai Lys Arg Gly

740 745750 lie Ala Gly Asn Glu Vai Asp Leu Ser Asp Gly Asp Tyr Gin Vai Vai755

760765

Pro Leu Leu Pro Thr Cys Lys Asp lie Asn Met Vai Lys Vai Ala Cys 770

775780

Asn Vai Leu Leu Ser Lys Phe lie Vai Gly Pro Pro Gly Ser Gly Lys 785

790 795800

- 143 035624

Thr Thr Trp Leu Leu Asn Gin Val Gin Asp Asp Asp Val He Tyr Thr

805 810815

Pro Thr His Gin Thr Met Phe Asp lie Val Ser Ala Leu Lys Val Cys

820 825830

Arg Tyr Ser He Pro Gly Ala Ser Gly Leu Pro Phe Pro Pro Pro Ala835

840845

Arg Ser Gly Pro Trp Val Arg Leu lie Ala Ser Gly His Val Pro Gly 850 855860

Arg Val Ser Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Tyr Cys Asn His Leu Asp lie 865

870 875880

Leu Arg Leu Leu Ser Lys Thr Pro Leu Val Cys Leu Gly Asp Leu Gin

885 890895

Gin Leu His Pro Val Gly Phe Asp Ser Tyr Cys Tyr Val Phe Asp Gin

900 905910

Met Pro Gin Lys Gin Leu Thr Thr He Tyr Arg Phe Gly Pro Asn He915

920925

Cys Ala Ala lie Gin Pro Cys Tyr Arg Glu Lys Leu Glu Ser Lys Ala 930 935940

Arg Asn Thr Arg Val Val Phe Thr Thr Arg Pro Val Ala Phe Gly Gin 945

950 955960

Val Leu Thr Pro Tyr His Lys Asp Arg Thr Gly Ser Ala He Thr He

965 970975

- 144 035624

Asp Ser Ser Gin Gly Ala Thr Phe Asp He Vai Thr Leu His Leu Pro

980 985990

Ser Pro Lys Ser Leu Asn Lys Ser Arg Ala Leu Vai Ala lie Thr Arg995

10001005

Ala Arg His Gly Leu Phe lie Tyr Asp Pro His Asp Gin Leu Gin 1010

10151020

Glu Phe Phe Asn Leu Thr Pro Glu Arg Thr Asp Cys Asn Leu Ala 1025 10301035

Phe Ser Arg Gly Asp Glu Leu Vai Vai Leu Asn Vai Asp Asn Ala 1040 10451050

Vai Thr Thr Vai Ala Lys Ala Leu Glu Thr Gly Ser Pro Arg Phe 1055 10601065

Arg Vai Ser Asp Pro Arg Cys Lys Ser Leu Leu Ala Ala Cys Ser 1070 10751080

Ala Ser Leu Glu Gly Ser Cys Met Pro Leu Pro Gin Vai Ala His 1085 10901095

Asn Leu Gly Phe Tyr Phe Ser Pro Asp Ser Pro Ala Phe Ala Pro 1100

11051110

Leu Pro Lys Glu Leu Ala Pro His Trp Pro Vai Vai Thr His Gin 1115 11201125

- 145 035624

Asn Asn Arg Ala Trp Pro Asp Arg Leu Vai Ala Ser Met Arg Pro 1130

11351140

He Asp Ala Arg Tyr Ser Lys Pro Met Vai Gly Ala Gly Tyr Vai 1145 11501155

Vai Gly Pro Ser lie Phe Leu Gly Thr Pro Gly Vai Vai Ser Tyr 1160

11651170

Tyr Leu Thr Leu Tyr lie Gly Gly Glu Pro Gin Ala Leu Pro Glu 1175 11801185

Thr Leu Vai Ser Thr Gly Arg He Ala Thr Asp Cys Arg Glu Tyr 1190 11951200

Leu Asp Ala Ala Glu Glu Glu Ala Ala Arg Glu Leu Pro His Ala 1205 12101215

Phe lie Gly Asp Vai Lys Gly Thr Thr lie Gly Gly Cys His His 1220 12251230 lie Thr Ser Lys Tyr Leu Pro Arg Ser Leu Pro Lys Asp Ser Vai1235

12401245

Ala Vai Vai Gly Vai Ser Ser Pro Gly Arg Ala Ala Lys Ala Vai 1250

12551260

Cys Thr Leu Thr Asp Vai Tyr Leu Pro Glu Leu Arg Pro Tyr Leu 1265

12701275

- 146 035624

Gin Pro 1285

Glu

Thr

Ala

Ser Lys 1290

Cys

Trp

Lys

Leu

Lys

Leu

Asp

Phe

1280

Arg Asp 1300

Val

Arg

Leu

Met Val 1305

Trp

Lys

Gly

Al a

Thr

Ala

Tyr

Phe

1295

Gin Leu 1315

Glu

Gly

Leu

Thr Trp 1320

Ser

Ala

Leu

Pro

Asp

Tyr

Ala

Arg

1310

Phe He 1330

Gin

Leu

Pro

Lys Asp 1335

Ala

Val

Val

Tyr

lie

Asp

Pro

Cys

1325

He Gly 1345

Pro

Al a

Thr

Ala Asn 1350

Arg

Lys

Val

Val

Arg

Thr

Thr

Asp

1340

Trp Arg 1360

Ala

Asp

Leu

Al a Val 1365

Thr

Pro

Tyr

Asp

Tyr

Gly

Ala

Gin

1355

Val He 1375

Leu

Thr

Thr

Ala Trp 1380

Phe

Glu

Asp

Leu

Gly

Pro

Gin

Trp

1370

Lys lie 1390

Leu

Gly

Leu

Gin Pro 1395

Phe

Arg

Arg

Thr

Phe

Gly

Phe

Glu

1385

Asn Thr 1405

Glu

Asp

Trp

Al a lie 1410

Leu

Ala

Arg

Arg

Met

Asn

Asp

Gly

1400

Lys Asp 1420

Tyr

Thr

Asp

Tyr Asn 1425

Trp

His

Cys

Val

Arg

Glu

Arg

Pro

1415

His Ala 1435

He

Tyr

Gly

Arg Ala 1440

Arg

Asp

Hi s

Thr

Tyr

His

Phe

Ala

1430

- 147 035624

Leu Gly Thr Glu Leu Gin Vai Glu Leu Gly Arg Pro Arg Leu Pro 1445 14501455

Pro Glu Gin Vai Pro 1460 <210>4 <211>249 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC 2 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:1 расположенным между нуклеотидами 11611..12360 <400>4

Met Gin Trp Vai Tyr Cys Gly Vai Lys Ser Vai Ser Cys Ser Trp Met 1

1015

Pro Ser Leu Ser Ser Leu Leu Vai Trp Leu Thr Leu Ser Ser Phe Ser

2530

Pro Tyr Cys Leu Gly Ser Leu Leu Gin Ala Gly Tyr Trp Ser Ser Phe35

4045

Ser Glu Trp Phe Ala Pro Arg Phe Ser Vai Arg Ala Leu Pro Phe Thr 50

5560

Leu Pro Asn Tyr Arg Arg Ser Tyr Glu Gly Leu Leu Pro Asn Cys Arg 65

7580

Pro Asp Vai Pro Gin Phe Ala Vai Lys His Pro Leu Gly He Leu Trp

9095

- 148

His Met Arg Vai Ser His Leu He Asp Glu Met Vai Ser Arg Arg lie

100 105HO

Tyr Arg Thr Met Glu His Ser Gly Gin Ala Ala Trp Lys Gin Vai Vai115

120125

Ser Glu Ala Thr Leu Thr Lys Leu Ser Arg Leu Asp Vai Vai Thr His 130 135140

Phe Gin His Leu Ala Ala Vai Glu Ala Asp Ser Cys Arg Phe Leu Ser 145

150 155160

Ser Arg Leu Ala Met Leu Lys Asn Leu Ala Vai Gly Asn Vai Ser Leu

165 170175

Glu Tyr Asn Thr Thr Leu Asp Arg Vai Glu Leu He Phe Pro Thr Pro

180 185190

Gly Thr Arg Pro Lys Leu Thr Asp Phe Arg Gin Trp Leu He Ser Vai195

200205

His Ala Ser lie Phe Ser Ser Vai Ala Ser Ser Vai Thr Leu Phe Thr 210

215220

Vai Leu Trp Leu Arg lie Pro Ala Leu Arg Tyr Vai Phe Gly Phe His 225

230 235240

Trp Pro Thr Ala Thr His His Ser Asn245 <210>5 <211>265

- 149 035624 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> ОРС 3 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:1 расположенным между нуклеотидами 12219..13016 <400>5

Met Ala Туг Gin Arg Ala Arg Phe His Leu Leu Leu Cys Gly Phe Vai 1

1015

Cys Tyr Leu Vai His Ser Ala Leu Ala Ser Asn Ser Ser Ser Thr Leu

2530

Cys Phe Trp Phe Pro Leu Ala His Gly Asn Thr Ser Phe Glu Leu Thr35

4045

He Asn Tyr Thr He Cys Lys Pro Cys Pro Thr Ser Gin Ala Ala Gin 50

5560

Gin Arg Leu Glu Pro Gly Arg Asn Vai Trp Cys Lys lie Gly His Asp 65

7580

Arg Cys Glu Glu Arg Asp His Asp Glu Leu Ser Met Ser lie Pro Ser 85 9095

Gly Tyr Asp Asn Leu Lys Leu Glu Gly Tyr Tyr Ala Trp Leu Ala Phe

100 105HO

Leu Ser Phe Ser Tyr Ala Ala Gin Phe His Pro Glu Leu Phe Gly lie115

120125

Gly Asn Vai Ser Arg Vai Phe Vai Asp Lys Arg His Gin Phe He Cys 130 135140

- 150 035624

Ala Glu His Asp 150

Gly Gin Asn Ser

155

Thr He Ser Ala

160

Arg His Asn lie 145

Ser Ala Ser Tyr 165

Ala Val Tyr Tyr 170

His His Gin He

175

Asp Gly Gly Asn

Trp Phe His Leu 180

Glu Trp Leu Arg 185

Pro Phe Phe Ser

190

Ser Trp Leu Val

Leu Asn He Ser

200

Trp Phe Leu Arg 205

Arg Ser Pro Ala

Ser Pro Ala Ser 195

Arg Arg He Tyr 215

Gin lie Leu Arg 220

Pro Thr Arg Pro

Arg Leu Pro Val 210

Ser Trp Ser Phe 230

Arg Thr Ser He 235

Val Ser Asn Leu

240

Thr Gly Pro Gin 225

Gin Arg Lys Val 245

Pro Leu Pro Ser

250

Gly Gly Arg Pro

255

Asn Val Val Lys

Pro Ser Ala Phe

Pro Ser Thr Ser

Arg

260 265 <210> 6 <211> 183 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC 4 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID N0:l, расположенным между нуклеотидами 12761..13312 <400> 6

- 151 035624

Met Ala Ala Thr He Leu Phe Leu Leu Ala Gly Ala Gin His Leu Met 1

1015

Val Ser Glu Ala Phe Ala Cys Lys Pro Cys Phe Ser Thr His Leu Ser

2530

Asp lie Lys Thr Asn Thr Thr Ala Ala Ala Gly Phe Met Val Leu Gin35

4045

Asn lie Asn Cys Phe Gin Ser His Arg Ala Ser Thr Ala Gin Gly Thr 50

5560

Thr Pro Leu Arg Arg Ser Ser Gin Cys Arg Glu Ala Val Gly lie Pro 65

7580

Gin Tyr lie Thr He Thr Ala Asn Val Thr Asp Glu Ser Tyr Leu Tyr

9095

Asn Ala Asp Leu Leu Met Leu Ser Ala Cys Leu Phe Tyr Ala Ser Glu

100 105110

Met Ser Glu Lys Gly Phe Lys Val lie Phe Gly Asn lie Ser Gly Val115

120125

Val Ser Ala Cys Val Asn Phe Thr Asp Tyr Val Ala His Val Thr Gin 130

135140

His Thr Gin Gin His His Leu Val lie Asp His lie Arg Leu Leu His 145

150 155160

Phe Leu Thr Pro Ser Thr Met Arg Trp Ala Thr Thr He Ala Cys Leu

165 170175

- 152 035624

Leu Ala He Leu Leu Ala Vai180 <210>7 <2H>201 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC 5 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:1 расположенным между нуклеотидами 13309..13914 <400>7

Met Lys Cys Ser Cys Lys Leu Gly His Phe Leu Thr Pro His Ser Cys 1

1015

Phe Trp Trp Leu Phe Leu Leu Cys Thr Gly Leu Ser Trp Ser Phe Vai

2530

Asp Gly Asn Asp Asp Ser Ser Thr Ser Gin Tyr lie Tyr Asn Leu Thr35

4045 lie Cys Glu Leu Asn Gly Thr Glu Trp Leu Ser Gly His Phe Asp Trp 50

5560

Ala Vai Glu Thr Phe Vai Leu Tyr Pro Vai Ala Thr His lie lie Ser 65

7580

Leu Gly Phe Leu Thr Thr Ser His Phe Leu Asp Ala Leu Gly Leu Gly

9095

Ala Vai Ser Ala Thr Gly Phe lie Gly Glu Arg Tyr Vai Leu Ser Ser

100 105HO

- 153 035624

Met Tyr Gly Val Cys Ala Phe Ala Ala Phe Val Cys Phe Val He Arg 115

120125

Ala Ala Lys Asn Cys Met Ala Cys Arg Tyr Ala Arg Thr Arg Phe Thr 130 135140

Asn Phe lie Val Asp Asp Arg Gly Arg lie His Arg Trp Lys Ser Ser 145

150 155160 lie Val Val Glu Lys Leu Gly Lys Ala Glu Val Gly Gly Asp Leu Val

165 170175

Asn lie Lys His Val Val Leu Glu Gly Val Lys Ala Gin Pro Leu Thr

180 185190

Arg Thr Ser Ala Glu Gin Trp Glu Ala 195200 <210>8 <211>173 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC 6 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:1 расположенным между нуклеотидами 13902..14423 <400>8

Met Gly Ser Leu Asp Asp Phe Cys Asn Asp Pro Thr Ala Ala Gin Lys 1

1015

Leu Val Leu Ala Phe Ser He Thr Tyr Thr Pro He Met He Tyr Ala

2530

- 154 035624

Leu Lys Vai Ser Arg Gly Arg Leu Leu Gly Leu Leu His He Leu lie 35

4045

Phe Leu Asn Cys Ser Phe Thr Phe Gly Tyr Met Thr Tyr Vai His Phe 50

5560

Gin Ser Thr Asn Arg Vai Ala Phe Thr Leu Gly Ala Vai Vai Ala Leu 65

7580

Leu Trp Gly Vai Tyr Ser Leu Thr Glu Ser Trp Lys Phe He Thr Ser 85 9095

Arg Cys Arg Leu Cys Cys Leu Gly Arg Arg Tyr lie Leu Ala Pro Ala

100 105HO

His His Vai Glu Ser Ala Ala Gly Leu His Ser lie Pro Ala Ser Gly115

120125

Asn Arg Ala Tyr Ala Vai Arg Lys Pro Gly Leu Thr Ser Vai Asn Gly 130 135140

Thr Leu Vai Pro Gly Leu Arg Ser Leu Vai Leu Gly Gly Lys Arg Ala 145

150 155160

Vai Lys Arg Gly Vai Vai Asn Leu Vai Lys Tyr Gly Arg165

170 <210>9 <211>128 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

- 155 035624 <223> OPC 7 MSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:1 расположенным между нуклеотидами 14413..14799 <400>9

Met Ala Gly Lys Asn Gin Ser Gin Lys Lys Arg Arg Asn Ala Ala Pro 1

1015

Met Gly Lys Gly Gin Pro Vai Asn Gin Leu Cys Gin Leu Leu Gly Thr

2530

Met He Lys Ser Gin Arg Gin Gin Ser Arg Gly Gly Gin Ala Lys Lys35

4045

Lys Lys Pro Glu Lys Pro His Phe Pro Leu Ala Ala Glu Asp Asp lie 50 5560

Arg His His Leu Thr Gin Ala Glu Arg Ser Leu Cys Leu Gin Ser lie 65

7580

Gin Thr Ala Phe Asn Gin Gly Ala Gly Thr Ala Ser Leu Ser Ser Ser

9095

Gly Lys Vai Ser Phe Gin Vai Glu Phe Met Leu Pro Vai Ala His Thr

100 105HO

Vai Arg Leu lie Arg Vai Thr Ser Thr Ser Ala Ser Gin Gly Ala Asn115

120125 <210>10 <211>14843 <212> ДНК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней <400>10 tttgtgtacc ttggaggcgt gggtacagcc ctgccccacc ccttggcccc tgttctagcc60

- 156 035624

cgacaggtac	ccttctctct	cggggcgagc	gcgccgcctg	etget ccctt	gcggcgggaa	120
ggacctcccg	agtatttccg	gagagcacct	gctttacggg	atctccgccc	tttaaccatg	180
tctgggatgt	tctcccggtg	catgtgcacc	ccggctgccc	gggtattttg	gaacgccggc	240
caagtctatt	gcacacggtg	tctcagtgca	cggtctcttc	tctctccaga	acttcaggac	300
acggacctcg	gtgcagttgg	cttgttt cac	aagcctaaag	acaagctcca	ttggaaagtt	360
cccattggta	tcccccaggt	ggaatgttct	ccatctgggt	gttgctggct	gtcaaccatt	420
tttcctttag	cgcgcatgac	ctccggcaat	cacaactt cc	ttcaacgact	cgtgaaggtt	480
gctgacgtat	tgtaccgtga	cggttgctta	acccctagac	acctccgtga	actccaagtt	540
tacgagcgtg	gttgcaattg	gtatccgatt	acggggcctg	tgcctgggat	ggctgtgtac	600
gcgaact cca	tgcacgtgtc	cgaccaaccg	ttccctggtg	ccactcatgt	gttaacaaat	660
tcccctttgc	ctcaacgggc	ttgtcggcag	ccgttctgtc	cgttcgaaga	ggcccattct	720
agcatataca	ggtgggaaaa	atttgtaatt	tttatggatt	cctcctccga	eggtegatet	780
cgcatgatgt	ggactccgga	atccgatgac	tccacggctt	tggaagtt et	gccgcccgag	840
ctagaacacc	aggtcaaggt	ccttgtt egg	agctttcccg	cccat cacct	tgtcgacctt	900
gccgattggg	agctcactga	gtcccctgag	aacggttttt	ccttcagcac	gtcacatcct	960
tgcggctacc	ttgttcggga	cccggctgta	teegaaggea	agtgttggct	ttcctgcttt	1020
ttgagccagt	cagccgaagt	gctcagtcgc	gaggcgcatc	tggctaccgc	ctatggttac	1080
caaaccaagt	ggggtgtgcc	tggcaagtac	atccagcgca	gaett caagt	tcacggtctc	1140
cgtgctgtgg	tcgaccctga	tggtcccatt	cacgttgaag	cattgtcttg	cccccagtct	1200
tggatcaggc	acttgaccct	gaatgatgat	gtcaccccgg	gattegtteg	cctaatgtct	1260
cttcgcattg	tgccgaacac	agagcctacc	acacaccgga	tctttcgttt	tggagtgcac	1320
aagtggtatg	gtgccgccgg	caaacgggcc	cgtggcaagc	gtgccgccaa	aagtgagaaa	1380
gactcggctt	ccaccctcaa	ggttgcccga	ccgacttcca	ccagtggaat	cgtcacctac	1440
tccccacctg	cggacgggtc	ttgtggttgg	catgcccttg	ccgccatact	gaaccggatg	1500
attaataatg	acttcacgtc	ccctctgcct	cggtacaaca	ggeeggagga	cgattgggct	1560
tctgatggtg	accttgct ca	ggccatt caa	tgtttgcaac	tacctgccgc	catagctcgg	1620

- 157 035624

aaccgcgcct	gccctaacgc	caaatacctc	gtaaaactca	acggagtt ca	ttgggaggta	1680
gaggtgaggc	ctggaatggc	tcctcgctcc	ctctctcgtg	agtgcgttgt	tggcgtctgc	1740
tctgaaggct	gtgtcgcgtc	gccttacccg	gaggacgggt	tgcctaaacg	tgcacttgag	1800
gccctggcgt	ctgcttatag	actgccttca	gactgtgttt	gtgatggtat	tattgacttc	1860
cttgccaat c	cacctcccca	ggagttctgg	actcttgaca	aaatgttgac	ttccccgtca	1920
ccggagcagt	ccggcttctc	tagtctgtat	aaattgttgt	tagaggtctt	gccgcagaaa	1980
tgcggat cca	cagaagggga	attcatctat	actgttgaga	ggatgttgaa	ggattgtccg	2040
agctccaaac	aggccatggc	cctccttgca	aaaattaagg	tcccatcctc	aaaggcccca	2100
tccgtgactc	tgaacgagtg	cttccccacg	gatgtt ccag	tcaactctga	gttaatatct	2160
tgggaagagc	ccaaagaccc	tggcgctgct	gttgtcctat	gtccatcgga	tgcaaaagaa	2220
tctaaggaaa	cagcccctga	agaagct caa	gcgagaaacc	gtaaggtcct	ccaccctgtg	2280
gtccttaccg	aggaacttag	cgagcaacag	gtgcaggtgg	ttgagggtga	tcaggatatg	2340
ccactggatt	tgacttggcc	aaccttaacc	gctacggcga	cccctgttag	agggccggta	2400
ccggacaatt	tgagctctgg	cattggtgcc	cagcccgcta	ccgtt caaga	actcattctg	2460
gcgaggcctg	caccccgt ct	tgttgagcgc	tgtggcacgg	agt cgaacgg	cagcagttca	2520
tttctggatt	tgcctgacgt	gcagacctcg	gaccagcctt	tagacctgtc	cctggccgcg	2580
tggcctgtaa	gggctaccgc	gtctgacccc	ggttggatcc	acggtaggcg	tgagcctgt c	2640
tttgtgaagc	ctcgaggtgt	tttctctgat	ggcgagtcgg	ccctt cagtt	cggagagctt	2700
tccgaagcca	gttctgtcgt	cgatgaccgg	acaaaagaag	ctccggtggt	tgacgccccc	2760
atcgatttga	caacttcgaa	cgagacgctc	tctgggtctg	acccctttga	att cgccaaa	2820
ttcaggcgcc	cgcgtttctc	cgcgcaagct	ttaatcgacc	gaggtggtcc	gcttgccgat	2880
gttcatgcaa	agataaagag	t cgggtatat	gaacaatgcc	ttcaagcttg	tgaacctggt	2940
agtcgtgcga	ccccagccac	caagaagtgg	ctcgacaaaa	tgtgggacag	ggtggacatg	3000
aaaacttggc	gctgcacctc	gcagttccaa	gctggtcaca	ttcttgagtc	cct caaatt c	3060
ctccctgaca	tgattcaaga	cacaccgcct	cctgtt ccca	ggaagaaccg	agctggtgac	3120
agtgccggcc	tgaagcaact	ggtggcgcag	tgggatagga	aattgagtgt	gacacccccc	3180

- 158 035624

acaaaaccgg	ttggaccggt	gcttgaccag	accgtccctc	tgcct atgga	cat ccagcaa	3240
gaagatgcca	tctccgctga	caagccaccc	catt egeaaa	acccttctag	tcaagtagat	3300
gtgggtggag	gttggaaaag	ttttatgctc	tccggcaccc	gtttcgcggg	gtccgttagt	3360
cagcgcctta	cgacatgggt	ttttgaggtt	ctctcccatc	tcccagcttt	tatgctcaca	3420
cttttctcgc	cacggggctc	tatggctcca	ggtgattggc	tgtttgcagg	tgctgttcta	3480
cttgctctcc	tgctctgccg	ttcttaccca	atactcggat	geett ccctt	attgggtgtc	3540
ttttctggtt	ctgtgcggtg	tgttcgtttg	ggtgtttttg	gtt et tggat	ggcttttgct	3600
gtatttttat	tctcgactcc	acccgaccca	gtcggttctt	cttgtgacca	egatt egeeg	3660
gagtgtcatg	ctgagctttt	ggetettgag	cagcgccaac	tttgggaacc	tgtgcgcagc	3720
cttgtggt eg	ggccat eggg	cctcttatgc	gtcattcttg	gcaagttact	cggtgggtca	3780
cgttgtctct	ggtttgttct	cctacgtata	tgeatget eg	cagat ttggc	aatttctctt	3840
atttatgtgg	tgt cccaagg	gcgttgtcac	aagtgttggg	gaaagtgtat	aaggaegget	3900
cctgcagaag	tgacccttaa	tgtgtttcct	ttttcgcgcg	ccacccgctc	atctcttgtg	3960
tccttgtgtg	atcggttcca	agcgccaaaa	ggagttgacc	ccgtgcactt	ggcgacaggc	4020
tggcgcgggt	gctggtgtgg	tgagagccct	attcatcaat	cacaccaaaa	accgatagct	4080
tatgccaact	tggatgaaaa	gaagatatcc	gcccagacgg	tgattgctgt	cccgtatgat	4140
cccagtcagg	ccattaaatg	cctgaaagtt	ttgcaggcag	gaggggctat	tgtggaccag	4200
cctacgcccg	aggtegteeg	tgtgtctgag	attcccttct	cggccccatt	ttttccgaag	4260
gtcccagtca	acccagattg	cagggttgtg	gtagattegg	acacttttgt	ggctgcggt c	4320
egetgeggtt	attcgacagc	acaactggtc	cttggtcggg	gcaactttgc	caagctaaat	4380
cagacccccc	tcaggaactc	tgtccccacc	aaaacaactg	gtggggcctc	atacaccctt	4440
gccgtggccc	aggtatetgt	gtggactctt	gttcatttca	tcctcggcct	ttggttaacg	4500
tcacctcaag	tgtgtggtcg	agggacctct	gacccgtggt	gtt cgaaccc	tttttcgtat	4560
cctacttatg	gccccggagt	tgtgtgttcc	tctcgactct	gcgtgtctgc	egaeggagtt	4620
accctgccat	tgttctcagc	cgttgcccat	ettt ccggta	gagaggtggg	gatttttatt	4680
ttggtgcttg	cctccttggg	cgctttagcc	caccgcttgg	et ett aaggc	agacatgtca	4740

- 159 035624

atggtctttt	tggcgttttg	tgcttacgcc	tggcccatga	get cctggtt	aatttgcttc	4800
tttcctatgc	tcttgaggtg	ggtaaccctt	catcctctca	ctatgctttg	ggtgcactca	4860
tttttggtgt	tttgcctacc	agctgccggc	gttctctcgc	tgggaataac	eggtettett	4920
tgggcagttg	gccgtttcac	ccaggttgcc	ggaattatca	caccttatga	cat ccaccag	4980
tatacctccg	gaccacgtgg	tgcagctgct	gtagcaacgg	ctccagaagg	tacttacatg	5040
gcggccgtt c	ggagagccgc	tttgactgga	cggactttga	tcttcacacc	atetgeagte	5100
ggat ccctt c	ttgaaggtgc	tttcagaact	caaaagccct	gccttaacac	cgtgaatgtc	5160
gtaggctctt	cccttggttc	tggaggagtt	ttcaccattg	atggcagaag	agteategte	5220
actgccaccc	atgtgttgaa	tggtaacaca	gccagggt ca	etggtgatte	ctacaaccgc	5280
atgcacacgt	tcaatactaa	tggtgattat	gcctggtccc	atgetgatga	ctggcaaggc	5340
gttgccccta	tggttaagat	cgctaagggg	tatcgcggtc	gtgcctactg	gcaaacgtca	5400
accggagtcg	aacctggcat	catgggggaa	ggattcgcct	tctgtttcac	taactgtggc	5460
gact cagggt	cacctgtcat	ttcagaagct	ggtgacctta	ttggagtcca	taccggttca	5520
aacaaactcg	gtt ctggt ct	tgtgacaacc	cctgaagggg	agacctgctc	cat caaggaa	5580
actaggctct	ctgacctttc	tagacatttt	gcaggt ccaa	gcgtccctct	tggggacatt	5640
aagttgagcc	cagccatcat	ccctgatgtg	acaactattc	egagtgaett	ggcat eget c	5700
cttgcttctg	tccccgtgat	ggaaggtggc	ctctcaactg	tccagctttt	gtgcgtcttt	5760
ttccttctct	ggcgcatgat	gggccatgcc	tggacaccca	ttgttgccgt	aggettettt	5820
ttgctgaatg	aaattctccc	agcagtcttg	gtccgagctg	tgttctcttt	tgcactcttt	5880
gtacttgcat	gggccacccc	ctggt cggca	caagtgttga	tgattagact	cctcacggcg	5940
gctctcaacc	gcaacaggtt	gtccctggcg	ttctacgcac	teggaggtgt	cgttggcctg	6000
gccacagaaa	tcgggacttt	tgctggtgga	tggcctgaac	tgtcccaagc	cct ct cgaca	6060
tactgcttcc	tgcccaggtt	ccttgctgtg	actagttatg	t ccccaccat	catcatcggt	6120
gggctccatg	ccctcggcgt	aattttgtgg	ttattcaaat	accgatgcct	ccacaacatg	6180
ctggttggtg	atgggagttt	ctcaagcgct	ttcttcctac	ggtattttgc	tgagggtaat	6240
cttaggaaag	gcgtgt cgca	gtcctgtggc	atgaataacg	aat ccctgac	agctgctttg	6300

- 160 035624

gcttgcaagt	tgt cgcaagc	tgaccttgat	tttttgtcca	gtttaacgaa	ctt caagtgc	6360
tttgtgt ccg	ctt caaacat	gaaaaatgca	gctggccaat	acatcgaggc	ggcgtatgct	6420
agagctctgc	gtcaggagct	ggcct ccttg	gttcaggttg	acaagatgaa	aggagtattg	6480
gccaagctcg	aggctttcgc	tgagacggcc	actccgtcac	ttgacacagg	tgacgtgatt	6540
gttctgcttg	ggcaacaccc	ccatggatcc	atcctcgaca	ttaatgtggg	gggtgaaagg	6600
aaaactgtgt	ctgtgcaaga	aacacgatgc	ctgggtggtt	ccaaattcag	tgtctgcact	6660
gtcgtgtcca	acacgcccgt	ggataccttg	accggcat cc	cactt cagac	gccaacccca	6720
ctttttgaaa	atggcccgcg	ccatcgcagc	gaggacgacg	accttaaagt	tgagagaatg	6780
aaaaaacact	gtgtat ccct	cggcttccac	aaaatcaatg	gtaaagttta	ctgcaaaatt	6840
tgggacaagt	ctaacggcga	caccttttac	acggatgatt	cccgatacac	tcaagaccat	6900
gcttttcagg	acaggt caac	cgactataga	gacagggatt	atgaaggtgt	acagaccgcc	6960
ccccaacagg	gattcgatcc	aaagt ccgaa	gcccctgttg	gcactgttgt	aat cggtggc	7020
attacgtata	acaggcat ct	ggtcaaaggt	aaggaggt cc	tagtt cccaa	acctgacaac	7080
tgccttgaag	ctgccagact	gtcccttgag	caagctcttg	ctgggatggg	ccaaacttgt	7140
gaccttacag	ctaccgaagt	ggagaaacta	aagcgcat ca	ttagtcaact	ccaaggtctg	7200
accactgaac	aggctttaaa	ctgctagccg	ccagcggctt	gacccgctgt	ggccgcggcg	7260
gcctagttgt	aactgaaacg	gcggtaaaaa	tcgtaaaata	ccacagcaga	actttcacct	7320
taggctcttt	agacctaaaa	gt cacct ccg	aggt ggaggt	gaagaaat ca	actgagcagg	7380
ggcacgctgt	cgtggcgaac	ttatgttccg	gtgtcgtctt	gatgaggcct	cacccaccgt	7440
cccttgttga	cgttctcctc	aaacccggac	ttgacacaac	acccggcatt	caaccagggc	7500
atggggccgg	gaatatgggc	gtgaacggtt	ctatttggga	ttttgaaact	gcacccacaa	7560
aggtagaact	agagttgtcc	aagcaaataa	tccaagcatg	tgaagtcagg	cgcggggacg	7620
cccctaacct	ccaact cccc	tacaagcttt	atcctgtcag	gggggacccc	gagcggcgta	7680
aaggtcgcct	tgtcaacact	aggtttggag	atttacctta	caaaactccc	caagacacca	7740
agtccgcaat	tcatgcggct	tgttgcctgc	atcccaatgg	ggtcctcgtg	tctgatggta	7800
aatccacgct	gggtaccact	cttcaacatg	gttt cgagct	ttatgtcccc	actgtacctt	7860

- 161 035624

atagtgt cat	ggaatacctt	gattcacgcc	ctgacacccc	ttttatgtgt	actaaacatg	7920
gcacttccaa	ggctgctgca	gaggacctcc	aaaaatatga	cctatccact	caagggtttg	7980
tcttgcctgg	ggtcctacgc	ctagtgcgca	ggttcatctt	tagccatgtt	ggtaaggcgc	8040
caccactgtt	ccttccatca	acctaccctg	ccaagaactc	catggcaggg	gtcaatggcc	8100
agaggtt ccc	aacaaaggat	gtccagagca	tacctgaaat	tgatgaaatg	tgcgcccgtg	8160
ccgt caagga	aaattggcag	actgtgacac	cttgcaccct	caaaaaacag	tactgttcca	8220
aacctaaaac	tagaaccatc	ctaggtacca	acaacttcat	agccttggct	cacaggtcag	8280
cact cagtgg	tgt cacccag	gcgtt catga	agaaggcctg	gaagt cccca	attgccttgg	8340
ggaaaaacaa	gtttaaggaa	ttgcattgca	ctgt cgccgg	cagatgcctt	gaggctgacc	8400
tggcttcctg	cgatcgcagc	acccccgcca	ttgtgaggtg	gtttgttgcc	aacct cctgt	8460
atgaacttgc	aggatgtgaa	gagtacttgc	ctagctacgt	gctcaactgt	tgccatgacc	8520
ttgtggcaac	gcaggatggc	gctttcacaa	aacgcggtgg	cctgtcgtcc	ggggaccccg	8580
tcaccagtgt	gtccaacacc	gtctactcac	tgataattta	cgcccagcac	atggtgcttt	8640
cggccttgaa	gatgggtcat	gaaattggtc	tcaagttcct	tgaggaacag	ctcaaatttg	8700
aggaccttct	tgaaat ccag	cccatgttag	tgtattctga	tgacctcgtc	ttgtatgcgg	8760
aaagacccac	ttttcccaac	taccattggt	gggt cgagca	tcttgacctg	atgttgggct	8820
ttaaaacgga	cccaaagaaa	actgtcataa	ctgataaacc	cagttttctc	ggctgcagaa	8880
ttgaagcagg	acggcagtta	gtccccaatc	gcgaccgtat	tctggctgct	cttgcatatc	8940
atatgaaggc	gcagaacgcc	tcagagtatt	atgcgt ccgc	tgccgcaatt	ctgatggatt	9000
cgtgtgcttg	cattgaccat	gaccccgagt	ggtatgagga	ccttatctgc	ggcat cgccc	9060
ggtgtgctcg	ccaggacggt	taccgttttc	caggcccggc	atttttcatg	tccatgtggg	9120
agaagctgaa	aagtcataac	gaagggaaga	aatgccgt ca	ctgcggcatc	tgcgacgcca	9180
aagccgacta	tgcgtccgcc	tgtggacttg	atttgtgttt	gtt ccatt ca	cactttcatc	9240
aacactgccc	agtcactctg	agctgtggcc	accatgccgg	ttcaaaggaa	tgttcgcagt	9300
gtcagtcacc	tgt cggggct	ggcaaat ccc	cccttgacgc	tgtgctgaaa	caaat cccgt	9360
acaaacctcc	tcgtaccatt	atcatgaagg	tggacaacaa	aacaacgacc	cttgacccgg	9420

- 162 035624

gaagatatca	gtcccgtcga	ggtcttgttg	cagt caaaag	aggtattgea	ggtaatgagg	9480
ttgatctttc	tgatggagac	taccaagtgg	tgcctctttt	gccgacttgc	aaagacataa	9540
acatggtgaa	ggtggcttgc	aacgtactac	tcagcaagtt	tatagtaggg	ccgccaggtt	9600
ccggaaaaac	cacctggcta	ctgaaccaag	tccaggacga	tgatgtcatt	tacacaccta	9660
ctcatcagac	aatgtttgac	atagt cagtg	ctcttaaagt	ttgeaggtat	tccatcccag	9720
gagcctcagg	actccctttt	ccaccacctg	ccaggt ccgg	gccgtgggtt	aggctcatcg	9780
ccagcggaca	tgt ccctggc	cgagtgtcat	atctcgatga	ggcaggatat	tgcaatcatc	9840
tagacattct	aaggctgctt	tccaaaacac	cccttgtgtg	tttgggtgac	cttcagcaac	9900
ttcacccggt	cggctttgat	tcctattgtt	atgtgttcga	tcagatgcct	cagaagcagc	9960
tgaccaccat	ttatagattt	ggccctaaca	tctgtgcagc	cat ccagcct	tgttacaggg	10020
agaaacttga	at ccaaggcc	aggaacacca	gagtggtttt	caccacccgg	cctgtggcct	10080
ttggtcaggt	cctgacaccg	taccacaaag	atcgtaccgg	ctctgcaata	actatagatt	10140
catcccaggg	ggcgaccttc	gacattgtga	cattgcatct	accat cgcca	aagtccctaa	10200
acaaatcccg	agcacttgta	gccatcactc	gggcaagaca	tgggttgttc	atttatgacc	10260
ctcatgacca	act ccaggag	tttttcaact	taacccccga	gcgcactgat	tgtaaccttg	10320
cgtt cagccg	tggggatgag	ctggttgttt	tgaatgtgga	taatgeggte	acaactgtag	10380
cgaaggccct	agagacaggt	tcaccccgat	ttcgagtatc	ggacccgagg	tgcaagtctc	10440
tcttagccgc	ttgttcggcc	agtctagaag	ggagctgcat	gccactacca	caagtagcac	10500
ataacctggg	gttttacttt	t ccccggaca	gcccagcttt	tgcacccctg	ccaaaagagc	10560
tggcgccaca	ttggccagtg	gtcacccacc	agaataat eg	agcgtggcct	gategaettg	10620
tcgctagtat	gcgcccaatt	gatgcccgct	acagcaagcc	aatggtcggt	gcagggtatg	10680
tggt cgggcc	atccattttt	cttggcactc	ctggtgtggt	gtcatactat	ctcacattat	10740
acat cggggg	cgagcctcag	gccctgccag	aaacactcgt	ttcaacagga	cgtatagcca	10800
cagattgtcg	ggaatatctc	gacgcggctg	aggaagaggc	agegagagaa	ett ccccacg	10860
catttattgg	cgatgt caaa	ggcactacgg	tcggggggtg	tcaccacatt	acatcgaaat	10920
acctacctag	gtccctgcct	aaagactctg	ttgctgtggt	tggggtgagt	tcgcccggta	10980

- 163 035624

gggctgctaa	agccgtgtgc	actctcaccg	atgtgtacct	ccccgaactc	cgaccatatt	11040
tgcaaccgga	gacggcat ca	aaatgctgga	aacttaaact	ggatttcagg	gatgttcgac	11100
tgatggtctg	gaaaggcgcc	acagcctatt	tccagttgga	agggctgaca	tggtcagcgc	11160
tgcccgatta	tgctaggttc	attcagctac	ccaaggatgc	cgttgtgtac	atcgatccgt	11220
gtatagggcc	ggcaacagcc	aatcgcaagg	ttgtgcgaac	cacagactgg	cgggccgacc	11280
tggcagtgac	accgtatgat	tacggtgctc	aggtcatttt	gacaacagcc	tggtt cgagg	11340
accttgggcc	gcagtggaag	attttggggt	tgcagccttt	cagacgaaca	tttggctttg	11400
agaacactga	agattgggca	att ct cgcac	gccgtatgaa	tgacggcaaa	gattacactg	11460
actataattg	gcattgtgta	cgagaacgcc	cacacgcaat	ttacgggcgc	gcccgtgacc	11520
atacgtatca	ttttgccctt	ggcactgaac	tgcaagtaga	gctgggcaga	ccccggctgc	11580
ctcctgagca	agtgccgtga	acgcggagtg	atgcaatggg	ttcactgtgg	agtaaaatca	11640
gtcagttgtt	cgtggatgcc	ttcactgagt	tccttgttag	tgtggttgac	attgtcatct	11700
ttctcgccat	attgtttggg	ttcactgttg	caggctggtt	attggtcttc	ctt ct cagag	11760
tggtttgctc	cgcgtttctc	cgttcgcgct	ctgccatt ca	ctctcccgaa	ctatcgaagg	11820
tcctatgagg	gcttgctacc	caactgcaga	ccggatgtcc	cacaattcgc	agttaagcac	11880
ccgttgggta	tactttggca	tatgcgagtc	tcccacctaa	ttgacgaaat	ggtctctcgc	11940
cgcatttacc	ggaccatgga	acattcgggt	caagcggcct	ggaagcaggt	tgttagtgaa	12000
gccactctca	caaaactgtc	aaggcttgac	gtagtcactc	atttccaaca	cctggccgca	12060
gtggaggctg	attcttgccg	cttccttagc	tcacgactcg	cgatgctgaa	aaaccttgcc	12120
gttggcaatg	tgagcctgga	gtacaacact	actttggacc	gcgttgagct	catctttccc	12180
acaccaggta	cgaggcccaa	gttgaccgat	tttaggcaat	ggcttatcag	cgtgcacgct	12240
tccatcttct	cct ctgtggc	ttcgtctgtt	accttgttca	cagtgctttg	gcttcgaatt	12300
ccagctctac	gctatgtttt	tggtttccat	tggcccacgg	caacacatca	ttcgaactaa	12360
ctatcaatta	cactatatgt	aagccatgcc	ctaccagt ca	agctgcccaa	caaagactcg	12420
agcctggccg	taacgtgtgg	tgcaaaatag	ggcacgacag	gtgtgaggaa	cgtgaccatg	12480
atgagttgtc	aatgtccatt	ccgtccgggt	acgacaacct	caaacttgag	ggttattatg	12540

- 164 035624

cttggctggc	ttttttgtcc	ttttcctacg	cggcccaatt	ccatccggag	ctgtt cggaa	12600
taggaaacgt	gtcgcgcgtc	tttgtggata	agcgacacca	gttcatttgc	gccgagcatg	12660
atggacaaaa	ttcaaccata	t ctgccagac	acaacatctc	cgcgtcgtat	gcggtgtatt	12720
accatcatca	aatagacggg	ggcaattggt	ttcatttgga	atggctgcga	ccattctttt	12780
cctcctggct	ggtgctcaac	atctcatggt	ttctgaggcg	ttcgcctgca	agccctgctt	12840
ctcgacgcat	ctatcagata	ttaagaccaa	cacgaccgcg	gctgccggtt	tcatggtcct	12900
tcagaacatc	aattgtttcc	aatctcacag	ggcctcaaca	gcgcaaggta	ccactcccct	12960
caggaggtcg	tcccaatgtc	gtgaagccgt	cggcattccc	cagtacatca	cgataacggc	13020
taatgtgacc	gatgaatcgt	atttgtacaa	cgcggacttg	ctgatgcttt	ccgcgtgcct	13080
tttctacgcc	tcggaaatga	gcgagaaagg	cttcaaagtc	atctttggga	atatttctgg	13140
cgttgtttcc	gcttgtgtta	atttcacaga	ttatgtggcc	catgtgaccc	aacacactca	13200
gcagcaccat	ttggtaattg	atcacattcg	gttactacac	ttcttgacac	cgtctacgat	13260
gaggtgggct	acaaccattg	cttgtttgtt	tgccattctt	ttggcggtat	gaaatgttct	13320
tgcaagttgg	ggcatttctt	gact cct cac	tcttgcttct	ggtggctttt	tttgctgtgt	13380
accggcttgt	cttggtcctt	tgtcgatggc	aacgacaaca	gctcgacatc	ccaatacata	13440
tataatttga	cgatatgcga	gctgaatggg	accgaatggt	tgt ccggt ca	ttttgattgg	13500
gcagtcgaaa	cctttgtgct	ttacccagtt	gccactcata	tcatttcact	gggttttctc	13560
acaacaagcc	atttccttga	tgcgctcggt	ctcggcgctg	tgt ccgccac	aggattcatt	13620
ggcgagcggt	atgtacttag	cagcatgtac	ggcgtttgcg	ccttcgcggc	get cgtatgt	13680
tttgtcatcc	gtgctgctaa	aaattgcatg	gcttgccgct	atgcccgcac	ccggtttacc	13740
aacttcatcg	tggacgaccg	gggaagaatc	catcgatgga	agtcttcaat	agtggtggag	13800
aaattgggca	aagctgaagt	cggtggtgac	cttgtcaaca	ttaagcatgt	tgtcctcgaa	13860
ggggttaaag	ctcaaccctt	gacgaggact	tcggctgagc	aatgggaagc	ctagacgact	13920
tttgcaacga	tcccaccgcc	gcacaaaaac	tcgtgctggc	ctttagcatc	acatatacac	13980
ccataatgat	atacgccctt	aaggtgtcac	gcggccgact	cctggggctg	ttgcacatct	14040
tgatatttct	gaattgtt cc	tttacttttg	ggtacatgac	atatgtgcat	tttcaatcca	14100

- 165 035624

ccaaccgtgt	cgcactcact	ctgggggctg	tagt cgccct	tttgtggggt	gtttacagcc	14160
tcacagagtc	atggaagttc	atcacttcca	gatgcagatt	gtgttgccta	ggccggcgat	14220
acattctggc	ccctgcccat	cacgtagaaa	gtgctgcagg	cctccattca	atcccagcgt	14280
ctggtaaccg	agcatacgct	gtgagaaagc	ccggactaac	atcagtgaac	ggcactctag	14340
tacctgggct	tcggagcctc	gtgctgggcg	gcaaacgagc	tgttaaacga	ggagtggtta	14400
acct cgt caa	gtatggccgg	taagaaccag	agccagaaga	aaagaagaaa	tgcagctccg	14460
atggggaaag	gccagccagt	caatcaactg	tgccagttgc	tgggtacaat	gataaagtcc	14520
cagcgccagc	aat ctagggg	aggacaggcc	aaaaagaaga	agcctgagaa	gccacatttt	14580
cccctagctg	ctgaagatga	cattcggcac	catctcaccc	aggccgaacg	ttccctctgc	14640
ttgcaat cga	tccagacggc	tttcaatcaa	ggcgcaggaa	ctgcgtcgct	ttcatccagc	14700
gggaaggtca	gtttccaggt	tgagttcatg	ctgccggttg	ctcatacagt	gcgcctgatt	14760
cgcgtgactt	ctacatccgc	cagtcagggt	gcaaattaat	ttgacagt ca	ggtgaatggc	14820

cgcgattgac gtgtggcctc taa

14843 <210>11 <211>2349 <212> БЕЛОК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней <400>11

Met Ser Gly Met Phe Ser Arg Cys

10

Met Cys Thr Pro Ala Ala Arg Vai 1

Phe Trp Asn Ala Gly Gin Vai Tyr

25

Cys Thr Arg Cys Leu Ser Ala Arg 30

Ser Leu Leu Ser Pro Glu Leu Gin

45

Leu Phe His Lys Pro Lys Asp Lys

60

Asp Thr Asp Leu Gly Ala Vai Gly 35

Leu His Trp Lys Vai Pro He Gly 50

- 166

Не 70

Pro

Gin

Val

Glu

Cys 75

Ser

Pro

Ser

Gly

Cys 80

Cys

Trp

Leu

Ser

Thr

65

Не

Phe

Pro

Leu

Al a

Arg

Met

Thr

Ser

Gly

Asn

Hi s

Asn

Phe

Leu

Gin

85

90

95

Arg

Leu

Val

Lys

Val

Ala

Asp

Val

Leu

Tyr

Arg

Asp

Gly

Cys

Leu

Thr

100

105

HO

Pro

Arg

His

Leu

Arg

Glu

Leu

Gin

Val

Tyr

Glu

Arg

Gly

Cys

Asn

Trp

115

120

125

Туг

Pro

He

Thr

Gly

Pro

Val

Pro

Gly

Met

Ala

Val

Tyr

Ala

Asn

Ser

130

135

140

Met

Hi s

Val

Ser

Asp

Gin

Pro

Phe

Pro

Gly

Ala

Thr

His

Val

Leu

Thr

145

150

155

160

Asn

Ser

Pro

Leu

Pro

Gin

Arg

Ala

Cys

Arg

Gin

Pro

Phe

Cys

Pro

Phe

165

170

175

Glu

Glu

Ala

His

Ser

Ser

He

Tyr

Arg

Trp

Glu

Lys

Phe

Val

He

Phe

180

185

190

Met

Asp

Ser

Ser

Ser

Asp

Gly

Arg

Ser

Arg

Met

Met

Trp

Thr

Pro

Glu

195

200

205

Ser

Asp

Asp

Ser

Thr

Ala

Leu

Glu

Val

Leu

Pro

Pro

Glu

Leu

Glu

Hi s

210

215

220

167 035624

Gin Vai Lys Vai Leu Vai Arg Ser Phe Pro Ala His His Leu Vai Asp 225

230 235240

Leu Ala Asp Trp Glu Leu Thr Glu Ser Pro Glu Asn Gly Phe Ser Phe

245 250255

Ser Thr Ser His Pro Cys Gly Tyr Leu Vai Arg Asp Pro Ala Vai Ser

260 265270

Glu Gly Lys Cys Trp Leu Ser Cys Phe Leu Ser Gin Ser Ala Glu Vai275

280285

Leu Ser Arg Glu Ala His Leu Ala Thr Ala Tyr Gly Tyr Gin Thr Lys 290 295300

Trp Gly Vai Pro Gly Lys Tyr He Gin Arg Arg Leu Gin Vai His Gly 305

310 315320

Leu Arg Ala Vai Vai Asp Pro Asp Gly Pro lie His Vai Glu Ala Leu

325 330335

Ser Cys Pro Gin Ser Trp lie Arg His Leu Thr Leu Asn Asp Asp Vai

340 345350

Thr Pro Gly Phe Vai Arg Leu Met Ser Leu Arg lie Vai Pro Asn Thr355

360365

Glu Pro Thr Thr His Arg He Phe Arg Phe Gly Vai His Lys Trp Tyr 370 375380

- 168 035624

Gly Ala Ala Gly Lys Arg Ala Arg Gly Lys Arg Ala Ala Lys Ser Glu 385

390 395400

Lys Asp Ser Ala Ser Thr Leu Lys Val Ala Arg Pro Thr Ser Thr Ser

405 410415

Gly He Val Thr Tyr Ser Pro Pro Ala Asp Gly Ser Cys Gly Trp His

420 425430

Ala Leu Ala Ala lie Leu Asn Arg Met lie Asn Asn Asp Phe Thr Ser435

440445

Pro Leu Pro Arg Tyr Asn Arg Pro Glu Asp Asp Trp Ala Ser Asp Gly 450

455460

Asp Leu Ala Gin Ala lie Gin Cys Leu Gin Leu Pro Ala Ala lie Ala 465

470 475480

Arg Asn Arg Ala Cys Pro Asn Ala Lys Tyr Leu Val Lys Leu Asn Gly

485 490495

Val His Trp Glu Val Glu Val Arg Pro Gly Met Ala Pro Arg Ser Leu

500 505510

Ser Arg Glu Cys Val Val Gly Val Cys Ser Glu Gly Cys Val Ala Ser515

520525

Pro Tyr Pro Glu Asp Gly Leu Pro Lys Arg Ala Leu Glu Ala Leu Ala 530

535540

Ser Ala Tyr Arg Leu Pro Ser Asp Cys Val Cys Asp Gly lie lie Asp 545

550 555560

169 035624

Phe Leu Ala Asn Pro Pro Pro Gin Glu Phe Trp Thr Leu Asp Lys Met

565 570575

Leu Thr Ser Pro Ser Pro Glu Gin Ser Gly Phe Ser Ser Leu Tyr Lys

580 585590

Leu Leu Leu Glu Vai Leu Pro Gin Lys Cys Gly Ser Thr Glu Gly Glu595

600605

Phe He Tyr Thr Vai Glu Arg Met Leu Lys Asp Cys Pro Ser Ser Lys 610 615620

Gin Ala Met Ala Leu Leu Ala Lys lie Lys Vai Pro Ser Ser Lys Ala 625

630 635640

Pro Ser Vai Thr Leu Asn Glu Cys Phe Pro Thr Asp Vai Pro Vai Asn

645 650655

Ser Glu Leu lie Ser Trp Glu Glu Pro Lys Asp Pro Gly Ala Ala Vai

660 665670

Vai Leu Cys Pro Ser Asp Ala Lys Glu Ser Lys Glu Thr Ala Pro Glu675

680685

Glu Ala Gin Ala Arg Asn Arg Lys Vai Leu His Pro Vai Vai Leu Thr 690 695700

Glu Glu Leu Ser Glu Gin Gin Vai Gin Vai Vai Glu Gly Asp Gin Asp 705

710 715720

- 170 035624

Met Pro Leu Asp Leu Thr Trp Pro Thr Leu Thr Ala Thr Ala Thr Pro

725 730735

Vai Arg Gly Pro Vai Pro Asp Asn Leu Ser Ser Gly He Gly Ala Gin

740 745750

Pro Ala Thr Vai Gin Glu Leu lie Leu Ala Arg Pro Ala Pro Arg Leu755

760765

Vai Glu Arg Cys Gly Thr Glu Ser Asn Gly Ser Ser Ser Phe Leu Asp 770

775780

Leu Pro Asp Vai Gin Thr Ser Asp Gin Pro Leu Asp Leu Ser Leu Ala 785

790 795800

Ala Trp Pro Vai Arg Ala Thr Ala Ser Asp Pro Gly Trp He His Gly

805 810815

Arg Arg Glu Pro Vai Phe Vai Lys Pro Arg Gly Vai Phe Ser Asp Gly

820 825830

Glu Ser Ala Leu Gin Phe Gly Glu Leu Ser Glu Ala Ser Ser Vai Vai835

840845

Asp Asp Arg Thr Lys Glu Ala Pro Vai Vai Asp Ala Pro lie Asp Leu 850 855860

Thr Thr Ser Asn Glu Thr Leu Ser Gly Ser Asp Pro Phe Glu Phe Ala 865

870 875880

- 171 035624

Lys Phe Arg Arg Pro Arg Phe Ser Ala

885 890

Gly Pro Leu Ala Asp Vai His Ala Lys

900 905

Gin Ala Leu lie Asp Arg Gly 895 lie Lys Ser Arg Vai Tyr Glu 910

Gin Cys Leu Gin Ala Cys Glu Pro Gly

920 925

Ser Arg Ala Thr Pro Ala Thr 915

Lys Lys Trp Leu Asp Lys Met Trp Asp

935 940

Arg Vai Asp Met Lys Thr Trp 930

Arg Cys Thr Ser Gin Phe Gin Ala Gly

950 955

His lie Leu Glu Ser Leu Lys 945

960

Phe Leu Pro Asp Met He Gin Asp Thr

965970

Asn Arg Ala Gly Asp Ser Ala Gly Leu

980985

Pro Pro Pro Vai Pro Arg Lys

975

Lys Gin Leu Vai Ala Gin Trp

990

Asp Arg Lys Leu Ser Vai Thr Pro Pro Thr Lys Pro Vai Gly Pro Vai995

10001005

Leu 1015

Asp

Gin

Thr

Vai

Pro Leu 1020

Pro

Met

Asp

He

Gin

Gin

Glu

Asp

1010

Ala 1030

He

Ser

Al a

Asp

Lys Pro 1035

Pro

His

Ser

Gin

Asn

Pro

Ser

Ser

1025

Gin

Vai

Asp

Vai

Gly

Gly Gly

Trp

Lys

Ser

Phe

Met

Leu

Ser

Gly

1040

1045 1050

- 172 035624

Thr Arg Phe Ala Gly Ser Vai Ser Gin Arg Leu Thr Thr Trp Vai 1055

1060 1065

Phe Glu Vai Leu Ser His Leu Pro Ala Phe Met Leu Thr Leu Phe 1070

10751080

Ser Pro Arg Gly Ser Met Ala Pro Gly Asp Trp Leu Phe Ala Gly 1085 10901095

Ala Vai Leu Leu Ala Leu Leu Leu Cys Arg Ser Tyr Pro He Leu 1100

11051110

Gly Cys Leu Pro Leu Leu Gly Vai Phe Ser Gly Ser Vai Arg Cys 1115

11201125

Vai Arg Leu Gly Vai Phe Gly Ser Trp Met Ala Phe Ala Vai Phe 1130

11351140

Leu Phe Ser Thr Pro Pro Asp Pro Vai Gly Ser Ser Cys Asp His 1145

11501155

Asp Ser Pro Glu Cys His Ala Glu Leu Leu Ala Leu Glu Gin Arg 1160

11651170

Gin Leu Trp Glu Pro Vai Arg Ser Leu Vai Vai Gly Pro Ser Gly 1175

11801185

Leu Leu Cys Vai lie Leu Gly Lys Leu Leu Gly Gly Ser Arg Cys 1190

11951200

- 173 035624

Leu Trp Phe Val Leu Leu Arg He Cys Met Leu Ala Asp Leu Ala 1205

1210 1215 lie Ser Leu lie Tyr Val Val Ser Gin Gly Arg Cys His Lys Cys 1220

12251230

Trp Gly Lys Cys lie Arg Thr Ala Pro Ala Glu Val Thr Leu Asn 1235 12401245

Val Phe Pro Phe Ser Arg Ala Thr Arg Ser Ser Leu Val Ser Leu 1250

12551260

Cys Asp Arg Phe Gin Ala Pro Lys Gly Val Asp Pro Val His Leu 1265

12701275

Ala Thr Gly Trp Arg Gly Cys Trp Cys Gly Glu Ser Pro lie His 1280 12851290

Gin Ser His Gin Lys Pro lie Ala Tyr Ala Asn Leu Asp Glu Lys1295

13001305

Lys lie Ser Ala Gin Thr Val lie Ala Val Pro Tyr Asp Pro Ser 1310 13151320

Gin Ala lie Lys Cys Leu Lys Val Leu Gin Ala Gly Gly Ala lie 1325 13301335

Val Asp Gin Pro Thr Pro Glu Val Val Arg Val Ser Glu lie Pro 1340

13451350

- 174 035624

Phe Ser Ala Pro Phe Phe Pro Lys Val Pro Val Asn Pro Asp Cys 1355

1360 1365

Arg Val Val Val Asp Ser Asp Thr Phe Val Ala Ala Val Arg Cys 1370

13751380

Gly Tyr Ser Thr Ala Gin Leu Val Leu Gly Arg Gly Asn Phe Ala 1385 13901395

Lys Leu Asn Gin Thr Pro Leu Arg Asn Ser Val Pro Thr Lys Thr 1400 14051410

Thr Gly Gly Ala Ser Tyr Thr Leu Ala Val Ala Gin Val Ser Val 1415 14201425

Trp Thr Leu Val His Phe He Leu Gly Leu Trp Leu Thr Ser Pro 1430 14351440

Gin Val Cys Gly Arg Gly Thr Ser Asp Pro Trp Cys Ser Asn Pro 1445 14501455

Phe Ser Tyr Pro Thr Tyr Gly Pro Gly Val Val Cys Ser Ser Arg 1460 14651470

Leu Cys Val Ser Ala Asp Gly Val Thr Leu Pro Leu Phe Ser Ala 1475 14801485

Val Ala His Leu Ser Gly Arg Glu Val Gly lie Phe lie Leu Val 1490

14951500

Leu Ala Ser Leu Gly Ala Leu Ala His Arg Leu Ala Leu Lys Ala 1505 15101515

- 175

Asp Met Ser Met Vai Phe Leu Ala Phe Cys Ala Tyr Ala Trp Pro 1520

1525 1530

Met Ser Ser Trp Leu He Cys Phe Phe Pro Met Leu Leu Arg Trp 1535 15401545

Vai Thr Leu His Pro Leu Thr Met Leu Trp Vai His Ser Phe Leu 1550

15551560

Vai Phe Cys Leu Pro Ala Ala Gly Vai Leu Ser Leu Gly lie Thr 1565 15701575

Gly Leu Leu Trp Ala Vai Gly Arg Phe Thr Gin Vai Ala Gly lie 1580 15851590

He Thr Pro Tyr Asp He His Gin Tyr Thr Ser Gly Pro Arg Gly 1595 16001605

Ala Ala Ala Vai Ala Thr Ala Pro Glu Gly Thr Tyr Met Ala Ala 1610

16151620

Vai Arg Arg Ala Ala Leu Thr Gly Arg Thr Leu He Phe Thr Pro 1625 16301635

Ser Ala Vai Gly Ser Leu Leu Glu Gly Ala Phe Arg Thr Gin Lys 1640 16451650

Pro Cys Leu Asn Thr Vai Asn Vai Vai Gly Ser Ser Leu Gly Ser 1655 16601665

- 176 035624

Gly Gly Val Phe Thr He Asp Gly Arg Arg Val lie Val Thr Ala 1670

1675 1680

Thr His Val Leu Asn Gly Asn Thr Ala Arg Val Thr Gly Asp Ser 1685 16901695

Tyr Asn Arg Met His Thr Phe Asn Thr Asn Gly Asp Tyr Ala Trp 1700 17051710

Ser His Ala Asp Asp Trp Gin Gly Val Ala Pro Met Val Lys lie 1715 17201725

Ala Lys Gly Tyr Arg Gly Arg Ala Tyr Trp Gin Thr Ser Thr Gly 1730 17351740

Val Glu Pro Gly lie Met Gly Glu Gly Phe Ala Phe Cys Phe Thr 1745 17501755

Asn Cys Gly Asp Ser Gly Ser Pro Val lie Ser Glu Ala Gly Asp 1760

17651770

Leu lie Gly Val His Thr Gly Ser Asn Lys Leu Gly Ser Gly Leu 1775 17801785

Val Thr Thr Pro Glu Gly Glu Thr Cys Ser He Lys Glu Thr Arg 1790

17951800

Leu Ser Asp Leu Ser Arg His Phe Ala Gly Pro Ser Val Pro Leu 1805 18101815

- 177 035624

Gly Asp 1825

He

Lys

Leu

Ser Pro 1830

Ala

He

He

Pro

Asp

Vai

Thr

Thr

1820

He Pro 1840

Ser

Asp

Leu

Al a Ser 1845

Leu

Leu

Al a

Ser

Vai

Pro

Vai

Met

1835

Glu Gly 1855

Gly

Leu

Ser

Thr Vai 1860

Gin

Leu

Leu

Cys

Vai

Phe

Phe

Leu

1850

Leu Trp 1870

Arg

Met

Met

Gly His 1875

Ala

Trp

Thr

Pro

He

Vai

Ala

Vai

1865

Gly Phe 1885

Phe

Leu

Leu

Asn Glu 1890

He

Leu

Pro

Al a

Vai

Leu

Vai

Arg

1880

Ala Vai 1900

Phe

Ser

Phe

Ala Leu 1905

Phe

Vai

Leu

Al a

Trp

Ala

Thr

Pro

1895

Trp Ser 1915

Ala

Gin

Vai

Leu Met 1920

He

Arg

Leu

Leu

Thr

Ala

Ala

Leu

1910

Asn Arg 1930

Asn

Arg

Leu

Ser Leu 1935

Ala

Phe

Tyr

Al a

Leu

Gly

Gly

Vai

1925

Vai Gly 1945

Leu

Al a

Thr

Glu He 1950

Gly

Thr

Phe

Al a

Gly

Gly

Trp

Pro

1940

Glu Leu 1960

Ser

Gin

Ala

Leu Ser 1965

Thr

Tyr

Cys

Phe

Leu

Pro

Arg

Phe

1955

Leu Ala 1975

Vai

Thr

Ser

Tyr Vai 1980

Pro

Thr

He

He

He

Gly

Gly

Leu

1970

- 178

His Ala

Leu

Gly

Vai

He Leu

Trp

Leu

Phe

Lys

Tyr

Arg

Cys

Leu

1985

1990

1995

His Asn

Met

Leu

Vai

Gly Asp

Gly

Phe

Ala

Phe

Phe

2000

2005

2010

Leu Arg

2020

Tyr

Phe

Ala

Glu Gly 2025

Asn

Leu

Arg

Lys

Gly

Vai

Gin

2015

Gly

Met

Asn

Asn Glu

Leu

Thr

Al a

Ala

Leu

Ala

Cys

2030

2035

2040

Lys Leu 2050

Gin

Ala

Asp Leu 2055

Asp

Phe

Leu

Leu

Thr

Asn

2045

Phe Lys 2065

Cys

Phe

Vai

Ser Al a

2070

Asn

Met

Lys

Asn

Ala

Ala

Gly

2060

Gin Tyr 2080

He

Glu

Ala

Ala Tyr 2085

Ala

Arg

Al a

Leu

Arg

Gin

Glu

Leu

2075

Al a Ser

Leu

Vai

Gin

2095

Vai Asp 2100

Lys

Met

Lys

Gly

Vai

Leu

Ala

Lys

2090

Leu Glu

Ala

Phe

Ala

Glu Thr

Ala

Thr

Leu

Asp

Thr

Gly

2105

2110

2115

Asp Vai 2125

He

Vai

Leu

Leu Gly 2130

Gin

Hi s

Gly

He

Leu

2120

- 179

Asp He Asn Vai Gly Gly Glu Arg Lys Thr Vai Ser Vai Gin Glu 2135

2140 2145

Thr Arg Cys Leu Gly Gly Ser Lys Phe Ser Vai Cys Thr Vai Vai 2150 21552160

Ser Asn Thr Pro Vai Asp Thr Leu Thr Gly He Pro Leu Gin Thr 2165 21702175

Pro Thr Pro Leu Phe Glu Asn Gly Pro Arg His Arg Ser Glu Asp 2180 21852190

Asp Asp Leu Lys Vai Glu Arg Met Lys Lys His Cys Vai Ser Leu 2195

22002205

Gly Phe His Lys lie Asn Gly Lys Vai Tyr Cys Lys lie Trp Asp 2210 22152220

Lys Ser Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Thr Asp Asp Ser Arg Tyr Thr 2225 22302235

Gin Asp His Ala Phe Gin Asp Arg Ser Thr Asp Tyr Arg Asp Arg 2240 22452250

Asp Tyr Glu Gly Vai Gin Thr Ala Pro Gin Gin Gly Phe Asp Pro 2255

22602265

Lys Ser Glu Ala Pro Vai Gly Thr Vai Vai lie Gly Gly lie Thr 2270

22752280

- 180 035624

Tyr Asn

2290

Arg His Leu Val Lys

2295

Gly Lys Glu Val Leu

Val Pro Lys

2285

Pro Asp 2305

Asn Cys Leu Glu Ala

2310

Ala Arg Leu Ser Leu

Glu Gin Ala

2300

Leu Ala

2320

Gly Met Gly Gin Thr

2325

Cys Asp Leu Thr Ala

Thr Glu Val

2315

Glu Lys 2335

Leu Lys Arg He lie

2340

Ser Gin Leu Gin Gly

Leu Thr Thr

2330

Glu Gin

Ala Leu Asn Cys

2345 <210>12 <211>1463 <212> БЕЛОК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней <400>12

Thr Gly Phe Lys Leu Leu Ala Ala Ser Gly Leu Thr Arg Cys Gly Arg 1

1015

Gly Gly Leu Val Val Thr Glu Thr Ala Val Lys lie Val Lys Tyr His

2530

Ser Arg Thr Phe Thr Leu Gly Ser Leu Asp Leu Lys Val Thr Ser Glu35

4045

Val Glu Val Lys Lys Ser Thr Glu Gin Gly His Ala Val Val Ala Asn 50

5560

- 181 035624

Leu Cys Ser Gly Vai Vai Leu Met Arg Pro His Pro Pro Ser Leu Vai 65

7580

Asp Vai Leu Leu Lys Pro Gly Leu Asp Thr Thr Pro Gly He Gin Pro 85 9095

Gly His Gly Ala Gly Asn Met Gly Vai Asn Gly Ser lie Trp Asp Phe

100 105110

Glu Thr Ala Pro Thr Lys Vai Glu Leu Glu Leu Ser Lys Gin lie lie115

120125

Gin Ala Cys Glu Vai Arg Arg Gly Asp Ala Pro Asn Leu Gin Leu Pro 130 135140

Tyr Lys Leu Tyr Pro Vai Arg Gly Asp Pro Glu Arg Arg Lys Gly Arg 145

150 155160

Leu Vai Asn Thr Arg Phe Gly Asp Leu Pro Tyr Lys Thr Pro Gin Asp

165 170175

Thr Lys Ser Ala lie His Ala Ala Cys Cys Leu His Pro Asn Gly Vai

180 185190

Leu Vai Ser Asp Gly Lys Ser Thr Leu Gly Thr Thr Leu Gin His Gly195

200205

Phe Glu Leu Tyr Vai Pro Thr Vai Pro Tyr Ser Vai Met Glu Tyr Leu 210 215220

Asp Ser Arg Pro Asp Thr Pro Phe Met Cys Thr Lys His Gly Thr Ser 225

230 235240

- 182 035624

Lys Ala Ala Ala Glu Asp Leu Gin Lys Tyr Asp Leu Ser Thr Gin Gly

245 250255

Phe Val Leu Pro Gly Val Leu Arg Leu Val Arg Arg Phe He Phe Ser

260 265270

His Val Gly Lys Ala Pro Pro Leu Phe Leu Pro Ser Thr Tyr Pro Ala275

280285

Lys Asn Ser Met Ala Gly Val Asn Gly Gin Arg Phe Pro Thr Lys Asp 290

295300

Val Gin Ser lie Pro Glu lie Asp Glu Met Cys Ala Arg Ala Val Lys 305

310 315320

Glu Asn Trp Gin Thr Val Thr Pro Cys Thr Leu Lys Lys Gin Tyr Cys

325 330335

Ser Lys Pro Lys Thr Arg Thr lie Leu Gly Thr Asn Asn Phe lie Ala

340 345350

Leu Ala His Arg Ser Ala Leu Ser Gly Val Thr Gin Ala Phe Met Lys355

360365

Lys Ala Trp Lys Ser Pro lie Ala Leu Gly Lys Asn Lys Phe Lys Glu 370 375380

Leu His Cys Thr Val Ala Gly Arg Cys Leu Glu Ala Asp Leu Ala Ser 385

390 395400

- 183 035624

Cys Asp Arg Ser Thr Pro Ala He Val Arg Trp Phe Val Ala Asn Leu

405 410415

Leu Tyr Glu Leu Ala Gly Cys Glu Glu Tyr Leu Pro Ser Tyr Val Leu

420 425430

Asn Cys Cys His Asp Leu Val Ala Thr Gin Asp Gly Ala Phe Thr Lys435

440445

Arg Gly Gly Leu Ser Ser Gly Asp Pro Val Thr Ser Val Ser Asn Thr 450 455460

Val Tyr Ser Leu lie lie Tyr Ala Gin His Met Val Leu Ser Ala Leu 465

470 475480

Lys Met Gly His Glu lie Gly Leu Lys Phe Leu Glu Glu Gin Leu Lys

485 490495

Phe Glu Asp Leu Leu Glu lie Gin Pro Met Leu Val Tyr Ser Asp Asp

500 505510

Leu Val Leu Tyr Ala Glu Arg Pro Thr Phe Pro Asn Tyr His Trp Trp515

520525

Val Glu His Leu Asp Leu Met Leu Gly Phe Lys Thr Asp Pro Lys Lys 530

535540

Thr Val lie Thr Asp Lys Pro Ser Phe Leu Gly Cys Arg lie Glu Ala 545

550

560

184 035624

Gly 5 65

Arg

Gin

Leu

Vai

Pro 570

Asn

Arg

Asp

Arg

He 575

Leu

Al a

Ala

Leu

Ala

Туг

Hi s

Met

Lys

Al a

Gin

Asn

Ala

Ser

Glu

Tyr

Tyr

Ala

Ser

Al a

Ala

580

585

590

Ala

He

Leu

Met

Asp

Ser

Cys

Ala

Cys

He

Asp

Hi s

Asp

Pro

Glu

Trp 595

600

605

Туг

Glu

Asp

Leu

He

Cys

Gly

He

Ala

Arg

Cys

Ala

Arg

Gin

Asp

Gly 610

615

620

Туг

Arg

Phe

Pro

Gly

Pro

Ala

Phe

Phe

Met

Ser

Met

Trp

Glu

Lys

Leu 625

630

635

640

Lys

Ser

His

Asn

Glu

Gly

Lys

Lys

Cys

Arg

Hi s

Cys

Gly

He

Cys

Asp

645

650

65 5

Ala

Lys

Ala

Asp

Tyr

Ala

Ser

Ala

Cys

Gly

Leu

Asp

Leu

Cys

Leu

Phe

660

665

670

Hi s

Ser

His

Phe

Hi s

Gin

Hi s

Cys

Pro

Vai

Thr

Leu

Ser

Cys

Gly

His 675

680

685

Hi s

Ala

Gly

Ser

Lys

Glu

Cys

Ser

Gin

Cys

Gin

Ser

Pro

Vai

Gly

Ala 690

695

700

Gly

Lys

Ser

Pro

Leu

Asp

Ala

Vai

Leu

Lys

Gin

He

Pro

Tyr

Lys

Pro 705

710

715

720

Pro

Arg

Thr

He

He

Met

Lys

Vai

Asp

Asn

Lys

Thr

Thr

Thr

Leu

Asp

725

730

735

- 185 035624

Pro Gly Arg Tyr Gin Ser Arg Arg Gly Leu Val Ala Val Lys Arg Gly

740 745750

He Ala Gly Asn Glu Val Asp Leu Ser Asp Gly Asp Tyr Gin Val Val755

760765

Pro Leu Leu Pro Thr Cys Lys Asp lie Asn Met Val Lys Val Ala Cys 770

775780

Asn Val Leu Leu Ser Lys Phe lie Val Gly Pro Pro Gly Ser Gly Lys 785

790 795800

Thr Thr Trp Leu Leu Asn Gin Val Gin Asp Asp Asp Val He Tyr Thr

805 810815

Pro Thr His Gin Thr Met Phe Asp lie Val Ser Ala Leu Lys Val Cys

820 825830

Arg Tyr Ser He Pro Gly Ala Ser Gly Leu Pro Phe Pro Pro Pro Ala835

840845

Arg Ser Gly Pro Trp Val Arg Leu lie Ala Ser Gly His Val Pro Gly 850 855860

Arg Val Ser Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Tyr Cys Asn His Leu Asp lie 865

870 875880

Leu Arg Leu Leu Ser Lys Thr Pro Leu Val Cys Leu Gly Asp Leu Gin

885 890895

- 186 035624

Gin

Leu

Vai

Gly

Phe

Asp

Tyr

Cys

Tyr

Vai

Phe

Asp

Gin

900

905

910

Met

Gin

Lys

Gin

Leu

Thr

Thr

He

Tyr

Arg

Phe

Gly

Asn

He

915

920

925

Cys

Ala

Ala lie

Gin

Cys

Tyr

Arg

Glu

Lys

Leu

Glu

Lys

Ala

930

935

940

Arg

Asn

Thr

Arg

Vai

Vai

Phe

Thr

Thr

Arg

Vai

Ala

Phe

Gly

Gin 945

950

955

960

Vai

Leu

Thr

Tyr

Hi s

Lys

Asp

Arg

Thr

Gly

Ala

He

Thr

He

965

970

975

Asp

Gin

Gly

Ala

Thr

Phe

Asp

He

Vai

Thr

Hi s

Leu

980

985

990

Lys

Leu

Asn

Lys

Arg Ala Leu Vai Ala lie Thr Arg

995

1000

1005

Ala Arg

Hi s

Gly

Phe lie

Tyr

Asp

Hi s

Asp

Gin

Leu

Gin

1010

1015

1020

Glu Phe

Phe

Asn

Glu

Arg

Thr

Asp

Cys

Asn

Leu

Ala

1025

1030

1035

Arg

Gly

Asp

Glu Leu

Vai

Vai

Leu

Asn

Vai

Asp

Asn

Ala

1040

1045

1050

- 187 035624

Val Thr 1060

Thr

Val

Ala

Lys Ala 1065

Leu

Glu

Thr

Gly

Ser

Pro

Arg

Phe

1055

Arg Val 1075

Ser

Asp

Pro

Arg Cys 1080

Lys

Ser

Leu

Leu

Ala

Ala

Cys

Ser

1070

Ala Ser 1090

Leu

Glu

Gly

Ser Cys 1095

Met

Pro

Leu

Pro

Gin

Val

Ala

Hi s

1085

Asn Leu 1105

Gly

Phe

Tyr

Phe Ser 1110

Pro

Asp

Ser

Pro

Ala

Phe

Ala

Pro

1100

Leu Pro 1120

Lys

Glu

Leu

Ala Pro 1125

Hi s

Trp

Pro

Val

Val

Thr

Hi s

Gin

1115

Asn Asn 1135

Arg

Al a

Trp

Pro Asp 1140

Arg

Leu

Val

Al a

Ser

Met

Arg

Pro

1130

He Asp 1150

Ala

Arg

Tyr

Ser Lys 1155

Pro

Met

Val

Gly

Ala

Gly

Tyr

Val

1145

Val Gly 1165

Pro

Ser

lie

Phe Leu 1170

Gly

Thr

Pro

Gly

Val

Val

Ser

Tyr

1160

Tyr Leu 1180

Thr

Leu

Tyr

He Gly 1185

Gly

Glu

Pro

Gin

Ala

Leu

Pro

Glu

1175

Thr Leu 1195

Val

Ser

Thr

Gly Arg 1200

He

Ala

Thr

Asp

Cys

Arg

Glu

Tyr

1190

Leu Asp 1210

Ala

Al a

Glu

Glu Glu 1215

Ala

Ala

Arg

Glu

Leu

Pro

Hi s

Ala

1205

- 188 035624

Phe He Gly Asp Val Lys Gly Thr Thr Val Gly Gly Cys His His 1220

1225 1230 lie Thr Ser Lys Tyr Leu Pro Arg Ser Leu Pro Lys Asp Ser Val 1235 12401245

Ala Val Val Gly Val Ser Ser Pro Gly Arg Ala Ala Lys Ala Val 1250

12551260

Cys Thr Leu Thr Asp Val Tyr Leu Pro Glu Leu Arg Pro Tyr Leu 1265 12701275

Gin Pro Glu Thr Ala Ser Lys Cys Trp Lys Leu Lys Leu Asp Phe 1280 12851290

Arg Asp Val Arg Leu Met Val Trp Lys Gly Ala Thr Ala Tyr Phe 1295 13001305

Gin Leu Glu Gly Leu Thr Trp Ser Ala Leu Pro Asp Tyr Ala Arg 1310 13151320

Phe lie Gin Leu Pro Lys Asp Ala Val Val Tyr lie Asp Pro Cys 1325 13301335

He Gly Pro Ala Thr Ala Asn Arg Lys Val Val Arg Thr Thr Asp 1340 13451350

Trp Arg Ala Asp Leu Ala Val Thr Pro Tyr Asp Tyr Gly Ala Gin 1355 13601365

- 189 035624

Val He Leu Thr Thr Ala Trp Phe Glu Asp Leu Gly Pro Gin Trp 1370

13751380

Lys He Leu Gly Leu Gin Pro Phe Arg Arg Thr Phe Gly Phe Glu 1385 13901395

Asn Thr Glu Asp Trp Ala lie Leu Ala Arg Arg Met Asn Asp Gly 1400 14051410

Lys Asp Tyr Thr Asp Tyr Asn Trp His Cys Val Arg Glu Arg Pro 1415 14201425

His Ala He Tyr Gly Arg Ala Arg Asp His Thr Tyr His Phe Ala 1430

14351440

Leu Gly Thr Glu Leu Gin Val Glu Leu Gly Arg Pro Arg Leu Pro 1445 14501455

Pro Glu Gin Val Pro 1460 <210>13 <211>249 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC 2 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:10, расположенным между нуклеотидами 11611..12360 <400> 13

Met Gin Trp Val His Cys Gly Val Lys Ser Val Ser Cys Ser Trp Met 1 5 10 15

- 190 035624

Pro Ser Leu Ser Ser Leu Leu Val Trp Leu Thr Leu Ser Ser Phe Ser

2530

Pro Tyr Cys Leu Gly Ser Leu Leu Gin Ala Gly Tyr Trp Ser Ser Phe35

4045

Ser Glu Trp Phe Ala Pro Arg Phe Ser Val Arg Ala Leu Pro Phe Thr 50

5560

Leu Pro Asn Tyr Arg Arg Ser Tyr Glu Gly Leu Leu Pro Asn Cys Arg 65

7580

Pro Asp Val Pro Gin Phe Ala Val Lys His Pro Leu Gly He Leu Trp

9095

His Met Arg Val Ser His Leu lie Asp Glu Met Val Ser Arg Arg lie

100 105110

Tyr Arg Thr Met Glu His Ser Gly Gin Ala Ala Trp Lys Gin Val Val115

120125

Ser Glu Ala Thr Leu Thr Lys Leu Ser Arg Leu Asp Val Val Thr His 130 135140

Phe Gin His Leu Ala Ala Val Glu Ala Asp Ser Cys Arg Phe Leu Ser 145

150 155160

Ser Arg Leu Ala Met Leu Lys Asn Leu Ala Val Gly Asn Val Ser Leu

165 170175

Glu Tyr Asn Thr Thr Leu Asp Arg Val Glu Leu He Phe Pro Thr Pro

180 185190

- 191

Gly Thr Arg Pro Lys

Leu

Thr Asp Phe Arg Gin Trp

Leu

He

Ser Vai

195

200

205

His Ala Ser lie Phe

Ser Vai Ala Ser Ser Vai

Thr

Leu

Phe Thr

210

215

220

Vai Leu Trp Leu Arg lie Pro Ala Leu Arg Tyr Vai Phe Gly Phe His 225

230

235

240

Trp Pro Thr Ala Thr

Hi s

His Ser Asn

245 <210> 14 <211> 265 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC 3 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:10, расположенным между нуклеотидами 12219..13016 <400>14

Met Ala Туг Gin Arg Ala Arg Phe His Leu Leu Leu Cys Gly Phe Vai 1 5 1015

Cys Tyr Leu Vai His Ser Ala Leu Ala Ser Asn Ser Ser Ser Thr Leu

2530

Cys Phe Trp Phe Pro Leu Ala His Gly Asn Thr Ser Phe Glu Leu Thr35

4045

He Asn Tyr Thr He Cys Lys Pro Cys Pro Thr Ser Gin Ala Ala Gin 50

5560

- 192 035624

Gin Arg Leu Glu Pro Gly Arg Asn Val Trp Cys Lys He Gly His Asp 65

7580

Arg Cys Glu Glu Arg Asp His Asp Glu Leu Ser Met Ser lie Pro Ser 85 9095

Gly Tyr Asp Asn Leu Lys Leu Glu Gly Tyr Tyr Ala Trp Leu Ala Phe

100 105HO

Leu Ser Phe Ser Tyr Ala Ala Gin Phe His Pro Glu Leu Phe Gly lie115

120125

Gly Asn Val Ser Arg Val Phe Val Asp Lys Arg His Gin Phe He Cys 130 135140

Ala Glu His Asp Gly Gin Asn Ser Thr lie Ser Ala Arg His Asn lie 145

150 155160

Ser Ala Ser Tyr Ala Val Tyr Tyr His His Gin lie Asp Gly Gly Asn

165 170175

Trp Phe His Leu Glu Trp Leu Arg Pro Phe Phe Ser Ser Trp Leu Val

180 185190

Leu Asn lie Ser Trp Phe Leu Arg Arg Ser Pro Ala Ser Pro Ala Ser195

200205

Arg Arg He Tyr Gin He Leu Arg Pro Thr Arg Pro Arg Leu Pro Val 210 215220

- 193 035624

Ser Trp Ser Phe Arg 230

Thr

235

Ser

He Val Ser Asn Leu Thr Gly Pro Gin 225

240

Gin Arg Lys Val Pro 245

Leu

250

Pro

Ser Gly Gly Arg Pro Asn Val Val Lys

255

Pro Ser Ala Phe Pro

Ser

Thr

Ser Arg

260

265 <210> 15 <211> 183 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC 4 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:10, расположенным между нуклеотидами 12761..13312 <400>15

Met Ala Ala Thr lie Leu Phe Leu Leu Ala Gly Ala Gin His Leu Met 1 5 1015

Val Ser Glu Ala Phe Ala Cys Lys Pro Cys Phe Ser Thr His Leu Ser

2530

Asp lie Lys Thr Asn Thr Thr Ala Ala Ala Gly Phe Met Val Leu Gin35

4045

Asn lie Asn Cys Phe Gin Ser His Arg Ala Ser Thr Ala Gin Gly Thr 50

5560

Thr Pro Leu Arg Arg Ser Ser Gin Cys Arg Glu Ala Val Gly lie Pro 65

7580

- 194

Gin Tyr He Thr Не Thr Ala Asn Vai Thr Asp Glu Ser Tyr Leu Tyr

9095

Asn Ala Asp Leu Leu Met Leu Ser Ala Cys Leu Phe Tyr Ala Ser Glu

100 105HO

Met Ser Glu Lys Gly Phe Lys Vai lie Phe Gly Asn lie Ser Gly Vai115

120125

Vai Ser Ala Cys Vai Asn Phe Thr Asp Tyr Vai Ala His Vai Thr Gin 130

135140

His Thr Gin Gin His His Leu Vai lie Asp His lie Arg Leu Leu His 145

150 155160

Phe Leu Thr Pro Ser Thr Met Arg Trp Ala Thr Thr He Ala Cys Leu

165 170175

Phe Ala lie Leu Leu Ala Vai180 <210>16 <211>201 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OPC 5 родительского штамма PRRSV 94881, кодируемая участком последовательности SEQ ID NO:10, расположенным между нуклеотидами 13309..13914 <400> 16

Met Lys Cys Ser Cys Lys Leu Gly His Phe Leu Thr Pro His Ser Cys 1 5 10 15

- 195 035624

Phe Trp Trp Leu Phe Leu Leu Cys Thr Gly Leu Ser Trp Ser Phe Val

2530

Asp Gly Asn Asp Asn Ser Ser Thr Ser Gin Tyr He Tyr Asn Leu Thr35

4045 lie Cys Glu Leu Asn Gly Thr Glu Trp Leu Ser Gly His Phe Asp Trp 50

5560

Ala Val Glu Thr Phe Val Leu Tyr Pro Val Ala Thr His lie lie Ser 65

7580

Leu Gly Phe Leu Thr Thr Ser His Phe Leu Asp Ala Leu Gly Leu Gly

9095

Ala Val Ser Ala Thr Gly Phe lie Gly Glu Arg Tyr Val Leu Ser Ser

100 105110

Met Tyr Gly Val Cys Ala Phe Ala Ala Leu Val Cys Phe Val lie Arg115

120125

Ala Ala Lys Asn Cys Met Ala Cys Arg Tyr Ala Arg Thr Arg Phe Thr 130 135140

Asn Phe lie Val Asp Asp Arg Gly Arg lie His Arg Trp Lys Ser Ser 145

150 155160 lie Val Val Glu Lys Leu Gly Lys Ala Glu Val Gly Gly Asp Leu Val

165 170175

Asn lie Lys His Val Val Leu Glu Gly Val Lys Ala Gin Pro Leu Thr

180 185190

- 196 035624

Arg Thr Ser Ala Glu Gin Trp Glu Ala

195

200

Met

Leu

Leu

Phe

Gin

Leu

Arg

100

Hi s

120

173

БЕЛОК

Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

Gly

Vai

Lys

Leu

Trp

Cys

Hi s

Asp

Asp 10

Phe

Cys

Asn

Asp

Thr

Al a

Ala

Gin

Lys

Vai

Asn

Thr

Gly

Arg

Vai

Ala

Phe

He

Thr

Tyr

Thr

He

Met

He

Tyr

Ala

Cys

Asn

Vai

Leu

Glu

Arg

Arg

Tyr

Cys

Gly 45

Arg

Gly

Leu

He

Leu

He

Phe

Thr

Phe

Gly

Tyr

Met

Thr

Tyr

Vai

Hi s

Phe

Vai

Ala

Leu

Thr

Cys 105

Ala

125

Leu

Thr

Glu

Leu

Gly

Arg

Arg

Ala

Gly

Hi s

Gly 80

Ala

Vai

Vai

Ala

Trp 95

Tyr 110

Lys

He

He

Phe

He

Thr

Al a

Ala

Ala

Gly

115

- 197 035624

Asn

Arg

Ala

Tyr

Al a

Val

Arg

Lys

Gly

Leu

Ser Val Asn

Gly

130

135

140

150

Val

170

Met

Met

Met

Lys 5 5

Arg

Gin

Leu

Lys

Arg

Gly

128

БЕЛОК

Gly

Val

Leu

Arg

Val

Leu

Gly

Gly Lys Arg

Ala

145

155

160

Val

Asn

Lys

Tyr

Gly

Arg

165

Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

Ala

Gly

Lys

Asn

Gin

Gin

Lys

Lys

Arg 15

Arg

Asn

Ala

Al a

Gly

Lys

Gly

Gin

Asn

Gin

Leu

He

Lys

Gin

Lys

Hi s

Ala

Glu

Lys

Phe

Asn

Cys 30

Gin

Gly

Arg 45

Gin

Gin

Phe

Gin

Ala

Glu

Arg

Gin

Gly

Ala

Gly

Arg

Gly

Gly

Gin

Ala

Lys

Lys

Leu

Ala

Ala

Glu

Asp

Asp

He

Leu

Cys

Gin

He

Ala

- 198

Gly Lys Val Ser Phe Gin Val Glu Phe Met Leu Pro Val Ala His Thr

100 105110

Val Arg Leu He Arg Val Thr Ser Thr Ser Ala Ser Gin Gly Ala Asn115

120125 <210>19 <211>7050 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид, кодирующий OPC1A ослабленного PRRSV 94881 <400> 19

atgt ctggga	tgttctcccg	gtgcatgtgc	accccggctg	cccgggtatt	ttggaacgcc	60
ggccaagtct	attgcacacg	gtgtctcagt	gcacggtctc	ttctctctcc	agaacttcag	120
gacacggacc	tcggtgcagt	tggcttgttt	cacaagccta	aagacaagct	ccattggaaa	180
gttcccattg	gtatccccca	ggtggaatgt	tctccatctg	ggtgttgctg	gctgtcaacc	240
atttttcctt	tagcgcgcat	gacct ccggc	aatcacaact	tccttcaacg	act cgtgaag	300
gttgctgatg	tattgtaccg	tgacggttgc	ttaaccccta	gacacctccg	tgaactccaa	360
gtttacgagc	gtggttgcaa	ttggtat ccg	attacggggc	ctgtgcctgg	gatggctgtg	420
tacgcgaact	ccatgcacgt	gtccgaccaa	ccgttccctg	gtgccactca	tgtgttaaca	480
aattcccctt	tgcctcaacg	ggcttgt egg	cagccgtt ct	gtccgttcga	agaggcccat	540
tctagcatat	acaggtggga	aaaatttgta	atttttatgg	attcctcctc	egaeggtega	600
tctcgcatga	tgtggactcc	ggaat ccgat	gact ccacgg	ctttggaagt	tctgccgccc	660
gagctagaac	accaggtcaa	ggtccttgtt	eggagettte	ccgcccat ca	ccttgtcgac	720
cttgccgatt	gggagctcac	tgagtcccct	gataaeggtt	tttccttcag	cacgt cacat	780
ccttgcggct	accttgtt eg	ggacccggct	gtat ccgaag	gcaagtgttg	gctttcctgc	840
tttttgagcc	agt cagccga	agtgctcagt	cgcgaggcgc	atctggctac	cgcctatggt	900
taccaaacca	agtggggtgt	gcctggcaag	tacatccagc	gcagacttca	agttcacggt	960

- 199 035624

ctccgtgctg	tggtcgaccc	tgatggtccc	attcacgttg	aagcattgtc	ttgcccccag	1020
tcttggatca	ggcacttgac	cctgaatgat	gatgtcaccc	egggattegt	tcgcctaatg	1080
tctcttcgca	ttgtgccgaa	cacagagcct	accacacacc	ggatctttcg	ttttggagtg	1140
cacaagtggt	atggtgeege	cggcaaacgg	gcccgtggca	agcgtgccgc	caaaagtgag	1200
aaagact egg	cttccaccct	caaggttgcc	cgaccgactt	ccaccagtgg	aatcgtcacc	1260
tactccccac	etgeggaegg	gtcttgtggt	tggcatgccc	ttgccgccat	actgaaccgg	1320
atgattaata	atgacttcac	gtcccctctg	cctcggtaca	acaggccgga	ggacgattgg	1380
gettetgatg	gtgaccttgc	t caggccatt	caatgtttgc	aactacctgc	cgccatagct	1440
cggaaccgcg	cctgccctaa	cgccaaatac	ctcataaaac	teaaeggagt	tcattgggag	1500
gtagaggtga	ggcctggaat	ggctcctcgc	tccctctctc	gtgagtgegt	tgttggcgtc	1560
tget etgaag	gctgtgtcgc	gtcgccttac	ccggaggacg	ggttgcctaa	aegtgeaett	1620
gaggccctgg	egtetgetta	tagactgcct	tcagactgtg	tttgtgatgg	tattattgac	1680
ttccttgcca	atccacctcc	ccaggagttc	tggactcttg	acaaaatgtt	gaett ccccg	1740
tcaccggagc	agt ccggctt	ctctagtctg	tataaattgt	tgttagagat	cttgccgcag	1800
aaatgeggat	ccacagaagg	ggaattcatc	tatactgttg	agaggatgtt	gaaggattgt	1860
ccgagct cca	aacaggccat	ggccctcctt	gcaaaaatta	aggtcccatc	ctcaaaggcc	1920
ccat ccgtga	ctctgaacga	gtgcttcccc	acggatgttc	cagtcaactc	tgagttaata	1980
tcttgggaag	agcccaaaga	ccctggcgct	gctgttgtcc	tatgtccatc	ggatgcaaaa	2040
gaat ctaagg	aaacagcccc	tgaagaaget	caagcgagaa	accgtaaggt	ccttcaccct	2100
gtggtcctta	ccgaggaact	tagcgagcaa	caggtgcagg	tggttgaggg	tgat caggat	2160
atgccactgg	atttgacttg	gccaacctta	accgctacgg	cgacccctgt	tagagggeeg	2220
gtaccggaca	atttgagctc	tggcattggt	gcccagcccg	ctaccgttca	agaactcatt	2280
etggegagge	ctgcaccccg	tcttgttgag	cgctgtggca	eggagtegaa	cggcagcagt	2340
tcatttctgg	atttgcctga	cgtgcagacc	tcggaccagc	ctttagacct	gtccctggcc	2400
gcgtggcctg	taagggctac	cgcgtctgac	cccggttgga	tccacggtag	gcgtgagcct	2460
gtctttgtga	agcctcgagg	tgttttctct	gatggegagt	cggccctt ca	gtt eggagag	2520

- 200 035624

cttt ccgaag	ccagttctgt	cgtcgatgac	cggacaaaag	aaget ccggt	ggttgacgcc	2580
cccatcgatt	tgacaacttc	gaacgagacg	ctctctgggt	ctgacccctt	tgaattegee	2640
aaattcaggc	gcccgcgttt	ctccgcgcaa	getttaateg	accgaggtgg	tccgcttgcc	2700
gatgttcatg	caaagataaa	gagtcgggta	tatgaacaat	geett caagc	ttgtgaacct	2760
ggtagtcgtg	cgaccccagc	caccaagaag	tggctcgaca	aaatgtggga	cagggtggac	2820
atgaaaactt	ggcgctgcac	ctcgcagttc	caagctggtc	acattcttga	gtccctcaaa	2880
ttcctccctg	acatgatt ca	agacacaccg	cctcctgttc	ccaggaagaa	ccgagctggt	2940
gacagtgccg	geetgaagea	actggtggcg	cagtgggata	ggaaategag	tgtgacaccc	3000
cccacaaaac	cggttggacc	ggtgcttgac	caggccgt cc	ctctgcctat	ggacatccag	3060
caaggagatg	ccatctccgc	tgacaagcca	ccccattcgc	aaaacccttc	tagteaagta	3120
gatgtgggtg	gaggttggaa	aagttttatg	ctctccggca	cccgtttcgc	ggggtccgtt	3180
agtcagcgcc	ttacgacatg	ggtttttgag	gttctctccc	atctcccagc	ttttatgctc	3240
acacttttct	cgccacgggg	ctctatggct	ccaggtgatt	ggctgtttgc	aggtgctgtt	3300
ctacttgct c	tcctgctctg	ccgttcttac	ccaatactcg	gatgccttcc	cttattgggt	3360
gtcttttctg	gttctgtgcg	gtgtgtt cgt	ttgggtgttt	ttggttcttg	gatggctttt	3420
gctgtatttt	tattctcgac	t ccacccgac	ccagtcggtt	cttcttgtga	ccacgattcg	3480
ccggagtgtc	atgetgaget	tttggctctt	gagcagcgcc	aactttggga	acctgtgcgc	3540
agccttgtgg	tcgggccatc	gggcctctta	tgegteatte	ttggcaagtt	act cggtggg	3600
tcacgttgtc	tctggtttgt	tctcctacgt	atatgeatge	tcgcagattt	ggcaatttct	3660
cttatttatg	tggtgt ccca	agggcgttgt	cacaagtgtt	ggggaaagtg	tataaggacg	3720
get cctgcag	aagtggccct	taatgtgttt	cctttttcgc	gcgccacccg	ctcatctctt	3780
gtgtccttgt	gtgatcggtt	ccaagcgcca	aaaggagttg	accccgtgca	cttggcgaca	3840
ggctggcgcg	ggtgctggtg	tggtgagagc	cctattcatc	aatcacacca	aaaaccgata	3900
gcttatgcca	acttggatga	aaagaagata	tccgcccaga	eggtgattge	tgt cccgtat	3960
gatcctagtc	aggccattaa	atgeetgaaa	gttttgcagg	caggaggggc	tattgtggac	4020
cagcctacgc	ccgaggtcgt	ccgtgtgtct	gagatt ccct	tctcggcccc	attttttccg	4080

- 201 035624

aaggtcccag	tcaacccaga	ctgcagggtt	gtggtagatt	cggacacttt	tgtggctgcg	4140
gtccgctgcg	gttattcgac	agcacaa ctg	gtccttggtc	ggggcaactt	tgccaagcta	4200
aatcagaccc	ccctcaggaa	ctctgtcccc	accaaaacaa	ctggtggggc	ctcatacacc	4260
cttgccgtgg	cccaggtatc	tgtgtggact	cttgtt catt	tcatcctcgg	cctttggtta	4320
acgt cacct c	aagtgtgtgg	t cgagggacc	tctgacccgt	ggtgttcgaa	ccctttttcg	4380
tatcctactt	atggccccgg	agttgtgtgt	tcctctcgac	tetgegtgte	tgeegaegga	4440
gttaccctgc	cattgttctc	agccgtt gcc	catctttccg	gtagagaggt	ggggattttt	4500
attttggtgc	ttgcct cctt	gggcgct tta	gcccaccgct	tggetettaa	ggcagacatg	4560
tcaatggtct	ttttggcgtt	ttgtgcttac	gcctggccca	tgagctcctg	gttaatttgc	4620
ttctttccta	tgctcttgag	gtgggtaacc	cttcatcctc	tcactatgct	ttgggtgcac	4680
tcatttttgg	tgttttgcct	accagctgcc	ggcgtt ct ct	cgctgggaat	aaccggtctt	4740
ctttgggcag	ttggccgttt	cacccaggtt	gccggaatta	tcacacctta	tgacatccac	4800
cagtatacct	ccggaccacg	tggtgcagct	gctgtagcaa	egget ccaga	aggtacttac	4860
atggcggccg	ttcggagagc	cgctttgact	ggacggactt	tgatcttcac	accat etgea	4920
gtcggatccc	ttcttgaagg	tgctttcaga	actcaaaagc	cctgccttaa	caccgtgaat	4980
gtcgtaggct	cttcccttgg	ttctggagga	gttttcacca	ttgatggcag	aagagteate	5040
gtcactgcca	cccatgtgtt	gaatggt aac	acagccaggg	tcactggtga	ttcctacaac	5100
cgcatgcaca	cgttcaatac	taatggtgat	tatgcctggt	cccatgctga	tgactggcaa	5160
ggcgttgccc	ctatggttaa	gatcgctaag	gggtatcgcg	gtcgtgccta	ctggcaaacg	5220
tcaaccggag	tcgaacctgg	catcatgggg	gaaggatt eg	ccttctgttt	cactaactgt	5280
ggcgactcag	ggtcacctgt	catttcagaa	gctggtgacc	ttattggagt	ccataccggt	5340
tcaaacaaac	tcggttctgg	t cttgtgaca	acccctgaag	gggagacctg	ctccatcaag	5400
gaaactaggc	tctctgacct	ttctagacat	tttgeaggte	caagcgtccc	tcttggggac	5460
attaagttga	gcccagccat	catccctgat	gtgacaacta	ttccgagtga	cttggcatcg	5520
ctccttgctt	ctgtccccgt	gatggaaggt	ggcctctcaa	ctgtccagct	tttgtgcgtc	5580
tttttccttc	tctggcgcat	gatgggccat	gcctggacac	ccattgttgc	egtaggette	5640

- 202 035624

tttttgctga	atgaaatt ct	cccagcagtc	ttggtccgag	ctgtgttctc	ttttgcactc	5700
tttgtacttg	catgggccac	cccctggtcg	gcacaagtgt	tgatgattag	actcctcacg	5760
gcggctctca	accgcaacag	gttgt ccctg	gcgttctacg	cattcggagg	tgt cgttggc	5820
ctggccacag	aaatcgggac	ttttgctggt	ggatggcctg	aactgtccca	agccctctcg	5880
acatactgct	tcctgcccag	gttccttgct	gtgactagtt	atgtccccac	catcatcatc	5940
ggtgggct cc	atgccctcgg	cgtaattttg	tggttattca	aataccgatg	cctccacaac	6000
atgctggttg	gtgatgggag	tttctcaagc	gctttcttcc	tacggtattt	tgctgagggt	6060
aatcttagga	aaggcgtgtc	gcagt cctgt	ggcatgaata	acgaatccct	gacagctgct	6120
ttggcttgca	agttgtcgca	agctgacctt	gattttttgt	ccagtttaac	gaacttcaag	6180
tgctttgtgt	ccgctt caaa	catgaaaaat	gcagctggcc	aatacatcga	ggcggcgtat	6240
gctagagct c	tgcgtcagga	gctggcctcc	ttggtt cagg	ttgacaagat	gaaaggagta	6300
ttggccaagc	tcgaggcttt	cgctgagacg	gccactccgt	cacttgacac	aggggacgtg	6360
attgttctgc	ttgggcaaca	cccccatgga	tccatcctcg	acattaatgt	ggggggtgaa	6420
aggaaaactg	tgt ctgtgca	agaaacacga	tgcctgggtg	gtt ccaaatt	cagtgtctgc	6480
actgtcgtgt	ccaacacgcc	cgtggatacc	ttgaccggta	tcccacttca	gacgccaacc	6540
ccactttttg	aaaatggccc	gcgccat cgc	agcgaggacg	acgacctcaa	agttgagaga	6600
atgaaaaaac	actgtgtatc	cctcggcttc	cacaaaat ca	atggtaaagt	ttactgcaaa	6660
atttgggaca	agt ctaacgg	cgacaccttt	tacacggatg	att cccgata	cactcaagac	6720
catgcttttc	aggacaggtc	aaccgactat	agagacaggg	attatgaagg	tgtacagacc	6780
gccccccaac	agggattcga	tccaaagtcc	gaagcccctg	ttggcactgt	tgtaatcggt	6840
ggcattacgt	ataacaggca	tctggtcaaa	ggtaaggagg	tcctagttcc	caaacctgac	6900
aactgccttg	aagctgccag	actgtccctt	gagcaagctc	ttgctgggat	gggccaaact	6960
tgtgacctta	cagctaccga	agtggagaaa	ctaaagcgca	tcattagtca	act ccaaggt	7020
ctgaccactg	aacaggcttt	aaactgctag				7050

<210> 20 <211> 4392

- 203 035624 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид, кодирующий ОРС1В ослабленного PRRSV 94881 <400> 20

acaggcttta	aactgctagc	cgccagcggc	ttgacccgct	gtggccgcgg	cggcctagtt	60
gtaactgaaa	cggcggtaaa	aatcgtaaaa	taccacagca	gaactttcac	cttaggctct	120
ttagacctaa	aagtcacctc	cgaggtggag	gtgaagaaat	caactgagca	ggggcacgct	180
gtcgtggcga	acttatgttc	cggtgtcgtc	ttgatgaggc	ctcacccacc	gtcccttgtt	240
gacgttctcc	tcaaacccgg	acttgacaca	acacccggca	ttcaaccagg	gcatggggcc	300
gggaatatgg	gcgtgaacgg	ttctatttgg	gattttgaaa	ctgcacccac	aaaggtagaa	360
ctagagttgt	ccaagcaaat	aatccaagca	tgtgaagt ca	ggcgcgggga	cgcccctaac	420
ctccaactcc	cctacaagct	ttatcctgtc	aggggggacc	ccgagcggcg	taaaggtcgc	480
cttgtcaaca	ctaggtttgg	agatttacct	tacaaaactc	cccaagacac	caagt ccgca	540
attcatgcgg	cttgttgcct	gcat cccaat	ggggtcctcg	tgtctgatgg	caaatccacg	600
ctgggtacca	ctcttcaaca	tggtttcgag	ctttatgtcc	ccactgtacc	ttatagtgtc	660
atggaatacc	ttgattcacg	ccctgacacc	ccttttatgt	gtactaaaca	tggcacttcc	720
aaggctgctg	cagaggacct	ccaaaaatat	gacctatcca	ctcaagggtt	tgtcttgcct	780
ggggtcctac	gcctagtgcg	caggttcatc	tttagccatg	ttggtaaggc	gccaccactg	840
ttccttccat	caacctaccc	tgccaagaac	t ccatggcag	gggtcaatgg	ccagaggtt c	900
ccaacaaagg	atgtccagag	catacctgaa	attgatgaaa	tgtgcgcccg	tgccgtcaag	960
gaaaattggc	agactgtgac	accttgcacc	ctcaaaaaac	agtactgttc	caaacctaaa	1020
actagaacca	tcctaggtac	caacaacttc	atagccttgg	ctcacaggtc	agcactcagt	1080
ggtgtcaccc	aggcgttcat	gaagaaggcc	tggaagtccc	caattgcctt	ggggaaaaac	1140
aagtttaagg	aattgcattg	cactgtcgcc	ggcagatgcc	ttgaggctga	cctggcttcc	1200
tgcgatcgca	gcacccccgc	cattgtgagg	tggtttgttg	ccaacctcct	gtatgaactt	1260
gcaggatgtg	aagagtactt	gcctagctac	gtgctcaact	gttgccatga	ccttgtggca	1320

- 204 035624

acgcaggatg	gcgctttcac	aaaacgcggt	ggcctgtcgt	ccggggaccc	cgtcaccagt	1380
gtgtccaaca	ccgtctactc	actgataatt	tacgcccagc	acatggtgct	ttcggccttg	1440
aagatgggt c	atgaaattgg	tctcaagttc	cttgaggaac	agctcaaatt	tgaggacctt	1500
cttgaaatcc	agcccatgtt	agtgtattct	gatgacct eg	tcttgtatgc	ggaaagaccc	1560
acttttccca	actaccattg	gtgggtcgag	catcttgacc	tgatgttggg	ctttaaaacg	1620
gacccaaaga	aaactgtcat	aactgataaa	cccagttttc	teggetgeag	aattgaagca	1680
ggacggcagt	tagtccccaa	t cgcgaccgt	attctggctg	ctcttgcata	tcatatgaag	1740
gcgcagaacg	cct cagagta	ttatgcgtcc	gctgccgcaa	ttctgatgga	ttcgtgtgct	1800
tgcattgacc	atgaccccga	gtggtatgag	gatettatet	gcggcatcgc	ccggtgtgct	1860
cgccaggacg	gttaccgttt	t ccaggcccg	gcatttttca	tgt ccatgtg	ggagaagctg	1920
aaaagtcata	atgaagggaa	gaaatgccgt	cactgcggca	tctgcgacgc	caaagccgac	1980
tatgcgt ccg	cctgtggact	tgatttgtgt	ttgttccatt	cacacttt ca	tcaacactgc	2040
ccagtcactc	tgagctgtgg	ccaccatgcc	ggtt caaagg	aatgttcgca	gtgtcagtca	2100
cctgtcgggg	ctggcaaatc	cccccttgac	gctgtgctga	aacaaatccc	gtacaaacct	2160
cctcgtacca	ttatcatgaa	ggtggacaac	aaaacaacga	cccttgaccc	gggaagatat	2220
cagt cccgt c	gaggtcttgt	tgcagtcaaa	agaggtattg	caggtaatga	ggttgatctt	2280
tctgatggag	actaccaagt	ggtgcct ctt	ttgeegaett	gcaaagacat	aaacatggtg	2340
aaggtggctt	gcaacgtact	actcagcaag	tttatagtag	ggccgccagg	ttccggaaaa	2400
accacctggc	tactgaacca	agtccaggac	gatgatgtea	tttacacacc	tactcatcag	2460
acaatgtttg	acatagtcag	tgctcttaaa	gtttgcaggt	attccatccc	aggagcctca	2520
ggactccctt	ttccaccacc	tgccaggtcc	gggccgtggg	ttaggctcat	cgccagcgga	2580
catgtccctg	gccgagtgtc	atatctcgat	gaggcaggat	attgeaatea	tctagacatt	2640
ctaaggctgc	ttt ccaaaac	accccttgtg	tgtttgggtg	acctt cagca	acttcacccg	2700
gtcggctttg	attcctattg	ttatgtgttc	gatcagatgc	ctcagaagca	gctgaccacc	2760
atttatagat	ttggccctaa	catctgtgca	gccatccagc	cttgttacag	ggagaaaett	2820
gaat ccaagg	ccaggaacac	cagagtggtt	ttcaccaccc	ggcctgtggc	ctttggtcag	2880

- 205 035624

gtcctgacac	cgtaccacaa	agatcgtacc	ggctctgcaa	taactataga	ttcatcccag	2940
ggggcgacct	tcgacattgt	gacattgcat	ctaccatcgc	caaagtccct	aaacaaatcc	3000
cgagcacttg	tagccatcac	t cgggcaaga	catgggttgt	tcatttatga	ccctcatgac	3060
caactccagg	agtttttcaa	cttaaccccc	gagcgcactg	attgtaacct	tgcgttcagc	3120
cgtggggatg	agctggttgt	tttgaatgtg	gataatgcgg	tcacaactgt	agegaaggee	3180
ctagagacag	gttcaccccg	atttcgagta	tcggacccga	ggtgeaagte	tctcttagcc	3240
gcttgttcgg	ccagtctaga	agggagctgc	atgccactac	cacaagtagc	acataacctg	3300
gggttttact	ttt ccccgga	cagcccagct	tttgcacccc	tgccaaaaga	gctggcgcca	3360
cattggccag	tggtcaccca	ccagaataat	cgagcgtggc	etgat cgact	tgt egetagt	3420
atgcgcccaa	ttgatgcccg	ctacagcaag	ccaatggt eg	gtgcagggta	tgtggtcggg	3480
ccatccattt	ttcttggcac	tcctggtgtg	gtgtcatact	atctcacatt	atacatcggg	3540
ggcgagcct c	aggccctgcc	agaaacactc	gttt caacag	gaegt atagc	cacagattgt	3600
cgggaatatc	tcgacgcggc	tgaggaagag	gcagcgagag	aactt cccca	egeatttatt	3660
ggcgatgtca	aaggcactac	gatcgggggg	tgtcaccaca	ttacatcgaa	atacctacct	3720
aggt ccctgc	ctaaagactc	tgttgctgtg	gttggggtga	gtt cgcccgg	tagggetget	3780
aaagccgtgt	gcactctcac	cgatgtgtac	ctccccgaac	tccgaccata	tttgeaaeeg	3840
gagacggcat	caaaatgctg	gaaacttaaa	ctggatttca	gggat gtt eg	aetgatggte	3900
tggaaaggcg	ccacagccta	tttccagttg	gaagggctga	catggtcagc	gctgcccgat	3960
tatgctaggt	tcattcagct	acccaaggat	gccgttgtgt	acatcgatcc	gtgtataggg	4020
ccggcaacag	ccaatcgcaa	ggttgtgcga	accacagact	ggcgggccga	cctggcagtg	4080
acaccgtatg	attacggtgc	tcaggtcatt	ttgacaacag	cctggttcga	ggaccttggg	4140
ccgcagtgga	agattttggg	gttgcagcct	ttcagacgaa	catttggctt	tgagaacact	4200
gaagattggg	caattctcgc	acgccgtatg	aatgaeggea	aagattacac	tgactataat	4260
tggcattgtg	tacgagaacg	cccacacgca	atttacgggc	gcgcccgtga	ccatacgtat	4320
cattttgccc	ttggcactga	actgcaagta	gagctgggca	gaccccggct	gcctcctgag	4380

caagtgccgt да 4392

- 206 035624 <210> 21 <211> 750 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид, кодирующий ОРС2 ослабленного PRRSV 94881 <400>21

atgcaat ggg	tttactgtgg	agtaaaatca	gtcagttgtt	cgtggatgcc	ttcactgagt	60
tccttgttag	tgtggttgac	attgteatet	ttctcgccat	attgtttggg	ttcactgttg	120
caggctggtt	attggtette	cttctcagag	tggtttgctc	cgcgtttctc	cgttcgcgct	180
ctgccattca	ctcttccgaa	etategaagg	tcctatgagg	gcttgctacc	caactgcaga	240
ccggatgtcc	cacaattcgc	agttaagcac	ccgttgggta	tactttggca	tatgegagte	300
tcccacctaa	ttgaegaaat	ggtctctcgc	cgcatttacc	ggaccatgga	acattcgggt	360
caagcggcct	ggaagcaggt	tgttagtgaa	gccactctca	caaaactgtc	aaggcttgac	420
gtagtcactc	atttccaaca	cctggccgca	gtggaggctg	attettgeeg	ett ccttagc	480
tcacgactcg	egatgetgaa	aaaccttgcc	gttggcaatg	tgagcctgga	gtacaacact	540
actttggacc	gegttgaget	catctttccc	acaccaggta	cgaggcccaa	gttgaccgat	600
tttaggcaat	ggcttatcag	cgtgcacgct	tccatcttct	cctctgtggc	ttcgtctgtt	660
accttgttca	cagtgctttg	gettegaatt	ccagctctac	gctatgtttt	tggtttccat	720
tggccca egg	caacacatca	ttcgaactaa				750

<210>22 <211>798 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид, кодирующий ОРСЗ ослабленного PRRSV 94881 <400>22 atggcttatc agcgtgcacg cttccatctt ctcctctgtg gcttcgtctg ttaccttgtt60 cacagtgctt tggcttcgaa ttccagctct acgctatgtt tttggtttcc attggcccac120

- 207 035624

ggcaacacat	cattcgaact	aactatcaat	tacactatat	gtaagccatg	ccctaccagt	180
caagctgccc	aacaaagact	cgagcctggc	cgtaacgtgt	ggtgcaaaat	agggcacgac	240
aggtgtgagg	aacgtgacca	tgatgagttg	tcaatgtcca	ttccgtccgg	gtacgacaac	300
ctcaaacttg	agggttatta	tgcttggctg	gcttttttgt	ccttttccta	cgcggcccaa	360
ttccatccgg	agctgttcgg	aataggaaac	gtgt cgcgcg	tctttgtgga	taagcgacac	420
cagttcattt	gcgccgagca	tgatggacaa	aatt caacca	tatctgccag	acacaacatc	480
tccgcgtcgt	atgcggtgta	ttaccatcat	caaatagacg	ggggcaattg	gtttcatttg	540
gaatggctgc	gaccattctt	ttcctcctgg	ctggtgct ca	acatctcatg	gtttctgagg	600
cgttcgcctg	caagccctgc	ttctcgacgc	atctatcaga	tattaagacc	aacacgaccg	660
cggctgccgg	tttcatggtc	cttcagaaca	tcaattgttt	ccaatctcac	agggcctcaa	720
cagcgcaagg	taccactccc	ctcaggaggt	cgtcccaatg	tcgtgaagcc	gtcggcattc	780
cccagtacat	cacgataa					798

<210> 23 <211> 552 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид, кодирующий OPC4 ослабленного PRRSV 94881

<400> 23 atggctgcga	ccattctttt	cctcctggct	ggtgct caac	atctcatggt	ttctgaggcg	60
ttcgcctgca	agccctgctt	ctcgacgcat	ctat cagata	ttaagaccaa	cacgaccgcg	120
gctgccggtt	tcatggtcct	tcagaacatc	aattgtttcc	aat ct cacag	ggcct caaca	180
gcgcaaggta	ccactcccct	caggaggtcg	tcccaatgtc	gtgaagccgt	cggcattccc	240
cagtacatca	cgataacggc	taatgtgacc	gatgaatcgt	atttgtacaa	cgcggacttg	300
ctgatgcttt	ccgcgtgcct	tttctacgcc	tcggaaatga	gcgagaaagg	ctt caaagt c	360
atctttggga	atatttctgg	cgttgtttcc	gcttgtgtta	atttcacaga	ttatgtggcc	420
catgtgaccc	aacacactca	gcagcaccat	ttggtaattg	atcacattcg	gttactacac	480
ttcttgacac	cgtctacgat	gaggtgggct	acaaccattg	cttgtttgct	tgccattctt	540

- 208 035624 ttggcggtat да 552 <210> 24 <211> 606 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид, кодирующий OPC5 ослабленного PRRSV 94881 <400>24

atgaaatgtt	cttgcaagtt	ggggcatttc	ttgactcctc	actcttgctt	ctggtggctt	60
tttttgctgt	gtaccggctt	gtcttggtcc	tttgtcgatg	gcaacgacga	cagct cgaca	120
tcccaataca	tatataattt	gacgatatgc	gagctgaatg	ggaccgaatg	gttgtccggt	180
cattttgatt	gggcagtcga	aacctttgtg	ctttacccag	ttgccact ca	tatcatttca	240
ctgggttttc	tcacaacaag	ccatttcctt	gatgcgct eg	gtctcggcgc	tgtgtccgcc	300
acaggattca	ttggcgagcg	gtatgtactt	agcagcatgt	acggcgtttg	cgccttcgcg	360
gcgttcgtat	gttttgtcat	ccgtgctgct	aaaaattgea	tggettgeeg	ctatgcccgc	420
acccggttta	ccaacttcat	cgtggacgac	cggggaagaa	tccatcgatg	gaagtettea	480
atagtggtgg	agaaattggg	caaagctgaa	gtcggtggtg	accttgtcaa	cattaagcat	540
gttgtcctcg	aaggggttaa	agctcaacct	ttgaegagga	etteggetga	gcaatgggaa	600

gcctag606 <210>25 <211>522 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид, кодирующий 0PC6 ослабленного PRRSV 94881 <400>25 atgggaagcc tagacgactt ttgcaacgat cccaccgccg cacaaaaact cgtgctggcc60 tttagcatca catatacacc cataatgata tacgccctta aggtgtcacg cggccgactc120 ctggggctgt tgcacatctt gatatttctg aattgttcct ttacttttgg gtacatgaca180

- 209 035624

tatgtgcatt	ttcaatccac	caaccgtgtc	gcattcactc	tgggggctgt	agtcgccctt	240
ttgtggggtg	tttacagcct	cacagagtca	tggaagtt ca	tcacttccag	atgeagattg	300
tgttgcctag	gccggcgata	cattctggcc	cctgcccatc	aegtagaaag	tgetgeagge	360
ctccattcaa	tcccagcgtc	tggtaaccga	gcatacgctg	tgagaaagee	cggactaaca	420
tcagtgaacg	gcactctagt	acctgggctt	cggagcct eg	tgctgggcgg	caaacgagct	480
gttaaacgag	gagtggttaa	cctcgtcaag	tatggccggt	aa		522

<210> 26 <211> 431 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид, кодирующий OPC7 ослабленного PRRSV 94881

<400> 26	ggggaaaggc	60
atggccggta	agaaccagag	ccagaagaaa	agaagaaatg	cagct ccgat
cagccagtca	atcaactgtg	ccagttgctg	ggtacaatga	taaagtccca	gcgccagcaa	120
tctaggggag	gacaggccaa	aaagaagaag	cctgagaagc	cacattttcc	cctagctgct	180
gaagatgaca	ttcggcacca	tctcacccag	geegaaegtt	ccctctgctt	gcaat egat c	240
cagacggctt	tcaatcaagg	cgcaggaact	gegtegettt	cat ccagcgg	gaaggteagt	300
ttccaggttg	agttcatgct	geeggttget	catacagtgc	geetgatt eg	egtgaettet	360
acat ccgcca	gtcagggtgc	aaattaattt	gacagt cagg	tgaatggccg	egattgaegt	420
gtggcctcta	a					431
<210> 27 <211> 7083 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотид, кодирующий OPCla родительского PRRSV 94881 <400> 27 atgtctggga tgttctcccg gtgcatgtgc accccggctg cccgggtatt ttggaacgcc 60

- 210 035624

ggccaagtct	attgcacacg	gtgtctcagt	gcacggtctc	ttctctctcc	agaacttcag	120
gacacggacc	teggtgeagt	tggcttgttt	cacaagccta	aagacaagct	ccattggaaa	180
gttcccattg	gtatccccca	ggtggaatgt	tctccatctg	ggtgttgctg	gctgtcaacc	240
atttttcctt	tagcgcgcat	gacct ccggc	aatcacaact	tccttcaacg	act cgtgaag	300
gttgctgacg	tattgtaeeg	tgacggttgc	ttaaccccta	gacacctccg	tgaactccaa	360
gtttacgagc	gtggttgcaa	ttggtatccg	attacggggc	ctgtgcctgg	gatggctgtg	420
tacgcgaact	ccatgcacgt	gtccgaccaa	ccgttccctg	gtgccact ca	tgtgttaaca	480
aattcccctt	tgcctcaacg	ggcttgtcgg	cagccgtt et	gtccgttcga	agaggcccat	540
tctagcatat	acaggtggga	aaaatttgta	atttttatgg	attcctcctc	egaeggtega	600
tctcgcatga	tgtggactcc	ggaat ccgat	gact ccacgg	ctttggaagt	tctgccgccc	660
gagctagaac	accaggtcaa	ggtccttgtt	eggagettte	ccgcccat ca	ccttgtcgac	720
cttgccgatt	gggagctcac	tgagtcccct	gagaaeggtt	tttccttcag	cacgt cacat	780
ccttgcggct	accttgtt eg	ggacccggct	gtat ccgaag	gcaagtgttg	gctttcctgc	840
tttttgagcc	agt cagccga	agtgctcagt	cgcgaggcgc	atctggctac	cgcctatggt	900
taccaaacca	agtggggtgt	gcctggcaag	tacatccagc	gcagacttca	agttcacggt	960
ctccgtgctg	tggtcgaccc	tgatggtccc	attcacgttg	aagcattgtc	ttgcccccag	1020
tcttggatca	ggcacttgac	cctgaatgat	gatgtcaccc	egggattegt	tcgcctaatg	1080
tctcttcgca	ttgtgccgaa	cacagagcct	accacacacc	ggatctttcg	ttttggagtg	1140
cacaagtggt	atggtgeege	cggcaaacgg	gcccgtggca	agcgtgccgc	caaaagtgag	1200
aaagact egg	cttccaccct	caaggttgcc	cgaccgactt	ccaccagtgg	aatcgtcacc	1260
tactccccac	etgeggaegg	gtcttgtggt	tggcatgccc	ttgccgccat	actgaaccgg	1320
atgattaata	atgacttcac	gtcccctctg	cctcggtaca	acaggccgga	ggacgattgg	1380
gettetgatg	gtgaccttgc	t caggccatt	caatgtttgc	aactacctgc	cgccatagct	1440
cggaaccgcg	cctgccctaa	cgccaaatac	ctcgtaaaac	t caacggagt	tcattgggag	1500
gtagaggtga	ggcctggaat	ggctcctcgc	tccctctctc	gtgagtgegt	tgttggcgtc	1560
tget etgaag	gctgtgtcgc	gtcgccttac	ccggaggacg	ggttgcctaa	aegtgeaett	1620

- 211 035624

gaggccctgg	cgtctgctta	tagactgcct	tcagactgtg	tttgtgatgg	tattattgac	1680
ttccttgcca	atccacctcc	ccaggagttc	tggactcttg	acaaaatgtt	gacttccccg	1740
tcaccggagc	agt ccggctt	ctctagtctg	tataaattgt	tgttagaggt	cttgccgcag	1800
aaatgcggat	ccacagaagg	ggaattcatc	tatactgttg	agaggatgtt	gaaggattgt	1860
ccgagct cca	aacaggccat	ggccctcctt	gcaaaaatta	aggtcccatc	ctcaaaggcc	1920
ccat ccgtga	ct ctgaacga	gtgcttcccc	acggatgttc	cagtcaactc	tgagttaata	1980
tcttgggaag	agcccaaaga	ccctggcgct	gctgttgtcc	tatgtccatc	ggatgcaaaa	2040
gaat ctaagg	aaacagcccc	tgaagaagct	caagcgagaa	accgtaaggt	cct ccaccct	2100
gtggtcctta	ccgaggaact	tagcgagcaa	caggtgcagg	tggttgaggg	tgatcaggat	2160
atgccactgg	atttgacttg	gccaacctta	accgctacgg	cgacccctgt	tagagggccg	2220
gtaccggaca	atttgagctc	tggcattggt	gcccagcccg	ctaccgttca	agaactcatt	2280
ctggcgaggc	ctgcaccccg	tcttgttgag	cgctgtggca	cggagtcgaa	cggcagcagt	2340
tcatttctgg	atttgcctga	cgtgcagacc	tcggaccagc	ctttagacct	gtccctggcc	2400
gcgtggcctg	taagggctac	cgcgtctgac	cccggttgga	tccacggtag	gcgtgagcct	2460
gtctttgtga	agcctcgagg	tgttttctct	gatggcgagt	cggccctt ca	gtt cggagag	2520
cttt ccgaag	ccagttctgt	cgtcgatgac	cggacaaaag	aagct ccggt	ggttgacgcc	2580
cccatcgatt	tgacaacttc	gaacgagacg	ctctctgggt	ctgacccctt	tgaattcgcc	2640
aaattcaggc	gcccgcgttt	ctccgcgcaa	gctttaatcg	accgaggtgg	tccgcttgcc	2700
gatgtt catg	caaagataaa	gagtcgggta	tatgaacaat	gcctt caagc	ttgtgaacct	2760
ggtagtcgtg	cgaccccagc	caccaagaag	tggctcgaca	aaatgtggga	cagggtggac	2820
atgaaaactt	ggcgctgcac	ctcgcagttc	caagctggtc	acattcttga	gtccctcaaa	2880
ttcctccctg	acatgatt ca	agacacaccg	cctcctgttc	ccaggaagaa	ccgagctggt	2940
gacagtgccg	gcctgaagca	actggtggcg	cagtgggata	ggaaattgag	tgtgacaccc	3000
cccacaaaac	cggttggacc	ggtgcttgac	cagaccgtcc	ctctgcctat	ggacatccag	3060
caagaagatg	ccatctccgc	tgacaagcca	ccccattcgc	aaaacccttc	tagtcaagta	3120
gatgtgggtg	gaggttggaa	aagttttatg	ctctccggca	cccgtttcgc	ggggtccgtt	3180

- 212 035624

agtcagcgcc	ttacgacatg	ggtttttgag	gttctctccc	atctcccagc	ttttatgct c	3240
acacttttct	cgccacgggg	ctctatggct	ccaggtgatt	ggctgtttgc	aggtgctgtt	3300
ctacttgct c	tcctgctctg	ccgttcttac	ccaatactcg	gatgcctt cc	cttattgggt	3360
gtcttttctg	gtt ctgtgcg	gtgtgtt cgt	ttgggtgttt	ttggttcttg	gatggctttt	3420
gctgtatttt	tattctcgac	t ccacccgac	ccagtcggtt	cttcttgtga	ccacgattcg	3480
ccggagtgtc	atgctgagct	tttggctctt	gagcagcgcc	aactttggga	acctgtgcgc	3540
agccttgtgg	tcgggccatc	gggcctctta	tgcgtcattc	ttggcaagtt	act cggtggg	3600
tcacgttgtc	tctggtttgt	tctcctacgt	atatgcatgc	tcgcagattt	ggcaatttct	3660
cttatttatg	tggtgt ccca	agggcgttgt	cacaagtgtt	ggggaaagtg	tataaggacg	3720
gctcctgcag	aagtgaccct	taatgtgttt	cctttttcgc	gcgccacccg	ctcatctctt	3780
gtgtccttgt	gtgatcggtt	ccaagcgcca	aaaggagttg	accccgtgca	cttggcgaca	3840
ggctggcgcg	ggtgctggtg	tggtgagagc	cctattcatc	aatcacacca	aaaaccgata	3900
gcttatgcca	acttggatga	aaagaagata	tccgcccaga	cggtgattgc	tgt cccgtat	3960
gatcccagtc	aggccattaa	atgcctgaaa	gttttgcagg	caggaggggc	tattgtggac	4020
cagcctacgc	ccgaggtcgt	ccgtgtgtct	gagatt ccct	tctcggcccc	attttttccg	4080
aaggtcccag	tcaacccaga	ttgcagggtt	gtggtagatt	cggacacttt	tgtggctgcg	4140
gtccgctgcg	gttattcgac	agcacaactg	gtccttggtc	ggggcaactt	tgccaagcta	4200
aatcagaccc	ccctcaggaa	ctctgtcccc	accaaaacaa	ctggtggggc	ctcatacacc	4260
cttgccgtgg	cccaggtatc	tgtgtggact	cttgttcatt	tcatcctcgg	cctttggtta	4320
acgtcacctc	aagtgtgtgg	t cgagggacc	tctgacccgt	ggtgttcgaa	ccctttttcg	4380
tatcctactt	atggccccgg	agttgtgtgt	tcctctcgac	tctgcgtgtc	tgccgacgga	4440
gttaccctgc	cattgttctc	agccgttgcc	catctttccg	gtagagaggt	ggggattttt	4500
attttggtgc	ttgcct cctt	gggcgcttta	gcccaccgct	tggctcttaa	ggcagacatg	4560
tcaatggtct	ttttggcgtt	ttgtgcttac	gcctggccca	tgagctcctg	gttaatttgc	4620
ttctttccta	tgctcttgag	gtgggtaacc	cttcatcctc	tcactatgct	ttgggtgca c	4680
tcatttttgg	tgttttgcct	accagctgcc	ggcgtt ct ct	cgctgggaat	aaccggtctt	4740

- 213 035624

ctttgggcag	ttggccgttt	cacccaggtt	gccggaatta	tcacacctta	tgacatccac	4800
cagtatacct	ccggaccacg	tggtgcagct	gctgtagcaa	egget ccaga	aggtacttac	4860
atggcggccg	ttcggagagc	cgctttgact	ggacggactt	tgatcttcac	accat etgea	4920
gtcggatccc	ttcttgaagg	tgctttcaga	actcaaaagc	cctgccttaa	caccgtgaat	4980
gtcgtaggct	cttcccttgg	ttctggagga	gttttcacca	ttgatggcag	aagagteate	5040
gtcactgcca	cccatgtgtt	gaatggtaac	acagccaggg	tcactggtga	ttcctacaac	5100
cgcatgcaca	cgttcaatac	taatggtgat	tatgcctggt	cccatgctga	tgactggcaa	5160
ggcgttgccc	ctatggttaa	gatcgctaag	gggtatcgcg	gtcgtgccta	ctggcaaacg	5220
tcaaccggag	tcgaacctgg	catcatgggg	gaaggatt eg	ccttctgttt	cactaactgt	5280
ggcgactcag	ggtcacctgt	cattt cagaa	gctggtgacc	ttattggagt	ccataccggt	5340
tcaaacaaac	tcggttctgg	t cttgtgaca	acccctgaag	gggagacctg	ctccatcaag	5400
gaaactaggc	tctctgacct	ttctagacat	tttgeaggte	caagcgtccc	tcttggggac	5460
attaagttga	gcccagccat	catccctgat	gtgacaacta	ttccgagtga	cttggcatcg	5520
ctccttgctt	ctgtccccgt	gatggaaggt	ggcctctcaa	ctgtccagct	tttgtgcgtc	5580
tttttccttc	tctggcgcat	gatgggccat	gcctggacac	ccattgttgc	egtaggette	5640
tttttgctga	atgaaatt ct	cccagcagtc	ttggtccgag	ctgtgttctc	ttttgcactc	5700
tttgtacttg	catgggccac	cccctggtcg	gcacaagtgt	tgatgattag	actcctcacg	5760
gcggctctca	accgcaacag	gttgt ccctg	gcgttctacg	cactcggagg	tgt cgttggc	5820
ctggccacag	aaatcgggac	ttttgctggt	ggatggcctg	aactgtccca	agccctctcg	5880
acatactgct	tcctgcccag	gttccttgct	gtgactagtt	atgtccccac	catcatcatc	5940
ggtgggctcc	atgccctcgg	cgtaattttg	tggttattca	aataccgatg	cctccacaac	6000
atgctggttg	gtgatgggag	tttctcaagc	gctttcttcc	taeggtattt	tgctgagggt	6060
aatcttagga	aaggcgtgtc	gcagt cctgt	ggcatgaata	acgaatccct	gacagctgct	6120
ttggcttgca	agttgtcgca	agctgacctt	gattttttgt	ccagtttaac	gaacttcaag	6180
tgctttgtgt	ccgctt caaa	catgaaaaat	gcagctggcc	aatacatcga	ggeggegtat	6240
gctagagct c	tgcgtcagga	gctggcctcc	ttggtt cagg	ttgacaagat	gaaaggagta	6300

- 214 035624

ttggccaagc	tcgaggcttt	cgctgagacg	gccactccgt	cacttgacac	aggtgacgtg	6360
attgttctgc	ttgggcaaca	cccccatgga	tccatcctcg	acattaatgt	ggggggtgaa	6420
aggaaaactg	tgt ctgtgca	agaaacacga	tgcctgggtg	gtt ccaaatt	cagtgtctgc	6480
actgtcgtgt	ccaacacgcc	cgtggatacc	ttgaccggca	tcccacttca	gacgccaacc	6540
ccactttttg	aaaatggccc	gcgccat cgc	agcgaggacg	acgaccttaa	agttgagaga	6600
atgaaaaaac	actgtgtatc	cctcggcttc	cacaaaatca	atggtaaagt	ttactgcaaa	6660
atttgggaca	agt ctaacgg	cgacaccttt	tacacggatg	att cccgata	cactcaagac	6720
catgcttttc	aggacaggtc	aaccgactat	agagacaggg	attatgaagg	tgtacagacc	6780
gccccccaac	agggattcga	tccaaagtcc	gaagcccctg	ttggcactgt	tgtaatcggt	6840
ggcattacgt	ataacaggca	tctggtcaaa	ggtaaggagg	tcctagttcc	caaacctgac	6900
aactgccttg	aagctgccag	actgtccctt	gagcaagctc	ttgctgggat	gggccaaact	6960
tgtgacctta	cagctaccga	agtggagaaa	ctaaagcgca	tcattagtca	act ccaaggt	7020
ctgaccactg	aacaggcttt	aaactgctag	ccgccagcgg	cttgacccgc	tgtggccgcg	7080
gcg						7083
<210> 28 <211> 4392 <212> ДНК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<4OO> 28

acaggcttta	aactgctagc	cgccagcggc	ttgacccgct	gtggccgcgg	cggcctagtt	60
gtaactgaaa	cggcggtaaa	aatcgtaaaa	taccacagca	gaactttcac	cttaggctct	120
ttagacctaa	aagtcacctc	cgaggtggag	gtgaagaaat	caactgagca	ggggcacgct	180
gtcgtggcga	acttatgttc	cggtgtcgtc	ttgatgaggc	ctcacccacc	gtcccttgtt	240
gacgttctcc	tcaaacccgg	acttgacaca	acacccggca	ttcaaccagg	gcatggggcc	300
gggaatatgg	gcgtgaacgg	ttctatttgg	gattttgaaa	ctgcacccac	aaaggtagaa	360
ctagagttgt	ccaagcaaat	aatccaagca	tgtgaagt ca	ggcgcgggga	cgcccctaac	420
ctccaactcc	cctacaagct	ttatcctgtc	aggggggacc	ccgagcggcg	taaaggtcgc	480
cttgtcaaca	ctaggtttgg	agatttacct	tacaaaactc	cccaagacac	caagt ccgca	540

- 215 035624

attcatgcgg	cttgttgcct	gcatcccaat	ggggtcctcg	tgtctgatgg	taaat ccacg	600
ctgggtacca	ctcttcaaca	tggtttcgag	ctttatgtcc	ccactgtacc	ttatagtgt c	660
atggaatacc	ttgattcacg	ccctgacacc	ccttttatgt	gtactaaaca	tggcacttcc	720
aaggctgctg	cagaggacct	ccaaaaatat	gacctatcca	ctcaagggtt	tgtcttgcct	780
ggggtcctac	gcctagtgcg	caggttcatc	tttagccatg	ttggtaaggc	gccaccactg	840
ttccttccat	caacctaccc	tgccaagaac	tccatggcag	gggtcaatgg	ccagaggtt c	900
ccaacaaagg	atgtccagag	catacctgaa	attgatgaaa	tgtgcgcccg	tgeegteaag	960
gaaaattggc	agactgtgac	accttgcacc	ctcaaaaaac	agtactgttc	caaacctaaa	1020
actagaacca	tcctaggtac	caacaacttc	atagccttgg	ctcacaggtc	agcactcagt	1080
ggtgtcaccc	aggcgttcat	gaagaaggcc	tggaagtccc	caattgcctt	ggggaaaaac	1140
aagtttaagg	aattgcattg	cactgtcgcc	ggcagatgcc	ttgaggctga	cctggcttcc	1200
tgcgatcgca	gcacccccgc	cattgtgagg	tggtttgttg	ccaacctcct	gtatgaaett	1260
gcaggatgtg	aagagtactt	gcctagctac	gtgctcaact	gttgccatga	ccttgtggca	1320
acgcaggatg	gcgctttcac	aaaacgcggt	ggcctgtcgt	ccggggaccc	cgtcaccagt	1380
gtgt ccaaca	ccgtctactc	actgataatt	tacgcccagc	acatggtgct	ttcggccttg	1440
aagatgggt c	atgaaattgg	tctcaagttc	cttgaggaac	agctcaaatt	tgaggacctt	1500
cttgaaatcc	agcccatgtt	agtgtattct	gatgacct eg	tcttgtatgc	ggaaagaccc	1560
acttttccca	actaccattg	gtgggtcgag	catcttgacc	tgatgttggg	ctttaaaacg	1620
gacccaaaga	aaactgtcat	aactgataaa	cccagttttc	teggetgeag	aattgaagca	1680
ggacggcagt	tagtccccaa	t cgcgaccgt	attctggctg	ctcttgcata	tcatatgaag	1740
gcgcagaacg	cct cagagta	ttatgcgtcc	gctgccgcaa	ttctgatgga	ttcgtgtgct	1800
tgcattgacc	atgaccccga	gtggtatgag	gaccttatct	gcggcatcgc	ccggtgtgct	1860
cgccaggacg	gttaccgttt	t ccaggcccg	gcatttttca	tgtccatgtg	ggagaagctg	1920
aaaagtcata	acgaagggaa	gaaatgccgt	cactgcggca	tctgcgacgc	caaagccgac	1980
tatgcgt ccg	cctgtggact	tgatttgtgt	ttgttccatt	cacacttt ca	tcaacactgc	2040
ccagtcactc	tgagctgtgg	ccaccatgcc	ggtt caaagg	aatgttcgca	gtgtcagtca	2100

- 216 035624

cctgtcgggg	ctggcaaatc	cccccttgac	gctgtgctga	aacaaatccc	gtacaaacct	2160
cctcgtacca	ttatcatgaa	ggtggacaac	aaaacaacga	cccttgaccc	gggaagatat	2220
cagt cccgt c	gaggtcttgt	tgcagtcaaa	agaggtattg	caggtaatga	ggttgatctt	2280
t ctgatggag	actaccaagt	ggtgcct ett	ttgeegaett	gcaaagacat	aaacatggtg	2340
aaggtggctt	gcaacgtact	actcagcaag	tttatagtag	ggccgccagg	ttccggaaaa	2400
accacctggc	tactgaacca	agtccaggac	gatgatgtea	tttacacacc	tactcatcag	2460
acaatgtttg	acatagtcag	tgctcttaaa	gtttgcaggt	attccatccc	aggagcct ca	2520
ggactccctt	ttccaccacc	tgccaggtcc	gggccgtggg	ttagget cat	cgccagcgga	2580
catgtccctg	gccgagtgtc	atatetegat	gaggcaggat	attgeaatea	tctagacatt	2640
ctaaggctgc	ttt ccaaaac	accccttgtg	tgtttgggtg	acctt cagca	acttcacccg	2700
gtcggctttg	attcctattg	ttatgtgttc	gatcagatgc	ctcagaagca	gctgaccacc	2760
atttatagat	ttggccctaa	catctgtgca	gccatccagc	cttgttacag	ggagaaaett	2820
gaat ccaagg	ccaggaacac	cagagtggtt	ttcaccaccc	ggcctgtggc	ctttggtcag	2880
gtcctgacac	cgtaccacaa	agatcgtacc	ggctctgcaa	taactataga	ttcatcccag	2940
ggggcgacct	tcgacattgt	gacattgcat	ctaccatcgc	caaagtccct	aaacaaatcc	3000
cgagcacttg	tagccatcac	t cgggcaaga	catgggttgt	tcatttatga	ccctcatgac	3060
caactccagg	agtttttcaa	cttaaccccc	gagcgcactg	attgtaacct	tgcgttcagc	3120
cgtggggatg	agctggttgt	tttgaatgtg	gataatgegg	tcacaactgt	agegaaggee	3180
ctagagacag	gtt caccccg	atttcgagta	tcggacccga	ggtgeaagte	tctcttagcc	3240
gcttgttcgg	ccagtctaga	agggagctgc	atgccactac	cacaagtagc	acataacctg	3300
gggttttact	ttt ccccgga	cagcccagct	tttgcacccc	tgccaaaaga	gctggcgcca	3360
cattggccag	tggtcaccca	ccagaataat	egagegtgge	ctgatcgact	tgtegetagt	3420
atgcgcccaa	ttgatgcccg	ctacagcaag	ccaatggt eg	gtgcagggta	tgtggtcggg	3480
ccatccattt	ttcttggcac	tcctggtgtg	gtgtcatact	atctcacatt	atacatcggg	3540
ggcgagcct c	aggccctgcc	agaaacactc	gtttcaacag	gaegtatage	cacagattgt	3600
cgggaatatc	tcgacgcggc	tgaggaagag	gcagcgagag	aactt cccca	egeatttatt	3660

- 217 035624

ggcgatgtca	aaggcactac	ggtcgggggg	tgtcaccaca	ttacatcgaa	atacctacct	3720
aggt ccctgc	ctaaagactc	tgttgctgtg	gttggggtga	gtt cgcccgg	tagggctgct	3780
aaagccgtgt	gcactctcac	cgatgtgtac	ctccccgaac	tccgaccata	tttgcaaccg	3840
gagacggcat	caaaatgctg	gaaacttaaa	ctggatttca	gggatgttcg	actgatggtc	3900
tggaaaggcg	ccacagccta	tttccagttg	gaagggctga	catggtcagc	gctgcccgat	3960
tatgctaggt	tcattcagct	acccaaggat	gccgttgtgt	acatcgatcc	gtgtataggg	4020
ccggcaacag	ccaatcgcaa	ggttgtgcga	accacagact	ggcgggccga	cctggcagtg	4080
acaccgtatg	attacggtgc	tcaggtcatt	ttgacaacag	cctggttcga	ggaccttggg	4140
ccgcagtgga	agattttggg	gttgcagcct	ttcagacgaa	catttggctt	tgagaacact	4200
gaagattggg	caattctcgc	acgccgtatg	aatgacggca	aagattacac	tgactataat	4260
tggcattgtg	tacgagaacg	cccacacgca	atttacgggc	gcgcccgtga	ccatacgtat	4320
cattttgccc	ttggcactga	actgcaagta	gagctgggca	gaccccggct	gcctcctgag	4380
caagtgccgt	ga					4392

<210> 29 <211> 750 <212> ДНК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней

<400> 29 atgcaatggg	ttcactgtgg	agtaaaatca	gtcagttgtt	cgtggatgcc	ttcactgagt	60
tccttgttag	tgtggttgac	attgtcatct	ttctcgccat	attgtttggg	ttcactgttg	120
caggctggtt	attggtcttc	cttctcagag	tggtttgctc	cgcgtttctc	cgttcgcgct	180
ctgccattca	ctctcccgaa	ctatcgaagg	tcctatgagg	gcttgctacc	caactgcaga	240
ccggatgtcc	cacaattcgc	agttaagcac	ccgttgggta	tactttggca	tatgcgagtc	300
tcccacctaa	ttgacgaaat	ggtctctcgc	cgcatttacc	ggaccatgga	acatt cgggt	360
caagcggcct	ggaagcaggt	tgttagtgaa	gccactctca	caaaactgtc	aaggcttgac	420
gtagtcactc	atttccaaca	cctggccgca	gtggaggctg	attcttgccg	ctt ccttagc	480
tcacgactcg	cgatgctgaa	aaaccttgcc	gttggcaatg	tgagcctgga	gtacaacact	540

- 218 035624

actttggacc	gcgttgagct	catctttccc	acaccaggta	cgaggcccaa	gttgaccgat	600
tttaggcaat	ggcttatcag	cgtgcacgct	tccatcttct	cctctgtggc	ttcgtctgtt	660
accttgttca	cagtgctttg	gcttcgaatt	ccagctctac	gctatgtttt	tggtttccat	720
tggcccacgg	caacacatca	ttcgaactaa				750

<210>30 <211>798 <212> ДНК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней <400>30

atggcttatc	agcgtgcacg	ctt ccat ctt	ctcctctgtg	gcttcgtctg	ttaccttgtt	60
cacagtgctt	tggctt cgaa	ttccagctct	acgctatgtt	tttggtttcc	attggcccac	120
ggcaacacat	cattcgaact	aactatcaat	tacactatat	gtaagccatg	ccctaccagt	180
caagctgccc	aacaaagact	cgagcctggc	cgtaacgtgt	ggtgcaaaat	agggcacgac	240
aggtgtgagg	aacgtgacca	tgatgagttg	tcaatgtcca	ttccgtccgg	gtacgacaac	300
ctcaaacttg	agggttatta	tgcttggctg	gcttttttgt	ccttttccta	cgcggcccaa	360
ttccatccgg	agctgttcgg	aataggaaac	gtgt cgcgcg	tctttgtgga	taagcgacac	420
cagttcattt	gcgccgagca	tgatggacaa	aatt caacca	tatctgccag	acacaacatc	480
tccgcgtcgt	atgcggtgta	ttaccatcat	caaatagacg	ggggcaattg	gtttcatttg	540
gaatggctgc	gaccattctt	ttcctcctgg	ctggtgct ca	acatctcatg	gtttctgagg	600
cgttcgcctg	caagccctgc	ttctcgacgc	atctatcaga	tattaagacc	aacacgaccg	660
cggctgccgg	tttcatggtc	cttcagaaca	tcaattgttt	ccaatctcac	agggcctcaa	720
cagcgcaagg	taccactccc	ctcaggaggt	cgtcccaatg	tcgtgaagcc	gtcggcattc	780

cccagtacat cacgataa798 <210>31 <211>552 <212> ДНК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней <400>31 atggctgcga ccattctttt cctcctggct ggtgctcaac atctcatggt ttctgaggcg60

- 219 035624

ttcgcctgca	agccctgctt	ctcgacgcat	ctat cagata	ttaagaccaa	cacgaccgcg	120
gctgccggtt	tcatggtcct	tcagaacatc	aattgtttcc	aat ct cacag	ggcct caaca	180
gcgcaaggta	ccactcccct	caggaggtcg	tcccaatgtc	gtgaagccgt	cggcattccc	240
cagtacatca	cgataacggc	taatgtgacc	gatgaatcgt	atttgtacaa	cgcggacttg	300
ctgatgcttt	ccgcgtgcct	tttctacgcc	tcggaaatga	gcgagaaagg	ctt caaagt c	360
atctttggga	atatttctgg	cgttgtttcc	gcttgtgtta	atttcacaga	ttatgtggcc	420
catgtgaccc	aacacactca	gcagcaccat	ttggtaattg	atcacattcg	gttactacac	480
ttcttgacac	cgtctacgat	gaggtgggct	acaaccattg	cttgtttgtt	tgccattctt	540
ttggcggtat	ga					552

<210>32 <211>606 <212> ДНК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней <400>32

atgaaatgtt	cttgcaagtt	ggggcatttc	ttgactcctc	actcttgctt	ctggtggctt	60
tttttgctgt	gtaccggctt	gtcttggtcc	tttgtcgatg	gcaacgacaa	cagct cgaca	120
tcccaataca	tatataattt	gacgatatgc	gagctgaatg	ggaccgaatg	gttgtccggt	180
cattttgatt	gggcagtcga	aacctttgtg	ctttacccag	ttgccact ca	tatcatttca	240
ctgggttttc	tcacaacaag	ccatttcctt	gatgcgct eg	gtctcggcgc	tgtgtccgcc	300
acaggattca	ttggcgagcg	gtatgtactt	agcagcatgt	acggcgtttg	cgccttcgcg	360
gcgctcgtat	gttttgtcat	ccgtgctgct	aaaaattgea	tggettgeeg	ctatgcccgc	420
acccggttta	ccaacttcat	cgtggacgac	cggggaagaa	t ccat egatg	gaagtettea	480
atagtggtgg	agaaattggg	caaagctgaa	gtcggtggtg	accttgtcaa	cattaagcat	540
gttgtcctcg	aaggggttaa	agctcaaccc	ttgaegagga	etteggetga	gcaatgggaa	600
gcctag						606

<210>33 <211>522 <212> ДНК <213> Нуклеотид ОРС6 PRRSV 94881

- 220 035624 <400> 33

atgggaagcc	tagacgactt	ttgcaacgat	cccaccgccg	cacaaaaact	cgtgctggcc	60
tttagcatca	catatacacc	cataatgata	tacgccctta	aggtgtcacg	cggccgactc	120
ctggggctgt	tgcacatctt	gatatttctg	aattgttcct	ttacttttgg	gtacatgaca	180
tatgtgcatt	ttcaatccac	caaccgtgtc	gcactcactc	tgggggctgt	agtcgccctt	240
ttgtggggtg	tttacagcct	cacagagtca	tggaagtt ca	tcacttccag	atgeagattg	300
tgttgcctag	gccggcgata	cattctggcc	cctgcccatc	aegtagaaag	tgetgeagge	360
ctccattcaa	tcccagcgtc	tggtaaccga	gcatacgctg	tgagaaagee	cggactaaca	420
tcagtgaacg	gcactctagt	acctgggctt	cggagcct eg	tgctgggcgg	caaacgagct	480
gttaaacgag	gagtggttaa	cctcgtcaag	tatggccggt	aa		522

<210> 34 <211> 387 <212> ДНК <213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней <400>34 atggccggta agaaccagag ccagaagaaa agaagaaatg cagctccgat ggggaaaggc60 cagccagtca atcaactgtg ccagttgctg ggtacaatga taaagtccca gcgccagcaa120 tctaggggag gacaggccaa aaagaagaag cctgagaagc cacattttcc cctagctgct180 gaagatgaca ttcggcacca tctcacccag gccgaacgtt ccctctgctt gcaatcgatc240 cagacggctt tcaatcaagg cgcaggaact gcgtcgcttt catccagcgg gaaggtcagt300 ttccaggttg agttcatgct gccggttgct catacagtgc gcctgattcg cgtgacttct360 acatccgcca gtcagggtgc aaattaa387

Claims (20)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Вирулентный вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV) европейского типа, представляющий собой штамм ECACC 11012501.
2. 2. Живой ослабленный вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV) европейского типа, представляющий собой штамм ECACC 11012502, полученный из родительского штамма ECACC 11012501.
3. 3. PRRSV по п.2, который ослаблен путем осуществления по меньшей мере 36 пассажей указанного родительского штамма в клеточной культуре и который при введении свинье, восприимчивой к PRRSV, не вызывает клинических признаков репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRS), но индуцирует иммунный ответ, приводящий к иммунизации указанной свиньи против патогенных форм PRRSV.
4. 4. Способ получения живого ослабленного PRRSV по п.2, включающий адаптацию PRRSV европейского типа по п.1 путем непрерывных пассажей на клетках линии MA 104, к клеткам млекопитающих, не относящихся к линии MA 104.
5. 5. Вакцина, предназначенная для защиты свиней от инфекции PRRSV, которая содержит живой ослабленный PRRSV по п.2 и фармацевтически приемлемый носитель.
6. 6. Вакцина по п.5, дополнительно содержащая один или несколько не представляющих собой PRRSV ослабленных или инактивированных патогенов или их антигенный материал.
7. 7. Вакцина по п.6, в которой указанные не представляющие собой PRRSV патогены выбраны из вируса псевдобешенства, вируса свиного гриппа, парвовируса свиней, трансмиссивного вируса гастроэнтерита, Escherichia coli, Erysipelo rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella cholerasuis, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Mycoplasma hyopneumoniae и Actinobacillus pleuropneumoniae.
8. 8. Вакцина по п.5, дополнительно содержащая один или несколько штаммов европейского PRRSV,

   - 221 035624 выбранных из штамма вируса Лелистад (CDI-NL-2.91) или штаммов ECACC 04102703, ECACC

   04102702, ECACC 04102704, CNCM I-1140, CNCM I-1387, CNCM I-1388, CNCM I-1102, CNCM I-1387, или ECACC V93070108, pT7P129A; ATCC VR-2332, ATCC VR-2368; ATCC VR-2495; ATCC VR 2385,

   ATCC VR 2386, ATCC VR 2429, ATCC VR 2474 и ATCC VR 2402.
9. 9. Вакцина по п.5, содержащая носитель, который пригоден для внутрикожного или внутримышечного введения.
10. 10. Вакцина по п.5, находящаяся в высушенной вымораживанием форме.
11. 11. Вакцина по п.5, где указанная вакцина содержит по меньшей мере примерно 107 вирусных частиц.
12. 12. Способ получения вакцины для защиты свиней от инфекции PRRSV, включающий смешивание живого ослабленного PRRSV по п.2 с фармацевтически приемлемым носителем.
13. 13. Способ по п.12, в котором к живому ослабленному PRRSV дополнительно добавляют адъювант.
14. 14. Применение вакцины по любому из пп.5-11 для иммунизации свиней от репродуктивнореспираторного синдрома свиней (PRRS).
15. 15. Применение по п.14, не приводящее к повреждению легких у указанных свиней после вакцинации.
16. 16. Вирус PRRS, имеющий нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 95% гомологична последовательности PRRSV по п.1, представленной в SEQ ID NO: 1, или последовательности PRRSV по п.2, представленной в SEQ ID NO: 10.
17. 17. Вирус PRRS по п.16, имеющий нуклеотидную последовательность, которая представлена либо в SEQ ID NO: 1, либо в SEQ ID NO: 10.
18. 18. Вакцина для защиты свиней от вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV), содержащая PRRS вирус по пп.16 или 17 и фармацевтически приемлемый носитель, где указанный PRRS вирус имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или ослабленный PRRS вирус, который имеет нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 95% гомологична последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1.
19. 19. Вакцина по п.18, которая дополнительно включает один или более не представляющих собой PRRSV ослабленных или инактивированных патогенов или их антигенный материал.
20. 20. Вакцина по п.19, в которой не представляющие собой PRRSV патогены выбраны из вируса псевдобешенства, вируса свиного гриппа, парвовируса свиней, трансмиссивного вируса гастроэнтерита, Escherichia coli, Erysipelo rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella cholerasuis, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Mycoplasma hyopneumoniae и Actinobacillus pleuropneumoniae.