EA035158B1 - Пептиды и композиции для лечения повреждений суставов - Google Patents
Пептиды и композиции для лечения повреждений суставов Download PDFInfo
- Publication number
- EA035158B1 EA035158B1 EA201591661A EA201591661A EA035158B1 EA 035158 B1 EA035158 B1 EA 035158B1 EA 201591661 A EA201591661 A EA 201591661A EA 201591661 A EA201591661 A EA 201591661A EA 035158 B1 EA035158 B1 EA 035158B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- polypeptide
- amino acid
- arthritis
- cartilage
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 298
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 266
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims description 63
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 60
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 253
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 91
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 46
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 230000002648 chondrogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 32
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 19
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 60
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims description 60
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 29
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 28
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 19
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 17
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 15
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 11
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 9
- 206010048873 Traumatic arthritis Diseases 0.000 claims description 9
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 9
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 8
- 206010071155 Autoimmune arthritis Diseases 0.000 claims description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000002513 implantation Methods 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 claims description 4
- 239000004576 sand Substances 0.000 abstract 1
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 932
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 232
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 228
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 211
- 102100025668 Angiopoietin-related protein 3 Human genes 0.000 description 112
- 101710085848 Angiopoietin-related protein 3 Proteins 0.000 description 108
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 95
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 95
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 91
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 63
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 52
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 49
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 49
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 49
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 49
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 48
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 48
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 47
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 47
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 38
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 38
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 33
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 30
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 24
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 19
- 101000693085 Homo sapiens Angiopoietin-related protein 3 Proteins 0.000 description 18
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 18
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 15
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 15
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 14
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 14
- 102000053580 human ANGPTL3 Human genes 0.000 description 14
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 13
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 13
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 13
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 12
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 12
- 102100025665 Angiopoietin-related protein 1 Human genes 0.000 description 11
- 101000693093 Homo sapiens Angiopoietin-related protein 1 Proteins 0.000 description 11
- 206010060820 Joint injury Diseases 0.000 description 11
- -1 amino acids amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 11
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 11
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000030746 Collagen Type X Human genes 0.000 description 9
- 108010022510 Collagen Type X Proteins 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 9
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 9
- 230000022159 cartilage development Effects 0.000 description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 8
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 238000013461 design Methods 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010072970 Meniscus injury Diseases 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 7
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 7
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- VUFNLQXQSDUXKB-DOFZRALJSA-N 2-[4-[4-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]butanoyloxy]ethyl (5z,8z,11z,14z)-icosa-5,8,11,14-tetraenoate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OCCOC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 VUFNLQXQSDUXKB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 6
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 6
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 230000005499 meniscus Effects 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 6
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- 101150054149 ANGPTL4 gene Proteins 0.000 description 5
- 102100036601 Aggrecan core protein Human genes 0.000 description 5
- 108010067219 Aggrecans Proteins 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 5
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 5
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 5
- 108700042530 Angiopoietin-Like Protein 4 Proteins 0.000 description 4
- 102000045205 Angiopoietin-Like Protein 4 Human genes 0.000 description 4
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 description 4
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 4
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 4
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 4
- 102000055008 Matrilin Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010072582 Matrilin Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 4
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 4
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 4
- 101150106167 SOX9 gene Proteins 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 210000004439 collateral ligament Anatomy 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 4
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 4
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 4
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 4
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 3
- 108010042918 Integrin alpha5beta1 Proteins 0.000 description 3
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- ZFOMKMMPBOQKMC-KXUCPTDWSA-N L-pyrrolysine Chemical compound C[C@@H]1CC=N[C@H]1C(=O)NCCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O ZFOMKMMPBOQKMC-KXUCPTDWSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 244000309464 bull Species 0.000 description 3
- 210000003321 cartilage cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 3
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 3
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 210000004353 tibial menisci Anatomy 0.000 description 3
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 3
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- NEMHIKRLROONTL-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-(4-azidophenyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 NEMHIKRLROONTL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- JTTIOYHBNXDJOD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-triaminopyrimidine Chemical compound NC1=CC(N)=NC(N)=N1 JTTIOYHBNXDJOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RSEBUVRVKCANEP-UHFFFAOYSA-N 2-pyrroline Chemical compound C1CC=CN1 RSEBUVRVKCANEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024210 CD166 antigen Human genes 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 2
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102100040870 Glycine amidinotransferase, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 101000980840 Homo sapiens CD166 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 2
- 101000893303 Homo sapiens Glycine amidinotransferase, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 2
- 101001034844 Homo sapiens Interferon-induced transmembrane protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000724418 Homo sapiens Neutral amino acid transporter B(0) Proteins 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- 102100040021 Interferon-induced transmembrane protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100027612 Kallikrein-11 Human genes 0.000 description 2
- 229930194542 Keto Natural products 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 206010029148 Nephrolithiasis Diseases 0.000 description 2
- 102100028267 Neutral amino acid transporter B(0) Human genes 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 2
- 108090000630 Oncostatin M Proteins 0.000 description 2
- 102000004140 Oncostatin M Human genes 0.000 description 2
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 2
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100028965 Proteoglycan 4 Human genes 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 101710152431 Trypsin-like protease Proteins 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 210000001264 anterior cruciate ligament Anatomy 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000015100 cartilage disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003011 chondroprotective effect Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 2
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 2
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 2
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 2
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 108010009030 lubricin Proteins 0.000 description 2
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000024121 nodulation Effects 0.000 description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920002946 poly[2-(methacryloxy)ethyl phosphorylcholine] polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 2
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 2
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 2
- ZVJHJDDKYZXRJI-UHFFFAOYSA-N pyrroline Natural products C1CC=NC1 ZVJHJDDKYZXRJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 2
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 210000005065 subchondral bone plate Anatomy 0.000 description 2
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 2
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 2
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025230 2-amino-3-ketobutyrate coenzyme A ligase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- VRYALKFFQXWPIH-HSUXUTPPSA-N 2-deoxy-D-galactose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-HSUXUTPPSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150040698 ANGPT2 gene Proteins 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010087522 Aeromonas hydrophilia lipase-acyltransferase Proteins 0.000 description 1
- VWEWCZSUWOEEFM-WDSKDSINSA-N Ala-Gly-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O VWEWCZSUWOEEFM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 108010039224 Amidophosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000052866 Amino Acyl-tRNA Synthetases Human genes 0.000 description 1
- 108700028939 Amino Acyl-tRNA Synthetases Proteins 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102100034594 Angiopoietin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034608 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100034598 Angiopoietin-related protein 7 Human genes 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 102100022544 Bone morphogenetic protein 7 Human genes 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 206010008609 Cholangitis sclerosing Diseases 0.000 description 1
- 206010061762 Chondropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000030939 Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 description 1
- 206010015218 Erythema multiforme Diseases 0.000 description 1
- 208000004332 Evans syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100035323 Fibroblast growth factor 18 Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241001123946 Gaga Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 241001077857 Grais Species 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000005331 Hepatitis D Diseases 0.000 description 1
- 208000037319 Hepatitis infectious Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000924552 Homo sapiens Angiopoietin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000924533 Homo sapiens Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000924546 Homo sapiens Angiopoietin-related protein 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000899361 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000878128 Homo sapiens Fibroblast growth factor 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000829958 Homo sapiens N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyl-transferase Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 208000002658 Intra-Articular Fractures Diseases 0.000 description 1
- 208000032984 Intraoperative Complications Diseases 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N L-methionine (R)-S-oxide Chemical compound C[S@@](=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101100001703 Mus musculus Angptl2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100001705 Mus musculus Angptl3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100434901 Mus musculus Angptl6 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000023178 Musculoskeletal disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 1
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102100023315 N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyl-transferase Human genes 0.000 description 1
- SSURCGGGQUWIHH-UHFFFAOYSA-N NNON Chemical compound NNON SSURCGGGQUWIHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 1
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 201000009859 Osteochondrosis Diseases 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 244000025272 Persea americana Species 0.000 description 1
- 235000008673 Persea americana Nutrition 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 201000007902 Primary cutaneous amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000006045 Spondylarthropathies Diseases 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 208000004732 Systemic Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102000012753 TIE-2 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010090091 TIE-2 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 1
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000023835 Tendon disease Diseases 0.000 description 1
- 206010043248 Tendon rupture Diseases 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000027207 Whipple disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010958 [3+2] cycloaddition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000033017 acquired idiopathic inflammatory myopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000009815 adipogenic differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N alpha-D-ara-dHexp Natural products OCC1OC(O)CC(O)C1O PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011882 arthroplasty Methods 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010927 atrophic thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000227 bioadhesive Substances 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- ZADPBFCGQRWHPN-UHFFFAOYSA-N boronic acid Chemical compound OBO ZADPBFCGQRWHPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019748 bullous skin disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 229960003773 calcitonin (salmon synthetic) Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N carboxyglutamic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008355 cartilage degradation Effects 0.000 description 1
- 230000003848 cartilage regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009816 chondrogenic differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 201000005795 chronic inflammatory demyelinating polyneuritis Diseases 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 208000010247 contact dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 206010061811 demyelinating polyneuropathy Diseases 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000001513 elbow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 201000009580 eosinophilic pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 201000001155 extrinsic allergic alveolitis Diseases 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 102000034240 fibrous proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005899 fibrous proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003811 finger Anatomy 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 1
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N formamide Substances NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 201000007192 granulomatous hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 201000010284 hepatitis E Diseases 0.000 description 1
- 230000001553 hepatotropic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000001624 hip Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 102000046949 human MSC Human genes 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229940018991 hyalgan Drugs 0.000 description 1
- 210000003035 hyaline cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 208000022098 hypersensitivity pneumonitis Diseases 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-O methylsulfide anion Chemical compound [SH2+]C LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012806 monitoring device Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000001002 morphogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000006053 organic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940023593 orthovisc Drugs 0.000 description 1
- 230000009818 osteogenic differentiation Effects 0.000 description 1
- PSWJVKKJYCAPTI-UHFFFAOYSA-N oxido-oxo-phosphonophosphanylphosphanium Chemical compound OP(O)(=O)PP(=O)=O PSWJVKKJYCAPTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 210000000426 patellar ligament Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 description 1
- DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N phosphonotyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 description 1
- PYJNAPOPMIJKJZ-UHFFFAOYSA-N phosphorylcholine chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O PYJNAPOPMIJKJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013138 pruning Methods 0.000 description 1
- 201000009732 pulmonary eosinophilia Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002278 reconstructive surgery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 1
- 108010068072 salmon calcitonin Proteins 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000010157 sclerosing cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N semicarbazide Chemical compound NNC(N)=O DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037974 severe injury Diseases 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 210000002832 shoulder Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940036220 synvisc Drugs 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 1
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1891—Angiogenesic factors; Angiogenin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
- A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
- A61K31/593—9,10-Secocholestane derivatives, e.g. cholecalciferol, i.e. vitamin D3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/728—Hyaluronic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/32—Bones; Osteocytes; Osteoblasts; Tendons; Tenocytes; Teeth; Odontoblasts; Cartilage; Chondrocytes; Synovial membrane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
- A61K38/014—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals from connective tissue peptides, e.g. gelatin, collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1875—Bone morphogenic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/225—Calcitonin gene related peptide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/515—Angiogenesic factors; Angiogenin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0655—Chondrocytes; Cartilage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/17—Angiopoietin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/13—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells
- C12N2506/1346—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from mesenchymal stem cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Virology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
Abstract
Изобретение относится к выделенному полипептиду с хондрогенной активностью и его вариантам, к фармацевтической композиции для лечения или профилактики артрита или повреждения хряща у пациента, содержащей указанный выделенный полипептид, к способу лечения, способу индукции дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток в хондроциты.
Description
Предпосылки изобретения
Остеоартроз (ОА) представляет собой наиболее распространенное расстройство опорнодвигательного аппарата. В настоящее время им страдают приблизительно 40 миллионов американцев; число увеличится до 60 миллионов человек в ближайшие двадцать лет в результате старения населения и увеличения средней продолжительности жизни, что делает ОА четвертой по значимости причиной инвалидности. ОА характеризуется медленным дегенеративным разрушением сустава, включая как суставной хрящ (содержащий клетки и матрикс, которые производит смазывание и амортизацию для сустава), так и субхондральную кость, лежащую в основе суставного хряща. ОА можно считать следствием различных этиологических факторов. Например, он может быть вызван патологическим биомеханическим стрессом или генетически обусловленной или приобретенной патологией суставного хряща или костной ткани. Современные способы лечения ОА включают облегчение боли при помощи пероральных НПВП или селективных ингибиторов циклооксигеназы 2 (СОХ-2), внутрисуставной (IA) инъекции средств, таких как кортикостероиды и гиалуронан, а также хирургические подходы.
Повреждение сустава, например сильное повреждение сустава, такое как разрыв мениска или связок, или внутрисуставной перелом, может также привести к артриту, например, посттравматическому артриту. Поскольку суставной хрящ обладает ограниченной способностью восстановления, даже небольшое незаметное повреждение часто может усугубляться со временем и приводить к возникновению ОА. Современные способы лечения повреждений суставов могут включать в себя операции и другие инвазивные процедуры, направленные на регенерацию поврежденных суставов, а также лечение с использованием средств для ослабления боли и воспаления.
Мезенхимальные стволовые клетки (MSC) присутствуют в зрелом суставном хряще и при выделении могут быть запрограммированы in vitro на дифференцировку в хондроциты и мезенхимальные клетки других линий и могут быть использованы для регенерации хряща. Отчасти этот процесс регулируется факторами роста (бета-трансформирующие факторы роста, морфогенетические протеины кости), составом сыворотки и межклеточным контактом. В WO 2011/008773 описаны пептидные композиции и применение этих композиций для лечения или профилактики артрита и повреждений суставов и для индуцирования дифференцировки мезенхимальных клеток в хондроциты. Кроме того, в WO 2012/129562 описаны низкомолекулярные соединения, композиции и применение этих композиций для улучшения состояния при артрите и поражении сустава и для индуцирования дифференцировки мезенхимальных клеток в хондроциты.
Несмотря на определенный прогресс в способах хирургического вмешательства и в регенеративных методиках в плане восстановления хрящевой ткани, замедления процесса дегенерации и улучшения восстановления поврежденных суставов существует постоянная необходимость в совершенствовании композиций и способов для эффективной регенерации хряща, для лечения повреждения суставов и улучшения состояния или профилактики ОА.
Краткое изложение сущности изобретения
Изобретение относится к обнаружению новых вариантов полипептидов и белков ангиопоэтинподобного белка 3 (ANGPTL3), которые имеют улучшенные фармацевтические свойства, например более стабильны, менее подвержены протеолизу и ферментативной деградации, чем ANGPTL3 дикого типа. Также изобретение относится к фармацевтическим композициям и способам лечения повреждения суставов или травмы сустава и к способам улучшения состояния при артрите или к способам профилактики артрита, повреждения суставов или травмы сустава у млекопитающего.
Таким образом, изобретение относится к протеазо-устойчивым полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности или по меньшей мере на 96, 97, 98, 99 или 100% идентична по аминокислотной последовательности любой аминокислотной последовательности, выбранной из одной или нескольких последовательностей табл. 1, и как далее описано в настоящем документе. Модифицированные полипептиды табл. 1 включают аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, как определено по отношению к полипептидную последовательность полноразмерного ANGPTL3 с последовательностью SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления аминокислота в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, представляет собой Q или S. В некоторых вариантах осуществления аминокислота в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления аминокислота в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, представляет собой S. В некоторых вариантах осуществления аминокислота в положении 423 делетирована, как определено по отношению к SEQ ID NO:1. Кроме того, предоставленные полипептиды обладают хондрогенной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит последовательность, которая по
- 1 035158 меньшей мере на 95% идентична или по меньшей мере на 96, 97, 98, 99 или 100% любой последовательности из SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 и SEQ ID NO:70. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична или по меньшей мере на 96, 97, 98, 99 или 100% любой последовательности из SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63 и SEQ ID NO:64. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит любую последовательность табл. 1. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит любую последовательность из SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 и SEQ ID NO:70. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63 и SEQ ID NO:64. В некоторых вариантах осуществления полипептид представляет собой любую последовательность из табл. 1. В некоторых вариантах осуществления полипептид представляет собой любую последовательность из SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 и SEQ ID NO:70. В некоторых вариантах осуществления полипептид представляет собой любую последовательность из SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63 и SEQ ID NO:64.
Полипептиды по изобретению могут включать одну или несколько химических модификаций (например, ПЭГилирование). В некоторых вариантах осуществления полипептиды по изобретению могут содержать гетерологичный пептид в качестве белка слияния, который может быть необязательно слит с амино- или карбоксиконцом полипептида. Также предоставлены полинуклеотиды, кодирующие полипептиды по изобретению; векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие полипептиды; и клеткихозяева, которые включают такие векторы.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим полипептиды по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Такие композиции можно использовать в способах, предусмотренных в этом документе для лечения, улучшения или профилактики артрита или повреждения суставов у пациента, где способ включает введение в сустав пациента терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по изобретению. Неограничивающие примеры состояний, для которых такие способы могут иметь преимущество, включают артрит (например, остеоартрит, травматический артрит) и повреждения суставов (например, сильная травма сустава).
Настоящее изобретение также относится к способам лечения индивидуума, включающим введение терапевтически эффективного количества полипептида по изобретению.
Предоставленные способы включают лечение индивидуума, страдающего повреждением сустава и/или артритом или имеющего риск их развития, включающие введение индивидууму терапевтически эффективного количества одного или более полипептидов по изобретению или их фармацевтической композиции. Также изобретение относится к способам индуцирования дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток в хрящевые клетки, включающим приведение мезенхимальных стволовых клеток в контакт с эффективным количеством полипептида по изобретению для индуцирования дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток в хондроциты.
Эти и другие аспекты изобретения, включая дополнительные признаки, преимущества и варианты осуществления изобретения, будут описаны и освещены более подробно в нижеследующем подробном описании и в формуле изобретения, приложенной к настоящему документу.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 иллюстрирует схему белков hANGPTL3, сконструированных для повышения стабильности белков и повышения протеолитической устойчивости. Во время продуцирования последовательностей белка дикого типа и пептидов между Lys423 и Ser424 наблюдалось 100% расщепление. Для уменьшения протеолиза были получены различные мутантные пептиды, в которых Lys423 был заменен на Gln или Ser; или Ser424 был заменен на Thr или Lys423 был делетирован;
фиг. 2А и В - графические представления экспрессии специфических белков хряща в присутствии или при отсутствии ANGPTL3 и инженерных конструкций. Фиксированные клетки окрашивали 2А для квантификации на проколлаген типа 2А (PIIANP) или 2В для квантификации на коллаген типа II для определения процента клеток, дифференцирующихся в хондроциты после обработки, как описано в пояс
- 2 035158 няющих примерах. Фиг. 2С иллюстрирует графическое представление количественной оценки анализов на ангиогенез в присутствии или при отсутствии ANGPTL3 или генно-инженерной конструкции по сравнению с белком положительного контроля, bFGF. Общая длина трубки и число точек ветвления представляли собой количественные измерения ангиогенеза. Несмотря на то что другими сообщалось об ангиогенной активности у ANGPTL3, и это исследование подтверждает активность, а также таковую у FGF, результаты продемонстрировали, что для конструкции С-терминального ANGPTL3 значительной активности не сохраняется;
фиг. 3 представляет собой графические представления, демонстрирующие увеличение экспрессии специфических белков хряща в присутствии ANGPTL3 или генно-инженерных конструкций. 3A. Клетки оценивали десять дней после лечения с помощью количественной ПЦР в реальном времени для определения экспрессии РНК для специфических белков хряща после обработки, как описано. Лубрицин, аггрекан и Sox9 представляют белки, родственные хрящевым; IGF и IFITM1 представляют потенциал дифференциации, и остеокальцин и коллаген X типа представляют белки, родственные костно/фиброзным белкам. 3B. Клетки оценивали три дня после обработки, как описано. Увеличенная экспрессия аггрекана была отмечена после лечения полипептидом С-концевой области генно-инженерной конструкции или ANGPTL1 дикого типа;
фиг. 4 иллюстрирует графическое представление хондрозащитной активности ANGPTL3 и генноинженерных конструкций. 4А: высвобождение гликозаминогликана (ГАГ), индикатора повреждения матрикса, ингибировалось с ростом количества ANGPTL3 и мутантных конструкций. Анализы ингибирования высвобождения ГАГ ex vivo (индикатор повреждения матрикса) проводили с использованием бычьего хряща, обработанного в присутствии или при отсутствии конструкций, как описано. 4В и 4С: нормализованное высвобождение ингибировалось с увеличением количества ANGPTL3 и генноинженерных конструкций, как указано. Хрящевые клетки обрабатывали в присутствии или при отсутствии конструкций, как описано, с последующими тестами реакции Грейсса, чтобы определить ингибирование нормализованного высвобождения как показателя хондрозащиты;
фиг. 5 - графическое представление, демонстрирующее ингибирование экспрессии коллагена типа X (показатель активности формирования фиброзных хрящей) в присутствии конструкций при гипертрофических условиях. Первичные хондроциты обрабатывали при наличии или отсутствии конструкций при гипертрофических условиях, как описано, с последующим определением экспрессии коллагена типа X, оцениваемой способом иммунофлюоресценции, как определение формирования фиброзного и гипертрофического хряща/дифференциации хондроцитов. 5А иллюстрирует результаты для С-терминального ANGPTL3 дикого типа или генно-инженерной конструкции. 5В иллюстрирует результаты для Сконцевого ANGPTL3 (WT) или генно-инженерных конструкций 242KQ или 242Kdel или С-концевого ANGPTL1;
фиг. 6 - схематическое представление парадигмы дозирования (6А) с последующим графическим представлением (6В) уменьшения степени тяжести заболевания сустава после лечения мышиным ANGPTL3 (17-460), как определено путем балльной оценки эрозии хряща латерального мыщелка бедра;
фиг. 7. является графическим представлением инкапаситантных измерений (показатель боли) у мышей после хирургической индукции повреждения хряща и последующего лечения ANGPTL3конструкциями один раз в неделю в течение трех недель (начало в день 7). 7А представляет инкапаситантные измерения на 35-й день после операции; и 7В представляет измерения, проведенные на 56-й день после операции;
фиг. 8 - графическим представлением балльной оценки общей степени тяжести заболевания сустава и улучшения степени тяжести повреждения хрящевой ткани, индуцированной коллагеназой у мышей после 3 процедур лечения один раз в неделю (дни 7, 14 и 21) ANGPTL3-конструкциями (указывается);
фиг. 9 иллюстрирует результаты повреждения суставов в модели разрыва мениска на крысах после лечения генно-инженерной ANGPTL3-конструкцией. Фиг. 9А является графическим представлением содержания протеогликанов в суставах через пять недель после лечения; фиг. 9В является графическим представлением балльной оценки степени тяжести бедренного сустава через пять недель после лечения. Результаты иллюстрируют улучшение состояния хрящевых повреждений, индуцированных хирургическим разрывом мениска у крыс, после 3 лечебных процедур один раз в неделю (дни 7, 14 и 21) с ANGPTL3 -конструкциями (указывается);
фиг. 10 - результаты повреждения суставов в модели разрыва мениска на крысах после лечения генно-инженерной ANGPTL3-конструкцией. Фиг. 10А является графическим представлением процентов восстановления in vivo, измеряемого по степени тяжести, интенсивности сафранина О, хрящевой области и толщине хряща. Фиг. 10В является графическим представлением инкапаситантных измерений (показатель боли) у крыс после хирургической индукции повреждения хряща и последующего лечения;
фиг. 11 является графическим представлением балльной оценки общей валового тяжести для иллюстрации улучшения в состоянии хрящевых повреждений, индуцированных хирургическим разрушением медиального мениска у собак после двухнедельных дозирования, начатого в 4-й день (каждая по 1,5 мкг/дозу или 15 мкг/дозу), или однократной 30 мкг-дозы, вводимой в 7-й день только.
- 3 035158
Подробное описание
Изобретение основано, по меньшей мере, частично на идентификации ангиопоэтин-подобных 3 (ANGPTL3) полипептидов, которые стимулируют хондроцитную дифференцировку мезенхимальных стволовых клеток и которые устойчивы к расщеплению протеазами (например, трипсин-подобными протеазами). WO 2011/008773 описывает ANGPTL3-пептидные композиции и применение пептидных композиций для лечения или профилактики артрита и повреждений суставов и для индуцирования дифференцировки мезенхимных клеток в хондроциты. Мы обнаружили, что ANGPTL3-белки дикого типа подвергаются протеазному обрезанию и нестабильности, и идентифицировали варианты последовательности, чтобы уменьшить этот эффект. Настоящее изобретение, таким образом, предоставляет улучшенные пептидные композиции для восстановления хряща. В частности, предоставляются ANGPTL3-пептиды, модифицированные в соответствии с настоящим изобретением для увеличения протеаза-устойчивости по сравнению с полипептидом ANGPTL3 дикого типа. Также предлагаются композиции и способы введения ANGPTL3-полипептидов, чтобы предотвратить или смягчить артрит или травму сустава с помощью введения полипептида по изобретению в сустав, хрящевую ткань или хрящевую проксимальную ткань, или системно. Далее, изобретение предоставляет составы и способы для индукции дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток в хондроциты.
Определения.
Термин протеаза-устоичивый в настоящем документе обозначает полипептид, включающий модификацию, которая предоставляет полипептид, менее чувствительный к расщеплению трипсинподобной протеазы, чем соответствующий немодифицированный полипептид дикого типа. В конкретных вариантах осуществления протеаза-устойчивый полипептид представляет собой полипептид ANGPTL3, который имеет аминокислотную замену относительно природной пептидной последовательности дикого типа, на остаток R или K.
ANGPTL3 относится к члену семейства ангиопоетиновых белков. Аминокислотная последовательность ANGPTL3 (входящий номер GenBank No. NP_055310.1) изложена в SEQ ID NO:1; и соответствующая полинуклеотидная последовательность которой изложена как SEQ ID NO:2 (номер NCBI референсной последовательности NM014495.2, где кодирующая последовательности ANGPTL3 содержит нуклеотиды 52-1434 SEQ ID NO:2). Полипептид ANGPTL3 относится к природному экспрессируемому полипептиду. Для целей настоящего раскрытия нумерация аминокислоты, как правило, определяется с учетом полной длины полипептидной последовательности ANGPTL3 дикого типа человека (как SEQ ID NO:1). Таким образом, в вариантах осуществления, в которых полипептид по изобретению содержит только с-концевую часть полноразмерного ANGPTL3, но не N-концевую части, хотя пептид состоит менее чем 460 аминокислот в длину, нумерация положений основывается на SEQ ID NO:1. Например, ссылка на положение 423 полипептида ANGPTL3 по изобретению относится к положению 423 SEQ ID NO:1, хотя полипептид ANGPTL3 по изобретению сам по себе может составлять только 200 аминокислот в длину. При определении аминокислоты в представляющей интерес последовательности из, которая соответствует положению в референсной последовательности, такой как как SEQ ID NO:1, это осуществляется с помощью оптимального выравнивания последовательностей, например, используя по умолчанию параметры выравнивания CLUSTAL или по умолчанию параметры выравнивания BLAST 2 и сравнивания последовательности. Например, положение 423 в представляющей интерес последовательности, которое определяется по отношению к SEQ ID NO:1, или аминокислота, которая соответствует положению 423 SEQ ID NO:1, означает аминокислоту, которая согласуется с положением 423 из SEQ ID NO:1 в случае, если представляющая интерес последовательность проценты оптимально выровнена с SEQ ID NO:1.
Термины пептидомиметический и миметический относятся к синтетическому химическому соединению, которое обладают в существенной степени теми же функциональными характеристиками, что и природный или не встречающийся в природе полипептид (например, ANGPTL3), но разными (хотя обычно подобными) структурными характеристиками. Пептидные аналоги обычно используются в области как непептидные активные соединения (например, лекарства) со свойствами, аналогичными тем, которые имеются у эталонного пептида. Такие непептидные соединения называются пептидные миметики или пептидомиметики (Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986); Veber and Freidinger TINS p. 392 (1985); and Evans et al. J. Med. Chem. 30: 1229 (1987)). Пептидные миметики, которые конструктивно сходны с терапевтически полезными пептидами, могут использоваться для того, чтобы произвести равноценный или усиленный терапевтический или профилактический эффект. Как правило, пептидомиметики структурно сходны с эталонным полипептидом (т.е. полипептидом, обладающим биологической или фармакологической активностью), например, обнаруженной у представляющего интерес полипептида, но имеют одну или несколько пептидных связей, необязательно замененных связью, выбранной из группы, включающей, например, -CH2NH-, -CH2S-, СН2-СН2-, -СН=СН- (цис и транс), -СОСН2-, -СН(ОН)СН2- и -CH2SO-. Миметик может либо полностью состоять из синтетических, ненатуральных аналогов аминокислот, или представляет собой химерную молекулу частично природных пептидных аминокислот и частично ненатуральных аналогов аминокислот. Миметик может также включать любое количество консервативных замен натуральных аминокислот при условии, что такие замены также не
- 4 035158 существенно изменяют структуру и/или активность миметика. Например, композиция миметика находится в рамках изобретения, если он обладает хондрогенной активностью полипептида ANGPTL3.
Термины полипептид, пептид и белок используются здесь взаимозаменяемо для обозначения полимера аминокислотных остатков. Термины применяются для аминокислотных полимеров, в которых один или более аминокислотных остатков представляет собой искусственный химический миметик соответствующей природной аминокислоты, а также для природных аминокислотных полимеров и неприродных аминокислотных полимеров. Полипептиды, пептиды и белки по изобретению включают протеаза-устойчивые ANGPTL3-пептидомиметики, обладающие хондрогенной активностью.
Термин аминокислота относится к природным и синтетическим аминокислотам, а также аналогам аминокислот и аминокислотным миметикам, которые функционируют аналогично природным аминокислотам. Природными являются те аминокислоты, которые кодируются генетическим кодом, а также те аминокислоты, которые затем были изменены, например гидроксипролин, γ-карбоксиглутамат и Офосфосерин. Аминокислотные аналоги относятся к соединениям, которые имеют ту же основную химическую структуру, что и природная аминокислота, т.е. углерод, который связан с водородом, карбоксильной группой, аминогруппой и R-группу, например гомосерин, норлейцин, метионинсульфоксид, метионинметилсульфоний. Такие аналоги имеют модифицированные R-группы (например, норлейцин) или модифицированный пептидный остов, но сохраняют ту же базовую химическую структуру, что и у природной аминокислоты. Природно кодируемыми аминокислотами являются 20 общих аминокислот (аланин, аргинин, аспарагин, аспарагиновая кислота, цистеин, глутамин, глутаминовая кислота, глицин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, триптофан, тирозин и валин), а также пирролизин, пирролинкарбоксилизин и селеноцистеин.
Консервативно модифицированные варианты относится к последовательностям как аминокислот, так и нуклеиновых кислот. По отношению к конкретной последовательности нуклеиновых кислот консервативно модифицированные варианты относятся к тем нуклеиновым кислотам, которые кодируют идентичные или по существу идентичные аминокислотные последовательности, или где нуклеиновая кислота не кодирует аминокислотную последовательность к, по существу, идентичным последовательностям. Вследствие вырожденности генетического кода большое количество функционально идентичных нуклеиновых кислот кодирует любой заданный белок. Например, каждый из кодонов GCA, GCC, GCG и GCU кодирует аминокислоту аланин. Таким образом, в каждом положении, в котором аланин определяется кодоном, кодон может быть изменен на какой-либо из соответствующих кодонов без изменения кодируемого полипептида. Такие вариации нуклеиновых кислот представляют собой молчащие вариации, которые являются одним из видов консервативно модифицированных вариаций. Каждая полипептидная последовательность в настоящем документе, которая кодируется с помощью полинуклеотида, включает все возможные молчащие вариации нуклеиновой кислоты. Любой специалист в рассматриваемой области техники признает, что каждый кодон в нуклеиновой кислоте (за исключением AUG, который является обычно единственным кодоном для метионина, и TGG, который обычно является единственным кодоном для триптофана) может быть модифицирован для получения функционально идентичной молекулы. Соответственно, каждая молчащая вариация нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, подразумевается в каждой описанной последовательности.
Любой специалист признает, что отдельные замены, делеции или добавления к нуклеотидной, пептидной, полипептидной, белковой последовательности, которая изменяет, добавляет или удаляет одну аминокислоту или небольшой процент аминокислот по сравнению с исходной кодируемой аминокислотной последовательностью, приводит к консервативно модифицированному варианту, где изменение производит замену аминокислоты на химически сходную аминокислоту, и/или полипептидной последовательности, которая производит структурно сходный белок, имеющий сходную функциональную активность исходного белка. Таблицы консервативных замен, обеспечивающих функционально подобные аминокислоты, хорошо известны в данной области техники. Такие консервативно модифицированные варианты дополняют и не исключают полиморфные варианты, межвидовые гомологи и аллели по изобретению.
Термин консервативные замены аминокислот относится к замене (по существу или иначе) аминокислоты из одной такой группы другой аминокислотой из той же группы. Один из примеров замен основан на анализе нормированных частот аминокислотных изменений между соответствующими белками гомологичных организмов (см., например Schulz G.E. and КН. Schirmer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag). По данным такого анализа можно определить группы аминокислот, где аминокислот внутри группы обмениваются преимущественно друг с другом и, следовательно, похожи друг на друга больше всего в их влиянии на общую структуру белка (см., например, Schulz GT. and R.H. Schirmer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag). Один пример из набора аминокислотных групп, определенных таким образом, включает: (i) заряженную группы, состоящую из Glu and Asp, Lys, Arg и His; (ii) положительно заряженную группу, состоящую из Lys, Arg и His; (iii) отрицательно заряженную группу, состоящую из Glu и Asp; (iv) ароматическую группу, состоящую из Phe, Tyr и Trp; (v) группу азотного кольца, состоящую из His и Trp; (vi) большую алифатическую неполярную группу, состоящую из Val, Leu and Ile; (vii) слабо-полярную группу, состоящую из Met и Cys; (viii) группу небольших остатков, со
- 5 035158 стоящую из Ser, Thr, Asp, Asn, Gly, Ala, Glu, Gln и Pro; (ix) алифатическую группу, состоящую из Val, Leu, His, Met и Cys; и (х) небольшую гидроксильную группу, состоящую из Ser и Thr. Другие примеры консервативных замен, основанных на общих физических свойствах, являются замены в следующих группах: 1) аланин (А), глицин (G); 2) аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е); 3) аспарагин (N), глутамин (Q); 4) аргинин (R), лизин (K); 5) изолейцин (I), лейцин (L), метионин (М), валин (V); 6) фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W); 7) серин (S), треонин (Т); и 8) цистеин (С), метионин (М) (см., например, Creighton, Proteins (1984)).
Процент идентичности последовательности определяется путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей на протяжении окна сравнения, при котором участок аминокислотной последовательности или полинуклеотидной последовательности в окне сравнения может содержать добавления или делеции (т.е. пробелы) по сравнению с эталонной последовательностью (например, полипептидом по изобретению), которая не содержит добавлений или делеций, для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процент высчитывается путем определения числа положений, на которых идентичные основания нуклеиновых кислот или аминокислотных остатков находятся в обеих последовательностях, для получения числа совпавших положений, деленного на число совпавших положений в общем количестве положений в окне сравнения, и умножения результата на 100, чтобы получить процент идентичности последовательности.
Термины идентичный или процент идентичности в контексте двух или более нуклеиновых кислот или полипептидных последовательностей относятся к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые являются одинаковыми последовательностями. Две последовательности являются по существу идентичными, если две последовательности имеют определенный процент остатков аминокислот или нуклеотидов, которые являются одинаковыми (т.е. 95% идентичность, необязательно 96, 97, 98 или 99% идентичность на протяжении определенной области или, если он не указан, на протяжении всей последовательности), при сравнении и выравнивании для максимального соответствия на протяжении окна сравнения, или желательного участка, определяемого с помощью одного из следующих алгоритмов сравнения последовательностей или путем ручного выравнивания и визуального исследования. Изобретение предоставляет полипептиды, которые являются существенно идентичными полипептидам, соответственно, служащим примером в настоящем документе (например, любой из SEQ ID NOs: 11-42), а также использует их, в том числе, но без ограничения, для применения при лечении или профилактике артрита или травмы сустава. Дополнительно, для нуклеиновых кислот, идентичность имеет место на протяжении области по меньшей мере примерно 150 нуклеотидов в длину или, более предпочтительно, на протяжении области, составляющей от 300 до 450 или 600 или более нуклеотидов в длину или всю длину эталонной последовательности. Для аминокислотной последовательности, необязательно, идентичность имеет место на протяжении области, составляющей по меньшей мере приблизительно 50 аминокислот в длину или, более предпочтительно, на протяжении области, составляющей от 100 до 150 или 200 и более аминокислот в длину или всю длину эталонной последовательности.
При сравнении последовательностей обычно одна последовательность выступает в качестве эталонной последовательности, с которой сравниваются тестируемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей, тестируемые и эталонную последовательности вводят в компьютер, обозначают координаты подпоследовательностей в случае необходимости и задают параметры программы алгоритма последовательностей. Можно использовать параметры программы по умолчанию, или могут быть определены альтернативные параметры. Алгоритм сравнения последовательностей затем вычисляет процент идентичности последовательности для тестируемых последовательностей относительно эталонной последовательности на основе параметров программы.
Окно сравнения, как используется в настоящем документе, включает ссылку на сегмент любого ряда последовательных положений, выбранного из группы, включающей от 50 до 600, как правило, примерно от 75 до примерно 200, более обычно примерно от 100 до примерно 150, в котором последовательность можно сравнивать с эталонной последовательностью из такого же числа смежных положений после того, как две последовательности оптимально выровнены. Способы выравнивания последовательностей для сравнения хорошо известны в данной области техники. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения может быть проведено, например, путем алгоритма локальной гомологии Smith and Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c, путем алгоритма гомологического выравнивания Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443, путем поиске способом сходства Pearson and Lipman (1988) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444, при помощи компьютерных реализаций этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA) или путем ручного выравнивания и визуального рассмотрения (см., например, Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1995, приложение)).
Двумя примерами алгоритмов, пригодных для определения процента идентичности последовательностей и сходства последовательностей, являются алгоритмы BLAST и BLAST 2.0, которые описаны в Altschul et al. (1977) Nuc. Acids. Res. 25:3389-3402 и Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 соответственно. Программное обеспечение для выполнения анализов BLAST публично доступно через Национальный центр биотехнологической информации. Этот алгоритм предполагает, в первую очередь, выявление высокорезультативных пар у последовательностей (HSP) путем идентификации коротких
- 6 035158 слов длиной W в последовательности запроса, которые либо совпадают, либо удовлетворяют некоторому положительно оцененному проходному баллу Т при выравнивании со словом той же длины в последовательности базы данных. Т называется порогом оценки соседних слов (Altschul et al., выше). Эти первоначальные совпадения соседних слов выступают в качестве затравок для инициирующих поисков, чтобы найти более длинные HSP, их содержащие. Совпадения слов распространяются в обоих направлениях вдоль каждой последовательности до тех пор, пока совокупный балл выравнивания может увеличиваться. Совокупные баллы рассчитываются с использованием, для нуклеотидных последовательностей, параметров М (наградной балл для пары совпадающих остатков; всегда >0) и N (штрафной балл за несовпадение остатков; всегда <0). Для аминокислотных последовательностей оценочные таблицы используются для расчета суммарного балла. Распространение совпадений слов в каждом направлении прекращается в случае, когда совокупный балл выравнивания снижается на количество X от своего максимального достигнутого значения; совокупный балл достигает нуля или ниже, из-за накопления одного или нескольких выравниваний остатков с отрицательной оценкой; или достигается конец любой последовательности. Параметры W, Т и X алгоритма BLAST определяют чувствительность и скорость выравнивания. В программе BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) по умолчанию используется длина слова (W) 11, ожидание (Е) 10, М=5, N=-4 и сравнение обеих цепей. Для аминокислотных последовательностей программа BLASTP по умолчанию использует длину слова 3 и ожидание (Е) 10 и оценочную матрицу BLOSUM62 (см. Henikoff and Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915) выравнивания (В) 50, ожидание (Е) 10, M=5, N=-4 и сравнение обеих цепей.
Алгоритм BLAST также выполняет статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787). Одним из критериев сходства, предусмотренных алгоритмом BLAST, является наименьшая сумма вероятностей (P(N)), которая обеспечивает индикацию вероятности, по которой сопоставление двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей могло бы произойти случайно. Например, нуклеиновая кислота рассматривается аналогично эталонной последовательности, если наименьшая сумма вероятностей при сравнении тестируемой нуклеиновой кислоты с эталонной нуклеиновой кислоты составляет менее чем примерно 0,2, более предпочтительно менее чем примерно 0,01 и, наиболее предпочтительно, менее чем примерно 0,001.
Термин выделенный в случае применения к нуклеиновой кислоте или белку означает, что нуклеиновая кислота или белок очищается, чтобы быть, по существу, свободной от других клеточных компонентов, с которыми она(он) связан в природном состоянии. Часто она(он) находится в однородном или почти однородном состоянии. Она(он) может быть либо сухой, либо находиться в водном растворе. Чистота и однородность может быть определена с использованием способов аналитической химии, известных и, как правило, используемых в рассматриваемой области техники, например гель-электрофорез в полиакриламидном геле, высокоэффективная жидкостная хроматография и др. Белок, который является преобладающим видом, присутствующим в препарате, является в существенной степени очищенным. Термин очищенный в некоторых вариантах осуществления обозначает, что белок образует, в основном, одну полосу на электрофорезном геле. Как правило, это означает, что белок, является, по меньшей мере, 85% чистоты, более предпочтительно по меньшей мере 95% чистоты и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 99% чистоты.
Термин гиалуроновая кислота используются в настоящем документе для включения производных гиалуроновой кислоты, которые включают сложные эфиры гиалуроновой кислоты, соли гиалуроновой кислоты, а также включает в себя термин гиалуронан. Обозначение также включает как низко-, так и высокомолекулярные формы гиалуронанов и сшитых гиалуронанов или ксиланов. Примерами таких гиалуронанов являются Synvisc™ (Genzyme Corp. Cambridge, Массачусетс), ORTHOVISC™ (Anika Therapeutics, Уоберн, Массачусетс), HYALGAN™ (Sanofi-Synthelabo Inc., Малверн, Пенсильвания) и Pro Vise (Alcon/No vartis).
Ангиопоэтин-подобные 3 протеаза-устойчивые полипептиды.
Ангиопоэтин-подобный 3 является членом ангиопоэтин-подобного семейства секретируемых факторов. Он преимущественно экспрессируется в печени и имеет характерную структуру ангиопоэтинов, состоящих из сигнального пептида, N-концевого биспирального домена (CCD) и С-концевого фибриноген(FBN)-подобного домена. Ангиопоэтин-подобный 3, как было показано, связывается с аУф3 интегринами, и самого по себе FBN-подобного домена было достаточно, чтобы индуцировать адгезию эндотелиальных клеток и ангиогенез in vivo (Camenisch et al., J. Biol. Chem. 277: 17281-17290, 2002). Эндогенные ANGPTL3 обычно расщепляются in vivo на аминоконцевой и карбоксиконцевой фрагменты. Как кратко изложено выше и далее описано в этом документе, изобретение предусматривает применение различных протеаза-устойчивых ANGPTL3-белков, обладающих хондрогенной активностью.
В некоторых вариантах осуществления выделенный полипептид включает аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 95% идентичность или по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичность с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из последовательностей в табл. 1, отличающаяся тем, что полипептид содержит аминокислоту, которая является полярной
- 7 035158 аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, или полипептид содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид по изобретению обладает хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:70, где полипептид содержит аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423 или полипептид содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активности. В дополнительном варианте осуществления полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющей по меньшей мере 95% идентичность или по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичность с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63 или SEQ ID NO:64, где полипептид содержит аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью.
В некоторых вариантах осуществления выделенный полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей из табл. 1, отличающуюся тем, что полипептид включает аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, или полипептидной содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит аминокислотную последовательность выбранную из любой из SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:70, где полипептид включает аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении, или 423 полипептид содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью. В дополнительном варианте полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63 или SEQ ID NO:64, где полипептид содержит аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью.
В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид имеет по меньшей мере 95% идентичность или по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичность с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из последовательностей из табл. 1, где полипептид включает аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, или полипептид содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления полипептид имеет по меньшей мере 95% идентичность или по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:70, где полипептид включает аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, или полипептидной содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью. В дополнительном варианте осуществления полипептид имеет по меньшей мере 95% идентичность, или по меньшей мере или по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичность с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63 или SEQ ID NO:64, где полипептид включает аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью.
В некоторых вариантах осуществления выделенный полипептид представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей, представленных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления полипептид представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ
- 8 035158
ID NO:41, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 или SEQ ID N0:70. В дополнительном варианте полипептид представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63 или SEQ ID NO:64.
Таблица 1 Конструкции вариантов ANGPTL3
SEQ ID | Конструкция | Последовательность |
14 | 207KQ | IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAI RPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGL EKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNA IPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPE RRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
15 | 207KS | IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAI RPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGL EKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNA IPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPE RRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
16 | 225KQ | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTDSESFE |
17 | 225KS | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTDSESFE |
18 | 225ST | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKTKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTDSESFE |
- 9 035158
19 | 226KQ | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTDSESFE |
20 | 226KS | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTDSESFE |
21 | 228KQ | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST KMLIHPTDSESFE |
22 | 228KS | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST KMLIHPTDSESFE |
23 | 228ST | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKTKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST KMLIHPTDSESFE |
24 | 233KQ | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH PTDSESFE |
25 | 233KS | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH PTDSESFE |
26 | 241KQ | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGW-WH DECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
27 | 2 4 IKS | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWTWH DECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
28 | 242KQ | IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD ECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
29 | 242KS | IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD ECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
- 10 035158
30 | 225-455KQ | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTD |
31 | 225-455KS | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTD |
32 | 22 6-455KQ | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTD |
33 | 226-455KS | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTD |
34 | 228-455KQ | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST KMLIHPTD |
- 11 035158
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW
TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED
228-455KS
WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF
NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST
KMLIHPTD
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH
RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK
233-455KQ
HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG
YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH
PTD
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH
RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK
233-455KS
HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG
YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH
PTD
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF
241-455KQ
NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY
LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH
DECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF
241-455KS
NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY
LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH
DECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN
242-455KQ
ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL
GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD
ECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN
242-455KS
ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL
GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD
ECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAI
RPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGL
207Kdel
EKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNA
IPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPER
RRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
- 12 035158
59 | 225Kdel | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTDSESFE |
60 | 226Kdel | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKS TKMLIHPTDSESFE |
61 | 228Kdel | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTK MLIHPTDSESFE |
62 | 233Kdel | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHP TDSESFE |
63 | 241Kdel | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH DECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
64 | 242Kdel | IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD ECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
65 | 225- 455Kdel | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHICAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTD |
66 | 226- 455Kdel | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKS TKMLIHPTD |
67 | 228-455Kdel | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTK MLIHPTD |
- 13 035158
68 | 233-455Kdel | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHP TD |
69 | 241-455Kdel | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH DECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
70 | 242-455Kdel | IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD ECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
Модифицированные полипептиды ANGPTL3 по изобретению имеют по меньшей мере одну замену в С-концевой части полипептида, чтобы сделать полипептид протеаза-устойчивым. Замена имеет место по остаткам R или K, так что полипептиды обладают повышенной устойчивостью, например, к трипсиноподобным протеиназам. Любая аминокислота может быть заменена на R или K в протеаза-устойчивом полипептиде ANGPTL3 по изобретению. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой полярную аминокислоту, например Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S. В некоторых вариантах осуществления протеазаустойчивый пептид содержит аминокислоту в положении 423, по отношению к SEQ ID NO:1, которая отлична от K или R. В некоторых вариантах осуществления полипептид по изобретению содержит аминокислоту в положении 423, которая является полярной аминокислотой. Например, аминокислота в положении 423 может представлять собой Q или S или другую полярную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления полипептид по изобретению имеет Q в положении 423. В других вариантах осуществления полипептид по изобретению имеет S в положении 423. В некоторых вариантах осуществления в дополнение к замене в 423, протеаза-устойчивый пептид имеет замену другого R или K в С-конце SEQ ID NO: 1 или ее варианте, при которой замена представляет собой полярную аминокислоту, отличную от R или K. В некоторых вариантах осуществления замена в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, представляет собой Q или S. Еще в других вариантах осуществления полипептид по изобретению имеет делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1.
В некоторых вариантах осуществления полипептид по изобретению составляет 250 аминокислот или меньше в длину и содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:70.
В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет применение полноразмерных протеаза-устойчивых, хондрогенных белков ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет протеаза-устойчивые белки ANGPTL3, содержащие С-концевую часть последовательности ANGPTL3, или ее хондрогенный вариант. В определенных вариантах осуществления у белков ANGPTL3 отсутствует амино-терминальный конец нативного белка. В некоторых вариантах осуществления у протеаза-устойчивых белков ANGPTL3 по изобретения отсутствует домен CCD и/или отсутствует существенная CCD-активность. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления протеазаустойчивые белки ANGPTL3 по изобретению включают, по меньшей мере, фрагмент (например по меньшей мере 100, 150, 200, 220 или 215 смежных аминокислот) карбоксиконцевого домена белка ANGPTL3 человека, или в существенной степени идентична последовательности карбоксиконцевой последовательности белка ANGPTL3 человека, где полипептид и его варианты сохраняет хондрогенную активность. В некоторых вариантах осуществления у протеаза-устойчивого полипептида по изобретению отсутствует по меньшей мере часть С-терминальной последовательности, например, отсутствует 5, 10, 15 или 20 аминокислот с С-терминального конца SEQ ID NO:1 (т.е. отсутствуют 456-460, 451-460, 446-460 или 441-460 в SEQ ID NO: 1).
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый полипептид ANGPTL3 по изобретению содержит смежные аминокислоты, соответствующие аминокислотным участкам: аминокислоты 241-455 или 241-460 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 242-455 или 242-460 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 233-455 или 233-460 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 228-455 или 228-460 из SEQ ID NO:1, аминокислоты 226-455 или 226-260 или аминокислоты 225-455 или 225-260 из SEQ ID NO:1, в которой аминокис
- 14 035158 лота заменяется на R или K или один остаток делегирован. В некоторых вариантах осуществления замены содержится в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления содержится делеция в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления протеазы-устойчивый полипептид содержит смежные аминокислоты, соответствующие аминокислотным областям 207-455 или 207-460 из SEQ ID NO:1, в которой аминокислота заменена на R или K, или один остаток делетирован. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция содержится в положении 423. В некоторых вариантах осуществления замена является полярной аминокислотой, например Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления, включена делеция в положении 423 относительно SEQ ID NO:1.
Изобретение дополнительно предоставляет протеаза-устойчивый полипептид, при этом полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичность, или по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичность с аминокислотами 240-454 из SEQ ID NO:1, аминокислотами 241-455 из SEQ ID NO:1 или аминокислотами 242-455 из SEQ ID NO:1 с заменой или делецией по аминокислоте, соответствующей положению 423 из SEQ ID NO:1, где замещенной аминокислотой является не R, и где полипептид обладает хондрогенной активностью. В других вариантах осуществления полипептид включает аминокислоты 240-454 из SEQ ID NO:1, аминокислоты 241-455 из SEQ ID NO:1 или аминокислоты 242-455 из SEQ ID NO:1, каждый полипептид с заменой или делецией по аминокислоте, соответствующей положению 423 SEQ ID NO:1, где замещенный аминокислотой является Q или S.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый полипептид ANGPTL3 по изобретению содержит аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере 95%, или по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, или по меньшей мере 99% идентичность с аминокислотами аминокислотами 242-455 или 242-460 из SEQ ID NO:1; 241-455 или 241-460 из SEQ ID NO:1; аминокислотами 233-455 или 233-460 из SEQ ID NO:1; аминокислотами 228-455 или 228-460 из SEQ ID NO:1, аминокислотами 226-455 или 226-260 из SEQ ID NO:1, или аминокислотами 225-455 или 225-260 из SEQ ID NO:1, в котором аминокислота заменена на R или K, или R или K делетированы. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция содержится в положении 423. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой полярную аминокислоту, например Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления, замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления содержится делетированный остаток в положении 423 относительно SEQ ID NO:1.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый полипептид ANGPTL3 по изобретению составляет 250 или 240 или меньше аминокислот в длину и содержит аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 и SEQ ID NO:70. В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый полипептид ANGPTL3 по изобретению составляет 230 или 225 или меньше аминокислот в длину и содержит аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:70.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивые белки ANGPTL3 по изобретению включают аминокислотные последовательности, имеющие, по меньшей мере 95% идентичность, или, по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичность с С-концевой последовательностью белка ANGPTL3 собаки, быка или лошади. В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивые белки ANGPTL3 по изобретению включают, по меньшей мере, фрагмент (например, по меньшей мере 100, 150, 200, 215 смежных аминокислот) последовательности нативного белка ANGPTL3 собаки (SEQ ID NO:4), лошади (SEQ ID NO:5) или быка (как SEQ ID NO:6), или последовательности, в существенной степени идентичной последовательности нативного белка ANGPTL3 собаки, быка или лошади, где полипептид включает аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, или полипептид содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления выделенный полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичностю, или по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичность с SEQ ID NO:42 и SEQ ID NO:43, где полипептид включает аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, или полипептид содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления полипептид
- 15 035158 имеет по меньшей мере 95% идентичность или по меньшей мере 96, 97, 98 или 99% идентичность с SEQ ID NO:42 и SEQ ID NO:43, где полипептид включает аминокислоту, которая является полярной аминокислотой, отличной от K или R в положении 423, или полипептид содержит делецию в положении 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1, и полипептид обладает хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит SEQ ID NO:42 или SEQ ID NO:43. В дополнительном варианте осуществления полипептид представляет собой SEQ ID NO:42 или SEQ ID NO:43.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый ANGPTL3 по изобретению содержит аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 95%, или по меньшей мере 96, 97, 98, или по меньшей мере 99% идентичность с аминокислотами 232-454 из SEQ ID NO:4, аминокислотами
240- 454 из SEQ ID NO:4, аминокислотами 227-454 из SEQ ID NO:4 или аминокислотами 224-454 из SEQ ID NO:4, в которой аминокислота заменена на R или K, или содержится делеция R или K. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция содержится в положении 422 в SEQ ID NO:4, что соответствует положению 423 в SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой полярную аминокислоту, например Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная делеция находится в положении 422 в SEQ ID NO:4.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый ANGPTL3 по изобретению содержит аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 95% или по меньшей мере 96, 97, 98 или по меньшей мере 99% идентичность с аминокислотами 233-455 из SEQ ID NO:5, аминокислотами
241- 455 из SEQ ID NO:5, аминокислотами 228-455 из SEQ ID NO:5 или аминокислотами 225-455 из SEQ ID NO:5, в которой аминокислота заменена на R или K, или содержится делеция R или K. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция находится в положении 423 в SEQ ID NO:5, что соответствует положению 423 в SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления замена является полярной аминокислотой, например, Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления, замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная делеция находится в положении 423 в SEQ ID NO:5.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый ANGPTL3 по изобретению содержит аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 95% или по меньшей мере 96, 97, 98 или по меньшей мере 99% идентичность с аминокислотами 233-455 из SEQ ID NO:6, аминокислотами 241-455 из SEQ ID NO:6, аминокислотами 228-455 из SEQ ID NO:6 или аминокислотами 225-455 из SEQ ID NO:6, в которой аминокислота заменяется на R или K, или содержится делеция R или K. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция содержится в положении 422 в SEQ ID NO:6, что соответствует положению 423 в SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления замена является полярной аминокислотой, например, Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная делеция находится в положении 422 из SEQ ID NO:6.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый полипептид ANGPTL3 по изобретению содержит смежные аминокислоты, соответствующие аминокислотным областям: аминокислоты
240- 454 из SEQ ID NO:4; аминокислоты 232-454 из SEQ ID NO:4; аминокислоты 227-454 из SEQ ID NO:4 или аминокислоты 224-454 из SEQ ID NO:4, в которой аминокислота заменена на R или K, или содержится делеция R или K. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция находится в положении 422 в SEQ ID NO:4 (которое является положением 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1). В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой полярную аминокислоту, например, Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления, замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления аминокислота делеция находится в положении 422 в SEQ ID NO:4.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый полипептид ANGPTL3 по изобретению содержит смежные аминокислоты, соответствующие аминокислотным областям: аминокислоты
241- 455 из SEQ ID NO:5; аминокислоты 233-455 из SEQ ID NO:5; аминокислоты 228-455 из SEQ ID NO:5 или аминокислоты 225-455 из SEQ ID NO:5, в которых аминокислота заменяется на R или K, или содержится делеция R или K. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция находится в положении 423 (что соответствует положению 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1). В некоторых вариантах осуществления замена является полярной аминокислотой, например, Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная делеция находится в положении 423 в SEQ ID NO:5.
В некоторых вариантах осуществления протеаза-устойчивый полипептид ANGPTL3 по изобрете
- 16 035158 нию содержит смежные аминокислоты, соответствующие аминокислотным областям: аминокислоты 241-455 из SEQ ID NO:6; аминокислоты 233-455 из SEQ ID NO:6; аминокислоты 228-455 из SEQ ID NO:6 или аминокислоты 225-455 из SEQ ID NO:6, в котором аминокислота заменена на R или K, или содержится делеция R или K. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция находится в положении 422 в SEQ ID NO:6 (которая является положением 423, как определено по отношению к SEQ ID NO:1). В некоторых вариантах осуществления замена является полярной аминокислотой, например Н, N, Q, S, Т, А или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Н, N, Q, S, Т или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления имеется делеция находится в положении 422 в SEQ ID NO:6.
Белки ANGPTL3 по изобретению, как описано выше, может включать природные последовательности белка ANGPTL3, фланкирующие области, описанные выше. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления белки ANGPTL3 по изобретению могут включать фланкирующие последовательности белка ANGPTL3, отличные от природных. Например, хондрогенно-активная часть белка ANGPTL3 может быть слита с одним или несколькими партнерами по слиянию и/или гетерологичными аминокислотами с образованием слитого белка. Последовательности партнеров по слиянию могут включать, в качестве неограничивающих примеров, аминокислотные теги, аминокислоты, отличные от L-аминокислот (например, Dаминокислоты) или другие аминокислотные миметики для продления in vivo времени полужизни и/или протеазной устойчивости, нацеливания последовательностей или других последовательностей.
В некоторых вариантах осуществления полипептид по изобретению является ПЭГилированным. В некоторых вариантах осуществления полипептид по изобретению слит с гетерологичным пептидом. В определенных вариантах осуществления полипептид слит с любым из человеческого сывороточного альбумина (HSA), константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина (Fc), полигистидина, глутатион^-трансферазы (GST), тиоредоксина, белка А, белка G, мальтоза-связывающего белка (МВР) или фрагментом любого из вышеперечисленных гетерологичных полипептидов(а). В конкретных вариантах осуществления гетерологичный полипептид слит с амино-терминальным концом полипептида по изобретению. В дополнительных или альтернативных вариантах осуществления гетерологичный полипептид слит с карбокси-терминальным концом полипептида по изобретению.
Белки ANGPTL3 по изобретению имеют хондрогенную активность и являются протеаза-устойчивыми. Как определено в настоящем документе, хондрогенез или хондрогенная активность относится к развитию хондроцитов из MSC. Индикаторы хондрогенной активности включают, без ограничения, продуцирование хрящевого матрикса. Продуцирование хрящевого матрикса может быть измерено с помощью различных маркеров, например таких как Sox9, коллагена II типа или продуцирование гликозаминогликанов (ГАГ). В некоторых вариантах осуществления продуцирование ГАГ измеряется как маркер продуцирования хрящевого матрикса. В некоторых вариантах осуществления 3-кратное увеличение продуцирования ГАГ при помощи экспрессии хрящ-специфического белка указывает на положительное продуцирование хрящевого матрикса.
Полипептид можно оценить на протеазную устойчивость, используя любой известный тест, который определяет расщепление с помощью сериновой протеазы, такой как трипсин. В некоторых вариантах осуществления протеазы, используемые для оценки протеолиза восприимчивость является сериновая протеаза трипсин. Полипептид считается протеаза-устойчивым, если он имеет пониженную чувствительность к трипсину, по сравнению с аналогом дикого типа. Пример анализа заключается в измерении количества расщепленного продукта, который образуется, когда полипептид подвергается воздействию трипсина в течение определенного периода времени, по сравнению с соответствующим природным пептидом человека. Расщепление можно определить с помощью любого известного анализа, например, электрофореза в ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия и LCMS. Иллюстративный анализ приводится в разделе Примеры.
В иллюстративном анализе ограниченный протеолиз путем проведения трипсинолиза осуществляется путем инкубации 10 нг белка, подлежащего оцениванию, с трипсином при массовом соотношении 8000:1 (белок:трипсин) в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию трипсинолиза можно затем гасить добавлением уксусной кислоты, чтобы довести реакцию до рН 3,0. Загашенные образцы затем разделяли и анализировали способом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия, например в 4-12% трис-бис геле для идентификации белков, которые устойчивы к расщеплению, от тех, которые расщепляются с появлением фрагмента, который образуется путем расщепления трипсином. Продукт расщепления отсутствует или снижен в протеаза-устойчивых полипептидах по сравнению с их аналогами дикого типа.
В некоторых вариантах осуществления полипептиды ANGPTL3 по изобретению включают по меньшей мере одну природно не кодируемую аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит 1, 2, 3, 4 или более не встречающихся в природе аминокислот. Способы получения и встраивания не встречающейся в природе аминокислоты в белок известны. См., например, патенты США № 7083970; и 7524647. Общие принципы производства ортогональных систем трансляции, которые подходят для создания белков, которые содержат одну или более желаемых не встречающихся в природе
- 17 035158 аминокислот, известны в данной области техники, так как являются общими способами получения ортогональных систем трансляции. Например, см. номера международных публикаций WO 2002/086075, озаглавленной METHODS AND COMPOSITION FOR THE PRODUCTION OF ORTHOGONAL tRNAAMINO ACYL-tRNA SYNTHETASE PAIRS; WO 2002/085923, озаглавленной IN VIVO INCORPORATION OF UNNATURAL AMINO ACIDS; WO 2004/094593, озаглавленной EXPANDING THE EUKARYOTIC GENETIC CODE; WO 2005/019415, поданной 7 июля 2004; WO 2005/007870, поданной 7 июля 2004; WO 2005/007624, поданной 7 июля 2004; WO 2006/110182, поданной 27 октября 2005, озаглавленной ORTHOGONAL TRANSLATION COMPONENTS FOR THE VIVO INCORPORATION OF UNNATURAL AMINO ACIDS и WO 2007/103490, поданной 7 марта 2007, озаглавленной SYSTEMS FOR THE EXPRESSION OF ORTHOGONAL TRANSLATION COMPONENTS IN EUBACTERIAL HOST CELLS. Для обсуждения ортогональных систем трансляции, которые включают не встречающиеся в природе аминокислоты, и способы их производства и применения, см. также Wang and Schultz, (2005) Expanding the Genetic Code Angewandte Chemie Int. Ed. 44: 34-66; Xie and Schultz, (2005) An Expanding Genetic Code Methods 36: 227-238; Xie and Schultz, (2005) Adding Amino Acids to the Genetic Repertoire Curr. Opinion in Chemical Biology 9: 548-554; и Wang, et al., (2006) Expanding the Genetic Code Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 35: 225-249; Deiters et al., (2005) In vivo incorporation of an alkyne into proteins in Escherichia coli Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15: 1521-1524; Chin et al., (2002) Addition of p-Azido-L-phenylalanine to the Genetic Code of Escherichia coli J. Am. Chem. Soc. 124: 9026-9027; и международную публикацию № WO 2006/034332, поданную 20 сентября 2005. Дополнительные подробности обнаруживаются в патентах США № 7045337; 7083970; 7238510; 7129333; 7262040; 7183082; 7199222 и 7217809. Природно не кодируемая аминокислота означает аминокислоту, которая не является одной из обычных аминокислот или пирролизином, пирролинкарбоксилизином или селеноцистеином. Другими терминами, которые могут использоваться синонимично с термином природно не кодируемая аминокислота, являются ненатуральная аминокислота, неприродная аминокислота, не встречающаяся в природе аминокислота и различные их версии с дефисом и без него. Термин природно не кодируемая аминокислота также включает, без ограничения, аминокислоты, которые возникают путем модификации (например, посттрансляционные модификации) природно кодируемой аминокислоты (включая, без ограничения, 20 обычных аминокислот или пирролизин, пирролинкарбоксилизин или селеноцистеин), но сами природно не включаются в растущую цепь полипептида при помощи трансляционного комплекса. Неограничивающие примеры таких не встречающающихся в природе аминокислот включают Nацетилглюкозаминил-С-серин, №ацетилглюкозаминил-С-треонин и O-фосфотирозин.
Природно не кодируемая аминокислота обычно обладает любой структурой, имеющей любую замещающую боковую цепь, отличную от тех, которые используются в двадцати природных аминокислотах. Поскольку природно не кодируемые аминокислоты по изобретению, как правило, отличаются от природных аминокислот только структурой боковой цепи, природно не кодируемые аминокислоты образуют амидные связи с другими аминокислотами, включая, в качестве неограничивающих примеров, природно или неприродно кодируемые, в том же порядке, в котором они формируются в природных полипептидах. При этом природно не кодируемые аминокислоты имеют группы боковой цепи, которые отличают их от природных аминокислот. Например, R необязательно включает алкил-, арил-, ацил-, кето-, азидо-, гидроксил-, гидразин-, циано-, гало-, гидразид, алкенил, алкинил, простой эфир, тиол, селено-, сульфонил-, борат, боронат, фосфо, фосфоно, фосфин, гетероциклическая, энон, имин, альдегид, сложный эфир, тиокислоту, гидроксиламин, аминогруппу или тому подобное или любые их сочетания. Другие не встречающиеся в природе аминокислоты, представляющие интерес, которые могут быть пригодны для использования в настоящем изобретении, включают, в качестве неограничивающих примеров, аминокислоты, содержащие фотоактивируемый кросс-линкер, спин-меченые аминокислоты, флуоресцентные аминокислоты, металл-связывающие аминокислоты, металл-содержащие аминокислоты, радиоактивные аминокислоты, аминокислоты с новыми функциональными группами, аминокислоты, которые ковалентно или нековалентно взаимодействуют с другими молекулами, фотозапираемые и/или фотоизомеризуемые аминокислоты, аминокислоты, которые содержат биотин или аналог биотина, гликозилированные аминокислоты, такие как серин с замещенным сахаром, других аминокислоты с модифицированными углеводами, кето-содержащие аминокислоты, аминокислоты, содержащие полиэтиленгликоль или полиэфир, аминокислоты с замещенным тяжелым атомом, химически расщепляемые и/или фоторазрушаемые аминокислоты, аминокислоты с удлиненной боковой цепью по сравнению с природными аминокислотами, включая, в качестве неограничивающих примеров, полиэфиры или длинноцепочечные углеводороды, включающие, в качестве неограничивающих примеров, больше, чем примерно 5 или больше, чем примерно 10 атомов углерода, углерод-связанные сахаросодержащие аминокислоты, редоксактивные аминокислоты, аминотиокислот-содержащие аминокислоты и аминокислоты, содержащие одну или более токсичных функциональных групп.
Типичные природно не кодируемые аминокислоты, которые могут быть пригодны для использования в настоящем изобретении и которые полезны для реакций с водорастворимыми полимерами, включают, в качестве неограничивающих примеров, таковые с карбонильной, аминоокси, гидразиновой, гидразидной, семикарбазидной, азидной и алкинной реакционноспособными группами. В некоторых вари
- 18 035158 антах осуществления природно не кодируемые аминокислоты содержат сахаридную функциональную группу. Примеры таких аминокислот включают N-ацетил-Е-глюкозаминил-Е-серин, N-ацетил-Егалактозаминил-Е-серин, N-ацетил-Е-глюкозаминил-Е-треонин, N-ацетил-Е-глюкозаминил-Е-аспарагин и О-маннозил-Е-серин. Примеры таких аминокислот включают также примеры, где природные N- или Освязь между аминокислотой и сахаридом заменяется ковалентной связью, не часто встречающейся в природе, в том числе в качестве неограничивающих примеров, алкен, оксим, тиоэфир, амид и тому подобное. Примеры таких аминокислот включают также сахариды, которые обычно не встречаются в природных белках, такие как 2-дезоксиглюкоза, 2-дезоксигалактоза и тому подобное.
Другой тип модификации, которую можно дополнительно вводить в белки ANGPIES по изобретению (например, в пределах полипептидной цепи или на N- или С-конец), например, для продления in vivo времени полужизни, является ПЭГ илирование или включение длинноцепочечных полимеров полиэтиленгликоля (ПЭГ). Введение ПЭГ или длинноцепочечных полимеров ПЭГ увеличивает эффективную молекулярную массу полипептидов, присутствующих, например, для предотвращения быстрой фильтрации в мочу. В некоторых вариантах осуществления остаток лизина в последовательности ANGPTE3 конъюгирован с ПЭГ непосредственно или через линкер. Такой линкер может представлять собой, например, остаток Glu или ацильный остаток, содержащие тиоловые функциональные группы для связывания с соответствующим образом модифицированной цепью ПЭГ. Альтернативным способом введения цепи ПЭГ является введение сначала остатка Cys в С-конец полипептидной цепи или в гидрофильные остатки, такие как замены по остаткам Arg или Eys. Этот остаток Cys затем сайт-специфически присоединяют к цепи ПЭГ, заключающей, например, малеимидную функцию. Способы включения ПЭГ или длинноцепочечных полимеров ПЭГ известны в рассматриваемой области техники (описанный, например, в Veronese F.M. et al., Drug Disc. Today 10: 1451-8 (2005); Greenwald R.B. et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 55: 217- 50 (2003); Roberts M.J. et al., Adv. Drug Deliv. Rev., 54: 459-76 (2002)), содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки. Другие способы полимерных коньюгатов, известные в данной области техники, могут также использоваться в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления, поли(2-метакрилоилоксиэтил фосфорилхолин) (РМРС) вводится в качестве полимерного конъюгата с белками ANGPTE3 по изобретению (см., например, WO 2008/098930; Eewis et al., Bioconjug Chem., 19: 2144-55 (2008)). В некоторых вариантах осуществления в фосфорилхолинсодержащие полимерные коньюгаты с белками ANGPTE3 могут быть использованы в настоящем изобретении. Специалист в рассматриваемой области техники признает, что другие биосовместимые полимерные конъюгаты могут быть использованы.
Описанный ранее альтернативный подход для включения ПЭГ или полимеров ПЭГ через включение ненатуральных аминокислот (как описано выше) может быть осуществлен с настоящими полипептидами. Этот подход использует эволюционирующую пару тРНК/тРНК-синтетазы и кодируется экспрессионной плазмидой при помощи амбер-супрессорного кодона (Deiters A. et al. (2004). Bio-org. Med. Chem. Eett. 14, 5743-5). Например, р-азидофенилаланин можно включать в настоящие полипептиды и затем проводить в реакцию с полимером ПЭГ, обладающего ацетиленовым радикалом, в присутствии восстановителя и ионов меди для облегчения органической реакции, известной как Хуисген[3+2]циклоприсоединение.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение также предусматривает конкретные мутации белков ANGPTE3, с тем чтобы изменить гликозилирование полипептида. Такие мутации могут быть отобраны так, чтобы ввести или устранить один или более сайтов гликозилирования, включая, в качестве неограничивающих примеров, О-связанные или N-связанные сайты гликозилирования. В определенных вариантах осуществления белки ANGPTE3 по настоящему изобретению имеют сайты гликозилирования и структуры без изменений по отношению к природным белкам ANGPTE3. В определенных вариантах осуществления вариант белков ANGPTE3 включает вариант гликозилирования, в котором число и/или тип сайтов гликозилирования были изменены по отношению к природным белкам ANGPTE3. В определенных вариантах вариант полипептида содержит большее или меньшее число Nсвязанных сайтов гликозилирования по сравнению с природным полипептидом. Сайт N-связанного гликозилирования характеризуется последовательностью: Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, в котором аминокислотный остаток, обозначенный как X, может представлять собой любой аминокислотный остаток, кроме пролина. Замена аминокислотных остатков для создания этой последовательности обеспечивает потенциальный новый сайт для добавления N-связанной углеводной цепи. Кроме того, замены, которые устраняют эту последовательность, удалят существующую N-связанную углеводную цепь. В определенных вариантах осуществления обеспечивается перестановка N-связанных углеводных цепей, где один или более N-связанных сайтов гликозилирования (обычно те, которые являются природными) устраняются и создаются один или более новых N-связанных сайтов.
Типичные варианты белков ANGPTE3 включают варианты цистеина, в которых один или более остатков цистеина удалены или заменены на другую аминокислоту (например, серин) по отношению к аминокислотной последовательностью природных белков ANGPTE3. В определенных вариантах осуществления цистеиновые варианты могут быть полезны, если белки ANGPTE3 должны быть повторно свернуты в биологически активную конформацию, например после выделения нерастворимых тел вклю
- 19 035158 чения. В определенных вариантах осуществления цистеиновые варианты имеют меньше остатков цистеина, чем природный полипептид. В определенных вариантах осуществления цистеиновые варианты содержат четное число остатков цистеина для минимизации взаимодействий, вытекающих из непарных цистеинов.
В некоторых вариантах осуществления функциональные варианты или модифицированные формы белков ANGPTL3 включают слитые белки белка ANGPTL3 по изобретению и один или более сливных доменов. Известные неограничивающие примеры сливных доменов включают полигистидин, Glu-Glu, глутатион-8-трансферазу (GST), тиоредоксин, белок А, белок G, константную область тяжелой цепи иммуноглобулина (Fc), мальтоза-связывающий белок (МВР) и/или сывороточный альбумин человека (HSA). Сливной домен или его фрагмент может быть выбран так, чтобы придать желаемое свойство. Например, некоторые сливные домены являются особенно полезными для выделения слитых белков с помощью аффинной хроматографии. Для аффинной очистки используются соответствующие матрицы для аффинной хроматографии, такие как глутатион-, амилаза- и никель- или кобальт-конъюгированные смолы. Множество таких матриц доступны в форме наборов, таких как система очистки Pharmacia GST и система QLAexpress™ (Qiagen), применимая для (HIS6) партнеров по слиянию. В качестве другого примера сливной домен может быть выбран таким образом, чтобы облегчить детектирование белков ANGPTL3. Примеры таких детекционных доменов включают различные флуоресцентные белки (например, GFP), а также эпитопные теги, которые, как правило, представляют собой короткие пептидные последовательности, для которых доступны специфические антитела. Известный эпитопные теги, для которых легкодоступны специфические моноклональные антитела, включают теги FLAG, гемагглютинин вируса гриппа (HA) и c-myc. В некоторых случаях сливные доменов имеют сайт расщепления протеазой, такой как сайт для фактора Xa или тромбина, который позволяет соответствующей протеазе частично расщеплять слитые белки и тем самым высвобождать оттуда рекомбинантные белки. Освобожденные белки могут быть отделены от сливного домена путем последующего хроматографического разделения. В определенных вариантах осуществления белок ANGPTL3 слит с доменом, который стабилизирует белок ANGPTL3 in vivo (стабилизирующий домен). По стабилизацией понимается все, что увеличивает время полужизни в сыворотке крови, независимо от того, является ли это следствием уменьшения деструкции, уменьшения выведения почками или другим фармакокинетическим эффектом. Слияния с Fc-частью иммуноглобулина, как известно, придают желательные фармакокинетические свойства широкому спектру белков. Кроме того, слияния человеческого сывороточного альбумина может придавать желательные свойства. Другие типы сливных доменов, которые можно выбрать, включают мультимеризированные (например, димеризированные, тетрамеризированные) домены и функциональные домены (что придает дополнительную биологическую функцию, по желанию). Слияния могут быть сконструированы таким образом, чтобы гетерологичный пептид был слит с аминоконца полипептида по изобретению и/или карбоксиконца полипептида по изобретению.
Нуклеиновые кислоты, кодирующие ангиопозтин-подобные 3 протеаза-устойчивые полипептиды.
Изобретение также предоставляет нуклеиновые кислоты, кодирующие протеаза-устойчивые полипептиды по изобретению и векторы экспрессии и клетки-хозяева для экспрессии протеаза-устойчивого полипептида. В других аспектах изобретение предоставляет полинуклеотид, кодирующий полипептид по изобретению, и экспрессионные векторы и клетки-хозяева, включающие такой полинуклеотид. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид оптимизирован для экспрессии в клетках-хозяевах. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет способ улучшения состояния или профилактики артрита или повреждение сустава у пациента-человека, включающий: введение в сустав пациента экспрессионного вектора, кодирующего полипептид по изобретению, после чего экспрессии полипептида приводит к улучшению состояния или предотвращает артрит или повреждение сустава у пациента. В некоторых вариантах осуществления пациент имеет артрит или повреждение сустава. В некоторых вариантах осуществления пациент не имеет, но находится в группе риска получения артрита или повреждения сустава. В некоторых вариантах осуществления артрит представляет собой остеоартрит, травматический артрит или аутоиммунный артрит.
Для экспрессии полипептидов по изобретению используют рутинные способы из области рекомбинантной генетики. Основные руководства, раскрывающие общие способы, использованные в этом изобретении, включают Sambrook and Russell eds. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition; серийные издания Ausubel et al. eds. (2007, с доработанным в 2010) Current Protocols in Molecular Biology, среди других известных в данной области техники.
Для экспрессии могут использоваться любые подходящие клетки-хозяева, известные в данной области техники, например клетки-хозяева млекопитающих, бактериальные клетки-хозяева, дрожжевых клетки-хозяева, клетки-хозяева насекомых и др. Как прокариотические, так и эукариотические системы экспрессии являются широко доступными. В некоторых вариантах осуществления экспрессионная система представляет собой систему экспрессии клеток млекопитающих, такую как система экспрессии СНО-клеток. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота может быть кодоноптимизированной для облегчения экспрессии в желаемой клетке-хозяине.
Невирусные векторы и системы включают плазмиды и эписомные векторы, обычно включающие
- 20 035158 экспрессионную кассету для экспрессии белка или РНК, и искусственные хромосомы человека (см., например, Harrington et al., Nat. Genet. 15:345, 1997). Например, невирусные векторы, полезные для экспрессии полипептидов по изобретению в клетках млекопитающих (например, человека), включают pThioHis А, В & С, pcDNA3. I/His, pEBVHis А, В & С (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния), векторы MPSV и многочисленные другие векторы, известные в рассматриваемой области техники для экспрессия других белков. Полезные вирусные векторы включают, в качестве неограничивающих примеров, векторы на основе аденовирусов, аденоассоциированных вирусов, вирусов герпеса, векторы на основе SV40, вируса папилломы, вируса НВР Эпштейна-Барра, вектор на основе вируса оспы кур, векторы на основе вируса коровьей оспы и вируса леса Семлики (SFV).
Выбор вектора экспрессии зависит от предполагаемой клетки-хозяина, в которой вектор будет экспрессироваться. Как правило, экспрессирующие векторы содержат промотор и другие регуляторные последовательности (например, энхансеры), которые функционально связаны с полинуклеотидами, кодирующими полипептид по изобретению. В некоторых вариантах осуществления используется индуцируемый промотор, чтобы предотвратить экспрессию встроенных последовательностей, кроме как при индуцирующих условиях. Индуцибельные промоторы включают, например, арабинозный. lacZ, металлотионеиновый промотор, глюкокортикоидные промоторы или промотор теплового шока. Кроме того, другие регуляторные элементы также могут быть включены для улучшения экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид по изобретению, например энхансеры, сайты связывания с рибосомой, последовательности терминации транскрипции и тому подобное.
В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по изобретению, может также включать последовательность, кодирующую последовательность сигнала секреции, так что полипептид секретируется из клетки-хозяина. Такая последовательность может быть предусмотрена в векторе или как часть нуклеиновой кислоты ANGPTL3, присутствующей в векторе.
Способы введения векторов экспрессии, содержащих представляющую интерес полинуклеотидную последовательность, варьируют в зависимости от типа клетки-хозяина. Например, трансфекцию при помощи хлорида кальция обычно используют для прокариотических клеток, тогда как обработка фосфатом кальция или электропорация может быть использована для других клеточных хозяев (см., обычно, Sambrook et al., выше). Другие способы включают, например, электропорацию, обработку фосфатом кальция, липосомо-опосредованную трансформацию, инъекции и микроинъекции, баллистические способы, виросомы, иммунолипосомы, конъюгаты поликатион:нуклеиновая кислота, незащищенную ДНК, искусственные вирионы, слияние со структурным белком VP22 вируса герпеса, агент-усиливающее поглощение ДНК и трансдукция ex vivo. Для долгосрочного, высокопродуктивного продуцирования рекомбинантных белков часто желательна стабильная экспрессия. Например, клеточные линии, которые стабильно экспрессируют полипептиды по изобретению, могут быть подготовлены, используя экспрессирующие векторы по изобретению, которые содержат участок начала репликации вируса или эндогенные элементы экспрессии и селектируемый маркерный ген.
В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, кодирующие протеаза-устойчивые полипептиды ANGPTL3 по изобретению, могут доставляться пациенту для лечения травмы или болезни, связанной суставами. Доставка таких нуклеиновых кислот может быть достигнуто с помощью любых средств, известных в данной области техники, но обычно выполняется с помощью прямой инъекции в пораженный сустав. В некоторых вариантах осуществления ДНК доставляется в виде незащищенной ДНК с помощью прямой инъекции в сустав. В некоторых вариантах осуществления используется вирусный вектор, включая, в качестве неограничивающих примеров, аденовирусный или аденовирусассоциированный вектор, вектор на основе вируса герпеса, вектор на основе вируса оспы кур или вектор на основе вируса коровьей оспы.
Способы лечебного применения полипептидов и показания.
Способы, описанные в изобретении, включают способ лечения индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества полипептида по изобретению, отличающийся тем, что индивидуум имеет или существует риск повреждения суставов или артрит. Изобретение также предоставляет способ улучшения состояния или профилактики артрита или повреждения сустава у пациента-человека, включающий введение в сустав пациента композиции, содержащей эффективное количество полипептида по изобретению, таким образом, улучшения состояния или профилактики артрита или травмы сустава у пациента. В некоторых вариантах осуществления пациент имеет артрит или повреждение сустава. В некоторых вариантах осуществления человек не имеет, но находится в группе риска получения артрита или повреждения сустава. В некоторых вариантах осуществления артрит представляет собой остеоартрит, травматический артрит или аутоиммунный артрит. В некоторых вариантах осуществления вводимая композиция дополнительно содержит гиалуроновую кислоту.
В другом аспекте изобретение предоставляет способ индукции дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток в хондроциты, включающий контактирование мезенхимальных стволовых клеток с достаточным количеством полипептида по изобретению, для индуцирования дифференцировки стволовых клеток в хондроциты. В некоторых вариантах осуществления способ осуществляют in vivo, и стволовые клетки присутствуют у пациента-человека.
- 21 035158
Предполагается, что полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения, улучшения состояния или предотвращения любого вида повреждений суставного хряща (например, повреждений суставов или травмы), в том числе, например, повреждение, возникающее в результате травмирующего события или разрыва сухожилия или связки. В некоторых вариантах осуществления белки по изобретению вводят для предотвращения или уменьшения артрита или повреждения сустава, например в случае, когда существует генетическая или семейная анамнеза артрита или повреждения сустава или травмы сустава или до или во время операции на суставе. В некоторых вариантах осуществления полипептиды, композиции и способы применяются для лечения повреждения суставов. В конкретных вариантах осуществления повреждение сустава представляет собой травматические поражение сустава. В других вариантах повреждение сустава представляет собой повреждение, возникающее от возраста или обездвиженности. Еще в других вариантах осуществления поражение сустава представляет собой повреждение, возникшее вследствие аутоиммунного расстройства. В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды, композиции и способы по изобретению могут применяться для лечения, улучшения состояния или профилактики остеоартрита. В некоторых вариантах осуществления полипептиды, композиции и способы применяют для уменьшения или предотвращения артрита у индивидуума с риском наличия или приобретения артрита. В некоторых вариантах осуществления полипептиды, композиции и способы применяют для уменьшения или предотвращения повреждения суставов у индивидуума с риском наличия или приобретения повреждения суставов.
В некоторых вариантах осуществления полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению обеспечивают способ стимуляции пролиферации хондроцитов и производства хряща в хрящевых тканях, которые были повреждены, например, вследствие травматического повреждения или хондропатии. В конкретных вариантах осуществления полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению полезны для лечения повреждений хряща в суставах, например на шарнирно-сочлененной поверхности, например в позвоночнике, плече, локте, запястье, суставах пальцев рук, тазобедренных, коленных, голеностопных суставах и суставах ног. Примеры заболеваний или расстройств, которые могут получить преимущество от лечения, включают остеоартрит, ревматоидный артрит, другие аутоиммунные заболевания или остеохондритные дессиканы. Кроме того, повреждение хряща или разрушение происходит в результате определенных генетических или метаболических расстройств, нарушение развития хрящевой ткани часто наблюдается в формах карликовости у человека, и/или повреждение или разрушение хрящей часто является результатом реконструктивной хирургии; таким образом, полипептиды, композиции и способы были бы полезны в терапии этих пациентов, будь то сами по себе или в сочетании с другими подходами.
Далее предполагается, что полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения, улучшения или профилактики различных расстройств хряща и/или связанные с ними симптомы или последствия таких состояний. Типичные состояния или расстройства для лечения, улучшения и/или профилактики с помощью полипептидов, композиций и способов по изобретению, включая, в качестве неограничивающих примеров, системную красную волчанку, ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, артроз, остеохондроз, спондилоартропатии, синдром Элерса Данло, системный склероз (склеродермию) или заболевание сухожилий. Другие состояния или расстройства, которые могут получить преимущества от лечения полипептидами для улучшения связанных эффектов, включают идиопатические воспалительные миопатии (дерматомиозит, полимиозит), синдром Шегрена, системный васкулит, саркоидоз, аутоиммунную гемолитическую анемию (иммунную панцитопению, пароксизмальную ночную гемоглобинурию), аутоиммунную тромбоцитопению (идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, иммуно-опосредованную тромбоцитопению), тиреоидит (базедова болезнь, тиреоидит Хашимото, ювенильный лимфоцитарный тиреоидит, атрофический тиреоидит), сахарный диабет, иммуноопосредованное заболевание почек (гломерулонефрит, тубулоинтерстициальный нефрит), демиелинизирующие заболевания центральной и периферической нервной системы, такие как рассеянный склероз, идиопатическая демиелинизирующая полиневропатия или синдром Гийена-Барре и хроническая воспалительная демиелинизирующая полиневропатия, гепатобилиарные заболевания, такие как инфекционный гепатит (гепатит А, В, С, D, Е и другие негепатотропные вирусы), аутоиммунный хронический активный гепатит, первичный билиарный цирроз, гранулематозный гепатит и склерозирующий холангит, воспалительное заболевание кишечника (язвенный колит: болезнь Крона), глютенчувствительная энтеропатия и болезнь Уиппла, аутоиммунные или иммуно-опосредованные заболевания кожи, включая буллезные кожные заболевания, мультиформную эритему и контактный дерматит, псориаз, аллергические заболевания, такие как астма, аллергический ринит, атопический дерматит, пищевая аллергия и крапивница, иммунологические заболевания легких, такие как эозинофильные пневмонии, идиопатический фиброз легких и пневмонит гиперчувствительности, сопутствующие трансплантации заболевания, включая отторжение трансплантата и реакция трансплантат против хозяина.
Пациент, как используется в настоящем документе, относится к любому индивидууму, которому вводят терапевтический полипептид по изобретению. Предполагается, что полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения млекопитающего. Как используется в настоящем документе, индивидуум относится к любому млекопитающему, включая лю
- 22 035158 дей, домашних и сельскохозяйственных животных, и зоопарк, спортивных или домашних животных, например крупный рогатый скот (например, коровы), лошади, собаки, овцы, свиньи, кролики, козы, кошки и др. В некоторых вариантах осуществления изобретения индивидуумом является человек. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является лошадь. В других вариантах осуществления индивидуум представляет собой собаку.
В некоторых вариантах осуществления полипептиды по изобретению могут быть гетерологичными по отношению к проходящему лечение млекопитающему. Например, белок ANGPTL3 человека или его фрагмент, белок или пептид, производный от белка ANGPTL3 человека (например, модифицированный белок ANGPTL3 человека, консервативный вариант белка ANGPTL3 человека, пептидомиметики, производные от белка ANGPTL3 человека) используются в лечении животного, такого как лошадь, крупный рогатый скот или собака. В некоторых вариантах осуществления гетерологичный белок ANGPTL3 может использоваться для наращивания популяций хондроцитов в культуре для трансплантации. В некоторых вариантах осуществления к наращенным культурам дополнительно подмешивают полипептиды и композиции, гомологиченые по отношению к проходящему лечение млекопитающему, и помещают в суставное пространство или непосредственно в дефект хряща. Альтернативно, полипептиды по изобретению, полученные от того же вида, т.е. белок ANGPTL3 человека или его фрагменты, белок или пептид, производный от белка ANGPTL3 человека (например, модифицированный белок ANGPTL3 человека, консервативный вариант белка ANGPTL3 человека, пептидомиметик, производный от белка ANGPTL3 человека) применяют при лечении пациента-человека. С помощью белка, полученного из тех же видов млекопитающих, которые проходят лечение, можно избежать случайных иммунных реакций.
В некоторых вариантах осуществления полипептиды и композиции по настоящему изобретению применяют способом прямой инъекции в синовиальную жидкость сустава, системного введения (перорально или внутривенно) либо непосредственно в дефект хряща, либо самостоятельно, либо в комплексе с подходящим носителем для длительного высвобождения белка. В некоторых вариантах осуществления полипептиды или композиции вводят в биосовместимой матрице или каркасе. Полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению могут также использоваться в сочетании с хирургической процедурой на пораженном суставе. Введение полипептида по изобретению может происходить до, во время или в сочетании с, и/или после хирургической процедуры. Например, полипептиды, композиции и способы по изобретению могут быть использованы для наращивания популяции хондроцитов в культуре для аутологичной или аллогенной хондроцитной имплантации (ACI). Хондроциты можно необязательно имплантировать с параллельным лечением, состоящим из введения полипептидов и композиций по настоящему изобретению. В этих процедурах, например, хрящевые клетки могут быть собраны артроскопически с неповрежденной минорной несущей нагрузку области поврежденного сустава, и могут культивироваться in vitro, при необходимости в присутствии полипептидов и композиций по настоящему изобретению и/или других факторов роста, чтобы увеличить количество клеток перед трансплантацией. К выращенным культурам затем при необходимости подмешивают полипептиды и композиции по настоящему изобретению и/или помещают в пространство сустава или непосредственно в дефект. В определенных вариантах осуществления выращенные культуры (необязательно с полипептидами по настоящему изобретению) помещаются в пространство сустава, суспендированные в матриксе или мембране. В других вариантах осуществления полипептиды и композиции по настоящему изобретению могут использоваться в комбинации с одним или более периостальных или перихондральных графтов, которые содержат образующие хрящ клетки и/или помогают удерживать трансплантированные хондроциты или клетки-предшественники хондроцитов на месте. В некоторых вариантах осуществления полипептиды и композиции по изобретению используются для восстановления повреждений хряща в сочетании с другими процедурами, включая, в качестве неограничивающих примеров, лаваж сустава, стимуляцию костного мозга, абразивную артропластику, субхондральное бурение или микротравматизацию проксимальной субхондральной кости. При необходимости, после введения полипептидов и композиций по настоящему изобретению и роста хрящей может быть полезным дополнительные хирургическое лечение, чтобы соответствующим образом оконтурить новообразованную хрящевую поверхность(ти).
Фармацевтические композиции.
Терапевтические композиции, содержащие предоставляемые полипептиды, находятся в рамках настоящего изобретения, и специально предусмотрены в свете выявления нескольких полипептидных последовательностей, проявляющих повышенную стабильность и протеаза-устойчивость. Таким образом, в дополнительном аспекте изобретение предоставляет фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество полипептида по изобретению. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции дополнительно включают фармацевтически или физиологически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит гиалуроновую кислоту или ее производное.
В дополнение, изобретение предоставляет способ улучшения или профилактики артрита или травмы сустава пациента-человека, включающий введение в сустав пациента композиции, содержащей эффективное количество полипептида по изобретению, тем самым улучшая состояние или препятствуя артриту или травме сустава у пациента. В некоторых вариантах осуществления пациент имеет артрит
- 23 035158 или повреждение сустава. В некоторых вариантах осуществления индивидуум не имеет, но находится в группе риска артрита или травмы сустава. В некоторых вариантах осуществления артрита представляет собой остеоартрит, травматический артрит или аутоиммунный артрит. В некоторых вариантах осуществления вводимая композиция дополнительно содержит гиалуроновую кислоту.
В другом аспекте изобретение предоставляет способ индукции дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток в хондроциты, включающий контактирование мезенхимальных стволовых клеток с достаточным количеством полипептида по изобретению для индуцирования дифференцировки стволовых клеток в хондроциты. В некоторых вариантах осуществления способ осуществляют in vivo, стволовые клетки передаются пациенту-человеку, и контактирование включает введение в сустав пациента композиции, содержащей эффективное количество полипептида по изобретению, индуцируя тем самым дифференцировку стволовых клеток в хондроциты и образование хряща.
Терапевтические композиции, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептиды по изобретению, могут быть доставлены пациенту для лечения связанной с суставом травмы или болезни, и также находятся в пределах объема настоящего изобретения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат зезащищенную ДНК, кодирующую полипептид по изобретению. В некоторых вариантах осуществления вирусный вектор используется для осуществления доставки, и фармацевтическая композиция содержит вектор, кодирующий полипептид по изобретению, включая, в качестве неограничивающих примеров, вектор на основе аденовируса или аденовирус-ассоциированный вектор, вектор на основе вируса герпеса, вектор на основе вирус оспы кур или вектор на основе вируса коровьей оспы. Фармацевтические композиции включают терапевтически эффективное количество нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид по изобретению, с фармацевтически или физиологически приемлемым носителем.
В другом аспекте настоящего изобретения предоставленные полипептиды предусматриваются для применения в качестве лекарственного средства для лечения поражения суставов. В некоторых вариантах осуществления предоставляются полипептиды по изобретению для применения в качестве лекарственного средства для облегчения артрита или повреждения суставов. В некоторых вариантах осуществления артрита является остеоартритом, травматическим артритом или аутоиммунным артритом. В некоторых вариантах осуществления повреждение суставов представляет собой травматическое поражение суставов, аутоиммунное повреждение, возрастное повреждение, или повреждение, связанное с обездвижением. В других вариантах осуществления предоставляется нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по изобретению для использования в лекарственном средстве.
Составы, пригодные для введения, содержат наполнители, включая, в качестве неограничивающих примеров, водные и неводные растворы, изотонические стерильные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые делают составы изотоническими, и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие вещества, солюбилизаторы, загустители, стабилизаторы и консерванты. В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции включают терапевтически эффективное количество пептида в смеси с фармацевтически приемлемое рецептурное средство, выбранное для пригодности со способом введения, форматом доставки и нужной дозировкой. См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th Ed., A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company 1990), и последующих изданий того же. Основное средство доставки или носитель в фармацевтической композиции может быть водной или неводной природы. Например, подходящее средство доставки или носитель может представлять собой воду для инъекций, физиологический солевой раствор или искусственная цереброспинальная жидкость, при необходимости дополненная другими материалами, распространенными в композициях для парентерального введения. Например, буферы могут использоваться, например, для поддержания композиции при физиологическом рН или при слегка пониженном рН, обычно в пределах диапазона от примерно рН 5 до примерно рН 8, и могут дополнительно включать сорбит, сывороточный альбумин, детергент или другой дополнительный компонент. В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции, содержащие полипептиды или нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид по изобретению, могут быть подготовлены для хранения в лиофилизированном виде с использованием соответствующих наполнителей (например, сахарозы).
Еще в других вариантах осуществления состав со средством, таким как инъекционные микросферы, биоэродируемые частицы, полимерные соединения, бусы или липосомы или другая биосовместимая матрица, которая обеспечивает контролируемое или замедленное высвобождение полипептида или нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид по изобретению, может затем быть доставлен посредством депо инъекции. Например, полипептиды или нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по изобретению, могут быть инкапсулированы в липосомы, или сформулированы в виде микрочастиц или микрокапсул, или могут быть включены в другие носители, такие как биодеградируемые полимеры, гидрогели, циклодекстрины (см., например, Gonzalez et al., 1999, Bioconjugate Chem., 10, 1068-1074; Wang et al., Международная РСТ публикация № WO 03/47518 и WO 03/46185), микросферы поли(молочной-когликолевой)кислоты (PLGA) и PLCA (см., например, патент США № 6447796 и публикацию патентной заявки США № US 2002130430), биодеградируемые нанокапсулы и биоклеющиеся микросферы, или с
- 24 035158 помощью белковых векторов (O'Hare and Normand, Международная РСТ публикация № WO 00/53722) или путем использования конъюгатов. Еще другие подходящие механизмы включают имплантируемые устройства доставки.
Доза соединения по настоящему изобретению для лечения вышеуказанных заболеваний или расстройств варьирует в зависимости от способа введения, возраста и/или массы тела индивидуума, состояния проходящего лечение индивидуума, и, в конечном счете, будет определяться лечащим врачом или ветеринаром. Доза, вводимая индивидууму, в контексте настоящего изобретения должна быть достаточной, чтобы вызвать благотворный ответ у индивидуума с течением времени. Такая доза является терапевтически эффективным количеством. В этой связи соответствующая доза может определяться эффективностью конкретного белка или нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид по используемому изобретению, и состоянием индивидуума, а также массой тела или площадью поверхности зоны обработки. Размер дозы также определяется наличием, характером и степенью каких-либо негативных побочных эффектов, которые сопровождают введение конкретного белка или вектора конкретному индивидууму. Введение может выполняться путем однократной или разделенной дозами, или в виде непрерывной инфузии с помощью имплантированного устройства или катетера. Частота дозирования будет зависеть от фармакокинетических параметров полипептида или нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид по изобретению, в применяемом составе. Врач-клиницист может титровать дозировку и/или модифицировать введение для достижения желаемых терапевтических эффектов. Типичная дозировка составляет от примерно 0,01 мкг/кг до примерно 100 мг/кг в зависимости от факторов. В определенных вариантах осуществления дозировка составляет от примерно 0,1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг; или примерно 0,1 мкг/кг; примерно 0,5 мкг/кг; примерно 1 мкг/кг; примерно 2 мкг/кг; примерно 5 мкг/кг; примерно 10 мкг/кг; примерно 15 мкг/кг; примерно 20 мкг/кг; примерно 25 мкг/кг; примерно 30 мкг/кг; примерно 35 мкг/кг; примерно 40 мкг/кг; примерно 45 мкг/кг; примерно 50 мкг/кг; примерно 55 мкг/кг; примерно 60 мкг/кг; примерно 65 мкг/кг; примерно 75 мкг/кг; примерно 85 мкг/кг; примерно 100 мкг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза составляет примерно 50 мкг/кг; 100 мкг/кг; примерно 150 мкг/кг; примерно 200 мкг/кг; примерно 250 мкг/кг; примерно 300 мкг/кг; примерно 350 мкг/кг; примерно 400 мкг/кг; примерно 450 мкг/кг; примерно 500 мкг/кг; примерно 550 мкг/кг; примерно 600 мкг/кг; примерно 650 мкг/кг; примерно 700 мкг/кг; примерно 750 мкг/кг; примерно 800 мкг/кг; примерно 850 мкг/кг; примерно 900 мкг/кг; примерно 950 мкг/кг, примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 3 мг/кг; примерно 4 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 6 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 8 мг/кг, примерно 9 мг/кг; примерно 10 мг/кг.
Способы введения.
Любой способ доставки белков или нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид по изобретению, в пораженный сустав может применяться. В практике данного изобретения композиции можно вводить парентерально, например инъецировать, например интраартикулярно (т.е. в сустав), внутривенно, внутримышечно, подкожно; впрыскивать, или имплантировать, например, в мембрану, матрицы, устройство и др. При инъецировании, вливании или имплантировании, доставка может направляться в соответствующую ткань или сустав, и доставка может представлять собой прямую доставку болюса или непрерывную подачу. В некоторых вариантах осуществления доставки может происходить в соответствующую ткань, расположенную в непосредственной близости от пораженного сустава. В некоторых вариантах осуществления доставки может проходить посредством диффузии, или посредством болюса с временным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления система контролируемого высвобождения (например, насос) могут быть размещены в непосредственной близости от терапевтической мишени, например, объединенной в котором полипептид вводят. В других вариантах осуществления композиции могут быть выбраны для приема внутрь, например ингаляционная или пероральная доставка.
Терапевтические полипептиды или нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по изобретению по настоящему изобретению, также можно эффективно использовать в комбинации с одним или более дополнительных активных средств (например, гиалуроновой кислотой или ее производным или солью, фактором роста (например, FGF18, ВМР7), хондрогенным средством (например, перорально кальцитонин лосося, SD-6010 (ингибитор iNOS), витамином D3 (холекальциферол), гидролизатом коллагена, ресулатидацетатом, неомыляемыми веществами авокадо, сои (ASU), соединение, описанное в WO 2012/129562, картогенин), стероидом, нестероидным противовоспалительным средством (НПВП) и др.) в зависимости от желаемой терапии или эффекта для улучшения или усиления терапевтического эффекта любого. Этот процесс может включать в себя введение обоих средств пациенту одновременно, либо в виде единой композиции или фармакологического состава, который включает в себя оба средства, или путем введения двух различных композиций или составов, где одна композиция включает полипептид или полинуклеотид, кодирующий полипептид по изобретению, а другая включает в себя второе средство(а). Введение терапевтической композиции, содержащей полипептид или полинуклеотид, кодирующий полипептид по изобретению, может предшествовать или следовать за введением второго средства с интервалами в диапазоне от минут до недель.
Составы соединений могут храниться в стерильных флаконах в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, сухого вещества или в виде обезвоженного или лиофилизированного порошка. Составы могут
- 25 035158 быть представлены в герметичных контейнерах с единичной дозой или несколькими дозами, таких как ампулы и флаконы. В некоторых вариантах осуществления составы могут быть представлены в одноили многокамерных предварительно наполненных шприцах (например, жидкостные шприцы, лизошприцы). Растворы и суспензии могут быть подготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного вида.
Также предоставляются наборы, включающие полипептиды или нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид по изобретению, по изобретению. В одном варианте осуществления предоставляются наборы для изготовления вводимой единицы однократной дозы. Набор содержит первый контейнер, содержащий высушенный полипептид или нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид по изобретению, и второй контейнер, содержащий формулу водного восстановления. В определенных вариантах осуществления один контейнер содержит однокамерный предварительно заполненный шприц. В других вариантах осуществления контейнеры объединены в качестве многокамерного предварительно заполненного шприца.
Иллюстративные примеры.
Следующие примеры предлагаются для иллюстрации, но не для ограничения изобретения.
Пример 1. Конструкции протеаза-устойчивых пептидов AngptB.
Различные N-концевые укороченные мутанты были сконструированы, чтобы устранить Освязанные сайты гликозилирования и содействовать биофизическим характеристикам белка. Для идентификации протеаза-устойчивых пептидов аминокислотные замены были введены в различные положения фрагментов пептида Angpt13 человека, соответствующие С-концевой области пептида. На фиг. 1 показаны положения мутаций в Angpt13 человека. Конструкции первоначально были подготовлены Hisтегами. Мутантные белки представляли собой: 225-460 K423Q (225KQ), 225-460 S424T (225ST), 226-460 K423Q (226KQ), 226-460 K423S (226KS), 228-460 K423Q (228KQ), 228-460 S424T (228ST), 233-460 K423Q (233KQ), 233-460 K423S (233KS), 241-460 K423Q (241KQ), 241-460 K423S (241KS), 241-460 Kdel (241Kdel), 242-460 K423Q (242KQ), 242-460 K423S (242KS) и 242-460 Kdel (242Kdel).
His-меченые белки экспрессировали в клетках HEK Freestyle™ и очищали при помощи Ni-NTA колоночной хроматографии. С-концевые конструкции без тега также клонировали, очищали описанным ранее способом (Gonzalez R. et al. PNAS 2010). Кратко, целевой белок с сигнальной последовательностью (1-16) был клонирован в вектор экспрессии млекопитающих с промотором цитомегаловируса. Через 96 ч после ДНК/ПЭИ трансфекции в HEK Freestyle 293 (Invitrogen) среду, содержащую секретируемый целевой белок, собирали и очищали при помощи колонки Hi-Trap SP (GE Healthcare). Белок элюировался в интервале от 50 мМ MES (рН 6,0), 125 мМ NaCl до 50 мМ MES (рН 6,0), 150 мМ NaCl. Анализ способом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия подтвердил, что очищенный белок обладал по меньшей мере 95% чистотой.
Протеаза-устойчивость оценивалась следующим образом. Ограниченный трипсинолиз проводили путем инкубации 10 нг каждого подготовленного белка с трипсином при массовом соотношении 8000:1 (белок:трипсин) в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию трипсинолиза затем гасили добавлением уксусной кислоты, чтобы довести реакцию до рН 3,0, и загашенные образцы анализировали при помощи LC/MS. 5 мин пик ОФ-ВЭЖХ, соответствующий массе С-концевым 43 аминокислотам (S424E460), было явным для соответствующих конструкций белка дикого типа. Сайт отрезания находился на том же участке, т.е. между K423 и S424, как отмечалось при продукции полноразмерного белка ANGPLT3 дикого типа. Этот пик отсутствовал, когда Lys в сайте отрезания был заменен на Gln. Каждая из пептидных конструкций 225KQ, 228KQ, 233KQ, 233KS, 241KQ, и 242KQ; и пептид дикого типа 225 подготавливали и анализировали. Пик, соответствующий массе С-концевым 43 аминокислотам, отсутствовал, когда Lys в сайте отрезания был заменен на Gln или Ser в каждой из конструкций, или когда Lys в положении 423 был удален.
Пример 2. Реакции связывания интегрина.
Интегрин aVB3. Подготовленные пептиды 225KQ, 228KQ, 233KQ, 241KQ и 242KQ проверяли in vitro на связывание с интегрином aV63. Кратко, планшеты Maxisorp покрывали интегрином aV63 (2 мкг/мл) и добавляли полипептидную конструкцию (указано) в различных концентрациях. Связанный пептид детектировали путем добавления моноклонального антитела против ANGPTL3, а затем с конъюгированным с пероксидазой корня хрена козьим антимышиным IgG-антителом. Все проверенные пептиды сохранили или улучшили способность к связыванию интегрина. ЕС50 для каждого определяли из данных связывания, и результаты показаны в табл. 2.
- 26 035158
Таблица 2. In vitro связывание ANGPTL3 и генно-инженерных полипептидных конструкций с интегринами
Интегрин α5β! ЕС50 | Интегрин aVp3 ЕС5о | |
WT | 3, 054 | 3,245 |
242KQ | 1,566 | 3, 076 |
241KQ | 2, 693 | 4,032 |
233KQ | 13, 83 | 6, 636 |
228KQ | 4,26 | 4,051 |
22 5KQ | 19, 89 | 11,18 |
Интегрин α5β1. Подготовленные пептиды 225KQ, 228KQ, 233KQ, 241KQ и 242KQ кг проверяли in vitro на связывание с интегрином α5β1. Планшеты покрывали 2 мкг/мл, как описано выше, но интегрином α5β1, и добавляли различные концентрации полипептидной конструкции (указано), и детектирование проводили, как описано выше. Все испытанные пептиды сохранили или улучшили способность к связыванию интегрина. ЕС50 для каждого определяли из данных связывания, и результаты показаны в табл. 2.
Пример 3. Функциональный анализ конструкций.
Культура клеток и дифференцировка. Первичные мезенхимальные стволовые клетки костного мозга человека (hMSC) были отсортированы в FACS и проверены, чтобы быть >98% положительными по CD29, CD44, CD105 и CD166 и <0,1% положительными по CD45; и для экспериментов были использованы клетки из пассажей 2-8. Хрящевые резидентные MSC человека (hCR-MSC) получали из человеческих первичных суставных хондроцитов, которые разделяли на отдельные клетки, поклоново выращивали в MSCGM и проверяли в качестве MSC через хондрогенную, остеогенную и адипогенную дифференциации. Клетки отсортировывали в FACS и проверяли, чтобы >98% были положительными по CD166 и CD105. hCR-MSC культивировали до 20 пассажей без изменения в клеточном профиле, определяли скорость роста или дифференциации.
Хондрогенез. Пептидные конструкции по изобретению оценивали в физических и функциональных тестах для оценки активности хондрогенеза.
Генно-инженерные конструкции, предоставленные в этом документе, являются производными от ANGPTL3, который принадлежит семейству из семи выявленных белков ANGPTL, которые имеют структурное сходство с ангиопоэтинами, но лишены способности связываться с рецептором Tie2 и, следовательно, имеют различные функции. Белки ANGPTL содержат N-терминальный биспиральный домена (CCD) и С-концевой фибриноген-подобный домен (FLD), и, как полагают, сильно регулируются при помощи их микроокружения и взаимодействиями с внеклеточным матриксом (ЕСМ), таким как фибронектин и интегрины. Conklin et al., Genomics 62(3): 477-482 (1999); Goh Y.Y. et al., Am. J. Pathol. 177(6): 2791-2803 (2010); Goh Y.Y. et al., J. Biol. Chem. 285(43): 32999-33009(2010). Последовательности для членов семейства ANGPTL, наиболее близкородственные ANGPTL3, ANGPTL1 (полноразмерный и Сконцевой домен) и ANGPTL4 (полноразмерный и С-концевой домен), приведены в табл. 3; и табл. 5В иллюстрирует выравнивание по всем С-концевым доменам членов этого семейства. Идентичности последовательностей среди внеклеточных доменов и С-концевых доменов ANGPTL1, ANGPTL4, а также других ангиопоэтиновых белков ANGPTL7, ANGPT1 и ANGPT2 представлены в табл. 5А. С-концевой домен (СТ) ANGPTL3 имеет 37% идентичности последовательности с СТ ANGPTL1 и 40% идентичности последовательности с СТ ANGPTL4.
Хондрогенез на основе клеток 2D индуцировали in vitro и оценивали, как описано ранее в Johnson K. et al., (2012) Science 336, 717. Кратко, первичные мезенхимальные стволовые клетки костного мозга человека (hMSC) высевали на питательные среды, затем заменяли на среды для хондрогенной стимуляции с конструкциями и без них.
Для первоначального изображения формировании конкреций лунки фиксировали и окрашивали родамином В, где конкреции легко выявлялись визуально, а снимки получали с помощью световой микроскопии. Для обеспечения высокопропускной детекции на основе изображений и количественного определения хондрогенные конкреции окрашивали Nile красным, который связывается неспецифично с коллагенами. Окрашенные Nile красным конкреции количественно оценивали на Acumen eX3 (устройство обработки изображений с высоким содержанием) путем возбуждения 488-лазером для быстрого обнаружения конкреций.
- 27 035158
Таблица 3. Последовательности ANGPTL-семейства
SEQ ID | Конструкция | Последовательность |
71 | hANGPTLl 1-491 | MKTFTWTLGVLFFLLVDTGHCRGGQFKIKKINQRRYPRATDGKEEAKKCA YTFLVPEQRITGPICVNTKGQDASTIKDMITRMDLENLKDVLSRQKREID VLQLWDVDGNIVNEVKLLRKESRNMNSRVTQLYMQLLHEIIRKRDNSLE LSQLENKILNVTTEMLKMATRYRELEVKYASLTDLVNNQSVMITLLEEQC LRIFSRQDTHVSPPLVQWPQHIPNSQQYTPGLLGGNEIQRDPGYPRDLM PPPDLATSPTKSPFKIPPVTFINEGPFKDCQQAKEAGHSVSGIYMIKPEN SNGPMQLWCENSLDPGGWTVIQKRTDGSVNFFRNWENYKKGFGNIDGEYW LGLENIYMLSNQDNYKLLIELEDWSDKKVYAEYSSFRLEPESEFYRLRLG TYQGNAGDSMMWHNGKQFTTLDRDKDMYAGNCAHFHKGGIVWYNACAHSNL NGVWYRGGHYRSKHQDGIFWAEYRGGSYSLRAVQMMIKPID |
72 | СТ hANGPTLl 271-491 | FINEGPFKDCQQAKEAGHSVSGIYMIKPENSNGPMQLWCENSLDPGGWTV IQKRTDGSVNFFRNWENYKKGFGNIDGEYWLGLENIYMLSNQDNYKLLIE LEDWSDKKVYAEYSSFRLEPESEFYRLRLGTYQGNAGDSMMWHNGKQFTT LDRDKDMYAGNCAHFHKGGWWYNACAHSNLNGVWYRGGHYRSKHQDGIFW AEYRGGSYSLRAVQMMIKPID |
73 | hANGPTL4 1-406 | MSGAPTAGAALMLCAATAVLLSAQGGPVQSKSPRFASWDEMNVLAHGLLQ LGQGLREHAERTRSQLSALERRLSACGSACQGTEGSTDLPLAPESRVDPE VLHSLQTQLKAQNSRIQQLFHKVAQQQRHLEKQHLRIQHLQSQFGLLDHK HLDHEVAKPARRKRLPEMAQPVDPAHNVSRLHRLPRDCQELFQVGERQSG LFEIQPQGSPPFLVNCKMTSDGGWTVIQRRHDGSVDFNRPWEAYKAGFGD PHGEFWLGLEKVHSITGDRNSRLAVQLRDWDGNAELLQFSVHLGGEDTAY SLQLTAPVAGQLGATTVPPSGLSVPFSTWDQDHDLRRDKNCAKSLSGGWW FGTCSHSNLNGQYFRSIPQQRQKLKKGIFWKTWRGRYYPLQATTMLIQPM AAEAAS |
74 | СТ hANGPTL4 179-406 | SRLHRLPRDCQELFQVGERQSGLFEIQPQGSPPFLVNCKMTSDGGWTVIQ RRHDGSVDFNRPWEAYKAGFGDPHGEFWLGLEKVHSITGDRNSRLAVQLR DWDGNAELLQFSVHLGGEDTAYSLQLTAPVAGQLGATTVPPSGLSVPFST WDQDHDLRRDKNCAKSLSGGWWFGTCSHSNLNGQYFRSIPQQRQKLKKGI FWKTWRGRYYPLQAT TMLIQPMAAEAAS |
Таблица 4. Хондрогенез белков-членов семейства ANGPTL
Белок | Активность образования конкреций | Индукция коллагена II типа | Входящий номер Genbank |
Angptll | Да | Да | NP_004664 |
Angptl2 | Нет | н/о | NP_036230 |
Angptl3 | Да | Да | NP_055310 |
Angptl4 | Да | Нет | NP_647475 |
Angptl6 | Нет | Нет | NP_114123 |
Ansptl7 | Нет | Нет | NP_066969 |
Angpt2 | Нет | н/о | NP_001138 |
Angptl | Нет | н/о | NP_004664 |
Хондрогенез на основе клеток 2D индуцировали in vitro и оценивали, как описано ранее в Johnson K. et al., (2012) Science 336, 717. Кратко, первичные мезенхимальные стволовые клетки костного мозга человека (hMSC) высевали на питательные среды, затем заменяли на среды для хондрогенной стимуляции с конструкциями и без них, и культивировали в течение 7 или 14 дней. Клетки затем фиксировали при помощи формальдегида, промывали и затем окрашивали с помощью стандартных иммуноцитохимических способов для детектирования первичных хрящевых белков проколлагена типа 2А (PIIANP) (фиг. 2A) и коллагена типа II (фиг. 2B). Для детектирования коллагена типа II, клетки переваривали с 0,2% коллагеназы II ((Worthington Biochemical, Лейквуд, штат Нью-Джерси), которую добавляли в
- 28 035158 раствор для нарушения проницаемости мембраны. Иммунофлуоресценцию для каждого детекируемого белка количественно определяли через отображение высокого содержания (Image Express Ultra (Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния), используя ячейку балльного сценария с несколькими длинами волн, и как описано ранее. См. фиг. 2. Экспрессию аггрекана контролировали путем подготовки клеток следующим образом: кратко, первичные hMSC (5000 клеток) засевали в Griener 384 луночный планшет. После 24 ч роста среду удаляли и заменяли 25 мкл DMEM, содержащей 1% FBS. Белковые конструкции, затем добавляли в каждую лунку в указанной дозе, и культуры выращивали при 37°C в течение 3 дней. Клетки фиксировали в 10% формалине и подвергали иммуноцитохимическим способам для детектирования экспрессии белка аггрекана. Лунки отображали при помощи ImageXpress Ultra и количественно определяли при помощи ячейку балльного сценария с несколькими длинами волн, n=6/концентрация белка. Результаты проиллюстрированы на фиг. 3B по отношению к контролю (клетки, стимулированные без конструкции, только разбавителем) для С-концевого (225-460) ANGPTL3 WT дикого типа, генноинженерной конструкции 242KQ или 242Kdel или полноразмерного ANGPTL1, члена родственного семейства ANGPTL-белков. Подобные результаты были получены в экспериментах с использованием каждой из конструкций 225WT, 225KQ, 226KQ, 228KQ, 233KQ, 241KQ и 242KQ.
Анализ хондрогенеза проводили с использованием тестов и способов, описанных ранее и в настоящем документе для дополнительных членов ANGPTL-родственного семейства.
Эксперименты проводили для проверки того, обладают ли близкородственные белки хондрогенной активностью и сохраняет ли активность С-терминальный конец белка. ANGPTL1 и ANGPTL4 демонстрировали активность в тестах на формирование конкреций; однако только ANGPTL1 показал индукцию коллагена типа II в анализах на хондрогенез. См. табл. 4. Результаты анализов активности формирования конкреций и индукции коллагена типа II суммированы в табл. 4. Дополнительные характеристики ANGPTL1 описаны в настоящем документе. См. другие части этого примера и фиг. 3-5.
Таблица 5. Гомология последовательностей среди членов ангиопоэтин-подобного семейства человека 5А. Идентичность последовательностей среди членов ангиопоэтин-подобного семейства человека (ECD или CTD)
Family member | Family member | % Sequence Identity |
hANGPTL3_17-460 | hANGPTL4_26-406 | 32, 6 |
hANGPTL3_17-460 | hANGPTLl_24-491 | 25, 7 |
hANGPTL3_17-460 | hANGPTL7_27-346 | 28,1 |
hANGPTL3_17-460 | hANGPTl_23-498 | 24,1 |
hANGPTL3_17-460 | hANGPT2_19-496 | 23,4 |
hANGPTL3_241-460 | hANGPTL4_l79-406 | 40, 0 |
hANGPTL3_241-460 | hANGPTLl_271-491 | 36, 8 |
hANGPTL3 241-460 | hANGPTL7_122-343 | 36, 4 |
hANGPTL3 241-460 | hANGPTl_277-497 | 37,3 |
hANGPTL3_241-460 | hANGPT2_275-495 | 36, 4 |
5В. Выравнивание последовательностей С-терминальных доменов членов ангиопоэтин-подобного семейства hANGPTL 1(271-491 )/hANGPTL3(241 -460)/hANGPTL4( 179-406)
HANGPTL3241-460 hANGPTL4_179-406 hANGPTL 1271-4 71
Clustal Consensus hANGPTL3_241-460 hANGPTL4_179-406 hANGPTLl_271-471 Clustal Consensus hANGPTL3_241-460 hANGPTL4_179-406 hANGPTl.l_271.-471
Clustal Consensus hANGPTL3_241-460 hANGPTL4_179-406 hANGPTll_271-471 Clustal Consensus hANGPTL3_241-460 hANGPTL4_179-406 hANGPTLl_271-471 Clustal Consensus
G GWW G GWW G GWW
Анализ экспрессии РНК был также использован для оценки экспрессии специфических белков хряща. Вкратце, qrt-PCR hMSC выращивали в осадочной культуре (1 χ 106 клеток/осадок) в течение 3, 7,
- 29 035158
10, 21 суток в бессывороточной среде DMEM, 1X ITS плюс конструкции (как указано). Среды заменяли каждые 3 дня. Экспрессию мРНК лубрицина, аггрекана, Sox9, IGF1, IFITM1, остеокальцина и коллагена X типа количественно оценивали с использованием Roche LightCycler (данные, полученные из 3 экспериментов, выполненных в двух повторностях (n=6)). Фиг. 3A представляет данные по экспрессии в день 10 для 242KQ и 225WT. Данные по генной экспрессии были сходными для всех генов в дни 3, 7 и 21.
Полноразмерный ANGPTL3, как ранее было показано, обладает хондрогенезной активностью как в человеческих, так и в мышиных мезенхимальных стволовых клетках. Конструкции проверяли на активность в мезенхимальных стволовых клетках человека, мыши, крысы и собаки, чтобы продемонстрировать способность к перекрестной реактивности с дополнительными видами. CR-MSC мыши, крысы, собаки и человека культивировали с конструкциями, как описано выше, в течение 18 дней. Культуры фиксировали и окрашивали с использованием стандартных иммуноцитохимических методик для детектирования хондроцит-специфического белка коллагена II типа, и коллаген II типа позитивные клетки были получены с помощью отображений высокого содержания. Похожее кратное увеличение количества коллагена II типа было подтверждено количественно для каждого вида оцениваемых клеток.
Хондропротекция. Пептидные конструкции оценивали в функциональных тестах для оценки хондропротекторной активности.
Анализ ингибирования высвобождения гликозамингликана (Г АГ) ex vivo (показатель повреждения матрикса) проводили, как описано в Johnson K. et al., (2012) Science 336, 717-721. Кратко, хрящ крупного рогатого скота выделяли, штамповали в симметричные круги и помещали в органную культуру. Срезы обрабатывали в течение 48 ч 20 нг/мл TNFa и 10 нг/мл онкостатина М (OSM) (медиаторы воспаления), чтобы индуцировать деградацию хрящевой ткани в присутствии или при отсутствии белковых конструкций для определения процента ингибирования высвобождения гликозаминогликанов (ГАГ).
Результаты, показанные на фиг. 4А, иллюстрируют данные, полученные от 4 доноров, n=12 с генноинженерными конструкциями как указано, и WT 225-460.
Анализ ингибирования оксида азота (NO) in vitro (показатель хондропротекции) проводили, как описано в Johnson K. et al., (2012) Science 336, 717-721. Кратко, первичные хондроциты обрабатывали в течение 48 ч белковыми конструкциями, как указано. Реакцию Грейсса проводили, чтобы определить влияние конструкций на ингибирование высвобождения NO. Результаты, показанные на фиг. 4В, иллюстрируют результаты для инженерных конструкций, как указывается, и WT C-терминального фрагмента 225-460. Результаты, показанные на фиг. 4С, иллюстрируют результаты с С-терминальным ANGPTL1 дикого типа, генно-инженерным ANGPTL3 242KQ или контролем.
Ингибирование формирования фиброзных хрящей. Первичные суставные хондроциты человека культивировали, как описано выше, с добавлением аскорбиновой кислоты и наличием или отсутствием конструкций (указано) в течение 14 дней для индуцирования гипертрофии и экспрессию коллагена тип X оценивали по иммунофлуоресценции. Результаты, показанные на фиг. 5А, иллюстрируют данные с конструкциями 225WT или 242KQ, как указано. Результаты, показанные на фиг. 5В, иллюстрируют данные с С-терминальным ANGPTL1 дикого типа, генно-инженерными ANGPTL3 242KQ или 242Kdel или фрагментом 225-460 С-терминальным ANGPTL3 дикого типа, как указано. Наличие дикого типа или активных конструкций оказывает ингибирующее действие на формирование фиброзной хрящевой ткани при гипертрофических состояниях, как детектируется по экспрессии коллагена типа X.
Ангиогенез. WT С-концевой домен белка ANGPTL3, как сообщалось, обладает ангиогенными активностями и свойствами in vitro и in vivo в модели роговицы на крысе. См. Camenisch et al., J. Biol. Chem. 277(19): 17281-17290 (2002). Для устранения возможного риска индуцирования новых кровеносных сосудов после in vivo введения с-концевого ANGPTL3, ангиогенные анализы in vitro были проведены. Кратко, первичные эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC) находились без сыворотки в течение ночи со средой базальных эндотелиальных клеток. Клетки затем метили зеленым клеточным трекером и добавляли к предварительно покрытым матригелем планшетам с внедренной белковой конструкцией (указывается). После культивирования в течение 18 ч в присутствии полноразмерного ANGPTL3 (50 нг/мл) или 242KQ (50 нг/мл) или bFGF в (50 нг/мл), который использовали в качестве положительного контроля, число точек ветвления и общую длину образованной пробки количественно определяли с помощью отображения высокого содержания как меру ангиогенной активности. В отличие от эффекта, наблюдаемого в присутствии полноразмерного ANGPTL3 или положительного контроля, было обнаружено незначительное увеличение любого из этих параметров в случае, когда клетки инкубировали с 242KQ. См. фиг. 2С.
CR-MSC существуют в пределах гиалинового суставного хряща и увеличиваются в числе в ответ на травму. После повреждения хрящевой ткани эти клетки обладают способностью участвовать в процессах репарации, но не в достаточной мере приводят к надлежащему восстановлению хряща сами по себе. Пациенты поэтому остаются с суставным хрящ, у которого отсутствует достаточная способность поддерживать безболезненную подвижность суставов и часто требуется хирургическое вмешательство и/или замена сустава для поддержания их качества жизни. Мы обнаружили, что ANGPTL3 и, в частности, сконструированные протеаза-устойчивые ANGPTL3-пептиды обладают способностью направлять дифференцировку человеческих CR-MSC в хондроциты, специфически секретирующие гиалиновые белки
- 30 035158 суставного хряща коллаген II типа и Sox9 при ингибировании формирования фиброзного хряща, отмеченного путем экспрессии коллагена типа X.
Об экспрессии ANGPTL3 не сообщалось, насколько нам известно, и она не наблюдалась в наших исследованиях с использованием вестерн-блоттинга в человеческих хондроцитах, MSC человека или синовиальных фибробластах человека. В суставах грызунов, экспрессия практически не была обнаружена посредством иммуногистохимии (IHC). Однако в остеоартритной синовиальной жидкости человека (n=2) низкий уровень ANGPTL3 (1,3-6,0 нг/мл) был выявлен с помощью иммуноферментного анализа (ELISA), указывая на то, что в подвергаемом риску суставе системно циркулирующий белок может входить в синовиальную полость.
Пример 4. Анализ конструкций in vivo Хирургическая модель тяжелой травмы на мышах.
Хирургическое рассечение передней крестообразной связки (ACL), медиального мениска большеберцовой связки (MMTL) и медиальной коллатеральной связки (MCL) правого колена у мышей линии C57BL/6 (n=12 /группе) проводили, чтобы вызвать нестабильность в коленном суставе и тем самым привести к ОА-фенотипу, использованному от ранее описанной модели Glasson S.S. et al., Osteoarthritis Cartilage 15, 1061 (2007). Для оценки потенциального терапевтического преимущества ANGPTL3-лечения, 15 недель после операции мышам вводили интрасуставно, как указано на фиг. 6А, раз в неделю в недели 1719: доза mANGPTL3 = 200 нг/колено. Количественные оценки тибиального плато были сделаны на шкале 0-4, где 0 является нормой, а 5 - тяжелым остеоартритом (разрушение хряща на всю его толщину). Два среза от каждой мыши были вслепую классифицировались 2 независимыми наблюдателями (фиг. 6В).
Облегчение индуцированной остеоартрозом боли у животных определяли при помощи инкапаситантного тестирования или определения процента времени, в течение которого мышь стояла на прооперированной ноге vs неоперированной ноге, с помощью прибора инкапаситантного мониторинга. Фиг. 7 иллюстрирует результаты отсчетов, представляющих болевой отклик на 35- и 56-й дни после операции, выраженные как % веса, приходящийся на прооперированную конечность vs неоперированной конечности. Обработка иллюстрирует результаты, полученные на животных, дозированных, как описано выше, полноразмерным мышиным ANGPTL3 (WT17-460) или С-концевым ANGPTL3 человека (WT225-460).
Модель хронического ОА на мышах (индуцированного коллагеназой VII). Другая широко применяемая животная модель остеоартрита, модель коллагеназа VII-индуцированного хронического поражения суставов, была использована для оценки in vivo эффективности конструкций. Модель и оценивание проводили, как описано ранее. См. van der Kraan P.M. et al., Am. J. Pathol. 135, 1001 (1989); и Johnson K. et al., Science 336, 717 (2012). Кратко, 3-дневный период воспаления следует за индуцированной коллагеназой дестабилизацией сустава, приводящей в результате к легкому или умеренному разрушению хрящевой ткани. Внутрисуставное введение конструкций проводили после индукции в колено один раз в неделю в течение трех недель, начиная с 3 недель после добавления коллагеназы VII. Сорок (42) дней после лечения суставы собирали и делали срезы. Гистологическая балльная оценка степени тяжести состояния сустава бедренной и большеберцовой кости давала возможность количественно оценивать репарацию тканей. Степени тяжести состояния сустава определяли путем гистологической балльной оценки, как описано выше. Фиг. 8 иллюстрирует восстановление с использованием конструкций 225WT, 225KQ, 228KQ, 233KQ и 241KQ. Для подтверждения наличия белка в суставе (долгосрочные внутрисуставные удержание), ткань фиксировали и окрашивали на присутствие конструкции белка WT с помощью иммуногистохимии. Анализ подтвердил присутствие белка, что указывало на внутрисуставное удержание ANGPTL3 (без каких-либо последствий на липид/триглицериды, оцениваемых с использованием стандартной метаболической панели, данные не приведены).
Гистологический анализ и оценивание сафранин О окрашенных срезов медиального плато большеберцовой кости (для выявления протеогликанов в участке повреждения, как описано выше) показали регенерацию в хрящевой ткани (данные не показаны). Качественный анализ подтвердил замену протеогликанов, сходную с уровнями, наблюдаемыми у наивной мыши, в то время как контроль с носителем не продемонстрировал похожей замены. Тканевые срезы также окрашивали, как описано выше для коллагена II типа, через 8 недель после инъекции повреждения. Качественный анализ подтвердил увеличение коллагена II типа в суставах, подвергавшихся лечению конструкцией, аналогичных уровням, которые наблюдались у наивной мыши; в то время как контроли, подвергшиеся лечению носителем, не продемонстрировали похожей замены. (данные не показаны).
Модель разрыва мениска на крысах.
Модель хирургической травмы на крысах также была использована для оценки эффективности конструкций in vivo. Модель и оценивание первоначально осуществляли, как описано ранее Gerwin N. et al. Osteoarthritis Cartilage. Suppl. 3: S24 (2010). Коротко, кожу обривали вдоль коленного сустава и медиальную коллатеральную связку (MCL) выделяли через разрез, и MCL стабилизировали и дистальный срез мениска делали с помощью скальпеля. В недели 1, 2 и 3 после операции белковую конструкцию или контроль с носителем вводили интрасуставно, затем суставы собирали и делали срезы на 4- и 6-й неделе после операции. Гистологическую балльную оценку степни тяжести состояния плато бедренной и большеберцовой кости проводили для количественной оценки восстановления тканей, как описано выше. Данные приведены за 6 недель анализов.
- 31 035158
Здоровый гиалиновый хрящ заменял повреждение после лечения. Гистологический анализ и классификацию латерального тибиального плато окрашенного сафранином О хряща проводили, как описано выше, и количественно оценивали. Результаты показали, что у животных, получавших конструкцию 242KQ, выявлялась регенерация в хрящевой ткани и замена протеогликанов, сходно с уровнями, наблюдаемыми у наивной крысы, в то время как контроль с носителем не продемонстрировал похожей замены. См. фиг. 9. Аналогичные результаты были отмечены для 225WT.
Слегка измененная модель хирургически индуцированного разрыва мениска, описанная выше, была использована, чтобы инициировать повреждение хряща у самцов крыс Льюиса с целью проверки эффективности 242KQ в стимулировании восстановления хрящевой ткани in vivo. Операции на крысах проводили, чтобы полностью разорвать медиальную коллатеральную связку и медиальный мениск для дестабилизации сустава, с тем чтобы последующая весовая нагрузка привела бы к быстрой дегенерации хряща. Был сделан надрез, чтобы разорвать связки по обе стороны иглы, обеспечивая тем самым полный разрез. Затем использовали лезвие скальпеля, чтобы проникнуть под связкой надколенника в синовиальное пространство, и заостренную верхушку использовали для того, чтобы разрезать мениск. Удачный разрез достигался, когда сустав вывихивался вбок. Через неделю после операции крыс дозировали путем внутрисуставной инъекции 242KQ или физиологического раствора в объеме 25 мкл во внутрисуставное синовиальное пространство.
Через двадцать восемь дней после операции по разрыву мениска и двадцать один день после внутрисуставной инъекции физиологического раствора или конструкции, исследуемых животных умерщвляли и пораженные суставы собирали для анализа, фиксировали в 10% формалине в PBS, декальцинировали муравьиной кислотой и заливали в парафин перед изготовлением срезов. Готовили корональные срезы и окрашивали сафранином О или оставляли неокрашенными для дальнейшего иммуногистохимического окрашивания. Анализ показал, что медиальное тибиальное плато имело наибольшее количество повреждений хряща, и было решено оценивать только эту область сустава на эффективность 242KQ. С использованием системы оценивания OARSI, балльная оценка степени тяжести состояния хрящей назначали для шести срезов по ширине тибиального хряща для каждого животного (N=10) вслепую. Балльное оценивание проводили дважды в разные временные точки и баллы затем усредняли, чтобы создать балльную оценку повреждения хряща. Кроме того, анализы объективной балльной оценки проводили с пользовательским скриптом, сгенерированным в среде Matlab. Алгоритм выявлял суставные хрящевые поверхности и объективно количественно определял дополнительные параметры хряща (зональные анализы, интенсивность сафранина О, область хряща, толщину хряща). Результаты иллюстрируются на фиг. 10А.
Структурное восстановление хряща не всегда связано с облегчением боли, по меньшей мере, у людей. Хотя физиология грызунов и манера ходьбы значительно отличаются от таковых у людей, 242KQ оценивали, чтобы определить наличие какого-либо улучшения в манере ходьбы или в продолжительности нахождения на конечности после хирургического лечения. Инкапаситантный мониторинг проводился на крысах, получавших 242KQ. Крыс подвергали измененной хирургической операции на мениске, как описано выше. Через одну неделю после операции 242KQ вводили в синовиальное пространство. На 28-й день крыс помещали в инкапаситантный монитор задними конечностями, и 30 последующих считываний были приняты в течение более 10 мин для каждой крысы для определения процента времени, проведенного (распределение веса) на каждой задней конечности. Эти данные дают представление о боль-индуцированном перераспределении веса. Было установлено, что в модели разрыва мениска на крысах лечение при помощи 242KQ через одну неделю после операции привело к частичному восстановлению способности к равной весовой нагрузке у крыс. См. фиг. 10В.
Одной из основных проблем в ходе спонтанного или хирургического восстановления хряща является замещение гиалинового суставного хряща фиброзной хрящевой тканью. Для исследования типа восстановления хряща, опосредованного ANGPTL3, срезы коленей крыс, полученные в исследовании разрыва мениска у крыс, проведенном выше, окрашивали в присутствии коллагена II типа (для индикации гиалинового суставного хряща) и коллагена X типа (для индикации фиброзного хряща). После однократного введения 20 мкг 242KQ наблюдалось качественное уменьшение величины экспрессии коллагена X типа.
Долговременное удержание 242KQ после внутривенной и внутрисуставной инъекции в колени крыс определяли путем 124Гмечения белка и введения с последующим РЕТ/цСТ отображением для контроля удержания. См., Gerwin N. et al. (2006) Advanced drug delivery reviews 58, 226-242. Среднее время удержания (MRT) после инъекции 242KQ в сустав, как был определено, составило ~17,3 ч, что является значительно увеличенным по сравнению со стандартными 2-3 ч, как сообщалось (см. табл. 6)
Таблица 6. Устойчивость 1241242KQ
Способ | Доза (мкг) | (нг/мл) | AUCo-inf (ч*мкг/мл) | CL (мл/ч) | Vss (мл) | MRT (ч) | Т1/2 (ч) |
IV | 164,2 | 129,3 | 22,1 | 7,4 | 53,4 | 7,2 | 12,4 |
IA | 38,3 | 0,2 | 1,9 | - | - | 17,3 | 7,2 |
Модель травматического повреждения сустава путем частичной менискэктомии на собаках Мы
- 32 035158 также оценивали активность ANGPTL3 в модели травматического повреждения суставов у собак. Модель выполняли и оценивание осуществляли, как описано в Connor J.R. et al., Osteoarthritis and cartilage/OARS, Osteoarthritis Research Society 17, 1236-1243 (2009). Вкратце, кожу обривали над коленным суставом и медиальную коллатеральную связку (MCL) выделяли через разрез, и MCL стабилизировали, и дистальный срез мениска проводили с помощью скальпеля. Четыре (4) дня после операции животные получали либо дозирование два раза в неделю (1,5 или 15 мкг), или однократную дозу (30 мкг) белковой конструкции (полноразмерный ANGPTL3 собаки) на 7-й день или контроль носителя (вводят внутрисуставно). Собак усыпляли на 28-е сутки и колени подвергали гистологическим срезам и классификации, как описано выше для экспериментов с крысами и мышами. Фиг. 10 иллюстрирует общую валовую балльную оценку восстановления, связанного с лечением собачьим ANGPTL3. По гистологической классификации и оценке срезов суставов собак, окрашенных сафранином О, в областях, где имели место наиболее серьезные потери хряща в группах с физраствором была, была часть сустава, которая имела наибольшее снижение в области поражения после однократной дозы 30 мкг cANGPTL3.
Следует понимать, что примеры и варианты осуществления, описанные в настоящем документе, предназначены лишь для иллюстративных целей,и что различные модификации или изменения в свете этого могут быть предложены специалистами в рассматриваемой области техники и подлежат включению в духе и компетенции данной заявки и в рамках прилагаемых пунктов формулы изобретения.
- 33 035158
Последовательности
SEQ ID | Конструкция | Последовательность |
1 | ANGPTL3 | MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGH GLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKN EEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVKYLEEQLTNLIQNQPETPEHPEVTSLK TFVEKQDNSIKDLLQTVEDQYKQLNQQHSQIKEIENQLRRTSIQEPTEISLSSKP RAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCD VISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYV LRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWD HKAKGHFNCPEGYSGGWWraDECGENNLNGKYNKPRAKSKPERRRGLSWKSQNGR LYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
человека | ||
2 | REFSEQ | ttccagaagaaaacagttccacgttgcttgaaattgaaaatcaagataaaaatgt tcacaattaagctccttctttttattgttcctctagttatttcctccagaattga tcaagacaattcatcatttgattctctatctccagagccaaaatcaagatttgct atgttagacgatgtaaaaattttagccaatggcctccttcagttgggacatggtc ttaaagactttgtccataagacgaagggccaaattaatgacatatttcaaaaact caacatatttgatcagtctttttatgatctatcgctgcaaaccagtgaaatcaaa gaagaagaaaaggaactgagaagaactacatataaactacaagtcaaaaatgaag aggtaaagaatatgtcacttgaactcaactcaaaacttgaaagcctcctagaaga aaaaattctacttcaacaaaaagtgaaatatttagaagagcaactaactaactta attcaaaatcaacctgaaactccagaacacccagaagtaacttcacttaaaactt ttgtagaaaaacaagataatagcatcaaagaccttctccagaccgtggaagacca atataaacaattaaaccaacagcatagtcaaataaaagaaatagaaaatcagctc agaaggactagtattcaagaacccacagaaatttctctatcttccaagccaagag caccaagaactactccctttcttcagttgaatgaaataagaaatgtaaaacatga tggcattcctgctgaatgtaccaccatttataacagaggtgaacatacaagtggc atgtatgccatcagacccagcaactctcaagtttttcatgtctactgtgatgtta tatcaggtagtccatggacattaattcaacatcgaatagatggatcacaaaactt caatgaaacgtgggagaactacaaatatggttttgggaggcttgatggagaattt tggttgggcctagagaagatatactccatagtgaagcaatctaattatgttttac gaattgagttggaagactggaaagacaacaaacattatattgaatattcttttta cttgggaaatcacgaaaccaactatacgctacatctagttgcgattactggcaat gtccccaatgcaatcccggaaaacaaagatttggtgttttctacttgggatcaca aagcaaaaggacacttcaactgtccagagggttattcaggaggctggtggtggca tgatgagtgtggagaaaacaacctaaatggtaaatataacaaaccaagagcaaaa tctaagccagagaggagaagaggattatcttggaagtctcaaaatggaaggttat actctataaaatcaaccaaaatgttgatccatccaacagattcagaaagctttga atgaactgaggcaaatttaaaaggcaataatttaaacattaacctcattccaagt taatgtggtctaataatctggtattaaatccttaagagaaagcttgagaaataga ttttttttatcttaaagtcactgtctatttaagattaaacatacaatcacataac cttaaagaataccgtttacatttctcaatcaaaattcttataatactatttgttt |
ANGPTL3 | ||
человека | ||
taaattttgtgatgtgggaatcaattttagatggtcacaatctagattataatca ataggtgaacttattaaataacttttctaaataaaaaatttagagacttttattt taaaaggcatcatatgagctaatatcacaactttcccagtttaaaaaactagtac tcttgttaaaactctaaacttgactaaatacagaggactggtaattgtacagttc ttaaatgttgtagtattaatttcaaaactaaaaatcgtcagcacagagtatgtgt aaaaatctgtaatacaaatttttaaactgatgcttcattttgctacaaaataatt tggagtaaatgtttgatatgatttatttatgaaacctaatgaagcagaattaaat actgtattaaaataagttcgctgtctttaaacaaatggagatgactactaagtca cattgactttaacatgaggtatcactataccttatt |
- 34 035158
3 | ANGPTL3 мыши | MHTIKLFLFWPLVIASRVDPDLSSFDSAPSEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGH GLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYDLSLRTNEIKEEEKELRRTTSTLQVKN EEVKNMSVELNSKLESLLEEKTALQHKVRALEEQLTNLILSPAGAQEHPEVTSLK SFVEQQDNSIRELLQSVEEQYKQLSQQHMQIKEIEKQLRKTGIQEPSENSLSSKS RAPRTTPPLQLNETENTEQDDLPADCSAVYNRGEHTSGVYTIKPRNSQGFNVYCD TQSGSPWTLIQHRKDGSQDFNETWENYEKGFGRLDGEFWLGLEKIYAIVQQSNYI LRLELQDWKDSKHYVEYSFHLGSHETNYTLHVAEIAGNIPGALPEHTDLMFSTWN HRAKGQLYCPESYSGGWWWNDICGENNLNGKYNKPRTKSRPERRRGIYWRPQSRK LYAIKSSKMMLQPTT |
4 | ANGPTL3 собаки | MYTIKLFLFIIPLVISSKIDRDYSSYDSVSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGH GLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYDLSLQTNEIKEEEKELRRTTSKLQVKN EEVKNMSLELNSKVESLLEEKILLQQKVRYLEKQLTSLIKNQPEIQEHPEVTSLK TFVEQQDNSIKDLLQTVEEQYRQLNQQHSQIKEIENQLRNVIQESTENSLSSKPR APRTTPFLHLNETKNVEHNDIPANCTTIYNRGEHTSGIYSIRPSNSQVFNVYCDV KSGSSWTLIQHRIDGSQNFNETWENYRYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYIL RIELEDWNDNKHYIEYFFHLGNHETNYTLHLVEITGNILNALPEHKDLVFSTWDH KAKGHVNCPESYSGGWIVWHNVCGENNLNGKYNKQRAKTKPERRRGLYWKSQNGR L YSIKSTKMLIHPIDSESSE |
5 | ANGPTL3 лошади | MYTIKLFLVIAPLVISSRIDQDYSSLDSIPPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGH GLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYALSLQTNEIKEEEKELRRTTSKLQVKN EEVKNMSLELNSKLESLLEEKSLLQQKVKYLEEQLTKLIKNQPEIQEHPEVTSLK TFVEQQDNSIKDLLQTMEEQYRQLNQQHSQIKEIENQLRRTGIQESTENSLSSKP RAPRTTPSFHLNETKDVEHDDFPADCTTIYNRGEHTSGIYSIKPSNSQVFNVYCD VISGSSWILIQRRIDGSQNFNETWQNYKYGFGRLDFEFWLGLEKIYSIVKRSNYI LRIELEDWKDNKHTIEYSFHLGNHETNYTLHLVEITGNVPNALPEHKDLVFSTWD HKAKGQLNCLESYSGGWWWHDVCGGDNPNGKYNKPRSKTKPERRRGICWKSQNGR LYTIKSTKMLIHPIDSESFELRQIKKPMN |
6 | Бычий ANGPTL3 | MYTIKLFLIIAPLVISSRTDQDYTSLDSISPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGH GLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYDLSLQTNEIKEEEKELRRATSKLQVKN EEVKNMSLELDSKLESLLEEKILLQQKVRYLEDQLTDLIKNQPQIQEYLEVTSLK |
TLVEQQDNSIKDLLQIVEEQYRQLNQQQSQIKEIENQLRRTGIKESTEISLSSKP RAPRTTPSFHSNETKNVEHDDIPADCTIIYNQGKHTSGIYSIRPSNSQVFNVYCD VKSGSSWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVMQSNYI LRIELEDWKDKYYTEYSFHLGDHETNYTLHLAEISGNGPKAFPEHKDLMFSTWDH KAKGHFNCPESNSGGWVYHDVCGENNLNGKYNKPKAKAKPERKEGICWKSQDGRL YSIKATKMLIHPSDSENSE | ||
7 | 207-455WT | IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAI RPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGL EKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNA IPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKSKPE RRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
8 | 225-455WT | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTD |
9 | 228-455WT | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST KMLIHPTD |
- 35 035158
10 | 233-455WT | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH PTD |
11 | 241-455WT | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH DECGENNLNGKYNKPRAKSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
12 | ANGPTL3KQ | MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGH GLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKN EEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVKYLEEQLTNLIQNQPETPEHPEVTSLK TFVEKQDNSIKDLLQTVEDQYKQLNQQHSQIKEIENQLRRTSIQEPTEISLSSKP RAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCD VISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYV LRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWD HKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGR LYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
13 | ANGPTL3KS | MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGH GLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKN EEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVKYLEEQLTNLIQNQPETPEHPEVTSLK TFVEKQDNSIKDLLQTVEDQYKQLNQQHSQIKEIENQLRRTSIQEPTEISLSSKP RAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCD VISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYV LRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWD HKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGR LYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
14 | 207KQ | IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAI RPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGL EKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNA IPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPE RRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
15 | 207KS | IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAI RPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGL EKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNA IPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPE RRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
16 | 225KQ | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTDSESFE |
17 | 225KS | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTDSESFE |
18 | 225ST | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKTKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTDSESFE |
- 36 035158
TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS
PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL
226KQ
EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG
HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK
STKMLIHPTDSESFE
TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS
PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL
226KS
EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG
HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK
STKMLIHPTDSESFE
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW
TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED
228KQ
WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF
NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST
KMLIHPTDSESFE
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW
TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED
228KS
WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF
NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST
KMLIHPTDSESFE
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW
TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED
228ST
WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF
NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKTKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST
KMLIHPTDSESFE
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH
RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK
233KQ
HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG
YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH
PTDSESFE
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH
RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK
233KS
HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG
YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH
PTDSESFE
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF
241KQ
NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY
LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH
DECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF
241KS
NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY
LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGW1WH
DECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN
242KQ
ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL
GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD
ECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN
242KS
ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL
GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD
ECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
- 37 035158
30 | 225-455KQ | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTD |
31 | 225-455KS | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSI KSTKMLIHPTD |
32 | 22 6-4 55KQ | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTD |
33 | 226-455KS | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTD |
34 | 228-455KQ | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST KMLIHPTD |
35 | 228-455KS | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSRPERRRGLSWKSQNGRLYSIKST KMLIHPTD |
36 | 233-455KQ | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH PTD |
- 38 035158
37 | 233-455KS | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIH PTD |
38 | 241-455KQ | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH DECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
39 | 241-455KS | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH DECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
40 | 242-455KQ | IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD ECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
41 | 242-455KS | IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD ECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
42 | 227KQ собаки | FLHLNETKNVEHNDIPANCTTIYNRGEHTSGIYSIRPSNSQVFNVYCDVKSGSSW TLIQHRIDGSQNFNETWENYRYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYILRIELED WNDNKHYIEYFFHLGNHETNYTLHLVEITGNILNALPEHKDLVFSTWDHKAKGHV NCPESYSGGWWWHNVCGENNLNGKYNKQRAQTKPERRRGLYWKSQNGRLYSIKST KMLIHPIDSESSE |
11 | 227KS собаки | FLHLNETKNVEHNDIPANCTTIYNRGEHTSGIYSIRPSNSQVFNVYCDVKSGSSW TLIQHRIDGSQNFNETWENYRYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYILRIELED WNDNKHYIEYFFHLGNHETNYTLHLVEITGNILNALPEHKDLVFSTWDHKAKGHV NCPESYSGGWWWHNVCGENNLNGKYNKQRASTKPERRRGLYWKSQNGRLYSIKST KMLIHPIDSESSE |
44 | Последовательность нуклеиновых кислот 225WT | ACTACTCCCTTTCTTCAGTTGAATGAAATAAGAAATGTAAAACATGATGGCATTC СТ GCT GAAT GTACCACCATTTATAACAGAGGT GAACATACAAGT GGCAT GTAT GC CATCAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATCAGGT AGT С CAT G GACАТ ТААТ Т СААСАТ С GAATAGAT G GAT САСААААС Т Т СААТ GAAA CGTGGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGTTGGG С С ТAGAGAAGATАТАС Т С СATAGT GAAG СААТ С ТААТ TATGTTTTAC GAAT Т GAG TTGGAAGACTGGAAAGACAACAAACATTATATTGAATATTCTTTTTACTTGGGAA ATCACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCCCCAA |
- 39 035158
TGCAATCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGCAAAA GGACACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGATGAGT GTGGAGAAAACAACCTAAATGGTAAATATAACAAACCAAGAGCAAAATCTAAGCC AGAGAGGAGAAGAGGATTAT СТТ GGAAGT СТ CAAAAT GGAAGGTTATACT СТАТА АААТ СААС СААААТ GT Т GAT С CAT С СААСAGAT Т СAGAAAG С Т Т Т GAA | |||
45 | Последова- | ACTACTCCCTTTCTTCAGTTGAATGAAATAAGAAATGTAAAACATGATGGCATTC СТ GCT GAAT GTACCACCATTTATAACAGAGGT GAACATACAAGT GGCAT GTAT GC CATCAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATCAGGT AGT С CAT G GAGAT TААТ T СAACAT C GAATAGAT G GAT СACААААС T T GAAT GAAA CGTGGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGTTGGG С С TAGAGAAGATATAC T C CATAGT GAAG GAAT С TAAT TATGTTTTAC GAAT T GAG TTGGAAGACTGGAAAGACAACAAACATTATATTGAATATTCTTTTTACTTGGGAA ATCACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCCCCAA TGCAATCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGCAAAA GGACACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGATGAGT GTGGAGAAAACAACCTAAATGGTAAATATAACAAACCAAGAGCACAATCTAAGCC AGAGAGGAGAAGAGGATTAT CTT GGAAGT CT CAAAAT GGAAGGTTATACT СТАТA АААТ CAAC CAAAAT GT T GAT C CAT C GAAGAGAT T CAGAAAG С T T T GAA | |
дельность | |||
нуклеиновых | |||
кислот 225KQ | |||
46 | Последова- | A.CTACTCCCTTTCTTCAGTTGAATGAAATAAGAAATGTAAAACATGATGGCATTC CT GCT GAAT GTACCACCATTTATAACAGAGGT GAACATACAAGT GGCAT GTAT GC CATCAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATCAGGT AGTCCAT GGAGATTААТT GAAGAT CGAATAGAT GGAT СACААААСTT GAAT GAAA CGTGGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGTTGGG С С T AGAGAAGAT AT AC T C CAT AGT GAAG GAAT С T AAT TATGTTTTAC GAAT T GAG TTGGAAGACTGGAAAGACAACAAACATTATATTGAATATTCTTTTTACTTGGGAA ATCACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCCCCAA TGCAATCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGCAAAA GGACACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGATGAGT GTGGAGAAAACAACCTAAATGGTAAATATAACAAACCAAGAGCAAGCTCTAAGCC AGAGAGGAGAAGAGGATTAT CTT GGAAGT CT CAAAAT GGAAGGTTATACT GTATA АААТ CAAC CAAAAT GT T GAT C CAT С CAACAGAT T CAGAAAGСT T T GAA | |
тельность | |||
нуклеиновых | |||
кислот 225KS | |||
£7 | Последова- | ACTCCCTTTCTTCAGTTGAATGAAATAAGAAATGTAAAACATGATGGCATTCCTG CTGAATGTACCACCATTTATAACAGAGGTGAACATACAAGTGGCATGTATGCCAT CAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATCAGGTAGT С CAT G GAGАТ ТААТ Т СААСАТ С GAATAGAT G GAT САСААААС Т Т СААТ GAAAC GT GGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGTTGGGCCT AGAGAAGATАТАС Т С СATAGT GAAG СААТ С ТААТ TATGTTTTAC GAAT Т GAGT Т G GAAGACTGGAAAGACAACAAACATTATATTGAATATTCTTTTTACTTGGGAAATC ACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCCCCAATGC | |
тельность | |||
нуклеиновых | |||
кислот 226KQ | |||
- 40 035158
AA.TCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGCAAAAGGA CACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGATGAGTGTG GAGAAAACAACCTAAATGGTAAATATAACAAACCAAGAGCACAATCTAAGCCAGA GAGGAGAAGAGGATTAT СТТ GGAAGT СТ CAAAAT GGAAGGTTATACT СТАТАААА Т СAAC СААААТ GT Т GAT С CAT С СAACAGAT Т СAGAAAG С Т Т Т GAA | ||
48_ | Поспелова- | ACTCCCTTTCTTCAGTTGAATGAAATAAGAAATGTAAAACATGATGGCATTCCTG CTGAATGTACCACCATTTATAACAGAGGTGAACATACAAGTGGCATGTATGCCAT CAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATCAGGTAGT С CAT G GACАТ ТААТ Т СAACАТ С GAATAGAT G GAT САСААААС Т Т СААТ GAAAC GT GGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGTTGGGCCT AGAGAAGATАТАС Т С СATAGT GAAG СААТ С ТААТ TATGTTTTAC GAAT Т GAGT Т G GAAGACTGGAAAGACAACAAACATTATATTGAATATTCTTTTTACTTGGGAAATC ACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCCCCAATGC AATCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGCAAAAGGA CACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGATGAGTGTG GAGAAAACAACCTAAAT GGTAAATATAACAAAC CAAGAGCAAGCT CTAAGCCAGA GAGGAGAAGAGGATTAT СТТ GGAAGT СТ CAAAAT GGAAGGTTATACT СТАТАААА Т СAAC CAAAAT GT Т GAT С CAT С СAACAGAT Т СAGAAAG С Т Т Т GAA |
тельность | ||
нуклеиновых | ||
кислот 226KS | ||
49 | Последова- | TTTCTTCAGTTGAATGAAATAAGAAATGTAAAACATGATGGCATTCCTGCTGAAT GTАС СAC CAT Т ТATAACAGAG GT GAACATACAAGT G G CAT GTAT G C CAT CAGAC C CAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATCAGGTAGTCCATGG ACAT TААТ T CAACAT C GAATAGAT GGAT СACААААСT T СAAT GAAAC GT GGGAGA ACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGTTGGGCCTAGAGAA GATATAC T C CATAGT GAAG СААТ С TAAT TATGTTTTAC GAAT T GAGT T G GAAGAC TGGAAAGACAACAAACATTATATTGAATATTCTTTTTACTTGGGAAATCACGAAA CCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCCCCAATGCAATCCC GGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGCAAAAGGACACTTC AA.CTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGATGAGTGTGGAGAAA ACAACCTAAATGGTAAATATAACAAACCAAGAGCACAATCTAAGCCAGAGAGGAG AA.GAGGATTATCTTGGAAGTCTCAAAATGGAAGGTTATACTCTATAAAATCAACC Z\Z\Z\AT GT T GAT C CAT C CZ\AC AGAT T CAGAAAG С T T T GAA |
тельность | ||
нуклеиновых | ||
кислот 228KQ | ||
50 | Последова- | TTTCTTCAGTTGZ\ATGZ\Z\ATZ\AGZ\Z\ATGTZ\Z\Z\ACATGATGGCATTCCTGCTGZ\AT GT AC C AC CAT T T ATZVX.C AGAG GT GZ\AC AT ACZiAGT G G CAT GT AT G C CAT C AGAC C CAGCZ\ACTCTCZ\AGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATCAGGTAGTCCATGG AC AT TZ\AT T CZ\AC AT C GZ\AT AGAT G GAT C ACZVViAC T T CZ\AT GAAAC GT G G GAGA ACTACZ\Z\ATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGZ\ATTTTGGTTGGGCCTAGAGZ\A GAT AT AC T C CAT AGT GAAG CZ\AT C TZ\AT TATGTTTTAC GZ\AT T GAGT T G GAAGAC TGGZ\Z\AGACZ\ACZ\Z\ACATTATATTGZ\ATATTCTTTTTACTTGGGZ\Z\ATCACGZ\Z\A CCZ\ACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCZ\ATGTCCCCZ\ATGCZ\ATCCC GGZ\Z\Z\ACZ\Z\AGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAZ\AGCZ\Z\Z\AGGACACTTC Z\ACT GT CCAGAGGGTTATT CAGGAGGCT GGT GGT GGCAT GAT GAGT GT GGAGZViA ACZ\ACCTZ\Z\ATGGTZ\Z\ATATZ\ACZ\Z\ACCZ\AGAGCZ\AGCTCTZ\AGCCAGAGAGGAG |
тельность | ||
нуклеиновых | ||
кислот 228KS | ||
AAGAGGATTATCTTGGAAGTCTCAAAATGGAAGGTTATACTCTATAAAATCAACC
ZiAAAT GT T GAT C CAT С СAACAGAT T CAGAAAG С T T T GAA
- 41 035158
Последовануклеиновых кислот
233KQ
Последовануклеиновых кислот
233KS
Последовануклеиновых кислот
241KQ
Последовануклеиновых кислот
241KS
ACAGAGGT GAACATACAAGT GGCAT GTAT GCCAT CAGACCCAGCAACT CT CAAGT
TTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATCAGGTAGTCCATGGACAXTAATTCAACAT
TTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGTTGGGCCTAGAGAAGATATACTCCATAGT
CATTATATTGAATATTCTTTTTACTTGGGAAATCACGAAACCAACTATACGCTAC
ATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCCCCAATGCAATCCCGGAAAACAAAGATTT
GGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGCAAAAGGACACTTCAACTGTCCAGAGGGT
TATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGATGAGTGTGGAGAAAACAACCTAAATGGTA
ACAGAGGT GAACATACAAGT GGCAT GTAT GCCAT CAGACCCAGCAACT CT CAAGT
T T T T CAT GT CTACT GT GAT GT TATAT CAGGTAGT C CAT GGACAT TAAT T CAACAT
TTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGTTGGGCCTAGAGAAGATATACTCCATAGT
CATTATATTGAATATTCTTTTTACTTGGGAAATCACGAAACCAACTATACGCTAC
ATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCCCCAATGCAATCCCGGAAAACAAAGATTT
GGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGCAAAAGGACACTTCAACTGTCCAGAGGGT
TATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGATGAGTGTGGAGAAAACAACCTAAATGGTA
GGCATTCCTGCTGAATGTACCACCATTTATAACAGAGGTGAACATACAAGTGGCA
TGTATGCCATCAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTAT
ATCAGGTAGTC CAT G GACAT TAAT T CAACAT C GAATAGAT G GAT СACAAAAC T T C
AATGAAACGTGGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTT
GGTTGGGCCTAGAGAAGATATACTCCATAGTGAAGCAATCTAATTATGTTTTACG
AATT GAGTT GGAAGACT GGAAAGACAACAAACATTATATT GAATATTCTTTTTAC
TTGGGAAATCACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATG
TCCCCAATGCAATCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAA
AGCAAAAGGACACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCAT
GGCATTCCTGCTGAATGTACCACCATTTATAACAGAGGTGAACATACAAGTGGCA
TGTATGCCATCAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTAT
ATCAGGTAGTC CAT G GACAT TAAT T CAACAT C GAATAGAT G GAT CACAAAAC T T C
AATGAAACGTGGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTT
GGTTGGGCCTAGAGAAGATATACTCCATAGTGAAGCAATCTAATTATGTTTTACG
AATT GAGTT GGAAGACT GGAAAGACAACAAACATTATATT GAATATTCTTTTTAC
TTGGGAAATCACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATG
TCCCCAATGCAATCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAA
AGCAAAAGGACACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCAT
- 42 035158
55 | Последовательность нуклеиновых кислот 242KQ | ATTCCTGCTGAATGTACCACCATTTATAACAGAGGTGAACATACAAGTGGCATGT ATGCCATCAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATC AGGTAGTC CAT G GAGAT TAAT T СAACAT C GAATAGAT G GAT СACAAAAC T T СAAT GAAACGTGGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGT TGGGCCTAGAGAAGATATACTCCATAGTGAAGCAATCTAATTATGTTTTACGAAT TGAGTTGGAAGACTGGAAAGACAACAAACATTATATTGAATATTCTTTTTACTTG GGAAATCACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCC CCAATGCAATCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGC AAAAGGACACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGAT GAGT GT GGAGAAAACAACCTAAAT GGTAAATATAACAAACCAAGAGCACAAT СТА AGCCAGAGAGGAGAAGAGGATTAT CTT GGAAGT CT CAAAAT GGAAGGTTATACT C TATAAAATCAACCAAAATGTT GAT CCAT СCAACAGATT CAGAAAGСTTT GAA |
56 57 5_8 59 | Последовательность нуклеиновых кислот 242KS Последовательность нуклеиновых кислот C227KQ 2 07Kdel 225Kdel | ATTCCTGCTGAATGTACCACCATTTATAACAGAGGTGAACATACAAGTGGCATGT ATGCCATCAGACCCAGCAACTCTCAAGTTTTTCATGTCTACTGTGATGTTATATC AGGTAGTC CAT G GAGAT TAAT T CAACAT C GAATAGAT G GAT GAGAAAAC T T CAAT GAAACGTGGGAGAACTACAAATATGGTTTTGGGAGGCTTGATGGAGAATTTTGGT TGGGCCTAGAGAAGATATACTCCATAGTGAAGCAATCTAATTATGTTTTACGAAT TGAGTTGGAAGACTGGAAAGACAACAAACATTATATTGAATATTCTTTTTACTTG GGAAATCACGAAACCAACTATACGCTACATCTAGTTGCGATTACTGGCAATGTCC CCAATGCAATCCCGGAAAACAAAGATTTGGTGTTTTCTACTTGGGATCACAAAGC AAAAGGACACTTCAACTGTCCAGAGGGTTATTCAGGAGGCTGGTGGTGGCATGAT GAGT GT GGAGAAAACAACCTAAAT GGTAAATATAACAAACCAAGAGCAAGCT СТА AGCCAGAGAGGAGAAGAGGATTAT CTT GGAAGT CT CAAAAT GGAAGGTTATACT C TATAAAAT CAAC CAAAAT GT T GAT C CAT С CAACAGAT T CAGAAAGСT T T GAA T T T T T GCAT СT CAAC GAAAC GAAGAAT GT C GAACACAAC GAGAT T С C GGСAAAT T GCACAACTATCTACAATAGAGGCGAACATACGTCCGGTATCTACTCCATTAGACC TTCAAACAGCCAGGTATTCAATGTGTACTGCGATGTAAAGTCAGGATCGTCATGG ACACTGATCCAGCATAGGATCGACGGGTCCCAGAACTTCAACGAGACATGGGAGA ACTACCGCTATGGATTTGGAAGGCTGGATGGGGAGTTCTGGTTGGGACTTGAGAA AATCTACAGCATTGTGAAGCAGTCGAACTACATTCTCCGGATTGAACTGGAGGAC TGGAATGACAACAAACACTACATCGAGTATTTCTTTCATCTCGGCAACCATGAAA CGAATTACACCTTGCACCTTGTGGAAATCACGGGCAACATTTTGAACGCGCTGCC AGAACACAAAGACCTGGTGTTTTCGACATGGGATCACAAAGCAAAGGGGCACGTG AACTGTCCCGAATCATATAGCGGGGGATGGTGGTGGCACAATGTCTGTGGTGAGA ACAATCTCAACGGGAAATACAATAAGCAGCGAGCTCAGACGAAACCCGAGCGGCG GAGAGGTCTGTATTGGAAGTCGCAGAATGGACGCCTGTATTCGATCAAATCGACG AAAATGCTCATCCACCCCATCGACTCCGAATCGTCGGAG IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAI RPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGL EKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNA IPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPER RRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTDSESFE |
60 | 22 6Kdel | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKS TKMLIHPTDSESFE |
- 43 035158
61 | 228Kdel | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTK MLIHPTDSESFE |
62 | 233Kdel | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHP TDSESFE |
63 | 241Kdel | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH DECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
64 | 242Kdel | IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHD ECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE |
65 | 225-455Kdel | TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISG SPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIE LEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAK GHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIK STKMLIHPTD |
66 | 226-455Kdel | TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGS PWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIEL EDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKG HFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKS TKMLIHPTD |
67 | 228-455Kdel | FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPW TLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELED WKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHF NCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTK MLIHPTD |
68 | 233-455Kdel | EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQH RIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNK HYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEG YSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHP TD |
69 | 241-455Kdel | GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNF NETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFY LGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWH DECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
70 | 242-455Kdel | IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFN ETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYL GNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWTfH D ECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD |
- 44 035158
71 | hANGPTLl 1- | MKTFTWTLGVLFFLLVDTGHCRGGQFKIKKINQRRYPRATDGKEEAKKCAYTFLVP EQRITGPICVNTKGQDASTIKDMITRMDLENLKDVLSRQKREIDVLQLWDVDGNI VNEVKLLRKESRNMNSRVTQLYMQLLHEIIRKRDNSLELSQLENKILNVTTEMLKM ATRYRELEVKYASLTDLVNNQSVMITLLEEQCLRIFSRQDTHVSPPLVQWPQHIP NSQQYTPGLLGGNEIQRDPGYPRDLMPPPDLATSPTKSPFKIPPVTFINEGPFKDC QQAKEAGHSVSGIYMIKPENSNGPMQLWCENSLDPGGWTVIQKRTDGSVNFFRNWE NYKKGFGNIDGEYWLGLENIYMLSNQDNYKLLIELEDWSDKKVYAEYSSFRLEPES EFYRLRLGTYQGNAGDSMMWHNGKQFTTLDRDKDMYAGNCAHFHKGGWWYNACAHS NLNGVWYRGGHYRSKHQDGIFWAEYRGGSYSLRAVQMMIKPID |
491 | ||
72 | СТ hANGPTLl 271- | FINEGPFKDCQQAKEAGHSVSGIYMIKPENSNGPMQLWCENSLDPGGWTVIQKRTD GSVNFFRNWENYKKGFGNIDGEYWLGLENIYMLSNQDNYKLLIELEDWSDKKVYAE YSSFRLEPESEFYRLRLGTYQGNAGDSMMWHNGKQFTTLDRDKDMYAGNCAHFHKG GWWYNACAHSNLNGVWYRGGHYRSKHQDGIFWAEYRGGSYSLRAVQMMIKPID |
491 | ||
73 | hANGPTL4 1- | MSGAPTAGAALMLCAATAVLLSAQGGPVQSKSPRFASWDEMNVLAHGLLQLGQGLR EHAERTRSQLSALERRLSACGSACQGTEGSTDLPLAPESRVDPEVLHSLQTQLKAQ NSRIQQLFHKVAQQQRHLEKQHLRIQHLQSQFGLLDHKHLDHEVAKPARRKRLPEM AQPVDPAHNVSRLHRLPRDCQELFQVGERQSGLFEIQPQGSPPFLVNCKMTSDGGW TVIQRRHDGSVDFNRPWEAYKAGFGDPHGEFWLGLEKVHSITGDRNSRLAVQLRDW DGNAELLQFSVHLGGEDTAYSLQLTAPVAGQLGATTVPPSGLSVPFSTWDQDHDLR RDKNCAKSLSGGWWFGTCSHSNLNGQYFRSIPQQRQKLKKGIFWKTWRGRYYPLQA TTMLIQPMAAEAAS |
406 | ||
74 | СТ LANGPTL4 179- | SRLHRLPRDCQELFQVGERQSGLFEIQPQGSPPFLVNCKMTSDGGWTVIQRRHDGS VDFNRPWEAYKAGFGDPHGEFWLGLEKVHSITGDRNSRLAVQLRDWDGNAELLQFS VHLGGEDTAYSLQLTAPVAGQLGATTVPPSGLSVPFSTWDQDHDLRRDKNCAKSLS GGWWFGTCSHSNLNGQYFRSIPQQRQKLKKGIFWKTWRGRYYPLQATTMLIQPMAA EAAS |
406 |
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Claims (27)
1. Выделенный полипептид с хондрогенной активностью, содержащий аминокислотную последовательность, которая по аминокислотной последовательности по меньшей мере на 95% идентична любой аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 и SEQ ID NO:70, причем аминокислота в положении 423 представляет собой Q или аминокислота в положении 423 удалена, как определено по отношению к SEQ ID NO:1.
2. Полипептид по п.1, в котором полипептид содержит SEQ ID NO:28.
3. Полипептид по п.1, в котором полипептид состоит из любой аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69 и SEQ ID NO:70.
4. Полипептид по п.1, который состоит из SEQ ID NO:28.
5. Полипептид по любому из пп.1-4, в котором полипептид является ПЭГилированным.
6. Фармацевтическая композиция для лечения, облегчения течения или профилактики артрита или повреждения хряща у пациента, содержащая терапевтически эффективное количество полипептида по любому из пп.1-5.
7. Способ лечения, облегчения течения или профилактики артрита или повреждения хряща у пациента, включающий введение в сустав пациента терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.6.
8. Способ по п.7, при котором у пациента имеется артрит или повреждение хряща.
9. Способ по п.7, при котором у пациента существует риск возникновения артрита или повреждения хряща.
10. Способ по п.8 или 9, при котором артрит представляет собой остеоартрит, травматический артрит или аутоиммунный артрит.
11. Способ по любому из пп.7-10, при котором композиция дополнительно содержит гиалуроновую
- 45 035158 кислоту.
12. Способ по любому из пп.7-11, дополнительно включающий хирургическое вмешательство на пораженном суставе.
13. Способ по п.12, при котором введение фармацевтической композиции происходит во время или после хирургического вмешательства.
14. Способ по п.7, при котором введение фармацевтической композиции происходит в сочетании с заменой хряща, имплантацией аутологичных хондроцитов (ACI) или матрикс-индуцированной имплантацией аутологичных хондроцитов (MACI).
15. Способ индукции дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток в хондроциты, включающий приведение мезенхимальных стволовых клеток в контакт с эффективным количеством полипептида по любому из пп.1-5 для индукции дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток в хондроциты.
16. Способ по п.15, при котором способ осуществляют in vivo и стволовые клетки присутствуют в организме индивида-человека.
17. Способ по п.16, при котором у индивида имеется артрит или повреждение хряща.
18. Способ по п.16, при котором у индивида имеется риск возникновения артрита или повреждения хряща.
19. Способ по п.17 или 18, при котором артрит представляет собой остеоартрит, травматический артрит или аутоиммунный артрит.
20. Способ лечения, облегчения течения или профилактики артрита или повреждения хряща у индивида, включающий введение индивиду терапевтически эффективного количества полипептида по любому из пп.1-5.
21. Способ по п.20, при котором индивид имеет артрит или повреждения хряща.
22. Способ по п.20, при котором индивид находится в группе риска возникновения артрита или повреждения хряща.
23. Способ по п.21 или 22, при котором артрит представляет собой остеоартроз, травматический артрит или аутоиммунный артрит.
24. Способ по любому из пп.20-23, дополнительно включающий введение гиалуроновой кислоты.
25. Способ по любому из пп.20-24, дополнительно включающий хирургическое вмешательство на пораженном суставе.
26. Способ по п.25, при котором введение полипептида происходит во время или после хирургического вмешательства.
27. Способ по п.20, при котором введение полипептида происходит в сочетании с заменой хряща, имплантацией аутологичных хондроцитов (ACI) или матрикс-индуцированной имплантацией аутологичных хондроцитов (MACI).
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361775400P | 2013-03-08 | 2013-03-08 | |
US201461938123P | 2014-02-10 | 2014-02-10 | |
PCT/US2014/022102 WO2014138687A1 (en) | 2013-03-08 | 2014-03-07 | Peptides and compositions for treatment of joint damage |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201591661A1 EA201591661A1 (ru) | 2015-12-30 |
EA035158B1 true EA035158B1 (ru) | 2020-05-06 |
Family
ID=50390286
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201591661A EA035158B1 (ru) | 2013-03-08 | 2014-03-07 | Пептиды и композиции для лечения повреждений суставов |
Country Status (39)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US9649359B2 (ru) |
EP (2) | EP2964250B1 (ru) |
JP (3) | JP6567429B2 (ru) |
KR (1) | KR102267341B1 (ru) |
CN (2) | CN105025917B (ru) |
AP (1) | AP2015008675A0 (ru) |
AU (3) | AU2014225348B2 (ru) |
BR (2) | BR112015021269B1 (ru) |
CA (1) | CA2903448C (ru) |
CL (1) | CL2015002443A1 (ru) |
CO (1) | CO7461145A2 (ru) |
CR (2) | CR20200290A (ru) |
CU (1) | CU24301B1 (ru) |
CY (1) | CY1120729T1 (ru) |
DK (1) | DK2964250T3 (ru) |
EA (1) | EA035158B1 (ru) |
EC (1) | ECSP15042898A (ru) |
ES (1) | ES2684349T3 (ru) |
HK (1) | HK1214754A1 (ru) |
HR (1) | HRP20181269T1 (ru) |
HU (1) | HUE038499T2 (ru) |
IL (1) | IL240727B (ru) |
JO (1) | JO3564B1 (ru) |
LT (1) | LT2964250T (ru) |
MX (1) | MX365157B (ru) |
MY (1) | MY173172A (ru) |
NZ (1) | NZ711037A (ru) |
PE (1) | PE20151528A1 (ru) |
PH (1) | PH12015501983B1 (ru) |
PL (1) | PL2964250T3 (ru) |
PT (1) | PT2964250T (ru) |
RS (1) | RS57446B1 (ru) |
SG (1) | SG11201506490TA (ru) |
SI (1) | SI2964250T1 (ru) |
TN (1) | TN2015000385A1 (ru) |
TW (1) | TWI634124B (ru) |
UY (1) | UY35368A (ru) |
WO (1) | WO2014138687A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201505966B (ru) |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
UA104031C2 (ru) | 2009-07-14 | 2013-12-25 | Зе Скріпс Рісьорч Інстітьют | Дифференциация мезенхимальных стволовых клеток |
US9301971B2 (en) | 2013-03-08 | 2016-04-05 | Novartis Ag | Peptides and compositions for treatment of joint damage |
UY35368A (es) | 2013-03-08 | 2014-10-31 | Irm Llc | Péptidos y composiciones para el tratamiento de daño articular |
CN109891632A (zh) | 2016-10-24 | 2019-06-14 | 住友化学株式会社 | 间隔件、和包含间隔件的二次电池 |
EP3538127A1 (en) * | 2016-11-14 | 2019-09-18 | Novartis AG | Methods and compositions for treatment of cartilage damage and arthritis |
CN108530619B (zh) * | 2017-03-01 | 2020-12-08 | 北京大学第三医院 | 功能化氨基酸、制备方法及由其制得的功能化氨基酸水凝胶 |
MA53388A (fr) | 2018-07-25 | 2021-06-02 | Novartis Ag | Inhibiteurs d'inflammasome nlrp3 |
TW202027794A (zh) | 2018-10-03 | 2020-08-01 | 瑞士商諾華公司 | 血管生成素樣3多肽之持續遞送 |
AR119731A1 (es) | 2019-05-17 | 2022-01-05 | Novartis Ag | Inhibidores del inflamasoma nlrp3 |
CN111973617A (zh) * | 2019-05-23 | 2020-11-24 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途 |
US20220380425A1 (en) * | 2019-07-04 | 2022-12-01 | Cadila Healthcare Limited | Angptl3 based vaccine for the treatment of liver disease |
KR102577697B1 (ko) * | 2019-11-13 | 2023-09-14 | 주식회사 나이벡 | 염증 및 상처 치료용 펩타이드 |
JP7298496B2 (ja) | 2020-01-31 | 2023-06-27 | トヨタ自動車株式会社 | 車両 |
TW202306970A (zh) | 2021-05-24 | 2023-02-16 | 瑞士商諾華公司 | 用於治療骨關節炎之方法 |
JP2024519893A (ja) | 2021-05-24 | 2024-05-21 | ノバルティス アーゲー | 変形性関節症の治療方法 |
CN113683678B (zh) * | 2021-09-15 | 2023-11-24 | 山西锦波生物医药股份有限公司 | 一种重组i型人源化胶原蛋白c1l2t及其制备方法和用途 |
CN113683681B (zh) * | 2021-09-15 | 2023-10-03 | 山西锦波生物医药股份有限公司 | 一种重组i型人源化胶原蛋白c1l3t及其制备方法和用途 |
WO2023084388A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | Novartis Ag | Methods for determining the biological activity of angptl polypeptides |
CN114377202B (zh) * | 2021-12-16 | 2023-01-24 | 方向前 | 适用于软骨再生的功能化自组装miRNA/多肽复合水凝胶及其制备方法 |
US20240067627A1 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-29 | Novartis Ag | Nlrp3 inflammasome inhibitors |
KR20240087877A (ko) * | 2022-12-09 | 2024-06-20 | (주)케어젠 | 연골 재생용 펩타이드 및 이의 용도 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011008773A2 (en) * | 2009-07-14 | 2011-01-20 | The Scripps Research Institute | Mesenchymal stem cell differentiation |
Family Cites Families (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8308236D0 (en) * | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Dna vectors |
US5462990A (en) | 1990-10-15 | 1995-10-31 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Multifunctional organic polymers |
US5288931A (en) | 1991-12-06 | 1994-02-22 | Genentech, Inc. | Method for refolding insoluble, misfolded insulin-like growth factor-I into an active conformation |
US6447796B1 (en) | 1994-05-16 | 2002-09-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Sustained release hydrophobic bioactive PLGA microspheres |
WO1999058660A1 (en) | 1998-05-12 | 1999-11-18 | Human Genome Sciences, Inc. | 97 human secreted proteins |
US6030831A (en) * | 1997-09-19 | 2000-02-29 | Genetech, Inc. | Tie ligand homologues |
AU3661199A (en) | 1998-04-27 | 1999-11-16 | Zymogenetics Inc. | Novel polypeptide growth factors and materials and methods for making them |
AU4643699A (en) | 1998-06-24 | 2000-01-10 | Compugen Ltd. | Angiopoietin-like growth factor sequences |
JP2003531811A (ja) | 1999-03-08 | 2003-10-28 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 血管形成及び心臓血管新生の促進又は阻害 |
DE60040274D1 (de) | 1999-03-10 | 2008-10-30 | Phogen Ltd | Verabreichung von nukleinsäuren und proteinen an zellen |
GB9912350D0 (en) | 1999-05-26 | 1999-07-28 | European Molecular Biology Lab Embl | Modified cytokine |
ATE368110T1 (de) | 1999-07-20 | 2007-08-15 | Genentech Inc | Zusammensetzung und verfahren zur behandlung von immunverwandten krankheiten |
US20030013649A1 (en) | 2000-01-31 | 2003-01-16 | Rosen Craig A. | Nucleic acids, proteins, and antibodies |
AU2437702A (en) | 2000-10-16 | 2002-04-29 | Genentech Inc | Methods of treatment using wisp polypeptides |
US20040249141A1 (en) | 2000-10-16 | 2004-12-09 | Audrey Goddard | Tie ligand homologues |
US20020130430A1 (en) | 2000-12-29 | 2002-09-19 | Castor Trevor Percival | Methods for making polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins and other products |
US20030027751A1 (en) | 2001-04-10 | 2003-02-06 | Genvec, Inc. | VEGF fusion proteins |
MXPA03009566A (es) | 2001-04-19 | 2004-12-06 | Scripps Research Inst | Metodos y composicion para la produccion de pares trna-aminoaciltrna sintetasa ortogonales. |
US20030194798A1 (en) | 2001-05-24 | 2003-10-16 | Surber Mark W. | Minicell compositions and methods |
FI117667B (fi) | 2001-07-05 | 2007-01-15 | Univ Zuerich | Farmaseuttinen koostumus, joka soveltuu käytettäväksi ortopediassa ja hammaslääketieteessä |
NZ532852A (en) | 2001-11-16 | 2006-08-31 | Genentech Inc | Composition comprising and method of using angiopoietin-like protein 3 Angptl3 |
US7060498B1 (en) | 2001-11-28 | 2006-06-13 | Genta Salus Llc | Polycationic water soluble copolymer and method for transferring polyanionic macromolecules across biological barriers |
US7141540B2 (en) | 2001-11-30 | 2006-11-28 | Genta Salus Llc | Cyclodextrin grafted biocompatible amphilphilic polymer and methods of preparation and use thereof |
KR20050093856A (ko) | 2002-09-09 | 2005-09-23 | 넥타르 테라퓨틱스 에이엘, 코포레이션 | 수용성 중합체 알카날 |
MXPA05003983A (es) | 2002-10-16 | 2005-06-22 | Scripps Research Inst | Incorporacion en sitio especifico de cetoaminoacidos en proteinas. |
JP4752001B2 (ja) | 2002-10-16 | 2011-08-17 | ザ スクリプス リサーチ インスティチュート | 糖蛋白質合成 |
CA2520750A1 (en) | 2003-04-17 | 2004-11-04 | The Scripps Research Institute | Orthogonal aminoacyl-trna synthetase |
CN101076598B (zh) | 2003-07-07 | 2012-07-25 | 斯克利普斯研究院 | 正交赖氨酰-tRNA和氨酰-tRNA合成酶对的组合物及其应用 |
US20060160175A1 (en) | 2003-07-07 | 2006-07-20 | The Scripps Research Institute | Compositions of orthogonal leucyl-trna and aminoacyl-trna synthetase pairs and uses thereof |
EP1658366A4 (en) | 2003-07-07 | 2006-08-09 | Scripps Research Inst | COMPOSITIONS OF ORTHOGONAL GLUTAMYL-TRNA AND AMINOACYL-TRNA-SYNTHETASEPAARES AND THEIR USES |
WO2006034332A2 (en) | 2004-09-21 | 2006-03-30 | The Scripps Research Institute | In vivo incorporation of alkynyl amino acids into proteins in eubacteria |
EP2383340B1 (en) | 2004-10-27 | 2014-07-16 | The Scripps Research Institute | Orthogonal translation components for the in vivo incorporation of unnatural amino acids |
JP2008532516A (ja) | 2005-03-11 | 2008-08-21 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 遺伝子破壊、組成物、およびそれに関連する方法 |
JP5139271B2 (ja) | 2005-05-24 | 2013-02-06 | ホワイトヘッド インスティチュート フォー バイオメディカル リサーチ | 培養した造血幹細胞を拡大しかつ分析する方法 |
AU2007223830A1 (en) | 2006-03-09 | 2007-09-13 | The Scripps Research Institute | System for the expression of orthogonal translation components in eubacterial host cells |
TWI528964B (zh) | 2006-12-06 | 2016-04-11 | 生化學工業股份有限公司 | 治療關節失調之長效藥劑 |
HUE033960T2 (en) | 2006-12-08 | 2018-01-29 | Lexicon Pharmaceuticals Inc | Monoclonal Antibodies to ANGPTL3 |
US8575397B2 (en) | 2007-02-14 | 2013-11-05 | Biocompatibles Uk Limited | Derivatisation of biological molecules |
US8609411B2 (en) | 2007-05-04 | 2013-12-17 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells |
AU2012212047A1 (en) | 2011-02-03 | 2013-08-22 | Xoma Technology Ltd. | Methods and materials for enhancing functional protein expression in bacteria |
WO2012129562A2 (en) | 2011-03-24 | 2012-09-27 | The Scripps Research Institute | Compounds and methods for inducing chondrogenesis |
JP5918909B2 (ja) | 2012-06-25 | 2016-05-18 | ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッドThe Brigham and Women’s Hospital, Inc. | 標的化治療薬 |
US9301971B2 (en) | 2013-03-08 | 2016-04-05 | Novartis Ag | Peptides and compositions for treatment of joint damage |
UY35368A (es) | 2013-03-08 | 2014-10-31 | Irm Llc | Péptidos y composiciones para el tratamiento de daño articular |
-
2014
- 2014-03-06 UY UY0001035368A patent/UY35368A/es active IP Right Grant
- 2014-03-06 JO JOP/2014/0076A patent/JO3564B1/ar active
- 2014-03-07 EA EA201591661A patent/EA035158B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-03-07 WO PCT/US2014/022102 patent/WO2014138687A1/en active Application Filing
- 2014-03-07 PL PL14713728T patent/PL2964250T3/pl unknown
- 2014-03-07 SG SG11201506490TA patent/SG11201506490TA/en unknown
- 2014-03-07 CR CR20200290A patent/CR20200290A/es unknown
- 2014-03-07 CA CA2903448A patent/CA2903448C/en active Active
- 2014-03-07 BR BR112015021269-7A patent/BR112015021269B1/pt active IP Right Grant
- 2014-03-07 JP JP2015561740A patent/JP6567429B2/ja active Active
- 2014-03-07 RS RS20180794A patent/RS57446B1/sr unknown
- 2014-03-07 CN CN201480012768.9A patent/CN105025917B/zh active Active
- 2014-03-07 BR BR122016021558-0A patent/BR122016021558B1/pt active IP Right Grant
- 2014-03-07 AP AP2015008675A patent/AP2015008675A0/xx unknown
- 2014-03-07 AU AU2014225348A patent/AU2014225348B2/en active Active
- 2014-03-07 CN CN202010722284.0A patent/CN111808182A/zh active Pending
- 2014-03-07 HU HUE14713728A patent/HUE038499T2/hu unknown
- 2014-03-07 US US14/772,209 patent/US9649359B2/en active Active
- 2014-03-07 PT PT14713728T patent/PT2964250T/pt unknown
- 2014-03-07 NZ NZ711037A patent/NZ711037A/en unknown
- 2014-03-07 MX MX2015011963A patent/MX365157B/es active IP Right Grant
- 2014-03-07 EP EP14713728.5A patent/EP2964250B1/en active Active
- 2014-03-07 EP EP18170788.6A patent/EP3391900A1/en active Pending
- 2014-03-07 ES ES14713728.5T patent/ES2684349T3/es active Active
- 2014-03-07 MY MYPI2015702657A patent/MY173172A/en unknown
- 2014-03-07 PE PE2015001873A patent/PE20151528A1/es active IP Right Grant
- 2014-03-07 TW TW103108047A patent/TWI634124B/zh active
- 2014-03-07 SI SI201430757T patent/SI2964250T1/sl unknown
- 2014-03-07 LT LTEP14713728.5T patent/LT2964250T/lt unknown
- 2014-03-07 CU CUP2015000097A patent/CU24301B1/xx unknown
- 2014-03-07 DK DK14713728.5T patent/DK2964250T3/da active
- 2014-03-07 KR KR1020157027474A patent/KR102267341B1/ko active IP Right Grant
-
2015
- 2015-08-18 ZA ZA2015/05966A patent/ZA201505966B/en unknown
- 2015-08-20 IL IL240727A patent/IL240727B/en active IP Right Grant
- 2015-08-31 CL CL2015002443A patent/CL2015002443A1/es unknown
- 2015-09-03 TN TN2015000385A patent/TN2015000385A1/en unknown
- 2015-09-07 PH PH12015501983A patent/PH12015501983B1/en unknown
- 2015-09-08 CR CR20150466A patent/CR20150466A/es unknown
- 2015-09-08 CO CO15210900A patent/CO7461145A2/es unknown
- 2015-10-08 EC ECIEPI201542898A patent/ECSP15042898A/es unknown
-
2016
- 2016-03-09 HK HK16102694.7A patent/HK1214754A1/zh unknown
- 2016-05-11 AU AU2016203028A patent/AU2016203028C1/en active Active
- 2016-12-21 AU AU2016277608A patent/AU2016277608B2/en active Active
-
2017
- 2017-03-13 US US15/457,656 patent/US10328126B2/en active Active
-
2018
- 2018-08-03 HR HRP20181269TT patent/HRP20181269T1/hr unknown
- 2018-08-07 CY CY181100821T patent/CY1120729T1/el unknown
-
2019
- 2019-05-06 US US16/403,677 patent/US11179442B2/en active Active
- 2019-07-30 JP JP2019140222A patent/JP6918871B2/ja active Active
-
2021
- 2021-07-20 JP JP2021119517A patent/JP2021178841A/ja active Pending
- 2021-11-08 US US17/453,960 patent/US20220184182A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011008773A2 (en) * | 2009-07-14 | 2011-01-20 | The Scripps Research Institute | Mesenchymal stem cell differentiation |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
E. F. O'SHEA, P. M. O'CONNOR, P. D. COTTER, R. P. ROSS, C. HILL: "Synthesis of Trypsin-Resistant Variants of the Listeria-Active Bacteriocin Salivaricin P", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY., vol. 76, no. 16, 15 August 2010 (2010-08-15), pages 5356 - 5362, XP055125364, ISSN: 00992240, DOI: 10.1128/AEM.00523-10 * |
JENNIFER A. SIEPEN, EMMA-JAYNE KEEVIL, DAVID KNIGHT, SIMON J. HUBBARD: "Prediction of Missed Cleavage Sites in Tryptic Peptides Aids Protein Identification in Proteomics", JOURNAL OF PROTEOME RESEARCH, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 6, no. 1, 1 January 2007 (2007-01-01), pages 399 - 408, XP055125357, ISSN: 15353893, DOI: 10.1021/pr060507u * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11179442B2 (en) | Peptides and compositions for treatment of joint damage | |
US11370820B2 (en) | Peptides and compositions for treatment of joint damage |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KG TJ TM |