EA034964B1 - Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов - Google Patents
Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов Download PDFInfo
- Publication number
- EA034964B1 EA034964B1 EA201490832A EA201490832A EA034964B1 EA 034964 B1 EA034964 B1 EA 034964B1 EA 201490832 A EA201490832 A EA 201490832A EA 201490832 A EA201490832 A EA 201490832A EA 034964 B1 EA034964 B1 EA 034964B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- snp
- snps
- azabicyclo
- chrna5
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/02—Antidotes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Psychology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способам прогнозирования способности индивида, страдающего когнитивными нарушениями или дисфункциями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, к ответу на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Description
Уровень техники
Когнитивные расстройства были признаны как клинически значимый аспект шизофрении и основной фактор, определяющий успешную функциональную реабилитацию и социальную реинтеграцию (Green, 1996; Green, 2007). Когнитивное расстройство при шизофрении или при других психических заболеваниях представляет собой приобретенное расстройство одной или более из функции памяти, разрешения проблем, ориентации и/или абстракции, что нарушает способность индивидуума функционировать независимо, что особенно выражено в вербальной памяти, исполнительных функциях, внимании и его активном поддержании, беглости речи и скорости движений, но также включая другие функции. Когнитивные нарушения не являются результатом положительных или отрицательных симптомов расстройства или не связаны с недостаточной мотивацией (Harvey et al., 2004). В большинстве случаев когнитивные расстройства не усугубляются или ослабляются по мере прогрессирования заболевания (Harvey et al., 2004). Нет принятых способов лечения по поводу когнитивных расстройств при шизофрении. Доступные в настоящее время способы антипсихотического лечения не улучшают когнитивную функцию сверх практических эффектов (Goldberg et al., 2007; Keefe et al., 2007).
Несколько серий данных свидетельствуют о том, что альфа 7 никотиновые ацетилхолиновые рецепторы (a7-nAChR) могут быть вовлечены в когнитивные нарушения при шизофрении. Связь между нарушениями сенсорной синхронизация P50, проявляемыми у лиц, страдающих шизофренией, и дефектом на хромосоме 15q14, сайте гена a7-nAChR (Chini et al., 1994), была установлена Freedman et al., 1997. Полиморфизмы в промоторной области a7-nAChR, которые уменьшали транскрипцию, были более распространены у пациентов с шизофренией, чем у контрольных индивидуумов (Leonard et al., 2002). Посмертные исследования продемонстрировали, что уровни a7-nAChR снижены в мозге страдающего шизофренией пациента (Freedman et al., 1995). Рецепторы a7-nAChR экспрессированы в ключевых зонах мозга, важных для обучения и памяти (гиппокамп, префронтальная кора и миндалевидные тела). Было показано, что активация a7-nAChR модулирует высвобождение глутаматергических, ГАМКергических и холинергических нейромедиаторов и улучшает когнитивную функцию на многообразии различных преклинических экспериментальных моделей у животных.
Были разработаны новые активаторы a7-nAChR для лечения патологических состояний, связанных с дефектными или неадекватно функционирующими никотиновыми ацетилхолиновыми рецепторами. Хотя предполагали, что лечение активатором a7-nAChR может уменьшить когнитивные нарушения, противоречивые данные и варьирование индивидуальных когнитивных ответов на лечение активатором a7-nAChR до настоящего времени препятствовало разработке способов лечения когнитивных нарушений на основе активатора a7-nAChR, например неизвестно, почему некоторые пациенты не реагируют на эти медикаментозные средства. Следовательно, существует потребность в прогнозировании заранее перед лечением вероятности того, будет ли пациент, страдающий когнитивными нарушениями или дисфункциями, отвечать на лечение активатором a7-nAChR. Соответственно, в данной области существует настоятельная потребность в способах прогнозирования способности пациентов с когнитивными нарушениями или дисфункциями отвечать на активатор a7-nAChR.
Краткое изложение сущности изобретения
Существует потребность в прогнозировании вероятности того, что пациент будет отвечать на лечение активатором a7-nAChR. Эта цель достигается способами и композициями, предоставленными в настоящем описании. В настоящем изобретении к удивлению было показано, что генетические варианты хромосомного локуса 15q24 представляют собой прогностические маркеры способности пациентов, страдающих когнитивными нарушениями или дисфункциями, отвечать на лечение активатором α7nAChR.
Поэтому первый предмет изобретения относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у выбранной популяции пациентов, причем популяция пациентов выбрана на основании присутствия по меньшей мере одного характерного SNP (однонуклеотидного полиморфизма) гена субъединицы альфа-5 (CHRNA5) человеческого ацетилхолинового рецептора (SEQ ID NO: 39; хромосома 15 NC_000015.9, цитогенетическая локализация: 15q24; геномные координаты (GRCh37): 78857861-78887610) или гена субъединицы альфа-3 (CHRNA3) человеческого ацетилхолинового рецептора (SEQ ID NO: 40; хромосома 15, NC_000015.9, цитогенетическая локализация: 15q24; геномные координаты: 78885394..78913637, комплемент).
Как описано здесь, характерный SNP, подобный rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), дифференциально присутствует у людей, и вероятность способности пациента отвечать на лечение можно прогнозировать на основании присутствия SNP в виде варианта rs55853698-T в геноме указанного пациента. Следовательно, характерный SNP в контексте настоящей заявки относится к специфическому SNP, который обеспечивает возможность заранее перед лечением прогнозировать вероятность того, что пациент, страдающий когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, будет отвечать на лечение активатором a7-nAChR. Характерный SNP в контексте настоящего описания относится к SNP, присутствующим в гене CHNRA5 или CHRNA3, и к тем, которые образуют гаплотип,
- 1 034964 или с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs. В другом варианте осуществления изобретение относится к способу идентификации характерных SNPs генов CHRNA5 или CHRNA3, включающему стадии:
a) выбора группы страдающих шизофренией пациентов, достаточно большой для получения статистически значимых результатов; и
b) получения генотипа указанных пациентов в генетическом локусе гена CHRNA5 или CHRNA3; и
c) введения указанным пациентам терапевтически эффективного количества активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов; и
d) выполнения теста оценки когнитивной функции у пациента со стадии c) использованием набора тестов когнитивной функции у страдающих шизофренией пациентов (например, набор тестов при шизофрении CogState™); и
e) подразделения пациентов со стадии d) на подгруппы отвечающих и не отвечающих на лечение идентификацией тех пациентов, которые проявляют статистически релевантное улучшенное визуальное обучение, способность запоминания, улучшенную когнитивную функцию, улучшенную аргументацию, способность разрешения проблем или улучшения внимания и его активного поддержания (отвечающие на лечение пациенты), причем улучшения, измеренные в виде размера эффекта, как описано ниже в разделе Примеры, составляют по меньшей мере примерно 0,1, или примерно 0,2, или примерно 0,3, или примерно 0,4, или более чем примерно 0,5; и
f) анализа последовательности ДНК генетических локусов субпопуляций отвечающих и не отвечающих на лечение пациентов, идентифицированных на стадии e), и отбора тех SNPs, которые присутствуют только в генетических локусах гена CHRNA5 или CHRNA3 отвечающих на лечение пациентов;
g) идентификации гетерозиготных или гомозиготных характерных вариантов SNP определением корреляции существования SNPs, отобранных на стадии f), с результатами теста когнитивной функции стадии d).
Способы получения и анализа генотипа пациента в определенном локусе или гене, а также тест оценки когнитивной функции хорошо известны в данной области техники и подробно описаны в настоящей заявке.
Предпочтительно, указанная композиция применяется для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. В одном варианте осуществления когнитивные нарушения, психотические и/или нейродегенеративные расстройства выбраны из группы, состоящей из легкого когнитивного нарушения, болезни Альцгеймера, деменции при болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, шизофрении, сосудистой деменции, деменции при СПИДе, сенильной деменции, легкого когнитивного нарушения, связанного с возрастом (MCI), связанного с возрастом нарушения памяти, аутизма, деменции при дегенерации лобной доли, инсульта, дегенеративных расстройств базальных ганглиев, рассеянного склероза, травмы, опухолей мозга, инфекций мозга, гидроцефалии, депрессии, токсических или метаболических расстройств и деменции, вызванных лекарственными средствами.
В другом варианте осуществления композиция применяется у популяции пациентов, выбранной на основании носительства SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) человеческого гена CHRNA5 или SNP, образующего гаплотип вместе с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs.
В еще одном варианте осуществления гаплотип SNP содержит по меньшей мере два из SNPs, rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34).
В определенных вариантах осуществления композиция для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств применяется у популяции пациентов, выбранных на основании носительства гаплотипа SNP, содержит SNPs rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), и где указанные SNPs образуют гаплотип delTTC или insATC. В другом варианте осуществления композиция для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств применяется у пациентов, выбранных на основании гомозиготности в отношении гаплотипов указанных выше характерных SNPs CHRNA5 или характерных SNP CHRNA5, в частности являющихся гомозиготными в отношении SNP rs55853698-T/T (SEQ ID NO: 1) или SNPs rs16969968-G/G (SEQ ID NO: 37).
Кроме того, изобретение относится к композициям для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, причем популяция пациентов выбрана на основании носительства характерных SNPs rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) гена CHRNA3 или SNPs, образующих гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с
- 2 034964 указанными SNPs, причем гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C(C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и причем гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, в то время как гомозиготное присутствие SNP rs6495308C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T (SEQ ID NO: 3/4) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Кроме того, изобретение относится к описанным в настоящей заявке и применяемым для осуществления способов по изобретению композициям, содержащим активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH2- или -CH2-CH2-; и L3 обозначает -CH2- или -CH(CH3)-; или L1 обозначает -CH2-CH2-; L2 обозначает -CH2-; и L3 обозначает -CH2-CH2-; L4 обозначает группу, выбранную из
о r1
L4a или L4b f где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалькильной составляющей; R1 обозначает водород или C1-4алкил; X обозначает -O- или -NH-; группа A выбрана из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к Х1; A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; каждая группа R2 обозначает независимо C1-6алкил, C1-6галогеналкил, О^алкокеи, C1-6галогеналкокси, галоген, циано или от трех- до шестичленную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или частично насыщенной и которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и причем каждая кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода, и не более чем 2 атома серы, и причем каждая кольцевая система может в свою очередь быть замещена один или несколько раз Аралкилом, C1-6галогеналкилом, ^^алкокси, C1-6галогеналкокси, галогеном, циано, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; или две группы R2 на соседних кольцевых атомах образуют ^^алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х2, и где ^^алкиленовая группа может быть замещена одной или несколькими группами R3; каждая группа Х2 независимо обозначает -O- или -N(R4)-; каждая группа R4 независимо обозначает водород или C1-6алкил; и каждая группа R3 независимо обозначает галоген или C1-6алкил; в форме свободного основании или в форме кислотно-аддитивной соли.
Дополнительный предмет изобретения относится к описанной в настоящей заявке композиции и применяемой для осуществления способов по изобретению композиции, где активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов применяется в виде свободного основания или в форме фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли. В другом варианте осуществления активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов представлен в форме его свободного основания или фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли в ассоциации с фармацевтическим носителем или разбавителем.
В другом варианте осуществления изобретения описанная в настоящей заявке и применяемая для осуществления способов по изобретению композиция дополнительно содержит второе средство, улучшающее когнитивную функцию, или терапевтическое соединение, полезное для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств.
В еще одном варианте осуществления изобретение относится к способу прогнозирования способности к ответу на лечение индивидуума или группы индивидуумов при лечении активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для повышения когнитивных способностей и/или лечения когнитивного нарушения, психотического и/или нейродегенеративного расстройства, включающему стадии: I)
- 3 034964 получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5; II) идентификации тех индивидуумов стадии I), которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968G (SEQ ID NO: 37) гена CHRNA5, или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, причем присутствие по меньшей мере одного из SNP или гаплотипов SNPs, указанных выше, является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
В еще одном варианте осуществления изобретение относится к способу прогнозирования способности к ответу на лечение индивидуума или группы индивидуумов при лечении активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для повышения когнитивных способностей и/или лечения когнитивного нарушения, психотического и/или нейродегенеративного расстройства, включающему стадии: I) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA3; II) идентификации тех индивидуумов стадии I), которые являются носителями SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35) гена CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, причем гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) или гаплотипов SNP, указанных выше, является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и причем гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Кроме того, изобретение относится к терапевтическому способу улучшения когнитивных способностей индивидуума и/или лечения индивидуумов, страдающих когнитивным нарушением, психотическим и/или нейродегенеративным расстройством, включающему стадии: III) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5; IV) идентификации тех индивидуумов стадии III), которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) гена CHRNA5 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP, причем присутствие по меньшей мере одного из SNPs или гаплотипов SNP является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов; или альтернативно III) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA3; IV) идентификации тех индивидуумов стадии III), которые являются носителями SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35) гена CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, причем гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и причем гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и V) введения терапевтического эффективного количества активатора альфа 7 никотинового рецептора тем индивидуумам, которые идентифицированы на стадии IV). В дополнительном варианте осуществления описанные выше стадии I) и III) дополнительно включают стадии: VI) получения биологического образца у указанного индивидуума, причем указанный образец выбран из группы, состоящей из крови, происходящего из крови продукта (такого как лейкоцитарная пленка, сыворотка и плазма), лимфы, мочи, слезной жидкости, слюны, спинномозговой жидкости, буккальных мазков, мокроты, волосяных корней, лейкоцитарного образца или образцов ткани или любой их комбинации, и VII) обеспечения контакта биологического образца стадии VI) с реагентом, способным выявить (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) CHRNA3 SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4), или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36), или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP.
Предпочтительно, указанные выше способы применяются для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Следовательно, в одном варианте осуществления указанные выше способы дополнительно включают в качестве первой стадии диагностику необходимости в улучшении когнитивных способностей или лечения когнитивного нарушения, психотического и/или нейродегенративного расстройства у индивидуума, причем когнитивные нарушения, психотические и/или нейродегенеративные расстройства могут быть выбраны из группы, состоящей из легкого когнитивного нарушения, болезни Альцгеймера, деменции при болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, шизофрении, сосудистой деменции, деменции при СПИДе, сенильной деменции, легкого когнитивного нарушения связанного с возрастом (MCI), связанного с возрастом нарушения памяти, аутизма, деменции при дегенерации лобной доли, инсульта, дегенеративных расстройств базальных ганглиев,
- 4 034964 рассеянного склероза, травмы, опухолей мозга, инфекций мозга, гидроцефалии, депрессии, токсических или метаболических расстройств и деменции, вызванных лекарственными средствами.
В другом варианте осуществления изобретения в указанных выше способах присутствие (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5, или SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP, определяется использованием по меньшей мере одного олигонуклеотида, который специфически гибридизируется с определенными областями на молекуле нуклеиновой кислоты, несущей указанный SNP или множество SNP. В частности, присутствие указанных CHRNA5/CHRNA3 SNP может быть выявлено типированием с использованием сиквенс-специфических праймеров (SSP), типированием с использованием сиквенс-специфических олигонуклеотидов (SSO), типированием на основе последовательности (SBT), амплификацией ДНК, такой как полимеразная цепная реакция (PCR, ПЦР), анализом с использованием микрочипа, норзерн-блот-анализом или обращенно-транскрипционной ПЦР.
В другом аспекте изобретения индивидуумов, отобранных в соответствии с описанными выше способами в качестве реагирующих на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для улучшения когнитивных способностей и/или лечения когнитивного нарушения, психотического и/или нейродегенеративного расстройства, лечат соединением формулы (I). В еще одном варианте осуществления можно совместно вводить второе средство, улучшающее когнитивную функцию, используемое для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, такое как обычное антипсихотическое средство или атипичное антипсихотическое средство.
В другом аспекте описанных способов подлежащая введению доза активатора 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов составляет от примерно 2 мг до примерно 100 мг в день.
Другой вариант осуществления изобретения относится к применению активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для лечения пациента, страдающего когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, или состоянием, при котором играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, причем пациент, отвечающий на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, был отобран в соответствии с описанными выше способами.
Кроме того, изобретение относится к применению по меньшей мере одного зонда для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3 или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP, для определения того, реагирует ли индивидуум на лечение агонистом альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств или состояния, при котором играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. В другом аспекте изобретение относится к набору, содержащему по меньшей мере один зонд для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP. Предпочтительно, указанный набор содержит VIII) средство для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и/или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 и/или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) и/или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP, и IX) инструкции по применению указанного набора.
Дополнительный предмет изобретения относится к применению набора, предпочтительно, описанного выше набора, пригодного для любого из описанных выше способов или видов применения, причем указанный набор содержит по меньшей мере один зонд для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP. В связанном варианте осуществления описанный выше набор содержит олигонуклеотидные зонды.
В другом варианте осуществления описанных выше способов и видов применения гаплотип CHRNA5/CHRNA3 SNP состоит по меньшей мере из двух SNP, выбранных из группы, состоящей из rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34). В другом варианте осуществления описанных выше способов или видов применения гаплотип SNP CHRNA5 состоит из характерного SNP rs55853698-T (SEQ ID NO:
- 5 034964
1) и по меньшей мере одного дополнительного SNP, выбранного из группы, состоящей из группы, состоящей из rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34). В связанном варианте осуществления гаплотип SNP выбран из гаплотипа delTTC и insATC, образованного SNP rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7).
Общие определения.
Для облегчения понимания настоящего изобретения сначала определяются отдельные термины. Дополнительные определения представлены по всему подробному описанию.
Термин содержащие означает включающие, например композиция, содержащая X, может состоять исключительно из X или может включать какой-либо дополнительный компонент, например X+Y.
Термин примерно в отношении числовой величины х означает, например, х±10%.
Термин средство, улучшающее когнитивную функцию в контексте настоящего описания относится к любому лекарственному средству, добавке, нутрицевтику, или функциональному пищевому продукту, который по сообщениям улучшает психические функции, такие как познание, память, интеллект, мотивация, внимание и концентрация.
Используемые в настоящем изобретении средства, улучшающие когнитивную функцию, включают без ограничения холинергические соединения, такие как ингибиторы ацетилхолинэстеразы и/или ингибиторы бутирилэстеразы (ривастигмин, донезепил, галантамин, гуперзин), ампакины (например, CX614, CX516), мускариновые модуляторы (например, агонисты мускариновых рецепторов), модуляторы NMDA-рецептора (например, положительные модуляторы, антагонисты, мемантин), ингибиторы фосфодиэстеразы (например, ингибиторы PDE4), ноотропные соединения, такие как гипергин, оксирацетам, анирацетам, ацетил-Е-карнитин, соединения, полученные из гинко, соединения, содержащиеся в геровиталах (омолаживающих средствах), такие как п-аминобензойная кислота и диэтиламиноэтанол и их производные, и соединения, модулирующие внимание, такие как метилфеникат, томокесетин и модафинил.
Термин обычные антипсихотические средства обозначает соединения, которые эффективны при лечении психозов, главным образом посредством антагонизма к D2 рецепторам допамина. Используемый в настоящем описании термин обычные антипсихотические средства включает без ограничения галоперидол, дроперидол, молиндон, флуфеназин, тиотиксен, флупентиксол, промазин, пимозид, хлорпромазин, метотримепразин, пипотиазин, трифлуоперазин, тиоридазин, ацетофеназин, хлорпротиксен и мезоридазин.
Термин атипичные антипсихотические средства обозначает соединения, которые эффективны при лечении психозов посредством дополнительного и/или механизма, отличного от антагонизма в отношении 2 рецепторов допамина. Используемый в настоящем описании термин атипичные антипсихотические средства включает без ограничения клозарил, рисперидон, оланзапин, кветиапин, зипразидон, арипипразол, сертиндол, перфеназин, мезоридазин, прохлорперазин, напроксен и локсапин.
Используемый в настоящем описании термин активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (активаторы a7-nAChR) относится к агонистам a7-nAChR и положительным аллостерическим модуляторам a7-nAChR, в частности к соединениям с низкой молекулярной массой (EMW), как описано здесь.
Термин SNP в контексте настоящего описания относится к однонуклеотидному полиморфизму. SNP представляет собой генетическое различие между индивидуумами; например, положение одиночного основания в ДНК организмов, которое является вариабельным. Термин SNP определяет специфическую аллель данного гена. Используемый в настоящем описании термин SNPs представляет собой множественное число SNP. SNP встречается в полиморфном сайте, занятом одиночным нуклеотидом, который представляет собой сайт различия между аллельными последовательностями. Этому сайту обычно предшествуют и за ним следуют высоко консервативные последовательности аллели (например, последовательности, которые варьируются менее чем у 1/100 или 1/1000 членов популяций). SNPs чаще всего являются диаллельными. Однонуклеотидный полиморфизм обычно возникает вследствие замещения одним нуклеотидом другого в полиморфном сайте. Переход представляет собой замещение одного пурина другим пурином или одного пиримидина другим пиримидином. Трансверсия представляет собой замещение пурина пиримидином или наоборот. Однонуклеотидный полиморфизм может также возникнуть в результате делеции нуклеотида или вставки нуклеотида относительно эталона. SNP может также относиться к полиморфному сайту на одной хромосоме или в пределах области одной хромосомы, причем SNP может относиться к вставке или делеции нескольких пар оснований (например, описанный здесь SNP rs3841325 относится к вставке/делеции 22 пар оснований в положении -71 выше стартового сайта транскрипции человеческого гена CHRNA5). Следовательно, термин SNP относится также к об
- 6 034964 ласти гена, имеющей одну из нескольких нуклеотидных последовательностей, обнаруживаемых в этой области гена у различных индивидуумов популяции. Хотя большинство SNPs являются редкими, по оценкам, имеется 5,3 миллиона общих SNPs, каждый с частотой 10-50%, которые составляют основную часть различий последовательностей ДНК между людьми. Такие SNPs присутствуют в человеческом геноме в одной из каждых 600 пар оснований (Kruglyak и Nickerson, Nature Genet. 27:235 (2001)). Аллели (варианты), составляющие блоки таких SNPs в тесной физической близости, часто коррелируются, что приводит к сниженной генетической вариабельности и определяет ограниченное число гаплотипов SNP (Fullerton et al., Am. J. Hum. Genet. 67:881 (2000)).
Термин ген относится к кодирующей области, функционально связанной с соответствующими регуляторными последовательностями, способной некоторым образом регулировать экспрессию полипептида. Ген включает не транслированные регуляторные области ДНК (например, промоторы, энхансеры, репрессоры и т.д.), предшествующие (находящиеся выше по ходу транскрипции) и следующие (ниже по ходу транскрипции) за кодирующей областью (открытая рамка считывания, ORF), а также, где применимо, вставочные последовательности (т.е. интроны) между отдельными кодирующими областями (т.е. эксонами). Гены могут также включать последовательности, локализующиеся и на 5'-, и на 3'-конце последовательностей, которые присутствуют на транскрипте РНК. Эти последовательности именуются фланкирующими последовательностями или областями (эти фланкирующие последовательности расположены ближе к 5' или 3' относительно не транслированной последовательности, присутствующей на транскрипте мРНК). 5'-фланкирующая область может содержать регуляторные последовательности, такие как промоторы и энхансеры, которые контролируют или влияют на транскрипцию гена. 3'фланкирующая область может содержать последовательности, которые направляют терминацию транскрипции, посттрансляционное расщепление и полиаденилирование.
Термин легкое когнитивное нарушение (MCI) в контексте настоящего описания относится к когнитивному нарушению, тяжесть которого выходит за пределы, ожидаемые для индивидуума определенного возраста и образования, но которое значимо не препятствует повседневной деятельности такого индивидуума (Petersen R.C., Smith G.E., Waring S.C., Ivnik R.J., Tangalos E.G., Kokmen E. (1999). Mild cognitive impairment: clinical characterization and outcome. Arch. Neurol. 56 (3) : 303-8).
Термин гаплотип в контексте настоящего описания относится к группе SNPs, которые, как представляется, не рекомбинируются независимо, и которые могут быть сгруппированы вместе в блоки SNPs. Следовательно, SNPs, которые составляют гаплотип, находятся в дисбалансе связи, и, таким образом, имеют тенденцию наследоваться вместе. В предпочтительном варианте осуществления гаплотип SNP относится к комбинации SNPs, присутствующих в человеческом гене CHRNA5 (SEQ ID NO: 39) и/или гене CHRNA3 (SEQ ID NO: 40), причем SNPs, образующие указанный гаплотип, локализуются в зоне примерно 100000, или примерно 50000, или примерно 30000, или примерно 20000, или примерно 10000 пар оснований выше по ходу транскрипции и/или ниже по ходу транскрипции от положения данного SNP в геноме. Гаплотип также относится к определенным комбинациям полиморфных вариантов (SNPs и/или аллелей), наблюдаемых в популяции, в полиморфных сайтах на одной хромосоме или в пределах области одной хромосомы. Описанный здесь гаплотип относится к любой комбинации SNPs или полиморфных сайтов. Гаплотип может содержать два или более SNPs/аллелей, и длина геномной области, содержащей гаплотип, может варьироваться от нескольких сотен оснований до сотен тысяч оснований. Специалистам в данной области техники известно, что один и тот же гаплотип может быть описан различным образом путем определения ограничивающих гаплотип аллелей из различных нитей нуклеиновой кислоты. Например, гаплотип delTTC, определяемый SNPs rs3841324-Del (SEQ ID NO: 6), rs503464-T (SEQ ID NO: 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7) по настоящему изобретению, представляет собой такой же гаплотип как GAAdel, определяемый теми же SNPs, в которых аллели определяются из другой нити, или delATC, в котором второй SNP определяется из другой нити. Описанные здесь SNPs дифференциально присутствуют у людей, и их специфическая последовательность указывает на вероятность ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Поэтому эти SNPs и гаплотипы, содержащие указанные SNPs, имеют диагностическую ценность для оценки риска и эффективности лечения у индивидуума. Выявление SNPs или полиморфных областей, образующих гаплотипы, может осуществляться известными в данной области техники способами, используемыми для выявления нуклеотидов в полиморфных сайтах (см. также представленное ниже определение дисбаланса связи).
Дисбаланс связи или LD относится к ситуации, при которой два или более аллельных варианта связаны, т.е. существует не случайная корреляция между аллельными вариантами в двух или более полиморфных сайтах у индивидуумов в популяции. LD обычно обозначается заглавной буквой D. Нормализация D делением ее на теоретический максимум для наблюдаемых частот аллелей приводит к получению величины D'. Величина 0 для D' указывает на то, что исследованные локусы в действительности независимы друг от друга, тогда как величина 1 демонстрирует полную зависимость. Два или более аллельных вариантов/SNPs, которые связаны, считаются находящимися в дисбалансе связи. В целом, аллельные варианты, которые являются частью гаплотипа или блока гаплотипов, находятся в дисбалансе связи. В данной области техники известны разнообразные способы/метрические показатели для оценки
- 7 034964 степени, в которой любые два полиморфных варианта (аллели) или SNPs находятся в LD. Пригодные метрические показатели D', r2 и другие (см., например, Hedrick P.W., Genetics, 117(2):331-41, 1987). Используемые здесь полиморфные варианты или SNPs находятся в прочной LD и образуют гаплотип, если D'>0,8.
Используемый в настоящем описании термин индивидуум относится предпочтительно к человеку, в частности пациенту, у которого диагностировано когнитивное нарушение, шизофрения или другое психическое заболевание, которое представляет собой приобретенную недостаточность одной или нескольких из функции памяти, решения проблем, ориентации и/или абстракции, что нарушает способность индивидуума независимо функционировать. Термины субъект, пациент или индивидуум используются взаимозаменяемо.
Термины когнитивные расстройства/нарушения и психотические и/или нейродегенеративные расстройства относятся к психическим заболеваниям, которые представляют собой приобретенные дефициты одной или нескольких из функции памяти, решения проблем, ориентации и/или абстракции, что нарушает способность индивидуума независимо функционировать. Примерами указанных расстройств являются болезнь Альцгеймера, деменция с тельцами Леви, боковой амиотрофический склероз, нарушение памяти, потеря памяти, недостаточность когнитивной функции, дефицит внимания, расстройство в виде гиперактивности, шизофрения, деменция при болезни Паркинсона и сосудистая деменция.
Подробное описание изобретения
Было обнаружено, что генетические варианты, присутствующие на гене субъединицы альфа-5 человеческого ацетилхолинового рецептора (CHRNA5) (SEQ ID NO: 39) или гене субъединицы альфа-3 человеческого нейронного ацетилхолинового рецептора (CHRNA3) (SEQ ID NO: 40), представляют собой маркеры для прогнозирования вероятности ответа на лечение активатором a7-nAChR у индивидуума, страдающего когнитивными нарушениями или дисфункциями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами. Никотиновые ацетилхолиновые рецепторы (nAChRs), такие как CHRNA5 или CHRNA3, являются членами суперсемейства управляемых лигандами ионных каналов, которые опосредуют быструю передачу сигналов в синапсах. Раскрытые здесь положения настоящего изобретения относятся к способу лечения когнитивных нарушений и дисфункций, психотических и/или нейродегенеративных расстройств активаторами a7-nAChR, на основании присутствия определенных характерных SNPs в человеческом гене CHRNA5 и/или CHRNA3.
Поэтому способы, композиции и наборы по настоящему изобретению обеспечивают средство для отбора пациентов, страдающих когнитивными нарушениями или дисфункциями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, которые более вероятно будут отвечать на лечение активатором a7-nAChR, посредством этого повышая терапевтическую эффективность таких способов лечения.
Поэтому в одном аспекте изобретение относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у отобранной популяции пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании генотипа пациентов в гене субъединицы альфа-5 человеческого ацетилхолинового рецептора (CHRNA5) или гене субъединицы альфа-3 человеческого нейронного ацетилхолинового рецептора (CHRNA3), и причем указанный генотип указывает на эффективность лечения активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Специфический маркер для прогнозирования ответной реакции на лечение активатором a7-nAChR может представлять собой SNP и/или полиморфную область. Специалисту в данной области техники известна последовательность нуклеиновых кислот и локализация гена CHRNA5 (локализующегося на человеческой хромосоме: 15 (NC_000015.9 (78857862..78887611) и гена CHRNA3 (локализующегося на человеческой хромосоме: 15 (NC_000015.9 (78885394..78913637, комплемент). Для более легкого понимания настоящего изобретения, описанные здесь SNPs определяются следующим образом:____________________________________________
Название SNP и идентификационный номер последовательности | Последовательность |
rs55853698 (SEQ ID NO. 1 или 2) rs55853698-T (SEQ ID NO. 1) | CGGGAGCTGTGGCGCGGAGCGGCCCC[G/T]CTGCTGCGTCTGCCCTCGT TTTGTC |
rs55853698-G (SEQ ID NO. 2) | |
rs6495308 (SEQ ID NO. 3 ил«4) rs6495308-C (SEQ ID NO. 3) rs6495308-T (SEQ ID NO. 4) | GTAACTGTCTGATGGCAGGTTTGCTG[C/T]TGGGAGAGTAGAGAAGAGGT TTGGG |
rs3841324 (SEQ ID NO. 5 «ли6) rs3841324-lns (SEQ ID NO. 5) rs3841324-Del (SEQ ID NO. 6) | GAAGCTCCCGGCGCCTAGCCCCGCCC[- /CTATTTCCCTCTGGCCCCGCCC]AATCCTCGCCTTGTTCCTTTTGGCC |
rs55781567 (SEQ ID NO. 7 «ли8) rs55781567-C (SEQ ID NO. 7) rs55781567-G (SEQ ID NO. 8) | TTGTCTCACGACTCACACTCAGTGCT[C/G]CATTCCCCAAGAGTTCGCGTT CCCC |
rs503464 (SEQ ID NO. 9 «ли Ю) rs503464-A (SEQ ID NO. 9) rs503464-T (SEQ ID NO. 10) | ACAGCTCCCGCCGGGACAGCAGCCTC[A/T]GCCTAGCAGCTTCTGGCGG GCTCGG |
rs56182392 (SEQ ID NO. 11™ 12) rs56182392-G (SEQ ID NO. 11) rs56182392-A (SEQ ID NO. 12) | GGAGCTTCCACATGCGTCCCGAGCCC[A/G]CCAGAAGCTGCTAGGCTGA GGCTGC |
- 8 034964
rs77293642 (SEQ ID NO. 13 14) rs77293642-C (SEQ ID NO. 13) rs77293642-T (SEQ ID NO. 14) | CTGCTAGGCTGAGGCTGCTGTCCCGG[C/T]GGGAGCTGTGGCGCGGAGC GGCCCC |
rs67624739 (SEQ ID NO. 15 «» 16) rs67624739-lns (SEQ ID NO. 15) rs67624739-Del (SEQ ID NO. 16) | GGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGC[- /CAGAGGGAAATAGGGGCGGGGC ]TAGGCGCCGGGAGCTTCCACATGCG |
rs142774214 (SEQ ID NO. 17 «л» 18) rs142774214-lns (SEQ ID NO. 17) rs142774214-Del (SEQ ID NO. 18) | GGGCCAAAAGGAACAAGGCGAGGATT[/GGGCGGGGCCAGAGGGAAATAG 1GGGCGGGGCTAGGCGCCGGGAGCTT |
rs60182379 (SEQ ID NO. 19 «ли 20) rs60182379-G (SEQ ID NO.19) rs60182379-T (SEQ ID NO. 20) | GGGGATCGGAGGCGGGGCTATGAATA[G/T]ACCGGACTGGGCCAAAAGG AACAAG |
rs77541452 (SEQ ID NO. 21 »» 22) rs77541452-A (SEQ ID NO. 21) rs77541452-G (SEQ ID NO. 22) | GACAGGGTTGGACCAGAGGCGGGGCG[A/G]GGTGGGGAAAGGGTTGGT GGGGATC |
rs72648882 (SEQ ID NO. 23 «» 24) rs72648882-G (SEQ ID NO. 23) rs72648882-T (SEQ ID NO. 24) | TGTTATCTTAAGGTGTGCAGTGACTA[G/T]GCCAAGGACATCCGGTGGTTA GAGA |
rs144334096 (SEQ ID NO. 25 «ли 26) rs144334096-A (SEQ ID NO. 25) rs144334096-T (SEQ ID NO. 26) | AGAGCAGACATCAATGAATAGCTGTT[A/T]TCTTAAGGTGTGCAGTGACTA GGCC |
rs114037126 (SEQ ID NO. 27»» 28) rs114037126-C (SEQ ID NO. 27) rs114037126-T (SEQ ID NO. 28) | AGCACAGAGCAGACATCAATGAATAG[C/T]TGTTATCTTAAGGTGTGCAGT GACT |
rs140280786 (SEQ ID NO. 29 «» 30) rs140280786-A (SEQ ID NO. 29) rs140280786-G (SEQ ID NO. 30) | CGGCTCCCTCTGCCACTGAAGTTTAA[A/G]GATAATTCGCCTGAATCCCTT CAGC |
rs147565924 (SEQ ID NO. 31»» 32) rs147565924-A (SEQ ID NO. 31) rs147565924-C (SEQ ID NO. 32) | TTCTTTGCAACCAGGTTTAG I I I I I C[A/C]CAGATTTACTAGTCTGGAGGGT GGA |
rs115662711 (SEQ ID NO. 33 ™34) rs115662711-C (SEQ ID NO. 33) rs115662711-T (SEQ ID NO. 34) | TGGCTCCATTGGATGTAATTTACATT[C/T]TTCCAGCTGTATTTGGACCTAA GAA |
rs1051730 (SEQ ID NO. 35 «ли 36) rs1051730-C (SEQ ID NO. 35) rs1051730-T (SEQ ID NO. 36) | TGGGCCATCATCAAAGCCCCAGGCTA[C/T]AAACACGACATCAAGTACAAC TGCT |
rs16969968 (SEQ ID NO. 37»» 38) rs16969968-G (SEQ ID NO. 37) rs16969968-A (SEQ ID NO. 38) | CTAGAAACACATTGGAAGCTGCGCTC[A/G]ATTCTATTCGCTACATTACAA GACA |
Предпочтительно, как описано здесь, указанная композиция применяется для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, путем улучшения когнитивных способностей индивидуума. В одном варианте осуществления когнитивные нарушения, психотические и/или нейродегенеративные расстройства выбраны из группы, состоящей из легкого когнитивного нарушения, болезни Альцгеймера, деменции при болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, деменции при СПИДе, сенильной деменции, легкого когнитивного нарушения связанного с возрастом (MCI), связанного с возрастом нарушения памяти, аутизма, деменции при дегенерации лобной доли, инсульта, дегенеративных расстройств базальных ганглиев, рассеянного склероза, травмы, опухолей мозга, инфекций мозга, гидроцефалии, депрессии, токсических или метаболических расстройств и деменции, вызванных лекарственными средствами. В другом варианте осуществления изобретения указанная композиция по изобретению применяется для лечения пациентов, страдающих шизофренией.
Лечение активаторами a7-nAChR популяции пациентов, отобранной на основании присутствия определенных характерных SNPs в человеческом гене CHRNA5 и/или CHRNA3, ведет к статистически релевантному улучшению способностей к визуальному обучению и памяти, улучшенной когнитивной функции, улучшенным способностям аргументации и решения проблем и улучшениям внимания и его активного поддержания, по сравнению с индивидуумами, не являющимися носителями характерных SNPs, в то время как улучшения, измеренные в виде размера эффекта, как описано в разделе Примеры, составляют по меньшей мере 0,1, или 0,2, или 0,3, или 0,4, или выше 0,5. Величины размера эффекта будут отличаться в зависимости от применяемых тестов и условия лечения. Фраза улучшение когнитивных способностей индивидуума относится к ситуации, при которой: (i) когнитивные навыки или способности, физиологическое состояние и/или психологическое состояние индивидуума считалось бы специалистом в данной области техники выходящим за пределы нормального диапазона здорового индивидуума, и (ii) где лечение композициями по изобретению или в соответствии со способами по изобретению ведет к значительному улучшению, по сравнению с индивидуумами контрольной группы (например, индивидуумами, которые не являются носителями маркерного SNP) или группы плацебо. Улучшение может быть полным (когда, например, по мнению специалиста в данной области техники, оцениваемые показатели состояния пациента укладываются в нормальный дипапазон) или частичным, при котором характерные признаки указанного выше состояния индивидуума становятся значительно меньше выраженными, чем они были бы у индивидуума, не получавшего композицию или лечение в соответствии с настоящим изобретением. Частичные результаты лечения могут привести к уменьшению тяжести
- 9 034964 указанных выше состояний или патологических симптомов, к увеличению частоты и длительности периодов ремиссии заболевания или предотвращению ухудшения состояния или нетрудоспособности вследствие прогрессирования заболевания. В этом контексте термин значительно меньше выраженные относится к состояниям или статусу индивидуума, которого специалист в данной области техники на основании измерения релевантного параметра после лечения композициями по изобретению или в соответствии со способом по изобретению не считал бы полностью здоровым (параметры у пациента могут еще выходить за пределы нормального диапазона), но у которого наблюдалось значительное увеличение релевантного параметра (которое может представлять собой увеличение или уменьшение определенного параметра). Значительное увеличение или уменьшение может быть идентифицировано, например, сравнением результатов лечения отдельных пациентов с индивидуумами контрольной группы (например, с индивидуумами, которые не являются носителями характерного маркерного SNP) или группы плацебо. Специалисту в данной области техники хорошо известен релевантный параметр для определения когнитивных способностей или способностей, физиологического состояния и/или психологического состояния индивидуума и то, как их определить. Специалист в данной области техники (например, врач) может выбрать указанные параметры на основании исследованного связанного с возрастом состояния. Фраза улучшение когнитивных способностей индивидуума относится также к ситуации, в которой индивидуум, которого специалист в данной области техники считал бы соответствующим нормальному диапазону (в отношении когнитивных способностей и способностей), желает улучшить свои когнитивные навыки или способности.
В одном варианте осуществления композиция применяется к популяций пациентов на основании носительства SNP rs55853698-T человеческого гена CHRNA5, раскрытого в SEQ ID NO: 1. SNP rs55853698 представляет собой аллель G/T (SEQ ID NO: 1 и 2) с длиной пар оснований 1, находящуюся в положении 78857939 человеческой хромосомы 15. В другом варианте осуществления композиция применяется у популяции пациентов, отобранной на основании носительства SNP rs16969968-G CHRNA5, раскрытого в SEQ ID NO: 37. SNP rs16969968 представляет собой аллель G/A с длиной пар оснований 1, находящуюся в положении 49673482 человеческой хромосомы 15 (SEQ ID NO: 37 и 38).
Специалисту в данной области техники понятно, что несколько SNPs или полиморфных областей существуют в человеческом гене CHRNA5 или в геномных областях человеческой хромосомы 15, образующих гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37). Указанные SNPs или полиморфные области могут локализоваться в зоне примерно 100000 или примерно 50000 или примерно 30000 или примерно 2 0000 или примерно 10000 пар оснований выше и ниже по ходу транскрипции относительно положения SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37). SNPs или полиморфные области, образующие гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), будут в равной степени пригодны для применения в качестве маркеров для прогнозирования ответа на лечение активатором a7-nAChR. Специалисту в данной области техники известны способы идентификации других SNPs или полиморфных областей, образующих гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) ((см., например, Hedrick P.W., Genetics, 1 17(2):331-41, 1987 и представленный выше раздел). Поэтому в другом аспекте изобретение относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, нацеленного на улучшение когнитивных способностей указанных пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании присутствия SNP или полиморфной области, образующих гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37). В еще одном варианте осуществления изобретение также относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, нацеленного на улучшение когнитивных способностей указанных пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании присутствия по меньшей мере одного из следующих SNPs: rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32) и/или rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34), образующих гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и/или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37). На основании изложенного выше композиция, содержащая активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, может применяться для лечения когнитивных, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у популяции пациентов, отобранной на основании носительства SNPs rs3841324-del (SEQ ID NO: 6), rs503464-T (SEQ ID NO: 10) и/или rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), потому что указанные SNPs образуют гаплотип delTTC с rs55853698-T (SEQ ID NO: 1). Альтернативно, популяция пациентов может быть отобрана на основании носительства SNPs га3841324-инов (SEQ ID NO: 5), или rs503464-A (SEQ ID NO: 9) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), потому что указанные SNPs образуют гаплотип insATC с rs55853698-T (SEQ ID NO: 1). В другом аспекте изобретения популяция пациентов может быть также отобрана на основании генотипа паци
- 10 034964 ентов в субъединице альфа-3 человеческого нейронного ацетилхолинового рецептора (CHRNA3). В одном варианте осуществления композиция применяется для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, нацеленного на улучшение когнитивных способностей указанных пациентов, в популяции пациентов, отобранной на основании носительства SNP rs6495308 человеческого CHRNA3, раскрытого в SEQ ID NO: 3/4. SNP rs6495308 представляет собой вариант аллели C/T с длиной пары оснований 1, находящейся в положении 78907656 человеческой хромосомы 15 (SEQ ID NO: 3 и 4). В еще одном варианте осуществления изобретение также относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, нацеленного на улучшение когнитивных способностей указанных пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании присутствия SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35). SNP rs1051730 представляет собой вариант аллели C/T с длиной пары оснований 1, находящийся в положении 78894339 человеческой хромосомы 15.
Несколько SNPs или полиморфных областей существуют в человеческом гене CHRNA3 (например, SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36). Указанные SNPs или полиморфные области могут быть расположены в зоне примерно 100000 или примерно 50000 или примерно 30000 или примерно 2 0000 или примерно 10000 пар оснований выше и ниже по ходу транскрипции от положения rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36). SNPs или полиморфные области, образующие гаплотип с SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) или SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35/36), одинаково пригодны для использования в качестве маркеров для прогнозирования способности к ответу на лечение активатором a7-nAChR. Поэтому в другом аспекте изобретение относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у отобранной популяции пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании присутствия SNP или полимерной области, образующих гаплотип с rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) или SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35/36). Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
В другом варианте осуществления изобретения композиция для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, применяется у пациентов, отобранных на основании их гомозиготности/гетерозиготности в отношении указанных выше характерных гаплотипов SNPs CHRNA5 или CHRNA3 или характерных гаплотипов SNP CHRNA5 или CHRNA3, в частности гомозиготности в отношении SNPs rs55853698-T/T (SEQ ID NO: 1) или rs16969968-G/G (SEQ ID NO: 37), rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) и/или гомозиготности/гетерозиготности в отношении SNP rs6495308-C/C или C/T (SEQ ID NO: 3/4) или SNPs, образующих гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs.
Активаторы a7-nAChR с низкой молекулярной массой: Агонисты a7-nAChR с низкой молекулярной массой: В одном варианте осуществления применяемый активатор a7-nAChR представляет собой агонист a7-nAChR.
Агонист a7-nAChR представляет собой соединение, которое связывается с рецептором, содержащим субъединицу a7-nAChR in vivo и in vitro, и активирует рецептор. Активацию можно измерить способом, описанным в заявке на Международный патент WO 2001/85727, т.е. функциональным анализом аффинитета в гомомерном a7-nAChR, проводимым с линией крысиных гипофизарных клеток, устойчиво экспрессирующих a7-nAChR. В качестве показателя используется входящий ток кальция после стимуляции рецептора, по сравнению с эпибатидином. Агонисты a7-nAChR в соответствии с изобретением обычно вызывают входящий ток кальция, составляющий по меньшей мере 50% максимального входящего тока, вызванного эпибатидином, при величине EC50 по меньшей мере 1 мкМ; предпочтительные агонисты вызывают входящий ток кальция по меньшей мере 75% максимального входящего тока, вызванного эпибатидином, при величине EC50 по меньшей мере 400 нМ; более предпочтительные агонисты вызывают входящий ток кальция по меньшей мере 85% максимального входящего тока, вызванного эпибатидином, при величине EC50 по меньшей мере 50 нМ.
Предпочтительные агонисты a7-nAChR должны хорошо всасываться из желудочно-кишечного тракта, должны быть достаточно метаболически устойчивыми и обладать благоприятными фармакокинетическими свойствами. Дополнительные предпочтительные агонисты a7-nAChR активно связываются in-vivo с a7-nAChRs, в то же время проявляя небольшой аффинитет в отношении других рецепторов, в частности, в отношении других nAChRs, например α4β2 nAChR, в отношении мускариновых ацетилхолиновых рецепторов, например M1, и/или 5-HT3 рецептора. Еще одни предпочтительные агонисты α7
- 11 034964 nAChR эффективно проникают через гематоэнцефалический барьер. Предпочтительные агонисты α7nAChR должны быть нетоксичными и демонстрировать незначительное количество побочных эффектов. Кроме того, предпочтительный агонист a7-nAChR должен быть способен существовать в физической форме, которая устойчива, не гигроскопична и легко включаться в состав лекарственного средства.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой селективный агонист α7nAChR, т.е. является селективным в отношении рецептора, содержащего субъединицу a7-nAChR, поскольку можно было бы ожидать, что такой агонист вызовет меньшее число побочных эффектов, чем не селективный агонист, у получающего лечение индивидуума. Агонист, являющийся селективным в отношении рецептора, содержащего субъединицу a7-nAChR, обладает функциональным аффинитетом к такому рецептору в гораздо более высокой степени, например по меньшей мере 10-кратного различия аффинитета по величине EC50, предпочтительно по меньшей мере 20-кратного, предпочтительнее по меньшей мере 50-кратного, по сравнению с любым другим никотиновым ацетилхолиновым рецептором. Для оценки аффинитета агонистов a7-nAChR по изобретению в отношении других никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, можно применять способ, описанный в заявке на Международный патент WO 2001/85727, т.е. для оценки аффинитета в отношении человеческого α4β2 nAChR, и аналогичный функциональный анализ проводят с использованием линии человеческих эмбриональных почечных клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий подтип α4β2, и для оценки активности соединений по изобретению в отношении ганглионарного подтипа и мышечного типа никотинового рецептора, аналогичные функциональные анализы проводят с использованием линии человеческих эмбриональных почечных клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий ганглионарный подтип, или клеточной линии, эндогенно экспрессирующей человеческий мышечный тип никотиновых рецепторов.
В последние 15 лет много усилий было сосредоточено на разработке селективных агонистов α7 nAChR, что привело к открытию многих различных хемотипов, проявляющих указанную селективную активность. Эти усилия резюмированы в обзоре Horenstein et al. (Mol. Pharmacol., 2008, 74, 1496-1511), в котором описано не менее чем 9 различных семейств агонистов α7 nAChR, у большинства из которых были обнаружены селективные агонисты. Действительно, несколько перспективных лекарственных средств, имеющих агонистический в отношении α7 nAChR тип действия, вступили в преклинические или даже клинические испытания (см. обзор: Broad et al., Drugs of Future, 2007, 32(2), 161-170; Romanelli et al., Expert Opin. Ther. Patents, 2007, 17(11), 1365-1377). Примерами таких соединений - тоже относящимися к разнообразным хемотипам - являются MEM3454, MEM63908, SSR180711, GTS21, EVP6124, ABT107, ABT126, TC-5619, AZD-6319 и SAR-130479. Другие агонисты α7 nAChR и их применение в качестве фармацевтических средств известны, например, из заявок на Международные патенты WO 2001/85727, WO 2004/022556, WO 2005/123732, WO 2006/005608, WO 2007/045478, WO 2007/068476 и WO 2007/068475.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 1500 Да. В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 1000 Да. В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 800 Да. В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 500 Да.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH2- или -CH2-CH2-; и L3 обозначает -CH2- или -CH(CH3)-; или
L1 обозначает -CH2-CH2-; L2 обозначает -CH2-; и L3 обозначает -CH2-CH2-;
L4 обозначает группу, выбранную из
О гр
L4a или L4b f где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалькильной составляющей;
R1 обозначает водород или О^алкил;
X1 обозначает -O- или -NH-;
группа A2 выбрана из
- 12 034964 где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к Х1;
Al обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;
каждая группа R2 обозначает независимо С1-6алкил, С1-6галогеналкил, С1-6алкокси, С1-6галогеналкокси, галоген, циано или от трех- до шестичленную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или частично насыщенной, и которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и причем каждая кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода, и не более чем 2 атома серы, и причем каждая кольцевая система может в свою очередь быть замещена один или несколько раз С1-6алкилом, С1-6галогеналкилом, С16алкокси, С1-6галогеналкокси, галогеном или циано, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;
или две группы R2 на соседних кольцевых атомах образуют С3-4алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х2, и где С3-4алкиленовая группа может быть замещена одной или несколькими группами R3;
каждая группа Х2 независимо обозначает -O- или -N(R4)-;
каждая группа R4 независимо обозначает водород или С1-6алкил; и каждая группа R3 независимо обозначает галоген или С1-6алкил;
в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
Пока нет иных указаний, выражения, используемые в настоящем изобретении, имеют следующее значение:
Алкил представляет прямоцепочечную или разветвленноцепочечную алкильную группу, например метил, этил, н- или изопропил, н-, изо-, втор- или трет-бутил, н-пентил, н-гексил; С1-6алкил предпочтительно представляет прямоцепочечный или разветвленноцепочечный С1-4алкил при особом предпочтении, отданном метилу, этилу, н-пропилу, изопропилу и трет-бутилу.
Каждая алкильная часть алкокси, галогеналкила и т.д. должна иметь такое же значение, как описано в указанном выше определении алкила, в частности в отношении линейности и предпочтительного размера.
Заместитель, замещенный один или несколько раз, например, как определено для A1, предпочтительно замещен одним-тремя заместителями. Галоген представляет собой в целом фтор, хлор, бром или йод; предпочтительно фтор, хлор или бром. Галогеналкильные группы предпочтительно имеют длину цепи от 1 до 4 атомов углерода и представляют собой, например фторметил, дифторметил, трифторметил, хлорметил, дихлорметил, трихлорометил, 2,2,2-трифторэтил, 2-фторэтил, 2-хлорэтил, пентафторэтил, 1,1-дифтор-2,2,2-трихлорэтил, 2,2,2-трихлорэтил, 1,1,2,2-тетрафторэтил, 2,2,3,3-тетрафторпропил, 2,2,3,3,3-пентафторпропил или 2,2,3,4,4,4-гексафторбутил;
предпочтительно -СБ3, -СНБ2, -СН2Б, -СНБ-СН3, -СР2СН3 или -СН2СР3.
В контексте изобретения определения две группы R2 на соседних кольцевых атомах образуют С3-4алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х2 или две группы R5 на соседних кольцевых атомах образуют С3-4алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х3 охватывают -СН2-СН2-СН2-, -СН2-СН2-СН2-СН2-, -О-СН2-О-, -О-СН2-СН2-О- и -СНтСН·^-. Примером замещенной группы является -СН2-СН2-^СН3)-.
В контексте изобретения определение A1 или А3 как от пяти- до десятичленной моноциклической или конденсированной полициклической ароматической кольцевой системы охватывает С6- или С10ароматическую углеводородную группу или от пяти- до десятичленную гетероциклическую ароматическую кольцевую систему. Полициклическая означает предпочтительно бициклическую.
В контексте изобретения определение R2 как от трех- до шестичленной моноциклической кольцевой системы охватывает С6-ароматическую углеводородную группу, от пяти- до шестичленную гетероциклическую ароматическую кольцевую систему и от трех- до шестичленную моноциклическую алифатическую или гетероциклическую кольцевую систему.
С6- или С10-ароматическая углеводородная группа представляет собой обычно фенил или нафтил, в частности, фенил.
Предпочтительно, но также в зависимости от определения заместителя, от пяти- до десятичленные гетероциклические ароматические кольцевые системы состоят из 5-10 кольцевых атомов, из которых 13 кольцевых атома представляют собой гетероатомы. Такие гетероциклические ароматические кольцевые системы могут присутствовать в виде одиночной кольцевой системы или в виде бициклических или трициклических кольцевых систем; предпочтительно, в виде одиночных кольцевых систем или в виде бенз-аннелированных кольцевых систем. Бициклические или трициклические кольцевые системы могут быть образованы аннелированием двух или более колец или мостиковым атомом, например кислорода, серы, азота. Примерами гетероциклических кольцевых систем являются: имидазо[2,1-Ь]тиазол, пиррол,
- 13 034964 пирролин, пирролидин, пиразол, пиразолин, пиразолидин, имидазол, имидазолин, имидазолидин, триазол, триазолин, триазолидин, тетразол, фуран, дигидрофуран, тетрагидрофуран, фуразан (оксадиазол), диоксолан, тиофен, дигидротиофен, тетрагидротиофен, оксазол, оксазолин, оксазолидин, изоксазол, изоксазолин, изоксазолидин, тиазол, тиазолин, тиазолидин, изотиазол, изотиазолин, изотиазолидин, тиадиазол, тиадиазолин, тиазолидин, пиридин, пиперидин, пиридазин, пиразин, пиперазин, триазин, пиран, тетрагидропиран, тиопиран, тетрагидротиопиран, оксазин, тиазин, диоксин, морфолин, пурин, птеридин и соответствующие бенз-аннелированные гетероциклы, например индол, изоиндол, кумарин, изохинолин, хинолин и тому подобные. Предпочтительными гетероциклами являются: имидазо[2,1-Ь]тиазол, оксазол, изоксазол, тиазол, изотиазол, триазол, пиррол, фуран, тетрагидрофуран, пиридин, пиримидин, имидазол или пиразол.
В контексте изобретения от трех- до шестичленных моноциклических алифатических кольцевых систем представляют собой обычно циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил.
За счет асимметрического атома (атомов) углерода, который может присутствовать в соединениях формулы (I) и соединения формулы (II), соединения могут существовать в оптически активной форме или в форме смесей оптических изомеров, например, в форме рацемических смесей или диастереомерных смесей. Все оптические изомеры и их смеси, включая рацемические смеси, являются частью настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH2-CH2-; и L3 обозначает -CH2- или -CH(CH3)-; L4 обозначает группу, выбранную из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалькильной составляющей; R1 обозначает водород или ^4алкил; X обозначает -O- или -NH-; группа A выбрана из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к X1;
A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;
каждая группа R2 обозначает независимо С1-6алкил, C1-6галогеналкил, С1-6алкокси, C1-6галогеналкокси или галоген.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH-CH-; и L3 обозначает -CH2-; L4 обозначает
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалкильной составляющей;
R1 обозначает водород или Х^алкил;
A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз
- 14 034964
R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; и каждая группа R2 обозначает независимо С1-6алкил, C1-6галогеналкил, С1-6алкокси, Оубгалогеналкокси или галоген.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH2-CH2-; и L3 обозначает -CH2- или -CH(CH3)-; L4 обозначает
L4b где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалильной составляющей; группа X1 обозначает -O- или -NH-; группа A выбрана из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к X1;
A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и где кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и где заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; и каждая группа R2 обозначает независимо C1-6алкил, C1-6галогеналкил, C1-6алкокси, C1-6галогеналкокси или галоген.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-CH2-; L2 обозначает -CH2-; и L3 обозначает -CH2-CH2; L4 обозначает
L4b где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалильной составляющей; группа X1 обозначает -O- или -NH-; группа A выбрана из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к X1;
A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и где кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и где заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; и каждая группа R2 обозначает независимо C1-6алкил, C1-6галогеналкил, C1-6алкокси, C1-6галогеналкокси или галоген.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы P1; группа P1 представляет собой группу, состоящую из
- 15 034964
А-1: Сложный (S)-1-(2-фторфенил)этиловый эфир (S)-(lазабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)карбаминовой кислоты;
А-2 : Сложный (R)-1-(2-хлорфенил)этиловый эфир (R) — (1 — азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)карбаминовой кислоты;
А-3: Сложный (S)-1-фенилэтиловый эфир (S)-(lазабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)карбаминовой кислоты;
В-1: (R)-3- (5-фенилпиримидин-2-илокси)-1азабицикло[2.2.2]октан;
В-2 : (R)-3-(5-п-толилпиримидин-2-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-3 : (R)-3-(5-(2-фтор-4-метилфенил)пиримидин-2-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-4 : (R)-3-(5-(3,4-диметилфенил)пиримидин-2-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-5 : (R)-3-(6-п-толилпиридин-З-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-6 : (R)-3-(6-фенилпиридин-З-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-7 : (R)-3-(6-(3,4-диметилфенил)пиридин-3-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-8 : (R)-3-[6-(2-фтор-4-метилфенил)пиридазин-3-илокси]-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-9: (R)-3-[6-(4,5-диметил-2-фторфенил)пиридазин-3 илокси]-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-10 : (R) -3- [6- (3,4-диметилфенил)пиридазин-3-илокси]-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-11: (R)-3-[6-(4-метилфенил)пиридазин-3-илокси]-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-12: (R)-3-[6-(2,5-дифтор-4-метилфенил)пиридазин-3 илокси]-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-13 : (2S,3R)-3-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси]-2 метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-14: (2R,3S)-3-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси]-2 метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-15 : (2S,3R)-3- [5-(1Н-индол-5-ил)пиримидин-2-илокси]-2 метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-16: (2R,3S)-3-[5-(1Н-индол-5-ил)пиримидин-2-илокси]-2 метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-17 : 3-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридин-3-илокси]-2-метил-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-18 : (2S,3R)-2-метил-З-[6-(5-метилтиофен-2-ил)пиридазин·
3-илокси]-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-19 : 3-[6— (2,3-диметил-1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси] 2-метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
- 16 034964
В-20 : транс-2-метил-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил) -(6 фенилпиридин-3-ил)амин;
В-21: транс-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридин-3-ил]-(2-метил-1 азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)амин;
С-1: (4S,5R)-4-[5-(1Н-индол-5-ил)пиримидин-2-илокси]-1 азабицикло[3.3.1]нонан;
С-2: 5-{2-[ (4 S,5R) — (1-азабицикло[3.3.1]нон-4 ил)окси]пиримидин-5-ил}-1,З-дигидроиндол-2-он;
С-3: (4S,5R)-4-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридин-3-илокси]-1 азабицикло[3.3.1]нонан;
С-4: (4S,5R)-4-[5-(1Н-индол-5-ил)пиридин-2-илокси]-1 азабицикло[3.3.1]нонан;
С-5: (4S,5R)-4-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси]-1 азабицикло[3.3.1]нонан;
С-6: 5-{6-[(4S,5R)-(1-азабицикло[3.3.1]нон-4 ил)окси]пиридазин-3-ил}-1,З-дигидроиндол-2-он;
С-7 : (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[5-(1Н-индол-5 ил)пиридин-2-ил]амин;
С-8: (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[5-(1Н-индол-5 ил)пиримидин-2-ил]амин;
С-9 : (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[6-(1Н-индол-5 ил)пиридин-3-ил]амин;
С-10: (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[6-(1Н-индол-5 ил)пиридин-3-ил]амин;
С-11: (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[5-(1Н-индол-4 ил)пиримидин-2-ил]амин;
С-12: (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[6-(1Н-индол-5 ил)пиридазин-3-ил]амин;
D-1: 4-(5-фенил-1,3,4-тиадиазол-2-илокси)-1 азатрицикло[3.3.1.13'7]декан, имеющий формулу
D-la: (4S)—4 — (5-фенил-1,3,4-тиадиазол-2-илокси)-1
- 17 034964 азатрицикло [3.3.1.13'7] декан;
D-lb : 4-(6-(1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси)-1азатрицикло [3.3.1.13,7] декан;
D-lc: 4-(6-( 1Н-индол-5-ил)пиридин-3-илокси)-1азатрицикло [3.3.1.13'7] декан;
D-ld: 4- (5-(1Н-индол-5-ил)пиримидин-2-илокси)-1азатрицикло [3.3.1.13,7] декан;
D-2 : 2- ( 6-фенилпиридазин-З-ил)октагидропиррол[3,4с]пиррол, имеющий формулу ηΟΟνΧΧΟ.
f
D-3 : 5-[6-(5-метилгексагидропиррол[3,4-с]пиррол-2илпиридазин-3-ил-1Н-индол, имеющий формулу
D-За : 5-[6-(цис-5-метилгексагидропиррол[3,4-с]пиррол-2илпиридазин-3-ил-1Н-индол;
D-4 : 5- [5-{6-метил-З,6-диазабицикло[3.2.0]гепт-3ил[пиридин-2-ил]-IH-индол, имеющий формулу
D-4a: 5— [5 —{ (1R,5R)-6-метил-З,6-диазабицикло[3.2.0]гепт-3ил[пиридин-2-ил]-IH-индол;
D-5 : 2-Метил-5-(6-фенилпиридазин-З-ил)октагидропиррол[3,4 — с]пиррол, имеющий формулу
D-6 : 5-{6-[1-азабицикло[2.2.2]окт-3-илокси]пиридазин-3ил}-IH-индол;
D-ба: 5-{6- [ (3R)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3илокси]пиридазин-3-ил}-1Н-индол;
D-7 : 5-{6-[1-азабицикло[2.2.2]окт-3-илокси]пиридазин-3ил}-1,3-дигидроиндол-2-он;
- 18 034964
D-7a : 5-{6- [ (3R)1-азабицикло[2.2.2]окт-3-илокси]пиридазин· 3-ил}-1,3-дигидроиндол-2-он;
D-8 : N-(1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-1Н-индазол-3· карбоксамид;
D-8a: N- ( (3R)-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-1Н-индазол-3· карбоксамид;
D-8b: N- ( (3S)-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-1Н-индазол-3· карбоксамид;
D-9 : N-(1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5-(трифторметокси)
1Н-индазол-3-карбоксамид;
D-9a : N- ( (3R)-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5· (трифторметокси)-1Н-индазол-3-карбоксамид;
D-9b: N- ( (3S)-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5· (трифторметокси)-1Н-индазол-3-карбоксамид;
D-10 : N-(2-( (3-пиридинил)метил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3· ил)бензофуран-2-карбоксамид;
D-10a: (2S,3R)-N-(2-((3-пиридинил)метил)-1· азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)бензофуран-2-карбоксамид;
D-ll: N-(2-( (3-пиридинил)метил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3· ил)-3,5-дифторбензамид;
D-lla: (2S,3R)-N-(2-((3-пиридинил)метил)-1· азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-3,5-дифторбензамид;
D-llb: N-(2-((3-пиридинил)метил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3· ил)-5-метилтиофен-2-карбоксамид;
D-llc: (2S,3R)-N-(2-((3-пиридинил)метил)-1· азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5-метилтиофен-2-карбоксамид;
D-lld: N-(2-((3-пиридинил)метил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3· ил)-5-(2-пиридинил)тиофен-2-карбоксамид;
D-lle: (2S,3R)-N-(2-((3-пиридинил)метил)-1· азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5-(2-пиридинил)тиофен-2-карбоксамид;
D-12 : 4-(5-метилоксазол[4,5-Ь]пиридин-2-ил)-1,4· диазабицикло[3.2.2]нонан;
D-13 : [N-[(3R)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил]-4· хлорбензамид;
D-14: (1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)амид фтор[2,3
с]пиридин-5-карбоновой кислоты;
- 19 034964
D-15: (1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)амид 2,3дигидробензо[1,4]диоксин-6-карбоновой кислоты;
D-16: (4-пиридин-3-иленил)амид 5-морфолин-4-илпентаноевой кислоты;
D-17 : N-{4-[4-(2,4-диметоксифенил)пиперазин-1-ил]бутил}-4пиридин-2-илбензамид;
D-18 : 1-[6-(4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-(4-пиперидин-1илбутил)мочевина;
D-19: 7,8,9,10-тетрагидро-б,10-метан-бН-пиразин-(2,3—
h) ( 3)-бензазепин;
D-20: (2'R)-спиро-[1-азабицикло[2.2.2]октан-3,2' (3Ή) фтор[2,3-Ь]пиридин];
D-21: Сложный 4-бромфениловый эфир 1,4диазабицикло[3.2.2]нонан-4-карбоновой кислоты;
D-22: 3—[1—(2,4-Диметоксифенил)мет-(Е)-илиден]-3,4,5,6тетрагидро-[2,3']бипиридинил;
D-23: (1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)амид 7-(2метоксифенил)бензофуран-2-карбоновой кислоты;
D-2 4 : N-метил-!-{5-[3'Н-спиро[4-азабицикло[2.2.2]октан2,2' -фтор[2,3-Ь]пиридин]-5'-ил]-2-тиенил}метанамин, имеющий формулу
D-24a: Ы-метил-1-{5-[(2R)-3'Н-спиро[4 азабицикло[2.2.2]октан-2,2'-фтор[2,3-Ь]пиридин]-5'-ил]-2тиенил}метанамин;
D-24b: Ы-метил-1-{5-[(2S)-3'Н-спиро[4 азабицикло[2.2.2]октан-2,2'-фтор[2,3-Ь]пиридин]-5'-ил]-2тиенил]метанамин;
D-25a: б-[(Анилинкарбонил)]-N-[(3R)-1 азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25b: N- [ (3R) -1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (4 хлорфенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25c: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2
- 20 034964 метоксифенил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид; D-25d: N- [ (3R) -1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (4· метоксифенил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25e: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2· фенилэтил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-2 5f: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (3· цианофенил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25g: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (3· бромфенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25h: N- [ (3R) -1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2 этоксифенил)амино]карбонил)амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-2 5i: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]— 6—({ [ (4 (диметиламино)фенил)амино]карбонил)амино)-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-25j: N- (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2 нитрофенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25k: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2,6 дифторфенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-2 51: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2,4 дихлорфенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25m: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[ ({ [3 (трифторметил)фенил]амино]карбонил)амино]-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-25n: N-[ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (3,4,5 триметоксифенил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-25o: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[ ({ [4 метокси-3-(трифторметил)фенил]амино}карбонил)амино]-1бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25p: N-{(3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[({[3 метоксифенил]амино}карбонил)амино]-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25q: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[ ({ [3 трифторметоксифенил]амино}карбонил)амино]-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-25r: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-{ [ (трет бутиламино)карбонил]амино}-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
- 21 034964
D-2 5s: Ν- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6 {[(циклогексиламино)карбонил]амино}-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-2 5t: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[ ({ [ (1S)—1 фенилэтил]амино}карбониламино]-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25u: 7-[(Анилинкарбонил)амино]-N-[(3R)-1 азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25v: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (4 метоксифенил)амино]карбонил}амино)-1-бензофуран-2-карбоксамид;
D-26a: N-[4-(2-Тиенил)фенил]-1-азабицикло[2.2.2]октан-3 карбоксамид;
D-2 6Ь: N-[4'-(Гидроксиметил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6с: N- (4'-Фтор-1,1'-бифенил-4-ил)-1 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6d: N-(4'-Метилсульфанил-1,1'-бифенил-4-ил)-1 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 бе: 2- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(4'-фтор-1, 1' бифенил-4-ил)ацетамид;
D-26f: 2- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(4'-метокси-1,1' бифенил-4-ил)ацетамид;
D-2 бд: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(4'-фтор-1,1' бифенил-3-ил)ацетамид;
D-2 6h: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(3'-нитро-1,1' бифенил-4-ил)ацетамид;
D-2 61: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-[4' (гидроксиметил)-1,1'-бифенил-3-ил]ацетамид;
D-2 6j: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-[4'—(бромметил) 1,1'-бифенил-4-ил]ацетамид;
D-26k: 2- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-[2' (гидроксиметил)-1,1'-бифенил-3-ил]ацетамид;
D-261: N-[3'(Ацетиламино)-1,1'-бифенил-4-ил]-2-(1 азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)ацетамид;
D-26m: (3R)-N-[2'-(Гидроксиметил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6п: (3R)-N-[4'—(Гидроксиметил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1
- 22 034964 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-26o: (3S)-Ν-[4'(Гидроксиметил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6р: (3R)-Ν-[4'-(4-Морфолинил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-26q: (3R)-N-[4'-(Гидроксиметил)-3'-(метокси) —1,1’ — бифенил-4-ил]-1-азабицикло[2.2.2]-октан-3-карбоксамид;
D-26r: Метил 4'-{[(3S)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-карбоксилат;
D-26s: 4’ — { [ (3 S)-1-Азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-карбоновая кислота;
D-2 6t: (3R)-N-[4'-(Гидрокси-1-метилэтил)-1,1'-бифенил-4ил]-1-азабицикло[2.2.2]-октан-3-карбоксамид;
D-2 6u: (3R)-N-[4'-(Аминокарбонил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-26v: (3R)-N-[4'-(Гидроксиметил)-З-фтор-1,1'-бифенил-4ил]-1-азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6w: (4'-{ [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-ил)метил метилкарбамат;
D-2 бх: (4'-{ [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-ил)метил изопропилкарбамат;
D-26y: (4' — { [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-ил)метил этилкарбамат;
D-26z: форма свободного основания соединения, выбранного из примеров №№ 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 и 35 документа WO2003/078431;
D-27a: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(7-бром-1бензотиен-2-ил)ацетамид;
D-27b: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(б-бром-1бензотиен-2-ил)ацетамид;
D-27c: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(7хинолинил)ацетамид;
D-27d: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(2нафтил)ацетамид;
D-27e: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(8-нитро-2нафтил)ацетамид;
- 23 034964
D-28a: N- (l-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-6· хинолинкарбоксамид;
D-28b: N- (l-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2· феназинкарбоксамид;
D-2 8c: N- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-7· хинолинкарбоксамид;
D-28d: N- [ (3R)-l-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6· хинолинкарбоксамид;
D-2 8e : N- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-этил-7 хинолинкарбоксамид;
D-28f: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-этил-6· хинолинкарбоксамид;
D-2 8g: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-метил-7· хинолинкарбоксамид;
D-2 8h: N- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-метил-6· хинолинкарбоксамид;
D-281: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-4-метил-6· хинолинкарбоксамид;
D-28j: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-пропил-6· хинолинкарбоксамид;
D-28k: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-этил-4-метил-6· хинолинкарбоксамид;
D-28I: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-пропил-7· хинолинкарбоксамид;
D-28m: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-этил-4-метил-7· хинолинкарбоксамид;
D-28n: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-4-(тетрагидро-2R пиран-2-ил)-6-хинолинкарбоксамид;
D-28o: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-4-(тетрагидро-2R пиран-2-ил)-7-хинолинкарбоксамид;
D-28p: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-фенил-6· хинолинкарбоксамид;
D-28q: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-фенил-7· хинолинкарбоксамид;
D-29 : (R)-З-хлор-N-(хинуклидин-3-ил)бензо[Ь]тиофен-2 карбоксамид;
D-30a: 5—{5—[(эндо)-8-азабицикло[3.2.1]октан-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол;
D-ЗОЬ: 5-{5-[(экзо)-8-азабицикло[3.2.1]октан-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол;
D-30c: 5—{5—[(эндо)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол;
D-30d: 5—{5— [ (экзо)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол;
D-30e: 4 —{5— [ (экзо)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол; и
D-30f: 5—{6— [ (экзо)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3илокси]пиридин-3-ил}-ΙΗ-индол;
- 24 034964 причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из соединения -1, -2 и -3; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления, агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из соединения B-1, B-2, B-3, B-4, B-5, B-6, B-7, B-8, B-9, B-10, B-11, B-12, B-13, B-14, B-15, B-16, B-17, B-18, B-19, B-20 и B-21; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из соединения C-1, C-2, C-3, C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-9, C-10, C-11 и C-12; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы Р2; группа Р2 представляет собой группу, состоящую из соединений -1, -2, -3, B-1, B-2, B-3, B-4, B-5, B-6, B-7, B-8, B-9, B-10, B-11, B-12, B-13, B-14, B-15, B-16, B-17, B-18, B-19, B-20, B-21, C-1, С-2, C3, C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-9, C-10, C-11, C-12, D-1, D-1a, D-1b, D-1c, D-1d, D-2, D-3, D-3a, D-4, D-4a, D8, D-8a, D-8b, D-9, D-9a, D-9b, D-10, D-10a, D-11, D-11a, D-11b, D-11c, D-11d, D-11e, D-12, D-19, D-22, D24, D-24a, D-24b, D-25a, D-25b, D-25c, D-25d, D-25e, D-25f, D-25g, D-25h, D-25i, D-25j, D-25k, D-25l, D25m, D-25n, D-25o, D-25p, D-25q, D-25r, D-25s, D-25t, D-25u, D-25v, D-28a, D-28b, D-28c, D-28d, D-28e, D-28f, D-28g, D-28h, D-28i, D-28j, D-28k, D-28l, D-28m, D-28n, D-28o, D-28p, D-28q, D-29, D-30a, D-30b, D-30c, D-30d, D-30e и D-30f; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы P3; группа P3 представляет собой группу, состоящую из соединений -1, -2, -3, B-1, B-2, B-3, B-4, B-5, B-6, B-7, B-8, B-9, B-10, B-11, B-12, B-13, B-14, B-15, B-16, B-17, B-18, B-19, B-20, B-21, C-1, C-2, C3, C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-9, C-10, C-11, C-12, D-1, D-1a, D-1b, D-1c, D-1d, D-2, D-3, D-3a, D-4, D-4a, D8, D-8a, D-8b, D-9, D-9a, D-9b, D-10, D-10a, D-11, D-11a, D-12, D-19, D-22, D-24, D-24a, D-24b, D-29, D30a, D-30b, D-30c, D-30d, D-30e и D-30f; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы P4; группа Р4 представляет собой группу, состоящую из соединений -1, B-5, B-8, B-12, B-13, C-5, C-6 и C-8; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
Соединения формулы (I) (например, соединения с -1 по -3, с B-1 по B-21 и с C-1 по C-12) и их получение известны из документов WO 2001/85727, WO 2004/022556, WO 2005/123732, WO 2006/005608, WO 2007/045478, WO 2007/068476 и WO 2007/068475, или могут быть получены аналогично указанным ссылкам. Соединения D-1 и D-1a могут быть получены в соответствии с документом WO 2008/058096.
Соединения D-2, D-3, D-3a, D-4, D-4a и D-5 (-582941) могут быть получены в соответствии с документом WO 2005/028477. Соединения D-6, D-6a, D-7 и E7a могут быть получены в соответствии с документом WO 2006/065233 и/или WO 2007/018738. Соединения D-8, D-8a, D-8b, D-9, D-9a и D-9b могут быть получены в соответствии с документом WO 2004/029050 и/или WO 2010/043515.
Соединения D-10 и D-10a могут быть получены в соответствии с документом WO 2004/076449 и/или WO 2009/018505. Соединения D-11, с D-11a по D-11e могут быть получены в соответствии с документом WO 2004/076449 и/или WO 2010/085724 и/или WO 2010/056622. Соединение D-12 (CP-810123) и соединение D-19 (варениклин) описаны в публикации O'Donnell et al., J. Med. Chem., 2010, 53, 1222-1237. Соединения D-13 (PNU-282987), D-14 (PHA543613), D-21 (SSR-180771) и D-23 (ABBF) описаны в публикации Horenstein et al., Mol. Pharmacol., 2008, 74, 1496-1511. Соединения D-15 (PHA568487), D-16 (WAY317538), D-17 (WAY-264620), D-20 (AZD-0328) и D-22 (GTS-21) описаны в публикации Haydar et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, 10, 144-152. Соединение D-18 (WYE-103914) описано в публикации Ghiron et al., J. Med. Chem., 2010, 53, 4379-4389. Соединения D-24, D-24a и D-24b описаны в документе WO 2007/133155 и/или WO 2009/066107. Соединения с D-25a по D-25v описаны в документе WO 2004/013136. Соединения с D-26a по D-26z описаны в документе WO 2003/078431. Соединения с D-27a до D-27e описаны в документе WO 2003/078430. Соединения с D-28a по D-28q описаны в документе WO 2003/043991.
Соединение D-29 описано в документе WO 2003/055878. Соединения с D-30a по D-30f описаны в документе WO 2007/137030.
Положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR с низкой молекулярной массой.
В одном варианте осуществления применяемый активатор a7-nAChR представляет собой положительный аллостерический модулятор a7-nAChR.
Используемый в настоящем описании термин положительный аллостерический модулятор α7nAChR обозначает соединение, которое связывается с рецептором, содержащим субъединицу α7
- 25 034964 nAChR in vivo и in vitro и потенцирует активацию рецептора, когда связывается его физиологический лиганд (т.е. ацетилхолин). Потенцирование может быть измерено способом, описанным в документе WO 2001/85727, т.е. функциональным анализом аффинитета в гомомерном a7-nAChR, проводимым с линией крысиных гипофизарных клеток, устойчиво экспрессирующей оп-nAChR. В качестве показателя используется входящий ток кальция после стимуляции рецептора по сравнению с одним связыванием ацетилхолином. Положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR в соответствии с изобретением обычно вызывают входящий ток кальция, составляющий по меньшей мере 200% максимального входящего потока, вызванного ацетилхолином, при величине EC50 по меньшей мере 5000 нМ; предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR вызывают входящий ток кальция, составляющий по меньшей мере 300% максимального входящего потока, вызванного ацетилхолином, при величине EC50 по меньшей мере 1000 нМ; более предпочтительные агонисты вызывают входящий ток кальция, составляющий по меньшей мере 400% максимального входящего тока, вызванного эпибатидином, при величине EC50 по меньшей мере 500 нМ.
В частности, предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR должны хорошо всасываться из желудочно-кишечного тракта, должны быть достаточно метаболически устойчивыми и обладать благоприятными фармакокинетическими свойствами.
Дополнительные предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR активно связываются in-vivo с a7-nAChRs, в то же время проявляя небольшой аффинитет в отношении других рецепторов, в частности в отношении других nAChRs, например α4β2 nAChR, в отношении мускариновых ацетилхолиновых рецепторов, например рецепторов M1 и/или 5-HT3. Дополнительные предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR эффективно проходят через гематоэнцефалический барьер.
Предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR должны быть нетоксичными и демонстрировать небольшое число побочных эффектов.
Кроме того, предпочтительный положительный аллостерический модулятор a7-nAChR должен быть способен существовать в физической форме, которая является устойчивой, не гигроскопичной и легко включаться в состав лекарственных препаратов.
В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR представляет собой селективный положительный аллостерический модулятор a7-nAChR, т.е. избирателен в отношении рецептора, содержащего субъединицу a7-nAChR, поскольку следовало бы ожидать, что такой положительный аллостерический модулятор вызовет у получающего лечение индивидуума меньшее число побочных эффектов, чем не селективный положительный аллостерический модулятор.
Положительный аллостерический модулятор, являющийся селективным в отношении рецептора, содержащего субъединицу a7-nAChR, обладает гораздо более высокой степенью функционального аффинитета к такому рецептору, например имеет в 10 раз больший аффинитет по величине EC50, предпочтительно по меньшей мере в 20 раз, предпочтительнее по меньшей мере в 50 раз больший аффинитет по сравнению с любым другим никотиновым ацетилхолиновым рецептором. Для оценки аффинитета положительного аллостерического модулятора a7-nAChR по изобретению к другим никотиновым ацетилхолиновым рецепторам можно использовать способ, описанный в заявке на Международный патент WO 2001/85727, т.е. для оценки аффинитета к человеческому нейронному α4β2 nAChR проводят аналогичный функциональный анализ с использованием линии человеческих эмбриональных почечных клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий подтип α4β2 и для оценки активности соединений по изобретению в отношении ганглионарного подтипа и мышечного типа никотинового рецептора, аналогичные функциональные анализы проводят с использованием линии человеческих эмбриональных почечных клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий ганглионарный подтип или линии клеток, эндогенно экспрессирующих человеческий мышечный тип никотиновых рецепторов.
В последние 12 лет много усилий было сосредоточено на разработке селективных положительных аллостерических модуляторов a7-nAChR, что привело к открытию множества различных хемотипов, проявляющих указанную селективную активность. Эти усилия резюмированы в обзоре Haydar et al. (Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, 10, 144-152), в котором описаны 11 соединений, действующих в качестве положительных аллостерических модуляторов a7-nAChR, относящихся к семи различным химическим семействам; т.е. XY-4083; PNU-120596, РНА-758454 и NS-1738; PHA-709829; SB-206553; LY2087101, LY-1078733 и LY-2087133; соединение 26; и A-867744 (обозначения соединений, взятые из публикации Haydar et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, 10, 144-152). В действительности, по меньшей мере на одно перспективное лекарственное средство, обладающее типом действия положительного аллостерического модулятора a7-nAChR, получено разрешение Администрации по пищевым продуктам и лекарственным средствам США на проведение клинических испытаний (т.е. XY-4083).
В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 1500 Да. В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 1000 Да. В одном варианте
- 26 034964 осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 800 Да. В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор α7nAChR имеет максимальную молекулярную массу 500 Да. В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы P5; группа P5 представляет собой группу, состоящую из соединений
Е-1: (Z)-N-(4-Хлорфенил)-3-(4-хлорфениламино)-2-(3метилизоксазол-5-ил)акриламид (XY-4083);
Е-2 : 1-(5-Хлор-2,4-диметоксифенил)-3-(5-метилизоксазол-Зил)мочевина (PNU-120596);
Е-3: 1-(5-Фтор-2,4-диметоксифенил)-3-(5трифторметилизоксазол-3-ил)мочевина (РНА-758454);
Е-4 : 1- (5-Хлор-2-гидроксифенил)-3-(2-хлор-5трифторметилфенил)мочевина (NS-1738);
Е-5: 4-(4-Хлорфенил)-2-(4-метоксифенил)-5-метил-2Нпиразол-3-иламин (РНА-709829);
Е-6: Пиридин-3-иламид 5-метил-З,5-дигидро-2Н-пиррол[2,3f]индол-1-карбоновой кислоты (SB-206553);
Е-7 : [2-(4-Фторфениламино)-4-метилтиазол-5-ил]тиофен-3илметанон (LY-2087101);
Е-8 : [2-(4-Фторфениламино)-4-метилтиазол-5-ил]-птолилметанон (LY-1078733);
Е-9 : Бензо[1,3]диоксол-5-ил-[2-(4-фторфениламино)-4метилтиазол-5-ил]метанон (LY-2087133);
Е-10: Амид 4-нафталин-1-ил-За,4,5,9Ь-тетрагидро-ЗНциклопента[с]хинолин-8-сульфоновой кислоты и
Е-11: 4-[5-(4-Хлорфенил)-2-метил-3-пропионилпиррол-1ил]бензолсульфонамид (А-867744);
причем указанное соединение представлено в форме свободного основания или в форме кислотноаддитивной соли.
В еще одном варианте осуществления описанные выше композиции, содержащие активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у группы пациентов, отобранной в соответствии с описанными здесь способами, содержит второе средство, улучшающее когнитивную функцию, или терапевтическое соединение, такое как обычное антипсихотическое средство или атипичное антипсихотическое средство.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет способы прогнозирования способности индивидуума, например, человека к ответу на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов на основании присутствия или отсутствия определенных генетических маркеров у подлежащего лечению индивидуума. Используемый в настоящем описании термин прогнозирование способности индивидуума к ответу на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов предназначен для ссылки на способность оценки вероятности того, что лечение индивидуума активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов будет (например, обеспечит измеряемое благоприятное воздействие) или не будет клинически эффективным у индивидуума. В частности, такая способность оценить вероятность того, будет ли или не будет лечение клинически эффективным, обычно реализуется перед началом лечения индивидуума активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Однако также возможно, что такая способность оценить вероятность того, будет ли или не будет лечение клинически эффективным, может реализоваться после начала лечения, но перед тем как у индивидуума наблюдался показатель клинической эффективности (например, показатель измеряемого благоприятного эффекта лечения).
Способ включает стадии: I) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5 и/или гена CHRNA3; II) идентификации тех индивидуумов стадии I), которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs и/или носителями SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36) CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, причем гомозиготное присутствие по меньшей мере одного из указанных SNPs CHRNA5 или SNP гаплотипов является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и причем гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того,
- 27 034964 что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Характеристика SNPs CHRNA5 и/или CHRNA3 или получение информации о генотипе индивидуума в указанных локусах может осуществляться путем использования любых технологий, хорошо известных в данной области техники. Например, может секвенироваться любая из областей генов. Любой из хорошо известных способов секвенирования одной или обеих нитей гена CHRNA5 и/или CHRNA3 может использоваться в способах по изобретению, такой как способы, описанные, например, в патенте США № 5075216, в публикациях Engelke et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. 85, 544-548 и Wong et al. (1987) Nature 330, 384-386; Maxim и Gilbert (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. 74:560; или Sanger (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. 74:5463. Кроме того, можно использовать любую из разнообразных процедур автоматизированного секвенирования (см., например, публикацию Naeve C.W et al. (1995) Biotechniques 19:448), включая секвенирование масс спектрометрией (см., например, опубликованную заявку на Международный патент WO 94/16101; публикации Cohen et al. (1996) Adv. Chromatogr. 36:127-162; и Griffin et al. (1993) Appl. Biochem. Biotechnol. 38:147-159.
Определение присутствия или отсутствия SNPs CHRNA5 и/или CHRNA3 в биологическом образце может осуществляться с использованием любой хорошо известной технологии, такой как полимеразная цепная реакция (ПЦР), реакция амплификации, ПЦР анализ с обратной транскриптазой, анализ конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP), выявление расщепления ошибочного спаривания оснований, гетеродуплексный анализ, саузерн-блот анализ, вестерн-блот анализ, секвенирование ДНК, анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов, анализ гаплотипа, серотипирование и их комбинации или субкомбинации. Например, образец мРНК может быть получен у индивидуума, и экспрессия мРНК, кодируемых аллелью CHRNA5 и/или CHRNA3 в образце мРНК, может быть выявлена с использованием стандартных технологий молекулярной биологии, таких как ПЦР анализ. Предпочтительным способом ПЦР анализа является полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (RTPCR). Другие подходящие системы для анализа образца мРНК включают анализ с использованием микрочипа (например, с использованием системы микрочипа Affymetrix's или технологии Illumina's BeadArray Technology). В определенных ситуациях возможен анализ экспрессии характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 на уровне белка с использованием реагента выявления, который выявляет белковый продукт, кодируемый мРНК биомаркера. Например, если доступен реагент в виде антитела, который специфически связывается с маркерным белком CHRNA5 или CHRNA3, а не с другими белками, то такое антитело можно использовать для выявления экспрессии маркерного белка CHRNA5 или CHRNA3 в клеточном образце, полученном у индивидуума, или препарате, полученном из клеточного образца, используя стандартные технологии на основе антител, известные в данной области техники, такие как анализ FACS (флуоресцентно-активированная клеточная сортировка), ELISA (иммуноферментный анализ) и тому подобные.
Как указано выше, определение присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 может включать, например, анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов. Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (RFLPS) основан на изменениях в сайте рестрикционного фермента. Кроме того, специфические для последовательности рибозимы (см., например, патент США № 5498531) могут использоваться для балльной оценки присутствия специфического сайта расщепления рибозима.
Другая технология для определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью, включает гибридизацию сегментов ДНК, которые анализируются (ДНК-мишень) комплементарным, меченым олигонуклеотидным зондом, как описано, например, в публикации Wallace et at. (1981) Nucl. Acids Res. 9, 879894. Поскольку дуплексы ДНК, содержащие даже одно ошибочное спаривание пары оснований, проявляют высокую термическую нестабильность, дифференциальная температура плавления может использоваться для отличия целевых ДНК, которые в полной мере комплементарны зонду из целевых ДНК, которые отличаются только одним нуклеотидом. Этот способ был адаптирован для выявления присутствия или отсутствия специфического рестрикционного сайта, как описано, например, в патенте США № 4683194. Способ включает использование меченого на конце олигонуклеотидного зонда, простирающегося по сайту рестрикции, который гибридизируется с ДНК-мишенью. Затем гибридизированный дуплекс ДНК инкубируют с рестрикционным ферментом, соответствующим этому сайту. Реформированные рестрикционные сайты расщепляются перевариванием в паре дуплексов между зондом и мишенью использованием рестрикционной эндонуклеазой. Специфический рестрикционный сайт присутствует в ДНК-мишени, если выявляются укороченные молекулы зонда.
Другие способы определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью, включают спосо
- 28 034964 бы, в которых используется защита от расщепляющих агентов, для выявления ошибочно спаренных оснований в гетеродуплексах РНК/РНК или РНК/ДНК (как описано, например, в публикации Myers et al. (1985) Science 230:1242). В целом, используемая в данной области техники методика расщепления ошибочного спаривания начинается получением гетеродуплексов, образованных гибридизацией (меченой) РНК или ДНК, содержащей полиморфную последовательность с потенциально полиморфной РНК или ДНК, полученной из образца. Двухнитевые дуплексы обрабатывают агентом, который расцепляет однонитевые области дуплекса, такие как существующие вследствие ошибочных спариваний пар оснований между контрольными и взятыми в качестве образца нитями. Например, дуплексы РНК/ДНК могут обрабатываться РНазой, а гибриды ДНК/ДНК обрабатываться нуклеазой S1 для ферментативного переваривания ошибочно спаренных областей. В других вариантах осуществления, дуплексы или ДНК/ДНК, или РНК/ДНК могут обрабатываться гидроксиламином или тетроксидом осмия и пиперидином для переваривания ошибочно спаренных областей. После переваривания ошибочно спаренных областей полученный материал затем отделяют по размеру на денатурирующих полиакриламидных гелях. См., например, публикации Cotton et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:4397; Saleeba et al. (1992) Methods Enzymol. 217:286-295. В предпочтительном варианте осуществления контрольная ДНК или РНК может метиться для выявления.
В другом варианте осуществления изменения электрофоретической подвижности могут использоваться для определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью. Например, однонитевой конформационный полиморфизм (SSCP) может использоваться для выявления различий электрофоретической подвижности между различными характерными маркерными аллелями гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью (как описано, например, в публикациях Orita et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA: 86:276; Cotton (1993) Mutat Res. 285:125-144; и Hayashi (1992) Genet. Anal. Tech. Appl. 9:73-79). Фрагменты однонитевой ДНК образцов и контрольных нуклеиновых кислот могут денатурироваться и обеспечиваться возможностью ренатурироваться. Вторичная структура однонитевых нуклеиновых кислот варьируется в соответствии с последовательностью; полученное в результате изменение электрофоретической подвижности обеспечивает возможность выявления изменения даже одного основания. Фрагменты ДНК можно метить или выявлять мечеными зондами. Чувствительность анализа можно увеличить использованием РНК (а не ДНК), в которой вторичная структура более чувствительна к изменению последовательности. В предпочтительном варианте осуществления в обсуждаемом способе используется гетеродуплексный анализ для отделения двухнитевых гетеродуплексных молекул на основании изменений электрофоретической подвижности (Keen et al. (1991) Trends Genet. 7:5).
В еще одном варианте осуществления движение молекулы нуклеиновой кислоты в полиакриламидных гелях, содержащих градиент денатурата, анализируется с использованием денатурирующего градиентного гель-электрофореза (DGGE) (как описано, например, в публикации Myers et al. (1985) Nature 313:495). Когда DGGE используется в качестве способа анализа, то ДНК может модифицироваться для обеспечения того, чтобы она не полностью денатруировалась, например, добавлением GC (гуанинцитозинового) клэмпа длиной приблизительно 40 пар оснований, обогащенной GC ДНК с высокой точкой плавления, с использованием ПЦР. В дополнительном варианте осуществления температурный градиент используется вместо денатурирующего градиента для идентификации различий подвижности контроля и образца ДНК (Rosenbaum и Reissner (1987) Biophys. Chem. 265:12753).
Примеры других технологий для определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью, включают без ограничения селективную олигонуклеотидную гибридизацию, селективную амплификацию или селективное удлинение праймера. Например, могут быть получены олигонуклеотидные праймеры, в которых полиморфная область размещена в центре, и затем гибридизированы к ДНК-мишени в условиях, которые обеспечивают возможность гибридизации, только если обнаруживается идеальное спаривание (Saiki et al. (1986) Nature 324:163; Saiki et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:6230). Такие аллель-специфические олигонуклеотиды гибридизируются с амплифицированной ПЦР ДНК-мишенью или рядом различных полиморфизмов, когда олигонуклеотиды присоединяются к гибридизирующей мембране и гибридизируются с меченой ДНК-мишенью.
Другой способ определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью, представляет собой способ удлинения праймера, который состоит из гибридизации меченого олигонуклеотидного праймера с матричной РНК или ДНК, и затем использовании ДНК-полимеразы и дезоксинуклеозидтрифосфатов для удлинения праймера на 5' конце матрицы. Затем разрушение продукта удлинения меченого праймера производится фракционированием на основании размера, например, электрофорезом через денатурирующий полиакриламидный гель. Этот способ часто используется для сравнения сегментов гомологичной ДНК и для выявления различий вследствие вставки или делеции нуклеотидов. Различия вследствие замещения нуклеотидов не выявляются, поскольку размер представляет собой единственный критерий, используемый для характеристики продукта удлинения праймера. Дополнительными хорошо известными способами генотипирования SNP являются
- 29 034964 генотипирование динамической аллель-специфической гибридизацией (DASH) (Howell W., Jobs M., Gyllensten U., Brookes A. (1999) Dynamic allele-specific hybridization. A new method for scoring single nucleotide polymorphisms. Nat. Biotechnol. 17(l):87-8);
выявление SNP посредством молекулярных маяков (Abravaya K., Huff J., Marshall R., Merchant В., Mullen C., Schneider G. и Robinson J. (2003) Molecular beacons as diagnostic tools: technology and applications. Clin. Chem. Lab. Med. 41:468-474;
микрочипы олигонуклеотидных SNP высокой плотности (Rapley R., Harbron S. (Eds.) (2004) Molecular Analysis and Genome Discovery. Chichester. John Wiley & Sons Ltd.);
флэп-эндонуклеазы (Invader assay for SNP genotyping. Mutat Res. 573 (1-2) : 103-10).
В случае, когда SNP локализуется в промоторной области или другой не кодирующей области, оказывающей влияние на частоту экспрессии гена, несущего указанный SNP, может происходить воздействие на уровни мРНК или белка. В такой ситуации присутствие SNP невозможно определить на основании последовательности мРНК или белка указанного соответствующего гена. Однако присутствие такого характерного SNP может быть определено косвенно измерениями уровней мРНК или белка. Следовательно, в другом варианте осуществления изобретения описанные здесь способы могут включать дополнительную или альтернативную стадию определения уровня мРНК или белка определенного гена или генного продукта в качестве способа косвенного определения присутствия характерного SNP в гене CHRNA5 или CHRNA3. Falvella и соавторы идентифицировали промоторные полиморфизмы и уровни транскрипта гена CHRNA5 (J. Natl. Cancer Inst. 2010; 102:1366-1370, Vol. 102, Issue 17, September 8, 2010). В указанной публикации было показано, что частота экспрессии гена CHRNA5, экспрессированного в виде уровней мРНК, белков, несущих гаплотип delTTC (образованный SNPs rs3841324-Del (SEQ ID NO: 6), rs503464-T (SEQ ID NO: 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), составляла 1,82, по сравнению с 0,88 и 1,06 для пациентов, несущих гаплотип InsTGG и InsATC соответственно. Следовательно, анализ уровней мРНК может использоваться в качестве косвенного анализа для определения присутствия гаплотипа delTTC у указанных пациентов.
Анализ гаплотипа одного или нескольких полиморфных сайтов вокруг характерной маркерной аллели или SNP гена CHRNA5 или CHRNA3 может также использоваться для определения присутствия или отсутствия дополнительных характерных SNPs и может включать, например, использование родословных семей, молекулярных технологий и/или статистических выводов.
Кроме того, любой из хорошо известных способов генотипирования таких SNPs (например, секвенирование ДНК, технологии гибридизации, анализа на основе ПЦР, анализ ПЦР на основе флуоресцентного красителя и гасящего агента (система выявления ПЦР по технологии Taqman), технологии на основе RFLP, однонитевой конформационный полиморфизм (SSCP), денатурирующий градиентный гельэлектрофорез (DGGE), температурный градиентный гель-электрофорез (TGGE), химическое расщепление ошибочных спариваний (CMC), система на основе гетеродуплексного анализа, методики на основе масс спектроскопии, инвазивный анализ расщепления, секвенирование соотношения полиморфизма (PRS), микрочипы, анализ удлинения по типу катящегося кольца, методики на основе ВЭЖХ, методики на основе DHPLC (денатурирующей ВЭЖХ), анализы удлинения олигонуклеотидов (OLA), анализа на основе удлинения (ARMS, (амплификации рефрактерной мутационной системы), ALEX (амплификации рефрактерного мутационного линейного удлинения), SBCE (удлинение цепи одиночного основания), анализ молекулярного маяка, технологии оккупант (технологии третьей волны), анализ цепной реакции лигазы, методики на основе анализа 5'-нуклеазы, гибридизационный электрофорез через набор капилляров (CAE), пиросеквенирование, анализ усечения белка (PTT), иммуноанализы, анализ гаплотипа и твердофазная гибридизация (дот-блот иммуноанализ, обращенный дот-блот, чипсы) очень хорошо известны в данной области техники и описаны, например, в публикациях Siitari, Nucleic. Acid. diagnostics market, Technology Review 125/2002, ISDN 1239-758; Caplin (1999) Biochemica 1:5-8; Neville, (2002) BioTechniques 32:34-43; Underbill (197) Genome Res. 7:996-1005; Oefner (2000) J. Chromatogr. В Biomed. Sci. Appl. 739:34555 и в заявке на патент США № 20010049586 и могут использоваться в способах по изобретению.
Любой пригодный образец ткани, полученный биопсией или иным образом у индивидуума, пораженного когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, может использоваться для определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3, или SNP, образующих гаплотип с такой характерной аллелью. Методики или способы получения биоптата у индивидуума хорошо известны в данной области техники. Выделение субкомпонентов образцов ткани (например, клеток или РНК или ДНК) может осуществляться с использованием хорошо известных в данной области методик, описанных ниже в разделе Примеры.
Присутствие, в частности, гомозиготное присутствие SNP rs55853698-T/T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G/G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, является показателем вероятности того, что индивидуум ответит на описанное здесь лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа rs6495308-C/T SNP является показателем веро
- 30 034964 ятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Следовательно, изобретение также относится к терапевтическому способу улучшения когнитивных способностей у индивидуума и/или лечения индивидуумов, страдающих когнитивным нарушением, психотическим и/или нейродегенеративным расстройством, включающему стадии: III) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5, как описано выше; IV) идентификации тех индивидуумов III), которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5, в частности тех индивидуумов, которые являются гомозиготными в отношении указанных вариантов SNP, или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs и/или несущими SNP rs6495308-C/C CHRNA3 или Т/С (SEQ ID NO: 3/4) или генотип SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) или SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs и V) введения терапевтического эффективного количества активатора альфа 7 никотиновых рецепторов тем индивидуумам, которые идентифицированы на стадии IV). В дополнительном варианте осуществления описанные выше стадии I) и III) дополнительно включают стадии: VI) получения биологического образца у указанного индивидуума, причем указанный образец выбран из группы, состоящей из крови, происходящего из крови продукта (такого как лейкоцитарная пленка, сыворотка и плазма), лимфы, мочи, слезной жидкости, слюны, спинномозговой жидкости, буккальных мазков, мокроты, волосяных корней, лейкоцитарного образца или образцов ткани или любой их комбинации, и VII) обеспечения контакта биологического образца стадии VI) с реагентом, способным выявить (как подробно описано выше) (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36), или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs.
Реагент, агент или устройство, с которым вступает в контакт биологический образец, может представлять собой, например, праймер(ы) ПЦР/секвенирования, нуклеотиды и ферменты, пригодные для амплификации, и/или секвенирования, и/или мечения SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5, или SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs и/или несущие SNP rs6495308-C/C CHRNA3, или Т/С (SEQ ID NO: 3/4), или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35), или SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, присутствующими в образце, антитело, способное выявлять один из указанных выше SNPs, или SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs, или SNP в таком же дисбалансе связи с указанными SNPs в образце, рестрикционный фермент и/или микрочип.
Термин терапевтически эффективное количество в контексте введения используемого здесь терапевтически эффективного количества относится к количеству активного ингредиента (например, активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов и/или второго средства, улучшающего когнитивную функцию, как описано здесь), которое при введении индивидууму достаточно для обеспечения терапевтического благоприятного действия, например, достаточно для лечения когнитивных нарушений или дисфункций, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, в частности, для улучшения когнитивных способностей индивидуума. В другом аспекте изобретения, когнитивные нарушения или дисфункции, психотические и/или нейродегенеративные расстройства представляют собой психическое заболевание или приобретенную недостаточность одной или нескольких из функции памяти, решения проблем, ориентации и/или абстракции, в частности, выраженной в вербальной памяти, исполнительных функциях, внимании и его активном поддержании, беглости речи и скорости движений. В дополнительном варианте осуществления когнитивные нарушения или дисфункции, психотические и/или нейродегенеративные расстройства представляют собой легкое когнитивное нарушение, болезнь Альцгеймера, деменцию при болезни Паркинсона, деменцию с тельцами Леви, шизофрению, сосудистую деменцию, деменцию при СПИДе, сенильную деменцию, легкое когнитивное нарушение, связанное с возрастом (MCI), связанное с возрастом нарушение памяти, аутизм, деменцию при дегенерации лобной доли, инсульт, дегенеративные расстройства базальных ганглиев, рассеянный склероз, травмы, опухоли мозга, инфекции мозга, гидроцефалию, депрессию, токсические или метаболические расстройства и деменции, вызванные лекарственными средствами.
Введение активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов относится к введению агониста или положительных аллостерических модуляторов альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, в частности, к соединениям с низкой молекулярной массой, выбранным из группы P1. Альтернативно, терапевтический способ улучшения когнитивных способностей индивидуума и/или лечения индивидуумов, страдающих когнитивным нарушением, психотическим и/или нейродегенеративным расстройством включает стадию введения агониста альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, представленного формулой (I), или соединения, выбранного из группы Р1.
Фармацевтически приемлемые соли известны в данной области (например, S.M. Berge et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sd., 1977, 66:1-19; и Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selec
- 31 034964 tion, and Use, Stahl RH., Wermuth C.G., Eds.; Wiley-VCH и VHCA: Zurich, 2002). Термин фармацевтически приемлемая соль предназначен для обозначения соли свободной формы, которая является нетоксичной, не является биологически непереносимой или не является иным образом нежелательной. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются те, которые фармакологически эффективны и пригодны для контакта с тканями пациента без вызова ненужной токсичности, раздражения или аллергической реакции.
В еще одном варианте осуществления в описанных способах лечения может вводиться второе средство улучшения когнитивной функции или терапевтического соединения, полезного для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, таких как обычные антипсихотические или атипичные антипсихотические средства. Предпочтительно применяется комбинация, представляющая собой фармацевтическую композицию или комбинированный фармацевтический препарат. Такую фармацевтическую композицию можно вводить вместе, одну за другой или отдельно в одной стандартной лекарственной форме.
В другом аспекте описанных способов доза активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, подлежащая введению, составляет от примерно 1 мг до примерно 100 мг в день. Альтернативно, подлежащая введению доза составляет от примерно 2 мг до примерно 100 мг, или от примерно 3 мг до примерно 90 мг, или примерно от 4 мг до примерно 80 мг, или от примерно 5 мг до примерно 70 мг, или от примерно 6 мг до примерно 60 мг, или от примерно 7 мг до примерно 50 мг, или от примерно 8 мг до примерно 40 мг, или от примерно 9 мг до примерно 35 мг, или от примерно 10 мг до примерно 30 мг в день, или от примерно 5 мг до примерно 10 мг, или от примерно 10 мг до примерно 15 мг, или от примерно 15 мг до примерно 20 мг, или от примерно 20 мг до примерно 25 мг в день. В одном варианте осуществления указанных аспектов активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов представляет собой агонист альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Другой вариант осуществления изобретения относится к применению активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, как описано выше, для лечения пациента с когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами или состояния, при котором играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, причем пациент, являющийся восприимчивым к лечению активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов был выбран в соответствии с описанными выше способами. Кроме того, изобретение относится к применению по меньшей мере одного зонда для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308-C/C CHRNA3 или Т/С (SEQ ID NO: 3/4), или (iv) SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35), или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP в таком же дисбалансе связи с указанными SNPs для определения того, будет ли индивидуум отвечать на (a) лечение когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств или состояния, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, или (b) улучшения когнитивных способностей активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Специалисту в данной области техники известны способы и технологии конструирования полезных зондов.
В другом аспекте изобретение относится к набору, содержащему по меньшей мере один зонд для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5 или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308-C/C или Т/С (SEQ ID NO: 3/4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35), или (v) SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs. Предпочтительно, указанный набор представляет собой набор для диагностики вероятности ответа индивидуума на лечение когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств или состояния, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, содержащий VIII) средство для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, и/или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), и/или (iii) SNP rs6495308-C/C или Т/С (SEQ ID NO: 3/4) CHRNA3, и/или (iv) SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35), и/или (v) SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, и IX) инструкции по применению указанного набора.
Дополнительный предмет изобретения относится к применению набора, предпочтительно, описанного выше набора, пригодного для любого из описанных выше способов или видов применения, причем указанный набор содержит по меньшей мере один зонд для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308-C/C или Т/С (SEQ ID NO: 3/4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35), или (v) SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs. В связанном варианте осуществления описанный выше набор содержит олигонуклеотидные зонды.
В другом варианте осуществления описанных выше способов или видов применения гаплотип SNP CHRNA5/CHRNA3 состоит по меньшей мере из двух SNPs, выбранных из группы, включающей rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14),
- 32 034964 rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34). В другом варианте осуществления описанных выше способов или видов применения гаплотип SNP CHRNA5 состоит из характерного SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и по меньшей мере одного дополнительного SNP, выбранного из группы, состоящей из rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34). В связанном варианте осуществления гаплотип SNP выбран из гаплотипа delTTC и insATC, образованного SNPs rs3841324 (SEQ ID NO: 5 и 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7).
Действительные уровни дозировки активных средств в фармацевтических композициях по настоящему изобретению могут варьироваться с тем, чтобы получить количество активного средства, которое эффективно для достижения желательного терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и типа введения, без токсического воздействия на пациента. Выбранный уровень дозировки зависит от разнообразных фармакокинетических факторов, включая активность конкретных используемых композиций по настоящему изобретению, или их сложного эфира, соли или амида, пути введения, времени введения, скорости выведения конкретного используемого соединения, длительности лечения, других лекарственных средств, соединений и/или материалов, применяемых в комбинации с конкретными используемыми композициями, возраста, пола, массы тела, тяжести заболевания, общего состояния здоровья и медицинского анамнеза получающего лечение пациента и подобных факторов, хорошо известных в областях медицины.
Введение терапевтически эффективной дозировки активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, содержащегося в композициях по изобретению, может привести к уменьшению тяжести патологических симптомов, увеличению частоты и длительности периодов ремиссии или профилактики патологии или потери трудоспособности вследствие поражения заболеванием, т.е. к улучшению когнитивных способностей.
Композиция по настоящему изобретению может вводиться одним или несколькими путями введения с использованием одного или нескольких из разнообразия способов, известных в данной области техники. Как понятно специалисту в данной области техники, путь и/или тип введения будет варьироваться в зависимости от желаемых результатов. Пути введения могут включать внутривенный, внутримышечный, интрадермальный, внутрибрюшинный, подкожный, спинальный или другие парентеральные пути введения, например инъекцией или инфузией. Используемая в настоящем описании фраза парентеральное введение означает типы введения, отличные от энтерального и топического введения, обычно инъекцией, и включает без ограничения внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, подоболочечную, внутрикапсулярную, внутриорбитальную, внутрисердечную, интрадермальную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, субкутикулярную, внутрисуставную, субкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную, эпидуральную и внутригрудинную инъекцию и инфузию. Альтернативно, соединение может вводиться не парентеральным путем, таким как топический, эпидермальный или мукозальный путь введения, например интраназально, перорально, вагинально, ректально, сублингвально или топически.
Активные соединения могут быть получены с носителями, которые защищают соединение против быстрого высвобождения, такие как препаративная форма контролируемого высвобождения, включая имплантаты, трансдермальные системы и микроинкапсулированные системы доставки. Могут использоваться биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Много способов получения таких препаративных форм запатентованы или в целом известны специалистам в данной области техники. См., например, руководство Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Предпочтительные терапевтические композиции представляют собой композиции для перорального или трансдермального введения.
Композиция для энтерального или парентерального введения представляет собой, например, стандартную лекарственную форму, такую как покрытая сахаром таблетка, таблетка, капсула, суппозитория или ампула.
Стандартное содержание активных ингредиентов в отдельной дозе не должно само по себе составлять терапевтически эффективное количество, поскольку такое количество может быть достигнуто введением множества единиц дозировки. Композиция в соответствии с изобретением может содержать, на
- 33 034964 пример, от примерно 10% до примерно 100%, предпочтительно, от примерно 20% до примерно 60% активных ингредиентов.
Если нет иных указаний, то фармацевтическую композицию в соответствии с изобретением получают, по существу, известным способом, например посредством способов обычного смешивания, гранулирования, покрытия сахаром, растворения или лиофилизации. При получении композиции для пероральной лекарственной формы можно использовать любую из обычных фармацевтических сред, например, воду, гликоли, масла, спирты, носители, такие как крахмалы, сахара или микрокристаллическая целлюлоза, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, связывающие агенты, разрыхлители и тому подобные. Ввиду легкости их введения, таблетки и капсулы представляют наиболее предпочтительные пероральные стандартные лекарственные формы, и в этом случае очевидно использование твердых фармацевтических носителей.
Последовательности
SEQ ID NO. | Название SNP | Последовательность |
1 | CHRNA5 SNP rs55853698-T | CGGGAGCTGTGGCGCGGAGCGGCCCCTCTGCTGCGTCTGCCCTCGT TTTGTC |
2 | CHRNA5 SNP rs55853698-G | CGGGAGCTGTGGCGCGGAGCGGCCCCGCTGCTGCGTCTGCCCTCG TTTTGTC |
3 | CHRNA3 SNP rs6495308-C | GTAACTGTCTGATGGCAGGTTTGCTGCTGGGAGAGTAGAGAAGAGGT TTGGG |
4 | CHRNA3 SNP rs6495308-T | GTAACTGTCTGATGGCAGGTTTGCTGTTGGGAGAGTAGAGAAGAGGT TTGGG |
5 | CHRNA5 SNP rs3841324-Ins | GAAGCTCCCGGCGCCTAGCCCCGCCCCTATTTCCCTCTGGCCCCGC CCAATCCTCGCCTTGTTCCTTTTGGCC |
6 | CHRNA5 SNP rs3841324-Del | GAAGCTCCCGGCGCCTAGCCCCGCCCAATCCTCGCCTTGTTCCTTTT GGCC |
7 | CHRNA5 SNP rs55781567-C | TTGTCTCACGACTCACACTCAGTGCTCCATTCCCCAAGAGTTCGCGTT CCCC |
8 | CHRNA5 SNP rs55781567-G | TTGTCTCACGACTCACACTCAGTGCTGCATTCCCCAAGAGTTCGCGTT CCCC |
9 | CHRNA5 SNP rs503464-A | ACAGCTCCCGCCGGGACAGCAGCCTCAGCCTAGCAGCTTCTGGCGG GCTCGG |
- 34 034964
10 | CHRNA5 SNP rs503464-T | ACAGCTCCCGCCGGGACAGCAGCCTCTGCCTAGCAGCTTCTGGCGG GCTCGG |
11 | CHRNA5 SNP rs56182392-G | GGAGCTTCCACATGCGTCCCGAGCCCGCCAGAAGCTGCTAGGCTGA GGCTGC |
12 | CHRNA5 SNP rs56182392-A | GGAGCTTCCACATGCGTCCCGAGCCCACCAGAAGCTGCTAGGCTGA GGCTGC |
13 | CHRNA5 SNP rs77293642-C | CTGCTAGGCTGAGGCTGCTGTCCCGGCGGGAGCTGTGGCGCGGAG CGGCCCC |
14 | CHRNA5 SNP rs77293642-T | CTGCTAGGCTGAGGCTGCTGTCCCGGTGGGAGCTGTGGCGCGGAGC GGCCCC |
15 | CHRNA5 SNP rs67624739-lns | GGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGCCAGAGGGAAATAGGGGCGG GGCTAGGCGCCGGGAGCTTCCACATGCG |
16 | CHRNA5 SNP rs67624739Del | GGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGCTAGGCGCCGGGAGCTTCCA CATGCG |
17 | CHRNA5 SNP rs 142774214Ins | GGGCCAAAAGGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGCCAGAGGG AAATAGGGGCGGGGCTAGGCGCCGGGAGCTT |
18 | CHRNA5 SNP rs 142774214Del | GGGCCAAAAGGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGCTAGGCGCCGG GAGCTT |
19 | CHRNA5 SNP rs60182379-G | GGGGATCGGAGGCGGGGCTATGAATAGACCGGACTGGGCCAAAAGG AACAAG |
20 | CHRNA5 SNP rs60182379-T | GGGGATCGGAGGCGGGGCTATGAATATACCGGACTGGGCCAAAAGG AACAAG |
21 | CHRNA5 SNP rs77541452-A | GACAGGGTTGGACCAGAGGCGGGGCGAGGTGGGGAAAGGGTTGGT GGGGATC |
22 | CHRNA5 SNP rs77541452-G | GACAGGGTTGGACCAGAGGCGGGGCGGGGTGGGGAAAGGGTTGGT GGGGATC |
23 | CHRNA5 SNP rs72648882-G | TGTTATCTTAAGGTGTGCAGTGACTAGGCCAAGGACATCCGGTGGTT AGAGA |
24 | CHRNA5 SNP rs72648882-T | TGTTATCTTAAGGTGTGCAGTGACTATGCCAAGGACATCCGGTGGTTA GAGA |
25 | CHRNA5 SNP rs144334096-A | AGAGCAGACATCAATGAATAGCTGTTATCTTAAGGTGTGCAGTGACTA GGCC |
26 | CHRNA5 SNP rs144334096-T | AGAGCAGACATCAATGAATAGCTGTTTTCTTAAGGTGTGCAGTGACTA GGCC |
27 | CHRNA5 SNP rs114037126-C | AGCACAGAGCAGACATCAATGAATAGCTGTTATCTTAAGGTGTGCAGT GACT |
28 | CHRNA5 SNP rs114037126-T | AGCACAGAGCAGACATCAATGAATAGTTGTTATCTTAAGGTGTGCAGT GACT |
29 | CHRNA5 SNP rs140280786-A | CGGCTCCCTCTGCCACTGAAGTTTAAAGATAATTCGCCTGAATCCCTT CAGC |
30 | CHRNA5 SNP rs140280786-G | CGGCTCCCTCTGCCACTGAAGTTTAAGGATAATTCGCCTGAATCCCTT CAGC |
31 | CHRNA5 SNP rs147565924-A | TTCTTTGCAACCAGGTTTAG I I I I I CACAGATTTACTAGTCTGGAGGG TGGA |
32 | CHRNA5 SNP rs147565924-C | TTCTTTGCAACCAGGTTTAG I I I I I CCCAGATTTACTAGTCTGGAGGG TGGA |
33 | CH RNA5 S N P rs 115662711 -C | TGGCTCCATTGGATGTAATTTACATTCTTCCAGCTGTATTTGGACCTAA GAA |
34 | CH RNA5 S N P rs 115662711 -T | TGGCTCCATTGGATGTAATTTACAI I I I ICCAGCTGTATTTGGACCTAA GAA |
35 | CHRNA3 SNP rs1051730-C | TGGGCCATCATCAAAGCCCCAGGCTACAAACACGACATCAAGTACAA CTGCT |
36 | CHRNA3 SNP rs1051730-T | TGGGCCATCATCAAAGCCCCAGGCTATAAACACGACATCAAGTACAA CTGCT |
37 | CHRNA5 SNP rs16969968-G | CTAGAAACACATTGGAAGCTGCGCTCGATTCTATTCGCTACATTACAA GACA |
38 | CHRNA5 SNP rs16969968-A | CTAGAAACACATTGGAAGCTGCGCTCAATTCTATTCGCTACATTACAA GACA |
Примеры
Общая методология.
Для измерения эффекта активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов на когнитивные способности пациентов, страдающих шизофренией, применяли адекватный набор тестов когнитивной функции (CogState™) короткой продолжительности (как подробно описано ниже), обеспечивающий возможность измерений в множественные точки времени в течение периода лечения (Pietrzak et al., 2009; Maruff et al., 2009).
Тест непрерывного парного ассоциативного обучения (CPAL).
Задание CPAL представляет собой обоснованный тест, который оценивает визуальную эпизодическую память (ассоциативное обучение). Этот тест использовали ранее при шизофрении. Перед началом этого задания инспектор, руководящий проведением теста, зачитывает пациенту полные инструкции из своего сценария. При тесте CPAL участники должны научиться серии ассоциаций между набором трудно словесно характеризуемого образца и его расположением. На фазе презентации задания образец появляется в участке, и требуется, чтобы индивидуум подтвердил, что он видел образец, прикосновением к участку, в котором он появляется. На этой стадии задания пациент также увидит, что имеются два положения, в которых мишень не появляется (отвлекающие положения). Образцы представляются в случайном порядке. Однако, будучи однажды представленным, образец остается в одном и том же положении в
- 35 034964 течение всего задания. На фазе обучения задания пациенты должны поместить каждый из восьми образцов в их правильные положения. Они должны это сделать в шесть циклов. В первый цикл один из образцов представляется в центральном положении, и индивидуумы должны запомнить положение, в котором он был показан. Они указывают положение прикосновением к нему. Если они прикасаются к неправильному положению, то над положением возникает визуальный звуковой сигнал (над положением появляется красный крест и раздается звонок). Затем пациент должен выбрать второе положение. Этот процесс продолжается до тех пор, пока пациент правильно расположит все четыре мишени в их правильные положения. После того как все восемь образцов были правильно расположены, начинается второй цикл. Во втором цикле образцы остаются в тех же положениях, но порядок их представления в центре экрана отличается от порядка в первом цикле (рандомизированного). Процесс помещения каждой мишени в правильное положение продолжается, как это было в первом цикле. Когда завершается второй цикл, такой же процесс повторяется по мере того, как по ходу циклов уменьшается число ошибок, совершаемых при помещении образцов в их правильные положения. Время введения составляет приблизительно 5 мин у здоровых добровольцев. Следовало ожидать, пациенты, страдающие шизофренией, завершат задание в пределах примерно 12 мин.
Тест NAB-лабиринты.
Набор тестов нейропсихологической оценки (NAB®) в лабиринтах измеряет планирование и предвидение - аспекты исполнительной функции, которые часто нарушаются у пациентов с дисфункцией лобной доли. Этот показатель быстро оценивает планирование и организационные способности посредством заданий прослеживания лабиринта, которые, как было обнаружено, традиционно чувствительны к поражениям лобной доли. Тест NAB-лабиринты состоит из семи лабиринтов, которые становятся все более сложными, позволяя инспектору оценивать в баллах лабиринты на основании полноты и времени завершения (NAB Neuropsychological Assessment Battery Mazes Test Kit; 2009, Robert Stern Travis White).
Набор матриц согласованной оценки когнитивной функции (MCCB, Matrics Assessment Inc.).
В рамках инициативы по исследованиям измерения и лечения для улучшения когнитивной функции при шизофрении (MATRICS) было определено, что определенные зоны или домены когнитивной функции необходимо исследовать для определения наличия эффектов лечения при шизофрении. Семь доменов когнитивной функции были идентифицированы на основании того, что они были достоверно нарушены у пациентов с хронической шизофренией. Эти домены включали скорость обработки, внимания/активного поддержания внимания, рабочей памяти, вербального обучения, визуального обучения, аргументации и решения проблем и социального познания.
CPT-IP (Тест непрерывного функционирования - Идентичные пары).
В представленных на экране инструкциях перед заданием задается вопрос: Карта красная? Инспектор, наблюдающий за ходом теста, читает полный текст инструкций индивидууму по сценарию инспектора, наблюдающего за ходом теста. Для начала выполнения задания инспектор или индивидуум должен нажать кнопку Ввод. Игральная карта представляется в центре экрана. Карта поворачивается на 180° с тем, чтобы оказаться лицевой стороной кверху. Как только это происходит, индивидуум должен решить, красная карта или нет. Если она красная, то индивидуум должен нажать клавишу Да, если она не красная, то он должен нажать клавишу Нет. Индивидуумы выполняют тест до тех пор, пока они не достигнут требуемого числа ответов, или до истечения периода проведения теста. Затем на экране представляются инструкции действительного теста. Инспектор, наблюдающий за проведением теста, или индивидуум должен нажать на кнопку Ввод для начала действительного теста. Индивидуума следует стимулировать работать как можно быстрее и как можно более точно выполнять задание. Например, индивидуум должен стараться не нажимать клавишу Да или Нет перед тем как карта повернется лицевой поверхностью кверху. Если они ошибаются, то слышен звук, сигнализирующий об ошибке.
Статистические методы для фармакодинамических анализов.
Оценку активности получали по статистическому анализу площади под кривой доза-эффект после введения исследуемого препарата (AUEC) 4-10 на CPAL следующим образом: параметры отдельно анализировали посредством модели линейного смешанного эффекта, корригированных по периодспецифической исходной величине для шкалы, группы лечения, периоду и последовательности в качестве фиксированных эффектов и для пациента в качестве случайного эффекта. Период-специфическую исходную величину для шкалы получали по средним период-специфическим величинам в день -1 и по величине перед введением. Стандартное отклонение (и его 95% CI (доверительный интервал)) между каждыми группами дозы B-5 и плацебо получали из модели. Размер эффекта получали делением величины стандартного отклонения в группе лечения (и его 95% CI) на корень квадратный двукратной рассчитанной дисперсии остаточной ошибки. Активность, определенную в параграфе выше, оценивали по размеру эффекта CPAL.
Пример 1. Структура исследования для идентификации существования субпопуляции пациентов, отвечающих на лечение B-5.
При попытке идентификации такой субпопуляции пациентов, которые отвечают на лечение B-5, исследование проводили для изучения связи между генетическими вариантами rs55853698 (SEQ ID NO:
- 36 034964 и 2) в гене CHRNA5 и эффективностью B-5 в исследовании. В исследовании использовали монофумарат B-5 в форме твердых желатиновых капсул, как описано в примере E.
Клинические образцы. Геномную ДНК у 29 индивидуумов экстрагировали из цельной крови в соответствии с инструкциями Gentra Systems, Inc. (Minneapolis, MN).
Анализ генотипирования. В общей сложности 29 образцов ДНК генотипировали на наличие rs55853698 (SEQ ID NO: 1 и 2) в гене CHRNA5. Генотипирование выполняли, используя системы Assaysby-Design (анализы по структуре) и Assays-on-Demand (анализы по требованию) (Applied Biosystems, Foster City, CA) на секвенаторе ABI 7900. При генотипировании использовали 1 нг геномной ДНК в соответствии с инструкциями производителя.
Статистический анализ. Использовали модель смешанного эффекта, включающую последовательность, период и лечение в качестве фиксированных эффектов, исходную величину в качестве ковариата и индивидуума в качестве случайного эффекта. Размер эффекта определяли по разности рассчитанных средних величин Лечения B-5 - Плацебо, деленных на квадратный корень двукратных рассчитанных величин дисперсии остаточной ошибки. Исходную тяжесть заболевания анализировали ANCOVA (анализом ковариации), корригированным по возрасту, полу, годам получения образования и курению в анамнезе.
Результаты. У пациентов, которые являются гомозиготными в отношении варианта T SNP rs55853698-T/T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, проявился значимый ответ на B-5 по тесту визуального обучения и памяти (CPAL), в сравнении с плацебо (2 мг: p=0,015, 15 мг: p=0,003 и 100 мг: p=0,024). Размер эффекта в трех группах лечения составил соответственно 0,63, 0,80 и 0,58. Напротив, пациенты, не являющиеся гомозиготными в отношении варианта T (G/T) или являющиеся гомозиготными в отношении варианта G (G/G) SNP rs55853698 CHRNA5, не проявили никакого значимого улучшения когнитивной функции (табл. 1). Эти результаты показывают, что генотип TT SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5 представляет собой прогностический маркер клинического ответа на B-5 у пациентов, страдающих шизофренией.
Таблица 1. Первичная клиническая конечная точка оценки CPAL набора тестов CogState™ по генотипам CHRNA5
Доза (мг) В-5 | Генотип rs55853698 ТТ (п=18) | Генотип rs55853698 GG+GT(п=8) | ||
Размер эффекта | Величина Р | Размер эффекта | Величина Р | |
2 | 0, 626 | 0, 015 | - | - |
15 | 0,795 | 0, 003 | -0,231 | 0,561 |
100 | 0,578 | 0, 024 | -0,158 | 0, 681 |
Ключевую вторичную клиническую конечную точку набора матриц согласованной оценки когнитивной функции (MCCB) оценивали в отношении эффективности B-5 у субпопуляций, определенных вариантом (rs55853698) CHRNA5. Как резюмировано в табл. 2, пациенты, являющиеся гомозиготными в отношении варианта T SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, проявили большее улучшение в отношении Аргументации и решения проблем (NAB-Mazes), по сравнению с плацебо. Размер эффекта составил 0,40, 0,50 и 0,32, соответственно, в когортах 2, 15 и 100 мг. Кроме того, у пациентов, являющихся гомозиготными в отношении варианта T SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, также проявилось большее улучшение в отношении Внимания и активности поддержания внимания (CPT-IP). Размер эффекта составил 0,47, 0,40 и 0,39, соответственно, в когортах 2, 15 и 100 мг. Напротив, у пациентов, не являющихся гомозиготными в отношении варианта T (G/T), или являющихся гомозиготными в отношении варианта G (G/G/) SNP rs55853698 CHRNA5, не проявилось никакое значимое улучшение когнитивной функции. Полученные результаты показывают, что генотип TT SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5 представляет собой прогностический маркер клинического ответа на B-5 у пациентов, страдающих шизофренией.
- 37 034964
Таблица 2. Вторичная клиническая конечная точка MCCB (набора матриц согласованной оценки когнитивной функции) по генотипам CHRNA5 MATRICS: Инициатива Национального Института психического здоровья по исследованию измерения и лечения для улучшения когнитивной, функции при шизофрении
Доза (мг) В-5 | Генотип rs55853698 ТТ (п=18) | Генотип rs55853698 GG+GT (п=8) | ||
Лабиринты NAB | ||||
Размер эффекта | Величина Р | Размер эффекта | Величина Р | |
2 | 0,4 | 0, 102 | -0,157 | 0,706 |
15 | 0,5 | 0, 045 | -0,109 | 0, 814 |
100 | 0,316 | 0, 199 | -0,153 | 0,708 |
CPT-IP | ||||
Размер эффекта | Величина Р | Размер эффекта | Величина Р | |
2 | 0,465 | 0, 059 | - | - |
15 | 0,404 | 0, 105 | 0, 019 | 0, 971 |
100 | 0,389 | 0, 116 | -0387 | 0,494 |
Таблица 3. Оценка с использованием первичной клинической конечной точки CPAL набора тестов CogState™ по генотипам (rs1051730) CHRNA3
Доза (мг) В-5 | Генотип rsl0517130 СС (п=19) | Генотип rsl0517130 СТ+ТТ (п=7) | ||
Размер эффекта | Величина Р | Размер эффекта | Величина Р | |
2 | 0, 443 | 0, 068 | 0, 565 | 0, 183 |
15 | 0, 627 | 0, 012 | -0,202 | 0, 622 |
100 | 0,464 | 0, 057 | -0,209 | 0, 606 |
Таблица 4. Оценка с использованием первичной клинической конечной точки CPAL набора тестов CogState™ по генотипам (rs6495308) CHRNA3
Доза (мг) В-5 | Генотип rs6495308 СС+СТ (п=15) | Генотип | rs6495308 ТТ (п=11) | ||
Размер эффекта | Величина Р | Размер эффекта | Величина Р | ||
2 | 0, 553 | 0, 048 | 0, 001 | 0, 998 | |
15 | 0, 593 | 0, 034 | -0,112 | 0,749 | |
100 | 0, 342 | 0,208 | -0,154 | 0, 639 |
В следующем разделе описаны дополнительные аспекты, относящиеся к этой технологии.
Пример А. Получение 5-хлор-2-(4-метилфенил)пиридина.
В атмосфере азота 2,5-дихлорпиридин (40 г, 270 ммоль), 4-метилфенилбороновую кислоту (39 г, 289 ммоль) и дихлорид бистрифенилфосфин-палладия(П) (1,14 г; 1,6 ммоль) суспендировали в воде (258 г)/ТНБ (тетрагидрофуран) (117 г) в течение приблизительно 30 мин при 35-55°С. Раствор трикалия фосфата (143,4 г, 676 ммоль) в воде (143 г) добавляли при 35-55°С в течение приблизительно 60-120 мин и температуру 55°С поддерживали в течение еще приблизительно 30-45 мин. Добавляли еще трикалий фосфат (22,9 г, 108 ммоль) в воде (22,9 г) в течение периода приблизительно 30 мин, и температуру повышали до 55-60°С для завершения реакции в пределах еще приблизительно 2 ч.
Для экстрактивного удаления палладия раствор цистеина (примерно 16 г) в воде (115 г) добавляли к реакционной смеси при 60-55°С. Приблизительно через 1 ч при 55°С двухфазную реакционную смесь просветляли фильтрацией через прокладку вспомогательного фильтра клеточного осадка (2-5 г) и смесь THF/воды (110 г/75 г) использовали для споласкивания. Слои объединенных фильтратов разделяли при 25°С, и водный слой, содержащий соль, экстрагировали THF (1x57 г). Объединенные слои THF разбавляли 94% этанолом (195 г) и концентрировали перегонкой под пониженным давлением (300-200 мбар) при температуре в кожухе 45°С для удаления основного количества THF (175-250 г). К остающемуся
- 38 034964 раствору продукта добавляли дополнительный этанол (97 г) и при 45-55°С постепенно добавляли воду (565 г) в течение периода приблизительно 60 мин для вызова и поддержания кристаллизации. Через 30 мин температуру снижали приблизительно до 20°С приблизительно через 90-120 мин, и еще через час при этой температуре твердые вещества собирали фильтрацией, промывали этанолом/водой 1:2 и сушили под пониженным давлением для выхода 5-хлор-2-(4-метилфенил)пиридина (52,5 г; 95% теории; чистота >95%; Pd <25 м.д.).
Пример В. Получение (К)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в свободной форме и в форме фумарата.
Пример B1. Образование свободной формы.
В атмосфере азота к 3И-хинуклидинолу (43,8 г, 0,34 моль) в DMSO (диметилсульфоксиде) (792 г) добавляли приблизительно 20% раствор в THF трет-бутоксида калия (210 г, 0,375 моль), и приблизительно при 40-45°С под пониженным давлением отгоняли растворитель THF. Температуру реакционной смеси повышали до 90°С, и постепенно добавляли твердый 5-хлор-2-(4-метилфенил)пиридин (61,2 г, 0,30 моль) по меньшей мере 4 порциями. Температуру дополнительно повышали до приблизительно 100105°С, и по меньшей мере еще через 3 часа при этой температуре реакция на (R)-3-(6-(4метилфенил)пиридин-3 -илокси)-1 -азабицикло [2.2.2] октан была завершена.
К реакционной смеси добавляли воду (150 г) при 60-25°С, и температуру постепенно снижали приблизительно до 20°С приблизительно за 60 мин, и добавляли дополнительную воду (210 г). По меньшей мере еще через дополнительных 2 часа при этой температуре мелкие твердые вещества собирали фильтрацией, промывали последовательно DMSO/водой (приблизительно 322 г; смесь 2:1), водой (500 г) и водой/этанолом (приблизительно 500 г; смесь 9:1) и сушили при 60°С под пониженным давлением для выхода Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (56,3 г, 63% теории).
Пример B2. Образование формы в виде фумарата.
К прозрачному раствору Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (39,6 г; 0,135 моль) и фумаровой кислоты (16,4 г, 0,141 моль) в этаноле (330 г)/воде (21 г) при 65°С добавляли трет-бутилметилэфир (142,5 г) и реакционную смесь охлаждали до 23°С приблизительно за 60 мин.
Дополнительно добавляли трет-бутилметилэфир (170,6 г). По меньшей мере еще через 2 ч твердые вещества собирали фильтрацией, промывали этанолом/трет-бутилметилэфиром (153 г; смесь 1:1) и сушили при 55-60°С под пониженным давлением для выхода гидрофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (43,8 г, 79% теории).
Пример C. Получение Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в свободной форме и в форме фумарата.
Пример C1. Образование свободной формы.
В атмосфере азота к 3R-хинуклидинолу (41,4 г, 0,325 моль) в DMSO (320 г) добавляли раствор 5хлор-2-(4-метилфенил)пиридин (51 г, 0,250 моль) в толуоле (201 г). Температуру постепенно повышали приблизительно до 100-105°С при удалении остаточной воды, если она имелась, кипячением в сосуде с обратным холодильником под пониженным давлением у водной ловушки в течение примерно 45 мин. В течение периода приблизительно 90 мин непрерывно добавляли приблизительно 20% раствор в THF трет-бутоксида калия (158,8 г, 0,283 моль) при постоянной отгонке растворителя THF. Еще через 2-5 ч приблизительно при 100-105°С реакция на Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октан была завершена.
Воду (293 г) добавляли к реакционной смеси при 60-25°С. Слои разделяли и толуоловый слой промывали водой (2x42 г). Раствор толуола сушили примерно при 60°С кипячением в сосуде с обратным холодильником под пониженным давлением у водной ловушки в течение примерно 45-60 мин.
Пример C2. Образование формы в виде фумарата.
К раствору толуола примера C1 примерно при 50-55°С постепенно добавляли кашицеобразную суспензию фумаровой кислоты (26,1 г, 0,9 экв.) в 94% EtOH (22 г) и толуол (97 г).
Дополнительное количество толуола (97 г) добавляли для споласкивания и еще через примерно 3060 мин при 55°С температуру постепенно снижали приблизительно до 20°С приблизительно за 120-180 мин. По меньшей мере еще через 1 ч твердые вещества собирали фильтрацией, промывали насыщенным водным раствором толуола (2x104 г) и сушили при 60°С под пониженным давлением для выхода гидрофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (84,8 г; 82% теории, на основании количества 5-хлор-2-(4-метилфенил)пиридина, использованного в примере C1).
Пример D. Получение монофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в кристаллической форме.
500 мг Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в форме свободного основания суспендировали в 20 мл изопропилового спирта. Добавляли стехиометрическое количество фумаровой кислоты. Полученный раствор перемешивали при окружающей температуре в течение 14 ч. Осадок собирали фильтрацией.
Пример D1. Получение монофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в кристаллической форме затравочной кристаллизацией.
- 39 034964
7,3 г монофумарата (К)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (чистота >98%; полученного, как описано, например, в примере С2) растворяли в этаноле (42,9 г)/изопропаноле (8,5 г)/воде (7,2 г) примерно при 50°С, просветляли фильтрацией и постепенно добавляли при этой температуре в течение периода примерно 8 ч к фильтрованному трет-бутилметилэфиру (118,4 г) при температуре примерно 50°С. После добавления примерно 25% фильтрата добавляли обработанную ультразвуком суспензию затравочных кристаллов монофумарата (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1азабицикло[2.2.2]октана (6 мг, полученного, например, как описано в примере C2) в изопропаноле (0,1 мл) для индукции кристаллизации. Суспензию продукта поддерживали в течение еще 1 ч при 50°С и охлаждали до 0°С в пределах 8 ч. Еще через 1 ч при этой температуре твердые вещества выделяли фильтрацией, промывали изопропанолом/трет-бутилметилэфиром (40 мл, смесь 1:1) и сушили примерно при 50°С под пониженным для выхода монофумарата (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (5,85 г; 81% теории; чистота >99,5%).
Пример E. Твердые капсулы.
Твердые желатиновые капсулы, каждая из которых содержит в качестве активного ингредиента 0,5, 5 или 25 мг монофумарата (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана, могут быть получены следующим образом:___________________________________________
Ингредиент для | %(масс./ | %(масс./ | %(масс./ |
заполнения капсул | масс.) для | масс.) для | масс.) для |
капсул по | капсул по 5 | капсул по 25 | |
0,5 мг | мг | мг | |
Монофумарат (R)-3- | 0,46 | 4, 65 | 23,23 |
(6- (4- | |||
метилфенил)пиридин- | |||
3-илокси)-1- | |||
азабицикло[2.2.2] | |||
октана | |||
Моногидрат лактозы | 65, 24 | 61,05 | 42,47 |
Микрокристаллическая | 25, 00 | 25, 00 | 25, 00 |
целлюлоза | |||
Гипромеллоза | 2,50 | 2,50 | 2,50 |
Кроскармеллоза | 6, 00 | 6, 00 | 6, 00 |
натрия | |||
Коллоидный диоксид | 0,30 | 0,30 | 0,30 |
кремния | |||
Стеарат магния | 0,50 | 0,50 | 0,50 |
Очищенная вода* | Сколько | Сколько | Сколько |
требуется | требуется | требуется |
*удаляется во время переработки.
Способ получения. Монофумарат (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана, моногидрат лактозы, микрокристаллическую целлюлозу, порцию кроскармеллозы натрия и гипромеллозу в сухой форме смешивали в резервуаре мешалки с высоким усилием сдвига и добавляли гранулирующую жидкость (очищенную воду). После завершения гранулирования влажные гранулы сушили в сушилке с псевдосжиженным слоем и сухие гранулы подвергали помолу. Остающиеся кроскармеллозу натрия и коллоидный диоксид кремния пропускали через подходящее сито и добавляли к сушеному гранулярному материалу и смешивали в подходящем смешивающем барабане. Это было достигнуто совместным просеиванием кроскармеллозы натрия и коллоидного диоксида кремния с порцией молотых гранул через подходящее сито в смешивающий барабан. Аналогичным образом добавляли требуемое количество просеянного стеарата магния к основному количеству гранул и затем смешивали в том же смешивающем барабане. Эту конечную смесь инкапсулировали в капсулы, используя автоматизированное оборудование. Массовое отношение заполняющего материала к оболочкам пустых капсул составило 2:1.
Пример F. Таблетки.
Пример F1. Таблетка с пленочным покрытием.
Покрытые пленкой таблетки, содержащие, например, 0,5 мг монофумарата (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана могут быть получены следующим образом.
Получение премикса.
- 40 034964
Отвесить монофумарат (К)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (например, приблизительно 0,7%) и маисовый крахмал (например, приблизительно 13%), смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений), пропустить через сито с размером отверстий приблизительно 0,25-1,0 мм. Смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений).
Получение конечной смеси.
К указанному выше премиксу добавить микрокристаллическую целлюлозу (например, приблизительно 25%), распылить лактозу (например, приблизительно 68%), кабоксиметилцеллюлозу натрия XL (например, приблизительно 2%) и Аэросил (например, приблизительно 0,5%) и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений). Пропустить через сито с размером отверстий приблизительно 0,25-1,0 мм и снова смешать (приблизительно 100-300 вращений).
Добавить стеарилфумарат натрия (например, приблизительно 1,5%) через ручное сито с размером пор приблизительно 0,5-1,0 мм и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 30-150 вращений).
Прессование.
На роторном прессе спрессовать указанную выше конечную смесь в сердцевины массой приблизительно 100 мг, используя специфический для дозировки инструментарий (например, приблизительно диаметром 6 мм, круглые, двояковыпуклые).
Покрытие.
Получить суспензию в воде с основными премиксами покрытия черного, красного, желтого и/или белого цвета. Покрыть указанные выше сердцевины в перфорированном барабане для нанесения покрытия и высушить.
Пример F2. Таблетка, покрытая двухслойной пленкой.
Таблетки, покрытые двухслойной пленкой, содержащие, например, 2,5 мг монофумарата (R)-3-(6-(4метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана, могут быть получены следующим образом.
Конечная активная смесь.
Отвесить монофумарат Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (например, приблизительно 15,5%), микрокристаллическую целлюлозу (например, приблизительно 25%), распылить лактозу (например, приблизительно 53%), карбоксиметилцеллюлозу натрия XL (например, приблизительно 3%) и Аэросил (например, приблизительно 0,5%) и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений). Пропустить эту смесь через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова смешать (приблизительно 100-300 вращений).
Добавить стеарилфумарат Na (например, приблизительно 3%) через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 30-150 вращений).
Конечная смесь плацебо.
Отвесить микрокристаллическую целлюлозу (например, приблизительно 26%), распылить лактозу (например, приблизительно 69%), карбоксиметилцеллюлозу натрия XL (например, приблизительно 1,9%) и Аэросил (например, приблизительно 0,5%) и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений). Пропустить эту смесь через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова смешать (приблизительно 100-300 вращений). Добавить стеарилфумарат натрия (например, приблизительно 3%) через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 30-150 вращений).
Прессование.
На роторном прессе спрессовать указанные выше конечные смеси в двухслойную сердцевину таблетки массой приблизительно 100 мг с одним слоем плацебо (приблизительно 77,5 мг) и одним активным слоем (приблизительно 22,5 мг), используя специфический для дозировки инструментарий (например, диаметром приблизительно 6 мм, круглые, двояковыпуклые).
Покрытие.
Получить суспензию в воде с основными премиксами покрытия черного, красного, желтого и/или белого цвета. Покрыть указанные выше сердцевины в перфорированном барабане для нанесения покрытия и высушить.
Пример F3. Таблетка с пленочным покрытием.
Покрытые пленкой таблетки, содержащие, например, 50 мг монофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана могут быть получены следующим образом.
Конечная смесь.
Отвесить монофумарат Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (например, приблизительно 15,5%), микрокристаллическую целлюлозу (например, приблизительно 25%), распылить лактозу (например, приблизительно 53%), карбоксиметилцеллюлозу натрия XL (например, приблизительно 3%) и Аэросил (например, приблизительно 0,5%) и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений). Пропустить эту смесь через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова смешать (приблизительно 100-300 вращений).
Добавить стеарилфумарат натрия (например, приблизительно 3%) через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 30-150 вращений).
Прессование.
- 41 034964
Спрессовать указанные выше конечные смеси в сердцевины на роторном прессе, используя специфический для дозировки инструментарий (например, диаметром приблизительно 5,9 мм, круглые, двояковыпуклые).
Покрытие.
Получить суспензию в воде с основными премиксами покрытия черного, красного, желтого и/или белого цвета. Покрыть указанные выше сердцевины в перфорированном барабане для нанесения покрытия и высушить.
Ссылки
1. Chini В, Raimond Е, Elgoyhen АВ, Moralli D, Balzaretti М, Heinemann S (1994). Molecular cloning and chromosomal localization of the human alpha 7-nicotinic receptor subunit gene (CHRNA7). Genomics 19: 379-381.
2. Freedman R, Hall M, Adler LE, Leonard S (1995). - Evidence in postmortem brain tissue for decreased numbers of hippocampal nicotinic receptors in schizophrenia. Biological.Psychiatry 38: 22-33.
3. Freedman R, Coon H, Myles-Worsley M, Orr-Urtreger A, Olincy A, Davis A, Polymeropoulos M, Holik J, Hopkins J, Hoff M, Rosenthal J, Waldo MC, Reimherr F, Wender P, Yaw J, Young DA, Breese CR, Adams C, Patterson D, Adler LE, Kruglyak L, Leonard S, Byerley W (1997). - Linkage of a neurophysiological deficit in schizophrenia to a chromosome 15 locus. - Proceedingsof the National Academy of Sciences of the United States of America. 94: 587-592.
4. Goldberg ТЕ, Goldman RS, Burdick KE, Malhotra AK, Lencz T, Patel RC, Woerner MG, Schooler NR, Kane JM, Robinson DG (2007). - Cognitive improvement after treatment with second-generation antipsychotic medications in first-episode schizophrenia: is it a practice effect? - Archives of General Psychiatry 64: 1115-1122.
5. Green MF (1996). - What are the functional consequences of neurocognitive deficits in schizophrenia?. American Journal of Psychiatry 153: 321-330.
6. Green MF (2007). - Cognition, drug treatment, and functional outcome in schizophrenia: a tale of two transitions. American Journal of Psychiatry 164: 992-994.
7. Harvey PD, Green MF, Keefe RS, Velligan DI (2004). - Cognitive functioning in schizophrenia: a consensus statement on its role in the definition and evaluation of effective treatments for the illness. Journal of Clinical Psychiatry 65: 361-372.
8. Keefe RS, Bilder RM, Davis SM, Harvey PD, Palmer BW, Gold JM, Meltzer HY, Green MF, Capuano G, Stroup TS, McEvoy JP, Swartz MS, Rosenheck RA, Perkins DO, Davis CE, Hsiao JK, Lieberman JA, CATIE I, - Neurocognitive Working Group (2007). Neurocognitive effects of antipsychotic medications in patients with chronic schizophrenia in the CATIE Trial. - Archives of General Psychiatry 64: 633-647.
9. Leonard S, Gault J, Hopkins J, Logel J, Vianzon R, Short M, Drebing C, Berger R, Venn D, Sirota P, Zerbe G, Olincy A, Ross RG, Adler LE, Freedman R (2002). Association of promoter variants in the alpha? nicotinic acetylcholine receptor subunit qene with an inhibitory deficit found in schizophrenia. Archives of General Psychiatry 59: 1085-1096.
- 42 034964 <110> Новартис АГ
Список последовательностей <120> Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых
ацетилхолиновых | рецепторов | |
<130> | VAND-0146-EA | |
<140> | EA 201490832 | |
<141> | 2014-05-19 | |
<150> | PCT/IB2012/055692 | |
<151> | 2012-10-18 | |
<150> | US 61/549,319 | |
<151> | 2011-10-20 | |
<160> | 40 | |
<170> | Patentin версии | 3.5 |
<210> | 1 | |
<211> | 52 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Homo sapiens | |
<400> | 1 |
cgggagctgt ggcgcggagc ggcccctctg ctgcgtctgc cctcgttttg tc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> cgggagctgt ggcgcggagc ggccccgctg ctgcgtctgc cctcgttttg tc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> gtaactgtct gatggcaggt ttgctgctgg gagagtagag aagaggtttg gg
<210> | 4 |
<211> | 52 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 4 |
gtaactgtct gatggcaggt ttgctgttgg gagagtagag aagaggtttg gg
<210> | 5 |
<211> | 73 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 5 |
gaagctcccg gcgcctagcc ccgcccctat ttccctctgg ccccgcccaa tcctcgcctt 60 gttccttttg gcc
- 43 034964
<210> | 6 |
<211> | 51 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 6 |
gaagctcccg gcgcctagcc | ccgcccaatc | ctcgccttgt | tccttttggc | c | 51 | |
<210> | Ί | |||||
<211> | 52 | |||||
<212> | ДНК | |||||
<213> | Homo sapiens | |||||
<400> | Ί | |||||
ttgtctcacg actcacactc | agtgctccat | tccccaagag | ttcgcgttcc | cc | 52 | |
<210> | 8 | |||||
<211> | 52 | |||||
<212> | ДНК | |||||
<213> | Homo sapiens | |||||
<400> | 8 | |||||
ttgtctcacg actcacactc | agtgctgcat | tccccaagag | ttcgcgttcc | cc | 52 | |
<210> | 9 | |||||
<211> | 52 | |||||
<212> | ДНК | |||||
<213> | Homo sapiens | |||||
<400> | 9 | |||||
acagctcccg ccgggacagc | agcctcagcc tagcagcttc | tggcgggctc | gg | 52 | ||
<210> | 10 | |||||
<211> | 52 | |||||
<212> | ДНК | |||||
<213> | Homo sapiens | |||||
<400> | 10 | |||||
acagctcccg ccgggacagc | agcctctgcc | tagcagcttc | tggcgggctc | gg | 52 | |
<210> | 11 | |||||
<211> | 52 | |||||
<212> | ДНК | |||||
<213> | Homo sapiens | |||||
<400> | 11 | |||||
ggagcttcca catgcgtccc | gagcccgcca | gaagctgcta | ggctgaggct | gc | 52 | |
<210> | 12 | |||||
<211> | 52 | |||||
<212> | ДНК | |||||
<213> | Homo sapiens | |||||
<400> | 12 | |||||
ggagcttcca catgcgtccc | gagcccacca | gaagctgcta | ggctgaggct | gc | 52 |
<210> 13 <211> 52 <212> ДНК
- 44 034964 cggagcggcc <213> Homo sapiens <400> 13 ctgctaggct gaggctgctg tcccggcggg agctgtggcg <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> ctgctaggct gaggctgctg tcccggtggg agctgtggcg cggagcggcc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> ggaacaaggc gaggattggg cggggccaga gggaaatagg ggcggggcta ggcgccggga gcttccacat gcg
<210> | 16 |
<211> | 51 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 16 |
ggaacaaggc gaggattggg cggggctagg cgccgggagc ttccacatgc <210>
<211>
<212>
<213>
122
ДНК
Homo sapiens <400> gcggggctat gaatagaccg gactgggcca aaaggaacaa ggcgaggatt gggcggggcc agagggaaat aggggcgggg ctaggcgccg ggagcttcca catgcgtccc gagcccgcca
120 ga
122 <210>
<211>
<212>
<213>
110
ДНК
Homo sapiens <400> gcggggctat gaatagaccg gactgggcca aaaggaacaa ggcgaggatt gggcggggcc agagggaaat aggcgccggg agcttccaca tgcgtcccga gcccgccaga no <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> ggggatcgga ggcggggcta tgaatagacc ggactgggcc aaaaggaaca ag
- 45 034964 aaaaggaaca ag <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> ggggatcgga ggcggggcta tgaatatacc ggactgggcc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> gacagggttg gaccagaggc ggggcgaggt ggggaaaggg ttggtgggga tc
<210> | 22 |
<211> | 52 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 22 |
gacagggttg gaccagaggc ggggcggggt ggggaaaggg ttggtgggga tc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> tgttatctta aggtgtgcag tgactaggcc aaggacatcc ggtggttaga ga <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> tgttatctta aggtgtgcag tgactatgcc aaggacatcc ggtggttaga ga
<210> | 25 |
<211> | 101 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 25 |
gcttcccctt ttggtgctga gcacagagca gacatcaatg aatagctgtt atcttaaggt gtgcagtgac taggccaagg acatccggtg gttagagaag
101
<210> | 26 |
<211> | 101 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 26 |
gcttcccctt ttggtgctga gcacagagca gacatcaatg aatagctgtt ttcttaaggt gtgcagtgac taggccaagg acatccggtg gttagagaag
101 <210> 27
- 46 034964 <211> 52 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 27 agcacagagc agacatcaat gaatagctgt tatcttaagg tgtgcagtga ct 52
<210> | 28 |
<211> | 52 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 28 |
agcacagagc agacatcaat gaatagttgt tatcttaagg tgtgcagtga ct 52 <210> 29 <211> 101 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 29 ataaagcgtt ctgtgaagag tcagcggctc cctctgccac tgaagtttaa agataattcg 60 cctgaatccc ttcagccaaa tgaagctttc taattatgga c 101
<210> | 30 |
<211> | 101 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 30 |
ataaagcgtt ctgtgaagag tcagcggctc cctctgccac tgaagtttaa ggataattcg 60 cctgaatccc ttcagccaaa tgaagctttc taattatgga c 101 <210> 31 <211> 101 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 31 cttcactgaa ttttgctgtt tagattcttt gcaaccaggt ttagtttttc acagatttac 60 tagtctggag ggtggagtga aatttttgct cacaatgagt c 101 <210> 32 <211> 101 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 32 cttcactgaa ttttgctgtt tagattcttt gcaaccaggt ttagtttttc ccagatttac 60 tagtctggag ggtggagtga aatttttgct cacaatgagt c 101 <210> 33 <211> 52 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 33 tggctccatt ggatgtaatt tacattcttc cagctgtatt tggacctaag aa 52
- 47 034964
<210> | 34 |
<211> | 52 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 34 |
tggctccatt ggatgtaatt tacatttttc cagctgtatt tggacctaag aa 52 <210> 35 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 35 ccccaggcta caaacacgac a 21 <210> 36 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 36 ccccaggcta taaacacgac a 21 <210> 37 <211> 21 <212> ДНК
<213> Homo sapiens | |
<400> 37 agctgcgctc gattctattc g | 21 |
<210> | 38 |
<211> | 21 |
<212> | ДНК |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 38 |
agctgcgctc aattctattc g 21 <210> 39 <211> 29750 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 39 acatgcgtcc cgagcccgcc agaagctgct aggctgaggc tgctgtcccg gcgggagctg60 tggcgcggag cggcccctct gctgcgtctg ccctcgtttt gtctcacgac tcacactcag120 tgctccattc cccaagagtt cgcgttcccc gcgcggcggt cgagaggcgg ctgcccgcgg180 tcccgcgcgg gcgcggggcg atggcggcgc gggggtcagg gccccgcgcg ctccgcctgc240 tgctcttggt ccagctggtc gcggggcgct gcggtctagc gggcgcggcg ggcggcgcgc300 agagaggtaa gcccgggctg cagaggggcg gggcgggagc tggcccggac tccacatcgc360 ggtgcccagg aagccgccag gcgacggccg ccggaaaacc tggttgcgag gggaggtggg420 tttttttctc ctgggggctt ggagtgaggt ttcagtttaa atgtccagat ttgctcattt480
- 48 034964
aaatgcagag | aaagggctac | ttgggtgggt | tttctttgtt | gttccacgac | ctgcatcgct | 540 |
ggagactacg | aggctggctt | agcgtatact | tccacacaac | tttttcagta | aaagatgcca | 600 |
ctcttgtcca | gcagggcttt | cctgtcctgg | tggcagccaa | gcttcccatt | ttgttgccca | 660 |
tttacgggat | atagagactc | tggggttcat | tctaggggtt | gggacttatc | ttccacctcc | 720 |
tgcccgccgc | ctcttcctcc | atccctgtcc | cctacccacc | gcagcatttg | aaaacctttc | 780 |
ctttcgccgg | agatgaaagg | tgtgtgttgt | agcaggctag | gcggccaact | tccctggctt | 840 |
cggggctaat | cgtttgcatc | cagagttcct | cactagctcc | ttagagcaca | gcttttttca | 900 |
gcctgctgtt | tttcaagagg | ttttggacag | gaatggaaac | aacaaaagaa | atcgcgtagt | 960 |
cctacatgtt | tcaagtgctt | gggaaagttt | tagagtcagt | tctctcaata | ccttgaagaa | 1020 |
aaacacgttt | gtggagcagc | tatggtgtga | tctaaacgta | gaaaagctaa | gcatccgtta | 1080 |
agcaagatat | gattacagaa | gttcactacg | tctgtatttc | aggttttatg | agtgagtttc | 1140 |
ttaaatagtg | gaaatattgc | aagaaccttt | tcttgccttt | cctttgttaa | ggtttttaat | 1200 |
ctatggctcc | tgattttagg | aagtaataag | actagaataa | ttcattgcag | gatgtattgc | 1260 |
ttagtgtaga | ccgaagagaa | ataagatgga | gggtgattta | aacaaatgaa | gaaaatcctg | 1320 |
ggcagagaga | gttaaacaga | aagaaaggaa | tgtgattttg | gagccaggca | aacctgtatt | 1380 |
caaattatgg | ctctggtgca | tcctgactgg | acgaacttct | ctcagctgtt | ttccttcttt | 1440 |
aagaaatggc | gggccgggcg | cggtggctca | cgcctgtaat | cccagcactt | tgggaggccg | 1500 |
aggcgggcag | atcacgaggt | caggagatcg | agaccatcct | ggctaacaca | gtgaaacccc | 1560 |
gtctctacta | aaaatacaaa | aaaattagcc | gggcgtggtg | gtgcgcgcct | gtagtcccag | 1620 |
ctactcggga | ggctgaggca | ggagaatgac | gtgaacccga | gaggcggagg | ttacagtgag | 1680 |
ccgagatcgc | gccactgcac | tccagcctgg | gcaacacagc | gagactccgt | ctcaaaaaaa | 1740 |
aaaaaaaaga | aaagaaaaga | aatgggggta | ataatcatgc | ttacctctca | gagttctttt | 1800 |
gaggattaaa | taatgcatat | aaaatgccag | gcacagtgcc | tgacactcga | gaaaatggta | 1860 |
gttctctacc | ccttttgatg | aaactgaact | ttaaaaatct | gtttcatgtc | ttttaatata | 1920 |
gaacactgta | gccaagcatt | aaatagtgta | aatagctatc | tcccttcatg | catggtgttc | 1980 |
agtgttataa | caaagtgaaa | tcgattagtt | cctgctttct | gccccactta | gttaatatct | 2040 |
ctctcataat | aaccatctgg | ttctattgca | cttctgtttc | ctcctgcttc | cacgtaagct | 2100 |
ccttaagaac | tgtgattctt | gtttatcttt | gtatcgccaa | cacctgcctt | aatgtaggag | 2160 |
cccagtgaag | gtttgcggaa | ggaaggagtg | gaacagtatt | acctctctgg | atattagttt | 2220 |
ctccatctgg | atggtgaggg | gccattaaag | gatccccctt | ccaccttgaa | aattataaga | 2280 |
ttctgtgtgc | tcttagaagt | gatcatcttg | aagaacaaag | tgatactgaa | tggatgatgt | 2340 |
aattgcacac | ttgctcttaa | ctgttaatat | gcatttgtgt | acaactgtcg | ttccatgtgg | 2400 |
gtggctgaaa | gtactgtctg | gaaataggag | acctgccact | cgctgtctgt | gtttccttgg | 2460 |
acgtattact | tgaccttgct | gattctttgt | ttctctctct | ttaaaatgaa | agggcggtag | 2520 |
- 49 034964
tagatgtttt | taagtcaact | ttaagttttt | taagttcaaa | tataattacc | tttattttta | 2580 |
caatttattg | ttttcatatt | cgtcttaggt | tcttaatagt | aacttttccc | tgtggttttc | 2640 |
tgtgagccag | ttcccaggta | aagagaatat | ctagtcagcc | cgcagctatt | atttggctga | 2700 |
tgaacggtca | cagagctgtg | gaaagtggct | caggagacaa | ttaaagtata | atatattaaa | 2760 |
gtataatgaa | ctagtacatc | aagataatac | aagcatttta | aactgacctg | tgattgggac | 2820 |
agtgattatg | gaagttagat | agtcattaac | tacctaacta | gttatatttc | ttactatttc | 2880 |
ttagctatgt | gacattttaa | agccaatggt | tatatttctt | agctgtgtga | cattttattt | 2940 |
ttttaatttt | ttttttaaaa | tattacttta | agttctggga | tacatgtgca | gaacctgcag | 3000 |
gtttgttaca | taggtataca | tgtgccatgg | tggtttgcta | cacctatcaa | cctgtcatct | 3060 |
aggttttaag | ccccacatgc | attaggtatt | tgtcctaatg | ctctccctcc | ccttgccccc | 3120 |
aacctcccga | cagaccctga | tgtgtgatgt | tcccctccct | gtgtccatgg | attctcattg | 3180 |
ttcaactccc | acttatgaaa | gagaacatgc | ggtgtttggt | gtctgttcct | gtgttagttt | 3240 |
gctgagcatg | atggtttcca | gcttcatcca | tgtccctgca | aaggacatga | actcattctt | 3300 |
ttttatggct | gcacgctatg | tgacatttta | aatggctgaa | ccttaatttt | aattactata | 3360 |
tgtagtggct | gaaaatgaaa | taggaaaatg | aaataattca | tagaaaatga | gagctatgaa | 3420 |
agattttttt | cttctcatct | ttagtcattt | tcattaacat | tttcagaagc | taacagaaat | 3480 |
acacacatac | tgactgtcag | ttttactttt | gttatatata | tgtccttacg | taaactttat | 3540 |
acacaattta | atttgcaatt | taaaattatt | ttgatttcca | agaaatacta | aatatgtgaa | 3600 |
ctagactgag | cagctggagg | gtaggatttc | atttgtctgt | gtatttcctg | atacactgca | 3660 |
gatatacctg | catttattaa | tgtagcctat | ggattgaact | ctgagctttt | tttcaaccta | 3720 |
taatctacaa | atgagatcta | gcaagtaatt | ttttataatt | aggatatgaa | gttttagttc | 3780 |
agtaatttca | gtacagaact | ttttcttcta | atagcattat | ttttcttaaa | gcattggaat | 3840 |
taaattatca | gatgatagtt | taagttcact | attaaataag | catgtcgaca | attagagttg | 3900 |
ttaaatattg | gaattttttt | tttttttttt | ttgagacgga | gtcttgcact | gttgcccagg | 3960 |
ttggagtgca | gtggtgcaat | ctcggctcac | tgcaagctct | gcctcccggg | ttcacgccgt | 4020 |
tctcctgcct | cagcctccca | agtagctggg | actacaggca | cccgccacca | cgcctggcta | 4080 |
attttttgta | tttttagtag | agacggggtt | tcaccatgtt | agccaggatg | gtctcgatct | 4140 |
cctgacctca | tgacccgccc | gcctcggcgt | cccaaagtgc | tgggattaca | ggtgtgagcc | 4200 |
accgtgcccg | gcctggaatt | gtttttgaaa | gaagtttaga | atttgtttct | ttaaacatct | 4260 |
gttccacaga | acagcatggg | tatagtgttt | tttttgtttt | tgtttttgtt | ttttttcttg | 4320 |
agacagagtc | tcactctgtc | gcccaggctg | gagtgcagtg | gcatgatctt | gtctcactgc | 4380 |
agcctctgcc | tctgggttca | agtgattctc | ctgcctcagc | ctcccaagta | gctgggatta | 4440 |
caggcatgtg | ccaccatgcc | tggctaattt | ttgtattttt | agtagagatg | gggtttctcc | 4500 |
attttggcca | ggctggtctt | gaaaactcct | gacctcaggt | gatccgcctg | cctcggcctc | 4560 |
- 50 034964
ccaaagtgtt | gggattacag | gcgtgagcca | ccgcgcctgg | cctgggtata | gttttataat | 4620 |
gacaatatga | tagaaaggat | tatttaaaat | catccttttc | tgttctatga | tgaaaaatgt | 4680 |
taatttagat | gttttgttct | cctttgagga | aacatgatat | tgtttgtcct | actgtttatt | 4740 |
tatttattat | ttttattgag | gcagagtctt | gctctgtcac | ctaggctgga | gtgcagtggc | 4800 |
gtgatcttgg | ctcactgaca | cctctggctc | ctgggtccaa | atgattctcg | tgcctcagcc | 4860 |
tcccaagtag | ctgaaattac | aggcatgtgc | caccaatccc | ggctattttt | tttttttttt | 4920 |
tttttttttt | agtaaagaca | gggtttcacc | atgttggcca | ggctggtctt | gaactcctgg | 4980 |
cctcgaatga | tccgcccgcc | ttggcttcgc | aaagtgctgg | gattacaggt | gtgagccacc | 5040 |
acgcccggcc | cctcctactg | tgtttaattc | agtgacttca | tgctcttctc | ttccaaagtg | 5100 |
tgattataaa | atatagcctt | ttaccagtaa | aaataggagt | taaatatgaa | tatttgaatt | 5160 |
ctgacaaaaa | aggtgatatg | aacttttagg | ttttattttt | atctggtttt | attttcattt | 5220 |
ttattttaca | ttcaactgta | tgtatggaat | taggcaaaac | tctttcctct | aggtcaggat | 5280 |
ttctcaacct | ctgaaatttt | gtactgggtt | attctttgtt | gtcagagggg | ggcgtcctgt | 5340 |
gccttgtagg | atgtttagca | gcatactggt | ctctagccat | gagatgccag | tagcacccac | 5400 |
tgaaaaatgt | ctccagacat | tgtcagatgt | gccctggggg | caaaattgtt | cttcacattt | 5460 |
gctacccctt | gagaaccact | tctctaggtc | ttgttgacca | gggcttctga | aacttagatg | 5520 |
tacacaggaa | ttccctcaga | acgcagatgc | tgatccagta | ggtcagaagc | agggcctgag | 5580 |
actctgcatt | tctaacaagc | tcccaggtga | tgtgaatact | gttggtcagt | gtatcacaat | 5640 |
taagtagcaa | ggttgtagaa | aagtccacat | tcataccaac | tgggtgaact | ctcaagggaa | 5700 |
gccgatgaaa | gtaattatgg | aaatagtgaa | tttacaatga | attgtagccc | aaacaatgta | 5760 |
aggctaatag | aagctaagaa | aacaagcatt | atcctgctgt | cctaacaaag | cagctgtctt | 5820 |
cacttttcca | tattttcttc | cagtccttag | tattcattca | taactcgaca | tctctaaggg | 5880 |
ggaaatttgc | aagagtcttt | tcaaggtcat | acaggcaacc | tcatgcacca | ttaggtgttt | 5940 |
tattccataa | tattgtaaat | atactagctc | ataatacata | tttatagcct | gttgagagat | 6000 |
ttatagcccc | aaattaagat | aatgaactct | gcatttactt | gatctgatga | tgctctgcct | 6060 |
tttttttttt | ttttttttga | agtgtacaag | ttgtctcgtc | tcctcgagaa | ctattgactg | 6120 |
cacctaaatt | aataccacct | aaggtcattc | attttcttac | tgcgagtgtt | ctgagagtca | 6180 |
gggtaagata | ttaagtttac | taaggcatag | cagttacagt | gtaactttat | cctataattc | 6240 |
tgtgataaaa | atcaatataa | aatataatga | aaatcctgga | gcgaaaaaaa | tccctctata | 6300 |
ttttatctgt | aatacttaaa | ataatgattg | gtaagcattc | ttgtttgtca | cattgaaaat | 6360 |
gttggatata | atacacattt | tccctcgttt | acaaaatggt | tacgttcact | gctttatctt | 6420 |
gctgttgctt | aaaatagccc | tcctaggact | gctgcaaaga | ggattttttt | ttcaaaagag | 6480 |
tacaagtcac | tttttgctaa | cttataaaaa | gatgcaagga | gacttcaggg | gtagattaac | 6540 |
tgctccagga | atgccttgat | tatgaattgg | ggaggtataa | tatacatcac | tcttcaaatc | 6600 |
- 51 034964
tttttagata | tattatctta | tttccttctt | atggcagcct | gtgaagaaga | aaaggaagat | 6660 |
attggcagca | cctagcaaga | tttaaaatgt | gcgccccctt | gactcagcag | ttttacttct | 6720 |
gagaatcatt | gctatagaaa | tctttgcatc | agtatggaaa | aagagatttg | ttaattacag | 6780 |
cattttttcc | cattgtaaca | ttattagaaa | taaccaaaaa | ctgaagacta | taaatgccaa | 6840 |
tcagtggtga | aaacttaaat | aaagtctaat | gcactcataa | tgatcacttt | gcagcttgtg | 6900 |
aaggaagact | ggagatagtt | ggacatctac | tggtatatag | tttatatagt | tgtgtttttt | 6960 |
attttttatt | ttattttttt | tgagacggag | ttttgctctt | gttgcccagg | ctggagttca | 7020 |
gtggcgtgat | ctcggctcac | tgcaacctct | gcctcccggg | ttcaagtgat | tctcctgcct | 7080 |
cagcctccca | agtagctggg | attacaggca | tgcaccacca | cgcctggcta | attttgtatt | 7140 |
tttagtagag | acggagtttc | tccatgttgg | tcatactggt | ctcgaactcc | cgacctcaag | 7200 |
tgatccccca | cctcagcctc | ccaaagtgct | gggattacag | gcgtgaacca | ccacacctgg | 7260 |
ctggtatata | gtattgaatg | aaaaaaagtt | gcagaactta | gaggaaaaca | tgtttctgtg | 7320 |
tgtgagtgaa | catgcatgta | atttaaaata | tctacacgtc | aaacttaatg | gttacccttg | 7380 |
gaaggaaggc | gaaggagagg | aggagggaga | attcttactc | tttatgagct | tctggatttg | 7440 |
aattttgaca | gtgaccacac | attccttttg | caattatagc | atcattttga | gaaaaaacaa | 7500 |
aataaatctg | ggtcctagtt | ctacttctgc | tgcttattag | ctactagtgt | cacaacagtg | 7560 |
gtttgcaaga | agggtcagtt | ttgctccccc | tcaccaacat | ttggcaatgt | ctggagacat | 7620 |
gattggttgt | catgtggggc | ggtggtatgt | ctagtgggta | gaagccaggg | atgccgctaa | 7680 |
acatacaggg | cacaggacag | ccctccacaa | cagggaattg | tccagcccaa | aatgtccgta | 7740 |
gtgccaagtt | gagaaatcct | gtgttagact | ccagagctgc | agtgctgttg | gaatatgcag | 7800 |
gtgatgcact | gtgcagtggc | aggggcgcca | ttctcactgt | ggggtgtact | ttgcatagcc | 7860 |
atagaattat | aagtatgata | taataaggta | aataaatatg | caagttttta | ccccaggaag | 7920 |
acaggcacca | ggtcttcgtt | ttctgctctc | cctctggcac | ctggcacaga | ggttggcaca | 7980 |
gtaagcagct | agttggcatt | tgttgaatta | acgaattgaa | caagatatca | cgttaggctc | 8040 |
tagtgtggcc | aagttgtagc | agatgctaaa | gatttaagaa | taatttgtgg | cagaaacttt | 8100 |
aaattatagt | taatgtctgt | ttttatctgc | aggttggcaa | aagactgcta | atatccacat | 8160 |
ttagttgctg | aacatgttgg | ttgacttttt | tccaaatcat | taccttttga | taagaaaatc | 8220 |
atgattcttc | atggaaaaat | gccagagcaa | agcactatca | aatgttccta | gaattttttt | 8280 |
tttttttttg | agacggagtt | tcactctgtc | acccagtctg | gagtgcagtg | gcacaatctc | 8340 |
ggctcactgc | aacctccacc | tcccaggttc | aagtgattct | tcttcttctg | cctcagcctc | 8400 |
ctgagtagct | gggactacag | gcgtgcacca | ccacgcctgg | ctaatttttt | tttttttttt | 8460 |
tttttttgta | tttttagtag | agacagggtt | tcaccatgtt | ggccaggatg | gtctcaaact | 8520 |
cctaacctcg | tgatccgccc | acctcggcct | cccaaagtgc | tgggattaca | ggcgtgagcc | 8580 |
accgtgcccg | gcctagaatt | ggttttttaa | atcctcaggg | ggaggccaag | gcgggcggat | 8640 |
- 52 034964 cacctgaggt cgggagttca aaaccagcct gaccaacatg gagaaacccc gtctctacta 8700 aaaatacaaa attatccggg cgtggtggca catgcctgta gtcccagcta ctcaggaggc 8760 tgaggcagga gaattgcttg aacctgggag gtggaggttg cagtgagccg agatcgcacc 8820 aatgcactcc agcctggcca acaggagcta aacgctgtct caaaaaaaaa aaaaaaaaat
8880 cctcaggtat ctttttggct acatactata tttagtgaag aaggtttttt taaaaaaatc 8940 ttaaactacc tagacactac ctaacatagt aagataatgt actttatttc atttgattca 9000 gacgagagtg aagcagctaa gcagaggttc tcctttttat taatgttttt taatggaaaa 9060 ataatgttca caagaatggt ccaaagtaat gaatcaaaaa gtcgttgcca tacccattta 9120 acaattattg acatattgct aacagatatc cttattttat ataggctaga aaattgtggg
9180 ccagacacgg tggctgacac ctgtaatccc agcactttgg gaggccgaga caggtggatt 9240 tcttgagctc aggagttcaa gaccagcctg agcaacatgg caaaaccctg tctctacaaa 9300 aaaattagct gggcatggtg gcgagtgcct gttgtcccag ctactcggga ggttgaggca 9360 ggaggattgc ttgagcacag gagatcgagg ctgcagtgag ccaagatcgt gccactgtac 9420 ttcagcttgg gcgaccaagt gagaccctgt cttaaaaaaa aaaaaaaaag gaaaggaaaa
9480 aaattgtggc ttatggatgg aggttaacag cttattagtg gtgccaagta ttcaaattaa 9540 ggttttcagc tttgcagttc tgtgtccttt ccttttcacc atactaaaac taaggagcaa 9600 ggttacattt ctttgaaaat aaatgtggtt tcaccaaatg atttgactgt gattttttta 9660 aatgtcattc tcccagttcc tcaaacttta ggcaatgaat gatagtaaga gttaaaattg 9720 aatttgtaaa accaaaatgt aaatatataa aagtgttagt gacattactg tatacacatt
9780 tatacctttg ttaggtattc aacttagttt ttctcttagc agctgtactt ttaactactt 9840 tagaagaatt atcccattta attttttutt gttcttatcc tatttttagt gtgcttcact 9900 gcttggtttc ctttgttttt ctgagatatg tggtttatat gctattagca ggttgtatta 9960 taattattat tatttggttt caagaagaga cttgaggaaa gctttatagt gacccattat 10020 tgcactgtgt taagagtgcc caatgccaca agcatattct tcctttgtat ttttgcaaag 10080 ttccattgcc tgggactgtc tggagacagt ctttgttggt ctatcagtta ccattacttt 10140 agcaatcatt tatggaagaa taagaacgac cctgtgctgg cacttatatc tacactgtta 10200 gctaatcctt acaatgacct cataagggag gtactttttt aatacctgtg tcacagatga 10260 agaaaaatca tatccaaagt tgagtaactt atctatcttt ttggttatag ccaatcctat 10320 taggtgtgaa gtgctgtttc attgtggtat tgatttgtgt tttcctgatg gctaaaggtg 10380 ttgagcatct tttcatatgc ttactggcct ttctttggag aaatgtctaa gttaatttag 10440 atctcttgcc catttaaaaa ttggattatt gaatcttttt attattcatt tataatagtt 10500 ctttatagat tttagataca agtcccctat cagatacatg atttgcaaat attttctctg 10560 ggttgtatat ccttttgatg taagggatct tttgaagtca agttttttgt tttgtttgtt 10620 tgtttttttt tttgttgttg tttttgagtt agagtctctc tctgtctccc tgactggagt 10680
- 53 034964
gcagtggcac | agtcttggct | cactgcaacc | tctgcctccc | aggttcaata | gatcctccta | 10740 |
cctcagcctc | cctagtagct | gggaccacag | gcgcgtgcta | cacgcccagc | tcattattgt | 10800 |
gtttttagta | gagacagggt | ttctccatgt | tggccaggct | ggtctcgaac | tcctggcctc | 10860 |
aagtgatcca | tttgcctcgg | cctcccaaag | tgctgggatt | acaggcgtga | gccaccgcgc | 10920 |
ctggcccaag | tcaactattt | ttaagacaag | gaagggaaga | aaaattaaaa | tgtaataatg | 10980 |
taataagtaa | ggccgggcgt | ggtggatctt | gtagcacttt | gggagattaa | ggtgggagga | 11040 |
ttgcttgagc | ccaagagttc | aagaccagcc | tgagctacaa | aaagagaccc | tgtctctaca | 11100 |
aaaaataaat | aaattagctg | ggtgtggtgg | aacgcacctg | tagttccagc | tctgtgggag | 11160 |
cttgagatag | gagggaggct | gaggtgggag | gattgcttga | gtccaggagt | tccaggctgc | 11220 |
agtgagccgt | gatggcgcca | ttgcactcca | gtctgggtga | cagggcgaga | cccagtctca | 11280 |
aaaaaaaaaa | aaaacaaaaa | aagcaattac | tgtcatcagc | ctatatgtag | tgctatagag | 11340 |
atgccaaaaa | agtgttcatt | ttgaatagga | tgagcaaata | ttaactattt | aaaacaactt | 11400 |
ctaaaaagaa | tttttccatt | tgattcagtt | tatttagaat | ttaccttaca | tatagtgtca | 11460 |
gtctttccta | ctggatagta | aatgtcgatg | ttgtctgttt | tgtttaccag | tgtgttccca | 11520 |
gtgcctgtct | gataaatgtt | tgttaaatga | atgaataagt | aaacatcaat | gtgggctaga | 11580 |
gctatcgggg | gtgtggcatt | cattaagtta | atctagaaag | ttgtcacaag | atggaagatg | 11640 |
ttagggtgat | gagagcatga | agccaaggtg | cccctcagag | ccctgcggtt | tatgaactct | 11700 |
gtagcagcaa | cccttctttt | catacgtata | tcctgatttg | taaaatgagg | ggatgcattg | 11760 |
gattgtctcc | tttttaacat | gctgaggttt | gtgaacagtg | gaaacttaaa | acatttacag | 11820 |
ccagctaaaa | aagcatgact | gctaagaaga | atttaagtgc | actatcaagg | ttttatgcta | 11880 |
agataccttt | gacatttgca | ctggacactg | ctgtaaagtg | tcctaagaaa | atggtatttc | 11940 |
tagtatggga | tgtattacga | agatattcac | aaagcagtat | cttgaagatt | ctcattaggt | 12000 |
agaatgttgg | gattactatt | ttatttatac | cctgtctact | ttctttcaaa | gaagatttga | 12060 |
gatagcgact | caagctagtt | tttcccccac | tcaggcaaag | gttcctttag | atgctattga | 12120 |
cagacatttt | aggctgggtg | cagtgactca | cacctgtaat | ctcagcactt | tgggaggcag | 12180 |
aggctagcag | atcgcttgag | ctcaggagtt | caagaccagt | ctgggcaaca | tggtgaaacc | 12240 |
ccatctctac | caaaaataca | aaacattagc | caggtgtggt | gcacgcctgt | ggtcccagtt | 12300 |
actcaggagg | ctgaggtggg | aggatcgctt | gagtccagga | ggttgaggct | gcagtgagcc | 12360 |
aagattgcac | cattgcactc | cagactgagt | gacagagacc | ctgtctcaaa | aaaaaaaaaa | 12420 |
aagacatttt | atttattaat | acttttatct | tttaaccctt | aaatttttgg | tatttcaggg | 12480 |
actataggag | gattagaaga | ggagaaatgg | ttcaataatg | ctattttaac | ttgaagctct | 12540 |
aaaattaatg | gcttttaaac | attaagaatg | actctagtgt | ataattttct | aaattaatct | 12600 |
aaatatcttc | aatgctgtgc | atttcagcat | aaggtgactt | ttacaggcgt | caccacacaa | 12660 |
actccatagt | atttgtagat | taaactaagt | atcttaaact | agttactgcc | tggcgcagtg | 12720 |
- 54 034964
gctcacgcct | gtaatcccag | cactttggga | ggccgaggcg | ggtggatcac | ctaaggtcag | 12780 |
gagttcaaga | ccagcctgac | cagtagggtg | aaaccccatc | tctactaaaa | atacaaaaat | 12840 |
tagccaggcg | tggtggcgtg | tgcctgtggt | ccctgctgtt | cgggaggctg | agacagagaa | 12900 |
tcacttgaac | ctgggaggtg | gaggttgcag | tgagccgaga | tcacaccact | gcactccagc | 12960 |
ctgggtgaca | gagtgagact | ccgtctcaag | ataaataaat | aaaaaataaa | taatttttta | 13020 |
aaattaaact | agttattcag | ggaagcagga | cacaaactct | tgaggagtag | gttatttatg | 13080 |
aaaaagagaa | ccaggaaata | ggtttcctcc | agctagagta | cctggatatt | ctttcatatc | 13140 |
tctgtatgga | aaacatggtc | tatcatcata | aagagaagat | tttgtgaaag | tgctaatttc | 13200 |
tctccaacca | tttcttttag | gttggagaag | aacaatcact | tgctactgta | atccttatgt | 13260 |
gtatatttgc | tgattaataa | gccagtgaca | tttttgtttc | aagtaaaagt | ggttttttcg | 13320 |
taatatcatt | agtcttaagt | aaaagtcatg | cttgaatttt | tatacatttc | acatttcctt | 13380 |
aagtgatccc | aggccagaca | acagtgaaaa | ctcatttctt | cagagatgct | tatttgagct | 13440 |
ctgtagtagc | ataagcataa | ctgtgatccc | caaatctaac | cagtctttgg | ccatagtatc | 13500 |
caaaacattt | tatattttga | cttttttttt | ttttttaaca | acttaggtcc | ttaaatagat | 13560 |
ttttttgaag | aaacaagttt | ctttttagta | tatttaatgg | cacatgtttc | ctgatttttg | 13620 |
aacgggaatt | cctcatcttc | attttacatt | gggccctgtg | aattatttag | ccaaccatgt | 13680 |
tcacattctc | acatatacat | acatttattt | atttattatt | tgtttgtttg | tttgtttgtt | 13740 |
tgtttgtttt | ttgagacaga | gtctcgctct | gttggccacg | ctggagtgca | gtggcacaat | 13800 |
ctcggctcac | tgcaacctct | gtctcccggg | ctcaagcagt | tctcctgcct | cagcctccca | 13860 |
agtagctggg | attacaggcg | tgtgccacca | tgcctgacta | atttttgtat | tttttgtaga | 13920 |
gacagggttt | caccatgttg | gccaggttcg | tctcgaactc | cttacctcag | gtaatctgtc | 13980 |
cgcctcagct | tcccaaagtg | ctgggattac | agacgtgagc | caccgcctat | ttattttttt | 14040 |
tactgatctt | gaaataaacc | tttcttgatt | ctttatcctc | agtatcccta | tatcagcata | 14100 |
acttttggaa | agagatcatt | cctgtctttg | cactctgtct | taaacatact | gcagttcatc | 14160 |
tctcttctct | tcccatagat | ggcttttgtt | agattcacca | ttgacctcac | tgttgctaat | 14220 |
ccaacactca | gttctcagct | gcctctccat | gtctcatgag | tagcatcagt | agattgggag | 14280 |
gctcaaccct | tcttgctgca | ttttcttcat | ttagcttcca | ggacagcatg | ctatctgcta | 14340 |
tcttcgagtt | cttccttcct | tattccctaa | aaagcagttt | tatacaaatg | tatagtttta | 14400 |
tacaaatata | gtagcaaagt | atgtcaaagc | taaatcaatc | attcaatatt | tatatatttt | 14460 |
catattaaga | ttatgacagg | ccaggcacag | tggctcacag | ctgtgatccc | agcactatgg | 14520 |
gaggctgagg | cgggcagatt | gctgaaggtc | agaagttcaa | gaccagtctg | gccaacatgg | 14580 |
tggaaccccg | tctctactaa | aaatacaaaa | attagccagg | cgtggtggtg | gatacctgta | 14640 |
gtctcagcta | ctcgggaggc | tgaggtggag | aattgcttga | atcccagtgg | cagaggttgc | 14700 |
aatgagccga | gattgcacca | ctgcacttcc | agcctgggag | accaggcagg | actccgtctc | 14760 |
- 55 034964
аааааааааа | аааааааааа | aaagattatg | caaattaaag | caattttaac | atttataatt | 14820 |
gataaatgag | ctttgcttta | gtatatctgt | tttctaggtt | tggaatttca | agataactcc | 14880 |
tgccaccctg | gcaatttaaa | agcttttatt | atttagattt | gaaactattc | tgtattgagt | 14940 |
actgagtgtt | tcttaaggag | ctcagcatat | tccaatagtc | agtctgattt | aactgagacg | 15000 |
tatctgaacc | agagtgtccc | ttattctatc | agaaatactt | acattaatat | ttcattttaa | 15060 |
aagctgcatt | aataatagcc | taaattgtag | tttggttcat | taataatctg | aacttttttt | 15120 |
ttcctttttt | tttttgagac | agagtctctc | tccatggccc | aggttggagt | gcagtggccc | 15180 |
gatcttggct | cactgcaacc | tttgcctcct | gggtttgaac | ttttguttga | aagtacaggt | 15240 |
atctggtggg | agagaagcga | gtacattaac | ttttaaaaat | ttgttataca | ggattatctg | 15300 |
aaccttcttc | tattgcaaaa | catgaagata | gtttgcttaa | ggatttattt | caagactacg | 15360 |
aaagatgggt | tcgtcctgtg | gaacacctga | atgacaaaat | aaaaataaaa | tttggacttg | 15420 |
caatatctca | attggtggat | gtggtaggtg | tgcatatcct | tctatagtca | atttcccaca | 15480 |
gatttagtga | gagcctggtg | tgtgcccagg | cactgtgcta | ggcaccaagg | attacaaagg | 15540 |
tgattgaagc | agtcctttgc | ctgaaggaac | tcaccaggga | aaagtagtga | ttgtgtcaca | 15600 |
tacatgataa | cacactgtgt | ttatatattt | tatagtttag | aaactgttta | tctcaatttg | 15660 |
gtaattataa | gtctatcttt | aacaaattca | aagatctaaa | acattgtgta | ttccttaaat | 15720 |
gtgttaaaaa | tagtttcaaa | aagttagctt | gaaaggaggg | aaaagaaaat | aaatttttaa | 15780 |
gtttaagaga | aaaagtccaa | aaatagagtg | atagattctt | aggaactaaa | agtatcacaa | 15840 |
gagatcatta | tcttgggctc | acacttaaaa | catttcagaa | atttttctat | atgacgttca | 15900 |
ttagtagaat | aagttccctt | gataaattgt | acttattgtc | aagagatcct | atctatttaa | 15960 |
actaaaacat | tcatgctaat | ttttaaacta | gtttcttctt | gttctgaaca | tgtaaatcaa | 16020 |
taattatttc | cctgttgtgt | tcccaaaata | accaagtata | tgtatattta | tatatatgta | 16080 |
tgttttaaaa | taacatttat | agatgtgctt | tatgttctga | ttacagaagc | aatgcgtgat | 16140 |
ttttgtagag | aatttggaaa | gtgcaaaaaa | tacaaatgag | aaaataaaaa | gtgactgtaa | 16200 |
ttctactacc | cggagatgac | taatgttaat | aattagttgt | gtttcttgcc | agtctgtctt | 16260 |
tgtgtatatg | ttacaaaatt | ggaataatat | tttagaaata | attttgatta | ctgctutttc | 16320 |
tctactatga | catgatgaac | attttcttat | gtcattacat | actctccaaa | tataattttt | 16380 |
aatagttaca | tatttcatct | ataatttaag | cattctccca | ttttgaacag | aagcttgttt | 16440 |
ccaatttttc | ttattataat | taacaatgat | gaatatattt | gtacacaaat | gcctgaacgt | 16500 |
ctcctttcct | taagaaaggc | agttagtgaa | ccaaaggata | tacctttttc | aaagtctatt | 16560 |
gctatgtcat | ctaattgctt | ccagaaaggt | taatgaatat | atgtggactg | tgtgtgctca | 16620 |
gcccttagct | agtcaatatg | gggagatttt | aaatgaaaat | aggaaagtgg | aaaagtaagg | 16680 |
tggtagccag | gtgtggtggt | tcatgcctgt | tatcccagca | ctttgggagg | ccaaggtggg | 16740 |
tggatcactt | gaggtcagga | gttccagacc | agcctggcca | atatagcaaa | acctcatttc | 16800 |
- 56 034964
tatcaaaaat | acaaaaatta | gctgggcggt | ggtccgtgcc | tgtaatccca | gctactcagg | 16860 |
aggctgagac | aggagaatcg | tttgaaccct | gggaagcaga | ggttgcagtg | agttgagatt | 16920 |
gcaccactgc | actccagcct | gggcaacaga | gcaagactct | gtctcaaaaa | aaaaaagaaa | 16980 |
agaaaagaaa | aagtaaggtg | ggtggggctt | gctctcaaag | atctttctgg | ttgaggtcat | 17040 |
tgacacacaa | atggtgtaga | aaactgtagc | actaaatcat | gatgccagaa | agagctggga | 17100 |
atgcagatct | taatgaatga | ccttatcaaa | gaaggtaggg | tagatgaggt | ggcacccgag | 17160 |
ctggctttgt | aggaagtgta | gggtttcaac | gtggcagaga | ggaaaagtat | ttaagtacaa | 17220 |
aggaacaata | tagttgtagg | tatataagtg | ataactgagc | cttcctgtac | agctgtttag | 17280 |
atcaaaagat | gaatgttggg | agccctggca | tacaggagtg | gtctgactgg | acggtggaga | 17340 |
aggtgaggag | aatccctgca | tgccacttcg | tctttactcc | tgccatgttt | acttcttggg | 17400 |
agaattttcc | tactggcact | agccatttat | tattcaaggc | caaattcatc | tgtcagaccc | 17460 |
tttgtgaaat | ctttccagaa | tccataagac | agcctctcct | gtgttcaaaa | tttttttttt | 17520 |
tttgcacttt | aatatggtgc | ccattacact | cactggtact | catgtgctct | ggcatttcat | 17580 |
cttcaaagct | gggtgaactt | tattccttgt | atctgtccca | gaacctagca | cggtatctgg | 17640 |
tacatagtaa | atgctgaatg | agtgagagac | ctgataggca | acagacacga | tcaaagcagt | 17700 |
actttcagaa | gatcagtaaa | acagtaatgt | acatggtttt | gaggagtgaa | agagagacta | 17760 |
gaaaatgaaa | ggcaagttag | aagaccacat | acaagaagga | acaggacttg | accactgaat | 17820 |
atggagggag | gcatcacatt | ttgaagccta | ggtgattaga | gtggaagagt | aacacatttg | 17880 |
aaaaatactg | tcggccgggc | acagtggctc | acgcctgtaa | tcccagcact | ttgggaggcc | 17940 |
gaggcaggta | gatcacaagg | tcaggagatt | gagaccatcc | tggctaacac | ggtgaaaccc | 18000 |
cgtctctact | aaaaaataca | aaaaaattag | ctgggcatgg | tggcgggcac | ctgtagtccc | 18060 |
agctactcgg | gaggccgagg | caggagaatg | gtgtgaacct | gggaggcgga | gcttgcagtg | 18120 |
agccgagatt | gcgccactgc | actccagcct | gggcgacaga | gcgagactct | gtctcaaaaa | 18180 |
aaaaaaaaaa | gaaaaatact | cttcattgtt | acgggagtag | ggcagagaag | atgatgagtt | 18240 |
tgattgtggt | ttgaggtgtt | aattccaaag | aaaatgttca | ctagcttttg | ggaagtcaag | 18300 |
actggctctg | agatgacaga | tgagaacaag | gatgtccatc | tggaattgct | ggcctggagg | 18360 |
agactgttga | aaactttgat | gagttttctt | tgtttttgtt | tttgcccttg | cctctcacct | 18420 |
cccactttga | tgagttttta | aagttagtgg | gaagagcagg | aacctgatcc | ttgaggaaca | 18480 |
tttgtagaaa | gtggtagaag | gaaggggtaa | ccaagcagag | aagttgggga | agggttgctt | 18540 |
cttgagagaa | gagcccaaaa | aatgaaatgt | cagtgactac | gaaagcagaa | gaggactgca | 18600 |
gtcaggggag | atgaagggtg | agggctctgg | agatggagaa | tggcaaattc | actgaattgt | 18660 |
gtctgagatg | ttttaggttc | cttttatcgc | taagctcccc | ggaatcatat | ttggtggatt | 18720 |
cctgccttat | ttcccacata | ttctgtcttt | tttttgtttt | taaatctcat | ttttggcttg | 18780 |
tttgttttga | ttttaaagat | aaaatctttt | tataaatacg | attacccctg | aaactcttct | 18840 |
- 57 034964
gctatattta | cacatgtagt | taacattttt | ccatttgtta | gtttaggttt | cctcctgggg | 18900 |
atcatcgtac | atttatctgt | cctcagttca | tttttgttgc | atcctccatt | gtgctgagca | 18960 |
cattatagat | gcttgggagg | tatttgaggt | cacattaaat | taggcggtat | cccttatggt | 19020 |
aatggctaac | caccacatct | taggggccat | ttgtgaactt | atggattatt | cttttatctg | 19080 |
tgttattgtt | gaaagtgcta | agtattgact | gggagcccaa | tttatgtgtg | tgtgcacatt | 19140 |
tttctaggga | aaggcccata | agtttcatta | gattctcaaa | gatgacctat | tgctatatac | 19200 |
tatcatcatg | ggtaatatgt | ttaccagaac | tttcctaatt | ataaatgcct | ctgtttagaa | 19260 |
cttttgccta | acaggcatat | tcagatacag | ggatcagcag | ttattctggg | tggtgtgcga | 19320 |
ctagggtgga | tagcagagtt | ggtggcttta | gatttaggaa | atttgagttc | taaaatcagt | 19380 |
gctaccagta | atcggtgctg | tgactttaag | caagtcacct | ctctgggcca | gtttctgtcg | 19440 |
cctaggctgg | agtgcagtga | catgatcttg | gctcactaca | acctctgcct | tccagattca | 19500 |
agcggttctc | ccacctcagc | ctcctgagta | gctgggacta | caggtgtgcc | accatgcccg | 19560 |
gctacttttt | gtatttttag | tagagaccag | gtttcatcat | attggccagt | ctggtctcga | 19620 |
actcctgacc | tcgtgatcca | cccgtcttgg | cctcccaagt | gctgggatta | caggtgtgag | 19680 |
ccaccgtgcc | cagccagctc | tagtgtttta | atcaaggaaa | attgctcttt | ggaactgcag | 19740 |
tgtaagagag | atggccgtgc | tgcatttccc | agtactcatt | ctccccatgc | agggacctca | 19800 |
tggagctgcc | tgcatcctca | ggggtatgct | tccttctggt | ctcttccttt | gtcctgggtc | 19860 |
acttacctgt | tgttgggacg | ggataaggaa | tgggtcacct | ccagttacct | gaggtattaa | 19920 |
tatttattta | cacccctgtc | ctatctcccc | agtttcctca | tacttctgtg | agtctctgtg | 19980 |
catagcattg | tgtcctacac | ataatatatt | tgcggctggt | gattatggat | cttttgttga | 20040 |
ttctcctggc | tccatgatat | ttcactaaaa | tttaatggaa | gaagtattac | tttaattaca | 20100 |
ccttgaatat | ttggtaaagg | actggcatag | caaagacatg | atagcagaga | ggtgtaagtg | 20160 |
agaagtacca | aggacctcca | gttctctaca | aaagtaggca | cgaaaagctt | tatgaaattc | 20220 |
gtattcaagg | ctgccaatat | tttttctttt | tctttttctt | ttcttttctt | tctttttttt | 20280 |
tttgagatgg | agtctcgctg | tgttgcccag | gctgtagtgc | agtggcatga | tcttggctca | 20340 |
ctgcaacctc | tgcctcccgg | gttcaagcaa | ttcttgtgcc | tccgcctcct | gaatagctgg | 20400 |
gattacatgc | atgtgccacc | atgcctggct | aattttttgt | attttttttt | tttaagtgga | 20460 |
gatggggttt | cactatgttg | gccaggctgg | tctcaaactc | ctgccctcaa | gtgatctgcc | 20520 |
caccttggcc | tcccaaagtg | ttggtattat | aggcataagc | cactgcgccc | agccctcaat | 20580 |
gttgtttctg | tctagcagac | ctacagggaa | attcagattc | ttccctcagc | agaggcaaat | 20640 |
gactgtaaga | gatgtccctc | agggatgtac | agaaataccg | tatctcactg | attctaagaa | 20700 |
gcacactttt | ccgcatttta | atacttctga | aatcatgatg | tgtcttataa | ttcatggcag | 20760 |
cttgtaattc | attgacagcc | cttttttctc | ctcttagtgc | taagcacata | aaataacact | 20820 |
atgcttatat | cttagactgc | atcttaaata | tgaggaaata | tagtagttga | gatgattaat | 20880 |
- 58 034964
gttaaatgca | aaaatgccaa | aggtatcttt | tagtgtagtt | tatctgaaat | agagagtatg | 20940 |
ttgaaaggag | taatgtgaaa | ttaggctgga | agaaagatcc | tagctttcta | gagaaccaga | 21000 |
ttgatgaatg | aaatgtgggt | actatgtgaa | gaagagtgtt | tatataacaa | tgtgaaattt | 21060 |
attatttaaa | gaattattgt | ttctgtaatt | gaaatcaatc | ttatttaaat | ttttattttt | 21120 |
taaaggatga | gaaaaatcag | ttaatgacaa | caaacgtctg | gttgaaacag | gtatgtgtgt | 21180 |
aaaattcaaa | cgggcaccca | attagtgact | gggacaccta | tttttattat | atgtattgta | 21240 |
gcagaaatac | aagagtatgt | atatttgtga | atacaaatga | atacgtgact | atatggcctt | 21300 |
ggtggattgg | caggacacag | aaagatgagg | gtagatggag | ttcttgtatt | tattcagcta | 21360 |
gtatttttgg | agtgcctatt | gtgtgccaga | cactgttatg | gggaaacagc | agtgaacaaa | 21420 |
acagacaaaa | aaccctgtag | tattagtccg | ttctcacact | gctataagga | catacccaag | 21480 |
gctgggtaat | ttataaaggg | aagaggttta | atggattcac | agttcagcat | gactggggag | 21540 |
gcttcacaat | gatggtggaa | agtgaaggag | aggcaaaggc | atgtcttaca | tggcagcagg | 21600 |
caagagagca | tgttcagggg | aactgccctt | tataaaacca | tcaattcaag | atgagatttg | 21660 |
ggtggggaca | cagccaaacc | acatcacctg | ccctcatgga | acttcattct | agtgggggaa | 21720 |
aaataaacaa | gttgtatagt | accttagaag | ctgataagct | tggggaaaaa | cacactggaa | 21780 |
aagaagatag | ggagtattgg | ggtcgggggt | gtacttataa | aaatggtggt | cagagaaaac | 21840 |
agcattgaga | agataatgtc | tgaacaaagt | cttggtggag | aggaagcaag | ccatgtgtat | 21900 |
atctggggag | gagcgttcca | ggcagcagga | cctacaagtg | caaaggtttc | tgagctggtg | 21960 |
tgtgcctagt | gtgtttaagc | agttgcaagg | aggccagtgt | ggctagcagt | gagagaacca | 22020 |
ttggggagag | ggggtgtagg | agatggcatc | agataagcaa | gaagaggctg | gtggagtagc | 22080 |
agctgcttat | aggccactgc | aaggattctg | actctctaag | gtggaaatgg | gcaagaatga | 22140 |
aatgaatttt | tttttaatag | atagtccctt | ttatataaag | gacttttgtt | tttttctggg | 22200 |
ccaccataca | tatgtcctaa | ctgctgttga | gcgcttcctt | ttgtttttat | catccctaat | 22260 |
ttttatacct | actatttgtt | ttctaacccc | gaactcctga | aaggcatata | tgcttttctc | 22320 |
agggtgcagc | tcctaacttg | atcacagaat | tgtaactgca | tggaggtagg | gtaaggtgtt | 22380 |
gaaatacgca | gaatgtgcaa | taaatccaac | tcccttttgc | atggaccaga | acagccaaat | 22440 |
tgggtgacaa | tacatctgga | aaaaagaatg | tttcccttga | acctggatat | taagtgcctg | 22500 |
tggcttcaag | tcctggatat | agtcagtcag | ttgatgggag | aagagttgcc | gagcagagcc | 22560 |
atgaacacat | ctagctctgg | ttctcacctg | tgtctcacag | ggaccatggt | gagaaccact | 22620 |
acacaagggg | acagggttat | ctggtgccca | taataagaaa | gacagggagg | tgttctctat | 22680 |
tgggggtaga | gatgatctca | tgtctaaaat | ttctggtgtg | acaaaaaagt | atggtattca | 22740 |
ctgtttttga | ctattagttt | tattgaaatt | gaggcagatt | tctttgtttt | aaaggaatgg | 22800 |
atagatgtaa | aattaagatg | gaaccctgat | gactatggtg | gaataaaagt | tatacgtgtt | 22860 |
ccttcagact | ctgtctggac | accagacatc | gttttgtttg | ataagtaagt | tatattctaa | 22920 |
- 59 034964
atatagtttt | atattttcaa | aagaaaacat | ttgtatttct | attaggcact | aataattttt | 22980 |
ctcccttttg | aaattgttta | ggtataaaaa | tcaaatgaca | tgaccgcatg | tgcctgggta | 23040 |
tgattacatg | ttttatagat | gaggaaacag | aggcttaggg | tggttgttct | tttccaagat | 23100 |
cacagagcta | gcacatggca | gagtaggggg | gtcacaccaa | ggggactgat | acctccattt | 23160 |
actctttgtt | ttactagact | acatatttgg | cagacttcta | gatttttttg | tatgtttttt | 23220 |
acgtcgttga | ggtcatattt | tatgttgaat | tgtgcatcct | tctagttgtg | tttaaatact | 23280 |
gtatcgtcat | tttcccacaa | tgaggaatgc | tgggttaatt | atcaattcat | ctttagaggc | 23340 |
atcctaccta | ggtgtgtttt | gaggattttt | ttttttttaa | cttaggggag | aggaaaattc | 23400 |
tgggtaccag | ttttattttt | ttctaagacc | actcctgggc | aaatctggga | atttgtgctt | 23460 |
atcttaaagc | actttgtctg | attcgaaaga | aggccatttg | gcatgaggac | agagcaactg | 23520 |
ctatgcaaaa | atatctttaa | tcttttgaca | ctttttacct | ccatgcttct | taagaagtga | 23580 |
acaaagcttg | taaggacaca | tgatgcagct | tcctggagca | tcattttatt | ttcagtaatt | 23640 |
gaaaacattt | ttatattaaa | catggatata | ttacagaata | gtgtgcaaaa | gccacatgaa | 23700 |
tttgaagaca | gcaacatttt | aaagaaatct | tatgttggtg | gtgtgctttc | ctagtatatg | 23760 |
gattctatac | tagacttttc | tcatatatga | attcacttgg | tgggagagct | tgagaggcat | 23820 |
agctgctttt | cagggtcatg | cccagcttgg | tgttcatggt | ctttccccat | caaagtaaaa | 23880 |
aacggccagt | atttgcgatg | aaggaagaag | agcactgtgg | agggagtcta | ggagtgtgga | 23940 |
ttcaggttct | ggctgtatgc | gtgcccattg | tgtcaatagc | ctgagtctat | tctgtgtgta | 24000 |
aggtgaggtc | ttttcaatca | ttagaatctc | aggcttctgt | gaaaatttgt | cagttctgga | 24060 |
gtagatgcag | aagaaggggt | tcagttctag | tagagttaga | tatttaagga | agatattcct | 24120 |
ggagcagggt | ccctatgtag | cacgtatatc | ttatctgaag | tatagtaatt | taaaaattat | 24180 |
ttcatgcaat | caatgatagg | cctgctttta | tattaggctt | atattaatac | aattcatgtg | 24240 |
cattgtttaa | tttctgcatt | gttattttat | atgtgtgtat | tttagtgcag | atggacgttt | 24300 |
tgaagggacc | agtacgaaaa | cagtcatcag | gtacaatggc | actgtcacct | ggactccacc | 24360 |
ggcaaactac | aaaagttcct | gtaccataga | tgtcacgttt | ttcccatttg | accttcagaa | 24420 |
ctgttccatg | aaatttggtt | cttggactta | tgatggatca | caggttgata | taattctaga | 24480 |
ggaccaagat | gtagacaaga | gagatttttt | tgataatgga | gaatgggaga | ttgtgagtgc | 24540 |
aacagggagc | aaaggaaaca | gaaccgacag | ctgttgctgg | tatccgtatg | tcacttactc | 24600 |
atttgtaatc | aagcgcctgc | ctctctttta | taccttgttc | cttataatac | cctgtattgg | 24660 |
gctctcattt | ttaactgtac | ttgtcttcta | tcttccttca | aatgaaggtg | aaaagatttg | 24720 |
tctctgcact | tcagtacttg | tgtctttgac | tgtcttcctt | ctggttattg | aagagatcat | 24780 |
accatcatct | tcaaaagtca | tacctctaat | tggagagtat | ctggtattta | ccatgatttt | 24840 |
tgtgacactg | tcaattatgg | taaccgtctt | cgctatcaac | attcatcatc | gttcttcctc | 24900 |
aacacataat | gccatggcgc | ctttggtccg | caagatattt | cttcacacgc | ttcccaaact | 24960 |
- 60 034964
gctttgcatg | agaagtcatg | tagacaggta | cttcactcag | aaagaggaaa | ctgagagtgg | 25020 |
tagtggacca | aaatcttcta | gaaacacatt | ggaagctgcg | ctcgattcta | ttcgctacat | 25080 |
tacaagacac | atcatgaagg | aaaatgatgt | ccgtgaggtc | tgtgatgtgt | atttacaaat | 25140 |
gcagatcttc | ttccatttta | agttcagaag | ttactttcat | taattttggc | agagtaaaca | 25200 |
gcatgaccct | taagtaagac | taagcataga | ttgagggcca | gaattgttga | catattttct | 25260 |
ataaaagatc | tttactaagg | cttgtttcag | ttaaagcacc | tgcaaaatgg | ggcatttaca | 25320 |
caaatctcac | ttctccactt | cccccatcag | catcttggat | aactctaaag | aaaatttagt | 25380 |
gttataftct | aaggaataat | cctgccatat | ttcttggctc | tgacctgatg | aattgtttta | 25440 |
atttcttggg | gtgagggcag | tgggtgaact | gttttaattt | tgtcttcagt | aactttgttt | 25500 |
ctaaattgtg | ataatctgta | ggcagaactc | cattataaca | gttaatggag | ttatcaaaag | 25560 |
ttcttttagg | ctgggcgcag | tggcttcatg | cctgtaatcc | caccactttg | ggaggccgag | 25620 |
gtgggtggat | catttgaggt | caggagtttg | agatcagcct | ggtcaacatg | gtgaaactcc | 25680 |
atttctacta | aaaatacaaa | aattagctgg | gcatggtggc | acatgcctat | agtcacagct | 25740 |
actcgggagg | ctggggcagg | agaatcactt | gaacccagga | ggcggagatt | gcagtgagcc | 25800 |
gagatcacgc | cattgcactc | cagcctgggc | gaccgagcaa | gactccgtct | caaaaaaaaa | 25860 |
aaaaaaaaaa | aagttctttt | aaagaatgag | cctaatgtgg | aatttataag | tataaaattc | 25920 |
agtcttgtca | ctgttatttc | ttctattgtg | tattatttta | aacctatgac | tatagtaata | 25980 |
ttttcataat | tgaatgtaca | ttaaaattat | gtgaattata | atctgtaaag | ctattttaaa | 26040 |
tggaaaattt | ccatcaggta | tgaggagaca | gaataaatct | ggcaaaatca | cagcctttat | 26100 |
cccaaaaggg | acatttgatg | tatatatttt | taaaactttt | tttcatatgt | taatgattta | 26160 |
atttcaataa | gactttcctt | ccttatttta | ttgtatttca | ataggttttt | ggggaacatg | 26220 |
tgtttggtca | catgcataag | ttctttcatg | ctgatttctg | agactttggt | gcacccatca | 26280 |
taaaaacttc | taatgcttgt | gggfttgtga | agtatctatt | tggtggtagc | ataatgaaat | 26340 |
tagtttataa | ggtttggagc | tatcattgga | gtttttaaaa | gtacatagat | ttgttaggta | 26400 |
atggtttaga | ctgagatgga | atttaataaa | tgtctgcaaa | gtattgtgca | aaagggtcat | 26460 |
ggctcatact | actaggacca | aggaggttgg | ttttattttc | agataaaaac | agaggcagag | 26520 |
gtggccaggt | gcggtggctc | acgcctgtaa | tcccagcact | ttgggaggct | gaggcaggtg | 26580 |
gatcacgagg | tcaggagttt | gagaccagcc | tggccaatat | ggtgaaacac | tgtctctcct | 26640 |
aaaaatagaa | aaattagctg | ggcatggtgg | tgtgtgcctg | tagtcccagc | cacctgggag | 26700 |
gctgaggcag | aagaatcact | taaacttggg | aggcagaggt | tgcagtgagc | cgaggtcacg | 26760 |
ccactgcact | ccagcctggg | ggacggagca | aggctctgtc | tcaaaataaa | ataagcagag | 26820 |
aagtaacagg | gtttacaatg | ccctaaattc | taaattatcc | tacactttgg | aggcacagtt | 26880 |
cccatagagg | acaccatcct | tcatagaggt | tcagggccag | ggaagcccct | ggtcaaggaa | 26940 |
atggccttgt | agaaagggga | gcccctgctg | cttagtggct | gggctcatcc | ttctttttcc | 27000 |
- 61 034964
ttgtggtggc | tccgagctgc | tgagccagct | ccctactaaa | gctggctcca | gggaagactg | 27060 |
ttctgtgctc | atgaaattag | actgaagtgg | tccctaggaa | atccaaaaat | aaataaagtg | 27120 |
tgtatgtgag | gaagatgaac | agctttctaa | catgtattat | tctgaaccaa | cttttaattt | 27180 |
ggcatgaaat | taatctcagg | ctagagtctc | tcaaaatatt | aaaataagta | aacactactg | 27240 |
ggcaagaata | agtatatata | gtaagaataa | ttttttttag | tttattgtaa | aatatccaag | 27300 |
tctattttaa | tttttaatct | atcaaaataa | accacttgta | atataagttg | atgtgtaaat | 27360 |
gaacatattt | tgtagtgtct | tttaaagctt | atatctatag | tagaccttca | ggctagtgtc | 27420 |
tgtccctgag | ctgagtatag | ggtcacttac | cgtttagagg | cagcaatggg | aggcagaaat | 27480 |
cgatttggct | tctaactcag | tgtgtttgtt | atatcttaaa | atatgtacac | aatttacaat | 27540 |
tatttaatgc | atttttattt | ttttcctaac | aggttgttga | agattggaaa | ttcatagccc | 27600 |
aggttcttga | tcggatgttt | ctgtggactt | ttcttttcgt | ttcaattgtt | ggatctcttg | 27660 |
ggctttttgt | tcctgttatt | tataaatggg | caaatatatt | aataccagtt | catattggaa | 27720 |
atgcaaataa | gtgaagcctc | ccaagggact | gaagtataca | tttagttaac | acacatatat | 27780 |
ctgatggcac | ctataaaatt | atgaaaatgt | aagttatgtg | ttaaatttag | tgcaagcttt | 27840 |
aacagactaa | gttgctaacc | tcaatttatg | ttaacagatg | atccatttga | acagttggct | 27900 |
gtatgactga | agtaataact | gatgagatac | atttgatctt | gtaaaaatag | caaaatatta | 27960 |
tctgaactgg | actagtgaaa | aatctagtat | ttgtatcctg | gcaaataata | ctaatttata | 28020 |
atccacagta | aagttcatcc | tttgactgtg | ctggagaatt | ccagttgtat | ttgaagactg | 28080 |
attttaaaac | ttttctgcat | ttggtaaagg | tatgtaaact | ttcctgtact | cactgagtaa | 28140 |
cagctaatct | ttaatataat | attatactgc | tatatttaaa | aagctgacta | cttgatataa | 28200 |
ttacttaatg | tgatgcttga | tataataatt | acttaatgtg | gccgggcacg | gtggctcaca | 28260 |
cctgtaatcc | cagcactttg | ggaggtcgag | gtgggcgtat | cacctgaggt | tgggagttcg | 28320 |
agaccagcct | gaccaacgtg | gagaaacccc | gtctctacta | aaaatatgaa | attagccagg | 28380 |
gtggtggtgc | acacctgtaa | tcccagctac | ctgggaggct | gcggcaggag | aatcgcttga | 28440 |
acccaggtgg | cggaggttgc | ggtgagctga | gatcacgcca | ttgcactcca | gcctgggcaa | 28500 |
caagagcaaa | actcagtctc | aaataataat | aataacaaca | acttaatgtg | ctgctgcttt | 28560 |
tccataacca | acattttaaa | aataaatgaa | aaacaggaat | tgggaactcc | tttaaggctt | 28620 |
actttattct | ttagatgctt | aattattgtg | ttaactattt | ctgtagctta | gcttccactg | 28680 |
taaagtcata | cagtagacaa | ctcctgtgga | cacgcagtag | catatcctta | acattaattt | 28740 |
cagtcctctt | gtccacattt | cccacaatta | atagaaccat | cttctatata | aattgtggta | 28800 |
gtatctcttt | atccttgatc | ttagaatagt | cagtccacta | caattacatg | aaccccattt | 28860 |
aaaaaacata | tttagggccg | ggggcagtgg | ctcacatctg | taatccaagc | actttgggag | 28920 |
gctgaggcag | gtggatcacc | agaggttagg | agttcgagac | tagcctgacc | aacatggtga | 28980 |
agccccgtct | ctactaagaa | tacaaaaaat | tagtcgggca | tggtagcagg | cgcctgtagt | 29040 |
- 62 034964 cccagctact caagaggctg aggcaggaga atcgcttgaa cctgggaggt ggaggctgca29100 gtgagccgag actgcgccat tgcactccag cctggcaaca agagcaaaac tctgtctcaa29160 acatattttg gtctaaatca ttctgtgaga aaacaatctt ctaatatgaa acacagtatt29220 ctaatttggt atatgcacac tgttatatac ctgtaatatt tcagttttct ctccttcatt29280 ctaacaatta caataataga atcttagagt tgcaagggcc tttagatgta atcaatctta29340 gcctattact agtacagcgt aaatgattta gtacagtata atgtatcaca gttaaaacag29400 ttaaattcca tctctaaatg tcaccacttc aggtgtgacc aggtagcaaa cactgacaga29460 aaccctcgtt caatttagaa ctcttagctg ttgagatcac aaacacctca tttatttata29520 ataagtaacc tatctaagtt caagccaatg ctctttggaa ggcggaggag accctatcta29580 atttgcattt aatcgtaggc aggtgtttaa tgccatttaa tgagtgaaag cctggtgtga29640 tgaatttaga ttgcctgcca gctacctacc ttagttcgta tacatccctg atccctctta29700 tactaccatt actgttactt atgattttta tatataaatt tttatcgaca29750 <210> 40 <211> 28244 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 40
gtccttccca | gggtgtgtta | gcgtctctcc | tacggcgccc | gcctagcccg | gtggtcccaa | 60 |
ccccctgcgg | gagctgcaca | cgccccggaa | acctgggaca | gaaactgagt | ccctctcctt | 120 |
cctggtggtg | gtgacagcac | ctgctcagat | ctggtcggac | gccgccggcc | ggagcaccca | 180 |
gcccggcgga | gaaggagctc | gcccggcgct | ggggactggg | acctggagcc | ccttccccta | 240 |
ccgcacgtac | gccccgcccc | gcgcacgccc | gcccgcccgc | ccgcgcctgg | cgcagcttca | 300 |
ctccggatgg | ttcctgtcct | cccgcgggtc | cgagggcgct | ggaaacccag | cggcggcgaa | 360 |
gcggagagga | gccccgcgcg | tctccgcccg | cacggctcca | ggtctggggt | ctgcgctgga | 420 |
gccgcgcggg | gagaggccgt | ctctgcgacc | gccgcgcccg | ctcccgaccg | tccgggtccg | 480 |
cggccagccc | ggccaccagc | catgggctct | ggcccgctct | cgctgcccct | ggcgctgtcg | 540 |
ccgccgcggc | tgctgctgct | gctgctgctg | tctctgctgc | caggtacgcg | cacaggcgtt | 600 |
agggctccgg | agggacgggc | gcccgagaag | gggcgcgggg | tccggagggg | ctgccggcga | 660 |
gaacaccgcg | cgggcgagcg | gagagggctg | gcgccgtcgc | cggggactcg | gaacccgcgc | 720 |
agactggctc | cagcccggcg | gcgacttggg | tggggtggct | ttttcccttt | cggctcacct | 780 |
cccaccccta | gccaccacca | aacctgggag | tcactgagcg | ggcgctggta | cgcgccgggt | 840 |
gatggggagg | tcgagaccgg | gtccttcgtc | ttgggcgcag | gagttgggga | ttcgcgtccc | 900 |
cgcgctgccc | gtcgccctgc | cccgcgcact | ggctcccaaa | ctggcgcgcc | caagcctccc | 960 |
gctccaccgt | ctgcatcccg | cccacctcct | catttgacgg | agatggctga | agacttggcc | 1020 |
aaggccacct | cgggaagagg | ggagtcgctt | cgggactggg | gctggagctg | gagcgccagc | 1080 |
- 63 034964
ctctcctccg | gttgtagcct | cctagcgctc | ctggctgcgt | cgctgaggga | ccctccaccg | 1140 |
ggagagcgcc | tcctgtcttc | ctcccgctct | ccagaggagc | ctgctggggg | aagccggccc | 1200 |
tggcccgccg | ctgggaggct | cttgggtgcc | tgggagggct | ggtgggtagc | gagagtcggg | 1260 |
gaccgggcaa | ggctgcaggg | aattcctgga | gggcccaggc | cggcggtctg | tcgtgcggct | 1320 |
gtgagctcag | agcgctttcc | gccctcggtg | ccgaggcctg | cactactcag | aacgccatac | 1380 |
gctctcaacc | gacctcctgc | ctgggaccct | tctttcatcc | tggggaagga | gagtggggag | 1440 |
caggaaaaat | cctatttcaa | gacctgagga | agttggattc | aacttcctag | aggattctcc | 1500 |
tcccgcttcc | ccaagctgcc | cccagatctg | tacgtgggaa | tcagaagaca | gctgacccgg | 1560 |
tatgcctcac | ttgtgctggg | gtgtggctta | ggaacaaaga | ggggtgccca | agggttgcag | 1620 |
aggtcagagt | ctttcatcag | gatatgaaga | cagcatcagc | aagagctggg | ggtcacacga | 1680 |
gatcacggga | gtcacacagt | gccttggctt | ctaagagggc | tggtggccac | ccctacaggg | 1740 |
tggaatgcag | gagaggccca | gacctgggct | gtgttctccc | ggaggctggg | aggtagaaga | 1800 |
cctgggcctg | ggcgaccgtg | gttggccctg | cccctgggag | cggactggcc | atctttccat | 1860 |
cgtggaagca | gtgagtggct | gtacccaggc | agacagcatt | tgccccacac | ccccacccgg | 1920 |
cagaaacaac | ccaggaaaag | attgcgaata | gttcttgacc | tcttaccgca | gcaccaagct | 1980 |
gtgcacttcc | ttcacaacaa | ccctttgagg | tggatacgtt | tataatcctt | attttgactg | 2040 |
gtaaagacac | aggttcagag | aggttaagcc | acttgcctaa | gctcacacag | cttacaagtg | 2100 |
atttgtcagg | atttgcacca | gatctgtcca | actccagagc | ccaggcttgc | aaccactgtg | 2160 |
cttctcactg | aatgcgtgtg | gccaggtaga | atcctgcccc | tcttgggcct | cagtttccca | 2220 |
ttttgtaacc | cactgggtta | gactggcctg | aaagtctagg | gttccacaga | atccccccac | 2280 |
aggtggaggg | gatgctgtag | atgggtgatg | tttctgctgg | gctgggtggg | ggaggttaag | 2340 |
taacgatttc | cccagggact | gacagggctg | cttcccacag | tggccagggc | ctcagaggct | 2400 |
gagcaccgtc | tatttgagcg | gctgtttgaa | gattacaatg | agatcatccg | gcctgtagcc | 2460 |
aacgtgtctg | acccagtcat | catccatttc | gaggtgtcca | tgtctcagct | ggtgaaggtg | 2520 |
gtgagtgctg | gaagccacga | gccgtggcca | tggggaccgg | ggcttctgga | ggagcctttc | 2580 |
ccagaattag | tcttgttttg | taattctcct | gtcaacttta | attcctcttt | ctaggatgaa | 2640 |
gtaaaccaga | tcatggagac | caacctgtgg | ctcaagcaag | taagtgacca | gaccctaggc | 2700 |
actgctgccc | cctggtggtg | actgttttat | ttgctttagg | tgaaccaaga | aaggcctaaa | 2760 |
gaccaggctt | catttacttc | tgtggaaccc | agattggggt | ccactgactg | gcagatatat | 2820 |
ctcttctaag | gcttgaggtc | acatgcactg | ccctacagtc | cccctggaag | gactgtaggg | 2880 |
cccaacccct | caagtcccag | atggacaggt | tgcagcctgg | agaaagacat | tctccatgtt | 2940 |
cacacaacag | aagagtacga | acctgagatt | gaagccctgc | ccccaaaccc | tggggtggtg | 3000 |
cctgagacac | ctccttctct | ccctcttgct | aaaaactcag | ttttttttcc | agacgggatc | 3060 |
tcgctctgtc | acccaggccg | gagtgctgtg | gcgtgatctc | ggctcactgc | aatctccacc | 3120 |
- 64 034964 agcagggttc aagcagttct cctgcctcag cctcccaagt agctgggacc acagctgtgc 3180 accaccacgt ctggctaatt tttggatttg ttatagagac agggtttcgc catgttgccc 3240 aggctggtct cgaacgcctg atctcaagca aaccacacac ctcagcctcc caaagtgctg gggttacagg cagaagccac tgtgcacagc ccctatactc attcttaagt cagaataaga
3300
3360 tgctgctgtt gttggtagcg tgggagtaga ttttcctgtt cagatcgagg ccaagaaatt 3420 gccttccaca tgtcctcccc agggaggctt tgtccagact tgccaggaga cataatggcc 3480 cattggcctg cgggtgaccc ttctgccagc ctggccagct gagcactcag cacacacagc 3540 cttcatcccc aggaggttgg aaagccagat gggcacagtg ccccacccag tacttgatgc
3600 acacgttccc tctgtggccg cagcctcacc cctctctcct ctggtgctca ggactcagac 3660 ctcccagcct ctggacccag acacttcctg ggccctgcag gggtcatgga ttcttccccc
3720 ggaatctttc agagtccagt cttgcttaac cttggggtga aagagtgtct atgttggaaa 3780 acacccctgg agagccattc aggggctgta aacaggcaca tggacctgga catgatgcat gaagtccagg agtctccacc tggcactaga agtgaccaga gaaagcacga gtaggccctg
3840
3900 tttggttgat gaggggctgg gcttgctcat ggttatgggg gcagtggctt ccctagtgcc 3960 aggaggtggc ccgcagagcc agccgtgtgc tctctcctgc actacaccca caggagaagt 4020 tggactatgt gatcatggca tggatgtggt tcggtcacat gcagcagggg tggggagtca 4080 ccaagatggg tggtgccacg ggaagtaaaa ccaggctgat tcttttaccg tctccttctc 4140 cctccctgct tccttccccg agatctggaa tgactacaag ctgaaatgga acccctctga 4200 ctatggtggg gcagagttca tgcgtgtccc tgcacagaag atctggaagc cagacattgt 4260 gctgtataac aagtaaggtg ctggggggcc cacgccctct cagggctgtc agcctgggct 4320 ctgggttttt ggcccactgt gcttaaaacc tggccttcct tggccttttc caagaaggct 4380 gcattcattt gttcagtcca taggtatgta atcagcaact actacatacc aggtaccaga 4440 gatgttggag agccacagag agcagcagtg tgctgagtgg cttcaaagca ggcatgggtg 4500 ggtggaagat ggcattggga aagtttcaag gaagaattgg catttgaagt gaatcctgaa 4560 gattgtgtag gatctcagga cagggagatg gagcagagga gggcccgggg aggcaggaga 4620 gtatgtcatg ggcagccaag gtgacctcat tggctggact gtgggacata aggctggaaa 4680 gatccatggg ccaaggacca accccagtgt gtggaggggg aaggctcaga tgcccggggc 4740 acctggaatg tagcatctgt tagcagctct gtgcaaacag acaggaatgg agtaaacggt 4800 ccctcctcac cttgtctttg aaagagaatg agggtgttgg agaagatcat agctgggtgg 4860 gcctaagctg tgtagtccca gggttcccag cctgctgact ggcatggtta ccaaggagct 4920 ttttttttgg gggggtgggg gggggaagac tgagtcttac tgtcacccag gctggagtgc 4980 agtggtggga tctcggctca cagcaacctc cacctcctgg gttcaagaaa tcctcctgcc 5040 tcagcctccc aagtagctgg gattacaggc acgtgctgcc acacctggct aattttgtat 5100 ttttcagtag agatggggtt ttgccatgtt ggccaggctg gttttgaact cctgacctca 5160
- 65 034964 agcaatctgt ctgccttggc ctcccaaagt gctgggatta cagcatgagc caccatgccc 5220 agccccaatg agctttttaa aaatacaggt gtttggccag gcatggtggc tgatgcctgt 5280 aatcccagca ctttgggagg ccgaggcagg aggatcactg gaggccagga gttcgagacc 5340 agcctggcca atataccaaa accccatctc tactaaaaat acaaaaaatt agccaggcat ggtggcgtgt gcctgtaatc ccagctactc cagaggctga ggcaggagaa tcgcttgaac ctggtaggta gaggctgcag tgacctagat cacaccactg tactccagcc tgggtgacag tgagactccg tctcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaataca ggtgcctgaa ttcaaaatat
5400
5460
5520
5580 tttattcttt gttcctcact gtcttttcta aagttaatat gtattacgtt atccaaaaaa 5640 tctctatacc tgtccccagg tcctgcccca cagaaacact gagtcagtgg gtctgggtag 5700 gcctaggaat gggtgttttc acaaagctgt cctgggggct gtgtgaccag cttgctttgg 5760 ggatccctga tctggccctt ccctgacatt tcacagatga ggactgaggc ccagagtgga 5820 tgtgtggcac agccaggtct ggggtggtct cagccatcca ctgtggcttt ggggccactg 5880 tgggcagtgg atgcaggagg ccgatgctgt gatcaggggg ctgagctggg caccccagcc 5940 tgtctctgcc tgtgtcccca aacctcttct ctactctccc aacagcaaac ctgccatcag 6000 acagttaccc tgctacacgg tgtaccctgc aggcctcctc ccactgggaa aaggtctggg 6060 ccttggagaa aggattgata gccccccaag tatgtgaagc aaggttccca tgtacagagt 6120 aggatgagca ttctgggccc cgtgctccca gcccgtctgg gtggctgcat ccaggtcgta 6180 gttgagaagg gtgagtccag gactaaaaag acttccctgg ctcctgccat cgagagaagc 6240 tgctctcgag ccagtccttc acagtgggcc acttccagtc tcctatggat ccggaatgtg 6300 catcttcccg ccagttttgg gaggcctctc ctctttctct cttgcaaagg ttcttcctct 6360 gccagacagg tcctgctcat catagcacct ccaaaacccc tcccttttct ctaagtccac 6420 acaaaactga tacttcccac atttaagctc tttcattgga ctgacataaa ttttagttga 6480 tattttgcaa tatgctagtt agttctctgg gtattgaaga atatcatttt tgtacctgca 6540 ttttagagtt aaaatgtttg aatatttaaa ccttttacat ttacatttaa acattttcag 6600 caaaacagtt gatgtagaat tagtctattc tgattttaat gctaagaata cttctaggtt 6660 tttatgccat attagtacaa aataatgttt tcttattagt agtattgatt ttacagttag 6720 tgtcaggact agagaagcta tgttttatac tgaatcccac tttctggtct ctggcaaaaa 6780 caaaagtggg tctttactca ctctaaagac agtccatgtt ttatttactg ttttcccaag 6840 gaaacacagc acttataaat gtttcttgta tgtaatttgt atttgtaaac tggtcatcaa 6900 agaactggga cacaatataa actcaacagg cttgcagatt tttttcttct tgcactgaat 6960 tgtcgtagga atcacatggt tcaaatgctc ttaagggaac tgggcagggt gtagagaatt 7020 tttgctaagc tacaattaag aaaatgagca aaaagtttaa tcttcatgtt ttgcgtttta 7080 tagccatttc cttgctggca atcttgagtg aacagctgga gtactgtagg atttatgatt 7140 ttagcaataa tgagaggcgt agcaaaatgt tgcaaattgg ctgtggagag gagcaaatat 7200
- 66 034964
cataaggaat | ttctttgaaa | tctgaagctg | aaaataacat | ttagagaaaa | tcatccaact | 7260 |
catgttctct | ctcttctcct | agttagaact | tcaattgctc | aggattcacc | ctctgttaag | 7320 |
gatttctctt | cttttttttc | cccccacccc | gagatggagt | ctcactctgt | cgcccaggct | 7380 |
ggagtgcagt | ggcatgatct | gggctcactg | caagctccgc | ctccctggtt | cacgccattc | 7440 |
tcctacctca | gcctcccaag | tagctgggac | tacaggcgcc | cgccaccacg | cctggctaat | 7500 |
ttttttgtgg | ttttttttgg | tttttttttt | gtttgtttgc | cactgcttta | cagttttttt | 7560 |
ttaaatttta | ttattattat | actttaagtt | ttagggtaca | tgtgcacaat | gtgcaggttt | 7620 |
gttacatatg | tatacatgtg | ccatgttggt | gtgctgcacc | cattaactcg | tcatttagca | 7680 |
ttaggtatat | ctcctaatgc | tatctctccc | ccctcccccc | accccacaac | agtccctggt | 7740 |
gtgtgatgtt | ccccttcctg | tgtccatgtg | ttctcattgt | tcaattccca | cctatgagtg | 7800 |
ataacatgcg | gtgtttggtt | ttttgtcctt | gcgatagttt | gctgagaatg | atggtttcca | 7860 |
gtttcatcca | tgtccctaca | aaggacatga | actcatcatt | ttttatggct | gcatagtatt | 7920 |
ccatggtgta | tatgtgccac | attttcttaa | tccagtctat | ccttgttgga | catttgggtt | 7980 |
ggttgcaagt | ctttgctatt | gtgaataatg | ccgcaataaa | catacgtgtg | catgtgtctt | 8040 |
tataacagca | tgatttatag | tcctttgggt | atatacccag | taatgggatg | gctgggtcaa | 8100 |
atggtatttc | tagttctaga | tccctgagga | atcggcacac | tgacttccac | aatggttgaa | 8160 |
ctagtttaca | ctcccaccaa | cagtgtaaaa | gtgttcctat | ttctccacat | cctcgccagc | 8220 |
atctgttgtt | tcctgacctt | ttaatgatcg | ccattctaac | tggtgtgaga | tggtatctca | 8280 |
ttgtggtttt | gatttgcatt | tctctgatgg | ccagtgacga | tgagcatttt | ttcatgtgtt | 8340 |
ttttggctgc | ataaatgtct | tcttttgaga | agtgtctgtt | catatccttc | acccactttt | 8400 |
tgatggggtt | gtttgttttt | ttcttgtaaa | tttgtttgag | ttcattgtag | attctgaata | 8460 |
ttagcccttt | gtcagatgag | taggttgtga | aaattttctc | ccattttgta | ggttgcctgt | 8520 |
tcactctgat | ggtagtttct | tttgctgtgc | agaagctctt | tagtttaatt | agatcccatt | 8580 |
tgtcaatttt | ggcttttgtt | gccattgctt | ttggtgtttt | agacatgaag | tccttgccca | 8640 |
tgcctatgtc | ctgaatggta | ttgcctaggt | tttcttcgag | ggtttttatg | gttttaggtc | 8700 |
taacatgtta | agtctttaat | ccatcttgaa | ttaatttttg | tataaggtgt | aaggaaggga | 8760 |
tccagtttca | gctttctaca | tatggctagc | cagttttccc | agcaccattt | attaaatagg | 8820 |
gaatcctttc | ccccattgct | tgtttttgtc | aggtttgtca | aagatcagat | agttgtagat | 8880 |
atgtggcgtt | atttctgagg | gctctgttct | gttcctttga | tctatatctc | tgttttggta | 8940 |
ccagtaccat | gctgttttgg | ttactgtagc | cttgtactat | agtttgaagt | caggtagtgt | 9000 |
gatgcctcca | gctttgttct | tttggcttag | gattgacttg | gcgatgcggg | ctctgttttg | 9060 |
gttccatatg | aactttaaag | tagttttttc | caattctgtg | aagaaagtca | ttggtggctt | 9120 |
gatggggatg | gcattgaatc | tataaattac | cttgggcagt | atggccattt | tcacgatatt | 9180 |
gattcttcct | acccatgagc | atggaatgtt | cttccatttg | tttgtatctt | cttttatttc | 9240 |
- 67 034964
attgagcagt | ggtttgtagt | tctccttgaa | gaggtccttc | acatccctct | taagttggat | 9300 |
tcctaggtat | tttattctct | ttgaagcaat | tgtgaatggt | agttcactca | tgatttggct | 9360 |
gtttgtctgt | tattggcgtg | taagaatgct | tgtgattttt | gtacattgat | tttgtatcct | 9420 |
gagactttgc | tgaagttgct | tatcagctta | aggagatttt | gggctgagac | aatggggttt | 9480 |
tctagatata | caatcatgtc | atctgcaaac | agggacaatt | tgacttcctc | ttttcctaat | 9540 |
tgaatccctt | tatttccttc | tcctgcctaa | ttgccctggc | cagaacttcc | aacactatgt | 9600 |
tgaataggag | tggtgagaga | gggcatccct | gtcttgtgcc | cgttttcaaa | aggaatgctt | 9660 |
ccagtttgtg | cgcattcagt | atgatattgg | ctgtgggttt | ctcatagaca | gctcttatta | 9720 |
ttttgagata | catcccatca | atacctaatt | tattgagagt | ttttagcgtg | aagggttgtt | 9780 |
gaattttgtc | aaaggccttt | tctgcatcta | ttgagataat | catgtggttt | ttgtctttgg | 9840 |
ttctgtttat | atgctggatt | acatttgttg | atttgcatat | gttgaaccag | ccttgcatcc | 9900 |
cagggatgaa | gcccacttga | tcatggtgga | taagcttttt | gatgtgctgc | tggattcggt | 9960 |
ttgccagtat | tttattgagg | atttttgcat | caatgttcat | caaggatatt | ggtctaaaat | 10020 |
tctctttttt | ggttgtgtct | ctgccagctt | tggtatcagg | aggatgctgg | cctcataaaa | 10080 |
tgagttaggg | aggattccct | ctttttctat | tgattggaat | agtttcagaa | ggaatggtac | 10140 |
cagctcctcc | ttgtacctct | gatagaattc | agctgtgaat | ccatctggtc | ctggactttt | 10200 |
tttggttggt | aagctattga | ttattgccac | aatttcagct | cctgttattg | gtctattcag | 10260 |
agattcaact | tcttcctggt | ttagtcttgg | gagagtgtat | gtgtccagga | atttatccat | 10320 |
ttcttctaga | ttttctagtt | tatttgcgta | gagttgtttg | tagtattctc | tgatggtaat | 10380 |
ttgtatttct | gtgggatcgg | tggtgatatc | ccctttatca | atttttattg | catctatttg | 10440 |
attcttcttt | ctgctttatt | agtcttgcta | gcagtctatc | aattttgttg | atcttttcaa | 10500 |
aaaaccagct | cctggattca | ttaatttttt | gaagggtttt | ttgtgtctct | atttccttca | 10560 |
gttctgctct | gattttagtt | atttcttgcc | ttctgctagc | ttttgaatgt | gtttgctctt | 10620 |
gcttttctag | ttcttttaat | tgtgatgtta | gggtgtcaat | tttggatctt | tcctgctttc | 10680 |
tcttgtgggc | atttagtgct | ataaatttct | ctctacacac | tgctttgaat | gcgtcccaga | 10740 |
gattctggta | tgttgtgtct | ttgttctcat | tggtttcaaa | gaacatcttt | atttctgcct | 10800 |
acctttcgtt | atgtacccag | tagtcattca | ggagcagatt | gttcagtttc | catgtagttg | 10860 |
agtggttttg | agtgagtttc | ttaatcctga | gttctagttt | gattgcactg | tggtctgaga | 10920 |
gacagtttgt | tacaatttgt | gttcttttac | atttgctgag | gagtgcttta | cttccaacta | 10980 |
tgtggtcaat | tttggaatag | gtgtggtgtg | gtgctgaaaa | aaatgtatgt | tctgttgatt | 11040 |
tggggtggag | agttctgtag | atgtctatta | ggtccgcttg | gtgcagagct | gagttcaatt | 11100 |
cctgggtatc | gttgttaact | ttgtcttgtt | gatctgtcta | atgttgacag | tggggtgttg | 11160 |
aagtctccca | ttattattgt | gtgggagtct | aagtctcttt | gtaggtctct | aaggacttgc | 11220 |
tttatgaatc | tgggtgctcc | tgtattgggt | gcctatatat | ttaggatagt | tagctcttct | 11280 |
- 68 034964
tgttgaattg | atccctttac | cattatgtaa | tggccttctt | tgtctctttt | gatctttgtt | 11340 |
ggtttaaagt | gttttatcag | agactaggat | tgcaacccct | gccttttttt | gttttccatt | 11400 |
tgcttggtag | atcttcctcc | atccctttat | tttgagccta | tgtgtgtctc | tgcgtgtgaa | 11460 |
atgggtttcc | tgaatacagc | acactgatgg | gtcttgactc | tttatccaat | ttgctagtct | 11520 |
gtgtctttta | attggagcat | ttagcccatt | tacatttaaa | gttaatattg | ttatgtgtga | 11580 |
atttggtcct | gtcattatta | tgttagctgg | tgattttgct | cgttagttga | tgcagtttct | 11640 |
tcctagcctt | gatggtcttt | acattttggc | atgtttttgc | agtggctggt | accagttgtt | 11700 |
cctttccatg | tttagcgctt | ccttcaggag | ctcttttagg | gcaggcctgg | tggtgataaa | 11760 |
atctctcagc | atttgcttgt | ctgtaaagta | ttttatttct | cctttactta | tgaagcttag | 11820 |
tttggctgga | tatgaaattc | tgggttgaaa | attcttttct | ttaagaatgt | tgaatattgg | 11880 |
cccccactct | cttctggctt | gtagagtatc | tgccgagaga | tctgctgtta | gtctgatggg | 11940 |
cttccctttg | tgggtaaccc | gacctttctt | tctggctgcc | cttaacattt | tttccttcat | 12000 |
ttcaactttg | gtgaatctga | ctattatgtg | tcttggagtt | gctcttctcg | aggagtatct | 12060 |
ttgtggcatt | ctctgtattt | cctgaatctg | aatgttggcc | tgccttgcta | gattggggaa | 12120 |
gttctcctgg | ataatatcct | gcagagtgtt | ttccaacttg | gttccattct | ccccgtcact | 12180 |
ttcaggtaca | ccaatcagat | gtagatttgg | tcttttcaca | tagtcccata | tttcttggag | 12240 |
gctttggtca | tttctattct | tttttctcta | aacttccctt | ctcacttcat | ttcattcatt | 12300 |
tcatcttcca | tcactgatac | cctttcttcc | agttgattgc | atcggctcct | gaggcttctg | 12360 |
cattcttcac | gtagttctcc | agccttggct | ttcagctcca | tcagctcctt | taaggacttc | 12420 |
tctgcattgg | ttattctagt | tatccatttg | tctaattttt | ttttcacagt | ttttaacttc | 12480 |
tttgccattg | gtttgaattt | cctcctgtag | cttggagtat | tttggtcgtc | tggagccttc | 12540 |
ttctctcaac | ttgtcaaagt | cattctccgt | ccagctttgt | tccattgctg | gtgaggagct | 12600 |
atgttccttt | ggaggaggag | aggtgctctg | atttttagag | tttccagttt | ttctgctctg | 12660 |
ttttttcccc | atctttgtgg | ttttatctac | ttttggtctt | tgatgatggt | gacgtacaga | 12720 |
tgggtttttg | gtgtggatat | gctttctgtt | tgttagtttt | ccttctaaca | gacaggaccc | 12780 |
tcagctgcag | gtctgttgga | gtttgctaga | ggtccactcc | agaccctgtt | tgcctgggta | 12840 |
tcagcagcgg | tggctgcaga | acagcggtgg | ctgtagaaca | gtggatcttg | gtgacccaca | 12900 |
gatgctgctg | cctgatcgtt | cctctggaag | ttttgtatca | gaggagtacc | cggccgtgtg | 12960 |
aggtgtcagt | ctgcccctac | ttggggggtg | tctcccagtt | aggctgctcg | ggggtcaggg | 13020 |
acccacttga | ggaggcagtc | tgcccgttct | cagatttcca | gctgcgtgct | gggagaacca | 13080 |
ttactctcct | caaagctgtc | agacagggaa | gtctgcagag | gttactgctg | tctttttgtt | 13140 |
tgtctgtgcc | ctgcccccag | aggtggagcc | tatagaggca | ggcaggcctc | cttgggctgt | 13200 |
ggtgggctcc | atccagttcg | agcttcccgg | ctgctttgtt | tacctaatca | aggctgggca | 13260 |
atggcaggcg | cccctccccc | agcatcgctg | ccgccttgca | gtttgatctc | agactgctgt | 13320 |
- 69 034964
gctagccatc | agcaagactc | cgtgtgtgta | ggaccctccg | agcaaggtgc | aggatgtaat | 13380 |
ctcctggtgt | gccgtttttt | aagcccgttg | gaaaagtgca | gtattagggt | gggagtgacc | 13440 |
cgattttcca | ggtgccatct | gtcacccctt | tctttgacta | ggaaagggaa | ctccctgacc | 13500 |
ccttgtgctt | cccaagtgag | gcaatgcctc | gccctgcttt | ggctcatgca | cagtgcgctg | 13560 |
cacccactat | cctgcaccca | ctgtctggca | ctccctagtg | agatgaacct | ggtacctcag | 13620 |
atggaaatgc | agaaatcacc | catcttctgc | attgctcatg | ctgggagctg | tagaccggag | 13680 |
ctgttcctat | ttggccattt | tggctccacc | cgaatttttt | tgtatttttt | tagtagcgac | 13740 |
ggggtttcac | cgttttagcc | aggatggtct | caatctcctg | acttagccag | gatggtctca | 13800 |
atctcctgac | tttgtgatcc | accctcctcg | gcctcccaaa | gtgctgggat | tacaggtgtg | 13860 |
agccatcatt | cccagccttt | ctcctgtgat | attttgtttt | ctaaagttca | tttgctgaca | 13920 |
gaatcctcag | agtattcatg | gacactgtat | actctgtgtt | ctggcaagtt | cataattcat | 13980 |
tgtaaccttt | ttagagaata | cttttaggta | acttggctgg | gtgtaaaatt | cttggctcct | 14040 |
ctttatcttc | catgaaaatc | tttttttttt | tttttttgga | gacagagtct | cactgtgttg | 14100 |
gccaggctgg | agtgccttgg | ctcactgcaa | tctctgcctc | ctgggttcca | gctattctcc | 14160 |
tgcctcagcc | tcctgagtag | ccgggattac | aggtgtgtgc | caccatgccc | agctaatttt | 14220 |
ttgtattttt | agtagagatg | gggtttcaca | atgttggcca | ggctggtctc | aaactcctga | 14280 |
cttcaaatga | tctgcccgcc | tcagccttcc | aaagtgctgg | gattacaggt | gtgagccatc | 14340 |
acacccagac | tgcttgttct | tatgtttctt | ctggttttct | tttttgtgtg | ttttttgttt | 14400 |
tgttttgttt | tgtttttttg | agacagactc | tcgtggtggc | atgatctcag | ctcactacaa | 14460 |
gctccgcctc | ccaggttcac | accattcccc | tgcctcagct | tcccaagtag | ctgggactac | 14520 |
aggtgcccac | caccacatcc | ggctaatttt | tttgtatttt | ttttagtaga | gacggggttt | 14580 |
cactgtgtta | gccaggatgg | tctcgatctc | ctgacctcgt | catccactca | cctcggcctc | 14640 |
ccaaagtgct | gggattacag | gcctgagcca | ccacccctgg | cctcttctgg | ttttatttct | 14700 |
aaaatgattt | ttttcttttt | cctaattctt | tcctaaattc | tgctagttct | ttatacattc | 14760 |
tttcatttaa | ccaaattatc | ccttatcttt | tctgatttct | gttctttcac | aattttgaaa | 14820 |
aatttcttag | tttcttttca | tttaatttgt | aatatcagat | tatcgtcagc | ttcatctgct | 14880 |
tggtggctct | atttttgtag | ttgctgttat | ctgcgtgtgt | gttaattcag | ttacttgtgt | 14940 |
ttgtattttt | tttttttttt | ttgagacatc | ttctgttttt | ttgctcttgt | taccaaggct | 15000 |
ggagtgcaat | ggcatgatct | tggctcactg | caacctctgc | ctctcagatt | caagcaattc | 15060 |
ttctgcctca | gcctcccaag | tagctgggac | tacaggtgac | tgccaccacg | cctagctaaa | 15120 |
tttttttttg | tatttttggt | agagacgggg | tttcaccatg | ttggccaggt | tggtctcgaa | 15180 |
ctcctgactt | caggtaatcc | acctgtctca | gcctcccaaa | gtgctgggat | tacaggcatg | 15240 |
agctgctgta | cccagtttgt | gtttttctta | caatatgttt | tcataaagct | tcgttgctct | 15300 |
tgtttaaata | gatagccttg | ctttactttt | agggcaagtt | cttgggggga | ataggagaag | 15360 |
- 70 034964
acggtagtta | ccttgaggtg | ccacttgtct | caatgcatgg | ccacctcccc | agtctccaca | 15420 |
gtcatgacac | ctcagtcatg | acatgaccgc | acagtcatgg | catctccacg | agctgctgcc | 15480 |
tctggatgct | gacttcagtt | tctgaacctt | ctttctcttc | tcatccccac | ttcttaccct | 15540 |
gttgagtttg | gattctacca | taagcagctt | tttctctgag | tgggtctctg | tccttctgaa | 15600 |
agggaggttt | tgggaggcat | ttctgacatc | ctcaagagcc | cacgtcagca | ctgactgacc | 15660 |
tctgcagaca | ctgagtggat | tcccacggga | tttttttggt | tcttgcccac | aaattggaac | 15720 |
ctgtggagcc | ctctctgttc | cattgttccc | cttgctgagg | attcagtgca | gagtggggtc | 15780 |
ctcgtctttt | gaggggcagc | cactttttgg | agattcctgt | gtctggcact | cttaggatct | 15840 |
taggacatga | gaacccttct | ttcttttccc | ccggctgcct | ctaccccgca | gctaatcgca | 15900 |
tgtgggtccc | acaggtcctg | ctggtggtgg | tggtctgacc | gcacactctc | atatcctgag | 15960 |
gtgctgtgta | acctaacttt | gttgacaatg | tgatcagatt | tgttattttg | ctgtcatcct | 16020 |
agttgcccta | tttttctgaa | gaaatttaga | gagattttaa | aaacccatgc | catcatgatc | 16080 |
tttctcatag | ccctcaccac | cccaccccac | ttctgttctt | aaatgccccc | tgtatgatag | 16140 |
tgctacctca | gctgatcatt | tgcacccata | ctaccttttc | tttttttaat | tgcctcacat | 16200 |
ggtttggcag | tacattgctc | agacccttcc | caccaatgct | gtcccttgct | gccagctatc | 16260 |
tctgggtgtg | atattgattg | actgagacag | aatctcactc | tgtcacccag | gctggagtgc | 16320 |
agtggtgcca | tctcagctca | ctgcagcttc | cacctcctgg | gttcaagcaa | ttctcctgcc | 16380 |
tcagcctccc | gagtagctgg | gattacaggt | gtgcaccacc | acacctggct | aatttttgta | 16440 |
tttttagtag | agatggggtt | ttgtcatgtt | gaccaggctg | gtctcaaact | gctgacctca | 16500 |
ggtgatctgc | ccgcctcagc | ctcccaaagt | attagtatta | caggtgtgag | ccaccacacc | 16560 |
cagctttcat | ttattttttg | gtcattcgtt | aggtcaacaa | atatttactg | agtgcccttt | 16620 |
atgaggctgg | tgctgtgcca | gaccccagtc | tccagctggg | tctgcatgtt | ctgtcttctg | 16680 |
ctagtagaga | tatgactgtt | gacactgccc | caggcagcac | acaggccttc | tgatctgggt | 16740 |
ggacacaccc | caggggtgct | gtgggcagca | gccacagtga | ccaggatccc | cagaaatgag | 16800 |
ccatcagcca | agctcagcta | acctctagta | tatgttcttt | gggcacatgc | acacatttct | 16860 |
gtgtctcctc | acttggggac | ccaagttctg | aatggccaag | gttctgccat | aaactctgtg | 16920 |
gagtctcgag | caagtcattc | ctgtcctttg | accgtcagtt | ttctctttgg | caaaatgaag | 16980 |
gtgttggact | agagcagggg | ctagcaaatg | ttttctctaa | agggccagag | aataaatatt | 17040 |
ttaggcgttg | tgggtcatac | agtgacggtc | acagctattc | atctctgccc | ctggagctca | 17100 |
aaagtagcta | tagataatgg | acaacaaaag | gcagtggcac | tattcccccc | agattttatt | 17160 |
tacagaaaga | ggaccacagc | ttgccaaccc | ctggaccaga | ccctgggctc | tgaagctccc | 17220 |
ttgccgctct | gacattttgt | tgatccagga | tgctgtatgg | aattggttca | ggaggcctct | 17280 |
gccttcctga | gggtcttttc | gaccttctgc | ttagcccagc | cctctccagg | gcccctcagt | 17340 |
gctaaacatg | ggctgagtcc | acttggggac | tgtgtggatg | ttcacctcca | ccccaccctc | 17400 |
- 71 034964
ctacctctcc | ctttttcctg | gagccaggag | caggaatact | cgtagggaat | taagggcatg | 17460 |
gtgggagtga | aattggggct | aagaatgtat | aaactcagca | gggcaccatt | gggggcaaac | 17520 |
tagccaacca | gaggaaagat | agttagtggc | tttggcattg | agccttcatg | ggtaatgatc | 17580 |
ctgctcaacc | gagacccagg | agagactagc | aaggaagaag | cacatgcacc | acaacattcc | 17640 |
ccttctgttt | tcacaggttc | ccatccaatt | acagcagcac | aaggatatcc | ctaaatgttt | 17700 |
aggctttgtc | attgtttaca | aggcaaagga | gtatggcagt | tgctcccttt | ggaggatgta | 17760 |
aatgccttca | caaggctaag | aaacttaaca | gggctgatcc | gaggaatgtt | taagaacctt | 17820 |
cctgggcagg | gccattgttg | tggaagcaac | tggccttgct | ctcagatggc | ctcatctggc | 17880 |
catcgcggat | ggaatgccca | atgcaagact | caacagggat | catcagctga | ttttctgtcg | 17940 |
aacaaaccaa | caagactatt | cctagaaaaa | cgtacatgtc | taaggccagg | cagtggctca | 18000 |
agcctgtaat | ctcagcactt | tgggaggccg | aggtgggcag | atcacttgag | gtcaggagtt | 18060 |
cgagaccagc | ccagccaaca | tggcaaaact | ccatccctac | taaaaataga | aaaagtagct | 18120 |
gagcgtttgt | ggtacatgct | tataattcca | gctactcagg | aggctgagca | ggagacttgc | 18180 |
ttgaaccccg | ggagacagag | attgtagtga | gctactgcat | tctagcctgg | gcaacagagt | 18240 |
gagactctgt | ctcaaagaaa | aagaaaaatg | tctatttctg | tgtgaaaata | aatgtcagga | 18300 |
tgcacatagt | gaaaaggaag | ggagaagaaa | catggggaga | aaatggggat | agggacacag | 18360 |
aaagtgaaga | aacctgttag | gctgaattcg | aaagacaagg | aagcaaaaca | tgattattgt | 18420 |
aaaacagtac | tgggaagaat | gggggtgggg | agggtacagg | gaatggtcaa | atcaggatcc | 18480 |
agagataggg | tttggaagta | aatccatctg | acaaggttcc | gtttaatggg | ggtggactcc | 18540 |
cctgggtggt | ctgtgcagcc | ccttccacat | ccatagtctg | gtttcacaca | cacattaggc | 18600 |
gcccggtaca | gactgaatga | ggagagggcc | aagcctcagg | gaccctgggt | ggcaaataat | 18660 |
cccaaaggct | gcttcagcac | ctggctccag | gaggatgacc | ttcctcccat | ttctttaatt | 18720 |
aaagggggac | caatcctctt | cgggcatttg | ggagtctatc | agtttgggac | ctgtattgtg | 18780 |
ggatgaactg | gtggcctgcc | ctggggcagg | gagtgatcca | tatctcagat | tgttgttggg | 18840 |
gagggagctt | gggcctcagt | atccctgttg | gtaaatgggg | ccaggaaatg | ggtgaccttt | 18900 |
tatggcactt | tagctctcat | cttccagtgc | cttccaaatc | attacttact | gtgagaagct | 18960 |
ggttgagatg | accacaatat | gaccaagtgt | taatgaccgt | gtgtcactgt | gccccctctt | 19020 |
tgtctttgca | gtgctgttgg | ggatttccag | gtggacgaca | agaccaaagc | cttactcaag | 19080 |
tacactgggg | aggtgacttg | gatacctccg | gccatcttta | agagctcctg | taaaatcgac | 19140 |
gtgacctact | tcccgtttga | ttaccaaaac | tgtaccatga | agttcggttc | ctggtcctac | 19200 |
gataaggcga | aaatcgatct | ggtcctgatc | ggctcttcca | tgaacctcaa | ggactattgg | 19260 |
gagagcggcg | agtgggccat | catcaaagcc | ccaggctaca | aacacgacat | caagtacaac | 19320 |
tgctgcgagg | agatctaccc | cgacatcaca | tactcgctgt | acatccggcg | cctgcccttg | 19380 |
ttctacacca | tcaacctcat | catcccctgc | ctgctcatct | ccttcctcac | tgtgctcgtc | 19440 |
- 72 034964
ttctacctgc | cctccgactg | cggtgagaag | gtgaccctgt | gcatttctgt | cctcctctcc | 19500 |
ctgacggtgt | ttctcctggt | gatcactgag | accatccctt | ccacctcgct | ggtcatcccc | 19560 |
ctgattggag | agtacctcct | gttcaccatg | atttttgtaa | ccttgtccat | cgtcatcacc | 19620 |
gtcttcgtgc | tcaacgtgca | ctacagaacc | ccgacgacac | acacaatgcc | ctcatgggtg | 19680 |
aagactgtat | tcttgaacct | gctccccagg | gtcatgttca | tgaccaggcc | aacaagcaac | 19740 |
gagggcaacg | ctcagaagcc | gaggcccctc | tacggtgccg | agctctcaaa | tctgaattgc | 19800 |
ttcagccgcg | cagagtccaa | aggctgcaag | gagggctacc | cctgccagga | cgggatgtgt | 19860 |
ggttactgcc | accaccgcag | gataaaaatc | tccaatttca | gtgctaacct | cacgagaagc | 19920 |
tctagttctg | aatctgttga | tgctgtgctg | tccctctctg | ctttgtcacc | agaaatcaaa | 19980 |
gaagccatcc | aaagtgtcaa | gtatattgct | gaaaatatga | aagcacaaaa | tgaagccaaa | 20040 |
gaggtaagga | tatggctttt | attacattgg | tcattcattc | attcaacaaa | tatttatggg | 20100 |
ttcctcgtgg | ggcaaggcat | agggtagggg | gttaagaaat | tgccctctgg | agtcagtggc | 20160 |
ctgtgttaag | accagttata | tgtccttggg | tatgttacct | cacctctctg | agcctgtttt | 20220 |
ctcttctgta | aaatgggatg | ataaagcttg | gtatgtggta | ccctgaagct | agccaccagg | 20280 |
ctgccagcag | gctggcaggc | tggaccatga | aaacacctga | tgccaataga | ctagattagg | 20340 |
atgtaggctg | gaaaagggca | tggggccaga | tgatctccag | ttagtattgg | ttaattgagg | 20400 |
ttatattttt | atttttattt | atttttttga | gacagggtcc | tgctctgttg | cccaggctgg | 20460 |
agtgcagtgg | cgcaatcttg | gctcactgca | acttccgcct | cccagctcaa | gcgattctcc | 20520 |
cacctcagtt | tcccgagtag | cttgaactac | agatgccccg | ccaccatacc | ctaatttttt | 20580 |
tgtaccgatg | gggttttgcc | atgttgccca | ggttggtctc | agactcctcg | actcaatctg | 20640 |
ctcacctcag | tctcccaaaa | tgctgggact | acaggcatga | gccaccgcac | ctggccttta | 20700 |
tttttacttt | ctaattgtat | atgtgttctc | actgaggaag | aatttacgtg | gagtaaagtg | 20760 |
cacacctctt | cagtgtacat | ctcaatgagt | ttttacatca | tgtatacaac | catgtaacca | 20820 |
agacccaggt | aaagatatag | aacactccca | gggcccctag | aaagttcccc | aatgcccttg | 20880 |
ccagtcagtg | tctccctccc | tgcttggtac | ccaccatcct | ggcttaggcg | cagtggctca | 20940 |
cgcctgtaat | cctagcactt | taggaggctg | aggcaggtgg | atggcttgag | atcaggagtt | 21000 |
tgagaccagc | ctgggaaaca | tagcgaaacc | ccgtctctaa | cagaaataca | aaaattagcc | 21060 |
aggcgtggtg | gcacgtgcct | gtagttccag | ctactcagga | ggctgaggtg | agaggatcac | 21120 |
tggagctcag | gaagtctagt | gagctgtgat | catgccactg | cactccagcc | tgggtaacag | 21180 |
agtgaagtcc | tttctttaat | taattaatta | attttttaaa | aaaccattat | actgacttat | 21240 |
ttgataattg | attagtttta | cctatttttt | tttttttttg | agatggagtc | ttgctctgtc | 21300 |
acccagaatg | gagtgcagta | gtacaatctc | tgcctactgc | aacctctgct | tcccaggttc | 21360 |
aagtgattca | catgcctcag | cctcccaagt | gtctgggact | acaggtaccc | gcccgctacc | 21420 |
atgcctaatt | ttttgtattt | ttaatagaga | ggggattttg | ccatgtttgt | caggctggtc | 21480 |
- 73 034964
ttgaactccc | gacctcaggt | gatctgcccg | ccttggcctc | ccaaagtgct | aggattaaag | 21540 |
gtgtgatcca | ccacacctgg | ccttttgagc | cctcagaaga | acatttatcc | ataaacattc | 21600 |
ttgagaaggc | atgccaataa | gaagagaaat | aaatccaggg | ggctacaaag | gagaggagga | 21660 |
aagcctcagg | ctccaccagt | caatgggcag | ctcagttctc | tgcacttccc | tttagccagg | 21720 |
ctctgctggg | cttgtgaggg | accccctgaa | cctgcatctc | tgggctggga | gtggcaggct | 21780 |
aaagaggcaa | agtggcaggg | gaacaaagat | ctccctagct | ctcccctcca | ccaagcccct | 21840 |
ccccctgcca | gccccagtct | ctggccacac | cttcccagtt | tctgggtctt | taaagtagtc | 21900 |
ttctcatgct | tctgggccag | ctctcaattt | gggctagttc | accactttgc | ctaacatctg | 21960 |
tgactcatca | gaaaatggcc | aatatcattg | tgctttaaag | actttaggag | ctagatataa | 22020 |
gccaggcaca | gtggcttaca | cctgtaatcc | aacactttgg | gaggccaagg | caggaggatc | 22080 |
acttgagccc | aggagttcaa | aaccatcctg | ggccacgtag | ggaaaccctt | tctctacaaa | 22140 |
aaaaatttaa | aaatcaggcc | aggtgcagtg | gctcacgcct | gtaatcccaa | cactttggga | 22200 |
ggccgaggca | ggtggatcac | ctgaggttgg | gagttcaaga | ccagcctggc | caacaatggt | 22260 |
gaacctccat | ctctactaaa | aatacaataa | attaaccggg | gggtggtggt | ggcatgagcc | 22320 |
tgtaatctta | gctactcggg | agtctgaggc | acaagaattg | cttgaactcg | ggagacagag | 22380 |
gttgcagtga | gccaagatca | caccactgga | ctccagccta | ggtgacagag | tgagactccg | 22440 |
tttcaaaaaa | aaaaaaaaaa | tgccgggtgc | agtggctgac | gcctgcaatc | ccagcacttt | 22500 |
gggaggctgg | ggcaggtgga | tcacctgagg | tcaggagttt | gagaccagcc | tggccaacat | 22560 |
aaaaccccat | ctctactaaa | tacaaaaatt | agctgggcat | ggtgctaggc | acctgtaatc | 22620 |
ccagctactc | aagaggctga | ggcaggagaa | ttgcttgaac | ctgggaggtg | gagcttgcag | 22680 |
tgaggcgagg | tcatgccact | gcactccagc | ctgggcgtct | caaaaaacaa | aaaattgccc | 22740 |
aagtgtagtg | acacacacct | gtagttccag | ctactcagga | agctgagtgg | ggaagattac | 22800 |
ttgagcccgg | gaggtcaagg | ctgcagcaag | ccatgattgc | acccctgcac | tccagcttga | 22860 |
gcaacaaagc | aagaccctgt | ctcaaaaaaa | aaaaaaagat | ataaaatttc | tgtccagcca | 22920 |
gctctttttg | caccactatt | tctattcatg | tataaaaccc | aagtgtcatc | tttcttcatg | 22980 |
aggcttgagt | aagggtcatt | ttataaatca | acattagtat | cactaggctc | tattcattaa | 23040 |
ggactctgtt | ctgaaacaag | cttctgaggg | aagtactgtt | cttatcccca | ttttacagat | 23100 |
aaggaaattg | aggctaagag | cggtcatgga | atttacccag | attctcacaa | ctcaaaagga | 23160 |
gcagagctgg | gattctaatc | agtttgtctc | caagtctctg | cttttccaca | cctctgcctc | 23220 |
ctagagcctt | aggaggtggc | tggtaggggg | tgggtaggaa | tctcacatct | caaggtgtat | 23280 |
ctgaagcaca | cacaaaccag | tcttaggaat | tcaaatgaag | tacctcatgg | caaatatggc | 23340 |
atcataattc | taattttacc | tatgacagta | gtgtcaccaa | gagaacacat | ttactcaggc | 23400 |
tcacaatggt | gatgtaaaat | cttcatctcc | cagcgccatt | tcagtatact | tataataaag | 23460 |
aggcagcatg | taatttatta | atttcattat | tgcttcaaaa | tcagctgact | catgggttct | 23520 |
- 74 034964
ctcaattcaa | ttatggcttc | tttgctttct | gaattgtcta | ggagtataat | tacaattttc | 23580 |
cttcctattt | caagcccaaa | ttgaagctgt | attatataca | attggtcttg | ctttttctcc | 23640 |
catcttttac | tttattgtca | gcaattattt | ctgatgttca | acctgctctc | caactgcaca | 23700 |
gtatcccatg | atactttggt | cttatgagta | aaaatgactt | ttgatcagct | gggcatcgtg | 23760 |
gagagggcag | tggggaggga | aagagtgatg | aggatggact | tgccctgata | acgcttatct | 23820 |
catttttgga | acagatgtta | aaaggaaatt | tattttgttg | tttttgagac | agggtctcgc | 23880 |
tctgttgccc | aggctggagt | gcagtggcgt | gatctctgct | cactgcaacc | tccgcctccc | 23940 |
gggttcaaga | aattctcatg | cctcagcctc | ccaagtagct | ggggattaca | ggcatgtgcc | 24000 |
accactcctg | gccaattttt | gtatttttgg | tagagacagg | gtttcaacag | ggtttcacca | 24060 |
tgttggccag | gctggtctca | aactcctgac | ctcaggtgat | ctcagcctcc | caaagtgctg | 24120 |
ggattacagg | cgtgagccac | tgcgccaaat | ttatatctaa | aactggatag | agtactttga | 24180 |
aacaatggta | gattatattg | gactatatta | gccattctaa | ccaaggccca | gaatcctgcc | 24240 |
atggaagcct | aagtaactgg | tttcactaac | tttataaaat | tggaattcag | tttagaaaaa | 24300 |
ctaggttatg | catttttagg | aaacttctga | tttgaaacag | atctaacatg | acagatcttt | 24360 |
tatacctgtt | tctctcctgc | ataaacagaa | acttgagaat | ggtggatttc | ctcagaccac | 24420 |
atcaattagg | aaaaaaaggg | cttcttacat | attagagaca | aaatggcttc | tactgcaacg | 24480 |
tgttgattac | atcttcagta | ttgaaaatgt | attcatttgc | ctttccctcc | atgttttttt | 24540 |
tcttttatca | ttttgttttg | cagattcaag | atgattggaa | gtatgttgcc | atggtgattg | 24600 |
atcgtatttt | tctgtgggtt | ttcaccctgg | tgtgcattct | agggacagca | ggattgtttc | 24660 |
tgcaacccct | gatggccagg | gaagatgcat | aagcactaag | ctgtgtgcct | gcctgggaga | 24720 |
cttccttgtg | tcagggcagg | aggaggctgc | ttcctagtaa | gaacgtactt | tctgttatca | 24780 |
agctaccagc | tttgtttttg | gcatttcgag | gtttacttat | tttccactta | tcttggaatc | 24840 |
atgcaaaaaa | aaaaatgtca | agagtattta | ttaccgataa | atgaacattt | aactagcctt | 24900 |
tttggtatgg | taaagagatg | tcaaaatgtg | attctatgtg | attagtatgc | tatgctatgg | 24960 |
aatatacatg | taaaaatgtt | tccttttagt | tgttgaaaca | aaactggata | gaaaaatgct | 25020 |
gttcagaaat | atgaaaagtc | attcagttat | cactacagat | ctcccagtaa | tttttcttat | 25080 |
ttagcccata | atctctttga | aggtttatac | taattcagca | atcccccatc | gttacccatt | 25140 |
tcttaccatg | catttctcgt | tctttactgg | gtctaaaggg | ctatgcctcc | atttcagaga | 25200 |
gcttcaacta | cttctcttgc | atacttctaa | attataccat | gagaaatcat | gcctagttat | 25260 |
tcattgttaa | tataactgtc | ttagtacacc | ataaactggg | tggattataa | acaacagaaa | 25320 |
cttctcagtt | ttggaggttg | ggaggtccaa | ggtcaaggca | ccagcaaatt | tggtgtctgg | 25380 |
tgagggtcct | cttcctcaaa | gggtgccttc | tagctgtgtc | ctcacatgac | tgaagggact | 25440 |
agctatctct | gtggggtcta | ttttataagg | gcactaaccc | cattcatgag | agcagagccc | 25500 |
ccatggccta | atcacctttc | caaggcccca | ccttctatct | aagacaatca | cgctgggaat | 25560 |
- 75 034964
aggtttcaac | atatgaattg | ggggaggaca | catttggacc | acagcatgaa | cctttagaac | 25620 |
agggtttctc | agccttagca | ctatggacat | tttgggctgg | ataaatatgt | gttggtacag | 25680 |
aatgggggta | tcctgtgcat | tgtaggatct | ttagcagtac | cctagcctca | actcactaga | 25740 |
tgccaatgac | ataccttgct | tcttcaccag | ttatgataac | caagaatgtc | tccattgtta | 25800 |
aatgttccct | taggagcaaa | attgcccctg | gttgagaaac | attgctttag | acaaattgtt | 25860 |
aagagtatca | tgtactacac | ttctgaaact | taacgtgatc | atcaccactg | acagatgatt | 25920 |
cacagagact | gtttgaatct | tgtctcacta | gtttttcctg | tgcaaaaata | aaatggacag | 25980 |
aattgcagcc | cgctgtgact | catgtttcaa | taagtcaaaa | gaaagatgtc | gataaaaatt | 26040 |
tatatataaa | aatcataagt | aacagtaatg | gtagtataag | agggatcagg | gatgtatacg | 26100 |
aactaaggta | ggtagctggc | aggcaatcta | aattcatcac | accaggcttt | cactcattaa | 26160 |
atggcattaa | acacctgcct | acgattaaat | gcaaattaga | tagggtctcc | tccgccttcc | 26220 |
aaagagcatt | ggcttgaact | tagataggtt | acttattata | aataaatgag | gtgtttgtga | 26280 |
tctcaacagc | taagagttct | aaattgaacg | agggtttctg | tcagtgtttg | ctacctggtc | 26340 |
acacctgaag | tggtgacatt | tagagatgga | atttaactgt | tttaactgtg | atacattata | 26400 |
ctgtactaaa | tcatttacgc | tgtactagta | ataggctaag | attgattaca | tctaaaggcc | 26460 |
cttgcaactc | taagattcta | ttattgtaat | tgttagaatg | aaggagagaa | aactgaaata | 26520 |
ttacaggtat | ataacagtgt | gcatatacca | aattagaata | ctgtgtttca | tattagaaga | 26580 |
ttgttttctc | acagaatgat | ttagaccaaa | atatgtttga | gacagagttt | tgctcttgtt | 26640 |
gccaggctgg | agtgcaatgg | cgcagtctcg | gctcactgca | gcctccacct | cccaggttca | 26700 |
agcgattctc | ctgcctcagc | ctcttgagta | gctgggacta | caggcgcctg | ctaccatgcc | 26760 |
cgactaattt | tttgtattct | tagtagagac | ggggcttcac | catgttggtc | aggctagtct | 26820 |
cgaactccta | acctctggtg | atccacctgc | ctcagcctcc | caaagtgctt | ggattacaga | 26880 |
tgtgagccac | tgcccccggc | cctaaatatg | ttttttaaat | ggggttcatg | taattgtagt | 26940 |
ggactgacta | ttctaagatc | aaggataaag | agatactacc | acaatttata | tagaagatgg | 27000 |
ttctattaat | tgtgggaaat | gtggacaaga | ggactgaaat | taatgttaag | gatatgctac | 27060 |
tgcgtgtcca | caggagttgt | ctactgtatg | actttacagt | ggaagctaag | ctacagaaat | 27120 |
agttaacaca | ataattaagc | atctaaagaa | taaagtaagc | cttaaaggag | ttcccaattc | 27180 |
ctgtttttca | tttattttta | aaatgttggt | tatggaaaag | cagcagcaca | ttaagttgtt | 27240 |
gttattatta | ttatttgaga | ctgagttttg | ctcttgttgc | ccaggctgga | gtgcaatggc | 27300 |
gtgatctcag | ctcaccgcaa | cctccgccac | ctgggttcaa | gcgattctcc | tgccgcagcc | 27360 |
tcccaggtag | ctgggattac | aggtgtgcac | caccaccctg | gctaatttca | tatttttagt | 27420 |
agagacgggg | tttctccacg | ttggtcaggc | tggtctcgaa | ctcccaacct | caggtgatac | 27480 |
gcccacctcg | acctcccaaa | gtgctgggat | tacaggtgtg | agccaccgtg | cccggccaca | 27540 |
ttaagtaatt | attatatcaa | gcatcacatt | aagtaattat | atcaagtagt | cagcttttta | 27600 |
aatatagcag | tataatatta | tattaaagat | tagctgttac | tcagtgagta | caggaaagtt | 27660 |
tacatacctt | taccaaatgc | agaaaagttt | taaaatcagt | cttcaaatac | aactggaatt | 27720 |
ctccagcaca | gtcaaaggat | gaactttact | gtggattata | aattagtatt | atttgccagg | 27780 |
atacaaatac | tagatttttc | actagtccag | ttcagataat | attttgctat | ttttacaaga | 27840 |
tcaaatgtat | ctcatcagtt | attacttcag | tcatacagcc | aactgttcaa | atggatcatc | 27900 |
tgttaacata | aattgaggtt | agcaacttag | tctgttaaag | cttgcactaa | atttaacaca | 27960 |
taacttacat | tttcataatt | ttataggtgc | catcagatat | atgtgtgtta | actaaatgta | 28020 |
tacttcagtc | ccttgggagg | cttcacttat | ttgcatttcc | aatatgaact | ggtattaata | 28080 |
tatttgccca | tttataaata | acaggaacaa | aaagcccaag | agatccaaca | attgaaacga | 28140 |
aaagaaaagt | ccacagaaac | atccgatcaa | gaacctgggc | tatgaatttc | caatcttcaa | 28200 |
caacctgtta | ggaaaaaaat | aaaaatgcat | taaataattg | taaa | 28244 |
Claims (19)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (α7 nAChR), для лечения когнитивного нарушения, психотического расстройства или нейродегенеративного расстройства у индивидуума в выбранной популяции индивидуумов, причем популяция индивидуумов выбрана на основе наличия по меньшей мере одного характерного SNP гена субъединицы альфа-5 (CHRNA5) человеческого ацетилхолинового рецептора или гена субъединицы альфа-3 (CHRNA3) человеческого ацетилхолинового рецептора.
- 2. Применение по п.1, причем когнитивное нарушение, психотическое расстройство или нейродегенеративное расстройство представляет собой состояние, при котором играет роль или задействована активация α7 nAChR.
- 3. Применение по п.1 или 2, причем когнитивное нарушение, психотическое расстройство или нейродегенеративное расстройство выбрано из группы, состоящей из легкого когнитивного нарушения, болезни Альцгеймера, деменции при болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, шизофрении, сосудистой деменции, деменции при СПИДе, сенильной деменции, легкого когнитивного нарушения, связанного с возрастом (MCI), связанного с возрастом нарушения памяти, аутизма, деменции при дегенерациях лобной доли, инсульта, дегенеративного расстройства базальных ганглиев, рассеянного склероза, травмы, опухоли мозга, инфекции мозга, гидроцефалии, депрессии, токсического или метаболического расстройства и деменции, вызванной лекарственными средствами.
- 4. Применение по п.3, причем когнитивное нарушение, психотическое расстройство или нейродегенеративное расстройство представляет собой шизофрению.
- 5. Применение по любому из пп.1-4, причем характерный SNP человеческого CHRNA5 представляет собой SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) или SNP, образующий гаплотип с одним из указанных SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с одним из указанных SNPs.
- 6. Применение по п.5, причем гаплотип SNP содержит SNPs rs3841324 (SED ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7) и причем указанные SNPs образуют гаплотипы delTTC или insATC.
- 7. Применение по любому одному из пп.1-6, причем индивидуумы в выбранной популяции индивидуумов являются гомозиготными в отношении характерных SNP CHRNA5 или указанных характерных SNP CHRNA5.
- 8. Применение по любому одному из пп.1-4, причем характерный SNP человеческого CHRNA3 представляет собой генотип SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4), или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36), или SNP, образующий гаплотип с одним из указанных SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с одним из указанных SNPs.
- 9. Применение по п.8, причем индивидуумы в выбранной популяции индивидуумов являются гомозиготными в отношении характерного генотипа SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) CHRNA3.
- 10. Применение по п.8, причем индивидуумы в выбранной популяции индивидуумов являются гомозиготными в отношении SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготными в отношении SNP rs6495308-C/T (SEQ ID NO: 3/4).
- 11. Применение по любому одному из пп.1-10, причем гаплотип SNP содержит по меньшей мере два из SNP, выбранных из группы, состоящей из rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4) и rs16969968-G (SEQ ID NO: 37).
- 12. Применение по любому одному из пп.1-11, где активатор α7 nAChR представляет собой соединение формулы (I)где L1 представляет собой -CH2-; L2 представляет собой -ОИ2-или -CH2-CH2-; и L3 представляет собой -CH2- или -CH(CH3)-; илиL1 представляет собой -CH2-CH2-; L2 представляет собой -CH2-; и L3 представляет собой -CH2-CH2-;L4 представляет собой группу, выбранную из- 77 034964или1_4а1_4ЬГ где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалькильной составляющей;Ri представляет собой водород или C1.4алкил;Х1 представляет собой -O- или -NH-;группа А2 выбрана изгде связь, отмеченная звездочкой, присоединена к Х1;A1 представляет собой от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;каждая группа R2 представляет собой независимо С1-6алкил, С1-6галогеналкил, С1-6алкокси, С1-6галогеналкокси, галоген, циано или от трех- до шестичленную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или частично насыщенной и которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и причем каждая кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем каждая кольцевая система может в свою очередь быть замещена один или несколько раз С1-6алкилом, С1-6галогеналкилом, С1-6алкокси, С1-6галогеналкокси, галогеном, циано, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;или две группы R2 на соседних кольцевых атомах образуют С3-4алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х2, и где С3-4алкиленовая группа может быть замещена одной или несколькими группами R3;каждая группа Х2 независимо представляет собой -O- или -N(R4)-;каждая группа R4 независимо представляет собой водород или С1-6алкил; и каждая группа R3 независимо представляет собой галоген или С1-6алкил;в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
- 13. Применение по п.12, где активатор α7 nAOiR находится в форме свободного основания или в форме фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли.
- 14. Применение по п.12 или 13, где соединение формулы (I) представляет собой R)-3-(6-п-толилпиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октан.
- 15. Способ прогнозирования способности к ответу на лечение индивидуумов или группы индивидуумов на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (α7 nAOiR) для улучшения когнитивных способностей или лечения когнитивного нарушения, психотического расстройства или нейродегенеративного расстройства, включающий стадии:I) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5; иII) идентификации тех индивидуумов стадии I, которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) гена OTRNA5, или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, причем присутствие по меньшей мере одного из SNPs или гаплотипов SNPs, перечисленных на стадии II выше, является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором α7 nAChR.
- 16. Способ прогнозирования способности к ответу на лечение индивидуума или группы индивидуумов на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (α7 nAOiR) для повышения когнитивных способностей или лечения когнитивного нарушения, психотического расстройства или нейродегенеративного расстройства, включающий стадии:- 78 034964I) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA3; иII) идентификации тех индивидуумов стадии I), которые являются носителями SNPs rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) и/или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36) CHRNA3, причем гомозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3), гетерозиготное присутствие SNP rs6495308-C/T или гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором α7 nAChR.
- 17. Применение по п.15 или 16, где активатор α7 nAChR представляет собой Щ)-3-(6-п-толилпиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октан в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
- 18. Применение по меньшей мере одного зонда для выявления:(i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4), или (iv) SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36), или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs для определения того, может ли индивидуум отвечать на:(a) лечение когнитивного нарушения, психотического расстройства или нейродегенеративного расстройства или состояния, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (α7 nAChR), или (b) улучшение когнитивных способностей активатором α7 nAChR.
- 19. Применение по п.18, где активатор α7 nAChR представляет собой Щ)-3-(6-п-толилпиридин-3илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октан в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161549319P | 2011-10-20 | 2011-10-20 | |
PCT/IB2012/055692 WO2013057687A2 (en) | 2011-10-20 | 2012-10-18 | Biomarkers predictive of responsiveness to alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor activator treatment |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201490832A1 EA201490832A1 (ru) | 2015-12-30 |
EA034964B1 true EA034964B1 (ru) | 2020-04-13 |
Family
ID=47297333
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201490832A EA034964B1 (ru) | 2011-10-20 | 2012-10-18 | Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP2768507B1 (ru) |
JP (1) | JP6162705B2 (ru) |
KR (1) | KR102043077B1 (ru) |
CN (1) | CN103930112B (ru) |
AU (1) | AU2012324458B2 (ru) |
BR (1) | BR112014007485B1 (ru) |
CA (2) | CA3083244C (ru) |
EA (1) | EA034964B1 (ru) |
ES (1) | ES2776996T3 (ru) |
IN (1) | IN2014CN03647A (ru) |
JO (1) | JO3766B1 (ru) |
MX (1) | MX2014004621A (ru) |
TW (1) | TWI635861B (ru) |
WO (1) | WO2013057687A2 (ru) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3578205A1 (en) | 2010-08-06 | 2019-12-11 | ModernaTX, Inc. | A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof |
AU2011308496A1 (en) | 2010-10-01 | 2013-05-02 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
JP2014511687A (ja) | 2011-03-31 | 2014-05-19 | モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド | 工学操作された核酸の送達および製剤 |
US9464124B2 (en) | 2011-09-12 | 2016-10-11 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
PT3682905T (pt) | 2011-10-03 | 2022-04-07 | Modernatx Inc | Nucleósidos, nucleótidos e ácidos nucleicos modificados e respetivas utilizações |
HRP20220717T1 (hr) | 2011-12-16 | 2022-07-22 | Modernatx, Inc. | Modificirani pripravci mrna |
US9572897B2 (en) | 2012-04-02 | 2017-02-21 | Modernatx, Inc. | Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins |
US9283287B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-03-15 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins |
EP2834358A4 (en) | 2012-04-02 | 2016-03-09 | Moderna Therapeutics Inc | MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF NUCLEAR PROTEINS |
US9254311B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-02-09 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of proteins |
EP4074834A1 (en) | 2012-11-26 | 2022-10-19 | ModernaTX, Inc. | Terminally modified rna |
US8980864B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-03-17 | Moderna Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of altering cholesterol levels |
EP3052106A4 (en) | 2013-09-30 | 2017-07-19 | ModernaTX, Inc. | Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides |
EP3052521A1 (en) | 2013-10-03 | 2016-08-10 | Moderna Therapeutics, Inc. | Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor |
CA2965129C (en) | 2014-10-20 | 2024-03-12 | Oyster Point Pharma, Inc. | Method of treating ocular conditions using varenicline |
IL299204A (en) | 2016-04-07 | 2023-02-01 | Oyster Point Pharma Inc | Methods for treating eye conditions |
US11433057B2 (en) * | 2016-05-20 | 2022-09-06 | Vanda Pharmaceuticals Inc. | Method for improving or enhancing cognition |
CN107188900B (zh) * | 2017-05-27 | 2019-09-06 | 北京师范大学 | α7烟碱型乙酰胆碱受体的配体化合物及其应用 |
US11862337B2 (en) | 2019-03-19 | 2024-01-02 | Cambridge Cognition Limited | Method and uses of diagnosing and recommending treatment for a psychotic disorder |
Family Cites Families (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4683194A (en) | 1984-05-29 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Method for detection of polymorphic restriction sites and nucleic acid sequences |
US5075216A (en) | 1988-09-23 | 1991-12-24 | Cetus Corporation | Methods for dna sequencing with thermus aquaticus dna polymerase |
CA2153387A1 (en) | 1993-01-07 | 1994-07-21 | Hubert Koester | Dna sequencing by mass spectrometry |
US5498531A (en) | 1993-09-10 | 1996-03-12 | President And Fellows Of Harvard College | Intron-mediated recombinant techniques and reagents |
US6953855B2 (en) | 1998-12-11 | 2005-10-11 | Targacept, Inc. | 3-substituted-2(arylalkyl)-1-azabicycloalkanes and methods of use thereof |
WO2001077388A2 (en) | 2000-04-05 | 2001-10-18 | Glaxo Group Limited | Iterative analysis of non-responding population in the design of pharmacogenetic studies |
GB0010955D0 (en) | 2000-05-05 | 2000-06-28 | Novartis Ag | Organic compounds |
DE10156719A1 (de) | 2001-11-19 | 2003-05-28 | Bayer Ag | Heteroarylcarbonsäureamide |
DE10164139A1 (de) | 2001-12-27 | 2003-07-10 | Bayer Ag | 2-Heteroarylcarbonsäureamide |
DE10211416A1 (de) | 2002-03-15 | 2003-09-25 | Bayer Ag | Essig- und Propionsäureamide |
DE10211415A1 (de) | 2002-03-15 | 2003-09-25 | Bayer Ag | Bicyclische N-Biarylamide |
DE10234424A1 (de) | 2002-07-29 | 2004-02-12 | Bayer Ag | Benzothiophen-, Benzofuran- und Indolharnstoffe |
GB0220581D0 (en) * | 2002-09-04 | 2002-10-09 | Novartis Ag | Organic Compound |
KR101129933B1 (ko) | 2002-09-25 | 2012-03-23 | 메모리 파마슈티칼스 코포레이션 | 인다졸, 벤조티아졸 및 벤조이소티아졸 및 그의 제조 및용도 |
US20050065178A1 (en) | 2003-09-19 | 2005-03-24 | Anwer Basha | Substituted diazabicycloakane derivatives |
US20050245531A1 (en) | 2003-12-22 | 2005-11-03 | Abbott Laboratories | Fused bicycloheterocycle substituted quinuclidine derivatives |
WO2006065233A1 (en) | 2004-12-10 | 2006-06-22 | Abbott Laboratories | Fused bicycloheterocycle substituted quinuclidine derivatives |
PE20060437A1 (es) | 2004-06-18 | 2006-06-08 | Novartis Ag | COMPUESTOS AZA-BICICLONONANOS COMO LIGANDOS COLINERGICOS DE nAChR |
GB0415746D0 (en) | 2004-07-14 | 2004-08-18 | Novartis Ag | Organic compounds |
GB0521508D0 (en) | 2005-10-21 | 2005-11-30 | Novartis Ag | Organic compounds |
GB0525672D0 (en) | 2005-12-16 | 2006-01-25 | Novartis Ag | Organic compounds |
GB0525673D0 (en) | 2005-12-16 | 2006-01-25 | Novartis Ag | Organic compounds |
TW200813067A (en) | 2006-05-17 | 2008-03-16 | Astrazeneca Ab | Nicotinic acetylcholine receptor ligands |
BRPI0711588A2 (pt) | 2006-05-19 | 2011-11-16 | Abbott Lab | derivados alcano azabicìclico substituìdo com bicicloeterociclo fundido |
US8314119B2 (en) | 2006-11-06 | 2012-11-20 | Abbvie Inc. | Azaadamantane derivatives and methods of use |
SA08290475B1 (ar) | 2007-08-02 | 2013-06-22 | Targacept Inc | (2s، 3r)-n-(2-((3-بيردينيل)ميثيل)-1-آزا بيسيكلو[2، 2، 2]أوكت-3-يل)بنزو فيوران-2-كربوكساميد، وصور أملاحه الجديدة وطرق استخدامه |
WO2009066107A1 (en) | 2007-11-21 | 2009-05-28 | Astrazeneca Ab | Use of a nicotinic receptor agonist |
CN102186826B (zh) | 2008-10-13 | 2015-06-17 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 制备双环5-三氟甲氧基-1h-3-吲唑甲酰胺合成中的吲唑中间体的非重氮化方法 |
CN102209540A (zh) * | 2008-11-11 | 2011-10-05 | 塔加西普特公司 | 使用α7-选择性配体的治疗方法 |
TW201031664A (en) * | 2009-01-26 | 2010-09-01 | Targacept Inc | Preparation and therapeutic applications of (2S,3R)-N-2-((3-pyridinyl)methyl)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-yl)-3,5-difluorobenzamide |
TWI558398B (zh) * | 2009-09-22 | 2016-11-21 | 諾華公司 | 菸鹼乙醯膽鹼受體α7活化劑之用途 |
-
2012
- 2012-10-18 KR KR1020147010115A patent/KR102043077B1/ko active IP Right Grant
- 2012-10-18 EP EP12797979.7A patent/EP2768507B1/en active Active
- 2012-10-18 WO PCT/IB2012/055692 patent/WO2013057687A2/en active Application Filing
- 2012-10-18 MX MX2014004621A patent/MX2014004621A/es active IP Right Grant
- 2012-10-18 AU AU2012324458A patent/AU2012324458B2/en active Active
- 2012-10-18 CN CN201280051452.1A patent/CN103930112B/zh active Active
- 2012-10-18 IN IN3647CHN2014 patent/IN2014CN03647A/en unknown
- 2012-10-18 JP JP2014536391A patent/JP6162705B2/ja active Active
- 2012-10-18 CA CA3083244A patent/CA3083244C/en active Active
- 2012-10-18 CA CA2852268A patent/CA2852268C/en active Active
- 2012-10-18 BR BR112014007485-2A patent/BR112014007485B1/pt active IP Right Grant
- 2012-10-18 ES ES12797979T patent/ES2776996T3/es active Active
- 2012-10-18 EA EA201490832A patent/EA034964B1/ru unknown
- 2012-10-18 JO JOP/2012/0311A patent/JO3766B1/ar active
- 2012-10-19 TW TW101138792A patent/TWI635861B/zh active
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
ANATOLY A. MAZUROV, SPEAKE JASON D., YOHANNES DANIEL: "Discovery and Development of α7 Nicotinic Acetylcholine Receptor Modulators", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 54, no. 23, 8 December 2011 (2011-12-08), pages 7943 - 7961, XP055060345, ISSN: 00222623, DOI: 10.1021/jm2007672 * |
GEORG WINTERER, KIRSTIN MITTELSTRASS, INA GIEGLING, CLAUDIA LAMINA, CHRISTOPH FEHR, HERMANN BRENNER, LUTZ P. BREITLING, BARBARA NI: "Risk gene variants for nicotine dependence in the CHRNA5-CHRNA3-CHRNB4 cluster are associated with cognitive performance", AMERICAN JOURNAL OF MEDICAL GENETICS PART B: NEUROPSYCHIATRIC GENETICS, WILEY-LISS, vol. 153B, no. 8, 1 December 2010 (2010-12-01), pages 1448 - 1458, XP055059810, ISSN: 15524841, DOI: 10.1002/ajmg.b.31126 * |
JOHANSSON I; INGELMAN-SUNDBERG M: "CNVs of human genes and their implication in pharmacogenetics", CYTOGENETIC AND GENOME RESEARCH, ALLERTON PRESS, NEW YORK, NY, US, vol. 123, no. 1-4, 1 March 2009 (2009-03-01), US, pages 195 - 204, XP009168924, ISSN: 1424-8581, DOI: 10.1159/000184709 * |
L. E. HONG, YANG X., WONODI I., HODGKINSON C. A., GOLDMAN D., STINE O. C., STEIN E. S., THAKER G. K.: "A CHRNA5 allele related to nicotine addiction and schizophrenia", GENES, BRAIN AND BEHAVIOR, BLACKWELL MUNKSGAARD, vol. 10, no. 5, 1 July 2011 (2011-07-01), pages 530 - 535, XP055059804, ISSN: 16011848, DOI: 10.1111/j.1601-183X.2011.00689.x * |
N. A. HORENSTEIN, LEONIK F. M., PAPKE R. L.: "Multiple Pharmacophores for the Selective Activation of Nicotinic �7-Type Acetylcholine Receptors", MOLECULAR PHARMACOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS, vol. 74, no. 6, 1 December 2008 (2008-12-01), pages 1496 - 1511, XP055060348, ISSN: 0026895X, DOI: 10.1124/mol.108.048892 * |
NADINE PETROVSKY, BORIS B QUEDNOW, ULRICH ETTINGER, ANNE SCHMECHTIG, RAINALD M�SSNER, DAVID A COLLIER, KAI-UWE K�HN, WOLFGANG MAIE: "Sensorimotor Gating is Associated with CHRNA3 Polymorphisms in Schizophrenia and Healthy Volunteers", NEUROPSYCHOPHARMACOLOGY, NO LONGER PUBLISHED BY ELSEVIER, vol. 35, no. 7, 1 June 2010 (2010-06-01), pages 1429 - 1439, XP055059821, ISSN: 0893133X, DOI: 10.1038/npp.2010.12 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2768507A2 (en) | 2014-08-27 |
JO3766B1 (ar) | 2021-01-31 |
BR112014007485B1 (pt) | 2022-05-31 |
TWI635861B (zh) | 2018-09-21 |
CA3083244C (en) | 2023-01-03 |
EP2768507B1 (en) | 2019-12-11 |
CA2852268A1 (en) | 2013-04-25 |
KR20140081822A (ko) | 2014-07-01 |
KR102043077B1 (ko) | 2019-11-11 |
JP2015501306A (ja) | 2015-01-15 |
TW201322980A (zh) | 2013-06-16 |
CA2852268C (en) | 2020-08-25 |
IN2014CN03647A (ru) | 2015-10-09 |
WO2013057687A3 (en) | 2013-07-11 |
EA201490832A1 (ru) | 2015-12-30 |
CN103930112A (zh) | 2014-07-16 |
AU2012324458B2 (en) | 2016-05-19 |
ES2776996T3 (es) | 2020-08-03 |
MX2014004621A (es) | 2014-08-22 |
JP6162705B2 (ja) | 2017-07-12 |
WO2013057687A2 (en) | 2013-04-25 |
CN103930112B (zh) | 2018-11-09 |
BR112014007485A2 (pt) | 2017-04-04 |
AU2012324458A1 (en) | 2014-05-01 |
CA3083244A1 (en) | 2013-04-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102043077B1 (ko) | 알파 7 니코틴성 아세틸콜린 수용체 활성화제 치료에 대한 반응성을 예측하는 바이오마커 | |
CA2566256C (en) | Genetic polymorphisms associated with liver fibrosis methods of detection and uses thereof | |
TWI334886B (en) | Genetic variants predicting warfarin sensitivity | |
KR102149483B1 (ko) | 예측변수 인자들을 이용하여 동정된 환자 부분 모집단에서 암 치료를 위한 마시티닙의 용도 | |
ES2661050T3 (es) | Biomarcador predictivo de la capacidad de respuesta a tratamiento con activador del receptor nicotínico de acetilcolina alfa-7 | |
AU2013313282B2 (en) | Mitigating tissue damage and fibrosis via latent transforming growth factor beta binding protein (LTBP4) | |
CA2651376A1 (en) | Method for diagnosis and treatment of a mental disease | |
TW200808976A (en) | Warfarin dosage prediction | |
KR20150023904A (ko) | 전립선암의 진단 및 치료에서의 마커의 용도 | |
KR20130123357A (ko) | 저산소증과 관련된 질환의 진단방법 및 키트 | |
US20030235847A1 (en) | Association of polymorphisms in the SOST gene region with bone mineral density | |
CN101631876A (zh) | 2型糖尿病的遗传易感性变体 | |
KR20090087486A (ko) | 타입 2 당뇨병의 유전적 감수성 변이 | |
US20030099958A1 (en) | Diagnosis and treatment of vascular disease | |
CN108624683B (zh) | Usp48基因突变在acth型垂体腺瘤分子诊断中的应用 | |
KR102074157B1 (ko) | Itpkc 및 slc11a1 유전자 다형성을 이용한 가와사키병 발병 예측 방법 | |
CN117795076A (zh) | 用丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶15(map3k15)抑制剂治疗代谢病症的方法 | |
TWI358456B (en) | Method of determining susceptibility of high myopi | |
CN113825839A (zh) | 用固醇调节元件结合蛋白切割激活蛋白(scap)抑制剂治疗脂质水平升高 | |
US20040138441A1 (en) | Novel gene functionally related to dyslexia | |
CN112534265A (zh) | 预选个体的抗癌治疗及鉴定易患病个体的筛选方法 | |
KR100968360B1 (ko) | Her-2 유전자 복제수 변화에 의해 발생되는 유방암의 진단 방법 | |
US20050233341A1 (en) | Methods for identifying risk of melanoma and treatments thereof | |
CA2826522A1 (en) | Genetic polymorphism in pnlpa3 associated with liver fibrosis methods of detection and uses thereof | |
US20030219787A1 (en) | Novel human gene functionally related to dyslexia |