EA034964B1 - Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов - Google Patents

Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов Download PDF

Info

Publication number
EA034964B1
EA034964B1 EA201490832A EA201490832A EA034964B1 EA 034964 B1 EA034964 B1 EA 034964B1 EA 201490832 A EA201490832 A EA 201490832A EA 201490832 A EA201490832 A EA 201490832A EA 034964 B1 EA034964 B1 EA 034964B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
snp
snps
azabicyclo
chrna5
Prior art date
Application number
EA201490832A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490832A1 (ru
Inventor
Доминик Фойербах
Бальтазар Гомес-Манкилла
Юньшэн Хэ
Доналд Джонс
Кристина Лопес-Лопес
Кевин Холл Макаллистер
Николь Пезу
Лиза Сэндфорд
Маркус Вайсс
Original Assignee
Новартис Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новартис Аг filed Critical Новартис Аг
Publication of EA201490832A1 publication Critical patent/EA201490832A1/ru
Publication of EA034964B1 publication Critical patent/EA034964B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)

Abstract

Изобретение относится к способам прогнозирования способности индивида, страдающего когнитивными нарушениями или дисфункциями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, к ответу на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.

Description

Уровень техники
Когнитивные расстройства были признаны как клинически значимый аспект шизофрении и основной фактор, определяющий успешную функциональную реабилитацию и социальную реинтеграцию (Green, 1996; Green, 2007). Когнитивное расстройство при шизофрении или при других психических заболеваниях представляет собой приобретенное расстройство одной или более из функции памяти, разрешения проблем, ориентации и/или абстракции, что нарушает способность индивидуума функционировать независимо, что особенно выражено в вербальной памяти, исполнительных функциях, внимании и его активном поддержании, беглости речи и скорости движений, но также включая другие функции. Когнитивные нарушения не являются результатом положительных или отрицательных симптомов расстройства или не связаны с недостаточной мотивацией (Harvey et al., 2004). В большинстве случаев когнитивные расстройства не усугубляются или ослабляются по мере прогрессирования заболевания (Harvey et al., 2004). Нет принятых способов лечения по поводу когнитивных расстройств при шизофрении. Доступные в настоящее время способы антипсихотического лечения не улучшают когнитивную функцию сверх практических эффектов (Goldberg et al., 2007; Keefe et al., 2007).
Несколько серий данных свидетельствуют о том, что альфа 7 никотиновые ацетилхолиновые рецепторы (a7-nAChR) могут быть вовлечены в когнитивные нарушения при шизофрении. Связь между нарушениями сенсорной синхронизация P50, проявляемыми у лиц, страдающих шизофренией, и дефектом на хромосоме 15q14, сайте гена a7-nAChR (Chini et al., 1994), была установлена Freedman et al., 1997. Полиморфизмы в промоторной области a7-nAChR, которые уменьшали транскрипцию, были более распространены у пациентов с шизофренией, чем у контрольных индивидуумов (Leonard et al., 2002). Посмертные исследования продемонстрировали, что уровни a7-nAChR снижены в мозге страдающего шизофренией пациента (Freedman et al., 1995). Рецепторы a7-nAChR экспрессированы в ключевых зонах мозга, важных для обучения и памяти (гиппокамп, префронтальная кора и миндалевидные тела). Было показано, что активация a7-nAChR модулирует высвобождение глутаматергических, ГАМКергических и холинергических нейромедиаторов и улучшает когнитивную функцию на многообразии различных преклинических экспериментальных моделей у животных.
Были разработаны новые активаторы a7-nAChR для лечения патологических состояний, связанных с дефектными или неадекватно функционирующими никотиновыми ацетилхолиновыми рецепторами. Хотя предполагали, что лечение активатором a7-nAChR может уменьшить когнитивные нарушения, противоречивые данные и варьирование индивидуальных когнитивных ответов на лечение активатором a7-nAChR до настоящего времени препятствовало разработке способов лечения когнитивных нарушений на основе активатора a7-nAChR, например неизвестно, почему некоторые пациенты не реагируют на эти медикаментозные средства. Следовательно, существует потребность в прогнозировании заранее перед лечением вероятности того, будет ли пациент, страдающий когнитивными нарушениями или дисфункциями, отвечать на лечение активатором a7-nAChR. Соответственно, в данной области существует настоятельная потребность в способах прогнозирования способности пациентов с когнитивными нарушениями или дисфункциями отвечать на активатор a7-nAChR.
Краткое изложение сущности изобретения
Существует потребность в прогнозировании вероятности того, что пациент будет отвечать на лечение активатором a7-nAChR. Эта цель достигается способами и композициями, предоставленными в настоящем описании. В настоящем изобретении к удивлению было показано, что генетические варианты хромосомного локуса 15q24 представляют собой прогностические маркеры способности пациентов, страдающих когнитивными нарушениями или дисфункциями, отвечать на лечение активатором α7nAChR.
Поэтому первый предмет изобретения относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у выбранной популяции пациентов, причем популяция пациентов выбрана на основании присутствия по меньшей мере одного характерного SNP (однонуклеотидного полиморфизма) гена субъединицы альфа-5 (CHRNA5) человеческого ацетилхолинового рецептора (SEQ ID NO: 39; хромосома 15 NC_000015.9, цитогенетическая локализация: 15q24; геномные координаты (GRCh37): 78857861-78887610) или гена субъединицы альфа-3 (CHRNA3) человеческого ацетилхолинового рецептора (SEQ ID NO: 40; хромосома 15, NC_000015.9, цитогенетическая локализация: 15q24; геномные координаты: 78885394..78913637, комплемент).
Как описано здесь, характерный SNP, подобный rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), дифференциально присутствует у людей, и вероятность способности пациента отвечать на лечение можно прогнозировать на основании присутствия SNP в виде варианта rs55853698-T в геноме указанного пациента. Следовательно, характерный SNP в контексте настоящей заявки относится к специфическому SNP, который обеспечивает возможность заранее перед лечением прогнозировать вероятность того, что пациент, страдающий когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, будет отвечать на лечение активатором a7-nAChR. Характерный SNP в контексте настоящего описания относится к SNP, присутствующим в гене CHNRA5 или CHRNA3, и к тем, которые образуют гаплотип,
- 1 034964 или с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs. В другом варианте осуществления изобретение относится к способу идентификации характерных SNPs генов CHRNA5 или CHRNA3, включающему стадии:
a) выбора группы страдающих шизофренией пациентов, достаточно большой для получения статистически значимых результатов; и
b) получения генотипа указанных пациентов в генетическом локусе гена CHRNA5 или CHRNA3; и
c) введения указанным пациентам терапевтически эффективного количества активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов; и
d) выполнения теста оценки когнитивной функции у пациента со стадии c) использованием набора тестов когнитивной функции у страдающих шизофренией пациентов (например, набор тестов при шизофрении CogState™); и
e) подразделения пациентов со стадии d) на подгруппы отвечающих и не отвечающих на лечение идентификацией тех пациентов, которые проявляют статистически релевантное улучшенное визуальное обучение, способность запоминания, улучшенную когнитивную функцию, улучшенную аргументацию, способность разрешения проблем или улучшения внимания и его активного поддержания (отвечающие на лечение пациенты), причем улучшения, измеренные в виде размера эффекта, как описано ниже в разделе Примеры, составляют по меньшей мере примерно 0,1, или примерно 0,2, или примерно 0,3, или примерно 0,4, или более чем примерно 0,5; и
f) анализа последовательности ДНК генетических локусов субпопуляций отвечающих и не отвечающих на лечение пациентов, идентифицированных на стадии e), и отбора тех SNPs, которые присутствуют только в генетических локусах гена CHRNA5 или CHRNA3 отвечающих на лечение пациентов;
g) идентификации гетерозиготных или гомозиготных характерных вариантов SNP определением корреляции существования SNPs, отобранных на стадии f), с результатами теста когнитивной функции стадии d).
Способы получения и анализа генотипа пациента в определенном локусе или гене, а также тест оценки когнитивной функции хорошо известны в данной области техники и подробно описаны в настоящей заявке.
Предпочтительно, указанная композиция применяется для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. В одном варианте осуществления когнитивные нарушения, психотические и/или нейродегенеративные расстройства выбраны из группы, состоящей из легкого когнитивного нарушения, болезни Альцгеймера, деменции при болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, шизофрении, сосудистой деменции, деменции при СПИДе, сенильной деменции, легкого когнитивного нарушения, связанного с возрастом (MCI), связанного с возрастом нарушения памяти, аутизма, деменции при дегенерации лобной доли, инсульта, дегенеративных расстройств базальных ганглиев, рассеянного склероза, травмы, опухолей мозга, инфекций мозга, гидроцефалии, депрессии, токсических или метаболических расстройств и деменции, вызванных лекарственными средствами.
В другом варианте осуществления композиция применяется у популяции пациентов, выбранной на основании носительства SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) человеческого гена CHRNA5 или SNP, образующего гаплотип вместе с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs.
В еще одном варианте осуществления гаплотип SNP содержит по меньшей мере два из SNPs, rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34).
В определенных вариантах осуществления композиция для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств применяется у популяции пациентов, выбранных на основании носительства гаплотипа SNP, содержит SNPs rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), и где указанные SNPs образуют гаплотип delTTC или insATC. В другом варианте осуществления композиция для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств применяется у пациентов, выбранных на основании гомозиготности в отношении гаплотипов указанных выше характерных SNPs CHRNA5 или характерных SNP CHRNA5, в частности являющихся гомозиготными в отношении SNP rs55853698-T/T (SEQ ID NO: 1) или SNPs rs16969968-G/G (SEQ ID NO: 37).
Кроме того, изобретение относится к композициям для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, причем популяция пациентов выбрана на основании носительства характерных SNPs rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) гена CHRNA3 или SNPs, образующих гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с
- 2 034964 указанными SNPs, причем гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C(C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и причем гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, в то время как гомозиготное присутствие SNP rs6495308C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T (SEQ ID NO: 3/4) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Кроме того, изобретение относится к описанным в настоящей заявке и применяемым для осуществления способов по изобретению композициям, содержащим активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH2- или -CH2-CH2-; и L3 обозначает -CH2- или -CH(CH3)-; или L1 обозначает -CH2-CH2-; L2 обозначает -CH2-; и L3 обозначает -CH2-CH2-; L4 обозначает группу, выбранную из
о r1
L4a или L4b f где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалькильной составляющей; R1 обозначает водород или C1-4алкил; X обозначает -O- или -NH-; группа A выбрана из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к Х1; A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; каждая группа R2 обозначает независимо C1-6алкил, C1-6галогеналкил, О^алкокеи, C1-6галогеналкокси, галоген, циано или от трех- до шестичленную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или частично насыщенной и которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и причем каждая кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода, и не более чем 2 атома серы, и причем каждая кольцевая система может в свою очередь быть замещена один или несколько раз Аралкилом, C1-6галогеналкилом, ^^алкокси, C1-6галогеналкокси, галогеном, циано, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; или две группы R2 на соседних кольцевых атомах образуют ^^алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х2, и где ^^алкиленовая группа может быть замещена одной или несколькими группами R3; каждая группа Х2 независимо обозначает -O- или -N(R4)-; каждая группа R4 независимо обозначает водород или C1-6алкил; и каждая группа R3 независимо обозначает галоген или C1-6алкил; в форме свободного основании или в форме кислотно-аддитивной соли.
Дополнительный предмет изобретения относится к описанной в настоящей заявке композиции и применяемой для осуществления способов по изобретению композиции, где активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов применяется в виде свободного основания или в форме фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли. В другом варианте осуществления активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов представлен в форме его свободного основания или фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли в ассоциации с фармацевтическим носителем или разбавителем.
В другом варианте осуществления изобретения описанная в настоящей заявке и применяемая для осуществления способов по изобретению композиция дополнительно содержит второе средство, улучшающее когнитивную функцию, или терапевтическое соединение, полезное для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств.
В еще одном варианте осуществления изобретение относится к способу прогнозирования способности к ответу на лечение индивидуума или группы индивидуумов при лечении активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для повышения когнитивных способностей и/или лечения когнитивного нарушения, психотического и/или нейродегенеративного расстройства, включающему стадии: I)
- 3 034964 получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5; II) идентификации тех индивидуумов стадии I), которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968G (SEQ ID NO: 37) гена CHRNA5, или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, причем присутствие по меньшей мере одного из SNP или гаплотипов SNPs, указанных выше, является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
В еще одном варианте осуществления изобретение относится к способу прогнозирования способности к ответу на лечение индивидуума или группы индивидуумов при лечении активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для повышения когнитивных способностей и/или лечения когнитивного нарушения, психотического и/или нейродегенеративного расстройства, включающему стадии: I) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA3; II) идентификации тех индивидуумов стадии I), которые являются носителями SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35) гена CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, причем гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) или гаплотипов SNP, указанных выше, является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и причем гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Кроме того, изобретение относится к терапевтическому способу улучшения когнитивных способностей индивидуума и/или лечения индивидуумов, страдающих когнитивным нарушением, психотическим и/или нейродегенеративным расстройством, включающему стадии: III) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5; IV) идентификации тех индивидуумов стадии III), которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) гена CHRNA5 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP, причем присутствие по меньшей мере одного из SNPs или гаплотипов SNP является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов; или альтернативно III) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA3; IV) идентификации тех индивидуумов стадии III), которые являются носителями SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35) гена CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, причем гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и причем гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и V) введения терапевтического эффективного количества активатора альфа 7 никотинового рецептора тем индивидуумам, которые идентифицированы на стадии IV). В дополнительном варианте осуществления описанные выше стадии I) и III) дополнительно включают стадии: VI) получения биологического образца у указанного индивидуума, причем указанный образец выбран из группы, состоящей из крови, происходящего из крови продукта (такого как лейкоцитарная пленка, сыворотка и плазма), лимфы, мочи, слезной жидкости, слюны, спинномозговой жидкости, буккальных мазков, мокроты, волосяных корней, лейкоцитарного образца или образцов ткани или любой их комбинации, и VII) обеспечения контакта биологического образца стадии VI) с реагентом, способным выявить (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) CHRNA3 SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4), или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36), или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP.
Предпочтительно, указанные выше способы применяются для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Следовательно, в одном варианте осуществления указанные выше способы дополнительно включают в качестве первой стадии диагностику необходимости в улучшении когнитивных способностей или лечения когнитивного нарушения, психотического и/или нейродегенративного расстройства у индивидуума, причем когнитивные нарушения, психотические и/или нейродегенеративные расстройства могут быть выбраны из группы, состоящей из легкого когнитивного нарушения, болезни Альцгеймера, деменции при болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, шизофрении, сосудистой деменции, деменции при СПИДе, сенильной деменции, легкого когнитивного нарушения связанного с возрастом (MCI), связанного с возрастом нарушения памяти, аутизма, деменции при дегенерации лобной доли, инсульта, дегенеративных расстройств базальных ганглиев,
- 4 034964 рассеянного склероза, травмы, опухолей мозга, инфекций мозга, гидроцефалии, депрессии, токсических или метаболических расстройств и деменции, вызванных лекарственными средствами.
В другом варианте осуществления изобретения в указанных выше способах присутствие (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5, или SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP, определяется использованием по меньшей мере одного олигонуклеотида, который специфически гибридизируется с определенными областями на молекуле нуклеиновой кислоты, несущей указанный SNP или множество SNP. В частности, присутствие указанных CHRNA5/CHRNA3 SNP может быть выявлено типированием с использованием сиквенс-специфических праймеров (SSP), типированием с использованием сиквенс-специфических олигонуклеотидов (SSO), типированием на основе последовательности (SBT), амплификацией ДНК, такой как полимеразная цепная реакция (PCR, ПЦР), анализом с использованием микрочипа, норзерн-блот-анализом или обращенно-транскрипционной ПЦР.
В другом аспекте изобретения индивидуумов, отобранных в соответствии с описанными выше способами в качестве реагирующих на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для улучшения когнитивных способностей и/или лечения когнитивного нарушения, психотического и/или нейродегенеративного расстройства, лечат соединением формулы (I). В еще одном варианте осуществления можно совместно вводить второе средство, улучшающее когнитивную функцию, используемое для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, такое как обычное антипсихотическое средство или атипичное антипсихотическое средство.
В другом аспекте описанных способов подлежащая введению доза активатора 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов составляет от примерно 2 мг до примерно 100 мг в день.
Другой вариант осуществления изобретения относится к применению активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов для лечения пациента, страдающего когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, или состоянием, при котором играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, причем пациент, отвечающий на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, был отобран в соответствии с описанными выше способами.
Кроме того, изобретение относится к применению по меньшей мере одного зонда для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3 или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP, для определения того, реагирует ли индивидуум на лечение агонистом альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств или состояния, при котором играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. В другом аспекте изобретение относится к набору, содержащему по меньшей мере один зонд для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP. Предпочтительно, указанный набор содержит VIII) средство для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и/или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 и/или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) и/или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP, и IX) инструкции по применению указанного набора.
Дополнительный предмет изобретения относится к применению набора, предпочтительно, описанного выше набора, пригодного для любого из описанных выше способов или видов применения, причем указанный набор содержит по меньшей мере один зонд для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36) или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNP. В связанном варианте осуществления описанный выше набор содержит олигонуклеотидные зонды.
В другом варианте осуществления описанных выше способов и видов применения гаплотип CHRNA5/CHRNA3 SNP состоит по меньшей мере из двух SNP, выбранных из группы, состоящей из rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34). В другом варианте осуществления описанных выше способов или видов применения гаплотип SNP CHRNA5 состоит из характерного SNP rs55853698-T (SEQ ID NO:
- 5 034964
1) и по меньшей мере одного дополнительного SNP, выбранного из группы, состоящей из группы, состоящей из rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34). В связанном варианте осуществления гаплотип SNP выбран из гаплотипа delTTC и insATC, образованного SNP rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7).
Общие определения.
Для облегчения понимания настоящего изобретения сначала определяются отдельные термины. Дополнительные определения представлены по всему подробному описанию.
Термин содержащие означает включающие, например композиция, содержащая X, может состоять исключительно из X или может включать какой-либо дополнительный компонент, например X+Y.
Термин примерно в отношении числовой величины х означает, например, х±10%.
Термин средство, улучшающее когнитивную функцию в контексте настоящего описания относится к любому лекарственному средству, добавке, нутрицевтику, или функциональному пищевому продукту, который по сообщениям улучшает психические функции, такие как познание, память, интеллект, мотивация, внимание и концентрация.
Используемые в настоящем изобретении средства, улучшающие когнитивную функцию, включают без ограничения холинергические соединения, такие как ингибиторы ацетилхолинэстеразы и/или ингибиторы бутирилэстеразы (ривастигмин, донезепил, галантамин, гуперзин), ампакины (например, CX614, CX516), мускариновые модуляторы (например, агонисты мускариновых рецепторов), модуляторы NMDA-рецептора (например, положительные модуляторы, антагонисты, мемантин), ингибиторы фосфодиэстеразы (например, ингибиторы PDE4), ноотропные соединения, такие как гипергин, оксирацетам, анирацетам, ацетил-Е-карнитин, соединения, полученные из гинко, соединения, содержащиеся в геровиталах (омолаживающих средствах), такие как п-аминобензойная кислота и диэтиламиноэтанол и их производные, и соединения, модулирующие внимание, такие как метилфеникат, томокесетин и модафинил.
Термин обычные антипсихотические средства обозначает соединения, которые эффективны при лечении психозов, главным образом посредством антагонизма к D2 рецепторам допамина. Используемый в настоящем описании термин обычные антипсихотические средства включает без ограничения галоперидол, дроперидол, молиндон, флуфеназин, тиотиксен, флупентиксол, промазин, пимозид, хлорпромазин, метотримепразин, пипотиазин, трифлуоперазин, тиоридазин, ацетофеназин, хлорпротиксен и мезоридазин.
Термин атипичные антипсихотические средства обозначает соединения, которые эффективны при лечении психозов посредством дополнительного и/или механизма, отличного от антагонизма в отношении 2 рецепторов допамина. Используемый в настоящем описании термин атипичные антипсихотические средства включает без ограничения клозарил, рисперидон, оланзапин, кветиапин, зипразидон, арипипразол, сертиндол, перфеназин, мезоридазин, прохлорперазин, напроксен и локсапин.
Используемый в настоящем описании термин активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (активаторы a7-nAChR) относится к агонистам a7-nAChR и положительным аллостерическим модуляторам a7-nAChR, в частности к соединениям с низкой молекулярной массой (EMW), как описано здесь.
Термин SNP в контексте настоящего описания относится к однонуклеотидному полиморфизму. SNP представляет собой генетическое различие между индивидуумами; например, положение одиночного основания в ДНК организмов, которое является вариабельным. Термин SNP определяет специфическую аллель данного гена. Используемый в настоящем описании термин SNPs представляет собой множественное число SNP. SNP встречается в полиморфном сайте, занятом одиночным нуклеотидом, который представляет собой сайт различия между аллельными последовательностями. Этому сайту обычно предшествуют и за ним следуют высоко консервативные последовательности аллели (например, последовательности, которые варьируются менее чем у 1/100 или 1/1000 членов популяций). SNPs чаще всего являются диаллельными. Однонуклеотидный полиморфизм обычно возникает вследствие замещения одним нуклеотидом другого в полиморфном сайте. Переход представляет собой замещение одного пурина другим пурином или одного пиримидина другим пиримидином. Трансверсия представляет собой замещение пурина пиримидином или наоборот. Однонуклеотидный полиморфизм может также возникнуть в результате делеции нуклеотида или вставки нуклеотида относительно эталона. SNP может также относиться к полиморфному сайту на одной хромосоме или в пределах области одной хромосомы, причем SNP может относиться к вставке или делеции нескольких пар оснований (например, описанный здесь SNP rs3841325 относится к вставке/делеции 22 пар оснований в положении -71 выше стартового сайта транскрипции человеческого гена CHRNA5). Следовательно, термин SNP относится также к об
- 6 034964 ласти гена, имеющей одну из нескольких нуклеотидных последовательностей, обнаруживаемых в этой области гена у различных индивидуумов популяции. Хотя большинство SNPs являются редкими, по оценкам, имеется 5,3 миллиона общих SNPs, каждый с частотой 10-50%, которые составляют основную часть различий последовательностей ДНК между людьми. Такие SNPs присутствуют в человеческом геноме в одной из каждых 600 пар оснований (Kruglyak и Nickerson, Nature Genet. 27:235 (2001)). Аллели (варианты), составляющие блоки таких SNPs в тесной физической близости, часто коррелируются, что приводит к сниженной генетической вариабельности и определяет ограниченное число гаплотипов SNP (Fullerton et al., Am. J. Hum. Genet. 67:881 (2000)).
Термин ген относится к кодирующей области, функционально связанной с соответствующими регуляторными последовательностями, способной некоторым образом регулировать экспрессию полипептида. Ген включает не транслированные регуляторные области ДНК (например, промоторы, энхансеры, репрессоры и т.д.), предшествующие (находящиеся выше по ходу транскрипции) и следующие (ниже по ходу транскрипции) за кодирующей областью (открытая рамка считывания, ORF), а также, где применимо, вставочные последовательности (т.е. интроны) между отдельными кодирующими областями (т.е. эксонами). Гены могут также включать последовательности, локализующиеся и на 5'-, и на 3'-конце последовательностей, которые присутствуют на транскрипте РНК. Эти последовательности именуются фланкирующими последовательностями или областями (эти фланкирующие последовательности расположены ближе к 5' или 3' относительно не транслированной последовательности, присутствующей на транскрипте мРНК). 5'-фланкирующая область может содержать регуляторные последовательности, такие как промоторы и энхансеры, которые контролируют или влияют на транскрипцию гена. 3'фланкирующая область может содержать последовательности, которые направляют терминацию транскрипции, посттрансляционное расщепление и полиаденилирование.
Термин легкое когнитивное нарушение (MCI) в контексте настоящего описания относится к когнитивному нарушению, тяжесть которого выходит за пределы, ожидаемые для индивидуума определенного возраста и образования, но которое значимо не препятствует повседневной деятельности такого индивидуума (Petersen R.C., Smith G.E., Waring S.C., Ivnik R.J., Tangalos E.G., Kokmen E. (1999). Mild cognitive impairment: clinical characterization and outcome. Arch. Neurol. 56 (3) : 303-8).
Термин гаплотип в контексте настоящего описания относится к группе SNPs, которые, как представляется, не рекомбинируются независимо, и которые могут быть сгруппированы вместе в блоки SNPs. Следовательно, SNPs, которые составляют гаплотип, находятся в дисбалансе связи, и, таким образом, имеют тенденцию наследоваться вместе. В предпочтительном варианте осуществления гаплотип SNP относится к комбинации SNPs, присутствующих в человеческом гене CHRNA5 (SEQ ID NO: 39) и/или гене CHRNA3 (SEQ ID NO: 40), причем SNPs, образующие указанный гаплотип, локализуются в зоне примерно 100000, или примерно 50000, или примерно 30000, или примерно 20000, или примерно 10000 пар оснований выше по ходу транскрипции и/или ниже по ходу транскрипции от положения данного SNP в геноме. Гаплотип также относится к определенным комбинациям полиморфных вариантов (SNPs и/или аллелей), наблюдаемых в популяции, в полиморфных сайтах на одной хромосоме или в пределах области одной хромосомы. Описанный здесь гаплотип относится к любой комбинации SNPs или полиморфных сайтов. Гаплотип может содержать два или более SNPs/аллелей, и длина геномной области, содержащей гаплотип, может варьироваться от нескольких сотен оснований до сотен тысяч оснований. Специалистам в данной области техники известно, что один и тот же гаплотип может быть описан различным образом путем определения ограничивающих гаплотип аллелей из различных нитей нуклеиновой кислоты. Например, гаплотип delTTC, определяемый SNPs rs3841324-Del (SEQ ID NO: 6), rs503464-T (SEQ ID NO: 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7) по настоящему изобретению, представляет собой такой же гаплотип как GAAdel, определяемый теми же SNPs, в которых аллели определяются из другой нити, или delATC, в котором второй SNP определяется из другой нити. Описанные здесь SNPs дифференциально присутствуют у людей, и их специфическая последовательность указывает на вероятность ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Поэтому эти SNPs и гаплотипы, содержащие указанные SNPs, имеют диагностическую ценность для оценки риска и эффективности лечения у индивидуума. Выявление SNPs или полиморфных областей, образующих гаплотипы, может осуществляться известными в данной области техники способами, используемыми для выявления нуклеотидов в полиморфных сайтах (см. также представленное ниже определение дисбаланса связи).
Дисбаланс связи или LD относится к ситуации, при которой два или более аллельных варианта связаны, т.е. существует не случайная корреляция между аллельными вариантами в двух или более полиморфных сайтах у индивидуумов в популяции. LD обычно обозначается заглавной буквой D. Нормализация D делением ее на теоретический максимум для наблюдаемых частот аллелей приводит к получению величины D'. Величина 0 для D' указывает на то, что исследованные локусы в действительности независимы друг от друга, тогда как величина 1 демонстрирует полную зависимость. Два или более аллельных вариантов/SNPs, которые связаны, считаются находящимися в дисбалансе связи. В целом, аллельные варианты, которые являются частью гаплотипа или блока гаплотипов, находятся в дисбалансе связи. В данной области техники известны разнообразные способы/метрические показатели для оценки
- 7 034964 степени, в которой любые два полиморфных варианта (аллели) или SNPs находятся в LD. Пригодные метрические показатели D', r2 и другие (см., например, Hedrick P.W., Genetics, 117(2):331-41, 1987). Используемые здесь полиморфные варианты или SNPs находятся в прочной LD и образуют гаплотип, если D'>0,8.
Используемый в настоящем описании термин индивидуум относится предпочтительно к человеку, в частности пациенту, у которого диагностировано когнитивное нарушение, шизофрения или другое психическое заболевание, которое представляет собой приобретенную недостаточность одной или нескольких из функции памяти, решения проблем, ориентации и/или абстракции, что нарушает способность индивидуума независимо функционировать. Термины субъект, пациент или индивидуум используются взаимозаменяемо.
Термины когнитивные расстройства/нарушения и психотические и/или нейродегенеративные расстройства относятся к психическим заболеваниям, которые представляют собой приобретенные дефициты одной или нескольких из функции памяти, решения проблем, ориентации и/или абстракции, что нарушает способность индивидуума независимо функционировать. Примерами указанных расстройств являются болезнь Альцгеймера, деменция с тельцами Леви, боковой амиотрофический склероз, нарушение памяти, потеря памяти, недостаточность когнитивной функции, дефицит внимания, расстройство в виде гиперактивности, шизофрения, деменция при болезни Паркинсона и сосудистая деменция.
Подробное описание изобретения
Было обнаружено, что генетические варианты, присутствующие на гене субъединицы альфа-5 человеческого ацетилхолинового рецептора (CHRNA5) (SEQ ID NO: 39) или гене субъединицы альфа-3 человеческого нейронного ацетилхолинового рецептора (CHRNA3) (SEQ ID NO: 40), представляют собой маркеры для прогнозирования вероятности ответа на лечение активатором a7-nAChR у индивидуума, страдающего когнитивными нарушениями или дисфункциями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами. Никотиновые ацетилхолиновые рецепторы (nAChRs), такие как CHRNA5 или CHRNA3, являются членами суперсемейства управляемых лигандами ионных каналов, которые опосредуют быструю передачу сигналов в синапсах. Раскрытые здесь положения настоящего изобретения относятся к способу лечения когнитивных нарушений и дисфункций, психотических и/или нейродегенеративных расстройств активаторами a7-nAChR, на основании присутствия определенных характерных SNPs в человеческом гене CHRNA5 и/или CHRNA3.
Поэтому способы, композиции и наборы по настоящему изобретению обеспечивают средство для отбора пациентов, страдающих когнитивными нарушениями или дисфункциями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, которые более вероятно будут отвечать на лечение активатором a7-nAChR, посредством этого повышая терапевтическую эффективность таких способов лечения.
Поэтому в одном аспекте изобретение относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у отобранной популяции пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании генотипа пациентов в гене субъединицы альфа-5 человеческого ацетилхолинового рецептора (CHRNA5) или гене субъединицы альфа-3 человеческого нейронного ацетилхолинового рецептора (CHRNA3), и причем указанный генотип указывает на эффективность лечения активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Специфический маркер для прогнозирования ответной реакции на лечение активатором a7-nAChR может представлять собой SNP и/или полиморфную область. Специалисту в данной области техники известна последовательность нуклеиновых кислот и локализация гена CHRNA5 (локализующегося на человеческой хромосоме: 15 (NC_000015.9 (78857862..78887611) и гена CHRNA3 (локализующегося на человеческой хромосоме: 15 (NC_000015.9 (78885394..78913637, комплемент). Для более легкого понимания настоящего изобретения, описанные здесь SNPs определяются следующим образом:____________________________________________
Название SNP и идентификационный номер последовательности Последовательность
rs55853698 (SEQ ID NO. 1 или 2) rs55853698-T (SEQ ID NO. 1) CGGGAGCTGTGGCGCGGAGCGGCCCC[G/T]CTGCTGCGTCTGCCCTCGT TTTGTC
rs55853698-G (SEQ ID NO. 2)
rs6495308 (SEQ ID NO. 3 ил«4) rs6495308-C (SEQ ID NO. 3) rs6495308-T (SEQ ID NO. 4) GTAACTGTCTGATGGCAGGTTTGCTG[C/T]TGGGAGAGTAGAGAAGAGGT TTGGG
rs3841324 (SEQ ID NO. 5 «ли6) rs3841324-lns (SEQ ID NO. 5) rs3841324-Del (SEQ ID NO. 6) GAAGCTCCCGGCGCCTAGCCCCGCCC[- /CTATTTCCCTCTGGCCCCGCCC]AATCCTCGCCTTGTTCCTTTTGGCC
rs55781567 (SEQ ID NO. 7 «ли8) rs55781567-C (SEQ ID NO. 7) rs55781567-G (SEQ ID NO. 8) TTGTCTCACGACTCACACTCAGTGCT[C/G]CATTCCCCAAGAGTTCGCGTT CCCC
rs503464 (SEQ ID NO. 9 «ли Ю) rs503464-A (SEQ ID NO. 9) rs503464-T (SEQ ID NO. 10) ACAGCTCCCGCCGGGACAGCAGCCTC[A/T]GCCTAGCAGCTTCTGGCGG GCTCGG
rs56182392 (SEQ ID NO. 11™ 12) rs56182392-G (SEQ ID NO. 11) rs56182392-A (SEQ ID NO. 12) GGAGCTTCCACATGCGTCCCGAGCCC[A/G]CCAGAAGCTGCTAGGCTGA GGCTGC
- 8 034964
rs77293642 (SEQ ID NO. 13 14) rs77293642-C (SEQ ID NO. 13) rs77293642-T (SEQ ID NO. 14) CTGCTAGGCTGAGGCTGCTGTCCCGG[C/T]GGGAGCTGTGGCGCGGAGC GGCCCC
rs67624739 (SEQ ID NO. 15 «» 16) rs67624739-lns (SEQ ID NO. 15) rs67624739-Del (SEQ ID NO. 16) GGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGC[- /CAGAGGGAAATAGGGGCGGGGC ]TAGGCGCCGGGAGCTTCCACATGCG
rs142774214 (SEQ ID NO. 17 «л» 18) rs142774214-lns (SEQ ID NO. 17) rs142774214-Del (SEQ ID NO. 18) GGGCCAAAAGGAACAAGGCGAGGATT[/GGGCGGGGCCAGAGGGAAATAG 1GGGCGGGGCTAGGCGCCGGGAGCTT
rs60182379 (SEQ ID NO. 19 «ли 20) rs60182379-G (SEQ ID NO.19) rs60182379-T (SEQ ID NO. 20) GGGGATCGGAGGCGGGGCTATGAATA[G/T]ACCGGACTGGGCCAAAAGG AACAAG
rs77541452 (SEQ ID NO. 21 »» 22) rs77541452-A (SEQ ID NO. 21) rs77541452-G (SEQ ID NO. 22) GACAGGGTTGGACCAGAGGCGGGGCG[A/G]GGTGGGGAAAGGGTTGGT GGGGATC
rs72648882 (SEQ ID NO. 23 «» 24) rs72648882-G (SEQ ID NO. 23) rs72648882-T (SEQ ID NO. 24) TGTTATCTTAAGGTGTGCAGTGACTA[G/T]GCCAAGGACATCCGGTGGTTA GAGA
rs144334096 (SEQ ID NO. 25 «ли 26) rs144334096-A (SEQ ID NO. 25) rs144334096-T (SEQ ID NO. 26) AGAGCAGACATCAATGAATAGCTGTT[A/T]TCTTAAGGTGTGCAGTGACTA GGCC
rs114037126 (SEQ ID NO. 27»» 28) rs114037126-C (SEQ ID NO. 27) rs114037126-T (SEQ ID NO. 28) AGCACAGAGCAGACATCAATGAATAG[C/T]TGTTATCTTAAGGTGTGCAGT GACT
rs140280786 (SEQ ID NO. 29 «» 30) rs140280786-A (SEQ ID NO. 29) rs140280786-G (SEQ ID NO. 30) CGGCTCCCTCTGCCACTGAAGTTTAA[A/G]GATAATTCGCCTGAATCCCTT CAGC
rs147565924 (SEQ ID NO. 31»» 32) rs147565924-A (SEQ ID NO. 31) rs147565924-C (SEQ ID NO. 32) TTCTTTGCAACCAGGTTTAG I I I I I C[A/C]CAGATTTACTAGTCTGGAGGGT GGA
rs115662711 (SEQ ID NO. 33 ™34) rs115662711-C (SEQ ID NO. 33) rs115662711-T (SEQ ID NO. 34) TGGCTCCATTGGATGTAATTTACATT[C/T]TTCCAGCTGTATTTGGACCTAA GAA
rs1051730 (SEQ ID NO. 35 «ли 36) rs1051730-C (SEQ ID NO. 35) rs1051730-T (SEQ ID NO. 36) TGGGCCATCATCAAAGCCCCAGGCTA[C/T]AAACACGACATCAAGTACAAC TGCT
rs16969968 (SEQ ID NO. 37»» 38) rs16969968-G (SEQ ID NO. 37) rs16969968-A (SEQ ID NO. 38) CTAGAAACACATTGGAAGCTGCGCTC[A/G]ATTCTATTCGCTACATTACAA GACA
Предпочтительно, как описано здесь, указанная композиция применяется для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, путем улучшения когнитивных способностей индивидуума. В одном варианте осуществления когнитивные нарушения, психотические и/или нейродегенеративные расстройства выбраны из группы, состоящей из легкого когнитивного нарушения, болезни Альцгеймера, деменции при болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, деменции при СПИДе, сенильной деменции, легкого когнитивного нарушения связанного с возрастом (MCI), связанного с возрастом нарушения памяти, аутизма, деменции при дегенерации лобной доли, инсульта, дегенеративных расстройств базальных ганглиев, рассеянного склероза, травмы, опухолей мозга, инфекций мозга, гидроцефалии, депрессии, токсических или метаболических расстройств и деменции, вызванных лекарственными средствами. В другом варианте осуществления изобретения указанная композиция по изобретению применяется для лечения пациентов, страдающих шизофренией.
Лечение активаторами a7-nAChR популяции пациентов, отобранной на основании присутствия определенных характерных SNPs в человеческом гене CHRNA5 и/или CHRNA3, ведет к статистически релевантному улучшению способностей к визуальному обучению и памяти, улучшенной когнитивной функции, улучшенным способностям аргументации и решения проблем и улучшениям внимания и его активного поддержания, по сравнению с индивидуумами, не являющимися носителями характерных SNPs, в то время как улучшения, измеренные в виде размера эффекта, как описано в разделе Примеры, составляют по меньшей мере 0,1, или 0,2, или 0,3, или 0,4, или выше 0,5. Величины размера эффекта будут отличаться в зависимости от применяемых тестов и условия лечения. Фраза улучшение когнитивных способностей индивидуума относится к ситуации, при которой: (i) когнитивные навыки или способности, физиологическое состояние и/или психологическое состояние индивидуума считалось бы специалистом в данной области техники выходящим за пределы нормального диапазона здорового индивидуума, и (ii) где лечение композициями по изобретению или в соответствии со способами по изобретению ведет к значительному улучшению, по сравнению с индивидуумами контрольной группы (например, индивидуумами, которые не являются носителями маркерного SNP) или группы плацебо. Улучшение может быть полным (когда, например, по мнению специалиста в данной области техники, оцениваемые показатели состояния пациента укладываются в нормальный дипапазон) или частичным, при котором характерные признаки указанного выше состояния индивидуума становятся значительно меньше выраженными, чем они были бы у индивидуума, не получавшего композицию или лечение в соответствии с настоящим изобретением. Частичные результаты лечения могут привести к уменьшению тяжести
- 9 034964 указанных выше состояний или патологических симптомов, к увеличению частоты и длительности периодов ремиссии заболевания или предотвращению ухудшения состояния или нетрудоспособности вследствие прогрессирования заболевания. В этом контексте термин значительно меньше выраженные относится к состояниям или статусу индивидуума, которого специалист в данной области техники на основании измерения релевантного параметра после лечения композициями по изобретению или в соответствии со способом по изобретению не считал бы полностью здоровым (параметры у пациента могут еще выходить за пределы нормального диапазона), но у которого наблюдалось значительное увеличение релевантного параметра (которое может представлять собой увеличение или уменьшение определенного параметра). Значительное увеличение или уменьшение может быть идентифицировано, например, сравнением результатов лечения отдельных пациентов с индивидуумами контрольной группы (например, с индивидуумами, которые не являются носителями характерного маркерного SNP) или группы плацебо. Специалисту в данной области техники хорошо известен релевантный параметр для определения когнитивных способностей или способностей, физиологического состояния и/или психологического состояния индивидуума и то, как их определить. Специалист в данной области техники (например, врач) может выбрать указанные параметры на основании исследованного связанного с возрастом состояния. Фраза улучшение когнитивных способностей индивидуума относится также к ситуации, в которой индивидуум, которого специалист в данной области техники считал бы соответствующим нормальному диапазону (в отношении когнитивных способностей и способностей), желает улучшить свои когнитивные навыки или способности.
В одном варианте осуществления композиция применяется к популяций пациентов на основании носительства SNP rs55853698-T человеческого гена CHRNA5, раскрытого в SEQ ID NO: 1. SNP rs55853698 представляет собой аллель G/T (SEQ ID NO: 1 и 2) с длиной пар оснований 1, находящуюся в положении 78857939 человеческой хромосомы 15. В другом варианте осуществления композиция применяется у популяции пациентов, отобранной на основании носительства SNP rs16969968-G CHRNA5, раскрытого в SEQ ID NO: 37. SNP rs16969968 представляет собой аллель G/A с длиной пар оснований 1, находящуюся в положении 49673482 человеческой хромосомы 15 (SEQ ID NO: 37 и 38).
Специалисту в данной области техники понятно, что несколько SNPs или полиморфных областей существуют в человеческом гене CHRNA5 или в геномных областях человеческой хромосомы 15, образующих гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37). Указанные SNPs или полиморфные области могут локализоваться в зоне примерно 100000 или примерно 50000 или примерно 30000 или примерно 2 0000 или примерно 10000 пар оснований выше и ниже по ходу транскрипции относительно положения SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37). SNPs или полиморфные области, образующие гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), будут в равной степени пригодны для применения в качестве маркеров для прогнозирования ответа на лечение активатором a7-nAChR. Специалисту в данной области техники известны способы идентификации других SNPs или полиморфных областей, образующих гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) ((см., например, Hedrick P.W., Genetics, 1 17(2):331-41, 1987 и представленный выше раздел). Поэтому в другом аспекте изобретение относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, нацеленного на улучшение когнитивных способностей указанных пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании присутствия SNP или полиморфной области, образующих гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37). В еще одном варианте осуществления изобретение также относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, нацеленного на улучшение когнитивных способностей указанных пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании присутствия по меньшей мере одного из следующих SNPs: rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32) и/или rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34), образующих гаплотип с SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и/или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37). На основании изложенного выше композиция, содержащая активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, может применяться для лечения когнитивных, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у популяции пациентов, отобранной на основании носительства SNPs rs3841324-del (SEQ ID NO: 6), rs503464-T (SEQ ID NO: 10) и/или rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), потому что указанные SNPs образуют гаплотип delTTC с rs55853698-T (SEQ ID NO: 1). Альтернативно, популяция пациентов может быть отобрана на основании носительства SNPs га3841324-инов (SEQ ID NO: 5), или rs503464-A (SEQ ID NO: 9) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), потому что указанные SNPs образуют гаплотип insATC с rs55853698-T (SEQ ID NO: 1). В другом аспекте изобретения популяция пациентов может быть также отобрана на основании генотипа паци
- 10 034964 ентов в субъединице альфа-3 человеческого нейронного ацетилхолинового рецептора (CHRNA3). В одном варианте осуществления композиция применяется для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, нацеленного на улучшение когнитивных способностей указанных пациентов, в популяции пациентов, отобранной на основании носительства SNP rs6495308 человеческого CHRNA3, раскрытого в SEQ ID NO: 3/4. SNP rs6495308 представляет собой вариант аллели C/T с длиной пары оснований 1, находящейся в положении 78907656 человеческой хромосомы 15 (SEQ ID NO: 3 и 4). В еще одном варианте осуществления изобретение также относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, нацеленного на улучшение когнитивных способностей указанных пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании присутствия SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35). SNP rs1051730 представляет собой вариант аллели C/T с длиной пары оснований 1, находящийся в положении 78894339 человеческой хромосомы 15.
Несколько SNPs или полиморфных областей существуют в человеческом гене CHRNA3 (например, SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36). Указанные SNPs или полиморфные области могут быть расположены в зоне примерно 100000 или примерно 50000 или примерно 30000 или примерно 2 0000 или примерно 10000 пар оснований выше и ниже по ходу транскрипции от положения rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36). SNPs или полиморфные области, образующие гаплотип с SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) или SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35/36), одинаково пригодны для использования в качестве маркеров для прогнозирования способности к ответу на лечение активатором a7-nAChR. Поэтому в другом аспекте изобретение относится к композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у отобранной популяции пациентов, причем популяция пациентов отобрана на основании присутствия SNP или полимерной области, образующих гаплотип с rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) или SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35/36). Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
В другом варианте осуществления изобретения композиция для лечения пациентов, страдающих когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, применяется у пациентов, отобранных на основании их гомозиготности/гетерозиготности в отношении указанных выше характерных гаплотипов SNPs CHRNA5 или CHRNA3 или характерных гаплотипов SNP CHRNA5 или CHRNA3, в частности гомозиготности в отношении SNPs rs55853698-T/T (SEQ ID NO: 1) или rs16969968-G/G (SEQ ID NO: 37), rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) и/или гомозиготности/гетерозиготности в отношении SNP rs6495308-C/C или C/T (SEQ ID NO: 3/4) или SNPs, образующих гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs.
Активаторы a7-nAChR с низкой молекулярной массой: Агонисты a7-nAChR с низкой молекулярной массой: В одном варианте осуществления применяемый активатор a7-nAChR представляет собой агонист a7-nAChR.
Агонист a7-nAChR представляет собой соединение, которое связывается с рецептором, содержащим субъединицу a7-nAChR in vivo и in vitro, и активирует рецептор. Активацию можно измерить способом, описанным в заявке на Международный патент WO 2001/85727, т.е. функциональным анализом аффинитета в гомомерном a7-nAChR, проводимым с линией крысиных гипофизарных клеток, устойчиво экспрессирующих a7-nAChR. В качестве показателя используется входящий ток кальция после стимуляции рецептора, по сравнению с эпибатидином. Агонисты a7-nAChR в соответствии с изобретением обычно вызывают входящий ток кальция, составляющий по меньшей мере 50% максимального входящего тока, вызванного эпибатидином, при величине EC50 по меньшей мере 1 мкМ; предпочтительные агонисты вызывают входящий ток кальция по меньшей мере 75% максимального входящего тока, вызванного эпибатидином, при величине EC50 по меньшей мере 400 нМ; более предпочтительные агонисты вызывают входящий ток кальция по меньшей мере 85% максимального входящего тока, вызванного эпибатидином, при величине EC50 по меньшей мере 50 нМ.
Предпочтительные агонисты a7-nAChR должны хорошо всасываться из желудочно-кишечного тракта, должны быть достаточно метаболически устойчивыми и обладать благоприятными фармакокинетическими свойствами. Дополнительные предпочтительные агонисты a7-nAChR активно связываются in-vivo с a7-nAChRs, в то же время проявляя небольшой аффинитет в отношении других рецепторов, в частности, в отношении других nAChRs, например α4β2 nAChR, в отношении мускариновых ацетилхолиновых рецепторов, например M1, и/или 5-HT3 рецептора. Еще одни предпочтительные агонисты α7
- 11 034964 nAChR эффективно проникают через гематоэнцефалический барьер. Предпочтительные агонисты α7nAChR должны быть нетоксичными и демонстрировать незначительное количество побочных эффектов. Кроме того, предпочтительный агонист a7-nAChR должен быть способен существовать в физической форме, которая устойчива, не гигроскопична и легко включаться в состав лекарственного средства.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой селективный агонист α7nAChR, т.е. является селективным в отношении рецептора, содержащего субъединицу a7-nAChR, поскольку можно было бы ожидать, что такой агонист вызовет меньшее число побочных эффектов, чем не селективный агонист, у получающего лечение индивидуума. Агонист, являющийся селективным в отношении рецептора, содержащего субъединицу a7-nAChR, обладает функциональным аффинитетом к такому рецептору в гораздо более высокой степени, например по меньшей мере 10-кратного различия аффинитета по величине EC50, предпочтительно по меньшей мере 20-кратного, предпочтительнее по меньшей мере 50-кратного, по сравнению с любым другим никотиновым ацетилхолиновым рецептором. Для оценки аффинитета агонистов a7-nAChR по изобретению в отношении других никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, можно применять способ, описанный в заявке на Международный патент WO 2001/85727, т.е. для оценки аффинитета в отношении человеческого α4β2 nAChR, и аналогичный функциональный анализ проводят с использованием линии человеческих эмбриональных почечных клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий подтип α4β2, и для оценки активности соединений по изобретению в отношении ганглионарного подтипа и мышечного типа никотинового рецептора, аналогичные функциональные анализы проводят с использованием линии человеческих эмбриональных почечных клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий ганглионарный подтип, или клеточной линии, эндогенно экспрессирующей человеческий мышечный тип никотиновых рецепторов.
В последние 15 лет много усилий было сосредоточено на разработке селективных агонистов α7 nAChR, что привело к открытию многих различных хемотипов, проявляющих указанную селективную активность. Эти усилия резюмированы в обзоре Horenstein et al. (Mol. Pharmacol., 2008, 74, 1496-1511), в котором описано не менее чем 9 различных семейств агонистов α7 nAChR, у большинства из которых были обнаружены селективные агонисты. Действительно, несколько перспективных лекарственных средств, имеющих агонистический в отношении α7 nAChR тип действия, вступили в преклинические или даже клинические испытания (см. обзор: Broad et al., Drugs of Future, 2007, 32(2), 161-170; Romanelli et al., Expert Opin. Ther. Patents, 2007, 17(11), 1365-1377). Примерами таких соединений - тоже относящимися к разнообразным хемотипам - являются MEM3454, MEM63908, SSR180711, GTS21, EVP6124, ABT107, ABT126, TC-5619, AZD-6319 и SAR-130479. Другие агонисты α7 nAChR и их применение в качестве фармацевтических средств известны, например, из заявок на Международные патенты WO 2001/85727, WO 2004/022556, WO 2005/123732, WO 2006/005608, WO 2007/045478, WO 2007/068476 и WO 2007/068475.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 1500 Да. В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 1000 Да. В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 800 Да. В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 500 Да.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH2- или -CH2-CH2-; и L3 обозначает -CH2- или -CH(CH3)-; или
L1 обозначает -CH2-CH2-; L2 обозначает -CH2-; и L3 обозначает -CH2-CH2-;
L4 обозначает группу, выбранную из
О гр
L4a или L4b f где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалькильной составляющей;
R1 обозначает водород или О^алкил;
X1 обозначает -O- или -NH-;
группа A2 выбрана из
- 12 034964 где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к Х1;
Al обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;
каждая группа R2 обозначает независимо С1-6алкил, С1-6галогеналкил, С1-6алкокси, С1-6галогеналкокси, галоген, циано или от трех- до шестичленную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или частично насыщенной, и которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и причем каждая кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода, и не более чем 2 атома серы, и причем каждая кольцевая система может в свою очередь быть замещена один или несколько раз С1-6алкилом, С1-6галогеналкилом, С16алкокси, С1-6галогеналкокси, галогеном или циано, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;
или две группы R2 на соседних кольцевых атомах образуют С3-4алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х2, и где С3-4алкиленовая группа может быть замещена одной или несколькими группами R3;
каждая группа Х2 независимо обозначает -O- или -N(R4)-;
каждая группа R4 независимо обозначает водород или С1-6алкил; и каждая группа R3 независимо обозначает галоген или С1-6алкил;
в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
Пока нет иных указаний, выражения, используемые в настоящем изобретении, имеют следующее значение:
Алкил представляет прямоцепочечную или разветвленноцепочечную алкильную группу, например метил, этил, н- или изопропил, н-, изо-, втор- или трет-бутил, н-пентил, н-гексил; С1-6алкил предпочтительно представляет прямоцепочечный или разветвленноцепочечный С1-4алкил при особом предпочтении, отданном метилу, этилу, н-пропилу, изопропилу и трет-бутилу.
Каждая алкильная часть алкокси, галогеналкила и т.д. должна иметь такое же значение, как описано в указанном выше определении алкила, в частности в отношении линейности и предпочтительного размера.
Заместитель, замещенный один или несколько раз, например, как определено для A1, предпочтительно замещен одним-тремя заместителями. Галоген представляет собой в целом фтор, хлор, бром или йод; предпочтительно фтор, хлор или бром. Галогеналкильные группы предпочтительно имеют длину цепи от 1 до 4 атомов углерода и представляют собой, например фторметил, дифторметил, трифторметил, хлорметил, дихлорметил, трихлорометил, 2,2,2-трифторэтил, 2-фторэтил, 2-хлорэтил, пентафторэтил, 1,1-дифтор-2,2,2-трихлорэтил, 2,2,2-трихлорэтил, 1,1,2,2-тетрафторэтил, 2,2,3,3-тетрафторпропил, 2,2,3,3,3-пентафторпропил или 2,2,3,4,4,4-гексафторбутил;
предпочтительно -СБ3, -СНБ2, -СН2Б, -СНБ-СН3, -СР2СН3 или -СН2СР3.
В контексте изобретения определения две группы R2 на соседних кольцевых атомах образуют С3-4алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х2 или две группы R5 на соседних кольцевых атомах образуют С3-4алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х3 охватывают -СН2-СН2-СН2-, -СН2-СН2-СН2-СН2-, -О-СН2-О-, -О-СН2-СН2-О- и -СНтСН·^-. Примером замещенной группы является -СН2-СН2-^СН3)-.
В контексте изобретения определение A1 или А3 как от пяти- до десятичленной моноциклической или конденсированной полициклической ароматической кольцевой системы охватывает С6- или С10ароматическую углеводородную группу или от пяти- до десятичленную гетероциклическую ароматическую кольцевую систему. Полициклическая означает предпочтительно бициклическую.
В контексте изобретения определение R2 как от трех- до шестичленной моноциклической кольцевой системы охватывает С6-ароматическую углеводородную группу, от пяти- до шестичленную гетероциклическую ароматическую кольцевую систему и от трех- до шестичленную моноциклическую алифатическую или гетероциклическую кольцевую систему.
С6- или С10-ароматическая углеводородная группа представляет собой обычно фенил или нафтил, в частности, фенил.
Предпочтительно, но также в зависимости от определения заместителя, от пяти- до десятичленные гетероциклические ароматические кольцевые системы состоят из 5-10 кольцевых атомов, из которых 13 кольцевых атома представляют собой гетероатомы. Такие гетероциклические ароматические кольцевые системы могут присутствовать в виде одиночной кольцевой системы или в виде бициклических или трициклических кольцевых систем; предпочтительно, в виде одиночных кольцевых систем или в виде бенз-аннелированных кольцевых систем. Бициклические или трициклические кольцевые системы могут быть образованы аннелированием двух или более колец или мостиковым атомом, например кислорода, серы, азота. Примерами гетероциклических кольцевых систем являются: имидазо[2,1-Ь]тиазол, пиррол,
- 13 034964 пирролин, пирролидин, пиразол, пиразолин, пиразолидин, имидазол, имидазолин, имидазолидин, триазол, триазолин, триазолидин, тетразол, фуран, дигидрофуран, тетрагидрофуран, фуразан (оксадиазол), диоксолан, тиофен, дигидротиофен, тетрагидротиофен, оксазол, оксазолин, оксазолидин, изоксазол, изоксазолин, изоксазолидин, тиазол, тиазолин, тиазолидин, изотиазол, изотиазолин, изотиазолидин, тиадиазол, тиадиазолин, тиазолидин, пиридин, пиперидин, пиридазин, пиразин, пиперазин, триазин, пиран, тетрагидропиран, тиопиран, тетрагидротиопиран, оксазин, тиазин, диоксин, морфолин, пурин, птеридин и соответствующие бенз-аннелированные гетероциклы, например индол, изоиндол, кумарин, изохинолин, хинолин и тому подобные. Предпочтительными гетероциклами являются: имидазо[2,1-Ь]тиазол, оксазол, изоксазол, тиазол, изотиазол, триазол, пиррол, фуран, тетрагидрофуран, пиридин, пиримидин, имидазол или пиразол.
В контексте изобретения от трех- до шестичленных моноциклических алифатических кольцевых систем представляют собой обычно циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил.
За счет асимметрического атома (атомов) углерода, который может присутствовать в соединениях формулы (I) и соединения формулы (II), соединения могут существовать в оптически активной форме или в форме смесей оптических изомеров, например, в форме рацемических смесей или диастереомерных смесей. Все оптические изомеры и их смеси, включая рацемические смеси, являются частью настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH2-CH2-; и L3 обозначает -CH2- или -CH(CH3)-; L4 обозначает группу, выбранную из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалькильной составляющей; R1 обозначает водород или ^4алкил; X обозначает -O- или -NH-; группа A выбрана из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к X1;
A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;
каждая группа R2 обозначает независимо С1-6алкил, C1-6галогеналкил, С1-6алкокси, C1-6галогеналкокси или галоген.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH-CH-; и L3 обозначает -CH2-; L4 обозначает
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалкильной составляющей;
R1 обозначает водород или Х^алкил;
A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз
- 14 034964
R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; и каждая группа R2 обозначает независимо С1-6алкил, C1-6галогеналкил, С1-6алкокси, Оубгалогеналкокси или галоген.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-; L2 обозначает -CH2-CH2-; и L3 обозначает -CH2- или -CH(CH3)-; L4 обозначает
L4b где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалильной составляющей; группа X1 обозначает -O- или -NH-; группа A выбрана из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к X1;
A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и где кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и где заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; и каждая группа R2 обозначает независимо C1-6алкил, C1-6галогеналкил, C1-6алкокси, C1-6галогеналкокси или галоген.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение формулы (I)
где L1 обозначает -CH2-CH2-; L2 обозначает -CH2-; и L3 обозначает -CH2-CH2; L4 обозначает
L4b где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалильной составляющей; группа X1 обозначает -O- или -NH-; группа A выбрана из
где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к X1;
A1 обозначает от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и где кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и где заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген; и каждая группа R2 обозначает независимо C1-6алкил, C1-6галогеналкил, C1-6алкокси, C1-6галогеналкокси или галоген.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы P1; группа P1 представляет собой группу, состоящую из
- 15 034964
А-1: Сложный (S)-1-(2-фторфенил)этиловый эфир (S)-(lазабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)карбаминовой кислоты;
А-2 : Сложный (R)-1-(2-хлорфенил)этиловый эфир (R) — (1 — азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)карбаминовой кислоты;
А-3: Сложный (S)-1-фенилэтиловый эфир (S)-(lазабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)карбаминовой кислоты;
В-1: (R)-3- (5-фенилпиримидин-2-илокси)-1азабицикло[2.2.2]октан;
В-2 : (R)-3-(5-п-толилпиримидин-2-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-3 : (R)-3-(5-(2-фтор-4-метилфенил)пиримидин-2-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-4 : (R)-3-(5-(3,4-диметилфенил)пиримидин-2-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-5 : (R)-3-(6-п-толилпиридин-З-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-6 : (R)-3-(6-фенилпиридин-З-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-7 : (R)-3-(6-(3,4-диметилфенил)пиридин-3-илокси)-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-8 : (R)-3-[6-(2-фтор-4-метилфенил)пиридазин-3-илокси]-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-9: (R)-3-[6-(4,5-диметил-2-фторфенил)пиридазин-3 илокси]-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-10 : (R) -3- [6- (3,4-диметилфенил)пиридазин-3-илокси]-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-11: (R)-3-[6-(4-метилфенил)пиридазин-3-илокси]-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-12: (R)-3-[6-(2,5-дифтор-4-метилфенил)пиридазин-3 илокси]-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-13 : (2S,3R)-3-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси]-2 метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-14: (2R,3S)-3-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси]-2 метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-15 : (2S,3R)-3- [5-(1Н-индол-5-ил)пиримидин-2-илокси]-2 метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-16: (2R,3S)-3-[5-(1Н-индол-5-ил)пиримидин-2-илокси]-2 метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-17 : 3-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридин-3-илокси]-2-метил-1 азабицикло[2.2.2]октан;
В-18 : (2S,3R)-2-метил-З-[6-(5-метилтиофен-2-ил)пиридазин·
3-илокси]-1-азабицикло[2.2.2]октан;
В-19 : 3-[6— (2,3-диметил-1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси] 2-метил-1-азабицикло[2.2.2]октан;
- 16 034964
В-20 : транс-2-метил-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил) -(6 фенилпиридин-3-ил)амин;
В-21: транс-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридин-3-ил]-(2-метил-1 азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)амин;
С-1: (4S,5R)-4-[5-(1Н-индол-5-ил)пиримидин-2-илокси]-1 азабицикло[3.3.1]нонан;
С-2: 5-{2-[ (4 S,5R) — (1-азабицикло[3.3.1]нон-4 ил)окси]пиримидин-5-ил}-1,З-дигидроиндол-2-он;
С-3: (4S,5R)-4-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридин-3-илокси]-1 азабицикло[3.3.1]нонан;
С-4: (4S,5R)-4-[5-(1Н-индол-5-ил)пиридин-2-илокси]-1 азабицикло[3.3.1]нонан;
С-5: (4S,5R)-4-[6-(1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси]-1 азабицикло[3.3.1]нонан;
С-6: 5-{6-[(4S,5R)-(1-азабицикло[3.3.1]нон-4 ил)окси]пиридазин-3-ил}-1,З-дигидроиндол-2-он;
С-7 : (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[5-(1Н-индол-5 ил)пиридин-2-ил]амин;
С-8: (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[5-(1Н-индол-5 ил)пиримидин-2-ил]амин;
С-9 : (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[6-(1Н-индол-5 ил)пиридин-3-ил]амин;
С-10: (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[6-(1Н-индол-5 ил)пиридин-3-ил]амин;
С-11: (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[5-(1Н-индол-4 ил)пиримидин-2-ил]амин;
С-12: (1-азабицикло[3.3.1]нон-4-ил)-[6-(1Н-индол-5 ил)пиридазин-3-ил]амин;
D-1: 4-(5-фенил-1,3,4-тиадиазол-2-илокси)-1 азатрицикло[3.3.1.13'7]декан, имеющий формулу
D-la: (4S)—4 — (5-фенил-1,3,4-тиадиазол-2-илокси)-1
- 17 034964 азатрицикло [3.3.1.13'7] декан;
D-lb : 4-(6-(1Н-индол-5-ил)пиридазин-3-илокси)-1азатрицикло [3.3.1.13,7] декан;
D-lc: 4-(6-( 1Н-индол-5-ил)пиридин-3-илокси)-1азатрицикло [3.3.1.13'7] декан;
D-ld: 4- (5-(1Н-индол-5-ил)пиримидин-2-илокси)-1азатрицикло [3.3.1.13,7] декан;
D-2 : 2- ( 6-фенилпиридазин-З-ил)октагидропиррол[3,4с]пиррол, имеющий формулу ηΟΟνΧΧΟ.
f
D-3 : 5-[6-(5-метилгексагидропиррол[3,4-с]пиррол-2илпиридазин-3-ил-1Н-индол, имеющий формулу
D-За : 5-[6-(цис-5-метилгексагидропиррол[3,4-с]пиррол-2илпиридазин-3-ил-1Н-индол;
D-4 : 5- [5-{6-метил-З,6-диазабицикло[3.2.0]гепт-3ил[пиридин-2-ил]-IH-индол, имеющий формулу
D-4a: 5— [5 —{ (1R,5R)-6-метил-З,6-диазабицикло[3.2.0]гепт-3ил[пиридин-2-ил]-IH-индол;
D-5 : 2-Метил-5-(6-фенилпиридазин-З-ил)октагидропиррол[3,4 — с]пиррол, имеющий формулу
D-6 : 5-{6-[1-азабицикло[2.2.2]окт-3-илокси]пиридазин-3ил}-IH-индол;
D-ба: 5-{6- [ (3R)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3илокси]пиридазин-3-ил}-1Н-индол;
D-7 : 5-{6-[1-азабицикло[2.2.2]окт-3-илокси]пиридазин-3ил}-1,3-дигидроиндол-2-он;
- 18 034964
D-7a : 5-{6- [ (3R)1-азабицикло[2.2.2]окт-3-илокси]пиридазин· 3-ил}-1,3-дигидроиндол-2-он;
D-8 : N-(1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-1Н-индазол-3· карбоксамид;
D-8a: N- ( (3R)-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-1Н-индазол-3· карбоксамид;
D-8b: N- ( (3S)-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-1Н-индазол-3· карбоксамид;
D-9 : N-(1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5-(трифторметокси)
1Н-индазол-3-карбоксамид;
D-9a : N- ( (3R)-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5· (трифторметокси)-1Н-индазол-3-карбоксамид;
D-9b: N- ( (3S)-1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5· (трифторметокси)-1Н-индазол-3-карбоксамид;
D-10 : N-(2-( (3-пиридинил)метил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3· ил)бензофуран-2-карбоксамид;
D-10a: (2S,3R)-N-(2-((3-пиридинил)метил)-1· азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)бензофуран-2-карбоксамид;
D-ll: N-(2-( (3-пиридинил)метил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3· ил)-3,5-дифторбензамид;
D-lla: (2S,3R)-N-(2-((3-пиридинил)метил)-1· азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-3,5-дифторбензамид;
D-llb: N-(2-((3-пиридинил)метил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3· ил)-5-метилтиофен-2-карбоксамид;
D-llc: (2S,3R)-N-(2-((3-пиридинил)метил)-1· азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5-метилтиофен-2-карбоксамид;
D-lld: N-(2-((3-пиридинил)метил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3· ил)-5-(2-пиридинил)тиофен-2-карбоксамид;
D-lle: (2S,3R)-N-(2-((3-пиридинил)метил)-1· азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-5-(2-пиридинил)тиофен-2-карбоксамид;
D-12 : 4-(5-метилоксазол[4,5-Ь]пиридин-2-ил)-1,4· диазабицикло[3.2.2]нонан;
D-13 : [N-[(3R)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил]-4· хлорбензамид;
D-14: (1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)амид фтор[2,3
с]пиридин-5-карбоновой кислоты;
- 19 034964
D-15: (1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)амид 2,3дигидробензо[1,4]диоксин-6-карбоновой кислоты;
D-16: (4-пиридин-3-иленил)амид 5-морфолин-4-илпентаноевой кислоты;
D-17 : N-{4-[4-(2,4-диметоксифенил)пиперазин-1-ил]бутил}-4пиридин-2-илбензамид;
D-18 : 1-[6-(4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-(4-пиперидин-1илбутил)мочевина;
D-19: 7,8,9,10-тетрагидро-б,10-метан-бН-пиразин-(2,3—
h) ( 3)-бензазепин;
D-20: (2'R)-спиро-[1-азабицикло[2.2.2]октан-3,2' (3Ή) фтор[2,3-Ь]пиридин];
D-21: Сложный 4-бромфениловый эфир 1,4диазабицикло[3.2.2]нонан-4-карбоновой кислоты;
D-22: 3—[1—(2,4-Диметоксифенил)мет-(Е)-илиден]-3,4,5,6тетрагидро-[2,3']бипиридинил;
D-23: (1-азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)амид 7-(2метоксифенил)бензофуран-2-карбоновой кислоты;
D-2 4 : N-метил-!-{5-[3'Н-спиро[4-азабицикло[2.2.2]октан2,2' -фтор[2,3-Ь]пиридин]-5'-ил]-2-тиенил}метанамин, имеющий формулу
D-24a: Ы-метил-1-{5-[(2R)-3'Н-спиро[4 азабицикло[2.2.2]октан-2,2'-фтор[2,3-Ь]пиридин]-5'-ил]-2тиенил}метанамин;
D-24b: Ы-метил-1-{5-[(2S)-3'Н-спиро[4 азабицикло[2.2.2]октан-2,2'-фтор[2,3-Ь]пиридин]-5'-ил]-2тиенил]метанамин;
D-25a: б-[(Анилинкарбонил)]-N-[(3R)-1 азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25b: N- [ (3R) -1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (4 хлорфенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25c: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2
- 20 034964 метоксифенил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид; D-25d: N- [ (3R) -1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (4· метоксифенил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25e: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2· фенилэтил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-2 5f: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (3· цианофенил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25g: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (3· бромфенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25h: N- [ (3R) -1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2 этоксифенил)амино]карбонил)амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-2 5i: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]— 6—({ [ (4 (диметиламино)фенил)амино]карбонил)амино)-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-25j: N- (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2 нитрофенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25k: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2,6 дифторфенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-2 51: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (2,4 дихлорфенил)амино]карбонил]амино)-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25m: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[ ({ [3 (трифторметил)фенил]амино]карбонил)амино]-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-25n: N-[ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (3,4,5 триметоксифенил)амино]карбонил}амино)-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-25o: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[ ({ [4 метокси-3-(трифторметил)фенил]амино}карбонил)амино]-1бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25p: N-{(3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[({[3 метоксифенил]амино}карбонил)амино]-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25q: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[ ({ [3 трифторметоксифенил]амино}карбонил)амино]-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-25r: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-{ [ (трет бутиламино)карбонил]амино}-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
- 21 034964
D-2 5s: Ν- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6 {[(циклогексиламино)карбонил]амино}-1-бензотиофен-2карбоксамид;
D-2 5t: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-[ ({ [ (1S)—1 фенилэтил]амино}карбониламино]-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25u: 7-[(Анилинкарбонил)амино]-N-[(3R)-1 азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-1-бензотиофен-2-карбоксамид;
D-25v: N- [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6-({ [ (4 метоксифенил)амино]карбонил}амино)-1-бензофуран-2-карбоксамид;
D-26a: N-[4-(2-Тиенил)фенил]-1-азабицикло[2.2.2]октан-3 карбоксамид;
D-2 6Ь: N-[4'-(Гидроксиметил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6с: N- (4'-Фтор-1,1'-бифенил-4-ил)-1 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6d: N-(4'-Метилсульфанил-1,1'-бифенил-4-ил)-1 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 бе: 2- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(4'-фтор-1, 1' бифенил-4-ил)ацетамид;
D-26f: 2- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(4'-метокси-1,1' бифенил-4-ил)ацетамид;
D-2 бд: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(4'-фтор-1,1' бифенил-3-ил)ацетамид;
D-2 6h: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(3'-нитро-1,1' бифенил-4-ил)ацетамид;
D-2 61: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-[4' (гидроксиметил)-1,1'-бифенил-3-ил]ацетамид;
D-2 6j: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-[4'—(бромметил) 1,1'-бифенил-4-ил]ацетамид;
D-26k: 2- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-[2' (гидроксиметил)-1,1'-бифенил-3-ил]ацетамид;
D-261: N-[3'(Ацетиламино)-1,1'-бифенил-4-ил]-2-(1 азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)ацетамид;
D-26m: (3R)-N-[2'-(Гидроксиметил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6п: (3R)-N-[4'—(Гидроксиметил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1
- 22 034964 азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-26o: (3S)-Ν-[4'(Гидроксиметил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6р: (3R)-Ν-[4'-(4-Морфолинил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-26q: (3R)-N-[4'-(Гидроксиметил)-3'-(метокси) —1,1’ — бифенил-4-ил]-1-азабицикло[2.2.2]-октан-3-карбоксамид;
D-26r: Метил 4'-{[(3S)-1-азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-карбоксилат;
D-26s: 4’ — { [ (3 S)-1-Азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-карбоновая кислота;
D-2 6t: (3R)-N-[4'-(Гидрокси-1-метилэтил)-1,1'-бифенил-4ил]-1-азабицикло[2.2.2]-октан-3-карбоксамид;
D-2 6u: (3R)-N-[4'-(Аминокарбонил)-1,1'-бифенил-4-ил]-1азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-26v: (3R)-N-[4'-(Гидроксиметил)-З-фтор-1,1'-бифенил-4ил]-1-азабицикло[2.2.2]октан-3-карбоксамид;
D-2 6w: (4'-{ [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-ил)метил метилкарбамат;
D-2 бх: (4'-{ [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-ил)метил изопропилкарбамат;
D-26y: (4' — { [ (3R)-1-Азабицикло[2.2.2]окт-3илкарбонил]амино}-1,1'-бифенил-4-ил)метил этилкарбамат;
D-26z: форма свободного основания соединения, выбранного из примеров №№ 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 и 35 документа WO2003/078431;
D-27a: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(7-бром-1бензотиен-2-ил)ацетамид;
D-27b: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(б-бром-1бензотиен-2-ил)ацетамид;
D-27c: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(7хинолинил)ацетамид;
D-27d: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(2нафтил)ацетамид;
D-27e: 2-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-N-(8-нитро-2нафтил)ацетамид;
- 23 034964
D-28a: N- (l-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-6· хинолинкарбоксамид;
D-28b: N- (l-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2· феназинкарбоксамид;
D-2 8c: N- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-7· хинолинкарбоксамид;
D-28d: N- [ (3R)-l-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил]-6· хинолинкарбоксамид;
D-2 8e : N- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-этил-7 хинолинкарбоксамид;
D-28f: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-этил-6· хинолинкарбоксамид;
D-2 8g: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-метил-7· хинолинкарбоксамид;
D-2 8h: N- (1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-метил-6· хинолинкарбоксамид;
D-281: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-4-метил-6· хинолинкарбоксамид;
D-28j: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-пропил-6· хинолинкарбоксамид;
D-28k: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-этил-4-метил-6· хинолинкарбоксамид;
D-28I: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-пропил-7· хинолинкарбоксамид;
D-28m: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-этил-4-метил-7· хинолинкарбоксамид;
D-28n: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-4-(тетрагидро-2R пиран-2-ил)-6-хинолинкарбоксамид;
D-28o: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-4-(тетрагидро-2R пиран-2-ил)-7-хинолинкарбоксамид;
D-28p: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-фенил-6· хинолинкарбоксамид;
D-28q: N-(1-Азабицикло[2.2.2]οκτ-3-ил)-2-фенил-7· хинолинкарбоксамид;
D-29 : (R)-З-хлор-N-(хинуклидин-3-ил)бензо[Ь]тиофен-2 карбоксамид;
D-30a: 5—{5—[(эндо)-8-азабицикло[3.2.1]октан-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол;
D-ЗОЬ: 5-{5-[(экзо)-8-азабицикло[3.2.1]октан-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол;
D-30c: 5—{5—[(эндо)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол;
D-30d: 5—{5— [ (экзо)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол;
D-30e: 4 —{5— [ (экзо)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3илокси]пиридин-2-ил}-ΙΗ-индол; и
D-30f: 5—{6— [ (экзо)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3илокси]пиридин-3-ил}-ΙΗ-индол;
- 24 034964 причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из соединения -1, -2 и -3; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления, агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из соединения B-1, B-2, B-3, B-4, B-5, B-6, B-7, B-8, B-9, B-10, B-11, B-12, B-13, B-14, B-15, B-16, B-17, B-18, B-19, B-20 и B-21; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из соединения C-1, C-2, C-3, C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-9, C-10, C-11 и C-12; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы Р2; группа Р2 представляет собой группу, состоящую из соединений -1, -2, -3, B-1, B-2, B-3, B-4, B-5, B-6, B-7, B-8, B-9, B-10, B-11, B-12, B-13, B-14, B-15, B-16, B-17, B-18, B-19, B-20, B-21, C-1, С-2, C3, C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-9, C-10, C-11, C-12, D-1, D-1a, D-1b, D-1c, D-1d, D-2, D-3, D-3a, D-4, D-4a, D8, D-8a, D-8b, D-9, D-9a, D-9b, D-10, D-10a, D-11, D-11a, D-11b, D-11c, D-11d, D-11e, D-12, D-19, D-22, D24, D-24a, D-24b, D-25a, D-25b, D-25c, D-25d, D-25e, D-25f, D-25g, D-25h, D-25i, D-25j, D-25k, D-25l, D25m, D-25n, D-25o, D-25p, D-25q, D-25r, D-25s, D-25t, D-25u, D-25v, D-28a, D-28b, D-28c, D-28d, D-28e, D-28f, D-28g, D-28h, D-28i, D-28j, D-28k, D-28l, D-28m, D-28n, D-28o, D-28p, D-28q, D-29, D-30a, D-30b, D-30c, D-30d, D-30e и D-30f; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы P3; группа P3 представляет собой группу, состоящую из соединений -1, -2, -3, B-1, B-2, B-3, B-4, B-5, B-6, B-7, B-8, B-9, B-10, B-11, B-12, B-13, B-14, B-15, B-16, B-17, B-18, B-19, B-20, B-21, C-1, C-2, C3, C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-9, C-10, C-11, C-12, D-1, D-1a, D-1b, D-1c, D-1d, D-2, D-3, D-3a, D-4, D-4a, D8, D-8a, D-8b, D-9, D-9a, D-9b, D-10, D-10a, D-11, D-11a, D-12, D-19, D-22, D-24, D-24a, D-24b, D-29, D30a, D-30b, D-30c, D-30d, D-30e и D-30f; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
В одном варианте осуществления агонист a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы P4; группа Р4 представляет собой группу, состоящую из соединений -1, B-5, B-8, B-12, B-13, C-5, C-6 и C-8; причем каждое из указанных соединений представлено в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
Соединения формулы (I) (например, соединения с -1 по -3, с B-1 по B-21 и с C-1 по C-12) и их получение известны из документов WO 2001/85727, WO 2004/022556, WO 2005/123732, WO 2006/005608, WO 2007/045478, WO 2007/068476 и WO 2007/068475, или могут быть получены аналогично указанным ссылкам. Соединения D-1 и D-1a могут быть получены в соответствии с документом WO 2008/058096.
Соединения D-2, D-3, D-3a, D-4, D-4a и D-5 (-582941) могут быть получены в соответствии с документом WO 2005/028477. Соединения D-6, D-6a, D-7 и E7a могут быть получены в соответствии с документом WO 2006/065233 и/или WO 2007/018738. Соединения D-8, D-8a, D-8b, D-9, D-9a и D-9b могут быть получены в соответствии с документом WO 2004/029050 и/или WO 2010/043515.
Соединения D-10 и D-10a могут быть получены в соответствии с документом WO 2004/076449 и/или WO 2009/018505. Соединения D-11, с D-11a по D-11e могут быть получены в соответствии с документом WO 2004/076449 и/или WO 2010/085724 и/или WO 2010/056622. Соединение D-12 (CP-810123) и соединение D-19 (варениклин) описаны в публикации O'Donnell et al., J. Med. Chem., 2010, 53, 1222-1237. Соединения D-13 (PNU-282987), D-14 (PHA543613), D-21 (SSR-180771) и D-23 (ABBF) описаны в публикации Horenstein et al., Mol. Pharmacol., 2008, 74, 1496-1511. Соединения D-15 (PHA568487), D-16 (WAY317538), D-17 (WAY-264620), D-20 (AZD-0328) и D-22 (GTS-21) описаны в публикации Haydar et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, 10, 144-152. Соединение D-18 (WYE-103914) описано в публикации Ghiron et al., J. Med. Chem., 2010, 53, 4379-4389. Соединения D-24, D-24a и D-24b описаны в документе WO 2007/133155 и/или WO 2009/066107. Соединения с D-25a по D-25v описаны в документе WO 2004/013136. Соединения с D-26a по D-26z описаны в документе WO 2003/078431. Соединения с D-27a до D-27e описаны в документе WO 2003/078430. Соединения с D-28a по D-28q описаны в документе WO 2003/043991.
Соединение D-29 описано в документе WO 2003/055878. Соединения с D-30a по D-30f описаны в документе WO 2007/137030.
Положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR с низкой молекулярной массой.
В одном варианте осуществления применяемый активатор a7-nAChR представляет собой положительный аллостерический модулятор a7-nAChR.
Используемый в настоящем описании термин положительный аллостерический модулятор α7nAChR обозначает соединение, которое связывается с рецептором, содержащим субъединицу α7
- 25 034964 nAChR in vivo и in vitro и потенцирует активацию рецептора, когда связывается его физиологический лиганд (т.е. ацетилхолин). Потенцирование может быть измерено способом, описанным в документе WO 2001/85727, т.е. функциональным анализом аффинитета в гомомерном a7-nAChR, проводимым с линией крысиных гипофизарных клеток, устойчиво экспрессирующей оп-nAChR. В качестве показателя используется входящий ток кальция после стимуляции рецептора по сравнению с одним связыванием ацетилхолином. Положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR в соответствии с изобретением обычно вызывают входящий ток кальция, составляющий по меньшей мере 200% максимального входящего потока, вызванного ацетилхолином, при величине EC50 по меньшей мере 5000 нМ; предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR вызывают входящий ток кальция, составляющий по меньшей мере 300% максимального входящего потока, вызванного ацетилхолином, при величине EC50 по меньшей мере 1000 нМ; более предпочтительные агонисты вызывают входящий ток кальция, составляющий по меньшей мере 400% максимального входящего тока, вызванного эпибатидином, при величине EC50 по меньшей мере 500 нМ.
В частности, предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR должны хорошо всасываться из желудочно-кишечного тракта, должны быть достаточно метаболически устойчивыми и обладать благоприятными фармакокинетическими свойствами.
Дополнительные предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR активно связываются in-vivo с a7-nAChRs, в то же время проявляя небольшой аффинитет в отношении других рецепторов, в частности в отношении других nAChRs, например α4β2 nAChR, в отношении мускариновых ацетилхолиновых рецепторов, например рецепторов M1 и/или 5-HT3. Дополнительные предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR эффективно проходят через гематоэнцефалический барьер.
Предпочтительные положительные аллостерические модуляторы a7-nAChR должны быть нетоксичными и демонстрировать небольшое число побочных эффектов.
Кроме того, предпочтительный положительный аллостерический модулятор a7-nAChR должен быть способен существовать в физической форме, которая является устойчивой, не гигроскопичной и легко включаться в состав лекарственных препаратов.
В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR представляет собой селективный положительный аллостерический модулятор a7-nAChR, т.е. избирателен в отношении рецептора, содержащего субъединицу a7-nAChR, поскольку следовало бы ожидать, что такой положительный аллостерический модулятор вызовет у получающего лечение индивидуума меньшее число побочных эффектов, чем не селективный положительный аллостерический модулятор.
Положительный аллостерический модулятор, являющийся селективным в отношении рецептора, содержащего субъединицу a7-nAChR, обладает гораздо более высокой степенью функционального аффинитета к такому рецептору, например имеет в 10 раз больший аффинитет по величине EC50, предпочтительно по меньшей мере в 20 раз, предпочтительнее по меньшей мере в 50 раз больший аффинитет по сравнению с любым другим никотиновым ацетилхолиновым рецептором. Для оценки аффинитета положительного аллостерического модулятора a7-nAChR по изобретению к другим никотиновым ацетилхолиновым рецепторам можно использовать способ, описанный в заявке на Международный патент WO 2001/85727, т.е. для оценки аффинитета к человеческому нейронному α4β2 nAChR проводят аналогичный функциональный анализ с использованием линии человеческих эмбриональных почечных клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий подтип α4β2 и для оценки активности соединений по изобретению в отношении ганглионарного подтипа и мышечного типа никотинового рецептора, аналогичные функциональные анализы проводят с использованием линии человеческих эмбриональных почечных клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий ганглионарный подтип или линии клеток, эндогенно экспрессирующих человеческий мышечный тип никотиновых рецепторов.
В последние 12 лет много усилий было сосредоточено на разработке селективных положительных аллостерических модуляторов a7-nAChR, что привело к открытию множества различных хемотипов, проявляющих указанную селективную активность. Эти усилия резюмированы в обзоре Haydar et al. (Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, 10, 144-152), в котором описаны 11 соединений, действующих в качестве положительных аллостерических модуляторов a7-nAChR, относящихся к семи различным химическим семействам; т.е. XY-4083; PNU-120596, РНА-758454 и NS-1738; PHA-709829; SB-206553; LY2087101, LY-1078733 и LY-2087133; соединение 26; и A-867744 (обозначения соединений, взятые из публикации Haydar et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, 10, 144-152). В действительности, по меньшей мере на одно перспективное лекарственное средство, обладающее типом действия положительного аллостерического модулятора a7-nAChR, получено разрешение Администрации по пищевым продуктам и лекарственным средствам США на проведение клинических испытаний (т.е. XY-4083).
В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 1500 Да. В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 1000 Да. В одном варианте
- 26 034964 осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR имеет максимальную молекулярную массу 800 Да. В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор α7nAChR имеет максимальную молекулярную массу 500 Да. В одном варианте осуществления положительный аллостерический модулятор a7-nAChR представляет собой соединение, выбранное из группы P5; группа P5 представляет собой группу, состоящую из соединений
Е-1: (Z)-N-(4-Хлорфенил)-3-(4-хлорфениламино)-2-(3метилизоксазол-5-ил)акриламид (XY-4083);
Е-2 : 1-(5-Хлор-2,4-диметоксифенил)-3-(5-метилизоксазол-Зил)мочевина (PNU-120596);
Е-3: 1-(5-Фтор-2,4-диметоксифенил)-3-(5трифторметилизоксазол-3-ил)мочевина (РНА-758454);
Е-4 : 1- (5-Хлор-2-гидроксифенил)-3-(2-хлор-5трифторметилфенил)мочевина (NS-1738);
Е-5: 4-(4-Хлорфенил)-2-(4-метоксифенил)-5-метил-2Нпиразол-3-иламин (РНА-709829);
Е-6: Пиридин-3-иламид 5-метил-З,5-дигидро-2Н-пиррол[2,3f]индол-1-карбоновой кислоты (SB-206553);
Е-7 : [2-(4-Фторфениламино)-4-метилтиазол-5-ил]тиофен-3илметанон (LY-2087101);
Е-8 : [2-(4-Фторфениламино)-4-метилтиазол-5-ил]-птолилметанон (LY-1078733);
Е-9 : Бензо[1,3]диоксол-5-ил-[2-(4-фторфениламино)-4метилтиазол-5-ил]метанон (LY-2087133);
Е-10: Амид 4-нафталин-1-ил-За,4,5,9Ь-тетрагидро-ЗНциклопента[с]хинолин-8-сульфоновой кислоты и
Е-11: 4-[5-(4-Хлорфенил)-2-метил-3-пропионилпиррол-1ил]бензолсульфонамид (А-867744);
причем указанное соединение представлено в форме свободного основания или в форме кислотноаддитивной соли.
В еще одном варианте осуществления описанные выше композиции, содержащие активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств у группы пациентов, отобранной в соответствии с описанными здесь способами, содержит второе средство, улучшающее когнитивную функцию, или терапевтическое соединение, такое как обычное антипсихотическое средство или атипичное антипсихотическое средство.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет способы прогнозирования способности индивидуума, например, человека к ответу на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов на основании присутствия или отсутствия определенных генетических маркеров у подлежащего лечению индивидуума. Используемый в настоящем описании термин прогнозирование способности индивидуума к ответу на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов предназначен для ссылки на способность оценки вероятности того, что лечение индивидуума активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов будет (например, обеспечит измеряемое благоприятное воздействие) или не будет клинически эффективным у индивидуума. В частности, такая способность оценить вероятность того, будет ли или не будет лечение клинически эффективным, обычно реализуется перед началом лечения индивидуума активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Однако также возможно, что такая способность оценить вероятность того, будет ли или не будет лечение клинически эффективным, может реализоваться после начала лечения, но перед тем как у индивидуума наблюдался показатель клинической эффективности (например, показатель измеряемого благоприятного эффекта лечения).
Способ включает стадии: I) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5 и/или гена CHRNA3; II) идентификации тех индивидуумов стадии I), которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs и/или носителями SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36) CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, причем гомозиготное присутствие по меньшей мере одного из указанных SNPs CHRNA5 или SNP гаплотипов является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, и причем гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того,
- 27 034964 что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/T является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Характеристика SNPs CHRNA5 и/или CHRNA3 или получение информации о генотипе индивидуума в указанных локусах может осуществляться путем использования любых технологий, хорошо известных в данной области техники. Например, может секвенироваться любая из областей генов. Любой из хорошо известных способов секвенирования одной или обеих нитей гена CHRNA5 и/или CHRNA3 может использоваться в способах по изобретению, такой как способы, описанные, например, в патенте США № 5075216, в публикациях Engelke et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. 85, 544-548 и Wong et al. (1987) Nature 330, 384-386; Maxim и Gilbert (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. 74:560; или Sanger (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. 74:5463. Кроме того, можно использовать любую из разнообразных процедур автоматизированного секвенирования (см., например, публикацию Naeve C.W et al. (1995) Biotechniques 19:448), включая секвенирование масс спектрометрией (см., например, опубликованную заявку на Международный патент WO 94/16101; публикации Cohen et al. (1996) Adv. Chromatogr. 36:127-162; и Griffin et al. (1993) Appl. Biochem. Biotechnol. 38:147-159.
Определение присутствия или отсутствия SNPs CHRNA5 и/или CHRNA3 в биологическом образце может осуществляться с использованием любой хорошо известной технологии, такой как полимеразная цепная реакция (ПЦР), реакция амплификации, ПЦР анализ с обратной транскриптазой, анализ конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP), выявление расщепления ошибочного спаривания оснований, гетеродуплексный анализ, саузерн-блот анализ, вестерн-блот анализ, секвенирование ДНК, анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов, анализ гаплотипа, серотипирование и их комбинации или субкомбинации. Например, образец мРНК может быть получен у индивидуума, и экспрессия мРНК, кодируемых аллелью CHRNA5 и/или CHRNA3 в образце мРНК, может быть выявлена с использованием стандартных технологий молекулярной биологии, таких как ПЦР анализ. Предпочтительным способом ПЦР анализа является полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (RTPCR). Другие подходящие системы для анализа образца мРНК включают анализ с использованием микрочипа (например, с использованием системы микрочипа Affymetrix's или технологии Illumina's BeadArray Technology). В определенных ситуациях возможен анализ экспрессии характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 на уровне белка с использованием реагента выявления, который выявляет белковый продукт, кодируемый мРНК биомаркера. Например, если доступен реагент в виде антитела, который специфически связывается с маркерным белком CHRNA5 или CHRNA3, а не с другими белками, то такое антитело можно использовать для выявления экспрессии маркерного белка CHRNA5 или CHRNA3 в клеточном образце, полученном у индивидуума, или препарате, полученном из клеточного образца, используя стандартные технологии на основе антител, известные в данной области техники, такие как анализ FACS (флуоресцентно-активированная клеточная сортировка), ELISA (иммуноферментный анализ) и тому подобные.
Как указано выше, определение присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 может включать, например, анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов. Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (RFLPS) основан на изменениях в сайте рестрикционного фермента. Кроме того, специфические для последовательности рибозимы (см., например, патент США № 5498531) могут использоваться для балльной оценки присутствия специфического сайта расщепления рибозима.
Другая технология для определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью, включает гибридизацию сегментов ДНК, которые анализируются (ДНК-мишень) комплементарным, меченым олигонуклеотидным зондом, как описано, например, в публикации Wallace et at. (1981) Nucl. Acids Res. 9, 879894. Поскольку дуплексы ДНК, содержащие даже одно ошибочное спаривание пары оснований, проявляют высокую термическую нестабильность, дифференциальная температура плавления может использоваться для отличия целевых ДНК, которые в полной мере комплементарны зонду из целевых ДНК, которые отличаются только одним нуклеотидом. Этот способ был адаптирован для выявления присутствия или отсутствия специфического рестрикционного сайта, как описано, например, в патенте США № 4683194. Способ включает использование меченого на конце олигонуклеотидного зонда, простирающегося по сайту рестрикции, который гибридизируется с ДНК-мишенью. Затем гибридизированный дуплекс ДНК инкубируют с рестрикционным ферментом, соответствующим этому сайту. Реформированные рестрикционные сайты расщепляются перевариванием в паре дуплексов между зондом и мишенью использованием рестрикционной эндонуклеазой. Специфический рестрикционный сайт присутствует в ДНК-мишени, если выявляются укороченные молекулы зонда.
Другие способы определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью, включают спосо
- 28 034964 бы, в которых используется защита от расщепляющих агентов, для выявления ошибочно спаренных оснований в гетеродуплексах РНК/РНК или РНК/ДНК (как описано, например, в публикации Myers et al. (1985) Science 230:1242). В целом, используемая в данной области техники методика расщепления ошибочного спаривания начинается получением гетеродуплексов, образованных гибридизацией (меченой) РНК или ДНК, содержащей полиморфную последовательность с потенциально полиморфной РНК или ДНК, полученной из образца. Двухнитевые дуплексы обрабатывают агентом, который расцепляет однонитевые области дуплекса, такие как существующие вследствие ошибочных спариваний пар оснований между контрольными и взятыми в качестве образца нитями. Например, дуплексы РНК/ДНК могут обрабатываться РНазой, а гибриды ДНК/ДНК обрабатываться нуклеазой S1 для ферментативного переваривания ошибочно спаренных областей. В других вариантах осуществления, дуплексы или ДНК/ДНК, или РНК/ДНК могут обрабатываться гидроксиламином или тетроксидом осмия и пиперидином для переваривания ошибочно спаренных областей. После переваривания ошибочно спаренных областей полученный материал затем отделяют по размеру на денатурирующих полиакриламидных гелях. См., например, публикации Cotton et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:4397; Saleeba et al. (1992) Methods Enzymol. 217:286-295. В предпочтительном варианте осуществления контрольная ДНК или РНК может метиться для выявления.
В другом варианте осуществления изменения электрофоретической подвижности могут использоваться для определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью. Например, однонитевой конформационный полиморфизм (SSCP) может использоваться для выявления различий электрофоретической подвижности между различными характерными маркерными аллелями гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью (как описано, например, в публикациях Orita et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA: 86:276; Cotton (1993) Mutat Res. 285:125-144; и Hayashi (1992) Genet. Anal. Tech. Appl. 9:73-79). Фрагменты однонитевой ДНК образцов и контрольных нуклеиновых кислот могут денатурироваться и обеспечиваться возможностью ренатурироваться. Вторичная структура однонитевых нуклеиновых кислот варьируется в соответствии с последовательностью; полученное в результате изменение электрофоретической подвижности обеспечивает возможность выявления изменения даже одного основания. Фрагменты ДНК можно метить или выявлять мечеными зондами. Чувствительность анализа можно увеличить использованием РНК (а не ДНК), в которой вторичная структура более чувствительна к изменению последовательности. В предпочтительном варианте осуществления в обсуждаемом способе используется гетеродуплексный анализ для отделения двухнитевых гетеродуплексных молекул на основании изменений электрофоретической подвижности (Keen et al. (1991) Trends Genet. 7:5).
В еще одном варианте осуществления движение молекулы нуклеиновой кислоты в полиакриламидных гелях, содержащих градиент денатурата, анализируется с использованием денатурирующего градиентного гель-электрофореза (DGGE) (как описано, например, в публикации Myers et al. (1985) Nature 313:495). Когда DGGE используется в качестве способа анализа, то ДНК может модифицироваться для обеспечения того, чтобы она не полностью денатруировалась, например, добавлением GC (гуанинцитозинового) клэмпа длиной приблизительно 40 пар оснований, обогащенной GC ДНК с высокой точкой плавления, с использованием ПЦР. В дополнительном варианте осуществления температурный градиент используется вместо денатурирующего градиента для идентификации различий подвижности контроля и образца ДНК (Rosenbaum и Reissner (1987) Biophys. Chem. 265:12753).
Примеры других технологий для определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью, включают без ограничения селективную олигонуклеотидную гибридизацию, селективную амплификацию или селективное удлинение праймера. Например, могут быть получены олигонуклеотидные праймеры, в которых полиморфная область размещена в центре, и затем гибридизированы к ДНК-мишени в условиях, которые обеспечивают возможность гибридизации, только если обнаруживается идеальное спаривание (Saiki et al. (1986) Nature 324:163; Saiki et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:6230). Такие аллель-специфические олигонуклеотиды гибридизируются с амплифицированной ПЦР ДНК-мишенью или рядом различных полиморфизмов, когда олигонуклеотиды присоединяются к гибридизирующей мембране и гибридизируются с меченой ДНК-мишенью.
Другой способ определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3 или SNP, образующего гаплотип с такой характерной аллелью, представляет собой способ удлинения праймера, который состоит из гибридизации меченого олигонуклеотидного праймера с матричной РНК или ДНК, и затем использовании ДНК-полимеразы и дезоксинуклеозидтрифосфатов для удлинения праймера на 5' конце матрицы. Затем разрушение продукта удлинения меченого праймера производится фракционированием на основании размера, например, электрофорезом через денатурирующий полиакриламидный гель. Этот способ часто используется для сравнения сегментов гомологичной ДНК и для выявления различий вследствие вставки или делеции нуклеотидов. Различия вследствие замещения нуклеотидов не выявляются, поскольку размер представляет собой единственный критерий, используемый для характеристики продукта удлинения праймера. Дополнительными хорошо известными способами генотипирования SNP являются
- 29 034964 генотипирование динамической аллель-специфической гибридизацией (DASH) (Howell W., Jobs M., Gyllensten U., Brookes A. (1999) Dynamic allele-specific hybridization. A new method for scoring single nucleotide polymorphisms. Nat. Biotechnol. 17(l):87-8);
выявление SNP посредством молекулярных маяков (Abravaya K., Huff J., Marshall R., Merchant В., Mullen C., Schneider G. и Robinson J. (2003) Molecular beacons as diagnostic tools: technology and applications. Clin. Chem. Lab. Med. 41:468-474;
микрочипы олигонуклеотидных SNP высокой плотности (Rapley R., Harbron S. (Eds.) (2004) Molecular Analysis and Genome Discovery. Chichester. John Wiley & Sons Ltd.);
флэп-эндонуклеазы (Invader assay for SNP genotyping. Mutat Res. 573 (1-2) : 103-10).
В случае, когда SNP локализуется в промоторной области или другой не кодирующей области, оказывающей влияние на частоту экспрессии гена, несущего указанный SNP, может происходить воздействие на уровни мРНК или белка. В такой ситуации присутствие SNP невозможно определить на основании последовательности мРНК или белка указанного соответствующего гена. Однако присутствие такого характерного SNP может быть определено косвенно измерениями уровней мРНК или белка. Следовательно, в другом варианте осуществления изобретения описанные здесь способы могут включать дополнительную или альтернативную стадию определения уровня мРНК или белка определенного гена или генного продукта в качестве способа косвенного определения присутствия характерного SNP в гене CHRNA5 или CHRNA3. Falvella и соавторы идентифицировали промоторные полиморфизмы и уровни транскрипта гена CHRNA5 (J. Natl. Cancer Inst. 2010; 102:1366-1370, Vol. 102, Issue 17, September 8, 2010). В указанной публикации было показано, что частота экспрессии гена CHRNA5, экспрессированного в виде уровней мРНК, белков, несущих гаплотип delTTC (образованный SNPs rs3841324-Del (SEQ ID NO: 6), rs503464-T (SEQ ID NO: 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), составляла 1,82, по сравнению с 0,88 и 1,06 для пациентов, несущих гаплотип InsTGG и InsATC соответственно. Следовательно, анализ уровней мРНК может использоваться в качестве косвенного анализа для определения присутствия гаплотипа delTTC у указанных пациентов.
Анализ гаплотипа одного или нескольких полиморфных сайтов вокруг характерной маркерной аллели или SNP гена CHRNA5 или CHRNA3 может также использоваться для определения присутствия или отсутствия дополнительных характерных SNPs и может включать, например, использование родословных семей, молекулярных технологий и/или статистических выводов.
Кроме того, любой из хорошо известных способов генотипирования таких SNPs (например, секвенирование ДНК, технологии гибридизации, анализа на основе ПЦР, анализ ПЦР на основе флуоресцентного красителя и гасящего агента (система выявления ПЦР по технологии Taqman), технологии на основе RFLP, однонитевой конформационный полиморфизм (SSCP), денатурирующий градиентный гельэлектрофорез (DGGE), температурный градиентный гель-электрофорез (TGGE), химическое расщепление ошибочных спариваний (CMC), система на основе гетеродуплексного анализа, методики на основе масс спектроскопии, инвазивный анализ расщепления, секвенирование соотношения полиморфизма (PRS), микрочипы, анализ удлинения по типу катящегося кольца, методики на основе ВЭЖХ, методики на основе DHPLC (денатурирующей ВЭЖХ), анализы удлинения олигонуклеотидов (OLA), анализа на основе удлинения (ARMS, (амплификации рефрактерной мутационной системы), ALEX (амплификации рефрактерного мутационного линейного удлинения), SBCE (удлинение цепи одиночного основания), анализ молекулярного маяка, технологии оккупант (технологии третьей волны), анализ цепной реакции лигазы, методики на основе анализа 5'-нуклеазы, гибридизационный электрофорез через набор капилляров (CAE), пиросеквенирование, анализ усечения белка (PTT), иммуноанализы, анализ гаплотипа и твердофазная гибридизация (дот-блот иммуноанализ, обращенный дот-блот, чипсы) очень хорошо известны в данной области техники и описаны, например, в публикациях Siitari, Nucleic. Acid. diagnostics market, Technology Review 125/2002, ISDN 1239-758; Caplin (1999) Biochemica 1:5-8; Neville, (2002) BioTechniques 32:34-43; Underbill (197) Genome Res. 7:996-1005; Oefner (2000) J. Chromatogr. В Biomed. Sci. Appl. 739:34555 и в заявке на патент США № 20010049586 и могут использоваться в способах по изобретению.
Любой пригодный образец ткани, полученный биопсией или иным образом у индивидуума, пораженного когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами, может использоваться для определения присутствия или отсутствия характерной маркерной аллели гена CHRNA5 или CHRNA3, или SNP, образующих гаплотип с такой характерной аллелью. Методики или способы получения биоптата у индивидуума хорошо известны в данной области техники. Выделение субкомпонентов образцов ткани (например, клеток или РНК или ДНК) может осуществляться с использованием хорошо известных в данной области методик, описанных ниже в разделе Примеры.
Присутствие, в частности, гомозиготное присутствие SNP rs55853698-T/T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G/G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5 или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, является показателем вероятности того, что индивидуум ответит на описанное здесь лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-T/T (SEQ ID NO: 4) является показателем вероятности того, что индивидуум не будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготное присутствие генотипа rs6495308-C/T SNP является показателем веро
- 30 034964 ятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Следовательно, изобретение также относится к терапевтическому способу улучшения когнитивных способностей у индивидуума и/или лечения индивидуумов, страдающих когнитивным нарушением, психотическим и/или нейродегенеративным расстройством, включающему стадии: III) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5, как описано выше; IV) идентификации тех индивидуумов III), которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5, в частности тех индивидуумов, которые являются гомозиготными в отношении указанных вариантов SNP, или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs и/или несущими SNP rs6495308-C/C CHRNA3 или Т/С (SEQ ID NO: 3/4) или генотип SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) или SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs и V) введения терапевтического эффективного количества активатора альфа 7 никотиновых рецепторов тем индивидуумам, которые идентифицированы на стадии IV). В дополнительном варианте осуществления описанные выше стадии I) и III) дополнительно включают стадии: VI) получения биологического образца у указанного индивидуума, причем указанный образец выбран из группы, состоящей из крови, происходящего из крови продукта (такого как лейкоцитарная пленка, сыворотка и плазма), лимфы, мочи, слезной жидкости, слюны, спинномозговой жидкости, буккальных мазков, мокроты, волосяных корней, лейкоцитарного образца или образцов ткани или любой их комбинации, и VII) обеспечения контакта биологического образца стадии VI) с реагентом, способным выявить (как подробно описано выше) (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308-C или -T (SEQ ID NO: 3 или 4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-T или -C (SEQ ID NO: 35 или 36), или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNP, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs.
Реагент, агент или устройство, с которым вступает в контакт биологический образец, может представлять собой, например, праймер(ы) ПЦР/секвенирования, нуклеотиды и ферменты, пригодные для амплификации, и/или секвенирования, и/или мечения SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) CHRNA5, или SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs и/или несущие SNP rs6495308-C/C CHRNA3, или Т/С (SEQ ID NO: 3/4), или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35), или SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, присутствующими в образце, антитело, способное выявлять один из указанных выше SNPs, или SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs, или SNP в таком же дисбалансе связи с указанными SNPs в образце, рестрикционный фермент и/или микрочип.
Термин терапевтически эффективное количество в контексте введения используемого здесь терапевтически эффективного количества относится к количеству активного ингредиента (например, активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов и/или второго средства, улучшающего когнитивную функцию, как описано здесь), которое при введении индивидууму достаточно для обеспечения терапевтического благоприятного действия, например, достаточно для лечения когнитивных нарушений или дисфункций, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, в частности, для улучшения когнитивных способностей индивидуума. В другом аспекте изобретения, когнитивные нарушения или дисфункции, психотические и/или нейродегенеративные расстройства представляют собой психическое заболевание или приобретенную недостаточность одной или нескольких из функции памяти, решения проблем, ориентации и/или абстракции, в частности, выраженной в вербальной памяти, исполнительных функциях, внимании и его активном поддержании, беглости речи и скорости движений. В дополнительном варианте осуществления когнитивные нарушения или дисфункции, психотические и/или нейродегенеративные расстройства представляют собой легкое когнитивное нарушение, болезнь Альцгеймера, деменцию при болезни Паркинсона, деменцию с тельцами Леви, шизофрению, сосудистую деменцию, деменцию при СПИДе, сенильную деменцию, легкое когнитивное нарушение, связанное с возрастом (MCI), связанное с возрастом нарушение памяти, аутизм, деменцию при дегенерации лобной доли, инсульт, дегенеративные расстройства базальных ганглиев, рассеянный склероз, травмы, опухоли мозга, инфекции мозга, гидроцефалию, депрессию, токсические или метаболические расстройства и деменции, вызванные лекарственными средствами.
Введение активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов относится к введению агониста или положительных аллостерических модуляторов альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, в частности, к соединениям с низкой молекулярной массой, выбранным из группы P1. Альтернативно, терапевтический способ улучшения когнитивных способностей индивидуума и/или лечения индивидуумов, страдающих когнитивным нарушением, психотическим и/или нейродегенеративным расстройством включает стадию введения агониста альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, представленного формулой (I), или соединения, выбранного из группы Р1.
Фармацевтически приемлемые соли известны в данной области (например, S.M. Berge et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sd., 1977, 66:1-19; и Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selec
- 31 034964 tion, and Use, Stahl RH., Wermuth C.G., Eds.; Wiley-VCH и VHCA: Zurich, 2002). Термин фармацевтически приемлемая соль предназначен для обозначения соли свободной формы, которая является нетоксичной, не является биологически непереносимой или не является иным образом нежелательной. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются те, которые фармакологически эффективны и пригодны для контакта с тканями пациента без вызова ненужной токсичности, раздражения или аллергической реакции.
В еще одном варианте осуществления в описанных способах лечения может вводиться второе средство улучшения когнитивной функции или терапевтического соединения, полезного для лечения когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств, таких как обычные антипсихотические или атипичные антипсихотические средства. Предпочтительно применяется комбинация, представляющая собой фармацевтическую композицию или комбинированный фармацевтический препарат. Такую фармацевтическую композицию можно вводить вместе, одну за другой или отдельно в одной стандартной лекарственной форме.
В другом аспекте описанных способов доза активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, подлежащая введению, составляет от примерно 1 мг до примерно 100 мг в день. Альтернативно, подлежащая введению доза составляет от примерно 2 мг до примерно 100 мг, или от примерно 3 мг до примерно 90 мг, или примерно от 4 мг до примерно 80 мг, или от примерно 5 мг до примерно 70 мг, или от примерно 6 мг до примерно 60 мг, или от примерно 7 мг до примерно 50 мг, или от примерно 8 мг до примерно 40 мг, или от примерно 9 мг до примерно 35 мг, или от примерно 10 мг до примерно 30 мг в день, или от примерно 5 мг до примерно 10 мг, или от примерно 10 мг до примерно 15 мг, или от примерно 15 мг до примерно 20 мг, или от примерно 20 мг до примерно 25 мг в день. В одном варианте осуществления указанных аспектов активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов представляет собой агонист альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.
Другой вариант осуществления изобретения относится к применению активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, как описано выше, для лечения пациента с когнитивными нарушениями, психотическими и/или нейродегенеративными расстройствами или состояния, при котором играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, причем пациент, являющийся восприимчивым к лечению активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов был выбран в соответствии с описанными выше способами. Кроме того, изобретение относится к применению по меньшей мере одного зонда для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308-C/C CHRNA3 или Т/С (SEQ ID NO: 3/4), или (iv) SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35), или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP в таком же дисбалансе связи с указанными SNPs для определения того, будет ли индивидуум отвечать на (a) лечение когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств или состояния, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, или (b) улучшения когнитивных способностей активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов. Специалисту в данной области техники известны способы и технологии конструирования полезных зондов.
В другом аспекте изобретение относится к набору, содержащему по меньшей мере один зонд для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5 или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308-C/C или Т/С (SEQ ID NO: 3/4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35), или (v) SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs. Предпочтительно, указанный набор представляет собой набор для диагностики вероятности ответа индивидуума на лечение когнитивных нарушений, психотических и/или нейродегенеративных расстройств или состояния, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, содержащий VIII) средство для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, и/или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), и/или (iii) SNP rs6495308-C/C или Т/С (SEQ ID NO: 3/4) CHRNA3, и/или (iv) SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35), и/или (v) SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs, и IX) инструкции по применению указанного набора.
Дополнительный предмет изобретения относится к применению набора, предпочтительно, описанного выше набора, пригодного для любого из описанных выше способов или видов применения, причем указанный набор содержит по меньшей мере один зонд для выявления (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308-C/C или Т/С (SEQ ID NO: 3/4) CHRNA3, или (iv) SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35), или (v) SNP, образующий гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs. В связанном варианте осуществления описанный выше набор содержит олигонуклеотидные зонды.
В другом варианте осуществления описанных выше способов или видов применения гаплотип SNP CHRNA5/CHRNA3 состоит по меньшей мере из двух SNPs, выбранных из группы, включающей rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14),
- 32 034964 rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34). В другом варианте осуществления описанных выше способов или видов применения гаплотип SNP CHRNA5 состоит из характерного SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и по меньшей мере одного дополнительного SNP, выбранного из группы, состоящей из rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36) и rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34). В связанном варианте осуществления гаплотип SNP выбран из гаплотипа delTTC и insATC, образованного SNPs rs3841324 (SEQ ID NO: 5 и 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7).
Действительные уровни дозировки активных средств в фармацевтических композициях по настоящему изобретению могут варьироваться с тем, чтобы получить количество активного средства, которое эффективно для достижения желательного терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и типа введения, без токсического воздействия на пациента. Выбранный уровень дозировки зависит от разнообразных фармакокинетических факторов, включая активность конкретных используемых композиций по настоящему изобретению, или их сложного эфира, соли или амида, пути введения, времени введения, скорости выведения конкретного используемого соединения, длительности лечения, других лекарственных средств, соединений и/или материалов, применяемых в комбинации с конкретными используемыми композициями, возраста, пола, массы тела, тяжести заболевания, общего состояния здоровья и медицинского анамнеза получающего лечение пациента и подобных факторов, хорошо известных в областях медицины.
Введение терапевтически эффективной дозировки активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, содержащегося в композициях по изобретению, может привести к уменьшению тяжести патологических симптомов, увеличению частоты и длительности периодов ремиссии или профилактики патологии или потери трудоспособности вследствие поражения заболеванием, т.е. к улучшению когнитивных способностей.
Композиция по настоящему изобретению может вводиться одним или несколькими путями введения с использованием одного или нескольких из разнообразия способов, известных в данной области техники. Как понятно специалисту в данной области техники, путь и/или тип введения будет варьироваться в зависимости от желаемых результатов. Пути введения могут включать внутривенный, внутримышечный, интрадермальный, внутрибрюшинный, подкожный, спинальный или другие парентеральные пути введения, например инъекцией или инфузией. Используемая в настоящем описании фраза парентеральное введение означает типы введения, отличные от энтерального и топического введения, обычно инъекцией, и включает без ограничения внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, подоболочечную, внутрикапсулярную, внутриорбитальную, внутрисердечную, интрадермальную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, субкутикулярную, внутрисуставную, субкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную, эпидуральную и внутригрудинную инъекцию и инфузию. Альтернативно, соединение может вводиться не парентеральным путем, таким как топический, эпидермальный или мукозальный путь введения, например интраназально, перорально, вагинально, ректально, сублингвально или топически.
Активные соединения могут быть получены с носителями, которые защищают соединение против быстрого высвобождения, такие как препаративная форма контролируемого высвобождения, включая имплантаты, трансдермальные системы и микроинкапсулированные системы доставки. Могут использоваться биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Много способов получения таких препаративных форм запатентованы или в целом известны специалистам в данной области техники. См., например, руководство Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Предпочтительные терапевтические композиции представляют собой композиции для перорального или трансдермального введения.
Композиция для энтерального или парентерального введения представляет собой, например, стандартную лекарственную форму, такую как покрытая сахаром таблетка, таблетка, капсула, суппозитория или ампула.
Стандартное содержание активных ингредиентов в отдельной дозе не должно само по себе составлять терапевтически эффективное количество, поскольку такое количество может быть достигнуто введением множества единиц дозировки. Композиция в соответствии с изобретением может содержать, на
- 33 034964 пример, от примерно 10% до примерно 100%, предпочтительно, от примерно 20% до примерно 60% активных ингредиентов.
Если нет иных указаний, то фармацевтическую композицию в соответствии с изобретением получают, по существу, известным способом, например посредством способов обычного смешивания, гранулирования, покрытия сахаром, растворения или лиофилизации. При получении композиции для пероральной лекарственной формы можно использовать любую из обычных фармацевтических сред, например, воду, гликоли, масла, спирты, носители, такие как крахмалы, сахара или микрокристаллическая целлюлоза, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, связывающие агенты, разрыхлители и тому подобные. Ввиду легкости их введения, таблетки и капсулы представляют наиболее предпочтительные пероральные стандартные лекарственные формы, и в этом случае очевидно использование твердых фармацевтических носителей.
Последовательности
SEQ ID NO. Название SNP Последовательность
1 CHRNA5 SNP rs55853698-T CGGGAGCTGTGGCGCGGAGCGGCCCCTCTGCTGCGTCTGCCCTCGT TTTGTC
2 CHRNA5 SNP rs55853698-G CGGGAGCTGTGGCGCGGAGCGGCCCCGCTGCTGCGTCTGCCCTCG TTTTGTC
3 CHRNA3 SNP rs6495308-C GTAACTGTCTGATGGCAGGTTTGCTGCTGGGAGAGTAGAGAAGAGGT TTGGG
4 CHRNA3 SNP rs6495308-T GTAACTGTCTGATGGCAGGTTTGCTGTTGGGAGAGTAGAGAAGAGGT TTGGG
5 CHRNA5 SNP rs3841324-Ins GAAGCTCCCGGCGCCTAGCCCCGCCCCTATTTCCCTCTGGCCCCGC CCAATCCTCGCCTTGTTCCTTTTGGCC
6 CHRNA5 SNP rs3841324-Del GAAGCTCCCGGCGCCTAGCCCCGCCCAATCCTCGCCTTGTTCCTTTT GGCC
7 CHRNA5 SNP rs55781567-C TTGTCTCACGACTCACACTCAGTGCTCCATTCCCCAAGAGTTCGCGTT CCCC
8 CHRNA5 SNP rs55781567-G TTGTCTCACGACTCACACTCAGTGCTGCATTCCCCAAGAGTTCGCGTT CCCC
9 CHRNA5 SNP rs503464-A ACAGCTCCCGCCGGGACAGCAGCCTCAGCCTAGCAGCTTCTGGCGG GCTCGG
- 34 034964
10 CHRNA5 SNP rs503464-T ACAGCTCCCGCCGGGACAGCAGCCTCTGCCTAGCAGCTTCTGGCGG GCTCGG
11 CHRNA5 SNP rs56182392-G GGAGCTTCCACATGCGTCCCGAGCCCGCCAGAAGCTGCTAGGCTGA GGCTGC
12 CHRNA5 SNP rs56182392-A GGAGCTTCCACATGCGTCCCGAGCCCACCAGAAGCTGCTAGGCTGA GGCTGC
13 CHRNA5 SNP rs77293642-C CTGCTAGGCTGAGGCTGCTGTCCCGGCGGGAGCTGTGGCGCGGAG CGGCCCC
14 CHRNA5 SNP rs77293642-T CTGCTAGGCTGAGGCTGCTGTCCCGGTGGGAGCTGTGGCGCGGAGC GGCCCC
15 CHRNA5 SNP rs67624739-lns GGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGCCAGAGGGAAATAGGGGCGG GGCTAGGCGCCGGGAGCTTCCACATGCG
16 CHRNA5 SNP rs67624739Del GGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGCTAGGCGCCGGGAGCTTCCA CATGCG
17 CHRNA5 SNP rs 142774214Ins GGGCCAAAAGGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGCCAGAGGG AAATAGGGGCGGGGCTAGGCGCCGGGAGCTT
18 CHRNA5 SNP rs 142774214Del GGGCCAAAAGGAACAAGGCGAGGATTGGGCGGGGCTAGGCGCCGG GAGCTT
19 CHRNA5 SNP rs60182379-G GGGGATCGGAGGCGGGGCTATGAATAGACCGGACTGGGCCAAAAGG AACAAG
20 CHRNA5 SNP rs60182379-T GGGGATCGGAGGCGGGGCTATGAATATACCGGACTGGGCCAAAAGG AACAAG
21 CHRNA5 SNP rs77541452-A GACAGGGTTGGACCAGAGGCGGGGCGAGGTGGGGAAAGGGTTGGT GGGGATC
22 CHRNA5 SNP rs77541452-G GACAGGGTTGGACCAGAGGCGGGGCGGGGTGGGGAAAGGGTTGGT GGGGATC
23 CHRNA5 SNP rs72648882-G TGTTATCTTAAGGTGTGCAGTGACTAGGCCAAGGACATCCGGTGGTT AGAGA
24 CHRNA5 SNP rs72648882-T TGTTATCTTAAGGTGTGCAGTGACTATGCCAAGGACATCCGGTGGTTA GAGA
25 CHRNA5 SNP rs144334096-A AGAGCAGACATCAATGAATAGCTGTTATCTTAAGGTGTGCAGTGACTA GGCC
26 CHRNA5 SNP rs144334096-T AGAGCAGACATCAATGAATAGCTGTTTTCTTAAGGTGTGCAGTGACTA GGCC
27 CHRNA5 SNP rs114037126-C AGCACAGAGCAGACATCAATGAATAGCTGTTATCTTAAGGTGTGCAGT GACT
28 CHRNA5 SNP rs114037126-T AGCACAGAGCAGACATCAATGAATAGTTGTTATCTTAAGGTGTGCAGT GACT
29 CHRNA5 SNP rs140280786-A CGGCTCCCTCTGCCACTGAAGTTTAAAGATAATTCGCCTGAATCCCTT CAGC
30 CHRNA5 SNP rs140280786-G CGGCTCCCTCTGCCACTGAAGTTTAAGGATAATTCGCCTGAATCCCTT CAGC
31 CHRNA5 SNP rs147565924-A TTCTTTGCAACCAGGTTTAG I I I I I CACAGATTTACTAGTCTGGAGGG TGGA
32 CHRNA5 SNP rs147565924-C TTCTTTGCAACCAGGTTTAG I I I I I CCCAGATTTACTAGTCTGGAGGG TGGA
33 CH RNA5 S N P rs 115662711 -C TGGCTCCATTGGATGTAATTTACATTCTTCCAGCTGTATTTGGACCTAA GAA
34 CH RNA5 S N P rs 115662711 -T TGGCTCCATTGGATGTAATTTACAI I I I ICCAGCTGTATTTGGACCTAA GAA
35 CHRNA3 SNP rs1051730-C TGGGCCATCATCAAAGCCCCAGGCTACAAACACGACATCAAGTACAA CTGCT
36 CHRNA3 SNP rs1051730-T TGGGCCATCATCAAAGCCCCAGGCTATAAACACGACATCAAGTACAA CTGCT
37 CHRNA5 SNP rs16969968-G CTAGAAACACATTGGAAGCTGCGCTCGATTCTATTCGCTACATTACAA GACA
38 CHRNA5 SNP rs16969968-A CTAGAAACACATTGGAAGCTGCGCTCAATTCTATTCGCTACATTACAA GACA
Примеры
Общая методология.
Для измерения эффекта активатора альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов на когнитивные способности пациентов, страдающих шизофренией, применяли адекватный набор тестов когнитивной функции (CogState™) короткой продолжительности (как подробно описано ниже), обеспечивающий возможность измерений в множественные точки времени в течение периода лечения (Pietrzak et al., 2009; Maruff et al., 2009).
Тест непрерывного парного ассоциативного обучения (CPAL).
Задание CPAL представляет собой обоснованный тест, который оценивает визуальную эпизодическую память (ассоциативное обучение). Этот тест использовали ранее при шизофрении. Перед началом этого задания инспектор, руководящий проведением теста, зачитывает пациенту полные инструкции из своего сценария. При тесте CPAL участники должны научиться серии ассоциаций между набором трудно словесно характеризуемого образца и его расположением. На фазе презентации задания образец появляется в участке, и требуется, чтобы индивидуум подтвердил, что он видел образец, прикосновением к участку, в котором он появляется. На этой стадии задания пациент также увидит, что имеются два положения, в которых мишень не появляется (отвлекающие положения). Образцы представляются в случайном порядке. Однако, будучи однажды представленным, образец остается в одном и том же положении в
- 35 034964 течение всего задания. На фазе обучения задания пациенты должны поместить каждый из восьми образцов в их правильные положения. Они должны это сделать в шесть циклов. В первый цикл один из образцов представляется в центральном положении, и индивидуумы должны запомнить положение, в котором он был показан. Они указывают положение прикосновением к нему. Если они прикасаются к неправильному положению, то над положением возникает визуальный звуковой сигнал (над положением появляется красный крест и раздается звонок). Затем пациент должен выбрать второе положение. Этот процесс продолжается до тех пор, пока пациент правильно расположит все четыре мишени в их правильные положения. После того как все восемь образцов были правильно расположены, начинается второй цикл. Во втором цикле образцы остаются в тех же положениях, но порядок их представления в центре экрана отличается от порядка в первом цикле (рандомизированного). Процесс помещения каждой мишени в правильное положение продолжается, как это было в первом цикле. Когда завершается второй цикл, такой же процесс повторяется по мере того, как по ходу циклов уменьшается число ошибок, совершаемых при помещении образцов в их правильные положения. Время введения составляет приблизительно 5 мин у здоровых добровольцев. Следовало ожидать, пациенты, страдающие шизофренией, завершат задание в пределах примерно 12 мин.
Тест NAB-лабиринты.
Набор тестов нейропсихологической оценки (NAB®) в лабиринтах измеряет планирование и предвидение - аспекты исполнительной функции, которые часто нарушаются у пациентов с дисфункцией лобной доли. Этот показатель быстро оценивает планирование и организационные способности посредством заданий прослеживания лабиринта, которые, как было обнаружено, традиционно чувствительны к поражениям лобной доли. Тест NAB-лабиринты состоит из семи лабиринтов, которые становятся все более сложными, позволяя инспектору оценивать в баллах лабиринты на основании полноты и времени завершения (NAB Neuropsychological Assessment Battery Mazes Test Kit; 2009, Robert Stern Travis White).
Набор матриц согласованной оценки когнитивной функции (MCCB, Matrics Assessment Inc.).
В рамках инициативы по исследованиям измерения и лечения для улучшения когнитивной функции при шизофрении (MATRICS) было определено, что определенные зоны или домены когнитивной функции необходимо исследовать для определения наличия эффектов лечения при шизофрении. Семь доменов когнитивной функции были идентифицированы на основании того, что они были достоверно нарушены у пациентов с хронической шизофренией. Эти домены включали скорость обработки, внимания/активного поддержания внимания, рабочей памяти, вербального обучения, визуального обучения, аргументации и решения проблем и социального познания.
CPT-IP (Тест непрерывного функционирования - Идентичные пары).
В представленных на экране инструкциях перед заданием задается вопрос: Карта красная? Инспектор, наблюдающий за ходом теста, читает полный текст инструкций индивидууму по сценарию инспектора, наблюдающего за ходом теста. Для начала выполнения задания инспектор или индивидуум должен нажать кнопку Ввод. Игральная карта представляется в центре экрана. Карта поворачивается на 180° с тем, чтобы оказаться лицевой стороной кверху. Как только это происходит, индивидуум должен решить, красная карта или нет. Если она красная, то индивидуум должен нажать клавишу Да, если она не красная, то он должен нажать клавишу Нет. Индивидуумы выполняют тест до тех пор, пока они не достигнут требуемого числа ответов, или до истечения периода проведения теста. Затем на экране представляются инструкции действительного теста. Инспектор, наблюдающий за проведением теста, или индивидуум должен нажать на кнопку Ввод для начала действительного теста. Индивидуума следует стимулировать работать как можно быстрее и как можно более точно выполнять задание. Например, индивидуум должен стараться не нажимать клавишу Да или Нет перед тем как карта повернется лицевой поверхностью кверху. Если они ошибаются, то слышен звук, сигнализирующий об ошибке.
Статистические методы для фармакодинамических анализов.
Оценку активности получали по статистическому анализу площади под кривой доза-эффект после введения исследуемого препарата (AUEC) 4-10 на CPAL следующим образом: параметры отдельно анализировали посредством модели линейного смешанного эффекта, корригированных по периодспецифической исходной величине для шкалы, группы лечения, периоду и последовательности в качестве фиксированных эффектов и для пациента в качестве случайного эффекта. Период-специфическую исходную величину для шкалы получали по средним период-специфическим величинам в день -1 и по величине перед введением. Стандартное отклонение (и его 95% CI (доверительный интервал)) между каждыми группами дозы B-5 и плацебо получали из модели. Размер эффекта получали делением величины стандартного отклонения в группе лечения (и его 95% CI) на корень квадратный двукратной рассчитанной дисперсии остаточной ошибки. Активность, определенную в параграфе выше, оценивали по размеру эффекта CPAL.
Пример 1. Структура исследования для идентификации существования субпопуляции пациентов, отвечающих на лечение B-5.
При попытке идентификации такой субпопуляции пациентов, которые отвечают на лечение B-5, исследование проводили для изучения связи между генетическими вариантами rs55853698 (SEQ ID NO:
- 36 034964 и 2) в гене CHRNA5 и эффективностью B-5 в исследовании. В исследовании использовали монофумарат B-5 в форме твердых желатиновых капсул, как описано в примере E.
Клинические образцы. Геномную ДНК у 29 индивидуумов экстрагировали из цельной крови в соответствии с инструкциями Gentra Systems, Inc. (Minneapolis, MN).
Анализ генотипирования. В общей сложности 29 образцов ДНК генотипировали на наличие rs55853698 (SEQ ID NO: 1 и 2) в гене CHRNA5. Генотипирование выполняли, используя системы Assaysby-Design (анализы по структуре) и Assays-on-Demand (анализы по требованию) (Applied Biosystems, Foster City, CA) на секвенаторе ABI 7900. При генотипировании использовали 1 нг геномной ДНК в соответствии с инструкциями производителя.
Статистический анализ. Использовали модель смешанного эффекта, включающую последовательность, период и лечение в качестве фиксированных эффектов, исходную величину в качестве ковариата и индивидуума в качестве случайного эффекта. Размер эффекта определяли по разности рассчитанных средних величин Лечения B-5 - Плацебо, деленных на квадратный корень двукратных рассчитанных величин дисперсии остаточной ошибки. Исходную тяжесть заболевания анализировали ANCOVA (анализом ковариации), корригированным по возрасту, полу, годам получения образования и курению в анамнезе.
Результаты. У пациентов, которые являются гомозиготными в отношении варианта T SNP rs55853698-T/T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, проявился значимый ответ на B-5 по тесту визуального обучения и памяти (CPAL), в сравнении с плацебо (2 мг: p=0,015, 15 мг: p=0,003 и 100 мг: p=0,024). Размер эффекта в трех группах лечения составил соответственно 0,63, 0,80 и 0,58. Напротив, пациенты, не являющиеся гомозиготными в отношении варианта T (G/T) или являющиеся гомозиготными в отношении варианта G (G/G) SNP rs55853698 CHRNA5, не проявили никакого значимого улучшения когнитивной функции (табл. 1). Эти результаты показывают, что генотип TT SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5 представляет собой прогностический маркер клинического ответа на B-5 у пациентов, страдающих шизофренией.
Таблица 1. Первичная клиническая конечная точка оценки CPAL набора тестов CogState™ по генотипам CHRNA5
Доза (мг) В-5 Генотип rs55853698 ТТ (п=18) Генотип rs55853698 GG+GT(п=8)
Размер эффекта Величина Р Размер эффекта Величина Р
2 0, 626 0, 015 - -
15 0,795 0, 003 -0,231 0,561
100 0,578 0, 024 -0,158 0, 681
Ключевую вторичную клиническую конечную точку набора матриц согласованной оценки когнитивной функции (MCCB) оценивали в отношении эффективности B-5 у субпопуляций, определенных вариантом (rs55853698) CHRNA5. Как резюмировано в табл. 2, пациенты, являющиеся гомозиготными в отношении варианта T SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, проявили большее улучшение в отношении Аргументации и решения проблем (NAB-Mazes), по сравнению с плацебо. Размер эффекта составил 0,40, 0,50 и 0,32, соответственно, в когортах 2, 15 и 100 мг. Кроме того, у пациентов, являющихся гомозиготными в отношении варианта T SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5, также проявилось большее улучшение в отношении Внимания и активности поддержания внимания (CPT-IP). Размер эффекта составил 0,47, 0,40 и 0,39, соответственно, в когортах 2, 15 и 100 мг. Напротив, у пациентов, не являющихся гомозиготными в отношении варианта T (G/T), или являющихся гомозиготными в отношении варианта G (G/G/) SNP rs55853698 CHRNA5, не проявилось никакое значимое улучшение когнитивной функции. Полученные результаты показывают, что генотип TT SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) CHRNA5 представляет собой прогностический маркер клинического ответа на B-5 у пациентов, страдающих шизофренией.
- 37 034964
Таблица 2. Вторичная клиническая конечная точка MCCB (набора матриц согласованной оценки когнитивной функции) по генотипам CHRNA5 MATRICS: Инициатива Национального Института психического здоровья по исследованию измерения и лечения для улучшения когнитивной, функции при шизофрении
Доза (мг) В-5 Генотип rs55853698 ТТ (п=18) Генотип rs55853698 GG+GT (п=8)
Лабиринты NAB
Размер эффекта Величина Р Размер эффекта Величина Р
2 0,4 0, 102 -0,157 0,706
15 0,5 0, 045 -0,109 0, 814
100 0,316 0, 199 -0,153 0,708
CPT-IP
Размер эффекта Величина Р Размер эффекта Величина Р
2 0,465 0, 059 - -
15 0,404 0, 105 0, 019 0, 971
100 0,389 0, 116 -0387 0,494
Таблица 3. Оценка с использованием первичной клинической конечной точки CPAL набора тестов CogState™ по генотипам (rs1051730) CHRNA3
Доза (мг) В-5 Генотип rsl0517130 СС (п=19) Генотип rsl0517130 СТ+ТТ (п=7)
Размер эффекта Величина Р Размер эффекта Величина Р
2 0, 443 0, 068 0, 565 0, 183
15 0, 627 0, 012 -0,202 0, 622
100 0,464 0, 057 -0,209 0, 606
Таблица 4. Оценка с использованием первичной клинической конечной точки CPAL набора тестов CogState™ по генотипам (rs6495308) CHRNA3
Доза (мг) В-5 Генотип rs6495308 СС+СТ (п=15) Генотип rs6495308 ТТ (п=11)
Размер эффекта Величина Р Размер эффекта Величина Р
2 0, 553 0, 048 0, 001 0, 998
15 0, 593 0, 034 -0,112 0,749
100 0, 342 0,208 -0,154 0, 639
В следующем разделе описаны дополнительные аспекты, относящиеся к этой технологии.
Пример А. Получение 5-хлор-2-(4-метилфенил)пиридина.
В атмосфере азота 2,5-дихлорпиридин (40 г, 270 ммоль), 4-метилфенилбороновую кислоту (39 г, 289 ммоль) и дихлорид бистрифенилфосфин-палладия(П) (1,14 г; 1,6 ммоль) суспендировали в воде (258 г)/ТНБ (тетрагидрофуран) (117 г) в течение приблизительно 30 мин при 35-55°С. Раствор трикалия фосфата (143,4 г, 676 ммоль) в воде (143 г) добавляли при 35-55°С в течение приблизительно 60-120 мин и температуру 55°С поддерживали в течение еще приблизительно 30-45 мин. Добавляли еще трикалий фосфат (22,9 г, 108 ммоль) в воде (22,9 г) в течение периода приблизительно 30 мин, и температуру повышали до 55-60°С для завершения реакции в пределах еще приблизительно 2 ч.
Для экстрактивного удаления палладия раствор цистеина (примерно 16 г) в воде (115 г) добавляли к реакционной смеси при 60-55°С. Приблизительно через 1 ч при 55°С двухфазную реакционную смесь просветляли фильтрацией через прокладку вспомогательного фильтра клеточного осадка (2-5 г) и смесь THF/воды (110 г/75 г) использовали для споласкивания. Слои объединенных фильтратов разделяли при 25°С, и водный слой, содержащий соль, экстрагировали THF (1x57 г). Объединенные слои THF разбавляли 94% этанолом (195 г) и концентрировали перегонкой под пониженным давлением (300-200 мбар) при температуре в кожухе 45°С для удаления основного количества THF (175-250 г). К остающемуся
- 38 034964 раствору продукта добавляли дополнительный этанол (97 г) и при 45-55°С постепенно добавляли воду (565 г) в течение периода приблизительно 60 мин для вызова и поддержания кристаллизации. Через 30 мин температуру снижали приблизительно до 20°С приблизительно через 90-120 мин, и еще через час при этой температуре твердые вещества собирали фильтрацией, промывали этанолом/водой 1:2 и сушили под пониженным давлением для выхода 5-хлор-2-(4-метилфенил)пиридина (52,5 г; 95% теории; чистота >95%; Pd <25 м.д.).
Пример В. Получение (К)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в свободной форме и в форме фумарата.
Пример B1. Образование свободной формы.
В атмосфере азота к 3И-хинуклидинолу (43,8 г, 0,34 моль) в DMSO (диметилсульфоксиде) (792 г) добавляли приблизительно 20% раствор в THF трет-бутоксида калия (210 г, 0,375 моль), и приблизительно при 40-45°С под пониженным давлением отгоняли растворитель THF. Температуру реакционной смеси повышали до 90°С, и постепенно добавляли твердый 5-хлор-2-(4-метилфенил)пиридин (61,2 г, 0,30 моль) по меньшей мере 4 порциями. Температуру дополнительно повышали до приблизительно 100105°С, и по меньшей мере еще через 3 часа при этой температуре реакция на (R)-3-(6-(4метилфенил)пиридин-3 -илокси)-1 -азабицикло [2.2.2] октан была завершена.
К реакционной смеси добавляли воду (150 г) при 60-25°С, и температуру постепенно снижали приблизительно до 20°С приблизительно за 60 мин, и добавляли дополнительную воду (210 г). По меньшей мере еще через дополнительных 2 часа при этой температуре мелкие твердые вещества собирали фильтрацией, промывали последовательно DMSO/водой (приблизительно 322 г; смесь 2:1), водой (500 г) и водой/этанолом (приблизительно 500 г; смесь 9:1) и сушили при 60°С под пониженным давлением для выхода Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (56,3 г, 63% теории).
Пример B2. Образование формы в виде фумарата.
К прозрачному раствору Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (39,6 г; 0,135 моль) и фумаровой кислоты (16,4 г, 0,141 моль) в этаноле (330 г)/воде (21 г) при 65°С добавляли трет-бутилметилэфир (142,5 г) и реакционную смесь охлаждали до 23°С приблизительно за 60 мин.
Дополнительно добавляли трет-бутилметилэфир (170,6 г). По меньшей мере еще через 2 ч твердые вещества собирали фильтрацией, промывали этанолом/трет-бутилметилэфиром (153 г; смесь 1:1) и сушили при 55-60°С под пониженным давлением для выхода гидрофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (43,8 г, 79% теории).
Пример C. Получение Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в свободной форме и в форме фумарата.
Пример C1. Образование свободной формы.
В атмосфере азота к 3R-хинуклидинолу (41,4 г, 0,325 моль) в DMSO (320 г) добавляли раствор 5хлор-2-(4-метилфенил)пиридин (51 г, 0,250 моль) в толуоле (201 г). Температуру постепенно повышали приблизительно до 100-105°С при удалении остаточной воды, если она имелась, кипячением в сосуде с обратным холодильником под пониженным давлением у водной ловушки в течение примерно 45 мин. В течение периода приблизительно 90 мин непрерывно добавляли приблизительно 20% раствор в THF трет-бутоксида калия (158,8 г, 0,283 моль) при постоянной отгонке растворителя THF. Еще через 2-5 ч приблизительно при 100-105°С реакция на Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октан была завершена.
Воду (293 г) добавляли к реакционной смеси при 60-25°С. Слои разделяли и толуоловый слой промывали водой (2x42 г). Раствор толуола сушили примерно при 60°С кипячением в сосуде с обратным холодильником под пониженным давлением у водной ловушки в течение примерно 45-60 мин.
Пример C2. Образование формы в виде фумарата.
К раствору толуола примера C1 примерно при 50-55°С постепенно добавляли кашицеобразную суспензию фумаровой кислоты (26,1 г, 0,9 экв.) в 94% EtOH (22 г) и толуол (97 г).
Дополнительное количество толуола (97 г) добавляли для споласкивания и еще через примерно 3060 мин при 55°С температуру постепенно снижали приблизительно до 20°С приблизительно за 120-180 мин. По меньшей мере еще через 1 ч твердые вещества собирали фильтрацией, промывали насыщенным водным раствором толуола (2x104 г) и сушили при 60°С под пониженным давлением для выхода гидрофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (84,8 г; 82% теории, на основании количества 5-хлор-2-(4-метилфенил)пиридина, использованного в примере C1).
Пример D. Получение монофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в кристаллической форме.
500 мг Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в форме свободного основания суспендировали в 20 мл изопропилового спирта. Добавляли стехиометрическое количество фумаровой кислоты. Полученный раствор перемешивали при окружающей температуре в течение 14 ч. Осадок собирали фильтрацией.
Пример D1. Получение монофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана в кристаллической форме затравочной кристаллизацией.
- 39 034964
7,3 г монофумарата (К)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (чистота >98%; полученного, как описано, например, в примере С2) растворяли в этаноле (42,9 г)/изопропаноле (8,5 г)/воде (7,2 г) примерно при 50°С, просветляли фильтрацией и постепенно добавляли при этой температуре в течение периода примерно 8 ч к фильтрованному трет-бутилметилэфиру (118,4 г) при температуре примерно 50°С. После добавления примерно 25% фильтрата добавляли обработанную ультразвуком суспензию затравочных кристаллов монофумарата (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1азабицикло[2.2.2]октана (6 мг, полученного, например, как описано в примере C2) в изопропаноле (0,1 мл) для индукции кристаллизации. Суспензию продукта поддерживали в течение еще 1 ч при 50°С и охлаждали до 0°С в пределах 8 ч. Еще через 1 ч при этой температуре твердые вещества выделяли фильтрацией, промывали изопропанолом/трет-бутилметилэфиром (40 мл, смесь 1:1) и сушили примерно при 50°С под пониженным для выхода монофумарата (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (5,85 г; 81% теории; чистота >99,5%).
Пример E. Твердые капсулы.
Твердые желатиновые капсулы, каждая из которых содержит в качестве активного ингредиента 0,5, 5 или 25 мг монофумарата (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана, могут быть получены следующим образом:___________________________________________
Ингредиент для %(масс./ %(масс./ %(масс./
заполнения капсул масс.) для масс.) для масс.) для
капсул по капсул по 5 капсул по 25
0,5 мг мг мг
Монофумарат (R)-3- 0,46 4, 65 23,23
(6- (4-
метилфенил)пиридин-
3-илокси)-1-
азабицикло[2.2.2]
октана
Моногидрат лактозы 65, 24 61,05 42,47
Микрокристаллическая 25, 00 25, 00 25, 00
целлюлоза
Гипромеллоза 2,50 2,50 2,50
Кроскармеллоза 6, 00 6, 00 6, 00
натрия
Коллоидный диоксид 0,30 0,30 0,30
кремния
Стеарат магния 0,50 0,50 0,50
Очищенная вода* Сколько Сколько Сколько
требуется требуется требуется
*удаляется во время переработки.
Способ получения. Монофумарат (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана, моногидрат лактозы, микрокристаллическую целлюлозу, порцию кроскармеллозы натрия и гипромеллозу в сухой форме смешивали в резервуаре мешалки с высоким усилием сдвига и добавляли гранулирующую жидкость (очищенную воду). После завершения гранулирования влажные гранулы сушили в сушилке с псевдосжиженным слоем и сухие гранулы подвергали помолу. Остающиеся кроскармеллозу натрия и коллоидный диоксид кремния пропускали через подходящее сито и добавляли к сушеному гранулярному материалу и смешивали в подходящем смешивающем барабане. Это было достигнуто совместным просеиванием кроскармеллозы натрия и коллоидного диоксида кремния с порцией молотых гранул через подходящее сито в смешивающий барабан. Аналогичным образом добавляли требуемое количество просеянного стеарата магния к основному количеству гранул и затем смешивали в том же смешивающем барабане. Эту конечную смесь инкапсулировали в капсулы, используя автоматизированное оборудование. Массовое отношение заполняющего материала к оболочкам пустых капсул составило 2:1.
Пример F. Таблетки.
Пример F1. Таблетка с пленочным покрытием.
Покрытые пленкой таблетки, содержащие, например, 0,5 мг монофумарата (Я)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана могут быть получены следующим образом.
Получение премикса.
- 40 034964
Отвесить монофумарат (К)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (например, приблизительно 0,7%) и маисовый крахмал (например, приблизительно 13%), смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений), пропустить через сито с размером отверстий приблизительно 0,25-1,0 мм. Смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений).
Получение конечной смеси.
К указанному выше премиксу добавить микрокристаллическую целлюлозу (например, приблизительно 25%), распылить лактозу (например, приблизительно 68%), кабоксиметилцеллюлозу натрия XL (например, приблизительно 2%) и Аэросил (например, приблизительно 0,5%) и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений). Пропустить через сито с размером отверстий приблизительно 0,25-1,0 мм и снова смешать (приблизительно 100-300 вращений).
Добавить стеарилфумарат натрия (например, приблизительно 1,5%) через ручное сито с размером пор приблизительно 0,5-1,0 мм и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 30-150 вращений).
Прессование.
На роторном прессе спрессовать указанную выше конечную смесь в сердцевины массой приблизительно 100 мг, используя специфический для дозировки инструментарий (например, приблизительно диаметром 6 мм, круглые, двояковыпуклые).
Покрытие.
Получить суспензию в воде с основными премиксами покрытия черного, красного, желтого и/или белого цвета. Покрыть указанные выше сердцевины в перфорированном барабане для нанесения покрытия и высушить.
Пример F2. Таблетка, покрытая двухслойной пленкой.
Таблетки, покрытые двухслойной пленкой, содержащие, например, 2,5 мг монофумарата (R)-3-(6-(4метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана, могут быть получены следующим образом.
Конечная активная смесь.
Отвесить монофумарат Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (например, приблизительно 15,5%), микрокристаллическую целлюлозу (например, приблизительно 25%), распылить лактозу (например, приблизительно 53%), карбоксиметилцеллюлозу натрия XL (например, приблизительно 3%) и Аэросил (например, приблизительно 0,5%) и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений). Пропустить эту смесь через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова смешать (приблизительно 100-300 вращений).
Добавить стеарилфумарат Na (например, приблизительно 3%) через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 30-150 вращений).
Конечная смесь плацебо.
Отвесить микрокристаллическую целлюлозу (например, приблизительно 26%), распылить лактозу (например, приблизительно 69%), карбоксиметилцеллюлозу натрия XL (например, приблизительно 1,9%) и Аэросил (например, приблизительно 0,5%) и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений). Пропустить эту смесь через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова смешать (приблизительно 100-300 вращений). Добавить стеарилфумарат натрия (например, приблизительно 3%) через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 30-150 вращений).
Прессование.
На роторном прессе спрессовать указанные выше конечные смеси в двухслойную сердцевину таблетки массой приблизительно 100 мг с одним слоем плацебо (приблизительно 77,5 мг) и одним активным слоем (приблизительно 22,5 мг), используя специфический для дозировки инструментарий (например, диаметром приблизительно 6 мм, круглые, двояковыпуклые).
Покрытие.
Получить суспензию в воде с основными премиксами покрытия черного, красного, желтого и/или белого цвета. Покрыть указанные выше сердцевины в перфорированном барабане для нанесения покрытия и высушить.
Пример F3. Таблетка с пленочным покрытием.
Покрытые пленкой таблетки, содержащие, например, 50 мг монофумарата Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана могут быть получены следующим образом.
Конечная смесь.
Отвесить монофумарат Щ)-3-(6-(4-метилфенил)пиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октана (например, приблизительно 15,5%), микрокристаллическую целлюлозу (например, приблизительно 25%), распылить лактозу (например, приблизительно 53%), карбоксиметилцеллюлозу натрия XL (например, приблизительно 3%) и Аэросил (например, приблизительно 0,5%) и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 100-300 вращений). Пропустить эту смесь через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова смешать (приблизительно 100-300 вращений).
Добавить стеарилфумарат натрия (например, приблизительно 3%) через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и смешать в барабанной мешалке (приблизительно 30-150 вращений).
Прессование.
- 41 034964
Спрессовать указанные выше конечные смеси в сердцевины на роторном прессе, используя специфический для дозировки инструментарий (например, диаметром приблизительно 5,9 мм, круглые, двояковыпуклые).
Покрытие.
Получить суспензию в воде с основными премиксами покрытия черного, красного, желтого и/или белого цвета. Покрыть указанные выше сердцевины в перфорированном барабане для нанесения покрытия и высушить.
Ссылки
1. Chini В, Raimond Е, Elgoyhen АВ, Moralli D, Balzaretti М, Heinemann S (1994). Molecular cloning and chromosomal localization of the human alpha 7-nicotinic receptor subunit gene (CHRNA7). Genomics 19: 379-381.
2. Freedman R, Hall M, Adler LE, Leonard S (1995). - Evidence in postmortem brain tissue for decreased numbers of hippocampal nicotinic receptors in schizophrenia. Biological.Psychiatry 38: 22-33.
3. Freedman R, Coon H, Myles-Worsley M, Orr-Urtreger A, Olincy A, Davis A, Polymeropoulos M, Holik J, Hopkins J, Hoff M, Rosenthal J, Waldo MC, Reimherr F, Wender P, Yaw J, Young DA, Breese CR, Adams C, Patterson D, Adler LE, Kruglyak L, Leonard S, Byerley W (1997). - Linkage of a neurophysiological deficit in schizophrenia to a chromosome 15 locus. - Proceedingsof the National Academy of Sciences of the United States of America. 94: 587-592.
4. Goldberg ТЕ, Goldman RS, Burdick KE, Malhotra AK, Lencz T, Patel RC, Woerner MG, Schooler NR, Kane JM, Robinson DG (2007). - Cognitive improvement after treatment with second-generation antipsychotic medications in first-episode schizophrenia: is it a practice effect? - Archives of General Psychiatry 64: 1115-1122.
5. Green MF (1996). - What are the functional consequences of neurocognitive deficits in schizophrenia?. American Journal of Psychiatry 153: 321-330.
6. Green MF (2007). - Cognition, drug treatment, and functional outcome in schizophrenia: a tale of two transitions. American Journal of Psychiatry 164: 992-994.
7. Harvey PD, Green MF, Keefe RS, Velligan DI (2004). - Cognitive functioning in schizophrenia: a consensus statement on its role in the definition and evaluation of effective treatments for the illness. Journal of Clinical Psychiatry 65: 361-372.
8. Keefe RS, Bilder RM, Davis SM, Harvey PD, Palmer BW, Gold JM, Meltzer HY, Green MF, Capuano G, Stroup TS, McEvoy JP, Swartz MS, Rosenheck RA, Perkins DO, Davis CE, Hsiao JK, Lieberman JA, CATIE I, - Neurocognitive Working Group (2007). Neurocognitive effects of antipsychotic medications in patients with chronic schizophrenia in the CATIE Trial. - Archives of General Psychiatry 64: 633-647.
9. Leonard S, Gault J, Hopkins J, Logel J, Vianzon R, Short M, Drebing C, Berger R, Venn D, Sirota P, Zerbe G, Olincy A, Ross RG, Adler LE, Freedman R (2002). Association of promoter variants in the alpha? nicotinic acetylcholine receptor subunit qene with an inhibitory deficit found in schizophrenia. Archives of General Psychiatry 59: 1085-1096.
- 42 034964 <110> Новартис АГ
Список последовательностей <120> Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых
ацетилхолиновых рецепторов
<130> VAND-0146-EA
<140> EA 201490832
<141> 2014-05-19
<150> PCT/IB2012/055692
<151> 2012-10-18
<150> US 61/549,319
<151> 2011-10-20
<160> 40
<170> Patentin версии 3.5
<210> 1
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 1
cgggagctgt ggcgcggagc ggcccctctg ctgcgtctgc cctcgttttg tc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> cgggagctgt ggcgcggagc ggccccgctg ctgcgtctgc cctcgttttg tc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> gtaactgtct gatggcaggt ttgctgctgg gagagtagag aagaggtttg gg
<210> 4
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 4
gtaactgtct gatggcaggt ttgctgttgg gagagtagag aagaggtttg gg
<210> 5
<211> 73
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 5
gaagctcccg gcgcctagcc ccgcccctat ttccctctgg ccccgcccaa tcctcgcctt 60 gttccttttg gcc
- 43 034964
<210> 6
<211> 51
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 6
gaagctcccg gcgcctagcc ccgcccaatc ctcgccttgt tccttttggc c 51
<210> Ί
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> Ί
ttgtctcacg actcacactc agtgctccat tccccaagag ttcgcgttcc cc 52
<210> 8
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 8
ttgtctcacg actcacactc agtgctgcat tccccaagag ttcgcgttcc cc 52
<210> 9
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 9
acagctcccg ccgggacagc agcctcagcc tagcagcttc tggcgggctc gg 52
<210> 10
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 10
acagctcccg ccgggacagc agcctctgcc tagcagcttc tggcgggctc gg 52
<210> 11
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 11
ggagcttcca catgcgtccc gagcccgcca gaagctgcta ggctgaggct gc 52
<210> 12
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 12
ggagcttcca catgcgtccc gagcccacca gaagctgcta ggctgaggct gc 52
<210> 13 <211> 52 <212> ДНК
- 44 034964 cggagcggcc <213> Homo sapiens <400> 13 ctgctaggct gaggctgctg tcccggcggg agctgtggcg <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> ctgctaggct gaggctgctg tcccggtggg agctgtggcg cggagcggcc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> ggaacaaggc gaggattggg cggggccaga gggaaatagg ggcggggcta ggcgccggga gcttccacat gcg
<210> 16
<211> 51
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 16
ggaacaaggc gaggattggg cggggctagg cgccgggagc ttccacatgc <210>
<211>
<212>
<213>
122
ДНК
Homo sapiens <400> gcggggctat gaatagaccg gactgggcca aaaggaacaa ggcgaggatt gggcggggcc agagggaaat aggggcgggg ctaggcgccg ggagcttcca catgcgtccc gagcccgcca
120 ga
122 <210>
<211>
<212>
<213>
110
ДНК
Homo sapiens <400> gcggggctat gaatagaccg gactgggcca aaaggaacaa ggcgaggatt gggcggggcc agagggaaat aggcgccggg agcttccaca tgcgtcccga gcccgccaga no <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> ggggatcgga ggcggggcta tgaatagacc ggactgggcc aaaaggaaca ag
- 45 034964 aaaaggaaca ag <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> ggggatcgga ggcggggcta tgaatatacc ggactgggcc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> gacagggttg gaccagaggc ggggcgaggt ggggaaaggg ttggtgggga tc
<210> 22
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 22
gacagggttg gaccagaggc ggggcggggt ggggaaaggg ttggtgggga tc <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> tgttatctta aggtgtgcag tgactaggcc aaggacatcc ggtggttaga ga <210>
<211>
<212>
<213>
ДНК
Homo sapiens <400> tgttatctta aggtgtgcag tgactatgcc aaggacatcc ggtggttaga ga
<210> 25
<211> 101
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 25
gcttcccctt ttggtgctga gcacagagca gacatcaatg aatagctgtt atcttaaggt gtgcagtgac taggccaagg acatccggtg gttagagaag
101
<210> 26
<211> 101
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 26
gcttcccctt ttggtgctga gcacagagca gacatcaatg aatagctgtt ttcttaaggt gtgcagtgac taggccaagg acatccggtg gttagagaag
101 <210> 27
- 46 034964 <211> 52 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 27 agcacagagc agacatcaat gaatagctgt tatcttaagg tgtgcagtga ct 52
<210> 28
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 28
agcacagagc agacatcaat gaatagttgt tatcttaagg tgtgcagtga ct 52 <210> 29 <211> 101 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 29 ataaagcgtt ctgtgaagag tcagcggctc cctctgccac tgaagtttaa agataattcg 60 cctgaatccc ttcagccaaa tgaagctttc taattatgga c 101
<210> 30
<211> 101
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 30
ataaagcgtt ctgtgaagag tcagcggctc cctctgccac tgaagtttaa ggataattcg 60 cctgaatccc ttcagccaaa tgaagctttc taattatgga c 101 <210> 31 <211> 101 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 31 cttcactgaa ttttgctgtt tagattcttt gcaaccaggt ttagtttttc acagatttac 60 tagtctggag ggtggagtga aatttttgct cacaatgagt c 101 <210> 32 <211> 101 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 32 cttcactgaa ttttgctgtt tagattcttt gcaaccaggt ttagtttttc ccagatttac 60 tagtctggag ggtggagtga aatttttgct cacaatgagt c 101 <210> 33 <211> 52 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 33 tggctccatt ggatgtaatt tacattcttc cagctgtatt tggacctaag aa 52
- 47 034964
<210> 34
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 34
tggctccatt ggatgtaatt tacatttttc cagctgtatt tggacctaag aa 52 <210> 35 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 35 ccccaggcta caaacacgac a 21 <210> 36 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 36 ccccaggcta taaacacgac a 21 <210> 37 <211> 21 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 37 agctgcgctc gattctattc g 21
<210> 38
<211> 21
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 38
agctgcgctc aattctattc g 21 <210> 39 <211> 29750 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 39 acatgcgtcc cgagcccgcc agaagctgct aggctgaggc tgctgtcccg gcgggagctg60 tggcgcggag cggcccctct gctgcgtctg ccctcgtttt gtctcacgac tcacactcag120 tgctccattc cccaagagtt cgcgttcccc gcgcggcggt cgagaggcgg ctgcccgcgg180 tcccgcgcgg gcgcggggcg atggcggcgc gggggtcagg gccccgcgcg ctccgcctgc240 tgctcttggt ccagctggtc gcggggcgct gcggtctagc gggcgcggcg ggcggcgcgc300 agagaggtaa gcccgggctg cagaggggcg gggcgggagc tggcccggac tccacatcgc360 ggtgcccagg aagccgccag gcgacggccg ccggaaaacc tggttgcgag gggaggtggg420 tttttttctc ctgggggctt ggagtgaggt ttcagtttaa atgtccagat ttgctcattt480
- 48 034964
aaatgcagag aaagggctac ttgggtgggt tttctttgtt gttccacgac ctgcatcgct 540
ggagactacg aggctggctt agcgtatact tccacacaac tttttcagta aaagatgcca 600
ctcttgtcca gcagggcttt cctgtcctgg tggcagccaa gcttcccatt ttgttgccca 660
tttacgggat atagagactc tggggttcat tctaggggtt gggacttatc ttccacctcc 720
tgcccgccgc ctcttcctcc atccctgtcc cctacccacc gcagcatttg aaaacctttc 780
ctttcgccgg agatgaaagg tgtgtgttgt agcaggctag gcggccaact tccctggctt 840
cggggctaat cgtttgcatc cagagttcct cactagctcc ttagagcaca gcttttttca 900
gcctgctgtt tttcaagagg ttttggacag gaatggaaac aacaaaagaa atcgcgtagt 960
cctacatgtt tcaagtgctt gggaaagttt tagagtcagt tctctcaata ccttgaagaa 1020
aaacacgttt gtggagcagc tatggtgtga tctaaacgta gaaaagctaa gcatccgtta 1080
agcaagatat gattacagaa gttcactacg tctgtatttc aggttttatg agtgagtttc 1140
ttaaatagtg gaaatattgc aagaaccttt tcttgccttt cctttgttaa ggtttttaat 1200
ctatggctcc tgattttagg aagtaataag actagaataa ttcattgcag gatgtattgc 1260
ttagtgtaga ccgaagagaa ataagatgga gggtgattta aacaaatgaa gaaaatcctg 1320
ggcagagaga gttaaacaga aagaaaggaa tgtgattttg gagccaggca aacctgtatt 1380
caaattatgg ctctggtgca tcctgactgg acgaacttct ctcagctgtt ttccttcttt 1440
aagaaatggc gggccgggcg cggtggctca cgcctgtaat cccagcactt tgggaggccg 1500
aggcgggcag atcacgaggt caggagatcg agaccatcct ggctaacaca gtgaaacccc 1560
gtctctacta aaaatacaaa aaaattagcc gggcgtggtg gtgcgcgcct gtagtcccag 1620
ctactcggga ggctgaggca ggagaatgac gtgaacccga gaggcggagg ttacagtgag 1680
ccgagatcgc gccactgcac tccagcctgg gcaacacagc gagactccgt ctcaaaaaaa 1740
aaaaaaaaga aaagaaaaga aatgggggta ataatcatgc ttacctctca gagttctttt 1800
gaggattaaa taatgcatat aaaatgccag gcacagtgcc tgacactcga gaaaatggta 1860
gttctctacc ccttttgatg aaactgaact ttaaaaatct gtttcatgtc ttttaatata 1920
gaacactgta gccaagcatt aaatagtgta aatagctatc tcccttcatg catggtgttc 1980
agtgttataa caaagtgaaa tcgattagtt cctgctttct gccccactta gttaatatct 2040
ctctcataat aaccatctgg ttctattgca cttctgtttc ctcctgcttc cacgtaagct 2100
ccttaagaac tgtgattctt gtttatcttt gtatcgccaa cacctgcctt aatgtaggag 2160
cccagtgaag gtttgcggaa ggaaggagtg gaacagtatt acctctctgg atattagttt 2220
ctccatctgg atggtgaggg gccattaaag gatccccctt ccaccttgaa aattataaga 2280
ttctgtgtgc tcttagaagt gatcatcttg aagaacaaag tgatactgaa tggatgatgt 2340
aattgcacac ttgctcttaa ctgttaatat gcatttgtgt acaactgtcg ttccatgtgg 2400
gtggctgaaa gtactgtctg gaaataggag acctgccact cgctgtctgt gtttccttgg 2460
acgtattact tgaccttgct gattctttgt ttctctctct ttaaaatgaa agggcggtag 2520
- 49 034964
tagatgtttt taagtcaact ttaagttttt taagttcaaa tataattacc tttattttta 2580
caatttattg ttttcatatt cgtcttaggt tcttaatagt aacttttccc tgtggttttc 2640
tgtgagccag ttcccaggta aagagaatat ctagtcagcc cgcagctatt atttggctga 2700
tgaacggtca cagagctgtg gaaagtggct caggagacaa ttaaagtata atatattaaa 2760
gtataatgaa ctagtacatc aagataatac aagcatttta aactgacctg tgattgggac 2820
agtgattatg gaagttagat agtcattaac tacctaacta gttatatttc ttactatttc 2880
ttagctatgt gacattttaa agccaatggt tatatttctt agctgtgtga cattttattt 2940
ttttaatttt ttttttaaaa tattacttta agttctggga tacatgtgca gaacctgcag 3000
gtttgttaca taggtataca tgtgccatgg tggtttgcta cacctatcaa cctgtcatct 3060
aggttttaag ccccacatgc attaggtatt tgtcctaatg ctctccctcc ccttgccccc 3120
aacctcccga cagaccctga tgtgtgatgt tcccctccct gtgtccatgg attctcattg 3180
ttcaactccc acttatgaaa gagaacatgc ggtgtttggt gtctgttcct gtgttagttt 3240
gctgagcatg atggtttcca gcttcatcca tgtccctgca aaggacatga actcattctt 3300
ttttatggct gcacgctatg tgacatttta aatggctgaa ccttaatttt aattactata 3360
tgtagtggct gaaaatgaaa taggaaaatg aaataattca tagaaaatga gagctatgaa 3420
agattttttt cttctcatct ttagtcattt tcattaacat tttcagaagc taacagaaat 3480
acacacatac tgactgtcag ttttactttt gttatatata tgtccttacg taaactttat 3540
acacaattta atttgcaatt taaaattatt ttgatttcca agaaatacta aatatgtgaa 3600
ctagactgag cagctggagg gtaggatttc atttgtctgt gtatttcctg atacactgca 3660
gatatacctg catttattaa tgtagcctat ggattgaact ctgagctttt tttcaaccta 3720
taatctacaa atgagatcta gcaagtaatt ttttataatt aggatatgaa gttttagttc 3780
agtaatttca gtacagaact ttttcttcta atagcattat ttttcttaaa gcattggaat 3840
taaattatca gatgatagtt taagttcact attaaataag catgtcgaca attagagttg 3900
ttaaatattg gaattttttt tttttttttt ttgagacgga gtcttgcact gttgcccagg 3960
ttggagtgca gtggtgcaat ctcggctcac tgcaagctct gcctcccggg ttcacgccgt 4020
tctcctgcct cagcctccca agtagctggg actacaggca cccgccacca cgcctggcta 4080
attttttgta tttttagtag agacggggtt tcaccatgtt agccaggatg gtctcgatct 4140
cctgacctca tgacccgccc gcctcggcgt cccaaagtgc tgggattaca ggtgtgagcc 4200
accgtgcccg gcctggaatt gtttttgaaa gaagtttaga atttgtttct ttaaacatct 4260
gttccacaga acagcatggg tatagtgttt tttttgtttt tgtttttgtt ttttttcttg 4320
agacagagtc tcactctgtc gcccaggctg gagtgcagtg gcatgatctt gtctcactgc 4380
agcctctgcc tctgggttca agtgattctc ctgcctcagc ctcccaagta gctgggatta 4440
caggcatgtg ccaccatgcc tggctaattt ttgtattttt agtagagatg gggtttctcc 4500
attttggcca ggctggtctt gaaaactcct gacctcaggt gatccgcctg cctcggcctc 4560
- 50 034964
ccaaagtgtt gggattacag gcgtgagcca ccgcgcctgg cctgggtata gttttataat 4620
gacaatatga tagaaaggat tatttaaaat catccttttc tgttctatga tgaaaaatgt 4680
taatttagat gttttgttct cctttgagga aacatgatat tgtttgtcct actgtttatt 4740
tatttattat ttttattgag gcagagtctt gctctgtcac ctaggctgga gtgcagtggc 4800
gtgatcttgg ctcactgaca cctctggctc ctgggtccaa atgattctcg tgcctcagcc 4860
tcccaagtag ctgaaattac aggcatgtgc caccaatccc ggctattttt tttttttttt 4920
tttttttttt agtaaagaca gggtttcacc atgttggcca ggctggtctt gaactcctgg 4980
cctcgaatga tccgcccgcc ttggcttcgc aaagtgctgg gattacaggt gtgagccacc 5040
acgcccggcc cctcctactg tgtttaattc agtgacttca tgctcttctc ttccaaagtg 5100
tgattataaa atatagcctt ttaccagtaa aaataggagt taaatatgaa tatttgaatt 5160
ctgacaaaaa aggtgatatg aacttttagg ttttattttt atctggtttt attttcattt 5220
ttattttaca ttcaactgta tgtatggaat taggcaaaac tctttcctct aggtcaggat 5280
ttctcaacct ctgaaatttt gtactgggtt attctttgtt gtcagagggg ggcgtcctgt 5340
gccttgtagg atgtttagca gcatactggt ctctagccat gagatgccag tagcacccac 5400
tgaaaaatgt ctccagacat tgtcagatgt gccctggggg caaaattgtt cttcacattt 5460
gctacccctt gagaaccact tctctaggtc ttgttgacca gggcttctga aacttagatg 5520
tacacaggaa ttccctcaga acgcagatgc tgatccagta ggtcagaagc agggcctgag 5580
actctgcatt tctaacaagc tcccaggtga tgtgaatact gttggtcagt gtatcacaat 5640
taagtagcaa ggttgtagaa aagtccacat tcataccaac tgggtgaact ctcaagggaa 5700
gccgatgaaa gtaattatgg aaatagtgaa tttacaatga attgtagccc aaacaatgta 5760
aggctaatag aagctaagaa aacaagcatt atcctgctgt cctaacaaag cagctgtctt 5820
cacttttcca tattttcttc cagtccttag tattcattca taactcgaca tctctaaggg 5880
ggaaatttgc aagagtcttt tcaaggtcat acaggcaacc tcatgcacca ttaggtgttt 5940
tattccataa tattgtaaat atactagctc ataatacata tttatagcct gttgagagat 6000
ttatagcccc aaattaagat aatgaactct gcatttactt gatctgatga tgctctgcct 6060
tttttttttt ttttttttga agtgtacaag ttgtctcgtc tcctcgagaa ctattgactg 6120
cacctaaatt aataccacct aaggtcattc attttcttac tgcgagtgtt ctgagagtca 6180
gggtaagata ttaagtttac taaggcatag cagttacagt gtaactttat cctataattc 6240
tgtgataaaa atcaatataa aatataatga aaatcctgga gcgaaaaaaa tccctctata 6300
ttttatctgt aatacttaaa ataatgattg gtaagcattc ttgtttgtca cattgaaaat 6360
gttggatata atacacattt tccctcgttt acaaaatggt tacgttcact gctttatctt 6420
gctgttgctt aaaatagccc tcctaggact gctgcaaaga ggattttttt ttcaaaagag 6480
tacaagtcac tttttgctaa cttataaaaa gatgcaagga gacttcaggg gtagattaac 6540
tgctccagga atgccttgat tatgaattgg ggaggtataa tatacatcac tcttcaaatc 6600
- 51 034964
tttttagata tattatctta tttccttctt atggcagcct gtgaagaaga aaaggaagat 6660
attggcagca cctagcaaga tttaaaatgt gcgccccctt gactcagcag ttttacttct 6720
gagaatcatt gctatagaaa tctttgcatc agtatggaaa aagagatttg ttaattacag 6780
cattttttcc cattgtaaca ttattagaaa taaccaaaaa ctgaagacta taaatgccaa 6840
tcagtggtga aaacttaaat aaagtctaat gcactcataa tgatcacttt gcagcttgtg 6900
aaggaagact ggagatagtt ggacatctac tggtatatag tttatatagt tgtgtttttt 6960
attttttatt ttattttttt tgagacggag ttttgctctt gttgcccagg ctggagttca 7020
gtggcgtgat ctcggctcac tgcaacctct gcctcccggg ttcaagtgat tctcctgcct 7080
cagcctccca agtagctggg attacaggca tgcaccacca cgcctggcta attttgtatt 7140
tttagtagag acggagtttc tccatgttgg tcatactggt ctcgaactcc cgacctcaag 7200
tgatccccca cctcagcctc ccaaagtgct gggattacag gcgtgaacca ccacacctgg 7260
ctggtatata gtattgaatg aaaaaaagtt gcagaactta gaggaaaaca tgtttctgtg 7320
tgtgagtgaa catgcatgta atttaaaata tctacacgtc aaacttaatg gttacccttg 7380
gaaggaaggc gaaggagagg aggagggaga attcttactc tttatgagct tctggatttg 7440
aattttgaca gtgaccacac attccttttg caattatagc atcattttga gaaaaaacaa 7500
aataaatctg ggtcctagtt ctacttctgc tgcttattag ctactagtgt cacaacagtg 7560
gtttgcaaga agggtcagtt ttgctccccc tcaccaacat ttggcaatgt ctggagacat 7620
gattggttgt catgtggggc ggtggtatgt ctagtgggta gaagccaggg atgccgctaa 7680
acatacaggg cacaggacag ccctccacaa cagggaattg tccagcccaa aatgtccgta 7740
gtgccaagtt gagaaatcct gtgttagact ccagagctgc agtgctgttg gaatatgcag 7800
gtgatgcact gtgcagtggc aggggcgcca ttctcactgt ggggtgtact ttgcatagcc 7860
atagaattat aagtatgata taataaggta aataaatatg caagttttta ccccaggaag 7920
acaggcacca ggtcttcgtt ttctgctctc cctctggcac ctggcacaga ggttggcaca 7980
gtaagcagct agttggcatt tgttgaatta acgaattgaa caagatatca cgttaggctc 8040
tagtgtggcc aagttgtagc agatgctaaa gatttaagaa taatttgtgg cagaaacttt 8100
aaattatagt taatgtctgt ttttatctgc aggttggcaa aagactgcta atatccacat 8160
ttagttgctg aacatgttgg ttgacttttt tccaaatcat taccttttga taagaaaatc 8220
atgattcttc atggaaaaat gccagagcaa agcactatca aatgttccta gaattttttt 8280
tttttttttg agacggagtt tcactctgtc acccagtctg gagtgcagtg gcacaatctc 8340
ggctcactgc aacctccacc tcccaggttc aagtgattct tcttcttctg cctcagcctc 8400
ctgagtagct gggactacag gcgtgcacca ccacgcctgg ctaatttttt tttttttttt 8460
tttttttgta tttttagtag agacagggtt tcaccatgtt ggccaggatg gtctcaaact 8520
cctaacctcg tgatccgccc acctcggcct cccaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc 8580
accgtgcccg gcctagaatt ggttttttaa atcctcaggg ggaggccaag gcgggcggat 8640
- 52 034964 cacctgaggt cgggagttca aaaccagcct gaccaacatg gagaaacccc gtctctacta 8700 aaaatacaaa attatccggg cgtggtggca catgcctgta gtcccagcta ctcaggaggc 8760 tgaggcagga gaattgcttg aacctgggag gtggaggttg cagtgagccg agatcgcacc 8820 aatgcactcc agcctggcca acaggagcta aacgctgtct caaaaaaaaa aaaaaaaaat
8880 cctcaggtat ctttttggct acatactata tttagtgaag aaggtttttt taaaaaaatc 8940 ttaaactacc tagacactac ctaacatagt aagataatgt actttatttc atttgattca 9000 gacgagagtg aagcagctaa gcagaggttc tcctttttat taatgttttt taatggaaaa 9060 ataatgttca caagaatggt ccaaagtaat gaatcaaaaa gtcgttgcca tacccattta 9120 acaattattg acatattgct aacagatatc cttattttat ataggctaga aaattgtggg
9180 ccagacacgg tggctgacac ctgtaatccc agcactttgg gaggccgaga caggtggatt 9240 tcttgagctc aggagttcaa gaccagcctg agcaacatgg caaaaccctg tctctacaaa 9300 aaaattagct gggcatggtg gcgagtgcct gttgtcccag ctactcggga ggttgaggca 9360 ggaggattgc ttgagcacag gagatcgagg ctgcagtgag ccaagatcgt gccactgtac 9420 ttcagcttgg gcgaccaagt gagaccctgt cttaaaaaaa aaaaaaaaag gaaaggaaaa
9480 aaattgtggc ttatggatgg aggttaacag cttattagtg gtgccaagta ttcaaattaa 9540 ggttttcagc tttgcagttc tgtgtccttt ccttttcacc atactaaaac taaggagcaa 9600 ggttacattt ctttgaaaat aaatgtggtt tcaccaaatg atttgactgt gattttttta 9660 aatgtcattc tcccagttcc tcaaacttta ggcaatgaat gatagtaaga gttaaaattg 9720 aatttgtaaa accaaaatgt aaatatataa aagtgttagt gacattactg tatacacatt
9780 tatacctttg ttaggtattc aacttagttt ttctcttagc agctgtactt ttaactactt 9840 tagaagaatt atcccattta attttttutt gttcttatcc tatttttagt gtgcttcact 9900 gcttggtttc ctttgttttt ctgagatatg tggtttatat gctattagca ggttgtatta 9960 taattattat tatttggttt caagaagaga cttgaggaaa gctttatagt gacccattat 10020 tgcactgtgt taagagtgcc caatgccaca agcatattct tcctttgtat ttttgcaaag 10080 ttccattgcc tgggactgtc tggagacagt ctttgttggt ctatcagtta ccattacttt 10140 agcaatcatt tatggaagaa taagaacgac cctgtgctgg cacttatatc tacactgtta 10200 gctaatcctt acaatgacct cataagggag gtactttttt aatacctgtg tcacagatga 10260 agaaaaatca tatccaaagt tgagtaactt atctatcttt ttggttatag ccaatcctat 10320 taggtgtgaa gtgctgtttc attgtggtat tgatttgtgt tttcctgatg gctaaaggtg 10380 ttgagcatct tttcatatgc ttactggcct ttctttggag aaatgtctaa gttaatttag 10440 atctcttgcc catttaaaaa ttggattatt gaatcttttt attattcatt tataatagtt 10500 ctttatagat tttagataca agtcccctat cagatacatg atttgcaaat attttctctg 10560 ggttgtatat ccttttgatg taagggatct tttgaagtca agttttttgt tttgtttgtt 10620 tgtttttttt tttgttgttg tttttgagtt agagtctctc tctgtctccc tgactggagt 10680
- 53 034964
gcagtggcac agtcttggct cactgcaacc tctgcctccc aggttcaata gatcctccta 10740
cctcagcctc cctagtagct gggaccacag gcgcgtgcta cacgcccagc tcattattgt 10800
gtttttagta gagacagggt ttctccatgt tggccaggct ggtctcgaac tcctggcctc 10860
aagtgatcca tttgcctcgg cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtga gccaccgcgc 10920
ctggcccaag tcaactattt ttaagacaag gaagggaaga aaaattaaaa tgtaataatg 10980
taataagtaa ggccgggcgt ggtggatctt gtagcacttt gggagattaa ggtgggagga 11040
ttgcttgagc ccaagagttc aagaccagcc tgagctacaa aaagagaccc tgtctctaca 11100
aaaaataaat aaattagctg ggtgtggtgg aacgcacctg tagttccagc tctgtgggag 11160
cttgagatag gagggaggct gaggtgggag gattgcttga gtccaggagt tccaggctgc 11220
agtgagccgt gatggcgcca ttgcactcca gtctgggtga cagggcgaga cccagtctca 11280
aaaaaaaaaa aaaacaaaaa aagcaattac tgtcatcagc ctatatgtag tgctatagag 11340
atgccaaaaa agtgttcatt ttgaatagga tgagcaaata ttaactattt aaaacaactt 11400
ctaaaaagaa tttttccatt tgattcagtt tatttagaat ttaccttaca tatagtgtca 11460
gtctttccta ctggatagta aatgtcgatg ttgtctgttt tgtttaccag tgtgttccca 11520
gtgcctgtct gataaatgtt tgttaaatga atgaataagt aaacatcaat gtgggctaga 11580
gctatcgggg gtgtggcatt cattaagtta atctagaaag ttgtcacaag atggaagatg 11640
ttagggtgat gagagcatga agccaaggtg cccctcagag ccctgcggtt tatgaactct 11700
gtagcagcaa cccttctttt catacgtata tcctgatttg taaaatgagg ggatgcattg 11760
gattgtctcc tttttaacat gctgaggttt gtgaacagtg gaaacttaaa acatttacag 11820
ccagctaaaa aagcatgact gctaagaaga atttaagtgc actatcaagg ttttatgcta 11880
agataccttt gacatttgca ctggacactg ctgtaaagtg tcctaagaaa atggtatttc 11940
tagtatggga tgtattacga agatattcac aaagcagtat cttgaagatt ctcattaggt 12000
agaatgttgg gattactatt ttatttatac cctgtctact ttctttcaaa gaagatttga 12060
gatagcgact caagctagtt tttcccccac tcaggcaaag gttcctttag atgctattga 12120
cagacatttt aggctgggtg cagtgactca cacctgtaat ctcagcactt tgggaggcag 12180
aggctagcag atcgcttgag ctcaggagtt caagaccagt ctgggcaaca tggtgaaacc 12240
ccatctctac caaaaataca aaacattagc caggtgtggt gcacgcctgt ggtcccagtt 12300
actcaggagg ctgaggtggg aggatcgctt gagtccagga ggttgaggct gcagtgagcc 12360
aagattgcac cattgcactc cagactgagt gacagagacc ctgtctcaaa aaaaaaaaaa 12420
aagacatttt atttattaat acttttatct tttaaccctt aaatttttgg tatttcaggg 12480
actataggag gattagaaga ggagaaatgg ttcaataatg ctattttaac ttgaagctct 12540
aaaattaatg gcttttaaac attaagaatg actctagtgt ataattttct aaattaatct 12600
aaatatcttc aatgctgtgc atttcagcat aaggtgactt ttacaggcgt caccacacaa 12660
actccatagt atttgtagat taaactaagt atcttaaact agttactgcc tggcgcagtg 12720
- 54 034964
gctcacgcct gtaatcccag cactttggga ggccgaggcg ggtggatcac ctaaggtcag 12780
gagttcaaga ccagcctgac cagtagggtg aaaccccatc tctactaaaa atacaaaaat 12840
tagccaggcg tggtggcgtg tgcctgtggt ccctgctgtt cgggaggctg agacagagaa 12900
tcacttgaac ctgggaggtg gaggttgcag tgagccgaga tcacaccact gcactccagc 12960
ctgggtgaca gagtgagact ccgtctcaag ataaataaat aaaaaataaa taatttttta 13020
aaattaaact agttattcag ggaagcagga cacaaactct tgaggagtag gttatttatg 13080
aaaaagagaa ccaggaaata ggtttcctcc agctagagta cctggatatt ctttcatatc 13140
tctgtatgga aaacatggtc tatcatcata aagagaagat tttgtgaaag tgctaatttc 13200
tctccaacca tttcttttag gttggagaag aacaatcact tgctactgta atccttatgt 13260
gtatatttgc tgattaataa gccagtgaca tttttgtttc aagtaaaagt ggttttttcg 13320
taatatcatt agtcttaagt aaaagtcatg cttgaatttt tatacatttc acatttcctt 13380
aagtgatccc aggccagaca acagtgaaaa ctcatttctt cagagatgct tatttgagct 13440
ctgtagtagc ataagcataa ctgtgatccc caaatctaac cagtctttgg ccatagtatc 13500
caaaacattt tatattttga cttttttttt ttttttaaca acttaggtcc ttaaatagat 13560
ttttttgaag aaacaagttt ctttttagta tatttaatgg cacatgtttc ctgatttttg 13620
aacgggaatt cctcatcttc attttacatt gggccctgtg aattatttag ccaaccatgt 13680
tcacattctc acatatacat acatttattt atttattatt tgtttgtttg tttgtttgtt 13740
tgtttgtttt ttgagacaga gtctcgctct gttggccacg ctggagtgca gtggcacaat 13800
ctcggctcac tgcaacctct gtctcccggg ctcaagcagt tctcctgcct cagcctccca 13860
agtagctggg attacaggcg tgtgccacca tgcctgacta atttttgtat tttttgtaga 13920
gacagggttt caccatgttg gccaggttcg tctcgaactc cttacctcag gtaatctgtc 13980
cgcctcagct tcccaaagtg ctgggattac agacgtgagc caccgcctat ttattttttt 14040
tactgatctt gaaataaacc tttcttgatt ctttatcctc agtatcccta tatcagcata 14100
acttttggaa agagatcatt cctgtctttg cactctgtct taaacatact gcagttcatc 14160
tctcttctct tcccatagat ggcttttgtt agattcacca ttgacctcac tgttgctaat 14220
ccaacactca gttctcagct gcctctccat gtctcatgag tagcatcagt agattgggag 14280
gctcaaccct tcttgctgca ttttcttcat ttagcttcca ggacagcatg ctatctgcta 14340
tcttcgagtt cttccttcct tattccctaa aaagcagttt tatacaaatg tatagtttta 14400
tacaaatata gtagcaaagt atgtcaaagc taaatcaatc attcaatatt tatatatttt 14460
catattaaga ttatgacagg ccaggcacag tggctcacag ctgtgatccc agcactatgg 14520
gaggctgagg cgggcagatt gctgaaggtc agaagttcaa gaccagtctg gccaacatgg 14580
tggaaccccg tctctactaa aaatacaaaa attagccagg cgtggtggtg gatacctgta 14640
gtctcagcta ctcgggaggc tgaggtggag aattgcttga atcccagtgg cagaggttgc 14700
aatgagccga gattgcacca ctgcacttcc agcctgggag accaggcagg actccgtctc 14760
- 55 034964
аааааааааа аааааааааа aaagattatg caaattaaag caattttaac atttataatt 14820
gataaatgag ctttgcttta gtatatctgt tttctaggtt tggaatttca agataactcc 14880
tgccaccctg gcaatttaaa agcttttatt atttagattt gaaactattc tgtattgagt 14940
actgagtgtt tcttaaggag ctcagcatat tccaatagtc agtctgattt aactgagacg 15000
tatctgaacc agagtgtccc ttattctatc agaaatactt acattaatat ttcattttaa 15060
aagctgcatt aataatagcc taaattgtag tttggttcat taataatctg aacttttttt 15120
ttcctttttt tttttgagac agagtctctc tccatggccc aggttggagt gcagtggccc 15180
gatcttggct cactgcaacc tttgcctcct gggtttgaac ttttguttga aagtacaggt 15240
atctggtggg agagaagcga gtacattaac ttttaaaaat ttgttataca ggattatctg 15300
aaccttcttc tattgcaaaa catgaagata gtttgcttaa ggatttattt caagactacg 15360
aaagatgggt tcgtcctgtg gaacacctga atgacaaaat aaaaataaaa tttggacttg 15420
caatatctca attggtggat gtggtaggtg tgcatatcct tctatagtca atttcccaca 15480
gatttagtga gagcctggtg tgtgcccagg cactgtgcta ggcaccaagg attacaaagg 15540
tgattgaagc agtcctttgc ctgaaggaac tcaccaggga aaagtagtga ttgtgtcaca 15600
tacatgataa cacactgtgt ttatatattt tatagtttag aaactgttta tctcaatttg 15660
gtaattataa gtctatcttt aacaaattca aagatctaaa acattgtgta ttccttaaat 15720
gtgttaaaaa tagtttcaaa aagttagctt gaaaggaggg aaaagaaaat aaatttttaa 15780
gtttaagaga aaaagtccaa aaatagagtg atagattctt aggaactaaa agtatcacaa 15840
gagatcatta tcttgggctc acacttaaaa catttcagaa atttttctat atgacgttca 15900
ttagtagaat aagttccctt gataaattgt acttattgtc aagagatcct atctatttaa 15960
actaaaacat tcatgctaat ttttaaacta gtttcttctt gttctgaaca tgtaaatcaa 16020
taattatttc cctgttgtgt tcccaaaata accaagtata tgtatattta tatatatgta 16080
tgttttaaaa taacatttat agatgtgctt tatgttctga ttacagaagc aatgcgtgat 16140
ttttgtagag aatttggaaa gtgcaaaaaa tacaaatgag aaaataaaaa gtgactgtaa 16200
ttctactacc cggagatgac taatgttaat aattagttgt gtttcttgcc agtctgtctt 16260
tgtgtatatg ttacaaaatt ggaataatat tttagaaata attttgatta ctgctutttc 16320
tctactatga catgatgaac attttcttat gtcattacat actctccaaa tataattttt 16380
aatagttaca tatttcatct ataatttaag cattctccca ttttgaacag aagcttgttt 16440
ccaatttttc ttattataat taacaatgat gaatatattt gtacacaaat gcctgaacgt 16500
ctcctttcct taagaaaggc agttagtgaa ccaaaggata tacctttttc aaagtctatt 16560
gctatgtcat ctaattgctt ccagaaaggt taatgaatat atgtggactg tgtgtgctca 16620
gcccttagct agtcaatatg gggagatttt aaatgaaaat aggaaagtgg aaaagtaagg 16680
tggtagccag gtgtggtggt tcatgcctgt tatcccagca ctttgggagg ccaaggtggg 16740
tggatcactt gaggtcagga gttccagacc agcctggcca atatagcaaa acctcatttc 16800
- 56 034964
tatcaaaaat acaaaaatta gctgggcggt ggtccgtgcc tgtaatccca gctactcagg 16860
aggctgagac aggagaatcg tttgaaccct gggaagcaga ggttgcagtg agttgagatt 16920
gcaccactgc actccagcct gggcaacaga gcaagactct gtctcaaaaa aaaaaagaaa 16980
agaaaagaaa aagtaaggtg ggtggggctt gctctcaaag atctttctgg ttgaggtcat 17040
tgacacacaa atggtgtaga aaactgtagc actaaatcat gatgccagaa agagctggga 17100
atgcagatct taatgaatga ccttatcaaa gaaggtaggg tagatgaggt ggcacccgag 17160
ctggctttgt aggaagtgta gggtttcaac gtggcagaga ggaaaagtat ttaagtacaa 17220
aggaacaata tagttgtagg tatataagtg ataactgagc cttcctgtac agctgtttag 17280
atcaaaagat gaatgttggg agccctggca tacaggagtg gtctgactgg acggtggaga 17340
aggtgaggag aatccctgca tgccacttcg tctttactcc tgccatgttt acttcttggg 17400
agaattttcc tactggcact agccatttat tattcaaggc caaattcatc tgtcagaccc 17460
tttgtgaaat ctttccagaa tccataagac agcctctcct gtgttcaaaa tttttttttt 17520
tttgcacttt aatatggtgc ccattacact cactggtact catgtgctct ggcatttcat 17580
cttcaaagct gggtgaactt tattccttgt atctgtccca gaacctagca cggtatctgg 17640
tacatagtaa atgctgaatg agtgagagac ctgataggca acagacacga tcaaagcagt 17700
actttcagaa gatcagtaaa acagtaatgt acatggtttt gaggagtgaa agagagacta 17760
gaaaatgaaa ggcaagttag aagaccacat acaagaagga acaggacttg accactgaat 17820
atggagggag gcatcacatt ttgaagccta ggtgattaga gtggaagagt aacacatttg 17880
aaaaatactg tcggccgggc acagtggctc acgcctgtaa tcccagcact ttgggaggcc 17940
gaggcaggta gatcacaagg tcaggagatt gagaccatcc tggctaacac ggtgaaaccc 18000
cgtctctact aaaaaataca aaaaaattag ctgggcatgg tggcgggcac ctgtagtccc 18060
agctactcgg gaggccgagg caggagaatg gtgtgaacct gggaggcgga gcttgcagtg 18120
agccgagatt gcgccactgc actccagcct gggcgacaga gcgagactct gtctcaaaaa 18180
aaaaaaaaaa gaaaaatact cttcattgtt acgggagtag ggcagagaag atgatgagtt 18240
tgattgtggt ttgaggtgtt aattccaaag aaaatgttca ctagcttttg ggaagtcaag 18300
actggctctg agatgacaga tgagaacaag gatgtccatc tggaattgct ggcctggagg 18360
agactgttga aaactttgat gagttttctt tgtttttgtt tttgcccttg cctctcacct 18420
cccactttga tgagttttta aagttagtgg gaagagcagg aacctgatcc ttgaggaaca 18480
tttgtagaaa gtggtagaag gaaggggtaa ccaagcagag aagttgggga agggttgctt 18540
cttgagagaa gagcccaaaa aatgaaatgt cagtgactac gaaagcagaa gaggactgca 18600
gtcaggggag atgaagggtg agggctctgg agatggagaa tggcaaattc actgaattgt 18660
gtctgagatg ttttaggttc cttttatcgc taagctcccc ggaatcatat ttggtggatt 18720
cctgccttat ttcccacata ttctgtcttt tttttgtttt taaatctcat ttttggcttg 18780
tttgttttga ttttaaagat aaaatctttt tataaatacg attacccctg aaactcttct 18840
- 57 034964
gctatattta cacatgtagt taacattttt ccatttgtta gtttaggttt cctcctgggg 18900
atcatcgtac atttatctgt cctcagttca tttttgttgc atcctccatt gtgctgagca 18960
cattatagat gcttgggagg tatttgaggt cacattaaat taggcggtat cccttatggt 19020
aatggctaac caccacatct taggggccat ttgtgaactt atggattatt cttttatctg 19080
tgttattgtt gaaagtgcta agtattgact gggagcccaa tttatgtgtg tgtgcacatt 19140
tttctaggga aaggcccata agtttcatta gattctcaaa gatgacctat tgctatatac 19200
tatcatcatg ggtaatatgt ttaccagaac tttcctaatt ataaatgcct ctgtttagaa 19260
cttttgccta acaggcatat tcagatacag ggatcagcag ttattctggg tggtgtgcga 19320
ctagggtgga tagcagagtt ggtggcttta gatttaggaa atttgagttc taaaatcagt 19380
gctaccagta atcggtgctg tgactttaag caagtcacct ctctgggcca gtttctgtcg 19440
cctaggctgg agtgcagtga catgatcttg gctcactaca acctctgcct tccagattca 19500
agcggttctc ccacctcagc ctcctgagta gctgggacta caggtgtgcc accatgcccg 19560
gctacttttt gtatttttag tagagaccag gtttcatcat attggccagt ctggtctcga 19620
actcctgacc tcgtgatcca cccgtcttgg cctcccaagt gctgggatta caggtgtgag 19680
ccaccgtgcc cagccagctc tagtgtttta atcaaggaaa attgctcttt ggaactgcag 19740
tgtaagagag atggccgtgc tgcatttccc agtactcatt ctccccatgc agggacctca 19800
tggagctgcc tgcatcctca ggggtatgct tccttctggt ctcttccttt gtcctgggtc 19860
acttacctgt tgttgggacg ggataaggaa tgggtcacct ccagttacct gaggtattaa 19920
tatttattta cacccctgtc ctatctcccc agtttcctca tacttctgtg agtctctgtg 19980
catagcattg tgtcctacac ataatatatt tgcggctggt gattatggat cttttgttga 20040
ttctcctggc tccatgatat ttcactaaaa tttaatggaa gaagtattac tttaattaca 20100
ccttgaatat ttggtaaagg actggcatag caaagacatg atagcagaga ggtgtaagtg 20160
agaagtacca aggacctcca gttctctaca aaagtaggca cgaaaagctt tatgaaattc 20220
gtattcaagg ctgccaatat tttttctttt tctttttctt ttcttttctt tctttttttt 20280
tttgagatgg agtctcgctg tgttgcccag gctgtagtgc agtggcatga tcttggctca 20340
ctgcaacctc tgcctcccgg gttcaagcaa ttcttgtgcc tccgcctcct gaatagctgg 20400
gattacatgc atgtgccacc atgcctggct aattttttgt attttttttt tttaagtgga 20460
gatggggttt cactatgttg gccaggctgg tctcaaactc ctgccctcaa gtgatctgcc 20520
caccttggcc tcccaaagtg ttggtattat aggcataagc cactgcgccc agccctcaat 20580
gttgtttctg tctagcagac ctacagggaa attcagattc ttccctcagc agaggcaaat 20640
gactgtaaga gatgtccctc agggatgtac agaaataccg tatctcactg attctaagaa 20700
gcacactttt ccgcatttta atacttctga aatcatgatg tgtcttataa ttcatggcag 20760
cttgtaattc attgacagcc cttttttctc ctcttagtgc taagcacata aaataacact 20820
atgcttatat cttagactgc atcttaaata tgaggaaata tagtagttga gatgattaat 20880
- 58 034964
gttaaatgca aaaatgccaa aggtatcttt tagtgtagtt tatctgaaat agagagtatg 20940
ttgaaaggag taatgtgaaa ttaggctgga agaaagatcc tagctttcta gagaaccaga 21000
ttgatgaatg aaatgtgggt actatgtgaa gaagagtgtt tatataacaa tgtgaaattt 21060
attatttaaa gaattattgt ttctgtaatt gaaatcaatc ttatttaaat ttttattttt 21120
taaaggatga gaaaaatcag ttaatgacaa caaacgtctg gttgaaacag gtatgtgtgt 21180
aaaattcaaa cgggcaccca attagtgact gggacaccta tttttattat atgtattgta 21240
gcagaaatac aagagtatgt atatttgtga atacaaatga atacgtgact atatggcctt 21300
ggtggattgg caggacacag aaagatgagg gtagatggag ttcttgtatt tattcagcta 21360
gtatttttgg agtgcctatt gtgtgccaga cactgttatg gggaaacagc agtgaacaaa 21420
acagacaaaa aaccctgtag tattagtccg ttctcacact gctataagga catacccaag 21480
gctgggtaat ttataaaggg aagaggttta atggattcac agttcagcat gactggggag 21540
gcttcacaat gatggtggaa agtgaaggag aggcaaaggc atgtcttaca tggcagcagg 21600
caagagagca tgttcagggg aactgccctt tataaaacca tcaattcaag atgagatttg 21660
ggtggggaca cagccaaacc acatcacctg ccctcatgga acttcattct agtgggggaa 21720
aaataaacaa gttgtatagt accttagaag ctgataagct tggggaaaaa cacactggaa 21780
aagaagatag ggagtattgg ggtcgggggt gtacttataa aaatggtggt cagagaaaac 21840
agcattgaga agataatgtc tgaacaaagt cttggtggag aggaagcaag ccatgtgtat 21900
atctggggag gagcgttcca ggcagcagga cctacaagtg caaaggtttc tgagctggtg 21960
tgtgcctagt gtgtttaagc agttgcaagg aggccagtgt ggctagcagt gagagaacca 22020
ttggggagag ggggtgtagg agatggcatc agataagcaa gaagaggctg gtggagtagc 22080
agctgcttat aggccactgc aaggattctg actctctaag gtggaaatgg gcaagaatga 22140
aatgaatttt tttttaatag atagtccctt ttatataaag gacttttgtt tttttctggg 22200
ccaccataca tatgtcctaa ctgctgttga gcgcttcctt ttgtttttat catccctaat 22260
ttttatacct actatttgtt ttctaacccc gaactcctga aaggcatata tgcttttctc 22320
agggtgcagc tcctaacttg atcacagaat tgtaactgca tggaggtagg gtaaggtgtt 22380
gaaatacgca gaatgtgcaa taaatccaac tcccttttgc atggaccaga acagccaaat 22440
tgggtgacaa tacatctgga aaaaagaatg tttcccttga acctggatat taagtgcctg 22500
tggcttcaag tcctggatat agtcagtcag ttgatgggag aagagttgcc gagcagagcc 22560
atgaacacat ctagctctgg ttctcacctg tgtctcacag ggaccatggt gagaaccact 22620
acacaagggg acagggttat ctggtgccca taataagaaa gacagggagg tgttctctat 22680
tgggggtaga gatgatctca tgtctaaaat ttctggtgtg acaaaaaagt atggtattca 22740
ctgtttttga ctattagttt tattgaaatt gaggcagatt tctttgtttt aaaggaatgg 22800
atagatgtaa aattaagatg gaaccctgat gactatggtg gaataaaagt tatacgtgtt 22860
ccttcagact ctgtctggac accagacatc gttttgtttg ataagtaagt tatattctaa 22920
- 59 034964
atatagtttt atattttcaa aagaaaacat ttgtatttct attaggcact aataattttt 22980
ctcccttttg aaattgttta ggtataaaaa tcaaatgaca tgaccgcatg tgcctgggta 23040
tgattacatg ttttatagat gaggaaacag aggcttaggg tggttgttct tttccaagat 23100
cacagagcta gcacatggca gagtaggggg gtcacaccaa ggggactgat acctccattt 23160
actctttgtt ttactagact acatatttgg cagacttcta gatttttttg tatgtttttt 23220
acgtcgttga ggtcatattt tatgttgaat tgtgcatcct tctagttgtg tttaaatact 23280
gtatcgtcat tttcccacaa tgaggaatgc tgggttaatt atcaattcat ctttagaggc 23340
atcctaccta ggtgtgtttt gaggattttt ttttttttaa cttaggggag aggaaaattc 23400
tgggtaccag ttttattttt ttctaagacc actcctgggc aaatctggga atttgtgctt 23460
atcttaaagc actttgtctg attcgaaaga aggccatttg gcatgaggac agagcaactg 23520
ctatgcaaaa atatctttaa tcttttgaca ctttttacct ccatgcttct taagaagtga 23580
acaaagcttg taaggacaca tgatgcagct tcctggagca tcattttatt ttcagtaatt 23640
gaaaacattt ttatattaaa catggatata ttacagaata gtgtgcaaaa gccacatgaa 23700
tttgaagaca gcaacatttt aaagaaatct tatgttggtg gtgtgctttc ctagtatatg 23760
gattctatac tagacttttc tcatatatga attcacttgg tgggagagct tgagaggcat 23820
agctgctttt cagggtcatg cccagcttgg tgttcatggt ctttccccat caaagtaaaa 23880
aacggccagt atttgcgatg aaggaagaag agcactgtgg agggagtcta ggagtgtgga 23940
ttcaggttct ggctgtatgc gtgcccattg tgtcaatagc ctgagtctat tctgtgtgta 24000
aggtgaggtc ttttcaatca ttagaatctc aggcttctgt gaaaatttgt cagttctgga 24060
gtagatgcag aagaaggggt tcagttctag tagagttaga tatttaagga agatattcct 24120
ggagcagggt ccctatgtag cacgtatatc ttatctgaag tatagtaatt taaaaattat 24180
ttcatgcaat caatgatagg cctgctttta tattaggctt atattaatac aattcatgtg 24240
cattgtttaa tttctgcatt gttattttat atgtgtgtat tttagtgcag atggacgttt 24300
tgaagggacc agtacgaaaa cagtcatcag gtacaatggc actgtcacct ggactccacc 24360
ggcaaactac aaaagttcct gtaccataga tgtcacgttt ttcccatttg accttcagaa 24420
ctgttccatg aaatttggtt cttggactta tgatggatca caggttgata taattctaga 24480
ggaccaagat gtagacaaga gagatttttt tgataatgga gaatgggaga ttgtgagtgc 24540
aacagggagc aaaggaaaca gaaccgacag ctgttgctgg tatccgtatg tcacttactc 24600
atttgtaatc aagcgcctgc ctctctttta taccttgttc cttataatac cctgtattgg 24660
gctctcattt ttaactgtac ttgtcttcta tcttccttca aatgaaggtg aaaagatttg 24720
tctctgcact tcagtacttg tgtctttgac tgtcttcctt ctggttattg aagagatcat 24780
accatcatct tcaaaagtca tacctctaat tggagagtat ctggtattta ccatgatttt 24840
tgtgacactg tcaattatgg taaccgtctt cgctatcaac attcatcatc gttcttcctc 24900
aacacataat gccatggcgc ctttggtccg caagatattt cttcacacgc ttcccaaact 24960
- 60 034964
gctttgcatg agaagtcatg tagacaggta cttcactcag aaagaggaaa ctgagagtgg 25020
tagtggacca aaatcttcta gaaacacatt ggaagctgcg ctcgattcta ttcgctacat 25080
tacaagacac atcatgaagg aaaatgatgt ccgtgaggtc tgtgatgtgt atttacaaat 25140
gcagatcttc ttccatttta agttcagaag ttactttcat taattttggc agagtaaaca 25200
gcatgaccct taagtaagac taagcataga ttgagggcca gaattgttga catattttct 25260
ataaaagatc tttactaagg cttgtttcag ttaaagcacc tgcaaaatgg ggcatttaca 25320
caaatctcac ttctccactt cccccatcag catcttggat aactctaaag aaaatttagt 25380
gttataftct aaggaataat cctgccatat ttcttggctc tgacctgatg aattgtttta 25440
atttcttggg gtgagggcag tgggtgaact gttttaattt tgtcttcagt aactttgttt 25500
ctaaattgtg ataatctgta ggcagaactc cattataaca gttaatggag ttatcaaaag 25560
ttcttttagg ctgggcgcag tggcttcatg cctgtaatcc caccactttg ggaggccgag 25620
gtgggtggat catttgaggt caggagtttg agatcagcct ggtcaacatg gtgaaactcc 25680
atttctacta aaaatacaaa aattagctgg gcatggtggc acatgcctat agtcacagct 25740
actcgggagg ctggggcagg agaatcactt gaacccagga ggcggagatt gcagtgagcc 25800
gagatcacgc cattgcactc cagcctgggc gaccgagcaa gactccgtct caaaaaaaaa 25860
aaaaaaaaaa aagttctttt aaagaatgag cctaatgtgg aatttataag tataaaattc 25920
agtcttgtca ctgttatttc ttctattgtg tattatttta aacctatgac tatagtaata 25980
ttttcataat tgaatgtaca ttaaaattat gtgaattata atctgtaaag ctattttaaa 26040
tggaaaattt ccatcaggta tgaggagaca gaataaatct ggcaaaatca cagcctttat 26100
cccaaaaggg acatttgatg tatatatttt taaaactttt tttcatatgt taatgattta 26160
atttcaataa gactttcctt ccttatttta ttgtatttca ataggttttt ggggaacatg 26220
tgtttggtca catgcataag ttctttcatg ctgatttctg agactttggt gcacccatca 26280
taaaaacttc taatgcttgt gggfttgtga agtatctatt tggtggtagc ataatgaaat 26340
tagtttataa ggtttggagc tatcattgga gtttttaaaa gtacatagat ttgttaggta 26400
atggtttaga ctgagatgga atttaataaa tgtctgcaaa gtattgtgca aaagggtcat 26460
ggctcatact actaggacca aggaggttgg ttttattttc agataaaaac agaggcagag 26520
gtggccaggt gcggtggctc acgcctgtaa tcccagcact ttgggaggct gaggcaggtg 26580
gatcacgagg tcaggagttt gagaccagcc tggccaatat ggtgaaacac tgtctctcct 26640
aaaaatagaa aaattagctg ggcatggtgg tgtgtgcctg tagtcccagc cacctgggag 26700
gctgaggcag aagaatcact taaacttggg aggcagaggt tgcagtgagc cgaggtcacg 26760
ccactgcact ccagcctggg ggacggagca aggctctgtc tcaaaataaa ataagcagag 26820
aagtaacagg gtttacaatg ccctaaattc taaattatcc tacactttgg aggcacagtt 26880
cccatagagg acaccatcct tcatagaggt tcagggccag ggaagcccct ggtcaaggaa 26940
atggccttgt agaaagggga gcccctgctg cttagtggct gggctcatcc ttctttttcc 27000
- 61 034964
ttgtggtggc tccgagctgc tgagccagct ccctactaaa gctggctcca gggaagactg 27060
ttctgtgctc atgaaattag actgaagtgg tccctaggaa atccaaaaat aaataaagtg 27120
tgtatgtgag gaagatgaac agctttctaa catgtattat tctgaaccaa cttttaattt 27180
ggcatgaaat taatctcagg ctagagtctc tcaaaatatt aaaataagta aacactactg 27240
ggcaagaata agtatatata gtaagaataa ttttttttag tttattgtaa aatatccaag 27300
tctattttaa tttttaatct atcaaaataa accacttgta atataagttg atgtgtaaat 27360
gaacatattt tgtagtgtct tttaaagctt atatctatag tagaccttca ggctagtgtc 27420
tgtccctgag ctgagtatag ggtcacttac cgtttagagg cagcaatggg aggcagaaat 27480
cgatttggct tctaactcag tgtgtttgtt atatcttaaa atatgtacac aatttacaat 27540
tatttaatgc atttttattt ttttcctaac aggttgttga agattggaaa ttcatagccc 27600
aggttcttga tcggatgttt ctgtggactt ttcttttcgt ttcaattgtt ggatctcttg 27660
ggctttttgt tcctgttatt tataaatggg caaatatatt aataccagtt catattggaa 27720
atgcaaataa gtgaagcctc ccaagggact gaagtataca tttagttaac acacatatat 27780
ctgatggcac ctataaaatt atgaaaatgt aagttatgtg ttaaatttag tgcaagcttt 27840
aacagactaa gttgctaacc tcaatttatg ttaacagatg atccatttga acagttggct 27900
gtatgactga agtaataact gatgagatac atttgatctt gtaaaaatag caaaatatta 27960
tctgaactgg actagtgaaa aatctagtat ttgtatcctg gcaaataata ctaatttata 28020
atccacagta aagttcatcc tttgactgtg ctggagaatt ccagttgtat ttgaagactg 28080
attttaaaac ttttctgcat ttggtaaagg tatgtaaact ttcctgtact cactgagtaa 28140
cagctaatct ttaatataat attatactgc tatatttaaa aagctgacta cttgatataa 28200
ttacttaatg tgatgcttga tataataatt acttaatgtg gccgggcacg gtggctcaca 28260
cctgtaatcc cagcactttg ggaggtcgag gtgggcgtat cacctgaggt tgggagttcg 28320
agaccagcct gaccaacgtg gagaaacccc gtctctacta aaaatatgaa attagccagg 28380
gtggtggtgc acacctgtaa tcccagctac ctgggaggct gcggcaggag aatcgcttga 28440
acccaggtgg cggaggttgc ggtgagctga gatcacgcca ttgcactcca gcctgggcaa 28500
caagagcaaa actcagtctc aaataataat aataacaaca acttaatgtg ctgctgcttt 28560
tccataacca acattttaaa aataaatgaa aaacaggaat tgggaactcc tttaaggctt 28620
actttattct ttagatgctt aattattgtg ttaactattt ctgtagctta gcttccactg 28680
taaagtcata cagtagacaa ctcctgtgga cacgcagtag catatcctta acattaattt 28740
cagtcctctt gtccacattt cccacaatta atagaaccat cttctatata aattgtggta 28800
gtatctcttt atccttgatc ttagaatagt cagtccacta caattacatg aaccccattt 28860
aaaaaacata tttagggccg ggggcagtgg ctcacatctg taatccaagc actttgggag 28920
gctgaggcag gtggatcacc agaggttagg agttcgagac tagcctgacc aacatggtga 28980
agccccgtct ctactaagaa tacaaaaaat tagtcgggca tggtagcagg cgcctgtagt 29040
- 62 034964 cccagctact caagaggctg aggcaggaga atcgcttgaa cctgggaggt ggaggctgca29100 gtgagccgag actgcgccat tgcactccag cctggcaaca agagcaaaac tctgtctcaa29160 acatattttg gtctaaatca ttctgtgaga aaacaatctt ctaatatgaa acacagtatt29220 ctaatttggt atatgcacac tgttatatac ctgtaatatt tcagttttct ctccttcatt29280 ctaacaatta caataataga atcttagagt tgcaagggcc tttagatgta atcaatctta29340 gcctattact agtacagcgt aaatgattta gtacagtata atgtatcaca gttaaaacag29400 ttaaattcca tctctaaatg tcaccacttc aggtgtgacc aggtagcaaa cactgacaga29460 aaccctcgtt caatttagaa ctcttagctg ttgagatcac aaacacctca tttatttata29520 ataagtaacc tatctaagtt caagccaatg ctctttggaa ggcggaggag accctatcta29580 atttgcattt aatcgtaggc aggtgtttaa tgccatttaa tgagtgaaag cctggtgtga29640 tgaatttaga ttgcctgcca gctacctacc ttagttcgta tacatccctg atccctctta29700 tactaccatt actgttactt atgattttta tatataaatt tttatcgaca29750 <210> 40 <211> 28244 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 40
gtccttccca gggtgtgtta gcgtctctcc tacggcgccc gcctagcccg gtggtcccaa 60
ccccctgcgg gagctgcaca cgccccggaa acctgggaca gaaactgagt ccctctcctt 120
cctggtggtg gtgacagcac ctgctcagat ctggtcggac gccgccggcc ggagcaccca 180
gcccggcgga gaaggagctc gcccggcgct ggggactggg acctggagcc ccttccccta 240
ccgcacgtac gccccgcccc gcgcacgccc gcccgcccgc ccgcgcctgg cgcagcttca 300
ctccggatgg ttcctgtcct cccgcgggtc cgagggcgct ggaaacccag cggcggcgaa 360
gcggagagga gccccgcgcg tctccgcccg cacggctcca ggtctggggt ctgcgctgga 420
gccgcgcggg gagaggccgt ctctgcgacc gccgcgcccg ctcccgaccg tccgggtccg 480
cggccagccc ggccaccagc catgggctct ggcccgctct cgctgcccct ggcgctgtcg 540
ccgccgcggc tgctgctgct gctgctgctg tctctgctgc caggtacgcg cacaggcgtt 600
agggctccgg agggacgggc gcccgagaag gggcgcgggg tccggagggg ctgccggcga 660
gaacaccgcg cgggcgagcg gagagggctg gcgccgtcgc cggggactcg gaacccgcgc 720
agactggctc cagcccggcg gcgacttggg tggggtggct ttttcccttt cggctcacct 780
cccaccccta gccaccacca aacctgggag tcactgagcg ggcgctggta cgcgccgggt 840
gatggggagg tcgagaccgg gtccttcgtc ttgggcgcag gagttgggga ttcgcgtccc 900
cgcgctgccc gtcgccctgc cccgcgcact ggctcccaaa ctggcgcgcc caagcctccc 960
gctccaccgt ctgcatcccg cccacctcct catttgacgg agatggctga agacttggcc 1020
aaggccacct cgggaagagg ggagtcgctt cgggactggg gctggagctg gagcgccagc 1080
- 63 034964
ctctcctccg gttgtagcct cctagcgctc ctggctgcgt cgctgaggga ccctccaccg 1140
ggagagcgcc tcctgtcttc ctcccgctct ccagaggagc ctgctggggg aagccggccc 1200
tggcccgccg ctgggaggct cttgggtgcc tgggagggct ggtgggtagc gagagtcggg 1260
gaccgggcaa ggctgcaggg aattcctgga gggcccaggc cggcggtctg tcgtgcggct 1320
gtgagctcag agcgctttcc gccctcggtg ccgaggcctg cactactcag aacgccatac 1380
gctctcaacc gacctcctgc ctgggaccct tctttcatcc tggggaagga gagtggggag 1440
caggaaaaat cctatttcaa gacctgagga agttggattc aacttcctag aggattctcc 1500
tcccgcttcc ccaagctgcc cccagatctg tacgtgggaa tcagaagaca gctgacccgg 1560
tatgcctcac ttgtgctggg gtgtggctta ggaacaaaga ggggtgccca agggttgcag 1620
aggtcagagt ctttcatcag gatatgaaga cagcatcagc aagagctggg ggtcacacga 1680
gatcacggga gtcacacagt gccttggctt ctaagagggc tggtggccac ccctacaggg 1740
tggaatgcag gagaggccca gacctgggct gtgttctccc ggaggctggg aggtagaaga 1800
cctgggcctg ggcgaccgtg gttggccctg cccctgggag cggactggcc atctttccat 1860
cgtggaagca gtgagtggct gtacccaggc agacagcatt tgccccacac ccccacccgg 1920
cagaaacaac ccaggaaaag attgcgaata gttcttgacc tcttaccgca gcaccaagct 1980
gtgcacttcc ttcacaacaa ccctttgagg tggatacgtt tataatcctt attttgactg 2040
gtaaagacac aggttcagag aggttaagcc acttgcctaa gctcacacag cttacaagtg 2100
atttgtcagg atttgcacca gatctgtcca actccagagc ccaggcttgc aaccactgtg 2160
cttctcactg aatgcgtgtg gccaggtaga atcctgcccc tcttgggcct cagtttccca 2220
ttttgtaacc cactgggtta gactggcctg aaagtctagg gttccacaga atccccccac 2280
aggtggaggg gatgctgtag atgggtgatg tttctgctgg gctgggtggg ggaggttaag 2340
taacgatttc cccagggact gacagggctg cttcccacag tggccagggc ctcagaggct 2400
gagcaccgtc tatttgagcg gctgtttgaa gattacaatg agatcatccg gcctgtagcc 2460
aacgtgtctg acccagtcat catccatttc gaggtgtcca tgtctcagct ggtgaaggtg 2520
gtgagtgctg gaagccacga gccgtggcca tggggaccgg ggcttctgga ggagcctttc 2580
ccagaattag tcttgttttg taattctcct gtcaacttta attcctcttt ctaggatgaa 2640
gtaaaccaga tcatggagac caacctgtgg ctcaagcaag taagtgacca gaccctaggc 2700
actgctgccc cctggtggtg actgttttat ttgctttagg tgaaccaaga aaggcctaaa 2760
gaccaggctt catttacttc tgtggaaccc agattggggt ccactgactg gcagatatat 2820
ctcttctaag gcttgaggtc acatgcactg ccctacagtc cccctggaag gactgtaggg 2880
cccaacccct caagtcccag atggacaggt tgcagcctgg agaaagacat tctccatgtt 2940
cacacaacag aagagtacga acctgagatt gaagccctgc ccccaaaccc tggggtggtg 3000
cctgagacac ctccttctct ccctcttgct aaaaactcag ttttttttcc agacgggatc 3060
tcgctctgtc acccaggccg gagtgctgtg gcgtgatctc ggctcactgc aatctccacc 3120
- 64 034964 agcagggttc aagcagttct cctgcctcag cctcccaagt agctgggacc acagctgtgc 3180 accaccacgt ctggctaatt tttggatttg ttatagagac agggtttcgc catgttgccc 3240 aggctggtct cgaacgcctg atctcaagca aaccacacac ctcagcctcc caaagtgctg gggttacagg cagaagccac tgtgcacagc ccctatactc attcttaagt cagaataaga
3300
3360 tgctgctgtt gttggtagcg tgggagtaga ttttcctgtt cagatcgagg ccaagaaatt 3420 gccttccaca tgtcctcccc agggaggctt tgtccagact tgccaggaga cataatggcc 3480 cattggcctg cgggtgaccc ttctgccagc ctggccagct gagcactcag cacacacagc 3540 cttcatcccc aggaggttgg aaagccagat gggcacagtg ccccacccag tacttgatgc
3600 acacgttccc tctgtggccg cagcctcacc cctctctcct ctggtgctca ggactcagac 3660 ctcccagcct ctggacccag acacttcctg ggccctgcag gggtcatgga ttcttccccc
3720 ggaatctttc agagtccagt cttgcttaac cttggggtga aagagtgtct atgttggaaa 3780 acacccctgg agagccattc aggggctgta aacaggcaca tggacctgga catgatgcat gaagtccagg agtctccacc tggcactaga agtgaccaga gaaagcacga gtaggccctg
3840
3900 tttggttgat gaggggctgg gcttgctcat ggttatgggg gcagtggctt ccctagtgcc 3960 aggaggtggc ccgcagagcc agccgtgtgc tctctcctgc actacaccca caggagaagt 4020 tggactatgt gatcatggca tggatgtggt tcggtcacat gcagcagggg tggggagtca 4080 ccaagatggg tggtgccacg ggaagtaaaa ccaggctgat tcttttaccg tctccttctc 4140 cctccctgct tccttccccg agatctggaa tgactacaag ctgaaatgga acccctctga 4200 ctatggtggg gcagagttca tgcgtgtccc tgcacagaag atctggaagc cagacattgt 4260 gctgtataac aagtaaggtg ctggggggcc cacgccctct cagggctgtc agcctgggct 4320 ctgggttttt ggcccactgt gcttaaaacc tggccttcct tggccttttc caagaaggct 4380 gcattcattt gttcagtcca taggtatgta atcagcaact actacatacc aggtaccaga 4440 gatgttggag agccacagag agcagcagtg tgctgagtgg cttcaaagca ggcatgggtg 4500 ggtggaagat ggcattggga aagtttcaag gaagaattgg catttgaagt gaatcctgaa 4560 gattgtgtag gatctcagga cagggagatg gagcagagga gggcccgggg aggcaggaga 4620 gtatgtcatg ggcagccaag gtgacctcat tggctggact gtgggacata aggctggaaa 4680 gatccatggg ccaaggacca accccagtgt gtggaggggg aaggctcaga tgcccggggc 4740 acctggaatg tagcatctgt tagcagctct gtgcaaacag acaggaatgg agtaaacggt 4800 ccctcctcac cttgtctttg aaagagaatg agggtgttgg agaagatcat agctgggtgg 4860 gcctaagctg tgtagtccca gggttcccag cctgctgact ggcatggtta ccaaggagct 4920 ttttttttgg gggggtgggg gggggaagac tgagtcttac tgtcacccag gctggagtgc 4980 agtggtggga tctcggctca cagcaacctc cacctcctgg gttcaagaaa tcctcctgcc 5040 tcagcctccc aagtagctgg gattacaggc acgtgctgcc acacctggct aattttgtat 5100 ttttcagtag agatggggtt ttgccatgtt ggccaggctg gttttgaact cctgacctca 5160
- 65 034964 agcaatctgt ctgccttggc ctcccaaagt gctgggatta cagcatgagc caccatgccc 5220 agccccaatg agctttttaa aaatacaggt gtttggccag gcatggtggc tgatgcctgt 5280 aatcccagca ctttgggagg ccgaggcagg aggatcactg gaggccagga gttcgagacc 5340 agcctggcca atataccaaa accccatctc tactaaaaat acaaaaaatt agccaggcat ggtggcgtgt gcctgtaatc ccagctactc cagaggctga ggcaggagaa tcgcttgaac ctggtaggta gaggctgcag tgacctagat cacaccactg tactccagcc tgggtgacag tgagactccg tctcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaataca ggtgcctgaa ttcaaaatat
5400
5460
5520
5580 tttattcttt gttcctcact gtcttttcta aagttaatat gtattacgtt atccaaaaaa 5640 tctctatacc tgtccccagg tcctgcccca cagaaacact gagtcagtgg gtctgggtag 5700 gcctaggaat gggtgttttc acaaagctgt cctgggggct gtgtgaccag cttgctttgg 5760 ggatccctga tctggccctt ccctgacatt tcacagatga ggactgaggc ccagagtgga 5820 tgtgtggcac agccaggtct ggggtggtct cagccatcca ctgtggcttt ggggccactg 5880 tgggcagtgg atgcaggagg ccgatgctgt gatcaggggg ctgagctggg caccccagcc 5940 tgtctctgcc tgtgtcccca aacctcttct ctactctccc aacagcaaac ctgccatcag 6000 acagttaccc tgctacacgg tgtaccctgc aggcctcctc ccactgggaa aaggtctggg 6060 ccttggagaa aggattgata gccccccaag tatgtgaagc aaggttccca tgtacagagt 6120 aggatgagca ttctgggccc cgtgctccca gcccgtctgg gtggctgcat ccaggtcgta 6180 gttgagaagg gtgagtccag gactaaaaag acttccctgg ctcctgccat cgagagaagc 6240 tgctctcgag ccagtccttc acagtgggcc acttccagtc tcctatggat ccggaatgtg 6300 catcttcccg ccagttttgg gaggcctctc ctctttctct cttgcaaagg ttcttcctct 6360 gccagacagg tcctgctcat catagcacct ccaaaacccc tcccttttct ctaagtccac 6420 acaaaactga tacttcccac atttaagctc tttcattgga ctgacataaa ttttagttga 6480 tattttgcaa tatgctagtt agttctctgg gtattgaaga atatcatttt tgtacctgca 6540 ttttagagtt aaaatgtttg aatatttaaa ccttttacat ttacatttaa acattttcag 6600 caaaacagtt gatgtagaat tagtctattc tgattttaat gctaagaata cttctaggtt 6660 tttatgccat attagtacaa aataatgttt tcttattagt agtattgatt ttacagttag 6720 tgtcaggact agagaagcta tgttttatac tgaatcccac tttctggtct ctggcaaaaa 6780 caaaagtggg tctttactca ctctaaagac agtccatgtt ttatttactg ttttcccaag 6840 gaaacacagc acttataaat gtttcttgta tgtaatttgt atttgtaaac tggtcatcaa 6900 agaactggga cacaatataa actcaacagg cttgcagatt tttttcttct tgcactgaat 6960 tgtcgtagga atcacatggt tcaaatgctc ttaagggaac tgggcagggt gtagagaatt 7020 tttgctaagc tacaattaag aaaatgagca aaaagtttaa tcttcatgtt ttgcgtttta 7080 tagccatttc cttgctggca atcttgagtg aacagctgga gtactgtagg atttatgatt 7140 ttagcaataa tgagaggcgt agcaaaatgt tgcaaattgg ctgtggagag gagcaaatat 7200
- 66 034964
cataaggaat ttctttgaaa tctgaagctg aaaataacat ttagagaaaa tcatccaact 7260
catgttctct ctcttctcct agttagaact tcaattgctc aggattcacc ctctgttaag 7320
gatttctctt cttttttttc cccccacccc gagatggagt ctcactctgt cgcccaggct 7380
ggagtgcagt ggcatgatct gggctcactg caagctccgc ctccctggtt cacgccattc 7440
tcctacctca gcctcccaag tagctgggac tacaggcgcc cgccaccacg cctggctaat 7500
ttttttgtgg ttttttttgg tttttttttt gtttgtttgc cactgcttta cagttttttt 7560
ttaaatttta ttattattat actttaagtt ttagggtaca tgtgcacaat gtgcaggttt 7620
gttacatatg tatacatgtg ccatgttggt gtgctgcacc cattaactcg tcatttagca 7680
ttaggtatat ctcctaatgc tatctctccc ccctcccccc accccacaac agtccctggt 7740
gtgtgatgtt ccccttcctg tgtccatgtg ttctcattgt tcaattccca cctatgagtg 7800
ataacatgcg gtgtttggtt ttttgtcctt gcgatagttt gctgagaatg atggtttcca 7860
gtttcatcca tgtccctaca aaggacatga actcatcatt ttttatggct gcatagtatt 7920
ccatggtgta tatgtgccac attttcttaa tccagtctat ccttgttgga catttgggtt 7980
ggttgcaagt ctttgctatt gtgaataatg ccgcaataaa catacgtgtg catgtgtctt 8040
tataacagca tgatttatag tcctttgggt atatacccag taatgggatg gctgggtcaa 8100
atggtatttc tagttctaga tccctgagga atcggcacac tgacttccac aatggttgaa 8160
ctagtttaca ctcccaccaa cagtgtaaaa gtgttcctat ttctccacat cctcgccagc 8220
atctgttgtt tcctgacctt ttaatgatcg ccattctaac tggtgtgaga tggtatctca 8280
ttgtggtttt gatttgcatt tctctgatgg ccagtgacga tgagcatttt ttcatgtgtt 8340
ttttggctgc ataaatgtct tcttttgaga agtgtctgtt catatccttc acccactttt 8400
tgatggggtt gtttgttttt ttcttgtaaa tttgtttgag ttcattgtag attctgaata 8460
ttagcccttt gtcagatgag taggttgtga aaattttctc ccattttgta ggttgcctgt 8520
tcactctgat ggtagtttct tttgctgtgc agaagctctt tagtttaatt agatcccatt 8580
tgtcaatttt ggcttttgtt gccattgctt ttggtgtttt agacatgaag tccttgccca 8640
tgcctatgtc ctgaatggta ttgcctaggt tttcttcgag ggtttttatg gttttaggtc 8700
taacatgtta agtctttaat ccatcttgaa ttaatttttg tataaggtgt aaggaaggga 8760
tccagtttca gctttctaca tatggctagc cagttttccc agcaccattt attaaatagg 8820
gaatcctttc ccccattgct tgtttttgtc aggtttgtca aagatcagat agttgtagat 8880
atgtggcgtt atttctgagg gctctgttct gttcctttga tctatatctc tgttttggta 8940
ccagtaccat gctgttttgg ttactgtagc cttgtactat agtttgaagt caggtagtgt 9000
gatgcctcca gctttgttct tttggcttag gattgacttg gcgatgcggg ctctgttttg 9060
gttccatatg aactttaaag tagttttttc caattctgtg aagaaagtca ttggtggctt 9120
gatggggatg gcattgaatc tataaattac cttgggcagt atggccattt tcacgatatt 9180
gattcttcct acccatgagc atggaatgtt cttccatttg tttgtatctt cttttatttc 9240
- 67 034964
attgagcagt ggtttgtagt tctccttgaa gaggtccttc acatccctct taagttggat 9300
tcctaggtat tttattctct ttgaagcaat tgtgaatggt agttcactca tgatttggct 9360
gtttgtctgt tattggcgtg taagaatgct tgtgattttt gtacattgat tttgtatcct 9420
gagactttgc tgaagttgct tatcagctta aggagatttt gggctgagac aatggggttt 9480
tctagatata caatcatgtc atctgcaaac agggacaatt tgacttcctc ttttcctaat 9540
tgaatccctt tatttccttc tcctgcctaa ttgccctggc cagaacttcc aacactatgt 9600
tgaataggag tggtgagaga gggcatccct gtcttgtgcc cgttttcaaa aggaatgctt 9660
ccagtttgtg cgcattcagt atgatattgg ctgtgggttt ctcatagaca gctcttatta 9720
ttttgagata catcccatca atacctaatt tattgagagt ttttagcgtg aagggttgtt 9780
gaattttgtc aaaggccttt tctgcatcta ttgagataat catgtggttt ttgtctttgg 9840
ttctgtttat atgctggatt acatttgttg atttgcatat gttgaaccag ccttgcatcc 9900
cagggatgaa gcccacttga tcatggtgga taagcttttt gatgtgctgc tggattcggt 9960
ttgccagtat tttattgagg atttttgcat caatgttcat caaggatatt ggtctaaaat 10020
tctctttttt ggttgtgtct ctgccagctt tggtatcagg aggatgctgg cctcataaaa 10080
tgagttaggg aggattccct ctttttctat tgattggaat agtttcagaa ggaatggtac 10140
cagctcctcc ttgtacctct gatagaattc agctgtgaat ccatctggtc ctggactttt 10200
tttggttggt aagctattga ttattgccac aatttcagct cctgttattg gtctattcag 10260
agattcaact tcttcctggt ttagtcttgg gagagtgtat gtgtccagga atttatccat 10320
ttcttctaga ttttctagtt tatttgcgta gagttgtttg tagtattctc tgatggtaat 10380
ttgtatttct gtgggatcgg tggtgatatc ccctttatca atttttattg catctatttg 10440
attcttcttt ctgctttatt agtcttgcta gcagtctatc aattttgttg atcttttcaa 10500
aaaaccagct cctggattca ttaatttttt gaagggtttt ttgtgtctct atttccttca 10560
gttctgctct gattttagtt atttcttgcc ttctgctagc ttttgaatgt gtttgctctt 10620
gcttttctag ttcttttaat tgtgatgtta gggtgtcaat tttggatctt tcctgctttc 10680
tcttgtgggc atttagtgct ataaatttct ctctacacac tgctttgaat gcgtcccaga 10740
gattctggta tgttgtgtct ttgttctcat tggtttcaaa gaacatcttt atttctgcct 10800
acctttcgtt atgtacccag tagtcattca ggagcagatt gttcagtttc catgtagttg 10860
agtggttttg agtgagtttc ttaatcctga gttctagttt gattgcactg tggtctgaga 10920
gacagtttgt tacaatttgt gttcttttac atttgctgag gagtgcttta cttccaacta 10980
tgtggtcaat tttggaatag gtgtggtgtg gtgctgaaaa aaatgtatgt tctgttgatt 11040
tggggtggag agttctgtag atgtctatta ggtccgcttg gtgcagagct gagttcaatt 11100
cctgggtatc gttgttaact ttgtcttgtt gatctgtcta atgttgacag tggggtgttg 11160
aagtctccca ttattattgt gtgggagtct aagtctcttt gtaggtctct aaggacttgc 11220
tttatgaatc tgggtgctcc tgtattgggt gcctatatat ttaggatagt tagctcttct 11280
- 68 034964
tgttgaattg atccctttac cattatgtaa tggccttctt tgtctctttt gatctttgtt 11340
ggtttaaagt gttttatcag agactaggat tgcaacccct gccttttttt gttttccatt 11400
tgcttggtag atcttcctcc atccctttat tttgagccta tgtgtgtctc tgcgtgtgaa 11460
atgggtttcc tgaatacagc acactgatgg gtcttgactc tttatccaat ttgctagtct 11520
gtgtctttta attggagcat ttagcccatt tacatttaaa gttaatattg ttatgtgtga 11580
atttggtcct gtcattatta tgttagctgg tgattttgct cgttagttga tgcagtttct 11640
tcctagcctt gatggtcttt acattttggc atgtttttgc agtggctggt accagttgtt 11700
cctttccatg tttagcgctt ccttcaggag ctcttttagg gcaggcctgg tggtgataaa 11760
atctctcagc atttgcttgt ctgtaaagta ttttatttct cctttactta tgaagcttag 11820
tttggctgga tatgaaattc tgggttgaaa attcttttct ttaagaatgt tgaatattgg 11880
cccccactct cttctggctt gtagagtatc tgccgagaga tctgctgtta gtctgatggg 11940
cttccctttg tgggtaaccc gacctttctt tctggctgcc cttaacattt tttccttcat 12000
ttcaactttg gtgaatctga ctattatgtg tcttggagtt gctcttctcg aggagtatct 12060
ttgtggcatt ctctgtattt cctgaatctg aatgttggcc tgccttgcta gattggggaa 12120
gttctcctgg ataatatcct gcagagtgtt ttccaacttg gttccattct ccccgtcact 12180
ttcaggtaca ccaatcagat gtagatttgg tcttttcaca tagtcccata tttcttggag 12240
gctttggtca tttctattct tttttctcta aacttccctt ctcacttcat ttcattcatt 12300
tcatcttcca tcactgatac cctttcttcc agttgattgc atcggctcct gaggcttctg 12360
cattcttcac gtagttctcc agccttggct ttcagctcca tcagctcctt taaggacttc 12420
tctgcattgg ttattctagt tatccatttg tctaattttt ttttcacagt ttttaacttc 12480
tttgccattg gtttgaattt cctcctgtag cttggagtat tttggtcgtc tggagccttc 12540
ttctctcaac ttgtcaaagt cattctccgt ccagctttgt tccattgctg gtgaggagct 12600
atgttccttt ggaggaggag aggtgctctg atttttagag tttccagttt ttctgctctg 12660
ttttttcccc atctttgtgg ttttatctac ttttggtctt tgatgatggt gacgtacaga 12720
tgggtttttg gtgtggatat gctttctgtt tgttagtttt ccttctaaca gacaggaccc 12780
tcagctgcag gtctgttgga gtttgctaga ggtccactcc agaccctgtt tgcctgggta 12840
tcagcagcgg tggctgcaga acagcggtgg ctgtagaaca gtggatcttg gtgacccaca 12900
gatgctgctg cctgatcgtt cctctggaag ttttgtatca gaggagtacc cggccgtgtg 12960
aggtgtcagt ctgcccctac ttggggggtg tctcccagtt aggctgctcg ggggtcaggg 13020
acccacttga ggaggcagtc tgcccgttct cagatttcca gctgcgtgct gggagaacca 13080
ttactctcct caaagctgtc agacagggaa gtctgcagag gttactgctg tctttttgtt 13140
tgtctgtgcc ctgcccccag aggtggagcc tatagaggca ggcaggcctc cttgggctgt 13200
ggtgggctcc atccagttcg agcttcccgg ctgctttgtt tacctaatca aggctgggca 13260
atggcaggcg cccctccccc agcatcgctg ccgccttgca gtttgatctc agactgctgt 13320
- 69 034964
gctagccatc agcaagactc cgtgtgtgta ggaccctccg agcaaggtgc aggatgtaat 13380
ctcctggtgt gccgtttttt aagcccgttg gaaaagtgca gtattagggt gggagtgacc 13440
cgattttcca ggtgccatct gtcacccctt tctttgacta ggaaagggaa ctccctgacc 13500
ccttgtgctt cccaagtgag gcaatgcctc gccctgcttt ggctcatgca cagtgcgctg 13560
cacccactat cctgcaccca ctgtctggca ctccctagtg agatgaacct ggtacctcag 13620
atggaaatgc agaaatcacc catcttctgc attgctcatg ctgggagctg tagaccggag 13680
ctgttcctat ttggccattt tggctccacc cgaatttttt tgtatttttt tagtagcgac 13740
ggggtttcac cgttttagcc aggatggtct caatctcctg acttagccag gatggtctca 13800
atctcctgac tttgtgatcc accctcctcg gcctcccaaa gtgctgggat tacaggtgtg 13860
agccatcatt cccagccttt ctcctgtgat attttgtttt ctaaagttca tttgctgaca 13920
gaatcctcag agtattcatg gacactgtat actctgtgtt ctggcaagtt cataattcat 13980
tgtaaccttt ttagagaata cttttaggta acttggctgg gtgtaaaatt cttggctcct 14040
ctttatcttc catgaaaatc tttttttttt tttttttgga gacagagtct cactgtgttg 14100
gccaggctgg agtgccttgg ctcactgcaa tctctgcctc ctgggttcca gctattctcc 14160
tgcctcagcc tcctgagtag ccgggattac aggtgtgtgc caccatgccc agctaatttt 14220
ttgtattttt agtagagatg gggtttcaca atgttggcca ggctggtctc aaactcctga 14280
cttcaaatga tctgcccgcc tcagccttcc aaagtgctgg gattacaggt gtgagccatc 14340
acacccagac tgcttgttct tatgtttctt ctggttttct tttttgtgtg ttttttgttt 14400
tgttttgttt tgtttttttg agacagactc tcgtggtggc atgatctcag ctcactacaa 14460
gctccgcctc ccaggttcac accattcccc tgcctcagct tcccaagtag ctgggactac 14520
aggtgcccac caccacatcc ggctaatttt tttgtatttt ttttagtaga gacggggttt 14580
cactgtgtta gccaggatgg tctcgatctc ctgacctcgt catccactca cctcggcctc 14640
ccaaagtgct gggattacag gcctgagcca ccacccctgg cctcttctgg ttttatttct 14700
aaaatgattt ttttcttttt cctaattctt tcctaaattc tgctagttct ttatacattc 14760
tttcatttaa ccaaattatc ccttatcttt tctgatttct gttctttcac aattttgaaa 14820
aatttcttag tttcttttca tttaatttgt aatatcagat tatcgtcagc ttcatctgct 14880
tggtggctct atttttgtag ttgctgttat ctgcgtgtgt gttaattcag ttacttgtgt 14940
ttgtattttt tttttttttt ttgagacatc ttctgttttt ttgctcttgt taccaaggct 15000
ggagtgcaat ggcatgatct tggctcactg caacctctgc ctctcagatt caagcaattc 15060
ttctgcctca gcctcccaag tagctgggac tacaggtgac tgccaccacg cctagctaaa 15120
tttttttttg tatttttggt agagacgggg tttcaccatg ttggccaggt tggtctcgaa 15180
ctcctgactt caggtaatcc acctgtctca gcctcccaaa gtgctgggat tacaggcatg 15240
agctgctgta cccagtttgt gtttttctta caatatgttt tcataaagct tcgttgctct 15300
tgtttaaata gatagccttg ctttactttt agggcaagtt cttgggggga ataggagaag 15360
- 70 034964
acggtagtta ccttgaggtg ccacttgtct caatgcatgg ccacctcccc agtctccaca 15420
gtcatgacac ctcagtcatg acatgaccgc acagtcatgg catctccacg agctgctgcc 15480
tctggatgct gacttcagtt tctgaacctt ctttctcttc tcatccccac ttcttaccct 15540
gttgagtttg gattctacca taagcagctt tttctctgag tgggtctctg tccttctgaa 15600
agggaggttt tgggaggcat ttctgacatc ctcaagagcc cacgtcagca ctgactgacc 15660
tctgcagaca ctgagtggat tcccacggga tttttttggt tcttgcccac aaattggaac 15720
ctgtggagcc ctctctgttc cattgttccc cttgctgagg attcagtgca gagtggggtc 15780
ctcgtctttt gaggggcagc cactttttgg agattcctgt gtctggcact cttaggatct 15840
taggacatga gaacccttct ttcttttccc ccggctgcct ctaccccgca gctaatcgca 15900
tgtgggtccc acaggtcctg ctggtggtgg tggtctgacc gcacactctc atatcctgag 15960
gtgctgtgta acctaacttt gttgacaatg tgatcagatt tgttattttg ctgtcatcct 16020
agttgcccta tttttctgaa gaaatttaga gagattttaa aaacccatgc catcatgatc 16080
tttctcatag ccctcaccac cccaccccac ttctgttctt aaatgccccc tgtatgatag 16140
tgctacctca gctgatcatt tgcacccata ctaccttttc tttttttaat tgcctcacat 16200
ggtttggcag tacattgctc agacccttcc caccaatgct gtcccttgct gccagctatc 16260
tctgggtgtg atattgattg actgagacag aatctcactc tgtcacccag gctggagtgc 16320
agtggtgcca tctcagctca ctgcagcttc cacctcctgg gttcaagcaa ttctcctgcc 16380
tcagcctccc gagtagctgg gattacaggt gtgcaccacc acacctggct aatttttgta 16440
tttttagtag agatggggtt ttgtcatgtt gaccaggctg gtctcaaact gctgacctca 16500
ggtgatctgc ccgcctcagc ctcccaaagt attagtatta caggtgtgag ccaccacacc 16560
cagctttcat ttattttttg gtcattcgtt aggtcaacaa atatttactg agtgcccttt 16620
atgaggctgg tgctgtgcca gaccccagtc tccagctggg tctgcatgtt ctgtcttctg 16680
ctagtagaga tatgactgtt gacactgccc caggcagcac acaggccttc tgatctgggt 16740
ggacacaccc caggggtgct gtgggcagca gccacagtga ccaggatccc cagaaatgag 16800
ccatcagcca agctcagcta acctctagta tatgttcttt gggcacatgc acacatttct 16860
gtgtctcctc acttggggac ccaagttctg aatggccaag gttctgccat aaactctgtg 16920
gagtctcgag caagtcattc ctgtcctttg accgtcagtt ttctctttgg caaaatgaag 16980
gtgttggact agagcagggg ctagcaaatg ttttctctaa agggccagag aataaatatt 17040
ttaggcgttg tgggtcatac agtgacggtc acagctattc atctctgccc ctggagctca 17100
aaagtagcta tagataatgg acaacaaaag gcagtggcac tattcccccc agattttatt 17160
tacagaaaga ggaccacagc ttgccaaccc ctggaccaga ccctgggctc tgaagctccc 17220
ttgccgctct gacattttgt tgatccagga tgctgtatgg aattggttca ggaggcctct 17280
gccttcctga gggtcttttc gaccttctgc ttagcccagc cctctccagg gcccctcagt 17340
gctaaacatg ggctgagtcc acttggggac tgtgtggatg ttcacctcca ccccaccctc 17400
- 71 034964
ctacctctcc ctttttcctg gagccaggag caggaatact cgtagggaat taagggcatg 17460
gtgggagtga aattggggct aagaatgtat aaactcagca gggcaccatt gggggcaaac 17520
tagccaacca gaggaaagat agttagtggc tttggcattg agccttcatg ggtaatgatc 17580
ctgctcaacc gagacccagg agagactagc aaggaagaag cacatgcacc acaacattcc 17640
ccttctgttt tcacaggttc ccatccaatt acagcagcac aaggatatcc ctaaatgttt 17700
aggctttgtc attgtttaca aggcaaagga gtatggcagt tgctcccttt ggaggatgta 17760
aatgccttca caaggctaag aaacttaaca gggctgatcc gaggaatgtt taagaacctt 17820
cctgggcagg gccattgttg tggaagcaac tggccttgct ctcagatggc ctcatctggc 17880
catcgcggat ggaatgccca atgcaagact caacagggat catcagctga ttttctgtcg 17940
aacaaaccaa caagactatt cctagaaaaa cgtacatgtc taaggccagg cagtggctca 18000
agcctgtaat ctcagcactt tgggaggccg aggtgggcag atcacttgag gtcaggagtt 18060
cgagaccagc ccagccaaca tggcaaaact ccatccctac taaaaataga aaaagtagct 18120
gagcgtttgt ggtacatgct tataattcca gctactcagg aggctgagca ggagacttgc 18180
ttgaaccccg ggagacagag attgtagtga gctactgcat tctagcctgg gcaacagagt 18240
gagactctgt ctcaaagaaa aagaaaaatg tctatttctg tgtgaaaata aatgtcagga 18300
tgcacatagt gaaaaggaag ggagaagaaa catggggaga aaatggggat agggacacag 18360
aaagtgaaga aacctgttag gctgaattcg aaagacaagg aagcaaaaca tgattattgt 18420
aaaacagtac tgggaagaat gggggtgggg agggtacagg gaatggtcaa atcaggatcc 18480
agagataggg tttggaagta aatccatctg acaaggttcc gtttaatggg ggtggactcc 18540
cctgggtggt ctgtgcagcc ccttccacat ccatagtctg gtttcacaca cacattaggc 18600
gcccggtaca gactgaatga ggagagggcc aagcctcagg gaccctgggt ggcaaataat 18660
cccaaaggct gcttcagcac ctggctccag gaggatgacc ttcctcccat ttctttaatt 18720
aaagggggac caatcctctt cgggcatttg ggagtctatc agtttgggac ctgtattgtg 18780
ggatgaactg gtggcctgcc ctggggcagg gagtgatcca tatctcagat tgttgttggg 18840
gagggagctt gggcctcagt atccctgttg gtaaatgggg ccaggaaatg ggtgaccttt 18900
tatggcactt tagctctcat cttccagtgc cttccaaatc attacttact gtgagaagct 18960
ggttgagatg accacaatat gaccaagtgt taatgaccgt gtgtcactgt gccccctctt 19020
tgtctttgca gtgctgttgg ggatttccag gtggacgaca agaccaaagc cttactcaag 19080
tacactgggg aggtgacttg gatacctccg gccatcttta agagctcctg taaaatcgac 19140
gtgacctact tcccgtttga ttaccaaaac tgtaccatga agttcggttc ctggtcctac 19200
gataaggcga aaatcgatct ggtcctgatc ggctcttcca tgaacctcaa ggactattgg 19260
gagagcggcg agtgggccat catcaaagcc ccaggctaca aacacgacat caagtacaac 19320
tgctgcgagg agatctaccc cgacatcaca tactcgctgt acatccggcg cctgcccttg 19380
ttctacacca tcaacctcat catcccctgc ctgctcatct ccttcctcac tgtgctcgtc 19440
- 72 034964
ttctacctgc cctccgactg cggtgagaag gtgaccctgt gcatttctgt cctcctctcc 19500
ctgacggtgt ttctcctggt gatcactgag accatccctt ccacctcgct ggtcatcccc 19560
ctgattggag agtacctcct gttcaccatg atttttgtaa ccttgtccat cgtcatcacc 19620
gtcttcgtgc tcaacgtgca ctacagaacc ccgacgacac acacaatgcc ctcatgggtg 19680
aagactgtat tcttgaacct gctccccagg gtcatgttca tgaccaggcc aacaagcaac 19740
gagggcaacg ctcagaagcc gaggcccctc tacggtgccg agctctcaaa tctgaattgc 19800
ttcagccgcg cagagtccaa aggctgcaag gagggctacc cctgccagga cgggatgtgt 19860
ggttactgcc accaccgcag gataaaaatc tccaatttca gtgctaacct cacgagaagc 19920
tctagttctg aatctgttga tgctgtgctg tccctctctg ctttgtcacc agaaatcaaa 19980
gaagccatcc aaagtgtcaa gtatattgct gaaaatatga aagcacaaaa tgaagccaaa 20040
gaggtaagga tatggctttt attacattgg tcattcattc attcaacaaa tatttatggg 20100
ttcctcgtgg ggcaaggcat agggtagggg gttaagaaat tgccctctgg agtcagtggc 20160
ctgtgttaag accagttata tgtccttggg tatgttacct cacctctctg agcctgtttt 20220
ctcttctgta aaatgggatg ataaagcttg gtatgtggta ccctgaagct agccaccagg 20280
ctgccagcag gctggcaggc tggaccatga aaacacctga tgccaataga ctagattagg 20340
atgtaggctg gaaaagggca tggggccaga tgatctccag ttagtattgg ttaattgagg 20400
ttatattttt atttttattt atttttttga gacagggtcc tgctctgttg cccaggctgg 20460
agtgcagtgg cgcaatcttg gctcactgca acttccgcct cccagctcaa gcgattctcc 20520
cacctcagtt tcccgagtag cttgaactac agatgccccg ccaccatacc ctaatttttt 20580
tgtaccgatg gggttttgcc atgttgccca ggttggtctc agactcctcg actcaatctg 20640
ctcacctcag tctcccaaaa tgctgggact acaggcatga gccaccgcac ctggccttta 20700
tttttacttt ctaattgtat atgtgttctc actgaggaag aatttacgtg gagtaaagtg 20760
cacacctctt cagtgtacat ctcaatgagt ttttacatca tgtatacaac catgtaacca 20820
agacccaggt aaagatatag aacactccca gggcccctag aaagttcccc aatgcccttg 20880
ccagtcagtg tctccctccc tgcttggtac ccaccatcct ggcttaggcg cagtggctca 20940
cgcctgtaat cctagcactt taggaggctg aggcaggtgg atggcttgag atcaggagtt 21000
tgagaccagc ctgggaaaca tagcgaaacc ccgtctctaa cagaaataca aaaattagcc 21060
aggcgtggtg gcacgtgcct gtagttccag ctactcagga ggctgaggtg agaggatcac 21120
tggagctcag gaagtctagt gagctgtgat catgccactg cactccagcc tgggtaacag 21180
agtgaagtcc tttctttaat taattaatta attttttaaa aaaccattat actgacttat 21240
ttgataattg attagtttta cctatttttt tttttttttg agatggagtc ttgctctgtc 21300
acccagaatg gagtgcagta gtacaatctc tgcctactgc aacctctgct tcccaggttc 21360
aagtgattca catgcctcag cctcccaagt gtctgggact acaggtaccc gcccgctacc 21420
atgcctaatt ttttgtattt ttaatagaga ggggattttg ccatgtttgt caggctggtc 21480
- 73 034964
ttgaactccc gacctcaggt gatctgcccg ccttggcctc ccaaagtgct aggattaaag 21540
gtgtgatcca ccacacctgg ccttttgagc cctcagaaga acatttatcc ataaacattc 21600
ttgagaaggc atgccaataa gaagagaaat aaatccaggg ggctacaaag gagaggagga 21660
aagcctcagg ctccaccagt caatgggcag ctcagttctc tgcacttccc tttagccagg 21720
ctctgctggg cttgtgaggg accccctgaa cctgcatctc tgggctggga gtggcaggct 21780
aaagaggcaa agtggcaggg gaacaaagat ctccctagct ctcccctcca ccaagcccct 21840
ccccctgcca gccccagtct ctggccacac cttcccagtt tctgggtctt taaagtagtc 21900
ttctcatgct tctgggccag ctctcaattt gggctagttc accactttgc ctaacatctg 21960
tgactcatca gaaaatggcc aatatcattg tgctttaaag actttaggag ctagatataa 22020
gccaggcaca gtggcttaca cctgtaatcc aacactttgg gaggccaagg caggaggatc 22080
acttgagccc aggagttcaa aaccatcctg ggccacgtag ggaaaccctt tctctacaaa 22140
aaaaatttaa aaatcaggcc aggtgcagtg gctcacgcct gtaatcccaa cactttggga 22200
ggccgaggca ggtggatcac ctgaggttgg gagttcaaga ccagcctggc caacaatggt 22260
gaacctccat ctctactaaa aatacaataa attaaccggg gggtggtggt ggcatgagcc 22320
tgtaatctta gctactcggg agtctgaggc acaagaattg cttgaactcg ggagacagag 22380
gttgcagtga gccaagatca caccactgga ctccagccta ggtgacagag tgagactccg 22440
tttcaaaaaa aaaaaaaaaa tgccgggtgc agtggctgac gcctgcaatc ccagcacttt 22500
gggaggctgg ggcaggtgga tcacctgagg tcaggagttt gagaccagcc tggccaacat 22560
aaaaccccat ctctactaaa tacaaaaatt agctgggcat ggtgctaggc acctgtaatc 22620
ccagctactc aagaggctga ggcaggagaa ttgcttgaac ctgggaggtg gagcttgcag 22680
tgaggcgagg tcatgccact gcactccagc ctgggcgtct caaaaaacaa aaaattgccc 22740
aagtgtagtg acacacacct gtagttccag ctactcagga agctgagtgg ggaagattac 22800
ttgagcccgg gaggtcaagg ctgcagcaag ccatgattgc acccctgcac tccagcttga 22860
gcaacaaagc aagaccctgt ctcaaaaaaa aaaaaaagat ataaaatttc tgtccagcca 22920
gctctttttg caccactatt tctattcatg tataaaaccc aagtgtcatc tttcttcatg 22980
aggcttgagt aagggtcatt ttataaatca acattagtat cactaggctc tattcattaa 23040
ggactctgtt ctgaaacaag cttctgaggg aagtactgtt cttatcccca ttttacagat 23100
aaggaaattg aggctaagag cggtcatgga atttacccag attctcacaa ctcaaaagga 23160
gcagagctgg gattctaatc agtttgtctc caagtctctg cttttccaca cctctgcctc 23220
ctagagcctt aggaggtggc tggtaggggg tgggtaggaa tctcacatct caaggtgtat 23280
ctgaagcaca cacaaaccag tcttaggaat tcaaatgaag tacctcatgg caaatatggc 23340
atcataattc taattttacc tatgacagta gtgtcaccaa gagaacacat ttactcaggc 23400
tcacaatggt gatgtaaaat cttcatctcc cagcgccatt tcagtatact tataataaag 23460
aggcagcatg taatttatta atttcattat tgcttcaaaa tcagctgact catgggttct 23520
- 74 034964
ctcaattcaa ttatggcttc tttgctttct gaattgtcta ggagtataat tacaattttc 23580
cttcctattt caagcccaaa ttgaagctgt attatataca attggtcttg ctttttctcc 23640
catcttttac tttattgtca gcaattattt ctgatgttca acctgctctc caactgcaca 23700
gtatcccatg atactttggt cttatgagta aaaatgactt ttgatcagct gggcatcgtg 23760
gagagggcag tggggaggga aagagtgatg aggatggact tgccctgata acgcttatct 23820
catttttgga acagatgtta aaaggaaatt tattttgttg tttttgagac agggtctcgc 23880
tctgttgccc aggctggagt gcagtggcgt gatctctgct cactgcaacc tccgcctccc 23940
gggttcaaga aattctcatg cctcagcctc ccaagtagct ggggattaca ggcatgtgcc 24000
accactcctg gccaattttt gtatttttgg tagagacagg gtttcaacag ggtttcacca 24060
tgttggccag gctggtctca aactcctgac ctcaggtgat ctcagcctcc caaagtgctg 24120
ggattacagg cgtgagccac tgcgccaaat ttatatctaa aactggatag agtactttga 24180
aacaatggta gattatattg gactatatta gccattctaa ccaaggccca gaatcctgcc 24240
atggaagcct aagtaactgg tttcactaac tttataaaat tggaattcag tttagaaaaa 24300
ctaggttatg catttttagg aaacttctga tttgaaacag atctaacatg acagatcttt 24360
tatacctgtt tctctcctgc ataaacagaa acttgagaat ggtggatttc ctcagaccac 24420
atcaattagg aaaaaaaggg cttcttacat attagagaca aaatggcttc tactgcaacg 24480
tgttgattac atcttcagta ttgaaaatgt attcatttgc ctttccctcc atgttttttt 24540
tcttttatca ttttgttttg cagattcaag atgattggaa gtatgttgcc atggtgattg 24600
atcgtatttt tctgtgggtt ttcaccctgg tgtgcattct agggacagca ggattgtttc 24660
tgcaacccct gatggccagg gaagatgcat aagcactaag ctgtgtgcct gcctgggaga 24720
cttccttgtg tcagggcagg aggaggctgc ttcctagtaa gaacgtactt tctgttatca 24780
agctaccagc tttgtttttg gcatttcgag gtttacttat tttccactta tcttggaatc 24840
atgcaaaaaa aaaaatgtca agagtattta ttaccgataa atgaacattt aactagcctt 24900
tttggtatgg taaagagatg tcaaaatgtg attctatgtg attagtatgc tatgctatgg 24960
aatatacatg taaaaatgtt tccttttagt tgttgaaaca aaactggata gaaaaatgct 25020
gttcagaaat atgaaaagtc attcagttat cactacagat ctcccagtaa tttttcttat 25080
ttagcccata atctctttga aggtttatac taattcagca atcccccatc gttacccatt 25140
tcttaccatg catttctcgt tctttactgg gtctaaaggg ctatgcctcc atttcagaga 25200
gcttcaacta cttctcttgc atacttctaa attataccat gagaaatcat gcctagttat 25260
tcattgttaa tataactgtc ttagtacacc ataaactggg tggattataa acaacagaaa 25320
cttctcagtt ttggaggttg ggaggtccaa ggtcaaggca ccagcaaatt tggtgtctgg 25380
tgagggtcct cttcctcaaa gggtgccttc tagctgtgtc ctcacatgac tgaagggact 25440
agctatctct gtggggtcta ttttataagg gcactaaccc cattcatgag agcagagccc 25500
ccatggccta atcacctttc caaggcccca ccttctatct aagacaatca cgctgggaat 25560
- 75 034964
aggtttcaac atatgaattg ggggaggaca catttggacc acagcatgaa cctttagaac 25620
agggtttctc agccttagca ctatggacat tttgggctgg ataaatatgt gttggtacag 25680
aatgggggta tcctgtgcat tgtaggatct ttagcagtac cctagcctca actcactaga 25740
tgccaatgac ataccttgct tcttcaccag ttatgataac caagaatgtc tccattgtta 25800
aatgttccct taggagcaaa attgcccctg gttgagaaac attgctttag acaaattgtt 25860
aagagtatca tgtactacac ttctgaaact taacgtgatc atcaccactg acagatgatt 25920
cacagagact gtttgaatct tgtctcacta gtttttcctg tgcaaaaata aaatggacag 25980
aattgcagcc cgctgtgact catgtttcaa taagtcaaaa gaaagatgtc gataaaaatt 26040
tatatataaa aatcataagt aacagtaatg gtagtataag agggatcagg gatgtatacg 26100
aactaaggta ggtagctggc aggcaatcta aattcatcac accaggcttt cactcattaa 26160
atggcattaa acacctgcct acgattaaat gcaaattaga tagggtctcc tccgccttcc 26220
aaagagcatt ggcttgaact tagataggtt acttattata aataaatgag gtgtttgtga 26280
tctcaacagc taagagttct aaattgaacg agggtttctg tcagtgtttg ctacctggtc 26340
acacctgaag tggtgacatt tagagatgga atttaactgt tttaactgtg atacattata 26400
ctgtactaaa tcatttacgc tgtactagta ataggctaag attgattaca tctaaaggcc 26460
cttgcaactc taagattcta ttattgtaat tgttagaatg aaggagagaa aactgaaata 26520
ttacaggtat ataacagtgt gcatatacca aattagaata ctgtgtttca tattagaaga 26580
ttgttttctc acagaatgat ttagaccaaa atatgtttga gacagagttt tgctcttgtt 26640
gccaggctgg agtgcaatgg cgcagtctcg gctcactgca gcctccacct cccaggttca 26700
agcgattctc ctgcctcagc ctcttgagta gctgggacta caggcgcctg ctaccatgcc 26760
cgactaattt tttgtattct tagtagagac ggggcttcac catgttggtc aggctagtct 26820
cgaactccta acctctggtg atccacctgc ctcagcctcc caaagtgctt ggattacaga 26880
tgtgagccac tgcccccggc cctaaatatg ttttttaaat ggggttcatg taattgtagt 26940
ggactgacta ttctaagatc aaggataaag agatactacc acaatttata tagaagatgg 27000
ttctattaat tgtgggaaat gtggacaaga ggactgaaat taatgttaag gatatgctac 27060
tgcgtgtcca caggagttgt ctactgtatg actttacagt ggaagctaag ctacagaaat 27120
agttaacaca ataattaagc atctaaagaa taaagtaagc cttaaaggag ttcccaattc 27180
ctgtttttca tttattttta aaatgttggt tatggaaaag cagcagcaca ttaagttgtt 27240
gttattatta ttatttgaga ctgagttttg ctcttgttgc ccaggctgga gtgcaatggc 27300
gtgatctcag ctcaccgcaa cctccgccac ctgggttcaa gcgattctcc tgccgcagcc 27360
tcccaggtag ctgggattac aggtgtgcac caccaccctg gctaatttca tatttttagt 27420
agagacgggg tttctccacg ttggtcaggc tggtctcgaa ctcccaacct caggtgatac 27480
gcccacctcg acctcccaaa gtgctgggat tacaggtgtg agccaccgtg cccggccaca 27540
ttaagtaatt attatatcaa gcatcacatt aagtaattat atcaagtagt cagcttttta 27600
aatatagcag tataatatta tattaaagat tagctgttac tcagtgagta caggaaagtt 27660
tacatacctt taccaaatgc agaaaagttt taaaatcagt cttcaaatac aactggaatt 27720
ctccagcaca gtcaaaggat gaactttact gtggattata aattagtatt atttgccagg 27780
atacaaatac tagatttttc actagtccag ttcagataat attttgctat ttttacaaga 27840
tcaaatgtat ctcatcagtt attacttcag tcatacagcc aactgttcaa atggatcatc 27900
tgttaacata aattgaggtt agcaacttag tctgttaaag cttgcactaa atttaacaca 27960
taacttacat tttcataatt ttataggtgc catcagatat atgtgtgtta actaaatgta 28020
tacttcagtc ccttgggagg cttcacttat ttgcatttcc aatatgaact ggtattaata 28080
tatttgccca tttataaata acaggaacaa aaagcccaag agatccaaca attgaaacga 28140
aaagaaaagt ccacagaaac atccgatcaa gaacctgggc tatgaatttc caatcttcaa 28200
caacctgtta ggaaaaaaat aaaaatgcat taaataattg taaa 28244

Claims (19)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Применение композиции, содержащей активатор альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (α7 nAChR), для лечения когнитивного нарушения, психотического расстройства или нейродегенеративного расстройства у индивидуума в выбранной популяции индивидуумов, причем популяция индивидуумов выбрана на основе наличия по меньшей мере одного характерного SNP гена субъединицы альфа-5 (CHRNA5) человеческого ацетилхолинового рецептора или гена субъединицы альфа-3 (CHRNA3) человеческого ацетилхолинового рецептора.
  2. 2. Применение по п.1, причем когнитивное нарушение, психотическое расстройство или нейродегенеративное расстройство представляет собой состояние, при котором играет роль или задействована активация α7 nAChR.
  3. 3. Применение по п.1 или 2, причем когнитивное нарушение, психотическое расстройство или нейродегенеративное расстройство выбрано из группы, состоящей из легкого когнитивного нарушения, болезни Альцгеймера, деменции при болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, шизофрении, сосудистой деменции, деменции при СПИДе, сенильной деменции, легкого когнитивного нарушения, связанного с возрастом (MCI), связанного с возрастом нарушения памяти, аутизма, деменции при дегенерациях лобной доли, инсульта, дегенеративного расстройства базальных ганглиев, рассеянного склероза, травмы, опухоли мозга, инфекции мозга, гидроцефалии, депрессии, токсического или метаболического расстройства и деменции, вызванной лекарственными средствами.
  4. 4. Применение по п.3, причем когнитивное нарушение, психотическое расстройство или нейродегенеративное расстройство представляет собой шизофрению.
  5. 5. Применение по любому из пп.1-4, причем характерный SNP человеческого CHRNA5 представляет собой SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) или SNP, образующий гаплотип с одним из указанных SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с одним из указанных SNPs.
  6. 6. Применение по п.5, причем гаплотип SNP содержит SNPs rs3841324 (SED ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1) и rs55781567-C (SEQ ID NO: 7) и причем указанные SNPs образуют гаплотипы delTTC или insATC.
  7. 7. Применение по любому одному из пп.1-6, причем индивидуумы в выбранной популяции индивидуумов являются гомозиготными в отношении характерных SNP CHRNA5 или указанных характерных SNP CHRNA5.
  8. 8. Применение по любому одному из пп.1-4, причем характерный SNP человеческого CHRNA3 представляет собой генотип SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4), или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36), или SNP, образующий гаплотип с одним из указанных SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с одним из указанных SNPs.
  9. 9. Применение по п.8, причем индивидуумы в выбранной популяции индивидуумов являются гомозиготными в отношении характерного генотипа SNP rs1051730-C/C (SEQ ID NO: 35) CHRNA3.
  10. 10. Применение по п.8, причем индивидуумы в выбранной популяции индивидуумов являются гомозиготными в отношении SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3) или гетерозиготными в отношении SNP rs6495308-C/T (SEQ ID NO: 3/4).
  11. 11. Применение по любому одному из пп.1-10, причем гаплотип SNP содержит по меньшей мере два из SNP, выбранных из группы, состоящей из rs3841324 (SEQ ID NO: 5 или 6), rs503464 (SEQ ID NO: 9 или 10), rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), rs55781567-C (SEQ ID NO: 7), rs56182392 (SEQ ID NO: 11 или 12), rs77293642 (SEQ ID NO: 13 или 14), rs67624739 (SEQ ID NO: 15 или 16), rs142774214 (SEQ ID NO: 17 или 18), rs60182379 (SEQ ID NO: 19 или 20), rs77541452 (SEQ ID NO: 21 или 22), rs72648882 (SEQ ID NO: 23 или 24), rs144334096 (SEQ ID NO: 25 или 26), rs114037126 (SEQ ID NO: 27 или 28), rs140280786 (SEQ ID NO: 29 или 30), rs147565924 (SEQ ID NO: 31 или 32), rs115662711 (SEQ ID NO: 33 или 34), rs1051730 (SEQ ID NO: 35 или 36), rs6495308 (SEQ ID NO: 3 или 4) и rs16969968-G (SEQ ID NO: 37).
  12. 12. Применение по любому одному из пп.1-11, где активатор α7 nAChR представляет собой соединение формулы (I)
    где L1 представляет собой -CH2-; L2 представляет собой -ОИ2-или -CH2-CH2-; и L3 представляет собой -CH2- или -CH(CH3)-; или
    L1 представляет собой -CH2-CH2-; L2 представляет собой -CH2-; и L3 представляет собой -CH2-CH2-;
    L4 представляет собой группу, выбранную из
    - 77 034964
    или
    1_4а
    1_4Ь
    Г где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к азабициклоалькильной составляющей;
    Ri представляет собой водород или C1.4алкил;
    Х1 представляет собой -O- или -NH-;
    группа А2 выбрана из
    где связь, отмеченная звездочкой, присоединена к Х1;
    A1 представляет собой от пяти- до десятичленную моноциклическую или конденсированную полициклическую ароматическую кольцевую систему, которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, причем кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем кольцевая система может быть замещена один или несколько раз R2, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;
    каждая группа R2 представляет собой независимо С1-6алкил, С1-6галогеналкил, С1-6алкокси, С1-6галогеналкокси, галоген, циано или от трех- до шестичленную моноциклическую кольцевую систему, которая может быть ароматической, насыщенной или частично насыщенной и которая может содержать от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и причем каждая кольцевая система может содержать не более чем 2 атома кислорода и не более чем 2 атома серы, и причем каждая кольцевая система может в свою очередь быть замещена один или несколько раз С1-6алкилом, С1-6галогеналкилом, С1-6алкокси, С1-6галогеналкокси, галогеном, циано, и причем заместитель на атоме азота в гетероциклической кольцевой системе может не представлять собой галоген;
    или две группы R2 на соседних кольцевых атомах образуют С3-4алкиленовую группу, где 1-2 атома углерода могут быть замещены Х2, и где С3-4алкиленовая группа может быть замещена одной или несколькими группами R3;
    каждая группа Х2 независимо представляет собой -O- или -N(R4)-;
    каждая группа R4 независимо представляет собой водород или С1-6алкил; и каждая группа R3 независимо представляет собой галоген или С1-6алкил;
    в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
  13. 13. Применение по п.12, где активатор α7 nAOiR находится в форме свободного основания или в форме фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли.
  14. 14. Применение по п.12 или 13, где соединение формулы (I) представляет собой R)-3-(6-п-толилпиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октан.
  15. 15. Способ прогнозирования способности к ответу на лечение индивидуумов или группы индивидуумов на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (α7 nAOiR) для улучшения когнитивных способностей или лечения когнитивного нарушения, психотического расстройства или нейродегенеративного расстройства, включающий стадии:
    I) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA5; и
    II) идентификации тех индивидуумов стадии I, которые являются носителями SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), или SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37) гена OTRNA5, или SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, причем присутствие по меньшей мере одного из SNPs или гаплотипов SNPs, перечисленных на стадии II выше, является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором α7 nAChR.
  16. 16. Способ прогнозирования способности к ответу на лечение индивидуума или группы индивидуумов на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (α7 nAOiR) для повышения когнитивных способностей или лечения когнитивного нарушения, психотического расстройства или нейродегенеративного расстройства, включающий стадии:
    - 78 034964
    I) получения генотипа индивидуума в генетическом локусе гена CHRNA3; и
    II) идентификации тех индивидуумов стадии I), которые являются носителями SNPs rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4) и/или SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36) CHRNA3, причем гомозиготное присутствие генотипа SNP rs6495308-C/C (SEQ ID NO: 3), гетерозиготное присутствие SNP rs6495308-C/T или гомозиготное присутствие SNP rs1051730-C (SEQ ID NO: 35) является показателем вероятности того, что индивидуум будет отвечать на лечение активатором α7 nAChR.
  17. 17. Применение по п.15 или 16, где активатор α7 nAChR представляет собой Щ)-3-(6-п-толилпиридин-3-илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октан в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
  18. 18. Применение по меньшей мере одного зонда для выявления:
    (i) SNP rs55853698-T (SEQ ID NO: 1), или (ii) SNP rs16969968-G (SEQ ID NO: 37), или (iii) SNP rs6495308 (SEQ ID NO: 3/4), или (iv) SNP rs1051730 (SEQ ID NO: 35/36), или (v) SNP, образующего гаплотип с указанными SNPs, или SNP с таким же дисбалансом связи с указанными SNPs для определения того, может ли индивидуум отвечать на:
    (a) лечение когнитивного нарушения, психотического расстройства или нейродегенеративного расстройства или состояния, при которых играет роль или задействована активация альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (α7 nAChR), или (b) улучшение когнитивных способностей активатором α7 nAChR.
  19. 19. Применение по п.18, где активатор α7 nAChR представляет собой Щ)-3-(6-п-толилпиридин-3илокси)-1-азабицикло[2.2.2]октан в форме свободного основания или в форме кислотно-аддитивной соли.
EA201490832A 2011-10-20 2012-10-18 Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов EA034964B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161549319P 2011-10-20 2011-10-20
PCT/IB2012/055692 WO2013057687A2 (en) 2011-10-20 2012-10-18 Biomarkers predictive of responsiveness to alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor activator treatment

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201490832A1 EA201490832A1 (ru) 2015-12-30
EA034964B1 true EA034964B1 (ru) 2020-04-13

Family

ID=47297333

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201490832A EA034964B1 (ru) 2011-10-20 2012-10-18 Биомаркеры, имеющие прогностическое значение в отношении ответа на лечение активатором альфа 7 никотиновых ацетилхолиновых рецепторов

Country Status (14)

Country Link
EP (1) EP2768507B1 (ru)
JP (1) JP6162705B2 (ru)
KR (1) KR102043077B1 (ru)
CN (1) CN103930112B (ru)
AU (1) AU2012324458B2 (ru)
BR (1) BR112014007485B1 (ru)
CA (2) CA3083244C (ru)
EA (1) EA034964B1 (ru)
ES (1) ES2776996T3 (ru)
IN (1) IN2014CN03647A (ru)
JO (1) JO3766B1 (ru)
MX (1) MX2014004621A (ru)
TW (1) TWI635861B (ru)
WO (1) WO2013057687A2 (ru)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
ES2911677T3 (es) 2011-10-03 2022-05-20 Modernatx Inc Nucleósidos, nucleótidos y ácidos nucleicos modificados, y sus usos
DE12858350T1 (de) 2011-12-16 2021-10-07 Modernatx, Inc. Modifizierte mrna zusammensetzungen
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
EP3501550A1 (en) 2012-04-02 2019-06-26 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
US9597380B2 (en) 2012-11-26 2017-03-21 Modernatx, Inc. Terminally modified RNA
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US9597284B2 (en) 2014-10-20 2017-03-21 Oyster Point Pharma, Inc. Dry eye treatments
AU2017248276B2 (en) 2016-04-07 2023-07-13 Oyster Point Pharma, Inc. Methods of treating ocular conditions
WO2017201364A1 (en) * 2016-05-20 2017-11-23 Vanda Pharmaceuticals Inc. Method for improving or enhancing cognition
CN107188900B (zh) * 2017-05-27 2019-09-06 北京师范大学 α7烟碱型乙酰胆碱受体的配体化合物及其应用
CN113840569A (zh) 2019-03-19 2021-12-24 剑桥认知有限公司 诊断精神病症和推荐用于精神病症的治疗的方法和用途

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683194A (en) 1984-05-29 1987-07-28 Cetus Corporation Method for detection of polymorphic restriction sites and nucleic acid sequences
US5075216A (en) 1988-09-23 1991-12-24 Cetus Corporation Methods for dna sequencing with thermus aquaticus dna polymerase
EP0679196B1 (en) 1993-01-07 2004-05-26 Sequenom, Inc. Dna sequencing by mass spectrometry
US5498531A (en) 1993-09-10 1996-03-12 President And Fellows Of Harvard College Intron-mediated recombinant techniques and reagents
US6953855B2 (en) 1998-12-11 2005-10-11 Targacept, Inc. 3-substituted-2(arylalkyl)-1-azabicycloalkanes and methods of use thereof
US20010049586A1 (en) 2000-04-05 2001-12-06 Roses Allen David Iterative analysis of non-responding population in the design of pharmacogenetic studies
GB0010955D0 (en) 2000-05-05 2000-06-28 Novartis Ag Organic compounds
DE10156719A1 (de) 2001-11-19 2003-05-28 Bayer Ag Heteroarylcarbonsäureamide
DE10164139A1 (de) 2001-12-27 2003-07-10 Bayer Ag 2-Heteroarylcarbonsäureamide
DE10211415A1 (de) 2002-03-15 2003-09-25 Bayer Ag Bicyclische N-Biarylamide
DE10211416A1 (de) 2002-03-15 2003-09-25 Bayer Ag Essig- und Propionsäureamide
DE10234424A1 (de) 2002-07-29 2004-02-12 Bayer Ag Benzothiophen-, Benzofuran- und Indolharnstoffe
GB0220581D0 (en) * 2002-09-04 2002-10-09 Novartis Ag Organic Compound
EE05516B1 (et) 2002-09-25 2012-02-15 Memory@Pharmaceuticals@Corporation Indasoolid bensotiasoolid ja bensoisotiasoolid nende valmistamine ning kasutamine
US20050065178A1 (en) 2003-09-19 2005-03-24 Anwer Basha Substituted diazabicycloakane derivatives
US20050245531A1 (en) 2003-12-22 2005-11-03 Abbott Laboratories Fused bicycloheterocycle substituted quinuclidine derivatives
AR049401A1 (es) 2004-06-18 2006-07-26 Novartis Ag Aza-biciclononanos
GB0415746D0 (en) 2004-07-14 2004-08-18 Novartis Ag Organic compounds
CN1922176A (zh) 2004-12-10 2007-02-28 艾博特公司 稠合的双环杂环取代的奎宁环衍生物
GB0521508D0 (en) 2005-10-21 2005-11-30 Novartis Ag Organic compounds
GB0525672D0 (en) 2005-12-16 2006-01-25 Novartis Ag Organic compounds
GB0525673D0 (en) 2005-12-16 2006-01-25 Novartis Ag Organic compounds
TW200813067A (en) 2006-05-17 2008-03-16 Astrazeneca Ab Nicotinic acetylcholine receptor ligands
CN102516241B (zh) 2006-05-19 2015-07-29 艾伯维巴哈马有限公司 Cns活性的稠合的双环杂环取代的氮杂双环烷烃衍生物
US8314119B2 (en) 2006-11-06 2012-11-20 Abbvie Inc. Azaadamantane derivatives and methods of use
SA08290475B1 (ar) 2007-08-02 2013-06-22 Targacept Inc (2s، 3r)-n-(2-((3-بيردينيل)ميثيل)-1-آزا بيسيكلو[2، 2، 2]أوكت-3-يل)بنزو فيوران-2-كربوكساميد، وصور أملاحه الجديدة وطرق استخدامه
WO2009066107A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Astrazeneca Ab Use of a nicotinic receptor agonist
BRPI0920187A2 (pt) 2008-10-13 2019-08-27 Hoffmann La Roche método sem diazônio para fabricar um indazol intermediário na síntese de amidas bicíclicas do ácido 5-(triflúor-metóxi)-1h-3-indazol-carboxílico
EP2364150A1 (en) 2008-11-11 2011-09-14 Targacept Inc. Treatment with alpha 7-selective ligands
TW201031664A (en) 2009-01-26 2010-09-01 Targacept Inc Preparation and therapeutic applications of (2S,3R)-N-2-((3-pyridinyl)methyl)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-yl)-3,5-difluorobenzamide
TWI558398B (zh) * 2009-09-22 2016-11-21 諾華公司 菸鹼乙醯膽鹼受體α７活化劑之用途

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANATOLY A. MAZUROV, SPEAKE JASON D., YOHANNES DANIEL: "Discovery and Development of α7 Nicotinic Acetylcholine Receptor Modulators", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 54, no. 23, 8 December 2011 (2011-12-08), pages 7943 - 7961, XP055060345, ISSN: 00222623, DOI: 10.1021/jm2007672 *
GEORG WINTERER, KIRSTIN MITTELSTRASS, INA GIEGLING, CLAUDIA LAMINA, CHRISTOPH FEHR, HERMANN BRENNER, LUTZ P. BREITLING, BARBARA NI: "Risk gene variants for nicotine dependence in the CHRNA5-CHRNA3-CHRNB4 cluster are associated with cognitive performance", AMERICAN JOURNAL OF MEDICAL GENETICS PART B: NEUROPSYCHIATRIC GENETICS, WILEY-LISS, vol. 153B, no. 8, 1 December 2010 (2010-12-01), pages 1448 - 1458, XP055059810, ISSN: 15524841, DOI: 10.1002/ajmg.b.31126 *
JOHANSSON I; INGELMAN-SUNDBERG M: "CNVs of human genes and their implication in pharmacogenetics", CYTOGENETIC AND GENOME RESEARCH, ALLERTON PRESS, NEW YORK, NY, US, vol. 123, no. 1-4, 1 March 2009 (2009-03-01), US, pages 195 - 204, XP009168924, ISSN: 1424-8581, DOI: 10.1159/000184709 *
L. E. HONG, YANG X., WONODI I., HODGKINSON C. A., GOLDMAN D., STINE O. C., STEIN E. S., THAKER G. K.: "A CHRNA5 allele related to nicotine addiction and schizophrenia", GENES, BRAIN AND BEHAVIOR, BLACKWELL MUNKSGAARD, vol. 10, no. 5, 1 July 2011 (2011-07-01), pages 530 - 535, XP055059804, ISSN: 16011848, DOI: 10.1111/j.1601-183X.2011.00689.x *
N. A. HORENSTEIN, LEONIK F. M., PAPKE R. L.: "Multiple Pharmacophores for the Selective Activation of Nicotinic �7-Type Acetylcholine Receptors", MOLECULAR PHARMACOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS, vol. 74, no. 6, 1 December 2008 (2008-12-01), pages 1496 - 1511, XP055060348, ISSN: 0026895X, DOI: 10.1124/mol.108.048892 *
NADINE PETROVSKY, BORIS B QUEDNOW, ULRICH ETTINGER, ANNE SCHMECHTIG, RAINALD M�SSNER, DAVID A COLLIER, KAI-UWE K�HN, WOLFGANG MAIE: "Sensorimotor Gating is Associated with CHRNA3 Polymorphisms in Schizophrenia and Healthy Volunteers", NEUROPSYCHOPHARMACOLOGY, NO LONGER PUBLISHED BY ELSEVIER, vol. 35, no. 7, 1 June 2010 (2010-06-01), pages 1429 - 1439, XP055059821, ISSN: 0893133X, DOI: 10.1038/npp.2010.12 *

Also Published As

Publication number Publication date
BR112014007485B1 (pt) 2022-05-31
JP6162705B2 (ja) 2017-07-12
TWI635861B (zh) 2018-09-21
EA201490832A1 (ru) 2015-12-30
JP2015501306A (ja) 2015-01-15
EP2768507B1 (en) 2019-12-11
MX2014004621A (es) 2014-08-22
WO2013057687A2 (en) 2013-04-25
AU2012324458B2 (en) 2016-05-19
CA2852268C (en) 2020-08-25
JO3766B1 (ar) 2021-01-31
EP2768507A2 (en) 2014-08-27
TW201322980A (zh) 2013-06-16
BR112014007485A2 (pt) 2017-04-04
CA2852268A1 (en) 2013-04-25
WO2013057687A3 (en) 2013-07-11
CN103930112B (zh) 2018-11-09
ES2776996T3 (es) 2020-08-03
KR20140081822A (ko) 2014-07-01
KR102043077B1 (ko) 2019-11-11
CA3083244A1 (en) 2013-04-25
IN2014CN03647A (ru) 2015-10-09
CA3083244C (en) 2023-01-03
AU2012324458A1 (en) 2014-05-01
CN103930112A (zh) 2014-07-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102043077B1 (ko) 알파 ７ 니코틴성 아세틸콜린 수용체 활성화제 치료에 대한 반응성을 예측하는 바이오마커
CA2566256C (en) Genetic polymorphisms associated with liver fibrosis methods of detection and uses thereof
TWI334886B (en) Genetic variants predicting warfarin sensitivity
KR102149483B1 (ko) 예측변수 인자들을 이용하여 동정된 환자 부분 모집단에서 암 치료를 위한 마시티닙의 용도
ES2661050T3 (es) Biomarcador predictivo de la capacidad de respuesta a tratamiento con activador del receptor nicotínico de acetilcolina alfa-7
AU2013313282B2 (en) Mitigating tissue damage and fibrosis via latent transforming growth factor beta binding protein (LTBP4)
CA2651376A1 (en) Method for diagnosis and treatment of a mental disease
TW200808976A (en) Warfarin dosage prediction
KR20150023904A (ko) 전립선암의 진단 및 치료에서의 마커의 용도
KR20130123357A (ko) 저산소증과 관련된 질환의 진단방법 및 키트
US20030235847A1 (en) Association of polymorphisms in the SOST gene region with bone mineral density
CN101631876A (zh) 2型糖尿病的遗传易感性变体
KR20090087486A (ko) 타입 ２ 당뇨병의 유전적 감수성 변이
US20030099958A1 (en) Diagnosis and treatment of vascular disease
CN108624683B (zh) Usp48基因突变在acth型垂体腺瘤分子诊断中的应用
KR102074157B1 (ko) Itpkc 및 slc11a1 유전자 다형성을 이용한 가와사키병 발병 예측 방법
CN117795076A (zh) 用丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶15(map3k15)抑制剂治疗代谢病症的方法
TWI358456B (en) Method of determining susceptibility of high myopi
CN113825839A (zh) 用固醇调节元件结合蛋白切割激活蛋白(scap)抑制剂治疗脂质水平升高
US20040138441A1 (en) Novel gene functionally related to dyslexia
CN112534265A (zh) 预选个体的抗癌治疗及鉴定易患病个体的筛选方法
KR100968360B1 (ko) Ｈｅｒ-2 유전자 복제수 변화에 의해 발생되는 유방암의 진단 방법
US20050233341A1 (en) Methods for identifying risk of melanoma and treatments thereof
CA2826522A1 (en) Genetic polymorphism in pnlpa3 associated with liver fibrosis methods of detection and uses thereof
US20030219787A1 (en) Novel human gene functionally related to dyslexia