EA031430B1 - Замещенные производные хиназолин-4-она - Google Patents

Замещенные производные хиназолин-4-она Download PDF

Info

Publication number
EA031430B1
EA031430B1 EA201690268A EA201690268A EA031430B1 EA 031430 B1 EA031430 B1 EA 031430B1 EA 201690268 A EA201690268 A EA 201690268A EA 201690268 A EA201690268 A EA 201690268A EA 031430 B1 EA031430 B1 EA 031430B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
amino
phenyl
oxo
dihydroquinazolin
carbonitrile
Prior art date
Application number
EA201690268A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201690268A1 (ru
Inventor
Чженьсин Ду
Самуэль Хинтерманн
Констанце Хурт
Себастьян Жакье
Хансйорг Леманн
Хенрик Мебитц
Николя Солдерманн
Александар Стоянович
Original Assignee
Новартис Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новартис Аг filed Critical Новартис Аг
Publication of EA201690268A1 publication Critical patent/EA201690268A1/ru
Publication of EA031430B1 publication Critical patent/EA031430B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/16—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two nitrogen atoms

Abstract

Изобретение относится к замещенным соединениям хиназолин-4-она формулы (I) и/или их фармацевтически приемлемым солям и/или сольватамгде R, R, R, R, Rи L имеют значения, определенные в описании. Такие соединения являются подходящими для лечения расстройства или заболевания, которое опосредовано активностью PI3K киназ класса I.

Description

Изобретение относится к замещенным соединениям хиназолин-4-она формулы (I) и/или их фармацевтически приемлемым солям и/или сольватам
(I) где R1, R2, R3, R5, R6 и L имеют значения, определенные в описании. Такие соединения являются подходящими для лечения расстройства или заболевания, которое опосредовано активностью PI3K киназ класса I.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к получению и применению новых замещенных производных хиназолин-4-она в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственных средств-кандидатов с ценными свойствами, подобными лекарственным, такими как, например, метаболическая стабильность и подходящая фармакокинетика, для модулирования, в частности, ингибирования активности или функционирования семейства фосфоинозитид-3'ОН киназ (указываемые далее как PI3K).
Предпосылки изобретения
Члены семейства фосфоинозитид-3-киназы (PI3K) участвуют в клеточном росте, дифференцировке, выживании, преобразовании цитоскелета и направленном перемещении внутриклеточных органелл в различных типах клеток (Okkenhaug and Wymann, Nature Rev. Immunol. 3:317 (2003)).
На сегодняшний день было идентифицировано восемь PI3K млекопитающих, разделенных на три основных класса (I, II и III) на основе их генетической последовательности, структуры, молекулы адаптера, экспрессии, метода активации и предпочитаемого субстрата.
Наиболее широко изученное семейство класса I (включая изоформы PI3K α, β, γ и δ) далее подразделяется на подклассы IA и IB. PI3 киназы класса IA (изоформы PI3Ka, PI3I<[3 и PI3[KS) состоят из регулирующего/адаптерного белка 85 кДа и трех каталитических субъединиц 110 кДа (p110a, р110в и p110δ), которые активируются в системе тирозинкиназы, тогда как класс IB состоит из единственной p110Y изоформы (PI3Ky), которая активируется G-белок-связанными рецепторами.
PI3IK5 и PI3Ky, оба, представляют собой липидные киназы, относящиеся к классу I PI3K семейства (PI3K α, β, γ и δ). PI3IK3 генерирует сигналы вторичного мессенджера в 5'-3' направлении рецепторов, связанных с тирозинкиназами, тогда как PI3K',' главным образом активируется G-белок-связанными рецепторами (GPCR). PI3KiS и PI3K',' представляют собой гетеродимеры, состоящие из адаптерного белка и каталитических р110δ или p110-,' субъединиц, соответственно, которые преобразуют фосфатидилинозитол-4,5-бис-фосфат (PtdInsP2) в фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфат (PtdInsP3). Эффекторные белки взаимодействуют с PtdInsP3 и запускают специфические сигнальные пути, участвующие в активации клеток, дифференцировке, направленном перемещении и выживании клеток.
Экспрессия каталитических р110δ или p110-,' субъединиц в основном ограничена лейкоцитами. Также экспрессия наблюдается в гладкомышечных клетках, миоцитах и эндотелиальных клетках. В отличие от этого, p110a и р110[3 экспрессируются всеми типами клеток (Marone et al. Biochimica et Biophysica Acta 1784:159 (2008)).
PI3K<3 связан с развитием и функцией В клеток (Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002)).
В клетки также играют важную роль в патогенезе ряда аутоиммунных и аллергических заболеваний, а также в процессе отторжения трансплантата (Martin and Chan, Annu. Rev. Immunol. 24:467 (2006)).
Была показана связь между PI3K',' и процессами, такими как хемотаксис лейкоцитов и дегрануляция тучных клеток, таким образом вызывая интерес к этой мишени для лечения аутоиммунных и воспалительных расстройств (Ghigo et al., Bioessays, 2010, 32, 185-196; Reif et al., J. Immunol., 2004, 173, 22362240; Laffargue et al., Immunity, 2002, 16, 441-451). Сообщалось также о связи PI3Ky со злокачественным новообразованием, диабетом, сердечно-сосудистым заболеванием и болезнью Альцгеймера.
Хемотаксис участвует во многих аутоиммунных или воспалительных заболеваниях, в ангиогенезе, инвазии/метастазировании, нейродегенерации или в заживлении ран (Gerard et al. Nat. Immunol. 2:108 (2001)). Различные во времени события при миграции лейкоцитов на реакцию хемокинов полностью зависят от PI3KS и PI3Ky (Liu et al. Blood 110:1191 (2007)).
PI3Ka и PI3I<[3 играют важную роль в поддержании гомеостаза, и лечение рака было связано с фармакологическим ингибированием этих молекулярных мишеней (Maira et al. Expert Opin. Ther. Targets 12:223 (2008)).
PI3Ka участвует в передаче сигналов инсулина и путях клеточного роста (Foukas et al. Nature 441:366 (2006)). Было высказано предположение, что PPTKS и/или PI3Ky изоформ-селективное ингибирование позволит избежать возможных побочных эффектов, таких как гипергликемия и метаболическая дисрегуляция или дисрегуляция фактора роста.
Паразитарные инфекции по-прежнему представляют собой одну из наиболее важных причин заболеваемости и смертности во всем мире. Среди паразитов, которые вызывают патологию у человека и животных, phylum apicomplexa включает группы трансмиссивных паразитов, которые ответственны за широкий спектр серьезных заболеваний, включая, но этим не ограничиваясь, малярию, лейшманиоз и трипаносомоз. Только малярией в год заражаются 5-10% людей, а также вызывается около 2 млн смертей [Schofield et al., Immunological processes in malaria pathogenesis, Nat Rev Imm 2005], [Schofiled I., Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra et al., TLRs in CNS Parasitic infections, Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau et al., Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings, Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011].
Toll-подобные рецепторы (TLR) представляют собой кодируемые генами зародышевой линии, фи- 1 031430 логенетически древние молекулы, которые распознают консервативно-эволюционные структурные релевантные молекулы (известные как патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (РАМР)) среди микробных патогенов. Ряд различных типов клеток, включая клетки иммунной системы, экспрессируют TLR и, таким образом, способны обнаруживать присутствие PAMP. Уже были описаны 10 функциональных членов семейства TLR (TLR1-10) у людей, все из которых распознают специфические молекулы PAMP. После распознавания этих конкретных PAMP TLR индуцируют и организуют иммунный ответ хозяина на инфекции с бактериями, вирусами, грибками и паразитами [Hedayat et al., Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease, review, Lancet Infectious disease 2011], [Kwai et al., TLRs and their crosstalk with other innate receptors in infection and immunity, review, Immunity May-2011].
Иммунная система инфицированного хозяина отвечает на инфекцию путем TLR индуцированной продукции провоспалительных цитокинов, главным образом, Т-хелперов типа 1 (Th1). В то время как адекватные количества этих цитокинов являются полезными и необходимыми для борьбы с инфекцией, перепроизводство этих медиаторов является вредным для хозяина и связано с иммуноопосредованной патологией, включая невропатологию и повреждение тканей с тяжелыми и часто фатальными последствиями. Одним известным и весьма актуальным примером такой иммуноопосредованной патологии является острая и церебральная малярия (СМ), которая вызывает серьезные клинические симптомы и часто со смертельным исходом. [Schofield et al., Immunological processes in malaria pathogenesis, Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L., Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra et al., TLRs in CNS Parasitic infections, Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau et al., Therapy of vectorborne protozoan infections in nonendemic settings, Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011] [Hedayat et al., Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease, review, Lancet Infectious disease 2011]. Несмотря на прогресс, достигнутый в лечении и искоренении малярии, уровень смертности, связанный с тяжелой формой малярии, включая СМ, остается неприемлемо высоким. Поэтому, чтобы предотвратить неврологические осложнения и смерть во всех случаях СМ, возможно не будет достаточно стратегии, направленной исключительно на искоренение паразитов у хозяина. Поэтому в медицине остается крайне важной потребностью разработка новых вспомогательных инновационных терапевтических стратегий для эффективного снижения смертности и заболеваемости, связанных с СМ, которые обусловлены, в частности, опосредованной хозяином иммунопатологией [Higgins et al., Immunopathogenesis of falciparum malaria: implications for adjunctive therapy in the management of severe and cerebral malaria, Expert Rev. Anti Infect. Ther. 2011].
Недавно было предоставлено еще одно свидетельство, что TLR9 играет ключевую роль в распознавании и реакции на паразитов, включая, но этим не ограничиваясь, Plasmodium, Leishmania, Trypanosoma и Toxoplasma [Gowda et al., The Nucleosome is the TLR9-specific Immunostimulatory component of plasmodium falciparum that activates DCs, PLoS ONE,. June 2011], [Peixoto-Rangel et al., Candidate gene analysis of ocular toxoplasmosis in Brazil: evidence for a role for TLR9, Mem Inst Oswaldo Cruz 2009], [Pellegrini et al., The role of TLRs and adoptive immunity in the development of protective or pathological immune response triggered by the Trypanosoma cruzi protozoan, Future Microbiol 2011], и что вмешательство в активацию TLR, включая TLR9, представляет собой многообещающую стратегию по предотвращению вредной воспалительной реакции при тяжелой и церебральной малярии [Franklin et al., Therapeutical targeting of nucleic acid-sensing TLRs prevents experimental cerebral malaria, PNAS 2011].
Малярия представляет собой инфекционное заболевание, вызываемое четырьмя простейшими паразитами: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale и Plasmodium malaria. Эти четыре паразита, как правило, передаются через укус инфицированной самки комара Anopheles. Малярия является проблемой во многих частях мира, и в течение последних нескольких десятилетий тяжесть малярии неуклонно возрастает. По оценкам, 1-3 млн человек умирают каждый год от малярии - в основном дети в возрасте до 5. Это увеличение смертности от малярии происходит отчасти из-за того, что Plasmodium falciparum, самый смертоносный малярийный паразит, приобрел устойчивость почти ко всем имеющимся противомалярийным препаратам, за исключением производных артемизинина.
Лейшманиоз вызван одним или более чем 20 видами простейших паразитов, которые принадлежат к роду Leishmania, и передается через укус самок москитов. Лейшманиоз является эндемическим заболеванием в примерно 88 странах, в том числе, во многих тропических и субтропических областях. Имеются четыре основные формы лейшманиоза. Висцеральный лейшманиоз, также называемый кала-азар, является наиболее серьезной формой и вызывается паразитом Leishmania donovani. Пациенты, у которых развивается висцеральный лейшманиоз, могут умереть в течение нескольких месяцев, если не получают лечения. Двумя основными способами лечения висцерального лейшманиоза являются производные сурьмы стибоглюконат натрия (Pentostam®) и меглумин антимониат (Glucantim®). Стибоглюконат натрия использовался в течение приблизительно 70 лет, и устойчивость к этому препарату является возрастающей проблемой. Кроме того, лечение является относительно долгим и болезненным и может вызывать нежелательные побочные эффекты.
Африканский трипаносомоз человека, известный также как сонная болезнь, является трансмиссивной паразитарной болезнью. Имеющие к нему отношение паразиты представляют собой протозоа, относящиеся к роду трипаносом (Trypanosoma). Они передаются людям от укусов мухи цеце (род Glossina),
- 2 031430 инфицированной от людей или животных, которые являются носителями этих патогенных паразитов человека.
Болезнь Шагаса (также называемая американский трипаносомоз) является еще одним паразитарным заболеванием человека, которое является эндемией среди бедных слоев населения на американском континенте. Заболевание вызывается простейшими паразитами Trypanosoma cruzi, которые передаются человеку через кровососущих насекомых. У человека заболевание происходит в два этапа: острая стадия, которая происходит вскоре после заражения, и хроническая стадия, которая может развиваться в течение многих лет. Хронические инфекции приводят к различным неврологическим расстройствам, в том числе, к слабоумию, повреждению сердечной мышцы, а иногда и к расширению пищеварительного тракта, а также к потере веса. В отсутствии лечения хроническое заболевание нередко приводит к смерти. Препаратами, доступными в настоящее время для лечения болезни Шагаса, являются нифуртимокс и бензнидазол. Тем не менее, проблемы с этим текущим лечением включают различные побочные эффекты, длительность лечения и необходимость медицинского наблюдения во время лечения. Кроме того, лечение является действительно эффективным только тогда, когда проводится во время острой стадии заболевания. Выработка резистентности к двум лекарствам первой линии уже произошла. В качестве препарата второй линии был предложен противогрибковый агент амфотерицин В, но этот препарат является дорогостоящим и относительно токсичными.
Токсоплазмоз представляет собой эндемическое заболевание во многих областях всего мира и может инфицировать большую часть взрослого населения. Однако его распространенность различается в разных странах. По оценкам, им инфицированы не менее 10% взрослого населения в северных странах с умеренным климатом, и более половины взрослого населения в средиземноморских и тропических странах. Toxoplasma gondii, возбудитель токсоплазмоза, является широко распространенным облигатным внутриклеточным простейшим, и считается наиболее частой причиной инфекционного ретинита у людей, который зависит от множества факторов, включая климат, соблюдение гигиены и пищевые обычаи. Период заболевания у обладающих здоровым иммунитетом взрослых, как правило, протекает бессимптомно и с самоизлечением. Как только произошло инфицирование, паразит образует скрытые кисты в сетчатке и в других органах тела, которые могут реактивироваться через годы после начального инфицирования, порождая острый ретинохороидит и образование новых ретинохороидальных повреждений [Arevalo et al., Ocular Toxoplasmosis in the developing world, Internat. Ophthal. Clin 2010].
Нейроцистицеркоз является наиболее распространенным паразитарным заболеванием ЦНС (заболеваемость ~2,5 млн по всему миру), вызванным личинками Taenia solium. Заболевание имеет длительную бессимптомную фазу у человека, характеризующуюся отсутствием определяемой воспалительной реакции в окружении паразита. Общий иммунный ответ в течение бессимптомного фазы является фенотипом Th2. Однако уничтожение личинок путем терапевтического лечения или с помощью обычного уничтожения паразитов вызывает сильную воспалительную реакцию, часто включающую хроническую гранулематозную реакцию и проявление типичных симптомов заболевания. Иммунный ответ в ЦНС симптоматического пациента состоит из открытого фенотипа Th1 или ответа смешанных Th1, Th2 и Th3, в зависимости от отсутствия или наличия гранулем. Избыточный воспалительный ответ, преобладающий в процессе симптоматической фазы в ЦНС, отвечает за тяжелую невропатологию и смертность, связанные с нейроцистицеркозом [Mishra et al., TLRs in CNS Parasitic infections, Curr Top Micro Imm 2009].
Сущность изобретения
Существует необходимость разработки ингибиторов нового класса I PI3 киназы, которые являются хорошими кандидатами лекарственных средств. В частности, соединения по изобретению должны очень хорошо связываться с PI3 киназами класса I, показывая при этом небольшое сродство к другим рецепторам и демонстрируя функциональную активность в качестве ингибиторов. Они должны хорошо всасываться из желудочно-кишечного тракта, быть метаболически стабильными и обладать благоприятными фармакокинетические свойства. При имении своей мишенью рецепторы в центральной нервной системе они должны свободно пересекать гематоэнцефалический барьер, и при имении избирательно своей мишенью рецепторы в периферической нервной системе они не должны пересекать гематоэнцефалический барьер.
Они должны быть нетоксичными и демонстрировать мало побочных эффектов. Кроме того, идеальный кандидат лекарственного средства должен существовать в физической форме, которая является стабильной, не гигроскопичной и из нее легко можно изготовить лекарственный препарат.
Соединения по изобретению демонстрируют некоторый уровень селективности в отношении различных паралогов PI3K α, β, γ и δ. В частности, демонстрируют некоторый уровень селективности для изоформ PI3IK5 и PI3Ky по сравнению с изоформой PI3Ka.
Соединения по настоящему изобретению, следовательно, вероятно могут быть использованы при лечении широкого спектра расстройств, в особенности, расстройств, включая, но этим не ограничиваясь, аутоиммунные заболевания, аутовоспалительные и воспалительные заболевания, аллергические заболевания, иммунопатологии, связанные с заболеванием или инфекцией, заболевания дыхательных путей, такие как астма и ХОБЛ, отторжение трансплантата, злокачественные новообразования, например, кро
- 3 031430 ветворного происхождения или солидные опухоли.
Различные варианты осуществления изобретения описаны далее.
В некоторых аспектах в данном документе предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, описываемого формулой (I) или ее подформулами, или его фармацевтически приемлемой соли и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится также к лечению состояний, заболеваний или расстройств, в которых одна или несколько функций В клеток, такие как продукция антител, презентация антигена, продукция цитокинов или лимфоидный органогенез являются анормальными или нежелательными, включая ревматоидный артрит и связанные заболевания (такие как анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, ювенильный артрит), пузырчатку обыкновенную и связанные заболевания, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, системную красную волчанку, рассеянный склероз, миастению гравис, синдром Шегрена (такой как первичный синдром Шегрена (pSS)), реакцию трансплантат против хозяина, аутоиммунную гемолитическую анемию, ANCAассоциированные васкулиты (такие как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемию, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, травмы ишемии/реперфузии, хроническую аутоиммунную крапивницу, аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическую астму, астму, связанную с аллергическим ринитом), астму, синдром Гудпасчера, различные типы гломерулонефритов, AMR (опосредованное антителами отторжение трансплантата), опосредованное В клетками гиперострое, острое и хроническое отторжение трансплантата и злокачественные новообразования кроветворного происхождения, включая, но этим не ограничиваясь, множественную миелому; острую гранулоцитную лейкемию; хроническую гранулоцитную лейкемию; лимфоцитарный лейкоз; миелоидный лейкоз; неходжкинскую лимфому; лимфомы; истинную полицитемию; эссенциальную тромбоцитемию; миелофиброз с миелоидной метаплазией и болезнь Вальденстрема, а также иммунопатологии, связанные с болезнью или инфекцией.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к замещенным соединениям хиназолин-4-она формулы (I) и/или
телями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой C4-C7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где C4-C7-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из Q-Q-алкила, гидрокси-А-^-алкила или C1-C4алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород;
- 4 031430
X представляет собой NH.
Если не указано иное, термин соединения по настоящему изобретению относится к соединениям формулы (I) и ее подформул, солям соединений, а также ко всем стереоизомерам (включая диастереоизомеры и энантиомеры).
Изобретение может быть более полно оценено при отсылке к последующему далее описанию, включая следующий словарь терминов и итоговые примеры. Как используется в настоящем документе, термины включающий в себя, содержащий и включающий используются в их полном неограничивающем смысле.
Таутомеры, такие как таутомерные формы пурина, могут быть представлены, например, во фрагменте R3 соединений формулы (I). Азотсодержащий гетероарильный остаток может образовывать Nоксиды, например, в положении R2 соединений формулы (I).
Если для соединений, солей и т.п. используется форма множественного числа, это следует понимать также как относящуюся к одному соединению, соли или т.п.
Общие термины, используемые в данном описании выше и ниже, предпочтительно, имеют в контексте данного описания следующие значения, если не указано иное.
Как используется в настоящем документе, термин С4-С7-гетероарил относится к 4-7-членному моноциклическому кольцу с максимумом насыщения, содержащему один атом азота, и, кроме того, 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S.
Применительно к R2, примеры С4-С7-гетероарила включают пиразол, имидазол, пиридин, пиримидин, изоксазол, тиазол, пиридазин, пиразин, оксазол, изотиазол, тиофен, фуран, триазол, тетразол.
Как используется в настоящем документе, все заместители указаны таким образом, чтобы указывать на последовательность функциональных групп (групп), из которых они состоят. Функциональные группы определены в данном документе выше.
В данном документе описаны различные варианты осуществления изобретения. Следует учитывать, что признаки, указанные для каждого варианта осуществления, могут быть объединены с другими указанными признаками с получением дополнительных вариантов осуществления настоящего изобретения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли, выбранному из соединения формулы (Ia)
где R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой С4-С7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где С4-С7-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из С1-С4-алкила, гидрокси-С1-С4-алкила или С1-С4алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород; и
R3 выбран из
- 5 031430
X представляет собой NH.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли, выбранному из соединения формулы (Ib)
телями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой С4-С7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где С4-С7-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из С1-С4-алкила, гидрокси-С1-С4-алкила или С1-С4алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород;
R7 выбран из метокси, гидрокси или фтора и
R3 выбран из
или
где R4 представляет собой амино,
R8 представляет собой метил, и
X представляет собой NH.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли, выбранному из соединения формулы (IA)
(IA) где R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой С4-С7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где С4-С7-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из С1-С4-алкила, гидрокси-С1-С4-алкила или С1-С4 алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород; -L-R3 выбран из
- 6 031430
где R7 выбран из метокси, гидрокси или фтора; и
R3 присоединен к L через трехвалентный атом азота.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли, выбранному из соединения формулы (IB)
телями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой C4-C7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где C4-C7-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из Ci-C.i-алкила, гидрокси-^^-алкила или C1-C4алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород;
-L-R3 выбран из
где R7 выбран из метокси, гидрокси или фтора; и
R3 присоединен к L через трехвалентный атом азота.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли, выбранному из соединения формулы (IC)
где R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой C4-C7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где C4-C7-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из CrQ-алкила, гидрокси-C1-C4-алкила или C1-C4 алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород; -L-R3 выбран из
где R7 выбран из метокси, гидрокси или фтора.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (IA), (IB) или (IC) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где -L-R3 выбран из
- 7 031430 где R7 выбран из метокси, гидроксила или фтора.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (IA), (IB) или (IC) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где -L-R3 выбран из
где R7 выбран из метокси, гидроксила или фтора.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ia), (Ib), (IA), (IB) или (IC) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где R2 выбран из пиразола, имидазола, пиридина, пиримидина, изоксазола или тиазола, которые являются незамещенными или замещены 1 заместителем, независимо выбранным из Q-Q-алкила, гидрокси-А^-алкила или C1-C4алкокси.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ia), (Ib), (IA), (IB) или (IC) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где R1 представляет собой фенил.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ia) или (Ib) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где R3 выбран из
; или где R4 представляет собой амино, R8 представляет собой метил и X выбран из NH. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ia) или (Ib) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где R3 выбран из
где R8 выбран из метила.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ia), (Ib), (IA), (IB) или (IC) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где R2 выбран из пиразола, имидазола, пиридина, пиримидина, изоксазола или тиазола, которые являются незамещенными или замещены 1 заместителем, независимо выбранным из Q-Q-алкила, гидрокси-А^-алкила или C1-C4алкокси.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (I'), (IA), (IB) или (IC) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1 или 2 заместителями, представляющими собой метил;
R2 выбран из пиразола, имидазола, пиридина, пиримидина, изоксазола или тиазола, которые являются незамещенными или замещены 1 заместителем, независимо выбранным из Q-Q-алкила, гидроксиQ-Q-алкила или Q-Q-алкокси;
-L-R3 выбран из
где R7 выбран из метокси, гидроксила или фтора;
R5 представляет собой водород и
R6 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (IA), (IB) или (IC) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
R1 представляет собой фенил;
R2 представляет собой Cs-CY-гетероарил, содержащий один атом азота, и, кроме того, 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где CY-Cy-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из Q-Q-алкила, гидрокси-ААалкила, C1-C4алкокси;
- 8 031430
-L-R3 выбран из
где R7 выбран из метокси, гидроксила или фтора;
R5 представляет собой водород и
R6 представляет собой водород.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (IA), (IB) или (IC) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
R1 представляет собой фенил;
R2 выбран из пиразола, имидазола, пиридина, пиримидина, изоксазола, тиазола, пиридазина, пиразина, оксазола, изотиазола, тиофена, фурана, триазола или тетразола, которые являются незамещенными или замещены 1-2 заместителями, независимо выбранными из C1-C4-алкила, гидрокси-C1-C4-алкила, C1C4-алкокси;
-L-R3 выбран из
где R7 выбран из метокси, гидроксила или фтора;
R5 представляет собой водород и
R6 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), выбранному из
2-амино-4-((2S, 4S)-2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
4-амино-6-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(2-метоксибЫazo1-5-ил)-4оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
- 9 031430
2-амино-4-((2S,4S)-4-метокси-2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-((2S,4S)-1-(2-амино-9Н-риг1п-6-ил)-4-метоксипирролидин2-ил)-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-З-фенилхиназолин-4(ЗН)-он, (S)-2-амино-4-метил-6-(2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4-оксо-З-(отолил)-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-1Н-имидазол-4-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила,
2-амино-4-((2 S, 4 S )-4-гидрокси-2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-метил-6-(2-(4-оксо-3-фенил-5-(пиримидин-5ил)-3, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(5-(5-метоксипиридин-З-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-метил-6-(2-(5-(2-метилпиримидин-5-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-метил-6-(2-(4-оксо-3-фенил-5-(пиридин-3-ил)
3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(5-(6-метоксипиридин-З-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(2-метоксипиримидин-5ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(2-метилпиримидин-5ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(4-оксо-3-фенил-5(пиридин-3-ил)-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(5-метоксипиридин-Зил) -4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(4-оксо-3-фенил-5(пиримидин-5-ил)-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6
- 10 031430 метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(4-метоксипиридин-3ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-1Нпиразол-4-ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S, 4S)-2-(5-(2-этоксипиримидин-5-ил)-6-фтор-4оксо-3-фенил-3, 4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S, 4S)-4-фтор-2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-имидазол-4-ил)4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(5-(2-этоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(3-гидроксипроп-1-ин-1-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, или
2-амино-4-((2S,4S)-4-метокси-2-(5-(2-метоксипиримидин-5ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила, и/или его фармацевтически приемлемой соли.
В другом варианте осуществления изобретения индивидуальные соединения в соответствии с настоящим изобретением представлены в разделе Примеры далее.
Следующие перечисленные варианты также являются вариантами осуществления настоящего изобретения.
Вариант осуществления 1. Соединение формулы (I)
или его фармацевтически приемлемая соль, где
R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой C4-C7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где C4-C7-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из Q-A-алкила, гидрокси-ААалкила или C1-C4алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород;
-L-R3 выбран из
где R7 выбран из метокси, гидрокси или фтора и R3 выбран из
- 11 031430
где R4 представляет собой амино,
R8 представляет собой метил и
X представляет собой NH.
Вариант осуществления 2. Соединение в соответствии с вариантом осуществления 1 или его фар-
телями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой C4-C7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где Q-Cy-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из Q-Q-алкила, гидрокси-C1-C4-алкила или C1-C4алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород и
R3 выбран из
где R4 представляет собой амино,
R8 представляет собой метил и
X представляет собой NH.
Вариант осуществления 3. Соединение в соответствии с вариантом осуществления 1 или его фармацевтически приемлемая соль формулы (Ib)
где R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой метил;
R2 представляет собой Q-Cy-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где Q-Cy-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из Q-Q-алкила, гидрокси-^-^-алкила или C1-C4 алкокси;
R5 и R6 представляют собой водород;
R7 выбран из метокси, гидрокси или фтора и R3 выбран из
- 12 031430
или
где R4 представляет собой амино,
R8 представляет собой метил и
X представляет собой NH.
Вариант осуществления 4. Соединение в соответствии с любым из вариантов осуществлений от 1 до 3 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой соединение формулы (IA), (IB) или (IC)
или
Вариант осуществления 5. Соединение в соответствии с любым из вариантов осуществлений от 1 до 4 или его фармацевтически приемлемая соль, где R3 выбран из
Вариант осуществления 6. Соединение в соответствии с любым из вариантов осуществлений от 1 до 5 или его фармацевтически приемлемая соль, где R2 представляет собой C5-C6-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где С5-С6-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из СгС4-алкила, гидрокси-СгС4-алкила или СгС4-алкокси.
- 13 031430
Вариант осуществления 7. Соединение в соответствии с вариантом осуществления 1, выбранное из
2-амино-4-( (2S, 4S)-2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4-оксо-Зфенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-Зфенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-Зфенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин- 14 031430
1-ил) -6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
4-амино-6-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин·
1- ил)пиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(2-метоксибЫazo1-5-ил)-4оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1 ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-метокси-2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-((2S,4S)-1-(2-амино-9Н-риг1п-6-ил)-4-метоксипирролидин-
2- ил)-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-З-фенилхиназолин-4(ЗН)-он, (S)-2-амино-4-метил-6-(2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4-оксо-З-(о· толил)-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-1Н-имидазол-4-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-метил-6-(2-(4-оксо-3-фенил-5-(пиримидин-5ил)-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(5-(5-метоксипиридин-З-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-метил-6-(2-(5-(2-метилпиримидин-5-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-метил-6-(2-(4-оксо-3-фенил-5-(пиридин-3-ил)
3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5- 15 031430 карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(5-(6-метоксипиридин-З-ил)-4-оксо-Зфенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(2-метоксипиримидин-5ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(2-метилпиримидин-5ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(4-оксо-3-фенил-5(пиридин-3-ил)-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(5-метоксипиридин-Зил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(4-оксо-3-фенил-5(пиримидин-5-ил)-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(4-метоксипиридин-Зил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-1Нпиразол-4-ил)-4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-2-(5-(2-этоксипиримидин-5-ил)-6-фтор-4оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-4-фтор-2-(5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)4-оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила,
2-амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-имидазол-4-ил)4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-2-амино-4-(2-(5-(2-этоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрила, (S)-4-амино-6-(2-(5-(3-гидроксипроп-1-ин-1-ил)-4-оксо-Зфенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5карбонитрила, или
2-амино-4-((2S,4S)-4-метокси-2-(5-(2-метоксипиримидин-5ил)-4-оксо-З-фенил-З, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)6-метилпиримидин-5-карбонитрила, или его фармацевтически приемлемой соли.
Вариант осуществления 8. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения в соответствии с любым из вариантов осуществлений 1-7 или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей.
Вариант осуществления 9. Способ модулирования активности PI3 киназ класса I у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения в соответствии с любым из вариантов осуществлений 1-7 или его фармацевтически приемлемую соль.
Вариант осуществления 10. Способ лечения расстройства или заболевания, выбранных из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), эндемичной разновидности листовидной (Бра
- 16 031430 зильской) пузырчатки (Fogo selvagem), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (АНА), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (МС), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS), АЫСА-ассоциированных васкулитов, криоглобулинемии, хронической аутоиммунной крапивницы (САИ), аллергии (атопического дерматита, контактного дерматита, аллергического ринита), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата, злокачественных новообразований кроветворного происхождения, тяжелой и церебральной малярии, трипаносомоза, лейшманиоза, токсоплазмоза и нейроцистицеркоза, заключающийся во введении субъекту терапевтически эффективного количества соединения в соответствии с любым из вариантов осуществлений 1-7 или его фармацевтически приемлемой соли.
Вариант осуществления 11. Соединение в соответствии с любым из вариантов осуществлений от 1 до 8 или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении расстройства или заболевания, выбранных из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), эндемичной разновидности листовидной (Бразильской) пузырчатки (Fogo selvagem), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (AHA), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (МС), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS), ANCA-ассоциированных васкулитов, криоглобулинемии, хронической аутоиммунной крапивницы (CAU), аллергии (атопического дерматита, контактного дерматита, аллергического ринита), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата, злокачественных новообразований кроветворного происхождения, тяжелой и церебральной малярии, трипаносомоза, лейшманиоза, токсоплазмоза и нейроцистицеркоза.
Вариант осуществления 12. Применение соединения в соответствии с любым из вариантов осуществлений 1-7 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения расстройства или заболевания, выбранных из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), эндемичной разновидности листовидной (Бразильской) пузырчатки (Fogo selvagem), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (AHA), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (МС), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS), ANGA- ассоциированных васкулитов, криоглобулинемии, хронической аутоиммунной крапивницы (CAU), аллергии (атопического дерматита, контактного дерматита, аллергического ринита), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата, злокачественных новообразований кроветворного происхождения, тяжелой и церебральной малярии, трипаносомоза, лейшманиоза, токсоплазмоза и нейроцистицеркоза.
В зависимости от выбора исходных материалов и способов соединения могут быть представлены в виде одного из возможных изомеров или в виде их смесей, например в виде оптически чистых изомеров или в виде смесей изомеров, таких как смеси рацематов и диастереоизомеров, в зависимости от количества асимметрических атомов углерода. Полагается, что настоящее изобретение включает все такие как возможные изомеры, включая рацемические смеси, диастереомерные смеси и оптически чистые формы. Оптически активные (R)- и (Ь)-изомеры могут быть получены с использованием хиральных синтонов или хиральных реагентов, или разделены с использованием общеизвестных методов. Если соединение содержит двойную связь, заместитель может быть Е- или Z-конфигурации. Если соединение содержит дизамещенный циклоалкил, циклоалкильный заместитель может быть цис- или транс-конфигурации. Предполагается также включение всех таутомерных форм.
Как используется в настоящем документе, термины соль или соли относятся к солям добавления кислот или добавления оснований соединений по изобретению. Термин соли включает, в частности, фармацевтически приемлемые соли. Термин фармацевтически приемлемые соли относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений по данному изобретению и которые обычно не являются биологически или иным образом нежелательными. Во многих случаях соединения по настоящему изобретению способны образовывать соли кислот и/или оснований ввиду наличия амино и/или карбоксильных групп или подобных им групп.
Фармацевтически приемлемые соли добавления кислот могут быть образованы с неорганическими кислотами и органическими кислотами.
Неорганические кислоты, из которых могут быть образованы соли, включают, например, хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п.
Органические кислоты, из которых могут быть образованы соли, включают, например, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, щавелевую кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, сульфосалициловую кислоту и т.п.
Фармацевтически приемлемые соли добавления оснований могут быть образованы с неорганическими и органическими основаниями.
- 17 031430
Неорганические основания, из которых могут быть образованы соли, включают, например, соли аммония и металлов групп I-XII из периодической таблицы. В некоторых вариантах осуществления соли являются солями натрия, калия, аммония, кальция, магния, железа, серебра, цинка и меди; в особенности, подходящие соли включают соли аммония, калия, натрия, кальция и магния.
Органического основания, из которых могут быть образованы соли, включают, например, первич ные, вторичные и третичные амины, замещенные амины, включая природные замещенные амины, циклические амины, основные ионообменные смолы и т.п. Некоторые органические амины включают изопропиламин, бензатин, холин, диэтаноламин, диэтиламин, лизин, меглумин, пиперазин и трометамин.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) в такой солевой форме как ацетат, аскорбат, адипат, аспартат, бензоат, безилат, бромид/гидробромид, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, камфорсульфонат, капрат, хлорид/гидрохлорид, хлортеофиллонат, цитрат, этандисульфонат, фумарат, глюцептат, глюконат, глюкуронат, глутамат, глутарат, гликолят, гиппурат, гидройодид/йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, манделат, мезилат, метилсульфат, мукат, нафтоат, напсилат, никотинат, нитрат, октадеканоат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, фосфат/гидрофосфат/дигидрофосфат, полигалактуронат, пропионат, себацат, стеарат, сукцинат, сульфосалицилат, сульфат, тартрат, тозилат, трифенатат, трифторацетат или ксинафоат.
Любая формула, представленная в данном документе, также предназначена для представления немеченых форм, а также меченных изотопами форм соединений. Изотопно меченные соединения имеют структуры, изображенные приведенными в данном документе формулами, за исключением того, что один или более атомов заменены атомами, имеющими выбранную атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые могут быть введены в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как H, H, С, С, С, N, F, P, 32P, 35S, 36С1, 123I, 124I, 125I соответственно. Настоящее изобретение включает различные изотопно мечен ные соединения, как указано выше, например, такие, в которых присутствуют радиоактивные изотопы, такие как 3Н и 14С, или такие, в которых присутствуют нерадиоактивные изотопы, такие как 2Н и 13С. Такие изотопно меченные соединения могут быть использованы при исследованиях метаболизма (с 14С), исследованиях кинетики реакций (например, с 2Н или 3Н), в методах обнаружения или визуализации, таких как позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), включая анализ распределения лекарственного средства или субстрата в ткани, или в радиационной терапии пациентов. В частности, 18F или меченные соединения могут быть особенно желательными при исследованиях ПЭТ или ОФЭКТ. Изотопно-меченные соединения формулы (I) обычно могут быть получены общеизвестными способами, известными специалистам в данной области, или способами, аналогичными тем, которые описаны в прилагаемых примерах и приготовления с использо ванием подходящего изотопно-меченного реагента вместо немеченого реагента, используемого до этого.
Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, в частности, дейтерием (т.е. 2Н или D), может давать определенные терапевтические преимущества в результате более высокой метаболической стабильности, например, повышенное in vivo время полужизни или уменьшение требуемого дозирования или улучшенный терапевтический индекс. Понятно, что дейтерий в данном контексте рассматривается как заместитель в соединении формулы (I). Концентрация такого тяжелого изотопа, в частности, дейтерия, может быть определена с помощью коэффициента изотопного обогащения. Термин коэффициент изотопного обогащения, используемый в настоящем документе, означает соотношение между содержанием изотопа и содержанием конкретного изотопа в природе. Если заместитель в соединении по настоящему изобретению обозначается дейтерий, такое соединение имеет коэффициент изотопного обогащения для каждого указанного атома дейтерия по меньшей мере 3500 (52,5% включения дейтерия на каждый указанный атом дейтерия), по меньшей мере 4000 (60% включения дейтерия), по меньшей мере 4500 (67,5% включения дейтерия), по меньшей мере 5000 (75% включения дейтерия), по меньшей мере 5500 (82,5% включения дейтерия), по меньшей мере 6000 (90% включения дейтерия), по крайней мере 6333,3 (95% включения дейтерия), по крайней мере 6466,7 (97% включения дейтерия), по меньшей мере 6600 (99% включения дейтерия) или по меньшей мере 6633,3 (99,5% включения дейтерия).
Фармацевтически приемлемая сольваты в соответствии с настоящим изобретением включают такие, где растворитель для кристаллизации может быть изотопно замещенным, например, D2O, й6-ацетон. ДМСО-а6.
Соединения по изобретению, т.е. соединения формулы (I), которые содержат группы, способные действовать в качестве доноров и/или акцепторов для водородных связей, могут образовывать сокристаллы с подходящими сокристаллическими формами. Указанные сокристаллы могут быть получены исходя из соединений формулы (I) известными способами образования сокристаллов. Такие способы включают растирание, нагрев, совместную сублимацию, совместное плавление или контактирование в растворе соединений формулы (I) с сокристаллической формой в условиях кристаллизации и выделения сокристаллов, полученных таким образом. Подходящие сокристаллические формы включают такие, которые описаны в WO 2004/078163. Таким образом, настоящее изобретение, кроме того, относится к сокристаллам, содержащим соединение формулы (I).
Как используется в настоящем документе, термин фармацевтически приемлемый носитель вклю- 18 031430 чает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, консерванты (например, антибактериальные средства, противогрибковые средства), изотонические агенты, замедляющие абсорбцию агенты, соли, консерванты, стабилизаторы лекарственных средств, связующие вещества, наполнители, разрыхлители, смазывающие вещества, подсластители, ароматизаторы, красители и т.п., а также их комбинации, что должно быть известно специалистам в данной области (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, p. 1289-1329). 3a исключением случаев, когда какой-либо обычный носитель не совместим с активным ингредиентом, предполагается его использование в терапевтических или фармацевтических композициях.
Термин терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению относится к такому количеству соединения по настоящему изобретению, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ у субъекта, например, уменьшение или ингибирование активности фермента или белка, или улучшение симптомов, облегчение симптомов, замедление или задержки развития болезни, или предотвращение заболевания и т.д. В одном не ограничивающем варианте осуществления изобретения термин терапевтически эффективное количество относится к такому количеству соединения по настоящему изобретению, которое при введении субъекту является эффективным для (1), по меньшей мере, частичного смягчения, ингибирования, предотвращения и/или облегчения состояния, или расстройства или заболевания (i), опосредованных PI3 киназами класса I, или (ii), связанных с PI3 киназами класса I, или (iii) характеризуемых активностью (нормальной или аномальной) PI3 киназ класса I, или (2) уменьшения или ингибирования активности PI3 киназ класса I, или (3) уменьшения или ингибирования экспрессии PI3 киназ класса I. В другом неограничивающем варианте осуществления изобретения термин терапевтически эффективное количество относится к такому количеству соединения по настоящему изобретению, которое при введении в клетку, или ткань, или неклеточный биологический материал или среду, является эффективным, по меньшей мере, для частично снижения или ингибирования активности PI3 киназ класса I; или, по крайней мере, частично снижения или ингибирования экспрессии PI3 киназ класса I. Значение термина терапевтически эффективное количество, как показано в приведенном выше варианте для PI3 киназ класса I также применимо в том же значении к любым другим соответствующим белкам/пептидам/ферментам.
Как используется в настоящем документе, термин субъект относится к животному. Обычно животным является млекопитающее. Термин субъект также относится, например, к приматам (например, людям, мужчинам или женщинам), коровам, овцам, козам, лошадям, собакам, кошкам, кроликам, крысам, мышам, рыбам, птицам и т.п. В некоторых вариантах осуществления субъектом является примат. В других вариантах осуществления субъектом является человек.
Как используется в настоящем документе, термин ингибировать, ингибирование или ингибируя означает снижение или подавление данного состояния, симптома или расстройства, или заболевания, или значительное снижение изначального уровня активности биологической активности или процесса.
Как используется в настоящем документе, термин лечить, лечение или подвергать лечению какое-либо заболевание или расстройство относится в одном варианте осуществления к остановке заболевания или расстройства (т.е. замедлению, или остановке, или ослаблению развития заболевания, или, по крайней мере одного из их клинических симптомов). В другом варианте осуществления лечить, лечение или подвергать лечению относится к облегчению или улучшению по меньшей мере одного физического параметра, в том числе тех, которые не могут быть различимы пациентом. В другом варианте осуществления лечить, лечение или подвергать лечению относится к модулированию заболевания или расстройства, либо физически (например, стабилизация заметного симптома), физиологически (например, стабилизация физического параметра) или и то и другое. В еще одном вариант осуществления лечить, лечение или подвергать лечению относится к предотвращению или задержке начала или развития или прогрессирования заболевания или расстройства.
Как используется в настоящем документе, субъект нуждается в лечении, если для такого субъекта была бы польза биологическая, медицинская или в качестве жизни от такого лечения.
Как используется в настоящем документе, при упоминании термина в единственном числе и аналогичных терминов, используемых в контексте настоящего изобретения (особенно в контексте требований) должны толковаться как охватывающие как единственное, так и множественное число, если иное не указано в данном документе или явно не опровергается контекстом.
Все способы, описанные в настоящем документе, могут быть осуществлены в любом подходящем порядке, если не указано иное или иным образом явно не противоречит контексту. Использование любых и всех примеров, или языка примеров (например, такой как), предусмотренных в настоящем документе, предназначены только для лучшего освещения изобретения и не накладывают ограничений на объем изобретения, заявленного в формуле изобретения.
Асимметричный атом (например, углерода или т.п.) соединения(ий) по настоящему изобретению может быть представлен рацемически или энантиомерно обогащенным, например, (R)-, (S)- или (R,S)конфигурации. В некоторых вариантах осуществления каждый асимметричный атом имеет по меньшей мере 50%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 60%-ный энантиомерный избыток, по меньшей
- 19 031430 мере 70%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 80%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 90%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 95%-ный энантиомерный избыток или по меньшей мере 99%-ный энантиомерный избыток в (R)- или ^-конфигурации. Заместители на атомах с ненасыщенными двойными связями, если возможно, может быть в цис- (Z)- или транс-(Е)-форме.
Соответственно, как используется в настоящем документе, соединение по настоящему изобретению может быть в виде одного из возможных изомеров, ротамеров, атропоизомеров, таутомеров или их смесей, например, в виде по существу чистых геометрических (цис или транс) изомеров, диастереоизомеров, оптических изомеров (антиподов), рацематов или их смесей. В некоторых соединениях формулы (I) могут быть представлены диастереоизомерные атропоизомеры, например, по отношению к затрудненному вращению вокруг связи N-R1.
Любые полученные смеси изомеров могут быть разделены на основе физико-химических различий их составных частей, на чистые или практически чистые геометрические или оптические изомеры, диастереоизомеры, рацематы, например, с помощью хроматографии и/или фракционной кристаллизации.
Полученные рацематы целевых продуктов или промежуточных соединений могут быть разделены на оптические антиподы известными способами, например, путем разделения диастереомерных солей, образованных с оптически активной кислотой или основанием, и высвобождением оптически активного кислотного или основного соединения. В частности, основная группа, таким образом, может быть использована для разделения соединений по настоящему изобретению на их оптические антиподы, например, путем фракционной кристаллизацией соли, образованной с оптически активной кислотой, например, с винной кислотой, дибензоилвинной кислотой, диацетилвинной кислотой, ди-О,О'-п-толуолвинной кислотой, миндальной кислотой, яблочной кислотой или камфор-10-сульфоновой кислотой. Рацемические продукты также могут быть разделены с помощью хиральной хроматографии, например, жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД) с использованием хирального адсорбента.
Кроме того, соединения по настоящему изобретению, включая их соли, также могут быть получены в виде их гидратов, или включают другие растворители, используемые для их кристаллизации. Соединения по настоящему изобретению могут по сути или по форме образовывать сольваты с фармацевтически приемлемыми растворителями (включая воду); предполагается, что изобретение охватывает их обе, сольватированные и несольватированные формы. Термин сольват относится к молекулярному комплексному соединению по настоящему изобретению (включая его фармацевтически приемлемые соли) с одним или несколькими молекулами растворителя. Такие молекулы растворителя являются широко известными в фармацевтической области, которые, как известно, являются безвредными для реципиента, например, вода, этанол и т.п. Термин гидрат относится к комплексу, где молекулой растворителем является вода.
Соединения по настоящему изобретению, включая их соли, гидраты и сольваты, могут по сути или по форме образовывать полиморфы.
Обычно, соединения формулы (I) могут быть получены в соответствии с способами, представленными далее.
- 20 031430
Схема А
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (I) в соответствии со стадиями а, а', b1, b1', c1, c1', d1 и d1' (схема А), где а', b1', c1' и d1' обозначают дополнительные стадии изменения функциональных групп или стадии введения функциональных групп, как необходимо.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (I) в соответствии со стадиями а, а', b2, b2', c2, c2', d1 и d1' (схема А), где а', b2', c2' и d1' обозначают дополнительные стадии изменения функциональных групп или стадии введения функциональных групп, как необходимо.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (I) в соответствии со стадиями a, a', b2, b2', c3, c3', d2 и d2' (схема А), где а', b2', c3' и d2' обозначают дополнительные стадии изменения функциональных групп или стадии введения функциональных групп, как необходимо.
В одном варианте осуществления соединение формулы (I) получают через стадию d1 реакции конденсации соединения формулы (Е)
R2' о
где R1 представляет собой R1, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R1 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
- 21 031430
R2 представляет собой R2, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R2 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R5 представляет собой R5, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R5 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R6 представляет собой R6, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R6 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп; и
L' представляет собой L, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в L посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
с соединением формулы R3'-Hal, где R3 представляет собой R3, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R3 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп; и
Hal представляет собой галоген, такой как хлор, бром или йод;
где в одном варианте осуществления реакцию конденсации проводят в присутствии аминового основания, такого как М^диизопропилэтиламин. Реакцию проводят в присутствии органического растворителя, такого как спирт, при микроволновом нагреве в течение от 30 мин до 8 ч или при обычном нагревании на масляной бане в течение от 30 мин до 6 дней при температуре в интервале 120-160°C.
Альтернативно, реакцию проводят в обычных условиях реакции Бухвальда-Хартвига с использованием подходящей комбинации Pd катализатора/лиганда, такой как Pd2(dba)3/2(дициклогексилфосфино)бифенил или Pd2(dba)3/2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил, Pd2(dba)3/XPhos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd (OAc)2/(rac)-BINAP или бис-(три-трет-бутилфосфин)палладий, и подходящего основания, такого как NaOtBu, Cs2CO3 или K3PO4, и органического растворителя, такого как толуол, диоксан или ТГФ. Реакционную смесь перемешивают при температуре приблизительно 60140°C, например, при температуре от 100 до 110°C и реакцию, необязательно, проводят в микроволновом реакторе. Реакцию, предпочтительно, проводят в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон; необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп d1'.
Соединение формулы (Е) получают посредством стадии c1 удаления защитной группы PG у соединения формулы (D)
R2' О
где PG представляет собой подходящую защитную группу, такую как группа Boc, и другие заместители имеют значения, определенные выше;
где в одном варианте осуществления, когда PG является группой Boc, реакцию удаления защитной группы осуществляют в органическом растворителе, таком как ТГФ или DCM, в присутствии органической кислоты, такой как трифторуксусная кислота, при комнатной температуре в течение 1-18 ч; или в присутствии неорганической кислоты, такой как HCl или H3PO4, необязательно, в присутствии воды при комнатной температуре в течение от 24 ч до 6 дней;
необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп c1'.
Соединение формулы (D) получают посредством стадии b1 конденсации соединения формулы (С)
где PG представляет собой подходящую защитную группу, такую как группа Boc, Hal1 представляет собой галоген, такой как бром или хлор или псевдогалоген, такой как трифлат, и другие заместители имеют значения, определенные выше;
с соединением формулы R2 -Y, где, когда R2 представляет собой C4-C7-гетероарил, как определено выше в качестве R2 для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в C4-C7-гетероарил посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп, Y представляет собой остаток бороновой кислоты или циклический или ациклический бороланил, такой как
- 22 031430
B(GE)2 или пинаколато-борон; или алкилстаннил, такой как трибутилстаннил, где, когда R2 представляет собой ААалкинил, как определено выше в качестве R2 для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в C^Cs-алкинил посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп, Y представляет собой Н (для концевого алкина) или Y представляет собой алкилстаннил (не концевой алкин), в обычных реакционных условиях реакции Сузуки (Y представляет собой остаток бороновой кислоты или циклический или ациклический боронатный эфир), реакции Стилля (Y представляет собой алкилстаннил) или конденсации Соногаширы (Y представляет собой Н концевого алкина), типичные условия реакции известны в данной области и могут использоваться в настоящем способе.
Типичные условия реакции Сузуки включают, например, наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, Pd(PPh3)4, или катализатор Pd(II), такой как PdCl2(PPh3)2; Pd(OAc)2, необязательно, в присутствии фосфинового лиганда, такого как BrettPhos; или Brettphos palladacycle, необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как основание, например, NaOEt, твердый или водный раствор Na2CO3, необязательно, в присутствии одного или нескольких разбавителей, в особенности, аполярных растворителей, например, бензола или толуола, или полярных растворителей, например, ацетонитрила или Ы-метил-2-пирролидона. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 100-180°C, например, в микроволновой печи. Реакция может быть осуществлена в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон.
Типичные условия для осуществления реакции Стилля включают, например, наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, бис-(три-трет-бутилфосфин)палладий или Pd2(dba)3, необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как хлорид лития, в присутствии растворителя, например, диоксана или ДМФ. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 80-160°C, обычно 80-100°C. Реакцию проводят в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон.
Типичные условия для осуществления конденсации Соногаширы включают наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, Pd(PPh3)4 или Pd2(dba)3 и соль медиД), такого как галогенид меди, такого как CuI, необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как основание, обычно аминовое основание, такое как диэтиламин или триэтиламин или карбонат калия или карбонат цезия, необязательно, в присутствии растворителя, например, ДМФ или эфирного растворителя. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно от комнатной температуры до 130°C, обычно 80°C. Реакция может быть осуществлена в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон.
После стадии b1 необязательно следуют стадии изменения функциональных групп или стадии введения функциональных групп b1'.
Соединение формулы (С) получают посредством стадии а взаимодействия соединения формулы (А)
Hal1
где заместители имеют значения, определенные выше;
с соединением формулы (B) соон
V
L PG (В) где заместители имеют значения, определенные выше;
с последующим взаимодействием с соединением формулы R1 -NH2, где R1 имеют значения, определенные выше;
где в одном варианте осуществления стадию а осуществляют в присутствии пиридина и трифенилфосфита при повышенной температуры, такой как 50-100°C, обычно 70°C, в течение от 0,5 до 30 ч, например в течение от 2 до 18 ч;
необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп а'.
В другом варианте осуществления соединение формулы (I) получают через стадию d1 реакции конденсации соединения формулы (Е)
R2' О
где R1 представляет собой R1, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель,
- 23 031430 который может быть преобразован в R1 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R2 представляет собой R2, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R2 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R5 представляет собой R5, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R5 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R6 представляет собой R6, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R6 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп; и
L' представляет собой L, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в L посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
с соединением формулы R3 -Hal, где R3 представляет собой R3, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R3 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп; и
Hal представляет собой галоген, такой как хлор, бром или йод;
где в одном варианте осуществления реакцию конденсации проводят в присутствии аминового основания, такого как НН-диизопропилэтиламин. Реакцию проводят в присутствии органического растворителя, такого как спирт, при микроволновом нагреве или при обычном нагревании на масляной бане при температуре в интервале от 120-160°C в течение от 30 мин до 6 дней.
Альтернативно, реакцию проводят в обычных условиях реакции Бухвальда-Хартвига с использованием подходящей комбинации Pd катализатора/лиганда, такой как Pd2(dba)3/2(дициклогексилфосфино)бифенил или Pd2(dba)3/2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-бифенил, Pd2(dba)3/XPhos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd (OAc)2/(rac)-BINAP или бис-(три-трет-бутилфосфин)палладий, и подходящего основания, такого как NaOtBu, Cs2CO3 или K3PO4, и органического растворителя, такого как толуол, диоксан или ТГФ. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 60140°C, например, при температуре от 100 до 110°C, и реакцию необязательно проводят в микроволновом реакторе. Реакцию, предпочтительно, проводят в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон.
Необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп d1'.
Соединение формулы (Е) получают посредством стадии с2 конденсации соединения формулы (F)
Hal1 О
(F) п где Hal1 представляет собой галоген, такой как бром или хлор или псевдогалоген, такой как трифлат, и другие заместители имеют значения, определенные выше;
с соединением формулы R2 -Y, где, когда R2 представляет собой C4-C7-гетероарил, как определено выше в качестве R2 для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в C4-C7-гетероарил, посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп, Y представляет собой бороновую кислоту остаток или циклический или ациклический бороланил, такой как В(ОН)2 или пинаколато-борон; или алкилстаннил, такой как трибутилстаннил, где, когда R2 представляет собой C2-C5-алкинил, как определено выше в качестве R2 для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в C2-C5-алкинил, посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп, Y представляет собой Н (для концевого алкина) или Y представляет собой алкилстаннил (не концевой алкин), в обычных реакционных условиях реакции Сузуки (Y представляет собой остаток бороновой кислоты или циклический или ациклический бороланил), реакции Стилля (Y представляет собой алкилстаннил) или конденсации Соногаширы (Y представляет собой Н концевого алкина), типичные условия реакции известны в данной области и могут использоваться в настоящем способе. Типичные условия реакции Сузуки включают, например, наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, Pd(PPh3)4, или катализатор Pd(II), такой как PdCl2(PPh3)2; Pd(OAc)2, необязательно, в присутствии фосфинового лиганда, такого как BrettPhos; или Brettphos palladacycle, необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как основание, например, NaOEt, твердый или водный раствор Na2CO3, необязательно, в присутствии одного или нескольких разбавителей, в особенности, полярных растворителей, например, бензола, толуола, ацетонитрила или N-метил-2
- 24 031430 пирролидона. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 100-180°C, например, в микроволновой печи. Реакция может быть осуществлена в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон. Типичные условия для осуществления реакции Стилля включают, например, наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, бис-(три-трет-бутилфосфин)палладий или Pd2(dba)3, необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как хлорид лития, в присутствии растворителя, например, ДМФ. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 100-160°C. Реакцию проводят в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон. Типичные условия для осуществления конденсации Соногаширы включают наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, Pd(PPh3)4 или Pd2(dba)3 и соли меди (I), такой как галогенид меди, такого как CuI, необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как основание, обычно аминовое основание, такое как диэтиламин или триэтиламин или карбонат калия или карбонат цезия, необязательно, в присутствии растворителя, например, ДМФ или эфирного растворителя. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 60-130°C. Реакция может быть осуществлена в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон.
После стадии с2 необязательно осуществляют стадии изменения функциональных групп или стадии введения функциональных групп с2'.
Соединение формулы (F) получают посредством стадии b2 удаления защитной группы PG у соединения формулы (С)
где PG представляет собой подходящую защитную группу, такую как группа Boc, и другие замес тители имеют значения, определенные выше;
где в одном варианте осуществления, когда PG является группой Boc, реакцию удаления защитной группы осуществляют в органическом растворителе, таком как ТГФ или DCM, в присутствии органической кислоты, такой как трифторуксусная кислота, или в присутствии неорганической кислоты, такой как HCl или H3PO4, необязательно, в присутствии воды. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение приблизительно 60-140°C, например, при температуре от 100 до 110°C;
необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп b2'.
Соединение формулы (С) получают посредством стадии а взаимодействия соединения формулы (А)
где заместители имеют значения, определенные выше;
с соединением формулы (B) соон
I
L
PG (В) где заместители имеют значения, определенные выше;
с последующим взаимодействием с соединеним формулы R1 -NH2, где R1 имеют значения, определенные выше;
где в одном варианте осуществления стадию а осуществляют в присутствии пиридина и трифенилфосфита при повышенной температуры, такой как 50-100°C, в течение от 0,5 до 30 ч, например, в течение от 2 до 18 ч; необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп а'.
В другом варианте осуществления соединение формулы (I) получают через стадию d2 реакции конденсации соединения формулы (G)
Hal1 О
где Hal1 представляет собой галоген, такой как бром или хлор или псевдогалоген, такой как трифлат;
R1 представляет собой R1, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, ко
- 25 031430 торый может быть преобразован в R1 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R5 представляет собой R5, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R5 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R6 представляет собой R6, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R6 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп; и
L' представляет собой L, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в L посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
с соединением формулы R2 -Y, где, когда R2 представляет собой C4-C7-гетероарил, как определено выше в качестве R2 для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в C4-C7-гетероарил, посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп, Y представляет собой бороновую кислоту остаток или циклический или ациклический бороланил, такой как B^^2 или пинаколато-борон; или алкилстаннил, такой как трибутилстаннил, где, когда R2 представляет собой Q-Q-алкинил, как определено выше в качестве R2 для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в C^Q-алкинил, посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп, Y представляет собой Н (для концевого алкина) или Y представляет собой алкилстаннил (не концевой алкин), в обычных реакционных условиях реакции Сузуки (Y представляет собой остаток бороновой кислоты или циклический или ациклический бороланил), реакции Стилля (Y представляет собой алкилстаннил) или конденсации Соногаширы (Y представляет собой Н концевого алкина), типичные условия реакции известны в данной области и могут использоваться в настоящем способе. Типичные условия реакции Сузуки включают, например, наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, Pd(PPh3)4, или катализатор Pd(II), такой как PdCl2(PPh3)2; Pd(OAc)2 необязательно, в присутствии фосфинового лиганда, такого как BrettPhos; или Brettphos palladacycle, необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как основание, например, NaOEt, твердый или водный раствор Na2CO3, необязательно, в присутствии одного или нескольких разбавителей, в особенности, полярных растворителей, например, бензола, толуола, ацетонитрила или №метил-2пирролидона. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 100-180°C, например, в микроволновой печи. Реакция может быть осуществлена в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон. Типичные условия для осуществления реакции Стилля включают, например, наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, бис-(три-трет-бутилфосфин)палладий или Pd2(dba)3/ необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как хлорид лития, в присутствии растворителя, например, ДМФ. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 100-160°C. Реакцию проводят в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон. Типичные условия для осуществления конденсации Соногаширы включают наличие палладиевого катализатора, такого как катализатор Pd(0), например, Pd(PPh3)4 или Pd2(dba)3 и соли медир), такойо как галогенид меди, такого как CuI, необязательно, в присутствии одного или нескольких агентов, способствующих реакции, таких как основание, обычно аминовое основание, такое как диэтиламин или триэтиламин или карбонат калия или карбонат цезия, необязательно, в присутствии растворителя, например, ДМФ или эфирного растворителя. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 60-130°C. Реакция может быть осуществлена в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон.
После стадии с2 необязательно осуществляют стадии изменения функциональных групп или стадии введения функциональных групп d2'.
Соединение формулы (G) получают посредством стадии c3 конденсации исходя из соединения формулы (F)
Hal1 О
где заместители имеют значения, определенные выше;
с соединением формулы R3 -Hal, где R3 представляет собой R3, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R3 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп; и
Hal представляет собой галоген, такой как хлор, бром или йод;
- 26 031430 где в одном варианте осуществления реакцию конденсации проводят в присутствии аминового основания, такого как ^^диизопропилэтиламин. Реакцию проводят в присутствии органического растворителя, такого как спирт, при микроволновом нагреве или при обычном нагревании на масляной бане при температуре в интервале от 120-160°C в течение от 30 мин до 6 дней.
Альтернативно, реакцию проводят в обычных условиях реакции Бухвальда-Хартвига с использованием подходящей комбинации Pd катализатора/лиганда, такой как Pd2(dba)3/2(дициклогексилфосфино)бифенил или Pd2(dba)3/2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-бифенил, Pd2(dba)3/XPhos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd (OAc)2/(rac)-BINAP или бис-(три-трет-бутилфосфин)палладий, и подходящего основания, такого как NaOtBu, Cs2CO3 или K3PO4, и органического растворителя, такого как толуол, диоксан или ТГФ. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 60140°C, например, при температуре от 100 до 110°C, и реакцию необязательно проводят в микроволновом реакторе. Реакцию предпочтительно проводят в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон; необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп c3'.
Соединение формулы (F) получают посредством стадии b2 удаления защитной группы PG у соединения формулы (С)
Hal1' о
где PG представляет собой подходящую защитную группу, такую как группа Boc, и другие замес тители имеют значения, определенные выше;
где в одном варианте осуществления, когда PG является группой Boc, реакцию удаления защитной группы осуществляют в органическом растворителе, таком как ТГФ или DCM, в присутствии органической кислоты, такой как трифторуксусная кислота, или в присутствии неорганической кислоты, такой как HCl или H3PO4, необязательно, в присутствии воды. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение приблизительно 60-140°C, например, при температуре от 100 до 110°C;
необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп b2'.
Соединение формулы (С) получают посредством стадии а взаимодействия соединения формулы (А)
где заместители имеют значения, определенные выше; с соединением формулы (B) соон
I L
PGZ (В) где заместители имеют значения, определенные выше;
с последующим взаимодействием с соединением формулы R1 -NH2, где R1' имеют значения, определенные выше;
где в одном варианте осуществления стадию а осуществляют в присутствии пиридина и трифенилфосфита при повышенной температуры, такой как 50-100°C в течение от 0,5 до 30 ч, например, в течение от 2 до 18 ч; необязательно, с последующим осуществлением стадий изменения функциональных групп или стадий введения функциональных групп а'.
Термин защитная группа, как используется в настоящем документе, относится к группе, которая защищает функциональную группу, которая присутствует в исходных продуктах и ее участие в реакции не предполагается. В дополнительных стадиях способа, осуществляемых по потребности, функциональные группы исходного соединения, которые не должны принимать участие в реакции, могут быть представлены в незащищенном виде или могут быть защищены, например, одной или несколькими защитными группами. Защитные группы затем полностью или частично удаляться в соответствии с одним из известных способов. Защитные группы и методы, которыми они вводятся и удаляются, описаны, например, в обзоре Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, London, New York 1973, и в Methoden der organischen Chemie, Houben-Weyl, 4th edition, Vol. 15/1, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart 1974, и в Theodora W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York 1981. Характерной особенностью защитных групп является то, что они могут быть легко удалены, то есть без возникновения нежелательных побочных реакций, например путем сольволиза, восстановления, фотолиза или в альтернативно в физиологических условиях.
- 27 031430
Промежуточное соединения и целевые продукты могут быть обработаны и/или очищены в соответствии со стандартными способами, например, с использованием хроматографических способов, способов распределения, (пере)кристаллизации и т.п.
Следующее относится в целом ко всем способам, упомянутым в настоящем документе выше и да лее.
Все вышеуказанные стадии способа могут быть проведены в условиях реакции, которые известны специалистам в данной области, в том числе те, которые оговорены особо, в частности, в отсутствие или, обычно, в присутствии растворителей или разбавителей, в том числе, например, растворителей или разбавителей, которые являются инертными по отношению к используемым реагентам и растворяют их, в отсутствие или в присутствии катализаторов, конденсирующих или нейтрализующих агентов, например ионообменных смол, таких как катиониты, например в Н+ форме, в зависимости от природы реакции и/или реагентов при пониженной, нормальной или повышенной температуре, например, при температуре в интервале от примерно -100 до примерно 190°C, включая, например от примерно -80 до примерно 150°C, например при температуре от -80 до -60°C, при комнатной температуре, при температуре от -20 до 40°C или при температуре кипения при атмосферном давлении или в закрытом сосуде, при необходимости под давлением и/или в инертной атмосфере, например, во атмосфере аргона или азота.
На всех стадиях реакций, смеси изомеров, которые образуются, могут быть разделены на индивидуальные изомеры, например, диастереоизомеры или энантиомеры, или на любые желаемые смеси изомеров, например, рацематы или смеси диастереомеров, например, аналогично описанным выше способам.
Растворители, из которых могут быть выбраны такие растворители, которые являются подходящими для конкретной реакции, включают те, которые указаны особо или, например, воду, сложные эфиры, такие как C1-C8-алкил-C1-C8-алканоаты, например, этилацетат, простые эфиры, такие как алифатические простые эфиры, например, диэтиловый эфир, или циклические эфиры, например, тетрагидрофуран или диоксан, жидкие ароматические углеводороды, такие как бензол или толуол, спирты, такие как метанол, этанол или 1- или 2-пропанол, нитрилы, такие как ацетонитрил, галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид или хлороформ, амиды кислот, такие как диметилформамид или диметилацетамид, основания, такие как гетероциклические азотистые основания, например, пиридин или Nметилпирролидин-2-он, ангидриды карбоновых кислот, такие как ангидриды ^-^-алкановых кислот, например, уксусный ангидрид, циклические, линейные или разветвленные углеводороды, такие как циклогексан, гексан или изопентан, метилциклогексан, или смеси указанных растворителей, например, водные растворы, Если в описании способов не указано иного. Такие смеси растворителей также могут быть использованы при обработке, например, путем хроматографии или распределения.
Соединения, включая их соли, также могут быть получены в виде гидратов, или их кристаллы, например, могут включать растворитель, используемый для кристаллизации. Могут быть представлены различные кристаллические формы.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к промежуточному соединению формулы (Е)
R2' О
где R1 представляет собой R1, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R1 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R2 представляет собой R2, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R2 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R5 представляет собой R5, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R5 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп;
R6 представляет собой R6, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в R6 посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп; и
L' представляет собой L, как определено выше для соединения формулы (I), или заместитель, который может быть преобразован в L посредством стадий преобразования функциональных групп или стадий введения функциональных групп.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к промежуточному соединению формулы (D)
- 28 031430
где PG представляет собой подходящую защитную группу, такую как группа Boc, и другие замес тители имеют значения, определенные выше.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к промежуточному соединению формулы (С)
где Hal1 представляет собой галоген, такой как бром или хлор или псевдогалоген, такой как трифлат, и другие заместители имеют значения, определенные выше.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к промежуточному соединению формулы (F)
где заместители имеют значения, определенные выше.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к промежуточному соединению формулы (G)
Hal1 о
где заместители имеют значения, определенные выше.
Кроме того, настоящее изобретение охватывает любой вариант настоящих способов, по которому промежуточный продукт, получаемый на любой его стадии, используют в качестве исходного материала и осуществляют остальные стадии, или по которому исходные материалы образуются in situ в условиях реакции, или по которому компоненты реакции используются в виде их солей или оптически чистого материала.
Соединения по изобретению и промежуточные соединения также могут быть преобразованы друг в друга в соответствии со способами обычно известными специалистам в данной области.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель. В еще одном варианте осуществления изобретения композиция содержит по меньшей мере два фармацевтически приемлемых носителя, таких как описанные в настоящем документе. В целях настоящего изобретения, если не описано иного, в состав композиции обычно входят сольваты и гидраты. Предпочтительно фармацевтически приемлемые носители являются стерильными. Фармацевтическая композиция может быть составлена для конкретного пути введения, такого как пероральное введение, парентеральное введение и ректального введения и т.д. Кроме того, фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть изготовлены в твердой форме (включая, без ограничения, капсулы, таблетки, пилюли, гранулы, порошки или суппозитории) или в жидкой форме (включая, без ограничения, растворы, суспензии или эмульсии).
Фармацевтические композиции могут быть подвергнуты обычным фармацевтическим операциям, таким как стерилизация, и/или могут содержать обычные инертные разбавители, лубриканты или буферные агенты, а также вспомогательные вещества, такие как консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы и буферные вещества, и т.д.
Обычно фармацевтические композиции представляют собой таблетки или желатиновые капсулы, содержащие активный ингредиент вместе с одним или несколькими из следующих:
a) разбавители, например лактоза, декстроза, сахароза, маннит, сорбит, целлюлоза и/или глицин;
b) лубриканты, например диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота, их магниевая или кальциевая соль и/или полиэтиленгликоль; для таблеток также
c) связующие, например алюмосиликат магния, крахмальная паста, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидон; при желании
d) разрыхлители, например крахмалы, агар, альгиновая кислота или ее натриевая соль, или шипучие смеси; и
e) абсорбенты, красители, ароматизаторы и подсластители. Таблетки могут быть либо покрыты
- 29 031430 пленкой, либо с энтеросолюбильным покрытием в соответствии с способами, известными в данной области.
Подходящие композиции для перорального введения содержат эффективное количество соединения по изобретению в виде таблеток, лепешек, водных или масляных суспензий, диспергируемых порошков или гранул, эмульсии, твердых или мягких капсул, или сиропов или эликсиров. Композиции, предназначенные для перорального применения, получают в соответствии со способом, известным в данной области получения фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или несколько агентов, выбранных из группы, включающей подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты, с целью получения фармацевтически удобных для пациента и приятных на вкус средств. Таблетки могут содержать активный ингредиент в смеси с нетоксическими фармацевтически приемлемыми инертными наполнителями, которые являются подходящими для получения таблеток. Указанными инертными наполнителями являются, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или натрия фосфат; гранулирующие и разрыхляющими агентами, например, кукурузный крахмал, или альгиновая кислота; связующие агенты, например, крахмал, желатин или гуммиарабик; и лубриканты, например, стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки являются непокрытыми или покрытыми известными методами для того, чтобы задержать разрушение и поглощение в желудочно-кишечном тракте, и тем самым обеспечить пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, может быть использован задерживающий материал, такой как глицерил моностеарат или глицерил дистеарат.
Средства для перорального применения могут быть представлены в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или масляной средой, например, арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.
Некоторые инъецируемые композиции представляют собой водные изотонические растворы или суспензии, а суппозитории, преимущественно, получают из жирных эмульсий или суспензий. Указанные композиции могут быть стерилизованы и/или содержать вспомогательные вещества, такие как консерванты, стабилизаторы, смачивающие или эмульгирующие агенты, способствующие растворению, соли для регулирования осмотического давления и/или буферные вещества. Кроме того, они также могут содержать другие терапевтически ценные вещества. Указанные композиции получают в соответствии с обычными способами смешивания, гранулирования или покрытия методами, соответственно, и содержат примерно 0,1-75% или содержат примерно 1-50% активного ингредиента.
Подходящие композиции для чрескожного введения включают эффективное количество соединения по настоящему изобретению с подходящим носителем. Носители, пригодные для трансдермальной доставки, включают абсорбируемые фармакологически приемлемые растворители, способствующие проникновению через кожу пациента. Например, устройства для чрескожного введения являются такими как в виде повязки, содержащей подложку, резервуара, содержащего соединение, необязательно, в смеси с носителями, необязательно, контролирующий скорость барьер для доставки соединения в кожу пациента при регулируемой и заранее определенной скоростью в течение длительного период времени, и средств для крепления устройства к коже
Подходящие композиции для местного применения, например, в кожу и в глаза, включают водные растворы, суспензии, мази, кремы, гели или распыляемые составы, например, для доставки в виде аэрозоля или т.п. Такие системы для местной доставки, в частности, являются целесообразными для кожного применения, например для лечения рака кожи, например, для профилактического применения в солнцезащитных кремах, лосьонах, спреях и т.п. Таким образом, они особенно подходят для использования для наружных, в том числе косметических, составов, хорошо известных в данной области техники. Также они могут содержать солюбилизаторы, стабилизаторы, вещество, регулирующее тоничность, буферы и консерванты.
Как используется в настоящем документе, местное применение могут также относиться к вдоху или к интраназальному применению. Их может быть удобно доставлять в виде сухого порошка (либо отдельно, в виде смеси, например, в виде сухой смеси с лактозой, или в виде частиц смешанных компонентов, например, с фосфолипидами) из сухого порошкового ингалятора или аэрозольного спрея из контейнера под давлением, насоса, спрея, распылителя или небулайзера, с использованием или без использования подходящего пропеллента.
Соединения формулы (I) в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли проявляют ценные фармакологические свойства, например, модулирующие PI3 киназы класса I свойства, например, как показано в исследованиях in vitro и in vivo, представленных в следующих разделах, и поэтому являются показанными для терапии или для использования в качестве научно-исследовательских химических веществ, например, в качестве рабочих соединений.
Соединения изобретения могут быть использованы при лечении состояний, заболеваний или расстройств, включая иммунопатологию, связанную с болезнью или инфекцией, при которых одна или несколько функций B клеток, такие как продукция антител, презентация антигенов, продукция цитокинов
- 30 031430 или лимфоидный органогенез, являются аномальными или являются нежелательными, включая ревматоидный артрит и связанные заболевания (такие как анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, ювенильный артрит), пузырчатку обыкновенную и связанные заболевания, идиопатическую тромбоцитопению пурпуру, системную красную волчанки, рассеянный склероз, миастению гравис, синдром Шегрена (такой как первичный синдром Шегрена (pSS)), реакцию трансплантат против хозяина, аутоиммунную гемолитическую анемию, ANCA-ассоциированные васкулиты (такие как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемию, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, травмы ишемии/реперфузии, хроническую аутоиммунную крапивницу, аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическую астму, астму, связанную с аллергическим ринитом), синдром Гудпасчера, различные типы гломерулонефритов, AMR (опосредованное антителами отторжение трансплантата), опосредованное В клетками гиперострое, острое и хроническое отторжение трансплантата и злокачественные новообразования кроветворного происхождения, включая, но этим не ограничиваясь, множественную миелому; острую гранулоцитную лейкемию; хроническую гранулоцитную лейкемию; лимфоцитарный лейкоз; миелоидный лейкоз; неходжкинскую лимфому; лимфомы; истинную полицитемию; эссенциальную тромбоцитемию; миелофиброз с миелоидную метаплазией; и болезнь Вальденстрема.
Изобретение относится к способам лечения состояний, заболеваний или расстройств, при которых одна или несколько функций нейтрофилов, таких как выделение супероксида, стимулированный экзоцитоз или хемотактическая миграция являются ненормальными или являются нежелательными, включая ревматоидный артрит, легочные или респираторные расстройства, такие как астма, воспалительные дерматозы, такие как псориаз, а также связанные с иммунопатологией заболевания или инфекции, и другие.
Настоящее изобретение включает способы лечения состояний, заболеваний или расстройств при которой одна или несколько функций базофилов и тучных клеток, такие как хемотактическая миграция или аллерген-IgE-опосредованная дегрануляция, являются аномальными или являются нежелательными, включая аллергические заболевания (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическую астму, астму, связанную с аллергическим ринитом, хроническая аллергическая крапивница), а также других расстройств, таких как ХОЗЛ, астма или эмфизема.
Настоящее изобретение включает способы лечения состояний, заболеваний или расстройств при которой одна или несколько функций T клеток, такие как продукция цитокинов или клеточноопосредованная цитотоксичность, являются аномальными или являются нежелательными, включая ревматоидный артрит, рассеянный склероз, острое или хроническое отторжение трансплантатов клеточных тканей или органов или злокачественные новообразования кроветворного происхождения, а также иммунопатологии, связанные с болезнью или инфекцией.
Кроме того, настоящее изобретение включает способы лечения нейродегенеративных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний и агрегацию тромбоцитов.
Кроме того, настоящее изобретение включает способы лечения кожных заболеваний, таких как поздняя кожная порфирия, полиморфный фотодерматоз, дерматомиозит, солнечная крапивница, красный плоский лишай в полости рта, панникулит, склеродермия, уртикарный васкулит.
Кроме того, настоящее изобретение включает способы лечения хронических воспалительных заболеваний, такого как саркоидоз, кольцевидная гранулема.
В других вариантах осуществления, состояние или расстройство (например, опосредованное PI3 киназами класса I) выбрано из группы, включающей истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию, миелофиброз с миелоидной метаплазией, бронхиальную астму, ХОБЛ, ОРДС, синдром Леффлера, эозинофильную пневмонию, паразитарное (в частности, многоклеточными) заражение (включая тропическую эозинофилию), бронхолегочный аспергиллез, узелковый полиартрит (в том числе синдром Черджа-Стросса), эозинофильную гранулему, связанные с эозинофилами нарушения, влияющие на дыхательные пути, причиненные реакцией на лекарство, псориаз, контактный дерматит, атопический дерматит, очаговую алопецию, мультиформную эритему, герпетиформный дерматит, склеродермию, витилиго, гиперчувствительный васкулит, крапивницу, буллезный пемфигоид, красную волчанку, пузырчатку, приобретенный буллезный эпидермолиз, аутоиммунные гематологические заболевания (например, гемолитическая анемия, апластическая анемия, врожденная апластическая анемия и идиопатическая тромбоцитопения), системную красную волчанку, полихондрит, склеродермию, гранулематоз Вегенера, дерматомиозит, хронический активный гепатит, миастению гравис, синдром Стивена-Джонсона, идиопатическая спру, аутоиммунное воспалительное заболевание кишечника (например, язвенный колит и болезнь Крона), эндокринную офтальмопатию, болезнь Грейвса, саркоидоз, альвеолит, хронический аллергический пневмонит, рассеянный склероз, первичный билиарный цирроз печени, увеит (передний и задний), интерстициальный фиброз легких, псориатический артрит, гломерулонефрит, сердечно-сосудистые заболевания, атеросклероз, гипертонию, тромбоз глубоких вен, инсульт, инфаркт миокарда, нестабильную стенокардию, тромбоэмболию, эмболию легочной артерии, тромболитические заболевания, острую артериальную ишемию, периферические тромботические окклюзии, и заболевание коронарной артерии, реперфузионные повреждения, ретинопатию, такую как диабетическую ретинопатию или индуцированную гипербарическим кислородом ретинопатию.
- 31 031430
В другом варианте осуществления соединения по настоящему изобретению могут быть использованы при лечении, предупреждении или облегчении аутоиммунного заболевания и воспалительных состояний, в частности, воспалительных состояний с этиологией, включающей аутоиммунный компонент, таких как артрит (например, ревматоидный артрит, хронический прогрессирующий артрит и деформирующий артрит) и ревматические заболевания, включая воспалительные заболевания и ревматические заболевания, связанные с потерей костной ткани, воспалительные боли, спондилоартропатию, включая анкилозирующий спондилит, синдром Рейтера, реактивный артрит, псориатический артрит и энтеропатический артрит, гиперчувствительность (включая как гиперчувствительность дыхательных путей, так и кожную чувствительность) и аллергии. Конкретные аутоиммунные заболевания, для которых могут быть использованы соединения по настоящему изобретению, включают аутоиммунные гематологические расстройства (включая, например, гемолитическую анемию, апластическую анемию, анемию эритроцитов и идиопатическую тромбоцитопению), приобретенную гемофилию А, болезнь Холодовых агглютининов, криоглобулинемию, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, синдром Шегрена, системную красную волчанку, воспалительные заболевания мышц, полихондрит, склеродому, васкулит, ассоциированный с антителами к цитоплазме нейтрофилов, IgM-опосредованню невропатию, синдром опсоклонусмиоклонус, гранулематоз Вегенера, дерматомиозит, хронический активный гепатит, миастению, псориаз, синдром Стивенса-Джонсона, пузырчатку обыкновенная, пузырчатку листовидную, идиопатическую спру, аутоиммунное воспалительное заболевание кишечника (включая, например, язвенный колит, болезнь Крона и синдром раздраженного кишечника), эндокринную офтальмопатию, болезнь Грейвса, саркоидоз, рассеянный склероз, оптиконевромиелит, первичный билиарный цирроз печени, юношеский диабет (сахарный диабет типа I), увеит (передний, срединный и задний, а также панувеит), сухой кератоконъюнктивит и весенний кератоконъюнктивит, интерстициальный фиброз легкого, псориатический артрит, анкилозирующий спондилоартрит и гломерулонефрит (с нефротическим синдромом и без, например, в том числе идиопатический нефротический синдром или нефропатию с минимальным изменением), опухоли, воспалительные заболевания кожи и роговицы, миозит, ослабление костей имплантатов, метаболические расстройства, такие как атеросклероз, диабет и дислипидемия.
В другом варианте осуществления соединения по настоящему изобретению могут быть использованы при лечении состояний или расстройств, выбранных из группы, включающей первичную кожную В-клеточную лимфому, иммунобуллезное заболевание, пузырчатку обыкновенная, пузырчатку листовидную, эндемический вариант бразильской пузырчатки (Fogo selvagem), паранеопластическую пузырчатку, буллезный пемфигоид, пузырчатку слизистой оболочки, приобретенный буллезный эпидермолиз, хроническую реакцию трансплантат против хозяина, дерматомиозит, системную красную волчанку, васкулит, васкулит небольших сосудов, васкулит, сопровождающийся крапивницей и гипокомплементемией, (антинейтрофильные цитоплазматические антитела)-ассоциированный васкулит, криоглобулинемию, синдром Шнитцлера, макроглобулинемию Вальденстрема, ангионевротический отек, витилиго, системную красную волчанку, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, рассеянный склероз, болезнь Холодовых агглютининов, аутоиммунную гемолитическую анемию, (антинейтрофильные цитоплазматические антитела)-ассоциированный васкулит, реакцию трансплантат против хозяина, криоглобулинемию и тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру. Таким образом, в качестве следующего варианта осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формул (I) или (I'), (I''), (Ia), (Ib), (IA), (IB) или (IQ в терапии. В еще одном варианте осуществления терапия выбрана для заболевания, которое можно лечить путем ингибирования PI3 киназ класса I. В другом варианте осуществления заболевание выбрано из вышеуказанного списка, соответственно, из аутоиммунных расстройств, аутовоспалительных и воспалительных заболеваний, аллергических заболеваний, заболеваний дыхательных путей, таких как астма и ХОЗЛ, отторжение трансплантата; включая иммунопатологию, связанную с болезнью или инфекцией, при которых одна или несколько функций В клеток, такие как продукция антител, презентация антигенов, продукция цитокинов или лимфоидный органогенез являются аномальными или являются нежелательными, включая такие как ревматоидный артрит и связанные заболевания (такие как анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, ювенильный артрит), пузырчатка обыкновенная и связанные заболевания, идиопатическая тромбоцитопения пурпура, системная красная волчанка, рассеянный склероз, миастения гравис, синдром Шегрена (такой как первичный синдром Шегрена (pSS)), реакция трансплантат против хозяина, аутоиммунная гемолитическая анемия, ANCA-ассоциированные васкулиты (такие как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемия, тромботическая тромбоцитопеническая пурпура, травмы ишемии/реперфузии, хроническая аутоиммунная крапивница, аллергия (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдром Гудпасчера, различные типы гломерулонефритов, AMR (опосредованные антителами отторжения трансплантата), опосредованное В клетками гиперострое, острое и хроническое отторжение трансплантата и злокачественные новообразования кроветворного происхождения, включая, но этим не ограничиваясь, множественную миелому; лейкемию; острую гранулоцитную лейкемию; хроническую гранулоцитную лейкемию; лимфоцитарный лейкоз; миелоидный лейкоз; неходжкинскую лимфому; лимфомы; истинную полицитемию; эссенциальную тромбоцитемию; миелофиброз с миелоидной метаплазией; и
- 32 031430 болезнь Вальденстрема; более соответственно, заболевания выбраны из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (АНА), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (MS), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS) (такого как первичный синдром Шегрена (pSS)), ANCAассоциированных васкулитов (таких как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемии, травмы ишемии/реперфузии, хронической аутоиммунной крапивницы (CAU), аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата и злокачественных новообразований кроветворного происхождения, а также иммунопатологии, связанных с болезнью или инфекцией, например, при тяжелой и церебральной малярии, трипаносомозе, лейшманиозе, токсоплазмозе и неироцистицеркозе.
Таким образом, в качестве следующего варианта осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (I'), (I), (Ia), (Ib), (IA), (IB) или (IC) для применения в терапии. В еще одном варианте осуществления терапия выбрана для заболевания, которое можно лечить путем ингибирования PI3 киназ класса I. В другом варианте осуществления заболевание выбрано из вышеуказанного списка, соответственно из аутоиммунных расстройств, аутовоспалительных и воспалительных заболеваний, аллергических заболеваний, заболеваний дыхательных путей, таких как астма и ХОЗЛ, отторжение трансплантата; включая иммунопатологию, связанную с болезнью или инфекцией, при которых одна или несколько функций В клеток, такие как продукция антител, презентация антигенов, продукция цитокинов или лимфоидный органогенез являются аномальными или являются нежелательными, включая такие как ревматоидный артрит и связанные заболевания (такие как анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, ювенильный артрит), пузырчатка обыкновенная и связанные заболевания, идиопатическая тромбоцитопения пурпура, системная красная волчанка, рассеянный склероз, миастения гравис, синдром Шегрена (такой как первичный синдром Шегрена (pSS)), реакция трансплантат против хозяина, аутоиммунная гемолитическая анемия, ANCA-ассоциированные васкулиты (такие как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемия, тромботическая тромбоцитопеническая пурпура, травмы ишемии/реперфузии, хроническая аутоиммунная крапивница, аллергия (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдром Гудпасчера, различные типы гломерулонефритов, AMR (опосредованные антителами отторжения трансплантата), опосредованное В клетками гиперострое, острое и хроническое отторжение трансплантата и злокачественные новообразования кроветворного происхождения, включая, но этим не ограничиваясь, множественную миелому; лейкемию; острую гранулоцитную лейкемию; хроническую гранулоцитную лейкемию; лимфоцитарный лейкоз; миелоидный лейкоз; неходжкинскую лимфому; лимфомы; истинную полицитемию; эссенциальную тромбоцитемию; миелофиброз с миелоидной метаплазией; и болезнь Вальденстрема; более соответственно, заболевание выбрано из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (АНА), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (MS), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS) (такого как первичный синдром Шегрена (pSS)), ANCA-ассоциированных васкулитов (таких как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемии, травмы ишемии/реперфузии, хронической аутоиммунной крапивницы (CAU), аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата и злокачественных новообразований кроветворного происхождения, а также иммунопатологии, связанных с болезнью или инфекцией, например, при тяжелой и церебральной малярии, трипаносомозе, лейшманиозе, токсоплазмозе и нейроцистицеркозе.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания, которое можно лечить путем ингибирования PI3 киназы класса I, который заключается во введении терапевтически приемлемого количества соединения формул (I) или (I'), (I''), (Ia), (Ib), (IA), (IB) или (IC). В еще одном варианте осуществления изобретения заболевание выбрано из вышеуказанного списка, соответственно, из аутоиммунных расстройств, аутовоспалительных и воспалительных заболеваний, аллергических заболеваний, заболеваний дыхательных путей, таких как астма и ХОЗЛ, отторжение трансплантата; включая иммунопатологию, связанную с болезнью или инфекцией, при которых одна или несколько функций В клеток, такие как продукция антител, презентация антигенов, продукция цитокинов или лимфоидный органогенез являются аномальными или являются нежелательными, включая такие как ревматоидный артрит и связанные заболевания (такие как анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, ювенильный артрит), пузырчатка обыкновенная и связанные заболевания, идиопатическая тромбоцитопения пурпура, системная красная волчанка, рассеянный склероз, миастения гравис, синдром Шегрена (такой как первичный синдром Шегрена (pSS)), реакция трансплантат против хозяина, аутоиммунная гемолитическая анемия, ANCA-ассоциированные васкулиты (такие как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемия, тромботическая
- 33 031430 тромбоцитопеническая пурпура, травмы ишемии/реперфузии, хроническая аутоиммунная крапивница, аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдром Гудпасчера, различные типы гломерулонефритов, AMR (опосредованные антителами отторжения трансплантата), опосредованное В клетками гиперострое, острое и хроническое отторжения трансплантата и злокачественные новообразований кроветворного происхождения, включая, но этим не ограничиваясь, множественную миелому; лейкемию острую гранулоцитную лейкемию; хроническую гранулоцитную лейкемию; лимфоцитарный лейкоз; миелоидный лейкоз; неходжкинскую лимфому; лимфомы; истинную полицитемию; эссенциальную тромбоцитемию; миелофиброз с миелоидной метаплазией; и болезнь Вальденстрема; более предпочтительно, такие как ревматоидный артрит (RA), пузырчатка обыкновенная (PV), идиопатическая тромбоцитопения пурпура (ITP), тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (ТТР), аутоиммунная гемолитическая анемия (AIHA), приобретенная гемофилия типа А (АНА), системная красная волчанка (SLE), рассеянный склероз (MS), миастения гравис (MG), синдром Шегрена (SS) (такой как первичный синдром Шегрена (pSS)), ANCA-ассоциированные васкулиты (такие как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемия, травмы ишемии/реперфузии, хроническая аутоиммунная крапивница (CAU), аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдром Гудпасчера, отторжение трансплантата и злокачественные новообразования кроветворного происхождения, а также иммунопатологии, связанные с болезнью или инфекцией, например, при тяжелой и церебральной малярии, трипаносомозе, лейшманиозе, токсоплазмозе и нейроцистицеркозе.
Таким образом, в качестве следующего варианта осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формул (I) или (I'), (I''), (Ia), (Ib), (IA), (IB) или (IC) получения лекарственного средства. В еще одном варианте осуществления изобретения лекарственное средство предназначено для лечения заболевания, которое можно лечить ингибированием PI3 киназы класса I. В другом варианте осуществления заболевание выбрано из вышеуказанного списка, соответственно из аутоиммунных расстройств, аутовоспалительных и воспалительных заболеваний, аллергических заболеваний, заболеваний дыхательных путей, таких как астма и ХОЗЛ, отторжения трансплантата; включая иммунопатологию, связанную с болезнью или инфекцией, при которых одна или несколько функций В клеток, такие как продукция антител, презентация антигенов, продукция цитокинов или лимфоидный органогенез являются аномальными или являются нежелательными, включая ревматоидный артрит и связанные заболевания (такие как анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, ювенильный артрит), пузырчатку обыкновенную и связанные заболевания, идиопатическую тромбоцитопению пурпуру, системную красную волчанку, рассеянный склероз, миастению гравис, синдром Шегрена (такой как первичный синдром Шегрена (pSS)), реакцию трансплантат против хозяина, аутоиммунную гемолитическую анемию, ANCA-ассоциированные васкулиты (такие как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемию, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, травмы ишемии/реперфузии, хроническую аутоиммунную крапивницу, аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдром Гудпасчера, различные типы гломерулонефритов, AMR (опосредованные антителами отторжения трансплантата), опосредованное В клетками гиперострое, острое и хроническое отторжения трансплантата и злокачественных новообразований кроветворного происхождения включая, но этим не ограничиваясь, множественную миелому; лейкемию; острое гранулоцитную лейкемию; хроническую гранулоцитную лейкемию; лимфоцитарный лейкоз; миелоидный лейкоз; неходжкинскую лимфому; лимфомы; истинную полицитемию; эссенциальную тромбоцитемию; миелофиброз с миелоидной метаплазией; и болезнь Вальденстрема; более предпочтительно заболевание выбрано из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (АНА), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (MS), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS) (такого как первичный синдром Шегрена (pSS)), ANCAассоциированных васкулитов (таких как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемии, травмы ишемии/реперфузии, хронической аутоиммунной крапивницы (CAU), аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата и злокачественных новообразований кроветворного происхождения, а также иммунопатологии, связанных с болезнью или инфекцией, например, при тяжелой и церебральной малярии, трипаносомозе, лейшманиозе, токсоплазмозе и нейроцистицеркозе.
Фармацевтическая композиция или комбинация по настоящему изобретению может быть в виде единицы дозирования примерно 1-1000 мг активного(ых) ингредиента(ов) для субъекта весом 50-70 кг, или примерно 1-500 мг, или примерно 1-250 мг, или примерно 1-150 мг, или примерно 0,5-100 мг активных ингредиентов. Терапевтически эффективная дозировка соединения, фармацевтической композиции или их комбинации зависит от вида субъекта, веса тела, возраста и индивидуального подвергаемого лечению состояния, расстройства или заболевания или их тяжести. Врач, клиницист или ветеринар обыч
- 34 031430 ной квалификации может легко определить эффективное количество каждого из активных ингредиентов, необходимых для предотвращения, лечения или ингибирования прогрессирования расстройства или заболевания.
Вышеуказанные свойства дозировок могут быть продемонстрированы в исследованиях in vitro и in vivo с использованием, преимущественно, млекопитающих, например, мышей, крыс, собак, обезьян, или изолированных органов, тканей и их препаратов. Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы in vitro в виде растворов, например, водных растворов, и in vivo либо энтерально, парентерально, преимущественно, внутривенно, например, в виде суспензии или в виде водного раствора. Дозировка in vitro может варьироваться в концентрациях между примерно 10-3 и 10-9 молярной. Терапевтически эффективное количество in vivo может варьироваться в зависимости от способа введения, в интервале примерно 0,1-500 мг/кг или в интервале примерно от 1-100 мг/кг.
Соединение по настоящему изобретению может быть введено либо одновременно с введением, либо перед введением, либо после введения одного или нескольких других терапевтических агентов. Соединение по настоящему изобретению может быть введено раздельно, тем же самым или иным путем введения, или вместе с такой же фармацевтической композицией, что и другие агенты. Терапевтический агент представляет собой, например, химическое соединение, пептид, антитело, фрагмент антитела или нуклеиновую кислоту, которые являются терапевтически активными или улучшают терапевтическую активность при введении пациенту в комбинации с соединением по изобретению.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к продукту, содержащему соединение формулы (I) и по меньшей мере один другой терапевтический агент в виде комбинированного средства для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии. В одном варианте осуществления терапией является лечение заболевания или состояния, опосредованного активностью PI3 киназ класса I. Продукты, представленные в виде комбинированного средства, включают композицию, содержащую соединение формулы (I) и другой(ие) терапевтической(ие) агент(ы) вместе в одной и той же фармацевтической композиции, или соединение формулы (I) и другой(ие) терапевтической(ие) агент(ы) в разделенной форме, например, в виде набора.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) и другой(ие) терапевтической(ие) агент(ы). Необязательно, фармацевтическая композиция может содержать фармацевтически приемлемый носитель, как описано выше.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к набору, содержащему две или более отдельных фармацевтических композиции, по меньшей мере одна из которых содержит соединение формулы (I). В одном варианте осуществления набор включает средство для раздельного хранения указанных композиций, такое как контейнер, градуированный флакон или разделенный пакет из фольги. Примером такого набора является блистерная упаковка, как обычно используется для упаковки таблеток, капсул и т.п.
Набор по изобретению может быть использован для введения различных лекарственных форм, например, пероральной и парентеральной, для введения отдельных композиций с различными интервалами дозирования или для титрования отдельных композиций относительно друг друга. Для удобства при использовании набор по изобретению включает в себя, как правило, инструкции по введению.
В комбинированной терапии по данному изобретению соединение по настоящему изобретению и другой терапевтический агент могут быть изготовлены и/или составлены одним и тем же или различными производителями. Кроме того, соединение по настоящему изобретению и другой терапевтический агент могут быть объединены в комбинированной терапии: (i) перед выдачей комбинированного продукта врачам (например, в случае набора, включающего соединение по изобретению и другой терапевтический агент); (ii) самим врачом (или под руководством врача) незадолго до введения; (iii) самим пациентом, например, в процессе последовательного введения соединения по настоящему изобретению и другого терапевтического агента.
Соответственно, настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для лечения заболевания или состояния, опосредованных активностью PI3 киназ класса I, где лекарственное средство изготовлено для введения с другим терапевтическим агентом. Настоящее изобретение также относится к применению другого терапевтического агента для лечения заболевания или состояния, опосредованных активностью PI3 киназ класса I, где лекарственное средство вводится с соединением формулы (I).
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) для применения в способе лечения заболевания или состояния, опосредованных активностью ферментами PI3 киназ класса I, где соединение формулы (I) подготовлено для введения с другим терапевтическим агентом. Настоящее изобретение также относится к другому терапевтическому агенту для применения в способе лечения заболевания или состояния, опосредованных активностью PI3 киназ класса I, где другой терапевтический агент подготовлен для введения с соединением формулы (I). Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) для применения в способе лечения заболевания или состояния, опосредованных активностью PI3 киназ класса I, где соединение формулы (I) вводится с другим терапевтическим агентом.
- 35 031430
Настоящее изобретение также относится к другому терапевтическому агенту для применения в способе лечения заболевания или состояния, опосредованных активностью PI3 киназы класса I, где другой терапевтический агент вводится с соединением формулы (I).
Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) для лечения заболевания или состояния, опосредованных активностью PI3 киназ класса I, где пациента предварительно (например, за 24 ч) обрабатывали другим терапевтическим агентом. Настоящее изобретение также относится к применению другого терапевтического агента для лечения заболевания или состояния, опосредованных активностью PI3 киназ класса I, где пациента предварительно (например, за 24 ч) обрабатывали соединением формулы (I).
Соединения формулы (I) могут быть введены в виде единственного активного ингредиента или в конъюгации, например, в качестве вспомогательного вещества, с другими лекарственными средствами, например, иммунодепрессантами или иммуномодулирующими агентами или другими противовоспалительными агентами, например, для лечения или предупреждения острого или хронического отторжения алло- или ксенотрансплантата или воспалительных или аутоиммунных расстройств, или с химиотерапевтическим агентом, например, антипролиферативным агентом против злокачественных клеток. Например, соединения формулы (I) могут быть использованы в комбинация с ингибитором кальциневрина, например циклоспорином А или FK 506; ингибитором mTOR, например, рапамицином, 40-О-(2гидроксиэтил)рапамицином, CCI779, АВТ578, АР23573, TAFA-93, биолимусом-7 или биолимусом-9; аскомицином, обладающим иммуносупрессорными свойствами, например, АВТ-281, ASM981 и т.д.; кортикостероидами; циклофосфамидом; азатиоприном; метотрексатом; лефлуномидом; мизорибином; микофеноловой кислотой или ее солью; микофенолатом мофетила; 15-деоксиспергуалином или его иммуносупрессорными гомологами, аналогами или производными; ингибитором РКС, например, как описано в WO 02/38561 или WO 03/82859, например, соединением по примеру 56 или 70; ингибитором JAK3 киназы, например, №бензил-3,4-дигирокси-бензилиден-цианоацетамид[-циано-(3,4-дигирокси)-Щбензилциннамамидом (тирфостин AG 490), продигиозином 25-C (PNU156804), [4-(4'гидроксифенил)амино-6,7-диметоксихиназолин] (WHI-P131), [4-(3 '-бром-4'-гидроксилфенил)амино-6,7диметоксихиназолин] (WHI-P154), [4-(3',5'-дибром-4'-гидроксилфенил)амино-6,7-диметоксихиназолин] WHI-P97, KRX-211, 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин1-ил}-3-оксо-пропионитрилом, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, например, моноцитрата (называемого также СР-690,550), или соединением, как описано в WO 04/052359 или WO 05/066156; иммуносупрессивными моноклональными антителами, например моноклональными антителами к рецепторам лейкоцитов, например, МНС, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD52, CD58, CD80, CD86 или их лигандами; другими иммуномодуляторными соединениями, например, рекомбинантной связывающей молекулой, имеющей по меньшей мере часть внеклеточного домена CTLA4 или его мутанта, например, по меньшей мер, внеклеточную часть CTLA4 или его мутанта, связанного сне-CTLA4 белковой последовательностью, например, CTLA4Ig (например, обозначенного АТСС 68629), или его мутанта, например LEA29Y; ингибиторами молекул адгезии, например антагонистами LFA-1, антагонистами ICAM-1 или -3, антагонистами VCAM-4 или антагонистами VLA-4; или антигистаминами; или противокашлевыми средствами или бронхорасширяющим агентом; или блокаторами рецепторов ангиотензина; или противоинфекционным агентом.
Когда соединения формулы (I) назначаются в сочетании с другой иммуносупрессивным/иммуномодуляторным, противовоспалительным, химиотерапевтическим или противоинфекционным лечением, дозировки одновременно вводимого иммуносупрессантного, иммуномодуляторного, противовоспалительного, химиотерапевтического или противоинфекционного соединения будут, конечно, меняться в зависимости от типа одновременного используемого лекарственного средства, например, будь то стероид или ингибитор кальциневрина, от конкретного лекарственного средства, от состояния, которое лечат и т.п.
Соединение формулы (I) также могут быть использованы преимущественно в сочетании друг с другом или в комбинации с другими терапевтическими агентами, особенно другими антипролиферативными агентами. Такие антипролиферативные агенты включают, но этим не ограничиваются, ингибиторы ароматазы; антиэстрогены; ингибиторы топоизомеразы I; ингибиторы топоизомеразы II; агенты, активные в отношении микротрубочек; алкилирующие агенты; ингибиторы гистондеацетилазы; соединения, которые вызывают процессы клеточной дифференциации; ингибиторы циклооксидазы; ММР ингибиторы; ингибиторы mTOR; противоопухолевые антиметаболиты; соединения платины; соединения, нацеленные на/уменьшающие активность киназ белков или липидов, и другие антиангиогенные соединения; соединения, которые нацелены на, уменьшающие или ингибирующие активность фосфатазы белка или липида; агонисты гонадорелина; антиандрогены; ингибиторы метионин аминопептидазы; бисфосфонаты; модификаторы биологического ответа; антипролиферативные антитела; ингибиторы гепараназы; ингибиторы онкогенных изоформ Ras; ингибиторы теломеразы; ингибиторы протеасом; агенты, используемые при лечении гематологических злокачественных новообразований; соединения, которые нацелены на, уменьшающие или ингибирующие активность Flt-3; ингибиторы Hsp90; темозоломид (TEMODAL®) и лейковорин.
- 36 031430
Термин ингибитор аротамазы, как используется в настоящем документе, относится к соединению, которое подавляет выработку эстрогена, то есть, превращение андростендиона и тестостерона в эстрон и эстрадиол соответственно. Термин включает, но этим не ограничивается, стероиды, особенно, атаместан, экземестан и форместан; и, в частности, нестероиды, особенно аминоглутетимид, роглетимид, пиридоглутетимид, трилостан, тестолактон, кетоконазол, ворозол, фадрозол, анастрозол и летрозол. Экземестан может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой AROMASIN. Форместан может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой LENTARON. Фадрозол может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой AFEMA. Анастрозол может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой ARIMIDEX. Летрозол может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой FEMARA или FEMAR. Аминоглутетимид может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой ORIMETEN. Комбинация по изобретению, включающая противоопухолевый агент, который является ингибитором ароматазы, особенно полезна для лечения положительных по рецепторам гормонов опухолей молочной железы.
Термин антиэстроген, как он используется в настоящем документе, относится к соединению, которое противодействует действию эстрогенов на уровне эстрогеновых рецепторов. Термин включает, но этим не ограничивается, тамоксифен, фулвестрант, ралоксифен и гидрохлорид ралоксифена. Тамоксифен может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой NOLVADEX. Гидрохлорид ралоксифена может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой EVISTA. Фулвестрант может иметь такой состав, как описано в патенте США № 4659516 или он может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой FASLODEX. Комбинация по изобретению, включающая противоопухолевый агент, который является антиэстрогеном, особенно полезна для лечения положительных по рецепторам эстрогена опухолей, например, опухолей молочной железы.
Термин антиандроген, как он используется в настоящем документе, относится к веществу, которое способно подавлять биологические эффекты андрогенных гормонов, и включает, но этим не ограничивается, бикалутамид (CASODEX), который может быть разработан в лекарственной форме, например, как описано в патенте США № 4636505.
Термин агонист гонадорелина, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, абареликс, гозерелин и ацетат гозерелина. Гозерилин описан в патенте США № 4100274 и может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой ZOLADEX. Абареликс может быть разработан в лекарственной форме, например, как описано в патенте США № 5843901.
Термин ингибитор топоизомеразы I, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, топотекан, гиматекан, иринотекан, кампотекан и его аналоги, 9нитрокамптотецин и макромолекулярный камптотециновый конъюгат PNU-166148 (соединение А1 в WO 99/17804). Иринотекан может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой CAMPTOSAR. Топотекан может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой HYCAMTIN.
Термин ингибитор топоизомеразы II, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, антрапиклины, такте как доксорубицин, включая липосомальную лекарственную форму, например, CAELYX; даунорубицин; эпирубицин; идарубицин; неморубицин; антрахиноны митоксантрон и лосоксантрон; и подофиллотоксины этопозид и тенипозид. Этопозид может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой ETOPOPHOS. Тенипозид может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой VM 26-BRISTOL. Доксорубицин может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой ADRIBLASTIN или ADRIAMYCIN. Эпирубицин может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой FARMORUBICIN. Идарубицин может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой ZAVEDOS. Митоксантрон может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой NOVANTRON.
Термин активный в отношении микротрубочек агент относится к агентам, стабилизирующим микротрубочки, дестабилизирующим микротрубочки, и ингибиторам полимеризации микротрубочек, включая, но этим не ограничиваясь, таксаны, например, паклитаксел и доцетаксел; алкалоиды винка, например, винбластин, особенно сульфат винбластина; винкристин, особенно сульфат винкристина и винорелбин; дискодермолиды; кохицин; и эпотилоны и их производные, например, эпотилон В или D или их производные. Паклитаксел может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, TAXOL. Доцетаксел может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой TAXOTERE. Сульфат винбластина может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой VINBLASTIN R.P. Сульфат винкристина может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, напри
- 37 031430 мер, под торговой маркой FARMISTIN. Дискодермолид может быть получен, например, как описано в патенте США № 5010099. Также включены производные эпотилона, которые описаны в WO 98/10121, в патенте США № 6194181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 и WO 00/31247. Особенно предпочтительными являются эпотилон А и/или В.
Термин алкилирующий агент, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан или нитрозомочевина (BCNU или Gliadel). Циклофосфамид может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой цикло-STIN. Ифосфамид может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой HOLOXAN.
Термин гистондеацетилазы ингибиторы или ингибиторы HDAC относится к соединениям, которые ингибируют гистондеацетилазу и которые обладают антипролиферативной активностью. Этот термин включает соединения, описанные в WO 02/22577, особенно N-гидрокси-3-[4-[[(2гидроксиэтил)[2-(Ш-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид, N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2метил-Ш-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид и их фармацевтически приемлемые соли. Кроме того, он особенно включает субероиланилид гидроксамовую кислоту (SAHA).
Термин противоопухолевый антиметаболит включает, но этим не ограничивается, 5-фторурацил, или 5-FU; капецитабин; гемцитабин; ДНК-деметилирующие агенты, такие как 5-азацидин и децитабин; метотрексат и эдатрексат; и антагонисты фолиевой кислоты, такие как пеметрексед. Капецитабин может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой XELODA. Гемцитабин может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой GEMZAR. Также включенными являются моноклональное антитело трастузумаб, который может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой HERCEPTIN.
Термин соединение платины, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, карбоплатин, цисплатин, цисплатином и оксалиплатин.
Карбоплатин может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой CARBOPLAT. Оксалиплатин может быть введен, например, в той форме, какой он поступает в продажу, например, под торговой маркой ELOXATIN.
Термин соединения, нацеленные на/уменьшающие активность киназ белков или липидов; или активность фосфатазы белков или липидов; или другие антиангиогенные соединения, как используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, ингибиторы протеинтирозинкиназы и/или серии и/или треонинкиназы или киназы липидов, например:
a) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность рецепторов тромбоцитарного фактора роста (PDGFR), такого как соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность PDGFR, особенно соединения, которые ингибируют PDGF рецептор, например, a №фенил-2-пиримидин-амин производное, например, иматиниб, SU101, SU6668 и GFB-111;
b) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность фактора роста фибробластов-рецепторов (FGFR);
c) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность рецептора инсулин-подобного фактора роста I (IGF-IR), такие как соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность IGF-IR, особенно соединения, которые ингибируют рецептор IGF-IR, такие как соединения, описанные в WO 02/092599;
d) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность семейства рецепторных тирозин киназ Trk;
e) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность семейства рецепторных тирозин киназ Axl;
f) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность рецептора c-Met;
g) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность рецепторных тирозин киназ Kit/SCFR;
h) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность рецепторных тирозин киназ C-kit (часть семейства PDGFR), такие как соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность семейства рецепторных тирозин киназ C-kit, особенно соединения, которые ингибируют рецептор C-kit, например, иматиниб;
i) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность членов семейства c-Abl и их ген-слитые продукты, например, киназы BCR-Abl, такие как соединения, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют активность членов семейства c-AbI и их генслитые продукты, например, №фенил-2-пиримидин-амин производное, например, иматиниб, PD180970, AG957, NSC 680410 или PD173955 от фирмы ParkeDavis;
j) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность членов семейства протеинкиназ С (РКС) и семейства серин/треонинкиназ Raf, членов семейств МЕК, SRC, JAK,
- 38 031430
FAK, PDK и Ras/MAPK, или семейства киназ PI(3), или семейства киназ, родственных И^-киназам, и/или членов семейства циклин-зависимых киназ (CDK) и в особенности производные стауроспорина, описываемые в патенте US 5093330, например, мидостаурин; другие примеры включают, например, UCN-01, сафингол, BAY 43-9006, бриостатин 1, перифозин, илмофозин, RO 318220 и RO 320432, GO 6976, Isis 3521, LY333531/LY37919, изохинолиновые соединения, такие как описываемые в WO 00/09495; FTI; PD184352 или QAN697 (ингибитор PI3K);
k) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность протеинтирозинкиназы ингибиторы, такие как соединения, которые имеют своей мишенью, уменьшают или ингибируют активность ингибиторы протеин-тирозинкиназы, включают иматиниба мезилат (GLEEVEC) или тирфостин. Тирфостин предпочтительно является соединением с низкой молекулярной массой (Mr<1500) или его фармацевтически приемлемой солью, в особенности соединением, выбранным из класса бензилиденмалонитрильных соединений или класса S-арилбензолмалонитрильных или бисубстратных хинолиновых соединений, более особенно соединением, выбранным из группы, включающей тирфостин A23/RG-50810, AG 99, тирфостин AG 213, тирфостин AG 1748, тирфостин AG 490, тирфостин B44, тирфостин B44 (+) энантиомер, тирфостин AG 555, AG 494, тирфостин AG 556, AG957 и адафостин (адамантиловый эфир 4-{[(2,5-дигироксифенил)метил]амино}бензойной кислоты), NSC 680410, адафостин; и
l) соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность семейства фактора эпидермального роста рецепторных тирозин киназ (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 в виде гомо- или гетеродимеров), такие как соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность семейства рецепторов эпидермальных факторов роста, представляют собой в особенности соединения, белки или антитела, которые ингибируют представителей рецепторных тирозинкиназ EGF, например, рецептора EGF рецептор, ErbB2, ErbB3 и ErbB4 или связываются с EGF или с родственными EGF лигандами, и они в особенности представляют собой соединения, белки или моноклональные антитела, которые в целом и конкретно описаны в WO 97/02266, например, соединение по примеру 39, или в EP 0564409; WO 99/03854; EP 0520722; EP 0566226; EP 0787722; EP 0837063; патент США № 5747498; WO 98/10767; WO 97/30034; WO 97/49688; WO 97/38983 и, особенно, WO 96/30347, например, соединение, известное как СР 358774; WO 96/33980, например, соединение ZD 1839; и WO 95/03283, например, соединение ZM105180, например, трастузумаб (HERCEPTIN), цетуксимаб, Иресса, Тарцева, OSI-774, CI1033, ЕКВ-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 или E7.6.3; и производные 7Шпирроло[2,3-б]пиримидина, которые описаны в WO 03/013541.
Другие антиангиогенные соединения включают соединения, имеющие другой механизм активности, например, не связанный с ингибированием протеин- или липидной киназы, например, талидомид 0 (THALOMID) и TNP-470.
Соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность фосфатазу белков или липидов представляют собой, например, ингибиторы фосфатазы 1, фосфатазы 2А, PTEN или CDC25, например, окадаевая кислота или ее производное.
Соединения, которые индуцируют процессы клеточной дифференциации, представляют собой, например, ретиноевую кислоту, α-, γ- или δ-токоферол или α-, γ- или δ-токотриенол.
Термин ингибитор циклооксидазы, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, например, ингибиторы Сох-2, 5-алкилзамещенную 2-ариламинофенилуксусную кислоту и производные, такие как целекоксиб (CELEBREX), рофекоксиб (VIOXX), эторикоксиб, вальдекоксиб или 5-алкил-2-ариламинофенилуксусную кислоту, например, 5-метил-2-(2'-хлор-6'фторанилино)фенилуксусную кислоту или люмиракоксиб.
Термин бисфосфонаты, как используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, этридоновую, клодроновую, тилудроновую, памидроновую, алендроновую, ибандроновую, ризедроновую и золедроновую кислоту. Этридоновая кислота может быть введена, например, в том виде, каком она поступает в продажу, например, под торговой маркой DIDRONEL. Клодроновая кислота может быть введена, например, в том виде, каком она поступает в продажу, например, под торговой маркой BONEFOS. Тилудроновая кислота может быть введена, например, в том виде, каком она поступает в продажу, например, под торговой маркой SKELID. Памидроновая кислота может быть введена, например, в том виде, каком она поступает в продажу, например, под торговой маркой AREDIA™. Алендроновая кислота может быть введена, например, в том виде, каком она поступает в продажу, например, под торговой маркой FOSAMAX. Ибандроновая кислота может быть введена, например, в том виде, каком она поступает в продажу, например, под торговой маркой BONDRANAT. Ризедроновая кислота может быть введена, например, в том виде, каком она поступает в продажу, например, под торговой маркой ACTONEL. Золедроновая кислота может быть введена, например, в том виде, каком она поступает в продажу, например, под торговой маркой ZOMETA.
Термин ингибиторы mTOR относится к соединениям, которые ингибируют мишень рапамицина (mTOR) у млекопитающих и которые обладают антипролиферативной активностью, такие как сиролимус (Rapamune®), эверолимус (Certican™), CCI-779 и АВТ578.
- 39 031430
Термин гепараназы ингибитор, как он используется в настоящем документе, относится к соединениям, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют деградацию гепаринсульфата. Термин включает, но этим не ограничивается, PI-88.
Термин модификатор биологического ответа, как он используется в настоящем документе, относится к лимфокину или интерферонам, например, интерферону γ.
Термин ингибитор онкогенных изоформ Ras, например, H-Ras, K-Ras или N-Ras, как он используется в настоящем документе, относится к соединениям, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют онкогенную активность Ras, например, а ингибитор фарнезилтрансферазы, например, L-744832, DK8G557 или R115777 (Zarnestra).
Термин ингибитор теломеразы, как он используется в настоящем документе, относится к соединениям, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют активность теломеразы. Соединения, которые имеют своей мишенью, уменьшают или ингибируют активность теломеразы, представляют собой, в особенности, соединения, которые ингибируют рецептор теломеразы, например, теломестатин.
Термин ингибитор метионинаминопептидазы, как он используется в настоящем документе, относится к соединениям, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют активность метиониновой аминопептидазы. Соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность метиониновой аминопептидазы представляют собой, например, бенгамид или его производное.
Термин ингибитор протеасом, как он используется в настоящем документе, относится к соединениям, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют активность протеасомы. Соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность протеасомы, включают, например, PS-341 и MLN 341.
Термин ингибитор матричной металлопротеиназы или ингибитор ММР, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, пептидомиметические и непептидомиметические ингибиторы коллагена, производные тетрациклина, например, гидроксаматный пептидомиметический ингибитор батимастат и его перорально биодоступный аналог маримастат (ВВ-2516), приномастат (AG3340), метастат (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, ТАА211, MMI270B или AAJ996.
Термин агенты, используемые при лечении злокачественных гематологических новообразований, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, ингибиторы FMSподобной тирозинкиназы, например, соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность рецепторов FMS-подобной тирозинкиназы (Flt-3R); интерферон, 1-b-Dарабинофурансилцитозин (ara-c) и бисульфан; и ингибиторы ALK, например, соединения, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют киназу анапластической лимфомы.
Соединения, имеющие своей мишенью, уменьшающие или ингибирующие активность рецепторов FMS-подобной тирозинкиназы (Flt-3R), в особенности, представляют собой соединения, белки или антитела, которые ингибируют члены семейства рецепторов Flt-3R киназы, например, РКС412, мидостаурин, производное стауроспорина и MLN518.
Термин ингибиторы HSP90, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, соединения, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют собственную активность АТРазы HSP90; деградирующие, имеющие в качестве мишени, снижающие или ингибирующие клиентные белки HSP90 посредством убиквитин-протеасомного пути. Соединения, которые имеют в качестве своей мишени, снижают или ингибируют собственную активность АТРазы HSP90, в особенности, представляют собой соединения, белки или антитела, которые ингибируют активность АТРазы HSP90, например, 17-аллиламино-17-деметоксигелданамицин (17AAG), производное гелданамицина, другие связанные с гелданамицином соединения, радикикол и ингибиторы HDAC.
Термин антипролиферативные антитела, как он используется в настоящем документе, включает, но этим не ограничивается, трастузумаб (Herceptin™), Трастузумаб-DM1, эрлотиниб (Tarceva™), бевацизумаб (Avastin™), ритуксимаб (Rituxan®), PRO64553 (анти-CD40) и 2С4 антитело. Под антителами понимаются, например, интактные моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела, образованные по крайней мере двумя интактными антителами, и фрагменты антител, коль скоро они проявляют желаемую биологическую активность.
Для лечения острого миелоидного лейкоза (AML), соединения формулы (I) могут быть использованы в комбинации со стандартной лекарственными средствами при лечении лейкемии, особенно в комбинации с лекарственными средствами, используемыми для лечения AML. В частности, соединения формулы (I) может быть введено в комбинации, например, с ингибитором фарнезилтрансферазы и/или другими лекарственными средствами, используемыми для лечения AML, такими как даунорубицин, адриамицин, Ara-C, VP-16, тенипозид, митоксантрон, идарубицин, карбоплатин и РКС412.
Соединение формулы (I) также могут быть использованы по преимуществу в комбинации друг с другом или в комбинации с другими терапевтическими агентами, в особенности, с другими антималярийными агентами. Такие противомалярийные средства включают, но не ограничиваются прогванил,
- 40 031430 хлорпрогванил, триметоприм, хлорохин, мефлохин, люмефантрин, атовакуон пириметаминсульфадоксин, пириметамин-дапсон, галофантрин, хинин, хинидин, амодиахин, амопирохин, сульфаниламиды, артемизинин, артефлен, артеметер, артесунат примахин, ингалируемый NO, L-аргинин, дипропилен триамин NONO-ат (донор NO), росиглитазон (агонист PPARy), активированный уголь, эритропоэтин, левамизол и пиронаридин.
Соединение формулы (I) также может быть использовано по преимуществу в комбинации друг с другом или в комбинации с другими терапевтическими агентами, такими как используются для лечения лейшманиоза, трипаносомоза, токсоплазмоза и нейроцистицеркоза. Такие агенты включают, но этим не ограничиваются, хлорохин сульфат, атоваквон-прогванил, артеметер-люмефантрин, хинин-сульфат, артезунат, хинин, доксициклин, клиндамицин, меглумина антимониат, натрия стибоглюконат, милтефозин, кетоконазол, пентамидин, амфотерицин В (AmB), липосомальный-AmB, паромомицин, эфлорнитин, нифуртимокс, сурамин, меларсопрол, преднизолон, бензнидазол, сульфадиазин, пириметамин, клиндамицин, триметоприм, сульфаметоксазол, азитромицин, атовакуон, дексаметазон, празиквантелем, альбендазол, бета-лактамы, фторхинолоны, макролиды, аминогликозиды, сульфадиазин и пириметамин.
Структуру активных агентов, идентифицированных кодовыми номерами, дженерическими или торговыми названия, можно узнать из современного издания стандартного справочника The Merck Index или из баз данных, например, Patents International, например, IMC World Publications.
Вышеуказанные соединения, которые могут быть использованы в комбинации с соединением формулы (I), могут быть получены и введены, как описано в данной области техники, так как в документах, цитированных выше.
Соединение формулы (I) также могут быть использованы по преимуществу в комбинации с известными терапевтическими способами, например, введением гормонов или, в особенности, облучением.
Соединение формулы (I), в частности, может быть использовано в качестве радиосенсибилизатора, особенно для лечения опухолей, которые проявляют слабую чувствительность к радиотерапии.
Примеры
Экспериментальные данные.
Следующие примеры предназначены для иллюстрации изобретения и не должны истолковываться как ограничивающие. Температуры даны в градусах Цельсия. Если не указано иное, все упаривания выполняются при пониженном давлении, обычно между примерно 15 мм рт.ст. и 100 мм рт.ст. (=20-133 мбар). Структура конечных продуктов, промежуточных и исходных материалов подтверждается стандартными аналитическими методами, например, микроанализом и спектральными характеристиками, например, МС, ИК, ЯМР. Используемые сокращения являются обычными в данной области.
Все исходные материалы, структурные элементы, реагенты, кислоты, основания, дегидратирующие агенты, растворители и катализаторы, используемые для синтеза соединений по настоящему изобретению, являются коммерчески доступными или могут быть получены путем органических методов синтеза, известных специалисту в данной области, (Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Vol. 21). Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут быть получены путем органических методов синтеза, известных специалисту в данной области техники, как показано в следующих примерах.
- 41 031430
Сокращения
ACN ацетонитрил
водн. водный
Вос трет-бутоксикарбонил
ушир. уширенный
Brettphos 2-(дициклогексилфосфино)-3,6диметокси-2',4',6'-триизопропил1,1' -бифенил
Brettphos хлор[2-(дициклогексилфосфино)-3,6-
Palladacycle диметокси-2',4',6'-триизопропил1,1 '-бифенил] [2- (2аминоэтил)фенил]-палладий(II)
Cui йодид меди (I)
CuSO4 сульфат меди (II)
Д день(дни), дублет
DCM дихлорметан
DIPEA диизопропилэтиламин
ДМФ диметилформамид
ДМСО диметилсульфоксид
экв . эквивалент(ы)
ESI ионгизация электрораспылением
Et3N триэтиламин
EtOAc этилацетат
EtOH этанол
4 час(ы)
HNO3 азотная кислота
ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
H3PO4 фосфорная кислота
- 42 031430
H2SO4 серная кислота
К2СО3 карбонат калия
ЖХМС жидкостная хроматография с массспектрометрией
МеОН метанол
Μ мин
MS mw
Na2CO3
NaHCO3
Na2SO4 hBuOH
NMP
ЯМР
Pd(OAc)2
Pd(PPh3) 4
PdCl2 (PPh3) 2 мультиплет минута(ты) масс-спектрометрия микроволны карбонат натрия бикарбонат натрия сульфат натрия н-бутанол
М-ме тил-2-пирролидон спектрометрия ядерного магнитного резонанса диацетат палладия тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия (II)
ОФ обращенная фаза
об. в минобороты в минуту
Rt время удерживания
RT комнатная температура
насыщ. насыщенный
С КФ сверхкритическая флюидная хроматография
раст. раствор
трет-бутил трет-бутилтрет-бутил
ТФУ трифторуксусная кислота
ТГФ тетрагидрофуран
У ВЭЖХ ультра высокоэффективная жидкостная хроматография
Используемым микроволновым оборудованием является Biotage Initiator®.
Все соединения названы с использованием программного обеспечения ChemDraw® Ultra или были использованы коммерческие названия.
Общая информация по хроматографии.
ЖХМС метод, используемый во всех примерах:
ВЭЖХ, размеры колонки: 2,1x50 мм;
ВЭЖХ, тип колонки: Acquity UPLC HSS T3, 1,8 мкм;
ВЭЖХ, элюент: А) вода + 0,05 об.%-ная муравьиная кислота + 3,75 мМ ацетат аммония В) ACN + 0,04 об.%-ная муравьиная кислота;
ВЭЖХ, градиент: 5-98% В за 1,4 мин, 98% В 0,4 мин, поток=1,0 мл/мин;
ВЭЖХ, температура колонки: 60°C.
Подготовка примеров.
Когда указано, что соединения были получены способом, описанным в отношении более раннего примера, специалисту в данной области будет понятно, что время реакции, количество эквивалентов реагентов и температура реакции могут быть изменены для каждого конкретной реакции, и что, тем не менее, може быть необходимо или желательно использовать различные условия обработки или очистки. Соединения, которые показывают атропизомеризм вокруг связи N-R1, могут быть получены в виде смесей диастереомерных атропизомеров, которые могут быть разделены в условиях хроматографии. Эти соединения в примерах показаны в виде смесей и, если возможно, кроме того, в виде разделенных диастереомерных атропоизомеров с подробным описанием условий разделения в каждом конкретном случае.
Пример 1. 2-Амино-4-(^^)-2-(6-фтор-5-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил
- 43 031430 \l-N
a) 2-Бром-3-фтор-6-нитробензойной кислоты.
Раствор 2-бром-3-фторбензойной кислоты (CAS registry 132715-69-6) (5 г, 22,83 ммоль) в конц. H2SO4 (15,82 мл, 297 ммоль) охлаждали до температуры 0°C и обрабатывали по каплям дымящей HNO3 (1,36 мл, 27,4 ммоль). Образовывался осадок белого цвета. Полученную суспензию перемешивали при температуре 0°C в течение 1,5 ч. Смесь выливали в ледяную воду и перемешивали в течение 30 мин. Полученную смесь разбавляли водой и экстрагировали DCM. Затем органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Это давало твердое вещество не совсем белого цвета (5,67 г, 94%) смеси 2-бром-3-фтор-6-нитробензойной кислоты (региоизомер 1) и 2-бром-3-фтор-5нитробензойной кислоты (региоизомер 2) при соотношении прибл. 2:1, которую использовали на следующей стадии без разделения.
ВЭЖХ 1-й региоизомер (69%) Rt=0,33 мин; ВЭЖХ 2-й региоизомер (30%) Rt=0,52 мин.
b) 6-Амино-2-бром-3-фторбензойная кислота.
Смесь 2-бром-3-фтор-6-нитробензойной кислоты и 2-бром-3-фтор-5-нитробензойной кислоты (5,60 г, 21,21 ммоль, при соотношении прибл. 2:1) растворяли в ТГФ (140 мл) и последовательно дегазировали и продували азотом (5х). Затем раствор желтого цвета обрабатывали 10%-ным палладием на углероде (1,13 г, 1,06 ммоль). Смесь темного цвета продували, затем насыщали газообразным водородом и оставляли перемешиваться в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через hyflo и слой промывали EtOAc (2х). Собранные фильтраты упаривали в вакууме с получением твердого вещества светло-коричневого цвета (5,4 г, 90%) в виде смеси прибл. 2:1 6амино-2-бром-3-фторбензойной кислоты (региоизомер 1) и 5-амино-2-бром-3-фторбензойной кислоты (региоизомер 2). Сырую смесь использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ВЭЖХ 1-й региоизомер (67%) Rt=0,50 мин; ESIMC: 234, 236 [(М+Н)+].
ВЭЖХ 2-й региоизомер (33%) Rt=0,51 мин; ESIMC: 234, 236 [(м+н)+].
c) ^0)-трет-Бутил 2-(5-бром-6-фтор-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-((третбутилдиметилсилил) окси)пирролидин-1 -карбоксилат.
Сухой раствор смеси 6-амино-2-бром-3-фторбензойной кислоты и 5-амино-2-бром-3фторбензойной кислоты (5,4 г, 13,84 ммоль, при соотношении прибл. 2:1) и (2S,4S)-1-(третбутоксикарбонил)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пирролидин-2-карбоновой кислоты (CAS registry 401564-17-8) (7,97 г, 60%-ное содержание, 13,84 ммоль) в пиридине (25 мл) обрабатывали трифенилфосфитом (CAS registry 101-02-0) (9,1 мл, 34,6 ммоль). Раствор светло-коричневого цвета перемешивали при температуре 70°C в течение 18 ч и затем по каплям добавляли анилин (CAS registry 62-53-3) (1,69 мл, 18,55 ммоль). После перемешивания реакционной смеси в течение еще 3 ч при температуре 70°C, пиридин удаляли при пониженном давлении и затем остаток разбавляли EtOAc, промывали насыщ. водн. раствором NaHCO3 (2х) и насыщенным солевым раствором. Органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле (от 0 до 15% EtOAc/гептан) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла оранжевого цвета (1,70 г, 17%-ный выход, 85%-ная чистота), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ВЭЖХ Rt=1,60 мин; ESIMC: 618, 620 [(М+Н)+].
d) ^0)-трет-Бутил 4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(6-фтор-5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-карбоксилат.
Раствор ^0)-трет-бутил 2-(5-бром-6-фтор-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-((третбутилдиметилсилил)окси)пирролидин-1-карбоксилата (160 мг, 0,22 ммоль, 85%-ное содержание) в ДМФ (2 мл) обрабатывали 1-метил-4-(трибутилстаннил)-Ш-пиразолом (CAS registry 179055-21-1) (93 мкл, 0,27 ммоль). Затем реакционную смесь дегазировали аргоном в течение 5 мин и обрабатывали бис-(три-третбутилфосфин)палладием(0) (CAS registry 53199-31-8) (11,24 мг, 0,022 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в герметически закрытом сосуде в атмосфере аргона при температуре 80°C в течение 18 ч, затем разбавляли EtOAc, фильтровали через универсальный картридж для разделения фаз Biotage и объединенные органические фазы концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле (от 0 до 15% MeOH/DCM) с получением указанного в заголовке соединения в виде смолы желтого цвета (127 мг, 75%-ный выход, 80%-ная чистота), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ВЭЖХ Rt=1,51 мин; ESIMC: 620 [(М+Н)+].
- 44 031430
e) 6-Фтор-2-((2S,4S)-4-гидроксипирролидин-2-ил)-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)-3-фенилхиназолин4(3И)-он.
При комнатной температуре раствор (2S,4S)-трет-бутил 4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(6фтор-5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1карбоксилата (127 мг, 0,16 ммоль, 80%-ная чистота) в ТГФ (0,7 мл) обрабатывали водн. раствором H3PO4 (0,8 мл, 85 мас.%). Смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. Добавляли воду и смесь подщелачивали насыщ. водн. раствором NaHCO3 до pH ~9. Смесь экстрагировали EtOAc (2х) и DCM (2х), затем объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением смолы желтого цвета (80 мг, 96%-ный выход, 80%-ная чистота), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ВЭЖХ Rt=0,49 мин; ESIMC: 406 [(М+Н)+].
f) 2-Амино-4-(^^)-2-(6-фтор-5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил.
Раствор 6-фтор-2-(^^)-4-гидроксипирролидин-2-ил)-5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-3фенилхиназолин-4(3Щ-она (25 мг, 0,062 ммоль) и 2-амино-4-хлор-6-метилпиримидин-5-карбонитрил (CAS registry 99586-66-0) (10,40 мг, 0,062 ммоль) в EtOH (1 мл) обрабатывали DIPEA (0,022 мл, 0,12 ммоль) и облучали при температуре 120°C в течение 45 мин в микроволновой печи.
Реакционную смесь упаривали при пониженном давлении. Масло обрабатывали DCM и промывали насыщ. водн. раствором NaHCO3, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали путем RP-ВЭЖХ (колонка SunFire C18, 100x30 мм, 5 мкм, скорость потока 30 мл/мин; градиент ACN + 0,1% ТФУ в Н2О + 0,1% ТФУ/от 12% до 32% за 16 мин, общее время работы: 20 мин) с получением указанного в заголовке соединения в виде свободного основания, полученного путем элюирования через картридж Varian ipe PL-HCO3 МР (22,2 мг, 67%-ный выход) и последующего упаривания.
ВЭЖХ Rt=0,81 мин; ESIMC: 538 [(М+Н)+].
'11 ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ6): δ 7,75-7,83 (м, 1Н), 7,62-7,74 (м, 2Н), 7,46-7,60 (м, 4Н), 7,34-7,45 (м, 2Н), 6,33-7,18 (ушир. м, 2Н), 5,09-5,40 (м,1Н), 4,47-4,76 (м, 1Н), 4,15 (д, 2Н), 3,81 (с, 3H), 3,61-3,75 (м, 1Н), 2,27 (с, 3H), 1,94-2,09 (м, 1Н), 1,80-1,93 (м, 1Н).
Примеры 2-33. Соединения, представленные в табл. 1-3, были получены способом, аналогичным тому, который использовался в примере 1. Поперечное связывание группы R2 может быть осуществлено как показано на второй, третьей или четвертой стадии последовательности (см. схему 1, 2 и 3 соответственно).
Альтернатива для примера 7. 2-Амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил
a) 2-Бром-3-фтор-6-нитробензойная кислота.
Раствор 2-бром-3-фторбензойной кислоты (CAS registry 132715-69-6) (155 г, 0,672 моль) в конц. H2SO4 (750 мл, 14 моль) охлаждали до температуры 0°C и в течение периода 1 ч по каплям добавляли дымящую HNO3 (39 мл, 0,864 моль), поддерживая температуру в интервале 0-5°C. Образовывался осадок белого цвета. Полученной суспензии давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Смесь выливали в ледяную воду (3 л), перемешивали в течение 30 мин и экстрагировали 3x1 л DCM. Органические фазы объединяли, промывали насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия. После упаривания растворителя получали 160 г твердого вещества не совсем белого цвета в виде смеси 2-бром-3-фтор-6-нитробензойной кислоты (региоизомер 1) и 2-бром-3-фтор-5нитробензойной кислоты (региоизомер 2) при соотношении прибл. 2:1. Сырой продукт растворяли в 2н NaOH (2 л) и pH доводили до 2 путем добавления конц. HCl. Экстрагирование с помощью 4х2 л этилацетата приводило к выделению региоизомера 2 в органическую фазу, тогда как региоизомер 1 в основном оставался в водной фазе. После удаления региоизомера 2 водную фазу доводили до pH 1 путем добавления еще конц. HCl и экстрагировали второй раз с помощью 2х1 л этилацетата. Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и упаривали с получением твердого вещества бежевого цвета (92 г, 47%), которое содержало 91% региоизомера 1 и 6% региоизомера 2.
ВЭЖХ 1-й региоизомер (91%) Rt=0,33 мин; ВЭЖХ 2-й региоизомер (6%) Rt=0,52 мин.
'11 ЯМР (600 МГц, ДМСОЛ6): δ 8,34-8,37 (дд, 1Н), 7,73-7,76 (т, 1Н).
b) 6-Амино-2-бром-3-фторбензойная кислота.
2-Бром-3-фтор-6-нитробензойной кислоты (87 г, 0,3 моль, 91% региоизомера 1) растворяли в ТГФ (870 мл) и последовательно дегазировали и продували азотом (5х). Затем раствор желтого цвета обрабатывали 10%-ным палладием на углероде (26 г). Смесь темного цвета продували, затем насыщали газообразным водородом и оставляли перемешиваться в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь фильтровали через hyflo и слой промывали ТГФ (2х). Собранные фильтраты упаривали в вакууме с получением твердого вещества бежевого цвета (76 г), которое суспендировали в диэтиловом эфире (300 мл) и перемешивали в течение 1 ч при температуре 0°C. Суспензию фильт
- 45 031430 ровали и твердое вещество сушили в вакууме с получением 60 г (85%) 6-амино-2-бром-3-фторбензойной кислоты в виде одного изомера.
ВЭЖХ (100%) Rt=0,47 мин; ESIMC: 234, 236 [(М+Н)+].
1H ЯМР (600 МГц, ДМСО-а6): δ 7,14-7,17 (т, 1Н), 6,74-6,77 (дд, 1Н).
c) ^^)-трет-Бутил 2-(5-бром-6-фтор-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-((третбутилдиметилсилил)окси)пирролидин-1-карбоксилат.
Сухой раствор смеси 6-амино-2-бром-3-фторбензойной кислоты (63 г, 242 ммоль) и (28,48)-1-(третбутоксикарбонил)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пирролидин-2-карбоновой кислоты (CAS registry 401564-17-8) (120 г, 70%-ное содержание, 243 ммоль) в пиридине (370 мл) обрабатывали трифенилфосфитом (CAS registry 101-02-0) (159 мл, 606 ммоль). Раствор светло-коричневого цвета перемешивали при температуре 80°C в течение 4 ч и затем по каплям добавляли анилин (CAS registry 62-53-3) (26,5 мл, 291 ммоль). После перемешивания реакционной смеси в течение еще 1 ч при температуре 80°C пиридин удаляли при пониженном давлении и затем остаток разбавляли EtOAc, промывали 1 н NaOH (2x1 л) и насыщенным солевым раствором. Органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле (от 0 до 15% EtOAc/гептан) с получением указанного в заголовке соединения в виде пены желтого цвета (53 г, 35%ный выход, >90%-ная чистота), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ВЭЖХ Rt=1,57 мин; ESIMC: 618, 620 [(М+Н)+].
d) (2S,4S)-трет-Бутил 4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(6-фтор-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-карбоксилат.
В раствор ^^)-трет-бутил 2-(5-бром-6-фтор-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4((трет-бутилдиметилсилил)окси)пирролидин-1-карбоксилата (53 г, 86 ммоль, >90%-ное содержание) в NMP (600 мл) добавляли (2-метоксипиридин-5-ил)бороновую кислоту (CAS registry 628692-15-9) (19,8 г, 129 ммоль), палладием(П)-ацетат (CAS registry 3375-31-3) (1,92 г, 8,6 ммоль), карбонат натрия (27,2 г, 257 ммоль) и X-Phos (CAS registry 564483-18-7) (8,17 г, 17,1 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 140°C и перемешивали в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь распределяли между этилацетатом (1 л) и водой (1 л). Водную фазу экстрагировали этилацетатом (1 л), и объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (1 л), сушили над сульфатом натрия и упаривали. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле (от 0 до 40% этилацетат/гексан) с получением пены желтого цвета (37 г), которую опять растворяли в DCM (300 мл) и обрабатывали смолой PL-TMT МР (0,66 ммоль/г) в течение 18 ч. После фильтрования и упаривания в вакууме получали указанное в заголовке соединение в виде пены белого цвета (35 г, 63%-ный выход).
ВЭЖХ Rt=1,52 мин; ESIMC: 648 [(М+Н)+].
e) 6-Фтор-2-((2S,4S)-4-гидроксипирролидин-2-ил)-5-(2-метоксипиримцдин-5-ил)-3фенилхиназолин-4(3Щ-он.
При комнатной температуре раствор (2S,4S)-трет-бутил 4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(6фтор-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3 -фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1карбоксилата (35 г, 54 ммоль) в ТГФ (400 мл) обрабатывали водн. раствором H3PO4 (600 мл, 85 мас.%). Смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Добавляли воду и смесь подщелачивали насыщ. водн. раствором Na2CO3 до pH ~10. Смесь экстрагировали EtOAc (2x5 л) и DCM (2x5 л), затем объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением твердого вещества бледно-желтого цвета (22,3 г, 90%-ный выход), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ВЭЖХ Rt=0,60 мин; ESIMC: 434 [(М+Н)+].
f) 2-Амино-4-(^^)-2-(6-фтор-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил.
Раствор 6-фтор-2-((2S,4S)-4-гидроксипирролидин-2-ил)-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-3фенилхиназолин-4(3Щ-она (22 г, 50,8 ммоль) и 2-амино-4-хлор-6-метилпиримидин-5-карбонитрила (CAS registry 99586-66-0) (9 г, 50,8 ммоль) в EtOH (600 мл) обрабатывали DIPEA (17,7 мл, 102 ммоль) и облучали при температуре 120°C в течение 60 мин в микроволновой печи.
Реакционную смесь упаривали при пониженном давлении. Масло обрабатывали DCM и промывали насыщ. водн. раствором NaHCO3, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле (от 10 до 100% этилацетат/гексан) с получением 18 г (63%-ный выход) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного твердого вещества.
ВЭЖХ Rt=0,85 мин; ESIMC: 566 [(М+Н)+].
Ή ЯМР (600 МГц, ДМСО-df,) δ 8,55 (ушир. с, 2Н), 7,83-7,78 (м, 2Н), 7,73 (дд, 1Н), 7,58-7,52 (м, 2Н), 7,52-7,48 (т, 1Н), 7,41 (д, 1Н), 7,05 (ушир. с, 1Н), 6,65 (ушир. с, 1Н), 5,32 (ушир. с, 1Н), 4,61 (ушир. с, 1Н), 4,18 (м, 2Н), 3,93 (с, 3H), 3,73 (ушир. с, 1Н), 2,29 (с, 3H), 2,04 (ушир. с, 1Н), 1,91-1,85 (м, 1Н).
Кристаллизация по примеру 7.
г аморфного продукта по примеру 7 отвешивали в круглодонную колбу и перемешивали со ско
- 46 031430 ростью 300 об/мин в 400 мл очищенной воды в течение 7 дней. Воду отфильтровывали и собранные твердые продукты сушили в вакууме при 60°C до постоянного веса. Полученное вещество оказалось кристаллическим согласно рентгеновской порошковой дифрактометрии с температурой плавления 178,1°C, как определено методом дифференциальной сканирующей калориметрии при 10°^мин (размер образца 2,2 мг).
Было обнаружено, что кристаллическая форма по примеру 7 содержит 10,7% (мас./мас.) воды, определенной с помощью элементного анализа и, вероятно, является тригидратом.
Таблица 1
Соединения, полученные в соответствии со схемой 1 (поперечное связывание арила на второй стадии)
R1, R2, R3, R5 имеют значения, указанные выше для соединения формулы (I), Hal1 представляет собой галоген, такой как бром или хлор, R представляет собой Н или R7, как определено выше для соединения формулы (I); R' представляет собой R или заместитель, который может быть преобразован в R путем одной или нескольких стадий изменения функциональных групп или стадии введения функциональ ных групп.
а) При комнатной температуре сухой раствор производного антраниловой кислоты II (1 экв.) и энантиомерно чистое производное циклической аминокислоты III (1 экв.) в пиридине (0,83 М) обрабатывали трифенилфосфитом (2,5 экв.), и реакционную смесь перемешивали при температуре 70°C в течение от 2 до 18 ч, затем обрабатывали амино соединением IV. Реакционную смесь перемешивали при температуре от 70 до 80°C в течение от 2 до 18 ч.
b1) Конденсация по Стиллу.
В атмосфере аргона раствор хлор или бром промежуточного соединения V (1 экв.) в ДМФ (от 0,07 до 0,1 М) обрабатывали гетероарил трибутилстаннаном VI (от 1,1 до 1,5 экв.) и бис-(три-третбутилфосфин)палладием(0) (0,1 экв.). Пробирку герметично закрывали и реакционную смесь перемешивали при температуре от 80 до 100°C в течение от 3 ч до 4 дней, или b2) конденсация по Сузуки.
Раствор хлор или бром промежуточного соединения V (1 экв.), гетероарил бороновой кислоты VI (2 экв.), Pd(OAc)2 (0,2 экв.)/BrettPhos (0,6 экв.) или BrettPhos Palladacycle (CAS registry 1148148-01-9) (0,2 экв.) и Na2CO3 (3 экв.) в NMP (0,094 М) дегазировали и насыщали аргоном (3х). Реакционную смесь облучали в микроволновом реакторе при температуре от 150 до 160°C в течение от 1 до 3 ч при нормальном поглощении с перезагрузкой катализатора и лиганда, при необходимости.
c) При комнатной температуре сухой раствор защищенного промежуточного соединения VII (1 экв.) в ТГФ или DCM (от 0,1 до 0,6 М) обрабатывали ТФУ (10 экв.), водн. раствором H3PO4 (85 мас.%) или водн. раствором H3PO4, затем ТФУ, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре
- 47 031430 в течение от 1 ч до 5 дней.
d) При комнатной температуре раствор промежуточного соединения с удаленными защитными группами (1 экв.) и арилгалогенид VIII (от 1 до 2,5 экв.) в спирте (н-BuOH или EtOH, от 0,08 до 0,1 М) обрабатывали DIPEA (от 2 до 5 экв.) и облучали в микроволновом реакторе или нагревали на масляной бане при температуре 120-160°C в течение от 0,5 ч до 6 дней.
Очистку промежуточных соединений и целевые продукты IX осуществляли путем флэшхроматографии, ВЭЖХ или СКФ.
Таблица 2
Соединения, полученные в соответствии со схемой 2 (поперечное связывание арила на третьей стадии)
Пример Соединение ВЭЖХ Rt [мин] МС [m/z; (М+1)+]
2 Yl-N Yjt η \н2 (S)-4-Амино-б-(2-(5-(1-метил-1Н-пиразол4-ил)-4-оксо-З-фенил-З, 4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB1, IC1, ID1, IE1 Условия: СВ1, CD1 0,93 490
3 О N^N JO ~ήη2 (S)-4-Амино-б-(2-(5-(2-метоксипиримидин5-ил)-4-оксо-З-фенил-З, 4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB1, IC1, ID1, IE6 Условия: СВ1, CD2 0,98 518
- 48 031430
4 N^N V? η Η2Ή=^~·®ν (S)-2-Амино-4-(2-(5-(2-метоксипиримидин5-ил)-4-оксо-З-фенил-З, 4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил) 6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB1, IC1, ID2, IE6 Условия: СВ1, CD2 1,00 532
5 \l—N N-У ί\ιη2 (S)-4-Амино-6-(2-(6-фтор-5-(1-метил-1Нпиразол-4-ил)-4-оксо-З-фенил-З, 4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB3, IC1, ID1, IE1 Условия: СВ1, CD1 0,93 508
- 49 031430
6 \-N Η2Νγ/Ν^Ν /yN (S)-2-Амино-4-(2-(6-фтор-5-(1-метил-1Hпиразол-4-ил)-4-оксо-З-фенил-З, 4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил) 6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB3, IC1, ID2, IE1 Условия: СВ1, CD1 0, 96 522
7 nA>n N-V Ν—/ H2N—\—=N 2-Амино-4-( (2S,4S)—2—(6-фтор-5-(2метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-З-фенил3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4гидроксипирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB3, IC1, ID2, IE6 Условия: СВ2, CD2 0,87 566
- 50 031430
- 51 031430
Схема 2
XI IX
R1, R2, R3, R5 имеют значения, указанные выше для соединения формулы (I), Hal1 представляет собой галоген, такой как бром или хлор, R представляет собой Н или R7, как определено выше для соединения формулы (I); R' представляет собой R или заместитель, который может быть преобразован в R путем одной или нескольких стадий изменения функциональных групп или стадии введения функциональных групп.
a) При комнатной температуре сухой раствор производного антраниловой кислоты II (1 экв.) и энантиомерно чистое циклической аминокислоты производное III (1 экв.) в пиридине (0,83 М) обрабатывали трифенилфосфитом (2,5 экв.), и реакционную смесь перемешивали при температуре 70°С в течение от 2 до 18 ч, затем обрабатывали амино соединением IV. Реакционную смесь перемешивали при температуре от 70 до 80°С в течение от 2 до 18 ч.
b) При комнатной температуре сухой раствор защищенного промежуточного соединения (1 экв.) в ТГФ или DCM (от 0,1 до 0,6 М) обрабатывали ТФУ (10 экв.), водн. раствором H3PO4 (85 мас.%) или водн. раствором H3PO4, затем ТФУ, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение от 1 ч до 5 дней.
c) Конденсация по Стиллу.
В атмосфере аргона раствор хлор или бром промежуточного соединения X (1 экв.) в ДМФ (от 0,07 до 0,1 М) обрабатывали гетероарил трибутилстаннаном VI (от 1,1 до 1,5 экв.) и бис-(три-третбутилфосфин)палладием(0) (0,1 экв.). Пробирку герметично закрывали и реакционную смесь перемешивали при температуре от 80 до 100°С в течение от 3 ч до 4 дней.
d) При комнатной температуре раствор промежуточного соединения XI (1 экв.) и арилгалогенида VIII (от 1 до 2,5 экв.) в спирте (н-BuOH или EtOH, от 0,08 до 0,1 М) обрабатывали DIPEA (от 2 до 5 экв.) и облучали в микроволновом реакторе или нагревали на масляной бане при температуре 120-160°С в течение от 0,5 ч до 6 дней.
Очистка промежуточных соединений и целевые продукты IX осуществляли путем флэшхроматографии, ВЭЖХ или СКФ.
- 52 031430
Таблица 3
Соединения, полученные в соответствии со схемой 3 (присоединение арила на четвертой , стадии)
Пример Соединение ВЭЖХ Rt [мин] МС [m/z; (М+1)+]
13 Yl-N V J? jA η~ Ό . (S)-2-Амино-4-метил-6-(2-(5-(1-метил1Н-пиразол-4-ил)-4-оксо-З-фенил-З,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB1, IC1, ID2, IE1 Условия: СВ1, CD1 0,96 504
14 \l-N ί\ιη2 (S)-4-Амино-б-(2-(5-(1-метил-1Нпиразол-4-ил)-4-оксо-З-(о-толил)-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB1, IC2, ID1, IE1 Условия: СВ1, CD1 1:1 Смесь диастереоизомерных атропоизомеров 0,97, 0,99 504
Схема 3
XII IX
R1, R2, R3, R5 имеют значения, указанные выше для соединения формулы (I), Hal1 представляет собой галоген, такой как бром или хлор, R представляет собой Н или R7, как определено выше для соединения формулы (I); R' представляет собой R или заместитель, который может быть преобразован в R путем одной или нескольких стадий изменения функциональных групп или стадии введения функциональных групп.
- 53 031430
a) При комнатной температуре сухой раствор производного антраниловой кислоты II (1 экв.) и энантиомерно чистое производное циклической аминокислоты III (1 экв.) в пиридине (0,83 М) обрабатывали трифенилфосфитом (2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при температуре 70°C в течение от 2 до 18 ч, затем обрабатывали амино соединение IV. Реакционную смесь перемешивали при температуре от 70 до 80°C в течение от 2 до 18 ч.
b) При комнатной температуре сухой раствор защищенного промежуточного соединения (1 экв.) в ТГФ или DCM (от 0,1 до 0,6 М) обрабатывали ТФУ (10 экв.), водн. раствором H3PO4 (85 мас.%) или водн. раствором H3PO4, затем ТФУ, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение от 1 ч до 5 дней.
c) При комнатной температуре раствор промежуточного соединения с удаленными защитными группами X (1 экв.) и арилгалогенид VIII (от 1 до 2,5 экв.) в спирте (н-BuOH или EtOH, от 0,08 до 0,1 М) обрабатывали DIPEA (от 2 до 5 экв.) и облучали в микроволновом реакторе или нагревали на масляной бане при температуре 120-160°C в течение от 0,5 ч до 6 дней.
d1) Конденсация по Стиллу.
В атмосфере аргона раствор хлор или бром промежуточного соединения XII (1 экв.) в ДМФ (от 0,07 до 0,1 М) обрабатывали гетероарил трибутилстаннаном VI (от 1,1 до 1,5 экв.) и бис-(три-третбутилфосфин)палладием(0) (0,1 экв.). Пробирку герметично закрывали и реакционную смесь перемешивали при температуре от 80 до 100°C в течение от 3 ч до 4 дней, или d2) конденсация по Сузуки.
Раствор хлор или бром промежуточного соединения XII (1 экв.), гетероарил бороновую кислоту или гетероарил боронатный эфир VI (1,2-2 экв.), Pd(OAc)2 (0,2 экв.)/BrettPhos (0,6 экв.), BrettPhos Palladacycle (CAS registry 1148148-01-9) (0,2 экв.) или PdCl2(PPh3)2 (0,07 экв.) и Na2CO3 (2,4-3 экв.) в NMP (0,094 М) или ацетонитриле (0,125 М) дегазировали и насыщали аргоном (3х). Реакционную смесь облучали в микроволновом реакторе при температуре от 150 до 160°C в течение от 5 мин до 3 ч с перезагрузкой катализатора и лиганда, при необходимости, или d3) конденсация Соногаширы.
Раствор бром промежуточного соединения XII (1 экв.), алкин VI (3 экв.), Pd(Ph3)4 (0,05 экв.), CuI (0,1 экв.) и Et3N (3 экв.) в ДМФ (0,1 М) в закрытом сосуде нагревали при температуре 100°C в течение 18 ч. Вновь помещали те же количества Pd(Ph3)4, CuI и алкина, чтобы завершить преобразование, и реакционную смесь перемешивали в течение еще 4 дней при температуре 100°C.
Любые функциональные группы, присутствующие в R2, могут быть дополнительно модифицированы в дополнительных стадиях, как описано в отдельных примерах, показанных ниже.
Очистку промежуточных соединений и целевых продуктов IX осуществляли путем флэшхроматографии, ВЭЖХ или СКФ.
- 54 031430
Пример Соединение ВЭЖХ Rt [мин] МС [m/z; (М+1)+]
15 Аνη2 (S)-4-Амино-б-(2-(5-(1-метил-1Нимидазол-4-ил)-4-оксо-З-фенил-З,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB1, IC1, ID1, IE2 Условия: СВ1, CD1 0,70 490
16 N-N7 j? jZj] ^Α'Ν,.,οη N-V Ν—( Η2Ν——=Ν 2-Амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(1метил-1Н-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB1, IC1, ID2, IE1 Условия: СВ2, CD1 0,79 520
- 55 031430
17 N^>N X x xj nV h2n—<ζ_Э—=N (S)-2-Амино-4-метил-6-(2-(4-оксо-3фенил-5-(пиримидин-5-ил)-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB2, IC1, ID2, IE7 Условия: СВ1, CD2 0, 91 502
18 /°\/% Хд Ό LAnA-\ nV nV H2N——=N (S)-2-АМИНО-4-(2-(5-(5-метоксипиридин3-ил)-4-оксо-З-фенил-З,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB2, IC1, ID2, IE8 Условия: СВ1, CD2 1, 11 531
- 56 031430
19 N^N ΪαΌ ^Sd nV h2n——=N (S)-2-Амино-4-метил-6-(2-(5-(2метилпиримидин-5-ил)-4-оксо-З-фенил3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин1-ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB2, IC1, ID2, IE9 Условия: СВ1, CD2 0, 94 516
20 nV Η2Ν—A—=Ν 0, 90 501
(S)-2-Амино-4-метил-6-(2-(4-оксо-3фенил-5-(пиридин-3-ил)-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)пиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB2, IC1, ID2, IE10 Условия: СВ1, CD2
- 57 031430
21 ЧО Хл JO N—/ H2N—^Jv>—=N (S)-2-АМИНО-4-(2-(5-(6-метоксипиридин3-ил)-4-оксо-З-фенил-З, 4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA1, IB2, IC1, ID2, IE11 Условия: СВ1, CD2 1,11 531
22 ЧО N^N nV H2N——=N 2-АМИНО-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(2метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-З-фенил3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB2, IC1, ID2, IE6 Условия: СВЗ, затем СВ1, CD2 0, 84 548
- 58 031430
23 N^N Υχη ^Α·-\ 1OH N-У N—/ h2n——=N 0,77 532
2-Амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(2метилпиримидин-5-ил)-4-оксо-З-фенил3, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB2, IC1, ID2, IE9 Условия: СВЗ, затем СВ1, CD2
XW ^А-'\..,он
24 Ν-/ Η2Ν—У—=Ν 0,72 517
2-АМИНО-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(4оксо-З-фенил-5-(пиридин-3-ил)-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB2, IC1, ID2, IE10 Условия: СВЗ, затем СВ1, CD2
- 59 031430
25 nV H2N—A—=N 2-АМИНО-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(5метоксипиридин-3-ил)-4-оксо-3-фенил3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB2, IC1, ID2, IE8 Условия: СВЗ, затем СВ1, CD2 0, 81 547
26 N^N j? 'VonV H2N—A—=N 0,75 518
2-АМИНО-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(4оксо-З-фенил-5-(пиримидин-5-ил)-3, 4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB2, IC1, ID2, IE7 Условия: СВЗ, затем СВ1, CD2
- 60 031430
27 [l N 11 jO ДЛА nA H2N——=N 2-Амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(6метоксипиридин-3-ил)-4-оксо-З-фенил3, 4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB2, IC1, ID2, IE11 Условия: СВЗ, CD2 0, 94 547
28 НО ^N-N 1ОН nA nA H2N——=N 2-Амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(1(2-гидроксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил)-4оксо-З-фенил-З,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB2, IC1, ID2, IE5 Условия: СВ2, CD2 После удаления защитных групп с использованием метода СЕ 0,74 550
- 61 031430
29 N^>N Αζι,Χ) μΎ H2N——=N 2-АМИНО-4-((2S,4S)-2-(5-(2этоксипиримидин-5-ил)-б-фтор-4-оксо-Зфенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4гидроксипирролидин-1-ил)-6метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA2, IB3, IC1, ID2, IE3 Условия: СВ2, CD1 0, 94 580
30 N-NZ Xjuo νΎ Η2Ν——=Ν 2-АМИНО-4-((2S,4S)-4-φτορ-2-(5-(1метил-1Н-пиразол-4-ил)-4-оксо-З-фенил3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрил Предшественники: IA3, IB2, IC1, ID2, IE1 Условия: СВ2, CD1 0, 88 522
- 62 031430
Общие способы, используемые для получения соединений по примерам в таблице.
СА) Циклизация с использованием POPh3.
При комнатной температуре сухой раствор производного аминокислоты (1 экв.) и производного антраниловой кислоты (1 экв.) в пиридине (0,83 М) обрабатывали трифенилфосфитом (2,5 экв.), и реакционную смесь перемешивали при температуре 70°С в течение от 2 до 18 ч, затем обрабатывали амино или гидразин производным. Реакционную смесь перемешивали при температуре 70°С в течение от 2 до 18 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc, промывали насыщ. водн. раствором NaHCO3 (2х) или насыщ.
- 63 031430 водн. раст. CuSO4 и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле (гептан/EtOAc).
CB) Условия удаления защитных групп.
СВ1) С использованием ТФУ.
При комнатной температуре сухой раствор Boc промежуточного соединения (1 экв.) в DCM (от 0,1 до 0,25 М) обрабатывали ТФУ (10 экв.), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение от 1 до 18 ч. Реакционную смесь подщелачивали насыщ. водн. раствором NaHCO3 до pH ~9. Смесь экстрагировали DCM (2х), затем объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме.
CB2) С использованием H3PO4.
При комнатной температуре сухой раствор производного аминокислоты (1 экв.) в ТГФ (от 0,2 до 0,6 М) обрабатывали водн. раствором H3PO4 (85 мас.%, приобретено у фирмы Aldrich) (такой же объем, как и растворителя). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение от 24 ч до 6 д. Добавляли воду и смесь подщелачивали насыщ. водн. раствором NaHCO3 до pH ~9. Смесь экстрагировали EtOAc (2х) и DCM (2х), затем объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме.
CB3) С использованием H3PO4 и ТФУ.
При комнатной температуре сухой раствор производного аминокислоты (1 экв.) в ТГФ (0,085 М) обрабатывали водн. раствором H3PO4 (85 мас.%, приобретено у фирмы Aldrich) (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч, затем добавляли ТФУ (13 экв.) и DCM (0,042 М), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 д. Проводили обработку основанием, и после концентрирования органического слоя остаток разбавляли DCM (0,14 М) и опять обрабатывали ТФУ (13 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь подщелачивали насыщ. водн. раствором NaHCO3 до pH ~9. Смесь экстрагировали DCM (2х), затем объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме.
CC) Присоединение группы R3.
При комнатной температуре раствор промежуточного соединения с удаленными защитными группами (1 экв.) и арилгалогенид (от 1 до 2,5 экв.) в спирте (н-BuOH или EtOH, от 0,08 до 0,1 М) обрабатывали DIPEA (от 2 до 5 экв.) и нагревали в микроволновом реакторе или на масляной бане при температуре 120-160°C в течение от 0,5 ч до 6 дней. Реакционную смесь упаривали при пониженном давлении. Остаток обрабатывали DCM и промывали насыщ. водн. раствором NaHCO3, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали с помощью либо флэшхроматографии, либо СКФ, либо преп. ОФ-ВЭЖХ.
CD) Присоединение группы R2.
CD1) С использованием промежуточного соединения IE1)-IE4).
В атмосфере аргона раствор хлор или бром промежуточного соединения (1 экв.) в ДМФ (от 0,07 до 0,1 М) обрабатывали IE (от 1,1 до 1,5 экв.) и бис-(три-трет-бутилфосфин)палладием(0) (0,1 экв.). Пробирку герметично закрывали и реакционную смесь перемешивали при температуре от 80 до 100°C в течение от 3 ч до 4 д. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали водой, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали с помощью либо флэшхроматографии, либо СКФ, либо преп. ОФ-ВЭЖХ.
CD2) С использованием промежуточного соединения IE5)-IE11).
Для IE5): раствор хлор или бром промежуточного соединения (1 экв.) в ацетонитриле (0,125 М) обрабатывали IE5) (1,2 экв.), затем 1 М водн. раст. Na2CO3 (2,4 экв.) и PdCl2(PPh3)2 (0,07 экв.). Реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе при температуре 150°C в течение 5 мин при нормальном поглощении. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали водой, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали с помощью либо флэш-хроматографии, либо СКФ, либо преп. ОФ-ВЭЖХ.
Для IE6)-IE11): раствор хлор или бром промежуточного соединения (1 экв.), IE (2 экв.), Pd(OAc)2 (0,2 экв.)/BrettPhos (0,6 экв.) или BrettPhos Palladacycle (CAS registry 1148148-01-9) (0,2 экв.), Na2CO3 (3 экв.) в NMP (0,094 М) дегазировали и насыщали аргоном (3х). Реакционную смесь облучали в микроволновом реакторе при температуре от 150 до 160°C в течение от 1 до 3 ч при нормальном поглощении с перезагрузкой катализатора и лиганда, при необходимости. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали водой, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали с помощью либо флэш-хроматографии, либо СКФ, либо преп. ОФ-ВЭЖХ.
CD3) С использованием промежуточного соединения IE12).
Раствор бром промежуточного соединения (1 экв.), IE12 (3 экв.), Pd(Ph3)4 (0,05 экв.), CuI (0,1 экв.), Et3N (3 экв.) в ДМФ (0,1 М) в закрытом сосуде нагревали при температуре 100°C в течение 18 ч. Вновь загружали те же количества Pd(Ph3)4, CuI и IE12, чтобы завершить преобразование, и реакционную смесь перемешивали в течение еще 4 д при температуре 100°C. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и про
- 64 031430 мывали водой, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали с помощью либо флэш-хроматографии, либо СКФ, либо преп. ОФ-ВЭЖХ.
СЕ) Деацилирование по примеру 28.
Раствор соответствующего ацетил производного (1 экв.) в сухом МеОН (0,1 М) обрабатывали K2CO3 (3 экв.). Суспензию перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Ее упаривали при пониженном давлении, и остаток обрабатывали EtOAc и промывали 1н. водн. раст. HCl, органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали с помощью СКФ.
Промежуточные соединения для примеров в таблице
IA) Аминокислотные производные.
Промежуточное соединение # Структура Название № CAS или комментарий к синтезу
IA1 ноос о ν ) Восх (S)-1-(третБутоксикарбонил)пирролидин-2карбоновой кислоты 15761-39-4
ΙΆ2 ноос о J' \nOTBDMS N./ Восх (2S,4S)-1- (трет-Бутоксикарбонил)-4( (третбутилдиметилсилил)окси)пирролидин2-карбоновой кислоты 401564-17-8
IA3 ноос о nV'F Восх (2S,4S)-1-(трет-Бутоксикарбонил)-4фтор-пирролидин-2-карбоновой кислоты 203866-13-1
IA4 НООС v Х>° Вос' ' (2S,4S)-1-(трет-Бутоксикарбонил)-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты 83623-93-2
IB) Производные антраниловой кислоты.
Промежуточное соединение # Структура Название № CAS или комментарий к синтезу
IB1 CI О А^°н V^nh2 2-Амино-б-хлорбензойной кислоты 2148-56-3
IB2 вг о όΥ %»νη2 2-Амино-б-бромбензойной кислоты 20776-48-1
IB3 Br О Ж.:н 6-Амино-2-бром-3фторбензойной кислоты В 2 стадии исходя из CAS 132715-69-6 (смотри пример 1)
IC) Амины или гидразины.
Промежуточное соединение # Структура Название № CAS или комментарий к синтезу
IC1 „„-О Анилин 62-53-3
IC2 ж о-Толуидин 95-53-4
- 65 031430
ID) R3 Предшественники.
Промежуточное соединение # Структура Название № CAS или комментарий к синтезу
ID1 Άnh2 4-Амино-6-хлорпиримидин-5карбонитрил 60025-09-4
ID2 h2n_-nvCI 2-Амино-4-хлop-6-метилпиримидин5-карбонитрил 99586-66-0
ID3 H2N VV 6-Бром-7Н-пурин-2-амин 82499-03-4
IE) R2 Предшественники.
Промежуточное соединение # Структура Название № CAS или комментарий к синтезу
IE1 v \l-N SY Asn 0 1-Метил-4-(трибутилстаннил)-1Hпиразол 179055-21-1
IE2 ψ 0 1-Метил-4-(трибутилстаннил)-1Нимидазол 446285-73-0
IE3 0 2-Этокси-5(трибутилстаннил)пиримидин 1025746-10-4
IE4 A 0 2-Метокси-5(трибутилстаннил)тиазол 1025744-42-6
О Ao
IE5 ^N-N Y O' O 0h 2-(4-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2“ диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил)этилацетат 1251731-71-1
- 66 031430
IE6 Ю N^N Ϊ НО ОН (2-Метоксипиримидин-5ил)бороновая кислота 628692-15-9
N^N
IE7 Y Пиримидин-5-илбороновая кислота 109299-78-7
но-юн
о
п Т (5-Метоксипиридин-З-ил)бороновая
IE8 850991-69-4
Т кислота
НО юн
1
N^N (2-Метилпиримидин-5-ил)бороновая
IE9 1034924-06-5
т кислота
но-юн
Ύ
IE10 т Пиридин-З-илбороновая кислота 1692-25-7
но-юн
I
(6-Метоксипиридин-З-ил)бороновая
IE11 il J 163105-89-3
т кислота
но-юн
он
IE12 Проп-2-ин-1-ол 107-19-7
Биологическая оценка
Активность соединения в соответствии с настоящее изобретение может быть оценена с помощью следующих in vitro и in vivo способов.
Биологический анализ.
1. Определение ингибирования активности ферментов изоформ PBK-альфа, PBK-бета, PBK-гамма и PBK-дельта.
1.1. Создание генетических конструкций, экспрессия белков и очистка.
Для ферментативного анализа получение PI3K генетических конструкций, экспрессия белков и очистка для HTS описаны в WO 2012/004299.
1.2. Биохимический анализ для PBK-альфа, PBK-бета (формат Kinase-Glo).
Эффективность соединений по примерам 1-117 в качестве ингибиторов PI3 киназа может быть продемонстрирована следующим образом.
Киназную реакцию осуществляли в конечном объеме 50 мкл на лунку половины площади TOSTAR, 96-луночного планшета. Конечные концентрации АТР и фосфатидилинозита в анализе составляла 5 мкМ и 6 мкг/мл соответственно. Реакцию инициируют добавлением PI3 киназы, например, PI3 киназы α.
р1106 компоненты анализа добавляли в каждую лунку следующим образом:
мкл исследуемого соединения в 5% ДМСО на лунку в колонках 2-1;
общую активность определяли путем добавления 10 мкл 5% об./об. ДМСО в первые 4 лунки колонки 1 и в последние 4 лунки колонки 12;
фоновое значение определяли путем добавления 10 мкМ контрольного соединения в последние 4 лунки колонки 1 и в первые 4 лунки колонки 12;
мл аналитической смеси готовили на планшет:
1,912 мл аналитического буфера HEPES,
8,33 мкл 3 мМ стокового раствора АТр, придающего конечную концентрацию 5 мкМ на лунку, мкл [33₽]АТР на данные активности, давая 0,05 мкКи на лунку, мкл 1 мг/мл стокового раствора PI, придающего конечную концентрацию 6 мкг/мл на лунку, мкл 1 М стокового раствора MgQ2, придающего конечную концентрацию 1 мМ на лунку;
мкл аналитической смеси добавляли на лунку;
- 67 031430 мл ферментной смеси готовили на планшете (х* мкл PI3 киназы p110a в 2 мл киназного буфера) (* объем фермента зависит от ферментативной активности используемой партии). Ферментную смесь держат на льду в течение в процессе добавления на аналитические планшеты;
мкл Ферментной смеси добавляли/на лунку для начала реакции;
планшет затем инкубировали при комнатной температуре в течение 90 мин;
реакцию останавливали путем добавления 50 мкл суспензии бусин WGA-SPA (покрытые агглютинином зародыша пшеницы бусины для сцинтилляционного анализа сближения) на лунку;
аналитический планшет герметизировали с использованием TopSeal-S (термосварка для микропланшетов из п олистирола, PerkinElmer LAS [Deutschland] GmbH, Rodgau, Germany) и инкубировали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 60 мин;
аналитический планшет затем центрифугировали при 1500 об/мин в течение 2 мин с использованием центрифуги Jouan bench top (Jouan Inc., Nantes, France);
аналитический планшет обсчитывали с использованием Packard TopCount, считая каждую лунку в течение 20 с.
В более предпочтительном анализе киназную реакцию осуществляли при конечном объеме 10 мкл на лунку с низким объемом не связывающего CORNING, на 384-ном черном планшете (кат. № #3676). Конечные концентрации АТР и фосфатидилинозитол (PI) в анализе составляют 1 мкм и 10 мкг/мл соответственно. Реакцию начинали путем добавления АТР.
Компоненты анализа добавляли на лунку следующим образом:
нл исследуемых соединений в 90% ДМСО на лунку, в колонках 1-20, 8 концентраций (1/3 и 1/3,33 стадия сериального разведения) по одной.
Низкий контроль: 50 нл 90% ДМСО на половину лунок колонок 23-24 (0,45% в конце).
Высокий контроль: 50 нл ссылочного соединения (например, соединения по примеру 7 в WO 2006/122806) на другую половину колонок 23-24 (2,5 мкм в конце).
Стандарт: 50 нл ссылочного соединения, только что указанного, разводили как исследуемые соединения на колонках 21-22.
мл буфер готовили для анализа:
200 мкл 1 М TRIS HCl pH7,5 (10 мМ в конце);
мкл 1 М MgCl2 (3 мМ в конце);
500 мкл 2 М NaCl (50 мМ в конце);
100 мкл 10% CHAPS (0,05% в конце);
200 мкл 100 мМ DTT (1 мМ в конце);
18,94 мл наночистой воды.
мл PI готовили для анализа:
200 мкл 1 мг/мл L-альфа-фосфатидилинозитола (печень крупного рогатого скота, Avanti полярные липиды Кат. № 840042С ММ=909,12) полученного в 3% октилгликозиде (10 мкг/мл в конце);
9,8 мл буфера.
мл АТР готовили для анализа:
6,7 мкл 3 мМ стокового раствора ATP, придающего конечную концентрацию 1 мкМ на лунку;
мл буфера.
2,5 мл каждой конструкции PI3K готовили для анализа в PI со следующей конечной концентрацией:
нМ PI3K альфа EMV B1075;
нМ бета EMV BV949.
мкл PI/PI3K добавляли на лунку.
мкл ATP добавляли на лунку для начала реакции.
Планшеты затем инкубировали при комнатной температуре в течение 60 мин (альфа, бета, дельта) или 120 мин (гамма).
Реакцию останавливали путем добавления 10 мкл Kinase-Glo (Promega Кат. № #6714).
Аналитические планшеты считывали после 10 мин на ридере Synergy 2 (BioTek, Vermont USA) со временем интегрирования 100 мс и чувствительностью, установленной на 191.
Вывод: высокий контроль составляет около 60'000 число отсчетов и низкий контроль составляет 30000 или менее.
Данный люминисцентный анализ дает полезное соотношение Z' между 0,4 и 0,7.
Значение Z' является универсальным измерением надежности анализа. Значение Z' между 0,5 и 1,0 считается как превосходный анализ.
1.3. Биохимический анализ для PI3K-дельта, PI3K-гамма (формат Adapta).
Набор для универсального киназного анализа TR-FRET Adapta™ был приобретен у фирмы Invitrogen Corporation (Carlsbad/CA, USA) (кат. № PV5099). Набор содержит следующие реагенты: Adapta Еианти-ADP антитело (меченные европием анти-ADP антитела в солевом буфере HEPES, кат. № PV5097), Alexa Fluor® 647-меченный ADP индикатор (Alexa Fluor® 647-меченный ADP индикатор в солевом бу
- 68 031430 фере HEPES, кат. № PV5098), фирменная буфер для разведения TR-FRET с pH 7,5 (кат. № PV3574).
Субстрат PIK3CD фосфатидилинозитол получали от фирмы Invitrogen (везикулы, состоящие из 2 мМ PI в 50 мМ HEPES pH 7,5; кат. № PV5371). Субстрат PIK3CG фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат (PIP(4,5)2 получали от фирмы Invitrogen (PIP2:PS большие однослойные везикулы, состоящие из 1 мМ PIP2: 19 мМ PS в 50 мМ HEPES pH 7,5, 3 мМ MgCl2, 1 мМ EGTA; кат. № PV5100).
Решенный временем флуоресцентный индуктивно-резонансный перенос энергии (TP-FRET) это технология, основанная на передаче энергии между двумя соседними красителями, от возбужденного электрона в одном красителе (донор) к электрону соседнего красителя (акцептор) через резонанс, затем высвобождаемая в виде фотона. Эта передача энергии обнаруживается увеличением флуоресценции акцептора, и уменьшением флуоресценции донора. В TR-FRET анализе для протеинкиназ используется с большим временем жизни лантанидные хелаты тербия или европия в качестве донорных образцов, которые преодолевают помехи от аутофлюоресценции соединения или рассеяния света от осажденных соединений, путем введения задержки после возбуждения от лампового источника возбуждения. Результаты часто выражаются как отношение интенсивностей акцепторных и донорных флуорофоров. Логометрический характер такой величины корректирует различия в объемах анализа между лунками, а также корректирует эффекты тушения из-за окрашенных соединений. Анализ Adapta™ можно разделить на две фазы: фазу киназной реакции и фазу определения ADP. В фазе киназной реакции, все компоненты киназной реакции добавляются в лунку, и реакционную смесь инкубируют в течение заданного периода времени, конкретного для каждой киназы. После завершения реакции раствор для обнаружения Euмеченного антитела анти-ADP, Alexa Fluor® 647-меченные ADP индикатор и ЭДТА (для остановки киназной реакции) добавляют к аналитической лунке. ADP, образованная в результате киназной реакции, будет заменять Alexa Fluor® 647-меченный ADP индикатор из антитела, что приводит к уменьшению TR-FRET сигнала. В присутствии ингибитора количество ADP, образованного в результате киназной реакции, снижается, и результирующее интактное антитело-индикатор взаимодействие поддерживает высокий сигнал TR-FRET. В анализе Adapta™, донор (европий-анти-ADP антитела) возбуждается при 340 нм и будет передавать свою энергию на акцептор (Alexa Fluor® 647-меченный ADP индикатор). Эмиссию из Alexa Fluor® 647 можно контролировать фильтром, центрированным при 665 нм, так как он расположен между пиками эмиссии донора, которая измеряется в 615/620 нм.
50-нл разведения соединений были распределены на 384-луночном планшете с мелкими лунками из белого полистирола, как описано в разделе 2.2. Затем 5 мкл PI3K-гамма и PI3K-дельта и липидный субстрат (PI или PIP2: PS), а затем 5 мкл АТР (конечный аналитический объем 10 мкл) инкубируют при комнатной температуре.
Стандартный реакционный буфер для TR-FRET анализа Adapta™ содержал 10 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 3 мМ MgCl2, 50 мМ NaCl, 1 мМ DTT, 0,05% CHAPS. Реакции останавливали с помощью 5 мкл смеси EDTA, содержащей Eu-меченное антитело анти-ADP и Alexa Fluor® 647-меченный ADP индикатор в буфере для разведения TR-FRET (право собственности от фирмы IVG). Планшеты считывали, спустя от 15 до 60 мин на ридере Synergy2 с использованием времени интегрирования в 0,4 с и задержке в 0,05 с. Контроль для 100%-ного ингибирования киназной реакции проводили путем замены PI3K стандартным реакционным буфером. Контроль для 0%-ного ингибирования получали с помощью основы растворителя соединений (90% ДМСО в Н2О).
Данные анализировали с помощью программного обеспечения Excel fit или GraphPad Prism. Значения EC50 были получены путем построения сигмоидальной кривой доза-ответ на графике анализа считывания относительно концентрации ингибитора. Все нанесения по точкам выполняли с программой XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, UK). Определение значений EC50 процента ингибирования для каждого соединения в 8 концентрациях (обычно 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1, 0,030, 0,010 и 0,003 мкМ) n=2, были получены путем построения сигмоидальной кривой доза-ответ на графике анализа считывания относительно концентрации ингибитора. Все нанесения по точкам выполняли с программой XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, UK).
В одном варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где указанный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K дельта, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в ферментном анализе PI3K дельта составляет между 1 и 500 нМ.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где указанный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K дельта, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в ферментном анализе PI3K дельта составляет между 1 и 100 нМ.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где указанный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K дельта, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в ферментном анализе PI3K дельта составляет между 0,5 и 10 нМ.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где ука
- 69 031430 занный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K гамма, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в ферментном анализе PI3K гамма составляет между 1 и 500 нМ.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где указанный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K гамма, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в ферментном анализе PI3K гамма составляет между 1 и 100 нМ.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где указанный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K дельта, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в клеточном анализе PI3K дельта составляет между 1 и 1000 нМ.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где указанный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K дельта, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в клеточном анализе PI3K дельта составляет между 1 и 500 нМ.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где указанный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K гамма, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в клеточном анализе PI3K гамма составляет между 1 и 1000 нМ.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I, где указанный ингибитор обладает ингибирующим действием в отношении изоформы PI3K гамма, где диапазон активности, выраженный в виде IC50, в клеточном анализе PI3K дельта гамма составляет между 1 и 500 нМ.
2. Клеточные анализы.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I демонстрирует по меньшей мере 10-кратную селективность в отношении изоформы PI3K альфа в клеточном анализе.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения ингибитор PI3 киназы класса I демонстрирует по меньшей мере 20-кратную селективность в отношении изоформы PI3K альфа в клеточном анализе.
2.1. Опосредованное фосфоинозитид-3 киназой (PI3K) Akt 1/2 (S473) фосфорилирование в клетках Rat-1.
Клетки Rat-1, стабильно сверхэкспрессирующие миристоилированную форму каталитической субъединицы фосфоинозитидного-3-киназы (PI3K) альфа, бета или дельта человека, высевали на 384луночные планшеты при плотности клеток 7500 (PI3K альфа), 6200 (PI3K бета) или 4000 (PI3K дельта) в 30 мкл питательной среды полного состава (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (DMEM с высоким содержанием глюкозы) с добавлением 10% (об./об.) фетальной бычьей сыворотки, 1% (об./об.) MEM неосновных аминокислот, 10 мМ HEPES, 2 мМ L-глутамина, 10 мкг/мл пуромицина и 1% (об./об.) пенициллина/стрептомицина) и инкубировали при 37°C/5% CO2/95% влажность в течение 24 ч. Соединения разводили на 384-луночных планшетах для соединений (планшеты с образцами соединений), с получением 8-точечных серийных разведений для 40 исследуемых соединений в 90% ДМСО, а также 4 ссылочных соединений плюс 16 высоких контролей и 16 низких (ингибированных) контролей. Предварительно разведенные планшеты были получены распределения с помощью пипетки 250 нл растворов соединений на 384-луночные планшеты из полипропилена (дочерние планшеты), с использованием нанолитровой пипетки-дозатора Hummingwell. Соединения предварительно разводили путем добавления 49,75 мкл питательной среды полного состава. 10 мкл предварительно разведенного раствора соединения переносили на луночный планшет с использованием 384-луночного пипеточного дозатора, получая в итоге концентрацию ДМСО в 0,11%. Лунки инкубировали в течение 1 ч при 37°C/5% CO2/95% влажность. Супернатант удаляли, лунки лизировали, используя 20 мкл лизисного буфера, для определения с помощью AlphaScreen® SureFire®.
Для определения р-АКТ(Ser473) был использован аналитический набор SureFire® p-Akt 1/2 (Ser473) (PerkinElmer, USA). 5 мкл клеточного лизата переносили на 384-луночные планшеты ProxiPlate с небольшим размером лунок для определения с использованием 384-луночного пипеточного дозатора. Добавление реагентов AlphaScreen® SureFire® осуществляли в соответствии с протоколом производителя. Во-первых, добавляли смесь 5 мкл реакционного буфера плюс активирующий буфер, содержащий бусины акцептора AlphaScreen®, планшет герметизировали, и инкубировали на планшетном шейкере в течение 2 ч при комнатной температуре. Во-вторых, добавляли 2 мкл буфера для разведения, содержащего бусины донора AlphaScreen®, и планшет инкубировали на планшетном шейкере как указано выше в течение еще 2 ч. Планшет считывали на совместимом планшете-ридере AlphaScreen® с использованием стандартных настроек AlphaScreen®.
Альтернативно, р-АКТ(Ser473) определяли с помощью аналитического набора CisBio HTRF: В качестве положительного контроля на планшеты с образцами соединений добавляли 0,9 мМ соль малеиновой кислоты 1 -(3 -(трифторметил)-4-(пиперазин-1-ил)фенил)-8-(6-метоксипиридин-3 -ил)-3 -метил-Шимидазо^^-с^инолин^^^-она в 90% (об./об.) ДМСО. Для исследования соединений в лунки высевали при плотности клеток 4000 (Rat-1 PT3K-дельта), 8000 (Rat-1 PT3K-альфа) или 6500 (Rat-1 PT3K-бета)
- 70 031430 в 30 мкл питательной среды полного состава на 384-луночных планшетах с полимерной поверхностью, способствуя адгезии клеток и их росту (аналитические планшеты) и выращивали при 37°C/5% СО2/90% влажность в течение 24 ч. Несколько 10-мкл предварительных разведений соединений из дочернего планшета затем переносили в лунки. После обработки соединением в течение 1 ч среду удаляли, и клетки лизировали путем добавления 20 мкл лизисного буфера, дополненного блокирующим буфером. Определение р-АКТ(Ser473) осуществляли с помощью аналитического набора HTRF рАКТ (Ser473) в соответствии с инструкциями производителя с использованием 16 мкл клеточного лизата при общем определяемом объеме в 20 мкл.
2.2. Определение активации мышиных В-клеток.
Было обнаружено, что PI3K5 модулирует функцию В-клеток в тех случаях, когда клетки стимулируются через В-клеточный рецептор (BCR) (Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002). Для оценки ингибирующего свойства соединений в отношении активации В-клеток, после стимуляции анти-IgM измеряли положительную регуляцию маркеров активации CD86 и CD69 в мышиных В-клетках, полученных из антител клеток селезенки мыши. CD69 представляет собой хорошо известный маркер для активации В - и Т-клеток (Sancho et al. Trends Immunol. 26:136 (2005). CD86 (также известный как В7-2) в основном экспрессируется на антигенпрезентирующих клетках, включая В-клетки. Покоящиеся В-клетки экспрессируют CD86 на низких уровнях, но положительно регулируют его после стимуляции, например, BCR или рецептора IL-4. CD86 на В клетке взаимодействует с CD28 на Т-клетках. Это взаимодействие необходимо для оптимальной активации Т-клеток и для генерации оптимального ответа IgG1 (Carreno et al. Annu Rev Immunol. 20:29 (2002)).
Селезенки мышей линии BALB/C собирали, спленоциты выделяли и дважды промывали раствором RPMI, содержащим 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS), 10 мМ HEPES, 100 ед./мл пенициллин/стрептомицин. RPMI, дополненный таким образом, далее называется средой. Клетки доводили до концентрации 2,5 х106 клеток/мл в среде, и 200 мкл суспензии клеток 5х106 клеток добавляли в соответствующие лунки 96-луночных планшетов.
Затем клетки стимулировали добавлением 50 мкл анти-IgM mAb в среде (конечная концентрация: 30 мкг/мл). После инкубации в течение 24 ч при 37°C клетки окрашивали с помощью следующих коктейлей из антител: антимышиный CD86-FITC, антимышиный CD69-PerCP-Cy5.5, антимышиный CD19PerCP для оценки В-клеток, и антимышиный CD3-FITC, антимышиный CD69-PE для оценки Т-клеток (2 мкл каждого антитела/лунку). Через один час выдерживания при комнатной температуре (RT) в темноте клетки переносили в 96-луночные планшеты Deepwell. Клетки промывали один раз 1 мл PBS, содержащим 2% FBS, и после повторного суспендирования в 200 мкл образцы анализировали на проточном цитометре FACS Calibur. Лимфоциты включали в точечный график с осями FSC/SSC в соответствии с размером и зернистостью, и дополнительно анализировали на предмет экспрессии CD19, CD3 и маркеров активации (CD86, CD69). Данные вычисляли из точечных графиков в виде процента положительно окрашенных клеток для маркеров активации в популяции CD19+ или CD3+, используя программное обеспечение BD CellQest.
Для оценки ингибирующего свойства соединений, соединения сначала растворяли и разбавляли в ДМСО с последующим 1:50 разбавлением в среде. Спленоциты мышей линии Balb/c выделяли, ресуспендировали и переносили в 96-луночные планшеты, как описано выше (200 мкл/лунку). В планшеты (25 мкл) добавляли разведенные соединения или растворитель, и инкубировали при 37°C в течение 1 ч. Затем культуры стимулировали 25 мкл анти-IgM мАт/лунка (конечная концентрация 30 мкг/мл) в течение 24 ч при 37°C и окрашивали антимышиным CD86-FITC и антимышиным CD19-PerCP (2 мкл каждого антитела/лунка). Экспрессию CD86 на CD19-положительных В-клетках количественно оценивали с использованием проточной цитометрии, как описано выше.
2.3. Определение активации В-клеток крысы.
Было обнаружено, что PI3K5 модулирует функцию В-клеток в тех случаях, когда клетки стимулируются через В-клеточный рецептор (BCR) (Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002). Для оценки ингибирующего свойства соединений в отношении активации В-клеток, после стимуляции анти-IgM и рекомбинантным IL-4 измеряли положительную регуляцию маркеров активации CD86 в В-клетках крыс, полученных из цельной крови. Молекула CD86 (также известная как В7-2) в основном экспрессируется на антигенпрезентирующих клетках, включая В-клетки. Покоящиеся В-клетки экспрессируют CD86 на низких уровнях, но положительно регулируют его после стимуляции, например, BCR или рецептора IL4. CD86 на В-клетках взаимодействует с CD28 на Т-клетках. Это взаимодействие необходимо для оптимальной активации Т-клеток и для генерации оптимального ответа IgG1 (Carreno et al. Annu Rev Immunol. 20:29 (2002)).
Отбор крови крыс.
Цельную кровь отбирали из брюшной аорты взрослых самцов крыс линии Lewis (LEW/HanHsd) с использованием 10-мл шприца с иглой, предварительно покрытой гепарином натрия. Кровь переносили в 50-мл пробирки Falcon и концентрацию антикоагулянта доводили до 100 ед./мл.
Стимуляция В-клеток крысы и обработка специфическим ингибитором.
- 71 031430
Для оценки in vitro эффектов иммуносупрессивных средств гепаринизированную кровь предварительно разбавляли средой до 50%. В качестве среды использовали DMEM с высоким содержанием глюкозы (Animed cat#l-26F01-I) с добавлением 100 ед./мл пенициллина, 100 мг/мл стрептомицина, 2 мМ Lглутамина, 50 мг/мл декстрана 40 и 5% фетальной телячьей сыворотки (FCS, Fetaclone I, Gibco #10270106). Затем 190 мкл предварительно разведенной крови было добавлено 10 мкл предварительно разбавленного анализируемого соединения в 96-луночных микротитрационных планшетах с U-образным дном (Nunc), обеспечивая 3-кратное серийное разбавление с диапазоном концентраций от 20 до 0,0003 мкМ. Контрольные лунки предварительно обрабатывали ДМСО с получением конечной концентрации 0,5% ДМСО. Культуры получали в двух экземплярах, тщательно смешивали при перемешивании на шейкере (Heidolph Titramax 101; 30 с, скорость 900), пипетировали вверх и вниз и вновь перемешивали на шейкере. Культуры инкубировали при 37°C, 5% СО2 в течение 1 ч. Затем добавляли 20 мкл поликлональных козьих антикрысиных IgM Ab (Serotec, Cat #302001) и 10 мкл разбавленного рекомбинантных rIL-4 (#340085 Immunotools) для получения конечных концентраций 30 мкг/мл и 5 нг/мл соответственно. Планшеты смешивали при перемешивании в планшетном шейкере, как описано выше, и инкубировали в течение 24 ч при 37°C, 5% СО2.
Определение активации клеток с помощью проточной цитометрии.
После инкубации добавляли 15 мкл раствора 25 мМ EDTA на лунку и встряхивали в течение 15 мин для отделения адгезивных клеток. Затем для анализа маркеров активации поверхности образцы окрашивали РЕ-Cy5-меченным анти-крысиным CD45RA (BD cat#557015), чтобы обеспечить включение Вклеток в анализ FACS. Кроме того, образцы окрашивали РЕ-меченными антикрысиным CD86 (BD cat#551396). Все процедуры окрашивания проводили при комнатной температуре в течение 30 мин в темноте. После инкубации образцы переносили в 96-луночные микротитровальные планшеты с Vобразным дном с глубокими ячейками (Corning #396096), содержащие 2 мл/лунка BD лизирующего раствора (BD #349202). После лизиса эритроцитов образцы промывали 2 мл CellWASH (BD #349524). Данные получали на проточном цитометре LSRII или FACSCalibur (BD Biosciences) с использованием программного обеспечения CellQuest Plus или DIVA (версия 6.1.1) соответственно. Лимфоциты включали в точечный график с осями координат FSC/SSC в соответствии с размером и зернистостью, и дополнительно анализировали на предмет экспрессии CD45RA и маркеров активации. Данные вычисляли из точечных графиков или гистограмм в виде процента положительно окрашенных клеток для маркеров активации в популяции CD45RA+.
Статистическая оценка.
Процент ингибирования активации В-клеток после воздействия препарата рассчитывали по следующей формуле:
(стимуляция без лекарственного препарата стимуляция с лекарственным.
%' Ингибирования: =Ю0 х препаратом) (стимуляция без лекарственного препарата - нестимулированная)
Для построения кривой нелинейной регрессии по точкам использовали программное обеспечение ORIGIN 7 (OriginLab Corporation, Northampton, MA). Концентрацию лекарственного средства, обеспечивающую 50%-ное ингибирование (IC50), определяли путем аппроксимации уравнения Хилла к данным ингибирования.
2.4. Клеточное исследование U937 АКТ для PI 3-киназы гамма.
Клетки линии моноцитов U937 поддерживали в базальной среде RPMI 1640, дополненной 10% инактивированной теплом фетальной телячьей сыворотки (FCS), 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ L-глутамина (Invitrogen). Суспензионную культуру U937 поддерживали путем посева клеток при плотности 0,125х106 клеток на мл в свежей среде каждые три или четыре дня. Клетки инкубировали при 37°C, 5% СО2. Три или четыре дня до анализа клетки высевали при плотности 0,25х106 клеток на мл при общем объеме 40 мл в сосуды для культур Т175.
Перед началом описанных далее манипуляций с клетками, аналитический планшет MSD (Meso Scale Discovery) блокировали добавлением 150 мкл/лунка поставляемого блокирующего буфера и инкубировали при встряхивании в течение минимум 1 ч при комнатной температуре. Все стадии анализа должны выполняться быстро, с точно определенными инкубационными периодами и с соблюдением температурного режима, в случае, когда это указано.
За 3 или 4 дня перед анализом клетки, высеянные с плотностью 0,25х106/мл, аспирировали, переносили в 50 мл пробирку фирмы Falcon, подсчитывали и центрифугировали в течение 8 мин при 300 об/мин при комнатной температуре. Супернатант аспирировали, клеточный остаток ресуспендировали и промывали один раз в HBSS (сбалансированный солевой раствор Хэнкса) путем центрифугирования в течение 8 мин при 300 об/мин при комнатной температуре. Клеточный остаток ресуспендировали в HBSS до концентрации 4х106 на мл, и в каждую лунку 96-луночного культурального планшета с плоским дном добавляли 100 мкл клеточной суспензии. Планшеты инкубировали в течение 1,5 ч при 37°C,
- 72 031430
5% CO2, чтобы создать фон АКТ фосфорилирования, чтобы уменьшить перед стадией стимуляции соединением.
Получали исходную концентрацию соединения, составляющую 5 мМ, в 100% ДМСО; из этого 1 в 125 разведение выполняли в HBSS, получая максимальную концентрацию соединения 40 мкМ, 0,8% ДМСО. Титрования соединений выполняли в свежих с плоским дном 96-луночных планшетах, 10кратным серийным разведением 40 мкМ в HBSS 0,8% ДМСО; наконечники пипеток заменяли после выполнения каждого разбавления. Концентрации соединений на этой стадии соответствовали 4-кратной конечной концентрации, необходимой в планшете для анализа. Клетки стимулировали соединением или HBSS 0,8% ДМСО путем прямого переноса 50 мкл/лунка из планшета для разведения соединений. Затем аналитический планшет, содержащий обработанные соединением клетки, инкубировали в течение 30 мин при 37°C. Во всех экспериментах использовали стандартное планшетное оборудование.
Обработанные соединением клетки, в дополнение к лункам положительного контроля (max MIP1a), стимулировали 50 мкл на лунку 40 нг/мл MIP1a (R&D Systems, номер по каталогу 270-LD, лиофилизированная смесь, восстановленная до 50 мкг/мл с помощью PBS 0,1% BSA). Отрицательные контрольные лунки (min HBSS) стимулировали 50 мкл/лунка HBSS при отсутствии MIP1a. Конечные концентрации соединений, в этот момент, разбавляли 4-кратно с получением максимальной концентрации 10 мкМ; в случае добавления конечная концентрация MIP1a составляет 10 нг/мл. Клетки инкубировали с MIP1a в течение 3 мин при 37°C, 5% СО2. После трехминутного периода стимуляции аналитический планшет охлаждали льдом на всех стадиях. Планшеты центрифугировали в течение 2 мин при 300 об/мин, 4°C, и супернатант удаляли путем осторожного опрокидывания, и затем планшет промокали тканью. Затем клетки промывали осторожным добавлением 150 мкл/лунка охлажденного льдом HBSS и центрифугировали при 300 об/мин в течение 5 мин при 4°C. Супернатант аспирировали и планшет блоттировали, как описано выше. Планшет инкубировали на льду, и клетки незамедлительно обрабатывали 35 мкл на лунку охлажденным льдом буфером для лизиса, полученным в соответствии с инструкциями (на аналитический планшет, к 5 мл Трис-буфера для лизиса добавляли 100 мкл 50х раствора ингибитора протеазы и 50 мкл каждого 100х раствора ингибитора фосфатазы I и II). Планшеты инкубировали на льду в течение 20 мин перед центрифугированием при 841 об/мин в течение 5 мин, 4°C.
Блокирующий буфер аспирировали из MSD планшета, и планшет промывали четыре раза 300 мкл/лунка Трис-буфером для промывки. Затем 25 мкл клеточного лизата переносили из аналитического планшета в промытый MSD планшет, который герметически закрывали и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч при встряхивании. Планшет промывали четыре раза 300 мкл на лунку Трисбуфером для промывки, затем добавляли 25 мкл на лунку детекторного антитела sulfo-tag anti-total AKT/pAKT (60 мкл 50х исходного раствора антител разбавляли в 1 мл блокирующего буфера, смешанного с 2 мл буфера для промывки) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч при встряхивании. Планшет промывали четыре раза 300 мкл на лунку Трис-буфером для промывки и добавляли 150 мкл на лунку буфера считывания, соблюдая осторожность, чтобы устранить введение пузырьков. Планшет непосредственно считывали с использованием MSD SECTOR Imager 6000.
Результаты экспортировали в Excel, и процент фосфорилированного АКТ вычисляли по следующей формуле: фосфопротеин в %=((2хфосфосигнал)/(фосфосигнал+суммарный сигнал))х100. Опосредованное соединением ингибирование фосфорилирования АКТ анализировали с использованием программного обеспечения Prizm V Graphpad.
2.5.Определение TLR9-индуцированных IL-6 в спленоцитах мыши.
Получение суспензии отдельных клеток из мышиной селезенки.
Селезенки иссекали у мышей линии C57BL/6 непосредственно после эвтаназии. Избыточное количество жира иссекали из селезенки, затем растирали селезенку через клеточное сито с ячейкой 0,4 мкМ с использованием поршня от 5 мл шприца. Получали суспензии отдельных клеток, и объем доводили до 15 мл в 50 мл пробирке фирмы Falcon, используя охлажденный PBS. Перед удалением супернатанта клетки центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 мин при 4°C, ресуспендировали в 5 мл лизирующего буфера эритроцитов на селезенку и инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре. Охлажденный льдом PBS (30 мл) добавляли к клеткам перед центрифугированием при 1500 об/мин в течение 5 мин при 4°C. Супернатант удаляли и клетки промывали дважды 40 мл культуральной среды с мышиными спленоцитами (MSCM). MSCM состояла из RPMI, дополненной 100 единиц/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, 1х заменимых аминокислот, 1 мМ пирувата натрия, 0,05 мМ β-меркаптоэтанола и 10% инактивированной теплом фетальной бычьей сыворотки (FBS). Клетки ресуспендировали в 10-20 мл MSCM и подсчитывали с помощью клеточного счетчика Countess. Приблизительно 60х106 спленоцитов получены из одной селезенки мыши линии C57BL/6.
Стимуляция мышиных спленоцитов и лечение с помощью специфического ингибитора.
Спленоциты высевали при конечной плотности 2х 105 клеток/лунка в объеме 100 мкл в 96-луночных планшетах с плоским дном, и инкубировали в увлажненном 37°C инкубаторе в течение 2-4 ч. После этого исследуемые соединения распределяли с помощью машины автоматизированной обработки жидкости с использованием ранее подготовленных планшетов для исходного раствора соединений. Планшеты для
- 73 031430 исходного раствора включали соединения (90%/10% 'dM^/dd^O), расположенные в 8-10 точке с использованием 2- или 3-кратного разведения. Машина для обработки жидкости распределяла 1 мкл каждого раствора из заранее подготовленного планшета с источником соединения в соответствующую целевую лунку в 96-луночном планшете. В итоге исходная концентрация соединений в культуре клеток составляла 10 мкм. Конечная концентрация ДМСО в клеточных культурах составляла 0,5%. Клетки инкубировали с соединениями в течение 1 ч, затем добавляли лиганда TLR. Затем добавляли 10xEC80 концентрацию CpG1826 в объеме 20 мкл (для конечного объема культуры 200 мкл), после чего культуры инкубировали в течение ночи во влажном инкубаторе при 37°C.
Определение интерлейкина-6 с помощью анализа ELISA.
После культивирования в течение ночи планшеты центрифугировали при 2000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Потом 150 мкл каждой культуры переносили в 96-луночные планшеты с V-образным дном и уровни IL-6 измеряли с использованием коммерчески доступного набора mouse-IL6-sandwich ELISA. Вкратце, планшеты покрывали в течение ночи иммобилизованным антителом перед блокированием в течение 1 ч с PBS/0,1% BSA. Образцы и стандарты добавляли в объеме 50 мкл, и планшет инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. После удаления стандартов/образцов планшет промывали, используя PBS/0,05% Tween, затем добавляли 50 мкл биотинилированного детекторного антитела, после чего планшет инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре при перемешивании. Планшеты снова промывали, затем добавляли 50 мкл стрептавидин-пероксидазы хрена на лунку в течение 20 мин. После дополнительных промывок планшета в каждую лунку добавляли 50 мкл субстрата ТМВ, и планшеты инкубировали в течение 20 мин, затем добавляли 25 мкл/лунка стопраствора. Уровни IL-6 измеряли с использованием планшета-ридера SpectraMax 190 (450 нм), и анализировали с использованием программного обеспечения SoftMax Pro и GraphPad Prism.
2.6. Определение TLR9-индуцированной IFNalpha в мононуклеарных клетках периферической крови человека (РВМС).
Получение РВМС из свежей крови человека.
Кровь человека (приблизительно 75 мл) собирали в 10 S-Monovette пробирок, содержащих гепарин (S-Monovette 7,5 мл NH гепарин 16 МЕ/мл крови, Starstedt). Пробирки Leucosep™ (30 мл #227290; Greiner Bio-он) подготавливали путем добавления 15 мл среды разделения лимфоцитов LSM1077™ на пробирку (#J15-004; PAA Laboratories) и центрифугировали в течение 30 с при 1000 об/мин. Около 25 мл крови переносили в пробирки Leucosep™ после разбавления в равных частях PBS (без Ca2+/Mg2+; #14190-094). Образцы центрифугировали при 800 об/мин в течение 20 мин при 22°C с помощью центрифуги Eppendorf 5810R без тормозного механизма. Слой РВМС осторожно удаляли из плазмы: разделяли по границе среды и переносили в чистую 50-мл пробирку. Клетки промывали один раз добавлением PBS (до 45 мл) и центрифугировали (1400 об/мин, 10 мин при 22°C) с использованием тормозного устройства (установленной на скорости 9) с использованием Eppendorf 5810R. Осажденные клетки осторожно ресуспендировали в среде (RPMI 1640 + GlutaMAX-I, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола, 10 мМ HEPES и 5% об./об. FCS) и образцы объединяли. Компоненты среды 2-меркаптоэтанол (#31350-010, 50 мМ), HEPES (#15630-056, 1 М) и RPMI 1640 (1х) + GlutaMAX-I (#61870-010) получали от компании Gibco. FCS (#2-01F36-1) получали от AMIMED. РВМС подсчитывали с помощью клеточного счетчика Countess® Automated (образец предварительно разбавляли 1:10 в среде, затем добавляли равного объема (10) мкл Trypan Blue). Клетки разбавляли до 4х106 клеток/мл и высеивали в 384-луночных планшетах (353962 #; Becton Dickinson АГ), с получением конечного объема 25 мкл (т.е. 1 х 105 клеток/лунка).
Стимуляция РВМС и лечение с помощью специфического ингибитора.
Соединения предварительно разбавляли в 100% об./об. ДМСО (#41640-100 мл; Sigma-Aldrich), с последующим переносом в среду (для достижения конечной концентрации ДМСО 0,25%). Клетки обрабатывали соответствующим разбавителем соединения (5 мкл) или контрольным носителем (5 мкл) и инкубировали в течение 30 мин при 37°C в увлажненном инкубаторе в атмосфере воздуха с 5% (об./об.) CO2. Клетки стимулировали CpG2216 (0,3 мкМ; #tlrl-hodna; Invivogen) или контрольным носителем (10 мкл/лунку) и инкубировали в течение 20 ч. Планшеты непродолжительно центрифугировали (200 об/мин в течение 2 мин при 22°C), и образцы супернатанта (30 мкл) удаляли для количественного определения уровней IFNa.
Количественная оценка IFNa с использованием технологии AlphaLisa.
Для количественного определения человеческого интерферона IFNalpha использовали набор AlphaLISA (#AL264F) от компании PerkinElmer. Смесь антител, содержащих анти-IFNa акцепторные гранулы (5 мкг/мл конечная) и биотинилированного антитела анти-IFN & (0,5 нМ конечная), подготавливали свежей и диспергировали (5 мкл) в 384-луночном Optiplates™ (#6007299; PerkinElmer). Выполняли разбавление известных стандартов IFNa (человеческий IFNa В (2b)) и вместе с клеточными супернатантами (5 мкл) добавляли к вышеуказанным планшетам. Планшеты непродолжительно центрифугировали (ускорение на 200 об/мин), покрывали адгезивной герметизирующей пленкой, перемешивали и инкубировали 1 ч при комнатной температуре в темноте. Подготавливали покрытые стрептавидином донорские гранулы (20 мкг/мл конечная) и добавляли в каждую лунку (5 мкл) в темной подсвеченной области (све
- 74 031430 точувствительная смесь). Планшеты инкубировали 30 мин при комнатной температуре (планшеты не должны подвергаться центрифугированию или покрываться пленкой). После инкубации планшеты считывали с помощью мультипланшетного ридера Envision™, оборудованного опцией ALPHA, использующей собственные стандартные настройки ALPHAscreen прибора (например, общее время измерения: 550 мс, время возбуждения Laser 680 нм: 180 мс, зеркало: D640 as, эмиссионный фильтр: M570w, средняя длина волны 570 нм, ширина полосы частот 100 нм, коэффициент пропускания 75%). Данные собирали для анализа и количественной оценки уровней IFNa.
Оценка и анализ данных.
Данные анализировали с использованием Excel XL набора 4.0 (Microsoft) с дополнительным средством XLfit (IDBS; версия 4.3.2). Конкретные концентрации IFNa определяли после экстраполяции для стандартных кривых с использованием человеческого IFNa В (2b). Индивидуальные значения соединений IC50 определяли путем нелинейной регрессии после построения кривых по экспериментальным данным.
3. Определение продукции антител к овечьим эритроцитам (SRBC).
Вкратце, крысам линии OFA вводили внутривенно овечьи эритроциты в день 0 (d0) и перорально исследуемые соединения в течение четырех последующих дней (d0-d3). Суспензии клеток селезенки получали в d4, и лимфоциты высевали на мягкий агар в присутствии индикатора клеток (SRBC) и комплимента. Лизис клеточного индикатора, благодаря секреции SRBC-специфического антитела (преимущественно подкласса IgM) и присутствию комплемента, давал тромбоциты. Количество тромбоцитов на планшет подсчитывали, и выражали как количество тромбоцитов на селезенку.
Иммунизация.
Группы из пяти самок крыс линии OFA иммунизировали в день 0 2х108/мл SRBC (полученных от Laboratory Animal Services LAS, Novartis Pharma AG) в объеме 0,5 мл на крысу путем внутривенного введения.
Обработки соединением.
Животных обрабатывали соединением, суспендированным в 0,5% CMC, 0,5% Tween80 в течение последующих 4 дней (дни 0, 1, 2 и 3), начиная с дня иммунизации. Соединение вводили перорально два раза в день с интервалами 12 ч между дозами в объеме применения 5 мл/кг массы тела.
Получение суспензий клеток селезенки.
На 4-й день животных умерщвляли с использованием СО2. Селезенки удаляли, взвешивали и хранили в пластиковых пробирках, содержащих 10 мл охлажденного (4°C) сбалансированного солевого раствора Хенкса (HBSS; Gibco, pH 7,3, содержащий 1 мг Phenolred/100 мл) для каждой селезенки крысы. Селезенки гомогенизировали с помощью стеклянного гомогенизатора Potter, охлаждали на льду в течение 5 мин и 1 мл супернатанта переносили в новую пробирку. Клетки промывали один раз в 4 мл HBSS, затем супернатанты отбраковывали, а гранулы вновь суспендировали в 1 мл HBSS. Количество лимфоцитов на селезенку определяли с помощью автоматизированного счетчика клеток, и суспензий клеток селезенки доводили до клеточной концентрации 30х 106/мл.
Анализ образования тромбоцитов.
Чашки Петри с мягким агаром подготавливали с 0,7% агарозы (SERVA) в HBSS.
Кроме того, 1 мл 0,7% агарозы подготавливали в пластиковых пробирках и хранили при 48°C на водяной бане. Добавляли около 50 мкл 30х106/мл суспензии клеток селезенки и 50 мкл SRBC при 40х108/мл, быстро перемешивали (Vortex) и выливали в подготовленные чашки с агарозой. Чашки Петри слегка наклоняли, чтобы достичь равномерного распределения смеси клеток на слое агарозы. Чашки оставляли при комнатной температуре в течение 15 мин, и затем инкубировали при 37°C в течение 60 мин. Потом добавляли 1,4 мл комплемента морской свинки (Harlan; 10%), и инкубирование продолжали еще в течение 60 мин при 37°C. SRBC-специфические антитела, высвобождаемые путем адсорбции В-клеток, связанных с антигеном (SRBC) в их окружении. Эти комплексы антиген-антитело активируют комплимент и обеспечивают лизис SRBC, оставляя светлое пятно (тромбоциты) в пределах красного слоя эритроцитов. Тромбоциты подсчитывали с помощью микроскопа.
Для определения ингибирования образования тромбоцитов использовали следующую формулу:
% ингибирования=Сх 100/V-100 где V=среднее число бляшек/селезенка для группы носителя;
С=среднее количество тромбоцитов/селезенка для группы, обработанной соединением.
Ссылки.
N.K. Jerne & A.A. Nordin (1963). Plaque formation in agar by single antibody-producing cells. Science 140:405.
N.K. Jerne, A.A. Nordin & C. Henry (1963). The agar plaque technique for recognizing antibodyproducing cells. In: Cell Bound Antibodies, B. Amos & H. Koprowski, Eds., Wistar Inst. Press, Philadelphia p. 109-125.
- 75 031430
Биологические данные. Ферментативный анализ.
Пример ID PI3K альфа IC50 [мкмоль 1-1] PI3K дельта IC50 [мкмоль 1-1] PI3K гамма IC50 [мкмоль 1-1]
1 0, 074 0, 008 0, 028
2 1,3 н. о. 0, 15
3 1,4 0, 008 1,2
4 0,32 0, 006 0, 082
5 0,23 0, 004 0, 085
6 0, 13 0, 009 0, 056
7 0,21 0, 006 0, 11
8 1,1 0, 014 0,75
9 0, 053 0, 008 0, 018
10 1,3 0, 006 0, 038
11 2,3 0, 045 0,23
12 1,2 0, 005 0,21
13 0,26 0, 007 0, 12
14 0, 92 0, 074 0,33
15* >10 >10 >10
16 0, 18 0, 007 0, 048
17 1,2 0, 021 0, 94
18 0, 056 0, 014 0, 089
19 0, 82 0, 017 0,39
20 0,26 0, 015 0, 14
21 0,26 0, 024 0,27
22 0,58 0, 005 0, 13
23 н. о. н. о. н. о.
24 0, 17 0, 005 0, 081
25 0, 048 0, 005 0, 065
26 0,53 0, 006 0,41
27 0, 086 0, 010 0, 058
28 0,24 0, 010 0, 021
29 0,37 0, 004 0, 013
30 0,45 0, 014 0, 024
31 0,57 0, 013 0, 11
32 0,49 0, 005 0, 14
33 0, 62 0, 013 0, 081
- 76 031430
Клеточные анализы.
Пример ID Клетка PI3K альфа IC50 [мкмоль 1-1] Клетка PI3K дельта IC50 [мкмоль 1-1] Клетка PI3K гамма IC50 [мкмоль 1-1]
1 2,2 0, 003 0, 032
2 1,3 0, 003 н. о.
3 6, 8 0, 011 0,43
4 2,8 < 0,003 0, 040
5 3, 0 0, 007 0,22
6 1,4 0, 005 0, 041
7 4,7 0, 009 0, 025
8 3,2 0, 006 0, 029
9 0, 67 <0,003 0, 056
10 3, 9 0, 060 0, 038
11 >10 0, 66 0,34
12 5, 9 0, 028 0, 12
13 1,1 0, 012 н. о.
14 3,3 0, 008 0,21
15* >10 5, 4 >10
16 2,7 0, 008 0, 055
17 5, 8 <0,003 0,29
18 0, 42 <0,003 0, 016
19 5, 4 <0,003 0,22
20 1,5 <0,003 0,27
21 2,5 0, 013 1,1
22 >10 0, 007 0, 018
23 >10 0, 013 0, 011
24 5, 0 <0,003 0, 009
25 1,9 0, 004 0, 049
26 >6, 5 0, 007 0, 17
27 1,3 0, 006 0, 063
28 >10 0, 090 0, 12
29 2,7 0, 006 0, 038
30 2,3 <0,010 0, 011
31 >10 0, 12 0,24
32 2,4 <0,003 0,72
33 6, 5 0, 014 0, 12
Предполагается, что биологические данные для примера 15 в ферментном и клеточном анализе являются ложными.

Claims (12)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой метил;
    R2 представляет собой С4-С7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где С4-С7-гетероарил является незамещенным или за
    - 77 031430 мещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из С1-С4-алкила, гидрокси-С1-С4-алкила или С1-С4алкокси;
    R5 и R6 представляют собой водород;
    -L-R3 выбран из где R7 выбран из метокси, гидрокси или фтора и R3 выбран из где R4 представляет собой амино;
    R8 представляет собой метил и
    X представляет собой NH.
  2. 2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль формулы (Ia) где R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой метил;
    R2 представляет собой С4-С7-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где С4-С7-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из С1-С4-алкила, гидрокси-С1-С4-алкила или С1-С4алкокси;
    R5 и R6 представляют собой водород и
    R3 выбран из где R4 представляет собой амино;
    R8 представляет собой метил и
    X представляет собой NH.
  3. 3. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль формулы (Ib)
    - 78 031430 где R1 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещен 1, 2 или 3 заместителями, представляющими собой метил;
    R2 представляет собой Q-Агетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где Q-Агетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из C1-C4-алкила, гидрокси-C1-C4-алкила или C1-C4алкокси;
    R5 и R6 представляют собой водород;
    R7 выбран из метокси, гидрокси или фтора и
    R3 выбран из где R4 представляет собой амино,
    R8 представляет собой метил и
    X представляет собой NH.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой соединение формул (IA), (IB) или (IC):
  5. 6. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где R2 представляет собой C5-C6-гетероарил, содержащий один атом азота и дополнительно 0, 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N или S, где C5-C6-гетероарил является незамещенным или замещен 1-3 заместите- 79 031430 лями, независимо выбранными из Q-Щ-алкила, гидрокси-^-Щ-алкила или Q-Щ-алкокси.
  6. 7. Соединение по п.1, выбранное из
    2-амино-4-(^^)-2-(6-фтор-5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-4-амино-6-(2-(5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-2-амино-4-(2-(5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-4-амино-6-(2-(6-фтор-5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-2-амино-4-(2-(6-фтор-5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    4-амино-6-(^^)-2-(6-фтор-5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-(^^)-2-(6-фтор-5-(2-метокситиазол-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-(^^)-4-метокси-2-(5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-((2S,4S)-1-(2-амино-9H-пурин-6-ил)-4-метоксипирролидин-2-ил)-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)-3фенилхиназолин-4(3Щ-он,
    ^)-2-амино-4-метил-6-(2-(5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-(о-толил)-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-4-амино-6-(2-(5-(1-метил-Ш-имидазол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-(^^)-4-гидрокси-2-(5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-2-амино-4-метил-6-(2-(4-оксо-3-фенил-5-(пиримидин-5-ил)-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-2-амино-4-(2-(5-(5-метоксипиридин-3-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-2-амино-4-метил-6-(2-(5-(2-метилпиримидин-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-2-амино-4-метил-6-(2-(4-оксо-3-фенил-5-(пиридин-3-ил)-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)пиримидин-5-карбонитрила,
    ^)-2-амино-4-(2-(5-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3 -фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(5-(2-метилпиримидин-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(4-оксо-3-фенил-5-(пиридин-3-ил)-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-(^^)-4-гидрокси-2-(5-(5-метоксипиридин-3-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-((2S,4S)-4-гидрокси-2-(4-оксо-3-фенил-5-(пиримидин-5-ил)-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-(^^)-4-гидрокси-2-(5-(4-метоксипиридин-3-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-(^^)-4-гидрокси-2-(5-(1-(2-гидроксиэтил)-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-((2S,4S)-2-(5-(2-этоксипиримидин-5-ил)-6-фтор-4-оксо-3 -фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-(^^)-4-фтор-2-(5-(1-метил-Ш-пиразол-4-ил)-4-оксо-3 -фенил-3,4-дигидрохиназолин2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    2-амино-4-(^^)-2-(6-фтор-5-(1-метил-Ш-имидазол-4-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила,
    - 80 031430
    ^)-2-амино-4-(2-(5-(2-этоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила или
    2-амино-4-((2S,4S)-4-метокси-2-(5-(2-метоксипиримидин-5-ил)-4-оксо-3-фенил-3,4дигидрохиназолин-2-ил)пирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5-карбонитрила, или его фармацевтически приемлемая соль.
  7. 8. Соединение, представляющее собой 2-амино-4-((2S,4S)-2-(6-фтор-5-(2-метоксипиримидин-5-ил)4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-4-гидроксипирролидин-1-ил)-6-метилпиримидин-5карбонитрил, или его фармацевтически приемлемая соль.
  8. 9. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей.
  9. 10. Способ модулирования активности PI3 киназ класса I у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемой соли.
  10. 11. Способ лечения расстройства или заболевания, выбранных из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), эндемичной разновидности листовидной (Бразильской) пузырчатки (Fogo selvagem), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (AHA), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (МС), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS) (такого как первичный синдром Шегрена (pSS)), ANCA-ассоциированных васкулитов (таких как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемии, травмы ишемии/реперфузии, хронической аутоиммунной крапивницы (CAU), аллергии (атопического дерматита, контактного дерматита, аллергического ринита), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата, злокачественных новообразований кроветворного происхождения, тяжелой и церебральной малярии, трипаносомоза, лейшманиоза, токсоплазмоза и нейроцистицеркоза, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемой соли.
  11. 12. Применение соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения расстройства или заболевания, выбранных из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), эндемичной разновидности листовидной (Бразильской) пузырчатки (Fogo selvagem), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (АНА), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (МС), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS) (такого как первичный синдром Шегрена (pSS)), ANCA-ассоциированных васкулитов (таких как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемии, травмы ишемии/реперфузии, хронической аутоиммунной крапивницы (CAU), аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата, злокачественных новообразований кроветворного происхождения, тяжелой и церебральной малярии, трипаносомоза, лейшманиоза, токсоплазмоза и нейроцистицеркоза.
  12. 13. Применение соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения расстройства или заболевания, выбранных из ревматоидного артрита (RA), пузырчатки обыкновенной (PV), эндемичной разновидности листовидной (Бразильской) пузырчатки (Fogo selvagem), идиопатической тромбоцитопении пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной гемолитической анемии (AIHA), приобретенной гемофилии типа А (АНА), системной красной волчанки (SLE), рассеянного склероза (МС), миастении гравис (MG), синдрома Шегрена (SS) (такого как первичный синдром Шегрена (pSS)), ANCAассоциированных васкулитов (таких как болезнь Вегенера, микроскопический полиангиит или синдром Черджа-Стросса), криоглобулинемии, травмы ишемии/реперфузии, хронической аутоиммунной крапивницы (CAU), аллергии (атопический дерматит, контактный дерматит, аллергический ринит, аллергическая астма, астма, связанная с аллергическим ринитом), синдрома Гудпасчера, отторжения трансплантата, злокачественных новообразований кроветворного происхождения, тяжелой и церебральной малярии, трипаносомоза, лейшманиоза, токсоплазмоза и нейроцистицеркоза.
    - 81 031430
    Фиг. 1
    Фиг. 2
EA201690268A 2013-07-24 2014-07-24 Замещенные производные хиназолин-4-она EA031430B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP13177827 2013-07-24
PCT/CN2014/082946 WO2015010641A1 (en) 2013-07-24 2014-07-24 Substituted quinazolin-4-one derivatives

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201690268A1 EA201690268A1 (ru) 2016-05-31
EA031430B1 true EA031430B1 (ru) 2018-12-28

Family

ID=48832822

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201690268A EA031430B1 (ru) 2013-07-24 2014-07-24 Замещенные производные хиназолин-4-она

Country Status (16)

Country Link
US (1) US9840498B2 (ru)
EP (1) EP3024827B1 (ru)
JP (1) JP6437544B2 (ru)
KR (1) KR20160033697A (ru)
CN (1) CN105452235B (ru)
AR (1) AR097024A1 (ru)
AU (1) AU2014295538B2 (ru)
CA (1) CA2917433A1 (ru)
EA (1) EA031430B1 (ru)
ES (1) ES2803513T3 (ru)
MX (1) MX368066B (ru)
PL (1) PL3024827T3 (ru)
PT (1) PT3024827T (ru)
TW (1) TW201534598A (ru)
UY (1) UY35675A (ru)
WO (1) WO2015010641A1 (ru)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8193182B2 (en) 2008-01-04 2012-06-05 Intellikine, Inc. Substituted isoquinolin-1(2H)-ones, and methods of use thereof
NZ587051A (en) 2008-01-04 2012-12-21 Intellikine Llc Isoquinolinone derivatives, compositions and methods of inhibiting phosphatidyl inositol-3 kinase (pi3 kinase)
ES2593256T3 (es) 2010-05-21 2016-12-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Compuestos químicos, composiciones y métodos para las modulaciones de cinasas
CN103648499B (zh) 2011-01-10 2017-02-15 无限药品股份有限公司 用于制备异喹啉酮的方法及异喹啉酮的固体形式
WO2013032591A1 (en) 2011-08-29 2013-03-07 Infinity Pharmaceuticals Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US8940742B2 (en) 2012-04-10 2015-01-27 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US8828998B2 (en) 2012-06-25 2014-09-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Treatment of lupus, fibrotic conditions, and inflammatory myopathies and other disorders using PI3 kinase inhibitors
US9481667B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Salts and solid forms of isoquinolinones and composition comprising and methods of using the same
WO2015051241A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CA2925944C (en) 2013-10-04 2023-01-10 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
EP4066834A1 (en) 2014-03-19 2022-10-05 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds for use in the treatment of pi3k-gamma mediated disorders
WO2015160975A2 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
EP3154960A1 (en) 2014-06-13 2017-04-19 Gilead Sciences, Inc. Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
EA201692249A1 (ru) 2014-06-13 2017-05-31 Джилид Сайэнс, Инк. Ингибиторы фосфатидилинозитол-3-киназы
CN106660994A (zh) 2014-06-13 2017-05-10 吉利德科学公司 磷脂酰肌醇3‑激酶抑制剂
ES2763104T3 (es) 2014-06-13 2020-05-27 Gilead Sciences Inc Derivados de quinazolinona como inhibidores de fosfatidilinositol 3-quinasa
ES2900812T3 (es) * 2014-06-24 2022-03-18 Gilead Sciences Inc Inhibidores de fosfatidilinositol 3-quinasa
WO2016054491A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CN108349985A (zh) 2015-09-14 2018-07-31 无限药品股份有限公司 异喹啉酮的固体形式、其制备方法、包含其的组合物及其使用方法
CN106995438B (zh) * 2016-01-22 2019-09-20 中国科学院上海药物研究所 一类取代喹唑啉-4-酮类化合物及其制备方法和医药用途
US10759806B2 (en) 2016-03-17 2020-09-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as PI3K kinase inhibitors
US10919914B2 (en) 2016-06-08 2021-02-16 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
WO2017223422A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
JOP20190052A1 (ar) 2016-09-22 2019-03-21 Astrazeneca Ab 5-[2-(بيريدين-2-يلامينو )-3،1 ثيازول-5-يال]-3،2 – ثنائي هيدرو- 1h- إيزوإندول 1--مشتق واحد واستخدامها كمثبطات مزدوجة للدلتا وغاما فوسفاتيديلينوسيتول 3-كيناز
US10751339B2 (en) 2018-01-20 2020-08-25 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Substituted aminopyrimidine compounds and methods of use
US10442799B1 (en) 2018-04-07 2019-10-15 Fuqiang Ruan Heterocyclic compounds and uses thereof
CN113512042A (zh) * 2020-04-09 2021-10-19 成都赜灵生物医药科技有限公司 取代喹唑啉-4-酮类化合物及其制备方法和用途
KR20240045472A (ko) * 2022-09-30 2024-04-08 주식회사 베노바이오 퀴나졸린염 화합물을 포함하는 관절염 치료용 조성물 및 이의 제조 방법

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005113556A1 (en) * 2004-05-13 2005-12-01 Icos Corporation Quinazolinones as inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
WO2007065662A2 (en) * 2005-12-08 2007-06-14 Novartis Ag Trisubstituted quinazolinone derivatives as vanilloid antagonists
WO2011011550A1 (en) * 2009-07-21 2011-01-27 Calistoga Pharmaceuticals Inc. Treatment of liver disorders with pi3k inhibitors
WO2014128612A1 (en) * 2013-02-20 2014-08-28 Novartis Ag Quinazolin-4-one derivatives

Family Cites Families (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3301855A (en) 1963-04-22 1967-01-31 Ciba Geigy Corp Derivatives of 4-nu-(2-nu, nu-dimethylaminolower alkyl)-amino quinazoline
GB1524747A (en) 1976-05-11 1978-09-13 Ici Ltd Polypeptide
ATE28864T1 (de) 1982-07-23 1987-08-15 Ici Plc Amide-derivate.
GB8327256D0 (en) 1983-10-12 1983-11-16 Ici Plc Steroid derivatives
US5093330A (en) 1987-06-15 1992-03-03 Ciba-Geigy Corporation Staurosporine derivatives substituted at methylamino nitrogen
US5010099A (en) 1989-08-11 1991-04-23 Harbor Branch Oceanographic Institution, Inc. Discodermolide compounds, compositions containing same and method of preparation and use
NZ243082A (en) 1991-06-28 1995-02-24 Ici Plc 4-anilino-quinazoline derivatives; pharmaceutical compositions, preparatory processes, and use thereof
GB9300059D0 (en) 1992-01-20 1993-03-03 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
TW225528B (ru) 1992-04-03 1994-06-21 Ciba Geigy Ag
GB9314893D0 (en) 1993-07-19 1993-09-01 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
EP0817775B1 (en) 1995-03-30 2001-09-12 Pfizer Inc. Quinazoline derivatives
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
US5747498A (en) 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
US5843901A (en) 1995-06-07 1998-12-01 Advanced Research & Technology Institute LHRH antagonist peptides
MX9800215A (es) 1995-07-06 1998-03-31 Novartis Ag Pirrolopirimidas y procesos para su preparacion.
US5760041A (en) 1996-02-05 1998-06-02 American Cyanamid Company 4-aminoquinazoline EGFR Inhibitors
GB9603095D0 (en) 1996-02-14 1996-04-10 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
DE69710712T3 (de) 1996-04-12 2010-12-23 Warner-Lambert Co. Llc Umkehrbare inhibitoren von tyrosin kinasen
CA2258548C (en) 1996-06-24 2005-07-26 Pfizer Inc. Phenylamino-substituted tricyclic derivatives for treatment of hyperproliferative diseases
WO1998008849A1 (de) 1996-08-30 1998-03-05 Novartis Aktiengesellschaft Verfahren zur herstellung von epothilonen und zwischenprodukte innerhalb des verfahrens
AU4141697A (en) 1996-09-06 1998-03-26 Obducat Ab Method for anisotropic etching of structures in conducting materials
AU4342997A (en) 1996-09-13 1998-04-02 Sugen, Inc. Use of quinazoline derivatives for the manufacture of a medicament in the reatment of hyperproliferative skin disorders
EP0837063A1 (en) 1996-10-17 1998-04-22 Pfizer Inc. 4-Aminoquinazoline derivatives
EP1367057B1 (de) 1996-11-18 2008-09-17 Gesellschaft für biotechnologische Forschung mbH (GBF) Epothilone E und F
US6441186B1 (en) 1996-12-13 2002-08-27 The Scripps Research Institute Epothilone analogs
CO4940418A1 (es) 1997-07-18 2000-07-24 Novartis Ag Modificacion de cristal de un derivado de n-fenil-2- pirimidinamina, procesos para su fabricacion y su uso
GB9721069D0 (en) 1997-10-03 1997-12-03 Pharmacia & Upjohn Spa Polymeric derivatives of camptothecin
US6194181B1 (en) 1998-02-19 2001-02-27 Novartis Ag Fermentative preparation process for and crystal forms of cytostatics
EP1058679B1 (en) 1998-02-25 2005-10-19 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues therof
EP1107964B8 (en) 1998-08-11 2010-04-07 Novartis AG Isoquinoline derivatives with angiogenesis inhibiting activity
KR100851418B1 (ko) 1998-11-20 2008-08-08 코산 바이오사이언시즈, 인코포레이티드 에포틸론 및 에포틸론 유도체의 생산을 위한 재조합 방법 및 물질
WO2001070737A2 (en) 2000-03-20 2001-09-27 Sepracor, Inc. Therapeutic heterocyclic compounds for the treatment of asthma and allergy and use thereof
WO2001081346A2 (en) 2000-04-25 2001-11-01 Icos Corporation Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta
US6667300B2 (en) 2000-04-25 2003-12-23 Icos Corporation Inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
US6608053B2 (en) 2000-04-27 2003-08-19 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Fused heteroaryl derivatives
PE20020354A1 (es) 2000-09-01 2002-06-12 Novartis Ag Compuestos de hidroxamato como inhibidores de histona-desacetilasa (hda)
WO2002026718A2 (en) 2000-09-29 2002-04-04 Millennium Pharmaceutical, Inc. Bicyclic pyrimidin-4-one based inhibitors of factor xa
TWI238824B (en) 2001-05-14 2005-09-01 Novartis Ag 4-amino-5-phenyl-7-cyclobutyl-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine derivatives
GB0119249D0 (en) 2001-08-07 2001-10-03 Novartis Ag Organic compounds
TW200306839A (en) 2002-02-06 2003-12-01 Novartis Ag Quinazolinone derivatives and their use as CB agonists
AU2003228283A1 (en) 2002-03-07 2003-09-22 X-Ceptor Therapeutics, Inc. Quinazolinone modulators of nuclear receptors
WO2004009036A2 (en) 2002-07-23 2004-01-29 Cytokinetics, Inc. Compounds compositions and methods
EP1407774A1 (en) 2002-09-10 2004-04-14 LION Bioscience AG 2-Amino-4-quinazolinones as LXR nuclear receptor binding compounds
AU2003277079A1 (en) 2002-09-30 2004-05-04 Cytokinetics, Inc. Compounds, compositions, and methods
KR20050084224A (ko) 2002-12-09 2005-08-26 더 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 야누스 티로신 키나제 3을 선택적으로 저해하는 방법
JP4887139B2 (ja) 2003-03-25 2012-02-29 武田薬品工業株式会社 ジペプチジルペプチダーゼインヒビター
WO2005016348A1 (en) 2003-08-14 2005-02-24 Icos Corporation Method of inhibiting immune responses stimulated by an endogenous factor
US20050054614A1 (en) 2003-08-14 2005-03-10 Diacovo Thomas G. Methods of inhibiting leukocyte accumulation
JP2005097276A (ja) * 2003-08-22 2005-04-14 Takeda Chem Ind Ltd 縮合ピリミジン誘導体およびその用途
WO2005067901A2 (en) 2004-01-08 2005-07-28 Michigan State University Methods for treating and preventing hypertension and hypertension-related disorders
EP1704145B1 (en) 2004-01-12 2012-06-13 YM BioSciences Australia Pty Ltd Selective kinase inhibitors
WO2005091711A2 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd Novel condensed pyrimidones
WO2005112935A1 (en) 2004-05-13 2005-12-01 Vanderbilt University Phosphoinositide 3-kinase delta selective inhibitors for inhibiting angiogenesis
EP1755609A1 (en) 2004-05-25 2007-02-28 Icos Corporation Methods for treating and/or preventing aberrant proliferation of hematopoietic cells
CN101123968A (zh) 2004-06-04 2008-02-13 艾科斯有限公司 肥大细胞病的治疗方法
GB0413618D0 (en) 2004-06-17 2004-07-21 Novartis Ag Organic compounds
US7939538B2 (en) 2004-06-28 2011-05-10 Amgen Inc. Compounds, compositions and methods for prevention and treatment of inflammatory and immunoregulatory disorders and diseases
CA2598409A1 (en) 2005-02-17 2006-08-24 Icos Corporation Phosphoinositide 3-kinase inhibitors for inhibiting leukocyte accumulation
WO2006116401A1 (en) * 2005-04-28 2006-11-02 Bristol-Myers Squibb Company C-5 substituted quinazolinone derivatives as selective estrogen receptor beta modulators
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
NZ571182A (en) 2006-04-04 2010-09-30 Univ California Pyrazolo[3,4-d]pyrimidines
AU2007323836B2 (en) 2006-11-13 2013-04-18 Icos Corporation Thienopyrimidinones for treatment of inflammatory disorders and cancers
WO2008064244A2 (en) 2006-11-20 2008-05-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Phosphoinositide modulation for the treatment of neurodegenerative diseases
WO2008071974A2 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Medical Research Council Use of pi3k m-tor and akt inhibitors to induce f0xp3 expression and generate regulatory t cells
WO2008076447A2 (en) 2006-12-15 2008-06-26 Ordway Research Institute Treatments of therapy-resistant diseases comprising drug combinations
WO2009036768A2 (en) 2007-09-19 2009-03-26 H. Lundbeck A/S Diagnosing potential weight gain in a subject
US20090131512A1 (en) 2007-10-31 2009-05-21 Dynavax Technologies Corp. Inhibition of type I in IFN production
NZ587051A (en) 2008-01-04 2012-12-21 Intellikine Llc Isoquinolinone derivatives, compositions and methods of inhibiting phosphatidyl inositol-3 kinase (pi3 kinase)
CA2975473C (en) 2008-11-13 2021-01-19 Gilead Calistoga Llc Therapies for hematologic malignancies
WO2010059593A1 (en) 2008-11-18 2010-05-27 Intellikine, Inc. Methods and compositions for treatment of ophthalmic conditions
WO2010065923A2 (en) 2008-12-04 2010-06-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Phosphatidylinositol-3-kinase p110 delta-targeted drugs in the treatment of cns disorders
WO2010083163A1 (en) 2009-01-13 2010-07-22 Philadelphia Health And Education Corporation The role of p110 delta signaling in morbidity and lung pathology induced by influenza virus infection
JP2012521994A (ja) 2009-03-24 2012-09-20 ギリアード カリストガ エルエルシー ２−プリニル−３−トリル−キナゾリノン誘導体のアトロプ異性体および使用方法
ES2548253T3 (es) 2009-04-20 2015-10-15 Gilead Calistoga Llc Métodos para el tratamiento de tumores sólidos
SG179085A1 (en) 2009-09-09 2012-04-27 Avila Therapeutics Inc Pi3 kinase inhibitors and uses thereof
US20120231015A1 (en) 2009-11-06 2012-09-13 Emory University Fragile x mental retardation protein (fmrp), compositions, and methods related thereto
MX2012007684A (es) 2009-12-30 2012-10-05 Avila Therapeutics Inc Modificacion covalente ligando dirigida de proteina.
ES2593256T3 (es) 2010-05-21 2016-12-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Compuestos químicos, composiciones y métodos para las modulaciones de cinasas
UA112517C2 (uk) 2010-07-06 2016-09-26 Новартіс Аг Тетрагідропіридопіримідинові похідні
WO2012028757A1 (es) 2010-09-02 2012-03-08 Universitat De Barcelona Tiazoles fluorados útiles para el tratamiento del cáncer
IT1403156B1 (it) 2010-12-01 2013-10-04 Università Degli Studi Di Torino Inibitori di fosfatidilinositol 3-chinasi, relative composizioni ed usi.
CN102838600A (zh) 2011-06-24 2012-12-26 山东亨利医药科技有限责任公司 苯基喹唑啉类PI3Kδ抑制剂
CN102838601A (zh) 2011-06-24 2012-12-26 山东亨利医药科技有限责任公司 选择性磷酰肌醇3-激酶δ抑制剂
EP2734520B1 (en) 2011-07-19 2016-09-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
WO2013032591A1 (en) * 2011-08-29 2013-03-07 Infinity Pharmaceuticals Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US8940742B2 (en) 2012-04-10 2015-01-27 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US9695156B2 (en) 2012-07-16 2017-07-04 Brown University Compounds for the treatment and prevention of infections
WO2014015523A1 (en) 2012-07-27 2014-01-30 Hutchison Medipharma Limited Novel heteroaryl and heterocycle compounds, compositions and methods
CA2895782C (en) 2012-12-21 2017-08-22 Gilead Calistoga Llc Substituted pyrimidine aminoalkyl-quinazolones as phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
JP6207100B2 (ja) 2012-12-21 2017-10-04 ギリアード カリストガ エルエルシー イソキノリノンまたはキナゾリノンホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005113556A1 (en) * 2004-05-13 2005-12-01 Icos Corporation Quinazolinones as inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
WO2007065662A2 (en) * 2005-12-08 2007-06-14 Novartis Ag Trisubstituted quinazolinone derivatives as vanilloid antagonists
WO2011011550A1 (en) * 2009-07-21 2011-01-27 Calistoga Pharmaceuticals Inc. Treatment of liver disorders with pi3k inhibitors
WO2014128612A1 (en) * 2013-02-20 2014-08-28 Novartis Ag Quinazolin-4-one derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
EP3024827A4 (en) 2017-04-26
CN105452235B (zh) 2019-08-09
JP2016527238A (ja) 2016-09-08
AU2014295538B2 (en) 2016-07-28
JP6437544B2 (ja) 2018-12-12
PT3024827T (pt) 2020-07-15
CA2917433A1 (en) 2015-01-29
TW201534598A (zh) 2015-09-16
PL3024827T3 (pl) 2020-10-19
UY35675A (es) 2015-02-27
AR097024A1 (es) 2016-02-10
EP3024827A1 (en) 2016-06-01
EP3024827B1 (en) 2020-04-15
US20160168131A1 (en) 2016-06-16
MX2016001011A (es) 2016-05-09
ES2803513T3 (es) 2021-01-27
KR20160033697A (ko) 2016-03-28
WO2015010641A1 (en) 2015-01-29
AU2014295538A1 (en) 2016-01-21
CN105452235A (zh) 2016-03-30
MX368066B (es) 2019-09-18
US9840498B2 (en) 2017-12-12
EA201690268A1 (ru) 2016-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3024827B1 (en) Substituted quinazolin-4-one derivatives
US9763952B2 (en) Dihydro-benzo-oxazine and dihydro-pyrido-oxazine derivatives
KR101560066B1 (ko) 테트라히드로-피리도-피리미딘 유도체
US9474762B2 (en) Triazolopyridine compounds
WO2014128612A1 (en) Quinazolin-4-one derivatives
KR102184069B1 (ko) 디히드로-피리도-옥사진 유도체의 고체 형태
KR20090007391A (ko) 키나제 억제제로서의 ３-비치환된 Ｎ-(아릴- 또는 헤테로아릴)-피라졸로[１,５-ａ]피리미딘
KR20140025530A (ko) 테트라히드로-피리도-피리미딘 유도체의 고체 형태 및 염
US20150148377A1 (en) Quinoline Derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM