EA028892B1 - Способ получения терпенов с помощью рекомбинантных микроорганизмов - Google Patents

Способ получения терпенов с помощью рекомбинантных микроорганизмов Download PDF

Info

Publication number
EA028892B1
EA028892B1 EA201492206A EA201492206A EA028892B1 EA 028892 B1 EA028892 B1 EA 028892B1 EA 201492206 A EA201492206 A EA 201492206A EA 201492206 A EA201492206 A EA 201492206A EA 028892 B1 EA028892 B1 EA 028892B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
diphosphate
synthase
nucleic acid
mevalonate
microorganism
Prior art date
Application number
EA201492206A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201492206A1 (ru
Inventor
Венди Чэнь
ФунМинь Лью
Михель Кёпке
Original Assignee
Ланцатек Нью Зилэнд Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=49670710&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA028892(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ланцатек Нью Зилэнд Лимитед filed Critical Ланцатек Нью Зилэнд Лимитед
Publication of EA201492206A1 publication Critical patent/EA201492206A1/ru
Publication of EA028892B1 publication Critical patent/EA028892B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
    • C12P5/007—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons containing one or more isoprene units, i.e. terpenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1022—Transferases (2.) transferring aldehyde or ketonic groups (2.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
    • C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1229—Phosphotransferases with a phosphate group as acceptor (2.7.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P9/00—Preparation of organic compounds containing a metal or atom other than H, N, C, O, S or halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
    • C12Y101/01088—Hydroxymethylglutaryl-CoA reductase (1.1.1.88)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
    • C12Y101/01267—1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase (1.1.1.267)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y117/00—Oxidoreductases acting on CH or CH2 groups (1.17)
    • C12Y117/07—Oxidoreductases acting on CH or CH2 groups (1.17) with an iron-sulfur protein as acceptor (1.17.7)
    • C12Y117/07001—(E)-4-Hydroxy-3-methylbut-2-enyl-diphosphate synthase (1.17.7.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y202/00—Transferases transferring aldehyde or ketonic groups (2.2)
    • C12Y202/01—Transketolases and transaldolases (2.2.1)
    • C12Y202/01007—1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase (2.2.1.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
    • C12Y203/01—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
    • C12Y203/01009—Acetyl-CoA C-acetyltransferase (2.3.1.9)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
    • C12Y203/03—Acyl groups converted into alkyl on transfer (2.3.3)
    • C12Y203/0301—Hydroxymethylglutaryl-CoA synthase (2.3.3.10)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y205/00—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5)
    • C12Y205/01—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5) transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5.1)
    • C12Y205/0101—(2E,6E)-Farnesyl diphosphate synthase (2.5.1.10), i.e. geranyltranstransferase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y205/00—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5)
    • C12Y205/01—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5) transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5.1)
    • C12Y205/0109—All-trans-octaprenyl-diphosphate synthase (2.5.1.90)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
    • C12Y207/01036—Mevalonate kinase (2.7.1.36)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
    • C12Y207/01148—4-(Cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol kinase (2.7.1.148)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/04—Phosphotransferases with a phosphate group as acceptor (2.7.4)
    • C12Y207/04002—Phosphomevalonate kinase (2.7.4.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/0706—2-C-Methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase (2.7.7.60)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/01—Carboxy-lyases (4.1.1)
    • C12Y401/01033—Diphosphomevalonate decarboxylase (4.1.1.33), i.e. mevalonate-pyrophosphate decarboxylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
    • C12Y402/03—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on phosphates (4.2.3)
    • C12Y402/03027—Isoprene synthase (4.2.3.27)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
    • C12Y402/03—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on phosphates (4.2.3)
    • C12Y402/03046—Alpha-farnesene synthase (4.2.3.46)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y406/00—Phosphorus-oxygen lyases (4.6)
    • C12Y406/01—Phosphorus-oxygen lyases (4.6.1)
    • C12Y406/01012—2-C-Methyl-D-erythritol 2,4-cyclodiphosphate synthase (4.6.1.12)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y503/00—Intramolecular oxidoreductases (5.3)
    • C12Y503/03—Intramolecular oxidoreductases (5.3) transposing C=C bonds (5.3.3)
    • C12Y503/03002—Isopentenyl-diphosphate DELTA-isomerase (5.3.3.2)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Терпены представляют собой ценные коммерческие продукты, используемые в различных отраслях промышленности. Терпены могут быть получены из нефтехимических источников и терпеновых сырьевых материалов, таких как терпентин. Однако указанные способы получения являются дорогостоящими, неприемлыми и часто вызывают экологические проблемы, включая влияние на изменение климата. Микробиологическая ферментация обеспечивает альтернативную возможность получения терпенов. Один или более терпенов и/или их предшественников можно получать путем ферментации микроорганизмами субстрата, содержащего CO. В указанных способах можно применять рекомбинантные микроорганизмы. В указанных способах можно применять карбоксидотрофные ацетогенные рекомбинантные микроорганизмы. Рекомбинантные микроорганизмы могут содержать, например, экзогенные ферменты мевалонатного (MVA) пути и/или DXS-пути.

Description

Настоящее изобретение относится к рекомбинантным микроорганизмам и способам получения терпенов и/или их предшественников путем ферментации указанными микроорганизмами субстрата, содержащего СО.
Уровень техники
Терпены представляют собой разнообразный класс природных химических веществ, состоящих из изопреновых единиц, содержащих пять атомов углерода.
Производные терпена включают терпеноиды (также называемые изопреноидами), которые могут образовываться в результате окисления или перегруппировки атомов углеводородного скелета или добавления или перегруппировки ряда функциональных групп.
Примеры терпенов включают изопрен (С5-гемитерпен), фарнезен (С15-сесквитерпены), артемизинин (С15-сесквитерпены), цитраль (С10-монотерпены), каротиноиды (С40-тетратерпены), ментол (С10монотерпены), камфору (С10-монотерпены) и каннабиноиды.
Терпены представляют собой ценные коммерческие продукты, используемые в разнообразных отраслях промышленности. Основная масса терпенов используется в качестве смол, растворителей, ароматизаторов и витаминов. Например, изопрен используют в получении синтетического каучука (цис-1,4полиизопрена), например, в шинной промышленности; фарнезен используют в качестве энергетически насыщенного заправочного топлива, используемого для транспортных средств, или в качестве реактивного топлива; артемизинин используют в качестве лекарственного средства против малярии и цитраль, каротиноиды, ментол, камфору и каннабиноиды используют в изготовлении фармацевтических препаратов, бутадиена и в качестве ароматических ингредиентов.
Терпены могут быть получены из нефтехимических источников и из терпеновых сырьевых материалов, таких как терпентин. Например, изопрен получают нефтехимическим путем в качестве побочного продукта крекинга нафты или нефтепродуктов в ходе получения этилена. Многие терпены также выделяют в относительно малых количествах из природных источников. Однако указанные способы получения являются дорогостоящими, неприемлемыми и часто вызывают экологические проблемы, включая влияние на изменение климата.
Из-за высокой воспламеняемости изопрена известные способы его получения требуют обширных мер предосторожности для предотвращения возникновения огня и взрывов.
Целью настоящего изобретения является устранение одного или более недостатков предшествующего уровня техники или, по меньшей мере, обеспечение альтернативных средств для получения терпенов и других связанных с ними продуктов.
Краткое описание изобретения
Микробиологическая ферментация обеспечивает альтернативную возможность получения терпенов. Терпены повсеместно распространены в природе, например, они вовлечены в биосинтез клеточной стенки бактерий и продуцируются некоторыми деревьями (например, тополем) для защиты листьев от воздействия УФ-света. Однако не все бактерии содержат необходимую клеточную систему для получения терпенов и/или их предшественников в качестве метаболических продуктов. Например, неизвестно о способности получения и выделения каких-либо терпенов и/или их предшественников в качестве метаболических продуктов карбоксидотрофными ацетогенными бактериями, такими как С. аШосШаподспит или С. ЦиидбаЫп, способными ферментировать субстраты, содержащие моноксид углерода, с получением продуктов, таких как этанол. Кроме того, для большинства бактерий неизвестна способность продуцировать какие-либо терпены, имеющие коммерческую ценность.
Изобретение, среди прочего, в целом обеспечивает способы получения одного или более терпенов и/или их предшественников путем ферментации микроорганизмами субстрата, содержащего СО, и рекомбинантные микроорганизмы для применения в указанных способах.
Согласно первому аспекту, изобретение обеспечивает карбоксидотрофные ацетогенные рекомбинантные микроорганизмы, способные продуцировать один или более терпенов и/или их предшественников и необязательно один или более других продуктов путем ферментации субстрата, содержащего СО.
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, микроорганизм адаптируют для экспрессии одного или более ферментов мевалонатного пути (МУЛ), отсутствующих в родительском микроорганизме, из которого происходит рекомбинантный микроорганизм (могут называться в настоящем изобретении экзогенными ферментами). Согласно другому варианту реализации изобретения, микроорганизм адаптируют для гиперэкспрессии одного или более ферментов мевалонатного пути (МУА), присутствующих в родительском микроорганизме, из которого происходит рекомбинантный микроорганизм (могут называться в настоящем изобретении эндогенными ферментами).
Согласно другому варианту реализации изобретения, микроорганизм адаптируют для:
a) экспрессии одного или более экзогенных ферментов мевалонатного пути (МУА) и/или гиперэкспрессии одного или более эндогенных ферментов мевалонатного пути (МУА); и
b) экспрессии одного или более экзогенных ферментов ΌΧδ-пути и/или гиперэкспрессии одного или более эндогенных ферментов ΌΧδ-пути.
Согласно одному варианту реализации изобретения, один или более ферментов мевалонатного пути
- 1 028892 (МУА) выбран из группы, состоящей из:
a) тиолазы (ЕС 2.3.1.9),
b) НМО-КоА-синтазы (ЕС 2.3.3.10),
c) НМО-КоА-редуктазы (ЕС 1.1.1.88), ά) мевалонаткиназы (ЕС 2.7.1.36),
е) фосфомевалонаткиназы (ЕС 2.7.4.2),
1) мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (ЕС 4.1.1.33) и
д) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно другому варианту реализации изобретения, один или более ферментов ΌΧδ-пути выбран из группы, состоящей из:
a) 1-дезокси-Р-ксилулозо-5-фосфатсинтазы, ΌΧδ (ЕС 2.2.1.7),
b) 1-дезокси-О-ксилулозо-6-фосфатредуктоизомеразы, ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267),
c) 2-С-метил-О-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазы, ΙδρΌ (ЕС 2.7.7.60), ά) 4-дифосфоцитидил-2-С-метил-О-эритритолкиназы, ΙδρΕ (ЕС 2.7.1.148),
е) 2-С-метил-О-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтазы, ΙδρΡ (ЕС 4.6.1.12),
1) 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазы, ΙδρΟ (ЕС 1.17.7.1),
д) 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазы (ЕС 1.17.1.2) и
й) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно другому варианту реализации изобретения, один или более дополнительных экзогенных или эндогенных ферментов экспрессируются или гиперэкспрессируются с получением терпенового соединения или его предшественника, где указанный экзогенный фермент, который экспрессируется, или указанный эндогенный фермент, который гиперэкспрессируется, выбран из группы, состоящей из:
a) геранил-транстрансферазы, Ρρδ (ЕС 2.5.1.10),
b) гептапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.10),
c) октапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.90), ά) изопренсинтазы (ЕС 4.2.3.27),
е) изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы (ЕС 5.3.3.2),
1) фарнезенсинтазы (ЕС 4.2.3.46/ЕС 4.2.3.47) и
д) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно одному варианту реализации изобретения, родительский микроорганизм способен ферментировать субстрат, содержащий СО, с получением ацетил-КоА, но не способен превращать ацетилКоА в мевалоновую кислоту или изопентенилпирофосфат (ΙΡΡ), и рекомбинантный микроорганизм адаптируют для экспрессии одного или более ферментов, вовлеченных в мевалонатный путь.
Согласно одному варианту реализации изобретения, один или более терпенов и/или их предшественников выбраны из мевалоновой кислоты, ΙΡΡ, диметилаллилпирофосфата (ΌΜΑΡΡ), изопрена, геранилпирофосфата (ΟΡΡ), фарнезилпирофосфата (ΡΡΡ) и фарнезена.
Согласно одному варианту реализации изобретения, микроорганизм содержит одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, адаптированных для повышения экспрессии одной или более эндогенных нуклеиновых кислот, где указанные одна или более эндогенных нуклеиновых кислоты кодируют один или более ферментов, на которые ссылаются выше в настоящем изобретении.
Согласно одному варианту реализации изобретения, одна или более экзогенных нуклеиновых кислот, адаптированных для повышения экспрессии, представляют собой регуляторный элемент. Согласно одному варианту реализации изобретения, регуляторный элемент представляет собой промотор. Согласно одному варианту реализации изобретения, промотор представляет собой конститутивный промотор. Согласно одному варианту реализации изобретения, промотор выбран из группы, включающей промоторы кластера генов Вуда-Льюнгдаля или оперона фосфотрансацетилазы/ацетаткиназы.
Согласно одному варианту реализации изобретения, микроорганизм содержит одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, кодирующих и адаптированных для экспрессии одного или более ферментов, на которые ссылаются выше в настоящем изобретении. Согласно одному варианту реализации изобретения, микроорганизмам содержит одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, кодирующих и адаптированных для экспрессии по меньшей мере двух ферментов. Согласно другим вариантам реализации изобретения, микроорганизм содержит одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, кодирующих и адаптированных для экспрессии по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех, по меньшей мере пяти, по меньшей мере шести, по меньшей мере семи, по меньшей мере восьми, по меньшей мере девяти или более ферментов.
Согласно одному варианту реализации изобретения, одна или более экзогенных нуклеиновых кислот представляют собой конструкцию или вектор на основе нуклеиновой кислоты, согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, плазмиду, кодирующую один или более ферментов, на которые ссылаются выше в настоящем изобретении, в любой комбинации.
Согласно одному варианту реализации изобретения, экзогенная нуклеиновая кислота представляет собой экспрессионную плазмиду.
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, родительский микроорганизм
- 2 028892 выбран из группы карбоксидотрофных ацетогенных бактерий. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, микроорганизм выбран из группы, включающей С1о8йтйшт аи1ое1каподепит. С1о51пй1ит ЦипдйаЫи. С1о8йгйшт гад5йа1ек С1о8йгйшт сатЬохМЕогапк. С1о8йгйшт йгакек С1о8йгйшт §еа1о1одепе5. С1о8йгйшт асейсит. С1о8йгйшт Готтюоасейсит. С1о51г1Й1ит тадпит. Ви1упЬас1епит те1ку1о1торЫсит, АсекоЬаскейит \уоойк. Л1кайЬаси1ит ЬассЬй. В1аийа ргойис(а. ЕиЬаскепит Итокит. Мооге11а ккеттоасейса. Мооге11а 1кегтаиЮ1горЫса. §роготи8а оуака. §роготи8а зйуасейса. 8роготи8а 5ркаего1йе5. ОхоЬаскег рГептди и Ткегтоапаегокас1ег кшук
Согласно одному варианту реализации изобретения. родительский микроорганизм представляет собой С1о8йтйшш аикоеккаподепит или С1о8йгйшт Ципдйаккк Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения. микроорганизм представляет собой С1о51г1Й1ит аикоеккаподепит Ό8Μ23693. Согласно другому конкретному варианту реализации изобретения. микроорганизм представляет собой С1о8йтйшт Уипдйак1и Ό8Μ13528 (или АТСС55383).
Согласно одному варианту реализации изобретения. у родительского микроорганизма отсутствует один или более генов ΌΧδ-пути и/или мевалонатного пути (МУА). Согласно одному варианту реализации изобретения. у родительского микроорганизма отсутствует один или более генов. кодирующих фермент. выбранный из группы. состоящей из:
a) тиолазы (ЕС 2.3.1.9).
b) НМО-КоА-синтазы (ЕС 2.3.3.10).
c) НМО-КоА-редуктазы (ЕС 1.1.1.88). й) мевалонаткиназы (ЕС 2.7.1.36).
е) фосфомевалонаткиназы (ЕС 2.7.4.2).
Г) мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (ЕС 4.1.1.33).
д) 1-дезокси-О-ксилулозо-5-фосфатсинтазы. ΌΧδ (ЕС 2.2.1.7).
к) 1-дезокси-О-ксилулозо-5-фосфатредуктоизомеразы. ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267). ί) 2-С-метил-О-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазы. ЕрО (ЕС 2.7.7.60).
Д 4-дифосфоцитидил-2-С-метил-О-эритритолкиназы. ЕрЕ (ЕС 2.7.1.148).
k) 2-С-метил-П-эритритол-2.4-циклодифосфатсиитазы. ЕрЕ (ЕС 4.6.1.12).
l) 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазы. ЕрО (ЕС 1.17.7.1). т) 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазы (ЕС 1.17.1.2) и
п) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно второму аспекту. изобретение обеспечивает нуклеиновую кислоту. кодирующую один или более ферментов. которые при экспрессии в микроорганизме позволяют указанному микроорганизму продуцировать один или более терпенов и/или их предшественников путем ферментации субстрата. содержащего СО.
Согласно одному варианту реализации изобретения. нуклеиновая кислота кодирует два или более ферментов. которые при экспрессии в микроорганизме позволяют указанному микроорганизму продуцировать один или более терпенов и/или их предшественников путем ферментации субстрата. содержащего СО. Согласно одному варианту реализации изобретения. нуклеиновая кислота согласно изобретению кодирует по меньшей мере три. по меньшей мере четыре. по меньшей мере пять. по меньшей мере шесть. по меньшей мере семь. по меньшей мере восемь. по меньшей мере девять или более указанных ферментов.
Согласно одному варианту реализации изобретения. нуклеиновая кислота кодирует один или более ферментов мевалонатного пути (МУА). Согласно одному варианту реализации изобретения. один или более указанных ферментов выбраны из группы. состоящей из:
a) тиолазы (ЕС 2.3.1.9).
b) НМО-КоА-синтазы (ЕС 2.3.3.10).
c) НМО-КоА-редуктазы (ЕС 1.1.1.88). й) мевалонаткиназы (ЕС 2.7.1.36).
е) фосфомевалонаткиназы (ЕС 2.7.4.2).
Г) мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (ЕС 4.1.1.33) и
д) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно конкретному варианту реализации изобретения. нуклеиновая кислота кодирует тиолазу (которая может представлять собой ацетил-КоА-с-ацетилтрансферазу). НМО-КоА-синтазу и НМО-КоАредуктазу.
Согласно другому варианту реализации изобретения. нуклеиновая кислота кодирует один или более ферментов мевалонатного пути (МУА) и один или более дополнительных нуклеиновых кислот ΌΧδпути. Согласно одному варианту реализации изобретения. один или более ферментов ΌΧδ-пути выбран из группы. состоящей из:
a) 1-дезоксиГО-ксилулозо-5-фосфатсинтазы. ΌΧδ (ЕС 2.2.1.7).
b) 1-дезокси-О-ксилулозо-5-фосфатредуктоизомеразы. ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267).
c) 2-С-метил-^-эритритол-4-фосфатцитидилилтраисферазы, ЕрО (ЕС 2.7.7.60). й) 4-дифосфоцитидил-2-С-метил-О-эритритолкиназы. ЕрЕ (ЕС 2.7.1.148).
- 3 028892
е) 2-С-метилГО-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтазы, ЕрЕ (ЕС 4.6.1.12), ί) 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазы, ЕрС (ЕС 1.17.7.1),
д) 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазы (ЕС 1.17.1.2) и
1ι) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота кодирует один или более дополнительных экзогенных или эндогенных ферментов, которые экспрессируются или гиперэкспрессируются с получением терпенового соединения или его предшественника, где указанная экзогенная нуклеиновая кислота, которая экспрессируется, кодирует фермент, выбранный из группы, или эндогенный фермент, который гиперэкспрессируется, выбран из группы, состоящей из:
a) геранил-транстрансферазы, Ер§ (ЕС 2.5.1.10),
b) гептапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.10),
c) октапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.90), ά) изопренсинтазы (ЕС 4.2.3.27),
е) изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы (ЕС 5.3.3.2), ί) фарнезенсинтазы (ЕС 4.2.3.46/ЕС 4.2.3.47) и
д) функционально эквивалентный вариант любого из указанных ферментов.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая тиолазу (ЕС 2.3.1.9), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 40 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая тиолазу (ЕС 2.3.1.9), представляет собой ацетил-КоА-с-ацетилтрансферазу и имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 41 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая НМС-КоАсинтазу (ЕС 2.3.3.10), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 42 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая НМС-КоАредуктазу (ЕС 1.1.1.88), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 43 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая мевалонаткиназу (ЕС 2.7.1.36), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 51 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая фосфомевалонаткиназу (ЕС 2.7.4.2), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 52 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая мевалонатдифосфатдекарбоксилазу (ЕС 4.1.1.33), имеет последовательность 8Е0 ГО N0: 53 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 1-дезоксиБ-ксилулозо-5-фосфатсинтазу, ΌΧ8, (ЕС 2.2.1.7), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 1 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 1-дезоксиБ-ксилулозо-5-фосфатредуктоизомеразу, ΌΧΚ, (ЕС 1.1.1.267), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 3 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 2-С-метилБ-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазу, ЕрБ, (ЕС 2.7.7.60), имеет последовательность 8Е0 ГО N0: 5 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 4дифосфоцитидил-2-С-метил-Б-эритритолкиназу, ЕрЕ, (ЕС 2.7.1.148), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 7 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 2-С-метилБ-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтазу, ЕрЕ, (ЕС 4.6.1.12), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 9 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 4-гидрокси3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазу, ЕрС, (ЕС 1.17.7.1), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 11 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 4-гидрокси3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазу (ЕС 1.17.1.2), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 13 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая геранилтранстрансферазу, Рр8, имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 15 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая гептапре- 4 028892 нилдифосфатсинтазу, имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 17 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая октапренилдифосфатсинтазу (ЕС 2.5.1.90), где указанная октапренилдифосфатсинтаза представляет собой полипренилсинтетазу, которая кодируется последовательностью 8ЕС ГО N0: 19 или ее функционально эквивалентным вариантом.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая изопренсинтазу (ίδρδ), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 21 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу (ίάί), имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 54 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая фарнезенсинтазу, имеет последовательность 8ЕС ГО N0: 57 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота кодирует следующие ферменты:
a) изопренсинтазу;
b) изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу (ίάί) и
c) 1-дезоксиГО-ксилулозо-5-фосфатсинтазу, ΌΧ8;
или функционально эквивалентные варианты указанных ферментов.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота кодирует следующие ферменты:
a) тиолазу;
b) НМС-КоА-синтазу;
c) НМС-КоА-редуктазу; ά) Мевалонаткиназу;
е) фосфомевалонаткиназу;
Г) мевалонатдифосфатдекарбоксилазу; д) изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу (ίάί) и И) изопренсинтазу или функционально эквивалентные варианты указанных ферментов.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота кодирует следующие ферменты:
a) геранилтранстрансферазу, Ρρδ, и
b) фарнезенсинтазу или функционально эквивалентные варианты указанных ферментов.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновые кислоты согласно изобретению также содержат промотор. Согласно одному варианту реализации изобретения, промотор обеспечивает конститутивную экспрессию генов под его контролем. Согласно конкретному варианту реализации изобретения, используют промотор кластера генов Вуда-Льюнгдаля. Согласно другому конкретному варианту реализации изобретения, используют промотор оперона фосфотрансацетилазы/ацетаткиназы. Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, промотор представляет собой промотор С. аи1ое1Ьаподепит.
Согласно третьему аспекту, изобретение обеспечивает конструкцию или вектор на основе нуклеиновой кислоты, содержащий одну или более нуклеиновых кислот согласно второму аспекту изобретения. Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, конструкция или вектор на основе нуклеиновой кислоты представляет собой экспрессионную конструкцию или вектор. Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, экспрессионная конструкция или вектор представляет собой плазмиду.
Согласно четвертому аспекту, изобретение обеспечивает хозяйские организмы, содержащие одну или более нуклеиновых кислот согласно второму аспекту изобретения или векторы или конструкции согласно третьему аспекту изобретения.
Согласно пятому аспекту, изобретение обеспечивает композицию, содержащую экспрессионную конструкцию или вектор, описанный в третьем аспекте изобретения, и конструкцию или вектор метилирования.
Предпочтительно композиция способна продуцировать рекомбинантный микроорганизм согласно первому аспекту изобретения.
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, экспрессионная конструкция/вектор и/или конструкция/вектор метилирования представляет собой плазмиду.
Согласно шестому аспекту, изобретение обеспечивает способ получения одного или более терпенов и/или их предшественников и необязательно одного или более других продуктов путем ферментации
- 5 028892 микроорганизмами, включающий ферментацию субстрата, содержащего СО, с использованием рекомбинантного микроорганизма согласно пятому аспекту изобретения.
Согласно одному варианту реализации изобретения, способ включает этапы:
(a) подача субстрата, содержащего СО, в биореактор, содержащий культуру одного или более микроорганизмов согласно первому аспекту изобретения, и (b) анаэробная ферментация культурой в биореакторе с получением по меньшей мере одного терпена и/или его предшественника.
Согласно одному варианту реализации изобретения, способ включает этапы:
(a) сбор СО-содержащего газа, полученного в результате производственного процесса;
(b) анаэробная ферментация СО-содержащего газа с получением по меньшей мере одного терпена и/или его предшественника культурой, содержащий один или более микроорганизмов согласно первому аспекту изобретения.
Согласно конкретным вариантам реализации аспектов способа, микроорганизм поддерживают в водной культуральной среде.
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения аспектов способа, ферментация субстрата проходит в биореакторе.
Согласно одному варианту реализации изобретения, один или более терпенов и/или их предшественников выбраны из мевалоновой кислоты, ΙΡΡ, диметилаллилпирофосфата (ΌΜΑΡΡ), изопрена, геранилпирофосфата (ΟΡΡ), фарнезилпирофосфата (ΡΡΡ) и фарнезена.
Предпочтительно субстрат, содержащий СО, представляет собой газообразный субстрат, содержащий СО. Согласно одному варианту реализации изобретения, субстрат включает промышленный отработанный газ. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, газ представляет собой отработанный газ со сталелитейного завода или синтез-газ.
Согласно одному варианту реализации изобретения, субстрат, как правило, имеет большое содержание СО, например, по меньшей мере от примерно 20 до примерно 100% СО по объему, от 20 до 70% СО по объему, от 30 до 60% СО по объему и от 40 до 55% СО по объему. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, субстрат содержит примерно 25%, или примерно 30%, или примерно 35%, или примерно 40%, или примерно 45%, или примерно 50% СО, или примерно 55% СО, или примерно 60% СО по объему.
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, способы также включают этап выделения терпена и/или его предшественника и необязательно одного или более других продуктов из ферментационного бульона.
Согласно седьмому аспекту, изобретение обеспечивает один или более терпенов и/или его предшественников, полученных с помощью способа согласно шестому аспекту. Согласно одному варианту реализации изобретения, один или более терпенов и/или их предшественников выбраны из группы, состоящей из мевалоновой кислоты, ΙΡΡ, диметилаллилпирофосфата (ΌΜΑΡΡ), изопрена, геранилпирофосфата (ΟΡΡ), фарнезилпирофосфата (ΡΡΡ) и фарнезена.
Согласно другому аспекту, изобретение обеспечивает способ получения микроорганизма согласно первому аспекту изобретения, включающий трансформацию карбоксидотрофного ацетогенного родительского микроорганизма путем введения одной или более нуклеиновых кислот с приобретением указанным микроорганизмом способности продуцировать или повышать выработку одного или более терпенов и/или их предшественников и необязательно одного или более других продуктов путем ферментации субстрата, содержащего СО, где указанный родительский микроорганизм не способен продуцировать или продуцирует в незначительном количестве один или более терпенов и/или их предшественников путем ферментации субстрата, содержащего СО.
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, родительский микроорганизм трансформируют путем введения одной или более экзогенных нуклеиновых кислот, адаптированных для экспрессии одного или более ферментов мевалонатного пути (МУЛ) и необязательно ΌΧδ-пути. Согласно другому варианту реализации изобретения, родительский микроорганизм трансформируют с помощью одной или более нуклеиновой кислоты, адаптированной для гиперэкспрессии одного или более ферментов мевалонатного пути (МУА) и необязательно ΌΧδ-пути, которые в естественных условиях присутствуют в родительском микроорганизме.
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, один или более ферментов являются такими, как описано выше в настоящем изобретении.
Согласно одному варианту реализации изобретения, предложены выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии, содержащие экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую фермент мевалонатного пути или ΌΧδ-пути или пути биосинтеза терпена, в результате чего бактерии экспрессируют указанный фермент, где фермент выбран из группы, состоящей из:
a) тиолазы (еС 2.3.1.9);
b) НМО-КоА-синтазы (ЕС 2.3.3.10);
c) НМО-КоА-редуктазы (ЕС 1.1.1.88); й) мевалонаткиназы (ЕС 2.7.1.36);
- 6 028892
е) фосфомевалонаткиназы (ЕС 2.7.4.2);
£) мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (ЕС 4.1.1.33); 1-дезокси-Б-ксилулозо-5-фосфатсинтазы, ΌΧ8 (ЕС 2.2.1.7);
д) 1-дезокси-Б-ксилулозо-5-фосфатредуктоизомеразы, ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267);
к) 2-С-метил-Б-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазы, ΙδρΌ (ЕС 2.7.7.60); ί) 4-дифосфоцитидил-2-С-метил-Б-эритритолкиназы, ΙδρΕ (ЕС 2.7.1.148);
_)) 2-С-метил-Б-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтазы, ΙδρΕ (ЕС 4.6.1.12);
k) 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазы, ΙδρΟ (ЕС 1.17.7.1);
l) 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазы (ЕС 1.17.1.2); геранилтранстрансферазы, Ερδ (ЕС 2.5.1.10);
т) гептапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.10);
п) октапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.90);
о) изопренсинтазы (ЕС 4.2.3.27);
р) изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы (ЕС 5.3.3.2); и ср фарнезенсинтазы (ЕС 4.2.3.46/ЕС 4.2.3.47).
Согласно некоторым аспектам изобретения, бактерии не экспрессируют фермент в отсутствие указанной нуклеиновой кислоты. Согласно некоторым аспектам изобретения, бактерии экспрессируют фермент в анаэробных условиях.
Согласно одному варианту реализации изобретения, предложена плазмида, которая может реплицироваться в карбоксидотрофных ацетогенных бактериях. Плазмида содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую фермент мевалонатного пути или ΌΧδ-пути или пути биосинтеза терпена, в результате чего когда плазмида находится в бактериях, фермент экспрессируется указанными бактериями. Фермент выбран из группы, состоящей из:
a) тиолазы (ЕС 2.3.1.9);
b) ΗΜΟ-КоА-синтазы (ЕС 2.3.3.10);
с) ΗΜΟ-КоА-редуктазы (ЕС 1.1.1.88); ά) мевалонаткиназы (ЕС 2.7.1.36);
е) фосфомевалонаткиназы (ЕС 2.7.4.2);
1) мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (ЕС 4.1.1.33); 1-дезокси-Б-ксилулозо-5-фосфатсинтазы, ΌΧ8 (ЕС 2.2.1.7);
д) 1-дезокси-Б-ксилулоза 5-фосфатредуктоизомеразы, ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267);
k) 2-С-метил-Б-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазы, ΙδρΌ (ЕС 2.7.7.60);
l) 4-дифосфоцитидил-2-С-метил-Б-эритритолкиназы, ΙδρΕ (ЕС 2.7.1.148);
_)) 2-С-метил-Б-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтазы, ΙδρΕ (ЕС 4.6.1.12);
k) 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазы, ΙδρΟ (ЕС 1.17.7.1);
l) 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазы (ЕС 1.17.1.2); геранил-транстрансферазы, Ερδ (ЕС 2.5.1.10);
т) гептапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.10);
п) октапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.90); о) изопренсинтазы (ЕС 4.2.3.27);
р) изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы (ЕС 5.3.3.2); и ср фарнезенсинтазы (ЕС 4.2.3.46/ЕС 4.2.3.47).
Согласно другому варианту реализации изобретения, предложен способ превращения СО и/или СО2 в изопрен. Способ включает подачу газообразного СО-содержащего и/или СО2- содержащего субстрата в биореактор, содержащий культуру карбоксидотрофных ацетогенных бактерий в культуральной среде, таким образом, что указанные бактерии превращают СО и/или СО2 в изопрен, и выделение изопрена из биореактора. Карбоксидотрофные ацетогенные бактерии генетически модифицированы для экспрессии изопренсинтазы.
Согласно другому варианту реализации изобретения, предложены выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую изопренсинтазу. Бактерии экспрессируют изопренсинтазу и способны превращать диметилаллилдифосфат в изопрен. Согласно одному аспекту изопренсинтаза представляет собой фермент Ροριιΐιΐδ ΙΐΌΐηιιΙοίίΚδ. Согласно другому аспекту нуклеиновая кислота является кодон-оптимизированной. Согласно другому аспекту изобретения, экспрессия изопренсинтазы находится под транскрипционным контролем промотора гена пируват:ферредоксин-оксидоредуктазы ΟοδΙπάίιιιη анЮеШаподепит.
Согласно другому варианту реализации изобретения, предложен способ превращения СО и/или СО2 в изопентилдифосфат (ΙΡΡ). Указанный способ включает: подачу газообразного СО-содержащего и/или СО2- содержащего субстрата в биореактор, содержащий культуру карбоксидотрофных ацетогенных бактерий в культуральной среде, таким образом, что бактерии превращают СО и/или СО2 в изопентилдифосфат (ΙΡΡ), и выделение ΙΡΡ из биореактора. Карбоксидотрофные ацетогенные бактерии генетически модифицированы для экспрессии изопентилдифосфат-дельта-изомеразы.
Согласно другому варианту реализации изобретения, предложены выделенные генетически моди- 7 028892 фицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую изопентилдифосфат-дельта-изомеразу. Указанные бактерии экспрессируют изопентилдифосфат-дельта-изомеразу и способны превращать диметилаллилдифосфат в изопентилдифосфат. Согласно некоторым аспектам изобретения, нуклеиновая кислота кодирует изопентилдифосфат-дельта-изомеразу С1о81л4шт Ъеуегтски. Согласно другим аспектам изобретения, нуклеиновая кислота находится под транскрипционным контролем промотора гена пируват:ферредоксин-оксидоредуктазы С1о8йл4шт аи!оеШаподепит. Согласно другим аспектам, нуклеиновая кислота находится под транскрипционным контролем промотора гена пируват:ферредоксин-оксидоредуктазы С1о8йл4шт анЮеШаподепит и располагается после второй нуклеиновой кислоты, кодирующей изопренсинтазу.
Согласно другому варианту реализации изобретения, предложен способ превращения СО и/или СО2 в изопентилдифосфат (ΙΡΡ) и/или изопрен. Способ включает: подачу газообразного СО-содержащего и/или СО2-содержащего субстрата в биореактор, содержащий культуру карбоксидотрофных ацетогенных бактерий в культуральной среде, таким образом, что бактерии превращают СО и/или СО2 в изопентилдифосфат (ΙΡΡ) и/или изопрен, и выделение ΙΡΡ и/или изопрена из биореактора. Карбоксидотрофные ацетогенные бактерии генетически модифицированы для содержания увеличенного числа копий нуклеиновой кислоты, кодирующей фермент дезоксиксилулозо-5-фосфатсинтазу (ΌΧ8), где увеличенное число копий составляет более чем 1 копия на геном.
Согласно другому варианту реализации, изобретение обеспечивает выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии, содержащие более 1 копии на геном нуклеиновой кислоты, кодирующей фермент дезоксиксилулозо-5-фосфатсинтазу (ΌΧ8). Согласно некоторым аспектам изобретения, выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии также могут содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую изопренсинтазу. Согласно другим аспектам, выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии также могут содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую изопентилдифосфат-дельта-изомеразу. Согласно другим аспектам, выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии также могут содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую изопентилдифосфат-дельта-изомеразу, и нуклеиновую кислоту, кодирующую изопренсинтазу.
Согласно другому варианту реализации изобретения, предложены выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую фосфомевалонаткиназу (РМК). Указанные бактерии экспрессируют закодированный фермент, и указанный фермент не является естественным для бактерий. Согласно некоторым аспектам изобретения, ферменты представляют собой ферменты §1арйу1ососси8 аигеиз. Согласно некоторым аспектам изобретения, фермент экспрессируется под контролем одного или более промоторов С. анЮеШаподегшт. Согласно некоторым аспектам, бактерии также содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую тиолазу (!Ь1А/угаВ), нуклеиновую кислоту, кодирующую НМО-КоА-синтазу (НМО8), и нуклеиновую кислоту, кодирующую НМО-КоА-редуктазу (НМОК). Согласно некоторым аспектам изобретения, тиолаза представляет собой тиолазу СДоЫпШит асеЮЬШуПсит.
Согласно некоторым аспектам изобретения, бактерии также содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую мевалонатдисфосфатдекарбоксилазу (ТМЭ).
Согласно другому варианту реализации изобретения, предложены выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии, содержащие экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую альфа-фарнезенсинтазу. Согласно некоторым аспектам изобретения, нуклеиновая кислота является кодон-оптимизированной для экспрессии в С. анЮеШаподепипт Согласно некоторым аспектам изобретения, альфа-фарнезенсинтаза представляет собой альфа-фарнезенсинтазу Ма1и8 х 4отезйса. Согласно некоторым аспектам изобретения, бактерии также содержат участок нуклеиновой кислоты, кодирующий геранил-транстрансферазу. Согласно некоторым аспектам изобретения, геранилтранстрансфераза представляет собой геранил-транстрансферазу Е.сой.
Подходящие выделенные генетически модифицированные карбоксидотрофные ацетогенные бактерии для любого из аспектов или вариантов реализации изобретения, могут быть выбраны из группы, состоящей из ОоЛпШит анЮеШаподепипт СДоЫпШит 1щпд4аЫи, СДоЛпШит гад84а1е1, СДоЫпШит сагЪох1Шуогапз, СДоЛпШит 4гаке1, ОозРлШит 8са!о1одепе8, СДоЛпШит асейсит, С1о8йлШит Гогтюоасейсит, С1о8йлШит тадпит, ВШупЬасЮпит теШу1о!горШсит, АсеЮЪасЮпит теоойй, А1кайЪаси1ит ЪассЬи, В1аийа ргойис!а, ЕиЬасЮпит Итозит, Мооге11а Шегтоасейса, Мооге11а ШегтаШойорШса, 8роготи8а оуа!а, Зроготиза зйуасейса, Зроготиза зрЬаегоШез, ОхоЬасЮг рГептди и ТЬегтоапаегоЪас!ег кшуг
Также можно обобщенно сказать, что изобретение состоит из частей, элементов и признаков, на которые ссылаются или которые указаны в описании заявки, отдельно или вместе, в любой или всех комбинациях двух или более указанных частей, элементов или признаков, и где конкретные целью значения, перечисленные в настоящем изобретении, имеют известные эквивалентны в области техники, к которой относится изобретение. Считается, что такие известные эквивалентны включены в настоящее изобретение в той же мере, как если бы были отдельно перечислены.
- 8 028892
Краткое описание графических материалов
Указанные и другие аспекты настоящего изобретения, которые следует рассматривать во всех его новых аспектах, будут очевидны из следующего далее описания, которое приведено исключительно в качестве примера со ссылкой на прилагаемые графические материалы.
Фиг. 1: схема пути получения терпенов; гены-мишени, описанные в настоящем изобретении, отмечены жирными стрелками.
Фиг. 2: генетическая карта плазмиды рМТЬ 85146-ίδρδ.
Фиг. 3: генетическая карта плазмиды рМТЬ 85246-ίδρδ-ίάί.
Фиг. 4: генетическая карта плазмиды рМТЬ 85246-ίδρ§-ίάί-άχ8.
Фиг. 5: результаты секвенирования плазмиды рМТЬ 85246-ίδρδ-ίάί-άχδ.
Фиг. 6: сравнение энергетических затрат для получения терпенов из СО через ΌΧδ-путь и мевалонатный путь.
Фиг. 7: мевалонатный путь.
Фиг. 8: изображение электрофореза в агарозном геле, подтверждающего присутствие экспрессирующей изопрен плазмиды рМТЬ 85246-18р5>4Ф в трансформантах С. анЮеФаподепшп. На дорожках 1 и 20 показана 100 Ър-ДНК- лесенка. На дорожках 3-6, 9-12, 15-18 показаны результаты ПЦР с использованием в качестве матрицы выделенных плазмид из 4 различных клонов в следующем порядке: со1Е1, егтВ и ίάί. На дорожках 2, 8 и 14 показаны результаты ПЦР без матрицы в качестве отрицательного контроля в следующем порядке: со1Е1, егтВ, и ίάί. На дорожках 7, 13 и 19 показаны результаты ПЦР с использованием рМТЬ 85246-18р8-1Й1 из Е.соП в качестве положительного контроля в следующем порядке: со1Е1, егтВ и ίάί.
Фиг. 9: экспрессирующая мевалонат плазмида рМТЬ8215-Рр1ааск-1Н1А-НМО8-Ра1р-НМОК.
Фиг. 10: экспрессирующая изопрен плазмида рМТЬ 8314-Рр1ааск-1ЫА-НМО8-Ра1р-НМОК-РгпТМК-РМК-РМО-Р£о1^1-18р8.
Фиг. 11: экспрессирующая фарнезен плазмида рМТЬ8314-Рр1ааск-1Н1А-НМО8-Ра1р-НМОК-РгпГМК-РМК-РМО-Р£о1^1-18рА-Р8.
Фиг. 12: генетическая карта плазмиды рМТЬ 85246-^8ρδ-^ά^-άx8.
Фиг. 13: график амплификации для эксперимента экспрессии гена в С. АнЮеШаподепипт содержащей плазмиду рМТЬ 85146-18р8.
Фиг. 14: график амплификации для эксперимента экспрессии гена в С. АиФеШаподепит, содержащей плазмиду рМТЬ 85246-^8ρδ-^ά^.
Фиг. 15: график амплификации для эксперимента экспрессии гена в С. АиФеШаподепиш, содержащей плазмиду рМТЬ 85246-^8ρδ-^ά^-άx8.
Фиг. 16: ПЦР-анализ на присутствие плазмиды рМТЬ8314РгпГ-МК-РМК-РМО-Р£о1^1-18рА-Р8. Ожидаемый размер бэнда составляет 1584 Ър. ДНК-маркер, представляющий собой 1кЪ-ДНК-лесенку Регтейа8.
Фиг. 17: кривая роста для трансформированной С. аиФеШаподетип, содержащей плазмиду рМТЬ8314РгпГ-МК-РМК-РМО-РГогШы8рА-Р8.
Фиг. 18: данные ПЦР с обратной транскрипцией, показывающие экспрессию генов мевалонаткиназы (МК 8ЕЦ ГО N0: 51), фосфомевалонаткиназы (РМК 8ЕЦ ГО N0: 52), мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (РМО §ЕЦ ГО N0: 53), изопентилдифосфат-дельта-изомеразы (ίάί 8ЕЦ ΙΌ N0: 54), геранилтранстрансферазы (18рА §ЕЦ ГО N0: 56) и фарнезенсинтазы (Р8 §ЕЦ ГО N0: 57).
Фиг. 19: выявление с помощью ГХ-МС и подтверждение присутствия фарнезена в мевалонатобогащенной (1 мМ) культуре, содержащей рМТЬ8314РгпГ-МК-РМК-РМО-Р£о1^1-18рА-Р8. ГХ-МСхроматограмму анализировали на предмет присутствия пиков, содержащих ионы с массой 93. Хроматограммы 1 и 2 представляют собой трансформированную С. аиФеШаподепит, 3 представляет собой стандарт бета-фарнезена, анализированный при таком же времени, как и образцы С. аиФеШаподепит. 4 представляет собой Е.соН, содержащую плазмиды рМТЬ8314РгпГ-МК-РМК-РМО-Р£о1^1-18рА-Р8, выращенные на М9-глюкозе и показывает выработку альфа-фарнезена, и 5 представляет собой стандарт бетафарнезена, анализируемого при таком же времени, как и образцы Е.соН. Различие во времени удерживания между образцами Е.соН и С. анЮеШаподепшн вызваны незначительными изменениями в приборе. Однако различия во времени удерживания между стандартом бета-фарнезена и продуцированным альфафарнезеном являются точно одинаковыми в обоих случаях, что вместе с совпадением масс-спектров подтверждает выработку альфа-фарнезена в С. анЮеШаподепшн.
Фиг. 20: МС-спектр для пиков, отмеченных 1А и 2 А на фиг. 19. МС-спектры соответствуют спектрам из базы данных №§Т (фиг. 21), подтверждая, что пик представляет собой альфа-фарнезен.
Фиг. 21: МС-спектр для альфа-фарнезена из базы данных масс-спектров N181.
Подробное описание изобретения
Далее следует описание настоящего изобретения, включая его предпочтительные варианты реализации, приведенные в общих терминах. Изобретение также объясняется с помощью описания, приведенного под заголовком Примеры в настоящем изобретении ниже, которые обеспечивают экспериментальные данные, иллюстрирующие изобретение, конкретные примеры различных аспектов и способов
- 9 028892 реализации изобретения.
Изобретатели неожиданно смогли сконструировать карбоксидотрофный ацетогенный микроорганизм с получением терпена и его предшественников, включая изопрен и фарнезен, путем ферментации субстрата, содержащего СО. Указанная конструкция предлагает альтернативный способ получения указанных продуктов, который может иметь преимущество по сравнению с существующими способами их получения. Кроме того, указанная конструкция предлагает способ использования моноксида углерода, полученного из производственного процесса, который в противном случае высвобождается в атмосферу и загрязняет окружающую среду.
При использовании в настоящем изобретении, ферментационный бульон представляет собой культуральную среду, содержащую, по меньшей мере, питательную среду и клетки бактерий.
При использовании в настоящем изобретении, челночный микроорганизм представляет собой микроорганизм, экспрессирующий фермент метилтрансферазу и отличающийся от микроорганизмамишени.
При использовании в настоящем изобретении, микроорганизм-мишень представляет собой микроорганизм, экспрессирующий гены, включенные в состав экспрессионной конструкции/вектора и отличается от челночного микроорганизма.
Предполагается, что термин главный продукт ферментации означает один продукт ферментации, который продуцируется с наиболее высокой концентрацией и/или выходом.
Термины повышение эффективности, повышенная эффективность и т.д. при использовании в отношении к процессу ферментации включают, но не ограничиваются указанными, повышение одного или более из следующих параметров: скорости роста микроорганизмов, катализирующих ферментацию, скорости роста и/или получения продукта при повышенной концентрации продукта, объема продуцируемого желаемого продукта на объем потребленного субстрата, скорости получения или уровня получения желаемого продукта и относительного отношения продуцированного желаемого продукта к другим побочным продуктами ферментации.
Следует понимать, что фраза субстрат, содержащий моноксид углерода, и подобные термины включают любой субстрат, в котором моноксид углерода является доступным для одного или более штаммов бактерий, например для роста и/или ферментации.
Фраза газообразный субстрат, содержащий моноксид углерода, и подобные фразы и термины включают любой газ, который содержит некоторый уровень моноксида углерода. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, субстрат содержит по меньшей мере от примерно 20 до примерно 100% СО по объему, от 20 до 70% СО по объему, от 30 до 60% СО по объему и от 40 до 55% СО по объему. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, субстрат содержит примерно 25% или примерно 30% или примерно 35% или примерно 40% или примерно 45% или примерно 50% СО или примерно 55% СО или примерно 60% СО по объему.
Несмотря на то что присутствие водорода в субстрате не является необходимым, наличие Н2 не должно оказывать неблагоприятного воздействия на образование продукта в соответствии со способами согласно изобретению. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, присутствие водорода приводит к улучшению общей эффективности получения спирта. Например, согласно конкретным вариантам реализации изобретения, соотношение Н2:СО в субстрате может составлять приблизительно 2:1 или 1:1 или 1:2. Согласно одному варианту реализации изобретения, субстрат содержит примерно 30% или менее Н2 по объему, 20% или менее Н2 по объему, примерно 15% или менее Н2 по объему или примерно 10% или менее Н2 по объему. Согласно другим вариантам реализации изобретения, поток субстрата содержит Н2 в низкой концентрации, например, менее 5% или менее 4% или менее 3% или менее 2% или менее 1%, или по существу не содержит водород. Субстрат также может содержать некоторое количество СО2, например, от примерно 1 до примерно 80% СО2 по объему или от 1 до примерно 30% СО2 по объему. Согласно одному варианту реализации изобретения, субстрат содержит примерно 20% СО2 по объему, или менее. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, субстрат содержит примерно 15% СО2 по объему или менее, примерно 10% СО2 по объему или менее, примерно 5% СО2 по объему или менее либо по существу не содержит СО2.
В следующем далее описании варианты реализации изобретения описаны в рамках доставки и ферментации газообразного субстрата, содержащего СО. Однако необходимо понимать, что газообразный субстрат может быть представлен в альтернативных формах. Например, газообразный субстрат, содержащий СО, может быть представлен в растворенном в жидкости виде. По существу, жидкость насыщают газом, содержащим моноксид углерода, и затем указанную жидкость добавляют в биореактор. Такое насыщение можно осуществлять с использованием стандартных методов. Например, можно использовать генератор дисперсии микропузырьков (Непкшкак с1 а1. 8са1е-ир о£ т1сгоЬиЬЬ1е Фкрегкюп дспсгаЮг £ог аегоЫс ГегтеШаЦоп; АррИей ВюсНетШгу апй Вю1есЬпо1о§у Уо1ите 101, ЫцтЬег 3/Ос1оЬег. 2002). В качестве дополнительного примера, газообразный субстрат, содержащий СО, можно адсорбировать на твердый носитель. Такие альтернативные способы включены в термин субстрат, содержащий СО и т.д.
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, СО-содержащий газообразный субстрат представляет собой промышленный сбросной или отработанный газ. Следует понимать, что промыш- 10 028892 ленные отработанные или сбросные газы обобщенно включают любые газы, содержащие СО, полученные в результате производственного процесса, и включают газы, полученные в результате изготовления продуктов на основе черных металлов, изготовления продуктов на основе не черных металлов, процессов переработки нефти, газификации угля, газификации биомассы, производства электроэнергии, производства углеродной сажи и изготовления кокса. Дополнительные примеры могут быть предложены в других местах в настоящем изобретении.
Если иное не следует из контекста, предполагается, что фразы ферментация, процесс ферментации или реакция ферментации и т.д., при использовании в настоящем изобретении, включают как фазу роста, так и фазу биосинтеза продукта процесса. Как описано далее в настоящем изобретении, согласно некоторым вариантам реализации изобретения, биореактор может включать первый реактор роста и второй реактор ферментации. В связи с этим следует понимать, что добавление металлов или композиций в реакцию ферментации включает их добавление в любой или оба из указанных реакторов.
Термин биореактор включает устройство ферментации, состоящее из одного или более сосудов и/или башенных блоков или трубопроводной обвязки, которое включает корпусный реактор с непрерывным перемешиванием (С8ТК.), клеточный реактор с неподвижным слоем (1СК), реактор с орошаемым слоем (ΊΒΚ), барботажную колонку, газлифтный ферментер, статический смеситель или другой сосуд или другое устройство, подходящее для контактирования газа с жидкостью. Согласно некотором вариантам реализации изобретения, биореактор может содержать первый реактор роста и второй реактор ферментации. Соответственно, следует понимать, что ссылка на добавление субстрата в биореактор или реакцию ферментации включает добавление в любой или оба из указанных реакторов, если применимо.
Экзогенные нуклеиновые кислоты представляют собой нуклеиновые кислоты, возникшие за пределами микроорганизма, в который они вводятся. Экзогенные нуклеиновые кислоты могут происходить из любого подходящего источника, включая, но не ограничиваясь указанными, микроорганизм, в который предполагается вводить указанные нуклеиновые кислоты (например, родительский микроорганизм, из которого произошел рекомбинантный микроорганизм), штаммы или виды микроорганизмов, которые отличаются от организма, в который предполагается вводить указанные нуклеиновые кислоты, или они могут быть созданы искусственным или рекомбинантным путем. Согласно одному варианту реализации изобретения, экзогенные нуклеиновые кислоты представляют собой последовательности нуклеиновых кислот, присутствующие в естественных условиях в микроорганизме, в который их предполагается вводить, и вводятся для повышения экспрессии или гиперэкспрессии конкретного гена (например, путем повышения числа копий последовательности (например, гена) или введения сильного или конститутивного промотора для повышения экспрессии). Согласно другому варианту реализации изобретения, экзогенные нуклеиновые кислоты представляют собой последовательности нуклеиновых кислот, не присутствующие в естественных условиях в микроорганизме, в который их предполагается вводить, и обеспечивают экспрессию продукта, не присутствующего в естественных условиях в указанном микроорганизме, или гиперэкспрессию гена, естественного для указанного микроорганизма (например, в случае введения регуляторного элемента, такого как промотор). Экзогенная нуклеиновая кислота может быть адаптирована для встраивания в геном микроорганизма, в который ее предполагается вводить, или для ее поддержания в экстра-хромосомном состоянии.
Термин экзогенный также может использоваться в отношении к белкам. Указанный термин относится к белку, не присутствующему в родительском микроорганизме, из которого произошел рекомбинантный микроорганизм.
Термин эндогенный при использовании в настоящем изобретении в отношении рекомбинантного микроорганизма и нуклеиновой кислоты или белка относится к любой нуклеиновой кислоте или белку, который присутствует в родительском микроорганизме, из которого произошел рекомбинантный микроорганизм.
Необходимо понимать, что изобретение можно осуществлять на практике с использованием нуклеиновых кислот, последовательность которых отличается от последовательностей, специально проиллюстрированных в настоящем изобретении, при условии, что они проявляют по существу такую же функцию. Для последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих белок или пептид, это означает, что закодированный белок или пептид имеет по существу такую же функцию. Для последовательностей нуклеиновых кислот, которые представляют собой последовательности промотора, последовательность варианта будет способна обеспечивать экспрессию одного или более генов. Такие нуклеиновые кислоты могут называться в настоящем изобретении функционально эквивалентными вариантами. В качестве примера, функционально эквивалентные варианты нуклеиновой кислоты включают аллельные варианты, фрагменты гена, гены, которые включают мутации (делеции, инсерции, нуклеотидные замены и т.д.) и/или полиморфизмы и т.д. Гомологичные гены из других микроорганизмов также могут рассматриваться в качестве примеров функционально эквивалентных вариантов последовательностей, конкретно проиллюстрированных в настоящем изобретении. Они включают гомологичные гены таких видов, как С1о8йтйшш ассЮЬШуПсит. ОоЧпйшт Ъеуегтски, С. 8асскагоЪи1у11сит и С. 5асскагорсгЬи1у1ассЮп1сит. подробное описание которых общедоступно на интернет-сайтах, таких как ОепЬапк или ΝΟΒΙ. Также следует понимать, что фраза функционально эквивалентные варианты включает нуклеиновые кислоты, по- 11 028892 следовательности которых различаются в результате оптимизации кодонов для конкретного организма. Функционально эквивалентные варианты нуклеиновой кислоты в настоящем изобретении предпочтительно, по меньшей мере примерно на 70%, предпочтительно примерно на 80%, более предпочтительно примерно на 85%, предпочтительно примерно на 90%, предпочтительно примерно на 95% или более идентичны последовательности идентифицированной нуклеиновой кислоты.
Следует понимать, что изобретение можно осуществлять на практике с использованием полипептидов, последовательность которых отличается от аминокислотной последовательности, конкретно проиллюстрированной в настоящем изобретении. Указанные варианты могут называться в настоящем изобретении функционально эквивалентными вариантами. Функционально эквивалентный вариант белка или пептида включает белки и пептиды, аминокислотная последовательность которых по меньшей мере на 40%, предпочтительно на 50%, предпочтительно на 60%, предпочтительно на 70%, предпочтительно на 75%, предпочтительно на 80%, предпочтительно на 85%, предпочтительно на 90%, предпочтительно на 95% или более идентична аминокислотной последовательности идентифицированного белка или пептида, и которые имеют по существу такую же функцию, как интересующий пептид или белок. Такие варианты включают фрагменты белка или пептида, где указанный фрагмент содержит процессированную форму полипептида, где аминокислотные делеции могут составлять от 1 до 5, до 10, до 15, до 20, до 25 аминокислот и могут продолжаться от 1 до 25 остатка на любом конце полипептида, и где указанные делеции могут быть любой длины в пределах указанной области или могут иметь внутреннее положение. Также следует понимать, что функционально эквивалентные варианты конкретных полипептидов в настоящем изобретении включают полипептиды, экспрессируемые гомологичными генами в других видах бактерий, например, как описано в предыдущем абзаце.
Предполагается, что фраза по существу такая же функция при использовании в настоящем изобретении означает, что нуклеиновая кислота или полипептид способны осуществлять функцию нуклеиновой кислоты или полипептида, вариантом которого они являются. Например, вариант фермента согласно изобретению способен катализировать такую же реакцию, как указанный фермент. Однако следует понимать, что вариант не должен иметь такой же уровень активности, как полипептид или нуклеиновая кислота, вариантам которой он является.
Оценить, имеет ли функционально эквивалентный вариант по существу такую же функцию, как нуклеиновая кислота или полипептид, вариантом которого он является, можно с использованием любого количества известных способов. Однако в качестве примера, можно использовать способы, описанные Сильвером и др. (§йуег е! а1. 1991, Р1ап! Рйу8ю1. 97: 1588-1591) или Зао и др. Щйао е! а1. 2011, Αρρΐ ΜίегоЫо1 Вю!есйпо1, 90:1915-1922) для фермента изопренсинтазы, Грином и др. (Сгееп е! а1. 2007, Рйу!осЬеш181гу; 68:176-188) для фермента фарнезенсинтазы, Кузуямой и др. (Ки/иуата е! а1. 2000, 1. Вас!епо1. 182, 891-897) для 1-дезокси-Э-ксилулозо-5-фосфатсинтазы Όχδ, Берндтом и Шлегелем (Вегпб!, 8сЫеде1. 1975, Агсй. МюгоЪю1. 103, 21-30) или Стим-Херндоном и др. (§йт-Негпбоп е! а1. 1995, Ген 154: 81-85) для тиолазы, Кабано и др. (СаЪапо е! а1. 1997, 1пзес! Вюсйет. Мо1. Вю1. 27: 499-505) для НМС-КоАсинтазы, Ма и др. (Ма е! а1. 2011, Ме!аЪ. Епфп., 13:588-597) для НМС-КоА-редуктазы и фермента мевалонаткиназы, Хердендорфом и Мизиорко (НегбепбогТ, М1/югко. 2007, Вюсйет18йу, 46: 11780-8) для фосфомевалонаткиназы и Крепким и др. (Кгерк1у е! а1. 2004, Рго!еш §ск 13: 1875-1881) для мевалонатдифосфатдекарбоксилазы. Также возможно идентифицировать гены ΌΧδ- и мевалонатного пути с использованием ингибиторов, таких как фосмидомицин или мевинолин, как описано Трутко и др. (ТгШко е! а1. 2005, МюгоЪю1оду 74: 153-158).
Следует понимать, что термины гиперэкспрессировать, гиперэкспрессия и подобные термины и фразы при использовании в отношении к изобретению обобщенно включают любое повышение экспрессия одного или более белков (включая экспрессию одной или более нуклеиновых кислот, кодирующих указанный белок) по сравнению с уровнем экспрессии белка (включая нуклеиновые кислоты) родительского микроорганизма в таких же условиях. Следует понимать, что указанные термины не означают, что белок (или нуклеиновая кислота) экспрессируется на каком-либо конкретном уровне.
Родительский микроорганизм представляет собой микроорганизм, используемый для создания рекомбинантного микроорганизма согласно изобретению. Родительский микроорганизм может представлять собой микроорганизм, который встречается в природе (т.е. микроорганизм дикого типа) или микроорганизм, ранее модифицированный, но не экспрессирующий или не гиперэкспрессирующий один или более ферментов, являющихся объектом настоящего изобретения. Соответственно, рекомбинантные микроорганизмы согласно изобретению могут быть модифицированы для экспрессии или гиперэкспрессии одного или более ферментов, которые не экспрессируются или не гиперэкспрессируются в родительском микроорганизме.
Следует понимать, что термины конструкции или векторы на основе нуклеиновой кислоты и подобные термины обобщенно включают любые нуклеиновые кислоты (включая ДНК и РНК), подходящие для применения в качестве носителя для переноса генетического материала в клетку. Следует понимать, что указанные термины включают плазмиды, вирусы (включая бактериофаги), космиды и искусственные хромосомы. Конструкции или векторы могут включать один или более регуляторных элементов, ориджинов репликации, сайтов множественного клонирования и/или селективных маркеров. Согласно
- 12 028892 одному конкретному варианту реализации изобретения, конструкции или векторы адаптируют для обеспечения экспрессии одного или более генов, закодированных указанной конструкцией или вектором. Конструкции или векторы на основе нуклеиновых кислот включают очищенные нуклеиновые кислоты, а также нуклеиновые кислоты, представленные вместе с одним или более агентами для облегчения их доставки в клетку (например, конъюгированную с липосомой нуклеиновую кислоту, организм, в котором содержится нуклеиновая кислота).
Следует понимать, что термин терпен, как изложено в настоящем изобретении, обобщенно включает любое соединение, состоящее из С5 изопреновых единиц, соединенных вместе, включая простые и сложные терпены и кислородсодержащие терпеновые соединения, такие как спирты, альдегиды и кетоны. Простые терпены встречаются в эфирных маслах и смолах растений, таких как хвойные растения. Более сложные терпены включают терпеноиды и витамин А, каротиноиды (такие как ликопен), сквален и каучук. Примеры монотерпенов включают, но не ограничиваются указанными, изопрен, пинен, нерол, цитраль, камфору, ментол, лимонен. Примеры сесквитерпенов включают, но не ограничиваются указанными, неролидол, фарнезол. Примеры дитерпенов включают, но не ограничиваются указанными, фитол, витамин Л!. Сквален представляет собой пример тритерпена, и каротин (провитамин Л!) представляет собой тетратерпен.
Предшественник терпена представляет собой соединение или промежуточное соединение, продуцируемое во время реакции с получением терпена, начинающейся с ацетил-КоА и необязательно пирувата. Термин относится к соединению-предшественнику или промежуточному соединению, которое обнаруживается в мевалонатном (МУЛ) пути и необязательно БХ8-пути, а также более поздних предшественников терпенов с более длинной цепью, таких как РРР и ΘΡΡ. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, предшественник терпена включает, но не ограничивается указанными, мевалоновую кислоту, ΙΡΡ, диметилаллилпирофосфат (БМЛРР), геранилпирофосфат (ΘΡΡ) и фарнезилпирофосфат (РРР).
БХЗ-путь представляет собой ферментативный путь от пирувата и Б-глицеральдегид-3-фосфата до БМЛРР или ΙΡΡ. Он также называется путем дезоксиксилулозо-5-фосфата (БХР/БХР8/БОХР или БХ8)/метилэритритолфосфата (МЕР).
Мевалонатный (МУА) путь представляет собой ферментативный путь от ацетил-Ко А до ΙΡΡ.
Микроорганизмы.
Известны два пути получения терпенов, путь дезоксиксилулозо-5-фосфата (БХР/БХР8/БОХР или БХ8)/метилэритритолфосфата (МЕР) (Нип!ег е! а1., 2007, I. Βίοί. сйет. 282: 21573-77), начинающийся с пирувата и Б-глицеральдегид-3-фосфата (Θ3Ρ) - двух основных промежуточных соединений гликолиза, и мевалонатный (МУА) путь (М1/югко, 2011, Агсй Вюсйет Вюрйуз, 505: 131-143), начинающийся с ацетил-КоА. Наличие любого из указанных путей исследовали у многих различных классов микроорганизмов (Ьапде е! а1., 2000, ΡΝΑ8, 97: 13172-77; Тги!ко е! а1., 2005, МюгоЪю1оду, 74: 153-158; 1и1зтд е! а1., 2007, Арр1 МюгоЪю1 Вю!есйпо1, 75: 1377-84), но не исследовали у карбоксидотрофных ацетогенных бактерий. Например, было обнаружено, что БХ8-путь присутствует у Е.сой, ВасШиз или МусоЪас!егшт, тогда как мевалонатный путь присутствует у дрожжей 8ассйаготусез, С1огойехи5 или Мухососсиз.
Согласно изобретению, проводили анализ генома карбоксидотрофных ацетогенов С. аи!ое!йаподепит, С. ЦипдбайШ на наличие любого из двух указанных путей. Все гены БХ8-пути были идентифицированы в С. аи!ое!йаподепит и С. ЦипдбайШ (табл. 1.1), тогда как мевалонатный путь не был выявлен. Кроме того, неизвестна способность карбоксидотрофных ацетогенных бактерий, таких как С. аи!ое!йаподепит или С. ЬщпдбаЫи, продуцировать какие-либо терпены в качестве конечных продуктов метаболизма.
Таблица 1.1
Гены БХ8-пути биосинтеза терпена, идентифицированные в С. аи!ое!йаподепит и С. ЦипдбайШ
Ген/Фермент С. аиГоеГИаподепит С. 1]ипд4аИШ
1 -дезокси-О-ксилулозо-5- фосфатсинтаза, 0X8 (ЕС:2.2.1.7) 8ЕО Ю ΝΟ: 1-2 ΥΡ_003779286.1; С1: 300854302, сии_сшбо
- 13 028892
1-дезоксиГО-ксилулоза 5- фосфатредуктоизомераза, ОХР (ЕС: 1.1.1.267) ЗЕО ГО ΝΟ: 3-4 ΥΡ_003779478.1; ΟΙ: 300854494, сии_с13080
2-С-метил-О-эритритол-4- фосфат- цитидилилтрансфераза, !зр0 (ЕС:2.7.7.60) ЗЕО ГО ΝΟ: 5-6 ΥΡ_003782252.1 ΟΙ: 300857268, С1_Л1_с41280
4-дифосфоцитидил-2-С- метил-О-эритритолкиназа, 1зрЕ (ЕС:2.7.1.148) ЗЕО ГО ΝΟ: 7-8 ΥΡ_003778403.1; ΟΙ: 300853419, сии_с021ю
2-С-метил-О-эритритол-2,4- циклодифосфатсинтаза, 1зрЕ(ЕС:4.6.1.12) ЗЕО ГО ΝΟ: 9-10 ΥΡ_003778349.1; ΟΙ: 300853365, сии_с01570
4-гид рокси-З-метилбут-2- ен-1-илдифосфатсинтаза, 1зрС (ЕС:1.17.7.1) ЗЕО ГО ΝΟ: 11-12 ΥΡ_003779480.1; ΟΙ: 300854496, сии_с1зюо
4-гид рокси-З-метилбут-2- енилдифосфатредуктаза (ЕС:1.17.1.2) ЗЕО ГО ΝΟ: 13-14 ΥΡ_003780294.1; ΟΙ: 300855310, сии_с2132о
Поздние гены синтеза терпенов из изопреновых единиц также идентифицировали в обоих организмах (табл. 1.2).
Таблица 1.2
Ген/Фермент С. аи!оеФаподепит С. 1]ипдс!аЫн
геранилтранстрансфераза, Ррз (ЕС:2.5.1.10) ЗЕО ГО ΝΟ: 15-16 ΥΡ_003779285.1; ΟΙ: 300854301, сии_с1115о
гептапренилдифосфат- синтаза, (ЕС:2.5.1.10) ЗЕО ГО ΝΟ: 17-18 ΥΡ_003779312.1; ΟΙ: 300854328, сии_с1142о
октапренилдифосфат- синтаза [ЕС:2.5.1.90] ЗЕО ГО ΝΟ: 19-20 ΥΡ_003782157.1; ΟΙ: 300857173, сии_с4озю
Терпены являются энергетически насыщенными соединениями, и для их синтеза клетке необходимо получать энергию в форме нуклеозидтрифосфатов, таких как АТФ. Использование сахара в качестве субстрата требует достаточного энергетического снабжения из реакций гликолиза для получения нескольких молекул АТФ. Выработка терпенов и/или их предшественников через ΌΧδ-путь с использованием сахара в качестве субстрата протекает относительно легко из-за доступности пирувата и Όглицеральдегид-3-фосфата (О3Р), где указанный О3Р происходит из сахаров С5-пентозы и С6-гексозы. Указанные С5- и С6-молекулы, таким образом, относительно легко превращаются в С5 изопреновые единицы, из которых состоят терпены.
Анаэробным ацетогенам, использующим С1 субстрат, подобный СО или СО2, сложнее синтезировать молекулы с длинной цепью, такие как гемитерпеноиды, из С1-единиц. Это, в частности, относится к терпенам с более длинной цепью, таким как С 10-монотерпены, С15-сесквитерпены или С40тетратерпены. На сегодняшний день продукты с наибольшим количеством атомов углерода, описанные у ацетогенов (как нативных, так и рекомбинантных организмов), представляют собой С4-соединения бутанол (Корке е! а1., 2011, Сигг. Ορίη. Вю!есЕпо1. 22: 320-325; 8сЫе1-Вепде1§богТ, Иигге, 2012, ΡΕΒδ БеНетз: 10.1016/].ТеЬЛе!.2012,04,043; Корке е! а1., 2011, Ргос. Να!. 8с1. ΕδΛ 107: 13087-92; Патент США 2011/0236941) и 2,3-бутандиол (Корке е! а1., 2011, Арр1. Εηνίτοη. МгсгоЬю1. 77:5467-75). Согласно изобретению неожиданно было показано, что возможно продуцировать указанные молекулы терпенов с более длинной цепью анаэробным путем с использованием С1-исходного продукта, представляющего собой СО, через промежуточное соединение ацетил-КоА.
Энергетика пути Вуда-Льюнгдаля анаэробных ацетогенов только исследуется, но в отличие от организмов с ферментацией при аэробных условиях роста или гликолизом сахара, в пути Вуда-Льюнгдаля АТФ не получается в результате фосфорилирования субстрата; фактически для превращения СО2 в формат в действительности требуется одна молекула АТФ и мембранный градиент. Изобретатели отмечают
- 14 028892 важность энергетической эффективности пути образования продукта. Изобретатели отмечают, что ацетогены непосредственно переводят субстрат СО или СО2 в ацетил-КоА, что представляет собой наиболее прямой путь получения терпенов и/или их предшественников с необходимостью только шести реакций, особенно по сравнению с системами на основе сахаров (фиг. 1). Несмотря на то что у карбоксидотрофных ацетогенов доступно меньшее количество АТФ, изобретатели считают, что этот более прямой путь может поддерживать более высокий уровень метаболизма (в связи с более высокой химической энергией реакций промежуточных соединений). Высокая эффективность метаболического пути важна, так как некоторые промежуточные соединения в пути биосинтеза терпена, такие как ключевые промежуточные соединения мевалонат и РРР, являются токсичными для большинства бактерий в отсутствие эффективного превращения.
Несмотря на более высокую доступность АТФ, указанная проблема токсичности промежуточных соединений может являться препятствием для получения терпенов из сахаров.
Изобретатели отмечают, что энергетика получения предшественника терпена 1РР и ΌΜΆΡΡ из СО (фиг. 6) по мевалонатному пути по сравнению с ΌΧδ-путем требует меньше нуклеозидтрифосфатов, таких как АТФ, меньше восстанавливающих агентов, а также является более прямым по сравнению с ΌΧδпутем с необходимостью только шести реакционных этапов из ацетил-КоА. Это обеспечивает преимущества в скорости реакций и метаболических путей и повышает общую энергетическую эффективность. Кроме того, более низкое число требуемых ферментов упрощает метод рекомбинации, необходимый для получения рекомбинантного микроорганизма.
Не было идентифицировано ацетогенов, имеющих мевалонатный путь, но изобретатели показали, что возможно вводить гены мевалонатного пути и необязательно ΌΧδ-пути в карбоксидотрофный ацетоген, такой как ОоЧпбшт аШоеФаподепит или С. ЦипдбаЫп, для эффективной получения терпенов и/или их предшественников из С1-углеродного субстрата СО. Изобретатели предполагают, что это применимо для всех карбоксидотрофных ацетогенных микроорганизмов.
Кроме того, ранее не была показана возможность получения терпенов и/или их предшественников с использованием рекомбинантных микроорганизмов в анаэробных условиях. Анаэробная продукция изопрена имеет преимущество, которое заключается в обеспечении более безопасных производственных условий, так как изопрен легко воспламеняется в присутствии кислорода и имеет нижний предел воспламеняемости (ЬРЬ), составляющий 1,5-2,0%, и верхний предел воспламеняемости (ИРЬ), составляющий 2,0-12% при комнатной температуре и атмосферном давлении. Так как пламя не образуется в отсутствие кислорода, изобретатели считают, что процесс анаэробной ферментации является предпочтительным, так как он является более безопасным при любых концентрациях продукта, газовых составах, диапазонах температуры и давления.
Как обсуждалось в настоящем изобретении выше, изобретение обеспечивает рекомбинантный микроорганизм, способный продуцировать один или более терпенов и/или их предшественников и необязательно один или более других продуктов путем ферментации субстрата, содержащего СО.
Согласно другому варианту реализации изобретения, микроорганизм адаптируют для экспрессии одного или более экзогенных ферментов мевалонатного пути (МУА) и/или гиперэкспрессии одного или более эндогенных ферментов мевалонатного пути (МУА) и экспрессии одного или более экзогенных ферментов ΌΧδ-пути и/или гиперэкспрессии одного или более эндогенных ферментов ΌΧδ-пути.
Согласно одному варианту реализации изобретения, родительский микроорганизм, их которого происходит рекомбинантный микроорганизм, способен ферментировать субстрат, содержащий СО, с получением ацетил-КоА, но не способен превращать ацетил-КоА в мевалоновую кислоту или изопентенилпирофосфат (1РР), и рекомбинантный микроорганизм адаптируют для экспрессии одного или более ферментов, вовлеченных в мевалонатный путь.
Микроорганизм можно адаптировать для экспрессии или гиперэкспрессии одного или более ферментов путем любого числа рекомбинантных способов, включая, например, повышение экспрессии нативных генов в микроорганизме (например, путем введения более сильного или конститутивного промотора для запуска экспрессии указанного гена), увеличение числа копий гена, кодирующего конкретный фермент, путем введения экзогенной нуклеиновой кислоты, кодирующей фермент и адаптированной для его экспрессии, введение экзогенной нуклеиновой кислоты, кодирующей фермент и адаптированной для экспрессии указанного фермента, не присутствующего в естественных условиях в родительском микроорганизме.
Согласно одному варианту реализации изобретения, один или более ферментов представляют собой ферменты мевалонатного пути (МУА) и выбраны из группы, состоящей из:
a) тиолазы (ЕС 2.3.1.9),
b) НМО-КоА-синтазы (ЕС 2.3.3.10),
c) НМО-КоА-редуктазы (ЕС 1.1.1.88), ά) мевалонаткиназы (ЕС 2.7.1.36),
е) фосфомевалонаткиназы (ЕС 2.7.4.2),
Г) мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (ЕС 4.1.1.33) и
- 15 028892
д) функционально эквивалентных вариантов любого из указанных ферментов.
Согласно другому варианту реализации изобретения, необязательный один или более ферментов представляют собой ферменты ΌΧδ-пути, выбранные из группы, состоящей из:
a) 1-дезоксиГО-ксилулозо-5-фосфатсинтазы, ΌΧδ (ЕС 2.2.1.7),
b) 1-дезокси-Э-ксилулоза 5-фосфатредуктоизомеразы, ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267),
c) 2-С-метилГО-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазы, ЕрИ (ЕС 2.7.7.60), й) 4-дифосфоцитидил-2-С-метилГО-эритритолкиназы, ЕрЕ (ЕС 2.7.1.148),
е) 2-С-метил-О-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтазы, ЕрР (ЕС 4.6.1.12), ί) 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазы, ЕрО (ЕС 1.17.7.1),
д) 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазы (ЕС 1.17.1.2), и
й) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно другому варианту реализации изобретения, один или более экзогенных или эндогенных дополнительных ферментов экспрессируются или гиперэкспрессируются, приводя к получению терпенового соединения и/или его предшественника, где указанный экзогенный фермент, который экспрессируется, или эндогенный фермент, который гиперэкспрессируется, выбран из группы, состоящей из:
a) геранил-транстрансферазы, Ррк (ЕС 2.5.1.10),
b) гептапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.10),
c) октапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.90), й) изопренсинтазы (ЕС 4.2.3.27),
е) изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы (ЕС 5.3.3.2), ί) фарнезенсинтазы (ЕС 4.2.3.46/ЕС 4.2.3.47), и
д) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Информация о последовательности каждого из ферментов приведена исключительно в качестве примера на фигурах в настоящем изобретении.
Ферменты, применимые в микроорганизмах согласно изобретению, могут происходить из любого подходящего источника, включая различные роды и виды бактерий или других организмов. Однако, согласно одному варианту реализации изобретения, ферменты происходят из 81арйу1ососси5 аигеик.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент изопренсинтаза (ίδρδ) происходит из Рор1аг 1гети1о1йек. Согласно другому варианту реализации изобретения, указанный фермент имеет последовательность нуклеиновых кислот, представленную в §ЕЦ ГО N0: 21 ниже в настоящем изобретении, или представляющую собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент дезоксиксилулозо-5-фосфатсинтаза происходит из С. аи1ое1йаподепит и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в §ЕЦ ГО N0: 1 и/или аминокислотной последовательностью, показанной в §ЕЦ ГО N0: 2 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент 1-дезокси-Э-ксилулозо-5фосфатредуктоизомераза, ΌΧΚ, происходит из С. аи1ое1йаподепцт и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в §ЕЦ ГО N0: 3, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент 2-С-метилГО-эритритол-4фосфатцитидилилтрансфераза, ЕрЭ. происходит из С. аи1ое1йаподепит и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в §ЕЦ ГО N0: 5, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент 4-дифосфоцитидил-2-С-метил-Ээритритолкиназа, ЕрЕ, происходит из С. аи1ое1йаподепит и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, представленной в §ЕЦ ГО N0: 7, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент 2-С-метилГО-эритритол-2,4циклодифосфатсинтаза, ЕрР, происходит из С. аи1ое1йаподепит и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, представленной в §ЕЦ ГО N0: 9, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1илдифосфатсинтаза, ЕрО, происходит из С. аи1ое1йаподепит и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в §ЕЦ ГО N0: 11, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент 4-гидрокси-3-метилбут-2енилдифосфатредуктаза происходит из С. аи1ое1йаподепит и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в §ЕЦ ГО N0: 13, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент мевалонаткиназа (МК) происходит из 81арйу1ососси5 аигеик подвида аигеик Ми50 и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, по- 16 028892 казанной в ЗЕф ГО N0: 51 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент фосфомевалонаткиназа (РМК) происходит из З!арЬу1ососсик аигеик подвида аигеик Ми50 и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 52 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент мевалонатдифосфатдекарбоксилаза (ΡΜΌ) происходит из З!арЬу1ососсик аигеик подвида аигеик Ми50 и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 53 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент изопентенилдифосфат-дельтаизомераза (ίάί) происходит из С1ок!пДшт Ъеуегтскн и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 54 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент тиолаза (!Ь1А) происходит из С1ок1пД1ит асеЮЪШуПсит АТСС824 и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 40 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент является тиолазой и представляет собой ацетил-КоА с-ацетилтрансферазу (угаВ), которая происходит из З!арЬу1ососсик аигеик подвида аигеик Ми50 и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 41 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент 3-гидрокси-3-метилглутарил-КоАсинтаза (НМОЗ) происходит из З!арЬу1ососсик аигеик подвида аигеик Ми50 и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 42 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент гидроксиметилглутарил-КоАредуктаза (НМСК.) происходит из З!арЬу1ососсик аигеик подвида аигеик Ми50 и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 43 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент геранил-транстрансфераза (1крА) происходит из штамма ЕксЬепсЫа сой К-12 подштамма МС1655 и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 56 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент гептапренилдифосфатсинтаза происходит из С. аиЮеГОаподепиш и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 17, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент полипренилсинтетаза происходит из С. аи!ое1Ьаподешт и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 19, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, фермент альфа-фарнезенсинтаза (РЗ) происходит из Ма1ик х Дотекйса и кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в ЗЕф ГО N0: 57 ниже в настоящем изобретении, или последовательностью, представляющей собой ее функционально эквивалентный вариант.
Ферменты и функциональные варианты, применимые в микроорганизмах, можно идентифицировать с помощью анализов, известных специалистам в данной области техники. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, фермент изопренсинтазу можно идентифицировать с помощью способа, описанного Сильвером и др. (Зйуег е! а1. 1991, Р1ап! РЬукю1. 97: 1588-1591) или Зао и др. (2Ьао е! а1. 2011, Арр1 МсгоЪю1 Вю!есЬпо1, 90:1915-1922). Согласно другому конкретному варианту реализации изобретения, фермент фарнезенсинтазу можно идентифицировать с помощью способа, изложенного в источнике Сгееп е! а1., 2007, РЬу!осЬетгк!гу; 68:176-188. Согласно другим конкретным вариантам реализации изобретения, ферменты мевалонатного пути можно идентифицировать с помощью способов, изложенных в следующих источниках: (СаЪапо е! а1. 1997, 1пкес! ВюсЬет. Мо1. Вю1. 27: 499-505) для НМОКоА-синтазы, (Ма е! а1. 2011, Ме!аЪ. Епдш., 13:588-597) для фермента НМО-КоА-редуктазы и мевалонаткиназы (НегДепДогГ апД М1/югко 2007, ВюсЬетгкЬу, 46: 11780-8) для фосфомевалонаткиназы и (Кгерк1у е! а1. 2004, Рго!еш Зск 13: 1875-1881) для мевалонатдифосфатдекарбоксилазы. Ма е! а1., 2011, Ме!аЪ. Епдщ., 13:588-597. 1-Дезокси-Э-ксилулозо-5-фосфатсинтазу ОХЗ-пути можно анализировать с использованием способа, изложенного в следующем источнике: Ки/иуата е! а1. 2000, 1. Вас!епо1. 182, 891-897. Также возможно идентифицировать гены ΌΧ3- и мевалонатного пути с использованием ингибиторов, таких как фосмидомицин или мевинолин, как описано Трутко и др. (ТгШко е! а1. 2005, МюгоЪю1оду 74: 153-158).
- 17 028892
Согласно одному варианту реализации изобретения, микроорганизм содержит одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, адаптированных для гиперэкспрессии одной или более эндогенных нуклеиновых кислот, где указанные одна или более эндогенных нуклеиновых кислот кодируют один или более ферментов, на которые ссылаются в настоящем изобретении ранее. Согласно одному варианту реализации изобретения, одна или более экзогенных нуклеиновых кислот, адаптированных для повышения экспрессии, представляет собой регуляторный элемент. Согласно одному варианту реализации изобретения, регуляторный элемент представляет собой промотор. Согласно одному варианту реализации изобретения, промотор представляет собой конститутивный промотор, который предпочтительно является высоко активным при подходящих условиях ферментации. Также можно использовать индуцибельные промоторы. Согласно предпочтительным вариантам реализации изобретения, промотор выбран из группы, включающей промоторы кластера генов Вуда-Льюнгдаля или оперона фосфотрансацетилаза/ацетаткиназа. Специалистам в данной области техники очевидно, что другие промоторы, которые могут направлять экспрессию, предпочтительно, экспрессию на высоком уровне, при подходящих условиях ферментации, будут эффективны в качестве альтернативных вариантов проиллюстрированным вариантам реализации изобретения.
Согласно одному варианту реализации изобретения, микроорганизм содержит одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, кодирующих и адаптированных для экспрессии одного или более ферментов, на которые ссылаются выше в настоящем изобретении. Согласно одному варианту реализации изобретения, микроорганизмы содержат одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, кодирующих и адаптированных для экспрессии по меньшей мере двух ферментов. Согласно другим вариантам реализации изобретения, микроорганизм содержит одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, кодирующих и адаптированных для экспрессии по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех, по меньшей мере пяти, по меньшей мере шести, по меньшей мере семи, по меньшей мере восьми, по меньшей мере девяти или более ферментов.
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, микроорганизм содержит одну или более экзогенных нуклеиновых кислот, кодирующих фермент согласно изобретению или его функционально эквивалентный вариант.
Микроорганизм может содержать одну или более экзогенных нуклеиновых кислот. Когда желательно трансформировать родительский микроорганизм двумя или более генетическими элементами (такими как гены или регуляторные элементы, например, промоторами), указанные элементы могут содержаться в одной или более экзогенных нуклеиновых кислотах.
Согласно одному варианту реализации изобретения, одна или более экзогенных нуклеиновых кислот представляют собой конструкцию или вектор на основе нуклеиновой кислоты, согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, плазмиду, кодирующую один или более ферментов, на которые ссылаются выше в настоящем изобретении, в любой комбинации.
Экзогенная нуклеиновые кислоты могут сохраняться в экстрахромосомном состоянии при трансформации родительского микроорганизма или могут встраиваться в геном родительского микроорганизма. Соответственно, они могут содержать дополнительные нуклеотидные последовательности, адаптированные для содействия интеграции (например, участок, который обеспечивает гомологичную рекомбинацию и направленную интеграцию в хозяйский геном) или экспрессии и репликации экстрахромосомной конструкции (например, ориджин репликации, промотор и другие регуляторные элементы или последовательности).
Согласно одному варианту реализации изобретения, экзогенные нуклеиновые кислоты, кодирующие один или более ферментов, как перечислено в настоящем изобретении ранее, также содержат промотор, адаптированный для обеспечения экспрессии одного или более ферментов, закодированных экзогенными нуклеиновыми кислотами. Согласно одному варианту реализации изобретения, промотор представляет собой конститутивный промотор, который предпочтительно высоко активен при подходящих условиях ферментации. Также можно использовать индуцибельные промоторы. Согласно предпочтительным вариантам реализации изобретения, промотор выбран из группы, включающей промоторы кластера генов Вуда-Льюнгдаля и фосфотрансацетилазы/ацетаткиназы. Специалистам в данной области техники очевидно, что другие промоторы, которые могут направлять экспрессию, предпочтительно, экспрессию на высоком уровне, при подходящих условиях ферментации, будут эффективны в качестве альтернативных вариантов проиллюстрированным вариантам реализации изобретения.
Согласно одному варианту реализации изобретения, экзогенная нуклеиновая кислота представляет собой экспрессионную плазмиду.
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, родительский микроорганизм выбран из группы карбоксидотрофных ацетогенных бактерий. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, микроорганизм выбран из группы, включающей С1о8йгйшт аиЮеШаподеиит, С1о51пйшт ЦиидйаЫи, С1о8йгйшт гад8Йа1е1, С1о8йгйшт сагЪохМКогаик, С1о8йгйшт йгакец С1о8йгйшт §еа1о1одеие8, С1о8йгйшт асейсит, С1о8йгйшт Гогписоасейсит. С1о8йгйшт тадиит, Ви1упЪас1епит те1ку1ойорЫсит, Асе1оЪас1епит \уоойи. А1каНЪаси1ит Ъассйй, В1аийа ргойисШ. ЕиЪаЛейиш Итожит. Мооге11а Шегтоасейса. Мооге11а ШегтаиЮгорЫса, Зроготика оуа1а. Зроготика ыКасейса. Зроготика крйаегогйек,
- 18 028892
О\оЬас1ег рГепшдп и ТЫегтоапаегоЬаЫег кшук
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, родительский микроорганизм выбран из группы этанологенных ацетогенных С?1ок1г101а„ включая виды С. аибэеЫаподепит, С. ЦипдбаЫ1и и С. гадкбаЫ и родственные изоляты. Указанные микроорганизмы включают, но не ограничиваются указанными, штаммы С. аЫоеЫаподепит ЛА1-1Т (0§М10061) [АЬбт 1, Ыауеаи Η, Νγηδ Е-Ь С1ок1пб1ит аЫоеЫаподепит, 8р. поу., ап апаегоЫс ЬасЮгшт 1Ыа1 ргобисек е1Ыапо1 Ггот сагЬоп топо\|бе. АгсЫ М1сгоЫо1 1994, 4: 345-351], С. аЫоеЫаподепит ЬВ§1560 (П8М19630) [§1тр8оп δΌ, Еогк1ег КЬ, 1гап РТ, Ро\уе М1, Уагпег 1Ь: №уе1 Ьас1епа апб тебюбк ЫегеоГ. Ы1етабопа1 ра1еп1 2009, УО/2009/064200], С. аШоеЫаподепит ЬВ81561 (П8М23693), С. 1]ипдбаЫ1б РЕТСТ Щ8М13528 = АТСС 55383) [Таппег Κδ, Мб1ег ЬМ, Уапд Ό: С1окбтбшт [ртдбаЫЫ 8р. поу., ап ЛсеЮдешс §реЫе8 т С1ок1пб1а1 γΚΝΛ Ното1оду Огоир I. 1п1 1 §у81 Вас1епо1 1993, 43: 232-236], С. 1)ипдбаЫ1и ЕК1-2 (АтСС 55380) [Оаббу ДЬ: С1окбгбшт к1аш \у1псЫ ргобисек асебс ааб Ггот \уак1е дакек. Патент США 1997, 5593886], С. 1_)ипдбаЫ1и С-01 (АТСС 55988) [Оаббу ДЬ, С1аикеп ЕС, Ко С-У: МюгоЫа1 ргосекк Гог 1Ые ргерагабоп оГ асебс ааб ак \уе11 ак кокет Гог ϊΐ8 еМгасбоп Ггот 1Ые ГегтеЫабоп ЬгоЫ. υδ ра1епГ 2002, 6368819], С. 1_)ипдбаЫ1и 0-52 (АТСС 55989) [Оаббу ДЬ, С1аикеп ЕС, Ко С-У: МюгоЫа1 ргосекк Гог 1Ые ргерагабоп оГ асебс аЫб ак \уе11 ак кокет Гог бк ехбнсбоп Ггот 1Ые ГегтеЫабоп Ьгобг Патент США, 2002, 6368819], С. гадкба1е1 Р11Т (АТСС ВАА-622) [НиЫпке КЬ, ЬеМк Κδ, Таппег Κδ: 1ко1абоп апб СЫагасЮп/абоп оГ поуе1 С1ок1пб1а1 8реаек. 1п1егпабопа1 ра1еп1 2008, УО 2008/028055], родственные изоляты, такие как С. соккаЫ [2аЫп е1 а1 - №уе1 еЫапо1одешс креЫек С1окбгбшт соккаЫ (заявка на патент США № υδ 20110229947)] и С1окбтбшт кр. (Туибп е1 а1., 2012, 1. Вю1есЫ Кек. 4: 1-12) или мутантные штаммы, такие как С. ЦипдбаЫЫ ОТА-1 (Тбабо-Лсетебо О. Ргобисбоп оГ ВюеЫапо1 Ггот δуηΐЫек^к Оак иктд С1окбгбшт ЦипдбаЫЫ. РЫЭ ИгеЫк, №пЫ Сагобпа δίаΐе ипкегкбу, 2010). Указанные штаммы образуют подгруппу в пределах группы I рРНК С1окбтб1а1, и ген 16δ рРНК имеет более чем 99% идентичности в пределах указанной подгруппы со сходным низким содержанием ОС-пар, составляющим около 30%. Однако эксперименты по ДНК-ДНК реассоциации и ДНКфингерпринтингу показали, что указанные штаммы принадлежат к различным видам [НиЫпке КЬ, беи1к Κδ, Таппег Κδ: 1ко1абоп апб СЫагас1еп/абоп оГ поуе1 С1ок1пб1а1 δрес^ек. 1п1егпабопа1 ра1еп1 2008, УО 2008/028055].
Все виды указанной группы имеют сходную морфологию и размер (размер клеток на стадии логарифмического роста составляет между 0.5-0.7х3-5 мкм), являются мезофилами (оптимальная температура роста составляет между 30-37°С) и строгими анаэробами [Таппег Κδ, Мб1ег ЬМ, Уапд Ό: С1окбтбшт 1)ипдбаЫ1б кр. поу., ап ЛсеЮдешс δрес^ек т С1ок1пб1а1 γΚΝΛ Ното1оду Огоир I. 1п1 ΐ. δукΐ Вас1епо1 1993, 43: 232-236; АЬбт 1., №-1уеаи Н., Жпк Е-Ь С1окбгбшт аЫоеЫаподепит, кр. поу., ап апаегоЫс Ьас1егшт Ыа1 ргобисек еЫапо1 Ггот сагЬоп топоюбе. АгсЫ МюгоЫо1 1994, 4: 345-351; НиЫпке Κ6, ЬеМк Κδ, Таппег Κδ: 1ко1абоп апб СЫагас1еп/абоп оГ поуе1 С1ок1пб1а1 δрес^ек. биегпабопа1 ра1еп1 2008, УО 2008/028055]. Более того, все виды указанной группы обладают одинаковыми главными филогенетическими признаками, такими как одинаковый диапазон рН (рН 4-7.5, с оптимальным исходным значением рН 5.5-6), активный аутотрофный рост на СО-содержащих газах с сопоставимыми скоростями роста и сходный метаболический профиль с этанолом и уксусной кислотой в качестве основных конечных продуктов ферментации и образование незначительного количества 2,3-бутандиола и молочной кислоты при определенных условиях. [Таппег Κδ, МШег ЬМ, Уапд Ό: С1окбтбшт ЩипдбаЫЫ кр. поу., ап ЛсеЮдешс δрес^ек ш С1окббб1а1 γΚΝΛ Ното1оду Огоир I. т1 1. δукΐ ВасЮбо1 1993, 43: 232-236; АЬбпг 1., №-1уеаи Н., Жпк Е-Ь С1окбтбшт аиЮеЫаподепит, кр. поу., ап апаегоЫс ЬасЮбит 1Ыа1 ргобисек еЫапо1 Ггот сагЬоп топоюбе. АгсЫ МюгоЫо1 1994, 4: 345-351; НиЫпке Κφ ЬеМк Κδ, Таппег Κδ: кок-топ апб СЫагас1еп/абоп оГ поуе1 С1ок1пбкб δрес^ек. бИегпабопа1 ра1еп1 2008, УО 2008/028055]. Также во всех трех видах наблюдается продукция индола. Однако виды различаются по утилизации субстратов, представляющих собой различные сахара (например, рамнозы, арабинозы), кислоты (например, глюконат, цитрат), аминокислоты (например, аргинин, гистидин), или других субстратов (например, бетаина, бутанола). Более того, было обнаружено, что некоторые из видов являются ауксотрофами в отношении конкретных витаминов (например, тиамина, биотина), в то время как другие не являются.
Согласно одному варианту реализации изобретения, родительский карбоксидотрофный ацетогенный микроорганизм выбран из группы, состоящей из С1окбгбшт аиЮеЫаподепит, С1окбгбшт уипдбаЫЫ, С1окбгбшт гадкба1е1, С1окбгбшт сагЬох1бкогапк, С1окбгбшт бгакег С1окбгбшт ксаЮ1одепек, ВтупЬасЮбит бтокит, ВЫубЬасЮбит теЫуюбюрЫюит, АсеЮЬасЮбит иооби, А1кабЬаси1ит ЬассЫи, В1аиба ргобисЮ, ЕиЬасЮбит бтокит, Мооге11а Ыегтоасебса, Моогеба ЫегтаиЮборЫса, О\оЬас1ег рГептди и ТЫегтоапаегоЬасЮг Κίηνί.
Согласно одному конкретному варианту реализации первого или второго аспекта, родительский микроорганизм выбран из группы карбоксидотрофных С1ок1пбкг включающей С1окбтбшт аиЮеЫаподепит, С1окбгбшт ЦипдбаЫЫ, С1окбгбшт гадкба1е1, С1окбгбшт сагЬох1бкогапк, С1окбгбшт бгакег С1окбгбшт ксаЮ1одепек, С1окбгбшт асебсит, С1окбгбшт Гогтгсоасебсит, С1окбгбшт тадпит.
Согласно одному варианту реализации изобретения, микроорганизм выбран из группы карбоксидотрофных С1ок1пбкг включающей виды С. аиЮеЫаподепит, С. 1)ипдбаЫ1и и С. гадкба1е1 и родственных культур. Указанные микроорганизмы включают, но не ограничиваются указанными, штаммы С. аиЮеЫ- 19 028892 аподепит 1А1-1Т (Ό8Μ10061) (АЬпт, Ыауеаи, & Νγηδ, 1994), С. аШоеШаподепит ЬВ81560 (Ό8Μ19630) (\\'О/2009/0б4200). С. аШоеШаподепит БВ81561 (Ό8Μ23693), С. ЩипдйаЫи ГЕТСТ (Ό8Μ13528 = АТСС 55383) (Таппег, ΜιΙΡγ, & Уапд, 1993), С. УипдйаЫД ΕΚΙ-2 (АТСС 55380) (Патент США 5,593,886), С. УипдйаЫя С-01 (АТСС 55988) (патент США 6,368,819), С. УипдйаЫя 0-52 (АТСС 55989) (патент США 6,368,819) или С. гадкйа1е1 Ρ11Τ (АТСС ВАА-622) (\О 2008/028055) и родственные изоляты, такие как С. соккаШ (патент США 2011/0229947), С1окктйшт кр. ΜΤ351 (Μχ1κκ1 Туигт & КшикЫп, 2012) и их мутантные штаммы, такие как С. ЦипдйаЫи ОТА-1 (иайо-Асеуейо О. Ρ^оάисΐ^оη оГ В|ое1Иапо1 Ггот 8уп(Иекй Оак Икшд С1окйтйшт ЦипдйаЫи. ΡΙιΌ ЫеЫк, №г1к Сагокпа 8(а1е ишуегкйу, 2010).
Указанные штаммы образуют подгруппу группы I С1окШЙ1а1 ρΡΗΚ (СоШпк е( а1., 1994), имеющих по меньшей мере 99% идентичности на уровне гена 16δ рРНК, хотя являются разными видами, как определено с помощью экспериментов по ДНК-ДНК реассоциации и ДНК-фингерпринтинга (публикация \О 2008/028055, патент США 2011/0229947).
Штаммы указанной группы определяются общими характеристиками, имеют сходный генотип и фенотип и одинаковый способ сохранения энергии и ферментативного метаболизма. У штаммов указанной группы отсутствуют цитохромы, и превращение энергии у них опосредуется комплексом КпГ.
Все штаммы указанной группы имеют размер генома примерно 4.2 МВр (Корке е( а1., 2010) и содержание ОС-пар примерно 32 мол.% (АЬпш е( а1., 1994; Корке е( а1., 2010; Таппег е( а1., 1993) (публикация \О 2008/028055; патент США 2011/0229947), а также консервативные опероны необходимых ключевых генов, кодирующих ферменты пути Вуда-Льюнгдаля (дегидрогеназу моноксида углерода, формилтетрагидрофолатсинтазу, метилен-тетрагидрофолатдегидрогеназу, формилтетрагидрофолатциклогидролазу, метилен-тетрагидрофолатредуктазу и дегидрогеназу моноксида углерода/Ацетил-КоА-синтазу), гидрогеназу, форматдегидрогеназу, комплекс КпГ (гпГСЭОЕАВ). пируват:ферредоксин-оксидоредуктазу, альдегид :ферредоксин-оксидоредуктаза (Корке е( а1., 2010, 2011). Было обнаружено, что организация и число генов пути Вуда-Льюнгдаля, ответственных за поглощение газа, одинаковы во всех видах, несмотря на различия в последовательностях нуклеиновых кислот и аминокислот (Корке е( а1., 2011).
Все указанные штаммы имеют сходную морфологию и размер (размер клеток на стадии логарифмического роста составляет 0.5-0.7х3-5 мкм), являются мезофилами (оптимальная температура роста составляет 30-37°С) и строгими анаэробами (АЬпш е( а1., 1994; Таппег е( а1., 1993, публикация \О 2008/028055). Более того, они все обладают одинаковыми главными филогенетическими признаками, такими как одинаковый диапазон рН (рН 4-7.5 с оптимальным исходным значением рН 5.5-6), активный аутотрофный рост на СО-содержащих газах с сопоставимыми скоростями роста и метаболический профиль с получением этанола и уксусной кислоты в качестве главных конечных продуктов ферментации, образованием незначительных количеств 2,3-бутандиола и молочной кислоты при определенных условиях (АЬпш е( а1., 1994; Корке е( а1., 2011; Таппег е( а1., 1993). Однако виды различаются по утилизации субстрата, представляющего собой различные сахара (например, рамнозы, арабинозы), кислоты (например, глюконат, цитрат), аминокислоты (например, аргинин, гистидин), или других субстратов (например, бетаина, бутанола). Было обнаружено, что некоторые из видов являются ауксотрофами в отношении конкретных витаминов (например, тиамина, биотина), в то время как другие не являются. Для ряда указанных организмов было показано восстановление карбоновых кислот в соответствующие спирты (Теге/, КюЫег, Ьойик, & АпдепеЫ, 2012).
Таким образом, описанные характеристики не специфичны для одного организма, такого как С. аиЮеШаподепит или С. УипдйаЫи, а являются общими характеристиками карбоксидотрофных этанолсинтезирующих ОокШЫа. Таким образом, можно предполагать, что изобретение применимо для указанных штаммов, несмотря на возможные различия в продуктивности.
Рекомбинантные карбоксидотрофные ацетогенные микроорганизмы согласно изобретению могут быть получены из родительского карбоксидотрофного ацетогенного микроорганизма и одной или более экзогенных нуклеиновых кислот с использованием любого количества методов получения рекомбинантных микроорганизмов, известных в данной области техники. Исключительно в качестве примера, трансформацию (включая трансдукцию или трансфекцию) можно достигать путем электропорации, электро слияния, обработки ультразвуком, полиэтиленгликоль-опосредованной трансформации, конъюгации или химической или природной компетенции. Подходящие методы трансформации описаны, например, в источнике 8атЬгоок 1., РгйксИ ЕР, Μатаί^к Т: Μо1еси1а^ С1отпд: А. 1аЬога(огу Μаηиа1, Со1й 8ргтд НагЬоиг ЬаЬго1агу Ριόκκ, Со1й 8ргтд НаГЬоиг, 1989.
Метод электропорации был описан для нескольких карбоксидотрофных ацетогенов, таких как С. УипдйаЫй (Корке е1 а1., 2010; Ьеапд, Иек1, Умп, & Ьоу1еу, 2012) ^^¥N22011/000203; \О2012/053905), С. аШоеШаподепит (ΡСΤ/NΖ2011/000203; \О2012/053905), АсеЮЬас1епит \уоойп (81га1/, 8аиег, КиЫп, & Иигге, 1994) или Μоо^е11а (Иегтоасекса (Кка е( а1., 2012) и представляет собой стандартный метод, используемый в случае многих С1окйтЙ1а, таких как С. асеЮЬШуПсит (Μе^те1кΐе^η, \е1кег, Веппей, & ΡароЫкакЫ, 1992), С. се11и1о1уйсит (1еппей, Тагйй, Уоипд, & Уоипд, 2000) или С. (ИегтосеПит (Μν Туигт, Иекац & Ьупй, 2004).
Метод электрослияния был описан для ацетогенных С1окктйшт кр. МТ351 (Туигт и КшикЫп,
- 20 028892
2012).
Для карбоксидотрофных ацетогенов был описан такой же метод индукции профага, как в случае С. 8са1о1одепе8 (Ргазаппа Татагари Раййа8ага1йу, 2010, Эеуе1ортеп1 оГ а Сепейс ΜοάίΓκαΐίοη §у81ет ίη С1о8Ιηάίιιιη 8са1о1одепез АТСС 25775 Гог Сепегайоп оГ МшапК Маз1ег8 Рго]ес1 \Уе81егп КеШиску Итуегейу).
Метод конъюгации был описан как метод выбора ацетогена С1ο8ί^^ά^ит ά^ГГ^с^1е (НегЬей, 0'КееГГе, Ршйу, Е1тоге, & М|п1оп, 2003) и многих других С1ο8ί^^ά^а, включая С. асеЮЬнуПсит (^ййат8, Уоипд, & Уоипд, 1990).
Согласно одному варианту реализации изобретения, родительский штамм использует С0 в качестве единственного источника углерода и энергии.
Согласно одному варианту реализации изобретения, родительский микроорганизм представляет собой С1ο8ί^^ά^ит аиЮеЙитодепит или С1ο8ί^^ά^ит (йп^аЫп. Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, микроорганизм представляет собой С1о81пФит аиЮеЙитодепит Ό8Μ23693. Согласно другому конкретному варианту реализации изобретения, микроорганизм представляет собой С1о8й1Фит Ιίιη^άηΐιΐη Ό8Μ13528 (или АТСС55383).
Нуклеиновые кислоты.
Изобретение также обеспечивает одну или более нуклеиновых кислот или конструкций на основе нуклеиновых кислот, применимых в получении рекомбинантного микроорганизма согласно изобретению.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота содержит последовательности, кодирующие один или более ферментов мевалонатного (МУА) пути и необязательно ΌΧδ-пути, которые при экспрессии в микроорганизме позволяют указанному микроорганизму продуцировать один или более терпенов и/или их предшественников путем ферментации субстрата, содержащего С0. Согласно одному конкретному варианту реализации, изобретение обеспечивает нуклеиновую кислоту, кодирующую два или более ферментов, которые при экспрессии в микроорганизме позволяют указанному микроорганизму продуцировать один или более терпенов и/или его предшественников путем ферментации субстрата, содержащего С0. Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота согласно изобретению кодирует три, четыре, пять или более указанных ферментов.
Согласно одному варианту реализации изобретения, один или более ферментов, кодируемых нуклеиновой кислотой, представляют собой ферменты мевалонатного пути (МУА) и выбраны из группы, состоящей из:
a) тиолазы (ЕС 2.3.1.9),
b) НМС-КоА-синтазы (ЕС 2.3.3.10),
c) НМС-КоА-редуктазы (ЕС 1.1.1.88), ά) мевалонаткиназы (ЕС 2.7.1.36),
е) фосфомевалонаткиназы (ЕС 2.7.4.2),
Г) мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (ЕС 4.1.1.33) и
д) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно другому варианту реализации изобретения, один или более необязательных ферментов, кодируемых нуклеиновой кислотой, представляют собой ферменты ΌΧδ-пути и выбраны из группы, состоящей из:
a) 1-дезокси-Ц-ксилулозо-5-фосфатсинтазы, ΌΧδ (ЕС 2.2.1.7),
b) 1-дезокси-О-ксилулозо-6-фосфатредуктоизомеразы, ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267),
c) 2-С-метил-О-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазы, Ι8ρϋ (ЕС 2.7.7.60), ά) 4-дифосфоцитидил-2-С-метил-Э-эритритолкиназы, 18рЕ (ЕС 2.7.1.148),
е) 2-С-метил-О-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтазы, 18рР (ЕС 4.6.1.12),
Г) 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазы, 18рС (ЕС 1.17.7.1),
д) 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазы (ЕС 1.17.1.2) и
И) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота кодирует один или более дополнительных ферментов, которые экспрессируются или гиперэкспрессируются, что позволяет получить терпеновое соединение и/или его предшественник, где экзогенный фермент, который экспрессируется, или эндогенный фермент, который гиперэкспрессируется, выбран из группы, состоящей из:
a) геранил-транстрансферазы, Рр8 (ЕС 2.5.1.10),
b) гептапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.10),
c) октапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.90), ά) изопренсинтазы (ЕС 4.2.3.27),
е) изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы (ЕС 5.3.3.2),
Г) фарнезенсинтазы (ЕС 4.2.3.46/ЕС 4.2.3.47) и
д) функционально эквивалентного варианта любого из указанных ферментов.
Примеры аминокислотных последовательностей и последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих каждый из указанных выше ферментов, предложены в настоящем изобретении или могут быть получены из базы СепВапк, как указано выше в настоящем изобретении. Однако специалисты в данной
- 21 028892 области техники легко определят альтернативные последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты или их функционально эквивалентные варианты, с учетом информации, содержащейся в настоящем изобретении, в базе ОепВапк и других базах данных, и генетического кода.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая тиолазу ПЫЛ), произошедшую из С^11^ц.ип асеЮЬШуПсит АТСС824, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 40 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая тиолазу, где указанная тиолаза представляет собой ацетил-КоА с-ацетилтрансферазу (угаВ), произошедшую из 81арЬу1ососсш аигеш подвида аигеш Ми50, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 41 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 3гидрокси-3-метилглутарил-КоА-синтазу (НМО8), произошедшую из 81арЬу1ососсш аигеш подвида аигеи8 Ми50, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 42 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая гидроксиметилглутарил-КоА-редуктазу (НМОК), произошедшую из 81арйу1ососсш аигеш подвида аигеш Ми50, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 43 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая мевалонаткиназу (МК), произошедшую из 81арЬу1ососсш аигеш подвида аигеш Ми50 кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 51 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая фосфомевалонаткиназу АМК), произошедшую из 81арЬу1ососсш аигеш подвида аигеш Ми50 кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 52 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая мевалонатдифосфатдекарбоксилазу (ТМО), произошедшую из 81арЬуюсоссш аигеш подвида аигеш Ми50, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 53 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая дезоксиксилулозо-5-фосфатсинтазу, произошедшую из С. аи1ое!йаподепит, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 1, и/или аминокислотной последовательностью, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 2 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 1-дезоксиО-ксилулозо-5-фосфатредуктоизомеразу, ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267), имеет последовательность δΕφ ΙΌ N0: 3 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 2-С-метилО-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазу, ΙδρΌ (ЕС 2.7.7.60), имеет последовательность δΕφ ΙΌ N0: 5 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 4дифосфоцитидил-2-С-метил-О-эритритолкиназу, ΙδρΕ (ЕС 2.7.1.148), имеет последовательность δΕφ ΙΌ N0: 7 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 2-С-метилО-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтазу, ΙδρΡ (ЕС 4.6.1.12), имеет последовательность δΕφ ΙΌ N0: 9 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 4-гидрокси3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазу, ΙδρΟ (ЕС 1.17.7.1), имеет последовательность δΕφ ΙΌ N0: 11 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая 4-гидрокси3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазу (ЕС 1.17.1.2), имеет последовательность δΕφ ΙΌ N0: 13 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая геранилтранстрансферазу (ίδρΆ), произошедшую из штамма ΕδΟκιΈ1ιί3 сой К-12 подштамма МО1655, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в δΕφ ΙΌ N0: 56 ниже в настоящем изобретении или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая гептапренилдифосфатсинтазу, имеет последовательность δΕφ ΙΌ N0: 17 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
- 22 028892
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая октапренилдифосфатсинтазу (ЕС 2.5.1.90), где указанная октапренилдифосфатсинтаза представляет собой полипренилсинтетазу, кодируется последовательностью 5>Еф ГО N0: 19 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая изопренсинтазу (ίδρδ), произошедшую из Рор1аг 1гети1о1Йе8, показана в 5>Еф ГО N0: 21 ниже в настоящем изобретении или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу (ίάί), произошедшую из ОоЧпйшш Ъеуегтски, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в 5>Еф ГО N0: 54 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно другому варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая альфафарнезенсинтазу (Р8), произошедшую из Ма1и8 х йотекйса, кодируется последовательностью нуклеиновых кислот, показанной в 5>Еф ГО N0: 57 ниже в настоящем изобретении, или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант.
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновые кислоты согласно изобретению также содержат промотор. Согласно одному варианту реализации изобретения, промотор обеспечивает конститутивную экспрессию генов под его контролем. Однако также можно использовать индуцибельные промоторы. Специалисты в данной области техники легко определят промоторы, применимые согласно изобретению. Предпочтительно промотор может вызывать экспрессию на высоком уровне при подходящих условиях ферментации. Согласно конкретному варианту реализации изобретения, используют промотор кластера Вуда-Льюнгдаля. Согласно другому варианту реализации изобретения, используют промотор фосфотрансацетилазы/ацетаткиназы. Согласно другому варианту реализации изобретения, промотор представляет собой промотор пируват:ферредоксин-оксидоредуктазы, промотор сложного оперона Κηί или промотор оперона АТФ-синтазы. Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, промотор представляет собой промотор из С. аи1ое1йаподепит.
Нуклеиновые кислоты согласно изобретению при трансформации могут оставаться в экстрахромо сомном состоянии по отношению к родительскому микроорганизму или могут быть адаптированы для встраивания в геном указанного микроорганизма. Соответственно, нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут содержать дополнительные нуклеотидные последовательности, адаптированные для обеспечения встраивания (например, участок, позволяющий гомологичную рекомбинацию и направленную интеграцию в хозяйский геном) или стабильной экспрессии и репликации экстрахромосомной конструкции (например, ориджин репликации, промотор и другие регуляторные последовательности).
Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота представляет собой конструкцию или вектор на основе нуклеиновой кислоты. Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, конструкция или вектор на основе нуклеиновой кислоты представляет собой экспрессионную конструкцию или вектор, однако, согласно изобретению, также включены другие конструкции и векторы, такие как конструкции и векторы, используемые для клонирования. Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, экспрессионная конструкция или вектор представляет собой плазмиду.
Необходимо понимать, что экспрессионная конструкция/вектор согласно настоящему изобретению может содержать любое количество регуляторных элементов в дополнение к промотору, а также при желании дополнительные гены, подходящие для экспрессии других белков. Согласно одному варианту реализации изобретения экспрессионная конструкция/вектор содержит один промотор. Согласно другому варианту реализации изобретения, экспрессионная конструкция/вектор содержит два или более промоторов. Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, экспрессионная конструкция/вектор содержит один промотор для каждого гена, который предполагается экспрессировать. Согласно одному варианту реализации изобретения, экспрессионная конструкция/вектор содержит один или более сайтов связывания рибосом, предпочтительно сайт связывания рибосом для каждого гена, который предполагается экспрессировать.
Специалистам в данной области техники очевидно, что последовательности нуклеиновых кислот и последовательности конструкции/вектора, описанные в настоящем изобретении, могут содержать стандартные линкерные нуклеотиды, такие как нуклеотиды, необходимые для сайтов связывания рибосом и/или сайтов рестрикции. Указанные линкерные последовательности не являются необходимыми и не ограничивают конкретные последовательности.
Нуклеиновые кислоты и конструкции нуклеиновых кислот, включая экспрессионные конструкции/векторы согласно изобретению, могут быть сконструированы с использованием любого количества стандартных методов, известных в данной области техники. Например, можно использовать химический синтез или рекомбинантные методы. Такие методы описаны, например, в источнике 8атЪтоок е1 а1. Мо1еси1аг С1ошпд: А 1аЪога1оту тапиа1, Со1й 8рттд НагЪог ЬаЪогаФгу Рте88, Со1й 5>рппд НагЪог, ΚΥ, 1989. Другие примеры методов описаны в разделе примеров далее в настоящем изобретении. По существу, отдельные гены и регуляторные элементы функционально связаны друг с другом, так что указанные ге- 23 028892 ны могут экспрессироваться с получением желаемых белков. Подходящие векторы для применения согласно изобретению очевидны специалистам в данной области техники. Однако, в качестве примера, следующие векторы могут являться подходящими: векторы рМТЬ80000, р1МР1, рЛК750 и плазмиды, показанные в разделе примеров далее в настоящем изобретении.
Необходимо понимать, что нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут быть в любой подходящей форме, включая РНК, ДНК или кДНК.
Изобретение также обеспечивает хозяйские организмы, в частности микроорганизмы, включая вирусы, бактерии и дрожжи, содержащие любую одну или более нуклеиновых кислот, описанных в настоящем изобретении.
Способы получения организмов.
Одну или более экзогенных нуклеиновых кислот можно доставлять в родительский микроорганизм в виде очищенных нуклеиновых кислот или нуклеиновых кислот, представленных вместе с одним или более агентами для облегчения процесса трансформации (например, конъюгированной с липосомой нуклеиновой кислоты, организма, в котором содержится нуклеиновая кислота). Одна или более нуклеиновых кислот может представлять собой ДНК, РНК или их комбинацию, если применимо. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, можно использовать ингибиторы рестрикции можно использовать; см., например, Мштау, Ν.Ε. е1 а1. (2000), М1сгоЫа1. Мо1ес. Вю1. Кеу. 64, 412.
Микроорганизмы согласно изобретению могут быть получены из родительского микроорганизма и одной или более экзогенной нуклеиновой кислоты с использованием любого количества способов получения рекомбинантных микроорганизмов, известных в данной области техники. Исключительно в качестве примера, трансформацию (включая трансдукцию или трансфекцию) можно достигать путем электропорации, обработки ультразвуком, опосредованной полиэтиленгликолем трансформации, химической или естественной компетенции или конъюгации. Подходящие методы трансформации описаны, например, в источнике 8атЬгоок 1., РгйксЬ Ε.Ρ., МатаЕк Т.: Мо1еси1аг С1отп§: А. 1аЬога!огу Мапиа1, Со1й 8рппд НагЬоиг ЬаЬго1агу Ргекк, Со1й 8рппд НагЬоиг, 1989.
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, системы рестрикции, активные в микроорганизме, который предполагается трансформировать, вызывают необходимость метилировать нуклеиновую кислоту, которую предполагается вводить в указанный микроорганизм. Указанное метилирование можно осуществлять с использованием различных методов, включая способы, описанные ниже и дополнительно проиллюстрированные далее в настоящем изобретении в разделе примеров.
В качестве примера, согласно одному варианту реализации изобретения, рекомбинантный микроорганизм согласно изобретению получают с помощью способа, включающего следующие этапы:
b) введение в челночный микроорганизм (ί) экспрессионной конструкции/вектора, как описано в настоящем изобретении, и (ίί) конструкции/вектора метилирования, содержащей ген метилтрансферазы;
c) экспрессия гена метилтрансферазы;
й) выделение одной или более конструкций/векторов из челночного микроорганизма и е) введение одной или более конструкций/векторов в микроорганизм-мишень.
Согласно одному варианту реализации изобретения, ген метилтрансферазы этапа Ь экспрессируется конститутивно. Согласно другому варианту реализации изобретения, экспрессия гена метилтрансферазы этапа Ь индуцируется.
Челночный микроорганизм представляет собой микроорганизм, предпочтительно микроорганизм без рестрикционной активности, который облегчает метилирование последовательностей нуклеиновых кислот, которые образуют экспрессионную конструкцию/вектор. Согласно конкретному варианту реализации изобретения, челночный микроорганизм представляет собой Е.соН, ВасШик киЬйШк или ЬасФсоссик 1асПк без рестрикционной активности.
Конструкции/векторы метилирования содержат последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую метилтрансферазу.
При введении экспрессионной конструкции/вектора и конструкции/вектора метилирования в челночный микроорганизм индуцируется ген метилтрансферазы, присутствующий в конструкции/векторе метилирования. Индукция может происходить с помощью любой подходящей системой промоторов, несмотря на то, что согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, конструкция/вектор метилирования содержит индуцибельный 1ас промотор и индуцируется добавлением лактозы или ее аналога, более предпочтительно, изопропил-Р-В-тиогалактозида (1РТО). Другие подходящие промоторы включают ага, 1е1 или Т7 систему. Согласно другому варианту реализации изобретения, промотор конструкции/вектора метилирования представляет собой конститутивный промотор.
Согласно конкретному варианту реализации изобретения, конструкция/вектор метилирования имеет ориджин репликации, специфичный для класса челночного микроорганизма, так что любой ген, присутствующий в конструкции/векторе метилирования, экспрессируется в челночном микроорганизме. Предпочтительно экспрессионная конструкция/вектор содержит ориджин репликации, специфичный для классу микроорганизма-мишени, так, что любой ген, присутствующий в экспрессионной конструкции/векторе, экспрессируются в микроорганизме-мишени.
Экспрессия фермента метилтрансферазы приводит к метилированию генов, присутствующих в экс- 24 028892 прессионной конструкции/векторе. Экспрессионную конструкцию/вектор затем можно выделять из челночного микроорганизма в соответствии с любым из ряда известных способов. Исключительно в качестве примера, для выделения экспрессионной конструкции/вектора можно использовать способы, описанные в разделе примеров ниже в настоящем изобретении.
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, обе конструкции/вектора выделяют одновременно.
Экспрессионную конструкция/вектор можно вводить в микроорганизм-мишень с использованием любого количества известных способов. Однако в качестве примера, можно использовать способы, описанные в разделе примеров ниже в настоящем изобретении. Благодаря метилированию экспрессионной конструкции/вектора последовательности нуклеиновых кислот, присутствующие в указанной экспрессионной конструкции/векторе можно встраивать в микроорганизм-мишень и успешно экспрессировать.
Предполагается, что ген метилтрансферазы можно вводить в челночный микроорганизм и гиперэкспрессировать. Таким образом, согласно одному варианту реализации изобретения, полученный фермент метилтрансферазу можно собирать с использованием известных способов и использовать ίη νίΙΐΌ для метилирования экспрессионной плазмиды. Экспрессионную конструкцию/вектор затем можно вводить в микроорганизм-мишень для экспрессии. Согласно другому варианту реализации изобретения, ген метилтрансферазы вводят в геном челночного микроорганизма с последующим введением в указанный челночный микроорганизм экспрессионной конструкции/вектора, выделением одной или более конструкции/вектора из указанного челночного микроорганизма и последующим введением указанной экспрессионной конструкции/вектора в микроорганизм-мишень.
Предполагается, что экспрессионную конструкцию/вектор и конструкцию/вектор метилирования, как определено выше, можно комбинировать с получением композиции. Указанная композиция особо применима в защитных механизмах ухода от рестрикции для получения рекомбинантных микроорганизмов согласно изобретению.
Согласно одному конкретному варианту реализации изобретения, экспрессионная конструкция/вектор и/или конструкция/вектора метилирования представляют собой плазмиды.
Специалистам в данной области техники очевиден ряд подходящих метилтрансфераз, применимых для получения микроорганизмов согласно изобретению. Однако в качестве примера можно использовать метилтрансферазу фага ВасШик киЫФк ФТ1 и метилтрансферазу, описанную в примерах далее в настоящем изобретении. Согласно одному варианту реализации изобретения, метилтрансфераза имеет аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 60 или представляет собой ее функционально эквивалентный вариант. Нуклеиновые кислоты, кодирующие подходящие метилтрансферазы, легко определить с учетом последовательности желаемой метилтрансферазы и генетического кода. Согласно одному варианту реализации изобретения, нуклеиновая кислота, кодирующая метилтрансферазу, является такой, как описано в Примерах далее в настоящем изобретении (например, нуклеиновая кислота, имеющая последовательность 8Е0 ГО N0: 63 или представляющая собой ее функционально эквивалентный вариант).
Можно использовать любое количество конструкций/векторов, адаптированных для обеспечения экспрессии гена метилтрансферазы для создания конструкции/вектора метилирования. Однако в качестве примера можно использовать плазмиду, описанную в разделе примеров ниже в настоящем изобретении.
Способы получения.
Изобретение обеспечивает способ получения одного или более терпенов и/или их предшественников и необязательно одного или более других продуктов путем ферментации микроорганизмами, включающий ферментацию субстрата, содержащего СО, с использованием рекомбинантного микроорганизма согласно изобретению. Предпочтительно один или более терпенов и/или его предшественников являются главными продуктами ферментации. Способы согласно изобретению можно применять для снижения общего выброса атмосферного углерода в результате производственного процесса.
Предпочтительно ферментация включает этап анаэробной ферментации субстрата в биореакторе с получением по меньшей мере одного или более терпенов и/или его предшественников с использованием рекомбинантного микроорганизма согласно изобретению.
Согласно одному варианту реализации изобретения, один или более терпенов и/или его предшественников выбран из мевалоновой кислоты, ΙΡΡ, диметилаллилпирофосфата (ΌΜΆΡΡ), изопрена, геранилпирофосфата(СРР), фарнезилпирофосфата (ΡΡΡ) и фарнезена.
Вместо получения изопрена непосредственно из ключевых промежуточных соединений терпеноида ΙΡΡ и ΌΜΑΡΡ с последующим их использованием для синтеза терпенов с более длинной цепью также возможно синтезировать терпены с более длинной цепью, такие как С10-монотерпеноиды или С15сесквитерпеноиды, непосредственно через геранил-транстрансферазу (см. табл. 6). Из структурного элемента С15-сесквитерпеноида фарнезила-РР возможно получать фарнезен, который, подобно этанолу, можно использовать в качестве транспортного топлива.
Согласно одному варианту реализации изобретения способ включает следующие этапы:
(а) подача субстрата, содержащего СО, в биореактор, содержащий культуру одного или более микроорганизмов согласно изобретению; и
- 25 028892 (Ъ) анаэробная ферментация культурой в биореакторе с получением по меньшей мере одного или более терпенов и/или их предшественников.
Согласно одному варианту реализации изобретения, способ включает следующие этапы:
a) сбор СО-содержащего газа, полученного в результате производственного процесса;
b) анаэробная ферментация СО-содержащего газа с получением по меньшей мере одного или более терпенов и/или их предшественников культурой, содержащей один или более микроорганизмов согласно изобретению.
Согласно варианту реализации изобретения, газообразный субстрат, ферментированный микроорганизмами, представляет собой газообразный субстрат, содержащий СО. Газообразный субстрат может представлять собой СО-содержащий отработанный газ, полученный в качестве побочного продукта производственного процесса или из других источников, например, из автомобильных выхлопных газов. Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, производственный процесс выбран из группы, состоящей из получения продуктов из сплавов на основе железа, например, на сталелитейном заводе, получения продуктов на основе цветных металлов, процессов переработки нефти, газификации угля, получения электроэнергии, получения углеродной сажи, получения аммиака, получения метанола и получения кокса. Согласно указанных вариантам реализации изобретения, СО-содержащий газ можно собирать из производственного процесса до его выделения в атмосферу с использованием любого подходящего метода. СО может являться компонентом синтез-газа (газа, содержащего моноксид углерода и водород). СО, полученный из производственных процессов, в норме сгорает с получением СО2 и, таким образом, изобретение особо применимо для снижения выброса СО2 газов, вызывающих парниковый эффект, и получения терпена для применения в качестве биотоплива. В зависимости от состава газообразного СО-содержащего субстрата также может быть желательно обрабатывать его до введения в реакцию ферментации для удаления любых нежелательных примесей, таких как частицы пыли. Например, газообразный субстрат сложно фильтровать или промывать с использованием известных способов.
Необходимо понимать, что для роста бактерий и превращения СО по меньшей мере в один или более терпенов и/или его предшественников помимо СО-содержащего газообразного субстрата необходимо подавать в биореактор подходящую жидкую питательную среду. Субстрат и среду можно подавать в биореактор непрерывно, порциями или периодически. Питательная среда содержит витамины и минералы, достаточные для обеспечения роста используемых микроорганизмов. Анаэробные среды, подходящие для ферментации с получением терпена и/или его предшественника с использованием СО, известны в данной области техники. Например, подходящая среда описана Бибелем (В1еЪе1, 2001). Согласно одному варианту реализации изобретения, среда является такой, как описано в разделе примеров далее в настоящем изобретении.
Ферментацию желательно проводят в подходящих условиях для осуществления ферментации с превращением СО по меньшей мере в один или более терпенов и/или их предшественников. Условия реакции, которые следует учитывать, включают давление, температуру, скорость потока газа, скорость потока жидкости, рН среды, окислительно-восстановительный потенциал среды, скорость перемешивания (в случае использования корпусного реактора с непрерывным перемешиванием), уровень инокулята, максимальная концентрация газообразного субстрата для гарантии того, что концентрация СО в жидкой фазе не становится лимитирующей, и максимальные концентрации продукта во избежание ингибирования продукта.
Кроме того, часто является желательным повышать концентрацию СО потока субстрата (или парциального давления СО в газовом субстрате) и, таким образом, повышать эффективность реакций ферментации, где СО представляет собой субстрат. Осуществление при повышенном давлении позволяет значительно повышать скорость перемещения СО из газовой в жидкую фазу, где он может поглощаться микроорганизмом в качестве источника углерода с получением по меньшей мере одного или более терпенов и/или их предшественников. Это в свою очередь означает, что время удерживания (определяемое как объем жидкости в биореакторе, деленный на скорость поступления потока газа) может быть снижено при поддержании биореактора при повышенном давлении вместо атмосферного. Оптимальные условия реакции будут зависеть отчасти от конкретного используемого микроорганизма согласно изобретению. Однако в целом предпочтительно, чтобы ферментация осуществлялось при давлении, превышающем давление окружающей среды. Кроме того, поскольку данная скорость превращения СО по меньшей мере в один или более терпенов и/или их предшественников отчасти является функцией времени удерживания субстрата, и достижение желаемого времени удерживания в свою очередь определяет требуемый объем биореактора, применение систем с повышенным давлением может значительно снижать требуемый объем биореактора и, следовательно, общую стоимость оборудования для ферментации. Согласно примерам, приведенным в патенте США № 5593886, объем реактора может быть снижен в линейной пропорциональности с повышением рабочего давления реактора, т.е. биореакторы, работающие при давлении в 10 атм должны составлять только одну десятую объема реакторов, работающих при давлении в 1 атм.
В качестве примера, было описано преимущество проведения ферментации газа в этанол при повышенном давлении. Например, в публикации XVО 02/08438 описаны способы ферментации газа в этанол, осуществляемого при давлении 30 и 75 фунтов/кв.дюйм, с выходом этанола 150 и 369 г/л/день соот- 26 028892 ветственно. Однако было обнаружено, что примеры способов ферментации, осуществляемые с использованием подобной среды и состава входящего газа, при атмосферном давлении приводили к получению в 10-20 раз меньшего количества этанола на литр в день.
Также желательно, чтобы скорость введения С0-содержащего газообразного субстрата позволяла гарантировать, что концентрация С0 в жидкой фазе не становится лимитирующей. Это связано с тем, что вследствие ограниченного количества С0 один или более продуктов могут поглощаться культурой.
Состав газовых потоков, используемых для введения в реакцию ферментации, может оказывать значительное влияние на эффективность и/или стоимость указанной реакции. Например, 02 может снижать эффективность анаэробного процесса ферментации. Переработка нежелательных или ненужных газов на стадиях процесса ферментации до или после ферментации может повышать энергозатратность указанных стадий (например, при сжатии потока газа до входа в биореактор излишнюю энергию можно использовать для сжатия газов, которые не являются необходимыми в ферментации). Соответственно, может являться желательным обрабатывать потоки субстрата, в частности, потоки субстрата, произошедшие из промышленных источников, для удаления нежелательных компонентов и повышения концентрации желаемых компонентов.
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, культуру бактерий согласно изобретению поддерживают в водной культуральной среде. Предпочтительно водная культуральная среда представляет собой минимальную анаэробную ростовую среду для микроорганизмов. Подходящие среды известны в данной области техники и описаны, например, в патентах США № 5173429 и 5593886 и публикации международной заявки XV0 02/08438, как описано в разделе примеров далее в настоящем изобретении.
Терпены и/или их предшественники или смесь, содержащую один или более терпенов, их предшественников и/или один или более других продуктов, можно восстанавливать из ферментационного бульона с помощью способов, известных в данной области техники, таких как фракционная перегонка или выпаривание, диффузионное испарение, отдувка газом и экстрактивная ферментация, включая например, экстракцию жидкость-жидкость. Согласно конкретным предпочтительным вариантам реализации изобретения, один или более терпенов и/или их предшественников и один или более продуктов восстанавливают из ферментационного бульона путем непрерывного удаления порции бульона из биореактора, отделения микробных клеток от бульона (удобно проводить путем фильтрования) и выделения одного или более продуктов из указанного бульона. Спирты можно для удобства восстанавливать, например, путем дистилляции. Ацетон можно восстанавливать, например, путем дистилляции. Любые продуцированные кислоты можно восстанавливать, например, путем адсорбции на активированный уголь. Отделенные микробные клетки предпочтительно возвращают в биореактор для ферментации. Бесклеточный пермеат, оставшийся после удаления любого спирта (спиртов) и кислоты (кислот), также предпочтительно возвращают в биореактор для ферментации. Дополнительные питательные вещества (такие как витамины В) можно добавлять к бесклеточному пермеату для восполнения питательной среды до ее возвращения в биореактор.
Кроме того, при подведении рН бульона для усиления адсорбции уксусной кислоты к активированному углю, как описано выше, следует заново доводить рН указанного бульона перед его возвращением в биореактор до значения, соответствующего значению рН бульона в биореакторе для ферментации.
Примеры
Далее следует более подробное описание изобретения со ссылкой на следующие неограничивающие примеры.
Пример 1. Экспрессия изопренсинтазы в С. анЮеФаподепит для получения изопрена из С0.
Согласно изобретению, были идентифицированы гены биосинтеза терпена в карбоксидотрофных ацетогенах, таких как С. анЮеФаподепит и С. ЦипдйаЫп. Был сконструирован рекомбинантный организм для получения изопрена. В природе изопрен выделяется некоторыми растениями, такими как тополь, для защиты листьев от УФ-излучения. Ген изопренсинтазы (ЕС 4.2.3.27) тополя был кодоноптимизирован и введен в карбоксидотрофный ацетоген С. анЮеШаподепит для получения изопрена из С0. Фермент превращает ключевое промежуточное соединение биосинтеза терпеноидов БМАРР (диметилаллилдифосфат) в изопрен в ходе необратимой реакции (фиг. 1).
Штаммы и условия роста.
(Все этапы субклонирования осуществляли в Е.соН с использованием стандартных штаммов и условий роста, как описано ранее (8атЬгоок е1 а1., Мо1еси1аг С1ошпд: А. 1аЬога1огу Мапиа1, Со1й 8ргшд НагЬоиг ЬаЬго!агу Рге§8, Со1й 8ргшд НагЬоиг, 1989; Аи8иЬе1 е1 а1., Сиггеп! ргоЮсоН ίη то1еси1аг Ью1оду, 1оЫп ΧνίΕ\' & 8оп8, Ый., НоЬокеп, 1987). С. аиЮеФаподепит Б8М10061 и Б8М23693 (производное Б8М10061) получали из Б8М2 (Германская коллекция микроорганизмов и клеточных культур, 1пЫойепЛгаЬе 7 В, 38124 Вгаип8сЫ№е1д, Германия). Рост поддерживали при температуре 37°С с использованием строго анаэробных условий и методов (Нипда1е, 1969, Ме1ЫоЙ8 ίη МюгоЬю1оду, уо1. 3В. Асайетю Рге88, №\ν Уогк: 117-132; Vо1ίе, 1971, Айу. М1сгоЬ. РЫу8ю1., 6: 107-146). Использовали среду с определенным химическим составом РЕТС без дрожжевого экстракта (табл. 1), и отработанный газ со сталелитейного завода (30 фунт/кв.дюйм), содержащий моноксид углерода (собранный со сталелитейного производства
- 27 028892
Новой Зеландии, Гленбрук, Новая Зеландия; состав: 44% СО, 32% Ν2, 22% СО2, 2% Н2) использовали в качестве единственного источника углерода и энергии.
Гмд5О4.7Н2О
| кн2ро4 раСЬ | Раствор металлических микроэлементов Витаминный раствор Вулфа Резазурин (исходный раствор 2 г/л)
Г'ыаНСОз р—— .............................. ................................
| Восстановитель
I Дистиллированная вода
Таблица 1
Концентрация, на 1 0 л среды г
0.1 г
0,2 г
0,8 г
0,1 г
0.02 г мл мл
0.5 мл г
006-0,008 % (по объему)
До 1 л. рН 5,5 (доведен с помощью НС!) | Витаминный раствор Вулфа ί Биотин
На л исходного раствора мг
- 28 028892 | Фолиевая кислота | 2 мг
Е Гидрохлорид пиридиксина 10 мг
Рибофлавин 5 мг
Никотиновая кислота 5 мг
□-(+)-Пантотенат кальция 5 мг
Витамин В12 0,1 мг
5 п-Аминобензойная кислота I 5 мг
| Липоевая кислота 5 мг
[ Тиамин 5 мг
} Дистиллированная вода до 1 л
) Раствор металлических микроэлементов ! на 1 л исходного раствора
| Нитрилотриуксусная кислота 2 г
! Μηδθ4.Η2ο 1 г
| Ре (δΟ4)2(ΝΗ4)2.6Η2Ο 0,8 г
| СоС12.6Н2О I 0,2 г
| ΖηδΟ4.7Η2Ο 0,2 мг
| СиС12.2Н2О 0,02 г
| ЫаМоО4.2Н2О 0,02 г
| Ыа26еОз 0,02 г
I ΝίΟΙ2.6Η2Ο ' 0,02 г
I Ν32ννθ4.2Η2Ο 0,02 г
| Дистиллированная вода до 1 л
Конструирование экспрессионной плазмиды.
Согласно настоящему изобретению использовали стандартные методы рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования (ЗатЬгоок I., Ргйясй ΕΕ, Матайз Т: Мо1еси1аг С1оптд: А. 1аЬога1огу Мапиа1, Со1й δρι-тд НагЬоиг РаЬогаЮгу ΡϊΌδδ, СоШ δρι-тд НагЬоиг, 1989; АнзнЫ РМ, Вгеп1 К., К^зШ КВ, Мооге ϋϋ, δе^άтап Ю, δητιΐΗ 1А, δΙπιΜ К: Сиггеп! ρι^Ό^Ε т то1еси1аг Ью1оду. бойп Айеу & δοпδ, РШ., НоЬокеп, 1987). Изопренсинтаза Ρορ1а^ ι^ети1ο^άеδ (ААО16588.1; 01:33358229) была кодон-оптимизирована (δΕΟ ΙΌ ЫО: 21) и синтезирована. Промоторный участок пируват:ферредоксин-оксидоредуктазы С. аи1ое1каподепит (δΕΟ ΙΌ ЫО: 22) использовали для экспрессии гена.
Геномную ДНК из С1оз1пбшт аи1ое1каподепит ^δΜ23693 выделяли с использованием модифицированного метода Бертрама и Дюрре (Вегйат и Эигге, 1989). 100 мл культуры, поддерживаемой в течение ночи, собирали (6,000хд, 15 мин, 4°С), промывали калий-фосфатным буфером (10 мМ, рН 7.5) и суспендировали в 1.9 мл буфера δΤΕ (50 мМ Тпз-НС1, 1 мМ ЭДТА, 200 мМ сахароза; рН 8,0). Добавляли 300 мкл лизозима (~100,000 и) и смесь инкубировали при температуре 37°С в течение 30 мин с последующим добавлением 280 мкл 10% (масса к объему) раствора ДСН и дополнительной инкубацией в течение 10 мин. РНК разрезали при комнатной температуре путем добавления 240 мкл раствора ЭДТА (0.5 М, рН 8), 20 мкл Тг1з-НС1 (1 М, рН 7,5) и 10 мкл РНКазы А (Регтеп1аз Ьйе δс^епсеδ). Затем добавляли 100 мкл протеиназы К (0,5 и), протеолиз проводили в течение 1-3 ч при 37°С. Наконец, добавляли 600 мкл перхлората натрия (5 М) с последующей экстракцией смесью фенол-хлороформ и преципитацией изопропанолом. Количество и качество ДНК контролировали с помощью спектрофотометрии. Последовательность промотора пируват: ферредоксин-оксидоредуктазы амплифицировали с помощью ПЦР с использованием олигонуклеотидов Ρρίο^-NοЙ-Р (δΕΟ ΙΌ ЫО: 23: ААОСООССОСААААТАОТТОА- 29 028892
ТААТААТОС) и Рр1ог-\йе1-Н (НЕС) ГО N0: 24: ТАСОСАТАТОААТТССТСТССТТТТСААОС) с использованием ДНК-полимеразы 1РгооГ ШдЫ Р1йе1йу (Вю-Кай ЬаЬогаФпек) и следующей программы: исходная денатурация при 98°С в течение 30 с с последующими 32 циклами денатурации (98°С в течение 10 с), отжиг (50-62°С в течение 30-120 с) и элонгация (72°С в течение 30-90 с), затем конечный этап удлинения (72°С в течение 10 мин).
Конструирование экспрессирующей изопренсинтазу плазмиды.
Конструирование экспрессионной плазмиды проводили в Е.соП ОН5а-Т1К (1пуйгодеп) и ХЬ1-В1ие МКР' Кап (§1га!адепе). На первом этапе амплифицированный промоторный участок РрГог клонировали в челночный вектор сой-С1о5йгйшт рМТЬ85141 (Р1797651.1; Щ1де1 Мш!оп, Ишуегкйу оГ ШШпдНат; Неар е1 а1., 2009) с использованием сайтов рестрикции №П и Дйе1 с получением плазмиды рМТЬ.85146. На втором этапе 1кр§ клонировали в рМТЬ85146 с использованием сайтов рестрикции Дйе1 и ЕсоК1, с получением плазмиды рМТЬ 85146-1кр§ (фиг. 2, §ЕЦ ГО N0: 25).
Трансформация и экспрессия в С. АиЮеШаподепит.
Перед трансформацией ДНК метилировали ш У1уо в Е.сой с использованием синтезированной гибридной метилтрансферазы II типа (§ЕЦ ГО N0: 63), коэкспрессированной в плазмиде метилирования (8ЕЦ ГО N0: 64), сконструированной из генов метилтрансферазы из С. аиЮеШаподепит, С. гадкйа1е1 и С. ЦцпдйаЫи, как описано в патенте США 2011/0236941.
Экспрессионную плазмиду и плазмиду метилирования трансформировали в те же рестрикционно неактивные клетки Е.сой ХЬ1-В1ие МКР' Кап (§1га!адепе), что возможно благодаря их совместимым Огат-(-) ориджинам репликации (высококопийный Со1Е1 в экспрессионной плазмиде и низкокопийный р15А в плазмиде метилирования). 1п У1уо метилирование индуцировали путем добавления 1 мМ 1РТО, и метилированные плазмиды выделяли с использованием набора ΟΙΛΟΕΗ РЕжпий Мй Кй (01АОЕЩ. Полученную смесь использовали для экспериментов по трансформации С. аи1оеГЫаподепит П8М23693, но только многочисленная (многокопийная) экспрессионная плазмида имела Огат-(+) ориджин репликации (герЬ), позволяющий ей реплицироваться в С1ок1г1й1а.
Трансформация в С. АиЮеШаподепит.
Во время всего эксперимента по трансформации С. анЮеШаподепит О8М23693 растили на среде РЕТС (табл. 1) с добавлением 1 г/л дрожжевого экстракта и 10 г/л фруктозы, а также отработанного газа (30 фунт/кв.дюйм) со сталелитейного завода (собранного от сталелитейного производства Новой Зеландии, Гленбрук, Новая Зеландия; состав: 44% С0, 32% N2, 22% СО2, 2% Н2) в качестве источника углерода.
Для получения компетентных клеток 50 мл культуры С. аийэеГЫаподепит О8М23693 субкультивировали в свежей среде в течение 3 последующих дней. Указанные клетки использовали для инокуляции 50 мл среды РЕТС, содержащей 40 мМ ОЬ-треонина, 0О600|||1| составляла 0,05. При достижении культурой 0Ό600πιη 0.4 клетки переносили в анаэробную камеру и собирали при скорости 4,700хд и температуре 4°С. Культуру промывали два раза ледяным буфером для электропорации (270 мМ сахароза, 1 мМ МдС12, 7 мМ фосфат натрия, рН 7,4) и в завершение суспендировали в свежем буфере для электропорации в объеме 600 мкл. Указанную смесь переносили в предварительно охлажденную кювету для электропорации с расстоянием между электродами 0,4 см, содержащую 1 мкг смеси метилированной плазмиды, и сразу обрабатывали с использованием системы электропорации Оепе ри1кег Хсе11 (Вю-Кай) со следующими установками: 2,5 кВ, 600 Ω и 25 мкФ. Достигали временных констант 3,7-4,0 мс. Культуру переносил в 5 мл свежей среды. За восстановлением клеток наблюдали при длине волны 600 нм с использованием спектрофотометра Зресйотс Нейок Еркйоп (ТЫегто), снабженного штативом для пробирок. После исходного сокращения биомассы клетки снова начинали расти. Как только биомасса удваивалась с указанного момента, клетки собирали, суспендировали в 200 мкл свежей среды и помещали на селективные РЕТС планшеты (содержащие 1,2% ВасЮ'1™ Адаг (ВО)) с соответствующими антибиотиками (4 мкг/мл кларитромицина или 15 мкг/мл тиамфеникола). Колонии становились видны через 4-5 дней инокуляции в присутствии газа со сталелитейного завода (30 фунт/кв.дюйм) при температуре 37°С.
Колонии использовали для инокуляции 2 мл среды РЕТС с антибиотиками. Выросшую культуру соскребали и переносили в объем 5 мл и затем 50 мл с использованием газа со сталелитейного завода (30 фунт/кв. дюйм) в качестве единственного источника.
Подтверждение успешной трансформации.
Для подтверждения переноса ДНК готовили минипрепарат плазмиды из 10 мл культуры с использованием набора 2урру для минипрепарата плазмиды (2уто). Поскольку качество выделенной плазмиды было не достаточным для рестрикционного переваривания из-за экзонуклеазной активности С1ок1г1й1а1 [ВигсЫЫагй! и Эигге, 1990], для выделенной плазмиды проводили ПЦР-анализ с олигонуклеотидными парами со1Е1-Р (НЕС) ГО N0: 65: СОТСАОАССССОТАОААА) и со1Е1-К (НЕС) ГО N0: 66: СТСТССТОТТССОАСССТ). ПЦР проводили с использованием набора для ПЦР 1МР0Н Мах1Ш15е Ргет1х (1п1гоп Вю ТесЫпо1од1ек) с использованием следующих условий: исходная денатурация при 94°С в течение 2 мин с последующими 35 циклами денатурации (94°С в течение 20 с), отжиг (55°С в течение 20
с) и элонгация (72°С в течение 60 с), и затем конечный этап удлинения (72°С в течение 5 мин).
- 30 028892
Для подтверждения идентичности клонов выделяли геномную ДНК (см. выше) из 50 мл культуры С. аШоеШаподепит Ό8Μ23693. Проводили ПЦР-анализ гена 16з ρΡΗΚ с использованием олигонуклеотидов £01 (8Е^ ΙΌ ΝΟ: 67: ССОААТТСОТСОАСААСАОАОТТТОАТССТООСТСАО) и γΡ2 (8Е^ ΙΌ ΝΟ: 68: СССОООАТССААОСТТАСООСТАССТТОТТАСОАСТТ) |\\ еХегд е! а1., 1991] и набора для ПЦР ΐΝΐΚΟΝ Мах1т1§е (ΙηΐΐΌη Вю Тесйпо1од1е§) при следующих условиях: исходная денатурация при 94°С в течение 2 мин с последующими 35 циклами денатурации (94°С в течение 20 с), отжиг (55°С в течение 20 с) и элонгация (72°С в течение 60 с), затем конечный этап удлинения (72°С в течение 5 мин). Результаты секвенирования показали по меньшей мере 99,9% идентичности для гена 16з ρΡΗΚ (гг§А) С. аиЮеЛНаподепит (Υ18178, 01:7271109).
Экспрессия гена изопренсинтазы.
Эксперименты количественного ПЦР-анализа с обратной транскрипцией проводили для подтверждения успешной экспрессии введенного гена изопренсинтазы в С. аШоеШаподепит.
Культура, содержащая плазмиду рМТЬ 85146-ΐδρ8 с геном изопренсинтазы, и контрольную культуру без плазмиды растили в бутылках для сыворотки на 50 мл в среде РЕТС (табл. 1) с использованием отработанного газа (30 фунт/кв.дюйм) со сталелитейного завода (собранного со сталелитейного производства Новой Зеландии, Гленбрук, Новая Зеландия; состав: 44% СО, 32% Ν2, 22% СО2, 2% Н2) в качестве единственного источника энергии и углерода. 0,8 мл образцов отбирали во время фазы логарифмического роста при ОГ)600п1|1 примерно 0,5 и смешивали с 1,6 мл РНК-защитным реагентом ^1адеп). Смесь центрифугировали (6,000хд, 5 мин, 4°С) и клеточный осадок быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С до экстракции РНК. Тотальную РНК выделяли с использованием набора К№азу Μΐηΐ ^1адеп) в соответствии с протоколом 5 руководства. Клетки разрушали путем 10-кратного пропускания смеси через шприц и разводили в 50 мкл воды без РНКаз/ДНКаз. После обработки ДНКазой Ι с использованием набора ДНК-Ггее™ (АтЪюп) проводили этап обратного транскрибирования с использованием набора обратных транскриптаз 8ирег§сг1р! ΙΙ Йпуйтодеп, Карлсбад, Калифорния, США). РНК выявляли с использованием биоанализатора Адйеп! Вюапа1у/ег 2100 (Адйеп! Тесйпо1од1е§, 8ап!а С1ага, СА, США), флуориметра С)иЪ11 Йпуйгодеп, Карлсбад, Калифорния, И8А) и метода электрофореза в геле. Контроль без обратной транскрипции (поп-КТ) проводили для каждой пары олигонуклеотидов. Все реакции количественной ПЦР с обратной транскрипцией проводили в двух повторностях с использованием одноцветной системы выявления Му®)'1™ (Вю-Кай ЬаЪга1ог1е8, Карлсбад, СА, США) в общем объеме реакции 15 мкл с содержанием 25 нг матрицы кДНК, 67 нМ каждого олигонуклеотида (табл. 2) и смеси 1х ^^™ 8ΥΒΚ® Огееп 8ирегт1х (Вю-Кай ЬаЪга1ог1е8, Карлсбад, Калифорния, США). Условия реакции были следующими: 95°С в течение 3 мин с последующими 40 циклами при 95°С в течение 15 с, 55°С в течение 15 с и 72°С в течение 30 с. Для определения димеризации олигонуклеотида или других артефактов амплификации проводили исследование с помощью кривой анализа непосредственно сразу после завершения количественной ПЦР (38 цикла при температуре от 58 до 95°С при скорости 1°С/с). Два гена домашнего хозяйства (гуанилаткиназы и форматтетрагидрофолат-лигазы) были включены для каждого образца кДНК для стандартизации. Определение относительной экспрессии гена проводили с использованием инструментального программного средства для измерения относительной экспрессии (КЕ8Т®) 2008 У2.0.7 (38). Серийные разведения кДНК с шагом 4 1од единицы использовали для получения стандартных кривых и получения эффективности амплификации для расчета концентрации мРНК.
Таблица 2
Олигонуклеотиды для количественной ПЦР с обратной транскрипцией
Мишень Название олигонуклео тида Последовательность ДНК (от 5' кЗ') 8ЕО Ю ΝΟ:
Гуанилаткиназа (дпк) СпК-Р ТСАССАССТТСТССААСТСС 108
СпК-К АССТССССТТТТСТТССАСА 109
Форматтетрагидрофолат -лигаза (РоТ41_) РоТ41_-Р САССТТТСССТССТСАССТА 110
РоТ41_-Р ААСТССССССТТСТАТТТСА 111
ίδρδ-Ρ АСС СТО ААТ ТТС ТТА САС 69
Изопренсинтаза
ттс тте а
ίερδ-Κ СТА АСТ ССА ТСА ААТ ССТ ССА СТА С 70
Тогда как не наблюдали амплификацию в случае штамма дикого типа при использовании олигонуклеотидной пары ΐδρ8, для штамма, содержащего плазмиду рМТЬ 85146-ΐδρ8, измеряли сигнал при использовании олигонуклеотидной пары ΐδρ8, что подтверждало успешную экспрессию гена ΐδρ8.
Пример 2. Экспрессия изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы для превращения между ключевым предшественниками терпена ^ΜΑΡΡ (диметилаллилдифосфат) и ΙΡΡ (изопентенилдифосфат).
Доступность и баланс предшественников ^ΜΑΡΡ (диметилаллилдифосфата) и ΙΡΡ (изопентенил- 31 028892 дифосфата) является критичным для получения терпенов. Тогда как в ΌΧδ-пути синтезируется как 1РР, так и ОМАРР в равной степени, в мевалонатном пути единственным продуктом является 1РР. Для получения изопрена требуется только присутствие предшественника ОМАРР вместе с изопренсинтазой, тогда как для получения более высокомолекулярных терпенов и терпеноидов требуется равное количество 1РР и ОМАРР, доступных для получения геранил-РР геранил-транстрансферазой.
Конструирование экспрессирующей изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу плазмиды.
Ген изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы ίάί из С. Веуеппскп (ген 10:5294264), кодирующий изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу (УР_001310174.1), клонировали после ίκρδ. Ген амплифицировали с использованием олигонуклеотида И1-СЪе1^ас1-Р (δΕΟ ГО ЫО: 26: ОТОАОСТСОАААООООАААТТАААТО) и И1-СЪе1-Крп1-К (δΕΟ ГО ЫО: 27: АТООТАССССАААТСТТТАТТТАОАСО) из геномной ДНК С. Ъеуегшскп ЫС1МВ8052, полученной с использованием такого же метода, как описано выше для С. аШоеШаподепит. Продукт ПЦР клонировали в вектор рМТЬ 85146-ίκρδ с использованием сайтов рестрикции δасI и Крп1 с получением плазмиды ρΜТ^85146-^8ρδ-^ά^ (δΕΟ ГО ЫО: 28). Маркер устойчивости к антибиотикам са1Р заменяли на егтВ (высвобождаемый вектором рМТЬ82254 (Р1797646.1; №§е1 Мш1оп, Итуегкйу оГ Ыойшдйат); Неар е1 а1., 2009) с использованием ферментов рестрикции Рте1 и Р8е1 с получением плазмиды ρΜТ^85246-^8ρδ-^ά^ (фиг. 3).
Трансформацию и экспрессию в С. аШоеШаподепит осуществляли, как описано для плазмиды рМТЬ 85146-ίφδ. После успешной трансформации проводили эксперимент роста в бутылках для сыворотки на 50 мл в среде РЕТС (табл. 1) с использованием отработанного газа (30 фунт/кв.дюйм) со сталелитейного завода (собранного со сталелитейного производства Новой Зеландии, Гленбрук, Новая Зеландия; состав: 44% СО, 32% Ы2, 22% СО2, 2% Н2) в качестве единственного источника энергии и углерода. Для подтверждения успешного введения плазмиды готовили минипрепарат ДНК плазмиды из трансформантов, как описано выше. ПЦР-анализ выделенной плазмиды с использованием пары олигонуклеотидов, направленных на со1Е1 (со1Е1-Р: δΕΟ ГО ЫО: 65: СОТСАОАССССОТАОААА и со1Е1-К: δΕΟ ГО ЫО: 66: СТСТССТОТТССОАСССТ), егтВ (егтВ-Р: δΕΟ ГО ЫО: 106: ТТТОТААТТААОААООАО и егтВ-Κ: δΕΟ ГО ЫО: 107: ОТАОААТССТТСТТСААС) и ίάί (М1-СЬе1-8ас1-Р: δΕΟ ГО ЫО: 26: ОТОАОСТСОАААООООАААТТАААТО и М1-СЪе1-Крп1-К: δΕΟ ГО ЫО: 27: АТООТАССССАААТСТТТАТТТАОАСО) подтверждал успешную трансформацию (фиг. 8). Подобным образом, экстрагировали геномную ДНК указанных трансформантов, и полученный ампликон 168 рРНК с использованием олигонуклеотидов ГО1 и гР2 (см. выше) подтверждал 99.9% идентичности гену 16δ рРНК С. аШоеШаподепит (Υ18178, 01:7271109).
Успешную экспрессию гена подтверждали, как описано выше, с использованием пары олигонуклеотидов для гена изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы ίάί (ίάί-Р, δΕΟ ГО ЫО: 71: АТА СОТ ОСТ ОТА ОТС АТС САА ОАТ А и ίάίΚ, δΕΟ ГО ЫО: 72: ТСТ ТСА АОТ ТСА САТ ОТА ААА ССС А) и образца из эксперимента роста в бутылке для сыворотки для С. АикэеГйаподепит, содержащими плазмиду рМТЬ 85146-ί8|:>δ-ίάί. Сигнал для гена изопренсинтазы ΐ8|3δ также наблюдали (фиг. 14).
Пример 3. Гиперэкспрессия генов ΟΧδ-пути.
Для улучшения синтеза по ΟΧδ-пути обеспечивали гиперэкспрессию генов указанного пути. Исходный этап пути, превращение пирувата и О-глицеральдегид-3-фосфата (О3Р) в дезоксиксилулозо-5фосфат (^XΡ/^XΡδ/^ОXΡ), катализировали с использованием дезоксиксилулозо-5-фосфатсинтазы (ΌΧ5).
Конструирование экспрессионной плазмиды с гиперэкспрессией ΟΧδ: Ген άχδ С. аШоеШаподепит амплифицировали из геномной ДНК с использованием олигонуклеотидов Ох8^а11-Р (δΕΟ ГО ЫО: 29: ОСАОТСОАСТТТАТТАААОООАТАОАТАА) и Όχβ-ΧΜ-Κ. (δΕΟ ГО ЫО: 30: ТОСТСОАОТТААААТАТАТОАСТТАССТСТО), как описано для других генов выше. Амплифицированный ген затем клонировали в плазмиду ρΜТ^85246-^8ρδ-^ά^ с помощью δΗ1Σ и ΧΜ с получением плазмиды ρΜТ^85246-^8ρδίάί-άχ8 (δΕΟ ГО ЫО: 31 и фиг. 4). Результаты секвенирования ДНК с использованием олигонуклеотидов, приведенных в табл. 3, подтверждали успешное клонирование ^8ρδ, ίάί и άχ8 без мутаций (фиг. 5). Гены Ϊ8|3δ и ίάί являлись такими, как описано в примере 1 и 2 соответственно.
- 32 028892
Таблица 3
Олигонуклеотиды для секвенирования
Название олигонуклеотида Последовательность ДНК (5' к 3') 5ЕО Ю N0:
М13К САССАААСАОСТАТСАС 32
Изопрен-5ея1 СТТАТТСААССТАСАССТТТ 33
Изопрен-зея2 САТТССТАААСААТТАССТС 34
Изопрен-зеиЗ ТСААСААОСТААСТОССТ 35
Изопрен-зея4 СТСАСССТАААССААСА 36
Изопрен-зея5 ССТАССТАСАСАААТТАСАА 37
Изопрен-зеяб ССААТСССААААТАТСТТСА 38
Изопрен-зед7 САААСАСАТСАСССААТАТТ 39
Трансформация и экспрессия в С. аиЮеФаподепит.
Трансформацию и экспрессию в С. аиЮеФаподепит проводили, как описано для плазмиды рМТЬ 85146-1зр8. После успешной трансформации проводили эксперимент роста в бутылках для сыворотки на 50 мл в среде РЕТС (табл. 1) с использованием отработанного газа (30 фунт/кв.дюйм) со сталелитейного завода (собранного со сталелитейного производства Новой Зеландии, Гленбрук, Новая Зеландия; состав: 44% СО, 32% Ν2, 22% СО2, 2% Н2) в качестве единственного источника энергии и углерода. Экспрессию гена подтверждали, как описано выше, с помощью образца, собранного при ОБ600пт = 0.75. Олигонуклеотидную пару бхз-Р (8Ер ГО N0: 73: АСАААОТАТСТААОАСАООАООТСА) и бхз-К (8Ер ГО ΝΟ: 74: ОАТОТСССАСАТСССАТАТААОТТТ) использовали для измерения экспрессии гена бхз как в штамме дикого типа, так и в штамме, содержащем плазмиду рМТЕ 85146-1зр8-1Ф-0хз. Было обнаружено, что уровень мРНК в штамме, содержащем плазмиду, был в 3 раза выше по сравнению с диким типов (фиг. 15). Биомассу стандартизировали до экстракции РНК.
Пример 4. Введение и экспрессия генов мевалонатного пути.
Первый этап мевалонатного пути (фиг. 7) катализировали с помощью тиолазы, которая превращает две молекулы ацетил-КоА в ацетоацетил-КоА (и Н8-КоА). Указанный фермент был успешно экспрессирован в карбоксидотрофных ацетогенах С1оз!п0шт аиЮеФаподепит и С. ЦипддаЫн теми же авторами (патент США № 2011/0236941). Конструкции для остальных генов мевалонатного пути были созданы.
Конструирование экспрессирующей мевалонат плазмиды.
Использовали стандартные методы рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования (8атЪгоок, I., Киззе11, Б., Мо1еси1аг с1опт§: А БаЪога!огу Мапиа1 3гб ЕФ, СоШ 8ргт§ НагЪоиг БаЪ Ргезз, СоШ 8ргт§ НагЪоиг, ΝΥ, 2001). Три гена, необходимых для синтеза мевалоната на ранних этапах мевалонатного пути, т.е. тиолаза (1й1А/угаВ), НМО-КоА-синтаза (НМО8) и НМО-КоА-редуктаза (НМОК), были кодон-оптимизированы как оперон (Рр!ааск-!й1А/угаВ-НМО8-Ра!р-НМОК).
Промотор оперона фосфотрансацетилазы/ацетаткиназы (Рр!а-аск) С. аи!ое!йаподепит (8Ер ГО ΝΟ: 61) использовали для экспрессии тиолазы и НМО-КоА-синтазы, тогда как промоторный участок АТФсинтазы (Ра!р) С. аи!ое!йаподепит использовали для экспрессии НМО-КоА-редуктазы. Два варианта тиолазы, !й1А из С1оз!п0шт асе!оЪи!у11сит и угаВ из 8!арйу1ососсиз аигеиз, синтезировали и фланкировали сайтами рестрикции Ше1 и ЕсоК1 для дальнейшего субклонирования. НМО-КоА-синтазу (НМО8) и НМО-КоА-редуктазу (НМОК) синтезировали из 8!арйу1ососсиз аигеиз и фланкировали сайтами рестрикции ЕсоК1-8ас1 и Крп1-ХЪа1, соответственно, для дальнейшего субклонирования. Все используемые оптимизированные последовательности ДНК приведены в табл. 4.
- 33 028892
Таблица 4
Последовательности экспрессирующей мевалонат плазмиды
ОПИСАНИЕ Источник 8ЕО Ю N0:
Тиолаза (1И1А) ΟΙοδΐπάίιίΓη асек>Ьи1уНсит АТСС 824; Ν0_003030.1; 0Ι: 1119056 40
Ацетил-коА с- ацетилтрансфераза (угаВ) 51арИу1ососсиз аигеиз подвида аигеиз Ми50; N0-002758.2; участок: 652965..654104; включая ΟΙ: 15923566 41
З-гидрокси-З- метилглутарил-коА-синтаза (НМС8) 51арИу1ососсиз аигеиз подвида аигеиз Ми50; N0-002758.2; участок: 2689180..2690346; включая ΟΙ: 15925536 42
Г идроксиметилглутарил- коА-редуктаза (НМОР) 51арИу1ососсиз аигеиз подвида аигеиз Ми50; N0-002758.2; участок: комплемент(2687648..2688925); включая 01: 15925535 43
Оперон фосфотрансацетилазы- ацетаткиназы (Рр1а-аск) С1оз1пс1|ит аи1ое1Иаподепит ОЗМ10061 44
Промотор АТФ-синтазы (Ра,р) С1оз1пс1|ит аи1ое1Иаподепит 05М10061 45
Промотор АТФ-синтазы (Ра1р) вместе с гидроксиметилглутарил-КоА-редуктазой (НМОК) амплифицировали с использованием олигонуклеотидов рИС57-Р (8Ер П) N0: 46: АОСАОАТТОТАСТОАОАОТОС) и рИС57-К (8Ер П) N0: 47: АСАОСТАТОАССАТОАТТАСО) и рИС57-Ра!р-НМОК в качестве матрицы. Амплифицированный фрагмент 2033 Ър расщепляли с помощью 8ас1 и ХЪа1 и лигировали в челночный вектор рМТЬ 82151 Е.соН-С1о8Мшт (Р17976; №§е1 Мт1оп, ишуегейу оГ ^Шпдйат, ИК; Неар е! а1., 2009, I. МюгоЪю1 Меίкоά8. 78: 79-85) с получением плазмиды рМТЬ 82151-Ра1р-НМОК (8Ер ([) N0: 76).
3-Гидрокси-3-метилглутарил-КоА-синтазу (НМО8) амплифицировали с кодон-синтезированной плазмиды рОН-8ец3.2 с использованием олигонуклеотидов ЕсоК1-НМО8_Р (8Ер П) N0: 77: АОССОТОААТТСОАООСТТТТАСТАААААСА) и ЕсоККНМО8_К (8Ер П) N0: 78: АООСОТСТАОАТОТТСОТСТСТАСАААТААТТ). Амплифицированный фрагмент 1391 Ър разрезали с помощью рестриктаз 8ай и ЕсоЫ и лигировали в ранее созданную плазмиду рМТЬ 82151-Ра1р-НМОК с получением рМТЬ 82151-НМО8-Ра!р-НМОК (8Ер П) N0: 79). Созданную плазмиду рМТЬ 82151-НМО8-Ра!р-НМОК (8Ер П) N0: 79) и кодон-оптимизированный оперон 1768 Ър из Рр1ааск-1Ь1А/угаВ разрезали с помощью рестриктаз и ЕсоКТ Проводили лигирование и затем трансформировали в Е.соН ХЬ1-В1ие МКР' Кап с получением плазмиды рМТЬ8215- Рр1ааск-1ЫА/угаВ-НМО8-Ра!р-НМОК (8Ер П) N0: 50).
Пять генов, необходимых для синтеза терпеноидных ключевых промежуточных соединений из мевалоната на более поздних этапах мевалонатного пути, т.е. мевалонаткиназа (МК), фосфомевалонаткиназа (РМК), мевалонатдифосфатдекарбоксилаза (РМЭ), изопентенилдифосфат-дельта-изомераза (ίάί) и изопренсинтаза (18р8) были кодон-оптимизированы с помощью АТО:В1о8уп1йеНс8 ОтЪН (Мерцхаузен, Германия). Мевалонаткиназу (МК), фосфомевалонаткиназу (РМК) и мевалонатдифосфатдекарбоксилазу (РМЭ) получали из 81арйу1ососси8 аигеи8.
Промоторный участок комплекса КЫР (Ртг) из С. Аи1ое1йапо§епит (8Ер П) N0: 62) использовали для экспрессии мевалонаткиназы (МК), фосфомевалонаткиназы (РМК) и мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (РМЭ), тогда как промоторный участок пируват:ферредоксин-оксидоредуктазы (РГог) из С. аиЮеСаподепит (8Ер П) N0: 22) использовали для экспрессия изопентенилдифосфат-дельта-изомеразы (ίάί) и изопренсинтазы 08р8). Все используемые последовательности ДНК приведены в табл. 5. Кодоноптимизированную РгпГ-МК амплифицировали с синтезированной плазмиды рОН- РтГ-МК-РМК-РМЭ с использованием олигонуклеотидов ^И^Ъа^РтГ-М^Р (8Ер П) N0: 80:
АТОСОСООССОСТАООТСТАОААТАТСОАТАСАОАТАААААААТАТАТААТАСАО) и 8ан-РтГМК_К (8ЕР П) N0: 81: ТООТТСТОТААСАОСОТАТТСАССТОС). Амплифицированный ген затем клонировали в плазмиду рМТЬ83145 (8Ер П) N0: 49) с помощью КоИ и 8аН с получением плазмиды рМТЬ8314-РгпГ-МК (8Ер П) N0: 82). Указанная полученную плазмиду и кодон-оптимизированный фрагмент 2165Ър РМК-РМЭ затем разрезали с помощью 8аИ и ΜπάΠΙ. Осуществляли лигирование с получением плазмиды рМТЬ 8314-РтГ-МК-РМК-РМЭ (8Ер П) N0: 83).
Экспрессирующие изопрен плазмиды без мевалонатного пути создавали путем лигирования изо- 34 028892 пренсинтазы (1зр8), фланкированной сайтами рестрикции Аде1 и №е1, с ранее созданной экспрессирующей фарнезен плазмидой, рМТР 8314-РтГ-МК-РМК-РМП-РГог-1й1-15рА-Р8 (8ЕЭ ГО NО: 91), с получением плазмиды рМТР8314-Рт£-МК-РМК-РМП-Р£ог-1Й1-15р8 (8ЕЭ ГО NО: 84). Конечную экспрессирующую изопрен плазмиду, рМТР 8314-Рр1ааск-1й1А-НМС8-Ра1р-НМСК-РгпГ-МК-РМК-РМП-РГог-1й1-15р8 (8ЕЭ ГО NО: 58, фиг. 10), создавали путем лигирования фрагмента 4630 Ьр Рр1ааск-1й1А-НМС8-Ра1рНМСК из рМТР8215-Рр1ааск-1й1А-НМС8-Ра!р-НМСК (8ЕП ГО Ж>: 50) с рМТР 8314-РгпГ-МК-РМКРМП-РГог-1Й1-15р8 (8ЕЭ ГО NО: 84) с использованием сайтов рестрикции №11 и ХЬа1.
Таблица 5
Последовательности экспрессирующей изопрен плазмиды из мевалонатного пути
Описание Источник ЗЕО Ю ΝΟ:
Мевалонаткиназа (МК) 51арИу1ососсиз аигеиз подвида аигеиз Ми50; Ν0_002758.2; участок: 665080..665919; включая 61:15923580 51
Фосфомевалонаткиназа (РМК) 51арИу1ососсиз аигеиз подвида аигеиз Ми50; Ν0_002758.2; участок: 666920..667996; включая 61:15923582 52
Мевалонатдифосфат- декарбоксилаза (РМО) 81арИу1ососсиз аигеиз подвида аигеиз Ми50; Ν0_002758.2; участок: 665924..666907; включая 61:15923581 53
Изопренсинтаза 0з15) изопренсинтаза из Тополь Лети1о1с1ез (ААО16588.1; 61:33358229) 21
Изопентенилдифосфат- дельта-изомераза (ίάί) С1оз1пс1|ит Ьеуеппскн ΝΟΙΜΒ 8052; ΥΡ_001310174.1; участок: комплемент(3597793.. 3598308); включая 61:150017920 54
Сложный промотор ΡΝΡ (РгпО С1оз1пс1|ит аЫоеШаподепит 08М10061 55
Пример 5. Введение фарнезенсинтазы в С. аи1ое1йаподепит для получения фарнезена из СО через мевалонатный путь.
Вместо получения изопрена непосредственно из терпеноидных ключевых промежуточных соединений 1РР и ОМАРЕ с последующим использованием их для синтеза терпенов с более длинной цепью также возможно синтезировать терпены с более длинной цепью, такие как С10 монотерпеноиды или С15 сесквитерпеноиды, непосредственно через геранил-транстрансферазу (см. табл. 6). Из структурного элемента С15 сесквитерпеноида фарнезила-РР возможно получать фарнезен, который, подобно этанолу, можно использовать в качестве транспортного топлива.
Конструирование экспрессирующей фарнезен плазмиды.
Два гена, необходимых для синтеза фарнезена из 1РР и ОМАРЕ через мевалонатный путь, т.е. геранил-транстрансфераза (1зрА) и альфа-фарнезенсинтаза (Р8), были кодон-оптимизированы. Геранилтранстрансферазу (1зрА) получали из штамма ЕксйепсЫа сой К-12 подштамма МС1655 и альфафарнезенсинтазу (Г8) получали из Ма1ик х йотекйса. Все используемые последовательности ДНК приведены в табл. 6. Кодон-оптимизированную ιόι амплифицировали с синтезированной плазмиды рМТГ83245-РГог-Р8-1Й1 (8ЕЭ ГО NО: 85) через мевалонатный путь ιώ Р (8ЕЭ ГО NО: 86: АСССАСТССАСАТСССАСАСТАТАТААТАССАСТАС) и 1Й1_К2 (8ЕЭ ГО Ш: 87: АСССССААССТТСССССАССССТТТАТТТАААТАТСТТАТТТТСАСС). Амплифицированный ген затем клонировали в плазмиду рМТЬ83245-РГог с помощью Хйо1 и НтйШ с получением плазмиды рМТГ83245-РГог-1Й1 (8ЕЭ ГО NО: 88). Указанную полученную плазмиду и кодон-оптимизированный фрагмент 1754Ьр фарнезенсинтазы (Г8) затем разрезали с помощью НтйШ и №е1. Осуществляли лигирование, приводящее к получению плазмиды рМТГ83245-РГог-1й1-Г8 (8ЕЭ ГО NО: 89). Фрагмент 946Ьр 1крА и рМТР83245-РГог-1й1-Р8 затем разрезали с помощью рестриктаз Аде1 и НтйШ и лигировали с получением плазмиды рМТЬ83245-РГог1й1-15рА-Р8 (8ЕЭ ГО NО: 90). Экспрессирующую фарнезен плазмиду без ранних генов мевалонатного пути создавали путем лигирования фрагмента 2516Ьр РГог-1й1-15рА-Р8 из рМТР83245-РГог-1й1-15рА-Р8 с рМТР 8314-РтГ-МК-РМК-РМО с получением плазмиды рМТР 8314-РтГ-МК-РМК-РМО-РГог-1й1-15рАР8 (8ЕЭ ГО NО: 91). Конечную экспрессирующую фарнезен плазмиду рМТР83145-1й1А-НМС8-Ра!рНМСК-РтГ-МК-РМК-РМО-РГог-1й1-15рА-Р8 (8ЕЭ ГО NО: 59 и фиг. 18) создавали путем лигирования фрагмента 4630 Ьр Рр1ааск-1й1А-НМС8-Ра1р-НМСК из рМТР8215-Рр1ааск-1й1А-НМС8-Ра!р-НМСК (8ЕП
- 35 028892
ΙΌ N0: 50) с рМТЬ 8314-Ргп£-МК-РМК-РМП-Р£ог-101-18рА-Р8 (8Ер ГО N0: 91) с использованием сайтов рестрикции КоИ и ХЪа1.
Таблица 6
Последовательности фарнезен-экспрессирующей плазмиды из мевалонатного пути
Описание Источник 5Е0 Ю N0:
Г еранил-транстрансфераза ОзрА) штамм ЕзсНепсЫа соН К-12 подштамм МС1655; Ν0_000913.2; участок: комплемент(439426..440325); включая 01:16128406 56
Альфа-фарнезенсинтаза (Р5) Ма1из х ботезйса; ΑΥ787633.1; 01:60418690 57
Трансформация в С. аи!ое!йапо§епит.
Трансформацию и экспрессию в С. аи!ое!йапо§епит осуществляли, как описано в примере 1.
Подтверждение успешной трансформации.
Присутствие рМТЕ8314-РгпГ-МК-РМК-РМП-Р1ог-101-15рА-Р8 (8Ер ГО N0: 59) подтверждали с помощью ПЦР-метода молекулярных колоний с использованием олигонуклеотидов герНР (8Ер ГО N0: 92: ААОААОООСОТАТАТОААААСТТОТ) апдсаЖ (8Ер ГО N0: 93: ТТСОТТТАСААААСООСАААТОТОА), которые селективно амплифицируют часть грамм+ репликона и большую часть гена са! на сериях плазмид рМТЬ831ххх с получением полоски с массой 1584 Ър (фиг. 16).
Экспрессия поздних генов мевалонатного пути в С. Аи!ое!йапо§епит.
Экспрессию поздних генов мевалонатного пути мевалонаткиназы (МК 8Ер ГО N0: 51), фосфомевалонаткиназы (РМК 8Ер ГО N0: 52), мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (РМ1) 8Ер ГО N0: 53), изопентилдифосфат-дельта-изомеразы (ίάί; 8Ер ГО N0: 54), геранил-транстрансферазы (18рА; 8Ер ГО N0: 56) и фарнезенсинтазы (Р8 8Ер ГО N0: 57) подтверждали, как описано выше в примере 1 с использованием олигонуклеотидов, перечисленных в табл. 7.
Таблица 7
Перечень олигонуклеотидов, используемых для выявления экспрессии поздних генов мевалонатного пути, содержащихся в плазмиде рМТР8314РгпГ-МК-РМК-РМП-Р1ог-101-15рА-Р8 (8Ер ГО N0: 91)
Мишень Название олигонуклео- тида Последовательность ДНК (5’ к 3’) ш о О О
Мевалонаткиназа МК-ЕТРСЕ- Р ОТОСТСОТАОАООТООТТСА 94
МК-ЕТРСЕ- Е ССААОТАТОТОСТОСАССАО 95
Фосфомевалонат- РМК- ЕТРСЕ-Р АТАТСАОАСССАСАСОСАОС 96
киназа РМК- ЕТРСЕ-Е ААТОСТТСАТТОСТАТОТСАСАТО 97
Мевалонатдифосфат- РМО- ЕТРСЕ-Р ОСАОААОСАААООСАОСААТ 98
декарбоксилаза РМБ- ЕТРСЕ-Е ТТОАТССААОАТТТОТАОСАТОС 99
Изопентилдифосфат- ίόί-ЕТРСЕ-Р СОАСАААСАСТТОТТОТАОТСАСС 100
дельта-изомераза ίόί-ΕΤΡΟΕ-Ε ТСААОТТСОСААОТАААТСССА 101
Геранил- 1зрА-ЕТРСЕ- Р АССАОСААТООАТОАСОАТО 102
гранстрансфераза 1зрА-ЕТРСЕ- Е АОТТТОТАААОСОТСАССТОС 103
Фарнезенсинтаза Р5-ЕТРСЕ-Р ААОСТАОТАОАТООТСООСТ 104
Р8-ЕТРСЕ-Е ААТОСТАСАССТАСТеСОСА 105
Данные ПЦР с обратной транскрипцией, подтверждающие экспрессию всех поздних генов мевалонатного пути, показаны на фиг. 18, указанные данные также суммированы в табл. 8.
- 36 028892
Таблица 8
Средние значения СТ для генов мевалонаткиназы (МК δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 51). фосфомевалонаткиназы (РМК δΕ9 ΙΌ ΝΟ: 52). мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (РМГ) δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 53). изопентилдифосфат-дельтаизомеразы (ΐάΐ δΕ9 ΙΌ ΝΟ: 54). геранил-транстрансферазы ДзрА δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 56) и фарнезенсинтазы (Εδ δΕ^ ΙΌ ΝΟ: 57) для двух независимых образцов. отобранных из двух заквасочных культур для эксперимента подпитки (см. ниже)
Ген Образец 1 (среднее С1) Образец 2 (среднее С1)
МК 21,9 20,82
РМК 23,64 22,81
РМО 24 22,83
1сП 24,23 27,54
ίδρΑ 23,92 23,22
Ρδ 21,28 (одна С1) 21,95 (одна С1)
НК (гИо) 31,5 28,88
Получение альфа-фарнезена из мевалоната.
После образования успешно трансформированной плазмиды рМТЬ8314-РгпГ-МК-РМК-РМП-РГог^й^-^δрА-Εδ проводили эксперимент роста в 50 мл среды РЕТС (табл. 1) в бутылках для сыворотки на 250 мл с использованием реального газа (30 фунт/кв.дюйм) с завода (собранного от сталелитейного производства Новой Зеландии. Гленбрук. Новая Зеландия; состав: 44% СО. 32% Ν2. 22% СО2. 2% Н2) в качестве единственного источника энергии и углерода. Все культуры инкубировали при 37°С на круговом шейкере. адаптированном для держания бутылок для сыворотки. Трансформантов сначала растили до плотности Οϋ600 ~0.4. затем субкультивировали в свежей среде с добавлением 1 мМ мевалоновой кислоты. Контроли без мевалоновой кислоты собирали в то же время из той же культуры. Образцы для ГХ-МС (газовой хроматографии-масс-спектрометрии) отбирали в каждой временной точке. На фиг. 17 показан пример кривой роста для 2 контрольных культур и двух культур. подпитываемых 1 мМ мевалонатом. Фарнезен выявляли в образцах. отобранных через 66 и 90 ч после начала эксперимента (фиг. 19-21).
Выявление альфа-фарнезена с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии.
Для выявления с помощью ГХ-МС альфа-фарнезена проводили экстракцию 5 мл культуры гексаном путем добавления 2 мл гексана и интенсивного перемешивания для смешивания в плотно закрытых стеклянных пробирках для проб. Пробирки затем инкубировали на ультразвуковой водяной бане в течение 5 мин для разделения фаз. 400 мкл экстракта гексана переносили в пробирку для ГХ и наносили на автонагружатель. Образцы анализировали на ГХ/МС-приборе с ионной ловушкой УАΚIАN ОС3800 Μδ4000 (Уапап Мс. Калифорния. США. Ν()\ν АдПеп! Тескпо1од1ез) с использованием колонки ЕС-1000 с толщиной фазы 0.25 мкм (Огасе ОауМзоп. Орегон. США). рабочей станции для МС Уапап (Уапап Мс. Са. Ν()\ν АдПеп! Тескпо1од1ез. Калифорния. США) и программы ΝΙδΤ Μδ δеа^ск 2.0 (АдПеп! Тескпо1од1ез. Калифорния. США). Объем вводимой пробы составлял 1 мкл. скорость потока газа гелиевого носителя составляла 1 мл/мин.
Изобретение было описано в настоящем изобретении со ссылкой на конкретные предпочтительные варианты реализации для возможности осуществления на практике изобретения без необходимости лишней экспериментальной работы. Однако специалисту в данной области техники очевидно. что многие из компонентов и параметров можно менять и модифицировать в известной мере или замещать на известные эквивалентны в пределах объема настоящего изобретения. Необходимо понимать. что указанные модификации и эквиваленты включены в настоящее изобретение в той же степени. как если бы были отдельно указаны. Названия. заголовки и т.д. приведены для более ясного понимания настоящего документа и не ограничивают объем настоящего изобретения.
Полное описание всех заявок. патентов и публикаций. цитированных выше и далее. при их наличии. включены в настоящее изобретение посредством ссылки. Однако ссылка на любые заявки. патенты и публикации в настоящем описании не является и не должна рассматриваться как утверждение или любая форма предположения того. что они составляют действительный предшествующий уровень техники или образуют часть общего известного знания в любой стране мира.
В настоящем описании и любых пунктах формулы изобретения. которая следует далее. если иное не следует из контекста. слова включает (содержит). включающий (содержащий) и т.д. следует рассматривать во включающем смысле (в отличие от исключающего смысла). другими словами. в смысле включая. но не ограниваясь.
- 37 028892
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> βΑΝΖΑΤΕΟΗ, НОВАЯ ЗЕЛАНДИЯ <120> Рекомбинантные микроорганизмы и их применение <130> ЬТ79 <160> 111 <170> Рабепб1п νθΓΞίοη 3.5 <210> 1 <211> 1875 <212> ДНК <213> С1озбг10.1ит аибоебйаподепит.
<400> 1 абдадбаабб баббадабаа ббабааадаб абааабдасд бааадаадаб дбсдббаааб 60
дабааааааа адсбадсбад адаааббада ааабббббаа бадасааадб абсбаадаса 120
ддаддбсабб бддсдбсбаа сббаддддбб дбддадсбса сбббдадббб абббадбдба 180
бббдабсбаа аббабдабаа асббабабдд дабдбдддас абсаддсбба бдбдсабааа 240
абссбсасдд даадааадда бааабббдаб асбббааддс аабббддадд аббаадбдда 300
бббссбаааа ддбдсдааад бабабабдаб бббббсдааа садддсабад бадбасббса 360
абабсбдсад сасббддааб ддсбадддсб ададабббаа адсабдадаа абабаабдбб 420
дббдсадбба баддадабдд адсасббасб ддаддбабдд сасбададдс ссбааабдаб 480
дбаддббаба дааааасбаа дсббабааба абаббааабд абаабсаааб дбсбабадда 540
ааааабдбад дбддадбабс бааабаббба аабааасбба дадбддассс баадбабааб 600
ааабббааад сддабдбада адсбааабба ааааадабас сбаабабадд ааааддаабд 660
дсаааабабс ббдааааддб аааааабдда абаааасааа бддбадббсс бддаабдббб 720
бббдаадаба бдддааббаа абабббадда ссаабадабд дбсабаабаб аааадаасбб 780
асадасдбас бсдсббсбдс аааадасаба сааддбссад ббаббабаса бабаабаасб 840
аадаааддаа ааддабабда абббдсадаа ааааабссад дбаааббсса бддаабаддд 900
ссббббаабб дсдссаабдд бдаасбддаб дсбддабсбб сааабасбба ббссааддсс 960
бббддааабд ааабддбааа дсбадсадаа ааадасдаба даабадбддс бабаасбдса 1020
дссабдаддд абддаасадд бсббаааадб ббббсбсааа адбббссбда ааддбббббб 1080
дабдбдддаа бадсадааса дсабдсбдба асссбддсад сбддаабддс асаддсаааб 1140
ббаааассбд бабббдсадб ббасбсбасб бббсббсааа дадсббабда бсаасббабб 1200
сабдабдбаб дбабдсаааа асббссадба дбббббдсбд бадабадддс сддсаббдба 1260
ддадаадабд дбдааасаса бсадддааба бббдабббаб сббасббаас ддааабдсса 1320
сабабдасдс ббабдбсбсс бааабдбаба дабдаасббс сабабабдбб аааабдддса 1380
- 38 028892
ббаддссада дббббссбдб адсбабаадд бабссааддд даддадабад бдбабдбсбс 1440
аабсссдбад ааааббббаа асббддааад бдддасбдба бббсааабда аддсадбдба 1500
дсаабааббд сбсадддбаа аабддбасаа аабдсадбдб бадсаддааа аааасббааа 1560
даааадддба бадабдбаад даббабаадб дсабдбббба ббаадссдсб ддасааддаа 1620
абдббаааса ддббадббда адааадбдба асбабсдбба сбдббдаада саабдбааба 1680
ададдаддаб баддабссба бабаббадаа бабдбаааба ааббааабаа аааадбаааа 1740
абаабааасб бадддбббда бдабаадббб дбасадсабд даааабссда баббббдбаб 1800
аадсбдбабд дбббддабсс баааддбабс дбааабадбд басббдаадс адсададдба 1860
адбсабабаб бббаа 1875
<210> 2 <211> 627 <212> Белок <213> С1озбг1д.1ит аибоебЪаподепит <400> 2
Меб 1 Бег Азп Ьеи Ьеи 5 Азр Азп Туг Ьуз Азр 10 11е Азп Азр Уа1 Ьуз 15 Ьуз
Меб Бег Ьеи Азп 20 Азр Ьуз Ьуз Ьуз Ьеи 25 А1а Агд О1и 11е Агд 30 Ьуз РЪе
Ьеи 11е Азр 35 Ьуз Уа1 Бег Ьуз ТЪг 40 О1у О1у Н1з Ьеи А1а 45 Бег Азп Ьеи
О1у Уа1 50 Уа1 О1и Ьеи ТЪг Ьеи 55 Бег Ьеи РЪе Бег Уа1 60 РЪе Азр Ьеи Азп
Туг 65 Азр Ьуз Ьеи 11е Тгр 70 Азр Уа1 О1у Н1з О1п 75 А1а Туг Уа1 Н1з Ьуз 80
11е Ьеи ТЪг О1у Агд 85 Ьуз Азр Ьуз РЪе Азр 90 ТЪг Ьеи Агд О1п РЪе 95 О1у
О1у Ьеи Бег О1у 100 РЪе Рго Ьуз Агд Суз 105 О1и Бег 11е Туг Азр 110 РЪе РЪе
О1и ТЪг О1у 115 НДз Бег Бег ТЪг Бег 120 11е Бег А1а А1а Ьеи 125 О1у Меб А1а
Агд А1а 130 Агд Азр Ьеи Ьуз Н1з 135 О1и Ьуз Туг Азп Уа1 140 Уа1 А1а Уа1 11е
- 39 028892
О1у 145 Азр О1у А1а Ьеи ТЪг О1у О1у МеЬ А1а Ьеи О1и А1а Ьеи Азп Азр
150 155 160
ναι О1у Туг Агд Ьуз ТЪг Ьуз Ьеи 11е 11е 11е Ьеи Азп Азр Азп О1п
165 170 175
МеЬ Зег 11е О1у Ьуз Азп Уа1 О1у О1у Уа1 Зег Ьуз Туг Ьеи Азп Ьуз
180 185 190
Ьеи Агд Уа1 Азр Рго Ьуз Туг Азп Ьуз РЪе Ьуз А1а Азр Уа1 О1и А1а
195 200 205
Ьуз Ьеи Ьуз Ьуз 11е Рго Азп 11е О1у Ьуз О1у МеЬ А1а Ьуз Туг Ьеи
210 215 220
О1и Ьуз Уа1 Ьуз Азп О1у 11е Ьуз О1п МеЬ Уа1 Уа1 Рго О1у МеЬ РЪе
225 230 235 240
РЪе О1и Азр МеЬ О1у 11е Ьуз Туг Ьеи О1у Рго 11е Азр О1у Н1з Азп
245 250 255
11е Ьуз О1и Ьеи ТЪг Азр Уа1 Ьеи А1а Зег А1а Ьуз Азр 11е О1п О1у
260 265 270
Рго Уа1 11е 11е Н1з 11е 11е ТЪг Ьуз Ьуз О1у Ьуз О1у Туг О1и РЪе
275 280 285
А1а О1и Ьуз Азп Рго О1у Ьуз РЪе Н1з О1у 11е О1у Рго РЪе Азп Суз
290 295 300
А1а Азп О1у О1и Ьеи Азр А1а О1у Зег Зег Азп ТЪг Туг Зег Ьуз А1а
305 310 315 320
РЪе О1у Азп О1и МеЬ Уа1 Ьуз Ьеи А1а О1и Ьуз Азр Азр Агд 11е Уа1
325 330 335
А1а 11е ТЪг А1а А1а МеЬ Агд Азр О1у ТЪг О1у Ьеи Ьуз Зег РЪе Зег
340 345 350
О1п Ьуз РЪе Рго О1и Агд РЪе РЪе Азр Уа1 О1у 11е А1а О1и О1п Н1з
355 360 365
А1а Уа1 ТЪг Ьеи А1а А1а О1у МеЬ А1а О1п А1а Азп Ьеи Ьуз Рго Уа1
370 375 380
РЪе А1а Уа1 Туг Зег ТЪг РЪе Ьеи О1п Агд А1а Туг Азр О1п Ьеи 11е
385 390 395 400
- 40 028892
Ηΐ3 Азр Уа1 Суз МеЬ 405 О1п Ьуз Ьеи Рго Уа1 410 Уа1 РЬе А1а Уа1 Азр 415 Агд
А1а О1у 11е Уа1 О1у О1и Азр О1у О1и ТЬг Н1з О1п О1у 11е РЬе Азр
420 425 430
Ьеи Зег Туг Ьеи ТЬг О1и МеЬ Рго Н1з МеЬ ТЬг Ьеи МеЬ Зег Рго Ьуз
435 440 445
Суз 11е Азр О1и Ьеи Рго Туг МеЬ Ьеи Ьуз Тгр А1а Ьеи О1у О1п Зег
450 455 460
РЬе Рго Уа1 А1а 11е Агд Туг Рго Агд О1у О1у Азр Зег Уа1 Суз Ьеи
465 470 475 480
Азп Рго Уа1 О1и Азп РЬе Ьуз Ьеи О1у Ьуз Тгр Азр Суз 11е Зег Азп
485 490 495
О1и О1у Зег Уа1 А1а 11е 11е А1а О1п О1у Ьуз МеЬ Уа1 О1п Азп А1а
500 505 510
Уа1 Ьеи А1а О1у Ьуз Ьуз Ьеи Ьуз О1и Ьуз О1у 11е Азр Уа1 Агд 11е
515 520 525
11е Зег А1а Суз РЬе 11е Ьуз Рго Ьеи Азр Ьуз О1и МеЬ Ьеи Азп Агд
530 535 540
Ьеи Уа1 О1и О1и Зег Уа1 ТЬг 11е Уа1 ТЬг Уа1 О1и Азр Азп Уа1 11е
545 550 555 560
Агд О1у О1у Ьеи О1у Зег Туг 11е Ьеи О1и Туг Уа1 Азп Ьуз Ьеи Азп
565 570 575
Ьуз Ьуз Уа1 Ьуз 11е 11е Азп Ьеи О1у РЬе Азр Азр Ьуз РЬе Уа1 О1п
580 585 590
Ηΐ3 О1у Ьуз Зег Азр 11е Ьеи Туг Ьуз Ьеи Туг О1у Ьеи Азр Рго Ьуз
595 600 605
О1у 11е Уа1 Азп Зег Уа1 Ьеи О1и А1а А1а О1и Уа1 Зег Нтз 11е РЬе
610 615 620
Агд О1и РЬе 625 <210> 3 <211> 1158
- 41 028892 <212> ДНК <213> С1озЁг1бЪит. аиЁоеЁЪаподепит <400> 3
аЁдаададаа ЁЁЁсааЁааЁ Ёддадссаса ддЁЁсЁаЁад даасссааас ЁсЁЁдаЁдЁа 60
сЁЁадаааас аааааддада ЁЁЁЁсадсЁЁ аЁаддЁдЁаЁ сЁдсаааЁад ЁадЁдЁадаЁ 120
ааасЁЁЁЁас аЁаЁааЁада ЁдааЁЁЁаас сссаааЁаЁд сддЁдсЁаас сдааааадаа 180
ЁсЁЁаЁЁЁаа адаЁаааада ЁаЁЁЁЁЁадЁ ааЁааааааЁ саааЁасааа ааЁаЁЁаЁЁЁ 240
ддадЁадаЁд даЁЁаааЁас ЁаЁадсЁадЁ сЁЁссЁдаад ЁЁдаЁаЁддЁ ЁдЁаасаЁсЁ 300
дЁадЁЁддаа ЁдаЁадддсЁ ЁдЁассаасЁ аЁаааадсаа ЁЁааадсдаа дааадасаЁа 360
дсЁЁЁадсЁа аЁааддадас аЁЁадЁЁдЁа ддаддадаас ЁддЁЁасааа аЁЁаЁсдааа 420
дааааЁааЁа ЁаааааЁаЁЁ ЁссЁдЁадаЁ ЁсададсаЁа дЁдсЁдЁЁЁЁ ЁсааЁдссЁЁ 480
садддаааЁа аЁЁЁЁдасда адЁЁдсЁааЁ ЁЁдаЁЁЁЁаа ссдсЁЁсадд ЁддассЁЁЁЁ 540
аддддааааа саааадаЁса асЁсЁсаааа дЁаасЁдЁаа аададдсдЁЁ дааЁсаЁсса 600
ааЁЁддадЁа Ёдддаааааа дсЁсасааЁа даЁЁсЁдсЁа сЁсЁЁаЁдаа ЁаадддасЁЁ 660
даадЁЁаЁад аадсЁсасЁЁ сЁЁаЁЁЁаас ЁЁассЁЁаЁд ааааЁаЁааа ддЁЁдЁадЁЁ 720
саЁссасааа дЁаЁадЁаса ЁЁсЁаЁддЁд дааЁаЁаддд аЁддаадЁдЁ ЁаЁддсасад 780
сЁЁдссасЁд садаЁаЁдад аЁЁассЁаЁа сааЁаЁдсас ЁдааЁЁаЁсс даааадааад 840
даадсЁдЁаа ЁадаЁаааЁЁ ддасЁЁсЁаЁ адсдЁаддаа аЁЁЁаадЁЁЁ ЁдаааадссЁ 900
даЁасадаЁа саЁЁсадасс асЁЁаааЁЁа дсЁЁаЁдаад садддаддаЁ аддаддсаса 960
аЁдссадсЁа ЁасЁаааЁЁд ЁдсаааЁдад даадсадЁаа дЁЁЁаЁЁссЁ ЁдсЁааЁааа 1020
аЁаааЁЁЁЁЁ ЁддаЁаЁадд саасаЁаЁЁа даададЁдЁа ЁдааЁаааЁЁ ЁасЁЁсасаа 1080
адЁасдЁаЁа сЁсЁддаЁда ЁЁЁасЁЁдас сЁадаааЁаа аадЁЁаадаа аЁаЁдЁаааа 1140
даЁаааЁЁЁа ЁсаааЁаа 1158
<210> 4 <211> 385 <212> Белок <213> С1озЁг1бЪит. аиЁоеЁЪаподепит <400> 4
МеЁ 1 Ьуз Агд 11е Бег 5 11е 11е О1у А1а ТЪг 10 О1у Бег 11е О1у ТЪг О1п 15
ТЪг Ьеи Азр Уа1 Ьеи Агд Ьуз О1п Ьуз О1у Азр РЪе О1п Ьеи 11е О1у
20 25 30
Уа1 Бег А1а Азп Бег Бег Уа1 Азр Ьуз Ьеи Ьеи Нгз 11е 11е Азр О1и
35 40 45
- 42 028892
РЬе Азп 50 Рго Ьуз Туг А1а Уа1 55 Ьеи ТЬг О1и Ьуз О1и 60 Зег Туг Ьеи Ьуз
11е Ьуз Азр 11е РЬе Зег Азп Ьуз Ьуз Зег Азп ТЬг Ьуз 11е Ьеи РЬе
65 70 75 80
О1у Уа1 Азр О1у Ьеи Азп ТЬг 11е А1а Зег Ьеи Рго О1и Уа1 Азр МеЕ
85 90 95
Уа1 Уа1 ТЬг Зег Уа1 Уа1 О1у МеЕ 11е О1у Ьеи Уа1 Рго ТЬг 11е Ьуз
100 105 110
А1а 11е Ьуз А1а Ьуз Ьуз Азр 11е А1а Ьеи А1а Азп Ьуз О1и ТЬг Ьеи
115 120 125
Уа1 Уа1 О1у О1у О1и Ьеи Уа1 ТЬг Ьуз Ьеи Зег Ьуз О1и Азп Азп 11е
130 135 140
Ьуз 11е РЬе Рго Уа1 Азр Зег О1и Н1з Зег А1а Уа1 РЬе О1п Суз Ьеи
145 150 155 160
О1п О1у Азп Азп РЬе Азр О1и Уа1 А1а Азп Ьеи 11е Ьеи ТЬг А1а Зег
165 170 175
О1у О1у Рго РЬе Агд О1у Ьуз ТЬг Ьуз Азр О1п Ьеи Зег Ьуз Уа1 ТЬг
180 185 190
Уа1 Ьуз О1и А1а Ьеи Азп Н1з Рго Азп Тгр Зег МеЕ О1у Ьуз Ьуз Ьеи
195 200 205
ТЬг 11е Азр Зег А1а ТЬг Ьеи МеЕ Азп Ьуз О1у Ьеи О1и Уа1 11е О1и
210 215 220
А1а Ηΐ3 РЬе Ьеи РЬе Азп Ьеи Рго Туг О1и Азп 11е Ьуз Уа1 Уа1 Уа1
225 230 235 240
Ηΐ3 Рго О1п Зег 11е Уа1 Н1з Зег МеЕ Уа1 О1и Туг Агд Азр О1у Зег
245 250 255
Уа1 МеЕ А1а О1п Ьеи А1а ТЬг А1а Азр МеЕ Агд Ьеи Рго 11е О1п Туг
260 265 270
А1а Ьеи Азп Туг Рго Ьуз Агд Ьуз О1и А1а Уа1 11е Азр Ьуз Ьеи Азр
275 280 285
РЬе Туг Зег Уа1 О1у Азп Ьеи Зег РЬе О1и Ьуз Рго Азр ТЬг Азр ТЬг
290 295 300
- 43 028892
РЬе 305 Агд Рго Ьеи Ьуз Ьеи 310 А1а Туг С1и А1а С1у 315 Агд 11е О1у О1у ТЬг 320
Меб Рго А1а 11е Ьеи 325 Азп Суз А1а Азп С1и 330 О1и А1а Уа1 Бег Ьеи 335 РЬе
Ьеи А1а Азп Ьуз 340 11е Азп РЬе Ьеи Азр 345 11е С1у Азп 11е Ьеи 350 О1и О1и
Суз Меб Азп 355 Ьуз РЬе ТЬг Бег С1п 360 Бег ТЬг Туг ТЬг Ьеи 365 Азр Азр Ьеи
Ьеи Азр 370 Ьеи С1и 11е Ьуз Уа1 375 Ьуз Ьуз Туг Уа1 Ьуз 380 Азр Ьуз РЬе 11е
Ьуз
385 <210> 5 <211> 693 <212> ДНК <213> С1озбг10.1ит аибоебЬаподепит.
<400> 5
абдаабддба аббабдсбаб баббдбадсб дссддсаадд дааааадааб дддаасбасб 60
аббаабаадс аабббаббаа ааббаадддб аадссбабаб бабаббаббс сабаадддса 120
ббббссабаа абссбсббаб адабддаабб абасбддбаб дбдсадааас бдадабадаа 180
баббдбаааа дадаадбадб адабааабаб дддсббсада аддбааббаа аббадббдсб 240
дддддбааад аасдбсадда ббсддбаббб аабддасбад дадббббада аааадаааас 300
бдбадбдббд ббсбааббса сдабддддсб адассббббд бсасбадбаа ааббаббдаб 360
дабддаабаа аабаббсбаа баддбабддд дсббдбдсбб дбддадббад дссбааддаб 420
асасбаааад ббадддаада аадбддаббб бсббсббсба саббададад ааааадббба 480
бббдсадббс ааасбссдса дбдббббааа бабдабббаа бббабдасбд бсабаааааа 540
ббаабдаабд аааааабдбд бдббасбдаб дабасбабдд бадбададсд ббабддаааб 600
ааддбббабб бдбабдаадд баасбабдаа аасабаааад бдассасасс адаадаббба 660
аабабадсбд ааадбабадб бдааааабаб баа 693
<210> 6 <211> 230 <212> Белок <213> С1озбг10.1ит аибоебЬаподепит.
<400> 6
- 44 028892
Меб Азп О1у Азп Туг А1а 11е 11е Уа1 А1а 10 А1а О1у Ьуз О1у Ьуз 15 Агд
1 5
Меб О1у ТЬг ТЬг 11е Азп Ьуз О1п РЬе 11е Ьуз 11е Ьуз О1у Ьуз Рго
20 25 30
11е Ьеи Туг Туг Бег 11е Агд А1а РЬе Бег 11е Азп Рго Ьеи 11е Азр
35 40 45
О1у 11е 11е Ьеи Уа1 Суз А1а О1и ТЬг О1и 11е О1и Туг Суз Ьуз Агд
50 55 60
О1и Уа1 Уа1 Азр Ьуз Туг О1у Ьеи О1п Ьуз Уа1 11е Ьуз Ьеи Уа1 А1а
65 70 75 80
О1у О1у Ьуз О1и Агд О1п Азр Бег Уа1 РЬе Азп О1у Ьеи О1у Уа1 Ьеи
85 90 95
О1и Ьуз О1и Азп Суз Бег Уа1 Уа1 Ьеи 11е Н1з Азр О1у А1а Агд Рго
100 105 110
РЬе Уа1 ТЬг Бег Ьуз 11е 11е Азр Азр О1у 11е Ьуз Туг Бег Азп Агд
115 120 125
Туг О1у А1а Суз А1а Суз О1у Уа1 Агд Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Ьуз Уа1
130 135 140
Агд О1и О1и Бег О1у РЬе Бег Бег Бег ТЬг Ьеи О1и Агд Ьуз Бег Ьеи
145 150 155 160
РЬе А1а Уа1 О1п ТЬг Рго О1п Суз РЬе Ьуз Туг Азр Ьеи 11е Туг Азр
165 170 175
Суз Ηΐ3 Ьуз Ьуз Ьеи Меб Азп О1и Ьуз Меб Суз Уа1 ТЬг Азр Азр ТЬг
180 185 190
Меб Уа1 Уа1 О1и Агд Туг О1у Азп Ьуз Уа1 Туг Ьеи Туг О1и О1у Азп
195 200 205
Туг О1и Азп 11е Ьуз Уа1 ТЬг ТЬг Рго О1и Азр Ьеи Азп 11е А1а О1и
210 215 220
Бег 11е Уа1 О1и Ьуз Туг
225 230 <210> 7 <211> 798
- 45 028892 <212> ДНК <213> С1озбг10иит. аибоебЪаподепит <400> 7
дбдддааааа даааадабдд дбабсабсбб ббдаааабда баабдсадаа бабадасбба 60
бабдабдббб бааааабада бдадабсааа асбддаабас адабабдсбс баабаабада 120
бабаббсссб дбдасаддад ааабббддбб басададсад сааааббабб баббдабааа 180
бабаабабаа адаабддааб бадбабааас абаддбаааа абабассбдб абсадсбдда 240
сббдсбддбд даадбдсдда бдсбдсадсб абасбааада сбабдадааа бабббабасб 300
ссбдаадбаа дбдабааада аббдадсдаа ббаддсббаа абабаддддс адабдббссб 360
баббдбабаа баддаддбас адссббдбдс даддддабад дададааддб басассасбс 420
абдссдббба дааассабаб асбсабабба аббааассас сббббддадб дадсасадса 480
даддбабаба ададбббада сабаадбааа абаааааддс абссбаабас адааабббба 540
абадабдсдд ббаабдаабс ааааббддад абдсбдадба аааасабдаа ааабдббббд 600
даааабдбаа сбббаааааа абабсссдбд сббадааааа бааааасбда бббдабадаб 660
бббддадсад ббддббсасб бабдадбдда адсддбссаа дсабббббдс бббббббдаб 720
дабабдсбаа аадсасадаа абдббабдаб аабабдаааа сбаддбабад ададдбдббб 780
аббасаадаа ссабббаа 798
<210> 8 <211> 265 <212> Белок <213> С1озбг1Шит аибоебЪаподепит <400> 8
Меб 1 О1у Ьуз Агд Ьуз 5 Азр О1у Туг Н1з Ьеи 10 Ьеи Ьуз Меб 11е Меб 15 О1п
Азп 11е Азр Ьеи Туг Азр Уа1 Ьеи Ьуз 11е Азр О1и 11е Ьуз ТЪг О1у
20 25 30
11е О1п 11е Суз Бег Азп Азп Агд Туг 11е Рго Суз Азр Агд Агд Азп
35 40 45
Ьеи Уа1 Туг Агд А1а А1а Ьуз Ьеи РЪе 11е Азр Ьуз Туг Азп 11е Ьуз
50 55 60
Азп О1у 11е Бег 11е Азп 11е О1у Ьуз Азп 11е Рго Уа1 Бег А1а О1у
65 70 75 80
Ьеи А1а О1у О1у Бег А1а Азр А1а А1а А1а 11е Ьеи Ьуз ТЪг Меб Агд
85 90 95
- 46 028892
Азп 11е Туг ТЬг 100 Рго О1и Уа1 Бег Азр 105 Ьуз О1и Ьеи Бег О1и 110 Ьеи О1у
Ьеи Азп 11е О1у А1а Азр Уа1 Рго Туг Суз 11е 11е О1у О1у ТЬг А1а
115 120 125
Ьеи Суз О1и О1у 11е О1у О1и Ьуз Уа1 ТЬг Рго Ьеи Меб Рго РЬе Агд
130 135 140
Азп Нчз 11е Ьеи 11е Ьеи 11е Ьуз Рго Рго РЬе О1у Уа1 Бег ТЬг А1а
145 150 155 160
О1и Уа1 Туг Ьуз Бег Ьеи Азр 11е Бег Ьуз 11е Ьуз Агд Нчз Рго Азп
165 170 175
ТЬг О1и 11е Ьеи 11е Азр А1а Уа1 Азп О1и Бег Ьуз Ьеи О1и Меб Ьеи
180 185 190
Бег Ьуз Азп Меб Ьуз Азп Уа1 Ьеи О1и Азп Уа1 ТЬг Ьеи Ьуз Ьуз Туг
195 200 205
Рго Уа1 Ьеи Агд Ьуз 11е Ьуз ТЬг Азр Ьеи 11е Азр РЬе О1у А1а Уа1
210 215 220
О1у Бег Ьеи Меб Бег О1у Бег О1у Рго Бег 11е РЬе А1а РЬе РЬе Азр
225 230 235 240
Азр Меб Ьеи Ьуз А1а О1п Ьуз Суз Туг Азр Азп Меб Ьуз ТЬг Агд Туг
245 250 255
Агд О1и Уа1 РЬе 11е ТЬг Агд ТЬг 11е
260 265
<210> 9 <211> 480 <212> ДНК <213> С1озбг10.1ит аибоебЬаподепит.
<400> 9
дбдаааабсд ддсббддбба бдабдбссаб аааббадббб абаабадасс бсббабббба 60
ддаддсдбаа абабсссббб бдаааааддб сббабдддас аббсадабдс адабдбасбб 120
сббсабдсаа баабддабад бсбссббдда дссббдбдбс баддбдабаб сддсаадсаб 180
ббсссбдаба абдабаабаа абабаадаас абабдбадбс ббаааббдсб дбсасабдба 240
бсадсбббда ббаабдаааа аддабабасб абадддааса бадаббсбаб бабаабадсс 300
даааадссба аасбббсббс абасабасаа дабабдаддд бааабабадс баааасбсба 360
- 47 028892 ааЬдЬаасЬа садссдЬааЬ аадЬдЬаааа дссасЬасад аддааддЬсЬ ЬддсЬЬЬасс 420 ддсаааддад ааддсаЬадс сдсЬсааадс аЬсЬдЬЬЬдЬ ЬаасадсЬаа ЬЬсааааЬаа 480 <210> 10 <211> 159 <212> Белок <213> С1озЬг10.1ит аиЬоеЬЬаподепит.
<400> 10
МеЬ 1 Ьуз 11е О1у Ьеи 5 О1у Туг Азр
Рго Ьеи 11е Ьеи 20 О1у О1у Уа1 Азп
О1у Ηΐ3 Бег 35 Азр А1а Азр Уа1 Ьеи 40
Ьеи О1у 50 А1а Ьеи Суз Ьеи О1у 55 Азр
Азр 65 Азп Ьуз Туг Ьуз Азп 70 11е Суз
Бег А1а Ьеи 11е Азп 85 О1и Ьуз О1у
11е 11е 11е А1а 100 О1и Ьуз Рго Ьуз
Агд Уа1 Азп 115 11е А1а Ьуз ТЬг Ьеи 120
Уа1 Ьуз 130 А1а ТЬг ТЬг О1и О1и 135 О1у
О1у 145 11е А1а А1а О1п Бег 150 11е Суз
Уа1 Няз 10 Ьуз Ьеи Уа1 Туг Азп 15 Агд
11е 25 Рго РЬе О1и Ьуз О1у 30 Ьеи МеЬ
Ьеи Н1з А1а 11е МеЬ 45 Азр Бег Ьеи
11е О1у Ьуз Н1з 60 РЬе Рго Азр Азп
Бег Ьеи Ьуз 75 Ьеи Ьеи Бег Н1з Уа1 80
Туг ТЬг 90 11е О1у Азп 11е Азр 95 Бег
Ьеи 105 Бег Бег Туг 11е О1п 110 Азр МеЬ
Азп Уа1 ТЬг ТЬг А1а 125 Уа1 11е Бег
Ьеи О1у РЬе ТЬг 140 О1у Ьуз О1у О1и
Ьеи Ьеи ТЬг 155 А1а Азп Бег Ьуз
<210> 11 <211> 1051 <212> ДНК <213> С1озЬг10.1ит аиЬоеЬЬаподепит.
<400> 11
ЬЬдааЬадад Ьаааааадаа аасадЬааад дЬаддсааЬа ЬаЬЬЬЬЬадд ЬддадаЬЬЬЬ 60
ссадЬадссд ЬасааЬсЬаЬ дасаааЬасд даЬасЬаддд аЬдЬадаадс сасЬасадсЬ 120
садаЬаЬЬЬс адсЬаааада адсаддЬЬдЬ даЬаЬсдЬса даЬдЬдсддЬ дссЬдаЬдаЬ 180
- 48 028892
аЬадсЬЬдса аЬЬссаЬдаа аааааЬсаЬа дааададЬад аЬаЬЬссасЬ ЬдЬадсадаЬ 240
аЬасаЬЬЬЬд аЬЬаЬаадЬЬ ддсдсЬЬааа ЬсЬаЬадааа аЬдддаЬаЬс ЬдсасЬЬада 300
аЬаааЬссЬд даааЬаЬЬдд аадсаЬадаа ададЬасдад аадЬддсаад адсадсаааа 360
даадсЬааЬа ЬЬссааЬЬад ааЬаддддЬа аасЬсЬддаЬ саЬЬаааааа адаЬаЬЬЬЬа 420
ааЬаааЬаЬд дЬададЬЬЬд ЬЬсддаЬдса сЬадЬадада дЬдсЬсЬада асаЬдЬаааа 480
аЬЬЬЬддааа асдЬаддаЬЬ ЬЬаЬдаЬаЬа дЬЬаЬаЬсса ЬааааЬсЬЬс аааЬдЬаааЬ 540
садаЬдаЬад ааадЬЬаЬад аааааЬаЬсЬ даааЬЬдЬад аЬЬаЬссасЬ ЬсассЬЬдда 600
дЬаасадаад саддаасЬаЬ ЬЬддсдадда асЬаЬааааЬ саадсаЬадд саЬаддЬасЬ 660
сЬЬЬЬдаЬдд ааддЬаЬадд адасасЬаЬа ададЬаЬсЬс ЬЬасаддааа ЬссадЬддаа 720
даадЬаадад Ьдддаааада ааЬаЬЬаааа ЬссЬдЬддаа ЬЬаЬаааада аддЬдЬддаа 780
ЬЬЬаЬаЬсаЬ дЬсссассЬд ЬддЬадаасЬ даааЬЬдаЬЬ ЬааЬЬааааЬ адсЬдадсаа 840
дЬддаааааа дасЬЬЬЬааа ЬаЬдсаЬааа аасаЬааадд ЬЬдсЬдЬЬаЬ дддаЬдЬдЬа 900
дЬаааЬддас саддЬдаддс Ьсдддаадса даЬаЬЬддЬа Ьадсаддсдд саааддЬдаа 960
ддсаЬЬаЬаЬ ЬЬаааааадд аааааЬадЬа аааааддЬаа дЬдаадааад ЬЬЬадЬадаа 1020
ЬсасЬЬаЬад аадаааЬада ааасаЬЬЬда г 1051
<210> 12 <211> 349 <212> Белок <213> С1озЬг10.1ит аиЬоеЬЬаподепит <400> 12
МеЬ 1 Азп Агд Уа1 Ьуз 5 Ьуз Ьуз ТЬг Уа1 Ьуз 10 Уа1 О1у Азп 11е РЬе 15 Ьеи
О1у О1у Азр РЬе Рго Уа1 А1а Уа1 О1п Зег МеЬ ТЬг Азп ТЬг Азр ТЬг
20 25 30
Агд Азр Уа1 О1и А1а ТЬг ТЬг А1а О1п 11е РЬе О1п Ьеи Ьуз О1и А1а
35 40 45
О1у Суз Азр 11е Уа1 Агд Суз А1а Уа1 Рго Азр Азр 11е А1а Суз Азп
50 55 60
Зег МеЬ Ьуз Ьуз 11е 11е О1и Агд Уа1 Азр 11е Рго Ьеи Уа1 А1а Азр
65 70 75 80
11е Нтз РЬе Азр Туг Ьуз Ьеи А1а Ьеи Ьуз Зег 11е О1и Азп О1у 11е
85 90 95
- 49 028892
Зег А1а Ьеи Агд 100 11е Азп Рго О1у Азп 105 11е О1у Зег 11е О1и 110 Агд Уа1
Агд О1и Уа1 А1а Агд А1а А1а Ьуз О1и А1а Азп 11е Рго 11е Агд 11е
115 120 125
О1у Уа1 Азп Зег О1у Зег Ьеи Ьуз Ьуз Азр 11е Ьеи Азп Ьуз Туг О1у
130 135 140
Агд Уа1 Суз Зег Азр А1а Ьеи Уа1 О1и Зег А1а Ьеи О1и Нтз Уа1 Ьуз
145 150 155 160
11е Ьеи О1и Азп Уа1 О1у РЬе Туг Азр 11е Уа1 11е Зег 11е Ьуз Зег
165 170 175
Зег Азп Уа1 Азп О1п МеЕ 11е О1и Зег Туг Агд Ьуз 11е Зег О1и 11е
180 185 190
Уа1 Азр Туг Рго Ьеи Нтз Ьеи О1у Уа1 ТЬг О1и А1а О1у ТЬг 11е Тгр
195 200 205
Агд О1у ТЬг 11е Ьуз Зег Зег 11е О1у 11е О1у ТЬг Ьеи Ьеи МеЕ О1и
210 215 220
О1у 11е О1у Азр ТЬг 11е Агд Уа1 Зег Ьеи ТЬг О1у Азп Рго Уа1 О1и
225 230 235 240
О1и Уа1 Агд Уа1 О1у Ьуз О1и 11е Ьеи Ьуз Зег Суз О1у 11е 11е Ьуз
245 250 255
О1и О1у Уа1 О1и РЬе 11е Зег Суз Рго ТЬг Суз О1у Агд ТЬг О1и 11е
260 265 270
Азр Ьеи 11е Ьуз 11е А1а О1и О1п Уа1 О1и Ьуз Агд Ьеи Ьеи Азп МеЕ
275 280 285
Ηΐ3 Ьуз Азп 11е Ьуз Уа1 А1а Уа1 МеЕ О1у Суз Уа1 Уа1 Азп О1у Рго
290 295 300
О1у О1и А1а Агд О1и А1а Азр 11е О1у 11е А1а О1у О1у Ьуз О1у О1и
305 310 315 320
О1у Не 11е РЬе Ьуз Ьуз О1у Ьуз 11е Уа1 Ьуз Ьуз Уа1 Зег О1и О1и
325 330 335
Зег Ьеи Уа1 О1и Зег Ьеи 11е О1и О1и 11е О1и Азп 11е
340 345
- 50 028892
<210> 13 <211> 1923 <212> ДНК <213> С1озЕг1Д1ит аиЕоеЕЬаподепит. <400> 13 дЕдаЕааааЕ ЕдаасаЕЕаЕ ЕЕЕадсадас аааЕссддаЕ ЕЕЕдсЕЕЕдд адЕааааада 60
дсЕдЕадасд ааЕсЕЕЕааа ддЕЕсааааа аааЕЕЕааЕа ааааааЕаЕа ЕасЕЕЕаддЕ 120
ссЕЕЕдаЕЕс аЕааЕадЕда ЕдЕадЕаааЕ аааЕЕааадд аааааддЕаЕ аЕаЕссЕаЕа 180
даааЕадаЕа аЕаЕадаЕаа ЕсЕаадддаа даЕдаЕдЕдд ЕЕаЕааЕасд ЕЕсЕсаЕддЕ 240
дЕЕсссдааа аааЕаЕЕЕЕЕ ЕасЕЕЕаааа ааЕааааааа ЕааасаЕадЕ аааЕдсаасЕ 300
ЕдсссаЕаЕд ЕЕЕЕаааЕаЕ асааадаааа дЕасаадааЕ аЕЕаЕаааЕЕ адддЕаЕЕсЕ 360
аЕаЕЕааЕад ЕаддадаЕаа аааЕсаЕссЕ даадЕааЕЕд дааЕаааЕдд аЕддЕдЕдаа 420
ааЕааадсЕЕ ЕааЕаЕсЕаа адаЕддсасс ааЕЕЕадааа адЕЕассаЕс аааасЕдЕдЕ 480
аЕадЕЕЕсЕс ааасЕасада аааасааЕсЕ аасЕдддааа аадЕдсЕЕад ЕаЕадЕддсЕ 540
аааааЕЕдЕа аадааЕЕЕаЕ ЕдсЕЕЕЕааЕ асЕаЕаЕдса дЕдссасада аЕЕЕсдЕсад 600
ааддсадсад садаЕаЕЕЕс ЕааадаадЕа даЕаЕдаЕдд ЕадЕааЕадд ЕддЕааааас 660
адсЕсЕааЕа сЕасЕааасЕ ЕЕаЕдаааЕа ЕдЕааадаЕа асЕдсааЕаа ЕасЕаЕЕЕаЕ 720
дЕЕдааааЕЕ саддадаааЕ ассЕдаЕдаЕ аЕаадЕааЕЕ дЕааЕааааЕ ЕаааасЕаЕа 780
ддЕдЕЕасад саддадсЕЕс аасассадаЕ ЕддаЕааЕаа аддаддсааЕ ЕЕЕаааааЕд 840
адЕдаЕдаса ааааЕЕЕада асЕаааЕдад саасЕаЕсЕЕ аЕаЕддасаа аааЕдаЕасс 900
саааЕааЕаЕ ЕаддЕдаааа ааЕЕаадддЕ асадЕааЕаЕ сЕдЕаааЕсс аааададдЕЕ 960
ЕЕЕЕЕаааЕа ЕаддаЕаЕаа аЕсадааддЕ дЕасЕЕссаа аасдЕдаааЕ аасааааааЕ 1020
дааадЕдаса асЕЕадаада аЕЕааЕЕсаЕ ЕдЕддадаЕд ааЕЕаЕаЕдЕ ЕааадЕааЕа 1080
адаадасааа аЕдаадаЕдд аЕаЕдЕддЕа ЕЕаЕсЕаада ЕадааЕЕада аададааааЕ 1140
дсЕЕаЕааад ааЕЕааадда адсЕааЕдда ааЕадЕсадд ЕаЕЕаааддЕ ЕаЕЕдЕаааа 1200
даадсЕдЕаа аЕддаддЕсЕ ЕдЕЕдссааЕ ЕасаааддЕд сЕадддЕаЕЕ ЕаЕассЕдсЕ 1260
ЕсЕсаЕдЕад ааЕЕаЕаЕса ЕдЕадаЕдаЕ сЕЕЕсасааЕ аЕдЕадаЕаа ададсЕЕдаЕ 1320
дЕаасЕаЕаа ЕЕдааЕЕЕаа адаадаааад аааддЕасса дааЕадЕадс ЕЕсаадаада 1380
дассЕЕЕЕда дааЕддааад адааааааЕд даадаасада сЕЕддааЕдЕ дсЕЕдааааа 1440
даЕасЕдЕад ЕадаЕддЕда адЕЕадаада ЕЕдасЕдаЕЕ ЕЕддсдсаЕЕ ЕдЕЕдаЕдЕа 1500
сааддадЕЕд асдддсЕЕсЕ асаЕдЕаЕсЕ даасЕЕЕссЕ ддддаададЕ Еддаааасса 1560
адЕдаЕдЕЕЕ ЕаааааЕсдд адаЕасдаЕЕ ааддЕЕЕаЕа ЕсЕЕадасаЕ ЕдаЕааадаа 1620
ааааадаадЕ ЕаЕсЕЕЕаЕс ЕЕЕаааааад сЕсаЕддаад аЕссаЕддаЕ саасдЕадас 1680
- 51 028892
аЬааааЬаЬс сЬдЬЬддсаа ЬдЬадЬЬсЬЬ ддЬааадЬад ЬЬаддЬЬЬдс аааЬЬЬЬддЬ 1740
дсаЬЬЬдЬЬд ааЬЬададсс аддЬдЬадаЬ дсаЬЬадЬЬс аЬаЬаЬсаса ааЬаадссаЬ 1800
аададааЬад аЬааассада адаЬдЬасЬЬ ааааЬаддЬс аддаааЬааа ддсЬаадаЬс 1860
сЬЬдаадЬаа асааадаЬад сдааааааЬа дсЬЬЬаадЬа ЬаааадаадЬ адаЬдаааЬс 1920
Ьаа 1923
<210> 14 <211> 640 <212> Белок <213> С1озЬг10лит аиЬоеЬЪаподепит <400> 14
МеЬ 1 11е Ьуз Ьеи Азп 5 11е 11е Ьеи А1а Азр 10 Ьуз Зег О1у РЪе Суз 15 РЪе
О1у Уа1 Ьуз Агд А1а Уа1 Азр О1и Зег Ьеи Ьуз Уа1 О1п Ьуз Ьуз РЪе
20 25 30
Азп Ьуз Ьуз 11е Туг ТЪг Ьеи О1у Рго Ьеи 11е Н1з Азп Зег Азр Уа1
35 40 45
Уа1 Азп Ьуз Ьеи Ьуз О1и Ьуз О1у 11е Туг Рго 11е О1и 11е Азр Азп
50 55 60
11е Азр Азп Ьеи Агд О1и Азр Азр Уа1 Уа1 11е 11е Агд Зег Н1з О1у
65 70 75 80
Уа1 Рго О1и Ьуз 11е РЪе РЪе ТЪг Ьеи Ьуз Азп Ьуз Ьуз 11е Азп 11е
85 90 95
Уа1 Азп А1а ТЪг Суз Рго Туг Уа1 Ьеи Азп 11е О1п Агд Ьуз Уа1 О1п
100 105 110
О1и Туг Туг Ьуз Ьеи О1у Туг Зег 11е Ьеи 11е Уа1 О1у Азр Ьуз Азп
115 120 125
Н1з Рго О1и Уа1 11е О1у 11е Азп О1у Тгр Суз О1и Азп Ьуз А1а Ьеи
130 135 140
11е Зег Ьуз Азр О1у ТЪг Азп Ьеи О1и Ьуз Ьеи Рго Зег Ьуз Ьеи Суз
145 150 155 160
11е Уа1 Зег О1п ТЪг ТЪг О1и Ьуз О1п Зег Азп Тгр О1и Ьуз Уа1 Ьеи
165 170 175
Зег 11е Уа1 А1а Ьуз Азп Суз Ьуз О1и РЪе 11е А1а РЪе Азп ТЪг 11е
- 52 028892
180 185 190
Суз Зег А1а ТЬг О1и РЬе Агд О1п Ьуз А1а А1а А1а Азр 11е Зег Ьуз
195 200 205
О1и Уа1 Азр МеЬ МеЬ Уа1 Уа1 11е О1у О1у Ьуз Азп Зег Зег Азп ТЬг
210 215 220
ТЬг Ьуз Ьеи Туг О1и 11е Суз Ьуз Азр Азп Суз Азп Азп ТЬг 11е Туг
225 230 235 240
ναι О1и Азп Зег С1у О1и 11е Рго Азр Азр 11е Зег Азп Суз Азп Ьуз
245 250 255
11е Ьуз ТЬг 11е С1у Уа1 ТЬг А1а О1у А1а Зег ТЬг Рго Азр Тгр 11е
260 265 270
11е Ьуз О1и А1а 11е Ьеи Ьуз МеЬ Зег Азр Азр Ьуз Азп Ьеи О1и Ьеи
275 280 285
Азп О1и О1п Ьеи Зег Туг МеЬ Азр Ьуз Азп Азр ТЬг О1п 11е 11е Ьеи
290 295 300
О1у О1и Ьуз 11е Ьуз О1у ТЬг Уа1 11е Зег Уа1 Азп Рго Ьуз О1и Уа1
305 310 315 320
РЬе Ьеи Азп 11е С1у Туг Ьуз Зег О1и О1у Уа1 Ьеи Рго Ьуз Агд О1и
325 330 335
11е ТЬг Ьуз Азп О1и Зег Азр Азп Ьеи О1и О1и Ьеи 11е Н1з Суз О1у
340 345 350
Азр О1и Ьеи Туг Уа1 Ьуз Уа1 11е Агд Агд О1п Азп О1и Азр О1у Туг
355 360 365
Уа1 Уа1 Ьеи Зег Ьуз 11е О1и Ьеи О1и Агд О1и Азп А1а Туг Ьуз О1и
370 375 380
Ьеи Ьуз О1и А1а Азп О1у Азп Зег О1п Уа1 Ьеи Ьуз Уа1 11е Уа1 Ьуз
385 390 395 400
О1и А1а Уа1 Азп О1у О1у Ьеи Уа1 А1а Азп Туг Ьуз О1у А1а Агд Уа1
405 410 415
РЬе 11е Рго А1а Зег Нтз Уа1 О1и Ьеи Туг Нтз Уа1 Азр Азр Ьеи Зег
420 425 430
- 53 028892
О1п Туг Уа1 435 Азр Ьуз О1и Ьеи Азр Уа1 440 ТЬг 11е 11е О1и 445 РЬе Ьуз О1и
О1и Ьуз Ьуз О1у ТЬг Агд 11е Уа1 А1а Зег Агд Агд Азр Ьеи Ьеи Агд
450 455 460
МеЕ О1и Агд О1и Ьуз МеЕ О1и О1и О1п ТЬг Тгр Азп Уа1 Ьеи О1и Ьуз
465 470 475 480
Азр ТЬг Уа1 Уа1 Азр О1у О1и Уа1 Агд Агд Ьеи ТЬг Азр РЬе О1у А1а
485 490 495
РЬе Уа1 Азр Уа1 О1п О1у Уа1 Азр О1у Ьеи Ьеи Н1з Уа1 Зег О1и Ьеи
500 505 510
Зег Тгр О1у Агд Уа1 О1у Ьуз Рго Зег Азр Уа1 Ьеи Ьуз 11е О1у Азр
515 520 525
ТЬг 11е Ьуз Уа1 Туг 11е Ьеи Азр 11е Азр Ьуз О1и Ьуз Ьуз Ьуз Ьеи
530 535 540
Зег Ьеи Зег Ьеи Ьуз Ьуз Ьеи МеЕ О1и Азр Рго Тгр 11е Азп Уа1 Азр
545 550 555 560
11е Ьуз Туг Рго Уа1 О1у Азп Уа1 Уа1 Ьеи О1у Ьуз Уа1 Уа1 Агд РЬе
565 570 575
А1а Азп РЬе О1у А1а РЬе Уа1 О1и Ьеи О1и Рго О1у Уа1 Азр А1а Ьеи
580 585 590
Уа1 Н1з 11е Зег О1п 11е Зег Н1з Ьуз Агд 11е Азр Ьуз Рго О1и Азр
595 600 605
Уа1 Ьеи Ьуз 11е О1у О1п О1и 11е Ьуз А1а Ьуз 11е Ьеи О1и Уа1 Азп
610 615 620
Ьуз Азр Зег О1и Ьуз 11е А1а Ьеи Зег 11е Ьуз О1и Уа1 Азр О1и 11е
625 630 635 640
<210> 15 <211> 882 <212> ДНК <213> С1озЕг10.1ит аиЕоеЕЬаподепит <400> 15
аЕддаааЕЕа ааддЕдЕааЕ ЕдааасаЕЕа адададдааЕ ЕдааЕаааЕа ссЕсЕаЕдас 60
ЕаЕаЕддадд дааааддаЕс ЕЕаЕааЕаад ададЕаЕаЕд аадсЕаЕдса дЕаЕадсЕЕа 120
даЕдсаддад дааададааЕ аадассЕсЕа сЕаЕЕЕсЕЕЕ ЕдасаЕаЕаа асЕЕЕаЕаад 180
- 54 028892
асадаббдса абдаддббаб ддабабадса дсадсбабад ааабдабаса сасббаббсс 240
ббааббсабд абдабббасс бдсбабддас аабдабдабб баадаадддд сааассбаса 300
аабсабаадд бабббддада адсбаббдсб дбасббдсдд дадабддасб бббааабдаа 360
дсаабдадбс бдабдбббад асасбдбабб дддааааадд абаасдсбаб аадддсббдб 420
адсаббаббб сбдааадбдс аддадсбдаб дддабддббд дсддасадас адбддабабб 480
ббаадбдааа асасбаадаб ассбабадаб садсбсбабб асабдсасад бааааааасд 540
ддадсдсбса бааааддабс бабаабабсб дсадсадбаб абдсдддадс аадбааадсб 600
дааабадаба ааббаадсба ббабддадаа аадббаддаб бддсабббса аабаааддаб 660
дабабаббдд абббаасадд адабасбдсб сббббаддба аааадабааа аадбдабсба 720
аабаабааса ааасбасабб бабаадбасб бабддаабаа абааабдсаа адааабдбдс 780
ааббсаабба саадбдаабд бабаддадба сбдаабддда бдадбдбада басббсббаб 840
сбаааадабб баасабсабб бббаббаааб ададаааадб да 882
<210> 16 <211> 293 <212> Белок <213> С1озбг1Шит аибоебЪаподепит <400> 16
Меб 1 О1и 11е Ьуз О1у Уа1 5 11е О1и ТЪг Ьеи Агд О1и О1и Ьеи Азп Ьуз
10 15
Туг Ьеи Туг Азр Туг Меб О1и О1у Ьуз О1у Бег Туг Азп Ьуз Агд Уа1
20 25 30
Туг О1и А1а Меб О1п Туг Бег Ьеи Азр А1а О1у О1у Ьуз Агд 11е Агд
35 40 45
Рго Ьеи Ьеи РЪе Ьеи Ьеи ТЪг Туг Ьуз Ьеи Туг Ьуз ТЪг Азр Суз Азп
50 55 60
О1и Уа1 Меб Азр 11е А1а А1а А1а 11е О1и Меб 11е Н1з ТЪг Туг Бег
65 70 75 80
Ьеи 11е Н1з Азр Азр Ьеи Рго А1а Меб Азр Азп Азр Азр Ьеи Агд Агд
85 90 95
О1у Ьуз Рго ТЪг Азп Н1з Ьуз Уа1 РЪе О1у О1и А1а 11е А1а Уа1 Ьеи
100 105 110
А1а О1у Азр О1у Ьеи Ьеи Азп О1и А1а Меб Бег Ьеи Меб РЪе Агд Нтз
115 120 125
- 55 028892
Суз 11е 130 О1у Ьуз Ьуз Азр Азп А1а 135 11е Агд А1а Суз 140 Зег 11е 11е Зег
О1и Зег А1а О1у А1а Азр О1у МеЕ Уа1 О1у О1у О1п ТЪг Уа1 Азр 11е
145 150 155 160
Ьеи Зег О1и Азп ТЪг Ьуз 11е Рго 11е Азр О1п Ьеи Туг Туг МеЕ Н1з
165 170 175
Зег Ьуз Ьуз ТЪг О1у А1а Ьеи 11е Ьуз О1у Зег 11е 11е Зег А1а А1а
180 185 190
Уа1 Туг А1а О1у А1а Зег Ьуз А1а О1и 11е Азр Ьуз Ьеи Зег Туг Туг
195 200 205
О1у О1и Ьуз Ьеи О1у Ьеи А1а РЪе О1п 11е Ьуз Азр Азр 11е Ьеи Азр
210 215 220
Ьеи ТЪг О1у Азр ТЪг А1а Ьеи Ьеи О1у Ьуз Ьуз 11е Ьуз Зег Азр Ьеи
225 230 235 240
Азп Азп Азп Ьуз ТЪг ТЪг РЪе 11е Зег ТЪг Туг О1у 11е Азп Ьуз Суз
245 250 255
Ьуз О1и МеЕ Суз Азп Зег 11е ТЪг Зег О1и Суз 11е О1у Уа1 Ьеи Азп
260 265 270
О1у МеЕ Зег Уа1 Азр ТЪг Зег Туг Ьеи Ьуз Азр Ьеи ТЪг Зег РЪе Ьеи
275 280 285
Ьеи Азп Агд О1и Ьуз 290 <210> 17 <211> 519 <212> ДНК <213> С1озЕг10пит аиЕоеЕЪаподепит <400> 17
аЕдааЕаааа сааддааааЕ ддЕЕЕЕЕЕЕа адсЕЕЕсЕаа саадЕаЕддс ЕЕЕадЕсаЕа 60
ЕасаЕааЕад ааасЕсаадЕ ЕссддЕЕЕЕа ЕЕЕсссддаа ЕааааЕЕадд асЕЕдсаааЕ 120
асааЕЕЕссс ЕадсЕдсасЕ ЕаЕасЕЕаЕа ддаЕддааад аадссЕЕасЕ ааЕЕаЕдЕЕЕ 180
ЕЕааддасдс ЕЕсЕаддаЕс ЕаЕдЕЕЕддЕ дддасааЕдЕ сЕассЕЕЕаЕ дЕЕсадсаЕа 240
дссддаддаа ЕЕЕЕаадЕаа саЕЕдЕЕаЕд аЕссЕЕсЕаЕ асаааЕаЕЕЕ ЕаааааЕЕсс 300
ЕЕаадЕсЕаЕ ддасЕаЕаад саЕаЕдсддд дсааЕаЕЕЕс асаасаЕадд ссаасЕЕЕЕа 360
- 56 028892
дбадсббсба бадбааббса адаббббадд абабасабаб абсбассддб дсббббаабс 420
бсбдсбабаа бсасаддаба сбббабаддб бддбдсдбда ааббссбаас баабаасбба 480
бабааааббс сбабдбббаа адааббаааа аабаадбаа 519
<210> 18 <211> 172 <212> Белок <213> С1озбг10.1ит аибоебЬаподепит <400> 18
Меб 1 Азп Ьуз ТЬг Агд 5 Ьуз Меб Уа1 РЬе Ьеи 10 Бег РЬе Ьеи ТЬг Бег 15 Меб
А1а Ьеи Уа1 11е Туг 11е 11е О1и ТЬг О1п Уа1 Рго Уа1 Ьеи РЬе Рго
20 25 30
О1у 11е Ьуз Ьеи О1у Ьеи А1а Азп ТЬг 11е Бег Ьеи А1а А1а Ьеи 11е
35 40 45
Ьеи 11е О1у Тгр Ьуз О1и А1а Ьеи Ьеи 11е Меб РЬе Ьеи Агд ТЬг Ьеи
50 55 60
Ьеи О1у Бег Меб РЬе О1у О1у ТЬг Меб Бег ТЬг РЬе Меб РЬе Бег 11е
65 70 75 80
А1а О1у О1у 11е Ьеи Бег Азп 11е Уа1 Меб 11е Ьеи Ьеи Туг Ьуз Туг
85 90 95
РЬе Ьуз Азп Бег Ьеи Бег Ьеи Тгр ТЬг 11е Бег 11е Суз О1у А1а 11е
100 105 110
РЬе Н1з Азп 11е О1у О1п Ьеи Ьеи Уа1 А1а Бег 11е Уа1 11е О1п Азр
115 120 125
РЬе Агд 11е Туг 11е Туг Ьеи Рго Уа1 Ьеи Ьеи 11е Бег А1а 11е 11е
130 135 140
ТЬг О1у Туг РЬе 11е О1у Тгр Суз Уа1 Ьуз РЬе Ьеи ТЬг Азп Азп Ьеи
145 150 155 160
Туг Ьуз 11е Рго Меб РЬе Ьуз О1и Ьеи Ьуз Азп Ьуз
165 170
<210> 19 <211> 825 <212> ДНК <213> С1озбг10.1ит аибоебЬаподепит
- 57 028892
<400> 19 аЕдаасЕЕсд аЕддааЕЕЕс ааЕЕссааЕа аЕаааадаас ЕЕааЕсаасЕ ЕдадЕЕадад 60
ЕЕааааааЕа ЕЕдсаЕсааа аЕЕадаЕЕсЕ асЕдЕЕасас аадаЕаЕЕЕЕ ЕассЕасЕЕЕ 120
ЕЕЕЕсааЕЕс саддЕаааад асЕаадассЕ асаЕЕаасаЕ ЕЕЕЕаЕсЕдс аддЕдсЕаЕЕ 180
адЕадсдадс ЕЕасЕЕсаЕс Едсаааасас аасЕЕааЕЕс адЕЕдЕсааЕ аадсЕЕадад 240
сЕЕаЕЕсаса дсдсЕадЕсЕ ааЕЕсаЕдаЕ даЕаЕсаЕад аЕддЕдасЕЕ асЕаадасдЕ 300
ддЕсадаааа ссЕЕаааЕаа дассЕЕЕдда ааЕааааЕад садЕасЕЕдс сддЕдаЕдсЕ 360
ЕЕдЕасЕсаа дддссЕЕЕас ЕаЕЕЕЕсЕса даЕасЕсЕдс саададааЕЕ ЕдсдсаддЕа 420
аЕдддсадад ЕЕасЕдааЕс ааЕдЕсЕдЕа дсЕдаааЕаЕ ЕаааЕдсЕаа сааЕсссЕсЕ 480
сссдаЕсдЕд ааассЕаЕЕЕ ЕааааЕсаЕс ЕЕаддааааа садсаЕсЕЕЕ саЕдадсдсЕ 540
ЕдЕЕдЕаддс ЕЕддЕддсад саЕадсЕЕаЕ дссссЕЕасд аададЕсЕаа ЕаЕдсЕЕЕсЕ 600
аааЕасддЕд аааассЕЕдд ЕаЕддсаЕаЕ саааЕасЕдд аЕдаЕЕаЕаЕ сдаЕдаддаЕ 660
сссдЕЕдсаа ЕдаааааЕдЕ аасЕаЕЕдаа дадддаЕЕЕд ааЕЕЕдсаЕа ЕааЕдссааа 720
дсЕЕсЕаЕЕд ааааЕЕЕааа адасЕсадса Еасааасааа дсЕЕааЕааЕ дЕЕадЕадас 780
ЕаЕдЕЕЕЕад аЕЕЕЕЕаЕад ЕссЕааддЕа дадааЕасаЕ ЕаЕад 825
<210> 20 <211> 274 <212> Белок <213> С1озЕг10.1ит аиЕоеЕЬаподепит.
<400> 20
МеЕ 1 Азп РЬе Азр О1у 5 11е Бег 11е Рго 11е 10 11е Ьуз О1и Ьеи Азп 15 О1п
Ьеи О1и Ьеи О1и 20 Ьеи Ьуз Азп 11е А1а 25 Бег Ьуз Ьеи Азр Бег 30 ТЬг Уа1
ТЬг О1п Азр 35 11е РЬе ТЬг Туг РЬе 40 РЬе Бег 11е Рго О1у 45 Ьуз Агд Ьеи
Агд Рго 50 ТЬг Ьеи ТЬг РЬе Ьеи 55 Бег А1а О1у А1а 11е 60 Бег Бег О1и Ьеи
ТЬг 65 Бег Бег А1а Ьуз Ηΐ3 70 Азп Ьеи 11е О1п Ьеи 75 Бег 11е Бег Ьеи О1и 80
Ьеи 11е Ηΐ3 Бег А1а 85 Бег Ьеи 11е Н1з Азр 90 Азр 11е 11е Азр О1у 95 Азр
Ьеи Ьеи Агд Агд О1у О1п Ьуз ТЬг Ьеи Азп Ьуз ТЬг РЬе О1у Азп Ьуз
- 58 028892
100 105 110
11е А1а Уа1 Ьеи А1а О1у Азр А1а Ьеи Туг Зег Агд А1а РЬе ТЬг 11е
115 120 125
РЬе Зег Азр ТЬг Ьеи Рго Агд О1и РЬе А1а О1п Уа1 МеЕ О1у Агд Уа1
130 135 140
ТЬг О1и Зег МеЕ Зег Уа1 А1а О1и 11е Ьеи Азп А1а Азп Азп Рго Зег
145 150 155 160
Рго Азр Агд О1и ТЬг Туг РЬе Ьуз 11е 11е Ьеи О1у Ьуз ТЬг А1а Зег
165 170 175
РЬе МеЕ Зег А1а Суз Суз Агд Ьеи О1у О1у Зег 11е А1а Туг А1а Рго
180 185 190
Туг О1и О1и Зег Азп МеЕ Ьеи Зег Ьуз Туг О1у О1и Азп Ьеи О1у МеЕ
195 200 205
А1а Туг С1п 11е Ьеи Азр Азр Туг 11е Азр О1и Азр Рго Уа1 А1а МеЕ
210 215 220
Ьуз Азп Уа1 ТЬг 11е О1и О1и О1у РЬе О1и РЬе А1а Туг Азп А1а Ьуз
225 230 235 240
А1а Зег 11е О1и Азп Ьеи Ьуз Азр Зег А1а Туг Ьуз О1п Зег Ьеи 11е
245 250 255
МеЕ Ьеи Уа1 Азр Туг Уа1 Ьеи Азр РЬе Туг Зег Рго Ьуз Уа1 О1и Азп
260 265 270
ТЬг Ьеи <210> 21 <211> 1797 <212> ДНК <213> Рори1из Егети1о1Ьез <400> 21
саЕаЕддсаа садааЕЕаЕЕ аЕдЕЕЕасас адассЕаЕаЕ сасЕЕасЕса сааасЕЕЕЕЕ 60
аддааЕссаЕ ЕассЕааадЕ ЕаЕЕсаадсЕ асассЕЕЕаа саЕЕаааасЕ ЕаддЕдЕадЕ 120
дЕЕЕсЕасад ааааЕдЕаЕс аЕЕЕадЕдад асадааасЕд ааасаадаад аЕсадсаааЕ 180
ЕаЕдаассаа аЕЕсЕЕддда ЕЕаЕдаЕЕаЕ сЕЕсЕЕЕсЕЕ сЕдаЕасЕда ЕдадЕсааЕа 240
даадЕасаЕа аадаЕааддс ЕаадаааЕЕа даадсЕдаад ЕЕаддадада ааЕаааЕааЕ 300
- 59 028892
дадааддсЬд ааЬЬЬсЬЬас асЬЬсЬЬдаа сЬЬаЬЬдаЬа аЬдЬасааад асЬЬддаЬЬа 360
ддаЬаЬадаЬ ЬЬдадЬсЬда ЬаЬаадаада дсаЬЬадаЬа даЬЬЬдЬаад ЬадЬддадда 420
ЬЬЬдаЬддад ЬЬасЬаааас ЬЬсаЬЬасаЬ ддаасадсаЬ ЬаЬсаЬЬЬад дЬЬаЬЬаадд 480
саасаЬддЬЬ ЬЬдаадЬаЬс ЬсаадаадсЬ ЬЬЬадЬддаЬ ЬЬааадаЬса дааЬддааас 540
ЬЬЬсЬЬдада аЬЬЬааадда адасаЬаааа дсааЬЬсЬЬЬ сЬсЬЬЬаЬда адсаЬсаЬЬЬ 600
ЬЬадсаЬЬад ааддЬдадаа ЬаЬаЬЬадаЬ даддсЬааад ЬаЬЬЬдсааЬ аЬсЬсаЬсЬЬ 660
ааадаасЬЬа дЬдаадаааа даЬЬддЬааа дааЬЬадсЬд аасаадЬЬЬс асаЬдсЬЬЬа 720
дааЬЬассаЬ ЬасаЬадаад аасасааада ЬЬадаадсад ЬЬЬддЬсааЬ адаадсаЬаЬ 780
адааадааад аадасдсааа ЬсаадЬасЬЬ ЬЬадаасЬЬд сааЬасЬЬда сЬасааЬаЬд 840
аЬЬсааадЬд ЬаЬаЬсадад ддаЬЬЬаада дааасаЬсаа даЬддЬддад аададЬадда 900
ЬЬадсаасЬа ааЬЬасаЬЬЬ ЬдсЬададаЬ аддсЬЬаЬЬд ааадЬЬЬЬЬа ЬЬдддсЬдЬЬ 960
ддадЬЬдсЬЬ ЬЬдаассаса аЬаЬЬсЬдаЬ ЬдсадаааЬа дЬдЬадсааа даЬдЬЬЬЬса 1020
ЬЬЬдЬЬасЬа ЬааЬЬдасда ЬаЬЬЬасдаЬ дЬаЬаЬддаа сЬЬЬадаЬда асЬЬдаасЬЬ 1080
ЬЬЬасЬдаЬд садЬЬдааад аЬдддаЬдЬа ааЬдсЬаЬЬа аЬдаЬсЬЬсс ЬдаЬЬаЬаЬд 1140
аадЬЬаЬдЬЬ ЬЬсЬЬдсасЬ ЬЬасааЬасЬ аЬЬаасдада ЬадсЬЬасда ЬаасЬЬаааа 1200
даЬаааддЬд адаасаЬасЬ ЬссЬЬаЬЬЬа асаааадсаЬ дддсадаЬЬЬ аЬдЬааЬдса 1260
ЬЬЬсЬЬсаад аадсЬаадЬд дсЬЬЬаЬааЬ аааЬсаасас сЬасаЬЬЬда ЬдаЬЬаЬЬЬЬ 1320
ддаааЬдсаЬ ддаааадЬЬс ЬадЬддассЬ ЬЬасадсЬЬа ЬЬЬЬЬдсЬЬа ЬЬЬЬдсЬдЬа 1380
дЬасадааса ЬЬааааадда ададаЬЬдад ааЬсЬЬсада ааЬаЬсаЬда саЬааЬаЬса 1440
адассЬадЬс асаЬЬЬЬЬад дсЬЬЬдЬааЬ даЬЬЬадсаЬ сЬдсЬЬсадс адаааЬадса 1500
ададдЬдааа сЬдсЬааЬЬс ЬдЬаадЬЬдЬ ЬаЬаЬдадаа сааааддЬаЬ аЬсЬдаадаа 1560
ЬЬадсЬасЬд ааадЬдЬЬаЬ дааЬсЬЬаЬа дасдааасЬЬ ддаадааааЬ даасааадаа 1620
ааасЬЬддЬд даЬсЬЬЬаЬЬ ЬдсаааассЬ ЬЬЬдЬЬдада сЬдсЬаЬааа ЬЬЬадсЬада 1680
садЬсЬсаЬЬ дсасаЬаЬса ЬааЬддЬдаЬ дсасаЬасЬа дЬссадаЬда аЬЬаасЬадд 1740
аааададЬас ЬЬадЬдЬааЬ аасЬдаасса аЬаЬЬассаЬ ЬЬдааадаЬа адааЬЬс 1797
<210> 22 <211> 617 <212> ДНК <213> С1озЬг10.1ит аиЬоеЬЬаподепит <400> 22
ддЬЬааЬдЬЬ аааааЬЬЬаЬ адЬаЬаасЬЬ ЬаааааасЬд ЬсЬЬааааад ЬЬдЬЬаЬаЬа 60
аааааЬдЬЬд асааЬЬааас адсЬаЬЬЬад Ьдсаааасаа ссаЬаааааЬ ЬЬааааааЬа 120
ссаЬаааЬЬа сЬЬдаааааЬ адЬЬдаЬааЬ ааЬдЬададЬ ЬаЬааасааа ддЬдаааадс 180
- 60 028892
аЁЁасЁЁдЁа ЁЁсЁЁЁЁЁЁа ЁаЁаЁЁаЁЁа ЁаааЁЁаааа ЁдаадсЁдЁа ЁЁадаааааа 240
ЁасасассЁд ЁааЁаЁаааа ЁЁЁЁаааЁЁа аЁЁЁЁЁааЁЁ ЁЁЁЁсааааЁ дЁаЁЁЁЁаса 300
ЁдЁЁЁадааЁ ЁЁЁдаЁдЁаЁ аЁЁааааЁад ЁадааЁасаЁ аадаЁасЁЁа аЁЁЁааЁЁаа 360
адаЁадЁЁаа дЁасЁЁЁЁса аЁдЁдсЁЁЁЁ ЁЁадаЁдЁЁЁ ааЁасаааЁс ЁЁЁааЁЁдЁа 420
ааадаааЁдс ЁдЁасЁаЁЁЁ асЁдЁасЁад ЁдасдддаЁЁ ааасЁдЁаЁЁ ааЁЁаЁаааЁ 480
ааааааЁаад ЁасадЁЁдЁЁ ЁааааЁЁаЁа ЁЁЁЁдЁаЁЁа ааЁсЁааЁад ЁасдаЁдЁаа 540
дЁЁаЁЁЁЁаЁ асЁаЁЁдсЁа дЁЁЁааЁааа аадаЁЁЁааЁ ЁаЁаЁасЁЁд ааааддадад 600
дааЁЁЁЁЁаЁ дсдЁааа 617
<210> 23 <211> 30 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность
<220> <223> олигонуклеотид Рр£ог-ЫоЁ1- -Р
<400> 23 аадсддссдс ааааЁадЁЁд аЁааЁааЁдс 30
<210> 24 <211> 30 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность
<220> <223> олигонуклеотид РрЁог-ΝάθΙ- -К
<400> 24 ЁасдсаЁаЁд ааЁЁссЁсЁс сЁЁЁЁсаадс 30
<210> 25 <211> 5345 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность
<220> <223> плазмида рМТЬ 1 35146-1зр5
<400> 25 ааЁЁсдадсЁ сддЁасссдд ддаЁссЁсЁа дадЁсдасдЁ сасдсдЁсса ЁддадаЁсЁс 60
даддссЁдса дасаЁдсаад сЁЁддсасЁд дссдЁсдЁЁЁ ЁасаасдЁсд ЁдасЁдддаа 120
аасссЁддсд ЁЁасссаасЁ ЁааЁсдссЁЁ дсадсасаЁс ссссЁЁЁсдс садсЁддсдЁ 180
ааЁадсдаад аддсссдсас сдаЁсдсссЁ ЁсссаасадЁ ЁдсдсадссЁ дааЁддсдаа 240
ЁддсдсЁадс аЁаааааЁаа даадссЁдса ЁЁЁдсаддсЁ ЁсЁЁаЁЁЁЁЁ аЁддсдсдсс 300
дсаЁЁсасЁЁ сЁЁЁЁсЁаЁа ЁаааЁаЁдад сдаадсдааЁ аадсдЁсдда ааадсадсаа 360
ааадЁЁЁссЁ ЁЁЁЁдсЁдЁЁ ддадсаЁддд ддЁЁсадддд дЁдсадЁаЁс ЁдасдЁсааЁ 420
- 61 028892
дссдадсдаа адсдадссда адддЁадсаЁ ЁЁасдЁЁада ЁаасссссЁд аЁаЁдсЁссд 480
асдсЁЁЁаЁа Ёадаааадаа даЁЁсаасЁа ддЁааааЁсЁ ЁааЁаЁаддЁ ЁдадаЁдаЁа 540
аддЁЁЁаЁаа ддааЁЁЁдЁЁ ЁдЁЁсЁааЁЁ ЁЁЁсасЁсаЁ ЁЁЁдЁЁсЁаа ЁЁЁсЁЁЁЁаа 600
саааЁдЁЁсЁ ЁЁЁЁЁЁЁЁЁа даасадЁЁаЁ даЁаЁадЁЁа дааЁадЁЁЁа аааЁааддад 660
Ёдадааааад аЁдааадааа даЁаЁддаас адЁсЁаЁааа ддсЁсЁсада ддсЁсаЁада 720
сдаадааадЁ ддадаадЁса ЁададдЁада саадЁЁаЁас сдЁааасааа сдЁсЁддЁаа 780
сЁЁсдЁааад дсаЁаЁаЁад ЁдсааЁЁааЁ аадЁаЁдЁЁа даЁаЁдаЁЁд дсддаааааа 840
асЁЁааааЁс дЁЁаасЁаЁа ЁссЁадаЁаа ЁдЁссасЁЁа адЁаасааЁа сааЁдаЁадс 900
Ёасаасаада даааЁадсаа аадсЁасадд аасаадЁсЁа сааасадЁаа ЁаасаасасЁ 960
ЁааааЁсЁЁа даадааддаа аЁаЁЁаЁааа аадааааасЁ ддадЁаЁЁаа ЁдЁЁааассс 1020
ЁдаасЁасЁа аЁдададдсд асдассаааа асаааааЁас сЁсЁЁасЁсд ааЁЁЁдддаа 1080
сЁЁЁдадсаа даддсаааЁд аааЁадаЁЁд ассЁсссааЁ аасассасдЁ адЁЁаЁЁддд 1140
аддЁсааЁсЁ аЁдаааЁдсд аЁЁаадддсс ддссадЁддд саадЁЁдааа ааЁЁсасааа 1200
ааЁдЁддЁаЁ ааЁаЁсЁЁЁд ЁЁсаЁЁадад сдаЁааасЁЁ дааЁЁЁдада дддаасЁЁад 1260
аЁддЁаЁЁЁд ааааааЁЁда ЁаааааЁадЁ Ёддаасадаа аададЁаЁЁЁ ЁдассасЁас 1320
ЁЁЁдсаадЁд ЁассЁЁдЁас сЁасадсаЁд ассдЁЁааад ЁддаЁаЁсас асаааЁааад 1380
даааадддаа ЁдааасЁаЁа ЁссЁдсааЁд сЁЁЁаЁЁаЁа ЁЁдсааЁдаЁ ЁдЁааассдс 1440
саЁЁсададЁ ЁЁаддасддс ааЁсааЁсаа даЁддЁдааЁ ЁддддаЁаЁа ЁдаЁдадаЁд 1500
аЁассаадсЁ аЁасааЁаЁЁ ЁсасааЁдаЁ асЁдааасаЁ ЁЁЁссадссЁ ЁЁддасЁдад 1560
ЁдЁаадЁсЁд асЁЁЁаааЁс аЁЁЁЁЁадса даЁЁаЁдааа дЁдаЁасдса асддЁаЁдда 1620
аасааЁсаЁа дааЁддаадд ааадссаааЁ дсЁссддааа асаЁЁЁЁЁаа ЁдЁаЁсЁаЁд 1680
аЁассдЁддЁ саассЁЁсда ЁддсЁЁЁааЁ сЁдааЁЁЁдс адаааддаЁа ЁдаЁЁаЁЁЁд 1740
аЁЁссЁаЁЁЁ ЁЁасЁаЁддд даааЁаЁЁаЁ ааадаадаЁа асааааЁЁаЁ асЁЁссЁЁЁд 1800
дсааЁЁсаад ЁЁсаЁсасдс адЁаЁдЁдас ддаЁЁЁсаса ЁЁЁдссдЁЁЁ ЁдЁааасдаа 1860
ЁЁдсаддааЁ ЁдаЁаааЁад ЁЁаасЁЁсад дЁЁЁдЁсЁдЁ аасЁааааас аадЁаЁЁЁаа 1920
дсааааасаЁ сдЁадаааЁа сддЁдЁЁЁЁЁ ЁдЁЁасссЁа адЁЁЁааасЁ ссЁЁЁЁЁдаЁ 1980
ааЁсЁсаЁда ссааааЁссс ЁЁаасдЁдад ЁЁЁЁсдЁЁсс асЁдадсдЁс адассссдЁа 2040
даааадаЁса ааддаЁсЁЁс ЁЁдадаЁссЁ ЁЁЁЁЁЁсЁдс дсдЁааЁсЁд сЁдсЁЁдсаа 2100
асааааааас сассдсЁасс адсддЁддЁЁ ЁдЁЁЁдссдд аЁсаададсЁ ассаасЁсЁЁ 2160
ЁЁЁссдаадд ЁаасЁддсЁЁ садсададсд садаЁассаа аЁасЁдЁЁсЁ ЁсЁадЁдЁад 2220
ссдЁадЁЁад дссассасЁЁ саадаасЁсЁ дЁадсассдс сЁасаЁассЁ сдсЁсЁдсЁа 2280
- 62 028892
абссбдббас садбддсбдс бдссадбддс дабаадбсдб дбсббассдд дббддасбса 2340
адасдабадб бассддабаа ддсдсадсдд бсдддсбдаа сддддддббс дбдсасасад 2400
сссадсббдд адсдаасдас сбасассдаа сбдадабасс басадсдбда дсбабдадаа 2460
адсдссасдс ббсссдаадд дадаааддсд дасаддбабс сддбаадсдд садддбсдда 2520
асаддададс дсасдаддда дсббссаддд ддааасдссб ддбабсббба бадбссбдбс 2580
дддбббсдсс ассбсбдасб бдадсдбсда бббббдбдаб дсбсдбсадд ддддсддадс 2640
сбабддаааа асдссадсаа сдсддссббб ббасддббсс бддссббббд сбддссбббб 2700
дсбсасабдб бсбббссбдс дббабссссб даббсбдбдд абаассдбаб бассдссббб 2760
дадбдадсбд абассдсбсд ссдсадссда асдассдадс дсадсдадбс адбдадсдад 2820
даадсддаад адсдсссааб асдсадддсс сссбдсадда бааааааабб дбадабаааб 2880
бббабааааб адббббабсб асаабббббб бабсаддааа садсбабдас сдсддссдсд 2940
дббаабдбба аааабббаба дбабаасббб аааааасбдб сббааааадб бдббабабаа 3000
аааабдббда сааббаааса дсбабббадб дсаааасаас сабааааабб баааааабас 3060
сабаааббас ббдаааааба дббдабааба абдбададбб абааасааад дбдаааадса 3120
ббасббдбаб бсббббббаб абаббаббаб аааббааааб даадсбдбаб бадааааааб 3180
асасассбдб аабабааааб бббаааббаа бббббааббб бббсаааабд баббббасаб 3240
дбббадаабб ббдабдбаба ббаааабадб адаабасаба адабасббаа бббааббааа 3300
дабадббаад басббббсаа бдбдсббббб бадабдббба абасааабсб ббааббдбаа 3360
аадааабдсб дбасбаббба сбдбасбадб дасдддабба аасбдбабба аббабаааба 3420
ааааабаадб асадббдббб ааааббабаб бббдбаббаа абсбаабадб асдабдбаад 3480
ббаббббаба сбаббдсбад бббаабаааа адабббаабб абабасббда аааддададд 3540
аабббббабд сдбсабабдд саасадаабб аббабдббба сасадассба бабсасббас 3600
бсасааасбб бббаддаабс саббассбаа адббаббсаа дсбасассбб баасаббааа 3660
асббаддбдб адбдбббсба садаааабдб абсабббадб дадасадааа сбдааасаад 3720
аадабсадса ааббабдаас саааббсббд ддаббабдаб бабсббсббб сббсбдабас 3780
бдабдадбса абадаадбас абааадабаа ддсбаадааа ббадаадсбд аадббаддад 3840
адааабаааб аабдадаадд сбдаабббсб басасббсбб даасббаббд абаабдбаса 3900
аадасббдда ббаддабаба дабббдадбс бдабабаада ададсаббад абадабббдб 3960
аадбадбдда ддабббдабд дадббасбаа аасббсабба сабддаасад саббабсабб 4020
баддббабба аддсаасабд дббббдаадб абсбсаадаа дсббббадбд дабббааада 4080
бсадаабдда аасбббсббд адаабббааа ддаадасаба ааадсааббс бббсбсббба 4140
бдаадсабса бббббадсаб бадааддбда даабабабба дабдаддсба аадбабббдс 4200
- 63 028892
аабабсбсаб сббааадаас ббадбдаада ааадаббддб ааадааббад сбдаасаадб 4260
ббсасабдсб ббадааббас саббасабад аадаасасаа адаббадаад садбббддбс 4320
аабадаадса бабадааада аадаадасдс ааабсаадба сббббадаас ббдсаабасб 4380
бдасбасааб абдаббсааа дбдбабабса дадддаббба ададааасаб саадабддбд 4440
дадаададба ддаббадсаа сбаааббаса ббббдсбада дабаддсбба ббдааадббб 4500
ббаббдддсб дббддадббд сббббдаасс асаабаббсб даббдсадаа абадбдбадс 4560
ааадабдббб бсабббдбба сбабааббда сдабабббас дабдбабабд даасбббада 4620
бдаасббдаа сбббббасбд абдсадббда аадабдддаб дбааабдсба ббаабдабсб 4680
бссбдаббаб абдаадббаб дббббсббдс асбббасааб асбаббаасд адабадсбба 4740
сдабаасбба ааадабааад дбдадаасаб асббссббаб ббаасаааад сабдддсада 4800
бббабдбааб дсабббсббс аадаадсбаа дбддсбббаб аабааабсаа сассбасабб 4860
бдабдаббаб бббддааабд сабддаааад ббсбадбдда ссбббасадс ббабббббдс 4920
ббаббббдсб дбадбасада асаббааааа ддаададабб дадаабсббс адааабабса 4980
бдасабааба бсаадассба дбсасабббб баддсбббдб аабдабббад сабсбдсббс 5040
адсадаааба дсаададдбд ааасбдсбаа ббсбдбаадб бдббабабда даасаааадд 5100
бабабсбдаа дааббадсба сбдааадбдб бабдаабсбб абадасдааа сббддаадаа 5160
аабдаасааа дааааасббд дбддабсббб абббдсаааа ссббббдббд адасбдсбаб 5220
ааабббадсб адасадбсбс аббдсасаба бсабаабддб дабдсасаба сбадбссада 5280
бдааббаасб аддаааадад басббадбдб аабаасбдаа ссаабаббас сабббдааад 5340
абаад 5345
<210> 26
<211> 26
<212> ДНК
<213> Синтетическая последовательность
<220>
<223> олигонуклеотид 141-СЬе1-5ас1-Р
<400> 26
дбдадсбсда ааддддаааб бааабд 26
<210> 27
<211> 27
<212> ДНК
<213> Синтетическая последовательность
<220>
<223> олигонуклеотид 141-СЬе1-Крп1-К
<400> 27
- 64 028892 абддбасссс ааабсбббаб ббадасд 27 <210> 28 <211> 5905 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ85246-1зрБ-1Ш
<400> 28 ссддддабсс бсбададбсд асдбсасдсд бссабддада бсбсдаддсс бдсадасабд 60
саадсббддс асбддссдбс дббббасаас дбсдбдасбд ддаааасссб ддсдббассс 120
аасббаабсд ссббдсадса сабсссссбб бсдссадсбд дсдбаабадс даададдссс 180
дсассдабсд сссббсссаа садббдсдса дссбдаабдд сдаабддсдс бадсабаааа 240
абаадаадсс бдсабббдса ддсббсббаб ббббабддсд сдссдсаббс асббсббббс 300
бабабаааба бдадсдаадс даабаадсдб сддаааадса дсааааадбб бссбббббдс 360
бдббддадса бдддддббса дддддбдсад бабсбдасдб саабдссдад сдааадсдад 420
ссдаадддба дсабббасдб бадабаассс ссбдабабдс бссдасдсбб бабабадааа 480
адаадаббса асбаддбааа абсббаабаб аддббдадаб дабааддббб абааддаабб 540
бдбббдббсб аабббббсас бсаббббдбб сбаабббсбб ббаасааабд ббсббббббб 600
бббадаасад ббабдабаба дббадаабад бббаааабаа ддадбдадаа ааадабдааа 660
дааадабабд даасадбсба баааддсбсб сададдсбса бадасдаада аадбддадаа 720
дбсабададд бадасаадбб абассдбааа сааасдбсбд дбаасббсдб аааддсабаб 780
абадбдсааб баабаадбаб дббадабабд аббддсддаа ааааасббаа аабсдббаас 840
бабабссбад абаабдбсса сббаадбаас аабасаабда бадсбасаас аададаааба 900
дсаааадсба саддаасаад бсбасаааса дбаабаасаа сасббааааб сббадаадаа 960
ддааабабба бааааадааа аасбддадба ббаабдббаа асссбдаасб асбаабдада 1020
ддсдасдасс ааааасаааа абассбсбба сбсдаабббд ддаасбббда дсаададдса 1080
аабдааабад аббдассбсс саабаасасс асдбадббаб бдддаддбса абсбабдааа 1140
бдсдаббаад ддссддссад бдддсаадбб даааааббса сааааабдбд дбабаабабс 1200
бббдббсабб ададсдабаа асббдааббб дададддаас ббадабддба бббдаааааа 1260
ббдабааааа бадббддаас адаааададб аббббдасса сбасбббдса адбдбассбб 1320
дбассбасад сабдассдбб ааадбддаба бсасасаааб аааддаааад ддаабдааас 1380
бабабссбдс аабдсбббаб бабаббдсаа бдаббдбааа ссдссаббса дадбббадда 1440
сддсаабсаа бсаадабддб дааббдддда бабабдабда дабдабасса адсбабасаа 1500
бабббсасаа бдабасбдаа асаббббсса дссбббддас бдадбдбаад бсбдасббба 1560
- 65 028892
ааЬсаЬЬЬЬЬ адсадаЬЬаЬ дааадЬдаЬа сдсаасддЬа ЬддааасааЬ саЬадааЬдд 1620
ааддааадсс аааЬдсЬссд даааасаЬЬЬ ЬЬааЬдЬаЬс ЬаЬдаЬассд ЬддЬсаассЬ 1680
ЬсдаЬддсЬЬ ЬааЬсЬдааЬ ЬЬдсадааад даЬаЬдаЬЬа ЬЬЬдаЬЬссЬ аЬЬЬЬЬасЬа 1740
ЬддддаааЬа ЬЬаЬааадаа даЬаасаааа ЬЬаЬасЬЬсс ЬЬЬддсааЬЬ саадЬЬсаЬс 1800
асдсадЬаЬд ЬдасддаЬЬЬ сасаЬЬЬдсс дЬЬЬЬдЬааа сдааЬЬдсад дааЬЬдаЬаа 1860
аЬадЬЬаасЬ ЬсаддЬЬЬдЬ сЬдЬаасЬаа ааасаадЬаЬ ЬЬаадсаааа асаЬсдЬада 1920
ааЬасддЬдЬ ЬЬЬЬЬдЬЬас ссЬаадЬЬЬа аасЬссЬЬЬЬ ЬдаЬааЬсЬс аЬдассаааа 1980
ЬсссЬЬаасд ЬдадЬЬЬЬсд ЬЬссасЬдад сдЬсадассс сдЬадаааад аЬсаааддаЬ 2040
сЬЬсЬЬдада ЬссЬЬЬЬЬЬЬ сЬдсдсдЬаа ЬсЬдсЬдсЬЬ дсааасаааа ааассассдс 2100
ЬассадсддЬ ддЬЬЬдЬЬЬд ссддаЬсаад адсЬассаас ЬсЬЬЬЬЬссд ааддЬаасЬд 2160
дсЬЬсадсад адсдсадаЬа ссаааЬасЬд ЬЬсЬЬсЬадЬ дЬадссдЬад ЬЬаддссасс 2220
асЬЬсаадаа сЬсЬдЬадса ссдссЬасаЬ ассЬсдсЬсЬ дсЬааЬссЬд ЬЬассадЬдд 2280
сЬдсЬдссад ЬддсдаЬаад ЬсдЬдЬсЬЬа ссдддЬЬдда сЬсаадасда ЬадЬЬассдд 2340
аЬааддсдса дсддЬсдддс Ьдаасддддд дЬЬсдЬдсас асадсссадс ЬЬддадсдаа 2400
сдассЬасас сдаасЬдада ЬассЬасадс дЬдадсЬаЬд адааадсдсс асдсЬЬсссд 2460
аадддадааа ддсддасадд ЬаЬссддЬаа дсддсадддЬ сддаасадда дадсдсасда 2520
дддадсЬЬсс адддддааас дссЬддЬаЬс ЬЬЬаЬадЬсс ЬдЬсдддЬЬЬ сдссассЬсЬ 2580
дасЬЬдадсд ЬсдаЬЬЬЬЬд ЬдаЬдсЬсдЬ саддддддсд дадссЬаЬдд ааааасдсса 2640
дсаасдсддс сЬЬЬЬЬасдд ЬЬссЬддссЬ ЬЬЬдсЬддсс ЬЬЬЬдсЬсас аЬдЬЬсЬЬЬс 2700
сЬдсдЬЬаЬс сссЬдаЬЬсЬ дЬддаЬаасс дЬаЬЬассдс сЬЬЬдадЬда дсЬдаЬассд 2760
сЬсдссдсад ссдаасдасс дадсдсадсд адЬсадЬдад сдаддаадсд даададсдсс 2820
сааЬасдсад ддсссссЬдс аддаЬааааа ааЬЬдЬадаЬ аааЬЬЬЬаЬа аааЬадЬЬЬЬ 2880
аЬсЬасааЬЬ ЬЬЬЬЬаЬсад дааасадсЬа Ьдассдсддс сдсддЬЬааЬ дЬЬаааааЬЬ 2940
ЬаЬадЬаЬаа сЬЬЬаааааа сЬдЬсЬЬааа аадЬЬдЬЬаЬ аЬааааааЬд ЬЬдасааЬЬа 3000
аасадсЬаЬЬ ЬадЬдсаааа саассаЬааа ааЬЬЬааааа аЬассаЬааа ЬЬасЬЬдааа 3060
ааЬадЬЬдаЬ ааЬааЬдЬад адЬЬаЬааас аааддЬдааа адсаЬЬасЬЬ дЬаЬЬсЬЬЬЬ 3120
ЬЬаЬаЬаЬЬа ЬЬаЬаааЬЬа аааЬдаадсЬ дЬаЬЬадааа аааЬасасас сЬдЬааЬаЬа 3180
аааЬЬЬЬааа ЬЬааЬЬЬЬЬа аЬЬЬЬЬЬсаа ааЬдЬаЬЬЬЬ асаЬдЬЬЬад ааЬЬЬЬдаЬд 3240
ЬаЬаЬЬаааа ЬадЬадааЬа саЬаадаЬас ЬЬааЬЬЬааЬ ЬааадаЬадЬ ЬаадЬасЬЬЬ 3300
ЬсааЬдЬдсЬ ЬЬЬЬЬадаЬд ЬЬЬааЬасаа аЬсЬЬЬааЬЬ дЬаааадааа ЬдсЬдЬасЬа 3360
ЬЬЬасЬдЬас ЬадЬдасддд аЬЬааасЬдЬ аЬЬааЬЬаЬа ааЬааааааЬ аадЬасадЬЬ 3420
- 66 028892
дбббаааабб абаббббдба ббааабсбаа бадбасдабд баадббаббб бабасбаббд 3480
сбадбббааб ааааадаббб ааббабабас ббдаааадда даддаабббб бабдсдбсаб 3540
абддсаасад ааббаббабд бббасасада ссбабабсас ббасбсасаа асбббббадд 3600
аабссаббас сбааадббаб бсаадсбаса ссбббаасаб баааасббад дбдбадбдбб 3660
бсбасадааа абдбабсабб бадбдадаса дааасбдааа саадаадабс адсаааббаб 3720
даассааабб сббдддабба бдаббабсбб сбббсббсбд абасбдабда дбсаабадаа 3780
дбасабааад абааддсбаа даааббадаа дсбдаадбба ддададаааб ааабаабдад 3840
ааддсбдааб ббсббасасб бсббдаасбб аббдабаабд басааадасб бддаббадда 3900
бабадабббд адбсбдабаб аадаададса ббадабадаб ббдбаадбад бддаддаббб 3960
дабддадбба сбаааасббс аббасабдда асадсаббаб сабббаддбб аббааддсаа 4020
сабддббббд аадбабсбса адаадсбббб адбддаббба аадабсадаа бддааасббб 4080
сббдадаабб баааддаада сабаааадса аббсбббсбс бббабдаадс абсаббббба 4140
дсаббадаад дбдадаабаб аббадабдад дсбааадбаб ббдсаабабс бсабсббааа 4200
даасббадбд аадаааадаб бддбааадаа ббадсбдаас аадбббсаса бдсбббадаа 4260
ббассаббас абадаадаас асааадабба даадсадббб ддбсаабада адсабабада 4320
аадааадаад асдсааабса адбасбббба даасббдсаа басббдасба саабабдабб 4380
сааадбдбаб абсададдда бббаададаа асабсаадаб ддбддадаад адбаддабба 4440
дсаасбаааб басаббббдс бададабадд сббаббдааа дбббббаббд ддсбдббдда 4500
дббдсббббд аассасааба ббсбдаббдс адааабадбд бадсааадаб дббббсаббб 4560
дббасбабаа ббдасдабаб ббасдабдба бабддаасбб бадабдаасб бдаасббббб 4620
асбдабдсад ббдааадабд ддабдбаааб дсбаббаабд абсббссбда ббабабдаад 4680
ббабдббббс ббдсасббба саабасбабб аасдадабад сббасдабаа сббаааадаб 4740
аааддбдада асабасббсс ббабббааса ааадсабддд садабббабд баабдсаббб 4800
сббсаадаад сбаадбддсб ббабаабааа бсаасассба сабббдабда ббаббббдда 4860
аабдсабдда ааадббсбад бддассббба садсббаббб ббдсббаббб бдсбдбадба 4920
садаасабба ааааддаада даббдадааб сббсадаааб абсабдасаб аабабсаада 4980
ссбадбсаса бббббаддсб ббдбаабдаб ббадсабсбд сббсадсада аабадсаада 5040
ддбдааасбд сбааббсбдб аадббдббаб абдадаасаа ааддбабабс бдаадаабба 5100
дсбасбдааа дбдббабдаа бсббабадас дааасббдда адаааабдаа сааадааааа 5160
сббддбддаб сбббабббдс аааассбббб дббдадасбд сбабаааббб адсбадасад 5220
бсбсаббдса сабабсабаа бддбдабдса сабасбадбс садабдаабб аасбаддааа 5280
ададбасбба дбдбаабаас бдаассааба ббассабббд ааадабаада аббсдадсбс 5340
- 67 028892
даааддддаа аббааабддс адаабабаба абадсбдбад абдаабббда баасдаааба 5400
ддббсааббд аааааабдда ддсбсассдб аааддаасаб басабададс бббббсбаба 5460
ббадбаббба аббсбааааа бсааббдбба ббасадаааа дааабдбааа аааабабсаб 5520
бсдссбддбс бсбддасааа басдбдсбдб адбсабссаа дабасддбда аадбббасаб 5580
дабдсдаббб абадааддсб бааддаадаа абдддбббба сабдбдаасб бдаадаадба 5640
бббадбббба бббабааадб аааасббдаа дабаабсббб ббдаааабда абабдабсаб 5700
дбаббсаббд ддааабабда бддадаааба аббдбаааса аадабдаадб адабдабббб 5760
аадбдддббд абаббаабда ддббаадаад дабаббабад аааддссада адсабасасб 5820
баббддббса адбабббадб баабааддса даааасаааа бабббаааба адбаадаабб 5880
бсдбсбаааб ааадабббдд ддбас 5905
<210> 29 <211> 29 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Бхз-БаИ-Р <400> 29 дсадбсдасб ббаббааадд дабадабаа 29 <210> 30 <211> 31 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Рхз-ХЬо1-К <400> 30 бдсбсдадбб аааабабабд асббассбсб д 31 <210> 31 <211> 7784 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ85246-1зрБ-1Й1-Эхз <400> 31
бсдаддссбд садасабдса адсббддсас бддссдбсдб бббасаасдб сдбдасбддд 60
аааасссбдд сдббасссаа сббаабсдсс ббдсадсаса бсссссбббс дссадсбддс 120
дбаабадсда ададдсссдс ассдабсдсс сббсссааса дббдсдсадс сбдаабддсд 180
аабддсдсба дсабаааааб аадаадссбд сабббдсадд сббсббаббб ббабддсдсд 240
- 68 028892
ссдсаЬЬсас ЬЬсЬЬЬЬсЬа ЬаЬаааЬаЬд адсдаадсда аЬаадсдЬсд даааадсадс 300
ааааадЬЬЬс сЬЬЬЬЬдсЬд ЬЬддадсаЬд ддддЬЬсадд дддЬдсадЬа ЬсЬдасдЬса 360
аЬдссдадсд ааадсдадсс даадддЬадс аЬЬЬасдЬЬа даЬаассссс ЬдаЬаЬдсЬс 420
сдасдсЬЬЬа ЬаЬадаааад аадаЬЬсаас ЬаддЬааааЬ сЬЬааЬаЬад дЬЬдадаЬда 480
ЬааддЬЬЬаЬ ааддааЬЬЬд ЬЬЬдЬЬсЬаа ЬЬЬЬЬсасЬс аЬЬЬЬдЬЬсЬ ааЬЬЬсЬЬЬЬ 540
аасаааЬдЬЬ сЬЬЬЬЬЬЬЬЬ ЬадаасадЬЬ аЬдаЬаЬадЬ ЬадааЬадЬЬ ЬааааЬаадд 600
адЬдадаааа адаЬдааада аадаЬаЬдда асадЬсЬаЬа ааддсЬсЬса даддсЬсаЬа 660
дасдаадааа дЬддадаадЬ саЬададдЬа дасаадЬЬаЬ ассдЬаааса аасдЬсЬддЬ 720
аасЬЬсдЬаа аддсаЬаЬаЬ адЬдсааЬЬа аЬаадЬаЬдЬ ЬадаЬаЬдаЬ Ьддсддаааа 780
ааасЬЬаааа ЬсдЬЬаасЬа ЬаЬссЬадаЬ ааЬдЬссасЬ ЬаадЬаасаа ЬасааЬдаЬа 840
дсЬасаасаа дадаааЬадс аааадсЬаса ддаасаадЬс ЬасааасадЬ ааЬаасааса 900
сЬЬааааЬсЬ Ьадаадаадд аааЬаЬЬаЬа аааадааааа сЬддадЬаЬЬ ааЬдЬЬааас 960
ссЬдаасЬас ЬааЬдададд сдасдассаа ааасаааааЬ ассЬсЬЬасЬ сдааЬЬЬддд 1020
аасЬЬЬдадс аададдсааа ЬдаааЬадаЬ ЬдассЬссса аЬаасассас дЬадЬЬаЬЬд 1080
ддаддЬсааЬ сЬаЬдаааЬд сдаЬЬааддд ссддссадЬд ддсаадЬЬда ааааЬЬсаса 1140
ааааЬдЬддЬ аЬааЬаЬсЬЬ ЬдЬЬсаЬЬад адсдаЬааас ЬЬдааЬЬЬда дадддаасЬЬ 1200
адаЬддЬаЬЬ ЬдааааааЬЬ даЬаааааЬа дЬЬддаасад аааададЬаЬ ЬЬЬдассасЬ 1260
асЬЬЬдсаад ЬдЬассЬЬдЬ ассЬасадса ЬдассдЬЬаа адЬддаЬаЬс асасаааЬаа 1320
аддааааддд ааЬдааасЬа ЬаЬссЬдсаа ЬдсЬЬЬаЬЬа ЬаЬЬдсааЬд аЬЬдЬааасс 1380
дссаЬЬсада дЬЬЬаддасд дсааЬсааЬс аадаЬддЬда аЬЬддддаЬа ЬаЬдаЬдада 1440
ЬдаЬассаад сЬаЬасааЬа ЬЬЬсасааЬд аЬасЬдааас аЬЬЬЬссадс сЬЬЬддасЬд 1500
адЬдЬаадЬс ЬдасЬЬЬааа ЬсаЬЬЬЬЬад садаЬЬаЬда аадЬдаЬасд саасддЬаЬд 1560
дааасааЬса ЬадааЬддаа ддааадссаа аЬдсЬссдда ааасаЬЬЬЬЬ ааЬдЬаЬсЬа 1620
ЬдаЬассдЬд дЬсаассЬЬс даЬддсЬЬЬа аЬсЬдааЬЬЬ дсадааадда ЬаЬдаЬЬаЬЬ 1680
ЬдаЬЬссЬаЬ ЬЬЬЬасЬаЬд дддаааЬаЬЬ аЬааадаада ЬаасааааЬЬ аЬасЬЬссЬЬ 1740
ЬддсааЬЬса адЬЬсаЬсас дсадЬаЬдЬд асддаЬЬЬса саЬЬЬдссдЬ ЬЬЬдЬааасд 1800
ааЬЬдсадда аЬЬдаЬаааЬ адЬЬаасЬЬс аддЬЬЬдЬсЬ дЬаасЬаааа асаадЬаЬЬЬ 1860
аадсааааас аЬсдЬадааа ЬасддЬдЬЬЬ ЬЬЬдЬЬассс ЬаадЬЬЬааа сЬссЬЬЬЬЬд 1920
аЬааЬсЬсаЬ дассааааЬс ссЬЬаасдЬд адЬЬЬЬсдЬЬ ссасЬдадсд Ьсадассссд 1980
ЬадаааадаЬ саааддаЬсЬ ЬсЬЬдадаЬс сЬЬЬЬЬЬЬсЬ дсдсдЬааЬс ЬдсЬдсЬЬдс 2040
ааасаааааа ассассдсЬа ссадсддЬдд ЬЬЬдЬЬЬдсс ддаЬсаадад сЬассаасЬс 2100
ЬЬЬЬЬссдаа ддЬаасЬддс ЬЬсадсадад сдсадаЬасс аааЬасЬдЬЬ сЬЬсЬадЬдЬ 2160
- 69 028892
адссдЁадЁЁ аддссассас ЁЁсаадаасЁ сЁдЁадсасс дссЁасаЁас сЁсдсЁсЁдс 2220
ЁааЁссЁдЁЁ ассадЁддсЁ дсЁдссадЁд дсдаЁаадЁс дЁдЁсЁЁасс дддЁЁддасЁ 2280
саадасдаЁа дЁЁассддаЁ ааддсдсадс ддЁсдддсЁд аасддддддЁ ЁсдЁдсасас 2340
адсссадсЁЁ ддадсдаасд ассЁасассд аасЁдадаЁа ссЁасадсдЁ дадсЁаЁдад 2400
ааадсдссас дсЁЁсссдаа дддадааадд сддасаддЁа ЁссддЁаадс ддсадддЁсд 2460
даасаддада дсдсасдадд дадсЁЁссад ддддааасдс сЁддЁаЁсЁЁ ЁаЁадЁссЁд 2520
ЁсдддЁЁЁсд ссассЁсЁда сЁЁдадсдЁс даЁЁЁЁЁдЁд аЁдсЁсдЁса ддддддсдда 2580
дссЁаЁддаа ааасдссадс аасдсддссЁ ЁЁЁЁасддЁЁ ссЁддссЁЁЁ ЁдсЁддссЁЁ 2640
ЁЁдсЁсасаЁ дЁЁсЁЁЁссЁ дсдЁЁаЁссс сЁдаЁЁсЁдЁ ддаЁаассдЁ аЁЁассдссЁ 2700
ЁЁдадЁдадс ЁдаЁассдсЁ сдссдсадсс даасдассда дсдсадсдад ЁсадЁдадсд 2760
аддаадсдда ададсдссса аЁасдсаддд сссссЁдсад даЁааааааа ЁЁдЁадаЁаа 2820
аЁЁЁЁаЁааа аЁадЁЁЁЁаЁ сЁасааЁЁЁЁ ЁЁЁаЁсадда аасадсЁаЁд ассдсддссд 2880
сддЁЁааЁдЁ ЁаааааЁЁЁа ЁадЁаЁаасЁ ЁЁаааааасЁ дЁсЁЁааааа дЁЁдЁЁаЁаЁ 2940
ааааааЁдЁЁ дасааЁЁааа садсЁаЁЁЁа дЁдсааааса ассаЁааааа ЁЁЁааааааЁ 3000
ассаЁаааЁЁ асЁЁдааааа ЁадЁЁдаЁаа ЁааЁдЁадад ЁЁаЁааасаа аддЁдаааад 3060
саЁЁасЁЁдЁ аЁЁсЁЁЁЁЁЁ аЁаЁаЁЁаЁЁ аЁаааЁЁааа аЁдаадсЁдЁ аЁЁадааааа 3120
аЁасасассЁ дЁааЁаЁааа аЁЁЁЁаааЁЁ ааЁЁЁЁЁааЁ ЁЁЁЁЁсаааа ЁдЁаЁЁЁЁас 3180
аЁдЁЁЁадаа ЁЁЁЁдаЁдЁа ЁаЁЁааааЁа дЁадааЁаса ЁаадаЁасЁЁ ааЁЁЁааЁЁа 3240
аадаЁадЁЁа адЁасЁЁЁЁс ааЁдЁдсЁЁЁ ЁЁЁадаЁдЁЁ ЁааЁасаааЁ сЁЁЁааЁЁдЁ 3300
аааадаааЁд сЁдЁасЁаЁЁ ЁасЁдЁасЁа дЁдасдддаЁ ЁааасЁдЁаЁ ЁааЁЁаЁааа 3360
ЁааааааЁаа дЁасадЁЁдЁ ЁЁааааЁЁаЁ аЁЁЁЁдЁаЁЁ аааЁсЁааЁа дЁасдаЁдЁа 3420
адЁЁаЁЁЁЁа ЁасЁаЁЁдсЁ адЁЁЁааЁаа ааадаЁЁЁаа ЁЁаЁаЁасЁЁ дааааддада 3480
ддааЁЁЁЁЁа ЁдсдЁсаЁаЁ ддсаасадаа ЁЁаЁЁаЁдЁЁ Ёасасадасс ЁаЁаЁсасЁЁ 3540
асЁсасааас ЁЁЁЁЁаддаа ЁссаЁЁассЁ ааадЁЁаЁЁс аадсЁасасс ЁЁЁаасаЁЁа 3600
ааасЁЁаддЁ дЁадЁдЁЁЁс ЁасадааааЁ дЁаЁсаЁЁЁа дЁдадасада аасЁдаааса 3660
адаадаЁсад саааЁЁаЁда ассаааЁЁсЁ ЁдддаЁЁаЁд аЁЁаЁсЁЁсЁ ЁЁсЁЁсЁдаЁ 3720
асЁдаЁдадЁ сааЁадаадЁ асаЁааадаЁ ааддсЁаада ааЁЁадаадс ЁдаадЁЁадд 3780
ададаааЁаа аЁааЁдадаа ддсЁдааЁЁЁ сЁЁасасЁЁс ЁЁдаасЁЁаЁ ЁдаЁааЁдЁа 3840
сааадасЁЁд даЁЁаддаЁа ЁадаЁЁЁдад ЁсЁдаЁаЁаа даададсаЁЁ адаЁадаЁЁЁ 3900
дЁаадЁадЁд даддаЁЁЁда ЁддадЁЁасЁ аааасЁЁсаЁ ЁасаЁддаас адсаЁЁаЁса 3960
ЁЁЁаддЁЁаЁ Ёааддсааса ЁддЁЁЁЁдаа дЁаЁсЁсаад аадсЁЁЁЁад ЁддаЁЁЁааа 4020
- 70 028892
даЕсадааЕд дааасЕЕЕсЕ ЕдадааЕЕЕа ааддаадаса ЕаааадсааЕ ЕсЕЕЕсЕсЕЕ 4080
ЕаЕдаадсаЕ саЕЕЕЕЕадс аЕЕадааддЕ дадааЕаЕаЕ ЕадаЕдаддс ЕааадЕаЕЕЕ 4140
дсааЕаЕсЕс аЕсЕЕааада асЕЕадЕдаа даааадаЕЕд дЕааадааЕЕ адсЕдаасаа 4200
дЕЕЕсасаЕд сЕЕЕадааЕЕ ассаЕЕасаЕ адаадаасас ааадаЕЕада адсадЕЕЕдд 4260
ЕсааЕадаад саЕаЕадааа дааадаадас дсаааЕсаад ЕасЕЕЕЕада асЕЕдсааЕа 4320
сЕЕдасЕаса аЕаЕдаЕЕса аадЕдЕаЕаЕ сададддаЕЕ Еаададааас аЕсаадаЕдд 4380
Еддадаадад ЕаддаЕЕадс аасЕаааЕЕа саЕЕЕЕдсЕа дадаЕаддсЕ ЕаЕЕдааадЕ 4440
ЕЕЕЕаЕЕддд сЕдЕЕддадЕ ЕдсЕЕЕЕдаа ссасааЕаЕЕ сЕдаЕЕдсад аааЕадЕдЕа 4500
дсааадаЕдЕ ЕЕЕсаЕЕЕдЕ ЕасЕаЕааЕЕ дасдаЕаЕЕЕ асдаЕдЕаЕа ЕддаасЕЕЕа 4560
даЕдаасЕЕд аасЕЕЕЕЕас ЕдаЕдсадЕЕ дааадаЕддд аЕдЕаааЕдс ЕаЕЕааЕдаЕ 4620
сЕЕссЕдаЕЕ аЕаЕдаадЕЕ аЕдЕЕЕЕсЕЕ дсасЕЕЕаса аЕасЕаЕЕаа сдадаЕадсЕ 4680
ЕасдаЕаасЕ ЕаааадаЕаа аддЕдадаас аЕасЕЕссЕЕ аЕЕЕаасааа адсаЕдддса 4740
даЕЕЕаЕдЕа аЕдсаЕЕЕсЕ ЕсаадаадсЕ аадЕддсЕЕЕ аЕааЕаааЕс аасассЕаса 4800
ЕЕЕдаЕдаЕЕ аЕЕЕЕддааа ЕдсаЕддааа адЕЕсЕадЕд дассЕЕЕаса дсЕЕаЕЕЕЕЕ 4860
дсЕЕаЕЕЕЕд сЕдЕадЕаса даасаЕЕааа ааддаадада ЕЕдадааЕсЕ ЕсадаааЕаЕ 4920
саЕдасаЕаа ЕаЕсаадасс ЕадЕсасаЕЕ ЕЕЕаддсЕЕЕ дЕааЕдаЕЕЕ адсаЕсЕдсЕ 4980
Есадсадааа Еадсаададд ЕдааасЕдсЕ ааЕЕсЕдЕаа дЕЕдЕЕаЕаЕ дадаасаааа 5040
ддЕаЕаЕсЕд аадааЕЕадс ЕасЕдааадЕ дЕЕаЕдааЕс ЕЕаЕадасда аасЕЕддаад 5100
ааааЕдааса аадааааасЕ ЕддЕддаЕсЕ ЕЕаЕЕЕдсаа аассЕЕЕЕдЕ ЕдадасЕдсЕ 5160
аЕаааЕЕЕад сЕадасадЕс ЕсаЕЕдсаса ЕаЕсаЕааЕд дЕдаЕдсаса ЕасЕадЕсса 5220
даЕдааЕЕаа сЕаддаааад адЕасЕЕадЕ дЕааЕаасЕд аассааЕаЕЕ ассаЕЕЕдаа 5280
адаЕаадааЕ ЕсдадсЕсда ааддддаааЕ ЕаааЕддсад ааЕаЕаЕааЕ адсЕдЕадаЕ 5340
дааЕЕЕдаЕа асдаааЕадд ЕЕсааЕЕдаа ааааЕддадд сЕсассдЕаа аддаасаЕЕа 5400
саЕададсЕЕ ЕЕЕсЕаЕаЕЕ адЕаЕЕЕааЕ ЕсЕаааааЕс ааЕЕдЕЕаЕЕ асадаааада 5460
ааЕдЕааааа ааЕаЕсаЕЕс дссЕддЕсЕс ЕддасаааЕа сдЕдсЕдЕад ЕсаЕссаада 5520
ЕасддЕдааа дЕЕЕасаЕда ЕдсдаЕЕЕаЕ адааддсЕЕа аддаадаааЕ дддЕЕЕЕаса 5580
ЕдЕдаасЕЕд аадаадЕаЕЕ ЕадЕЕЕЕаЕЕ ЕаЕааадЕаа аасЕЕдаада ЕааЕсЕЕЕЕЕ 5640
дааааЕдааЕ аЕдаЕсаЕдЕ аЕЕсаЕЕддд аааЕаЕдаЕд дадаааЕааЕ ЕдЕааасааа 5700
даЕдаадЕад аЕдаЕЕЕЕаа дЕдддЕЕдаЕ аЕЕааЕдадд ЕЕаадаадда ЕаЕЕаЕадаа 5760
аддссадаад саЕасасЕЕа ЕЕддЕЕсаад ЕаЕЕЕадЕЕа аЕааддсада ааасааааЕа 5820
ЕЕЕаааЕаад ЕаадааЕЕЕс дЕсЕаааЕаа адаЕЕЕдддд Еасссдддда ЕссЕсЕадад 5880
ЕсдасЕЕЕаЕ ЕааадддаЕа даЕааддаЕд адЕааЕЕЕаЕ ЕадаЕааЕЕа ЕааадаЕаЕа 5940
- 71 028892
аабдасдбаа адаадабдбс дббааабдаб аааааааадс бадсбадада ааббадаааа 6000
бббббаабад асааадбабс баадасадда ддбсабббдд сдбсбаасбб аддддббдбд 6060
дадсбсасбб бдадбббабб бадбдбаббб дабсбааабб абдабааасб бабабдддаб 6120
дбдддасабс аддсббабдб дсабаааабс сбсасдддаа даааддабаа абббдабасб 6180
ббааддсааб ббддаддабб аадбддаббб ссбааааддб дсдааадбаб абабдабббб 6240
ббсдааасад ддсабадбад басббсааба бсбдсадсас ббддаабддс бадддсбада 6300
дабббааадс абдадаааба баабдббдбб дсадббабад дадабддадс асббасбдда 6360
ддбабддсас бададдсссб ааабдабдба ддббабадаа ааасбаадсб бабаабааба 6420
ббааабдаба абсааабдбс бабаддаааа аабдбаддбд дадбабсбаа абабббаааб 6480
ааасббадад бддасссбаа дбабаабааа бббааадсдд абдбадаадс баааббаааа 6540
аадабассба абабаддааа аддаабддса ааабабсббд ааааддбааа ааабддааба 6600
ааасааабдд бадббссбдд аабдбббббб даадабабдд дааббаааба бббаддасса 6660
абадабддбс абаабабааа адаасббаса дасдбасбсд сббсбдсааа адасабасаа 6720
ддбссадбба ббабасабаб аабаасбаад аааддаааад дабабдаабб бдсаадаааа 6780
ааабссаддб аааббссабд даабадддсс ббббааббдс дссаабддбд аасбддабдс 6840
бддабсббса аабасббабб ссааддссбб бддааабдаа абддбааадс бадсадаааа 6900
адасдабада абадбддсба баасбдсадс сабдадддаб ддаасаддбс ббаааадббб 6960
ббсбсаааад бббссбдааа ддббббббда бдбдддааба дсадаасадс абдсбдбаас 7020
ссбддсадсб ддаабддсас аддсаааббб аааассбдба бббдсадббб асбсбасббб 7080
бсббсааада дсббабдабс аасббаббса бдабдбабдб абдсааааас ббссадбадб 7140
ббббдсбдба дабадддссд дсаббдбадд адаадабддб дааасасабс адддаабабб 7200
бдабббабсб басббаасдд ааабдссаса бабдасдсбб абдбсбссба аабдбабада 7260
бдаасббсса бабабдббаа аабдддсабб аддссададб бббссбдбад сбабааддба 7320
бссаадддда ддадабадбд бабдбсбсаа бсссдбадаа ааббббааас ббддааадбд 7380
ддасбдбабб бсааабдаад дсадбдбадс аабааббдсб садддбаааа бддбасаааа 7440
бдсадбдбба дсаддааааа аасббааада ааадддбаба дабдбаадда ббабаадбдс 7500
абдббббабб аадссдсбдд асааддаааб дббааасадд ббадббдаад ааадбдбаас 7560
бабсдббасб дббдаадаса абдбаабаад аддаддабба ддабссбаба баббадааба 7620
бдбааабааа ббааабаааа аадбаааааб аабааасбба дддбббдабд абаадбббдб 7680
асадсабдда ааабссдаба ббббдбабаа дсбдбабддб ббддабссба ааддбабсдб 7740
ааабадбдба сббдаадсад сададдбаад бсабабаббб баас 7784
- 72 028892 <210> 32 <211> 17 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид М13К.
<400> 32 саддааасад сЕаЕдас 17 <210> 33 <211> 20 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотиды Изопрен-зед1 <400> 33 дЕЕаЕЕсаад сЕасассЕЕЕ 20 <210> 34 <211> 20 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Изопрен-зед2 <400> 34 даЕЕддЕааа дааЕЕадсЕд 20 <210> 35 <211> 18 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Изопрен-зед3 <400> 35
ЕсаадаадсЕ аадЕддсЕ 18 <210> 36 <211> 17 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Изопрен-зед4 <400> 36 сЕсассдЕаа аддааса 17 <210> 37 <211> 20
- 73 028892 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Изопрен-зед5 <400> 37 дсбадсбада даааббадаа 20 <210> 38 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Изопрен-зед6 <400> 38 ддаабддсаа аабабсббда 20 <210> 39 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Изопрен-зед7 <400> 39 дааасасабс адддаабабб 20 <210> 40 <211> 1179 <212> ДНК <213> С1озбг10.1ит асебоЬибуИсит <400> 40
абдааададд ббдббаббдс абсадсбдбб адаасбдсаа баддабсбба бддааааадб 60
сббааадабд бассадсадб адасббаддб дсаасбдсаа баааддаадс адбааадааа 120
дсаддбабаа аассбдаада бдббаабдаа дббаббббад дааасдбабб асаадсбдда 180
сббддасада абссадсбад асаддсабса ббсааадсад даббассадб ададабассб 240
дсбабдасба ббаабааадб ббдбддббса ддаббаадаа садбббсббб адсбдсбсаа 300
аббабаааад сбддбдасдс адабдбааба абадсаддбд дбабддаааа бабдбсаада 360
дсассабасс ббдсбаабаа бдсбадабдд ддббабадаа бдддааасдс бааабббдба 420
дасдааабда баасбдабдд асбббдддаб дсабббаасд аббабсасаб дддааббасб 480
дсбдааааба бадсбдадад абддаабаба адбададаад аасаадабда дбббдсасбб 540
дсабсбсада ааааддсада адаадсбабб ааабсаддас аабббааада бдаааббдбб 600
ссадбадбаа ббаааддбад ааааддбдаа асадббдбад асасбдабда асабссбада 660
бббддабсба саабадаадд бббадсбааа ббааадссбд сббббаадаа адасддааса 720
- 74 028892 дЬаасЬдсЬд дааасдсаЬс аддЬЬЬаааЬ даЬЬдЬдсад сЬдЬЬЬЬадЬ ЬаЬЬаЬдЬсЬ 780 дсЬдаааадд саааддааЬЬ аддЬдЬЬааа ссасЬЬдсЬа адаЬадЬЬад ЬЬаЬддЬЬса 840 дсаддЬдЬад аЬссЬдсЬаЬ ЬаЬдддаЬаЬ ддассЬЬЬЬЬ аЬдсЬасааа ддсадсЬаЬЬ 900 дааааддсЬд дЬЬддасадЬ ЬдаЬдаасЬЬ даЬсЬЬаЬад адЬсаааЬда ддсаЬЬЬдса 960 дсасааадЬс ЬЬдсЬдЬЬдс ЬааддаЬсЬЬ аааЬЬсдаЬа ЬдааЬааадЬ аааЬдЬааас 1020 ддЬддЬдсЬа ЬадсасЬЬдд ЬсаЬссааЬа ддЬдсЬадЬд дЬдсЬадааЬ ЬЬЬадЬЬаса 1080
ЬЬадЬЬсаЬд сааЬдсаааа дададасдсЬ ааааадддас ЬЬдсаасЬЬЬ аЬдсаЬаддЬ 1140 ддЬддЬсаад даасадсааЬ асЬЬсЬЬдаа аааЬдЬЬаа 1179 <210> 41 <211> 1140 <212> ДНК <213> ЗЬарЬу1ососсиз аигеиз подтип аигеиз <400> 41 аЬдааЬсадд сЬдЬЬаЬадЬ ЬдсЬдсааад адаасЬдсаЬ ЬЬддааааЬа ЬддЬддЬасЬ 60
ЬЬаааасасс ЬЬдаассада асааЬЬасЬЬ аадссаЬЬаЬ ЬЬсадсасЬЬ Ьааадааааа 120
ЬаЬссЬдаад ЬЬаЬаЬсЬаа ааЬадаЬдаЬ дЬадЬЬЬЬад дааасдЬадЬ ЬддаааЬддЬ 180 ддЬааЬаЬЬд сЬадаааадс асЬЬсЬЬдаа дсаддаЬЬаа аадаЬадЬаЬ ассаддЬдЬа 240 асЬаЬадаса дасааЬдсдд аЬсЬддаЬЬа дааЬсадЬас ааЬасдсаЬд ЬадааЬдаЬа 300 саадсаддЬд сЬддаааадЬ ЬЬаЬаЬЬдса ддЬддЬдЬЬд ааЬсЬасаЬс аададсассЬ 360
ЬддааааЬаа ададассаса ЬЬсЬдЬЬЬаЬ дааасЬдсаЬ ЬассададЬЬ сЬаЬдааада 420 дсаЬсаЬЬсд сассЬдаааЬ дЬсадаЬсса адЬаЬдаЬас ааддЬдсЬда дааЬдЬадсЬ 480 ааааЬдЬаЬд аЬдЬЬадЬад адаасЬЬсаа даЬдадЬЬЬд саЬасадаЬс асаЬсаасЬЬ 540 асадсЬдааа аЬдЬааадаа ЬддаааЬаЬЬ Ьсасаадааа ЬЬсЬЬссааЬ аасадЬааад 600 ддЬдаааЬаЬ ЬсааЬасЬда ЬдааадЬЬЬа аааЬсЬсаЬа ЬЬссаааада ЬааЬЬЬсддЬ 660 адаЬЬЬааас сЬдЬааЬааа аддЬддЬасЬ дЬаасадсЬд сЬааЬадЬЬд ЬаЬдаадаас 720 даЬддЬдсад ЬаЬЬаЬЬасЬ ЬаЬЬаЬддаа ааддаЬаЬдд сЬЬаЬдаасЬ ЬддаЬЬЬдад 780 саЬддаЬЬаЬ ЬаЬЬЬааада сддЬдЬаасЬ дЬаддЬдЬад аЬадЬаасЬЬ ЬссаддааЬа 840 ддассЬдЬЬс сЬдсЬаЬаЬс аааЬсЬЬЬЬа аададааасс аасЬЬасааЬ адааааЬаЬЬ 900 даадЬааЬЬд адаЬаааЬда адсаЬЬЬЬсЬ дсЬсаддЬад ЬЬдсЬЬдЬса дсаадсЬсЬЬ 960 ааЬаЬаадЬа аЬасЬсадЬЬ ааасаЬЬЬдд ддЬддЬдсаЬ ЬадсаадЬдд ЬсаЬссЬЬаЬ 1020 ддЬдсаЬсад дЬдсасадЬЬ адЬЬасаада ЬЬаЬЬЬЬаЬа ЬдЬЬсдаЬаа ададасааЬд 1080 аЬЬдсЬЬсЬа ЬдддааЬадд ЬддЬддЬЬЬа ддаааЬдсад сЬсЬЬЬЬЬас ЬадаЬЬЬЬаа 1140
- 75 028892 <210> 42 <211> 1167 <212> ДНК <213> ЗЬарЬу1ососсиз аигеиз подтип аигеиз <400> 42
аЬдасЬаЬад дааЬЬдасаа ааЬааасЬЬЬ ЬасдЬассаа ааЬаЬЬаЬдЬ адаЬаЬддса 60
аааЬЬадсад аадсаадаса адЬадассса ааЬаааЬЬЬс ЬЬаЬЬддааЬ аддасадасЬ 120
даааЬддсад ЬЬадЬссадЬ ааассаадаЬ аЬадЬаЬсаа ЬдддЬдсЬаа ЬдсЬдсЬааа 180
даЬаЬааЬаа сЬдаЬдаада сааааадааа аЬаддааЬдд ЬааЬадЬадс аасЬдадЬса 240
дсадЬадаЬд садсаааддс адсадсадЬа садаЬЬсаЬа аЬЬЬаЬЬадд ЬаЬЬсаасса 300
ЬЬЬдсаадаЬ дЬЬЬсдаааЬ дааадаадса ЬдЬЬаЬдсЬд сЬасЬссЬдс ааЬЬсадЬЬа 360
дсЬааддаЬЬ аЬЬЬадсЬас аадассаааЬ дадааадЬЬЬ ЬадЬЬаЬадс ЬасадаЬаса 420
дсЬадаЬаЬд дасЬЬааЬЬс аддЬддЬдаа ссЬасЬсаад дЬдсЬддЬдс ЬдЬЬдсЬаЬд 480
дЬЬаЬадсЬс аЬааЬссЬад ЬаЬасЬЬдса ЬЬаааЬдаад асдсЬдЬЬдс ЬЬаЬасадаа 540
даЬдЬЬЬаЬд аЬЬЬсЬддад ассаасадда саЬаадЬаЬс саЬЬадЬада ЬддЬдсЬЬЬа 600
Ьсаааадасд саЬаЬаЬЬад аЬсЬЬЬЬсаа сааЬсЬЬдда аЬдааЬаЬдс Ьаададасаа 660
ддааададЬЬ ЬадсЬдаЬЬЬ ЬдсЬадЬсЬЬ ЬдсЬЬЬсаЬд ЬЬссЬЬЬЬас ЬааааЬдддЬ 720
аааааддсЬЬ ЬадааЬсЬаЬ ааЬадаЬаас дсадаЬдааа саасЬсаада дадаЬЬаада 780
ЬсЬддаЬаЬд аадаЬдсадЬ ЬдаЬЬасааЬ адаЬаЬдЬЬд даааЬаЬаЬа сасаддаадЬ 840
сЬЬЬаЬсЬЬЬ сЬсЬЬаЬаад ЬсЬЬсЬЬдаа ааЬададаЬЬ ЬасаддсЬдд ЬдааасЬаЬЬ 900
ддаЬЬаЬЬЬЬ саЬасддаЬс аддЬЬсЬдЬЬ ддЬдааЬЬЬЬ аЬЬсадсЬас асЬЬдЬадаа 960
ддаЬаЬааад аЬсассЬЬда Ьсаддсадса сасааадсас ЬЬЬЬааасаа ЬадаасЬдаа 1020
дЬаЬсадЬад аЬдсаЬасда аасаЬЬЬЬЬс аададаЬЬЬд аЬдаЬдЬада аЬЬЬдаЬдаа 1080
дадсаддаЬд садЬЬсаЬда адаЬадасаЬ аЬаЬЬсЬаЬс ЬЬЬсааасаЬ ададааЬааЬ 1140
дЬаададааЬ аЬсаЬадасс ЬдааЬаа 1167
<210> 43 <211> 1278
<212> ДНК <213> ЗЬарЬу1ососсиз <400> 43 аигеиз подтип аигеиз
аЬдсааЬсаЬ Ьадасааааа ЬЬЬсадасаЬ ЬЬаЬсаадас аасаааадЬЬ асаасааЬЬа 60
дЬЬдаЬааас адЬддсЬЬЬс адаадаЬсад ЬЬЬдаЬаЬЬЬ ЬасЬЬааЬса ЬссЬсЬЬаЬа 120
даЬдаадаад ЬЬдсЬааЬад ЬсЬЬаЬадаа ааЬдЬааЬЬд сасадддЬдс аЬЬассадЬЬ 180
ддасЬЬсЬЬс сЬааЬаЬааЬ адЬЬдаЬдаЬ ааддсЬЬаЬд ЬЬдЬассааЬ даЬддЬЬдаа 240
даассЬадЬд ЬЬдЬЬдсадс ЬдсаЬсЬЬаЬ ддЬдсЬаааЬ ЬадЬаааЬса дасаддЬдда 300
- 76 028892
ЕЕЕаааасЕд ЕаЕсаЕсада аадааЕааЕд аЕЕддасада ЕадЕаЕЕЕда ЕддЕдЕадаЕ 360
дасасЕдааа ааЕЕаадЕдс адаЕаЕЕааа дсаЕЕадааа аасаааЕаса ЕаадаЕЕдса 420
даЕдаадсаЕ аЕссЕадЕаЕ аааадсаада ддЕддЕддЕЕ аЕсааадааЕ адсааЕадаЕ 480
асаЕЕЕссад адсаасаасЕ ЕЕЕаадЕсЕЕ ааддЕаЕЕЕд ЕадаЕасааа адаЕдсЕаЕд 540
ддЕдсЕааЕа ЕдсЕЕааЕас ЕаЕасЕЕдад дсааЕаасЕд саЕЕссЕЕаа аааЕдааЕсЕ 600
ссЕсааЕсад аЕаЕаЕЕааЕ дЕсЕаЕасЕЕ ЕсааассаЕд саасЕдсЕад ЕдЕадЕаааа 660
дЕасааддЕд адаЕадаЕдЕ аааадаЕсЕЕ дсЕададдЕд ааадаасадд ЕдаадаадЕа 720
дсЕаададаа Еддааададс ЕЕсЕдЕаЕЕа дсЕсаддЕЕд аЕаЕЕсаЕад адсЕдсааса 780
саЕаасааад дЕдЕЕаЕдаа ЕддааЕасаЕ дсЕдЕЕдЕЕЕ ЕадсЕасадд аааЕдаЕасЕ 840
ададдЕдсЕд аадсаЕсЕдс асаЕдсаЕас дсаЕсаадад асддасааЕа ЕададдЕаЕа 900
дсаасЕЕдда даЕаЕдаЕса даададасаа адасЕЕаЕЕд даасЕаЕЕда адЕЕссааЕд 960
асасЕЕдсЕа ЕадЕаддЕдд ЕддЕасЕааа дЕаЕЕассаа ЕадсЕааддс аЕсаЕЕадад 1020
ЕЕаЕЕаааЕд ЕЕдаЕЕсЕдс асаадаасЕЕ ддасасдЕад ЕЕдсЕдсЕдЕ ЕддаЕЕадса 1080
саааасЕЕЕд сЕдсЕЕдЕад адсасЕЕдЕЕ ЕсЕдааддЕа ЕЕсаасаадд асасаЕдЕса 1140
ЕЕасааЕаЕа ааадЕЕЕадс ааЕадЕадЕа ддЕдсаааад дЕдасдадаЕ адсасаадЕа 1200
дсадаадсЕс ЕЕааасадда ассаададсЕ ааЕасасадд ЕЕдсЕдааад ааЕЕЕЕасад 1260
даааЕЕадас адсааЕаа 1278
<210> 44 <211> 552 <212> ДНК <213> СТозЕгтбтиш. аиЕоеЕЬаподепит
<400> 44 адаЕадЕсаЕ ааЕадЕЕсса дааЕадЕЕса аЕЕЕадаааЕ ЕадасЕааас ЕЕсааааЕдЕ 60
ЕЕдЕЕаааЕа ЕаЕассааЕс ЕадЕаЕадаЕ аЕЕЕЕЕЕааа ЕасЕддасЕЕ ааасадЕадЕ 120
ааЕЕЕдссЕа аааааЕЕЕЕЕ ЕсааЕЕЕЕЕЕ ЕЕааааааЕс сЕЕЕЕсаадЕ ЕдЕасаЕЕдЕ 180
ЕаЕддЕааЕа ЕдЕааЕЕдаа даадЕЕаЕдЕ адЕааЕаЕЕд ЕааасдЕЕЕс ЕЕдаЕЕЕЕЕЕ 240
ЕасаЕссаЕд ЕадЕдсЕЕаа аааассаааа ЕаЕдЕсасаЕ дсасЕЕдЕаЕ аЕЕЕсаааЕа 300
асааЕаЕЕЕа ЕЕЕЕсЕсдЕЕ аааЕЕсасаа аЕааЕЕЕаЕЕ ааЕааЕаЕса аЕаассаада 360
ЕЕаЕасЕЕаа аЕддаЕдЕЕЕ аЕЕЕЕЕЕаас асЕЕЕЕаЕад ЕаааЕаЕаЕЕ ЕаЕЕЕЕаЕдЕ 420
адЕааааадд ЕЕаЕааЕЕаЕ ааЕЕдЕаЕЕЕ аЕЕасааЕЕа аЕЕааааЕаа ааааЕадддЕ 480
ЕЕЕаддЕааа аЕЕаадЕЕаЕ ЕЕЕаадаадЕ ааЕЕасааЕа ааааЕЕдаад ЕЕаЕЕЕсЕЕЕ 540
ааддаддааа ЕЕ 552
<210> 45
- 77 028892 <211> 386 <212> ДНК <213> С1озбг10.1ит аибоебЬаподепит.
<400> 45
дббабааббб бсааббббса ббсбббббаа аддадаббад сабасабббб абсабаабба 60
басадасааб абадбаабаб абдабдббаа аабабсааба бабддббааа аабсбдбаба 120
ббббббссса ббббааббаб ббдбасбаба абаббасасб дадбдбаббд сабабббааа 180
ааабабббдд басааббадб бадббаааба ааббсбаааб бдбаааббаб садаабссбб 240
аббааддааа басабадабб бааддадааа бсабааааад дбдбаабаба аасбддсбаа 300
ааббдадсаа аааббдадса аббаадасбб бббдаббдба бсбббббаба бабббааддб 360
абабаабсбб абббабаббд ддддаа 386
<210> 46 <211> 21 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид риС57-Р <400> 46 адсадаббдб асбдададбд с 21 <210> 47 <211> 21 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид риС57-К <400> 47 асадсбабда ссабдаббас д 21 <210> 48 <211> 3552 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ 85245 <400> 48
ааасбссббб ббдабаабсб сабдассааа абсссббаас дбдадббббс дббссасбда 60
дсдбсадасс ссдбадаааа дабсааадда бсббсббдад абссбббббб бсбдсдсдба 120
абсбдсбдсб бдсааасааа аааассассд сбассадсдд бддбббдббб дссддабсаа 180
дадсбассаа сбсбббббсс дааддбаасб ддсббсадса дадсдсадаб ассааабасб 240
дббсббсбад бдбадссдба дббаддссас сасббсаада асбсбдбадс ассдссбаса 300
- 78 028892
ЕассЕсдсЕс ЕдсЕааЕссЕ дЕЕассадЕд дсЕдсЕдсса дЕддсдаЕаа дЕсдЕдЕсЕЕ 360
ассдддЕЕдд асЕсаадасд аЕадЕЕассд даЕааддсдс адсддЕсддд сЕдаасдддд 420
ддЕЕсдЕдса сасадсссад сЕЕддадсда асдассЕаса ссдаасЕдад аЕассЕасад 480
сдЕдадсЕаЕ дадааадсдс сасдсЕЕссс даадддадаа аддсддасад дЕаЕссддЕа 540
адсддсаддд Есддаасадд ададсдсасд адддадсЕЕс садддддааа сдссЕддЕаЕ 600
сЕЕЕаЕадЕс сЕдЕсдддЕЕ ЕсдссассЕс ЕдасЕЕдадс дЕсдаЕЕЕЕЕ дЕдаЕдсЕсд 660
Есаддддддс ддадссЕаЕд дааааасдсс адсаасдсдд ссЕЕЕЕЕасд дЕЕссЕддсс 720
ЕЕЕЕдсЕддс сЕЕЕЕдсЕса саЕдЕЕсЕЕЕ ссЕдсдЕЕаЕ ссссЕдаЕЕс ЕдЕддаЕаас 780
сдЕаЕЕассд ссЕЕЕдадЕд адсЕдаЕасс дсЕсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадЕсадЕда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЕасдса дддсссссЕд саддаЕаааа 900
аааЕЕдЕада ЕаааЕЕЕЕаЕ ааааЕадЕЕЕ ЕаЕсЕасааЕ ЕЕЕЕЕЕаЕса ддааасадсЕ 960
аЕдассдсдд ссдсааЕаЕд аЕаЕЕЕаЕдЕ ссаЕЕдЕдаа адддаЕЕаЕа ЕЕсаасЕаЕЕ 1020
аЕЕссадЕЕа сдЕЕсаЕада ааЕЕЕЕссЕЕ ЕсЕааааЕаЕ ЕЕЕаЕЕссаЕ дЕсаадаасЕ 1080
сЕдЕЕЕаЕЕЕ саЕЕааадаа сЕаЕаадЕас ааадЕаЕаад дсаЕЕЕдааа аааЕаддсЕа 1140
дЕаЕаЕЕдаЕ ЕдаЕЕаЕЕЕа ЕЕЕЕааааЕд ссЕаадЕдаа аЕаЕаЕасаЕ аЕЕаЕаасаа 1200
ЕааааЕаадЕ аЕЕадЕдЕад даЕЕЕЕЕааа ЕададЕаЕсЕ аЕЕЕЕсадаЕ ЕаааЕЕЕЕЕд 1260
аЕЕаЕЕЕдаЕ ЕЕасаЕЕаЕа ЕааЕаЕЕдад ЕааадЕаЕЕд асЕадсаааа ЕЕЕЕЕЕдаЕа 1320
сЕЕЕааЕЕЕд ЕдаааЕЕЕсЕ ЕаЕсаааадЕ ЕаЕаЕЕЕЕЕд ааЕааЕЕЕЕЕ аЕЕдаааааЕ 1380
асаасЕаааа аддаЕЕаЕад ЕаЕаадЕдЕд ЕдЕааЕЕЕЕд ЕдЕЕаааЕЕЕ ааадддадда 1440
ааЕдаасаЕд ааасаЕаЕдд ЕдассаЕдаЕ ЕасдааЕЕсд адсЕсддЕас ссддддаЕсс 1500
ЕсЕададЕсд асдЕсасдсд ЕссаЕддада ЕсЕсдаддсс ЕдсадасаЕд саадсЕЕддс 1560
асЕддссдЕс дЕЕЕЕасаас дЕсдЕдасЕд ддаааасссЕ ддсдЕЕассс аасЕЕааЕсд 1620
ссЕЕдсадса саЕсссссЕЕ ЕсдссадсЕд дсдЕааЕадс даададдссс дсассдаЕсд 1680
сссЕЕсссаа садЕЕдсдса дссЕдааЕдд сдааЕддсдс ЕадсаЕаааа аЕаадаадсс 1740
ЕдсаЕЕЕдса ддсЕЕсЕЕаЕ ЕЕЕЕаЕддсд сдссдсаЕЕс асЕЕсЕЕЕЕс ЕаЕаЕаааЕа 1800
Едадсдаадс дааЕаадсдЕ сддаааадса дсааааадЕЕ ЕссЕЕЕЕЕдс ЕдЕЕддадса 1860
ЕдддддЕЕса дддддЕдсад ЕаЕсЕдасдЕ сааЕдссдад сдааадсдад ссдаадддЕа 1920
дсаЕЕЕасдЕ ЕадаЕаассс ссЕдаЕаЕдс ЕссдасдсЕЕ ЕаЕаЕадааа адаадаЕЕса 1980
асЕаддЕааа аЕсЕЕааЕаЕ аддЕЕдадаЕ даЕааддЕЕЕ аЕааддааЕЕ ЕдЕЕЕдЕЕсЕ 2040
ааЕЕЕЕЕсас ЕсаЕЕЕЕдЕЕ сЕааЕЕЕсЕЕ ЕЕаасаааЕд ЕЕсЕЕЕЕЕЕЕ ЕЕЕадаасад 2100
ЕЕаЕдаЕаЕа дЕЕадааЕад ЕЕЕааааЕаа ддадЕдадаа ааадаЕдааа дааадаЕаЕд 2160
даасадЕсЕа ЕаааддсЕсЕ сададдсЕса Еадасдаада аадЕддадаа дЕсаЕададд 2220
- 79 028892
ЕадасаадЕЕ аЕассдЕааа сааасдЕсЕд дЕаасЕЕсдЕ аааддсаЕаЕ аЕадЕдсааЕ 2280
ЕааЕаадЕаЕ дЕЕадаЕаЕд аЕЕддсддаа ааааасЕЕаа ааЕсдЕЕаас ЕаЕаЕссЕад 2340
аЕааЕдЕсса сЕЕаадЕаас ааЕасааЕда ЕадсЕасаас аададаааЕа дсаааадсЕа 2400
саддаасаад ЕсЕасаааса дЕааЕаасаа сасЕЕааааЕ сЕЕадаадаа ддаааЕаЕЕа 2460
Еааааадааа аасЕддадЕа ЕЕааЕдЕЕаа асссЕдаасЕ асЕааЕдада ддсдасдасс 2520
ааааасаааа аЕассЕсЕЕа сЕсдааЕЕЕд ддаасЕЕЕда дсаададдса ааЕдаааЕад 2580
аЕЕдассЕсс сааЕаасасс асдЕадЕЕаЕ ЕдддаддЕса аЕсЕаЕдааа ЕдсдаЕЕаад 2640
ддссддссда адсааасЕЕа ададЕдЕдЕЕ даЕадЕдсад ЕаЕсЕЕаааа ЕЕЕЕдЕаЕаа 2700
ЕаддааЕЕда адЕЕаааЕЕа даЕдсЕаааа аЕЕЕдЕааЕЕ аадааддадЕ даЕЕасаЕда 2760
асаааааЕаЕ ааааЕаЕЕсЕ саааасЕЕЕЕ ЕаасдадЕда аааадЕасЕс аассаааЕаа 2820
ЕаааасааЕЕ дааЕЕЕаааа дааассдаЕа ссдЕЕЕасда ааЕЕддааса ддЕааадддс 2880
аЕЕЕаасдас дааасЕддсЕ ааааЕаадЕа аасаддЕаас дЕсЕаЕЕдаа ЕЕадасадЕс 2940
аЕсЕаЕЕсаа сЕЕаЕсдЕса даааааЕЕаа аасЕдааЕас ЕсдЕдЕсасЕ ЕЕааЕЕсасс 3000
аадаЕаЕЕсЕ асадЕЕЕсаа ЕЕсссЕааса аасададдЕа ЕааааЕЕдЕЕ дддадЕаЕЕс 3060
сЕЕассаЕЕЕ аадсасасаа аЕЕаЕЕаааа аадЕддЕЕЕЕ ЕдааадссаЕ дсдЕсЕдаса 3120
ЕсЕаЕсЕдаЕ ЕдЕЕдаадаа ддаЕЕсЕаса адсдЕассЕЕ ддаЕаЕЕсас сдаасасЕад 3180
ддЕЕдсЕсЕЕ дсасасЕсаа дЕсЕсдаЕЕс адсааЕЕдсЕ ЕаадсЕдсса дсддааЕдсЕ 3240
ЕЕсаЕссЕаа ассаааадЕа аасадЕдЕсЕ ЕааЕаааасЕ ЕасссдссаЕ ассасадаЕд 3300
ЕЕссадаЕаа аЕаЕЕддаад сЕаЕаЕасдЕ асЕЕЕдЕЕЕс ааааЕдддЕс ааЕсдадааЕ 3360
аЕсдЕсаасЕ дЕЕЕасЕааа ааЕсадЕЕЕс аЕсаадсааЕ дааасасдсс ааадЕаааса 3420
аЕЕЕаадЕас сдЕЕасЕЕаЕ дадсаадЕаЕ ЕдЕсЕаЕЕЕЕ ЕааЕадЕЕаЕ сЕаЕЕаЕЕЕа 3480
асдддаддаа аЕааЕЕсЕаЕ дадЕсдсЕЕЕ ЕдЕаааЕЕЕд дааадЕЕаса сдЕЕасЕааа 3540
дддааЕдЕдЕ ЕЕ 3552
<210> 49 <211> 4186 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ 83145 <400> 49
ааасЕссЕЕЕ ЕЕдаЕааЕсЕ саЕдассааа аЕсссЕЕаас дЕдадЕЕЕЕс дЕЕссасЕда 60
дсдЕсадасс ссдЕадаааа даЕсааадда ЕсЕЕсЕЕдад аЕссЕЕЕЕЕЕ ЕсЕдсдсдЕа 120
аЕсЕдсЕдсЕ Едсааасааа аааассассд сЕассадсдд ЕддЕЕЕдЕЕЕ дссддаЕсаа 180
- 80 028892
дадсЕассаа сЕсЕЕЕЕЕсс дааддЕаасЕ ддсЕЕсадса дадсдсадаЕ ассаааЕасЕ 240
дЕЕсЕЕсЕад ЕдЕадссдЕа дЕЕаддссас сасЕЕсаада асЕсЕдЕадс ассдссЕаса 300
ЕассЕсдсЕс ЕдсЕааЕссЕ дЕЕассадЕд дсЕдсЕдсса дЕддсдаЕаа дЕсдЕдЕсЕЕ 360
ассдддЕЕдд асЕсаадасд аЕадЕЕассд даЕааддсдс адсддЕсддд сЕдаасдддд 420
ддЕЕсдЕдса сасадсссад сЕЕддадсда асдассЕаса ссдаасЕдад аЕассЕасад 480
сдЕдадсЕаЕ дадааадсдс сасдсЕЕссс даадддадаа аддсддасад дЕаЕссддЕа 540
адсддсаддд Есддаасадд ададсдсасд адддадсЕЕс садддддааа сдссЕддЕаЕ 600
сЕЕЕаЕадЕс сЕдЕсдддЕЕ ЕсдссассЕс ЕдасЕЕдадс дЕсдаЕЕЕЕЕ дЕдаЕдсЕсд 660
Есаддддддс ддадссЕаЕд дааааасдсс адсаасдсдд ссЕЕЕЕЕасд дЕЕссЕддсс 720
ЕЕЕЕдсЕддс сЕЕЕЕдсЕса саЕдЕЕсЕЕЕ ссЕдсдЕЕаЕ ссссЕдаЕЕс ЕдЕддаЕаас 780
сдЕаЕЕассд ссЕЕЕдадЕд адсЕдаЕасс дсЕсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадЕсадЕда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЕасдса дддсссссЕд саддаЕаааа 900
аааЕЕдЕада ЕаааЕЕЕЕаЕ ааааЕадЕЕЕ ЕаЕсЕасааЕ ЕЕЕЕЕЕаЕса ддааасадсЕ 960
аЕдассдсдд ссдсааЕаЕд аЕаЕЕЕаЕдЕ ссаЕЕдЕдаа адддаЕЕаЕа ЕЕсаасЕаЕЕ 1020
аЕЕссадЕЕа сдЕЕсаЕада ааЕЕЕЕссЕЕ ЕсЕааааЕаЕ ЕЕЕаЕЕссаЕ дЕсаадаасЕ 1080
сЕдЕЕЕаЕЕЕ саЕЕааадаа сЕаЕаадЕас ааадЕаЕаад дсаЕЕЕдааа аааЕаддсЕа 1140
дЕаЕаЕЕдаЕ ЕдаЕЕаЕЕЕа ЕЕЕЕааааЕд ссЕаадЕдаа аЕаЕаЕасаЕ аЕЕаЕаасаа 1200
ЕааааЕаадЕ аЕЕадЕдЕад даЕЕЕЕЕааа ЕададЕаЕсЕ аЕЕЕЕсадаЕ ЕаааЕЕЕЕЕд 1260
аЕЕаЕЕЕдаЕ ЕЕасаЕЕаЕа ЕааЕаЕЕдад ЕааадЕаЕЕд асЕадсаааа ЕЕЕЕЕЕдаЕа 1320
сЕЕЕааЕЕЕд ЕдаааЕЕЕсЕ ЕаЕсаааадЕ ЕаЕаЕЕЕЕЕд ааЕааЕЕЕЕЕ аЕЕдаааааЕ 1380
асаасЕаааа аддаЕЕаЕад ЕаЕаадЕдЕд ЕдЕааЕЕЕЕд ЕдЕЕаааЕЕЕ ааадддадда 1440
ааЕдаасаЕд ааасаЕаЕдд ЕдассаЕдаЕ ЕасдааЕЕсд адсЕсддЕас ссддддаЕсс 1500
ЕсЕададЕсд асдЕсасдсд ЕссаЕддада ЕсЕсдаддсс ЕдсадасаЕд саадсЕЕддс 1560
асЕддссдЕс дЕЕЕЕасаас дЕсдЕдасЕд ддаааасссЕ ддсдЕЕассс аасЕЕааЕсд 1620
ссЕЕдсадса саЕсссссЕЕ ЕсдссадсЕд дсдЕааЕадс даададдссс дсассдаЕсд 1680
сссЕЕсссаа садЕЕдсдса дссЕдааЕдд сдааЕддсдс ЕадсаЕаааа аЕаадаадсс 1740
ЕдсаЕЕЕдса ддсЕЕсЕЕаЕ ЕЕЕЕаЕддсд сдссдссаЕЕ аЕЕЕЕЕЕЕда асааЕЕдаса 1800
аЕЕсаЕЕЕсЕ ЕаЕЕЕЕЕЕаЕ ЕаадЕдаЕад Есааааддса ЕаасадЕдсЕ дааЕадааад 1860
аааЕЕЕасад аааадааааЕ ЕаЕадааЕЕЕ адЕаЕдаЕЕа аЕЕаЕасЕса ЕЕЕаЕдааЕд 1920
ЕЕЕааЕЕдаа Еасааааааа ааЕасЕЕдЕЕ аЕдЕаЕЕсаа ЕЕасдддЕЕа аааЕаЕадас 1980
аадЕЕдаааа аЕЕЕааЕааа ааааЕаадЕс сЕсадсЕсЕЕ аЕаЕаЕЕаад сЕассаасЕЕ 2040
адЕаЕаЕаад ссаааасЕЕа ааЕдЕдсЕас саасасаЕса адссдЕЕада даасЕсЕаЕс 2100
- 81 028892
ЕаЕадсааЕа ЕЕЕсаааЕдЕ ассдасаЕас аададаааса ЕЕаасЕаЕаЕ аЕаЕЕсааЕЕ 2160
ЕаЕдадаЕЕа ЕсЕЕаасада ЕаЕаааЕдЕа ааЕЕдсааЕа адЕаадаЕЕЕ адаадЕЕЕаЕ 2220
адссЕЕЕдЕд ЕаЕЕддаадс адЕасдсааа ддсЕЕЕЕЕЕа ЕЕЕдаЕаааа аЕЕадаадЕа 2280
ЕаЕЕЕаЕЕЕЕ ЕЕсаЕааЕЕа аЕЕЕаЕдааа аЕдааадддд дЕдадсааад Едасададда 2340
аадсадЕаЕс ЕЕаЕсаааЕа асааддЕаЕЕ адсааЕаЕса ЕЕаЕЕдасЕЕ ЕадсадЕааа 2400
саЕЕаЕдасЕ ЕЕЕаЕадЕдс ЕЕдЕадсЕаа дЕадЕасдаа адддддадсЕ ЕЕааааадсЕ 2460
ссЕЕддааЕа саЕадааЕЕс аЕаааЕЕааЕ ЕЕаЕдаааад аадддсдЕаЕ аЕдаааасЕЕ 2520
дЕаааааЕЕд сааададЕЕЕ аЕЕааадаЕа сЕдаааЕаЕд сааааЕасаЕ ЕсдЕЕдаЕда 2580
ЕЕсаЕдаЕаа аасадЕадса ассЕаЕЕдса дЕаааЕасаа ЕдадЕсаада ЕдЕЕЕасаЕа 2640
аадддааадЕ ссааЕдЕаЕЕ ааЕЕдЕЕсаа адаЕдаассд аЕаЕддаЕдд ЕдЕдссаЕаа 2700
аааЕдадаЕд ЕЕЕЕасадад даадаасада ааааадаасд ЕасаЕдсаЕЕ аааЕаЕЕаЕд 2760
сааддадсЕЕ ЕаааааадсЕ саЕдЕааада ададЕааааа дааааааЕаа ЕЕЕаЕЕЕаЕЕ 2820
ааЕЕЕааЕаЕ ЕдададЕдсс дасасадЕаЕ дсасЕааааа аЕаЕаЕсЕдЕ ддЕдЕадЕда 2880
дссдаЕасаа ааддаЕадЕс асЕсдсаЕЕЕ ЕсаЕааЕаса ЕсЕЕаЕдЕЕа ЕдаЕЕаЕдЕд 2940
ЕсддЕдддас ЕЕсасдасда ааасссасаа Еааааааада дЕЕсддддЕа дддЕЕаадса 3000
ЕадЕЕдаддс аасЕааасаа ЕсаадсЕадд аЕаЕдсадЕа дсадассдЕа аддЕсдЕЕдЕ 3060
ЕЕаддЕдЕдЕ ЕдЕааЕасаЕ асдсЕаЕЕаа даЕдЕааааа ЕасддаЕасс ааЕдааддда 3120
ааадЕаЕааЕ ЕЕЕЕддаЕдЕ адЕЕЕдЕЕЕд ЕЕсаЕсЕаЕд ддсааасЕас дЕссааадсс 3180
дЕЕЕссаааЕ сЕдсЕааааа дЕаЕаЕссЕЕ ЕсЕааааЕса аадЕсаадЕа ЕдаааЕсаЕа 3240
ааЕааадЕЕЕ ааЕЕЕЕдаад ЕЕаЕЕаЕдаЕ аЕЕаЕдЕЕЕЕ ЕсЕаЕЕаааа ЕаааЕЕаадЕ 3300
аЕаЕадааЕа дЕЕЕааЕааЕ адЕаЕаЕасЕ ЕааЕдЕдаЕа адЕдЕсЕдас адЕдЕсасад 3360
аааддаЕдаЕ ЕдЕЕаЕддаЕ ЕаЕаадсддс сддссадЕдд дсаадЕЕдаа аааЕЕсасаа 3420
аааЕдЕддЕа ЕааЕаЕсЕЕЕ дЕЕсаЕЕада дсдаЕааасЕ ЕдааЕЕЕдад адддаасЕЕа 3480
даЕддЕаЕЕЕ дааааааЕЕд аЕаааааЕад ЕЕддаасада ааададЕаЕЕ ЕЕдассасЕа 3540
сЕЕЕдсаадЕ дЕассЕЕдЕа ссЕасадсаЕ дассдЕЕааа дЕддаЕаЕса сасаааЕааа 3600
ддааааддда аЕдааасЕаЕ аЕссЕдсааЕ дсЕЕЕаЕЕаЕ аЕЕдсааЕда ЕЕдЕааассд 3660
ссаЕЕсадад ЕЕЕаддасдд сааЕсааЕса адаЕддЕдаа ЕЕддддаЕаЕ аЕдаЕдадаЕ 3720
даЕассаадс ЕаЕасааЕаЕ ЕЕсасааЕда ЕасЕдаааса ЕЕЕЕссадсс ЕЕЕддасЕда 3780
дЕдЕаадЕсЕ дасЕЕЕаааЕ саЕЕЕЕЕадс адаЕЕаЕдаа адЕдаЕасдс аасддЕаЕдд 3840
ааасааЕсаЕ адааЕддаад дааадссааа ЕдсЕссддаа аасаЕЕЕЕЕа аЕдЕаЕсЕаЕ 3900
даЕассдЕдд ЕсаассЕЕсд аЕддсЕЕЕаа ЕсЕдааЕЕЕд садаааддаЕ аЕдаЕЕаЕЕЕ 3960
- 82 028892
даЁЁссЁаЁЁ ЁЁЁасЁаЁдд ддаааЁаЁЁа ЁааадаадаЁ аасааааЁЁа ЁасЁЁссЁЁЁ 4020
ддсааЁЁсаа дЁЁсаЁсасд садЁаЁдЁда сддаЁЁЁсас аЁЁЁдссдЁЁ ЁЁдЁааасда 4080
аЁЁдсаддаа ЁЁдаЁаааЁа дЁЁаасЁЁса ддЁЁЁдЁсЁд ЁаасЁааааа саадЁаЁЁЁа 4140
адсаааааса ЁсдЁадаааЁ асддЁдЁЁЁЁ ЁЁдЁЁасссЁ аадЁЁЁ 4186
<210> 50 <211> 9827 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ8215-РрЁааск-ЁЫА-НМО5-РаЁр-НМОК <400> 50 ссЁдсаддаЁ аааааааЁЁд ЁадаЁаааЁЁ ЁЁаЁааааЁа дЁЁЁЁаЁсЁа сааЁЁЁЁЁЁЁ 60 аЁсаддааас адсЁаЁдасс дсддссдсад аЁадЁсаЁаа ЁадЁЁссада аЁадЁЁсааЁ 120
ЁЁадаааЁЁа дасЁааасЁЁ сааааЁдЁЁЁ дЁЁаааЁаЁа ЁассааЁсЁа дЁаЁадаЁаЁ 180
ЁЁЁЁЁаааЁа сЁддасЁЁаа асадЁадЁаа ЁЁЁдссЁааа аааЁЁЁЁЁЁс ааЁЁЁЁЁЁЁЁ 240 ааааааЁссЁ ЁЁЁсаадЁЁд ЁасаЁЁдЁЁа ЁддЁааЁаЁд ЁааЁЁдаада адЁЁаЁдЁад 300
ЁааЁаЁЁдЁа аасдЁЁЁсЁЁ даЁЁЁЁЁЁЁа саЁссаЁдЁа дЁдсЁЁаааа аассааааЁа 360
ЁдЁсасаЁдс асЁЁдЁаЁаЁ ЁЁсаааЁаас ааЁаЁЁЁаЁЁ ЁЁсЁсдЁЁаа аЁЁсасаааЁ 420 ааЁЁЁаЁЁаа ЁааЁаЁсааЁ аассаадаЁЁ аЁасЁЁаааЁ ддаЁдЁЁЁаЁ ЁЁЁЁЁаасас 480
ЁЁЁЁаЁадЁа ааЁаЁаЁЁЁа ЁЁЁЁаЁдЁад ЁаааааддЁЁ аЁааЁЁаЁаа ЁЁдЁаЁЁЁаЁ 540
ЁасааЁЁааЁ ЁааааЁаааа ааЁадддЁЁЁ ЁаддЁааааЁ ЁаадЁЁаЁЁЁ ЁаадаадЁаа 600
ЁЁасааЁааа ааЁЁдаадЁЁ аЁЁЁсЁЁЁаа ддаддаааЁЁ саЁаЁдааад аддЁЁдЁЁаЁ 660
ЁдсаЁсадсЁ дЁЁадаасЁд сааЁаддаЁс ЁЁаЁддаааа адЁсЁЁааад аЁдЁассадс 720 адЁадасЁЁа ддЁдсаасЁд сааЁааадда адсадЁааад ааадсаддЁа ЁаааассЁда 780 адаЁдЁЁааЁ даадЁЁаЁЁЁ ЁаддааасдЁ аЁЁасаадсЁ ддасЁЁддас адааЁссадс 840
Ёадасаддса ЁсаЁЁсааад саддаЁЁасс адЁададаЁа ссЁдсЁаЁда сЁаЁЁааЁаа 900 адЁЁЁдЁддЁ ЁсаддаЁЁаа даасадЁЁЁс ЁЁЁадсЁдсЁ саааЁЁаЁаа аадсЁддЁда 960 сдсадаЁдЁа аЁааЁадсад дЁддЁаЁдда аааЁаЁдЁса ададсассаЁ ассЁЁдсЁаа 1020
ЁааЁдсЁада ЁддддЁЁаЁа дааЁдддааа сдсЁаааЁЁЁ дЁадасдааа ЁдаЁаасЁда 1080
ЁддасЁЁЁдд даЁдсаЁЁЁа асдаЁЁаЁса саЁдддааЁЁ асЁдсЁдааа аЁаЁадсЁда 1140 дадаЁддааЁ аЁаадЁадад аадаасаада ЁдадЁЁЁдса сЁЁдсаЁсЁс адаааааддс 1200 адаадаадсЁ аЁЁаааЁсад дасааЁЁЁаа адаЁдаааЁЁ дЁЁссадЁад ЁааЁЁааадд 1260
ЁадааааддЁ дааасадЁЁд ЁадасасЁда ЁдаасаЁссЁ адаЁЁЁддаЁ сЁасааЁада 1320 аддЁЁЁадсЁ аааЁЁааадс сЁдсЁЁЁЁаа дааадасдда асадЁаасЁд сЁддааасдс 1380
- 83 028892
абсаддббба аабдаббдбд садсбдбббб адббаббабд бсбдсбдааа аддсааадда 1440
аббаддбдбб ааассасббд сбаадабадб бадббабддб бсадсаддбд бадабссбдс 1500
баббабддда бабддассбб бббабдсбас аааддсадсб аббдаааадд сбддббддас 1560
адббдабдаа сббдабсбба бададбсааа бдаддсаббб дсадсасааа дбсббдсбдб 1620
бдсбааддаб сббаааббсд абабдаабаа адбааабдба аасддбддбд сбабадсасб 1680
бддбсабсса абаддбдсба дбддбдсбад ааббббадбб асаббадббс абдсаабдса 1740
ааадададас дсбааааадд дасббдсаас бббабдсаба ддбддбддбс ааддаасадс 1800
аабасббсбб дааааабдбб аадааббсда ддсббббасб ааааасааба аааасаддад 1860
дааабаабаб дасбабадда аббдасаааа бааасбббба сдбассаааа баббабдбад 1920
абабддсааа аббадсадаа дсаадасаад бадасссааа бааабббсбб аббддаабад 1980
дасадасбда аабддсадбб адбссадбаа ассаадабаб адбабсаабд ддбдсбаабд 2040
сбдсбааада бабаабаасб дабдаадаса аааадааааб аддаабддба абадбадсаа 2100
сбдадбсадс адбадабдса дсаааддсад садсадбаса даббсабааб ббаббаддба 2160
ббсаассабб бдсаадабдб ббсдааабда аадаадсабд ббабдсбдсб асбссбдсаа 2220
ббсадббадс бааддаббаб ббадсбасаа дассааабда дааадбббба дббабадсба 2280
садабасадс бадабабдда сббааббсад дбддбдаасс басбсааддб дсбддбдсбд 2340
ббдсбабддб бабадсбсаб аабссбадба басббдсабб ааабдаадас дсбдббдсбб 2400
абасадаада бдбббабдаб ббсбддадас саасаддаса баадбабсса ббадбадабд 2460
дбдсбббабс аааадасдса бабаббадаб сббббсааса абсббддааб даабабдсба 2520
ададасаадд ааададббба дсбдаббббд сбадбсбббд сбббсабдбб ссббббасба 2580
ааабдддбаа аааддсббба даабсбабаа бадабаасдс адабдаааса асбсаадада 2640
даббаадабс бддабабдаа дабдсадббд аббасаабад абабдббдда аабабабаса 2700
саддаадбсб ббабсбббсб сббабаадбс ббсббдаааа бададаббба саддсбддбд 2760
ааасбаббдд аббаббббса басддабсад дббсбдббдд бдааббббаб бсадсбасас 2820
ббдбадаадд абабааадаб сассббдабс аддсадсаса сааадсасбб ббааасааба 2880
даасбдаадб абсадбадаб дсабасдааа сабббббсаа дадабббдаб дабдбадааб 2940
ббдабдаада дсаддабдса дббсабдаад абадасабаб аббсбабсбб бсааасабад 3000
адаабаабдб аададаабаб сабадассбд аабаададсб сдббабаабб ббсааббббс 3060
аббсббббба ааддадабба дсабасаббб бабсабаабб абасадасаа бабадбааба 3120
бабдабдбба ааабабсааб абабддббаа ааабсбдбаб аббббббссс аббббаабба 3180
бббдбасбаб аабаббасас бдадбдбабб дсабабббаа аааабабббд дбасааббад 3240
- 84 028892
ббадббаааб аааббсбааа ббдбааабба бсадаабссб баббааддаа абасабадаб 3300
ббааддадаа абсабааааа ддбдбаабаб ааасбддсба аааббдадса ааааббдадс 3360
ааббаадасб ббббдаббдб абсбббббаб абабббаадд бабабаабсб бабббабабб 3420
дддддааддб ассабдсааб саббадасаа ааабббсада сабббабсаа дасаасаааа 3480
дббасаасаа ббадббдаба аасадбддсб ббсадаадаб садбббдаба ббббасббаа 3540
бсабссбсбб абадабдаад аадббдсбаа бадбсббаба даааабдбаа ббдсасаддд 3600
бдсаббасса дббддасббс ббссбаабаб аабадббдаб дабааддсбб абдббдбасс 3660
аабдабддбб даадаассба дбдббдббдс адсбдсабсб бабддбдсба ааббадбааа 3720
бсадасаддб ддабббаааа сбдбабсабс адааадааба абдаббддас адабадбабб 3780
бдабддбдба дабдасасбд аааааббаад бдсадабабб ааадсаббад ааааасаааб 3840
асабаадабб дсадабдаад сабабссбад бабаааадса ададдбддбд дббабсааад 3900
аабадсааба дабасабббс сададсааса асббббаадб сббааддбаб ббдбадабас 3960
аааадабдсб абдддбдсба абабдсббаа басбабасбб даддсаабаа сбдсаббссб 4020
бааааабдаа бсбссбсааб садабабабб аабдбсбаба сбббсааасс абдсаасбдс 4080
бадбдбадба ааадбасаад дбдадабада бдбаааадаб сббдсбадад дбдааадаас 4140
аддбдаадаа дбадсбаада даабддааад адсббсбдба ббадсбсадд ббдабаббса 4200
бададсбдса асасабааса ааддбдббаб даабддааба сабдсбдббд ббббадсбас 4260
аддааабдаб асбададдбд сбдаадсабс бдсасабдса басдсабсаа дадасддаса 4320
абабададдб абадсаасбб ддадабабда бсадаадада сааадасбба ббддаасбаб 4380
бдаадббсса абдасасббд сбабадбадд бддбддбасб ааадбаббас саабадсбаа 4440
ддсабсабба дадббаббаа абдббдаббс бдсасаадаа сббддасасд бадббдсбдс 4500
бдббддабба дсасаааасб ббдсбдсббд бададсасбб дбббсбдаад дбаббсааса 4560
аддасасабд бсаббасааб абаааадббб адсаабадба дбаддбдсаа ааддбдасда 4620
дабадсасаа дбадсадаад сбсббаааса ддаассаада дсбаабасас аддббдсбда 4680
аадаабббба саддааабба дасадсааба абсбададбс дасдбсасдс дбссабддад 4740
абсбсдаддс сбдсадасаб дсаадсббдд сасбддссдб сдббббасаа сдбсдбдасб 4800
дддаааассс бддсдббасс саасббаабс дссббдсадс асабсссссб ббсдссадсб 4860
ддсдбаабад сдаададдсс сдсассдабс дсссббссса асадббдсдс адссбдаабд 4920
дсдаабддсд сбадсабааа аабаадаадс сбдсабббдс аддсббсбба бббббабддс 4980
дсдссдббсб даабссббад сбаабддббс аасаддбаас бабдасдаад абадсасссб 5040
ддабаадбсб дбаабддабб сбааддсабб баабдаадас дбдбабабаа аабдбдсбаа 5100
бдааааадаа аабдсдббаа аададссбаа аабдадббса аабддббббд аааббдаббд 5160
- 85 028892
д5ад555аа5 55аа5а5а55 5555с5а55д дсЬаЬсЬсда ЬассЬаЬада аЬсЬЬсЬдЬЬ 5220
сас5555д55 555дааа5а5 аааааддддс 55555адссс с55555555а ааасЬссдда 5280
ддад555с55 саЬЬсЬЬдаЬ асЬаЬасдЬа асЬаЬЬЬЬсд аЬЬЬдасЬЬс аЬЬдЬсааЬЬ 5340
аадсЬадЬаа ааЬсааЬддЬ Ьаааааасаа аааасЬЬдса 55555с5асс 5ад5аа555а 5400
5аа5555аад 5д5сдад555 аааадЬаЬаа ЬЬЬассадда ааддадсаад 555555аа5а 5460
аддаааааЬЬ 555сс5555а аааЬЬсЬаЬЬ ЬсдЬЬаЬаЬд асЬааЬЬаЬа аЬсааааааа 5520
ЬдааааЬааа саададдЬаа ааасЬдсЬЬЬ ададаааЬдЬ асЬдаЬаааа ааадаааааа 5580
5сс5ада555 асдЬсаЬаса 5адсасс555 аасЬасЬаад аааааЬаЬЬд аааддасЬЬс 5640
сасЬЬдЬдда даЬЬаЬЬЬдЬ 55а5д55дад ЬдаЬдсадас ЬЬадаасаЬЬ ЬЬаааЬЬаса 5700
ЬаааддЬааЬ 5555дсдд5а аЬадаЬЬЬЬд ЬссааЬдЬдЬ адЬЬддсдас 55дс55д5аа 5760
ддаЬадЬЬЬа даааЬаЬсЬа 55с55а5дда дсаЬЬЬаада ааадаадааа аЬааададЬЬ 5820
5а5а55555а асЬсЬЬасаа сЬссаааЬдЬ ааааадЬЬаЬ даЬсЬЬааЬЬ аЬЬсЬаЬЬаа 5880
асааЬаЬааЬ аааЬсЬЬЬЬа аааааЬЬааЬ ддадсдЬаад даадЬЬаадд аЬаЬаасЬаа 5940
аддЬЬаЬаЬа адааааЬЬад аадЬаасЬЬа ссааааддаа аааЬасаЬаа саааддаЬЬЬ 6000
аЬддааааЬа аааааадаЬЬ аЬЬаЬсаааа ааааддасЬЬ даааЬЬддЬд аЬЬЬадаасс 6060
5аа5555да5 асЬЬаЬааЬс с5са5555са 5д5ад55а55 дсадЬЬааЬа ааадЬЬаЬЬЬ 6120
ЬасадаЬааа ааЬЬаЬЬаЬа ЬаааЬсдада аадаЬддЬЬд дааЬЬаЬдда адЬЬЬдсЬас 6180
ЬааддаЬдаЬ ЬсЬаЬаасЬс аадЬЬдаЬдЬ Ьадаааадса ааааЬЬааЬд аЬЬаЬааада 6240
ддЬЬЬасдаа сЬЬдсдаааЬ аЬЬсадсЬаа адасасЬдаЬ 5а555аа5а5 сдаддссадЬ 6300
аЬЬЬдаааЬЬ 5555а5ааад саЬЬаааадд саадсаддЬа 55ад55555а дЬддаЬЬЬЬЬ 6360
ЬааадаЬдса сасаааЬЬдЬ асаадсаадд аааасЬЬдаЬ дЬЬЬаЬаааа адааадаЬда 6420
ааЬЬаааЬаЬ дЬсЬаЬаЬад 555а55а5аа ЬЬддЬдсааа ааасааЬаЬд аааааасЬад 6480
ааЬаадддаа сЬЬасддаад аЬдааааада адааЬЬаааЬ саадаЬЬЬаа ЬадаЬдаааЬ 6540
адаааЬадаЬ ЬааадЬдЬаа сЬаЬасЬЬЬа ЬаЬаЬаЬаЬд аЬЬааааааа Ьаааааасаа 6600
садссЬаЬЬа ддЬЬдЬЬдЬЬ 5555а5555с 555а55аа55 55555аа555 55ад55555а 6660
д55с555555 ааааЬаадЬЬ ЬсадссЬсЬЬ 555саа5а55 5555ааадаа ддадЬаЬЬЬд 6720
саЬдааЬЬдс с555555с5а асадасЬЬад даааЬаЬЬЬЬ аасадЬаЬсЬ ЬсЬЬдсдссд 6780
дЬдаЬЬЬЬдд аасЬЬсаЬаа сЬЬасЬааЬЬ 5а5аа55а55 а5555с5555 55аа55д5аа 6840
садЬЬдсааа адаадсЬдаа ссЬдЬЬссЬЬ саасЬадЬЬЬ аЬсаЬсЬЬса аЬаЬааЬаЬЬ 6900
сЬЬдассЬаЬ аЬадЬаЬааа 5а5а55555а 55а5а55555 ас555555с5 дааЬсЬаЬЬа 6960
5555а5аа5с аЬааааадЬЬ ЬЬассассаа аадааддЬЬд ЬасЬссЬЬсЬ ддЬссаасаЬ 7020
- 86 028892
аЕЕЕЕЕЕЕас ЕаЕаЕЕаЕсЕ аааЕааЕЕЕЕ ЕдддаасЕдд ЕдЕЕдЕааЕЕ ЕдаЕЕааЕсд 7080
аасаассадЕ ЕаЕасЕЕааа ддааЕЕаЕаа сЕаЕаааааЕ аЕаЕаддаЕЕ аЕсЕЕЕЕЕаа 7140
аЕЕЕсаЕЕаЕ ЕддссЕссЕЕ ЕЕЕаЕЕаааЕ ЕЕаЕдЕЕасс аЕааааадда саЕаасддда 7200
аЕаЕдЕадаа ЕаЕЕЕЕЕааЕ дЕадасаааа ЕЕЕЕасаЕаа аЕаЕааадаа аддаадЕдЕЕ 7260
ЕдЕЕЕаааЕЕ ЕЕаЕадсааа сЕаЕсааааа ЕЕадддддаЕ аааааЕЕЕаЕ дааааааадд 7320
ЕЕЕЕсдаЕдЕ ЕаЕЕЕЕЕаЕд ЕЕЕаасЕЕЕа аЕадЕЕЕдЕд дЕЕЕаЕЕЕас аааЕЕсддсс 7380
ддссадЕддд саадЕЕдааа ааЕЕсасааа ааЕдЕддЕаЕ ааЕаЕсЕЕЕд ЕЕсаЕЕадад 7440
сдаЕааасЕЕ дааЕЕЕдада дддаасЕЕад аЕддЕаЕЕЕд ааааааЕЕда ЕаааааЕадЕ 7500
Еддаасадаа аададЕаЕЕЕ ЕдассасЕас ЕЕЕдсаадЕд ЕассЕЕдЕас сЕасадсаЕд 7560
ассдЕЕааад ЕддаЕаЕсас асаааЕааад даааадддаа ЕдааасЕаЕа ЕссЕдсааЕд 7620
сЕЕЕаЕЕаЕа ЕЕдсааЕдаЕ ЕдЕааассдс саЕЕсададЕ ЕЕаддасддс ааЕсааЕсаа 7680
даЕддЕдааЕ ЕддддаЕаЕа ЕдаЕдадаЕд аЕассаадсЕ аЕасааЕаЕЕ ЕсасааЕдаЕ 7740
асЕдааасаЕ ЕЕЕссадссЕ ЕЕддасЕдад ЕдЕаадЕсЕд асЕЕЕаааЕс аЕЕЕЕЕадса 7800
даЕЕаЕдааа дЕдаЕасдса асддЕаЕдда аасааЕсаЕа дааЕддаадд ааадссаааЕ 7860
дсЕссддааа асаЕЕЕЕЕаа ЕдЕаЕсЕаЕд аЕассдЕддЕ саассЕЕсда ЕддсЕЕЕааЕ 7920
сЕдааЕЕЕдс адаааддаЕа ЕдаЕЕаЕЕЕд аЕЕссЕаЕЕЕ ЕЕасЕаЕддд даааЕаЕЕаЕ 7980
ааадаадаЕа асааааЕЕаЕ асЕЕссЕЕЕд дсааЕЕсаад ЕЕсаЕсасдс адЕаЕдЕдас 8040
ддаЕЕЕсаса ЕЕЕдссдЕЕЕ ЕдЕааасдаа ЕЕдсаддааЕ ЕдаЕаааЕад ЕЕаасЕЕсад 8100
дЕЕЕдЕсЕдЕ аасЕааааас аадЕаЕЕЕаа дсааааасаЕ сдЕадаааЕа сддЕдЕЕЕЕЕ 8160
ЕдЕЕасссЕа адЕЕЕааасЕ ссЕЕЕЕЕдаЕ ааЕсЕсаЕда ссааааЕссс ЕЕаасдЕдад 8220
ЕЕЕЕсдЕЕсс асЕдадсдЕс адассссдЕа даааадаЕса ааддаЕсЕЕс ЕЕдадаЕссЕ 8280
ЕЕЕЕЕЕсЕдс дсдЕааЕсЕд сЕдсЕЕдсаа асааааааас сассдсЕасс адсддЕддЕЕ 8340
ЕдЕЕЕдссдд аЕсаададсЕ ассаасЕсЕЕ ЕЕЕссдаадд ЕаасЕддсЕЕ садсададсд 8400
садаЕассаа аЕасЕдЕЕсЕ ЕсЕадЕдЕад ссдЕадЕЕад дссассасЕЕ саадаасЕсЕ 8460
дЕадсассдс сЕасаЕассЕ сдсЕсЕдсЕа аЕссЕдЕЕас садЕддсЕдс ЕдссадЕддс 8520
даЕаадЕсдЕ дЕсЕЕассдд дЕЕддасЕса адасдаЕадЕ ЕассддаЕаа ддсдсадсдд 8580
ЕсдддсЕдаа сддддддЕЕс дЕдсасасад сссадсЕЕдд адсдаасдас сЕасассдаа 8640
сЕдадаЕасс ЕасадсдЕда дсЕаЕдадаа адсдссасдс ЕЕсссдаадд дадаааддсд 8700
дасаддЕаЕс сддЕаадсдд садддЕсдда асаддададс дсасдаддда дсЕЕссаддд 8760
ддааасдссЕ ддЕаЕсЕЕЕа ЕадЕссЕдЕс дддЕЕЕсдсс ассЕсЕдасЕ ЕдадсдЕсда 8820
ЕЕЕЕЕдЕдаЕ дсЕсдЕсадд ддддсддадс сЕаЕддаааа асдссадсаа сдсддссЕЕЕ 8880
ЕЕасддЕЕсс ЕддссЕЕЕЕд сЕддссЕЕЕЕ дсЕсасаЕдЕ ЕсЕЕЕссЕдс дЕЕаЕссссЕ 8940
- 87 028892
даЬЬсЬдЬдд аЬаассдЬаЬ ЬассдссЬЬЬ дадЬдадсЬд аЬассдсЬсд ссдсадссда 9000
асдассдадс дсадсдадЬс адЬдадсдад даадсддаад адсдсссааЬ асдсадддсс 9060
сссЬдсЬЬсд дддЬсаЬЬаЬ адсдаЬЬЬЬЬ ЬсддЬаЬаЬс саЬссЬЬЬЬЬ сдсасдаЬаЬ 9120
асаддаЬЬЬЬ дссааадддЬ ЬсдЬдЬадас ЬЬЬссЬЬддЬ дЬаЬссаасд дсдЬсадссд 9180
ддсаддаЬад дЬдаадЬадд сссасссдсд адсдддЬдЬЬ ссЬЬсЬЬсас ЬдЬсссЬЬаЬ 9240
ЬсдсассЬдд сддЬдсЬсаа сдддааЬссЬ дсЬсЬдсдад дсЬддссддс Ьассдссддс 9300
дЬаасадаЬд адддсаадсд даЬддсЬдаЬ дааассаадс саассаддаа дддсадссса 9360
ссЬаЬсаадд ЬдЬасЬдссЬ Ьссадасдаа сдаададсда ЬЬдаддаааа ддсддсддсд 9420
дссддсаЬда дссЬдЬсддс сЬассЬдсЬд дссдЬсддсс адддсЬасаа ааЬсасдддс 9480
дЬсдЬддасЬ аЬдадсасдЬ ссдсдадсЬд дсссдсаЬса аЬддсдассЬ дддссдссЬд 9540
ддсддссЬдс ЬдааасЬсЬд дсЬсассдас дасссдсдса сддсдсддЬЬ сддЬдаЬдсс 9600
асдаЬссЬсд сссЬдсЬддс даадаЬсдаа дадаадсадд асдадсЬЬдд сааддЬсаЬд 9660
аЬдддсдЬдд Ьссдсссдад ддсададсса ЬдасЬЬЬЬЬЬ адссдсЬааа асддссдддд 9720
ддЬдсдсдЬд аЬЬдссаадс асдЬссссаЬ дсдсЬссаЬс аадаададсд асЬЬсдсдда 9780
дсЬддЬдаад ЬасаЬсассд асдадсаадд саадассдаЬ сдддссс 9827
<210> 51 <211> 843 <212> ДНК <213> ЗЬарЬу1ососсиз аигеиз подтип аигеиз
<400> 51 аЬдаЬадсЬд ЬЬссаЬЬЬаа сдсЬддаааа аЬаааадЬЬЬ ЬааЬЬдаддс аЬЬадааЬсЬ 60
ддаааЬЬаЬЬ саЬсааЬааа аЬсадаЬдЬа ЬаЬдасддаа ЬдЬЬаЬаЬда ЬдсассадаЬ 120
сассЬЬаааЬ саЬЬадЬааа садаЬЬЬдЬа даасЬЬааЬа аЬаЬаасЬда дссаЬЬадса 180
дЬаасЬаЬас адасаааЬсЬ ЬссЬссЬЬса ададдЬсЬЬд даЬсЬадЬдс адсЬдЬЬдсЬ 240
дЬЬдсЬЬЬЬд Ьаададсаад ЬЬаЬдаЬЬЬс ЬЬаддааааа дЬЬЬаасЬаа адаададсЬЬ 300
аЬадаааадд сЬааЬЬдддс ЬдаасаааЬа дсЬсаЬддаа адссаЬсЬдд ааЬадаЬаса 360
сааасааЬад ЬаЬсЬддааа дссЬдЬЬЬдд ЬЬЬсаааадд дасаЬдсада аасасЬЬааа 420
асЬсЬЬЬсас ЬЬдаЬддаЬа саЬддЬадЬа аЬЬдаЬасад дЬдЬЬааадд аадЬасаада 480
саддсЬдЬад аадаЬдЬЬса ЬааасЬЬЬдс даадаЬссЬс ааЬаЬаЬдад ЬсасдЬаааа 540
сасаЬаддаа аасЬЬдЬасЬ ЬададсаЬсЬ даЬдЬЬаЬЬд аасаЬсаЬаа сЬЬЬдаадса 600
сЬЬдсЬдаЬа ЬаЬЬсааЬда аЬдЬсаЬдсЬ даЬЬЬааадд сЬсЬЬасадЬ аадЬсаЬдас 660
ааааЬадаас адЬЬааЬдаа даЬаддаааа дааааЬддЬд сЬаЬадсЬдд ЬаааЬЬаасЬ 720
ддЬдсЬддЬа даддЬддЬЬс ааЬдЬЬаЬЬа сЬЬдсаааад асЬЬассаас ЬдсааадааЬ 780
- 88 028892
абадббааад баа садбададаа адсбддбдса дсасабасбб ддаббдаааа бббаддбддб 840 843
<210> 52 <211> 1077 <212> ДНК <213> БбарЬу1ососсиз аигеиз подтип аигеиз
<400> 52 абдабасаад баааддсасс аддаааабба бабабадсад дбдаабасдс бдббасадаа 60
ссаддабаба аабсбдббсб бабадсбсбб дабадабббд ббасадсбас баббдаддаа 120
дсбдабсааб асаааддаас аабасаббса ааддсаббас абсасаабсс адбаасбббб 180
адбададабд аадаббсбаб бдббабабса дасссасасд садсааааса асббааббаб 240
дбадбаасбд сбабадаааб абббдадсаа бабдсааааб сабдбдасаб адсаабдаад 300
саббббсабб баасбабада ббсбаасбба дабдабадба абддасабаа дбабддасбб 360
ддабсббсбд сбдсбдбббб адбббсадба аббааадбас ббаасдаабб ббабдабабд 420
ааасбббсаа ассбббабаб абабаадбба дсадбааббд сбаабабдаа аббасададб 480
ббабсббсаб дсддбдабаб адсадбаадб дбббаббсад дббддббадс ббаббсбаса 540
бббдассабд аабдддбааа асассадаба даадабасаа садббдаада адбасббабб 600
аааааббддс сбддаббаса сабададсса сббсаадсбс сбдаааабаб ддаадббсбб 660
абаддббдда саддбадбсс адсбадбадб ссбсаббббд бббсбдаадб баааадасбб 720
аадбсадабс сббсабббба сддбдабббс ббадаадабб сасабадабд бдбадааааа 780
ббааббсабд саббсаааас баабаабабб аадддбдббс адаааабддб аадасадааб 840
адаасбабба басааадааб ддабааддаа дсаасадббд абабададас бдадаадбба 900
ааабабббаб дбдабаббдс бдааааабаб сабддбдсаа дбаааасббс аддбдсбддб 960
ддбддбдабб дсддаабаас бабаабаааб ааддабдбад асааададаа аабабабдаб 1020
даабддасба аасабддааб ааадссбсбб аадбббааба бббабсабдд асаабаа 1077
<210> 53 <211> 984 <212> ДНК <213> БбарЬу1ососсиз аигеиз подтип аигеиз
<400> 53 абдабааааб сбддаааадс аададсасас асбаабабад сасббабааа абаббддддб 60
аадааадабд аддсаббааб аабассаабд аабаасбсаа бабсадбаас бббадаааад 120
ббббабасбд ааасаааадб басабббаас дабсадсбба сбсаадабса аббббддсбб 180
аабддбдааа аадбббсбдд аааадаабба даааадаббб сааадбабаб ддабаббдбб 240
- 89 028892
адаааЕадад сЕддааЕада ЕЕддЕаЕдсЕ дадаЕадааЕ сЕдаЕааЕЕЕ ЕдЕЕссЕаса 300
дсЕдсЕддЕс ЕЕдсЕадЕЕс ЕдсЕадЕдсЕ ЕаЕдсадсаЕ ЕадсЕдсЕдс аЕдЕаассаа 360
дсасЕЕдаЕЕ ЕасадЕЕаад ЕдаЕааадас ЕЕаадЕадаЕ ЕадсЕадааЕ ЕддаЕсадда 420
ЕсадсаЕсаа даЕсааЕаЕа сддЕддЕЕЕЕ дсадааЕддд аааааддаЕа ЕааЕдасдаа 480
асЕЕсЕЕаЕд сЕдЕЕссаЕЕ адааадЕааЕ сасЕЕЕдаад аЕдаЕсЕЕдс ЕаЕдаЕЕЕЕЕ 540
дЕадЕааЕаа ассаасаЕЕс ЕаааааддЕЕ ссЕЕсаадаЕ аЕддааЕдЕс ЕсЕЕасаада 600
ааЕасаадЕа даЕЕсЕаЕса аЕаЕЕддЕЕа дассаЕаЕЕд аЕдаадаЕсЕ Едсадаадса 660
ааддсадсаа ЕасаадаЕаа ддаЕЕЕЕаад адаЕЕаддЕд аадЕЕаЕЕда ададааЕдда 720
сЕЕадааЕдс аЕдсЕасааа ЕсЕЕддаЕса асЕссассЕЕ ЕЕасЕЕасЕЕ адЕасаадад 780
ЕсаЕасдаЕд ЕааЕддсаЕЕ адЕасаЕдад ЕдЕададаад саддаЕаЕсс аЕдсЕаЕЕЕс 840
асЕаЕддаЕд сЕддассЕаа ЕдЕаааааЕа сЕЕдЕадада адааааасаа асаасадаЕа 900
аЕадаЕааас ЕЕЕЕаасЕса дЕЕсдаЕааЕ ааЕсадаЕаа ЕадаЕадЕда ЕаЕЕаЕадсЕ 960
асаддЕаЕЕд аааЕЕаЕада аЕаа 984
<210> 54 <211> 516 <212> ДНК <213> С1озЕг10.1ит Ье1зег1пск11 <400> 54
аЕддсададЕ аЕаЕааЕадс адЕадаЕдад ЕЕсдаЕаасд аааЕаддаЕс ааЕадаааад 60
аЕддаадсЕс аЕадаааадд аасасЕЕсаЕ ададсаЕЕса дЕаЕЕЕЕадЕ ЕЕЕЕаасЕса 120
аадааЕсаас ЕЕЕЕаЕЕаса даааадаааЕ дЕааадаааЕ аЕсасЕсЕсс аддаЕЕаЕдд 180
асааасасЕЕ дЕЕдЕадЕса сссаадаЕаЕ ддЕдааЕсЕс ЕЕсаЕдаЕдс ЕаЕаЕасада 240
адаЕЕаааад аададаЕддд аЕЕЕасЕЕдс даасЕЕдаад аадЕаЕЕсЕс аЕЕсаЕаЕаЕ 300
ааддЕаааас ЕЕдаадаЕаа ЕЕЕаЕЕЕдад ааЕдааЕаЕд ассаЕдЕаЕЕ ЕаЕЕддЕааа 360
ЕаЕдаЕддЕд адаЕааЕЕдЕ ЕааЕааадаЕ даадЕЕдаЕд аЕЕЕЕаааЕд ддЕадасаЕЕ 420
ааЕдаадЕЕа ааааддасаЕ ааЕадааада ссЕдаддсаЕ аЕасЕЕасЕд дЕЕЕаадЕаЕ 480
сЕЕдЕаааЕа аадсЕдаааа ЕаадаЕаЕЕЕ аааЕаа 516
<210> 55 <211> 120 <212> ДНК <213> С1озЕг10.1ит аиЕоеЕкаподепит <400> 55
аЕаЕсдаЕас адаЕаааааа аЕаЕаЕааЕа садаадаааа ааЕЕаЕаааЕ ЕЕдЕддЕаЕа 60
аЕаЕааадЕа ЕадЕааЕЕЕа адЕЕЕааасс ЕсдЕдаааас дсЕаасаааЕ ааЕаддаддЕ 120
- 90 028892
<210> 56
<211> 900
<212> ДНК
<213> ЕзсЬейсЫа οοΐί
<400> 56
абддабббсс сасаасаабб адаадсабдб дбаааасадд сбаабсаддс асббадбада 60
бббаббдсбс сбсббссббб бсаааабаса ссадбадбад ааасбабдса абасддбдса 120
сббббаддбд дбаааадабб аадассаббс ббадбабабд сбасаддаса бабдбббддб 180
дбабсаасба абасбббада сдсбссадсб дсбдсбдббд аабдбаббса бдсабаббсб 240
ббаабасабд абдасббасс адсаабддаб дасдабдабб баадаададд бббассбаса 300
бдбсабдбба аабббддбда адсбаабдса аббббадсад дбдасдсббб асааасббба 360
дсбббббсба басбббсада бдсадасабд ссбдаадббб садабадада бадаабббсб 420
абдабабсад адсббдсабс бдсабсадда абадсбддаа бдбдсддбдд бсаадсасбб 480
дабббадабд садааддбаа асасдбасса сббдабдсаб бадададааб бсабадасаб 540
аааасаддбд сбсббабаад адсадсадба адаббаддбд сбббаадбдс бддбдасаад 600
ддбадаадад сасббссадб асббдабаад бабдсадааа дбабаддабб адсббббсаа 660
дббсаадабд асабасббда сдббдббддб дабасбдсба сбббаддааа аадасадддб 720
дсадабсадс ааббаддааа абсбасабас ссбдсбббас ббддаббада асаддсбада 780
аадааадсаа дадасббааб адабдасдса адасааадбс ббааасадбб адсбдаасаа 840
бсасббдаса саадбдсасб бдаадсасбб дсадаббаба ббабасадад ааасаадбаа 900
<210> 57 <211> 975 <212> ДНК <213> Ма1из х 4отезбгса <400> 57
абддааббба дадбасаббб асаддсадас аасдаасада ааабабббса ааабсааабд 60
ааассададс садаадсабс абабсббаба аабсааадаа даадбдсбаа ббабааасса 120
аасабббдда аааасдаббб бсббдабсад бсбббаабаб саааабабда бддбдабдаа 180
бабадаааас бббсадаааа дббаабадаа даадбааада бабасабабс адсададасб 240
абддабббад ббдсбааабб адаасббаба даббсбдбба даааасббдд асббдсбааб 300
сбббббдада аадааабааа ддаадсабба дасадбабад садсаабада абсадабааб 360
ббаддаасба дадасдабсб ббабддааса дсбсббсабб ббаадаббсб бадасадсаб 420
ддабабаадд баадбсаада бабабббддб адабббабдд абдадааадд аасаббадаа 480
аабсабсасб ббдсасасбб ааааддаабд ббадааббаб ббдаддсаад баабсббдда 540
бббдааддбд аадасабабб адабдаадсб ааадсабсбс ббасасббдс бсббададаб 600
- 91 028892
ЕсаддасаЕа ЕЕЕдЕЕаЕсс адасЕсааас ЕЕаадЕадад аЕдЕадЕЕса ЕадЕЕЕадаа 660
ЕЕассЕадЕс аЕадаададЕ ЕсааЕддЕЕс даЕдЕааааЕ ддсадаЕЕаа ЕдсаЕасдаа 720
ааадаЕаЕЕЕ дЕададЕааа ЕдсаасЕЕЕа ЕЕададЕЕад сааадЕЕааа ЕЕЕЕааЕдЕЕ 780
дЕЕсаадсЕс адсЕЕсадаа дааЕсЕЕада даадсЕадЕа даЕддЕдддс ЕааЕсЕЕддЕ 840
ЕЕсдсадаЕа аЕЕЕааадЕЕ ЕдсЕададаЕ адасЕЕдЕад адЕдЕЕЕЕЕс аЕдсдсадЕа 900
ддЕдЕадсаЕ ЕЕдаассада дсаЕЕсаЕсЕ ЕЕЕадааЕаЕ дЕЕЕаасЕаа ддЕааЕЕааЕ 960
сЕЕдЕЕсЕЕа ЕЕаЕа 975
<210> 58 <211> 13817 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> рМТЬ8314-РрЕааск-ЕЬ1А-НМОЗ-РаЕр-НМОК-Ргп£-МК-РМК-РМВ-Р£ог-1Ы-1зр З <400> 58
ааасЕссЕЕЕ ЕЕдаЕааЕсЕ саЕдассааа аЕсссЕЕаас дЕдадЕЕЕЕс дЕЕссасЕда 60
дсдЕсадасс ссдЕадаааа даЕсааадда ЕсЕЕсЕЕдад аЕссЕЕЕЕЕЕ ЕсЕдсдсдЕа 120
аЕсЕдсЕдсЕ Едсааасааа аааассассд сЕассадсдд ЕддЕЕЕдЕЕЕ дссддаЕсаа 180
дадсЕассаа сЕсЕЕЕЕЕсс дааддЕаасЕ ддсЕЕсадса дадсдсадаЕ ассаааЕасЕ 240
дЕЕсЕЕсЕад ЕдЕадссдЕа дЕЕаддссас сасЕЕсаада асЕсЕдЕадс ассдссЕаса 300
ЕассЕсдсЕс ЕдсЕааЕссЕ дЕЕассадЕд дсЕдсЕдсса дЕддсдаЕаа дЕсдЕдЕсЕЕ 360
ассдддЕЕдд асЕсаадасд аЕадЕЕассд даЕааддсдс адсддЕсддд сЕдаасдддд 420
ддЕЕсдЕдса сасадсссад сЕЕддадсда асдассЕаса ссдаасЕдад аЕассЕасад 480
сдЕдадсЕаЕ дадааадсдс сасдсЕЕссс даадддадаа аддсддасад дЕаЕссддЕа 540
адсддсаддд Есддаасадд ададсдсасд адддадсЕЕс садддддааа сдссЕддЕаЕ 600
сЕЕЕаЕадЕс сЕдЕсдддЕЕ ЕсдссассЕс ЕдасЕЕдадс дЕсдаЕЕЕЕЕ дЕдаЕдсЕсд 660
Есаддддддс ддадссЕаЕд дааааасдсс адсаасдсдд ссЕЕЕЕЕасд дЕЕссЕддсс 720
ЕЕЕЕдсЕддс сЕЕЕЕдсЕса саЕдЕЕсЕЕЕ ссЕдсдЕЕаЕ ссссЕдаЕЕс ЕдЕддаЕаас 780
сдЕаЕЕассд ссЕЕЕдадЕд адсЕдаЕасс дсЕсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадЕсадЕда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЕасдса дддсссссЕд саддаЕаааа 900
аааЕЕдЕада ЕаааЕЕЕЕаЕ ааааЕадЕЕЕ ЕаЕсЕасааЕ ЕЕЕЕЕЕаЕса ддааасадсЕ 960
аЕдассдсдд ссдсадаЕад ЕсаЕааЕадЕ ЕссадааЕад ЕЕсааЕЕЕад аааЕЕадасЕ 1020
ааасЕЕсааа аЕдЕЕЕдЕЕа ааЕаЕаЕасс ааЕсЕадЕаЕ адаЕаЕЕЕЕЕ ЕаааЕасЕдд 1080
асЕЕааасад ЕадЕааЕЕЕд ссЕааааааЕ ЕЕЕЕЕсааЕЕ ЕЕЕЕЕЕаааа ааЕссЕЕЕЕс 1140
- 92 028892
аадЁЁдЁаса ЁЁдЁЁаЁддЁ ааЁаЁдЁааЁ ЁдаадаадЁЁ аЁдЁадЁааЁ аЁЁдЁааасд 1200
ЁЁЁсЁЁдаЁЁ ЁЁЁЁЁасаЁс саЁдЁадЁдс ЁЁаааааасс ааааЁаЁдЁс асаЁдсасЁЁ 1260
дЁаЁаЁЁЁса ааЁаасааЁа ЁЁЁаЁЁЁЁсЁ сдЁЁаааЁЁс асаааЁааЁЁ ЁаЁЁааЁааЁ 1320
аЁсааЁаасс аадаЁЁаЁас ЁЁаааЁддаЁ дЁЁЁаЁЁЁЁЁ ЁаасасЁЁЁЁ аЁадЁаааЁа 1380
ЁаЁЁЁаЁЁЁЁ аЁдЁадЁааа ааддЁЁаЁаа ЁЁаЁааЁЁдЁ аЁЁЁаЁЁаса аЁЁааЁЁааа 1440
аЁааааааЁа дддЁЁЁЁадд ЁааааЁЁаад ЁЁаЁЁЁЁаад аадЁааЁЁас ааЁаааааЁЁ 1500
даадЁЁаЁЁЁ сЁЁЁааддад даааЁЁсаЁа ЁдааададдЁ ЁдЁЁаЁЁдса ЁсадсЁдЁЁа 1560
даасЁдсааЁ аддаЁсЁЁаЁ ддааааадЁс ЁЁааадаЁдЁ ассадсадЁа дасЁЁаддЁд 1620
саасЁдсааЁ аааддаадса дЁааадааад саддЁаЁааа ассЁдаадаЁ дЁЁааЁдаад 1680
ЁЁаЁЁЁЁадд ааасдЁаЁЁа саадсЁддас ЁЁддасадаа ЁссадсЁада саддсаЁсаЁ 1740
Ёсааадсадд аЁЁассадЁа дадаЁассЁд сЁаЁдасЁаЁ ЁааЁааадЁЁ ЁдЁддЁЁсад 1800
даЁЁаадаас адЁЁЁсЁЁЁа дсЁдсЁсааа ЁЁаЁаааадс ЁддЁдасдса даЁдЁааЁаа 1860
ЁадсаддЁдд ЁаЁддааааЁ аЁдЁсаадад сассаЁассЁ ЁдсЁааЁааЁ дсЁадаЁддд 1920
дЁЁаЁадааЁ дддааасдсЁ аааЁЁЁдЁад асдаааЁдаЁ аасЁдаЁдда сЁЁЁдддаЁд 1980
саЁЁЁаасда ЁЁаЁсасаЁд ддааЁЁасЁд сЁдааааЁаЁ адсЁдадада ЁддааЁаЁаа 2040
дЁададаада асаадаЁдад ЁЁЁдсасЁЁд саЁсЁсадаа аааддсадаа даадсЁаЁЁа 2100
ааЁсаддаса аЁЁЁааадаЁ даааЁЁдЁЁс садЁадЁааЁ ЁаааддЁада аааддЁдааа 2160
садЁЁдЁада сасЁдаЁдаа саЁссЁадаЁ ЁЁддаЁсЁас ааЁадааддЁ ЁЁадсЁаааЁ 2220
ЁааадссЁдс ЁЁЁЁаадааа дасддаасад ЁаасЁдсЁдд ааасдсаЁса ддЁЁЁаааЁд 2280
аЁЁдЁдсадс ЁдЁЁЁЁадЁЁ аЁЁаЁдЁсЁд сЁдааааддс аааддааЁЁа ддЁдЁЁааас 2340
сасЁЁдсЁаа даЁадЁЁадЁ ЁаЁддЁЁсад саддЁдЁада ЁссЁдсЁаЁЁ аЁдддаЁаЁд 2400
дассЁЁЁЁЁа ЁдсЁасааад дсадсЁаЁЁд ааааддсЁдд ЁЁддасадЁЁ даЁдаасЁЁд 2460
аЁсЁЁаЁада дЁсаааЁдад дсаЁЁЁдсад сасааадЁсЁ ЁдсЁдЁЁдсЁ ааддаЁсЁЁа 2520
ааЁЁсдаЁаЁ дааЁааадЁа ааЁдЁааасд дЁддЁдсЁаЁ адсасЁЁддЁ саЁссааЁад 2580
дЁдсЁадЁдд ЁдсЁадааЁЁ ЁЁадЁЁасаЁ ЁадЁЁсаЁдс ааЁдсаааад ададасдсЁа 2640
аааадддасЁ ЁдсаасЁЁЁа ЁдсаЁаддЁд дЁддЁсаадд аасадсааЁа сЁЁсЁЁдааа 2700
ааЁдЁЁаада аЁЁсдаддсЁ ЁЁЁасЁаааа асааЁааааа саддаддааа ЁааЁаЁдасЁ 2760
аЁаддааЁЁд асааааЁааа сЁЁЁЁасдЁа ссааааЁаЁЁ аЁдЁадаЁаЁ ддсааааЁЁа 2820
дсадаадсаа дасаадЁада сссаааЁааа ЁЁЁсЁЁаЁЁд дааЁаддаса дасЁдаааЁд 2880
дсадЁЁадЁс садЁааасса адаЁаЁадЁа ЁсааЁдддЁд сЁааЁдсЁдс ЁааадаЁаЁа 2940
аЁаасЁдаЁд аадасааааа дааааЁадда аЁддЁааЁад ЁадсаасЁда дЁсадсадЁа 3000
даЁдсадсаа аддсадсадс адЁасадаЁЁ саЁааЁЁЁаЁ ЁаддЁаЁЁса ассаЁЁЁдса 3060
- 93 028892
адаЕдЕЕЕсд аааЕдааада адсаЕдЕЕаЕ дсЕдсЕасЕс сЕдсааЕЕса дЕЕадсЕаад 3120
даЕЕаЕЕЕад сЕасаадасс аааЕдадааа дЕЕЕЕадЕЕа ЕадсЕасада ЕасадсЕада 3180
ЕаЕддасЕЕа аЕЕсаддЕдд ЕдаассЕасЕ сааддЕдсЕд дЕдсЕдЕЕдс ЕаЕддЕЕаЕа 3240
дсЕсаЕааЕс сЕадЕаЕасЕ ЕдсаЕЕаааЕ даадасдсЕд ЕЕдсЕЕаЕас адаадаЕдЕЕ 3300
ЕаЕдаЕЕЕсЕ ддадассаас аддасаЕаад ЕаЕссаЕЕад ЕадаЕддЕдс ЕЕЕаЕсаааа 3360
дасдсаЕаЕа ЕЕадаЕсЕЕЕ ЕсаасааЕсЕ ЕддааЕдааЕ аЕдсЕаадад асааддааад 3420
адЕЕЕадсЕд аЕЕЕЕдсЕад ЕсЕЕЕдсЕЕЕ саЕдЕЕссЕЕ ЕЕасЕааааЕ дддЕааааад 3480
дсЕЕЕадааЕ сЕаЕааЕада ЕаасдсадаЕ дааасаасЕс аадададаЕЕ аадаЕсЕдда 3540
ЕаЕдаадаЕд садЕЕдаЕЕа сааЕадаЕаЕ дЕЕддаааЕа ЕаЕасасадд аадЕсЕЕЕаЕ 3600
сЕЕЕсЕсЕЕа ЕаадЕсЕЕсЕ ЕдааааЕада даЕЕЕасадд сЕддЕдааас ЕаЕЕддаЕЕа 3660
ЕЕЕЕсаЕасд даЕсаддЕЕс ЕдЕЕддЕдаа ЕЕЕЕаЕЕсад сЕасасЕЕдЕ адааддаЕаЕ 3720
ааадаЕсасс ЕЕдаЕсаддс адсасасааа дсасЕЕЕЕаа асааЕадаас ЕдаадЕаЕса 3780
дЕадаЕдсаЕ асдааасаЕЕ ЕЕЕсаадада ЕЕЕдаЕдаЕд ЕадааЕЕЕда Едаададсад 3840
даЕдсадЕЕс аЕдаадаЕад асаЕаЕаЕЕс ЕаЕсЕЕЕсаа асаЕададаа ЕааЕдЕаада 3900
дааЕаЕсаЕа дассЕдааЕа ададсЕсдЕЕ аЕааЕЕЕЕса аЕЕЕЕсаЕЕс ЕЕЕЕЕааадд 3960
адаЕЕадсаЕ асаЕЕЕЕаЕс аЕааЕЕаЕас адасааЕаЕа дЕааЕаЕаЕд аЕдЕЕааааЕ 4020
аЕсааЕаЕаЕ ддЕЕаааааЕ сЕдЕаЕаЕЕЕ ЕЕЕсссаЕЕЕ ЕааЕЕаЕЕЕд ЕасЕаЕааЕа 4080
ЕЕасасЕдад ЕдЕаЕЕдсаЕ аЕЕЕаааааа ЕаЕЕЕддЕас ааЕЕадЕЕад ЕЕаааЕаааЕ 4140
ЕсЕаааЕЕдЕ аааЕЕаЕсад ааЕссЕЕаЕЕ ааддаааЕас аЕадаЕЕЕаа ддадаааЕса 4200
ЕаааааддЕд ЕааЕаЕааас ЕддсЕааааЕ Едадсааааа ЕЕдадсааЕЕ аадасЕЕЕЕЕ 4260
даЕЕдЕаЕсЕ ЕЕЕЕаЕаЕаЕ ЕЕааддЕаЕа ЕааЕсЕЕаЕЕ ЕаЕаЕЕдддд дааддЕасса 4320
ЕдсааЕсаЕЕ адасаааааЕ ЕЕсадасаЕЕ ЕаЕсаадаса асаааадЕЕа саасааЕЕад 4380
ЕЕдаЕаааса дЕддсЕЕЕса даадаЕсадЕ ЕЕдаЕаЕЕЕЕ асЕЕааЕсаЕ ссЕсЕЕаЕад 4440
аЕдаадаадЕ ЕдсЕааЕадЕ сЕЕаЕадааа аЕдЕааЕЕдс асадддЕдса ЕЕассадЕЕд 4500
дасЕЕсЕЕсс ЕааЕаЕааЕа дЕЕдаЕдаЕа аддсЕЕаЕдЕ ЕдЕассааЕд аЕддЕЕдаад 4560
аассЕадЕдЕ ЕдЕЕдсадсЕ дсаЕсЕЕаЕд дЕдсЕаааЕЕ адЕаааЕсад асаддЕддаЕ 4620
ЕЕаааасЕдЕ аЕсаЕсадаа адааЕааЕда ЕЕддасадаЕ адЕаЕЕЕдаЕ ддЕдЕадаЕд 4680
асасЕдаааа аЕЕаадЕдса даЕаЕЕааад саЕЕадаааа асаааЕасаЕ аадаЕЕдсад 4740
аЕдаадсаЕа ЕссЕадЕаЕа ааадсаадад дЕддЕддЕЕа ЕсааадааЕа дсааЕадаЕа 4800
саЕЕЕссада дсаасаасЕЕ ЕЕаадЕсЕЕа аддЕаЕЕЕдЕ адаЕасаааа даЕдсЕаЕдд 4860
дЕдсЕааЕаЕ дсЕЕааЕасЕ аЕасЕЕдадд сааЕаасЕдс аЕЕссЕЕааа ааЕдааЕсЕс 4920
- 94 028892
сЬсааЬсада ЬаЬаЬЬааЬд ЬсЬаЬасЬЬЬ сааассаЬдс аасЬдсЬадЬ дЬадЬаааад 4980
ЬасааддЬда даЬадаЬдЬа ааадаЬсЬЬд сЬададдЬда аадаасаддЬ даадаадЬад 5040
сЬаададааЬ ддааададсЬ ЬсЬдЬаЬЬад сЬсаддЬЬда ЬаЬЬсаЬада дсЬдсаасас 5100
аЬаасааадд ЬдЬЬаЬдааЬ ддааЬасаЬд сЬдЬЬдЬЬЬЬ адсЬасадда ааЬдаЬасЬа 5160
даддЬдсЬда адсаЬсЬдса саЬдсаЬасд саЬсаадада сддасааЬаЬ ададдЬаЬад 5220
саасЬЬддад аЬаЬдаЬсад аададасааа дасЬЬаЬЬдд аасЬаЬЬдаа дЬЬссааЬда 5280
сасЬЬдсЬаЬ адЬаддЬддЬ ддЬасЬааад ЬаЬЬассааЬ адсЬааддса ЬсаЬЬададЬ 5340
ЬаЬЬаааЬдЬ ЬдаЬЬсЬдса саадаасЬЬд дасасдЬадЬ ЬдсЬдсЬдЬЬ ддаЬЬадсас 5400
аааасЬЬЬдс ЬдсЬЬдЬада дсасЬЬдЬЬЬ сЬдааддЬаЬ Ьсаасаадда сасаЬдЬсаЬ 5460
ЬасааЬаЬаа аадЬЬЬадса аЬадЬадЬад дЬдсаааадд ЬдасдадаЬа дсасаадЬад 5520
садаадсЬсЬ Ьааасаддаа ссаададсЬа аЬасасаддЬ ЬдсЬдааада аЬЬЬЬасадд 5580
аааЬЬадаса дсааЬааЬсЬ адааЬаЬсда ЬасадаЬааа ааааЬаЬаЬа аЬасадаада 5640
аааааЬЬаЬа ааЬЬЬдЬддЬ аЬааЬаЬааа дЬаЬадЬааЬ ЬЬаадЬЬЬаа ассЬсдЬдаа 5700
аасдсЬааса ааЬааЬадда ддЬсааЬЬда ЬдаЬадсЬдЬ ЬссаЬЬЬаас дсЬддааааа 5760
ЬаааадЬЬЬЬ ааЬЬдаддса ЬЬадааЬсЬд даааЬЬаЬЬс аЬсааЬаааа ЬсадаЬдЬаЬ 5820
аЬдасддааЬ дЬЬаЬаЬдаЬ дсассадаЬс ассЬЬаааЬс аЬЬадЬааас адаЬЬЬдЬад 5880
аасЬЬааЬаа ЬаЬаасЬдад ссаЬЬадсад ЬаасЬаЬаса дасаааЬсЬЬ ссЬссЬЬсаа 5940
даддЬсЬЬдд аЬсЬадЬдса дсЬдЬЬдсЬд ЬЬдсЬЬЬЬдЬ аададсаадЬ ЬаЬдаЬЬЬсЬ 6000
Ьаддааааад ЬЬЬаасЬааа даададсЬЬа Ьадааааддс ЬааЬЬдддсЬ даасаааЬад 6060
сЬсаЬддааа дссаЬсЬдда аЬадаЬасас ааасааЬадЬ аЬсЬддааад ссЬдЬЬЬддЬ 6120
ЬЬсааааддд асаЬдсадаа асасЬЬаааа сЬсЬЬЬсасЬ ЬдаЬддаЬас аЬддЬадЬаа 6180
ЬЬдаЬасадд ЬдЬЬааадда адЬасаадас аддсЬдЬада адаЬдЬЬсаЬ ааасЬЬЬдсд 6240
аадаЬссЬса аЬаЬаЬдадЬ сасдЬаааас асаЬаддааа асЬЬдЬасЬЬ ададсаЬсЬд 6300
аЬдЬЬаЬЬда асаЬсаЬаас ЬЬЬдаадсас ЬЬдсЬдаЬаЬ аЬЬсааЬдаа ЬдЬсаЬдсЬд 6360
аЬЬЬаааддс ЬсЬЬасадЬа адЬсаЬдаса аааЬадааса дЬЬааЬдаад аЬаддаааад 6420
ааааЬддЬдс ЬаЬадсЬддЬ аааЬЬаасЬд дЬдсЬддЬад аддЬддЬЬса аЬдЬЬаЬЬас 6480
ЬЬдсаааада сЬЬассаасЬ дсааадааЬа ЬадЬЬааадс адЬададааа дсЬддЬдсад 6540
сасаЬасЬЬд даЬЬдааааЬ ЬЬаддЬддЬЬ аадЬсдасаа адасасЬааа аааЬЬаЬааа 6600
адЬаааддад дасаЬЬаааЬ даЬасаадЬа ааддсассад дааааЬЬаЬа ЬаЬадсаддЬ 6660
дааЬасдсЬд ЬЬасадаасс аддаЬаЬааа ЬсЬдЬЬсЬЬа ЬадсЬсЬЬда ЬадаЬЬЬдЬЬ 6720
асадсЬасЬа ЬЬдаддаадс ЬдаЬсааЬас аааддаасаа ЬасаЬЬсааа ддсаЬЬасаЬ 6780
сасааЬссад ЬаасЬЬЬЬад ЬададаЬдаа даЬЬсЬаЬЬд ЬЬаЬаЬсада сссасасдса 6840
- 95 028892
дсаааасаас ЕЕааЕЕаЕдЕ адЕаасЕдсЕ аЕадаааЕаЕ ЕЕдадсааЕа ЕдсааааЕса 6900
ЕдЕдасаЕад сааЕдаадса ЕЕЕЕсаЕЕЕа асЕаЕадаЕЕ сЕаасЕЕада ЕдаЕадЕааЕ 6960
ддасаЕаадЕ аЕддасЕЕдд аЕсЕЕсЕдсЕ дсЕдЕЕЕЕад ЕЕЕсадЕааЕ ЕааадЕасЕЕ 7020
аасдааЕЕЕЕ аЕдаЕаЕдаа асЕЕЕсааас сЕЕЕаЕаЕаЕ аЕаадЕЕадс адЕааЕЕдсЕ 7080
ааЕаЕдаааЕ ЕасададЕЕЕ аЕсЕЕсаЕдс ддЕдаЕаЕад садЕаадЕдЕ ЕЕаЕЕсаддЕ 7140
ЕддЕЕадсЕЕ аЕЕсЕасаЕЕ ЕдассаЕдаа ЕдддЕаааас ассадаЕада адаЕасааса 7200
дЕЕдаадаад ЕасЕЕаЕЕаа аааЕЕддссЕ ддаЕЕасаса ЕададссасЕ ЕсаадсЕссЕ 7260
дааааЕаЕдд аадЕЕсЕЕаЕ аддЕЕддаса ддЕадЕссад сЕадЕадЕсс ЕсаЕЕЕЕдЕЕ 7320
ЕсЕдаадЕЕа ааадасЕЕаа дЕсадаЕссЕ ЕсаЕЕЕЕасд дЕдаЕЕЕсЕЕ адаадаЕЕса 7380
саЕадаЕдЕд ЕадаааааЕЕ ааЕЕсаЕдса ЕЕсаааасЕа аЕааЕаЕЕаа дддЕдЕЕсад 7440
ааааЕддЕаа дасадааЕад аасЕаЕЕаЕа сааадааЕдд аЕааддаадс аасадЕЕдаЕ 7500
аЕададасЕд адаадЕЕааа аЕаЕЕЕаЕдЕ даЕаЕЕдсЕд аааааЕаЕса ЕддЕдсаадЕ 7560
аааасЕЕсад дЕдсЕддЕдд ЕддЕдаЕЕдс ддааЕаасЕа ЕааЕаааЕаа ддаЕдЕадас 7620
ааададаааа ЕаЕаЕдаЕда аЕддасЕааа саЕддааЕаа адссЕсЕЕаа дЕЕЕааЕаЕЕ 7680
ЕаЕсаЕддас ааЕаассаЕд дЕсааЕааЕс ЕЕасааЕааа Еаааадааад даддсааааа 7740
ЕаЕдаЕаааа ЕсЕддаааад саададсаса сасЕааЕаЕа дсасЕЕаЕаа ааЕаЕЕдддд 7800
ЕаадааадаЕ даддсаЕЕаа ЕааЕассааЕ дааЕаасЕса аЕаЕсадЕаа сЕЕЕадаааа 7860
дЕЕЕЕаЕасЕ дааасаааад ЕЕасаЕЕЕаа сдаЕсадсЕЕ асЕсаадаЕс ааЕЕЕЕддсЕ 7920
ЕааЕддЕдаа ааадЕЕЕсЕд даааадааЕЕ адаааадаЕЕ ЕсааадЕаЕа ЕддаЕаЕЕдЕ 7980
ЕадаааЕада дсЕддааЕад аЕЕддЕаЕдс ЕдадаЕадаа ЕсЕдаЕааЕЕ ЕЕдЕЕссЕас 8040
адсЕдсЕддЕ сЕЕдсЕадЕЕ сЕдсЕадЕдс ЕЕаЕдсадса ЕЕадсЕдсЕд саЕдЕаасса 8100
адсасЕЕдаЕ ЕЕасадЕЕаа дЕдаЕааада сЕЕаадЕада ЕЕадсЕадаа ЕЕддаЕсадд 8160
аЕсадсаЕса адаЕсааЕаЕ асддЕддЕЕЕ ЕдсадааЕдд даааааддаЕ аЕааЕдасда 8220
аасЕЕсЕЕаЕ дсЕдЕЕссаЕ ЕадааадЕаа ЕсасЕЕЕдаа даЕдаЕсЕЕд сЕаЕдаЕЕЕЕ 8280
ЕдЕадЕааЕа аассаасаЕЕ сЕаааааддЕ ЕссЕЕсаада ЕаЕддааЕдЕ сЕсЕЕасаад 8340
аааЕасаадЕ адаЕЕсЕаЕс ааЕаЕЕддЕЕ адассаЕаЕЕ даЕдаадаЕс ЕЕдсадаадс 8400
аааддсадса аЕасаадаЕа аддаЕЕЕЕаа дадаЕЕаддЕ даадЕЕаЕЕд аададааЕдд 8460
асЕЕадааЕд саЕдсЕасаа аЕсЕЕддаЕс аасЕссассЕ ЕЕЕасЕЕасЕ ЕадЕасаада 8520
дЕсаЕасдаЕ дЕааЕддсаЕ ЕадЕасаЕда дЕдЕададаа дсаддаЕаЕс саЕдсЕаЕЕЕ 8580
сасЕаЕддаЕ дсЕддассЕа аЕдЕаааааЕ асЕЕдЕадад аадаааааса аасаасадаЕ 8640
ааЕадаЕааа сЕЕЕЕаасЕс адЕЕсдаЕаа ЕааЕсадаЕа аЕадаЕадЕд аЕаЕЕаЕадс 8700
- 96 028892
басаддбабб даааббабад аабааасбад ббдбабабба ааабадбада абасабаада 8760
басббааббб ааббааадаб адббаадбас ббббсаабдб дсббббббад абдбббааба 8820
сааабсббба аббдбаааад ааабдсбдба сбабббасбд ббсбадбдас дддаббааас 8880
бдбаббаабб абааабаааа аабаадбаса дббдбббааа аббабабббб дбаббааабс 8940
баабадбасд абдбаадбба ббббабасба ббдсбадббб аабааааада бббааббаба 9000
басббдаааа ддададдаас бсдадабддс ададбабаба абадсадбад абдадббсда 9060
баасдаааба ддабсаабад аааадабдда адсбсабада аааддаасас ббсабададс 9120
аббсадбабб ббадббббба асбсааадаа бсаасбббба ббасадаааа дааабдбааа 9180
дааабабсас бсбссаддаб бабддасааа сасббдббдб адбсасссаа дабабддбда 9240
абсбсббсаб дабдсбабаб асадаадабб аааадаадад абдддаббба сббдсдаасб 9300
бдаадаадба ббсбсаббса бабабааддб аааасббдаа дабаабббаб ббдадаабда 9360
абабдассаб дбабббаббд дбааабабда бддбдадаба аббдббааба аадабдаадб 9420
бдабдабббб ааабдддбад асаббаабда адббааааад дасабаабад ааадассбда 9480
ддсабабасб басбддббба адбабсббдб ааабааадсб даааабаада бабббаааба 9540
аассддбддд аддааабдаа сабддсааса дааббаббаб дбббасасад ассбабабса 9600
сббасбсаса аасбббббад даабссабба ссбааадбба ббсаадсбас ассбббааса 9660
ббаааасбба ддбдбадбдб ббсбасадаа аабдбабсаб ббадбдадас адааасбдаа 9720
асаадаадаб садсааабба бдаассаааб бсббдддабб абдаббабсб бсбббсббсб 9780
дабасбдабд адбсаабада адбасабааа дабааддсба адаааббада адсбдаадбб 9840
аддададааа бааабаабда дааддсбдаа бббсббасас ббсббдаасб баббдабааб 9900
дбасааадас ббддаббадд абабадаббб дадбсбдаба баадаададс аббадабада 9960
бббдбаадба дбддаддабб бдабддадбб асбаааасбб саббасабдд аасадсабба 10020
бсабббаддб баббааддса асабддбббб даадбабсбс аадаадсббб бадбддаббб 10080
ааадабсада абддааасбб бсббдадааб ббаааддаад асабаааадс ааббсбббсб 10140
сбббабдаад сабсаббббб адсаббадаа ддбдадааба баббадабда ддсбааадба 10200
бббдсаабаб сбсабсббаа адаасббадб даадаааада ббддбааада аббадсбдаа 10260
саадбббсас абдсбббада аббассабба сабадаадаа сасааадабб адаадсадбб 10320
бддбсаабад аадсабабад ааадааадаа дасдсааабс аадбасбббб адаасббдса 10380
абасббдасб асаабабдаб бсааадбдба бабсададдд абббаадада аасабсаада 10440
бддбддадаа дадбаддабб адсаасбааа ббасаббббд сбададабад дсббаббдаа 10500
адбббббабб дддсбдббдд адббдсбббб даассасааб аббсбдаббд садааабадб 10560
дбадсааада бдббббсабб бдббасбаба аббдасдаба бббасдабдб абабддаасб 10620
- 97 028892
ббадабдаас ббдаасбббб басбдабдса дббдааадаб дддабдбааа бдсбаббааб 10680
дабсббссбд аббабабдаа дббабдбббб сббдсасббб асаабасбаб баасдадаба 10740
дсббасдаба асббаааада баааддбдад аасабасббс сббабббаас аааадсабдд 10800
дсадабббаб дбаабдсабб бсббсаадаа дсбаадбддс бббабаабаа абсаасассб 10860
асабббдабд аббаббббдд ааабдсабдд аааадббсба дбддассббб асадсббабб 10920
бббдсббабб ббдсбдбадб асадаасабб аааааддаад адаббдадаа бсббсадааа 10980
бабсабдаса баабабсаад ассбадбсас абббббаддс бббдбаабда бббадсабсб 11040
дсббсадсад ааабадсаад аддбдааасб дсбааббсбд баадббдбба бабдадааса 11100
аааддбабаб сбдаадаабб адсбасбдаа адбдббабда абсббабада сдааасббдд 11160
аадаааабда асааадаааа асббддбдда бсбббабббд саааассббб бдббдадасб 11220
дсбабааабб бадсбадаса дбсбсаббдс асабабсаба абддбдабдс асабасбадб 11280
ссадабдааб баасбаддаа аададбасбб адбдбаабаа сбдаассааб аббассаббб 11340
дааадабаад сбадсабааа аабаадаадс сбдсабббдс аддсббсбба бббббабддс 11400
дсдссдссаб бабббббббд аасааббдас ааббсабббс ббабббббба ббаадбдаба 11460
дбсааааддс абаасадбдс бдаабадааа дааабббаса даааадаааа ббабадаабб 11520
бадбабдабб ааббабасбс абббабдааб дбббааббда абасаааааа ааабасббдб 11580
бабдбаббса аббасдддбб аааабабада саадббдааа аабббаабаа ааааабаадб 11640
ссбсадсбсб бабабаббаа дсбассаасб бадбабабаа дссаааасбб ааабдбдсба 11700
ссаасасабс аадссдббад адаасбсбаб сбабадсааб абббсааабд бассдасаба 11760
саададааас аббаасбаба бабаббсааб ббабдадабб абсббаасад абабааабдб 11820
аааббдсааб аадбаадабб бадаадббба бадссбббдб дбаббддаад садбасдсаа 11880
аддсбббббб абббдабааа ааббадаадб абабббаббб бббсабаабб аабббабдаа 11940
аабдаааддд ддбдадсааа дбдасададд ааадсадбаб сббабсаааб аасааддбаб 12000
бадсаабабс аббаббдасб ббадсадбаа асаббабдас ббббабадбд сббдбадсба 12060
адбадбасда аадддддадс бббааааадс бссббддааб асабадаабб сабаааббаа 12120
бббабдаааа даадддсдба бабдаааасб бдбааааабб дсааададбб баббааадаб 12180
асбдааабаб дсаааабаса ббсдббдабд аббсабдаба ааасадбадс аассбаббдс 12240
адбааабаса абдадбсаад абдбббасаб ааадддааад бссаабдбаб бааббдббса 12300
аадабдаасс дабабддабд дбдбдссаба аааабдадаб дббббасада ддаадаасад 12360
аааааадаас дбасабдсаб бааабаббаб дсааддадсб ббаааааадс бсабдбааад 12420
аададбаааа адааааааба абббабббаб баабббааба ббдададбдс сдасасадба 12480
- 98 028892
ЬдсасЬаааа ааЬаЬаЬсЬд ЬддЬдЬадЬд адссдаЬаса аааддаЬадЬ сасЬсдсаЬЬ 12540
ЬЬсаЬааЬас аЬсЬЬаЬдЬЬ аЬдаЬЬаЬдЬ дЬсддЬддда сЬЬсасдасд аааасссаса 12600
аЬааааааад адЬЬсддддЬ адддЬЬаадс аЬадЬЬдадд саасЬаааса аЬсаадсЬад 12660
даЬаЬдсадЬ адсадассдЬ ааддЬсдЬЬд ЬЬЬаддЬдЬд ЬЬдЬааЬаса ЬасдсЬаЬЬа 12720
адаЬдЬаааа аЬасддаЬас сааЬдааддд аааадЬаЬаа ЬЬЬЬЬддаЬд ЬадЬЬЬдЬЬЬ 12780
дЬЬсаЬсЬаЬ дддсааасЬа сдЬссааадс сдЬЬЬссааа ЬсЬдсЬаааа адЬаЬаЬссЬ 12840
ЬЬсЬааааЬс ааадЬсаадЬ аЬдаааЬсаЬ аааЬааадЬЬ ЬааЬЬЬЬдаа дЬЬаЬЬаЬда 12900
ЬаЬЬаЬдЬЬЬ ЬЬсЬаЬЬааа аЬаааЬЬаад ЬаЬаЬадааЬ адЬЬЬааЬаа ЬадЬаЬаЬас 12960
ЬЬааЬдЬдаЬ аадЬдЬсЬда садЬдЬсаса даааддаЬда ЬЬдЬЬаЬдда ЬЬаЬаадсдд 13020
ссддссадЬд ддсаадЬЬда ааааЬЬсаса ааааЬдЬддЬ аЬааЬаЬсЬЬ ЬдЬЬсаЬЬад 13080
адсдаЬааас ЬЬдааЬЬЬда дадддаасЬЬ адаЬддЬаЬЬ ЬдааааааЬЬ даЬаааааЬа 13140
дЬЬддаасад аааададЬаЬ ЬЬЬдассасЬ асЬЬЬдсаад ЬдЬассЬЬдЬ ассЬасадса 13200
ЬдассдЬЬаа адЬддаЬаЬс асасаааЬаа аддааааддд ааЬдааасЬа ЬаЬссЬдсаа 13260
ЬдсЬЬЬаЬЬа ЬаЬЬдсааЬд аЬЬдЬааасс дссаЬЬсада дЬЬЬаддасд дсааЬсааЬс 13320
аадаЬддЬда аЬЬддддаЬа ЬаЬдаЬдада ЬдаЬассаад сЬаЬасааЬа ЬЬЬсасааЬд 13380
аЬасЬдааас аЬЬЬЬссадс сЬЬЬддасЬд адЬдЬаадЬс ЬдасЬЬЬааа ЬсаЬЬЬЬЬад 13440
садаЬЬаЬда аадЬдаЬасд саасддЬаЬд дааасааЬса ЬадааЬддаа ддааадссаа 13500
аЬдсЬссдда ааасаЬЬЬЬЬ ааЬдЬаЬсЬа ЬдаЬассдЬд дЬсаассЬЬс даЬддсЬЬЬа 13560
аЬсЬдааЬЬЬ дсадааадда ЬаЬдаЬЬаЬЬ ЬдаЬЬссЬаЬ ЬЬЬЬасЬаЬд дддаааЬаЬЬ 13620
аЬааадаада ЬаасааааЬЬ аЬасЬЬссЬЬ ЬддсааЬЬса адЬЬсаЬсас дсадЬаЬдЬд 13680
асддаЬЬЬса саЬЬЬдссдЬ ЬЬЬдЬааасд ааЬЬдсадда аЬЬдаЬаааЬ адЬЬаасЬЬс 13740
аддЬЬЬдЬсЬ дЬаасЬаааа асаадЬаЬЬЬ аадсааааас аЬсдЬадааа ЬасддЬдЬЬЬ 13800
ЬЬЬдЬЬассс ЬаадЬЬЬ 13817
<210> 59 <211> 14709 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ8314-РрЬааск-ЬЬ1А-НМОЗ-РаЬр-НМОК-Ргп£-МК-РМК-РМВ-Р£ог-1Д1-1зр
А-РЗ
<400> 59 ааасЬссЬЬЬ ЬЬдаЬааЬсЬ саЬдассааа аЬсссЬЬаас дЬдадЬЬЬЬс дЬЬссасЬда 60
дсдЬсадасс ссдЬадаааа даЬсааадда ЬсЬЬсЬЬдад аЬссЬЬЬЬЬЬ ЬсЬдсдсдЬа 120
аЬсЬдсЬдсЬ Ьдсааасааа аааассассд сЬассадсдд ЬддЬЬЬдЬЬЬ дссддаЬсаа 180
- 99 028892
дадсЁассаа сёсёёёёёсс дааддЁаасЁ ддсЁЁсадса дадсдсадаЁ ассаааЁасЁ 240
дЁЁсЁЁсЁад ЁдЁадссдЁа дЁЁаддссас сасЁЁсаада асЁсЁдЁадс ассдссЁаса 300
ЁассЁсдсЁс ЁдсЁааЁссЁ дЁЁассадЁд дсЁдсЁдсса дЁддсдаЁаа дЁсдЁдЁсЁЁ 360
ассдддЁЁдд асЁсаадасд аЁадЁЁассд даЁааддсдс адсддЁсддд сЁдаасдддд 420
ддЁЁсдЁдса сасадсссад сЁЁддадсда асдассЁаса ссдаасЁдад аЁассЁасад 480
сдЁдадсЁаЁ дадааадсдс сасдсЁЁссс даадддадаа аддсддасад дЁаЁссддЁа 540
адсддсаддд Ёсддаасадд ададсдсасд адддадсЁЁс садддддааа сдссЁддЁаЁ 600
сЁЁЁаЁадЁс сЁдЁсдддЁЁ ЁсдссассЁс ЁдасЁЁдадс дЁсдаЁЁЁЁЁ дЁдаЁдсЁсд 660
Ёсаддддддс ддадссЁаЁд дааааасдсс адсаасдсдд ссЁЁЁЁЁасд дЁЁссЁддсс 720
ЁЁЁЁдсЁддс сЁЁЁЁдсЁса саЁдЁЁсЁЁЁ ссЁдсдЁЁаЁ ссссЁдаЁЁс ЁдЁддаЁаас 780
сдЁаЁЁассд ссЁЁЁдадЁд адсЁдаЁасс дсЁсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадЁсадЁда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЁасдса дддсссссЁд саддаЁаааа 900
аааЁЁдЁада ЁаааЁЁЁЁаЁ ааааЁадЁЁЁ ЁаЁсЁасааЁ ЁЁЁЁЁЁаЁса ддааасадсЁ 960
аЁдассдсдд ссдсадаЁад ЁсаЁааЁадЁ ЁссадааЁад ЁЁсааЁЁЁад аааЁЁадасЁ 1020
ааасЁЁсааа аЁдЁЁЁдЁЁа ааЁаЁаЁасс ааЁсЁадЁаЁ адаЁаЁЁЁЁЁ ЁаааЁасЁдд 1080
асЁЁааасад ЁадЁааЁЁЁд ссЁааааааЁ ЁЁЁЁЁсааЁЁ ЁЁЁЁЁЁаааа ааЁссЁЁЁЁс 1140
аадЁЁдЁаса ЁЁдЁЁаЁддЁ ааЁаЁдЁааЁ ЁдаадаадЁЁ аЁдЁадЁааЁ аЁЁдЁааасд 1200
ЁЁЁсЁЁдаЁЁ ЁЁЁЁЁасаЁс саЁдЁадЁдс ЁЁаааааасс ааааЁаЁдЁс асаЁдсасЁЁ 1260
дЁаЁаЁЁЁса ааЁаасааЁа ЁЁЁаЁЁЁЁСЁ сдЁЁаааЁЁс асаааЁааЁЁ ЁаЁЁааЁааЁ 1320
аЁсааЁаасс аадаЁЁаЁас ЁЁаааЁддаЁ дЁЁЁаЁЁЁЁЁ ЁаасасЁЁЁЁ аЁадЁаааЁа 1380
ЁаЁЁЁаЁЁЁЁ аЁдЁадЁааа ааддЁЁаЁаа ЁЁаЁааЁЁдЁ аЁЁЁаЁЁаса аЁЁааЁЁааа 1440
аЁааааааЁа дддЁЁЁЁадд ЁааааЁЁаад ЁЁаЁЁЁЁаад аадЁааЁЁас ааЁаааааЁЁ 1500
даадЁЁаЁЁЁ сЁЁЁааддад даааЁЁсаЁа ЁдааададдЁ ЁдЁЁаЁЁдса ЁсадсЁдЁЁа 1560
даасЁдсааЁ аддаЁсЁЁаЁ ддааааадЁс ЁЁааадаЁдЁ ассадсадЁа дасЁЁаддЁд 1620
саасЁдсааЁ аааддаадса дЁааадааад саддЁаЁааа ассЁдаадаЁ дЁЁааЁдаад 1680
ЁЁаЁЁЁЁадд ааасдЁаЁЁа саадсЁддас ЁЁддасадаа ЁссадсЁада саддсаЁсаЁ 1740
Ёсааадсадд аЁЁассадЁа дадаЁассЁд сЁаЁдасЁаЁ ЁааЁааадЁЁ ЁдЁддЁЁсад 1800
даЁЁаадаас адЁЁЁсЁЁЁа дсЁдсЁсааа ЁЁаЁаааадс ЁддЁдасдса даЁдЁааЁаа 1860
ЁадсаддЁдд ЁаЁддааааЁ аЁдЁсаадад сассаЁассЁ ЁдсЁааЁааЁ дсЁадаЁддд 1920
дЁЁаЁадааЁ дддааасдсЁ аааЁЁЁдЁад асдаааЁдаЁ аасЁдаЁдда сЁЁЁдддаЁд 1980
саЁЁЁаасда ЁЁаЁсасаЁд ддааЁЁасЁд сЁдааааЁаЁ адсЁдадада ЁддааЁаЁаа 2040
- 100 028892
дЕададаада асаадаЕдад ЕЕЕдсасЕЕд саЕсЕсадаа аааддсадаа даадсЕаЕЕа 2100
ааЕсаддаса аЕЕЕааадаЕ даааЕЕдЕЕс садЕадЕааЕ ЕаааддЕада аааддЕдааа 2160
садЕЕдЕада сасЕдаЕдаа саЕссЕадаЕ ЕЕддаЕсЕас ааЕадааддЕ ЕЕадсЕаааЕ 2220
ЕааадссЕдс ЕЕЕЕаадааа дасддаасад ЕаасЕдсЕдд ааасдсаЕса ддЕЕЕаааЕд 2280
аЕЕдЕдсадс ЕдЕЕЕЕадЕЕ аЕЕаЕдЕсЕд сЕдааааддс аааддааЕЕа ддЕдЕЕааас 2340
сасЕЕдсЕаа даЕадЕЕадЕ ЕаЕддЕЕсад саддЕдЕада ЕссЕдсЕаЕЕ аЕдддаЕаЕд 2400
дассЕЕЕЕЕа ЕдсЕасааад дсадсЕаЕЕд ааааддсЕдд ЕЕддасадЕЕ даЕдаасЕЕд 2460
аЕсЕЕаЕада дЕсаааЕдад дсаЕЕЕдсад сасааадЕсЕ ЕдсЕдЕЕдсЕ ааддаЕсЕЕа 2520
ааЕЕсдаЕаЕ дааЕааадЕа ааЕдЕааасд дЕддЕдсЕаЕ адсасЕЕддЕ саЕссааЕад 2580
дЕдсЕадЕдд ЕдсЕадааЕЕ ЕЕадЕЕасаЕ ЕадЕЕсаЕдс ааЕдсаааад ададасдсЕа 2640
аааадддасЕ ЕдсаасЕЕЕа ЕдсаЕаддЕд дЕддЕсаадд аасадсааЕа сЕЕсЕЕдааа 2700
ааЕдЕЕаада аЕЕсдаддсЕ ЕЕЕасЕаааа асааЕааааа саддаддааа ЕааЕаЕдасЕ 2760
аЕаддааЕЕд асааааЕааа сЕЕЕЕасдЕа ссааааЕаЕЕ аЕдЕадаЕаЕ ддсааааЕЕа 2820
дсадаадсаа дасаадЕада сссаааЕааа ЕЕЕсЕЕаЕЕд дааЕаддаса дасЕдаааЕд 2880
дсадЕЕадЕс садЕааасса адаЕаЕадЕа ЕсааЕдддЕд сЕааЕдсЕдс ЕааадаЕаЕа 2940
аЕаасЕдаЕд аадасааааа дааааЕадда аЕддЕааЕад ЕадсаасЕда дЕсадсадЕа 3000
даЕдсадсаа аддсадсадс адЕасадаЕЕ саЕааЕЕЕаЕ ЕаддЕаЕЕса ассаЕЕЕдса 3060
адаЕдЕЕЕсд аааЕдааада адсаЕдЕЕаЕ дсЕдсЕасЕс сЕдсааЕЕса дЕЕадсЕаад 3120
даЕЕаЕЕЕад сЕасаадасс аааЕдадааа дЕЕЕЕадЕЕа ЕадсЕасада ЕасадсЕада 3180
ЕаЕддасЕЕа аЕЕсаддЕдд ЕдаассЕасЕ сааддЕдсЕд дЕдсЕдЕЕдс ЕаЕддЕЕаЕа 3240
дсЕсаЕааЕс сЕадЕаЕасЕ ЕдсаЕЕаааЕ даадасдсЕд ЕЕдсЕЕаЕас адаадаЕдЕЕ 3300
ЕаЕдаЕЕЕсЕ ддадассаас аддасаЕаад ЕаЕссаЕЕад ЕадаЕддЕдс ЕЕЕаЕсаааа 3360
дасдсаЕаЕа ЕЕадаЕсЕЕЕ ЕсаасааЕсЕ ЕддааЕдааЕ аЕдсЕаадад асааддааад 3420
адЕЕЕадсЕд аЕЕЕЕдсЕад ЕсЕЕЕдсЕЕЕ саЕдЕЕссЕЕ ЕЕасЕааааЕ дддЕааааад 3480
дсЕЕЕадааЕ сЕаЕааЕада ЕаасдсадаЕ дааасаасЕс аадададаЕЕ аадаЕсЕдда 3540
ЕаЕдаадаЕд садЕЕдаЕЕа сааЕадаЕаЕ дЕЕддаааЕа ЕаЕасасадд аадЕсЕЕЕаЕ 3600
сЕЕЕсЕсЕЕа ЕаадЕсЕЕсЕ ЕдааааЕада даЕЕЕасадд сЕддЕдааас ЕаЕЕддаЕЕа 3660
ЕЕЕЕсаЕасд даЕсаддЕЕс ЕдЕЕддЕдаа ЕЕЕЕаЕЕсад сЕасасЕЕдЕ адааддаЕаЕ 3720
ааадаЕсасс ЕЕдаЕсаддс адсасасааа дсасЕЕЕЕаа асааЕадаас ЕдаадЕаЕса 3780
дЕадаЕдсаЕ асдааасаЕЕ ЕЕЕсаадада ЕЕЕдаЕдаЕд ЕадааЕЕЕда Едаададсад 3840
даЕдсадЕЕс аЕдаадаЕад асаЕаЕаЕЕс ЕаЕсЕЕЕсаа асаЕададаа ЕааЕдЕаада 3900
дааЕаЕсаЕа дассЕдааЕа ададсЕсдЕЕ аЕааЕЕЕЕса аЕЕЕЕсаЕЕс ЕЕЕЕЕааадд 3960
- 101 028892
адаЕЕадсаЕ асаЕЕЕЕаЕс аЕааЕЕаЕас адасааЕаЕа дЕааЕаЕаЕд аЕдЕЕааааЕ 4020
аЕсааЕаЕаЕ ддЕЕаааааЕ сЕдЕаЕаЕЕЕ ЕЕЕсссаЕЕЕ ЕааЕЕаЕЕЕд ЕасЕаЕааЕа 4080
ЕЕасасЕдад ЕдЕаЕЕдсаЕ аЕЕЕаааааа ЕаЕЕЕддЕас ааЕЕадЕЕад ЕЕаааЕаааЕ 4140
ЕсЕаааЕЕдЕ аааЕЕаЕсад ааЕссЕЕаЕЕ ааддаааЕас аЕадаЕЕЕаа ддадаааЕса 4200
ЕаааааддЕд ЕааЕаЕааас ЕддсЕааааЕ Едадсааааа ЕЕдадсааЕЕ аадасЕЕЕЕЕ 4260
даЕЕдЕаЕсЕ ЕЕЕЕаЕаЕаЕ ЕЕааддЕаЕа ЕааЕсЕЕаЕЕ ЕаЕаЕЕдддд дааддЕасса 4320
ЕдсааЕсаЕЕ адасаааааЕ ЕЕсадасаЕЕ ЕаЕсаадаса асаааадЕЕа саасааЕЕад 4380
ЕЕдаЕаааса дЕддсЕЕЕса даадаЕсадЕ ЕЕдаЕаЕЕЕЕ асЕЕааЕсаЕ ссЕсЕЕаЕад 4440
аЕдаадаадЕ ЕдсЕааЕадЕ сЕЕаЕадааа аЕдЕааЕЕдс асадддЕдса ЕЕассадЕЕд 4500
дасЕЕсЕЕсс ЕааЕаЕааЕа дЕЕдаЕдаЕа аддсЕЕаЕдЕ ЕдЕассааЕд аЕддЕЕдаад 4560
аассЕадЕдЕ ЕдЕЕдсадсЕ дсаЕсЕЕаЕд дЕдсЕаааЕЕ адЕаааЕсад асаддЕддаЕ 4620
ЕЕаааасЕдЕ аЕсаЕсадаа адааЕааЕда ЕЕддасадаЕ адЕаЕЕЕдаЕ ддЕдЕадаЕд 4680
асасЕдаааа аЕЕаадЕдса даЕаЕЕааад саЕЕадаааа асаааЕасаЕ аадаЕЕдсад 4740
аЕдаадсаЕа ЕссЕадЕаЕа ааадсаадад дЕддЕддЕЕа ЕсааадааЕа дсааЕадаЕа 4800
саЕЕЕссада дсаасаасЕЕ ЕЕаадЕсЕЕа аддЕаЕЕЕдЕ адаЕасаааа даЕдсЕаЕдд 4860
дЕдсЕааЕаЕ дсЕЕааЕасЕ аЕасЕЕдадд сааЕаасЕдс аЕЕссЕЕааа ааЕдааЕсЕс 4920
сЕсааЕсада ЕаЕаЕЕааЕд ЕсЕаЕасЕЕЕ сааассаЕдс аасЕдсЕадЕ дЕадЕаааад 4980
ЕасааддЕда даЕадаЕдЕа ааадаЕсЕЕд сЕададдЕда аадаасаддЕ даадаадЕад 5040
сЕаададааЕ ддааададсЕ ЕсЕдЕаЕЕад сЕсаддЕЕда ЕаЕЕсаЕада дсЕдсаасас 5100
аЕаасааадд ЕдЕЕаЕдааЕ ддааЕасаЕд сЕдЕЕдЕЕЕЕ адсЕасадда ааЕдаЕасЕа 5160
даддЕдсЕда адсаЕсЕдса саЕдсаЕасд саЕсаадада сддасааЕаЕ ададдЕаЕад 5220
саасЕЕддад аЕаЕдаЕсад аададасааа дасЕЕаЕЕдд аасЕаЕЕдаа дЕЕссааЕда 5280
сасЕЕдсЕаЕ адЕаддЕддЕ ддЕасЕааад ЕаЕЕассааЕ адсЕааддса ЕсаЕЕададЕ 5340
ЕаЕЕаааЕдЕ ЕдаЕЕсЕдса саадаасЕЕд дасасдЕадЕ ЕдсЕдсЕдЕЕ ддаЕЕадсас 5400
аааасЕЕЕдс ЕдсЕЕдЕада дсасЕЕдЕЕЕ сЕдааддЕаЕ Есаасаадда сасаЕдЕсаЕ 5460
ЕасааЕаЕаа аадЕЕЕадса аЕадЕадЕад дЕдсаааадд ЕдасдадаЕа дсасаадЕад 5520
садаадсЕсЕ Еааасаддаа ссаададсЕа аЕасасаддЕ ЕдсЕдааада аЕЕЕЕасадд 5580
аааЕЕадаса дсааЕааЕсЕ адааЕаЕсда ЕасадаЕааа ааааЕаЕаЕа аЕасадаада 5640
аааааЕЕаЕа ааЕЕЕдЕддЕ аЕааЕаЕааа дЕаЕадЕааЕ ЕЕаадЕЕЕаа ассЕсдЕдаа 5700
аасдсЕааса ааЕааЕадда ддЕсааЕЕда ЕдаЕадсЕдЕ ЕссаЕЕЕаас дсЕддааааа 5760
ЕаааадЕЕЕЕ ааЕЕдаддса ЕЕадааЕсЕд даааЕЕаЕЕс аЕсааЕаааа ЕсадаЕдЕаЕ 5820
- 102 028892
абдасддааб дббабабдаб дсассадабс ассббааабс аббадбааас адабббдбад 5880
аасббаабаа бабаасбдад ссаббадсад баасбабаса дасааабсбб ссбссббсаа 5940
даддбсббдд абсбадбдса дсбдббдсбд ббдсббббдб аададсаадб бабдабббсб 6000
баддааааад бббаасбааа даададсбба бадааааддс бааббдддсб даасааабад 6060
сбсабддааа дссабсбдда абадабасас ааасаабадб абсбддааад ссбдбббддб 6120
ббсааааддд асабдсадаа асасббаааа сбсбббсасб бдабддабас абддбадбаа 6180
ббдабасадд бдббааадда адбасаадас аддсбдбада адабдббсаб ааасбббдсд 6240
аадабссбса абабабдадб сасдбаааас асабаддааа асббдбасбб ададсабсбд 6300
абдббаббда асабсабаас бббдаадсас ббдсбдабаб аббсаабдаа бдбсабдсбд 6360
абббаааддс бсббасадба адбсабдаса ааабадааса дббаабдаад абаддаааад 6420
аааабддбдс бабадсбддб аааббаасбд дбдсбддбад аддбддббса абдббаббас 6480
ббдсаааада сббассаасб дсааадааба бадббааадс адбададааа дсбддбдсад 6540
сасабасббд даббдааааб ббаддбддбб аадбсдасаа адасасбааа аааббабааа 6600
адбаааддад дасаббаааб дабасаадба ааддсассад дааааббаба бабадсаддб 6660
даабасдсбд ббасадаасс аддабабааа бсбдббсбба бадсбсббда бадабббдбб 6720
асадсбасба ббдаддаадс бдабсаабас аааддаасаа басаббсааа ддсаббасаб 6780
сасаабссад баасббббад бададабдаа даббсбаббд ббабабсада сссасасдса 6840
дсаааасаас ббааббабдб адбаасбдсб абадааабаб ббдадсааба бдсаааабса 6900
бдбдасабад саабдаадса ббббсаббба асбабадабб сбаасббада бдабадбааб 6960
ддасабаадб абддасббдд абсббсбдсб дсбдббббад бббсадбааб бааадбасбб 7020
аасдаабббб абдабабдаа асбббсааас сбббабабаб абаадббадс адбааббдсб 7080
аабабдаааб басададббб абсббсабдс ддбдабабад садбаадбдб ббаббсаддб 7140
бддббадсбб аббсбасабб бдассабдаа бдддбаааас ассадабада адабасааса 7200
дббдаадаад басббаббаа аааббддссб ддаббасаса бададссасб бсаадсбссб 7260
даааабабдд аадббсббаб аддббддаса ддбадбссад сбадбадбсс бсаббббдбб 7320
бсбдаадбба ааадасббаа дбсадабссб бсаббббасд дбдабббсбб адаадаббса 7380
сабадабдбд бадааааабб ааббсабдса ббсаааасба абаабаббаа дддбдббсад 7440
аааабддбаа дасадаабад аасбаббаба сааадаабдд абааддаадс аасадббдаб 7500
абададасбд адаадббааа абабббабдб дабаббдсбд ааааабабса бддбдсаадб 7560
аааасббсад дбдсбддбдд бддбдаббдс ддаабаасба баабааабаа ддабдбадас 7620
ааададаааа бабабдабда абддасбааа сабддаабаа адссбсббаа дбббаабабб 7680
бабсабддас аабаассабд дбсаабаабс ббасаабааа баааадааад даддсааааа 7740
- 103 028892
ЬаЬдаЬаааа ЬсЬддаааад саададсаса сасЬааЬаЬа дсасЬЬаЬаа ааЬаЬЬдддд 7800
ЬаадааадаЬ даддсаЬЬаа ЬааЬассааЬ дааЬаасЬса аЬаЬсадЬаа сЬЬЬадаааа 7860
дЬЬЬЬаЬасЬ дааасаааад ЬЬасаЬЬЬаа сдаЬсадсЬЬ асЬсаадаЬс ааЬЬЬЬддсЬ 7920
ЬааЬддЬдаа ааадЬЬЬсЬд даааадааЬЬ адаааадаЬЬ ЬсааадЬаЬа ЬддаЬаЬЬдЬ 7980
ЬадаааЬада дсЬддааЬад аЬЬддЬаЬдс ЬдадаЬадаа ЬсЬдаЬааЬЬ ЬЬдЬЬссЬас 8040
адсЬдсЬддЬ сЬЬдсЬадЬЬ сЬдсЬадЬдс ЬЬаЬдсадса ЬЬадсЬдсЬд саЬдЬаасса 8100
адсасЬЬдаЬ ЬЬасадЬЬаа дЬдаЬааада сЬЬаадЬада ЬЬадсЬадаа ЬЬддаЬсадд 8160
аЬсадсаЬса адаЬсааЬаЬ асддЬддЬЬЬ ЬдсадааЬдд даааааддаЬ аЬааЬдасда 8220
аасЬЬсЬЬаЬ дсЬдЬЬссаЬ ЬадааадЬаа ЬсасЬЬЬдаа даЬдаЬсЬЬд сЬаЬдаЬЬЬЬ 8280
ЬдЬадЬааЬа аассаасаЬЬ сЬаааааддЬ ЬссЬЬсаада ЬаЬддааЬдЬ сЬсЬЬасаад 8340
аааЬасаадЬ адаЬЬсЬаЬс ааЬаЬЬддЬЬ адассаЬаЬЬ даЬдаадаЬс ЬЬдсадаадс 8400
аааддсадса аЬасаадаЬа аддаЬЬЬЬаа дадаЬЬаддЬ даадЬЬаЬЬд аададааЬдд 8460
асЬЬадааЬд саЬдсЬасаа аЬсЬЬддаЬс аасЬссассЬ ЬЬЬасЬЬасЬ ЬадЬасаада 8520
дЬсаЬасдаЬ дЬааЬддсаЬ ЬадЬасаЬда дЬдЬададаа дсаддаЬаЬс саЬдсЬаЬЬЬ 8580
сасЬаЬддаЬ дсЬддассЬа аЬдЬаааааЬ асЬЬдЬадад аадаааааса аасаасадаЬ 8640
ааЬадаЬааа сЬЬЬЬаасЬс адЬЬсдаЬаа ЬааЬсадаЬа аЬадаЬадЬд аЬаЬЬаЬадс 8700
ЬасаддЬаЬЬ даааЬЬаЬад ааЬааасЬад ЬЬдЬаЬаЬЬа аааЬадЬада аЬасаЬаада 8760
ЬасЬЬааЬЬЬ ааЬЬааадаЬ адЬЬаадЬас ЬЬЬЬсааЬдЬ дсЬЬЬЬЬЬад аЬдЬЬЬааЬа 8820
саааЬсЬЬЬа аЬЬдЬаааад аааЬдсЬдЬа сЬаЬЬЬасЬд ЬЬсЬадЬдас дддаЬЬааас 8880
ЬдЬаЬЬааЬЬ аЬаааЬаааа ааЬаадЬаса дЬЬдЬЬЬааа аЬЬаЬаЬЬЬЬ дЬаЬЬаааЬс 8940
ЬааЬадЬасд аЬдЬаадЬЬа ЬЬЬЬаЬасЬа ЬЬдсЬадЬЬЬ ааЬааааада ЬЬЬааЬЬаЬа 9000
ЬасЬЬдаааа ддададдаас ЬсдадаЬддс ададЬаЬаЬа аЬадсадЬад аЬдадЬЬсда 9060
ЬаасдаааЬа ддаЬсааЬад аааадаЬдда адсЬсаЬада аааддаасас ЬЬсаЬададс 9120
аЬЬсадЬаЬЬ ЬЬадЬЬЬЬЬа асЬсааадаа ЬсаасЬЬЬЬа ЬЬасадаааа даааЬдЬааа 9180
даааЬаЬсас ЬсЬссаддаЬ ЬаЬддасааа сасЬЬдЬЬдЬ адЬсасссаа даЬаЬддЬда 9240
аЬсЬсЬЬсаЬ даЬдсЬаЬаЬ асадаадаЬЬ аааадаадад аЬдддаЬЬЬа сЬЬдсдаасЬ 9300
ЬдаадаадЬа ЬЬсЬсаЬЬса ЬаЬаЬааддЬ аааасЬЬдаа даЬааЬЬЬаЬ ЬЬдадааЬда 9360
аЬаЬдассаЬ дЬаЬЬЬаЬЬд дЬаааЬаЬда ЬддЬдадаЬа аЬЬдЬЬааЬа аадаЬдаадЬ 9420
ЬдаЬдаЬЬЬЬ аааЬдддЬад асаЬЬааЬда адЬЬааааад дасаЬааЬад ааадассЬда 9480
ддсаЬаЬасЬ ЬасЬддЬЬЬа адЬаЬсЬЬдЬ аааЬааадсЬ дааааЬаада ЬаЬЬЬаааЬа 9540
аассддЬсад ЬаасдааЬад ааЬЬадаааа асаааддадд саадасааЬд даЬЬЬсссас 9600
- 104 028892
аасааЕЕада адсаЕдЕдЕа ааасаддсЕа аЕсаддсасЕ ЕадЕадаЕЕЕ аЕЕдсЕссЕс 9660
ЕЕссЕЕЕЕса аааЕасасса дЕадЕадааа сЕаЕдсааЕа сддЕдсасЕЕ ЕЕаддЕддЕа 9720
ааадаЕЕаад ассаЕЕсЕЕа дЕаЕаЕдсЕа саддасасаЕ дЕЕЕддЕдЕа ЕсаасЕааЕа 9780
сЕЕЕадасдс ЕссадсЕдсЕ дсЕдЕЕдааЕ дЕаЕЕсаЕдс ЕЕаЕЕсЕЕЕа аЕасаЕдаЕд 9840
асЕЕассадс ааЕддаЕдас даЕдаЕЕЕаа даададдЕЕЕ ассЕасаЕдЕ саЕдЕЕаааЕ 9900
ЕЕддЕдаадс ЕааЕдсааЕЕ ЕЕадсаддЕд асдсЕЕЕаса аасЕЕЕадсЕ ЕЕЕЕсЕаЕас 9960
ЕЕЕсадаЕдс адасаЕдссЕ даадЕЕЕсад аЕададаЕад ааЕЕЕсЕаЕд аЕаЕсададс 10020
ЕЕдсаЕсЕдс аЕсаддааЕа дсЕддааЕдЕ дсддЕддЕса адсасЕЕдаЕ ЕЕадаЕдсад 10080
ааддЕаааса сдЕассасЕЕ даЕдсЕЕЕад ададааЕаса ЕадасаЕааа асаддЕдсЕс 10140
ЕЕаЕаададс адсадЕаада ЕЕаддЕдсЕЕ ЕаадЕдсЕдд ЕдасаадддЕ адаададсас 10200
ЕЕссадЕасЕ ЕдаЕаадЕаЕ дсадааадЕа ЕаддаЕЕадс ЕЕЕЕсаадЕЕ саадаЕдаса 10260
ЕасЕЕдасдЕ ЕдЕЕддЕдаЕ асЕдсЕасЕЕ Еаддааааад асадддЕдса даЕсадсааЕ 10320
ЕаддааааЕс ЕасаЕасссЕ дсЕЕЕасЕЕд даЕЕадааса ддсЕадааад ааадсаадад 10380
асЕЕааЕада Едасдсаада сааадЕсЕЕа аасадЕЕадс ЕдаасааЕса сЕЕдасасаа 10440
дЕдсасЕЕда адсасЕЕдса даЕЕаЕаЕЕа Еасададааа саадЕаааад сЕЕЕЕааадд 10500
аддддааааа аЕддааЕЕЕа дадЕасаЕЕЕ асаддсадас аасдаасада аааЕаЕЕЕса 10560
аааЕсаааЕд ааассададс садаадсаЕс аЕаЕсЕЕаЕа ааЕсааадаа даадЕдсЕаа 10620
ЕЕаЕааасса аасаЕЕЕдда аааасдаЕЕЕ ЕсЕЕдаЕсад ЕсЕЕЕааЕаЕ сааааЕаЕда 10680
ЕддЕдаЕдаа ЕаЕадаааас ЕЕЕсадаааа дЕЕааЕадаа даадЕааада ЕаЕасаЕаЕс 10740
адсададасЕ аЕддаЕЕЕад ЕЕдсЕаааЕЕ адаасЕЕаЕа даЕЕсЕдЕЕа даааасЕЕдд 10800
асЕЕдсЕааЕ сЕЕЕЕЕдада аадаааЕааа ддаадсаЕЕа дасадЕаЕад садсааЕада 10860
аЕсадаЕааЕ ЕЕаддаасЕа дадасдаЕсЕ ЕЕаЕддааса дсЕсЕЕсаЕЕ ЕЕаадаЕЕсЕ 10920
ЕадасадсаЕ ддаЕаЕаадд ЕаадЕсаада ЕаЕаЕЕЕддЕ адаЕЕЕаЕдд аЕдадааадд 10980
аасаЕЕадаа ааЕсаЕсасЕ ЕЕдсасасЕЕ ааааддааЕд ЕЕадааЕЕаЕ ЕЕдаддсаад 11040
ЕааЕсЕЕдда ЕЕЕдааддЕд аадасаЕаЕЕ адаЕдаадсЕ ааадсаЕсЕс ЕЕасасЕЕдс 11100
ЕсЕЕададаЕ ЕсаддасаЕа ЕЕЕдЕЕаЕсс адасЕсааас ЕЕаадЕадад аЕдЕадЕЕса 11160
ЕадЕЕЕадаа ЕЕассЕадЕс аЕадаададЕ ЕсааЕддЕЕс даЕдЕааааЕ ддсадаЕЕаа 11220
ЕдсаЕасдаа ааадаЕаЕЕЕ дЕададЕааа ЕдсаасЕЕЕа ЕЕададЕЕад сааадЕЕааа 11280
ЕЕЕЕааЕдЕЕ дЕЕсаадсЕс адсЕЕсадаа дааЕсЕЕада даадсЕадЕа даЕддЕдддс 11340
ЕааЕсЕЕддЕ ЕЕсдсадаЕа аЕЕЕааадЕЕ ЕдсЕададаЕ адасЕЕдЕад адЕдЕЕЕЕЕс 11400
аЕдсдсадЕа ддЕдЕадсаЕ ЕЕдаассада дсаЕЕсаЕсЕ ЕЕЕадааЕаЕ дЕЕЕаасЕаа 11460
ддЕааЕЕааЕ сЕЕдЕЕсЕЕа ЕЕаЕадаЕда ЕдЕаЕасдаЕ аЕаЕаЕддаЕ сЕдаадаада 11520
- 105 028892
дЕЕаааасаЕ ЕЕЕасаааЕд сЕдЕЕдаЕад аЕдддасадЕ ададааасад аасадсЕЕсс 11580
ЕдааЕдсаЕд ааааЕдЕдЕЕ ЕЕсаадЕаЕЕ аЕаЕаасасЕ асЕЕдсдааа Еадсаадада 11640
даЕадаадаа даааасддЕЕ ддааЕсаадЕ аЕЕассЕсаа сЕЕасЕаадд ЕЕЕдддсЕда 11700
ЕЕЕЕЕдЕаад дсЕсЕЕЕЕад ЕЕдаадсада дЕддЕасааЕ аааЕсасаЕа ЕЕссаасаЕЕ 11760
адаадааЕаЕ сЕЕадааасд даЕдЕаЕаЕс аадЕадЕдЕа ЕсЕдЕасЕЕЕ ЕадЕЕсасЕс 11820
ЕЕЕсЕЕЕЕса аЕаасЕсаЕд ааддЕасааа адаааЕддсЕ даЕЕЕсЕЕас аЕаааааЕда 11880
адаЕсЕЕЕЕа ЕасаасаЕаа дЕсЕЕаЕадЕ аадаЕЕааас ааЕдаЕЕЕад дЕасаЕсадс 11940
ЕдсЕдаасад дааададдЕд аЕЕсЕссЕЕс ЕЕсЕаЕадЕЕ ЕдсЕаЕаЕда дадаадЕЕаа 12000
ЕдсЕЕсЕдаа дадасЕдсаа дааадааЕаЕ ааадддааЕд аЕЕдаЕааЕд сЕЕддааааа 12060
ддЕЕааЕдда аааЕдЕЕЕса саасЕаасса адЕЕссаЕЕЕ сЕЕЕсаЕсаЕ ЕсаЕдааЕаа 12120
ЕдсаасЕаас аЕддсаадад ЕадсасасЕс аЕЕаЕаЕааа дасддЕдаЕд дЕЕЕЕддЕда 12180
Есаадааааа ддассЕадаа сасаЕаЕЕсЕ ЕадЕЕЕаЕЕа ЕЕссаассЕЕ ЕадЕаааЕЕа 12240
адсЕадсаЕа ааааЕаадаа дссЕдсаЕЕЕ дсаддсЕЕсЕ ЕаЕЕЕЕЕаЕд дсдсдссдсс 12300
аЕЕаЕЕЕЕЕЕ ЕдаасааЕЕд асааЕЕсаЕЕ ЕсЕЕаЕЕЕЕЕ ЕаЕЕаадЕда ЕадЕсаааад 12360
дсаЕаасадЕ дсЕдааЕада аадаааЕЕЕа садаааадаа ааЕЕаЕадаа ЕЕЕадЕаЕда 12420
ЕЕааЕЕаЕас ЕсаЕЕЕаЕда аЕдЕЕЕааЕЕ дааЕасаааа аааааЕасЕЕ дЕЕаЕдЕаЕЕ 12480
сааЕЕасддд ЕЕааааЕаЕа дасаадЕЕда ааааЕЕЕааЕ аааааааЕаа дЕссЕсадсЕ 12540
сЕЕаЕаЕаЕЕ аадсЕассаа сЕЕадЕаЕаЕ аадссаааас ЕЕаааЕдЕдс Еассаасаса 12600
ЕсаадссдЕЕ ададаасЕсЕ аЕсЕаЕадса аЕаЕЕЕсааа ЕдЕассдаса Еасаададаа 12660
асаЕЕаасЕа ЕаЕаЕаЕЕса аЕЕЕаЕдада ЕЕаЕсЕЕаас адаЕаЕаааЕ дЕаааЕЕдса 12720
аЕаадЕаада ЕЕЕадаадЕЕ ЕаЕадссЕЕЕ дЕдЕаЕЕдда адсадЕасдс аааддсЕЕЕЕ 12780
ЕЕаЕЕЕдаЕа ааааЕЕадаа дЕаЕаЕЕЕаЕ ЕЕЕЕЕсаЕаа ЕЕааЕЕЕаЕд ааааЕдааад 12840
ддддЕдадса аадЕдасада ддааадсадЕ аЕсЕЕаЕсаа аЕаасааддЕ аЕЕадсааЕа 12900
ЕсаЕЕаЕЕда сЕЕЕадсадЕ ааасаЕЕаЕд асЕЕЕЕаЕад ЕдсЕЕдЕадс ЕаадЕадЕас 12960
даааддддда дсЕЕЕааааа дсЕссЕЕдда аЕасаЕадаа ЕЕсаЕаааЕЕ ааЕЕЕаЕдаа 13020
аадаадддсд ЕаЕаЕдаааа сЕЕдЕааааа ЕЕдсааадад ЕЕЕаЕЕааад аЕасЕдаааЕ 13080
аЕдсааааЕа саЕЕсдЕЕда ЕдаЕЕсаЕда ЕаааасадЕа дсаассЕаЕЕ дсадЕаааЕа 13140
сааЕдадЕса адаЕдЕЕЕас аЕааадддаа адЕссааЕдЕ аЕЕааЕЕдЕЕ сааадаЕдаа 13200
ссдаЕаЕдда ЕддЕдЕдсса ЕаааааЕдад аЕдЕЕЕЕаса даддаадаас адаааааада 13260
асдЕасаЕдс аЕЕаааЕаЕЕ аЕдсааддад сЕЕЕаааааа дсЕсаЕдЕаа адаададЕаа 13320
ааадаааааа ЕааЕЕЕаЕЕЕ аЕЕааЕЕЕаа ЕаЕЕдададЕ дссдасасад ЕаЕдсасЕаа 13380
- 106 028892
аааабабабс бдбддбдбад бдадссдаба сааааддаба дбсасбсдса ббббсабааб 13440
асабсббабд ббабдаббаб дбдбсддбдд дасббсасда сдаааассса саабаааааа 13500
ададббсддд дбадддббаа дсабадббда ддсаасбааа саабсаадсб аддабабдса 13560
дбадсадасс дбааддбсдб бдбббаддбд бдббдбааба сабасдсбаб баадабдбаа 13620
ааабасддаб ассаабдаад ддаааадбаб аабббббдда бдбадбббдб ббдббсабсб 13680
абдддсааас басдбссааа дссдбббсса аабсбдсбаа ааадбабабс сбббсбаааа 13740
бсааадбсаа дбабдааабс абааабааад бббааббббд аадббаббаб дабаббабдб 13800
ббббсбабба ааабааабба адбабабада абадбббааб аабадбабаб асббаабдбд 13860
абаадбдбсб дасадбдбса садаааддаб даббдббабд даббабаадс ддссддссад 13920
бдддсаадбб даааааббса сааааабдбд дбабаабабс бббдббсабб ададсдабаа 13980
асббдааббб дададддаас ббадабддба бббдаааааа ббдабааааа бадббддаас 14040
адаааададб аббббдасса сбасбббдса адбдбассбб дбассбасад сабдассдбб 14100
ааадбддаба бсасасаааб аааддаааад ддаабдааас бабабссбдс аабдсбббаб 14160
бабаббдсаа бдаббдбааа ссдссаббса дадбббадда сддсаабсаа бсаадабддб 14220
дааббдддда бабабдабда дабдабасса адсбабасаа бабббсасаа бдабасбдаа 14280
асаббббсса дссбббддас бдадбдбаад бсбдасббба аабсаббббб адсадаббаб 14340
дааадбдаба сдсаасддба бддааасааб сабадаабдд ааддааадсс ааабдсбссд 14400
даааасаббб ббаабдбабс бабдабассд бддбсаассб бсдабддсбб баабсбдааб 14460
ббдсадааад дабабдабба бббдаббссб абббббасба бддддаааба ббабааадаа 14520
дабаасаааа ббабасббсс бббддсаабб саадббсабс асдсадбабд бдасддаббб 14580
сасабббдсс дббббдбааа сдааббдсад дааббдабаа абадббаасб бсаддбббдб 14640
сбдбаасбаа ааасаадбаб ббаадсаааа асабсдбада аабасддбдб бббббдббас 14700
ссбаадббб 14709 <210> 60 <211> 601 <212> Белок <213> синтетическая последовательность
<220> <223> гибридная метилтрансфераза II типа
<400> 60
Меб РЬе Рго Суз Азп А1а Туг 11е О1и Туг О1у Азр Ьуз Азп Меб Азп
1 5 10 15
Бег РЬе 11е О1и Азр Уа1 О1и О1п 11е Туг Азп РЬе 11е Ьуз Ьуз Азп 20 25 30
- 107 028892
11е Азр Уа1 35 О1и О1и Ьуз МеЁ Н1з 40 РЬе 11е О1и ТЬг Туг 45 Ьуз О1п Ьуз
Зег Азп МеЁ Ьуз Ьуз О1и 11е Зег РЬе Зег О1и О1и Туг Туг Ьуз О1п
50 55 60
Ьуз 11е МеЁ Азп О1у Ьуз Азп О1у Уа1 Уа1 Туг ТЬг Рго Рго О1и МеЁ
65 70 75 80
А1а А1а РЬе МеЁ Уа1 Ьуз Азп Ьеи 11е Азп Уа1 Азп Азр Уа1 11е О1у
85 90 95
Азп Рго РЬе 11е Ьуз 11е 11е Азр Рго Зег Суз О1у Зег О1у Азп Ьеи
100 105 110
11е Суз Ьуз Суз РЬе Ьеи Туг Ьеи Азп Агд 11е РЬе 11е Ьуз Азп 11е
115 120 125
О1и Уа1 11е Азп Зег Ьуз Азп Азп Ьеи Азп Ьеи Ьуз Ьеи О1и Азр 11е
130 135 140
Зег Туг Н1з 11е Уа1 Агд Азп Азп Ьеи РЬе О1у РЬе Азр 11е Азр О1и
145 150 155 160
ТЬг А1а 11е Ьуз Уа1 Ьеи Ьуз 11е Азр Ьеи РЬе Ьеи 11е Зег Азп О1п
165 170 175
РЬе Зег О1и Ьуз Азп РЬе О1п Уа1 Ьуз Азр РЬе Ьеи Уа1 О1и Азп 11е
180 185 190
Азр Агд Ьуз Туг Азр Уа1 РЬе 11е О1у Азп Рго Рго Туг 11е О1у Н1з
195 200 205
Ьуз Зег Уа1 Азр Зег Зег Туг Зег Туг Уа1 Ьеи Агд Ьуз 11е Туг О1у
210 215 220
Зег 11е Туг Агд Азр Ьуз О1у Азр 11е Зег Туг Суз РЬе РЬе О1п Ьуз
225 230 235 240
Зег Ьеи Ьуз Суз Ьеи Ьуз О1и О1у О1у Ьуз Ьеи Уа1 РЬе Уа1 ТЬг Зег
245 250 255
Агд Туг РЬе Суз О1и Зег Суз Зег О1у Ьуз О1и Ьеи Агд Ьуз РЬе Ьеи
260 265 270
11е О1и Азп ТЬг Зег 11е Туг Ьуз 11е 11е Азр РЬе Туг О1у 11е Агд
- 108
275 280 285
Рго РЬе Ьуз Агд Уа1 О1у 11е Азр Рго МеЬ 11е 11е РЬе Ьеи Уа1 Агд
290 295 300
ТЬг Ьуз Азп Тгр Азп Азп Азп 11е О1и 11е 11е Агд Рго Азп Ьуз 11е
305 310 315 320
О1и Ьуз Азп О1и Ьуз Азп Ьуз РЬе Ьеи Азр Зег Ьеи РЬе Ьеи Азр Ьуз
325 330 335
Зег О1и Ьуз Суз Ьуз Ьуз РЬе Зег 11е Зег О1п Ьуз Зег 11е Азп Азп
340 345 350
Азр О1у Тгр Уа1 РЬе Уа1 Азр О1и Уа1 О1и Ьуз Азп 11е 11е Азр Ьуз
355 360 365
11е Ьуз О1и Ьуз Зег Ьуз РЬе 11е Ьеи Ьуз Азр 11е Суз Н1з Зег Суз
370 375 380
О1п О1у 11е 11е ТЬг О1у Суз Азр Агд А1а РЬе 11е Уа1 Азр Агд Азр
385 390 395 400
11е 11е Азп Зег Агд Ьуз 11е О1и Ьеи Агд Ьеи 11е Ьуз Рго Тгр 11е
405 410 415
Ьуз Зег Зег Н1з 11е Агд Ьуз Азп О1и Уа1 11е Ьуз О1у О1и Ьуз РЬе
420 425 430
11е 11е Туг Зег Азп Ьеи 11е О1и Азп О1и ТЬг О1и Суз Рго Азп А1а
435 440 445
11е Ьуз Туг 11е О1и О1п Туг Ьуз Ьуз Агд Ьеи МеЬ О1и Агд Агд О1и
450 455 460
Суз Ьуз Ьуз О1у ТЬг Агд Ьуз Тгр Туг О1и Ьеи О1п Тгр О1у Агд Ьуз
465 470 475 480
Рго О1и 11е РЬе О1и О1и Ьуз Ьуз 11е Уа1 РЬе Рго Туг Ьуз Зег Суз
485 490 495
Азр Азп Агд РЬе А1а Ьеи Азр Ьуз О1у Зег Туг РЬе Зег А1а Азр 11е
500 505 510
Туг Зег Ьеи Уа1 Ьеи Ьуз Ьуз Азп Уа1 Рго РЬе ТЬг Туг О1и 11е Ьеи
515 520 525
- 109
Ьеи Азп 530 11е Ьеи Азп Зег Рго 535 Ьеи Туг О1и РЬе Туг 540 РЬе Ьуз ТЬг РЬе
А1а 545 Ьуз Ьуз Ьеи О1у О1и 550 Азп Ьеи Туг О1и Туг 555 Туг Рго Азп Азп Ьеи 560
МеЕ Ьуз Ьеи Суз 11е 565 Рго Зег 11е Азр РЬе 570 О1у О1у О1и Азп Азп 575 11е
О1и Ьуз Ьуз Ьеи 580 Туг Азр РЬе РЬе О1у 585 Ьеи ТЬг Азр Ьуз О1и 590 11е О1и
11е Уа1 О1и Ьуз 11е Ьуз Азр Азп Суз 595 600
<210> 61
<211> 419
<212> ДНК
<213> С1озЕг1Ыит аиЕоеЕЬаподепит
<400> 61
адаааЕЕЕЕс сЕЕЕсЕаааа ЕаЕЕЕЕаЕЕс саЕдЕсаада асЕсЕдЕЕЕа ЕЕЕсаЕЕааа 60
даасЕаЕаад ЕасааадЕаЕ ааддсаЕЕЕд ааааааЕадд сЕадЕаЕаЕЕ даЕЕдаЕЕаЕ 120
ЕЕаЕЕЕЕааа аЕдссЕаадЕ даааЕаЕаЕа саЕаЕЕаЕаа сааЕааааЕа адЕаЕЕадЕд 180
ЕаддаЕЕЕЕЕ аааЕададЕа ЕсЕаЕЕЕЕса даЕЕаааЕЕЕ ЕЕдаЕЕаЕЕЕ даЕЕЕасаЕЕ 240
аЕаЕааЕаЕЕ дадЕааадЕа ЕЕдасЕадса аааЕЕЕЕЕЕд аЕасЕЕЕааЕ ЕЕдЕдаааЕЕ 300
ЕсЕЕаЕсааа адЕЕаЕаЕЕЕ ЕЕдааЕааЕЕ ЕЕЕаЕЕдааа ааЕасаасЕа ааааддаЕЕа 360
ЕадЕаЕаадЕ дЕдЕдЕааЕЕ ЕЕдЕдЕЕааа ЕЕЕаааддда ддаааЕдаас аЕдаааЕЕд 419
<210> 62 <211> 567 <212> ДНК <213> С1озЕг1Ыит аиЕоеЕЬаподепит <400> 62
сЕссЕааЕЕЕ ЕдаааЕсЕаа ЕаЕаЕсЕаЕЕ аааЕсаЕаЕЕ ЕЕсаЕаЕдЕа ааЕаааЕаад 60
ЕЕЕЕЕаЕдса аЕЕЕЕдаааа аддЕаЕЕЕдс аЕаааасддс ЕЕдаааЕсаа ЕадЕЕаасдс 120
ааЕадЕЕаЕЕ сЕЕЕЕадсаЕ асаЕЕаадЕс аасааааЕЕа дсаЕдЕааЕа аЕЕаЕдааЕа 180
аЕЕаЕЕасаЕ аЕаЕЕсааЕа ЕЕаЕаЕЕааа аааааЕасЕЕ ЕдЕЕЕЕаадЕ аЕааадЕааа 240
ааааЕаддса ЕаааЕдЕаас ааааасЕдЕЕ ааЕЕЕЕЕЕдЕ дЕсааЕааЕЕ ЕЕЕдЕЕаЕаЕ 300
ЕаЕЕЕЕааЕЕ аааЕЕЕЕЕса саЕдЕаЕааЕ ЕаааадЕаад аЕадаЕаЕЕс ЕааЕдЕасЕЕ 360
асЕЕаддЕад ааааасаЕдЕ аЕасааааЕЕ аааааасЕаЕ ЕаЕаасасаЕ адЕаЕсааЕа 420
ЕЕдааддЕаа ЕасЕдЕЕсаа ЕаЕсдаЕаса даЕааааааа аЕаЕаЕааЕа садаадаааа 480
- 110 028892
ааЬЬаЬаааЬ ЬЬдЬддЬаЬа аЬаЬааадЬа ЬадЬааЬЬЬа адЬЬЬааасс ЬсдЬдаааас 540
дсЬаасаааЬ ааЬаддаддЬ дЬаЬЬаЬ 567
<210> 63 <211> 1806 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность
<220> <223> гибридная метилтрансфераза II типа
<400> 63 аЬдЬЬЬссдЬ дсааЬдссЬа ЬаЬсдааЬаЬ ддЬдаЬаааа аЬаЬдаасад сЬЬЬаЬсдаа 60
даЬдЬддаас адаЬсЬасаа сЬЬсаЬЬааа аадаасаЬЬд аЬдЬддаада ааадаЬдсаЬ 120
ЬЬсаЬЬдааа ссЬаЬаааса даааадсаас аЬдаадааад адаЬЬадсЬЬ Ьадсдаадаа 180
ЬасЬаЬааас адаадаЬЬаЬ даасддсааа ааЬддсдЬЬд ЬдЬасасссс дссддаааЬд 240
дсддссЬЬЬа ЬддЬЬааааа ЬсЬдаЬсаас дЬЬаасдаЬд ЬЬаЬЬддсаа ЬссдЬЬЬаЬЬ 300
ааааЬсаЬЬд асссдадсЬд сддЬадсддс ааЬсЬдаЬЬЬ дсаааЬдЬЬЬ ЬсЬдЬаЬсЬд 360
ааЬсдсаЬсЬ ЬЬаЬЬаадаа саЬЬдаддЬд аЬЬаасадса ааааЬаассЬ дааЬсЬдааа 420
сЬддаадаса ЬсадсЬасса саЬсдЬЬсдс аасааЬсЬдЬ ЬЬддсЬЬсда ЬаЬЬдасдаа 480
ассдсдаЬса аадЬдсЬдаа ааЬЬдаЬсЬд ЬЬЬсЬдаЬса дсаассааЬЬ Ьадсдадааа 540
ааЬЬЬссадд ЬЬааадасЬЬ ЬсЬддЬддаа ааЬаЬЬдаЬс дсаааЬаЬда сдЬдЬЬсаЬЬ 600
ддЬааЬссдс сдЬаЬаЬсдд Ьсасаааадс дЬддасадса дсЬасадсЬа сдЬдсЬдсдс 660
ааааЬсЬасд дсадсаЬсЬа ссдсдасааа ддсдаЬаЬса дсЬаЬЬдЬЬЬ сЬЬЬсадаад 720
адссЬдаааЬ дЬсЬдаадда аддЬддсааа сЬддЬдЬЬЬд Ьдассадссд сЬасЬЬсЬдс 780
дададсЬдса дсддЬааада асЬдсдЬааа ЬЬссЬдаЬсд аааасасдад саЬЬЬасаад 840
аЬсаЬЬдаЬЬ ЬЬЬасддсаЬ ссдсссдЬЬс ааасдсдЬдд дЬаЬсдаЬсс даЬдаЬЬаЬЬ 900
ЬЬЬсЬддЬЬс дЬасдаадаа сЬддаасааЬ аасаЬЬдааа ЬЬаЬЬсдссс даасаадаЬЬ 960
даааадаасд аааадаасаа аЬЬссЬддаЬ адссЬдЬЬсс Ьддасаааад сдаааадЬдЬ 1020
ааааадЬЬЬа дсаЬЬадсса даааадсаЬЬ ааЬаасдаЬд дсЬдддЬЬЬЬ сдЬддасдаа 1080
дЬддадаааа асаЬЬаЬсда сааааЬсааа дадаааадса адЬЬсаЬЬсЬ дааадаЬаЬЬ 1140
ЬдссаЬадсЬ дЬсааддсаЬ ЬаЬсассддЬ ЬдЬдаЬсдсд ссЬЬЬаЬЬдЬ ддассдЬдаЬ 1200
аЬсаЬсааЬа дссдЬаадаЬ сдаасЬдсдЬ сЬдаЬЬааас сдЬддаЬЬаа аадсадссаЬ 1260
аЬссдЬаада аЬдаадЬЬаЬ Ьаадддсдаа аааЬЬсаЬса ЬсЬаЬадсаа ссЬдаЬЬдад 1320
ааЬдааассд адЬдЬссдаа ЬдсдаЬЬааа ЬаЬаЬсдаас адЬасаадаа асдЬсЬдаЬд 1380
дадсдссдсд ааЬдсааааа дддсасдсдЬ аадЬддЬаЬд аасЬдсааЬд дддссдЬааа 1440
ссддаааЬсЬ Ьсдаадаааа дааааЬЬдЬЬ ЬЬсссдЬаЬа ааадсЬдЬда сааЬсдЬЬЬЬ 1500
- 111 028892
дсасЕддаЕа адддЕадсЕа ЕЕЕЕадсдса дасаЕЕЕаЕа дссЕддЕЕсЕ даадаааааЕ 1560
дЕдссдЕЕса ссЕаЕдадаЕ ссЕдсЕдааЕ аЕссЕдааЕа дсссдсЕдЕа сдадЕЕЕЕас 1620
ЕЕЕаадассЕ Есдсдааааа дсЕдддсдад ааЕсЕдЕасд адЕасЕаЕсс даасаассЕд 1680
аЕдаадсЕдЕ дсаЕсссдад саЕсдаЕЕЕс ддсддЕдада асааЕаЕЕда дааааадсЕд 1740
ЕаЕдаЕЕЕсЕ ЕЕддЕсЕдас ддаЕааадаа аЕЕдадаЕЕд ЕддадаадаЕ сааадаЕаас 1800
ЕдсЕаа 1806
<210> 64 <211> 4709 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность
<220> <223> сконструированная плазмида метилирования
<400> 64 дЕЕЕдссасс ЕдасдЕсЕаа дааааддааЕ аЕЕсадсааЕ ЕЕдсссдЕдс сдаадааадд 60
сссасссдЕд ааддЕдадсс адЕдадЕЕда ЕЕдсЕасдЕа аЕЕадЕЕадЕ ЕадсссЕЕад 120
ЕдасЕсдЕаа ЕасдасЕсас ЕаЕадддсЕс даддсддссд сдсаасдсаа ЕЕааЕдЕдад 180
ЕЕадсЕсасЕ саЕЕаддсас сссаддсЕЕЕ асасЕЕЕаЕд сЕЕссддсЕс дЕаЕдЕЕдЕд 240
ЕддааЕЕдЕд адсддаЕаас ааЕЕЕсасас аддааасаса ЕаЕдЕЕЕссд ЕдсааЕдссЕ 300
аЕаЕсдааЕа ЕддЕдаЕааа ааЕаЕдааса дсЕЕЕаЕсда адаЕдЕддаа садаЕсЕаса 360
асЕЕсаЕЕаа ааадаасаЕЕ даЕдЕддаад аааадаЕдса ЕЕЕсаЕЕдаа ассЕаЕааас 420
адаааадсаа саЕдаадааа дадаЕЕадсЕ ЕЕадсдаада аЕасЕаЕааа садаадаЕЕа 480
Едаасддсаа аааЕддсдЕЕ дЕдЕасассс сдссддаааЕ ддсддссЕЕЕ аЕддЕЕаааа 540
аЕсЕдаЕсаа сдЕЕаасдаЕ дЕЕаЕЕддса аЕссдЕЕЕаЕ ЕааааЕсаЕЕ дасссдадсЕ 600
дсддЕадсдд сааЕсЕдаЕЕ ЕдсаааЕдЕЕ ЕЕсЕдЕаЕсЕ дааЕсдсаЕс ЕЕЕаЕЕаада 660
асаЕЕдаддЕ даЕЕаасадс аааааЕаасс ЕдааЕсЕдаа асЕддаадас аЕсадсЕасс 720
асаЕсдЕЕсд саасааЕсЕд ЕЕЕддсЕЕсд аЕаЕЕдасда аассдсдаЕс ааадЕдсЕда 780
аааЕЕдаЕсЕ дЕЕЕсЕдаЕс адсаассааЕ ЕЕадсдадаа аааЕЕЕссад дЕЕааадасЕ 840
ЕЕсЕддЕдда аааЕаЕЕдаЕ сдсаааЕаЕд асдЕдЕЕсаЕ ЕддЕааЕссд ссдЕаЕаЕсд 900
дЕсасаааад сдЕддасадс адсЕасадсЕ асдЕдсЕдсд сааааЕсЕас ддсадсаЕсЕ 960
ассдсдасаа аддсдаЕаЕс адсЕаЕЕдЕЕ ЕсЕЕЕсадаа дадссЕдааа ЕдЕсЕдаадд 1020
ааддЕддсаа асЕддЕдЕЕЕ дЕдассадсс дсЕасЕЕсЕд сдададсЕдс адсддЕааад 1080
аасЕдсдЕаа аЕЕссЕдаЕс даааасасда дсаЕЕЕасаа даЕсаЕЕдаЕ ЕЕЕЕасддса 1140
ЕссдсссдЕЕ сааасдсдЕд ддЕаЕсдаЕс сдаЕдаЕЕаЕ ЕЕЕЕсЕддЕЕ сдЕасдаада 1200
- 112 028892
асЕддаасаа ЕаасаЕЕдаа аЕЕаЕЕсдсс сдаасаадаЕ Едаааадаас даааадааса 1260
ааЕЕссЕдда ЕадссЕдЕЕс сЕддасаааа дсдаааадЕд ЕааааадЕЕЕ адсаЕЕадсс 1320
адаааадсаЕ ЕааЕаасдаЕ ддсЕдддЕЕЕ ЕсдЕддасда адЕддадааа аасаЕЕаЕсд 1380
асааааЕсаа ададаааадс аадЕЕсаЕЕс ЕдааадаЕаЕ ЕЕдссаЕадс ЕдЕсааддса 1440
ЕЕаЕсассдд ЕЕдЕдаЕсдс дссЕЕЕаЕЕд ЕддассдЕда ЕаЕсаЕсааЕ адссдЕаада 1500
ЕсдаасЕдсд ЕсЕдаЕЕааа ссдЕддаЕЕа ааадсадсса ЕаЕссдЕаад ааЕдаадЕЕа 1560
ЕЕаадддсда ааааЕЕсаЕс аЕсЕаЕадса ассЕдаЕЕда дааЕдааасс дадЕдЕссда 1620
аЕдсдаЕЕаа аЕаЕаЕсдаа садЕасаада аасдЕсЕдаЕ ддадсдссдс дааЕдсаааа 1680
адддсасдсд ЕаадЕддЕаЕ даасЕдсааЕ ддддссдЕаа ассддаааЕс ЕЕсдаадааа 1740
адааааЕЕдЕ ЕЕЕсссдЕаЕ аааадсЕдЕд асааЕсдЕЕЕ ЕдсасЕддаЕ аадддЕадсЕ 1800
аЕЕЕЕадсдс адасаЕЕЕаЕ адссЕддЕЕс Едаадааааа ЕдЕдссдЕЕс ассЕаЕдада 1860
ЕссЕдсЕдаа ЕаЕссЕдааЕ адсссдсЕдЕ асдадЕЕЕЕа сЕЕЕаадасс ЕЕсдсдаааа 1920
адсЕдддсда дааЕсЕдЕас дадЕасЕаЕс сдаасаассЕ даЕдаадсЕд ЕдсаЕсссда 1980
дсаЕсдаЕЕЕ сддсддЕдад аасааЕаЕЕд адааааадсЕ дЕаЕдаЕЕЕс ЕЕЕддЕсЕда 2040
сддаЕааада ааЕЕдадаЕЕ дЕддадаада ЕсааадаЕаа сЕдсЕаадаа ЕЕсдаЕаЕса 2100
сссдддаасЕ адЕсЕдсадс ссЕЕЕадЕда дддЕЕааЕЕд дадЕсасЕаа дддЕЕадЕЕа 2160
дЕЕадаЕЕад садааадЕса ааадссЕссд ассддаддсЕ ЕЕЕдасЕааа асЕЕсссЕЕд 2220
дддЕЕаЕсаЕ ЕддддсЕсас Есаааддсдд ЕааЕсадаЕа аааааааЕсс ЕЕадсЕЕЕсд 2280
сЕааддаЕда ЕЕЕсЕдсЕад адаЕддааЕа дасЕддаЕдд аддсддаЕаа адЕЕдсадда 2340
ссасЕЕсЕдс дсЕсддсссЕ ЕссддсЕддс ЕддЕЕЕаЕЕд сЕдаЕаааЕс ЕддадссддЕ 2400
дадсдЕдддЕ сЕсдсддЕаЕ саЕЕдсадса сЕддддссад аЕддЕаадсс сЕсссдЕаЕс 2460
дЕадЕЕаЕсЕ асасдасддд дадЕсаддса асЕаЕддаЕд аасдаааЕад асадаЕсдсЕ 2520
дадаЕаддЕд ссЕсасЕдаЕ ЕаадсаЕЕдд ЕаасЕдЕсад ассаадЕЕЕа сЕсаЕаЕаЕа 2580
сЕЕЕадаЕЕд аЕЕЕаааасЕ ЕсаЕЕЕЕЕаа ЕЕЕаааадда ЕсЕаддЕдаа даЕссЕЕЕЕЕ 2640
даЕааЕсЕса ЕдассааааЕ сссЕЕаасдЕ дадЕЕЕЕсдЕ ЕссасЕдадс дЕсадасссс 2700
ЕЕааЕаадаЕ даЕсЕЕсЕЕд адаЕсдЕЕЕЕ ддЕсЕдсдсд ЕааЕсЕсЕЕд сЕсЕдаааас 2760
даааааассд ссЕЕдсаддд сддЕЕЕЕЕсд ааддЕЕсЕсЕ дадсЕассаа сЕсЕЕЕдаас 2820
сдаддЕаасЕ ддсЕЕддадд адсдсадЕса ссаааасЕЕд ЕссЕЕЕсадЕ ЕЕадссЕЕаа 2880
ссддсдсаЕд асЕЕсаадас ЕаасЕссЕсЕ аааЕсааЕЕа ссадЕддсЕд сЕдссадЕдд 2940
ЕдсЕЕЕЕдса ЕдЕсЕЕЕссд ддЕЕддасЕс аадасдаЕад ЕЕассддаЕа аддсдсадсд 3000
дЕсддасЕда асддддддЕЕ сдЕдсаЕаса дЕссадсЕЕд дадсдаасЕд ссЕасссдда 3060
асЕдадЕдЕс аддсдЕддаа Едадасааас дсддссаЕаа садсддааЕд асассддЕаа 3120
- 113 028892 ассдаааддс аддаасадда дадсдсасда дддадссдсс аддддааасд ссбддбабсб 3180 ббабадбссб дбсдддбббс дссассасбд абббдадсдб садабббсдб дабдсббдбс 3240 аддддддсдд адссбабдда аааасддсбб бдссдсддсс сбсбсасббс ссбдббаадб 3300 абсббссбдд сабсббссад дааабсбссд ссссдббсдб аадссабббс сдсбсдссдс 3360 адбсдаасда ссдадсдбад сдадбсадбд адсдаддаад сддаабабаб ссбдбабсас 3420 абаббсбдсб дасдсассдд бдсадссббб бббсбссбдс сасабдаадс асббсасбда 3480 сасссбсабс адбдссааса бадбаадсса дбабасасбс сдсбадсдсб даддбсбдсс 3540 бсдбдаадаа ддбдббдсбд асбсабасса ддссбдаабс дссссабсаб ссадссадаа 3600 адбдадддад ссасддббда бдададсббб дббдбаддбд дассадббдд бдаббббдаа 3660 сббббдсббб дссасддаас ддбсбдсдбб дбсдддаада бдсдбдабсб дабссббсаа 3720 сбсадсаааа дббсдаббба ббсаасааад ссасдббдбд бсбсаааабс бсбдабдбба 3780 саббдсасаа дабаааааба бабсабсабд аасаабаааа сбдбсбдсбб асабааасад 3840 баабасаадд ддбдбббасб ададдббдаб сдддсасдба ададдббсса асбббсасса 3900 баабдаааба адабсасбас сдддсдбабб ббббдадбба бсдадабббб саддадсбаа 3960 ддаадсбааа абддадаааа ааабсасддд абабассасс дббдабабаб сссаабддса 4020 бсдбааадаа саббббдадд сабббсадбс адббдсбсаа бдбассбаба ассадассдб 4080 бсадсбддаб аббасддссб ббббааадас сдбааадааа аабаадсаса адббббабсс 4140 ддссбббабб сасаббсббд сссдссбдаб даасдсбсас ссддадбббс дбабддссаб 4200 дааадасддб дадсбддбда бсбдддабад бдббсасссб бдббасассд ббббссабда 4260 дсааасбдаа асдббббсдб сссбсбддад бдаабассас дасдабббсс ддсадбббсб 4320 ссасабабаб бсдсаадабд бддсдбдбба сддбдаааас сбддссбабб бсссбааадд 4380 дбббаббдад аабабдбббб ббдбсбсадс саабсссбдд дбдадбббса ссадббббда 4440 бббааасдбд дссаабабдд асаасббсбб сдсссссдбб ббсасдабдд дсааабабба 4500 басдсааддс дасааддбдс бдабдссдсб ддсдабссад дббсабсабд ссдбббдбда 4560 бддсббссаб дбсддссдса бдсббаабда аббасаасад басбдбдабд адбддсаддд 4620 сддддсдбаа баабасбадс бссддсаааа ааасдддсаа ддбдбсасса сссбдсссбб 4680 бббсбббааа ассдаааада ббасббсдс 4709 <210> 65 <211> 18 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид со1Е1-Р
- 114 028892 <400> 65 сдЬсадассс сдЬадааа 18 <210> 66 <211> 18 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид со1Е1-К <400> 66 сЬсЬссЬдЬЬ ссдасссЬ 18 <210> 67 <211> 37 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ΡΌ1 <400> 67 ссдааЬЬсдЬ сдасаасада дЬЬЬдаЬссЬ ддсЬсад 37 <210> 68 <211> 37 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Кр2 <400> 68 сссдддаЬсс аадсЬЬасдд сЬассЬЬдЬЬ асдасЬЬ 37 <210> 69 <211> 25 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид 1зрЗ-Р <400> 69 аддсЬдааЬЬ ЬсЬЬасасЬЬ сЬЬда 25 <210> 70 <211> 25 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид 1зрЗ-К <400> 70 дЬаасЬссаЬ саааЬссЬсс асЬас 25
- 115 028892 <210> 71 <211> 25 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ίάί-Р <400> 71 абасдбдсбд бадбсабсса адаба <210> 72 <211> 25 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ίάίΚ.
<400> 72 бсббсаадбб сасабдбааа ассса <210> 73 <211> 25 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Дхз-Р <400> 73 асааадбабс баадасадда ддбса <210> 74 <211> 25 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Дхз-К.
<400> 74 дабдбсссас абсссабаба адббб <210> 75 <211> 6018 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ85246-1зрБ-1Д1 <400> 75 ссддддабсс бсбададбсд асдбсасдсд бссабддада бсбсдаддсс бдсадасабд саадсббддс асбддссдбс дббббасаас дбсдбдасбд ддаааасссб ддсдббассс 120
- 116 028892
аасббаабсд ссббдсадса сабсссссбб бсдссадсбд дсдбаабадс даададдссс 180
дсассдабсд сссббсссаа садббдсдса дссбдаабдд сдаабддсдс бадсабаааа 240
абаадаадсс бдсабббдса ддсббсббаб ббббабддсд сдссдсаббс асббсббббс 300
бабабаааба бдадсдаадс даабаадсдб сддаааадса дсааааадбб бссбббббдс 360
бдббддадса бдддддббса дддддбдсад бабсбдасдб саабдссдад сдааадсдад 420
ссдаадддба дсабббасдб бадабаассс ссбдабабдс бссдасдсбб бабабадааа 480
адаадаббса асбаддбааа абсббаабаб аддббдадаб дабааддббб абааддаабб 540
бдбббдббсб аабббббсас бсаббббдбб сбаабббсбб ббаасааабд ббсббббббб 600
бббадаасад ббабдабаба дббадаабад бббаааабаа ддадбдадаа ааадабдааа 660
дааадабабд даасадбсба баааддсбсб сададдсбса бадасдаада аадбддадаа 720
дбсабададд бадасаадбб абассдбааа сааасдбсбд дбаасббсдб аааддсабаб 780
абадбдсааб баабаадбаб дббадабабд аббддсддаа ааааасббаа аабсдббаас 840
бабабссбад абаабдбсса сббаадбаас аабасаабда бадсбасаас аададаааба 900
дсаааадсба саддаасаад бсбасаааса дбаабаасаа сасббааааб сббадаадаа 960
ддааабабба бааааадааа аасбддадба ббаабдббаа асссбдаасб асбаабдада 1020
ддсдасдасс ааааасаааа абассбсбба сбсдаабббд ддаасбббда дсаададдса 1080
аабдааабад аббдассбсс саабаасасс асдбадббаб бдддаддбса абсбабдааа 1140
бдсдаббаад ддссддссда адсааасбба ададбдбдбб дабадбдсад бабсббаааа 1200
ббббдбабаа баддааббда адббааабба дабдсбаааа абббдбаабб аадааддадб 1260
даббасабда асааааабаб аааабаббсб саааасбббб баасдадбда аааадбасбс 1320
аассааабаа баааасаабб даабббаааа дааассдаба ссдбббасда ааббддааса 1380
ддбааадддс абббаасдас дааасбддсб аааабаадба аасаддбаас дбсбаббдаа 1440
ббадасадбс абсбаббсаа сббабсдбса даааааббаа аасбдаабас бсдбдбсасб 1500
ббааббсасс аадабаббсб асадбббсаа ббсссбааса аасададдба бааааббдбб 1560
дддадбаббс сббассаббб аадсасасаа аббаббаааа аадбддбббб бдааадссаб 1620
дсдбсбдаса бсбабсбдаб бдббдаадаа ддаббсбаса адсдбассбб ддабаббсас 1680
сдаасасбад ддббдсбсбб дсасасбсаа дбсбсдаббс адсааббдсб баадсбдсса 1740
дсддаабдсб ббсабссбаа ассаааадба аасадбдбсб баабаааасб басссдссаб 1800
ассасадабд ббссадабаа абаббддаад сбабабасдб асбббдбббс аааабдддбс 1860
аабсдадааб абсдбсаасб дбббасбааа аабсадбббс абсаадсааб дааасасдсс 1920
ааадбаааса абббаадбас сдббасббаб дадсаадбаб бдбсбабббб баабадббаб 1980
сбаббаббба асдддаддаа абааббсбаб дадбсдсббб бдбааабббд дааадббаса 2040
- 117 028892
сдЕЕасЕааа дддааЕдЕдЕ ЕЕааасЕссЕ ЕЕЕЕдаЕааЕ сЕсаЕдасса аааЕсссЕЕа 2100
асдЕдадЕЕЕ ЕсдЕЕссасЕ дадсдЕсада ссссдЕадаа аадаЕсааад даЕсЕЕсЕЕд 2160
адаЕссЕЕЕЕ ЕЕЕсЕдсдсд ЕааЕсЕдсЕд сЕЕдсаааса аааааассас сдсЕассадс 2220
ддЕддЕЕЕдЕ ЕЕдссддаЕс аададсЕасс аасЕсЕЕЕЕЕ ссдааддЕаа сЕддсЕЕсад 2280
сададсдсад аЕассаааЕа сЕдЕЕсЕЕсЕ адЕдЕадссд ЕадЕЕаддсс ассасЕЕсаа 2340
даасЕсЕдЕа дсассдссЕа саЕассЕсдс ЕсЕдсЕааЕс сЕдЕЕассад ЕддсЕдсЕдс 2400
садЕддсдаЕ аадЕсдЕдЕс ЕЕассдддЕЕ ддасЕсаада сдаЕадЕЕас сддаЕааддс 2460
дсадсддЕсд ддсЕдаасдд ддддЕЕсдЕд сасасадссс адсЕЕддадс даасдассЕа 2520
сассдаасЕд адаЕассЕас адсдЕдадсЕ аЕдадааадс дссасдсЕЕс ссдаадддад 2580
аааддсддас аддЕаЕссдд Еаадсддсад ддЕсддааса ддададсдса сдадддадсЕ 2640
Ессаддддда аасдссЕддЕ аЕсЕЕЕаЕад ЕссЕдЕсддд ЕЕЕсдссасс ЕсЕдасЕЕда 2700
дсдЕсдаЕЕЕ ЕЕдЕдаЕдсЕ сдЕсаддддд дсддадссЕа Еддааааасд ссадсаасдс 2760
ддссЕЕЕЕЕа сддЕЕссЕдд ссЕЕЕЕдсЕд дссЕЕЕЕдсЕ сасаЕдЕЕсЕ ЕЕссЕдсдЕЕ 2820
аЕссссЕдаЕ ЕсЕдЕддаЕа ассдЕаЕЕас сдссЕЕЕдад ЕдадсЕдаЕа ссдсЕсдссд 2880
садссдаасд ассдадсдса дсдадЕсадЕ дадсдаддаа дсддаададс дсссааЕасд 2940
садддссссс ЕдсаддаЕаа аааааЕЕдЕа даЕаааЕЕЕЕ аЕааааЕадЕ ЕЕЕаЕсЕаса 3000
аЕЕЕЕЕЕЕаЕ саддааасад сЕаЕдассдс ддссдсддЕЕ ааЕдЕЕаааа аЕЕЕаЕадЕа 3060
ЕаасЕЕЕааа ааасЕдЕсЕЕ ааааадЕЕдЕ ЕаЕаЕааааа аЕдЕЕдасаа ЕЕааасадсЕ 3120
аЕЕЕадЕдса ааасаассаЕ аааааЕЕЕаа ааааЕассаЕ аааЕЕасЕЕд аааааЕадЕЕ 3180
даЕааЕааЕд ЕададЕЕаЕа аасаааддЕд аааадсаЕЕа сЕЕдЕаЕЕсЕ ЕЕЕЕЕаЕаЕа 3240
ЕЕаЕЕаЕааа ЕЕааааЕдаа дсЕдЕаЕЕад ааааааЕаса сассЕдЕааЕ аЕааааЕЕЕЕ 3300
аааЕЕааЕЕЕ ЕЕааЕЕЕЕЕЕ сааааЕдЕаЕ ЕЕЕасаЕдЕЕ ЕадааЕЕЕЕд аЕдЕаЕаЕЕа 3360
аааЕадЕада аЕасаЕаада ЕасЕЕааЕЕЕ ааЕЕааадаЕ адЕЕаадЕас ЕЕЕЕсааЕдЕ 3420
дсЕЕЕЕЕЕад аЕдЕЕЕааЕа саааЕсЕЕЕа аЕЕдЕаааад аааЕдсЕдЕа сЕаЕЕЕасЕд 3480
ЕасЕадЕдас дддаЕЕааас ЕдЕаЕЕааЕЕ аЕаааЕаааа ааЕаадЕаса дЕЕдЕЕЕааа 3540
аЕЕаЕаЕЕЕЕ дЕаЕЕаааЕс ЕааЕадЕасд аЕдЕаадЕЕа ЕЕЕЕаЕасЕа ЕЕдсЕадЕЕЕ 3600
ааЕааааада ЕЕЕааЕЕаЕа ЕасЕЕдаааа ддададдааЕ ЕЕЕЕаЕдсдЕ саЕаЕддсаа 3660
садааЕЕаЕЕ аЕдЕЕЕасас адассЕаЕаЕ сасЕЕасЕса сааасЕЕЕЕЕ аддааЕссаЕ 3720
ЕассЕааадЕ ЕаЕЕсаадсЕ асассЕЕЕаа саЕЕаааасЕ ЕаддЕдЕадЕ дЕЕЕсЕасад 3780
ааааЕдЕаЕс аЕЕЕадЕдад асадааасЕд ааасаадаад аЕсадсаааЕ ЕаЕдаассаа 3840
аЕЕсЕЕддда ЕЕаЕдаЕЕаЕ сЕЕсЕЕЕсЕЕ сЕдаЕасЕда ЕдадЕсааЕа даадЕасаЕа 3900
- 118 028892
аадаЕааддс ЕаадаааЕЕа даадсЕдаад ЕЕаддадада ааЕаааЕааЕ дадааддсЕд 3960
ааЕЕЕсЕЕас асЕЕсЕЕдаа сЕЕаЕЕдаЕа аЕдЕасааад асЕЕддаЕЕа ддаЕаЕадаЕ 4020
ЕЕдадЕсЕда ЕаЕаадаада дсаЕЕадаЕа даЕЕЕдЕаад ЕадЕддадда ЕЕЕдаЕддад 4080
ЕЕасЕаааас ЕЕсаЕЕасаЕ ддаасадсаЕ ЕаЕсаЕЕЕад дЕЕаЕЕаадд саасаЕддЕЕ 4140
ЕЕдаадЕаЕс ЕсаадаадсЕ ЕЕЕадЕддаЕ ЕЕааадаЕса дааЕддааас ЕЕЕсЕЕдада 4200
аЕЕЕааадда адасаЕаааа дсааЕЕсЕЕЕ сЕсЕЕЕаЕда адсаЕсаЕЕЕ ЕЕадсаЕЕад 4260
ааддЕдадаа ЕаЕаЕЕадаЕ даддсЕааад ЕаЕЕЕдсааЕ аЕсЕсаЕсЕЕ ааадаасЕЕа 4320
дЕдаадаааа даЕЕддЕааа дааЕЕадсЕд аасаадЕЕЕс асаЕдсЕЕЕа дааЕЕассаЕ 4380
ЕасаЕадаад аасасааада ЕЕадаадсад ЕЕЕддЕсааЕ адаадсаЕаЕ адааадааад 4440
аадасдсааа ЕсаадЕасЕЕ ЕЕадаасЕЕд сааЕасЕЕда сЕасааЕаЕд аЕЕсааадЕд 4500
ЕаЕаЕсадад ддаЕЕЕаада дааасаЕсаа даЕддЕддад аададЕадда ЕЕадсаасЕа 4560
ааЕЕасаЕЕЕ ЕдсЕададаЕ аддсЕЕаЕЕд ааадЕЕЕЕЕа ЕЕдддсЕдЕЕ ддадЕЕдсЕЕ 4620
ЕЕдаассаса аЕаЕЕсЕдаЕ ЕдсадаааЕа дЕдЕадсааа даЕдЕЕЕЕса ЕЕЕдЕЕасЕа 4680
ЕааЕЕдасда ЕаЕЕЕасдаЕ дЕаЕаЕддаа сЕЕЕадаЕда асЕЕдаасЕЕ ЕЕЕасЕдаЕд 4740
садЕЕдааад аЕдддаЕдЕа ааЕдсЕаЕЕа аЕдаЕсЕЕсс ЕдаЕЕаЕаЕд аадЕЕаЕдЕЕ 4800
ЕЕсЕЕдсасЕ ЕЕасааЕасЕ аЕЕаасдада ЕадсЕЕасда ЕаасЕЕаааа даЕаааддЕд 4860
адаасаЕасЕ ЕссЕЕаЕЕЕа асаааадсаЕ дддсадаЕЕЕ аЕдЕааЕдса ЕЕЕсЕЕсаад 4920
аадсЕаадЕд дсЕЕЕаЕааЕ аааЕсаасас сЕасаЕЕЕда ЕдаЕЕаЕЕЕЕ ддаааЕдсаЕ 4980
ддаааадЕЕс ЕадЕддассЕ ЕЕасадсЕЕа ЕЕЕЕЕдсЕЕа ЕЕЕЕдсЕдЕа дЕасадааса 5040
ЕЕааааадда ададаЕЕдад ааЕсЕЕсада ааЕаЕсаЕда саЕааЕаЕса адассЕадЕс 5100
асаЕЕЕЕЕад дсЕЕЕдЕааЕ даЕЕЕадсаЕ сЕдсЕЕсадс адаааЕадса ададдЕдааа 5160
сЕдсЕааЕЕс ЕдЕаадЕЕдЕ ЕаЕаЕдадаа сааааддЕаЕ аЕсЕдаадаа ЕЕадсЕасЕд 5220
ааадЕдЕЕаЕ дааЕсЕЕаЕа дасдааасЕЕ ддаадааааЕ даасааадаа ааасЕЕддЕд 5280
даЕсЕЕЕаЕЕ ЕдсаааассЕ ЕЕЕдЕЕдада сЕдсЕаЕааа ЕЕЕадсЕада садЕсЕсаЕЕ 5340
дсасаЕаЕса ЕааЕддЕдаЕ дсасаЕасЕа дЕссадаЕда аЕЕаасЕадд аааададЕас 5400
ЕЕадЕдЕааЕ аасЕдаасса аЕаЕЕассаЕ ЕЕдааадаЕа адааЕЕсдад сЕсдаааддд 5460
даааЕЕаааЕ ддсадааЕаЕ аЕааЕадсЕд ЕадаЕдааЕЕ ЕдаЕаасдаа аЕаддЕЕсаа 5520
ЕЕдааааааЕ ддаддсЕсас сдЕаааддаа саЕЕасаЕад адсЕЕЕЕЕсЕ аЕаЕЕадЕаЕ 5580
ЕЕааЕЕсЕаа аааЕсааЕЕд ЕЕаЕЕасада ааадаааЕдЕ аааааааЕаЕ саЕЕсдссЕд 5640
дЕсЕсЕддас аааЕасдЕдс ЕдЕадЕсаЕс саадаЕасдд ЕдааадЕЕЕа саЕдаЕдсда 5700
ЕЕЕаЕадаад дсЕЕааддаа даааЕдддЕЕ ЕЕасаЕдЕда асЕЕдаадаа дЕаЕЕЕадЕЕ 5760
ЕЕаЕЕЕаЕаа адЕаааасЕЕ даадаЕааЕс ЕЕЕЕЕдаааа ЕдааЕаЕдаЕ саЕдЕаЕЕса 5820
- 119 028892
ЕЕдддаааЕа ЕдаЕддадаа аЕааЕЕдЕаа асааадаЕда адЕадаЕдаЕ ЕЕЕаадЕддд 5880
ЕЕдаЕаЕЕаа ЕдаддЕЕаад ааддаЕаЕЕа Еадаааддсс адаадсаЕас асЕЕаЕЕддЕ 5940
ЕсаадЕаЕЕЕ адЕЕааЕаад дсадааааса аааЕаЕЕЕаа аЕаадЕаада аЕЕЕсдЕсЕа 6000
ааЕааадаЕЕ ЕддддЕас 6018
<210> 76 <211> 6909 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ 82151-РаЕр-НМОК.
<400> 76
ссЕдсаддаЕ аааааааЕЕд ЕадаЕаааЕЕ ЕЕаЕааааЕа дЕЕЕЕаЕсЕа сааЕЕЕЕЕЕЕ 60
аЕсаддааас адсЕаЕдасс дсддссдсЕд ЕаЕссаЕаЕд ассаЕдаЕЕа сдааЕЕсдад 120
сЕсдЕЕаЕаа ЕЕЕЕсааЕЕЕ ЕсаЕЕсЕЕЕЕ ЕаааддадаЕ ЕадсаЕасаЕ ЕЕЕаЕсаЕаа 180
ЕЕаЕасадас ааЕаЕадЕаа ЕаЕаЕдаЕдЕ ЕааааЕаЕса аЕаЕаЕддЕЕ аааааЕсЕдЕ 240
аЕаЕЕЕЕЕЕс ссаЕЕЕЕааЕ ЕаЕЕЕдЕасЕ аЕааЕаЕЕас асЕдадЕдЕа ЕЕдсаЕаЕЕЕ 300
ааааааЕаЕЕ ЕддЕасааЕЕ адЕЕадЕЕаа аЕаааЕЕсЕа ааЕЕдЕаааЕ ЕаЕсадааЕс 360
сЕЕаЕЕаадд аааЕасаЕад аЕЕЕааддад аааЕсаЕааа ааддЕдЕааЕ аЕааасЕддс 420
ЕааааЕЕдад саааааЕЕда дсааЕЕаада сЕЕЕЕЕдаЕЕ дЕаЕсЕЕЕЕЕ аЕаЕаЕЕЕаа 480
ддЕаЕаЕааЕ сЕЕаЕЕЕаЕа ЕЕдддддаад дЕассаЕдса аЕсаЕЕадас аааааЕЕЕса 540
дасаЕЕЕаЕс аадасаасаа аадЕЕасаас ааЕЕадЕЕда ЕааасадЕдд сЕЕЕсадаад 600
аЕсадЕЕЕда ЕаЕЕЕЕасЕЕ ааЕсаЕссЕс ЕЕаЕадаЕда адаадЕЕдсЕ ааЕадЕсЕЕа 660
ЕадааааЕдЕ ааЕЕдсасад ддЕдсаЕЕас садЕЕддасЕ ЕсЕЕссЕааЕ аЕааЕадЕЕд 720
аЕдаЕааддс ЕЕаЕдЕЕдЕа ссааЕдаЕдд ЕЕдаадаасс ЕадЕдЕЕдЕЕ дсадсЕдсаЕ 780
сЕЕаЕддЕдс ЕаааЕЕадЕа ааЕсадасад дЕддаЕЕЕаа аасЕдЕаЕса Есадааадаа 840
ЕааЕдаЕЕдд асадаЕадЕа ЕЕЕдаЕддЕд ЕадаЕдасас ЕдаааааЕЕа адЕдсадаЕа 900
ЕЕааадсаЕЕ адааааасаа аЕасаЕаада ЕЕдсадаЕда адсаЕаЕссЕ адЕаЕаааад 960
саададдЕдд ЕддЕЕаЕсаа адааЕадсаа ЕадаЕасаЕЕ Ессададсаа саасЕЕЕЕаа 1020
дЕсЕЕааддЕ аЕЕЕдЕадаЕ асаааадаЕд сЕаЕдддЕдс ЕааЕаЕдсЕЕ ааЕасЕаЕас 1080
ЕЕдаддсааЕ аасЕдсаЕЕс сЕЕаааааЕд ааЕсЕссЕса аЕсадаЕаЕа ЕЕааЕдЕсЕа 1140
ЕасЕЕЕсааа ссаЕдсаасЕ дсЕадЕдЕад ЕаааадЕаса аддЕдадаЕа даЕдЕаааад 1200
аЕсЕЕдсЕад аддЕдааада асаддЕдаад аадЕадсЕаа дадааЕддаа ададсЕЕсЕд 1260
ЕаЕЕадсЕса ддЕЕдаЕаЕЕ саЕададсЕд саасасаЕаа саааддЕдЕЕ аЕдааЕддаа 1320
- 120 028892
ЕасаЕдсЕдЕ ЕдЕЕЕЕадсЕ асаддаааЕд аЕасЕададд ЕдсЕдаадса ЕсЕдсасаЕд 1380
саЕасдсаЕс аададасдда сааЕаЕадад дЕаЕадсаас ЕЕддадаЕаЕ даЕсадаада 1440
дасааадасЕ ЕаЕЕддаасЕ аЕЕдаадЕЕс сааЕдасасЕ ЕдсЕаЕадЕа ддЕддЕддЕа 1500
сЕааадЕаЕЕ ассааЕадсЕ ааддсаЕсаЕ ЕададЕЕаЕЕ аааЕдЕЕдаЕ ЕсЕдсасаад 1560
аасЕЕддаса сдЕадЕЕдсЕ дсЕдЕЕддаЕ Еадсасаааа сЕЕЕдсЕдсЕ ЕдЕададсас 1620
ЕЕдЕЕЕсЕда аддЕаЕЕсаа сааддасаса ЕдЕсаЕЕаса аЕаЕаааадЕ ЕЕадсааЕад 1680
ЕадЕаддЕдс ааааддЕдас дадаЕадсас аадЕадсада адсЕсЕЕааа саддаассаа 1740
дадсЕааЕас асаддЕЕдсЕ дааадааЕЕЕ ЕасаддаааЕ Еадасадсаа ЕааЕсЕадад 1800
ЕсдасдЕсас дсдЕссаЕдд адаЕсЕсдад дссЕдсадас аЕдсаадсЕЕ ддсасЕддсс 1860
дЕсдЕЕЕЕас аасдЕсдЕда сЕдддаааас ссЕддсдЕЕа сссаасЕЕаа ЕсдссЕЕдса 1920
дсасаЕсссс сЕЕЕсдссад сЕддсдЕааЕ адсдаададд сссдсассда ЕсдсссЕЕсс 1980
саасадЕЕдс дсадссЕдаа ЕддсдааЕдд сдсЕадсаЕа ааааЕаадаа дссЕдсаЕЕЕ 2040
дсаддсЕЕсЕ ЕаЕЕЕЕЕаЕд дсдсдссдЕЕ сЕдааЕссЕЕ адсЕааЕддЕ ЕсаасаддЕа 2100
асЕаЕдасда адаЕадсасс сЕддаЕаадЕ сЕдЕааЕдда ЕЕсЕааддса ЕЕЕааЕдаад 2160
асдЕдЕаЕаЕ ааааЕдЕдсЕ ааЕдааааад ааааЕдсдЕЕ аааададссЕ ааааЕдадЕЕ 2220
саааЕддЕЕЕ ЕдаааЕЕдаЕ ЕддЕадЕЕЕа аЕЕЕааЕаЕа ЕЕЕЕЕЕсЕаЕ ЕддсЕаЕсЕс 2280
даЕассЕаЕа дааЕсЕЕсЕд ЕЕсасЕЕЕЕд ЕЕЕЕЕдаааЕ аЕаааааддд дсЕЕЕЕЕадс 2340
сссЕЕЕЕЕЕЕ ЕаааасЕссд даддадЕЕЕс ЕЕсаЕЕсЕЕд аЕасЕаЕасд ЕаасЕаЕЕЕЕ 2400
сдаЕЕЕдасЕ ЕсаЕЕдЕсаа ЕЕаадсЕадЕ ааааЕсааЕд дЕЕаааааас аааааасЕЕд 2460
саЕЕЕЕЕсЕа ссЕадЕааЕЕ ЕаЕааЕЕЕЕа адЕдЕсдадЕ ЕЕаааадЕаЕ ааЕЕЕассад 2520
даааддадса адЕЕЕЕЕЕаа Еааддааааа ЕЕЕЕЕссЕЕЕ ЕааааЕЕсЕа ЕЕЕсдЕЕаЕа 2580
ЕдасЕааЕЕа ЕааЕсааааа ааЕдааааЕа аасаададдЕ ааааасЕдсЕ ЕЕададаааЕ 2640
дЕасЕдаЕаа ааааадаааа ааЕссЕадаЕ ЕЕасдЕсаЕа саЕадсассЕ ЕЕаасЕасЕа 2700
адаааааЕаЕ ЕдаааддасЕ ЕссасЕЕдЕд дадаЕЕаЕЕЕ дЕЕЕаЕдЕЕд адЕдаЕдсад 2760
асЕЕадааса ЕЕЕЕаааЕЕа саЕаааддЕа аЕЕЕЕЕдсдд ЕааЕадаЕЕЕ ЕдЕссааЕдЕ 2820
дЕадЕЕддсд асЕЕдсЕЕдЕ ааддаЕадЕЕ ЕадаааЕаЕс ЕаЕЕсЕЕаЕд дадсаЕЕЕаа 2880
даааадаада аааЕааадад ЕЕЕаЕаЕЕЕЕ ЕаасЕсЕЕас аасЕссаааЕ дЕааааадЕЕ 2940
аЕдаЕсЕЕаа ЕЕаЕЕсЕаЕЕ ааасааЕаЕа аЕаааЕсЕЕЕ ЕааааааЕЕа аЕддадсдЕа 3000
аддаадЕЕаа ддаЕаЕаасЕ аааддЕЕаЕа ЕаадааааЕЕ адаадЕаасЕ Еассаааадд 3060
аааааЕасаЕ аасаааддаЕ ЕЕаЕддаааа Еааааааада ЕЕаЕЕаЕсаа ааааааддас 3120
ЕЕдаааЕЕдд ЕдаЕЕЕадаа ссЕааЕЕЕЕд аЕасЕЕаЕаа ЕссЕсаЕЕЕЕ саЕдЕадЕЕа 3180
ЕЕдсадЕЕаа ЕаааадЕЕаЕ ЕЕЕасадаЕа ааааЕЕаЕЕа ЕаЕаааЕсда дааадаЕддЕ 3240
- 121 028892
ЕддааЕЕаЕд даадЕЕЕдсЕ асЕааддаЕд аЕЕсЕаЕаас ЕсаадЕЕдаЕ дЕЕадаааад 3300
саааааЕЕаа ЕдаЕЕаЕааа даддЕЕЕасд аасЕЕдсдаа аЕаЕЕсадсЕ ааадасасЕд 3360
аЕЕаЕЕЕааЕ аЕсдаддсса дЕаЕЕЕдааа ЕЕЕЕЕЕаЕаа адсаЕЕаааа ддсаадсадд 3420
ЕаЕЕадЕЕЕЕ ЕадЕддаЕЕЕ ЕЕЕааадаЕд сасасаааЕЕ дЕасаадсаа ддаааасЕЕд 3480
аЕдЕЕЕаЕаа ааадааадаЕ даааЕЕаааЕ аЕдЕсЕаЕаЕ адЕЕЕаЕЕаЕ ааЕЕддЕдса 3540
ааааасааЕа ЕдаааааасЕ адааЕааддд аасЕЕасдда адаЕдааааа даадааЕЕаа 3600
аЕсаадаЕЕЕ ааЕадаЕдаа аЕадаааЕад аЕЕааадЕдЕ аасЕаЕасЕЕ ЕаЕаЕаЕаЕа 3660
ЕдаЕЕааааа ааЕаааааас аасадссЕаЕ ЕаддЕЕдЕЕд ЕЕЕЕЕЕаЕЕЕ ЕсЕЕЕаЕЕаа 3720
ЕЕЕЕЕЕЕааЕ ЕЕЕЕадЕЕЕЕ ЕадЕЕсЕЕЕЕ ЕЕааааЕаад ЕЕЕсадссЕс ЕЕЕЕЕсааЕа 3780
ЕЕЕЕЕЕааад ааддадЕаЕЕ ЕдсаЕдааЕЕ дссЕЕЕЕЕЕс ЕаасадасЕЕ аддаааЕаЕЕ 3840
ЕЕаасадЕаЕ сЕЕсЕЕдсдс сддЕдаЕЕЕЕ ддаасЕЕсаЕ аасЕЕасЕаа ЕЕЕаЕааЕЕа 3900
ЕЕаЕЕЕЕсЕЕ ЕЕЕЕааЕЕдЕ аасадЕЕдса ааадаадсЕд аассЕдЕЕсс ЕЕсаасЕадЕ 3960
ЕЕаЕсаЕсЕЕ сааЕаЕааЕа ЕЕсЕЕдассЕ аЕаЕадЕаЕа ааЕаЕаЕЕЕЕ ЕаЕЕаЕаЕЕЕ 4020
ЕЕасЕЕЕЕЕЕ сЕдааЕсЕаЕ ЕаЕЕЕЕаЕаа ЕсаЕааааад ЕЕЕЕассасс аааадааддЕ 4080
ЕдЕасЕссЕЕ сЕддЕссаас аЕаЕЕЕЕЕЕЕ асЕаЕаЕЕаЕ сЕаааЕааЕЕ ЕЕЕдддаасЕ 4140
ддЕдЕЕдЕаа ЕЕЕдаЕЕааЕ сдаасаасса дЕЕаЕасЕЕа ааддааЕЕаЕ аасЕаЕаааа 4200
аЕаЕаЕадда ЕЕаЕсЕЕЕЕЕ аааЕЕЕсаЕЕ аЕЕддссЕсс ЕЕЕЕЕаЕЕаа аЕЕЕаЕдЕЕа 4260
ссаЕааааад дасаЕаасдд дааЕаЕдЕад ааЕаЕЕЕЕЕа аЕдЕадасаа ааЕЕЕЕасаЕ 4320
аааЕаЕааад аааддаадЕд ЕЕЕдЕЕЕааа ЕЕЕЕаЕадса аасЕаЕсааа ааЕЕаддддд 4380
аЕаааааЕЕЕ аЕдааааааа ддЕЕЕЕсдаЕ дЕЕаЕЕЕЕЕа ЕдЕЕЕаасЕЕ ЕааЕадЕЕЕд 4440
ЕддЕЕЕаЕЕЕ асаааЕЕсдд ссддссадЕд ддсаадЕЕда ааааЕЕсаса ааааЕдЕддЕ 4500
аЕааЕаЕсЕЕ ЕдЕЕсаЕЕад адсдаЕааас ЕЕдааЕЕЕда дадддаасЕЕ адаЕддЕаЕЕ 4560
ЕдааааааЕЕ даЕаааааЕа дЕЕддаасад аааададЕаЕ ЕЕЕдассасЕ асЕЕЕдсаад 4620
ЕдЕассЕЕдЕ ассЕасадса ЕдассдЕЕаа адЕддаЕаЕс асасаааЕаа аддааааддд 4680
ааЕдааасЕа ЕаЕссЕдсаа ЕдсЕЕЕаЕЕа ЕаЕЕдсааЕд аЕЕдЕааасс дссаЕЕсада 4740
дЕЕЕаддасд дсааЕсааЕс аадаЕддЕда аЕЕддддаЕа ЕаЕдаЕдада ЕдаЕассаад 4800
сЕаЕасааЕа ЕЕЕсасааЕд аЕасЕдааас аЕЕЕЕссадс сЕЕЕддасЕд адЕдЕаадЕс 4860
ЕдасЕЕЕааа ЕсаЕЕЕЕЕад садаЕЕаЕда аадЕдаЕасд саасддЕаЕд дааасааЕса 4920
ЕадааЕддаа ддааадссаа аЕдсЕссдда ааасаЕЕЕЕЕ ааЕдЕаЕсЕа ЕдаЕассдЕд 4980
дЕсаассЕЕс даЕддсЕЕЕа аЕсЕдааЕЕЕ дсадааадда ЕаЕдаЕЕаЕЕ ЕдаЕЕссЕаЕ 5040
ЕЕЕЕасЕаЕд дддаааЕаЕЕ аЕааадаада ЕаасааааЕЕ аЕасЕЕссЕЕ ЕддсааЕЕса 5100
- 122 028892
адЬЬсаЬсас дсадЬаЬдЬд асддаЬЬЬса саЬЬЬдссдЬ ЬЬЬдЬааасд ааЬЬдсадда 5160
аЬЬдаЬаааЬ адЬЬаасЬЬс аддЬЬЬдЬсЬ дЬаасЬаааа асаадЬаЬЬЬ аадсааааас 5220
аЬсдЬадааа ЬасддЬдЬЬЬ ЬЬЬдЬЬассс ЬаадЬЬЬааа сЬссЬЬЬЬЬд аЬааЬсЬсаЬ 5280
дассааааЬс ссЬЬаасдЬд адЬЬЬЬсдЬЬ ссасЬдадсд Ьсадассссд ЬадаааадаЬ 5340
саааддаЬсЬ ЬсЬЬдадаЬс сЬЬЬЬЬЬЬсЬ дсдсдЬааЬс ЬдсЬдсЬЬдс ааасаааааа 5400
ассассдсЬа ссадсддЬдд ЬЬЬдЬЬЬдсс ддаЬсаадад сЬассаасЬс ЬЬЬЬЬссдаа 5460
ддЬаасЬддс ЬЬсадсадад сдсадаЬасс аааЬасЬдЬЬ сЬЬсЬадЬдЬ адссдЬадЬЬ 5520
аддссассас ЬЬсаадаасЬ сЬдЬадсасс дссЬасаЬас сЬсдсЬсЬдс ЬааЬссЬдЬЬ 5580
ассадЬддсЬ дсЬдссадЬд дсдаЬаадЬс дЬдЬсЬЬасс дддЬЬддасЬ саадасдаЬа 5640
дЬЬассддаЬ ааддсдсадс ддЬсдддсЬд аасддддддЬ ЬсдЬдсасас адсссадсЬЬ 5700
ддадсдаасд ассЬасассд аасЬдадаЬа ссЬасадсдЬ дадсЬаЬдад ааадсдссас 5760
дсЬЬсссдаа дддадааадд сддасаддЬа ЬссддЬаадс ддсадддЬсд даасаддада 5820
дсдсасдадд дадсЬЬссад ддддааасдс сЬддЬаЬсЬЬ ЬаЬадЬссЬд ЬсдддЬЬЬсд 5880
ссассЬсЬда сЬЬдадсдЬс даЬЬЬЬЬдЬд аЬдсЬсдЬса ддддддсдда дссЬаЬддаа 5940
ааасдссадс аасдсддссЬ ЬЬЬЬасддЬЬ ссЬддссЬЬЬ ЬдсЬддссЬЬ ЬЬдсЬсасаЬ 6000
дЬЬсЬЬЬссЬ дсдЬЬаЬссс сЬдаЬЬсЬдЬ ддаЬаассдЬ аЬЬассдссЬ ЬЬдадЬдадс 6060
ЬдаЬассдсЬ сдссдсадсс даасдассда дсдсадсдад ЬсадЬдадсд аддаадсдда 6120
ададсдссса аЬасдсаддд сссссЬдсЬЬ сддддЬсаЬЬ аЬадсдаЬЬЬ ЬЬЬсддЬаЬа 6180
ЬссаЬссЬЬЬ ЬЬсдсасдаЬ аЬасаддаЬЬ ЬЬдссааадд дЬЬсдЬдЬад асЬЬЬссЬЬд 6240
дЬдЬаЬссаа сддсдЬсадс сдддсаддаЬ аддЬдаадЬа ддсссасссд сдадсдддЬд 6300
ЬЬссЬЬсЬЬс асЬдЬсссЬЬ аЬЬсдсассЬ ддсддЬдсЬс аасдддааЬс сЬдсЬсЬдсд 6360
аддсЬддссд дсЬассдссд дсдЬаасада Ьдадддсаад сддаЬддсЬд аЬдааассаа 6420
дссаассадд аадддсадсс сассЬаЬсаа ддЬдЬасЬдс сЬЬссадасд аасдаададс 6480
даЬЬдаддаа ааддсддсдд сддссддсаЬ дадссЬдЬсд дссЬассЬдс ЬддссдЬсдд 6540
ссадддсЬас ааааЬсасдд дсдЬсдЬдда сЬаЬдадсас дЬссдсдадс ЬддсссдсаЬ 6600
сааЬддсдас сЬдддссдсс ЬдддсддссЬ дсЬдааасЬс ЬддсЬсассд асдасссдсд 6660
сасддсдсдд ЬЬсддЬдаЬд ссасдаЬссЬ сдсссЬдсЬд дсдаадаЬсд аададаадса 6720
ддасдадсЬЬ ддсааддЬса ЬдаЬдддсдЬ ддЬссдсссд адддсададс саЬдасЬЬЬЬ 6780
ЬЬадссдсЬа ааасддссдд ддддЬдсдсд ЬдаЬЬдссаа дсасдЬсссс аЬдсдсЬсса 6840
Ьсаадаадад сдасЬЬсдсд дадсЬддЬда адЬасаЬсас сдасдадсаа ддсаадассд 6900
аЬсдддссс 6909
- 123 028892 <210> 77 <211> 31 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ЕсоК1-НМОЗ_Р <400> 77 адссдЬдааЬ ЬсдаддсЬЬЬ ЬасЬааааас а 31 <210> 78 <211> 32 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ЕсоК1-НМОЗ_К <400> 78 аддсдЬсЬад аЬдЬЬсдЬсЬ сЬасаааЬаа ЬЬ 32 <210> 79 <211> 8116 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ 82151-НМОЗ-РаЬр-НМОК.
<400> 79 ссЬдсаддаЬ аааааааЬЬд ЬадаЬаааЬЬ ЬЬаЬааааЬа дЬЬЬЬаЬсЬа сааЬЬЬЬЬЬЬ 60
аЬсаддааас адсЬаЬдасс дсддссдсЬд ЬаЬссаЬаЬд ассаЬдаЬЬа сдааЬЬсдад 120
дсЬЬЬЬасЬа аааасааЬаа ааасаддадд аааЬааЬаЬд асЬаЬаддаа ЬЬдасааааЬ 180
ааасЬЬЬЬас дЬассааааЬ аЬЬаЬдЬада ЬаЬддсаааа ЬЬадсадаад саадасаадЬ 240
адасссаааЬ аааЬЬЬсЬЬа ЬЬддааЬадд асадасЬдаа аЬддсадЬЬа дЬссадЬааа 300
ссаадаЬаЬа дЬаЬсааЬдд дЬдсЬааЬдс ЬдсЬааадаЬ аЬааЬаасЬд аЬдаадасаа 360
ааадааааЬа ддааЬддЬаа ЬадЬадсаас ЬдадЬсадса дЬадаЬдсад саааддсадс 420
адсадЬасад аЬЬсаЬааЬЬ ЬаЬЬаддЬаЬ ЬсаассаЬЬЬ дсаадаЬдЬЬ ЬсдаааЬдаа 480
адаадсаЬдЬ ЬаЬдсЬдсЬа сЬссЬдсааЬ ЬсадЬЬадсЬ ааддаЬЬаЬЬ ЬадсЬасаад 540
ассаааЬдад ааадЬЬЬЬад ЬЬаЬадсЬас адаЬасадсЬ адаЬаЬддас ЬЬааЬЬсадд 600
ЬддЬдаассЬ асЬсааддЬд сЬддЬдсЬдЬ ЬдсЬаЬддЬЬ аЬадсЬсаЬа аЬссЬадЬаЬ 660
асЬЬдсаЬЬа ааЬдаадасд сЬдЬЬдсЬЬа ЬасадаадаЬ дЬЬЬаЬдаЬЬ ЬсЬддадасс 720
аасаддасаЬ аадЬаЬссаЬ ЬадЬадаЬдд ЬдсЬЬЬаЬса ааадасдсаЬ аЬаЬЬадаЬс 780
ЬЬЬЬсаасаа ЬсЬЬддааЬд ааЬаЬдсЬаа дадасаадда аададЬЬЬад сЬдаЬЬЬЬдс 840
ЬадЬсЬЬЬдс ЬЬЬсаЬдЬЬс сЬЬЬЬасЬаа ааЬдддЬааа ааддсЬЬЬад ааЬсЬаЬааЬ 900
- 124 028892
адабаасдса дабдааасаа сбсаададад аббаадабсб ддабабдаад абдсадббда 960
ббасаабада бабдббддаа абабабасас аддаадбсбб бабсбббсбс ббабаадбсб 1020
бсббдааааб ададабббас аддсбддбда аасбаббдда ббаббббсаб асддабсадд 1080
ббсбдббддб дааббббабб садсбасасб бдбадаадда бабааадабс ассббдабса 1140
ддсадсасас ааадсасббб бааасаабад аасбдаадба бсадбадабд сабасдааас 1200
абббббсаад адабббдабд абдбадаабб бдабдаадад саддабдсад ббсабдаада 1260
бадасабаба ббсбабсббб сааасабада даабаабдба ададаабабс абадассбда 1320
абаададсбс дббабааббб бсааббббса ббсбббббаа аддадаббад сабасабббб 1380
абсабаабба басадасааб абадбаабаб абдабдббаа аабабсааба бабддббааа 1440
аабсбдбаба ббббббссса ббббааббаб ббдбасбаба абаббасасб дадбдбаббд 1500
сабабббааа ааабабббдд басааббадб бадббаааба ааббсбаааб бдбаааббаб 1560
садаабссбб аббааддааа басабадабб бааддадааа бсабааааад дбдбаабаба 1620
аасбддсбаа ааббдадсаа аааббдадса аббаадасбб бббдаббдба бсбббббаба 1680
бабббааддб абабаабсбб абббабаббд ддддааддба ссабдсаабс аббадасааа 1740
аабббсадас абббабсаад асаасаааад ббасаасааб бадббдабаа асадбддсбб 1800
бсадаадабс адбббдабаб бббасббааб сабссбсбба бадабдаада адббдсбааб 1860
адбсббабад аааабдбааб бдсасадддб дсаббассад ббддасббсб бссбаабаба 1920
абадббдабд абааддсбба бдббдбасса абдабддббд аадаассбад бдббдббдса 1980
дсбдсабсбб абддбдсбаа аббадбаааб садасаддбд дабббаааас бдбабсабса 2040
дааадаабаа бдаббддаса дабадбаббб дабддбдбад абдасасбда ааааббаадб 2100
дсадабабба аадсаббада аааасаааба сабаадаббд садабдаадс абабссбадб 2160
абаааадсаа даддбддбдд ббабсааада абадсаабад абасабббсс ададсаасаа 2220
сббббаадбс ббааддбабб бдбадабаса ааадабдсба бдддбдсбаа бабдсббааб 2280
асбабасббд аддсаабаас бдсаббссбб ааааабдааб сбссбсаабс адабабабба 2340
абдбсбабас бббсааасса бдсаасбдсб адбдбадбаа аадбасаадд бдадабадаб 2400
дбаааадабс ббдсбададд бдааадааса ддбдаадаад бадсбаадад аабддааада 2460
дсббсбдбаб бадсбсаддб бдабаббсаб ададсбдсаа сасабаасаа аддбдббабд 2520
аабддаабас абдсбдббдб бббадсбаса ддааабдаба сбададдбдс бдаадсабсб 2580
дсасабдсаб асдсабсаад адасддасаа бабададдба бадсаасббд дадабабдаб 2640
садаададас ааадасббаб бддаасбабб даадббссаа бдасасббдс бабадбаддб 2700
ддбддбасба аадбаббасс аабадсбаад дсабсаббад адббаббааа бдббдаббсб 2760
дсасаадаас ббддасасдб адббдсбдсб дббддаббад сасаааасбб бдсбдсббдб 2820
- 125 028892
ададсасЬЬд ЬЬЬсЬдаадд ЬаЬЬсаасаа ддасасаЬдЬ саЬЬасааЬа ЬаааадЬЬЬа 2880
дсааЬадЬад ЬаддЬдсааа аддЬдасдад аЬадсасаад Ьадсадаадс ЬсЬЬааасад 2940
даассаадад сЬааЬасаса ддЬЬдсЬдаа адааЬЬЬЬас аддаааЬЬад асадсааЬаа 3000
ЬсЬададЬсд асдЬсасдсд ЬссаЬддада ЬсЬсдаддсс ЬдсадасаЬд саадсЬЬддс 3060
асЬддссдЬс дЬЬЬЬасаас дЬсдЬдасЬд ддаааасссЬ ддсдЬЬассс аасЬЬааЬсд 3120
ссЬЬдсадса саЬсссссЬЬ ЬсдссадсЬд дсдЬааЬадс даададдссс дсассдаЬсд 3180
сссЬЬсссаа садЬЬдсдса дссЬдааЬдд сдааЬддсдс ЬадсаЬаааа аЬаадаадсс 3240
ЬдсаЬЬЬдса ддсЬЬсЬЬаЬ ЬЬЬЬаЬддсд сдссдЬЬсЬд ааЬссЬЬадс ЬааЬддЬЬса 3300
асаддЬаасЬ аЬдасдаада ЬадсасссЬд даЬаадЬсЬд ЬааЬддаЬЬс ЬааддсаЬЬЬ 3360
ааЬдаадасд ЬдЬаЬаЬааа аЬдЬдсЬааЬ дааааадааа аЬдсдЬЬааа ададссЬааа 3420
аЬдадЬЬсаа аЬддЬЬЬЬда ааЬЬдаЬЬдд ЬадЬЬЬааЬЬ ЬааЬаЬаЬЬЬ ЬЬЬсЬаЬЬдд 3480
сЬаЬсЬсдаЬ ассЬаЬадаа ЬсЬЬсЬдЬЬс асЬЬЬЬдЬЬЬ ЬЬдаааЬаЬа ааааддддсЬ 3540
ЬЬЬЬадсссс ЬЬЬЬЬЬЬЬаа аасЬссддад дадЬЬЬсЬЬс аЬЬсЬЬдаЬа сЬаЬасдЬаа 3600
сЬаЬЬЬЬсда ЬЬЬдасЬЬса ЬЬдЬсааЬЬа адсЬадЬааа аЬсааЬддЬЬ аааааасааа 3660
ааасЬЬдсаЬ ЬЬЬЬсЬассЬ адЬааЬЬЬаЬ ааЬЬЬЬаадЬ дЬсдадЬЬЬа ааадЬаЬааЬ 3720
ЬЬассаддаа аддадсаадЬ ЬЬЬЬЬааЬаа ддаааааЬЬЬ ЬЬссЬЬЬЬаа ааЬЬсЬаЬЬЬ 3780
сдЬЬаЬаЬда сЬааЬЬаЬаа ЬсаааааааЬ дааааЬааас аададдЬааа аасЬдсЬЬЬа 3840
дадаааЬдЬа сЬдаЬааааа аадааааааЬ ссЬадаЬЬЬа сдЬсаЬасаЬ адсассЬЬЬа 3900
асЬасЬаада ааааЬаЬЬда ааддасЬЬсс асЬЬдЬддад аЬЬаЬЬЬдЬЬ ЬаЬдЬЬдадЬ 3960
даЬдсадасЬ ЬадаасаЬЬЬ ЬаааЬЬасаЬ аааддЬааЬЬ ЬЬЬдсддЬаа ЬадаЬЬЬЬдЬ 4020
ссааЬдЬдЬа дЬЬддсдасЬ ЬдсЬЬдЬаад даЬадЬЬЬад аааЬаЬсЬаЬ ЬсЬЬаЬддад 4080
саЬЬЬаадаа аадаадаааа ЬааададЬЬЬ аЬаЬЬЬЬЬаа сЬсЬЬасаас ЬссаааЬдЬа 4140
аааадЬЬаЬд аЬсЬЬааЬЬа ЬЬсЬаЬЬааа сааЬаЬааЬа ааЬсЬЬЬЬаа ааааЬЬааЬд 4200
дадсдЬаадд аадЬЬаадда ЬаЬаасЬааа ддЬЬаЬаЬаа дааааЬЬада адЬаасЬЬас 4260
сааааддааа ааЬасаЬаас аааддаЬЬЬа ЬддааааЬаа ааааадаЬЬа ЬЬаЬсааааа 4320
аааддасЬЬд аааЬЬддЬда ЬЬЬадаассЬ ааЬЬЬЬдаЬа сЬЬаЬааЬсс ЬсаЬЬЬЬсаЬ 4380
дЬадЬЬаЬЬд садЬЬааЬаа аадЬЬаЬЬЬЬ асадаЬаааа аЬЬаЬЬаЬаЬ аааЬсдадаа 4440
адаЬддЬЬдд ааЬЬаЬддаа дЬЬЬдсЬасЬ ааддаЬдаЬЬ сЬаЬаасЬса адЬЬдаЬдЬЬ 4500
адаааадсаа аааЬЬааЬда ЬЬаЬааадад дЬЬЬасдаас ЬЬдсдаааЬа ЬЬсадсЬааа 4560
дасасЬдаЬЬ аЬЬЬааЬаЬс даддссадЬа ЬЬЬдаааЬЬЬ ЬЬЬаЬааадс аЬЬааааддс 4620
аадсаддЬаЬ ЬадЬЬЬЬЬад ЬддаЬЬЬЬЬЬ ааадаЬдсас асаааЬЬдЬа саадсаадда 4680
- 126 028892
ааасЕЕдаЕд ЕЕЕаЕааааа дааадаЕдаа аЕЕаааЕаЕд ЕсЕаЕаЕадЕ ЕЕаЕЕаЕааЕ 4740
ЕддЕдсаааа аасааЕаЕда ааааасЕада аЕаадддаас ЕЕасддаада Едааааадаа 4800
дааЕЕаааЕс аадаЕЕЕааЕ адаЕдаааЕа даааЕадаЕЕ ааадЕдЕаас ЕаЕасЕЕЕаЕ 4860
аЕаЕаЕаЕда ЕЕаааааааЕ аааааасаас адссЕаЕЕад дЕЕдЕЕдЕЕЕ ЕЕЕаЕЕЕЕсЕ 4920
ЕЕаЕЕааЕЕЕ ЕЕЕЕааЕЕЕЕ ЕадЕЕЕЕЕад ЕЕсЕЕЕЕЕЕа аааЕаадЕЕЕ садссЕсЕЕЕ 4980
ЕЕсааЕаЕЕЕ ЕЕЕааадаад дадЕаЕЕЕдс аЕдааЕЕдсс ЕЕЕЕЕЕсЕаа садасЕЕадд 5040
аааЕаЕЕЕЕа асадЕаЕсЕЕ сЕЕдсдссдд ЕдаЕЕЕЕдда асЕЕсаЕаас ЕЕасЕааЕЕЕ 5100
аЕааЕЕаЕЕа ЕЕЕЕсЕЕЕЕЕ ЕааЕЕдЕаас адЕЕдсаааа даадсЕдаас сЕдЕЕссЕЕс 5160
аасЕадЕЕЕа ЕсаЕсЕЕсаа ЕаЕааЕаЕЕс ЕЕдассЕаЕа ЕадЕаЕаааЕ аЕаЕЕЕЕЕаЕ 5220
ЕаЕаЕЕЕЕЕа сЕЕЕЕЕЕсЕд ааЕсЕаЕЕаЕ ЕЕЕаЕааЕса ЕааааадЕЕЕ Еассассааа 5280
адааддЕЕдЕ асЕссЕЕсЕд дЕссаасаЕа ЕЕЕЕЕЕЕасЕ аЕаЕЕаЕсЕа ааЕааЕЕЕЕЕ 5340
дддаасЕддЕ дЕЕдЕааЕЕЕ даЕЕааЕсда асаассадЕЕ аЕасЕЕааад дааЕЕаЕаас 5400
ЕаЕаааааЕа ЕаЕаддаЕЕа ЕсЕЕЕЕЕааа ЕЕЕсаЕЕаЕЕ ддссЕссЕЕЕ ЕЕаЕЕаааЕЕ 5460
ЕаЕдЕЕасса Еаааааддас аЕаасдддаа ЕаЕдЕадааЕ аЕЕЕЕЕааЕд ЕадасааааЕ 5520
ЕЕЕасаЕааа ЕаЕааадааа ддаадЕдЕЕЕ дЕЕЕаааЕЕЕ ЕаЕадсааас ЕаЕсаааааЕ 5580
ЕадддддаЕа ааааЕЕЕаЕд аааааааддЕ ЕЕЕсдаЕдЕЕ аЕЕЕЕЕаЕдЕ ЕЕаасЕЕЕаа 5640
ЕадЕЕЕдЕдд ЕЕЕаЕЕЕаса ааЕЕсддссд дссадЕдддс аадЕЕдаааа аЕЕсасаааа 5700
аЕдЕддЕаЕа аЕаЕсЕЕЕдЕ ЕсаЕЕададс даЕааасЕЕд ааЕЕЕдадад ддаасЕЕада 5760
ЕддЕаЕЕЕда аааааЕЕдаЕ аааааЕадЕЕ ддаасадааа ададЕаЕЕЕЕ дассасЕасЕ 5820
ЕЕдсаадЕдЕ ассЕЕдЕасс ЕасадсаЕда ссдЕЕааадЕ ддаЕаЕсаса саааЕааадд 5880
аааадддааЕ дааасЕаЕаЕ ссЕдсааЕдс ЕЕЕаЕЕаЕаЕ ЕдсааЕдаЕЕ дЕааассдсс 5940
аЕЕсададЕЕ Еаддасддса аЕсааЕсаад аЕддЕдааЕЕ ддддаЕаЕаЕ даЕдадаЕда 6000
ЕассаадсЕа ЕасааЕаЕЕЕ сасааЕдаЕа сЕдааасаЕЕ ЕЕссадссЕЕ ЕддасЕдадЕ 6060
дЕаадЕсЕда сЕЕЕаааЕса ЕЕЕЕЕадсад аЕЕаЕдааад ЕдаЕасдсаа сддЕаЕддаа 6120
асааЕсаЕад ааЕддаадда аадссаааЕд сЕссддаааа саЕЕЕЕЕааЕ дЕаЕсЕаЕда 6180
ЕассдЕддЕс аассЕЕсдаЕ ддсЕЕЕааЕс ЕдааЕЕЕдса даааддаЕаЕ даЕЕаЕЕЕда 6240
ЕЕссЕаЕЕЕЕ ЕасЕаЕдддд аааЕаЕЕаЕа аадаадаЕаа сааааЕЕаЕа сЕЕссЕЕЕдд 6300
сааЕЕсаадЕ ЕсаЕсасдса дЕаЕдЕдасд даЕЕЕсасаЕ ЕЕдссдЕЕЕЕ дЕааасдааЕ 6360
ЕдсаддааЕЕ даЕаааЕадЕ ЕаасЕЕсадд ЕЕЕдЕсЕдЕа асЕаааааса адЕаЕЕЕаад 6420
сааааасаЕс дЕадаааЕас ддЕдЕЕЕЕЕЕ дЕЕасссЕаа дЕЕЕааасЕс сЕЕЕЕЕдаЕа 6480
аЕсЕсаЕдас сааааЕсссЕ ЕаасдЕдадЕ ЕЕЕсдЕЕсса сЕдадсдЕса дассссдЕад 6540
аааадаЕсаа аддаЕсЕЕсЕ ЕдадаЕссЕЕ ЕЕЕЕЕсЕдсд сдЕааЕсЕдс ЕдсЕЕдсааа 6600
- 127 028892 сааааааасс ассдсбасса дсддбддббб дбббдссдда бсаададсба ссаасбсббб 6660 ббссдааддб аасбддсббс адсададсдс адабассааа басбдббсбб сбадбдбадс 6720 сдбадббадд ссассасббс аадаасбсбд бадсассдсс басабассбс дсбсбдсбаа 6780 бссбдббасс адбддсбдсб дссадбддсд абаадбсдбд бсббассддд ббддасбсаа 6840 дасдабадбб ассддабаад дсдсадсддб сдддсбдаас ддддддббсд бдсасасадс 6900 ссадсббдда дсдаасдасс басассдаас бдадабассб асадсдбдад сбабдадааа 6960 дсдссасдсб бсссдааддд адаааддсдд асаддбабсс ддбаадсддс адддбсддаа 7020 саддададсд сасдадддад сббссадддд дааасдссбд дбабсбббаб адбссбдбсд 7080 ддбббсдсса ссбсбдасбб дадсдбсдаб ббббдбдабд сбсдбсаддд дддсддадсс 7140 бабддааааа сдссадсаас дсддссбббб басддббссб ддссббббдс бддссббббд 7200 сбсасабдбб сбббссбдсд ббабссссбд аббсбдбдда баассдбабб ассдссбббд 7260 адбдадсбда бассдсбсдс сдсадссдаа сдассдадсд садсдадбса дбдадсдадд 7320 аадсддаада дсдсссааба сдсадддссс ссбдсббсдд ддбсаббаба дсдабббббб 7380 сддбабабсс абссбббббс дсасдабаба саддаббббд ссааадддбб сдбдбадасб 7440 ббссббддбд бабссаасдд сдбсадссдд дсаддабадд бдаадбаддс ссасссдсда 7500 дсдддбдббс сббсббсасб дбсссббабб сдсассбддс ддбдсбсаас дддаабссбд 7560 сбсбдсдадд сбддссддсб ассдссддсд баасадабда дддсаадсдд абддсбдабд 7620 ааассаадсс аассаддаад ддсадсссас сбабсааддб дбасбдссбб ссадасдаас 7680 даададсдаб бдаддаааад дсддсддсдд ссддсабдад ссбдбсддсс бассбдсбдд 7740 ссдбсддсса дддсбасааа абсасдддсд бсдбддасба бдадсасдбс сдсдадсбдд 7800 сссдсабсаа бддсдассбд ддссдссбдд дсддссбдсб дааасбсбдд сбсассдасд 7860 асссдсдсас ддсдсддббс ддбдабдсса сдабссбсдс ссбдсбддсд аадабсдаад 7920 адаадсадда сдадсббддс ааддбсабда бдддсдбддб ссдсссдадд дсададссаб 7980 дасбббббба дссдсбаааа сддссддддд дбдсдсдбда ббдссаадса сдбссссабд 8040 сдсбссабса адаададсда сббсдсддад сбддбдаадб асабсассда сдадсааддс 8100 аадассдабс дддссс 8116 <210> 80 <211> 55 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид Ыоб1-ХЬа1-Ргп£-МК_Р <400> 80
- 128 028892
абдсдсддсс дсбаддбсба даабабсдаб асадабаааа ааабабабаа басад 55
<210> 81
<211> 27
<212> ДНК
<213> синтетическая последовательность
<220>
<223> олигонуклеотид Ба11-Ргп£-МК_К
<400> 81
бддббсбдба асадсдбабб сассбдс 27
<210> 82
<211> 4633
<212> ДНК
<213> синтетическая последовательность
<220>
<223> плазмида рМТЬ8314-Ргп£-МК
<400> 82
ааасбссббб ббдабаабсб сабдассааа абсссббаас дбдадббббс дббссасбда 60
дсдбсадасс ссдбадаааа дабсааадда бсббсббдад абссбббббб бсбдсдсдба 120
абсбдсбдсб бдсааасааа аааассассд сбассадсдд бддбббдббб дссддабсаа 180
дадсбассаа сбсбббббсс дааддбаасб ддсббсадса дадсдсадаб ассааабасб 240
дббсббсбад бдбадссдба дббаддссас сасббсаада асбсбдбадс ассдссбаса 300
бассбсдсбс бдсбаабссб дббассадбд дсбдсбдсса дбддсдабаа дбсдбдбсбб 360
ассдддббдд асбсаадасд абадббассд дабааддсдс адсддбсддд сбдаасдддд 420
ддббсдбдса сасадсссад сббддадсда асдассбаса ссдаасбдад абассбасад 480
сдбдадсбаб дадааадсдс сасдсббссс даадддадаа аддсддасад дбабссддба 540
адсддсаддд бсддаасадд ададсдсасд адддадсббс садддддааа сдссбддбаб 600
сбббабадбс сбдбсдддбб бсдссассбс бдасббдадс дбсдаббббб дбдабдсбсд 660
бсаддддддс ддадссбабд дааааасдсс адсаасдсдд ссбббббасд дббссбддсс 720
ббббдсбддс сббббдсбса сабдббсббб ссбдсдббаб ссссбдаббс бдбддабаас 780
сдбаббассд ссбббдадбд адсбдабасс дсбсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадбсадбда дсдаддаадс ддаададсдс ссаабасдса дддсссссбд саддабаааа 900
аааббдбада баааббббаб аааабадббб бабсбасааб ббббббабса ддааасадсб 960
абдассдсдд ссдсбаддбс бадаабабсд абасадабаа ааааабабаб аабасадаад 1020
ааааааббаб ааабббдбдд бабаабабаа адбабадбаа бббаадббба аассбсдбда 1080
ааасдсбаас ааабаабадд аддбсааббд абдабадсбд ббссабббаа сдсбддаааа 1140
абаааадббб бааббдаддс аббадаабсб ддаааббабб сабсаабааа абсадабдба 1200
- 129 028892
бабдасддаа бдббабабда бдсассадаб сассббаааб саббадбааа садабббдба 1260
даасббааба абабаасбда дссаббадса дбаасбабас адасааабсб бссбссббса 1320
ададдбсббд дабсбадбдс адсбдббдсб дббдсббббд баададсаад ббабдабббс 1380
ббаддааааа дбббаасбаа адаададсбб абадаааадд сбааббдддс бдаасаааба 1440
дсбсабддаа адссабсбдд аабадабаса сааасаабад бабсбддааа дссбдбббдд 1500
бббсаааадд дасабдсада аасасббааа асбсбббсас ббдабддаба сабддбадба 1560
аббдабасад дбдббааадд аадбасаада саддсбдбад аадабдббса бааасбббдс 1620
даадабссбс аабабабдад бсасдбаааа сасабаддаа аасббдбасб бададсабсб 1680
дабдббаббд аасабсабаа сбббдаадса сббдсбдаба баббсаабда абдбсабдсб 1740
дабббааадд сбсббасадб аадбсабдас аааабадаас адббаабдаа дабаддаааа 1800
даааабддбд сбабадсбдд баааббаасб ддбдсбддба даддбддббс аабдббабба 1860
сббдсаааад асббассаас бдсааадааб абадббааад садбададаа адсбддбдса 1920
дсасабасбб ддаббдаааа бббаддбддб баадбсдасд бсасдсдбсс абддадабсб 1980
сдаддссбдс адасабдсаа дсббддсасб ддссдбсдбб ббасаасдбс дбдасбддда 2040
ааасссбддс дббасссаас ббаабсдссб бдсадсасаб сссссбббсд ссадсбддсд 2100
баабадсдаа даддсссдса ссдабсдссс ббсссаасад ббдсдсадсс бдаабддсда 2160
абддсдсбад сабаааааба адаадссбдс абббдсаддс ббсббабббб бабддсдсдс 2220
сдссаббабб бббббдааса аббдасаабб сабббсббаб бббббаббаа дбдабадбса 2280
аааддсабаа садбдсбдаа бадааадааа бббасадааа адааааббаб адаабббадб 2340
абдаббаабб абасбсаббб абдаабдббб ааббдаабас аааааааааб асббдббабд 2400
баббсаабба сдддббаааа бабадасаад ббдааааабб баабаааааа абаадбссбс 2460
адсбсббаба баббаадсба ссаасббадб абабаадсса ааасббаааб дбдсбассаа 2520
сасабсаадс сдббададаа сбсбабсбаб адсаабаббб сааабдбасс дасабасаад 2580
адааасабба асбабабаба ббсаабббаб дадаббабсб баасадабаб ааабдбаааб 2640
бдсаабаадб аадабббада адбббабадс сбббдбдбаб бддаадсадб асдсаааддс 2700
ббббббаббб дабааааабб адаадбабаб ббаббббббс абааббаабб бабдаааабд 2760
ааадддддбд адсааадбда сададдааад садбабсбба бсааабааса аддбаббадс 2820
аабабсабба ббдасбббад садбааасаб бабдасбббб абадбдсббд бадсбаадба 2880
дбасдааадд дддадсббба аааадсбссб бддаабасаб адааббсаба ааббааббба 2940
бдаааадаад ддсдбабабд аааасббдба ааааббдсаа ададбббабб ааадабасбд 3000
ааабабдсаа аабасаббсд ббдабдаббс абдабаааас адбадсаасс баббдсадба 3060
- 130 028892
ааЕасааЕда дЕсаадаЕдЕ ЕЕасаЕааад ддааадЕсса аЕдЕаЕЕааЕ ЕдЕЕсааада 3120
ЕдаассдаЕа ЕддаЕддЕдЕ дссаЕааааа ЕдадаЕдЕЕЕ Еасададдаа даасадаааа 3180
аадаасдЕас аЕдсаЕЕааа ЕаЕЕаЕдсаа ддадсЕЕЕаа аааадсЕсаЕ дЕааадаада 3240
дЕааааадаа ааааЕааЕЕЕ аЕЕЕаЕЕааЕ ЕЕааЕаЕЕда дадЕдссдас асадЕаЕдса 3300
сЕааааааЕа ЕаЕсЕдЕддЕ дЕадЕдадсс даЕасаааад даЕадЕсасЕ сдсаЕЕЕЕса 3360
ЕааЕасаЕсЕ ЕаЕдЕЕаЕда ЕЕаЕдЕдЕсд дЕдддасЕЕс асдасдаааа сссасааЕаа 3420
ааааададЕЕ сддддЕаддд ЕЕаадсаЕад ЕЕдаддсаас ЕааасааЕса адсЕаддаЕа 3480
ЕдсадЕадса дассдЕаадд ЕсдЕЕдЕЕЕа ддЕдЕдЕЕдЕ ааЕасаЕасд сЕаЕЕаадаЕ 3540
дЕаааааЕас ддаЕассааЕ даадддаааа дЕаЕааЕЕЕЕ ЕддаЕдЕадЕ ЕЕдЕЕЕдЕЕс 3600
аЕсЕаЕдддс ааасЕасдЕс сааадссдЕЕ ЕссаааЕсЕд сЕааааадЕа ЕаЕссЕЕЕсЕ 3660
ааааЕсааад ЕсаадЕаЕда ааЕсаЕаааЕ ааадЕЕЕааЕ ЕЕЕдаадЕЕа ЕЕаЕдаЕаЕЕ 3720
аЕдЕЕЕЕЕсЕ аЕЕааааЕаа аЕЕаадЕаЕа ЕадааЕадЕЕ ЕааЕааЕадЕ аЕаЕасЕЕаа 3780
ЕдЕдаЕаадЕ дЕсЕдасадЕ дЕсасадааа ддаЕдаЕЕдЕ ЕаЕддаЕЕаЕ аадсддссдд 3840
ссадЕдддса адЕЕдааааа ЕЕсасааааа ЕдЕддЕаЕаа ЕаЕсЕЕЕдЕЕ саЕЕададсд 3900
аЕааасЕЕда аЕЕЕдададд даасЕЕадаЕ ддЕаЕЕЕдаа ааааЕЕдаЕа ааааЕадЕЕд 3960
даасадаааа дадЕаЕЕЕЕд ассасЕасЕЕ ЕдсаадЕдЕа ссЕЕдЕассЕ асадсаЕдас 4020
сдЕЕааадЕд даЕаЕсасас аааЕааадда ааадддааЕд ааасЕаЕаЕс сЕдсааЕдсЕ 4080
ЕЕаЕЕаЕаЕЕ дсааЕдаЕЕд Еааассдсса ЕЕсададЕЕЕ аддасддсаа ЕсааЕсаада 4140
ЕддЕдааЕЕд дддаЕаЕаЕд аЕдадаЕдаЕ ассаадсЕаЕ асааЕаЕЕЕс асааЕдаЕас 4200
ЕдааасаЕЕЕ ЕссадссЕЕЕ ддасЕдадЕд ЕаадЕсЕдас ЕЕЕаааЕсаЕ ЕЕЕЕадсада 4260
ЕЕаЕдааадЕ даЕасдсаас ддЕаЕддааа сааЕсаЕада аЕддааддаа адссаааЕдс 4320
Ессддаааас аЕЕЕЕЕааЕд ЕаЕсЕаЕдаЕ ассдЕддЕса ассЕЕсдаЕд дсЕЕЕааЕсЕ 4380
дааЕЕЕдсад аааддаЕаЕд аЕЕаЕЕЕдаЕ ЕссЕаЕЕЕЕЕ асЕаЕдддда ааЕаЕЕаЕаа 4440
адаадаЕаас ааааЕЕаЕас ЕЕссЕЕЕддс ааЕЕсаадЕЕ саЕсасдсад ЕаЕдЕдасдд 4500
аЕЕЕсасаЕЕ ЕдссдЕЕЕЕд ЕааасдааЕЕ дсаддааЕЕд аЕаааЕадЕЕ аасЕЕсаддЕ 4560
ЕЕдЕсЕдЕаа сЕааааасаа дЕаЕЕЕаадс ааааасаЕсд ЕадаааЕасд дЕдЕЕЕЕЕЕд 4620
ЕЕасссЕаад ЕЕЕ 4633
<210> <211> <212> <213> 83 6753 ДНК синтетическая последовательность
<220> <223> плазмида рМТЬ 8314-Ргп£-МК-РМК-РМО
- 131 028892
<400> 83 ааасЕссЕЕЕ ЕЕдаЕааЕсЕ саЕдассааа аЕсссЕЕаас дЕдадЕЕЕЕс дЕЕссасЕда 60
дсдЕсадасс ссдЕадаааа даЕсааадда ЕсЕЕсЕЕдад аЕссЕЕЕЕЕЕ ЕсЕдсдсдЕа 120
аЕсЕдсЕдсЕ Едсааасааа аааассассд сЕассадсдд ЕддЕЕЕдЕЕЕ дссддаЕсаа 180
дадсЕассаа сЕсЕЕЕЕЕсс дааддЕаасЕ ддсЕЕсадса дадсдсадаЕ ассаааЕасЕ 240
дЕЕсЕЕсЕад ЕдЕадссдЕа дЕЕаддссас сасЕЕсаада асЕсЕдЕадс ассдссЕаса 300
ЕассЕсдсЕс ЕдсЕааЕссЕ дЕЕассадЕд дсЕдсЕдсса дЕддсдаЕаа дЕсдЕдЕсЕЕ 360
ассдддЕЕдд асЕсаадасд аЕадЕЕассд даЕааддсдс адсддЕсддд сЕдаасдддд 420
ддЕЕсдЕдса сасадсссад сЕЕддадсда асдассЕаса ссдаасЕдад аЕассЕасад 480
сдЕдадсЕаЕ дадааадсдс сасдсЕЕссс даадддадаа аддсддасад дЕаЕссддЕа 540
адсддсаддд Есддаасадд ададсдсасд адддадсЕЕс садддддааа сдссЕддЕаЕ 600
сЕЕЕаЕадЕс сЕдЕсдддЕЕ ЕсдссассЕс ЕдасЕЕдадс дЕсдаЕЕЕЕЕ дЕдаЕдсЕсд 660
Есаддддддс ддадссЕаЕд дааааасдсс адсаасдсдд ссЕЕЕЕЕасд дЕЕссЕддсс 720
ЕЕЕЕдсЕддс сЕЕЕЕдсЕса саЕдЕЕсЕЕЕ ссЕдсдЕЕаЕ ссссЕдаЕЕс ЕдЕддаЕаас 780
сдЕаЕЕассд ссЕЕЕдадЕд адсЕдаЕасс дсЕсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадЕсадЕда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЕасдса дддсссссЕд саддаЕаааа 900
аааЕЕдЕада ЕаааЕЕЕЕаЕ ааааЕадЕЕЕ ЕаЕсЕасааЕ ЕЕЕЕЕЕаЕса ддааасадсЕ 960
аЕдассдсдд ссдсЕаддЕс ЕадааЕаЕсд аЕасадаЕаа аааааЕаЕаЕ ааЕасадаад 1020
ааааааЕЕаЕ аааЕЕЕдЕдд ЕаЕааЕаЕаа адЕаЕадЕаа ЕЕЕаадЕЕЕа аассЕсдЕда 1080
ааасдсЕаас аааЕааЕадд аддЕсааЕЕд аЕдаЕадсЕд ЕЕссаЕЕЕаа сдсЕддаааа 1140
аЕаааадЕЕЕ ЕааЕЕдаддс аЕЕадааЕсЕ ддаааЕЕаЕЕ саЕсааЕааа аЕсадаЕдЕа 1200
ЕаЕдасддаа ЕдЕЕаЕаЕда ЕдсассадаЕ сассЕЕаааЕ саЕЕадЕааа садаЕЕЕдЕа 1260
даасЕЕааЕа аЕаЕаасЕда дссаЕЕадса дЕаасЕаЕас адасаааЕсЕ ЕссЕссЕЕса 1320
ададдЕсЕЕд даЕсЕадЕдс адсЕдЕЕдсЕ дЕЕдсЕЕЕЕд Еаададсаад ЕЕаЕдаЕЕЕс 1380
ЕЕаддааааа дЕЕЕаасЕаа адаададсЕЕ аЕадаааадд сЕааЕЕдддс ЕдаасаааЕа 1440
дсЕсаЕддаа адссаЕсЕдд ааЕадаЕаса сааасааЕад ЕаЕсЕддааа дссЕдЕЕЕдд 1500
ЕЕЕсаааадд дасаЕдсада аасасЕЕааа асЕсЕЕЕсас ЕЕдаЕддаЕа саЕддЕадЕа 1560
аЕЕдаЕасад дЕдЕЕааадд аадЕасаада саддсЕдЕад аадаЕдЕЕса ЕааасЕЕЕдс 1620
даадаЕссЕс ааЕаЕаЕдад ЕсасдЕаааа сасаЕаддаа аасЕЕдЕасЕ ЕададсаЕсЕ 1680
даЕдЕЕаЕЕд аасаЕсаЕаа сЕЕЕдаадса сЕЕдсЕдаЕа ЕаЕЕсааЕда аЕдЕсаЕдсЕ 1740
даЕЕЕааадд сЕсЕЕасадЕ аадЕсаЕдас ааааЕадаас адЕЕааЕдаа даЕаддаааа 1800
дааааЕддЕд сЕаЕадсЕдд ЕаааЕЕаасЕ ддЕдсЕддЕа даддЕддЕЕс ааЕдЕЕаЕЕа 1860
- 132 028892
сЕЕдсаааад асЕЕассаас ЕдсааадааЕ аЕадЕЕааад садЕададаа адсЕддЕдса 1920
дсасаЕасЕЕ ддаЕЕдаааа ЕЕЕаддЕддЕ ЕаадЕсдаса аадасасЕаа ааааЕЕаЕаа 1980
аадЕааадда ддасаЕЕааа ЕдаЕасаадЕ аааддсасса ддааааЕЕаЕ аЕаЕадсадд 2040
ЕдааЕасдсЕ дЕЕасадаас саддаЕаЕаа аЕсЕдЕЕсЕЕ аЕадсЕсЕЕд аЕадаЕЕЕдЕ 2100
ЕасадсЕасЕ аЕЕдаддаад сЕдаЕсааЕа саааддааса аЕасаЕЕсаа аддсаЕЕаса 2160
ЕсасааЕсса дЕаасЕЕЕЕа дЕададаЕда адаЕЕсЕаЕЕ дЕЕаЕаЕсад асссасасдс 2220
адсаааасаа сЕЕааЕЕаЕд ЕадЕаасЕдс ЕаЕадаааЕа ЕЕЕдадсааЕ аЕдсааааЕс 2280
аЕдЕдасаЕа дсааЕдаадс аЕЕЕЕсаЕЕЕ аасЕаЕадаЕ ЕсЕаасЕЕад аЕдаЕадЕаа 2340
ЕддасаЕаад ЕаЕддасЕЕд даЕсЕЕсЕдс ЕдсЕдЕЕЕЕа дЕЕЕсадЕаа ЕЕааадЕасЕ 2400
ЕаасдааЕЕЕ ЕаЕдаЕаЕда аасЕЕЕсааа ссЕЕЕаЕаЕа ЕаЕаадЕЕад садЕааЕЕдс 2460
ЕааЕаЕдааа ЕЕасададЕЕ ЕаЕсЕЕсаЕд сддЕдаЕаЕа дсадЕаадЕд ЕЕЕаЕЕсадд 2520
ЕЕддЕЕадсЕ ЕаЕЕсЕасаЕ ЕЕдассаЕда аЕдддЕаааа сассадаЕад аадаЕасаас 2580
адЕЕдаадаа дЕасЕЕаЕЕа ааааЕЕддсс ЕддаЕЕасас аЕададссас ЕЕсаадсЕсс 2640
ЕдааааЕаЕд даадЕЕсЕЕа ЕаддЕЕддас аддЕадЕсса дсЕадЕадЕс сЕсаЕЕЕЕдЕ 2700
ЕЕсЕдаадЕЕ аааадасЕЕа адЕсадаЕсс ЕЕсаЕЕЕЕас ддЕдаЕЕЕсЕ ЕадаадаЕЕс 2760
асаЕадаЕдЕ дЕадаааааЕ ЕааЕЕсаЕдс аЕЕсаааасЕ ааЕааЕаЕЕа адддЕдЕЕса 2820
дааааЕддЕа адасадааЕа даасЕаЕЕаЕ асааадааЕд даЕааддаад саасадЕЕда 2880
ЕаЕададасЕ дадаадЕЕаа ааЕаЕЕЕаЕд ЕдаЕаЕЕдсЕ даааааЕаЕс аЕддЕдсаад 2940
ЕаааасЕЕса ддЕдсЕддЕд дЕддЕдаЕЕд сддааЕаасЕ аЕааЕаааЕа аддаЕдЕада 3000
сааададааа аЕаЕаЕдаЕд ааЕддасЕаа асаЕддааЕа аадссЕсЕЕа адЕЕЕааЕаЕ 3060
ЕЕаЕсаЕдда сааЕаассаЕ ддЕсааЕааЕ сЕЕасааЕаа аЕаааадааа ддаддсаааа 3120
аЕаЕдаЕааа аЕсЕддаааа дсаададсас асасЕааЕаЕ адсасЕЕаЕа аааЕаЕЕддд 3180
дЕаадааада ЕдаддсаЕЕа аЕааЕассаа ЕдааЕаасЕс ааЕаЕсадЕа асЕЕЕадааа 3240
адЕЕЕЕаЕас Едааасаааа дЕЕасаЕЕЕа асдаЕсадсЕ ЕасЕсаадаЕ сааЕЕЕЕддс 3300
ЕЕааЕддЕда аааадЕЕЕсЕ ддаааадааЕ ЕадаааадаЕ ЕЕсааадЕаЕ аЕддаЕаЕЕд 3360
ЕЕадаааЕад адсЕддааЕа даЕЕддЕаЕд сЕдадаЕада аЕсЕдаЕааЕ ЕЕЕдЕЕссЕа 3420
садсЕдсЕдд ЕсЕЕдсЕадЕ ЕсЕдсЕадЕд сЕЕаЕдсадс аЕЕадсЕдсЕ дсаЕдЕаасс 3480
аадсасЕЕда ЕЕЕасадЕЕа адЕдаЕааад асЕЕаадЕад аЕЕадсЕада аЕЕддаЕсад 3540
даЕсадсаЕс аадаЕсааЕа ЕасддЕддЕЕ ЕЕдсадааЕд ддааааадда ЕаЕааЕдасд 3600
ааасЕЕсЕЕа ЕдсЕдЕЕсса ЕЕадааадЕа аЕсасЕЕЕда адаЕдаЕсЕЕ дсЕаЕдаЕЕЕ 3660
ЕЕдЕадЕааЕ ааассаасаЕ ЕсЕааааадд ЕЕссЕЕсаад аЕаЕддааЕд ЕсЕсЕЕасаа 3720
даааЕасаад ЕадаЕЕсЕаЕ сааЕаЕЕддЕ ЕадассаЕаЕ ЕдаЕдаадаЕ сЕЕдсадаад 3780
- 133 028892
саааддсадс ааЕасаадаЕ ааддаЕЕЕЕа ададаЕЕадд ЕдаадЕЕаЕЕ даададааЕд 3840
дасЕЕадааЕ дсаЕдсЕаса ааЕсЕЕддаЕ саасЕссасс ЕЕЕЕасЕЕас ЕЕадЕасаад 3900
адЕсаЕасда ЕдЕааЕддса ЕЕадЕасаЕд адЕдЕадада адсаддаЕаЕ ссаЕдсЕаЕЕ 3960
ЕсасЕаЕдда ЕдсЕддассЕ ааЕдЕааааа ЕасЕЕдЕада даадааааас ааасаасада 4020
ЕааЕадаЕаа асЕЕЕЕаасЕ садЕЕсдаЕа аЕааЕсадаЕ ааЕадаЕадЕ даЕаЕЕаЕад 4080
сЕасаддЕаЕ ЕдаааЕЕаЕа дааЕааасЕа дЕЕссдсЕаа дсЕЕддсасЕ ддссдЕсдЕЕ 4140
ЕЕасаасдЕс дЕдасЕддда ааасссЕддс дЕЕасссаас ЕЕааЕсдссЕ ЕдсадсасаЕ 4200
сссссЕЕЕсд ссадсЕддсд ЕааЕадсдаа даддсссдса ссдаЕсдссс ЕЕсссаасад 4260
ЕЕдсдсадсс ЕдааЕддсда аЕддсдсЕад саЕаааааЕа адаадссЕдс аЕЕЕдсаддс 4320
ЕЕсЕЕаЕЕЕЕ ЕаЕддсдсдс сдссаЕЕаЕЕ ЕЕЕЕЕдааса аЕЕдасааЕЕ саЕЕЕсЕЕаЕ 4380
ЕЕЕЕЕаЕЕаа дЕдаЕадЕса аааддсаЕаа садЕдсЕдаа Еадааадааа ЕЕЕасадааа 4440
адааааЕЕаЕ адааЕЕЕадЕ аЕдаЕЕааЕЕ аЕасЕсаЕЕЕ аЕдааЕдЕЕЕ ааЕЕдааЕас 4500
аааааааааЕ асЕЕдЕЕаЕд ЕаЕЕсааЕЕа сдддЕЕаааа ЕаЕадасаад ЕЕдаааааЕЕ 4560
ЕааЕаааааа аЕаадЕссЕс адсЕсЕЕаЕа ЕаЕЕаадсЕа ссаасЕЕадЕ аЕаЕаадсса 4620
ааасЕЕаааЕ дЕдсЕассаа сасаЕсаадс сдЕЕададаа сЕсЕаЕсЕаЕ адсааЕаЕЕЕ 4680
саааЕдЕасс дасаЕасаад адааасаЕЕа асЕаЕаЕаЕа ЕЕсааЕЕЕаЕ дадаЕЕаЕсЕ 4740
ЕаасадаЕаЕ аааЕдЕаааЕ ЕдсааЕаадЕ аадаЕЕЕада адЕЕЕаЕадс сЕЕЕдЕдЕаЕ 4800
ЕддаадсадЕ асдсаааддс ЕЕЕЕЕЕаЕЕЕ даЕаааааЕЕ адаадЕаЕаЕ ЕЕаЕЕЕЕЕЕс 4860
аЕааЕЕааЕЕ ЕаЕдааааЕд ааадддддЕд адсааадЕда сададдааад садЕаЕсЕЕа 4920
ЕсаааЕааса аддЕаЕЕадс ааЕаЕсаЕЕа ЕЕдасЕЕЕад садЕааасаЕ ЕаЕдасЕЕЕЕ 4980
аЕадЕдсЕЕд ЕадсЕаадЕа дЕасдааадд дддадсЕЕЕа аааадсЕссЕ ЕддааЕасаЕ 5040
адааЕЕсаЕа ааЕЕааЕЕЕа Едаааадаад ддсдЕаЕаЕд аааасЕЕдЕа ааааЕЕдсаа 5100
ададЕЕЕаЕЕ ааадаЕасЕд аааЕаЕдсаа ааЕасаЕЕсд ЕЕдаЕдаЕЕс аЕдаЕаааас 5160
адЕадсаасс ЕаЕЕдсадЕа ааЕасааЕда дЕсаадаЕдЕ ЕЕасаЕааад ддааадЕсса 5220
аЕдЕаЕЕааЕ ЕдЕЕсааада ЕдаассдаЕа ЕддаЕддЕдЕ дссаЕааааа ЕдадаЕдЕЕЕ 5280
Еасададдаа даасадаааа аадаасдЕас аЕдсаЕЕааа ЕаЕЕаЕдсаа ддадсЕЕЕаа 5340
аааадсЕсаЕ дЕааадаада дЕааааадаа ааааЕааЕЕЕ аЕЕЕаЕЕааЕ ЕЕааЕаЕЕда 5400
дадЕдссдас асадЕаЕдса сЕааааааЕа ЕаЕсЕдЕддЕ дЕадЕдадсс даЕасаааад 5460
даЕадЕсасЕ сдсаЕЕЕЕса ЕааЕасаЕсЕ ЕаЕдЕЕаЕда ЕЕаЕдЕдЕсд дЕдддасЕЕс 5520
асдасдаааа сссасааЕаа ааааададЕЕ сддддЕаддд ЕЕаадсаЕад ЕЕдаддсаас 5580
ЕааасааЕса адсЕаддаЕа ЕдсадЕадса дассдЕаадд ЕсдЕЕдЕЕЕа ддЕдЕдЕЕдЕ 5640
- 134 028892
ааЕасаЕасд сЕаЕЕаадаЕ дЕаааааЕас ддаЕассааЕ даадддаааа дЕаЕааЕЕЕЕ 5700
ЕддаЕдЕадЕ ЕЕдЕЕЕдЕЕс аЕсЕаЕдддс ааасЕасдЕс сааадссдЕЕ ЕссаааЕсЕд 5760
сЕааааадЕа ЕаЕссЕЕЕсЕ ааааЕсааад ЕсаадЕаЕда ааЕсаЕаааЕ ааадЕЕЕааЕ 5820
ЕЕЕдаадЕЕа ЕЕаЕдаЕаЕЕ аЕдЕЕЕЕЕсЕ аЕЕааааЕаа аЕЕаадЕаЕа ЕадааЕадЕЕ 5880
ЕааЕааЕадЕ аЕаЕасЕЕаа ЕдЕдаЕаадЕ дЕсЕдасадЕ дЕсасадааа ддаЕдаЕЕдЕ 5940
ЕаЕддаЕЕаЕ аадсддссдд ссадЕдддса адЕЕдааааа ЕЕсасааааа ЕдЕддЕаЕаа 6000
ЕаЕсЕЕЕдЕЕ саЕЕададсд аЕааасЕЕда аЕЕЕдададд даасЕЕадаЕ ддЕаЕЕЕдаа 6060
ааааЕЕдаЕа ааааЕадЕЕд даасадаааа дадЕаЕЕЕЕд ассасЕасЕЕ ЕдсаадЕдЕа 6120
ссЕЕдЕассЕ асадсаЕдас сдЕЕааадЕд даЕаЕсасас аааЕааадда ааадддааЕд 6180
ааасЕаЕаЕс сЕдсааЕдсЕ ЕЕаЕЕаЕаЕЕ дсааЕдаЕЕд Еааассдсса ЕЕсададЕЕЕ 6240
аддасддсаа ЕсааЕсаада ЕддЕдааЕЕд дддаЕаЕаЕд аЕдадаЕдаЕ ассаадсЕаЕ 6300
асааЕаЕЕЕс асааЕдаЕас ЕдааасаЕЕЕ ЕссадссЕЕЕ ддасЕдадЕд ЕаадЕсЕдас 6360
ЕЕЕаааЕсаЕ ЕЕЕЕадсада ЕЕаЕдааадЕ даЕасдсаас ддЕаЕддааа сааЕсаЕада 6420
аЕддааддаа адссаааЕдс Ессддаааас аЕЕЕЕЕааЕд ЕаЕсЕаЕдаЕ ассдЕддЕса 6480
ассЕЕсдаЕд дсЕЕЕааЕсЕ дааЕЕЕдсад аааддаЕаЕд аЕЕаЕЕЕдаЕ ЕссЕаЕЕЕЕЕ 6540
асЕаЕдддда ааЕаЕЕаЕаа адаадаЕаас ааааЕЕаЕас ЕЕссЕЕЕддс ааЕЕсаадЕЕ 6600
саЕсасдсад ЕаЕдЕдасдд аЕЕЕсасаЕЕ ЕдссдЕЕЕЕд ЕааасдааЕЕ дсаддааЕЕд 6660
аЕаааЕадЕЕ аасЕЕсаддЕ ЕЕдЕсЕдЕаа сЕааааасаа дЕаЕЕЕаадс ааааасаЕсд 6720
ЕадаааЕасд дЕдЕЕЕЕЕЕд ЕЕасссЕаад ЕЕЕ 6753
<210> 84 <211> 9198 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность
<220> <223> плазмида рМТЬ8314-Ргп£-МК- -РМК-РМЬ-РЕог-тбт-тзрЗ
<400> 84 ааасЕссЕЕЕ ЕЕдаЕааЕсЕ саЕдассааа аЕсссЕЕаас дЕдадЕЕЕЕс дЕЕссасЕда 60
дсдЕсадасс ссдЕадаааа даЕсааадда ЕсЕЕсЕЕдад аЕссЕЕЕЕЕЕ ЕсЕдсдсдЕа 120
аЕсЕдсЕдсЕ Едсааасааа аааассассд сЕассадсдд ЕддЕЕЕдЕЕЕ дссддаЕсаа 180
дадсЕассаа сЕсЕЕЕЕЕсс дааддЕаасЕ ддсЕЕсадса дадсдсадаЕ ассаааЕасЕ 240
дЕЕсЕЕсЕад ЕдЕадссдЕа дЕЕаддссас сасЕЕсаада асЕсЕдЕадс ассдссЕаса 300
ЕассЕсдсЕс ЕдсЕааЕссЕ дЕЕассадЕд дсЕдсЕдсса дЕддсдаЕаа дЕсдЕдЕсЕЕ 360
ассдддЕЕдд асЕсаадасд аЕадЕЕассд даЕааддсдс адсддЕсддд сЕдаасдддд 420
ддЕЕсдЕдса сасадсссад сЕЕддадсда асдассЕаса ссдаасЕдад аЕассЕасад 480
- 135 028892
сдбдадсбаб дадааадсдс сасдсббссс даадддадаа аддсддасад дбабссддба 540
адсддсаддд бсддаасадд ададсдсасд адддадсббс садддддааа сдссбддбаб 600
сбббабадбс сбдбсдддбб бсдссассбс бдасббдадс дбсдаббббб дбдабдсбсд 660
бсаддддддс ддадссбабд дааааасдсс адсаасдсдд ссбббббасд дббссбддсс 720
ббббдсбддс сббббдсбса сабдббсббб ссбдсдббаб ссссбдаббс бдбддабаас 780
сдбаббассд ссбббдадбд адсбдабасс дсбсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадбсадбда дсдаддаадс ддаададсдс ссаабасдса дддсссссбд саддабаааа 900
аааббдбада баааббббаб аааабадббб бабсбасааб ббббббабса ддааасадсб 960
абдассдсдд ссдсбаддбс бадаабабсд абасадабаа ааааабабаб аабасадаад 1020
ааааааббаб ааабббдбдд бабаабабаа адбабадбаа бббаадббба аассбсдбда 1080
ааасдсбаас ааабаабадд аддбсааббд абдабадсбд ббссабббаа сдсбддаааа 1140
абаааадббб бааббдаддс аббадаабсб ддаааббабб сабсаабааа абсадабдба 1200
бабдасддаа бдббабабда бдсассадаб сассббаааб саббадбааа садабббдба 1260
даасббааба абабаасбда дссаббадса дбаасбабас адасааабсб бссбссббса 1320
ададдбсббд дабсбадбдс адсбдббдсб дббдсббббд баададсаад ббабдабббс 1380
ббаддааааа дбббаасбаа адаададсбб абадаааадд сбааббдддс бдаасаааба 1440
дсбсабддаа адссабсбдд аабадабаса сааасаабад бабсбддааа дссбдбббдд 1500
бббсаааадд дасабдсада аасасббааа асбсбббсас ббдабддаба сабддбадба 1560
аббдабасад дбдббааадд аадбасаада саддсбдбад аадабдббса бааасбббдс 1620
даадабссбс аабабабдад бсасдбаааа сасабаддаа аасббдбасб бададсабсб 1680
дабдббаббд аасабсабаа сбббдаадса сббдсбдаба баббсаабда абдбсабдсб 1740
дабббааадд сбсббасадб аадбсабдас аааабадаас адббаабдаа дабаддаааа 1800
даааабддбд сбабадсбдд баааббаасб ддбдсбддба даддбддббс аабдббабба 1860
сббдсаааад асббассаас бдсааадааб абадббааад садбададаа адсбддбдса 1920
дсасабасбб ддаббдаааа бббаддбддб баадбсдаса аадасасбаа ааааббабаа 1980
аадбааадда ддасаббааа бдабасаадб аааддсасса ддааааббаб абабадсадд 2040
бдаабасдсб дббасадаас саддабабаа абсбдббсбб абадсбсббд абадабббдб 2100
басадсбасб аббдаддаад сбдабсааба саааддааса абасаббсаа аддсаббаса 2160
бсасаабсса дбаасбббба дбададабда адаббсбабб дббабабсад асссасасдс 2220
адсаааасаа сббааббабд бадбаасбдс бабадаааба бббдадсааб абдсаааабс 2280
абдбдасаба дсаабдаадс аббббсаббб аасбабадаб бсбаасббад абдабадбаа 2340
- 136 028892
ЕддасаЕаад ЕаЕддасЕЕд даЕсЕЕсЕдс ЕдсЕдЕЕЕЕа дЕЕЕсадЕаа ЕЕааадЕасЕ 2400
ЕаасдааЕЕЕ ЕаЕдаЕаЕда аасЕЕЕсааа ссЕЕЕаЕаЕа ЕаЕаадЕЕад садЕааЕЕдс 2460
ЕааЕаЕдааа ЕЕасададЕЕ ЕаЕсЕЕсаЕд сддЕдаЕаЕа дсадЕаадЕд ЕЕЕаЕЕсадд 2520
ЕЕддЕЕадсЕ ЕаЕЕсЕасаЕ ЕЕдассаЕда аЕдддЕаааа сассадаЕад аадаЕасаас 2580
адЕЕдаадаа дЕасЕЕаЕЕа ааааЕЕддсс ЕддаЕЕасас аЕададссас ЕЕсаадсЕсс 2640
ЕдааааЕаЕд даадЕЕсЕЕа ЕаддЕЕддас аддЕадЕсса дсЕадЕадЕс сЕсаЕЕЕЕдЕ 2700
ЕЕсЕдаадЕЕ аааадасЕЕа адЕсадаЕсс ЕЕсаЕЕЕЕас ддЕдаЕЕЕсЕ ЕадаадаЕЕс 2760
асаЕадаЕдЕ дЕадаааааЕ ЕааЕЕсаЕдс аЕЕсаааасЕ ааЕааЕаЕЕа адддЕдЕЕса 2820
дааааЕддЕа адасадааЕа даасЕаЕЕаЕ асааадааЕд даЕааддаад саасадЕЕда 2880
ЕаЕададасЕ дадаадЕЕаа ааЕаЕЕЕаЕд ЕдаЕаЕЕдсЕ даааааЕаЕс аЕддЕдсаад 2940
ЕаааасЕЕса ддЕдсЕддЕд дЕддЕдаЕЕд сддааЕаасЕ аЕааЕаааЕа аддаЕдЕада 3000
сааададааа аЕаЕаЕдаЕд ааЕддасЕаа асаЕддааЕа аадссЕсЕЕа адЕЕЕааЕаЕ 3060
ЕЕаЕсаЕдда сааЕаассаЕ ддЕсааЕааЕ сЕЕасааЕаа аЕаааадааа ддаддсаааа 3120
аЕаЕдаЕааа аЕсЕддаааа дсаададсас асасЕааЕаЕ адсасЕЕаЕа аааЕаЕЕддд 3180
дЕаадааада ЕдаддсаЕЕа аЕааЕассаа ЕдааЕаасЕс ааЕаЕсадЕа асЕЕЕадааа 3240
адЕЕЕЕаЕас Едааасаааа дЕЕасаЕЕЕа асдаЕсадсЕ ЕасЕсаадаЕ сааЕЕЕЕддс 3300
ЕЕааЕддЕда аааадЕЕЕсЕ ддаааадааЕ ЕадаааадаЕ ЕЕсааадЕаЕ аЕддаЕаЕЕд 3360
ЕЕадаааЕад адсЕддааЕа даЕЕддЕаЕд сЕдадаЕада аЕсЕдаЕааЕ ЕЕЕдЕЕссЕа 3420
садсЕдсЕдд ЕсЕЕдсЕадЕ ЕсЕдсЕадЕд сЕЕаЕдсадс аЕЕадсЕдсЕ дсаЕдЕаасс 3480
аадсасЕЕда ЕЕЕасадЕЕа адЕдаЕааад асЕЕаадЕад аЕЕадсЕада аЕЕддаЕсад 3540
даЕсадсаЕс аадаЕсааЕа ЕасддЕддЕЕ ЕЕдсадааЕд ддааааадда ЕаЕааЕдасд 3600
ааасЕЕсЕЕа ЕдсЕдЕЕсса ЕЕадааадЕа аЕсасЕЕЕда адаЕдаЕсЕЕ дсЕаЕдаЕЕЕ 3660
ЕЕдЕадЕааЕ ааассаасаЕ ЕсЕааааадд ЕЕссЕЕсаад аЕаЕддааЕд ЕсЕсЕЕасаа 3720
даааЕасаад ЕадаЕЕсЕаЕ сааЕаЕЕддЕ ЕадассаЕаЕ ЕдаЕдаадаЕ сЕЕдсадаад 3780
саааддсадс ааЕасаадаЕ ааддаЕЕЕЕа ададаЕЕадд ЕдаадЕЕаЕЕ даададааЕд 3840
дасЕЕадааЕ дсаЕдсЕаса ааЕсЕЕддаЕ саасЕссасс ЕЕЕЕасЕЕас ЕЕадЕасаад 3900
адЕсаЕасда ЕдЕааЕддса ЕЕадЕасаЕд адЕдЕадада адсаддаЕаЕ ссаЕдсЕаЕЕ 3960
ЕсасЕаЕдда ЕдсЕддассЕ ааЕдЕааааа ЕасЕЕдЕада даадааааас ааасаасада 4020
ЕааЕадаЕаа асЕЕЕЕаасЕ садЕЕсдаЕа аЕааЕсадаЕ ааЕадаЕадЕ даЕаЕЕаЕад 4080
сЕасаддЕаЕ ЕдаааЕЕаЕа дааЕааасЕа дЕЕдЕаЕаЕЕ ааааЕадЕад ааЕасаЕаад 4140
аЕасЕЕааЕЕ ЕааЕЕааада ЕадЕЕаадЕа сЕЕЕЕсааЕд ЕдсЕЕЕЕЕЕа даЕдЕЕЕааЕ 4200
асаааЕсЕЕЕ ааЕЕдЕаааа даааЕдсЕдЕ асЕаЕЕЕасЕ дЕЕсЕадЕда сдддаЕЕааа 4260
- 137 028892
сЬдЬаЬЬааЬ ЬаЬаааЬааа аааЬаадЬас адЬЬдЬЬЬаа ааЬЬаЬаЬЬЬ ЬдЬаЬЬаааЬ 4320
сЬааЬадЬас даЬдЬаадЬЬ аЬЬЬЬаЬасЬ аЬЬдсЬадЬЬ ЬааЬааааад аЬЬЬааЬЬаЬ 4380
аЬасЬЬдааа аддададдаа сЬсдадаЬдд сададЬаЬаЬ ааЬадсадЬа даЬдадЬЬсд 4440
аЬаасдаааЬ аддаЬсааЬа даааадаЬдд аадсЬсаЬад ааааддааса сЬЬсаЬадад 4500
саЬЬсадЬаЬ ЬЬЬадЬЬЬЬЬ аасЬсааада аЬсаасЬЬЬЬ аЬЬасадааа адаааЬдЬаа 4560
адаааЬаЬса сЬсЬссадда ЬЬаЬддасаа асасЬЬдЬЬд ЬадЬсассса адаЬаЬддЬд 4620
ааЬсЬсЬЬса ЬдаЬдсЬаЬа ЬасадаадаЬ Ьаааадаада даЬдддаЬЬЬ асЬЬдсдаас 4680
ЬЬдаадаадЬ аЬЬсЬсаЬЬс аЬаЬаЬаадд ЬаааасЬЬда адаЬааЬЬЬа ЬЬЬдадааЬд 4740
ааЬаЬдасса ЬдЬаЬЬЬаЬЬ ддЬаааЬаЬд аЬддЬдадаЬ ааЬЬдЬЬааЬ ааадаЬдаад 4800
ЬЬдаЬдаЬЬЬ ЬаааЬдддЬа дасаЬЬааЬд аадЬЬааааа ддасаЬааЬа дааадассЬд 4860
аддсаЬаЬас ЬЬасЬддЬЬЬ аадЬаЬсЬЬд ЬаааЬааадс ЬдааааЬаад аЬаЬЬЬаааЬ 4920
ааассддЬдд даддаааЬда асаЬддсаас адааЬЬаЬЬа ЬдЬЬЬасаса дассЬаЬаЬс 4980
асЬЬасЬсас ааасЬЬЬЬЬа ддааЬссаЬЬ ассЬааадЬЬ аЬЬсаадсЬа сассЬЬЬаас 5040
аЬЬаааасЬЬ аддЬдЬадЬд ЬЬЬсЬасада аааЬдЬаЬса ЬЬЬадЬдада садааасЬда 5100
аасаадаада ЬсадсаааЬЬ аЬдаассааа ЬЬсЬЬдддаЬ ЬаЬдаЬЬаЬс ЬЬсЬЬЬсЬЬс 5160
ЬдаЬасЬдаЬ дадЬсааЬад аадЬасаЬаа адаЬааддсЬ аадаааЬЬад аадсЬдаадЬ 5220
Ьаддададаа аЬаааЬааЬд адааддсЬда аЬЬЬсЬЬаса сЬЬсЬЬдаас ЬЬаЬЬдаЬаа 5280
ЬдЬасааада сЬЬддаЬЬад даЬаЬадаЬЬ ЬдадЬсЬдаЬ аЬаадаадад саЬЬадаЬад 5340
аЬЬЬдЬаадЬ адЬддаддаЬ ЬЬдаЬддадЬ ЬасЬаааасЬ ЬсаЬЬасаЬд даасадсаЬЬ 5400
аЬсаЬЬЬадд ЬЬаЬЬааддс аасаЬддЬЬЬ ЬдаадЬаЬсЬ саадаадсЬЬ ЬЬадЬддаЬЬ 5460
ЬааадаЬсад ааЬддааасЬ ЬЬсЬЬдадаа ЬЬЬаааддаа дасаЬаааад сааЬЬсЬЬЬс 5520
ЬсЬЬЬаЬдаа дсаЬсаЬЬЬЬ ЬадсаЬЬада аддЬдадааЬ аЬаЬЬадаЬд аддсЬааадЬ 5580
аЬЬЬдсааЬа ЬсЬсаЬсЬЬа аадаасЬЬад Ьдаадаааад аЬЬддЬааад ааЬЬадсЬда 5640
асаадЬЬЬса саЬдсЬЬЬад ааЬЬассаЬЬ асаЬадаада асасааадаЬ ЬадаадсадЬ 5700
ЬЬддЬсааЬа даадсаЬаЬа дааадааада адасдсаааЬ саадЬасЬЬЬ ЬадаасЬЬдс 5760
ааЬасЬЬдас ЬасааЬаЬда ЬЬсааадЬдЬ аЬаЬсададд даЬЬЬаадад ааасаЬсаад 5820
аЬддЬддада ададЬаддаЬ ЬадсаасЬаа аЬЬасаЬЬЬЬ дсЬададаЬа ддсЬЬаЬЬда 5880
аадЬЬЬЬЬаЬ ЬдддсЬдЬЬд дадЬЬдсЬЬЬ Ьдаассасаа ЬаЬЬсЬдаЬЬ дсадаааЬад 5940
ЬдЬадсааад аЬдЬЬЬЬсаЬ ЬЬдЬЬасЬаЬ ааЬЬдасдаЬ аЬЬЬасдаЬд ЬаЬаЬддаас 6000
ЬЬЬадаЬдаа сЬЬдаасЬЬЬ ЬЬасЬдаЬдс адЬЬдааада ЬдддаЬдЬаа аЬдсЬаЬЬаа 6060
ЬдаЬсЬЬссЬ даЬЬаЬаЬда адЬЬаЬдЬЬЬ ЬсЬЬдсасЬЬ ЬасааЬасЬа ЬЬаасдадаЬ 6120
- 138 028892
адсЬЬасдаЬ аасЬЬаааад аЬаааддЬда даасаЬасЬЬ ссЬЬаЬЬЬаа саааадсаЬд 6180
ддсадаЬЬЬа ЬдЬааЬдсаЬ ЬЬсЬЬсаада адсЬаадЬдд сЬЬЬаЬааЬа ааЬсаасасс 6240
ЬасаЬЬЬдаЬ даЬЬаЬЬЬЬд даааЬдсаЬд даааадЬЬсЬ адЬддассЬЬ ЬасадсЬЬаЬ 6300
ЬЬЬЬдсЬЬаЬ ЬЬЬдсЬдЬад ЬасадаасаЬ Ьаааааддаа дадаЬЬдада аЬсЬЬсадаа 6360
аЬаЬсаЬдас аЬааЬаЬсаа дассЬадЬса саЬЬЬЬЬадд сЬЬЬдЬааЬд аЬЬЬадсаЬс 6420
ЬдсЬЬсадса даааЬадсаа даддЬдааас ЬдсЬааЬЬсЬ дЬаадЬЬдЬЬ аЬаЬдадаас 6480
ааааддЬаЬа ЬсЬдаадааЬ ЬадсЬасЬда аадЬдЬЬаЬд ааЬсЬЬаЬад асдааасЬЬд 6540
даадааааЬд аасааадааа аасЬЬддЬдд аЬсЬЬЬаЬЬЬ дсаааассЬЬ ЬЬдЬЬдадас 6600
ЬдсЬаЬаааЬ ЬЬадсЬадас адЬсЬсаЬЬд сасаЬаЬсаЬ ааЬддЬдаЬд сасаЬасЬад 6660
ЬссадаЬдаа ЬЬаасЬадда ааададЬасЬ ЬадЬдЬааЬа асЬдаассаа ЬаЬЬассаЬЬ 6720
ЬдааадаЬаа дсЬадсаЬаа аааЬаадаад ссЬдсаЬЬЬд саддсЬЬсЬЬ аЬЬЬЬЬаЬдд 6780
сдсдссдсса ЬЬаЬЬЬЬЬЬЬ даасааЬЬда сааЬЬсаЬЬЬ сЬЬаЬЬЬЬЬЬ аЬЬаадЬдаЬ 6840
адЬсаааадд саЬаасадЬд сЬдааЬадаа адаааЬЬЬас адаааадааа аЬЬаЬадааЬ 6900
ЬЬадЬаЬдаЬ ЬааЬЬаЬасЬ саЬЬЬаЬдаа ЬдЬЬЬааЬЬд ааЬасааааа ааааЬасЬЬд 6960
ЬЬаЬдЬаЬЬс ааЬЬасдддЬ ЬааааЬаЬад асаадЬЬдаа аааЬЬЬааЬа ааааааЬаад 7020
ЬссЬсадсЬс ЬЬаЬаЬаЬЬа адсЬассаас ЬЬадЬаЬаЬа адссаааасЬ ЬаааЬдЬдсЬ 7080
ассаасасаЬ саадссдЬЬа дадаасЬсЬа ЬсЬаЬадсаа ЬаЬЬЬсаааЬ дЬассдасаЬ 7140
асаададааа саЬЬаасЬаЬ аЬаЬаЬЬсаа ЬЬЬаЬдадаЬ ЬаЬсЬЬааса даЬаЬаааЬд 7200
ЬаааЬЬдсаа ЬаадЬаадаЬ ЬЬадаадЬЬЬ аЬадссЬЬЬд ЬдЬаЬЬддаа дсадЬасдса 7260
ааддсЬЬЬЬЬ ЬаЬЬЬдаЬаа аааЬЬадаад ЬаЬаЬЬЬаЬЬ ЬЬЬЬсаЬааЬ ЬааЬЬЬаЬда 7320
аааЬдааадд дддЬдадсаа адЬдасадад дааадсадЬа ЬсЬЬаЬсааа ЬаасааддЬа 7380
ЬЬадсааЬаЬ саЬЬаЬЬдас ЬЬЬадсадЬа аасаЬЬаЬда сЬЬЬЬаЬадЬ дсЬЬдЬадсЬ 7440
аадЬадЬасд ааадддддад сЬЬЬааааад сЬссЬЬддаа ЬасаЬадааЬ ЬсаЬаааЬЬа 7500
аЬЬЬаЬдааа адаадддсдЬ аЬаЬдаааас ЬЬдЬаааааЬ ЬдсааададЬ ЬЬаЬЬааада 7560
ЬасЬдаааЬа ЬдсааааЬас аЬЬсдЬЬдаЬ даЬЬсаЬдаЬ аааасадЬад саассЬаЬЬд 7620
садЬаааЬас ааЬдадЬсаа даЬдЬЬЬаса Ьааадддааа дЬссааЬдЬа ЬЬааЬЬдЬЬс 7680
ааадаЬдаас сдаЬаЬддаЬ ддЬдЬдссаЬ аааааЬдада ЬдЬЬЬЬасад аддаадааса 7740
даааааадаа сдЬасаЬдса ЬЬаааЬаЬЬа Ьдсааддадс ЬЬЬаааааад сЬсаЬдЬааа 7800
даададЬааа аадааааааЬ ааЬЬЬаЬЬЬа ЬЬааЬЬЬааЬ аЬЬдададЬд ссдасасадЬ 7860
аЬдсасЬааа аааЬаЬаЬсЬ дЬддЬдЬадЬ дадссдаЬас ааааддаЬад ЬсасЬсдсаЬ 7920
ЬЬЬсаЬааЬа саЬсЬЬаЬдЬ ЬаЬдаЬЬаЬд ЬдЬсддЬддд асЬЬсасдас даааасссас 7980
ааЬааааааа дадЬЬсдддд ЬадддЬЬаад саЬадЬЬдад дсаасЬааас ааЬсаадсЬа 8040
- 139 028892
ддабабдсад бадсадассд бааддбсдбб дбббаддбдб дббдбаабас абасдсбабб 8100
аадабдбааа аабасддаба ссаабдаадд даааадбаба абббббддаб дбадбббдбб 8160
бдббсабсба бдддсааасб асдбссааад ссдбббссаа абсбдсбааа аадбабабсс 8220
бббсбааааб сааадбсаад бабдааабса бааабааадб ббааббббда адббаббабд 8280
абаббабдбб бббсбаббаа аабаааббаа дбабабадаа бадбббааба абадбабаба 8340
сббаабдбда баадбдбсбд асадбдбсас адаааддабд аббдббабдд аббабаадсд 8400
дссддссадб дддсаадббд аааааббсас ааааабдбдд бабаабабсб ббдббсабба 8460
дадсдабааа сббдаабббд ададддаасб бадабддбаб ббдааааааб бдабаааааб 8520
адббддааса даааададба ббббдассас басбббдсаа дбдбассббд бассбасадс 8580
абдассдбба аадбддабаб сасасаааба ааддаааадд даабдааасб абабссбдса 8640
абдсбббабб абаббдсааб даббдбааас сдссаббсад адбббаддас ддсаабсааб 8700
саадабддбд ааббддддаб абабдабдад абдабассаа дсбабасааб абббсасааб 8760
дабасбдааа саббббссад ссбббддасб дадбдбаадб сбдасбббаа абсаббббба 8820
дсадаббабд ааадбдабас дсаасддбаб ддааасаабс абадаабдда аддааадсса 8880
аабдсбссдд аааасабббб баабдбабсб абдабассдб ддбсаассбб сдабддсббб 8940
аабсбдаабб бдсадааадд абабдаббаб ббдаббссба бббббасбаб ддддааабаб 9000
бабааадаад абаасааааб бабасббссб ббддсааббс аадббсабса сдсадбабдб 9060
дасддабббс асабббдссд ббббдбааас дааббдсадд ааббдабааа бадббаасбб 9120
саддбббдбс бдбаасбааа аасаадбабб баадсааааа сабсдбадаа абасддбдбб 9180
ббббдббасс сбаадббб 9198
<210> 85 <211> 6841 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ83245-Р£ог-РБ-10.1 <400> 85 ааасбссббб ббдабаабсб сабдассааа абсссббаас дбдадббббс дббссасбда 60 дсдбсадасс ссдбадаааа дабсааадда бсббсббдад абссбббббб бсбдсдсдба 120 абсбдсбдсб бдсааасааа аааассассд сбассадсдд бддбббдббб дссддабсаа 180 дадсбассаа сбсбббббсс дааддбаасб ддсббсадса дадсдсадаб ассааабасб 240 дббсббсбад бдбадссдба дббаддссас сасббсаада асбсбдбадс ассдссбаса 300 бассбсдсбс бдсбаабссб дббассадбд дсбдсбдсса дбддсдабаа дбсдбдбсбб 360
- 140 028892
ассдддЬЬдд асЬсаадасд аЬадЬЬассд даЬааддсдс адсддЬсддд сЬдаасдддд 420
ддЬЬсдЬдса сасадсссад сЬЬддадсда асдассЬаса ссдаасЬдад аЬассЬасад 480
сдЬдадсЬаЬ дадааадсдс сасдсЬЬссс даадддадаа аддсддасад дЬаЬссддЬа 540
адсддсаддд Ьсддаасадд ададсдсасд адддадсЬЬс садддддааа сдссЬддЬаЬ 600
сЬЬЬаЬадЬс сЬдЬсдддЬЬ ЬсдссассЬс ЬдасЬЬдадс дЬсдаЬЬЬЬЬ дЬдаЬдсЬсд 660
Ьсаддддддс ддадссЬаЬд дааааасдсс адсаасдсдд ссЬЬЬЬЬасд дЬЬссЬддсс 720
ЬЬЬЬдсЬддс сЬЬЬЬдсЬса саЬдЬЬсЬЬЬ ссЬдсдЬЬаЬ ссссЬдаЬЬс ЬдЬддаЬаас 780
сдЬаЬЬассд ссЬЬЬдадЬд адсЬдаЬасс дсЬсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадЬсадЬда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЬасдса дддсссссЬд саддаЬаааа 900
аааЬЬдЬада ЬаааЬЬЬЬаЬ ааааЬадЬЬЬ ЬаЬсЬасааЬ ЬЬЬЬЬЬаЬса ддааасадсЬ 960
аЬдассдсдд ссдсааЬаЬд аЬаЬЬЬаЬдЬ ссаЬЬдЬдаа адддаЬЬаЬа ЬЬсаасЬаЬЬ 1020
аЬЬссадЬЬа сдЬЬсаЬада ааЬЬЬЬссЬЬ ЬсЬааааЬаЬ ЬЬЬаЬЬссаЬ дЬсаадаасЬ 1080
сЬдЬЬЬаЬЬЬ саЬЬааадаа сЬаЬаадЬас ааадЬаЬаад дсаЬЬЬдааа аааЬаддсЬа 1140
дЬаЬаЬЬдаЬ ЬдаЬЬаЬЬЬа ЬЬЬЬааааЬд ссЬаадЬдаа аЬаЬаЬасаЬ аЬЬаЬаасаа 1200
ЬааааЬаадЬ аЬЬадЬдЬад даЬЬЬЬЬааа ЬададЬаЬсЬ аЬЬЬЬсадаЬ ЬаааЬЬЬЬЬд 1260
аЬЬаЬЬЬдаЬ ЬЬасаЬЬаЬа ЬааЬаЬЬдад ЬааадЬаЬЬд асЬадсаааа ЬЬЬЬЬЬдаЬа 1320
сЬЬЬааЬЬЬд ЬдаааЬЬЬсЬ ЬаЬсаааадЬ ЬаЬаЬЬЬЬЬд ааЬааЬЬЬЬЬ аЬЬдаааааЬ 1380
асаасЬаааа аддаЬЬаЬад ЬаЬаадЬдЬд ЬдЬааЬЬЬЬд ЬдЬЬаааЬЬЬ ааадддадда 1440
ааЬдаасаЬд ааасаЬаЬдд ЬдассаЬдаЬ ЬасдааЬЬсд адсЬсддЬас ссддддаЬсс 1500
ЬсЬадЬЬдЬа ЬаЬЬааааЬа дЬадааЬаса ЬаадаЬасЬЬ ааЬЬЬааЬЬа аадаЬадЬЬа 1560
адЬасЬЬЬЬс ааЬдЬдсЬЬЬ ЬЬЬадаЬдЬЬ ЬааЬасаааЬ сЬЬЬааЬЬдЬ аааадаааЬд 1620
сЬдЬасЬаЬЬ ЬасЬдЬЬсЬа дЬдасдддаЬ ЬааасЬдЬаЬ ЬааЬЬаЬааа ЬааааааЬаа 1680
дЬасадЬЬдЬ ЬЬааааЬЬаЬ аЬЬЬЬдЬаЬЬ аааЬсЬааЬа дЬасдаЬдЬа адЬЬаЬЬЬЬа 1740
ЬасЬаЬЬдсЬ адЬЬЬааЬаа ааадаЬЬЬаа ЬЬаЬаЬасЬЬ дааааддада ддаасЬсдад 1800
аЬддааЬЬЬа дадЬасаЬЬЬ асаддсадас аасдаасада аааЬаЬЬЬса аааЬсаааЬд 1860
ааассададс садаадсаЬс аЬаЬсЬЬаЬа ааЬсааадаа даадЬдсЬаа ЬЬаЬааасса 1920
аасаЬЬЬдда аааасдаЬЬЬ ЬсЬЬдаЬсад ЬсЬЬЬааЬаЬ сааааЬаЬда ЬддЬдаЬдаа 1980
ЬаЬадаааас ЬЬЬсадаааа дЬЬааЬадаа даадЬааада ЬаЬасаЬаЬс адсададасЬ 2040
аЬддаЬЬЬад ЬЬдсЬаааЬЬ адаасЬЬаЬа даЬЬсЬдЬЬа даааасЬЬдд асЬЬдсЬааЬ 2100
сЬЬЬЬЬдада аадаааЬааа ддаадсаЬЬа дасадЬаЬад садсааЬада аЬсадаЬааЬ 2160
ЬЬаддаасЬа дадасдаЬсЬ ЬЬаЬддааса дсЬсЬЬсаЬЬ ЬЬаадаЬЬсЬ ЬадасадсаЬ 2220
ддаЬаЬаадд ЬаадЬсаада ЬаЬаЬЬЬддЬ адаЬЬЬаЬдд аЬдадааадд аасаЬЬадаа 2280
- 141 028892
ааЕсаЕсасЕ ЕЕдсасасЕЕ ааааддааЕд ЕЕадааЕЕаЕ ЕЕдаддсаад ЕааЕсЕЕдда 2340
ЕЕЕдааддЕд аадасаЕаЕЕ адаЕдаадсЕ ааадсаЕсЕс ЕЕасасЕЕдс ЕсЕЕададаЕ 2400
ЕсаддасаЕа ЕЕЕдЕЕаЕсс адасЕсааас ЕЕаадЕадад аЕдЕадЕЕса ЕадЕЕЕадаа 2460
ЕЕассЕадЕс аЕадаададЕ ЕсааЕддЕЕс даЕдЕааааЕ ддсадаЕЕаа ЕдсаЕасдаа 2520
ааадаЕаЕЕЕ дЕададЕааа ЕдсаасЕЕЕа ЕЕададЕЕад сааадЕЕааа ЕЕЕЕааЕдЕЕ 2580
дЕЕсаадсЕс адсЕЕсадаа дааЕсЕЕада даадсЕадЕа даЕддЕдддс ЕааЕсЕЕддЕ 2640
ЕЕсдсадаЕа аЕЕЕааадЕЕ ЕдсЕададаЕ адасЕЕдЕад адЕдЕЕЕЕЕс аЕдсдсадЕа 2700
ддЕдЕадсаЕ ЕЕдаассада дсаЕЕсаЕсЕ ЕЕЕадааЕаЕ дЕЕЕаасЕаа ддЕааЕЕааЕ 2760
сЕЕдЕЕсЕЕа ЕЕаЕадаЕда ЕдЕаЕасдаЕ аЕаЕаЕддаЕ сЕдаадаада дЕЕаааасаЕ 2820
ЕЕЕасаааЕд сЕдЕЕдаЕад аЕдддасадЕ ададааасад аасадсЕЕсс ЕдааЕдсаЕд 2880
ааааЕдЕдЕЕ ЕЕсаадЕаЕЕ аЕаЕаасасЕ асЕЕдсдааа Еадсаадада даЕадаадаа 2940
даааасддЕЕ ддааЕсаадЕ аЕЕассЕсаа сЕЕасЕаадд ЕЕЕдддсЕда ЕЕЕЕЕдЕаад 3000
дсЕсЕЕЕЕад ЕЕдаадсада дЕддЕасааЕ аааЕсасаЕа ЕЕссаасаЕЕ адаадааЕаЕ 3060
сЕЕадааасд даЕдЕаЕаЕс аадЕадЕдЕа ЕсЕдЕасЕЕЕ ЕадЕЕсасЕс ЕЕЕсЕЕЕЕса 3120
аЕаасЕсаЕд ааддЕасааа адаааЕддсЕ даЕЕЕсЕЕас аЕаааааЕда адаЕсЕЕЕЕа 3180
ЕасаасаЕаа дЕсЕЕаЕадЕ аадаЕЕааас ааЕдаЕЕЕад дЕасаЕсадс ЕдсЕдаасад 3240
дааададдЕд аЕЕсЕссЕЕс ЕЕсЕаЕадЕЕ ЕдсЕаЕаЕда дадаадЕЕаа ЕдсЕЕсЕдаа 3300
дадасЕдсаа дааадааЕаЕ ааадддааЕд аЕЕдаЕааЕд сЕЕддааааа ддЕЕааЕдда 3360
аааЕдЕЕЕса саасЕаасса адЕЕссаЕЕЕ сЕЕЕсаЕсаЕ ЕсаЕдааЕаа ЕдсаасЕаас 3420
аЕддсаадад ЕадсасасЕс аЕЕаЕаЕааа дасддЕдаЕд дЕЕЕЕддЕда Есаадааааа 3480
ддассЕадаа сасаЕаЕЕсЕ ЕадЕЕЕаЕЕа ЕЕссаассЕЕ ЕадЕаааЕЕа асЕдсадддЕ 3540
ЕсаааасаЕа даЕЕаааааа ЕЕаааддадд ддааааааЕд дсададЕаЕа ЕааЕадсадЕ 3600
адаЕдадЕЕс даЕаасдааа ЕаддаЕсааЕ адаааадаЕд даадсЕсаЕа дааааддаас 3660
асЕЕсаЕада дсаЕЕсадЕа ЕЕЕЕадЕЕЕЕ ЕаасЕсааад ааЕсаасЕЕЕ ЕаЕЕасадаа 3720
аадаааЕдЕа аадаааЕаЕс асЕсЕссадд аЕЕаЕддаса аасасЕЕдЕЕ дЕадЕсассс 3780
аадаЕаЕддЕ дааЕсЕсЕЕс аЕдаЕдсЕаЕ аЕасадаада ЕЕаааадаад адаЕдддаЕЕ 3840
ЕасЕЕдсдаа сЕЕдаадаад ЕаЕЕсЕсаЕЕ саЕаЕаЕаад дЕаааасЕЕд аадаЕааЕЕЕ 3900
аЕЕЕдадааЕ дааЕаЕдасс аЕдЕаЕЕЕаЕ ЕддЕаааЕаЕ даЕддЕдада ЕааЕЕдЕЕаа 3960
ЕааадаЕдаа дЕЕдаЕдаЕЕ ЕЕаааЕдддЕ адасаЕЕааЕ даадЕЕаааа аддасаЕааЕ 4020
адааадассЕ даддсаЕаЕа сЕЕасЕддЕЕ ЕаадЕаЕсЕЕ дЕаааЕааад сЕдааааЕаа 4080
даЕаЕЕЕааа ЕаааадсЕЕд дсасЕддссд ЕсдЕЕЕЕаса асдЕсдЕдас Едддаааасс 4140
- 142 028892
сЕддсдЕЕас ссаасЕЕааЕ сдссЕЕдсад сасаЕссссс ЕЕЕсдссадс ЕддсдЕааЕа 4200
дсдаададдс ссдсассдаЕ сдсссЕЕссс аасадЕЕдсд садссЕдааЕ ддсдааЕддс 4260
дсЕадсаЕаа аааЕаадаад ссЕдсаЕЕЕд саддсЕЕсЕЕ аЕЕЕЕЕаЕдд сдсдссдсса 4320
ЕЕаЕЕЕЕЕЕЕ даасааЕЕда сааЕЕсаЕЕЕ сЕЕаЕЕЕЕЕЕ аЕЕаадЕдаЕ адЕсаааадд 4380
саЕаасадЕд сЕдааЕадаа адаааЕЕЕас адаааадааа аЕЕаЕадааЕ ЕЕадЕаЕдаЕ 4440
ЕааЕЕаЕасЕ саЕЕЕаЕдаа ЕдЕЕЕааЕЕд ааЕасааааа ааааЕасЕЕд ЕЕаЕдЕаЕЕс 4500
ааЕЕасдддЕ ЕааааЕаЕад асаадЕЕдаа аааЕЕЕааЕа ааааааЕаад ЕссЕсадсЕс 4560
ЕЕаЕаЕаЕЕа адсЕассаас ЕЕадЕаЕаЕа адссаааасЕ ЕаааЕдЕдсЕ ассаасасаЕ 4620
саадссдЕЕа дадаасЕсЕа ЕсЕаЕадсаа ЕаЕЕЕсаааЕ дЕассдасаЕ асаададааа 4680
саЕЕаасЕаЕ аЕаЕаЕЕсаа ЕЕЕаЕдадаЕ ЕаЕсЕЕааса даЕаЕаааЕд ЕаааЕЕдсаа 4740
ЕаадЕаадаЕ ЕЕадаадЕЕЕ аЕадссЕЕЕд ЕдЕаЕЕддаа дсадЕасдса ааддсЕЕЕЕЕ 4800
ЕаЕЕЕдаЕаа аааЕЕадаад ЕаЕаЕЕЕаЕЕ ЕЕЕЕсаЕааЕ ЕааЕЕЕаЕда аааЕдааадд 4860
дддЕдадсаа адЕдасадад дааадсадЕа ЕсЕЕаЕсааа ЕаасааддЕа ЕЕадсааЕаЕ 4920
саЕЕаЕЕдас ЕЕЕадсадЕа аасаЕЕаЕда сЕЕЕЕаЕадЕ дсЕЕдЕадсЕ аадЕадЕасд 4980
ааадддддад сЕЕЕааааад сЕссЕЕддаа ЕасаЕадааЕ ЕсаЕаааЕЕа аЕЕЕаЕдааа 5040
адаадддсдЕ аЕаЕдаааас ЕЕдЕаааааЕ ЕдсааададЕ ЕЕаЕЕааада ЕасЕдаааЕа 5100
ЕдсааааЕас аЕЕсдЕЕдаЕ даЕЕсаЕдаЕ аааасадЕад саассЕаЕЕд садЕаааЕас 5160
ааЕдадЕсаа даЕдЕЕЕаса Еааадддааа дЕссааЕдЕа ЕЕааЕЕдЕЕс ааадаЕдаас 5220
сдаЕаЕддаЕ ддЕдЕдссаЕ аааааЕдада ЕдЕЕЕЕасад аддаадааса даааааадаа 5280
сдЕасаЕдса ЕЕаааЕаЕЕа Едсааддадс ЕЕЕаааааад сЕсаЕдЕааа даададЕааа 5340
аадааааааЕ ааЕЕЕаЕЕЕа ЕЕааЕЕЕааЕ аЕЕдададЕд ссдасасадЕ аЕдсасЕааа 5400
аааЕаЕаЕсЕ дЕддЕдЕадЕ дадссдаЕас ааааддаЕад ЕсасЕсдсаЕ ЕЕЕсаЕааЕа 5460
саЕсЕЕаЕдЕ ЕаЕдаЕЕаЕд ЕдЕсддЕддд асЕЕсасдас даааасссас ааЕааааааа 5520
дадЕЕсдддд ЕадддЕЕаад саЕадЕЕдад дсаасЕааас ааЕсаадсЕа ддаЕаЕдсад 5580
Еадсадассд ЕааддЕсдЕЕ дЕЕЕаддЕдЕ дЕЕдЕааЕас аЕасдсЕаЕЕ аадаЕдЕааа 5640
ааЕасддаЕа ссааЕдаадд даааадЕаЕа аЕЕЕЕЕддаЕ дЕадЕЕЕдЕЕ ЕдЕЕсаЕсЕа 5700
ЕдддсааасЕ асдЕссааад ссдЕЕЕссаа аЕсЕдсЕааа аадЕаЕаЕсс ЕЕЕсЕааааЕ 5760
сааадЕсаад ЕаЕдаааЕса ЕаааЕааадЕ ЕЕааЕЕЕЕда адЕЕаЕЕаЕд аЕаЕЕаЕдЕЕ 5820
ЕЕЕсЕаЕЕаа ааЕаааЕЕаа дЕаЕаЕадаа ЕадЕЕЕааЕа аЕадЕаЕаЕа сЕЕааЕдЕда 5880
ЕаадЕдЕсЕд асадЕдЕсас адаааддаЕд аЕЕдЕЕаЕдд аЕЕаЕаадсд дссддссдаа 5940
дсааасЕЕаа дадЕдЕдЕЕд аЕадЕдсадЕ аЕсЕЕааааЕ ЕЕЕдЕаЕааЕ аддааЕЕдаа 6000
дЕЕаааЕЕад аЕдсЕааааа ЕЕЕдЕааЕЕа адааддадЕд аЕЕасаЕдаа саааааЕаЕа 6060
- 143 028892
ааабаббсбс аааасббббб аасдадбдаа ааадбасбса ассааабааб аааасааббд 6120
аабббаааад ааассдабас сдбббасдаа аббддаасад дбааадддса бббаасдасд 6180
ааасбддсба ааабаадбаа асаддбаасд бсбаббдааб бадасадбса бсбаббсаас 6240
ббабсдбсад аааааббааа асбдаабасб сдбдбсасбб бааббсасса адабаббсба 6300
садбббсааб бсссбаасаа асададдбаб ааааббдббд ддадбаббсс ббассаббба 6360
адсасасааа ббаббааааа адбддббббб дааадссабд сдбсбдасаб сбабсбдабб 6420
дббдаадаад даббсбасаа дсдбассббд дабаббсасс даасасбадд дббдсбсббд 6480
сасасбсаад бсбсдаббса дсааббдсбб аадсбдссад сддаабдсбб бсабссбааа 6540
ссаааадбаа асадбдбсбб аабаааасбб асссдссаба ссасадабдб бссадабааа 6600
баббддаадс бабабасдба сбббдбббса ааабдддбса абсдадааба бсдбсаасбд 6660
бббасбаааа абсадбббса бсаадсаабд ааасасдсса аадбааасаа бббаадбасс 6720
дббасббабд адсаадбабб дбсбаббббб аабадббабс баббабббаа сдддаддааа 6780
бааббсбабд адбсдсбббб дбааабббдд ааадббасас дббасбааад ддаабдбдбб 6840
б 6841 <210> 86 <211> 36 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ίά.ί_Ρ2
<400> 86
аддсасбсда дабддсадад бабабаабад садбад 36
<210> 87
<211> 47
<212> ДНК
<213> синтетическая последовательность
<220>
<223> олигонуклеотид ίά.ί_Κ2
<400> 87
аддсдсаадс ббддсдсасс ддбббаббба аабабсббаб бббсадс 47
<210> 88 <211> 5075 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ83245-Р£ог-1Ш <400> 88
- 144 028892
ааасЕссЕЕЕ ЕЕдаЕааЕсЕ саЕдассааа аЕсссЕЕаас дЕдадЕЕЕЕс дЕЕссасЕда 60
дсдЕсадасс ссдЕадаааа даЕсааадда ЕсЕЕсЕЕдад аЕссЕЕЕЕЕЕ ЕсЕдсдсдЕа 120
аЕсЕдсЕдсЕ Едсааасааа аааассассд сЕассадсдд ЕддЕЕЕдЕЕЕ дссддаЕсаа 180
дадсЕассаа сЕсЕЕЕЕЕсс дааддЕаасЕ ддсЕЕсадса дадсдсадаЕ ассаааЕасЕ 240
дЕЕсЕЕсЕад ЕдЕадссдЕа дЕЕаддссас сасЕЕсаада асЕсЕдЕадс ассдссЕаса 300
ЕассЕсдсЕс ЕдсЕааЕссЕ дЕЕассадЕд дсЕдсЕдсса дЕддсдаЕаа дЕсдЕдЕсЕЕ 360
ассдддЕЕдд асЕсаадасд аЕадЕЕассд даЕааддсдс адсддЕсддд сЕдаасдддд 420
ддЕЕсдЕдса сасадсссад сЕЕддадсда асдассЕаса ссдаасЕдад аЕассЕасад 480
сдЕдадсЕаЕ дадааадсдс сасдсЕЕссс даадддадаа аддсддасад дЕаЕссддЕа 540
адсддсаддд Есддаасадд ададсдсасд адддадсЕЕс садддддааа сдссЕддЕаЕ 600
сЕЕЕаЕадЕс сЕдЕсдддЕЕ ЕсдссассЕс ЕдасЕЕдадс дЕсдаЕЕЕЕЕ дЕдаЕдсЕсд 660
Есаддддддс ддадссЕаЕд дааааасдсс адсаасдсдд ссЕЕЕЕЕасд дЕЕссЕддсс 720
ЕЕЕЕдсЕддс сЕЕЕЕдсЕса саЕдЕЕсЕЕЕ ссЕдсдЕЕаЕ ссссЕдаЕЕс ЕдЕддаЕаас 780
сдЕаЕЕассд ссЕЕЕдадЕд адсЕдаЕасс дсЕсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадЕсадЕда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЕасдса дддсссссЕд саддаЕаааа 900
аааЕЕдЕада ЕаааЕЕЕЕаЕ ааааЕадЕЕЕ ЕаЕсЕасааЕ ЕЕЕЕЕЕаЕса ддааасадсЕ 960
аЕдассдсдд ссдсааЕаЕд аЕаЕЕЕаЕдЕ ссаЕЕдЕдаа адддаЕЕаЕа ЕЕсаасЕаЕЕ 1020
аЕЕссадЕЕа сдЕЕсаЕада ааЕЕЕЕссЕЕ ЕсЕааааЕаЕ ЕЕЕаЕЕссаЕ дЕсаадаасЕ 1080
сЕдЕЕЕаЕЕЕ саЕЕааадаа сЕаЕаадЕас ааадЕаЕаад дсаЕЕЕдааа аааЕаддсЕа 1140
дЕаЕаЕЕдаЕ ЕдаЕЕаЕЕЕа ЕЕЕЕааааЕд ссЕаадЕдаа аЕаЕаЕасаЕ аЕЕаЕаасаа 1200
ЕааааЕаадЕ аЕЕадЕдЕад даЕЕЕЕЕааа ЕададЕаЕсЕ аЕЕЕЕсадаЕ ЕаааЕЕЕЕЕд 1260
аЕЕаЕЕЕдаЕ ЕЕасаЕЕаЕа ЕааЕаЕЕдад ЕааадЕаЕЕд асЕадсаааа ЕЕЕЕЕЕдаЕа 1320
сЕЕЕааЕЕЕд ЕдаааЕЕЕсЕ ЕаЕсаааадЕ ЕаЕаЕЕЕЕЕд ааЕааЕЕЕЕЕ аЕЕдаааааЕ 1380
асаасЕаааа аддаЕЕаЕад ЕаЕаадЕдЕд ЕдЕааЕЕЕЕд ЕдЕЕаааЕЕЕ ааадддадда 1440
ааЕдаасаЕд ааасаЕаЕдд ЕдассаЕдаЕ ЕасдааЕЕсд адсЕсддЕас ссддддаЕсс 1500
ЕсЕадЕЕдЕа ЕаЕЕааааЕа дЕадааЕаса ЕаадаЕасЕЕ ааЕЕЕааЕЕа аадаЕадЕЕа 1560
адЕасЕЕЕЕс ааЕдЕдсЕЕЕ ЕЕЕадаЕдЕЕ ЕааЕасаааЕ сЕЕЕааЕЕдЕ аааадаааЕд 1620
сЕдЕасЕаЕЕ ЕасЕдЕЕсЕа дЕдасдддаЕ ЕааасЕдЕаЕ ЕааЕЕаЕааа ЕааааааЕаа 1680
дЕасадЕЕдЕ ЕЕааааЕЕаЕ аЕЕЕЕдЕаЕЕ аааЕсЕааЕа дЕасдаЕдЕа адЕЕаЕЕЕЕа 1740
ЕасЕаЕЕдсЕ адЕЕЕааЕаа ааадаЕЕЕаа ЕЕаЕаЕасЕЕ дааааддада ддаасЕсдад 1800
аЕддсададЕ аЕаЕааЕадс адЕадаЕдад ЕЕсдаЕаасд аааЕаддаЕс ааЕадаааад 1860
аЕддаадсЕс аЕадаааадд аасасЕЕсаЕ ададсаЕЕса дЕаЕЕЕЕадЕ ЕЕЕЕаасЕса 1920
- 145 028892
аадааЕсаас ЕЕЕЕаЕЕаса даааадаааЕ дЕааадаааЕ аЕсасЕсЕсс аддаЕЕаЕдд 1980
асааасасЕЕ дЕЕдЕадЕса сссаадаЕаЕ ддЕдааЕсЕс ЕЕсаЕдаЕдс ЕаЕаЕасада 2040
адаЕЕаааад аададаЕддд аЕЕЕасЕЕдс даасЕЕдаад аадЕаЕЕсЕс аЕЕсаЕаЕаЕ 2100
ааддЕаааас ЕЕдаадаЕаа ЕЕЕаЕЕЕдад ааЕдааЕаЕд ассаЕдЕаЕЕ ЕаЕЕддЕааа 2160
ЕаЕдаЕддЕд адаЕааЕЕдЕ ЕааЕааадаЕ даадЕЕдаЕд аЕЕЕЕаааЕд ддЕадасаЕЕ 2220
ааЕдаадЕЕа ааааддасаЕ ааЕадааада ссЕдаддсаЕ аЕасЕЕасЕд дЕЕЕаадЕаЕ 2280
сЕЕдЕаааЕа аадсЕдаааа ЕаадаЕаЕЕЕ аааЕааассд дЕдсдссаад сЕЕддсасЕд 2340
дссдЕсдЕЕЕ ЕасаасдЕсд ЕдасЕдддаа аасссЕддсд ЕЕасссаасЕ ЕааЕсдссЕЕ 2400
дсадсасаЕс ссссЕЕЕсдс садсЕддсдЕ ааЕадсдаад аддсссдсас сдаЕсдсссЕ 2460
ЕсссаасадЕ ЕдсдсадссЕ дааЕддсдаа ЕддсдсЕадс аЕаааааЕаа даадссЕдса 2520
ЕЕЕдсаддсЕ ЕсЕЕаЕЕЕЕЕ аЕддсдсдсс дссаЕЕаЕЕЕ ЕЕЕЕдаасаа ЕЕдасааЕЕс 2580
аЕЕЕсЕЕаЕЕ ЕЕЕЕаЕЕаад ЕдаЕадЕсаа ааддсаЕаас адЕдсЕдааЕ адааадаааЕ 2640
ЕЕасадаааа дааааЕЕаЕа дааЕЕЕадЕа ЕдаЕЕааЕЕа ЕасЕсаЕЕЕа ЕдааЕдЕЕЕа 2700
аЕЕдааЕаса ааааааааЕа сЕЕдЕЕаЕдЕ аЕЕсааЕЕас дддЕЕааааЕ аЕадасаадЕ 2760
ЕдаааааЕЕЕ ааЕааааааа ЕаадЕссЕса дсЕсЕЕаЕаЕ аЕЕаадсЕас саасЕЕадЕа 2820
ЕаЕаадссаа аасЕЕаааЕд ЕдсЕассаас асаЕсаадсс дЕЕададаас ЕсЕаЕсЕаЕа 2880
дсааЕаЕЕЕс аааЕдЕассд асаЕасаада дааасаЕЕаа сЕаЕаЕаЕаЕ ЕсааЕЕЕаЕд 2940
адаЕЕаЕсЕЕ аасадаЕаЕа ааЕдЕаааЕЕ дсааЕаадЕа адаЕЕЕадаа дЕЕЕаЕадсс 3000
ЕЕЕдЕдЕаЕЕ ддаадсадЕа сдсаааддсЕ ЕЕЕЕЕаЕЕЕд аЕаааааЕЕа даадЕаЕаЕЕ 3060
ЕаЕЕЕЕЕЕса ЕааЕЕааЕЕЕ аЕдааааЕда аадддддЕда дсааадЕдас ададдааадс 3120
адЕаЕсЕЕаЕ саааЕаасаа ддЕаЕЕадса аЕаЕсаЕЕаЕ ЕдасЕЕЕадс адЕааасаЕЕ 3180
аЕдасЕЕЕЕа ЕадЕдсЕЕдЕ адсЕаадЕад Еасдаааддд ддадсЕЕЕаа ааадсЕссЕЕ 3240
ддааЕасаЕа дааЕЕсаЕаа аЕЕааЕЕЕаЕ даааадаадд дсдЕаЕаЕда ааасЕЕдЕаа 3300
аааЕЕдсааа дадЕЕЕаЕЕа аадаЕасЕда ааЕаЕдсааа аЕасаЕЕсдЕ ЕдаЕдаЕЕса 3360
ЕдаЕааааса дЕадсаассЕ аЕЕдсадЕаа аЕасааЕдад ЕсаадаЕдЕЕ ЕасаЕааадд 3420
дааадЕссаа ЕдЕаЕЕааЕЕ дЕЕсааадаЕ даассдаЕаЕ ддаЕддЕдЕд ссаЕаааааЕ 3480
дадаЕдЕЕЕЕ асададдаад аасадааааа адаасдЕаса ЕдсаЕЕаааЕ аЕЕаЕдсаад 3540
дадсЕЕЕааа ааадсЕсаЕд Еааадаадад Еааааадааа аааЕааЕЕЕа ЕЕЕаЕЕааЕЕ 3600
ЕааЕаЕЕдад адЕдссдаса садЕаЕдсас ЕааааааЕаЕ аЕсЕдЕддЕд ЕадЕдадссд 3660
аЕасаааадд аЕадЕсасЕс дсаЕЕЕЕсаЕ ааЕасаЕсЕЕ аЕдЕЕаЕдаЕ ЕаЕдЕдЕсдд 3720
ЕдддасЕЕса сдасдаааас ссасааЕааа аааададЕЕс ддддЕадддЕ ЕаадсаЕадЕ 3780
- 146 028892
ЕдаддсаасЕ ааасааЕсаа дсЕаддаЕаЕ дсадЕадсад ассдЕааддЕ сдЕЕдЕЕЕад 3840
дЕдЕдЕЕдЕа аЕасаЕасдс ЕаЕЕаадаЕд ЕаааааЕасд даЕассааЕд аадддаааад 3900
ЕаЕааЕЕЕЕЕ ддаЕдЕадЕЕ ЕдЕЕЕдЕЕса ЕсЕаЕдддса аасЕасдЕсс ааадссдЕЕЕ 3960
ссаааЕсЕдс ЕааааадЕаЕ аЕссЕЕЕсЕа аааЕсааадЕ саадЕаЕдаа аЕсаЕаааЕа 4020
аадЕЕЕааЕЕ ЕЕдаадЕЕаЕ ЕаЕдаЕаЕЕа ЕдЕЕЕЕЕсЕа ЕЕааааЕааа ЕЕаадЕаЕаЕ 4080
адааЕадЕЕЕ ааЕааЕадЕа ЕаЕасЕЕааЕ дЕдаЕаадЕд ЕсЕдасадЕд Есасадааад 4140
даЕдаЕЕдЕЕ аЕддаЕЕаЕа адсддссддс сдаадсааас ЕЕаададЕдЕ дЕЕдаЕадЕд 4200
садЕаЕсЕЕа аааЕЕЕЕдЕа ЕааЕаддааЕ ЕдаадЕЕааа ЕЕадаЕдсЕа ааааЕЕЕдЕа 4260
аЕЕаадаадд адЕдаЕЕаса Едаасааааа ЕаЕааааЕаЕ ЕсЕсаааасЕ ЕЕЕЕаасдад 4320
ЕдааааадЕа сЕсаассааа ЕааЕааааса аЕЕдааЕЕЕа ааадааассд аЕассдЕЕЕа 4380
сдаааЕЕдда асаддЕааад ддсаЕЕЕаас дасдааасЕд дсЕааааЕаа дЕааасаддЕ 4440
аасдЕсЕаЕЕ дааЕЕадаса дЕсаЕсЕаЕЕ саасЕЕаЕсд ЕсадаааааЕ ЕаааасЕдаа 4500
ЕасЕсдЕдЕс асЕЕЕааЕЕс ассаадаЕаЕ ЕсЕасадЕЕЕ сааЕЕсссЕа асааасадад 4560
дЕаЕааааЕЕ дЕЕдддадЕа ЕЕссЕЕасса ЕЕЕаадсаса саааЕЕаЕЕа ааааадЕддЕ 4620
ЕЕЕЕдааадс саЕдсдЕсЕд асаЕсЕаЕсЕ даЕЕдЕЕдаа дааддаЕЕсЕ асаадсдЕас 4680
сЕЕддаЕаЕЕ сассдаасас ЕадддЕЕдсЕ сЕЕдсасасЕ саадЕсЕсда ЕЕсадсааЕЕ 4740
дсЕЕаадсЕд ссадсддааЕ дсЕЕЕсаЕсс Еааассаааа дЕааасадЕд ЕсЕЕааЕааа 4800
асЕЕасссдс саЕассасад аЕдЕЕссада ЕаааЕаЕЕдд аадсЕаЕаЕа сдЕасЕЕЕдЕ 4860
ЕЕсааааЕдд дЕсааЕсдад ааЕаЕсдЕса асЕдЕЕЕасЕ аааааЕсадЕ ЕЕсаЕсаадс 4920
ааЕдааасас дссааадЕаа асааЕЕЕаад ЕассдЕЕасЕ ЕаЕдадсаад ЕаЕЕдЕсЕаЕ 4980
ЕЕЕЕааЕадЕ ЕаЕсЕаЕЕаЕ ЕЕаасдддад даааЕааЕЕс ЕаЕдадЕсдс ЕЕЕЕдЕаааЕ 5040
ЕЕддааадЕЕ асасдЕЕасЕ ааадддааЕд ЕдЕЕЕ 5075
<210> 89 <211> 6662 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ83245-Р£ог-10.1-РЗ <400> 89
ааасЕссЕЕЕ ЕЕдаЕааЕсЕ саЕдассааа аЕсссЕЕаас дЕдадЕЕЕЕс дЕЕссасЕда 60
дсдЕсадасс ссдЕадаааа даЕсааадда ЕсЕЕсЕЕдад аЕссЕЕЕЕЕЕ ЕсЕдсдсдЕа 120
аЕсЕдсЕдсЕ Едсааасааа аааассассд сЕассадсдд ЕддЕЕЕдЕЕЕ дссддаЕсаа 180
дадсЕассаа сЕсЕЕЕЕЕсс дааддЕаасЕ ддсЕЕсадса дадсдсадаЕ ассаааЕасЕ 240
дЕЕсЕЕсЕад ЕдЕадссдЕа дЕЕаддссас сасЕЕсаада асЕсЕдЕадс ассдссЕаса 300
- 147 028892
ЕассЕсдсЕс ЕдсЕааЕссЕ дЕЕассадЕд дсЕдсЕдсса дЕддсдаЕаа дЕсдЕдЕсЕЕ 360
ассдддЕЕдд асЕсаадасд аЕадЕЕассд даЕааддсдс адсддЕсддд сЕдаасдддд 420
ддЕЕсдЕдса сасадсссад сЕЕддадсда асдассЕаса ссдаасЕдад аЕассЕасад 480
сдЕдадсЕаЕ дадааадсдс сасдсЕЕссс даадддадаа аддсддасад дЕаЕссддЕа 540
адсддсаддд Есддаасадд ададсдсасд адддадсЕЕс садддддааа сдссЕддЕаЕ 600
сЕЕЕаЕадЕс сЕдЕсдддЕЕ ЕсдссассЕс ЕдасЕЕдадс дЕсдаЕЕЕЕЕ дЕдаЕдсЕсд 660
Есаддддддс ддадссЕаЕд дааааасдсс адсаасдсдд ссЕЕЕЕЕасд дЕЕссЕддсс 720
ЕЕЕЕдсЕддс сЕЕЕЕдсЕса саЕдЕЕсЕЕЕ ссЕдсдЕЕаЕ ссссЕдаЕЕс ЕдЕддаЕаас 780
сдЕаЕЕассд ссЕЕЕдадЕд адсЕдаЕасс дсЕсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадЕсадЕда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЕасдса дддсссссЕд саддаЕаааа 900
аааЕЕдЕада ЕаааЕЕЕЕаЕ ааааЕадЕЕЕ ЕаЕсЕасааЕ ЕЕЕЕЕЕаЕса ддааасадсЕ 960
аЕдассдсдд ссдсааЕаЕд аЕаЕЕЕаЕдЕ ссаЕЕдЕдаа адддаЕЕаЕа ЕЕсаасЕаЕЕ 1020
аЕЕссадЕЕа сдЕЕсаЕада ааЕЕЕЕссЕЕ ЕсЕааааЕаЕ ЕЕЕаЕЕссаЕ дЕсаадаасЕ 1080
сЕдЕЕЕаЕЕЕ саЕЕааадаа сЕаЕаадЕас ааадЕаЕаад дсаЕЕЕдааа аааЕаддсЕа 1140
дЕаЕаЕЕдаЕ ЕдаЕЕаЕЕЕа ЕЕЕЕааааЕд ссЕаадЕдаа аЕаЕаЕасаЕ аЕЕаЕаасаа 1200
ЕааааЕаадЕ аЕЕадЕдЕад даЕЕЕЕЕааа ЕададЕаЕсЕ аЕЕЕЕсадаЕ ЕаааЕЕЕЕЕд 1260
аЕЕаЕЕЕдаЕ ЕЕасаЕЕаЕа ЕааЕаЕЕдад ЕааадЕаЕЕд асЕадсаааа ЕЕЕЕЕЕдаЕа 1320
сЕЕЕааЕЕЕд ЕдаааЕЕЕсЕ ЕаЕсаааадЕ ЕаЕаЕЕЕЕЕд ааЕааЕЕЕЕЕ аЕЕдаааааЕ 1380
асаасЕаааа аддаЕЕаЕад ЕаЕаадЕдЕд ЕдЕааЕЕЕЕд ЕдЕЕаааЕЕЕ ааадддадда 1440
ааЕдаасаЕд ааасаЕаЕдд ЕдассаЕдаЕ ЕасдааЕЕсд адсЕсддЕас ссддддаЕсс 1500
ЕсЕадЕЕдЕа ЕаЕЕааааЕа дЕадааЕаса ЕаадаЕасЕЕ ааЕЕЕааЕЕа аадаЕадЕЕа 1560
адЕасЕЕЕЕс ааЕдЕдсЕЕЕ ЕЕЕадаЕдЕЕ ЕааЕасаааЕ сЕЕЕааЕЕдЕ аааадаааЕд 1620
сЕдЕасЕаЕЕ ЕасЕдЕЕсЕа дЕдасдддаЕ ЕааасЕдЕаЕ ЕааЕЕаЕааа ЕааааааЕаа 1680
дЕасадЕЕдЕ ЕЕааааЕЕаЕ аЕЕЕЕдЕаЕЕ аааЕсЕааЕа дЕасдаЕдЕа адЕЕаЕЕЕЕа 1740
ЕасЕаЕЕдсЕ адЕЕЕааЕаа ааадаЕЕЕаа ЕЕаЕаЕасЕЕ дааааддада ддаасЕсдад 1800
аЕддсададЕ аЕаЕааЕадс адЕадаЕдад ЕЕсдаЕаасд аааЕаддаЕс ааЕадаааад 1860
аЕддаадсЕс аЕадаааадд аасасЕЕсаЕ ададсаЕЕса дЕаЕЕЕЕадЕ ЕЕЕЕаасЕса 1920
аадааЕсаас ЕЕЕЕаЕЕаса даааадаааЕ дЕааадаааЕ аЕсасЕсЕсс аддаЕЕаЕдд 1980
асааасасЕЕ дЕЕдЕадЕса сссаадаЕаЕ ддЕдааЕсЕс ЕЕсаЕдаЕдс ЕаЕаЕасада 2040
адаЕЕаааад аададаЕддд аЕЕЕасЕЕдс даасЕЕдаад аадЕаЕЕсЕс аЕЕсаЕаЕаЕ 2100
ааддЕаааас ЕЕдаадаЕаа ЕЕЕаЕЕЕдад ааЕдааЕаЕд ассаЕдЕаЕЕ ЕаЕЕддЕааа 2160
- 148 028892
ЁаЁдаЁддЁд адаЁааЁЁдЁ ЁааЁааадаЁ даадЁЁдаЁд аЁЁЁЁаааЁд ддЁадасаЁЁ 2220
ааЁдаадЁЁа ааааддасаЁ ааЁадааада ссЁдаддсаЁ аЁасЁЁасЁд дЁЁЁаадЁаЁ 2280
сЁЁдЁаааЁа аадсЁдаааа ЁаадаЁаЁЁЁ аааЁааассд дЁдсдссаад сЁЁЁЁааадд 2340
аддддааааа аЁддааЁЁЁа дадЁасаЁЁЁ асаддсадас аасдаасада аааЁаЁЁЁса 2400
аааЁсаааЁд ааассададс садаадсаЁс аЁаЁсЁЁаЁа ааЁсааадаа даадЁдсЁаа 2460
ЁЁаЁааасса аасаЁЁЁдда аааасдаЁЁЁ ЁсЁЁдаЁсад ЁсЁЁЁааЁаЁ сааааЁаЁда 2520
ЁддЁдаЁдаа ЁаЁадаааас ЁЁЁсадаааа дЁЁааЁадаа даадЁааада ЁаЁасаЁаЁс 2580
адсададасЁ аЁддаЁЁЁад ЁЁдсЁаааЁЁ адаасЁЁаЁа даЁЁсЁдЁЁа даааасЁЁдд 2640
асЁЁдсЁааЁ сЁЁЁЁЁдада аадаааЁааа ддаадсаЁЁа дасадЁаЁад садсааЁада 2700
аЁсадаЁааЁ ЁЁаддаасЁа дадасдаЁсЁ ЁЁаЁддааса дсЁсЁЁсаЁЁ ЁЁаадаЁЁсЁ 2760
ЁадасадсаЁ ддаЁаЁаадд ЁаадЁсаада ЁаЁаЁЁЁддЁ адаЁЁЁаЁдд аЁдадааадд 2820
аасаЁЁадаа ааЁсаЁсасЁ ЁЁдсасасЁЁ ааааддааЁд ЁЁадааЁЁаЁ ЁЁдаддсаад 2880
ЁааЁсЁЁдда ЁЁЁдааддЁд аадасаЁаЁЁ адаЁдаадсЁ ааадсаЁсЁс ЁЁасасЁЁдс 2940
ЁсЁЁададаЁ ЁсаддасаЁа ЁЁЁдЁЁаЁсс адасЁсааас ЁЁаадЁадад аЁдЁадЁЁса 3000
ЁадЁЁЁадаа ЁЁассЁадЁс аЁадаададЁ ЁсааЁддЁЁс даЁдЁааааЁ ддсадаЁЁаа 3060
ЁдсаЁасдаа ааадаЁаЁЁЁ дЁададЁааа ЁдсаасЁЁЁа ЁЁададЁЁад сааадЁЁааа 3120
ЁЁЁЁааЁдЁЁ дЁЁсаадсЁс адсЁЁсадаа дааЁсЁЁада даадсЁадЁа даЁддЁдддс 3180
ЁааЁсЁЁддЁ ЁЁсдсадаЁа аЁЁЁааадЁЁ ЁдсЁададаЁ адасЁЁдЁад адЁдЁЁЁЁЁс 3240
аЁдсдсадЁа ддЁдЁадсаЁ ЁЁдаассада дсаЁЁсаЁсЁ ЁЁЁадааЁаЁ дЁЁЁаасЁаа 3300
ддЁааЁЁааЁ сЁЁдЁЁсЁЁа ЁЁаЁадаЁда ЁдЁаЁасдаЁ аЁаЁаЁддаЁ сЁдаадаада 3360
дЁЁаааасаЁ ЁЁЁасаааЁд сЁдЁЁдаЁад аЁдддасадЁ ададааасад аасадсЁЁсс 3420
ЁдааЁдсаЁд ааааЁдЁдЁЁ ЁЁсаадЁаЁЁ аЁаЁаасасЁ асЁЁдсдааа Ёадсаадада 3480
даЁадаадаа даааасддЁЁ ддааЁсаадЁ аЁЁассЁсаа сЁЁасЁаадд ЁЁЁдддсЁда 3540
ЁЁЁЁЁдЁаад дсЁсЁЁЁЁад ЁЁдаадсада дЁддЁасааЁ аааЁсасаЁа ЁЁссаасаЁЁ 3600
адаадааЁаЁ сЁЁадааасд даЁдЁаЁаЁс аадЁадЁдЁа ЁсЁдЁасЁЁЁ ЁадЁЁсасЁс 3660
ЁЁЁсЁЁЁЁса аЁаасЁсаЁд ааддЁасааа адаааЁддсЁ даЁЁЁсЁЁас аЁаааааЁда 3720
адаЁсЁЁЁЁа ЁасаасаЁаа дЁсЁЁаЁадЁ аадаЁЁааас ааЁдаЁЁЁад дЁасаЁсадс 3780
ЁдсЁдаасад дааададдЁд аЁЁсЁссЁЁс ЁЁсЁаЁадЁЁ ЁдсЁаЁаЁда дадаадЁЁаа 3840
ЁдсЁЁсЁдаа дадасЁдсаа дааадааЁаЁ ааадддааЁд аЁЁдаЁааЁд сЁЁддааааа 3900
ддЁЁааЁдда аааЁдЁЁЁса саасЁаасса адЁЁссаЁЁЁ сЁЁЁсаЁсаЁ ЁсаЁдааЁаа 3960
ЁдсаасЁаас аЁддсаадад ЁадсасасЁс аЁЁаЁаЁааа дасддЁдаЁд дЁЁЁЁддЁда 4020
Ёсаадааааа ддассЁадаа сасаЁаЁЁсЁ ЁадЁЁЁаЁЁа ЁЁссаассЁЁ ЁадЁаааЁЁа 4080
- 149 028892
адсбадсаба аааабаадаа дссбдсаббб дсаддсббсб бабббббабд дсдсдссдсс 4140
аббабббббб бдаасааббд асааббсабб бсббаббббб баббаадбда бадбсаааад 4200
дсабаасадб дсбдаабада аадаааббба садаааадаа ааббабадаа бббадбабда 4260
ббааббабас бсабббабда абдбббаабб даабасаааа ааааабасбб дббабдбабб 4320
сааббасддд ббаааабаба дасаадббда аааабббааб ааааааабаа дбссбсадсб 4380
сббабабабб аадсбассаа сббадбабаб аадссаааас ббааабдбдс бассаасаса 4440
бсаадссдбб ададаасбсб абсбабадса абабббсааа бдбассдаса басаададаа 4500
асаббаасба бабабаббса абббабдада ббабсббаас адабабаааб дбаааббдса 4560
абаадбаада бббадаадбб бабадссббб дбдбаббдда адсадбасдс аааддсбббб 4620
ббабббдаба ааааббадаа дбабабббаб бббббсабаа ббаабббабд аааабдааад 4680
ддддбдадса аадбдасада ддааадсадб абсббабсаа абаасааддб аббадсааба 4740
бсаббаббда сбббадсадб ааасаббабд асббббабад бдсббдбадс баадбадбас 4800
даааддддда дсбббааааа дсбссббдда абасабадаа ббсабааабб аабббабдаа 4860
аадаадддсд бабабдаааа сббдбааааа ббдсааадад бббаббааад абасбдаааб 4920
абдсааааба саббсдббда бдаббсабда баааасадба дсаассбабб дсадбаааба 4980
саабдадбса адабдбббас абааадддаа адбссаабдб аббааббдбб сааадабдаа 5040
ссдабабдда бддбдбдсса бааааабдад абдббббаса даддаадаас адаааааада 5100
асдбасабдс аббааабабб абдсааддад сбббаааааа дсбсабдбаа адаададбаа 5160
ааадаааааа баабббаббб аббаабббаа баббдададб дссдасасад бабдсасбаа 5220
аааабабабс бдбддбдбад бдадссдаба сааааддаба дбсасбсдса ббббсабааб 5280
асабсббабд ббабдаббаб дбдбсддбдд дасббсасда сдаааассса саабаааааа 5340
ададббсддд дбадддббаа дсабадббда ддсаасбааа саабсаадсб аддабабдса 5400
дбадсадасс дбааддбсдб бдбббаддбд бдббдбааба сабасдсбаб баадабдбаа 5460
ааабасддаб ассаабдаад ддаааадбаб аабббббдда бдбадбббдб ббдббсабсб 5520
абдддсааас басдбссааа дссдбббсса аабсбдсбаа ааадбабабс сбббсбаааа 5580
бсааадбсаа дбабдааабс абааабааад бббааббббд аадббаббаб дабаббабдб 5640
ббббсбабба ааабааабба адбабабада абадбббааб аабадбабаб асббаабдбд 5700
абаадбдбсб дасадбдбса садаааддаб даббдббабд даббабаадс ддссддссда 5760
адсааасбба ададбдбдбб дабадбдсад бабсббаааа ббббдбабаа баддааббда 5820
адббааабба дабдсбаааа абббдбаабб аадааддадб даббасабда асааааабаб 5880
аааабаббсб саааасбббб баасдадбда аааадбасбс аассааабаа баааасаабб 5940
- 150 028892
даабббаааа дааассдаба ссдбббасда ааббддааса ддбааадддс абббаасдас 6000
дааасбддсб аааабаадба аасаддбаас дбсбаббдаа ббадасадбс абсбаббсаа 6060
сббабсдбса даааааббаа аасбдаабас бсдбдбсасб ббааббсасс аадабаббсб 6120
асадбббсаа ббсссбааса аасададдба бааааббдбб дддадбаббс сббассаббб 6180
аадсасасаа аббаббаааа аадбддбббб бдааадссаб дсдбсбдаса бсбабсбдаб 6240
бдббдаадаа ддаббсбаса адсдбассбб ддабаббсас сдаасасбад ддббдсбсбб 6300
дсасасбсаа дбсбсдаббс адсааббдсб баадсбдсса дсддаабдсб ббсабссбаа 6360
ассаааадба аасадбдбсб баабаааасб басссдссаб ассасадабд ббссадабаа 6420
абаббддаад сбабабасдб асбббдбббс аааабдддбс аабсдадааб абсдбсаасб 6480
дбббасбааа аабсадбббс абсаадсааб дааасасдсс ааадбаааса абббаадбас 6540
сдббасббаб дадсаадбаб бдбсбабббб баабадббаб сбаббаббба асдддаддаа 6600
абааббсбаб дадбсдсббб бдбааабббд дааадббаса сдббасбааа дддаабдбдб 6660
бб 6662 <210> 90 <211> 7077 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ83245-Р£ог-10.1-1зрА-РБ <400> 90 ааасбссббб ббдабаабсб сабдассааа абсссббаас дбдадббббс дббссасбда 60 дсдбсадасс ссдбадаааа дабсааадда бсббсббдад абссбббббб бсбдсдсдба 120 абсбдсбдсб бдсааасааа аааассассд сбассадсдд бддбббдббб дссддабсаа 180 дадсбассаа сбсбббббсс дааддбаасб ддсббсадса дадсдсадаб ассааабасб 240 дббсббсбад бдбадссдба дббаддссас сасббсаада асбсбдбадс ассдссбаса 300 бассбсдсбс бдсбаабссб дббассадбд дсбдсбдсса дбддсдабаа дбсдбдбсбб 360 ассдддббдд асбсаадасд абадббассд дабааддсдс адсддбсддд сбдаасдддд 420 ддббсдбдса сасадсссад сббддадсда асдассбаса ссдаасбдад абассбасад 480 сдбдадсбаб дадааадсдс сасдсббссс даадддадаа аддсддасад дбабссддба 540 адсддсаддд бсддаасадд ададсдсасд адддадсббс садддддааа сдссбддбаб 600 сбббабадбс сбдбсдддбб бсдссассбс бдасббдадс дбсдаббббб дбдабдсбсд 660 бсаддддддс ддадссбабд дааааасдсс адсаасдсдд ссбббббасд дббссбддсс 720 ббббдсбддс сббббдсбса сабдббсббб ссбдсдббаб ссссбдаббс бдбддабаас 780 сдбаббассд ссбббдадбд адсбдабасс дсбсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
- 151 028892
дадЬсадЬда дсдаддаадс ддаададсдс ссааЬасдса дддсссссЬд саддаЬаааа 900
аааЬЬдЬада ЬаааЬЬЬЬаЬ ааааЬадЬЬЬ ЬаЬсЬасааЬ ЬЬЬЬЬЬаЬса ддааасадсЬ 960
аЬдассдсдд ссдсассдад асЬадЬЬдЬа ЬаЬЬааааЬа дЬадааЬаса ЬаадаЬасЬЬ 1020
ааЬЬЬааЬЬа аадаЬадЬЬа адЬасЬЬЬЬс ааЬдЬдсЬЬЬ ЬЬЬадаЬдЬЬ ЬааЬасаааЬ 1080
сЬЬЬааЬЬдЬ аааадаааЬд сЬдЬасЬаЬЬ ЬасЬдЬЬсЬа дЬдасдддаЬ ЬааасЬдЬаЬ 1140
ЬааЬЬаЬааа ЬааааааЬаа дЬасадЬЬдЬ ЬЬааааЬЬаЬ аЬЬЬЬдЬаЬЬ аааЬсЬааЬа 1200
дЬасдаЬдЬа адЬЬаЬЬЬЬа ЬасЬаЬЬдсЬ адЬЬЬааЬаа ааадаЬЬЬаа ЬЬаЬаЬасЬЬ 1260
дааааддада ддаасЬсдад аЬддсададЬ аЬаЬааЬадс адЬадаЬдад ЬЬсдаЬаасд 1320
аааЬаддаЬс ааЬадаааад аЬддаадсЬс аЬадаааадд аасасЬЬсаЬ ададсаЬЬса 1380
дЬаЬЬЬЬадЬ ЬЬЬЬаасЬса аадааЬсаас ЬЬЬЬаЬЬаса даааадаааЬ дЬааадаааЬ 1440
аЬсасЬсЬсс аддаЬЬаЬдд асааасасЬЬ дЬЬдЬадЬса сссаадаЬаЬ ддЬдааЬсЬс 1500
ЬЬсаЬдаЬдс ЬаЬаЬасада адаЬЬаааад аададаЬддд аЬЬЬасЬЬдс даасЬЬдаад 1560
аадЬаЬЬсЬс аЬЬсаЬаЬаЬ ааддЬаааас ЬЬдаадаЬаа ЬЬЬаЬЬЬдад ааЬдааЬаЬд 1620
ассаЬдЬаЬЬ ЬаЬЬддЬааа ЬаЬдаЬддЬд адаЬааЬЬдЬ ЬааЬааадаЬ даадЬЬдаЬд 1680
аЬЬЬЬаааЬд ддЬадасаЬЬ ааЬдаадЬЬа ааааддасаЬ ааЬадааада ссЬдаддсаЬ 1740
аЬасЬЬасЬд дЬЬЬаадЬаЬ сЬЬдЬаааЬа аадсЬдаааа ЬаадаЬаЬЬЬ аааЬааассд 1800
дЬсадЬаасд ааЬадааЬЬа дааааасааа ддаддсаада сааЬддаЬЬЬ сссасаасаа 1860
ЬЬадаадсаЬ дЬдЬааааса ддсЬааЬсад дсасЬЬадЬа даЬЬЬаЬЬдс ЬссЬсЬЬссЬ 1920
ЬЬЬсааааЬа сассадЬадЬ адааасЬаЬд сааЬасддЬд сасЬЬЬЬадд ЬддЬаааада 1980
ЬЬаадассаЬ ЬсЬЬадЬаЬа ЬдсЬасадда сасаЬдЬЬЬд дЬдЬаЬсаас ЬааЬасЬЬЬа 2040
дасдсЬссад сЬдсЬдсЬдЬ ЬдааЬдЬаЬЬ саЬдсЬЬаЬЬ сЬЬЬааЬаса ЬдаЬдасЬЬа 2100
ссадсааЬдд аЬдасдаЬда ЬЬЬаадаада ддЬЬЬассЬа саЬдЬсаЬдЬ ЬаааЬЬЬддЬ 2160
даадсЬааЬд сааЬЬЬЬадс аддЬдасдсЬ ЬЬасааасЬЬ ЬадсЬЬЬЬЬс ЬаЬасЬЬЬса 2220
даЬдсадаса ЬдссЬдаадЬ ЬЬсадаЬада даЬадааЬЬЬ сЬаЬдаЬаЬс ададсЬЬдса 2280
ЬсЬдсаЬсад дааЬадсЬдд ааЬдЬдсддЬ ддЬсаадсас ЬЬдаЬЬЬада ЬдсадааддЬ 2340
ааасасдЬас сасЬЬдаЬдс ЬЬЬададада аЬасаЬадас аЬаааасадд ЬдсЬсЬЬаЬа 2400
ададсадсад ЬаадаЬЬадд ЬдсЬЬЬаадЬ дсЬддЬдаса адддЬадаад адсасЬЬсса 2460
дЬасЬЬдаЬа адЬаЬдсада аадЬаЬадда ЬЬадсЬЬЬЬс аадЬЬсаада ЬдасаЬасЬЬ 2520
дасдЬЬдЬЬд дЬдаЬасЬдс ЬасЬЬЬадда аааадасадд дЬдсадаЬса дсааЬЬадда 2580
аааЬсЬасаЬ асссЬдсЬЬЬ асЬЬддаЬЬа даасаддсЬа дааадааадс аададасЬЬа 2640
аЬадаЬдасд саадасааад ЬсЬЬааасад ЬЬадсЬдаас ааЬсасЬЬда сасаадЬдса 2700
- 152 028892
сЕЕдаадсас ЕЕдсадаЕЕа ЕаЕЕаЕасад адааасаадЕ аааадсЕЕЕЕ аааддадддд 2760
ааааааЕдда аЕЕЕададЕа саЕЕЕасадд садасаасда асадааааЕа ЕЕЕсааааЕс 2820
аааЕдааасс ададссадаа дсаЕсаЕаЕс ЕЕаЕаааЕса аадаадаадЕ дсЕааЕЕаЕа 2880
аассааасаЕ ЕЕддааааас даЕЕЕЕсЕЕд аЕсадЕсЕЕЕ ааЕаЕсаааа ЕаЕдаЕддЕд 2940
аЕдааЕаЕад аааасЕЕЕса даааадЕЕаа ЕадаадаадЕ ааадаЕаЕас аЕаЕсадсад 3000
адасЕаЕдда ЕЕЕадЕЕдсЕ аааЕЕадаас ЕЕаЕадаЕЕс ЕдЕЕадаааа сЕЕддасЕЕд 3060
сЕааЕсЕЕЕЕ Едадааадаа аЕаааддаад саЕЕадасад ЕаЕадсадса аЕадааЕсад 3120
аЕааЕЕЕадд аасЕададас даЕсЕЕЕаЕд даасадсЕсЕ ЕсаЕЕЕЕаад аЕЕсЕЕадас 3180
адсаЕддаЕа ЕааддЕаадЕ саадаЕаЕаЕ ЕЕддЕадаЕЕ ЕаЕддаЕдад аааддаасаЕ 3240
ЕадааааЕса ЕсасЕЕЕдса сасЕЕаааад дааЕдЕЕада аЕЕаЕЕЕдад дсаадЕааЕс 3300
ЕЕддаЕЕЕда аддЕдаадас аЕаЕЕадаЕд аадсЕааадс аЕсЕсЕЕаса сЕЕдсЕсЕЕа 3360
дадаЕЕсадд асаЕаЕЕЕдЕ ЕаЕссадасЕ сааасЕЕаад ЕададаЕдЕа дЕЕсаЕадЕЕ 3420
ЕадааЕЕасс ЕадЕсаЕада ададЕЕсааЕ ддЕЕсдаЕдЕ ааааЕддсад аЕЕааЕдсаЕ 3480
асдааааада ЕаЕЕЕдЕада дЕаааЕдсаа сЕЕЕаЕЕада дЕЕадсааад ЕЕаааЕЕЕЕа 3540
аЕдЕЕдЕЕса адсЕсадсЕЕ садаадааЕс ЕЕададаадс ЕадЕадаЕдд ЕдддсЕааЕс 3600
ЕЕддЕЕЕсдс адаЕааЕЕЕа аадЕЕЕдсЕа дадаЕадасЕ ЕдЕададЕдЕ ЕЕЕЕсаЕдсд 3660
садЕаддЕдЕ адсаЕЕЕдаа ссададсаЕЕ саЕсЕЕЕЕад ааЕаЕдЕЕЕа асЕааддЕаа 3720
ЕЕааЕсЕЕдЕ ЕсЕЕаЕЕаЕа даЕдаЕдЕаЕ асдаЕаЕаЕа ЕддаЕсЕдаа даададЕЕаа 3780
аасаЕЕЕЕас аааЕдсЕдЕЕ даЕадаЕддд асадЕадада аасадаасад сЕЕссЕдааЕ 3840
дсаЕдааааЕ дЕдЕЕЕЕсаа дЕаЕЕаЕаЕа асасЕасЕЕд сдаааЕадса адададаЕад 3900
аадаадаааа сддЕЕддааЕ саадЕаЕЕас сЕсаасЕЕас ЕааддЕЕЕдд дсЕдаЕЕЕЕЕ 3960
дЕааддсЕсЕ ЕЕЕадЕЕдаа дсададЕддЕ асааЕаааЕс асаЕаЕЕсса асаЕЕадаад 4020
ааЕаЕсЕЕад ааасддаЕдЕ аЕаЕсаадЕа дЕдЕаЕсЕдЕ асЕЕЕЕадЕЕ сасЕсЕЕЕсЕ 4080
ЕЕЕсааЕаас ЕсаЕдааддЕ асаааадааа ЕддсЕдаЕЕЕ сЕЕасаЕааа ааЕдаадаЕс 4140
ЕЕЕЕаЕасаа саЕаадЕсЕЕ аЕадЕаадаЕ ЕааасааЕда ЕЕЕаддЕаса ЕсадсЕдсЕд 4200
аасаддааад аддЕдаЕЕсЕ ссЕЕсЕЕсЕа ЕадЕЕЕдсЕа ЕаЕдададаа дЕЕааЕдсЕЕ 4260
сЕдаададас Едсаадааад ааЕаЕааадд дааЕдаЕЕда ЕааЕдсЕЕдд аааааддЕЕа 4320
аЕддааааЕд ЕЕЕсасаасЕ аассаадЕЕс саЕЕЕсЕЕЕс аЕсаЕЕсаЕд ааЕааЕдсаа 4380
сЕаасаЕддс аададЕадса сасЕсаЕЕаЕ аЕааадасдд ЕдаЕддЕЕЕЕ ддЕдаЕсаад 4440
аааааддасс ЕадаасасаЕ аЕЕсЕЕадЕЕ ЕаЕЕаЕЕсса ассЕЕЕадЕа ааЕЕаадсЕа 4500
дсаЕаааааЕ аадаадссЕд саЕЕЕдсадд сЕЕсЕЕаЕЕЕ ЕЕаЕддсдсд ссдссаЕЕаЕ 4560
ЕЕЕЕЕЕдаас ааЕЕдасааЕ ЕсаЕЕЕсЕЕа ЕЕЕЕЕЕаЕЕа адЕдаЕадЕс ааааддсаЕа 4620
- 153 028892
асадЕдсЕда аЕадааадаа аЕЕЕасадаа аадааааЕЕа ЕадааЕЕЕад ЕаЕдаЕЕааЕ 4680
ЕаЕасЕсаЕЕ ЕаЕдааЕдЕЕ ЕааЕЕдааЕа сааааааааа ЕасЕЕдЕЕаЕ дЕаЕЕсааЕЕ 4740
асдддЕЕааа аЕаЕадасаа дЕЕдаааааЕ ЕЕааЕааааа ааЕаадЕссЕ садсЕсЕЕаЕ 4800
аЕаЕЕаадсЕ ассаасЕЕад ЕаЕаЕаадсс аааасЕЕааа ЕдЕдсЕасса асасаЕсаад 4860
ссдЕЕадада асЕсЕаЕсЕа ЕадсааЕаЕЕ ЕсаааЕдЕас сдасаЕасаа дадааасаЕЕ 4920
аасЕаЕаЕаЕ аЕЕсааЕЕЕа ЕдадаЕЕаЕс ЕЕаасадаЕа ЕаааЕдЕааа ЕЕдсааЕаад 4980
ЕаадаЕЕЕад аадЕЕЕаЕад ссЕЕЕдЕдЕа ЕЕддаадсад Еасдсааадд сЕЕЕЕЕЕаЕЕ 5040
ЕдаЕаааааЕ ЕадаадЕаЕа ЕЕЕаЕЕЕЕЕЕ саЕааЕЕааЕ ЕЕаЕдааааЕ дааадддддЕ 5100
дадсааадЕд асададдааа дсадЕаЕсЕЕ аЕсаааЕаас ааддЕаЕЕад сааЕаЕсаЕЕ 5160
аЕЕдасЕЕЕа дсадЕаааса ЕЕаЕдасЕЕЕ ЕаЕадЕдсЕЕ дЕадсЕаадЕ адЕасдааад 5220
ддддадсЕЕЕ ааааадсЕсс ЕЕддааЕаса ЕадааЕЕсаЕ аааЕЕааЕЕЕ аЕдаааадаа 5280
дддсдЕаЕаЕ даааасЕЕдЕ аааааЕЕдса аададЕЕЕаЕ ЕааадаЕасЕ даааЕаЕдса 5340
аааЕасаЕЕс дЕЕдаЕдаЕЕ саЕдаЕаааа садЕадсаас сЕаЕЕдсадЕ аааЕасааЕд 5400
адЕсаадаЕд ЕЕЕасаЕааа дддааадЕсс ааЕдЕаЕЕаа ЕЕдЕЕсааад аЕдаассдаЕ 5460
аЕддаЕддЕд ЕдссаЕаааа аЕдадаЕдЕЕ ЕЕасададда адаасадааа ааадаасдЕа 5520
саЕдсаЕЕаа аЕаЕЕаЕдса аддадсЕЕЕа ааааадсЕса ЕдЕааадаад адЕааааада 5580
аааааЕааЕЕ ЕаЕЕЕаЕЕаа ЕЕЕааЕаЕЕд ададЕдссда сасадЕаЕдс асЕааааааЕ 5640
аЕаЕсЕдЕдд ЕдЕадЕдадс сдаЕасаааа ддаЕадЕсас ЕсдсаЕЕЕЕс аЕааЕасаЕс 5700
ЕЕаЕдЕЕаЕд аЕЕаЕдЕдЕс ддЕдддасЕЕ сасдасдааа асссасааЕа аааааададЕ 5760
ЕсддддЕадд дЕЕаадсаЕа дЕЕдаддсаа сЕааасааЕс аадсЕаддаЕ аЕдсадЕадс 5820
адассдЕаад дЕсдЕЕдЕЕЕ аддЕдЕдЕЕд ЕааЕасаЕас дсЕаЕЕаада ЕдЕаааааЕа 5880
сддаЕассаа Едаадддааа адЕаЕааЕЕЕ ЕЕддаЕдЕад ЕЕЕдЕЕЕдЕЕ саЕсЕаЕддд 5940
сааасЕасдЕ ссааадссдЕ ЕЕссаааЕсЕ дсЕааааадЕ аЕаЕссЕЕЕс ЕааааЕсааа 6000
дЕсаадЕаЕд аааЕсаЕааа ЕааадЕЕЕаа ЕЕЕЕдаадЕЕ аЕЕаЕдаЕаЕ ЕаЕдЕЕЕЕЕс 6060
ЕаЕЕааааЕа ааЕЕаадЕаЕ аЕадааЕадЕ ЕЕааЕааЕад ЕаЕаЕасЕЕа аЕдЕдаЕаад 6120
ЕдЕсЕдасад ЕдЕсасадаа аддаЕдаЕЕд ЕЕаЕддаЕЕа Еаадсддссд дссдаадсаа 6180
асЕЕаададЕ дЕдЕЕдаЕад ЕдсадЕаЕсЕ ЕааааЕЕЕЕд ЕаЕааЕадда аЕЕдаадЕЕа 6240
ааЕЕадаЕдс ЕаааааЕЕЕд ЕааЕЕаадаа ддадЕдаЕЕа саЕдаасааа ааЕаЕааааЕ 6300
аЕЕсЕсаааа сЕЕЕЕЕаасд адЕдааааад ЕасЕсаасса ааЕааЕаааа сааЕЕдааЕЕ 6360
Еаааадааас сдаЕассдЕЕ ЕасдаааЕЕд даасаддЕаа адддсаЕЕЕа асдасдааас 6420
ЕддсЕааааЕ аадЕааасад дЕаасдЕсЕа ЕЕдааЕЕада садЕсаЕсЕа ЕЕсаасЕЕаЕ 6480
- 154 028892
сдбсадаааа аббаааасбд аабасбсдбд бсасбббааб бсассаадаб аббсбасадб 6540
ббсааббссс баасааасад аддбабаааа ббдббдддад баббссббас сабббаадса 6600
сасаааббаб баааааадбд дбббббдааа дссабдсдбс бдасабсбаб сбдаббдббд 6660
аадааддабб сбасаадсдб ассббддаба ббсассдаас асбадддббд сбсббдсаса 6720
сбсаадбсбс даббсадсаа ббдсббаадс бдссадсдда абдсбббсаб ссбааассаа 6780
аадбааасад бдбсббааба ааасббассс дссабассас адабдббсса дабааабабб 6840
ддаадсбаба басдбасббб дбббсааааб дддбсаабсд адаабабсдб саасбдббба 6900
сбааааабса дбббсабсаа дсаабдааас асдссааадб ааасааббба адбассдбба 6960
сббабдадса адбаббдбсб абббббааба дббабсбабб абббаасддд аддааабааб 7020
бсбабдадбс дсббббдбаа абббддааад ббасасдбба сбааадддаа бдбдббб 7077
<210> 91 <211> 10090 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> плазмида рМТЬ 8314-Ргп£-МК-РМК-РМР-Р:Еог-10.1-1зрА-Р5 <400> 91
ааасбссббб ббдабаабсб сабдассааа абсссббаас дбдадббббс дббссасбда 60
дсдбсадасс ссдбадаааа дабсааадда бсббсббдад абссбббббб бсбдсдсдба 120
абсбдсбдсб бдсааасааа аааассассд сбассадсдд бддбббдббб дссддабсаа 180
дадсбассаа сбсбббббсс дааддбаасб ддсббсадса дадсдсадаб ассааабасб 240
дббсббсбад бдбадссдба дббаддссас сасббсаада асбсбдбадс ассдссбаса 300
бассбсдсбс бдсбаабссб дббассадбд дсбдсбдсса дбддсдабаа дбсдбдбсбб 360
ассдддббдд асбсаадасд абадббассд дабааддсдс адсддбсддд сбдаасдддд 420
ддббсдбдса сасадсссад сббддадсда асдассбаса ссдаасбдад абассбасад 480
сдбдадсбаб дадааадсдс сасдсббссс даадддадаа аддсддасад дбабссддба 540
адсддсаддд бсддаасадд ададсдсасд адддадсббс садддддааа сдссбддбаб 600
сбббабадбс сбдбсдддбб бсдссассбс бдасббдадс дбсдаббббб дбдабдсбсд 660
бсаддддддс ддадссбабд дааааасдсс адсаасдсдд ссбббббасд дббссбддсс 720
ббббдсбддс сббббдсбса сабдббсббб ссбдсдббаб ссссбдаббс бдбддабаас 780
сдбаббассд ссбббдадбд адсбдабасс дсбсдссдса дссдаасдас сдадсдсадс 840
дадбсадбда дсдаддаадс ддаададсдс ссаабасдса дддсссссбд саддабаааа 900
аааббдбада баааббббаб аааабадббб бабсбасааб ббббббабса ддааасадсб 960
абдассдсдд ссдсбаддбс бадаабабсд абасадабаа ааааабабаб аабасадаад 1020
- 155 028892
ааааааЬЬаЬ аааЬЬЬдЬдд ЬаЬааЬаЬаа адЬаЬадЬаа ЬЬЬаадЬЬЬа аассЬсдЬда 1080
ааасдсЬаас аааЬааЬадд аддЬсааЬЬд аЬдаЬадсЬд ЬЬссаЬЬЬаа сдсЬддаааа 1140
аЬаааадЬЬЬ ЬааЬЬдаддс аЬЬадааЬсЬ ддаааЬЬаЬЬ саЬсааЬааа аЬсадаЬдЬа 1200
ЬаЬдасддаа ЬдЬЬаЬаЬда ЬдсассадаЬ сассЬЬаааЬ саЬЬадЬааа садаЬЬЬдЬа 1260
даасЬЬааЬа аЬаЬаасЬда дссаЬЬадса дЬаасЬаЬас адасаааЬсЬ ЬссЬссЬЬса 1320
ададдЬсЬЬд даЬсЬадЬдс адсЬдЬЬдсЬ дЬЬдсЬЬЬЬд Ьаададсаад ЬЬаЬдаЬЬЬс 1380
ЬЬаддааааа дЬЬЬаасЬаа адаададсЬЬ аЬадаааадд сЬааЬЬдддс ЬдаасаааЬа 1440
дсЬсаЬддаа адссаЬсЬдд ааЬадаЬаса сааасааЬад ЬаЬсЬддааа дссЬдЬЬЬдд 1500
ЬЬЬсаааадд дасаЬдсада аасасЬЬааа асЬсЬЬЬсас ЬЬдаЬддаЬа саЬддЬадЬа 1560
аЬЬдаЬасад дЬдЬЬааадд аадЬасаада саддсЬдЬад аадаЬдЬЬса ЬааасЬЬЬдс 1620
даадаЬссЬс ааЬаЬаЬдад ЬсасдЬаааа сасаЬаддаа аасЬЬдЬасЬ ЬададсаЬсЬ 1680
даЬдЬЬаЬЬд аасаЬсаЬаа сЬЬЬдаадса сЬЬдсЬдаЬа ЬаЬЬсааЬда аЬдЬсаЬдсЬ 1740
даЬЬЬааадд сЬсЬЬасадЬ аадЬсаЬдас ааааЬадаас адЬЬааЬдаа даЬаддаааа 1800
дааааЬддЬд сЬаЬадсЬдд ЬаааЬЬаасЬ ддЬдсЬддЬа даддЬддЬЬс ааЬдЬЬаЬЬа 1860
сЬЬдсаааад асЬЬассаас ЬдсааадааЬ аЬадЬЬааад садЬададаа адсЬддЬдса 1920
дсасаЬасЬЬ ддаЬЬдаааа ЬЬЬаддЬддЬ ЬаадЬсдаса аадасасЬаа ааааЬЬаЬаа 1980
аадЬааадда ддасаЬЬааа ЬдаЬасаадЬ аааддсасса ддааааЬЬаЬ аЬаЬадсадд 2040
ЬдааЬасдсЬ дЬЬасадаас саддаЬаЬаа аЬсЬдЬЬсЬЬ аЬадсЬсЬЬд аЬадаЬЬЬдЬ 2100
ЬасадсЬасЬ аЬЬдаддаад сЬдаЬсааЬа саааддааса аЬасаЬЬсаа аддсаЬЬаса 2160
ЬсасааЬсса дЬаасЬЬЬЬа дЬададаЬда адаЬЬсЬаЬЬ дЬЬаЬаЬсад асссасасдс 2220
адсаааасаа сЬЬааЬЬаЬд ЬадЬаасЬдс ЬаЬадаааЬа ЬЬЬдадсааЬ аЬдсааааЬс 2280
аЬдЬдасаЬа дсааЬдаадс аЬЬЬЬсаЬЬЬ аасЬаЬадаЬ ЬсЬаасЬЬад аЬдаЬадЬаа 2340
ЬддасаЬаад ЬаЬддасЬЬд даЬсЬЬсЬдс ЬдсЬдЬЬЬЬа дЬЬЬсадЬаа ЬЬааадЬасЬ 2400
ЬаасдааЬЬЬ ЬаЬдаЬаЬда аасЬЬЬсааа ссЬЬЬаЬаЬа ЬаЬаадЬЬад садЬааЬЬдс 2460
ЬааЬаЬдааа ЬЬасададЬЬ ЬаЬсЬЬсаЬд сддЬдаЬаЬа дсадЬаадЬд ЬЬЬаЬЬсадд 2520
ЬЬддЬЬадсЬ ЬаЬЬсЬасаЬ ЬЬдассаЬда аЬдддЬаааа сассадаЬад аадаЬасаас 2580
адЬЬдаадаа дЬасЬЬаЬЬа ааааЬЬддсс ЬддаЬЬасас аЬададссас ЬЬсаадсЬсс 2640
ЬдааааЬаЬд даадЬЬсЬЬа ЬаддЬЬддас аддЬадЬсса дсЬадЬадЬс сЬсаЬЬЬЬдЬ 2700
ЬЬсЬдаадЬЬ аааадасЬЬа адЬсадаЬсс ЬЬсаЬЬЬЬас ддЬдаЬЬЬсЬ ЬадаадаЬЬс 2760
асаЬадаЬдЬ дЬадаааааЬ ЬааЬЬсаЬдс аЬЬсаааасЬ ааЬааЬаЬЬа адддЬдЬЬса 2820
дааааЬддЬа адасадааЬа даасЬаЬЬаЬ асааадааЬд даЬааддаад саасадЬЬда 2880
- 156 028892
ЬаЬададасЬ дадаадЬЬаа ааЬаЬЬЬаЬд ЬдаЬаЬЬдсЬ даааааЬаЬс аЬддЬдсаад 2940
ЬаааасЬЬса ддЬдсЬддЬд дЬддЬдаЬЬд сддааЬаасЬ аЬааЬаааЬа аддаЬдЬада 3000
сааададааа аЬаЬаЬдаЬд ааЬддасЬаа асаЬддааЬа аадссЬсЬЬа адЬЬЬааЬаЬ 3060
ЬЬаЬсаЬдда сааЬаассаЬ ддЬсааЬааЬ сЬЬасааЬаа аЬаааадааа ддаддсаааа 3120
аЬаЬдаЬааа аЬсЬддаааа дсаададсас асасЬааЬаЬ адсасЬЬаЬа аааЬаЬЬддд 3180
дЬаадааада ЬдаддсаЬЬа аЬааЬассаа ЬдааЬаасЬс ааЬаЬсадЬа асЬЬЬадааа 3240
адЬЬЬЬаЬас Ьдааасаааа дЬЬасаЬЬЬа асдаЬсадсЬ ЬасЬсаадаЬ сааЬЬЬЬддс 3300
ЬЬааЬддЬда аааадЬЬЬсЬ ддаааадааЬ ЬадаааадаЬ ЬЬсааадЬаЬ аЬддаЬаЬЬд 3360
ЬЬадаааЬад адсЬддааЬа даЬЬддЬаЬд сЬдадаЬада аЬсЬдаЬааЬ ЬЬЬдЬЬссЬа 3420
садсЬдсЬдд ЬсЬЬдсЬадЬ ЬсЬдсЬадЬд сЬЬаЬдсадс аЬЬадсЬдсЬ дсаЬдЬаасс 3480
аадсасЬЬда ЬЬЬасадЬЬа адЬдаЬааад асЬЬаадЬад аЬЬадсЬада аЬЬддаЬсад 3540
даЬсадсаЬс аадаЬсааЬа ЬасддЬддЬЬ ЬЬдсадааЬд ддааааадда ЬаЬааЬдасд 3600
ааасЬЬсЬЬа ЬдсЬдЬЬсса ЬЬадааадЬа аЬсасЬЬЬда адаЬдаЬсЬЬ дсЬаЬдаЬЬЬ 3660
ЬЬдЬадЬааЬ ааассаасаЬ ЬсЬааааадд ЬЬссЬЬсаад аЬаЬддааЬд ЬсЬсЬЬасаа 3720
даааЬасаад ЬадаЬЬсЬаЬ сааЬаЬЬддЬ ЬадассаЬаЬ ЬдаЬдаадаЬ сЬЬдсадаад 3780
саааддсадс ааЬасаадаЬ ааддаЬЬЬЬа ададаЬЬадд ЬдаадЬЬаЬЬ даададааЬд 3840
дасЬЬадааЬ дсаЬдсЬаса ааЬсЬЬддаЬ саасЬссасс ЬЬЬЬасЬЬас ЬЬадЬасаад 3900
адЬсаЬасда ЬдЬааЬддса ЬЬадЬасаЬд адЬдЬадада адсаддаЬаЬ ссаЬдсЬаЬЬ 3960
ЬсасЬаЬдда ЬдсЬддассЬ ааЬдЬааааа ЬасЬЬдЬада даадааааас ааасаасада 4020
ЬааЬадаЬаа асЬЬЬЬаасЬ садЬЬсдаЬа аЬааЬсадаЬ ааЬадаЬадЬ даЬаЬЬаЬад 4080
сЬасаддЬаЬ ЬдаааЬЬаЬа дааЬааасЬа дЬЬдЬаЬаЬЬ ааааЬадЬад ааЬасаЬаад 4140
аЬасЬЬааЬЬ ЬааЬЬааада ЬадЬЬаадЬа сЬЬЬЬсааЬд ЬдсЬЬЬЬЬЬа даЬдЬЬЬааЬ 4200
асаааЬсЬЬЬ ааЬЬдЬаааа даааЬдсЬдЬ асЬаЬЬЬасЬ дЬЬсЬадЬда сдддаЬЬааа 4260
сЬдЬаЬЬааЬ ЬаЬаааЬааа аааЬаадЬас адЬЬдЬЬЬаа ааЬЬаЬаЬЬЬ ЬдЬаЬЬаааЬ 4320
сЬааЬадЬас даЬдЬаадЬЬ аЬЬЬЬаЬасЬ аЬЬдсЬадЬЬ ЬааЬааааад аЬЬЬааЬЬаЬ 4380
аЬасЬЬдааа аддададдаа сЬсдадаЬдд сададЬаЬаЬ ааЬадсадЬа даЬдадЬЬсд 4440
аЬаасдаааЬ аддаЬсааЬа даааадаЬдд аадсЬсаЬад ааааддааса сЬЬсаЬадад 4500
саЬЬсадЬаЬ ЬЬЬадЬЬЬЬЬ аасЬсааада аЬсаасЬЬЬЬ аЬЬасадааа адаааЬдЬаа 4560
адаааЬаЬса сЬсЬссадда ЬЬаЬддасаа асасЬЬдЬЬд ЬадЬсассса адаЬаЬддЬд 4620
ааЬсЬсЬЬса ЬдаЬдсЬаЬа ЬасадаадаЬ Ьаааадаада даЬдддаЬЬЬ асЬЬдсдаас 4680
ЬЬдаадаадЬ аЬЬсЬсаЬЬс аЬаЬаЬаадд ЬаааасЬЬда адаЬааЬЬЬа ЬЬЬдадааЬд 4740
ааЬаЬдасса ЬдЬаЬЬЬаЬЬ ддЬаааЬаЬд аЬддЬдадаЬ ааЬЬдЬЬааЬ ааадаЬдаад 4800
- 157 028892
ЕЕдаЕдаЕЕЕ ЕаааЕдддЕа дасаЕЕааЕд аадЕЕааааа ддасаЕааЕа дааадассЕд 4860
аддсаЕаЕас ЕЕасЕддЕЕЕ аадЕаЕсЕЕд ЕаааЕааадс ЕдааааЕаад аЕаЕЕЕаааЕ 4920
ааассддЕса дЕаасдааЕа дааЕЕадааа аасаааддад дсаадасааЕ ддаЕЕЕссса 4980
саасааЕЕад аадсаЕдЕдЕ аааасаддсЕ ааЕсаддсас ЕЕадЕадаЕЕ ЕаЕЕдсЕссЕ 5040
сЕЕссЕЕЕЕс ааааЕасасс адЕадЕадаа асЕаЕдсааЕ асддЕдсасЕ ЕЕЕаддЕддЕ 5100
аааадаЕЕаа дассаЕЕсЕЕ адЕаЕаЕдсЕ асаддасаса ЕдЕЕЕддЕдЕ аЕсаасЕааЕ 5160
асЕЕЕадасд сЕссадсЕдс ЕдсЕдЕЕдаа ЕдЕаЕЕсаЕд сЕЕаЕЕсЕЕЕ ааЕасаЕдаЕ 5220
дасЕЕассад сааЕддаЕда сдаЕдаЕЕЕа адаададдЕЕ ЕассЕасаЕд ЕсаЕдЕЕааа 5280
ЕЕЕддЕдаад сЕааЕдсааЕ ЕЕЕадсаддЕ дасдсЕЕЕас ааасЕЕЕадс ЕЕЕЕЕсЕаЕа 5340
сЕЕЕсадаЕд садасаЕдсс ЕдаадЕЕЕса даЕададаЕа дааЕЕЕсЕаЕ даЕаЕсадад 5400
сЕЕдсаЕсЕд саЕсаддааЕ адсЕддааЕд ЕдсддЕддЕс аадсасЕЕда ЕЕЕадаЕдса 5460
дааддЕааас асдЕассасЕ ЕдаЕдсЕЕЕа дададааЕас аЕадасаЕаа аасаддЕдсЕ 5520
сЕЕаЕаадад садсадЕаад аЕЕаддЕдсЕ ЕЕаадЕдсЕд дЕдасааддд Еадаададса 5580
сЕЕссадЕас ЕЕдаЕаадЕа ЕдсадааадЕ аЕаддаЕЕад сЕЕЕЕсаадЕ ЕсаадаЕдас 5640
аЕасЕЕдасд ЕЕдЕЕддЕда ЕасЕдсЕасЕ ЕЕаддааааа дасадддЕдс адаЕсадсаа 5700
ЕЕаддааааЕ сЕасаЕассс ЕдсЕЕЕасЕЕ ддаЕЕадаас аддсЕадааа дааадсаада 5760
дасЕЕааЕад аЕдасдсаад асааадЕсЕЕ ааасадЕЕад сЕдаасааЕс асЕЕдасаса 5820
адЕдсасЕЕд аадсасЕЕдс адаЕЕаЕаЕЕ аЕасададаа асаадЕаааа дсЕЕЕЕааад 5880
даддддаааа ааЕддааЕЕЕ ададЕасаЕЕ Еасаддсада саасдаасад ааааЕаЕЕЕс 5940
ааааЕсаааЕ дааассадад ссадаадсаЕ саЕаЕсЕЕаЕ аааЕсааада адаадЕдсЕа 6000
аЕЕаЕааасс ааасаЕЕЕдд ааааасдаЕЕ ЕЕсЕЕдаЕса дЕсЕЕЕааЕа ЕсааааЕаЕд 6060
аЕддЕдаЕда аЕаЕадаааа сЕЕЕсадааа адЕЕааЕада адаадЕааад аЕаЕасаЕаЕ 6120
садсададас ЕаЕддаЕЕЕа дЕЕдсЕаааЕ ЕадаасЕЕаЕ адаЕЕсЕдЕЕ адаааасЕЕд 6180
дасЕЕдсЕаа ЕсЕЕЕЕЕдад ааадаааЕаа аддаадсаЕЕ адасадЕаЕа дсадсааЕад 6240
ааЕсадаЕаа ЕЕЕаддаасЕ ададасдаЕс ЕЕЕаЕддаас адсЕсЕЕсаЕ ЕЕЕаадаЕЕс 6300
ЕЕадасадса ЕддаЕаЕаад дЕаадЕсаад аЕаЕаЕЕЕдд ЕадаЕЕЕаЕд даЕдадааад 6360
даасаЕЕада аааЕсаЕсас ЕЕЕдсасасЕ ЕааааддааЕ дЕЕадааЕЕа ЕЕЕдаддсаа 6420
дЕааЕсЕЕдд аЕЕЕдааддЕ даадасаЕаЕ ЕадаЕдаадс ЕааадсаЕсЕ сЕЕасасЕЕд 6480
сЕсЕЕадада ЕЕсаддасаЕ аЕЕЕдЕЕаЕс садасЕсааа сЕЕаадЕада даЕдЕадЕЕс 6540
аЕадЕЕЕада аЕЕассЕадЕ саЕадаадад ЕЕсааЕддЕЕ сдаЕдЕаааа ЕддсадаЕЕа 6600
аЕдсаЕасда аааадаЕаЕЕ ЕдЕададЕаа аЕдсаасЕЕЕ аЕЕададЕЕа дсааадЕЕаа 6660
- 158 028892
аббббаабдб бдббсаадсб садсббсада адаабсббад адаадсбадб адабддбддд 6720
сбаабсббдд бббсдсадаб аабббааадб ббдсбадада бадасббдба дадбдббббб 6780
сабдсдсадб аддбдбадса бббдаассад адсаббсабс ббббадааба бдбббаасба 6840
аддбааббаа бсббдббсбб аббабадабд абдбабасда бабабабдда бсбдаадаад 6900
адббааааса ббббасаааб дсбдббдаба дабдддасад бададаааса даасадсббс 6960
сбдаабдсаб даааабдбдб бббсаадбаб бабабаасас басббдсдаа абадсаадад 7020
адабадаада адаааасддб бддаабсаад баббассбса асббасбаад дбббдддсбд 7080
абббббдбаа ддсбсбббба дббдаадсад адбддбасаа бааабсасаб аббссаасаб 7140
бадаадааба бсббадааас ддабдбабаб саадбадбдб абсбдбасбб ббадббсасб 7200
сбббсббббс аабаасбсаб дааддбасаа аадааабддс бдабббсбба сабааааабд 7260
аадабсбббб абасаасаба адбсббабад баадаббааа саабдаббба ддбасабсад 7320
сбдсбдааса ддааададдб даббсбссбб сббсбабадб ббдсбабабд ададаадбба 7380
абдсббсбда ададасбдса адааадааба бааадддааб даббдабааб дсббддаааа 7440
аддббаабдд аааабдбббс асаасбаасс аадббссабб бсбббсабса ббсабдааба 7500
абдсаасбаа сабддсаада дбадсасасб саббабабаа адасддбдаб ддббббддбд 7560
абсаадаааа аддассбада асасабаббс ббадбббабб аббссаассб ббадбааабб 7620
аадсбадсаб ааааабаада адссбдсабб бдсаддсббс ббабббббаб ддсдсдссдс 7680
саббаббббб ббдаасаабб дасааббсаб ббсббабббб ббаббаадбд абадбсаааа 7740
ддсабаасад бдсбдаабад ааадаааббб асадаааада аааббабада абббадбабд 7800
аббааббаба сбсабббабд аабдбббааб бдаабасааа аааааабасб бдббабдбаб 7860
бсааббасдд дббаааабаб адасаадббд ааааабббаа баааааааба адбссбсадс 7920
бсббабабаб баадсбасса асббадбаба баадссаааа сббааабдбд сбассаасас 7980
абсаадссдб бададаасбс бабсбабадс аабабббсаа абдбассдас абасаадада 8040
аасаббаасб абабабаббс аабббабдад аббабсббаа садабабааа бдбаааббдс 8100
аабаадбаад абббадаадб ббабадссбб бдбдбаббдд аадсадбасд саааддсббб 8160
бббабббдаб аааааббада адбабаббба ббббббсаба аббаабббаб даааабдааа 8220
дддддбдадс ааадбдасад аддааадсад бабсббабса аабаасаадд баббадсааб 8280
абсаббаббд асбббадсад бааасаббаб дасббббаба дбдсббдбад сбаадбадба 8340
сдаааддддд адсбббаааа адсбссббдд аабасабада аббсабаааб баабббабда 8400
ааадаадддс дбабабдааа асббдбаааа аббдсааада дбббаббааа дабасбдааа 8460
бабдсааааб асаббсдббд абдаббсабд абаааасадб адсаассбаб бдсадбаааб 8520
асаабдадбс аадабдббба сабаааддда аадбссаабд баббааббдб бсааадабда 8580
- 159 028892
ассдаЬаЬдд аЬддЬдЬдсс аЬаааааЬда даЬдЬЬЬЬас ададдаадаа садаааааад 8640
аасдЬасаЬд саЬЬаааЬаЬ ЬаЬдсаадда дсЬЬЬааааа адсЬсаЬдЬа аадаададЬа 8700
аааадааааа аЬааЬЬЬаЬЬ ЬаЬЬааЬЬЬа аЬаЬЬдадад Ьдссдасаса дЬаЬдсасЬа 8760
аааааЬаЬаЬ сЬдЬддЬдЬа дЬдадссдаЬ асааааддаЬ адЬсасЬсдс аЬЬЬЬсаЬаа 8820
ЬасаЬсЬЬаЬ дЬЬаЬдаЬЬа ЬдЬдЬсддЬд ддасЬЬсасд асдаааассс асааЬааааа 8880
аададЬЬсдд ддЬадддЬЬа адсаЬадЬЬд аддсаасЬаа асааЬсаадс ЬаддаЬаЬдс 8940
адЬадсадас сдЬааддЬсд ЬЬдЬЬЬаддЬ дЬдЬЬдЬааЬ асаЬасдсЬа ЬЬаадаЬдЬа 9000
ааааЬасдда ЬассааЬдаа дддаааадЬа ЬааЬЬЬЬЬдд аЬдЬадЬЬЬд ЬЬЬдЬЬсаЬс 9060
ЬаЬдддсааа сЬасдЬссаа адссдЬЬЬсс аааЬсЬдсЬа аааадЬаЬаЬ ссЬЬЬсЬааа 9120
аЬсааадЬса адЬаЬдаааЬ саЬаааЬааа дЬЬЬааЬЬЬЬ даадЬЬаЬЬа ЬдаЬаЬЬаЬд 9180
ЬЬЬЬЬсЬаЬЬ ааааЬаааЬЬ аадЬаЬаЬад ааЬадЬЬЬаа ЬааЬадЬаЬа ЬасЬЬааЬдЬ 9240
даЬаадЬдЬс ЬдасадЬдЬс асадааадда ЬдаЬЬдЬЬаЬ ддаЬЬаЬаад сддссддсса 9300
дЬдддсаадЬ ЬдаааааЬЬс асаааааЬдЬ ддЬаЬааЬаЬ сЬЬЬдЬЬсаЬ ЬададсдаЬа 9360
аасЬЬдааЬЬ Ьдададддаа сЬЬадаЬддЬ аЬЬЬдааааа аЬЬдаЬаааа аЬадЬЬддаа 9420
садаааадад ЬаЬЬЬЬдасс асЬасЬЬЬдс аадЬдЬассЬ ЬдЬассЬаса дсаЬдассдЬ 9480
ЬааадЬддаЬ аЬсасасааа Ьаааддаааа дддааЬдааа сЬаЬаЬссЬд сааЬдсЬЬЬа 9540
ЬЬаЬаЬЬдса аЬдаЬЬдЬаа ассдссаЬЬс ададЬЬЬадд асддсааЬса аЬсаадаЬдд 9600
ЬдааЬЬдддд аЬаЬаЬдаЬд адаЬдаЬасс аадсЬаЬаса аЬаЬЬЬсаса аЬдаЬасЬда 9660
аасаЬЬЬЬсс адссЬЬЬдда сЬдадЬдЬаа дЬсЬдасЬЬЬ аааЬсаЬЬЬЬ ЬадсадаЬЬа 9720
ЬдааадЬдаЬ асдсаасддЬ аЬддааасаа ЬсаЬадааЬд дааддааадс саааЬдсЬсс 9780
ддаааасаЬЬ ЬЬЬааЬдЬаЬ сЬаЬдаЬасс дЬддЬсаасс ЬЬсдаЬддсЬ ЬЬааЬсЬдаа 9840
ЬЬЬдсадааа ддаЬаЬдаЬЬ аЬЬЬдаЬЬсс ЬаЬЬЬЬЬасЬ аЬддддаааЬ аЬЬаЬааада 9900
адаЬаасааа аЬЬаЬасЬЬс сЬЬЬддсааЬ ЬсаадЬЬсаЬ сасдсадЬаЬ дЬдасддаЬЬ 9960
ЬсасаЬЬЬдс сдЬЬЬЬдЬаа асдааЬЬдса ддааЬЬдаЬа ааЬадЬЬаас ЬЬсаддЬЬЬд 10020
ЬсЬдЬаасЬа аааасаадЬа ЬЬЬаадсааа аасаЬсдЬад аааЬасддЬд ЬЬЬЬЬЬдЬЬа 10080
сссЬаадЬЬЬ 10090
<210> <211> <212> <213> 92 25 ДНК синтетическая последовательность
<220>
<223> олигонуклеотид герНР
<400> 92
- 160 028892 аадаадддсд ЕаЕаЕдаааа сЕЕдЕ 25 <210> 93 <211> 25 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид саЕК <400> 93
ЕЕсдЕЕЕаса ааасддсааа ЕдЕда 25 <210> 94 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид МК-КТРСК-Р <400> 94 дЕдсЕддЕад аддЕддЕЕса 20 <210> 95 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид МК-КТРСК-К <400> 95 ссаадЕаЕдЕ дсЕдсассад 20 <210> 96 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид РМК-КТРСК-Р <400> 96 аЕаЕсадасс сасасдсадс 20 <210> 97 <211> 24 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид РМК-КТРСК-К <400> 97 ааЕдсЕЕсаЕ ЕдсЕаЕдЕса саЕд 24
- 161 028892 <210> 98 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид РМЬ-КТРСК-Р <400> 98 дсадаадсаа аддсадсааЕ 20 <210> 99 <211> 23 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид РМЬ-КТРСК-К.
<400> 99
ЕЕдаЕссаад аЕЕЕдЕадса Едс 23 <210> 100 <211> 24 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ίάί-КТРСК-Р <400> 100 ддасааасас ЕЕдЕЕдЕадЕ сасс 24 <210> 101 <211> 22 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ίάί-КТРСК-К.
<400> 101
ЕсаадЕЕсдс аадЕаааЕсс са 22 <210> 102 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид 1зрА-КТРСК-Р <400> 102 ассадсааЕд даЕдасдаЕд 20
<210> 103
<211> 21
<212> ДНК
- 162 028892 <213>
<220>
<223>
синтетическая последовательность олигонуклеотид 1зрА-КТРСК-К <400>
<400> 103 адбббдбааа дсдбсассбд с <210> 104 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид РБ-КТРСК-Р <400> 104 аадсбадбад абддбдддсб 20 <210> 105 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид РБ-КТРСК-К <400> 105 аабдсбасас сбасбдсдса 20 <210> 106 <211> 18 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид егтВ-Р <400> 106 бббдбаабба адааддад 18 <210> 107 <211> 18 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223>
олигонуклеотид егтВ-К <400> 107 дбадаабссб бсббсаас <210> 108 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
- 163 028892 <223> олигонуклеотид ОпК-Р <400> 108
ЁсаддассЁЁ сЁддаасЁдд 20 <210> 109 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид ОпК-К <400> 109 ассЁссссЁЁ ЁЁсЁЁддада 20 <210> 110 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид РоТ4Ь-Р <400> 110 саддЁЁЁсдд ЁдсЁдассЁа 20 <210> 111 <211> 20 <212> ДНК <213> синтетическая последовательность <220>
<223> олигонуклеотид РоТ4Ь-Р <400> 111 аасЁссдссд ЁЁдЁаЁЁЁса 20
182
- 164 028892

Claims (19)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ получения терпена, включающий подведение газообразного субстрата, содержащего СО, к культуре генно-инженерных, карбоксидотрофных ацетогенных бактерий, и ферментацию газообразного субстрата культурой с получением терпена, где бактерии содержат одну или более экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую фермент мевалонатного пути, выбранный из группы, состоящей из тиолазы (ЕС 2.3.1.9), НМО-КоАсинтазы (ЕС 2.3.3.10), НМО-КоА-редуктазы (ЕС 1.1.1.88), мевалонаткиназы (ЕС 2.7.1.36), фосфомевалонаткиназы (ЕС 2.7.4.2) и мевалонатдифосфатдекарбоксилазы (ЕС 4.1.1.33);
    фермент пути дезоксиксилулозо-5-фосфата (ΌΧ8), выбранный из группы, состоящей из 1-дезоксиР-ксилулозо-5-фосфатсинтазы ΌΧδ (ЕС 2.2.1.7), 1-дезокси-О-ксилулозо-6-фосфатредуктоизомеразы ΌΧΚ (ЕС 1.1.1.267), 2-С-метил-О-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансферазы ΙδρΌ (ЕС 2.7.7.60), 4дифосфоцитидил-2-С-метил-Э-эритритолкиназы ΙδρΕ (ЕС 2.7.1.148), 2-С-метил-Э-эритритол-2,4циклодифосфатсинтазы ΙδρΡ (ЕС 4.6.1.12), 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-илдифосфатсинтазы ΙδρΟ (ЕС 1.17.7.1) и 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктазы (ЕС 1.17.1.2); или фермент пути биосинтеза терпена, выбранный из группы, состоящей из геранилтрансферазы Ρρδ (ЕС 2.5.1.10), гептапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.10), октапренилдифосфатсинтазы (ЕС 2.5.1.90), изопренсинтазы (ЕС 4.2.3.27), изопентенилдифосфатдельта-изомеразы (ЕС 5.3.3.2) и фарнезенсинтазы (ЕС 4.2.3.46/ЕС 4.2.3.47).
  2. 2. Способ по п.1, где терпен выбран из группы, состоящей из мевалоновой кислоты, изопентенилпирофосфата (ΙΡΡ), диметилаллилпирофосфата (ΌΜΑΡΡ), изопрена, геранилпирофосфата (ОРР), фарнезилпирофосфата (ΡΡΡ) и фарнезена.
  3. 3. Способ по п.2, где терпен представляет собой изопрен и бактерии содержат экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую изопренсинтазу.
  4. 4. Способ по п.3, где изопренсинтаза представляет собой изопренсинтазу Ρορυϊυδ ΙΐΌΐηιιΙοίύοδ.
  5. 5. Способ по п.2, где терпен представляет собой изопентенилпирофосфат и где бактерии содержат экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу.
  6. 6. Способ по п.5, где изопентенилдифосфат-дельта-изомераза представляет собой изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу ΟοδΙπύίιιιη Ъеуегтеки.
  7. 7. Способ по п.1, где бактерии содержат экзогенные нуклеиновые кислоты, кодирующие изопренсинтазу, изопентенилдифосфат-дельта-изомеразу и 1-дезокси-Э-ксилулозо-5-фосфатсинтазу ΌΧ8.
  8. 8. Способ по п.1, где бактерии выбраны из группы, состоящей из ΟοδΙπύίιιιη аиГоеШаподепит, ΟοδΙπύίιιιη ЦипдбаЫп, ΟοδΙπύίιιιη га^6а1ец ΟοδΙπύίιιιη сагЪохШАогащ, ΟοδΙιϊύπιιη бгакец ΟοδΙιϊύπιιη δοαΐοϊο^^δ, ΟοδΙπύίιιιη асейсит, ΟοδΙπάίιιιη Гогтюоасейсит, ΟοδΙπάίιιιη тадпит, ВШупЬасЮпит теШу1οί^ορЬ^сит, Асе1оЬас1епит теоойй, А1кайЪаси1ит Ъассйй, В1аийа ρΐΌάικΚτ ЕиЪасЮпит 1^тοδит. Мооге11а Шегтоасейса, Мооге11а ίЬе^таиΐοΐ^ορЬ^са, δρο^οтиδа оуа!а, δρο^οтиδа δ^1νасейса, δρο^οтиδа δρЬае^ο^йеδ, ОхоЪас1ег ρΑηηίβίί и ТНегтоапаегоЬас1ег кщуГ
  9. 9. Способ по п.1, где газообразный субстрат включает по меньшей мере 20% СО.
  10. 10. Способ по п.1, где газообразный субстрат дополнительно включает СО2.
  11. 11. Способ по п.1, где газообразный субстрат дополнительно включает Н2.
  12. 12. Способ по п.1, где газообразный субстрат получают из производственного процесса, выбранного из группы, состоящей из получения продуктов из сплавов на основе железа, получения продуктов на основе цветных металлов, процессов переработки нефти, газификации угля, получения электроэнергии, получения углеродной сажи, получения аммиака, получения метанола и получения кокса.
  13. 13. Способ по п.1, где газообразный субстрат представляет собой синтез-газ.
    - 165 028892
    СО/Н2 | Путь Вуда-Льюнгдаля
    Ацетил-ко А <— φ14 ψ15 ψ16
    Мевалоновая кислота + 17 + 18 ф 19 »1Тирувато θΡΕΡο < 1
    Сахар
    Ф | Гликолиз θ ОЗР
    ΙΡΡ θϋΜΑΡΡ—> Изопрен 12 11
    ОРР |8
    РР Р—>Фарнезен |9 13
    НРР I10 ОРР РЕР Фосфоенолпируват ОЗР Глицеральдегид-З-фосфат ΙΡΡ Изопентенилдифосфат □МАРР Диметилаллилпирофосфат ОРР Геранилпирофосфат РРР Фарнезилпирофосфат НРР Гептапренилпирофосфат ОРР Октапренилпирофосфат
    1 1-дезокси-О-ксилулозо-5-фосфатсинтаза ΌΧ8 (ЕС:2.2.1.7)
    2 1 -дезокси-О-ксилулозо-5-фосфатредуктоизомераза ОХР (ЕС: 1.1.1.267)
    3 2-С-метил-О-эритритол-4-фосфатцитидилилтрансфераза РрО (ЕС:2.7.7.60)
    4 4-дифосфоцитидил-2-С-метил-0-эритритолкиназа ЕрЕ (ЕС:2.7.1.148)
    5 2-С-метил-О-эритритол-2,4-циклодифосфатсинтаза 1§рР (ЕС:4.6.1.12)
    6 4-гидрокси-3-метилбут-2-ен-1-ил-дифосфатсинтаза ЕрО (ЕС: 1.17.7.1)
    7 4-гидрокси-3-метилбут-2-енилдифосфатредуктаза (ЕС: 1.17.1.2)
    8 Геранилтранстрансфераза Ρρδ (ЕС:2.5.1.10)
    9 Гептапренилдифосфатсинтаза (ЕС:2.5.1.10)
    10 Октапренилдифосфатсинтаза (ЕС:2.5.1.90)
    11 Изопренсинтаза (ЕС:4.2.3.27)
    12 Изопентенилдифосфат-дельта-изомераза (ЕС ЕС 5.3.3.2)
    13 Фарнезенсинтаза (ЕС 4.2.3.46/ ЕС 4.2.3.47)
  14. 14 Тиолаза (ЕС 2.3.1.9)
  15. 15 НМО-коА-синтаза (ЕС 2.3.3.10)
  16. 16 НМО-коА-редуктаза (ЕС 1.1.1.88)
  17. 17 Мевалонаткиназа (ЕС 2.7.1.36)
  18. 18 Фосфомевалонаткиназа (ЕС 2.7.4.2)
  19. 19 Мевалонатдифосфатдекарбоксилаза (ЕС 4.1.1.33)
EA201492206A 2012-06-01 2013-06-04 Способ получения терпенов с помощью рекомбинантных микроорганизмов EA028892B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261654412P 2012-06-01 2012-06-01
PCT/NZ2013/000095 WO2013180584A1 (en) 2012-06-01 2013-06-04 Recombinant microorganisms and uses therefor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201492206A1 EA201492206A1 (ru) 2015-09-30
EA028892B1 true EA028892B1 (ru) 2018-01-31

Family

ID=49670710

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201492206A EA028892B1 (ru) 2012-06-01 2013-06-04 Способ получения терпенов с помощью рекомбинантных микроорганизмов

Country Status (10)

Country Link
US (5) US20130323820A1 (ru)
EP (3) EP3346008B1 (ru)
JP (2) JP6643083B2 (ru)
CN (3) CN111218418A (ru)
DK (2) DK3346008T3 (ru)
EA (1) EA028892B1 (ru)
ES (2) ES2674984T3 (ru)
IN (1) IN2014DN10236A (ru)
PL (2) PL3346008T3 (ru)
WO (1) WO2013180584A1 (ru)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130323820A1 (en) * 2012-06-01 2013-12-05 Lanzatech New Zealand Limited Recombinant microorganisms and uses therefor
EP2913392B1 (en) 2012-10-23 2023-06-07 Sekisui Chemical Co., Ltd. Recombinant cell and production method for isoprene
RU2013146377A (ru) * 2013-10-17 2015-04-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОПРЕНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ РОДА Bacillus
ES2828707T3 (es) 2014-01-28 2021-05-27 Lanzatech New Zealand Ltd Método para producir un microorganismo recombinante
KR102533454B1 (ko) * 2014-01-30 2023-05-17 란자테크 엔지, 인크. 재조합 미생물 및 이들의 사용 방법
JP6325862B2 (ja) * 2014-03-25 2018-05-16 積水化学工業株式会社 組換え細胞、並びに、環式モノテルペンの生産方法
JP2016059313A (ja) * 2014-09-17 2016-04-25 積水化学工業株式会社 組換え細胞、並びに、イソプレン又は環式イソプレノイドの生産方法
HUE062028T2 (hu) 2014-10-22 2023-09-28 Lanzatech Nz Inc Többszakaszos bioreaktor-folyamatok
EP3210012B1 (en) 2014-10-22 2023-06-07 LanzaTech NZ, Inc. Gas testing unit and method
CN107002028A (zh) * 2014-12-08 2017-08-01 朗泽科技新西兰有限公司 呈现通过发酵路径的增大的通量的重组微生物
US10131884B2 (en) 2015-02-23 2018-11-20 Lanzatech New Zealand Limited Recombinant acetogenic bacterium for the conversion of methane to products
DE102015103608A1 (de) * 2015-03-11 2016-09-15 Basf Se Verfahren zur mikrobiellen de novo Synthese von Terpenen
US20190017076A1 (en) 2015-08-17 2019-01-17 Invista North America S.A.R.L. Methods, cells and reagents for production of isoprene, derivatives and intermediates thereof
US20170145441A1 (en) 2015-08-17 2017-05-25 INVISTA North America S.à.r.l. Methods, hosts, and reagents related thereto for production of unsaturated pentahydrocarbons, derivatives and intermediates thereof
KR20210037002A (ko) 2015-10-13 2021-04-05 란자테크 뉴질랜드 리미티드 에너지-생성 발효 경로를 포함하는 유전자 조작된 박테리아
EP3385378A4 (en) * 2015-11-30 2019-04-24 Sekisui Chemical Co., Ltd. RECOMBINANT CELL, PROCESS FOR PRODUCING THE RECOMBINANT CELL, AND PROCESS FOR PRODUCING AN ORGANIC COMPOUND
EA201891335A1 (ru) 2015-12-03 2018-11-30 Ланцатек Нью Зилэнд Лимитед Добавление аргинина с целью повышения эффективности ацетогенов, ферментирующих газ
US10358661B2 (en) 2015-12-28 2019-07-23 Lanzatech New Zealand Limited Microorganism with modified hydrogenase activity
EP4234707A3 (en) 2016-02-01 2024-06-05 LanzaTech NZ, Inc. Integrated fermentation and electrolysis process
CN109072245B (zh) 2016-02-26 2022-06-14 朗泽科技新西兰有限公司 用于c1固定菌的crispr/cas系统
EP3464559A4 (en) 2016-05-14 2020-02-12 Lanzatech, Inc. MODIFIED ALDEHYDE / FERREDOXIN OXYDOREDUCTASE MICROORGANISM AND RELATED METHODS
WO2018070141A1 (ja) * 2016-10-13 2018-04-19 積水化学工業株式会社 偏性嫌気性酢酸生成微生物、並びに、組換え微生物
KR102000755B1 (ko) * 2016-12-27 2019-07-17 한국과학기술원 외부 유전자가 도입된 재조합 미생물 및 상기 미생물을 이용하여 개미산과 이산화탄소로부터 유용물질을 제조하는 방법
GB201701548D0 (en) * 2017-01-31 2017-03-15 Univ Manchester Process for producing monoterpenes
WO2019006255A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Invista North America S.A.R.L. METHODS, MATERIALS, SYNTHETIC HOSTS AND REAGENTS FOR HYDROCARBON BIOSYNTHESIS AND DERIVATIVES
US11162115B2 (en) 2017-06-30 2021-11-02 Inv Nylon Chemicals Americas, Llc Methods, synthetic hosts and reagents for the biosynthesis of hydrocarbons
JP7326252B2 (ja) 2017-09-08 2023-08-15 ランザテク，インコーポレイテッド 水素に富むｃ１含有基質を使用した代謝物生成方法およびシステム
US11505809B2 (en) 2017-09-28 2022-11-22 Inv Nylon Chemicals Americas Llc Organisms and biosynthetic processes for hydrocarbon synthesis
CN109722404B (zh) * 2017-10-30 2021-03-12 中国石油化工股份有限公司 利用纤维素制备金合欢烯的工程菌株及方法
EP3720944A1 (en) 2017-12-07 2020-10-14 Zymergen Inc. Engineered biosynthetic pathways for production of (6e)-8-hydroxygeraniol by fermentation
MY196897A (en) 2017-12-19 2023-05-09 Lanzatech Inc Microorganisms and methods for the biological production of ethylene glycol
CN111868047A (zh) 2017-12-21 2020-10-30 齐默尔根公司 荆芥内半缩醛氧化还原酶、荆芥内半缩醛合酶和能够产生荆芥内酯的微生物
WO2019157507A1 (en) 2018-02-12 2019-08-15 Lanzatech, Inc. A process for improving carbon conversion efficiency
KR102122898B1 (ko) * 2018-02-26 2020-06-15 주식회사 엠디헬스케어 블라우티아 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도
EA202092427A1 (ru) 2018-04-20 2021-02-02 Ланцатек, Инк. Интермиттентные электролизные потоки
KR102549843B1 (ko) 2018-11-19 2023-06-29 란자테크, 인크. 발효와 가스화의 통합
KR20210100749A (ko) 2019-02-08 2021-08-17 란자테크, 인크. 유사한 비등점 생성물의 회수 방법
CN109666683B (zh) * 2019-02-27 2021-10-29 昆明理工大学 乙酰辅酶A乙酰转移酶基因RKAcaT2及其应用
WO2020188033A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 Global Bioenergies Improved means and methods for producing isobutene from acetyl-coa
CN109777815B (zh) * 2019-03-28 2021-10-29 昆明理工大学 HMG-CoA合成酶基因RKHMGCS及其应用
CN112955560A (zh) 2019-07-11 2021-06-11 朗泽科技有限公司 优化气体利用的方法
CN110702821B (zh) * 2019-11-26 2022-06-07 四川大学华西医院 一种慢性阻塞性肺疾病分型检测试剂盒
WO2021165229A1 (en) 2020-02-17 2021-08-26 Scientist Of Fortune S.A. Method for the incorporation of formaldehyde into biomass
BR112022024652B1 (pt) 2020-06-06 2024-01-16 Lanzatech, Inc Micro-organismo geneticamente modificado, e, método para a produção de um produto
KR20230051629A (ko) 2021-02-08 2023-04-18 란자테크, 인크. 재조합 미생물 및 이의 용도
TW202307202A (zh) 2021-08-06 2023-02-16 美商朗澤科技有限公司 用於改良乙二醇之生物產生的微生物及方法
CN117980473A (zh) 2021-09-06 2024-05-03 环球生物能源公司 产生较少巴豆酸的生物体
EP4144838A1 (en) 2021-09-06 2023-03-08 Global Bioenergies Organisms producing less crotonic acid

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008137092A2 (en) * 2007-05-01 2008-11-13 Acidophil, Llc Methods for the direct conversion of carbon dioxide into a hydrocarbon using a metabolically engineered photosynthetic microorganism
WO2009111513A1 (en) * 2008-03-03 2009-09-11 Joule Biotechnologies, Inc. Engineered co2 fixing microorganisms producing carbon-based products of interest
US20110014672A1 (en) * 2009-06-17 2011-01-20 Chotani Gopal K Isoprene production using the dxp and mva pathway
US20110236941A1 (en) * 2010-10-22 2011-09-29 Lanzatech New Zealand Limited Recombinant microorganism and methods of production thereof

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2002A (en) 1841-03-12 Tor and planter for plowing
US5173429A (en) 1990-11-09 1992-12-22 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Clostridiumm ljungdahlii, an anaerobic ethanol and acetate producing microorganism
US5593886A (en) 1992-10-30 1997-01-14 Gaddy; James L. Clostridium stain which produces acetic acid from waste gases
EP2305825B1 (en) * 1998-07-06 2015-01-14 DCV Inc. doing business as Bio-Technical Resourses Method of vitamin production
UA72220C2 (ru) 1998-09-08 2005-02-15 Байоенджініерінг Рісорсиз, Інк. Translated By PlajНЕСМЕШИВАЕМАЯ С ВОДОЙ СМЕСЬ РАСТВОРИТЕЛЬ/СОРАСТВОРИТЕЛЬ ДЛЯ ЭКСТРАГИРОВАНИЯ УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ АНАЭРОБНОГО МИКРОБНОГО БРОЖЕНИЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ (ВАРИАНТЫ), МОДИФИЦИРОВАННЫЙ РАСТВОРИТЕЛЬ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ
PT1303629E (pt) 2000-07-25 2006-10-31 Emmaus Foundation Inc Metodos para aumentar a producao de etanol a partir da fermantacao microbiana
EP1392824B1 (en) * 2001-06-06 2008-08-20 DSM IP Assets B.V. Improved isoprenoid production
US8114645B2 (en) * 2006-05-19 2012-02-14 The Regents Of The University Of California Methods for increasing isoprenoid and isoprenoid precursor production by modulating fatty acid levels
US7704723B2 (en) 2006-08-31 2010-04-27 The Board Of Regents For Oklahoma State University Isolation and characterization of novel clostridial species
EP3020799B1 (en) * 2006-09-26 2020-08-26 The Regents of The University of California Production of isoprenoids and isoprenoid precursors
US20090082495A1 (en) * 2007-09-20 2009-03-26 Rene Jean Zimmer Pneumatic Tire
MX302107B (es) * 2007-09-20 2012-08-08 Amyris Biotechnologies Inc Produccion de isoprenoides.
US8222013B2 (en) 2007-11-13 2012-07-17 Lanzatech New Zealand Limited Bacteria and methods of use thereof
CN102027124B (zh) * 2007-12-13 2015-11-25 丹尼斯科美国公司 用于生产异戊二烯的组合物和方法
US8691553B2 (en) * 2008-01-22 2014-04-08 Genomatica, Inc. Methods and organisms for utilizing synthesis gas or other gaseous carbon sources and methanol
US8481286B2 (en) * 2008-08-12 2013-07-09 Allylix, Inc. Method for production of isoprenoid compounds
EP2382312A2 (en) * 2008-12-30 2011-11-02 Danisco US Inc. Methods of producing isoprene and a co-product
US8759047B2 (en) * 2009-09-16 2014-06-24 Coskata, Inc. Process for fermentation of syngas from indirect gasification
US8143037B2 (en) 2010-03-19 2012-03-27 Coskata, Inc. Ethanologenic Clostridium species, Clostridium coskatii
US8933282B2 (en) * 2010-06-17 2015-01-13 Danisco Us Inc. Fuel compositions comprising isoprene derivatives
US8987431B2 (en) * 2010-07-01 2015-03-24 Coskata, Inc. Essential genes encoding conserved metabolic pathway function in autotrophic solventogenic clostridial species
WO2012019169A1 (en) * 2010-08-06 2012-02-09 Danisco Us Inc. Production of isoprene under neutral ph conditions
WO2012024522A2 (en) * 2010-08-19 2012-02-23 Lanzatech New Zealand Limited A process for producing chemicals using microbial fermentation of substrates comprising carbon monoxide
WO2012034023A2 (en) * 2010-09-10 2012-03-15 University Of Delaware Recombinant clostridia that fix co2 and co and uses thereof
US20110256600A1 (en) * 2011-02-02 2011-10-20 Lanzatech New Zealand Limited Recombinant Microorganisms and Methods of Use Thereof
MY168208A (en) 2011-02-25 2018-10-15 Lanzatech New Zealand Ltd Recombinant microorganisms and uses therefor
US20130273625A1 (en) * 2011-10-07 2013-10-17 Danisco Us Inc. Methods for increasing microbial production of isoprene, isoprenoids, and isoprenoid precursor molecules using glucose and acetate co-metabolism
US20130323820A1 (en) * 2012-06-01 2013-12-05 Lanzatech New Zealand Limited Recombinant microorganisms and uses therefor
WO2013181647A2 (en) * 2012-06-01 2013-12-05 Danisco Us Inc. Compositions and methods of producing isoprene and/or industrrial bio-products using anaerobic microorganisms
WO2015081331A1 (en) 2013-11-29 2015-06-04 Lanzatech New Zealand Limited Methods and systems for improving fermentation efficiency

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008137092A2 (en) * 2007-05-01 2008-11-13 Acidophil, Llc Methods for the direct conversion of carbon dioxide into a hydrocarbon using a metabolically engineered photosynthetic microorganism
WO2009111513A1 (en) * 2008-03-03 2009-09-11 Joule Biotechnologies, Inc. Engineered co2 fixing microorganisms producing carbon-based products of interest
US20110014672A1 (en) * 2009-06-17 2011-01-20 Chotani Gopal K Isoprene production using the dxp and mva pathway
US20110236941A1 (en) * 2010-10-22 2011-09-29 Lanzatech New Zealand Limited Recombinant microorganism and methods of production thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YANG, J. et al.: "Enhancing production of bio-isoprene using hybrid MVA pathway and isoprene synthase in E. coli", PLoS One, 27 April 2012, vol. 7, Issue 4, e33509 (p. 1-7). See abstract; pages 2 and 5; figures 1-2 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104822823B (zh) 2020-02-14
JP2015519065A (ja) 2015-07-09
EP3346008A1 (en) 2018-07-11
CN111218418A (zh) 2020-06-02
DK2855662T3 (en) 2018-06-25
PL2855662T3 (pl) 2018-08-31
US20210062229A1 (en) 2021-03-04
EP3795680A1 (en) 2021-03-24
CN104822823A (zh) 2015-08-05
JP2018110584A (ja) 2018-07-19
JP6636550B2 (ja) 2020-01-29
DK3346008T3 (da) 2021-01-11
IN2014DN10236A (ru) 2015-08-07
EP3346008B1 (en) 2020-10-07
US20150191747A1 (en) 2015-07-09
US20130323820A1 (en) 2013-12-05
PL3346008T3 (pl) 2021-04-19
EA201492206A1 (ru) 2015-09-30
EP2855662A4 (en) 2015-12-30
ES2674984T3 (es) 2018-07-05
JP6643083B2 (ja) 2020-02-12
CN111304260A (zh) 2020-06-19
EP2855662A1 (en) 2015-04-08
US11459589B2 (en) 2022-10-04
EP2855662B1 (en) 2018-03-21
ES2841725T3 (es) 2021-07-09
US10913958B2 (en) 2021-02-09
WO2013180584A1 (en) 2013-12-05
CN104822823B8 (zh) 2020-05-22
US20180142265A1 (en) 2018-05-24
US20230013524A1 (en) 2023-01-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028892B1 (ru) Способ получения терпенов с помощью рекомбинантных микроорганизмов
Sukovich et al. Structure, function, and insights into the biosynthesis of a head-to-head hydrocarbon in Shewanella oneidensis strain MR-1
Chubukov et al. Acute limonene toxicity in Escherichia coli is caused by limonene hydroperoxide and alleviated by a point mutation in alkyl hydroperoxidase AhpC
Ro et al. Induction of multiple pleiotropic drug resistance genes in yeast engineered to produce an increased level of anti-malarial drug precursor, artemisinic acid
Xue et al. Enhancing isoprene production by genetic modification of the 1-deoxy-d-xylulose-5-phosphate pathway in Bacillus subtilis
Case et al. Cyanobacterial chemical production
US10253335B2 (en) Method for producing beta-santalene
JP7105783B2 (ja) 組換え宿主におけるシトロネラール及びシトロネロールの生産
Yoshino et al. Alkane production by the marine cyanobacterium Synechococcus sp. NKBG15041c possessing the α-olefin biosynthesis pathway
Ducluzeau et al. Gene network reconstruction identifies the authentic trans‐prenyl diphosphate synthase that makes the solanesyl moiety of ubiquinone‐9 in Arabidopsis
Graham et al. The biosynthetic pathway for myxol-2′ fucoside (myxoxanthophyll) in the cyanobacterium Synechococcus sp. strain PCC 7002
Xue et al. Functional expression of an Arabidopsis p450 enzyme, p-coumarate-3-hydroxylase, in the cyanobacterium Synechocystis PCC 6803 for the biosynthesis of caffeic acid
US20140170731A1 (en) Methods, systems and compositions related to microbial bio-production of butanol and/or isobutanol
De Roos et al. Temporal shotgun metagenomics revealed the potential metabolic capabilities of specific microorganisms during lambic beer production
US10844405B2 (en) Enzymes and microorganisms for the production of 1,3-butadiene and other dienes
Li et al. Discovery of several novel targets that enhance β-carotene production in Saccharomyces cerevisiae
Picaud et al. Improved conditions for production of recombinant plant sesquiterpene synthases in Escherichia coli
JP2021533764A (ja) １，３−プロパンジオールおよび酪酸の生産が改善された微生物
Kwon et al. Metabolic changes of the acetogen Clostridium sp. AWRP through adaptation to acetate challenge
US20230090600A1 (en) Microbial fermentation for the production of isoprenoid alcohols and derivatives
Alshehri et al. Metabolic engineering of MEP pathway for overproduction of lycopene in Saccharomyces cerevisiae using pESC-LEU and pTEF1/Zeo vectors.
Chacón Esterification as a strategy for the detoxification of value compounds in Escherichia coli

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KG TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): BY KZ RU

NF4A Restoration of lapsed right to a eurasian patent

Designated state(s): BY KZ RU

TB4A Correction of composition of inventors in a published eurasian patent