EA027922B1 - Средства для лечения нарушений, вовлекающих модуляцию рецепторов рианодина - Google Patents

Средства для лечения нарушений, вовлекающих модуляцию рецепторов рианодина Download PDF

Info

Publication number
EA027922B1
EA027922B1 EA201401141A EA201401141A EA027922B1 EA 027922 B1 EA027922 B1 EA 027922B1 EA 201401141 A EA201401141 A EA 201401141A EA 201401141 A EA201401141 A EA 201401141A EA 027922 B1 EA027922 B1 EA 027922B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
disorders
diseases
pharmaceutical composition
muscle
Prior art date
Application number
EA201401141A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201401141A8 (ru
EA201401141A1 (ru
Inventor
Цзямин Ян
Сандро Бельведере
Яел Уэбб
Марк Бертран
Николь Вийенёв
Эндрью Р. Маркс
Жан-Луи Пеглион
Original Assignee
Ле Лаборатуар Сервье
Армго Фарма Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ле Лаборатуар Сервье, Армго Фарма Инк. filed Critical Ле Лаборатуар Сервье
Publication of EA201401141A1 publication Critical patent/EA201401141A1/ru
Publication of EA201401141A8 publication Critical patent/EA201401141A8/ru
Publication of EA027922B1 publication Critical patent/EA027922B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D281/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
    • C07D281/02—Seven-membered rings
    • C07D281/04—Seven-membered rings having the hetero atoms in positions 1 and 4
    • C07D281/08—Seven-membered rings having the hetero atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D281/10—Seven-membered rings having the hetero atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/554—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one sulfur as ring hetero atoms, e.g. clothiapine, diltiazem
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/02—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms with only carbon-to-carbon double bonds as unsaturation
    • C07C57/13—Dicarboxylic acids
    • C07C57/15—Fumaric acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D285/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D275/00 - C07D283/00
    • C07D285/36—Seven-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/841—Muscles; heart

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)

Abstract

Изобретение относится к производным 1,4-бензотиазепина формулы (I)и их применению для лечения состояний, нарушений и заболеваний, связанных с рецепторами рианодина (RyRs), которые регулируют кальциевый канал, функционирующий в клетках. В изобретении также описаны фармацевтические композиции, содержащие соединения, и их применения для лечения заболеваний и состояний, связанных с RyRs, в частности нарушений сердечной деятельности, костно-мышечных нарушений и нарушений центральной нервной системы (ЦНС).

Description

Настоящее изобретение относится к производным 1,4-бензотиазепина и их применению для лечения нарушений и заболеваний, связанных с рецепторами рианодина (КуКв), которые регулируют кальциевый канал, функционирующий в клетках. В изобретении также описаны фармацевтические композиции, содержащие эти соединения, и их применения для лечения заболеваний и состояний, связанных с КуКв, в частности нарушений сердечной деятельности, костно-мышечных нарушений и нарушений центральной нервной системы (ЦНС).
Предпосылки создания изобретения
Саркоплазматический ретикулум (8К) представляет собой структуру в клетках, которая функционирует, в частности, в качестве специализированного внутриклеточного запаса кальция (Са2'). КуКв представляют собой каналы в 8К, которые открываются и закрываются для регуляции высвобождения Са2' из 8К во внутриклеточную цитоплазму клетки. Высвобождение Са2' в цитоплазму из 8К повышает концентрацию Са2' в цитоплазме. Вероятность открытия КуКв относится к вероятности, что КуК открывается в любой данный момент и, следовательно, способен высвобождать Са2' в цитоплазму из 8К.
Существует три типа КуК, все они являются высоко гомологичными: КуК1, КуК2, и КуК3. КуК1 обнаружен главным образом в скелетных мышцах, а также в других тканях, КуК2 обнаружен главным образом в сердце, а также в других тканях, и КуК3 обнаружен в головном мозге, а также в других тканях. КуК представляет собой тетрамер. Часть КуК комплекса образована четырьмя КуК полипептидами в ассоциации с четырьмя ЕК506 связывающими белками (ЕКВРв) (калстабины), в особенности РКВР12 (калстабин1) и РКВР12,6 (калстабин2). Калстабин1 связывается с КуК1 и КуК3, тогда как калстабин2 связывается с КуК2. Калстабины связываются с КуК (одна молекула на КуК субъединицу), стабилизируют КуК функцию, способствуют сопряженному отпиранию между соседними КуКв и предотвращают анормальную активацию (Са2' утечка) канала путем стабилизации закрытого состояния канала.
Рецептор рианодина 2 и сердечные заболевания.
В поперечно-полосатых мышках сердца КуК2 является основным каналом, высвобождающим Са2', необходимым для сопряжения возбуждения-сокращения (ЕС) и сокращения мышц. При ЕС сопряжении деполяризация мембраны сердечной мышечной клетки в фазе ноль действия потенциала активирует потенциалозависимые Са2' каналы. Поступление Са2' через открытые потенциалозависимые каналы, в свою очередь, инициирует высвобождение Са2+ из 8К через КуК2. Этот процесс известен как Са2'индуцированное высвобождение Са2+. Затем КуК2-опосредованное Са2+-индуцированное высвобождение Са2' активирует сократительные белки в сердечной клетке, что приводит к сокращению сердечной мышцы.
Фосфорилирование КуК2 с помощью протеинкиназы А (РКА) является важной частью ответа бей или беги, который повышает сердечное ЕС связанное усиление путем увеличения количества Са2+, высвобождаемого для данного триггера. Этот путь передачи сигналов обеспечивает механизм, с помощью которого активация симпатической нервной системы (8Ν8) в ответ на стресс приводит к повышенному сердечному выбросу. Фосфорилирование КуК2 с помощью РКА приводит к частичной диссоциации калстабин2 из канала, которая, в свою очередь, приводит к повышенной вероятности открытия и повышенному высвобождению Са2+ из 8К во внутриклеточную цитоплазму.
Сердечная недостаточность (НЕ) характеризуется долгосрочным гиперадренергическим состоянием, при котором уровни катехоламина в сыворотке хронически повышены. Одним из последствий этого хронического гиперадренергического состояния является устойчивое РКА гиперфосфорилирование КуК2, таким образом, что 3-4 из четырех 8ет2808 в каждом гомотетрамерном КуК2 канале хронически фосфорилированы (Магх 8.0. и др. Се11, 2000;101(4):365-376). В частности, хроническое РКА гиперфосфорилирование КуК2 связано с истощением канал-стабилизирующей субъединицы калстабин2 из макромолекулярного комплекса КуК2 канала. Истощение калстабина приводит к диастолической 8К Са2' утечке из КуК комплекса, что способствует ослабленной сокращаемости (Магх и др., 2000). Вследствие активации входящих деполяризующих токов эта диастолическая 8К Са2+ утечка также связана со смертельными сердечными аритмиями (ЬеЬпап и др., I. СНп 1пуев1. 2008;118(6):2230-2245). Действительно, мыши, сконструированные с КуК2 с отсутствующим РКА сайтом фосфорилирования, защищены от НЕ прогрессии после инфаркта миокарда (М1) (ХУеЬгепв Х.Н. и др. Ргос Νηΐ1 Асаб 8с1 И8А. 2006;103(3):511518). Дополнительно, хроническое РКА гиперфосфорилирование КуК2 в НЕ связано с ремоделированием КуК2 макромолекулярного комплекса, который включает истощение фосфатаз (Магх и др., 2000) РР1 и РР2а (ослабленное дефосфорилирование 8ег2808) и сАМР-специфический тип 4 фосфодиэстераз (РЭЕ4Э3) из КуК2 комплекса. Истощение РЭЕ4Э3 из КуК2 комплекса вызывает долговременное повышение локальных уровней сАМР (ЬеЬпай 8.Е. и др., Се11 2005;123(1):25-35). Таким образом, диастолическая 8К Са2+ утечка способствует НЕ прогрессированию и аритмиям. Кроме того, в недавнем отчете было показано, что у нокин мышей КуК2-82808И'/' (аспарагиновая кислота, заменяющая серин 2808) мимическое конститутивное РКА гиперфосфорилирование КуК2, проявляет истощение калстабин2 и утечку КуК2. У мышей КуК2-82808И'/' развивается зависимая от возраста кардиомиопатия, проявляется повышенное КуК2 окисление и нитрозилирование, уменьшенное содержание 8К Са2' запасов и повышенная диастолическая 8К Са2' утечка. После инфаркта миокарда у мышей КуК2-82808И'/' проявляет- 1 027922 ся повышенная смертность по сравнению с ЮТ однопометными животными. Лечение с помощью 8107, производного 1,4-бензотиазепина, которое стабилизирует КуК2-калстабин2 взаимодействия (ЮО 2007/024717), ингибирует КуК2-опосредованную диастолическую 8К Са2' утечку и уменьшает НР прогрессирование как у мышей ЮТ, так и у мышей КуК2-82808Э+/+ (8Ьап и др., 1. СНп ΙηναΙ.. 2010 Эес 1;120(12):4375-87).
Кроме того, КуК2 содержит около 33 свободных тиольных остатков, придающих ему высокую чувствительность к окислительно-восстановительному состоянию в клетке. Окисление цистеина облегчает КуК открытие и 8К Са2+ утечку. 8Ьап и др., 2010, показали, что окисление и нитрозилирование КуК2 и диссоциация стабилизирующей субъединицы калстабин2 из КуК2 индуцирует 8К Са2+ утечку.
Катехоламинергическая полиморфная желудочковая тахикардия (СРУТ) представляет собой наследственное нарушение у особей со структурно нормальными сердцами. Более чем 50 индивидуальных КуК2 мутаций были связаны с СРУТ. У пациентов с СРУТ наблюдается обморок и внезапная сердечная смерть (8СЭ) от подросткового возраста до совершеннолетия, и к 35 годам смертность составляет вплоть до 50%. У особей с СРУТ наблюдаются желудочковые аритмии при нагрузках, но в состоянии покоя аритмии не развиваются. СРУТ-ассоциированные КуК2 мутации приводят к дающим утечку КуК2 каналам вследствие снижения связывания субъединицы калстабин2 (ЬеНпаг! и др., 2008). Мыши, гетерозиготные по К24748 мутации в КуК2 (КуК2-К24748 мыши), проявляют самопроизвольные генерализированные тонико-клонические пароксизмы (которые развиваются при отсутствии сердечных аритмий), вызванные физической нагрузкой желудочковые аритмии и 8СЭ. Лечение с помощью 8107 увеличивает связывание калстабин2 с мутантным КуК2-К24748 каналом, ингибирует утечку канала, предотвращает сердечные аритмии и повышает судорожный порог (ЬеНпаг! и др., 2008).
Рецептор рианодина 1 и заболевания скелетных мышц.
Сокращения скелетных мышц активируется 8К Са2+, высвобождаемым с помощью КуК1. Деполяризация поперечной (Т)-канальцевой мембраны активирует потенциальный датчик дигидропиридинового рецептора (Сау1.1), который, в свою очередь, активирует КуК1 каналы посредством прямого белокбелкового взаимодействия, вызывая высвобождение 8К Са2+ запасов. Са2+ связывается с тропонином С, предоставляя возможность происходить перекрестному связыванию актина-миозина и укорочению саркомера.
В условиях пролонгированного мышечного стресса (например, при беге на марафонные дистанции) или при заболевании, таком как сердечная недостаточность, которые оба характеризуются хронической активацией 8Ν8, функционирование скелетных мышц нарушается, вероятно, вследствие изменения ЕС связывания. В частности, количество Са2+, высвобождаемое из 8К при каждом сокращении мышцы, уменьшается, могут происходить явления абберантного высвобождения Са2+, и замедляется обратное поглощение Са2+ (Кшкеп 8. и др. 2003, 1. Се11 ΒίοΙ. 160:919-928). Эти наблюдения свидетельствуют о том, что вредные эффекты хронической активации 8Ν8 на скелетные мышцы могут быть обусловлены, по меньшей мере, частично дефектами в Са2+ передаче сигналов.
КуК1 макромолекулярный комплекс состоит из тетрамера 560 кДа КуК1 субъединицы, которая образует каркас для белков, которые регулируют функционирование канала, включая РКА и фосфодиэстераза 4Ό3 (РОЕ4П3), протеинфосфатаза 1 (РР1) и калстабин1. А-киназный якорный белок (тАКАР) нацеливает РКА и РЭЕ4Э3 на КуК1, в то время как синофилин нацеливает РР1 на канал (Магх и др. 2000; ВгШайек и др., Се11, 1994, 77, 513-523; ВеШпдег и др. 1. С1ш. 1пуе51. 2008, 118, 445-53). Каталитические и регуляторные субъединицы РКА, РР1, и РЭЕ4Э3 регулируют РКА-опосредованное фосфорилирование КуК1 на 8ег2843 (8ег2844 у мышей). Было показано, что РКА-опосредованное фосфорилирование КуК1 при 8ег2844 повышает чувствительность канала к цитоплазматическому Са2+, уменьшает связывающую способность калстабин1 к КуК1 и дестабилизирует закрытое состояние канала (Кшкеп и др., 2003; Магх 8.О. и др., 8с1епсе, 1998, 281:818-821). Описано, что концентрации калстабин1 в скелетных мышцах составляют приблизительно 200 нМ и что РКА фосфорилирование КуК1 уменьшает связывающую способность калстабин1 к КуК1 от приблизительно 100-200 нМ до более чем 600 нМ. Таким образом, в физиологических условиях уменьшение связывающей способности калстабин1 к КуК1, возникающее вследствие РКА фосфорилирования КуК1 на 8ег2843, достаточно для существенного уменьшения количества калстабин1, присутствующего в КуК1 комплексе. Хроническое РКА гиперфосфорилирование КуК1 На1 8ег2843 (определяемое как РКА фосфорилирование 3 или 4 из 4 РКА 8ег2843 сайтов, присутствующих в каждом КуК1 гомотетрамере) приводит к дающим утечку каналам (то есть каналы, подверженные открытию в состоянии покоя), что способствует нарушению функций скелетных мышц, которая связана с устойчивыми гиперадренергическими состояниями, такими как происходящие у особей с сердечной недостаточностью (Кшкеп и др., 2003).
Кроме того, было описано, что регуляция КуК1 посредством посттрансляционных модификаций, отличающихся от фосфорилирования, таких как нитрозилирование свободных сульфгидрильных групп на остатках цистеина (8-нитрозилирование), а также окисление канала повышает активность КуК1 канала. Было показано, что 8-нитрозилирование и окисление КуК1 каждый уменьшает связывание калстабин1 с КуК1.
Ранее ВеШпдег и др. (Ргос. Ν;·ιΐ1. Асай. 8с1. 2008, 105(6):2198-2002) было показано, что при чрезмер- 2 027922 ных нагрузках у мышей и людей КуК1 прогрессивно РКА-гиперфосфорилирован, 8-нитрозилирован и истощен ΡΌΕ4Ό3 и калстабин1, что приводит к дающим утечку каналам, которые вызывают снижение способности переносить физическую нагрузку у мышей. Лечение с помощью 8107 предотвращает истощение калстабин1 из КуК1 комплекса, улучшает создание силы и способность переносить физическую нагрузку и уменьшает активность Са2+- зависимой нейтральной протеазы кальпаин и уровни креатининкиназы в плазме.
Мышечная дистрофия Дюшенна (ΌΜΌ) представляет собой одно из основных летальных генетических заболеваний у детей. ΌΜΌ связана с X хромосомой, поражая 1 из 3,5 тыс. новорожденных особей мужского пола и типично приводит к смерти приблизительно в возрасте ~30 лет от дыхательной или сердечной недостаточности. Мутации в дистрофине, ассоциированные с ΌΜΌ, приводят к полной потере дистрофинового белка, таким образом разрушая связь между субсарколеммным цитоскелетом и внеклеточным матриксом. Эта связь является необходимой для защиты и стабилизации мышцы от повреждения, вызванного сокращением. В настоящее время отсутствует лечение ΌΜΌ, и большинство лечений является паллиативным. Перспективные интервенции в фазе Ι/ΙΙ клинических исследований представляют собой перескакивание экзонов, ингибирование миостатина и повышенную регуляцию утрофина. Тем не менее, существуют проблемы с системной доставкой, поддерживанием перескакивания экзонов и повышенной регуляцией утрофина. Дополнительно, в фазе Ι/ΙΙ клинических исследований инактивация миостатина для повышения размера мышц не проявляет улучшения относительно мышечной силы или функции. Нестабильность сарколеммы вследствие мутаций в дистрофине имеет каскадный эффект. Одним из основных эффектов является повышение цитозольной концентрации Са2'. что приводит к активации Са2+-зависимых протеаз (кальпаинов). Другим эффектом является воспаление и повышение активности ίΝΟ8, что может вызывать окисление/нитрозилирование белков, липидов и ДНК. ΌΜΌ патология мышц является прогрессирующей и значительно превышает нестабильность сарколеммы. Таким образом, патология согласуется с нестабильностью сарколеммы, повышая чувствительность к дальнейшему повреждению. Недавно было показано, что чрезмерное окисление или нитрозилирование КуК1 может разрушать взаимодействие калстабин1 с КуК1 комплексом, приводя к КуК1 утечке и мышечной слабости на мышиной модели мышечной дистрофии (тбх), и что лечение с помощью 8107 улучшает показатели функционирования мышц на этой мышиной модели (ВеШидег А. и др. 2009, №-Цигс Μеб^с^ηе, 15:325-330).
Возрастная потеря мышечной массы и силы (саркопения) способствует инвалидности и повышает смертность. Апбег88оп Ό. и др. (Се11 ΜеίаЬ. 2011 Аид 3;14(2): 196-207) описали, что КуК1 от старых (24 месяцев) мышей окислена, цистеин-нитрозилирована и истощена на калстабин1 по сравнению с КуК1 от более молодых (3-6 месяцев) взрослых особей. Ремоделирование этого комплекса КуК1 канала приводит к дающим утечку каналам с повышенной вероятностью открытия, что обуславливает внутриклеточную утечку кальция в скелетных мышцах. Лечение старых мышей с помощью 8107 стабилизирует связывание калстабин1 с КуК1, уменьшает внутриклеточную утечку кальция, снижает активные формы кислорода (КО8) и повышает тетаническое высвобождение Са2+, удельную мышечную силу и способность переносить физическую нагрузку.
В опубликованных РСТ международных патентных заявках \УО 2005/094457, \УО 2006/101496 и \УО 2007/024717 описаны производные 1,4-бензотиазепина и их применение для лечения, в частности, сердечных нарушений, нарушений скелетных мышц и когнитивных нарушений.
Опубликованная РСТ международная патентная заявка \УО 2008/060332 относится к применению производных 1,4-бензотиазепина для лечения мышечного утомления у субъектов, страдающих от таких патологий, как мышечная дистрофия, или у субъектов, страдающих от мышечного утомления в результате долговременной, длительной и/или энергичной нагрузки или хронического стресса.
Опубликованная РСТ международная патентная заявка \УО 2008/021432 относится к применению производных 1,4-бензотиазепина для лечения и/или предотвращения заболеваний, нарушений и состояний, поражающих нервную систему.
Опубликованная РСТ международная патентная заявка \УО 2012/019076 относится к применению производных 1,4-бензотиазепина для лечения и/или предотвращения кардиального ишемического/реперфузионного повреждения. Раисопшег и др., Ргос Ν;·ιΟ Асаб 8с1 И8А, 2011, 108(32): 13258-63 описали, что КуК утечка, опосредованная активацией каспазы-8, приводит к повреждению левого желудочка после миокардиальной ишемии-реперфузии, и что лечение с помощью 8107 ингибирует 8К Са2' утечку, уменьшает желудочковые аритмии, размер инфаркта и реконструкцию левого желудочка на 15 дней после реперфузии.
Опубликованная РСТ международная патентная заявка \УО 2012/019071 относится к применению производных 1,4-бензотиазепина для лечения и/или предотвращения саркопении.
Опубликованная РСТ международная патентная заявка \УО 2012/037105 относится к применению производных 1,4-бензотиазепина для лечения и/или предотвращения индуцированных стрессом нарушений и заболеваний нейронов.
Существует потребность в идентификации новых соединений, эффективных для лечения нарушений и заболеваний, связанных с КуКк, включая нарушения и заболевания скелетных мышц и нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания. Более предпочтительно существует потреб- 3 027922 ность в идентификации новых средств, которые можно использовать для лечения КуК-ассоциированных нарушений, например, путем репарации утечки в КуК каналах, и усиления связывания калстабинов с РКА-фосфорилированными/окисленными/нитрозилированными КуКз и с мутантными КуКз, которые другим способом имеют уменьшенное сродство к или не связываются с калстабинами.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает новые производные 1,4-бензотиазепина и их фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах осуществления соединения согласно настоящему изобретению представляют собой стабилизаторы рецептора рианодина (КуК) кальциевого канала, в некоторых источниках обозначаемые как Куса1з™. Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает способы применения этих соединений для лечения нарушений и заболеваний, связанных с КуКз.
Соединения согласно настоящему изобретению выбирают из производных 1,4-бензотиазепина, описанных в ШО 2007/024717. В ШО 2007/024717 раскрыты структурно сходные соединения, тем не менее, как более подробно описано в настоящей заявке, было обнаружено, что эти соединения являются очень нестабильными и, следовательно, их терапевтическая активность в качестве лекарственных средств ограничена. Таким образом, задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является обеспечение альтернативных производных 1,4-бензотиазепина, которые являются не только фармакологически активными, но также имеют благоприятные свойства, такие как высокая метаболическая стабильность, и, следовательно, они являются пригодными в качестве лекарственных средств для лечения заболеваний и состояний, связанных с КуК, например кардиальных нарушений, нарушений скелетных мышц и нарушений центральной нервной системы (ЦНС). Неожиданно было обнаружено, что соединения формулы (I) являются стабильными, а также фармакологически активными, таким образом обеспечивая техническое решение задачи, лежащей в основе настоящего изобретения.
Соединения согласно настоящему изобретению представлены структурой формулы (I)
где К представляет собой СООН; и его фармацевтически приемлемые соли.
Соединения формулы (I) могут быть представлены в форме соли с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием. Такие соли предпочтительно выбирают из группы, включающей соли натрия, калия, магния, гемифумарат, гидрохлорид и гидробромид, с каждой возможностью представляя отдельный вариант осуществления настоящего изобретения. Одна предпочтительная сейчас соль представляет собой натриевую соль. Другая предпочтительная сейчас соль представляет собой гемифумаратную соль.
В некоторых специфических вариантах осуществления соединение выбирают из группы, включающей соединения 1, 4 и 6 и их фармацевтически приемлемые соли. Структуры этих соединений представлены в настоящей заявке ниже.
В предпочтительном варианте осуществления соединение представлено структурой соединения (1)
или его фармацевтически приемлемые соли.
В некоторых вариантах осуществления соединение 1 обеспечивается в виде исходного соединения. Тем не менее, в других вариантах осуществления соединение 1 обеспечивается в форме соли с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием. Предпочтительно такую соль выбирают из группы, включающей соли натрия, калия, магния, гемифумарат, гидрохлорид и гидробромид, с каждой возможностью представляя отдельный вариант осуществления настоящего изобретения. Одна предпочтительная сейчас соль представляет собой натриевую соль. Другая предпочтительная сейчас соль представляет собой гемифумаратную соль.
Настоящее изобретение также обеспечивает способы синтеза соединений согласно изобретению и их солей.
Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции, которые содержат одно или несколько соединений согласно изобретению и по меньшей мере одно вспомогательное вещество или наполнитель, например заполнители, разбавители, связующие, агенты, вызывающие дезинтеграцию, буферные вещества, красители, эмульсификаторы, средства, улучшающие запах, гелеобразующие вещества, скользящие вещества, консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, суспендирующие агенты, подсластители, вещества, регулирующие тоничность, смачивающие вещества, эмульсификаторы, диспергирующие вещества, агенты, вызывающие набухание, ретарданты, скользящие вещества, абсорбирующие вещества, и средства, повышающие вязкость. Композиции могут быть представлены в дозиро- 4 027922 ванной форме в виде капсул, гранул, порошков, растворов, саше, суспензий, или таблеток.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает способы лечения или предотвращения различных нарушений, заболеваний и состояний, связанных с КуКк, такие как кардиальные, мышечноскелетные когнитивные, ЦНС и нейромышечные нарушения и заболевания, которые включают введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, количества соединения формулы (I) или его соли, эффективного для предотвращения или лечения нарушения или заболевания, связанного с КуК. Настоящее изобретение также обеспечивает способ предотвращения или лечения утечки в КуК (включая КуК1, КуК2 и КуК3) у субъекта, включающего введение субъекту количества соединения формулы (I) или его соли, эффективного для предотвращения или лечения утечки в КуК.
Дополнительно, настоящее изобретение обеспечивает способ модулирования связывания КуКк и калстабинов у субъекта, включающий введение субъекту количества соединения формулы (I) или его соли, эффективного для модуляции количества КуК-связанного калстабина.
Настоящее изобретение дополнительно относится к применению соединения формулы (I) для приготовления лекарственного средства для лечения и/или предотвращения нарушений, заболеваний и состояний, связанных с КуКк, таких как кардиальные, мышечно-скелетные и когнитивные нарушения и заболевания/нарушения и заболевания ЦНС. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для приготовления лекарственного средства для предотвращения или лечения утечки в КуК. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для приготовления лекарственного средства для модуляции количества КуК-связанных калстабинов.
Способы согласно изобретению могут быть практически осуществлены на системах ίη νίίτο (например, культивируемые клетки или ткани) или ίη νίνο (например, на животном, отличающемся от человека, или человеке).
В некоторых вариантах осуществления соединения согласно изобретению обеспечиваются в комбинации с терапией перескакивания экзона, например антисмысловыми олигонуклеотидами (АО§), таким образом, чтобы усилить перескакивание экзона в мРНК, представляющей интерес, например, ΌΜΌ ген, как в дальнейшем описано в настоящей заявке. Другие характерные особенности и преимущества настоящего изобретения будут понятны со следующих подробных описаний и фигур.
Краткое описание фигур
Фиг. 1А - иммуноблот с антителом к калстабин2, показывающий связывание калстабин2 с РКАфосфорилированным КуК2 при отсутствии (-) или в присутствии 100 нМ соединения 1. (+): калстабин связывается с не-РКА фосфорилированным КуК2. §36 (и§ 7544678), использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 1В - иммуноблот с антителом к калстабин2, показывающий связывание калстабин2 с РКАфосфорилированным КуК2 при отсутствии (-) или в присутствии 100 нМ соединений 2, 3 или 4. (+): калстабин связывается с не-РКА фосфорилированным КуК2. §36 использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 1С - иммуноблот с антителом к калстабин1, показывающий связывание калстабин1 с РКАфосфорилированным КуК1 при отсутствии (отриц) или в присутствии указанных концентраций соединения 1 или 4. (Полож): калстабин связывается с не-РКА фосфорилированным КуК1. §36 использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 2 - фиг 2А - иммуноблот с антителом к калстабин1, который показывает уровни калстабин1 в иммуноосажденных КуК1 комплексах из лизатов большеберцовой кости у мышей, которым вводили носитель (50:50 ДМСО/РЕС), только изопротеренол Ц§О) или изопротеренол совместно с указанными концентрациями соединения 1 в осмотических насосах. §36 использовали в качестве контроля при 3,6 мМ. Фиг. 2В - определение количества % калстабин1, который повторно связывается с КуК1.
Фиг. 3 - модель хронической сердечной недостаточности у крыс, индуцируемая ишемическиреперфузионным (НК) повреждением. Для ЕК протокола переднюю нисходящую ветвь (ЬАО) левой коронарной артерии окклюзировали в течение 1 ч.
Фиг. 4 - объемы левого желудочка (ЬУ) и фракции выброса (ЕР) у крыс, леченных с помощью соединения 1 в дозе 5 мг/кг/д (5МК) или 10 мг/кг/д (10МК) в питьевой воде отн. леченных с помощью наполнителя (Н2О) и ложнооперированных животных. Хроническую сердечную недостаточность индуцировали путем ишемически-реперфузионного Ц/К) повреждения. ЬАО артерию окклюзировали в течение 1 ч; лечение начинали через 1 неделю после реперфузии и продолжали в течение 3 месяцев. Эхокардиографические параметры получали через 1, 2 или 3 месяца после лечения. Фиг. 4А - ЬУ конечный диастолический объем; фиг. 4В - ЬУ конечный систолический объем; фиг. 4С - ЕР. Фиг. 4 А и 4В - § Р<0,001 отн. ложн; *Р<0,05 отн. наполнителя; 1Р<0,001 отн. наполнителя. Фиг. 4С - § Р<0,001 отн. ложн, !р<0,001 отн. наполнителя.
Фиг. 5 На фиг. 5А-С представлены вес тела (В^) (5А), размер инфаркта (5В) и вес ЬУ (5С), и на фиг. 5Ό представлено содержание коллагена у крыс, леченных с помощью соединения 1 в дозе 5 мг/кг/д (5МК) и 10 мг/кг/д (10МК) в питьевой воде отн. леченных с помощью наполнителя(Н2О) и ложноопери- 5 027922 рованных животных. Хроническую сердечную недостаточность индуцировали путем ишемическиреперфузионного (Ι/К) повреждения. ΓΑΙ) артерию окклюзировали в течение 1 ч; лечение начинали через 1 неделю после реперфузии и продолжали в течение 3 месяцев. Параметры измеряли через 3 месяца после лечения. Фиг. 5А-С - не достоверны. Фиг. 5Ό - ТТ’(’р<0,001 отн. ложн; *Р<0,05 отн. наполнителя.
Фиг. 6 - инвазивные гемодинамики: систолическое давление в левом желудочке (ЬУ 8Р) (6А), ύΡ/Фтах (6В); и 6Р/Фтт (6С) у крыс, леченных с помощью соединения 1 в дозе 5 мг/кг/д (5МК) или 10 мг/кг/д (10МК) в питьевой воде отн. леченных с помощью наполнителя (Н2О) и ложнооперированных животных. Хроническую сердечную недостаточность индуцировали путем ишемическиреперфузионного (Ι/К) повреждения. ΓΑΙ) артерию окклюзировали в течение 1 ч; лечение начинали через 1 неделю после реперфузии и продолжали в течение 3 месяцев. Гемодинамические параметры измеряли через 3 месяца после лечения. Фиг. 6А - не достоверны. Фиг. 6В - § Р<0,05 отн. ложн; *Р<0,05 отн. наполнителя. Фиг. 6С - 1*Р<0,01 отн. ложн; *Р<0,05 отн. наполнителя.
Фиг. 7 - концентрации соединения 1 в плазме (мкМ) отн. времени суток.
Фиг. 8 - Г у крыс, леченных с помощью соединения 1 или соединения А в дозе 5 мг/кг/д (5МК) в питьевой воде отн. леченных с помощью наполнителя (Н2О) и ложнооперированных животных. ΓΑΓ) артерию окклюзировали в течение 1 ч; лечение начинали через 1 неделю после реперфузии и продолжали в течение 3 месяцев. Эхокардиографические параметры получали через 1, 2 или 3 месяца после лечения. § Р<0,001 отн. ложн; *Р<0,05 отн. наполнителя;' Р<0,001 отн. наполнителя.
Фиг. 9 - влияние соединения 1 на самопроизвольную физическую активность тдх и УТ мышей по сравнению с контролем, леченных с помощью наполнителя (Н2О). Р<0,001 для активности в дни 1-19 у мышей тдх, которым вводили дозу 10 и 50 мг/кг/сутки (целевая доза) в питьевой воде, по сравнению с контрольным наполнителем.
Фиг. 10- специфическое соотношение сила-частота ΕΌΤ мышцы. (А) тдх мыши, леченные с помощью соединения 1 (5, 10 и 50 мг/кг/д (целевая доза)), которое вводили в питьевой воде, по сравнению с контролем, леченным с помощью наполнителя (Н2О) (п=5). р<0,05 для дозы 50 мг/кг/д при частотах 150 Гц и выше. (В) УТ, С57ВЬ/6, мыши, леченные с помощью соединения 1 (50 мг/кг/д (целевая доза), которое вводили в питьевой воде, по сравнению с контролями, леченными с помощью наполнителя (Н2О) (п=4).
Фиг. 11 - средний вес тела (12А) и среднее потребление воды (12В) для тдх и УТ мышей, леченных с помощью наполнителя (Н2О) или соединения 1 (50 мг/кг/д (целевая доза), которое вводили в питьевой воде.
Подробное описание изобретения
Подразумевается, что подробное описание и специфические примеры, в то время как раскрывают различные варианты осуществления изобретения, представлены только с целью иллюстрации, при этом различные изменения и модификации в пределах сущности и объема изобретения станут очевидными для специалистов в данной области техники из этого подробного описания.
Как используется в настоящей заявке и приложенных пунктах формулы изобретения, формы единственного числа включают также формы множественного числа, если из контекста очевидно не следует иначе. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящей заявке, полностью включены в качестве ссылки.
Термин Куеа1з™ относится к стабилизаторам кальциевого канала рецептора рианодина, представленным соединениями общей формулы (I) или (ΙΑ), как обеспечивается изобретением, а также специфическими соединениями, обозначенными цифровыми номерами, как обеспечивается изобретением, и в настоящей заявке собирательно обозначается как соединение(я) согласно изобретению.
Соединения.
В некоторых вариантах осуществления соединения согласно настоящему изобретению представлены структурой формулы (ΙΑ)
(ΙΑ) где К представляет собой СООН или его биоизостер, СООК1 или СХ; и
К1 представляет собой С1-С4 алкил; и его фармацевтически приемлемые соли.
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления К в формуле (ΙΑ) представляет собой карбоновую кислоту (СООН). В других предпочтительных вариантах осуществления К в формуле (ΙΑ) представляет собой биоизостер карбоновой кислоты, например тетразол. Альтернативно, биоизостер карбоновой кислоты может представлять собой кислый гетероцикл, такой как 1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-он, 1,2,4-тиадиазол-5(4Н)-он, 1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-тион, 1,3,4-оксадиазол-2(3Н)-тион, 4-метил- 1Н-1,2,4- 6 027922 триазол-5(4Н)-тион, 5-фтороротовую кислоту и другие. Дополнительные биоизостеры карбоновых кислот описаны, например, в Натаба Υ. и др., Бюогд. Меб. СНет. ЬеН. 2006; 16:4354-4359; Негг КЛ. и др., Бюогд. Меб. СНет. 2002; 10: 3379-3393; О1езеп Р.Н., Сигг. Θρΐη. Эгид Όΐδοον. ЭеуеН 2001; 4: 471; Ра1ат С.А. и др., К СНет. Κ^ν. 1996; 96:3147; К1тига Т. и др. Бюогд. Меб. СНет. Бей. 2006; 16: 2380-2386 и КоНага Υ. и др. Бюогд. Меб. СНет. Бей. 1995; 5(17): 1903-1908. Содержание каждой из вышеуказанных ссылок включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В одном предпочтительно варианте осуществления соединение согласно настоящему изобретению представлено структурой формулы (1А), где К представляет собой СООН и его фармацевтически приемлемые соли (то есть соединение формулы (I)).
В других предпочтительных вариантах осуществления К в формуле (1А) находится в положении 4 фенильного кольца (то есть положении 7 бензотиазепинового кольца). Каждая возможность представляет собой отдельный вариант осуществления настоящего изобретения. Соединения формулы (1А) или (I) могут быть представлены в форме соли с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием. Такие соли предпочтительно выбирают из группы, включающей натрия, калия, магния, гемифумарат, гидрохлорид и гидробромид соли, с каждой возможностью представляя отдельный вариант осуществления настоящего изобретения. Одна предпочтительная сейчас соль представляет собой натриевую соль. Другая предпочтительная сейчас соль представляет собой гемифумаратную соль.
В некоторых специфических вариантах осуществления, соединение выбирают из группы, включающей соединения 1 -12 и их фармацевтически приемлемые соли. Эти соединения представлены следующими структурами он (1) о
(2)
О (3) он (4)
- 7 027922
- 8 027922
Химические определения.
Термин алкил, как используется в настоящей заявке, относится к линейному или разветвленному насыщенному углеводороду, который имеет от 1 до 4 атомов углерода (С1-С4 алкил). Типичные алкильные группы включают, но не ограничиваясь только ими, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил и трет-бутил. Алкильная группа может быть незамещена или замещена одной или несколькими группами, выбранными из галогена, галоалкила, гидрокси, алкокси, галоалкокси, циклоалкила, арила, гетероциклила, гетероарила, амидо, алкиламидо, диалкиламидо, нитро, амино, циано, N3, оксо, алкиламино, диалкиламино, карбоксила, тио, тиоалкила и тиоарила.
Соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в их таутомерной форме. Все такие таутомерные формы рассматриваются в данной заявке как часть настоящего изобретения.
Все стереоизомеры соединений согласно настоящему изобретению (например, те, которые могут существовать благодаря ассиметричным углеродам на различных заместителях), включая энантиомерные формы и диастереомерные формы, также охватываются объемом настоящего изобретения. Индивидуальные стереоизомеры соединения согласно изобретению, например, могут быть, по существу, свободными от других изомеров (например, в виде чистого или, по существу, чистого оптического изомера, имеющего удельную активность), или могут быть смешаны, например, в виде рацематов или в виде смесей, обогащенных одним стереоизомером. Хиральные центры согласно настоящему изобретению могут иметь 8- или К-конфигурацию, как определено Рекомендациями ИЮПАК (ГОРАС) 1974. Рацемические формы могут быть разделены физическими методами, такими как, например фракционированная кристаллизация, разделение или кристаллизация производных диастереомеров или разделение с помощью хиральной колоночной хроматографии. Индивидуальные оптические изомеры могут быть получены из рацематов с помощью любого подходящего метода, включая, без ограничений, общепринятые методы, такие как, например, образование соли с оптически активной кислотой или основанием, с последующей кристаллизацией.
Соединения согласно настоящему изобретению после их получения предпочтительно выделяют и очищают, получая композицию, содержащую количество по весу, равное или большее чем приблизительно 90% соединения, приблизительно 95% соединения и даже более предпочтительно больше чем приблизительно 99% соединения (по существу, чистое соединение), которое затем используют или приготавливают в виде фармацевтического препарата, как описано в настоящей заявке. Такие по существу,чистые соединения согласно настоящему изобретению также рассматриваются в данной заявке как часть настоящего изобретения.
Терапевтическое применение.
Настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые способны лечить состояния, нарушения и заболевания, связанные с КуГО. Более предпочтительно настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые способны фиксировать утечку в КуК каналах, которые могут представлять собой КуК1, КуК2 и/или КуК3 каналы. В одном варианте осуществления соединения согласно изобретению усиливают ассоциацию и/или ингибируют диссоциацию КуК и калстабина (например, КуК1 и калстабин1; КуК2 и калстабин2; и КуК3 и калстабин1). Состояния, нарушения и заболевания, связанные с КуКк, обозначают нарушения и заболевания, которые можно лечить и/или предотвращать путем модуляции КуК и включают, без ограничений, нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания, мышечное утомление, нарушения и заболевания опорно-двигательного аппарата, нарушения и заболевания ЦНС, когнитивную дисфункцию, нейромышечные заболевания и нарушения, улучшение когнитивной функции, нарушения и заболевания костной системы, раковую кахексию, злокачественную гипертермию, диабет, внезапную сердечную смерть и синдром внезапной детской смерти.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или предотвращения состояния, выбранного из группы, включающей нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания, мышечное утомление, нарушения и заболевания опорнодвигательного аппарата, нарушения и заболевания ЦНС, когнитивную дисфункцию, нейромышечные заболевания и нарушения, нарушения и заболевания костной системы, раковую кахексию, злокачественную гипертермию, диабет, внезапную сердечную смерть и синдром внезапной детской смерти, или для улучшения когнитивной функции, способ включает стадию введения субъекту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или (1А), как описано в данной заявке, или его соли для осуществления такого лечения. Данное предпочтительное соединение представляет собой соединение формулы (1).
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению эффективного количества соединения формулы (I) или (1А), как описано в данной заявке, или его соли для приготовления лекарственного средства для предотвращения или лечения состояния, выбранного из группы, включающей нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания, мышечное утомление, скелетно-мышечные нарушения и заболевания, нарушения и заболевания ЦНС, нейромышечные заболевания и нарушения, когнитивную дисфункцию, нарушения и заболевания костной системы, раковую кахексию, злокачественную гипертермию, диабет, внезапную сердечную смерть и синдром внезапной детской смерти, или для улучшения когнитивной функции. Данное предпочтительное соединение представ- 9 027922 ляет собой соединение формулы (1).
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или (1А), как описано в данной заявке, или его соли для применения для приготовления лекарственного средства для предотвращения или лечения состояния, выбранного из группы, включающей нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания, мышечное утомление, скелетно-мышечные нарушения и заболевания, нарушения и заболевания ЦНС, когнитивную дисфункцию, нейромышечные заболевания и нарушения, нарушения и заболевания костной системы, раковую кахексию, злокачественную гипертермию, диабет, внезапную сердечную смерть, и синдром внезапной детской смерти, или для улучшения когнитивной функции. Данное предпочтительное соединение представляет собой соединение формулы (1).
В одном варианте осуществления состояние, нарушение или заболевание связано с аномальной функцией КуК1. В другом варианте осуществления состояние, нарушение или заболевание связано с аномальной функцией КуК2. В другом варианте осуществления состояние, нарушение или заболевание связано с аномальной функцией КуК3. Каждая возможность представляет собой отдельный вариант осуществления настоящего изобретения.
Нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания включают, но не ограничиваясь только ими, нарушения и заболевания, связанные с аритмией сердца, вызванные физической нагрузкой нарушения и заболевания, связанные с аритмией сердца, сердечную недостаточность, застойную сердечную недостаточность, хроническую сердечную недостаточность, острую сердечную недостаточность, систолическую сердечную недостаточность, диастолическую сердечную недостаточность, острую декомпенсированную сердечную недостаточность, сердечную ишемию/реперфузионное повреждение (Ι/К) (включая Ι/К повреждение после коронарной ангиопластики или после тромболизиса при инфаркте миокарда (ΜΙ)), хроническое обструктивное заболевание легких и повышенное кровяное давление. Нарушения и заболевания, связанные с аритмией сердца, включают, но не ограничиваясь только ими, предсердную и желудочковую аритмию, предсердную и желудочковую фибрилляцию, предсердную и желудочковую тахиаритмию, предсердную и желудочковую тахикардию, катехоламинергическую полиморфную желудочковую тахикардию (СРУТ) и вызванные физической нагрузкой их варианты.
Соединения согласно изобретению также пригодны для лечения мышечного утомления, которое может быть обусловлено пролонгированной нагрузкой или нагрузкой высокой интенсивности, или может быть вызвано мышечно-скелетными заболеваниями. Примеры мышечных нарушений и заболеваний включают, но не ограничиваясь только ими, утомление скелетных мышц, поражение сердцевины мышечных волокон, вызванное физической нагрузкой утомление скелетных мышц, нарушения мочевого пузыря, недержание, возрастное мышечное утомление, саркопению, врожденные миопатии, миопатии и/или атрофии скелетных мышц, раковую кахексию, миопатию с сердцевинами и палочками, митохондриальные миопатии [например, синдром Кеати8-8ауте, синдром МЕЬА8 (митохондриальную миопатию, энцефалопатию, лактацидоз, и удар), и синдром МЕККР (миоклоническая эпилепсия с разорванными красными волокнами)], эндокринные миопатии, болезни накопления гликогена в мышцах [например, болезнь Ротре, болезнь Аийеткеи, и болезнь Соп|. миоглобинурии [например, болезнь МсАтй1е, болезнь Татш, и болезнь О|Маиго|, дерматомиозиты, оссифицирующий миозит, семейный периодический паралич, полимиозит, миозит с тельцами включения, нейромиотонию, синдром мышечной скованности, злокачественную гипертермию, обыкновенные мышечные судороги, тетанию, миастению гравис, спинальную мышечную атрофию (8МА), спинальную и бульбарную мышечную атрофию (8ВМА, также известную как спинобульбарную мышечную атрофия, бульбоспинальную атрофию, Х-связанную бульбоспинальную невропатию (ΧΒ8Ν), Х-связанную спинальную мышечную атрофию 1 типа (8МАХ1), и болезнь Кеииейк (КО)) и мышечную дистрофию. Предпочтительные скелетно-мышечные нарушения включают, но не ограничиваясь только ими, вызванное физической нагрузкой утомление скелетных мышц, врожденную миопатию, мышечную дистрофию, старческое мышечное утомление, саркопению, поражение сердцевины мышечных волокон, раковую кахексию, нарушения мочевого пузыря и недержание.
Примеры мышечной дистрофии включают, но не ограничиваясь только ими, мышечную дистрофию Дюшенна (ОМО), мышечную дистрофию Беккера (ВМО), тазо-плечевую мышечную дистрофию (ЬСМО), врожденную мышечную дистрофию (СМО), дистальную мышечную дистрофию, плечелопаточно-лицевую мышечную дистрофию, миотоническую мышечную дистрофию, мышечную дистрофию Эмери-Дрейфуса и окулофарингеальную мышечную дистрофию, где особенно предпочтительной является ОМО.
Врожденная мышечная дистрофия, как используется в настоящей заявке, относится к мышечной дистрофии, которая является перинатальной. СМО классифицируется на основании генетических мутаций: 1) гены, кодирующие структурные белки базальной мембраны или внеклеточного матрикса волокон скелетных мышц; 2) гены, кодирующие предполагаемые или доказанные гликозилтрансферазы, которые, в свою очередь, оказывают влияние на гликозилирование дистрогликана, наружного мембранного белка базальной мембраны; и 3) другие. Примеры СМО включают, но не ограничиваясь только ими ламинина2-дефицитная СмО (МОС1А), и11г1сП сМс (ИСМОк 1, 2 и 3), синдром 4а1кег-4агЬигд (448), заболевание мышцы-глаза-головной мозг (МЕВ), Рикиуата СМО (РСМО), СМО плюс вторичная недостаточ- 10 027922 ность ламинина 1 (МОС1В), СМО плюс вторичная недостаточность ламинина 2 (МОС1С), СМО с умственной отсталостью и пахигирией (МЭС1Э) и ригидный позвоночник с мышечной дистрофией 1 типа (К8МБ1).
Когнитивная дисфункция может быть связана или включать, но не ограничиваясь только ими, потерю памяти, связанную с возрастом потерю памяти, посттравматическое стрессовое расстройство (ΡΤδΌ), синдром дефицита внимания с гиперактивностью (ΛΌΗΌ), расстройства аутистического спектра (ΆδΌ), генерализированное тревожное расстройство (САО), обсессивно-компульсивное расстройство (ОСО), шизофрению, биполярное расстройство или большую депрессию.
Нарушения и заболевания ЦНС включают, но не ограничиваясь только ими, болезнь Альцгеймера (АО), невропатию, пароксизмы, болезнь Паркинсона (ΡΌ) и болезнь Хантингтона (ΗΌ).
Нейромышечные нарушения и заболевания включают, но не ограничиваясь только ими, спинальноцеребеллярную атаксию (8СА), и боковой амиотрофический склероз (АЬ§, болезнь Лу Герига).
В некоторых вариантах осуществления соединения согласно настоящему изобретению улучшают когнитивную функцию, которая может быть выбрана из кратковременной памяти, долговременной памяти, внимания, обучения, и любой их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления соединения согласно настоящему изобретению пригодны для лечения раковой кахексии, то есть мышечная слабость, которая связана со злокачественным новообразованием в целом, и предпочтительно мышечная слабость при метастатическом злокачественном новообразовании, таком как метастазы в костях. Мышечная слабость и мышечная атрофия (кахексия) являются распространенными паранеопластическими симптомами у пациентов со злокачественными новообразованиями. Эти состояния вызывают существенное утомление и значительное снижение качества жизни пациентов. Настоящее изобретение обеспечивает способ лечения и предотвращения мышечной слабости у пациента со злокачественным новообразованием, основанном, в частности, на открытии того, что при определенных типах злокачественных новообразований, например при раке предстательной железы и молочной железы с метастазами в костях, КуК1 окисляется, что вызывает его утечку. Дополнительно было обнаружено, что предотвращение утечки путем введения Куса1 соединений улучшает мышечную функцию. Примеры злокачественных новообразований включают, но не ограничиваясь только ими, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак костей, рак поджелудочной железы, рак легкого, рак ободочной кишки и рак желудочно-кишечного тракта.
Терапия перескакиванием экзона.
В некоторых вариантах осуществления соединения согласно настоящему изобретению модулируют (например, усиливают) мРНК сплайсинг путем усиления антисмыслового опосредованного перескакивания экзона. Эта модуляция сплайсинга осуществляется в присутствии антисмысловых олигонуклеотидов (АОк), которые являются специфическими для сплайсинговых последовательностей, представляющих интерес. В некоторых вариантах осуществления согласно изобретени, соединение формулы (I) или (1А) и АО могут действовать синергетически, соединение формулы (I) или (1А) усиливает АО опосредованное перескакивание экзона. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для применения для лечения или предотвращения любого из состояний, описанных в настоящей заявке, которые связаны с дающими утечку КуК, дополнительно включающие применение антисмыслового АО, который специфический для сплайсинговой последовательности в мРНК последовательности, для усиливающего экзона, пропущенного в мРНК, представляющей интерес.
Один предпочтительный вариант осуществления изобретения для усиления перескакивания экзона с помощью соединений согласно настоящему изобретению касается мышечной дистрофии Дюшенна (ОМО). ЭМЭ представляет собой летальное Х-связанное рецессивное заболевание, которое характеризуется прогрессирующей мышечной слабостью в течение периода жизни пациента. ЭМЭ главным образом вызывается выходящими из рамки мультиэкзоннными делециями в ЭМЭ гене, которые отсекают продукцию белка дистрофина. Потеря экспрессии дистрофина отдельно не раскрывает патофизиологию ЭМЭ. Разрушение комплекса дистрофин-гликопротеин (ЭСС) также приводит к окислительному стрессу, перегрузке митохондриального Са2' и апоптозу, повышению протока Са2' в мышцы и паталогической Са2' передаче сигналов. Отсутствует эффективное лечение для ЭМЭ. и фармакологическое лечение было продемонстрировано только для кортикостероидов, которые могут пролонгировать способность передвигаться, но имеют существенные побочные действия. Опосредованное антисмысловым олигонуклеотидом перескакивание экзона является перспективным терапевтическим подходом, нацеленным на восстановление ЭМЭ рамки считывания и предоставляющим возможность экспрессии интактного комплекса дистрофина с гликопротеином. До настоящего времени с помощью этого метода были получены низкие уровни белка дистрофина у людей. Кепйа11 и др. (§с1 Тгаиз1 Мей, 2012, 4(164), р. 164га160) описали, что определенные низкомолекулярные структуры, такие как Дантролен и другие КуК модуляторы, потенциируют опосредованное антисмысловым олигомеров перескакивание экзона для повышения перескакивания экзона для восстановления мРНК рамки считывания, сарколеммного белка дистрофина и комплекса дистрофина с гликопротеном в скелетных мышцах тйх мышей, мышиная модель ЭМЭ.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лече- 11 027922 ния ΌΜΌ путем введения субъекту, который в этом нуждается, соединения формулы (I) или (ΙΑ) в соответствии с настоящим изобретением, в комбинации с антисмысловым олигонуклеотидом (АО), который специфический для сплайсинговой последовательности одного или нескольких экзонов ΌΜΌ гена, например экзон 23, 45, 44, 50, 51, 52 и/или 53 ΌΜΌ гена. Предпочтительные ΑΟδ включают, но не ограничиваясь только ими, ΑΟδ нацеливающий ΌΜΌ экзон 23, 50 и/или 51 ΌΜΌ гена, такой как 2'-О-метил (2'ОМе) фосфоротиоат или фосфородиамидат морфолино (РМО) ΑΟδ. Примеры таких ΑΟδ включают, но не ограничиваясь только ими, Рто051/О8К2402968, ЛУ14658/Е1срП1ЬСп. и РМО Е23 морфолино (5'ΟΟΟΟΑΑΑΟΟΤΟΟΟΟΤΤΑΟΟΤΟΑΑΑΤ-3').
Термин эффективное количество, достаточное количество или терапевтически эффективное количество средства, как используется в настоящей заявке, взаимозаменяемо, представляет собой количество, которого достаточно для осуществления благоприятных или желательных результатов, включая клинические результаты и, как таковые, эффективное количество или его варианты зависят от контекста, в котором они применяется. Ответ в некоторых вариантах осуществления является профилактическим, в других - терапевтическим и в других их комбинацией. Термин эффективное количество также включает количество соединения согласно изобретению, которое является терапевтически эффективным и которое исключает или существенно ослабляет нежелательные побочные эффекты.
Как используется в настоящей заявке и очевидно для специалиста в данной области техники лечение представляет собой подход для получения благоприятных или желательных результатов, включая клинические результаты. Благоприятные или желательные клинические результаты могут включать, но не ограничиваясь только ими, ослабление или уменьшение одного или нескольких симптомов или состояний, снижение степени заболевания, стабилизации (то есть отсутствие ухудшения) стадии заболевания, предотвращение распространения заболевания, замедления или снижения прогрессирования заболевания, улучшение или облегчение степени заболевания и ремиссия (либо частичная, либо общая) либо обнаруживаемая или необнаруживаемая. Лечение также может обозначать пролонгирование выживания по сравнению с ожидаемым выживанием у субъектов, не получавших лечения.
Фармацевтические композиции.
Соединения согласно изобретению приготавливаются в виде фармацевтических композиций для введения людям в биологически совместимой форме, подходящей для введения ίη νίνο. В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, которая содержит соединения согласно изобретению в смеси с фармацевтически приемлемым разбавителем и/или носителем. Фармацевтически приемлемый носитель предпочтительно является приемлемым в смысле совместимости с другими компонентами композиции и не опасным для его реципиента.
Соединение можно вводить отдельно, но предпочтительно его вводят с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. Фармацевтически приемлемый носитель, используемый в настоящей заявке, может быть выбран из различных органических или неорганических материалов, которые используются в качестве материалов для фармацевтических препаратов и которые инкорпорированы в качестве любого одного или нескольких из следующих: заполнители, разбавители, связующие, агенты, вызывающие дезинтеграцию, буферные вещества, красители, эмульсификаторы, средства, улучшающие запах, гелеобразующие вещества, скользящие вещества, консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, суспендирующие агенты, подсластители, вещества, регулирующие тоничность, смачивающие вещества, эмульсификаторы, диспергирующие вещества, агенты, вызывающие набухание, ретарданты, скользящие вещества, абсорбирующие вещества и средства, повышающие вязкость.
Соединения согласно настоящему изобретению вводят человеку или животному с помощью известных процедур, включая, без ограничений, пероральное, сублингвальное, буккальное, парентеральное (внутривенное, внутримышечное или подкожное), трансдермальное, чрес- или транскожное, интраназальное, интравагинальное, ректальное, глазное и респираторное (путем ингаляционного введения). Соединения согласно изобретению также могут вводиться субъекту путем доставки в мышцы субъекта, включая, но не ограничиваясь только ими, сердечные или скелетные мышцы субъекта. В одном варианте осуществления соединение вводят субъекту путем целевой доставки в мышечные клетки сердца с помощью катетера, вставленного в сердце субъекта. В других вариантах осуществления соединения могут вводиться непосредственно в ЦНС, например, путем эндолюмбальной инъекции или внутрижелудочковой инъекции соединений непосредственно в цереброспинальную жидкость (С8Р) или путем внутрижелудочкового, интратекального или интерстициального введения. Особенно предпочтительным является пероральное введение.
Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением для твердого перорального введения включают в особенности таблетки или драже, подъязычные таблетки, саше, капсулы, включая желатиновые капсулы, порошки, и гранулы, и композиции для жидкого перорального, назального, буккального или глазного введения включают, в особенности эмульсии, растворы, суспензии, капли, сиропы и аэрозоли. Соединения также можно вводить в виде суспензии или раствора с помощью питьевой воды или с пищей. Примеры приемлемых фармацевтических носителей включают, но не ограничиваясь только ими, производные целлюлозы, включая карбоксиметил целлюлозу, метилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, этилцеллюлозу и микрокристаллическую целлюлозу; сахара, та- 12 027922 кие как, в частности маннит, сахароза или лактоза; глицерин, гуммиарабик, стеарат магния, натрия стеарил фумарат, солевой раствор, альгинат натрия, крахмал, тальк и воду.
Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением для парентеральных инъекций включают в особенности стерильные растворы, которые могут быть водными или неводными, дисперсии, суспензии или эмульсии, а также стерильные порошки для восстановления инъекционных растворов или дисперсий. Соединения согласно изобретению можно комбинировать со стерильным водным раствором, который является изотоническим с кровью субъекта. Такой препарат приготавливают путем растворения твердого активного компонента в воде, содержащей физиологически совместимые вещества, такие как хлорид натрия, глицин и другие, и имеющей забуференное рН, совместимое с физиологическими условиями, таким образом, что получают водный раствор, и после этого указанному раствору придают стерильность. Препарат представлен в единичных или многодозовых контейнерах, таких как запечатанные ампулы или флаконы. Препарат доставляется с помощью любого способа инъекции, включая, без ограничений, эпифасциальный, внутрикасульный, внутричерепной, внутрикожный, интратекальный, внутримышечный, внутриорбитальный, внутрибрюшинный, интраспинальный, интрастернальный, внутрисосудистый, внутривенный, паренхиматозный, подкожный или подъязычный или с помощью катетера в сердце субъекта.
Фармацевтические композиции для ректального или вагинального введения предпочтительно представляют собой суппозитории, и композиции для черес- или транскожного введения включают в особенности порошки, аэрозоли, кремы, мази, гели и пластыри.
Для трансдермального введения соединения согласно изобретению комбинируют с усилителями проникновения через кожу, такими как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, изопропанол, этанол, олеиновая кислота, Ν-метилпирролидон и другими, которые повышают проницаемость кожи для соединений согласно изобретению и позволяют соединениям проникать через кожу и в кровоток. Композиции соединение/усилитель можно дополнительно комбинировать с полимерным веществом, таким как этилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, этилен/винилацетат, поливинилпирролидон и другими, обеспечивая композиции в форме геля, которую растворяют в растворителе, упаривают до желательной вязкости и затем наносят на материал-подложку, обеспечивая пластырь.
Фармацевтические препараты согласно настоящему изобретению приготавливают с помощью методов, хорошо известных в области фармацевтики, включая, но не ограничиваясь только ими, методы влажной и сухой грануляции, или путем прямого прессования. Выбор носителя определяется растворимостью и химической природой соединений, выбранным путем введения и стандартной фармацевтической практикой.
Фармацевтические композиции, упомянутые выше, иллюстрируют изобретение, но никоим образом его не ограничивают.
В соответствии со способами согласно настоящему изобретению любые из этих соединений могут вводиться субъекту (или контактировать с клетками субъекта) в количестве, эффективном для ограничения или предотвращения снижения уровня КуК-связанного калстабина у субъекта, предпочтительно в клетках субъекта. Это количество легко может быть определено квалифицированным специалистом в данной области техники на основе известных процедур, включая анализы титрационных кривых, полученные ίη νίνο, и способы и анализы, описанные в настоящей заявке. Подходящее количество соединений согласно изобретению эффективно для ограничения или предотвращения снижения уровня КуКсвязанного калстабина у субъекта в диапазоне от приблизительно 0,01 мг/кг/сутки до приблизительно 100 мг/кг/сутки (например, 1, 2, 5, 10, 20, 25, 50 или 100 мг/кг/сутки), и/или представляет собой количество, достаточное для достижения уровней в плазме в диапазоне от приблизительно 300 нг/мл до приблизительно 5,000 нг/мл. Альтернативно, количество соединений согласно изобретению находится в диапазоне от приблизительно 1 мг/кг/сутки до приблизительно 50 мг/кг/сутки. Альтернативно, количество соединений согласно изобретению находится в диапазоне от приблизительно 10 мг/кг/сутки до приблизительно 20 мг/кг/сутки. Также охватываются количества от приблизительно 0,01 или 0,05 мг/кг/сутки до приблизительно 5 мг/кг/сутки или приблизительно 10 мг/кг/сутки, которые можно вводить.
Способы синтеза.
Настоящее изобретение обеспечивает в дальнейшем аспекте способы получения соединения согласно изобретению и его соли. Более предпочтительно настоящее изобретение обеспечивает способы получения соединений формулы (I) или (ΙΑ), например соединений 1 - 12 или их солей. Различные пути синтеза соединений описаны в примерах. Общий путь синтеза (КО8) представлен на схеме 1 ниже.
- 13 027922
Схема 1
На схеме 1 Ка представляет собой СООК1 или ΟΝ; К1 представляет собой С1-С4 алкил, и Ь представляет собой уходящую группу, которая представляет собой, например, галоген, сульфонат (О8О2К' где К' представляет собой алкил или арил, например, ОМ§ (мезилат), ОТ§ (тозилат)) и другие. Аминовое исходное вещество подвергают реакции с алкилирующим агентом (производным бензила, представленным выше), предпочтительно в присутствии основания, получая желательный продукт или его предшественник (К=Ка). Если это является желательным, то предшественник в дальнейшем можно подвергать реакции для превращения группы Ка в группу К, как подтверждено примерами в экспериментальном разделе в данной заявке ниже, или с помощью любого другого метода, известного специалисту в данной области техники. Например, сложноэфирный предшественник (Ка =СООК1 где К1 представляет собой С1-С4 алкил), можно превращать в соответствующую карбоновую кислоту (К = СООН) путем гидролиза в кислых или щелочных условиях в соответствии с известными способами. Альтернативно, нитрильный предшественник (Ка СМ можно превращать в тетразол (изостер карбоновой кислоты) путем реакции с азидом натрия в подходящих условиях, или в карбоновую кислоту (К=СООН) путем гидролиза.
Аминовое исходное вещество может быть получено в соответствии с методами, описанными в \\О 2009/111463 или \\О 2007/024717, или с помощью любого другого метода, известного специалисту в данной области техники. Содержание всех вышеуказанных документов включено в настоящую заявку в качестве ссылки. Природа основания особо не ограничена. Предпочтительные основания включают, но не ограничиваясь только ими, гидриды (например, гидрид натрия или калия) и Ν,Νдиизопропилэтиламин. Другие подходящие основания Ьа§е§ включают, но не ограничиваясь только ими, органическое основание, такое как третичный амин, выбранный из группы, включающей ациклические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диметилфениламин диизопропилэтиламин и трибутиламин), циклические амины (например, Ν-метилморфолин) и ароматические амины (диметиланилин, диметиламинопиридин и пиридин).
Реакция может быть осуществлена в присутствии или отсутствие растворителя. Природа растворителя, если он используется, особо не ограничена, примеры включают растворители, такие как сложный эфир (например, этилацетат), простой эфир (например, ТГФ), хлорированный растворитель (например, дихлорметан или хлороформ), диметилформамид (ДМФА) и другие растворители, такие как ацетонитрил, или толуол, или смеси этих растворителей друг с другом или с водой.
Соли соединений формулы (I), где К-СООН, могут быть приготовлены путем взаимодействия исходной молекулы с подходящим основанием, например №ОН или КОН, получая соответствующие соли щелочных металлов, например соли натрия или калия. Альтернативно, сложные эфиры (К=СООК1) могут быть непосредственно превращены в соли путем реакций с подходящими основаниями.
Соли соединений формулы (I) также могут быть приготовлены путем реакции исходной молекулы с подходящей кислотой, например НС1, фумаровая кислота или паратолуолсульфоновая кислота, получая соответствующие соли, например гидрохлорид, тозилат или гемифумарат.
Примеры
Следующие примеры представлены в качестве иллюстрации некоторых предпочтительных вариантов осуществления изобретения.
Пример 1. Синтез.
Приборы.
ЯМР: Вгикег ΑVΑNСΕ III 400 или Уапаи Мегсигу 300
ЖХ/МС: \а!ег§ СеМ 600, оборудованный автоматическим пробоотборником 717Р1и§, детектором с фотодиодной матрицей 2996 и масс-детектором 3100, или Μίηκκί/ιι 210
Общая процедура алкилирования 7-метокси-2,3,4,5-тетрагидробензо[к][1,4]тиазепина (Амин).
Амин (структура, представленная выше) (1 ммоль) растворяли в 3 мл дихлорметана. К раствору добавляли алкилирующий реагент (1 ммоль), после этого добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,34 мл, 2
- 14 027922 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Раствор загружали на колонку сразу и элюировали с гексаном/ЕЮЛе (2:1, об./об.).
Метил 3-((7-метокси-2,3-дигидробензо[1][1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензоат.
1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): 7,96 (т, 2Н), 7,46 (т, 3Н), 6,70 (άά, 1=8,4 Гц, 3,0 Гц, 1Н), 6,50 (ά, >2,7
Гц, 1Н), 4,09 (§, 2Н), 3,90 (8, 3Н), 3,72 (8, 3Н), 3,57 (8, 2Н), 3,35 (т, 2Н), 2,72 (т, 2Н). МС: 344(М+1)
Метил 4-((7-метокси-2,3-дигидробензо[1][1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензоат.
1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): 7,99 (ά, >8,4 Гц, 2Н), 7,46 (ά, >8,4 Гц, 1Н), 7,37 (ά, >8,7 Гц, 2Н), 6,70 (άά, >8,4 Гц, 3,0 Гц, 1Н), 6,50 (ά, >2,7 Гц, 1Н), 4,09 (8, 2Н), 3,90 (8, 3Н), 3,72 (8, 3Н), 3,57 (8, 2Н), 3,35 (т, 2Н), 2,72 (т, 2Н). МС: 344(М+1)
Метил 2-((7-метокси-2,3-дигидробензо[1][1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензоат.
Соединение превращали в гидрохлоридную соль с 2М НС1 в простом эфире. 1Н ЯМР (300 МГц,
ДМСО-ά,,): 10,33(Ьг, 1Н), 8,08 (ά, >7,5 Гц, 1Н), 7,80-7,65 (т, 3Н), 7,51 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 7,14 (8, 1Н), 6,99 (άά, 1=8,4, 2,1 Гц, 1Н), 4,90-4,40 (т, Ьг, 4Н), 3,88 (8, 3Н), 3,78 (8, 3Н), 3,40 (т, 2Н), 3,26 (т, 1Н), 3,11 (т, 1Н). МС: 344 (М+1)
2-((7-Метокси-2,3-дигидробензо[1][1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензонитрил.
1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): 7,67-7,26 (т, 5Н), 6,73 (ά, 1=2,7 Гц, 1Н), 6,74 (άά, 1=2,7,8,4 Гц, 1Н), 4,14 (8, 2Н), 3,78(8, 3Н), 3,70 (8, 2Н), 3,36 (т, 2Н), 2,76 (т, 2Н). МС:311(М+1)
3-((7-Метокси-2,3-дигидробензо[1][1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензонитрил.
1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): 7,64-7,42 (т, 5Н), 6,74 (άά, 1=2,7,8,4 Гц, 1Н), 6,48 (ά, 1=2,7 Гц, 1Н), 4,08 (8, 2Н), 3,75(8, 3Н), 3,57 (8, 2Н), 3,36 (т, 2Н), 2,76 (т, 2Н). МС : 311 (М+1)
4-((7-Метокси-2,3-дигидробензо[1][1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензонитрил. 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): 7,64 (ά, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,42 (т, 3Н), 6,74 (άά, 1=2,7,8,4 Гц, 1Н), 6,48 (ά, 1=2,7 Гц, 1Н), 4,08 (8, 2Н), 3,75(8, 3Н), 3,58 (8, 2Н), 3,36 (т, 2Н), 2,76 (т, 2Н). МС: 311 (М+1)
Гидролиз сложного эфира (общая процедура).
Метиловый сложный эфир (3 ммоль) растворяли в 30 мл ТГФ/метанол/1М ХаОН (1:1:1, об./об.). Смесь перемешивали в течение 8 ч, и ТСХ показала полное исчезновение сложного эфира. Добавляли 1 мл конц. НС1 для доведения до кислого рН. Органический растворитель удаляли и образованное твердое
- 15 027922 вещество собирали путем фильтрации. Твердое вещество высушивали на воздухе.
-((7-Метокси-2,3 -дигидробензо[1] [ 1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензойная кислота.
Ее получали путем экстрагирования с ЕЮАс в качестве растворителя. 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13):
8,10 (з, 1Н), 8,04 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,80 (Ьг, 1Н), 7,46 (т, 2Н), 6,80 (т, 2Н), 4,40 (з, 2Н), 3,90 (з, 2Н), 3,76 (з, 3Н), 3,42 (з, 2Н), 2,86 (з, 2Н). МС: 330 (М+1), 328 (М-1).
4-((7-Метокси-2,3-дигидробензо[1][1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензойная кислота.
Ее получали путем экстрагирования с ЕЮАс в качестве растворителя. 'И ЯМР (300 МГц, СОС13): 8,02 (ά, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,46 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,42 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 6,70 (άά, >8,4 Гц, 3,0 Гц, 1Н), 6,50 (ά, 1=3,0 Гц, 1Н), 4,11 (з, 2Н), 3,72 (з, 3Н), 3,62 (з, 2Н), 3,35 (т, 2Н), 2,76 (т, 2Н). МС: 330 (М+1), 328 (М-1).
Соединение 1, натрия соль.
Натриевую соль соединения 1 получали из исходной молекулы, используя 1 эквивалент ХаОН в ЕЮН (ΐ пл соли>290°С).
'И ЯМР (ДМСО-О6, 600 МГц), δ (ч./млн): 7,77 (2Н, т), 7,41 (1Н, ά), 7,13 (2Н, т), 6,75 (1Н, άά), 6,63 (1Н, ά), 4,00 (2Н, з), 3,70 (3Н, з), 3,49 (2Н, з), 3,18 (2Н, т), 2,70 (2Н, т).
Соединение 1, гемифумаратная соль.
1,6 г соединения 1 (нейтральная форма) и 265 мг фумаровой кислоты вносили в круглодонную колбу. После добавления 18 мл ацетона и 2 мл воды реакционную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником. Наблюдали частичную солюбилизацию (но не полное осветление) с последующим осаждением. После этого реакционную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения оставшееся твердое вещество выделяли путем фильтрации, промывали 3 мл ацетона и высушивали в вакууме (40°С /10 мбар) в течение 4 ч.
'И ЯМР (ДМСОЮ6, 600 МГц), δ (част. на млн.) : 12,97 (2Н, Ьз), 7,90 (2Н, т), 7,43 (1Н, ά), 7,40 (2Н, т), 6,77 (1Н, άά), 6,64 (1Н, ά), 6,62 (1Н, з), 4,03 (2Н, з), 3,70(3Н, з), 3,58 (2Н, з), 3,20 (2Н, т), 2,72 (2Н, т).
2-((7-Метокси-2,3-дигидробензо[1][1,4]тиазепин-4(5Н)-ил)метил)бензойная кислота.
Соединение превращали в гидрохлоридную соль с 2М НС1 в простом эфире. 'ΐ I ЯМР (300 МГц, ДМСОМ6): 10,10(Ьг, 1Н), 8,08 (ά, >7,5 Гц, 1Н), 7,66-7,51 (т, 4Н), 7,17 (ά, 1=2,1 Гц, 1Н), 6,99 (άά, 1=8,4, 2,1 Гц, 1Н), 4,80-4,40 (т, Ьг, 4Н), 3,78 (з, 3Н), 3,46 (т, 2Н), 3,13 (т, 2Н). МС: 330(М+1), 328 (М-1).
Синтез тетразола (общая процедура).
Нитрильный предшественник (3,22 ммоль), азид натрия (830 мг, 12,9 ммоль) и триэтиламин гидрохлорид (1,72 г, 12,9 ммоль) перемешивали в 40 мл безводного ДМФА при 100°С в течение 5 дней. ДМФА удаляли в высоком вакууме и остаток смешивали с водой. Водный раствор экстрагировали дихлорметаном (3x100 мл), Чистое соединение очищали путем колоночной хроматографии (ЕЮАс/метанол).
4-(2-( 1Н-Т етразол-5-ил)бензил)-7-метокси-2,3,4,5-тетрагидробензо[1] [ 1,4]тиазепин.
'И ЯМР (300 МГц, СПС13 и капля СП3ОП): 8,30 (ά, 1=8,7 Гц, 1Н), 7,53 (т, 2Н). 7,14 (ΐ, 1=7,8 Гц, 1Н),
7,20 (ά, 1=7,5 Гц,1Н), 6,84 (άά, 1=2,7,8,4 Гц, 1Н), 6,69 (ά, 1=2,7 Гц, 1Н), 4,46 (з, 2Н), 3,80(з, 2Н), 3,75 (з,
- 16 027922
2Н), 3,43 (т, 2Н), 2,96 (т, 2Н). МС: 354(М+1), 352(М-1)
4-(3-(1Н-Тетразол-5-ил)бензил)-7-метокси-2,3,4,5-тетрагидробензо[£][1,4]тиазепин.
1Н ЯМР (300 МГц, СЭС13): 8,16 (з, 1Н), 7,90 (ά, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,40 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н),7,20 (т, 2Н),
6,74 (άά, 1=2,7,8,4 Гц, 1Н), 6,58 (ά, 1=2,7 Гц, 1Н), 4,18 (з, 2Н), 3,75(з, 5Н), 3,36 (т, 2Н), 2,76 (т, 2Н). ). МС: 354(М+1), 352(М-1)
4-(4-(1Н-Тетразол-5-ил)бензил)-7-метокси-2,3,4,5-тетрагидробензо[£][1,4]тиазепин.
1Н ЯМР (300 МГц, СПС13 и капля СП3ОП): 7,99 (ά, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,42 (т, 3Н), 6,74 (άά, 1=2,7,8,4 Гц,
1Н), 6,53 (ά, 1=2,7 Гц, 1Н), 4,10 (з, 2Н), 3,71(з, 3Н), 3,58 (з, 2Н), 3,36 (т, 2Н), 2,76 (т, 2Н). ). МС: 354(М+1), 352(М-1)
Синтез 7-метокси-2,3,4,5-тетрагидробензо[£][1,4]тиазепина (Амин).
АХ οι~~/νη2 НС1
1,5 экв. К2СО3; 1,0 экв. :А ΌΙΕΑ, ТГФ, нагрев, в колбе с обрати, холод., в течение ночи
АХ 5^^ΝΗ2
ΟΙγΟ^Ο о
14аНСО3; вода ДХМ, кт
экв.(НСНО)„ 0,4 ЭКВ.РТ8А
33% НВг в уксусной к-те '
НВг
4
2-(4-Метоксифенилтио)этанамин (1).
4-Метокситиофенол (50 г, 0,357 моль), 2-хлорэтиламин моногидрохлорид (39,8 г, 0,343 моль.), К2СО3 (78,8 г, 0,57 моль) и диизопропил этиламин (32 мл, 0,178 моль) смешивали в 200 мл ТГФ. Смесь дегазировали в течение 5 мин при пониженном давлении и нагревали в колбе с обратным холодильником в атмосфере аргона в течение ночи. Растворитель удаляли и в колбу добавляли воду (300 мл). Смесь экстрагировали дихлорметаном (3x200 мл). Органические компоненты собирали, удаляли дихлорметан и добавляли 50 мл конц. НС1, затем добавляли 200 мл воды. Раствор экстрагировали с помощью 1: 1 ЕЮАс/гексан (3 х200 мл). Водный слой доводили до рН 10 с помощью 2 М ХаОН, и экстрагировали с помощью дихлорметана (3x200 мл). Объединенный органический раствор высушивали над безводным сульфатом натрия. Удаление растворителя обеспечивает 61 г целевого соединения в виде бесцветной жидкости, с выходом 97%.
1Н-ЯМР (300 МГц, СЭС13): 7,35(ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 6,81 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 3,77 (з, 3Н), 2,88-2,80 (т, 4Н), 1,44 (з, 2Н).
Бензил 2-(4-метоксифенилтио)этилкарбамат (2).
Первый способ.
В колбу, содержащую соединение 1 (8,0 г, 43,7 ммоль), бикарбонат натрия (12,1 г, 144 ммоль), воду (100 мл) и дихлорметан (200 мл), добавляли бензил хлорформиат (8,2 г, 48,1 ммоль, разведенный в 100 мл дихлорметана) по каплям при 0°С. После добавления смесь перемешивали при к.т. в течение 5 ч. Органический слой собирали, и водный раствор экстрагировали с помощью 100 мл дихлорметана. Объединенный органический раствор высушивали над сульфатом натрия. Растворитель удаляли, и полученное твердое вещество растирали в порошок с 200 мл ТГФ/гексан (1:10). Твердое вещество собирали и высушивали, получая целевой продукт (12,9 г) с выходом 93%.
Альтернативный способ.
К раствору соединения 1 (10 г, 54,6 ммоль) и триэтиламина (15 мл, 106 ммоль) в 200 мл дихлорметана добавляли бензил хлорформиат (7,24 мл, 51,5 ммоль, разведенный в 100 мл дихлорметана) по каплям при 0°С. После добавления раствор перемешивали при к.т. в течение одного часа. Твердое вещество удаляли путем фильтрации. Раствор экстрагировали с помощью 100 мл 0,1М НС1 и 100 мл нас. карбоната
- 17 027922 натрия и высушивали над безводным сульфатом натрия. Удаление растворителя обеспечивает белое твердое вещество, которое перемешивали в 200 мл ТГФ/гексан (1:20) в течение трех часов. Твердое вещество собирали путем фильтрации, получая 14,2 г целевого соединения с выходом 87%.
!Н-ЯМР (300 МГц, СОС13): 7,35(т, 7Н), 6,83 (б, 1=8,7 Гц, 2Н), 5,07 (т, 3Н), 3,77 (5, 3Н), 3,10 (д, .1 6,3 Гц, 2Н), 2,92 (ΐ, 3 6.3 Гц, 2Н).
Бензил 7-метокси-2,3-дигидробензо[Г| [1,4]тиазепин-4(5Н)-карбоксилат (3).
Смесь соединения 2 (7,3 г, 23 ммоль), параформальдегида (6,9 г, 0,23 моль) и н-толуолсульфоновой кислоты (1,45 г, 7,6 ммоль) в 250 мл толуола перемешивали при 70° С в течение ночи. После охлаждения до к.т. твердое вещество отфильтровали. Раствор экстрагировали с помощью нас. карбоната натрия (100 мл), и органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия. Получали целевой продукт (7,4 г) в виде жидкости после удаления растворителя с выходом 97%.
’Н-ЯМР (300 МГц, СЭС13): 7,44 (б, 1=8,1 Гц, 0,77Н), 7,32 (т, 5,60Н), 7,07 (б, 1=2,7 Гц, 0,33Н), 6,68 (т, 1,30 Н), 5,04 (5, 2Н), 4,59 (55, 2Н), 3,96 (Ьг, 1,80), 3,80 (55, 1,23 Н), 3,55 (5, 1,97Н), 2,76 (т, 2Н).
7-Метокси-2,3,4,5-тетрагидробензо[Г|[1,4]тиазепин гидробромид (Амин) (4 НВг соль).
Первый способ.
Раствор НВг (33% в уксусной кислоте, 10 мл) добавляли к соединению 3 (4,2 г, 12,8 ммоль). После добавления начинал выделяться углекислый газ, и образовывалось белое твердое вещество. Смесь оставляли отстаиваться при к.т. в течение дополнительных 2 ч. К смеси добавляли простой диэтиловый эфир (150 мл), и ее перемешивали в течение 30 мин. Твердое вещество собирали путем фильтрации и промывали простым диэтиловым эфиром. Твердое вещество высушивали в вакууме, получая 3,40 г целевого соединения с выходом 91,8%. !Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6): 9,02 (Ьг, 2Н), 7,52 (б, 1=8,1 Гц, 1Н), 7,27 (б, 1=3,3 Гц, 1Н), 6,92 (бб, 1=8,4, 2,7 Гц, 1Н), 4,41 (5, 2Н), 3,77 (5, 3Н), 3,53 (т, 2Н), 2,96 (т, 2Н).
Альтернативный способ (свободное основание 4а).
Соединение 3 (10 г, 30 ммоль) смешивали с 50 мл конц. НС1, 50 мл воды и 30 мл диоксана. Смесь перемешивали при 100° С в течение ночи. После охлаждения до к.т. большинство растворителя и НС1 удаляли при пониженном давлении. К раствору добавляли воду (100 мл), и твердое вещество отфильтровали. Водный раствор экстрагировали с помощью ЕЮАс/гексан (1:1, 3x100 мл) и подщелачивали путем добавления 15 г ЫаОН. Смесь экстрагировали с помощью дихлорметана (3x150 мл). Объединенный раствор высушивали над безводным сульфатом натрия. Удаление растворителя обеспечивает жидкость, которая отвердевала после отстаивания при кт, получая 6,2 г целевого соединения. 'Н-ЯМР (300 МГц, СЭСЕ): 7,42 (б, 1=8,1 Гц, 1Н), 6,78 (б, 1=2,7 Гц, Н), 6,68 (бб, 1=2,7, 8,1 Гц, 1Н), 4,08 (5, 2Н), 3,96 (Ьг, 1,80), 3,76 (5, 3 Н), 3,38 (т, 2Н), 2,68 (т, 2Н).
Пример 2. Связывание калстабин2 с РКА-фосфорилированным КуК2.
Мембраны кардиального 8К приготавливали, как было описано ранее (Магх и др., 2000; КаПап и др., Сис. Ке5., 1996, 78:990-97). Иммуноблотинг микросом (50 мкг) осуществляли, как было описано ранее, с антителом к калстабину (1:1,000) Цауататап и др., Г Вю1. СНет., 1992, 267:9474-77) в течение 1 ч при комнатной температуре (Ке1кеп и др., Спси1айоп, 107:2459-66, 2003). После инкубирования с НКРмеченным антикроликовым 1дС (1:5,000 разведение; Ттап5бисйоп ЬаЬога1ог1е5, Ьехтдфп Ку.), блоты формировали, используя ЕСЬ (АтегаНат РНаттаиа, Р15са1атау, N.1.) и обнаруживали на рентгеновской пленке, или подвергали воздействию вторичных антител, меченных с помощью инфракрасного красителя и визуализировали на оборудовании от Ы-Сот Вю5с1епсе5 (модель Обу55еу). Если специально не указано иначе, соединения тестировали при концентрации 100 нМ. Репрезентативный анализ связывания калстабин2 представлен ниже.
А. РКА фосфорилирование саркоплазматического ретикулума сердца (С8К).
Реакционную смесь вносили в микроцентрифужную пробирку объемом. 200 мкг кардиального 8К добавляли к реакционной смеси киназного буфера, РКА и АТР до конечного объема 100 мкл (реакционная смесь ниже). АТР добавляли последним для инициирования реакции.
Реакционная смесь.
мкл=проба (кардиальный 8К, 2 или 10 мкг/мкл) мкл=10хкиназный буфер (80 мМ МдС12, 100 мМ ЕСТ А, 500 мМ
ТП5/Р1РЕ8), рН 7,0 мкл=РКА (2 ед./мкл) (81дта #Р2645) мкл=10хАТР (1,0 мМ) (81дта А 9187) мкл=разведенный Н2О.
1. Пробирки инкубировали при 30°С в течение 30 мин.
2. После этого реакционную смесь переносили в толстостенные стеклянные пробирки объемом 0,5 мл.
3. Стеклянные пробирки, содержащие реакционную смесь, центрифугировали в течение 10 мин при 50,000хд на центрифуге 8ог\'а11 КСМ120ЕХ, используя ротор 8120АТ3. Центрифугирование при 50,000хд в течение 10 мин достаточно для выделения микросом.
4. Полученный осадок после центрифугирования промывали 4 раза со связывающим буфером (10
- 18 027922 мМ Имидазол, 300мМ сахароза, рН 7,4). Каждый раз в пробирку добавляли 100 мкл 1х связывающего буфера для промывки осадка после центрифугирования. Осадок после центрифугирования ресуспендировали путем промывки вверх и вниз, используя микродозатор. После последнего центрифугирования добавляли 50 мкл связывающего буфера, и осадок после центрифугирования со всех пробирок собирали. Реакцию хранили при-20°С.
5. Фосфорилирование подтверждали путем отделения приблизительно 10 мкг С8К путем гельэлектрофореза на 6% полиациламиде (РАСЕ), и иммуноблоты анализировали относительно как общего КуК (5029 антитело, 1:3000 разведение или моноклональное антитело от АГПп11у ВютеадеШв, Са! # МА3916, 1:2000 разведение), так и фосфорилированного РКА КуК2 (Р2809 АЬ, 1:10000 разведение).
6. Аликвоты можно хранить при -80°С.
В. Анализ повторного связывания калстабина.
1. РКА-фосфорилированный С8К (около 20 мкг) инкубировали с 250 нМ. Калстабин 2 в 100 мкл связывающего буфера (как описано выше) с соединениями или без них.
2. Реакцию запускали в толстостенной стеклянной пробирке объемом 0,5 мл (оборудование НйасЫ СепЬтГиде, № каталога В4105).
3. Калстабин2 добавляли в качестве последнего реагента в реакционную смесь. Реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение 30 мин.
4. После реакции пробирки центрифугировали в течение 10 мин при 100,000 д. (8отуа11 КСМ120ЕХ центрифуга с 8120АТ3 ротор).
5. Полученный осадок после центрифугирования промывали 4 раза в 1х связывающем буфере при 4°С. После каждой промывки пробирки центрифугировали при 50,000 д в течение 10 мин при 4°С.
6. После конечной промывки, супернатант отбрасывали.
7. Добавляли 20 мкл буфера для образца (2х) [6х буфер для образца, описанный ниже], и осадок после центрифугирования ресуспендировали с верхушкой и/или путем короткого встряхивания. Суспензию переносили в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл.
8. Пробирки нагревали при 90°С в течение 4 мин.
9. Белки разделяли с помощью 15% 8Э8/РАСЕ.
10. Связывание калстабин2 определяли с анти-ЕКВР (1ауататап и др., I. Вю1. СЬет. 1992;267:947477, 1:2000) первичным антителом и подходящим вторичным антителом.
6х Буфер для образца
7,0 мл 4х Тпв-НС1/8П8, рН6,8
3,0 мл глицерина (30% конечная концентрация)
1,0 г 8Ό8 (10% конечная концентрация)
0,93 г ΌΤΤ (0,6М конечная) мг бромфенолового синего (0,001% конечная концентрация)
Дистиллированная вода до конечного объема 10 мл.
Хранение в аликвотах 1 мл при-70°С.
Результаты.
На фиг. 1А представлен иммуноблот с антителом к калстабин2, показывающий связывание калстабин2 с РКА-фосфорилированным КуК2 при отсутствии (-) или в присутствии 100 нМ соединения 1. ('): калстабин связывается с не-РКА фосфорилированным КуК2. 836, бензотиазепин, описанный в И8 7544678, использовали в качестве контроля. Как показано, соединение 1 при концентрации 100 нМ предотвращает диссоциацию калстабин2 из РКА-фосфорилированного КуК2 и/или усиливает (повторное)связывание калстабин2 с РКА-фосфорилированным КуК.
Как показано на фиг. 1В, также было обнаружено, что следующие репрезентативные соединения предотвращают диссоциацию калстабин2 из РКА-фосфорилированный КуК2 и/или усиливают (повторное)связывание калстабин2 с РКА-фосфорилированным КуК2 при тестировании в вышеуказанном анализе повторного связывания калстабин2 при 100 нМ: соединения 2, 3 и 4.
Пример 3. Связывание калстабин1 с РКА-фосфорилированным КуК1.
8К мембраны из скелетных мышц приготавливали аналогично описанному в примере 2 и как дополнительно описано в опубликованной заявке на патент США № 2004/0224368, содержание которой включено в настоящую заявку в качестве ссылки. Иммуноблотинг микросом (50 мкг) осуществляли, как описано, с антителом к калстабин1 (2утеб) (1:1,000). Блоты развивали и количественно определяли, как описано в примере 2.
На фиг. 1С представлен иммуноблот с антителом к калстабин1, показывающий связывание калстабин1 с РКА фосфорилированным КуК1 при отсутствии (отриц.) или в присутствии указанных концентраций соединения 1 или соединения 4. (Полож.): калстабин связывается с не-РКА фосфорилированным КуК1. 836 использовали в качестве контроля. Как показано, соединение 1 и соединение 4 предотвращает диссоциацию калстабин1 из РКА фосфорилированного КуК1 и/или усиливает (повторное)связывание калстабин1 с РКА-фосфорилированным КуК1 в зависимости от дозы, с оценочным ЕС50 приблизительно 100 и 150 нМ соответственно.
- 19 027922
Пример 4. Повторное связывание калстабин1 с КуК1 у мышей, которым вводили изопротеренол.
Изопротеренол, агонист бета-адренергического рецептора, индуцирует сердечную недостаточность у мышей путем сверхстимуляции бета-адренергического рецептора. Конкурирует с этим активация РКА, фосфорилирование КуК2 на 8К и снижение взаимодействия калстабин2 (РКБР12.6) с КуК2. Сходный каскад событий происходит в скелетных мышцах, где КуК1 фосфорилирован, что приводит к снижению связывания калстабин1 (РКБР12) с КуК1.
Как более подробно описано в опубликованной международной заявке № \УО 2008/064264, содержание которой включено в настоящую заявку в качестве ссылки, хроническое введение изопротеренола мышам дикого типа предоставляет быстрый и надежный способ индуцирования изменений в КуК биохимии, который легко можно количественно определить. Эти изменения включают повышение КуК фосфорилирования и сопутствующее снижение связывания калстабина.
Животные и реагенты.
Мышей С57В1/6 содержали и исследовали в соответствии с установленными протоколами. Синтетический бета-адренергический агонист, изопротеренол (18О) получали от §1§та (165627) и готовили в виде 100 мг/мл маточного раствора в воде. Лизирующий буфер готовили путем добавления сахарозы (1 мМ), дитиотреита (320 мМ), и 1 таблетки ингибитора протеазы (10Х) к 10 мл маточного раствора (10 мМ НЕРЕ8, 1 мМ ЕЭТА, 20 мМ ХаР, 2 мМ Ха3УО4).
Приготовление осмотического насоса и хирургическая имплантация.
Мышам непрерывно инфузировали в течение пяти дней 10 мг/мл изопротеренола (1 мкл/йг) с помощью имплантированного подкожно осмотического инфузионного насоса (А1/е1 МпиО8то0с Ритр, модель 2001, Эигсс1 Сотротабои, Сиретйио, СА).
Для ввода лекарственного средства осмотический насос удерживали вертикально, и 200 мкл раствора лекарственного средства инъецировали в насос с помощью шприца 1 мл (присоединенного к канюле), который содержит избыток раствора лекарственного средства (~250-300 мкл). Раствор лекарственного средства инъецировали медленно наклонно, в то время как шприц медленно поднимали до тех пор, пока насос не был переполнен. Переливание через край жидкости при закрытии насоса подтверждал, что насос был заполнен правильно.
Загруженные осмотические насосы имплантировали подкожно с помощью следующих стадий. Мышь-реципиент анестезировали 1,5-2% изофлураном в О2, который вводили при 0,6 л/мин, и после этого ее вес измеряли и записывали. После этого мышь помещали на пенополистирол грудной клеткой вниз, лицом в носовую часть. Шерсть срезали на затылке, начиная сзади ушей и до верхушки головы. Участок аккуратно протирали 70% спиртом, и осуществляли небольшой надрез по средней линии затылка голова/шей. Держатель шва смазывали спиртом, вставляли в разрез и открывали для освобождения кожи от нижерасположенной ткани. Для приспособления насоса это отверстие удлиняли назад до задней части туловища. Загруженную помпу вставляли в отверстие с высвобождением ее участка, расположенного вдали от рассечения, и предоставляли возможность установиться под кожей с минимальным напряжением. Разрез зашивали с помощью 5,0 нейлоновых швов, для этого требуется приблизительно 5-6 швов, и участок тщательно протирали 70%-ным спиртом. После хирургического вмешательства мышей помещали в индивидуальные клетки для минимизации повреждения и возможной активации симпатической нервной системы.
Выделение скелетных мышц.
Ткань скелетных мышц мышей выделяли следующим образом. На мышцах лапы срезали кожу на лодыжке и тянули вверх. Ткань поддерживали влажной с помощью буфера Тироде (10 мМ НЕРЕ8, 140 мМ ХаС1, 2,68 мМ КС1, 0,42 мМ Ха2НРО4, 1,7 мМ МдС12, 11,9 мМ ХаНСО;. 5 мМ глюкоза, 1,8 мМ СаС12, приготовленного путем добавления 20 мг СаС12 к 100 мл 1Х буферу, полученному из 10Х раствора без СаС12). Следующие мышцы выделяли и замораживали в жидком азоте. Длинный разгибатель пальцев (ЕЭЬ) выделяли путем вставления ножниц между латеральным сухожилием и X, образованным ЕЭЬ и большеберцовыми сухожилиями, срезали вверх по направлению к коленям; разрезали малоберцовую мышцу для раскрытия веерообразного малоберцового сухожилия; вставляли зажимы под X и под мышцу для освобождения ЕЭЬ сухожилия; срезали ЕЭЬ сухожилие и натягивали мышцу; и в завершение срезали ослабленную ЕЭЬ. Камбаловидную мышцу выделяли путем удаления малоберцовой мышцы с верхушки икроножной мышцы путем разреза и поднятия вверх ахилового сухожилия; срезали камбаловидную мышцу на верхушке мышцы позади колена; и в завершение натягивали камбаловидную мышцу и отрезали ее от икроножной мышцы. Большеберцовую кость выделяли путем разреза большеберцового сухожилия срезания с верхушки лодыжки, оттягивали сухожилие вверх, и отрезали его от большеберцовой кости. Широкую мышцу (мышцу бедра) выделяли с обеих ног путем отрезания мышцы немного выше колена, и удаляли мышечный пучок. Образцы замораживали в жидком азоте.
КуК1 иммунопреципитация с тканевых лизатов.
КуК1 иммунопреципитатировали с образцов путем инкубирования 200-500 мкг гомогената с 2 мкл анти-КуК1 антитела (2утеб) в 0,5 мл модифицированного К1РА буфера (50 мМ ТГ18-НС1 (рН 7,4), 0,9% ХаС1, 5,0 мМ ХаР, 1,0 мМ Ха3УО4, 0,5% Ттйои-Х100 и ингибиторы протеазы) при 4°С в течение 1,5 ч. После этого образцы инкубировали с шариками белок А сефароза (Атегейат Рйатташа ВюРесй, Р18- 20 027922 са1а\\у, N1) при 4°С в течение 1 ч, после этого шарики промывали три раза с помощью ледяного ΚΙΡΑ. Образцы нагревали до 95°С и разделяли на фракции по размерам с помощью δΌδ-ΡΑΟΕ (15% §Ό§ΡΑΟΕ для калстабины). Иммуноблоты развивали, используя анти-ΡΚΒΡ антитело (РКБР12/12,6, 1ауагатап и др., I. ΒίοΙ. СБет. 1992;267:9474-77) при 1:2,000 разведении. Антитела разводили в 5% молоке или ΤΒ8-Τ (20 мМ ТП5-НС1, рН 7,5, 0,5М ЫаС1, 0,05% Т^ееп® 20, 0,5% Ττίΐοη Х-100).
Результаты.
Осмотические насосы, содержащие изопротеренол с или без тестируемого соединения, имплантировали мышам, как описано выше. Мышам осмотически перфузировали в течение пяти дней либо только наполнитель (ДМСО/ΡΕΟ), только изопротеренол (Ι§Ο) (0,5 мг/кг/ч), или комбинацию изопротеренола (0,5 мг/кг/ч) и соединения 1 в указанных концентрациях. В день 6 каждую мышь умертвляли, и ткани скелетных мышц выделяли и использовали для анализа связывания калстабин1 в КуК1 иммунопреципитатах.
Влияние соединения 1 на усиление связывания калстабин1 с КуК1 в скелетных мышцах, выделенных у мышей, которым вводили изопротеренол, представлено на фиг. 2А (иммуноблот) и 2В (графическое количественное описание). Как показано, соединение 1 усиливает уровни калстабин1, связанного с КуК1, в мембранах скелетных мышц до уровня, которых сходный с уровнем, наблюдаемым при введении 3,6 мМ §36, другого производного бензотиазепина, которое использовали в качестве положительного контроля (\νθ2008/064264). Сходные результаты получали для соединения 4 (данные не показаны).
Пример 5. Влияние соединения 1 на модели хронической постишемической сердечной недостаточности у крыс.
Задачи.
Задачей этого исследования являлось тестирование способности соединения 1 уменьшать сердечную дисфункцию и ослабления реконструкции желудочка на модели сердечной недостаточности, индуцированной ишемией-реперфузией.
Методология.
Хроническую сердечную недостаточность индуцировали у самцов крыс Вистар (224-240 г, в возрасте 10-11) путем ишемически-реперфузионного (Ι/К) повреждения. Для Ι/К протокола переднюю нисходящую ветвь (ΕΑΌ) левой коронарной артерии окклюзировали в течение 1 ч. Лечение с помощью лекарственного средства (5 или 10 мг/кг/д в питьевой воде) начинали через 1 неделю после реперфузии и поддерживали в течение периода исследования 3 месяца. Эффективность соединения 1 оценивали путем эхокардиографии через один, два и три месяца после начала и с помощью инвазивной гемодинамики через 3 месяца путем сравнения с наполнителем и ложнооперированными животными. Образцы сердца также анализировали для оценки гипертрофии и содержания коллагена. Кровь собирали у каждой крысы после окончания исследования для оценки концентраций лекарственного средства в плазме крови, как показано на фиг. 3. Схема исследования представлена на фиг. 3. Эксперименты осуществляли слепым образом.
Статистические методы.
Для параметров, измеренных в динамике, сравнение ложнооперированных относительно наполнителя и сравнение лечения лекарственным средством анализировали путем 2 факторного ΑΝΟνΑδ с повторными измерениями. Для параметров, измеренных при умерщвлении и морфометрии, сравнение ложнооперированных относительно наполнителя анализировали с помощью критерия Стьюдента и сравнения лечения лекарственным средством путем 1-факторного ΑΝΟνΑ с последующим критерием Даннета.
Результаты.
Животные, леченные с помощью наполнителя Ι/К, по сравнению с ложнооперированными животными, проявили повышенный левожелудочковый (Εν) конечный систолический (Εν Ε§ν) и конечный диастолический (Εν ΕΌν) объемы (фиг. 4 А и В), угнетение сердечной функции, что определяли по снижению фракции выброса (ΕΡ) (фиг. 4С) и повышенному интерстициальному содержанию коллагена (фиг. 5Ό). Соединение 1, которое вводили в дозе 5 и 10 мг/кг/д, существенно повышает ΕΡ, а также снижает как ΕΥΕδν, так и БУРОУ по сравнению с наполнителем, от одного до трех месяцев (фиг. 4А-С), а также уменьшает интерстициальное содержание коллагена (фиг. 5Ό).
Инвазивное гемодинамическое исследование (через 3 месяца) показало сохранение Εν άΡ/άΐ тах и Εν άΡ/άΐ тт у животных, леченных с помощью соединения 1 в дозах 5 и 10 мг/кг/д по сравнению с наполнителем (фиг. 6В и С), с статистически недостоверным изменением Εν систолического давления при лечении (фиг. 6А).
Не наблюдали влияния на вес тела (Βν), размер инфаркта или гипертрофию (вес ЬУ) при лечении (фиг. 5А-С). Концентрации лекарственного средства в плазме представлены на фиг. 7.
Результаты указывают на то, что соединение 1 при концентрации всего лишь 5 мг/кг/д проявляет благоприятный эффект как на систолическую, так и диастолическую сердечную функцию на модели хронической постишемической сердечной недостаточности у крыс.
Соединение 1 существенно и неожиданно более активно по сравнению с соединением А, структурно сходным производным бензотиазепина, описанным в νΟ 2007/024717. Как показано на фиг. 8, соединение А, вводимое при концентрации 5 мг/кг/д в течение 3 месяцев, не способно улучшить систоличе- 21 027922 скую и диастолическую сердечную функцию по сравнению с соединением 1 на модели хронической постишемической сердечной недостаточности у крыс при окончании исследования. Таким образом, благоприятные эффекты соединения 1, но не соединения А, наблюдали в дозе 5 мг/кг/д после лечения в течение 3 месяцев на модели СИР у крыс.
Пример 6. Влияние соединения 1 на мышечную функцию на модели мышечной дистрофии у мышей (шйх).
Задача.
Задачей этого исследования является определение, будет ли лечение с помощью соединения 1 улучшать мышечную функцию на модели с дефицитом дистрофина у мышей (шйх).
Методология.
С57ВГ/103сЗп-0МЭшйх/1 (сокращенно как шйх, п=5 на группу) мышей в возрасте 6 недель и около 20 г в начале исследования акклиматизировали в клетках на колесах в течение шести дней перед рандомизацией на группы, получающие лечение либо с помощью наполнителя (Н2О) или целевых доз 5, 10 или 50 мг/кг/д (действующие дозы 7,9; 12,8 и 61,5 мг/кг/д соответственно, определенных на основании еженедельно измеренного потребления раствора лекарственного средства, разделенного на вес тела) натриевой соли соединения 1 (на основании веса исходного лекарственного средства; натрия соль далее в этом настоящем изобретении обозначается как соединение 1), которую вводили в питьевой воде ай йЬйиш в течение 4 недель. Мыши С57ВЙ/6 (сокращенные как ^Т, п=4 на группу) в соответствующей возрастной группе рандомизировали на группы, получающие лечение либо с помощью наполнителя (Н2О) или целевой дозы 50 мг/кг/д (действующая доза 67,7 мг/кг/д) натриевой соли соединения 1.
Произвольную активность на колесо, вес тела и среднее потребление воды измеряли в течение первых 3 недель. Удельную мышечную силу измеряли через 4 недели лечения после окончания исследования.
Пройденное расстояние (Км/день) в течение 24-часового периода анализировали в качестве показателя улучшенной функциональной активности (см., ΌΜΌ_Μ.2.1.002 8ОР на 1Шр://\у\у\у.1геа1-пт<±С11/). По результатам исследования мышцу - длинный разгибатель пальцев (ЕЭЬ) отделяли для анализа мышечной силы, как более подробно описано далее ниже. Кровь собирали от каждой мыши путем ретроорбитального спуска крови при окончании исследования (после окончания темного цикла - приблизительно 7 ч утра) для оценки концентрации лекарственного средства в плазме крови. Эксперименты были слепыми.
Измерения силы.
После окончания исследования ЕЭЬ мышцу иссекали от задних конечностей для анализа изометрической силы, используя 407А Ми§с1е Те§1 Зу§1еш от Аигога Зшепййс (Аигога, Оп1апо, Сапайа). 6-0 швами привязывали к каждому сухожилию, и цельную ЕЭЬ мышцу, сухожилье к сухожилью, переносили в баню Кадпой О2/СО2 (95%/5%), барботированную раствором Тироде (в мМ: №С1 121, КС1 5,0, СаС12 1,8, МдС12, №Н2РО4, №НСО3 24, и глюкоза 5,5). Используя швы, одну связку привязывали вертикально к крюку из нержавеющей стали, присоединенному к датчику силы. Другую пришитую связку прижимали к движущемуся плечу на системе Аигога. ЕЭЬ мышцу стимулировали для сокращения, используя электрическое поле между двумя платиновыми электродами. В начале каждого эксперимента длину мышцы доводили для получения максимальной силы. Определяли соотношения сила-частота путем запускания сокращений, используя поэтапные стимулирующие частоты (5-250 Гц для 200 мс при сверхпороговом напряжении). Между стимуляциями мышце предоставляли возможность отдыхать ~3 мин. После окончания измерения силы измеряли длину (Ьо) мышцы ЕЭЬ, в то время как она была привязана в Аигога системе, исключая связки. После этого ЕЭЬ мышцу удаляли из системы и взвешивали после отсечения концов связок и снятия швов. Затем ЕЭЬ мышцу замораживали в жидком азоте. Площадь поперечного сечения (мм2) ЕЭЬ мышцы рассчитывали путем деления веса ЕЭЬ мышцы на длину ЕЭЬ мышцы и постоянную плотности мышц млекопитающих 1,056 мг/м3 (Уашайа Т., и др. Аййпйз апй гйеишайзш 60:3280-3289). Для определения удельной силы ЕЭЬ (кН/м2), абсолютную судорожную силу разделяли на площадь поперечного сечения ЕЭЬ мышцы.
Статистические методы.
Для определения статистической достоверности использовали критерий Стьюдента для сравнения между двумя группами. Все объединенные данные выражали в виде среднего значения +/-СКО.
Результаты.
Тестировали способность соединения 1 улучшать произвольные упражнения у шйх мышей. После акклиматизации мышей к клетке с произвольными колесами наблюдали за активностью мышей на произвольно движущихся колесах с помощью компьютера 24/7. Собранные данные пересчитывали в пройденное расстояние в день в течение 3 недель. Мйх мыши, которых лечили с помощью 10 и 50 мг/кг/д (целевая доза) соединения 1, перемещались на достоверно более длинные расстояния на колесах по срав- 22 027922 нению с тдх мышами, которых лечили только с помощью наполнителя (Н2О) (Р<0,001 с дня 1 до дня 19). Эффект лечения наблюдали уже через 2-3 дня после начала лечения, и он продолжался в течение наблюдаемого периода активности. Не наблюдали эффекта соединения 1 на пройденное расстояние у УТ мышей, которых лечили с помощью 50 мг/кг/д соединения 1 (фиг. 9). Дополнительно, как было определено с помощью измерений силы ιη νΐΐΓΟ на ЕОР мышце (фиг. 10), лечение с помощью соединения 1 повышает удельную силу в тдх мышце в зависимости от дозы. При частоте стимуляции 150 Гц и выше у тдх мышей, которых лечили с помощью 50 мг/кг/д, было обнаружено статистически достоверное повышение удельной мышечной силы (Р<0,05). Не наблюдали эффекта лечения с помощью соединения 1 на удельную мышечную силу у мышей УТ.
Как показано на фиг. 11, лечение с помощью соединения 1 не оказывает влияния на тела. Не наблюдали дозозависимых эффектов на потребление воды. Утреннее экспонирование в крови для соединения 1 составляло (среднее значение±СКО) 3,3±0,4 мкМ для дозы 5 мг/кг/д у тдх мышей, 10,7±0,9 мкМ для дозы 10 мг/кг/д у тдх мышей, 52,8±1,7 мкМ для дозы 50 мг/кг/д у тдх мышей и 72,8±7,0 мкМ для дозы 50 мг/кг/д у мышей УТ. Взятые в совокупности, результаты показывают, что по сравнению с контролями, которых лечили наполнителем, лечение с помощью соединения 1 в дозах 10 и 50 мг/кг/д (целевая доза) повышает упражнения на произвольно движущихся колесах через 3 недели и удельную мышечную силу через 4 недели у тдх мышей, мышиная модель мышечной дистрофии Дюшенна (ΌΜΌ), таким образом демонстрируя полезность соединения 1 и его аналогов, как заявлено в данной заявке, для лечения мышечной дистрофии.
Пример 7. Метаболическая стабильность.
Метаболическую стабильность соединения 1, типичного Куса1™ в соответствии с настоящим изобретением, сравнивали с соединением В и соединением С, структурно сходными производными бензотиазепина, описанными в УО 2007/024717.
А. Метаболическая стабильность в микросомах печени человека.
Методы.
Солюбилизация соединения. Маточные растворы готовили в ДМСО, и рабочие растворы - в воде, содержащей 1 мг/мл Β8Α.
Предсказания метаболической биодоступности.
Предсказания метаболической биодоступности (МГ%) основывались на измерениях метаболической стабильности ιη νΐΐΓΟ с микросомами печени, предполагая общую абсорбцию. Вкратце, неизмененные лекарственные средства количественно определяли с помощью ЖХ-МС-МС с последующим инкубированием (10-7М) с микросомами печени человека и крысы (0,33 мг белка/мл) после инкубирования в течение 0, 5, 15, 30 и 60 мин в присутствии ΝΑΟΡΠ (1 мМ). Ферментативную реакцию останавливали с помощью метанола (об./об.), и белки осаждали путем центрифугирования. Собственный клиренс ιη νΐΐΓΟ (С1Ш_т1с), выраженный в виде мл/мин/г белка представлял собой наклон (после Ι.Ν линеаризации) оставшейся концентрации неизмененного лекарственного средства относительно времени инкубирования. После этого ιη νΐΐΓΟ С1т1 увеличивали масштаб до всего организма ιη νίνο (νΐνοΟΐηΐ), используя 0,045 мг белка/кг печени и вес печени 11 г для крысы и 1,2 кг для человека. Затем ιη νΐνΟ С1т1 преобразовывали в клиренсы в печение (НерС1), используя тщательно перемешанную модель (НерС1=ν^νοС1^ηΐ*НΒΡ/ (νΐνΟСНЫ+НВР), где НВГ (ток крови в течение) принимали как 22 мл/мин для крысы и 1500 мл/мин для человека. После этого МГ% вычитали из коэффициента очищения с помощью следующего уравнения (МГ%=1-НерС1/НВГ). Результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1
Стабильность в микросомах человека
Соеди- нение Структура Микросомы крысы Микросомы человека
С|1п,-т“ мр крысы . Класс г , П11С мл/мин/мг белка /о СПй_ Ш1С чело- МР т, . Класс века ппс мл/мин % /мг белка
В очень 823 5 низ- кий очень 285 6 низ- кий
- 23 027922
с ОО' -о 1926 2 очень низ- кий 1326 2 очень низ- кий
ХУ Л4! Про- межу- точ-
1 101 30 ное сое- ди- нение 9,1 75 высо- кий
a. ίΊίηί_ηιίο - собственный клиренс ίη νίίτο в мл/мин/мг белка.
b. МР% - метаболическая биодоступность в %.
В. Метаболическая стабильность в гепатоцитах печени крыс и человека.
Солюбилизация соединения.
Маточные растворы готовили в ДМСО, и рабочие растворы - в среде Вильяма, содержащей 1/10 плазмы крысы или 1/4 плазы человека.
Определение метаболической стабильности.
Соединения инкубировали при 10-7 М с выделенными гепатоцитами (6Е+5 клеток/мл для гепатоцитов крысы и 4Е+5 клеток/мл для гепатоцитов человека) при 37°С в плазме с одних и тех же видов, разведенных в среде Вильяма (1/10 разведение для крысы и 1/4 разведение для человека). Отбор образцов осуществляли через 0, 10, 20, 30, 60 и 120 мин, и ферментативную реакцию останавливали с помощью метанола (об./об.). Белки осаждали путем центрифугирования, и супернатант анализировали с помощью ЖХ/МС/МС. СЕн1, выраженный в виде мл/мин/г белка, рассчитывали для микросом печени, используя соотношение 0,134 мг белка/мл для 4Е+5 клеток/мл для человека и 0,201 мг белка/мл для 6Е+5 клеток/мл для крысы. Присутствие препарата сравнения и потенциального метаболита проверяли с помощью ЖХ/МС/МС при исследовании в каждом образце. Результаты представлены в табл. 2:
Таблица 2
Стабильность в гепатоциты крысы и человека
Соеди- нение Гепатоциты крысы Гепатоциты человека
СНп! (мл/мин/мг белка) МР крыс ы % 9 клеток/мл СНШ (мл/мин/мг белка) МР человека % () клеток/мл
В 1334 3 6,00Е+05 693 3 4,00Е+05
1 5 90 6,00Е+05 0 100 4,00Е+05
С 2610 2 6,00Е+05 100 16 4,00Е+05
a. С1т1_Ш1С - ίη νίίτο собствнная стабильность в мл/мин/мг белка.
b. МР% - метаболическая биодоступность в %.
c. 0 - количество клеток на мл.
С. Метаболическая стабильность в микросомах мыши и крысы.
Материалы и методы.
Буфер для разведения: 0,1М Тп§ НС1 буфер при рН 7,4, содержащий 5 мМ ЕОТА.
Раствор кофактора ЫАБРН.
В пробирку фирмы Ракет объемом 50 мл, содержащей 2,79 мл буфера для разведения, добавляли 0,429 мл ЫАБРН-регенерирующего раствора А и 0,079 мл ЫАБРН- регенерирующего раствора В.
Приготовление микросом (1,5 мг/мл раствора).
В пробирку фирмы Ракет объемом 50 мл, содержащую 3,32 мл буфера для разведения, предварительно нагретого при 37°С в течение 15 мин (по меньшей мере 10 мин), добавляли 0,178 мл микросомы (24,6 мг/мл) к предварительно нагретому буферу для разведения. Концентрация белка в этом препарате микросом составляла 1,25 мг/мл.
Образец (тестируемое соединение) - исходный и промежуточный маточные растворы.
Готовили 1 мг/ мл (0,5 мг/мл использовали для соединения 1) раствор тестируемого соединения в метаноле. 100 мкМ промежуточного раствора тестируемого соединения из исходного маточного раствора готовили с помощью буфера для разведения. 5 мкМ раствор готовили путем разведения 100 мкМ промежуточного раствора, используя буфер для разведения.
Эксперимент.
(Эксперименты осуществляли в микроцентрифужных пробирках эппендорфа объемом 1,5 мл) мин инкубирование. Процедура:
a. Добавляли 100 мкл предварительно нагретых микросом.
b. Добавляли 50 мкл 5 мкМ раствора тестируемого соединения.
c. Добавляли 500 мкл холодного стоп-раствора (ледяной метанол).
б. Добавляли 100 мкл раствора кофактора ЫАБРН в эппендорф.
ί минут инкубирование.
- 24 027922
a. Перемешивали вихрем эппендорф.
b. Добавляли 100 мкл раствора кофактора ΝΛΟΡΠ в эппендорф.
c. Добавляли 50 мкл 5 мкМ раствора тестируемого соединения. ά. Добавляли 100 мкл предварительно нагретых микросом.
е. Инкубировали эппендорф при 37°С 300 об./мин для 'ΐ' мин на термомиксере.
Г. Удаляли эппендорф с термомиксера.
д. Добавляли 500 мкл холодного стоп-раствора (ледяной метанол) й. Перемешивали вихрем эппендорф.
Оба образца, инкубированных в течение '0' и 'ΐ' минут, центрифугировали при 15, 000 § при 4°С в течение 15 мин 500 мкл раствора супернатанта удаляли и его подвергали ЖХ/МС анализу (81М - контроль заданных ионов).
Результаты выражали в виде % оставшегося тестируемого соединения=(МС площади пика образца 'ΐ' мин/МС площади пика образца '0' мин.)*100. Площадь МС использовали в виде среднего для двойных инъекций.
Моменты времени=0, 15, 30 и 60 мин для каждого тестируемого соединения.
Положительный контроль.
мкМ имипрамин - 5 мин и 2 мкМ имипрамин - 15 мин инкубирование использовали в качестве положительного контроля в экспериментах стабильности микросом печени у крыс и людей.
Результаты представлены в табл. 3.
Таблица 3
Стабильность микросом у мышей и крыс
Ιη УНго Метаболическая стабильность Соединение (1) Соединение (В) Соединение (С)
Микросомы крысы (% оставшихся)
15 мин 54% 1% 0%
30 мин 17% 0% 0%
1 ч 2% 0% 0%
Микросомы мыши (% оставшихся)
15 мин 99% 0% 0%
30 мин 98% 0% 0%
1 ч 82% 0% 0%
Неожиданно, как видно в табл. 1-3, соединение 1 было существенно более стабильным в микросомах мыши, крысы и человека и в гепатоцитах крысы и человека по сравнению со структурными аналогами соединениями В и С, описанными в АО 2007/024717, оба из которых, как было обнаружено, обладают плохой метаболической стабильностью ΐπ-νΐΐΓΟ в тестируемых системах, что делает эти соединения непригодными для разработок в качестве кандидатов для лекарственных средств. Неожиданно и непредсказуемо вытеснение Н или ОН компонентов в соединениях, известных из уровня техники, с помощью СООН компонента, приводит к соединению 1, которое проявляет высокую метаболическую стабильность во всех тестируемых системах. Повышение метаболической стабильности соединения 1 по сравнению с его структурными аналогами было действительно неожиданным и обосновывает неожиданные преимущества этого соединения по сравнению с соединениями, известными из уровня техники.
Все публикации, ссылки, патенты и патентные заявки, процитированные в настоящей заявке, полностью включены в качестве ссылки таким образом, если бы каждая отдельная заявка, патент или патентная публикация были специфически и индивидуально включены полностью в качестве ссылки.
Представленное выше описание специфических вариантов осуществления таким образом полностью раскрывает общую природу изобретения, что другие могут путем применения известных в настоящий период знаний, легко модифицировать и/или адаптировать для различных применений такие специфические варианты осуществления без чрезмерных экспериментов и в пределах объема заявленного изобретения, и, следовательно, такие адаптации и модификации должны и предназначены включаться с объем и диапазон эквивалентов раскрытых вариантов осуществления изобретения. Подразумевается, что фразеология или терминология, используемая в настоящей заявке, представлена с целью иллюстрации и без ограничения. Средства, материалы и стадии осуществления различных раскрытых функций могут принимать альтернативные формы без отклонения от объема изобретения.

Claims (30)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение, представленное структурой формулы (I)
    - 25 027922 где К представляет собой СООН; и его фармацевтически приемлемые соли.
  2. 2. Соединение в соответствии с п.1 в форме соли с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.
  3. 3. Соединение в соответствии с п.2, где соль выбирают из группы, включающей соль натрия, калия, магния, гемифумарат, гидрохлорид и гидробромид.
  4. 4. Соединение в соответствии с п.3, где соль представляет собой соль натрия или гемифумарат.
  5. 5. Соединение в соответствии с п.1, которое выбирают из группы, включающей
  6. 6. Соединение в соответствии с п.1, которое представлено структурой формулы (1) или его фармацевтически приемлемые соли.
  7. 7. Соединение в соответствии с п.6 в форме соли с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.
  8. 8. Соединение в соответствии с п.7, где соль выбирают из группы, включающей соль натрия, калия, магния, гемифумарат, гидрохлорид и гидробромид.
  9. 9. Соединение в соответствии с п.8, где соль представляет собой натриевую соль.
  10. 10. Соединение в соответствии с п.8, где соль представляет собой гемифумаратную соль.
  11. 11. Фармацевтическая композиция, которая содержит соединение в соответствии с любым из пп.110 в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями или носителями.
  12. 12. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.11 для лечения или предотвращения состояния, выбранного из группы, включающей нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания, мышечное утомление, нарушения и заболевания опорно-двигательного аппарата, нарушения и заболевания ЦНС, нейромышечные нарушения и заболевания, нарушения и заболевания костной системы, раковую кахексию, злокачественную гипертермию, диабет, внезапную сердечную смерть и синдром внезапной детской смерти, или для улучшения когнитивной функции.
  13. 13. Способ лечения или предотвращения состояния, выбранного из группы, включающей нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания, мышечное утомление, нарушения и заболевания опорно-двигательного аппарата, нарушения и заболевания ЦНС, нейромышечные нарушения и заболевания, нарушения и заболевания костной системы, раковую кахексию, злокачественную гипертермию, диабет, внезапную сердечную смерть и синдром внезапной детской смерти, или для улучшения когнитивной функции, введением субъекту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества соединения в соответствии с любым из пп.1-10 или фармацевтической композиции в соответствии с п.11.
  14. 14. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где состояние связано с ано- 26 027922 мальной функцией рецептора рианодина типа 1 (КуК1), рецептора рианодина типа 2 (КуК2), рецептора рианодина типа 3 (КуК3) или их комбинацией.
  15. 15. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где нарушения сердечной деятельности и кардиологические заболевания выбирают из группы, включающей нарушения и заболевания, связанные с аритмией сердца, выбранные из группы, включающей предсердную и желудочковую аритмию, предсердную и желудочковую фибрилляцию, предсердную и желудочковую тахиаритмию, предсердную и желудочковую тахикардию, катехоламинергическую полиморфную желудочковую тахикардию (СРУТ); сердечную ишемию/реперфузионное повреждение (Ι/К); хроническое обструктивное заболевание легких; Ι/К повреждение после коронарной ангиопластики или после тромболизиса для лечения инфаркта миокарда (ΜΙ); повышенное кровяное давление и сердечную недостаточность, выбранную из группы, состоящей из застойной сердечной недостаточности; хронической сердечной недостаточности; острой сердечной недостаточности; систолической сердечной недостаточности; диастолической сердечной недостаточности; острой декомпенсированной сердечной недостаточности.
  16. 16. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где мышечное утомление обусловлено заболеванием, нарушением или состоянием скелетных мышц.
  17. 17. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где скелетно-мышечное нарушение, заболевание или состояние выбирают из группы, включающей вызванное физической нагрузкой утомление скелетных мышц; вызванное физической нагрузкой мышечное утомление, обусловленное пролонгированной нагрузкой или нагрузкой высокой интенсивности; врожденную миопатию; мышечную дистрофию, такую как мышечная дистрофия Дюшенна (ΌΜΌ), мышечную дистрофию Беккера (ΒΜΟ), тазо-плечевую мышечную дистрофию (ΕΟΜΌ), плече-лопаточно-лицевую мышечную дистрофию, миотоническую мышечную дистрофию, врожденную мышечную дистрофию (ΈΜΩ), дистальную мышечную дистрофию, мышечную дистрофию Эмери-Дрейфуса, окулофарингеальную мышечную дистрофию; спинальную мышечную атрофию (8ΜА), спинальную и бульбарную мышечную атрофию (8ΒΜА), старческое мышечное утомление; саркопению, поражение сердцевины мышечных волокон; раковую кахексию; нарушения мочевого пузыря и недержание.
  18. 18. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где нарушения и заболевания ЦНС выбирают из группы, включающей болезнь Альцгеймера (АО), невропатию, пароксизмы, болезнь Паркинсона (РО), когнитивную дисфункцию и болезнь Хантингтона (НО); и нейромышечные нарушения и заболевания выбирают из группы, включающей спинально-церебеллярную атаксию (8СА) и боковой амиотрофический склероз (АЬ8, болезнь Лу Герига).
  19. 19. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.18, где когнитивная дисфункция связана со стрессом или возрастом, или где когнитивная функция, подлежащая улучшению, представляет собой кратковременную память, долговременную память, внимание или обучение, или где когнитивная дисфункция связана с заболеванием или нарушением, выбранным из группы, включающей болезнь Альцгеймера (АО), синдром дефицита внимания с гиперактивностью (АОНО), расстройства аутистического спектра (А8О), генерализированное тревожное расстройство (ОАО), обсессивно-компульсивное расстройство (ОСО), болезнь Паркинсона (РО), посттравматическое стрессовое расстройство (РТ8О), шизофрению, биполярное расстройство и большую депрессию.
  20. 20. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где состояние представляет собой раковую кахексию.
  21. 21. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.20, где раковая кахексия возникает вследствие злокачественного новообразования, имеющего метастазы в костях.
  22. 22. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где соединение используют в дозе, достаточной для восстановления или усиления связывания калстабин2 с КуК2.
  23. 23. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где соединение используют в дозе, достаточной для восстановления или усиления связывания калстабин1 с КуК1.
  24. 24. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, где соединение используют в дозе, достаточной для снижения утечки Са2' через КуК канал.
  25. 25. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.12, дополнительно включающее применение антисмыслового олигонуклеотида (АО), который является специфическим для сплайсинговой последовательности в мРНК, представляющей интерес, для усиления пропуска экзона в указанной мРНК, представляющей интерес.
  26. 26. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.25 для лечения мышечной дистрофии Дюшенна (ΟΜΟ), где антисмысловой олигонуклеотид (АО) является специфическим для сплайсинговой последовательности по меньшей мере одного экзона ΟΜΟ гена.
  27. 27. Применение фармацевтической композиции в соответствии с п.26, где антисмысловой олигонуклеотид (АО) является специфическим для сплайсинговой последовательности экзона 23, 45, 44, 50, 51, 52 и/или 53 ΟΜΟ гена.
  28. 28. Способ лечения субъекта, который имеет мышечную дистрофию Дюшенна (ΟΜΟ), который включает стадию введения указанному субъекту соединения в соответствии с любым из пп.1-10 или фармацевтической композиции в соответствии с п.11 в комбинации с антисмысловым олигонуклеотидом
    - 27 027922 (АО), который является специфическим для сплайсинговой последовательности по меньшей мере одного экзона ΌΜΌ гена.
  29. 29. Способ лечения субъекта в соответствии с п.28, где антисмысловой олигонуклеотид (АО) является специфическим для сплайсинговой последовательности экзона 23, 45, 44, 50, 51, 52 и/или 53 ΌΜΌ гена.
  30. 30. Способ получения соединения в соответствии с любым из пп.1-10, который включает стадию взаимодействия соединения формулы с соединением формулы где Ка представляет собой СООК1 или ϋΝ; К1 представляет собой С1-С4 алкил и Ь представляет собой уходящую группу, с получением соединения формулы и превращения группы К в группу К.
EA201401141A 2012-04-18 2013-04-17 Средства для лечения нарушений, вовлекающих модуляцию рецепторов рианодина EA027922B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261625890P 2012-04-18 2012-04-18
EP12167732.2A EP2708535A1 (en) 2012-05-11 2012-05-11 Agents for treating disorders involving modulation of ryanodine receptors
PCT/EP2013/057958 WO2013156505A1 (en) 2012-04-18 2013-04-17 Agents for treating disorders involving modulation of ryanodine receptors

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201401141A1 EA201401141A1 (ru) 2015-04-30
EA201401141A8 EA201401141A8 (ru) 2015-08-31
EA027922B1 true EA027922B1 (ru) 2017-09-29

Family

ID=49165460

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201401141A EA027922B1 (ru) 2012-04-18 2013-04-17 Средства для лечения нарушений, вовлекающих модуляцию рецепторов рианодина

Country Status (48)

Country Link
US (3) US20130281512A1 (ru)
EP (2) EP2708535A1 (ru)
JP (1) JP5965542B2 (ru)
KR (1) KR101731459B1 (ru)
CN (1) CN104350045B (ru)
AP (1) AP3591A (ru)
AR (1) AR090712A1 (ru)
AU (1) AU2013248313B2 (ru)
BR (1) BR112014025670B1 (ru)
CA (1) CA2870599C (ru)
CL (1) CL2014002756A1 (ru)
CO (1) CO7091184A2 (ru)
CR (1) CR20140476A (ru)
CU (1) CU24327B1 (ru)
CY (1) CY1115826T1 (ru)
DK (1) DK2653466T3 (ru)
DO (1) DOP2014000230A (ru)
EA (1) EA027922B1 (ru)
EC (1) ECSP14027564A (ru)
ES (1) ES2529890T3 (ru)
GT (1) GT201400222A (ru)
HK (2) HK1192537A1 (ru)
HR (1) HRP20141113T8 (ru)
HU (1) HUE024284T2 (ru)
IL (1) IL235043A (ru)
JO (1) JO3070B1 (ru)
MA (1) MA37525B1 (ru)
MD (1) MD4489C1 (ru)
ME (1) ME01969B (ru)
MX (1) MX350890B (ru)
MY (1) MY167783A (ru)
NI (1) NI201400123A (ru)
NZ (1) NZ701122A (ru)
PE (1) PE20142193A1 (ru)
PH (1) PH12014502256B1 (ru)
PL (1) PL2653466T3 (ru)
PT (1) PT2653466E (ru)
RS (1) RS53711B1 (ru)
RU (1) RU2644350C2 (ru)
SA (1) SA113340479B1 (ru)
SG (1) SG11201406404YA (ru)
SI (1) SI2653466T1 (ru)
TN (1) TN2014000424A1 (ru)
TW (1) TWI507399B (ru)
UA (1) UA113759C2 (ru)
UY (1) UY34742A (ru)
WO (1) WO2013156505A1 (ru)
ZA (1) ZA201407499B (ru)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014144654A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Rosalind Franklin University Of Medicine And Science Compounds for stabilizing ryanodine receptors from aberrant levels of calcium release
US9725429B2 (en) 2013-03-15 2017-08-08 Rosalind Franklin University Of Medicine And Science Furanyl-imine and thiofuranyl-imine compounds for stabilizing ryanodine receptors from aberrant levels of calcium release
EP4082538B1 (en) 2013-07-18 2024-02-14 Baylor College of Medicine Methods and compositions for treatment of muscle wasting, muscle weakness, and/or cachexia
WO2015197562A1 (en) * 2014-06-23 2015-12-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of disorders or diseases associated with ryanodine receptor dysfunction
CN106795148B (zh) * 2014-07-30 2019-12-10 埃塔斯制药株式会社 1,4-苯并硫氮杂*-1-氧化物衍生物的光学异构体及使用它的医药组合物
WO2016109596A1 (en) * 2014-12-30 2016-07-07 Myotherix, Inc. Novel calcium modulators
ES2643856B1 (es) 2016-05-24 2018-08-03 Universidad Del Pais Vasco / Euskal Herriko Unibertsitatea Triazoles para la regulación de la homeostasis de calcio intracelular
US11426415B2 (en) 2017-03-06 2022-08-30 Washington University Treatment for Wolfram syndrome and other endoplasmic reticulum stress disorders
WO2019082940A1 (ja) * 2017-10-25 2019-05-02 学校法人順天堂 リアノジン受容体阻害薬
US11026905B2 (en) 2018-04-19 2021-06-08 Tvardi Therapeutics, Inc. STAT3 inhibitors
ES2911428T3 (es) 2018-04-19 2022-05-19 Tvardi Therapeutics Inc Inhibidores de STAT3
CA3159181A1 (en) 2020-01-24 2021-07-29 Imran ALIBHAI Therapeutic compounds, formulations, and uses thereof
MX2023004745A (es) * 2020-11-06 2023-05-10 Cytokinetics Inc 1,4-diazepanonas biciclicas y sus usos terapeuticos.
JP2024503045A (ja) 2021-01-08 2024-01-24 アームゴ・ファーマ・インコーポレーテッド リアノジン受容体調節因子の結晶形態およびその使用
US11717526B2 (en) 2021-05-20 2023-08-08 Armgo Pharma, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a ryanodine receptor modulator and uses thereof
EP4433062A1 (en) * 2021-11-16 2024-09-25 Armgo Pharma, Inc. Therapeutic compounds
EP4230196A1 (en) 2022-02-21 2023-08-23 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of dystrophinopathies
WO2023244946A1 (en) 2022-06-15 2023-12-21 Tvardi Therapeutics, Inc. Prodrugs of stat3 inhibitors

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007024717A2 (en) * 2005-08-25 2007-03-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the ryr receptors
WO2008021432A2 (en) * 2006-08-17 2008-02-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for treatment of conditions affecting the nervous system
WO2008021439A2 (en) * 2006-08-17 2008-02-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for treatment of cardiac hypertrophy
WO2008060332A2 (en) * 2006-06-02 2008-05-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for treating or reducing muscle fatigue
WO2012037105A1 (en) * 2010-09-14 2012-03-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods of treating, ameliorating or preventing stress-induced neuronal disorders and diseases

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE58901634D1 (de) * 1988-11-05 1992-07-16 Bayer Ag Verfahren zur kernchlorierung von aromatischen kohlenwasserstoffen.
GB9021813D0 (en) * 1990-10-08 1990-11-21 Ici Plc Tricyclic heterocycles
PT100631B (pt) 1991-06-28 1999-06-30 Smithkline Beecham Corp Antagonistas biciclicos de fibrinogenio, seu uso e composicoes farmaceuticas que os contem
HUT71819A (en) * 1992-11-09 1996-02-28 Boots Co Plc 1,4-benzothiazepine derivatives and pharmaceutical compositions containing them
FR2752017B1 (fr) 1996-08-01 1998-10-16 Hispano Suiza Sa Inverseur de poussee de turboreacteur a portes formant ecopes
GB9914745D0 (en) 1999-06-24 1999-08-25 Knoll Ag Therapeutic agents
US7879840B2 (en) * 2005-08-25 2011-02-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US8022058B2 (en) * 2000-05-10 2011-09-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US7718644B2 (en) 2004-01-22 2010-05-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrhythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2) and uses thereof
US20040229781A1 (en) * 2000-05-10 2004-11-18 Marks Andrew Robert Compounds and methods for treating and preventing exercise-induced cardiac arrhythmias
US20020183307A1 (en) 2000-07-26 2002-12-05 Tremont Samuel J. Novel 1,4-benzothiazephine and 1,5-benzothiazepine compounds as inhibitors of apical sodium co-dependent bile acid transport and taurocholate uptake
EP1392291B1 (en) 2000-10-30 2007-05-30 Janssen Pharmaceutica N.V. Tripeptidyl peptidase inhibitors
US7544678B2 (en) * 2002-11-05 2009-06-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2)
AU2004220548A1 (en) 2003-03-07 2004-09-23 The Trustees Of Columbia University, In The City Of New York Type 1 ryanodine receptor-based methods
US20090292119A1 (en) * 2003-10-07 2009-11-26 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for synthesizing benzothiazepine compounds
WO2006101495A1 (en) 2005-03-23 2006-09-28 Battelle Memorial Institute Advanced capability rfid system
WO2007127145A2 (en) 2006-04-25 2007-11-08 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods and compositions for treatment of cardiac arrhythmia in non-human animals
WO2008064264A2 (en) 2006-11-20 2008-05-29 Armgo Pharma, Inc. In vivo methods for identifying and screening compounds that modulate calstabin binding to a ryanodine receptor
ME01989B (me) * 2008-03-03 2012-08-31 Servier Lab Postupak za proizvodnju benzotiazepina od gama-aminoalkilbenzena
CN101891706B (zh) * 2010-04-09 2013-05-29 复旦大学 3,4-二氢苯并[f][1,4]噻氮杂*类化合物或其盐及其药物用途
WO2012019071A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods of preventing and treating sarcopenia
WO2012019076A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for preventing and treating cardiac ischemia/reperfusion injury

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007024717A2 (en) * 2005-08-25 2007-03-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the ryr receptors
WO2008060332A2 (en) * 2006-06-02 2008-05-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for treating or reducing muscle fatigue
WO2008021432A2 (en) * 2006-08-17 2008-02-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for treatment of conditions affecting the nervous system
WO2008021439A2 (en) * 2006-08-17 2008-02-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for treatment of cardiac hypertrophy
WO2012037105A1 (en) * 2010-09-14 2012-03-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods of treating, ameliorating or preventing stress-induced neuronal disorders and diseases

Also Published As

Publication number Publication date
GT201400222A (es) 2018-09-28
DK2653466T3 (en) 2015-02-02
CR20140476A (es) 2014-12-02
JP2015514736A (ja) 2015-05-21
CO7091184A2 (es) 2014-10-21
MD4489C1 (ru) 2018-01-31
SG11201406404YA (en) 2014-11-27
MX350890B (es) 2017-09-25
NI201400123A (es) 2015-03-05
HRP20141113T1 (hr) 2015-01-02
UA113759C2 (xx) 2017-03-10
RU2014145939A (ru) 2016-06-10
RU2644350C2 (ru) 2018-02-09
TW201345900A (zh) 2013-11-16
PH12014502256A1 (en) 2015-02-09
EP2708535A1 (en) 2014-03-19
JP5965542B2 (ja) 2016-08-10
CA2870599C (en) 2016-08-16
ECSP14027564A (es) 2015-08-31
MX2014012575A (es) 2015-07-06
US20140378437A1 (en) 2014-12-25
EP2653466B1 (en) 2014-10-29
TWI507399B (zh) 2015-11-11
US20140088171A1 (en) 2014-03-27
AP2014008011A0 (en) 2014-10-31
IL235043A (en) 2016-10-31
AP3591A (en) 2016-02-15
RS53711B1 (en) 2015-04-30
PL2653466T3 (pl) 2015-04-30
NZ701122A (en) 2016-07-29
CN104350045B (zh) 2016-08-24
MA37525B1 (fr) 2016-12-30
CY1115826T1 (el) 2017-01-25
EA201401141A8 (ru) 2015-08-31
ES2529890T8 (es) 2015-08-24
MD20140119A2 (ru) 2015-04-30
AU2013248313B2 (en) 2016-11-10
JO3070B1 (ar) 2017-03-15
CU24327B1 (es) 2018-03-13
CU20140119A7 (es) 2015-03-30
PH12014502256B1 (en) 2015-02-09
US20130281512A1 (en) 2013-10-24
ZA201407499B (en) 2015-12-23
HRP20141113T8 (hr) 2015-11-06
AU2013248313A1 (en) 2014-10-30
DOP2014000230A (es) 2014-12-15
KR101731459B1 (ko) 2017-04-28
SA113340479B1 (ar) 2015-09-03
UY34742A (es) 2013-11-29
MY167783A (en) 2018-09-25
CA2870599A1 (en) 2013-10-24
EP2653466A1 (en) 2013-10-23
WO2013156505A1 (en) 2013-10-24
HUE024284T2 (en) 2016-01-28
ME01969B (me) 2015-05-20
PT2653466E (pt) 2014-12-03
ES2529890T3 (es) 2015-02-25
CL2014002756A1 (es) 2015-06-12
HK1207073A1 (zh) 2016-01-22
PE20142193A1 (es) 2014-12-31
MD4489B1 (ru) 2017-06-30
SI2653466T1 (sl) 2015-03-31
MA37525A1 (fr) 2016-05-31
HK1192537A1 (zh) 2014-08-22
EA201401141A1 (ru) 2015-04-30
CN104350045A (zh) 2015-02-11
US8853198B2 (en) 2014-10-07
TN2014000424A1 (fr) 2016-03-30
AR090712A1 (es) 2014-12-03
BR112014025670B1 (pt) 2020-06-30
KR20150003347A (ko) 2015-01-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA027922B1 (ru) Средства для лечения нарушений, вовлекающих модуляцию рецепторов рианодина
EA018922B1 (ru) Модулирующие сиртуин соединения
BG107994A (bg) 4-&#34;л&#34;оро-n-индан-2-илб...нзамид и използван...&#39;о м&#34; ка&#39;о &#34;арма-...в&#39;и-но &#39;р...д&#39;&#39;во
US20220298112A1 (en) N-(PHENYL)-Indole-3-Sulfonamide Derivatives And Related Compounds As GPR17 Modulators For Treating CNS Disorders Such As Multiple Sclerosis
US20100331418A1 (en) Pan-Antagonists For The Androgen Receptor And Androgen Receptor Mutants Associated With Anti-Androgen Withdrawal
JP2008179541A (ja) 神経因性疼痛治療薬
CN114409680A (zh) Ppar激动剂及其应用
EP4155294A1 (en) Compound for preventing or treating lipid metabolism-related diseases
US9206132B2 (en) Use of a novel aminopyridine derivative to prevent or treat cancer
WO2020249120A1 (zh) 氨基硫醇类化合物作为脑神经或心脏保护剂的用途
WO2021041866A1 (en) Small molecule agonists of mucolipin 1 and uses thereof
KR102701383B1 (ko) 리포-하이드록삼산 유도체 및 이의 약학적 용도
CN108299411B (zh) 4,4-二苯基哌啶类化合物或其可药用盐、药物组合物及用途
WO2024036223A1 (en) Epicatechin inhibiting atp hydrolysis
CN115974719A (zh) 化合物、包括所述化合物的药物组合物及其用途
WO2023225563A2 (en) Selective sigma-2 receptor ligands as modulators of tmem97
US20180116983A1 (en) Compounds for treating disorders associated with bk channel modulation

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU