UA113759C2 - Засоби для лікування порушень із залученням модуляції рецепторів ріанодіну - Google Patents

Засоби для лікування порушень із залученням модуляції рецепторів ріанодіну Download PDF

Info

Publication number
UA113759C2
UA113759C2 UAA201412301A UAA201412301A UA113759C2 UA 113759 C2 UA113759 C2 UA 113759C2 UA A201412301 A UAA201412301 A UA A201412301A UA A201412301 A UAA201412301 A UA A201412301A UA 113759 C2 UA113759 C2 UA 113759C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
compound
diseases
disease
disorders
treatment
Prior art date
Application number
UAA201412301A
Other languages
English (en)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed filed Critical
Publication of UA113759C2 publication Critical patent/UA113759C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D281/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
    • C07D281/02—Seven-membered rings
    • C07D281/04—Seven-membered rings having the hetero atoms in positions 1 and 4
    • C07D281/08—Seven-membered rings having the hetero atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D281/10—Seven-membered rings having the hetero atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/554—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one sulfur as ring hetero atoms, e.g. clothiapine, diltiazem
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/02—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms with only carbon-to-carbon double bonds as unsaturation
    • C07C57/13—Dicarboxylic acids
    • C07C57/15—Fumaric acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D285/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D275/00 - C07D283/00
    • C07D285/36—Seven-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/841—Muscles; heart

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Transplantation (AREA)

Abstract

Даний винахід стосується похідних 1,4-бензотіазепіну та їх застосування у лікуванні станів, порушень і захворювань, пов'язаних з рецепторами ріанодину (RyR), які регулюють функціонування кальцієвих каналів у клітинах. Винахід також описує фармацевтичні композиції, які містять такі сполуки, і їх застосування у лікуванні захворювань і станів, пов'язаних з RyR, зокрема порушень серцевої, скелетно-м'язової і центральної нервової системи (ЦНС).

Description

ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід відноситься до похідних 1,4-бензотіазепіну та їх використання для лікування порушень і захворювань, пов'язаних з рецепторами ріанодину (КУК), які регулюють функціонування кальцієвих каналів у клітинах. Винахід також описує фармацевтичні композиції, які містять такі сполуки і їх використання для лікування захворювань і станів, пов'язаних з КУК, зокрема, порушень серцевої, скелетно-м'язової і центральної нервової системи (ЦНС).
ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ
Саркоплазматичний ретикулум (СР) являє собою структуру в клітинах, яка функціонує, серед іншого, як спеціалізований внутрішньоклітинний кальцієвий (Са?) пул. Рецептори ріанодину (КУК) являють собою канали у саркоплазматичному ретикулумі, які відкриваються і закриваються, щоб регулювати вивільнення Са: з СР у внутрішньоклітинну цитоплазму клітини.
Вивільнення Са: у цитоплазму з СР підвищує цитоплазматичну концентрацію Са. Виявлена можливість Кук відноситься до ймовірності того, що Кук відкривається у будь-який певний момент, а, отже, є здатним вивільняти Са-" у цитоплазму з СР.
Існує три типи КУК, всі з яких є високо гомологічними: КУК!1, Кука і КУКЗ. Кук знаходиться переважно у скелетних м'язах, а також інших тканинах, Кук2 знаходиться переважно у серці, а також інших тканинах, і КуКкКЗ знаходиться у головному мозку, а також інших тканинах. Кук являє собою тетрамер. Частина комплексу Кук утворена чотирма поліпептидами Кук у поєднанні з чотирма ЕК5БОб-зв'язуючими білками (ЕКВР) (калстабінами), зокрема ЕКВР12 (калстабін1) і ЕКВР 12.6 (калстабін2). Калстабіні зв'язується з КУуК! і КУКЗ, тоді як калстабін2 зв'язується з Кук2. Калстабіни зв'язуються з Кук (одна молекула на субодиницю КУБ), стабілізують функцію Кук, сприяють сполученому гейтуванню між сусідніми Кук. і запобігають аномальній активації (витоку Са") каналу шляхом стабілізації закритого стану каналу.
Рецептор ріанодину 2 і серцево-судинні захворювання
У серцевому поперечносмугастому м'язі, КуКк2 є основним каналом вивільнення Саг», необхідним для електромеханічного (ЕМ) сполучення і скорочення м'язів. В процесі ЕМ сполучення, деполяризація клітинної мембрани серцевого м'яза під час нульової фази потенціалу дії активує потенціалзалежні канали Са". Приплив Са" через відкриті потенціалзалежні канали в свою чергу ініціює вивільнення Са?" з СР через Бук2. Цей процес є
Ко) відомим як Са?-індуковане вивільнення Са". ВуВ2-опосередковане Са? -індуковане вивільнення Са?" потім активує скорочувальні білки у серцевій клітині, що призводить до скорочення серцевого м'яза.
Фосфорилювання Кука протеїнкіназою А (ПКА) є важливою частиною реакції "боротьби або втечі" (адаптаційної антистресової реакції), яка підвищує приріст серцевого ЄС сполучення шляхом збільшення кількості вивільненого Са? для даного тригера. Цей сигнальний шлях забезпечує механізм, за допомогою якого активація симпатичної нервової системи (СНО), у відповідь на стрес, призводить до підвищення об'ємної швидкості кровотоку серця.
Фосфорилювання Кук2 протеїнкіназою А призводить до часткової дисоціації калстабіну2 з каналу, що, в свою чергу, призводить до підвищеної ймовірності відкриття, і підвищеного вивільнення Са": з СР у внутрішньоклітинну цитоплазму.
Серцева недостатність (СН) характеризується стійким гіперадренергічним станом, при якому рівні катехоламінів у сироватці є хронічно підвищеними. Одним з наслідків такого хронічного гіперадренергічного стану є постійне ПКА-гіперфосфорилювання Кука, таким чином, що 3-4 з чотирьох 5Зег2808 у кожному гомотетрамерному каналі КуКк2 є хронічно фосфорильованими (Магх 50, еї аї. СеїЇ, 2000:101(4):365-376). Зокрема, хронічне ПКА- гіперфосфорилювання КукК2 пов'язане з елімінацією субодиниці калстабіну2, що стабілізує канал, з макромолекулярного комплексу каналу КукК2. Елімінація калстабіну призводить до діастолічного "витоку" Са? з СР через комплекс Кук, що сприяє порушенню скорочувальної здатності (Магх еї аїЇ., 2000). Внаслідок активації внутрішніх деполяризуючих струмів, цей діастолічний "витік" Са? з СР також пов'язаний зі смертельною серцевою аритмією (І еппагі еї аї, У Сіїп Іпмевзі. 2008;118(6):2230-2245). Дійсно, миші, створені методами генної інженерії, з
ЕУуК2, позбавленим сайту ПКА-фосфорилювання, є захищеними від прогресування СН після інфаркту міокарда (ІМ) (Уейгеп5 ХН еї аї. Ргос Май Асад 5сі ОБА. 2006;103(3):511-518). Крім того, хронічне ПКА-гіперфосфорилювання Кук2 при СН пов'язане з ремоделюванням макромолекулярного комплексу КукК2, який включає в себе елімінацію фосфатаз (Магх еї аї. 2000) РРІ і РР2А (послаблюючи дефосфорилювання бег2808) і цАМФ-специфічної фосфодіестерази типу 4 (РОЕ40О3) з комплексу Кук2. Елімінація РОЕ4О3З з комплексу Кук2 спричиняє стале підвищення місцевих рівнів ЦАМФ (І еппагі ЗЕ, еї а!., Сеїї 2005;123(1):25-35).
Таким чином, діастолічний витік Са? з СР сприяє прогресуванню СН і аритмії. Крім того, бо нещодавній звіт засвідчив, що активація Кук2-528080--/- (аспарагінова кислота, що заміняє серин 2808) у мишей, що імітує конститутивне ПКА-гіперфосфорилювання Кук2, демонструє елімінацію калстабіну?2 і негерметичність (витік) каналу Кук2. У мишей Кук2-528080-/-- розвивається вікова кардіоміопатія, вони демонструють підвищене окислення і нітрозилювання
Ргугг, зниження вмісту накопиченого Са?" в СР, та підвищення діастолічного витоку Са?" з СР.
Після інфаркту міокарда, миші Кук2-528080-/- мають підвищену смертність в порівнянні з однопослідними тваринами дикого типу (МУТ). Введення 5107, 1,4-бензотіазепіну, що стабілізує взаємодії Кук2-калстабіну2 (МО 2007/0247 17), інгібує Кук2-опосередкований діастолічний витік
Са з СР і знижує прогресування СН як у мишей дикого типу, так і у мишей Кук2-528080-/-- (Зпап еї а!., У Сіїп Іпмеві. 2010 Оес 17120(12):4375-87).
Крім того, Кук2 містить близько 33 вільних тіолових залишків, які роблять його дуже чутливим до стану клітинного окислення-відновлення. Окислення цистеїну сприяє відкриттю
РУК і витоку Са? з СР. пап еї аї., 2010, продемонстрували, що окислення і нітрозилювання
Рука та дисоціація стабілізуючої субодиниці калстабіну2 з Кука2 викликає витік Са: з СР.
Катехоламінергічна поліморфна шлуночкова тахікардія (КПШТ) є спадковим порушенням у осіб зі структурно нормальним серцем. Понад 50 різних мутацій Кук2 були пов'язані з КПШТ.
Пацієнти з КПШТ страждають від непритомності і раптової серцевої смерті (РСС) від малечого до дорослого віку, і до 35 років смертність становить до 5095. Пацієнти з КОШТ мають шлуночкові аритмії у разі фізичного навантаження, але не зазнають аритмії у стані спокою.
Мутації КуКк2, пов'язані з КПШТ, призводять до втрати "герметичності" каналів КУК2 внаслідок зниження зв'язування субодиниці калстабіну2 (Іеппагі еї аїЇ.,, 2008). Миші, гетерозиготні по мутації К24745 у КуКк2 (миші Кук2-К24745), демонстрували спонтанні генералізовані тоніко- клонічні напади (які сталися за відсутності серцевої аритмії), шлуночкові аритмії, викликані фізичним навантаженням, і РОС. Введення 5107 підвищує зв'язування калстабіну2 з каналом
Вун2-к24745 мутанта, інгібує витік каналу, запобігає серцевим аритміям і підвищує судомний поріг (І еппагі еї аї., 2008).
Рецептор ріанодину 1 і скелетно-м'язові захворювання
Скорочення скелетних м'язів активується шляхом вивільнення Са?" з СР через канал КУК1.
Деполяризація мембрани поперечної (Т)-трубочки міоциту активує датчик напруги дигідропіридинового рецептора (Сам1.1), що в свою чергу активує канали КуУК1! через пряму білок-білюову взаємодію, викликаючи вивільнення запасів Са?" з СР. Са? зв'язується з тропоніном С, забезпечуючи виникнення актин-міозин поперечних зв'язків і скорочення саркомеру.
В умовах тривалого м'язового стресу (наприклад, під час марафонського бігу) або при таких хворобах, як серцева недостатність, обидва з яких характеризується хронічною активацією симпатичної нервової системи (СНО), функція скелетних м'язів порушується, можливо внаслідок зміненого електромеханічного (ЕМ) сполучення. Зокрема, кількість Са?", вивільненого з СР під час кожного скорочення м'язу, зменшується, можуть мати місце явища аберантного вивільнення Са": і зворотне захоплення Са?" сповільнюється (РеїКеп, 5, єї аїІ. 2003. 9. Сеї! Віої. 160:919-928). Ці спостереження наводять на думку про те, що шкідливі ефекти хронічної активації симпатичної нервової системи у скелетних м'язах можуть бути викликані, принаймні частково, дефектами у сигналізації Саг-.
Макромолекулярний комплекс Кук! складається з тетрамеру субодиниці 560-кДа КУК1, що утворює каркас для білків, які регулюють функцію каналу, включаючи ПКА і фосфодіестеразу 403 (РОЕ403), протєїнфосфатазу 1 (РР) і калстабін1. А-кіназа якірний білок (пАКАР) націлює
ПКА ї РОЕ40О3 на КУКТ, в той час як спінофілін націлює РРІ1 на канал (Маїгх єї а. 2000; ВиПапіев5 еї аї., СеїІ, 1994, 77, 513-523; ВейПпдег єї аїЇ. У. Сііп. Іпме5і. 2008, 118, 445-53). Каталітичні і регуляторні субодиниці ПКА, РР1 і РОЕ4О3 регулюють ПКА-опосередковане фосфорилювання
КУКІ! у бБег284 3 (бег2844 у мишей). Було продемонстровано, що ПКА-опосередковане фосфорилювання КУуКІ! у Бег2844 підвищує чутливість каналу до цитоплазматичного Са, знижує спорідненість (афінність) зв'язування калстабіну! з КУКТ, і дестабілізує закритий стан каналу (Кеїкеп еї аїЇ., 2003; Магх, 5.0. єї аїЇ., бсієпсе, 1998, 281:818-821). Концентрації калстабіну! у скелетних м'язах, як повідомляється, становлять приблизно 200 нМ, і ПКА- фосфорилювання Кук знижує спорідненість зв'язування калстабіну! з КуУК1 з приблизно 100- 200 НМ до понад 600 нМ. Таким чином, у фізіологічних умовах, зниження спорідненості зв'язування калстабінуї з Кук!, в результаті ПКА-фосфорилювання Кук! у Зег2843, є достатнім, щоб істотно зменшити кількість калстабіну!, присутнього у комплексі КукК1. Хронічне
ПКА-гіперфосфорилювання КУК!1 у бег2843 (визначається як ПКА-фосфорилювання З або 4 з 4
ПКА 5Зег2843 сайтів, присутніх у кожному гомотетрамері КУК!) призводить до виникнення "негерметичних" каналів (тобто, каналів, схильних до відкриття у стані спокою), які сприяють бо дисфункції скелетних м'язів, пов'язаній з постійними гіперадренергічними станами, які виникають у пацієнтів з серцевою недостатністю (КеїКеп еї аї., 2003).
Крім того, регулювання Кук! шляхом посттрансляційних модифікацій, інших ніж фосфорилювання, наприклад, шляхом нітрозилювання вільних сульфгідрильних груп У цистеїнових залишках (5-нітрозилювання), а також шляхом окислення каналу, як повідомляється, підвищують активність каналу КуКк!. 5-нітрозилювання і окислення КУК!, кожне з яких, як було продемонстровано, знижують зв'язування калстабіну! з КУК1.
Як повідомлялося раніше у Веїїпдег еї аї. (Ргос. Маї!. Асад. зЗсі. 2008, 105(6):2198-2002), під час екстремального фізичного навантаження у мишей і людей, КУК! поступово ПКА- гіперфосфорилюється, 5-нітрозилюється і зазнає елімінації РОЕ4О3 і калстабіну!, в результаті чого виникають "негерметичні "канали, які спричиняють зниження здатності до фізичного навантаження у мишей. Введення 5107 запобігає елімінації калстабінуї з комплексу КУК'1, покращує формування сили і здатності до фізичного навантаження та знижує Са залежну активність нейтральної протеази - кальпаїну і рівні концентрації креатинін-кінази у плазмі крові.
М'язова дистрофія Дюшена (МДД) є одним з найпоширеніших смертельних генетичних захворювань дитячого віку. МДД є зчепленою з Х-хромосомою і на неї страждає 1 з 3500 новонароджених хлопчиків, і зазвичай вона призводить до смерті у віці 30 років від дихальної або серцевої недостатності. Мутації дистрофіну, пов'язані з МДД, призводять до повної втрати білка дистрофіну, тим самим порушуючи зв'язок між цитоскелетом субсарколеми і позаклітинним матриксом. Цей зв'язок має важливе значення для захисту і стабілізації м'язів проти травм, викликаних скороченням. У даний час МДД є невиліковною і більшість видів клінічної терапії є паліативними. Новими видами втручання у клінічних дослідженнях Фази ІЛІ є пропуск екзонів, інгібування міостатину і підвищувальна регуляція атрофіну. Тим не менш, існують проблеми з системною доставкою, підтримкою пропуску екзонів і підвищувальною регуляцією атрофіну. Крім того, у клінічних дослідженнях Фази І/ЛІ інактивація міостатину для підвищення розміру м'язів не призвела до покращення міцності або функції м'язів. Сарколемна нестабільність внаслідок мутацій дистрофіну має каскадний ефект. Одним з основних ефектів є підвищена цитозольна концентрація Са", яка призводить до активації Са? -залежних протеаз (кальпаїнів). Іншим ефектом є запалення і підвищена активність індуцибельної синтази оксиду азоту (ІМО5), що може призвести до окислення/нітрозилювання білків, ліпідів і ДНК. М'язова
Зо патологія МДД є прогресивною і набагато перевищує нестабільність сарколеми. Таким чином, патологія узгоджується з нестабільністю сарколеми, підвищуючи сприйнятливість до подальшої травми. Нещодавно було продемонстровано, що надмірне окислення або нітрозилювання Кук1 може порушити взаємодію калстабіну! з комплексом Кук, що призводить до нещільності КУуК1 і м'язової слабкості у мишачої моделі м'язової дистрофії (тах) і, що лікування за допомогою 5107 покращує показники функції м'язів у цій мишачій моделі (Веїподег, А. еї аІ. 2009, Маїшге
Меадісіпе, 15:325-330).
Вікова втрата м'язової маси і сили (саркопенія) сприяє інвалідності і підвищенню смертності.
Апаегззоп, О. єї аї. (Сеї! Меїаб. 2011 Аца 3;14(2):196-207) повідомляють, що КУКІ від мишей, що зістарілися (24 місяці) є окисленим, цистеїн-нітрозильованим і збіднілим на калстабін1, порівняно з КУКІ! від дорослих мишей молодшого віку (3-6 місяців). Така реконструкція комплексу каналу КУуК! призвела до утворення "негерметичних" каналів з підвищеною ймовірністю відкриття, що призводить до внутрішньоклітинного витоку кальцію у скелетних м'язах. Введення мишам, що зістарілися, 5107 стабілізувало зв'язування калстабіну! з КУК!1, знизило внутрішньоклітинний витік кальцію, знизило реактивні форми кисню (КО5) і посилило тетанічне вивільнення Са", специфічну для м'язів силу і здатність до фізичного навантаження.
Міжнародні патентні публікації РСТ УМО 2005/094457, УМО 2006/101496 і УМО 2007/024717 описують похідні 1,4-бензотіазепіну і їх використання при лікуванні серцевих, скелетно-м'язових і когнітивних порушень, серед інших.
Міжнародна патентна публікація РСТ УМО 2008/060332 відноситься до використання 1,4- бензотіазепіну для лікування м'язової втоми у пацієнтів, які страждають від патології, такої як м'язова дистрофія, або у пацієнтів, які страждають від м'язової втоми в результаті стійкого, тривалого та/або інтенсивного навантаження або хронічного стресу.
Міжнародна патентна публікація РСТ УМО 2008/021432 відноситься до використання 1,4- бензотіазепіну для лікування та/або профілактики захворювань, порушень і станів, які впливають на нервову систему.
Міжнародна патентна публікація РСТ УМО 2012/019076 відноситься до використання похідних 1,4-бензотіазепіну для лікування та/або профілактики серцевої ішемії/реперфузійного пошкодження. ЕРацйсоппіег еї аї., Ргос Маї! Асай 5сі ОБА, 2011, 108(32): 13258-63 повідомляють про те, що витік КУК, опосередкований активацією каспази-8, призводить до травми лівого бо шлуночка після ішемії-реперфузійного пошкодження міокарда, і що лікування за допомогою
5107 інгібувало витік Са: з СР, знизило шлуночкові аритмії, розмір інфаркту і ремоделювання лівого шлуночка через 15 діб після реперфузії.
Міжнародна патентна публікація РСТ УМО 2012/019071 відноситься до використання похідних 1,4-бензотіазепіну для лікування та/або профілактики саркопенії.
Міжнародна патентна публікація РСТ УУО 2012/037105 відноситься до використання похідних 1,4-бензотіазепіну для лікування та/або профілактики нейронних порушень і захворювань, спричинених стресом.
Існує потреба виявлення нових сполук, ефективних для лікування порушень і захворювань, пов'язаних з КУК, в тому числі скелетно-м'язових і серцевих порушень і захворювань. Більш конкретно, залишається потреба у виявленні нових засобів, які можуть бути використані для лікування порушень, пов'язаних з Кук, наприклад, усунення витоку в каналах КУБК, і підвищення зв'язування калстабінів з ПКА-фосфорильованими / оксигенованими / нітрозильованими КУЄ. та з мутантними КуК, які в іншому випадку мають понижену спорідненість (афінність) з калстабінами або не зв'язується з ними.
СУТНІСТЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід відноситься до нових похідних 1,4-бензотіазепіну і їх фармацевтично прийнятних солей. У деяких варіантах здійснення винаходу сполуки за даним винаходом є стабілізаторами кальцієвих каналів рецептора ріанодину (РУБ), які іноді називають "Кусаї5 "М",
Даний винахід також відноситься до способів використання цих сполук для лікування порушень і захворювань, пов'язаних з КУК.
Сполуки за даним винаходом обирають з похідних 1,4-бензотіазепіну, описаних у патенті
МО 2007/024717. Патент МО 2007/024717 описує структурно подібні сполуки, проте, як додатково описано в даному документі, було виявлено, що ці сполуки є дуже нестійкими а, отже, їх терапевтичне застосування як лікарських засобів є обмеженим. Проблема, що лежить в основі цього застосування, таким чином, полягає у забезпеченні альтернативних похідних 1,4- бензотіазепіну, які є не тільки фармакологічно активними, але також мають сприятливі властивості, такі як висока метаболічна стабільність, а, отже, є придатними як лікарські засоби при лікуванні захворювань і станів, пов'язаних з КУК, наприклад, порушень серцевої, скелетно- м'язової і центральної нервової системи (ЦНС). Несподівано було виявлено, що сполуки
Зо формули (І) є стабільними, а також фармакологічно активними, таким чином, забезпечуючи технічне рішення проблеми, що лежить в основі даного винаходу.
Сполуки за даним винаходом представлені структурою Формули (1): нзсо м ШЕ
С
-Ж
З
() де
Е являє собою СООН; і її фармацевтично прийнятні солі.
Сполуки Формули (І) можуть бути присутніми у формі солі з фармацевтично прийнятною кислотою або основою. Такі солі переважно обирають із групи, що складається з солей натрію, калію, магнію, геміфумарату, гідрохлориду та гідроброміду, причому кожна така можливість представляє собою окремий варіант здійснення даного винаходу. На даний момент переважною сіллю є натрієва сіль. Іншою переважною сіллю на даний момент є сіль геміфумарату.
У деяких конкретних варіантах здійснення сполуку обирають з групи, що складається зі сполуки 1, сполуки 4 і сполуки 6 та їх фармацевтично прийнятних солей. Структури цих сполук описані нижче.
У переважному варіанті здійснення винаходу сполука представлена структурою сполуки (1):
рай "
С й і) (Фін! (1) або її фармацевтично прийнятної солі.
У деяких варіантах здійснення сполука 1 представлена як вихідна сполука. У інших варіантах здійснення, проте, сполука 1 представлена у формі солі з фармацевтично прийнятною кислотою або основою. Переважно, таку сіль обирають із групи, що складається з солей натрію, калію, магнію, геміфумарату, гідрохлориду та гідроброміду, причому кожна така можливість представляє собою окремий варіант здійснення даного винаходу. На даний момент переважною сіллю є натрієва сіль. Іншою переважною сіллю на даний момент є сіль геміфумарату.
Даний винахід також відноситься до способів синтезу сполук за винаходом і їх солей.
Даний винахід також забезпечує фармацевтичні композиції, які містять одну або більше зі сполук за даним винаходом, і, принаймні, одну добавку або ексципієнт, наприклад, наповнювачі, розріджувачі, зв'язуючі речовини, розпушувачі, буфери, барвники, емульгатори, агенти, що покращують смак, гелеутворювачі, ковзаючі речовини, консерванти, солюбілізатори, стабілізатори, суспендуючі агенти, підсолоджувачі, тонізуючі агенти, змочуючі агенти, емульгуючі агенти, диспергуючі агенти, агенти, що викликають набухання, сповільнювачі, змащувальні речовини, абсорбенти, і агенти, що підвищують в'язкість. Композиції можуть бути представлені у формі капсул, гранул, порошків, розчинів, саше, суспензій або таблетованій лікарській формі.
Даний винахід також забезпечує способи лікування або профілактики різних порушень, захворювань і станів, пов'язаних з Кук, таких як серцеві, скелетно-м'язові, когнітивні, ЦНС і нервово-м'язові порушення і захворювання, та включає в себе введення пацієнту, який потребує такого лікування, кількості сполуки Формули (І) або її солі, що є ефективною для профілактики або лікування порушення або захворювання, пов'язаного з КуУК. Даний винахід також забезпечує спосіб профілактики або лікування витоку в каналі КУуК (в тому числі КУК'1,
РУК і КУКЗ) у пацієнта, включаючи введення пацієнту кількості сполуки Формули (І) або її солі, що є ефективною для профілактики або лікування витоку в КУК.
Крім того, даний винахід відноситься до способу модуляції зв'язування Кук і калстабінів у
Зо пацієнта, який включає в себе введення пацієнту кількості сполуки Формули (І) або її солі, що є ефективною для модуляції кількості Кук-зв'язаного калстабіну.
Даний винахід також відноситься до використання сполуки Формули (І) для виготовлення лікарського засобу для лікування та/або профілактики порушень, захворювань і станів, пов'язаних з КУК, таких як серцеві, скелетно-м'язові і когнітивні/ЦНе порушення і захворювання.
В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до використання сполуки Формули (1) для виготовлення лікарського засобу для профілактики або лікування витік у каналі Кук. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до використання сполуки Формули (І) для виготовлення лікарського засобу для модуляції кількості Кук-зв'язаних калстабінів.
Способи винаходу можуть бути реалізовані у системі іп міго (наприклад, культивовані клітини або тканини) або іп мімо (наприклад, у тварин, що не належать до людського роду або у людини).
У деяких варіантах здійснення винаходу сполуки за даним винаходом представлені в поєднанні з терапією пропуску екзонів, наприклад, антисмислових олігонуклеотидів (АОС), з тим щоб посилити пропуск екзонів у мРНК-мішені, наприклад, гена МДД, як описано далі. Інші ознаки і переваги даного винаходу стануть очевидними з нижченаведеного докладного опису та фігур.
КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР
ФігуратА Імуноблот з антитілом калстабіну2, який показує зв'язування калстабіну2 з ПКА- фосфорильованим Кука за відсутності (-) або у присутності 100 нМ сполуки 1. (8: зв'язування калстабіну з ПКА-нефосфорильованим Кук2. 536 (05 7.544.678) використовується як позитивний контроль.
Фігура!В Імуноблот з антитілом калстабіну2, який показує зв'язування калстабіну2 з ПКА- фосфорильованим Кука за відсутності (-) або у присутності 100 нМ сполуки 2, сполуки З або сполуки 4. (ж): зв'язування калстабіну з ПКА-нефосфорильованим
Кукаг. 536 використовується як позитивний контроль.
Фігура17С Імуноблот з антитілом калстабіну!, який показує зв'язування калстабіну! з ПКА- фосфорильованим Кук! за відсутності (Мед) або у присутності зазначених концентрацій сполуки 1 або сполуки 4. (Ро5): зв'язування калстабіну з ПКА- нефосфорильованим КУКТ1. 536 використовується як позитивний контроль.
Фігура 2 Фігура 2А: Імуноблот з антитілом калстабіну!, який показує рівні калстабінуї в імунопреципітованих комплексах КУК! з лізатів великогомілкового м'яза мишей, яким вводили носій (50:50 ДМСО/ПЕГ), тільки ізопротеренол (І5О) або ізопротеренол разом із зазначеними концентраціями сполуки 1 в осмотичних насосах. 536 використовується як контроль при 3,6 мМ.
Фігура 28: кількісне визначення 95 калстабіну!, який повторно зв'язується з КуК1.
Фігура З Щурячу модель хронічної серцевої недостатності індукували ішемічно- реперфузійним (І/Р) пошкодженням. Для протоколу І/Р, передню низхідну ліву (ПНЛ) коронарну артерію перетискали протягом 1 години.
Фігура 4 Об'єми лівого шлуночка (ЛШ) і фракція викиду (ФВ) у щурів, які отримували сполуку 1 по 5 мг/кг/добу (5МК) або 10 мг/кг/добу (10МК) у питній воді, в порівнянні з тваринами, які отримували носій (Н2гО), і тваринами, які отримували плацебо. Хронічна серцева недостатність була індукована ішемічно- реперфузійним (І/Р) пошкодженням. ПНЛ артерію перетискали протягом 1 години; лікування почалося через 1 тиждень після реперфузії і тривало протягом
З місяців. Ехокардіографічні параметри були отримані після 1, 2 або З місяців лікування. Фігура 4А: Кінцево-діастолічний об'єм ЛШ; Фігура 4В: Кінцево- систолічний об'єм ЛШ; Фігура 4С: ФВ. Фігури 4А і 48: 5Р«0,001 у порівнянні з тваринами, які отримували плацебо; "Р«0,05 у порівнянні з тваринами, які отримували носій; ТР«0,001 у порівнянні з тваринами, які отримували носій.
Фігура 4С: 5Р«0,001 у порівнянні з тваринами, які отримували плацебо, ТР.-0,001 у порівнянні з тваринами, які отримували носій.
Фігура 5 Фігури 5А-С зображують вагу тіла (ВУМ) (5А), розмір інфаркту (58), вагу ЛШ (5С), а Фігура 50 зображує вміст колагену у щурів, які отримували сполуку 1 по 5 мг/кг/добу (5МК) або 10 мг/кг/добу (1ОМК) у питній воді, в порівнянні з тваринами, які отримували носій (НгО), і тваринами, які отримували плацебо. Хронічна серцева недостатність була індукована ішемічно-реперфузійним (/((І/Р) пошкодженням. ПНЛ артерію перетискали протягом 1 години; лікування почалося через 1 тиждень після реперфузії і тривало протягом 3 місяців.
Параметри були виміряні після З місяців лікування. Фігури 5А-С: не мають істотного значення. Фігура 50: ТТТР«0,001 у порівнянні з тваринами, які отримували плацебо; "Р«0,05 у порівнянні з тваринами, які отримували носій.
Фігура 6 Інвазивна гемодинаміка: систолічний тиск крові у лівому шлуночку (СТ ЛШ) (б6А), ар/даїтах (68); та аР/дітіп (6С) у щурів, які отримували сполуку 1 по 5 мг/кг/добу (5МК) або 10 мг/кг/добу (10МК) у питній воді в порівнянні з тваринами, які отримували носій (НгО), і тваринами, які отримували плацебо. Хронічна серцева недостатність була індукована ішемічно-реперфузійним (І/Р) пошкодженням.
ПНЛ артерію перетискали протягом 1 години; лікування почалося через 1 тиждень після реперфузії і тривало протягом З місяців. Гемодинамічні параметри вимірювалися після З місяців лікування. Фігура бА: не має істотного значення.
Фігура 6В: 5 Р«е0,05 у порівнянні з тваринами, які отримували плацебо; "Р«0,05 у порівнянні з тваринами, які отримували носій. Фігура 6С: ТР«0,01 у порівнянні з тваринами, які отримували плацебо; "Р«0,05 у порівнянні з тваринами, які отримували носій.
Фігура 7 Концентрації сполуки 1 у плазмі П(мкМ) залежно від часу доби.
Фігура 8 Фракція викиду (ФВ) у щурів, які отримували сполуку 1 або сполуку А по 5 мг/кг/добу (5МК) у питній воді, в порівнянні з тваринами, які отримували носій (НО), і тваринами, які отримували плацебо. ПНЛ артерію перетискали протягом 1 години; лікування почалося через 1 тиждень після реперфузії і тривало протягом З місяців. Ехокардіографічні параметри були отримані після 1, 2 або З місяців лікування. 5Р«0,001 у порівнянні з тваринами, які отримували плацебо; "р«0,05 у порівнянні з тваринами, які отримували носій; ТР«О,001 у порівнянні з тваринами, які отримували носій.
Фігура 9 Вплив сполуки 1 на спонтанну фізичну активність мишей тах і М/Т у порівнянні з контрольними тваринами, які отримували носій (НгО). Р«0.001 протягом 1-19 днів активності у мишей тах, які отримували 10 і 50 мг/кг/добу (цільової дози) разом з питною водою, в порівнянні з контрольними тваринами, які отримували носій.
Фігура10О0 Співвідношення питомої сили-частоти м'яза довгого розгинача пальців (ДРП).
Миші (А) тах отримували сполуку 1 (5, 10 ї 50 мг/кг/добу (цільова доза)), яку вводили разом з питною водою, у порівнянні з контрольними тваринами, які отримували носій (НгО) (п-5). р «0,05, для дози по 50 мг/кг/добу, при частоті 150
Гц ї вище. Миші (В) М/Т, С57ВІ /6 отримували сполуку 1 (50 мг/кг/добу (цільова доза) разом з питною водою, у порівнянні з контрольними тваринами, які отримували носій (НгО) (п-4).
Фігура 11 Середня вага тіла (12А) і середнє споживання води (128) у мишей тах і мишей дикого типу, які отримували носій (НгО) або сполуку 1 (50 мг/кг/добу (цільова доза) разом з питною водою.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Слід мати на увазі, що докладний опис і конкретні приклади, які вказують на різні варіанти здійснення винаходу, наведені тільки як ілюстрація, оскільки різні зміни і модифікації в межах сутності та обсягу винаходу стануть очевидними для фахівців в даній галузі техніки з цього докладного опису.
Як використовуються в даному описі і у формулі винаходу, що додається, форми однини включають в себе посилання на множину, якщо зміст чітко не вказує на зворотне. Всі публікації, патентні заявки, патенти та інші посилання, згадані тут, включені у всій їх повноті шляхом посилання.
Термін "Кусаї5"М" відноситься до стабілізаторів кальцієвих каналів рецептора ріанодину (КУК), представлених сполуками загальної Формули (І) або (ІА), які пропонуються винаходом, а також конкретними сполуками, позначеними цифровими номерами, як це передбачено винаходом, і тут усі разом називаються "сполукою (сполуками) за винаходом".
Сполуки
У деяких варіантах здійснення винаходу сполуки за даним винаходом представлені структурною Формулою (ІА):
Ннзсо М х р 5 (А) де
Е являє собою СООН або її біоізостер, СООК! або СМ; і
В' являє собою С.-Сх алкіл; і їх фармацевтично прийнятні солі.
У деяких переважних варіантах здійснення ЕК у Формулі (І) являє собою карбонову кислоту (СООН). В інших переважних варіантах здійснення КЕ у Формулі (І) являє собою біоізостер карбонової кислоти, наприклад, тетразол. Альтернативно, біоіїзостер карбонової кислоти може являти собою кислотний гетероцикл, такий як 1,2,4-оксадіазол-5(4Н)-он, 1,2,4-тіадіазол-5(4Н)- он, 1,2,4-оксадіазол-5 (4Н)-тіон, 1,3,4-оксадіазол-2(ЗН)-тіон, 4-метил-1 Н-1,2,4-триазол-5(4Н) - тіон, 5-фтороротова кислота, тощо. Додаткові біоіїзостери карбонових кислот описані, наприклад, у Натада, У. еї аїІ., Віосогда. Мед. Спет. І ей. 2006; 16:4354-4359; Нет", В... еї аї.,
Віоогд. Мед. Спет. 2002; 10: 3379-3393; ОІезеп, Р.Н., Сит. Оріп. Огид Оівзсом. Юемеї. 2001; 4: 471; Раїапі. С.А. еї а!., У. Сет. ВНем. 1996; 96:3147; Кітига, Т. еї аі. Віоогд. Мед. Спет. І ей.
2006; 16: 2380-2386; апа Копнага, У. єї аї. Віоогд. Мед. Спет. І ей. 1995; 5(17): 1903-1908. Зміст кожного із зазначених вище посилань включено тут шляхом посилання.
В одному переважному варіанті здійснення винаходу сполуки за даним винаходом представлені структурою Формули (ІА) де К являє собою СООН і її фармацевтично прийнятні солі (наприклад, сполуку Формули (1)).
В інших переважних варіантах здійснення К у Формулі (ІА) знаходиться в положенні 4 фенільного кільця (тобто положенні 7 бензотіазепінового кільця). Кожна можливість представляє собою окремий варіант здійснення даного винаходу. Сполуки Формули (ІА) або (І) можуть бути присутніми у формі солі з фармацевтично прийнятною кислотою або основою. Такі солі переважно обирають із групи, що складається з солей натрію, калію, магнію, геміфумарату, гідрохлориду та гідроброміду, причому кожна така можливість представляє собою окремий варіант здійснення даного винаходу. На даний момент переважною сіллю є натрієва сіль. Іншою переважною сіллю на даний момент є сіль геміфумарату.
У деяких конкретних варіантах здійснення сполуку обирають з групи, що складається зі сполуки 1, сполуки 2, сполуки 3, сполуки 4, сполуки 5, сполуки 6, сполуки 7, сполуки 8, сполуки 9, сполуки 10, сполуки 11, сполуки 12, і їх фармацевтично прийнятних солей. Ці сполуки представлені такими структурами: т й й
В, і
З он : (1) і) шовной
Шо : (г) рай х
В, Ї 5 ів; ; (3) он ус 5 . (4)
у, о т пф
Шо (5) он о що
Шо (6)
І" со
Шо (7)
М д т пф
Шо (8) гру
Шо . (9)
М- ж ) МН
М що
Шо (10) М
М в и
МН ра С М і
/ч т С М ї
Н
З . (12)
Хімічні визначення:
Термін "алкіл", як використовується тут, відноситься до лінійного або розгалуженого насиченого вуглеводню, який містить від 1 до 4 атомів вуглецю ("С1-Са алкіл"). Репрезентативні алкільні групи включають в себе, але не обмежуються, метил, етил, пропіл, ізопропіл, бутил, втор-бутил і трет-бутил. Алкільна група може бути незаміщеною або заміщеною однією або кількома групами, обраними з галогену, галоалкілу, гідрокси, алкокси, галоалкокси, циклоалкілу, арилу, гетероциклілу, гетероарилу, амідо, алкіламідо, діалкіламідо, нітро, аміно, ціано, М"з, оксо, алкіламіно, діалкіламіно, карбоксилу, тіо, тіоалкілу і тіоарилу.
Сполуки за даним винаходом можуть існувати у своїй таутомерній формі. Всі такі таутомерні форми розглядаються тут як частина даного винаходу.
Усі стереоізомери сполук за даним винаходом (наприклад, ті, які можуть існувати завдяки асиметричним атомам вуглецю у різних замісниках), в тому числі енантіомерні форми та діастереомерні форми, розглядаються як такі, що включені в обсяг даного винаходу. Окремі стереоізомери сполук за винаходом можуть, наприклад, бути по суті вільними від інших ізомерів (наприклад, у вигляді чистого або по суті чистого оптичного ізомеру, який має зазначену активність) або можуть бути змішаними, наприклад, у вигляді рацематів, або у вигляді сумішей збагачених одним стереоіїзомером. Хіральні центри за даним винаходом можуть мати конфігурацію З або К, як визначено у Рекомендаціях Міжнародного союзу теоретичної і прикладної хімії (ШРАС 1974). Рацемічні форми можуть бути відокремлені фізичними методами, такими як, наприклад, фракційна кристалізація, відокремлення або кристалізація діастереомерних похідних або відокремлення за допомогою хіральної колонкової хроматографії. Окремі оптичні ізомери можуть бути отримані з рацематів будь-яким придатним способом, включаючи, без обмеження, звичайні способи, такі як, наприклад, утворення солі за допомогою оптично активної кислоти або основи з подальшою кристалізацією.
Сполуки за даним винаходом, після їх приготування, переважно є виділеними і очищеними для отримання композиції, що містить кількість за вагою, яка дорівнює або є більшою, ніж близько 90 95 сполуки, близько 95 95 сполуки, і навіть більш переважно більше ніж близько 99 95
Зо сполуки ("по суті чистої" сполуки), яка потім використовується або застосовується у рецептурі, як описано тут. Такі "по суті чисті" сполуки за даним винаходом також розглядаються тут як частина даного винаходу.
Терапевтичне застосування
Даний винахід відноситься до сполук, які є придатними для лікування станів, порушень і захворювань, пов'язаних з Кук. Більш конкретно, даний винахід відноситься до сполук, які є придатними для усунення витоку в каналах Кук, що можуть являти собою канали КУуК1, Кукг2 та/лабо КукЗ. В одному варіанті здійснення сполуки за даним винаходом покращують зв'язування та/або інгібують дисоціацію Кук і калстабіну (наприклад, КУК! і калстабіну!; Кукг і калстабіну2 і КукЗ і калстабіну!). "Стани, порушення і захворювання, пов'язані з Кук" означають порушення і захворювання, які можуть лікуватися та/або попереджатися шляхом модуляції Кук і включають в себе, без обмеження, серцеві порушення та захворювання, м'язову втому, скелетно-м'язові порушення та захворювання, порушення та захворювання ЦНС, когнітивну дисфункцію, нервово-м'язові захворювання та порушення, покращення когнітивної функції, ураження та захворювання кісток, ракову кахексію, злоякісну гіпертермію, цукровий діабет, раптову серцеву смерть і синдром раптової дитячої смерті.
Таким чином, в одному варіанті здійснення даний винахід відноситься до способу лікування або профілактики стану, обраного з групи, що складається з серцевих порушень та захворювань, м'язової втоми, скелетно-м'язових порушень та захворювань, порушень та захворювань ЦНС, когнітивної дисфункції, нервово-м'язових захворювань та порушень, уражень та захворювань кісток, ракової кахексії, злоякісної гіпертермії, цукрового діабету, раптової серцевої смерті і синдрому раптової дитячої смерті, або для покращення когнітивної функції, причому спосіб включає в себе стадію введення пацієнту, який цього потребує, терапевтично ефективної кількості сполуки Формули (І) або (ІА), як описано тут, або її солі, для здійснення такого лікування. На даний момент переважною сполукою є сполука Формули (1).
В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до використання ефективної кількості сполуки Формули (І) або (ІА), як описано тут, або її солі, для виготовлення лікарського засобу для лікування або профілактики стану, обраного з групи, що складається з серцевих порушень та захворювань, м'язової втоми, скелетно-м'язових порушень та захворювань, порушень та захворювань ЦНС, нервово-м'язових захворювань та порушень, когнітивної дисфункції, уражень та захворювань кісток, ракової кахексії, злоякісної гіпертермії, цукрового діабету, раптової серцевої смерті і синдрому раптової дитячої смерті, або для покращення когнітивної функції. На даний момент переважною сполукою є сполука Формули (1).
В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до сполуки Формули (І) або (ІА), як описано тут, або її солі, для використання при виготовленні лікарського засобу для лікування або профілактики стану, обраного з групи, що складається з серцевих порушень та захворювань, м'язової втоми, скелетно-м'язових порушень та захворювань, порушень та захворювань ЦНС, когнітивної дисфункції, нервово-м'язових захворювань та порушень, уражень та захворювань кісток, ракової кахексії, злоякісної гіпертермії, цукрового діабету, раптової серцевої смерті і синдрому раптової дитячої смерті, або для покращення когнітивної функції. На даний момент переважною сполукою є сполука Формули (1).
В одному варіанті здійснення стан, порушення або захворювання є пов'язаним з аномальною функцією Кук. В іншому варіанті здійснення стан, порушення або захворювання є пов'язаним з аномальною функції Кук2. В іншому варіанті здійснення стан, порушення або захворювання є пов'язаним з аномальною функції КукЗ. Кожна можливість представляє собою окремий варіант здійснення даного винаходу.
Серцеві порушення і захворювання включають в себе, але не обмежуються, порушення і захворювання, пов'язані з нерегулярним серцебиттям, порушення і захворювання, пов'язані з нерегулярним серцебиттям, викликаним фізичним навантаженням, серцеву недостатність, застійну серцеву недостатність, хронічну серцеву недостатність, гостру серцеву недостатність, систолічну серцеву недостатність, діастолічну серцеву недостатність, гостру декомпенсовану серцеву недостатність, ішемічно-реперфузійне (1/Р) пошкодження серця (у тому числі ішемічно-
Зо реперфузійне пошкодження після коронарної ангіопластики або після тромболізису при інфаркті міокарда (ІМ)), хронічну обструктивну хворобу легень і високий кров'яний тиск. Порушення і захворювання, пов'язані з нерегулярним серцебиттям, включають в себе, але не обмежуються, передсердну і шлуночкову аритмію, передсердну і шлуночкову фібриляцію, передсердну і шлуночкову тахіаритмію, передсердну і шлуночкову тахікардію, катехоламінергічну поліморфну шлуночкову тахікардію (КПШТ) та їх варіанти, викликані фізичним навантаженням.
Сполуки за винаходом також є корисними при лікуванні м'язової втоми, яка може виникати в результаті тривалого фізичного навантаження або високоїнтенсивного фізичного навантаження, або може бути викликана скелетно-м'язовими захворюваннями. Приклади скелетно-м'язових порушень і захворювань включають в себе, але не обмежуються, скелетно-м'язову втому, хворобу серцевини м'язових волокон, скелетно-м'язову втому, викликану фізичним навантаженням, ураження сечового міхура, нетримання сечі, скелетно-м'язову втому, пов'язану з віком, саркопенію, вроджені міопатії, скелетно-м'язові міопатії та/або атрофії, ракову кахексію, міопатію з ураженням серцевини і стрижнів м'язових волокон, мітохондріальні міопатії
Інаприклад, синдром Кірнса-Сейра (Кеагб5-5ауге), синдром МЕГАЗ (мітохондріальна міопатія, енцефалопатія, лактацидоз та інсульт) і синдром МЕККЕ (міоклонічна епілепсія з рваними червоними волокнами))!, ендокринні міопатії хвороби накопичення м'язового глікогену
Інаприклад, хвороба Помпе (Ротре), хвороба Андерсен (Апдегзеп) і хвороба Корі (Согі)|, міоглобінурії (наприклад, хвороба Мак-Ардла (МсАГгаїе), хвороба Таруї (Тагиї) і хвороба Дімауро (рімацго))Ї, дерматоміозит, осифікуючий міозит, сімейний періодичний параліч, поліміозит, міозит з включеними тільцями, нейроміотонію, синдром скутої людини, злоякісну гіпертермію, загальні м'язові судоми, тетанію, міастенію гравіс, спинальну м'язову атрофію (СМА), спинальну і бульбарну м'язову атрофію (СБМА, також відому як спинобульбарна м'язова атрофія, бульбоспинальна атрофія, бульбоспинальна невропатія, зчеплена з Х-хромосомою (ХВ5М), спинальна м'язова атрофія типу 1, зчеплена з Х-хромосомою (ЗМАХТ) і хвороба Кеннеді (КО)) і м'язову дистрофію. Переважні скелетно-м'язові порушення включають в себе, але не обмежуються, скелетно-м'язову втому, викликану фізичним навантаженням, вроджену міопатію, м'язову дистрофію, скелетно-м'язову втому, пов'язану з віком, саркопенію, хворобу серцевини м'язових волокон, ракову кахексію, ураження сечового міхура і нетримання сечі.
Приклади м'язової дистрофії включають в себе, але не обмежуються, м'язову дистрофію бо Дюшена (МДД), м'язову дистрофію Беккера (МДБ), поясно-кінцівкову дистрофію (ПКД -
дистрофію Лейдена), вроджену м'язову дистрофію (ВМД), дистальну м'язову дистрофію, плече- лопаточно-лицеву дистрофію, міотонічну м'язову дистрофію, м'язову дистрофію Емері-
Дрейфуса (Етегу-Огейи55) і окулофарінгеальну м'язову дистрофію, причому МДД на даний момент є переважною.
Вроджена м'язова дистрофія, як використовується тут, відноситься до м'язової дистрофії, яка має місце при народженні. ВМД класифікується на основі генетичних мутацій: 1) гени, що кодують структурні білки базальної мембрани або позаклітинного матриксу скелетно-м'язових волокон; 2) гени, що кодують передбачувані або виражені глікозилтрансферази, які в свою чергу впливають на глікозилювання з дістрогліканом, зовнішнім мембранним білком базальної мембрани; та 3) інші. Приклади ВМД, включають, але не обмежуються, ламінін- «2-дефіцитну
ВМД (МОСТА), ВМД Ульріха (СМО 1, 2 і 3), синдром Уокера-Варбурга (М/ЛЛІ5), захворювання м'язів-очей-головного мозку (МЕВ), ВМД Фукуяма (ЕСМО), ВМД плюс вторинний дефіцит ламініну 1 (МОС1В), ВМД плюс вторинний дефіцит ламініну 2 (МОС1С), ВМД з розумовою відсталістю та пахігірією (МОС10) та синдром ригідного хребта з м'язовою дистрофією типу 1 (А5МОТ).
Когнітивна дисфункція може бути пов'язана або включає в себе, але не обмежується, втрату пам'яті, втрату пам'яті, що залежить від віку, синдром посттравматичного стресу (ПТСР), синдром дефіциту уваги і гіперактивності (СДУГ), розлад аутистичного спектру (РАС), генералізований тривожний розлад (ГТР), обсесивно-компульсивний розлад (ОКР), шизофренію, біполярний розлад або велику депресію.
Порушення і захворювання ЦНС включають в себе, але не обмежуються, хворобу
Альцгеймера (ХА), нейропатію, судоми, хворобу Паркінсона (ХП) і хворобу Хантінгтона (ХХ).
Нервово-м'язові порушення і захворювання включають в себе, але не обмежуються, спинально-церебелярну атаксію (СЦА) і бічний аміотрофічний склероз (БАС, хворобу Лу Геріга).
У деяких варіантах здійснення винаходу сполуки за даним винаходом поліпшують когнітивну функцію, яка може бути обрана з короткочасної пам'яті, довготривалої пам'яті, уваги, навчання та будь-якої їх комбінації.
У деяких варіантах здійснення винаходу сполуки за даним винаходом є корисними при лікуванні ракової кахексії, тобто, м'язової слабкості, що пов'язана з раком в цілому, і,
Зо переважно, м'язової слабкості при метастатичному раку, наприклад, метастази в кістки. М'язова слабкість і атрофія м'язів (кахексії) є загальними паранеопластичними симптомами у онкологічних хворих. Такі стани спричиняють значну втому і різко знижують якість життя пацієнта. Даний винахід відноситься до способу лікування і профілактики м'язової слабкості у пацієнта, що хворіє на рак, грунтуючись, зокрема, на відкритті, що, у деяких видів раку, наприклад, раку передміхурової залози і раку молочної залози з метастазами в кістки, КУК!1 окислюється і це призводить до втрати його "герметичності". Крім того, було встановлено, що профілактика витоку шляхом введення сполук "Куса!" покращує функцію м'язів. Приклади раку включають в себе, але не обмежуються, рак молочної залози, рак передміхурової залози, рак кісток, рак підшлункової залози, рак легенів, рак товстої кишки і рак шлунково-кишкового тракту.
Терапія пропуску екзонів
У деяких варіантах здійснення винаходу сполуки за даним винаходом модулюють (наприклад, посилюють) сплайсинг мРНК шляхом посилення пропуску екзонів, опосередкованого антисмисловими олігонуклеотидами. Така модуляція сплайсингу здійснюється у присутності антисмислових олігонуклеотидів (АС), які є специфічними для послідовностей сплайсингу, що представляють інтерес. У деяких варіантах здійснення даного винаходу, сполука формули (І) або (ІА) і АО можуть діяти синергічно, причому сполука формули (І) або (ІА) посилює пропуск екзонів, опосередкований АО. Таким чином, у деяких варіантах здійснення даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції для використання при лікуванні або профілактиці будь-якого зі станів, описаних тут, які пов'язані з негерметичним
КУК, додатково включаючи використання антисмислового олігонуклеотиду, який є специфічним для послідовності сплайсингу у послідовності МРНК, для посилення пропуску екзонів у мРНК- мішені.
Один конкретний варіант для посилення пропуску екзонів за допомогою сполук за даним винаходом стосується м'язової дистрофії Дюшена (МДД) МДД являє собою смертельну рецесивну хворобу, зчеплену з Х-хромосомою, що характеризується прогресуючою м'язовою слабкістю протягом усього життя пацієнта. МДД, в першу чергу, викликана множинними делеціями екзонів зі зміною рамки зчитування у гені МДД, що призводить до абляції виробництва білка дистрофіну. Втрата експресії дистрофіну, сама по собі, не пояснює патофізіології МДД. Пошкодження дистрофін-глікопротеїнового комплексу (ДГК) також 60 призводить до окислювального стресу, мітохондріального перевантаження Са?" та апоптозу,
підвищення припливу Са-: у м'язи і сигналізації патологічного Са. МДД немає радикальної терапії і єдиним підтвердженим фармакологічним лікуванням є прийом кортикостероїдів, які можуть продовжити здатність пересуватися, але мають суттєві побічні ефекти. Пропуск екзонів, опосередкований антисмисловим олігонуклеотидом, є перспективним терапевтичним підходом, спрямованим на відновлення рамки зчитування МДД і забезпечує експресію непошкодженого дистрофін-глікопротеїнового комплексу. На сьогоднішній день, низькі рівні білка дистрофину були вироблені у людей за допомогою цього способу. Кепааї! єї аї. (5сі Тгапві Мед, 2012, 4(164), р. 164га160) повідомляли про те, що деякі малі молекули, такі як дантролен та інші модулятори
КУК, стимулюють пропуск екзонів з використанням антисмислових олігомерів для підвищення пропуску екзонів з метою відновлення рамки зчитування мРНК, сарколемного білка дистрофину і дистрофін-глікопротеїнового комплексу у скелетних м'язах мишей тах, мишачої моделі МДД.
Таким чином, в одному варіанті здійснення даний винахід відноситься до способу лікування
МДД шляхом введення пацієнту, який цього потребує, сполуки формули (І) або (ІА) відповідно до даного винаходу, у поєднанні з антисмисловим олігонуклеотидом (АОС), який є специфічним для послідовності сплайсингу одного або більше екзонів гена МДД, наприклад екзону 23, 45, 44, 50, 51, 52 та/або 53 гена МДД. Переважні АО включають в себе, але не обмежуються, АО, націлені на екзон МДД 23, 50 та/або 51 гена МДД, наприклад, 2'-О-метил (2'ОМе) тіофосфат або фосфордіамідат морфоліно (РМО) АО. Приклади таких АО, включають в себе, але не обмежуються, Рго051/55К2402968, АМІ4658/Еїерітзеп і РМО Е23 морфоліно /(5'- ваССАААССТосааТстТ ТАССТОадААТ-З).
Термін "ефективна кількість", "достатня кількість" або "терапевтично ефективна кількість" агента, як використовується тут взаємозамінно, означає, що кількість є достатньою для досягнення корисних або бажаних результатів, у тому числі клінічних результатів і, як така, "ефективна кількість" або її варіанти, залежить від контексту, в якому вона застосовується.
Реакція у деяких варіантах здійснення є профілактичною, в інших - терапевтичною, і ще в інших варіантах являє собою їх поєднання. Термін "ефективна кількість" також включає в себе кількість сполуки за даним винаходом, яка є "терапевтично ефективною", і яка дозволяє уникнути або істотно послаблює небажані побічні ефекти.
Як використовується в даному описі, а також є добре відомим у даній галузі техніки, термін
Зо "лікування" являє собою підхід для отримання корисних або бажаних результатів, у тому числі клінічних результатів. Корисні або бажані клінічні результати можуть включати в себе, але не обмежуються, полегшення або поліпшення одного або більше симптомів або станів, зниження ступеня захворювання, стабілізацію (тобто, не погіршення) стану захворювання, запобігання поширенню хвороби, затримку або уповільнення прогресування захворювання, покращення або тимчасове полегшення хворобливого стану і ремісію (або часткову, або повну), що піддається або не піддається виявленню. "Лікування" може також означати подовження виживання у порівнянні з очікуваним виживанням, за умови неотримання лікування.
Фармацевтичні композиції
Сполуки за винаходом виготовляють у вигляді фармацевтичних композицій для введення пацієнту-людині у біологічно сумісній формі, придатній для введення іп мімо. Відповідно до іншого аспекту, даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції, яка містить сполуки за винаходом у суміші з фармацевтично прийнятним розріджувачем та/або носієм.
Фармацевтично-прийнятний носій, переважно є "прийнятним" у сенсі сумісності з іншими інгредієнтами композиції і не має шкідливого впливу на реципієнта, який приймає його.
Сполука може вводитися окремо, але переважно її вводять з одним або більше фармацевтично прийнятними носіями. Фармацевтично прийнятний носій, який використовується в даному описі, може бути обраний з різних органічних або неорганічних матеріалів, які використовуються як матеріали для фармацевтичних композицій і, які включені як будь-який один або більше з наповнювачів, розріджувачів, зв'язуючих речовин, розпушувачів, буферів, барвників, емульгаторів, агентів, що покращують смак, гелеутворювачів, ковзаючих речовин, консервантів, солюбілізаторів, стабілізаторів, суспендуючих агентів, підсолоджувачів, тонізуючих агентів, змочуючих агентів, емульгуючих агентів, диспергуючих агентів, агентів, що викликають набухання, сповільнювачів, змащувальних речовин, абсорбентів і агентів, що підвищують в'язкість.
Сполуки за даним винаходом вводять пацієнту-людині або тварині за допомогою відомих процедур, в тому числі, без обмеження, шляхом перорального, сублінгвального, буккального, парентерального (внутрішньовенного, внутрішньом'язового або підшкірного), трансдермального, підшкірного або чрезшкірного, інтраназального, інтравагінального, ректального, очного та респіраторного (через інгаляцію) введення. Сполуки за даним 60 винаходом також можуть вводитися пацієнту шляхом доставки до м'язів пацієнта, в тому числі,
але не обмежуючись, до серцевих або скелетних м'язів пацієнта. В одному варіанті здійснення сполука вводиться пацієнту шляхом спрямованої доставки до клітин серцевого м'яза через катетер, введений у серце пацієнта. В інших варіантах здійснення сполуки можуть бути введені безпосередньо у ЦНС, наприклад, шляхом ендолюмбальної ін'єкції або інтравентрикулярної інфузії сполук безпосередньо у спинномозкову рідину (СМР), або шляхом інтравентрикулярного, інтратекального або інтерстиціального введення. Пероральне введення є переважним на даний момент.
Фармацевтичні композиції відповідно до винаходу для перорального введення у твердій формі включають в себе, зокрема, таблетки або драже, під'язикові таблетки, саше, капсули, в тому числі желатинові капсули, порошки, гранули, а композиції для перорального, назального, буккального або очного введення у рідкій формі включають в себе, зокрема, емульсії, розчини, суспензії, краплі, сиропи і аерозолі. Сполуки також можуть бути введені у вигляді суспензії або розчину з питною водою або з їжею. Приклади прийнятних фармацевтичних носіїв включають в себе, але не обмежуються, похідні целюлози, в тому числі карбоксиметилцеллюлозу, метилцелюлозу, гідроксипропілцелюлозу, гідроксипропілметилцелюлозу, етилцелюлозу та мікрокристалічну целюлозу; цукор, такий як маніт, сахарозу або лактозу; гліцерин, аравійську камедь, стеарат магнію, стеарилфумарат натрію, фізіологічний розчин, альгінат натрію, крохмаль, тальк та воду, серед інших.
Фармацевтичні композиції відповідно до винаходу для парентеральних ін'єкцій включають в себе, зокрема, стерильні розчини, які можуть бути водними або неводними, дисперсії, суспензії або емульсії, а також стерильні порошки для відновлення ін'єкційних розчинів або дисперсій.
Сполуки за винаходом можуть бути з'єднані зі стерильним водним розчином, який є ізотонічним з кров'ю пацієнта. Такий склад отримують шляхом розчинення твердого активного інгредієнта у воді, яка містить фізіологічно сумісні речовини, такі як хлорид натрію, гліцин тощо, і має буферний рн, сумісний з фізіологічними умовами, таким чином, щоб утворити водний розчин, який згодом набуває стерильності. Склад міститься у разових або багаторазових дозованих контейнерах, наприклад, герметичних ампулах або флаконах. Склад доставляється будь-яким видом ін'єкції в тому числі, без обмеження, епіфасціальним, інтракапсулярним, внутрішньочерепним, внутрішньошкірним, інтратекальним, внутрішньом'язовим,
Зо інтраорбітальним, внутрішньочеревним, інтраспинальним, інтрастернальним, внутрішньосудинним, внутрішньовенним, паренхіматозним, підшкірним або сублінгвальним шляхом, або через катетер, введений у серце пацієнта.
Фармацевтичні композиції для ректального або вагінального введення являють собою переважно супозиторії, а композиції для підшкірного або чрезшкірного введення включають в себе, зокрема, порошки, аерозолі, креми, мазі, гелі та пластирі.
Для чрезшкірного введення, сполуки за даним винаходом поєднують з підсилювачами чрезшкірного проникнення, такими як пропіленгліколь, поліетиленгліколь, ізопропанол, етанол, олеїнова кислота, М-метилпіролідон, тощо, які покращують проникність шкіри для сполук за винаходом, і дозволяють сполукам проникати через шкіру у кровотік. Композиції сполуки/підсилювача можуть також додатково поєднуватися з полімерною речовиною, такою як етилцелюлоза, гідроксипропілцелюлоза, етилен/вінілацетат, полівінілпіролідон, тощо, для отримання композиції у формі гелю, яка розчиняється в розчиннику, випарюється до бажаної в'язкості, а потім наноситься на матеріал основи для отримання пластиру.
Фармацевтичні композиції за даним винаходом отримують способами, добре відомими у фармацевтичній галузі, включаючи, але не обмежуючись, способи мокрої і сухої грануляції, або шляхом прямого пресування. Вибір носія визначається розчинністю і хімічною природою сполук, обраним шляхом введення і стандартною фармацевтичною практикою.
Фармацевтичні композиції, зазначені вище, ілюструють винахід, але жодним чином не обмежують його.
Відповідно до способів здійснення даного винаходу, будь-яка з цих сполук може бути введена пацієнту (або контактує з клітинами пацієнта) у кількості, ефективній для обмеження або запобігання зниженню рівня КукК-пов'язаного калстабіну у пацієнта, зокрема, у клітинах пацієнта. Ця кількість легко визначається фахівцем у даній галузі техніки, на основі відомих процедур, в тому числі аналізу кривих титрування, визначених іп мімо, і способів та аналізів, описаних тут. Відповідна кількість сполук за винаходом, ефективна для обмеження або запобігання зниженню рівня КукК-пов'язаного калстабіну у пацієнта знаходиться в діапазоні від близько 0,01 мг/кг/добу до близько 100 мг/кг/добу (наприклад, 1, 2, 5, 10, 20, 25, 50 або 100 мг/кг/добу), та/або є кількістю, достатньою для досягнення рівнів плазми в діапазоні від близько 300 нг/мл до близько 5000 нг/мл. Альтернативно, кількість сполук за винаходом знаходиться в 60 діапазоні від близько 1 мг/кг/добу до близько 50 мг/кг/добу. Альтернативно, кількість сполук за винаходом знаходиться в діапазоні від близько 10 мг/кг/добу до близько 20 мг/кг/добу. Крім того, тут включені кількості від близько 0,01 мг/кг/добу або 0,05 мг/кг/добу до близько 5 мг/кг/добу або близько 10 мг/кг/добу, які можуть вводитися.
Способи синтезу
Даний винахід забезпечує, у додатковому аспекті, способи отримання сполуки за даним винаходом і її солей. Більш конкретно, даний винахід відноситься до способів отримання сполук
Формули (І) або (ІА), наприклад, сполуки 1, сполуки 2, сполуки 3, сполуки 4, сполуки 5, сполуки 6, сполуки 7, сполуки 8, сполуки 9, сполуки 10, сполуки 11 і сполуки 12 або їх солей. Різні шляхи синтезу сполук описані у прикладах. Загальний шлях синтезу (КО5) представлено на схемі 1, наведеній нижче: її й:
Фе но МН СО нео М хх - - - -»ь | - - -ра / УС 5 5 но М с с--ж | зу подо 5
Схема 1
На схемі 1, Ба являє собою СООК' або СМ; КЕ! являє собою Сі-Са алкіл, і Ї являє собою заміщувану групу, яка, як приклад, являє собою галоген, сульфонат (ОБОЖ;, де ЕК являє собою алкіл або арил, наприклад, ОМ5 (мезилат), ОТ5 (тозилат)), тощо. Амінний вихідний матеріал піддали реакції з алкілуючим агентом (похідною бензилу, зображеною вище), переважно у присутності основи, для отримання бажаного продукту або його попередника (К-К-). За необхідності, такий попередник додатково може бути підданий реакції для конвертації групи Кг у групу К, як проілюстровано тут у експериментальному розділі нижче, або будь-яким іншим способом, відомим фахівцеві в даній галузі техніки. Наприклад, складноефірний попередник (Кг - СООНВ', де К' являє собою С1-С4 алкіл) може бути конвертований у відповідну карбонову кислоту (К-СООН) шляхом гідролізу у кислому або лужному середовищі відповідно до відомих способів. Альтернативно, нітрилів попередник (К2 - СМ) може бути конвертований у тетразол (ізостер карбонової кислоти) шляхом реакції з азидом натрію у відповідних умовах, або карбонову кислоту (К-СООН) шляхом гідролізу.
Амінний вихідний матеріал може бути отриманий у відповідності зі способами, описаними в
МО 2009/111463 або УМО 2007/024717, або будь-яким іншим способом, відомим фахівцеві в
Зо даній галузі техніки. Зміст всіх зазначених вище посилань включено тут за допомогою посилання. Тип основи особливо не обмежують. Переважні основи включають в себе, але не обмежуються, гідриди (наприклад, гідрид натрію або калію) і М,М-диіїзопропілетиламін. Інші відповідні основи включають в себе, але не обмежуються, органічну основу, таку як третинний амін, обраний з групи, що складається з ациклічних амінів (наприклад, триметиламін, триетиламін, диметилфеніламін, диізопропілетиламін і трибутіламін), циклічних амінів (наприклад, М-метилморфолін) і ароматичних амінів (диметиланілін, диметиламінопіридин і піридин).
Реакція може проводитися в присутності або за відсутності розчинника. Тип розчинника, при використанні, особливо не обмежують, причому приклади включають в себе розчинники, такі як складний ефір (наприклад, етилацетат), простий ефір (наприклад, ТГФ), хлорований розчинник (наприклад, дихлорметан або хлороформ), диметилформамід (ДМФ) та інші розчинники, такі як ацетонітрил або толуол, або суміші цих розчинників одного з одним або з водою.
Солі сполук формули (І), де К-СООН, можуть бути отримані за допомогою реакції вихідної молекули з відповідною основою, наприклад, Маон або КОН, з отриманням відповідних солей лужних металів, наприклад, натрієвих або калієвих солей. Альтернативно, складні ефіри (А-СООВ') можуть бути безпосередньо конвертовані у солі шляхом реакцій з відповідними основами.
Солі сполук формули (І) можуть бути також отримані за допомогою реакції вихідної молекули з відповідною кислотою, наприклад, НСІ, фумаровою кислотою або пара-
толуолсульфоновою кислотою з отриманням відповідних солей, наприклад, гідрохлориду, тозилату або геміфумарату.
ПРИКЛАДИ
Наступні приклади наведені як ілюстрації деяких переважних варіантів здійснення відповідно до винаходу.
Приклад 1: Синтез
Інструменти:
ЯМР: спектрометр Вгикег АМАМСЕ ПП 400 або Магіап Мегсигу 300
РХ/МС: система хроматографії Умаїег5 Оена 600, оснащена автоматичним пробовідбірником
Ашозатріег 717Ріиз, детектором на фотодіодній матриці Рпоїо Оіоде АгІтау Оеєїесіог 2996 і масовим детектором Ма55 Оеїесіог 3100, або Зпітайд2и 210.
Загальна процедура для алкілування 7-метокси-2,3,4,5-тетрагідробензо(е|1 4 гіазепіну
Самін"). со | --КНн в,
Амін
Амін (структура, зображена вище) (1 ммоль) розчинили у З мл дихлорметану. До розчину додали алкілуючий реагент (1 ммоль) з наступним додаванням М,М-диізопропілетиламіну (0,34 мл, 2 ммоль). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Отриманий розчин завантажили безпосередньо у колонку і елюювали сумішшю гексану/етилацетату (2:1, об./об.).
СООСН. ооо 5
Сполука 2
Метил 3-((7-метокси-2,3-дигідробензо ЩИ1,4гіазепін-4(5Н)-іл)уметилубензоат: "Н ЯМР (300
МГц, СОС»): 7,96 (м, 2Н), 7,46 (м, ЗН), 6,70 (дд, уУ-8,4 Гц, 3,0 Гц, 1Н), 6,50 (д, У-2,7 Гц, 1Н), 4,09 (с, 2Н), 3,90 (с, ЗН), 3,72 (с, ЗН), 3,57 (с, 2Н), 3,35 (м, 2Н), 2,72 (м, 2Н). МС: 344 (Мт) подив
Що СсОоОСсНнз
Сполука З
Зо Метил 4-((7-метокси-2,3-дигідробензо|Щ(1,4)гіазепін-4(5Н)-іл)уметилубензоат: "Н ЯМР (300
МГц, СОСІ»): 7,99 (д, У-8,4 Гц, 2Н), 7,46 (д, У-8,4 Гц, 1Н), 7,37 (д, У9-8,7 Гц, 2Н), 6,70 (дд, 9-84
Гц, 3,0 Гц, 1Н), 6,50 (д, У-2,7 Гц, 1Н), 4,09 (с, 2Н), 3,90 (с, ЗН), 3,72 (с, ЗН), 3,57 (с, 2Н), 3,35 (м, 2Н), 2,72 (м, 2Н). МС: 344 (Мт) нзсоОос що, -
НОСІ
ЗБ 5
Сполука 5
Метил 2-(7-метокси-2,3-дигідробензо|Ц1,4|гіазепін-4(5Н)-іл)уметил)бензоат: сполуку конвертували у хлористоводневу сіль за допомогою 2М НСЇІ в ефірі. "Н ЯМР (300 МГц, ДМСО- дв): 10,33 (ушир., 1Н), 8,08 (д, 9У-7,5 Гц, 1Н), 7,80-7,65 (м, ЗН), 7,51 (д, У-8,1 Гц, 1Н), 7,14 (с, 1Н), 6,99 (дд, У-8,4, 2,1 Гц, 1Н), 4,90-4,40 (м, ушир., 4Н), 3,88 (с, ЗН), 3,78 (с, ЗН), 3,40 (м, 2Н), 3,26 (м, 1Н), 3,11 (м, 1Н). МС: 344 (М--1)
МС
«ого
З
Сполука 7 2-((7-метокси-2,3-дигідробензо|Ц(1,4)гіазепін-4(5Н)-іл)уметил)бензонітрил: "Н-ЯМР (300 МГц,
СОбіз): 7,67-7,26 (м, 5Н), 6,73 (д, У-2,7 Гц, 1Н), 6,74 (дд, 9У-2,7, 8,4 Гу, 1Н), 4,14 (с, 2Н), 3,78 (с,
ЗН), 3,70 (с, 2Н), 3,36 (м, 2Н), 2,76 (м, 2Н). МС: 311 (Мт)
СМ ого 5
Сполука 8 3-((7-метокси-2,3-дигідробензо|(Ц(1,4|гіазепін-4(5Н)-іл)уметил)бензонітрил: "Н-ЯМР (300 МГц,
СОбіз): 7,64-7,42 (м, 5Н), 6,74 (дд, У-2,7, 8,4 Гц, 1Н), 6,48 (д, 9У-2,7 Гц, 1Н), 4,08 (с, 2Н), 3,75 (с,
ЗН), 3,57 (с, 2Н), 3,36 (м, 2Н), 2,76 (м, 2Н). МС: 311 (Мт)
З
Сполука 9 4-((7-метокси-2,3-дигідробензо|(Ц(1,4|гіазепін-4(5Н)-іл)уметил)бензонітрил: "Н-ЯМР (300 МГц,
СОФІ»): 7,64 (д, 9-72 Гц, 2Н), 7,42 (м, ЗН), 6,74 (дд, У-2,7, 8,4 Гц, 1Н), 6,48 (д, 9У-2,7 Гц, 1Н), 4,08 (с, 2Н), 3,75 (с, ЗН), 3,58 (с, 2Н), 3,36 (м, 2Н), 2,76 (м, 2Н). МС: 311 (М--1)
Гідроліз складного ефіру (загальна процедура)
Складний метиловий ефір (3 ммоль) розчинили у суміші 30 мл ТГФ/метанолу/ їм маон (17:71, об./06.). Суміш перемішували протягом 8 годин, і тонкошарова хроматографія (ТШХ) засвідчила повне зникнення складного ефіру. Додали 1 мл концентрованого НСІ для доведення до кислого рН. Органічний розчинник видалили і отриманий твердий залишок зібрали за допомогою фільтрації. Твердий залишок висушили на повітрі.
СсОоОНн тео 5
Сполука 4 3-((7-метокси-2,3-дигідробензо|(Ц(1,4|гіазепін-4(5Н)-іл)уметил)бензойна кислота: цю сполуку було отримано шляхом екстрагування з ЕІОАс як розчинником. "Н-ЯМР (300 МГц, СОСІ»): 8,10 (с, 1Н), 8,04 (д, 9-84 Гц, 1Н), 7,80 (ушир., 1Н), 7,46 (м, 2Н), 6,80 (м, 2Н), 4,40 (с, 2Н), 3,90 (с, 2Н),
Зо 3,76 (с, ЗН), 3,42 (с, 2Н), 2,86 (с, 2Н). МС: 330 (Мн), 328 (М-1). дове:
Щі СсОооНн 5
Сполука 1 4-((7-метокси-2,3-дигідробензо|(Ц(1,4|гіазепін-4(5Н)-іл)уметил) бензойна кислота: цю сполуку було отримано шляхом екстрагування з ЕІОАс як розчинником. "Н-ЯМР (300 МГц, СОСІ»): 8,02 (д, 4-8,4 Гц, 2Н), 7,46 (д, У-8,4 Гц, 1Н), 7,42 (д, 9У-8,7 Гц, 2Н), 6,70 (дд, У-8,4 Гц, 3,0 Гц, 1Н), 6,50 (д, 9-3,0 Гц, 1Н), 4,11 (с, 2Н), 3,72 (с, ЗН), 3,62 (с, 2Н), 3,35 (м, 2Н), 2,76 (м, 2Н). МС: 330 (М--1), 328 (М-1).
Сполука 1, натрієва сіль:
Натрієву сіль сполуки 1 отримали з вихідної молекули за допомогою 1 еквіваленту Масон в
КОН (темп. плавлення солі:.» 290 С).
І"Н ЯМР (ДМСО-ав, 600 МГц), б (ч.н.м.): 7,77 (2Н, м), 7,41 (1Н, д), 7,13 (2Н, м), 6,75 (1Н, дд), 6,63 (1Н, д), 4,00 (2Н, с), 3,70 (ЗН, с), 3,49 (2Н, с), 3,18 (2Н, м), 2,70 (2Н, м).
Сполука 1, сіль геміфумарату: 1,6 г сполуки 1 (нейтральної форми) і 265 мг фумарової кислоти ввели у круглодонну колбу.
Після додавання 18 мл ацетону і 2 мл води, реакційну суміш нагрівали зі зворотним холодильником. Спостерігалося часткове розчинення (але не повне освітлення) з наступним осадженням. Потім реакційну суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом ночі. Після охолодження твердий залишок виділили за допомогою фільтрації, промили З мл ацетону і сушили у вакуумі (40 "С/10 мбар) протягом 4 годин.
І"Н 'ЯМР (ДМСО-дв, 600 МГ), б (ч.н.м.): 12,97 (2Н, ушир.с), 7,90 (2Н, м), 7,43 (1Н, д), 7,40 (2Н, м), 6,77 (1Н, дд), 6,64 (1Н, д), 6,62 (1Н, с), 4,03 (2Н, с), 3,70 (ЗН, с), 3,58 (2Н, с), 3,20 (2Н, м), 2,72 (2Н, м). нос щіФі 5
Сполука 6 2-(7-метокси-2,3-дигідробензо| ЦИ ,4гіазепін-4(5Н)-іл)уметил)бензойна кислота: сполуку конвертували у хлористоводневу сіль за допомогою 2М НОСІ в ефірі. "Н ЯМР (300 МГц, ДМСО- дв): 10,10 («ушир., 1Н), 8,08 (д, 9У-7,5 Гц, 1Н), 7,66-7,51 (м, 4Н), 7,17 (д, 9-21 Гу, 1Н), 6,99 (дд, 984,21 Гу, 1Н), 4,80-4,40 (м, ушир., 4Н), 3,78 (с, ЗН), 3,46 (м, 2Н), 3,13 (м, 2Н). МС: 330 (М-1), 328 (М-1).
Синтез тетразолу (загальна процедура)
Нітриловий попередник (3,22 ммоль), азид натрію (830 мг, 12,9 ммоль) і гідрохлорид триетиламіну (1,72 г, 12,9 ммоль) перемішували у 40 мл безводного ДМФ при температурі 100 "С протягом 5 днів. ДМФ видалили у високому вакуумі і залишок змішали з водою. Водний розчин екстрагували дихлорметаном (3 х 100мл), чисту сполуку очищали за допомогою колонкової хроматографії (етилацетатом/метанолом). -М
М м-н о о; з
Зо Сполука 10 4-(2-(1Н-тетразол-5-іл)бензил)-7-метокси-2,3,4,5-тетрагідробензо ЧІП Ятгіазепін: "Н ЯМР (300
МГц, СОС», ії крапля СОзОВ): 8,30 (д, 9У-8,7 Гц, 1Н), 7,53 (м, 2Н), 7,14 (т, 9У-7,8 Гу, 1Н), 7,20 (д, 97,5 Гц, 1Н), 6,84 (дд, 9У-2.7,8.4 Гу, 1Н), 6,69 (д, У-2,7 Гу, 1Н), 4,46 (с, 2Н), 3,80 (с, 2Н), 3,75 (с, 2Н), 3,43 (м, 2Н), 2,96 (м, 2Н). МС: 354 (МТ), 352 (М-1) -М зм
М
Н оо,
З
Сполука 11 4-(3-(1Н-тетразол-5-іл)бензил)-7-метокси-2,3,4,5-тетрагідробензо|Ц(1,4)гіазепін: "Н ЯМР (300
Му, СОС»): 8,16 (с, 1Н), 7,90 (д, У-7,5 Гу, 1Н), 7,40 (д, 9У-8,4 Гу, 1Н), 7,20 (м, 2Н), 6,74 (дд, 9-2,7, 8,4 Гц, 1Н), 6,58 (д, 9У-2,7 Гц, 1Н), 4,18 (с, 2Н), 3,75 (с, 5Н), 3,36 (м, 2Н), 2,76 (м, 2Н).). МС: 354 (М.н1), 352 (М-1)
АКА
Х дода в Н
Сполука 12 4-(4-(1Н-тетразол-5-іл)бензил)-7-метокси-2,3,4,5-тетрагідробензо|Ц(1,4)гіазепін: "Н ЯМР (300
МГц, СОСІ», і крапля СОзОБ): 7,99 (д, 9-72 Гц, 2Н), 7,42 (м, ЗН), 6,74 (дд, 9-2,7, 8,4 Гц, 1Н), 6,53 (д, 9-2,7 Гу, 1Н), 4,10 (с, 2Н), 3,71 (с, ЗН), 3,58 (с, 2Н), 3,36 (м, 2Н), 2,76 (м, 2Н).). МС: 354 (М), 352 (М-1)
Синтез 7-метокси-2,3,4,5-тетрагідробензо ЦИ1,4|гіазепін ("амін"). кімн. темп.
З3З 9о НВг у оцтовій кислоті вода
ТГФ, зворотний холодильник протягом ночі ред Ф сі- МН, НС р 8 зн ІФ мшо -10 и 1,5 ед. КСО»; 1.0 ед. ОІЕА в7и 7 н о. ДІ
ТНЕ, гейих, омегпідне Мансо», маег а ВІЙ 1 ОСМ, гі (в) 2
Ге! 10 еа-(НСНО), ого 3395 НВг іп Асейіс Асів "со НВ - ----2 2 --Я - -яжляфятжш хз - - з 0.4 ед-РТЗА Що З 3 4 2(4-метоксифенілтіо)етанамін (1) 4-метокситіофенол (50 г, 0,357 моль), моногідрохлорид 2-хлоретиламіну (39,8 г, 0,343 моль),
КСО» (78,8 г, 0,57 моль) і диізопропілетиламін (32 мл, 0,178 моль) змішали у 200 мл ТІГФ.
Суміш дегазували протягом 5 хвилин при зниженому тиску і нагрівали зі зворотним холодильником в атмосфері аргону протягом ночі. Розчинник видалили і додали воду (300 мл) у колбу. Суміш екстрагували дихлорметаном (3 х 200 мл). Органічні шари зібрали, дихлорметан видалили і додали 50 мл концентрованого НСІ з подальшим додаванням 200 мл води. Розчин екстрагували 1:11 Е(Ас/гексаном (З х 200 мл). Водний шар довели до рН 10 за допомогою 2 М
Ммаон і екстрагували дихлорметаном (3 х 200 мл). Об'єднаний органічний розчин сушили над безводним сульфатом натрію. Після видалення розчинника отримали 61 г цільової сполуки у вигляді безбарвної рідини з виходом 97 95. "Н-ЯМР (300 МГц, СОС»): 7,35 (д, У-8,7 Гц, 2Н), 6,81 (д, 9У-8,7 Гц, 2Н), 3,77 (с, ЗН), 2,88-2,80 (м, 4Н), 1,44 (с, 2Н).
Бензил 2-(4-метоксифенілтіо)етилкарбамат (2)
Зо Перший спосіб
У колбу, що містить сполуку 1 (8,0 г, 43,7 ммоль), бікарбонат натрію (12,1 г, 144 ммоль), воду (100 мл) і дихлорметан (200 мл) додали бензиловий ефір хлормурашиної кислоти (8,2 г, 48,1 ммоль, розведений у 100 мл дихлорметану) по краплях при 0 "С. Після додавання, суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 5 годин. Органічний шар зібрали, а водний розчин екстрагували 100 мл дихлорметану. Об'єднаний органічний розчин висушили над сульфатом натрію. Розчинник видалили і отриманий твердий залишок розтирали з 200 мл
ТГФ/гексану (1:10). Твердий залишок зібрали і висушили, залишаючи цільовий продукт (12,9 г) з виходом 93 95.
Альтернативний спосіб
До розчину сполуки 1 (10 г, 54,6 ммоль) і триетиламіну (15 мл, 106 ммоль) у 200 мл дихлорметані додали бензиловий ефір хлормурашиної кислоти (7,24 мл, 51,5 ммоль, розведений у 100 мл дихлорметану) по краплях при 0 "С. Після додавання, цей розчин перемішували при кімнатній температурі протягом однієї години. Твердий залишок видалили шляхом фільтрування. Розчин екстрагували 100 мл 0,1 М НСЇІ ї 100 мл насиченого карбонату натрію і висушили над безводним сульфатом натрію. Після видалення розчинника отримали білу тверду речовину, яку перемішували у 200 мл ТГф/гексану (1:20) протягом трьох годин.
Твердий залишок зібрали за допомогою фільтрування з отриманням 14,2 г цільової сполуки з виходом 87 95. "Н-ЯМР (300 МГц, СОСІз): 7,35 (м, 7Н), 6,83 (д, 9У-8,7 Гц, 2Н), 5,07 (м, ЗН), 3,77 (с, ЗН), 3,10 (д, 9-6,3 Гц, 2Н), 2,92 (т, У-6,3 Гц, 2Н).
Бензил 7-метокси-2,3-дигідробензо| Щ1,4)гіазепін-А(5Н)-карбоксилат (3)
Суміш сполуки 2 (7,3 г, 23 ммоль), параформальдегіду (6,9 г 0,23 моль) і р- толуолсульфонової кислоти (1,45 г, 7,6 ммоль) у 250 мл толуолу перемішували при температурі 70"С протягом ночі. Після охолодження до кімнатної температури, твердий залишок відфільтрували. Розчин екстрагували насиченим карбонатом натрію (100 мл), і органічний шар висушили над безводним сульфатом натрію. Цільовий продукт (7,4 г) отримали у вигляді рідини після видалення розчинника з виходом 97 95. "Н-ЯМР (300 МГц, СОС»): 7,44 (д, У-8,1 Гц, 0,77Н), 7,32 (м, 5,60Н), 7,07 (д, 9У-2,7 Гц, 0,33Н), 6,68 (м, 1,30ОН), 5,04 (с, 2Н), 4,59 (сс, 2Н), 3,96 (ушир., 1,80), 3,680 (сс, 1,23 Н), 3,55 (с, 1,97Н), 2,76 (м, 2Н). 7-метокси-2,3,4,5-тетрагідробензо|ЦП1,4гіазепін гідробромід (амін) (сіль 4 НВі)
Перший спосіб
Розчин НВг (33 95 у оцтовій кислоті, 10 мл) додали до сполуки З (4,2 г, 12,8 ммоль). Після додавання, почав виділятися двоокис вуглецю і утворився білий твердий залишок. Суміші дали відстоятися при кімнатній температурі протягом ще 2 годин. До суміші додали діетиловий ефір (150 мл) і суміш перемішували протягом 30 хвилин. Твердий залишок зібрали за допомогою фільтрації і промили діетиловим ефіром. Твердий залишок висушили під вакуумом для отримання 3,40 г цільової сполуки з виходом 91,8 95. "Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-ав): 9,02 (ушир., 2Н), 7,52 (д, 9У-8,1 Гц, 1Н), 7,27 (д, 9У-3,3 Гц, 1Н), 6,92 (дд, 9-84, 2,7 Гу, 1Н), 4,41 (с, 2Н), 3,77 (с, ЗН), 3,53 (м, 2Н), 2,96 (м, 2Н).
Альтернативний спосіб (вільна основа 4а)
Сполуку З (10 г, 30 ммоль) змішали з 50 мл концентрованого НСІ, 50 мл води і 30 мл діоксану. Суміш перемішували при 100 С протягом ночі. Після охолодження до кімнатної
Зо температури, більшу частину розчинника і НСІ видалили при зниженому тиску. До розчину додали воду (100 мл) і твердий залишок відфільтрували. Водний розчин екстрагували сумішшю етилацетату/гексану (111,3 х 100 мл) і підлужили шляхом додавання 15 г Маон. Суміш екстрагували дихлорметаном (3 х 150 мл). Об'єднаний розчин висушили над безводним сульфатом натрію. Після видалення розчинника отримали рідину, яка затверднула після витримування при кімнатній температурі, залишаючи 6,2 г цільової сполуки. "Н-ЯМР (300 МГц, СОСІ»): 7,42 (д, 9-81 Гу, 1Н), 6,78 (д, У-2,7 Гц, Н), 6,68 (дд, 9У-2,7, 8,1 Гц, 1Н), 4,08 (с, 2Н), 3,96 (ушир., 1,80), 3,76 (с, ЗН), 3,38 (м, 2Н), 2,68 (м, 2Н).
ПРИКЛАД 2: Зв'язування калстабіну2 з ПКА-фосфорильованим Кука
Серцеві мембрани СР приготували, як було описано раніше (Магх еї аї!., 2000; Капап еї аї.,
Сік. Вез., 1996, 78:990-97). Імуноблотинг мікросом (50 мкг) проводили, як описано, з анти- антитілом калстабіну 1:1000) (дауагатап еї аї.,.. Віої. Спет., 1992, 267:9474-77) протягом 1 години при кімнатній температурі (МеїКеп еї аї., Сігосшацоп, 107:2459-66, 2003). Після інкубації з
НАР-міченим анти-Ідс кролика (1:5000 розбавлення; Тгапзаисійп ГІ арогайогіє5, І ехіпдіоп, Ку.), блоти були розроблені з використанням ЕСІ (Атег5йат РПаптасіа, Рібзсайамжау, МУ) і їх піддавали виявленню на рентгенівській плівці або піддавали впливу вторинних антитіл, мічених інфрачервоним барвником, та піддавали візуалізації на обладнанні фірми Гі-Сог Віозсієпсе5 (модель Одуб5хзеу). Якщо не вказано інше, сполуки тестували при концентрації 100 нм.
Репрезентативний аналіз зв'язування калстабіну2 представлено нижче.
А. ПКА фосфорилювання серцевого саркоплазматичного ретикулуму (ССР)
Реакційну суміш сформували у 1,5 мл пробірці. 200 мкг серцевого СР додали до реакційної суміші кіназного буфера, ПКА їі АТФ з кінцевим об'ємом 100 мкл (нижче зазначеної реакційної суміші). АТФ додали останнім, щоб ініціювати реакцію.
Реакційна суміш: 20 мкл - Зразок (серцевий СР, 2 або 10 мкг/мкл) 10 мкл - 10х кіназного буфера (80 мМ Масі», 100 мм ЕСТА, 500 мМ Тгтгіз/РІРЕ5), рН - 7,0 20 мкл - ПКА (2одиниці/мкл) (Зідта Ж Р2645) 10 мкл - 10х АТФ (1,0 мм) (Зідта 9187) 40 мкл - дистильованої НгО 1. Пробірки інкубували при температурі 30 "С протягом 30 хвилин. бо 2. Реакційну суміш потім перенесли у 0,5 мл товстостінні пробірки.
3. Пробірки, що містять реакційну суміш, центрифугували протягом 10 хвилин при 50.000х49 у центрифузі Зогмаі! Сепігпгиде КСМ120ОЕХ з використанням ротора 5120АТ3. Центрифугування при 50.000х9 протягом 10 хвилин є достатнім для виділення мікросом. 4. Отриманий осад промили 4 рази зв'язуючим буферним розчином (10 мМ імідазолу, 300
ММ сахарози, рН 7,4). Щоразу додавали 100 мкл їх зв'язуючого буферу у пробірку для промивання осаду. Осад ресуспендували шляхом промивання вгору і вниз за допомогою піпетки. Після останнього центрифугування додали 50 мкл зв'язуючого буферу і осади з усіх пробірок знову об'єднали. Реакційну суміш зберігали при температурі -20 76. 5. Фосфорилювання було підтверджене шляхом відокремлення близько 10 мкг ССР за допомогою електрофорезу у 6 95 поліакриламідному гелі (РАСЕ) та аналізу імуноблотів як для загального КУК (5029 Ат., 1:3000 розбавлення або моноклональні Ат. від Айіпку Віогеадепів, Саї
Ж МАЗ-916, розведення 1:2000), так і для ПКА-фосфорильованого Кука2г (Р2809 Ат., 1:10000 розведення). 6. Аліквоти можуть зберігатися при -80 "С.
В. Аналіз повторного зв'язування калстабіну 1. ПКА-фосфорильований ССР (приблизно 20 мкг) інкубували з 250 нМ калстабіну 2 у 100 мкл зв'язуючого буферу (як описано вище) разом зі сполуками або без них. 2. Реакцію проводили у 0,5 мл товстостінній пробірці (Ніаспі Сепігїиде маге, Саїаіюд ж
В4105). 3. Калстабін2 додали як останній реагент у реакційну суміш. Реакцію проводили при кімнатній температурі протягом 30 хвилин. 4. Після завершення реакції, пробірки центрифугували протягом 10 хвилин при 100000 4д (центрифуга 5огмаі! КСМ120ЕХ з ротором 5120АТ3). 5. Отриманий осад промили 4 рази у їх зв'язуючому буфері при 4 "С. Після кожної промивки пробірки центрифугували при 50000 уд протягом 10 хвилин при 4 70. 6. Після останньої промивки, супернатант видаляли. 7. Додали 20 мкл буферу для зразків (2х) |Єх буфер для зразків описаний нижче) і осад ресуспендували за допомогою піпетки та/"або шляхом короткочасного перемішування вихровим способом. Суспензію перенесли в 1,5 мл мікроцентрифужну пробірку.
Зо 8. Пробірки нагрівали при 90 "С протягом 4 хвилин. 9. Білки відокремили, використовуючи 15 95 505/РАСЕ. 10. Зв'язування калстабіну2 виявили за допомогою анти-ЕКВР (дауагатап єї аї., У. Віої.
Спет. 1992;:267:9474-77, 1:2000) первинного антитіла і відповідного вторинного антитіла. бх Буфер для зразків 7,0 мл 4х Тгіз-НСЗОБ, рн 6,8 3,0 мл гліцерину (30 95 кінцева концентрація) 1,0 г 505 (10 95 кінцева концентрація) 0,93 г ОТ (0,6 М кінцева) 1 мгбромфеноловий синій (0,001 95 кінцева концентрація)
Дистильована вода до 10 мл кінцевого об'єму.
Зберігати у Імл аліквотах при -70 "С.
Результати:
Фігура 1А зображує імуноблот з антитілом калстабіну2, який показує зв'язування калстабіну?2 з ПКА-фосфорильованим Кук2 за відсутності (-у або у присутності 100 нМ сполуки 1. (5): зв'язування калстабіну з ПКА-нефосфорильованим Кук2. 536, бензотіазепін, описаний в патенті О5 7.544.678, використовується як позитивний контроль. Як зображено, сполука 1, у концентрації 100 нМ, запобігає дисоціації калстабіну2 з ПКА-фосфорильованого Кука та/або посилює (повторне) зв'язування калстабіну2 з ПКА-фосфорильованим КУК.
Як зображено на Фігурі 18, було виявлено, що наступні репрезентативні сполуки також запобігають дисоціації калстабіну2 з ПКА-фосфорильованого Кук2, та/або посилюють (повторне) зв'язування калстабіну2 з ПКА-фосфорильованим Кук2 при тестуванні у вищезгаданому аналізі повторного зв'язування калстабіну2 при 100 нм: сполука 2, сполука З і сполука 4.
ПРИКЛАД 3: Зв'язування калстабіну! з ПКА-фосфорильованим Кук!
Мембрани СР зі скелетних м'язів були отримані способом, аналогічним описаному у
Прикладі 2, і як додатково описано в патентній заявці 5 Мо 2004/0224368, зміст якої включено в даний опис шляхом посилання. Імуноблотинг мікросом (50 мкг) проводили, як описано, з анти- антитілом калстабіну! (7утей) (1:1000). Блоти були розроблені і кількісно обчислені, як описано у Прикладі 2. 60 Фігура 1С зображує імуноблот з антитілом калстабіну!, який показує зв'язування калстабіну!
з ПКА-фосфорильованим КУК за відсутності (Мед) або у присутності зазначених концентрацій сполуки 1 або сполуки 4. (Роз): зв'язування калстабіну з ПКА-нефосфорильованим Кук1. 536 використовується як контроль. Як показано, сполука 1 і сполука 4 запобігали дисоціації калстабінуї з ПКА-фосфорильованого Кук! та/або посилювали (повторне) зв'язування калстабіну! з ПКА-фосфорильованим Кук! залежно від дози, з оціночним ЕС5О близько 100 нм і 150 нМ, відповідно.
ПРИКЛАД 4: Повторне зв'язування калстабінуї з Кук! у мишей, яким вводили ізопротеренол
Ізопротеренол, агоніст бета-адренергічного рецептора, викликає серцеву недостатність у мишей через надмірну стимуляцію бета-адренергічного рецептора. Одночасно з цим відбувається активація ПКА, фосфорилювання Кука на СР, і зниження взаємодії калстабіну?2 (ЕКВР12.6) з Кук2. Аналогічна послідовність подій має місце у скелетному м'язі, в якому Кук! фосфорилюється, що призводить до зниження зв'язування калстабіну! (ЕКВР12) з КУК1.
Як докладно описано у міжнародній публікації Ме ММО2008/064264, зміст якої включено в даний опис шляхом посилання, хронічне введення ізопротеренолу мишам дикого типу забезпечує швидкий і надійний спосіб індукування змін у біохімії Ку, які можуть бути легко визначені кількісно. Ці зміни включають в себе підвищення фосфорилювання Кук і супутнє зниження зв'язування калстабіну.
Тварини і реагенти
Мишей С57ВІ/6 утримували і досліджували згідно з затвердженими протоколами.
Синтетичний бета-адренергічний агоніст, ізопротеренол (ІЗО) отримали від компанії Зідта (65627) і приготували у вигляді маточного розчину 100 мг/мл у воді. Буфер для лізису отримали шляхом додавання сахарози (1 мМ), дитіотреїтолу (320 мм) та 1 таблетки інгібітору протеази (Ох) у 10 мл маточний розчин (10 мМ НЕРЕФ5, 1 мМ ЕДТА, 20 мМ Має, 2 мМ Мазмох).
Підготовка осмотичного насосу та хірургічна імплантація
Мишам постійно вводили шляхом інфузії протягом п'яти днів 10 мг/мл ізопротеренолу (1 мкл/годину) за допомогою підшкірно імплантованого осмотичного насосу для інфузії (осмотичний мінінасос АїЇ7еї, модель 2001, Юигесі Согрогайіоп, Сирегіїіпо, СА).
Для завантаженням лікарського засобу, осмотичний насос утримувався вертикально і 200
Зо мкл розчину препарату вводили в насос через 1 мл шприц (прикріплений до канюли), який містив надлишок розчину препарату (х- 250-300 мкл). Розчин препарату вводили повільно вниз, у той час як шприц повільно підіймали до тих пір, поки насос не переповнювався. Переливання витісненої рідини при закупорювані насосу підтверджувало, що насос був заповнений належним чином.
Завантажені осмотичні насоси були імплантовані підшкірно за допомогою наступних стадій.
Мишу-реципієнт анестезували 1,5-2 95 ізофлураном в ОО», який вводили зі швидкістю 0,6 л/хвилину, потім її вагу вимірювали і реєстрували. Потім мишу помістили грудьми вниз на пінополістирол, так щоб її морда знаходилася у носовому конусі. Хутро обрізали на задній частині шиї, розширюючи за вухами до верхньої частини голови. Цю ділянку обережно протерли 70 95 спиртом, і зробили невеликий надріз по серединній лінії на потилиці голови/шиї. Тримач шовного матеріалу протерли спиртом, вставили у розріз і відкрили, щоб звільнити шкіру від основної тканини. Щоб розмістити насос, цей отвір було розширено назад до задньої частини тулубу. Завантажений насос вставили в отвір так, щоб його місце випуску було розташоване в стороні від розрізу, і дали можливість осісти під шкірою з мінімальним натягом. Розріз закрили 5,0 нейлоновим шовним матеріалом, що потребувало приблизно 5-6 швів, і цю ділянку обережно протерли 70 95 спиртом. Після хірургічної операції мишей помістили в окремі клітки, щоб звести до мінімуму пошкодження і, можливо, активацію симпатичної нервової системи.
Відокремлення скелетного м'яза
Відокремлення тканини скелетного м'яза миші здійснювали у такий спосіб. М'язи ноги відкрили шляхом розтину шкіри на гомілюовостопному суглобі і потягнувши вгору. Тканину тримали змоченою буфером Тіроде (10 мМ НЕРЕ5, 140 мМ Масі, 2,68 мМ КСІ, 0,42 мМ
МагНРО», 1,7 мМ Масі», 11,9 мМ Мансоз, 5 мМ глюкози, 1,8 мМ Сасі», отриманого шляхом додавання 20 мг Сасі» у 100 мл 1Х буфера, приготованого з розчину 10Х без Сасі»). Наступні м'язи були відокремлені і заморожені в рідкому азоті. Довгий розгинач пальців (ДРП) відокремили шляхом введення ножиців між бічним сухожиллям і Х, утвореним ДРП і сухожиллям великогомілкового м'яза, розрізаючи вгору до коліна; розрізаючи малогомілковий м'яз, щоб викрити віялоподібне сухожилля литкового м'яза; вводячи пінцет під Х і під м'яз, щоб послабити сухожилля ДРП; надрізаючи сухожилля ДРП і підтягуючи м'язи; і, нарешті, надрізаючи для відокремлення ДРП. Камбалоподібний м'яз відокремили шляхом видалення 60 малогомілкового м'яза від верхньої частини литкового м'яза;відкриваючи камбалоподібний м'яз на нижній частині литкового м'яза шляхом розрізання і підіймання вгору Ахіллового сухожилля; розрізаючи камбалоподібний м'яз у верхній частині м'яза під коліном; і, нарешті, потягнувши камбалоподібний м'яз і відрізавши його від литкового м'яза. Великогомілковий м'яз відокремили шляхом відрізання сухожилля великогомілкового м'яза від передньої частини гомілковостопного суглоба, потягнувши сухожилля вгору, і відрізаючи його від кістки. Широкий м'яз (м'яз стегна) відокремили від обох ніг, розрізаючи м'яз трохи вище коліна і видаляючи м'язовий пучок. Зразки заморозили в рідкому азоті.
Імунопреципітація Кук" з тканини лізатів
РУК! імунопреципітували зі зразків шляхом інкубації 200-500 мкг гомогенату з 2 мкл анти-
РУК! антитіла (7утеа) у 0,5 мл модифікованого буферу КІРА (50 мМ Тті5-НСЇІ (рН 7,4), 0,9 95 масі, 5,0 мМ МарБ, 1,0 мМ Мазмох, 0,5 95 Тийоп-Х100 і інгібітори протеази) при температурі 4 7С протягом 1,5 годин. Потім зразки інкубували з гранулами Протеїн А сефарози (Атег5пат
Рпапгтасіа Віоїесі, Різсаїамжу, МУ) при температурі 4 "С протягом 1 години, після чого гранули промили три рази крижаним буфером КІРА. Зразки нагріли до 95"С і фракціонували за розміром за допомогою 505-РАСЕ (1595 505-РАСЕ для калстабіну). Імуноблоти були розроблені з використанням анти-ЕКВР антитіла (ЕКВР 12/12.6, дауагатап еї аї., У. Віої. Спет. 1992:267:9474-77) при розведенні 1:2000. Антитіла розводили у 5 95 молоці або ТВ5-Т (20 мМ
Ттів-НСЇІ, рН 7,5, 0,5 М масі, 0,05 96 Тмеєпо 20, 0.5 956 Т"йоп Х-100).
Результати
Осмотичні насоси, що містять ізопротеренол разом з тестованою сполукою або без неї імплантували в мишей, як описано вище. Мишей піддавали осмотичній перфузії протягом п'яти днів або тільки з носієм (ДМСО/ПЕГ), тільки ізопротеренолом (І5О) (0,5 мг/кг/годину), або у поєднання ізопротеренолу (0,5 мг/кг/годину) зі сполукою 1 у зазначених концентраціях. На 6-й день, кожну мишу умертвляли, і тканини скелетних м'язів відокремили та використовували для аналізу зв'язування калстабіну! в імунопреципітатах КУК!1.
Вплив сполуки 1 на підвищення зв'язування калстабіну!ї з Кук 1 у скелетних м'язах, відокремлених від мишей, які отримували ізопротеренол, зображено на Фігурі 2А (імуноблоті) і
Фігурі 28 (графічне кількісне відображення). Як зображено, сполука 1 підвищила рівні калстабіну!, зв'язаного з Кук! у мембранах скелетних м'язів, до рівня, аналогічного тому, що
Зо спостерігається при введенні 3,6 мМ 536, іншу похідну бензотіазепіну використовували як позитивний контроль (М/О2008/064264). Подібні результати були отримані для сполуки 4 (дані не показані).
ПРИКЛАД 5: Вплив сполуки 1 у моделі хронічної постішемічної серцевої недостатності у щурів
Ціль
Ціллю даного дослідження було перевірити здатність сполуки 1 до зменшення серцевої дисфункції і послаблення шлуночкового ремоделювання у моделі серцевої недостатності, викликаної ішемічно-реперфузійним пошкодженням.
Методологія
Хронічна серцева недостатність була індукована у щурів-самців М/ізіаг (224-240 г, 10-11 тижнів) шляхом ішемічно-реперфузійного (І/Р) пошкодження. Для протоколу І/Р, передню низхідну ліву (ПНЛ) коронарну артерію перетискали протягом 1 години. Медикаментозне лікування (5 мг/кг/добу або 10 мг/кг/добу у питній воді) було розпочато через 1 тиждень після реперфузії і тривало протягом З місяців періоду дослідження. Ефективність сполуки 1 оцінювали за даними ехокардіографії через один, два і три місяці після початку лікування, і за допомогою інвазивної гемодинаміки у З місяці в порівнянні з тваринами, які отримували носій, і тваринами, які отримували плацебо. Серцеві зразки були також проаналізовані з метою оцінки гіпертрофії і вмісту колагену. Кров збирали від кожного щура в останній день дослідження для оцінки концентрації препарату в плазмі, як показано на Фігурі 3. Схема дослідження представлена на фігурі 3. Експерименти виконували у сліпий спосіб.
Статистичні методи
На основі параметрів, вимірюваних з плином часу, порівняння тварин, які отримували плацебо, з тваринами, які отримували носій, і порівняння способів медикаментозного лікування аналізували за допомогою двофакторного дисперсійного аналізу (АМОМА) з повторними вимірами. На основі параметрів, вимірюваних при умертвленні тварин і даних морфометрії, порівняння тварин, які отримували плацебо, з тваринами, які отримували носій, аналізували за допомогою Т-тесту, а порівняння способів медикаментозного лікування - за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу з подальшим тестом Даннетта (ЮОиппей).
Результати бо Р тварини, які отримували носій, у порівнянні з тваринами, які отримували плацебо,
продемонстрували підвищений кінцево-систолічний об'єм лівого шлуночка (КСО ЛШ) і підвищений кінцево-діастолічний об'єм лівого шлуночка (КДО ЛШ) (Фігури 4А і 4В), пригнічену серцеву функцію, яка вимірювалася зниженою фракцією викиду (ФВ) (Фігура 4С), і підвищений вміст інтерстиціального колагену (Фігура 50). Сполука 1, яку вводили по 5 і 10 мг/кг/добу, значно підвищила ФВ, а також знизила як КСО ЛШ, так і КДО ЛШ, у порівнянні з носієм, за проміжок часу від одного до трьох місяців (Фігури 4А-С), а також знизила вміст інтерстиціального колагену (Фігура 50).
Дослідження інвазивної гемодинаміки (через З місяці) засвідчило збереження ар/атах і арР/антіп у лівому шлуночку тварин, які отримували сполуку 1 по 5 і 10 мг/кг/добу в порівнянні з тваринами, які отримували носій (Фігури 6В і 6С), без статистично значущої зміни систолічною тиску у ЛШ після лікування (Фігура 6А).
Жодного впливу на вагу тіла (ВУМ), розмір інфаркту або гіпертрофію (вагу ЛШ) не спостерігалося після лікування (Фігури 5А-С). Концентрації препарату у плазмі зображені на
Фігурі 7.
Результати свідчать про те, що сполука 1, при таких низьких концентраціях, як 5 мг/кг/добу, має сприятливий вплив як на систолічну, так і діастолічну серцеву функції у моделі хронічної постішемічної серцевої недостатності у щурів.
Сполука 1 була значно і несподівано активнішою порівняно зі сполукою А, структурно пов'язаною похідною бензотіазепіну, описаною в УМО 2007/024717. Як показано на фігурі 8, сполука А, яку вводили у концентрації 5 мг/кг/добу протягом 3-х місяців, не змогла поліпшити систолічну і діастолічну серцеву функцію в порівнянні зі сполукою 1 у моделі хронічної постішемічної серцевої недостатності у щурів при завершенні дослідження. Таким чином, сприятливі ефекти сполуки 1, але не сполуки А, спостерігалися при дозі 5 мг/кг/добу після З місяців лікування у моделі хронічної серцевої недостатності у щурів. он по
З
Сполука А
ПРИКЛАД 6: Вплив сполуки 1 на функцію м'язів у моделі м'язової дистрофії у мишей (тах)
Ціль
Ціллю даного дослідження було перевірити, чи покращує лікування сполукою 1 функцію
Зо м'язів у мишачої моделі з дефіцитом дистрофіну (тах).
Методологія
Мишей С57ВІ Л105с5п0-МДД (скорочено тах, п-5 у кожній групі), віком 6 тижнів і близько 20 грамів, на початку дослідження, акліматизували до кліток з колесом протягом шести днів, перш ніж провести їх рандомізацію на групи, які отримували лікування або носієм (НгО), або цільові дози по 5 мг/кг/добу, 10 мг/кг/добу або 50 мг/кг/добу (фактичні дози: 7,9 мг/кг/добу; 12,8 мг/кг/добу; і 61,5 мг/кг/день, відповідно, визначаються на основі щотижневого виміряного споживання розчину препарату, поділеного на вагу тіла) натрієвої солі сполуки 1 (у розрахунку на вагу вихідного препарату; натрієва сіль згадується тут далі у цьому Прикладі як "сполука 17"), які вводили разом з питною водою ай Ібішт (досхочу) протягом 4 тижнів. Підібрані за віком миші С57ВІ/6 (скорочено - М/Т (дикого типу), п-4 у кожній групі) були рандомізовані на групи, які отримували лікування або носієм (НгО), або цільову дозу 50 мг/кг/добу (фактична доза: 67,7 мг/кг/добу) натрієвої солі сполуки 1.
Довільну активність на колесі, вагу тіла і середнє споживання води вимірювали протягом перших З тижнів. Питому м'язову силу вимірювали після 4 тижнів лікування, в кінці дослідження.
Пройдену відстань (км/добу) протягом 24 годин аналізували як індекс поліпшеної функціональної активності (див., ОМО М.2.1.002 БОР аї пер:/Лумлм Ігеаї-пта.ец/). Наприкінці дослідження, м'яз довгого розгинача пальців (ДРП) відокремили для аналізу сили м'язів, як додатково описано нижче. Кров збирали від кожної миші шляхом ретроорбітальної кровотечі в кінці дослідження (після завершення темного часу доби - о 7 годині ранку), щоб оцінити концентрації препарату в плазмі. Експерименти виконували у сліпий спосіб.
Вимірювання сили
В кінці дослідження, м'яз ДРП відтяли від задніх кінцівок для аналізу ізометричної сили за допомогою системи для дослідження м'язів 407А Мизсіе Теб5і Зузіет від А!йгога Зсіепійіс (Аєйгога, Опіагіо, Сапада). Шовний матеріал 6-0 прив'язали до кожного сухожилля і усього м'яза
ДРП, сухожилля до сухожилля, перенесли у ванну Раньоті (Кадпоїї) з О2/СбО» (95 95/5 9) барботованим розчином Тіроде (у мМ: Масі 121, КСІ 5,0, Сасі» 1,8, МоСі-, МаНнгРО», МансСоз 24 і глюкози 5,5). За допомогою шовного матеріалу одне сухожилля прив'язали вертикально до крюка з нержавіючої сталі, приєднаного до датчика сили. Інше сухожилля з шовним матеріалом було затиснуте внизу у рухомому важелі системи А!йгога. М'яз ДРП стимулювали для скорочення за допомогою електричного поля між двома платиновими електродами. На початку кожного експерименту, довжину м'язів корегували для отримання максимальної сили.
Співвідношення сили-частоти визначали шляхом ініціювання скорочення з використанням поступово наростаючих частот стимуляції (5-250 Гц протягом 200 мс за надпорогової напруги).
Між стимуляціями м'язу давали можливість відпочити х З хвилини. Наприкінці вимірювання сили, довжину (Іо) м'яза ДРП, закріпленого шовним матеріалом у системі Аєгога, вимірювали за винятком сухожиль. Потім м'яз ДРП видаляли із системи і зважували, після відсікання кінцевих сухожиль і шовного матеріалу. Потім м'яз ДРП заморозили в рідкому азоті. Площу поперечного перерізу (мм) м'яза ДРП розрахували, поділивши вагу м'яза ДРП на довжину м'яза ДРП і константу щільності м'язів ссавців 1,056 мг/м (Матада, Т., еї аІ. Апйітїйі5 апа птештаїївт 60:3280- 3289). Щоб визначити питому силу ДРП (кН/м7), абсолютну тетанічну силу поділили на площу поперечного перерізу м'яза ДРП.
Статистичні методи
Для визначення статистичної значущості, т-критерій Стьюдента використовували для порівняння між двома групами. Усі узагальнені дані були виражені як середня величина ж/- ЗЕМ (стандартна похибка середньої величини).
Результати
Здатність сполуки 1 для поліпшення довільного фізичного навантаження у мишей тах піддали тестуванню. Після акліматизації мишей до клітки з довільним колесом, активність мишей на довільному колесі контролювали за допомогою комп'ютера 24 години 7днів на тиждень. Зібрані дані транскрибували у відстань, пройдену за добу протягом З тижнів. Миші тах, які отримували 10 і 50 мг/кг/добу (цільову дозу) сполуки 1 проходили значно більші відстані на колесі у порівнянні з мишами тах, які отримували тільки носій (НгО) (Р-0,001 від доби 1 до доби 19). Ефект лікування спостерігався вже через 2-3 днів після початку лікування і тривав
Зо протягом усього періоду моніторингу активності. Відсутність ефекту сполуки 1 на пройдену відстань спостерігалася у мишей дикого типу (М/Т), які отримували 50 мг/кг/добу сполуки 1 (Фігура 9). Крім того, як визначено вимірами сили іп міо у м'язі ДРП (Фігура 10), лікування сполукою 1 підвищувало питому силу у м'язах мишей тах залежно від дози. При частотах стимуляції 150 Гу ії вище миші тах, які отримували по 50 мг/кг/добу, продемонстрували статистично значуще збільшення питомої м'язової сили (Р«0,05). Відсутність ефекту лікування сполукою 1 на питому м'язову силу спостерігалася у мишей УМТ.
Як зображено на фігурі 11, лікування сполукою 1 не впливає на вагу тіла. Не спостерігалося ефекту, залежного від дози, на споживання води. Ранковий контакт сполуки 1 з кров'ю становив (середнє значення ж ЗЕМ) 3,3240,4 мкм для мишей тах, які отримували дозу 5 мг/кг/добу, 10,720,9 мкМ для мишей тах, які отримували дозу 10 мг/кг/добу, 52,8-41,7 мкМ для мишей тах, які отримували дозу 50 мг/кг/добу і 72,8-7,0 мкМ для мишей МУ/Т, які отримували дозу 50 мг/кг/добу. Узяті разом, результати показують, що, в порівнянні з контрольними тваринами, які отримували носій, лікування сполукою 1 у дозі 10 мг/кг/добу і 50 мг/кг/добу (цільова доза) покращило здатність до фізичного навантаження на довільному колесі після З тижнів і підвищило питому м'язову силу після 4 тижнів у мишей тах, мишачої моделі м'язової дистрофії
Дюшена (МДД), тим самим демонструючи корисність сполуки 1 і її аналогів, як заявлено тут, при лікуванні м'язової дистрофії.
ПРИКЛАД 7: Метаболічна стабільність
Метаболічну стабільність сполуки 1, репрезентативної Руса!"М згідно з даним винаходом, порівнювали зі сполукою В і сполукою С, структурно спорідненими похідними бензотіазепіну, описаними в МО 2007/024717.
А. Метаболічна стабільність у мікросомах печінки людини
Способи:
Солюбілізація сполуки: маточні розчини готували у ДМСО, а робочі розчини - у воді, що містить 1 мг/мл бичачого сироваткового альбуміну (БСА).
Прогнозування метаболічної біодоступності: Прогнозування метаболічної біодоступності (МЕ9У5) грунтувалися на вимірах метаболічної стабільності іп мйго у мікросомах печінки, виходячи з припущення про повне поглинання. Коротко, незмінені препарати були кількісно визначені за допомогою РХ-МО-МС після інкубації (10-7 М) у мікросомах печінки щурів і людини бо (0,33 мг білка/мл) через 0, 5, 15, 30 і 60 хвилин інкубації у присутності НАДФН (1 мМ).
Ферментативну реакцію зупинили метанолом (06б./06.), і білки осаджували шляхом центрифугування. Власні кліренси іп міїго (Сіїпї тіс), виражені у мл/хв/г білка, являли собою кут нахилу графіка лінійної залежності (після ІМ лінеаризації) залишкової концентрації незмінного препарату в залежності від часу інкубації. Іп міго кліренси (Сііп) потім масштабували до всього тіла іп мімо (мімоСіїп) з використанням 0,045 мг білка/кг печінки і печінки вагою 11 г для щурів і 1,2 кг для людини. Іп мімо кліренси (Сіїп)) потім трансформували у печінкові кліренси (Нерсі) з використанням добре перемішаної моделі (НерсієммосСіїпеНВЕмімосСіїпі-НВЕ), де НВЕ (печінковий кровотік) були взяті як 22 мл/хв для щурів і 1500 мл/хв для людини. МЕ9о потім віднімали від коефіцієнта очищення (кліренса) за наступним рівнянням (МЕ95-1-Нерсі/НВЕ).
Результати представлені в Таблиці 1:
Таблиця 1
Стабільність у мікросомах людини
Спо- . . лука Структура Мікросоми щура Мікросоми людини
Сіпг тіс Сі тіс щура Ме Клас людини МЕ Клас мл/хв/г | тіс Фо мл/хв/г | тіс Фо білка білка
Ж СК» 823 Б | Дуже 285 дуже
В, низький низький 8: (о) низький низький 5 й х 1 В, о 101 30 проміжний 9.1 75 високий 5 а. Сіїпії тіс: власний кліренс іп міго у мл/хв/г білка р. МЕ95: метаболічна біодоступність у 90
В. Метаболічна стабільність у печінкових гепатоцитах щурів і людини
Солюбілізація сполуки: маточні розчини готували у ДМСО, а робочі розчини - у середовищі
Вільяма (УМіат), що містить 1/10 плазми щура або 1/4 людської плазми.
Визначення метаболічної стабільності: Сполуки інкубували при 107 М з ізольованими гепатоцитами (6Е « 5 клітин/мл для гепатоцитів щурів і 4АЕ5 клітин/мл для гепатоцитів людини) при 37 "С у плазмі від одних зразків, розчинених у середовищі Вільяма (1/10 розведення для щурів і 1/4 розведення для людини). Проведення вимірювань здійснювали на 0, 10, 20, 30, 60 і 120 хвилинах і ферментативну реакцію зупиняли метанолом (об./06.). Білки осаджували центрифугуванням і супернатант аналізували за допомогою РХ/МС/МС. Кліренс (Сіїп), виражений у мл/хв/г білка, розраховували для печінкових мікросом з використанням коефіцієнта 0,134 мг білка/мл для 4Е-5 клітин/мл для людини і 0,201 мг білка/мл для бЕж5 клітин/мл для щурів. Наявність еталонного препарату і потенціального метаболіту перевіряли за допомогою
РХ/МС/МС при аналізі кожного зразка. Результати представлені в Таблиці 2:
Таблиця 2
Стабільність у гепатоцитах щурів і людини р віки аннни до млн | они білка) щура Фо білка) людини 90
В | 1334 з | 605 | 693 | З | 4о0Б5 7715 щ|МДр 90 | 605 | 0 | 700 | 4о0Бно5 а. Сіїпії тіс: власний кліренс іп міго у мл/хв/г білка р. МЕ95: метаболічна біодоступність у до с. 0: Кількість клітин на мл.
С. Метаболічна стабільність у мікросомах мишей та щурів
Матеріали і способи
Буфер для розведення: 0,1 М Ттгіб-НСІ буфер при рН 7,4, що містить 5 ММ ЕДТА.
Розчину кофактору відновленого нікотинамідаденіндинуклеотидфосфату (НАДФН): До 50 мл пробірки "Гаїсоп", що містить 2,79 мл буферу для розведення додали 0,429 мл НАДФН- відновлюючого розчину А і 0,079 мл НАДФН-відновлюючого розчину В.
Приготування мікросом: (1,5 мг/мл розчин) 50 мл пробірку "Гаісоп", що містить 3,32 мл буферу для розведення попередньо нагрівали при температурі 37 "С протягом 15 хвилин (принаймні 10 хв.). Додали 0,178 мл мікросом (24,6 мг/мл) до попередньо нагрітого буферу для розведення. Концентрація білка цього приготування мікросом становила 1,25 мг/мл.
Зразок (тестова сполука) - вихідний і проміжний маточні розчини: приготували 1 мг/мл (0,5 мг/мл використовували для сполуки 1) розчину тестової сполуки в метанолі. 100 мкм проміжного розчину тестової сполуки з вихідного маточного розчину приготували з використанням буферу для розведення. 5 мкМ розчину приготували шляхом розведення 100 мкм проміжного розчину з використанням буферу для розведення.
Експеримент: (Експерименти проводили у 1,5 мл центрифужній мікропробірці "еппендорф")
О хвилинна інкубація. Процедура: а. Додати 100 мкл попередньо нагрітих мікросом р. Додати 50 мкл 5 мкМ розчину тестової сполуки с. Додати 500 мкл холодного стоп-реагента (крижаний метанол) а. Додати 100 мкл розчину кофактору НАДФН до мікропробірки еппендорф а. Перемішувати вихровим способом мікропробірку еппендорф "" хвилинна інкубація р. Додати 100 мкл розчину кофактору НАДФН до мікропробірки еппендорф
Зо с. Додати 50 мкл 5 мкМ розчину тестової сполуки а. Додати 100 мкл попередньо нагрітих мікросом е. Інкубувати мікропробірку еппендорф при 37 "С і 300 об. на хвилину протягом "ї" хвилин у термоміксері
І. Видалити мікропробірку еппендорф з термоміксера 9. Додати 500 мкл холодного стоп-реагента (крижаний метанол)
І. Перемішувати вихровим способом мікропробірку еппендорф.
Обидва зразки, інкубовані "0" і "" хвилин, центрифугували при 15.000 гої при 4 "С протягом 15 хвилин. 500 мкл розчину супернатанту видалили і піддали його аналізу РХ/МС (5ІМ - контроль заданих іонів).
Результати виражені як 9о тестової сполуки, що залишилася - (Площа піку МС зразка "С" хв. /
Площа піку зразка "0" хв.)"100. Площа МС, що використовується, являє собою середнє значення дублюючих ін'єкцій.
Часові точки - 0, 15, 30 і 60 хвилин для кожної тестової сполуки.
Позитивний контроль: 2 МКМ Іміпраміну - 5 хвилинну і 2 мкМ Іміпраміну - 15 хвилинну інкубацію використовували як позитивний контроль для проведення експериментів стабільності мікросом печінки щурів і мишей.
Результати представлені в Таблиці 3:
Таблиця З
Стабільність у мікросомах мишей і щурів 11111111 | Сполука) | Сполука(В) | Сполука(с) о Метаболічна стабільністьіпйуйо | /!/ (ЇЇ (
Мікротоми щурів (ббзалишилося).д//-/:71Ї11111111111111Ї1111111111111С (Мікросоми мишей (Фбзалишилося).д ///:/://7771Ї1111111111111111Ї1111111111111
Дивно, як показано в Таблицях 1-3, сполука 1 була значно стабільнішою у мікросомах мишей, щурів та людини, і у гепатоцитах щурів та людини, в порівнянні зі структурними аналогами - сполуками В і С, описаними в УМО 2007/024717, обидві з яких, як було встановлено, мають низьку метаболічну стабільність іп міго у тестованих системах, що робить ці сполуки непридатними для розробки у якості кандидатів на лікарський препарат. Дивно і несподівано, заміна груп Н або ОН у сполуках відомого рівня техніки групою СООН призвела до отримання сполуки 1, яка відзначається високою метаболічною стабільністю у всіх тестових системах.
Підвищена метаболічна стабільність Сполуки 1 у порівнянні з її структурними аналогами, дійсно, є дивною і обгрунтовує несподівані переваги цієї сполуки над сполуками, відомими в даній галузі техніки.
Усі публікації, посилання, патенти і патентні заявки, цитовані тут, включені шляхом посилання у всій своїй повноті в тій же мірі, якби кожна окрема заявка, патент або патентна заявка були конкретно та окремо вказані як такі, що включені шляхом посилання у їх повному обсязі.
Наведений вище опис конкретних варіантів здійснення настільки повно розкриває загальний характер винаходу, що інші можуть, із застосуванням сучасних знань, легко модифікувати та/або адаптувати для різних застосувань такі конкретні варіанти без зайвого експериментування і без відходу від загальної концепції, і, таким чином, такі адаптації та модифікації повинні і мають на меті розумітися в рамках сенсу і обсягу еквівалентів розкритих варіантів здійснення. Слід розуміти, що фразеологія або термінологія, використовувана тут, має на меті ілюстрацію, а не обмеження. Засоби, матеріали і стадії для виконання різних функцій, описаних тут, можуть набувати різних альтернативних форм без відступу від винаходу.

Claims (34)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Сполука, яка представлена структурою Формули (1): нео М7 ї » ко, в З що Зо де Е являє собою СООН; або її фармацевтично прийнятні солі.
2. Сполука за п. 1 у формі солі з фармацевтично прийнятною кислотою або основою.
3. Сполука за п. 2, яка відрізняється тим, що сіль вибирають з групи, що складається з натрію, калію, магнію, геміфумарату, гідрохлориду і гідроброміду, переважно сіль являє собою сіль натрію або геміфумарату.
4. Сполука за п. 1, яку вибирають з групи, що складається з:
(в) ра М В, й і) он (0) ; он (в) ) (4) і он (в) (в) р СУ (6)
5. Сполука за п. 1, яка представлена структурою Формули (1): (в) р М В, й 2) он 5 (0) , або її фармацевтично прийнятні солі.
6. Сполука за п. 5 у формі солі з фармацевтично прийнятною кислотою або основою.
7. Сполука за п. б, яка відрізняється тим, що сіль вибирають з групи, що складається з натрію, калію, магнію, геміфумарату, гідрохлориду і гідроброміду.
8. Сполука за п. 7, яка відрізняється тим, що сіль являє собою натрієву сіль.
9. Сполука за п. 7, яка відрізняється тим, що сіль являє собою сіль геміфумарату.
10. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку за будь-яким з пп. 1-9 у поєднанні з одним або кількома фармацевтично прийнятними наповнювачами або носіями.
11. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вибраного з групи, що складається з серцевих порушень та захворювань, м'язової втоми, скелетно-м'язових порушень та захворювань, порушень та захворювань ЦНС, когнітивної дисфункції, нервово-м'язових порушень та захворювань, уражень та захворювань кісток, ракової кахексії, злоякісної гіпертермії, цукрового діабету, раптової серцевої смерті і синдрому раптової дитячої смерті, або для покращення когнітивної функції.
12. Спосіб лікування або профілактики стану, вибраного з групи, що складається з серцевих порушень та захворювань, м'язової втоми, скелетно-м'язових порушень та захворювань, порушень та захворювань ЦНеС, когнітивної дисфункції, нервово-м'язових порушень та захворювань, уражень та захворювань кісток, ракової кахексії, злоякісної гіпертермії, цукрового діабету, раптової серцевої смерті і синдрому раптової дитячої смерті, або для покращення когнітивної функції, за яким вводять пацієнту, який цього потребує, терапевтично ефективну кількість сполуки за будь-яким з пп. 1-9 або фармацевтичної композиції за п. 10 для здійснення такого лікування. Зо
13. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вказаного в п. 11, де стан є пов'язаним з аномальною функцією рецептора ріанодину 1 (КУК'), рецептора ріанодину типу 2 (Кукг), рецептора ріанодину типу З (КУКЗ) або їх поєднання.
14. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де стан є пов'язаним з аномальною функцією рецептора ріанодину 1 (КУКІ!), рецептора ріанодину типу 2 (Кук2), рецептора ріанодину типу З (КукЗ) або їх поєднання.
15. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вказаного в п. 11, де серцеві порушення і захворювання вибирають з групи, що складається з порушень і захворювань, пов'язаних з нерегулярним серцебиттям, таких як порушення і захворювання, пов'язані з нерегулярним серцебиттям, вибрані з групи, що складається з передсердної і шлуночкової аритмії, передсердної і шлуночкової фібриляції, передсердної і шлуночкової тахіаритмії, передсердної і шлуночкової тахікардії, катехоламінергічної поліморфної шлуночкової тахікардії (КПШТ) та їх варіантів, викликаних фізичним навантаженням; порушення і захворювання, пов'язані з нерегулярним серцебиттям, викликані фізичним навантаженням; серцева недостатність; застійна серцева недостатність; хронічна серцева недостатність; гостра серцева недостатність; систолічна серцева недостатність; діастолічна серцева недостатність; гостра декомпенсована серцева недостатність; ішемічно- реперфузійне (І/Р) пошкодження серця; хронічна обструктивна хвороба легень; ішемічно- реперфузійне пошкодження після коронарної ангіопластики або після тромболізису при лікуванні інфаркту міокарда (ІМ) і високий кров'яний тиск.
16. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де серцеві порушення і захворювання вибирають з групи, що складається з порушень і захворювань, пов'язаних з нерегулярним серцебиттям, таких як порушення і захворювання, пов'язані з нерегулярним серцебиттям, вибрані з групи, що складається з передсердної і шлуночкової аритмії, передсердної і шлуночкової фібриляції, передсердної і шлуночкової тахіаритмії передсердної і шлуночкової тахікардії, катехоламінергічної поліморфної шлуночкової тахікардії (КПШТ) та їх варіантів, викликаних фізичним навантаженням; порушення і захворювання, пов'язані з нерегулярним серцебиттям, викликані фізичним навантаженням; серцева недостатність; застійна серцева недостатність; хронічна серцева недостатність; гостра серцева недостатність; систолічна серцева недостатність; діастолічна серцева недостатність; гостра декомпенсована серцева недостатність; ішемічно-реперфузійне (І/Р) пошкодження серця; хронічна обструктивна хвороба легень; ішемічно-реперфузійне пошкодження після коронарної ангіопластики або після тромболізису при лікуванні інфаркту міокарда (ІМ) і високий кров'яний тиск.
17. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вказаного в п. 11, де м'язова втома виникає внаслідок скелетно-м'язового захворювання, порушення або стану.
18. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де м'язова втома виникає внаслідок скелетно-м'язового захворювання, порушення або стану.
19. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вказаного в п. 11, де скелетно-м'язове порушення, захворювання або стан вибирають з групи, що складається з скелетно-м'язової втоми, викликаної фізичним навантаженням; м'язової втоми, викликаної фізичним навантаженням, яка виникає в результаті тривалого фізичного навантаження або високоїнтенсивного фізичного навантаження; вродженої міопатії; м'язової дистрофії, такої як м'язова дистрофія Дюшена (МДД), м'язова дистрофія Беккера (МДЕ), поясно-кінцівкова дистрофія (ПКД), плечолопатково-лицева дистрофія, міотонічна м'язова дистрофія, вроджена м'язова дистрофія (ВМД), дистальна м'язова дистрофія, м'язова дистрофія Емері-Дрейфуса і окулофарингеальна м'язова дистрофія; спінальної м'язової атрофії (СМА), спінальної і бульбарної м'язової атрофії (СБМА), м'язової втоми, пов'язаної з віком, саркопенії, хвороби серцевини м'язових волокон, ракової кахексії, ураження сечового міхура і нетримання сечі.
20. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де скелетно-м'язове порушення, захворювання або стан вибирають з групи, що складається з скелетно-м'язової втоми, викликаної фізичним навантаженням; м'язової втоми, викликаної фізичним навантаженням, яка виникає в результаті тривалого фізичного навантаження або високоїнтенсивного фізичного навантаження; вродженої міопатії; м'язової дистрофії, такої як м'язова дистрофія Дюшена (МДД), м'язова дистрофія Беккера (МДЕ), бо поясно-кінцівкова дистрофія (ПКД), плечолопатково-лицева дистрофія, міотонічна м'язова дистрофія, вроджена м'язова дистрофія (ВМД), дистальна м'язова дистрофія, м'язова дистрофія Емері-Дрейфуса і окулофарингеальна м'язова дистрофія; спінальної м'язової атрофії (СМА), спінальної і бульбарної м'язової атрофії (СБМА), м'язової втоми, пов'язаної з віком, саркопенії, хвороби серцевини м'язових волокон, ракової кахексії, ураження сечового міхура і нетримання сечі.
21. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вказаного в п. 11, де порушення і захворювання ЦНС вибирають з групи, що складається з хвороби Альцгеймера (ХА), нейропатії, судом, хвороби Паркінсона (ХП) і хвороби Хантінгтона (ХХ); і нервово-м'язові порушення і захворювання вибирають з групи, що складається зі спінально-церебелярної атаксії (СЦА) і бічного аміотрофічного склерозу (БАС, хвороби Лу Геріга).
22. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де порушення і захворювання ЦНС вибирають з групи, що складається з хвороби Альцгеймера (ХА), нейропатії, судом, хвороби Паркінсона (ХП) і хвороби Хантінгтона (ХХ); ії нервово-м'язові порушення і захворювання вибирають з групи, що складається зі спінально-церебелярної атаксії (СЦА) і бічного аміотрофічного склерозу (БАС, хвороби Лу Геріга).
23. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вказаного в п. 11, де когнітивна дисфункція є пов'язаною зі стресом або пов'язаною з віком, або когнітивна функція, яка потребує поліпшення, являє собою короткочасну пам'ять, довготривалу пам'ять, увагу або навчання, або когнітивна дисфункція є пов'язаною із захворюванням або порушенням, вибраним з групи, що складається з хвороби Альцгеймера (ХА), синдрому дефіциту уваги і гіперактивності (СДУГ), розладу аутистичного спектра (РАС), генералізованого тривожного розладу (ГТР), обсесивно-компульсивного розладу (ОКР), хвороби Паркінсона (ХП), синдрому посттравматичного стресу (ПТСР), шизофренії, біполярного розладу або великої депресії.
24. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де когнітивна дисфункція є пов'язаною зі стресом або пов'язаною з віком, або когнітивна функція, яка потребує поліпшення, являє собою короткочасну пам'ять, Зо довготривалу пам'ять, увагу або навчання, або когнітивна дисфункція є пов'язаною із захворюванням або порушенням, вибраним з групи, що складається з хвороби Альцгеймера (ХА), синдрому дефіциту уваги і гіперактивності (СДУГ), розладу аутистичного спектра (РАС), генералізованого тривожного розладу (ГТР), обсесивно-компульсивного розладу (ОКР), хвороби Паркінсона (ХП), синдрому посттравматичного стресу (ПТСР), шизофренії, біполярного розладу або великої депресії.
25. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вказаного в п. 11, де стан являє собою ракову кахексію, переважно викликану раком, який має метастази у кістки.
26. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де стан являє собою ракову кахексію, переважно викликану раком, який має метастази у кістки.
27. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де сполука за будь-яким з пп. 1-9 використовується у дозі, достатній для відновлення або поліпшення зв'язування калстабіну-2 з Кука.
28. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де сполука за будь-яким з пп. 1-9 використовується у дозі, достатній для відновлення або поліпшення зв'язування калстабіну-1 з Кук.
29. Фармацевтична композиція за п. 10 для застосування в способі лікування або профілактики стану, вказаного в п. 12, де сполука за будь-яким з пп. 1-9 використовується у дозі, достатній для зниження витоку Са?" через канал Бук.
30. Сполука за будь-яким з пп. 1-9 або її сіль для застосування у лікуванні або профілактиці стану, вибраного з групи, що складається з серцевих порушень та захворювань, м'язової втоми, скелетно-м'язових порушень та захворювань, порушень та захворювань ЦНС, когнітивної дисфункції, нервово-м'язових порушень та захворювань, уражень та захворювань кісток, ракової кахексії, злоякісної гіпертермії, цукрового діабету, раптової серцевої смерті і синдрому раптової дитячої смерті, або для покращення когнітивної функції.
31. Фармацевтична композиція за п. 10 в поєднанні з антисмисловим олігонуклеотидом (АОС), який є специфічним для послідовності сплайсингу у мРНК-мішені, для посилення пропуску екзонів у зазначеній мРНК-мішені, для застосування в способі лікування або профілактики 60 стану, вказаного в п. 12.
32. Фармацевтична композиція за п. 31 для застосування у лікуванні м'язової дистрофії Дюшена (МДД), яка відрізняється тим, що антисмисловий олігонуклеотид (АС) є специфічним для послідовності сплайсингу принаймні одного екзона гена МДД, переважно послідовності сплайсингу екзона 23, 45, 44, 50, 51, 52 та/або 53 гена МДД.
33. Спосіб лікування пацієнта, який має м'язову дистрофію Дюшена (МДД), за яким вводять зазначеному пацієнту сполуку за будь-яким з пп. 1-9, або фармацевтичну композицію за п. 10, у поєднанні з антисмисловим олігонуклеотидом (АС), який є специфічним для послідовності сплайсингу принаймні одного екзона гена МДД, переважно послідовності сплайсингу екзона 23, 45, 44, 50, 51, 52 та/або 53 гена МДД.
34. Спосіб отримання сполуки за будь-яким з пп. 1-9, за яким здійснюють взаємодію сполуки формули тес Що зі сполукою формули що ра де Ка являє собою СООМК' або СМ; АК" являє собою Сі-С4-алкіл і Її являє собою заміщувану групу, для отримання сполуки формули: нео М В, І З «і конвертування групи Ка у групу К для отримання сполуки формули (1).
UAA201412301A 2012-04-18 2013-04-17 Засоби для лікування порушень із залученням модуляції рецепторів ріанодіну UA113759C2 (xx)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261625890P 2012-04-18 2012-04-18
EP12167732.2A EP2708535A1 (en) 2012-05-11 2012-05-11 Agents for treating disorders involving modulation of ryanodine receptors
PCT/EP2013/057958 WO2013156505A1 (en) 2012-04-18 2013-04-17 Agents for treating disorders involving modulation of ryanodine receptors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA113759C2 true UA113759C2 (xx) 2017-03-10

Family

ID=49165460

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201412301A UA113759C2 (xx) 2012-04-18 2013-04-17 Засоби для лікування порушень із залученням модуляції рецепторів ріанодіну

Country Status (48)

Country Link
US (3) US20130281512A1 (uk)
EP (2) EP2708535A1 (uk)
JP (1) JP5965542B2 (uk)
KR (1) KR101731459B1 (uk)
CN (1) CN104350045B (uk)
AP (1) AP3591A (uk)
AR (1) AR090712A1 (uk)
AU (1) AU2013248313B2 (uk)
BR (1) BR112014025670B1 (uk)
CA (1) CA2870599C (uk)
CL (1) CL2014002756A1 (uk)
CO (1) CO7091184A2 (uk)
CR (1) CR20140476A (uk)
CU (1) CU24327B1 (uk)
CY (1) CY1115826T1 (uk)
DK (1) DK2653466T3 (uk)
DO (1) DOP2014000230A (uk)
EA (1) EA027922B1 (uk)
EC (1) ECSP14027564A (uk)
ES (1) ES2529890T3 (uk)
GT (1) GT201400222A (uk)
HK (2) HK1192537A1 (uk)
HR (1) HRP20141113T8 (uk)
HU (1) HUE024284T2 (uk)
IL (1) IL235043A (uk)
JO (1) JO3070B1 (uk)
MA (1) MA37525B1 (uk)
MD (1) MD4489C1 (uk)
ME (1) ME01969B (uk)
MX (1) MX350890B (uk)
MY (1) MY167783A (uk)
NI (1) NI201400123A (uk)
NZ (1) NZ701122A (uk)
PE (1) PE20142193A1 (uk)
PH (1) PH12014502256B1 (uk)
PL (1) PL2653466T3 (uk)
PT (1) PT2653466E (uk)
RS (1) RS53711B1 (uk)
RU (1) RU2644350C2 (uk)
SA (1) SA113340479B1 (uk)
SG (1) SG11201406404YA (uk)
SI (1) SI2653466T1 (uk)
TN (1) TN2014000424A1 (uk)
TW (1) TWI507399B (uk)
UA (1) UA113759C2 (uk)
UY (1) UY34742A (uk)
WO (1) WO2013156505A1 (uk)
ZA (1) ZA201407499B (uk)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2968229B1 (en) 2013-03-15 2019-12-04 Rosalind Franklin University of Medicine and Science Compounds for stabilizing ryanodine receptors from aberrant levels of calcium release
US9725429B2 (en) 2013-03-15 2017-08-08 Rosalind Franklin University Of Medicine And Science Furanyl-imine and thiofuranyl-imine compounds for stabilizing ryanodine receptors from aberrant levels of calcium release
AU2014290368B2 (en) 2013-07-18 2019-07-11 Baylor College Of Medicine Methods and compositions for treatment of muscle wasting, muscle weakness, and/or cachexia
WO2015197562A1 (en) * 2014-06-23 2015-12-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of disorders or diseases associated with ryanodine receptor dysfunction
US10071996B2 (en) 2014-07-30 2018-09-11 Aetas Pharma Co., Ltd. Optical isomer of 1,4-benzothiazepine-1-oxide derivative, and pharmaceutical composition prepared using same
EP3240547A4 (en) * 2014-12-30 2018-06-13 Myotherix Inc. Novel calcium modulators
ES2643856B1 (es) 2016-05-24 2018-08-03 Universidad Del Pais Vasco / Euskal Herriko Unibertsitatea Triazoles para la regulación de la homeostasis de calcio intracelular
WO2018165171A1 (en) 2017-03-06 2018-09-13 Washington University Treatment for wolfram syndrome and other endoplasmic reticulum stress disorders
JP7282332B2 (ja) * 2017-10-25 2023-05-29 学校法人順天堂 リアノジン受容体阻害薬
EP3773537B1 (en) 2018-04-19 2022-03-23 Tvardi Therapeutics, Inc. Stat3 inhibitors
US11026905B2 (en) 2018-04-19 2021-06-08 Tvardi Therapeutics, Inc. STAT3 inhibitors
EP4093377A1 (en) 2020-01-24 2022-11-30 Tvardi Therapeutics, Inc. Therapeutic compounds, formulations, and uses thereof
EP4240724A1 (en) 2020-11-06 2023-09-13 Cytokinetics, Inc. Bicyclic 1,4-diazepanones and therapeutic uses thereof
WO2022150603A1 (en) * 2021-01-08 2022-07-14 Armgo Pharma, Inc. Crystalline forms of a ryanodine receptor modulator and uses thereof
WO2022246114A2 (en) * 2021-05-20 2022-11-24 Armgo Pharma, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a ryanodine receptor modulator and uses thereof
IL312745A (en) * 2021-11-16 2024-07-01 Armgo Pharma Inc Therapeutic compounds
EP4230196A1 (en) 2022-02-21 2023-08-23 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of dystrophinopathies
WO2023244946A1 (en) 2022-06-15 2023-12-21 Tvardi Therapeutics, Inc. Prodrugs of stat3 inhibitors

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE58901634D1 (de) 1988-11-05 1992-07-16 Bayer Ag Verfahren zur kernchlorierung von aromatischen kohlenwasserstoffen.
GB9021813D0 (en) * 1990-10-08 1990-11-21 Ici Plc Tricyclic heterocycles
ZA924760B (en) 1991-06-28 1993-03-31 Smithkline Beecham Corp Bicyclic fibrinogen antagonists
PL179401B1 (pl) * 1992-11-09 2000-08-31 Boots Co Plc Nowe zwiazki, pochodne benzotioazepiny, sposób ich otrzymywania oraz kompozycja farmaceutyczna zawierajaca pochodne benzotioazepiny PL PL PL PL PL PL PL PL
FR2752017B1 (fr) 1996-08-01 1998-10-16 Hispano Suiza Sa Inverseur de poussee de turboreacteur a portes formant ecopes
GB9914745D0 (en) 1999-06-24 1999-08-25 Knoll Ag Therapeutic agents
US8022058B2 (en) * 2000-05-10 2011-09-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US7718644B2 (en) * 2004-01-22 2010-05-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrhythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2) and uses thereof
US20040229781A1 (en) * 2000-05-10 2004-11-18 Marks Andrew Robert Compounds and methods for treating and preventing exercise-induced cardiac arrhythmias
US7879840B2 (en) * 2005-08-25 2011-02-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US20020183307A1 (en) 2000-07-26 2002-12-05 Tremont Samuel J. Novel 1,4-benzothiazephine and 1,5-benzothiazepine compounds as inhibitors of apical sodium co-dependent bile acid transport and taurocholate uptake
CA2422617C (en) 2000-10-30 2011-07-12 Janssen Pharmaceutica N.V. Tripeptidyl peptidase inhibitors
US7544678B2 (en) 2002-11-05 2009-06-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2)
EP1603450A4 (en) 2003-03-07 2009-07-29 Univ Columbia METHODS USING TYPE 1 RYANODINE RECEPTOR
US20090292119A1 (en) * 2003-10-07 2009-11-26 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for synthesizing benzothiazepine compounds
WO2006101495A1 (en) 2005-03-23 2006-09-28 Battelle Memorial Institute Advanced capability rfid system
US7704990B2 (en) 2005-08-25 2010-04-27 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
WO2007127145A2 (en) 2006-04-25 2007-11-08 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods and compositions for treatment of cardiac arrhythmia in non-human animals
WO2008060332A2 (en) 2006-06-02 2008-05-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for treating or reducing muscle fatigue
WO2008021432A2 (en) 2006-08-17 2008-02-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for treatment of conditions affecting the nervous system
WO2008021439A2 (en) * 2006-08-17 2008-02-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for treatment of cardiac hypertrophy
WO2008064264A2 (en) 2006-11-20 2008-05-29 Armgo Pharma, Inc. In vivo methods for identifying and screening compounds that modulate calstabin binding to a ryanodine receptor
DK2250159T3 (da) * 2008-03-03 2012-03-19 Servier Lab Fremgangsmåde til fremstilling af benzothiazepiner fra gamma-amino-alkylbenzener
CN101891706B (zh) * 2010-04-09 2013-05-29 复旦大学 3,4-二氢苯并[f][1,4]噻氮杂*类化合物或其盐及其药物用途
WO2012019071A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods of preventing and treating sarcopenia
WO2012019076A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for preventing and treating cardiac ischemia/reperfusion injury
WO2012037105A1 (en) 2010-09-14 2012-03-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods of treating, ameliorating or preventing stress-induced neuronal disorders and diseases

Also Published As

Publication number Publication date
AP3591A (en) 2016-02-15
SG11201406404YA (en) 2014-11-27
MD4489C1 (ro) 2018-01-31
WO2013156505A1 (en) 2013-10-24
IL235043A (en) 2016-10-31
CU24327B1 (es) 2018-03-13
ES2529890T8 (es) 2015-08-24
PL2653466T3 (pl) 2015-04-30
BR112014025670B1 (pt) 2020-06-30
AU2013248313B2 (en) 2016-11-10
CO7091184A2 (es) 2014-10-21
TW201345900A (zh) 2013-11-16
RS53711B1 (en) 2015-04-30
PH12014502256A1 (en) 2015-02-09
US20130281512A1 (en) 2013-10-24
US8853198B2 (en) 2014-10-07
HK1192537A1 (zh) 2014-08-22
CN104350045A (zh) 2015-02-11
ME01969B (me) 2015-05-20
EA201401141A1 (ru) 2015-04-30
EA201401141A8 (ru) 2015-08-31
CA2870599A1 (en) 2013-10-24
CL2014002756A1 (es) 2015-06-12
ECSP14027564A (es) 2015-08-31
UY34742A (es) 2013-11-29
EP2708535A1 (en) 2014-03-19
DOP2014000230A (es) 2014-12-15
KR101731459B1 (ko) 2017-04-28
HUE024284T2 (en) 2016-01-28
TN2014000424A1 (fr) 2016-03-30
EP2653466A1 (en) 2013-10-23
NZ701122A (en) 2016-07-29
MA37525A1 (fr) 2016-05-31
US20140088171A1 (en) 2014-03-27
MX2014012575A (es) 2015-07-06
AR090712A1 (es) 2014-12-03
TWI507399B (zh) 2015-11-11
HRP20141113T1 (hr) 2015-01-02
CY1115826T1 (el) 2017-01-25
HK1207073A1 (zh) 2016-01-22
SI2653466T1 (sl) 2015-03-31
RU2644350C2 (ru) 2018-02-09
ZA201407499B (en) 2015-12-23
CN104350045B (zh) 2016-08-24
JP5965542B2 (ja) 2016-08-10
MD4489B1 (ro) 2017-06-30
AP2014008011A0 (en) 2014-10-31
NI201400123A (es) 2015-03-05
RU2014145939A (ru) 2016-06-10
CU20140119A7 (es) 2015-03-30
JO3070B1 (ar) 2017-03-15
MX350890B (es) 2017-09-25
CR20140476A (es) 2014-12-02
HRP20141113T8 (hr) 2015-11-06
MA37525B1 (fr) 2016-12-30
PT2653466E (pt) 2014-12-03
SA113340479B1 (ar) 2015-09-03
KR20150003347A (ko) 2015-01-08
JP2015514736A (ja) 2015-05-21
US20140378437A1 (en) 2014-12-25
AU2013248313A1 (en) 2014-10-30
MY167783A (en) 2018-09-25
EP2653466B1 (en) 2014-10-29
EA027922B1 (ru) 2017-09-29
MD20140119A2 (ro) 2015-04-30
GT201400222A (es) 2018-09-28
DK2653466T3 (en) 2015-02-02
ES2529890T3 (es) 2015-02-25
PE20142193A1 (es) 2014-12-31
CA2870599C (en) 2016-08-16
PH12014502256B1 (en) 2015-02-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA113759C2 (xx) Засоби для лікування порушень із залученням модуляції рецепторів ріанодіну
EP2590510B1 (en) Compounds and methods for inhibiting phosphate transport
JP4936666B2 (ja) カリウムチャンネル遮断薬としてのスルホンアミド
WO2008060332A2 (en) Methods for treating or reducing muscle fatigue
US12076326B2 (en) Crystalline forms of a ryanodine receptor modulator and uses thereof
JP2007501234A (ja) マロニル−ＣｏＡデカルボキシラーゼ阻害剤として有用なピペリジン化合物
AU2019351731A1 (en) Spak kinase inhibitors as neuroprotective agents
US9468669B2 (en) Methods to treat dysregulated blood glucose disorders
EP3725315B1 (en) Renal dysfunction improving drug comprising optical isomer of 1,4-benzothiazepine-1-oxide derivative
WO2015197562A1 (en) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of disorders or diseases associated with ryanodine receptor dysfunction
MXPA02006225A (es) Compuestos de 3-fenil-3,7-diazabiciclo[3,3,1]nonano, asi como procedimientos para su preparacion y medicamentos que contienen estos compuestos.
US20110152268A1 (en) Novel pharmaceutical composition for treating nociceptive pain
WO2018130207A1 (zh) 4,4-二苯基哌啶类化合物或其可药用盐、药物组合物及用途
WO2024036223A1 (en) Epicatechin inhibiting atp hydrolysis
JP6021616B2 (ja) ３−ピペラジニル−１−ピペリジニル−プロパン誘導体及びそれを含有してなる医薬組成物
BR112015016433B1 (pt) Uso de um composto de formula (i) para tratar um disturbio associado com a tensão do dobramento incorreto da proteína
JP2010064957A (ja) カルシミメティクスを有効成分として含むＫｌｏｔｈｏまたはＦＧＦ２３に関連する疾患の予防または治療剤