WO2020249120A1 - 氨基硫醇类化合物作为脑神经或心脏保护剂的用途 - Google Patents

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Abstract

氨基硫醇类化合物作为脑神经保护剂或心脏保护剂的用途，特别是在预防或治疗心脑血管疾病，例如心脑缺血再灌注损伤、脑卒中等疾病中的用途。

Description

氨基硫醇类化合物作为脑神经或心脏保护剂的用途 技术领域
本发明涉及氨基硫醇类化合物作为脑神经保护剂的用途，特别是在预防或治疗心脑血管疾病，例如心脑缺血再灌注损伤、脑卒中中的用途。
背景介绍
脑卒中是导致全球人类致残或致死的首要病因。在一些国家和城市，脑卒中甚至已经超过心血管病，成为第一位死因。根据中国生物技术发展中心抽样调查的数据显示，中国城乡脑血管病的年发病率平均为200/10万，患病率为400-700/10万，全国每年新发脑血管病病例250万，死亡率为130/10万，是我国人口总死亡第二位原因。脑卒中患者中，70-80％为缺血性脑卒中，对于脑缺血性疾病，尽早恢复脑组织的供血供氧是挽救其生命、降低致残率的有效手段之一；但脑组织恢复血氧供应后，脑功能障碍却有了更严重的损伤，即脑缺血再灌注损伤(Cerebral Ischemia Reperfusion Injury,CIRI)。
脑缺血再灌注损伤，即脑组织经历一定时间的缺血后恢复血流供应，可能出现缺血性损伤进一步加重的现象。脑缺血再灌注损伤在临床上十分常见而且难以避免。当脑组织恢复血流后，必然经历一个缺血再灌注的过程，尽管恢复其血液循环是挽救脑组织所必须，但再灌注后引发的一系列复杂的反应又可能加重缺血脑组织的损伤。迄今为止，临床上对脑缺血再灌注损伤尚无一种十分有效的防治方法。因此，寻找有效措施延缓和减轻脑缺血再灌注损伤已成为亟待解决的重要问题。
目前临床应用的药物种类繁多，但疗效并不令人满意。脑卒中的治疗包括超早期溶栓和神经保护药物。早期溶栓治疗，它是疏通血管、缩小梗死灶、减轻脑水肿最有效的治疗方法之一。但是，溶栓治疗需要严格掌握好治疗时间窗(发病6小时以内)。研究数据显示，美国仅有3％-5％的急性缺血性脑卒中患者接受了静脉溶栓治疗；中国国家脑卒中调查显示，静脉rt-PA溶栓治疗率为1.6％。治疗率低的原因错综复杂，但是其中一个重要的因素是超出溶栓时间窗。因此，溶栓的应用受到一定限制。神经保护是治疗缺血性脑卒中 的另外一种重要手段。缺血后颅内的神经细胞将发生“级联反应”的瀑布现象，这为神经保护剂的临床应用提供了理论基础。从20世纪50年代以来，国内外对缺血后“级联反应”过程的许多环节进行了大量研究，包括钙离子拮抗剂、抗兴奋性毒性氨基酸、γ氨基丁酸受体激动剂、抗细胞间黏附分子抗体、神经营养药物等。然而来自动物实验的阳性研究结果并没有在临床试验中得到证实。
目前，用于治疗缺血性脑卒中的药物，例如依拉达丰已经于2001年在日本被批准上市，2005年在中国批准上市。但是，由于该化合物在美国和欧洲的临床实验中未取得显著成果，因此未被美国和欧洲的药物注册部门批准。此外，依拉达丰被披露具有严重的副作用，如急性肾功能衰竭、肝功能异常、黄疸、血小板减少、弥漫性血管内凝血等。目前，针对缺血性脑卒中的治疗，目前尚无有效的神经保护剂被各国的药物注册部门批准上市。
CN106432014A或WO2018/041245披露了氨基硫醇类化合物，其被证实能有效用作辐射损伤防护和救治的药物；而且这些氨基硫醇类化合物与氨磷汀相比被认为具有更长的半衰期和更低的不良反应。
本发明的发明人意料不到地发现，这些氨基硫醇类化合物可作为脑神经保护剂预防或治疗心脑血管疾病，例如脑卒中，特别是缺血性脑卒中的用途。
发明内容
本发明的发明人发现，本发明的氨基硫醇类化合物相比于同样具有辐射损伤防护作用的氨磷汀具有显著的脑梗面积缓解率，因此本发明的氨基硫醇类化合物具有脑神经保护作用；相比于阳性药物依拉达丰，本发明的氨基硫醇类化合物也具有更好的脑梗面积及行为缓解率。
一方面，本发明提供式(I)化合物或选自下述组(II)任一的化合物在制备用作脑神经保护剂或心脏保护剂的药物中的用途，其中所述式(I)化合物为
Figure PCTCN2020095998-appb-000001
其中，
A 1选自-C(O)NR 8-、-S(O) 2-NR 8-、-S(O)NR 8-和-R 7-NR 8-；
A 2选自羰基、磺酰基、亚硫酰基、取代或未取代的C 1-6烷基；
R 1和R 5可相同或不同，选自氢、取代或未取代的C 1-C 5烷基或杂烷基；
R 2和R 6可相同或不同，选自取代或未取代的C 1-C 5烷基或杂烷基；
n为0-20000的整数；
R 3、R 4独立地选自氢、X、取代或未取代的C 1-6烷基；
X选自F、Cl、Br和I；
R 7选自取代或未取代的C 1-C 6烷基，R 8选自氢、取代或未取代的C 1-C 6烷基；
或其立体异构体或其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物；
组(II)化合物：(R)-2-(((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇或其盐酸盐(化合物1)、(R)-N-((R)-3-((2-甲氧基丙-2-基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2,2,3-三甲基噻唑烷-4-甲酰胺(化合物2)和(R)-2,2,3-三甲基-N-((6R,9R)-3,3,12,12-四甲基-6-(甲基氨基甲酰基)-8-氧代-2,13-二氧杂-4,11-二硫杂-7-氮杂四癸烷-9-基)噻唑烷-4-甲酰胺(化合物3)、(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)丙酰胺、(R)-N-((7R,10R)-6,9-二氧代-13,13,13-三苯基-7-(三苯甲基硫基甲基)-12-硫杂-2,5,8-三氮杂十三烷-10-基)-3-巯基-2-(2-(甲基氨基)乙基氨基)丙酰胺、(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰胺和(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-((R)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰氨基)丙酰胺。
在一实施方案中，所述式(I)化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺；或(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺。
在一实施方案中，所述式(I)化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺或其药学上可接受的盐；或(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺或其药学上可接受的盐。
在一实施方案中，所述式(I)化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐；或(R)-3-巯基-N-((R)- 3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐。
在一实施方案中，所述式(I)化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺盐酸盐；或(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺盐酸盐。
在一实施方案中，式(I)化合物或组(II)化合物作为脑神经保护剂，用于预防或治疗下述疾病或病症中的一种或多种：脑卒中，包括缺血性和出血性脑卒中；在缺血性脑卒中治疗过程中诱发的二次损伤，即脑缺血再灌注损伤；动脉粥样硬化、脑溢血、高血压、心肌梗塞、心绞痛、冠心病、心肌纤维化、心脏病、心律不齐、头晕、失眠等；静脉曲张、水肿等与血管通透性升高有关的疾病；老年性疾病，例如帕金森症、脑萎缩、老年性痴呆；其它脑神经损伤类疾病，包括但不限于脑外伤、脑血管硬化(脑溢血、脑血栓)后遗症、脑炎与脑膜炎后遗症、脱髓鞘疾病、局部缺血、缺氧、脑血管意外、代谢失调、毒性作用、神经毒性作用、外科手术、医原性影响、压力、质量效应、出血、热、化学因素、辐射、血管痉挛、神经变性性疾病、神经变性性病变、感染、癫痫等原因造成的神经损伤；休克治疗、动脉搭桥术、溶栓疗法、经皮腔内冠脉血管成形术、心脏外科体外循环、心肺脑复苏、或断肢再植和器官移植；系统性硬皮病、肌肉侧索硬化症(ALS)等。
在一实施方案中，式(I)化合物或组(II)化合物作为脑神经保护剂，用于预防或治疗脑卒中。
在一实施方案中，式(I)化合物或组(II)化合物作为脑神经保护剂，用于预防或治疗缺血性脑卒中。
在一实施方案中，式(I)化合物或组(II)化合物作为脑神经保护剂，用于急性缺血性脑卒中。
在一实施方案中，式(I)化合物或组(II)化合物用于预防或治疗缺血性脑卒中急性期治疗剂和缺血性脑卒中后的脑神经保护剂。
在另一实施方案中，式(I)化合物或组(II)化合物作为心脏保护剂，用于预防或治疗心肌缺血或由心肌缺血引起的心肌梗塞或心脑缺血再灌注损伤。
在一实施方案中，式(I)化合物的剂量为约9-16200mg/kg/天。
在一实施方案中，本发明还涉及新氨基硫醇类衍生物，选自：(R)-2- (((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇或其盐酸盐(化合物1)、(R)-N-((R)-3-((2-甲氧基丙-2-基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2,2,3-三甲基噻唑烷-4-甲酰胺(化合物2)和(R)-2,2,3-三甲基-N-((6R,9R)-3,3,12,12-四甲基-6-(甲基氨基甲酰基)-8-氧代-2,13-二氧杂-4,11-二硫杂-7-氮杂四癸烷-9-基)噻唑烷-4-甲酰胺(化合物3)、(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)丙酰胺、(R)-N-((7R,10R)-6,9-二氧代-13,13,13-三苯基-7-(三苯甲基硫基甲基)-12-硫杂-2,5,8-三氮杂十三烷-10-基)-3-巯基-2-(2-(甲基氨基)乙基氨基)丙酰胺、(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰胺和(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-((R)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰氨基)丙酰胺。
在一实施方案中，本发明的氨基硫醇类化合物或氨基硫醇类衍生物用于治疗和/或预防辐射损伤、化疗药损伤的药物和/或化妆品。在一实施方案中，所述辐射包括电离辐射、非电离辐射或多种类型辐射共同发生的情况；电离辐射包括：α射线，β射线，γ射线，X射线，中子辐射；所述的辐射损伤包括辐射引起的直接损伤和间接损伤；所述化疗药物指作用于DNA、RNA、微管蛋白的抗肿瘤药物。
在一实施方案中，本发明的氨基硫醇类化合物或氨基硫醇类衍生物用作抗肿瘤药物。
附图说明
图1示出了在实施例1的动物缺血性脑卒中模型中给药化合物A或化合物B后的大鼠的神经行为学评价结果。
图2示出了在实施例1的动物缺血性脑卒中模型中给药化合物A或化合物B后的大鼠的脑梗死面积(TTC染色)评价结果。
图3示出了在实施例1的动物缺血性脑卒中模型中给药化合物A或化合物B后的大鼠的脑梗死面积结果。
图4示出了在实施例2的动物缺血性脑卒中模型中给药化合物A、化合物B、依达拉丰或氨磷汀后的大鼠的神经行为学评价结果。
图5示出了在实施例2的动物缺血性脑卒中模型中给药化合物A、化合物B、依达拉丰或氨磷汀后的大鼠的神经行为学改进的百分比。
图6示出了在实施例2的动物缺血性脑卒中模型中给药化合物A、化合物B、依达拉丰或氨磷汀后的大鼠的脑梗死面积结果。
图7示出了在实施例2的动物缺血性脑卒中模型中给药化合物A、化合物B、依达拉丰或氨磷汀后的大鼠的脑梗死面积改进百分比。
图8示出了在实施例2的动物缺血性脑卒中模型中给药化合物A、化合物B、依达拉丰或氨磷汀后的大鼠的脑梗死面积(TTC染色)评价结果。
图9示出了实施例3中化合物B/化合物A对顺铂诱导的SD大鼠的体重改变。
图10A和图10B示出了实施例3中化合物B/A对顺铂诱导的肾毒性防护作用。
图11示出了实施例4中化合物B对放射性肠损伤的防护作用。
图12示出了化合物B对放射性肺损伤的防护作用。
图13示出了化合物B对放射诱导的造血系统损伤的防护作用。
图14示出了给药化合物1时小鼠存活率。
图15示出了给药化合物2时小鼠存活率。
图16示出了给药化合物3时小鼠存活率。
图17示出了皮损区样本H-E染色(×40)。
图18示出了各组样本皮损区真皮厚度。
图19示出了化合物A、B治疗对皮损部位胶原的影响。
图20示出了化合物A、B治疗对皮损部位H 2O 2水平的影响。
具体实施方式
一方面，本发明所涉及的氨基硫醇类化合物包括CN106432014A或WO2018/041245披露的式(I)化合物。具体地，本发明所涉及的氨基硫醇类化合物包括式(I)化合物
Figure PCTCN2020095998-appb-000002
其中，
A 1选自-C(O)NR 8-、-S(O) 2-NR 8-、-S(O)NR 8-和-R 7-NR 8-；
A 2选自羰基、磺酰基、亚硫酰基、取代或未取代的C 1-6烷基；
R 1和R 5可相同或不同，选自氢、取代或未取代的C 1-C 5烷基或杂烷基；
R 2和R 6可相同或不同，选自取代或未取代的C 1-C 5烷基或杂烷基；
n为0-20000的整数；
R 3、R 4独立地选自氢、X、取代或未取代的C 1-6烷基；
X选自F、Cl、Br和I；
R 7选自取代或未取代的C 1-C 6烷基，R 8选自氢、取代或未取代的C 1-C 6烷基；
或其立体异构体或其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物。
优选地，R 1、R 2、R 5、R 6可相同或不同，选自氢、C 1-3烷基、羟基或氨基取代的C 1-C 3烷基或杂烷基；更优选地，R 1、R 2、R 5、R 6可相同或不同，选自氢、甲基、乙基；更优选地，R 1和R 2中一个为氢，另一个为C 1-C 3烷基(例如，甲基、乙基或丙基)，以及R 5和R 6中一个为氢，另一个为C 1-C 3烷基(例如，甲基、乙基或丙基)；甚至更优选地，R 1和R 2中一个为氢，另一个为甲基，以及R 5和R 6中一个为氢，另一个为甲基；或者可供选择地，R 1和R 2为甲基或乙基，以及R 5和R 6为甲基或乙基；
优选地，n为0-2000的整数；更优选地，n为1-200的整数；进一步优选地，n为1-200的整数；再进一步优选地，n为1-50的整数；更优选为1-10的整数(包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)；
优选地，R 3、R 4独立地选自氢、X、取代或未取代的C 1-3烷基；更优选地，R 3、R 4独立地选自氢、X、甲基；
优选地，X选自F、Cl；更优选地，X为F；
优选地，R 7选自取代或未取代的C 1-C 3烷基；更优选地，R 7为亚甲基；
优选地，R 8选自氢、取代或未取代的C 1-C 3烷基；更优选地，R 8选自氢、甲基、乙基；进一步优选地，R 8为氢；
所述化合物中，与R 3、R 4直接相连的手性碳为R构型或S构型。优选地，与R 3、R 4直接相连的手性碳均为R构型。
更优选地，与R 3、R 4直接相连的手性碳均为R构型；以及R 1和R 2中一个为氢，另一个为甲基，以及R 5和R 6中一个为氢，另一个为甲基。
在一实施方案中，本发明的氨基硫醇类化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺(简称为化合物A)；(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺(简称为化合物B)。
在一实施方案中，本发明的氨基硫醇类化合物包括游离碱形式的化合物或其药学上可接受的盐。例如，所述游离碱形式的化合物与无机酸形成的盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、碳酸盐、碳氢酸盐、磷酸盐、磷酸一氢酸盐、磷酸二氢酸盐、硫酸盐、硫酸一氢酸盐、氢碘酸或亚磷酸盐等，或者与相对无毒副作用的有机酸形成的盐，如乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、异丁酸盐、草酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、苦杏仁酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等。
在优选的实施方案中，本发明的氨基硫醇类化合物为上述化合物A或化合物B的三氟乙酸盐、化合物A或化合物B的盐酸盐。
在一实施方案中，本发明的氨基硫醇类化合物包括所述化合物的前药形式。
在一实施方式中，本发明的氨基硫醇类化合物包括所述化合物的非溶剂化或溶剂化的形式，例如水合物形式。一般来说，溶剂化的形式等价于非溶剂化形式，二者都包括在本发明的范围内。本发明化合物存在多晶型或无定型。一般来说，本发明化合物各种存在的物理形态在使用时是等价的，且都包括在本发明的范围内。
另一方面，本发明的氨基硫醇类化合物包括以下的新氨基硫醇类衍生物，选自：(R)-2-(((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇或其盐酸盐(化合物1)、(R)-N-((R)-3-((2-甲氧基丙-2-基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2,2,3-三甲基噻唑烷-4-甲酰胺(化合物2)、(R)-2,2,3-三甲基-N-((6R,9R)-3,3,12,12-四甲基-6-(甲基氨基甲酰基)-8-氧代-2,13-二氧杂-4,11-二硫杂-7-氮杂四癸烷-9-基)噻唑烷-4-甲酰胺(化合物3)、(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)丙酰胺、(R)-N-((7R,10R)-6,9-二氧代-13,13,13-三苯基-7-(三苯甲基硫基甲基)-12-硫杂-2,5,8-三氮杂十三烷-10-基)-3-巯基-2-(2-(甲基氨基)乙基氨基)丙酰胺、(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2- 甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰胺和(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-((R)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰氨基)丙酰胺。
本发明所涉及的氨基硫醇类化合物可作为脑神经保护剂。在本申请中，脑神经保护作用是指减少、停止或消除神经损伤，并且对遭受神经损伤的神经组织是有保护性、恢复性和重新激活作用。
具体地，本发明所涉及的氨基硫醇类化合物可作为脑神经保护剂，可用于预防或治疗下述疾病或病症中的一种或多种：脑卒中，包括缺血性和出血性脑卒中；在缺血性脑卒中治疗过程中诱发的二次损伤，即脑缺血再灌注损伤；动脉粥样硬化、脑溢血、高血压、心肌梗塞、心绞痛、冠心病、心肌纤维化、心脏病、心律不齐、头晕、失眠等；静脉曲张、水肿等与血管通透性升高有关的疾病；老年性疾病，例如帕金森症、脑萎缩、老年性痴呆；其它脑神经损伤类疾病，包括但不限于脑外伤、脑血管硬化(脑溢血、脑血栓)后遗症、脑炎与脑膜炎后遗症、脱髓鞘疾病、局部缺血、缺氧、脑血管意外、代谢失调、毒性作用、神经毒性作用、外科手术、医原性影响、压力、质量效应、出血、热、化学因素、辐射、血管痉挛、神经变性性疾病、神经变性性病变、感染、癫痫等原因造成的神经损伤；休克治疗、动脉搭桥术、溶栓疗法、经皮腔内冠脉血管成形术、心脏外科体外循环、心肺脑复苏、或断肢再植和器官移植；系统性硬皮病、肌肉侧索硬化症(ALS)等。
本发明所涉及的氨基硫醇类化合物，尤其是化合物A或化合物B可作为脑神经保护剂有效用于治疗或预防脑卒中，例如缺血性脑卒中或出血性脑卒中；可有效用于预防或治疗缺血性脑卒中急性期治疗剂和缺血性脑卒中后的脑神经保护剂。对上述疾病的治疗包括在本发明的范围内。
本发明所涉及的氨基硫醇类化合物，包括式(I)化合物或组(II)化合物，可用作心脏保护剂，用于预防或治疗心肌缺血或由心肌缺血引起的心肌梗塞。
心肌缺血是一种当冠状血流不足以供给足够的氧来以正常速率消耗碳燃料和重新合成ATP时发生的代谢疾病。局部缺血心肌缺血会导致心肌氧气的供需不平衡，心肌缺血包括劳累性和血管痉挛性心肌功能不良。劳累性局部缺血一般是由于出现了临界动脉血管粥样硬化狭窄，所述狭窄包括大冠状动脉引起的心内膜下流动减少。血管痉挛性局部缺血与病灶变化的痉挛有 关，其发作与劳累和压力无关。痉挛最好定义为血管紧张程度的突然增加。血管痉挛性局部缺血的机理包括：(i)由儿茶酚胺增加引起的狭窄处血管紧张程度的增加；(ii)暂时性管腔内阻塞；以及(iii)由内皮损伤处血小板形成的血管活性物质的释放。冠状循环是非常独特的，这是因为该循环布满了能够为整个循环产生充满压力的器官。因此，能够改变外周循环状况和收缩力的干涉将对冠状循环具有巨大的作用。冠状脉管系统的调节单元是内径改变很大的小的冠状小动脉。所述内径的变化是由于血管平滑肌的本能收缩(自动调节)或由心室收缩引起的血管外压力。对局部缺血疾病的纯治疗作用包括了决定氧气供需的对立因素的综合作用。
式(I)化合物或组(II)化合物作为心脏保护剂用于改善缺血性损伤或改善心肌梗塞发作面或心脑缺血再灌注损伤。
“改善缺血性损伤”是指预防或降低由心肌缺血引起的心肌缺血性损伤。“改善心肌梗塞发作面”是指降低由心肌缺血引起的心肌梗塞发作面，或预防由心肌缺血引起的心肌梗塞。
本发明所涉及的氨基硫醇类化合物也可以用于预防或治疗下述疾病：
肺癌、胃癌、乳腺癌、直肠癌、鼻炎癌等；
非菌性炎症，如股骨头坏死、前列腺炎、乳腺炎等；
免疫性疾病，如红斑狼疮、牛皮癣、硬皮病等自体免疫疾病等；
关节炎、风湿、类风湿等骨关节病；
白内障、玻璃体浑浊、青光眼、眼底黄斑变性、青少年近视等；
糖尿病肾病、糖尿病眼病等；
禽流感感染、脓毒症、股骨头坏死、前列腺炎、乳腺炎、红斑狼疮、牛皮癣、硬皮病、关节炎、风湿、类风湿、白内障、玻璃体浑浊、青光眼、眼底黄斑变性、青少年近视、干眼综合症、糖尿病及其并发症(糖尿病肾病、糖尿病眼病)、间质性肺病、特发性肺纤维化、结节病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肺气肿、肌萎缩侧索硬化(ALS)、老年斑、皱纹、肾移植中肾缺血再灌注损伤、牙周炎、支气管哮喘、过敏性哮喘、阻塞性睡眠呼吸暂停、疼痛、术后肌痛、肥胖、隔膜功能障碍机械通气、巨细胞病毒感染、高脂血症、急剧性胰腺炎、胰腺纤维化、肝炎、肝硬化、肝纤维化、骨质疏松症、范科尼贫血、外周动脉闭塞性疾病、子宫膜异位、多囊卵巢综合症、精子无力症、急性高山病等。
可以利用各种给药途径给药本发明所涉及的氨基硫醇类化合物或其药学上可接受的盐或水合物。合适的给药途径包括但不限于吸入给药，或胃肠外途径，包括静脉内给药(输液或推注给药)、肌内给药、腹膜内给药、鞘内给药、皮下给药、鼻内给药、经粘膜给药、舌下给药、肠内给药、局部给药。优选地，将本发明所涉及的氨基硫醇类化合物通过口服途径或者静脉内给药。
可以将本发明所涉及的氨基硫醇类化合物或其药学上可接受的盐和/或水合物单独给药至受试者，或者将本发明所涉及的氨基硫醇类化合物或其药学上可接受的盐和/或水合物与其它一种或多种其它药剂(包括但不限于其它脑神经保护剂、抗肿瘤剂、化疗药等)联合给药至受试者。
当给药本发明的氨基硫醇类化合物时，给药剂量范围按照患者体重计通常为约9-16200mg/kg/天，一般是从约9-8100mg/kg/天，或约9-4000mg/kg/天，或约9-2000mg/kg/天，或约9-1000mg/kg/天，或约9-500mg/kg/天，或约9-250mg/kg/天，或约9-120mg/kg/天，或约9-50mg/kg/天，或约9-40mg/kg/天，或约9-20mg/kg/天。
具体的给药方式、给药剂量和间隔将取决于受试者的体重、疾病的严重程度、给药方式和处方医师的判断。
实施例
以下实施例用于示例性说明本发明，但是本发明不限于此。
实施例1：评价化合物A或化合物B在缺血性脑卒中模型中的作用
1.实验动物
选择健康和雄性的SPF级SD大鼠(体重为250g-300g)。
2.实验分组(5组*6只)
将所选取的大鼠如下分组(五组：A、B、C、D和E组，每组6只大鼠)：
Figure PCTCN2020095998-appb-000003
注：实施例中所使用的化合物A和化合物B均为其三氟乙酸盐形式
其中，将化合物B溶于磷酸盐缓冲液(PBS)中，然后冷藏保存，需要现用现配，避免暴露在空气中以及避光。将化合物A溶于15％Solutol HS 15(获自深圳市浩博世纪生物有限公司)/85％HP-B-CD(获自Solarbio)的溶剂(20％，w/v)中，储存方式同化合物B。
3.建模方法
(1)麻醉大鼠，颈部备皮，保持体温在37±0.5℃。
(2)颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根6-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。
(3)使用动脉夹夹闭颈总动脉。在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。
(4)缺血后90min拔掉线栓，用6-0丝线结扎外动脉近心端，用3-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将大鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。
(5)术后24h，对大鼠进行神经功能评分，然后麻醉大鼠，取大脑，如下所述用TTC(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,sigma公司)进行染色。
4.对模型进行神经行为学评估
在建模前后对实验动物进行神经功能缺失体征评分。评分标准参考Longa及Bederson的5分制法：在动物麻醉清醒后24h进行，分值越高，说明动物行为障碍越严重。
0分:无神经损伤症状
1分:不能完全伸展对侧前爪
2分:向对侧转圈
3分:向对侧倾倒
4分:不能自发行走，意识丧失
5.TTC染色和梗死面积统计(5组*6只)
麻醉大鼠后，取大鼠脑组织，放入-20℃冰箱冷冻30min。用PBS配置1％TTC(W/V)，37℃水浴至TTC溶解，将冻好的脑组织切片，置于10ml TTC溶液中，37℃恒温孵育10min。不时翻动脑片，使组织均匀染色。正常脑组 织染色后呈鲜红色，而梗死区在彩图中呈苍白色或者在黑白图中呈浅白色。并使用软件对梗死面积的测量和统计分析。
6.实验结果
下表汇总了每只动物的行为学评分及脑梗死面积的数据
Figure PCTCN2020095998-appb-000004
上述结果表明了化合物A或化合物B对动物缺血性脑卒中模型(MCAO)具有优异的改善作用，无论是从脑梗死面积的评价还是行为学评分，都显著改了模型动物的缺血再灌注损伤。例如，在C组、D组和E组中神经学改善百分比分别为66.7％、66.7％和77.8％(参见图1)；以及脑梗死面积改善百分比分别为62.5％、44.4％和83.9％(参见图2和图3)。
实施例2：评价化合物化合物B、化合物A、氨磷汀、依拉达丰对SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型的作用
以与实施例1相同的方式，选择实验动物，不同的是实验分成七组(即A组、B组、C组、D组、E组、F组和G组，其中C、D和E组采用不同于实施例1的给药剂量，F组给药依拉达丰，以及G组给药氨磷汀)。然后，采用 与实施例1相同的方式建模，采用相同的方式对7组实验模型进行神经行为学评估，采用相同方式对7组实验进行TTC染色和梗死面积统计。
实施例2中实验分组如下：
A组 空白对照组
B组 缺血再灌注造模组
C组 再灌注前5min给药化合物B(100mg/kg ip)
D组 再灌注前2.5h给药化合物A(400mg/kg po)
E组 再灌注前2.5h给药化合物A(800mg/kg po)
F组 再灌注前给药依拉达丰(XH-001)(3mg/kg,iv)
G组 再灌注前5min给药氨磷汀(XH-002)(100mg/kg,ip)
注：实施例中所使用的化合物A和化合物B均为其三氟乙酸盐形式
其中，将化合物B溶于磷酸盐缓冲液(PBS)中，然后冷藏保存，需要现用现配，避免暴露在空气中以及避光。将化合物A溶于15％Solutol HS 15/85％HP-B-CD的溶剂(20％，w/v)中，储存方式同化合物B。将依拉达丰溶于为1N NaOH中，用1N HCl滴定至7.4；将氨磷汀溶于PBS中。
下表汇总了每只动物的行为学评分及脑梗死面积的数据
Figure PCTCN2020095998-appb-000005
Figure PCTCN2020095998-appb-000006
上述结果表明，在C组、D组、E组、F组和G组中神经学改善百分比分别为29.32％、46.99％、59.01％、46.99％、和29.32％(参见图4和5)；以及脑梗死面积改善百分比分别为59.5％、72.97％、87.32％、58.85％和23.24％(参见图6、7和8)。而且，当化合物B的剂量降低为100mg/kg时，对大鼠MCAO模型仍然具有很好的保护作用。此外，化合物A的剂量降低到800和400mg/kg，明显缓解了MCAO大鼠的症状及脑梗死面积，且呈剂量依赖型。与阳性药XH-001(依拉达丰)相比，化合物A的作用效果更好，脑梗死面积缓解率高达87.32％，而氨磷汀效果最差，脑梗面积缓解率只有23.24％。
实施例3：化合物B/化合物A对顺铂诱导的SD大鼠肾毒性的防护作用
1.实验动物
选择健康和雄性的SPF级SD大鼠(体重为250g-300g)。
2.实验方案
Conrol组：PBS
顺铂：5mg/kg ip
顺铂+化合物B组：5mg/kg ip+化合物B 200mg/kg ip，顺铂给药前30min 给予化合物B
顺铂+氨磷汀组：5mg/kg ip+AMI 200mg/kg ip，顺铂给药前30min给予AMI
顺铂+化合物A组：5mg/kg ip+化合物A 800mg/kg po，顺铂给药前30min给予化合物A
3.实验步骤
(1)将实验所用SD大鼠称重、标注，均匀分为5组，每组3只SD大鼠。
(2)化合物B、化合物A、AMI组分别按计划的浓度给药，半小时后，顺铂组、化合物B组、化合物A组、氨磷汀组分别给与顺铂，5mg/kg，对照组给予PBS。
(3)大鼠每天称重，记录，第5天，于SD大鼠眼内眦取血，至于抗凝管中。
(4)每管取100μL全血，置于斯玛特试剂盘中，放入全自动生化分析仪(SMT-100V)，检测全血中血肌酐和尿素氮的水平。
4.实验结果
SD大鼠体重的改变示于图9中。当对SD大鼠单独给予顺铂时，体重严重下降，当给与化合物B时，体重不仅没有下降，反而增加；与顺铂组相比，尽管化合物A组和氨磷汀组大鼠的体重下降，但是下降程度明显好于顺铂组，说明，化合物B、化合物A对顺铂诱导的大鼠体重下降有一定的预防作用。
(2)血肌酐和尿素氮水平的变化
由表和图我们可以看出，顺铂可以显著提高大鼠血液中的肌酐和尿素氮的水平，而化合物A、化合物B及氨磷汀均可以显著降低由顺铂诱导的血肌酐和尿素氮水平的升高，甚至化合物B、化合物A的活性稍微强于氨磷汀。
Figure PCTCN2020095998-appb-000007
Figure PCTCN2020095998-appb-000008
注：实施例中所使用的化合物A和化合物B均为其三氟乙酸盐形式
如上表和图10A和10B所示，化合物B(TFA)/化合物A(TFA)对顺铂诱导的肾毒性具有很好的防护作用，可以用于预防肿瘤病人在化疗过程中由于化疗药物导致的肾损伤。
实施例4：氨基硫醇类化合物的辐射防护
以下实施例证实了本发明的氨基硫醇类化合物对对放射性肠损伤、放射性肺损伤和放射诱导的造血系统损伤的防护作用。
1.对放射性肠损伤的防护作用
C57雄性小鼠，随机分4组，分别是空白对照组、照射组、化合物B(TFA)照射组、AMI照射组，给药方式均为腹腔注射，照前30min给药，给药剂量均为517mpk，腹部照射剂量为16Gy，于第五天，取小肠组织，进行HE染色。
图11显示了正常的未照射的肠绒毛结构清晰，密集；照射后小肠绒毛结构改变；化合物B(TFA)照射组和氨磷汀照射组肠绒毛结构改变较照射组轻微，说明化合物B(TFA)对放射性肠损伤有很好的保护作用，效果与氨磷汀类似。
2.放射性肺损伤防护作用
C57雄性小鼠，随机分4组，分别是空白对照组、照射组、化合物B(TFA)照射组、AMI照射组，给药方式均为腹腔注射，照前30min给药，给药剂量均为517mpk，右侧肺照射剂量为17Gy，于第2、4、6个月取肺组织，进行HE染色。
图12示出了，在侧肺照射后，肺最主要的表现是放射性肺炎，Control组小鼠肺组织呈明显的空泡样结构；17Gy组小鼠肺泡结构改变，表现为肺大面积炎性浸润(蓝色的小点就是炎性细胞)，肺泡被炎性细胞填充；氨磷汀 和化合物B都能部分缓解炎性细胞浸润的情况，减轻放射性肺炎的发生，说明，化合物B对放射性肺损伤有很好的保护作用，效果与氨磷汀类似。
3.放射诱导的造血系统损伤的防护作用
C57雄性小鼠，随机分6组，分别是空白对照组、照射组、化合物B(TFA)组、AMI组、化合物B(TFA)照射组、AMI照射组，给药方式均为腹腔注射，照前30min给药，给药剂量均为517mpk，全身照射剂量为4Gy，于第15天取材，检测外周血指标。
图13示出了照射使小鼠外周血WBC、RBC、PLT数量减少，给化合物B(TFA)能增加照射后这些细胞的数量。同时，照射后，小鼠外周血LY％减少，NE％增多，化合物B(TFA)可以减轻这种分化异常，因此，化合物B(TFA)对血液系统有很好的保护作用。
实施例5：一些新氨基硫醇化合物的合成
实施例5A：(R)-2-(((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000009
步骤1：S-三苯甲基-L-半胱氨酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000010
将化合物L-半胱氨酸盐酸盐(10g，63.45mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(120ml)，加入三苯基氯甲烷(19.46g，69.795mmol)，加热到60-65℃，反应8小时，TLC检测反应完毕，冷却到室温，加入10％醋酸钠溶液(300ml)，析出白色固体，过滤，滤渣用纯水(300ml)洗，然后用丙酮(200ml)洗，干燥，产物为白色固体(17.56g，产率：76.15％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.28(m,18H),2.92(dd,1H),2.59(dd,1H),2.41(dd,1H)。
步骤2：N-(叔丁氧羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000011
将化合物S-三苯甲基-L-半胱氨酸(5g，13.76mmol)溶于二氧六环(40ml)、水(20ml)、1M氢氧化钠溶液(14ml)的混合溶液，于冰浴下搅拌，加入Boc-酸酐(3.5ml，15.14mmol)，反应自然升至室温，搅拌8小时，TLC检测反应完毕，将反应混合物浓缩至20-25ml，加入乙酸乙酯，在冰浴下边搅拌边滴加硫酸氢钠溶液，调pH至2-3后，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，产物为白色固体(5.5g，产率:86.21％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.26(m，16H)，3.78(d,1H)，2.51(m,1H),2.36(dd,1H),1.4(d,9H)。
步骤3：N-(叔丁氧羰基)-N-甲基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000012
将化合物N-(叔丁氧羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸(2.1g，4.53mmol)溶于无水四氢呋喃(6ml)，将氢化钠(436mg，10.9mmol)溶于无水四氢呋喃(14ml)，将氨基酸的四氢呋喃溶液在冰浴条件下滴加到氢化钠的四氢呋喃溶液中，然后缓慢滴加碘甲烷(0.93ml，14.95mmol)，搅拌过夜，TLC检测反应完毕，加入pH＝7的磷酸盐缓冲液淬灭，用饱和氯化铵溶液调pH至6-7，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，得到产物为白色固体(1.3g，产率：60.19％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.3(m,15H),3.75(s,1H),2.8(s,1H),2.66(d,4H),1.4(d,9H)。
步骤4：(9H-芴-9-基)甲基(R)-(1-(甲基氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基甲酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000013
将化合物(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(三苯甲基硫基)丙酸(10g，17.07mmol)溶解在四氢呋喃(50ml)中，在0-5℃下加入N'N-羰基二咪唑(5.59g，34.48mmol)，氮气条件下搅拌2小时后加入甲胺(3.03ml，68.28mmol)，0-5℃反应2小时，待反应物消耗完后，加入2M盐酸(60ml)淬灭，反应混合物用二氯甲烷萃取，有机层用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干 燥，浓缩，得到粗产物，加入甲醇(20ml)室温搅拌过夜，有白色固体析出，过滤，滤渣为产物，甲醇相浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，得到白色固体(9.44g，产率：92.37％)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.89(d,2H),7.81(d,1H),7.74(d,2H),7.66(d,1H),7.41(t,2H),7.29(m,17H),4.31(d,1H),4.22(t,2H),4.00(d,1H),2.53(d,3H),2.39(d,2H)。
步骤5：(R)-2-氨基-N-甲基-3-(三苯甲基硫基)丙酰胺的合成
Figure PCTCN2020095998-appb-000014
将化合物(9H-芴-9-基)甲基(R)-(1-(甲基氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基甲酸(2g，3.34mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(20ml)，加入哌啶(0.07ml，0.668mmol)，室温下反应4小时，TLC检测反应完毕，反应混合物用饱和食盐水洗，用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸钠干燥，然后浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，产物为黄白色固体(879mg，产率：69.76％)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.77(d,1H),7.29(m,15H),3.08(m,1H),2.55(d.3H),2.37(dd,1H),2.19(dd,1H),1.80(s,2H)。
步骤6：叔丁基甲基((R)-1-(((R)-1-(甲氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基甲酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000015
将化合物N-(叔丁氧羰基)-N-甲基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸(150mg，0.314mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，加入1-羟基苯并三唑(63.7mg，0.471mmol)，EDCI(90.3mg，0.471mmol)，室温搅拌5分钟，加入(R)-2-氨基-N-甲基-3-(三苯甲基硫基)丙酰胺(141.9mg，0.377mmol)，室温搅拌30分钟，TLC检测反应完毕，混合物用饱和食盐水洗，用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸钠干燥，然后浓缩，TLC(二氯甲烷：甲醇15：1)纯化，产物为白色固体(260mg，产率：99.2％)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.39(m,12H),7.22(m,20H),4.1(d,1H),3.95(s,1H),2.61(dd,10H),1.39(s,9H)。
步骤7：(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-苯基丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000016
将化合物叔丁基甲基((R)-1-(((R)-1-(甲氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基甲酸(1.1g，1.32mmol)溶于二氯甲烷：三氟乙酸：三异丙基硅烷(体积比50:47:3)(25ml)，室温下搅拌5min，TLC检测反应完毕，浓缩，加入乙醚，于冰浴下搅拌，有白色固体析出，过滤，干燥得到产品(400mg，产率：86.9％)。 1H NMR(400MHz,MeOD)δ4.5(m,1H),4.07(t,1H),3.18-2.96(m,3H),2.82(m,1H),2.78(s,3H),2.74(s,3H)；ESI-MS:252[M+H] +。
步骤8：(R-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-N-((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000017
将(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-苯基丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐(2.0g，5.7mmol)加入到二氯甲烷(20mL)中，然后再加入三乙胺(2.0g，20mmol)和对甲氧基苄氯(1.9g，12mmol)，25℃下搅拌12小时。反应液浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷5％-1％)，得到无色油状物(790mg，产率：29.3％)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.9(m,1H),7.28-7.25(m,4H),6.88-6.84(m,4H),6.35(m,1H),4.47-4.42(m,1H),3.81(d,6H),3.72-3.70(m,3H),3.51(s,2H),3.04-3.01(m,1H),2.95-2.90(m,1H),2.84-2.72(m,5H),2.67-2.64(m,1H),2.32(s,3H)。
步骤9：(R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-N 2-((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-2-(甲基氨基)丙基)-N 1-甲基丙烷-1,2-二胺的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000018
将(R-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-N-((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺(790mg，1.6mmol)加入到四氢呋喃(10mL)中，然后再加入硼烷四氢呋喃溶液(21mL，21mmol)，氮气保护下加热至回流，搅拌8小时。TLC检测反应完毕，冷却后加入甲醇(5mL)淬灭，反应液搅拌回流1小时。反应液浓缩得到黄色油状物(740mg，产率：100％)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.28-7.23(m,4H),6.87-6.84(m,4H),3.81(s,6H), 3.75(t,3H),3.70(s,4H),2.65-2.40(m,10H),2.30(dd,3H)。
步骤10：(R)-2-(((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000019
将(R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-N 2-((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-2-(甲基氨基)丙基)-N 1-甲基丙烷-1,2-二胺(800mg，1.7mmol)和邻甲酚(1.9g，17mmol)加入到三氟乙酸(30mL)中，氮气保护下加热至回流，搅拌8小时。TLC检测反应完毕，冷却后浓缩加入水(10mL)和乙醚(20mL)。分液，水相用乙醚洗(15mL)。水相用碳酸钾水溶液(10％)调节pH到10，然后用二氯甲烷(10mL X2)萃取，合并有机相加入氯化氢/二氯甲烷溶液(1M，10mL)。过滤得到白色固体(200mg，产率：45％)。 1H NMR(400MHz,D 2O)δ3.93(bs,1H),3.71-3.67(m,1H),3.44-3.35(m,2H),3.29-3.22(m,3H),3.17(d,2H),3.03-2.99(m,1H),2.67(d,6H)；ESI-MS:224[M+H] +。
实施例5B：(R-2-(((R)-3-巯基-2-(((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000020
步骤1：S-三苯甲基-L-半胱氨酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000021
将化合物L-半胱氨酸盐酸盐(10g，63.45mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺 (120ml)，加入三苯基氯甲烷(19.46g，69.795mmol)，加热到60-65℃，反应8小时，TLC检测反应完毕，冷却到室温，加入10％醋酸钠溶液(300ml)，析出白色固体，过滤，滤渣用纯水(300ml)洗，然后用丙酮(200ml)洗，干燥，产物为白色固体(17.56g，产率：76.15％)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.28(m,18H),2.92(dd,1H),2.59(dd,1H),2.41(dd,1H)。
步骤2：N-(叔丁氧羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000022
将化合物S-三苯甲基-L-半胱氨酸(5g，13.76mmol)溶于二氧六环(40ml)，水(20ml)、1M氢氧化钠溶液(14ml)的混合溶液，于冰浴下搅拌，加入Boc-酸酐(3.5ml，15.14mmol)，反应自然升至室温，搅拌8小时，TLC检测反应完毕，将反应混合物浓缩至20-25ml，加入乙酸乙酯，在冰浴下边搅拌边滴加硫酸氢钠溶液，调pH至2-3后，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，产物为白色固体(5.5g，产率：86.21％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.26(m,16H),3.78(m,1H),2.51(m,1H),2.36(dd,1H),1.4(s,9H)。
步骤3：N-(叔丁氧羰基)-N-甲基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000023
将化合物N-(叔丁氧羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸(2.1g，4.53mmol)溶于无水四氢呋喃(6ml)，将氢化钠(436mg，10.9mmol)溶于无水四氢呋喃(14ml)，将氨基酸的四氢呋喃溶液在冰浴条件下滴加到氢化钠的四氢呋喃溶液中，然后缓慢滴加碘甲烷(0.93ml，14.95mmol)，搅拌过夜，TLC检测反应完毕，加入pH7的磷酸盐缓冲液淬灭，用饱和氯化铵溶液调pH至6-7，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，产物为白色固体(1.3g，产率：60.19％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.3(m,15H),3.75(s,1H),2.8(s,1H),2.66(d,4H),1.4(d,9H)。
步骤4：(9H-芴-9-基)甲基(R)-(1-(甲基氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基甲酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000024
将化合物(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(三苯甲基硫基)丙 酸(10g，17.07mmol)溶解在四氢呋喃(50ml)中，在0-5℃下加入N'N-羰基二咪唑(5.59g，34.48mmol)，氮气条件下搅拌2小时后加入甲胺(3.03ml，68.28mmol)，0-5℃反应2小时，待反应物消耗完后，加入2M盐酸(60ml)淬灭，反应混合物用二氯甲烷萃取，有机层用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物，加入甲醇(20ml)室温搅拌过夜，有白色固体析出，过滤，滤渣为产物，甲醇相浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，得到白色固体(9.44g，产率：92.37％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,2H),7.81(d,1H),7.74(d,2H),7.66(d,1H),7.41(t,2H),7.29(m,17H),4.31(d,1H),4.22(t,2H),4.00(d,1H),2.53(d,3H),2.39(d,2H)。
步骤5：(R)-2-氨基-N-甲基-3-(三苯甲基硫基)丙酰胺的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000025
将化合物(9H-芴-9-基)甲基(R)-(1-(甲基氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基甲酸(2g，3.34mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(20ml)，加入哌啶(0.07ml，0.668mmol)，室温下反应4小时，TLC检测反应完毕，反应混合物用饱和食盐水洗，用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸钠干燥，然后浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，产物为黄白色固体(879mg，产率：69.76％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.77(d,1H),7.29(m,15H),3.08(m,1H),2.55(d,3H),2.37(m,1H),2.19(m,1H),1.80(s,2H)。
步骤6：(9H-芴-9-基)甲基((R)-1-(((R)-1-(甲氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基甲酸的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000026
将化合物(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(三苯甲基硫基)丙酸(100mg，0.17mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，加入1-羟基苯并三唑(34.5mg，0.255mmol)、EDCI(48.9mg，0.255mmol)，室温搅拌5分钟，加入(R)-2-氨基-N-甲基-3-(三苯甲基硫基)丙酰胺(76.8mg，0.204mmol)，室温反应30分钟，TLC检测反应完毕，混合物用饱和食盐水洗，用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸钠干燥，然后浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)得到产物为白色固体(160mg，产率：99.68％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,2H),7.71(m,4H),7.40(m,2H),7.38-7.25(m,30H),4.25(m,4H),4.01(m,1H),2.50-2.33(m,7H)。
步骤7：(R)-2-氨基-N-((R)-1-(甲氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)-3-(三苯甲基硫基)丙酰胺的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000027
将化合物(9H-芴-9-基)甲基((R)-1-(((R)-1-(甲氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)氨基甲酸(3.6g，3.8mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(15ml)，加入哌啶(0.07ml，0.76mmol)，室温下反应4小时，TLC检测反应完毕，反应混合物用饱和食盐水洗，用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸钠干燥，然后浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)，产物为白色固体(1.3g，产率：47.44％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.83(d,1H),7.27(m,30H),4.25(s,1H),3.29(m,2H),3.20(s,1H),2.65-2.23(m,5H)。
步骤8：甲基((4R,7R,10R)-3,6,9-三氧代-13,13,13-三苯基-4,7-双((三苯甲基硫基)甲基)-12-硫杂-2,5-8-三氮杂十三烷-10-基)氨基甲酸叔丁基酯的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000028
将化合物N-(叔丁氧羰基)-N-甲基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸(509mg，1.07mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入1-羟基苯并三唑(218mg，1.61mmol)，EDCI(309mg，1.61mmol)，室温搅拌5分钟，加入(R)-2-氨基-N-((R)-1-(甲氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫基)丙-2-基)-3-(三苯甲基硫基)丙酰胺(924mg，1.28mmol)，室温反应30分钟，TLC检测反应完毕，混合物用饱和食盐水洗，用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷1％-5％)得到产物为白色固体(985mg，产率：77.93％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(d,1H),7.73(d,2H),7.32-7.21(m,45H),4.25(m,3H),2.62(m,1H),2.49(m,6H)2.47-2.23(m,5H),1.35-1.21(d,9H)。
步骤9：(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000029
将甲基((4R,7R,10R)-3,6,9-三氧代-13,13,13-三苯基-4,7-双((三苯甲基硫基)甲基)-12-硫杂-2,5-8-三氮杂十三烷-10-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.5g， 1.27mmol)溶于二氯甲烷：三氟乙酸：三异丙基硅烷(体积比50：47：3)(40ml)，室温下搅拌5min，TLC检测反应完毕，浓缩，加入乙醚，于冰浴下搅拌，有白色固体析出，过滤，干燥得到产品(446mg，产率：77.77％)。 1HNMR(400MHz,MeOD)δ4.54(m,1H),4.42(m,1H),4.05(t,1H),3.13(m,1H),2.99(m,2H),2.85(m,2H),2.79(m,1H),2.73(s,3H),2.70(s,3H)。ESI-MS:355,[M+H] +。
步骤10：(R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-N-((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-1-(((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000030
将(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐(1.1g，2.4mmol)加入到二氯甲烷(20mL)中，然后再加入三乙胺(1.1g，11mmol)和对甲氧基苄氯(1.1g，7.2mmol)，25℃下搅拌12小时。反应液浓缩，柱层析分离(甲醇：二氯甲烷5％-1％)，得到无色油状物(640mg，产率：36％)。。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.84(s,1H),7.28-7.22(m,6H),6.96(d,1H)，6.88-6.83(m,6H),6.70(s，1H)4.55-4.53(m,2H),3.79(s,9H),3.71-3.67(m,7H),3.03-2.79(m,6H),2.80(d,3H),2.65-2.61(m,1H)2.34(s,3H)。
步骤11：(R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-N 2-((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-2-(((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-2-(甲基氨基)丙基)氨基)丙基)-N 1甲基丙烷-1,2-二胺的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000031
将(R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-N-((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-1-(((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺(3.2g，4.5mmol)加入到四氢呋喃(100mL)中，然后再加入硼烷四氢呋喃溶液(140mL，140mmol)，氮气保护下加热至回流，搅拌8小时。TLC检测反应完毕，冷却后加入甲醇(20mL)淬灭，反应液搅拌回流1小时。反应液浓缩得到黄色油状物(3.1g，产率：100％)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.25-7.22(m,6H),6.86-6.84(m,6H),3.80(d,9H),3.67(d,6H),2.65- 2.44(m,19H),2.30(d,6H)。
步骤12：(R-2-(((R)-3-巯基-2-(((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇盐酸盐的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000032
将(R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-N 2-((R)-3-((4-甲氧基苄基)硫基)-2-(甲基氨基)丙基)-N 1-甲基丙烷-1,2-二胺(3.1g，4.5mmol)和邻甲酚(15g，140mmol)加入到三氟乙酸(120mL)中，氮气保护下加热至回流，搅拌8小时。TLC检测反应完毕，冷却后浓缩加入水(15mL)和乙醚(30mL)。分液，水相用乙醚洗(30mL)，然后水相用碳酸钾水溶液(10％)调节pH到10，用二氯甲烷(10mL X2)萃取，合并有机相加入氯化氢/二氯甲烷溶液(1M，30mL)。过滤得到白色固体(200mg，产率：28％)。 1H NMR(400MHz,D 2O)δ4.01-3.93(m,1H),3.75-3.70(m,1H),3.63-3.61(m,1H),3.44-3.37(m,3H),3.27-2.93(m,10H),2.70(d,3H),2.65(d,3H)；ESI-MS:313[M+H] +。
实施例5C：(R)-N-((R)-3-((2-甲氧基丙-2-基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2,2,3-三甲基噻唑烷-4-甲酰胺的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000033
将(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-苯基丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐(4g，11mmol)、1g蒙脱土K10、50ml丙酮、150ml 2,2-二甲氧基丙烷混溶，N 2保护25℃下搅拌24h。TLC检测反应完毕后，过滤，将滤液旋干，进行柱层析分离(中性Al 2O 3，MeOH/DCM＝1/450)，得到产品600mg，产率15.1％。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.86(d,1H),6.29(s,1H),4.49(dd,1H),3.53(dd,1H),3.41(dd,1H),3.30(s,3H),3.10(dd,1H),3.00–2.77(m,5H),2.34(s,3H),1.65–1.53(m,9H),1.46(s,3H)，ESI-MS:365[M+H] +。
实施例5D：(R)-2,2,3-三甲基-N-((6R,9R)-3,3,12,12-四甲基-6-(甲基氨基甲酰基)-8-氧代-2,13-二氧杂-4,11-二硫杂-7-氮杂四癸烷-9-基)噻唑烷-4-甲酰胺的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000034
将(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐(4.5g，9.6mmol)、0.9g蒙脱土K10、45ml丙酮、135ml 2,2-二甲氧基丙烷混溶，氮气保护25℃下搅拌24h。TLC检测反应完毕后，过滤，将滤液旋干，进行柱层析分离(中性Al 2O 3，MeOH/DCM＝1/350)，得到产品650mg，产率12.5％ 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.95(d,1H),7.36(d,1H),6.78(s,1H),4.68(dt,1H),4.56(dd,7.3Hz,1H),3.57(dd,1H),3.42(dd,1H),3.32(d,6H),3.15(ddd,2H),2.93(ddd,3H),2.84(d,3H),2.40(s,3H),1.58(dt,15H),1.48(s,3H),ESI-MS:539[M+H] +。
实施例5E:(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)丙酰胺
Figure PCTCN2020095998-appb-000035
步骤1：(R)-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(三苯甲硫基)丙酰氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure PCTCN2020095998-appb-000036
将N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸(10g,17.07mmol)溶于100mL二氯甲烷，在室温条件下加入1-羟基苯并三唑(HOBT)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，搅拌10分钟，加入(2-氨基乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(3.6g,20.48mmol)，室温搅拌40分钟，TLC检测反应完毕，加入50％的饱和氯化钠和水淬灭，反应混合物用乙酸乙 酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，层析柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝3：1—1:3)，得到目标产物为白色固体(10g，产率86％),HESI:742.45[M+H]+
步骤2：(R)-2-(2-氨基-3-(三苯硫基)丙酰氨基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure PCTCN2020095998-appb-000037
将(R)-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(三苯甲硫基)丙酰氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(8.8g,11.86mmol)溶解在80mL的二氯甲烷中，加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)(8.2g,53.90mmol)在室温条件下搅拌40分钟，TLC检测反应完毕，加入50％的饱和氯化钠和水淬灭，反应混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，层析柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝3：1—1:3)，得到目标产物为白色固体(5.6g，产率89％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.49–7.44(m,5H),7.34–7.28(m,7H),7.26–7.21(m,3H),3.33(s,4H),3.04(s,1H),2.85(s,3H),2.77(d,J＝12.6Hz,1H),2.54(s,1H),1.46(s,9H).
步骤3：((5R,8R)-1-(9H-芴-9-基)-3,6,9-三氧代-5,8-双((三苯甲硫基)甲基)-2-氧杂-4,7,10-三半胱氨酰基-12-基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯的合成：
Figure PCTCN2020095998-appb-000038
将N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸(10g,17.07mmol)溶于100mL二氯甲烷，在室温条件下加入1-羟基苯并三唑(HOBT)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，搅拌10分钟，加入(R)-2-(2-氨基-3-(三苯硫基)丙酰氨基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯，然后就在室温搅拌40分钟，TLC检测反应完毕，加入50％的饱和氯化钠和水淬灭，反应混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，层析柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝3：1—1:3)，得到目标产物为白色固体(9.8g,产率87.5％), 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.77(t,J＝6.8Hz,2H),7.56(d,J＝7.4Hz,2H),7.47–7.33(m,14H),7.28–7.13(m,20H),5.00(d,J＝6.3Hz,1H),4.38(dt,J＝17.2,9.2Hz,2H),4.17(dd,J＝16.8,7.2Hz,2H),3.26(s,2H),3.14(s,2H),2.79(s,3H),2.76–2.36(m,4H),1.45(s,9H).
步骤4：(2-((R)-2-((R)-2-氨基-3-(三苯甲硫基)丙酰氨基)-3-(三苯甲硫基)丙酰氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure PCTCN2020095998-appb-000039
将((5R,8R)-1-(9H-芴-9-基)-3,6,9-三氧代-5,8-双((三苯甲硫基)甲基)-2-氧杂-4,7，10-三半胱氨酰基-12-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(2g,1.840mmol)溶解在50mL的二氯甲烷中，加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)(8.2g,53.90mmol)在室温条件下搅拌40分钟，TLC检测反应完毕，加入50％的饱和氯化钠和水淬灭，反应混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，层析柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝3：1—1:3)，得到目标产物为白色固体(1.28g，产率80％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.58–7.14(m,30H),4.28–4.06(m,1H),3.24(s,4H),2.82(s,3H),2.71(s,2H),2.47(s,2H),1.43(s,9H).
步骤5：((6R,9R)-7,10-二氧代-6,9-双((三苯甲硫基)甲基)-2,5,8,11-四氮杂十三烷-13-基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯的合成
Figure PCTCN2020095998-appb-000040
将(2-((R)-2-((R)-2-氨基-3-(三苯甲硫基)丙酰氨基)-3-(三苯甲硫基)丙酰氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,0.578mmol)溶解到10mL甲醇溶液中，在0℃的条件下加入硼氢化钠，滴入一滴冰醋酸，加入甲基(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁基酯(150mg,0.868mmol),室温搅拌1个小时，真空浓缩，反应物用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，然后用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，层析柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得到产物(370mg,产率63％)。 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.49–7.33(m,13H),7.29–7.19(m,18H),3.98(m,1H),3.24-3.16(m,6H),2.81(s,3H),2.79(s,3H),2.65-2.62(m,2H),2.58-2.55(m,2H),2.51–2.36(m,3H),1.45(s,9H),1.43(s,9H).
步骤6：(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)丙酰胺的合成
Figure PCTCN2020095998-appb-000041
将((6R,9R)-7,10-二氧代-6,9-双((三苯甲硫基)甲基)-2,5,8,11-四氮杂十三烷-13-基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(360mg，0.390mmol)溶解在5mL二氯甲烷溶液中，在氮气保护下，加入三氟乙酸(4.45g,39.03mmol)，三异丙基硅烷(0.17g,0.109mmol)搅拌40分钟，TLC检测反应完毕，将反应体系真空浓缩，用甲基叔丁基醚洗涤，得到产物(TFA盐形式，125mg,产率81％)，经过六步反应总产率为25.7％， 1H NMR(400MHz,氧化氘)δ4.48(dd,J＝7.8,5.3Hz,1H),4.23(s,1H),3.50(q,J＝5.8Hz,2H),3.45–3.29(m,4H),3.17-3.11(m,3H),3.04(dd,J＝14.9,6.0Hz,1H),2.94(dd,J＝14.3,5.3Hz,1H),2.83(dd,J＝14.2,7.7Hz,1H),2.71(s,3H),2.66(s,3H).HESI:436.70[M+H]+
以类似的方式，制备得到下述实施例5F、5G和5H。
实施例5F：(R)-N-((7R,10R)-6,9-二氧代-13,13,13-三苯基-7-(三苯甲基硫基甲基)-12-硫杂-2,5,8-三氮杂十三烷-10-基)-3-巯基-2-(2-(甲基氨基)乙基氨基)丙酰胺
Figure PCTCN2020095998-appb-000042
实施例5G：(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰胺
Figure PCTCN2020095998-appb-000043
实施例5H：(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-((R)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰氨基)丙酰胺
Figure PCTCN2020095998-appb-000044
实施例5I：生物学活性实施例--化合物1、化合物2、化合物3的保护 作用。
材料：γ射线照射装置为 137Cs辐照仪，剂量率0.99Gy/min。C57BL/6小鼠，雄性，体重21-22g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，合格证号SCXK(京)2014-0004，分组情况为：照射并给空白溶剂组、照射并给药组，每组6只。化合物1、化合物2、化合物3(分别由实施例5A、5C、5D制备得到)结构见表1。
表1化合物1-3的命名和结构式
Figure PCTCN2020095998-appb-000045
方法：照射及药物处理方式： 137Csγ射线一次全身照射，照射剂量率为0.99Gy/min，小鼠吸收剂量分别为8.0Gy；化合物1溶于生理盐水，给药时震摇均匀，化合物1于照射前30min腹腔注射(200mg/kg BW)。对照组注射生理盐水，照射剂量为8.0Gy。观察各组小鼠30天存活情况，计算存活率。
结果：化合物1腹腔注射(200mg/kg BW)，经8.0Gy  137Csγ射线一次性全身照射，与照射并给空白溶剂组相比，各组小鼠生存率情况见图1。
方法：照射及药物处理方式： 137Csγ射线一次全身照射，照射剂量率为0.99Gy/min，小鼠吸收剂量分别为8.0Gy；化合物2,3溶于85％HP-β-CD和15％Solutol HS的混合溶剂中，给药时震摇均匀。化合物2于照射前4小时灌胃给药(1600mg/kg BW)，化合物3于照射前1小时灌胃给药(1500mg/kg BW)。对照组灌胃85％HP-β-CD和15％Solutol HS的混合溶剂，照射剂量为8.0Gy。观察各组小鼠30天存活情况，计算存活率。
结果：化合物2灌胃给药(1600mg/kg BW)，经8.0Gy  137Csγ射线一次性 全身照射，与照射并给空白溶剂组相比，各组小鼠生存率情况见图2。化合物3灌胃给药(1500mg/kg BW)，经8.0Gy  137Csγ射线一次性全身照射，与照射并给空白溶剂组相比，各组小鼠生存率情况见图3。
实施例6：评价本发明化合物在心肌缺血再灌注模型中的作用
采用以下心肌缺血再灌注模型评价本发明化合物的作用。
用1.0g·kg-1的乌拉溶液对大鼠进行腹腔注射麻醉；
将针形电极插入大鼠四肢的皮下，连接心电图，并描记Ⅱ导联，持续监测心电图的变化，进而挑选心电图正常的大鼠进行试验，剔除不正常者；
在大鼠的颈部正中的位置切口，将气管分离开，插入导气管。连接小动物呼吸机，保证其呼吸频率为7080次/分钟，呼吸比为1.5:1，潮气量为11.5mL/100g；首先将右颈部的总动脉分离，插入左心导管，来观察心脏功能的各个参数；在胸骨左缘的第24肋间开胸，用拉钩拉开肋骨，暴露心脏，静待10min，使血压呼吸平稳；在冠状动脉左前降支(LAD)处用3-0缝合线结扎，进行缺血损伤，缺血30min；30min后去除缝合线，恢复血液供应，进行再灌注损伤。用TTC染色法评价心肌梗死面积。
建模成功的标准：
冠状动脉结扎成功的标准：在心电图上明显出现了S-T段的抬高和/或者T波段高耸，并且心外膜缝线远端出现发绀的现象，说明冠状动脉结扎成功。
缺血后再灌注成功的标准：在抬高的S-T段有超过50％发生了下降，而且心外膜的颜色恢复原有色泽，说明缺血后再灌注模型构建成功。
实验排除标准：
在实验手术过程中出血过多的模型
在进行缺血处理前，大鼠出现严重的心率失常，67％:包括心室颤动、心室扑动、心房颤动、心房扑动、室上性心动过速、室性心动过速、频发室性早搏、房室传导阻滞和束支传阻滞等
大鼠的平均动脉压发生超过70mm Hg的持续下降。
实施例7：评价本发明化合物在心肌梗死模型中的作用
1.按照以下方式对大鼠进行分组和给药
(1)模型
(2)化合物B(iv)100mg/kg
(3)化合物A(iv)100mg/kg
(4)化合物A(口服)500mg/kg
(5)单硝酸异山梨酯注射液(iv)1mg/kg(相当于临床等效剂量)。
每组10只大鼠，缺血30min再灌注后立即静脉给药，iv 10％1min+ivdrip90％30min，给药体积2ml/只。化合物A(口服)500mg/kg于再灌后2h动物清醒后灌胃给药，给药体积10ml/kg。
注：该实施例中所使用的化合物A和B为其盐酸盐形式。
2.模型制备
大鼠在腹腔注射3％戊巴比妥钠60mg/kg全麻的条件下，仰卧位固定于手术台上。胸部前外侧手术野去毛，常规消毒。切开皮肤、肌层，肌层行荷包缝合，左侧第四肋间隙开胸，以环形钩拉出心脏。在左心耳下方3～4mm处的冠脉前降支位置，以6/0无损伤丝线穿线，并置直径1.6mm尼龙线，连同冠状动脉前降支一起结扎，另一端留于体外备用。将心脏放回胸腔，排空胸腔内空气，关闭胸腔。结扎30min后小心移除尼龙线进行再灌注。
与正常Ⅱ导联心电图(ECG-Ⅱ)比较，冠脉结扎后30min，ECG-Ⅱ的ST段抬高0.1mV以上者作为缺血成功。不满足上述标准的动物表明造型不成功，从实验中剔除。
3.心肌梗死范围及心肌酶测定
取心脏左心室，沿冠状面切成2mm厚的切片，放入2％TTC染液中，避光37℃温孵2min进行染色，采用COOLPIX955数码相机成像系统将数字影象存储于计算机中，并用图象分析系统v 4.0软件测量梗死区和全脑面积，计算心肌梗死范围(梗死区面积占左室面积百分比)
大鼠经腹主动脉取血，4℃，3000rpm×10min离心，取上层血清酶联免疫法测定LDH。
4.实验结果
4.1.心肌梗死范围
与模型对照组比较，给予化合物B(iv)100mg/kg组、化合物A(iv)100mg/kg、化合物A(口服)500mg/kg治疗后，可使心肌梗死范围分别降低25.2％(P<0.05)、24.5％(P<0.05)、28.5％(P<0.01)；单硝酸异山梨酯注射液 1mg/kg组降低25.5％(P<0.05)。各组与单硝酸异山梨酯注射液组比较均无明显差异(P>0.05)。
表1 化合物A/B对大鼠心肌梗死范围的影响(
Figure PCTCN2020095998-appb-000046
n＝10)
Figure PCTCN2020095998-appb-000047
注：1.与模型组比较， *P<0.05， **P<0.01。
4.2.心肌酶测定结果
与模型对照组比较，给予化合物B(iv)100mg/kg组、化合物A(iv)100mg/kg、化合物A(口服)500mg/kg治疗后，可使心肌酶LDH分别降低22.2％(P<0.05)、19.9％(P<0.05)、25.8％(P<0.01)；单硝酸异山梨酯注射液1mg/kg组降低22.4％(P<0.05)。各组与单硝酸异山梨酯注射液组比较均无明显差异(P>0.05)。结果见表2。
表2化合物A/B对大鼠心肌酶的影响(
Figure PCTCN2020095998-appb-000048
n＝10)
Figure PCTCN2020095998-appb-000049
注：1.与模型组比较， *P<0.05， **P<0.01。
实施例8：本发明化合物对博来霉素(BLM)诱导的硬皮病小鼠模型中真皮纤维化的保护作用
材料：C57BL/6雌性小鼠，体重20-25g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，采用随机数表法将24只小鼠分为空白对照组(1)、硬皮病模型组(2)、硬皮病+化合物A治疗组(3)、硬皮病+化合物B治疗组(4)，每组6只。博来霉素(bleomycin,BLM)购自Sigma公司。H-E染色试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。该实施例中所使用的化合物A为其盐酸盐形式，化合物B为其三氟乙酸盐形式。
方法：使用电动剃毛器对小鼠预定注射部位(面积1cm 2)进行剃毛处理。(1)(2)组小鼠腹腔注射PBS，(3)组小鼠灌胃给药化合物A(600mg/kg/d，溶于PBS)，(4)组小鼠腹腔注射化合物B(200mg/kg/d，溶于PBS)；之后立即(1)组小鼠背部皮下注射PBS，(2)、(4)组小鼠背部皮下注射BLM(1mg/ml，溶于PBS)，15min后(3)组小鼠背部皮下注射BLM(1mg/ml，溶于PBS)。每日1次，连续给药28天后，于第29天颈椎脱臼处死动物。常规碘酒消毒小鼠背部皮肤，手术剪取局部病变皮肤组织，固定于4％多聚甲醛，石蜡包埋并切片，进行H-E染色分析。
结果：如图17所示，H-E染色可见空白对照组真皮层胶原纤维分布结构正常，脂肪层明显。而BLM模型组真皮层胶原明显增多，脂肪层消失，并伴有明显的炎性细胞浸润。相对于BLM模型组，化合物B治疗组真皮层胶原增生情况改善，而化合物A治疗组的真皮层胶原厚度明显降低，脂肪层明显增厚。图18表明，与空白对照组相比，BLM模型组真皮厚度增加(p<0.001)；与BLM模型组相比，化合物B治疗组真皮厚度降低(p<0.01)，而化合物A治疗能够更好的降低皮损部位的真皮厚度，与BLM模型组相比差异具有统计学意义(p<0.001)。
实施例9：本发明化合物对博来霉素(BLM)诱导的硬皮病小鼠模型中羟脯氨酸表达水平的影响
材料：羟脯氨酸试剂盒、H 2O 2试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
方法：取小鼠部分皮损组织，依据试剂盒说明书的要求，对皮损区羟脯氨酸、过氧化氢含量进行检测。
结果：本研究通过羟脯氨酸的量间接评估胶原的含量，如图19所示，经BLM处理后皮肤组织内的羟脯氨酸表达水平明显变高(p<0.05)，经化合物A、化合物B治疗后皮损部位的羟脯氨酸水平下调，其中BLM+化合物B组与BLM模型组相比差异显著(p<0.05)。此外，本研究通过研究组织内过 氧化氢浓度来检测组织内的氧化应激水平，如图20所示，BLM能够明显上调组织内的H 2O 2水平(p<0.001)，A、B治疗后皮肤内的H 2O 2浓度减少，且与BLM模型组相比差异显著(p<0.01，p<0.001)。该实施例中所使用的化合物A为其盐酸盐形式，化合物B为其三氟乙酸盐形式
至此，本领域技术人员应认识到，虽然本文已详尽示出和描述了本发明的多个示例性实施例，但是，在不脱离本发明精神和范围的情况下，仍可根据本发明公开的内容直接确定或推导出符合本发明原理的许多其他变型或修改。因此，本发明的范围应被理解和认定为覆盖了所有这些其他变型或修改。

Claims (13)

  1. 式(I)化合物或选自下述组(II)任一的化合物在制备用作脑神经保护剂或心脏保护剂的药物中的用途，其中所述式(I)化合物为
    Figure PCTCN2020095998-appb-100001
    其中，
    A 1选自-C(O)NR 8-、-S(O) 2-NR 8-、-S(O)NR 8-和-R 7-NR 8-；
    A 2选自羰基、磺酰基、亚硫酰基、取代或未取代的C 1-6烷基；
    R 1和R 5可相同或不同，选自氢、取代或未取代的C 1-C 5烷基或杂烷基；
    R 2和R 6可相同或不同，选自取代或未取代的C 1-C 5烷基或杂烷基；
    n为0-20000的整数；
    R 3、R 4独立地选自氢、X、取代或未取代的C 1-6烷基；
    X选自F、Cl、Br和I；
    R 7选自取代或未取代的C 1-C 6烷基，R 8选自氢、取代或未取代的C 1-C 6烷基；
    或其立体异构体或其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物；
    组(II)化合物：(R)-2-(((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇或其盐酸盐(化合物1)、(R)-N-((R)-3-((2-甲氧基丙-2-基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2,2,3-三甲基噻唑烷-4-甲酰胺(化合物2)和(R)-2,2,3-三甲基-N-((6R,9R)-3,3,12,12-四甲基-6-(甲基氨基甲酰基)-8-氧代-2,13-二氧杂-4,11-二硫杂-7-氮杂四癸烷-9-基)噻唑烷-4-甲酰胺(化合物3)、(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)丙酰胺、(R)-N-((7R,10R)-6,9-二氧代-13,13,13-三苯基-7-(三苯甲基硫基甲基)-12-硫杂-2,5,8-三氮杂十三烷-10-基)-3-巯基-2-(2-(甲基氨基)乙基氨基)丙酰胺、(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰胺和(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-((R)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷- 1-基)丙酰氨基)丙酰胺。
  2. 权利要求1的用途，其中所述式(I)化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺；或(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺。
  3. 权利要求1的用途，其中所述式(I)化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺或其药学上可接受的盐；或(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺或其药学上可接受的盐。
  4. 权利要求1的用途，其中所述式(I)化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐；或(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺三氟乙酸盐。
  5. 权利要求1的用途，其中所述式(I)化合物为(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺盐酸盐；或(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-(((R)-3-巯基-1-(甲基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺盐酸盐。
  6. 权利要求1-5任一项的用途，其中所述化合物作为脑神经保护剂，用于预防或治疗下述疾病或病症中的一种或多种：脑卒中，包括缺血性和出血性脑卒中；在缺血性脑卒中治疗过程中诱发的二次损伤，即脑缺血再灌注损伤；动脉粥样硬化、脑溢血、高血压、心肌梗塞、心绞痛、冠心病、心肌纤维化、心脏病、心律不齐、头晕、失眠等；静脉曲张、水肿等与血管通透性升高有关的疾病；老年性疾病，例如帕金森症、脑萎缩、老年性痴呆；其它脑神经损伤类疾病，包括但不限于脑外伤、脑血管硬化(脑溢血、脑血栓)后遗症、脑炎与脑膜炎后遗症、脱髓鞘疾病、局部缺血、缺氧、脑血管意外、代谢失调、毒性作用、神经毒性作用、外科手术、医原性影响、压力、质量效应、出血、热、化学因素、辐射、血管痉挛、神经变性性疾病、神经变性性病变、感染、癫痫等原因造成的神经损伤；休克治疗、动脉搭桥术、溶栓疗法、经皮腔内冠脉血管成形术、心脏外科体外循环、心肺脑复苏、或断肢再植和器官移植；系统性硬皮病或肌肉侧索硬化症。
  7. 权利要求6的用途，其中所述化合物作为脑神经保护剂，用于预防 或治疗脑卒中。
  8. 权利要求6的用途，其中所述化合物作为脑神经保护剂，用于预防或治疗缺血性脑卒中。
  9. 权利要求6的用途，其中所述化合物作为脑神经保护剂，用于急性缺血性脑卒中。
  10. 权利要求1的用途，其中所述化合物作为心脏保护剂，用于预防或治疗心肌缺血或由心肌缺血引起的心肌梗塞或心脑缺血再灌注损伤。
  11. 权利要求1-10中任一项的用途，其中所述化合物的剂量为约9-16200mg/kg/天。
  12. 化合物或其药用盐，选自(R)-2-(((R)-3-巯基-2-(甲基氨基)丙基)氨基)-3-(甲基氨基)丙烷-1-硫醇、(R)-N-((R)-3-((2-甲氧基丙-2-基)硫基)-1-(甲基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2,2,3-三甲基噻唑烷-4-甲酰胺、(R)-2,2,3-三甲基-N-((6R,9R)-3,3,12,12-四甲基-6-(甲基氨基甲酰基)-8-氧代-2,13-二氧杂-4,11-二硫杂-7-氮杂四癸烷-9-基)噻唑烷-4-甲酰胺、(R)-3-巯基-N-((R)-3-巯基-1-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-((2-(甲基氨基)乙基)氨基)丙酰胺、(R)-N-((7R,10R)-6,9-二氧代-13,13,13-三苯基-7-(三苯甲基硫基甲基)-12-硫杂-2,5,8-三氮杂十三烷-10-基)-3-巯基-2-(2-(甲基氨基)乙基氨基)丙酰胺、(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰胺和(R)-N-((R)-3,3-二甲基-7-氧代-2-氧杂-4-硫杂-8,11-二氮杂十二烷-6-基)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-((R)-3-(2-甲氧基丙-2-基硫基)-2-(2,2,3-三甲基咪唑烷-1-基)丙酰氨基)丙酰胺。
  13. 权利要求1-5中的化合物或权利要求12的化合物在制备用于治疗和/或预防辐射损伤的药物、化疗药损伤的药物、化妆品、抗肿瘤药物中的用途。
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